TRABAJO PRCTICO N 9

COMPARTIMENTOS INTRACELULARES 1

OBJETIVOS

Al finalizar el trabajo prctico se espera que el alumno haya comprendido que los
procesos biomoleculares de la clula ocurren en compartimientos especializados que
se interrelacionan e interconectan directa e indirectamente generando en la clula un
sistema interno de continuidad estructural y funcional.

UNIDAD DE CONOCIMIENTO

TEMARIO
Relaciones topolgicas. Movimiento de protenas entre los distintos compartimentos:
va citoplasmtica y va retculo endoplsmico. Sealizacin del destino de las
protenas. Sntesis de nuevas organelas.
- Compartimiento citoslico: Organizacin. Modificacin covalente y recambio de
protenas en las clulas eucariticas.
- Transporte de macromolculas a travs de las membranas internas: La membrana
nuclear. Los poros nucleares: transporte activo de protenas hacia el ncleo y de
cidos ribonucleicos fuera del mismo. Transporte de protenas hacia los distintos
compartimentos mitocondriales.
- Peroxisomas: Funciones. Origen de los componentes peroxisomales.
- Retculo endoplsmico: Retculo endoplsmico liso y rugoso. Unin de ribosomas al
retculo. Pptidos sealizadores. Procesamiento postraduccional de las protenas
sintetizadas en el retculo rugoso: glicosilacin, formacin de puentes disulfuro.
Funciones del retculo liso.

VOCABULARIO ESPECFICO DEL TEMA

Compartimentacin - dolicol - glicosilacin - lumen - pptido seal - peroxidasas
- protenas chaperonas - proteosomas - regin seal - sntesis de novo -
translocaciones.

BIBLIOGRAFA
Alberts, B. y otros. Biologa molecular de la clula. Editorial Omega. Barcelona, 5ta ed.
(2010)
Alberts, B y otros. Introduccin a la Biologa Celular, Editorial Panamericana 3ra ed
(2011)
De Robertis, E.; Hib, J. y Ponzio, R. Fundamentos de Biologa celular y molecular.
Editorial El Ateneo. 2004.

UNIDAD DE ACCION

Se pretende que el alumno, en su casa, realice la gua de estudio utilizando la

bibliografa seleccionada, y en clase resuelva los ejercicios de aplicacin con ayuda de
los conceptos tericos y la colaboracin del docente.

CUESTIONARIO GUIA DE ESTUDIO

1- a) Cules son los principales compartimientos intracelulares en las clulas

eucariotas?
b) Cul es el significado biolgico de la existencia de compartimientos
celulares?

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c) Cul es la diferencia entre citosol y citoplasma? Describa sntesis,
modificaciones post-traduccionales y degradacin de las protenas citoslicas.
d) Cul es el destino de las protenas sintetizadas en ribosomas libres en el
citosol?

2- a) A qu se denomina sistema de endomembranas? Qu orgnulos

forman parte de este sistema?
b) Explique cmo se interrelacionan los componentes del sistema de
endomembranas.
c) Cul es la relacin del citoesqueleto con la distribucin espacial del sistema
de endomembranas en el citoplasma?
d) A qu espacio es topolgicamente equivalente el interior del Retculo
endoplsmico (RE), del Golgi y de los lisosomas?

3- a) Cmo se define el destino de las protenas sintetizadas en los ribosomas

libres y adheridos al RE rugoso?
b) Defina y diferencie secuencia y regin seal. Describa las caractersticas
particulares de las mismas.

4- Explique el mecanismo de transporte de protenas desde el citosol ncleo.

Se trata de un proceso co o post-traduccional? Se trata de un proceso activo
o pasivo?

5- Cmo se originan las mitocondrias y los peroxisomas? Qu elementos

avalan el origen endosimbitico de estos organoides?

6- Explique el mecanismo de traslocacin de protenas al interior de las

mitocondrias. Se trata de un proceso co o post-traduccional?

7- Cmo se define el destino final de las protenas mitocondriales?

8- Caracterice las enzimas peroxisomales indicando su funcin. Qu funcin

cumple el oxgeno en los procesos que se llevan a cabo en los peroxisomas?

9- Qu son las partculas de reconocimiento de seal (SRP) y los receptores

de SRP? Describa localizacin y mecanismos de accin de cada uno.

10- a) Qu factores determinan la posicin de las protenas en las

membranas?
b) Explique el mecanismo de traslocacin de protenas al interior del RER. Se
trata de un proceso co o post-traduccional?, es un mecanismo endergnico o
exergnico?
c) Cules son y cmo estn determinados los posibles destinos de una
protena cuya sntesis finaliza en el interior del RER?
d) Describa el proceso de glicosilacin de las protenas en el RE indicando la
funcin del dolicol, glicosil transferasas y oligosacrido tranferasas.
e) Qu relacin existe entre la glicosilacin y el plegamiento de las protenas?
Qu ocurre con las protenas que nunca llegan a plegarse correctamente?

11- a) Cules son las funciones del RE liso?

b) Qu es y qu funcin cumple la Citocromo P-450?
c) Qu son los microsomas?, cmo pueden obtenerse y cul es su utilidad
prctica?
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12- a) Explique la localizacin y el proceso de sntesis de los lpidos y de las
protenas que forman las membranas celulares.
En el Trabajo Prctico dedicado a la membrana plasmtica Ud. vio que el
movimiento de flip-flop de los fosfolpidos es poco frecuente. Cmo justifica
entonces, la asimetra observada en tales membranas respecto a los
fosfolpidos?

EJERCICIOS DE APLICACIN

1- Observe el siguiente esquema.

Complete las referencias, escribiendo el nombre de los compartimentos

intracelulares sealados.
Establezca cules de esos compartimentos estn relacionados entre s y
cules no lo estn.

2-. Por ingeniera gentica se disearon una serie de genes. Cada uno de ellos
codifica para una protena con seales de localizacin intracelular
contradictorias. En qu compartimiento esperara encontrar a cada una de las
siguientes combinaciones? Por qu?
a) Seales de importacin a ncleo e importacin a RE
b) Seales de importacin a peroxisomas e importacin a RE
c) Seales de importacin a mitocondria y retencin a RE (considerar que la
secuencia de importacin a RE no est presente)
d) Seales de importacin a ncleo y exportacin de ncleo
3- Lea el siguiente listado de protenas:

fosfofructoquinasa catalasa
actina ARN polimerasa III
ADN polimerasa histonas
ATPasa Na+ - K+ disulfuro isomerasa
aminoacil ARNt sintetasa Citocromo C
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 Indique cules de estas molculas presentan seales de clasificacin y cules
carecen de ellas. Establezca los motivos de estas diferencias.
Qu caractersticas en cuanto al tipo de aminocidos presentarn las seales
de clasificacin en aquellas protenas que las presentan?
Explique que modificaciones sufren estas molculas proteicas desde su
sntesis hasta su localizacin definitiva en la clula.
En el mapa de carreteras que figura a continuacin, indique el camino seguido
por estas protenas, desde su sitio de sntesis hasta su destino final.

Transporte a travs de poros

Transporte transmembrana
Transporte vesicular

4- Por ingeniera gentica se gener una protena de fusin en la cual se

introdujo un pptido seal en una protena que normalmente reside en el
citosol. Se transfect una lnea celular con el cDNA correspondiente. Se
homogeneiz el cultivo y el homogenato se someti a centrifugacin diferencial.
La protena de fusin se localiz en el pellet obtenido luego de centrifugar el
homogenato a 80000 xg durante 1 hora:
a) En que fraccin subcelular se encontr la protena en cuestin
b) De qu naturaleza era el pptido seal fusionado a la protena

5- En el curso de muchas reacciones metablicas que ocurren en las clulas

se generan productos txicos que pueden producir mutaciones gnicas y
alteraciones en las membranas celulares, este ltimo hecho vinculado con
algunos aspectos del proceso de envejecimiento celular.
Entre esos productos se cuentan el perxido de hidrgeno (H 202).
4
Respecto a esta sustancia:
Qu orgnulo/s est/n relacionado/s con su produccin?
De qu forma se degrada este producto txico?
Explique las funciones del perxido de hidrgeno en las clulas hepticas y
renales.

6- Un cultivo de levaduras se repic en tres tubos de ensayo, los cuales a su

vez fueron incubados en presencia de grandes cantidades de metanol para un
tubo, ibuprofeno en un segundo tubo y finalmente glucosa para el tercer tubo.
Cul de estos tres tubos cree Usted que es el tubo control? Espera Ud.
encontrar diferencias significativas respecto al desarrollo de algn orgnulo en
alguno de los tubos de reaccin respecto a dicho control? Justifique su
respuesta.

Metanol

7- Un individuo consume regularmente altas dosis de fenobarbital, una droga

liposoluble perteneciente al grupo de los hipnticos que produce alteraciones
sobre el sistema nervioso central.
Qu orgnulo de las clulas hepticas duplica su superficie?
Por qu se activan los ribosomas de las clulas hepticas?
Si este individuo deja de consumir fenobarbital, qu cambios ocurren en sus
clulas hepticas?
Explique brevemente en que consiste la detoxificacin mediada por el orgnulo
mencionado en el primer inciso.

8- Maria G. es una joven paciente suya que actualmente se encuentra en

tratamiento por tuberculosis. Hace algo ms de dos meses toma las dosis que
usted le recomend de rifampicina, un antibitico y potente inductor de la
citocromo p450 heptica.
Mara se siente paulatinamente mejor de su enfermedad y as se lo hace saber
pero ahora el motivo de su consulta es otro. Ella toma tambin anticonceptivos
orales, mtodo que le haba sido siempre eficaz.
Ahora est muy preocupada, tiene fuertes sospechas de que est embarazada.
Entonces usted le toma una muestra de sangre, la enva al laboratorio y
confirma la sospecha de su paciente.
Qu tipo de metabolizacin le parece que puede tener el anticonceptivo oral
que estaba tomando Mara (teniendo en cuenta que se trata de un compuesto
esteroideo)? Describa brevemente este proceso.
Le parece que hay alguna relacin entre el tratamiento antituberculoso y el
embarazo de Mara? De contestar afirmativamente intente explicar dicha
relacin.
Cmo le parece que podra haberse evitado este inconveniente?

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9- Al sintetizar in vitro molculas de inmunoglobulinas (1) empleando ribosomas
libres y el ARNm que las codifica, se vio que presentaban una secuencia
terminal adicional de unos 20 aminocidos que no apareca en las
inmunoglobulinas naturales. El pptido extra tampoco apareca en las
inmunoglobulinas sintetizadas in vitro por los ribosomas ligados al retculo
endoplsmico rugoso fraccionado a partir de un homogenato. Qu
conclusiones se pueden sacar de estas observaciones?
(1) Las inmunoglobulinas son protenas globulares circulantes, altamente especficas,
sintetizadas por los linfocitos B.

10- Usted es un experimentado cientfico que desea desentraar los

mecanismos de una curiosa enfermedad hereditaria que cursa con retraso
mental, hepatoesplenomegalia (agrandamiento del bazo y el hgado) y muerte
a una corta edad.
En primera instancia estudia el genoma de sus pacientes con lo cual localiza
una mutacin que afecta al gen DPM1 cuya funcin se desconoce an.
Esperanzado e intrigado a la vez decide emprender con su equipo una nueva
etapa experimental.
Mediante ingeniera gentica obtiene ratones que presentan el mismo defecto
gentico que sus pacientes. Selecciona algunos de sus roedores a los cuales
les extirpa el hgado, del que toma muestras que enva para su anlisis
histopatolgico.
El informe del patlogo detalla la presencia de hepatocitos con acmulos
eosinfilos amorfos rodeados por membrana y RER inidentificable con
conservacin del resto del sistema de endomembranas.
Considerando este resultado decide enviar las muestras para la realizacin de
una tcnica especfica que detecta el receptor de LDL (glicoprotena de
membrana) y protenas del citosol mediante inmunofluorescencia.
En el primer caso (deteccin del receptor de LDL) se presenta fluorescencia en
el espacio correspondiente a los acmulos eosinfilos antes nombrados y muy
escasa en la membrana; en el segundo caso (deteccin de protenas de
citosol) el resultado es normal, marcndose homogneamente el citoplasma.
Basndose en estos datos responda:

Qu cree que representan los acmulos eosinfilos presentes en la biopsia

del tejido?
En qu paso del metabolismo de las protenas (sntesis, modificacin post-
traduccional, transporte, destruccin, etc) est el defecto?
Qu organela podra estar involucrada en esta enfermedad?
Por qu las protenas citoslicas no se ven afectadas?
Por qu permanecen en el RER las protenas involucradas?
Por qu no se degradan all?
Usted quiere determinar adems cules son las enzimas defectuosas y para
ello realiza las siguientes mediciones en sus muestras:

Nivel de UDP-GlcNAc.........................Normal
Nivel de GDP-Man..............................Aumentado
Nivel de Dolicol-P...............................Normal
Nivel de Dolicol-P-GlcNAc..................Normal
Nivel de Dolicol-P-Man.......................Bajo
Nivel de Dolicol-P-GlcNAc-Man........Bajo
En qu paso enzimtico se encuentra el defecto?
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Qu consecuencia tiene esto sobre la glicosilacin de las protenas?
Cmo cree que sern los niveles de glicoprotenas en lisosomas, vesculas de
exportacin, protenas de membrana?

EJERCICIOS ADICIONALES

1- Usted se halla abocado a un estudio que emplea cepas de ratones mutantes

deficientes en la enzima catalasa y cepas de ratones control. Como resultado
encuentra que los mutantes presentan un aspecto deteriorado y daos a nivel
del ADN que ha sido extrado de linfocitos de sangre perifrica que el control no
manifest. Los ratones mutantes sin embargo continan viviendo.Qu
explicacin puede brindar sobre este hallazgo?

2- La enzima dihidrofolatoreductasa (DHRF) se localiza normalmente en le

citosol. Una versin modificada genticamente por el agregado de una
secuencia de localizacin mitocondrial es transportada eficientemente hacia la
mitocondria. Sin embargo si la enzima modificada es incubada previamente con
metotrexato, que se une fuertemente a su sitio activo, permanece en el citosol
Por qu supone Ud. que el metotrexato interfiere en la importacin hacia la
mitocondria?. Describa el proceso normal de importacin de una protena a la
matriz mitocondrial.

3- La secuenciacin de una protena de membrana y su gen correspondiente,

demostr que en el ARNm se codifican 12 aminocidos ms que la protena
obtenida al final. Cuando en ensayos in vitro se induce la expresin del ARNm
sin estos 12 aminocidos la protena slo se obtiene del citosol de la clula.
a) Cul es la funcin de estos 12 aminocidos presentes en el ARNm?
b) En que regin u organela de la clula se sintetiza esta protena?
c) Indique un ejemplo de protena de membrana

4- Para analizar la estructura-funcin de una glicoprotena de membrana

plasmtica se la modifica genticamente cambiando las asparaginas de los
sitios de glicosilacin de la protena salvaje por alaninas. Al obtener los lisados
totales de las clulas transfectadas con el gen mutado se constata que la
protena se sintetiza. Sin embargo no se la encuentra en la membrana
plasmtica. En qu compartimento celular esperara encontrar la protena?
Por qu?

5- La mayora de las clulas tienen un retculo endoplsmico liso escaso, pero

es abundante en algunos tipos concretos: clulas musculares estriadas, clulas
estromales ovricas, clulas de Leydig, clulas de la corteza subrarrenal y
hepatocitos
Para cada una de ellas indique a que se debe su abundancia