Produccin de bacterias nativas y cidos orgnicos

Proyecto:

de inters comercial en acuicultura en VINSOTEL S.A.

Objetivo general: Implementar una planta biorreactor para producir diversos productos
biotecnolgicos mediante el uso de bacterias y hongos para la fermentacin y produccin de
cidos orgnicos, bacterias sulfato oxidantes, nitroreductasas, degradadoras de materia
orgnica y probiticas.

Dergradacin Degradacin de Acidos orgnicos

deTxicos Materia orgnica
Ac. frmico
Sulfurobacter y Bacillus sp
Streptococcus Ac. ctrico
Nitrobacter
Aspirgillus oryzae Ac. Lctico
Sacharomyces Ac. Fumrico
cerevisseae
Ac. Srbico
Objetivo 0. Adecuacin de las reas de laboratorio de microbiologa y oficina segn la lista
de presupuestos de prioridades.

Fase 1. Implementacin bsica: Oficina, bao y laboratorio. Personal de aluminio y vidrio,

gasfitera y electricidad.

Fase 2. Implementacin de las reas: de trabajo: Equipo de albailera y pintura.

Fase 3. Implementacin de equipos de higiene como extractores de aire, Lmpara de insectos.

Cortinas de tiras,

Objetivos 1. Obtencin del material biolgico mediante aislamientos en campo y compra de

transgnicos y pruebas de eficiencia. (1 mes).

Tarea 1: Implementacin de un departamento de microbiologa.

Tarea 2: Aislamientos de Bacillus probitico mediante cultivos en MRS al 2% de sal para

caracterizar su crecimiento.

Tarea 3: Aislamientos de bacterias nitroreductasas mediante agar de amoniaco con

fenolftalena para caracterizar su crecimiento.

Tarea 4: Aislamientos de bacterias sulfato oxidantes mediante agar tiosulfato y caracterizacin

de crecimiento.

Tarea 5: Compra de al por mayor de cidos orgnicos grado tcnico.

Tarea 6. Pruebas de masificacin de cepas seleccionadas en medios de cultivo artesanales a

gran escala.

Objetivos 2. Pruebas de bioensayos de toxicidad bacteriana y compuestos en larvas de

camarn. (2 meses)

Tarea 1. Masificar bacterias potenciales por el mtodo de fermentado en frascos de 100ml.

(nitrificantes, sulfoxiadantes y degradadores de materia orgnica)

Tarea 2. Prueba de degradacin de lodos en frascos de 200ml. (nitrificantes, sulfoxiadantes y

degradadores de materia orgnica) mtodo de percepcin organolptica para la seleccin de
bacterias eficientes.

Tarea 3. Prueba de bacterias masificadas y eficientes con post larvas de camarn a una
concentracin comercial.

Tarea 4. Prueba de desarrollo y supervivencia de postlarvas en base a diferentes formulaciones

de cidos orgnicos.

Objetivo 3. Implementacin de equipos. (1 meses)

Tarea 1. Cotizacin y aprobacin del presupuesto de compra de equipos de produccin.

(semana 2) Tanques, centrfuga separadora, tanque de acero para mezclas.

Tarea 2. Instalacin de equipos

Tarea 3. Prueba piloto de produccin de Bacillus y aspergillus en tanques de 500L

Objetivos 4. Producir a gran escala de bacterias de inters. (2-3 meses)

Tarea 1. Obtener 10 bidones, producto en lquido de bacterias Nitrosobacter y sulfatomonas.

Tarea 2. Obtener una produccin de al menos 10 bidones 20L de bacterias degradadoras de

materia orgnica.

Tarea 3. Obtener 10 sacos hermticos de 5kg de cidos orgnicos de alta eficiencia.

Materiales y Mtodos.

Una vez adecuado los ambientes primarios se necesitan:

Materiales segn adecuaciones

Materiales para el rea de microbiologa:

Banco alto
Campana de vidrio (para mantener estril el rea de trabajo) (artesanal)
Refrigeradora (para guardar las cepas).
Autoclave (Pasteurizador de vapor a presin)
Tanque de gas con vlvula
microPipeta de 1ml
placas Petri de vidrio 200u
Matraz erlemeyer 250ml 10u
Mechero de Bunsen
Tubos eppendorf de 1,5mL 200u
Esparcidores de metal para siembra 10u
Asa de platino 2u
Recipiente de plstico con tapa hermtica de 10L 5u
Baldes de 5L
Mangueras de aireacin 3/16 10m
Balanza de dos decimales
Recipientes hermticos de 200ml 20u
Seis placas de 96 hoyos autoclavables

Materiales para la oficina

Escritorio
Silla
Bitcora de registros

Materiales y equipos para el rea de produccin

Tanques tipo botella 500L 5u (en la segunda etapa de produccin se necesitarn 5 o 10

ms).
Baldes blancos hermticos de 10L 20u
Bomba de agua dulce de 1/3HP (opcional en caso de que el agua no llegue a la altura
deseada)
Manguera de agua resistente a presin 10m 2u
 Escalera de 3m
Balanza grande de 100kg
Jarra de 5L
Pala de aluminio para harinas 10u.
Sellador de sacos y cosedora.
Mezcladora de slidos (artesanal)
Mezcladora de lquidos y biorreactor/fermentador (artesanal)
Pulverizador y secadora (artesanal)

Equipamiento personal:

Mandil o mameluco blanco.

Guantes blancos de trabajo.
Mascarillas con filtro de polvo.
Gorra para la industria alimentaria.

Insumos del rea de procesos.

Melaza al 80%
Harina de yuca (Opcional)
Sal Marina
Cloruro de amonio
Sulfato de amonio
Tiosulfato de sodio
Bicarbonato de sodio
Sulfato de sodio
Hidrgeno fosfato de potasio.
Agua potable.
Ac. Oxlico
Ac. Frmico
Ac. Ascrbico
Ac. Ctrico
Ac. Srbico
Ac. Lctico
Ac. Fumrico.

Insumos a nivel de laboratorio de microbiologa.

Agar bacteriolgico
Thiosulfato de sodio pentahidratado
Peptona
Bicarbonato de sodio
Cloruro de amonio
Cloruro de sodio
MRS agar
Azucar dextrosa
Sulfato de magnesio
Hidrgeno fosfato de potasio
Hidrgeno fosfato de sodio
Procedimientos y protocolos

Aislamiento:

Nitrificantes (reductoras de amonio)

Se lo realizar mediante el cultivo primario en caldo Amoniacado. Posteriormente si fuera

viable se procedern a aislarla en el caldo gelificado con agar al 1,5% mediante el mtodo de
estriado. Un marcador de la reduccin de amoniaco es la ausencia del olor del amonio.

NITROSOMONAS MEDIUM LIQUID SOLUTION

1000m agua destilada
Na2HPO4, 13.5 g
KH2PO4, 0.7 g
MgSO4.7H20, 0.1 g
NaHCO3, 0.5 g
(NH4)2SO4, 2.5 g
FeCl3 6H2O, 14.4 mg
CaCl2*2H2O, 18.4 mg
distilled water, 1000 ml
final pH, 8.0.
Temperature 28C
Time of incubation 7 days

Sulfato oxidante (reductoras de HS)

Se usar el mtodo de agar prpura como marcador de actividad oxidativa del sulfato, el
mtodo ser de seleccin por decoloracin formada en el agar.

(SOB) MEDIUM SCREENING

1000ml agua destilada
15 g of Bactoagar
10g peptona
1.5 g of K2HPO4
0.75 g of ferric ammonium citrate
1.0 g of Na2S2O3.5H2O Tiosulfato de sodio
0.0025g Azul de bromofenol

Descomponedores de Materia Orgnica.

Se realizar un aislamiento por capacidad de generar proteasas con el agar leche. Y se

seleccionarn los que presenten halo de inhibicin.

SKIM MILK AGAR

1000ml agua destilada
agar, 10.5 g/L
casein peptone, 5 g/L
D(+)-glucose, 1 g/L
skim milk powder (inhibitor-free), 1 g/L
yeast extract, 2.5 g/L
Bactoagar 1,5%

MRS AGAR 1% ClNa

Las levaduras y hongos sern aislados por el agar de peptona con penicilina y estreptomicina al
2,5x10-3M cada una.

Caracterizacin de funciones

Las bacterias sern masificadas mediante fermentos y se irn probando en una proporcin de
1/10 de agua de mar en un contenedor hermtico con lodo con amoniaco y sulfurado. El
efecto de la bacteria se lo evidenciar mediante anlisis organolptico en comparacin con los
controles.

En un segundo plano se evaluarn el efecto del consorcio de bacterias y hongos sobre la

descomposicin de animales muertos (camarn) en comparacin con el control.

Prueba de toxicidad

Las cepas de inters sern evaluadas mediante la adicin del fermento en 1/20 sobre agua de
mar conteniendo postlarvas de camarn. Se evaluarn por microscopa el estado de
metamorfosis, laceraciones, pigmentaciones, crecimiento, estado del intestino y sobre todo
mortalidad.

Escalamiento y masificacin

Estandarizacin de cultivo:

Se probarn variaciones de ingredientes del cultivo masivo para optimizar la tasa de

crecimiento. (ser evaluada mediante el mtodo turbidez en diluciones seriadas).

La temperatura adecuada ser evaluada mediante la prueba de gradiente de un cultivo (una

lmpara de calor alumbrando parcialmente los fermentos). y el crecimiento ser evaluado
mediante el mtodo de turbidez en diluciones seriadas 1/10 de placas de 96 hoyos.

Cosecha y produccin (presentaciones)

La cosecha ser removida a los das mximos de crecimiento bacteriano despus de un anlisis
de curva de crecimiento evaluado previamente por el mtodo de turbidez en diluciones en
placas y por el CENAIM como organismo certificador.

Previo al envasado en lquido ser sometido a una mezcladora/biorreactor para aadir

aditivos. El envasado se lo realizar en recipientes nuevos libres de inhibidores bacterianos.

Posteriormente si amerita el caso, se podra desarrollar el secador por pulverizacin (SPRAY

DRYER) para el secado de todo el fermento para el empaquetado en bolsas plsticas
hermticas.
Produccin de cidos Orgnicos eficientes

Las distintas formulaciones de cidos orgnicos sern evaluadas por la capacidad de tolerancia
de la larva. Dependiendo de eso se proceder a formular en pequeas cantidades los
compuestos fuertes y en altas cantidades los ms tolerables. Cabe recalcar que se tomar en
cuenta el factor costo al momento de la formulcin.

Equipos.

Mezcladora de solidos

Mezcladora lquidos/Fermentador/ Bioreactor/Dispensador

Secador por pulverizacin (SPRAY DRY)