MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE MEXICO FACULTAD DE MEDICINA MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS AUTOR M.C. Ricardo Lara Gardujio COAUTORES M. en C. Wenceslao Fajardo Rojo M.C, Isabel Manco Toro Colaboradoras: Mayra Esther Durn Bernat Ma. Esther Chacén Lépez 2013MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina INDICE ‘iTuLo PREFACIO. DEDICATORIA are NORMAS DE LA EVALUACION PARA LAS PRACTICAS, DELABORATORIO DE AGENTES BIOLOGICOS. PRACTICA | ____ Reglamento del Laboratorio. PRACTICA 2 ‘Material mds frecuerte wilizado en el Laboratori. PRACTICA 3 -__ Méiodos de Esterilizacién y Desinfecetin PRACTICA 4 Medios de Cultivo de as Agemes Bielégicas PRACTICA Tincién de Gram PRACTICA 6 Flora normal del Organismo Humana PRACTICA 7 Prineipios de Diagnéstico en la Microbiologia Médlea PRACTICA 8 _____ Tincién de Ziehl-Neelsen . PRACTICA 8 Coprocultiv. PRACTICA 10 -__ bfeeto Bactericida del Suero Humano PRACTICA 11 Reacciones Febriles PRACTICA 12 Entamoheba histolytica. PRACTICA 13 Giardia lama PRACTICA 14 | __ Balantidven colt PRACTICA 15 Trichomona vaginalis. PRACTICA 16 Toxoplasma gondll PRACTICA 17 Tripanosona cruzi PRACTICA 18 Plasmodium PRACTICA 19 Leisimania braziliensis PRACTICA 20 Ascaris lumbrieoides PRACTICA 21 Triciuris wichiura. « PRACTICA 22 Enterobius vermicularis PRACTICA 23 Triehnella spiralis PRACTICA 24 Onchocerca volvulus PRACTICA 25 Céstodos ~ Tenia soltum. . BIBLIOGRAFIA . 26 28 3 36 9 40 4a 2 43 “4 45 6 a” 48 0 50 3MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PREFACIO El presente Manual de Agentes biolégicos, no pretende ser un tratado de dicha asignatura, ya que ha sido elaborado con el fin de servir como guia a los alunos que inician su estudio en esta materia y tiende a crear en ellos una conducta que les facilite su desenvolvimiento dentro del laboratorio. Sern tratados en ests obra, temas fundamentales e indispensables para crear en el alumno una idea de conjunto de Io que es el Laboratorio de Agentes Biolégicos, desde el punto de vista médico y que se iré completando a medida que sus estudios sean mas avanzados. Las pricticas estén descritas en una forma elemental, relatando los pasos a seguir, fo que seré analizado por cada alumno bajo las indicaciones del instructor. El procedimiento seguido en cada préctica se adapta a las circunstancias, es decir al medio, al material disponible y a los recursos con que se cuentan, esto puede modificarse conforme a los recursos y a la experiencia personal. ‘No se espere encontrar un estudio completo de los diferentes agentes biolégicos que atacan a los animales y al hombre; por el contratio, ha sido elaborado tomando en ‘cuenta que se llega a este laboratorio previamente documentada sobre los temas que aq précticas como un medio de retroalimentar el contenido tedrico. e van a tratar y que han sido estudiados en la clase tedrica, sirviendo las En las précticas de parasitologia se ha omitido informacién con la finalidad de que el estudiante complete el manual consultendo su libro de texto, revistas, boletines ylo medios audiovisuales como Intemet. ACADEMIA DE AGENTES BIOLOGICOSMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina “DEDICATORIA” El presente manual reine las experiencias del personal docente que a formado parte de la academia, la cual en su inicio tomé el nombre de Microbiologia y Parasitologia, denomindndose actuelmente asignatura de Agentes Biolégicos. Por medio de este manual se les hace un reconocimiento al M. C. Juan Arzate Escartin (QEP.D,) pionero de la cétedra, Q.B.P, Héctor Manuel Lépez Lépez y al M. C. Salvador Lépez Rodriguez, quienes contribuyeron en su oportunidad con los conocimientos necesarios para integrar y mejorar el contenido det manual. LOS INTEGRANTES DE LA ACADEMIA. M. en C. Wenceslao Fajardo Rojo M. C, Ricardo Lara Garduiio M. C. Isabel Manco ToraMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina NORMAS DE EVALUACION PARA LAS PRACTICAS DE LABORATORIO DE AGENTES BIOLOGICOS EI Manual de las practicas de laboratorio se dividen en dos partes: a) BACTERIOLOGIA y b) PARASITOLOGIA Las précticas correspondientes a Bacteriologia, se evaluardn al final de las mismas, con 5a 10 reactivos, obteniendo asf una calificacién de 0 a 10 puntos en cada practica. Las pricticas correspondientes a Parasitologia, se evaluarén en un solo examen, en donde se identificaran los parésitos observados en las précticas anteriores, més 5 a 10 reactivos relacionados con lo mismo; obteniéndose asf una calificacién de 0 a 10 puntos. La identificacién por parasito, corresponde a una préctica, si el alumno no identifica el pardsito, las preguntas relacionadas con el mismo serén incorrectas. La calificacién para cada uno de los exémenes parciales de pricticas, serd en caso de Bacteriologia el promedio de los exémenes que se aplicaron hasta ese momento, y la calificacién del Gltimo parcial sera la que corresponda a las précticas de Parasitologia, para que coincidan con los exmenes parciales de teoria, ACADEMIA DE AGENTES BIOLOGICOSMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 1 REGLAMENTO DEL LABORATORIO El objetivo principal de este Reglamento, es evitar accidentes lamentables al alumno durante el desarrollo de sus précticas, ya que se manejan microorganismos patégenos. Para evitar cualquier riesgo, el alumno deberé observar las siguientes normas: Presentarse a cada una de sus practicas de laboratorio con bata limpia. ‘No debe ingerir ningiin alimento, ni fumar durante su préctica. No colocar sobre la mesa de trabajo: ropa, libros, cuadernos, bolsas, etc., a excepcin de su Manual y sus lépices de colores. 4. Cada equipo serd responsable de su mesa de trabajo: 8. De desinfectarla antes y después de cada prictica con alcohol al 70% b. Asegurarse de que todas las Haves de agua y gas, asf como todos los aparatos eléctricos en su mesa de trabajo estén apagados antes de abandonar el laboratorio. 5. Cada equipo seré responsable del microscopic o microscopios que se les asignen. a. Antes de guardar el microscopio, asegurarse que las lentes estén limpias de accite de inmersién. 6. Fsterilizar el asa de alambre antes y después de usarse. 7. Eyitar llevarse objetos a la boca (como lépices, dedos, etc.), durante su estancia en el Laboratorio, 8. Si por accidente se derrama un cultivo de mictoorganismos, notifique a su profesor inmediatamente. 9. Si sufre usted algin percance (las quemaduras suelen ser bastante comunes) notifiquese a su profesor 10. Los cultivos para incubarse se meterdn en la incubadora y los desechables el profesor le indicaré que hacer con ellos. 11. Al hervir un recipiente con agar para derretirlo, asegurarse de que el tapén esté un poco flojo; de otra manera el recipiente puede estallar. 12. Lave sus manos con agua y jabén al terminar cada préctica de laboratorio. METODO. 1. Los alumnos formarin sus equipos, de acuerdo a las indicaciones de! maestro. 2, Los alumnos explicardn la importancia, del porqué deben de cumplirse estrictamente las normas de laboratorio y realizara las actividades que permitan e! cumplimiento de éstas. aMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina a. PRACTICA No 2 MATERIAL MAS FRECUENTE UTILIZADO EN EL LABORATORIO DE MICROBILOGIA E] objetivo principal de esta préctica, es que el alumno de segundo ao de la Carrera de Médico Cirujano, sea capaz de conocer y manejar adecuadamente el material que va a utilizar durante su curso de précticas en el Laboratorio de Microbiologia, Existe gran cantidad de material y aparatos que se utilizan en el laboratorio de Microbiologia para Técnicas de Investigacién 0 Anilisis especiali describirdn fos més necesarios zados, en ésta practica se Asa de alambre.- Es el elemento que més utilizaré el alumno en el curso, de ahi que su uso correcto dependa de la eficacia del trabajo para evitar la contaminacién de los cultivos y del personal que trabaja en el laboratorio. El asa de alambre consiste en un porta-asa de 30 em, de largo por 0.5 em. de grosor y un alambre que generalmente es de 7 em, de largo. Para manejar el asa de alambre, se toma el porta-asa como si fuera un lapiz; y los dos Gltimos dedos sirven para remover los tapones de los tubos de cultivo. El alambre se puede utilizar con su extremo en forma de aro o bien, recta. El primero es para estriar y el segundo para sembrar por puntura. El asa de alambre se debe esterilizar cuando: I.- Esta seca y al medio ambiente: se introduce directamente a la zona caliente de la ama del mechero. 2.- Esté hnimeda por haber tomado muestras Ifquidas con gérmenes: se introduce el alambre en la zona fria de la flama del mechero y después se va subiendo a la zona caliente, para evitar la proyeccién del contenido por el brusco cambio de temperatura y evitar contaminarse el mismo y a su compafiero. Siempre al terminar de usar el asa se esteriliza el alambre para evitar contaminaciones posteriores. Mechero Bunsen.- Es un instrumento itil en el laboratorio que nos sirve para producir un rea estéril de 10 a 20 em. de didmetro alrededor de la flama, campo suficiente para evitar la contaminacién de los cultivos. Consta de las siguientes partes: una base, donde tiene una entrada para el gas, un control de aire y un tubo. Caja de Petri. Esta puede ser de vidrio o de plistico, la diltima es desechable. Constan de dos valvas de apariencia similar excepto que una es ligeramente mayor y cubre a la menor. Un cultivo ordinario en caja de Petri contiene alrededor de 15 ml de medio s6lido; una vez que el medio se ha solidificado en la Caja de Petri ésta ya se puede invertir sin que el medio se escurra, en Ja mayoria de las Cajas de Petri se incuban en aMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina posicidn invertida. Las cajas que més se usan son las de 150 mm. de didmetro por 20 mm, de altura, La caja se maneja toméndola con la mano izquierda y sujetando la valva superior con el dedo indice y pulgar, y la valva inferior descansaindola en los tres iltimos dedos. Las cajas de Petri se pueden esterilizar en forma individual con envoltura de papel de estraza o bien en cajas especiales. 4. Pipetas Bacteriolégicas.- La pipeta bacteriolégica es un utensilio de vidrio que sirve para transferir de un recipiente a otro cantidades especificas del Iiquido. Puesto que ordinariamente se requiere que Ia transferencia se haga bajo condiciones asépticas, las pipetas deberin ser esterilizadas individualmente en papel de estraza 0 pipeteros, permitiendo transferir liquidos de un recipiente a otro sin contaminaci6n bacteriana. e. Tubo de Ensayo.- Los tubos de ensayo deben ser de cristal resistente, de paredes gruesas, sin reborde para facilitar la colocacién del tapén y su almacenamiento; ‘generalmente se emplean de 13 x 100 mm para cultivos £. Porta objetos.- Deben ser de vidrio duro no corrosible, las superficies no deben presentar ralladuras y deberin medir 7.5 x 2.5 em. y 2 mm. de grosor g. Cubre objetos.- Deben ser de vidrio duro no corrosible, las superficies no deben presentar ralladuras, las medidas que més se emplean son 22 x 22 mm. y 24 x 50 mm. h. Matraces.- Su tamaiio y forma es variable, los més utilizados son los Erlenmeyer, sirven para preparar los medios de cultivo y las soluciones. Cémara cuenta colonias Québec.- Sirve para contar las colonias que crecen en las cajas de Petri j. Bafio Maria.- Generalmente se utiliza para licuar los medios de cultivo o bien, para ‘mantenerlos a una temperatura de 42 a 45 grados para ser vaciados en las cajas de Petri, generalmente tiene un redstato y un termémetro, k, Reftigerador.- Se usa en Microbiologia para conservar medios de cultivo sembrados y evitar el crecimiento excesivo de las colonias, para preservar los medios de cultivo en las cajas de Petri, evitar su desecacién, para conservacién de reactivos y conservar muesttas 0 especimenes que no se procesan inmediatamente. |. Microscopio.- £1 mictoscopio es un instrumento de incalculable valor, que requiere de ciertos cuidados para su conservacién. CUIDADOS DEL MICROSCOPIO. Cuando no se utiliza el microscopio, debe guardarse en su caja o bien taparse con una funda, ya sea de franela o de pléstico. 2, Después de utilizar aceite de inmersién se deberd limpiar Ia lente con un papel especial y en caso de que el aceite se haya secado, aplicar cuidadosamente xilol con papel para lentes, teniendo cuicado que no se disuelva el pegamento de la lente,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina 3. Cualquier suciedad o liquide que se derrame sobre el microscopio debe limpiarse de inmediato. Los oculares deben limpiarse después de usar el microscopio. 5. Debe evitarse quitar los oculares para evitar la penetracién de hongos deteriorantes. 6. Si en la platina existe dificultad para su movimiento no forzarla y avisar al instructor. 7. El traslado del microscopio de un lugar a otro se debe hacer toméndolo de la columna. ‘Toda la cristaleria después de utilizarla, se debe lavar con jabén detergente y de inmediato esterilizarse, OBJETIVOS ESPECIFICOS: _L.- Realizaré el dibujo del material que més se utiliza en el laboratorio. 2. Deseribird la fincién del material de laboratorio empleado. MATERIAL 1. ASA DE ALAMBRE 2. MECHERO BUNSEN, 3. CAJAS DE PETRI 4, TUBOS DE ENSAYO 5. PORTA OBJETOS 6. CUBRE OBJETOS 7, MATRACES 8. CAMARA CUENTA COLONIAS DE QUEBEC 9. BANO MARIA. 10, MICROSCOPIO 11. GRADILLAS 12, PISETAS 13, HORNO 14, AUTOCLAVE 15, OLLAS DE PRESION 16. REFRIGERADOR 17. INCUBADORA 18. VARILLA DE TINCION 19, PIPETAS SEROLOGICASMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina 20. VASO DE PRECIPITADO 21. PROBETAS 22, FRASCOS GOTERO (PARA REACTIVOS) 23, PLACAS DE AGLUTINACION 24, HISOPOS 25, ABATELENGUAS 26. LIGADURAMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 3 METODOS DE ESTERILIZACION Y DESINFECCION 1 objeto principal de esta préctica es mostrar al alumno las medidas con que cuenta el laboratorio para la esterilizacién del material. Bsterilizacién.- Es un proceso por medio de! cual se destruyen todos los microorganismos de una preparacién. Estéril.~ Significa exento de vida de cualquier clase. Desinfeccién.- Es un proceso de esterilizecién, mediante el cual se matan los microorganismos de una superficie, al aplicar una substancia quimica, Desinfectante.- Sustancia quimica que se emplea para matar microorganismos sobre superficies, pero toxica cuando se aplica en tejidos. Para lograr la esterilizacién en el laboratorio, se emplean agentes fi quimicos y agentes quimioterépicos cos, agentes “Agentes Fisicos” a) Calor seco.- La aplicacién de calor seco es el método mas simple para esterilizar material, 2 condicién de que éste no sufta daffo por el calor. La llama del mechero Bunsen es un esterilizador efectivo y el mas usado en bacteriologia, se emplea para esterilizar el asa de alambre. Una temperatura de 100 grados centigrados mata a todas las formas bacterianas en 2.6 3 minutos, excepto esporas; para matar éstas se requiere una temperatura de 121 grados centigrados durante 15 minutos. b) Horo de aire caliente.- Se emplea para la esterilizacién de cristalerfa, se debe dejar enfriar el horno Jentamente antes de sacar e! material, pues de otro modo podria romperse. En el horno se tienen temperaturas hasta de 180 grados centigrados, suficientes para matar a todas las bacterias incluyendo a las esporas y se requiere de una a dos horas, ©) Calor Hiimedo.- Generalmente se usa el vapor, tanto porque las bacterias se mueren més rapidamente cuando se encuentran himedas como porque el vapor proporciona un medio de distribuir el calor homogéneamente en todas las direcciones en el recipiente. El vapor debe conservarse a una presién de 1000 g/cm’ sobre la presién atmosférica para obtener una temperatura de 121 grados centigrados durante 15 minutos; con este propésito se utilizan las autoclaves o las ollas de presién. EI calor ya sea seco o htimedo aetiia desnaturalizando las proteinas celulares y fragmentando las membranas celulares. d) Radiaciones.- La luz ultravioleta y las radiaciones ionizantes, matan a la célula por interferir en la replicacién del DNA. “Agentes Quimicos” a) Alcoholes.- Son téxicos para las células a concentraciones relativamente altas. Los aleoholes etilico e isopropilico son de uso comtin a concentraciones de 70 por ciento en solucién acuosa actian como desnaturalizantes de las proteinas,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina b) Fenol.- El fenol y varios compuestos fendlicos son agentes antibacteriales fuertes. A concentraciones de | al 2 por ciento en solucién acuosa desnaturaliza a las protefnas. ©) lones de metales pesados. Las sales de mercurio, plata y cobre desnaturalizan a las proteinas a altas concentraciones, pero son perjudiciales a los tejidos humanos, por lo que se deben utilizar a bajas concentraciones. El mercurio se emplea combinéndolo con compuestos orgénicos, ejemplo e! mercurocrome y el merthiolate. 4) Agentes oxidantes,- Los agentes oxidantes inactivan a las células oxidando grupos oxidrilo libres. Entre los agentes itiles estan: e] perdxido de hidrégeno, yodo, hipocloritos, cloro y compuestos que liberan cloro lentamente (cloruro de calcio). €) Agentes alquilizantes.- Los agentes que se usan mas comtinmente para desinfeccién son el formaldehfdo y el éxido de etileno, éste constituye el desinfectante mas confiable para superficies secas. Se usa para la desinfeccién de instrumentos quirin 1) Detergentes.- Los compuestos que tienen la propiedad de concentrarse en las interfases se les lama agentes tensioactivos o detergentes. Se conocen dos tipos de detergentes: aniénicos y catiénicos. Dentro de los detergentes aniénicos tenemos a los jabones y las sales biliares. “Agentes quimioterdpicos” Para que un compuesto se considere como quimioterépico til, deber ser: bacteriostitico 0 bactericida y ser inocuo para ef huésped. Un ejemplo de quimioterdpico son las penicilinas, las sulfas, etc. OBJETIVOS ESPECIFICOS 1.- Realizard la practica de esterilizacién y desinfeccién. ~ Realizaré los dibujos del material de laboratorio, que proporcione esterilizacién por calor himedo y seco. MATERIAL (ESTERILIZACION) POR EQUIPO ~ Dos tubos con 1.0 ml de una suspension de bacteria Escherichia coli Dos cajas de Petri con medio de cultivo agar nuttitivo Una espatula de vidrio. Un vaso de precipitado de 50 ml con alcohol. Un marcador color negro. waeee MATERIAL (DESINFECCION) POR EQUIPO Dos cajas de Petri con medio de ager nuttitivo, Dos hisopos estétiles. Dos tubos con 2 ml de solucién salina. Una torunda con fenol al 3%. RYERSMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina METODO ESTERILIZACION 1. Solicitar dos tubos que contengan cada uno | ml de suspensién de Escherichia coli de una dilucién de diez a la menos siete de un cultivo de 24:00 hrs. de incubacién. Junio a la zona de esterilidad del mechero, vierta de uno de los tubos 0.2 ml de bacterias con una pipeta de 0.2 ml en el medio de cultivo de una caja de Petri que contiene 15 ml de agar nutritivo solidificado. 3. Con una espatula de vidrio previamente esterilizada al flamearla con alcohol en el mechero, distribuya homogéneamente el Ifquido de los 0.2 ml de bacterias que se vertieron en la superficie del medio de cultivo, al terminar esterilice nuevamente la espatula de vidrio flameandola con alcohol en el mechero. 4. Deje tapada y en reposo la caja (unos tres minutos) para que seque el liquido que contiene las bacterias en el medio de cultivo y posteriormente invierta la caja. Por la parte externa de la caja de Petri en la valva pequefia, con un marcador esterbrook de tinta negra o en un masking tape anote el niimero de grupo, equipo y escriba “CONTROL DE ESTERILIZACION”. 6. El segundo tubo PROBLEMA DE ESTERILIZACION, con suspensién de Escherichia coli se marcara con el nimero de su equipo y se entregard al personal de instructores para que lo ponga en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presién, donde se obtendré una temperatura de 121 grados centigrados. 7. Después del tiempo de estar en el autoclave, el tubo PROBLEMA DE ESTERILIZACION se someterd exactamente a los pasos del 2 al 5, con la siguiente variacion: la caja de Petri se marcaré “PROBLEMA DE ESTERILIZACION”, ademas del ntimeto de su grupo y equipo. METODO DE DESINFECCION 1. Marque dos cajas de Petri, que contengan agar nutritivo, de la siguiente manera: a. Niimero de grupo, equipo CONTROL DE DESINFECCION b. Numero de grupo, equipo PROBLEMA DE DESINFECCION 2. Seleccione un drea del piso de 4 cm? aproximadamente, frételo con un hisopo stéril que previamente se ha humedecido con solucién salina 3. Transfiera el producto del frotis hecho en el piso, a toda la superficie de la caja de Petri que marcé como; CONTROL DE DESINFECCION. 4, Seleccione una segunda Area del piso de 4 cm* aproximadamente, fidtela con algodén que contenga fenol al 5 por ciento, 5. Después de que la superficie del piso se haya secado, frétela con un hisopo previamente humedecido con solucién selina. 6. Transfiera el producto del frotis a toda las superficie de la caja de Petri que mares: PROBLEMA DE DESINFECCION. Las cajas de Petri de ESTERILIZACION y de DESINFECCION, se meten a la incubadora 24 horas a 37 grados centigrados, después de este tiempo se observa si hay crecimiento bacteriano 0 no.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 4 MEDIOS DE CULTIVOS DE LOS AGENTES BIOLOGICOS El objetivo principal de ésta practica, es que el alumno conozea los medios de cultivo que més se emplean en el laboratorio de Microbiologia para cultivar ¢ identificar a los Agentes Biologicos (virus, bacterias, hongos y parésitos). CLASIFICACION GENERAL ‘Naturales, ejemplo: animales de laboratorio Artificiales, ejemplo: agar nutritivo SEGUN SU CONSISTENCIA Sélidos, ejemplo: agar nutritive Semisélidos, ejemplo: medio de MIO Liquidos, ejemplo: medio B.H.I. CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE, CULTIVO ARTIFICIALES SEGUN SU FUNCION Entiquecimiento, ejemplo: caldo tetrationato Selectivo, ejemplo: sulfito de bismuto Diferenciales, ejemplo: F.M.B. agar, Mac Conkey agar. Enriquecido, ejemplo: Gelosa sangre, B.H.1 Los medios de cultivo naturales, representan para los Agentes Biol6gicos los medios més propicios para su crecimiento, Los medios artificiales requieren de elementos nutricios esenciales en concentracién adecuada, necesaria cantidad de sal, adecuado volumen de agua, pH, temperatura y atmésfera para el metabolismo del cultive y estar esterilizado, algunos medios tienen colorantes artificiales, se preparan de acuerdo a formulas establecidas 0 siguiendo las instrucciones anexas que traen los medios deshidratados. Los medios de cultivo artificiales antetiormente mencionados se utilizan para las ias, para los virus se emplean sistemas de células vivas como: cultivo de células, ‘les de laboratorio y embriones de pollo, para los hongos se emplea el medio de Sabouraud y para los pardsitos por ejemplo Trichomona vaginalis se emplean medios s6lidos 6 liquidos libres de células, cultivo de tejidos y embrién de pollo. OBJETIVOS ESPECIFICOS: - Realizaré el dibujo de los medios sélidos y liquidos, indicando el color normal de las mismas. 2.- Describiré la funcién de los medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento, a]MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina MATERIAL POR EQUIPO Tres tubos con cultivo: uno con Escherichia coli, otro con Staphylococcus y el tltimo con Proteus 0 Salmonella, cada uno contiene una concentracién de diez a la menos uno, bacterias por mililitr. 2, Cuatro cajas de Petri con los siguientes medios de cultivo: una con E.M.B. ager, otra con Manitol Agar, Ia siguiente con Sulfito de Bismuto y otra mas con agar nutriente. Se usard un juego de medios de cultivo para cada una de las bacterias (total 3 juegos). 3. Una asa de alambre con aro en la punta. METODO |. marear las cajas con el N° de Grupo, equipo y la bacteria inoculada. 2. Tomar con el aro del asa de alambre previamente esterilizada, una muestra de cada uno de los tres tubos que contienen las bacterias seftaladas en el material Cada muestra tomada se inocula en una sola caja de los medios de cultivo, 4, En cada caja de cultivo se inocula la muestra haciendo tres estrfas, con [a finalidad de separar las bacterias y ver claramente el crecimiento, la primera estria se deposita la muestra que se tomé, la segunda estria se hace esterilizando el asa y sin tomar muestra nuevamente, se extiende la iiltima parte de la primera estria, en un lugar del medio de cultivo en que no se ha depositado muestra, en la tercera esiria se repiten los pasos de la segunda, al terminar esterilice el asa para tomar otra muestra para otro medio de cultivo. Repita el paso anterior en cada uno de los medios de cultivo. ‘Una vez sembrados todos los medios de cultivo se meten a incubar por 24 horas, a 37° C. Los resultados se observan en la siguiente prictica y se compara la eficiencia de la funcién de cada medio de cultivo.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 5 TINCION DE GRAM OBJETIVO PRINCIPAL El objetivo principal de ésta practica, es que el alumno sea capaz de teftir un frotis con la técnica de Gram y distinguir las bacterias Gram positivas de las negativas. INTRODUCCION Gram en 1883, descubrié ¢l més importante método diferencial que actualmente se llama coloracién de Gram. E] buscaba una coloracién que tiflera las bacterias de un color, y el tejido de otro; su primer trabajo fue en el tejido pulmonar de un caso de pneumonia heumocéccica. La particular combinacién de colorantes que ahora se usan, es una modificacién que tiffe las bacterias de un color violeta oscuro y el tejido de un color café, més tarde otros investigadores establecieron el hecho de que ciertas bacterias retenian el colorante inicial y otras tomaban el segundo colorante o colorantes de contraste. Aquellos que retenian el colorante inicial después de decolorarlas se llamaron Gram positives (toman color violeta), y las que toman el colorante de contraste Gram negativas (color rojo). La importancia que tiene el saber si una infeccién es causada por bacterias Gram positivas es para instituir un tratamiento quimioterapéutico. REGLAS DE LA TECNICA DE GRAM a) Todos los cocos son Gram positivos, excepto los del género Neisseria b) Todos los bacilos son Gram negativos, excepto los de la familia Bacillaceas, Género Mycobacterium y Género Corynebacterium. MATERIAL 1. Cultivo de 24 horas de Escherichia coli. 2. Cultivo de Bacillus subtilis 0 Estafilococo 3. Laminillas, asa de alambre y lo necesario para la técnica de Gram. METODO A= PREPARACION DE FROTIS A PARTIR DE SUSPENSION BACTERIANA Al Con ayuda de un una asa bacteriolégica, tome una asada (gota de suspension atrapada en el aro de la punta del asa) de la suspensién bacteriana. A2- Transferirla a un portaobjetos, rotarla en sus superficies formando un rectingulo de | cm. de ancho por 2 em. de largo aproximadamente,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina AB Esterilice su asa y deje que su frotis se seque a la temperatura ambiente, TINCION DE GRAM. BAe B4~ BS. B6- B7- BB- Bo B.10.- BAL. Haga un frotis de cada una de las suspensiones de bacterias y fijelos de acuerdo a las instrucciones anteriores. Ya seco y fijo, coloque el portaobjetos en el frotis sobre una varilla de tincién ctibralo con cristal violeta durante un minuto, después de este tiempo elimine ef colorante enjuagandolo con agua de la llave o una piseta. Sin esperar a que el frotis seque, ciibralo con lugol durante un minuto, después de este tiempo elimine el lugol enjuagando con agua de la Ilave o piseta. Sin esperar a que el frotis seque, tsmelo con su mano entre el dedo pulgar e indice inclinelo ligeramente, Con ayuda de un gotero, adicione sobre el frotis, gota a gota, alechol-acetona; SUSPENDA LA ADICION HASTA QUE USTED OBSERVE QUE LAS GOTAS AL ESCURRIR YA NO ARRASTRAN COLORANTE, Enjuague con agua, y sin esperar a que seque, cubra el frotis con Safranina durante 30 segundos, Elimine fa safranina enjuagando con agua. Deje que el frotis seque a la temperatura ambiente, ya seco, observe con objetivo de inmersién. Interpretacién de las observaciones, B.9.1.~Las bacterias que retienen el Cristal Violeta y aparecen tefiidas de color violeta o azul intenso son denominadas GRAM POSITIVAS. B.9.2.- Las bacterias que no retienen el Cristal Violeta y se tiflen con saffanina aparecen de color rosado y son denominadas GRAM NEGATIVAS. Haga esquemas a color, indique con flechas cuales son las bacterias Gram negativas y cuales son Gram positivas. Conteste el cuestionario que el maestro le dictard para su hoja de evaluacién,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 6 FLORA NORMAL DEL ORGANISMO HUMANO El objetivo principal de ésta practica, es que el alumno observe por los métodos del laboratorio los diferentes microorganismos, que existen en una forma constante y hasta cierto punto normal, en diversas partes de] organismo humano, para que los tenga en cuenta cuando reciba informes del laboratorio sobre andlisis bacteriolégicos de sus pacientes y pueda determinar cual es en realidad el agente patdgeno. INTRODUCCION, Existe en el organismo humano una serie de microorganismos que constituyen lo que se conoce como flora normal, la cual se encuentra en las superficies internas y externas del cuerpo humano; alguno de estos agentes se presenta en forma esporadica y se les denomina flora transitoria, otros estén en forma relativamente permanente consideréndolos como flora residente. La accién que puede ejercer la flora sobre el organismo depende del equilibrio que guarden ambos y pueden ser patégenos en caso de que sea introducida a sangre, érganos y tejidos en los que no deben existir microorganismos. Algunos agentes bacterianos de la flora normal ejercen acciones benéficas para el ‘organismo, como pueden ser: Sintetizar vitamina K, ayudar a la absorcién de alimentos interferir con el establecimiento de gérmenes patégenos. Mieroorganismos de la flora normal que con més frecuencia se afslan en especimenes de pacientes: PIEL. Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus (en pequetia cantidad), Especies de Micrococus Especies no patogenas de Neisseria Estreptococos alfa hemoliticos y no hemoliticos. Especies de Propionibacterium: Especies de Pepiococus. Cantidades pequeftas de otros microorganismos (especies de Candida, especies de Acinetobacter, etc.) NASOFARINGE, 1, Cualquier cantidad de los siguientes: Difteroides, especies patégenas de Neisseira, Estreptococos alfa hemoliticos; Staphylococcus epidermidis, Estreptococos no hhemoliticos, anaerobios (demasiedas especies para enumerarlas; cantidades variables de Bacteroides, cocos anaerobios, Difteroides, especies de Fusobacterium, etc.) Cantidades menores de los siguientes cuando acompafian a los microorganismos enumerados anteriormente: Levaduras, especies de Hemophilus, Neumococes, Staphylococcus aureus, Bacilos gram negativos, Neisseria meninigitidis,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina APARATO GASTROINTESTINAL Y RECTO. |. Varias enterobacterias excepto Salmonella, Shigella, Yersina, Vibrio y especies de Campylobacter. 2, Bacilos Gram negativos no fermentadores de la dextrosa, 3. Enterococos. 4. Estreptococos alfa hemolitico y no hemolitico. 5. Staphylococcus epidermidis 6. Difteroides. 7. Staphylococcus aureus en pequefia cantidad. 8. Levadura en pequefia cantidad, 9, Anaerobios en gran néimero (demasiadas especies pata nombratlos), GENITALES. 1, Cualquier cantidad de las siguientes especies de Corynebacterium, especies de Lactobacillus, Estreptococos alfa hemoliticos y no hemoliticos, especies no patégenas de Neisseria, 2. Los siguientes cuando estén mezclados y no predominan, Estreptococos, Staphylococcus epidermidis, Candida albicans y otras levaduras. Anaerobios (demasiadas especies para enumerarlas); las siguientes pueden ser importantes cuando se presentan en cultivos puros 0 predominan claramente: grupo del Bacteroides fragilis; especies de Clostridium peptostreptoccocus y Peptococcus. MATERIAL, Cajas de Petri con medio de ager 110, nutritivo, agar sangre. Hisopos estériles Tubos con solucién salina Estufa Bacteriolégica (ineubadora) BeRe METODO 8) Humedecer los hisopos con solucién salina b) Tomar con el hisopo himedo una muestra de un lugar determinado del organismo humano. (cabello, piel, nariz, oido, mucosa bucal). ©) Una vez tomada la muestra se procede a sembrar con el hisopo sobre la caja del medio de cultivo que le indique su profesor y en la forma que le seftale, 4) Las cajas se marcaran con el No. de la mesa y el lugar de donde se tomé la muestra. ) Se meterdn a incubar las cajas a 37 °C. en la estufa bacteriolégica por 24 horas. ) En la préxima clase se procede a observar la morfologia de las colonias que crecieron en los medios de cultivo. g) Se escogera una o més colonias para hacer una tincién de Gram y poder observar las caracteristicas morfoldgicas de los microorganisms. h) El alumno realizaré un esquema de la morfologia colonial observada en los medios de cultivo y de los que observe en el frotis.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 7 PRINCIPIOS DE DIAGNOSTICO EN LA MICROBIOLOGIA MEDICA OBJETIVO Al término de la préctica el alumno podré aplicar los principios fundamentales de la microbiologia médica diagnéstica para demostrar el agente etiolégico de las enfermedades infecciosas; INTRODUCCION Los médicos s¢ enfrentan constantemente con proceso infecciosos, por lo que deben saber cuando y como tomar especimenes, qué exémenes de laboratorio solicitar y como interpretar los resultados, para concluir en un buen diagnéstico y realizar un adecuado tratamiento en beneficio de la salud de su paciente. Debido a que ninguna prueba microbiolégica por si sola permite el aislamiento y caracterizacién de todos los patégenos potenciales, Ja informacién clfnica es mucho més importante pare la microbiologia médica diagnéstica que para la mayoria de las pruebas quimicas 0 hematolégicas. Por lo anterior es ‘conveniente tomar en cuenta las siguientes consideraciones: |. REGLAS GENERALES PARA LA TOMA DE MUESTRAS 1. La muestra deberé ser representativa del proceso infeccioso. 2. Hacer una asepsia adecuada de la zona afectada en los casos que ésta sea requerida, 3. Utilizar equipo y/o material estéril, evitando toda accién que pueda contaminar la muestra, ejemplo: exposicién excesiva al medio ambiente o introducir en la muestra material no estérl. 4. Obtener una cantidad suficiente del espécimen para permitir un estudio completo, 5. Rotular o etiquetar la muestra con los datos que permitan identificar y diferenciarla de otros especimenes. 6. La muestra debera tomarse antes de la administracién de antimicrobianos o si se estén aplicando, suspenderlos por un determinado tiempo antes de la toma de muestra, Una vez tomada fa muestra se enviardn inmediatamente al Laboratorio 0 se metera al refrigerador. 8. En caso de enfermedades por virus, clamidias, rickettsias y micoplasmas es conveniente la asesorfa de un laboratorio especializado H- ES IMPORTANTE UNA ESTRECHA COLABORACION ENTRE EL MEDICO Y EL LABORATORIO PARA LOGRAR OPTIMOS RESULTADOS.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina UL EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACION El agente infeccioso y/o la demostracién de la respuesta inmune, depende de una adecuada seleccidn de los métodos de laboratorio, por lo que @ continuacién se mencionan algunos de los més frecuentes utilizados: |. Métodos para demostrar en forma directa el agente infeccioso en los especimenes obtenidos: Ax Mictoscopia y técnica de tincién A.L= Observacin directa: Hidréxido de potasio 10 por ciento, contraste de fase, campo oscuro, Iugol. A.2- Tinciones: Gram, ZiehI-Neelsen, azul-lactofenol de algodén, anticuerpos fluorescentes, argéntica. B.- Cultivo: animales de laboratorio, cultivo de eélulas, cultivo de tejidos, medios artificiales, ete. 2, Métodos para demostrar en forma indirecta el agente etioldgico de una enfermedad infecciosa. A)- Determinacién de antigenos en los especimenes, ejemplo: Antigeno Austr B)~ Determinacién de anticuerpos, ejemplo: reacciones febriles C)~ Pruebas cuténeas, ejemplo: P.P.D. (Intradermorreacciones) IV. EXAMENES DE LABORATORIO A SOLICITAR SEGUN EL TIPO DE ESPECIMEN MUESTRA EXAM, ESPECIFICO EXAM. INESPECIFICO Hemocultivo Sangre Prueba Serologica B.H. Quim, Sanguinea WDRL) Orina eo General de orina Exudado Faringeo Exuclado Nasofaringeo pecimenes de vias Exudado Bronquial 0 respiratorias pulmonar Baciloscopta Coprocultive Coproparasitoseépico ‘Técnicas en fresco Contenido Géstrico Contenido Duodenal Especimenes de vias gastrointestinalesMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina MUESTRA EXAM. ESPECIFICO EXAM. INESPECIFICO: Sy : Exudado uretral Espreimenice vies Exudado vaginal senitourinarias Frotis de lesiones localizadas Especimenes de piel Examen bacteriolégico del (ABSCESOS) pus Cultivo LGR. Frotis directo de sedimento Estudio fisico-quimico Pruebas serolégicas Médula Osea Mielocuttivo EXAMEN A REALIZAR Seleccionar uno o dos de los siguientes exdmenes, con la finalidad de aplicar los principios de microbiologia médica diagnéstica y aislar microorganismos potenciales ppatdgenos; los cuales podrén ser de utilidad para la siguiente practica: A~ EXUDADO FARINGEO B.. PUS DE UN FORUNCULO C.. MUESTRA DE FOSA NASAL D. MUESTRA DE UN PROCESO INFECCIOSO QUE SEA ACCESIBLE MATERIAL, Hisopos estériles, solucién salina estéril, alcohol 70 por ciento, torundas. MEDIOS DE CULTIVO EMB ager, manitol, gelosa sangre y agar nutriente, METODO Humedecer uno 0 dos hisopos en solucién salina segiin el nimero de muestras a tomar. 2. Con el hisopo himedo tomar la muestra de una zona accesible del cuerpo de uno de sus compatieros y que sea representativa de un proceso infeccioso o que puedan existir bacterias patégenas (exudado faringeo), 3. Una vez tomada Ja muestra; cerca de la zona de esterilidad de la flama del mechero, se procede a sembrar con el hisopo sobre cada uno de los medios de cultivo. 4, El hisopo utilizado para la muestra y siembra se depositaré en el lugar que indique el instructor. 5. Incubar a 37° C. por 24 horas las cajas que se han inoculado. 6. Las eajas deberdn ir marcadas con el ntimero de equipo, grupo y el tipo de muestra.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS: Facultad de Medicina 7. En la préxima clase se procederd a observar la morfologia de las colonias que erecieron en los medios de cultivo para determinar en base a las instrucciones del profesor, cudles son posiblemente las bacterias patégenas y realizar Ia tincién de Gram. 8. Elaborar el reporte de laboratorio en base a los resultados.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 8 TINCION DE ZIEHL-NEELSEN (BACILOSCOPIA) OBJETIVO El objetivo principal de esta prictica, es que el alumno sea capaz de tefir y reconocer los bacilos alcohol-dcido resistentes (BAAR) en un frotis (frote) de muestras de pacientes que se sospechan cuadros clinicos de una tuberculosis. INTRODUCCION Las micobacterias se han definido en relacién @ una propiedad tintérea, caracteristica que depende de la riqueza en lipidos en su pared celuler. Son relativamente impermeables a varios colorantes bisicos, cuando retienen el colorante resisten la decoloracién con disolventes orgénicos acidificados, por lo cual se han denominado alcohol 4cido resistentes, las mycobacterias incluyen desde saprofitos inocuos del suelo y agua hasta organismos que son responsables de la tuberculosis como Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis y Mycobacterium atlpicas, hasta Mycobacterium leprae. La técnica de coloracién para bacilos Acido resistentes fue descubierta por Zichl- Neelsen en 1882-1883. Actualmente el médico solicita al laboratorio en un paciente con tos crénica por més de tres meses y algunas de las siguientes manifestaciones: febricula, pérdida de peso, diaforesis, anorexia, adinamia o hemoptisis, una Baciloscopia para detectar en forma temprana una tuberculosis, hacer diagnéstico y/o evolucién del tratamiento antifimico. MATERIAL POR EQUIPO Esputo (“gargajo”) de un paciente que se sospecha clinicamente de tuberculosis Cubre bocas para cada integrante del equipo Guantes de cirujano para cada alumno ‘Tres aplicadores de madera ‘Tres portaobjetos Equipo de colorantes y reactivos para la tincién, carbol-fuscina. Alcohol dcido y azul de imetileno, Torundas con alcohol 8. Recipiente de vidrio o plastico que contenga fenol al 10% AwAURS METODO A Preparacién de un frotis a partir de una expectoracién profunda (“esputo”), sera demostrado por e! personal instructor. le De una a tres muestras de expectoracién en diferentes frascos de vidrio ESTERILES, tipo “gerber” con tapén de rosea. 2- Lamuestra se debera mantener envuelta con papel oscuro y a temperatura ambiente. 3 Antes de maniputar la muestra colocarse cubre bocas y guantes.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina 4 Sin destapar el frasco inviértalo, si la muestra permanece adherida, es dil para continuar con la practica, de lo contrario se descarta por no ser representativa. Quebrar uno de los extremos del aplicador de madera, con la finalidad de formar una astilla 6- _ Destapar en la zona estéril del mechero, un frasco que contenge el esputo. 7- Con el aplicador astillado, seleccionar una zona de la muestra con caracteristica sanguinolenta, purulenta y/o viscosa, y tomar una poreién con la astilla 8- Transferir el material seleccionado a un portaobjeto y extenderlo de tal manera que se forme un recténgulo de 2 cm. x Im. 9.- No cologue el aplicador sobre la mesa, ni en el cesto de basura, coléquelo en un tecipiente con fenol al 10% o en el lugar que indique el instructor. 10.- Deje que seque ef material transferido al portaobjetos, ya seco, fijelo a la flama del mechero. B~ _ Tincidn de Ziehl-Neelsen Coloque el portaobjetos con el frotis preparado en la seccién de lavado de su mesa de trabajo sobre una varilla de tincién. Cubra el portaobjetos y el frotis en su totalidad con carbol-fuscina, Con la ayuda de una pinza tome una torunda impregnada de alcohol y enciéndala, Pase, con movimiento de vaivén, la torunda encendida por debajo del portaabjetos cubierto con carbol-fuscina hasta observar que desprende vapores. Mantenga la emisién de vapores det colorante durante cinco minutos: no permita que el colorante hierva; para evitar eso y mantener fa emisién de vapores, usted puede acercar y retirar Ja torunda, si se le agota encienda otra, no debe secarse la preparacién, si es necesario agregue més colorante. 6- Después de los cinco minutos espere que el portaobjetos con el frotis enftfe, con ayuda de una piseta con agua elimine el colorante. 7- Tome con el dedo pulger e indice el fiotis y adicione alcohol écido hasta que no quede en el portaobjetos ningtin resto de colorante. ‘Be Enjuague con agua y sin esperar que seque el frotis, cfibralo con azul de metileno por espacio de cinco minutos. 9.- _Enjuague con agua, deje que el frotis seque y observe con objetivo de inmersién. 10.- Las bacterias que aparecen teftidas de rojo se denominan Acido alcohol resistentes (BAAR) y las que tifien de azul, écido alcohol sensibies. 11- Para cada frotis (frote) teffido, se observarén 50 campos siguiendo la trayectoria que se anota en el esquema. 12. Anotar los resultados de acuerdo a las siguiente clave: BAAR + Si se observan menos de 4 bacilos en los 50 campos BAAR ++ Si se observan de 4 50 bacilos en todos los campos BAAR ++ Si se observan entre 51 y 500 bacilos en los campos BAAR NEGATIVO No se encontraron bacilos alcohol dcido resistentes en los campos Realice el esquema del frotis y un comentario de su interpretacién Resuelva el cuestionario de evaluacién que le proporcionaré el profesor.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 9 COPROCULTIVO OBJETIVO EL alumno seguiré Ia secuencia de Ja marcha bacteriolégica para el aislamiento identificacién de enterobacterias patogenas para el humano, INTRODUCCION La materia fecal humana contiene una carga elevada de bacterias, aproximadamente 10%,, Esta carga esté compuesta por una mezcla de diferentes especies bacterianas, pudiendo reconocerse dos grandes grupos’ A= BACTERIAS DE LA FLORA NORMAL, en el que se incluyen los siguientes género y especies: 1. Klebsiella * 2. Proteus * 3. Hafitia * 4, Serratia * 5. Enterobacter * 6. Alcaligenes feacalis 7. Peptoestreptococcus 8. Enterococcus 9. Pseudomonas 10, Escherichia coli * “Especies y/o géneros de la Familia ENTEROBACTERIACEA La materia fecal de los humanos sanos, contiene todas o varias de las bacterias anteriores. B- _ BACTERIAS PATOGENAS, en el que se incluyen: a Salmonella * 2- Shigella * 3- Escherichia coli enteropatégena * 4. Escherichia coli toxigénica 5. Campylobacter 6- Yersinia * fe Vibrio *Especies y/o géneros de la Familia ENTEROBACTERIACEAMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina Las bacterias patégenas slo aparecen en la materia fecal de portadores asintomaticos y en personas con signos y/o sintomas elinicos de afeccién en tubo digestivo. Debido a la presencia de gran cantidad de bacterias en la materia fecal humana, se deben seguir en el Laboratorio varios pasos para poder demostrar en ella la presencia de algin paté geno. MATERIAL POR EQUIPO A+ PRIMERA ETAPA (ENRIQUECIMIENTO) 1- Materia fecal obtenida de una persona con signos y/o sintomas clinicos que afecten tubo digestivo y que no hayan recibido tratamiento con antimicrobianos © materia fecal de una persona que manipule alimentos. 2.» Dos Hisopos estériles 3- Un tubo con medio liquido de tetrationato (tubo con liquide de color verde ‘opaco), que permitird selectivamente el crecimiento de bacterias del género SALMONELLA. 4- Un tubo de medio liquido de selenito (tubo con liquide de color rojo o naranja) que seleccionaré a las bacterias del género SHIGELLA. B.-_ SEGUNDA ETAPA (AISLAMIENTO) 1- Asa bacteriolégica 2- — Recipiente con fenol 3- Una caja de Petri con medio sdlido de agar SS (Medio de color rosado) 4- Una caja de Petri con medio sélido de agar Verde Brillante (Medio de color verde) TERCERA ETAPA (IDENTIFICACION) 1. Asa bacteriolégica 2- — Recipiente con fenol 3~ Una caja de Petri con medio sélido de agar SS (Medio de color rosado) 4 - Una caja de Petri con medio s6lido de agar Verde brillante (Medio de color : verde) METODO PRIMERA ETAPA (ENRIQUECIMIENTO) Colectar entre 502 100 g. De materia fecal de la persona seleccionada, en un frasco de vidrio, boca ancha, con tapa de rosca y estéril (tipo “gerber”) 2- Mantener en reffigeracién hasta el momento de su procesamiento. 3 Retirar la muestra del reftigerador, destaparla y manipularla en al zona de esterilidad que da la flama del mechero, 4- Seleccionar a simple vista, una zona en donde haya moco y/o sangre. 5. _Introducir en la zona seleccionada, la punta de algodén de un hisopo estétil y por rotacién impregnarlo con la materia fecal. 6- Sumergir el hisopo impregnado con materia fecal, en el tubo de Caldo ‘Tetrationato.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina 7- _ Repetir los mismos procedimientos para el segundo hisopo e introducir éste en el tubo con Caldo Selenito. 8.-__Incubar ambos tubos con el hisopo dentro, a 37° C. hasta la proxima sesién de laboratorio (de 24 a 96 horas). SEGUNDA ETAPA (AISLAMIENTO) 1 Retire de la incubadora los tubos que contienen los medio liquidos y los hisopos. 2. En la zona de esterilidad que da la flama del mechero, destape los tubos, saque los hisopos y descértelos en un recipiente que contenga fenol 3- Con una asa bacteriolégica, tome una asada del tubo con caldo tetrationato y depositela sobre un costado de la caja de Petri que contiene el agar SS, distribuya por estria cruzada, 4- Con una asa bacteriolégica tome una asada del tubo con caldo selenito y depositela sobre un costado de la caja de Petri que contiene el agar verde brillante, distribuya por estria cruzada. 5. Una vez que se hayan sembrado las cajas de Petri inviértalas y fije la tapa con trozos de masking tape, identifiquelas con ef nimero de su equipo. 6- Incube ambas cajas @ 37° C. durante 24 horas. TERCERA ETAPA (IDENTIFICACION) I~ Seleccione una colonia bacteriana o transliicida de cada uno de los medios de agar. 2- Para cada colonia seleccionada sembrard un conjunto de los siguientes medios, a) TSlo Kligler b) LIA °) MIO d) Caldo de urea 3 Colocar el filamento del asa bacteriolégica en posicién recta y sembrar de la siguiente manera: a).- Medio TSI o Kligler Por estria superficial y picaduraMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina ©) Medio Caldo Urea, por asada b).~ Medio M10, por pieadura : 4 Haga un esquema de cada tubo con el color original. 5- _ Identifique cada tubo con el nimero de su equipo y con el nombre del medio de procedencia. 6- Incube todos los tubos, 18 horas a 37° C. 7- — Identifique las bacterias aisladas de acuerdo al esquema que aparece cn la siguiente hoja. 8.- Las colonias que no puedan ser identificadas porque no se ajusten a ningin esquema de la hoja siguiente, serdn catalogadas como FLORA NORMAL.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina TsI CALDO. KLIGLER LIA Mio UREA | / SALMONELLA fooN SHIGELLA N ESCHERICHIA COLMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 10 EFECTO BACTERICIDA DEL SUERO HUMANO OBJETIVO El alumno manipularé el material y el equipo de laboratorio de Microbiologia para poner de manifiesto uno de los mecanismos inespecificos de defensa del organismo humano en contra de agentes bioldgicos bacterianos. INTRODUCCION En 1890 Behring observé que el sueto de la rata ejercia una influencia destructora notable sobre Bacillus anthracis. Nutal por su parte sefialé que la sangre desfibrinada de diversos animales es bactericida para determinado nimero de gérmenes y que esta propiedad desaparecia después de calentarla a 56° C. durante treinta minutos. En 1893 Buchner demostré que este poder bactericida pertenecfa al suero exento de elementos celulares y que se trataba de un poder citotéxico general. Posteriormente se demostré que esta propiedad se encontraba también presente en el suero humano. La capacidad bactericida del suero se incrementa cuando el hombre o los animales se ponen en contacto previamente con las bacterias, es decir, cuando aquellos reciben un estimulo antigénico por parte de éstos. Actualmente se sabe que tal propiedad bactericida se debe a la presencia en el sucro, de una sustancia denominada Complemento; y que el incremento de la propiedad se debe a la accién del complemento combinada con la accién de los anticuerpos séricos que aparecen después del estimulo antigénico. MATERIAL POR EQUIPO 1. Una jeringa desechable de 5 c.. 2. Torundas con alcoho! 3. Ligadura 4, Cuatro tubos de 13 x 100 estériles 5, Dos cajas de Petri con agar nutritivo 6. Espatula de vidrio 7. 8 9. I Vaso de precipitado de 50 mi con alcohol Una pipeta Pasteur y bulbo de suecién Dos aplicadores de madera 0. Dos pipetas o micropipetas de 0.2 mlMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina METODO A= OBTENCION DE LA MUESTRA DE SUERO 1- Por puncién venosa, en el pliegue del brazo, obtenga 5 cc de sangre de un voluntario del equipo (La persona seleccionada no deberé haber ingerido alimentos o liquidos en un lapso de 4 horas previas a la obtencién de la muestra) 2- Deposite la sangre extraida en un tubo de 13 x 100, mérquelo con el niimero de su equipo, 3 Incube el tubo de sangre a 37° C. durante 30 — 60 minutos para favorecer la formacién de coagulo. 4 Después de la incubacién, con precaucién, desprenda el codgulo de las paredes del tubo con ayuda de un aplicador de madera. 5 Después de desprendido el coigulo, centrifugue el tubo a 2500 RPM. durante 15 minutos, con ello se separard el suero. 6.- Después de la centrifugacién, separe el suero por aspiracién con ayuda de una pipeta Pasteur provista de un bulbo de succién esterl 7 Deposite el suero suecionado en otro tubo de 13 x 100, tépelo con tapén de hule y mérquelo con el nfimero de su equipo. Manténgalo en refrigeracién hasta el desarrollo del experimento, B. DEMOSTRACION DEL EFECTO BACTERICIDA DEL SUERO. 1~ Marque el tubo de 13 x 100 estéril que contiene 0.9 ml de solucién salina + 0.1 ml de bacterias Escheria coli, de una suspensién diez a la menos seis de un cultivo de 24:00 horas (SS + B), con la palabra CONTROL, niimero de grupo y equipo, incubar a 37° C. durante 30 minutos. 2- Marque el tubo de 13 x 100 estéril que contiene 0.9 mi de suero + 0.1 ml de bacterias Escherichia coli, de una suspensién diez a la menos seis de un cultivo de 24:00 horas (S + B), con la palabra PROBLEMA, niimero de grupo y eq) 3 Incubar el tubo PROBLEMA y CONTROL a 37° C. por 30 minutos. 4 Mientras los tubos Problema de todos los equipos se incuban, marque las cajas de Petri, colocando un masking tape en la parte externa de le valva pequefia: a) Una con: CONTROL, niimero de grupo y equipo b) Otra con: PROBLEMA, mimero de grupo y equipo 5 Vierta 0.2 ml de tubo marcado como CONTROL (SS +B) en la caja con medio de cultivo marcada como CONTROL y distribiyalo homogéneamente sobre la superficie del medio con ta varilla de vidrio, previamente esterilizada al flamearla con alcohol, en la llama del mechero. 6- Cubra con la valva grande la caja de medio de cultivo CONTRO que inoculé (sembr6) y déjela reposar de | 2 3 minutos, para posteriormente invertirla con la valve pequefia hacia arriba y déjela en la mesa, 7- Después de sacar de la incubadora el tubo PROBLEMA (S + B), realice los pasos 5 y 6, con el tubo y el medio de cultivo de la caja de Petri, marcados como PROBLEMA, [34]MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina 8- _ Incube las eajas CONTROL y PROBLEMA a 37° C. por 24:00 horas, 9- En Ia siguiente practica, revise el resultado de crecimiento de colonias y podré ‘comparar la diferencia en el CONTROL y PROBLEA al contar el mimero de colonias. 10. Escriba un reporte de los resultados.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No I REACCIONES FEBRILES OBJETIVO El alumno seguira la secuencia del proceso de laboratorio para Ia deteccién de anticuerpos contra Salmonella typhi, Brucella, Rickettsia prowazeki y Rickettsia typhi en una muestra de suero. INTRODUCCION Las Reaceiones Febriles incluyen la: a) Reaccién de Widal b) Reaccidn de Huddelsson c) Reaccién de Weil-Felix Que se aplican respectivamente, para esiablecer el diagnéstico serol6gico de: a) Fiebre Tifoides b) Brucellosis ©) Tifo Exantemético y murino Las mismas constituyen un ejemplo de reaceién antigeno-anticuerpo de aglutinacién. Con estas pruebas de Laboratorio el Médico se auxilia para confirmar su diagnéstico clinico referido a alguna de las enfermedades citadas anteriormente. La mejor manera de aplicar estas reacciones al diagndstico, es realizindolas en dos rmuestras séricas de un mismo paciente, que deben obtenerse con un intervalo minimo de dos semanas. Si el titulo de anticuerpos se incrementa en 4 6 més unidades en la segunda muestra sérica comparada con la primera, se estableceré el diagnéstico de certeza. En las reacciones febriles se emplean los siguientes antigenos. a) Resccién de Widal: —Tifico “O” Tifico “H” b) Reaceién de Huddelsson: Brucella abortus c) Reaccién de Weil-Felix: Proteus OX 19 MATERIAL, As PRUEBA CUALITATIVA I= Una muestra de suero (de 0.5 a 2.0 ml) obtenida de un paciente que esté cursando con un proceso febril o de un voluntario que:MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina 2). En el pasado haya tenido alguna de las enfermedades que se investigan con las teacciones. b).- Su ocupacién se relacione con e! manejo de animales. 2- Una placa excavada para reaccién de aglutinacién. 3. Tres aplicadores de madera. 4- Una pipeta serolégica de 1 ml de capacidad. 5. Losantigenos serén distribuidos por los instructores. B._ PRUEBA CUANTITATIVA (Sélo serd realizada en el caso de que alguna de las Reacciones haya sido positiva en la Prueba Cualitativa) La misma muestra de suero que se utilizé en la Prueba Cuslitativa. Una gradilla Un matraz Erlenmeyer con 20 ml de capacidad. Seis tubos de 13 x 100. Dos pipetas serol6gicas de 1 ml de capacidad. 6- Tres aplicadores de madera. 7 Una placa excavada para aglutinacién. METODO A. PRUEBA CUALITATIVA I= Con ayuda de una pipeta serolégica de I ml coloque cuatro gotas de su suero en cada uno de cuatro diferentes pozos de la placa excavada para aglutinacién. Adiciones a la primera gota de su suero una gota de antigeno tifico “O”, a la segunda una gota del tifico “H”, a la tercer una gota de Brucella abortus y a la cuarta una gota de Proteus OX 19. 3. Para los cuatro pozos, mezcle ambas gotas con un trozo de aplicador de madera, UTILICE UN TROZO NUEVO PARA CADA POZO. 4 Agite por rotacién con su mano, la placa excavada por espacio de diez minutos. S= Los pozos que muestren formacién de grumos serén POSITIVOS; los que permanezcan en suspensin homoggnea serin NEGATIVOS. 6- Si su suero aglutind més de un antigeno, seleccione uno y proceda a la realizacién de la Prueba Cuantitativa. En caso contrario, la préctica termina con la Prueba Cualitativa, B.» PRUEBA CUANTITATIVA 1- Coloque en una gradilla una serie de seis tubos que marearé de Ia siguiente manera: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320. 2- Con ayuda de una pipeta serolégica de 1 ml de capacidad: coloque las cantidades de solucién salina que se le indican a continuacién:MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina TUBO T0120 140 1:80 1160 1320 SOLUCION 0.9 05 05 05 05 05 SALINA _ 3.- Haga diluciones de suero como se muestra en el siguiente esquema: 0.1 mi 0.5 ml 0.5 mt 0.5 mi 0.5 ml OSml 05m suero DESCAR- TAR SOLUCION SALINA>| 0.9 05 05 0s os DILUCION 1:10 ——* 1:20 ——> 1:40 ——* 1:80 ——* 1:160 —*1:320 4- Con ayuda de una pipeta de 1 ml diferente a la anterior, coloque una gota de cada dilucién en un pozo de una placa para aglutinacién, use un pozo para cada dilucién. INICE POR LA DILUCION MAS ALTA. (1:320). S= A cada gota de las diluciones de suero, adicidnele una gota del antigeno que se aglutiné en la Prueba Cualitativa. Mezcle las gotas con un trozo de aplicador de madera y rote la placa por espacio de 10 minutos. 6- La cantidad de anticuerpos sera la dilucién més alta de suero que provoque aglutinacién visible del antigeno.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 12 ENTAMOEBA HISTOLYTICA INTRODUCCION La amiba que es otto nombre que recibe el parésito, usvalmente vive en el intestino del hombre, pero puede encontrarsele extraintestinalmente. Enfermedades; Ami frecuente en nuestro medio. , Disenteria amibiane, Hepatitis amibiana. Es una parasitosis Se le puede observar en forma de: A= — Trofozoito, B- _ Prequiste. C= Quiste (forma infectante). La infeccién se adquiere al ingerir quistes. Los cuales pueden estar presentes en heces, dedos, alimentos, liquidos, moscas, fomites. El hombre es a la vez huésped y fuente de infeccién principal. OBJETIVO Que el alumno observe las distintas formas evolutivas que presenta el pardsito. MATERIAL, Laminillas (Frotis del pardsito) Microscopio. REPORTE DE DATOS Describir y dibujar lo observado en la laminillaMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 13 GIARDIA LAMBLIA INTRODUCCION Es un protozoario piriforme y flagelado, que vive en el duodeno y las primeras porciones del yeyuno, a veces en los conducts biliares y la vesfcula, El humano es e! huésped natural de Giardia lamblia. La transmision es por alimento y agua conteminada, aguas negras, moscas, manipuladores de alimentos, y por las manos llevadas a la boca, OBJETIVO Que el alumno observe la morfologfa de este pardsito en un frotis. MATERIAL Laminilla (frotis del pardsito) Microscopio. REPORTE DE DATOS El alumno describird y dibujara lo observado en Ia laminilla,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 4 BALANTIDIUM COLI INTRODUCCION Es el protozoario intestinal de mayor tamaflo del hombre Tiene forma de bolsa (balatidium-saquito) y es ciliado. El trofozoito vive en la mucosa y submucosa del intestino grueso, fundamentalmente enel ciego yen el ileon terminal. Su ciclo bioldgico es idéntico al de la entamocba histolytica OBJETIVO Observar su morfologia en laminilla fja (frotis). MATERIAL, Frotis. Microscopio. REPORTE DE DATOS Deseribir y dibujar lo observado en el microscopio.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 15 TRICHOMONA VAGINALIS INTRODUCCION Es un parisito flagelado con membrana ondulante. Tiene tres especies: T. vaginalis de Ja vagina, T. hominis en el intestino y T. tenax en la boca. T. vaginalis es el tinico con poder patdgeno aunque puede presentarse diarrea, ante una infeccidn intensa por T. hominis. T. vaginalis es piriforme La infeccién es mas frecuente en personas con deficiente higiene. La transmisién puede hacerse de varis formas, Ia més frecuente es por contacto sexual, también se puede contraer por articulos de higiene contaminados y asientos de excusados. OBJETIVO Observar la morfologia del pardsito. MATERIAL Laminillas fijas. Microscapio. REPORTE DE DATOS Deseribir y dibujar lo observado en la preparacién,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 16 TOXOPLASMA GONDIL INTRODUCCION Es un pardsito intracelular obligado piriforme. En el ciclo natural las ratas y ratones que contienen quistes infectantes, son ingeridos por el gato, el cual funciona como huésped definitivo para la etapa sexual del pardsito, pero también el ganado bovino esté expuesto a ser infectado con el parisito. Por tal motivo la infeccién en el hombre puede deberse: a la ingestién de carne de carnero cruda o mal cocida 0 que contenge quistes de Toxoplasma. La ingestién de material contaminado con heces infectadas de gato. La Toxoplasmosis desarrolla dos entidades clinicas; la congénita y la adquitida, siendo la primera la forma més agresiva. OBJETIVO dentificar la morfologia del par: en laminilla fija (frotis). MATERIAL Laminilla (frotis) Microscopio. REPORTE DE DATOS Deseribir y dibujar lo observado en Ia laminilla.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 17 TRIPANOSONA CRUZI INTRODUCCION Este protozoario es el agente etiolégico de Ia Tripanosomiasis Americana o enfermedad de Chagas. En los frotis se le puede observar en forma de “S” 0 de “U” con un flagelo libre. Esta parasitosis se adquiere al albergarse la Chinche Rediivida (que contiene en su intestino el Tripanosoma), en la piel del hombre, en el momento que extrae sangre defeca, estas heces producen irritacién y con la comezén se le abre camino para su penetracién, La enfermedad de Chagas es frecuente en Sudamérica y América Central incluyendo México. Su frecuencia es mayor en las clases més pobres que viven en cabafias de adobe con tejado de paja, en cuyas paredes se esconden los insectos vectores. OBJETIVO Que el alumno observe en un frotis le forma caracteristica del pardsito. MATERIAL, Laminilla con frotis Microscopio. REPORTE DE DATOS Deseribir y dibujar lo observado en la laminilla.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 18 PLASMODIUM INTRODUCCION Su ciclo asexual (Ezquizogonia), tiene lugar en los glébulos rojos de vertebrados, y el sexual (Esporogonia) en el mosquito (anopheles) especies: PLASMODIUM VIVAX PLASMODIUM MALARIE PLASMODIUM FALCIPARUM PLASMODIUM OVALE La vida de los plasmodios transcurre en dos huéspedes, un vertebrado y un mosquito. El ciclo es: El mosquito adquiere la infeccién al chupar sangre de una persona enferma, luego aquél ya infectado la puede transmitir a una persona sana. Esto puede repetirse en innumerables ocasiones (hhombre-mosquito-hombre, ete.).. OBJETIVO Que el alumno observe las caracteristicas morfolégicas de este parésito en su frotis. MATERIAL, Laminilla fija (frotis) Microscopio. REPORTE DE DATOS Que dibuje y deseriba lo observacio en la muestra en estudio.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 19 LEISHMANIA BRAZILIENSIS INTRODUCCION Otro protozoario que afecta al hombre, la enfermedad que produce recibe varios nombres, Leishmaniasis americana, Leishmaniasis mucocutinea, Espudia, Uta y filcera de los chicleros. El crecimiento de estos pardsitos en medios de cultivo es malo. Es un pequefio protozoario oval de 2 a 5 micras por | a 3 micras Los vectores de esta infeccién son las moscas del género Lutzomya, quienes albergan al parésito en su intestino, y se considera que el protozoario es regurgitado mas que inyectado en Ia piel del hombre. OBJETIVO Identificar la morfologia del pardsito. MATERIAL Laminilla (frotis) Microscopio. REPORTE DE DATOS Describir y dibujar lo observado en Ia laminilla,MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 20 ASCARIS LUMBRICOIDES INTRODUCCION Es un nematodo que en su forma adulta se le puede observar a simple vista, es de color blanco o rosado y llega a medir de 10 a 35 om. de longitud. Los huevecillos son de un aspecto mamelonado, La infeccién inioia al ingerir huevecillos que se albergan en la tierra, al realizar el fecalismo al aire libre, personas parasitadas. En niflos es mas frecuente dado que tienden a comer tierra contaminada, OBJETIVO Observan y dibujar las caracteristicas del parésito en su etapa adulta, MATERIAL, Muestra del pardsito adulto. Microscopio. REPORTE DE DATOS Deseribit y dibujar lo observado en la laminillaMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 2 TRICHURIS TRICHIURA INTRODUCCION El hombre es huésped principal de este nematodo, tiene un aspecto de litigo el parisito adulto, y los huevecillos tienen forma de limén, La infeccién se adquiere al ingerir huevecillos por falta de higiene personal y por fomites. En la trichurasis, por existir pujo y tenesmo rectal, en ocasiones se presenta prolapso rectal, OBJETIVO ‘Observar las caracteristicas morfol6gices del parésito. MATERIAL Laminilla (frotis) Microscopio. REPORTE DE DATOS Deseribir y dibujar lo observado en el frotis.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 22 ENTEROBIUS VERMICULARIS INTRODUCCION La enterobiasis u oxiuriais, es producida por el gusano Enterobius vermicularis, Mega a medir de 2 a 5 mm. Esté incluido también dentro de los nematodas. El hombre es el (inico huésped conocido, su habitat en el ciego y porciones adyacentes del intestino delgado y grueso. Puede emigrar a las regiones perianal y para realizar la oviposicién, Su ciclo es ano- mano-boca, OBJETIVO Observar las caracteristicas morfologices del pardsito, ya sea en laminilla fija o bien en preparacién del pardsito adulto. MATERIAL, Laminilla fija o preparacién del pardsito adulto(trotis) Microscopio (en laminilla fija).. REPORTE DE DATOS Describir y dibujar lo observado en las muestras proporcionadas.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 23 TRICHINELLA SPIRALIS INTRODUCCION Es el agente etiolégico de la triquinosis o triquinelosis, es un nematodo que tiene la forma cilindrica alargada. En su ciclo vital, el mismo animal actie como huésped intermediario y definitive albergando transitoriamente al pardsito adulto y por largos perfodo a la larva. Para que ésta complete su ciclo vital es necesario que otro huésped ingiera carne que contenga larvas enquistadas: EI hombre ingiere larvas infectantes generalmente en carne de cerdo, éstas pasan al intestino delgado, después son absorbidas y pueden pasar a la circulacién y de ahi llegan al imiisculo estriado principalmente donde se enquistan. OBJETIVO Observar las caracteristicas morfolégicas del nematodo. MATERIAL, Laminilla (frotis) Microscopio. REPORTE DE DATOS Deseribir y dibujar lo observado en la laminilla.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 24 ONCHOCERCA VOLVULUS INTRODUCCION Oncocerciasis, oncocercosis. Es un gusano filiforme. EI hombre es el tinico huésped definitive. Los gusanos adultos se encuentran en el tejido subcutineo, las microfitarias ya liberadas se encuentran en nédulos, tejido subcutineo, linféticos y piel. Puede provocar ceguera, Los intermediarios principales son los rodador del género similium y cuando éste esta infeotado y pica, pasan las larvas a través de le picadura del nuevo huésped. OBJETIVO Observar las caracteristicas de este nematodo, MATERIAL, Laminilla fija(frotis) Microscopio. REPORTE DE DATOS Describir y dibujar lo observado en la muestra.MANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina PRACTICA No 25 CESTODOS-TAENIA SOLIUM INTRODUCCION Es la tenia del cerdo, el hombre es el nico huésped definitivo y también es e! huésped del quiste, el pardsito adulto mide de 2 a 4 metros, rara vez mas. Es de color blanco brillante con segmentaciones que corresponde a las proglétides. ‘Su habitat en e] cuerpo humano del verme adulto es la porcién proximal del yeyuno. EI huésped intermediario es el cerdo, que alberga el quiste. Los huevos expulsados por el huesped definitivo son ingeridos en el alimento o el agua por el intermediario susceptible, ‘entre los cuales est ¢l hombre. El embrién escapa de su cubierta y se absorbe en el intestino, de ahi a los vasos sanguineos y es arrasttado a diversos érganos. El cisticerco se [lama Cysticercus cellulosae. OBJETIVO ‘Observar las caracteristicas morfoldgicas del cestodo. MATERIAL Preparaci6n del pardsito en forma adulta o madura. Microscopic. REPORTE DE DATOS, Describir y dibujar lo observado en la laminillaMANUAL DE PRACTICAS DE AGENTES BIOLOGICOS Facultad de Medicina BIBLIOGRAFIA |. Burrows, William, Tratado de microbiologia, editorial SALVAT. 2. Damaso Rivas, uman parasitology, Saunders Company 1920. 3. Davis, B.D. R. Dulbecco, H.N. Eisen., HS Ginsberg y W.B. Wood, Tratado de microbiologia, editorial SALVAT. 4, Francisco Biagi F. Parasitosis en pediatria, Ediciones Médicas del Hospital Infantil de México. 5. Harold W. Brow, Parasitologia clinica, editorial Interamericana. 6. Jawetz, Emest, Joseph, Melnich y Edard A. Adelber., Manual de microbiologia moderna, editorial Manual Moderno. 7. Manuel Martinez Baez MC., Manual de parasitologia médica, editorial Prensa Médica Mexicana.