MINICURSO: BIOLOGIA MOLECULAR PROF ANTNIO SRGIO

EXTRAO DE PROTENAS SALIVA / SANGUE

- Coletar saliva em uma placa de Petri.
- Em microtubo, adicionar 100ul de saliva.
- Adicionar 400ul da soluo de extrao de protenas.
- Incubar por 2 horas em temperatura ambiente.
- Centrifugar 10000rpm por 30min.
- Retirar o sobrenadante (+-400ul) e colocar em outro tubo.
- Seguir com a dosagem do material sobrenadante.

DOSAGEM DE PROTENAS - MTODO DE BRADFORD

REAGENTE DE BRADFORD (100 mg de azul de Coomassie G-250, dissolvido
em 50 mL de etanol 100%; 100 mL de cido fosfrico 85%, gua miliQ qsp 1000
ml)
Curva de calibrao
Soluo de 2000ug/ml de BSA
- Identificar os tubos com a concentrao.
- Adicionar 1ml da soluo de BSA no microtubo com 1ml de gua.
- Homogeneizar e retirar 1ml colocando no prximo microtubo.
- Fazer a mesma diluio para os prximos tubos.
- Mediar a absorbncia em 595nm.
Diluio seriada de BSA (Bovine Serum Albumin)

Quantidade em ug

1000 500 250 125 62,5

- Plotar os dados no excel.

- Inserir grfico dos dados.
- Pedir a linha de tendncia com a equao da reta e o valor de R. (OBS:
quanto mais prximo de 1, melhor a qualidade dos pontos da curva de
calibrao).
- Dosagem das amostras
- Na cubeta, adicionar 990ul do reagente de Bradford.
- Adicionar 10ul de amostra no reagente.
- Medir a Absorbncia (y) em 595nm.
- Substituir o valor de y na equao e calcular o x (concentrao).
EXTRAO DE DNA DE MORANGO
Os morangos que consumimos hoje so resultado de cruzamentos de espcies
diferentes que ocorriam naturalmente na Europa (Frana e Rssia) e nas
Amricas (Chile e Estados Unidos). Prestam-se muito bem para a extrao de
DNA porque so fceis de serem macerados e quando maduros produzem
pectinases e celulases, que so respectivamente as enzimas que degradam os
reforos celulares de pectina e a celulose. Alm disso, os morangos atuais so
octaplides, ou seja, possuem 8 genomas!

MATERIAL NECESSRIO:
Morangos maduros
Saco plstico resistente
Tubo de ensaio
Filtro de papel
Detergente domstico
Sal
lcool gelado (colocado no congelador por 1 noite)
Basto de vidro
gua morna (70 o 75 o C)

PROCEDIMENTO
Colocar 2 a 3 morangos em um saco plstico, umas 5 gotas de detergente, uma
pitada de sal de cozinha e um pouco de gua morna. Macerar tudo e filtrar.
Colocar sobre o filtrado o mesmo volume de lcool gelado, com cuidado para
que forme uma fase sobre o filtrado.
Aguardar um pouco e observar o DNA saindo do filtrado e passando para a fase
do lcool.
Com o auxlio do basto de vidro, fazendo-se movimentos giratrios, pode
pescar os filamentos que so as molculas de DNA.