Biosntesis y bioconversin de metabolitos secundarios por clulas cultivadas in vitro

Cultivos vegetales ->

Sustancias farmacolgicas
Agrcola
Industrial

La fitoquimica ya los metabolitos secundarios

Principios de siglo XX -> Todos los medicamentos provenan de plantas

Se logr asilar los glucosidos de Digitalis purpurea-> Mejor cardiotnico que se conoce.
1926 Cloetta -> digitoxina
Digitoxenina (Stoll y Kreis, 1934)
Digitonina (Tschesche y Hagedorn, 1936)
1940 Marker y colaboradores -> diosgenina de Dioscorea compasitae. Sapogenina
esteroidal (Base de produccin de hormonas para el control de la natalidad)
Alcaloides de Catharantus roseus -> Vincoleucoblastina y vincristina, actividad antitumoral

Extraccin de principios activos de plantas: Algunas limitaciones

La quinina que se extrae de chinchona officinalis -> Hay que esperar 21 aos para
que la planta llegue a la madurez adecuada y se pueda explotar.
La sobreexplotacin de Discorea compositae , causo perdidas de rendimiento de
8% a 3% en la disminucin de diosgenina.
Catharantus roseus -> Pequeas cantidades de producto (Vincoleucoblastina y
vincristina)
Papaver somniferum -> Probelmas de cultivos ilegales

Conceptos bsicos sobre los metabolitos secundarios

Se definen como metabolitos aquellos compuestos que no tienen una funcin reconocida en el
mantenimiento de procesos fisiolgicos fundamentales de los organismos que los sintetizan.

Protegerlas contra depredadores

Permitirlas competir ventajosamente por el hbitat
Atraer polonizadores
Atraer simbiontes
Brindar proteccin contra diferentes tipos de estrs

Bell (1981) -> Los metabolitos secundarios serian productos final de un proceso biosintetico
aberrante y otros serian productos de excrecin.
Tcnicas para la produccin de metabolitos secundarios

Tres alternativas principales:

1. Seleccionar variantes genticas sobre productoras
2. Optimizar el medio de cultivo para la produccin de biomasa y para la biosntesis
3. Producir biomasa a gran escala
Modificacin gentica de variantes sobreproductoras

Desconocimiento de factores que regulan el metabolismo secundario, e inclusive de las

reacciones y enzimas involucradas en l.
Existen enzimas que desvan los metabolitos primarios hacia vas metablicas secundarias.
Berlin (1984) -> Modificacin gentica que tiende a aumentar el rendimiento de
quinilizidina en cultivos de Lupinus sp. (Lisina-Descarboxilasa bacteriana).
Fusion somatica -> Obtiene lneas sobreproductoras secundarias
Hibridos somticos de Nicotina tabacum -> Produce cuatro veces ms alcaloides que N.
rustica y 10 veces ms que N. tabacum.

La seleccin y clonacin de las clulas sobreproductoras puede dar como resultado lneas celulares
sobreproductoras estables.

Se tiene que seleccionar estas clulas entre una poblacin de millones de clulas.
Clonarlas cultivando a baja densidad celular.

Chaprin et al. (1984) -> Medir por micro espectrofotometra la concentracin intracelular de cido
rosmarnico en Coleus blumei en suspensin.

Brown et al (1984) -> Separar por fluorocitometra protoplastos de Catharan roseus con alto
contenido de alcaloides. Este mtodo permite separar, cada segundo, 1000 celulas con una
viabilidad elevada (30% -50% de estas generan planta).

Punto isoelctrico -> Seleccin de productos de fusin de protoplastos.

Preacondecimiento de medio de cultivo -> Cultivas las clulas a alta densidad sobre un papel filtro
colocado encima del medio de cultivo, se recupera el 70% del plaqueo.

Optimizacin de medios de cultivo