DIVERSIDADE DE BACTRIAS FIXADORAS DE N2 ASSOCIADAS

Brachiaria sp.
DIAS, M.S.1; SOUZA, F.R.C.2; MANTOVANI, J.R.3; RESENDE, A.V.4; FLORENTINO, L.A.5
1Mestrandoem Cincia Animal, Unifenas, bolsista CAPES/PROSUP; 2Graduanda em Agronomia, Unifenas, bolsista
PIBIC/CNPq; 3Professor Dr., Unifenas; 4Professor Dr., Unifenas, co-orientador; 5Professora Dra., Unifenas, orientadora.

INTRODUO
O processo de degradao das pastagens no Brasil esta em torno de
50% da rea cultivada, o que pode ser explicado, principalmente, pela baixa
fertilidade do solo e pela falta de reposio de nutrientes, principalmente Surgimento da
nitrognio e fsforo. Em relao ao nitrognio, o uso da biotecnologia da pelcula tpica
fixao biolgica do nitrognio (FBN) apresenta-se como uma alternativa Figura 1. Amostras inoculadas Figura 2.Formao de
com solo e tecido vegetal pelcula tpica
utilizao de fertilizantes nitrogenados, reduzindo os custos de produo e
tambm possveis impactos ambientais. Nesse sentido, este trabalho visou
isolar e identificar morfologicamente bactrias fixadoras de nitrognio
associadas Brachiaria sp. no perodo da seca e chuvoso.
Culturas riscadas
MATERIAL E MTODOS para obteno de
isolados
Foram colhidas amostras de solos (0-20cm) cultivados sob Brachiaria
Figura 3.Formao de
sp. e partes de tecido vegetal destas gramneas, no perodo de seca e
pelcula tpica
chuvoso em reas de pastagens nos municpios de Alfenas e Machado, Sul
de Minas Gerais, as quais foram encaminhadas ao Laboratrio de
Microbiologia Agrcola da UNIFENAS. As amostras foram analisadas quanto a
ocorrncia de bactrias diazotrficas associativas e endofticas (figura 1), Re-inoculao
sendo utilizados cinco meios de cultura semi-slidos e semi-especficos: FAM para confirmao
(Magalhes & Dbereiner, 1984), JMV (Reis et al., 2004), JNFb, LGI e NFb
(Dbereiner et al., 1995), em que a presena de crescimento bacteriano foi
evidenciado pela formao de pelcula tpica (figura 2 e 3), prximo a
Figura 6.Formao
superfcie dos frascos contendo os meios de cultura. Aps a pelcula atingir a Figura 4. Culturas Figura 5. Culturas
de pelcula tpica (re-
superfcie, com o auxlio de uma ala de platina, foi transferida uma pequena riscadas em meio riscadas em meio
inoculao)
slido BDA slido BDA
quantidade da cultura para placas contendo meio slido batata-dextrose-agar
(BDA) acrescida do indicador azul de bromotimol (figura 4 e 5). As culturas Obteno
foram repicadas sucessivamente at obteno de culturas puras. de isolados
Posteriormente ao isolamento as estirpes foram inoculadas novamente no e caracterizao
mesmo meio de origem semisslido para confirmao quanto da fixao de
N2 (figura 6 e 7). Aps a purificao, os isolados oriundos dos meios
semisslidos FAM, JMV, JNFb, LGI e NFb, procedeu-se a caracterizao Figura 7.Formao
cultural em meio slido BDA acrescido do indicador azul de bromotimol (figura de pelcula tpica re-
Figura 8. Isolados submetidos a Inoculao)
9).
caracterizao cultural
Tabela 1. Nmero de isolados obtidos no perodo de seca e chuvoso, isolados
originados de tecido vegetal e de solo em relao aos meios semi-especficos e semi-
RESULTADOS seletivos.

Foram obtidos 332 isolados, sendo 119 isolados originados do solo e 213 Perodo de seca Perodo chuvoso
de tecido vegetal (tabela 1). Esses isolados foram caracterizados quanto ao N de N de
tempo de crescimento, alterao do pH do meio de cultura, cor e forma da
Ponto Local isolados Planta Solo isolados Planta Solo
colnia, absoro de indicador e produo de exopolissacardeos e
agrupados em dendrograma, a 100% de similaridade, originando 68 grupos, P01 Alfenas 27 18 9 45 32 13
sendo 27 do perodo de seca e 41 do perodo chuvoso. P02 Alfenas 21 17 4 57 34 23
P03 Alfenas 8 7 1 45 27 18
CONCLUSO
P01 Machado 14 8 6 28 15 13
Foi observado maior diversidade de bactrias diazotrficas no perodo P02 Machado 11 9 2 45 29 16
chuvoso, o que pode estar relacionado umidade do solo, a qual contribui
P03 Machado 1 0 1 30 17 13
para a manuteno destes organismos na rizosfera, sendo o maior nmero de
isolados obtidos a partir de tecido vegetal (razes). Total 82 59 23 250 154 96

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
MAGALHAES, F.M.M. & DBEREINER, J. Occurrence of Azospirillum amazonense in some Amazonian (Brazil) ecosystems. R. Microbiol., 15:246-252, 1984.

DBEREINER, J.; BALDANI, J. I. & BALDANI, V. L. D. Como isolar e identificar bactrias diazotrficas de plantas no leguminosas. Braslia, Embrapa-SPI.
Itagua, Embrapa- CNPAB, 1995. 60p.

REIS, V. M.;ESTRADA-DE LOS SANTOS, P.;TENORIO-SALGADO, S.; VOGEL, J.; STOFFELS,M.; GUYON, S.; MAVINGUI, P.; BALDANI, V. L.D.; SCHMID, M.;
BALDANI, J. I.; BALANDREAU,J.; HARTMANN, A.;CABALLERO-MELLADO, J.Burkholderia tropica sp. nov., a novel nitrogen-fixing, plant-associated
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