UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

INFORME DE LABORATORIO N 10

RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES FECALES POR EL MTODO DE

FILTRO DE MEMBRANA

ARTETA LAYMITO, JHOSEP- 20162549 B

FERNANDEZ SORIANO, LUIS ANTHONNY 20161213 K

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTN MARTNEZ VILA

Lima, Per

2017
1. Introduccin

La presencia de Escherichia coli indica contaminacin fecal en agua, ya que este

microorganismo es habitante normal del tracto digestivo de animales de sangre caliente
y rara vez se encuentra en agua o suelo que no haya sufrido algn tipo d contaminacin
fecal, por ello se considera como indicador universal. Este microorganismo genera una
alerta a cualquier sistema de suministro de agua ya que su presencia por si sola puede
generar gastroenteritis y causar la muerte como el caso de la cepa E coli O157:H7 o
puede sugerir la presencia de otros microorganismos altamente patgenos como son la
Salmonella, Shigella, Klebsiella, Listeria etc.

La identificacin de Coliformes totales es ms difcil ya que estos pueden provenir de

suelo, y de superficies de agua dulce por lo que no siempre son intestinales. La
presencia de Coliformes sugiere fallas en la eficacia del tratamiento y la integridad del
sistema de distribucin. La identificacin de las cepas aisladas puede a veces dar una
indicacin sobre el origen.

La filtracin por membrana es el mecanismo mediante el cual se atrapan en la

superficie de la membrana microorganismos cuyo tamao es mayor que el tamao del
poro 0.45 um, esto gracias a que una bomba elctrica ejerce una presin diferencial
sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Los contaminantes de tamao menor
que el especfico del poro atraviesan la membrana o se quedan retenidos en su interior,
las bacterias quedan en la superficie de la membrana y luego est es llevada a un
medio de enriquecimiento selectivo, en el IDEAM se utiliza el medio de cultivo
Chromocult el cual promueve el crecimiento y la identificacin.

El medio de cultivo contiene el sutrato Salmon GAL 6 cloro 3 indol y D

galactopiranosido es un sustrato cromognico que es usado para la deteccin de la
enzima galactosidasa de colonias bacterianas en un ensayo colorimtrico; que da como
resultado el cambio de la colonia a un color rojo salmn. Esta reaccin se observa
cuando hay coliformes totales.

Para diferenciar la E.coli de los coliformes totales se hace por medio del sustrato
cromognico X-Glucorsido, que reacciona con la enzima glucoronidasa pero estas
tambin reaccionan con el Sustrato Salmn- GAL produciendo un color azul - violeta en
la colonia.

El mtodo es aplicable a aguas superficiales y residuales en el IDEAM en un rango de

1 a 200000 UFC/100mL. Segn el Decreto nmero 1575 de 2007 Por el cual se
expiden normas tcnicas de calidad de agua potable. ARTICULO 25. El agua para
consumo humano debe cumplir con los siguientes valores admisibles desde el punto de
vista microbiolgico. FILTRACION POR MEMBRANA: Coliformes totales. 0
UFC/100mL y E. coli, 0 UFC/100mL
 Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial - Repblica de Colombia

SUBDIRECCIN DE HIDROLOGIA GRUPO LABORATORIO DE CALIDAD AMBIENTAL

Cdigo: TP0314 Fecha: 30/08/2007 Versin: 03 Pgina: 3 de 17
COLIFORMES TOTALES Y E. COLI POR EL MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA EN AGAR CHROMOCULT

2. Definiciones

Coliformes Totales: Bacterias gram negativas, no esporoformadoras,

oxidasa negativa, con capacidad de crecimiento aerbico y
facultativamente anaerbico en presencia de sales biliares, que a
temperatura especificada de 35C +/- 2C causan fermentacin de lactosa
con produccin de gas. Poseen la enzima B-galactosidasa.

E. coli: Escherichia coli: Bacilo gram negativo, capaz de desarrollarse

en presencia de sales biliares u otros agentes (tensoactivos) que tengan
propiedades similares e inhibitorias del crecimiento y que son capaces de
fermentar la lactosa a temperaturas de 35C +/- 2C, con produccin de
cido, gas y aldehdo en un lapso de 18 a 48 horas. Oxidasa negativa, no
esporgena y reduce el nitrato a nitrito. Tambin es capaz de producir
indol a partir de triptofano a una temperatura de 44c +-05 en un tiempo
de 21+/- 3 horas. Poseen la enzima B-glucoronidasa, la cual es detectada
por medios cromgenos o fluorgenos.

Medio de Cultivo Selectivo: Medio que promueve el crecimiento de

microorganismos especficos, al tiempo que inhibe, total o parcialmente, el
crecimiento de otros microorganismos. Como es este medio de cultivo
UFC/100mL: Unidades formadoras de colonias por 100 mililitro
mL:mililitros.
LDM: Limite de Deteccin del Mtodo
Salmon-GAL: Sustrato cromognico que reacciona con la enzima
galactosidasa y las colonias toman color rojo salmn
X-glucoronide: Sustrato cromognico que reacciona con la
glucoronidasa y produce color azul en las colonias.

RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES FECALES POR EL MTODO

DE FILTRO DE MEMBRANA
 OBJETIVOS

Evaluar la presencia en aguas diversas de coliformes como indicadores de calidad higinico

sanitaria.

Evidenciar la contaminacin de origen fecal del agua mediante la determinacin de

coliformes fecales.

Manejo del mtodo del filtro de membrana para el recuento de bacterias indicadoras de

importancia higinico-sanitaria

Aplicar correctamente principios empricos acerca de intervalos o UFC en calidad higinico

sanitarios de aguas.

Determinar cuantitativamente microorganismos de la familia enterobacterias.

 FUNDAMENTO TERICO

PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS

Molcula de agua.

Accin capilar del agua y el mercurio.

El agua es una sustancia que qumicamente se formula como H2O; es decir, que una molcula

de agua se compone de dos tomos de hidrgeno enlazados covalentemente a un tomo de

oxgeno.

Fue Henry Cavendish quien descubri en 1781 que el agua es una sustancia compuesta y no un

elemento, como se pensaba desde la Antigedad. Los resultados de dicho descubrimiento fueron

desarrollados por Antoine Laurent de Lavoisier dando a conocer que el agua estaba formada por

oxgeno e hidrgeno. En 1804, el qumico francs Joseph Louis Gay-Lussac y el naturalista y

gegrafo alemn Alexander von Humboldt demostraron que el agua estaba formada por dos

volmenes de hidrgeno por cada volumen de oxgeno (H2O).

Las propiedades fisicoqumicas ms notables del agua son:

El agua es inspida e inodora en condiciones normales de presin y temperatura. El color del agua

vara segn su estado: como lquido, puede parecer incolora en pequeas cantidades, aunque en

el espectrgrafo se prueba que tiene un ligero tono azul verdoso. El hielo tambin tiende al azul y

en estado gaseoso (vapor de agua) es incolora.

El agua bloquea slo ligeramente la radiacin solar UV fuerte, permitiendo que las plantas

acuticas absorban su energa.

Ya que el oxgeno tiene una electronegatividad superior a la del hidrgeno, el agua es una

molcula polar. El oxgeno tiene una ligera carga negativa, mientras que los tomos de hidrgenos

tienen una carga ligeramente positiva del que resulta un fuerte momento dipolar elctrico. La
interaccin entre los diferentes dipolos elctricos de una molcula causa una atraccin en red que

explica el elevado ndice de tensin superficial del agua.

La fuerza de interaccin de la tensin superficial del agua es la fuerza de van der Waals

entre molculas de agua. La aparente elasticidad causada por la tensin superficial explica la

formacin de ondas capilares. A presin constante, el ndice de tensin superficial del agua

disminuye al aumentar su temperatura. Tambin tiene un alto valor adhesivo gracias a su

naturaleza polar.

La capilaridad se refiere a la tendencia del agua de moverse por un tubo estrecho en contra

de la fuerza de la gravedad. Esta propiedad es aprovechada por todas las plantas vasculares,

como los rboles.

Otra fuerza muy importante que refuerza la unin entre molculas de agua es el enlace por puente

de hidrgeno.

El punto de ebullicin del agua (y de cualquier otro lquido) est directamente relacionado

con la presin atmosfrica. Por ejemplo, en la cima del Everest, el agua hierve a unos 68 C,

mientras que al nivel del mar este valor sube hasta 100. Del mismo modo, el agua cercana a

fuentes geotrmicas puede alcanzar temperaturas de cientos de grados centgrados y seguir

siendo lquida.] Su temperatura crtica es de 373,85 C (647,14 K), su valor especfico de fusin es

de 0,334 kJ/g y su ndice especfico de vaporizacin es de 2,23kJ/g.[15]

El agua es un disolvente muy potente, al que se ha catalogado como el disolvente universal,

y afecta a muchos tipos de sustancias distintas. Las sustancias que se mezclan y se disuelven bien

en agua como las sales, azcares, cidos, lcalis, y algunos gases (como el oxgeno o el dixido

de carbono, mediante carbonacin) son llamadas hidrfilas, mientras que las que no combinan

bien con el agua como lpidos y grasas se denominan sustancias hidrfobas. Todos los

componentes principales de las clulas de protenas, ADN y polisacridos se disuelven en agua.

Puede formar un azetropo con muchos otros disolventes.

El agua es miscible con muchos lquidos, como el etanol, y en cualquier proporcin,

formando un lquido homogneo. Por otra parte, los aceites son inmiscibles con el agua, y forman
capas de variable densidad sobre la superficie del agua. Como cualquier gas, el vapor de agua es

miscible completamente con el aire.

El agua pura tiene una conductividad elctrica relativamente baja, pero ese valor se

incrementa significativamente con la disolucin de una pequea cantidad de material inico, como

el cloruro de sodio.

Clases de agua

Segn las sustancias que tengan disueltas, las aguas de la naturaleza pueden dividirse en

dos grandes grupos: aguas saladas y aguas dulces.

El agua salada se halla en ocanos y mares, donde se desarrolla una abundante poblacin animal

y vegetal, de la que se beneficia la humanidad. Esta agua tiene un contenido salino. En cada litro

de ella, hay hasta 35 gramos de sales disueltas. La mayor parte de estas sales, es Cloruro Sdico o

sal comn. El agua salada no sirve para el consumo humano ni para regados, a no ser que se

trate en una Planta desalinizadora. Este proceso utiliza el principio de la evaporacin. Pero el

costo por litro de agua tratada, es muy alto. Por eso se reserva para casos muy especiales.

Las aguas dulces son las que se hallan normalmente en los continentes (ros, lagos, pozos,

etc.) y las procedentes de las lluvias. Nunca son aguas qumicamente puras. Estas no existen en la

naturaleza. Se presentan siempre con sustancias disueltas como sales, materias orgnicas e

incluso organismos microscpicos. Pero las cantidades son muy pequeas. Del orden de

miligramos por litro. A veces pueden presentarse turbias. Ello es debido a que en su movimiento

han arrastrado tierras, arenillas, etc. Las aguas dulces pueden tambin contener sustancias

derivadas de las actividades del hombre (domsticas, agrcolas o industriales, cuyos residuos

acaban mezclndose con las aguas.

No todas las aguas dulces sirven para el consumo humano. Cuando lo son se les llama

potables. Las aguas potables deben cumplir unos requisitos en cuanto a las sustancias que

contienen. Eso se determina mediante anlisis qumicos y bacteriolgicos. Hay aguas dulces no

potables que mediante tratamiento se las puede convertir en potables. Se lleva a cabo en las

plantas de depuracin. En ellas se somete al agua procesos de sedimentacin y filtrado. Tambin

se aaden pequeas cantidades de cloro u ozono, que eliminan los grmenes.

 Antes de beber un agua hay que tener la certeza de que es potable. Si dudas, pregntaselo

a tus padres o a alguna persona mayor. Un agua no potable puede enfermar a quien la bebe. En la

historia ha habido importantes epidemias. El agua que llega a tu casa, salvo que avisen de los

contrarios, es agua potable. Las aguas estancadas pueden no ser potables. A veces, algunas

aguas de ros y fuentes tampoco lo son, por estar contaminadas.

Bacterias Indicadoras de Contaminacin

Las condiciones bacteriolgicas del agua son fundamentales desde el punto de vista

sanitario. La norma bacteriolgica de calidad establece que el agua debe estar exenta de

patgenos de origen entrico y parasitario intestinal que son los responsables de transmitir

enfermedades como salmonelosis, shigelosis, amebiasis, etc.

Los microorganismos indicadores de contaminacin deben cumplir los siguientes requisitos: fciles

de aislar y crecer en el laboratorio; ser relativamente inocuos para el hombre y animales; y

presencia en agua relacionada, cualitativamente y cuantitativamente con la de otros

microorganismos patgenos de aislamiento ms difcil. Tres tipos de bacterias califican a tal fin:

Coliformes fecales: indican contaminacin fecal.

Aerobias mesfilas: determinan efectividad del tratamiento de aguas.

Pseudomonas: sealan deterioro en la calidad del agua o una recontaminacin.

Desde el punto de vista bacteriolgico, para definir la potabilidad del agua, es preciso investigar

bacterias aerobias mesfilas y, coliformes totales y fecales. La gran sensibilidad de las bacterias

aerobias mesfilas a los agentes de los agentes de cloracin, las ubica como indicadoras de la

eficacia del tratamiento de potabilizacin del agua.

Las bacterias coliformes habitan el tracto intestinal de mamferos y aves, y se caracterizan

por su capacidad de fermentar lactosa a 35C. Los gneros que componeneste grupo son

Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter y Edwardsiella. Todas pueden existir

como saprofitas independientemente, o como microorganismos intestinales, excepto el gnero

Escherichia cuyo origen es slo fecal.

Esto ha llevado a distinguir entre coliformes totales (grupo que incluye a todos los coliformes de

cualquier origen) y coliformes fecales (trmino que designa a los coliformes de origen

exclusivamente intestinal) con capacidad de fermentar lactosa tambin a 44,5C. La existencia de

una contaminacin microbiolgica de origen fecal se restringe a la presencia de coliformes fecales,

mientras que la presencia de coliformes totales que desarrollan a 35C, slo indica existencia de

contaminacin, sin asegurar su origen. Los enterococos fecales cuyo desarrollo ocurre a 35C se

usan como indicadores complementarios de contaminacin fecal.

La validez de todo examen bacteriolgico se apoya en una apropiada toma de muestra (recipiente

estril de boca ancha y metodologa precisa), y en las adecuadas condiciones de transporte desde

el lugar de la fuente de agua hacia el laboratorio (refrigeracin, tiempo).

El sistema de conservacin de la muestra debe ser confiable, y la misma analizada

inmediatamente o al cabo de un corto perodo entre extraccin y anlisis. El anlisis cuantitativo de

bacterias indicadoras de contaminacin en una muestra de agua puede realizarse por dos

metodologas diferentes:

Recuento directo de microorganismos cultivables por siembra de la muestra sobre o en un

medio de cultivo agarizado.

Recuento indirecto (basado en clculos estadsticos) despus de sembrar diluciones

seriadas de la muestra en medios de cultivos lquidos especficos. Se considera, al cabo de

una incubacin adecuada, los nmeros de cultivos positivos y negativos. Esta

metodologa se denomina Tcnica de los Tubos Mltiples y los resultados se expresan

como nmero ms probable (NMP) de microorganismos.

Adems de otros mtodos, se puede recurrir a aquellos en los que se aplica biologa molecular

como por ejemplo, la tcnica de hibridacin in situ por fluorescencia (FISH) utilizando sondas

marcadas en base a secuencia nucleotdica del gen 16S.

 En este captulo slo se describir el primer mtodo en el cual la muestra se concentra por

filtracin sobre membrana, denominada Tcnica de la Membrana Filtrante. En ella, se procede a

filtrar un volumen determinado de muestra (normalmente 100 mL) a travs de membranas de

steres de celulosa generalmente con dimetro de poros de 0,45 m y en algunos casos de 0,22

m. Posteriormente, la membrana se deposita sobre un medio de cultivo selectivo y bajo

condiciones favorables (temperatura y tiempo de incubacin) y sobre la membrana desarrollan

colonias aisladas con aspectos caractersticos que permiten la identificacin y el recuento.

Conociendo el volumen de muestra filtrada es posible determinar el nmero de UFC por unidad de

volumen. La obtencin de resultados confiables requiere un intercambio de nutrientes a travs de

los poros de la membrana, por ello se debe evitar la filtracin de aguas con alto contenido de

material en suspensin que pueden obstruir las membranas. Adems, el nmero de colonias

desarrolladas sobre la membrana debe ser inferior a un determinado valor (variable segn los

microorganismos y la composicin del medio que condiciona el tamao de las colonias)

generalmente comprendido entre 80 y 100. A valores superiores, la proximidad de las colonias,

puede conducir a resultados inexactos. Los medios de cultivos usados, las temperaturas y tiempos

de incubacin, y el color de las colonias tpicas de bacterias indicadoras de contaminacin se

detallan en la Tabla 2.

La importancia de conocer las especies presentes en los sistemas acuosos naturales y el

comportamiento en su ambiente, radica en la posibilidad de desarrollar nuevas tecnologas que

logren su eliminacin y de esta manera controlar enfermedades de origen hdrico.

CRITERIOS DE CALIDAD PARA AGUAS DE CONSUMO HUMANO Y USO DOMESTICO

Se entiende por agua para consumo humano y uso domstico aquella que se emplea en

actividades como:

a) Bebidas y preparacin de alimentos para consumo.

 b) Satisfaccin de necesidades domsticas, individuales o colectivas, tales como higiene

personal y limpieza de elementos, materiales o utensilios.

c) Fabricacin o procesamiento de alimentos en general.

Esta norma se aplica durante la captacin de la misma y se refiere a las aguas para consumo

humano y uso domstico, que nicamente requieran de tratamiento convencional, debern cumplir

con los siguientes criterios. Ver la tabla 1.

DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES

Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en muestras

lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el mtodo de las diluciones en

serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos slidos o lquidos, como el

recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) o la estimacin por el mtodo del

Nmero Ms Probable (NMP).

El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo

ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero de

microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que tambin

puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos,

sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es aplicable para estimar el

nmero de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como

anaerobias.

Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa

a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales.

Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por

Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi

exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la

presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad

de soportar temperaturas ms elevadas; soportan la presencia de bilis en medios de cultivo, por

cual pueden ser sembrados en caldo VRBA, quien actua como medio selectivo; el cido
producido por la fermentacin de la lactosa, ocasiona el vire del indicador rojo neutro y la

precipitacin de las sales biliares por lo que las colonias son color rojo oscuro y generalmente

estn rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas, de color rojo claro o rosa. Estas

caractersticas ayudan en la diferenciacin de Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los

Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida

por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho

tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta

como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia

indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de

enfermedades.

COLIFORMES TOTALES

La especie de coliformes designa a un grupo de bacterias de crecimiento aerobico que tienen

ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de

contaminacin del agua y los alimentos.

Esta conformado por los siguientes generos: klebsiella, enterobacter y citrobacter. El hbitat de los

coliformes es generalmente el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es

decir, homeotermos, pero tambin ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en

suelos, semillas y vegetales. Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por

las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse que la mayora de los coliformes

que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, existen muchos coliformes de

vida libre.

COLIFORMES FECALES

Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo coliforme. Son definidas como

bacilos gram-negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas a

44.5 C +/- 0.2 C dentro de las 24 +/- 2 horas. La mayor especie en el grupo de coliforme fecal es

el Escherichia coli. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en

la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo y en el tracto intestinal de los humanos y
de los animales motivo por el cual son utilizados como indicadores de contaminacin de agua y de

alimentos.

MECANISMOS DE TRANSMICION

VIA DE ELIMINACION MECANISMO DE ENFERMEDAD O AGENTE

TRANSMISION INFECCIOSO

- Heces- mano boca Hepatitis A

Digestiva - Heces- agua alimento- Colera

boca Salmonelosis

Shigella

Fiebre tifoidea

A) MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA

Para la deteccin de coliformes totales y coliformes fecales (E. coli) es utilizado el mtodo de

filtracin por membrana, el cual es un mtodo altamente reproducible, puede usarse para analizar

volmenes de muestra relativamente grandes y se obtienen resultados en menor tiempo que con el

NMP. Sin embargo, no se puede aplicarse a cualquier tipo de muestra y tiene sus limitaciones.

Tambin se encuentra entre los mtodos estndares. A los efectos de la filtracin por membrana

debe replantearse la definicin de coliformes: bastones Gram. (-), aerobios o anaerobios

facultativos, que dan colonias oscuras con brillo metlico en medio endo, luego de 24 horas de

incubacin a 35c +/- 2c. La determinacin de coliformes fecales por filtracin puede hacerse a

partir de las colonias desarrolladas en endo o directamente incubando la membrana en medio m-

FC e incubando a 44.5c.

B) Filtracin a travs de membrana

El nmero de coliformes totales presentes en el agua se determina mediante la filtracin de

volmenes especficos de la muestra a travs de filtros de membrana. Por lo general, estn

compuestos de steres de celulosa, tpicamente con poros de 0,45 mm de dimetro que retienen

los coliformes totales y otras clases de bacterias presentes en la muestra. Despus se incuban las

membranas vueltas hacia arriba en un medio selectivo. En la prctica, la tcnica de filtracin de

membrana ofrece resultados comparables a los que se obtienen con el mtodo de tubos mltiples.

Una de las ventajas del mtodo de filtracin a travs de membrana es la prontitud con que pueden

obtenerse los resultados y, en consecuencia, se pueden llevar a cabo rpidamente acciones

correctivas y operar en la planta de agua de nuevo en forma normal. Esta tcnica puede aplicarse

en el anlisis de casi todos los tipos de agua, tambin se utiliza en el anlisis de leche y otros

alimentos lquidos.

C. Aparatos y tcnicas de filtracin (la que se usar)

El aparato de filtracin consiste de un

disco incrustado (portafiltros) sostenido

por soporte de goma o caucho y que se

ajusta a una base donde puede fijarse

un embudo graduado o una rampa

mltiple de filtracin.

D. Volumen de agua analizada

El volumen de muestra a filtrar es generalmente de 100 ml, excepto para aguas envasadas, en las

que se recomienda analizar muestras de 250 ml. Sin embargo, en aguas superficiales y en general

en aguas naturales sin tratar, el nmero de bacterias en 100 ml puede variar desde pocas decenas
hasta cientos de millares. La siguiente tabla proporciona unos datos que pueden servir de

orientacin:

Tipos de agua Coliformes totales

Potable de consumo pblico 100 ml

Envasadas 250 ml

Manantiales 15; 60; 100 ml

Lagos, depsitos 4; 15; 60; 100 ml

Acometidas 0,08; 0,15; 0,5; 1,4 ml

De playas 0,08; 0,15; 0,5; 1,4 ml

De ros 0,003; 0,01; 0,02; 0,08 ml

Residuales cloradas 0,003; 0,01; 0,02; 0,08 ml

Residuales sin tratar 0,0001; 0,0003; 0,001; 0,003; 0,01 ml

Las muestras comprendidas entre 30 ml y 250 ml se filtran directamente aadindolas al embudo

de filtracin.

Para muestras entre 1 y 30 ml, se aaden primero al embudo 20-30 ml de solucin tamponada

estril y, encima de ella, se vierte la muestra a filtrar.

Para todas las muestras inferiores a 1 ml, es preciso realizar previamente diluciones con solucin

tamponada estril.

VENTAJAS:

a) Los resultados se obtienen ms rpido (24hrs).

b) Permite examinar grandes volmenes de agua.

c) Recuento ms exacto y directo (viables y muertas, se cuentan todas)

 DESVENTAJAS

a) Por elevada carga microbiana no coliforme o bajo nmero de coliformes, puede haber

una inhibicin de estos coliformes.

b) Por elevada turbiedad de la muestra, puede impedir otros organismos o agentes

abiticos que interfieran en el crecimiento de coliformes.

c) El agua puede contener sustancias txicas, la cual puede ser absorbida por la membrana, el

cual si se hace la siembra, tambin el medio ser ms propenso a ser txico.

RECUENTO PARA ESTE PROCEDIMIENTO

Debido a que es difcil saber si una sola bacteria dio origen a una colonia, se expresa

usualmente el nmero de clulas viables como unidades formadoras de colonias (UFC).

Como se trata coliformes el laboratorio entre 20 80 para totales y 20-60 para fecales

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

METODOLOGA
Instrumentos y materiales:

Placas Petri de 60x15mm esterilizadas

Pipetas esterilizadas

Agar m-FC (con cido roslico) preparado en Matraz Erlenmeyer

Agar Endo (preparado con etanol 96%) Matraz Erlenmeyer

Pinzas y tijeras.

Hornilla

Pipetas de 10ml y bombillas

Mechero de alcohol

Alcohol

Agua peptonada

Frasco de vidrio con 300 ml de agua peptonada

Frasco de vidrio esterilizadas de 1 litro para las muestras

Muestra de agua de quebrada.

Muestra de agua subterrnea.

Parafilm, globos, guantes quirrgicos.

Equipos:

Incubadora.

Refrigeradora

Bao Mara

Contador de colonias

Equipo de filtracin.

Membrana de filtrado 47-50mm 0,45m de poro

Embudo esterilizado

Equipo de bomba de filtrado (bomba de vaco)

Soporte de filtro de membrana (multifiltracin, debe estar esterilizado)

Rampa en acero inoxidable

1 Frasco para vaco (kitasato) (1 litro )

Junta de goma (tapn) Guko para matraces Kitasatos

50 cm de tubo flexible o manguera.

A) Filtracin por membrana para recuento de coliformes totales y fecales:

Procedimiento experimental

Se trabaj con muestras de:

a. Agua de una quebrada

b. Agua subterrnea

1. Plaquear el agar Endo en 6 placas pequeas estriles de 60 x15mm igualmente se

plaquea el agar m-FC que contiene cido roslico (compuesto de color rojizo) en 3

placas pequeas estriles de 5 a 6 ml que es lo que cabe en la plaquita.

2. Se arma el equipo de filtracin. Se conecta el kitasato con la manguera a la fuente de

vaco que servir de trampa para que el agua no llegue directamente a la bomba y la

malogre.

3. La otra manguera que sale del kitasato se conecta al soporte.

4. Prender el mechero para condiciones de esterilidad.

5. Se coloca en el equipo de multifiltracin el soporte poroso y embudo de filtracin

6. Con la pinza esterilizada con alcohol y flameada al mechero, que no est muy caliente

se toma la membrana y se coloca en la base porosa de membrana y luego se coloca el

embudo de filtracin de plstico autoclavable.

7. Por el embudo se agrega 100 ml de la muestra de agua (habr una marca de volumen

en el embudo), esta muestra habr sido previamente homogenizada agitando 30 veces

para homogenizarla.

8. Se enciende el motor y se deja que filtre todo el agua. Cuando toda la muestra ya paso

por el filtro se apaga.

9. Con la pinza esterilizada nuevamente, se saca la membrana y con cuidado se coloca en

la placa, encima del agar solidificado, con mucha serenidad y manteniendo cerca a la

flama, para no errar o malograr en la metodologa y las condiciones asptica y de

esterilizacin.

10. El mismo procedimiento se hace pero haciendo pasar 10ml y 1ml

11. Hacer el filtrado de 100 ml, eso se hace 2 veces, ello se realiza en los intermedios a los

cambios de tipo de muestra, el cual ingresa a tallar el enjuagado con agua peptonada

del equipo antes del cambioluego en vez de 100ml de hace pasar 10ml, 2 veces tambin

y luego se hace pasar 1 ml. 2 veces tambin

12. Pero ese 1ml y 10ml se hace pasar combinado con agua peptonada con unos 100ml o

ms aproximadamente

B) RECUENTO DE COLIFORMES EN PLACA: Tapa abajo llevamos en conjuntos las 6

placas de medio Endo a la incubadora y los de medio m-FC, al bao Mara, para ello

se cubren con Parafilm, globo, y solamente en un guante quirrgico, creando as

condiciones de impermeabilidad, y para que no se queden flotando en bao Mara,

se les pone encima una rejilla y sobre ella envases con agua para que no reflote la

rejilla. Controlar una puesta de aprox. 24 horas a una temperatura oscilante de 35

37C. Procurar haber hecho los rotulados respectivos y acertados

1. Transcurrido el tiempo, describir observaciones y realizar un conteo rpido de

cada placa Petri, marcando y anotando posibles cantidades en las placas o en

apuntes propios.
 RESULTADOS Y OBSERVACIONES

RESULTADOS LABORATORIO N 11

Observaciones generales:

Conteo para Coliformes totales, medio Endo de 20 a 80colonias. Deben ser contabilizadas

las rojas con brillo metlico verdoso y adems deben ser oscuras.

Conteo para Coliformes fecales, medio m-FC DE 20 a 60 colonias

La tabla adjunta solo es de Coliformes totales de medio ENDO, pues para el medio m-FC,

no hubo ninguna clase de crecimiento, ms uno que otro que fue afectada por el agua

circundante del bao Mara hasta dentro de las placas.

Parea coliformes totales, se cuentan las de brillo metlico y las ms opacas o ennegrecidas

Para el tipo de muestra de 1ml en la tabla, tampoco no hubo clase alguna de crecimiento.

La manera de obtenerlo es:

N DE COLONIAS DE COLIFORME CONTADAS X 100 : Unidades: UFC / (100,10,1) ml

VOLUMEN DE MUESTRA ORIGINAL (100,10 o 1 ml)

MUESTRA TIPO DE CLCULO RESULTADO

MUESTRA

AGUA 100ml 132 UFC/100ml

SUBTERRNEA

10ml 320 UFC/10ml

AGUA DE 100ml 204 UFC/100ml

 QUEBRADA 10ml 410 UFC/10 ml

Tomando concentraciones consecutivas:

Sale:

Coliformes Totales para agua subterrnea: 132 UFC/100ml.

Coliformes Totales para agua de quebrada: 204 UFC/100ml

DISCUSIN

1. Ningun crecimiento para medio m-FC, por lo que nos lleva a considerar un agua para

consumo humano o entrada de agua a la plaquita a pesar del acondicionamiento

impermeable, pudo haber alterado los resultados.

2. Las posibilidades de contaminacin por cualquier factor, son muy altas, lo que dificulta el

trabajo con organismos y muestras delicadas, al tratarse del recuento en placa.

3. Desinfeccin constante de las pinzas, influir si se realiza de manera correcta en la

verificacin de resultados.

4. Ninguno de los medios para plaquear son autoclavables, por los tipos de compuestos

voltiles que conforman su preparacin. Ventajas y desventajas de los procedimientos de

purificacin. Es bueno moverse a perfeccionar las metodologas y conocer sus fundamentos

tericos.
 CONCLUSIONES

1. Cuantificado el promedio de 2008, hacia encontrar otra vez ms figuretti a famosos y ellos:

2. Coliformes Totales para agua subterrnea: 132 UFC/100ml.

3. Coliformes Totales para agua de quebrada: 204 UFC/100ml

4. La importancia del proceso de control de calidad del agua potable es vital, ya que a partir de

los resultados del control se conocen las caractersticas del agua procesada y suministrada

a la poblacin y se establecen las acciones necesarias para mejorar la calidad de este

elemento.

5. La ausencia de fecales en cada recuento, hace que el agua sea apta para consumo

humano, pues son estas las que no deben haber en este tipo de alimento.

6. Uso de formas fsicas de conteo de colonias, gran utilidad de la bomba de vaco en los

laboratorio, es de gran importancia su manejo y forma de aprovechar su aporte a las

investigaciones y metodologas

RECOMENDACIONES

1) Observar los detalles oral y procedimentalmente de cada mtodo explicado por el profesor.

Prestar debida atencin en los nuevos procedimientos en especial para este laboratorio,

como es filtracin de membrana

1) Para evitar infecciones, contaminacin y resultados no deseados, mantener prendido el

mechero de ron y los accesorios del equipo de filtracin no deben tocar superficies

diferentes al mismo sistema, asegurando condiciones asptica si se usan guantes

 quirrgicos, equipos y condiciones de laboratorio con tecnologa de punta, este ultimo

aun en eterno proyecto.

2) En los plaqueos y preparacin de las placas Petri, evitar jugar o hablar, manteniendo el

3) No calentar mucho las pinzas con las que se coger el filtro de membrana estril, pues y

estas pueden llegar a quemarse producir resultados indeseados.

4) Usar una pipeta diferente para cada dilucin o componente.

5) Las pipetas deben ser estriles y se debe tener cuidado de no confundir una con otra al

momento de las diluciones.

BIBLIOGRAFA

BROCK-MADIGAN Microbiologa Prentice Hall Latinoamericana 1 Ed 1991

JAWETZ, MENICK Y ADELBERG Microbiologa Medica MC Graw-Hill

INTERAMERICANA EDITORES, S.A.Mxico 25ava.Ed 2001

LLOP, VALDEZ- DAPENA, ZUAZO Microbiologa Y parasitologa Mdicas Editorial de

Ciencias Mdicas, TOMO I La Habana- Cuba 2001

EXTRA:
MATERIALES DE LABORATORIO: http://www.labbox.com/es/productos/
 Anexos

TABLA 1

LIMITES MAXIMOS PERMISIBLES PARA AGUA DE CONSUMO HUMANO Y USO DOMESTICO.

TABLA 2
GRAFICOS: (Representativos)

Placas con sus respectivos filtros Acondicionando impermea bilidad a los de medio m-FC

Ningn coliforme fecal en mxima comcentracin

Claros brotes de brillo metlico y oscuros, en 100ml de agua subterrnea