MANUAL DE BIOTECNOLOGIA REPRODUCTIVA EN

BOVINOS

INTRODUCCION

La Biotecnologa Reproductiva en general, es el conjunto de procedimientos cuyos objetivos bsicos son

el mejoramiento gentico y por consiguiente la produccin y productividad del hato ganadero, el
mejoramiento de la eficiencia reproductiva, la reduccin del intervalo generacional y conservacin de
especies en extincin, mediante la implementacin y aplicacin de Tcnicas de Reproduccin Asistida,
respetando el medio ambiente y el bienestar de los mismos.
Se distingue de las Tcnicas genticas porque no alteran el genoma del animal. Las Tcnicas Genticas
o Transgnicas se ocupan de los genes en particular y no pertenecen a la Biotecnologa Reproductiva,
sin embargo estn estrechamente relacionadas con esta. Es as como es posible la inyeccin de ADN en
proncleos de embriones bovinos producidos previamente mediante fecundacin in vitro. (PALMA)

La ganadera moderna es el resultado del esfuerzo de dos grupos pioneros, el cientfico investigativo,
quien ha desarrollado procesos y tcnicas reproductivas y el comercial, el cual ha adaptado estas
tecnologas a la practica y su aplicabilidad en la industria, hacindolas viables econmicamente.

La incorporacin de nuevos equipos de imagenologa ultrasonografica o Ecografa; de congelacin

automtica, tanto de semen como de embriones; de transporte incubacin y conservacin de clulas
germinales, microscopios de alta definicin y microscopa electrnica, cmaras de flujo laminar;
elaboracin de medios de cultivo y conservacin, han hecho posible que la Biotecnologa Reproductiva
haya avanzado de manera espectacular en los ltimos 20 aos, en especial a partir de los aos 80s.

Los avances logrados en las diferentes investigaciones sobre Biologa Molecular, Fisiologa de los
Factores de Crecimiento, Fisiologa de la Dinmica Folicular, ha permitido una mayor comprensin de la
Fisiologa Reproductiva y un mejor manejo de las Ondas Foliculares durante el ciclo estral, en las
distintas especies.

El aporte de la industria farmacutica en el desarrollo de nuevos productos hormonales, tanto en dosis

como en presentacin, han permitido la agilizacin y masificacin de los protocolos establecidos en estas
tcnicas de Reproduccin Asistida.

En un comienzo la Biotecnologa Reproductiva tuvo un aire de mitificacin, en especial el Trasplante de

Embriones, dada la complejidad de los diferentes procesos que deba efectuarse para su ejecucin e
implementacin a nivel de campo, al igual que los distintos pasos a seguir a nivel de laboratorio. Estos
procedimientos se han hecho ms giles y sencillos, lo cual ha facilitado su masificacin y difusin,
mediante la capacitacin de un gran nmero de profesionales en este campo, en Universidades y
Centrales de de Reproduccin Asistida y una mayor aceptacin por parte de los ganaderos, quienes son
los directamente beneficiados con estas nuevas tcnicas.

El profesional dedicado a la Reproduccin Asistida debe poseer excelentes conocimientos bsicos de

anatoma y fisiologa de los diferentes rganos del tracto reproductivo, e igualmente adquirir las
habilidades necesarias en tcnicas de palpacin, cateterizacin cervical, ecografa, aspiracin folicular,
evaluacin cultivo y conservacin de clulas germinales.

En este Manual de Biotecnologa Reproductiva en Bovinos se tratarn los principales aspectos de las
Tcnicas de Reproduccin Asistida, si bien no con la profundidad cientfica de cada una de ellas, si desde
un punto de vista prctico, para su implementacin y aplicacin en la ganadera Colombiana, por parte de
los Profesionales. Cada captulo ser revisado y actualizado periodicamente, con el fin de incluir los
avances logrados en cada uno de los temas expuestos.

MIGUEL GERMAN RIVERA GAONA

MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA Es.

EVOLUCION DE LA BIOTECNOLOGIA REPRODUCTIVA

Las Tcnicas En Biotecnologa Reproductiva constituyen el grupo de procedimientos ms representativos

de la Biologa y su control por parte del hombre. Contemplan la manipulacin de las clulas germinales
reproductivas, el manejo reproductivo y la conservacin de los seres vivos.

Cada tcnica desempea por si misma un papel importante y ha sido la base para el avance y desarrollo
de otros procedimientos ms complejos, partiendo de la investigacin y su aplicabilidad en la Industria
Animal y la Medicina Humana.
Algunas han sido aplicadas y difundidas de manera amplia, con resultados satisfactorios. Sin embargo,
otros no lo han sido tanto debido a su complejidad y altos costos de implementacin, por lo que estn an
en el campo de la investigacin.

Todos los programas de Biotecnologa Reproductiva tiene como finalidad el aumento de la produccin y
productividad en cada especie, a travs del mejoramiento gentico, la reduccin del intervalo
generacional, el aumento de la eficiencia reproductiva y la conservacin de las especies en vas de
extincin.

Es de gran importancia tener en cuenta la relevancia que ha obtenido la Biotecnologa Reproductiva en

especies como equinos, ovinos, porcinos, caninos, ya que inicialmente estuvo circunscrita a la especie
bovina en relacin con la Inseminacin Artificial IA y posteriormente a la Transferencia de Embriones TE,
seguida de la Inseminacin Artificial a Tiempo Fijo IATF, Fertilizacin In Vitro FIV, Transplante de
Embriones a Tiempo Fijo TETF y Manipulacin de Clulas Germinales Reproductivas en investigaciones
sobre sexaje de semen y embriones, Clonacin y Fecundacin Intra Citoplasmtica etc.

Puesto que el manejo reproductivo del hato est influido por diferentes y variados factores tales como
Raza, Nutricin, Sanidad, Medio Ambiente, cada uno de estos debe analizarse antes de implementar
cualquier programa de Reproduccin Asistida, con el fin de lograr los mejores resultados tanto
productivos como econmicos.

Los nuevos conocimientos adquiridos sobre la dinmica folicular, mediante el empleo de la ecografa y la
utilizacin de hormonas para la manipulacin del ciclo estral, son herramientas que permiten implementar
de forma prctica la utilizacin de estas biotecnologas por parte de los ganaderos.

A manera de ejemplo, la utilizacin de protocolos que combinan la aplicacin de hormonas para

sincronizar el celo y la ovulacin, ha permitido inseminar un grupo significativo de hembras sin deteccin
del celo y prear ms de la mitad de ellas en un solo da de trabajo. La otra mitad se la puede servir con
toro. Este mtodo tiene no solo un impacto en el mejoramiento gentico, sino tambin en el aspecto
econmico, al tener un costo por preez por IA compatible con los costos de preez por toro. Por lo tanto
la biotecnologa aplicada debe mejorar la calidad del producto obtenido, aumentando su valor en el
mercado. (TRIBULO)

En la Tabla 1 se presentan las principales Tcnicas De Reproduccin Asistida que

sern tratadas en este Manual de Biotecnologa Reproductiva
La primer Tcnica de Reproduccin Asistida la constituye la Inseminacin Artificial IA, siendo innegable
su importancia en el mejoramiento de los parmetros reproductivos y reproductivos de a ganadera
mundial de leche, mediante el empleo de reproductores cuidadosamente seleccionados de acuerdo a los
registros del desempeo de su descendencia o toros probados, as como su participacin en el control de
enfermedades venreas.

Fue a partir de los aos 40s poca en donde la IA tuvo su mayor auge debido a la aplicacin del mtodo
rectovaginal de fijacin cervical, la utilizacin de pajillas plsticas selladas para el empaque del
semen (SORENSEN), el empleo de la pistola de inseminacin diseada por CASSOU, la incorporacin
de la yema de huevo y crioprotectores que hicieron posible la congelacin del semen, adems del diseo
de la vagina artificial para la recoleccin de semen (MILOVANOV).

Sin embargo, este aumento en la produccin conllev a una disminucin de la fertilidad del hato,
manifestandose en una mayor incidencia de anestros postparto, demora en la reiniciacin de la actividad
ovrica y ampliacin de los parmetros reproductivos, lo que se refleja en una disminucin de preeces al
ao.

Con el fin de de lograr inseminar el mayor nmero de hembras en un perodo ms corto,

se propuso la manipulacin del ciclo estral, dando lugar a los protocolos de
Sincronizacin de Calores y en tal sentido en 1948 CRISTIAN y CASIDA utilizaron
progesterona con el propsito de bloquear la funcin ovrica. Una vez se suspenda la medicacin la
mayora de las hembras presentaban sntomas de celo.

En 1972 con la aparicin de la PGF2 ROWSON et al, propusieron su administracin para sincronizar
celos, debido a su actividad luteoltica. Los resultados obtenidos han sido muy variables, dado que debe
contarse con un buen sistema de identificacin de calores.

Paralelamente al manejo del ciclo estral y con el fin de lograr la reduccin del intervalo
generacional, se logr el primer nacimiento de un ternero por Trasferencia de
Embriones TE, en la Universidad de Wiscounsin 1951 (WILLET). A finales de los aos
60s se logra establecer los protocolos de superovulacin, medios de cultivo,
recuperacin quirrgica y trasplante de embriones (ELSDEN). Estos procedimientos
fueron la base para el establecimiento de la industria de TE en los aos 70s.

En 1976 ELSDEN logra la recoleccin No Quirrgica de embriones mediante la

adaptacin de un catter de Foley de dos vas, introduciendo a presin un medio de
lavado dentro del tero, recuperandolo luego por gravedad, en cilindros graduados,
tcnica que se ha mantenido hasta hoy, con algunas variaciones.

Los protocolos de superovulacin han sufrido varias modificaciones en cuanto a la

hormona, dosis y tiempos de aplicacin, dependiendo la escuela aplicada, Francesa,
Americana, Brazilera, Italiana, Japonesa etc.

Inicialmente la trasferencia se realiz por va quirrgica mediante incisin del flanco del
mismo lado del CL, colocando el embrin en fresco, dentro de la luz en la punta del
cuerno, mediante una pipeta de 20 unida a una jeringa de 1 ml que contena el embrin
en un medio elaborado para el efecto. En 1986 se comenz a utilizar la trasferencia no
quirrgica utilizando una pistola con aperturas laterales, similar al de IA con una mayor
longitud. Los mejores resultados se obtuvieron al trasferir embriones al sincronizar el
celo entre donante y receptora.

El promedio de embriones calificados como "Buenos" y pegados, procedentes de

hembras reproductivamente normales, ha permanecido sin cambios significativos en los
ltimos 30 aos tanto en vacas de carne como de leche (6.2 - 7.0). (HASLER)

Con el fin de reducir el intervalo generacional se logra el nacimiento del primer ternero
producido totalmente por Fertilizacin In Vitro FIV en 1987 (FUKUDA). Posteriormente en
1988 se desarroll la tcnica de Aspiracin Folicular Trasvaginal mediante el empleo
del ecgrafo, la cual se ha convertido en la tcnica de recoleccin de oocitos
provenientes de vacas vivas, denominada as mismo Ovum Pic-Up
OPU (PIETERSE). Recientemente se han llevado a cabo diferentes estudios tendientes a
determinar la programacin y frecuencia de OPU con y sin estimulacin con
FSH. (CHAUBAL - DE ROOVER)

Por ser un proceso poco invasivo, la FIV es la tcnica de reproduccin asistida con
mayor futuro as como de mayor aplicacin en vacas de alta produccin con problemas de fertilidad y
en especies en vas de extincin. A manera de ejemplo, en Canada de una produccin total de de 287
embriones por FIV en 2004 se paso a 4453 en 2012; En Estados Unidos en tres de las principales
compaas que ofrecan este servicio, de una produccin total de 2078 embriones en 2004 se lleg a
40602 de 8689 de OPUs en 2011. Trans Ova genetics una de las empresas productoras de embriones In
Vitro tiene proyectado para 2013 15.000 OPUs con una produccin de 70.000 embriones.

Todos los programas de FIV en Norte Amrica incluyen la estimilacin de las donadoras con FSH y OPU
efectuada cada 14 das, con resultados en Trans Ova Genetic de 18 a 20 oocitos recolectados por OPU,
con un 25% de blastocistos desarrollados. En contraste con el Brazil, en donde la mayora de las
donantes Bos Indicus se caracterizan por un gran recuento de folculos ovaricos, que no reciben FSH y
OPU es efectuada semanalmente. (HASLER)

Paralelamente se han implementado tcnicas de sexaje de semen y embriones. El sexaje de semen est
disponible comercialmente desde principos de 2006 mediante la tcnica de Citometra De Flujo, basada
en las diferencias existentes entre los cromosmas X de la hembra y Y de los machos. Consiste en pasar
el fludo que contiene el semen, previamente teido, por un detector laser de fluorescencia, que
proporciona una longitud de onda correcta de la luz, sin causar dao del DNA. El equipo de sexaje de
semen tiene una precisin de 90% (Clasificador de espermatozoides MoFlo 1 SX(DakotaCytomation, Fort
Cllins,CO), operado a 50 psi). (SEIDEL y GARNER)

En 1989 mediante la Tcnica de Reaccin de cadenas De Polimerasa se logra

determinar el sexo de los embriones en estado de mrula o blastocisto a niveles fiables
y rpidos. (BIONDOLI)

Los Laboratorios MINITUB han desarrollado la tecnica SEX-Y que contiene un marcador molecular
especfico, conocido como Bov-Y, el cual reconoce una posicin en el Cromosoma Y bovino. Para
identificar el sexo del embrin se realiza una biopsia. Las clulas extradas son tratadas con el marcador
Bov-Y. Si el embrin corresponde al sexo masculino, el el marcador rodea al ADN del Cromosoma Y,
generando una luminosidad florescente que se puede observar como un punto ntido y claro con el
microscopio de fluorescencia. Si en cambio, se trata de un embrin femenino, est ausente el
Cromosoma Y, no se produce la fijacin del marcador Bov-Y y no se genera la seal
fluorescente (MINITUB)

Gracias al ecgrafo se logr una mayor comprensin de la dinmica folicular y el comportamiento de las
ondas foliculares en bovinos. Debido a que unas de las limitantes para el empleo de la IA en vacas en
pastoreo son la deficiente deteccin de celos, anestro posparto y pubertad tarda, se desarrollaron
protocolos tendientes a obtener la sincronizacin de la ovulacin, tcnica que permite inseminar un mayor
nmero de hembras en un perodo ms definido, sin la necesidad de detectar los animales en celo, la
cual se ha denominado Inseminacin Artificial a Tiempo Fijo IATF.

La tcnica de Eco Ultrasonografa o Ecografa introducida en 1980 e inicialmente

empleada en el examen clnico del tracto reproductivo, ha sido una herramienta bsica
de investigacin, utilizada ampliamente en la determinacin de la caracterizacin de la
dinmica folicular, el control gonadotropico y el papel hormonal de los folculos sobre el
ciclo estral.
 Como ayuda diagnostica ha permitido la
determinacin precoz de la gestacin en las distintas especies (Figura 1), la viabilidad del feto en su
desarrollo inicial mediante la observacin del latido cardaco, momento de la ruptura del folculo y
eclosin del ovocito, determinacin del sexo del feto en los das 50 - 60.

Figura 2

Ecografa de los miembros anteriores (MA), miembros posteriores (MP), cordn umbilical (CU) y cola (C)
de un feto bovino de 60 das. El tubrculo genital (TG) est localizado entre los miembros posteriores en
el feto macho y caudal a los miembros posteriores adelante de la cola en el feto hembra.

En la yegua ha permitido determinar la movilidad del embrin dentro del tero, mientras es esfrico (6-16
mm), durante los das 10 a 15 de gestacin; de que manera en una gestacin gemelar un embrin
elimina al otro sin que se lesiones as mismo; la aglomeracin de la granulosa del folculo ovulatorio en el
polo opuesto al futuro sitios de ruptura como sntoma de ovulacin inmediata.

La Figura 3 muestra el proceso de reduccin de uno de los embriones de gestacin gemelar con
fijacin en el mismo cuerno uterino. En el da 17 la gruesa pared vascular (lnea amarilla del saco vitelino
del embrin a desaparecer (SV2) es forzado por las contracciones uterinas dentro de la pared vascular
del saco vitelino del embrin a desarrollarse (SV1).
El rea vascular (linea roja) de SV1 est en contacto con el endometrio. En el da 29 la pared vascular del
embrin a desaparecer est bloqueada desde el endometrio.

Otra aplicacin importante de la ecografa es la aspiracin folicular dentro del proceso de Fertilizacin In
Vitro FIV. (Figura 4).

Igualmente estudios realizados con ecografa Dopler a color han mostrado la perfusin
vascular del endometrio luego de que el embrin equino se desplaza entre los cuernos
uterinos y la expansin del alantocrion en cada uno de los cuernos en bovinos. En las
novillas ha permitido observar el incremento y descenso del flujo sanguneo durante el
pulso de PGF2.

En la Tabla 1 se muestran algunos de los eventos relacionados con la ecografa.

Los ejemplos anteriores muestran la importancia que ha tenido la ecografa en la

investigacin y la practica reproductiva, sin la cual estos y otros hallazgos
permaneceran an desconocidos (GINTHER)

Sin embargo es de anotar que la ecografa es una ayuda diagnostica, cuya

implementacin solo tendr buenos resultados en la medida
que el profesional tenga unas bases firmes en anatoma y
fisiologa del tracto reproductivo, as como una gran habilidad
en la palpacin e identificacin de las diferentes partes que lo componen.

EVOLUCION DE LA REPRODUCCION ASISTIDA EN COLOMBIA

Durante aos el manejo reproductivo y mejoramiento gentico en Colombia se b

as en la utilizacin de la monta natural, mediante el empleo de reproductores p
roducidos en la hacienda o importados,
tanto por entidades gubernamentales de fomento, como por algunas Asociaciones
de Ganaderos y particulares.

El papel desempeado por las diferentes asociaciones de ganaderos

ha sido fundamental en este aspecto. Vale mencionar a los
Doctores Manuel Gomez Rueda, Heliodor Bonilla Guzman, Eladio Sandoval,
Roberto Heinsohn De Brigard, German Serrano, Ignacio Pareja,
Roberto Saenz, de la Asociacin de Criadores de Ganado Ceb, quienes apoyar
on e impulsaron la seleccin de reproductores nacionales y la importacin de nu
evas lneas genticas, que han permitido a travs de los aos posicionar a Colo
mbia como uno de los pases con mayor calidad gentica en esta especie.

Es as como se importaron reproductores de la lnea Manso, Madison,

V8, que han sido la base del mejoramiento de ganaderas de trayectoria naciona
l como las Haciendas "El Puente", "Peas Blancas", "Talavera De La Reina",
"Doyare", lneas que se han difundido ampliamente en las diferentes empresas g
anaderas dedicadas a la produccin de ganado puro y comercial.

Dentro de la Asociacin de Criadores de la Raza Pardo

Suizo influy significativamente el Dr Jaime Arenas Bonilla, en los criadores de l
a Raza Holstein y Jersey el Dr. Gonzalo Maldonado y en la Raza Normando el
Dr Armando Echeverry. En aos recientes merece
destacar la labor de las Asociaciones de ganado Simmental, Angus, Senepol,
Blonde D'Aquitaine, Montbelird entre otras, quienes han introducido
y adaptado estas razas al medio Colombiano.

A comienzo de los aos 60s el Instituto Colombiano Agropecuario ICA,

estableci su Departamento de Reproduccin
Animal y con el concurso de los Doctores Irenarco Casas A. y
Bernardino Rodriguez Urrea, se impulso
la tcnica de Inseminacin Artificial a nivel nacional.
Paralelamente la empresa ABS dedicada a la distribucin de semen
de toros americanos de las distintas razas, especialmente Holstein y Pardo
Suizo, contribuy a su diseminacin y difusin.

Es de anotar que en el Departamento del Tolima,

durante la Gobernacin del Doctor Parga Cortez, se mont el primer Centro
de Reproduccin en la Granja "Las Brisas" en Ibagu, dentro del programa de f
omento ganadero, con ganado importado de Gran Bretaa como el Angus,
hoy en da de moda, donde se elaboraba semen en pajillas y pelets de esta raza,
bajo la direccin del Dr Rembert Sanchez segn directrices del Instituto Spallanzani.

En la actualidad
esta labor ha sido asumida por productores de razas puras y Centros
De Reproduccin Asistida, quienes han logrado la adaptacin de nuevas razas
a un medio tropical clido, humedo, hostil como el campo Colombiano.

La implementacin de las diferentes tcnicas

de Reproduccin Asistida ha contado con profesionales destacados como los Do
ctores Hans Schroeder, Hector Obando, Gustavo Jaramillo, German Velez,
Martha Olivera, Gabriel Velez, Jorge Echeverry, Carlos Gutierrez,
Julio Olaya, Ramn Gomez, Aldemar
Chavez, quienes han sido pioneros en estas disciplinas. Es importante destacar
igualmente la labor del Doctor Elkin Lucena y su equipo de Cecolfes, en las t
cnicas de manejo, cultivo y criopreservacin de clulas germinales.
Dentro de las Centrales de Reproduccin se encuentran empresas como CTELCA,
CGR, CRYOGEN, EMBRIOCELL, EMBRIONES DEL SINU, VITROGEN,
EMPRESA GENTICA ESPECIAL E.G.E, con tcnicas Brasileras,
Americanas y Europeas.
Estas centrales junto con entidades acadmicas como el IRAC, han participado d
e manera definitiva en la capacitacin de profesionales, difusin
y aplicacin de estos procedimientos.

A continuacin me permito relacionar algunos eventos puntuales que considero s

e han destacado en la Reproduccin Asistida en Colombia.
En la publicacin de la "REVISTA EL CEBU 379 MARZO-ABRIL 2011" se relaciona
la evolucin de la Reproduccin Asistida entre los aos 2009 -
2010, en los ganados registrados en "ASOCEBU".
La Tabla 3 muestra el comportamiento reproductivo durante los aos 2009 - 2010
con base en el registro de animales nacidos por monta natural, que representa el 44.2%
, siendo el de los nacidos mediante Reproduccin Asistida del 55.8%, lo que refleja la acogida de
estas tcnicas por parte de los ganaderos.

En la Tabla 4 se observa que de estas tcnicas

la ms empleada ha sido la Inseminacin Artificial con un 68.3%, no
especificandose si corresponde a Inseminacin convencional o Inseminacin
a Tiempo Fijo. La Transferencia de Embriones participa en un 31.7% con
15.7% para la TE y 16% para FIV.
La Tabla 5 muestra que del total de Transferencias de Embriones
el 2.8% es de embriones congelados y el 31.8% de embriones en fresco.
Para FIV es del 65.4% lo cual nos indica el auge de esta tcnica y su gran aceptacin dentro
del gremio.

En el Grafico 1 vemos la representacin de estos resultados.

Tabla 6. Evolucin De La Reproduccin Asistida Asocebu 2009 - 2012

Se puede observar como la reproduccin Asistida ha ganado aceptacin dentro del gremio Cebuista con
un incremento en la FIV.

Frente a los tipos de concepcin durante 2012 se increment el nmero de cras

concebidas por FIV (4367), tambin aument levemente la concepcin por monta
natural (24.671), pero la IA (17.671) y la TE 3.052), disminuyeron con respecto a 2011.
Para 2012, el incremento de la TE fue de un 3.52% frente a 2011, reportando as
4.112 lavados al finalizar el ao, de los cuales 906 fueron embriones frescos, 3.113 FIV
y 93 congelados.(Revista "El Ceb 391)

Lo anterior nos hace concluir que la Fertilizacin In Vitro ser la tcnica que tiene
ms futuro, dada su baja
invasividad, la mayor vida til reproductiva de las donantes y por lo tanto la de
mayor posibilidad de extraccin de clulas germinales para ser fertilizadas.

Si bien estos datos corresponden a la especie Bos Indicus en Colombia, los por
centajes en las razas Bos Taurus deben ser ms notorios, pues los resultados d
e las diferentes investigaciones confirman que esta especie responde mejor y de

manera ms consistente a la administracin de hormonas, siendo su comportami

ento estral ms manifiesto y definido.

BIBLIOGRAFIA

ASOCEBU. MEJORAMIENTO CONTINUO EN LA PRESTACION DEL SERVICIO. REVISTA "EL CEBU"

379 MARZO ABRIL 2011.

ASOCEBU. DINAMICA DE REGISTROS 2012. SERVICIO EFICIENTE AL SOCIO. REVISTA "EL CEBU"
391
MARZO - ABRIL 2013

CHAUBAL SA, MOLINA JA, OHLRICHS CL, FERRE LB, FABER DC, BOLS PE, et al. Comparison of
different transvaginal ovum pick-up protocols to optimize retrieval and embryo production over a 10-week
period in cows. Theriogenology. 2006;65:16311648
ELSDEN RP. Embryo collection by surgical methods. In: Betteridge JK editors. Embryo transfer in farm
animals, Monograph no. 16. Ottawa: Canadian Department of Agriculture; 1977;p. 1013

ELSDEN RP, Hasler JF, Seidel GE. Non-surgical recovery of bovine eggs. Theriogenology. 1976;6:523
532

MINITUB.- Determinacin sexo de embriones Bovinos. www.minitub.de

MILOVANOV, V. K. Artificial Insemination of Livestock in the U.S.S.R. Washington: Tech. Services, U.S.
Dept. Commerce, 1964

PIETERSE MC, KAPPEN KA, KRUIP TAM, TAVERNE MAM. Aspiration of bovine oocytes during
transvaginal ultrasound scanning of ovaries. Theriogenology. 1988;30:751762

SEIDEL, G. E., J. L. SCHENK, L. A. HERICKHOFF, S. P. DOYLE, Z. BRINK, R. D. GREEN AND D. G.

CRAN. 1999. Insemination of heifers with sexed sperm. Theriogenology. 52: 14071420.

SEIDEL, G. E. AND D. L. GARNER. 2002. Current status of sexing mammalian spermatozoa. Animal
Reproduction Science. 124: 733743.
SEIDEL, G. E. 2007. Overview of sexing sperm. Theriogenology. 68: 443446.

TRIBULO H: Impacto Econmico De La Biotecnologa Revista Gentica Bovina N 8. Mayo Junio 2008
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ASPECTOS GENERALES QUE AFECTAN LA REPRODUCCION

El Manejo de la Biotecnologa Reproductiva es multifactorial.

En el interviene una serie de elementos que interactuan entre si de manera estr
echa, por
lo que la alteracin o variacin de cualquiera de ellos incide marcadamente en l
os resultados finales de su aplicacin e implementacin.

Los Factores que afectan la reproduccin son principalmente SANIDAD - RAZA -

NUTRICION -
MEDIO AMBIENTE. Antes de hacer cualquier recomendacin sobre estos aspectos,
el profesional debe comparar las prdidas ocasionadas por el problema que las
origina, con los costos que implican la reduccin o disminucin del mismo. (VANS
AUN)

SANIDAD

Tradicionalmente en Colombia los programas de Sanidad del hato estn basados

en estrategias tendientes a optimizar la prevalencia de enfermedades
y en los ltimos aos a la
erradicacin de algunas de ellas sujetas a programas oficiales de control obligato
rio como la Brucelosis, Tuberculosis,
Encefalitis Espongiforme y Rabia, que interfieren la exportacin de productos
pecuarios, adems de tener carcter zoontico.

As mismo la Sanidad se ha limitado al manejo reproductivo, control parasitario,

control de mastitis, control de enfermedades bacteriales,
virales y carenciales que no estn dentro de las polticas del gobierno, las cual
es son asumidas por los productores como consecuencia de las prdidas econ
micas que originan y a la concientizacin, culturizacin,
asistencia tcnica y adopcin de Buenas Practicas Ganaderas. Se estima que la
mortalidad por estos motivos son del orden del 6% en terneros y del 2% en ad
ultos. (FEDEGAN)

En la Tabla 1 se presentan los resultados de positividad de las enfermedades reproductivas

durante los aos 2005 - 2009 (ICA - FEDEGAN)

La mayor positividad corresponde a IBR con 69%, seguida de la Leptospirosis con 46%

La Figura 1 muestra su distribucin nacional en estos mismos aos.

El Departamento del Magdalena sobresale por su alta prevalencia en estas enfermedades con 84%,
de las cuales es notoria IBR, Leptospirosis y DVB. El segundo lugar corresponde a Sucre
con una reactividad del 71%, con predominancia de Leptospirosis, IBR,
Leucosis y DVB en su orden.

Estas enfermedades se manifiestan por un alto ndice de merte embrionaria o abortos, los cuales pasan
desapercibidos por parte del ganadero. Se da el caso de hembras diagnosticadas cargadas a los 90 das
por palpacin y confirmadas por ecografa, que luego de un tiempo se observa que la gestacin no
progresa o entran en celo y al realizarseles los exmenes de laboratorio correspondientes dan
positivas a una de ellas

El costo del anlisis de las muestras necesarias para su identificacin se ve rec

ompensado luego por un mayor nmero de preeces y partos.
El exito o fracaso de los programas de reproduccin dependen del estado sanit
ario del hato.

La Tabla 2 muestra la incidencia de las Enfermedades No Reproductivas 2005 - 2009.

La Diarrea Neonatal ocupa el primer lugar de prevalencia, seguida de la Mastitis.

Las Enfermedades Parasitarias se refieren casi exclusivamente a Hemoparsitos en general, no
especificndose el tipo de agente. La Clostridiosis muestra un descenso en su
prevalencia, debido a la adopcin de la vacunacin sistemtica.

De acuerdo con lo expuesto podemos afirmar que es necesaria la identificacin

de
estas enfermedades dentro del hato, con el fin de tomar las medidas sanitarias
necesarias para controlarlas y declarar la explotacin libre de Brucelosis, Aftosa,
Paratuberculosis y Rabia, si se quiere obtener optimos resultados reproductivos.

Tabla 3. Plan Sanitario recomendado para el control de las diferentes enfermedades que ms inc
idencia tienen en el hato Colombiano.

Es importante efectuar un adecuado control de parsitos externos en

especial de la
garrapata principal agente portador de hemoparsitos como la Babesia,
Piroplasma y Anaplasma, enfermedades que influyen notoriamente en la adaptaci
n de razas Taurus al trpico Colombiano.

Se sabe de hatos Holstein trasladados

a clima clido que han sido diezmados en un 50% por este concepto, o de ani
males importados localizados en la Costa
Caribe que no se pudieron adaptar por la misma razn.

Tabla 4.- Relacin de Patologias Reproductivas por Regiones en Colombia.

 RAZA - GENETICA

El mejoramiento gentico tiene como propsito el aumento de la produccin del

hato y la adaptacin a un medio natural especfico, lo cual se consigue cuando
se escogen animales o embriones, en las mismas condiciones en las que se v
a a desempear su descendencia.

Lo anterior es posible mediante la seleccin, en donde se escogen los animales

superiores para que sean los padres o madres de la futura generacin, lo que i
mplica descartar como reproductores aquellos que no cumplan con los parmetro
s establecidos como ptimos, tanto por las Asociaciones respectivas, como por e
l ganadero en su hato.
Esto se ha obviado en parte por la produccin de hembras y
machos puros adaptados a nuestras zonas de clima clido.

El reproductor es el responsable del mejoramiento gentico del hato, en

programas reproductivos de Monta Natural o Inseminacin Artificial. Por lo
tanto debe poseer cualidades deseables como son las caractersticas
raciales, capacidad y potencial de fertilidad, en busca de un biotipo que
sea sobresaliente en produccin de carne o leche como futuro semental.

Se ha comprobado que la seleccin por fenotipo no conlleva necesariamente a

un mejoramiento del hato. Es la razn por la cual se deben utilizar reproductor
es puros probados, cuyo mejoramiento
generacional se haya establecido. Es por ello importante analizar los registros d
e comportamiento del reproductor a comprar, o de los
catlogos suministrados por las casas distribuidoras de semen. Igualmente se rec
omienda efectuar un examen androlgico antes de la compra, como se exige a
reproductores para exposicin, con lo que se evita su devolucin por infertilidad
o falta de lbido, lo cual es incmodo tanto para el comprador como para el ve
ndedor.

La hembra debe poseer las caractersticas propias de la raza, ser

buena productora de leche, resistente al medio ambiente, habilidad materna,
facilidad al parto, longevidad, estar libre de enfermedades, ser cclica
y poseer excelente anatoma del tracto reproductivo.
Es la base de las Tcnicas de Reproduccin Asistida como el Transplante de E
mbriones y la Fertilizacin In Vitro.
El mejoramiento gentico
se consigue igualmente mediante el cruzamiento, que permite complementar las c
aractersticas productivas de dos o ms razas. Su objetivo es
generar vigor hbrido, con lo que se consigue resistencia al calor
y a parsitos externos. Es el caso del Simbra, Gyrholando, Brangus que
poseen 3/8 Ceb, 5/8 Taurus. Los apareamientos de animales 3/8
5/8 del mismo cruce, se comportan como homozigotos
y se manejan como razas puras.

En resumen, el programar, aparear o cruzar es fundamental

para producir ejemplares sanos fenotpica y genotpicamente, adems de frtiles,
productivos y vigorosos, capaces de soportar el medio tropical
y trasmitir a sus descendientes las bondades anotadas.
El cruzamiento no resuelve problemas de manejo,
es una herramienta para mejorar la produccin. (RUEDA)

Un segundo objetivo de los cruzamientos es

la produccin de nuevas razas como en el caso de la Raza
Lucerna originada en la Hacienda El Hatico en Buga la Grande, Valle del Cauca,
que posee 40% Holstein 30% Shorthorn y 30% Hartn del Valle, y la Raza
Velasquez producida en la Hacienda Africa en La Dorada Caldas por el Doctor
Jos Velasquez Q., compuesta por Red poll 2/4 Brahman Rojo Romo Sinuano .

Sin embargo, este mejoramiento gentico tendiente a conseguir un aumento en la

produccin de leche, ha conducido a una disminucin de la fertilidad en las vacas
de alta produccin, lo cual se traduce en
una disminucin de la Eficiencia Reproductiva, demora en
el reinicio de la actividad ovrica y aumento del anestro postparto.
Al mismo tiempo que aumentan los niveles de produccin, disminuye la resistencia de
las vacas a las enfermedades metablicas y su longevidad debido al aumento en la
incidencia de estrs, patologas de la ubre y del aparato locomotor.(RODRIGUEZ)

En el Grfico 2 podemos apreciar que en hembras Bos Indicus el porcentaje

de preez es menor al de hembras Bos Taurus
Igualmente en el Grfico 3 se observa la influencia de la raza en la tasa de preez
y la importancia que tiene en el desempeo reproductivo de las hembras bovinas.

Cualquier programa de mejoramiento gentico, por simple que sea,

debe considerar en forma prioritaria el medio ambiente en donde van a desenvolverse
los animales, con la certeza de que factores como el clima, manejo, nutricin y enfermedades,
siempre sern un factor limitante en la produccin animal. La primera condicin
que debemos exigir a nuestros animales es adaptacin, siendo la mejor expresin de esta
la fertilidad del rebao. Si este es capaz de reproducirse en niveles satisfactorios en el medio
en que se encuentra, por difcil que sea, es porque de hecho est generando
una mayor cantidad de individuos con alto nivel de adaptacin.(ATENCIO)
En la Tabla 5 se presentan los resultados obtenidos en un estudio realizado en
un hato del municipio de Belmira, vereda el Silencio, a una altura de 2.200
m.s.n.m. Departamento de Antioquia.

El hato cuenta con el manejo propio de la lechera especializada con consumos de

forraje de alta calidad y suplementos concentrados en alto porcentaje (ECHEVERRI)

Si bien hay diferencias significativas estadsticamente,

estas no son demasiado amplias en la prctica,
en donde los cruces tienen parmetros mejores que las razas puras.
Lo anterior nos hace pensar que en condiciones uniformes de manejo y nutricin,
los comportamientos de los cruces pueden ser similares a las razas puras.
Igualmente nos indica la interaccin existente entre la RAZA NUTRICION
REPRODUCCION
 NUTRICION

La nutricin es el factor que ms influye en la funcionalidad del aparato reproductor. Un desbalance

nutricional en exceso o defecto altera el ciclo estral de la hembra y el libido en el macho.

Un animal puede tener la mejor gentica pero mal nutrido no la puede trasmitir.
De acuerdo con el Dr Ricardo Sandino Pardo La Raza Entra Por La Boca,
lo cual confirma la estrecha relacin entre estos dos factores.

Despus del parto, las altas demandas de nutrientes requeridos para la sntesis de
grandes volmenes de leche, la limitada capacidad de consumo de alimentos y las
inadecuadas concentraciones de nutrientes; conducen al Balance Energtico Negativo
(BEN). Esta condicin determina una respuesta compensatoria (homeorresis) que
incluye el tejido adiposo, el hgado, los msculos y los huesos. (BATISTA)

La mala Condicin Corporal (CC) al parto tiene un significativo impacto negativo sobre
la probabilidad de concepcin, la tasa de prdida embrionaria y la proporcin de
animales en anestro. Al estar en esta etapa, las vacas deben movilizar grandes
reservas grasas, pero tambin algunas reservas proteicas, aumentando la incidencia de
desrdenes metablicos como fiebre de leche, acidosis, acetonemia, hgado graso y
desplazamiento del abomaso. La fiebre de leche y la acetonemia afectan las
contracciones uterinas, retrasan el parto, aumentan el riesgo de retencin de
membranas fetales (RMF) y por consiguiente desarrollo de endometritis. Las hembras
que llegan gordas y/o sobre-alimentadas al parto, son las que se convierten en vacas
problema cuando se presenta el BEN (RUKKWAMSUK)
En el Grfico 4 observamos que la sobrealimentacin de la vaca lechera antes del
parto retrasa la primera ovulacin espontnea posparto. Lo anterior implica que la alta
CC al parto se considere peor que la CC baja, porque las vacas con alta CC
comen menos despus del parto, tienen menos apetito y movilizan ms fcilmente
energa de las reservas corporales, siendo ms propensas a sufrir grandes cambios en
su CC.

Adems, la CC alta parece ser uno de los factores nutricionales de riesgo que causan
hipocalcemia y deficiencias en vitamina E, Selenio y como consecuencia estos
desrdenes metablicos predisponen a las vacas a patologas ginecolgicas post-parto,
de las cuales la endometritis es la ms importante. Los factores de riesgo para la
endometritis post-parto son hipocalcemia y retencin de placenta. En resumen, las
vacas que son capaces de mantener la misma CC (ya sea baja o alta) tienen mayor
probabilidad de xito reproductivo que las que tienen fluctuaciones en la CC. (SMITH)

La respuesta al BEN se traduce en una disminucin en la produccin de GnRH

y la marcada disminucin en la liberacin pulsatil de LH,
manifestndose en celos silenciosos y anestro. (SANTOS)

Por lo anterior el reinicio de la ciclicidad ovrica luego del parto est

ntimamente asociada con el BEN
durante este perodo y el comienzo del Balance Energtico Positivo
BEP, lo cual se correlaciona ntimamente con el tiempo de la primera ovulacin
y por lo tanto con un acortamiento del perodo parto concepcin. (BUTLER)

A pesar de que los mecanismos fisiolgicos

que tiene la vaca de leche para adaptarse a los requerimientos de lactacin son
bsicamente similares en los diferentes sistemas productivos, en sistemas de manejo
extensivo, las demandas energticas debidas al pastoreo pueden modificar las grandes
transformaciones que ocurren en este perodo. Ms an, la ingestin de materia seca
en estos sistemas es usualmente ms bajo que los sistemas en confinamiento y
generalmente es insuficiente para sostener la alta produccin de leche que puede
obtenerse con el potencial gentico existente. (CAVESTANY)

Las hembras bovinas son ms susceptibles a los efectos nocivos de la obesidad

y sobrealimentacin en el periparto, lo cual conduce a la produccin
de vulos de inferior calidad,
reduccin de las tasas de preez y como consecuencia
aumento de la edad al primer parto en novillas y el Intervalo Entre
Partos (IEP) en vacas.

En el macho sobrealimentado el aumento de la grasa inguinal

eleva la temperatura escrotal disminuyendo el nmero de espermatozoides
normales y su motilidad progresiva,
bajos niveles de testosterona disminuyendo la libido. Los toros obesos se fatigan
ms rpidamente afectando su capacidad de monta,
especialmente en pastoreo. (CONTRERAS)

Los pastizales renovados y bien mantenidos permiten que el ganado disponga de un alimento
de buena calidad durante cualquier poca del ao.

Sin embargo esto es difcil de conseguir en un sistema de manejo en pastoreo,

si no se cuenta principalmente con riego.

Es importante tener en cuenta cuales son los pastos regionales adaptados a la zona y el anli
sis de suelo, antes de introducir pastos que son exigentes en agua y a un tipo de suelo en
especial.
No hay que olvidar que el pasto debe manejarse como un cultivo convencional cualquiera.
En perodos de lluvia o de sequa. extremos hace que se pierda el adelanto, tanto en producci
n de leche como en peso corporal, logrados en perodos de niveles pluviomtricos considerados
normales.
Por lo anterior es recomendable implementar un sistema de alimentacin suplementario
como el silvopastoril, los bancos de protena o el
ensilaje, que nos permita suplementar o suministrar un alimento de calidad uniforme durante c
ualquier poca del ao y
mantener un buen estado corporal del animal, en especial si est dentro de un programa de Re
produccin Asistida.

Es bsico el suministro de un alimento rico en energa o "flushing

nutricional" al inicio del programa de Reproduccin Asistida,
principalmente a las receptoras, para la obtencin de buenos resultados de pegamiento embrio
nario.
Junto con el suministro de un alimento uniforme es importante la administracin de medicamento
s a base de fsforo al inicio del programa a las novillas receptoras o vacas postparto lo cual
estimula la funcionalidad ovrica y la induccin de celos.

La nutricin se manifiesta en el buen estado del animal y se refleja en su Con

dicin Corporal CC, la cual se califica en la escala de 1 a 5.
CC 4.5 - 5.0

Grasa mal distribuida

Apelotonamientos de grasa en pecho, pierna y cola

Una hembra cebada con ovarios engrasados presenta anestro y baja fertilidad
CC 4.0

Buena distribucin de grasa

No se marca el costillar
Espacio interisquiatico sobresaliente no hundido
Cojn de grasa en la cola
CC 3.0

Hundimiento del ijar.

Hundimiento espacio interisquiatico.
No hay cojn de grasa en la cola.
Espacios intercostales poco marcados.

CC 2.5

Espacios intercostales marcados

Sobresalen las puntas del anca.
Se aprecian las vertebras de la cola.
Hundimiento del recto en el espacio interisquiatico

La Eficiencia Reproductiva aumenta en

la medida que mejora la Condicin Corporal,
por lo que es recomendable incluir en los Programas de Reproduccin Asistida
hembras con CC 3.0 en adelante o con CC 2.5 si se encuentran en perodo de
ganancia de peso en el postparto.
En la Tabla
6 observamos como las novillas entran en celo con un peso adecuado de 340
Kls, el cual se logra mediante una buena alimentacin, pudindose alcanzar
con animales de 18 y 20 meses.

La Tabla 7 muestra el desenvolvimiento de la jornada de pastoreo del ganado b

ovino.

Este comportamiento es importante

tenerlo en cuenta, en especial en hembras de doble propsito con ternero al pie,
que se encierran en la tarde para ser ordeadas en la maana, debindoseles dejar pasto
en los comederos, de tal manera que puedan llenar mejor la ubre, al comer en la madrugada.

MEDIO AMBIENTE

Junto con la nutricin es el factor que ms influye en el desempeo reprod

uctivo.
El exceso de calor o frio induce el estrs calrico el cual incide negativam
ente en la produccin y aptitud reproductiva del animal.

El estrs calrico es la incapacidad del organismo para mantener constante

la temperatura corporal u homeostasia.

Existe una zona de confort del ganado, dentro de la cual se mantiene

el animal sin necesidad de activar sus mecanismos de autorregulacin,
la cual se considera para el Bos Taurus por encima de los 16C
y de 27C para el Indicus. Si la temperatura ambiente
sobrepasa los 27C para el Bos Taurus y 35C para el Indicus,
se origina una falla en la termorregulacin, aumentndose la
temperatura rectal del animal, disminucin del consumo de alimento,
disminucin de la produccin y composicin de la leche y prdida de peso.
La Figura 8 representa el medio ambiente ideal para el trpico, con sombro sufi
ciente, que le permite al animal protegerse de las temperaturas extrema.

Es frecuente ver en la zona de La Dorada y Pto Boyaca, potreros con reas de

polisombra para el ganado, debido a la tala indiscriminada

La primer respuesta que se produce en el bovino expuesto a altas temperaturas es un aumento del ritmo
respiratorio, seguido de aumento de la temperatura corporal. Al aumentar la frecuencia respiratoria
aumenta la ventilacin de las vas areas, y por tanto, favorece la evaporacin de esas superficies
hmedas, entre las que figuran, lengua, boca y vas nasales. Como consecuencia del enfriamiento de
estas superficies, se enfra la sangre que fluye por las mismas.

En medios trmicos elevados los bovinos tienden a reducir su produccin de calor

mediante anorexia voluntaria. Esta reduccin del consumo de alimento se refleja en
la reduccin de la actividad muscular desplegada en la bsqueda de los
mismos y el cambio en su conducta de pastoreo, al pastar
menos durante el da, realizndolo en las horas de la noche donde las temperaturas
son ms frescas. Este efecto indica la necesidad de suministrar buen pasto nocturno a
los animales que tienen que soportar temperaturas diurnas de 27C o ms, o
suministrarles potreros con sombro.

La temperatura crtica para el descenso en la produccin lctea se encuentra entre los

21C a 26,5C para las vacas Holstein y Jersey y entre 29,5C y 32C para las vacas
Pardo Suizo. Estos resultados fijan la temperatura ptima para el rendimiento lcteo de
estas razas entre los 10C y 15,5C.
Temperaturas de 0C apenas tienen efectos sobre la produccin lctea en tanto que
temperaturas superiores a 15,5C afectan adversamente el rendimiento
lcteo. (SALVADOR)

Las primeras respuestas reproductivas al estrs calrico son la disminucin de la

intensidad y duracin del estro, cuya consecuencia es la baja fertilidad. Se sabe que
las hembras mamferas son ms sensibles al estrs calrico durante los 12 das
anteriores al estro, aumentando esta sensibilidad durante los dos das previos al
mismo. (GILARD)

Al evaluar el efecto del calor sobre los folculos de mayor tamao en vacas lecheras
lactantes, se observ una disminucin en el desarrollo del folculo dominante de la
primera onda folicular y la prdida de dominancia del mismo, ya que se ha observado
que en vacas con estrs calrico se mantiene el nmero de folculos medianos, durante
el perodo de dominancia de la primera onda folicular, en comparacin con vacas en
termoneutralidad .

Otra manifestacin de la falla de dominancia, es el anticipo en dos das, de la

emergencia de un nuevo folculo para la segunda onda de crecimiento folicular, que
frecuentemente es recambiado cuando hay estrs trmico despus del da 11 del ciclo.
La disminucin del tamao de los folculos dominante y subordinado y del volumen del
fluido folicular en vacas con estrs calrico, indica que el efecto de calor puede afectar
la seleccin, la dominancia folicular y la calidad de los folculos. Un aspecto adicional,
es la presencia incrementada de ovarios qusticos, por efectos de altas
temperaturas. (GONZALEZ)

Durante el estrs calrico se presenta un retardo en

la esteroidognesis folicular en folculos preovulatorios de tamao medio y
baja viabilidad de los folculos preovulatorios. (CORDOVA)

La mayor influencia en la reproduccin se debe a fallas en la implantacin del embrin,

ya que la vaca con stress calrico presenta vasodilatacin perifrica por lo que
disminuye el aporte sanguneo al tero. Adems cualquier tipo de stress determina
liberacin de Prostaglandinas que por su efecto luteolitico agrava ms el cuadro de
infertilidad. (RODRIGUEZ)

Estudios in vitro han descrito que un incremento de la temperatura compromete la

viabilidad del ovocito, la sobrevivencia del embrin y disminuye la capacidad del medio
ambiente uterino para apoyar el desarrollo embrionario, principalmente en los primeros
tres das de edad.Tambin se ha observado, in vitro, que cuando el embrin tiene un
mayor desarrollo (mrula), adquiere ms resistencia al estrs calrico. Los embriones
de vacas Bos indicus son menos susceptibles al efecto del calor.(GONZALEZ)
Se postula que exponiendo a las hembras mamferas domsticas al estrs
calrico durante el estro, se altera la dinmica folicular y disminuye el predominio del
folculo en el estro siguiente.

Se ha demostrado que en perodos de severo estrs calrico, solamente un 10 a

20% de las inseminaciones pueden resultar en preez. (DAVE)

Los machos tambin son afectados en su eficiencia reproductiva por el efecto de stress
calrico provocando disminucin de la libido, disminucin de la calidad y
volumen del eyaculado e incrementarse el nmero de
espermatozoides muertos.(COUBROGH)

Se afirma que la raza Jersey es ms tolerante al estrs calrico que la Holstein.

Trabajos realizados en estados Unidos indican que las vacas Holstein y
Jersey establecidas en lugares clidos,
expresan signos de celo tan solo durante 12 a 13 horas,
lo que significa una diferencia de 5 a 6 horas menos que la duracin considera
da normal del celo en los animales ubicados en sitios templados. (YABUTA)

BIBLIOGRAFIA

ATENCIO A. PRODUCCIN VS. ADAPTACIN. UN DIFCIL EQUILIBRIO ANTAGNICO. REV. EL

CEBU 380 JUNIO 2011.

BUTLER WR, EVERETT RW, COPPOK CE. 1981. THE RELATIONSHIPS BETWEEN ENERGY
BALANCE, MILK PRODUCTION AND OVULATION IN POSTPARTUM HOLSTEIN COWS. J ANIM SCI
53: 742

CABODEVILA J. CATENA M. EVALUACION DE SEMEN CONGELADO-DESCONGELADO. 24/10/2012.

ENGORMIX
CAVESTANY D.- INDUCCIN DE CELOS E INSEMINACIN ARTIFICIAL EN VACAS DE LECHE EN
ANESTRO UNA NUEVA APROXIMACIN A UN VIEJO PROBLEMA. FILE:///C|/ANESTRO.HTML (1 OF
12)23/06/2010

CAVESTANY D, MANEJO REPRODUCTIVO EN VACAS DE LECHE: PRODUCIR O NO? REV. INIA

42OO5

CONTRERAS G.A.- ES EL SOBREACONDICIONAMIENTO CORPORAL DEL GANADO UNA

ENFERMEDAD?. REVISTA EL CEBU JUNIO 2011.

CORDOVA A.; CORDOVA C.A; SALTIJERAL J.A.; RUIZLANG, C.G.1; CAMPOS, V.M; CORTS
SUREZ, S.; GUERRALIERA EFECTO DE LA MASTITIS Y EL ESTRS SOBRE LA REPRODUCCIN
DE LA VACA. 4 JULIO 2008

COUBROUGH RI. 1985. STRESS AND FERTILITY. A REVIEW. J VET RES 52: 153156.

http://patrocipes.uson.mx/patrocipes/invpec/ranchos/RA0085.html

CUTAIA L.- PROGRAMAS DE INSEMINACION ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO: ANALISIS DE COSTOS E

IMPLEMENTACION. 2012

DAVE L. 1999. MANEJO DEL ESTRS CALRICO. www.accelgen.com/spanish/nov_heat150.html

ECHEVERRI J. HERRAMIENTAS DE UTILIDAD EN LA PRACTICA ANDROLOGICA BOVINA. Rev

ista El Ceb 380 Mayo-Junio 2011.
FEDEGAN.- SITUACION EN COLOMBIA DE ENFERMEDADES BOVINAS NO SUJETAS AL CONTROL
OFICIAL. JULIO 2011

GILARD E, MEIDAN R, BERMAN A, GRABER Y, WOLFENSOND. 1993. EFFECT OF HEAT STRESS

ON TONIC AND GNRHINDUCED GONADOTROPHIN SECRETION IN RELATION TO
CONCENTRATION OF OESTRADIOL IN PLASMA OF CYCLIC COWS. J REPROD FERTIL 99:315321.

GONZALEZ E. LOZANO R.-

EL ESTRES CALORICO Y LA REPRODUCCION EN VACAS LECHERAS. CONFERENCIAS MA
GISTRALES AMMVEB.

RIVERA M.- Conferencias Ginecologa y Obstetricia Bovina FMVZ U. Tolima 1982

RIVERA M. MANUAL DE REPRODUCCION VACA YEGUA PERRA. 2007

RODRIGUEZ H, ARTINEZ HULLTGREN, BAGE. R, BERGQVIS A.B, SVENSON C, BERGSTEN C,

LIDFORDS L, GUNNARSSON S. ALGERS B, EMANUELSON U, BERGLUND B, ANDERSO G, HAARD
M, LINDHE B, STALHAMMAR H, GUSTAFSSON H. EFICIENCIA REPRODUCTIVA EN VACAS
LECHERAS DE ALTA PRODUCCIN: ES SOSTENIBLE CON LAS PRCTICAS DE MANEJO
ACTUALES? 11-Dec- www.ivis.org

RUKKWAMSUK T, KRUIP TA, WENSING T. RELATIONSHIP BETWEEN OVERFEEDING AND

OVERCONDITIONING IN THE DRY PERIOD AND THE PROBLEMS OF HIGH PRODUCING DAIRY
COWS DURING THE POSTPARTURIENT PERIOD. VET Q 1999; 21: 71-77.

VANSAUN R. BARTLETT P. MORROW D. Monitoring The Efects Of Diseaes On Milk Production In Dairy
Cattle. Continuing Education Art. Vol 9 N 6 Jun 1987

YABUTA O: KUNIO A. 200. El Estrs Calrico En El Ganado Lechero.

http://fmvz1.uat.mx/Investigacion/memorias/principal7.htm.
FACTORES QUE AFECTAN LOS RESULTADOS DE LA
REPRODUCCION ASISTIDA

FACTORES QUE AFECTAN LOS RESULTADOS DE LA REPRODUCCION ASISTIDA

Adems de los Aspectos Generales Que Afectan La Reproduccin, debemos tener en cuenta aquellos
que interfieren o afectan los resultados de las Tcnicas de Reproduccin Asistida. (Tabla 1)

INSTALACIONES Y PERSONAL
Figura 1 Instalaciones y Personal

Para el manejo reproductivo de los animales del hato, se debe contar con instalaciones y construcciones
bsicas y adecuadas, que faciliten la movilidad de los animales y la comodidad de los operadores, para
realizar las labores de rutina de manera segura, rpida, eficiente y confortable, con el menor estrs para
los animales, dentro de las denominadas Buenas Practicas Ganaderas.

Esas instalaciones comprenden los corrales, calceta, brete, palpadero, bscula, baadera, sala de
ordeo, salacunas, paritorio, embarcadero.

Igualmente debe contarse con potreros debidamente cercados, comederos, saladeros, y bebederos que
permitan la suplementacin nutricional adecuada y separacin de los lotes de acuerdo a la produccin y
estado reproductivo, facilitando su observacin y manejo (Figura 2)
El personal debe ser instruido de manera clara sobre sus labores, para trabajar en equipo con el fin de
lograr el mejor rendimiento posible de la explotacin. Es importante que todo el personal de la finca est
en capacidad de identificar correctamente una hembra en celo, principal limitante de la Inseminacin
Artificial. Igualmente se debe capacitar o reentrenar al personal encargado de efectuar labores tcnicas,
segn los avances y modificaciones que se vayan presentando en la evolucin de las mismas. (Figura 3)

As mismo se les debe informar sobre los diferentes mecanismos de las distintas tcnicas de
Reproduccin Asistida, de tal manera que se sientan parte de la ejecucin y participen activamente en la
consecucin de los objetivos programados.

CATEGORIA DE LOS VIENTRES A TRATAR

Los principales lotes dentro del manejo reproductivo del hato, se refieren a novillas de vientre, vacas en
ordeo, vacas con cra al pie, vacas secas, vacas horras, vacas proximas.
En el Grfico 1 se puede apreciar que no se presenta diferencia significativa en el porcentaje de preez
entre novillas y vacas con cra, mientras si la hay con relacin a vacas secas. (CUTAIA)

Esta diferencia de porcentajes de preez entre vacas secas y vacas con cra y novillas puede deberse
al hecho de que el lote de vacas seca incluye vacas vacas por problemas nutricionales o por ser de baja
fertilidad.

En conclusin se debe tener en cuenta ste parmetro al seleccionar el tipo de protocolo a aplicar al lote
seleccionado para el programa de IA a implementar.

CICLICIDAD

La ciclicidad se determina por la presencia de estructuras ovricas palpables y/o identificables por
ecografa como Cuerpo Lteo o Folculo, as como por el aumento de tamao y tonicidad del tero.
Hay que tener en cuenta que en algunas hembras no se aprecian estas estructuras, pero el tero y en
especial los cuernos se encuentran trgidos, enroscados y con tono, lo que indica funcionalidad ovrica,
puediendose tratar de la presencia de CL intraestromal, por lo que se debe confirma por ecografa. No
olvidar que el tero es el rgano blanco de las hormonas ovricas.

Las hembras anestricas son aquellas que no presentan estructuras palpables o estas son de tamao
pequeo a la palpacin o poco apreciables a la ecografa, adems el tero se encuentra flcido.
Grfico 2.- Las hembras cclicas presentan mayor porcentaje de preez con respecto a las vacas
anestricas. (CUTAIA)

Grfico 3.- Las hembras que presentan ovarios con

estructuras funcionales logran un mayor ndice de preez. (BO).

Teniendo en cuenta estos dos factores se sugiere que el profesional efecte una evaluacin y medicin
de las estructuras del tracto reproductivo, en el tipo de hembras con las cuales va a trabajar y obtenga un
rango de aceptabilidad funcional, dada la gran variabilidad de estas debidas a condiciones de raza,
nutricin, condicin corporal y manejo existentes en cada una de las explotaciones que labora.

De igual forma le permitir tener una idea ms clara del protocolo hormonal a emplear en determinado
momento, con el fin de manipular adecuadamente el estro en programas de Reproduccin Asistida.

Tabla 3.- Clasificacin del Tracto Reproductivo Bovino.

Tabla 3.- Clasificacin Cuerpo Luteo.

Se recomienda trabajar con tractos reproductivos 4 - 5 y CLs 3 (VELEZ)

MANEJO DE DISPOSITIVOS INTRAVAGINALES

Los disposititvos intravaginales de 1 gm o ms se reutilizado en dos y tres ocasiones en programas de

IATF, por lo que su manejo y conservacin necesita que su manejo y conservacin se efecte de forma
higinica, con el fin de evitar infecciones del tracto reproductivo por su reutilizacin, lo que es lesivo para
el animal.

Luego de su utilizacin se deben limpiar rigurosamente con agua y desinfectados con solucin una
solucin bactericida. Deben mantenerse en sus bolsas plsticas metalizadas con el objeto de evitar su
exposicin a la luz solar y el calor, de tal manera que por evaporacin pierda el contenido de
progesterona y por consiguiente su efectividad posterior.

Grfico 4.- Porcentaje de prdidas de dispositivos intravaginales en IATF.

Las perdidas del dispositivo intravaginal, en especial los reutilizados, hace que los costos sean mayores y
los resultados esperados sean menores
Dentro de los puntos a tener en cuenta en el manejo de los dispositivos intravaginales se recomiendan
los siguientes (Figura 4)

- Evitar en lo posible pastorearlos en pastizales tiernos que estimulen diarreas.

- Evitar mantener los animales mucho tiempo encorralados.
- Mantener los dispositivos en recientes sellados y no exponerlos a la luz solar y/o al medio ambiente.
- Evitar utilizarlos en vacas en confinamiento. Las prdidas de dispositivos en estos casos son de un 6 a
10% ms sobre la media de prdidas totales (CUTAIA 2009)

La disponibilidad en el mercado de dispositivos de 0.5 gm de uso nico, puede evitar o al menos

disminuir estas prdidas y por consiguiente mejorar los resultados y rebajar los costos.

CALIDAD SEMINAL

La utilizacin de semen de gran calidad, es uno de los aspectos fundamentales en el xito de la

aplicacin de cualquiera de las tcnicas de reproduccin desarrolladas hasta ahora. Por tal razn es de
gran importancia determinar la fertilidad de los lotes de pajillas de semen congelado disponibles, antes de
iniciar el montaje y desarrollo de un proyecto de Reproduccin Asistida.
Hay que considerar que el semen congelado no es un producto uniforme ya que existe cierto rango de
diferencia entre los lotes considerados aptos y un semen de optima calidad. Adems, la calidad del
semen puede verse afectada en las distintas fases de su elaboracin, ya sea porque su traslado de un
termo a otro no se realiza con la precaucin necesaria o porque durante su almacenamiento no se
mantiene el nivel adecuado de nitrgeno lquido en el termo de conservacin, o porque se exponen las
pajillas por perodos ms prolongados de lo recomendado en la boca del termo.

El semen al ser congelado sufre una serie de procesos que pueden alterar su calidad inicial. Muchas
veces un semen de alta calidad al momento de la congelacin termina siendo de calidad media o baja al
ser descongelado. De aqu la importancia de evaluar el semen luego de su descongelacin.

Sin tener en cuenta la complejidad de los procesos biolgicos que ocurren dentro de la clula
espermtica, la congelacin es un proceso de deshidratacin celular, que comprende la cristalizacin del
agua la cual ocurre entre los -3 y -45C. Una vez se completa la cristalizacin sucede un fenmeno
similar, la recristalizacin, que consiste en el crecimiento de grandes cristales de hielo a expensas de los
pequeos cristales. Este proceso se presenta cuando el descongelado es lento. Aunque el punto de
congelacin celular est por debajo de los -10C, las clulas permanecen sin congelarse hasta los -15C.
Durante la congelacin las clulas comienzan a equilibrarse con el medio debido a la prdida de agua
intracelular. Esta deshidratacin produce una disminucin de la presin intracelular y un incremento en la
concentracin del soluto.

Por lo tanto, la congelacin lenta le permitir a la clula mantenerse en equilibrio con el medio exterior.
Es por eso que a los -10 o -15C la cantidad de agua intracelular es muy poca. Una congelacin muy
rpida no permite ese intercambio y por consiguiente a los -10C la clula posee mucha agua intracelular.
De todas maneras durante la congelacin las clulas pierden agua y hay un aumento de la concentracin
del crioprotector intra y extracelulares.

Existen dos mecanismos de los cuales depende la supervivencia de los espermatozoides a la

congelacin:

Las clulas congeladas a temperaturas por debajo de la velocidad crtica son destruidas por una
exposicin prolongada al crioprotector. A medida que se va congelando el agua del crioprotector, el
medio se vuele hiperosmtico con respecto a las clulas y produce su muerte.
Las clulas congeladas a velocidades por encima del valor crtico tienen un perodo de tiempo
insuficiente para el intercambio osmtico y por tal razn no pueden expulsar la totalidad del agua
intracelular, formndose los cristales de hielo dentro de la clula ocasionando su muerte.

Tabla 4.- Mecanismos por los cuales se causa dao celular durante la congelacin del semen
El glicerol adicionado al diluyente del semen al reducir la concentracin de electrolitos en el agua
residual no congelada, dentro y alrededor de la clula, tiene un efecto protector sobre la superficie
celular.

El punto crtico durante la congelacin y la descongelacin est entre los -10 a -50C, por lo tanto es
importante atravesar esta zona rpidamente. Se ha comprobado que la descongelacin rpida tiene
mejores resultados que la lenta.

Para evaluar la calidad seminal se han diseado diferentes protocolos , los cuales contemplan la
motilidad y la morfologa espermtica, junto con otros parmetros como la integridad del acrosoma,
cocentracin, microbiologa, propiedades quimicas y bioquimicas, as como la viabilidad in vitro o in vivo.

La evaluacin de la motilidad y morfologa se lleva a cabo con la ayuda del microscopio o por medio
microfotografa y contadores electrnicos computarizados. La observacin directa es el mtodo ms viejo
y ms utilizado dada su facilidad de diagnostico y su bajo costo. Sin embargo tiene la desventaja de ser
una medicin subjetiva y altamente influenciada por el evaluador, por lo que debe ejecutarse con sumo
cuidado y de manera ordenada, con el fin de evitar errores de evaluacin. Ocasionalmente ha sucedido
que toros campeones del ms alto pedigree producen semen no satisfactorio.

El movimiento progresivo al igual que la integridad acrosomal, se debe evaluar

inmediatamente despus de la descongelacin y luego de 2 horas de incubacin a 37C. Tabla 5

La motilidad por si sola no tiene un valor de prediccin de la fertilidad si no va acompaada de la

evaluacin de la morfologa y la integridad del acrosoma.

La evaluacin del acrosoma es un factor importante dado que las enzimas que contiene
son vitales para la penetracin de la zona pelcida por parte del espermatozoide, durante el proceso
de fertilizacin.

Para ello se coloca una gota de semen de 2 a 4 mm sobre un portaobjeto e igual cantidad de
glutaraldehido al 0.2% diluido en buffer fosfato salino. El glutaraldehido detiene el movimiento celular y
previene el dao celular. Se agrega una gota de eosina-nigrosina. La extensin se observa al
microscopio de contraste de fase y se cuentan 100 clulas. (BO)

Recordemos que el mnimo aceptable de espermatozoides es del 70% de los

espermatozoides normales.
Hay ciertas enfermedades propias del toro como la Aftosa, Micobacterium bovis, Paratuberculosis,
Brucella abortus, Trichomona fetus, Campylobacter venrealis, Leptospira sp, IBR, BVD y P13, de las
cuales debe estar libre para evitar su trasmisin, existen otras que pueden surgir durante el proceso de
congelacin del semen como Estreptococos, Estafilococos, E. Coli, Pseudomona areuginosa,
Corynebacterium pyogenes, Hongos y Levaduras. La calidad bacteriolgica del semen es reflejo directo
de la calidad higienica y sanitaria del centro de IA.

En resumen es imperioso evaluar la calidad del semen con que vamos trabajar antes de la
implementacin de cualquiera de las tcnicas de Reproduccin Asistida, la cual debe ser Muy buena o
Excelente.

NUMERO DE ANIMALES POR LOTE

Una vez se seleccionen las hembras teniendo en su CC, ciclicidad, tamao y desarrollo del tracto
reproductivo, funcionalidad ovrica etc, se distribuyen los lotes para la aplicacin del protocolo ms
adecuado a sus condiciones reproductivas, con el fin de lograr los mejores resultados. La finalidad de las
tcnicas de Reproduccin Asistida es la de lograr el mayor nmero de animales gestantes por ao y no el
mayor nmero de inseminaciones por hora

FACTORES VARIOS

Junto con lo anotado anteriormente y de acuerdo a observaciones recopiladas en el ejercicio profesional,

es importante tener en cuenta otros aspectos puntuales, a los cuales no se les da la importancia que
tienen por su obiedad, ya sea por olvido, negligencia o ambas y que hay que corregir: Tabla 6
 RESUMEN

En la Tabla 7 se resumen los puntos ms relevantes a tener en cuenta para lograr los mejores
resultados en las tcnicas de Reproduccin Asistida.
BIBLIOGRAFIA
BO G. ESPECIALIDAD EN REPRODUCCION BOVINA IRAC 2005 COLOMBIA.

BO G. SINCRONIZACION DE CELOS E INSEMINACION ARTIFICIAL EN GANADO

BOVINO. IRAC

CUTAIA L.- Importancia, Organizacin y Manejo de la Informacin en Programas Reproductivos

2009 SYNTEX SA, Instituto de Reproduccin Animal Crdoba (IRAC), Universidad Nacional de Crdoba

CUTAIA L.- ESTADO DEL ARTE EN IATF: FACTORES QUE AFECTAN SUS RESULTADOS 2003

CUTAIA L.- Importancia, Organizacin y Manejo de la Informacin en Programas Reproductivos

2009 SYNTEX SA, Instituto de Reproduccin Animal Crdoba (IRAC), Universidad Nacional de Crdoba

CUTAIA L.- INSEMINACION ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO (IATF): UNA HERRAMIENTA PARA EL
MEJORAMIENTO GENETICO.2006

CUTAIA L. FERESIN F. VIDELA D. BO G. CONCENTRACIONES PLASMATICAS DE

PROGESTERONA EN VACAS DE LECHE EN LACTANCIA TRATADAS CON
DISPOSITIVOS INTRAVAGINALES CON DIFERENTES DOSIS DE PROGESTERONA

CUTAIA L. BO G. OPCIONES DE MANEJO Y TRATAMIENTOS PARA

PREAR LAS VACAS VACIAS DESPUES DE LA IATF. 2012
CUTAIA L.- PROGRAMAS DE INSEMINACION ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO: ANALISIS DE COSTOS E
IMPLEMENTACION. 2012

VELEZ G. MANUAL DE LA VACA RECEPTORA. 2011

MANEJO DEL CICLO ESTRAL INDUCCION Y SINCRONIZACION DEL

CELO E INSEMINACION A TIEMPO FIJO

Desde el descubrimiento de las hormonas y su disponibilidad comercial, se ha tratado de controlar la

fisiologa del ciclo estral con el fin de lograr una mejor eficiencia reproductiva. Igualmente con la
aplicacin de la ecografa como ayuda diagnstica y un mejor conocimiento de la dinmica folicular se
han desarrollado distintos procedimientos o protocolos tendientes a lograr este objetivo.

Para obtener un adecuado manejo del ciclo estral es indispensable controlar el crecimiento folicular, la
regresin del CL y la ovulacin del folculo dominante.

En el Grfico 1 se especifica cual es el papel que desempea cada una de las hormonas en el control de
la dinmica folicular.
Dentro de las diferentes tcnicas de manejo del ciclo estral tenemos la Induccin y Sincronizacin del
celo e Inseminacin A Tiempo Fijo.

INDUCCION DEL CELO

Uno de los principales problemas a enfrentar es el anestro postparto y con tal finalidad se han
recomendado varios protocolos tendientes a inducir la reiniciacin de la actividad ovrica, dentro
del espacio de tiempo denominado Perodo de Espera Voluntario -PEV- para que la hembra quede
gestante entre los 60 - 100 das postparto.

El reinicio de la actividad ovrica en el postparto est determinada por la recuperacin de la funcionalidad

e interaccin del eje Hipotlamo - Hipfisis - Ovario, intimamente relacionada con tres factores
principales: Nutricin, reflejada en la Condicin Corporal; Amamantamiento, representado por la
presencia del ternero; Alta Produccin de leche.

Es indudable que una nutricin adecuada en el postparto es la mejor manera de estimular la

funcionalidad ovrica. El reinicio de la ciclicidad ovrica est altamente asociada con el balance
energtico durante este perodo y el Balance Energtico Positivo -BEP- se correlaciona ntimamente con
el tiempo a la primera ovulacin. (BUTTLER)

Es necesario por consiguiente que la hembra entre en un BEP en el postparto donde gane peso, por lo
que una dieta rica en energa en el preparto permite una mejor CC al parto y por lo tanto al postparto.
Junto con el mejoramiento de la nutricin se han administrado vitaminas y minerales por va parenteral o
en la sal de consumo, as como productos yodados que estimulen por irritacin la actividad ovrica.

En el Grfico 2 se muestra el efecto comparativo de la administracin rutinaria a los 30 das postparto, de

un yodurado(LIVANAL) y compuestos a base de vitaminas y minerales, PGF2 y combinaciones entre
estos productos, aprecindose buenos resultados con el yodurado. (VILLARRAGA)

Igualmente se han logrado resultados similares con la administracin de Calfosvit, como inductor de celo
en el postparto.

Grfico 3

Otros autores han comparado la administracin de minerales con el masaje ovrico, como inductores de
celo en vacas postparto.(COREA)
Sin embargo, no existe un tratamiento en particular para el anestro postparto que pueda recomendarse
inequivocamente para todos los hatos. Con esta consideracin presente, los tratamientos para el anestro
postparto deben estar dirigidos a aumentar la frecuencia de pulsos de LH y permitir que los folculos
alcancen las etapas finales de maduracin.

Las vacas ceb en pastoreo han mostrado que retornan al celo en un perodo dramticamente ms
temprano que las vacas amamantando a voluntad, cuando se manejan programas de amamantamiento
restringido o destete temporal. De otra parte, se logr disminuir el perodo parto-primer celo en vacas de
primer parto con ternero al pie de 168 a 69 das en aquellas que se manejaron con amamantamiento
una vez al da. (BO)

SINCRONIZACION DE CELOS

Siguiendo un orden cronolgico de los diferentes modelos de control del ciclo estral, CASIDA propuso la
utilizacin de progestgenos con el fin de bloquear la funcin reproductiva y observ que al suspender la
medicacin buena parte de las hembras presentaron sntomas de celo. A raz de haber determinado la
actividad luteoltica de la PGF2, ROWSON 1972 propuso su empleo como agente sincronizador de
celos. En la actualidad se encuentran disponibles en el mercado diferentes preparados a base de estas
hormonas, con el fin de sincronizar celos e inseminar un mayor nmero de hembras en un menor tiempo.

PROGESTAGENOS

Varios estudios demuestran que los progestgenos tienen la capacidad de inducir la cilcicidad en vacas
en anestro, siendo la nutricin y el amamantamiento los factores que ms influyen en el reinicio de la
actividad ovrica, concluyendose que ste ltimo es el de mayor impacto en la inhibicin del eje
hipotlamo-hipfisi-ovario. Por tal razn se han desarrollado protocolos que combinan el empleo de
progestgenos y el destete temporal para lograr un mayor ndice preez en ganado de carne con ternero
al pie.

En la actualidad se cuenta con dos mtodos de administracin de progestgenos, el implante auricular y

los Dispositivos Intravaginales DIV, los cuales bloquean el eje hipotlamo- hipfisis simulando una fase
ltea.

IMPLANTE AURICULAR

El CRESTAR de laboratorios INTERVET, es un implante que contiene 3 mg de Norgestomet ms un

preparado inyectable de 2 ml con 3 mg de Norgestomet y 5 mg de Valerato de estradiol. La porcin
inyectable de norgestomet tiene como finalidad logara inicialmente niveles altos de progesterona
circulante, los cuales sern mantenidos por la liberacin lenta del implante. El VE induce la luteolisis del
CL presente en el momento de su aplicacin. Se colocan en la cara dorsal de la oreja del animal y
permanecen por un perodo de 9 das .

Cerca de un 90% de las hembras entran en celo dentro de los 5 das siguientes a su retiro.

En el Grfico 4 se muestra el protocolo recomendado por Intervet. En animales diagnosticados cclicos al

inicio del programa de sincronizacin, se recomienda aplicar una dosis de PGF2 al retiro del
implante. En vacas diagnosticadas como anestricas al inicio del programa, se recomienda la
administracin de 400 a 700 UI de eCG. (BELACUBA)

La eCG puede ser reemplazada por PMSG Follign de Intervet.

La inseminacin se realiza al celo detectado CD luego del retiro del implante o IATF entre las 50 y 56
horas de su retiro. Se pueden efectuar dos inseminaciones luego del retiro del implante a las 46 y 72
horas, segn el protocolo recomendado por Intervet.
 SCENA utiliz el
protocolo CRESTAR adminsitrando Folligon el da de las IATF, junto con Destete Temporal, mediante
enlatado del ternero durante 11 das y lo compar con el protocolo CRESTARsolo, DT solo y vacas
control sin tratamiento alguno.

Todos los tratamientos permanecieron con toro durante 43 das.. Diagnstico de gestacin por ecografa
a los 45 das. Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puede apreciar la influencia del DT en asocio
con el tratamiento CRESTAR.

En un trabajo realizado por URIBE- VELASQUEZ y colaboradores, se emplearon implantes

de CRESTAR reutilizados. Estos implantes haban sido utilizados una vez durante 9 das.
Posteriormente fueron lavados con agua destilada, empacados en papel de aluminio y refrigerados a 4C
durante dos semanas. Los implantes de Norgestomet reutilizados fueron eficaces para sincronizar el
estro y alcanzar tasas de preez adecuadas en vacas Brahman.

En otro estudio se concluy que los implantes auriculares nuevos y de segundo uso, generan ndices
similares de presentacin de celos. As mismo, los porcentajes de preez son mayores en vacas
ciclando frente a vacas en anestro.(URIBE)

DISPOSITIVOS INTRAVAGINALES CON PROGESTERONA DIV

 Figura 1.- Actualmente en el mercado se
encuentran disponibles varios tipos de Dispositivos Intravaginales con diferentes niveles de
progesterona. PRID SANOFI 1.55 gm; CIDR-B PFIZER 1.35 gm;CUE-MATE BIONICHE 1.0
gm; DIB SYNTEX 0.5 -1.0 gm.

La aplicacin de estos dispositivos en la sincronizacin de celos ha sido ampliamente difundida, dando

lugar a diferentes protocolos de IA e IATF.

COMO UTILIZAR EL DISPOSITIVO INTRAVAGINAL CIDR-B

1.- Utilice siempre guantes protectores

2.- Prepare solucin desinfectante. Lave el aplicador en la solucin entre cada aplicacin.
3.- Coloque el dispositivo en el aplicador con el cabo trasero a lo largo de la ranura. Las dos aletas
ajustarn y sobresaldrn unos centmetros por encima del aplicador.
4.- Aplique suficiente gel lubricante en la punta del aplicador.

5.- Aparte la cola del animal a un lado y limpie la vulva con toalla absorbente.
6.- Abra los labios vulvares y deslice el aplicador haca arriba en ngulo.por encima de la pelvis y empuje
hasta sentir un poco de resistencia.
7.- Presione el embolo del aplicador para depositar el dispositivo y luego retire suavemente el aplicador.
8.- Si sobresale mucho el cabo del dispositivo se puede recortar para que solo sobresalga un poco y
evitar que otros animales curiosos lo extraigan.

9.- Para retirar el dispositivo 7 das despus basta con halar el cabo suave pero firmemente.
10.- Lave y desinfecte el dispositivo si lo va a reutilizar y coloquelo en recipiente sellado
El Grfico 5 muestra el protocolo recomendado para sincronizar celos con DIV e Inseminacin
Artificial convencional a Celo Detectado.

De acuerdo al Grfico 6 se lleg a la conclusin que los perfiles de concentracin de P4 en vacas

Holstein en lactancia no presentan diferencia significativa entre los distintos DIV de liberacin de P4. Sin
embargo, el tratamiento con DIB de 1.0 gm o CIDR de 1.3 gm alcanzaron perfiles menores de
concentraciones de P4 en plasma durante 21 das, lo que indica que los DIV que poseen mayor cantidad
de P4 la liberacin se realiza por un perodo ms prolongado que en los DIV con menor cantidad de
P4 (BO)

El Grfico 7 muestra que los niveles de P4 en vacas ovariectomizadas son similares cuando se aplican
DIV con diferentes dosis de P4. Por lo anterior la aplicacin de uno u otro no influye significativamente en
los resultados de sincronizacin de celos. (AVILES)

En el Grfico 8 se observa que los niveles sanguneos de P4 liberados al aplicar DIB de 0.5 gm, son
similares a los DIB de 1.0 gm. Sin embargo, la aplicacin de DIB de 1.0 gm usados, liberan una
cantidad insuficiente de P4, por lo que no sera recomendable su empleo en vacas en lactancia (CUTAIA)

La Tabla 2 muestra que mediante la utilizacin de DIB nuevos o usados conteniendo 1.0 gm de P4 o
DIB nuevo de 0.5 gm de P4 en programas IATF se obtienen resultados similares de preez. Sin
embargo el DIB de 0.5 usado origina porcentajes menores de preez, por lo que no sera factible su
reutilizacin. (BO)
Tabla 3.

En un estudio realizado por GONZALEZ se compar la respuesta de sincronizacin a protocolos que

utilizaron CRESTAR y CIDR en vacas lecheras en anestro postparto, encontrndose que no hubo
diferencia significativa entre los dos tratamientos.

Los S.C. estuvieron dentro de los valores ptimos 1.3 - 1.5. Tampoco hubo diferencia significativa en la
Tasa de Concepcin -T.C-. 50 y 52%.

Estos resultados indican que la decisin de escoger un protocolo u otro, depender del criterio del
profesional y el factor econmico.

PROSTAGLANDINAS

El descubrimiento de las prostaglandinas y su efecto luteoltico en los aos 70, constituy un grave
avance en el conocimiento de la fisiologa y la manipulacin del ciclo estral, en las diferentes especies
animales. Son derivados del cido linoleico y araquidnico, producidas en diferentes rganos, siendo
bajos sus niveles sanguneos debido a su degradacin rpida, especialmente en el pulmn.

La PGF2 es la prostaglandina empleada en reproduccin y es producida en el tero, llegando al CL del

ovario por efecto de contracorriente, de la vena uterina a la arteria ovrica, dada la cercana entre estos
vasos.

Debido a la dificultad de aislar la PGF2 natural en cantidades comerciales, las empresas farmacuticas
consiguieron elaborar PGF2 sinttica de idntica composicin a la natural y anlogos sintticos de
PGF2 con la porcin activa de la hormona ms no del resto de la molcula, siendo su accin ms
potente a menor dosis, dependiendo del anlogo.
Tabla 4

Los estudios realizados permitieron determinar que la PGF2 acta solamente sobre un CL funcional a
partir del da 5 hasta el da 17 del ciclo, momento en el cual el CL entra en regresin natural, por lo que
la administracin de PGs entre el da 17 y el da 5 del ciclo siguiente no tiene efecto alguno sobre la
duracin del ciclo estral. La receptividad del CL a las PGs aumenta a partir del da 6 del ciclo estral.

La regresin del CL se presenta entre las 12 y 24 horas postaplicacin, presentndose celo el da 2 a 5

de su administracin, dependiendo del desarrollo folicular. El 10% de las vacas son refractarias a la
aplicacin de la PGF2, esto se deba a que no todos los CLs maduros son lisados por la PGF2,
especialmente en vacas lecheras en lactancia. (MOMONT)

Los trabajos de ROWSON y COOPER, demostraron que al administrar 500 mg de Cloprostenol, un

anlogo sinttico de PGF2, produca luteolisis del CL en la mitad de la fase ltea y que si se administra
una segunda dosis en el da 11 despus de la primera, todos los animales se encontraban en fase ltea,
por lo que eran sensibles a la accin luteoltica de esta segunda aplicacin, presentando celo entre los 2
y 4 das de la segunda inyeccin, observndose una gran concentracin y rpida iniciacin de los celos.

Con la aplicacin de estas tcnicas ecogrficas en los aos 90, se hizo claridad sobre la dinmica
folicular y la influencia que sobre la misma tena la PGF2, se lleg a la conclusin que el intervalo entre
su aplicacin hasta la ovulacin dependa del grado de desarrollo del CL y del folculo
dominante (KASTELIC)

Resumiendo: La administracin de una dosis de PGF2 produce la regresin del CL en la mayora de los
das del diestro e induce celo en ms de la mitad de las hembras ciclando. Una inyeccin repetida 11
das ms tarde producir la sincronizacin de los celos del lote tratado, debido a que en ese momento
todas ellas se encontrarn entre los das 6 a 16 del ciclo y las que respondieron a la primera dosis
estarn en el da 7-9. (BO)

Grfico 9

Muestra la presentacin de celos en novillas y vacas despus de dos y una aplicaciones de PGF2,
observndose una gran dispersin de los celos en el tiempo. Esta gran variabilidad en el intervalo entre el
momento de la aplicacin de la PGF2 y la ovulacin es muy amplia, lo que produce bajos ndices de
preez a la IATF.

Grfico 10.-

Se aprecia el comportamiento de la presentacin de celos en vacas y novillas a la administracin de

PGF2, observndose una diferencia en el patrn de desarrollo folicular que hace que la dispersin en la
aparicin de celos despus de la PGF2, sea mayor en vacas que en novillas. Con un intervalo de 11
das, la segunda dosis de PGF2 coincide con un alto porcentaje de vacas en un estado temprano del
ciclo, con CLs que no responden al efecto luteoltico. (BO)
Con base en lo anterior FOLMAN compar dos tratamientos de intervalos de 11 y 14 das, en vacas
primparas lactando. El intervalo de 14 das increment el porcentaje de vacas preadas a la primera
inseminacin (84.2% vs 61.9%) y redujo el nmero de vacas vacas, por lo que se recomienda un
intervalo de 11 das para novillas y de 14 das para vacas lactantes luego de la primera aplicacin de
PGF2 en los protocolos de sincronizacin de celos con esta hormona.

Teniendo en cuenta lo expresado anteriormente se sugiere el protocolo de sincronizacin de celos con

PGF2 del Grfico 11.

Este tratamiento est indicado cuando se seleccionan hembras ciclando, con buena CC que permitan
esperar buenos indices de preez a celo detectado, no estando indicado en programas de IATF.

INSEMINACION ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO

A partir de la aplicacin de la ecografa como ayuda diagnstica en reproduccin, se logr tener un mayor
conocimiento sobre la dinmica folicular, lo cual ha permitido la manipulacin del ciclo estral tendiente a
mejorar el desempeo reproductivo del hato bovino en general. Igualmente y debido a que los principales
factores que influyen en la fertilidad, son la alta produccin de leche, la condicin corporal y la deficiencia
en la deteccin de celos, se han diseado distintos sistemas o protocolos que permitan alcanzar los
mejores ndices en estos parmetros de la produccin ganadera.
Una de las alternativas ms tiles para incrementar la cantidad de vacas inseminadas en un perodo
corto de tiempo, es la utilizacin de protocolos que sinronicen la ovulacin y permitan la inseminacin
sistemtica, sin la necesidad de detectar celo. Adems, el desarrollo de protocolos para vacas en anestro
postpato permite la inseminacin de una poblacin de animales significativamente mayor. (BO)

Actualmente se dispone de dos tipos de protocolos para IATF, los que utilizan la GnRH y PGF2
denominados protocolos Ovsynch y los que emplean dispositivos liberadores de progesterona y
estradiol. (BO)

Los tratamientos que han demostrado mayor efectividad en el control del ciclo estral para la
implementacin de programas de IATF, son los que combinan GnRH con PGs y los que utilizan distintas
combinaciones de estrgenos y progesterona (CUTAIA)

Diversos trabajos demostraron que la administracin IM de GnRH produce picos preovulatorios de LH

cerca de las 2 horas de su aplicacin, por lo que est indicada para inducir la ovulacin del folculo
dominante y el desarrollo de una onda folicular.(THATCHER)

El comienzo de la nueva onda folicular post GnRH fu en promedio de 1.6 das despus de su aplicacin,
no obstante todas las hembras tenan un nuevo folculo dominante a los 7 das.

Grfico 12

Con base en estos resultados se administr PGF2 7 das despus para sincronizar el celo e inseminar a
celo detectado. Este protocolo recibi el nombre "Select-Synch", el cual ha tenido bastante aceptacin
por parte de los ganaderos. Sin embargo este programa no soluciona el problema de la deteccin de
celos.
Grfico 13

Con posterioridad se demostr que el folculo dominante en crecimiento ovulaba de manera ms precisa
aplicando una segunda dosis de GnRH 1.5 a 2.0 das despus de la PGF2. Despus de la segunda
dosis de GnRH se insemina sin deteccin de celos entre las 0 y 24 horas, optimo 16-18, dando lugar a un
nuevo protocolo denominado "OVSYNCH". Si se insemina a las 0 horas, da de la aplicacin de la
segunda dosis de GnRH el protocolo se denomina "COSYNCH". (GEARY)

El objeto de la administracin de la primera dosis de GnRH es el de sincronizar la emergencia de una

nueva onda folicular o la luteinizacin de un folculo en vacas anovulatorias y la segunda dosis es la
sincronizacin de la ovulacin.

Diferentes trabajos han demostrado que los protocolos Ovsynch tienen tasas de preez similares a las
que se obtienen en vacas sincronizadas con PGF2 e inseminadas 12 horas despus del celo detectado,
por lo que se utiliza en gran medida para inseminar vacas cclicas de leche (CARAVIELLO)

De otra parte el protocolo Ovsynch no tuvo xito para sincronizar vacas en anestro postparto. Este
protocolo induce la ovulacin en un alto porcentaje de vacas en anestro, pero algunas tienen una fase
ltea posterior ms reducida lo que produce tasas de gestacin ms bajas que las vacas cclicas.
Igualmente las tasas de preez en novillas tratadas con Ovsynch son bajas.

Varios trabajos han determinado que la presencia de P4 es un pre-requisito para la expresin normal del
celo y una fase ltea normal. La sensibilizacin de la P4 es un factor definitivo en la diferenciacin normal
de las clulas de la granulosa y el desarrollo del CL luego de la ovulacin, siendo necesaria para la
reiniciacin de los ciclos en vacas anestricas postparto.
Por lo expuesto anteriormente y con el fin de lograr una mejor respuesta a la IATF se determin utilizar
los DIV en los protocolos Ovsynch y Cosynch en vacas en anestro y novillas, con el fin de inducir la
ciclicidad en estas hembras, dando lugar a los protocolos presentados en el Grfico 14

En la Tabla 5 observamos que no hay diferencia

signficativa en las tasa de preez entre Ovsynch y Ovsynch con DIV en vacas ciclando, pero si hay
diferencia significativa entre Ovsynch y Cosynch con DIV en vacas en anestro. (PURSLEY)

Igualmente se observa que no hay diferencia en la tasa de preez entre Ovsynch y Cosynch con DIV en
vacas, pero si la hay entre Cosynch y Cosynch con DIV en novillas.(MARTINEZ)
En consecuencia se ha recomendado la inclusin de DIV con progesterona en protocolos Ovsynch -
Cosynch, con el fin de aumentar la fertilidad en vacas de leche lactando en anestro y novillas.

Debido a los resultados obtenidos en diferentes investigaciones, se determin que los estrgenos
inducen la atresia de los folculos existentes al momento de su aplicacin y por consiguiente una nueva
onda folicular. Esta atresia se produce por la supresin de las gonadotropinas circulantes FSH-LH y no
por un efecto local a nivel de ovario. Igualmente se estableci que la administracin de progestgenos y
estrgenos en cualquier momento del ciclo estral, induce el crecimiento sincrnico de una nueva onda
folicular aproximadamente a los 4 das de la aplicacin.

Esto ha dado lugar al desarrollo de nuevos protocolos de sincronizacin de celos, ovulacin e IATF. Los
tratamientos que han demostrado mayor efectividad en el control del ciclo estral en programas de IATF,
son los que combinan GnRH con PGF2 y los que utilizan distintas combinaciones de estrgenos y
progesterona (CUTAIA)

En los paises en donde los estrgenos no estn autorizados como Norteamrica, Europa y Nueva
Zelanda, se utilizan los DIV con progesterona en asociacin con el protocolo Ovsynch para mejorar la
fertilidad de las vacas que todava no han comenzado a ciclar o vacas en anestro anovulatorio, siendo
este el problema ms comn en los sistemas de produccin lechera. En los pases del Mercosur los
protocolos ms empleados son en base a progestgenos y estrgenos.
Grfico 15.- Protocolo para IATF mediante
P4-PGF2-BE

Consiste en la administracin de 2 mg de BE al momento de la insercin del DIV en el da 0, remocin del

DIV en el da 7 y administracin de PGF2 en el da 7-8. Administracin de 1 mg de BE 24 horas
despus del retiro del DIV e IATF a las 54-56 horas luego de la remocin del DIV. (o 30 horas despus de
la segunda dosis de BE)

La recomendacin de IATF a las 52-56 horas de la remocin del DIV con P4, se origina en los resultados
en diferentes trabajos, en los cuales se detect un pico de LH a las 12 horas despus de la aplicacin de
1 mg de BE, y a que la ovulacin tena lugar alrededor de las 40 a 48 horas de la administracin (64 y 72
horas despus de la remocin de un CIDR-B o DIB) (BO)

En otro trabajo se administr 1 mg de Cipionato de Estradiol ECP el da del retiro del DIV y la
administracin de PGF2. Puesto que el ECP tiene una va media mayor a la del BE, el pico de LH
preovulatorio se produce a las 24 horas de la aplicacin del ECP. Por tal razn si administramos ECP se
elimina el uso de BE a las 24 horas del retiro del DIV ya que la ovulacin con ECP tiene lugar a las 72
horas, tiempo similar al de la ovulacin con BE. Sin embargo la diferencia del ndice de preez en ambos
tratamientos no fu significativa. La ventaja entonces de utilizar ECP
es la eliminacin de un encierro luego del retiro del DIV. (BO)

El tiempo trascurrido desde el inicio del protocolo y la IATF oscila entre los 9 a 10 das y todas las vacas
deben ser inseminadas en un rango de 4 horas. Este ltimo punto es muy importante ya que se debe
programar la cantidad de animales a tratar en funcin de este tiempo y esto depender
fundamentalmente de las instalaciones disponibles y del personal con que se cuente.

En la Tabla 6 se puede apreciar que los resultados obtenidos estn en un promedio del 50%, con un
rango muy amplio de 28.7% a 75.0%. (CUTAIA)

Tabla 7

El primer factor a tener en cuenta al momento de iniciar un programa de IATF es la CC, siendo la
recomendad de 3.0-3.5, pudiendo ser de 2.5 si est en proceso de ganancia de peso (BEP), esta puede
reforzarse con suplementacin alimenticia rica en carbohidratos como un ensilaje de maiz.

Un segundo factor es el grado de ciclicidad del lote, ya que como se ha demostrado en diferentes
trabajos, no es lo mismo tratar hembras cclicas que hembras en anestro o novillas, siendo los protocolos
que incluyen los DIV con P4, los ms indicados en estos dos ltimos lotes.

Un tercer factor, no menos importante, es el tipo de hembras del lote a tratar, si son Bos Indicus, Bos
Taurus o sus cruces, debido a que el comportamiento de celo es diferente.

Con el fin de mejorar los porcentajes de preez en vacas en anestro, se han desarrollado otras ayudas o
protocolos como administracin de eCG al momento del retiro del DIV. Las vacas en condiciones de
pastoreo presentan una alta incidencia de anestro postparto con presencia de folculos pequeos que,
luego de la administracin de estrgenos a las 24 horas de retirado el DIV, en especial BE, entran en celo
pero no ovulan. Con la administracin de 400 mg de eCG al momento del retiro del DIV se produce un
estmulo gonadotrpico, con lo cual se logra el desarrollo de los folculos, la obtencin de un folculo de
buen tamao, ovulacin y un CL de calidad, consiguiendose con esto un mayor ndice de preez. (BO)

Otro aspecto en este sentido se refiere al empleo del Destete Temporal -DT- por 40 o 72 horas. Este
punto est intimamente relacionado con la CC, puesto que las hembras responden mejor cuando tienen
una buena CC o estn en BEP.

Grfico 16

El papel del DT es similar al de la administracin de eCG al momento del retiro del DIV, aumentando la
pulsatilidad de la LH. Si hay una sincrona de onda luego de utilizar estradiol y colocar un DIV con P4, ya
que el DIV va a aumentar la pulsatilidad de la LH.

Si se hace el DT al momento de retirar el DIV se va a aumentar an ms esta pulsatilidad y cuando

colocamos el segundo estradiol se va a lograr una mayor ovulacin.
Cuando solo se utiliza el DT en vacas de baja CC, el aumento de la pulsatilidad de LH es insuficiente y
por consiguiente no hay desarrollo del folculo y ovulacin. (BO)

En la Tabla 8 se aprecia que la utilizacin del DT y P4 solos mejoran la tasa de preez, sin embargo
cuando se usan combinados, los ndices de preez mejoran ostensiblemente.(MENCHACA)

VITTONE et al encontraron que la tasa de preez solo mejora cuando el DT se realiza al comienzo del
tratamiento hormonal, al utilizar DIV con P4 y DT en vacas de baja CC. De otra
parteVASCONCELOS concluy que el DT solo, mejora el comportamiento del celo, mientras que el DIV
solo beneficia la concepcin. La combinacin de DIV- DT mejora la tasa de preez al mejorar el
comportamiento y la concepcin.

En una investigacin realizada por OSORNO y CASTRO 2010 Tabla 9, en hatos de ganado Brahman
comertcial en Puerto Salgar, Magdalena Medio Colombiano, se determin que la Interrupcin Temporal
del Amamantamiento (ITA), al momento del retiro del DIB, para programas de IATF, por 80 o 56 horas
mejora los ndices de preez, cuando se utiliza el protocolo BE- DIV P4 - PGs y eCG.
En todos los tratamientos en que se utiliz DT, los porcentajes de preez por IATF fueron superiores a los
que se obtuvieron con monta natural o grupo control. No hubo diferencia significativa entre el ITA de 80
o 56 horas. Se recomienda un DT de 72 horas.

Las investigaciones expuestas demuestran que el DT aumenta los ndices de preez al emplearse en
combinacin en los protocolos de IATF. El inconveniente est en el manejo de los animales y la
disponibilidad de reas para su aislamiento y aplicacin de los frmacos.

Grfico 17.-
Una vez realizada la IATF existen varias alternativas de manejo de las vacas tratadas, la ms comn es
el repaso con toro, el cual debe comenzar al da 15 de la IATF y no antes, para evitar confusiones entre
la preez por IATF y la preez por toro.

Las vacas son tratadas con un protocolo BE - DIV - PGF2 - BE e IATF a las 52-56 horas de retirado el
DIV (30 horas despus de la administracin del BE da 8).

A los 15 das de la IATF entran en servicio con toro hasta los 90 das.

Se realiza ecografa a los 30 das de la IATF para diagnstico de preez y ecografa a los 60 y 90 das
para diagnstico de preez por toro.

La Tabla 10 muestra los resultados de los ndices de preez en vacas con cra, vacas secas y novillas
tratadas con IATF y repaso con toro. Se observa un incremento significativo en los ndices de
preez. (CUTAIA)
Grfico 18

Una segunda alternativa es la utilizacin de la IA a Celo Detectado, entre el da 15 a 25 despus de la

IATF y repaso con toro a partir del da 25 hasta los 90 das. Ecografa el da 55 para diagnstico de
gestacin.

Grfico 19

Otra alternativa es la de realizar un programa de resincronizacin de celos, de esta manera, tambin con
el uso de un DIV, es factible reinseminar los animales vacos a la IA, colocando el DIV entre el da 14 -17,
despus de la primera IA, hasta el da 21 -24 y realizar la segunda IA a celo detectado.

Grfico 20

Igualmente se puede resincronizar y reinseminar las hembras vacias a la IATF, las cuales entran en
celo luego de la IATF, administrando BE y un DIV el da 13, retirando el DIV el da 20 e inseminar a celo
detectado junto en un rango que va de 20 a 25 das post IATF. Los resultados esperados con este
tratamiento son de 70 a 75% de preez con las dos inseminaciones para ganado de carne y entre 60 y
70% para ganado de leche. (CUTAIA)

En una investigacin realizada por POOCK et al en vacas Holstein de acuerdo a la fecha de parto, se
trataron con un protocolo "Presynch Ovsynch" (PGF2, 14 das; PGF2, 14 das; GnRH, 7 das; PGF2,
56 horas; GnRH, 16 horas ; IA a Tiempo Fijo), de tal manera que que la primera IATF fu entre los 70 a
76 das postparto, se concluy que la Preez en vacas inseminadas a tiempo fijo el primer servicio o
resincronizadas en programas basados en Ovsynch (P/IA), no se afecta por el empleo de diferentes
productos en base a GnRH. Sin embargo hay otros factores que afectan la P/IA incluyen el nmero de
servicios (menor para el segundo servicio o ms), mes (menor en los meses de verano), SCC (menor en
vacas con SCC mayor) y el porcentaje de protena en la leche (mayor en vacas con mayor porcentaje de
protena).

Como se ha visto existe una gran variedad de protocolos para la implementacin de un programa
de IATF, por lo que la escogencia y aplicacin de uno u otro depende en alto grado del anlisis de los
diferentes factores que afectan e intervienen en el buen desempeo reproductivo de las hembras a
tratar, en especial la Condicin Corporal, Tipo de ganado, Ciclicidad de las hembras, Disposicin de
instalaciones y Personal capacitado.

La importancia de los programas de IATF est en producir el mayor nmero de

preeces por unidad de tiempo y no en el mayor nmero de hembras tratadas, siendo
una herramienta muy til en el mejoramiento de la fertilidad del hato bovino
y complemento de un buen sistema de manejo, pero no lo reemplaza.

Igualmente no se constituyen en la frmula mgica para solucionar problemas

reproductivos, por lo que deben ser aplicados con un gran criterio y responsabilidad por
parte del Profesional en Reproduccin Asistida, quien desempea un papel definitivo
en los resultados del programa de IATF.

BIBLIOGRAFIA

BECALUBA F.- METODOS DE SINCRONIZACION DE CELOS EN BOVINOS. 02/08/2007 ENGORMIX

BO G. CUTAIA L. ESTRATEGIAS PARA INCREMENTAR LA PREEZ EN VACAS EN ANESTRO. 2005.

MANUAL DE GANADERIA DOBLE PROPOSITO.

BO G. ESPECIALIDAD EN REPRODUCCION BOVINA IRAC 2005

BO G. CUTAIA L. ESTRATEGIAS PARA INCREMENTAR LA PREEZ EN VACAS EN ANESTRO.

MANUAL DE GANADERIA DOBLE PROPOSITO 2005

BO G. SINCRONIZACION DE CELOS E INSEMINACION ARTIFICIAL EN GANADO BOVINO

IRAC 2005 COLOMBIA

BO G. CUTAIA L. PINCINATO D. PERESA C. EFECTO DEL CONTENIDO DE PROGESTERONA DE

UN DISPOSITIVO INTRAVAGINAL SOBRE LAS TASAS DE PREEZ OBTENIDAS EN VAQUILLONAS
CRUZA BOS INDICUS INSEMINADAS A TIEMPO FIJO. CONGRESO MUNDIAL DE REPRODUCCION
EN RUMIANTES NUEVA ZELANDA AGOSTO 2006

BO G. CUTAIA L. SOUZA A. BARUSELLI P. ACTUALIZACION SOBRE PROTOCOLOS DE IATF EN

BOVINOS DE LECHE.

BO G. CUTAIA L. PINCINATO D. PERESA C. EFECTO DEL CONTENIDO DE PROGESTERONA DE

UN DISPOSITIVO INTRAVAGINAL SOBRE LAS TASAS DE PREEZ OBTENIDAS EN VAQUILLONAS
CREUZA BOS INDICUS INSEMINADAS A TIEMPO FIJO. CONGRESO MUNDIAL DE REPRODUCCION
EN RUMIANTES NUEVA ZELANDA 2006

BO G. CUTAIAL. TRIBULO R.- TRTAMIENTOS HORMONALES PARA INSEMINACION ARTIFICIAL A

TIEMPO FIJO EN BOVINOS DE CRANE: ALGUNAS EXPERIENCIAS REALIZADAS EN ARGENTINA.

BO G. IATF: PROTOCOLOS A BASE DE P4 Y E2. VI JORNADAS DE TAURUS REPRODUCCION

BOVINA 2012 IRAC CORDOBA ARGENTINA

BO G. QUE APRENDIMOS DESPUES DE 17 AOS EN IATF EN HATOS DE CRIA. VI JORNADA

TAURUS DE REPRODUCCION BOVINA SEP 2012 http://www.engormix.com/MA-ganaderia-
carne/videos/iatf-rodeos-cria-avances-gabriel-t20292.htm

BUTTLER WR, EVERETT RW. COPPOK CE. 1981. THE RELATIONSHIPS BETWEEN ENERGY
BALANCE, MILK PRODUCTION AND OVULATION IN POSTPARTUM HOLSTEIN COWS. J. Anim. Sci
53: 742

CARAVIELLO. DZ.WEIGEL KA. FRICKE PM. WILTBANK MC. FLORENT MJ, COOK NB. SURVEY OF
MANAGEMENT PRACTICE RELATED TO THE REPRODUCTIVE PERFORMANCE OF DARY CATTLE
ON LARGE COMMERCIAL FARMS IN THE UNITED STATES. J. DAIRY SCI 89 4723-4735 2006

COREA A. HERNANDEZ N. INDUCCION DEL CELO EN VACAS EN ANESTRO POSTPARTO

MEDIANTE LA ADMINISTRACION DE SALES MINERALES VITAMINAS Y MASAJE OVARICO EN EL
MUNICIPIO DE RIOBLANCO MATAGALPA. 2007

CUTAIA L. ESTADO D EL ARTE EN IATF: FACTORES QUE AFECTAN SUS RESULTADOS 2003

CUTAI L. VIDELA DORNA I. ABA M. BO G. CONNCENTRACIONES PLASMATICAS DE

PROGESTERONA EN VACAS OVARIOECTOMIZADAS TRATADAS CON DISPOSITIVOS
INTRAVAGINALES FORMULAFOS CON DIFERENTES DOSIS DE P4. VI SIMPOSIO INTERNACIONAL
DE REPRODUCCION ANIMAL - IRAC- CORDOBA ARG. 2005

CUTAIA L. INSEMINACION ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO (IATF): UNA HERRAMIENTA PARA EL

MEJORAMIENTO GENETICO 2006

CUTAIA L. IMPORTANCIA, ORGANIZACION Y MANEJO DE LA INFORMACION EN PROGRAMAS

REPRODUCTIVOS 2009 SYNTEX S.A.
CUTAIA L. FERESIN F. VIDELA D. BO G. CONCENTRACIONES PLASMATICAS DE PROGESTERONA
EN VACAS DE LECHE EN LACTANCIA TRATADAS CON DISPOSITIVOS INTRAVAGINALES CON
DIFERENTES DOSIS DE PROGESTERONA.

CUTAIA L. BO G. OPCIONES DE MANEJO Y TRATAMIENTOS PARA PREAR LAS VACAS VACIAS

DESPUES DE LA IATF 2012

CUTAIA L. PROGRAMAS DE INSEMINACION ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO. ANALISIS DE COSTOS E

IMPLEMENTACION. 2012

FOLMAN Y. KAIM M. HERZ Z. ROSEMBERG M.- COMPARISON OF METHODS FOR

SYNCRONIZATION OF UESTRUS CYCLE IN DAIRY COWS. J. DAIRY SCI.1990

GEARY TW. WHITTER JC. HALLFORD DM. MACNEIL MD. CALF REMOVAL IMPROVES
CONCEPTION RATES TO THE OVSYNCH AND COSYNCH PROTOCOLS. J. ANIM. SCI 2001

GONZALEZ A. COMPARACION ENTRE EL CRESTAR Y CIDR COMO SINCRONIZADORES DE

CELOS SOBRE EL COMPORTAMIENTO REPRODUCTIVO DE ACAS LECHERAS CON ANESTRO
POSTPARTO. dIC 2010.

KASTELIC JP.- SINCRONIZACION DE CELOS E INSEMINACION ARTIFICIAL EN EL GANADO

BOVINO. CONFERENCIA IRAC 2006

MARTINEZ N.- IATF: ALTERNATIVA PARA MEJORAR LA INSEMINACION ARTIFICIAL. REVISTA

GENETICA BOVINA N 2 ED MARZO-ABRIL 2007

MOMONT HW. SEGIN BE.- TREATMENT OF UNOBSERVED ESTRUS IN LACTATING DAIRY COWS
WITH PROSTAGALDIN F2 PRODUCTS. PROC. SYMPOSIUM ON REPRODUCTIVE MANAGEMENT
IN FOOD ANIMALS, COMP. CONT. ED 1983; 28-31
POOCK. S.E. LAMBERSON W.R. LUCY M.C. EFEFECT OF DIFFERENT GONADORELIN (GnRH)
PRODUCTS USED FOR THE FIRST OR RESYNHRONIZED TIME ARTIFICIAL INSIRY COWS.
MINATION ON PREGNANCY RATES IN POSTPARTUM DAY. THERIOGENOLOGY. SEPTIEMBRE 1
2015 Vol 84, Issue 4, Pginas 504-508.

SCENA .G. VENTURINI M. DOMINGUEZ G. FADER F. EFICACIA DEL CRESTAR COMBINADO CON
DESTETE TEMPORARIO EN VACAS MEDIA SANGRE CEBU CON POBRE CONDICION CORPORAL.
22/10/2007

THATCHER W W. MACMILLAN K.L HANSEN P.J DROST M. CONCEPTS FOR REGULATION OF

CORPUS LUTEUM FUNCTION BY CONCEPTUS AND OVARIAN FOLLICLES TO IMPROVE
FERTILITY. THERIOGENOLOGY 1989.

URIBE-VELASQUEZ L. CORREA OROZCO A. CUARTAS BETANCURTH L. VILLAMIZAR RAMIREZ D.

ANGEL BOTERO S. EVALUACION DE IMPLANTES DE NORGESTOMET REUTILIZADOS EN
PROTOCOLOS DE SINCRONIZACION DEL ESTRO EN VACAS BRAHMAN. REV. MVZ CORDOBA
VOL 18 NUM 1 ENERO-ABRIL 2013 PP 336-3345. UNIVERSIDAD DE CORDOBA MONTERIA
COLOMBIA.

URIBE R. ROBLEDO E. USO DE DISPOSITIVOS AURICULARES DE NORGESTOMET EN

INSEMINACIO ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO EN BOVINOS DOBLE PROPOSITO, CON
AMAMANTAMIENTO PERMANENTE. REV. CES MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA/VOL
7/NUM1 ENERO-JUNI 20127ISSN 1900-9607

VILLARRAGA A.C. ESTUDIO COMPARATIVO DE TRES TRATAMIENTOS PARA MEJORAR LA

EFICIENCIA REPRODUCTIVA EN EL POSTPARTO EN GANADO DE LECHE EN EL TROPICO. 1990

INSEMINACION ARTIFICIAL

Es la tcnica mediante la cual se fecunda una hembra utilizando mecanismos que simulan la monta
natural y que consiste en el depsito del semen del macho dentro del tracto genital de la hembra, en un
momento adecuado, que coincide con la ovulacin.

Es innegable la importancia de la Inseminacin Artificial en el desarrollo de la ganadera Colombiana,

principalmente en explotaciones de leche y doble propsito, siendo el mejoramiento gentico factor
preponderante y benfico en la produccin y productividad de las mismas. Es as mismo, una tcnica
simple, exitosa y econmicamente factible de implementar en el hato nacional.

La utilizacin de semen procedente de toros probados en centrales de reproduccin, tanto extranjeras

como nacionales ha permitido la adaptacin de hembras y reproductores al medio ambiente tropical
Colombiano, lo cual se refleja en la calidad de las cras resultantes y el aumento de la produccin por
unidad.

Si bien la aplicacin de la IA y la IATF muestran resultados satisfactorios de fertilidad, existe un nmero

variable de hembras que no se logra prear mediante stas tcnicas, las cuales se convierten en
hembras problema.

Estas circunstancias pueden deberse a defectos anatmicos como el cuello en S muy frecuente en
ganado cebuino, o inflamaciones del tero no detectables a la palpacin o la ecografa, o simplemente no
quedaron gestantes luego de dos o tres inseminaciones. Lo anterior hace necesario la utilizacin de
"toros repasadores" con el fin de prear este grupo de hembras. El toro repasador debe llenar las
caractersticas fenotpicas propias de la raza y las caractersticas de un buen reproductor, con el fin de
que se conserven las metas de produccin del hato.

Con el fin de obtener los mejores parmetros reproductivos mediante la utilizacin de la IA, adems de
los factores que intervienen en la reproduccin, como Sanidad, Nutricin, Raza y Medio Ambiente y
aquellos que afectan la aplicacin de las Tcnicas de Reproduccin Asistida, deben tenerse en cuenta
algunos puntos que inciden directamente en la aplicacin y ejecucin de esta tcnica. Tabla 1 :

TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO DEL SEMEN

El factor clave para la preservacin prolongada de los gametos, es la baja temperatura, por lo que el
semen debe mantenerse durante todo el perodo de su almacenamiento por debajo de los -130C, para
que conserve la mxima fertilidad, siendo la temperatura dentro del termo de -196C. Si se presentan
ligeros aumentos de temperatura cuando se maneja el semen congelado, se producen graves daos
irreversibles del lquido intracelular del espermatozoide, debido a la "recristalizacin". La exposicin
repetida de manera inadecuada de las pajillas en la boca del termo, deteriora la calidad seminal con el
consiguiente efecto negativo inmediato y acumulativo sobre la calidad del semen.

En la Figura 1 se muestra el rango de temperatura a boca de termo con Nitrgeno lquido y la manera de
exponer las canastillas para el retiro de las pajillas.

Algunas veces debemos realizar varias inseminaciones por lo que debemos levantar la canastilla
repetidamente, exponiendo el semen cada vez a temperatura ambiente durante cortos perodos. De otra
parte durante la transferencia del semen entre termos y la manipulacin de las canastillas, el semen se
expone a diferentes temperaturas, lo cual produce daos sobre el mismo.

Pickett et al midi la temperatura del semen durante la manipulacin de las canastillas y observ que
aunque el semen est en contacto con el nitrgeno tiempo suficiente, en cada exposicin a temperatura
ambiente, ste alcanza temperaturas mayores, requiriendo ms de 10 minutos para que recupere
nuevamente los -196C, en especial si el nivel de nitrgeno es bajo.

Por lo anterior se recomienda siempre manipular el semen lo ms rpido posible, manteniendolo

almacenado en gobelets de plstico llenos de nitrgeno lquido, para minimizar los cambios de
temperatura durante el proceso.

Grfico 1.- Temperatura del semen dentro de las pajillas sostenidas con pinzas en canastillas metlicas
durante la exposicin a temperatura ambiente 20 +/- 0.6C. Cada curva representa el promedio de 5
rplicas (BERNDSTON).

TEMPERATURA DE DESCONGELACION DE LA PAJILLA

Las mayores diferencias entre los inseminadores en el manejo del semen se produce durante la
descongelacin. Algunos utilizan llevarlas en el bolsillo o entre la ropa y el cuerpo, para que lleguen a la
temperatura corporal, lo cual se ha comprobado que nunca alcanzan esta temperatura; colocarlas dentro
de la vagina; utilizar agua del grifo; temperaturas y tiempos variables de exposicin, protocolos que son
inadecuados y no logran ndices de fertilidad aceptables.

BARTH et al en un experimento concluy que luego de 30 segundos de exposicin a bao mara a 35 -

37, el semen en pajillas llega a 30C y no sufre schok trmico, por lo que se recomienda este protocolo
de descongelacin del semen. Tambin compar distintos tiempos de exposicin a temperatura y tiempo
de descongelacin, comprobandose que el semen despus de exponerlo durante 12 segundos a 37C,
solamente alcanza 0C, por lo que sufre schock trmico y en consecuencia prdida de la motilidad,
actividad metablica, capacidad fecundante y lesin de la membrana plasmtica.

En otro experimento realizado por SENGER et al, se descongelaron pajillas de 0.5 ml a dos
temperaturas (5C y 35C) para luego exponerlas a diferentes temperaraturas de 1C - 20C -37C,
imitando distintas posibilidades de temperaturas ambiente.

Como se puede ver en la Tabla 2 los mejores resultados expresados en motilidad espermtica e
integridad acrosomal fueron con temperatura de 37C y luego mantenidos entre 37C y 20C. Por lo
tanto si no hay una temperatura ambiente baja, no hay peligro de schock trmico, siempre y cuando se
realice rpidamente la IA. Lo anterior corrobora los resultados y recomendaciones del trabajo de BARTH.

Adems se recomienda mantener el semen en el mismo bao mara hasta el momento de la

inseminacin, la que debe realizarse dentro de los 15 minutos del descongelamiento partir de ste
momento comienza a disminuir la integridad del acrosoma y la motilidad espermtica.

Cuando se trabaja a la intemperie con bajas temperaturas, existe la posibilidad de que se produzca
schock trmico por la diferencia de temperaturas entre el descogelamiento y el medio ambiente, por lo
que se recomienda proteger el semen desde el momento de su descongelamiento y su traslado hasta la
vaca a inseminar. (BO).

Cuando es necesario inseminar un grupo grande de animales en un tiempo corto, es recomendable que
un ayudante vaya descongelando las pajillas, segn vaya progresando el proceso, lo que permite mayor
precisin y seguridad en cada inseminacin.
El proceso de transporte espermtico en el tracto reproductor femenino (Tabla 3) se lleva cabo
inicialmente de forma rpida y luego de forma lenta. En la fase rpida los mecanismos fisiolgicos del
tracto femenino trasportan los espermatozoide hasta el oviducto sin la participacin activa de los mismos
y no son fecundantes. Durante la fase lenta los espermatozoides llegan al oviducto 8 horas despus del
servicio y son almacenados por 18 horas en el itsmo, parte inferior del oviducto, para posteriormente
avanzar hasta la unin con la ampolla, sitio en donde se realiza de la fecundacin luego de la
capacitacin espermtica.

Por esta razn solo una poca cantidad de espermatozoides llegan a este sitio ya que en su gran mayora
son fagocitados o eliminados con el moco cervical, debido a movimientos retrgrados del eyaculado.

GALLAGER y SENGER demostraron que al

efectuar recolecciones de material vaginal, no existan diferencias en la eliminacin de espermatozoides
cuando la siembra se realizaba en los cuernos o el cuerpo del tero, pero si haba diferencias cuando la
siembra se realizaba en la ltima porcin del cuello.

De otra parte se observ que los inseminadores que decan depositar el semen en el cuerpo del tero, lo
hacan en realidad en el cervix. Tabla 4.

Teniendo en cuenta lo anterior se propuso depositar el

semen delante del cuerpo dentro del tero, logrndose que los inseminadores reentrenados en este
procedimiento, mejoren los ndices de fertilidad.

En conclusin se recomienda efectuar el depsito del semen en la porcin anterior del cuerpo del tero.
Figura 2
DETECCION DE CELO

SINTOMAS DE CELO

La principal falla en los programas de IA es la deficiencia en la deteccin de calores, causante d e los

bajos indices de concepcin y, por consiguiente largos I.E.P, por lo que la identificacin de la vaca en
celo se constituye en el objetivo primordial de un programa de Inseminacin.(GRAVES)

Figura 3.- El conjunto de hembras del hato conforman un grupo sexualmente activo que interacta entre
si. La hembra en celo se muestra inquieta, se mueve a intervalos cortos, muge, se topetean y frotan la
cabeza entre ellas, olfatean y lamen los genitales de sus compaeras
Figura 4. La pasividad ante la monta es el nico indicador de que la vaca se encuentra en celo. Como
consecuencia de la monta los pelos de la zona del anca se aprecian revueltos en inclusive hay depilacin
del rea. La actividad de monta se estimula cuando el ganado se encuentra en movimiento, encorralado
o comiendo. Se ha comprobado que ms del 85% de las vacas que intetan montar a otras por el frente
estaban en celo, por lo que esta manifestacin puede considerarse como signo secundario confiable de
celo. (FONSECA)

Figura 5.- La edematizacin e hiperemia de la vulva y el cuello se debe a los altos niveles de estrgenos,
que causan un aumento de la irrigacin del tero, enroscamiento y turgidez de los cuernos.

Figura 6.- Sin duda el principal signo fsico de celo es la secrecin vulvar de moco cervical claro y
cristalino, ms evidente en novillas que en vacas.
La duracin del celo depende de la especie y vara de una hembra a otra dentro de la misma especie. La
estimulacin del grupo de hembras por el macho reduce la duracin del estro y el momento de la
ovulacin. El celo es ms corto en animales en pastoreo que en estabulacin, siendo igualmente ms
corto en ganado ceb.

La presentacin de celos en ganado de leche sucede frecuentemente dentro del horario de la Tabla 5

Para lograr el mayor porcentaje de determinacin visual del celo, es necesario revisar los lotes dos o tres
veces al da, con una duracin mnima de una hora, ya que el animal puede mostrar de una a tres montas
por hora, lo que implica que an teniendo un excelente personal detectando celos, es posible que se
pasen parte de ellos por razones fisiolgicas. Grfico 2

De otra pare se debe tener especial dedicacin durante el perodo de observacin, conocer los animales
y las diferencias de comportamiento y dominancia entre ellos. Muchas veces durante la observacin se
confunde al animal que est en celo con otros que estn entrando o saliendo del celo, o simplemente son
animales que no estn en celo, originando un bajo porcentaje de preez, aunque con porcentajes
aparentemente normales de deteccin de celos. (MARTINEZ)

Para tener una idea de esta problemtica hay que considerar que mundialmente se pierden entre el 20%
y 50% de los celos y que el 30% de las vacas son inseminadas a destiempo o cuando no estn en
celo. (BALL)

Figura 7.- La observacin visual directa es el mtodo ms utilizado para detectar celo en la vaca. Una
buena observacin al igual que la disposicin de corrales y calcetas tanto para la observacin del celo,
como para efectuar fcilmente la inseminacin, mejora el porcentaje de preez.

La eficiencia en la deteccin visual de celo vara entre 90% y menos del 50% (ROELOFS)

AYUDAS PARA DETECCION DE CELOS

En la actualidad existe un gran nmero de ayudas para detectar celo en bovinos, algunos ms
sofisticados que otros, dependiendo del tamao del hato y el tipo de explotacin, en los cuales se
emplean sistemas automticos de televisin y computarizacin, conectados a centrales de observacin y
registro. Todos tienen como objetivo mejorar la deteccin de celos. Por lo general se combinan con otras
tcnicas complementarias.
Figura 8.

La desviacin de pene es la tcnica quirrgica ms empleada. La punta del prepucio debe quedar lo
suficientemente alta y estirada, de tal manera que no permita que el macho introduzca el pene.
Igualmente no debe quedar en hamaca pues hace posible que la orina se deposite en la curvatura
inferior, produciendo irritacin del rgano.

Figura 9

Las tintas se aplican en la parte anterior de la raz de la cola. Se aprecia su decoloracin o dispersin de
la mancha al ser montada por otro animal.
Figura 10

Los parches como el "Kamar", se aplican en la raz de la cola, el cual se colorea al ser presionado por
otro animal que monte la hembra en celo. Simple, se puede perder o dar falsos positivos. Efectividad
promedio 80%

Figura 11

La vaca androgenizada es una hembra que mediante la administracin de testosterona adquiere

comportamiento de macho, por lo que se le denomina "machorra". Para su seleccin se tiene en cuenta
que se encuentre vaca, preferiblemente hembra de despaje por fertilidad, no ciclando, no lactante, buen
tamao, fsicamente sana especialmente de patas. Sirven igualmente las hembras con quistes ovricos
o hembras "Free martin"

El tratamiento consiste en la administracin IM de testosterona (Testoviron Depot).

Dosis de induccin 2000 UI. 8 ampollas de 250 UI.

Dosis de mantenimiento 1000 UI. 4 ampollas de 250 UI cada 30 das.
Si se suspende el tratamiento por cualquier circunstancia, la vaca puede reiniciar ciclos y quedar
preada al ser servida por el toro. Esta posibilidad debe ponerse en conocimiento del
ganadero (RIVERA)

Otra alternativa es la administracin de 500 mg IM y 1500 mg Sc de testosterona al momento de

colocar 8 implantes (4 en cada oreja) de SYNOVEX (200 mg de propionato de testosterona + 20 mg de
benzoato de estradiol por implante). Esto mantendr al animal activo por 60 a 90 das. (MORTMEN)

En la Tabla 6 se muestra la eficiencia de varios mtodos de deteccin de celos.

(CAVALIERI)
Figura 12

El podmetro en hatos lecheros en estabulacin permanente, es tan efectivo como la observacin visual
por 30 a 60 minutos, 1 a 3 veces al da. Menos efectivo que 4 observaciones diarias por 60 minutos o 6
observaciones diarias por 30 minutos. La ombinacin de podometra y observacin son superiores a
cada mtodo utilizado por separado (KASTELICK).

Sumado a esto, el podmetro detect el 63-79% de perodos luteales u ovulaciones no acompaadas de

comportamiento de estro. Se emplea asociado con determinacin de progesterona en leche durante el
ordeo. Tiene una efectividad de 91% y 92% (COHEN). Ha sido incorporado en sistemas computarizados
de manejo del hato, emplendolo con xito como nico mtodo de deteccin de celo. (SPAHR)
Figura 13

El sistema cerrado de televisin tiene una efectividad de registro de celos del 56 al 94%, siendo menor
que lla deteccin visual directa. La exactitud se aproxima a 50% y es menor que la deteccin
visual (BALL)

Figura 14

El sistema Heat Watch es un detector de celos radiotelemtrico automatizado que mediante un sensor de
presin colocado en el anca, permite registrar la actividad de monta, fecha, identificacin y duracin de la
monta, la cual es trasmitida a una antena repetidora que enva la informacin a un centro de
computacin. Se considera que una vaca est en celo si monta 3 veces en un perodo de 4 horas.

Este sistema ha sido probado en la Universidad de Virginia Tech desde 1994 obtenindose una eficiencia
de deteccin de celo del 94% con un nivel de exactitud del 95% (BO)

Como puede verse existe una gran variedad de mtodos tendientes a detectar celos en bovino, cada uno
tiene sus ventajas y desventajas. Su empleo depende en gran medida del tamao del hato y el tipo de
explotacin, ya sea intensiva o extensiva, leche, carne o doble propsito.
La Tabla 7 presenta los principales errores que se cometen en la deteccin de celos.

En los mtodos no electrnicos se recomienda el empleo de Chin-ball

Por lo anterior es conveniente combinar uno de los mtodos no electrnicos con la inspeccin visual para
mejores resultados.

MOMENTO DE LA INSEMINACION

El servicio natural y la inseminacin artificial terminan en preez solamente si el espermatozoide se

encuentra en "el lugar adecuado en el momento oportuno". De ah la importancia de detectar a tiempo el
animal en celo mediante la identificacin de los sntomas correspondientes, los cuales han permitido
desarrollar las diferentes ayudas complementarias con tal fin.

En la Figura 15 podemos apreciar las distintas

actividades que se manifiestan en el trascurso del ciclo estral.

La actitud de caminar, en la cual se basa el podmetro, se aumenta cuando la vaca est en celo.

Durante este perodo el animal disminuye el tiempo dedicado a comer y la produccin de leche baja.

Igualmente la hembra monta y se deja montar, topetea otras vacas para finalmente presentar la
inmovilidad a la monta, signo inequvoco de celo.

Los eventos que determinan el momento de la IA son la viabilidad y funcionalidad del esperma
(aproximadamente 24-30 hs) y el ovocito (6-10 hs), junto con el tiempo requerido por el espermatozoide
para ser transportado desde el sitio de depsito hasta el lugar de la fertilizacin (aproximadamente 4-8
hs). Para que ocurra la fertilizacin del vulo es necesario que los espermatozoides se depositen antes
de la ovulacin, para que tengan tiempo de adquirir la capacidad fecundante (capacitacin espermtica)
y esperen al vulo en la parte media del oviducto o mpula. Grafico 3

La ovulacin ocurre alrededor de las 27hs de iniciado el estro.(WALKER)

Las inseminaciones tempranas tienen bajos ndices de fertilizacin y embriones de buena calidad,
mientras que con las inseminaciones tardas se obtienen indices altos de fertilizacin pero embriones de
baja calidad. La fertilidad despus de la primera IA es considerada aceptable cuando el porcentaje de no
retorno al celo despus de 56 das de la IA es > 60%.(SAACKE)
Sin embargo, el problema surge cuando no se puede determinar en forma precisa el momento en que
comenz el celo, por lo que se ha establecido que el momento de la inseminacin en hembras que entran
en celo en la maana se inseminen en la tarde y las que entran en la tarde se inseminen en la maana,
con dos observaciones diarias.

Adems si se observan los celos tres veces al da y teniendo en cuenta el horario de la

presentacin de celos expuestos en la Tabla 8, se recomiendan servir las hembras en el horario
de la Tabla 9
Cuando se determin celo mediante el podmetro, se obtuvieron tasas de concepcin muy similares en
vacas inseminadas 0-24 hs del inicio del celo.

Con el sistema Heat-Watch se determin que la tasa de concepcin fu ptima en 2661 vacas
inseminadas 4-16 hs posteriors al inicio del celo, con un 46-51%, presentndose una reduccin (43%), en
la tasa de concepcin de las vacas inseminadas cerca del inicio del celo (0-4 hs).
(WILTBANK)
El ganado ceb, cuyo comportamiento, manifestacin e intensidad de los sntomas de celo son muy
variables, los resultados de la IA son menores que en el ganado de leche. Teniendo en cuenta que la
duracin del celo en ceb es ms corto, se recomienda servir en el momento en que se observen los
sntomas de celo. En las razas cebuinas el celo tiene una duracin de 5-7 horas, especialmente de
noche. Para el trpico Colombiano se reportan promedios en novillas ceb de 10 horas y 18 horas en
Holstein (GONGORA)

En el Grfico 6 se observa que el ganado ceb presenta los celos con mayor frecuencia en las horas de
la maana (68.7%) que en la tarde (31.25%) (AGUIRRE)

TECNICA DE INSEMINACION ARTIFICIAL

La Figura 16 muestra los diferentes implementos necesarios para efectuar adecuadamente la
Inseminacin Artificial.

PROCESO DE LA INSEMINACION ARTIFICIAL

1.- Identifique las hembras en celo de acuerdo a los sntomas observados

2.- Revise la tarjeta reproductiva del animal y/o la base de datos y constate que se encuentra dentro del
Perodo De Espera Voluntario PVE, igualmente si ha tenido servicios previos y cuantos. Proceda segn el
protocolo establecido.

3.- Site los animales a inseminar en el embudo y la calceta del corral.

Introduzca la hembra dentro del brete y asegrela adecuadamente.

4.- Examine y observe las caractersticas del flujo vaginal, que sea limpio, transparente y brillante. Si es
turbio o con estras de sangre o grumos de pus no insemine.
Registre la novedad y aplique el tratamiento segn el protocolo recomendado.
Los grumos pueden deberse a residuos de semen de un servicio por toro. No olvidar que al presentarse
metrorragia esta puede deberse a que el celo sucedi dos das antes, la cual es inodora. Es frecuente en
novillas.
5.- Coloque en un sitio adecuado los implementos a utilizar, como fundas, pistola, corta pajillas (tijera),
toallas, termo descongelador, etc.

6.- Llene el termo descongelador con agua tibia a 37C.

Revise y controle peridicamente la temperatura del termo, en especial si son varias las pajillas a
descongelar.
7.- Realice la limpieza con agua de los genitales externos, el recto y el perin, de
arriba abajo teniendo cuidado que no entre agua en la vagina.

Seque con la toalla de papel los genitales externos.

8.- Levante la canastilla apropiada que contiene las pajillas segn el toro a utilizar
No exponga la canastilla fuera del termo, mantngala a nivel de la boca del mismo.
El tiempo de exposicin de la canastilla no debe sobrepasar los 10 segundos.

9.- Retire la pajilla y controle el registro del toro.

Si utiliza el termo de transporte coloque el nmero de pajillas necesarias dentro del termo lleno
previamente con nitrgeno lquido.
Deje semiabierta la tapa del termo de transporte de manera que respire su contenido, ya que si la cierra
puede explotar el termo.

10.- Introduzca la pajilla con el extremo sellado hacia abajo, dentro del termo descongelador a 35C-
37C por un perodo de 30 segundos.

11.- Retire la pajilla luego de los 30 segundos. Si hay burbuja de aire sacuda la pajilla para eliminar la
burbuja.
12.- Seque la pajilla con papel absorbente. Una gota de agua puede producir shock osmtico,
ocasionando dao espermtico irreversible.

13.- Corte la punta sellada de la pajilla, lado contrario al tapn blanco, con el corta pajillas o la tijera.

14.- Introduzca el extremo cortado de la pajilla dentro del embolo verde de la funda de la pistola, hasta
que calce mediante un giro y se ajuste de manera adecuada.

Igualmente se puede introducir la pajilla por el extremo del tapn blanco en la punta de la pistola hasta
que toque el tope interno de la misma, para luego colocar la funda y calzar el embolo verde de la funda
en la punta de la pajilla.
15.- Empuje suavemente la pistola con la pajilla dentro de la funda hasta alcanzar la punta y asegrela
segn el tipo de pistola utilizada.

16.- Coloque la pistola armada dentro de la camisa sanitaria.

17.- Separe con los dedos los labios vulvares e introduzca la pistola en un ngulo de 45 hasta tocar el
techo de la vagina. Con esto evitar la introduccin de la pistola en el meto urinario externo

18.- Con la mano en el recto, localice el cuello del tero, colquelo en el cuenco de la mano y fjelo con
los dedos. Llvelo hacia adelante para evitar pliegues en la vagina, lo cual puede dificultar la llegada de
la punta de la pistola a la entrada del cuello.
19.- Con el cuello del tero en el cuenco de la mano, oriente la punta de la pistola hacia abajo y adelante,
buscando la entrada del cuello. El dedo pulgar puede servir de gua al colocarlo en la entrada del cuello,
dirigiendo la punta de la pistola hasta que toque el dedo y dirjala al orificio externo del cuello.
Especialmente en cuellos muy grandes.

Por medio de movimientos suaves gue la pistola a travs del canal cervical, pasando los anillos del
cuello uterino, hasta llegar a la parte ms anterior del cuerpo uterino, punto blanco de depsito del
semen. Una forma de saber que ya estamos en el punto blanco, es sintiendo con con el dedo ndice la
punta de la pistola inmediatamente por delante del cuerpo del tero.

20.- Deposite el semen en el punto blanco mediante presin suave del mbolo de la pistola. Retire
suavemente la pistola y con la mano en el recto efecte un masaje suave de los rganos genitales, con el
fin de favorecer el avance del semen. Algunos profesionales recomiendan masajear el cltoris por unos
segundos con el fin de estimular movimientos peristlticos del tracto genital, facilitando el avance
del semen

21.- Retire la funda de la pistola, verifique la correcta descarga del semen y la identificacin de la pajilla.
Anote el servicio de la inseminacin en el libro de registro correspondiente (fecha, toro, novedades,
comentarios, tratamientos etc). Limpie cuidadosamente la pistola, squela y desinfctela una vez
terminado el proceso.

METODO DE INSEMINACION ARTIFICIAL "EL TORITO"

www.youtube.com/watch?v=MfgADPJKFb4

Este mtodo de Inseminacin Artificial ha sido desarrolado en Mxico por los Drs Marco Antonio Hidalgo
y Malcom Nivem. Consiste en la visualizacin del orificio posterior del cuello uterino a travs de la
utilizacin de un espculo vaginal y una fuente de luz, depositando el semen en la parte anterior del
primer anillo uterino, mediante el empleo de un dispositivo especialmente adecuado para este fin, e
impulsar el contenido de la pajilla por medio de la inyeccin de una solucin isotnica dentro del tero.

Es de anotar que al igual que en el sistema de inseminacin tradicional, este mtodo requiere de un
equipo especialmente diseado para el efecto. Debe realizarse dentro de los parmetros recomendados
para el manejo reproductivo del hato, como sanidad, control de enfermedades, manejo nutricional,
suministro de minerales, condicin corporal, manejo adecuado del semen, identificacin de las vacas,
deteccin de celo, momento ptimo de inseminacin, control de registros. Por lo anterior es importante
instruir y capacitar el personal de la finca en estos aspectos. Igualmente se recomienda evaluar
peridicamente los resultados y ajustar los aspectos de manejo reproductivo segn el caso.

1.-Coloque el equipo "El Torito" en un sitios adecuado

2.- Asegure adecuadamente el animal a inseminar.

Lave, limpie y seque el ano, perin y vulva.

3.- Prepare el termo de icopor con agua a temperatura entre 35-37C y

mantengala durante todo el proceso.
Introduzca la jeringa o jeringas con el lquido potencializador (activador), segn l nmero de animales a
procesar.

4.- Tenga listo el vaginoscopio con la funda plstica protectora. Es recomendable la aplicacin de gel
lubricante al momento de introducirlo en la vagina

El vaginoscopio puede ser desechable o de uso mltiple.

5.-Retire la jeringa con el diluyente potencializador y squela con la toalla de papel absorbente

6.- Inserte el extremo inferior de la pipeta en el conector de la jeringa

7.- Inyecte la solucin potencializadora hasta cerca del extremo superior de la pipeta, que tiene forma
cnica en su interior. En la jeringa quedan 3 ml de diluyente

8.- Asegure la jeringa del potencializador al dispositivo sujetador

9.- Retire la pajilla del termo de transporte. Constate el nmero del toro programado
Coloque la pajilla en el termo de descongelacin a 35-37C durante 30 segundos. La pajilla puede
permanecer en este termo de 15 a 30 minutos, luego de descongelada.
Si son varios los animales a inseminar dentro de un programa de IATF, es conveniente y recomendable
contar con un auxiliar que vaya descongelando y colocando las jeringas con el potencializador, segn se
vaya adelantando el proceso, adems de armar los dispositivos, lo cual agiliza la operacin de
inseminacin mltiple
10 .- Retire la pajilla del termo descongelador y observe si tiene burbuja de aire, sacudala y squela
cuidadosamente con toalla de papel absorbente.

11.- Corte la pajilla por el extremo sellado.

12.- Inserte el extremo cortado de la pajilla en el extremo cnico de la pipeta y ajustela firmemente

13.- Corte el extremo de la pajilla con el tapn blanco.

14.- Coloque la jeringa de 20 ml en el dispositivo sujetador y aspire 20 ml de aire

15.- Destape la bolsa con el dispositivo de la bomba inflable.

16.- Es recomendable insertar la manguerita del dispositivo inflable en la jeringa de 20 y probar que
funciona adecuadamente, sin retirarlos de la bolsa.

17.- Inserte la punta de la pipeta con la pajilla, en el extremo del dispositivo de la bomba inflable. Ahora
puede retirar la bolsa.
18.- Inserte el extremo libre de la manguerita del dispositivo de la bomba inflable, en el conector de la
jeringa de 20 ml y ajustelo con un giro.

19.- Limpie el recto y la vulva con toalla de papel.

20.- Coloque la linterna en el borde del vaginoscopio, asegurela y prenda la luz

21.- Introduzca el vaginoscopio lubricado, dentro de la vagina, dirigindolo inicialmente hacia arriba, luego
hacia abajo y adelante

22.- Localice y visualice el orificio externo del cuello del tero.

 23.- Introduzca el dispositivo armado dentro del vaginoscopio e inserte
la punta dentro del orificio posterior del cuello uterino, hasta un punto anterior al primer anillo. Esto se
facilita por la dilatacin del cuello y el lquido mucoso presente durante el celo.

24.- Infle el baln insuflando el aire en la jeringa de 20 ml, presionando suavemente el mbolo. Esto
evitar el reflujo del potencializador y el semen

25.- Fije el mbolo de la jeringa con el seguro del dispositivo, para evitar que se desinfle el baln y haya
reflujo del lquido al inyectarlo.
26.- Presione firme y rpidamente el mbolo de la jeringa con el diluyente potencializador, para impulsar
dentro del tero el semen contenido en la pajilla

27.- Luego de 20 a 30 segundos, aspire el aire del baln inflado.

28.- Retire el dispositivo armado y suavemente retire el vaginoscopio.

29.- Deseche el vaginoscopio, la funda del vaginoscopio, la pipeta y la jeringa del diluyente. Si el
vaginoscopio no es desechable lvelo con agua y jabn y desinfectelo.

BIBLIOGRAFIA

AGUIRRE G. PARDO C. GONGORA A. INICIO DEL CELO, TASA DE GESTACIN Y RELACIN DEL
TIEMPO DE INSEMINACIN CON LOS NIVELES DE PROGESTERONA EN VACAS
BRAHMAN Rev.MVZ Cordoba vol.11 no.1 Crdoba Ene/Jun 2006

BALL P. Oestrus detection in dairy cattle. In practice. 1987. 9:223.

BARTH, A. D. BULL, THUNDATHILL AND MAPLETOFT R. J. IMPORTANCIA DE LA CALIDAD

SEMINAL Y EL USO DE FIV PARA EL ESTUDIO DE EFECTOS ESPERMTICOS MEMORIAS V
SIMPOSIO INTERNACIONAL DE REPRODUCCIN ANIMAL - INRA PAG. 205-221, 2003.
 BERNDSTON W.E PICKETT B.W RUGG C.D.- Procedures for field handling of bovine semen in plastic
straws. Proc. Sixth. Tech. Conf. Artific. Insem. and Reprod. 51 60 1976

BO G. ESPECIALIDAD EN REPRODUCCION BOVINA IRAC 2005 COLOMBIA

FONSECA F.A.,BRITT J.H.,MCDANIEL B.T.,WILK J.C. AND RAKES A.H. Reproductive traits of Holsteins and Jerseys. Effects of age milk
yield, and clinical abnormalities on involution of the cervix and uterus, ovulation, estrous cycles,detection of estrous, conception rates, and
days open. J.Dairy. Sci.1983. 66:1128

GONGORA A.- Fisiologa del Estro y Factores que Afectan su Expresin en Bovinos a Nivel del Trpico. Revista
El Ceb Asoceb N 313 Marzo Abril 2.000

GRAVES, W. MCKEE, L. Dairy herd synchronization programs. In: The University of Georgia and Ft,
Valley State University Bulletin. No. 1227 mar 2003

KASTELIC JP. Ovarian folicular developement in catle. Advances in Large Animal Reproduction. WCMV. June Conference, Saskatoon.
Canada 1992.

MARTINEZ N.- IATF: Alternativa para mejorar la Inseminacin Artificial. REVISTA Gentica Bovina

N 2 Ed. Marzo Abril 2007

MORTMEN RG, SALMAN MD, GUTIERREZ M, OLSON JD. Effects of androgenizing dairy heifers with
ear implants containing testosterone and estrogen on detection of estrus. J Dairy Sci 1990; 71:1773-1778.
PICKETT ET AL., AI Beef Cattle, Proc Tenth NAAM 1976.

RIVERA M.- Conferencias Ginecologa y Obstetricia Bovina FMVZ U. Tolima 1982

RIVERA M. MANUAL DE REPRODUCCION VACA YEGUA PERRA 2007

ROELOFSA J, B, F. LPEZ-GATIUSC F, HUNTERD R.H.F., VAN EERDENBURGE F.J.C.M. HANZENF

CH. When is a cow in estrus? Clinical and practical aspects. Adaptation Physiology Group, Wageningen
University, The Netherlands

SAACKE, R.G., DALTON, J.C., NADIR, S., NEBEL, R. AND J.H. BAME. 2000. Relationship of seminal
traits and insemination time to fertilization rate and embryo quality. Anim. Reprod. Sci. 60-61:663-677.

SENGER PL. BECKER WC. HILLERS JK.- Effect of thawing rate and post thaw temperatures on motility and acrosomal maintenance in
ovine semen frozen in plastic straws. J. Anim. Sc. 42:932-936. 1976

SENGER PL. BECKER WC AND HILLERS JK.

INFLUENCE OF CORNUAL INSEMINATION ON CONCEPTION RATES IN DARY CATLE. J. Anim
Sci. 66:3010-3016 1988.

SPAHR SL AND LEWIS GS Computer aided reproduction control. Proc 23rd Int Dairy Congress 1990.

WALKER, W. L., NEBEL, R. L. AND M. L. MCGILLARD.1996. Time of ovulation relative to mounting

activity in dairy cattle. J. Dairy Sci. 79:1555-1561.
WILTBANK M.C. SARTORI R. PURSLEY J.R. VASCONCELOS J.L.M. Cual es el momento ptimo para
inseminar 2002

TRASFERENCIA DE EMBRIONES

La Transferencia De Embriones TE es el proceso mediante el cual los embriones son recolectados de

una hembra "Donadora", antes de su implantacin en el tero, para ser trasferidos al tero de otra
hembra o "Receptora", de manera que complete su desarrollo gestacional y den lugar al nacimiento de
una cra viable.

Rowson en la Universidad de Cambridge describi las tcnicas quirrgicas de TE en bovinos con ndices
de preez excelentes, las cuales fueron una herramienta importante en su aplicacin comercial en la
primera mitad de los aos 70s.

Los protocolos de superovulacin, la elaboracin y utilizacin del medio adecuado, la recoleccin y

transferencia quirrgica fueron desarrollados por BETTERIDGE, ADAMS, SEIDEL, FOOTE y ONUMA,
sentando las bases para la industria de TE en la ganadera moderna, aunando los esfuerzos de la
investigacin y la parte comercial.

Con posterioridad adems de los anteriores, HASLER, ELSDEN, ROW, DROST, MAPLETOFT, entre
otros, implementaron la tcnica no quirrgica tanto para la recoleccin como para la trasferencia de
embriones y difundieron e incrementaron las empresas comerciales de TE, propagndose como industria
a nivel mundial.

Hay que considerar dos aspectos en la TE, el primero se refiere a la parte investigativa, la cual ha
permitido conocer la fisiologa, manejo, clasificacin, preservacin y manipulacin de las clulas
germinales y el embrin como tal. En este campo se pueden emplear oocitos y espermatozoides
procedentes de hembras y reproductores de poco valor gentico ya que su manejo y manipulacin se
realiza de manera experimental, clulas que pueden ser obtenidas de animales de granja o de matadero,
como de animales de laboratorio. Adems la prdida de estas clulas durante los diferentes procesos no
es econmicamente significativa.

En la actualidad los estudios que originalmente fueron planeados para contestar preguntas bsicas de
fisiologa, estn siendo utilizados para mejorar e incrementar el empleo de la Trasferencia de Embriones
en la industria bovina. Las nuevas tcnicas han agregado una gran cantidad de perspectivas acerca de
la utilizacin de la TE con fines investigativos. La produccin de gemelos idnticos, clones, quimeras por
mencionar algunos, seguramente contribuirn al avance de estas ciencias. Como se mencion
anteriormente, las tcnicas de FIV est siendo utilizadas para el estudio de la capacidad fertilizante del
semen y son de inmenso valor en el estudio de la competencia del ovocito y el metabolismo embrionerio.
(MAPLETOFT).

El segundo aspecto, estrechamente relacionado con el primero pero diferente en su objetivo final, tiene
que ver con su aplicacin, adaptacin y manejo desde el punto de vista comercial. En este aspecto las
clulas germinales proceden de animales de alto valor gentico y por consiguiente de un mayor valor
econmico, ya que su finalidad es la obtencin de una descendencia de gran calidad gentica y de
produccin.

Igualmente debe considerarse si la Trasferencia de Embriones se efectuar en una explotacin en

particular, con hembras producidas en la finca o dentro de una Central de reproduccin Asistida, ya que
su orientacin y desarrollo tienen manejos diferentes, dado que el nmero de donadoras y receptoras a
tratar.

La Te a nivel de finca exige condiciones ptimas de manejo acompaadas de un proceso de

capacitacin tcnica del personal a cargo de la manipulacin, alimentacin, sanidad y cuidados de la
ganadera en general y del programa en particular, dentro de lo que ha denominado Buenas Practicas
Ganaderas BPG.

A nivel de Centrales de Reproduccin Asistida, estas deben llenar los ms altos estndares de Sanidad
Animal, Calidad Gentica y Seguridad Biolgica, de tal manera que garanticen embriones de ptima
calidad reflejados en cras excelentes.

APLICACIONES DE LA TE

Las principales aplicaciones de la TE son el mejoramiento gentico, al incrementar la intensidad de la

seleccin y el acortamiento del intervalo generacional. Esto ha dado lugar al proceso denominado
Multiple Ovulacin y Trasferencia de Embriones MOET. En muchos pases se han constituido rebaos
lites cuyas hembras jvenes se emplean para conformar "MOET Juveniles", mientras que la progenie
de machos est siendo seleccionada para la prxima generacin de toros probados para Inseminacin
Artificial. Se ha estimado que de esta manera, puede duplicarse la ganancia gentica en menor
tiempo. (SMITH-KEPLER)

As como la IA permiti la diseminacin del potencial gentico de los machos y la obtencin de toros
valiosos, la TE permite la difusin del material gentico de hembras de alta produccin, muchas de las
cuales pueden ser no solamente del mismo origen, sino hermanas completas. (BETTERIDGE)
La Asociacin Canadiense de Criadores de Animales desarroll un programa para la produccin y
evaluacin de la siguiente generacin de toros donadores para IA. Las vacas donadoras seleccionadas
fuero superovuladas e inseminadas con los mejores toros probados disponibles.La progenie de machos
fue dejada en espera, mientras que las hembras fueron llevadas a produccin. Luego los toros
fueron probados a travs de la historia productiva de sus hermanas, en lugar de la historia productiva de
sus hijas. De esta manera se pudo evaluar genticamente un toro en 3.5 aos, mientras que el estudio de
progenie tradicional tarda 5.5 aos. El recorte del intervalo generacional puede dar lugar a una mayor
ganancia gentica en general. Adems la exportacin y transporte de embriones permite el traslado de
progenies completas en forma de embriones congelados a menor costo. (MAPLETOFT)

TECNICA DE TRASFERENCIA DE EMBRIONES

La tcnica de Trasferencia de Embriones consta en general de los siguientes pasos:

Seleccin de la Donadora.
Seleccin de la Receptora.
Superovulacin de la Donadora.
Fertilizacin de la Donadora.
Recoleccin de Embriones.
Evaluacin y Clasificacin de Embriones.
Trasferencia de los Embriones
Criopreservacin de los Embriones.

SELECCION DE LA DONADORA

La seleccin de las donadoras est regida por criterios de productividad, mejoramiento gentico y valor
agregado de las cras, ya que sus costos tienden a reducirse en la medida que aumentan estos
aspectos. (MAPLETOFT)
Los principales criterios a tener en cuenta en la seleccin de la donadora son:

Superioridad Gentica.

Debe conocerse su pedigr, ndices propios de produccin y de su progenie, as como poseer las mejores
caractersticas fenotpicas de la raza o tipo de ganado a producir, cuyas cras deben superiores al
promedio del hato, especialmente comparadas con las hermanas de la hembra, descendientes del mismo
toro. Dentro de este aspecto debe trabajarse con toros probados de alta calidad gentica y
mejorantes. (RUANE)

Capacidad Reproductiva

Este aspecto incluye la historia reproductiva del animal, nmero y facilidad de parto, habilidad materna,
peso de las cras al nacimiento, destete y al ao. La donadora debe encontrarse en su mejor edad
reproductiva, un alto nivel de fertilidad con dos o menos servicios por concepcin y un comportamiento
regular en su ciclicidad durante los ltimos perodos estrales.

Adems es importante determinar la anatoma y funcionalidad del tracto reproductivo mediante la

identificacin de estructuras ovricas de buen tamao, un cuello recto que permita el paso del catter de
forma fcil. Lo anterior se logra mediante palpacin transrectal y/o ecografa, junto con la cateterizacin
previa del tracto reproductivo. Si se selecciona hembras recin paridas, se recomienda que estn dentro
del PEV establecido en el manejo reproductivo del hato, con un mnimo de 60 das postparto, para que se
garantice una involucin completa del tero y el reinicio de la funcionalidad ovrica (GONZALEZ)

Es conveniente saber que comportamiento tiene en su ciclicidad, si es de una, dos o tres ondas
foliculares, en especial si se va a trabajar con embriones frescos o si se realizar mediante induccin y
sincronizacin de la donadora.

Por muchos aos se estableci como norma de seleccin de la donadora que esta deba dejar pasar dos
ciclos estrales entre tratamientos SOV, con lo cual se podran efectuar lavados a intervalos de 60 das o
ms. Sin embargo, HASLER y la central Gentica de Holanda determinaron que es posible SOV las
donadoras a intervalos de 40 das por medio de la aplicacin de implantes auriculares de progesterona,
luego de la administracin de prostaglandinas despus de la recoleccin de los embriones, si tener que
esperar la presentacin de los dos ciclos. estos cambios en los protocolos de SOV aumentaron en un
50% el nmero de embriones recolectados y congelados por unidad de tiempo, con fines de exportacin.

Buena Condicin Corporal

Como se anot en captulos anteriores, la CC es el reflejo de la alimentacin suministrada. La donadora

debe estar en un rango de CC de 3.0 a 4.0 no cebada. Las hembras donadoras deben incluirse en un
programa de nutricin balanceada antes de efectuar el proceso de SOV, donde se debe procurar
administrar forrajes que brinden al animal los nutrientes necesarios para que se cumplan las funciones
reproductivas, adems de la incorporacin de productos que proporcionen al animal niveles energticos
adecuados en la dieta, as como suplementos vitamnicos y minerales (GOMEZ)
La donadora debe encontrarse en un estado sanitario ptimo, libre de enfermedades infecciosas
reproductivas, por lo que antes de iniciar un programa de TE a nivel de finca, se recomienda determinar
por medio de exmenes de laboratorio especficos, la incidencia de estas afecciones, cuyo costo se ver
recompensados luego por un mayor porcentaje de embriones viables y el xito del programa. As mismo
la donadora no debe haber presentado retencin de placenta en su ltimo parto o secreciones vaginales
manifiestas previas al tratamiento.

Cantidad De Vacas Donadoras

La cantidad de vacas donadoras a trabajar depende de la respuesta que estas presenten a los protocolos
de SOV y la cantidad de receptoras disponibles. Cuando se desea trasferir los embriones en fresco es
recomendable tener por lo menos 10 receptoras por donadora con el fin de contar con el suficiente
nmero de receptoras en celo natural, sincronizadas con el celo de la donadora y que estn en el da de
desarrollo de los embriones recolectados.

El manejo de criterios estrictos de seleccin asegurar la superioridad gentica y un alto nivel de xito, lo
que hace que el procedimiento sea ms econmico.

Es imposible predecir cul ser la produccin de embriones de una donante primeriza en particular. Si
hablamos que hay para el MOET un promedio de 5-6 embriones viables por colecta o lavado, hay que
tener presente que un tercio de esas vacas no responder al tratamiento, un tercio responder por debajo
del promedio y otro tercio lo har por encima del promedio, siendo variable la produccin de embriones
entre donantes y entre colectas. una buena donadora en el primer tratamiento lo seguir siendo en los
posteriores. Esta es la gran pregunta que nos hacen los clientes y como no se deben crear falsas
expectativas en un trabajo, que adems genera mucha ansiedad en todos sus actores, debemos ser
claros de tal manera que todos los involucrados entiendan como ser en la realidad.

SELECCION DE LA RECEPTORA

La hembra receptora en los programas de TE juega un papel importante en los resultados finales, siendo
una limitante en la implantacin de estos programas a nivel de finca seras, ya que hay que contar con un
nmero suficiente de hembras aptas para ser trasferidas. Por tal razn un nmero representativo de
hatos ganaderos han redireccionado su explotacin a la produccin de hembras receptoras, para ser
comercializadas en programas de TE.

Las receptoras deben reunir los requisitos de sanidad similares a las donadoras, as mismo tener el
tamao adecuado para permitir el desarrollo normal del feto correspondiente a la raza del embrin, contar
con un canal de parto ancho y nivelado que tenga facilidades al nacimiento. Igualmente debe contar con
un sistema mamarios acorde que permita una produccin suficiente para sostenimiento adecuado de la
cra resultante.

En el caso de de vacas receptoras, deben haber tenido 1 a 2 partos y estar dentro de un perodo
postparto no menor de 90 das, con involucin uterina completa y no estar a mamatando. (DUICA). La CC
ideal es de 3 o ms, que muestren buena distribucin de la grasa corporal, en la prctica hembras con
360 a 460 Kls. Se recomienda que las novillas tengan una edad de 18 a 24 meses y se encuentren cerca
de los 350 Kls.

Se recomienda la evaluacin del desarrollo y funcionalidad del tracto reproductivo de la receptora al inicio
del programa de TE, mediante palpacin transrectal y examen ecogrfico del mismo. Tabla 1.

Durante esta evaluacin se determina la presencia de alteraciones anatmicas en especial de los

cuernos y cuello. Para que los cuernos uterinos de la receptora se consideren aptos para la TE debe
tener un dimetro mayor de 25 mm, con Condicin del Tracto Reproductivo 3 a 5. (VELEZ)
Al igual que la donante es importante determinar la facilidad de cateterizacin del cuello. As mismo tener
una ciclicidad regular, con estructuras ovricas desarrolladas y funcionales. Entre mejor calidad del CL
mayor ndice de preez de la receptora. Grfico 1.

Se ha podido determinar que al evaluar las estructuras ovricas por medio de ecografa transrectal se
observa que un folculo preovulatorio de 1.3 cms, da lugar a un CL de 5 mm con niveles plasmticos de
P4 de 1.22 ng/ml, midiendo a los 14 das 6 mm y niveles de P4 de 2.48 ng/ml. Para un folculo de 1.6
cms, el CL en el da 7 mide 6 mm y niveles plasmticos de P4 de 3.05 ng/ml. Con lo anterior se espera
generar unas condiciones uterinas ms favorables para el desarrollo inicial del embrin y la necesidad de
realizar una evaluacin previa a la transferencia a la receptora, con lo cual permite obtener mejores
resultados de la TE. (VASCONCELOS)

Sin embargo, la existencia de un umbral en los niveles de P4 para evitar que se presente muerte
embrionaria es controversial, ya que algunos estudios reportan preeces en receptoras con
concentraciones de P4 <1 ng/ml al momento de la TE. En un estudio realizado por RODRIGUEZ et al, el
promedio de los valores del dimetro del CL fu de 19.6 1.8 con un coeficiente de varianza bajo (9%),

mientras que el promedio de P4 fu de 3.62.6 ng/ml, con un coeficiente de varianza elevado (74%).
Adems, valores bajos al momento de la transferencia podra estar reflejando no solo una funcin ltea
anormal sino tambin deficiencia en la deteccin de celos.

Diferentes trabajos han concluido que el tipo de ganado que mejor se ha comportado como receptoras
son las hembras F1 resultantes del cruce de Raza Ceb con razas europeas, debido a su regularidad en
el ciclo estral, facilidad y mayor intensidad del celo, docilidad de manejo y buena produccin de leche
para el sostenimiento de la cra.

Como mnimo se debe contar con 8 a 10 receptoras por donante cuando se hace TE en fresco. No es
recomendable utilizar receptoras con ms de 2 transferencias negativas (GOMEZ)

SUPEROVULACION DE LA DONADORA SOV

La superovulacin SOV tiene como objetivo lograr el mayor nmero de oocitos a ser fecundados, para
producir embriones de alta calidad que puedan ser transferibles y progresen a un proceso gestacional
que finalmente de lugar al nacimiento de una cra normal viable. La gran variabilidad en la respuesta a los
tratamientos SOV, el tiempo requerido y los esfuerzos necesarios para la administracin de las hormonas
empleadas en ellos, as como la prediccin incierta de los resultados, ha hecho que se afecte la difusin
de la TE.

De otra parte, los avances logrados en los ltimos aos no han podido aumentar de manera significativa
el nmero de embriones transferibles por tratamiento SOV. La implementacin de protocolos que
controlan la emergencia de la onda folicular y la ovulacin aplicados en la IATF, han facilitado la SOV de
grupos de donantes, independientemente del perodo del ciclo estral en que se encuentren y la IA, sin la
necesidad de detectar celos. Sin embargo an se presentan inconvenientes que potencialmente pueden
dar lugar a errores y afectar la respuesta superovulatoria o an peor una ausencia total de respuesta.

De otra parte, el nmero de embriones

transferibles en vacas reproductivamente normales se ha mantenido relativamente constante, tanto en
vacas de leche como de carne. LOONEY report un promedio de 11.5 embriones recolectados, con un
promedio de 6.2 transferibles en ms de 2000 vacas de 14 razas. El 24% de las recolecciones no
produjo embriones viables, 64% de las donadoras produjo menos del nmero de embriones transferibles
y el 30% de las recolecciones produjo el 70% de los embriones.
Otro estudio retrospectivo que incluy 1263 donantes encontr que solamente el 68% de las hembras
inducidas a superovular produjeron embriones transferibles. El 32% restante lo integraron: 7% sin
estimulacin ovrica, 7% sin recoleccin de de oocitos ni embriones, 17% sin embriones transferibles, 1%
donde no se efectu el lavado porque presentaron celo antes de la administracin de PGF2 durante el
tratamiento hormonal(BELACUBA)

Estos promedios pueden compararse con los datos aportados por la AETA en los cuales el promedio fue
de 7.0 en ganado de carne con ms de 24.000 donadoras y 6.3 en vacas de leche con ms de 15.000
donadoras en 2011. (MAPLETOFT).

Igualmente, al evaluar el promedio de embriones recolectados por 4 empresas comerciales, este no ha

variado en los ltimos 20 aos, lo que confirma los datos de la AETA. (HASLER)
En la Tabla 4 se presentan los principales factores que influyen en la respuesta SOV, ya sea con
relacin al tratamiento como a la donante. Todos estos factores deben tenerse en cuenta al momento de
seleccionar el protocolo a implementar, por lo que tiene gran relevancia el criterio y la experiencia del
profesional que lo realiza.

Tipo de Gonadotropina.

En comienzo en el proceso SOV se utilizaron productos cuyo principio activo era la Gonadotropina Srica
de Yegua Preada PMSG, elaborada por medio de la recoleccin de sangre de yeguas con 80 - 120
das, en la actualidad denominada Gonadotropina Corionica equina eCG. Estos preparados produjeron
una gran variabilidad de respuesta SOV y sus ndices de recuperacin estuvieron influenciadas
negativamente por una excesiva reaccin ovulatoria y una menor sensibilidad de respuesta a
tratamientos repetidos.
Esta reaccin se debe a un perodo de persistencia de ms de 10 das en la circulacin general,
producindose una estimulacin ovrica continua, folculos anovulatorios, perfiles endocrinos anormales
y embriones de baja calidad. (MOOR)

FOLIGON . Dosis 1500 a 3000 UI IM. entre los das 8 a 13 del ciclo, seguidos de 3 ml de Prosolvin
48 horas despus.(INTERVET)
Con posterioridad se pudo disponer de productos a base de extractos pituitarios de mayor actividad FSH
que LH, puesto que no se pueden obtener puros de una u otra hormona, al administrarse en inyecciones
mltiples y al comparlos con la administracin de una dosis nica de eCG, se logr obtener un mayor
nmero de embriones buenos. Los extractos piutuitarios se FSH/LH con ajo contenido LH han mejorado
la respuesta SOV en el ganado. (HASLER)

Pureza

Aunque en general se considera que es necesaria la presencia de cierta cantidad de LH en estos

preparados para el xito de la SOV, la relacin FSH/LH debe ser adecuada para que favorezcan el
desarrollo final de los folculos. Se ha sostenido que una dosis elevada de extractos pituitarios cuya
relacin FSH/LH contengan mayor cantidad de LH, induce una activacin prematura del oocito lo que se
refleja en una reduccin significativa del porcentaje de oocitos fertilizados y embriones
transferibles. (GONZALEZ)

Puesto que el perodo de vida biolgica de la FSH es de 5 horas o menos, esta debe administrarse dos
veces al da para la induccin de la SOV. (LOONELY)

Sin embargo estudios recientes han reportado que la produccin de frmacos a base de FSH, mediante
tcnica recombinante, inducen una respuesta SOV sin adicin de LH exogena y que la calidad de los
embriones puede ser superior. (LOONELY)

Adems de estos estudios y otros ms recientes que emplearon FSH recombinante indican que en el
futuro se utilizarn gonadotropinas recombinantes, en la actualidad no se emplean por sus altos
costos (ROGAN)

Momento del inicio de la SOV

Los tratamientos de SOV generalmente se inician entre los das 8 y 12 del ciclo estral (celo = Da 0), sin
embargo se ha demostrado una mayor respuesta SOV cuando los tratamientos se inician el da 9 del
ciclo. Esta observacin ha sido sustentada recientemente mediante ecografa al apreciarse que la
segunda onda folicular empieza 8.5 das despus de la ovulacin (da 9.5 del ciclo) en las vacas de tres
ondas foliculares y en el da 9.5 post ovulacin (10.5 das del ciclo) en vacas de dos ondas
foliculares. (GINTHER)

En un sentido prctico, es lgico suponer que las vacas con dos ondas foliculares tienden a tener ciclos
ms cortos (18-20 das) que las vacas de tres ondas (21-23 das). Por esta razn, la duracin del ciclo
estral anterior de la donadora puede proporcionar una pista sobre cual puede ser el mejor da para iniciar
el tratamiento SOV. (MAPLETOFT)

Moor y col, sugirieron que tanto la tasa de ovulacin como el nmero de embriones viables producidos
son relativamente consistentes dentro de los mismos individuos; los animales que responden poco en un
ensayo lo seguan haciendo en tratamientos subsiguientes, mientras que aquellos animales que
respondieron bien inicialmente, lo continan haciendo de ese modo. Aunque hubo una gran variabilidad
entre vacas, se ha visto que el nmero de folculos >1.7 mm de dimetro en un ovario, se correlaciono
positivamente con la respuesta SOV a los tratamientos con gonadotropinas. Mas recientemente SINGH y
col, demostraron que el nmero de folculos presentes en el momento de la emergencia de la onda
folicular permite predecir la respuesta SOV.

Estado de desarrollo folicular al inicio del tratamiento SOV

Otro factor relacionado con la donante en si misma, se refiere al estado de desarrollo folicular al momento
de iniciar el tratamiento. Esto tiene mayor importancia cuando en el proceso de TE se utiliza la deteccin
del celo de la donante para iniciar el tratamiento.

La ecografa de los ovarios puede proveer informacin acerca del momento ms apropiado para iniciar
los tratamientos SOV, con el fin de obtener la mxima respuesta de una vaca en particular. Durante la
mitad del desarrollo de una onda folicular, el folculo dominante FD, actuando local o sistemicamente,
induce la atresia de otros folculos en desarrollo. En este sentido se ha demostrado que el inicio de los
tratamientos SOV en presencia de un FD resulta en un 40-50% de disminucin en la respuesta
SOV. (SHAW)

Igualmente se ha determinado que existe una alta correlacin entre el nmero de folculos pequeos al
momento de iniciar el tratamiento y la respuesta SOV. En conjunto, estos datos sugieren que se puede
esperar una disminucin en la respuesta SOV si est presente un FD activo al momento de iniciar los
tratamientos y que la presencia de folculos que estn creciendo activamente en un rango de 3-6 mm de
dimetro (emergencia de la onda folicular) puede estar asociada con una mejor respuesta SOV. A travs
de solo un examen ecogrfico en condiciones de campo es difcil determinar si un folculo grande es o
no funcionalmente dominante y si los folculos pequeos estn creciendo activamente o estn sufriendo
atresia. Sin embargo, la presencia de ms de seis o siete folculos de 3-6 mm de dimetro 8 a 10 das
despus de la ovulacin, en presencia de un folculo grande, provee suficiente evidencia del inicio de una
nueva onda de desarrollo folicular. (SINGH)

Raza
La raza es un factor presente en los tratamientos SOV ya que en varios estudios se ha determinado que
las vacas Holstein requieren de una mayor proporcin de FSH,mientras las vacas Charolaise requieren
una mayor proporcin de LH para una mxima respuesta SOV.

Dosis SOV y via de adminsitracin

Los resultados de diferentes trabajos indican que la dosis ideal para vacas Bos Taurus es de 400 mg de
Folltropin , para vacas Bos Indicus es de 260 a 320 mg y para novillas 200 a 260 mg, con resultados
altamente satisfactorios. El ganado Bos Indicus responde exageradamente a dosis altas de FSH,
encontrandose respuestas satisfactorias con dosis de 133 a 200 mg de Folltropin-V y de 200 a 260 mg
en sus cruces (BELACUBA)

En cuanto a las dosis empleadas algunos prefieren dosis uniformes y otros prefieren dosis descendentes
de FSH, siendo la mejor va de administracin la IM, al compararla con la va SC.

Momento de la IA y Calidad seminal.

Otro factor no menos importante se refiere a la calidad del semen, el momento de la IA y la habilidad del
inseminador. Existen evidencias de la existencia de una relacin positiva entre la calidad del semen, el
ndice de fertilidad y la calidad embrionaria, por parte de Centros Comerciales de Reproduccin Asistida
en programas de TE.

Condicin Corporal CC

En trminos generales se considera que la CC influye en la respuesta SOV, de manera similar a lo que se
presenta en las hembras no tratadas, por lo que se asume que el nivel de energa de la racin influye en
las tasas de ovulacin y fecundacin como en la viabilidad de los embriones. Hanselmann demostr
que las donadoras a nivel de campo tuvieron 2.2 embriones transferibles ms que las estabuladas.

Intervalo Entre Recolecciones

Durante muchos aos se ha tenido como norma que se debe dejar que pasen dos ciclos de la donadora
antes de iniciar un nuevo tratamiento de SOV. As mismo es prctica comn administrar PGF2 despus
de la recoleccin, a las donadoras que no retornaron en celo dentro de las 3 semanas siguientes. En
consecuencia este protocolo permite que se pueda efectuar recolecciones a intervalos de 60 das o ms.
Sin embargo HASLERrealiz SOVs a intervalos de 40 das sin necesidad de tener que esperar a que se
presentaran ciclos estrales entre lavados. Este cambio de protocolo,. increment en un 50% el nmero
de embriones recolectados y congelados por unidad de tiempo en Holland Genetics. MAPLETOFT ha
realizado lavados a intervalos de 30 das, mtodo que se presenta ms adelante. Hoy en da muchos
profesionales en TE han adoptado estos protocolos para efectuar SOVs a intervalos de 40 y 30 das.

PROTOCOLOS DE SUPEROVULACION SOV

En los aos 70s se utiliz la eCG como hormona superovulatoria, empleando el protocolo descrito en el
Grafico 2. Se inicia en el da de presentacin del celo detectado, Da 0. La dosis de eCG es una sola
administrada en el da 10, seguida de PGF2 el da 12 a IA los das 14 y 15, efectuando el lavado,
recoleccin y transferencia en fresco el da 22.

Sin embargo por su gran variabilidad de respuesta y ante la implementacin de protocolos a base de FSH
se restringi su aplicacin.
Con posterioridad se ha utilizado el protocolo tradicional de SOV Grfico 3, el cual se inicia teniendo
como base la deteccin del celo o Da 0, aplicando la FSH (FOLLTROPIN-V - PLUSET), a partir del
da 10, seguida de la administracin de PGF2 a las 48 horas, por lo que normalmente se presenta celo
a las 36 a 48 horas, efectuando las inseminaciones, con o sin manifestaciones de celo a las 60 y 72
horas, luego de la PGF2. Las vacas que presentan celo antes de lo esperado, no ms de 24 horas, se
les puede suspender la administracin de FSH y se inseminan a las 12 y 24 horas de iniciado el celo. Las
vacas que entran en celo un da despus de lo esperado se insemina pero van a tener un respuesta baja
(1 a 2 CLs) (BELACUBA)

Hay divergencias en cuanto al nmero de inseminaciones, unos realizan 2 inseminaciones a las 12 y 24

horas de iniciado el celo y otros 3 inseminaciones a las 0 - 12 y 24 horas de iniciado el celo. Sin
embargo, no hay un protocolo con una sola inseminacin que haya sido eceptado como
superior (STROUD)
Las receptoras son tratadas con PGF2 18 a 24 horas antes de la primera inseminacin de la donante,
de manera que presente celo en sincrona con la donante. Hay profesionales que prefieren detectar celo
en el lote de receptoras y utilizar aquellas que presentaron celo un da antes o un da despus de la
donante (BO)

El inicio del tratamiennto SOV en los protocolos convencionales se basa en que la mayora de las vacas
se encuentran en el comienzo de la segunda onda folicular en el da 10, habindose demostrado que la
respuesta SOV es mayor cuando el tratamiento con FSH se inicia en el momento exacto de la
emergencia folicular, en lugar de 1 o 2 das despus. Teniendo en cuenta lo
anterior, los tratamientos convencionales para ser aplicados a un grupo de donantes, presentan varios
inconvenientes:

1.- Se requiere de un sistema de deteccin de celos eficaz, con dedicacin casi exclusiva del personal
encargado y una respuesta del 100% efectiva a la presincronizacin de las donantes, para determinar el
denominado "Celo Base".

2.- Desde el punto de vista prctico, es imposible tener a todas las donantes iniciando una onda folicular
al mismo tiempo y por consiguiente en el mismo da elegido para la administracin de la FSH
3.- El nmero necesario de receptoras sera demasiado grande y dependera del nmero de donabtes,
haciendo an menos prctico el tratar grupos numerosos de donantes, en especial si la TE se efecta
con embriones en fresco.

Los avances obtenidos sobre la dinmica folicular y el manejo del ciclo estral, no han permitido lograr un
mejoramiento en el nmero de embriones transferibles con el tratamiento SOV. Sin embargo, el
desarrollo de protocolos que facilitan el control de la emergencia folicular y la ovulacin han facilitado la
SOV e IATF de las donadoras, sin necesidad de detectar celos. Lo anterior constituye una avance
importante en la aplicacin comercial de la TE por parte de las Centrales de Reproduccin Asistida,
quienes pueden efectuar tratamientos SOV, IATF, TE y TETF de forma masiva. Por otra parte se siguen
presentando algunos inconvenientes que dan lugar a una disminucin en la respuesta a la SOV, o peor
an, una ausencia total de respuesta, los cuales deben ser abocados y solucionados por el profesional.

Con el fin de darle un mejor manejo y tratar un mayor nmero de donadoras, se adaptaron los protocolos
empleados en IATF para la sincronizacin de las ondas folicular y la ovulacin, utilizando GnRH o
Estradioles, junto con progestgenos en implantes auriculares o DIV, adems de PGF2. Lo anterior ha
dado lugar a nuevos protocolos de TE.

Otro mtodo eficaz para sincronizar el desarrollo folicular consiste en la aspiracin de todos los folculos
>5 mm presentes en los ovarios de la donadora, mediante ecografa transvaginal (OPU), con lo que se
produce un aumento significativo de la FSH circulante y el reclutamiento de una nueva onda folicular 1.5
das despus. Se ha empleado la aspiracinsolamente del folculo dominante FD, 2 das antes de
comenzar la SOV, obtenindose una respuesta significativamente mayor que las vacas estimuladas en el
mismo perodo del ciclo, con presencia del FD.
El inconveniente de este mtodo es que hay que dominar la tcnica de aspiracin OPU por parte del
profesional, lo que hace que se adapte ms a Centros de Reproduccin, donde todas las se encuentran
concentradas en un solo lugar, al contrario de la SOV en donadoras a nivel de finca.

Otros trabajos aspiraron los dos folculos ms grandes, sin embargo la diferencia en la respuesta SOV no
ha sido lo suficientemente significativa en relacin con los protocolos SOV convencionales. (BELACUBA)

La posibilidad de elegir la induccin de la emergencia de una nueva onda folicular por medio del
Estradiol, permite iniciar la SOV sin tener en cuenta el estado del ciclo estral, eliminando la necesidad de
detectar celo y esperar 8 a 2 das para administrar el tratamiento con FSH

Como se vio anteriormente el Estradiol suprime la liberacin de FSH e induce la atresia folicular. Cuando
se metaboliza aumenta la FSH y se produce la emergencia de la nueva onda folicular, en promedio a los
4 das despus de su aplicacin. En este momento se inicia la administracin de FSH.
Grfico 4

Por lo tanto, este tratamiento permite el desarrollo de un nmero variable o cohorte de folculos de 3 a 5
mm que crecen al mismo tiempo.

Diversos experimentos demostraron que el BE es el estrgeno que suprime el desarrollo folicular de

manera ms efectiva y la respuesta SOV es mayor cuando se combina con P4 IM en el mismo momento
de la insercin del DIV. La dosis de 2.0 a 2.5 mg de BE, combinado con 50 mg de P4 administrados IM,
fueron las dosis ms efectivas con un intervalo entre el tratamiento y el comienzo de la nueva onda
folicular de 4.0 das. Adems con el tratamiento BE+P4 se obtuvo un nmero similar de embriones
transferibles que con el tratamiento de 17- Estradiol+ P4. El resultado de la utilizacin del protocolo
BE+P4 fue satisfactorio tanto en vacas Bos Taurus como Bos Indicus (MAPLETOFT)

Aunque el nmero de embriones transferibles no ha aumemtado en relacin con las hembras

superovuladas entre los 8 a 12 das despus del estro, la tas de fertilizacin en vacas donadoras SOV,
despus de los tratamientos con estradiol y progestgenos, fu signifcativamente mayor que las vacas
control. (BO)

Adems, las novillas SOV el da 4 despus de la insercin de un DIV de progesterona, sin la

administracin de estradiol, tuvieron un porcentaje bajo de oocitos fertilizados y embriones transferibles,
en comparacin con las tratadas con estradiol al momento de insertar el DIV d progesterona. Por el
contrario las tratadas con estradiol y progesterona presentan el desarrollo de una nueva onda folicular y
en consecuencia un grupo ms uniforme de folculos viables con oocitos competentes al omento de ser
tratados con FSH. Esto demuestra que los folculos subordinados pueden ser salvados de la atresia, si se
hace la aspiracin del FD o son tratadas con FSH al momento de la seleccin del FD. (ADAMS)

La mayora de los protocolos de sincronizacin de una nueva onda folicular para SOV comprende la
administracin de 2.0 -2.5 mg de BE ms 50 o 100 mg de progesterona IM al momento de insertar un DIV
de P4. Grafico 5.

Las dosis de FSH pueden ser iguales o ser descendentes al igual que el tratamiento convencional para
TE en fresco. La PGF2 se aplica en el da 6 AM-PM. El DIV se retira el da 6 PM. La IA se inicia el da 9
AM-PM y el da 10 AM. La recoleccin de embriones se efecta el da 16. Tabla 13

Un nuevo protocolo que involucra el empleo de un diluyente de liberacin lenta de la FSH. ha aumentado
la eficiencia SOV sin que se incremente al produccin de embriones. El protocolo utiliza 2 aplicaciones de
FSH disuelta en Acido Hialurnico y lo compara con el protocolo convencional de 8 aplicaciones de FSH
disueltas en solucin salina. La produccin de embriones para el protocolo con formulacin de liberacin
lenta fue similar al protocolo tradicional, resaltndose que las hembras necesitan menos manejo, lo cual
reduce las labores y el estrs de las donantes. (TRIBULO)

Con el fin de lograr una sincronizacin de la ovulacin y un mayor nmero de ovulaciones se ha

propuesto el protocolo que incluye la administracin de eCG, 2 das antes del tratamiento SOV con FSH.
Grfico 6.
En la Tabla 14 se observan los resultados obtenidos con la administracin de eCG en el da 2.3 antes de
SOV, en donde la administracin de eCG en el da 2 tuvo la mejor respuesta tanto de embriones
fertilizados como de embriones transferibles. (MENDOZA)

Grgico 7.

Para evitar la necesidad de observar celos en las donadoras se indujo la sincrona de la ovulacin
mediante el empleo de un protocolo que utiliza un DIV y BE con la administracin de pLH (LUTROPIN)
el DIV. 24 horas despus de retirar el DIV. Los tratamientos SOV se iniciaron 24 horas despus de la
ovulacin y por lo tanto la emergencia de la primera onda folicular. (BO)
Luego de varios experimentos BO et al, adaptaron un protocolo para IATF en donadoras Bos Taurus, sin
la necesidad de detectar celo y sin comprometer las resultados. Grfico 8.

En este protocolo la emergencia de la onda folicular fue sincronizada con BE y un DIV en el da 0. El

tratamiento con FSH se inici el da 4. El da 6 se administr PGF2 AM-PM. En la maana del da 7, 24
horas despus de la administracin de PGF2 se retir el DIV. En la maana del da 8, 24 horas despus
del retiro del DIV, se administr pLH o GnRH. La IATF se realiz a las 12 y 24 horas despus. El dejar la
remocin del DIV para la maana del da 7 produjo un mayor nmero de oocitos y embriones fertilizados
que al removerlo en la tarde del da 6. Desde el punto de vista prctico la IATF de la donadora ha sido til
en la eliminacin de tener que detectar celo. (BO)

Sin embargo BARUSELLI et al confirmaron que era preferible remover el DIV en la tarde del da 7 (P36),
enseguida de la administracin de pLH o GnRH. As mismo tuvieron xito al realizar una sola dosis de IA
con semen de muy alta calidad 16 horas despus.(BARUSELLI)

Estudios recientes han confirmado que la gran variabilidad individual de respuesta a la SOV est
influenciada por el nmero de folculos presentes en el ovario de la donadora, sin embargo todos los
esfuerzos e investigaciones en este sentido no se han reflejado en un mayor nmero de embriones
suministrados por una donadora. (BO)

La necesidad de inyectar dos veces por da, hace que el tratamiento requiera mxima atencin y resulta a
veces muy difcil de aplicar en algunas explotaciones, reduciendo an ms la posibilidad de su utilizacin
masiva. Adems, cuando el tratamiento es aplicado incorrectamente las vacas no responden, o si se las
trata bruscamente puede causar estrs en algunas donantes, con la consiguiente disminucin de la
respuesta SOV.
Con el fin de reducir el estrs de manejo y la influencia que este tiene sobre la respuesta SOV se
disearon varios experimentos en dode se admiistr una dosis nica de FOLLTROPIN, comparando su
efecto con la administracin de dos dosis mltiples descendentes. Esta dosis nica se diluyo en un
agente de liberacin lenta, SRF de Bioniche Anial Health, siendo la dilucin de mejor respuesta la del
25% y la dosis de SOV de mejor respuesta de 400 mg de FOLLTROPIN-V.

En el Da 0, todas las vacas recibieron 5 mg de 17

Estradiol, 50 mg de progesterona y un dispositivo Cue Mate. El Da 4, las vacas fueron SOV con dos
tratamientos: las vaas del Grupo Control recibieron Folltropin-V en dosis decrecientes por va IM cada 12
horas durante 4 das, mientras que las vacas del Grupo Dosis Simple, recibieron una dosis nica de
Folltropin-V diluida en 10 ml de SRF que fue aplicada por va IM en la tabla del cuello. En la maana y la
tarde del Da 6, todas la vacas recibieron PGF2 y se retir el Cue-Mate en la tarde del Dia 6. En la
maana del Dia 8 la vacas reibieron 12.5 mg de pLH y fueron inseminadas 122 y 24 horas ms tarde en
el Dia 9. Las vacas que mostraron celo en la tarde del Dia 7, fueron inseminadas en el momento de la
pLH y 12 horas ms tarde. Se recolectaron os embriones en el Da 15 y fueron clasificados siguiendo las
normas de la IETS. En el Dia de la recoleccin, las donantes recibieron PGF2, para ser nuevamente
tratadas entre 13 y 20 dias despus (30 a 40 das de intervalo entre recolecciones).

Este protocolo tuvo una respuesta SOV similar a la obtenida con el protocolo convencional de 8 dosis
diarias por 4 das. No hubo efectos adversos del tratamiento sobre crecimiento folicular, el momento de la
ovulacin y la calidad embrionaria, no obstante siendo viscosa la dilucin de SRF empleada, la cual
requiere de cuidados especiales. (BO-TRIBULO 2011)

Con el fin de reducir las labores en el tratamiento superovulatorio mediante la aplicacin

dos veces al da va IM de FSH durante 3 a 4 das, HIRAIZUMI et al, investigaron la
respuesta SOV en vacas Japanese Black con una dosis Subcutnea de FSHp en la
regin del cuello, en dos dosis diferentes de 20 Unidades Armour (UA), tratamiento 1, y
30 Unidades Armour (UA), tratamiento 2, disueltas cada una en 10 ml o 50 ml de
solucin salina, en comparacin con el grupo control que recibieron 20 UA IM dos veces
al da en dosis decrecientes por ms de 3 das.

En el tratamiento 1 el promedio de CLs (15.4 2.5, 18.1 3.4 y 17.2 2.6), el nmero
total de huevos y embriones (12.9 1.4, 15.9 3.5 y 16.2 2.8), y los embriones
transferibles (7.5 2.0, 10.4 2.8 y 8.0 2.1) no hubo diferencias entre los
tratamientos A B y el control.

En el tratamiento 2 el promedio en el nmero de CLs (20.5 4.3, 20.4 2.7 y

20.1 3.4), el nmero total de huevos y embriones (21.7 4.2, 17.3 3.4 y 16.5 3.2),
y embriones transferibles (8.1 1.6, 9.3 2.2 y 9.5 1.9) no hubo diferencias entre los
tratamientos C y D y el grupo control.

A las 10 horas despus de la administracin, la concentracin de FSHp disminuy y no hubo diferencias

entre los tres tratamientos. Estos resultados sugieren que el aumento del volumen de solucin salina o la
dosis de FSHp no afect su comportamiento de absorcin al ser administrada en dosis nica
Subcutnea. Por lo tanto la administracin Subcutnea de FSHp a dosis de 20 o 30 UA disueltas en 10 o
50 ml de solucin salina es capaz de inducir la respuesta superovulatoria comparable con la obtenida por
la administracin IM dos veces al da, en vacas Japanese Black.

El siguiente protocolo del Grfico 10, muestra como se puede SOV vacas cada 30 das, sin necesidad de
detectar celos y sin comprometer los resultados.

Da 0 - Insertar CIDR + 17 Estradiol 5 mg + 100 mg P4.

Da 4 - Folltropin-V 80 mg dos veces al da IM
Da 5 - Folltropin-V 60 mg dos veces al da IM
Da 6 - Folltropin-V 40 mg IM AM. + PGF2
Da 6 - Folltropin-V 40 mg IM PM.
Remover CIDR
Da 7 - Folltropin-V 20 mg dos veces al da IMDa 8 - IA - PM
Da 9 - IA - AM
Da 15- Recoleccin de embriones, congelacin o transferencia.
PGF2
Da 30 - Insertar CIDR + 17 Esrtradiol 5 mg + 100 mg de progesterona. (MAPLETOFT)

Este estudio ha demostrado que el control exgeno del inicio de la onda folicular ofrece la ventaja de
poder iniciar los tratamientos SOVs en un momento ptimo para el reclutamiento de folculos,
independientemente del estado del ciclo estral. El protocolo es prctico, facil de seguir por el personal de
la finca y lo ms importante, elimina la necesidad de detectar tanto los celos como la ovulacin y la
consecuente espera de 8 - 12 das para poder iniciar el tratamiento con gonadotropinas.

En la Tabla 15 se encuentra una hoja de calculo en donde al tomar como base la fecha del da de inicio
del protocolo de TE o Da 0, se pueden programar las distintas actividades a realizar, tanto en la
donadora como en la receptora. (VEJARANO)
Grfico 11

Muestra las distintas labores a realizar durante el protocolo completo de TE en fresco y la sincronizacin
que debe haber entre el inicio del tratamiento de la donadora y la receptora, con IATF para que el tero
de la receptora se encuentre en el momento correspondiente a la edad de desarrollo de los embriones a
transferir, por lo que el protocolo en la receptora se inicia 2 das antes del protocolo de la donadora y se
efecta el lavado o recoleccin de embriones en el da 15 del protocolo de TE.

Como vemos hay una gran variedad y multiplicidad de protocolos de SOV para TE, por lo que en la
utilizacin o aplicacin de uno u otro juega un gran papel el criterio y la experiencia del profesional.

RECOLECCION DE EMBRIONES

Luego de su fertilizacin en la ampolla oviductal, los embriones llegan al tero despus del da 5, sin
embargo, ms del 10% puede permanecer en el oviducto al menos hasta el da 8, encontrndose en este
da en la punta del cuerno.

El medio de lavado como el de mantenimiento debe semejarse fsica y qumicamente al medio interno del
tero al momento de su recoleccin. El pH debe mantenerse en 7.5 0.5, co una osmolaridad de 285 a
300 miliosmoles (mMol). Algunos profesionales y Centrales prefieren preparar sus propios medios de
lavado y mantenimiento, de acuerdo a la escuela en donde se especializaron, otros utilizan preparados
comerciales listos para su administracin.

El medio de lavado ms empleado es el Fosfato Buffer Salino -PBS- Dulbecco, adicionado de Suero fetal
Bovino -SFB- inactivado con calor y una solucin adecuada de antibiticos/antimicticos. Igualmente
puede emplearse Albmina Serica Bovina -ASB-. Esta solucin debe prepararse y mantenerse congelada
en pequeas dosis individuales, para facilitar su manejo. El medio derecoleccin contiene de 1 a 2% de
SFB y el de mantenimiento normalmente contiene 10% de SFB, pudiendose almacenar en jeringas de
almacenamiento, las cuales deben tener mbolos plsticos, pues se ha demostrado que los mbolos de
caucho
de las jeringas desechables son txicos para los embriones (MAPLETOFT)

En la actualidad se dispone comercialmente de diferentes medios de recoleccin y mantenimiento

como TCM-199, HMS F-1, HAM-F10, VIGRO, BioLife TM Advantage, Embriocare , DMEM
Dulbecco Modificado Medio Eagle, etc. Comnmente, los embriones son mantenidos en el mismo
medio uno similar al que fue usado para la recoleccin. Algunos de estos medios de recoleccin,
mantenimiento y congelacin no contienen preparados con productos de origen animal y que por lo tanto
no requieren refrigeracin, contribuyendo adems a mejorar la bioseguridad.

En un comienzo la recoleccin de embriones se efectu mediante tcnica quirrgica, va incisin del

flanco izquierdo, esta tcnica fue ampliamente utilizada por los profesionales a comienzo de los 80s. Es
de anotar que en Colombia el Dr Gustavo Jaramillo fue el pionero de la tcnica de transferencia
quirrgica en bovinos en el ao 1976 y con posterioridad en la TE no quirrgica.

Con posterioridad ELSDEN y HASLER, entre otros, el mtodo no

desarrollaron
quirrgico mediante el empleo de un catter de Foley adaptado para el efecto. Este
mtodo evolucion rpidamente con los trabajos realizados por la Universidad de
Wisconsin y Utrech, utilizando catteres siliconados de longitud y tamao variable.
El catter de Rush es de dos vas y tiene un mayor
espacio entre la punta y el baln, adems
de poseer una longitud de 67 cm y un dimetro externo de 14 a 18 cm, cuatro orificios,
un espacio entre la punta y el globo de 5.5 cm, y aseguramiento mediante enroscado.
Su extensin permite que pueda ser utilizado en vacas con diferentes tamaos del tero
y que puedan ser introducidos a distancias distintas dentro del cuerno uterino. Sin
embargo, hay variedad de proveedores de equipos que suministran otro tipo de
catteres que son modificaciones del catter de Rush. Actualmente es la tcnica
empleada por todos los Profesionales de Reproduccin Asistida, dada su facilidad de
ejecucin.

Existe una gran variedad de tcnicas de lavado con porcentajes de xito comparables.

Como requisito previo debe realizarse una anestesia epidural baja, con la administracin de 2 a 3 ml de
lidocana o xiloxaina al 2%.

La inyeccin debe aplicarse lentamente y sin resistencia. A pesar que la relajacin de la cola es
inmediata, la accin sobre el recto y el esfnter del ano requiere aproximadamente 10 minutos. Por otra
parte puede producirse un efecto anestsico incompleto, con una buena anestesia de la cola (flaccidez)
pero insuficiente anestesia de los rganos de internos, causado por lo general por una incorrecta
administracin. En ese caso deber suplementarse o repetirse la dosis.

Es importante destacar que una insuficiente anestesia epidural puede ocasionar el fracaso del lavaje en
animales indciles, en estos casos se recomienda la administracin controlada de tranquilizantes como la
Ketamina o la Xilacina.
En algunos casos es posible la aspiracin de aire dentro del recto, lo que constituye una complicacin
pues este pierde sensibilidad y capacidad de expulsin del aire, para solucionar este inconveniente se
puede hacer retraccin suave del tero al momento de efectuar la evacuacin de la materia fecal.

La tcnica de lavado y recoleccin de embriones consiste en la introduccin del catter, con un estilete
acerado que le da la rigidez necesaria para su paso a travs del crvix, colocndo la punta del mismo en
la parte media de cada cuerno o an ms adentro, con el fin de efectuar el lavado individual de cada uno.

Los puntos de referencia para el avance del catter son el ligamento intercornual, la curvatura uterina y el
extremo anterior del cuerno. Una vez se alcanza la posicin deseada se retira el mandril y se procede a
insuflar el baln con aire o medio. El volumen depende de la edad y tamao del animal, siendo el
operador quien determine finalmente por palpacin la cantidad a administrar.

Si el baln se encuentra en el extremo anterior del cuerno y este no se distiende al inyectar la solucin,
significa que la pared del tero se desgarr o fue perforada con la punta del catter, el medio es
expulsado en la cavidad abdominal, recuperndose solo un volumen reducido teido de sangre.

Existen dos sistemas de lavado o recoleccin de embriones, el de flujo continuo, con un sistema de
circuito cerrado y la recoleccin interrumpida la cual se realiza con jeringa.Cada tcnica tiene sus
ventajas y desventajas, pudindose combinar ambas tcnicas por parte del profesional, segn su criterio
y experiencia.
 En el flujo continuo el medio de lavado se introduce
dentro del tero por gravedad.

Otros utilizan un sistema de circuito cerrado de tres vas y jeringas que facilitan la
introduccin de pequeos volmenes de medio.

El medio con los embriones son recolectados en filtros que permiten su separacin a
medida que fluye el medio de lavado, equipos que son desechables. Hay una amplia gama
de filtros que permiten el paso del medio, mientras quedan atrapados los oocitos y embriones dentro del
mismo y se desecha el medio sobrante.
El volumen de medio a inyectar debe ser regulada cuidadosamente por el operador, de manera que se
introduzca la cantidad suficiente para que se produzca dentro del tero la presin de retorno sin que su
exceso provoque dolor. Generalmente se administran 30 a 50 ml, siendo el volumen total de 500 a 700 ml
por cada cuerno, a criterio del profesional. La recuperacin optima del medio no es inferior al 90% del
volumen inyectado, sin embargo se afirma que la mayor parte de embriones y oocitos se obtienen
despus de recuperar 200 ml.

El sistema de jeringa permite la introduccin de una pequea cantidad de medio que produce
un torbellino interno, con lo que se movilizan los embriones, siendo luego extrado
con la misma jeringa de manera alterna y posteriormente pasarlo por los filtros para su
separacin y posterior clasificacin. Una vez terminado el lavado se repite la misma operacin en
el otro cuerno. De acuerdo a la flexibilidad del catter es posible cambiarlo de cuerno sin sacarlo del
tracto genital, para lo cual luego de desinflar el baln, se retira hasta el crvix con el fin de introducir
lentamente el mandril para luego ser dirigido al otro cuerno.

el nmero
Una gua para determinar la cantidad de embriones posibles de recuperar, es la de contar
de CLs presentes en cada ovario, ya que correspondera con el nmero de ovulaciones.
Sin embargo no siempre sucede esto y la razn no se conoce con exactitud, dndose
algunas explicaciones como oocitos no fertilizados, embriones retardados o
degenerados que quedan atrapados en el oviducto o ser reabsorbidos, falta de
experiencia o problemas de lavado an en grupos experimentados.
Una vez se completa el proceso de recoleccin, se efecta el vertimiento del contenido de los filtros en
una caja de Petri, as como una irrigacin y lavado del filtro y el catter para realizar un barrido de los
mismos

EVALUACION DE EMBRIONES

La evaluacin de los embriones debe realizarse

de la caja de Petri sobre una base cuadriculada, que facilita
mediante examen microscpico
la observacin ordenada con aumentos de 50 100 X.

Todas las estructuras encontradas son trasferidas a otra caja para su seleccin individual y conformar un
grupo final para clasificacin.
Cada uno de los embriones es colocado en cajas de seleccin y almacenamiento. Aunque los embriones
son trasferidos luego de su seleccin, es posible conservarlos por algunas horas a temperatura ambiente
en el medio de mantenimiento, el cual es ms enriquecido que el de recoleccin.

Los puntos a tener en cuenta al evaluar los embriones son:

ESFERIFICIDAD.- La estructura es esfrica, cualquier variacin se considera una colapso y por

consiguiente de menor calidad.

ESTRUCTURAS VISIBLES.- En sus estados iniciales las blastomeras son bien definidas, mientras que a
medida que son ms numerosas son menos diferenciables debido a la aglomeracin de las mismas.
REGULARIDAD.- Se aprecian estructuras bien definidas sin deformaciones que indiquen
su degeneracin o muerte.

OPACIDAD.- Los embriones viables poseen refringencia, los degenerados son opacos y en su mayora
son siempre oocitos. La refringencia del embrin es debida a la brillantez de la membrana plasmtica del
embrin.

ZONA PELUCIDA INTACTA - ZP.- La ZP no debe presentar fracturas, desgarros o soluciones de

continuidad, as como erosin de su superficie, esto ltimo es indicativo de lesin bacterial.

El dimetro promedio del embrin bovino es de 150 190 m, incluyendo el espesor de la ZP de 12 a 15

m. Este permanece sin cambios desde el estado de una clula hasta el estado de Blastocisto.

El embrin ideal debe ser compacto y esfrico. Las blastmeras deben tener tamao, color y apariencia
similares, con un contorno uniforme. La ZP debe ser uniforme, no debe tener fisuras ni estar colapsada y
no presentar detritus celulares en su superficie. El contenido del embrin debe ser fijo. El citoplasma no
debe estar granulado o tener vesculas. El espacio perivitelino, el cual es el espacio existente entre el
embrin y la ZP, debe estar limpio y no contener residuos celulares.

ESTADOS DE DESARROLLO EMBRIONARIO

MORULA TEMPRANA.-
Masa de al menos 16 blastmeras individuales difciles de distinguir una de la otra, la cual ocupa la
mayor parte del espacio perivitelino.

MORULA COMPACTA.-

Blastometras agrupadas formando una masa compacta que ocupa el 60 70% del espacio perivitelino.

BLASTOCISTO TEMPRANO.- Las blastmeras organizadas se distienden formando un anillo con una
cavidad o blastocele para ocupar el 60 -70% del espacio perivitelino
BLASTOCISTO.-Dentro de la ZP se observan cambios bien diferenciados de la capa externa del embrin
o Trofoblasto y la Masa Celular Interna, ms oscura y compacta. El blastocele es ms
notorio y el embrin ocupa casi todo el espacio perivitelino.

BLASTOCISTO TARDIO O EXPANDIDO.- El dimetro general del embrin aumenta

notoriamente, mientras se aprecia un gran adelgazamiento de la ZP.

BLASTOCISTO ECLOSIONADO.-

Los embriones en este estado inician la perdida de la ZP, la cual se rompe y permite la extrusin del
embrin, por lo que se puede observar la salida del mismo por la ruptura dejndolo completamente libre,
siendo evidente la delimitacin del Blastocele y la Masa Celular Interna MCI, o pueden estar colapsados.
Su identificacin puede ser difcil a menos que se re -expandan.

CALIDAD EMBRIONARIA

EXCELENTE.- Embrin esfrico simtrico, con clulas de tamao color y apariencia uniforme, contenido
embrionario fijo y ZP intacta.

BUENO: Presentan pequeas imperfecciones como blastmeras extruidas, de menor tamao, forma
irregular con algunas vesculas.

REGULAR: Los defectos son ms definidos, con blastmeras extruidas, vesculas y clulas degeneradas.
MALO: Las blastmeras extruidas son numerosas as como las clulas degeneradas de diferentes
tamaos, vesculas grandes y numerosas, aunque aparentemente se ve una masa embrionable viable.
Generalmente no son de calidad trasferible.

CODIGOS DE CALIDAD RECOMENDADOS

Los cdigos establecidos por la IETS para clasificar embriones se encuentran entre 1 a 4.

Cdigo 1.- Excelente o bueno. Embriones simtricos y esfricos, con masa embrionaria constituida por
blastmeras de tamao, color y densidad uniforme. Se encuentran en estado correspondiente al de la
edad de recoleccin. Se pueden observar irregularidades menores con al menos el 85% de masa celular
viable e intacta. El material extruido en el espacio perivitelino no mayor del 10%. La ZP debe ser lisa y no
presentar superficies cncavas o planas que puede ocasionar que el embrin se adhiera a las pajillas o
cajas de Petri.

Cdigo 2.- Regular. Alteraciones moderadas en la forma, tamao, color y densidad de la masa
embrionaria y de las clulas individuales. Al menos el 50% de la masa embrionaria debe ser viable e
intacta.

Codigo 3.- Malo. Marcas irregulares en la masa embrionaria, tamao, color y densidad de las clulas. Un
25% de la masa embrionaria viable e intacta.

Cdigo 4.- Degenerado. Embriones con masa indefinida o colapsada.

Estos embriones junto con los oocitos no son viables para trasferencia.

El manual de la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones IETS dice, "Se debe reconocer
que la evaluacin visual de embriones es una evaluacin subjetiva de un sistema biolgico y no es una
ciencia exacta. Existen adems otros factores, como las condiciones medioambientales, la calidad de las
receptoras y la habilidad de los tcnicos, que juegan un papel muy importante en la obtencin de
gestaciones a partir de los embriones transferidos. Se ha reconocido tambin que existen muchos
sistemas diferentes usados para clasificar embriones, siendo unos ms sofisticados que otros. El criterio
para asignar un cdigo de calidad en los formatos estandarizados, fueron simplificados para ser
amigables con el usuario. Generalmente, a menos que se especifique otra cosa, solamente los
embriones clasificados con Cdigo 1 podrn ser utilizados en el comercio internacional". (IETS)

En una misma recoleccin es posible encontrar una considerable variedad de estados de desarrollo
embrionario en un momento determinado. El da 7 despus de l IA pueden encontrarse mrulas y
blastocitos en eclosin. Al mismo tiempo, se pueden encontrar embriones de excelente calidad y
embriones no fertilizados y degenerados. El hecho de encontrar grandes variaciones en la calidad y el
estado de desarrollo embrionario generalmente indica que los embriones con apariencia normal pueden
estar sujetos a estrs alterados y por consiguiente los ndices de preez no son satisfactorios. Los
embriones de excelente y buena calidad, en estados de desarrollo de mrula compacta a blastocito
producen ndices de preez ms altos, an despus de haber sido congelados. Los embriones regulares,
de baja calidad o malos producen ndices de preez bajos despus de congelados, por lo que deben ser
transferidos en fresco. Es recomendable escoger el estado de desarrollo del embrin acorde con la
sincrona de la receptora. Los embriones clasificados como regulares o pobres tienen mayor posibilidad
de sobrevivir si son trasferidos a las receptoras con mejor sincrona.

Una vez seleccionados los embriones a trasferir se deben efectuar varios lavados, con el fin de
eliminar moco o clulas adheridas a la ZP, de tal manera que se aslen en un estado de
limpieza ptimo.

Para el efecto se realiza la siguiente serie de lavados:

5 lavados con PBS (1/100 volumen de los embriones y no ms de 10 embriones).

2 lavados con tripsina al 0.2% por 30 a 60 segundos.

5 lavados con PBS.

Luego de llevar a cabo los lavados, se procede al empacado del embrin en la pajilla de
transferencia o congelacin segn el caso. Al efecto se coloca la pajilla en el catter por
el extremo con el tapn blanco hacia abajo y se coloca el dispositivo para facilitar la
aspiracin del embrin y se colocan en la gradilla segn el nmero de embriones a
transferir.

TRANSFERENCIA DEL EMBRION

Las primeras trasferencias en los aos 70s sellevaron a cabo por el mtodo quirrgico,
mediante incisin de la fosa paralumbar correspondiente al mismo lado en que se
encuentra el CL, identificado con anterioridad. Se expona la punta del cuerno uterino a
travs de la incisin y se puncionaba la pared del tero con un estilete romo. El embrin
previamente seleccionado y aspirado en una pipeta Pasteur o catter N 20, unido a
una jeringa de 1 ml, se depositaba en la punta del cuerno a travs de la puncin
previamente realizada. (HASLER)

Actualmente la TE se efecta por la tcnica no quirrgica para lo cual se utilizan varios tipos de
catteres, unos con mandril y otros rgidos con adaptadores para la pajilla.
Con la hembra asegurada en el brete, se procede al lavado y desinfeccin del tren posterior y los
genitales externos. Luego se aplica una anestesia epidural baja, con el fin de relajar el cuello y facilitar la
introduccin del catter. Enseguida se arma la pistola con la pajilla del embrin a transferir.
El catter se introduce en la vagina, de la misma manera a como se procede en la IA, hasta llegar a la
parte anterior del cuerno uterino, para dirigirlo posteriormente a la punta del cuerno
ipsilateral al CL, previamente identificado.

SINCRONIZACION DONADORA RECEPTORA

Desde la iniciacin del TE se ha hecho nfasis en la necesidad de lograr una sincronizacin entre la
edad cclica del tero de la receptora con la edad de desarrollo del embrin, tanto para su transferencia
en fresco como de embriones congelados.

Con el manejo del ciclo estral, mediante protocolos hormonales para IATF se ha conseguido este
objetivo, sin embargo hay dos tendencias bien definidas.

La primera, considerada tradicional, consiste en detectar el celo de un grupo de receptoras y utilizar

aquellas que presentan celo con una diferencia de 1 da con el celo de referencia de la donadora e
inicio del protocolo elegido de TE.

La segunda consiste en la realizacin de los protocolos para IATF en las receptoras, detectar el celo y
utilizar las que presenten celo en el tiempo anotado anteriormente, o efectuar la transferencia a las
receptoras a Tiempo Fijo sin la necesidad de detectar celos. Por consiguiente el primer aspecto de
seleccin de la receptora a tener en cuenta en la TE, adems de la condicin corporal y la ciclicidad, e
independientemente del mtodo de sincronizacin que se utilice es la sincronizacin y la deteccin de
celos.
En la Tabla 16se presenta los resultados relacionados por el Dr. Gabriel Velez junto con
otros profesionales, que dan una idea y pueden servir de gua a seguir en el ejercicio de
la Reproduccin Asistida.

Las receptoras sincronizadas con PGF2 deben tratarse 12 a 24 horas antes de la donadora, ya que la
PGF2 induce la presentacin del celo 60 a 72 horas de su aplicacin. (KASTELIC)

El xito de los programas de sincronizacin de celos depende del entendimiento de las siguientes reas:
1.- La fisiologa del ciclo estral bovino (descrito anteriormente),
2.- Agentes farmacolgicos y sus efectos sobre el ciclo estral de las vacas.
3.- Factores de manejo del rebao que puedan reducir el anestro e incrementar las tasas de
concepcin. (MAPLETOF)
Un primer factor de seleccin de la receptora es el da de transferencia a la receptora.

En el Grfico 12 se aprecia que los porcentajes de concepcin en los das 7-8-9

corresponden al 47%- 55% y 43% respectivamente. Es claro que el mejor da para
efectuar la transferencia de los embriones es el da 8 con una preez del 80% de las receptoras y
un porcentaje de concepciones del 55% en este da. Este dato es importante cuando se manejan
volmenes altos de hembras. (VELEZ)

Un segundo factor de seleccin al momento de la transferencia es la presencia y el tamao del CL en la

receptora. Hay que considerar que en los primeros 7 das del ciclo estral el tamao del CL puede
aumentar de 9.4 mm a 21.9 mm y que con esto aumenta la tasa de concepcin.Segn Oyuela
2009 el porcentaje de preez para CL en tres Centrales de Asistencia Reproductiva fueron de 28% para
CL1 39% para CL2 y CL3. Grfico 13

Lo anterior ha sido corroborado por otros trabajos (BARUSELLI SPELL) y de hecho, el tamao del CL y
la concentracin de P4 al momento de la TE es una variable considerada determinante para el
establecimiento de la preez. Por esta razn, la medicin del CL es un parmetro de seleccin de las
receptoras.

Al mismo tiempo que se determina el tamao del CL mediante palpacin y ecografa, se determina
el ovario en que se encuentra, ya sea el derecho o el izquierdo, lo cual es importante
para que al momento de realizar la transferencia esta se efecte en el cuerno ipsilateral
al CL del ovario de la receptora.
De otra parte hay que tener en cuenta que al momento de seleccionar las receptoras el da de la
transferencia se presenta una gran variacin en cuanto a su clasificacin como aptas y no
aptas. Segn VELEZ un 25% de las receptoras sincronizadas no se van a poder utilizar en la
transferencia.
 y minerales en las receptoras dentro de un
La administracin de complejos vitamnicos
programa de mejoramiento y preparacin del grupo de receptoras previo a su
inclusin en protocolos de TE, aumenta la capacidad y el porcentaje de pegamiento
de embriones.

Dentro de los productos comerciales se encuentran el Kirofosfan, Betaferol, Calfosvit

TE, se ha podido adelantar la

Debido a la implementacin de los protocolos de IATF en la
Trasferencia de Embriones a Tiempo Fijo TETF, en donde es posible eliminar la
necesidad de detectar celos en las receptoras, protocolos que fueron expuestos
anteriormente

CONGELACION DE EMBRIONES

La congelacin de embriones es una tcnica que se aplica cuando hay disponibilidad de embriones de
excelente calidad que no son trasferidos en fresco y pueden aprovecharse en procesos posteriores. Su
objeto es la reducir los procesos metablicos del embrin a su mnima expresin y se puedan conservar
el mayor tiempo posible y garantizar que en el momento de su utilizacin luego de la descongelacin
conserven su viabilidad y por lo tanto lleguen a terminar en una gestacin.

La congelacin de las clulas vivas es un proceso fisico - quimico complejo de intercambio de agua entre
la clula y el medio que la rodea, existiendo un ndice de enfriamiento ptimo para cada tipo de clulas, lo
cual depende del tamao de la clula, el radio entre su superficie y su volumen, su permeabilidad al
agua y el coeficiente de temperatura de esa permeabilidad.(PALASZ)

Normalmente, el medio que contiene los embriones se enfra por debajo de su punto de congelacin sin
formar cristales de hielo, fenmeno conocido como sper-enfriamiento. Luego, a una temperatura ms
baja, ocurre la formacin de ncleos de hielo, seguida por un rpido incremento en la temperatura debido
a la liberacin del calor de fusin latente. Para evitar un superenfriamiento muy extenso, se debe inducir
la cristalizacin del hielo en el medio extracelular ms menos a 2C por debajo de su punto de
congelacin (-4 a -7C), por medio de la induccin de la formacin de un cristal de hielo en el medio.
Esto se conoce en ingles como "seeding" o siembra. El agua en las clulas del embrin y entre los
cristales de hielo por fuera del embrin, no se congela a esa temperatura porque los solutos presentes
disminuyen el punto de congelacin. Durante el enfriamiento posterior y el agrandamiento de los cristales
de hielo, la concentracin de solutos se incrementa y el embrin responde osmticamente perdiendo
agua dentro del medio extracelular que no se ha congelado.

Las clulas se daan durante los procesos de congelacin y descongelacin principalmente por los
efectos de la solucin y la formacin de hielo intracelular. Esto ltimo, es especialmente daino cuando
se forman cantidades relativamente abundantes de cristales grandes.

Para asegurar la supervivencia del embrin luego de la congelacin, se requiere la adicin de

crioprotectores los cuales actan reduciendo la cantidad de hielo presente a una temperatura
determinada durante la congelacin, moderando as los cambios en la concentracin de solutos. Los
criterios que debe cumplir un crioprotector son: tener alta solubilidad, baja toxicidad a altas
concentraciones, y bajo peso molecular, tanto para facilitar la permeabilidad como para ejercer un efecto
de unin mximo. Durante la adicin y dilucin del criprotector, la clula sufrir cambios osmticos que
conducen a la expansin o contraccin de la misma. Como resultado, si la adicin o, particularmente la
dilucin, se lleva a cabo de manera inapropiada, la viabilidad de las clulas puede verse afectada.

En la actualidad se prefiere utilizar el etilenglicol con crioprotector, ya que no necesita ser removido del
embrin antes de la trasferencia como sucede con el glicerol utilizado en un principio.

Los embriones seleccionados son colocados en el medio de congelacin a base de PBS suplementado
con SFB al 10-20% y 1.0 a 1.5 M de etilenglicol, a temperatura ambiente (20C), dejndolos por 8 a 10
minutos para permitir que el crioprotector se equilibre dentro de las clulas embrionarias. Durante este
perodo de equilibrio se empacan los embriones en pajillas francesas de 0.25 a o.5 ml, las cuales se
sellan.

A partir de 2009 ms del 99% de los embriones de vacas de carne y leche en los Estados Unidos han
sido congelados en Etilen Glicol por la American Embryo Transfer Association (AETA) para una
Trasferencia Directa TD.

Una vez empacadas se colocan inmediatamente en la cmara del congelador a una temperatura de -6 a -
7C, donde se dejan por 5 minutos, en vapores de nitrgeno.

Luego se induce la cristalizacin del hielo en el medio extracelular o seeding mediante la aplicacin de
una pinza hemosttica o un topito de algodn preenfriado en el nitrgeno lquido, tocando la pared
exterior de la pajilla, teniendo cuidado de no tocar la columna del medio que contiene el embrin. Debe
observarse una mancha blanca por debajo del menisco donde se aplic la pinza, lo que confirma que el
proceso de cristalizacin se ha llevado correctamente.
Se recomienda que el proceso de cristalizacin se realice individualmente y no en conjunto de la totalidad
de los embriones a congelar. La tcnica correcta es empacar un embrin, colocarlo en la criocmara e
inmediatamente realizar la cristalizacin de la pajilla en forma individual. Se deben mantener las pajillas
a esta temperatura por 10 minutos ms para permitir que la cristalizacin del medio alcance su
equilibrio. Luego se enfran los embriones a una tasa de 0.3 a 0.8 C/min hasta alcanzar una
temperatura de entre -30 y -40C, y enseguida colocan las pajillas en una cnula plstica para despus
ser depositadas en un gobelet y sumergidas posteriormente en nitrgeno lquido a -196C dentro de un
termo para su almacenamiento. (MAPLETOF)

La descongelacin de los embriones se realiza colocando las pajillas dentro de un recipiente de agua
tibia con temperatura entre 20 Y 35C. Se ha demostrado que se redujo la incidencia de fracturas
en la ZP cuando las pajillas eran descongeladas exponindolas solamente al aire, o
cuando se descongelaban exponindolas primero al aire por 10-15 segundos para
luego llevarlas al bao mara a 35C.

BIBLIOGRAFIA

ADAMS GP, KOT K, SMITH CA, GINTHER OJ. Selection of the dominant follicle and suppression of
follicular growth in heifers.Anim Reprod Sci. 1993;30:259271

BARUSELLI, P. Increased pregnancy rates in embryo recipients treated whith CIDR-B

devices. Theriogenology 55. (2001).

BARUSELLI P, S FILHO M, MARTINS C, NASSER L, NOGUEIRA M, BARROS C,

ET AL. Superovulation and embryo transfer in Bos indicuscattle. Theriogenology. 2006;65:7788

BARUSELLI P, S FILHO M, MARTINS C, NASSER L, NOGUEIRA M, BARROS C, et al. Superovulation

and embryo transfer in Bos indicuscattle. Theriogenology. 2006;65:7788

BELACUBA F. FACTORES QUE AFECTAN LA SUPEROVULACION EN

BOVINO. 2007 www.engormix.com

BETTERIDGE K.J. EMBRIO TRANSFER. PROCEDURES AND RESULTS OBTAINABLE IN CATTLE.

Current Therapy In Theriogenology: Diagnosis, Treatment Sand Prevention Of Reproductive Disease In
Animals. Morrow D. 1980

BETTERIDGE KJ. An historical look at embryo transfer. J Reprod Fert 1981; 62:1-13.

BETTERIDGE KJ. A history of farm animal embryo transfer and some associated techniques.
Adams CE. Mammalian egg transfer. Boca Raton, FL: CRC Press, Inc.; 1982;

BO G. MAPLETOFT R. HISTORICAL PERSPECTIVES AND RECET RESEARCH ON

SUPEROVULATION IN CATTLE. VOLUME 81. ISSUE 1 pages 38-48, 1 January
2014 www.theriojournal.com/article/S0093-691X(13)00385-3/fulltext

B, G.A.1; CARBALLO GUERRERO, D.1, 2; TRBULO, A.1, 2; TRBULO, H.1, 2; TRBULO, R.1, 2 Y
MAPLETOFT, R.J.3. 2011. TAURUS, BS. AS. Nuevos tratamientos Hormonales Para Superovulacin De
Donantes De Embriones Bovinos

B GA, BARUSELLI PS, MORENO D, CUTAIA L, CACCIA M, TRIBULO R, ET AL. The control of
follicular wave development for self-appointed embryo transfer programs in
cattle. Theriogenology. 2002;57:537

B GA, PIERSON RA, MAPLETOFT RJ. The effect of estradiol valerate on follicular dynamics and
superovulatory response in cows with Syncro Mate B implants. Theriogenology. 1991;36:169183

DIAZ F. IMPACTO DEL USO DE UN SUPLEMENTO VITAMINICO MINERAL EN PROGRAMAS DE

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES A TIEMPO FIJO (TETF). Revista Genetica Bovina N 15 Sep. Oct
2009.

DROST M, BRAND A, AARTS MH. A device for non-surgical recovery of bovine

embryos. Theriogenology. 1976;6:503507

DUICA A. TOVIO N. GRAJALES H. FACTORES QUE AFECTAN LA EFICIENCIA REPRODUCTIVA DE

LA HEMBRA RECEPTORA EN PROGRAMAS DE GRANSPLANTE DE EMBRIONES. Revista de
Medicina Veterinaria N 14: 107-124 / Julio - diciembre 2007

ELSDEN RP, HASLER JF, SEIDEL GE. Non-surgical Recovery Of Bovine Eggs. Theriogenology.
1976;6:523532

FOOTE RH, ONUMA H. SUPEROVULATION, OVUM COLLECTION, CULTURE AND TRANSFER.J

Dairy Sci. 1970;53:16811692

GINTHER OJ. KNOP L. KASTELIC JP. Temporal associations among ovarian events in cattle during
oestrous cycles with two or three follicular waves. J Reprod Fert 1989; 87:223-230. -

GOMEZ C.J. QUE ES LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES. Revista Gentica Bovina N 1 Enero-

Febrero 2007
GOMEZ, C. Transferencia de embriones experiencias en Colombia. Memorias, congreso internacional
de reproduccin bovina. INTERVET. Bogota. Colombia. Septiembre de 2005.

GONZALEZ A, LUSSIER J, CARRUTHERS T, MURPHY B, MAPLETOFT R. Superovulation of beef

heifers with Folltropin. A new FSH preparation containing reduced LH
activity. Theriogenology. 1990;33:519529

HAFEZ E. Reproduccin e inseminacin de los animales domesticos. 7 edi. Reproductive Health

Center IVF/Andrology International. Kiawah Island, South Carolina, USA: McGraw Hill
Interamericana. 2000: 33 144.

HASLER J.F. FORTY YEARS OF EMBRYO TRANSFER IN CATTLE: A REVIEW FOCUSING ON THE
JOURNAL THERIOGENOLOGY, THE GROWTH OF THE INDUSTRY IN NORTH AMERICA, AND
PERSONAL REMINISCES. Volume 81, Issue 1 , Pages 152-169, 1 January 2014

HASLER JF. The Holstein cow in embryo transfer today as compared to 20 years ago. Theriogenology.
2006;65:416

HASLER JF. The current status and future of commercial embryo transfer in cattle. Anim Reprod Sci
2003; 79:245-264.

HIRAIZUMI S. NISHINOMIYA H. OIKAWA T SAKAGAMI M, SANO F. NISHINO O. KURAHARA T,

NISHIMOTO N, ISHIYAMA O, HASEGAWA, HASHIYADA Y. SUPEROVULATORY RESPONSE IN
JAPANESE BLACK COWS RECEIVING A SINGLE SUBCUTANEOUS PORCINE FOLLICLE
STIMULATING HORMONE TREATMENT OR SIX INTRAMUSCULAR TREATMENTS OVER THREE
DAYS. RECEIVED: JULY 23, 2013; RECEIVED IN REVISED FORM: SEPTEMBER 9,
2014; ACCEPTED: SEPTEMBER 11, 2014; PUBLISHED ONLINE:SEPTEMBER 18,
201DOI: HTTP://DX.DOI.ORG/10.1016/J.THERIOGENOLOGY.2014.09.012

IETS.- Manual of the IETS. Third Edition. DA Stringfellow & SM Seidel (eds). Savoy, IL: IETS, 1998. -
Available from amazon.com -

INTERVET. COMPENDIUM DE REPRODUCCION ANIMAL.

KASTELIC JP, KNOPF L, GINTHER OJ. Effect of day of prostaglandin F treatment on selection and
development of the ovulatory follicle in heifers. Anim Reprod Sci 1990; 23:169-180.

LEIBO SP, MAPLETOFT RJ. Direct transfer of cryopreserved cattle embryos in North America. In: Proc
Ann Mtg Am Embryo Trans Assoc, San Antonio, TX, 1998; 91-98.

LOONEY C, BOUTLE B, ARCHIBALD L, GODKE R. Comparison of once daily FSH and twice daily FSH
injections for superovulatin in beef cattle. Theriogenology. 1981;15:1322
LOONEY CR. SUPEROVULATION IN BEEF FEMALES. In: Proceedings of the 5th Annual Convention of
the AETA. AETA 1986:1632.

MAPLETOFT. Transferencia de embriones en bovinos IVIS Reviews in Veterinary Medicine,

I.V.I.S. (Ed.). International Veterinary Information Service, Ithaca NY (www.ivis.org), Last updated: 17-
Nov-2006; R0104.1106.ES

MAPLETOFT, RJ, BO, GA, ADAMS, GP, 2000. Advances in the manipulations of donor cow and recipient
estrus cycles in bovine embryo transfer programs.Arquivos de la Facultad de Veterinaria (UFRGS, Porto
Alegre) 28:23-48.

MAPLETOFT RJ. EMBRYO TRANSFER IN THE COW: GENERAL PROCEDURES. Rev sci tech Off int
Epiz 1985; 4:843-858.

MENDOZA R. CURSO DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES.EN BOVINOS. HUMBERTO TRIBULO

GABRIEL BO RICARDO TRIBULO ESTEBAN BALLA ANDRES TRIBULO. CLASE 1
SUPEROVULACION. http://www.slideshare.net/ricardomorenojerez/clase-1-superovulacion

MOOR R, KRUIP T, GREEN D. Intraovarian control of folliculogenesis: limits to

superovulation?. Theriogenology. 1984;21:103116

OYUELA L.A. FACTORES QUE AFECTAN LA TASAS DE PREEZ EN PROGRAMAS DE

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES PRODUCIDOS IN VITRO, EN RAZAS CEBUINAS. Tesis de Grado
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Universidad Nacional. 2009

PALASZ AT, MAPLETOFT RJ. Cryopreservation of mammalian embryos and oocytes: Recent
advances. Biotech Advan 1996; 14:127-149.

PALMA, G. Biotecnologa de la reproduccin. Balcare. Argentina: INTA, 2001.

RODRIGUEZ M. GIRALDO C. CASTAEDA S. RUIZ T. OLIVERA M. ANALISIS DE LAS TASAS DE

PREEZ EN PROGRAMAS DE TE EN COLOMBIA. Sci. Agri. Universidad de Antioquia. Facultad de
Ciencia Agrarias. Grupo Fisiologa y Biotecnologa Animal. ISSUU Revista Gentica Bovina N 16.

ROWE RW, DEL CAMPO MR, EILTS CL, FRENCH LR, WINCH RP, GINTHER OJ. A single cannula
technique for nonsurgical collection of ova from cattle.Theriogenology. 1976;6:471483

RUANE J, SMITH C. The genetic response possible in dairy cattle improvement by setting up a multiple
ovulation and embryo transfer (MOET) nucleus scheme. Genet Sel Eval 1989; 21:169-183.
SINGH J, DOMINGUEZ M, JAISWAL R, Y COL.; A simple ultrasound test to predict superstimulatory
response in cattle. Theriogenology 2004; 62:227-243.

SMITH C. Applications of embryo transfer in animal breeding. Theriogenology, 1988; 29:203-212.

SMITH C. Genetic improvement of livestock using nucleus breeding units. World Anim Review 1988; 65:2-
10.

SMITH C, RUANE J. Use of sib testing as a supplement to progeny testing to improve the genetic merit of
commercial review in dairy cattle. Can J Anim Sci 1987; 67:985-990.

SPELL, A. BEAL, W; CORAH, L; LAMB, G Evaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy
rates of embryo transfer in beef cattle.Theriogenology 56. (2001): 287-297.

STROUD B, HASLER JF. Dissecting why superovulation and embryo transfer usually work on some farms
but not on others. Theriogenology. 2006;65:6576

TEEPKER G, KELLER DS. Selection of sires originating from a nucleus breeding unit for use in a
commercial dairy population. Can J Anim Sci 1989; 69:595-604.

TRIBULO A, ROGAN D, TRIBULO H, TRIBULO R, MAPLETOFT RJ, BO GA. Superovulation of beef

cattle with a split-single intramuscular administration of Folltropin-V in two concentrations of
hyaluronan. Theriogenology. 2012;77:16791685

VASCONCELOS, J.;SARTORI, R.; OLIVEIRA, H.; GUENTHER, J.; WILBANK, M. Reduction is size of the
ovulatory follicle reduces subsequent luteal size and pregnancy rate. Theriogenology 56. (2001): 307
314.

VELEZ G. MANUAL DE LA VACA RECEPTORA. 2011.

VEJARANO A. MVZ. phD. DEPARTAMENTO DE REPRODUCCION UNIVERSIDAD DEL TOLIMA.

GRUPO DE INVESTIGACION URO. CONFERENCIAS DE ACTUALIZACION.

VOELKEL SA, HU YX. Direct transfer of frozen-thawed bovine embryos. Theriogenology 1992; 37:23-38.

SHAW DW, GOOD TE. Recovery rates and embryo quality following dominant follicle ablation in
superovulated cattle. Theriogenology 2000; 53:1521-1528. - PubMed -
SINGH J, DOMINGUEZ M, JAISWAL R, Y COL.; A simple ultrasound test to predict superstimulatory
response in cattle. Theriogenology 2004; 62:227-243.

FERTILIZACION IN VITRO

La Fertilizacin In Vitro es la Tcnica de Reproduccin Asistida en donde la

Maduracin y Fecundacin de los gametos femeninos, as como el
desarrollo de los embriones resultantes hasta el estado de blastocisto,
se lleva a cabo artificialmente a nivel de laboratorio, para con posterioridad ser
congelados o transferidos a una receptora en donde terminar su perodo de gestacin,
dando lugar a un nuevo individuo viable.

Este captulo estar dirigido a presentar y analizar los diferentes aspectos relacionados
con la especie bovina, su aplicacin, desarrollo y avances obtenidos a nivel nacional.
En la actualidad existe un gran nmero de Profesionales y Compaas de Reproduccin
Asistida que ofrecen este servicio, algunas de las cuales han sido citadas en el primer
captulo del presente Manual De Biotecnologa Reproductiva En Bovinos

La primera cra en bovinos obtenida por FIV fue un ternero nacido el 9-06-
1981. (BRACKETT)

Al igual que la TE, la FIV se ha desarrollado desde el punto de vista investigativo,

requisito previo para su implementacin y desenvolvimiento a nivel comercial, objetivo
final como factor de produccin, productividad y valor agregado de la industria
ganadera.
En el aspecto investigativo la FIV permite obtener los conocimientos bsicos para
entender el mismo proceso in vitro y poder afrontar otras lneas de investigacin como
la criopreservacin de gametos y embriones, la transferencia nuclear y la produccin de
embriones genticamente modificados. Igualmente es posible la evaluacin de la
capacidad fecundante del semen y el diseo de diferentes protocolos de congelacin y
sexaje del mismo. Es una tcnica que facilita la conservacin de especies en vas de
extincin.

La aplicacin inicial de la Produccin de Embriones In Vitro (PEIV) fue la obtencin de

embriones bovinos a gran escala, a partir de ovarios de donadoras de matadero. Como
resultado de la implementacin de tcnicas que permiten la recoleccin de ovocitos de
manera directa de ovarios de donadoras vivas, se ha podido introducir ampliamente la
PEIV en programas de seleccin gentica en las distintas especies.

La utilizacin de la PEIV para la produccin comercial de embriones presenta las

siguientes ventajas

1.- Logra un mejoramiento gentico del hato ms gil en un menor tiempo, acortando el
perodo generacional, utilizando hembras de alta produccin y
reproductores probados.

2.- Esta tcnica no altera los ciclos reproductivos de la donadora, por lo que no hay
necesidad de aplicar gonadotropinas, evitando efectos secundarios por el empleo de
FSH.
3.- Se logra una mayor cantidad de embriones por donante ya que la aspiracin folicular
puede realizarse a intervalos cortos. Igualmente puede ejecutarse en hembras
gestantes o poco despus del parto.

4.- La FIV est indicada en hembras de alta produccin que no son aptas para un
proceso de TE convencional, por deformaciones anatmicas que impiden la fertilizacin
y/o el lavado de los embriones, como el cuello en S, o que no responden al tratamiento
superovulatorio MOET (Multiovulacin y Transferencia de Embriones). As mismo est
indicada en hembras que han sido eliminadas de la reproduccin por afecciones que no
alteran el funcionamiento ovrico, como metritis, complicaciones post quirrgicas o
lesiones podales, vacas repetidoras (RODRIGUEZ)

5.- La tcnica permite la utilizacin de semen de toros costosos ya que el nmero de

embriones producidos por pajilla disminuye los costos del semen. As una pajilla es
suficiente para 3 a 5 donadoras. De otra parte, cada grupo de ovocitos se puede
inseminar con un toro diferente, lo que aumenta el nmero de posibles combinaciones
genticas (MERTON)

6.- La PEIV permite y facilita la utilizacin de semen sexado para la produccin de

hembras con una eficiencia del 90%. (DAYAN)

Sin embargo la FIV presenta algunos inconvenientes para el logro de resultados ms

satisfactorios.
1.- A pesar de los esfuerzos realizados para mejorar la eficiencia de la FIV, esta tiene
an un bajo rendimiento ya que el porcentaje de ovocitos capaces de transformarse en
embriones transferibles est entre el 30 40%.

2.- Los embriones producidos in vitro son de menor calidad que los obtenidos in vivo,
existiendo entre ellos numerosas diferencias.

Los embriones producidos in vitro son ms oscuros y de menor densidad por su mayor
contenido citoplasmtico de lpidos. Tienen un menor nmero de blastmeras, en
especial a nivel de la masa celular interna, una zona pelcida ms frgil, reduccin del
espacio perivitelino y mayor velocidad de desarrollo. Adems presentan alteraciones
de comunicacin intercelular, con una expresin anormal de las protenas que forman
las uniones Gap, un mayor contenido de triglicridos y menor de otros lpidos,
alteraciones de la expresin gentica, mayor incidencia de apoptosis.

Lo anterior reduce su potencial de desarrollo pre y postimplantacin, lo cual origina

bajos porcentajes de gestacin (30-40%). (HERRADON)

3.- Existe una mayor divergencia en el desarrollo de los embriones obtenidos in vitro
respecto de los obtenidos in vivo, ya que los segundos dependen del momento de la
ovulacin y la fecundacin, sin embargo, en el modelo in vitro el momento de la
fecundacin es ms preciso y por lo tanto tiene una mayor sincronizacin (PALMA)

4.- Los embriones in vitro tienen menor resistencia a la criopreservacin, siendo uno de
sus principales problemas, ya que la supervivencia despus del congelamiento es
menor que el de los embriones producidos in vivo, lo cual dificulta su conservacin a
largo plazo. Por lo tanto, estos embriones son transferidos preferiblemente en fresco, lo
cual requiere de la sincronizacin de las receptoras con la produccin de
embriones. (COLAZO)

5.- Nacimiento de terneros voluminosos, conocido como exceso de volumen fetal. Ms

del 30% de los terneros nacidos por FIV presentan un peso superior a los 50 Kgs,
independientemente de su raza. Lo cual aumenta el porcentaje de distocias por este
concepto. (KRUIP)

En el Grfico 1 se aprecia la tendencia de la PEIV a nivel mundial.

La TEs producida por FIV en 2011 en Sur Amrica fue de 373.836, siendo el Brasil el
pas en donde se logr el mayor nmero de TE-FIV 318.119, representando el 85% del
total. En Colombia se lograron 30.000 TE-FIV, con un crecimiento del 900% en 10
aos. (GOMEZ)
A pesar de las limitaciones de la tcnica, Brasil ha mostrado un fuerte impulso para
reemplazar la TE por OPU / PIV. Esto se debe a una peculiaridad del ganado ceb (Bos
indicus), dado que las vacas suelen tener ms folculos ovricos y ms ovocitos
recuperados por OPU en comparacin con el ganado Bos taurus.(PONTES)

No hay ninguna explicacin aparente para esta diferencia biolgica intrigante. Sin
embargo, la informacin disponible en la mayora de OPU/PIV en Brasil se obtuvo en
Nelore, responsable de aproximadamente el 80% del rebao brasileo (cerca de 200
millones de animales) Las razas cebunas siguen representando la mayora de los
embriones producidos en Brasil, con 94,0% del total. (PONTES).
Segn ASOCEBU durante 2012 se increment el Fertilizaciones In Vitro, para un total de
4367. Para 2012, el incremento de la Transferencia de Embriones fue de un 3.52%
frente a 2011, reportndose 4112 lavados al finalizar el ao, de los cuales 906 fueron
embriones frescos, 3113 In Vitro y 93 congelados. (Revista El Cebu 391 Marzo-Abril
2013)
En la Tabla 2 se pueda apreciar cual ha sido la Evolucin de la TE-FIV en Colombia
de 2.008 a 2.012 en donde se ha logrado un mejoramiento efectivo del 9.6% en el
porcentaje de preez, en 5 aos. (GOMEZ 2013)

TECNICA DE PRODUCCION DE EMBRIONES IN VITRO - PEIV -

La PEIV es un mtodo importante en el avance de reas de investigacin cuya principal

limitante es el alto costo de la produccin convencional de embriones. Desde el punto
de vista comercial se emplea para acelerar la produccin de animales genticamente
superiores. Comprende para su realizacin de los siguientes pasos:

1.- Recoleccin de ovocitos.

2.- Seleccin de ovocitos

3.- Transporte y Maduracin de ovocitos

4.- Capacitacin Espermtica.

5.- Fertilizacin Gamtica

6.- Seleccin de Embriones.

7.- Transplante de Embriones

RECOLECCION DE OVOCITOS

La recoleccin de ovocitos puede realizarse a partir ovarios de hembras de matadero o

en donadoras vivas mediante procedimientos quirrgicos, laparoscopicos o Aspiracin
Folicular Transvaginal (OPU).

RECOLECCION A PARTIR HEMBRAS DE MATADERO

La obtencin de ovarios de hembras de matadero es la forma ms comn y econmica
para la recoleccin de ovocitos con fines experimentales del proceso de FIV. Es el
mtodo que ha permitido el desarrollo de la produccin in vitro de embriones bovinos y
la que dio comienzo a la produccin de embriones a gran escala.

OBTENCION Y TRANSPORTE DE LOS OVARIOS

Los ovarios deben ser obtenidos enseguida del sangrado de los animales,
efectundose un primer lavado con solucin salina, para eliminar la sangre y
adherencias. El transporte puede hacerse en solucin salina o PBS con antibiticos a
temperatura ambiente.
Yang y col. Fueron los primeros en estudiar el tiempo de conservacin de los ovarios a
24-25C. Los autores observaron que el transporte de los ovarios durante 11 horas no
disminuy la vitalidad de los oocitos obtenidos, lo cual constituye un aspecto prctico
importante al permitir el procesamiento de material recolectado a grandes distancias.

Sin embargo las temperaturas ambientales entre 30C y 35C alteran el tiempo de
procesamiento el cual debe hacerse dentro de las 2 horas de su obtencin. Cuando los
ovarios se conservan durante 24 horas a 21C, 18C y 15C los porcentajes de divisin
y de blastocistos no fueron diferentes del grupo a 25C durante 4 horas. La refrigeracin
de los ovarios a 4C durante 12 24 horas no afect la tasa de divisin. (PALMA)

Una vez llegan los ovarios al laboratorio deben procesarse en condiciones aspticas y
bajo una cmara de flujo laminar. Se lavan 3 veces en medio de transporte, se secan
con gasa o papel absorbente estril, se depositan en recipientes trmicos que
contienen solucin salina o PBS con antibiticos (Penicilina G sdica 100 UI/ml + 100
g/ml de Sulfato de Estreptomicina) y se procede a la obtencin de los ovocitos para el
proceso de FIV. (REA)

La recoleccin se efecta mediante diseccin o cortes ovricos (SLICING) y aspiracin

de los folculos.

TECNICA DE DISECCION
 La tcnica de diseccin consiste en
efectuar varios cortes en el estroma ovrico y mediante presin del mismo producir la
expulsin de los ovocitos.

Tiene la ventaja de permitir el aislamiento individual de los folculos determinando su

tamao antes de la recoleccin de todos los ovocitos, con el fin de asegurar la mxima
recuperacin de ovocitos competentes, de cualquier donadora. (GALLI)

TECNICA DE ASPIRACION FOLICULAR

La tcnica de aspiracin de los folculos se realiza por medio de jeringas con aguja
N18. Se introduce la aguja con el bisel hacia arriba dentro el estroma ovrico,
dirigiendo la punta hasta penetrar el interior del folculo, efectuando enseguida la
aspiracin tanto del lquido folicular como del ovocito.

Al efectuar la aspiracin se aprecia la reduccin de las paredes del folculo.

Sin retirar la aguja del ovario se busca un nuevo folculo para aspirarlo. Se aspiran
folculos entre 2 a 6 mm de dimetro. Los ovocitos de folculos bovinos con un dimetro
menor se encuentran todava en fase de crecimiento y no han adquirido aun la
capacidad para madurar. De otra parte los ovocitos provenientes de folculos de ms de
10 mm presentan un mayor nmero de ovocitos degenerados.(GONZALEZ)
Los ovocitos aspirados son depositados en un tubo de ensayo, dejndolos en reposo
durante 30 minutos, en incubadora a 39C, 5% de CO2 y 100% de humedad, con el fin
de favorecer la precipitacin del sedimento compuesto por ovocitos, clulas de
descamacin, sangre. Con posterioridad se aspira el sedimento con una pipeta y se
coloca en una caja de Petri con medio TCM 199 temperado, para la correspondiente
seleccin bajo el estereoscopio.

RECOLECCION DE OVOCITOS EN ANIMALES VIVOS

La recoleccin de ovocitos en animales vivos se puede efectuar mediante mtodos

quirrgicos como ovariectoma transvaginal o paralumbar, laparotoma ventral o
paralumbar, laparoscopia abdominal, mtodos invasivos y costosos que dejan secuelas
como las adherencias. Igualmente puede efectuarse la Aspiracin Folicular Dirigida por
Ecgrafo.

OVARIECTOMIA

La ovariectoma puede efectuarse por va transvaginal utilizando un bistur de Dutto y

un dilatador vaginal. Se realiza una colpotoma dorsal del fornix vaginal y se extraen
ambos ovarios con el ovariotomo. (ALLER). Sin embargo el riesgo de peritonitis y
evisceracin a travs de la incisin vaginal han limitado y restringido este
procedimiento. Igualmente puede efectuarse por laparotoma paralumbar y extraccin
con el ovariotomo, proceso similar a la castracin de hembras.
LAPAROSCOPIA

Mediante anestesia general se prepara la hembra y se localizan los puntos de

penetracin del equipo de laparoscopa, por delante del tendn prepubico y por detrs
del ombligo. Con la fuente de luz se localizan los ovarios y se fijan alternativamente con
la pinza caimn. Luego se punciona y aspira el folculo por medio del aspirador
conectado al tubo recolector.
Por lo general se somete la hembra a un proceso previo de superovulacin, con el fin
de obtener un mayor nmero de ovocitos aptos, as como facilitar la aspiracin por el
tamao de los folculos. (DE LA FUENTE)

ASPIRACION FOLICULAR TRANSVAGINAL - OPU -

Es la tcnica por medio de la cual se recolectan ovocitos de folculos en ovarios de

hembras vivas, utilizando la aspiracin guiada por ecografa a travs de la pared del
fornix vaginal. Se considera una adaptacin de la tcnica empleada en humanos. Es
ms conocida como Ovum Pick Up OPU- por sus siglas en ingles.

En la actualidad es la tcnica utilizada regularmente en el proceso de PEIV en bovinos.

La tcnica de la OPU tiene la ventaja de ser sencilla y fcil de efectuar, adems de
permitir la recoleccin de ovocitos en series repetidas para procedimientos in vitro, con
un aumento en el nmero de folculos luego de varias semanas de aspiracin folicular.

La eficacia del procedimiento de aspiracin folicular transvaginal est directamente

relacionada con una metodologa adecuada, dado que las variables tcnicas para
obtener los ovocitos pueden tener un impacto considerable en la cantidad y la
morfologa del cumulus oophorus (CCOs), y en consecuencia, sobre la capacidad para
desarrollarse.
Otro aspecto se relaciona con el tipo o raza de la donante, teniendo en cuenta su
condicin corporal y la edad.

En relacin con la raza se ha encontrado una peculiaridad en el ganado Bos indicus en

el que las hembras suelen tener un mayor nmero de folculos ovricos y ovocitos
recuperados por OPU, en comparacin con el ganado Bos taurus. Sin embargo, no hay
una explicacin aparente para esta diferencia biolgica intrigante. (PONTES)

Hay un constante incremento en la participacin de las razas lecheras en el mercado de

embriones, especialmente el Gyr (68,0% del total) y Gyrholando (22,4%), la nica raza
compuesta con una importante participacin tanto en la TE como en la PIV (VIANA).

El inters por las razas cebunas lecheras se debe a su capacidad de adaptacin para
producir grandes cantidades de leche bajo condiciones de estrs tales como altas
temperaturas, parsitos y pastos pobres. El incremento del mtodo de la PIV
en donantes Gyrholando se ha debido al aumento de la eficiencia del uso de semen
sexado para la fertilizacin in vitro, lo que facilita la produccin de un gran nmero de
hembras para la industria lctea. (XU)
En El Grfico 3 se presenta el comportamiento de OPU en las
diferentes razas bovinas en Colombia.

GOMEZ.
Es notorio y sin explicacin alguna cmo ciertas hembras han producido cientos de
ovocitos en un solo procedimiento OPU, sin ningn tipo de estmulo. SENEDA obtuvo
251 ovocitos por una sola vez, al igual que otros profesionales, lo cual indica la
existencia de una variacin individual en la produccin de ovocitos de donantes Bos
indicus, en donde el Nelore presenta una especial caracterstica solo en la produccin
de embriones in vitro. (RAFAGNIN)
En la Tabla 3 se muestra los resultados obtenidos por el Dr Ramn Gomez, lo cual
corrobora lo expuesto en tal sentido por otros autores.

Aunque las hembras Nelore tengan mayor nmero de folculos reclutados,

los parmetros reproductivos pueden variar ampliamente entre los animales de la
misma raza, o incluso entre gemelos monocigticos. (MACHADO)

Hay animales con un buen potencial para la OPU/PIV, debido a que presentaN de
forma natural muy altos promedios de ovocitos y por consiguiente buen nmero de
embriones y preeces. Muchos criadores han identificado hembras cuya progenie es
muy buscada y fcilmente vendible, por lo tanto esas hembras son usadas
exclusivamente para PEIV.
En la Tabla 4 se puede observar el desenvolvimiento de la vaca 118/2 durante los
aos 2008-2012 en un programa de PEIF. (GOMEZ)

Con referencia a la edad, en las hembras prepuberes los ovocitos han demostrado una
gran reduccin de desarrollo al estado de blastocisto debido a la poca influencia de las
gonadotropinas en este perodo, de otra parte las hembras viejas producen ovocitos
con bajo porcentaje de desen arrollo y de baja calidad debido a las pocas capas de las
clulas del cmulo.

Puesto que los ovarios de hembras gestantes mantienen su actividad durante la preez,
es posible la recuperacin de los ovocitos hasta el da 100 de gestacin o hasta el
momento en que el profesional pueda retraer los ovarios sin mayor esfuerzo.
Igualmente est indicada en hembras de alta produccin con problemas reproductivos
no ovricos como alteraciones de tipo anatmico del tracto reproductivo, afecciones
podales y/o hembras repetidoras.

Por lo anterior desde el punto de vista prctico y comercial, las hembras a aspirar deben
ser jvenes, hijas de vacas de alta produccin o hembras adultas con registros
actualizados, en su pico de produccin.

De otra parte hay consenso sobre la Condicin Corporal (CC), en la que las donantes
con baja CC
producen ovocitos con menos capacidad para desarrollarse al estado de blastocis
to, y hay evidencias de que las donantes sometidas a estrs tendran ovocitos
menos competentes.

La tcnica de OPU es un procedimiento minimamente invasivo que permite la

recoleccin de ovocitos en sesiones repetidas a intervalos de 7 a 15 das, con lo cual se
logra un mayor nmero de embriones por animal ao, que por TE convencional.

Existen estudios que sugieren diferentes das del ciclo estral para realizar la OPU (das
3-4, 9-10, 15-16 despus del estro) y a diferentes intervalos de una o dos veces a la
semana.
MERTON et al sugiere que la mejor tasa de recuperacin se presenta cuando el
intervalo entre punciones es de 7 das, al compararlo con protocolos que utilizan
intervalos de 3 o 4 das.

En un trabajo realizado por MOREIRA y col, se realiz la recoleccin de ovocitos

mediante OPU a intervalos de una vez por semana (Grupo 1) y dos veces a la semana
(Grupo 2). No hubo diferencia significativa entre los grupos G1 y G2. Los folculos >9
mm se observaron durante todos los intervalos considerados entre aspiraciones (3-4 o 7
das). Se recolectaron ms ovocitos por sesin en el G1. La recoleccin de COCs
Grado I fue mayor en el G2. No hubo diferencia en la tasa de clivaje entre los grupos,
pero el porcentaje de embriones que alcanzaron el estado de blastocisto fue mayor en
el G2. La mayor calidad de los ovocitos del G2 fue compensada por la mayor tasa de
recuperacin del G1.

GALLI et al observaron que la OPU realizada dos veces a la semana, produca el mayor
nmero de ovocitos recolectados con la calidad adecuada para la PIV.

La competencia de los ovocitos obtenidos por aspiracin folicular transvaginal no

parece estar influenciada por el tamao del folculo, sin embargo se ha demostrado que
la tasa de recuperacin es ms alta significativamente para los folculos inferiores o
iguales a 4 mm. La tasa de recuperacin es el nmero de ovocitos recuperados tras la
puncin de 100 folculos y ha demostrado que los folculos menores permiten la ms
eficiente recuperacin ovocitaria Como una estrategia para mejorar la relacin costo-
beneficio en los programas de PIVE, los donantes pueden clasificarse como adecuada
cuando la ecografa de los ovarios muestra de manera satisfactoria la poblacin de
folculos con un dimetro superior a 3 mm (SENEDA).
Entre un 50 y 70% de los ovocitos obtenidos son aptos para la fertilizacin in vitro,
alrededor del 90% de estos son fertilizados y entre el 20 y 40% alcanzan el estado de
blastocisto. Por lo tanto, mantener una fuente constante de ovocitos de alta capacidad
de desarrollo, alto valor gentico y mxima calidad sanitaria es uno de los puntos claves
para garantizar un sistema comercial de produccin in vitro de embriones. (NAVA)

La tasa de preez se encuentra alrededor del 50% para los embriones en fresco y cerca
del 40% para embriones congelados, siendo la tasa de nacimientos menor en un 5-10%
que la tasa de preez. Estos resultados varan ampliamente en los diferentes
programas de FIV. (WAGTENDONK-de LEEUW)

Algunos profesionales han implementado la compra de ovocitos aspirados de novillas

de matadero, provenientes de ganaderas de alta produccin, eliminadas con la
finalidad de mantener la capacidad de carga de la explotacin, las cuales se destinan a
la produccin y congelacin de embriones por FIV.

La puncin continua, dos veces a la semana, tiene una gran influencia sobre el ciclo
estral, al modificar la funcin endocrina y los mecanismos de crecimiento folicular, lo
que conduce a que se presenten intervalos irregulares o ausencia de estros. Las
punciones en sesiones frecuentes pueden dar lugar a una disfuncin o ausencia del CL
y a una produccin inadecuada de Progesterona. TAKENOUCHI et al sugieren que si la
OPU se limita a los das 0 y 12 del ciclo, la influencia de la dinmica folicular puede
disminuirse o eliminarse. BAGE et al afirman que en protocolo de dos veces a la
semana, limitados a la primera mitad del ciclo estral, en novillas, estas presentan
intervalos estrales normales. (PFEIFER)
Se ha demostrado que la perforacin del fornix vaginal cura rpidamente y solo en
pocas oportunidades se presentan inflamaciones o procesos infecciosos del tracto
genital. Puede desarrollarse en algunos casos hematomas en la regin perivaginal, no
siendo un problema grave para la donante. La puncin de los ovarios puede dar lugar a
fibrosis o adherencias, en especial en vacas sometidas a aspiraciones seriadas en
perodos cortos, igualmente se ha observado mineralizacin del folculo o del
parnquima ovrico, as como engrosamiento del epitelio ovrico, lo cual da lugar a una
disminucin de la actividad ovrica. El riesgo de secuelas consecutivas a la OPU existe
y debe tenerse en cuenta, por lo que el procedimiento debe realizarse de manera
cuidadosa.

Por lo anterior, al igual que en todas las tcnicas de reproduccin asistida, es

importante que el profesional tenga bases firmes sobre anatoma y fisiologa
reproductiva, al igual que la habilidad necesaria para la correcta identificacin del tracto
genital y las estructuras funcionales del ovario, tanto por palpacin como por ecografa.
Juega un papel muy importante el criterio y la experiencia del profesional en la
escogencia del protocolo a seguir teniendo en cuenta las distintas variables tanto
generales como individuales, al seleccionar la donante y evaluar su capacidad de
produccin de ovocitos, al momento de la OPU, para que se puedan lograr resultados
satisfactorios.

TECNICA OPU
Para llevar a cabo la tcnica de aspiracin folicular in vivo se requiere contar con un
equipo de ecografa, un transductor sectorial, una bomba de aspiracin controlable y un
sistema gua de la aguja.

El transductor lineal es sin duda el ms utilizado en reproduccin de animales grandes.

La principal desventaja de su utilizacin en OPU, se refiere al limitado espacio entre el
transductor y la aguja, lo que impide que sean puncionadas todas las regiones del
ovario, as como el cambio de posicin de los ovarios.
En la actualidad se utiliza el transductor convexo o sectorial, por su
versatilidad, facilidad y eficiencia en la fijacin y el cambio de posicin del ovario, as
como una mejor apreciacin de folculos pequeos en comparacin con el transductor
lineal. La sonda ecogrfica para OPU ha sido adaptada para permitir la fijacin y
manipulacin del ovario, de tal manera que este en contacto estrecho con el transductor
y a su vez permita que la punta de la aguja pueda visualizarse cuando penetra dentro
del folculo a ser aspirado.

Para la aspiracin se emplean agujas hipodrmicas desechables de calibre 18 - 19 y

40 - 50 mm de longitud. Las agujas con calibres superiores a 18 estn relacionadas con
mayores tasas de recuperacin, pero con un porcentaje mayor de ovocitos desnudos,
as como importantes daos al estroma y una mayor cantidad de sangre en el lquido
aspirado. Las agujas de dimetro inferior a 18 han reducido las tasas de recuperacin
de ovocitos, posiblemente por la lentitud de la aspiracin del lquido folicular en el
momento de la puncin.

Contrario a las expectativas sobre que el bisel corto sera ms eficiente, ms fcil y
rpido de introducir en el interior del folculo, se ha reportado una mayor recuperacin y
calidad de los ovocitos cuando se utilizaron agujas con bisel largo. La razn sera que el
corte del bisel largo permite una superficie ms amplia de la punta de la aguja lo que
facilita la penetracin dentro del folculo y evita la posibilidad de fuga del contenido
folicular. (SENEDA)

La frecuencia del transductor es una variable importante en el proceso de recoleccin

de ovocitos [26]. Hay citas de 3,5 MHz de frecuencia [8], de 7,5 MHz [27, 47], 5,0 MHz
[1,16,41] y 6,5 MHz [28,45].
En primer lugar, al iniciar el trabajo, las hembras a aspirar deben sedarse con xilazina y
adems recibir anestesia epidural con lidocaina al 2% (3-5 ml/vaca). Luego se procede
a limpiar y desinfectar la vulva y el perin.
Una vez realizada la limpieza y desinfeccin del tren posterior, se procede a armar el
portaguja en la gua y se acopla el transductor al sistema. Una vez acoplado se protege
con una funda plstica que puede ser un guante desechable.

Se introduce el transductor dentro de la vagina, hasta el fornix vaginal, ubicando la

cabeza del mismo en el lado del ovario a puncionar. Luego se introduce la mano
izquierda por el recto y se retrae el ovario, fijndolo contra la cabeza del transductor.
Luego de ubicar el ovario a aspirar, se impulsa la aguja suavemente para que penetre
la pared vaginal y la folicular.
Una vez logrado esto la bomba de vaco aspira el contenido y lo deposita en el filtro de
embriones o en el recipiente destinado para tal fin. En cualquiera de los casos estos
deben contener medio de aspiracin heparinizado (PBS+10% de suero fetal bovino).

En la pantalla del ecgrafo podemos ubicar y visualizar los folculos, as como apreciar la trayectoria de la
aguja, la aspiracin del contenido folicular, la reduccin del espacio ocupado por folculo y el xito de la
aspiracin
http://www.youtube.com/watch?v=Wm4Khn6MVbc

Luego de completar la aspiracin de los folculos en cada uno de los ovarios, los
ovocitos son depositados en un recipiente con medio de cultivo para con posterioridad
ser seleccionados con el fin de iniciar el proceso de maduracin.

MEDIOS DE CULTIVO
Para que se efecten a nivel de laboratorio las diferentes etapas de desarrollo y
fertilizacin del ovocito, as como el crecimiento del embrin y su capacidad de ser
transferido, es necesario contar con medios de cultivo celular adecuados, cuyos
requerimientos fisiolgicos para el mantenimiento y desarrollo de los embriones son
fundamentales y sus mrgenes de variacin reducidos.

Inicialmente estos medios eran elaborados por los profesionales en Centros de

Reproduccin Asistida, con lo cual se incrementaban los costos y la
inestabilidad de los mismos, dada la complejidad de su preparacin y el equipo
necesario para su elaboracin..

En la actualidad diferentes casas comerciales producen y distribuyen los medios

bsicos de cultivo, los que pueden restituirse poco antes de ser utilizados o ser
refrigerados y almacenados por periodos variables, segn el caso. Estos medios
varan desde los muy simples a los muy complejos, que en general contienen en
sustancias como:

1.- Iones inorgnicos cuyas funciones son catalticas y fisiolgicas.

2.- Fuentes de energa como el lactato, piruvato y glucosa.

3.- Aminocidos que intervienen en la sntesis proteica. Sirven como fuente de

energa, como tampones intracelulares del pH y reguladores del desarrollo embrionario.
4.- Vitaminas que juegan un papel importante en el metabolismo de los hidratos de
carbono y los aminocidos, como coenzimas.

5.- Elementos orgnicos como fuente adicional de protenas. Entre estos tenemos el

Suero Bovino (SB) y la Albumina Srica Bovina (BAS)

Su calidad y composicin qumica depende del tipo y estado del donante:

Suero Fetal Bovino (SFB).
Suero de ternero recin nacido.
Suero de novillo.
Suero de vaca en celo (SVC).

Los efectos benficos de la adicin del suero o la albmina son:

Proteccin de los embriones en cultivo de sustancias toxicas como los

metales pesados
Aportar Hormonas y Factores de Crecimiento.
Reduccin de la tensin superficial del medio, evitando que los embriones se adhieran
a los dispositivos como placas de cultivo, pipetas, tubos etc. (MUCCI)

6.- Hormonas que inciden notoriamente en el desarrollo embrionario, siendo benficas

sobre el complejo cmulo-ovocito completando la maduracin meitica. Diversos
autores han adicionado hormonas como LH, FSH y 17 Estradiol a los medios de
maduracin y desarrollo de los ovocitos, con el fin de lograr un mayor nmero de
embriones transferibles. Recientemente se ha empleado como sustitutos de ellas el
Lquido Folicular (LFb) y el Fluido Oviductal Sinttico modificado (SOFm). El LFb
contiene esteroides, glucosaminoglicanos y metabolitos sintetizados por las clulas de
la teca folicular.

7.- Antibiticos. Simultneamente los medios de cultivo son complementados con

antibiticos con el fin de suprimir el crecimiento de microorganismos contaminantes.

Otros requisitos del medio de cultivo estn relacionados con:

Agua = Se emplea como diluyente de los componentes del medio, recomendndose la

utilizacin de agua Bidestilada (BD) o tridestilada. Actualmente se emplea el sistema de
purificacin mediante osmosis reversa. Su grado de pureza est fuertemente
relacionada con el desarrollo embrionario.

pH = El pH debe estar entre 7.2 y 7.4 para cultivo, mientras que para el medio de
fecundacin se recomienda un pH superior 7.6 7.8.

Osmolaridad = La osmolaridad ptima en el medio de cultivo debe estar entre 275 y

285 mOsm.

Dixido de carbono (CO2) y tensin de Oxgeno (O2) = Las condiciones habituales

para la maduracin y fertilizacin del ovocito son 5% de CO2 y 95% de aire. El CO2 es
necesario para la regulacin del pH intracelular. Para el desarrollo embrionario CO2
5%, O 5%, N 90%

Temperatura = La temperatura de cultivo utilizada en general por los investigadores es

de 38.5C con 100% de humedad.

Conservacin = Almacenamiento en refrigeracin entre 2 6C

Signos de alteracin = Cambios de coloracin

Presencia de grumos o precipitado

Insolubilidad

SELECCION DE OVOCITOS

El desarrollo in vitro de los ovocitos est ntimamente relacionado con la aptitud que
adquieren durante su etapa folicular previa. El folculo es una estructura ovrica con dos
funciones, produccin de hormonas y de ovocitos aptos para ser fecundados. Las
mismas son llevadas a cabo por los folculos antrales, los cuales poseen una pared
interna de clulas de la granulosa que se apoyan sobre la membrana basal. Esta matriz
extracelular separa las capas epiteliales del mesnquima y afecta la migracin celular,
proliferacin y diferenciacin de las clulas que se apoyan en ella.

La seleccin de los ovocitos se realiza generalmente en base a tres criterios: el

dimetro del ovocito, el aspecto de su citoplasma y las caractersticas del cmulo que
los rodea. El dimetro de los ovocitos condiciona su capacidad para madurar de tal
forma que los ovocitos bovinos con un dimetro inferior a 110 m se encuentran todava
en fase de crecimiento y no han adquirido aun la capacidad para madurar.
Los ovocitos rodeados por un cmulo compacto formado por varias capas de clulas,
presentan mayores porcentajes de maduracin, fecundacin y desarrollo hasta
blastocistos, que los que carecen de cmulo o los que estn rodeados solamente por la
corona radiada.

Diversos autores han tratado de establecer una relacin entre el aspecto del citoplasma
y la competencia del ovocito para madurar, ser fecundado y soportar el desarrollo
posterior. As, se ha comprobado que los ovocitos que presentan un ooplasma oscuro
muestran una acumulacin de lpidos y un buen potencial para el desarrollo, mientras
que los que presentan un citoplasma plido tienen una baja densidad de orgnulos y
escaso potencial de desarrollo. Por otra parte, cuando el ooplasma es negro, los
ovocitos estn envejecidos y tienen un potencial muy bajo para soportar el desarrollo
(Nagano et al., 2006) (HERRADON)

El potencial de maduracin, fecundacin y capacidad de desarrollo embrionario de los

ovocitos se puede estimar por la aparicin de clulas del Complejo Cumulus Oophorus
(COC), con la siguiente clasificacin.
 Grado I (GI) - Cumulus
compacto, que contiene ms de tres capas de clulas. Ooplasma con
granulaciones finas y homogneas, que llenan el interior de la zona pelcida y capa de
color marrn.

Grado II (GII) - Cumulus compacto que rodea completamente el ovocito, con menos de
tres capas de clulas. Ooplasma con granulaciones distribuidas heterogneamente, que
pueden estar ms concentradas en el centro y ms claro en la periferia o condensadas
en un solo lugar en donde se ve una mancha oscura.

Grado III (GIII) Oopplasma contrado, con espacio entre la membrana celular y la
zona pelcida, llenando el espacio perivitelino de manera irregular.
En este grupo se encuentran:

Desnudo - No cubiertos por clulas del cmulo o cubiertos en parte por ellas.

Degenerado Con citoplasma heterogneo, vacuolizado o fragmentado.

Atrsico - Cumulus oophorus oscuro o con presencia de signos de

degeneracin citopl
asmtica. (RAFAGNIN)
MADURACION DE OVOCITOS MIV

Una vez seleccionados los ovocitos son colocados en un medio de maduracin e

incubados durante 24 horas en un ambiente de alta humedad, 5% de CO2 y
protegidos de la luz. Una vez trascurridas las 24 horas de la MIV, los ovocitos
maduros (MII), estn preparados para su fecundacin

Los ovocitos una vez retirados de los ovarios, no estn aptos an para ser fecundados
e iniciar el desarrollo embrionario inicial, por lo que es necesario que sufran una serie
de modificaciones estructurales y bioqumicas en el Ncleo (Maduracin Nuclear)
y en el Citoplasma (Maduracin Citoplasmtica) para poder adquirir la capacidad de
ser fecundados, lo que en conjunto se denomina Maduracin Ovocitaria.

La maduracin del ovocito es la ltima de una serie de etapas que debe atravesar una
clula germinal femenina para adquirir la capacidad de ser fecundada y dar origen a un
nuevo individuo. Durante esta ltima etapa el ovocito sufre profundos cambios a nivel
nuclear y citoplasmticos que son regulados paracrinamente por una compleja
comunicacin bidireccional con las clulas somticas que lo rodean. Esta regulacin
local es coordinada por factores endocrinos que son secretados en forma cclica. Como
resultado de la interaccin entre los diferentes niveles de regulacin, paracrina y
endocrina, solo unos pocos ovocitos son seleccionados para iniciar la etapa de
maduracin a lo largo de la vida frtil, mientras que la mayor parte degeneran en
atresia. Al final de la etapa de maduracin ocurre la ovulacin, y el ovocito es, durante
un corto perodo de tiempo, una clula completamente competente capaz de dar origen
a un nuevo individuo si es fecundada en un momento determinado. (LATTANZI)

Existe una relacin entre el dimetro del folculo y el desarrollo del ovocito y su
capacidad de desarrollo in vitro. As ovocitos procedentes de folculos pequeos (1-2
mm) logran la maduracin nuclear pero son inmaduros citoplasmticamente. De otra
parte ovocitos procedentes de folculos medianos (2-5 mm) o grandes (5-8mm) tienen
un mayor porcentaje de lograr la maduracin nuclear y alcanzar el estado de
blastocisto. La competencia meitica aparece cuando el ovocito alcanza el 80-90% de
su tamao, pero hasta, que no alcanza su tamao mximo no puede completar la
maduracin citoplasmtica.

La tasa de maduracin nuclear aumenta con el dimetro del ovocito, lo que sugiere que
los ovocitos con dimetro inferior a 110 m estn an efectuando la sntesis de ARN y
por consiguiente todava se encuentran en fase de crecimiento y por consiguiente no
han completado la maduracin nuclear y citoplasmtica en el momento de la FIV.
Cuando el dimetro ovocitario supera los 110 m la mayora de los ovocitos se
desarrollan hasta MII. (GONZALEZ)

Tabla 6

Se aprecia la relacin existente entre el tamao del folculo y el ovocito y su

capacidad para alcanzar su desarrollo a MII
La maduracin nuclear y citoplasmtica debe ocurrir simultneamente confirindole a
los ovocitos la capacidad de ser fecundados adems de poder descondensar la cabeza
del espermatozoide, formar los proncleos y el desarrollo normal del embrin.

Los eventos nucleares consisten en la reorganizacin de la red de microtubulos,

rompimiento de del envoltorio nuclear, descondensacin de los cromosomas y
progresin a la Metafase I, Anafase I, Telofase I, expulsin del primer cuerpo polar
hasta llegar al estado de Metafase II.

En cuanto al citoplasma, ocurre la reprogramacin de la sntesis proteica, as como la

activacin de la proteinquinasa por los Mitgenos (MAPK) y el Factor Promotor de la
Maduracin (MPF). Igualmente se desencadenan los mecanismos de liberacin
de Ca++ y la adquisicin de la capacidad de decondensar la cabeza del
espermatozoide.

Adems durante este perodo ocurren cambios en la reorganizacin del

citoplasma tales como el desarrollo continuo de los niveles lipdicos, reduccin del
aparato de Golgi, aparicin de los ribosomas adyacentes a los cromosomas, migracin
de las mitocondrias y alineamiento de los grnulos corticales prximos a la membrana
plasmtica. El aumento de los niveles lipdicos est asociado a la formacin de un pool
de energtico esencial para que el
ovocito pueda desarrollarse despus de la fecundacin.
Otro evento que ocurre durante la maduracin ovocitaria es la expansin de las clulas
del cmulo que circundan al ovocito, las cuales son clulas especializadas de la
granulosa asociadas metablicamente entre s y con el ovocito. Las proyecciones de las
clulas del cmulo atraviesan la Zona Pelcida y forman pequeas uniones con el
ovocito. Estas uniones son la nica entrada de sustancias que estimulan el plasma. En
el ovocito inmaduro estas clulas estn muy compactas y durante la maduracin se
inicia la secrecin de cido hialurnico, el cual se deposita entre ellas separndolas y
originando su expansin.

Todos estos eventos que tienen lugar normalmente en el animal, deben llevarse a cabo
a nivel de laboratorio durante el proceso de Maduracin IV.

La expansin de las clulas del cumulo y la aparicin de los cuerpos polares son los
sntomas ms significativos de que la maduracin del ovocito sigue un curso normal.