IMPLICACIONES CLNICAS DE LA INVESTIGACIN BSICA

SOBRE PRIONES, PROTEASOMAS Y VACAS LOCAS

Alfred L. Goldberg, Ph. D.
N Engl J Med 357 (2007): 1150-1152
Traducido por: Dr. Aurelio Mendoza Medelln

1
Todas las clulas tienen la capacidad
de degradar selectivamente las pro-
tenas intracelulares mal plegadas, las
cuales, si se acumularan, podran
interferir con las funciones normales y
podran ser txicas. Tales protenas
pueden aparecer por efecto de muta-
ciones, errores en la expresin gnica,
falla en el plegamiento correcto,
desnaturalizacin espontnea o por
dao post-sinttico (por ejemplo, por
radicales libres). Es incierta la fre-
cuencia con que ocurren dichos even-
tos en las clulas, debido principal-
mente a que la va proteasoma-
ubiquitina rpidamente degrada las
protenas aberrantes, incluyendo las
que causan varias enfermedades
hereditarias, como es el caso de la
fibrosis cstica y varias hemoglobino-
patas.1
Esta va tambin protege contra las
enfermedades neurodegenerativas.1,2
Las caractersticas de la esclerosis
lateral amiotrfica, la enfermedad de
Parkinson, la demencia con cuerpos
de Lewy, la enfermedad de
Huntington y la enfermedad de
Alzheimer, son distintas pero todas
tienen en comn la presencia de
protenas anormales en inclusiones
intracelulares que generalmente se
hallan asociadas con la ubiquitina y
los proteasomas.2 Al parecer, estas
enfermedades resultan de la
acumulacin de especies protenicas
txicas, aunque existe evidencia
creciente de que las inclusiones ami-
loides correlacionan con las enferme-
dades sin ser la causa inmediata de
stas2, 3 y que la patologa neuronal se
produce por microagregados solubles
ms pequeos de la protena aberran-
te.
No se conocen los mecanismos a
travs de los cuales estas protenas
tipo amiloide interfieren con las
funciones normales, promoviendo
eventualmente la apoptosis. Una hip-
tesis frecuentemente propuesta expli-
ca que la va ubiquitina-proteasoma
normalmente elimina estas protenas
txicas mal conformadas, las cuales
2
gradualmente se acumulan y even-
tualmente, en especial en personas de
ms edad, superan la capacidad de
dicho sistema proteoltico e interfieren
con su funcionamiento. El incremento
de protenas mal plegadas causa
finalmente falla de los mecanismos
proteolticos de las neuronas, nece-
sarios para el funcionamiento normal
de las clulas y su sobrevivencia.2 No
existe evidencia directa de que las
protenas anormales txicas en las
enfermedades antes mencionadas
puedan inhibir el funcionamiento de
los proteasomas.
Sin embargo, recientemente Kristian-
sen et al.3 presentaron evidencias
fuertes de que los agregados solubles
de protenas txicas pueden causar
enfermedad prinica inhibiendo espe-
cficamente la funcin del proteasoma
26S.
Las enfermedades prinicas son un
grupo de enfermedades neurodegene-
rativas fatales transmisibles, asocia-
das con encefalopata espongiforme,
incluyendo patologas humanas como
la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob,
el sndrome de Gerstmann-Straussler-
Sheinker y el kuru; en ovejas, el
escrapie; y en vacas, la encefalopata
espongiforme bovina (o enfermedad
de las vacas locas).4 En Gran Bretaa
han muerto ms de 150 personas de
una variante de la enfermedad de
Creutzfeldt-Jakob adquirida a travs
de la ingestin de carne que contena
priones. Durante mucho tiempo estas
enfermedades han representado un
misterio biolgico, debido a que se
mostr que el agente transmisible no
contena cidos nucleicos, pero los
trascendentales estudios de Stanley
Prusiner y Charles Weissmann esta-
blecieron que tales enfermedades son
causadas por una forma txica de la
protena prinica. Esta protena es
capaz de entrar a las clulas e inducir
un rearreglo conformacional en la
protena prinica normal, soluble y
monomrica (PrPc), convirtindola en
una especie txica y transmisible
(PrPSc).4 En esta conformacin pato-
gnica el prin es bsicamente inso-
luble, resistente a proteasas y deter-
gentes, con mayor proporcin de
estructura laminar responsable de
que se forme la protena amiloide,
formando agregados ms grandes que
con la especie normal. Este cambio
conformacional y la resultante acumu-
lacin de PrPSc causa en ltima
instancia prdida de las neuronas,
gliosis y apariencia espongiforme. Los
ratones que no expresan la protena
normal no son susceptibles a la
enfermedad.3, 4
Una laguna mayor en nuestro
entendimiento de la enfermedad es
cmo la conversin de PrPc a PrPSc
eventualmente mata las neuronas.
Para clarificar el mecanismo de la
neurotoxicidad, Kristiansen et al.
probaron si la PrPSc interfiere con la
funcin del proteasoma, mediante
abordajes in vivo e in vitro. En la va
ubiquitina-proteasoma las protenas
son etiquetadas para su degradacin
mediante la unin covalente de una
cadena de molculas de ubiquitina
con lo cual el complejo proteasoma
26S rpidamente las hidroliza.
Cuando los sustratos son etiquetados
con la cadena de ubiquitina, se unen
al componente regulador 19S del
proteasoma, que desensambla la
cadena y recicla las molculas de
ubiquitina. Entonces, mediante un
proceso multi-etapas dependiente de
ATP que apenas empieza a entender-
se, las ATPasas de la partcula 19S
desenrollan el sustrato y lo translocan
a travs de un canal de acceso al
proteasoma 20S para ser degradado
(Fig. 1).5 En el interior de esta
partcula cilndrica hueca la protena
es degradada a pptidos pequeos
que luego se liberan del proteasoma
para ser rpidamente degradadas a
aminocidos por peptidasas citosli-
cas.
Kristiansen et al. mostraron que
neuronas y clulas de neuroblastoma
infectadas con priones presentan
actividad proteasmica reducida para
sustratos estndar. El proteasoma
3
20S contiene en su cmara central
seis sitios proteolticos: dos de ellos
hidrolizan a las protenas preferente-
mente en enlaces situados inmediata-
mente despus de aminocidos hidro-
fbicos; dos actan en enlaces ubica-
dos despus de aminocidos bsicos y
dos despus de aminocidos cidos.1,
2
Utilizando sustratos peptdicos
especficos para cada sitio, Kristiansen
et al. mostraron que los tres tipos de
actividad se redujeron en neuronas
infectadas por priones. Ms an,
demostraron en neuronas en cultivo
infectadas que haba PrPSc en el
citosol y que dichas clulas tenan una
capacidad disminuida para degradar
una protena fluorescente transfectada
que es un sustrato de la va
ubiquitina-proteasoma. Adems, al
eliminar los priones de estas clulas
se restauraban las tasas normales de
degradacin.
Infectando con priones ratones
transgnicos que expresan la protena
fluorescente, Kristiansen et al.
demostraron que la protena PrPSc
induca defectos similares en la
capacidad del cerebro para degradar
la protena. En el citosol de las
neuronas infectadas se detectaron
acmulos de material ubiquitinado
que recuerdan los que se encuentran
en varias enfermedades neurodegene-
rativas que inician en la edad adulta,
y en clulas tratadas con inhibidores
farmacolgicos del proteasoma.3
Aunque la disminucin en la capaci-
dad degradativa es consistente con la
prdida de actividad proteasmica,
podra tambin deberse a defectos en
la ubiquitinacin o en otras etapas de
la va. Sin embargo, los autores
obtuvieron otros datos de soporte
utilizando proteasomas 26S purifica-
dos y PrPSc obtenida de cerebros de
ratones infectados, as como PrP
recombinante de ratn plegada en
una estructura de hlice semejante
a la PrPc nativa, y una especie con
predominio de lamina que imita las
propiedades de la PrPSc. Se encontr
una clara reduccin en la actividad de
los proteasomas purificados (as como
en los de las neuronas) solamente con
las formas agregadas de PrPSc. Se
demostr que dicha inhibicin result
de la asociacin estequiomtrica de la
especie oligomrica con los proteaso-
mas.
Aunque ahora est claro que la PrPSc
citoslica puede interferir con la
actividad de peptidasa del proteasoma
y que las neuronas infectadas quedan
defectuosas en la degradacin de
protenas, no existe prueba de que
este sea el nico mecanismo de
toxicidad, ni siquiera que sea el
mecanismo crtico que lleva a la
prdida neuronal en las enfermedades
prinicas. La prdida de la funcin
proteasmica afecta muchos procesos
celulares fundamentales y puede
inducir apoptosis. Adems de servir
como sistema de control de calidad,
esta va es crtica para la regulacin
de las redes de sealizacin y vas
metablicas, alcanzando niveles de
selectividad muy elevados en el ser
humano debido a la presencia de
cientos de ligasas de ubiquitina
diferentes que participan en la
remocin de diferentes protenas.1 No
sorprende que en modelos celulares
de todas las enfermedades neurode-
generativas el tratamiento con inhibi-
dores del proteasoma promueva la
patognesis y la muerte neuronal. Los
sitios proteolticos del proteasoma
20S constituyen el blanco del
medicamento anticncer bortezomib
(Velcade), que se utiliza ampliamente
en el tratamiento para el mieloma
mltiple un cncer que parece
depender particularmente de los
proteasomas para sobrevivir y para
degradar las inmunoglobulinas mal
plegadas. Una importante caracters-
tica de la selectividad de dicho
medicamento es que no entra al
sistema nervioso, donde probable-
mente acelerara el inicio de la
enfermedad neurodegenerativa.
Tambin queda sin aclarar con
exactitud cmo es que los agregados
pequeos de PrPSc inhiben la degrada-
4
cin de pptidos por el proteasoma.
La decisin de qu protenas son
translocadas al interior de la partcula
para su degradacin depende del
anillo de ATPasas en el componente
regulador 19S, que probablemente es
el sitio al que se unen los oligmeros
de PrPSc (Fig. 1). Normalmente las
protenas celulares destinadas a ser
degradadas se unen a estas ATPasas,
las cuales las desenrollan antes de
translocarlas al interior de la partcula
20S. Sin embargo, la excepcional
estabilidad de la PrPSc hace improba-
ble que estas estructuras puedan
desensamblarse y los microagregados
de PrPSc probablemente son demasia-
do grandes para atravesar el anillo de
ATPasas y el an ms estrecho canal
de entrada a la partcula 20S. De esta
manera, puede ser que se comporten
como un tapn pegajoso que interfie-
re la entrada de otros sustratos a la
partcula 20S. Este simple mecanismo
est ahora en condiciones de ser
probado.
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Cell 2005; 20: 687-98
 Apertura del acceso Desenrrollamiento
a 20S Translocacin
Degradacin
Protena Ubiquitina
ubiquitinada reciclada

Proteasoma 26S

Sitios
proteo-
Unin
lticos
del
Unin de ATP sustrato

Protena prinica
txica PrPSc

Proteasoma
26S inactivo

Figura 1. La va ubiquitina-proteasoma y la protena prinica txica.

La degradacin de protenas por el proteasoma 26S involucra mltiples etapas dependientes de ATP, 5 incluyendo
la apertura del canal de entrada para los sustratos hacia la partcula 20S, la unin del sustrato ubiquitinado,
desensamble de la cadena de ubiquitina y desenrrollamiento y translocacin de la protena a travs del canal
abierto, por el anillo de ATPasas. La unin de oligmeros de la protena prinica txica (PrPSc) a estas ATPasas
puede explicar las observaciones recientes de Kristiansen et al.3 de que en clulas infectadas con PrPSc se inhibe
la degradacin de protenas y pptidos por los proteasomas, acumulndose las protenas ubiquitinadas. ATP
significa adenosina trifosfato, ADP adenosina bifosfato y Pi fosfato inorgnico.