UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA
Informe de laboratorio N3 Biologa general

Tema: Determinacin experimental de biomolculas II

INTEGRANTES:
AGUIRRE BOTTGER, Cosette
BERROCAL PUITALLA, Frank
CARRILLO RUIZ, Ricardo
ENRIQUEZ ARAUJO, Fabrizio
VASQUEZ VILLALOBOS, Helena
I. RESULTADOS: La presente prctica de laboratorio estuvo dividida en cuatro
actividades o experiencias. Estas se centraron en la determinacin experimental de
biomolculas. Se observ la desnaturalizacin y presencia de ciertas protenas e
incluso reacciones relacionadas con actividad enzimtica.

1.1 Desnaturalizacin de protenas: Se presentarn las observaciones realizadas

durante el desarrollo de la primera experiencia de laboratorio.

ORDEN DE REACCIN:
C 1. Papa
D
2. Pan
3. Zanahoria
4. Manzana
5. Cebolla
B
E
(*) El orden de reaccin fue establecido
tomando en cuenta la coloracin violeta oscuro
A observada. A mayor intensidad, se coloc un
orden mayor.

Coloracin del lugol: Marrn oscuro

a) Muestra de papa: Al aplicarle el lugol este empieza a extenderse en todo el

trozo, tindose de un azul morado oscuro intenso. La muestra de color
eludida fue observada de manera casi inmediata.

b) Muestra de zanahoria: El cambio de color es paulatino, al cabo de

aproximadamente 1 hora, la muestra se tie de un color morado oscuro.

c) Muestra de pan: Al igual que lo observado con la muestra de papa, el

cambio de color es muy rpido. La muestra se tie de color azul oscuro de
manera progresiva.

d) Muestra de manzana: La tonalidad final observada fue marrn oscuro,

adems, el cambio apreciado fue lento pasando de un marrn claro (lugol)
a uno ms oscuro.

e) Muestra de cebolla: La coloracin observada fue marrn clara, que es

propia del lugol. Al cabo de una hora, la tonalidad mencionada se mantuvo
constante.
 1.2 Reconocimiento de azcar reductor: Se muestran las observaciones realizadas
para la segunda experiencia de laboratorio. El reactivo implicado en este caso
fue el Reactivo de Benedict. Se colocarn los registros fotogrficos despus
de que las sustancias implicadas, ya con las respectivas gotas del Reactivo de
Benedict, hayan sido sometidas a un aumento de temperatura durante 3 min.

D C B A

- CONTENIDO DE LOS TUBOS DE ENSAYO:

A los 4 tubos de ensayo utilizados se les
A) 1 ml de agua destilada agreg 0,5 ml de reactivo de Benedict.
B) 1 ml de glucosa Para luego someterlos a un incremento
C) 1 ml de jugo de mandarina de temperatura colocndolos en un
D) 1 ml de orina sistema de bao mara durante 3 min.
-
- OBSERVACIONES:

Coloracin del reactivo de Benedict: Turquesa intenso

Tubo A: se observ un cambio de coloracin inmediato, el agua destilada adopt

el color del reactivo de Benedict (turquesa). La coloracin se mantuvo incluso
despus de los 3 minutos en el bao mara.

Tubo B: Despus de los 3 minutos en el bao mara, la glucosa contenida en el

tubo B ms los 0,5 ml de reactivo de Benedict, torn su coloracin de ** a un
rojo ladrillo. Este color fue percibido no solo al final del tiempo mencionado, sino
al cabo de 30 segundo sometido a un aumento de temperatura.

Tubo C: sucedi algo similar a lo acontecido con el tubo de ensayo B. En este

caso, el jugo de mandarina ms los 0,5 ml de reactivo de Benedict adopt un
color naranja oscuro despus de los tres minutos en el bao mara. Aunque cabe
mencionar que durante ese lapso de tiempo, la sustancia pas de una coloracin
amarilla verdosa a anaranjado oscura.
 Tubo D: se apreci que la sustancia contenida en este tubo de ensayo se torn
verde con una naturaleza opaca despus de los tres minutos en el bao mara.
Este cambio de color fue progresivo durante el tiempo mencionado.

1.3 Propiedades de los lpidos: Se presentarn las observaciones realizadas durante

el desarrollo de la tercera experiencia de laboratorio. El registro fotogrfico
colocado fue el obtenido despus de aproximadamente 2 min desde que las
distintas sustancias contenidas en el tubo de ensayo hayan sido mezcladas.

A B C

CONTENIDO DE LOS TUBOS DE ENSAYO

A) 2 ml de agua destilada B) 2 ml de agua destilada C) 2 ml de bencina

+ + +
1 ml de aceite. 1 ml de aceite 1 ml de aceite
+
una pizca de detergente

- OBSERVACIONES:

Tubo A: Se aprecia una clara separacin entre el agua y el aceite. Este ltimo forma
una capa sobre el agua. Las dos sustancias, a pesar de la agitacin realizada en el tubo
de ensayo, no se llegan a mezclar.

Tubo B: Se observa tambin la formacin de una capa de coloracin blanca, pero muy
tenue, formada por la mezcla emulsificada de agua y aceite. Debajo de esta se aprecia
el agua mezclada con el detergente (ms densa). Ambas capas no poseen una
separacin clara. En la regin superior, se observa una mezcla heterognea entre el
agua y el aceite (pequeas burbujas observadas).

Tubo C: La mezcla observada entre el aceite y la bencina es homognea.

1.4 Reconocimiento de lpidos: Se presentarn las observaciones realizadas durante el
desarrollo de la cuarta experiencia de laboratorio. Cabe mencionar que ninguno de los
tubos de ensayo fue agitado despus de agregar las tres gotas de reactivo de Sudn III.
Las reacciones apreciadas fueron rpidas.

Tubos de ensayo antes de adicionar las tres gotas de Sudn III

A B C D

- CONTENIDO DE LOS TUBOS DE ENSAYO:

A) 1 ml de agua destilada A los 4 tubos de ensayo utilizados se les

B) 1 ml de aceite agreg 2 gotas de Sudan III.
C) 1 ml de leche descremada Sper light
D) 1 ml de leche evaporada

Tubos de ensayo despus de adicionar las tres gotas de Sudn III

A B C D

- OBSERVACIONES:

Coloracin del reactivo Sudn III: Rojo intenso

Tubo A: se puede apreciar que la solucin se pigmenta completamente de un

color rosado tenue. Las gotas de Sudn II se mezclan de manera homognea con
el agua destilada.
 Tubo B: Se forma un anillo de color rojo intenso en la parte superior del
contenido de aceite. Esta coloracin es de naturaleza intensa.

Tubo C: Se nota que la muestra de leche descremada se torna de color rosado,

ello sin la necesidad de agitar la muestra. A diferencia del tubo anterior el anillo
formado es de coloracin rosa tenue. La reaccin observada es muy similar a la
ocurrida con el agua destilada.

Tubo D: Fue posible apreciar la formacin de un anillo de color rojo en la

superficie de la muestra. Fue una reaccin similar a la observada con el aceite
contenido en el tubo B.

II. DISCUSIONES

2.1 Reconocimiento del almidn:

Los distintos cambio de color observados, fueron producto de la interaccin del

lugol con los componentes de las muestras vegetales en cuestin. El lugol, es
comnmente utilizado para comprobar la presencia de almidn. Si la muestra
contiene almidn, la coloracin caracterstica es azul oscuro o morado intenso.
Ello es el resultado de la formacin de cadenas de poliyoduro a partir de la
reaccin de las cadenas anilladas de la amilosa que conforman al almidn con el
yodo presente en el lugol. En los anillo mencionados es en donde se depositan
y juntan las molculas de yodo, dotando a la mezcla del color azul caracterstico
(Morrison & Boyd, 1998). Se puede mencionar que mientras la coloracin azul
es ms intensa, existe un mayor contenido de almidn en la muestra.

En la seccin de resultados se indic el orden de reaccin segn la tonalidad azul

oscura mencionada. A partir de ello y teniendo en cuenta lo anterior se puede
mencionar que la papa contiene ms almidn, en comparacin a las dems
muestras. En segundo lugar se encuentra el pan seguido de la zanahoria y
finalmente la manzana. En cuanto a la cebolla, la coloracin observada fue la
propia del lugol, por lo que no presenta almidn o lo tiene en cantidades
mnimas.

Las conclusiones se validad con los ndices de azcares propuesto por

Quiroga, L. (2008) en Los almidones resistentes y la salud

ndice de azcares (muy bajo < 40) ndice de azcares (alto > 40)
Manzana 35 Papa 70
Zanahorias.45 Pan..70-95
Cebolla..15
Tabla extrada y modificada el 31 de marzo del 2016
2.2 Reconocimiento de Azcar reductor:

En primer lugar, los azcares reductores pueden existir como aldehdo o cetona
libre. Poseen los grupos mencionados de forma libre por lo que adquieren las
propiedades qumicas de los grupos eludidos. Entre los ms comunes se encuentran
la mayor parte de los monosacridos como la glucosa, la fructuosa y algunos
disacridos (Stryer & Berg, 2012). Por otro lado, Plummer (1981) menciona que los
grupos aldehdos libres de los azcares reductores frente a ciertos reactivos
producen reacciones de coloracin y en pocos casos de precipitacin. Por otro lado,
tambin se pueden presentar otro tipo de caractersticas distintas para cada tipo de
glcido. Para las pruebas realizadas con el reactivo de Benedict, es necesario un
aumento de temperatura ya que ello aumenta la velocidad de difusin. En cuanto
al reactivo de Benedict (compuesto por iones de Cu+2), es usado para detectar la
presencia de azcares reductores, puesto que contiene iones de cobre que se
reducen en presencia de los azcares reductores. Durante estas reacciones el azcar
se oxida, dando lugar a una reaccin del tipo redox puesto que la oxidacin del
azcar se produce de manera simultnea a la reduccin del cobre. (Plummer, 1981)

Tubo A: Tal como se detall en la seccin de resultados, no se not la presencia de

reaccin alguna. El agua destilada adquiri el color turquesa que es propio del
reactivo de Benedict. Ello se debe a que el agua no cuenta con ningn tipo de azcar
reductor. Por ello este tubo fue considerado como la muestra control negativa.

Tubo B: La reaccin observada fue rpida mostrando una coloracin final de

tonalidades rojo ladrillo. Se comprueba que efectivamente la glucosa es un azcar
reductor (Stryer & Berg, 2012). En tal sentido, se consider a esta muestra como
control positiva. De esta manera, se pudieron hacer comparaciones, teniendo en
cuenta el control negativo y positivo, con respecto a los dos tubos de ensayo
restantes.

La coloracin observada es producto de una reaccin redox, la glucosa reaccion

con el ion cprico (Cu2+) que es parte del reactivo de Benedict reducindolo a su
forma cuprosa (Cu+) al mismo tiempo que esta se oxidaba convirtindose en cido
glucnico. A partir de ello se forma Cu2O, el cual es el responsable de la coloracin
final eludida (rojo ladrillo).

Tubo C: Es posible mencionar que el resultado obtenido fue positivo. Mencionamos

ello ya que la coloracin final observada estuvo ntimamente relacionada al control
positivo. Se comprueba que el jugo de mandarina posee azcares reductores. En
primer lugar, la coloracin observada no fue producto de una mezcla entre la
coloracin del jugo y el reactivo de Benedict. Si ello hubiera acontecido, le resultado
final hubiera sido de color verde oscuro. En segundo lugar, los azcares presentes
en el jugo de mandarina son en su mayora glucosa y la fructuosa que son azcares
reductores como sealan Stryer & Berg (2012); por otro lado, presenta sacarosa en
pequea proporcin y no presenta maltosa tal como lo menciona el estudio de
Resultados de estudios cromatogrficos de azcares de la Es cuela de Bioqumica
y farmacia de Ecuador (2014). En dicha experimentacin de cromatografa se tuvo
en cuenta los factores de retencin de los estndares (Rf).
Tubo D: El resultado de esta muestra demuestra que el contenido de glucosa en la
orina es mnimo, ello se explicar posteriormente. Adems, lo mencionado se avala
con las coloraciones que se mostrarn en la tabla posterior acerca de niveles de
glucosa en la orina y los resultados esperados teniendo en cuenta su cantidad. El
primer indicio acerca de ello fue la coloracin final observada que fue verde, hecho
que resultara como producto de una mezcla entre tonalidades azules y amarillas.
EN nuestro caso, la tonalidad de la muestra de orina era de coloraciones amarillas
tenues, mientras que el reactivo de Benedict era de color turquesa.

Por otro lado, en cuanto al funcionamiento del cuerpo humano con respecto a la
glucosa (principal azcar reductor). Es el rin quin absorbe, bajo un desempeo
ptimo, aproximadamente el 99,9% de la glucosa que se filtra en el glomrulo
producto de la degradacin de los alimentos que consumimos. En tanto, como
menciona Parker y Winston (2007), en el caso de que la concentracin de glucosa
en sangre supere los 160 a 180 mg/dl el rin ya no es capaz de reabsorber toda la
glucosa sino una parte se excreta con la orina (p. 192) .Por tal razn, el nivel de
glucosa en la orina es prcticamente mnimo, haciendo posible que el reactivo de
Benedict no reaccione con la muestra de orina con la que se experiment.

2.3 Propiedades de lpidos:

Para comprender el comportamiento observado es necesario conocer las

caractersticas de los lpidos. Plumer (1981) menciona que son sustancias insolubles
al agua ya que una larga cadena hidrocarbonada de naturaleza apolar, ello no
permite la formacin de puentes de hidrgeno con las molculas de agua y por ende
no puede disolverse en esta. No obstante, son solubles en sustancia no polares y en
etanol en un 95% (p. 193).

En tanto, los fenmenos observados son el resultado de la formacin de una

emulsin parcial o completa entre las molculas de gua y de aceite. Boatella (2004)
menciona que una emulsin es la dispersin de una fase liquida en forma de gotas
diminutas (en nuestro caso gotas de aceite) en una fase continua (agua destilada).
En las emulsiones pueden darse diversos fenmenos Es un proceso que consiste en
la mezcla de dos lquidos diferentes inmiscibles entre s. Uno de los lquidos se
encontrar formando la fase dispersa (burbujas de aceite), que se encontrar en
forma de pequeos cogulos dentro del otro lquido que conforma la mezcla, el que
recibe el nombre de dispersante (agua destilada).

Tubo 1: Agua destilada + Aceite

Como se detall, el agua y el aceite no se llegan a mezclar. Cuando entran en

contacto y se agita rpidamente el tubo de ensayo, lo primero que se forma es una
emulsin transitoria. A medida que el tiempo avanza, las gotas de aceite, que son
de menor densidad (0,92 gr/cm3) ascienden y se unen entre s a partir de atracciones
polares. Por otro lado, el agua permanece en la base del tubo de ensayo al poseer
una densidad mayor (1 gr/cm3).
 Tubo 2: Agua destilada + aceite + detergente

A diferencia del tubo anterior, cuando se agita esta mezcla y se deja reposar por
cierto tiempo se forma una emulsin permanente. Ello se debe a que el detergente
rodea las gotas de aceite suspendidas por un momento en el agua. Este hecho se
explica mejor si se conoce la naturaleza de los detergentes: estos se forman por
molculas que poseen una zona hidrofbica y una hidroflica. La seccin hidroflica,
que son las cabezas de las molculas de detergente, interaccionan con el agua,
mientras que las largas cadenas hidrofbicas se unan a las partculas de grasa. As se
forman grupos circulares llamados micelas con el material graso absorbido dentro y
atrapado, que son exactamente las burbujas observadas en el tubo de ensayo.

Regin hidroflica:
Interaccin con molculas
de agua (zonas polares, se
Regin hidrofbica observa claramente la
diferencia de cargas)

COMPONENTES MOLECULARES DEL DETERGENTE

Imagen recuperada el 1 de abril del 2016 de: http://repositoriorecursos-
download.educ.ar/dinamico/UnidadHtml__get__bfc6bd91-6515-4913-b206-e690528f937c/15063-
edi/data/35610687-c858-11e0-8210-e7f760fda940/index.htm

Tubo 3: Bencina + Aceite

Se observ una mezcla homognea entre ambas sustancias. Ello es debido a que la
bencina, al ser un derivado del petrleo, posee caractersticas apolares y una
densidad similar a la del aceite.

2.4 Reconocimiento de lpidos:

El reactivo implicado en esta experiencia fue el Sudn III. Este es un colorante con
una estructura molecular que le permite ser soluble en lpidos, adems en su
composicin va acompaado regularmente de una solucin de etanol-acetona o de
etanol-agua que permite disolverse en los lpidos, principalmente en los triglicridos
ya que es una molcula no polar (Audesirk, Audesirk and Byers, 2008).
Tubo A: Como se detall en la seccin de resultados, el agua destilada y las gotas de
Sudn III se mezclaron de manera homognea sin la necesidad de agitar la mezcla.
Esto se explica por el hecho de que, como se mencion, el sudan es un reactivo que
sirve para identificar la presencia de lpidos. Entonces, ya que el agua no los posee
en ninguna proporcin de lpidos puesto que pas por un proceso de destilacin, no
reacciona de manera alguna. La coloracin observada solamente es producto de una
mezcla de colores. Sabiendo que el agua no posee ningn tipo de lpidos, se tom
esta muestra como el tubo control negativo, con el objetivo de compararla con lo
observado con los siguientes tubos.

Tubo B: al igual que el tubo anterior, la mezcla entre el aceite y el Sudn no fue
agitada. El Sudn III reaccion con la muestra de aceite formando un anillo de color
rojo intenso en la superficie de esta sustancia. Este anillo rojo se explica porque el
sudan se usa como un colorante especfico para revelar la presencia de grasas,
hecho que se comprueba con el de hecho de que el aceite que se us en su totalidad
estaba compuesto en su totalidad de grasas saturadas y otras insaturadas (Ville,
1997) En tal sentido, a este tubo se le denomin como muestra control positiva.

Tubo C: La reaccin observada fue muy similar al tubo control negativo, sin
necesidad de agitar la muestra adopt una coloracin rosa como producto de una
mezcla de colores (blanco + rojo). Al ser similar al control negativo, se puede
mencionar que la leche descremada no posee grasas o las posee en mnima
proporcin. Ello se explica en el sentido de que la leche descremada utilizada posee
un 2,5 g de grasas totales (indicado en el empaque). Por otro lado, otro hecho que
avala lo mencionado es que la leche descremada pasa por un proceso de
centrifugacin terminando con un 88% de contenido libre de grasas, es ello lo que
genera el anillo de rosado tenue en la superficie de la leche que es la parte que
reaccin con el Sudn (Ville, 1996).

Tubo D: Lo observado en el caso de este ltimo tubo de ensayo es similar al tubo

control positivo, el anillo que se form en l aparte superior de la leche fue de una
coloracin rojo intenso, hecho que demuestra que la leche evaporada contiene una
cantidad de grasas mayor que la leche descremada. Lo mencionado se valida con el
hecho de que la leche utilizada posee un 9,4 g de grasa por volumen total del tarro.
Si la muestra hubiera sido agitada se observara una coloracin roja intensa en toda
la mezcla de leche.
III. CONCLUSIONES:

Las experimentaciones y observaciones realizadas permitieron cumplir los objetivos

propuestos al inicio de la sesin.

El trabajo hecho con el lugol y las distintas muestras empleadas de trozos de pan,
papa, manzana, zanahoria y cebolla, hicieron posible el reconocimiento de almidn.
Por otro lado, el reactivo de Benedict, en contacto con las soluciones empleadas en
la segunda experiencia permiti identificar de manera ptima la presencia de
azcares reductores como la glucosa.

Las propiedades fisicoqumicas de los lpidos fueron reconocidas a partir de la

observacin de los fenmenos ocurridos entre el agua y el aceite, el agua de manera
conjunta con el aceite y una pizca de detergente y finalmente entre la bencina y el
aceite.

Para finalizar, la presencia de lpidos fue comprobada haciendo uso del indicador
Sudn III en muestras de agua destilada, aceite, leche evaporada y leche
descremada.

IV. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

Ville, C. (1996) Biologa (6ta. Ed.). Mxico: McGraw-Hill Interamericana

Ville, C. (1997) Biologa (8va. Ed.). Mxico: McGraw-Hill Interamericana

Audesirk, T., Audesirk, G. and Byers, B. (2008). Biologa: La vida en la Tierra. 8th ed.
Mxico: Pearson Educacin.

Plummer, D, T. (Eds.). (1981). Bioqumica Practica. Mxico: McGraw-Hill

Interamericana.

Stryer, L., Berg, J. and Tymoczko, J. (2012). Bioqumica: con aplicaciones clnicas.
Barcelona: EDITORIAL REVERT.

Boatella, R. (2004) Qumica y Bioqumica de los Alimentos II. Barcelona: Universidad

de Barcelona Ediciones. 2004

Ledezma, C. (2008) Los almidones resistentes y la salud. Recuperado de:

http://www.upb.edu/sites/default/files/11Quiroga8.pdf

Morrison & Boyd (1998) Qumica orgnica. Quinta edicin. Mxico: Fondo educativo
interamericano

Escuela Superior Politcnica de Chimborazo Ecuador. (2014). Resultados de

Estudios Cromatogrficos de Azcares. Recuperado de
https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-
i/cromatografia-de-azucares