Universidad Austral de Chile

Escuela de Enfermera
Microbiologa
ETMP 109

CAMPYLOBACTER-HELICOBACTER-VIBRIO
PRIMER SEMESTRE 2017

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 Gnero
Helicobacter
Familia Helicobactereaceae.
Comprende los gneros Helicobacter y
Wolinella.
Gnero Helicobacter:
H. pylori
H. cinaedi
H. fennelliae
Especies del
gnero
Helicobacter:
 Helicobacter pylori.
Es la especie mas representativa de esta
familia y de mayor inters para el hombre.
El origen de su nombre:
Fue llamada inicialmente como GCLO
(Gastric Campylobacter like organism),
luego Campylobacter pyloridis, despus
C. pylori y en 1989 luego de secuenciar su
DNA se vio que no perteneca al gnero
Campylobacter y fue emplazada en el
gnero Helicobacter.
 En 1982 Warren y Marshall
descubrieron la bacteria
Helicobacter pylori en una serie
de biopsias gstricas y
posteriormente confirmaron la
directa vinculacin del
microorganismo con la gastritis,
la lcera y el cncer gstrico lo
que les vali el Premio Nobel
Robin Warren y Barry de Medicina el ao 2005.
Marshall quienes fueron
premiados con el Nobel de Existen 11 especies mas del
Medicina y Fisiologa, por gnero Helicobacter que
el descubrimiento de la
pueden infectar al hombre
bacteria Helicobacter
pylori 1982. adems de H. pylori.
Es parsito exclusivo del
hombre.
 Taxonoma:
Reino: Bacteria.
Filo: Proteobacteria.
Clase: Epsilon Proteobacteria.
Orden: Campylobacterales.
Familia: Helicobactereaceae.
Gnero: Helicobacter.
Especie: Helicobacter pylori.
 Caractersticas y
morfologa de H. pylori.
Bacteria Gram (-) que adquiere forma de S, en U,
espiral o bacilar con una longitud de 2,5 a 5 m y 0,5 a 1 m de
dimetro.
Es microaeroflica y mvil que cuenta con 4 a 6 flagelos polares
envainados.
No esporulada.
No usa Carbohidratos como fuente energtica solo aminocidos.
Es de crecimiento lento a 37 C y se caracteriza bioqumicamente
por la presencia de Ureasa, Catalasa y Oxidasa.
Su hbitat es el antro gstrico de los seres humanos y otros
primates donde se distinguen dos poblaciones bacterianas:
Una no adherente, envejecida y no replicante (98%).
Adherente y en activa replicacin (2%).
 Muchas lceras y algunos tipos de gastritis son debidas a
infecciones por H. pylori.
Por su forma espiral puede literalmente atornillarse para
colonizar el epitelio estomacal.

Gram en placa. Tincin con bromuro de

etidio.
Coloniza principalmente el
antro del estmago, aunque
tambin puede infectar el
cuerpo, fondo o desplazarse al
duodeno.
 Caractersticas bioqumicas:
Posee diferentes enzimas que le permiten
obtener energa o para defenderse en el
ambiente hostil en el que se encuentra.
Estas enzimas adems permiten su
identificacin de manera correcta:
Ureasa: enzima que hidroliza la urea
produciendo amonio alcalinizando del
ambiente prximo a ella. Esta caracterstica
puede detectarse en el laboratorio mediante
el cambio de color (rosa) que se produce al
variar el pH del medio que contiene urea.
Catalasa: enzima capaz
de descomponer el H2O2
en H2O liberando O2
(produccin de burbujas).

Oxidasa: enzima capaz

de oxidar determinado
sustrato formando un
compuesto coloreado
(prpura) en presencia
de oxigeno.
 Patognesis:
Modo de infeccin:
1. H. pylori penetra la capa mucosa del
estomago y se adhiere a la superficie
de la capa mucosa epitelial gstrica
2. Produce amoniaco a partir de la urea
para neutralizar el acido gstrico
3. Migracin y proliferacin de H.
pylori al foco de infeccin.
4. Se desarrolla la ulceracin gstrica
con destruccin de la mucosa,
inflamacin y muerte de las clulas
mucosas.

No invade pero ocasiona una fuerte

respuesta inflamatoria.
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 Factores de virulencia:
Son factores que le permiten colonizar la mucosa
gstrica del estmago, inducir daos en los tejidos o
liberarse de los mecanismos de defensa del husped.
Entre las caractersticas de virulencia podramos
destacar:
Ureasa: Le permite alcalinizar el pH del medio que
coloniza.
La estructura espiral. Le permite introducirse a travs
de la capa de moco gstrico atornillndose y
favoreciendo por lo tanto el acercamiento a las clulas
epiteliales gstricas.
La movilidad: H. pylori posee de 4 a 6 flagelos polares
que le confieren una gran movilidad y le permiten llegar
a la mucosa y no ser eliminado por los mecanismos
defensivos del husped.
Las adhesinas: Posee una gran variedad de adhesinas
que reconocen de forma especfica a los receptores de
la mucosa gstrica y se unen a ellos comenzando la
colonizacin bacteriana.
La toxina vacuolizante VacA: produce la formacin de
grandes vacuolas en las clulas eucariticas. Este efecto lo
producen ms de la mitad de los aislamientos clnicos de H.
pylori y aquellos que poseen la toxina se han asociado con
cuadros ms graves de enfermedad. Est codificada por el
gen vacA, presente en todos los aislamientos, produzcan o
no la toxina, aunque la secuencia del gen parece ser
diferente.

La protena CagA: es una protena codificada por el gen

cagA que podra estar implicada en el proceso de activacin
de la toxina vacuolizante (cagA= gen asociado a citotoxina).
Esta podra influir en la respuesta inflamatoria y aumentar la
secrecin de interleuquina. El gen cagA se encuentra
localizado en una regin del cromosoma que se conoce como
Isla de patogenicidad (PAI).
 Factores de riesgo:
Edad: la colonizacin de la
mucosa gstrica ocurre
tpicamente durante la niez.
~10% desarrolla enfermedad.
(desde gastritis ulcera
MALT)
Pas de origen: mas
frecuente en pases in
vas de desarrollo que en
pases desarrollados.

Posicin socioeconmica
- Pobreza
Mecanismos de transmisin.
Transmisin de la
infeccin es persona-
persona: gastro-oral,
oral-oral y oral-fecal.
Estudios recientes han
demostrado que la
mosca comn, es un
eficiente transportador
de la bacteria y cumple
un papel importante al
contaminar los
alimentos.
 Clnica:
Gastritis crnica: es uno de
los procesos inflamatorios mas
frecuente en humanos.
Cncer gstrico: H. pyloris
es considerado un factor de
riesgo. Con 69% a 94% de
prevalencia de la infeccin por
H. pyloris en pacientes con este
cncer.
lcera duodenal y
gstrica: est presente en el Ulcera duodenal.
95 al 97 % de los pacientes con
ulcera duodenal y en un 83%
con ulcera gstrica.
Infeccin por H. pylori en nios: presenta
caractersticas propias, tanto desde el punto de vista
clnico, como diagnstico y teraputico.
El dolor abdominal, de vmitos y en menor proporcin
de anorexia con perdida de peso, pirosis y sensacin
de plenitud postprandial. Menor proporcin de cagA y
vacA.
Linfoma tipo MALT de localizacin gstrica (tejido
linfoide asociado a mucosas):
El linfoma MALT es un Linfoma de clulas B extranodal
de la zona marginal. Predomina en la edad adulta,
ms frecuente en mujeres y constituye el 5-10 % de
las neoplasias gstricas.
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lcera duodenal

lcera gstrica
Biopsia gstrica .
 Identificacin y Diagnstico:

Endoscopia: normal no es especifica ya que los sitios de

infeccin no son observables especialmente en nios y jvenes.
Endoscopia laser confocal: 2 tinciones de contraste:
-Acriflavina: (tpica)
-Fluorescena: (i.v)
 Directos: Demuestran directamente el organismo.
Indirectos: Demuestra alguna caracterstica de la
bacteria.
Diagnstico
bacteriolgico

Gram Urea
directo rpida Cultivos Histologa
 Test Invasivos.
Se inician con una toma de muestra como
biopsia o cepillado gstrico.
Cultivos: se debe tener en consideracin que el
paciente no halla consumido antibiticos ni drogas
antisecretoras (PPI), con 2 semanas de anterioridad.
1. Biopsias:
-Contaminacin en la toma de muestra (flora
orofaringea)
-Condiciones de transporte: solucin salina (4 hrs.) o
medio de transporte comercial de agar semislido a 4
C
-Condiciones de cultivo debe ser las adecuadas
para este m. o. exigente.
Jarra de anaerobiosis Medio Agar para el
para el trasporte e transporte de biopsia.
incubacion de H. pyloris.
-Cultivo en placa: los componentes del medio incluye:
-Agar base: Agar cerebro-corazn y agar Columbia.
-Suplementos de crecimiento: sangre (animal, oveja, caballo o humana) o
suero que proporcionan vitaminas y oligoelementos.
-Suplementos selectivos: para evitar contaminacin con otros M. O.
Antibiticos y antimicticos.

Suplementos incluyen : Vancomicina (cocos gram +), polimixina, ac.

Nalidixico, colistina, trimetoprim o cefsulodin (bacilos gram -) y nystatina o
amfotericina B (hongos).
DENT: suplemento comercial
(modificacin de la formula de Skirrow)
reemplaza polimixina por cefsulodina y
aade amfotericina B.
Requiere para incubacin una jarra de
anaerobiosis con una pCO2 de 2 a 10 KPa.
Requiere periodos de incubacin largos de
3 a 4 das a 37 C.
-Clasificacin
fenotpica: colonia
pequea, circular,
brillantes y
trasparentes,
observada despus
de 3 a 4 das en una
placa de cultivo de
medio selectivo. Sin
actividad hemoltica
pero puede aparecer
despus de unos das
a 4 C.
-Cultivo en caldos: las condiciones de cultivo en
agar se aplican tambin a los caldos.
-*Formas cocoides: cuando hay falta de nutrientes.
Unos dicen que es una forma no viable de la
bacteria otros que es una forma resistente. Formas
viables no cultivables.
-Mantenimiento de las cepas: los cultivos son
extremadamente sensibles a la desecacin,
contacto con el aire y temperatura. Las bacterias
pueden sobrevivir en placas por lo menos una
semana si son mantenidas en una atmsfera
microaeroflica y a 4 C.
 Diagnstico Histopatolgico: es el diagnstico
mas comnmente usado.
-Coleccin y trasporte de espcimen.
-Preparacin de los cortes histolgicos dependiendo de la
tcnica de tincin y microscpica: Inmunohistoqumica,
FISH, microscopa electrnica, etc.
-Examen de los cortes.
Microscopa: a partir de la obtencin de una biopsia o raspado
gstrico, una parte de sta puede ser usada para tcnicas de observacin
microscpica.
-Gram
-Genta (uno de los mas usado por su simplicidad y buen contraste)
-Giemsa
-Bromuro de etidio
-Naranja de acridina
 Microscopia electrnica.

Morfologa de H. pyloris de
biopsias: bacilo con forma de
coma o S de 2,5 a 4m de
largo y 0.5 a 1 m de ancho.

Tincin con naranja de acridina de una biopsia

gstrica.
Otras fuentes de especimenes para cultivo:
Jugo gstrico, sangre, saliva, orina y heces.

Cultivo gstricos de otras Helicobacter.

Helicobacter
heilmannii: fcilmente
identificable debido a su
morfologa tpica de 6 a 8
espirales no adheridos a
clulas epiteliales
formando agregados en el
lumen de las criptas.
 Test de la Ureasa:
Fue el primer mtodo aplicado para el
diagnstico rpido por McNulty y Wise.
-Principio: la ureasa es una enzima
caracterstica de H. pylori producida en
gran cantidad por ste, que hidroliza la
urea produciendo amonio alcalinizando
su medio ambiente prximo para poder
colonizar el estomago (pH cido). Esta
caracterstica puede detectarse en el
laboratorio mediante el cambio de color
que se produce al variar el pH del medio
que contiene urea mas un indicador de
pH a rosado. (ejem.: rojo fenol, cambia el
medio de amarillo a rojo o violeta) (H.
heilmannii tambin es ureasa +)
 Mtodos moleculares.
PCR estndar para deteccin de H. pylori:
el diseo de primers deben ser dirigidos contra una regin
conservada del genoma en todas las cepas de H. pylori.
-ureA, glmM, gen del 16S rRNA, tsaA (26 KDa).
-Ramdom primers: evaluando el patrn de amplificacin.
-Problemas: posible existencia de inhibidores de la taq
polimerasa que disminuyen la sensibilidad de la reaccin y
la posible contaminacin exgena del espcimen.
PCR para deteccin de factores
patognicos:
-cag PAI (islas de patogenicidad): relacionadas con las
formas mas severas de la enfermedades gstricas.
cagA es el mayor gen de cag PAI.
-Polimorfismo del gen vacA (s1m1, s1m2, s2m2) para
determinacin del genotipo de las cepas.
-Genes envueltos en adherencia (babA2, sabA).
-Otros genes envueltos en patogenicidad (oipA, dupA, iceA).
PCR-tiempo real: Tcnica mas sensible y mas especifica. Permite
no solo la cuantificacin si no tambin detectar puntos de mutaciones
asociados a resistencia (SYBR green y FRET entre otras).

PCR para cuantificacin: es posible por el desarrollo de

PCR- tiempo real.
Usada para el seguimiento de la efectividad del tratamiento de
un paciente con antimicrobianos.
 Sensibilidad antibitica.

en Agar.
Mtodos de
dilucin o Caldo.
In vitro
con
Disco
Mtodos de
Epsilometro
difusin E-test
Mtodos de dilucin en Agar: se incluye el AB diluido en el
medio de cultivo.

En la imagen se puede
observar una placa en la que
cada uno de los botones
corresponde a una cepa
inoculada de Helicobacter
pylori.
E-Test: consiste en una tira de plstico que contiene
un determinado antibitico a diferentes concentraciones
en forma de gradiente. Cuando la tira se pone en
contacto con el medio de cultivo, el antibitico difunde en
este medio. El crecimiento de la bacteria en las zonas
prximas a la tira sirve para determinar si el
microorganismo es sensible o resistente.

E-Test de una cepa sencible:

Agar yema de huevo con sales de
tetrazolio cambia de color de
amarillo a rojo cuando existe
crecimiento.
 Resistencia antibitica.
Glucopptidos
Cefsulodina
Polimixina
Ac. Nalidixico Algunos de ellos son
Trimetoprim usados como
suplementos para
Sulfonamidas medios selectivos
Nistatina
Anfotericina B
Cicloheximida
 Tratamiento:
Para el tratamiento es necesario conocer la
sensibilidad in vitro a distintos Abs. debido al desarrollo
de resistencia del H. pylori.
Compuestos no Abs.: PPI o Inhibidores de la bomba
de protones de las clulas parietales gstricas.
-Sales de bismuto
-Antagonistas de receptor H2 (ranitidina).
Antibiticos:
-Beta-lactamicos: Amoxicilina.
-Macrolidos: Claritromicina.
-Nitroimidazole: Metronidazol.
-Tetraciclina.
-El tratamiento es combinado para ser mas efectivo:
recomendndose pautas triples de AB y un agente
antiulceroso.
-Por ejemplo el tratamiento de eleccin en Chile es:
PPI
Amoxicilina
Claritromicina.
-O tambin:
PPI
Metronidazole
Claritromicina
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 BIBLIOGRAFIA
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www.helicobacterspain.com