Karina Medina Hernndez

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MTODO DESCRIPCIN REACCIN

Mtodo de Kjeldahl En general, el procedimiento El mtodo de Kjeldahl consta
de referencia Kjeldahl de las siguientes etapas:
determina la materia
nitrogenada total, que incluye
tanto las no protenas como Digestin en Destilar con
las protenas verdaderas.En la exceso N total
mezcla de digestin se incluye (NH4)2SO4/H2SO4 NaOH en exc
sulfato sdico para aumentar NH3/cido brico
el punto de ebullicin y un
catalizador para acelerar la
reaccin, tal como sulfato de
cobre. El amoniaco en el
destilado se retiene o bien por
un cido normalizado y se
valora por retroceso, o en
cido brico y valora
directamente.
Mtodo de Biuret Comprende un ensayo
calorimtrico de un paso
donde se cuantifica la
formacin de un complejo
estable entre protenas y cobre
(II). El complejo presenta un
color violeta caracterstico, que
se puede observar a 310nm o
540-560nm, el cual se da por
la coordinacin de un tomo
de cobre con cuatro tomos de
nitrgeno. El complejo se basa
en la desprotonacin de los
grupos amida para formar el
enlace con el cobre (II) o por el
establecimiento de un enlace
coordinado entre el metal y los
pares de electrones libres de
los tomos de oxigeno y de
nitrgeno del pptido. Despus
de la adicin del reactivo de
cobre se requiere de tiempo
para desarrollar una coloracin
de Biuret
Mtodo "dye-binding" Se caracteriza por la formacin
de un cogulo de protena,
coloreado e insoluble producto
de la reaccin de la protena
con una solucin coloreada de
cido sulfnico a pH 2. El
anin coloreado se une por
asociaciones electrostticas a
los sitios bsicos de la
protena, por ejemplo a los
grupos M-amino de lisina,
guanidina de arginina, imidazol
de histidina y aminos
terminales. Adems se
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producen atracciones
intermoleculares por
interacciones hidrofbicas
entre la protena y la mitad no
inica del anin y entre el
anin unido a protena y la
mitad no inica del anin en
solucin.

El cogulo se separa por

filtracin y se mide
colorimtricamente el exceso
de tintura en el sobrenadante.
Esta medida se relaciona con
el contenido de protena.

Mtodo de destilacin La hidrlisis de las amidas en

alcalina medio alcalino fuerte da origen
a amonaco el cual es
destilado y su valor es
relacionado con el contenido
de protena.
Mtodo de Lowry Se basa en la reduccin del 3H2O x P2O5 x 13WO3 x 5MoO3
reactivo de Folin-Ciocalteau x 10H2O + Complejo protena-
que es una mezcla de cidos Cu++ Especies
fosfomolibdico y fosfotungstico
por la oxidacin de tirosina, reducidas de coloracin azul
triptofano, cisterna, cistina de
las cadenas polipeptdicas. El
proceso de oxido-reduccin se
acompaa de la formacin de
un color azul caracterstico.
Quelatos de cobre en la
estructura del pptido facilitan
la transferencia de electrones
de los grupos funcionales
amino al cromgeno cido.
Mtodo de titulacin con A la muestra neutralizada con
formol lcali se le agrega
formaldehido en exceso el cual
reacciona con cada grupo
bsico de lisina y arginina. El
exceso de formaldehido se
neutraliza con un exceso de
lcali estndar el cual se titula,
y se relaciona con el contenido
de protena.

Espectroscopa infrarroja Se aprovecha la absorcin del

grupo amida del enlace
peptdico a 6,46 Tm.
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Espectrofotometra Mide protenas en solucin con

ultravioleta absorcin mxima a 280 nm
atribuible a los anillos
aromticos de tirosina y
triptfano y entre 180-220nm.
Unin de colorantes Controlando el pH y la fuerza
inica del medio los grupos
funcionales cidos y bsicos
de las protenas pueden
interactuar con grupos
orgnicos de carga opuesta. Al
realizarse la unin se presenta
coloracin o bien un cambio de
esta. Comnmente se usan
colorantes sulfonados los
cuales reaccionan a pH cido
con el grupo -amino de la
lisina y el grupo guanidina de
la arginina, el imidasol de la
histidina y un numero limitado
de -amino terminales.
Mtodo turbidimtrico La turbidez producida cuando
una protena se mezcla con
alguno de los precipitantes
comunes para protenas en
bajas concentraciones, esto se
puede utilizar como un ndice
de la concentracin de
protenas.
Espectroscopa Irradiacin del material con
electrnica rayos X y cuantificacin de los
fotoelectrones liberados
caractersticos al tomo de N
del grupo amida de la protena.
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Mtodos para identificar lpidos

Mtodo Descripcin
Mtodo de Soxhlet Es una extraccin semicontinua con disolvente
donde una cantidad de disolvente rodea la
muestra y se calienta a ebullicin, una vez que
dentro del Soxhlet, el lquido condensado llega
a cierto nivel es sifoneado de regreso al matraz
de ebullicin, la grasa se mide por prdida de
peso de la muestra o por cantidad de muestra
removida

Mtodo de Goldfish Es una extraccin continua por disolvente

donde a la muestra se le hace pasar vapor de
disolvente y la grasa se cuantifica por prdida
de peso en la muestra o por grasa removida.

Mtodo por lotes (en batch)
Se basa en una separacin de fases entre dos
disolventes no miscibles. Se sabe que la
sustancia de inters es soluble en uno de ellos.
Posteriormente se separa la fase que se sabe
contiene la sustancia y se desecha la otra, se
concentra y se obtiene la sustancia.

Mtodo de Bligh-Dyer El mtodo se basa en la homogenizacin de la

muestra con cloroformo, metanol y agua en
proporciones tales que se forme una sola fase
miscible con el agua de la muestra.

Mtodo de Rse-Gottlieb De acuerdo a este mtodo, la separacin de la

grasa es lograda por amoniaco y etanol con un
posterior efecto de deshidratacin sobre los
fosfolpidos. La grasa es disuelta en ter recin
destilado y se aade algo de petrleo de tal
suerte que se separen algunos compuestos no
lipdicos que se puedan encontrar en la fase
etrea.

Mtodo de Gerber Con estos mtodos volumtricos la muestra se

sita en un butirmetro y se descompone
utilizando cidos o lcalis de manera que la
grasa es liberada, esta se separa por mtodos
mecnicos (centrifuga) y se colecta en el cuello
calibrado.
Mtodo de Mojonnier La grasa es extrada con una mezcla de ter
etlico y ter de petrleo en un matraz de
Mojonnier, la grasa extrada se pone a peso
constante y es expresada en porcentaje de
grasa por peso.
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Mtodos para identificar carbohidratos
Mtodo de fenol-sulfrico
ANALISIS DE POLISACARIDOS
Extraccin selectiva de almidn
Cloruro de calcio
cido perclrico
etanol y cido perclrico
Con dimetil sulfxido (DMSO)
Los carbohidratos sern destruidos por
calor y por cido, son particularmente
sensible a cidos fuertes y altas
temperaturas. Bajo estas condiciones una
serie de reacciones complejas toman lugar
empezando con una deshidratacin simple.
Los dos tipos de molculas que se pueden
encontrar en el almidn difieren
apreciablemente en sus solubilidades en
disolventes acuosos.
La extraccin con cloruro de calcio ha sido
utilizada ampliamente en el anlisis de
almidones en cereales por mtodos
polarimetritos, dando resultados
reproducibles. Otros polisacridos son
solubles en este reactivo y es necesario
tener cuidado en la aplicacin de este
mtodo a otros tipos de alimentos.
El almidn se extrae de una muestra seca
con cido perclrico y se precipita como
complejo yodurado el cual, se descompone
antes de que se hidrolice el almidn.
El mtodo se diseo originalmente para
cereales y envuelve la extraccin de
azucares libres con etanol acuoso y la
extraccin del almidn con cido perclrico
del residuo, con mtodos como el de
antrona.
El almidn se dispersa en DMSO y luego
se convierte cuantitativamente en D-
glucosa con -amilasa termoestable,
llevando a cabo la polimerizacin y de
polimerizacin del almidn. Una
glucoamilasa completa la accin de la -
amilasa para determinar la D-glucosa
usando un reactivo contiene una parte
incolora que se oxida a un compuesto
colorido por medio del peroxido de
hidrogeno proveniente de la glucosa.
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