MEDICION DE LA TASA DE CONSUMO DE OXIGENO

Respirmetros a presin constante

El principio de funcionamiento de los respirmetros a presin constante se basa

en la fijacin en medio acuoso alcalino del CO2 liberado por los organismos, y la
consecuente disminucin del volumen gaseoso de la cmara donde aquel se encuentra,
debido al consumo del O2. Estos respirmetros funcionan a presin constante, pues
continuamente se nivela la presin interna con la presin externa, a travs de un lquido
cuyo desplazamiento sobre una pipeta graduada, de disposicin horizontal, equivale al
volumen de oxgeno consumido. El dispositivo se sumerge en un bao de agua a fin de
mantener estable la temperatura. La Figura 1 esquematiza el instrumental mencionado:

Figura 1: Respirmetro de presin constante (sistema cerrado). Ref: Dezi, R.E. et al.,
1987. Physis, 45A: 47-60.

Respirmetros a volmen constante

Un mtodo tradicionalmente utilizado para la medicin de la tasa de consumo de

oxgeno a volmen constante es el mtodo de Warburg, que basicamente consiste en un
recipiente con la muestra biolgica, unido a un manmetro (Figura 2). Durante la
medicin, las conexiones externas del recipiente mencionado (reaction-vessel en la
Figura) permanecen cerradas, registrndose el cambio de presin en el manmetro (por
la diferencia en la altura del lquido manomtrico en ambas ramas del manmetro). Una
versin an utilizada de este mtodo esta dado por el sistema de respirmetros mltiples
ideado por Gilson (Fig. 3), en el cul la diferencia de presin producida durante la
medicin se mide sobre una perilla micromtrica luego de restituir la altura de la
columna de lquido manomtrico a su valor original. En todos los casos el CO 2 es fijado
en medio alcalino (hidrxido de sodio concentrado, o similar).

1
Figura 2: Respirmetro a volmen constante de Warburg.. Ref: Dunn, A., Arditti, J.,
1969. Experimental Animal Physiology. Holt, Rinehart and Winston, 312 pp.

Figura 3: Sistema de respirmetros mltiples de Gilson (volumen constante). Ref. idem

Fig. 2.

2
 Son muy utilizados actualmente los respirmetros a volumen constante que
incluyen electrodos sensibles al oxgeno, los cuales registran el descenso de la
concentracin de O2 disuelto en una solucin acuosa (inicialmente saturada de O 2)
contenida en una cmara hermtica, en presencia de un tejido (Figura 4) o bien el
descenso de la concentracin de O2 del aire contenido en una cmara hermtica en
presencia de un organismo (con absorcin del CO2 por la cal sodada). A fin de controlar
la temperatura, las cmaras de medicin se sumergen en un bao termostatizado con
agitacin continua. La toma de datos de los respirmetros se efecta por lectura del
monitor del medidor (caso de la Figura 4), o bien mediante una placa adquisidora de
datos conectada a una computadora.

1 2

3 0.00
5

6
7

Figura 4: Respirmetro a volumen constante equipado con electrodo de oxgeno. 1)

electrodo sensible al O2, 2) termmetro, 3) cnula, 4) cmara hermtica con buzo
revestido de tefln, 5) bao trmico, 6) registrador, 7) agitador magntico.

Sistema de respirmetro a volumen constante, con electrodo de O2 y adquisicin de

datos por computadora. Se resume a continuacin un protocolo bsico para medicin de
la tasa de consumo de O2 en un invertebrado (cangrejo), a modo de ejemplo:

Armado del dispositivo: Se coloca al cangrejo en la cmara de medicin con un fondo

de agua salina, a fin de estandarizar la presin de vapor de agua y la disponibilidad de
agua para la recirculacin branquial. Dentro de cada respirmetro se coloca un electrodo
de oxgeno y se sella hermticamente el recipiente antes de comenzar cada medicin.

La diferencia de potencial (en mV), generada por electrodo, es luego amplificada

y acondicionada, para finalmente dirigirse a un conversor analgico-digital, conectado a
una computadora. El software especialmente provisto por los diseadores del
instrumental permite manejar la toma de datos y su almacenamiento.

Calibracin: como en todo instrumento de medicin, el paso de calibracin es

imprescindible para asociar la unidad primaria de transduccin (mV, en este caso), con
la deseada (concentracin de oxgeno en el respirmetro, medida en partes por milln:
ppm). Para esto, previamente a las mediciones se introduce el electrodo en una solucin
saturada de sulfito de sodio, que mantiene en cero la tensin de O2. Mediante una rutina

3
del programa, se asigna el valor 0 ppm al valor de voltaje que se lee con el electrodo
sumergido. El segundo punto de calibracin es el de saturacin, para lo cual se deja
expuesto el electrodo al aire y se asigna el valor de saturacin en ppm, tabulado para la
temperatura y presin vigentes, a la correspondiente lectura en mV con el electrodo al
aire.

Clculo de la tasa de consumo de oxgeno:

En primer lugar, se calcula el volumen de O 2 presente en la cmara y medido por

el electrodo, de acuerdo con el siguiente algoritmo:

l O2= Lectura en ppm (mg/l) x Vol.O2 en 1 mg (ml/mg) x VC (l)

donde:

Vol. O2 en 1 mg (a 760 mmHg y 273 K)= 22,4 ml / 32 mg (1 mol) = 0,7 ml/mg

VC= volumen neto de la cmara de medicin.

La tasa de consumo de oxgeno se calcula luego como la pendiente de la

regresin de los l O2 remanentes en cada respirmetro en funcin del tiempo (Figura
5). De esta manera la tasa de consumo queda expresada, por ejemplo, en l O 2/min . Es
necesario multiplicar luego la pendiente obtenida de la regresin l O 2 versus tiempo
por 1. Por qu ?.

Figura 5: volumen de O2 en la cmara de medicin en funcin del tiempo. Registro tipo

mostrado por el programa de adquisicin de datos. Ref: Rodrguez Moreno. P.A. et al.
1998. Bull. Environ. Contam. Toxicol., 61: 629-636.