Professional Documents
Culture Documents
1. Resumen:
2. Resultados y discusin:
Para el recuento en placa, se hizo un duplicado de diluciones en placas Petri en los medios
de Extracto de Suelo y agar Plate Count a travs de la siembra en profundidad para ser
incubados a 24 y 36C. Esto para asemejar condiciones ambientales de la muestra en estudio
e identificar la presencia de bacterias patgenas respectivamente. Se analiz y observ
adems la existencia de hongos en las placas.
66x104 [ufc/ml] para APC mientras que a 36C se obtuvo 217x106 [ufc/ml] para AES y
15x106 [ufc/ml] para APC. Se ignor para 24C las diluciones 10-7 para AES y 10-5, 10-6 y
10-7 para APC mientras que para 36C se ignor las diluciones 10-4 para AES y 10-7 para APC
debido a que no se encontraban en el rango aceptable.
A continuacin, se eligieron las colonias ms representativas para realizar los cultivos puros
en APC y AES con el mtodo de siembra por estras, las cuales se incubaron a 37C por 24
a 48 horas, arrojando resultados positivos para la placa APC y negativa para AES.
Una vez obtenido el cultivo puro de la placa APC, se identific algunas caractersticas de
est como la forma, tamao, elevacin, consistencia, superficie y olor de la colonia. Despus
de un previo anlisis, se lleg a la siguiente conclusin: colonia con forma circular, tamao
aproximado de 5 mm, elevacin convexa, consistencia viscosa, superficie lisa y olor presente.
Con el cultivo puro listo, se procedi a tomar muestras del cultivo puro para realizar la tincin
de Gram y estudiar su morfologa e identificar si pertenecen a las Gram positivas o negativas
(ver imgenes 1,2 y 3). Segn la literatura, las bacterias que predominan en el suelo son las
del genero Bacillus, Pseudomonas, Clostridium, Nitrobacter, entre otras, las que estn
relacionadas generalmente con los ciclos de los nutrientes. Esto nos dar una idea en primera
instancia para identificar e ir generando hiptesis respecto a las bacterias en estudio.
Indol
Resultado negativo. Lo que se buscaba con esta prueba, era la formacin de anillo
rojo en la superficie gracias al reactivo Kovacs. Como se puede apreciar en la imagen
4, el resultado fue negativo debido a la formacin de un anillo amarillo, lo cual
significa que las bacterias en estudio carecen de la enzima triptofanasa.
Voges Proskauer
Para esta prueba, lo que se esperaba era el viraje de color amarillo a rojo producto de
la fermentacin de la glucosa. El resultado despus de la siembra del cultivo puro,
incubacin y adicin del reactivo Barrit fue negativo.
Informe 6 Microbiologa Ambiental (2016)
Rojo Metilo
Resultado negativo debido a que no hubo ningn cambio de color en el tubo de
ensayo. Nula fermentacin de la glucosa a cidos.
SIM
Resultado negativo debido a que en el medio se observa movilidad solo en la zona de
inoculacin. No se observa crecimiento de microorganismos en todo el tubo. (Ver
imagen 5)
Citrato
Resultado negativo. Medio de cultivo se mantuvo intacto, lo que significa que las
bacterias en estudio no usan el citrato como una fuente de carbono y de energa.
TSI
Resultado positivo. Cambio de color debido a la fermentacin de hidratos de carbono
presentes en el medo. (Ver imagen 6)
Tabla y figuras:
Medio de ml gastados
Medio grs/ml N Lote Fecha cultivo Mtodo de
de expiracin pH pH NaOH HCl esterilizaci
cultivo inicial final n
AES 0,02 - - 7,5 6,94 0 2 Autoclave
ml
APC 0,0235 3169276 30/04/2018 - 7,06 0 0 Autoclave
Como se puede apreciar en la tabla 1, para el nico medio de cultivo al cual se le agreg un
cido o base fue para el agar Extracto de Suelo. Se agreg 2 ml de HCL para dejar al medio
de cultivo con su pH ptimo, 6.8 0.2. Para los dems medio de cultivos no fue necesario
agregar una base o cido debido a que todos presentaron el pH ptimo inmediatamente.
Destacar que para la prueba Indol, el medio se encontraba en expiracin por lo cual, pudo
haber influido en los resultados.
Durante las 24 horas de incubacin, se pudo empezar a formular e indagar que las bacterias
crecan ms rpido a una temperatura mayor, en este caso 36 C. Incluso, las diluciones 10-
4
y 10-5 a 36C ya se encontraban en el rango ptimo de colonias. Mencionar que no se
identific ningn hongo durante las 24 horas.
Tabla 3: Recuento en placa durante 48 horas de incubacin
Finalmente, transcurridas las 72 horas se hizo el conteo final para el clculo de las unidades
formadoras de colonias. Para esto se tom solo las que se encontraban en el rango ptimo.
Los valores fueron mencionados anteriormente. Por ltimo, mencionar que la cantidad de
hongos fue significativa, por lo que pudo haber influido en el crecimiento de las bacterias.
Tabla 5: Reacciones tpicas de especies bacterianas
Como se puede apreciar en la tabla 5 y en base a los resultados obtenidos de las pruebas
bioqumicas se puede concluir lo siguiente:
1. Ausencia de la bacteria Escherichia Coli debido a la reaccin negativa de la prueba
Indol. La bacteria Klebsiella pneumoniae comnmente se identifica con este
resultado, pero como se puede apreciar para las pruebas bioqumicas de citrato y
Voges Proskauer debera dar positiva, lo cual no se dio en este estudio.
3. Con respecto a las bacterias Pseudomonas sp. y Clostridium, los resultados obtenidos
concuerdan con la tabla 5, por lo cual nos hace pensar que podramos estar frente a
este tipo de bacterias como se mencion anteriormente.
Informe 6 Microbiologa Ambiental (2016)
Imagen 9: Pseudomonas,
Bacilos Gram negativo
Informe 6 Microbiologa Ambiental (2016)
3. Conclusin:
El estudio demostr que las bacterias crecen ms rpido a una temperatura mayor. Tambin,
que el medio AES mostr mayor potencial en cuanto al crecimiento bacteriano. Esto
posiblemente a que el AES presentaba los nutrientes necesarios y similares a las del suelo en
estudio. Debido a esto, el nmero de colonias se vio reflejado llegando despus de 72 horas
a 39x106 [ufc/ml] para AES y a 66x104 [ufc/ml] para APC a 24C mientras que se obtuvo
217x106 [ufc/ml] para AES y 15x106 [ufc/ml] para APC a 36C. A su vez se concluy que
las bacterias en su mayora eran gramnegativos del tipo bacillus y que las grampositivas eran
formadoras de esporas como posiblemente Clostridium perfringens.
4. Referencias
Fernndez. L. Rojas. G. Roldn. T. Ramrez. M. Zegarra. H. Uribe. R. Reyes. R.
Flores. D. & Arce. J. (2006). Manual de tcnicas de anlisis de suelos aplicadas.
tems Nota:
Resumen (20%)
Resultados y discusin (50%)
Conclusin (25%)
Referencias (5%)
Nota Final: