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TULCN - ECUADOR
AO: 2015
CERTIFICADO.
-----------------------------
Dr. Luis Balarezo
Tulcn, 18 de diciembre de 2014
i
AUTORA DE TRABAJO.
Yo, Diana Karolina Sierra Bolaos con cdula de identidad nmero 040164479-
4 declaro: que la investigacin es absolutamente original, autentica, personal y
los resultados y conclusiones a los que he llegado son de mi absoluta
responsabilidad.
.........................................
Diana Karolina Sierra Bolaos
Tulcn, 18 de diciembre de 2014
ii
ACTA DE CESIN DE DERECHOS DE TESIS DE GRADO.
Yo Diana Karolina Sierra Bolaos, declaro ser autor del presente trabajo y eximo
expresamente a la Universidad Politcnica Estatal del Carchi y a sus
representantes legales de posibles reclamos o acciones legales.
--------------------------------------------
Diana Karolina Sierra Bolaos
CI 040164479-4
iii
AGRADECIMIENTO.
Agradezco sobre todo a Dios, por darme la vida, salud y la felicidad de culminar
con xito mis estudios superiores.
Agradezco a los miembros del tribunal de tesis, Dr. Luis Balarezo como Tutor, y
al Ing. Fausto Montenegro como Biometrista, por la orientacin y ayuda que me
brindaron para la culminacin de la presente investigacin.
iv
DEDICATORIA.
Esta tesis est dedicada a Dios que estuvo a mi lado en el largo camino
trascurrido, guindome con su luz y ayudndome a ser mejor con las pruebas
que me han colmado de fortaleza, firmeza y sabidura.
Con mucho cario dedico tambin este trabajo a mi familia que me acompa en
todo momento con su amor y consejos encaminados para que yo pueda culminar
mi meta.
v
NDICE GENERAL
CERTIFICADO. ......................................................................................... i
AGRADECIMIENTO. ............................................................................... iv
DEDICATORIA. ........................................................................................ v
ABSTRACT. ........................................................................................ - 2 -
INTRODUCCIN ................................................................................ - 4 -
I. EL PROBLEMA. .......................................................................... - 5 -
III. METODOLOGA........................................................................ - 29 -
4.1. CONCLUSIONES...................................................................... - 53 -
V. BIBLIOGRAFA ........................................................................ - 55 -
vii
NDICE DE TABLAS
NDICE DE GRFICOS
viii
Grfico 6: Porcentaje de viabilidad de ovocitos bovinos a travs del tiempo - 48 -
Grfico 7: Regresin lineal de la viabilidad de ovocitos bovinos obtenidos .. - 49 -
NDICE DE FOTOGRAFAS
NDICE DE ANEXOS
ix
RESUMEN EJECUTIVO
-1-
ABSTRACT.
The total number of viable oocytes was 2018, giving an average of 10.09 oocytes
/ ovary. The highest percentage of viable oocytes are obtained at 1 and 3 hours
post slaughter, with a value of 68,7% and 62,81% of viability respectively, these
were statistically the best times, but also viable oocytes could obtain yet elapsed
nine hours post slaughter keeping ovaries at 38C with a percentage viability of
51.51%.
-2-
TUKUYSHUK RANAKU
Jatun rimay: Ovarios, ovocitos, ashka jatun yuyay kutishuk ladumun rrin, pacha
kutishuk ladu rrin.
-3-
INTRODUCCIN
-4-
I. EL PROBLEMA.
-5-
embriones que segn la FAO (2010) han tenido un impacto notable en los
programas de mejoramiento de ganado en los pases desarrollados.
-6-
1.3. DELIMITACIN.
1.3.3.1 Ubicacin:
Provincia Carchi
Cantn Tulcn
Parroquia Tulcn
Sitio UPEC
Altitud 2938 m.s.n.m.
Latitud 0 48 0 N
Longitud 77 43 0 E
Temperatura promedio mensual 13.2 C
Precipitacin promedio mensual 75.1 mm
Humedad relativa 79 %
Fuente: Estacin aeropuerto de Tulcn-2011
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
-7-
1.3.4. Duracin de la investigacin.
1.3.5. Beneficiarios
1.4. JUSTIFICACIN.
-8-
apuntar a un pas que exporte y venda tecnologas a partir de la gran diversidad
gentica que posee el Ecuador con animales resistentes y adaptados a
diferentes pisos climticos como aquel ganado de lechera que se explota sobre
los 3.000 msnm (Caiza, 2013).
Segn Collantes (2011), afirma que existe un riesgo muy grande al adquirir un
ejemplar bovino de alto valor gentico, ya que existen enfermedades, sustancias
txicas, y una serie de factores que podran causar una muerte sbita del animal,
o simplemente atrofiar su capacidad reproductiva. Considerando estos riesgos,
es necesario estar al tanto del avance de las biotecnologas aplicadas a la
reproduccin bovina, ya que ellas nos brindan alternativas para un eficiente
aprovechamiento del potencial gentico de un reproductor, sea macho o hembra,
adems nos ofrece soluciones reales para casos como incapacidad de
reproduccin por alguna enfermedad, o en el caso de una muerte sbita que se
pueda presentar en la hacienda.
-9-
por ello que con esta investigacin se pretende demostrar la posibilidad de
obtener ovocitos bovinos viables despus de la prdida del animal recuperando
parte de su material gentico, que caso contrario seran desaprovechados tras
su muerte.
1.5. OBJETIVOS.
- 10 -
II. FUNDAMENTACIN TERICA.
- 11 -
Fernndez F., Hernndez E. & Castellanos G. (2012) en su investigacin
publicada en la Revista Salud Animal titulada Viabilidad de Ovocitos Porcinos
Inmaduros y Madurados In Vitro Vitrificados con Etiln Glicol y Trehalosa, se
evala la viabilidad de ovocitos porcinos inmaduros (VG) y madurados in vitro
(MII) despus de la vitrificacin usando etiln glicol y trehalosa, se colectaron
503 ovarios de los cuales se obtuvieron 731 ovocitos por aspiracin de folculos
de 3 a 5 mm. Estos se dividieron en 3 grupos: Grupo 1) control (52 ovocitos),
Grupo 2) vitrificacin de ovocitos en estado de VG (326 ovocitos) y maduracin
despus del calentamiento y Grupo 3) vitrificacin de ovocitos madurados in vitro
(353 ovocitos). En el grupo 1, despus de ser cultivados in vitro por 44 horas se
evalu la maduracin mediante la tincin con orcena al 1% en cido actico al
45%. Los grupos 2 y 3 fueron vitrificados utilizando el protocolo de dos pasos
(equilibrio y vitrificacin), la viabilidad fue evaluada al momento del calentamiento
(desvitrificacin), mediante la tincin con azul de tiazolil (MTT). Los resultados
obtenidos de maduracin en el grupo 1, fue con presencia de VG 44%, en estado
de MI (cromatina condensada o metafase I) 23% y MII 33%. La viabilidad en el
grupo 2, en fresco fue 100%, al momento del calentamiento 76% y a 44 horas
de cultivo in vitro despus del calentamiento 13%. Los ovocitos del grupo 3, antes
de la vitrificacin presentaron una viabilidad de 94.8% y despus del
calentamiento 50%. Se concluye que aunque la viabilidad es mayor al momento
del calentamiento en los ovocitos inmaduros que en los maduros, stos ltimos
pueden presentar una mayor ventaja para el desarrollo posterior en la
reproduccin asistida, ya que en los inmaduros reduce mucho la viabilidad al
cultivarlos por 44 horas para su maduracin in vitro.
- 12 -
evaluacin de la MIV: expansin de cummulus (EC) y aparicin del primer
corpsculo polar (CP). En esta investigacin se trabaj con un diseo
experimental completamente al azar (DCA) con arreglo factorial 2x2 (4
tratamientos). Los ovarios bovinos fueron recuperados del matadero del cantn
Meja. La MIV se hizo a 37C, 5% de CO2 y humedad a saturacin por 22-24h.
Se pusieron a madurar 80 ovocitos, 40 pertenecientes a la raza Holstein Friesian
y 40 a la raza Jersey. De los cuales maduraron 55 (68.75%) evaluados por EC y
59 (73.5%) evaluados por CP. La tasa de maduracin para el medio TCM-199
+SFB fue de 62.5% para EC y 72.2% para CP, y para el medio TCM-199+EGF
fue de 75% para EC y 75% para CP. La tasa de maduracin para Holstein fue
de 65% para EC y 80% para CP y para Jersey 72% (EC) y 67% (CP). Los ANOVA
mostraron que no existen diferencias significativas entre tratamientos, medios ni
razas. Este trabajo representa el primer intento de MIV en el Ecuador, cuyos
resultados son similares a los reportados en otros trabajos, a pesar de haber
trabajado a un grado y medio menos de temperatura. Esto abre las puertas para
continuar con estudios de fertilizacin in vitro y criopreservacin en bovinos,
permitindonos estar a la par con respecto a los pases de la regin.
- 13 -
Art. 281 La soberana alimentaria constituye un objetivo estratgico y una
obligacin del Estado para garantizar que las personas, comunidades, pueblos y
nacionalidades alcancen la autosuficiencia de alimentos sanos y culturalmente
apropiados de forma permanente (Asamblea Constituyente, 2008).
Para ello, ser responsabilidad del Estado:
- 14 -
Con la presente investigacin pretendemos dar cumplimiento a lo estipulado en
el reglamento de la Universidad Politcnica Estatal del Carchi en cuanto a
trabajos de investigacin de tesis, graduacin, titulacin e incorporacin, captulo
II del marco legal, artculo 2 que menciona la obligatoriedad de la tesis, para la
obtencin del ttulo profesional de tercer nivel, en referencia a los artculos 80
literal e) y 144 de la ley orgnica de educacin superior LOES. (UPEC, 2011).
- 15 -
son fuente de una gran cantidad de ovocitos, que despus de su maduracin
pueden estar aptos para la generacin de embriones in vitro.
- 16 -
Esencialmente el curso de la actividad ovrica se encamina al desarrollo del
vulo y de las estructuras foliculares para culminar con la formacin y la
evolucin del cuerpo lteo, los cuales determinan una fase folicular o estrognica
y otra luteal o progesternica. (Santa Cruz, 2012)
2.4.2. Ovognesis
El nmero de gametos que poseen las hembras domsticas est fijado desde el
mismo momento de su nacimiento. La ternera nace con un crecido nmero de
ovocitos primarios, el que vara grandemente; se calcula de unos 40 000 a 800
000. Estos disminuyen muy rpido a partir del nacimiento y despus de este lo
hacen de forma gradual. (Brito & Tagle, 2009). La ovognesis comienza en la
vida fetal con la divisin mittica de las ovogonias, hasta que en cierto momento
las clulas se convierten en ovocitos y empiezan el proceso de meiosis, el cual
permite obtener una clula haploide apta para ser fecundada (vulo). La meiosis
se detiene en dos momentos especficos: alrededor del nacimiento y en la
ovulacin y slo se completar al producirse la fecundacin. El proceso meitico
consta de dos divisiones: meiosis I y II, divididas cada una en cuatro fases:
profase, metafase, anafase y telofase (Gonzlez, 2012).
- 17 -
Fotografa 2: Ovognesis
2.4.3. Foliculognesis
- 18 -
El folculo primordial esta constituido por el oocito primario, que se encuentra
rodeado de una pequea capa de pequeas celulas foliculares planas, que dan
origen a las clulas de la granulosa. Segn (Palma, 2001) el inicio de su
crecimiento se define por: el incremento en el tamao del ovocito, un cambio en
la forma de las celulas foliculares, que pasan de planas a cbicas y el comienzo
de la formacion de la zona pelucida, denominandose foliculo primario.
- 19 -
Fotografa 3: Anatoma del Ovocito
La maduracin puede ser dividida en dos etapas: un largo periodo inicial, durante
el cual el ovocito crece y madura en el interior de un folculo en crecimiento, y un
corto periodo final que se completa entre el reinicio de la meiosis y la ovulacin.
La primera de estas etapas tiene una duracin de varias semanas o meses y
supone la adquisicin gradual de una gran parte de la maquinaria necesaria para
soportar el desarrollo embrionario temprano (Eppig y Downs, citados por
Canzos, 2012).
- 20 -
La maduracin nuclear abarca la progresin desde el estado de la profase de la
primera divisin meitica hasta la metafase de la segunda divisin meitica. La
descarga de LH, originada pocas horas antes de la ovulacin e inducida por el
propio oocito, activa de nuevo la meiosis, que se aprecia por la desintegracin
de la vescula germinal, ocurriendo las distintas fases meiticas, hasta que tras
la extrusin del primer corpsculo polar, se vuelve a interrumpir la meiosis en la
metafase de la segunda divisin, coincidiendo con la ovulacin (Benavides,
2012).
Una vez que un folculo empieza a crecer, el crecimiento parece ser continuo
hasta que el folculo tiene uno de dos posibles destinos ovulacin o atresia. Es
bien conocido que muy pocos folculos que inician su crecimiento exitosamente
llegan a ovular, la mayora muere antes de alcanzar este estadio (Benavides,
2012).
- 21 -
mejoramiento gentico de los animales ampliando la eficiencia reproductiva y
una calidad superior de sus productos (Mellisho, 2010).
- 22 -
La temperatura de transporte segn Palma citado por Gonzlez (2012), puede
ser temperatura ambiente, sin embargo, se ha demostrado que el mantenimiento
de la temperatura durante el transporte a 30C es importante ya que por debajo
de esta, se ve comprometida la capacidad de maduracin del ovocito in vitro
(Santa Cruz, 2012).
Segn Motlik y Fulka citados por Santa Cruz (2012), los folculos menores de 2
mm de dimetro contienen un alto porcentaje de ovocitos incompetentes o bien
atrsicos, mientras que los mayores de 10 mm presentan un mayor nmero de
ovocitos degenerados. Por ello, la mayora de los autores seleccionan folculos
antrales, de dimetros comprendidos entre 2 y 8 mm.
Gandolfi y cols. citados por Gardn (2000), afirman que la morfologia de los
ovarios puede ayudar como metodo de preseleccin de ovocitos, clasificando a
los ovarios en tres categorias de acuerdo a la cantidad y tamao de folculos. De
esta manera: Categoria 1: ovarios con foliculo mayor a 10 mm de diametro.
Categoria 2: ovarios con presencia de 10 foliculos de 2 a 5 mm de diametro y
ausencia de 1 folculo de 10 mm de diametro y Categoria 3: ovarios con presencia
de menos de 10 foliculos de 2 a 5 mm de diametro y ausencia de 1 folculo de 10
mm de diametro. Indicando que los ovarios de las categorias 1 y 2 contienen
ovocitos que forman mayor proporcion de blastositos, despus de ser madurados
y fertilizados in vitro.
- 23 -
2.4.9. Obtencin de ovocitos
- 24 -
tejido para alcanzar folculos corticales ms profundos; sin embargo, la
diseccin consume ms tiempo (Benavides, 2012).
- 25 -
- Calidad 1: Ovocito con citoplasma homogneo y con granulaciones finas, y
mltiples capas compactas de clulas del cmulo.
- 26 -
2.5. VOCABULARIO TCNICO
- 27 -
Transferencia de embriones: es un mtodo artificial de reproduccin que
consiste en recoger un embrin del tero de una hembra llamada donante para
introducirlo en el tero de una hembra llamada receptora. As continuar su
crecimiento y desarrollo hasta el parto.
- 28 -
III. METODOLOGA.
- 29 -
3.3. POBLACIN Y MUESTRA DE LA INVESTIGACIN.
3.3.1. Poblacin:
3.3.2. Muestra:
La muestra se basa en los ovarios post mortem a los que se les realizarn los
respectivos anlisis.
Donde:
N: es el tamao de la poblacin o universo
k: es una constante que depende del nivel de confianza que asignemos. Para
un nivel de confianza de 95% el valor de k sera 1,96.
- 30 -
q: es la proporcin de individuos que no poseen esa caracterstica, es decir, es
1-p.
n: es el tamao de la muestra.
1561,61
n=
6,87 + 0.96
n = 200
Con esto obtenemos un total de 200 unidades experimentales que debern ser
analizados en esta investigacin.
- 31 -
TABLA 2: OPERACIONALIZACIN DE VARIABLES.
- 32 -
3.5. RECOLECCIN DE INFORMACIN.
- 33 -
Tabla 3: Descripcin de los factores en estudio.
Tiempo trascurrido post Ovarios
mortem
1hora 40
3 horas 40
5 horas 40
7 horas 40
9 horas 40
Cada muestra estuvo constituida por un ovario de una hembra bovina sin tomar
en cuenta su edad y estado fisiolgico, los ovarios fueron obtenidos en el camal,
fueron lavados, y colocados en una solucin salina al 0.9% a una temperatura
de 38C.
- 34 -
Fotografa 4: Ovarios Bovinos Recolectados
- 35 -
3.5.8.1. Cantidad de ovocitos obtenidos
- 36 -
3.5.9. Materiales
Ovarios
Termo
Tarrinas trmicas
Bisturs
Pinzas
Guantes quirrgicos
Bolgrafo
Hojas de registro
3.5.9.3. Equipos
Microscopio
Balanza de 300g de capacidad.
Probeta de 1000 ml
Termmetro
Vidrio reloj
Vaso de precipitacin
Bao Mara
- 37 -
Flash Memori
Calculadora
Cmara fotogrfica
Computadora
Impresora
Solucin salina
Alcohol
3.5.10. Procedimiento
- 38 -
Fotografa 6: Extraccin de lquido folicular
- 39 -
3.5.10.4. Clasificacin de ovocitos: Con la utilizacin de un microscopio se
observ los ovocitos presentes en el contenido folicular y se procedi a
clasificarlos morfolgicamente mediante la clasificacin de Stojkovic et al., citada
por Collantes (2011), en categoras 1, 2, 3 y 4, las cuales se describen en el
apartado 2.4.10.
Tomando en cuenta que los ovocitos calidad 1 y 2 son catalogados como viables
para la produccin in vitro de embriones, y los ovocitos de calidad 3 y 4 son
catalogados como no viables para dicha biotecnologa.
- 40 -
3.5.11. Diagrama de procedimiento
INICIO
Determinacion
de sexo
Faenamiento de
hembras bovinas
Extraccin de
aparato
reproductor
Obtencin de
ovarios
Extraccin de
lquido folicular
Observacin
microscpica de
ovocitos
Clasificacin
morfolgica
Determinacin
de la viabilidad
Toma de datos
Procesamiento
de la informacin
Anlisis e
interpretacin
- 41 -
3.6. PROCESAMIENTO, ANLISIS E INTERPRETACIN DE
RESULTADOS.
- 42 -
Tabla 4: Anlisis estadstico de viabilidad (%) de ovocitos bovinos 1 hora post
mortem
Media 68,70
Error tpico 1,89
Mediana 69,61
Moda 66,67
Desviacin estndar 11,94
Cuenta 40
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
80,00
60,00
40,00
20,00
0,00
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39
Ovarios
- 43 -
Tabla 5: Anlisis Estadstico de Viabilidad (%) a 3 horas post mortem
Media 62,81
Error tpico 1,68
Mediana 63,64
Moda 62,5
Desviacin estndar 10,61
Cuenta 40
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
90,00
80,00
70,00
Viabilidad (%)
60,00
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39
Ovarios
- 44 -
Tabla 6: Anlisis Estadstico de Viabilidad (%) a 5 horas post mortem
Media 57,81
Error tpico 1,74
Mediana 60
Moda 60
Desviacin estndar 11,01
Cuenta 40
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
90,00
80,00
70,00
Viabilidad (%)
60,00
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39
Ovarios
- 45 -
Tabla 7: Anlisis Estadstico de Viabilidad (%) a 7 horas post mortem
Media 54,41
Error tpico 1,22
Mediana 55,28
Moda 54,55
Desviacin estndar 7,69
Cuenta 40
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
80,00
70,00
60,00
Viabilidad (%)
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39
Ovarios
- 46 -
Tabla 8: Anlisis Estadstico de Viabilidad (%) a 9 horas post mortem
Media 51,51
Error tpico 1,32
Mediana 51,92
Moda 50
Desviacin estndar 8,35
Cuenta 40
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
80,00
70,00
60,00
Viabilidad (%)
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39
Ovarios
- 47 -
Tabla 9: Viabilidad (%) de ovocitos bovinos a 1, 3, 5, 7 y 9 horas post mortem
HORA VIABILIDAD
(%)
1 hora 68,69
3 horas 62,81
5 horas 57,81
7 horas 54,41
9 horas 51,50
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
80
70
68,69
60
62,81
Viiabilidad (%)
50 57,81
54,41
51,50
40
30
20
10
0
1 hora 3 horas 5 horas 7 horas 9 horas
Tiempo (horas)
- 48 -
3.6.1.2. Anlisis de regresin lineal de variables.
80
70
68,69
60 y = -4,278x + 71,878
62,81 R = 0,978
57,81
VIIABILIDAD (%)
50 54,41
51,50
40
30
20
10
0
1 hora 3 horas 5 horas 7 horas 9 horas
TIEMPO (HORAS)
Tabla 10: Anlisis de regresin lineal del porcentaje de viabilidad de ovocitos bovinos
Variable N R R Aj
%Viables 5 0,98 0,98
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
- 49 -
Tomando la informacin sobre los coeficientes de regresin se puede escribir la
ecuacin del modelo ajustado:
= +
= 71,88 4,24
= 71,88 4,24(12)
= 21 %
Este resultado, al igual que cualquier otra prediccin deseada usando valores de
X dentro o fuera del rango estudiado, puede obtenerse automticamente al
reemplazar x por una hora especificada.
F.V. GL SC CM F CAL
Total 199 27189,97
Momentos De Recoleccin 4 7486,44 1871,61 18,52
Error 195 19703,52 101,04
CV% 17,02%
Elaborado por: Sierra, K. (2014)
- 50 -
Tabla 13: Prueba de Tukey 5% para la viabilidad de ovocitos bovinos en los diferentes
momentos de recoleccin
- 51 -
c. Cantidad ovocitos recolectados a 1, 3, 5, 7 y 9 horas post mortem
4.1. CONCLUSIONES.
- 53 -
4.2. RECOMENDACIONES.
- 54 -
V. BIBLIOGRAFA
Ahuka, C., Montiel, F., & Ponciano, P. (2013). Produccin In Vitro y transferencia
de embriones en bovinos. Veracruz, Mxico.
Apuntes de Biologa para estudiantes y Profesores. (Junio de 2014).
Gametognesis. Obtenido de
http://www.biologiaescolar.com/2014/06/gametogenesis.html
Asamblea Constituyente. (2008). Constitucion de la republica del Ecuador. Quito.
Benavides, L. A. (2012). Efecto del Mtodo de Coleccin y Tensin de Oxgeno
sobre el desarrollo embrionario de Ovocitos Bovinos fecundados y
cultivados In Vitro. Lima, Per.
Brito, R., & Tagle, L. (2009). Fisiologa de la reproduccin animal: con elementos
de biotecnologa. Cuba: Flix Varela.
Canzos, J. M. (Mayo de 2012). DISEO DE UN MEDIO DEFINIDO PARA LA
MADURACIN IN VITRO DE OVOCITOS BOVINOS EN BAJA TENSIN
DE OXIGENO. Espaa.
Caiza, F. (2013). INIAP realiz seminario interinstitucional sobre Biotecnologa
Aplicada a la Reproduccin Bovina. Coordinacin Comunicacin INIAP.
Carrasco, A. (2012). USO DE AZUL BRILLANTE DE CRESILO EN LA
SELECCIN DE OVOCITOS . Valdivia, Chile.
Collantes, J. I. (2011). VIABILIDAD DE LOS OVOCITOS BOVINOS OBTENIDOS
POST MORTEM, PARA LA PRODUCCIN DE EMBRIONES IN-VITRO.
Obtenido de Repositorio de la Universidad de Guayaquil:
http://repositorio.ug.edu.ec/bitstream/redug/891/1/Collantes%20Mendoza
%20Jimmy188.pdf
Cuadrado, F. (Junio de 2012). Evaluacin de ovocitos bovinos por microscopia
de luz polarizada. Obtenido de
http://digibuo.uniovi.es/dspace/bitstream/10651/4014/1/TFMdef.pdf
FAO, F. a. (2007). La situacin de los recursos zoogeneticos mundiales para la
alimentacin y la agricultura. Roma: Comisin de los recursos genticos
para la alimentacin y la agricultura.
- 55 -
FAO, F. a. (2011). Informe sobre los progresos realizados en la aplicacin del
Plan de Accin Mundial sobre los Recursos Zoogenticos.
Gardn, J. (2000). Utilizacin de antisuero H-Y para sexar embriones bovinos en
diferentes estadios del desarrollo embrionario, obtenidos por fertilizacin
in vitro. Crdoba: Universidad de Crdoba.
Gomez, O. (2012). TECNICAS DEL SLICING Y ASPIRACION FOLICULAR EN
LA EFICIENCIA DE LA RECUPERACION DE OVOCITOS BOVINOS
CRIOLLOS POSTMORTEN EN EL CAMAL. Asociacin Peruana de
Reproduccin Animal, 38-39.
Gonzlez, V. (2012). EVALUACIN DE LA EXPANSIN DE LAS CLULASDEL
CMULO EN LA MADURACIN IN VITRODE TRES TIPOS
MORFOLGICOS DE OOCITOSPROCEDENTES DE OVARIOS DE
VACAS DE MATADERODE LA CIUDAD DE LOJA CON DOS MEDIOS
DE MADURACIN. Loja: CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA.
Herrera, L., & Jara, O. (2009). COMPARACIN DE DOS SUPLEMENTOS PARA
MADURACIN . Bogot: UNIVERSIDAD DE LA SALLE.
Instituto de Investigaciones Biolgicas Clemente Estable. (2014). Obtenido de
http://iibce.edu.uy/uas/biomolec/ovocito.htm
Lorenzo, P. (1992). MADURAClON IN VITRO DE OOCITOS DE GANADO
VACUNO. Madrid: Departamento de Fisiologa Animal. Obtenido de
http://biblioteca.ucm.es/tesis/19911996/D/2/AD2007601.pdf
Mellisho, E. (2010). Biotecnologa Reproductiva. Per: La Molina.
Palma, G. (2001). Biotecnologa de la reproduccin. Argentina: Instituto Nacional
de Tecnologia Agropecuaria.
Santa Cruz, C. (2012). Efecto de tres suplementos macromolculas (pva, pvp y
bsa) sobre la tasa de maduracin, division y desarrollo embrionario in vitro
de ovocitos bovinos procedentes de ovarios obtenidos de camal. Lima,
Per.
- 56 -
Universidad de Sevilla. (2014). Lminas Ovario. Obtenido de
http://personal.us.es/salles/OMA/docencia/practicas/difiore/laminas/Ovari
o-b128.htm>
UPEC. (2011). Manual para la presentacion del perfil del proyecto de tesis de
grado, proyecto de tesis de grado e informe final de tesis de grado. Tulcan:
UPEC.
Valencia, E. (2012). Maduracin in vitro de ovocitos colectados post mortem de
ovarios de vacas Holstein Friesian y Jersey. Quito.
- 57 -
VI. ANEXOS.
Anexo 1: Cantidad de ovocitos obtenidos 1 hora post mortem
No
Fecha Hora Hora Tiempo Viables Viables Total % V % NV
1 25/08/2014 10:49 11:50 01:01:00 9 0 9 100,00 0,00
2 25/08/2014 10:49 11:53 01:04:00 5 3 8 62,50 37,50
3 25/08/2014 10:58 12:04 01:06:00 5 5 10 50,00 50,00
4 25/08/2014 10:58 12:04 01:06:00 7 2 9 77,78 22,22
5 31/08/2014 12:47 13:49 01:02:00 8 3 11 72,73 27,27
6 31/08/2014 12:47 13:49 01:02:00 9 5 14 64,29 35,71
7 04/09/2014 12:57 14:06 01:09:00 6 6 12 50,00 50,00
8 04/09/2014 12:57 14:06 01:09:00 7 5 12 58,33 41,67
9 10/09/2014 10:50 11:50 01:00:00 4 2 6 66,67 33,33
10 10/09/2014 10:50 11:55 01:05:00 3 1 4 75,00 25,00
11 01/10/2014 10:20 11:21 01:01:00 9 4 13 69,23 30,77
12 01/10/2014 10:20 11:24 01:04:00 5 2 7 71,43 28,57
13 01/10/2014 10:35 11:28 00:53:00 8 3 11 72,73 27,27
14 01/10/2014 10:35 11:35 01:00:00 7 2 9 77,78 22,22
15 02/10/2014 11:40 12:40 01:00:00 5 1 6 83,33 16,67
16 02/10/2014 11:40 12:40 01:00:00 4 2 6 66,67 33,33
17 02/10/2014 11:50 12:50 01:00:00 9 12 21 42,86 57,14
18 02/10/2014 11:50 12:50 01:00:00 11 1 12 91,67 8,33
19 08/10/2014 10:30 11:38 01:08:00 7 3 10 70,00 30,00
20 08/10/2014 10:30 11:38 01:08:00 7 2 9 77,78 22,22
21 08/10/2014 10:50 11:54 01:04:00 3 2 5 60,00 40,00
22 08/10/2014 10:50 11:54 01:04:00 6 1 7 85,71 14,29
23 08/10/2014 10:54 11:57 01:03:00 2 2 4 50,00 50,00
24 08/10/2014 10:54 11:57 01:03:00 6 2 8 75,00 25,00
25 13/10/2014 10:35 11:36 01:01:00 7 4 11 63,64 36,36
26 13/10/2014 10:35 11:38 01:03:00 7 3 10 70,00 30,00
27 13/10/2014 10:40 11:40 01:00:00 6 2 8 75,00 25,00
28 15/10/2014 10:20 11:20 01:00:00 5 4 9 55,56 44,44
29 15/10/2014 10:20 11:26 01:06:00 7 5 12 58,33 41,67
30 15/10/2014 10:30 11:34 01:04:00 6 2 8 75,00 25,00
31 15/10/2014 10:30 11:40 01:10:00 7 3 10 70,00 30,00
32 15/10/2014 10:40 11:47 01:07:00 8 4 12 66,67 33,33
33 15/10/2014 10:47 11:54 01:07:00 6 1 7 85,71 14,29
34 15/10/2014 10:47 11:54 01:07:00 6 5 11 54,55 45,45
35 20/10/2014 10:00 11:00 01:00:00 10 4 14 71,43 28,57
36 20/10/2014 10:00 11:00 01:00:00 12 9 21 57,14 42,86
37 20/10/2014 10:05 11:07 01:02:00 9 5 14 64,29 35,71
38 20/10/2014 10:22 11:30 01:08:00 10 6 16 62,50 37,50
- 58 -
39 20/10/2014 10:56 11:58 01:02:00 6 3 9 66,67 33,33
40 20/10/2014 10:56 12:00 01:04:00 8 2 10 80,00 20,00
- 59 -
35 15/10/2014 9:25 12:25 03:00:00 2 1 3 66,67 33,33
36 15/10/2014 9:25 12:30 03:05:00 7 4 11 63,64 36,36
37 15/10/2014 9:30 12:30 03:00:00 7 2 9 77,78 22,22
38 15/10/2014 9:30 12:34 03:04:00 6 3 9 66,67 33,33
39 15/10/2014 9:35 12:34 02:59:00 4 3 7 57,14 42,86
40 15/10/2014 9:35 12:35 03:00:00 3 3 6 50,00 50,00
- 60 -
31 09/10/2014 12:29 17:35 05:06:00 9 6 15 60,00 40,00
32 09/10/2014 12:35 17:42 05:07:00 6 5 11 54,55 45,45
33 13/10/2014 10:00 15:10 05:10:00 14 5 19 73,68 26,32
34 13/10/2014 10:00 15:10 05:10:00 4 5 9 44,44 55,56
35 13/10/2014 10:07 15:13 05:06:00 7 5 12 58,33 41,67
36 13/10/2014 10:07 15:13 05:06:00 6 4 10 60,00 40,00
37 13/10/2014 10:11 15:15 05:04:00 8 5 13 61,54 38,46
38 13/10/2014 10:11 15:15 05:04:00 5 4 9 55,56 44,44
39 13/10/2014 10:15 15:18 05:03:00 7 6 13 53,85 46,15
40 13/10/2014 10:15 15:18 05:03:00 4 5 9 44,44 55,56
- 61 -
28 02/10/2014 10:14 17:17 07:03:00 5 5 10 50,00 50,00
29 02/10/2014 10:19 17:20 07:01:00 5 4 9 55,56 44,44
30 02/10/2014 10:27 17:27 07:00:00 6 7 13 46,15 53,85
31 02/10/2014 10:27 17:30 07:03:00 7 5 12 58,33 41,67
32 02/10/2014 10:45 17:40 06:55:00 4 3 7 57,14 42,86
33 02/10/2014 10:45 17:48 07:03:00 6 4 10 60,00 40,00
34 02/10/2014 11:05 18:00 06:55:00 4 5 9 44,44 55,56
35 02/10/2014 11:11 18:12 07:01:00 5 8 13 38,46 61,54
36 02/10/2014 11:17 18:24 07:07:00 7 5 12 58,33 41,67
37 08/10/2014 11:17 18:30 07:13:00 4 3 7 57,14 42,86
38 08/10/2014 11:29 18:24 06:55:00 5 4 9 55,56 44,44
39 08/10/2014 11:29 19:30 08:01:00 5 5 10 50,00 50,00
40 08/10/2014 11:41 19:40 07:59:00 11 9 20 55,00 45,00
N No
Fecha Hora Hora Tiempo Viables Viables total %V % NV
1 28/08/2014 9:44 16:37 06:53:00 6 4 10 60,00 40,00
2 28/08/2014 9:44 16:37 06:53:00 4 5 9 44,44 55,56
3 31/08/2014 9:53 17:00 07:07:00 3 1 4 75,00 25,00
4 31/08/2014 9:53 17:03 07:10:00 3 4 7 42,86 57,14
5 31/08/2014 10:01 17:07 07:06:00 5 3 8 62,50 37,50
6 31/08/2014 10:01 17:07 07:06:00 8 6 14 57,14 42,86
7 31/08/2014 10:08 17:11 07:03:00 6 4 10 60,00 40,00
8 31/08/2014 10:17 17:15 06:58:00 6 6 12 50,00 50,00
9 31/08/2014 10:17 17:17 07:00:00 6 5 11 54,55 45,45
10 31/08/2014 10:20 17:21 07:01:00 4 5 9 44,44 55,56
11 31/08/2014 10:23 17:26 07:03:00 4 6 10 40,00 60,00
12 01/09/2014 10:25 17:25 07:00:00 6 5 11 54,55 45,45
13 01/09/2014 10:37 17:32 06:55:00 4 3 7 57,14 42,86
14 01/09/2014 10:49 17:39 06:50:00 10 8 18 55,56 44,44
15 01/10/2014 9:30 17:03 07:33:00 6 3 9 66,67 33,33
16 01/10/2014 9:30 17:03 07:33:00 4 3 7 57,14 42,86
17 01/10/2014 9:53 17:07 07:14:00 2 1 3 66,67 33,33
18 01/10/2014 9:53 17:07 07:14:00 4 3 7 57,14 42,86
19 01/10/2014 9:53 17:11 07:18:00 5 3 8 62,50 37,50
20 01/10/2014 10:21 17:21 07:00:00 8 6 14 57,14 42,86
21 01/10/2014 10:29 17:29 07:00:00 4 5 9 44,44 55,56
22 01/10/2014 10:29 17:33 07:04:00 5 4 9 55,56 44,44
23 01/10/2014 11:01 17:51 06:50:00 4 4 8 50,00 50,00
24 01/10/2014 11:13 18:05 06:52:00 7 4 11 63,64 36,36
- 62 -
25 01/10/2014 11:13 18:12 06:59:00 3 7 10 30,00 70,00
26 02/10/2014 10:05 17:05 07:00:00 7 7 14 50,00 50,00
27 02/10/2014 10:14 17:14 07:00:00 9 4 13 69,23 30,77
28 02/10/2014 10:14 17:17 07:03:00 2 3 5 40,00 60,00
29 02/10/2014 10:19 17:20 07:01:00 6 5 11 54,55 45,45
30 02/10/2014 10:27 17:27 07:00:00 6 7 13 46,15 53,85
31 02/10/2014 10:27 17:30 07:03:00 8 5 13 61,54 38,46
32 02/10/2014 10:45 17:40 06:55:00 4 3 7 57,14 42,86
33 02/10/2014 10:45 17:48 07:03:00 6 4 10 60,00 40,00
34 02/10/2014 11:05 18:00 06:55:00 4 5 9 44,44 55,56
35 08/10/2014 11:11 18:12 07:01:00 5 9 14 35,71 64,29
36 08/10/2014 11:17 18:24 07:07:00 7 5 12 58,33 41,67
37 16/10/2014 11:17 18:30 07:13:00 4 3 7 57,14 42,86
38 16/10/2014 11:29 18:24 06:55:00 11 9 20 55,00 45,00
39 16/10/2014 11:29 19:30 08:01:00 5 5 10 50,00 50,00
40 16/10/2014 11:41 19:40 07:59:00 10 4 14 71,43 28,57
- 63 -
19 01/10/2014 9:30 18:40 09:10:00 5 5 10 50,00 50,00
20 01/10/2014 9:53 18:55 09:02:00 5 7 12 41,67 58,33
21 01/10/2014 9:53 18:57 09:04:00 5 9 14 35,71 64,29
22 01/10/2014 9:53 19:04 09:11:00 7 6 13 53,85 46,15
23 01/10/2014 10:00 19:11 09:11:00 4 4 8 50,00 50,00
24 01/10/2014 10:05 19:18 09:13:00 3 3 6 50,00 50,00
25 01/10/2014 10:05 19:22 09:17:00 4 3 7 57,14 42,86
26 01/10/2014 10:21 19:32 09:11:00 4 5 9 44,44 55,56
27 01/10/2014 10:29 19:35 09:06:00 5 6 11 45,45 54,55
28 01/10/2014 10:29 19:38 09:09:00 4 5 9 44,44 55,56
29 02/10/2014 9:40 18:50 09:10:00 8 5 13 61,54 38,46
30 02/10/2014 9:50 18:54 09:04:00 5 2 7 71,43 28,57
31 02/10/2014 9:30 18:30 09:00:00 3 3 6 50,00 50,00
32 02/10/2014 9:30 18:35 09:05:00 5 4 9 55,56 44,44
33 02/10/2014 9:37 18:40 09:03:00 6 4 10 60,00 40,00
34 02/10/2014 9:37 18:46 09:09:00 8 5 13 61,54 38,46
35 08/10/2014 9:40 18:50 09:10:00 5 5 10 50,00 50,00
36 08/10/2014 9:50 18:54 09:04:00 9 7 16 56,25 43,75
37 16/10/2014 7:18 16:10 08:52:00 5 6 11 45,45 54,55
38 16/10/2014 7:18 16:10 08:52:00 2 3 5 40,00 60,00
39 16/10/2014 7:21 16:10 08:49:00 6 5 11 54,55 45,45
40 16/10/2014 7:21 16:10 08:49:00 7 8 15 46,67 53,33
- 64 -
- 65 -