Marco teorico

Pseudomonas aeruginosa

Este patgeno oportunista de individuos immunocomprometidos, P. aeruginosa infecta los

pulmones y las vas respiratorias, las vas urinarias, los tejidos, (heridas), y tambin causa
otras sepsis (infecciones generalizadas en el organismo). Pseudomonas puede causar neumonas a
grupos,lo que en ocasiones precisa ayuda mecnica para superar dichas neumonas, siendo uno de
los microorganismos ms frecuentes aislados en muchos estudios

https://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_aeruginosa

Diplococos

En Microbiologa:
Los diplococos son un conjunto de bacterias que se caracterizan por ser cocos asociados formando
parejas. Entre los diplococos patgenos ms caractersticos encontramos a:
Streptococcus pneumoniae: Neumococo o diplococo Gram positivo.
Neisseria gonorrhoeae: Diplococo Gram negativo.
Moraxella catarrhalis: Diplococo Gram negativo.
Neisseria meningitidis.

*http://equipodelaboratorioclinico.blogspot.pe/2012/12/diplococos_4.html

Levaduras

La levadura Saccharomyces cerevisiae es un hongo ascomiceto unicelular. Los hongos son

organismos eucariticos (sus clulas tienen una organizacin interna en orgnulos membranosos)
quimiohetertrofos. A continuacin vamos a explicar el concepto de quimiohetertrofo y a
describir los principales grupos de hongos.

Los organismos necesitan carbono y energa para poder crecer. En la naturaleza las fuentes de
energa pueden ser qumicas (energa presente en los enlaces de compuestos qumicos) o lumnica
(energa de la luz que se transforma en energa qumica). Por otra parte, las reaccines de xido-
reduccin que tienen lugar en los seres vivos requieren donadores de electrones que pueden ser
orgnicos o inorgnicos. Por ltimo, el carbono puede encontrarse de dos formas, como carbono
orgnico y como carbono inorgnico (CO2). La combinacin de estas posibilidades da lugar a las
diferentes categoras de microorganismos en funcin de su nutricin:

*http://www.unavarra.es/genmic/micind-2-1.htm
Bacilos

La palabra bacilo (plural bacilos) se usa para describir cualquier bacteria con forma de barra o vara,
y pueden encontrarse en muchos grupos taxonmicos diferentes de bacterias. Sin embargo el
nombre Bacillus, se refiere a un gnero especfico de bacteria. El otro nombre Bacilli, hace
referencia a una clase de bacterias que incluyen dos rdenes, uno de los cuales contiene al
gnero Bacillus.Los bacilos son bacterias que se encuentran en diferentes ambientes y solo se
pueden observar con un microscopio.Los bacilos se suelen dividir en:
Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana en la pared celular porque carecen de capa
de| lipopolisacrido.
Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacrido
(peptidoglicano).
Aunque muchos bacilos son patgenos para el ser humano, algunos no hacen dao, pues son los
encargados de producir algunos productos lcteos como el yogurt (lactobacilos).Al igual que los
cocos los bacilos se agrupan de diferentes formas tales como cocobacilos, diplobacilos y
estreptobacilos.

*http://bipesbiporus.blogspot.pe/p/bacilos.html

Estretobacilos

La palabra bacilo (plural bacilos) se usa para describir cualquier bacteria con forma de barra o vara,
y pueden encontrarse en muchos grupos taxonmicos diferentes de bacterias. Sin embargo el
nombre Bacillus, se refiere a un gnero especfico de bacteria. El otro nombre Bacilli, hace
referencia a una clase de bacterias que incluyen dos rdenes, uno de los cuales contiene al
gnero Bacillus.
Los bacilos son bacterias que se encuentran en diferentes ambientes y solo se pueden observar
con un microscopio.
Los bacilos se suelen dividir en:
Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana en la pared celular porque carecen de capa
de| lipopolisacrido.
Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacrido
(peptidoglicano).
Aunque muchos bacilos son patgenos para el ser humano, algunos no hacen dao, pues son los
encargados de producir algunos productos lcteos como el yogurt (lactobacilos).

*http://bipesbiporus.blogspot.pe/2012/02/bacilos.html
Estafilococo

Bacteria gram-positiva del gnero Staphylococcus. Son organismos saprfitos de la epidermis y

mucosas de los hombres y de otros vertebrados homeotermos, pero en ciertas condiciones poden
actuar como patgenos. S. aureus es la especie implicada con ms frecuencia en procesos
infecciosos y que puede atacar gravemente los tejidos seos, cartilaginosos y conjuntivos, despus
de haber penetrado en el organismo a travs de una herida. Durante las infecciones liberan una
sustancia txica, las estafilotoxinas*, que incrementa su virulencia.

*http://www.doctissimo.com/es/salud/diccionario-medico/estafilococo

Estreptococos
El estreptococo es un trmino que se refiere a un conjunto de bacterias del gnero Streptococcus.
Entre ellas se encuentran, en particular, los enterococos y los neumococos. Algunas de estas
bacterias estn presentes de forma natural en el cuerpo humano; por ejemplo, los enterococos en
el tubo digestivo. Los estreptococos son responsables de numerosas infecciones que incluyen las
siguientes enfermedades: amigdalitis bacteriana, infecciones de la piel como imptigo o erisipela,
infecciones respiratorias como la neumona, la meningitis o ciertas infecciones generalizadas. Los
estreptococos son generalmente sensibles a los antibiticos, los ms utilizados son las penicilinas.

*http://salud.ccm.net/faq/8402-estreptococo-definicion

MEDIOS DE CULTIVO

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el

crecimiento de los microorganismos es el CultivoPara que las bacterias crezcan adecuadamente en
un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado
de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante. En los diferentes medios de cultivo se
encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre
completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos

*http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
MEDIO COMPONENTES CARACTERISTICAS USO VISUALIZACION DE
PRINCIPALES COLONIAS
SOLIDOS
Agar nutritivo Caldo nutritivo + No es diferencial Medio rico para
Agar. Diferentes el cultivo de
versiones con microorganismos
distintos en general,
componentes crecen una gran
(peptona, triptona- mayora, excepto
soja, infusin de algunos muy
cerebro y corazn, exigentes
agar Brucella, agar
Columbia, etc.)
Agar saburo Peptona + no es diferencial Funcionan como
Dextrosa medio de
(carbohidrato) + enriquecimiento
Agar-agar + para hongos y
Agua destilada como medio
selectivo para los
mismos
Agar TSA Digestin No es diferencial, Medio rico para
enzimtica de soja si no se le aade el cultivo de
y casena. sangre microorganismos
en general. Se
usa como base
para agar sangre.
Crecen una gran
mayora, e
incluso algunos
exigentes, como
Brucella,
Corynebactrium,
Listeria
Agar sangre Agar base (BHI, Diferencial, Aislamiento de la Distingue tres tipos de
Columbia, TSA, permite ver gran mayora de hemlisis: -hemlisis
Brucella) + 5% distintos tipos de microorganismos, o hemlisis total -
sangre de oveja hemlisis incluidos algunos hemlisis o hemlisis
desfibrinada muy exigentes. parcial -hemlisis o
No permite el no hemlisis
crecimiento de
Neisseria y
Haemophilus
Agar sangre para Agar base (p.e.., Diferencial, Medio Hemolisis
anaerobicos Columbia) + 5% hemlisis enriquecido,
sangre de oveja + permite el
extracto de crecimiento de
levadura + hemina una gran mayora
+ vitamina K de anaerobios
Medio de Kligler Lactosa:glucosa Medio rico y Identificacin Pico rojo/fondo
(Tubo en pico de 10:1 Rojo fenol diferencial, presuntiva de amarillo: fermentan
flauta) como indicador permite ver 4 gneros de glucosa y no produce
Tiosulfato sdico Fe caractersticas de enterobacterias sulfuro (Providencia,
para detectar la las Shigella, Serratia,
formacin de enterobacterias: algunas especies de
sulfuro fermentacin de la Citrobacter) Pico rojo/
glucosa, fondo rojo y
fermentacin de la precipitado negro:
lactosa, fermenta glucosa y
produccin de produce sulfuro
sulfuro y (Salmonella, Proteus)
formacin de Pico amarillo/fondo
gases. amarillo: fermenta
glucosa y lactosa y no
produce sulfuro (E.
coli, Klebsiella,
Enterobacter). Puede
haber formacin de
gases (se levanta el
agar). Pico amarillo,
fondo amarillo y
precipitado negro:
fermenta glucosa y
lactosa y produce
freundii sulfuro
(Citrobater)
Caldos de
eriquecimineto
Caldo nutritivo Extracto de carne Para
con NaCl. Se puede microorganismos
suplementar con no exigentes
extracto de
levadura, peptonas,
glucosa, etc.
Caldo lactosado El extracto de carne pH 6.9 +-0.2 Es un medio rico
y la peptona, son la en nutrientes,y
fuente de carbono no contiene
y nitrgeno, inhibidores del
mientras que la crecimiento
lactosa es el bacteriano.
hidrato de carbono.
Caldo peptona Caldo con peptona pH 8,4 Enriquecimiento
 complementada de especies de
Vibrio, antes de
subcultivar en
medios ms
selectivos
Medios selectivos
Agar de MacConkey Inhibidores: cristal Selectivo y Aislamiento de Las enterobacterias
violeta y sales diferencial bacterias gram fermentadoras de
biliares. Lactosa negativas lactosa (E. coli,
como agente (enterobacterias). Enterobacter,
diferencial. Rojo El colorante Klebsiella) se ven
neutro como cristal violeta rosa/rojo/violeta. E.
indicador. inhiben las gram coli puede presentar
positivas. Las um halo rosa
sales biliares alrededor de ls
inhiben las gram colonias, debido a la
positivas y precipitacin de las
algunas gram sales biliares a pH muy
negativas (no las cido. Las no
enterobacterias). fermentadoras de
lactosa (Salmonella,
Shigella,Providencia,
Proteus) se ven
transparentes.

*http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-cultivo.pdf

Mtodos de coloracin en la microbiologa

La tincin es un proceso por el cual las molculas de un colorante se absorben a una superficie. El
uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de los microorganismos y poder realizar
la observacin en microscopio ptico
Los colorantes ms usados son: azul de metileno, cristal violeta, safranina, estos son catinicos y se
combinan fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como los cidos
nucleicos y los polisacridos cidos.
Tincin de Gram
1) Las clulas son fijadas por medio del calor sobre un portaobjetos, se tien primero con una
solucin de cristal violeta y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este punto
las clulas Gram positivas y Gram negativas, estn teidas de azul/violeta.
2) El portaobjetos se cubre con una solucin de yodo-yoduro potsico. El KI hace soluble el I2 en
agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. En este
punto las clulas se mantienen iguales.
3) Se inicia con la decoloracin usando una solucin de Alcohol-acetona, sustancias en las que
es soluble el complejo I2-Cristal violeta. Algunos microorganismos no se decoloran. La diferencia
esencial entre los dos tipos de clulas es la resistencia que presentan ante la decoloracin.
Despus de la decoloracin las clulas Gram positivas son azul\violeta, y las Gram negativas son
incoloras.
4) Para poner de manifiesto las clulas Gram Negativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es de color rojo, como la safranina.
Tincin cido-alcohol resistencia
1) Se coloca sobre el portaobjetos una mezcla de fucsia-fenol, en la que la fucsia hace de
colorante rosa y el fenol de mordiente. Las clulas se tien de rosa, tanto las cido-alcohol-
sensibles como las resistentes.
2) Se usa un decolorante orgnico que hace que las bacterias cido-alcohol sensibles se
decoloren mientras que las acido-alcohol resistentes permanecen rosas.
3) Se utiliza un colorante de contraste, como el azul de metileno.
Tincin de Esporas
1) Sobre el portaobjetos con la preparacin se coloca verde malaquita que tie las clulas de
verde.
2) Se lava con agua destilada con lo que las clulas quedan incoloras y las esporas verdes.
3) Se usa safranina para obtener bacterias de color rojo/rosa mientras que las endoesporas
continan verdes.

Observacin (in vivo)

Mtodo de la gota pendiente.

Este procedimiento es la forma ms sencilla de observacin de organismos vivos, nos proporciona
informacin sobre la morfologa, tamao, color y movilidad de las bacterias. Sin embargo, debido a
la falta de contraste con el entorno es una prctica que se utiliza nicamente para la observacin
del movimiento.
Material necesario
Cultivos bacterianos de Escherichia coli y Pseudomonas sp.en medios de cultivo lquido (caldo
triptona soja), vaso lavador, portaobjetos excavado, cubreobjetos, asa de siembra, pipeta Pasteur,
aceite de inmersin.
Procedimiento
Tomar una gota de un cultivo lquido reciente (24 horas) usando un asa de siembra o una pipeta
Pasteur estril.
Colocar en el centro de un cubreobjetos y aadir cuatro pequeas gotas de aceite en los cuatro
extremos.
Colocar el portaobjetos excavado sobre el cubreobjetos, cuidando que la gota quede situada en el
centro de la depresin.
Dar la vuelta al portaobjetos.
Colocar una gota de aceite de inmersin y observar con objetivo de inmersin (100x).