UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGA AGRCOLA

PRCTICAS DE BIOQUIMICA

PROGRAMA DE PRCTICAS DE LABORATORIO

- PRESENTACIN

Las prcticas de bioqumica para la especialidad de Parasitologa Agrcola, tienen

como objetivo, entre otros, introducir al estudiante en aquellas tcnicas bsicas
ms comunes utilizadas tanto en el anlisis bioqumico cualitativo como en el
cuantitativo. De acuerdo al programa terico y conociendo los requerimientos
especficos para otros cursos y para el desarrollo en el campo profesional de los
estudiantes, es necesario que en las prcticas iniciales de este curso se revisen y
manejen conceptos referentes a diferentes unidades de concentracin de
soluciones, los clculos para correccin por pureza, as como la verificacin
experimental de la concentracin resultante.

Los materiales, equipos y reactivos qumicos de frecuente empleo en un

laboratorio de anlisis, igualmente requiere de su presentacin y revisin para su
uso cuidadoso y correcto para que de esa manera se eviten al mximo errores y
accidentes. Es evidente que lo antes sealado, servir como prerrequisito para
continuar con el desarrollo de prcticas en las que se har uso de los conceptos
revisados, experimentados y que junto con los nuevos conceptos y experiencias
se irn formando las habilidades y destrezas en el estudiante.

Lo antes dicho, corresponde a una breve pero muy significativa revisin de la

qumica analtica clsica, la gravimetra y la volumetra y que se estima cubrir en
cuatro sesiones de prcticas.

Cumplidos los prerrequisitos, el estudiante estar en condiciones de abordar con

holgura cada una de las prcticas siguientes, que se han programado esperando
una formacin experimental en bioqumica bsica y aplicada, que implica tambin,
la revisin de conceptos como el pH, la importancia del agua en la vida, las
soluciones amortiguadoras en los sistemas biolgicos, esto para que el estudiante
tenga presente el entorno en que se encuentran las biomolculas a las que va a
ser capaz de identificar y cuantificar en el laboratorio, nos referimos a compuestos
orgnicos como los lpidos, protenas y carbohidratos, molculas que de acuerdo a
sus propiedades fisicoqumicas sern detectadas, aisladas y cuantificadas a partir
de sus fuentes naturales que pueden ser de ndole diversa, esto en relacin a las
diferentes especies vegetales, animales o microorganismos, entes relacionados a
cualquier rama de las ciencias biolgicas por ejemplo la que nos ocupa, el
especialista en Parasicologa Agrcola.

De acuerdo a lo antes mencionado, el programa ya desarrollado formar a un

estudiante que conocer a las biomolculas, porque las ha manejado de manera

1
pura como reactivo analtico (R.A.), ha consultado las estructuras qumicas
correspondientes, tambin sus propiedades qumicas, propiedades que ha
corroborado mediante la experimentacin en el laboratorio, pero adems, a esas
mismas molculas las ha aislado de sus fuentes naturales, las ha identificado
como ya se ha dicho y algo mas, las podr haber cuantificado y reportado usando
las unidades de concentracin adecuadas.

Por otro lado, el estudiante tambin sabr acerca del metabolismo de los
organismos, sntesis y degradacin de compuestos, la accin de las enzimas, as
como la medicin de procesos fisiolgicos como la respiracin , todo ello haciendo
uso de las metodologas de la qumica analtica clsica o cuando as se requiera,
usando mtodos instrumentales como la espectrofotometra, cromatografa,
refractometra, polarimetra,

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 REGLAMENTO PARA EL USO DE LABORATORIOS

EL CUMPLIMIENTO DE LOS SIGUIENTES PUNTOS PERMITIR A LOS

USUARIOS, MAYOR SEGURIDAD Y ARMONA DURANTE EL TRABAJO A
REALIZAR.

1. ASISTIR PUNTUALMENTE A SU PRCTICA.

2. DESDE LA PRIMERA SESIN, IDENTIFICAR SISTEMAS DE

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO COMO SON: BOTIQUN DE
PRIMEROS AUXILIOS, EXTINGUIDOR DE FUEGO, MANTA APAGA
FUEGO, REGADERA DE AGUA, SALIDAS PARA CASO DE
EMERGENCIA.

3. DURANTE TODA LA ESTANCIA EN EL LABORATORIO, SE

MANTENDR EL ORDEN Y LA DISCIPLINA.

4. LIMPIAR Y MANTENER AS SU LUGAR DE TRABAJO.

5. USAR BATA BLANCA DURANTE TODO SU TRABAJO.

6. LOS ALUMNOS, DEBERN TENER UNA LIBRETA ESPECIAL O

BITCORA PARA EL REGISTRO DE DATOS Y/O RESULTADOS DE LOS
EXPERIMENTOS DE LAS PRCTICAS.

7. NO TOMAR ALIMENTOS EN EL LABORATORIO.

8. ANTES DE INICIAR EL TRABAJO DE LABORATORIO, LOS USUARIOS

DEBEN HACER VALE POR EL MATERIAL QUE SE LES
PROPORCIONAR, Y ENTREGAR ESE MATERIAL AL FINALIZAR LA
PRCTICA., EN CASO DE LA FALTA DE ALGN MATERIAL, EL
ALUMNO (NA) O EL EQUIPO REPONDR EL FALTANTE A LA
SIGUIENTE SESIN. SI NO EXISTE ADEUDO SE DEVOLVER EL VALE.

9. EL MATERIAL DE VIDRIO Y EQUIPOS USADOS DEBERN

DEVOLVERSE LIMPIOS.

10. AL USAR LOS REACTIVOS QUMICOS, TENGA SIEMPRE PRESENTE

LAS INDICACIONES EN EL MANEJO CORRECTO PARA SEGURIDAD
PERSONAL Y DE GRUPO.

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 DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGA AGRCOLA
PROGRAMA DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

1. INTRODUCCIN AL TRABAJO DE LABORATORIO.

2a. CLCULO Y PREPARACIN DE SOLUCIONES A DIFERENTES UNIDADES DE

CONCENTRACIN.

2b. VALORACIN DE SOLUCIONES POR VOLUMETRA, REFRACTOMETRA O

POLARIMETRA SEGN CORRESPONDA.

3. CUANTIFICACIN DE ACIDEZ TITULABLE EN UN PRODUCTO BIOLGICO

(EXTRACTO DE FRUTOS, LQUIDOS PECUARIOS, PRODUCTOS DEL
METABOLISMO DE CEPAS MICROBIANAS).

4. AGUA, pH y SOLUCIONES AMORTIGUADORAS.

5. CROMATOGRAFA EN PAPEL PARA IDENTIFICACIN DE AZCARES.

6. REACCIONES CUALITATIVAS PARA IDENTIFICACIN Y CLASIFICACIN

DE AZCARES.

7. CUANTIFICACIN DE AZCARES DE UNA MUESTRA BIOLGICA, POR

ESPECTROFOTOMETRA.

8. ANLISIS DE AMINOCIDOS A PARTIR DE HIDROLIZADO DE MUESTRAS

BIOLGICAS (ESPECIES VEGETALES, MUESTRAS ANIMALES, CEPAS
MICROBIANAS ETC.).

9. CUANTIFICACIN DEL CONTENIDO PROTICO DE UNA MUESTRA

BIOLGICA.

10. ANLISIS DE LPIDOS.

11. EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO EN LA VELOCIDAD DE

REACCIN ENZIMTICA.

12. EFECTO DEL pH EN LA VELOCIDAD DE REACCIN ENZIMTICA.

13. RESPIRACIN. SU MEDICIN EN ORGANISMOS VEGETALES Y/O

MICROBIANOS, EMPLEO DE ELECTRODO SENSOR ELECTRNICO
COMPUTARIZADO.

14. SEMINARIOS EN INSTRUMENTACIN BIOQUMICA: Cromatografa de gas,

Colorimetra, Potenciometra, Refractometra, Polarimetra, Electroforesis,
Espectrometra de I.R. (INFRARROJO), RESONANCIA MAGNTICA
NUCLEAR (RMN)

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 PRCTICA 1

INTRODUCCIN AL TRABAJO DE LABORATORIO.

INTRODUCCIN

Para poder llevar a cabo una experimentacin exitosa es necesario conocer la

operacin ptima de los instrumentos a usar, as como las reglas generales que
rigen un laboratorio, evitando de esta manera accidentes en el trabajo y errores en
los resultados.
En esta primera prctica, se presenta un avance de los conocimientos que se irn
revisando, relacionados al manejo de conceptos necesarios para preparar
soluciones, en diferentes unidades de concentracin, conocer el uso y manejo
correcto de la balanza analtica y el ensayo con equipo volumtrico.

OBJETIVO
Dar a conocer al alumno el material de vidrio volumtrico y equipo
gravimtrico.
Que el alumno conozca el uso correcto del material volumtrico,
gravimtrico y en general del laboratorio.
Revisar los conceptos tericos y clculos para preparar soluciones molares,
normales, porcentuales, partes por milln, muy usadas en el laboratorio y
en el campo profesional.
Encontrar experimentalmente el volumen que ocupa una gota ideal
volumtrica.
Presentar ejercicios para realizacin de clculos gravimtricos.

MATERIAL DE LABORATORIO, VOLUMTRICO Y GRAVIMTRICO

Bureta: Instrumento cilndrico, volumtrico de laboratorio, es de vidrio graduado,
alargado, que antes de la punta de salida, tiene acoplada una vlvula para poder
controlar el flujo del lquido que se va a medir en mL. El uso ms significativo es
en valoraciones(o titulaciones para producir soluciones tipo) o en las
cuantificaciones volumtricas de acidez, azcar, nitrgeno de protenas, etc.
Matraz Erlenmeyer: Vasija o recipiente de vidrio que se emplea para contener
lquidos, son de vidrio que resisten calentamiento en mecheros de gas o parrillas
elctricas, de diferentes capacidades, regularmente estn graduados tambin se
utiliza para titular en el anlisis cuantitativo volumtrico.

Matraz Aforado: Instrumento de vidrio de cuello largo y angosto, en el que se

encuentra marcado el aforo que corresponde a la capacidad en mL del

5
instrumento, normalmente se utiliza para preparar soluciones y/o diluciones de
concentracin exactamente conocidas.

Pipeta: Instrumento cilndrico de vidrio que se emplea para medir con mayor
exactitud, pueden estar graduados en mL, en sus fracciones o son volumtricos,
es decir, en estos ltimos solamente se puede medir la cantidad total en mL ya
que no tienen graduacin en fracciones de mL..

Soporte universal. Instrumento de metal que se usa como soporte para el

montaje de diversos materiales de laboratorio, principalmente buretas. Para hacer
volumetra, el soporte universal necesariamente debe tener fijada una pinza para
bureta.

Existen diversos materiales, en esta ocasin, para esta la primera prctica, solo
incluimos los que se van a utilizar para demostracin.

La variacin de material de vidrio de laboratorio es diversa, abundante,

concluyendo que la mayor parte de ellos es de material resistente a temperaturas
altas, aunque frgiles a cadas. La limpieza de dicho material debe ser a cada
momento despus de su uso, de no ser as se podra provocar una reaccin
diferente con otra sustancia contaminante al material utilizado y de inters.

En ocasiones se emplean materiales de hule como la pro-pipeta, o de plstico

como embudos, probetas, vlvulas para bureta etc.
En algunos casos tambin es utilizado material de metal como las gradillas,
pinzas, soporte universal, tripi, rejillas de alambre con cubierta de asbesto, etc.

Formas de expresar la concentracin.

Existen diferentes formas de expresar la concentracin de una disolucin. Las que
se emplean con mayor frecuencia suponen el comparar la cantidad de soluto con
la cantidad total de disolucin, ya sea en trminos de masas, ya sea en trminos
de masa a volumen o incluso de volumen a volumen si todos los componentes son
lquidos. En este grupo se incluyen las siguientes:

Molaridad (M). Es la forma ms frecuente de expresar la concentracin de las

disoluciones en qumica. Indica el nmero de moles (m) de soluto en gramos,
disueltos por cada litro (L) de disolucin; se representa por la letra M. El clculo de
la molaridad se efecta determinando primero el nmero de moles y dividiendo por
el volumen total en litros:

Gramos por litro (g/L). Indica la masa en gramos disuelta en cada litro de
disolucin. Tiene la ventaja de ser una concentracin expresada en unidades
6
directamente medibles para el tipo de disoluciones ms frecuentes en qumica (las
de slidos en lquidos). La balanza expresa la medida de la masa de soluto en
gramos y los recipientes de uso habitual en qumica indican el volumen de lquido
contenido en litros de solucin o en sus submltiplos. Su clculo inmediato es:

Tanto por ciento en peso (% P/P). Expresa la masa en gramos de soluto

disuelta por cada cien gramos de disolucin. Su clculo requiere considerar
separadamente la masa del soluto y la del disolvente:

Siendo la masa de la disolucin la suma de masas del soluto y la del disolvente.

Para el estudio de ciertos fenmenos fisicoqumicos, resulta de inters expresar la

concentracin en trminos de proporcin de cantidad de soluto a cantidad de
disolvente. Se emplea entonces la molalidad:

Molalidad. Indica el nmero de moles de soluto disuelto en cada kilogramo de

disolvente:

Aplicacin: clculo de concentraciones

a) Solucin porcentual p/p (% p/p). Se trata de calcular el nmero de
gramos de soluto por cada cien gramos de disolucin, es decir:

b) Solucin porcentual p/v... (% p/v). Se calcula el nmero de gramos de

soluto a disolver el 100 mL de disolucin

7
 N de g de soluto (ejemplo 4.5 g de NaCl / 100 mL de disolucin
total en agua destilada) = 4.5 % p/v

c) Solucin Molar. Dado que:

d) Solucin Molal. De acuerdo con su definicin:

e) Solucin Normal. Cuando se realizan valoraciones (o titulaciones) en

reacciones cido-base, las soluciones patrn usadas, es decir, aquellas
soluciones de concentracin exactamente conocidas y que se usan como
referencia para cuantificar la concentracin de otra, lo correcto, lo adecuado
es que la concentracin a que se encuentran preparadas es de alguna
Normalidad.
Definicin: Una solucin normal es aquella que contiene por cada litro, un
equivalente qumico en gramos (g), de la sustancia pura, es decir, del cido
o de la base o de una sal a usar como patrn.
Para reacciones cido-base, el peso equivalente (g), se calcula dividiendo
la masa molecular (g) por el nmero de hidrgenos sustituibles del cido o
por el nmero de hidroxilos igualmente sustituibles en la reaccin en que
participan.
Ejemplos:
H2SO4Masa molecular (g) = 98 Peso equivalente (g)= 98/2 = 49.00
HCl Masa molecular (g) =36.5 Peso equivalente (g)= 36.5/1 = 36.50
Ca (OH)2 Masa Molecular (g)=74.08 Peso equivalente (g)= 74.08/2 = 37.04
NaOH Masa Molecular (g) = 40 Peso equivalente (g)= 40/1 = 40.00

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MATERIALES Y REACTIVOS
Soporte universal
Pinzas para soporte universal.
Bureta de 25 o 50 mL.
Matraz Erlenmeyer de 250 mL.
Pipeta volumtrica de varias capacidades.
Pipeta graduada de varias capacidades.
Matraces aforados.
Balanza analtica.
Balanza granataria.
Vaso de precipitados.
Agua destilada.

EXPERIMENTO 1
Disear experimento para que usando diferentes equipos volumtricos, se
encuentre el volumen en mL de una gota ideal volumtrica.
Para obtener resultados llenar esta tabla de frecuencia.

Volumen de
gota ideal,
Equipo mL/gota, esto
Muestra mL No. de gotas mL/ gota
volumtrico por la
tendencia
observada.

Pipeta
graduada 5 mL

Pipeta
graduada 10
mL

Pipeta vol. 1 mL

Pipeta vol. 5 mL

Bureta de 25
mL

PROMEDIO mL / gota.

9
EXPERIMENTO 2
Ensayar pesada en la balanza analtica y granataria, esto con ayuda del
instructor, anotando como resultado, la secuencia para su uso correcto y obtener
la pesada.
Adicionalmente revisar bibliogrficamente, el uso correcto, la instalacin de una
balanza analtica y reportar qu mide, as como el fundamento terico de la
medicin.

RESULTADOS
1. Dar una clasificacin del material utilizado en el laboratorio, sealando
caractersticas y uso.
2. Reportar los aspectos sealados en el experimento 1 y 2.
3. Definir peso molecular, solucin molar, peso equivalente y solucin normal.
4. Reportar el peso molecular de los siguientes compuestos y proponer otros
cinco.

Ejemplo: Sacarosa C12H22O11, P.M. =144+22+176 = 342

a) cido sulfrico
b) Hidrxido de sodio
c) HCl
d) Na2CO3
e) KHC8H4O4
5. Reportar el peso equivalente (g) de los siguientes compuestos y sealar
otros cinco.
Ejemplo: H2SO4 cido Sulfrico P.E. = 98g / 2 = 49 g.
a) NaOH
b) (NH4)2SO4
c) HCl
d) Na2CO3
e) KNO3

6. Calcular la preparacin de las siguientes soluciones:

a) 1.5L de H2SO4 al 1.25 % p/v, el R.A. est al 97 % p/p de pureza, la
densidad del cido es 1.84 g/mL. Qu volumen en mL del R.A. se
necesita medir para esta preparacin?.
b) 1.5L de NaOH al 1.25 % p/v, el R.A. est al 99 % p/p de pureza.
Cuntos gramos g del R.A. se necesita pesar?.

10
c) 1.5L de NaOH a 0.1N, los datos de este Reactivo Analtico, ya estn en
el problema (b). Cuantos g del hidrxido de sodio R.A. se necesita
pesar para esta solucin?.
d) 1.5L de HCl 0.1N, este R.A. est a 37 % p/p de pureza, su densidad es
1.19 g/mL. Cuantos mL debe medirse de este reactivo para la
preparacin ?
e) 1.5L de H3BO3 al 4 % p/v, la pureza de este reactivo es 99.5 % p/p,
Cuntos g del R.A. se pesar para esta solucin?.
f) Define qu es una solucin que contiene 30 ppm p/v, o p/p de
CaCO3?.
g) Define Cuantos g habr de NaCl puro, en 500 L de una solucin que
contenga 2.5 % p/v ?
h) Reporta la bibliografa consultada.

Nota: Para citar toda la bibliografa revisar ISO 690.

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 PRCTICA 2

PREPARACIN DE SOLUCIONES Y VALORACIN.

INTRODUCCIN

En el mtodo de clasificacin de la materia que se basa en la composicin, se

considera que una muestra dada de material puede ser una sustancia pura o una
mezcla. El trmino sustancia pura se refiere a un material cuyas partes tienen la
misma composicin y que tiene un conjunto exclusivo y definido de propiedades.
En contraste, una mezcla consta de una o ms sustancias y tiene una
composicin arbitraria. Las propiedades de la mezcla no son caractersticas, sino
que dependen de su composicin.

Las soluciones carecen de composicin definida, sin embargo, para la mayora de

las soluciones hay cierto lmite de soluto que puede disolverse en una cantidad
determinada de disolvente a una temperatura dada. Conviene referirse a la
sustancia que se disuelve como al soluto, y aquella en la que tiene lugar la
solucin como al solvente.

Una solucin que contiene a una temperatura dada tanto soluto como puede
disolver se dice que es saturada, cualquier solucin que tiene una cantidad mayor
se llama sobresaturada, este ltimo tipo de solucin existe nicamente en
deficiencia de solvente y es sumamente inestable, pues la simple agitacin de una
diminuta cantidad de soluto basta siempre para provocar la precipitacin del
exceso de este.

Para conocer el estado de una solucin con respecto a la saturacin, basta

agregar a aquella un poco de soluto, si este no se disuelve ms y hay
precipitacin, la solucin original estaba sobresaturada. La solubilidad depende de
la temperatura, la mayora de los slidos se disuelve ms en lquidos a altas que a
bajas temperaturas, mientras que los gases se disuelven ms en lquidos fros que
en calientes.

OBJETIVO
Preparar soluciones de concentracin requerida, a partir de
especificaciones de reactivos de alta pureza.
Valorar una solucin cida (HCl 0.1N) por medio de titulacin, aplicando el
principio de equivalencia y empleando una solucin Tipo o Estndar de
compuesto tipo primario.
Titular una solucin alcalina (NaOH 0.1N) a partir de una solucin Tipo o
Estndar de compuesto tipo primario.

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MATERIAL Y REACTIVOS
Fenolftalena solucin indicadora
1 Soporte universal
Na2CO3 R.A.
1 Matraz aforado de 100 mL
KHC8H4O4 R.A.(Biftalato de
2 Matraces Erlenmeyer de 250 mL
potasio a peso cte.), revisar
1 Vaso de precipitado de 250 mL
pureza.
1 Bureta de 25 50 mL
1 Pipeta graduada de 10 mL
Rojo de metilo sol. indicador.
HCl R.A., d= 1.19 g/mL, pureza
37 % p/p,
NaOH R.A., pureza 99.5 %

Se revisarn los clculos para la preparacin de soluciones de:

NaOH 0.1N., HCl 0.1 N., H2SO5 1.25% p/v, NaOH 1.25% p/v, H3BO3 4% p/v y se
titularn las soluciones 0.1N. de NaOH y de HCl con sus compuestos primarios
correspondientes.

PROCEDIMIENTO
Titulacin de las soluciones aproximadamente 0.1N de NaOH.
La bureta debe estar limpia y seca, posteriormente se mantiene en posicin
vertical con ayuda de un soporte universal (o pie universal) con la llave cerrada
(posicin horizontal) y se vierte en ella unos cinco mL de la solucin que se va a
emplear para su titulacin (NaOH patrn). Se gira la bureta en posicin horizontal
de modo que moje toda la superficie interior de la bureta, luego se desecha la
solucin de enjuague abriendo (posicin vertical) la llave de la bureta para eliminar
esa solucin empleada. Este proceso se llama ambientar la bureta. Esto se realiza
para eliminar los posibles residuos de agua que podra contener la bureta lo que
traera como consecuencia un cambio en la concentracin de NaOH patrn lo que
alterara los resultados verdaderos de clculos de la titulacin.
Posteriormente se llena la bureta con la solucin (NaOH patrn) sobrepasando la
marca cero de aforo; la marca cero (se encuentra en la parte superior de la
bureta). Se elimina un volumen de disolucin (NaOH patrn) que se agreg a la
bureta, de modo que la parte inferior del menisco coincida con el comienzo de la
graduacin, es decir la marca cero. La punta inferior de la bureta debe quedar
totalmente llena de disolucin. Se debe tener la precaucin de que no se formen
burbujas en la punta de la bureta; de ser as, se debe abrir la llave y dejar caer un
volumen de disolucin hasta eliminar las burbujas y se vuelve a aforar.
La vlvula de la bureta debe de quedar graduada de tal forma que vierta una gota
despus de otra (se distinga cada una). Ya aforada la bureta con la solucin de
NaOH a valorar, se agrega entonces la solucin gota a gota a 10 mL de solucin
exactamente 0.1N de cido patrn o estndar tipo primario contenido en un
matraz Erlenmeyer que adems contiene 50 mL de agua destilada y una a dos
gotas de solucin indicadora de fenolftalena. El matraz erlenmeyer se coloca
sobre una superficie blanca para poder observar la aparicin (vire) de color rosa el
cual debe persistir al menos 30 segundos, lo que significa que el volumen gastado
13
y anotado de la solucin de sosa, contiene los mili equivalentes de los 10 mL
del patrn primario usado.
Cada vez que se agrega un volumen de solucin desde la bureta, se debe agitar el
matraz con una mano o con un magneto especial para uso en parrillas con
agitador elctrico, para permitir que las sustancias reaccionen y poder identificar
con el menor error el punto final de la reaccin. Con la otra mano se controla la
vlvula de la bureta.
La titulacin se repite tres veces como mnimo cuando los datos se han
reproducido.
Para el clculo de la normalidad de la solucin de hidrxido de sodio, usar la
ecuacin de los volmenes equivalentes, esto para cuando se usa el patrn
primario en solucin exactamente 0.1N que tambin deber haberse calculado y
preparado correctamente.
Nsosa Vsosa= Nprimario Vprimario
Posterior a las titulaciones repetidas, se conocern tres datos de la ecuacin por lo
que se despeja Nsosa, se sustituyen los datos en la ecuacin y se calcula el valor
resultante promediando las tres de repeticiones.

Tambin es posible titular la solucin de sosa, usando tres pesadas en gramos

masa del reactivo tipo primario correspondiente disueltos en 50 mL de agua
destilada cada una en tres erlenmeyer, estimando que debern gastarse unos 10
mL de la solucin de NaOH que est aproximadamente 0.1N., para mayor
informacin al respecto, consultar en textos de Anlisis Qumico Cuantitativo.

RESULTADOS.- Adicionalmente al formato conocido para reporte, responder en

especial las siguientes cuestiones.

a) Reporta las reacciones qumicas usadas en las valoraciones del NaOH y

del HCl con sus respectivas sustancias tipo primario.
b) Reporta los clculos y resultados de normalidad encontrados en las
titulaciones
c) Explica qu se entiende por punto final, punto de equivalencia o punto
estequiomtrico en una titulacin de soluciones?
d) Explica por qu se emplea fenolftalena como indicador del punto final de
una valoracin?, Tiene algo que ver con el pH?
e) Existen otros indicadores del punto final en valoraciones de reaccin
cido-base o neutralizacin?
f) Reporta la bibliografa consultada.

14
 PRCTICA 3

CUANTIFICACIN DE LA ACIDEZ TITULABLE EN UN PRODUCTO VEGETAL

O EN CUALQUIER OTRA MUESTRA BIOLGICA DE INTERS

El cido ctrico es un cido tricarboxlico que contienen un grupo oxidrilo, es el

principal constituyente del jugo de limn, se encuentra inalterable al aire, soluble
en agua y en alcohol. Tiene un amplio uso en la fabricacin de limonadas, de
fomentos calmantes (lceras cancerosas), de gargarismos (difteria) y de citratos,
como el de hierro amoniacal, el de magnesio, etc. Muy empleados en la medicina.
Los jugos de frutas ctricas se tratan con la cal para formar tartrato de calcio, el
cual deja libre al cido ctrico al ser tratado por cido sulfrico. El sulfato de calcio
producido se separa por filtracin y se hace cristalizar la solucin. Segn
WHEMER se obtiene el cido rico mediante el hongo citromicelo.

Por va sinttica el cido ctrico se obtiene a partir de la dicloroacetona. Esta se

trata primeramente con cido cianhdrico y se hidroliza. El producto formado se
trata por cianuro de potasio, y nuevamente se hidroliza por la ebullicin con HCl.

CIDO CTRICO
El ciclo del cido ctrico, considerado el centro del metabolismo, consiste en
reacciones enzimticas, todas ellas mitocondriales, en los eucariontes del ciclo del
cido ctrico es la va central del metabolismo aerobio, es la va oxidativa final en
el catabolismo de los carbohidratos, cidos grasos y aminocidos, adems es una
fuente importante de intermediarios de las molculas biosintticas. En muchas
clulas la accin acoplada del ciclo de cido ctrico y la cadena de transporte de
electrones son responsables de la mayora de la energa producida.
El ciclo de Krebs, es la ruta central comn para la degradacin de los restos
acetilo (de los tomos de C) que derivan de los glcidos, cidos grasos,
aminocidos. Es una ruta universal, catalizada por un sistema multienzimtico
que acepta los grupos acetilo de acetil-Co A como combustible, degradndolo
hasta CO2 y tomos de H, que son conducidos hasta el O 2 que se reduce para
formar H2O (en la cadena de transporte de electrones). El trabajo acoplado del
ciclo del cido ctrico y la cadena de transporte de electrones es la mayor fuente
de energa metablica.

Frmula semidesarrollada del cido ctrico.

HOOC CH2 C (OH) (COOH) CH2 - COOH

FORMACIN DE CIDO CTRICO EN EL METABOLISMO.

15
 Fig 1. Ciclo de Krebs

OBJETIVO(S)

Cuantificar acidez titulable como cido ctrico en un producto natural.

Dar uso a una de las soluciones (NaOH) calculada y preparada
cuantitativamente por volumetra en prcticas 1 y 2.

MATERIALES Y REACTIVOS
Matraz Erlenmeyer de 250mL
Coladera de plstico
Algodn o tela filtrante
Centrfuga con tubos y camisas metlicas para los tubos.
1 pipeta de 10 mL
1 probeta de 50 mL
1 matraz aforado de 500 mL (solo uno para todo el grupo)
1 vaso de pp. de 200 mL
1 soporte universal
1 bureta de 25 mL
Hidrxido de sodio 0.1N o de la normalidad exacta que haya resultado.
16
 Fenolftalena solucin como indicador
Jugo o extracto filtrado de cualquier fruta (naranja, toronja, uva, etc.)

PROCEDIMIENTO
Extraer el jugo de la fruta (o muestra representativa de unos 40 a 60 mL), colar y/o
filtrar para eliminar completamente los slidos suspendidos, si es necesario
centrifugar por 10 min y 3000 rpm, medir una alcuota de 50 mL, aforar con agua
destilada a 500 mL en un matraz aforado. Se procede a tomar una alcuota de 10
mL y se colocan en un matraz Erlenmeyer de con 40 mL de H2O destilada
recientemente hervida, ms una agota del indicador de fenolftalena para la
valoracin.

Ya debe estar montado su equipo de titulacin, en la bureta se coloca el NaOH

0.1N que se aade gota a gota al matraz Erlenmeyer que contiene la alcuota
diluida del jugo controlando el flujo con la vlvula y se suspende la adicin cuando
el color de la muestra analizada vira a color rosa tenue, anotar el gasto en mL de
sosa utilizada en la valoracin. Repetir el procedimiento al menos tres veces para
obtener un clculo ms exacto.

RESULTADOS

Clculo:
La concentracin porcentual de acidez, se calcula de la siguiente manera:

% cido ctrico = (Nsosa) (Vsosa) (p meq ac. ctrico) (D) (100)/A

g cido ctrico/ 100 mL de jugo o extracto.

Donde:
N= Normalidad de hidrxido de sodio.
V= Gasto de NaOH 0.1 N en mL.
P meq= peso en mili equivalentes gramo del cido ctrico = 0.0713.
D= Dilucin (500/50).
A=volumen en mL utilizados del diluido para la valoracin o gramos de
muestra valorados.

Para el informe de esta prctica seguir el formato indicado, debiendo

contener lo siguiente:

Datos de cantidad de muestra, mL o gramos a analizar

Volumen de solucin tipo de sosa gastados en valoraciones

17
 Reporta todos los clculos realizados de manera secuencial.
Reportar los resultados como g de cido ctrico/100 mL de jugo filtrado.
Reportar la reaccin qumica utilizada para la valoracin
Reportar qu otros cidos orgnicos existen en diferentes frutas como
pltanos, manzanas, en el yogurt, en el vinagre, y en los productos
metablicos de los ciclos bioqumicos.
Reportar bibliografa referente a la concentracin de acidez en los
diferentes productos trabajados en la prctica, as como los citados como
cuestionario.

Nota.- Para poder realizar la prctica siguiente: Agua pH, y soluciones

amortiguadoras, revisar este tema incluidos problemas en el captulo
correspondiente del texto:

Bioqumica fundamental.
Eric E. Conn y Stuphf.

18
 PRCTICA No 4

AGUA PH Y SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

AGUA nombre comn que se le aplica al estado lquido del compuesto de

hidrgeno y oxgeno H2O. Los antiguos filsofos consideraban al agua como un
elemento bsico que representaba a todas las sustancias lquidas. Los cientficos
no descartaron esta idea hasta la ltima mitad del siglo XVIII. En 1781 el qumico
britnico Henry Cavendish sintetiz agua detonando una mezcla de hidrgeno y
aire. Sin embargo, los resultados de este experimento no fueron interpretados
claramente hasta dos aos ms tarde, cuando el qumico francs Antonie Lauret
de Lavoissier propuso que el agua no era un elemento si no un compuesto de
oxgeno e hidrgeno. En un documento cientfico presentado en 1804, el qumico
francs Joseph Louis gay-Lussac y el naturalista alemn Alexander Von Humboldt
demostraron conjuntamente que el agua consista en dos volmenes de hidrgeno
y uno de oxgeno tal como se expresa en la frmula actual H2O.

Casi todo, el hidrgeno del agua tiene una masa atmica de 1.00797. El qumico
estadounidense Harol Clayton Urey descubri en 1932 la presencia en el agua de
una pequea cantidad (1 parte por 6.000) de lo que se denomina agua pesada u
xido de deuterio D2O; el estadounidense Ariatid Grosse descubri que el agua
existente en la naturaleza contienen tambin cantidades mnimas de xido de tritio
(T2O); el tritio es el istopo del hidrgeno con masa atmica de 3.

pH es el trmino que indica la concentracin de iones de hidrgeno en una

disolucin. Se trata de una medida de la acidez de la disolucin. El trmino (del
francs) pouvoir hidrogeno, poder del hidrgeno se define como el logaritmo de
la concentracin de iones hidrgeno, H+, cambiando el signo:

pH= - log( H+)

Donde:

(H+) es la concentracin de iones hidrgeno en moles por litro.

Debido a que los iones H+ se asocian con las molculas de agua para formar
iones hidronio, H3O+, el pH tambin se expresa a menudo en trminos de
concentracin de iones hidronio.

En el agua pura a temperatura de 25C , existen cantidades iguales de iones

H3O+ y de iones hidroxilo (OH-), la concentracin de cada uno es 10-7 moles /litro.
Por lo tanto, el pH del agua pura es log (10-7) que equivale a 7, sin embargo, al
aadirle un cido al agua, se forman un exceso de iones H3O+ en consecuencia,
su concentracin puede variar entre 10-6 y 10-1 moles/litro, dependiendo de la
fuerza y de la cantidad de cido. As, las disoluciones acidas tienen un pH que
vara desde 6 (cido dbil) hasta 1 (cido fuerte). Tambin se puede determinar

19
midiendo el potencial elctrico que se origina en ciertos electrodos especiales
sumergidos en la disolucin.

SOLUCIONES AMORTIGUADORAS
Solucin tampn, solucin Buffer o solucin amortiguadora, es una solucin que
contiene sustancias que inhiben los cambios de pH o concentracin de Ion
hidrgeno de la disolucin. Como ejemplo de dichas sustancias se puede
mencionar una solucin en que se encuentra mezcladas cido actico y acetato
de sodio en alguna proporcin.

OBJETIVO
Que el alumno reconozca in vitro, el efecto amortiguador a los cambios de pH
cuando existe presencia de una mezcla de un cido dbil no disociado y su base
conjugada, esto cuando llega al ambiente amortiguador en cantidades no
catastrficas, algn agente de carcter cido o alcalino.

MATERIALES Y REACTIVOS
1 vaso de pp. 500mL.
1 vaso de pp. 250mL.
1 probeta de 500 mL.
1 agitador de vidrio
2 pipetas de 5 mL.
1 pH-metro
cido Actico 0.1M
cido Fosfrico 0.1M
Hidrxido de sodio 0.1M

PROCEDIMIENTO
En un vaso de precipitado verter 50 mL de H3PO4 0.1M medir el pH con un
potencimetro previamente calibrado a pH 7, enseguida aadir 5mL de NaOH
0.1M homogeneizar con la varilla de vidrio la muestra y volver a medir pH, repetir
colocando adiciones de 5mL de NaOH 0.1M y leer pH, esto se realiza hasta
observar que el pH ha variado de manera abrupta a un valor alto de 10 o ms.
graficar para identificar el valor pH=Pka.
pH = pKa+log (A-/HA)
Este mismo procedimiento se toma pero variando el cido, en el lugar del cido
fosfrico se coloca cido actico y se sigue el mismo procedimiento.

RESULTADOS

Seguir el formato de informes y en cuyo contenido debe aparecer los conceptos :

Que se entiende por pka ?

20
Dnde se localiza ese valor o valores segn el caso en la grfica de la curva de valoracin
correspondientes?
Qu importancia tiene el pka en los sistemas biolgicos?

Qu molculas intervienen en los organismos vivos en el efecto de amortiguacin a los

cambios de pH?

Reporte los valores o rangos de pH ptimos a los cuales se desarrollan mejor los hongos
microscpicos, bacterias y levaduras.

Cuntos valores de pKa se encontraron en las curvas de valoracin de H3PO4 y de cido

actico?

Qu valores de pKa encontr experimentalmente? Y los valores bibliogrficos son

iguales, muy diferentes o se aproximan?

Reporte anexo los ejercicios de clculos de pH, concentraciones de iones hidrgeno, anexo
en el texto Bioqumica General del autor Eric E. Conn y Stumpf. Ed. LIMUSA.

Reporta la bibliografa consultada.

21
 PRCTICA No 5

CROMATOGRAFA EN PAPEL DE AZCARES SENCILLOS A PARTIR DE SU

FUENTE NATURAL

INTRODUCCIN

Desarrollada por primera vez en el siglo XIX como un medio para estudiar y
separar pigmentos de plantas de ah el nombre de croma. La metodologa de la
cromatografa incluye ahora diversos procedimientos. Todos funcionan bajo el
mismo principio general: el flujo interrumpido de una fase en movimiento que
contiene la muestra por analizar a travs de una regin de una sustancia
estacionaria, la cual, por varios medios, interacta en grados diferentes con los
componentes individuales de esta.

El tipo de interaccin entre la fase estacionaria y los componentes en la muestra

es lo que distingue los diferentes procedimientos. Esta interaccin se basa en uno
de los principios siguientes: intercambio inico, solubilidad, adsorcin o filtracin.
Algunos procedimientos utilizan una combinacin de factores.

Comnmente, una estrategia es empacar la fase estacionaria en una columna y

luego permitir que la fase mvil fluya a travs de la columna (algunas veces con la
ayuda de aplicacin de presin), por una razn obvia, tales mtodos se
denominan colectivamente cromatografa en columna.

Principios de la cromatografa

Varios factores son importantes en la separacin de sustancias por cromatografa

en papel, entre ellos hay que citar la particin, una combinacin de particin y
adsorcin y en, algunos casos el intercambio inico. El factor predominante en la
separacin de solutos por cromatografa en papel es la particin entre dos fases
no miscibles. Tericamente el papel acta como soporte inerte del solvente
acuoso, aunque en el papel tambin se pueden llevar a cabo otras funciones tales
como movimiento capilar de los solutos y atraccin debida a impurezas polares del
papel. La particin ocurre entre la fase acuosa estacionaria y el solvente o fase
mvil.

El soluto se mueve en direccin del flujo del solvente a una velocidad que es
regulada por su atraccin a la fase acuosa estacionaria o por la fase orgnica
mvil no polar. La atraccin del soluto por la ltima fase es prueba de una mayor
velocidad de migracin del soluto. Entre ellos se citan: el peso molecular, tipo de
papel empleado, tamao de la cmara cromatogrfica, temperatura, etc. La
velocidad de migracin del soluto problema en la direccin del flujo del solvente
viene determinada por lo que se denomina Rf, que es la distancia recorrida por el
soluto, desde el punto de partida o de aplicacin, dividida por la distancia recorrida
por el frente del solvente igualmente desde el punto de aplicacin del soluto
problema.
22
.
El Rf de cualquier soluto de un sistema no debe ser mayor de 1.0 (una
representacin esquemtica de un desarrollo cromatogrfico ser elaborado por el
estudiante en su informe, incluyendo los datos referidos para el clculo de Rf).

Se han ideado muchas tcnicas para llevar a cabo la cromatografa en papel. Los
carbohidratos, por ejemplo (sobre todo los azcares sencillos), son difciles de
separar por las tcnicas corrientes, debido a las semejanzas existentes entre ellos
en peso molecular y grupos activos. Posiblemente el mejor mtodo de separacin
de los azcares sencillos lo constituye la cromatografa en papel de tipo
descendente continuo (el cual es empleado en esta prctica), de contarse con
equipo para ese tipo, puede encontrarse la tcnica ascendente.

Se emplean diferentes reactivos para revelar los cromatogramas de los azcares

sencillos. Entre ellos citaremos nitrato de plata amoniacal, ftalato de anilina, m-
fenilenoldiamina, permanganato-alcalino, y otros, los cuales en presencia de
azcares desarrollan colores caractersticos con lo cual pueden ser detectados
estos azucares.

Cromatografa de intercambio inico en columna

Cuando los solutos que se van a separar pueden existir como iones cargados
positiva o negativamente, el procedimiento de cromatografa de intercambio inico
es una tcnica muy efectiva y con un poder de resolucin muy alto. La fase
estacionaria est compuesta por una sustancia slida que participa realmente en
el proceso, interactuando con los componentes de la mezcla. Por razones que
sern obvias, estos materiales se llaman intercambiadores inicos. La mayora de
los intercambiadores inicos son materiales sintticos (llamados resinas) que se
fabrican en forma de esferas muy pequeas. Qumicamente, cada esfera slida
est compuesta de cadenas polimricas grandes. El poder de la resina para
funcionar como intercambiador inico se origina por la presencia de diversos
grupos ionizables que estn unidos a lo largo de la cadena polimrica. Existiran
miles de estos grupos en una sola esfera.

Una de las resinas de uso ms amplio contienen grupos de cido sulfnico (-

SO3H) que son fuertemente cidos. Esta resina se utiliza generalmente en una
forma salina tal como (-SO3_Na+) y se llama intercambiador catinico.
Una vez que la muestra que se est moviendo entra a la columna empacada, los
componentes catinicos de la muestra interactan con la resina mediante
asociacin electrosttica. Esta extraccin puede hacer que un componente
catinico de la muestra intercambie con el Na+ en los sitios del SO3-: es decir,
ocurre un intercambio catinico. Como las partculas de resina estn
estacionarias, el efecto del intercambio es retardar el movimiento de los solutos
inicos a travs de la columna a medida que los materiales disueltos avanzan en
la fase mvil a lo largo del funcionamiento de la columna, los solutos estn en un
ciclo continuo de unin, liberacin, etc.
23
Cromatografa en papel

Uno de los primeros diseos en el desarrollo de las tcnicas cromatogrficas fue el

uso de una hoja de papel filtro como un soporte inerte estacionario para un lquido.
El papel se humedece absorbiendo primero vapor de agua; as, la fase
estacionaria es un lquido polar sostenido en el papel. Otro disolvente (rico en una
sustancia ms polar como n-butanol/H2O; 8/1; v/v) se deja migrar hacia arriba o
hacia abajo del papel mediante accin capilar.

Cuando este disolvente de desarrollo alcanza la ubicacin (origen) donde se aplic

previamente una porcin de la muestra sobre el papel, la muestra en el origen se
disolver en diferentes grados entre la fase mvil no polar (principalmente n-
butanol) y la fase polar estacionaria (principalmente agua).

Esta particin basada en la solubilidad continuar mientras el disolvente de

desarrollo se mueva en toda la longitud del papel. Las sustancias que son ms
solubles en agua se movern menos que las ms solubles en la fase orgnica
mvil.

Cromatografa en capa fina

Un ejemplo tpico del mtodo cromatografa en capa fina es el ejemplo de una fase
estacionaria slida pulverizada como una fina cubierta, sobre una superficie lisa de
un soporte firme (vidrio o plstico). La fase slida puede funcionar como agente
absorbente (por lo comn la slica gel), un intercambiador inico (se usan
materiales de celulosa modificada), o un barniz (un gel poroso como poli acrlica).
El procedimiento es similar al de cromatografa en papel. La popularidad de la
cromatografa en capa fina se debe a varias caractersticas: la resolucin de los
solutos y la reproducibilidad de los resultados estn comprendidas de buenas a
excelentes; la mayora de las separaciones se logran rpidamente, de 0.5 a 3 hrs.;
puede utilizarse para el anlisis de casi todo tipo de sustancias; pueden detectarse
cantidades muy pequeas (niveles de microgramos) de soluto; y finalmente,
aunque no menos importante, el mtodo resulta barato y fcil de realizar.

OBJETIVO
Aprender a usar el mtodo cromatogrfico en papel para identificar los tipos
de azcares de cualquier fuente natural; frutos, material foliar, lizados de
microorganismos, cualquier extracto de material biolgico.
Conocer los diferentes mtodos de anlisis.

MATERIALES Y REACTIVOS
1 tira de papel para cromatografa

24
 Tubos capilares, uno para cada azcar testigo y el o los problemas con
azcar.
Estufa para secado 90 a 95 C
Regla de 30 cm.
Vaso de precipitados de 250 mL
Ftalato de anilina, o nitrato de plata amoniacal.
Dextrosa solucin al 1% como testigo.
Fructosa
Xilosa
Otros azcares
Extracto clarificado de una muestra de fruto, u otro tipo de muestra.
Solvente para el desarrollo cromatogrfico: etanol(100 mL) -n-butanol(400
mL)-agua destilada(500 mL)

PROCEDIMIENTO.
Extraer de una muestra el jugo de cualquier fruta, se eliminan restos de tejidos, se
cuela con ayuda de un trozo de tela si es necesario, se clarifica con ayuda de
crema de almina, como se indicar. El lquido obtenido contiene carbohidratos
simples (azcares), los cuales sern separados por cromatografa en el papel que
se le proporciona (papel para cromatografa), la muestra anterior se colocar en
un vaso de precipitados.

El papel cromatogrfico deber marcarse con ayuda de un lpiz de grafito y una

regla (no utilizar bolgrafo ni ninguna clase de tinta). La tira deber medir aprox.
57cm de largo y 15.5 16 cm de ancho. Trazar tres lneas transversales en el
extremo superior de la tira cromatogrfica, la separacin entre ellas debe ser
2, 5 y 3 centmetros respectivamente en ese orden, en la tercera lnea estarn
marcados con lpiz los puntos de aplicacin de testigos y problema a analizar. Los
puntos de aplicacin estarn separados 2 cm en los extremos izquierdo y derecho,
los puntos intermedios igualmente unos 2 cm para que las manchas de
aplicaciones no se mezclen en ningn momento del proceso o desarrollo
cromatogrfico.

Con ayuda de un tubo capilar, se toma una muestra sin que escurra y se coloca
tocando la superficie del papel para cromatografa en el punto de aplicacin
correspondiente previamente marcado como F (fructosa), R (ribosa), S (sacarosa),
P (problema), tales marca se harn de tal manera que no interfieran el lugar o
punto de aplicacin pero que s identifique la muestra aplicada ah. Se aplicar
tres veces cada muestra, pero deber secarse la primera para poder aplicar la
segunda y as tambin la tercera; se colocan con estricta limpieza y cuidado, el
tubo capilar utilizado se separa de los dems o se coloca en la solucin
correspondiente de azcares testigo o del problema, cada solucin de azcares
testigo y solucin problema debern tener su propia pipeta capilar y no permitir
contaminaciones cruzadas entre ellas, al trmino se lavan y en otra ocasin se
pueden utilizar, en caso de contar solo con uno se lava bien se seca y se utiliza y

25
para las dems aplicaciones se hace lo mismo. Se usarn como testigos dextrosa,
fructosa, xilosa y otros que se requieran y que estn disponibles.
Al trmino de la preparacin de las tiras cromatogrficas, se colocan en la cmara
para el desarrollo, se dejan ah con el solvente previamente colocado para
saturacin con sus vapores, se coloca solvente en la cubeta superior de donde
penden las tiras de cromatografa y se procede as al desarrollo cromatogrfico
que puede tardar aproximadamente de 6 a 8 horas.

Cuando el frente del solvente ha llegado a 1 cm del extremo inferior de la tira

cromatogrfica se considera terminado el desarrollo y con ayuda de unas pinzas
se saca cada tira , se marca de inmediato con lpiz la lnea del frente del solvente,
esto antes de que se seque el solvente, de otra manera no podr calcularse el
valor Rf que se utiliza para la identificacin de cada una de las manchas de
azcares separados.

Esperar para que se sequen al aire los cromatogramas, aplicar cuidadosamente el

revelador elegido, revelar por calentamiento en estufa de secado a 90C, delimitar
con lpiz cada mancha aparecida y ponerle un nmero; a partir del punto de
aplicacin se mide el recorrido de cada mancha as como de su frente del
solvente. Con todos esos datos numricos se estar en posibilidad de poder
identificar con los Rfs de testigos y Rfs de las manchas separadas del problema,
los azcares presentes en ese problema, al menos si los azcares usados como
testigo estn presentes ah.

RESULTADOS
1) Los resultados se reportan de la siguiente forma:
Rf= Distancia recorrida de la mancha (cm)/ Distancia recorrida del
solvente ( cm).
2) Qu aplicaciones tiene la cromatografa?
3) Explica qu es la fase mvil ?
4) Explica qu es la fase estacionaria en cromatografa.
5) Incluye un esquema del cromatograma obtenido.
6) Cuantos azcares identificaste en la muestra problema y cuantos
aparecen en total en el cromatograma?
7) Anexa tu tira cromatogrfica.

8) Bibliografa consultada?

26
 PRCTICA No 6

REACCIONES CUALITATIVAS DE CARBOHIDRATOS PARA SU

IDENTIFICACION Y CLASIFICACION.

INTRODUCCIN.

Los hidratos de carbono tambin llamados azcares, glcidos, o sacridos, son un

grupo de biomolculas cuya caracterstica qumica principal es su naturaleza
polihidroxlica con otra funcin ms oxidada, el grupo carbonilo que se puede
presentar de dos formas: aldehdos o cetonas.

Los glcidos o azcares son sustancias que en un principio se les denomin

hidratos de carbono, y en muchos textos todava se les encuentra bajo esa
denominacin.

Los glcidos estn ampliamente distribuidos tanto en tejidos animales como

vegetales. En las plantas son producto de la fotosntesis, e incluyen la celulosa de
la pared celular vegetal. En las clulas animales, los glcidos y glicgenos sirven
como fuente de energa para las actividades vitales.

Por su funcin qumica son aldehdos polihidroxilados o cetonas polihidroxiladas,

esto quiere decir que son cadenas de tomos de carbono en donde el primer
carbono tiene una funcin aldehdo, o el segundo tiene una funcin cetona, y tiene
un grupo oxhidrilo en cada uno de los carbonos restantes.

En la prctica se realizan algunos ensayos de reacciones qumicas coloridas que

pueden ayudar a clasificar e incluso, a identificar un determinado azcar entre
varios posibles. El principal problema es la sensibilidad de algunos de ellos, que
los hacen poco tiles en muestras muy diluidas. As, la orina contiene cantidades
muy pequeas de azcares, que no pueden detectarse por estos ensayos. Solo en
casos de osuria (eliminacin de azcares en orina en cantidades anormalmente
altas) pueden ser vlidos para verificar e identificar algunos de ellos.

CLASIFICACION DE LOS CARBOHIDRATOS

a) Monosacridos, o glcidos simples

Constituyen las unidades menores del grupo. Se clasifican de acuerdo con el
nmero de tomos de C que poseen: triosa, tetrosa, pentosa, hexosa y heptosa,
siendo las ms importantes biolgicamente las que tienen 3, 5 y 6 tomos de
carbono, si poseen funcin aldehdo se llaman aldosas y si tienen funcin cetona,
cetosas. Todos son reductores.

b) Oligosacridos
Por hidrlisis dan de 2 a 6 molculas de monosacridos. Se forman por la unin
de n molculas de estas ltimas con prdidas de n-1 molculas de agua. Si por

27
hidrlisis dan dos molculas se denominan disacridos, etc. Algunos son
reductores otros no reductores.

c) Polisacridos u sidos
Por hidrlisis, dan un nmero variable de monosacridos. Si dan pentosas por
hidrlisis se denominan pentosanos; si dan hexosas, hexosanos. Otros
compuestos dentro del grupo son los monosacridos y ciertos cidos urnicos
derivados de la glucosa y la galactosa. No son reductores.

OBJETIVOS
a) Reconocer experimentalmente a los carbohidratos dependiendo de sus
caractersticas qumicas.
b) Realizar reacciones cualitativas con compuestos azucarados.
c) Probar las diferentes reacciones de identificacin de azcares en un extracto
biolgico

MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo Reactivo de Fehling A Y B
Gradilla Reactivo de Barfoed
Pinzas para tubo de ensayo Fructosa en solucin al 1 %
Mechero para gas Xilosa
Pipetas graduadas de 1, 5 y Sacarosa
10 mL Dextrosa
Tripi para mechero Ribosa
Tela de alambre con asbesto Jugos filtrados de varios frutos
Reactivo de Seliwanoff
Reactivo de Orcinol de Bial

PROCEDIMIENTO
Reaccin de Seliwanoff.
Las cetosas (glcidos con funcin cetona en carbono 2) se diferencian de las
aldosas ya que las cetosas por su mayor velocidad de reaccin dan mayor
cantidad de producto colorido en el mismo tiempo que las aldosas, que producen
menor cantidad de color.

En tubos de ensayo agregar 1mL de la solucin azcar disponible: fructosa, xilosa,

sacarosa, dextrosa, ribosa y un extracto azucarado clarificado.

A cada tubo preparado anteriormente adicionar 5 mL de reactivo de Seliwanoff.

Colocar a bao mara hasta aparicin de color rojo intenso (cetosas) o color rosa
para las aldosas, esto ocurre por la mayor velocidad de reaccin en cetosas.
Anotar los resultados de cada reaccin para su consulta, anlisis y reporte.

28
Reaccin de Orcinol de Bial.

Las pentosas (glcidos de 5 carbonos) se diferencian de las hexosas (glcidos de

6 carbonos) por medio de la reaccin de Bial, ya que solo las pentosas dan
positivas en esta reaccin.

En tubos de ensayo agregar 1mL de la solucin de azcar disponible (fructosa,

xilosa, sacarosa, dextrosa, ribosa y un extracto azucarado clarificado). A cada tubo
preparado anteriormente adicionar 1mL de reactivo de Orcinol.
Colocar a bao mara hasta el cambio de color. Las pentosas producen color
verde- azul caracterstico, los otros azcares producen color amarillo parduzco.
Anotar todos los resultados para consultar, analizar y reportar.

Reaccin de Fehling.

Las reacciones generales de reconocimiento de glcidos se basan en sus

propiedades reductoras (reaccin de Fehling), ya que con estos tipos de azcares
la reaccin es positiva cuando se produce un precipitado rojo de Cu 2O. Los
azucares no reductores no producen el precipitado, el grupo funcional reductor en
los azcares es el grupo carbonilo libre o en potencia (cetnico o aldehdo).

1. En tubos de ensayo agregar 1mL de la solucin del azcar disponible

(fructosa, Xilosa, Sacarosa, Dextrosa, Ribosa y un extracto azucarado
clarificado).

2. A cada tubo preparado anteriormente adicionar 2.5 mL de reactivo de

Fehling (A+B, en dilucin 1:1 v/v).

3. En un tubo de ensayo adicional, realizar la prueba siguiente: 1 mL de

solucin de sacarosa + 1 mL de HCl R.A., mantener un minuto a B.M. a 65
C, al cabo del minuto neutralizar el cido con 8 mL de sol. de NaOH del
40%, entonces realizar la reaccin de Fehling (+ 2.5 mL del reactivo A+B)
en B.M., observar el resultado y explicarlo.

4. Colocar todos los tubos a bao mara hasta el cambio de color (aparicin
de precipitado rojo). Anotar todos los resultados para consultar, analizar,
explicar, concluir y reportar.

Reaccin Barfoed.

Los monosacridos dan positiva esta reaccin en menor tiempo que los
disacridos ya que los disacridos tardan un mayor tiempo para la aparicin de
precipitado rojo al someter a bao mara los reactantes.

1. En tubos de ensayo agregar 5mL de la solucin azcar disponible (fructosa,

Xilosa, Sacarosa, Dextrosa, Ribosa y un extracto azucarado clarificado).

29
2. A cada tubo preparado anteriormente adicionar 5mL de reactivo de Barfoed
(acetato de cobre en medio cido).

3. De inmediato colocar los tubos en el bao mara caliente y a partir de este

instante medir el tiempo en segundos o minutos en que aparece un
precipitado rojo de xido de cobre Cu2O. Anotar los resultados indicando
los tiempos e identificando qu azcares han resultado monosacridos y
disacridos. Consultarlos para su confirmacin.

Para informe de resultados presentar en forma de tabla para cada tipo de

reaccin y mencionar para cada azcar su clasificacin resultante, adems
consultar y reportar cada reaccin con molculas semidesarrolladas de
reactantes y productos.

30
 PRCTICA No 7

CUANTIFICACIN DE AZCAR TOTAL POR ESPECTROFOMETRA A

PARTIR DE UNA MUESTRA BIOLGICA Y POR EL MTODO FENOL
SULFRICO.

INTRODUCCIN.

Ley general de la colorimetra y espectrofotometra.

La cantidad de luz absorbida (A) por una solucin verdadera es directamente

proporcional a la concentracin (X) del soluto disuelto y a la distancia
recorrida (d) por el haz luminoso dentro de la solucin.

ESPECTOFOTOMETRA
La espectrofotometra, como su nombre indica, consiste en la medicin de LA
CANTIDAD DE LUZ ABSORBIDA (A) utilizando alguna de las distintas longitudes
de onda que forma el espectro U.V., visible o I.R. El espectro visible est
comprendido entre 350 a 750 nanmetros.

La medicin espectrofotomtrica nos dice qu cantidad de un tipo de ondas existe

en un color dado. Por ejemplo las comprendidas entre 400 y 410 nm. O las
comprendidas entre 600 y 690 nm.

El rango de medicin de ondas se denomina ancho de banda, que en el ejemplo

anterior es de 10 nm, ya que las ondas se miden en conjuntos de esas cantidades,
entre 400 - 410 nm y 680- 690nm.

Cuando, con un ancho determinado, se miden todas las ondas del espectro visible
entre 400 700 nm; se obtiene una curva, que se le denomina curva espectral,
que es respectiva del color analizado.

LONGITUD DE ONDA.
Cuando la luz solar ilumina a los objetos de la superficie terrestre una porcin de
la energa es la absorbida; otro parte es transmitida hacia sectores inferiores y otra
ms reflejada. La luz solar que incide en la superficie terrestre posee un amplio
rango de valores de longitud de onda. Por otro parte, las propiedades fsicas y
qumica de los objetos de la superficie de la tierra afecta la cantidad y
caractersticas de la energa que es reflejada, transmitida absorbida, en
comparacin con el total que incide en dichos objetos. En general, los objetos de
la superficie terrestre actan como filtros que selectivamente reflejan, absorben o
transmiten energa dependiendo de su longitud de onda.

31
La colorimetra se refiere a la determinacin de sustancias dependiendo de su
propiedad de absorber luz visible. Es un mtodo visual que se basa en la
comparacin de color de una solucin de concentracin no conocida contra una
solucin de concentracin conocida. La sensacin de color es la respuesta a una
serie de estmulos fsicos, qumicos y biolgicos, combinados de ciertas partes de
la retina del ojo para la energa radiante en determinadas longitudes de onda o
frecuencia. La colorimetra se emplea para designar la medida de la fraccin de la
luz blanca de una lmpara incandescente que pasa a travs de un medio lquido o
disolucin o es reflejada por una superficie slida. La colorimetra tambin es una
tcnica instrumental que tiene por objeto determinar la absorcin de luz visible por
una muestra, que puede ser una sustancia pura o bien una mezcla en solucin.

Para ello se utiliza un instrumento constituido por los siguientes elementos:

Fuente de radiacin (luz blanca).
Sistema dispersivo (red de difraccin, rendijas de entrada y salida).
Detector (foto tubo, que transforma la seal luminosa en una seal
elctrica).
Sistema de medida de la absorbancia o % de transmitancia, una vez
amplificada (convertidor analgico digital).

La absorcin de la radiacin por una muestra en la regin visible, as como en

general en cualquier regin del espectro, est regida por la ley de Lambert- Beer.
Esta ley establece que la fraccin de luz absorbida por una muestra es mayor
cuanto ms grande es el nmero de molculas- concentracin- sobre las que
incide la radiacin.

OBJETIVO.

a) Ensayar como en todo anlisis, el tratamiento previo o acondicionamiento

de la muestra eliminacin de interferentes-.
b) Construir la curva Tipo. Medir la cantidad de luz absorbida (A) respecto a la
concentracin (X) de azcar disuelta, graficados estos datos para un rango
de concentraciones, para ello se debe tener una solucin madre, es decir
de concentracin conocida, que a partir de ella y mediante alcuotas que se
colocan en una serie de tubos de ensayo, se obtendrn concentraciones
progresivas y a los cuales mediante el tratamiento qumico, se desarrollar
una cantidad de color.
c) Cuantificar azcar en una muestra biolgica con bajo contenido, utilizando
como referencia para ello, la curva tipo.

MATERIALES Y REACTIVOS:

Espectrofotmetro Gnesys de B&L

Celdas de lectura tambin llamadas cubetas porta muestras.

32
 Clarificante de almina
Papel filtro Whatman n 1
Probeta de 100 mL,
Matraz aforado de 100 y 500 mL
Fenol al 80 %
Agua destilada.
Muestra problema con bajo contenido de azcar, p.e. limn mexicano.
Vaso de precipitados de 250 mL, 400 mL .
Pipeta volumtrica de 1 mL
Pipetas graduadas de 5 y 10 mL

CURVA TIPO DE AZCAR MTODO FENOL-CIDO SULFRICO DUBOIS-

Enumerar ocho tubos de ensaye del 1 al 8 con tinta indeleble, hacer duplicados de
cada uno de ellos y colocarlos en una gradilla para aadirles los reactivos
indicados en la tabla siguiente, esto en orden de columnas de izquierda a derecha.
El ltimo reactivo a aadir con mucho cuidado y con una pipeta es el H2SO4 R.A.,
lo cual se har deslizando este por la pared del tubo y sin agitar, cuando todos los
tubos contengan el cido, se agitar uno a uno con el agitador vortex especial
para estos casos; deber asegurarse que las soluciones queden homogneas.
Dejar reposar las soluciones por 15 minutos a obscuridad, esto para desarrollar
un color mbar que absorbe luz de longitud de onda de 490 nm.

TABLA DE PREPARACIN DE LA CURVA TIPO.

N TUBO con mL sol madre Azcar mL H2O mL fenol mL A A

duplicados C =100 g/mL g/mL destilada del 80 H2SO4
% R.A.
1(Blanco)...1 0.0 0.0 2.0 0.1 3.0 0.00 0.00
22 0.1 1.9 0.1 3.0
33 0.2 1.8 0.1 3.0
44 0.4 1.6 0.1 3.0
55 0.6 1.4 0.1 3.0
66 0.8 1.2 0.1 3.0
77 1.0 100 1.0 0.1 3.0
8...8(Problema) 0.1(alcuota 1.9 o.1 3.0
problema)
99(Problema) 0.4(alcuota 1.6 0.1 3.0
problema)

ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA PROBLEMA PARA SU LECTURA EN

ABSORBANCIA Y CLCULO DE CONCENTRACIN DE AZCAR TOTAL.

Extraer el jugo de un fruto o de varios (limn u otro producto biolgico)

dependiendo de su tamao; filtrar con ayuda de la tela y medir 50 mL con
pipeta volumtrica, en seguida clarificar con 75 mL de crema de almina,
filtrar y/o centrifugar garantizando que la solucin resultante est
translcida, decantar el lquido claro de la centrifugacin, re suspender el
precipitado con cinco mL de agua destilada para recuperar el azcar

33
 residual, juntar los lquidos obtenidos y medir el total recuperado para
calcular la dilucin.

Del diluido anterior se toma una alcuota representativa de acuerdo a la

escala de alcuotas de la curva tipo (ejemplo tubo n 2, 0.1 mL de alcuota
y/o 0.4 mL de alcuota en el caso del tubo n 4), se coloca en tubos de
ensaye, aadir los reactivos correspondientes igual que se hace con curva
tipo para hacer lecturas de absorbancia y posterior interpolacin y clculo
de concentracin de azcar total por cada mL o cada 100 mL de jugo del
producto.

Reportar:

Adicional al formato de un reporte debe incluir en el:

a) Esquema de los componentes de un colormetro de Dubosq y explicar el

modo de funcionamiento _Revisin bibliogrfica-
b) Esquema de los componentes de un espectrofotmetro U.V. Visible.
c) Reaccin qumica que ocurre entre el o los azcares y los reactivos de
mtodo usado.
d) Grfica de la curva tipo en papel milimtrico, adicional al que realice con
hoja electrnica.
e) Calcular la pendiente as de la curva tipo.
f) Con la ecuacin de la recta, despejar X para clculo de concentracin de
azcar total en la muestra.. Es importante tener nota de las diluciones
realizada para efecto de tomarlos en cuenta en el clculo.
g) Reportar el resultado obtenido y consultar en la bibliografa este dato para
contrastar tal resultado.

34
 PRCTICA No 8

ANLISIS DE AMINOCIDOS EN HIDROLIZADO DE PRODUCTOS

VEGETALES, ANIMALES, MICROORGANISMOS ENTRE OTROS.

INTRODUCCIN.

Los aminocidos son sustancias cristalinas, casi siempre de sabor dulce; que
tienen carcter cido como propiedad importante y actividad ptica; qumicamente
son cidos carboxlicos con por lo menos, un grupo amino por molcula, 20
aminocidos diferentes son los componentes esenciales de las protenas
especificas consumidas por la sola accin de vivir.

Las protenas son los compuestos nitrogenados ms abundantes del organismo, a

la ves son el fundamento de la vida. En efecto, debido a la gran variedad de
protenas existentes y como consecuencia de su estructura, cumplen con
funciones muy diversas, participando en todos los procesos biolgicos y
construyendo estructuras fundamentales en los seres vivos. De este modo, actan
acelerando reacciones bioqumicas que de otro modo no podran producirse en los
tiempos necesarios para la vida (enzimas), transportando sustancias como la
hemoglobina de la sangre que transporta oxgeno a los tejidos, cumpliendo
funciones estructurales como la queratina del pelo, sirviendo como reserva
(albmina de huevo) entre otros.
Esas sustancias se incorporan inicialmente al torrente sanguneo y, desde ah son
distribuidas hacia los tejidos que las necesitan para formar las protenas,
consumidas durante el ciclo vital.

Se sabe que de los 20 aminocidos proteicos conocidos, ocho resultan

indispensables. Son estos aminocidos los que requieren ser incorporados al
organismo en su cotidiana alimentacin y, con ms razn en los momentos en que
el organismo ms lo necesita: en la disfuncin o enfermedad. Hay que destacar
que, si falta uno solo de ellos (aminocidos esenciales) no ser posible sintetizar
ninguna de las protenas en la que sea requerido dicho aminocido.

Lista de aminocidos (esenciales y no esenciales) y funcin de cada uno de ellos.

1. L-Alanina: intervienen en el metabolismo de la glucosa. La glucosa es un
carbohidrato simple que el organismo utiliza como fuente de energa.
2. L-Arginina: est aplicada en la conservacin del equilibrio de nitrgeno y
de bixido de carbono. Tambin tiene una gran importancia en la
produccin de la hormona de crecimiento, directamente involucrada en el
crecimiento de los tejidos y msculos y en el mantenimiento y reparacin
del sistema inmunolgico.
3. L-Asparagina: intervienen especficamente en los procesos metablicos
del sistema nervioso central.
4. cido L-Asprtico: es muy importante para la desintoxicacin del hgado y
su correcto funcionamiento. El cido L-Asprtico se combina con otros

35
 aminocidos formando molculas capaces de absorber toxinas del torrente
sanguneo.
5. L-Citrulina: intervienen especficamente en la eliminacin del amoniaco.
6. L-Cistina: tambin intervienen en la desintoxicacin, en combinacin con
los aminocidos anteriores. La L-Cistina es muy importante en la sntesis de
la insulina y tambin en las reacciones de ciertas molculas a la insulina.
7. L-Cistena: junto con la L-Cistina, la L-Cistena est implicada en la
desintoxicacin, principalmente como antagonista de los radicales libres.
Tambin contribuye a mantener la salud de los cabellos por su elevado
contenido de azufre.
8. L-Glutamina: nutriente cerebral e interviene especficamente en la
utilizacin de la glucosa por el cerebro.
9. Acido L-Glutmico: tiene gran importancia en el funcionamiento del
sistema nervioso central y acta como estimulante del sistema
inmunolgico.
10. L-Glicina: en combinacin con muchos otros aminocidos, es un
componente de numerosos tejidos del organismo.
11. L-Histidina: en combinacin con la hormona de crecimiento y algunos
aminocidos asociados, contribuyen el crecimiento y reparacin de los
tejidos con un papel especficamente relacionado con el sistema
cardiovascular.
12. L-Serina: junto con algunos aminocidos mencionados intervienen en la
desintoxicacin del organismo, crecimiento muscular y metabolismo de
grasas y cidos grasos.
13. L-Taurina: estimula la hormona del crecimiento en asociacin con otros
aminocidos, esta aplicada en la regulacin de la presin sangunea,
fortalece al msculo cardiaco y vigoriza el sistema nervioso.
14. L-Tirosina: Es un neurotransmisor directo puede ser muy eficaz en el
tratamiento de la depresin, en combinacin con otros aminocidos
necesarios.
15. L-Ornitina: Es especifico de la hormona del crecimiento en asociacin con
otros aminocidos ya mencionados. Al combinarse con la L-Arginina y con
carnitina que se sintetiza en el organismo, la L-Ornitina tiene una importante
funcin corporal en el metabolismo del exceso de grasa corporal.
16. L-Prolina: Est involucrada tambin en la produccin de colgeno y tiene
gran importancia en la reparacin y mantenimiento del msculo y huesos.
Los (8) esenciales
17. L-Isoleucina: Junto con la L-Leucina y la hormona del crecimiento
intervienen en la formacin de reparacin del tejido muscular.
18. L-Leucina: Junto con la L-Isoleucina y la hormona del crecimiento reparan
el tejido muscular.
19. L-Lisina: es uno de los ms importantes aminocidos por que, en
asociacin con varios aminocidos ms, interviene en diversas funciones,
influyendo el crecimiento, reparacin de tejidos, anticuerpos del sistema
inmunolgico y sntesis de hormonas.

36
 20. L-Metionina: colabora en la sntesis de protenas y constituye el principal
limitante en las protenas de la dieta. El aminocido limitante determina el
porcentaje de alimento que va a utilizarse a nivel celular.
21. L-Fenilalanina: interviene en la produccin del colgeno fundamentalmente
en la estructura de la piel y el tejido conectivo, y tambin en la formacin de
diversas neuro hormonas.
22. L-Triptofano: Esta implicado en el crecimiento y en la produccin hormonal
especialmente en la funcin de las glndulas de secrecin adrenal.
Tambin interviene en la sntesis de la serotina, neuro hormonal
involucrada en la relajacin y el sueo.
23. L-Treonina: Junto con la L-Metionina y el cido L-Asprtico ayuda al
hgado en sus funciones generales de desintoxicacin.
24. L-Valina: Estimula el crecimiento y reparacin de los tejidos, el
mantenimiento de diversos sistemas y balance de nitrgeno.

Debemos recordar que, debido a la crtica relacin entre los diversos aminocidos
limitantes presentes en cualquier alimento, solo relativamente pequea cantidad
de aminocidos de cada alimento pasa a formar parte de las protenas del
organismo. El resto se usa como fuente de energa o se convierte en grasas si no
debe usarse inmediatamente.

OBJETIVO.

Dar a conocer al alumno la diferencia entre cromatografa de azcares y de

aminocidos.

MATERIALES Y REACTIVOS
1 tira de papel para cromatografa
Cmara cromatogrfica
Regla de 30 cm
Lpiz carbn.
Aminocidos testigo en solucin
Tubos capilares
Estufa para secado de cromatogramas
Muestras proteicas digeridas en HCl 6N
Vaso de precipitados de 250 mL

PROCEDIMIENTO.

Se hidroliza una muestra proteica (1 2) en HCl 6N a ebullicin y reflujo para

obtener los aminocidos en forma de clorhidrato. Someter a los pasos ya vistos en
cromatografa de azcares.

a) Trazado de lneas con lpiz en las en tiras cromatogrficas .

b) Hacer los dobleces en las lneas solidas del papel.

37
 c) Aplicar 5 6 veces los testigos de aminocidos y las muestras problema
hidrolizadas con HCl 6 N., Dejar que sequen cada una de las aplicaciones
de muestras a desarrollar.
d) Desarrollar el cromatograma usando el solvente adecuado para separacin
de aminocidos. Al final del mismo y antes de que seque el solvente de
desarrollo, trazar con lpiz el frente del solvente.
e) Revelar los cromatogramas atomizando Ninhidrina en solucin y
calentando dichas tiras en estufa a 95 |C.
f) Delinear con lpiz el contorno de las manchas reveladas, estimar los
centros de cada una de ellas y calcular los Rfs.
g) Con los valores obtenidos, compara los valores de manchas problema y
valores de los testigos. Los valores iguales encontrados en estas
comparaciones indican presuntivamente que se trata de los mismos
aminocidos testigo y mancha problema.

h) El resultado se presenta de igual manera que en cromatografa de

azcares.

El REPORTE DEBE INCLUIR LO SIGUIENTE:

a) Incluir en el informe escrito, el cromatograma revelado.

b) Informe del n de manchas o aminocidos aparecidos en el o los
hidrolizados.
c) Informa los aminocidos identificados en la muestra hidrolizada.
d) Informa la reaccin qumica entre la Ninhidrina y los aminocidos.
e) Informa qu aminocido da color amarillo en la reaccin anterior.
f) Cuantos mtodos de hidrlisis de muestras proteicas se pueden usar y
cul es la diferencia en resultados entre ellas?
g) Cmo acta el veneno de serpientes?
h) Cules son los aminocidos esenciales y porqu se llaman as?
i) Qu se debe entender por productos funcionales y nutracuticos?

38
 PRCTICA No 9

CUANTIFICACIN DEL CONTENIDO DE PROTEINA

DETERMINACION DE NITRGENO POR EL MTODO KJELDAHL

Protena es cualquiera de los numerosos compuestos orgnicos constituidos por

aminocidos unidos por enlaces peptdico que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la concentracin muscular o la respuesta
inmunolgica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes
principales de las clulas y que suponen ms del 50% del peso seco de los
animales. El trmino protena es derivada del griego proteios, que significa
primero.

Las molculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el cabello, hasta los glbulos compactos solubles, capaces de
atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones metablicas. Tiene un
peso molculas elevado y son especficas de cada especie y de cada uno de sus
rganos se estima que el ser humano tiene unas 30 000 protenas distintas, de las
que solo un 2% se han descrito con detalle. Las protenas sirven sobre todo para
construir y mantener las clulas aunque su descomposicin qumica tambin
proporciona energa, con un rendimiento de 4 Kcal / g., similar al de los hidratos de
carbono.

Las protenas, desde las humanas hasta las que forman las bacterias unicelulares
son el resultado de las distintas combinaciones entre 20 aminocidos distintos,
compuestos a su vez por carbono, hidrgeno, oxigeno, nitrgeno, y a veces,
azufre.

En la molcula proteica, estos aminocidos se unen en largas hileras (cadenas

polipeptdicas) mantenidas por enlaces peptdicos, que son enlaces entre el grupo
amino (-NH2) y carboxilo (-COOH) en nmero casi infinito de combinaciones en
que se unen los aminocidos y las formas helicoidales y globulares en las
funciones que estos compuestos desempean en los seres vivos.

Para sintetizar sus protenas esenciales, cada especie necesita disponer de los
veinte aminocidos en ciertas proporciones. Mientras que las plantas que pueden
fabricar sus aminocidos a partir de la fotosntesis, casi todos los dems
organismos solo pueden sintetizar algunos. Los restantes llamados aminocidos
esenciales para mantenerse sano: Leucina, isoleucina, lisina, metionina
fenilalanina, treonina, triptofano, y valina todos ellos se encuentran en las
protenas de las semillas vegetales, pero como las plantas suelen ser pobres en
lisina y triptofano, los especialistas en nutricin humana aconsejan complementar
la dieta con protenas animales presentes en la carne, los huevos y la leche, que
contienen todos los aminocidos esenciales.

Las protenas son componentes altamente polimerizados, que estn formados por
aminocidos. Tambin se unen a componentes no proteicos. Las protenas se
39
encuentran entre los nutrientes ms importantes, junto con los lpidos y los
carbohidratos. Adems de su funcin energtica al organismo, dada su naturaleza
nitrogenada, son necesarias para la sntesis de compuestos propios del organismo
implicados en la estructura de las membranas junto con los lpidos, como
glicoprotidos en funciones de lubricacin como nuclidos que posibilitan la
sntesis de las protenas propias del organismo, as como la formacin de los
cromosomas y la divisin celular.

El mtodo kjeldahl es usado para determinar el nitrgeno total y este a su vez se

considera una medida de protena bruta o cruda. El factor que permite
correlacionar el contenido del nitrgeno con el de protenas depende del material
que se analiza. El principio bsico del mtodo Kjeldahl es la conversin de
nitrgeno de la sustancia nitrogenada en amonio mediante una digestin con cido
sulfrico concentrado, el material orgnico se oxida a bixido de carbono y agua,
una parte del cido sulfrico se convierte en SO2, y el nitrgeno se fija con sulfato
de amonio. La oxidacin del material orgnico se puede acelerar aadiendo
sustancias (Na2SO4) que elevan al punto de ebullicin del cido o mediante la
adicin de un catalizador o ambos.

El amonio presente como sulfato se libera agregando un exceso de hidrxido de

sodio. Luego se destila por arrastre con vapor y se recoge en una disolucin de
cido brico. Esta ltima se titula con un HCl 0.1 N siendo la cantidad (mL)
consumida directamente dependiente del contenido de nitrgeno en la muestra.

OBJETIVO(s)

Utilizando El mtodo Kjeldahl, cuantificar el contenido proteico presente en una

muestra de producto alimenticio o de cualquier muestra biolgica que contenga
protena.

Conocer la proporcin de protena en el problema.

MATERIALES Y REACTIVOS
Campana de extraccin de gases
Tubos de digestin Agua destilada
Termo bloque apropiado para los 0.2500 g a 0.30 g de muestra.
tubos anteriores HCl 0.1N
Balanza analtica Na2SO4 catalizador
Erlenmeyer de 250mL Cu2SO4 catalizador
Equipo de titulacin. cido Brico al 4.0 %
Indicador cido-base para NaOH al 40 %
protena.

PROCEDIMIENTO

Digestin de la muestra:
40
Pesar aproximadamente 0.2500 g de muestra molida, hmeda o seca cuyo
contenido de % de humedad se conozca, verterla con todo y el papel con la que
fue pesada en el tubo digestor; aadir catalizador Na 2SO4, CuSO4.5H2O una
pastilla-, 8 mL de H2SO4 reactivo analtico, aadir 4 perlas de vidrio y dejar a
ebullicin hasta que el color obscuro de la muestra cambie a azul-verde brillante
limpio de cualquier indicio de materia orgnica sin digerir, despus del cambio de
obscuro a azul claro, dejar reposar durante 15 20 minutos para enfriar. Y
proseguir al destilado.

Destilacin:

Aadir con cuidado 50 mL de agua destilada al digerido, disolver y transferir al

matraz Kjeldahl, lavar con ms agua destilada el tubo y aadir los lavados del
matraz hasta el volumen total de 200 mL de H2O.
Colocar en el equipo de destilacin un matraz Erlenmeyer con 50 mL de cido
brico al 4%, aadir para destilar 80 mL de NaOH al 40%. Destilar hasta
volumen total de 250 mL.

APAGADO DEL DESTILADOR:

Para ello, retirar en primer trmino el matraz de destilacin de tal manera que el
tubo de bajada del destilado quede fuera del lquido destilado, solo
entonces apagar el mechero de gas encendido. Si no se hace de esta manera y
se apaga la fuente de calor, el destilado retorna abruptamente al matraz de
destilacin perdindose el trabajo realizado, adems de que pudiera
romperse el equipo por cambio brusco de temperatura.

Valorar el destilado:

Valorar el destilado con HCl 0.1N, usando indicador cido base especial para
mtodo de Kjeldahl. Con el volumen gastado de HCl calcular el % de N y % de
protena.

CLCULOS:

% NITRGENO= N (V-VT) (0.014) (100) / g muestra o mL de muestra digerida.

% PROTEINA = % NITRGENO (F);

NOMENCLATURA:

N.- Normalidad del HCl.

V.- Volumen gastado (mL) del HCl en el sistema con muestra.
VT.- Volumen gastado (mL) de HCl en el sistema solo con digerido de papel
envoltura sin muestra.
0.014.- g nitrgeno/ meq Nitrgeno
F.- Factor de conversin de nitrgeno a protena valor promedio = 6.25

41
REPORTAR:

Dentro del contenido general de su informe de prctica, considerar la inclusin de

los siguientes conceptos a consultar:

a) Las reacciones qumicas detalladas y empleadas en cada fase de mtodo

de Kjeldahl.
b) Mencione las fases del mtodo.
c) Consulte y reporte otros factores (F) para estimar protenas. Consultar
valores para muestras especficas: Frijol, trigo, maz, leche, carne de ave,
huevo.
d) Consulte un cuadro de composicin bromatolgica de una especie vegetal
parte comestible, por ejemplo la que le toc analizar.
e) Consulte qu otro(s) mtodos estn disponibles para cuantificacin de
protenas, por ejemplo mtodos colorimtricos, mencione el fundamento
terico de ellos.

42
 PRCTICA No 10

ANLISIS DE LPIDOS.

INTRODUCCIN.

Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas bsicamente por carbono e

hidrgeno y tambin oxgeno; pero en porcentajes ms bajos adems pueden
contener fsforo, nitrgeno y azufre.

Es un grupo de sustancias muy heterogneas que solo tienen en comn estas dos
caractersticas.

1. Son insolubles en agua.

2. Son solubles en disolventes orgnicos como ter, cloroformo, benceno, ter
de petrleo, acetona.

CLASIFICACIN DE LOS LPIDOS.

Los lpidos se clasifican en dos grupos, entendiendo a que poseen en su

composicin cidos grasos (lpidos saponificables) o no lo poseen (lpidos
insaponificables).

1. Lpidos Saponificables
a) Simples
-Acilglicridos
-Cridos
b) Complejos
-Fosfolpidos
-Glucolpidos
2. Lpidos Insaponificables
a) Terpenos
b) Esteroides
c) Prostaglandinas

CIDOS GRASOS.

Loa cidos grasos son molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada
de tipo lineal, y generalmente con un nmero par de tomos de carbono. Tiene en
un extremo de la cadena un grupo carboxilo.

Se conocen unos 70 cidos grasos que se pueden clasificar en 2 grupos:

- Los cidos grasos saturados solo tienen enlace 3s simples entre los tomos
de carbono. Son ejemplos de este tipo de cidos el mirstico (14 C); el
Palmtico (16 C) y el esterico (18 C).
- Los cidos grasos insaturados tienen uno o varios enlaces dobles en su
cadena y sus molculas presentan codos, con cambio de direccin en los
43
 lugares donde aparecen un doble enlace. Son ejemplos el oleico (18 C y un
doble enlace) y el linolico (18 C y dos dobles enlaces).

La principal propiedad de los cidos grasos es la solubilidad, ya que estos poseen

una zona hidrfila, el grupo carboxilo y una zona lipfila, la cadena hidrocarbonada
que presenta grupos metileno y grupos metilo terminales, por eso las molculas de
los cidos grasos son anfipticas, pues por una parte, la cadena aliftica es apolar
y por tanto, soluble en disolventes orgnicos (lipfila), y por otra, el grupo carboxilo
es polar y soluble en agua (hidrfilo).

Desde el punto de vista qumico, los cidos grasos son capaces de formar enlaces
ster con los grupos oxidrilo de un alcohol como el glicerol o de otros alcoholes
lineales. Cuando estos enlaces se hidrolizan con un lcali, se rompen y se
obtienen las sales de los cidos grasos correspondientes, denominados jabones,
mediante el proceso llamado saponificacin.

Lpidos Simples:

Son lpidos saponificables en cuya composicin qumica solo intervienen carbono,

hidrgeno y oxgeno.

Acilglicridos:

Son lpidos simples formados por la esterificacin de una, dos o tres molculas de
cidos grasos con una molcula de glicerina. Tambin reciben el nombre de
glicridos o grasa simples.

Son lpidos saponificables en cuya estructura molecular adems de carbono,

hidrgeno y oxgeno hay nitrgeno, fsforo, azufre o un glcido. Son las
principales molculas constitutivas de la doble capa lipdica de que segn el
nmero de cidos grasos se distinguen tres tipos de estos lpidos:

El monoglicridos, que contienen una molcula de cido graso.

Los diglicridos, con dos molculas de cidos grasos.
Los triglicridos, con tres molculas de cidos grasos.

Los acilglicridos frente a bases dan lugar a reacciones de saponificacin en la

que se producen molculas de jabn.

Ceras:

Las ceras son steres de cidos grasos de cadena larga con alcoholes tambin de
cadena larga. En general son slidas y totalmente insolubles en agua. Todas las
funciones que realizan estn relacionadas con su impermeabilidad al agua y con
su consistencia firme. As las plumas, el pelo, la piel, las hojas, frutos, estn

44
cubiertos de una capa de cera protectora. Una de las ceras ms conocidas es la
que generan las abejas para confeccionar su panal.

OBJETIVOS.

A) Ensayo de un mtodo para cuantificacin de lpidos en muestras agrcolas

como extracto etreo.
B) Determinacin de ndice de acidez a un aceite comestible.

MATERIALES Y REACTIVOS:

1 Vaso para extractor Goldfish Fenolftalena solucin

Cartucho de celulosa a peso Muestra de aceite comestible
constante. para cuantificacin de ndice de
Muestra molida y seca para Acidez.
cuantificacin de % de Extracto Bureta de 25 mL
Etreo, KOH 0.1 N
1 Embudo de plstico Agua destilada
Matraces Erlenmeyer de 250
mL

PROCEDIMIENTO.

a) Se pesa una muestra seca y molida en un cartucho a peso constante

aproximadamente 3.0000 g, colocar el cartucho con muestra en el extractor.
b) Extraer en el aparato durante aproximadamente 6 horas. Despus de este
tiempo,
c) Sacar del extractor los cartuchos con ayuda de una pinza y dejar ventilar al
aire libre y luego,
d) secar hasta peso constante en la estufa de secado.
e) Colocar en desecador para enfriar y luego pesar en balanza analtica para
encontrar la prdida de peso, este dato es el extracto etreo en base seca.
f) Calcular la prdida de peso, as como % E.E. BS. Y % EE. BH.

( P1 P 2) 100
% de extractoetreo ; El resultado es en base seca, calcular para
M base hmeda, considerando un dato de %
humedad.

NOMENCLATURA:
P1= Peso del cartucho con muestra seca y con grasa.
P2= Peso del cartucho con muestra seca y sin grasa.
M= Peso de la muestra molida y seca con grasa en gramos.

Reportar especificando la muestra usada y compararla con el valor encontrado

en la literatura citada para la misma muestra.

45
CUANTIFICACIN DE ACIDEZ EN UN LPIDO (INDICE DE ACIDEZ)

La acidez de un lpido es el porcentaje de cidos grasos libres (que no estn

esterificados al glicerol o a otro alcohol) presentes en l, se expresa como los
miligramos de hidrxido de potasio necesarios para neutralizar un gramo de lpido.
El valor de acidez puede aumentar cuando los lpidos, grasas o aceites son
hidrolizados de manera natural por accin de las enzimas, accin qumica,
exposicin al aire o la luz.

Generalmente los lpidos frescos o recin preparados no contienen cidos grasos

libres o si los contienen estn en muy pequeas cantidades.

El ndice de acidez tambin se define como el nmero de miliequivalentes de KOH

que consumen un gramo de aceite o grasa para neutralizar los cidos libres que
contiene.

MATERIALES:

Matraz Erlenmeyer de 250 mL------------ 2 piezas por equipo

Bureta de 25 mL ---------------------- 1 pieza
Balanza analtica ---------------------------- 1 pieza
Sol. Alcohlica de KOH 0.5 N ------------------------- 2 L para el grupo
Sol. de fenolftalena 0.1 % en etanol -------------- un frasco gotero por equipo
Etanol de 96 %
ter etlico

PROCEDIMIENTO:

En un matraz Erlenmeyer disolver 10 g de muestra seca de lpido en 150 mL de una

mezcla 1:1 de etanol y ter (neutralizada previamente con lcali); se agita y titula con
el hidrxido de potasio en presencia de fenolftalena. Anotar el gasto y calcular el
ndice de acidez.

V x 56.108
ndice de acidez = ---------------------
m
NOMENCLATURA:
V.- Volumen de KOH gastado en la titulacin.
56.108 = mg de KOH equivalente a 1 mL de KOH 1N.

REPORTAR:
- El ndice de acidez encontrado comparando con el dato bibliogrfico de la
muestra usada.
- Calcular usando los mismos datos de valoracin, el % de acidez como cido
oleico.
- Reportar la reaccin qumica usada (neutralizacin).

46
 PRCTICA 11

CINTICA DE REACCIONES ENZIMTICAS: EFECTO DE LA

CONCENTRACIN DE SUSTRATO EN LA VELOCIDAD DE REACIN
ENZIMTICA

Las enzimas son catalizadores protenicos que aceleran la velocidad de una

reaccin y que no se consumen durante sta. A diferencia de los catalizadores
qumicos las enzimas actan en condiciones muy suaves, a temperaturas por
debajo de los 70C, a un pH alrededor de 7 y a una presin de una atmsfera, sin
embargo el incremento que ejercen sobre la velocidad de la reaccin es enorme, y
va de 1 a 10 veces con respecto a la reaccin en ausencia del catalizador. Otra
propiedad importante de las enzimas es su alto grado de especificidad; solamente
catalizan la reaccin en la que participan un sustrato o un grupo de sustratos con
ciertas caractersticas qumicas y geomtricas. Ya que las enzimas son ciento de
veces ms grandes y complejas que el sustrato, en muchas de ellas existen sitios,
en la superficie de la protena cuyo fin es regular la actividad enzimtica.
Las enzimas son protenas desarrolladas por la clula en los organismos vivos con
la funcin especfica de catalizar reacciones bioqumicas. Las enzimas
incrementan la velocidad al cual las reacciones se aproximan al equilibrio. Las
enzimas provocan el cambio de velocidad de reaccin qumica pero sin cambiar el
proceso en el que la enzima puede unirse temporalmente de forma covalente a la
racin, pero al final la enzima se regenera en su forma original y se libera el
producto.

OBJETIVO
Comprobar que una muestra vegetal contiene enzimas, peroxidasa y catalaza que
inactivan al sustrato H2O2.
Comprobar que las reacciones estn catalizadas por enzimas, las cuales actan a
una velocidad de reaccin en determinadas condiciones.
Comprobar que la concentracin de sustrato afecta la velocidad de reaccin.

MATERIALES Y REACTIVOS
1 Mortero
1 Matraz Erlenmeyer de 250 mL
1 Matraz aforado de 500 mL
1 Papel filtro
6 Tubos Smith
Carbonato de calcio
10g de muestra biolgica vegetal fresca ( chcharos, el cual debe tener
agua destilada previamente hervida con 0.2g de carbonato de calcio.
Agua oxigenada
1 Pipeta graduada de 1 mL
1 Pipeta graduada de 5 mL
1 Pipeta graduada de 10 mL

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PROCEDIMIENTO
Pesar 10 g de chcharos frescos u otra especie vegetal.
Macerarlos con ayuda de un mortero.
Aforar a 500 mL. Filtrar el preparado.
Enumerar 8 tubos de Smith (1 al 8) y tratarlos de acuerdo al cuadro.

Cuando se aade el sustrato perxido de hidrgeno a cada tubo, de inmediato

invertir el tubo para que se mezclen los reactivos inundando por completo la parte
graduada en mL , as mismo, de inmediato colocar en posicin vertical sobre la
mesa los tubos de reaccin y contar exactamente cinco minutos para de hacer la
lectura de los mL de O2 generado por la reaccin enzimtica, estos datos se
tabulan en la columna correspondiente para el clculo de los mmol de O2/ min
que es la velocidad de reaccin enzimtica para cada concentracin del sustrato.

Tabla de procedimiento que incluye : Resultados.

mL. de mL. de mL. de mL. de O2 mL de O2 mmol mmol
No.
extracto de agua H2O2 al generado en generados H2O2/mL O2/min
tubo
enzimas destilada 3% 5 min por min.
1 9 3.0 0.0
2 9 2.8 0.2
3 9 2.6 0.4
4 9 2.4 0.6
5 9 2.2 0.8
6 9 2.0 1.0
7 9 1.8 1.2
8 9 1.6 1.4

RESULTADOS
1. Reportar la grfica Michaellis- Menten como mmol O2/min contra mmol
H2O2/mL
2. Reportar la grfica de Linewaver-Burk de las inversas 1/Vo contra 1/(S),
donde se estimara los valores de km y Vmx, el significado de Km y su
localizacin marcados en la grfica Michaellis- Menten.
3. Ejemplo de los clculos de los moles para Vo (mmol O2/min y mmoles
H2O2/mL en cada punto de la grfica.

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 PRCTICA 12

CINTICA DE REACCIONES ENZIMTICAS

EFECTO DEL pH EN LA VELOCIDAD DE REACCIN ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones qumicas que son

catalizadas por las enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa
acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la especificidad de la enzima.
La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima puede medirse con
relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar la
enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc, y que se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada
es la velocidad mxima que se determina numricamente midiendo la aparicin de
los productos o desaparicin de los reactivos.

Las enzimas poseen grupos qumicos ionizables (Carboxilos.- COOH; amino NH

tiol-SH: imidasol.etc), en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH
del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra.
Como la conformacin de la protena dependen en parte de sus cargas elctricas,
habr un pH en el cual la conformacin ser la mas adecuada para la actividad
cataltica. Este es llamado pH ptimo.

OBJETIVO
La mayora de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones
Dar a conocer al aluno los pH de las enzimas

MATERIALES
1 mortero
1 Matraz Erlenmeyer
10gr de muestra
6 Tubos Smith

EQUIPO

Se emplean tubos de Smith para capturar el oxgeno generado en el tiempo

establecido

PROCEDIMIENTO

Se procede a realizar lo mismo de la practica de cintica de reacciones

enzimticas pero ahora no se le aade el carbonato al agua destilada solo se deja
as. Y realizamos el siguiente cuadro.

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 mL de extracto mL de sol. mL de H2O2 Lectura de mL Lectura de mL
No de tubo
de enzimas buffer al 3% de O2 / 5min de O2 / min

pH 2 4 7 1.0

pH 4 4 7 1.0

pH 6 4 7 1.0

pH 7 4 7 1.0

pH 8 4 7 1.0

pH 10 4 7 1.0

pH 12 4 7 1.0

RESULTADOS.

1. Con una grfica de moles O2/min generados (Vo), contra pH, encontrar el
pH ptimo al cual la peroxidasa acta para degradar al sustrato H2O2.
2. Reportar de la bibliografa, cinco enzimas con sus pH ptimos de actividad

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 PRCTICA 13

RESPIRACION

Respiracin, proceso fisiolgico por el cual los organismos vivos toman oxigeno
del medio circundante y desprende bixido de carbono. El trmino respiracin se
utiliza tambin para el proceso de liberacin de energa por parte de las clulas,
procedente de la combustin de molculas como los hidratos de carbono y las
grasas. La respiracin celular es similar en la mayora de los organismos, desde
los unicelulares, como la ameba y el paramecio, hasta los organismos superiores.

La respiracin se desarrolla en dos etapas: el ciclo de Krebs o ciclo de los cidos

tricarboxlicos (Figura 2) y el transporte terminal de electrones o cadena de
electrones (Figura 3). En el | de la respiracin las molculas de tres carbonos de
cido pirvico producido en la gluclisis son degradadas a grupos acetilo de dos
carbonos, que luego entran al ciclo de Krebs.

Figura 2. Ciclo de Krebs o ciclo de los cidos tricarboxlicos

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 Figura 3. Transporte terminal de electrones o cadena de electrones

La etapa final de la respiracin es el transporte terminal de electrones, que

involucra a una cadena de transportadores de electrones y enzimas embutidas en
la membrana interna de la mitocondria. A lo largo de esta serie de transportadores
de electrones, los electrones de alta energa transportados por el NADH de la
gluclisis y por el NADH y el FADH2 del ciclo de Krebs van bajando hasta el
oxgeno.

OBJETIVO
Dar a conocer que cualquier objeto que tuvo o tenga vida sigue respirando o
consumiendo oxgeno y eliminando CO2.

MATERIALES
Muestra representativa de cualquier especie que tenga vida.

EQUIPO
Se usara un sensor de CO2 como producto de respiracin, tal sensor es un
electrodo especifico, que emite seal a una interface y este a su vez a una
computadora que registra las ppm de CO2 acumulado en un recipiente con
material respirado, adicionalmente un programa grafica la velocidad de respiracin
con respecto al tiempo.

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BIBLIOGRAFA RECOMENDADA

Netto Diana Victoria. Respiracin. ItzRed. Disponible en www.fisicanet.com. Fecha

de consulta 10 de Diciembre del 2008
Leheninger L. Albert. (1984).Bioqumica. Octava edicin, editorial Omega, Espaa.
Manuela Arrebola Jimnez. Universidad de Granada. Curso: Aplicaciones
Educativas de las Nuevas Tecnologas
http://www.ugr.es/~sevimeco/documentos/edu_multimedia/acido_base/unida
d_didactica.htm: Unidad didctica de cido base. Fecha de consulta:13-
Noviembre-2008

BUSCADORES RECOMENDADOS
www.ingenieriaquimica.net
www.fisicanet.com

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UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGA AGRCOLA

PRCTICAS DE BIOQUMICA

FELIX ESPARZA TORRES

MARIO GALEANA DE LA CRUZ

JULIO 2008

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