MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGIA

MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

1. INTRODUCCIN

El estudio de las bacterias, virus, parsitos, hongos y otros agentes infecciosos que pueden ser
patgenos para el hombre, los animales u otras formas de vida comporta riesgos que varan segn
el agente infeccioso y los procedimientos utilizados. Las normas de Seguridad Biolgica pretenden
reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulacin de material peligroso y son muy
rigurosas para los agentes ms peligrosos y menos exigentes para los que causan problemas de
menor entidad. Deben ser consideradas como compromisos destinados a conseguir que las
personas que trabajan con agentes infecciosos en el Laboratorio de Microbiologa estn expuestas
al mnimo riesgo posible.

1.1. Manual de Bioseguridad del Laboratorio deMicrobiologa

En todo Laboratorio de Microbiologa debe existir un Manual de Bioeguridad porque todo el

personal tiene el derecho y el deber de conocer enprofundidad los riesgos de su profesin. Es
imposibleprotegerse de lo que se desconoce, de ah laimportancia de este Manual, su revisin
anual, suentrega con acuse de recibo a todo el personal dellaboratorio, as como su cumplimiento.

2. PRINCIPIOS BSICOS DE LA BIOSEGURIDAD

2.1. Definiciones

Agentes biolgicos. Microorganismos, con inclusin de los genticamente modificados,

cultivos celulares y endoparsitos humanos susceptibles de originar cualquier tipo de
infeccin, alergia o toxicidad.

Microorganismo. Toda entidad microbiolgica, celular o no, capaz de reproducirse o de

transferir material gentico.

Cultivo celular. El resultado del crecimiento in vitro de clulas obtenidas de organismos

multicelulares.

Peligro. Todo aquello que puede producir un dao o un deterioro de la calidad de vida
individual o colectiva de las personas.

Dao. Es la consecuencia producida por un peligro sobre la calidad de vida individual o

colectiva de las personas.

Riesgo. Probabilidad de que ante un determinado peligro se produzca un cierto dao,

pudiendo por ello cuantificarse.
1
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

Desinfeccin (segn la OMS). Eliminacin de agentes infecciosos que estn fuera del
organismo por medio de la exposicin directa a agentes qumicos o fsicos.

Contaminacin (segn la OMS). Presencia de un agente infeccioso en la superficie del

organismo; tambin en vestimenta, ropa de cama, juguetes, instrumentos quirrgicos,
apsitos u otros objetos inanimados o substancias, incluyendo el agua y los alimentos.

Esterilizacin (segn la OMS). Destruccin de todas las formas de vida por calor, radiacin,
gas o tratamiento qumico.

Limpieza (segn la OMS). Eliminacin, mediante fregado y lavado con agua caliente, jabn
o un detergente adecuado, o por el empleo de una aspiradora, de agentes infecciosos y
substancias orgnicas de superficies en las cuales stos pueden encontrar condiciones
adecuadas para sobrevivir o multiplicarse.

2.2. Clasificacin de los agentes biolgicos por grupos de riesgo

A lo largo de todo este manual, se hace referencia a los peligros relativos que entraan los
microorganismos infecciosos, clasificados por grupos de riesgo (grupos de riesgo 1, 2, 3 y 4 (OMS)).
Esta clasificacin por grupos de riesgo se utilizar exclusivamente para el trabajo de laboratorio .
En el cuadro 1 se describen esos grupos de riesgo.

Cuadro 1. Clasificacin de los microorganismos infecciosos por grupos de riesgo

Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo) Microorganismos que tienen
pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano o los animales.
Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo) Agentes patgenos que
pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que tienen pocas probabilidades de
entraar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la poblacin, el ganado o el medio
ambiente. La exposicin en el laboratorio puede provocar una infeccin grave, pero existen
medidas preventivas y teraputicas eficaces y el riesgo de propagacin es limitado.
Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo) Agentes patgenos que
suelen provocar enfermedades humanas o animales graves, pero que de ordinario no se
propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y teraputicas eficaces.

Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado) Agentes patgenos que suelen
provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales y que se transmiten fcilmente
de un individuo a otro, directa o indirectamente. Normalmente no existen medidas preventivas y
teraputicas eficaces.

2.3. Niveles de contencin

2
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

La Seguridad Biolgica se fundamenta en tres elementos: 1) Las tcnicas de laboratorio, 2) El

equipo de seguridad (o barreras primarias) y 3) El diseo de la instalacin (o barreras secundarias).

Tcnicas de laboratorio. El elemento ms importante para contener los riesgos biolgicos es

el seguimiento estricto de las prcticas y tcnicas estndar microbiolgicas.
Como parte de estas prcticas est el desarrollo o adopcin por parte de cada laboratorio de
un manual de operaciones (o Manual de Bioseguridad) en el que se identifiquen los riesgos
que pueda sufrir el personal y que especifique los procedimientos que puedan minimizar esos
riesgos.

Equipo de seguridad (barreras primarias).Se incluyen en este apartado tanto dispositivos o

aparatos que garantizan la seguridad (por ejemplo, las cabinas de seguridad biolgica), como
las prendas de proteccin personal (guantes, mascarillas, batas, calzado...).

Diseo y construccin de la instalacin (barreras secundarias). La magnitud de las barreras

secundarias depender del tipo de agente infeccioso que se manipule en el laboratorio.
Dentro de ellas se incluyen la separacin de las zonas donde tiene acceso el pblico, la
disponibilidad de sistemas de descontaminacin (autoclaves), el filtrado del aire de salida al
exterior, el flujo de aire direccional, etc.

El trmino contencin se emplea para describir los mtodos que hacen seguro el manejo de
materiales infecciosos en el laboratorio. El propsito de la contencin es reducir al mnimo la
exposicin del personal de los laboratorios, otras personas y el entorno a agentes potencialmente
peligrosos.
Se suelen describir cuatro niveles de contencin o de seguridad biolgica, que consisten en la
combinacin, en menor o mayor grado, de los tres elementos de seguridad biolgica descritos:
tcnica microbiolgica, equipo de seguridad y diseo de la instalacin. Cada combinacin est
especficamente dirigida al tipo de operaciones que se realizan, las vas de transmisin de los
agentes infecciosos y la funcin o actividad del laboratorio.

Nivel de contencin 1. Es el nivel de seguridad requerido para los agentes biolgicos del
grupo 1, es decir, los que no producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad
conocida y estable a los antimicrobianos. Es el utilizado habitualmente en los laboratorios de
prcticas de universidades o centros docentes donde se emplean cepas no patgenas (E. coliK12,
Saccharomycescerevisiae, etc.). Ejemplos tpicos son todos los microorganismos que se utilizan en
la industria de la alimentacin para la elaboracin de quesos, cerveza, embutidos, etc.

Nivel de contencin 2. Es el obligado para agentes del grupo 2 como algunos que,
perteneciendo a la propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologa infecciosa
humana de gravedad moderada o limitada. Deben ser manipulados por personal especializado
(tcnicos de laboratorio, especialistas en Microbiologa) y son los que con ms frecuencia se
estudian en el Laboratoriode Microbiologa Clnica: estafilococos, Salmonella, etc.
3
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

Nivel de contencin 3. Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo 3,
microorganismos que cursan con patologa grave, de difcil y largo tratamiento, que pueden curar
con secuelas y ocasionalmente producir la muerte. El mayor y ms frecuente peligro que entraan
stos es la infeccin adquirida a travs de aerosoles y por fluidos biolgicos. Por ello, las
principales medidas a tomar en este caso son la correcta manipulacin y la utilizacin de cabinas
de seguridad. En los Laboratorios de Microbiologa Clnica los ejemplos ms tpicos de este tipo de
microorganismos son M.tuberculosis, Brucella, Coxiellaburnet, etc. Slopueden ser procesados por
personal cualificado y en una zona con la infraestructura apropiada para el Nivel de Contencin 3,
es decir, con aire acondicionado independiente, sin recirculacin de aire, con gradiente de presin,
cabinas de bioseguridad, etc.

Nivel de contencin 4. Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha un agente
especialmente patgeno e infectocontagioso, extico o no, que produce alta mortalidad y para el
que no existe tratamiento y/o es poco fiable. Normalmente son microorganismos de dosis infectiva
baja y alta contagiosidad. Este nivel tambin puede utilizarse para trabajar con animales de
experimentacin infectados por microorganismos del grupo 4. Ejemplos de este nivel son los
arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa y el virus Machupo, virus Ebola, etc. Adems,
deben incluirse en este nivel de contencin los microorganismos propios del grupo 3 que
adquieran propiedades patgenas que los eleven al grupo 4.Un ejemplo sera Mycobacterium
bovis multirresistente que puede causar fallecimiento por fracaso teraputico.

En general, la naturaleza infecciosa del material clnico es desconocida y al Laboratorio de

Microbiologa suelen remitirse muestras muy diversas. Es responsabilidad del Jefe del Laboratorio
el establecimiento de prcticas normalizadas que de forma realista permitan su manipulacin.
Excepto en casos excepcionales (por ejemplo: sospecha de fiebres hemorrgicas), el
procesamiento inicial de los especmenes clnicos y las pruebas serolgicas pueden realizarse de
forma segura en un nivel 2, que es el nivel recomendado para trabajar con patgenos que se
transmiten por va sangunea como el virus de la hepatitis B y el VIH, a lo que habra que aadir las
precauciones universales que deben ser tomadas con todas las muestras de sangre y otros
materiales potencialmente infecciosos.
Los laboratorios que realicen trabajos que impliquen la manipulacin de agentes biolgicos de los
grupos 2, 3 4 con fines de investigacin, desarrollo, enseanza o diagnstico debern establecer
medidas de contencin que se aplicaran segn la naturaleza de las actividades, la evaluacin del
riesgo para los trabajadores y las caractersticas del agente biolgico de que se trate.

3. LABORATORIOS BSICOS NIVELES DE BIOSEGURIDAD 1 Y 2

Las orientaciones y recomendaciones que se ofrecen en el presente manual a ttulo de requisitos

mnimos para los laboratorios de todos los niveles de bioseguridad ataen a los microorganismos
de los grupos de riesgo 1 a 4. Aunque algunas precaucionespueden parecer innecesarias para
algunos organismos del grupo de riesgo 1, son convenientescon fines de capacitacin, para
fomentar el uso de tcnicas microbiolgicas apropiadas (es decir, seguras).Todos los laboratorios
de diagnstico y de atencin de salud (de salud pblicaclnicos o de hospital) deben estar
4
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

diseados para cumplir, como mnimo, los requisitosdel nivel de bioseguridad 2. Dado que ningn
laboratorio puede ejercer uncontrol absoluto sobre las muestras que recibe, el personal puede
verse expuesto aorganismos de grupos de riesgo ms altos de lo previsto. Esa posibilidad debe
tenerse presente en la elaboracin de los planes y las polticas de seguridad. En algunos pases se
exige que los laboratorios clnicos estn acreditados. En general, siempre debenadoptarse y
aplicarse las precauciones normalizadas (2).Las directrices para laboratorios bsicos niveles de
bioseguridad 1 y 2 que aquse exponen son completas y detalladas, ya que son fundamentales para
todo tipo delaboratorios. Las directrices para los laboratorios de contencin nivel de
bioseguridad3 y los laboratorios de contencin mxima nivel de bioseguridad 4 que seofrecen
ms adelante (captulos 4 y 5) son modificaciones y adiciones a estas directricesy estn concebidas
para trabajar con los agentes patgenos ms peligrosos (demayor riesgo).

Cdigo de prcticas

Este cdigo es una enumeracin de las prcticas y los procedimientos de laboratorio esenciales
que constituyen la base de las tcnicas microbiolgicas apropiadas. Enmuchos laboratorios y
programas nacionales, este cdigo puede utilizarse para elaboraruna gua escrita de prcticas y
procedimientos para el trabajo de laboratorio encondiciones de seguridad.
Cada laboratorio debe adoptar un manual de seguridad o de trabajo en el que se identifiquen los
riesgos conocidos y potenciales y se especifiquen las prcticas ylos procedimientos encaminados a
eliminar o reducir al mnimo esos riesgos. Lastcnicas microbiolgicas apropiadas son
fundamentales para la seguridad en ellaboratorio y no pueden sustituirse por equipo de
laboratorio especializado, que no pasa de ser un complemento. A continuacin se exponen los
conceptos ms importantes.

Acceso

1. El smbolo y signo internacional de peligro biolgico (figura 1) deber colocarse en las puertas de
los locales donde se manipulen microorganismos del grupo de riesgo 2 o superior.
2. Slo podr entrar en las zonas de trabajo del laboratorio el personal autorizado.
3. Las puertas del laboratorio se mantendrn cerradas.
4. No se autorizar ni permitir la entrada de nios en las zonas de trabajo del laboratorio.

5
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

Proteccin
personal

1. Se usarn en todo
momento
monos, batas o
uniformes
especiales para el
trabajo en el
laboratorio.
2. Se usarn
guantes
protectores
apropiados para
todos los
procedimientos que
puedan
entraar
contacto directo
o accidental con
sangre, lquidos
corporales y otros
materiales
potencialmente
infecciosos o
animales infectados. Una vez utilizados, los guantes se retirarn de forma asptica y a continuacin
se lavarn las manos.
3. El personal deber lavarse las manos despus de manipular materiales y animales infecciosos,
as como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio.
4. Se usarn gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de proteccin cuando sea necesario
proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos y fuentes de radiacin ultravioleta artificial.
5. Estar prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio, por ejemplo en cantinas,
cafeteras, oficinas, bibliotecas, salas para el personal y baos.
6. No se usar calzado sin puntera.
7. En las zonas de trabajo estar prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosmticos o manipular
lentes de contacto.
8. Estar prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas de trabajo
del laboratorio.
9. La ropa protectora de laboratorio no se guardar en los mismos armarios o taquillas que la ropa
de calle.

Procedimientos
6
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

1. Estar estrictamente prohibido pipetear con la boca.

2. No se colocar ningn material en la boca ni se pasar la lengua por las etiquetas.
3. Todos los procedimientos tcnicos se practicarn de manera que se reduzca al mnimo la
formacin de aerosoles y gotculas.
4. Se limitar el uso de jeringuillas y agujas hipodrmicas, que no se utilizarn en lugar de
dispositivos de pipeteo ni con ningn fin distinto de las inyecciones por va parenteral o la
aspiracin de lquidos de los animales de laboratorio.
5. Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se
comunicarn al supervisor del laboratorio. Se mantendr un registro escrito de esos accidentes e
incidentes.
6. Se elaborar y seguir un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames.
7. Los lquidos contaminados debern descontaminarse (por medios qumicos o fsicos) antes de
eliminarlos por el colector de saneamiento. Puede ser necesario un sistema de tratamiento de
efluentes, segn lo que indique la evaluacin de riesgos del agente con el que se est trabajando.
8. Los documentos escritos que hayan de salir del laboratorio se protegern de la contaminacin
mientras se encuentren en ste.

Zonas de trabajo del laboratorio

1. El laboratorio se mantendr ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el

trabajo.
2. Las superficies de trabajo se descontaminarn despus de todo derrame de material
potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo.
3. Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados debern ser descontaminados antes de
eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.
4. El embalaje y el transporte de material debern seguir la reglamentacin nacional o
internacional aplicable.
5. Las ventanas que puedan abrirse estarn equipadas con rejillas que impidan el paso de
artrpodos.

Gestin de la bioseguridad

1. Incumbir al director del laboratorio (la persona que tiene responsabilidad inmediata respecto
del laboratorio) garantizar la elaboracin y la adopcin de un plan de gestin de la bioseguridad y
de un manual de seguridad o de operacin.
2. El supervisor del laboratorio (que depender del director) velar por que se proporcione
capacitacin peridica en materia de seguridad en el laboratorio.
3. Se informar al personal de los riesgos especiales y se le exigir que lea el manual de seguridad
o de trabajo y siga las prcticas y los procedimientos normalizados.El supervisor del laboratorio se
asegurar de que todo el personal los comprendadebidamente. En el laboratorio estar disponible
una copia del manual de seguridado de trabajo.
4. Habr un programa de lucha contra los artrpodos y los roedores.
5. Se ofrecer a todo el personal en caso de necesidad un servicio apropiado de
evaluacin,vigilancia y tratamiento mdico, y se mantendrn los debidos registrosmdicos.
7
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

Diseo e instalaciones del laboratorio

Al disear el laboratorio y asignarle determinados tipos de trabajo, se prestar especialatencin a

aquellas condiciones que se sepa que plantean problemas de seguridad.
Entre ellas figuran:
1. La formacin de aerosoles.
2. El trabajo con grandes cantidades o altas concentraciones de microorganismos.
3. El exceso de personal o de material.
4. La infestacin por roedores y artrpodos.
5. La entrada de personas no autorizadas.
6. El circuito de trabajo: utilizacin de muestras y reactivos concretos.

Caractersticas de diseo

1. Se dispondr de espacio suficiente para realizar el trabajo de laboratorio en condiciones de

seguridad y para la limpieza y el mantenimiento.
2. Las paredes, los techos y los suelos sern lisos, fciles de limpiar, impermeables a los lquidos y
resistentes a los productos qumicos y desinfectantes normalmente utilizados en el laboratorio. Los
suelos sern antideslizantes.
3. Las superficies de trabajo sern impermeables y resistentes a desinfectantes, cidos, lcalis,
disolventes orgnicos y calor moderado.
4. La iluminacin ser adecuada para todas las actividades. Se evitarn los reflejos y brillos
molestos.
5. El mobiliario debe ser robusto y debe quedar espacio entre mesas, armarios y otros muebles, as
como debajo de los mismos, a fin de facilitar la limpieza.
6. Habr espacio suficiente para guardar los artculos de uso inmediato, evitando as su
acumulacin desordenada sobre las mesas de trabajo y en los pasillos. Tambin debe preverse
espacio para el almacenamiento a largo plazo, convenientemente situado fuera de las zonas de
trabajo.
7. Se prevern espacio e instalaciones para la manipulacin y el almacenamiento seguros de
disolventes, material radiactivo y gases comprimidos y licuados.
8. Los locales para guardar la ropa de calle y los objetos personales se encontrarn fuera de las
zonas de trabajo del laboratorio.
9. Los locales para comer y beber y para descansar se dispondrn fuera de las zonas de trabajo del
laboratorio.
10. En cada sala del laboratorio habr lavabos, a ser posible con agua corriente, instalados de
preferencia cerca de la salida.
11. Las puertas irn provistas de mirillas y estarn debidamente protegidas contra el fuego; de
preferencia se cerrarn automticamente.
12. En el nivel de bioseguridad 2, se dispondr de una autoclave u otro medio de
descontaminacin debidamente prximo al laboratorio.
13. Los sistemas de seguridad deben comprender medios de proteccin contra incendios y
emergencias elctricas, as como duchas para casos de urgencia y medios para el lavado de los
ojos.
8
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

14. Hay que prever locales o salas de primeros auxilios, convenientemente equipados y fcilmente
accesibles (vase el anexo 1).
15. Cuando se planifique una nueva instalacin, habr que prever un sistema mecnico de
ventilacin que introduzca aire del exterior sin recirculacin. Cuando no se disponga de ventilacin
mecnica, las ventanas debern poder abrirse y, a ser posible, estarn provistas de mosquiteras.
16. Es indispensable contar con un suministro regular de agua de buena calidad. No debe haber
ninguna conexin entre las conducciones de agua destinada al laboratorio y las del agua de bebida.
El sistema de abastecimiento pblico de agua estar protegido contra el reflujo por un dispositivo
adecuado.
17. Debe disponerse de un suministro de electricidad seguro y de suficiente capacidad, as como
de un sistema de iluminacin de emergencia que permita salir del laboratorio en condiciones de
seguridad. Conviene contar con un grupo electrgeno de reserva para alimentar el equipo esencial
(estufas, CSB, congeladores, entre otros), as como para la ventilacin de las jaulas de los animales.
18. Es esencial un suministro fiable y adecuado de gas. La instalacin debe ser objeto del debido
mantenimiento.
19. Tanto los laboratorios como los locales destinados a los animales son a veces objeto de actos
de vandalismo. Hay que preveer sistemas de proteccin fsica y contra incendios. Cabe mejorar la
seguridad reforzando las puertas, protegiendo las ventanas y limitando el nmero de llaves en
circulacin.

Material de laboratorio

Junto con los procedimientos y prcticas correctos, el uso de material de seguridad ayudar a
reducir los riesgos cuando se trabaje con agentes biolgicos que entraen peligro. En la presente
seccin se exponen los principios fundamentales relacionados con el material apropiado para los
laboratorios de todos los niveles de bioseguridad.
Los requisitos en relacin con el material de laboratorio correspondiente a niveles de bioseguridad
ms altos se detallan en los captulos pertinentes.
Tras consultar con el funcionario de bioseguridad y el comit de seguridad (en caso de que se haya
designado), el director del laboratorio debe velar por que el material sea apropiado y se utilice
debidamente. Para elegir el material de laboratorio habr que cerciorarse de que responda a los
siguientes principios generales:
1. Que su diseo permita limitar o evitar los contactos entre el trabajador y el material infeccioso.
2. Que est construido con materiales impermeables a los lquidos, resistentes a la corrosin y
acordes con las normas de resistencia estructural.
3. Que carezca de rebabas, bordes cortantes y partes mviles sin proteger.
4. Que est diseado, construido e instalado con miras a simplificar su manejo y conservacin, as
como a facilitar la limpieza, la descontaminacin y las pruebas de certificacin; siempre que se
pueda, se evitar el material de vidrio y otro material rompible.

Material de bioseguridad indispensable

1. Dispositivos de pipeteo para evitar que se pipetee con la boca. Existen muchos modelos
diferentes.
2. CSB, que se utilizarn en los siguientes casos:
9
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

Siempre que se manipule material infeccioso; ese material puede ser centrifugado en el
laboratorio ordinario si se utilizan vasos de centrifugadora con tapas hermticas de seguridad y si
stos se cargan y descargan en una CSB;
Cuando haya un alto riesgo de infeccin transmitida por va area.
Cuando se utilicen procedimientos con grandes posibilidades de producir aerosoles, como la
centrifugacin, trituracin, homogeneizacin, agitaciones o mezcla vigorosa, desintegracin
ultrasnica, apertura de envases de materiales infecciosos cuya presin interna pueda diferir de la
presin ambiental, inoculacin intranasal a animales y recoleccin de tejidos infecciosos de
animales y huevos.
3. Asas de siembra de plstico desechables. Tambin pueden utilizarse incineradores elctricos de
asas dentro de la CSB para reducir la formacin de aerosoles.
4. Frascos y tubos con tapn de rosca.
5. Autoclaves u otros medios apropiados para esterilizar el material contaminado.
6. Pipetas de Pasteur de plstico desechables, cuando estn disponibles, en sustitucin del vidrio.
7. Los aparatos como las autoclaves y las CSB deben ser validados con mtodos apropiados antes
de usarlos.

Vigilancia mdica y sanitaria

La entidad que emplea al personal del laboratorio tiene la obligacin de cerciorarse, por medio del
director de ste, de que la salud de dicho personal est sometida a la debida vigilancia. El objetivo
de esa vigilancia es detectar posibles enfermedades contradas durante el trabajo. Entre las
actividades apropiadas para alcanzar ese objetivo figuran las siguientes:
1. Proporcionar inmunizacin activa o pasiva cuando est indicada.
2. Facilitar la deteccin temprana de infecciones adquiridas en el laboratorio.
3. Excluir a las personas muy susceptibles (por ejemplo, embarazadas o personas
inmunodeficientes) de las tareas de laboratorio que entraen mucho riesgo.
4. Proporcionar material y procedimientos eficaces de proteccin personal.

Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos en el nivel de

bioseguridad 1
La experiencia indica que estos microorganismos tienen pocas probabilidades de provocar
enfermedades humanas o enfermedades animales de importancia veterinaria. No obstante, lo
ideal es someter a todo el personal a un reconocimiento mdico previo a la contratacin en el que
se anoten los antecedentes mdicos de cada persona.
Conviene que se notifiquen rpidamente las enfermedades o accidentes de laboratorio y que
todos los miembros del personal comprendan la importancia de aplicar tcnicas microbiolgicas
apropiadas.

Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos en el nivel de

bioseguridad 2

1. El reconocimiento mdico previo al empleo o a la asignacin de un puesto es indispensable.

Debe registrarse el historial mdico de la persona y realizar una evaluacin de la salud ocupacional
para los fines del laboratorio.
10
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

2. El director del laboratorio debe mantener un registro de enfermedades y bajas laborales.

3. Las mujeres en edad fecunda debern ser informadas de los riesgos que supone para el feto la
exposicin profesional a ciertos microorganismos, como el virus de la rubola. Las medidas
concretas que se adopten para proteger al feto dependern de los microorganismos a los que
pueda estar expuesta la mujer.

Capacitacin

Los errores humanos y las tcnicas incorrectas pueden poner en peligro incluso las
mejoresmedidas destinadas a proteger al personal de laboratorio. Por esta razn, el elemento
clave para prevenir las infecciones adquiridas, los incidentes y los accidentes en el laboratorio es
un personal preocupado por la seguridad y bien informado sobre la manera de reconocer y
combatir los peligros que entraa su trabajo en ese entorno.

En consecuencia, la formacin continua en el servicio acerca de las medidas de seguridad es

primordial. El proceso empieza por el personal directivo, que debe velar porque los
procedimientos y prcticas de seguridad en el laboratorio formen parte de lacapacitacin bsica de
los empleados. La formacin en medidas de seguridad siempre debe estar integrada en la
capacitacin inicial de los nuevos empleados. Deben ponerse a disposicin del personal el cdigo
de prcticas y las directrices locales, incluido el manual de seguridad o de operaciones. Se
adoptarn medidas para garantizar que los empleados hayan ledo y comprendido las directrices,
como pueden ser las pginas de firmas. Los supervisores del laboratorio deben desempear el
papel principal en la formacin de sus subordinados inmediatos acerca de las tcnicas correctas de
laboratorio.

El funcionario encargado de la bioseguridad puede colaborar en esa formacin y contribuir a la

elaboracin de materiales y documentos de capacitacin (vase tambin el captulo 21 OMS).
La capacitacin del personal debe comprender siempre la enseanza de mtodos seguros para
utilizar procedimientos peligrosos que habitualmente afectan a todo el personal de laboratorio y
que entraan los siguientes riesgos:

1. Riesgo de inhalacin (es decir, formacin de aerosoles): uso de asas, siembra de placas de agar,
pipeteo, preparacin de frotis, apertura de recipientes de cultivo, toma de muestras de
sangre/suero, centrifugacin, entre otros.
2. Riesgo de ingestin al manipular muestras, frotis y cultivos.
3. Riesgo de inoculacin cutnea al emplear jeringuillas y agujas.
4. Riesgo de mordeduras y araazos en la manipulacin de animales.
5. Manipulacin de sangre y otros materiales patolgicos potencialmente peligrosos.
6. Descontaminacin y eliminacin de material infeccioso.

Manipulacin de desechos

Se considera desecho todo aquello que debe descartarse. En los laboratorios, la descontaminacin
y la eliminacin de desechos son operaciones estrechamente relacionadas. En el trabajo cotidiano,

11
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

son pocos los materiales contaminados que es preciso retirar del laboratorio o destruir. La mayor
parte de la cristalera, los instrumentos y la ropa del laboratorio vuelve a utilizarse o se recicla.

El principio bsico es que todo el material infeccioso ha de ser descontaminado, esterilizado en

autoclave o incinerado en el laboratorio. El tratamiento en autoclave de vapor constituye el
mtodo de eleccin para todos los procesos de descontaminacin. El material destinado a la
descontaminacin y eliminacin debe introducirse en recipientes (por ejemplo en bolsas de
plstico resistentes al tratamiento en autoclave) que tengan un cdigo de color para indicar si el
contenido ha de pasar a la autoclave o a la incineracin. Slo se recurrir a otros mtodos si stos
eliminan o destruyen los microorganismos

Procedimientos de manipulacin y eliminacin de material y desechos contaminados

Deber adoptarse un sistema de identificacin y separacin del material infeccioso y sus

recipientes. Se seguirn las normas nacionales e internacionales y se tendrn en cuenta las
siguientes categoras:

1. Desechos no contaminados (no infecciosos) que puedan reutilizarse o reciclarse o eliminarse

como si fueran basura en general.
2. Objetos cortantes y punzantes contaminados (infecciosos): agujas hipodrmicas, bisturs,
cuchillas, vidrio roto; se recogern siempre en recipientes a prueba de perforacin dotados de
tapaderas y sern tratados como material infeccioso.
3. Material contaminado destinado al tratamiento en autoclave que despus pueda lavarse y
volverse a utilizar o reciclarse.
4. Material contaminado destinado al tratamiento en autoclave y a la eliminacin.
5. Material contaminado destinado a la incineracin directa.

Objetos cortantes y punzantes

Las agujas hipodrmicas no se deben volver a tapar, cortar ni retirar de las jeringuillas desechables
despus de utilizarlas. El conjunto completo debe colocarse en un recipiente de eliminacin
especfico. Las jeringuillas desechables, utilizadas con o sin aguja, se introducirn en recipientes de
eliminacin apropiados y se incinerarn, esterilizndolas previamente en autoclave si fuera
necesario.
Los recipientes de eliminacin de objetos cortantes y punzantes sern resistentes a la perforacin y
no se llenarn por completo. Cuando estn llenos en sus tres cuartas partes se colocarn en un
recipiente de desechos infecciosos y se incinerarn, esterilizndolos primero en autoclave si la
prctica del laboratorio lo exige. Los recipientes de eliminacin de objetos cortantes y punzantes
no se desecharn en vertederos.

Material contaminado (potencialmente infeccioso) para ser tratado en autoclave y reutilizado

No se efectuar limpieza alguna de ningn material contaminado (potencialmente infeccioso) que

vaya a ser tratado en autoclave y reutilizado. Cualquier limpieza o reparacin que se revele
necesaria se realizar siempre despus del paso por la autoclave o la desinfeccin.
12
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

Material contaminado (potencialmente infeccioso) para ser eliminado

Aparte de los objetos cortantes y punzantes mencionados ms arriba, todo el material

contaminado (potencialmente infeccioso) debe ser introducido en recipientes impermeables (por
ejemplo en bolsas de plstico que resistan el tratamiento en autoclave marcadas con un cdigo de
color) y tratado en autoclave antes de proceder a su eliminacin. Despus de pasar por la
autoclave, el material puede colocarse en recipientes apropiados para ser transportado al
incinerador. Si es posible, el material procedente de actividades relacionadas con la atencin
sanitaria no debe desecharse en vertederos, ni siquiera despus de haber sido descontaminado. Si
se dispone de un incinerador en el laboratorio, no es necesario el tratamiento en autoclave: el
material contaminado se coloca en recipientes especialmente marcados (por ejemplo, bolsas con
un cdigo de color) y se transporta directamente al incinerador. Los recipientes de transporte
reutilizables deben ser impermeables y tener tapas que ajusten debidamente.
Se desinfectarn y limpiarn antes de devolverlos al laboratorio para un uso ulterior.
En cada puesto de trabajo deben colocarse recipientes, tarros o cubetas para desechos, de
preferencia irrompibles (por ejemplo, de plstico). Cuando se utilicen desinfectantes, los
materiales de desecho deben permanecer en contacto ntimo con stos (es decir, sin estar
protegidos por burbujas de aire) durante el tiempo apropiado, segn el desinfectante que se utilice
(vase el captulo 14). Los recipientes para desechos habrn de ser descontaminados y lavados
antes de su reutilizacin.
La incineracin de desechos contaminados deber contar con la aprobacin de lasautoridades
encargadas de la salud pblica y la contaminacin del aire, as como ladel funcionario de
bioseguridad del laboratorio (vase la seccin relativa a la incineracinen el captulo 14 OMS).

4. TCNICAS DE LABORATORIO

Los errores humanos, las tcnicas de laboratorio incorrectas y el mal uso del equipo son la causa
de la mayora de los accidentes de laboratorio y las infecciones conexas. En el presente captulo se
compendian los mtodos tcnicos destinados a evitar o reducir al mnimo los accidentes ms
comunes provocados por esos factores.

Manipulacin segura de muestras en el laboratorio

La recogida, transporte y manipulacin de muestras en el laboratorio entraan unriesgo de
infeccin para el personal.

Recipientes para muestras

Los recipientes para muestras pueden ser de vidrio o, preferiblemente, de plstico.Deben ser
fuertes y no permitir fugas cuando la tapa o el tapn estn correctamente colocados. En el exterior
del recipiente no debe quedar ningn material. Los recipienteshan de estar correctamente
rotulados para facilitar su identificacin. Los formulariosde peticin de examen de la muestra no se
colocarn alrededor de los recipientes,sino por separado, preferiblemente en sobres
impermeables.

Transporte de muestras dentro de la instalacin

13
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

Para evitar fugas o derrames accidentales, deben utilizarse envases/embalajes secundarios(por

ejemplo, cajas) equipados con gradillas, de modo que los recipientes quecontienen las muestras se
mantengan en posicin vertical. Los envases/embalajessecundarios pueden ser de metal o de
plstico, pero deben poderse tratar en autoclaveo ser resistentes a la accin de los desinfectantes
qumicos; de preferencia, el cierre debe tener una junta que garantice la estanqueidad. Debern
descontaminarseperidicamente.

Recepcin de las muestras

Los laboratorios que reciban un elevado nmero de muestras deben destinar un localo zona
especial con este propsito.

Apertura de los envases/embalajes

El personal que recibe y desempaqueta las muestras debe conocer los riesgos para lasalud que
entraa su actividad y debe estar capacitado para adoptar precauciones normalizadas (2),
particularmente cuando manipule recipientes rotos o con fugas. Los recipientes primarios de las
muestras deben abrirse en una CSB. Se dispondr de desinfectantes.

Uso de pipetas y dispositivos de pipeteo

1. Debe utilizarse siempre un dispositivo de pipeteo. El pipeteo con la boca estar prohibido.
2. Todas las pipetas tendrn tapones de algodn para reducir la contaminacin de los dispositivos
de pipeteo.
3. Nunca se insuflar aire en un lquido que contenga agentes infecciosos.
4. No debe mezclarse el material infeccioso aspirando y soplando alternativamente a travs de una
pipeta.
5. No se expulsarn a la fuerza los lquidos de una pipeta.
6. Son preferibles las pipetas aforadas con una muesca superior y otra inferior, ya que no exigen la
expulsin de la ltima gota.
7. Las pipetas contaminadas deben sumergirse completamente en un desinfectante adecuado
contenido en un recipiente irrompible y permanecer en l durante un tiempo suficiente antes de
tirarlas.
8. Debe colocarse un recipiente para las pipetas usadas dentro (no fuera) de la CSB.
9. No deben utilizarse para pipetear jeringuillas provistas de aguja hipodrmica.
10 En vez de agujas, existen dispositivos para abrir los frascos tapados con un diafragma que
permiten usar pipetas y evitar el uso de agujas y jeringuillas hipodrmicas.
11. Para evitar la dispersin del material infeccioso que caiga accidentalmente de una pipeta, se
recubrir la superficie de trabajo con material absorbente, que se desechar como residuo
infeccioso una vez utilizado.

Tcnicas para evitar la dispersin de material infeccioso

1. A fin de evitar que su carga caiga prematuramente, las asas microbiolgicas deben tener un
dimetro de 23mm y terminar en un anillo completamente cerrado.
Los mangos no deben tener ms de 6cm de longitud para reducir la vibracin al mnimo.
2. Para evitar el riesgo de que se produzcan salpicaduras de material infeccioso al flamear las asas
en el mechero de Bunsen, se utilizar un microincinerador elctrico cerrado para esterilizar las
asas. Es preferible utilizar asas desechables que no necesitan volver a ser esterilizadas.
14
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

3. Al secar muestras de esputo debe procederse con cuidado para evitar la creacin de aerosoles.
4. Las muestras y los cultivos desechados destinados a la autoclave o a la eliminacin se colocarn
en recipientes impermeables, como las bolsas de desechos de laboratorio. La parte superior se
cerrar (por ejemplo con cinta de autoclave) antes de tirarlas a los recipientes para desechos.
5. Las zonas de trabajo se descontaminarn con un desinfectante apropiado despus de cada
periodo de trabajo.

Cmaras de seguridad biolgica

Instalacin de la cabina:
1. Debe situarse lo ms lejos posible de las rejillas de aire acondicionado, campanas de gases,
puertas y zonas de mucho trfico de personas, que claramente interfieren en el flujo laminar.
2. Las ventanas del laboratorio han de permanecer siempre cerradas.
3. Debe existir al menos 0,3 m entre la salida de aire de la cabina y el techo del laboratorio.
4. Se instalar sobre una superficie slida y nunca mvil. Si es posible, en un recinto cerrado o en
una zona de acceso restringido.

Al iniciar el trabajo:
1. Poner en marcha la cabina durante 5-10 minutos, a fin de purgar los filtros y lavar la zona
protegida.
2. Comprobar que el manmetro situado en la parte superior del frontal se estabiliza e indica la
presin adecuada (vara con el modelo de cabina).
3. Apagar la luz ultravioleta (si estuviera encendida) y encender la luz fluorescente.
4. Limpiar la superficie de trabajo con un producto adecuado (por ejemplo, alcohol etlico al 70%).
5. Antes y despus de haber trabajado en una cabina deberan lavarse con cuidado manos y
brazos, prestando especial atencin a las uas
6. Se aconseja emplear batas de manga larga con bocamangas ajustadas y guantes de ltex. Esta
prctica minimiza el desplazamiento de la flora bacteriana de la piel hacia el interior del rea de
trabajo, a la vez que protege las manos y brazos del operario de toda contaminacin
7. En determinados casos, adems es recomendable el empleo de mascarilla.

Durante la manipulacin:
1. Todo el material a utilizar (y nada ms) se sita en la zona de trabajo antes de empezar. De esta
forma se evita tener que estar continuamente metiendo y sacando material durante el tiempo de
operacin.
2. Es aconsejable haber descontaminado el exterior del material que se ha introducido en la
cabina.
3. Este material se coloca con un orden lgico, de manera que el material contaminado se sita en
un extremo de la superficie de trabajo y el no contaminado ocupa el extremo opuesto de la misma.
4. Segn el tipo de manipulacin y el modelo de la cabina, la zona de mxima seguridad dentro de
la superficie de trabajo vara. En general, se recomienda trabajar a unos 5-10 cm por encima de la
superficie y alejado de los bordes de la misma. Especial atencin se prestar a no obstruir las
rejillas del aire con materiales o residuos.
5. Una vez que el trabajo haya comenzado y sea imprescindible la introduccin de nuevo material,
se recomienda esperar 2-3 minutos antes de reiniciar la tarea. As se permite la estabilizacin del
15
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

flujo de aire. Es conveniente recordar que cuanto ms material se introduzca en la cabina, la

probabilidad de provocar turbulencias de aire se incrementa.
6. Mantener al mnimo la actividad del laboratorio en el que se localiza la cabina en uso, a fin de
evitar corrientes de aire que perturben el flujo. El flujo laminar se ve fcilmente alterado por las
corrientes de aire ambientales provenientes de puertas o ventanas abiertas, movimientos de
personas, sistema de ventilacin del laboratorio.
7. Evitar los movimientos bruscos dentro de la cabina. El movimiento de los brazos y manos ser
lento, para as impedir la formacin de corrientes de aire que alteren el flujo laminar.
8. Al igual que en el resto del laboratorio, no debe utilizarse el mechero Bunsen, cuya llama crea
turbulencias en el flujo y adems puede daar el filtro HEPA.
9. Cuando deban emplearse asas de platino es aconsejable el incinerador elctrico o, mejor an,
asas desechables.
10. Si se produce un vertido accidental de material biolgico se recoger inmediatamente,
descontaminado la superficie de trabajo y todo el material que en ese momento exista dentro de
la cabina.
11. No se utilizar nunca una cabina cuando est sonando alguna de sus alarmas.

Al finalizar el trabajo:
1. Limpiar el exterior de todo el material que se haya contaminado.
2. Vaciar la cabina por completo de cualquier material.
3. Limpiar y descontaminar con alcohol etlico al 70% o producto similar la superficie de trabajo.
4. Dejar en marcha la cabina durante al menos 15 minutos.
5. Conectar si fuera necesario la luz ultravioleta (UV). Conviene saber que la luz UV tiene poco
poder de penetracin por lo que su capacidad descontaminante es muy limitada.

Limpieza y desinfeccin de la CSB

1. Se llevar a cabo una desinfeccin completa en las siguientes situaciones: a) en caso de que se
haya producido un vertido importante; b) antes de cualquier reparacin; c) antes de iniciarse los
chequeos peridicos; d) siempre que se cambie el programa de trabajo; e) cuando se substituyan
los filtros HEPA y f) al cambiarla de lugar (incluso dentro del mismo laboratorio).
2. Se realizar con vapores de formaldehdo y siempre por personal debidamente entrenado y con
las prendas de proteccin personal adecuadas.
3. Por otro lado, debe tenerse en cuenta que una buena limpieza de la zona de trabajo es una
garanta de ausencia de polvo y otros contaminantes. La limpieza tiene por objeto eliminar la
suciedad que se halla adherida a las superficies y que sirve de soporte a los microorganismos. Al
limpiar se elimina tambin la materia orgnica, contribuyendo de forma decisiva a la eficacia de la
posterior descontaminacin.
4. Es conveniente una vez a la semana levantar la superficie de trabajo y limpiar y descontaminar
por debajo de ella.
5. Nunca se debe utilizar la cabina como almacn transitorio de equipo o material de laboratorio.
Esta mala prctica conduce a una acumulacin de polvo totalmente innecesaria.
6. Evitar introducir en la cabina materiales que emitan partculas fcilmente como algodn, papel,
madera, cartn, lpices...

Mantenimiento de la CSB
16
 MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO
DE MICROBIOLOGIA

1. Semanalmente se limpiar la superficie de trabajo y el resto del interior de la cabina.

2. Semanalmente se pondr en marcha a fin de comprobar la medida que da el manmetro.
3. Mensualmente, con un pao mojado, se limpiarn todas las superficies exteriores con objeto de
eliminar el polvo acumulado.
4. Mensualmente se revisar el estado de las vlvulas interiores con que vaya equipada.
5. Anualmente se certificar por una entidad cualificada.

Usos de la CSB en el Laboratorio de Microbiologa

1- Control de aerosoles infecciosos. Se generan en el procesamiento de muestras o cultivos como:

a.- Manipulacin de microorganismos del grupo de riesgo 3.
b.- Machacamiento de tejidos.
c.- Descontaminacin de muestras para cultivo de Micobacterias.
d.- Procedimientos de identificacin de hongos.
e.- Utilizacin del Vortex para mezclar muestras con microorganismos del grupo de riesgo 3.
f.- Decantacin de lquidos en muestras conmicroorganismos del grupo de riesgo 3.

2- Proteccin de muestras o materiales de la contaminacin externa:

a.- Procesamiento de lquidos orgnicosestriles con microorganismos del grupo de riesgo 3.
b.- Cultivos celulares.
c.- Preparacin de soluciones de medios y reactivos que deban ser estriles.

17