Receptores.

Aspectos Farmacodinmicos

Jenny Fiedler

Lab. Neuroplasticidad y Neurogentica.

Depto. Bioqumica y Biologa Molecular
jfiedler@ciq.uchile.cl
Funcin de las protenas
Enzimas
(biocatalizadores)

Receptores /
canales/
transportadores
Estructurales
(membranas)
Activador y
represor de genes
 DNABlancos farmacolgicos
RNA
Protenas
Pptidos
( 50
aminocidos)
Blancos farmacolgicos: Receptores
Superficie celular, citoslicos,
organelos y nucleares
Establecen enlaces con los
ligandos
Pueden ser agonistas o
antagonistas
La interaccin ligando agonista-
receptor produce respuestas
celulares
http://www.nature.com/ncomms/2015/1509
28/ncomms9480/fig_tab/ncomms9480_F1.
html
Receptor canal
http://jgp.rupress.org/content/131/2/163/F1.
expansion.html
http://www.nanion.de/products/patchliner/data/91-products/patchliner-
data/699-icell-neurons-gaba-currents.html
RECEPTORES CON ACTIVIDAD
INTRINSECA
Receptores esteroidales
ESTEREOSELECTIVIDAD
R + L <=> R-L => EFECTO
EVALUACION
DEL
EFECTO
Antimuscarinic benzetimide and its resolved
stereoisomers dexetimide and levetimide
Dobutamina

isomero(+) agonista 1/2 y antagonista 1,

isomero() agonista 1.

J Pharmacol Exp Ther. 1981 Nov;219(2):447-52.Alpha and beta

adrenergic effects of the stereoisomers of dobutamine.
Ruffolo RR Jr, Spradlin TA, Pollock GD, Waddell JE, Murphy PJ.
 CARACTERISTICAS DE LOS RECEPTORES

1) PRODUCEN UNA RESPUESTA BIOLGICA

2) SON SATURABLES

3) ESPECIFICOS

4) ESTABLECEN UNA INTERACCIN REVERSIBLE CON EL LIGANDO

CURVA DOSIS EFECTO
INDICE TERAPUTICO

LD50
ED50
EFECTOS ALOSTERICOS SOBRE RECEPTORES
 Estudio de la interaccin
Ligando-Receptor

R + L* RL*

La unin entre el ligando y el receptor debe obedecer a la

ley de accin de masas.

La unin ocurre cuando el ligando y el receptor colisionan

con una orientacin y energa apropiada.
 k1
[ligando] + [receptor] [ligando] [receptor]
k2

k1 = constante de velocidad de asociacin

k2 = constante de velocidad de disociacin

Interaccin es reversible.

La velocidad de formacin de [L] + [R] o la

disociacin de [LR] depende solamente del nmero
de receptores, la concentracin del ligando y las
constantes de velocidad k1 y k2.
En el equilibrio

[L] [R] k1 = [LR] k2

KD = k2/k1 = [L][R]
[LR]

Kd unidades ?

Kd = 1/Ka es una medida inversa de la afinidad del

receptor.

Kd = [L] produce el 50% ocupancia del receptor

Estudio de la interaccin Ligando-Receptor
k1
[ligando] + [receptor] [ligando receptor]
k2

Contarcon una preparacin de membranas de un

rgano que presente abundancia del receptor

Disponerde un ligando (NT, H, Ag, Antg) marcado

isotpicamente (Yodo o 3H)
 Ensayo de unin a receptores

Receptor
Radioligando
Condicin de equilibrio
Tcnica de separacin del complejo L-R del
ligando libre apropiada
 Tejido apropiado
Mtodo rpido separacin complejo ligando-Receptor
Mtodo de filtracin
Soporte slido
Incubacin con concentraciones
variables del frmaco
Unin no especfica

U no esp=Linear y no-saturable
 Calculo
[L*] Bound Bound (NS) Specific
(total) (total-NS)
0.1 X0.1 Y0.1 X0.1-Y0.1
0.3 X0.3 Y0.3 X0.3-Y0.3
1 X1 Y1 X1-Y1
3 X3 Y3 X3-Y3
10 X10 Y10 X10-Y10
100 X100 Y100 X100-Y100
 Unin no Especfica

Qu se debe usar??
Utilizar un frmaco no marcado que se una
al receptor.
Que concentracin del frmaco no
marcado se debe usar?
Cercana a 100 veces la KD que presenta
por el receptor.
 La unin del frmaco est dada:
Nmero de receptores
La concentracin del ligando agregado
La afinidad de la droga por su receptor
 Mtodos Grficos
1. Ajuste a una curva para determinar Bmax
(LRmax) y KD

Unin especfica [LR]=[LR]max[L]

KD+[L]

Esta ecuacin describe una hiprbola

rectangular o isoterma

LRmax=Bmax =Rtotal
 Transformacin de Scatchard
Y Bound/Free (radioligando unido/libre)

X Bound (pmol/mg proteina).

 Grfica de Scatchard
40

30
Positive Cooperativity
Bound/Free

20

10

Negative Cooperativity
0
50 60 70 80 90 100

Bound
 Grfica de Hill
[ LR]
Log nLog [ L] nLog ( K d )
[ LR ] max [ LR]
4

Slope=n
3
X-intercept=Kd when n=1
n=2
n=1
Log(B/Bmax-B)

n=0.5
0

-1
0.1 1 10 100 1000
Log[L]
 Consideraciones

Ley de accin de masas

Scatchard lineal , o coeficiente de Hill =1
No hay deplecin del ligando(unin total<10%)
Equilibrio ([R]<<Kd; [R]<<[L])

Fisiolgicamente-relevante
Saturable
Especfico
que la concentracin se pueda lograr in vivo.
Que la Kd este relacionada con la potencia del
frmaco in vivo.
Ensayos de competencia
Permite
estimar la afinidad de un ligando no
marcado por su receptor.

Competitivo o no-competitivo.
Mtodo:
Se trabaja con una nica concentracin de
ligando marcado
Concentraciones variables del ligando no
marcado.
 Ensayo de competencia

Ensayo de competencia en funcin de la concentracin competidor

Ligando marcado isotpicamente

Competidor concentracin variable
 IC50 = concentracindel frmaco que COMPITE con
el 50% del ligando marcado.

IC50 no corresponde a la KD del frmaco

Ki = constante de disociacin del frmaco al equilibrio
Es la concentracin del inhibidor (competidor) que se une al 50% de
los sitios receptores.
Ki
se puede determinar si se conoce la IC50.
Mediante la ecuacin de Cheng y Prusoff.
Example: Find Ki of morphine in a preparation with 3H-diprenorphine.

IC50 = 100 nM Ki = 25 nM
[L] = 3 nM
KD = 1 nM
 Ligando compite por la Unin
de dos sitios

Competitive radioligand binding assay. Displacement of [3H]SR141716A binding to

CB1 cannabinoid receptors in a mouse brain homogenate by the cannabinoid
agonists AM2233 and WIN55212-2. Displacement curves are shown fit to a two-
site model with Ki values of 0.08 nM and 17 nM for AM2233 and 2 nM and 43 nM
for WIN55212-2.