Incremento de la estabilidad

de bixina, norbixina y geraniol

por acomplejamiento con
-cyclodextrina

Ricardo Bentez,*
Luis Alberto Lenis,
Jonathan Paz

Resumen
En esta investigacin se
estudi el efecto del encapsu-
lamiento con sulfobutil-ter
-ciclodextrina (SBE7--CD), de
los colorantes bixina, norbixina y
el aceite esencial geraniol. Este
tratamiento aument la solubili-
dad en agua de los huspedes y
brind proteccin contra factores
ambientales como la luz directa
del sol, oxgeno y exceso de
calor, evitando la rpida degra-
dacin. Los encapsulamientos
se realizaron con la tcnica de
inclusin en lquido, variando
los mtodos, de acuerdo con
las caractersticas qumicas de
cada uno de los huspedes.
Finalmente, mediante anlisis
por calorimetra diferencial de
barrido (DSC) se comprob la
estabilidad trmica de todos los
encapsulados.
Palabras clave: ciclodex-
trinas, carotenos, bixina, norbixi-
na, geraniol, DSC

*
Grupo de Investigacin en Qumica de Productos Naturales, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad del Cauca, Popayn, Cauca, Colombia. rbenitez@unicauca.edu.co
Fecha de recepcin: noviembre 18 de 2009 Fecha de aceptacin: marzo 3 de 2010

94 El Hombre y la Mquina No. 34 Enero-Junio de 2010


Ricardo Bentez Luis Alberto Lenis Jonathan Paz
Abstract
In this investigation studied
the effect of the inclusion with
sulfobutyl ether of -cyclodextrin
(SBE7 - -CD), of the carotenes
bixin, norbixin and the essential
oil geraniol. This treatment in-
creased the solubility in water of
the guests and offered protection
against environmental factors as
the direct light of the Sun, oxygen
and heat excess, avoiding the
rapid degradation. The inclusions
carried out with the technology of
incorporation in liquid, changing
the methods, in agreement with
the chemical characteristics of
each one of the guests. Finally, by
means of analysis for Differential
scanning calorimetry (DSC) the
encased ones verified the thermal
stability of products.
Key Words: -cyclodextrin,
carotene, bixin, norbixin, geran-
iol, DSC
Introduccin
Las ciclodextrinas (hospeda-
dor) son carbohidratos cclicos
derivados del almidn que tienen la
habilidad de encapsular otras mo-
lculas (husped) al interior de sus
rgidas estructuras. La interaccin
entre estos dos tipos de molcula
puede involucrar una inclusion
total o solo una asociacin con la
parte hidrofbica de la molcula.1-3
Molecularmente las ciclodextrinas
son cerradas en crculo, formando
un anillo con superficie exterior
hidroflico y una cavidad interior
hidrofbica. La superficie hidro-
flica, genera buena solubilidad
en agua para la ciclodextrina y
la cavidad lipoflica provee un
medio favorable para molculas
insolubles en agua. SBE 7--CD
es una ciclodextrina modificada,
diseada para maximizar la segu-
ridad, optimizar la complejacin y
El Hombre y la Mquina No. 34 Enero-Junio de 2010
Incremento de la estabilidad de bixina, norbixina y geraniol
por acomplejamiento con -cyclodextrina
para aumentar la solubilidad y es-
tabilidad de molculas insolubles.
Adems es una molcula poliani-
nica hepta substituida con una sal
de sulfonato de sodio, separada de
la cavidad lipoflica por un grupo
espaciador butil-ter, , sulfobuti-
leter (SBE7).4
La habilidad de estas molculas
hospedadoras de formar complejos
de inclusin puede cambiar las pro-
piedades fsicas y qumicas de sus
molculas huspedes, ofreciendo
una variedad de usos potenciales
en la industria de los alimentos. Se
conoce que los aceites causantes
del sabor y aroma de extraccin
natural consisten en mezclas de
unos cuantos componentes hasta
varios cientos de ellos; muchos de
estos pueden ser insolubles en agua
o susceptibles de volatilizacin,
o ambos. La microencapsulacin
de estos aceites con las ciclodex-
trinas puede reducir o eliminar la
volatilidad y la susceptibilidad a la
oxidacin; as entre muchas otras
ventajas, frecuentemente mejoran la
solubilidad acuosa del aceite.5-9.
Dos pigmentos carotenoides
(extraidos de Bixa orellana), son
bixina (C25H30O4), nombre cientfi-
co: cido 9 cis 6,6 diapocaro-
teno 6,6 dioico, mono metil ester,
y norbixina (C 24H 28O 4), nombre
cientfico: cido, 6 metilhidrogen
9- cis 6,6 diapocaroteno 6,6
dioico. En estado puro estos carote-
noides son muy sensibles a la oxi-
dacin debido a su naturaleza fuer-
temente insaturada; esta oxidacin
implica una disminucin directa del
color rojo por efecto de la desapari-
cin de los enlaces conjugados; la
oxidacin es acelerada por la accin
de la luz, el calor, y en presencia de
aceites ocurre por los catalizadores
metlicos, en particular el cobre, el
hierro y el manganeso; el contacto
con los hidroperxidos de cidos
grasos induce una descomposicin
va radical libre, por lo tanto es
95
 Incremento de la estabilidad de bixina, norbixina y geraniol
Ricardo Bentez Luis Alberto Lenis Jonathan Paz
necesario conservarlos al vaco en
atmsfera inerte.10
Materiales y procedimientos
La ciclodextrina usada en el
proceso de encapsulacin, SBE7-
-CD fue obtenida de CyDex Inc.
Overland Park, Estados Unidos.
Los carotenos bixina y norbixina
fueron (extrados de Bixa orella-
na), purificados y analizados por
comparacin con patrones por
HPLC. El geraniol fue provisto
por Merck. Todos los solventes
fueron reactivos grado analtico
RPA y HPLC Mallinckrodt, usados
tal como se recibieron.
Equipos
Los anlisis de HPLC fueron
realizados en un equipo Hewlett
Packard 1100, con bomba cuater-
naria, detector UV (428, 480 nm
colorantes) y (206 nm geraniol),
se usaron solventes grado HPLC
Mallinckrodt, microfiltrados por
membranas de 0.45 m Fisher
Scientific y una columna Nova Pac,
ODS C18, (150 x 4.6 i.d) mm, 5 m.
Igualmente se us un sistema anali-
zador de calorimetria diferencial de
barrido Perkin Elmer.
Encapsulamiento de bixina
1:1(ciclodextrina:bixina) en
moles
El complejo de bixina con
SBE7--CD se form por el mtodo
de disolucin.11 Los equivalentes
de ciclodextrina sustrato fueron
equimolares con relacin 1:1. La
ciclodextrina fue disuelta en agua y
seguidamente se adicion la bixina
disuelta en cloroformo. La mezcla
resultante se mantuvo a un pH = 5.5
y agitacin magntica de 400rpm,
con control de temperatura a 30
C (+ 2 C), durante 40 horas. La
solucin final fue filtrada al vaco
con papel (de 25-12m Schleicher
and Schuell) para separar bixina
sin solubilizar del complejo SBE7-
96 El Hombre y la Mquina No. 34 Enero-Junio de 2010
por acomplejamiento con -cyclodextrina
-CD-Bixina. La solucin del
complejo fue introducida en una
estufa con recirculacin de aire a
35C por 48 horas. El polvo del
complejo fue entonces removido
del horno y llevado a la cmara de
desecacin con silica gel a 25 C
por un tiempo adicional de 12 horas
para que alcance el equilibrio con el
contenido de humedad. Finalmente
el complejo de inclusin con apa-
riencia cristalina de color rojo, fue
almacenado en frasco mbar con
tapa y refrigerado a -4 C.
Encapsulamiento
de norbixina
1:1(ciclodextrina:norbixina)
en moles
El complejo de norbixina con
SBE7--CD se realiz usando el
mtodo de disolucin.11 Las cantida-
des de reaccin fueron equimolares
en relacin (1:1). La norbixina fue
disuelta en agua y seguidamente se
le adicion a esta solucin la ciclo-
dextrina en forma slida. El resto
del procedimiento, hasta obtener el
complejo de inclusin con aparien-
cia cristalina de color rojo-naranja,
fue realizado de igual manera como
el empleado para bixina.
Encapsulamiento
de geraniol
1:1(ciclodextrina:geraniol )
en moles
El complejo de geraniol fue
preparado usando el mtodo de
precipitacin.12,13 Las cantidades
de reaccin fueron equimolares en
relacin (1:1). En un baln de fondo
redondo fue calentado el etanol a
52C (+ 2C), luego se coloc a 100
rpm de agitacin y fue agregada
la ciclodextrina, despus de 2min
se adicion el geraniol disuelto en
etanol y se apag el calentamiento.
La agitacin fue aumentada a 300
rpm y se mantuvo por 4h ms.
Transcurrido el tiempo, se retiro
la agitacin, se coloc una tapa al
recipiente y se llev a la nevera

Ricardo Bentez Luis Alberto Lenis Jonathan Paz
a 4C (+2C) por 8h para lograr
estabilizacin del complejo. Por
rota-evaporacin se elimin el eta-
nol a 90 rpm, 30C, y 450 mmHg.
Finalmente se coloc el polvo del
complejo de geraniol en estufa
de recirculacin de aire a 25C (+
2C) por 10h y luego en cmara
de desecacin con silica gel por 3h
ms. El complejo de inclusin con
apariencia cristalina de color blanco
fue almacenado en frasco mbar con
tapa y refrigerado a -4 C.
Anlisis de calorimetra
diferencial de barrido
En este estudio se registra de
forma continua la capacidad calo-
rfica aparente de una molcula en
funcin de la temperatura; caracte-
rizado por un pico de absorcin de
calor correspondiente a un proceso
endotrmico o de transicin trmi-
camente inducida. Se realizaron los
anlisis de DSC para los huspedes,
antes y despus de ser encapsula-
dos; tambin se hizo el anlisis para
SBE7--CD, comparando la gran
estabilidad de esta ciclodextrina
con el resto de los complejos de
inclusion.14
Resultados y discusin
Anlisis de calorimetra
diferencial de barrido
(DSC).
La calorimetra diferencial
de barrido es una tcnica termo-
analtica que se usa para monitorear
los cambios en la energa trmica
asociados con las transformaciones
fsicas y qumicas de los materiales
como funcin de la temperatura.
Por ejemplo, transiciones de una
estructura cristalina a una estructura
amorfa en un slido, reacciones qu-
micas, etc. En ambas transformacio-
nes el calor es liberado o absorbido.
En tecnologa de alimentos hay
numerosos ejemplos en los cuales
El Hombre y la Mquina No. 34 Enero-Junio de 2010
Incremento de la estabilidad de bixina, norbixina y geraniol
por acomplejamiento con -cyclodextrina
algunas sustancias experimentan
cambios fsicos y/o qumicos cuan-
do se les suministra o extrae calor
como: cambios de fase en agua,
prdida de color por oxidacin de
carotenos, prdidas por rpida vo-
latilizacin, desnaturalizacin de
protenas, entre otros.15
En particular los termogramas
por la tcnica de DSC, obtenidos
de los complejos de inclusion con
ciclodextrinas, nos permiten iden-
tificar las transiciones de fase del
sistema, las cuales pueden explicar-
se mediante la teora de equilibrio
de fases.14
En la Figura 1 se muestran los
termogramas para bixina, norbixina
y ciclodextrina obtenidos por el
DSC. En el caso del geraniol al ser
un lquido puro, podemos tomar
como eje de comparacin el punto
de ebullicin de 230C obtenido
terica y experimentalmente. Como
puede apreciarse, aparece una sola
transicin de fase endotrmica para
la ciclodextrina, que ocurre a una
temperatura del orden de 270C
para la cual se lleva a cabo la fusin
de los cristales; luego hay un des-
prendimiento de calor producto de
la descomposicin de la molcula.
El termograma de bixina muestra
una temperatura de fusin de 210C,
Figura 1. Comparacin de los DSC de bixina, norbixina y ciclodextrina.
97

Ricardo Bentez Luis Alberto Lenis Jonathan Paz
con una capacidad calrica menor
que la ciclodextrina, y posterior-
mente una depresin exotrmica
de descomposicin. Finalmente la
norbixina presenta un cambio de
fase alrededor de 190C producto
de la fusin, y luego una pequea
depresin que es donde se libera el
calor de la descomposicin.
En la Figura 2 se observa el
grfico DSC de todos los complejos
de inclusion. Se puede notar que
en el termograma del complejo
de norbixina se tiene un mayor
flujo de calor, alrededor de 210C,
incrementando la capacidad calo-
rfica del complejo, luego el nico
cambio de fase alrededor de 260C,
producto de la fusin del complejo y
una posterior depresin de descom-
posicin. En el complejo de bixina
(color vinotinto) se encuentra una
cristalizacin alrededor de 200C,
con un Cp bastante pequeo, luego
un nuevo cambio de fase alrededor
de 270C , seguido de liberacin de
calor por la descomposicin. En el
complejo de geraniol, se observan
dos cambios de fase, el primero
cerca de 230C producto de la
evaporacin de restos de geraniol
absorbidos superficialmente en el
complejo de inclusin, el segundo
cambio de fase se encuentra en el
orden de 270C por la fusin del
Figura 2. Comparacin DSC de todos los complejos
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Incremento de la estabilidad de bixina, norbixina y geraniol
por acomplejamiento con -cyclodextrina
complejo de inclusin de geraniol, y
finalmente la descomposicin mos-
trada en la depresin exotrmica.
Se encontr en la Figura 2, que
los complejos de inclusion presen-
tan mejor estabilidad trmica que
las molculas huspedes, esto ocu-
rre ya que la ciclodextrina las recu-
bre y protege hasta una temperatura
alrededor de 270 C, donde alcanza
su propia desestabilizacin trmico-
estructural. Se generaron as tres
diferentes complejos en los que se
mantiene al husped con todas sus
propiedades organolpticas natura-
les, pero causndole ms estabilidad
frente a temperaturas altas.
Conclusiones
Experimentalmente se encon-
traron compuestos de color blanco
para el complejo de geraniol y de
color rojo anaranjado para los
complejos de bixina y norbixina, los
cuales fueron totalmente solubles
en agua y de otras caractersticas
organolpticas iguales al respectivo
husped puro.
Con los anlisis de calorimetra
diferencial de barrido (DSC), se
encontr que el punto de descom-
posicin de los huspedes puros
se increment hasta 270C luego
de formarse los correspondientes
complejos de inclusin. La inestabi-
lizacin estructural de estos nuevos
complejos lleg cuando la ciclodex-
trina que es la molcula que protege
las sustancias huspedes, alcanz
su temperatura de fusin. Estos
compuestos, con caractersticas de
mayor resistencia a la degradacin,
sern la solucin de muchos indus-
triales de los sectores alimentario,
farmacutico y textil.
Agradecimientos
Agradecemos a la Vicerrectora
de Investigaciones de la Universi-
dad del Cauca, Colombia, por la
El Hombre y la Mquina No. 34 Enero-Junio de 2010

Ricardo Bentez Luis Alberto Lenis Jonathan Paz
colaboracin econmica para la
ejecucin de este proyecto.
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