UNIVERSIDAD TECNICA DE ORURO

FACULTAD NACIONAL DE INGENIERIA Asignatura: PRQ 3217 A

CARRERA DE INGENIERIA QUIMICA
Docente:
Ing. Aleida Garca Alcocer Trabajo:
USO DE PROBIOTICOS EN
Universitario: SUSTITUCION DE ANTIBIOTICOS
MALLCU HUAYLLAS MARIA Fecha de entrega: 29 - noviembre -
2015
PATIO ANDRADE PAOLA

USO DE PROBIOTICOS EN SUSTITUCION DE ANTIBIOTICOS

1. INTRODUCCION
Los mecanismos de accin de los probiticos incluyen la produccin de sustancias inhibitorias tales
como cidos orgnicos y bacteriocinas, y competicin por nutrientes esenciales o enzimas, agrega
adems la competicin por sitios de adhesin, alteraciones en la actividad enzimtica de los
patgenos, funciones inmunoestimulantes y beneficios nutricionales, tales como mejorar la
digestibilidad y la utilizacin del alimento. Como agentes probiticos se han usado ampliamente
algunas especies de bacterias cido lcticas (LAB, por sus siglas en ingls) y bifidobacterias,
principalmente en humanos y otros animales terrestres, en base a esto, recientemente, varios
trabajos se han enfocado en el uso de probiticos como reguladores del desarrollo de las larvas, su
crecimiento y supervivencia durante las primeras semanas de vida como pez.
A fin de formular un producto probitico deshidratado estable en base a una cepa autctona
Lactobacillus plantarum, con miras a su uso profilctico, se plante un esquema productivo que
contaba con las etapas de cultivo, concentracin por membranas y estabilizacin de biomasa
mediante secado por atomizacin.
Se plantea la necesidad de evaluar un proceso que permita la obtencin a gran escala de un
producto probitico deshidratado estable haciendo uso de todas las herramientas disponibles
(concentracin, uso de sustancias protectoras, secado por atomizacin) a fin de lograr un producto
con una viabilidad de a lo menos 10 8 UFC/g y que sea capaz de mantener las propiedades de inters
tecnolgico, por las que inicialmente fue seleccionado.
Con respecto a la calidad del producto final obtenido a partir de secado por atomizacin, las
condiciones de operacin del mismo, as como las condiciones de la alimentacin, parecieran ser las
variables ms influyentes. Los parmetros de proceso estudiados incluyen: patrones de flujo del
aire (co-corriente, contracorriente, flujo mixto), presin de atomizacin, tiempo de residencia,
velocidad de alimentacin y temperaturas de entrada y salida. De todas stas, se ha reportado que la
temperatura de salida es parmetro que ms afecta la viabilidad de los microorganismos, aunque
tambin reportan cierta influencia de la velocidad de flujo de alimentacin en la viabilidad final del
producto.

En 1969, el investigador Swann alertaba del posible riesgo de seleccin de bacterias

resistentes en los animales que posteriormente pudieran ser consumidos por los seres
humanos, y era enftico en evitar el uso de antibiticos como promotores de crecimiento
animal, que pudieran tambin emplearse en medicina humana por el efecto de
reacciones cruzadas que estos eventualmente pudieran generar.

Actualmente, la mayor preocupacin radica en el riesgo potencial por su uso en los

animales productores de alimento y su contribucin a favorecer el desarrollo de
enteropatgenos resistentes a los antibiticos en el tracto intestinal (Christina et al.,
2003; Gunther, 2003; Levin, 2007). Segn National Institute of Allergy and Infectious
Diseases (NIAID), esta resistencia antibitica generada en los microorganismos se
transmite en la progenie de forma directa a travs de los genes, o a travs de los
plsmidos, a otras especies.

2. CARACTERIZACION Y ALCANCE DEL PROCESO

Los probiticos se consideran aditivos alimentarios formados por microorganismos vivos que tienen
efectos beneficiosos en la salud del hospedador (Scherezenmeir y de Vrese, 2001). Deben reunir las
siguientes caractersticas: no ser sensibles a las enzimas gastrointestinales; ser estables frente a cidos y
bilis y no conjugarse con las sales biliares; poseer capacidad para adherirse a las superficies epiteliales;
sobrevivir en el ecosistema intestinal; producir sustancias antimicrobianas y tener capacidad de
crecimiento rpido en las condiciones del intestino grueso. Si bien en la definicin no se
mencionan cantidades especficas a administrar, se ha reportado que una dosis diaria mayor o igual a
10 9 UFC es adecuada, para ello, las bacterias probiticas deben estar en una concentracin
entre 10 6 10 7 UFC/g (Kosin, 2006; Meng, 2008).
Entre los microorganismos ms utilizados para estos fines se encuentran diferentes especies de
bacterias: Lactobacillus (L. acidophillus, L. caseii, L. bulgaricus, L. reuteri, L. plantarum),
Bifidobacterium (B. bifidum, B. longum, B. breve, B. infantil, B. animalis) y levaduras,
fundamentalmente del gnero Saccharomyces. Se pueden emplear en formas puras o combinadas, lo
que propicia su amplia variedad en el mercado internacional.
La produccin de probiticos tiene como primera etapa la seleccin de cepas, una vez cumplido con
esto se debe hacer un estudio completo sobre los requerimientos nutricionales del microorganismo en
cuestin, slo despus de esto se puede empezar a evaluar el modo de cultivo y escoger el que mejor se
ajuste a nuestras necesidades y recursos, aunque la variable dominante en este caso es el tener un
cultivo con una alta concentracin celular. Posterior a ello y si es necesario, se debe pensar en las
labores de separacin y concentracin y ante eso se deben evaluar las alternativas posibles y verificar
que las mismas cumplan con su labor ocasionando el mnimo dao a los microorganismos, pero
sin descuidar tampoco la calidad de la separacin y la mantencin de las condiciones lo ms
aspticas posibles a fin de asegurar un producto final de calidad.
Una vez que se tiene una concentracin adecuada de bacterias se debe encontrar la forma de aumentar
la estabilidad de la biomasa. Las bacterias probiticas en su mayora son comercializadas en forma
congelada o deshidratada, siendo esta ltima comnmente obtenida mediante liofilizacin. De forma de
reducir los tiempos y los costos de energa asociados a este proceso, muchos autores han recomendado
el uso del secado pora atomizacin como la alternativa ms adecuada para altas velocidades de
produccin con un costo que puede llegar a ser 80% ms bajo que el proceso de liofilizacin
(Desmond et al. 2002; Varsha et al. 2011). Con respecto a la calidad del producto final obtenido a
partir de secado por atomizacin, las condiciones de operacin del mismo, as como las condiciones
de la alimentacin, parecieran ser las variables ms influyentes. Los parmetros de proceso
estudiados incluyen: patrones de flujo del aire (co-corriente, contracorriente, flujo mixto), presin
de atomizacin, tiempo de residencia, velocidad de alimentacin y temperaturas de entrada y salida.
El objetivo principal es de estandarizar el proceso y las condiciones de operacin para la formulacin
de un producto probitico deshidratado estable de viabilidad igual o superior a 10 8 UFC/g cuyo
principio activo sea una cepa Lactobacillus plantarum autctona.
3. CINETICA DEL PROCESO Y MICROORGANISMOS UTILIZADOS
Crecimiento y Produccin
El crecimiento y la formacin de productos son procesos de bioconversin en los cuales los nutrientes
alimentados al fermentador son convertidos en biomasa y metabolitos. A continuacin se presentan las
ecuaciones del balance de materia para el crecimiento bacteriano, la utilizacin de sustrato y
la formacin de productos en un proceso de fermentacin discontinua.
Para el crecimiento se tiene
Utilizacin de sustrato

Reordenando se puede obtener

Donde qs corresponde a la tasa especfica de utilizacin de sustrato, mientras que Y XS

representa el mximo rendimiento para el crecimiento celular corregido segn los
requerimientos de energa para funciones de mantenimiento. Los procesos de mantenimiento son
aquellos en los que se consume energa sin que se produzca directamente un incremento de biomasa,
pero que sin embargo son necesarios para el crecimiento y sobrevida del cultivo.
En forma anloga para la formacin de productos se tiene

La productividad volumtrica (P) es un indicador del desempeo global del proceso. En un

cultivo batch es necesario calcular dicho parmetro sobre todo el tiempo utilizado en el proceso, el
cual no solo incluye el tiempo de fermentacin, sino todo el que se necesita para preparar un nuevo
ensayo, es decir incluye: preparacin de un nuevo inculo, lavado del reactor, preparacin de medio de
alimentacin, esterilizacin y puesta en marcha, de este modo, la productividad volumtrica
queda dada por:

Donde Xo y X f corresponden a las concentraciones celulares inicial y final, m es la velocidad de

crecimiento especfica mxima, mientras que t T , tD y tL corresponden a los tiempos de
preparacin del reactor, esterilizacin y duracin de la nueva fase larga respectivamente.
Por su parte, en el cultivo continuo, la productividad volumtrica se define como

Donde D, corresponde al factor de dilucin o en trminos ms ingenieriles al inverso del

tiempo de residencia.

Donde F es la velocidad de flujo de alimentacin, V el volumen del reactor y el tiempo de residencia.

Del balance de materia en un reactor continuo, considerando que la concentracin de microorganismos
depende slo del sustrato limitante se tiene que

Donde es la velocidad de crecimiento especfica.

En el caso del cultivo fed batch, la productividad se mide en funcin de la cantidad de
biomasa o producto formado con respecto a la cantidad de tiempo transcurrido

Cinticas de crecimiento y acidificacin del probiotico Lactobacillus plantarum LPS47

En matraces de 200 ml, conteniendo el medio de cultivo tradicional, se inocularon en forma separada
la cepa fresca as como tambin producto deshidratado. En ambos casos se tuvo cuidado de partir con
una concentracin inicial de 105 UFC/ml. Durante un periodo de 24 - 32 horas, y cada 3 horas, se hizo
recuento de microorganismos viables y se midi el pH. Las cinticas de crecimiento fueron modeladas
por la ecuacin de Gompertz

N son las UFC/ml a un tiempo arbitrario, t, N o son las UFC/ml iniciales, m es la velocidad mxima
de crecimiento, y A, son el tiempo de latencia y la concentracin de microorganismos en
fase estacionaria respectivamente.

4. TIPO DE REACTORES UTILIZADOS

Estrategias comunes de cultivo
Una vez que una determinada cepa o conjunto de cepas es seleccionada por sus caractersticas
probiticas, el paso siguiente consiste en el cultivo. Dentro de las formas en que el cultivo
puede llevarse a cabo estn el modo discontinuo (batch), el modo continuo y el semicontinuo (o
fedbatch). El uso de uno u otro estar determinado principalmente por las caractersticas del
microorganismo y tambin por lo que se desea privilegiar, es decir, si se desea fomentar la produccin
de biomasa o bien la produccin de un metabolito.
5. DESCRIPCION DE LOS REACTORES Y CONDICIONES DEL PROCESO
Cultivo discontinuo
Muchos procesos bioqumicos involucran el crecimiento en modo discontinuo de las clulas. En esta
operacin, a un medio lquido (o slido) se agrega un inculo de clulas vivas y nada se agrega o retira
del recipiente hasta que el proceso es finalizado. Como es de esperar, la concentracin celular,
de nutrientes y productos vara con el tiempo. La ventaja de este modo de operacin radica
principalmente en la sencillez de su implementacin
Cultivo continuo quimiostato
El cultivo continuo de microorganismos tiene, al igual que el cultivo discontinuo, gran aplicacin
en la biotecnologa, durante el tiempo que dura la operacin el reactor se alimenta
continuamente con sustrato y a fin de mantener el volumen constante se va retirando, tambin
continuamente, una cantidad de lquido del reactor. La agitacin permanente permite que el sistema
sea homogneo, por tanto, en cualquier parte del reactor la concentracin celular, de sustrato y
de productos metablicos ser la misma.
Cultivo fedbatch
En este modo de operacin el sustrato es alimentado continua o semi-continuamente, mientras
el efluente es removido en forma discontinua. La operacin fedbatch combina las ventajas de los
modos discontinuo y continuo y a su vez minimiza las desventajas que estos poseen, el cultivo
fedbatch es fcil de implementar y escalar, al mismo tiempo, se asegura una alta densidad celular y
formacin de producto debido a la extensin del tiempo de trabajo lo cual se debe a que la
alimentaciones capaz de reemplazar los nutrientes agotados y por otro lado diluir el caldo de
fermentacin, lo cual promueve el crecimiento y alivia los efectos adversos que pudiera tener la
acumulacin desmedida de metabolitos en el crecimiento celular.
Microfiltracin
En general las membranas usadas tienen una estructura microporosa capaz de separar partculas finas
con un rango de tamao entre 0.02 20 m. En la microfiltracin por flujo cruzado (CFM) el fluido a
ser filtrado fluye en forma paralela a la superficie de la membrana y el permeado pasa a travs de la
misma debido a una diferencia de presin, el flujo cruzado es capaz de reducir la formacin del
queque y por tanto lo mantiene a un nivel bajo por lo cual se hace posible operar el equipo
en un estado casi estacionario por largo tiempo (Ripperger y Altmann, 2002).
 Figura 5.1. Principio de la filtracin por flujo cruzado (Ripperger yAltmann, 2002)
La estructura microporosa de la membrana de microfiltracin permite separar las partculas de acuerdo
al tamao de los poros, por tanto, la separacin estar mayormente limitada a la superficie externa de
la membrana.
En este sentido este trabajo es un aporte tanto en el conocimiento de la operacin de microfiltracin
aplicada a una cepa autctona probitica como tambin en el hecho de saber si la misma es
factible de ser estabilizada mediante una operacin posterior, que ya de por si es estresante: secado
por atomizacin.
Estabilizacin de biomasa
Secado por atomizacin
El secado por atomizacin se define como la transformacin de una alimentacin en estado fluido a
una forma seca por atomizacin en un medio caliente, en otras palabras, se basa en la evaporacin
rpida del disolvente por pulverizacin del producto a secar en el seno de una corriente de gas caliente.
La Fig. 5.2. presenta una instalacin tpica de secado por atomizacin, aqu el aire caliente ingresa por
la parte superior de la cmara de secado, en esta misma zona se procede a pulverizar la suspensin del
producto a secar. En la parte cnica inferior se recoge la mayor parte del producto seco mientras que el
aire de secado se escapa por la salida lateral, la porcin de finos que ste arrastra es
separada y recuperada en los ciclones (Casp y Abril, 1999)

Figura 5.2. Esquema de una instalacin de Secado por atomizacin. 1. Calentador de aire, 2. Torre de
desecacin, 3. Depsito de alimentacin, 4. Bomba de dosificacin, 5. Turbina de aspersin, 6.
Ciclones separadores, 7. Ventilador principal. (A) Entrada de aire ambiente, (B) Entrada del producto
en suspensin, (C) Salida aire usado, (D) Producto seco.
Microencapsulacin
Es la tecnologa de empacar sustancias en fases slida, lquida o gaseosa en pequeas cpsulas selladas
que pueden liberar su contenido a una velocidad controlada bajo condiciones especficas, el material
encapsulante ideal debera cumplir con las siguientes caractersticas
i. Buenas propiedades reolgicas a altas concentraciones.
ii. Capacidad de dispersarse o emulsificar la sustancia activa y estabilizar la emulsin producida.
iii. No debe reaccionar con la sustancia a ser encapsulada durante el proceso o durante el
almacenamiento.
iv. Capacidad para mantener la sustancia activa bien protegida y evitar fugas de la misma al ambiente.
v. Debe ser soluble en solventes usados en la industria de alimentos (e.g. agua)
vi. Econmico
vii. De grado alimenticio

6. FLUJOGRAMA DEL PROCESO

Diagrama Global

Cultivo

Concentracin de biomasa
Estabilizacin de biomasa
7. EFICIENCIA DEL PROCESO
Cultivo discontinuo
La ventaja de este modo de operacin radica principalmente en la sencillez de su implementacin, sin
embargo, posee tambin serias desventajas como ser el hecho que al finalizar el proceso las clulas al
interior del reactor poseen una distribucin de edades, existen problemas de limitacin de nutrientes,
baja densidad celular, baja productividad y acumulacin de toxinas (Dorka, 2007). Dependiendo
del microorganismo podr existir mayor o menor grado de inhibicin en relacin a el o los metabolitos
formados durante la fermentacin. En trminos de productividad debe de tomarse en cuenta no solo el
tiempo requerido para la fermentacin, si no tambin el tiempo necesario para vaciar el reactor, lavarlo
y prepararlo para un nuevo cultivo.
Cultivo continuo quimiostato
En comparacin al cultivo en modo discontinuo durante el cultivo continuo es posible alcanzar
alta densidad celular y alta productividad sin limitaciones de sustrato o inhibicin de crecimiento
debido a la acumulacin de toxinas y/o metabolitos (Dorka, 2007). En cuanto a las desventajas, se
menciona el hecho de que dependiendo de las condiciones de operacin (tiempo de residencia) podra
haber prdida importante de sustrato en la descarga y que si bien en teora un reactor en modo
continuo es capaz de funcionar por largos periodos de tiempo, en la prctica esto ltimo no es siempre
vlido dado que a mayor tiempo de operacin mayor probabilidad de que surjan problemas de
contaminacin o de mutacin de los microorganismos.
Cultivo fedbatch
Dentro de las ventajas, el cultivo fedbatch permite ejercer control sobre la produccin de subproductos
ya que es posible limitar la provisin de sustratos escogiendo slo aquellos necesarios para la
formacin del producto principal. Adems, es posible reponer el agua perdida por evaporacin durante
la operacin. Dentro de las desventajas se debe tener cuidado, al igual que en el cultivo discontinuo,
con la acumulacin de metabolitos que pudieran llegar a niveles inhibitorios, por otro lado se
debe cuidar que otros nutrientes, no incorporados en el medio de alimentacin, pudieran volverse
limitantes.
El riesgo de los probiticos
En 2010 un estudio demostr que la mayor parte de los probiticos que se venden en el mercado no
contienen el nmero suficiente de bacterias vivas como para producir algn efecto.
La mayora de probiticos se venden hoy en da en forma de cpsulas o de comprimidos.
En los comprimidos hay un nmero extremadamente bajo de bacterias vivas, ya que la presin
necesaria para formar el comprimido hace que la temperatura suba por encima de los 50C y mate a una
gran parte de ellas. Por tanto, es casi imposible que existan comprimidos de probiticos que ofrezcan
buenos resultados.
Los Beneficios de los Probiticos
Beneficios de los probioticos para la salud se relacionan con la ingesta de dosis diarias de probiticos.
Una respuesta mejorada del sistema inmunolgico
Reduce los efectos negativos de tomar muchos tipos de antibiticos
Ayuda a prevenir y tratar la inflamacin del colon despus de una ciruga
Aumenta la habilidad de digerir alimentos
Reduce la intolerancia a la lactosa
Reduce la presencia de infecciones de levadura, vaginitis y candidiasis
Incrementa la habilidad de asimilar los nutrientes de los alimentos
Alivia muchos trastornos digestivos comunes tales como el estreimiento, la diarrea y el
Sndrome de Colon Irritable
Incrementa la habilidad de absorber el calcio

8. BIBLIOGRAFIA

https://revistaing.uniandes.edu.co/pdf/Rev19-17.pdf
http://repositorio.udec.cl/xmlui/bitstream/handle/123456789/1526/Tesis_Estudio_del_Cultivo
_y_Concentracion_de_una_Cepa.Image.Marked.pdf?sequence=1
www.alimentosargentinos.gov.ar/contenido/.../Ficha_12_PreyPro.pdf
www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0798...
www.hablemosclaro.org/.../5/.../Produccin_de_Bacterias_cido_Lctica...