Dilucin Bacteriana

Por Quistin Garca Hylary

Es una tcnica que permite evaluar bacterias heterotrficas, aerobias totales (BAT),
bacterias reductoras de sulfato (BRS), anaerobias heterotrficas totales (BAnT). La tcnica
de dilucin consiste en inocular una serie de frascos tipo antibitico que contienen 9
mililitros del medio de cultivo apropiado segn el tipo de bacteria que se quiere evaluar.
Se obtiene un mililitro de la muestra usando una jeringa descartable, estril de 1 o 2
mililitros, de capacidad. Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja del mismo, se
invierte y se retira 1 mililitro que se inocula en el 2do frasco.
Con una nueva jeringa se retira 1 ml del frasco no. 2, previamente agitado y se inocula el
frasco No. 3, y as sucesivamente utilizando una nueva jeringa para cada frasco.

Si no se conoce informacin previa sobre la cantidad de bacterias/ml dela muestra diluir

suelen sembrarse 6 frascos. La manifestacin del crecimiento de bacteriano de observa por
la turbidez del medio de cultivo que se compara por transparencia con un frasco sin
inocular en el caso de bacterias aerobias y anaerobias totales, en el caso de bacterias
reductoras de sulfato se debe observar un ennegrecimiento del frasco.
Una vez inoculados los frascos se incuban durante 7 das o 14 das a 5C respecto a la
temperatura de la muestra, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos que
manifiestan desarrollo positivo. Para calcular la densidad bacteriana se tienen en cuenta los
frascos que manifiesten alguna modificacin como consecuencia del crecimiento
bacteriano.
Hay una variedad de acontecimientos que interfieren con la interpretacin de resultados
obtenidos utilizando las diluciones seriadas. Algunos de los ms comunes son:
 Todos los frascos muestran crecimiento. Si esto sucede, no es posible estimar la poblacin.
Un frasco no denota crecimiento y el resto s. Es decir, hay un salto en los frascos positivos.
Este salto debe ser anotado y se informara de la concentracin bacteriana correspondiente
al frasco de mayor numeracin que resulto positivo.

Por Ramirez Jessica

Mediante el uso de esta tcnica de simple ejecucin y fcil interpretacin, se pueden
evaluar diferentes grupos bacterianos segn el medio de cultivo que contenga el frasco.
Es aplicable para evaluar bacterias heterotrficas, aerobias totales (BAT), bacterias
reductoras de sulfato (BRS), anaerobias heterotrficas totales (BAnT), etc.
Esta tcnica est recomendada por el Instituto Americano del Petrleo (API) para evaluar
calidad biolgica en aguas de inyeccin en recuperacin secundaria y tambin es
ampliamente usada en evaluacin de problemas microbiolgicos en aguas de refrigeracin.
Procedimiento.
La tcnica de dilucin por extincin consiste en inocular una serie de frascos tipo
antibitico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado segn el tipo de bacteria que
se quiera evaluar.
Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estril, de 1 o 2 ml de
capacidad.
Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se retira 1 ml
que se inocula en el 2 frasco.

Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N 2, previamente agitado, y se inocula el
frasco N 3 y as sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.

Si no existe informacin previa sobre cantidad de bacterias/mL de la muestra suelen

sembrarse 6 frascos.
La manifestacin de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de cultivo
que se compara por transparencia con un frasco sin inocular en el caso de bacterias aerobias
totales y bacterias anaerobias totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos se debe
observar un ennegrecimiento del frasco.
 Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban durante 7 das
(BAT, BAT-RF, MFT) o 14 das (BPA) en estufa de cultivo a 5C respecto de la
temperatura del agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos
que manifiestan desarrollo positivo. Para el caso de los medios BRS y BRH, el plazo de
lectura es de 28 das mximo, realizando tambin lecturas peridicas.
Clculos de densidad bacteriana.
Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna modificacin como consecuencia del
crecimiento bacteriano; esta modificacin puede ser turbidez, cambio de color,
ennegrecimiento, etc. Por ejemplo: si se us el medio BAT-RF y se observa turbidez y/o
cambio de color hasta el frasco N 4 el resultado sera 1000-10000 bact/mL o
exponencialmente 103 104 bact/mL. Habitualmente se informa 104 bact/mL.
Problemas comunes en la interpretacin del crecimiento bacteriano cuando se utiliza la
tcnica de dilucin por extincin.
Hay una variedad de acontecimientos que interfieren con la interpretacin de resultados
obtenidos utilizando las diluciones seriadas. Algunos de los ms comunes son:

Todos los frascos muestran crecimiento.

Si esto sucede, no es posible estimar la poblacin, por ejemplo si en una serie de 6 frascos
inoculados todos se manifiestan positivos se debe informar:106 bact/mL. Para el prximo
anlisis de esa muestra habra que considerar el empleo de 8 o 9 frascos.
Un frasco no denota crecimiento y el resto s.
Algunas veces uno de los frascos permanece sin cambios mientras que los ubicados
anterior y posteriormente en la serie inoculada muestran positividad. Es decir, hay un
salto en los frascos positivos. Este salto debe ser anotado y se informar la
concentracin bacteriana correspondiente al frasco de mayor numeracin que result
positivo. Por ejemplo: El crecimiento positivo se observa en los frascos 1, 2 y 4 mientras
los frascos 3, 5 y 6 permanecen sin modificaciones, todo despus de incubar a la
temperatura y tiempo incubado. Hay varias explicaciones posibles para esto, incluyendo
una contaminacin accidental del frasco 4. Por lo tanto, nunca se puede saber que ocurri
realmente y hay que proceder de la forma ms simple ante una situacin dudosa.

En el ejemplo anterior, si se confa razonablemente en que los frascos fueron rotulados

apropiadamente con su nmero de orden, el informe ser 104 bact/mL anotando el frasco
que salt.
Frascos que se manifiestan positivos inmediatamente. Si el primer frasco con un medio de
cultivo para BRS se ennegrece dentro de las 2 horas de haber sido inoculado con 1 mL de
agua muestra, este ennegrecimiento no es producto del crecimiento bacteriano dentro del
frasco; el color negro es debido al SFe proveniente de altos niveles de SH2 en la muestra de
agua que reaccion con el Fe disuelto en el caldo de cultivo. En estos casos se pueden
seguir dos cursos de accin:
1) Proceder con las diluciones seriadas. Los frascos 2 a 6 permanecern generalmente sin
cambios y pueden ser usados para detectar el crecimiento bacteriano incubndolos a
 temperatura y tiempo adecuado y observando ennegrecimiento en los mismos transcurrido
el tiempo de incubacin.
2) Colectar por lo menos 50 mL de agua en un frasco estril y agregarle una tableta de
Alka-Seltzer que puede despojar la mayora del SH2 de la muestra. Cuando la tableta cesa
de burbujear, retirar 1 mL de agua con jeringa estril y llevar a cabo el procedimiento
habitual de las diluciones seriadas.

Por Ramos Michelle

Las bacterias, son las ms peque; as y numerosos microorganismos que se encuentran en el
suelo, el nmero de bacterias en el suelo pueden o salar desde o menos a varios millones de
estimaciones se realizan en cultivos o mediante examen microscpico. La tcnica de
dilucin en placa se usa ms frecuentemente.
El procedimiento para realizar esta tcnica:
Inocular una serie de frascos tipo antibitico que contiene 9 ml de medio de cultivo
apropiado segn el tipo de bacteria que se quiera evaluar.

Se inocula el primer frasco, retirar la aguja se agita el mismo se invierte, se retira un ml

que se inocula en el segundo frasco

Con una nueva jeringa, se retira un ml de frasco nmero 2, previamente agitado, y se

inocula el frasco no 3 y haci sucesivamente, utilizando una nueva jeringa por cada frasco
Clculos de densidad bacteriana
Se tiene en cuenta los frascos que manifiestan alguna modificacin como consecuencia del
crecimiento bacteriano: esta modificacin puede ser turbidez cambio de color, en
negrecimiento, etc.
Por ejemplo: si se us el medio BAT RF y se observa turbidez y lo cambio de color hasta
el frasco numero 4 el resultado seria 1000-10;000bacte/ml o exponencialmente 103-
104bact/ml habitualmente se informa 104 bact/ml.
Por Rangel Hugo
Mediante el uso de esta tcnica de simple ejecucin y fcil interpretacin, se pueden
evaluar diferentes grupos bacterianos segn el medio de cultivo que contenga el frasco.
Es aplicable para evaluar bacterias heterotrficas, aerobias totales (BAT), bacterias
reductoras de sulfato (BRS), anaerobias heterotrficas totales (BAnT), etc.
Esta tcnica est recomendada por el Instituto Americano del Petrleo (API) para evaluar
calidad biolgica en aguas de inyeccin en recuperacin secundaria y tambin es
ampliamente usada en evaluacin de problemas microbiolgicos en aguas de refrigeracin.
Procedimiento.
La tcnica de dilucin por extincin consiste en inocular una serie de frascos tipo
antibitico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado segn el tipo de bacteria que
se quiera evaluar.
Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estril, de 1 o 2 ml de
capacidad.
Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se
retira 1 ml que se inocula en el 2 frasco.
Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N 2, previamente agitado, y se
inocula el frasco N 3 y as sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco
Si no existe informacin previa sobre cantidad de bacterias/mL de la muestra suelen
sembrarse 6 frascos.
La manifestacin de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de
cultivo que se compara por transparencia con un frasco sin inocular en el caso de bacterias
aerobias totales y bacterias anaerobias totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos
se debe observar un ennegrecimiento del frasco.
Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban durante 7
das (BAT, BAT-RF, MFT) o 14 das (BPA) en estufa de cultivo a 5C respecto de la
temperatura del agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos
que manifiestan desarrollo positivo. Para el caso de los medios BRS y BRH, el plazo de
lectura es de 28 das mximo, realizando tambin lecturas peridicas..
Clculos de densidad bacteriana.
Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna modificacin como
consecuencia del crecimiento bacteriano; esta modificacin puede ser turbidez, cambio de
color, ennegrecimiento, etc.

Por Rascon Lizeth

Mediante el uso de esta tcnica de simple ejecucin y fcil interpretacin, se pueden
evaluar diferentes grupos bacterianos segn el medio de cultivo que contenga el frasco.
Es aplicable para evaluar bacterias heterotrficas, aerobias totales (BAT), bacterias
reductoras de sulfato (BRS), anaerobias heterotrficas totales (BAnT), etc.
Procedimiento.
La tcnica de dilucin por extincin consiste en inocular una serie de frascos tipo
antibitico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado segn el tipo de bacteria que
se quiera evaluar.
Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estril, de 1 o 2 ml de
capacidad.
Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se retira 1 ml
que se inocula en el 2 frasco.
Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N 2, previamente agitado, y se inocula el
frasco N 3 y as sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.
A manifestacin de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de cultivo
que se compara por transparencia con un frasco sin inocular en el caso de bacterias aerobias
totales y bacterias anaerobias totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos se debe
observar un ennegrecimiento del frasco.
Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban durante 7 das
(BAT, BAT-RF, MFT) o 14 das (BPA) en estufa de cultivo a 5C respecto de la
temperatura del agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos
que manifiestan desarrollo positivo. Para el caso de los medios BRS y BRH, el plazo de
lectura es de 28 das mximo, realizando tambin lecturas peridicas..
Clculos de densidad bacteriana.
Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna modificacin como consecuencia del
crecimiento bacteriano; esta modificacin puede ser turbidez, cambio de color,
ennegrecimiento, etc.
Por ejemplo: si se us el medio BAT-RF y se observa turbidez y/o cambio de color hasta el
frasco N 4 el resultado sera 1000-10000 bact/mL o exponencialmente 103-104 bact/mL..
Habitualmente se informa 104 bact/mL.
Por Luis Diego Reyes Marcial
Tcnica de recuento por dilucin
Mediante el uso de esta tcnica de simple ejecucin y fcil interpretacin, se pueden evaluar
diferentes grupos bacterianos segn el medio de cultivo que contenga el frasco. Es aplicable
para evaluar bacterias heterotrficas, aerobias totales, bacterias reductoras de sulfato,
anaerobias heterotrficas totales, etc.

Procedimiento.

La tcnica de dilucin por extincin consiste en inocular una serie de frascos tipo antibitico
que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado segn el tipo de bacteria que se quiera
evaluar.
Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa descartable, estril, de 1 o 2 ml de
capacidad.
Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se
retira 1 ml que se inocula en el 2 frasco.
Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N 2, previamente agitado, y se
inocula el frasco N 3 y as sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.
Si no existe informacin previa sobre cantidad de bacterias/ml de la muestra suelen sembrarse 6
frascos. La manifestacin de crecimiento bacteriano se observa por la turbidez del medio de
cultivo que se compara por transparencia con un frasco sin inocular en el caso de bacterias
aerobias totales y bacterias anaerobias totales; en el caso de bacterias reductoras de sulfatos se
debe observar un ennegrecimiento del frasco.

Una vez inoculados los frascos y rotulados convenientemente, se incuban durante 7 das (BAT,
BAT-RF, MFT) o 14 das (BPA) en estufa de cultivo a 5C respecto de la temperatura del
agua muestreada, efectuando lecturas diarias para observar aquellos frascos que manifiestan
desarrollo positivo. Para el caso de los medios BRS y BRH, el plazo de lectura es de 28 das
mximo, realizando tambin lecturas peridicas.

Clculos.

Se tienen en cuenta los frascos que manifiesten alguna modificacin como consecuencia del
crecimiento bacteriano; esta modificacin puede ser turbidez, cambio de color,
ennegrecimiento, etc. Por ejemplo: si se us el medio BAT-RF y se observa turbidez y/o
cambio de color hasta el frasco N 4 el resultado sera 1000-10000 bact/ml o exponencialmente
103-104 bact/ml. Habitualmente se informa 104 bact/ml.