UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

ESCUELA DE ENFERMERA

Ao de la Diversificacin Productiva y del Fortalecimiento de la

Educacin
Universidad Nacional Del Per
Facultad de Medicina Humana
Escuela profesional de Enfermera

Practica de Laboratorio # 2
MTODO COLORIMTRICO EN LA DETERMINACIN DE
CARBOHIDRATOS

ASIGNATURA: Bioqumica

DOCENTES: Dra. Violeta Morn Garrido

Dr. Carlos Holgun Mauricci

ALUMNA: Fiorella Paola Dioses Fernndez

Piura 2015

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MARCO TEORICO
Colorimtrico: Estudia la medida de los colores y que desarrolla
mtodos para la cuantificacin del color, es decir la obtencin de valores
numricos del color.
Fotometra: La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms
usado en las investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un
instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida
por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una
que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Espectrofotometra : Es la medicin de la cantidad de energa radiante

que absorbe o transmite un sistema qumico en funcin de la longitud de
onda; es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones
qumicas y bioqumicas. El espectrofotmetro es un instrumento que
permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin
que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una
cantidad conocida de la misma sustancia.

Tipos de espectrofotometra
Espectrofotometra de absorcin molecular VIS-UV. 13,
Espectrofotometra de absorcin molecular IR.15.
Espectrofotometra de absorcin y emisin atmica.
Espectrofotometra con atomizadores electrotrmicos.
Espectrofotometra de emisin con plasma.
Espectrofotometra de fluorescencia molecular.

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MTODO COLORIMETRICO EN LA DETERMINACION DE

CARBOHIDRATOS
PODER REDUCTOR DE LOS AZUCARES
1. INTERACCIN DE LA ENERGIA CON LA MATERIA: FOTOMETRIA
Una caracterstica de las molculas es la de absorber determinados tipos
de radiaciones dependiendo de su estructura.
As, por ejemplo, una solucin que contiene in cprico hidrato absorbe
energa radiante de la longitud de onda que corresponde al amarillo.

FOTOMETRIA, comprende el estudio de los mtodos que permiten medir

la concentracin, establece la estructura y lograr la identificacin de
ciertas sustancias, aprovechando su capacidad de absorber y emitir
energa radiante.

2. METODO GRAFICO
Inscribamos un papel milimetrado aritmtico los valores de A en el eje
de las ordenadas contra C concentracin en el de las abscisas de cada
uno de los patrones o standard debe obtenerse una recta, averiguar la
concentracin del desconocido por la grfica.

3. METODO ANALITICO (ECUACION DE LAMBERT Y BEER)

Dada la ecuacin A= abc y b dimetro de las cubetas 1 cm, el valor de ab
es una constancia o factor para cada uno de las sustancias standars.

Ab= Factor = a
conc
Los valores hallados deben ser iguales dentro del error experimental si se
sigue la ley de Lambert y Beer y tenemos el promedio factor.
Dividiendo la absorbancia del desconocido entre los valores de factor
promedio obtiene la concentracin del desconocido.

C desconocido = b desconocido
Factor promedio

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PRACTICA DE LABORATORIO
1. PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS
DISEOS EXPERIMENTALES:

Glucosa en sangre (mtodo fotocalorimtrico)

Reactivos B St1 St2 St3 St4 D

Std 30 um 30 um 30 um 30 um 30 um
Reactivo 3 um 3 um 3 um 3 um 3 um 3 um
de trabajo

Incubar por 5 a 37C y leer a los 505 um contra blanco

METODO GRAFICO
Inscribamos un papel milimetrado aritmtico los valores de A en
el eje de las ordenadas contra C concentraciones en el de las
abscisas de cada uno de lo patrones y standard debe obtenerse
una recta, averiguar la concentracin del desconocido por la
grfica.
METODO ANALITICO ( ECUACION DE LAMBERT Y
BEER)
Dada la ecuacin A= abc y b dimetro de las cubetas es 1cm,
el valor de ab es una constancia o factor para cada uno de las
sustancias standars.
F=C Stand/ Abs
Los valores hallados deben ser iguales dentro del error
experimental si se sigue la ley de Lambert y Beer y tenemos el
promedio factor.
Dividiendo la absorbancia del desconocido entre los valores del
Factor Promedio obtiene la concentracin del desconocido.
Fx=270.898
Desc. = F x Abs
2. PROCEDIMIENTO
RESULTADOS

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RESULTADO ABSORBANCIA

Usando las siguientes formula: F= C Stand / Abs , tenemos :

ST1 = 50 mg%
ST2 = 100 mg%
ST3 = 100 mg%
ST4 = 200 mg%

F1 = 50/ Fx = 1083.592/4
F2 = 100/
F3 = 150/263.158 Fx = 270.898
F4 = 200/0.68 = 294.118

Para hallar la concentracin del problema, usamos la siguiente

formula:
[] Abs Fact
50 0.19 263.2
Desc = F x Abs 100 0.38 263.1
150 0.58 258.6
200 0.77 259.0
260.95

GRAFICO

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CUESTIONARIO DE LA PRACTICA DE LABORATORIO

1. Que es Fotocolormetro?
Mtodo que sirve para hallar concentraciones de diferentes muestras
coloreadas.
Consiste en medir la intensidad de la luz absorbida (A) o transmitida (T) por
una solucin coloreada de compuestos.
El fundamento de la fotocolormetria se debe a la capacidad de las
molculas para absorber radiaciones.
La absorcin de luz en un compuesto coloreado puede variar debido:
la longitud de onda, concentracin del compuesto, la longitud celda que
contiene la muestra.

2. Que es precisin?
Es la dispersin del conjunto de valores obtenidos de mediciones repetidas
de una magnitud. Cuanto menor es la dispersin mayor la precisin. Una
medida comn de la variabilidad es la desviacin estndar de las
mediciones y la precisin se puede estimar como una funcin de ella. Es
importante resaltar que la automatizacin de diferentes pruebas o tcnicas
puede producir un aumento de la precisin. Esto se debe a que con dicha
automatizacin, lo que logramos es una disminucin de los errores
manuales o su correccin inmediata. No hay que confundir resolucin con
precisin.

3. Que es exactitud?
Se refiere a cun cerca del valor real se encuentra el valor medido. En
trminos estadsticos, la exactitud est relacionada con el sesgo de una
estimacin. Cuanto menor es el sesgo ms exacto es una estimacin.
Cuando se expresa la exactitud de un resultado, se expresa mediante el
error absoluto que es la diferencia entre el valor experimental y el valor
verdadero.

4. Indique solucin estndar o patrn y para que se usa

La solucin estndar es una solucin que contiene una concentracin
conocida de un elemento o sustancias conocidas, y por ende sus
propiedades como el pH tambin se conocen. Y se usan como punto de
comparacin, o referencia cuando se va a hacer una estandarizacin o
valoracin de alguna otra sustancia.

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5. Indique que es longitud de onda y para que se usa en

espectrofotometra.
La longitud de onda es la distancia real que recorre una perturbacin
(una onda) en un determinado intervalo de tiempo. Ese intervalo de tiempo
es el transcurrido entre dos mximos consecutivos de alguna propiedad
fsica de la onda

6. Fundamente 4 mtodos basados en absorcin de energa y longitudes

de onda.
Espectrofotometra de Resonancia Magntica Nuclear.
Espectrofotometra Raman
Espectrofotometra de llana
Espectrofotometra de Absorcin Atmica

7. Si quisieras determinar la concentracin de las diferentes soluciones

de glucosa, que longitud de onda empleara para obtener la mayor
sensibilidad Por qu?

La mejor longitud de onda que pasa por el origen es de 540, registrando la

concentracin de la muestra del problema con los datos de la absorbancia
y la constante de calibracin promedio de aquella longitud de onda.
Demostrando as la Ley de Lambert-Beer que establece una
proporcionalidad directa entre la concentracin e intensidad de color de una
sustancia en solucin medida como absorbancia.

8. Como puede influir la longitud de onda sobre la sensibilidad de un

mtodo fotocolormetro?

La longitud de onda es la que permite que en el mtodo fotocolormetro se

forme un espectro de absorcin de luz monocromtica.

9. Que es rayo monocromtico?

Es aquella que est formada por componentes de un solo color. Es decir, que
tiene una sola longitud de onda, correspondiente al color.

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10. En que se fundamenta la espectrofotometra raman, resonancia

magntica nuclear y espectroscopia de masa?, 1 aplicacin clnica de
cada una de ellas .

ESPECTOFOTOMETRIA RAMAN: la tcnica analtica espectrofotometra

Raman se basa en un fenmeno especfico de dispersin de la luz que
presenta alguna similitud y recuerda a la fluorescencia.

En espectrofotometra Raman, las vibraciones moleculares se miden en

forma de emisin de energa luminosa (radiacin Raman dispersada) como
consecuencia de la excitacin con una fuente monocromtica de luz visible
generalmente del rojo o IRC (la intensidad de luz dispersada es slo de 10-
5 a 10-6 del incidente). Precisamente para separar est dbil luz Raman de
la fluorescencia de muchas molculas el haz excitante es de la zona del
rojo (600-1000nm), donde la energa del fotn es insuficiente para activar
la molcula al nivel electrnico excitado y desencadenar fluorescencia. Se
evitar as un elevado fondo que podra suponer una fluorescencia
simultnea.

El haz excitante debe ser de elevada energa y altamente monocromtico,

razn por la cual se utiliza el lser como fuente de energa en esta tcnica
analtica espectrofotometrica. El desplazamiento de las emisiones Raman
de una molcula con respecto a la longitud de onda incidente es una
importante arma analtica complementaria en cuanto a aplicaciones a la
espectroscopia de absorcin infrarroja.

Aplicacin: esta tcnica se aplica en anlisis de la calidad qumica

del agua para determinar la claridad y para el control de los procesos de
tratamiento. Adems es de gran ayuda en el control de Calidad de la
transparencia de aguas, bebidas y productos alimenticios;
monitorizacin del crecimiento de los cultivos bacterianos;
inmunoensayos; contenido en macromolculas, etc.

RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR: la resonancia magntica nuclear

(NMR) est basada en la medicin de absorcin radiacin de
radiofrecuencia por un ncleo en un campo magntico fuerte. La absorcin
de la radiacin hace que el spin nuclear se alinee o gire en direccin de
mayor energa. Luego de absorber energa los ncleos reemitirn radiacin
RF y volvern al estado de energa ms bajo.

El principio de NMR se basa en que los ncleos con nmero impar de

protones, neutrones o ambos tendrn un spin nuclear intrnseco. Cuando
un ncleo con un spin nuclear distinto de cero es ubicado en el campo
magntico, el spin nuclear puede alinearse en la misma direccin o en
direccin opuesta al campo. Estas dos alineaciones de spin nucleares
tienen diferentes energas y la aplicacin de un campo magntico produce
la degeneracin de los spins nucleares. Un ncleo que posee su spin
alineado con el campo tendr una energa ms baja que cuando tiene su
spin alineado en direccin opuesta al campo.

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La energa de una transicin de transicin NMR depende de la fuerza del

campo magntico, un factor de proporcionalidad para cada ncleo llamado
relacin magnetogyric. El entorno local alrededor del ncleo en una
molcula perturbar levemente el campo magntico local ejercido sobre el
ncleo y afectar su energa exacta de transicin. Esta dependencia de la
energa de transicin en la posicin de un tomo, en particular en una
molcula, hace que la espectroscopia NMR sea de mucha utilidad para
determinar la estructura de molculas

La espectrofotometra NMR es una de las herramientas ms poderosas

para elucidar la estructura de especies orgnicas e inorgnicas. Tambin
se ha comprobado que es til para la determinacin cuantitativa de
especies de absorcin.

ESPECTROSCOPIA DE MASA: La espectrometra de masas se

fundamenta en la separacin de partculas moleculares o atmicas por su
diferente masa. El proceso de la espectrometra de masas comprende
bsicamente cuatro etapas:

1. Ionizacin de la muestra
La ionizacin de la muestra se consigue por bombardeo mediante
electrones (e-) segn el proceso:

M + e- M+ + 2e-

2. Aceleracin de los iones por un campo elctrico

Convertimos una fraccin significativa de los tomos formados en la etapa
1 en un flujo de iones, generalmente positivos y de carga nica.
La velocidad que adquieren viene regida por la frmula:

v = [2eV/m]

Donde V es el potencial aplicado, e la carga del electrn y m la masa.

Cuando las partculas aceleradas se someten a la accin de un campo
magntico (H) describen una trayectoria circular de radio r alrededor de
este campo, desarrollando una fuerza centrfuga mv2/r, la cual es igual
a la fuerza de atraccin del campo Hev.
De esto deducimos que el radio es igual a:

r = (2Vm/H2e)

3. Dispersin de los iones segn su relacin masa/carga

Basndonos en la ecuacin anterior podemos calcular la relacin m/e que
es:

m/e = H2.r2/2V

Dado que la mayora de los iones formados en la segunda etapa tienen una
sola carga y que el resto de parmetros se mantienen constantes, la
relacin m/e suele ser la masa del in.

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La utilidad analtica de un espectrmetro de masas depende de la

resolucin del instrumento, o capacidad del mismo para separar dos
partculas de diferente masa.

4. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal

elctrica
El ordenador al que est conectado el aparato recoge las distintas
seales y las reproduce en forma de espectrograma, formato de fcil
interpretacin.

Fig.1: Esquematizacin del paso de una muestra por los principales

componentes de un instrumento de espectroscopia de masas.

11. En qu se fundamenta la espectrofotometra de llama y de absorcin

atmica? De un ejemplo de uso y en medio ambiente.

A. ESPECTROFOTOMETRIA DE LLAMA: en los ltimos aos se ha

desarrollado y aplicado en el campo de la espectrofotometra de absorcin
atmica (AAS) con llama la denominada "thermospray flame furnace atomic
absoprtion spectrometry" (TS-FF-AAS) para la determinacin de metales
pesados a niveles de g L-1 mediante el uso de un tubo capilar cermico
como sistema de introduccin de muestra y un tubo metlico como sistema
de atomizacin. Recientemente, una de las variantes y aplicaciones de la
TS-FF-AAS ha sido la digestin en lnea, transporte e introduccin de

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muestras biolgicas para la determinacin de Cd, Cu y Pb a niveles de g

g-1. Muy novedosa ha sido tambin la aplicacin de la nebulizacin
hidrulica y uso del tubo en la llama ("hydraulic high-pressure nebulization
beam injection flame furnace atomic absorption spectrometry" (HHPN-
BIFF-AAS)) en la determinacin de Cd y Pb llegando a obtener lmites de
deteccin 10 veces mejores respecto de la AAS con llama y nebulizacin
neumtica.

B. ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA: la absorcin de

la luz por medio de tomos brinda una herramienta analtica poderosa para
los anlisis cuantitativos y cualitativos. La espectrofotometra de absorcin
atmica (AAS) se basa en el principio que los tomos libres en estado
fundamental pueden absorber la luz a una cierta longitud de onda. La
absorcin es especfica, por lo que cada elemento absorbe a longitudes de
onda nicas. AAS es una tcnica analtica aplicable al anlisis de trazas de
elementos metlicos en minerales, muestras biolgicas, metalrgicas,
farmacuticas, aguas, alimentos y de medio ambiente.

Aplicacin: esta tcnica se ha aplicado a cerca de 60 elementos y es una

herramienta primordial para los estudios en donde se determinan vestigios
de metales en muestras biolgicas o del medio ambiente. Se emplea,
adems, en el anlisis de agua, bioqumica toxicologa, medicina industria
farmacutica, industria petroqumica, etc.

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BIBLIOGRAFIA

http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa#Tipos_de_espectro
fotometr.C3.ADa
https://es.wikipedia.org/wiki/Luz_monocrom%C3%A1tica
https://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_onda
https://es.wikipedia.org/wiki/Soluci%C3%B3n_est%C3%A1ndar
https://ar.answers.yahoo.com/question/index?qid=20070620101816AA5R8y
b
http://es.slideshare.net/juandavidlopeznorena/fotocolorimetria

pg. 12