Discusin y resultados

Tabla # 1 Resultados de dixido de carbono producidos en cada azcar:

Carbohidratos 10 min 20 min 30 min 40min 50 min

Glucosa O ml 2 ml 5 ml 8 ml 11 ml
sacarosa 1 ml 4 ml 8 ml 11 ml 14 ml
fructosa 1 ml 2 ml 6 ml 9 ml 12 ml
almidn 0 ml 0 ml 0 ml O ml O ml

Grafico # 1

PRODUCCIN DE CO2 VS TIEMPO

(GLUCOSA)
12
10
8
CO2 (ml)

6
4
2
0
10 20 30 40 50
tiempo (min)

-Glucosa: La reaccin con glucosa se observ que hubo una produccin de

dixido de carbono en menor cantidad, en comparacin con los otros 3
azucares, la menor cantidad producida se debe a que la glucosa debe
empezar a desde el inicio de la glucolisis para poder ser trasformada hasta
piruvato requiriendo mayor molculas energticas (ATP), un ATP para
llevar la glucosa asta glucosa 6 fosfato y otra para convertir la fructosa 6-
fosfato a fructosa 1,6- fosfato, y molculas que liberen energa como el
NAD para que la molcula de gliceraldeido 3- fosfato se convierta en 1,3-
bisfosfato glicerato.
 Luego que se obtiene el piruvato la reaccin se va por el camino de la
fermentacin por la ausencia de oxgeno y la presencia de la levadura el cual
presenta enzimas capaces de extraer un molcula de dixido de carbono,
aqu es donde el piruvato sufre una descarboxilacion produiciendo dixido
de carbono y acetaldehdo, con la entrada de un NADH reducido se
desprende un NAD oxidado producindose como producto final etanol. .
Esto explica por qu la glucosa produce menor cantidad de dixido de
carbono, admiten un mayor tiempo para que sean trasformadas estas
molculas.(1)

Este descubrimiento fue hecho por los hermanos Bucher en 1897, de forma
accidental. Estaban interesados en la fabricacin de extratos de levaduras
libres de clulas por su posible uso teraputico. Estos extractos haban de
ser preservados sin la utilizacin de antispticos tales como el fenol, por lo
que decidieron utilizar sacarosa, un conservador utilizado comnmente en la
qumica culinaria, obtuvieron resultados sorprendentes. La sacarosa fue
fermentada rpidamente hasta alcohol por el jugo de levadura. El significado
de este hallazgo fue inmenso. Los Bucher demostraron, por primera vez que
la fermentacin poda producirse fuera de las clulas vivas. (1)

Grafico # 2

PRODUCCIN DE CO2 VS TIEMPO

(SACAROSA)

15
CO2 (ml)

10
5
0
10 20 30 40 50
tiempo (min)
-Sacarosa: En la reaccin de la sacarosa se apreci una gran cantidad de
dixido de carbono, fue la reaccin con mayor produccin de gas emitida.
Se debe tomar en cuenta primordialmente que la sacarosa es un disacrido
formado por glucosa y fructosa unidos por enlaces beta 1-2, La mayor
produccin de dixido de carbono observada en esta reaccin lo explica la
molcula de este disacrido, por ser un disacrido la produccin de dixido
de carbono se va generar el doble de gas, cada monosacrido va a aportar
una cantidad de gas por separado, que al sumarlo o medirlos se obtiene una
mayor cantidad de dixido de carbono. Un disacrido consta de dos azucares
unidos por un enlace O-glicosidico.La sacarosa una forma de carbohidratos
en plantas, se obtiene comercialmente de caa de azcar y remolacha. Este
disacrido se unen los carbones anomericos de la glucosa y de la fructosa: la
configuracin de este enlace glicosidico es alfa para la glucosa y beta para
la fructosa. (1)

Grafico # 3

PRODUCCIN DE CO2 VS TIEMPO

(fructosa)
14
12
10
CO2 (ml)

8
6
4
2
0
10 20 30 40 50
tiempo (min)
-Fructosa: La reaccin de la fructosa, se observ que en comparacin a la
glucosa, tubo una mayor produccin de dixido carbn, la fructosa al igual
que la glucosa ambos son monosacridos, uno con un grupo cetosa y otro
con un grupo aldosa, presente en la glucolisis, la diferencia que existe de por
que la molcula de fructosa produce ms dixido de carbn, hacindolas
reaccionar al igual con la levadura, se debe a que la molcula de fructosa ya
est trasformada en la glucolisis, y se a incorporando al experimento en
forma de fructosa , disminuyen as el tiempo de reaccin de convertirla de
glucosa a fructosa, ahorrndose as un gasto energtico de ATP lo que hace
que la molcula sea ms rpidamente trasformada a piruvato y actu mas
rpidamente la enzimas de las levaduras producindose la fermentacin con
mayor rapidez. Produciendo as en los diferentes tiempos estudiados mayor
produccin de dixido de carbono y etanol. Los monosacridos son aquellos
carbohidratos que no pueden ser hidrilizados en molculas ms sencillas.
Pueden subdividirse en triosas, pentosa, hexosas dependiendo de la cantidad
de tomos de carbono que contengan; y como aldosas y cetosas dependiendo
si tienen o no el grupo aldehdo o cetosa. (3)

Grafico # 4

PRODUCCIN DE CO2 VS TIEMPO

(almidon)
1

0.8
CO2 (ml)

0.6

0.4

0.2

0
10 20 30 40 50
tiempo (min)
-Almidn: La reaccin con almidn no se produjo dixido de carbono en
ninguno de los tiempos estudiados. El almidn es polisacrido unido por
varios residuos de azucares formando cadenas muy grades y ramificadas, la
curiosidad de que por que no se produce dixido de carbono en la reaccin
con levadura siendo una molcula de azucares, se debe a que la levadura no
tiene enzimas capaces de romper enlaces especficos de esta macromolcula
y llevarlos a formar molculas ms pequeas como glucosa y poder as
llevar a a piruvato y poder llevarse acabo la reaccin de la fermentacin de,
la molcula capaz de romper estos enlaces se llama la alfa-milasa capaz de
romper estos enlaces y degradarlos hasta glucosa y as poder ser llevados a
la glucolisis. El almidn est formado por una cadena alfaglucosidica
compuesto que solo produce glucosa en la hidrolisis, es un homopolimero
denominado glucosano o glucano. Constituyen la fuente ms importante de
los carbohidratos de los alimentos y se encuentran en los cereales, las
patatas, las legumbres y otros vegetales. Los dos constituyentes principales
de almidn son: la amilosa (15 a 20 %) que tiene estructura helicoidal no
ramificada, y la amilopectina (50 a 80 %) que consiste en cadenas muy
ramificadas de 24 a 30 residuos de glucosa unidos por enlaces 1, 4 en las
cadenas y los enlaces 1,6 en los puntos de ramificacin.(3)
 C6H12O6 + 2 Pi + 2 ADP 2 CH3-CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP + 25.5 kcal

Reacciones generales de la fermentacin alcohlica

 Metodologa

Al iniciar el experimento se pesaron 0,5 gr de cada azcar (sacarosa, fructosa,

glucosa almidn) y o,5 gr de levadura se trasvasaron a un Becker, se aadieron 1
ml de agua a cada una y solucin buffer acetato, luego se le agrego 1 ml de 2,6-
diclorofenol-indofenol sdico, se agitaron muy cuidadosamente para no forma
burbujas, hasta obtener una solucin homognea, en seguida se aadieron a una
inyectadora sin formar burbujas de oxgeno, se colocaron en un cilindro de
goma y se llevaron a una estufa de calentamiento, se llev el tiempo, y cada 10
min se observaba, as hasta llegar a los 50 min.
 Objetivos

1. Evaluar el consumo de glucosa en condiciones anaerbicas, llevada a cabo

por un cultivo de levadura utilizando la produccin de CO2 como una
medida directa.
 Universidad Nacional Experimental del Tchira
Vicerrectorado Acadmico
Departamento de Qumica
Laboratorio de Bioqumica

Practica N # 8 Fermentacin de la
glucosa
(Informe)

Integrante:
Liescar O Medina.
C.I:19.541.811
Seccin: 3

San Cristbal Abril 2013

 Introduccin
El azcar glucosa es el carbohidrato ms importante. La mayor cantidad del
carbohidrato diettico pasa al torrente sanguneo en forma de glucosa o es
convertida en el hgado y, a partir de ella, pueden formase los dems
carbohidratos en el cuerpo. Es tambin el combustible principal de los
mamferos y combustible universal para el feto. En el organismo es
convertida a otros carbohidratos que tienen funciones altamente especficas,
por ejemplo, el glucgeno para almacn; ribosa en los cidos nucleicos;
galactosa en la lactosa de la leche y en ciertos lpidos complejos y,
combinados con protenas en las glucoproteinas y los proteoglucanos.Las
enfermedades que se relacionan con carbohidratos incluye diabetes sacarina,
galactosemia, enfermedades por almacn de glucgeno e intolerancia a la
lactosa. (2)
La glucosa no es solamente un combustible excelente sino que tambin un
precursor extremadamente verstil, capaz de suministrar una cantidad de
intermediarios metablicos para las reacciones biocinticas. Una bacteria tal
como Escherichiacoli puede obtener de la glucosa los esqueletos carbonados
de cada uno de los aminocidos, nucletidos, coenzimas, cidos grasos y
otros intermediarios metablicos necesarios para el crecimiento. El estudio
completo de los distintos metabolismos de la glucosa abarcara cientos o
miles de trasformaciones. En plantas y animales superiores la glucosa tiene
tres destinos principales: puede ser almacenada (en forma de polisacridos o
de sacarosa), oxidada a un compuesto de tres carbonos (pirvico) va
glucolisis para proporcionar ATP e intermediarios metablicos, u oxidada
por la ruta de las pentosas fosfato (fosfogluconato) para obtener riburosa 5-
fosfato y NADPH para los procesos biosinteticos reductores. (2).

Hay una necesidad mnima de glucosa en todos los tejidos. En algunos

casos, por ejemplo, en el cerebro, la necesidad es sustancial; en tanto que en
otros, como en los eritrocitos, es casi total. La glucolisis es la va principal
para la utilizacin de la glucosa y se lleva a cabo en el citosol de todas las
clulas. Es una va nica, dado que puede utilizar oxigeno si est disponible
(aerobia) o funcionar en su ausencia total (anaerobia). Sin embargo, para que
la glucosa se oxide hasta la etapa terminal del piruvato de la gluclisis,
precisa no solamente oxigeno molecular, sino tambin sistemas enzimticos
mitocondriales, como el complejo piruvato deshidrogenasa, el ciclo del
cido ctrico y la cadena respiratoria. (2).
 Fermentacin es un trmino general que indica degradacin anaerbica de
la glucosa u otros nutrientes orgnicos para obtener energa en forma de
ATP. Debido a que los seres vivos aparecieron en primer lugar en una
atmosfera carente de oxgeno, la degradacin anaerbica de la glucosa es
probablemente el mecanismo biolgico ms antiguo para obtener energa a
partir de molculas combustibles orgnicos en el transcurso de la evolucin
esta secuencia de reacciones se ha conservado completamente; los enzimas
glucoliticos de los animales vertebrados son muy similares en secuencia de
aminocidos y estructura tridimensional a sus homlogos de la levadura o la
espinaca. El proceso de la glucolisis solo difiere de una especie a otra en los
detalles de su regulacin y en el destino posterior del piruvato formado. Los
principios termodinmicos y los tipos de mecanismo reguladores de la
glucolisis se encuentran en todas las rutas del metabolismo celular. (1).

En las investigaciones sobre la glucolisis, se comprendi que el proceso de

fermentacin en las levaduras es semejante a la degradacin del glucgeno
en el musculo. Se not que cuando un musculo se contrae en un medio
anaerobio, es decir exento de oxgeno, el glucgeno desaparece y se forma
Lactato como principal producto final. Cuando se introduce el oxgeno, tiene
lugar la recuperacin aerobia y el glucgeno reaparece, mientras que el
lactato desaparece. Sin embargo, si la contraccin se produce en condiciones
aerobias, no hay acumulacin de lactato y el piruvato se convierte en el
producto final principal; este ltimo es oxidado despus a CO2 y agua. Como
resultado de estas observaciones, se ha hecho costumbre separar el
metabolismo de los carbohidratos en una fase anaerobia y otra aerobia. No
obstante, esta distincin es arbitraria ya que las reacciones de la glucolisis
son las mismas tanto en presencia de oxgeno como en su ausencia, excepto
en su extensin y en sus productos finales. (2).

El etanol se forma a partir del piruvato en levaduras y muchos otros

microorganismos. El primer paso es la descarboxilacion del piruvato.Esta
reaccin esta catalizada por el piruvato descarboxilasa, el cual necesita de la
coenzima tiamina pirofosfato. Este coenzima derivado de la vitamina
tiamina (B1), tambin participa en reacciones catalizadas por otros enzimas.
El segundo paso es la reduccin del acetaldehdo a etanol por el NADH,
mediante una reaccin catalizada por el alcohol deshidrogenasa, este proceso
regenera NAD. (1)
El lactato se forma normalmente a partir del piruvato en una serie de
microorganismos en un proceso llamado fermentacin lctica. La reaccin
tambin se produce en las clulas de los organismos superiores cuando la
cantidad de oxigeno disponible es limitada, como ocurre en el musculo
durante la actividad intensa. Las reduccin del piruvato por el NADH para
formar lactato esta catalizada por la lactato deshidrogenasa. (3)

Las fermentaciones aportan solamente una fraccin de la energa que se

podra obtener de la combustin completa de la glucosa. Por qu una va
metablica relativamente ineficaz se utiliza con tal profusin? La razn
fundamental es que no requiere oxgeno. La posibilidad de vivir sin oxgeno
capacita a husped para acomodarse a vivir en sitios tales como suelos,
aguas profundas o poros de la piel. Algunos organismos, llamados
anaerbicos obligados no pueden vivir en presencia de oxgeno, un
compuesto altamente reactivo. La bacteria Clostridium perfringens, causante
de la gangrena, es un ejemplo anaerobio obligado. Los msculos
esquelticos de la mayora de los animales pueden funcionar de forma
anaerobia durante periodos cortos. (3)
As, por ejemplo, cuando los animales realizan estallidos de ejercicios
intensos sus necesidades de ATP crecen ms aprisa que la capacidad, del
cuerpo para aportar el oxgeno a los msculos. El musculo funciona de
manera anaerbica hasta llegar a la fatiga, que a su vez, esta originada por la
acumulacin de lactato. Aunque hemos considerado solo las fermentaciones
lcticas y alcohlicas, hay microorganismos capaces de generar una amplia
gama de molculas como productos finales de la fermentacin, de hecho
muchos productos alimentarios, incluyendo la crema agria el yogurt y varios
quesos la cerveza, el vino son el resultado de la fermentacin. (3)

Las fuentes de carbono utilizadas por las levaduras varan desde los
carbohidratos hasta los aminocidos. Adems, la capacidad de utilizar
ciertos tipos de azcares ha sido tradicionalmente empleada para la
caracterizacin de las distintas razas que esta especie presenta. Entre los
azcares que puede utilizar estn monosacridos como
la glucosa,fructosa, manosa y galactosa, entre otros. Tambin son capaces de
utilizar disacridos como la maltosa y la sacarosa y trisacridos como
la rafinosa. Uno de los azcares que no puede metabolizar es la lactosa,
utilizndose este azcar para distinguir esta especie de Kluyveromyces
lactis . Tambin es capaz de utilizar otras fuentes de carbono distintas a
carbohidratos y aminocidos. (2)
Por norma general, las levaduras mantienen dos tipos de metabolismo muy
bien diferenciados. Por una parte, en condiciones en las que existen altas
concentraciones de glucosa, fructosa o maltosa, la tendencia es a realizar una
fermentacin de estos, es decir, se realiza la gluclisis y posteriormente se
forma etanol. Una vez que estos azcares escasean, se produce la respiracin
del etanol, va ciclo de Krebs. Evolutivamente esto es un proceso que, a
priori, no es ventajoso por ser energticamente desfavorable para la
reproduccin del organismo, dado que se obtiene mucha menos energa en el
primer proceso que en el segundo. No obstante, la gran mayora de los
organismos son muy sensibles al etanol, por lo que se ha entendido como un
proceso de competencia por sustrato. Las levaduras, adems de necesitar una
fuente de carbono, necesitan tanto fuentes de nitrgeno como podran ser el
amonio, la urea o distintos tipos de aminocidos como fuentes de
fsforo.(2)
Levadura es un nombre genrico que agrupa a una variedad de hongos,
incluyendo tanto especies patgenas para plantas y animales, como especies
no solamente inocuas sino de gran utilidad. De hecho, las levaduras
constituyen el grupo de microorganismos ms ntimamente asociado al
progreso y bienestar de la humanidad. Algunas especies de levaduras del
gnero Saccharomyces son capaces de llevar a cabo el proceso de
fermentacin, propiedad que se ha explotado desde hace muchos aos en la
produccin de pan y de bebidas alcohlicas, y que a su vez ha inspirado un
sinnmero de obras de arte que ensalzan al Dios del vino y a aquellos que
disfrutan su consumo. Desde el punto de vista cientfico, el estudio de las
levaduras como modelo biolgico ha contribuido de manera muy importante
a elucidar los procesos bsicos de la fisiologa celular.
www.quimica.unam.mx/IMG/pdf/trabajoscientificos.pdf

En 1897, los hermanos Hans y Edward Buchner obtuvieron extractos libres

de clulas moliendo levadura para pan con granos de arena, a los cuales
adicionaron grandes cantidades de azcar de caa para evitar su posible
contaminacin. Para su sorpresa, encontraron que el azcar se fermentaba
rpidamente: por primera vez se haba descubierto un modelo para el estudio
de la fermentacin alcohlica en un sistema carente de clulas. Este
descubrimiento atrajo la atencin de los bioqumicos, que decidieron
analizar cada uno de los pasos que conducan a la produccin de etanol y
bixido de carbono a partir de la glucosa. Este trabajo implic el esfuerzo de
muchos cientficos y di como resultado el descubrimiento y descripcin del
metabolismo del carbono; algunas de las vas metablicas que conocemos
actualmente, llevan los nombres de los cientficos que participaron en este
trabajo, como Embden Meyerhof.
www.quimica.unam.mx/IMG/pdf/trabajoscientificos.pdf
 Bibliografa

1. Lubert, S y John, L. Bioqumica 6a Ed. (2008). 305,306, 446,448

2. Quesada, S. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica. EUNED

(2007). 90-95

3. Murray, R; Granner, D; Mayes, P y Rodwell, V. Bioqumica de Harper. 14a Ed.

(2008). 160,163-164,167,168

Consultas en lnea

www.quimica.unam.mx/IMG/pdf/trabajoscientificos.pdf
 Conclusin

Se logr obtener el consumo de los diferentes azucares, hacindola

reaccionar con levadura, apreciando la produccin de CO2 en cada una de
ellas.

Adems se pudo apreciar el comportamiento de cada uno de los azucares, y

de l porque en las reacciones se produjo ms dixido de carbono una que en
las otras.