UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA

Validacin del mtodo analtico por HPLC para

disolucin de levonorgestrel 1.5 mg grageas

TESIS

QUE PARA OBTENER EL TITULO DE:

QUMICO FARMACUTICO BILOGO

PRESENTA

BERTHA ANGELICA HERNANDEZ BALLESTEROS

DIRECTOR EXTERNO:

Q.F.B. JORGE ANTONIO CAMPOS CAMPOS

DIRECTOR INTERNO:

DR. LUIS MORALES DE LA VEGA

Xalapa-Enrquez.,Ver. ENERO/2014

AGRADECIMIENTOS:

En primer lugar a Dios por haberme acompaado a lo largo de mi carrera, por ser mi fortaleza en los
momentos de debilidad y por brindarme una vida llena de aprendizajes, experiencias y sobre todo
felicidad.

Quiero expresar mi ms profundo agradecimiento al Dr. Luis Morales de la Vega y al Q.F.B. Jorge
Antonio Campos Campos mis asesores de tesis por su entrega de conocimientos y preocupacin
otorgadas desinteresadamente, adems del tiempo, apoyo, gua y comprensin.

A los integrantes del Comit de Tesis: Q.F.B. Izmit Camacho de la Cerda, Q.F.B. Mauro Villanueva
Lendechy, M.F. Magda Olivia Prez Vzquez, Q.F.B. Guadalupe Magaa Prez por su paciencia y
comprensin.

Al Director de Planta Q.F.B Jorge Rico y al Gerente de Control de Calidad Q.F.B. Rosa Martha
Santamara Uribe por las facilidades prestadas en la realizacin de este trabajo en el Laboratorio de
Control Fisicoqumico del rea de Control de Calidad, Planta Farma Orizaba de Bayer de Mxico S.A.
de C.V.

A mis hermanos: Ana Lilia, Mara Elena, Miguel Antonio, Jorge Luis, Jos Juvenal que son parte
primordial en mi vida por todo su apoyo, cario y comprensin, a mis sobrinos Arantxa e Irving Yair
por impulsarme a realizar cosas nuevas y ser mejor cada da.

A los grandes amigos con los que tuve la oportunidad de compartir toda esta aventura: Alejandro,
Aracely, Rosario, Michelle, Amada Guadalupe, Csar, Juan Carlos, Carlos Snchez, Oswaldo, Sixto,
Irma, Francisco, Carlos Hernndez, Patricia, Catalina, Berenice, Abigail por todo el apoyo
incondicional y a todos mis dems compaeros de la carrera sin ellos el camino no hubiese sido
divertido.

ii

DEDICATORIA:

A los dos pilares y grandes seres humanos que me han dado lo ms hermoso que tengo la
vida y una gran familia.

MI MADRE Y MI PADRE

Han visto pasar mi vida estando all en cada momento.

Han sabido hacer de m una mujer que se ha sentido siempre
tan envuelta en cario y comprensin para contar lo que cualquier hijo esconde.
Ni un consejo sin razn encuentro en una coleccin de mil momentos
que quedaran ah grabados. Prueba de un amor eterno
que dar siempre alimento a una vida que dos personas crearon.
Por tantas cosas
Gracias una vez ms

iii

 INDICE

Pg.
INDICE. iv
LISTADETABLAS...... v
LISTADEFIGURAS. vi
RESUMEN. 1
ANTECEDENTES... 2
1.INTRODUCCIN. 4
1.1VALIDACION. 4
1.1.1CRITERIOSDEVALIDACIONAESTUDIARENFUNCIONDELTIPOMETODO. 5
1.2CALIFICACIONDELINSTRUMENTAL. 8
1.2.1ETAPASDEUNACALIFICACION.. 8
1.3DISOLUCION. 10
1.4LEVONORGESTREL 15
1.4.1PROPIEDADESFARMACOLOGICAS.. 18
2.JUSTIFICACION 19
3.PLANTEAMIENTODELPROBLEMA 20
4.OBJETIVOS. 21
DIAGRAMADETRABAJO 22
5.PARTEEXPERIMENTAL.. 23
5.1CALIBRACIONMECANICADELDISOLUTORSOTAXYHANSON 23
5.2CALIBRACIONANALITICADELDISOLUTORSOTAXYHANSON. 29
5.3METODOLOGIADISOLUCIONDELEVONORGESTREL(HPLC). 32
5.3.1PROCEDIMIENTODEDISOLUCION.. 34
5.3.2EVALUACIONDELASCONDICIONESDEDISOLUCIONDELPRINCIPIOACTIVO. 38
5.3.3VALIDACIONDELMETODOANALITICOPORHPLC 39
6.RESULTADOS 42
7.DISCUSIN. 57
8.CONCLUSIONES. 58
9.REFERENCIASBIBLIOGRAFICAS.. 59
ANEXOIMATERIALYEQUIPOUTILIZADOENLACALIBRACIONMECANICADELDISOLUTOR
SOTAXYJANSON.. 63
ANEXOIIVALORESDELADISTRIBUCIONtDEDUNNET 65
ANEXOIIICERTIFICADOSDELOSMATERIALESYEQUIPOSUTILIZADOS 66

iv

 LISTA DE TABLAS

Pg.
Tabla 1 Parmetros de desempeo analticos en funcin del mtodo analtico aplicado 6
Tabla 2 Parmetros a evaluar en un sistema HPLC... 10
Tabla 3 Especificacin mecnicas disolutor Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus. 23
Tabla 4 Especificaciones de dimensiones disolutor Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus 23
Tabla 5 Lmites de porcentaje disuelto de tabletas USP Tipo No Desintegrantes de cido saliclico 29
Tabla 6 Lmites de porcentaje disuelto de tabletas USP Tipo Desintegrantes de Prednisona 29
Tabla 7 Condiciones de ensayo del mtodo de disolucin de levonorgestrel grageas. 34
Tabla 8 Verificacin de temperatura del medio de disolucin lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N 42
Tabla 9 Bamboleo de las varillas y paletas agitadoras disolutor Sotax AT7... 43
Tabla 10 Bamboleo de las varillas con canastillas disolutor Sotax AT7. 43
Tabla 11 Velocidad de giro de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 .. 43
Tabla 12 Velocidad de giro de las varillas con canastas disolutor Sotax AT7 ..... 44
Tabla 13 Criterios de aceptacin de las dimensiones de las paletas del disolutor Sotax AT7. 44
Tabla 14 Resultado de dimensiones de las paletas disolutor Sotax AT7 .... 44
Tabla 15 Resultados de disolucin de tabletas de Prednisona... 45
Tabla 16 Resultados de disolucin de tabletas de cido saliclico. 45
Tabla 17 Resultados de temperatura del bao y velocidad de agitacin...... 46
Tabla 18 Resultados de vibracin, altura, dimetro interno de los vasos y temperatura del medio de
disolucin.. 46
Tabla 19 Dimensiones de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 .... 46
Tabla 20 Resultados de disolucin tabletas de prednisona. 47
Tabla 21 Resultados de disolucin tabletas de cido saliclico... 47
Tabla 22 Perfil de disolucin de levonorgestrel grageas 1.5 mg .... 48
Tabla 23 Selectividad de los componentes relevantes, respuestas en tiempo de retencin.. 49
Tabla 24 Evaluacin respuesta en unidades de rea del estndar de levonorgestrel 52
Tabla 25 Porcentaje de recuperacin.. 53
Tabla 26 Linearidad del sistema... 53
Tabla 27 Estabilidad de la muestra tiempo 0 y 24 h de almacenamiento.. 55
Tabla 28 Intervalo de confianza 56
Tabla 29 Comparacin de resultados de disolucin Sotax (Equipo 1)/Hanson (Equipo 2). 56

 LISTA DE FIGURAS

Pg.
Figura 1 Instrumento de verificacin de distancia de la paleta agitadora del disolutor. 25
Figura 2 Ajuste de laminillas del cople de la paleta agitadora .. 25
Figura 3 Instrumento de verificacin de bamboleo de la paleta agitadora..... 26
Figura 4 Medicin de la velocidad de giro de las paletas agitadoras... 26
Figura 5 Medicin del bamboleo a la altura de la varilla con canasta.. 27
Figura 6 Medicin del bamboleo a la altura de la canasta. 27
Figura 7 Medicin de la velocidad de giro de las varillas con canastas. 28
Figura 8 Esquema de trabajo de la vlvula de 6 vas en el HPLC 37
Figura 9 Verificacin de la distancia de las varilla paletas agitadoras. 42
Figura 10 Grfica del perfil de disolucin de levonorgestrel disuelto en intervalos de 15 a 45
minutos 48
Figura 11 Cromatograma de la solucin blanco. 50
Figura 12 Cromatograma de la solucin placebo.. 50
Figura 13 Cromatograma de la solucin estndar. 51
Figura 14 Cromatograma de la solucin muestra.. 51
Figura 15 Grfica de regresin lineal de Levonorgestrel.. 54

vi

 RESUMEN

La validacin de un mtodo analtico, constituye un instrumento importante para garantizar la

calidad del medicamento. En el presente trabajo se demostr la aplicabilidad del mtodo analtico de
Casa Matriz por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) para la determinacin de
levonorgestrel en la disolucin de grageas (de acuerdo al reporte de validacin del mtodo de
disolucin evaluado No. A33108 con fecha de emisin del 25.07.07 de Casa Matriz), utilizada para
pruebas de liberacin y estudios de estabilidad. Se realiz una revisin de la documentacin de los
equipos y materiales que fueron utilizados durante la validacin los cuales se encontraban calibrados
y/o calificados. Se presentan los resultados obtenidos en la validacin del mtodo analtico por
cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC). Definidas las condiciones, previo al inicio de la
validacin, se realiz un ensayo de adecuacin del sistema, con el cual se comprob el buen
funcionamiento del sistema de bombeo, inyector, horno y detector. Como parte del Plan de validacin
del mtodo analtico para disolucin de PAE 1.5 mg y 0.75 mg, comprimido recubierto.
No. VP_PV.PLM02209; se analizaron los parmetros: selectividad, linealidad del sistema, precisin
del mtodo, precisin del sistema, estabilidad de la muestra y tolerancia. As mismo se realiz la
calibracin qumica y mecnica de los disolutores de acuerdo al procedimiento No. S.PLM00711. En
los cuales cumplen los parmetros de temperatura, vibracin, altura de los aparatos 1 y 2 con
respecto al fondo del vaso, bamboleo, velocidad de giro y dimensiones; as como tambin la
calibracin analtica de las tabletas desintegrantes y no desintegrantes cumplen con los lmites
establecidos en los certificados de dichas tabletas. En cuanto a los parmetros de validacin se
demuestra mediante los procedimientos estadsticos empleados, que el mtodo analtico es selectivo,
porque los excipientes de la formulacin no interfieren en la determinacin del principio activo ya que
no se detecta ninguna respuesta significativa en el cromatograma; es lineal porque se obtiene un
coeficiente de correlacin r= 0.999311; es precisa ya que para la repetibilidad se obtiene una RSD de
0.4%; y para la reproducibilidad se obtiene una RSD de 0.5%; es estable ya que despus de 24 horas
de almacenamiento se obtuvo un porcentaje de disolucin de 100.7% y finalmente en la tolerancia se
obtuvo un valor de 1.5%, la diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor de
3.0%. De esta manera se comprob experimentalmente la utilidad del procedimiento establecido para
la validacin del mtodo analtico.

 ANTECEDENTES

La validacin garantiza la calidad del medicamento, puesto que le confiere fiabilidad a los
resultados obtenidos en el anlisis, asegurando as, que el medicamento cumpla los parmetros de
calidad establecidos.

La industria farmacutica consiente de su alta responsabilidad, acta siempre buscando mejorar la

calidad del medicamento a lo largo del proceso que lo crea. El objetivo es uno y es importante
conseguirlo plenamente, esto es, el medicamento seguro, estable y eficaz, y la validacin constituye
un instrumento importante a este respecto.

Por otra parte los mtodos analticos deben validarse para cumplir con las exigencias
contempladas en la Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgos Sanitarios (COFEPRIS) de
acuerdo a las Buenas Prcticas de Fabricacin (NOM-059-SSA1-2006).

Por lo que fue necesario realizar la validacin del mtodo de anlisis por cromatografa lquida
de alta resolucin (HPLC) para levonorgestrel 1.5 mg grageas, el cual garantizar que los resultados
que se obtendrn son confiables. Esta validacin ha sido realizada en el Laboratorio de Control
Fisicoqumico del rea de Control de Calidad, Planta Farma Orizaba de Bayer de Mxico S.A. de C.V.

El levonorgestrel fue la base de los primeros anticonceptivos orales combinados y tambin es

usado para la llamada Anticoncepcin de Emergencia o Pldora el Da Despus, es un compuesto
qumico sinttico derivado de la 19-nortestosterona, la cual deriva de la hormona masculina
testosterona, este origen hace que tenga una accin dual, es por un lado similar a la hormona
femenina progesterona y por otro lado tiene efectos masculinizantes que antagonizan la accin de las
hormonas femeninas (L., 1994, pg. 68). A principios de los aos 70, investigadores de varios pases
comenzaron a realizar estudios con dosis variables de levonorgestrel para su uso de anticoncepcin
postcoital de rutina los resultados de los primeros estudios mostraron que una dosis nica de
0.75 mg administrada poco despus de un coito sin proteccin era, eficaz para prevenir el embarazo.
Sin embargo presentaba una alta incidencia de alteraciones menstruales al usarse como
anticoncepcin postcoital de rutina. Sin embargo, estos primeros estudios sugirieron que el
levonorgestrel podr ser til en anticoncepcin de emergencia postcoital.

Una caracterstica del Levonorgestrel es que es un activo prcticamente insoluble en agua,

por lo que necesita de un vehculo, en este caso un surfactante (tensoactivo) como lauril sulfato de
sodio, que permita la solubilidad del activo en el agua, a una condicin de pH cida.

 Las propiedades generales y comportamiento de los agentes tensoactivos se deben al
carcter dual de sus molculas (grupo hidrfilo y lipfilo); es as como el antagonismo entre estas dos
secciones de su molcula y el equilibrio entre ellas es la que da al compuesto sus propiedades
activas de superficie. El grupo hidrfilo ejerce un efecto solubilizante y tiende a llevar a la molcula a
disolucin completa. El grupo hidrfobo, en cambio, debido a su insolubilidad tiende a contrarrestar la
tendencia del otro.

Un laboratorio de anlisis debe tener como uno de sus propsitos principales la produccin de
datos analticos de alta calidad por medio del uso de mediciones analticas que sean precisas,
confiables y adecuadas para tal fin. Este propsito puede alcanzarse de una manera eficaz si se
cuenta con un sistema planificado y documentado de la calidad de las actividades.

La industria farmacutica, al igual que en otras industrias, est sometida a las reglas del
mercado, que impone una exigencia de calidad, sin las cuales un determinado producto no sera
utilizado por los consumidores.

El consumidor es especialmente sensible a los productos farmacuticos y los laboratorios

fabricantes cuidan mucho la calidad de estos, ya que cualquier deficiencia puede originar problemas
sanitarios, en ocasiones graves, que puedan provocar la inmediata retirada del producto incluso el
cierre del Laboratorio fabricante.

Por todo esto es muy importante el llevar a cabo la validacin de los mtodos analticos ya que
Validar es comprobar y certificar, con evidencia convenientemente documentada, que un mtodo,
sistema o proceso, cumple y se desarrolla tal y como estaba previsto, dentro de intervalos definidos.

La Validacin de un mtodo analtico contribuye a garantizar la calidad del medicamento, as

mismo es necesaria porque proporciona un alto grado de confianza, en el mtodo analtico y en la
calidad de los resultados, adems de que permite un conocimiento profundo del mtodo, as como de
sus caractersticas de funcionamiento. Este conocimiento y seguridad en el mtodo analtico que ha
sido validado se traduce en: disminucin en el nmero de fallas y repeticiones, con el consiguiente
ahorro de los costos asociados y consecuentemente cumplir con los plazos previstos de anlisis.

1. INTRODUCCION

Para el desarrollo qumico-farmacutico de un nuevo medicamento, as como tambin para los

ya existentes en el mercado es imprescindible la utilizacin de un mtodo analtico que permita
cuantificar el producto mayoritario en forma de materia prima o como principio activo de una
formulacin. Para asegurar la confiabilidad, los mtodos analticos se someten a un proceso de
validacin (45), que puede ser de carcter prospectivo o retrospectivo y comprobar si el mtodo es lo
suficientemente confiable y si los resultados previstos se obtienen dentro de las especificaciones de
identificacin y cuantificacin del principio activo que compone al medicamento y no al anlisis
completo de las especificaciones que este debe cumplir. (61)(62)

La validacin del mtodo ayuda a confirmar la calidad del medicamento, puesto que le confiere
fiabilidad a los resultados obtenidos en el anlisis.

La industria farmacutica consciente de su alta responsabilidad, acta siempre buscando

mejorar la calidad del medicamento a lo largo del proceso que lo crea y la validacin constituye un
instrumento importante a este respecto.

Para el cumplimiento de las buenas prcticas de laboratorio (NOM-059) de la validacin (62) (66)
es un requisito imprescindible que est establecido por agencias regulatorias (59) (60) y por comisiones
de Farmacopeas para el registro de los medicamentos. (4)

1.1 VALIDACION

El control analtico de un producto farmacutico o de sus ingredientes es necesario para

asegurar su eficacia y seguridad durante todas las etapas de su perodo de vida til incluyendo su
almacenamiento, distribucin y venta. Este control debe realizarse de acuerdo con especificaciones
establecidas y comprobadas durante la elaboracin del producto. De aqu viene la importancia de la
validacin, pues su objetivo principal es el de asegurar que una metodologa analtica seleccionada
dar resultados reproducibles y confiables que sean adecuados para el propsito previsto, por lo
tanto, es necesario definir debidamente tanto las condiciones en que la metodologa ha de emplearse
como el objetivo previsto para la misma. (41)

Un laboratorio de anlisis debe tener como uno de sus propsitos principales la produccin de
datos analticos de alta calidad por medio del uso de mediciones analticas que sean precisas,
confiables y adecuadas para tal fin. Este propsito puede alcanzarse de una manera eficaz si se
cuenta con un sistema planificado y documentado de la calidad de las actividades. El laboratorio
necesitar operar bajo un sistema de garanta de calidad que incluya una extensa documentacin de
sus actividades (34) siguiendo las Buenas Prcticas de Laboratorio y las Buenas Prcticas de
documentacin. La industria farmacutica, al igual que en otras industrias, est sometida a las reglas
del mercado, que impone una exigencia de calidad, sin las cuales un determinado producto no sera
utilizado por los consumidores.

Cualquier deficiencia puede originar problemas sanitarios, en ocasiones graves, que puedan
provocar la inmediata retirada del producto incluso el cierre del laboratorio fabricante. (34)

 La Validacin de un mtodo analtico que garantiza la calidad del medicamento, as mismo es
necesaria porque:

Proporciona un alto grado de confianza, seguridad en el mtodo analtico y en la calidad de

los resultados.

Permite un conocimiento profundo del mtodo, as como de sus caractersticas de

funcionamiento. Este conocimiento y seguridad en el mtodo analtico que ha sido validado,
se traduce en: disminucin en el nmero de fallas y repeticiones, con el consiguiente ahorro
de los costos asociados y consecuentemente cumplir los plazos previstos de anlisis.

La validacin de un mtodo analtico es el proceso que establece por medio de estudios de

laboratorio, que las caractersticas de desempeo de la metodologa cumplen los requisitos para las
aplicaciones analticas previstas (40), asegurndonos que es lineal, exacta y precisa bajo los rangos
especificados, y que los resultados son altamente confiables.

Las caractersticas de desempeo analtico habituales que deben considerarse en la validacin

de un mtodo analtico son (40): Exactitud, Precisin, Selectividad, Lmite de Deteccin, Lmite de
Cuantificacin, Linealidad, Intervalo.

La validacin de un mtodo analtico se fundamenta en la determinacin de estos parmetros,

que se aplican de acuerdo con la categora a la que pertenezcan.

La etapa previa a la validacin de un mtodo analtico, corresponde al estudio de todo aquello

involucrado en el proceso que pueda afectar la calidad del producto final, es decir, la calificacin de
los equipos utilizados durante el desarrollo del proceso, los procedimientos, el personal y la materia
prima involucrados en l.

La calificacin es una premisa necesaria para poder validar. Es la comprobacin formal,

sistemtica y documentada de que el equipo es el ms adecuado para los fines previstos. Para llevar
a cabo la misma se procede a la calibracin del equipo y a la comprobacin de mtodos y sistemas.

La calificacin de equipos es establecer evidencia documentada de que un equipo funciona

correctamente. Corresponde a realizar pruebas o ensayos a un equipo que es vital en un proceso de
fabricacin, comparar los resultados contra especificaciones o normas de calidad internacionales o
nacionales y as determinar si es apto para asegurar un producto final de calidad.

1.1.1 Criterios de Validacin a estudiar en funcin del tipo de Mtodo Analtico

El procedimiento de los ensayos vara de acuerdo a las determinaciones que se quieren

evaluar. Considerando esta variedad para los ensayos, es lgico que diferentes mtodos requieran
diferentes esquemas de validacin, a continuacin de describen los ms comunes:

TIPO I

Mtodos analticos para cuantificar el componente activo o componentes principales del

producto farmacutico terminado (incluyendo conservadores).

TIPO II

Mtodos analticos para la determinacin de impurezas en un granel de sustancias o

componentes de degradacin en producto terminado. Aqu se determinan valores lmites para el
control de impurezas.

Pueden ser pruebas cuantitativas o una prueba cualitativa para determinar si la impureza est
presente en la muestra por encima o por debajo de un valor lmite especificado. Cualquiera de los
dos pretende reflejar las caractersticas de pureza de la muestra.

TIPO III

Mtodo analtico para determinar las caractersticas de selectividad, lmite de deteccin y

precisin del producto terminado (por ejemplo: Disolucin: Liberacin del principio activo).

TIPO IV

Prueba de identificacin. Se realiza para asegurar la identidad de un analito en una muestra

comparando con un estndar de referencia.

En la tabla 1 se observa que los ensayos para cada categora requieren diferentes tipos de
anlisis:

PARAMETROS DE ENSAYO ENSAYO ENSAYO

ENSAYO TIPO III
DESEMPEO ANALITICO TIPO I TIPO II TIPO IV

CUANTITATIVAS PRUEBAS LIMITES

(IMPUREZAS)

EXACTITUD SI SI * * NO

PRESICION SI SI NO SI NO

SELECTIVIDAD SI SI SI * SI

LIMITE DE DETECCION NO NO SI * NO

LIMITE DE CUANTIFICACIN NO SI NO * NO

LINEALIDAD SI SI NO * NO

RANGO SI SI * * NO

TABLA 1: PARAMETROS DE DESEMPEO ANALTICOS EN FUNCIN DEL MTODO ANALTICO APLICADO

(*)Puede requerir, dependiendo de la naturaleza del ensayo.

 A continuacin de describen los parmetros de una validacin analtica:

Exactitud
La exactitud de un mtodo analtico es la cercana de los resultados de la prueba obtenidos por
dicho mtodo al valor aceptado como verdadero. La exactitud debe establecerse a lo largo del
intervalo especificado del procedimiento analtico, se evala utilizando un mnimo de 9
determinaciones en un mnimo de 3 niveles de concentracin que cubran el intervalo especificado
(por ejemplo, 3 rplicas en cada una de tres concentraciones del procedimiento analtico total).
La exactitud debe ser reportada como porcentaje de recuperacin de una cantidad conocida de
analito aadida a la muestra o como la diferencia entre la media y un valor aceptado como real en
conjunto con los intervalos de confianza.

Precisin
Expresa el grado de concordancia entre resultados individuales cuando el mtodo se aplica
repetidamente a mltiples muestras de una mezcla homognea. La precisin de un mtodo analtico
es generalmente expresada como la desviacin estndar, da idea de errores aleatorios y puede ser
considerada en tres niveles: repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad.
Selectividad
Es la capacidad de un mtodo analtico para medir exacta y especficamente el analito sin
interferencias de impurezas, productos de degradacin o excipientes que pueden estar presentes en
la muestra. Se expresa como el grado de inexactitud del mtodo. Este parmetro es muy importante
en el caso de los mtodos analticos diseados para la cuantificacin del analito en formulaciones y
estudios de estabilidad. (46)
Lmite de deteccin
El lmite de deteccin es una caracterstica de las pruebas de lmite. Es la cantidad ms baja de
analito que puede detectarse, pero no necesariamente cuantificarse, bajo las condiciones
experimentales establecidas. De esta manera, las pruebas de lmite solamente fundamentan que
cantidad del analito est por encima o por debajo de un nivel de seguridad.
Lmite de cuantificacin
El lmite de cuantificacin es una caracterstica de las valoraciones cuantitativas de compuestos
que se encuentran en baja concentracin en la matriz de una muestra, como por ejemplo impurezas
en materias primas y productos de degradacin en productos farmacuticos terminados. Es la
cantidad menor de analito que puede determinarse con precisin y exactitud aceptable en una
muestra, bajo las condiciones experimentales establecidas.
Repetibilidad
Expresa la precisin bajo las mismas condiciones de operacin en un corto periodo de tiempo,
utilizando el mismo analista, con el mismo equipo. Es tambin llamada precisin intra-anlisis. Debe
evaluarse utilizando: un mnimo de 9 determinaciones que cubran el intervalo especificado para el
procedimiento (por ejemplo, 3 rplicas de cada una de 3 concentraciones) o, un mnimo de 6
determinaciones en el 100% de la concentracin de la prueba.

 Linealidad

La linealidad de un mtodo analtico es su capacidad para demostrar que los resultados de la

prueba son directamente proporcionales (o se convierten en directamente proporcionales mediante
una transformacin matemtica bien definida) a la concentracin del analito dentro de un rango dado.

Rango

El rango de un mtodo analtico, es el intervalo entre los niveles superior e inferior (incluyendo
estos valores), en el que se ha demostrado un nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad del
mtodo tal cual est escrito.

Precisin intermedia
Expresa la variacin dentro del laboratorio, en diferentes das, o con diferentes analistas o
equipo dentro del mismo laboratorio. La evaluacin de la precisin intermedia depende de las
circunstancias bajo las cuales se usar el procedimiento. El analista debe establecer los efectos de
eventos aleatorios (variaciones como das, analistas, equipo, etc.) en la precisin del procedimiento
analtico.
Robustez
La robustez de un mtodo analtico es el grado de reproducibilidad de los resultados obtenidos
del anlisis de las mismas muestras bajo diversas condiciones tales como diferentes laboratorios,
analistas, instrumentos, lotes de reactivos, temperaturas, das, etc.
Un mtodo analtico es robusto cuando proporciona resultados con precisin y exactitud
aceptables en condiciones de trabajo ambientales y/o analticas diferentes. Manifiesta la influencia
que tienen pequeas alteraciones en el mtodo de anlisis sobre los resultados.
Es determinada por el anlisis de alcuotas de lotes homogneos en diferentes laboratorios, por
diferentes analistas, en condiciones ambientales y operacionales que pueden diferir pero dentro de
los parmetros especificados en el ensayo. La evaluacin de la robustez debe considerarse durante
la fase de desarrollo y depende del tipo de procedimiento en estudio.

1.2 CALIFICACION DEL INSTRUMENTAL.

La calificacin del equipo HPLC es en esencia la verificacin del rendimiento del instrumento
elegido para una tcnica analtica en particular, as como el software y el hardware que lo controla. (47)

1.2.1 ETAPAS DE UNA CALIFICACIN:

La calificacin de un equipo se realiza en tres etapas sucesivas:

 CALIFICACION DEL HPLC

Los parmetros a evaluar en un sistema HPLC se encuentran detallados en la tabla 2.

Calificacin de Instalacin (IQ)

Es la verificacin documentada de que todos los aspectos claves de la instalacin estn de

acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Asegura que el equipo est instalado
adecuadamente. En esta etapa se recolecta toda la informacin de identificacin, la ubicacin, los
requisitos de servicios bsicos, las conexiones y toda medida de seguridad del equipo que sea
preciso documentar. Corresponden a las especificaciones aprobadas en el diseo. Las cuales pueden
ser:

Nombre del equipo

Nombre del fabricante, modelo o tipo
Nmero de serie
Fecha en la que fue recibido
Condiciones en las que fue recibido (nuevo o usado)
Aspectos verificados para su aceptacin de recepcin
Fecha en la que el equipo fue puesto en servicio por el laboratorio
Localizacin del equipo en el laboratorio
Manual de operacin
Manual del mantenimiento

Calificacin Operacional (OQ)

Es la verificacin de que los equipos funcionan en forma esperada y son capaces de operar
satisfactoriamente, sobre todo en el rango de los parmetros operacionales para los que han sido
diseados. Demuestra que funciona segn lo previsto. En esta etapa se someten a prueba todos los
controles de operacin bajo condiciones normales y bajo condiciones extremas como por ejemplo el
reinicio de un equipo despus de un corte de luz, todos los puntos de alarma, interruptores,
dispositivos visualizadores y cualquier otra indicacin de operacin y funcin. Es realizado por el
tcnico calificado.

 Mdulo Parmetro Importante para:

Reproducibilidad de flujo Reproducibilidad/TR/A/H

Bomba
Precisin de gradiente Transferencia del mtodo

Reproducibilidad Precisin de resultados

Inyector
Residuo de muestra Exactitud de precisin de resultados
Reproducibilidad de T TR/A/H/forma de pico
Horno
Ruido Sensibilidad
Energa de lmpara Sensibilidad
Detector Relacin seal/ruido Sensibilidad
Precisin de longitud de onda Sensibilidad, Trasferencia de datos
Linealidad Precisin de resultados
Forma de pico
Columna Proceso de datos, identificacin,
Asimetra de pico
reproducibilidad
TR, Resolucin, platos tericos
TR= tiempo de retencin
A= rea
H= altura

TABLA 2: PARAMETROS A EVALUAR EN UN SISTEMA HPLC

Calificacin de Desempeo (PQ)

Se realiza para demostrar la efectividad y reproducibilidad del proceso, bajo condiciones

normales de operacin, y bajo condiciones lmites de operacin. Es verificado por el usuario,
trabajando con estndares certificados. Es la verificacin que el equipo funciona en la forma esperada
y es capaz de operar satisfactoriamente sobre todo el rango de los parmetros operacionales para el
que ha sido diseado.

1.3 DISOLUCION

La absorcin de un frmaco, tras la administracin oral desde una forma de dosificacin slida
depende de la liberacin principio activo del producto y de su disolucin o solubilizacin del frmaco
bajo condiciones fisiolgicas y la permeabilidad por el sistema gastrointestinal. Debido a la naturaleza
de estos factores, la evaluacin de la velocidad de disolucin in vitro puede ser una prediccin del
comportamiento in vivo (27), por ello se utilizan las pruebas de disolucin in vitro para las formas de
dosificacin oral slidas, como comprimidos y cpsulas, para: 1) evaluar la calidad de un producto
medicinal lote a lote; 2) guiar el desarrollo de nuevas formulaciones; y 3) asegurar la calidad y el
rendimiento continuo del producto, despus de ciertos cambios, tales como cambios en la
formulacin, el proceso de fabricacin, el sitio de fabricacin y el aumento en escala del proceso de
fabricacin. (27)

Existen diversos factores que afectan la velocidad de disolucin como los relacionados con las
propiedades fisicoqumicas del principio activo: tamao de partcula, estado cristalino, polimorfismo,
10

etc.; la influencia de los excipientes durante el proceso de elaboracin de los preparados slidos;
adems de considerar los efectos de la fuerza de compresin sobre la velocidad de disolucin.

Los equipos y tcnicas de disolucin se clasifican de acuerdo a la hidrodinmica asociada,

existen dos categoras generales: los mtodos con cubetas y los sistemas con compartimentos
abiertos con flujo abierto. Los ms utilizados son los establecidos por la farmacopea de los Estados
Unidos Americanos (USP/NF) los cuales corresponden a los mtodos con cubetas, que son los de
canastillas (aparato 1) y de paletas (aparato 2) el diseo del aparato afecta los resultados de la
disolucin debido a diversos factores entre los que se incluyen: la geometra y la estructura del
recipiente, el tipo y la intensidad de la agitacin, as como la composicin y el volumen del medio de
disolucin. Estos factores a su vez afectan la velocidad de erosin del preparado slido intacto sobre
las partculas, la dispersin de las partculas desintegradas, la homogeneidad del lquido de
disolucin y finalmente la reproducibilidad del sistema de una corrida a otra.

Las monografas de cada producto farmacutico en la FEUM actual describen el medio de

disolucin, la velocidad de agitacin y el porcentaje del frmaco que deber disolverse en un tiempo
determinado (Valor Q, que se define como la cantidad de ingrediente activo (frmaco) disuelto
expresado como un porcentaje del contenido declarado), estas condiciones se especifican en base a
las propiedades intrnsecas del frmaco y su comportamiento de disolucin.

Los perfiles de disolucin por su parte comprenden la determinacin mltiple de la

concentracin del frmaco disuelto durante el proceso de disolucin a fin de demostrar la
intercambiabilidad de los medicamentos genricos, as como los requisitos a que se debern sujetar
los establecimientos que lleven a cabo dichas pruebas. (26) Es una curva caracterstica que representa
la concentracin de frmaco disuelto contra el tiempo. Para llevar a cabo la comparacin de los
estudios de los perfiles de disolucin existen diversas metodologas. De acuerdo a la Norma Oficial
Mexicana NOM-177-SSA1-1998 se realiza el clculo del factor de similitud f, el cual relaciona los
porcentajes disueltos tanto del medicamento de referencia como del de prueba. Un valor de f
comprendido entre 50 y 100 indica perfiles de disolucin similares. Por otra parte es posible analizar
diversos parmetros de disolucin desde el punto de vista cintico a partir de los datos
experimentales de porcentaje disuelto en funcin del tiempo. En general el proceso de disolucin de
un frmaco contenido en un medicamento, presenta una cintica de primer orden, es decir, est en
funcin de la cantidad de principio activo presente. A partir de la ecuacin para describir los procesos
de primer orden pueden calcularse parmetros como la constante de velocidad de disolucin, tiempo
medio de disolucin, ste ltimo permite una evaluacin comparativa de las distintas formulaciones.
(30)

La prueba de disolucin es una prueba fsico qumica que determina el porcentaje de frmaco
que se disuelve por unidad de tiempo bajo condiciones estandarizadas de la interfase lquida/slida,
la temperatura y la composicin del solvente; es bsico e imprescindible para la liberacin de cada
lote de las formas farmacuticas slidas fabricadas. Por otra parte es un ensayo empleado desde el
comienzo del desarrollo de la formulacin y utilizado en fases posteriores a ste, porque permite el
estudio de los mecanismos de liberacin del principio activo en las formulaciones de liberacin
controlada y no controlada y permite la obtencin de un perfil de disolucin predeterminado y
reproducible. As como tambin la comparacin y estudio de calidad intralotes e interlotes, es un

11

indicador de estabilidad del preparado farmacutico y predice la biodisponibilidad y bioequivalencia in
vitro de productos farmacuticos slidos orales.

Principales funciones del ensayo de disolucin:

Optimizacin de la efectividad de la forma farmacutica: Durante el desarrollo de un producto

y en la evaluacin de su estabilidad.

Verificacin rutinaria de la calidad de la produccin para asegurar la uniformidad entre los

lotes fabricados.

Verificacin de la bioequivalencia.

Gua para el desarrollo de nuevas formulaciones en las diferentes etapas y procesos de

fabricacin.

Ayuda a seleccionar excipientes.

Asiste en cumplir los requisitos legales.

Ayuda a controlar parmetros de manufactura: presin de compresin, densidad de la capa,

solvente residual, nivel de humedad.

Productos de liberacin controlada: Provee evidencia de caractersticas de liberacin

retardada en productos con cubierta entrica (ej. Disolucin de dos etapas); provee evidencia
de un perfil de disolucin que es lento y controlado; provee informacin necesaria para poder
establecer correlaciones in vitro-in vivo.

Est prueba se realiz principalmente debido a que el ensayo de desintegracin no garantizaba

que la formulacin liberase el frmaco, ya que los comprimidos deben primero disolverse (despus de
disgregarse) en el tracto gastrointestinal para absorberse. Frecuentemente la velocidad de absorcin
de un frmaco la determina la velocidad de disolucin de los comprimidos.

Los objetivos de disolucin son que la forma farmacutica libere la mxima cantidad de frmaco
vehiculizado, lo ms cerca del 100% o del porcentaje especificado en cada caso y que la velocidad de
liberacin del lote sea uniforme para que todos sean clnicamente efectivos.

Durante el desarrollo de una forma farmacutica slida, la FDA recomienda que la disolucin se
evale en condiciones fisiolgicas, si es posible. Esto permitir relacionar los resultados de disolucin
con el comportamiento del producto in vivo. (42)

La FDA recomienda que se utilicen medios acuosos dentro del rango de pH de 1.2 a 6.8,
generalmente se prueban:

HCl 0.1 N (pH 1.2)

Buffer de acetatos USP a pH 4.5

Buffer de fosfatos a pH 6.8

Fluido gstrico simulado a pH 1.2 (sin enzimas)

Fluido intestinal simulado a pH 6.8 (sin enzimas)

12

 Sin embargo, el estricto cumplimiento al medio ambiente gastrointestinal no tiene que ser
utilizado en las pruebas disolucin de rutina. Las condiciones de la prueba deben basarse en las
caractersticas fisicoqumicas del medicamento y las condiciones ambientales de la forma de
dosificacin pueden estar expuestas tras la administracin oral. (42)

El volumen del medio de disolucin es generalmente de 500, 900 o 1000 ml condiciones de

inmersin deseables pero no obligatorias. Un medio acuoso con un rango de pH 1.2 a 6.8 (fuerza
inica de buffers igual que en USP) debe ser utilizado. Para simular el fluido intestinal, un medio de
disolucin de pH 6.8 debe ser empleado. Un pH ms alto se debe justificar, caso por caso y, en
general, no debe exceder de PH 8.0. Para simular el fluido gstrico, un medio de disolucin de pH 1.2
se debe de emplear sin enzimas. La necesidad de enzimas en el fluido gstrico simulado y fluido
intestinal simulado debe ser evaluado sobre una base caso por caso y debe ser justificado. La
experiencia reciente con productos de cpsula de gelatina indica la necesidad del uso enzimas
(pepsina con fluido gstrico simulado y pancreatina con fluido intestinal simulado) para disolver
partculas que pueden formarse e impedir disolucin del frmaco. (42)

El uso de agua como medio de disolucin no se recomienda porque las condiciones de prueba
como el pH y la tensin superficial pueden cambiar dependiendo de dnde se obtuvo el agua, y
tambin pueden cambiar durante la prueba debido a la influencia de los ingredientes activos e
inactivos. Para el agua o productos farmacuticos ligeramente insolubles en agua, el uso de un
surfactante como lauril sulfato de sodio, se recomienda para mejorar la solubilidad. La necesidad y la
cantidad de tensioactivo se justifica. El uso de solventes orgnicos no se recomienda. (42)

Los agentes tensioactivos pueden mejorar la humectacin de las partculas favoreciendo el

contacto entre stas y el disolvente. En consecuencia, la superficie libre para el ataque
por el lquido disolvente es acrecentada. Esta accin es la que permite que frmacos
hidrofbicos mejoren sus caractersticas de disolucin en presencia de tensioactivos.

En el tracto gastrointestinal, un frmaco que se disuelve es absorbido instantneamente, por lo

que la concentracin de la disolucin del principio activo en el lquido de la zona de absorcin est
siempre muy lejos de la concentracin a saturacin. Cuando se cumplen estas condiciones, es decir,
cuando la concentracin del soluto es inferior al 10%-20% de su concentracin a saturacin, se habla
de condiciones sink. De esta manera, en el ensayo de disolucin in vitro las condiciones sink
existen cuando el volumen del medio de disolucin es de 5 a 10 veces mayor que el volumen
requerido para hacer una solucin saturada de un frmaco (C < 0.15Cs o C <<Cs). Si el frmaco es
poco soluble en agua, es necesaria una gran cantidad de medio de disolucin para asegurar las
condiciones sink; para minimizar el efecto de gradiente de concentracin y mantener las condiciones
sink, la concentracin del principio activo no debe exceder del 10%-15% de su mxima solubilidad
en el medio de disolucin seleccionado. Para la mayora de los frmacos, la utilizacin de alrededor
de 1 litro de medio de disolucin es ms que suficiente para mantener las condiciones sink. (15)

Este hecho hace que la ley de Noyes-Whitney en la que se basan los ensayos de
biodisponibilidad de frmacos, quede explicada en base a la Cs de la siguiente manera:

dQ = -K (Cs - C) dQ = -KCs
dt dt

13

 En estas ecuaciones, dC/dt representa la velocidad de disolucin, K la constante de
proporcionalidad del proceso (constante de disolucin), Cs la concentracin de una disolucin
saturada y C la concentracin de la disolucin a un tiempo determinado.

Bajo condiciones sink la constante de velocidad de disolucin (dQ/dt = K) se puede calcular

fcilmente y representa un proceso cintico de orden cero. Si bien las condiciones sink son las
recomendadas para desarrollar todo ensayo de disolucin, no son obligatorias. (15)

Cuando una substancia se disuelve en un medio lquido cualquiera las molculas disueltas
provocan una disminucin del gradiente de concentracin y, por consiguiente, la velocidad de
disolucin va disminuyendo con el tiempo. Los denominados mtodos "sink" comprenden todas
aquellas tcnicas que, de una u otra manera procuran la eliminacin de la substancia disuelta desde
el medio de disolucin a medida que sta se va disolviendo, con el fin de mantener la concentracin
constante y a un nivel muy bajo. Los mtodos "sink" parecen ser bastante adecuados, sobre todo si
se imagina que "in vivo", la disolucin de frmacos se realiza conforme a un modelo semejante ya
que generalmente, y segn las condiciones fisicoqumicas imperantes en el tracto gastrointestinal, el
medicamento va siendo absorbido a medida que se disuelve desde el lquido de disolucin. (43)

La finalidad es determinar la velocidad con la que el medicamento se disuelve; esto es, se trata
de establecer una velocidad de liberacin a partir de liberacin de las formas slidas que, en la
mayora de los casos no son enteramente solubles y que esta velocidad no solo est condicionada
por la solubilidad de principio activo y forma farmacutica sino por naturaleza fsica de la parte no
soluble (humectacin, porosidad, etc.), y de las uniones entre el soluto y algunos constituyentes
insolubles en el disolvente (intercambio de iones, adyuvantes lipdicos, derivados de la celulosa, etc.),
y es necesario que en cada instante la solucin sometida a prueba sea de tal concentracin que
refleje la cantidad de soluto realmente disuelto.

Los resultados del anlisis pueden ser afectados debido a una serie de factores a tener en
cuenta que son: volumen dispensado incorrecto, mala desgasificacin, evaporacin del medio, pH,
temperatura incorrecta, sistemas filtrantes no idneos, excentricidad de los agitadores, verticalidad de
los vstagos, centrado de los vasos, vibraciones, velocidad de agitacin incorrecta, vasos en mal
estado, formas farmacuticas que flotan, tomas de muestra incorrectas, fotosensibilidad del producto
que se est analizando, reposicin de medios (puede hacerse continuamente o de forma intermitente,
en cuyo ltimo caso deben reponerse las alcuotas del volumen tomado).

Los resultados se expresan como concentracin del frmaco existente en el medio de

disolucin en funcin del tiempo, como la cantidad de frmaco remanente en la forma farmacutica
con respecto al tiempo bajo condiciones estandarizadas o el tiempo en que un porcentaje concreto
del frmaco es liberado.

Normalmente en la industria farmacutica interesa obtener 2 tipos de datos:

Porcentaje disuelto: Cantidad de principio activo disuelto en un determinado tiempo.

Generalmente se utiliza para productos de liberacin inmediata. Tambin es la manera rutinaria de
control de calidad sobre producto terminado.

14

 Perfil: Caso particular del ensayo de disolucin que consiste en tomar muestras intermedias
durante toda la duracin del mismo, con el fin de obtener una curva de disolucin del principio activo.
Se puede realizar un clculo logartmico para efectuar estudios comparativos entre curvas.
Generalmente se utilizan los perfiles de disolucin para productos de liberacin prolongada que
requieren por lo menos 3 puntos de muestreo cubriendo el perfil de disolucin. Los perfiles de
disolucin tambin se utilizan para aceptar la similitud de dos o ms productos despus de cambios
basados en SUPAC (Scale Up and Post-Approval Changes). (15)

Previo a la ejecucin de la prueba de disolucin adems de controlar los factores internos as

como externos que pueden afectar al equipo tambin deben tenerse controlados los siguientes
puntos:

Equipos calificados
Instrumentos calibrados
Mtodos Analticos validados
Personal formado
Procedimientos estandarizados
Interconexin con medios de servicios requeridos

La disolucin es el mejor sustituto del biocomportamiento cuando se logra establecer una

correlacin in vitro-in vivo (IVIVC). Una forma farmacutica debe disolverse rpidamente y liberar no
menos del 85% del contenido indicado en su etiqueta en un perodo de 30 minutos utilizando el
Aparato 1 de la USP a 100 rpm con el mismo intervalo de pH.

El procedimiento de disolucin est considerado principalmente como una herramienta de

control de calidad para una forma farmacutica slida especfica y como seal de biodisponibilidad y
de bioequivalencia.

1.4 LEVONORGESTREL

Desde siempre se ha reconocido la necesidad de la anticoncepcin oral. Himes hace ms de

2000 aos aconsejaba la toma de estricnina, mercurio y arsnico con fines anticonceptivos, medidas
que a todas luces son ineficaces y fuertemente peligrosas. (50) El entendimiento de las hormonas
femeninas para la regulacin de la ovulacin y el embarazo, son el verdadero punto de partida
cientfico para la posterior anticoncepcin hormonal.

En 1944 Russell Marker comenz a producir progesterona a partir de un compuesto llamado

Diosgenina, hallado en la raz de la planta denominada "Cabeza de negro". Aos despus se
encontr que en la raz del barbasco haba 10 veces ms cantidad de Diosgenina.

Al mismo tiempo en Alemania, Inhoffer realiz investigaciones con la Etisterona, un derivado de

la progesterona, obtenido a partir de plantas. Para mediados del Siglo XX laboratorios Syntesis y
simultneamente G.D. Searle anunciaron la elaboracin de dos derivados de la progesterona: la
Noretindrona y el Noretinodrel, quedando por establecerse la dosificacin adecuada que tuviese un

15

mnimo de efectos secundarios. Estos a la larga seran los gestgenos de los primeros
anticonceptivos orales utilizados. Por la misma poca la Worcester Foundation for Experimental
Biology patrocina los trabajos de John Rock en Harvard, Gregory Pincus y M.C. Chang en Worcester.
(50)

La ciencia mdica ha avanzado a pasos agigantados, entregando a la mujer beneficios que van
ms all de la sola anticoncepcin. La anticoncepcin de emergencia se refiere a mtodos que las
mujeres pueden usar como respaldo y en caso de emergencia, dentro de los primeros das
posteriores a una relacin sexual sin proteccin, con el objetivo de prevenir un embarazo no deseado.

El levonorgestrel fue la base de los primeros anticonceptivos orales combinados que incluan
30 g de Etinilestradiol, siendo el Microgynon el primer microdosis introducido, en 1973. (51) Para la
misma poca se observ que algunos gestgenos, especialmente los 17--hidroxi derivados, al
combinarlos con estrgenos tambin predisponan a enfermedad cardio-vascular. (52) Para disminuir
estos efectos metablicos adversos se sintetizaron nuevos gestgenos (53) y se disminuy
considerablemente su concentracin. El levonorgestrel hizo parte de los primeros anticonceptivos
orales trifsicos, introducidos en Alemania en 1979 y en los E.E.U.U. en 1985. (51) Con un diseo que
imitaba el ciclo menstrual normal, rgimen 6, 5,10, se consegua administrar una menor
concentracin total de gestgenos. (54)Durante la dcada de los ochenta se introdujeron el Gestodeno,
Norgestimato y Desorgestrel, tambin el grupo de los Gonano, que tienen al parecer un impacto
metablico favorable mucho mayor que sus predecesores. La combinacin de uno de estos, con el
Etinilestradiol, conforman los anticonceptivos de ltima generacin, los de gran uso y de amplia
evaluacin actual, donde el sinergismo es evidente. En 1998 son introducidos en Colombia los
anticonceptivos orales combinados, microdosis que asocian 20 g de Etinilestradiol y 75 g de
Gestodeno. Las pequeas cantidades de estrgeno y gestgeno, en combinacin, inhiben mejor la
ovulacin que grandes cantidades de estrgeno o gestgeno solos. (52) A los preparados monofsicos
se han sumado las presentaciones trifsicas, las cuales tienen una gran aceptacin por las usuarias y
se encuentran disponibles en el mundo entero. (55)

ANTICONCEPCION DE EMERGENCIA

El LEVONORGESTREL usado para la llamada Anticoncepcin de Emergencia o Pldora del Da

Despus, es un compuesto qumico sinttico derivado de la 19-nortestosterona, la cual deriva de la
hormona masculina testosterona, este origen hace que tenga una accin dual, es por un lado similar
a la hormona femenina progesterona y por otro lado tiene efectos masculinizantes que antagonizan la
accin de las hormonas femeninas. (56) A principios de los aos 70, investigadores de varios pases
comenzaron a realizar estudios con dosis variables de levonorgestrel para su uso de anticoncepcin
postcoital de rutina, los resultados de los primeros estudios mostraron que una dosis nica de
0.75 mg administrada poco despus de un coito sin proteccin era, eficaz para prevenir el embarazo.
Sin embargo presentaba una alta incidencia de alteraciones menstruales al usarse como
anticoncepcin postcoital de rutina. Aun as, estos primeros estudios sugirieron que el levonorgestrel
podra ser til en anticoncepcin de emergencia postcoital.

16

 El levonorgestrel representa la generacin ms reciente en anticoncepcin de emergencia. En
Hong-Kong el primer estudio comparativo patrocinado por la OMS en 834 mujeres, sugiri que el
levonorgestrel slo, usado dentro de 48 horas despus de un coito sin proteccin anticonceptiva, era
tan eficaz como el mtodo de Yuzpe y causaba menos efectos secundarios. El estudio multicntrico
siguiente realizado por la OMS en 21 centros de 24 pases que involucr a 1988 mujeres confirm
estos resultados. Este estudio mostr que el rgimen levonorgestrel (en dosis de 0.75 mg repetida
12 horas ms tarde) era al menos tan eficaz como el rgimen Yuzpe dentro de las 72 horas
siguientes y era mucho mejor tolerado. El estudio de la OMS demostr que cuanto antes se tome el
mtodo anticonceptivo de emergencia despus de un coito sin proteccin, ms eficaz es su accin.
(57)

Se cree que el levonorgestrel acta como anticonceptivo de emergencia principalmente

retrasando la ovulacin o interfiriendo con la fertilizacin (alterando el transporte de los
espermatozoides y/o vulos a travs de las Trompas). Adems es probable que inhiba la implantacin
mediante la alteracin del endometrio. Una vez que se ha producido la implantacin no es eficaz y no
puede interferir o provocar un aborto. No se han asociado complicaciones serias con el tratamiento
del levonorgestrel. Utilizado correctamente, es seguro para la mayora de las mujeres. No es
necesario un examen fsico antes de administrarlo. Sin embargo, se recomienda realizar un examen
fsico o plvico de seguimiento si existe cualquier duda con respecto a la salud general de la mujer o
si se sospecha de un embarazo. (57)

El Mtodo de Yuzpe es un mtodo anticonceptivo que consiste en administrar 2 tabletas de

anticonceptivo oral de macrodosis que incluya 50 g de Etinilestradiol y 250 g de Levonorgestrel
(Noral, Neogynon), durante las primeras 72 horas despus del coito sin proteccin y repetir la
ingesta 12 horas ms tarde. Si las tabletas de macrodosis no estn disponibles, pueden administrarse
4 tabletas de microdosis que incluyan 30 g de Etinilestradiol y 150 g de Levonorgestrel (Nordette,
Microgynon) en las primeras 72 horas despus del coito sin proteccin y tomar otras 4 pldoras 12
horas ms tarde. Es un mtodo seguro, econmico y accesible, que en muy pocos casos implican
nuseas como efectos secundarios. Se desarrollo a finales de los setenta como mtodo de control de
natalidad postcoital. Su mecanismo de accin es la inhibicin o el retraso de la ovulacin para
prevenir la fertilizacin, aunque tambin modifica el endometrio e impide la normal implantacin,
incluso puede alterar el transporte del ovocito o del espermatozoide.

PROPIEDADES FISICAS, QUIMICAS Y FARMACOLOGICAS DE LEVONORGESTREL

El levonorgestrel (o l-norgestrel o D-norgestrel) es una progestina sinttica biolgicamente
activa derivada de la hormona progesterona. Previene embarazos no deseados en tres diferentes
caminos, dependiendo del estado del ciclo menstrual en el cual ocurren las relaciones sexuales sin
proteccin: suprime la ovulacin.

Formula molecular: C21H28O2

17

Formula estructural (IUPAC):

Su denominacin qumica: 13-etil-17-etilin-17-hidroxi-4-gonen-3-ona, peso molecular:

312.446 g/mol, punto de fusin: entre 232C y 239C, es un polvo cristalino blanco o casi blanco,
soluble en cloroformo, poco soluble en cloruro de metileno, ligeramente soluble en alcohol,
ligeramente insoluble en agua, su biodisponibilidad es de aproximadamente 100%, se une a protenas
en un 55%, su metabolismo es a nivel heptico, de acuerdo al Sistema de Clasificacin
Biofarmacutica (SCB) se encuentra dentro de la clase II debido a su baja solubilidad y alta
permeabilidad. (64)

1.4.1 Propiedades farmacolgicas:

Qumicamente el levonorgestrel es una hormona esteroidea activa y enantimero de la mezcla

racmica norgestrel. Es una progestina gonano derivado del 19-nortestosterona, (58) la cual a su vez,
deriva de la hormona masculina testosterona. Este origen hace que el levonorgestrel tenga una
accin dual: por un lado similar a la hormona femenina progesterona (que favorece la gestacin) y por
otro, que tenga efectos masculinizantes, que antagonizan la accin de las hormonas femeninas.

Su afinidad de ligandos relativos in vitro en los receptores para la hormona esteroides son:
100% de progesterona sobre su receptor de progesterona, 58% de la testosterona sobre su receptor
andrognico (AR), 17% de la aldosterona sobre el receptor mineralocorticoide, 7.5% del cortisol sobre
el receptor glucocorticoide, y <0.02% del estradiol sobre el receptor del estrgeno (48). En dosis bajas,
el levonorgestrel se usa como un anticonceptivo oral en formulaciones monofsicas y trifsicas de
grageas combinadas. Las dosis monofsicas varan entre 100 y 250 g y las dosis trifsicas entre
50 g, 75 g y 125 g. Es usado como pldora anticonceptiva de emergencia a dosis nica elevada
de 1500 g, (49) o dos dosis de 750 g cada una (separadas por 12 horas), y deben ser tomadas
antes de que transcurran tres das del sexo no protegido.

18

2. JUSTIFICACION

El anlisis de Disolucin es una herramienta valiosa como prueba de rutina en Control de

Calidad para la medicin del desempeo de un medicamento, y de ayuda para el desarrollo de una

formulacin. El mtodo analtico que se utilice para cuantificar el frmaco debe estar debidamente

validado y cumplir con requisitos apropiados de linealidad, exactitud, precisin, estabilidad,

selectividad y rango. Se debe utilizar una curva de calibracin apropiada, construida con el estndar

de referencia del principio activo, para interpolar las concentraciones del frmaco disuelto. La

Validacin ayuda a confirmar la calidad del medicamento, puesto que le confiere confiabilidad a los

resultados obtenidos en el anlisis, asegurando as, que el producto farmacutico sea seguro, estable

y eficaz. As como tambin deben ser validadas todas las variables involucradas en el sistema, tanto

las de la metodologa analtica como las del aparato de disolucin. En estas circunstancias, la

concentracin de levonorgestrel en su presentacin comercial Oportuna grageas de 1.5 mg de Bayer

de Mxico S.A. de C.V. implica el uso de un mtodo analtico que permita a travs de esta prueba in

vitro la completa liberacin del activo en el tiempo establecido para estar biodisponible, a travs de la

evaluacin de su disolucin; debido a que dicho mtodo fue desarrollado en casa matriz para su

registro ante las autoridades sanitarias de nuestro pas es necesario llevar a cabo la validacin del

mtodo analtico para comprobar que este es reproducible, ya que no se trata de un mtodo

farmacopeico.

19

3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La contracepcin postcoital tiene como objetivo prevenir el embarazo en aquellas mujeres que
han tenido un coito sin proteccin anticonceptiva, por lo que la fabricacin, prescripcin y
dispensacin de un medicamento tienen como objetivo comn obtener eficacia adecuada para el
paciente, ya que el riesgo de embarazo tras un coito no protegido oscila en torno a un 8% por trmino
medio, y administrando levonorgestrel se reduce la contracepcin postcoital hormonal hasta un 2%.
Se ha estimado que el levonorgestrel evita un 85% de los embarazos esperados, esta proteccin es
menor cuanto mayor es el tiempo transcurrido de administracin de medicamento tras el coito (95%
dentro de las primeras 24 horas; 85% entre las siguientes 24-48 horas; y 58% si se emplea entre las
48 y 72 horas). Por lo que es importante asegurar travs control fsico, qumico y biolgico que el
medicamento sea liberado oportunamente para tener eficacia en la prevencin de embarazos no
deseados.

El motivo de la validacin del mtodo analtico para disolucin se debe a la alta concentracin
del principio activo (Levonorgestrel) y a su baja solubilidad en agua surge la necesidad de cambiar las
condiciones del medio de disolucin y la velocidad de agitacin (rpm) del mtodo de disolucin
general transferido en el reporte interno Lab to Lab de fecha 06.06.07 y reporte interno de validacin
No. A33108 de Bayer Schering Pharma AG. Las condiciones a utilizar son las recomendadas en la
norma de anlisis interna No. D-0359/1 de Postinor 1, tableta SH No. T03551C (Levonorgestrel
1.5 mg) de fecha 27.05.06 (Mtodo de disolucin P2-LN-HP).

20

4. OBJETIVOS

4.1 OBJETIVO GENERAL

Demostrar a travs de evidencia documentada obtenida por estudios de laboratorio, que el

medio de disolucin y las condiciones de anlisis seleccionadas para el mtodo analtico de
disolucin en Levonorgestrel grageas 1.5 mg cumplen con los criterios de aceptacin
establecidos para cada parmetro de desempeo analtico de acuerdo al plan de validacin No.
VP_PV.PLM02209.

4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Calibrar analticamente los disolutores SOTAX AT7 y HANSON SR18 Plus.

Calificar mecnicamente los disolutores SOTAX AT7 y HANSON SR18 Plus y que estos
cumplan con los criterios de aceptacin establecidos para cada disolutor.

Revisar que la calificacin del Sistema HPLC Waters No. 1 se encuentra debidamente
documentada y se cumplen con todos los criterios de aceptacin establecidos para cada
mdulo del sistema.

Verificar que los materiales a utilizar durante la validacin sean adecuados para este efecto y
los Instrumentos se deben encontrar calibrados y el estndar a utilizar durante la validacin
debe contar con su respectivo certificado de anlisis.

Validar la metodologa analtica de los parmetros analticos ms relevantes a ser evaluados

para la prueba de disolucin y el mtodo HPLC usado para la determinacin del principio activo
Levonorgestrel, despus de la disolucin de Levonorgestrel gragea 1.5 mg.

Establecer un Protocolo de Validacin de la Metodologa analtica a validar (Levonorgestrel

gragea 1.5 mg), por el Laboratorio de Control Fisicoqumico.

Demostrar el uso indistinto del disolutor Sotax AT7 y Hanson RS8 Plus.

21

 DIAGRAMA DE TRABAJO

Parte experimental

Calibracinmecnicadisolutor Calibracinanalticadisolutor Metodologadedisolucinde

SotaxyHanson SotaxyHanson levonorgestrel(HPLC)

Pruebas mecnicas: Tabletastipo Tabletastipono

Nivel: con respecto al plano Desintegrantes Desintegrantes
horizontal (Prednisona) (cidosaliclico)
Vibracin del equipo
Temperatura del medio de
disolucin
Condiciones de disolucin: Para el mtodo HPLC:
Velocidad de rotacin (rpm)
Evaluar medio de disolucin Selectividad
Concentricidad con respecto al
y velocidad de agitacin Precisin del sistema
eje de rotacin
Linealidad del sistema
Altura de los aparatos 1 y 2 con
Precisin del mtodo
respecto al fondo del vaso
(repetibilidad al 100%)
Oscilacin (bamboleo) de las
Estabilidad de la
paletas, ejes de agitacin y
muestra
Tolerancia
Medicin de dimensiones:
Vaso
Eje
Seguro de retencin
Canastillas
Paletas

22

5. PARTE EXPERIMENTAL
5.1 CALIBRACION MECANICA DISOLUTOR SOTAX Y HANSON

Material y equipo utilizado ver anexo I.

Criterios de aceptacin:
Tabla 3. Especificaciones mecnicas disolutor Sotax y Hanson

PARAMETRO ESPECIFICACIN LMITES

Nivel Con respecto al plano horizontal N/A
No ms de
Vibracin 0.1 mils (0.025 mm)
transmitido al vaso
Temperatura Temperatura seleccionada 0.5C
Velocidad (rpm) Velocidad seleccionada 4.0%
Concentricidad (excentricidad) con
Desviacin mxima de 2.0 mm
respecto al eje de rotacin
Altura de los aparatos 1 (canastillas) y 2
25.0 2.0 mm
(paletas) con respecto al fondo del vaso.
Oscilacin (bamboleo) de las paletas,
Deflexin mxima de 1.0 mm
ejes de agitacin y canastillas.

Tabla 4. Especificaciones de dimensiones disolutor Sotax y Hanson

PARAMETRO DETERMINACIN LMITES

Altura: 160 210 mm
VASO
Dimetro interno: 98 106 mm
EJE Dimetro: 6.3 6.5 mm / 9.4 10.1 mm
Soporte de acero inoxidable con 3 grapas.
SEGURO DE RETENCION Orificio de salida: 1.5 2.5 mm
Altura: 4.6 5.6 mm

Tamiz 40 x 40, 0.254 mm

Altura total: 34.0 40.0 mm
Altura del tamiz 26.0 28.0 mm
CANASTILLAS
Dimetro interno 20.1 20.3 mm
Dimetro externo tamiz 21.2 23.2 mm
Dimetro externo arillo 22.0 28.0

Dimetro sin tefln: 9.4 10.1 mm

Espesor de la hlice: 3.0 5.0 mm
PALETAS Altura de la hlice: 18.5 19.5 mm
Cuerda mayor: 74.0 75.0 mm
Cuerda menor: 41.0 43.0 mm

23

REVISIN GENERAL.

1. Con la funcin de continuidad del multmetro digital verificar la integridad del fusible y visualmente
verificar que la capacidad de ste sea de 10 A.
2. Inspeccionar el sistema mecnico del equipo, verificar rotores y mandriles deben de estar
completos sin presentar juego, el sistema de transmisin no debe presentar desgaste, los
disolutores deben de funcionar y estar libres de vibraciones excesivas, y el sistema de control de
velocidad, debe responder a 50, 100 y 150 rpm.

TEMPERATURA DEL BAO (SOLO DISOLUTOR HANSON)

1. Encender el sistema en el orden siguiente: regulador de voltaje (en caso de contar con alguno) y
disolutor.
2. Programar en el disolutor: una temperatura de 35.0, 37.0 y 40.0C y dejar que se estabilice el
tiempo necesario.
3. Verificar la temperatura del bao con un termmetro calibrado y certificado.
4. Los resultados debern cumplir con los parmetros establecidos en la tabla de especificaciones
mecnicas.
5. Reportar en la hoja de resultados.

VERIFICACION DE LA TEMPERATURA DEL MEDIO EN LOS VASOS DEL DISOLUTOR

Llenar el bao del disolutor con 18 l de agua purificada y los vasos del disolutor con 900 ml de
agua purificada cada uno. Cerrar la barra de alimentador de muestras. Encender el disolutor y
programar el control de temperatura del bao a 37C; cuando el indicador de control de temperatura
del disolutor muestre 37C esperar 1 hora para que la temperatura del medio en los vasos (agua
purificada) se estabilice. Al trmino de 1 h, introducir en el vaso No. 1 el RTD a travs de la abertura
para pipeta. Esperar 5 minutos a que se estabilice el RTD y realizar la primera lectura registrando el
valor de la temperatura del medio en los vasos del disolutor, sacar el termmetro del vaso y esperar 2
minutos para volverlo a introducir, realizar un total de tres lecturas, repetir el procedimiento anterior
para cada uno de los vasos restantes. Al trmino de la prueba, vaciar el agua purificada del bao de
los vasos.

Aparato No. 2
VERIFICACION DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA PALETA AGITADORA AL
FONDO DEL VASO

Levantar la cubierta del disolutor y desmontar la paleta agitadora del vaso No. 1. Introducir en la
paleta agitadora el indicador de distancia, montar la paleta agitadora y cerrar la cubierta del disolutor.
Verificar que la orilla inferior de la paleta agitadora est dentro de las marcas del indicador. Realizar el
procedimiento anterior para cada uno de los vasos restantes.

24

 Figura 1. Instrumento de Verificacin de distancia
de la paleta agitadora del disolutor

VERIFICACION DEL BAMBOLEO DE LAS PALETAS AGITADORAS

Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. Introducir el calibrador de
acoplamiento con su abertura ms grande en el cople de la paleta agitadora para ajustar sus
laminillas, sacar el calibrador de acoplamiento e introducirlo nuevamente en el cople de la paleta
agitadora pero ahora con su abertura ms pequea.

Figura 2. Ajuste de laminillas del cople de la paleta agitadora

Atornillar el soporte del medidor de bamboleo a la brida. Colocar en el borde de sellado para el
vaso No. 1, la brida y cerrar su broche. Montar la paleta agitadora e introducir el medidor de
bamboleo en el orificio superior del soporte (para medir el bamboleo a la altura de la varilla de la
paleta agitadora), deslizar el medidor hasta que toque la varilla cuidando que la aguja indicadora del
medidor permanezca en el cero, apretar el tornillo del soporte para fijar el medidor. Programar el
control de velocidad del disolutor para una velocidad de 50 rpm y encenderlo. Verificar que la aguja
indicadora del medidor de bamboleo se mueva en forma uniforme con cada bamboleo de la varilla,
iniciar el cronmetro y durante 30 s realizar la lectura del bamboleo, registrando el valor ms alto;
despus de los 30 s, apagar el control de velocidad, programarlo para una velocidad de 100 rpm,
encenderlo nuevamente y durante 30 s realizar la lectura del bamboleo, registrando el valor ms
alto. Despus de haber realizado el procedimiento anterior, quitar el medidor de bamboleo e
introducirlo en el orificio central del soporte (para medir el bamboleo a la altura de la paleta agitadora),

25

deslizar el medidor hasta que toque la parte superior de la paleta cuidando que la aguja indicadora
del medidor permanezca en el cero, apretar el tornillo del soporte para fijar el medidor. Realizar las
mediciones para velocidades de 50 y 100 rpm, guindose de las instrucciones dadas anteriormente
para las pruebas a la varilla. Repetir los procedimientos anteriores para cada una de las paletas
agitadoras restantes y anotar los resultados.

Figura 3. Instrumento de verificacin de bamboleo de la paleta agitadora

VERIFICACION DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS PALETAS AGITADORAS

Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. En la paleta agitadora del vaso
No. 1, colocar una etiqueta reflejante en una de las aletas y en la parte trasera de la misma, colocar
un pedazo de papel (para evitar doble lectura en el tacmetro). Montar la paleta y programar el
control de velocidad del disolutor para una velocidad de 50 rpm y encenderlo. Colocar el tacmetro
ptico a una distancia de 15 cm y con un grado de inclinacin de 20 de la etiqueta reflejante.
Presionar el botn de encendido del tacmetro y cuando las lecturas sean estables, iniciar el
cronmetro. Realizar lecturas durante 30 s, registrando el valor ms alto y el valor ms bajo de
velocidad. Repetir el procedimiento anterior a una velocidad de 100 rpm registrando los valores.
Repetir el procedimiento anterior para cada una de las paletas agitadoras restantes.
El disolutor Hanson se programa a una velocidad de 50, 100, 150 y 200 rpm.

Figura 4. Medicin de la velocidad de giro de las paletas agitadoras

26

Aparato No. 1
VERIFICACION DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA CANASTA AL FONDO DEL
VASO

Levantar la cubierta del disolutor y desmontar la paleta agitadora del vaso No. 1. Introducir en la
varilla con canasta el indicador de distancia, montar la varilla con canasta y cerrar la cubierta del
disolutor. Verificar que la orilla inferior de la canasta est dentro de las marcas del indicador. Realizar
el procedimiento anterior para cada uno de las varillas restantes.

VERIFICACION DEL BAMBOLEO DE LAS VARILLAS CON CANASTAS

Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. Introducir el calibrador de
acoplamiento con su abertura ms grande en el cople de la varilla con canasta para ajustar sus
laminillas, sacar el calibrador de acoplamiento e introducirlo nuevamente en el cople de la varilla con
canasta pero ahora con su abertura ms pequea, como se ajustaron en el bamboleo de las paletas
agitadoras (ver figura 3). Realizar el mismo procedimiento indicado para la determinacin de
bamboleo en las paletas agitadoras despus de ajustar las laminillas y registrar los resultados.

Figura 5. Medicin de bamboleo a la Figura 6. Medicin del bamboleo a la

altura de la varilla con canasta altura de la canasta

VERIFICACION DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS VARILLAS CON CANASTA

Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. En la paleta agitadora No. 1,
colocar una etiqueta reflejante en una de las varillas con canasta y montar la varilla con canasta.
Realizar el mismo procedimiento de la determinacin de velocidad en las paletas agitadoras y anotar
los resultados.
27

 Figura 7. Medicin de la velocidad de giro de las varillas con canastas

EXCENTRICIDAD (DISOLUTOR HANSON)

Encender el sistema en el orden siguiente: regulador de voltaje (en caso de contar con alguno)
y disolutor. Programarlo a una velocidad de 25 rpm. Utilizando un medidor de desplazamiento
calibrado y certificado, determinar el desplazamiento existente en el centro de cada vaso con
respecto al eje de rotacin de los aparatos 1 y 2 de disolucin que les correspondan. Los resultados
debern cumplir con los parmetros establecidos en la tabla de especificaciones mecnicas. Anotar
los resultados.

DIMENSIONES

Utilizando un vernier calibrado y certificado, realizar las mediciones especificadas en la tabla 4

de especificaciones de dimensiones.

28

5.2 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX Y HANSON

Material ver anexo I.

Criterios de aceptacin:

Tabla 5. Lmites del porcentaje disuelto de las tabletas USP Tipo No Desintegrantes de cido
Saliclico de 300 mg Lote: Q0D200

% DISUELTO
APARATO EN 30 MINUTOS A 100
RPM
Canastillas
23 - 30
(USP No. 1)
Paletas
17 - 25
(USP No. 2)

Tabla 6. Lmites del porcentaje disuelto de las tabletas USP Tipo Desintegrantes de Prednisona
de 10 mg Lote: P0E203

% DISUELTO
APARATO EN 30 MINUTOS A 100
RPM
Canastillas
47 - 82
(USP No. 1)
Paletas
30 - 57
(USP No. 2)

Calibracin con las tabletas Tipo desintegrante

CONDICIONES PARA EL ENSAYO:

Medio de disolucin: agua grado inyectable

Volumen de llenado: 500 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin 50 y/o 100 min-1 segn los especifique el certificado de la tableta.

PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PROBLEMAS

Introducir en cada uno de los 6 vasos de vidrio una tableta de Prednisona 10 mg USP con base
de lactosa y agitar durante 30 minutos. Tomar con la jeringa y el dispositivo para toma de muestras
20 ml de cada una de las muestras y filtrar con membrana Durapore HV 0.45 m, desechar los
primeros 5 ml de filtrado, el resto depositarlo en una vaso de precipitado. Tomar 10 ml de filtrado e
introducir en un matraz aforado de 50 ml, aforar con agua grado inyectable.
29

PREPARACIN DE LA SOLUCIN ESTNDAR (DISOLUTOR SOTAX AT7)

En un matraz aforado de 50 ml disolver 2 mg de Prednisona, Estndar USP (peso Std) con 5 ml

de Etanol GR y aforar con agua grado inyectable hasta la marca 10 ml, de esta solucin se aforan a
100 ml con agua grado inyectable.

Tomar las lecturas en el espectrofotmetro de las extinciones de las soluciones Estndar y

problema a 242 nm en celdas de cuarzo de 1 cm, contra un blanco de agua grado inyectable.

PREPARACIN DE LA SOLUCIN ESTNDAR (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS)

Pesar con exactitud aproximadamente de 20 mg de estndar de Prednisona; disolver en 10 ml

de etanol y aforar a 100 ml con agua. Realizar una dilucin de 10 en 100 ml con agua. Concentracin
final de activo de 20 g/ml, que equivale al 100.0% en comparacin con la concentracin a la que se
llega con las tabletas en el medio de disolucin.

CLCULOS (DISOLUTOR SOTAX AT7):

Abs1 x 500 x 50 x 100 x W Std x 10

% disuelto de Prednisona/Tab. = -----------------------------------------------
Abs2 x 1 x 10 x 50 x 100 x 10

Donde:
Abs1 = Extincin de la solucin problema
Abs2 = Extincin de la solucin estndar
W std = Peso real del estndar

CLCULOS (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS):

Abs1 x W std x P std x 100

% disuelto de Prednisona/Tab. = ---------------------------------------
Abs2 x W std terico
Donde:

Abs1 = Extincin de la solucin problema

Abs2 = Extincin de la solucin estndar
W std = Peso real del estndar
P std = Pureza del estndar
W std terico = Peso de estndar terico

30

Calibracin con las tabletas tipo no desintegrante

CONDICIONES PARA EL ENSAYO:

Medio de disolucin: Buffer-Fosfato 0.05M pH 7.40 0.05

Volumen de llenado: 900 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 50 y/o 100 min-1 segn lo especifique el certificado de las tabletas
calibradoras.

REACTIVOS

Solucin Buffer-Fosfato 0.05M pH 7.40

Pesar 68.04 g de dihidrgeno Fosfato de Potasio (KH2PO4) y 14.7 g de Hidrxido de sodio

(NaOH), disolver y aforar a 10 000 ml (10 litros) con agua grado inyectable.

PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PROBLEMA

Introducir en cada uno de los 6 vasos de vidrio una tableta de cido saliclico de 300 mg USP y
agitar durante 30 minutos. Tomar con la jeringa y el dispositivo para toma de muestras 20 ml de cada
una de las muestras y filtrar con membrana durapore HV 0.45 m, desechar los primeros 5 ml del
filtrado, el resto depositarlo en un vaso de precipitado. Tomar 10 ml de filtrado e introducir en un
matraz de 50 ml, aforar con solucin Buffer- Fosfato 0.05M.

PREPARACIN DE LA SOLUCIN ESTNDAR (DISOLUTOR SOTAX AT7)

En un matraz aforado de 50 ml disolver 3 mg de cido saliclico, Estndar USP (Peso Std),

adicionar con una pipeta 0.5 ml de Etanol GR y aforar con solucin Buffer-Fosfato 0.05M. Tomar 10
ml de esta solucin e introducir en una matraz de 50 ml, aforar con solucin Buffer-Fosfato 0.05M.

Tomar las lecturas en el espectrofotmetro de las absorbancias de las soluciones Estndar y

problema a 296 nm en celdas de cuarzo de 1 cm, contra un blanco de solucin Buffer-Fosfato 0.05M.

PREPARACIN DE LA SOLUCIN ESTNDAR (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS)

Pesar con exactitud aproximadamente 33.3 mg de estndar de cido saliclico y disolver en 1

ml de etanol y aforar a 100 ml con Buffer de Fosfatos. Realizar una dilucin de 10 en 100 ml con
agua. La concentracin final de activo de 333 g/ml, que equivale al 100.0% en comparacin con la
concentracin a la que se llega con las tabletas en el medio de disolucin.
31

CLCULOS (DISOLUTOR SOTAX AT7)

Abs1 x 900 x 50 x 100 x W Std x 10

% disuelto de Ac. saliclico/Tab. = --------------------------------------------------
Abs2 x 1 x 10 x 50 x 50 x 300

Donde:
Abs1 = Extincin de la solucin problema
Abs2 = Extincin de la solucin estndar
W std = Peso real del estndar

CLCULOS (DISOLUTOR HANSON SR8 PLUS)

Abs1 x W std x P std x 100

% disuelto de Ac. saliclico/Tab. = -----------------------------------------
Abs2 x W std terico
Donde:

Abs1 = Extincin de la solucin problema

Abs2 = Extincin de la solucin estndar
W std = Peso real del estndar
P std = Pureza del estndar
W std terico = Peso de estndar terico

5.3 METODOLOGIA DISOLUCIN DE LEVONORGESTREL (HPLC)

Material ver anexo I.

Equipos:
Los equipos utilizados en la presente validacin han sido calibrados, calificados y verificados, y
se detallan a continuacin:

Balanza analtica Sartorius BP-210-S

Microbalanza analtica Sartorius MC-5
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin (HPLC No.1) equipado con los siguientes mdulos:
Detector de Fluorescencia Modelo: 474 Marca: Waters
Detector UV Modelo: 486 Marca: Waters
Inyector automtico Modelo 717plus Marca: Waters
Bomba A Modelo: 510 Marca: Waters
Bomba B Modelo: 510 Marca: Waters
Vlvula de 10 vas Marca: Waters
Desgasificador de solventes Modelo: ERC Marca: Waters

32

 Disolutor Sotax AT7
Disolutor Hanson SR8 Plus
Software Empower 2
Termmetro Indicador de temperatura con RTD Marca: Kaye/Burs Engr Modelo: FTM-
100/604406
Tacmetro No: TAC-001 Marca: Jaquet, Modelo: DHO 907
Vernier Electrodigital: VER-009 Marca: Mitutoyo, Modelo: 9699
Material de vidrio en la cantidad necesaria para los ensayos (pipetas volumtricas, matraces
aforados, con certificado clase A), tulipanes para pesaje, etc.

Criterios de aceptacin:

Para las condiciones de disolucin

Parmetro analtico Criterios de aceptacin

Medio de disolucin Confirmar que el lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1 N
utilizado medio de disolucin evaluado es capaz de liberar
al principio activo Levonorgestrel. Q= 75%, t= 45 min
CV 10.0%.
Velocidad de agitacin Confirmar que la velocidad de agitacin (100 rpm) indicada
en el mtodo evaluado es la adecuada para la liberacin
del principio activo. Q= 75%, t= 45 min CV 10.0%

Para el mtodo HPLC

Parmetro analtico Criterios de aceptacin

Selectividad Confirmar que el mtodo evaluado es capaz de separar y
cuantificar las sustancias activas de los excipientes, sin
que exista interferencia de otras sustancias presentes.
Precisin del sistema CV 2.0%
Linealidad del sistema r 0.99
r2 0.98
CVFR 2.0%
Precisin del mtodo CV 3.0%
(Repetibilidad al 100%)
Estabilidad de la muestra La muestra es estable si, el intervalo de confianza (IC)
para la diferencia de la media de la muestra con respecto
a la media del anlisis inicial, incluye el valor de cero y/o
la magnitud del efecto (Factor I) no excede de 97.0 a
103.0%
Tolerancia La diferencia de los valores promedio entre el disolutor
Sotax y Hanson (valor absoluto) debe ser 3.0%
33

5.3.1 Procedimiento de disolucin

La disolucin del principio activo se realiza segn la F. Eur 2.9.3., USP <711>, y JP 6.10. La
determinacin posterior de los principios activos disueltos se realiza por HPLC en una columna de
fase inversa con conmutacin de columnas (F. Euro. 2.2.29, USP <621>, JP).
Realizar el anlisis de las muestras inmediatamente despus de la disolucin.

Condiciones de ensayo:

Aparato Aparato de paletas, segn la PH. Eur., USP

y JP
Nmero de muestras n= 6
Medio de disolucin Lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N
Volumen de llenado 900 ml
Temperatura 37C 0.5C
Velocidad de agitacin 100 rpm
Duracin de la prueba 45 min
Volumen de la prueba 10 ml
Filtracin S, descartar los primeros 6 ml

Tabla 7: Condiciones de ensayo del mtodo de disolucin de levonorgestrel grageas

Preparacin de las soluciones problema

Introducir 1 gragea en cada uno de los seis recipientes de vidrio que contienen 900 ml de medio
de disolucin preparado. Agitar hasta el tiempo de muestreo segn la especificacin. En el tiempo
indicado se toman 10 ml de solucin de cada recipiente de aparato de anlisis.
Filtrar separadamente alcuotas de 10 ml de cada solucin problema a travs de un filtro de
membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0.45 RC Whatman de dimetro de poro 0.45 m
usando una jeringa de 10 ml, desechar los primeros 6 ml.

Las soluciones lmpidas se usan como las soluciones problema.

Solucin de referencia R1
Lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin)

Preparacin de la solucin de referencia R2 (patrn al 100%)

Preparar una solucin con 0.333 g/ml (0.300 g/ml) de levonorgestrel disolviendo patrn de
trabajo de levonorgestrel en metanol grado cromatografico y diluyendo con R1 (medio de disolucin).
La cantidad mxima de metanol es 1.0% del volumen final R2= CR.

Ejemplo:
Pesar exactamente y disolver 3.333 mg (3.000 a 3.666 mg) de patrn de trabajo de
levonorgestrel en metanol grado cromatografico en un matraz aforado de 50 ml y aforar = Solucin A.

34

 Introducir 2.50 ml de la solucin A en un matraz aforado de 100 ml, se adicionan 38.0 ml de
metanol grado cromatografico, aforar con R1 (medio de disolucin) = solucin CR.

Preparacin de la solucin de referencia R3 (placebo)

Se transfiri una gragea placebo a un vaso del disolutor, previamente llenado con medio de
disolucin, y se agit por 30 minutos.

Condiciones de ensayo de HPLC

Volmenes de S1 a S6, R1, R2

Inyectados:
Secuencia de inyeccin:
Detector:
Columna de enriquecimiento:
Fase estacionaria:
Columna:
Fase estacionaria:
Fase mvil 1:
Fase mvil 2:
Caudal de la fase mvil 1:
Caudal de la fase mvil 2:
Temperatura de la columna:
Tiempo de adquisicin de datos:
Prueba de idoneidad del sistema:
100.0 l
R1, R2, S1 a S6, R2, R1
Detector UV a 242 nm
Acero, longitud 33 mm, dimetro interno 4.0 mm
Corasil C18, 37 a 55 m
Acero, longitud 10 cm, dimetro interno 4.0 mm
NovaPak, 4 mm
Agua grado inyectable
Acetonitrilo + Metanol + Agua
(350 + 150 + 500 ml)
Medir los volmenes separadamente y mezclar
2 ml por min
1.3 ml por min
25 3C
10 min
El coeficiente de variacin (CV) del rea de los picos de
levonorgestrel de 6 inyecciones de R2 no debe superar
3% para el pico de levonorgestrel (UV).

La inyeccin de R1 se usa para identificar los picos del

sistema.

El factor de simetra (T) del pico de levonorgestrel debe

estar entre 0.8 y 1.8.

Realizacin del HPLC

Purgar 100 l de cada una de las soluciones problema S1 a S6, o 100 l de la solucin de
referencia R2 del automuestrador con fase mvil 1 a travs de una vlvula de 6 vas en la columna de
enriquecimiento y concentrar. Conmutar la vlvula de 6 vas y separar la muestra en la columna
analtica con fase mvil 2.
Ver diagrama de flujo de la vlvula de 6 vas y los tiempos de conmutacin de las columnas.

35

Diagrama de flujo de la vlvula de 6 vas y tiempos de conmutacin de columnas

Bomba1
(Fasemvil
Ciclo 1:
Lavado
Auto

muestreador

Vlvula
automticade6
vas

Columna
(Fasemvil1)

Columna
analtica

Lavado Detector Sistemadedatos

Bomba1
(Fasemvil1)

Ciclo 2:
Auto
muestreador
Lavado

Vlvulade6vas
automtica

Columna
(Fasemvil1)
Columna
analtica

Bomba2
(Fasemvil2)

Lavado Sistemadedatos
BDetector
36

 Inicio Ciclo 1 Ciclo 2 Ciclo 3 Final

2 minutos 6 minutos 2 minutos

Ciclo 1: La muestra se transfiere a la columna de enriquecimiento usando fase mvil 1.

Ciclo 2: La vlvula se conmuta, la muestra se transfiere con la fase mvil 2 desde la columna de
enriquecimiento hasta la columna analtica y se separa.

Ciclo 3: La vlvula se pone en la posicin de partida, la fase mvil 1 fluye a travs de columna
de enriquecimiento y la fase mvil 2 fluye a travs de la columna analtica.

Figura No. 8 Esquema de trabajo de la vlvula de 6 vas en el HPLC

37

Clculos y resultados:

Al ingresar las variables de clculo al mtodo, se obtienen los resultados directamente por
generacin del Software Empower 2.

Disolucin de levonorgestrel en porcentaje, valores individuales

AS x C1 x FV x 100 x cR AS x C1 x FV x cR
= ------------------------------------ = ------------------------------
AR x C2 x 100 AR x C2

AS = reas de levonorgestrel en los cromatogramas de las soluciones problema S1 a S6 (en UA)

AR = reas de levonorgestrel en los cromatogramas de la solucin de referencia R2 (en UA)
C1 = contenido del patrn de trabajo de levonorgestrel (en porcentaje)
C2 = contenido declarado de levonorgestrel por comprimido recubierto (en mg)
cR = concentracin de levonorgestrel en R2 (en mg/ml)
FV = volumen de llenado en ml
UA = unidades de rea

Ensayo de adecuabilidad del sistema.

Previo a la validacin del mtodo analtico se realiza un ensayo de adecuabilidad del sistema, el
cual se realiz inyectando sucesivamente 6 veces la solucin estndar. Mediante la determinacin de
los siguientes parmetros cromatogrficos:

Nmero de platos tericos (N) mayor a 2000

Factor de simetra (T) entre 0.8 y 1.8
Coeficiente de variacin (RSD) 3%

Se comprobar el funcionamiento de: el sistema de bombeo, inyector y detector.

5.3.2 Evaluacin de las condiciones de disolucin del principio activo Levonorgestrel:

Los parmetros evaluados fueron:

Para las condiciones del ensayo de disolucin

Medio de disolucin: Probar la influencia del medio de disolucin (Lauril sulfato de

sodio 0.1% en HCl 0.1N) en el comprimido recubierto usando la condicin de pH
establecida en la norma de anlisis, del medio de disolucin lauril sulfato de sodio
0.1% en HCl 0.1N. Reportar la media, la desviacin estndar y el coeficiente de
variacin de los valores obtenidos, as como la grfica del perfil de disolucin.

Velocidad de agitacin: Desarrollar el perfil de disolucin con los adecuados puntos de

muestreo (15, 30 y 45 minutos) en Lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N, velocidad
de agitacin 100 rpm. Reportar la media, la desviacin estndar y el coeficiente de
variacin de los valores obtenidos, as como la grfica del perfil de disolucin.
38

5.3.3 Validacin del mtodo analtico por HPLC

De acuerdo a los criterios mencionados anteriormente, para el presente trabajo corresponde al

TIPO III, es decir se analizarn los siguientes parmetros:

1. Selectividad
Soluciones de anlisis: Solucin blanco (medio de disolucin)
Solucin placebo
Solucin de referencia
Solucin muestra

Preparacin del placebo:

Introducir 1 gragea placebo en uno de los seis recipientes de vidrio que contienen 900 ml de
medio de disolucin preparado. Agitar hasta el tiempo de muestreo segn la especificacin. En el
tiempo indicado tomar 10 ml de solucin de cada recipiente de aparato de anlisis.
Filtrar separadamente una alcuota de 10 ml de la solucin problema a travs de un filtro de
membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0.45 RC Whatman de dimetro de poro 0.45 m
usando una jeringa de 10 ml, desechar los primeros 6 ml.

La solucin lmpida se usa como la solucin problema.

Preparacin de la solucin de referencia:

Pesar exactamente y disolver 3.333 mg de patrn de trabajo de levonorgestrel en metanol para
cromatografa en un matraz aforado de 50 ml y aforar = Solucin A.

Introducir 2.50 ml de la solucin A en un matraz aforado de 100 ml, adicionar 38.0 ml de

metanol para cromatografa, aforar con R1 (medio de disolucin) = solucin cR.

Preparacin de la muestra:
Introducir 1 gragea en cada uno de los seis recipientes de vidrio que contienen 900 ml de medio
de disolucin preparado. Agitar hasta el tiempo de muestreo segn la especificacin. En el tiempo
indicado se toman 10 ml de solucin de cada recipiente del aparato de anlisis.
Filtrar separadamente alcuotas de 10 ml de cada solucin problema a travs de un filtro de
membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0.45 RC Whatman de dimetro de poro 0.45 m
usando una jeringa de 10 ml, desechar los primeros 6 ml.

Las soluciones lmpidas se usan como las soluciones problema.

Inyectar separadamente cada preparacin conforme a las condiciones cromatogrficas

indicadas en la norma de anlisis.
Reportar el tiempo de retencin de los componentes separados.

2. Precisin del sistema

Evaluar la precisin del sistema con seis inyecciones de solucin estndar al 100%.

39

Estndar al 100%:
Pesar exactamente y disolver 3.333 mg (3.000 a 3.666 mg) de patrn de trabajo de
levonorgestrel en metanol para cromatografa en un matraz aforado de 50 ml y aforar.

Introducir 2.50 ml de la solucin anterior en un matraz aforado de 100 ml, adicionar 38.0 ml de
metanol para cromatografa, aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N.

Calcular el coeficiente de variacin de las seis reas obtenidas.

3. Linealidad del sistema

Se determin construyendo una curva de calibracin utilizando 5 diluciones preparadas a partir
de la misma solucin patrn, se trabaj por duplicado para cada dilucin. El intervalo de
concentraciones medidas fue del 70 al 130% e incluy la concentracin seleccionada como el 100%;
es decir el rango de concentraciones estudiadas fue de 1.05 a 1.95 mg, considerando la
concentracin de 1.5 mg como el 100%.

Solucin Patrn:
En un matraz aforado de 100 ml se disuelven 3.400 mg de Levonorgestrel con metanol y
aforar. De esta solucin hacer diluciones por duplicado de acuerdo a lo siguiente:

Estndar al 70%:
Medir 3.5 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 100 ml, adicionar 38.0 ml de
metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1 N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00119 mg/ml.

Estndar al 80%:
Medir 1.0 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 25 ml, adicionar 9.5 ml de metanol
y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00136 mg/ml.

Estndar al 100%:
Medir 1.0 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 20 ml, adicionar 7.6 ml de metanol
y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00170 mg/ml.

Estndar al 120%:
Medir 3.0 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 50 ml, adicionar 19.0 ml de metanol
y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin: 0.00204
mg/ml.

Estndar al 130%:
Medir 6.5 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 100 ml, adicionar 38.0 ml de
metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00221 mg/ml.

40

 Reportar el coeficiente de correlacin (r), el coeficiente de determinacin (r2) y el coeficiente de
variacin (CV) del factor de respuesta, con las reas obtenidas.

4. Precisin del mtodo

Preparar una solucin stock de Levonorgestrel en metanol, pesando 15 mg de levonorgestrel en
un matraz aforado de 100 ml y transferir alcuotas de 10 ml correspondiendo aproximadamente al
contenido de Levonorgestrel, grageas junto con placebo gragea dentro de los vasos de disolucin
individualmente. Despus de llevar a volumen (total de 900 ml con medio de disolucin) agitar por 45
minutos a 100 rpm, filtrar las soluciones e inyectar bajo las condiciones cromatogrficas establecidas
en la norma de anlisis. Llevar a cabo la cuantificacin usando mtodo de calibracin con estndar
externo.
Calcular el coeficiente de variacin de los seis resultados obtenidos.

5. Estabilidad de la muestra
Soluciones de anlisis: preparar la solucin problema, por sextuplicado y analizar a la longitud
de onda indicada en la norma de anlisis. Reanalizar a las 24 horas de almacenamiento a
temperatura ambiente, usando el mismo estndar de referencia para muestras dependientes y/o
utilizando un estndar de referencia fresco para la realizacin del ensayo para muestras
independientes.
Nota: El anlisis y reanlisis debern ser llevados a cabo por el mismo analista en cada tiempo
de anlisis (0 y 24 horas).
Reportar el intervalo de confianza IC y la media del factor I.

6. Tolerancia
Preparar seis muestras de acuerdo a la norma de anlisis. Analizar las muestras usando
diferentes aparatos de disolucin: 1) Sotax, 2) Hanson. Analizar a las condiciones establecidas en la
norma de anlisis. Llevar a cabo la cuantificacin usando mtodo de calibracin externo.
Calcular el promedio de los seis valores obtenidos con cada disolutor.

41

6. RESULTADOS

6.1 CALIBRACION MECANICA DISOLUTOR SOTAX

REVISION GENERAL

La capacidad del fusible es de 10A.

Sistema mecnico todos los rotores y mandriles estn completos, el sistema de transmisin no
presenta desgaste, el disolutor funciona correctamente y se encuentra libre de vibraciones excesivas,
el sistema de control de velocidad corresponde a 50, 100 y 150 rpm.

VERIFICACIN DE LA TEMPERATURA DEL MEDIO EN LOS VASOS DEL DISOLUTOR SOTAX

Tabla 8. Verificacin de temperatura del medio de disolucin lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N
Temperatura C en los vasos (37 C 5C)
No. de vaso 1 2 3 4 5 6 7
36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9
37.0 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 37.0
36.9 36.9 36.9 37.0 36.9 36.9 36.9
Cumple

VERIFICACIN DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA PALETA AGITADORA AL

FONDO DEL VASO

Resultado: Cumple

Figura 9. Verificacin de la distancia de paletas agitadoras del disolutor

42

 VERIFICACIN DEL BAMBOLEO DE LAS VARILLAS Y PALETAS AGITADORAS

Tabla 9. Bamboleo de las varillas y paletas agitadoras disolutor Sotax AT7

Bamboleo rpm 1 2 3 4 5 6 7 Especificacin
50 0.14 0.15 0.21 0.21 0.13 0.15 0.16
Varillas
100 0.16 0.17 0.26 0.32 0.21 0.28 0.20
1 mm
50 0.11 0.10 0.09 0.28 0.23 0.20 0.23
Paletas
100 0.13 0.16 0.13 0.39 0.34 0.22 0.26
Cumple

VERIFICACIN DEL BAMBOLEO DE LAS VARILLAS CON CANASTAS

Tabla 10. Bamboleo de las varillas con canastillas disolutor Sotax AT7
Bamboleo rpm 1 2 3 4 5 6 7 Especificacin
Varilla sin 50 0.08 0.17 0.15 0.30 0.20 0.15 0.14
canastilla
100 0.11 0.20 0.27 0.36 0.26 0.18 0.16
Varilla 1 mm
50 0.18 0.46 0.13 0.28 0.12 0.11 0.13
con
canastilla 100 0.27 0.49 0.18 0.33 0.19 0.18 0.21
Cumple

VERIFICACIN DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS PALETAS AGITADORAS

Lmites: 50 rpm 2 rpm

100 rpm 4 rpm

Tabla 11. Velocidad de giro de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7
Paletas agitadoras
1 2 3 4 5 6 7 Limites
RPM
Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max

50 49.67 50.51 49.59 50.38 49.83 50.34 49.52 50.23 49.62 50.67 49.71 50.24 49.49 50.47 2 rpm

100 99.68 100.8 99.66 100.4 99.76 100.7 99.65 100.7 99.73 100.4 99.61 100.9 99.23 100.7 4 rpm

Cumple

43

 VERIFICACIN DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS VARILLAS CON CANASTAS

Tabla 12. Velocidad de giro de las varillas con canastas disolutor Sotax AT7
Varillas con Canastas
1 2 3 4 5 6 7 Limites
RPM
Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max

50 49.42 50.44 49.85 50.23 49.66 50.39 49.81 50.41 49.6 50.56 49.69 50.65 49.72 50.35 2 rpm

100 99.38 100.6 99.7 100.8 99.74 100.9 99.35 100.6 99.64 100.8 99.77 100.9 99.65 100.8 4 rpm

Cumple

VERIFICACIN DE LAS DIMENSIONES DE LAS PALETAS

Tabla13.Criteriosdeaceptacindelasdimensionesdelaspaletasdisolutor Sotax AT7

Criteriosdeaceptacin: mm

Dimetrodeleje 9.410.1
Espesordelahlice 3.05.0
Alturadelahlice 18.519.5
Cuerdamayor 74.075.0
Cuerdamenor 41.043.0

Tabla 14. Resultado de dimensiones de las Paletas del disolutor Sotax AT7

Paleta
Dimensiones 1 2 3 4 5 6 7
Dimetro del eje 9.9 9.91 9.89 9.91 9.93 9.9 9.96
Espesordelahlice 3.96 3.98 3.99 3.99 4.01 3.97 3.97
Alturadelahlice 19.03 18.97 19.01 19.04 18.97 18.96 19.03
Cuerdamayor 74.43 74.38 74.47 74.34 74.44 74.4 74.44
Cuerdamenor 41.96 41.94 41.73 41.92 42.05 42.03 41.98
Cumple

44

6.2 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX AT7

Calibracin con tabletas desintegrantes

Condiciones:
Medio de disolucin: Agua grado inyectable
Volumen del medio: 500 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 50 rpm
Tiempo: 30 minutos

Tabla 15. Resultados de disolucin tabletas de Prednisona

No. de Vaso
1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 1 58 69 62 55 65 62 47 82%
Aparato 2 39 44 39 40 38 40 37 70%
Cumple

Calibracin con tabletas no desintegrantes de cido saliclico

Condiciones:
Medio de disolucin: Solucin Buffer de fosfato pH 7.4 0.5
Volumen del medio: 900 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 100 rpm
Tiempo: 30 minutos

Tabla 16. Resultados de disolucin tabletas de Ac. saliclico

No. de Vaso
1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 1 25 25 26 25 27 25 23 30%
Aparato 2 19 18 19 20 18 20 17 25%
Cumple

45

6.3 CALIFICACION MECANICA DISOLUTOR HANSON:

Tabla 17. Resultados de temperatura del bao y velocidad de agitacin

PARAMETRO ESPECIFICACIN LMITES RESULTADOS

Nivel del instrumento Con respecto al plano horizontal NIVELADO NIVELADO
Temperatura 35C 0.5C 34.8C
Temperatura del bao Temperatura 37C 0.5C 36.9C
Temperatura 40C 0.5C 39.9C
Velocidad: 50 rpm 48 52 rpm 50 rpm
Velocidad: 100 rpm 96 104 rpm 100 rpm
Velocidad (rpm)
Velocidad: 150 rpm 144 156 rpm 150 rpm
Velocidad: 200 rpm 192 208 rpm 200 rpm

Tabla 18. Resultados de vibracin, altura, dimetro interno de los vasos y temperatura del medio de
disolucin

POSICION LMITES 1 2 3 4 5 6
VASOS Identificacin V1 V2 V3 V4 V5 V6
Vibracin No ms de 0.1 mils 0.012 0.008 0.010 0.010 0.010 0.018
Altura 160.0 210.0 mm 165.09 166.69 167.12 165.95 165.50 164.18
Dimetro interno 98.0 106.0 mm 104.38 103.65 103.03 104.54 103.41 103.63
Temperatura 37C 0.5C 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9

Tabla 19. Dimensiones de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7

PALETAS LMITES P1 P2 P3 P4 P5 P6
Excentricidad No ms de 2.0 mm 1.0 1.5 1.0 1.0 0.5 1.5
Bamboleo No ms de 1.0 mm 0.13 0.20 0.05 0.08 0.33 0.41
No ms de 1.0 mm
Altura con respecto al 23.0 27.0 mm 26.0 25.5 25.5 25.5 26.5 26.0
fondo del vaso
Dimetro del eje 9.4 10.1 mm 9.52 9.51 9.52 9.52 9.52 9.52
9.4 10.1 mm
Espesor de la hlice 3.0 5.0 mm 4.83 4.84 4.87 4.81 4.83 4.84
Altura de la hlice 18.5 19.5 mm 19.02 19.04 19.07 19.06 19.03 19.00
Cuerda menor 41.0 43.0 mm 42.25 42.43 42.42 41.89 42.42 42.36
Cuerda mayor 74.0 75.0 mm 74.53 74.53 74.54 74.54 74.51 74.54

46

6.4 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR HANSON SR8

Calibracin tipo desintegrante con tabletas de Prednisona

Condiciones:
Medio de disolucin: Agua grado inyectable
Volumen del medio: 500 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 50 rpm
Tiempo: 30 minutos

Tabla 20. Resultados de disolucin tabletas de Prednisona

1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 2 41.9 39.1 37.6 38.3 37.9 37.2 30 57%
Cumple

Calibracin tipo no desintegrante con tabletas de cido saliclico

Condiciones:
Medio de disolucin: Solucin Buffer de fosfato pH 7.4 0.5
Volumen del medio: 900 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 100 rpm
Tiempo: 30 minutos

Tabla 21. Resultados de disolucin tabletas de cido saliclico

1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 2 21.0 18.0 20.0 19.00 22.00 22.0 17 25%
Cumple

6.5 EVALUACION DE LAS CONDICIONES DE DISOLUCION DEL PRINCIPIO ACTIVO

LEVONORGESTREL

Medio de disolucin y Velocidad de agitacin

Se examin la influencia del medio de disolucin en la liberacin del principio activo de
Levonorgestrel gragea bajo la condicin del pH establecida en la norma de anlisis
No. S MX 029 S11.

47

 Para esto se desarroll un perfil de disolucin en lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1 N con
intervalos adecuados de muestreo (15, 30 y 45 minutos), la evaluacin se realiz a la velocidad de
agitacin de 100 rpm. Los resultados se presentan en la tabla siguiente:

Tabla 22. Perfil de disolucin de levonorgestrel grageas

Tiempo de disolucin
(minutos)
15 30 45
Levonorgestrel
(% terico declarado)
Muestra 1 95 98 98
Muestra 2 95 98 99
Muestra 3 94 98 98
Muestra 4 95 99 99
Muestra 5 92 97 98
Muestra 6 92 98 99
Media (%) 94 98 99
Desv. est. 1.47 0.63 0.55
C.V. (%) 1.57 0.65 0.56
Mnimo 92 97 98
Mximo 95 99 99

Figura 10. Grfica perfil de disolucin de Levonorgestrel disuelto en intervalos

de 15 a 45 minutos.

48

 Puede observarse una liberacin inmediata de levonorgestrel a los 15 minutos, sta puede
explicarse por la composicin del producto como gragea, la capa tiene que disolverse antes de que
ocurra la disolucin del principio activo. De conformidad con los resultados obtenidos el medio de
disolucin y la velocidad de agitacin son los adecuados para la disgregacin de los comprimidos
recubiertos. En el perfil de disolucin el volumen tomado del recipiente de disolucin no se sustituy,
la cantidad de principio activo disuelto se corrigi por clculo.

6.6 Parmetros de validacin del Mtodo HPLC

Selectividad

La selectividad fue evaluada con una solucin blanco (lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N,
una solucin placebo (Placebo gragea Lote: 1464), una solucin de referencia (estndar de
levonorgestrel al 100%) y una solucin muestra de levonorgestrel gragea Lote: 1004 (S), preparadas
de acuerdo a la norma de anlisis; se inyectaron separadamente y conforme a las condiciones
cromatogrficas indicadas en la norma de anlisis No. S MX 029 S11.

Tabla 23. Selectividad de los componentes relevantes, respuestas en tiempo de retencin.

Solventes, principio activo Tiempos de retencin

y excipiente (en minutos
Excipiente Levonorgestrel
(placebo)
1. Solucin blanco
------------ ------------
(R1-medio de dislucin)
2. Solucin placebo (R3) ------------ ------------
3. Solucin de referencia
------------ 7.647
(R2-estndar al 100%)
4. Solucin muestra
------------ 7.713
(S-Lote: 1004)

En los cromatogramas obtenidos de levonorgestrel presenta tiempo de retencin de

aproximadamente 7.713 minutos.

49

 SOLUCIN BLANCO (R1-MEDIO DE DISOLUCIN)

Figura 11. Cromatograma de solucin blanco

SOLUCIN PLACEBO (R3)

Figura 12. Cromatograma solucin placebo

50

 SOLUCION REFENCIA (R2-ESTANDAR AL 100%)

Figura 13. Cromatograma de solucion estndar

SOLUCION MUESTRA (S-Lote: 1004)

Figura 14. Cromatograma de solucin muestra

51

 Se confirm que el mtodo es capaz de separar y cuantificar la sustancia activa de los

excipientes sin que existiera interferencia de otras sustancias presentes, lo cual demostr la
selectividad adecuada del mtodo.

Precisin del sistema

La precisin del sistema fue evaluada con 6 inyecciones de 100 l de solucin estndar al
100% (solucin de referencia). Se evaluaron las reas estadsticamente.

Tabla 24 Evaluacin respuesta en unidades de rea del estndar de levonorgestrel

No. de Concentracin Respuesta

inyeccin Porcentual terica (Unidades de rea)
1 100.0 401448
2 100.0 404312
3 100.0 404765
4 100.0 404500
5 100.0 404926
6 100.0 405536
n 6
media 404248
s 1434.8
CV < 2.0% 0.4%

Precisin del mtodo

Repetibilidad al 100%

Se prepar una solucin patrn metanlica de Levonorgestrel (15 mg en 100 ml = 0.15

mg/ml correspondientes a aproximadamente el contenido declarado en el producto), de esta solucin
se tomaron alcuotas de 10 ml y se transfirieron seis veces junto con un comprimido placebo a seis
recipientes de disolucin distintos, se llev a un volumen de 900 ml. Posteriormente se trataron
conforme al ensayo de disolucin. Las soluciones filtradas se inyectaron despus de agitar durante 45
minutos.
Las condiciones para las 6 repeticiones fueron idnticas (mismo operador, mismo instrumento,
da y misma calibracin).
La cuantificacin se realiz usando un mtodo de calibracin con estndar externo
(Levonorgestrel).
Se calcul el coeficiente de variacin de los 6 resultados.

52

 Tabla 25. Porcentaje de recuperacin de levonorgestrel

Concentracin Concentracin % de
Adicionada Recuperada recobro
(mg/gragea) (mg/gragea)
1.500 1.512 101
1.500 1.503 100
1.500 1.513 101
1.500 1.516 101
1.500 1.503 100
1.500 1.518 101
n 6
media 100.7
s 0.5
CV < 3.0% 0.5%

Linealidad del sistema

La linealidad del sistema fue evaluada con 5 niveles de concentracin diferentes, utilizando
solucin estndar de Levonorgestrel en un rango de 70% a 130%. La preparacin de las soluciones
de prueba fue realizada por duplicado, considerando que la concentracin al 100% equivale a 0.0017
mg/ml, segn mtodo analtico. Las soluciones de prueba se prepararon por duplicado a cada nivel
de concentracin.

Preparacin de la solucin de Referencia:

En un matraz aforado de 100 ml se disuelven 3.400 mg (3.230 3.570 mg) de Levonorgestrel
estndar de trabajo en metanol para cromatografa y se lleva al aforo.

Preparacin de las soluciones estndares de trabajo:

De la solucin estndar de referencia de levonorgestrel, hacer diluciones por duplicado de
acuerdo al siguiente esquema:

Tabla 26. Linealidad del sistema

Porcentaje Alcuota Alcuota de Aforo Conc. (mg/ml) Concentracin Respuesta
de la metanol para con de porcentual (unidades
solucin cromatografa diluente* Levonorgestrel terica de rea)
Stock (X) (y)
70% 3.5 ml 38.0 ml 100 ml 0.00119 70A 296308
70B 304416
80% 1.0 ml 9.5 ml 25 ml 0.00136 80A 336622
80B 335725
100% 1.0 ml 7.6 ml 20 ml 0.00170 100A 419822
100B 418823
120% 3.0 ml 19.0 ml 50 ml 0.00204 120A 503864
120B 501144
130% 6.5 ml 38.0 ml 100 ml 0.00221 130A 551802
130B 544637
*Diluente: Lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin)

53

 La regresin lineal (concentracin en % / rea) fue calculada conforme al mtodo de mnimos
cuadrados usando las reas y concentraciones para cada inyeccin como rplica independiente.

LINEALIDADDELSISTEMA

CorridaA
RespuestaenUnidadesdeArea

y=4945.8x 106442 CorridaB

R=0.8576

R2=0.9986

y=4139.36x+ 7380.7

ConcentracinPorcentualTerica

Figura 15. Grafica de regresin lineal de Levonorgestrel en el rango de concentracin para

disolucin de 70.0% a 130.0%.

Datos estadsticos
Frmula de calibracin lineal y = a + bx
Ordenada al origen a = 7380.7
Pendiente b = 4139.36
Coeficiente de variacin = 0.930479
Coeficiente de determinacin = 0.998622
Coeficiente de correlacin = 0.999311

Los clculos estadisticos se realizaron con el software para anlisis estadistico de Validacin de
Mtodos Analticos (SAEVMA W-2.0).

Variacin de la concentracin de levonorgestrel.

El modelo lineal representa de manera correcta la relacin entre concentracin porcentual

terica y respuesta en unidades de rea, tambin es proporcional en el rango estudiado.
Los criterios de aceptacin se cumplen para el: CVFR 1.2 < 2.0%, r 1.00 > 0.99, r2 1.00 > 0.98.

Estabilidad de la muestra analitica

54

 Las estabilidad de la muestra analitica fue evaluada con un lote de levonorgestrel grageas. Se
preparar una solucin estndar y seis soluciones problema, las cuales fueron evaluadas
inmediatamente despus de su preparacin (tiempo cero), alicuotas de las soluciones se
almacenaron en matraces aforados de vidrio incoloro y transparente. Los matraces se conservaron a
aproximadamente 20C 2C (temperatura ambiente) con luz de da y fueron analizadas despus de
24 horas de almacenamiento bajo las mismas condiciones de operacin por el mismo analista.

Formulas

Intervalo de confianza: IC=(Yn Y0) t* x Spn2 (2/3) ; t* = 2.86

2S02 + 2S02
Varianza ponderada: sp2n = ----------------- ;
2(c + 1)

t* = Valor de la t de Dunnett con c comparaciones, 2(c + 1) grados de libertad y una

probabilidad acumulada de 0.975 =6 (equivalente al 95% de confianza).

Ver tabla de la distribucin t de Dunnett, en el anexo.

Media del factor I: I = In/N Factor I = (Yn / Y0) x 100

Resultados:

Tabla 27. Estabiliad de la muestra tiempo 0 y 24 h almacenamiento.

Anlisis inicial (Y0) A Temp. Ambiente (Y1)
% recobro % recobro
103 106
98 99
99 100
100 100
101 101
102 101
Media: Y0= 100.5000% Y1= 101.1667%
Varianza: S02= 3.5000 S12= 6.1667%
Sp2= Varianza ponderada Sp12= 3.2222
IC0 = intervalo Superior IC1= 4.8585
confianza Inferior IC1= -3.5251

El valor resultante del ensayo inicial se utiliz para comparar el valor del ensayo a las 24 horas de
almacenamiento.

55

 Tabla 28. Intervalo de confianza
I1 102.9
I2 101.0
I3 101.0
I0= Factor I0 I4 100.0
I5 100.0
I6 99.0
= Media del factor I 1= 100.7%

La diferencia de los valores promedio de Levonorgestrel de las soluciones problema S es menor

de 1%.

El intervalo de confianza (IC) 4.8585 a -3.5251 incluye el valor de cero y el Factor I1 = 100.7
no excede el 3%.

Los resultados obtenidos cumplen con lo establecido en los criterios de aceptacin, lo cual
demuestra la estabilidad de la solucin estndar y la solucin problema durante 24 horas de
almacenamiento, aproximadamente 20 2C (temperatura ambiente) con luz diurna.

No son necesarias precauciones especiales.

Tolerancia

Se prepararon 2 pares de seis muestras de Levonorgestrel grageas como se describe en la

norma de anlisis No. S MX 029 S11. Estas muestras se analizaron usando los aparatos de
disolucin: 1) Sotax, 2) Hanson. Se analizaron con las condiciones establecidas en la norma de
anlisis. La cuantificacin se realiz usando mtodo de calibracin con estndar externo.

Se calcul el valor promedio de los seis porcentajes resultantes.

Resultados:

Tabla 29. Comparacin de resultados disolutor Sotax (Equipo1) y Hanson (Equipo 2)

Equipo 1 Equipo 2
103% 103%
98% 98%
99% 99%
98% 100%
98% 101%
98% 102%
Media: 99.0% 100.5%

El resultado obtenido cumple con lo establecido en el criterio de aceptacin 1.5 < 3.0%. La
diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor del 3.0%.

56

7. DISCUSION

Los resultados obtenidos en la calibracin mecnica de los disolutores Sotax y Hanson cumplen
con los parmetros de temperatura, vibracin, altura de los aparatos 1 y 2 con respecto al fondo del
vaso, bamboleo, velocidad de giro, dimensiones (de vaso, eje, seguro de retencin, canastillas y
paletas) establecidos; as como tambin la calibracin analtica de las tabletas de cido saliclico (no
desintegrantes) y tabletas de prednisona (desintegrantes) cumplen con los lmites establecidos en los
certificados de dichas tabletas.

Se tienen registros de todos los pasos realizados durante el proceso de calibracin y los
certificados de los instrumentos y materiales utilizados.

En cuanto a la validacin de los parmetros de HPLC:

Selectividad.
El mtodo analtico es selectivo, porque los excipientes de la formulacin no interfieren en la
determinacin del principio activo ya que no se detecta ninguna respuesta significativa en el
cromatograma, obtenindose un tiempo de retencin a los 7.713 y 7.647 minutos de la solucin
muestra y de la solucin de referencia, mientras que la solucin blanco y placebo no muestran
ninguna respuesta en el tiempo indicado.
As mismo los tiempos de retencin son similares tanto para el estndar como para la muestra
(7.713 y 7.647 min).

Precisin.
El estudio de precisin del sistema mostr una buena repetibilidad de los resultados,
obtenindose una desviacin estndar relativa (RSD) de 0.4%, siendo el valor mximo de 2.0%.
El estudio de precisin del mtodo mostr una buena reproducibilidad de los resultados,
obtenindose una desviacin estndar relativa CV de 0.5%, siendo el valor mximo < 3.0%.

Linealidad del sistema.

Se analizaron las siguientes concentraciones: 70%, 80%, 100%, 120% y 130% (siendo el 100%
igual a 0.0017 mg/ml) las cuales al ser evaluadas estadsticamente, se observ que por el rango entre
70% y 130% se obtienen un coeficiente de correlacin r= 0.999311, siendo el valor mnimo de 0.99, y
un coeficiente de determinacin r2= 0.998622, siendo el valor mnimo de 0.98, lo que demuestra que
existe regresin (relacin lineal) entre las variables concentracin y sus respuestas.

Estabilidad de la muestra analtica.

La estabilidad de la muestra fue evaluada despus de 24 horas de almacenamiento, se calcul
el intervalo de confianza (IC) 4.8585 a -3.5251 para la diferencia de la media de la muestra con
respecto a la media del anlisis inicial, incluye el valor cero y/o la magnitud del efecto (Factor I)
100.7% no excede de 97.0% a 103.0%.

Tolerancia.
Se calcul el valor promedio de los seis porcentajes resultantes de cada equipo siendo el valor
1.5%, la diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor del 3.0%.
Todos los resultados obtenidos en la validacin del mtodo analtico permiten asegurar que el mtodo
analtico es confiable. De esta manera se comprob experimentalmente la utilidad del procedimiento
establecido para la validacin del mtodo analtico.

57

8. CONCLUSION

Los resultados obtenidos de la calibracin mecnica de los disolutores Sotax AT7 y Hanson
SR8 Plus cumplen con los parmetros establecidos as como tambin los resultados obtenidos de la
calibracin analtica cumplen con los lmites establecidos de % disuelto de las tabletas de cido
saliclico (no desintegrantes) y prednisona (desintegrantes).

Se tienen registrados todos los pasos realizados durante el proceso de calibracin, y de los
certificados de los instrumentos y materiales utilizados en el Informe de Calibracin de los disolutores
Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus.

Por lo tanto con base en toda la documentacin, registros obtenidos y resultados podemos
concluir que los disolutor SOTAX AT7 y el disolutor Hanson SR8 plus cumplen con los criterios de
aceptacin establecidos en la calificacin inicial y se encuentran aptos para realizar anlisis y
validaciones.

Al realizar la validacin del mtodo de disolucin de levonorgestrel grageas en el medio de

disolucin los resultados indican que el mtodo para cuantificar levonorgestrel es confiable.

Se establece que la metodologa analtica para levonorgestrel grageas es lineal en el intervalo

de concentracin estudiado debido al valor obtenido para el coeficiente de correlacin, tambin se
comprob la linealidad con el coeficiente de variacin de los factores de respuesta y se corrobor que
el valor de la pendiente es significativamente distinta de cero y que el intercepto no est
estadsticamente alejada del cero.

La metodologa aprob los ensayos de precisin del sistema y del mtodo al ser el C.V. menor
al 2% y aprob el ensayo de reproducibilidad al ser el C.V. menor al 3%, con lo que se concluye que
la metodologa es precisa.

La metodologa es selectiva frente a los excipientes, pues no se presentaron picos que

interfieran con el levonorgestrel.

Tambin se comprob que la solucin estndar y las muestras a la concentracin de trabajo

son estables durante 24 horas de almacenamiento; 20 2C (temperatura ambiente) con luz diurna.
No son necesarios precauciones especiales.

Los resultados obtenidos de la prueba de perfil de disolucin del medicamento conteniendo

levonorgestrel como principio activo muestran que el comportamiento de disolucin in vitro es
confiable ya que cumple satisfactoriamente con todos los criterios de aceptacin de validacin
reportados en la NOM-177-SSA-1-1998.

Se demostr que para el anlisis pueden utilizarse los equipos de disolucin SOTAX AT7 y
Hanson SR8 Plus ya que la prueba de tolerancia arrojo valores similares entre ambos, siendo la
diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor de 3.0%.

Por todos los resultados obtenidos queda demostrado que la metodologa cumple con los
parmetros mnimos descritos en la norma de anlisis No. S MX 029 S11 para la categora tipo III.

58

 9. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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Drogas Centro de Evaluacin e Investigacin de Drogas (CDER) (1997). Gua para la Industria
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4. Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2007, Buenas prcticas de fabricacin para

establecimientos de la industria qumico farmacutica dedicados a la fabricacin de
medicamentos.

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No. P2-LN-HP. Alemania. (2006)

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17. PNO para Operacin del disolutor Sotax AT7 No. S.PLM00567. (2008)

18. PNO para Uso del mdulo de bombeo Waters, modelo 510 No. S.PLM00586. (2008)

19. PNO para Operacin del inyector automtico Waters 717 No. S.PLM00700. (2007)

20. PNO para Empleo de sustancias estndares en Control de Calidad. No. S.PLM00781. (2008)

21. PNO para Uso del software SAEVMA-W2.0 utilizado para clculos estadsticos
No. S.PLM00854. (2008)

22. PNO para Operacin del detector de absorbancia variable UV/Vis Waters 486
No. S.PLM00883. (2007)

23. PNO para Operacin del disolutor Hanson SR8 Plus No. S.PLM02093. (2007)

24. PNO para Uso del Software cromatogrfico Empower 2 No. S.PLM00670 (2007)

25. PNO para Uso de los espectrofotmetros UV/Vis Cary 100 conc. y Cary 300 conc.
No. S.PLM00223 (2007)

26. Norma Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-1998, Que establece las pruebas y procedimientos para
demostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros
autorizados que realicen las pruebas.

27. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Estudios de perfiles de disolucin Novena
Edicin, (2009) pg. 2133.

28. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Validacin de procedimientos analticos Novena
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31. International Conference on Harmonization, ICH Harmonized Tripartite Guideline- Text on

Validation of Analytical Procedures: Methodology, Fed. Reg. (1996)

32. Castillo, A.C., Gonzlez, H.R., Protocolo para la validacin de mtodos analticos para la
cuantificacin de frmacos, Rev. Cubana Farm, (1997), 30(1)

33. Organizacin Mundial de la Salud. Comit de Expertos de la OMS en Especificaciones para las
Preparaciones Farmacuticas. (1992) 32 Informe, Anexo 5. Ginebra.

34. Alonso, J. Blanco J, Bustamante P, et al. Tecnologa Farmacutica. Madrid. Editorial sntesis. Vol.
2: Formas farmacuticas (1997)

60

35. Goodman y Gilman. Las bases farmacolgicas de la teraputica T. II pg. 798 8a edicin revisada,
Mc Graw Hill interamericana Editores S.A. de C.V. Mxico D.F. (1998)

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Farmacuticas Slidas. Pharmaceutical Technology en Espaol JULIO/AGOSTO (2007) Pg. 54
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JULIO/AGOSTO (2007) Pg. 34 38.

38. Plan de validacin del mtodo analtico para disolucin de PAE-1.5 mg y 0.75 mg, comprimido
recubierto No. VP_PV.PLM02209. Versin 0.1 (2007).

39. Informe de Validacin del mtodo analtico para disolucin de PAE 1.5 mg y 075 mg, comprimido
recubierto. No. VI_PV.PLM02433. Versin 0.1 (2008).

40. Gonzles-Martn, G. Fundamentos de Farmacia Clnica y Atencin Farmacutica. Ediciones

Universidad Catlica de Chile, 1 ed. (2004).

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61

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Drogas Centro de Evaluacin e investigacin de Frmacos (CDER) Excencin de los estudios de
biodisponibilidad y bioequivalencia in vivo para formas posolgicas orales slidas de liberacin
inmediata en base a un sistema de clasificacin biofarmacuticas. Gua para la industria (2000).

62

 ANEXO I

MATERIAL Y EQUIPO UTILIZADO EN LA CALIBRACION MECANICA DEL DISOLUTOR SOTAX Y

JANSON

Material:

Agua grado inyectable

Equipo:

Manual de operacin del disolutor SOTAX AT7 y HANSON SR8 PLUS

Cronmetro con certificado vigente de calibracin
Calibrador electrodigital con certificado vigente de calibracin
Indicador de temperatura con RTD con certificado vigente de calibracin
Multmetro digital
Kit de verificacin

MATERIAL UTILIZADO EN LA CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX Y JANSON

Material:

Tabletas de Prednisona 10 mg USP Lote:P0E203

Prednisona, Estndar USP Lote: N0E330
Tabletas de cido saliclico 300 mg USP Lote: Q0D200
cido saliclico, Estndar USP Lote: K0F112
Etanol GR
Agua grado inyectable
Buffer de fosfato 0.05 M pH 7.4 0.05
Membranas durapore HV 0.45 m, Millipore
Dispositivo de filtracin
Jeringas de plstico de 20 ml
Matraces aforados de 50 y 100 y 5000 ml
Pipetas volumtricas de 5 y 10 ml
Dispositivo para toma de muestras
Dihidrogeno fosfato de potasio Proveedor: J. T. Baker Lote: A45161
Hidrxido de sodio Proveedor: J. T. Baker Lote: L31481

63

MATERIAL UTILIZADO EN LA METODOLOGIA DISOLUCION DE LEVONORGESTREL (HPLC)

Material:

Acetonitrilo para cromatografa Proveedor: Burdik & Jackson Lote: CV962

Metanol para cromatografa Proveedor: Burdik & Jackson Lote: CV822
Agua para cromatografa (Grado inyectable) Lote: 24.05.08
Lauril sultato de sodio Proveedor Merck Lote: K36293334648
cido clorhdrico Proveedor: J.T. Baker Lote: C32C24
Estndar de trabajo de Levonorgestrel Proveedor: Bayer Schering Parma
Lote: AS2546
Levonorgestrel gragea Lote: 1004
Placebo gragea Lote: 1464
Membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0.45 RC de dimetro de poro 0.45 m Whatman

64

 ANEXO II

VALORES DE LA DISTRIBUCION "t" DE DUNNETT

CON UNA PROBABILIDAD ACUMULADA DE 0.975

COMPARACIONES

1 2 3 4 5 6 7 8 9
5.00 2.57 3.03 3.29 3.48 3.62 3.73 3.82 3.90 3.97
6.00 2.45 2.86 3.10 3.26 3.39 3.49 3.57 3.64 3.71
G 7.00 2.36 2.75 2.97 3.12 3.24 3.33 3.41 3.47 3.53
R 8.00 2.31 2.67 2.88 3.02 3.13 3.22 3.29 3.35 3.41
A 9.00 2.26 2.61 2.81 2.95 3.05 3.14 3.20 3.26 3.32
D
O 10.00 2.23 2.57 2.76 2.89 2.99 3.07 3.14 3.19 3.24
S 11.00 2.20 2.53 2.72 2.84 2.94 3.02 3.08 3.14 3.19
12.00 2.18 2.50 2.68 2.81 2.90 2.98 3.04 3.09 3.14
D 13.00 2.16 2.48 2.65 2.78 2.87 2.94 3.00 3.06 3.10
E 14.00 2.14 2.46 2.63 2.75 2.84 2.91 2.97 3.02 3.07

L 15.00 2.13 2.44 2.61 2.73 2.82 2.89 2.95 3.00 3.04
I 16.00 2.12 2.42 2.59 2.71 2.80 2.87 2.92 2.97 3.02
B 17.00 2.11 2.41 2.58 2.69 2.78 2.85 2.90 2.95 3.00
E 18.00 2.10 2.40 2.56 2.68 2.76 2.83 2.89 2.94 2.98
R 19.00 2.09 2.39 2.55 2.66 2.75 2.81 2.87 2.92 2.96
T
A 20.00 2.09 2.39 2.54 2.65 2.73 2.80 2.86 2.90 2.95
D 24.00 2.06 2.38 2.51 2.61 2.70 2.76 2.81 2.86 2.90
30.00 2.04 2.32 2.47 2.58 2.66 2.72 2.77 2.82 2.86
40.00 2.02 2.29 2.44 2.54 2.62 2.68 2.73 2.77 2.81
60.00 2.00 2.27 2.41 2.51 2.58 2.64 2.69 2.73 2.77

120.00 1.98 2.24 2.38 2.47 2.55 2.60 2.65 2.69 2.73
1.96 2.21 2.35 2.44 2.51 2.57 2.61 2.65 2.69

65

 ANEXO III

CERTIFICADOS DE MATERIALES DE LOS MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS

1. Certificado USP Estndar Prednisona

2. Certificado USP Tabletas de Prednisona
3. Certificado USP Estndar cido saliclico
4. Certificado USP Tabletas de cido saliclico
5. Certificado de Trazabilidad y Calibracin Distek Model 170 Center Chek Gauge 0 to 5 mm
6. Certificado de Trazabilidad y Calibracin Distek Model 180 Height Chek Gauge 21 to 29 mm
7. Informe de Calibracin Calibrador Digital
8. Certificado de Trazabilidad 10 Spindle Calibration Shaft
9. Certificado de inspeccin y calibracin QAIIC Satation Model 12-0550
10. Certificado de inspeccin y calibracin Speed Sensor, Wobble Gauge, Temperature Prob,
Level sensor, Vibration Sensor
11. Certificado de entrenamiento
12. Certificado de Calibracin Indicador de Temperatura con RTD de 100Q
13. Certificado de Calibracin Tacmetro digital
14. Certificado de Calibracin Cronometro digital
15. Certificado de Calibracin Indicador de temperatura tipo vstago fijo
16. Certificado de Calibracin Calibrador electrodigital

66

 67

 68

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 73

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 75

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 82

 83

 84

 85

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