PRACTICA 3 CONTEO DE MICROORGANISMOS EN AGAR NUTRITIVO Y

AGAR SABOURAUD

1. INTRODUCCIN

El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo
tipo de bacteria. Es muy til porque permanece solido incluso a relativas altas
temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la
superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una
sustancia espesa, con colonias difcilmente observables.

El agar Sabouraud es un medio de cultivo que por sus caractersticas funciona

como medio de enriquecimiento para hongos. El medio contiene peptonas y una
elevada concentracin de glucosa que favorece el crecimiento de los hongos sobre
las bacterias. Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente dermatofitos,
aunque tambin pueden desarrollarse en l cierto tipo de bacterias filamentosas
tales como Nocardia.

2. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

- Siembra en superficie de agar nutritivo y agar sabouraud.

- Observacin de microorganismos en las placas Petri mediante la tcnica de
Gram.
OBJETIVO ESPECFICO
- Conteo de microorganismos en muestra de lodo residual de la laguna de
oxidacin de Covicorti.

3. MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS

MATERIALES

- Muestra de lodo de una laguna de oxidacin

- Balanza
- 4 Placas Petri
- Asa de vidrio
- Agar nutritivo
- Agar sabouraud
- Asa de vidrio
- Agua destilada
- Tubos de ensayo
- Pipeta de 10 ml.
- Estufa
- Placas de vidrio
- Azul de lactofenol
- Glugol
- Alcohol cetona
- Zafranina
- Aceite de cedro

PROCEDIMIENTO

Pesar 10 gramos de la muestra de agua residual y diluir en 90 ml de agua destilada,

agitamos para separar los microorganismos de las partculas y esperamos hasta la
sedimentacin. Esto se considera como la dilucin inicial.
Tomamos 0.1 ml de la dilucin inicial (10-1) y diluimos de manera consecutiva en 8
tubos de ensayo, tomando siempre 0.1 ml de cada tubo de ensayo hasta la dilucin
10-9.
Se incorpor en la placa con agar nutritivo, 0.1 ml de la dilucin 10-9 y 10-7; y en la
placa con agar sabouraud, 0.1 ml de la dilucin 10-5 y 10-4. Es necesario usar un asa
de vidrio, calentando el asa en el mechero y enfrindola en la tapa, con el fin de
extender de manera homognea los microorganismos en las placas con el agar.
Luego se colocan las placas Petri en una estufa a 30 C.

Para la observacin de hongos, se utiliz azul de lactofenol y un aumento de x40.

Y para la observacin de bacterias, se utiliz Cristal violeta por 1 minuto, Glugol
por 3 minutos, Alcohol cetona para decolorar, 30 segundos de Zafranina y Aceite
de cedro para la coloracin. Se debe lavar la lmina de vidrio durante cada
perodo. Luego colocar en el microscopio para la observacin de microorganismos.
4. RESULTADOS

Tabla 1. Conteo de bacterias en Agar nutritivo

Dilucin 10-9 10-7
Bacterias
20 x 1010 3 x 108
(UFC/ml)

Tabla 2. Conteo de hongos en Agar sabouraud

Dilucin 10-5 10-4
Hongos
84 x 106 36 x 105
(UFC/ml)

5. COMENTARIO CRTICO

La muestra fue tomada de la orilla de la laguna de oxidacin de Covicorti.

El nmero de hongos es menor al de bacterias, por esta razn la dilucin utilizada

en el agar sabouraud es menor.

Los hongos demoran en crecer de 2 a 5 das y las bacterias de 24 a 48 horas.

Por el tipo de microorganismos que queremos encontrar, es posible tambin

incubar a temperatura ambiente.

Cuando se realiza la siembra en superficie se agrega 0.1 ml de la ltima disolucin

a la placa Petri pero cuando se usa la siembra por incorporacin, se agrega 1ml de
la ltima disolucin a la placa Petri.

6. CONCLUSION

Las bacterias se encontraron en mayor nmero que los hongos en las placas Petri.

En la observacin con microscopio, se encontraron bacterias gram negativas y

hongos esporulados.
 El nmero de bacterias en las disoluciones de agar nutritivo fue de: 20 x 10 10 en
disolucin 10-9 y 3 x 108 en disolucin 10-7.

El nmero de hongos en las disoluciones de agar sabouraud fue de: 84 x 106 en

disolucin 10-5 y 36 x 105 en disolucin 10-4.

7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Casado G., Torrico C. Medios de cultivo en un laboratorio de microbiologa (2012).

Editorial UNED. Madrid.
PRACTICA 4. DETERMINACIN DE OXIGENO DISUELTO
1. INTRODUCCIN

La demanda bioqumica de oxgeno (DBO5) es una prueba usada para la

determinacin de los requerimientos de oxgeno para la degradacin bioqumica
de la materia orgnica en las aguas municipales, industriales y en general aguas
residuales; su aplicacin permite calcular los efectos de las descargas de los
efluentes domsticos e industriales sobre la calidad de las aguas de los cuerpos
receptores. Los datos de la prueba de la DBO5 se utilizan en ingeniera para disear
las plantas de tratamiento de aguas residuales. En aguas residuales domsticas, el
valor de la DBO5 representa en promedio un 65 a 70% del total de la materia
orgnica oxidable. La DBO como todo ensayo biolgico, requiere cuidado especial
en su realizacin, as como conocimiento de las caractersticas esenciales que
deben cumplirse, con el fin de obtener valores representativos confiables.
El ensayo supone la medida de la cantidad de oxgeno requerido por los
organismos en sus procesos metablicos al consumir la materia orgnica presente
en las aguas residuales o naturales, por lo que es necesario garantizar que durante
todo el perodo del ensayo exista suficiente O.D. para ser utilizado por los
organismos. Adems, debe garantizarse que se suministran las condiciones
ambientales adecuadas para el desarrollo y trabajo de los microorganismos, as
que se deben proporcionar los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano
tales como N y P y eliminar cualquier sustancia txica en la muestra. Es tambin
necesario que exista una poblacin de organismos suficiente en cantidad y
variedad de especies, comnmente llamada simiente, durante la realizacin del
ensayo.
Las condiciones estndar del ensayo incluyen incubacin en la oscuridad a 20C
por un tiempo determinado, generalmente cinco das. Las condiciones naturales de
temperatura, poblacin biolgica, movimiento del agua, luz solar y la
concentracin de oxgeno no pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los
resultados obtenidos deben tomar en cuenta los factores anteriores para lograr
una adecuada interpretacin. Las muestras de agua residual o una dilucin
conveniente de las mismas, se incuban por cinco das a 20C en la oscuridad. La
disminucin de la concentracin de oxgeno disuelto (OD), medida por el mtodo
Winkler o una modificacin del mismo, durante el periodo de incubacin, produce
una medida de la DBO5.
2. OBJETIVOS

Determinar cantidad de oxgeno disuelto en un cuerpo de agua.

3. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

MATERIALES

- Bureta de 50 mL
- Probeta de 50 o 100 mL
- Pipetas de 1 mL
- Vaso de precipitacin de 100 mL
- Frasco BOD de 300 mL con tapa esmerilada
- Sulfato de manganeso al 50%
- Solucin de yoduro-alcalino-azida:
Solucin de yoduro de potasio
Solucin de KOH
Solucin de azida de sodio
Mezclar en volmenes iguales
- cido sulfrico cc.
- Solucin de almidn al 1% (indicador)
- Solucin de tiosulfato de sodio

PROCEDIMIENTO

- Llenar el frasco BOD con 30 ml de la muestra y tapar, evitando la formacin de

burbujas.
- Destapar y adicionar 1mL de solucin de MnSO4 y 1mL de solucin de yoduro-
alcalino-azida. Luego tapar y homogenizar por inversin, dejando reposar
durante 10 minutos.
- Luego adicionar 1 mL de H2SO4 cc. Tapar y agitar hasta que el precipitado se
disuelva y el agua cambie a color ambar (Si continua de color blanco, la
muestra no tiene OD). Dejar reposar por 30 minutos.
- Colocar 50 mL en un vaso y agregar 1 mL de solucin de almidn (indicador) y
esperar hasta que cambie a color azul.
- Titular con solucin de Tiosulfato de sodio hasta que desaparezca la coloracin
azul. Anotar gasto.
- Repetir la titulacin y obtener el promedio.
- Determinar la DBO con la frmulas

DBO (mg O2/L) =

p= Fraccin de muestra analizada (Dilucin)

.
OD (mg O2/L) =

V= volumen de muestra titulada 50 mL

Volumen frasco DBO = 300 mL

4. RESULTADOS

Tabla 1. Datos obtenidos de DBO5d de una muestra de agua

Dilucin OD1 OD2 Factor 4d DBO5d
Mesa a1 (mL) a2 (mL)
(%) (mgO2/L) (mgO2/L) (1.37) (mgO2/L)
1 15 0.49 1.97 0.1 0.4 10.47 14.34
2 10 0.8 3.22 0.1 0.4 28.2 38.63
3 25 0.785 3.16 0.15 0.6 10.24 14
4 10 0.69 2.78 0.2 0.81 19.7 27

Clculos de mesa 4:

- OD1 (Calculado en el momento de laboratorio)

0.49 0.025 8 1000

OD1 (mgO2/L) = 3002 = 1.97
50
300

- OD2 (Calculado una semana despes)

0.1 0.025 8 1000

OD2 (mgO2/L) = 3002 = 0.4
50
300
 Clculo de DBO5d

1.970.4
DBO (mgO2/L) = = 10.467
0.15

Luego multiplicamos por el factor de DBO y obtenemos la DBO5d

DBO5d (mgO2/L) = 10.467 x 1.37 = 14.34

5. COMENTARIO CRTICO

Se obtuvieron valores grandes de DBO5 en todas las mesas.

Se desconoce el origen de la muestra que se nos fue otorgado en el laboratorio.

El factor para hallar la DBO es un valor que se obtiene a partir de tablas.

Se presentaron inconvenientes al momento de agregar la muestra en el primer

frasco de DBO perteneciente al dato obtenido en la OD1 por lo que pudo
distorsionar de alguna manera el resultado obtenido.

6. CONCLUSION

Los valores de DBO5d obtenidos nos indican que la muestra es de un agua poco
contaminada (valores de DBO entre 5 y 50 mgO2/L se encuentran dentro de esta
categora.

7. REFERENCIA BIBLIOGRFICA

-FERRERO,J.M.,(1974). Depuracin Biolgica del agua. Editorial Revert. Madrid: Espaa.