DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES Y TOTALES A PARTIR DEL

MTODO DE MILLER (DNS) MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRA VISIBLE

Dirigido a: INSTRUCTORA
LUISA FERNANDA CARREO

APRENDIZ:

EWIN ALDEMAR GMEZ RUBIANO

ESPECIALIDAD TECNOLOGA
QUMICA APLICADA A LA INDUSTRIA

GRUPO 19TGQIN
Ficha de caracterizacin: 954213
JORNADA: NOCTURNA

SENA

CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL

REGIONAL DISTRITO CAPITAL

BOGOT D.C

2016
 OBJETIVO

Analizar los azucares reductores y totales por medio del mtodo DNS
contemplados en el analito de inters el durazno (Prunus prsica) y a su vez
observar los datos obtenidos para tener un informacin primaria aceptable para el
proyecto de inters.
 INTRODUCCIN

En todos los seres vivos se encuentran presentes los carbohidratos ya que la

ribosa y la desoxirribosa son parte de su material gentico. De la misma forma, en
las frutas y hortalizas los carbohidratos cumplen funciones estructurales y
energticas, constituyendo algunos la estructura rgida o mecnica de los tejidos
vegetales; en tanto que en las semillas, races y tubrculos funcionan bsicamente
como reservas energticas. Adems de ser componentes naturales de muchos
alimentos, la industria alimentaria emplea los carbohidratos en funcin de sus
propiedades funcionales, usndolos como ingredientes para mejorar la
aceptabilidad, palatabilidad y vida til de diversos alimentos.

.
 MARCO TERICO

El mtodo DNS (tcnica de Miller) es una tcnica colorimtrica que emplea cido
3,5 dinitrosaliclico para la hidrlisis de polisacridos presentes en una muestra.
Determina las absorbancias por medio de un espectrofotmetro a 540 nm. Esta
tcnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una
fermentacin o para cuantificar los productos de una reaccin enzimtica. La curva
de calibracin es la representacin grfica en un eje de coordenadas, de la
Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la Concentracin (eje de abscisas: X).
Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus
absorbancias, construyndose la curva de calibrado, que es una recta. La
concentracin de una solucin problema (desconocida), se averigua por
interpolacin de la Abs de la solucin en la curva de calibracin, o a travs de la
ecuacin de la recta (y = mx + b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) x
concentracin + absorbancia del blanco. Fundamento. El DNS reacciona
nicamente con los azcares reductores
 MATERIALES Y EQUIPOS

Material volumtrico: Baln aforado de 500 ml

Pipetas de 5 y 10 ml
Material de vidrio : vaso de precipitados de 50 ml
Vaso de precipitados de 250 ml
Baln aforado de 10 ml
Matraz erlenmeyer de 100 ml
Vidrio de reloj
Agitador de vidrio
Pipetas de 1 y 10 ml
Tubos de ensayo
Esptula, pinza para tubos de ensayo

EQUIPOS

Balanza analtica
Plancha de calentamiento con agitacin
Espectrofotmetro

REACTIVOS

Glucosa
Hidrxido de sodio
Tartrato de sodio- potasio
Acido 3,5 dinitrosalicilico
 PROCEDIMIENTO

1- Tome 1 ml de jugo filtrado y vierta en un erlenmeyer de 100 ml

2- Adicione 5 ml de acido clorhdrico (HCl) concentrado
3- Lleve el erlenmeyer a 65 C en un bao de de agua por 10 min
4- Pasado el tiempo de calentamiento ,djelo enfriar a temperatura ambiente y
neutralice con NaOH al 10 %
5- Enrase con agua destilada.

PREPARACIN DE SOLUCIONES

1- Prepare una solucin patrn de glucosa al 0,1% p/v 100 ml

2- Prepare el reactivo del acido 3,5 dinitrosalicilico para 500 ml , teniendo en
cuenta los siguientes pasos:

Pese 5 g de acido 3,5 dinitrosalicilico ,150 g de tartrato de sodio. Potasio y 8 g

de hidrxido de sodio.
Disuelva el OH en 200 ml de agua y adicione en agitacin el tartrato de sodio
potasio.
Complete con agua hasta 400 ml y adicione lentamente el acido 3,5
dinitrosalicilico.
Djelo en agitacin y en calentamiento por 15 min
Llvelo a volumen y filtre si es necesario.

PREPARACIN DEL EQUIPO

Calibre el espectrofotmetro en cero (100%T y / o A = 0), teniendo en cuenta

que la longitud de onda es 540 nm y el blanco es agua destilada mas el
reactivo DNS.

DESARROLLO DE LA REACCIN DEL DNS

Tomar 4 ml de cada patrn y llevar a un tubo de ensayo

Adicionar 1 ml de la solucin de DNS a cada tubo de ensayo
Lleve los tubos a un bao de agua a 100 C por 5 min y luego djelo enfriar a
temperatura ambiente.
Realice la lectura a 540 nm en el espectrofotmetro.
 RESULTADOS

En esta prctica se analizaron los datos cualitativos presentes en la muestra de

acuerdo a su concentracin y a su absorbancia obtenida en la lectura del
espectrofotmetro.

CURVA DE CALIBRACIN
CONCENTRACIN ABSORBANCIA
mg/ml
80 0.2602
160 0.4477
240 0.6826
320 0.9528
400 1.2598

CONCENTRACIN DE AZUCARES TOTALES

X= X=
Y = mx+b (Y+b/m) 0,073+0,2368/0,00313
DESPEJE DE X= x= 98,97 mg/ml
X = (Y+b/m)

DATO ESTABLECIDO POR ESPECTROFOTMETRO 0,073

PENDIENTE 0,00313038
INTERSECCIN -0,03067
COEFICIENTE DE CORRELACIN 0,99573171
 CURVA DE CALIBRACION PARA DNS y = 0.0031x - 0.0307
R = 0.9915
1.4
ABSORBANCIA 1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 100 200 300 400 500
CONCENTRACION

Y=mx-b
Y+b=mx
X=Y+b/m
Y=0,0031X-0,073
X=0,2368+0,073/0,00313= 98,97 mg/ml

Este clculo se realiza para obtener la concentracin de azucares reductores.

CLCULOS

Con el factor de dilucin de la cantidad de durazno y cantidad de agua es el

siguiente:

Durazno inicial: 354.3 g

Cantidad de agua: 500 ml

98,97 1 1000
= ,
1 100 1

0,09897 354,3
= , /
0,500 2

Donde nuestra concentracin real del mosto es de , g/L

CLCULOS GLUCOSA:

0,1g x 1ml x 4ml x 1000g x 1000ml = 80mg

100ml 10ml 5ml 1g 1L

0,1g x 2ml x 4ml x 1000g x 1000ml = 160mg

100ml 10ml 5ml 1g 1L

0,1g x 3ml x 4ml x 1000g x 1000ml = 240mg

100ml 10ml 5ml 1g 1L

0,1g x 4ml x 4ml x 1000g x 1000ml = 320mg

100ml 10ml 5ml 1g 1L

0,1g x 5ml x 4ml x 1000g x 1000ml = 400mg

100ml 10ml 5ml 1g 1L

ANLISIS DE RESULTADOS

Con la curva obtenida se realiza una grfica de tendencia lineal que se ajusta a los
datos, el R2 obtenido para la ecuacin de la recta es de 0,9915. Teniendo en
cuenta que el R2 es mayor a 0.95 los datos no tienen mucha dispersin, por
cuanto se refleja una linealidad y es de tendencia progresiva lo cual es excelente
para los datos manejados en la fabricacin del vinagre.

Por medio de este mtodo DNS se logro determinar de una forma cuantitativa la
concentracin de azucares reductores de un mosto de durazno, la cual es una
tcnica colorimtrica donde se emplea el cido dinitrosaliclico. La reaccin que
tiene lugar es del tipo oxidacin-reduccin donde hace reaccionar un azcar con
el DNS en medio alcalino. Si el azcar es reductor, el DNS se reduce a DAS y el
azcar se oxida. Esta reduccin se observa en el cambio de color.

Se obtuvo un buen resultado en azucares reductores el cual nos ayuda para

nuestra fermentacin alcohlica, en cuanto a azucares totales no los logramos
obtener, de este obtuvimos datos errneos donde no logramos tener un dato
confiable por un error elativo en manera de preparar concentraciones y sus
dilucion
 CONCLUSIONES

Se logro analizar por medio de la curva de calibracin la concentracin real de

la fruta de inters, el cual nos arrojo un dato primario para las fermentaciones al
momento de la fabricacin del vinagre.

El mtodo DNS es de gran importancia por su capacidad de determinar los

azucares reductores presentes en las frutas con contenidos de azucares
superiores, lo cual es de excelente aplicacin para el proyecto de inters que es
la de fabricar vinagre atreves del durazno.
 BIBLIOGRAFA

https://www.academia.edu/4403544/DETERMINACION_DE_AZUCARES_RED
UCTORES_METODO_DNS

http://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-azcares-reductores-por-
espectrofotometra-mtodo-dns

http://tuayudaenellaboratorio.blogspot.com.co/2013/03/determinacion-del-
caracter-reductor-de.html