UNIVERSIDAD DR.

JOSE MATIAS DELGADO

Facultad de Agricultura e Investigacin Agrcola
Julia Hill de O Sullivan

Catedrtica: Lic. Cristabel Cruz Muoz

Practica n5: medio ambiente

Instructores: Vanessa Segura

Enrique Rivas Sandoval

Estudiante: Gabriela Ivett Brizuela Doratt

Carn: 201400966

Fecha: 27/05/15
Introduccion

El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones

fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de
forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos lquidos y
slidos en funcin de las caractersticas del medio y cultivos discontinuos
y continuos en funcin de la disponibilidad de nutrientes en el medio.

Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin in vitro de las

bacterias, para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio
bioqumico e inmunolgico, al contar con material en cantidad suficiente.
Por ello constare de lagunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes,
condicione de aeroanaerobiosis, etc.), que sern las ms idneas para la
bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una de ellas en
particular, en la bacteriologa sistemtica.

Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de

enriquecimiento que tratan de aumentar el nmero de bacteria existentes,
si consideramos que se encuentran en cantidad muy exigua, a la vez que
inhiben la flora de asociacin acompaante( y de aislamiento ( que tienen
por fin conseguir una colonia o clon, es decir, grupo de bacterias
procedentes de una sola, con todas sus propiedades); los dos primeros son
principalmente lquidos y los segundos, slidos. Los medios selectivos son
aquellos que poseen algn componente que permite o no le crecimiento de
una especie bacteriana, carcter de importancias para su identificacin, y
los diferenciales, aquellos que las diversas especies que hay que testar
alteran de forma distinta, por lo que suelen llevar indicadores (sustancias
que varan su coloracin segn el pH del medio) u otros ndices de
reacciones qumicas definidas.
Objetivos

El objetivo de este trabajo es realizar muestras de aire, agua y tierra

reseando el material necesario, la tcnica de obtencin y caractersticas
especiales de aquellas a observar.

Identificar mtodos eficaces para el aislamiento de microorganismos.

Conocer algunos mtodos para obtener un cultivo puro.
Observar el desarrollo que se obtuvo al cultivar los microorganismos en
el aire, tierra y agua en agar nutritivo y agar EMB.
Materiales
Agar nutritivo
Agar EMB
Jeringa de 3mL
Jeringa de 10 mL
Tubos
Cajas Petri
Agua pectonada
Vieta

Papel toalla

Fsforos
Muestra de tierra, agua y aire.

Procedimiento
Con el agua pectonada (buffer pH 7). Es un medio lquido y si es lquido se
har en tubo bacteriano.

Para el agua purificada.

Se le agregara 1 ml de agua. En cada tubo se le agregara 9 ml de agua

pectonada ms 1 ml de agua, se homogenizara la mezcla.
Se tendrn 4 tubos bacterianos del cual el
primero ser el 1-10, es decir, la que se hizo
anteriormente. La segunda ser 1 en 100 a
esta se le agregara 9 ml de agua pectonada
y 1 ml de la solucin patrn. La tercera ser
1 en 1000 de igual forma que la segunda se
le agregara 9 ml de agua y 10 ml de la
solucin 1 en 100. La cuarta se le agregaran
9 ml de agua pectonada y del 1 en 10000 se
le agregara 1 ml a la 1 en 1000.

Luego de a ver realizado lo anterior, del tubo 1 en 10 se sacara 1ml y se le

pondr a la caja un ml a cada uno.

9ml de agar EMB en 4 cajas. Se har el movimiento en 8 con la caja Petri

para que as se mezcle bien el agar con la mezcla de agua pectonada y el
agua.

Para la tierra

Se le agregara 1 ml de tierra. En cada tubo se le agregara 9 ml de agua

pectonada ms 1 ml de tierra, se homogenizara la mezcla.

Se tendrn 4 tubos bacterianos del cual el primero ser el 1-10, es decir,

la que se hizo anteriormente. La segunda ser 1 en 100 a esta se le
agregara 9 ml de agua pectonada y 1 ml de la solucin patrn. La tercera
ser 1 en 1000 de igual forma que la segunda se le agregara 9 ml de agua
y 10 ml de la solucin 1 en 100. La cuarta se le agregaran 9 ml de agua
pectonada y del 1 en 10000 se le agregara 1 ml a la 1 en 1000.

Luego de a ver realizado lo anterior, del tubo 1 en 10 se sacara 1ml y se le

pondr a la caja un ml a cada uno.

9ml de agar nutritivo en 4 cajas. Se har el movimiento en 8 con la caja

Petri para que as se mezcle bien el agar con la mezcla de agua pectonada
y la tierra.
Como se muestra en la imagen, es un ejemplo de cmo se realiz la
siembra

Recordar a ver limpiado las cajas con alcohol y la zona de trabajo. Siempre
con el mechero encendido

Agar nutritivo y agar sabouraud

Se harn muestras de aire con los 2 agares. Siempre ocupando 9 ml del respectivo agar, se dejaran
20 min en un lugar ventilado.

Resultados
Resultados con tierra

Las cajas Petri que se sembraron anteriormente, se pusieron en la

incubadora para que se llevara a cabo el cultivo.
Este fue el resultado del cultivo con agar nutritivo. Este es un medio no
selectivo, podemos identificar a los cocos.

En cada caja se puede observar una gran diferencia sobre las bacterias
que se pueden ver:

En la 1:10 se puede observar que son incontables las bacterias que

se presentan
En la 1:100 ya se puede hacer un conteo de cuantas pueden a ver
en cada cuarto.
En la 1:1000 es fcilmente la visibilidad para poder contar cada una
de ellas.
En la 1:10000 se pueden observar claramente las bacterias porque
son ms grandes.

Para hacer el conteo de cuantas bacterias hay, se divide la caja Petri en 4

partes iguales. Se numeran y se empieza el conteo

1
= 36
AN 1:10: 4
2= 26 R/1,560 UFC/gr
3= 56
4= 38
15610
1
= 10
AN 1:100: 4
2= 9 R/2,200 UFC/gr
3= 6
4= 4
22 100
1
= 7
AN 1:1000: 4
2= 3 R/33,000 UFC/gr
3= 8
4= 15
33 1000
1
= 6
AN 1:10000: 4
2= 5 R/240,000 UFC/gr
3= 6
4= 7
24 10000
Resultados con agua purificada

Debido a que el agua era purificada no se pudo observar resultado alguna

de formacin bacteriana.

Resultados con agar nutritivo y sabouraud

Se puede observar que se obtuvieron resultados en las cajas Petri

sembradas para el aire. Se pueden distinguir los puntitos que son las
bacterias.
Conclusiones
En esta prctica se aprend la importancia de preparar medios de cultivo,
de que materiales pueden ser hechos, los distintos tipos de cultivos que
pueden desarrollarse en el laboratorio, as como su clasificacin, sus
caractersticas principales, los distintos tipos que pueden servir para
identificar diferentes bacterias, as como las condiciones que estos deben
de reunir.

Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a

partir de muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay
gran diversidad microbiana, as como comprobar la pureza de los cultivos
obtenidos.

Los cultivos puros estn formados por un solo tipo de microorganismo; y

son indispensables para conocer las caractersticas morfolgicas,
propiedades de tincin, actividad bioqumico e identificacin de las
especies microbianas

En este experimento se pudo realizar la siembra de dilucin, en la cual dio

como resultado la formacin de colonias sobre las placas de agar nutritivo
y agar rojo violeta. Las colonias se formaron durante un tiempo de
incubacin de un da aproximadamente.

Despus de un da aproximadamente pasadas se pudo observar las

diferentes caractersticas de las diferentes bacterias como su forma y
tamao.

Recomendaciones
Tener una zona de trabajo estril para un resultado mejor
 Conocer un poco sobre las bacterias que se van a observar en la
prctica.
Despus de a ver terminado, a ver dejado todo en orden.
Al haber sembrado mover en forma de ocho la caja Petri para mejor
resultado del cultivo.
Tener cuidado con la caja Petri, limpiarlas bien y al momento de
lavarlas no dejarlas mucho tiempo en agua caliente.

Anexos
Agar nutritivo

Uso
Medio de cultivo utilizado para
propsitos generales, para el aislamiento
y recuento de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales.

Su uso est descripto en procedimientos

para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia
sanitaria.

Fundamento
Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la pluripeptona y el
extracto de carne constituyen la fuente de carbono, nitrgeno y aportan
nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico y el agar es el agente solidificante.

Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estril para

favorecer el crecimiento de microorganismos exigentes en sus
requerimientos nutricionales y permite una clara visualizacin de las
reacciones de hemlisis.

Contenido y composicin

Cdigo B0412284: 6 frascos x 50 ml.

Frmula

Pluripeptona......................................................................................5.0 g

Extracto de
carne.................................................................................................3.0 g

Cloruro de
sodio...................................................................................................8.0 g

Agar..................................................................................................15.0 g

Agua
purificada.......................................................................................1000 ml

pH final: 7.3 0.2

Agar Sabouraud Glucosado

Uso

Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de

hongos patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de
levaduras.

Fundamento

Medio de cultivo recomendado para el

aislamiento y desarrollo de hongos,
particularmente los asociados con
infecciones cutneas (piel, pelo). En el
medio de cultivo, la peptona, la
triptena y la glucosa son los
nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El alto contenido de
glucosa, la presencia de cloranfenicol
y el pH cido, inhiben el desarrollo
bacteriano y favorecen el crecimiento
de hongos y levaduras. El agar es el
agente solidificante. Puede ser
suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento.

Contenido y composicin

Cdigo B0215005: envase x 100 g.

Cdigo B0215006: envase x 500 g.

Frmula (en gramos por litro)

Peptona................................................................................................5.0.
Triptena...............................................................................................5.0.
Glucosa..............................................................................................40.0.
Cloranfenicol.......................................................................................0.05.
Agar....................................................................................................15.0.
pH final: 5.6 0.2

Agua Peptonada

Uso

Medio utilizado como diluyente y para el enriquecimiento bacteriano a partir de

alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento

Medio de enriquecimiento no selectivo, en el cual la peptona proporciona

nutrientes necesario para el desarrollo microbiano y el cloruro de sodio mantiene
el balance osmtico. Permite recuperar clulas de enterobacterias daadas por
procesos fisicoqumicos a los que ha sido sometido el alimento. Adems puede ser
utilizado como diluyente de muestras en reemplazo de solucin fisiolgica y como
medio base para la fermentacin de hidratos de carbono. En este ltimo caso se
debe adicionar el indicador de Andrade y el
hidrato de carbono en cuestin en
concentracin final al 1%.

Contenido y composicin

Cdigo B0215205: envase x 100 g

Cdigo B0215206: envase x 500 g

Frmula (en gramos por litro)

Peptona de carne...............................................................................10.0.
Cloruro de sodio.............................................................................................5.0.
pH final: 7.2 0.2

Agar EMB
Uso

Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento

selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.

Fundamento

El medio de cultivo combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de

Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de
enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. Es nutritivo por la
presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La diferenciacin
entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son
incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno;
stos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram
positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y
Citrobacter spp. Presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que
utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras
que las que no lo hacen son incoloras. Tambin, pueden crecer especies de
Candida y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en
profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus
spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras
que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas se observan como colonias de
color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de
acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de
metileno a sus membranas. En este medio se
obtiene adems, un buen desarrollo de especies de
Salmonella y Shigella.

Contenido y composicin

Cdigo B0210105: envase x 100 g.

Cdigo B0210106: envase x 500 g.

Frmula (en gramos por litro)

Peptona...............................................................................................10.0.
Lactosa............................................................................................................5.0.
Sacarosa.........................................................................................................5.0.
Fosfato dipotsico......................................................................................2.0.
Eosina............................................................................................................0.4.
Azul de metileno..........................................................................................0.065.
Agar...........................................................................................................13.5.
pH final: 7.2 0.2