CROMATOGRAFA

CROMATOGRAFA INICA

INTRODUCCIN

Para evaluar las caractersticas de las sustancias se deben utilizar diferentes

tcnicas, las cuales han ido evolucionando con el transcurrir de los aos. Una
de las ms usadas es la cromatografa. Se observa con frecuencia en el
entorno con sus mltiples variantes ya sea en un aspecto natural o artificial.

La cromatografa es mtodo que nos va a permitir no solo la separacin de

sustancias por los diferentes componentes de una mezcla, sino tambin su
identificacin y cuantificacin. Contando con la fase estacionaria que retrasa el
paso de los componentes de la muestra a travs de este sistema que presenta
diferentes velocidades y tiempo especfico para pasar a travs del sistema.

Se puede clasificar para una mayor comprensin segn el fluido usado para
dicha prueba en cromatografa de lquidos, cromatografa de gases y
cromatografa de fluidos supercrticos.

En la cromatografa de intercambio inico que deriva de la cromatografa de

lquidos, permite la separacin de iones y molculas, determina cantidades
especficas, y puede ser usada en cualquier tipo de molcula como son los
aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, entre
otros, esto hace posible que se tenga un control sobre las determinadas
pruebas.

La cromatografa inica actualmente es ms rpida y eficaz, lo que la hace ms

atractiva desde el punto de vista analtico. En este informe trataremos la
cromatografa como punto global orientndonos a la cromotografa inica
como punto principal.

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CROMATOGRAFA INICA

A. CROMATOGRAFA

Definicin:

El trmino cromatografa es el nombre general para el amplio rango de

procesos de separacin fsico-qumico en los que los componentes a ser
separados son distribuidos entre una fase estacionaria y una fase mvil.

La fase estacionaria retiene el analito.

La fase mvil disuelve y transporta el analito.

Tanto FASE MVIL como FASE ESTACIONARIA son INICAS.

B. CLASIFICACIN DE LA CROMATOGRAFA

Existen diferentes criterios de clasificacin de la cromatografa, como por

ejemplo:

1. Por la naturaleza de sus fases: Fase mvil fase estacionaria.

1.1. Cromatografa lquido - lquido.

1.2. Cromatografa gas - lquido.

1.3. Cromatografa lquido - slido.

1.4. Cromatografa gas - slido.

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CROMATOGRAFA INICA

2. Atendiendo al proceso qumico-fsico que va a protagonizar el

proceso de separacin:

2.1. Cromatografa de Adsorcin.

2.2. Cromatografa de Reparto.

2.3. Cromatografa de Intercambio inico.

2.4. Cromatografa de Exclusin.

Y el criterio que separa a la cromatografa en dos grandes grupos y que

tomaremos de referencia en esta oportunidad es:

3. Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase

estacionaria:

a) Cromatografa plana: La fase estacionaria se sita sobre una placa

plana o sobre un papel.

Cromatografa en papel

Cromatografa en capa fina (TLC)

b) Cromatografa en columna: La fase estacionaria se sita dentro de

una columna, y segn el fluido empleado en la fase mvil se distingue
en:

Cromatografa de gases (GC)

Cromatografa de lquidos (LC)

Cromatografa de fluidos supercrticos.

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CROMATOGRAFA INICA

3. a. CROMATOGRAFA PLANA

La fase estacionaria se coloca en un soporte plano. En la cromatografa plana

el flujo de fase mvil se consigue por capilaridad o por capilaridad y gravedad.
Solo pueden emplearse lquidos como fases mviles. Existen dos tipos:

3. a.1. Cromatografa en papel: La fase estacionaria est constituida por el

agua retenida en la celulosa, pero actualmente ya existen papeles cambiadores
de iones.

3. a.2. Cromatografa en capa fina (TLC): La fase estacionaria es un slido

absorbente finamente dividido o un lquido inmovilizado sobre un slido
colocado sobre una placa plana.

3. b. CROMATOGRAFA EN COLUMNA

Todas las cromatografas denominadas en columna se caracterizan por tener

una fase estacionaria que se encuentra dentro de una columna de vidrio de 5 a
30 mm de dimetro por la que se hace pasar una fase mvil lquida o gaseosa
que estar en permanente movimiento. Segn la afinidad de las molculas por
la fase mvil o la estacionaria, stas se separaran.

Despus de cada cromatografa se puede obtener informacin del

cromatograma tanto cualitativa (para identificar los distintos compuestos de la
mezcla) como cuantitativa (para poder obtener la cantidad y composicin de las
sustancias separadas).

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CROMATOGRAFA INICA

Las fases estacionarias pueden ser de materiales muy distintos, existen

derivados de dextranos (sefadex), derivados de agarosa, poliacrilamida,
esferas de vidrio, slice, etc.

3. b.1. Cromatografa en lquidos (fase mvil liquida)

3. b.1.1. Cromatografa de exclusin

Su fase mvil es lquida y la fase estacionaria es un material poroso, que

retiene a las molculas en funcin de su tamao. En ocasiones se denomina
tambin cromatografa de filtracin sobre geles o de permeabilidad (GPC).
3. b.1.2 Cromatografa de intercambio inico
El slido retiene a los solutos gracias a atracciones electrostticas. La fase
estacionaria solida lleva en la superficie cargas electrostticas fijas, que
retienen contraiones mviles que pueden intercambiarse por iones de la fase
mvil.

3. b.1.3. Cromatografa de absorcin

La fase estacionaria solida retiene a los solutos por un doble efecto de
adsorcin fsica y qumica. Las interacciones implicadas son el tipo de fuerzas
de Van Der Waals.
3. b.1.4. Cromatografa de reparto
La fase estacionaria es un lquido inmovilizados sobre un material inerte solido
que solo acta de soporte.
3. b.1.5. Cromatografa de afinidad o de fases enlazadas
La fase estacionaria es generalmente un polmero de tipo inmovilizado sobre
un slido inerte por enlaces covalentes.
En los dos ltimos casos la separacin se debe a equilibrios de distribucin de
los solutos entre las fases mvil y estacionaria controlados por la diferente
solubilidad de los mismos en las distintas fases.

3. b.2. Cromatografa de gases (fase mvil gaseosa)

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CROMATOGRAFA INICA

3. b.2.1. Cromatografa de absorcin o cromatografa gas - solido

La fase estacionaria es un slido finamente dividido, que retiene a los solutos
por adsorcin.

3. b.2.2. Cromatografa de particin o reparto

La fase estacionaria es un lquido retenido por impregnacin o por enlace sobre
un slido inerte. Se basa en equilibrios de distribucin.

3. b.3. Cromatografa de fluidos supercrticos (la fase mvil es un fluido

supercrtico)
Un fluido supercrtico es un fluido calentado a T ambiente y P superiores a las
crticas. Posee algunas caractersticas propias de un gas y algunas propias de
un lquido. La fase estacionaria puede ser liquida o slida.

C. CROMATOGRAFA INICA

La cromatografa inica es una tcnica basada en la separacin de sustancias

por su diferente migracin en una columna de intercambio inico o en una
lmina impregnada con un intercambiador inico.

El principio bsico de la cromatografa de intercambio inico es que las

molculas cargadas se adhieran a los intercambiadores de forma reversible de
modo que dichas molculas pueden ser unidas o desunidas cambiando el
ambiente inico.

Los iones de las muestras son desplazados de la columna con una

solucin de eluyente.
Se establece una competencia entre los iones de la muestra y los del
eluyente por reaccionar con los grupos funcionales del intercambiador
inico utilizando condiciones que originan una unin fuerte y estable.
Se eluye de la columna de tampones de diferentes pH o diferente fuerza
inica, compitiendo los componentes del tampn con el material, por los
sitios de unin.

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CROMATOGRAFA INICA

La habilidad del in de la muestra de competir con el in del eluyente

depende de la naturaleza del intercambiador y de cada in particular de
la muestra.

FASE ESTACIONARIA

Composicin de la fase ESTACIONARIA:

Intercambiador inico por lo general es un polmero que tiene grupos cargados

unidos.

- Sustrato/resina: Poliestireno/divinilbenzeno, Polimetacrilato, Polialcohol,

Hidroxietilmetacrilato (HEMA), Silicato.
- Partculas esfricas dimetros 2-10m
- Los ms usuales:
Intercambiadores inicos de superficie funcionalizada
Intercambiadores inicos peliculares
- Grupos activos

INTERCAMBIADORES ANINICOS: Son portadores de grupos con cargas

positivas que unen aniones de forma reversible. Si el grupo cargado es
positivo, es un intercambiador de aniones. Los intercambiadores dbilmente
bsicos ms corrientes son los grupos aminos alifticos o aromticos.

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CROMATOGRAFA INICA

INTERCAMBIADOR CATINICO: Los intercambiadores catinicos son

portadores de grupos con carga negativa que unen cationes de modo
reversible. Un grupo tpico que se utiliza en los intercambiadores de cationes es
el grupo sulfnico, SO-3. Si se une un H+ al grupo, se dice que el
intercambiador se encuentra en forma cida y puede, por ejemplo, intercambiar
un H+ por un Na+ o dos H+ por un Ca+2. El grupo cido sulfnico es un
intercambiador de cationes fuertemente cido. Otros grupos de utilizacin
corriente son el carbonilo e hidroxilo fenlico, dos intercambiadores catinicos
dbilmente cidos.

Capacidad de un intercambiador inico:

La capacidad de intercambio, Q, es el
N de lugares disponibles para
intercambio inico. Se suele dar normalmente por gramo de material de relleno
seco, en microequivalentes o micromoles por gramo (ueq/g umol/g).

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CROMATOGRAFA INICA

FASE MVIL

- Mantiene ionizados los grupos activos de la fase estacionaria

- Disuelve y transporta la muestra
- Controla la retencin de la muestra
- Regula el pH

ANIONES:

NaOH
NaHCO3
Na2CO3

CATIONES:

HNO3
cido metanosulfnico
cido tartrico

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CROMATOGRAFA INICA

- Efecto de un modificador orgnico:

Disminuye la retencin de la materia orgnica
Modifica la SELECTIVIDAD
Metanol, acetonitrilo, THF, isopropanol, acetona, etc.

- Fuerza inica de la fase mvil: Un aumento en la concentracin se

traduce normalmente en una separacin ms rpida, pero tambin en una
conductividad de fondo ms alta.

DETECCIN

Modos de deteccin

- Detector de conductividad
- Detector amperomtrico
- Detector UV/VIS (ptico)
- Tcnicas combinadas: IC/MS y IC-ICP/MS

La separacin de la cromatografa de Intercambio Inico depende de la

absorcin reversible de molculas de soluto con carga hacia grupos
inmovilizados en la superficie, los cuales poseen carga opuesta.
La mayora de los experimentos de intercambio inico involucran cuatro etapas
principales:

Equilibracin
Aplicacin de la muestra y Lavado
Elucin
Regeneracin

1. La primera etapa es la Equilibracin de la Fase Estacionaria a las

condiciones iniciales deseadas. Cuando se alcanza el equilibrio, todos los
grupos cargados de la fase estacionaria estarn asociados con contraiones
intercambiables, como cloro o sodio.

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2. La segunda etapa es la Aplicacin de la Muestra y Lavado.

El objetivo de esta etapa es formar enlaces con las molculas deseadas y lavar
todo el material que no se haya unido. El buffer de la muestra debe tener el
mismo pH y fuerza inica que el buffer de la solucin inicialcon el fin de enlazar
todas las protenas de carga apropiada.

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3. En la tercera etapa, Elucin, las biomolculas se liberan del

intercambiador inico mediante un cambio en la composicin del buffer.
Comnmente, esto se realiza incrementando la fuerza inica de la solucin, la
concentracin del cloruro de sodio o de alguna otra sal simple, con el fin de
desorber las protenas absorbidas. Las protenas se desorben de acuerdo al
nmero de grupos cargados en su superficie.

4. La etapa final, Regeneracin, remueve todas las molculas que an se

encuentren unidas a la superficie. Esto asegura que la capacidad total de la
fase estacionaria se encuentre disponible en la siguiente corrida experimental.
D. APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA INICA

La tcnica de cromatografa inica puede ser utilizado en diferentes campos,

como:

- Anlisis de agua de consumo.

- Aguas minerales.

- Bebidas.

- Productos crnicos.

- Productos vegetales.

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CROMATOGRAFA INICA

- Alimentacin infantil.

En todos estos casos, se analiza la presencia de:

a) Aniones inorgnicos y orgnicos: Fluoruros, cloruros, nitritos, bromuros,

nitratos, fosfatos, sulfatos, bromatos, cloritos, cloratos; cidos actico, ctrico,
tartrico, lctico, srbico, benzoico, etc.

b) Azcares y polialcoholes: Monosacridos, disacridos, oligosacridos y

polisacridos.

c) Cationes: Sodio, amonio, potasio, calcio, magnesio, etc.

Por ejemplo, una investigacin realizada para estimar la cantidad de nutrientes

en aguas del rio Daule en Ecuador (Jimnez, 2013), utiliza la metodologa de la
cromatografa inica para cuantificar los aniones presentes en el agua, como
son: cloruro (Cl-), nitrito (NO2-), nitrato (NO3-), fosfato (PO4-3) y sulfato (SO4-2).

Aquella investigacin fue validada por Excel de Microsoft, verificndose la

validez de los resultados obtenidos.

E. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
CROMATOGRAFA INICA DIFERENCIACIN
o VENTAJAS
Alta capacidad
Alta resolucin
Paso concentrador (permite sembrar un gran volumen para luego eluirlo en un
menor volumen)

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CROMATOGRAFA INICA

Con una misma columna se puede utilizar a diferentes pH y obtener diversos

perfiles de elucin
o DESVENTAJAS
Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser aplicadas a este tipo de
cromatografa

CROMATOGRAFA INICA SIN SUPRESIN

o CROMATOGRAFA ANINICA SIN SUPRESIN QUMICA
Es la medida de diferencia entre la conductividad del ion de la muestra y el
ion del eluyente.
Conductividad de fondo alta
Amplia gama de eluyentes a elegir
Se trabaja con sistemas MONO-COLUMNA
Utiliza intercambiadores inicos de baja capacidad
Se utiliza para cationes, cidos orgnicos, hidratos de carbono y
aplicaciones especiales de aniones:
Anlisis sencillos de aniones
Anlisis de aniones en matrices muy difciles
Anlisis de aniones de cidos dbiles(cianuros, silicatos, boratos,
sulfatos, etc)

o CROMATOGRAFA CATINICA SIN SUPRESIN QUMICA

Se usa como eluyente iones grandes
Conductividad equivalente, Conductividad
Fondos de conductividad moderada
Sensibilidad y ruido aceptables
Medidas de concentracin altas
Algunos cidos carboxlicos aliftico, de mayor conductividad
Equivalente (oxlico, ctrico): deteccin UV
Rango lineal reducido

CROMATOGRAFA INICA CON SUPRESIN

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CROMATOGRAFA INICA

CROMATOGRAFA ANINICA CON SUPRESIN QUMICA

Baja conductividad de fondo
Mejora los lmites de deteccin para la mayora de especies aninicas
Se utiliza para aniones orgnicos e inorgnicos
Se reduce la conductividad del eluyente en una reaccin POST- COLUMNA
La conductividad del eluyente es reducida
Se aumenta la seal del analito.

CROMATOGRAFA INICA SIN CROMATOGRAFA INICA

SUPRESIN
Conductividad de fondo alta
Baja sensibilidad para aniones
Alta sensibilidad para cationes
Amplio rango de linealidad
CON SUPRESIN
Baja conductividad de fondo
Alta sensibilidad para
aniones
Sensibilidad media para

Amplia gama de eluyentes cationes

Poca robustez para cationes
Rango de linealidad
reducido
Los eluyentes deben
proporcionar H2O

CROMATOGRAFA DE CROMATOGRAFA DE
INTERCAMBIO ANINICO INTERCAMBIO CATINICO

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CROMATOGRAFA INICA

Empleado en la purificacin de Son portadores de grupos con

protenas carga negativa que unen
Obtiene medios con alta pureza y cationes de modo reversible
altas recuperaciones.
Son portadores de grupos con
cargas positivas que se unen a
aniones de forma reversible.

Se muestra un estudio donde se evalu la tcnica de cromatografa inica para

fomentar su uso en la investigacin y estudios de posgrado en ciencias del
agua en el cual se analizaron muestras de agua natural(manantial y lluvia ) con
tcnicas convencionales (turbidimetra, volumetra y espectrometra de
absorcin atmica ) y HPLC y se encontr que la cromatografa inica genera
menos de la mitad del volumen de desechos con relacin a las tcnicas
convencionales, desechos que son menos txicos y que estn en
concentraciones de mg/L. Tambin, los costos se disminuyen 3.5 veces al
utilizar HPLC, los tiempos promedio se redujeron de 3 das a 4 horas, y los
errores experimentales fueron menores. Los resultados encontrados
permitieron afirmar que la cromatografa inica es una tcnica analtica
cualitativa y cuantitativa, rpida, econmica, sensible y confiable y que puede
ser realizada por estudiantes entrenados, no requiriendo de larga
especializacin.( Trujillo E and cols., 2015)

BIBLIOGRAFA

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 CROMATOGRAFA
CROMATOGRAFA INICA

Utilizacin de la cromatografa inica en el anlisis de muestras de agua

de drenaje y de solucin de suelo , Mara Elena Fernndez Boy ,Ao
1992

Jimnez, D. (2013). Estimacin de la concentracin de nutrientes en

aguas superficiales del ro Daule y validacin del mtodo de
cuantificacin de aniones en agua por cromatografa inica (tesis de
postgrado). Escuela Superior Politcnica del Litoral, Guayaquil, Ecuador.
Disponible en: laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-
qumicos/cromatografa-inica

Trujillo E, Fonseca E, Garca M.A y Martinez Vernica (2015) Mxico,

Evaluacin de la Cromatografa Inica para Fomentar su uso en la
Investigacin y Estudios de Postgrado en Ciencias del Agua [en lnea].
Disponible en: www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0718-
50062009000100003

CROMATOGRAFA INICA FUNDAMENTOS DE LA TCNICA [En

lnea]. Serves tcnics dinvestigaci.
Disponible en: ssyf.ua.es/va/formacion/documentos/cursos-
programados/2014/tecnicas-espectroscopicas/fonaments-de-la-
tecnica.pdf [Consulta: 19 de agosto 2017].

PURIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS. Cromatografa de

intercambio inico. [En lnea].
Disponible en: www.cultek.com/aplicaciones.asp?
p=Aplicacion_AN_Purificacion&opc=tecnicas&idap=35 [Consulta: 19 de
agosto 2017].

Romero Garca Aida Susana (Semestre 2/2002). CROMATOGRAFA

Curso de Mtodos [En lnea]. Instituto de Biotecnologa, UNAM
Disponible en:
www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cromatografia.pdf [2017, 19 de
agosto].

17
 CROMATOGRAFA
CROMATOGRAFA INICA

Imagination at work (Productor) y General Electric Healthcare

Biosciences (Autor). (2012). The principle of Ion Exchange
Chromatography [Video].

Alvarez,C., Diaz,G., Hollman,L., Macusso, R. ,Cromatografa de

Intercambio Inico [En lnea].
Disponible en: http://ufq.unq.edu.ar/Docencia-
Virtual/BQblog/Cromatografia%20de%20intercambio%20ionico.pdf
[2017, 19 de agosto].

Revista mexicana de ingieneria qumica. Biotecnologa. Tcnicas

cromatogrficas y su aplicacin a estudios de cambios
conformacionales, estabilidad y replegamiento de protenas. K. Mayolo-
Deloisa, L.M. Martnez y M. Rito-Palomares.
Disponible en: www.scielo.org.mx/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1665-27382012000300006

PDF: Tcnicas cromatografas. Clasificacin de los mtodos

cromatogrficos.
Disponible en : www4.ujaen.es/~mjayora/docencia_archivos/Quimica
%20analitica%20ambiental/Tema6.pdf

Tcnicas bioqumicas: Cromatografa de intercambio inico.

Introduccin. Cromatografa plana y en columna. Por Valeria Paz
Fuentes Conapiado.
Disponible en : es.scribd.com/doc/33726236/Informe-Cromatografia-de-
Intercambio-Ionico

PDF: Tipos de cromatografa. Criterios de clasificacin cromatografa

en columna.
Disponible en : blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-
CROMATOGRAF%C3%8DA.pdf

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