CRISPR, CLULAS-TRONCO E CURA AO HIV

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26/02/2016

CRISPR, CLULAS-TRONCO E CURA AO HIV

Ricardo Cambraia Parreira, Rodrigo R Resende

Edio Vol. 3, N. 7, 26 de Fevereiro 2016

DOI: http://dx.doi.org/10.15729/nanocellnews.2016.02.26.003

Uma das infeces virais que mais se alastraram no mundo foi o HIV, o vrus causador da AIDS.

Um relatrio de 2014 da Unaids (Programa das Naes Unidas para HIV e Aids) revela que o nmero de infeces
com o vrus aumentou 11% no Brasil entre 2005 e 2013, indo na contramo da mdia global, que apresenta queda.
Mesmo entre pases vizinhos, vem havendo uma reduo no ndice geral de novos casos. No Mxico e no Peru,
por exemplo, essas taxas caram 39% e 26%, respectivamente.

Em se tratando de dados mais globais, um ndice do estudo que chama ateno o fato de que cerca de 54% das
pessoas infectadas no mundo todo no tm conscincia disso. Ou seja, 19 milhes das 35 milhes de pessoas que
atualmente vivem com HIV no mundo no sabem que tm o vrus. (BBC Brasil 16/06/2014) Isso simplesmente
desesperador, j que muitas dessas pessoas so como roletas russas, um jogo em que h apenas uma bala no
tambor do revlver. O tambor girado e, quando para, acionado o gatilho. Se a bala no estiver, o jogador
sobrevive, caso contrrio a bala estoura seus miolos. No caso do portador do HIV que no sabe que possui o
vrus, ele a bala do revlver. E a pessoa que se relaciona sexualmente sem proteo com ele, o jogador que
perde a vida.

Mas, pesquisadores descobriram que, eliminando um receptor das clulas brancas humanas, o CCR5, o HIV no
poderia mais infectar.

O SISTEMA DE ATAQUE DO VRUS

O HIV utiliza de protenas em seu capsdeo, estrutura que protege o genoma viral, para entrar nas clulas
humanas. Protenas do capsdeo viral ligam-se a receptores presentes na membrana celular e, assim, o vrus pode
ser internalizado. A essa entrada do vrus chamamos de infeco das clulas humanas pelo HIV.

O principal co-receptor utilizado para infeco das clulas pelo HIV (do ingls Human Immunodeficiency Virus,
causador da AIDS) chamado CCR5 (C-C receptor de quimiocina tipo 5). Isso foi constatado quando um paciente
com HIV recebeu clulas-tronco hematopoiticas (clulas-tronco que se diferenciam em clulas do tecido
sanguneo e do sistema imune) de um doador homozigoto (possui dois alelos idnticos, um proveniente do pai e
outro da me) para a mutao no gene CCR5. Este gene produz uma protena que funciona como um receptor na
membrana das clulas T auxiliares e outras clulas de defesa dos seres humano, que so reconhecidos pelas
protenas do capsdeo viral, permitindo a entrada do HIV nas clulas.

As pessoas com a mutao denominada CCR5-Delta32 apresentam um encurtamento da protena CCR5. Esse
encurtamento do CCR5 impede o seu alojamento na membrana plasmtica, ficando o receptor solto no citoplasma
da clula, tornando assim, as clulas de defesa resistentes infeco pelo vrus da AIDS. Quando o indivduo
possui a mutao em apenas um alelo do gene (heterozigoto, isto , ou o gene do pai ou o da me defeituoso), a
clula continua suscetvel infeco pelo vrus, porm apresenta uma progresso da doena de forma muito mais
lenta.
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Entretanto, esse tipo de transplante alognico (clulas provenientes de outro indivduo) no pode ser aplicado em
larga escala. Isso se deve ao nmero pequeno de doadores com a mutao e da incompatibilidade desses
doadores com as pessoas que necessitam do transplante, alm da necessidade de destruio completa da medula
ssea e supresso imune para evitar a rejeio das clulas pelo organismo.

Figura 1: Lado A: A presena da protena CCR5 permite a ligao do HIV superfcie celular e, com isso, o vrus
entra dentro da clula; Lado B: a mutao CCR5-Delta32 impede a expresso da protena na superfcie da
membrana da clula, evitando assim a infeco pelo HIV.

COMO ELIMINAR A INFECO PELO HIV

Uma alternativa seria o transplante autlogo, ou seja, as clulas seriam transplantadas do prprio indivduo. Esse
tipo de transplante no requer a destruio completa da medula ssea ou imune supresso para evitar a rejeio
das clulas, o que torna essa abordagem menos txica. Para isso, os pesquisadores tm produzido clulas-tronco
progenitoras hematopoiticas com o gene CCR5 desabilitado, por meio de tcnicas que utilizam RNAs
silenciadores da expresso do gene alvo, alm de enzimas que promovem a quebra do gene especfico.
Entretanto, essas abordagens necessitam de sistemas de entrega que podem resultar em integrao de mutaes
e desenvolvimento de resposta imunolgica contra as clulas transduzidas, provocando complicaes para o
paciente.

Recentemente, vrios sistemas de engenharia utilizando nucleases tm sido utilizados para modificaes no
genoma, como TALENS (do ingls transcription activator-like effector nucleases) e CRISPRdo ingls ( Clustered
Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats). Essas enzimas produzem quebras na dupla fita do genoma com
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grande eficincia por utilizar a prpria mquina de reparao de DNA das clulas.

Os pesquisadores Lin Ye e colaboradores, do Departamento de Medicina e Instituto de Gentica Humana,

associaram essas novas abordagens para alterar o genoma, com clulas-tronco pluripotentes induzidas (iPSC, do
ingls induced pluripotent stem cells), j que as clulas paciente-especficas poderiam ser geneticamente
modificadas e diferenciar em vrias linhagens de clulas, o que seria uma fonte potencial para terapia celular
contra pessoas infectadas com HIV. Juntamente com essa metodologia, eles tambm utilizaram uma tecnologia de
transposon piggyBac (sequncia de DNA capaz de se movimentar de uma regio para outra no genoma) para
inserir marcadores selecionveis capazes de enriquecer as clulas que sofreram recombinao homloga, ou seja,
que receberam mudanas genticas.

Os autores conseguiram gerar mutaes CCR5-Delta32 nos dois alelos nas clulas-tronco pluripotentes induzidas
por meio das tecnologias de modificao do genoma TALENS e CRISPR. Posteriormente, essas clulas foram
diferenciadas em moncitos/macrfagos e apresentaram resistncia infeco pelo HIV-1. As vantagens na
combinao dessas tecnologias mencionadas podem ser agrupadas em 4 razes: necessidade de uma pequena
quantidade de clulas sanguneas para produo das clulas-tronco induzidas, produo ilimitada dessas clulas
induzidas, verificao e confirmao da integridade do genoma das iPSCs e, por ltimo, reconstruir todas as
clulas do sistema sanguneo e imune. Essa abordagem uma ferramenta potencial para a manipulao gentica
em produzir uma terapia celular baseada em clulas autlogas nos pacientes infectados com HIV.

Uma possibilidade para curar os portadores de HIV!

Referncia

Li C1, Guan X1, Du T2, Jin W1, Wu B3, Liu Y2, Wang P1, Hu B1, Griffin GE4, Shattock RJ5, Hu Q6. Inhibition of
HIV-1 infection of primary CD4+ T-cells by gene editing of CCR5 using adenovirus-delivered CRISPR/Cas9. J Gen
Virol. 2015 Aug;96(8):2381-93. doi: 10.1099/vir.0.000139. Epub 2015 Apr 8.

A reproduo parcial ou total s permitida com a citao do artigo do Nanocell News.

ISSN 2318-5880

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