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AREAS:
MICROBIOLOGIA
PARASITOLOGIA
MICOLOGIA
BACILOSCOPIA
TUTOR DE AREA:
Mblgo. Liliana Soledad Cabanillas Arana
Mblgo. Vitaliano O. Fernandez Maguia
ROTACION: 20 DE ABRIL
19 DE JUNIO
El objetivo de este informe y en los dos meses que rote por estas reas fue
reconocer, identificar, procesar, prepara los diferentes materiales que se da en
uso como son: Agar Mac conkey, Miuller Hinton y Agar chocolate.
En este informe dar a presentar las diversas tcnicas que aprend, con ciertas
limitaciones, presentare lo ms fundamental que realice en cada procedimiento.
Esta definicin operativa no incluye los hongos, tanto inferiores como superiores,
ni las algas aunque ambos grupos son considerados microorganismos porque
su organizacin es esencialmente unicelular (las clulas que los constituyen
mantienen un alto grado de autonoma entre s). Por otra parte, organismos
pluricelulares pueden ser de tamao tan pequeo que entren dentro de la
definicin anterior sin dejar por ello de ser estructuralmente tan complejos como
cualquier animal superior. En nuestro curso nos centraremos principalmente en
bacterias, virus y hongos.
1. LAS BACTERIAS
Las bacterias son microorganismos unicelulares que se presentan un tamao de
algunos micrmetros de largo. Las bacterias son procariotas, no tienen ncleo ni
orgnulos internos. Generalmente poseen una pared celular. Muchas bacterias
disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento.
Membrana citoplasmtica.
Capa gruesa de peptidoglicano.
cidos teicoicos y lipoteicoicos, que sirven como agentes quelantes y en
ciertos tipos de adherencia.
Polisacridos de la cpsula.
Si algn flagelo est presente, este contiene dos anillos como soporte, las
bacterias Gram positivas tienen solamente una capa membranal.
La red de murena est muy desarrollada y La red de murena presenta una sola capa
llega a tener hasta 40 capas
La penicilina mata a las Gram positivas, ya La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa
que bloquea la formacin de enlaces de la capa de lipopolisacridos situada en la parte
peptdicos entre las diferentes cadenas del externa de la pared celular.
peptidoglucano
2.2 CATTERES:
a) Toma de muestra:
Lavado de manos con antisptico.
Colocarse los guantes estriles
Realizar la desinfeccin de la piel con alcohol 70. Dejar secar.
2.3. UROCULTIVO
a) Instrucciones para pacientes que no controlan esfnteres:
Lavar los genitales con abundante agua y jabn. En los varones,
retraer el prepucio para su mejor higiene.
2.4. COPROCULTIVO
a) Toma de Muestra
Con el hisopo, tomar la materia fecal recin emitida, eligiendo las
partes mucosas y/o sanguinolentas. No arrastrar demasiado material.
Colocar en un tubo sin medio de transporte.
Enviar inmediatamente al Laboratorio de Microbiologa.
c) Frotis bacteriano
1. Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriolgica hasta el
rojo vivo y esperar a que enfre un poco.
2. Tomar con el asa una gota de agua estril y agregarla en un
portaobjetos.
3. Flamear nuevamente el asa y esperar a que enfre.
4. Tomar con el asa un poco de muestra bacteriana a partir de una
colonia aislada.
5. Despus agregar la muestra en la gota de agua que est en el
portaobjetos y homogeneizar suavemente con movimientos circulares.
6. Esperar que seque al aire libre o poner durante uno o dos segundos
con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta
que el calor no debe ser directo (slo se pasa por la llama), puesto que
el calor excesivo puede cambiar la morfologa celular de las bacterias
a observar.
d) Tincin:
1. Agregar cristal violeta, solo el suficiente para que se cubra el extendido
bacteriano, dejar actuar durante 60 segundos.
2. Agregar el lugol, solo el suficiente, dejar actuar durante 60 segundos.
3. Enjuagar con agua corriente.
4. Agregar una o dos gotas de alcohol-acetona e inmediatamente
enjuagar con agua corriente.
5. Agregar Safranina, solo la suficiente, Dejar actuar durante 60
segundos.
6. Enjuagar con agua corriente.
7. Dejar secar a temperatura ambiente.
8. Observar en un microscopio ptico con un objetivo 100X usando aceite
de inmersin.
Consideraciones:
No Agar sangre (peroxidasa en los eritrocitos).
5. PRUEBA DE LA COAGULASA
5.1. Fundamento:
Detecta un factor de agregacin clumping factor en la superficie de la
bacteria.
5.2. Coagulasa procedimiento:
RESULTADO
NEGATIVO
RESULTADO
POSITIVO
RESULTADO POSITIVO
6. PRUEBA DE LA OXIDASA
Esta prueba est basada en la identificacin de una enzima bacteriana llamada
citocromo C oxidasa y para reducir el nombre se le dice oxidasa.
Todas las bacterias aerobias obtienen su energa en forma de ATP a partir del
proceso de respiracin tambin llamado cadena respiratoria, este se lleva a cabo
en la membrana celular bacteriana, en las siguientes lneas se dar una breve
explicacin de la cadena respiratoria solo con la finalidad de entender de donde
proviene y que realiza la enzima citocromo C oxidasa, entindase que todo este
proceso tiene la finalidad de producir ATP.
1. Agua destilada
2. Pipetas Pasteur
3. Capucho para sostener la
pipeta
4. Parafina
5. Pipeta para coger el agua
destilada para colocar a los
posillos.
6. La suspensin de la bacteria
en agua destilada
7. El sistema API
h) INCUBACIN EN ESTUFA
a. TDA
b. VP
c. IND
d. Oxidasa
Estafilococos en directo
a) UROCULTIVO
- Gentamicina - Ciprofloxacino
- Ceftriaxona
- Ceftazidima
- Amikacina
- Nitrofurantoina
- Sulfatrimetoprim (cotrimoxasol)
- Ac. Nadilixico
ORINA Streptococcus Fecalis
- Impenem
- Amoxicilina
- Vancomicina
- Azitromicina
- Clorafenicol
- Ampicilina Sulbactam
- Penicilina
- Cefotaxima acida clavulanico
b) COPROCULTIVO
- Gentamicina
- Ceftazidima
- Ceftriaxona
- Furazolidona
- Cefoxitima
- Clorafenicol
- Amikacina
- Ciprofloxacino
c) SECRECIN FARINGEA
- Amikacina
- Cefotaxima clavulanico
- Ceftriaxona
- Levofloxacino
- Ampicilina Sulbactam
- Piperaciclina- tazobactam
- Cefadroxilo
- Ampicilina Sulbactam
- Penicilina
- Vancomicina
- Gentamicina
- Amoxici clavulanico
- Imipenem
- Ciprofloxacino
- Azitromici
9.4. PROCEDIMIENTO PARA EL ANTIBIOGRAMA
1. MORFOLOGA.
2.4. PASOS:
3.1. PASOS:
c) Recortar un cuadradito de
medio de cultivo (superficie =
de la del cubreobjetos).
k) Retirar el cubreobjetos
1. TRANSMISIN
La tuberculosis es transmitida de persona a persona principalmente por va
respiratoria, a travs de las gotitas de Pflge. Los bacilos tuberculosos (en
nmero de 1 a 3) forman los ncleos de estas pequeas gotitas, lo
suficientemente pequeas (1-5 micras de dimetro) como para evaporarse, y
permanecer suspendidas en el aire varias horas.
Las partculas de mayor tamao, aunque tengan mayor nmero de bacilos, son
menos contagiosas, pues caen por gravedad, o en el caso de ser inhaladas, son
eliminadas por el sistema mucociliar y la tos. Cuando una persona
con tuberculosis pulmonar o larngea tose, estornuda, habla o canta, emite estas
pequeas partculas.
La posibilidad de que la enfermedad se transmita depende de cuatro factores:
2. CALIDAD DE MUESTRA
a) La muestra de esputo mucopurulenta, proveniente de rbol bronquial, es la
que asegura mayor probabilidad de que se puedan observar bacilos
b) Una buena muestra tiene aproximadamente 3 a 5ml, es generalmente espesa
y mucoide. Puede ser fluida con partculas de material purulento. El color es
variable (blanco, amarillento y hasta verdoso).
REPORTE DE RESULTADOS
3. AMEBAS
Los quistes de las amebas suelen mostrar una granulacin fina. En su estado
maduro, el nmero de nucleos varia de uno (Iodomoeba, Entamoeba polecki), a
cuatro (E. histolytica/ E. hartmanni, E. nana) u ocho (E. coli). Las masas de
glucgeno, asociadas sobre todo con quistes de Iodamoeba, pueden verse
tambin en quistes inmaduros o maduros (con menor frecuencia) de especies de
Entamoeba y E. nana. Otras inclusiones citoplasmticas de los quistes son
cuerpos cromatoides refringentes en forma de bastones con extremos
redondeados (E.Histolytica / E. dispar y E. hartmanni) o con estremos irregulares
(E. coli). Se tie de color rosado a rojo con tincin tricromica o de color azulado
a negro con hematoxilina ferrica, pero no se tien con yodo.
4. FLAGELADOS
Giardia duodenales (=G. lamblia), denominada tambin G. intestinales, es
robablemente el flagelado humano mas conocido. Dientamoeba fragilis,
clasificada antes como ameba, ha sido reclasificada como flagelado y esta
relacionada con tricomonas. Las tricomonas y D. fragilis carecen de estadio
qustico.
Dientamoeba fragilis, si bien se suele afirmar que no es patgena para el ser
humano, se asocia con diarrea y otros sntomas intestinales en muchas
personas. Por lo general, los trofozoitos de Dientamoeba tienen uno o dos
ncleos, aunque predominan las formas binucleadas. El ncleo carece de
cromatina perifrica, y el cariosoma est fragmentado en cuatro o ms grnulos
en una masa central.
Giardia duodenales es uno de los protozoos intestinales diagnosticados con
mayor frecuencia en los Estados Unidos. Se consideraba no patgeno, aunque
en la actualidad se reconoce que en general es patgeno y que provoca
sntomas que varan desde la diarrea leve hasta sndrome de malabsorcin, por
ejemplo esteatorrea; la infeccin es ms complicada en los nios.
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA DE
AZUCARES REDUCTORES (BENEDICT)
LECTURA:
Reaccin Positiva:
LECTURA:
Reaccin Positiva: Se formara un anillo visible en la
superficie de color violeta o negro
PROCEDIMIENTO DE LEUCOCITOS EN HECES
(REACCIN INFLAMATORIA)
Lectura:
Reaccin Positiva:
AZUL DE
SULFATO DE LUGOL METILENO
AGUA DESTILADA ZINC
MICROCENTRIFUGA MICROSCOPIO
PROCEDIMIENTO
1. Se prepara los coladores de plstico con una doble capa de gasa sobre
las copas de vidrio.
2. Se colocan aproximadamente 4 gr. De heces, usando el baja lenguas. La
muestra se hace pasar con agua destilada, tratando de homogenizar al
filtrar.
3. Se deja reposar 45 minutos.
4. Con una pipeta se llenara el sobrenadante en el micro vial hasta la mitad
y la otra mitad se llena la solucin de sulfato de Zinc hasta el borde.
Centrifugar a 2.300 rpm, durante un minuto.
5. De ah se deja solo el sedimento en la copa y lo que resta del
sobrenadante se desecha.
6. Tomar con una pipeta una alcuota de la superficie del micro vial. Colocar
en el portaobjetos 1 gota de la muestra con 1 gota del Lugol y cubrirlo con
una micro laminilla
7. Simultneamente colocar en el otro extremo del portaobjetos 1 gota del
sedimento del micro vial y cubrir con un micro laminilla.
8. Y luego llevarlo al microscopio a menor y mayor aumento para su lectura.
(1 MES)
20 DE ABRIL AL 19 SECRECIN LIQUIDO COPROCULTIVO UROCULTIVO
DE MAYO)
PLASMA SEMINAL 1
ORINA 77
HECES 5
LCR / LP / LA 5
HISOFADO
4
FARINGEO
SONDA FOLEY
CUERO
2
CABELLUDO
CANTIDAD DE
TIPOS DE 7 5 5 77
MUESTRAS
TOTAL DE MUESTRAS 94
(2 MES)
19 DE MAYO AL 19 SECRECIN LIQUIDO COPROCULTIVO UROCULTIVO
DE JUNIO)
PLASMA SEMINAL 9
ORINA 80
HECES 17
LCR / LP / LA 8
HISOFADO
10
FARINGEO
SONDA FOLEY
CUERO
4
CABELLUDO
CANTIDAD DE
TIPOS DE 23 8 17 80
MUESTRAS
TOTAL DE MUESTRAS 128
El total de muestras de los dos meses de rotacin son 222 muestras todas estas
muestras se les cultiva en agar Miuller Hinton sangre y Miuller Hinton (cada uno
de las muestras) y referente a su Gram del crecimiento de las colonias se les
hacia su antibiograma.
ANEXOS
EQUIPOS DE MICROBIOLOGIA PARASITOLOGIA Y BK