El codigo genetico

1." poslcl6n 2.' posicion 3," posicion

18Xtremo 5'1 lextremo 3'1
! U C A G !
..... So, TV' e,. U

U -
Ph.
Leu
le'
So,
So,
S.,
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STOP
STOP
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L" Pm His A', U

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L., P'o GI. A', G

II. n" A,. S., U

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A II. Th, e
II. Th, L" A" A
M.l Th' L,_ A', G

V., AI. A,p GI, U

V.,
G
AI. A,p GI, e
V., AI. GI, GI, A
V., AI. GI, m, G

AmlnOlicidos y
SUS sfmbolos Codones
A AI. AI,nina GCA GCe GeG GCU
C c,. Cistelna UGC UGU
0 "'p Acido aspArtico GAe GAU
E GI, Acido glulamico GAA GAG
F Ph. Fenilatanina uue UUU
G GI, Glicine GGA GGe GGG GGU
H His Hiltidirnl CAC eAU
II. l~eucina AUA AUe AUU
K L,. lisil'la AAA AAG
L L" lauein. UUA UUG eUA cue eUG CUU
M Mot Metionlna AUG
N
P
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P,o
Asperagina
Prolin.
AAC
eeA
AAU
cce eCG ceu
a GI. Glutamine CAA CAG
R A" Arginine AGA AGG eGA eGe CGG eGU
s S., Serine AGe AGU UCA uee ueG ueu
T Thf Treonlna ACA AeC ACG ACU
V V., Valin. GUA GUe GUG GUU
W T", Tript6fano UGG
y TV' TIroslna UAe UAU
 -
BIOLOGIA MOLECULAR DE
-
LA ELULA
TERCERA EDICION

Bruce Alberts. Dennis Bray

Julian Lewis Martin Raff
Keith Roberts. James D. Watson

Traduddo poT

Meree Durforl i Call

Catednltica de Biologfa Celular Animal y Vegetal
de la Facultad de Biologfa
de 1a Universidad de Barcelona

Miquel Llobera i Sande

Catedriitico de Bioquimica y Bialag!a Molecular
de Iii Facultad de Biologfa
de 1a Universidad de Barcelona

EDICIONES OMEGA, S.A.

Plal6. 26 08006 Barcelona
BruceAlberlses DoclOr (Ph.D.) par la Universidad de Harvard y
actualmente es Presidente de la National Academy of SCiences y
Profesor de Bioqufmica y Bioffsica en la Universidad de California,
San Francisco. Denllis Brayes Doctor (Ph.D.) por el Massachusetts
Institute ofTechnology y actualmente esta becado por el Medical
Research Council en el Departamento de Zoologia de la Universidad
de Cambridge. Julian Lewis es Doctor (D.Phil.) por la Universidad de
Oxford y actualmente es Senior Scientist en la Imperial Cancer
Research Fund Developmental Biology Unit, de la Universidad de
Oxford. Marti" Raffes Doctor (M.D.) por la Universidad de McGill y
actualmente es Profesor del MRC Laboratory for Molecular Cell
Biology y del Biology Department University College de Londres.
Keith Roberlses Doctor (Ph.D.) por la Universidad de Cambridge y
actualmente es Director del Depanmem ofCel! Biology del John
Innes Institute de Norwich. James D. Watson es DoclOr (Ph.D.) por la
Universidad de Indiana y actualmente es Director del Cold Spring
Harbor Laboratory. Es autorde Molecular Biologyo[tlleGe/ley, con
Francis Crick y Maurice Wilkins, recibi6 el Premio Nobel de Medicina
y Fisiologfa en 1962.

En la traducci6n han colaborado: Ora. M. Gracia Bozzo,

Ora. Roser Pagan, Ora. Montserrat Poquet. Dr. Manuel Reina,
Dr. Josep Valero y Dr. Sen~n Vilar6.

Quedan rigurosamente prohibidas. sin la autorizaci6n escrita de los

titulares del "Copyright", bajo las sanciones establecidas en las leyes,
la reproducci6n total 0 parcial de esta obra por cualquier medio 0
procedimiento, cornprendidos la reprograffa y el tralamiemo
informatlco, y la distribuci6n de ejemplares de ella mediante alquiJer
o prestamo publicos, asf como la exportaci6n
e importaci6n de esos cjcmplares para su distribuci6n en vema, fuera
del ambito de la Comunidad Econ6mica Europea.
Aul.horized translation from English language edition
published by Garland Publishing. Inc.
MOLECULAR BIOLOGY OF THB CEll
CI993. 1989. 1994 by BruceAlbens, Dennis Bray, Julian Lewis,
Martin Raff, Keith Roberts and James D. Watson
y para la edici6n espanola
CI996 EdicionesOmega. SA, Barcelona
ISBN 84-282-101 I-X
DepOsito legal B. 23.553-96
Printed in Spain
Lnd. GrM. Ferr~ Olsina, SA - VlIadomat, 158-160 int. -08015 Barcelona
Cublcrta antcrlor: III fOlograffa muestra una libra
nerviosa de rala en cultlvo. Estl!. marcada con un
nuorocromo asociado a un anticuerpo que reconoce el
soma celular y las prolongaciones dendrftkas de la
cl!lulll (amarillo). Los tenninales nerviosos (verde) de
Olras neuronas (no visibles) que han eslablecido
sinapsis con la celula eslan marcados con un
anlicuerpo direrente. (Por conesra de Olar Mundigl y
Piclro de Camilli.)
Cubicna poslerior-Ios aUIOTeS, en orden alrabetico.
alravesando Abbey Road en Londres, yendo a comer.
La mayor parte de esla lercera edid6n Sf ha escrito en
una casa situada en el lingulo de la imagen. (FotografJa
de Richard Olivier.)
Dedkalorla: Gavin Borden, Ultimo presidente de
Garland Publishing. cunido durante Ia ascensi6n cerca
del Mount McKinley. a mediadosde 1980, oon Bruce
Alberts, autorde ~8iologra Molecu1ardc La celula~ y el
ramoso gufa de montatla Mugs Stwnp (1940-1992).
 fndice general
Caracterlsticas especiales xv
fndice de materias xvii
Agradecimientos xxxix
Nota allector xliii
Nota de Los traductores xlv
PARTE
i Introducci6n a la celuia I
1. La evoluci6n de la celula 3
2. Pequefias moleculas, energia y biosintesis 43
3. Macromoleculas: estructura, forma e informaci6n 93
, 4. C6mo se estudian las celulas 147
PARTE
Genetica molecular II
5. Funci6n de las proteinas 207
6. Mecanismos geneticos basicos 237
7. Tecnologia del DNA recombinante 313
8. El nueleo celular 359
9. EI control de la expresi6n genica 429
PARTE
Organizaci6n interna de la celuia III
10. Estructura de la membrana 509
11. T'ransporte de mohkuJas pequeflas a traves de la
membrana y base i6nica de la excitabilidad
de la membrana 541
12. Compartimientos intracelulares y clasificaci6n
de proteinas 589
13. Tea-fico vesicular mediante las rutas secretora
yendocftica 641
14. Conversi6n energetica: mitocondrias y cloroplastos 697
15. Transmisi6n de seflales entre celulas 771
16. EI citoesqueleto 843
17. El cicio de divisi6n celular 925
18. Los mecanismos de la divisi6n celular 977
PARTE
Las celulas en su contexto social IV
19. Adhesi6n celular, uniones celulares y matriz extracelular 1017
20. Celulas germinaJes y fecundaci6n 1083
21. Mecanismos celulares del desarrollo Illl
22. Celulas diferenciadas y conservaci6n de los tejidos 1219
23. EI sistema inmunitario 1279
24. Cancer 1345
, Glosario G-l
fndice alfabetico 1- J

xiii
Caracteristicas especiales
Panel I-I CluJas eucariotas: esquema de sus principales organulos 18-19
Panel 1-2 Modelos celu.lares y tejidos con los que estan construidas las plantas 5uperiores 30-31
Panel 1-3 Algunos de los diferentes lipos de celuJas existeOles en el cuerpo de un vertebrado 36-39
Tabla 2-1 Composici6n quImica aproximada de una ceJula bacleriana 45
Panel 2-1 Propiedades qufmicas del agua y su influencia sabre el componamienlo de las moleculas
biol6gicas 50-51
Panel 2-2 Enlaces y grupos qufmicos frecuentes en las moleculas biol6gicas 52-53
Panel 2-3 Algunos de los tipos de azucares encontrados habituaJrnente en las celulas 54-55
Panel 2-4 Algunos de los tipos de acidos grasos encontrados hahirualmente en las celulas
y las eslructuras que (annan 56-57
Panel 2-5 Los 20 aminoa.cidos que inlervienen en la sfnlesis de las prole[nas 58-59
Pane12-6 Resumen de los principales tipos de nucle6tidos y sus derivados existentes en las celuJas 6l>-61

Tabla 3-1 Composici6n quimica aproximada de una bacteria tfpica y de una oolula de mamffero tipica 94
Tabla 3-2 Enlaces qufmicos covalemes y no covalentes 95
Panel 3-1 Principales tipos de fuerzas no covalentes d~biles que unen las moleculas entre sf 96-97
Tabla 3-3 La relacion entre las diferencias de energfa libre y las conSlantes de equiHbrio 101

Panel 3-2 Estructuras del DNA y del RNA 104-105

Tabla 1J-I Comparacion de las conccmraciones i6nicas en cl interior y el exterior de una c~lula
de mamffero 542
,
Panel 11-1 Equilibrio del agua intracelular: el problema y su soluci6n 552
Panel 11-2 Deduction de la ecuaci6n de Nernst 562
Panel 11-3 Algunos experimentos c1asicos realizados en el axon gigante del caJamar 568
Tabla 12-1 Volumenes relativos ocupados por los principales compartimientos intracelulares
en una celula hepatica tipica (hepatocito) 591
Tabla 12-2 Cantidades relativas de tipos de membrana en dos cclulas eucariotas 591
Panel 12-1 Estudio de las secuencias sefial y de la translocaci6n de protefnas a traves de membranas 598
Panel 13-1 Estrategias utiJizadas para estudiar los mecanismos moleculares implicados
en el transporte vesicular 682-683
Panel 14-1 Energfa libre y reacciones biol6gicas 714-715
Panel 16-1 Polimerizacion de la actina y la tubuJina 682-883
Panel 18-1 los seis estadios de la division celular 982-983
Pane121-1 Revisi6n de genetica chisica 1148-1149
Panel 21-2 Caracterfsticas generales del desarrollo temprano de las plantas con nares 1189
CapftuJo 22 A~ndice CatAlogo de las c~luJas del cuerpo humano aduho 1271-1274

xv
.
Indice de materias

Introducci6n a la celula II Parte

Capitulo
La evolucl6n de la celula 1
Desde lIu moiecuJas huea la prlmet'a (;t!Jula , Las dlulas eucariOlas conrienen una rica dOlaci6n
Eo condiciones prebi6ticas se pueden formar mol~ulas
biol6gicas , de membranas internas
Las celulas eucariotas tienen un citoesqueleto '"
25
Pueden desllrrolJarse sistemas qufmicos complejo! en un
enlomo lllejado de su equilibria qufmico , Entre los prolOzoos se encuentran las cclulas mas
compleJas conocldliS 25
Los polinucle6tidos son capaces de dirigir su propia sllllesis 6 En las celulas eucariotas el material genctico esta
Las molkulas aUlorrepLicantes esllin somelidas II III selecci6n empaquetado de fonna compleja 26
natural 7 Resllmen 27
A1gunas mollkulas espedalizadas de RNA pueden catalizar
reacciones bioqufmicas 8 De las tt1ulas simples a los organlsmos plurk:elulares 27
La informad6n Ollyc desde los polinucle6lidos a los Las celulas se pueden asociar formando colonias 28
polipeplidos 8 Las dlulas de un organismo superior se especializan
las membranas definieron la primera relula 10 ycooperan 29
Todas las relulas aetuales utillzan el ON.... como La organizaci6n pluricelular depende de la cohesi6n
material hereditario 11 enlre las dlulas 32
Resumen 12 L.1S capas de dlulas epiteliales envuelven un medio lnterno
prolegldo 32
De los procarlolas a los ellcorlola! 12 La comunicaci6n cClulacelula controla es esquema
Las cl!lulas procariotas son estructuralmenlc simples espacial de los organismos pluricelulares 33
pero bioqulmicamente diversas 12 La memoria celular permile el desarrollo de palrones
Las reacciones metab6licas evolucionan l' complejos 34
Comparando secuencias de DNA se pueden dcducir Los programas b4sicos de desarrollo tienden a ser
relaciones evolutivas 15 conservados en Ia evolucidn 34
Las cianobaeterias pueden fijar CO, y N, 16 Las cclulas somaticas del cuerpo de los venebrados mueslran
Las baeterias pueden realizar la oxidaci6n aerdbica m4s de 200 lipos diferentcs de cspecJalizaci6n 36
de las moleculas nutritivas 17 Los genes pueden ser activados y desaclivados 37
Las c~lulas eucariOias poseen varios orgJinulos caracterfsticos 2<J Comparaciones entre secuencias revelan celllenares
Las c~lulas eucariOlas dependen de las rnitocondrias de familias de genes 110111610gos 37
para su rnetaboJismo oxldatlvo 21 Resumen '1
Los cloroplaslos son descendlenles de una celula procariola
incorporada 22 81bllograffa '1

Pequeiias moleculas, energia y sfntesis

Los componenlCS qulinkos de una dlula 43 las ~lulas oblienen energfa mediante la oxidaci6n
La qufmica celular se basa en los compueslos de carbono 43 de mol&:u1as biol6gicas 65
Las cclulas ulllizan cuatro ripos Msiros de molcculas pequel'ias 45 La dcgradaci6n de una molecula organica se reali:w
a trav~s de una secuencia de reacciones catallUldas
Los aztlcarcs son las moiccuilis alimenticilis de III celula 46 enzimll.ticamenle 66
Los acidos grasos son componellles de las membranas celulares 47 Parle de la energfa liberada en las reacciones de oxidaci6n
Los amlno4cldos son las subunldades de las prOlefnas 48 se acopla a la reacd6n de formaci6n de ATP 66
Los nucle6lidos son las subunidades del DNA y del RNA 49 La hidr6lisis del ATP genera orden en las clHulas 67
Resumen 62 Resumen 69

Orden biokSgk:oyenergta 62 FJ allmenlo y la obtenckSn de la energfa celular 69

El orden bioldgico resuha posible gTllcias a la Iibcrad6n Las moleculas alimentidas son degradadas en Ires etapas
de energfa calorffica por parte de las celu1as 63 para producir ATP 69
Los organismos fOiosintetizadores ulilizan la luz solar La g1ucolisis puede producir ATP incluso en ausencia de
para slnletizar compuestos organicos 63 oxfgeno 70
La energ(a qufmica pasa de las plantas a los anlmales 64 EI NADH es elintermediario central ell el catabolismo oxldativo 73

xvii
EI metabolismo esta dominado por el cicio del acido cltrico 74 Los~Irmeros biol6gicos se sinletlzan mediante la repeticiOn
En la fosfonlaciOn oxidatlva, la lransferencia de eleclrones e reacelones elemenlales de deshidratadOn 84
aJ oldgeno impulsa la formaciOn de ATP 75 Resumen 84
Los aminoacidos y los nucle6tidos forman pane del cicio del N 16 CoordlnackSn entre calaboUsmo y bk>5fnlesls B6
Resumen n El melabolismo esla organizado y regulado B6
U b50sntesls YI. cread6n de orden n Las vias metab6licas eslan reguladas a lraves de cambios
de la actlvidad enzimatica B6
El cambio de eneTgfa Iibre de una reaa:kSn determlna
sl bla puede producirse 0 no n Las reacdones catab6licas pueden revertirse mediante un
apone de energl'a 87
A menudo las reacdones de bios{nlesis eslan acopladas
dlrectamente a la hldr6tisis del ATP 78 Las enzimas pueden activarse e inhibirse mediante
modificaciones covalenles 89
Las coenzimas inlervienen en la lransferencia de
delenninados grupos quImicos 80 Las reacciones eslan companimenladas, lanto dentro de
las c~lulas como dentro de los organismos 89
La estruetura de las coenzimas sugiere que se formaron
en un mundo de RNA 81 Resllmen 91
La biosfntesls neceslta poder reductor 82 Blbllografia 91

Capffulo
MacromolecuIas: estructura, forma e informaci6n S
ProcesoI de reconoclmlento molecular 93 Los dominios est4n formadas par cadenas pollpeptldicas
Las interacclones especfficas de una macromolecula dependen que se pUegan adelante y atrlis. generando delgadas
de enlaces d~biles no covalentes 94 clrcunvoludones en la superflcle de la protefna 124
Una h~lice es un motivo estruetwal comun en las estrueturas De entre la gran cantidad de cadenas polipeptldicas posibles.
biol6gicas generadas a partir de subunidades repelidas 99 unicamente un nUmero relalivamenle pequeno de elias
lIegaria a ser util 125
La dlfusiOn es el primer paso hacia el reconoclmiento
molecular 99 Normalmenle las nuevas prolelnas se desarrollan por
aJ{eraciones menores de prolelnas antiguas 125
Los movimientos t~nnicos unen a las moiKulas y luego
las separan 99 Las nuevas prOlefnas pueden desarrollarse por recomblnaci6n
de dominios polipeptfdicos preexistentes 127
La constante de equilibria constiluye una medida de la
!uen.a de interacdOn entre dos moll!culas 100 Las homologlas estruetwales pueden contnbuir en la
asignaciOn de !undones a las prOlefnas descubienas
Los 'lomos y las molKulas se mueven mpidamente 101 recientemente 129
Los proccsos de reconocimienlo molecular nunea pueden Las subunidades proteicas pueden ensamblarse fonnando
ser perfectos 101 grandeseslrucluras 130
Resumen 102 Un solo [ipo de subunldad proleiea puede interacdonar
consigo misma fonnando agregados geom~lricos regulares 130
Addoanudclcos 102
A menudo las prOlefnas superenrolladas colaboran en la
Los genes estlin fonnados por DNA 102 conslrucdOn de grandes estruCIUras en las c~lulas 131
Las mol~culas de DNA consisten en dos largas cadenas Las proternas pueden ensamblarse rommndo laminas,
unidas por pares de bases complementarlas 103 tubos 0 esferas 132
La estructura del DNA proporclona una explicacl6n del Muchas estructuras celulares son capaces de aUloensamblarse 132
proceso de la herenda 106
No todas las estructuras biol6g1cas se forman por
Los errores en el proceso de replicaci6n del DNA generan autoensamblaje 134
mUlaclones 108
RC$ll/llcll 135
La secuencia de nucle6tidos de un gen delermina
[a secuencia de aminoaddos de una Ilrolelna 108 Las proteCnas como cataJlzadores 135
Portiones de la secuencla de DNA se copian en mollkulas La confomlaciOn de una proterna determlna sus propiedades
de RNA para gular la sfnlesis de protelnas 109 qurmicas 135
Las moll!culas de RNA de eucariolas son conadas El primer paso de la call1.lisis enzimll.tica es la uniOn del
y recombinadas, eliminandose secuencias intron 110 substrato 137
Las secuencias de nucle6tidos del mRNA son Mleldas~ Las enzimas aceleran las reacciones estabtlizando
en grupos de Ires y traducidas a aminoaddos 111 delenninados eslados de transickSn 138
Las moll!culas de !RNA emparejan los aminoicidos con Las enzimas pueden facililar Ia fonnaci6n y Ia rorura
los grupos de nucle6tidos III de enlaces covalenles a uav& de una calaIisis adda
El mensaje de RNA se lee de un enremo al otro por un y b4siea simultanea 139
ribosoma ll2 Ademlis, las enzimas pueden incrementar las velocidades
A1gunas molecu.las de RNA acruan como C81aJizadores 113 de reacciOn fonnando enlaces covalentes Intennedios
Resumen 116 con sus subslralos 140
las enzimas aceleran las reacciones qufmicas pero no
Esuuctun de lu prolefnas I 16 pueden hacerlas energ~tieamelllem's favorables 140
La fonna de una molecula proteica estll. detennlnada por l.as en7Jmas pueden delenninar el senlido de una vfa
la secuencia de sus aminOlicidos 116 acoplando detenninadas reacciones a la hidrOlisis del ATP 141
Diferentes cadenas proteicas presentan esquemas de Los complejos multienzimliticos ayudon a Incrementar
plegamiento 19uales 119 la velocldad del metabolismo celular 14 J
Las prolefnas son mol~ulas asombrosamente vers4tiles 120 Resumen 142
Las protefnas presentan diferentes nlveles de organlzaclOn
eSlructuraJ 122 Blhllografia 143

xviii (ndlce de materias

 C6mo se estudian las Hulas
Obscrvacl6n de la estructura de las celulas con el Fracdonamlenlo de las celuJas y anBJlsls de sus molllkuJas 172
mlcroscoplo 147 Los organulos y las macromoleculas pueden separarse
EI microscopio 6ptico puedc resolver detalles si/uados 1I por ultracentrifugaei6n 172
O,21.lffi de distancia 149 Los detalles moleculares de los procesos celulares
Para la observati6n microsc6pica, normalmcnte los tejldas complejos unicamente se pueden descifrar en sistemas
son fijados y seccionados 150 libres de celulas 174
Los diferentes componentes de la cc!lula pueden sec lenidos Las protefnas pueden separase mediante cromatograffa 176
selectivamente 151 Mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con
Mediante la microsc:;opia de tluorescencia se pueden localizar SOS pueden determinarse el tamano y la composicl6n
mo1E!culas cIllas celulas de forma especlfica 152 de subunidades de una prOlefna 179
Las celuJas vivas se pueden observar con nitldez en Wl Mediante electroforesis bidimensional sobre gel
microscopio de contraste de fases 0 de contcaste de pollacrilamida, se pueden resolver mas de
de fases interferencial 153 1000 protefnas sobre un mismo gel lei
Mediamc lecnicas elcctronieas [as im<1genes PUedCIl seT La hidr6lisis seleetiva de una proteina genera un
amplificadas yanalizadas 154 conjunto caracterfstico de fragmentos peptfdicos 183
Gracias aJ microscopio de barrido confocal es posible Mediante maquinas automatizadas pueden analizarse
abtencr imil.genes de complejos objetos secuencias cortas de aminoacidos 184
tridimensionales 155 La difracci6n de rayos X por cristales de prOlefna puede
El microscopio electr6nico resuelve la estruclura tina revelar la eS!nlctura exacta de una protema 185
de la cl!lula 157 Tambien se puede determinar la estructura molecular
Para poder ser estudiadas al microscopio electr6nico, utiJizando espectroscopia de resonancia magnetica
las muestras biol6gicas requieren una preparaci6n nuclear (NMR) 186
especial 159 Resumen 187
Mediante la microscopia electr6niea de barrido se
pueden obtener imagenes tridimensionales 161 Sigulendo el rastro y cuantLOeando las molllkulu
EI sombreado metalleo permile el examen a alta resoluci6n del Interior de las celulas 189
de delalles superficiales, mediante el microseopio Los atomos radiactivos pueden ser deteetados con una
electr6nieo de transmisi6n 162 gran sensibilidad 189
La mieroscopia electr6nica de criofraetura y la de grabado Los radiois6topos se utiJizan para marcar las moMculas
por eongelaci6n proporeionan una nueva visi6n en las celulas y en los organismos y seguirles la pisla 190
del interior celular 162 Las concentraciones de los iones se pueden medir mediante
La tinci6n negatlva y la microscopia crioeleetr6nica permlten electrodos intracelulares 191
observar macromoMculas a alta resoluci6n 163 Los cambios nl.pldos en las concentraciones i6nicas
Resumen 165 intracelulares se pueden medir mediante indicadores
emisores de luz 193
Aisiamento ycrecimlenlo de celulas en cuilivo 166
Existen diferentes sistemas que permiten introducir
Las celulas de un tejido pueden ser aisladas y separadas moleculas en una et'ilula para las que la membrana
en diversos tipos eelulares 166 cclular sea impermeable 194
Las eelulas pueden eultivarse en una plaea de cultivo 167 La activaci6n inducida por la luz de molllkulas
Los medios definidos qufmicamellle, libres de suero, precursoras "empaquetadas" facilita el estudio
permiten la identifieaci6n de factores de erecimienlo de la dinamica intracelular 197
especffieos 168 se pueden utiJizar anticuerpos para deteclar y aislar
Las Hneas eelulares eucariOias constituyen una fuente molt'iculas determinadas 197
ampliamente utilizada para la oblenci6n de celulas Las lineas celulares de hibridomas constiluyen una fucnte
homogeneas 169 pemlanente de anricuerpos monoclonales 199
Las celulas pueden fusionarse formando ctHulas Resumen 201
hJbridas 170
Resumen 172 BlbJlograffa 201

Parte
Genetica molecular II
l
Funci6n de las proteinas

I
(
Las protenas como maquinas
La uni6n de un ligando puede cambiar la conformaci6n
de una protefna
Amenudo cuando dos ligandos se unen a la misma proterna,
cada uno de ellos afecta la uni6n del otro
207

208

209
Las transiciones alostericas colaboran en la regulaci6n
del melabolismo
Amenudo las prote(nas forman agregados
slmetricos que sufren transiciones alostericas
eooperalivas
210

212
Dos ligandos cuyos lugares de uni6n estan acoplados La transici6n alostt'irlca de la aspartato transcarbamilasa
pucden afectar reciprocamente uno la uni6n del otto 210 se conoce a nivel at6mico 212

fndice de materlas xJx

La fosforilaci6n de prolefnas es un mecanismo para A menudo las protefnas fonnan grandes complejos que
dirigir transiciones alost~ricas en las c~lulas eucariotas 214 aetuan como mdquinas proteicas 225
Una c~lula eucariota coOlielle muchas prote(lla quinasas Resumen 225
y fosratasas 215
La eslruetura de la prOlefna quinasa Cdk mueslra de qu~ Nacimiento, ensamblaje y muerte de las protefnas 2.2fi
fonna una pr01eflla puede aetuar como un microchip 216 Se cree que las protefnas se pliegan a tram de un
Las prOlefnas que unen e hidrolizan GrP son reguladores intennediario globular fundido 226
celulares ubicuos 218 Las chaperonas moleculares facilhan el plegamiento
Otras protefnas controlan la actividad de las protefnas de las protefnas 227
que unenGTP, dClerminandosise ulleGDPo GTP 219 Muchas protelnas contienen series de moleculas plegadas
La transici6n alost~rica de la proteilla EF-Tu nlUCSlra de que de forma Independleme 229
mancra pequc~as moh!culas pueden generar grandes Los m6dulos confleren versatilidad y a menudo median
movimientos 219 las interacciones protelna-protefna 230
Protefnas que hldroli7.an ATP realizan trabajo mecdnico Las prolclnas puedcn unirse unas a otras a trawls de
en las celulas 221 diferentes lipas de inlenases 231
La estruCtura de la mlosina revela de que forma los muscuJos La conexi6n y la proteolisis selecliva aseguran los
generan fuerza 222 ensamblajes del tipo todo 0 nada 231
Protefnas alost~ricas unidas a membrana y dirigidas por ATP La proloolisis dependiente de ubiquitina es la responsable
puedell actuarcomo bombas i61licas 0 trabajar en sentido principal del recambio proteico selectivo en los eucariotas 232
inverso, sintetizando ATP 223 La vida media de una protefna puede ser detenninada
las transiciolles alostericas acopladas energ~ticamente por enzimas que alteran su extremo N 234
penniten a las protefnas actuar como motores, como Resumen 235
relotes, como factores de ensambla}e 0 como
transductores de infonnaci6n 224 BlbUografia 23S

capftulo
Mecanismos geneticos basicos 6
S(ntesls de RNA y de protefnas 237 La mayor!a de mUlaclones de las proternas resultan
La RNA potimerasa copia el DNA a RNA: el proceso de la perjudicialcs y son ellminadas por selecd6n natural 259
transcripd6n del DNA 238 I'ara que exista la vida tal como la conocemos, es necesario
SOlo se utilizan zonas scleccionadas de un cromosoma que se den estas bajas frecuencias de mutaci6n 260
para producir moleculas de RNA 241 EI hceho de que las frecuencias de mutaci6n sean bajas
las moleculas de RNA de rransferencia actuan como signilica que los organismos relacionados han de estar
adaptadores que traducen secuellcias de nude6tidos fomtados esencialmente por las mismas protefnas 260
a secuencias de prote[na 242 Si no fueran corregidas, las alteradones esponntneas del
Unas delenninadas enzimas acoplan cada aminrnicido DNA podrian cambiar rapidamente las secuencias del DNA 261
con su molb;ula aproplada de tRNA 243 La estabilidad de los genes depende de La reparaci6n del DNA 263
Los aminodcidos se van anadiendo al extremo carboxilo Las alteraclones del DNA pueden ser e1lminadas por mds
terminal de una cadena polipeptfdica en crecimiento 244 de una vla 263
EI c6digo genetioo es degenerado 245 Las celuJas pueden producirenzimas de reparaci6n de DNA
Los acontecimientos de la sfntesis proteica estdn catalizados en respuesta a las alteraciones del DNA 266
sobre 1.'1 ribosoma 246 La eSlructura y las propiedades qulmicas de la doble heUce
El ribosoma se desplaza, paso a paso, a 10 largo de la cadena del DNA hacen que sea facil de reparar 266
de mRNA 247 Resumen 268
Cuando 51.' a1canza uno de los tIes tipos de cod6n de
lenninaci6n, la cadena proteica se tibera del ribosoma 249 Mecanlsmos de replkacl6n del DNA 268
F.J proceso de iniciaci6n establece la paula de lcetum para Tal como ocurre para 1.'1 proceso de rCI>araci6n del DNA,
la s[ntesis proteica 249 el fundamento del proceso de replicaci6n es el
En celulas eucariotas, normal mente 5610 se sintetiza un tipo apareamiento de bases 268
de cadena polipeptldica sobre cada molecula de mRNA 252 La horquilla de replicaci6n del DNA es asim~trica 269
La unk'in de \'llrios ribosomas a una misma molecula de El elevado grado de fidelidad del mecanlsmo de replicaci6n
mRNA genera polirribosomas 253 del DNA requlere la eristenda de una meeanismo de
En los eucariotas. la yelocldad general de s[ntesis de ~correcci6n de galeradas- 270
protemas csta controlada por factores de Iniciaci6n 254 5610 la replicacl6n del DNA en direcci6n 5' a 3' pennite
La fidelidad de la s!ntesis de protemas estd incrementada la existencia de un eficieme procesos de correcd6n
gracias ados procesos independientcs de correcci6n deerrores 271
de galeradas 254 Una enzima especial que polimeriza nucle6tidos sinletiza
Muchos inhibidores de la s[ntesis de protcfnas en procariotas conas moleculas cebadoras de RNA sobre la cadena
resultan utiles como antibi6ticos 255 relTasada 272
lC6rno c\'OIucion6 eI proceso de la s!ntesis de prolefnas? 257 Vnas protelnas especiales ayudan a abrlr la doble Mllee
Resumen 257 del DNA por delante de la horquilla de replicaci6n 273
Una moh!cula de DNA polimerasa m6v11 se mallliene unida
Meeanlsmos de reparacl6n del DNA 258 al DNA mediante un alllllo deslizante 273
Las secuencias de DNA 51.' mantienen con un elevado grado En la horquilla de replicati6n. una serie de proternas cooperan
de fidelidad 258 entre sl fonnando una -mdquina de replicaci6n- 275
Las frecuencias de mutaci6n observadas en Iulas proliferativas Un sistema de correcci6n de galeradas que e1imina los errorell
son conslstenles con los vaIores evolutivos estimados 259 de replicaci6n producidos por la m4quina de repUcaci6n 276

xx [ndice de malerias
 las horqullJas de replicaclon se inician en el origen 277 VIrus, phlsmldos yelemcnlos genetlcos transponlbles 293
las DNA to~olsomerasas cvitan que el DNA se enrede Los virus son elementos gem!ticos moviles 293
durante a replicacion 278 La cubierta eKterior de un virus puede scr una capsidc
La replicacion del DNA en los eucariolas es blisicamente proteica 0 una envoltura membranosa 294
similar a la de los procariotas 280 Los genomas vfrlcos se presentan en una gran variedad
Resllmen 280 de formas vfricas y pueden ser tanto de DNA
como de RNA 29'
RecomblnacHSn geneUca
La re.;;ombinacion general esla guiada por interacciones
de apareamielllO de bases entre cadenas oomplementarias
"" Los cromosomas vfricos codifican enzimas implicadas
en la replicaeion de su licido nudeioo 296
de dos moltkulas homologas de DNA 282 Tanto los virus RNA como los virus DNA se replican mediante
la formacion de cadenas oomplemcntarias 297
La recomblnacion general puede iniciarse en una muesca
de una cadena de la doble helice de DNA 283 Los virus ulilizan la maquinaria de I..Uioo intracelular de
sus ctlulas hul!sped 298
Las reacciones de hibridacion del. DNA proporcionan un
modelo seneillo para la fase de apareamiento de bases Diferentes virus recubienos geman a panir de diferentes
en la recomblnacion general 294 membranas ululares 300
La prOlefna RccA pennite a una molOCula de una sola Los cromosomas vfricos pueden integnuse en los
cadena de DNA aparearse oon una region homologa eromosomas del huesped 301
de una doble helke en E. coli 285 La sfntesis continuada de algunas prolefnas vfricas puede
La recombinacidn genelica general habimalmenle mpone transfonnar a las celulas en cancerosas 301
lffi intercamblo cruzado de cadenas 0 entrecruzamienlo 287 Los \;rus lumorales RNA son relrovirus 302
La oonvenion Ink:a SoC produce combinando procesos de El virus del SIDA es un retrovirus 30<
recombinadon general y de s(ntesis limitada de DNA 287 Algunos elemenlos lransponib1es estan estrc.::hamente
Los mecanlsmos de correa:ion de efTOres pueden evilar relacionados con los retrovirus 305
la recombinadon genetk:a promlscua entre dos
secuencias de DNA mal apareadas Otros elementos lransponibles se transfieren directamente
288 a sf mlsmos desde un lugar a otro del gellOma 305
Enzimas de recombinaclon espedfica de lugar ponen y
quitan del genoma secuencias especiales de DNA Probablemenle la mayorfa de los virus evolucionaron a pamr
289 de plasmidos 306
La recombinacion lransposicional puede insenar un elememo
gem!lico movil en cualquier sccuencia de DNA
Resumen 307
291
Resumen 292 Bibllograaa 308

CapftulO
Tecnologfa del DNA recombinante 7
Fragmenl8c16n, scparacl6n y secuenclacl6n de molkulas Cionaje de DNA 331
deDNA 314 Se pucde conslruir una llbrerla de DNA utilizando veetores
Las endonucleasas de reslrlcclon oorlan las moJeculas de vCricos 0 veclores plasmfdicos 332
DNA en secuencias nucleolldicas espedficas 315 Dos lipos de Iibrerfas de DNA cubren diferemes propOsitos 333
Los mapas de restriccion muestran la distribucion de pequei'ias
secuenclas nucleotfdicas a 10 largo del eromosoma Los clones cDNA comienen secuendas codificantes
315 oolllinuas
Las moltkulas de DNA de diferentes tamai'ios pueden
separarse mediante la electroforesis en gel 317
Pueden pre parse librerlas cDNA a partir de poblaciones
selecclonadas de mol~ulas de mRNA
'"
335
Las moleculas purificadas de DNA pueden ser marcadas
ill vitro con radlois6topos 0 con marcadores qufmicos
Para idcntificar los clones de interes en una librerla de DNA
316 pucde utllizarse tanto una sonda DNA como un ensayo
los fragmenlos ;llslados de DNA pueden ser rapldamente para In prote[na expresada 335
secuenclados 31' La traduccion ill vilro faci!lta la identificaci6n del cIon de
Las huellas del DNA revelan loslugares donde las protefnas DNA correcto 337
se unen a la molecuta de DNA 320 La sel(.'Cc!on de clones DNA solapados permite "caminar"
Reswllf:1l 322 sabre el cromosoma hasta un gen vc.::mo de interes 337
IHbridacion de dcldos nuclelcos Se estdn construyendo librerfas genomicas de clones
322 ordenados para organlsrnos selecclonados 339
La hibridacion de ~cidos nucleicos proporclona un metodo
sensible para la delea:lon de secuencias de!erminadas El clonaje posiclonal de DNA revela la presencia de genes
de nucle6tidos de funciones imprevistas 340
323
Las lransrerencias Northern y Southern facilitan la hibridaclon Mediante una reaccion de polimerizacion en cadena se
oon moltkulas de ~cidos nudeicos separadas pueden donar segmemos de DNA en un tubo de ensayo 340
elcctrofore!icamenle 32< Resumen 341
El an~lisis de los polimorlismos de longitud de los fragmcmos
de reslrlccion (RFLP) facUita el aml.l.isis genelioo de los Ingenlerla de DNA 342
grandes genomas 32.

I
Se pueden constroir moleculas de DNA de cualquier secuencia
Las moleculas sinteticas de DNA facili!an el diagn6stico uniendo fragmentos de DNA 343
prenatal de enfermedades genl!licas 327 Es kSible producl~ndescantidades de molecuJ.as de RNA
La hibridaclon poco rigurosa pennile idenlificar genes omogeneas m "ante transcription de DNA in vitro 343
relaclonados de fonna indirecta 329 Utilizando \'eClores de expresion es posible producir grandes
Las lecnicas de hibridaeion in situ penni{en localizar cantidades de prolefnas celulares minoritarias 34'
secueneias espedficas de acidos nucleicos en los Los genes marcadores pennilen analizar la funcwn de 18$
cromosomas yen las ctlulas 330 secuencias de DNA reguladoras 345
Resumen 331 Los organismos mutanles revelan mejor la funciOn de un gen 345

(ndiee de materias
xxi
Pueden fabricaf5e "a rnedJda" Cl11ulas y organismos que Genes sometidos II ingenierfll genetica se pueden insenar
contengan genes altcrados 347 de forma pemlancnte en III linea genninal de un raldn
Los genes se puedcn redisei'iar para que produzcan o de III mosca del vlnagre. produciendo animales
prote/nas de cualquier sccucncia que se desce 347 nangenicos 351
HabifUalmeme las prOlefnas de fusi6n son de gran utilidad EI direcclonamlenlO gcnico hace posible ablener
para anaHzar III funci6n proteka 346 ratones trallsgenicos que carecen de delerminados
los genes nonnales son r;tcilmente reemplazables pot genes 353
mutantes, tanto en bacterias como ell algunos eucariotas Las phullas lransgenicas son imponantes tanto para III
inferiores 349 biologfa celular como para la agricuhura 355
Genes desarroUados por ingenlerfa genetica pueden Resllmen 356
crear mutaciones dominantes especfficas en los
organismos diploides 350 Blbllografl'a 356

El mlcleo celular
EI DNA crom0s6mico '/ su ftnpaquelamlenlo 361 Regiones distintas del mi5mo cromosoma se replican en
<:ada molkula de DNA que forma un cromosoma ha de diferente momento 385
contener un cenudmero, dos lel6meros y varios orfgenes La cromatina muy condensada se replica lardfamente en la fase
de replicilld6n 361 S, mienlras que la cromalina activa se replica temprano 386
La mayor parte del DNA Cfom0s6mico no codifica prote[nas Las unidades de replicad6n lardfas coinciden con las bandas
esenciales ni RNA 363 ficas en A-T en los cromosom3S metaflisicos 386
Cada gen produce una molkula de RNA 364 EI pandn ordenado de aClivaci6n de los orfgenes de
La comparacl6n enlre secuendas de DNA de organismos replicacl6n puede conlribuir a la memoria de la cl!lula 387
reladonados permile diferenciar enlre regiones de DNA Factores unidos a la cromatina aseguran que cada regi6n
de secuencia conservada y no conservada 366 del DNA 5610 se replique una~"CZ 388
Las histonas son las principales prolefnas eslruclurales A medida que el DNA se replica. se van ensamblando nuevas
en los cromosomas eucarlotas 366 hislonas en la cromatina 389
La asociaci6n de las hlslOnas con el DNA conduce a Los tel6meros son secuencias cortas. repetidas. ricas en G,
la fomlaci6n de los nucleosomas, las partfculas unitarias que se aftaden aI extremo de los cromosomas por acci6n
de 18 cromalina 367 de la telomerasa 389
La posici6n de los nucleosomas en el DNA viene determinada Resumell 390
por la lendencia del DNA a formar bucles eslrechos y por
la presencia de ol.ras prOle{nas de uni6n al DNA 368 SlolHI, y procesamlenlo del RNA 391
Habitualmente los nucleosomas se empaquetan con la Las RNA polimerasas illlercambian subunidades cuando
hlstona HI formando estruCIUros regulares de orden inlcian cada cadena de RNA 392
superior 369 En las cl!lulas eucarlotas, el RNA sintetiza por Ires RNA
Resume" 370 polimerasas dlferentes 393
La RNA polimerasa II transcribe algunas secuencias de
La eslructura global de los cromosomas 371 DNA mucho m:!.s frecuentemente que otras 393
Los cromosomas plumulados conllcnen bucles de cromatina Los precursores de los RNA mcnsajeros son modificados
descondensada 371 covalelllernellle en sus dos extremos 395
Tambicn se pueden apreciar domlnios eSlructurales El procesamicllIo del RNA elirnina largas secuencias
organizados en la crorml!Jn8 interfdslca en los nuc!eotldieas del Interior de las mol~culas de RNA 397
cromosonllls poliu!nlcos 373
Los transcritos hnRNA son inmcdlalamente recubiertos
Los dl{erentes domlnlos de la cromatlna de los cromosomas por prole[na y snRNP 396
po!itcnicos pueden empaquetarse y desempaquetarse
como una unidad 374 Las secuencias intrdnlcas se eUminan de las moltkulas
de RNA en forma de law 400
Es probable que tanto las bandas como las inlerbandas
de los cromOSOlllllS polltenicos contengan genes 375 Habltualmente de cada transcrito de RNA se eUminan
muchas secuenclas intr6nicas 401
La cromatlna est:!. menos condensada en las regiones que
son transcripcionalmente activas 376 \ esludio tie la talasemia revela de que forma 13 matluracldn
del RNA puetle pemlitir que las prote{nas evolucionen 402
La cromatina aCliva es bloqufmlcamelllc difcrente 3n Probablemente la maduraci6n del RNA calalizada por el
La heterocromalina esla muy condensada y es espliceosoma c~oolucion6 a partir de mecanismos de
transcripclonalmente Inaetiva 378 automaduraci6n 403
Los cromosomas mit61icos estdn formados porcromatina E1lranspone de los mRNA al citoplasma se retrasa hasta
en su forma mas condensada 378 que la maduraci6n se ha completado 404
Cada uno de los cromosomas mil61icos presenla un patron Los RNA rlbos6micos y los RNA de transferencia se sintellzan
caraclerislico de grandes dominios estruclUrales 380 sobre conjuntos de genes idl!nticos dispueslos en tiindem 405
Resumen 381 FJ nucleolo es una mdquina produclora de ribosomas 407
Replkad6n del cromosoma 382- FJ nucleolo es un subcompartimiento nuclear muy organizado 408
Secuencias espedflcas de DNA acnian como orfgenes Despub de cada mitosis, el nucloolo se ensambla de nuevo
de repUcad6n 382 en detenninados cromosomas 409
Un sistema eucariota libre de cl!lula5 replica el cromosoma Los cromosomas ocupan tenl1orios discretos en el ntlcleo
de un virus de simio 383 lnterfasico 410
Los origenes de replkad6n de los cromosomas eucariotas tEstt muyordenado el ntkleol 411
se aetivan en grupos 384 Resumen 412

xxii (ndice de materlas

Organlzacl6n y evolucl6n del genoma nuclear 413 Las seeuendas de DNA satelite no denen ninguna funeion
Los genomas se van ajustando de forma precisa por conocida 420
mUlaciones punluales y se remodelan radicalmente 0 La evoluei6n de los genomas se ha aeelerado
aumentan de tamano por reeombinaeion genetica 413 mediante ai menos Ires tipos de elementos
Las seeuencias repetidas en tlindem de DNA tienden a transponibles 421
permaneeer inaiteradas 414 Los elementos uansponibles afectan frecuentemenle a
La evoludon de la familia de ios genes de la globina muestra la regulaeion geniea 422
~ue las dupJieadones al azar eonlribuycn a la evoludon Las "explosiones de transposieion' provoean cambios
e los organismos 415 ealastroficos en los genomas e incrementan ia diversidad
Los genes que codlfican nuevasJ:rolelnas se pueden crear biol6gic<l 423
mediante la recombinacion e exones 417 Aproximadamente un diez por ciento del genoma
La mayorla de las protefnas se han originado probablemcnte humane consiste en dos familias de elementos
a partir de genes altamente fragmentados 417 transponibles 423
Una fraccion mayotitaria del DNA de los eucariotas superiores Resumen 424
eSlli fonnada pot seeuencias de nucleOtidos repetidas
y no codificantes 41' BlbUograffa 424

EI control de la expresl6n gcnlca

Inlroducel6n aI control genlco 429 La regulacion de la transcripcion en las celulas eucariOlas es
Los distintos tipos celulares de un organismo pluriceiuiar eompleja 449
contienen el mismo DNA 429 Las RNA polinlerasas eucariotas requieren facIO res de
Distintos tipos celulares sintelizan distintos conjuntos transcripcion generales 450
de protefnas 430 Los incrementadores 0 activadores controlan los genes
Un celula puede cambiar la expresi6n de sus genes a distancia 451
como respuesta a sel\ales extemas 431 Una regi6n de control eucariota estli farmada por un
La expresion genica se puede reguiar en muehas de las etapas promOlor y por las secuencias de DNA reguladoras 452
de la vra que conduce desde el DNA al RNA Y a las protelnas 431 Muchas prote[nas aClivadoras aceletan el ensamblaje de
Resumen 432 los facIO res generales de transcripcion 453
Las protefnas represoras p\leden inhibir la transcripcion
Mallvos estructurales de unl6n a DNA en IllS prote(nllS de diferentes formas 454
de regulacl6n genlea 432 Las protefnas reguladoras de genes de celulas eueariotas
Las prolefnas de regulacion genica se descubrieron ftecuentemente se ensamblan formando pequenos
utillzando tecnicas de genetica bacteriana 432 complejos sobre el DNA 454
El eXlerior de la heliee de DNA puede ser lefdo por prolefnas 433 Los comple/'os interruplOres geneticos que regulan el
La geometrla de la doble heliee de DNA depende de la desarrol 0 de DrosoplJila estlin formados por modulos
secuenda de nucleotidos 433 menores 456
Secuendas cortas de DNA son eomponentes fundamenlales EI gen eve de Drosophila estli regulado por conlroles
de los interruptores geneticos 435 combinatorios 457
Las protefnas de reguJacion genica contienen motivos En mamfferos las regiones de control tambil!n estan formadas
estructuraJes que pueden leer secuencias de DNA 435 a partir de modulos reguladores sencillos 458
EI motivo helice-giro-heliee es uno de los motivos de union Asu vez, la actividad de una protefna de regulacion genica
a DNA mlis simples y comunes 437 puede estar regulada 459
Las prote(nas de homeodominios son una clase especial de Las bacterias ulilizan subunidades intereambiables de la RNA
protefnas helice-giro-heliee 438 polimerasa para colaborar en el control de la transcripci6n
genica 460
Existen diferentes tipos de motivos de union a DNA en forma
de dedos de zinc 439 Los interruplores geneticos han evolucionado
gradualmente 461
Las lliminas ~ tambicn pueden reeonoeer el DNA 440
Resumen 461
EI motivo cremallera de leucina estli implicado tanlO en ei
reconocimiento del DNA como en la dimerizacion 440 ESlruetura de la cromatlnft y el control de la expresl6n
El motlvo helice-bucle-helice lambil!n esta implicado en gcnlca 462
la dimerizaci6n y la union al DNA 442 La transcripcion del DNA que estli empaquelado en
Aun no es posible predecir la secuencia de DNA que es nucleosomas se puede aetivar 463
reconocida por una protefna reguladora 442 Algunas formas de la cromatina impiden la transctipclon 463
Un ensayo de movilidad en gel permite deteclar COil gran Antes de que los genes de globina de mamffero puedan
facilidad prolelnas que se unen a una secuellcia especffica lranscribirse, puede ser necesaria una etapa de
de DNA 443 descondensacion 465
La cromatograffa de afinidad de DNA facilita la purifieacion No se eonocen los mecanismos que forman la cromatina
de protelnas de union a secuenclas especlficas de DNA 444 aetiva 466
Resumen 445 La tension superhelicoidal del DNA permite la acci6n a
distancia 467
C6mo funclonan los Inlerruptores genl!dcos 445
Resumen 469
El represor de lripl6fano es un interruplor simple que
aCliva y desactiva genes en bacterias 446 Mecanlsmos genetlcos que ortglnan lipos celulares
Los aetivadores Iranscripcionaies activan los genes 447 elIpeclallzados 469
Un activador transcripcional y un represor Itanscripcional Los cambios de fase de las bacterias son provocados
comrolan el operon lac 448 por teorganizaciones del DNA 469

fndice de materias xxiii

En levaduras, a1gunas prolefnas reguladoras delerminan Un cambio en el punto de rolura del transcrito de RNA y
Ia identidad del tipo celular 470 la adki6n de poli-A puede cambiar eI extremo carboxilo
Dos prolefnas f4gicas que se reprimen mUlUamente MJ sfntesis
terminal de una prmerna 486
delerminan el. eslado del baeleri6fago lambda 4n La definlci6n de gen se ha de modi6car debido aI
La expresi6n de una prole{na reguladora erftica puede descubrimienlo de la maduraci6n ahemativa del RNA 487
disparar la expresi6n de una baterfa de genes siluados E1lranspone de RNA desde el n6c1eo puede ser regulado 486
pordebajo (en direcd6n 3') 474 Algunos RNA estan localizados en regiones especfficas del
EI control g~nlco combinatorlo cs la norma en los eucariotas 475 eitoplasma 489
se hereda un cromosoma X Inactlvo 476 La edicl6n del RNA puede cambiar el sentldo del mensaJe
del HNA 490
Los genes de Drosopllihl y de Icvadura lambh!n pueden
inaelivarse por caraelerislicas heredharias de su Las celulas eueariOlas Yprocariotas utilizan estrategias
eslrUctura eromalfnica 478 diferentes para especificar ellugar de lnldo de la
traducd6n en una mollX;ula de mRNA 492
Cuando las celulas de \'enebrados se dividen, puedcn
heredar el palron de metUad6n del DNA 479 La fosforUad6n de un factor de iniciaci6n regula la sfnlesis
de prolefnas 493
En las celulas de los venebrados la metilaci6n del DNA
refueru las decisiones del desarrollo 480 Las prole[nas que se unen a la regi6n 5' Ifder de los mRNA
intervienen en el oontrol traduccional negative 494
La aetividad gen6mica heredable requiere melilaci6n
del DNA 481 La expresi6n g~nica put.ode eslar controlada por variaciones
de la estabilidad del mRNA 495
En los marnfreros, las islas rieas en CG estan asociadas La degradaci6n selecliva del mRNA estl1 acoplada a la
con alrededor de 40 000 genes 482
496
traducci6n
ReSll/llell 483
EI control citoplasmtilico de la longilud de las cadenas de
pali.A pueden afectar lal110 la lraduccl6n como la
Controles poSI-transcripctonaJes 484 eslabilidad del mRNA 497
La atenuaei6n de la transcripcl6n causa una lerminaci6n Algunos mRNA contienen seftales de reconocimiento que
lemprana de a1gunas molEculas de RNA 484 interrumpen el proceso normal de la traducci6n 498
La madurad6n altemativa del. RNA puede producir direrentes Es muy probable que las reacciones catalizadas por RNA
foemas de protei:na a panir de un mismo gen 484 tengan un origen muy antiguo 499
La delerminaci6n del sexo en Drosophila depende de una Resumen 499
serie de procesos de maduraci6n a1lernaliva reglJlada
del RNA 485 Blbliograffa 500

Organizaci6n interna de la celula

CaphuJo
Estructura de la membrana 10
La bleapa IIpfdlca 510 La g1ucoforina atraviesa la bicapa Iipfdica del g16bulo rojo,
Los llpidos de las membranas son moleculns anfipaticas formando una h~lice U sencilla 526
que eSpanlaneamente forman bicapas 510 La banda 3 de la membrana celular del eritrocito es ulla
La hicapa lipldlca es un fluido hidimensional 511 prOlefna de membrana multipaso que eataliza el
cotransporle anl6nico 527
La fluidez de una bicapa lipldica depende de su
compasici6n 513 La baclcriorrodopsina es una bomba de I>rolones
que alraviesa In blcapa en forma de siete
La bicapa Iipfdica es asimelrica 514 helices U 528
En la superficie de ladas las membranas plasm~ticas Las parinas son protefnas transmembrann formadoras
hay g1ucolfpidos 516 de canales que ernl4n la membrana en forma de
Resume'l 517 un barril II 530
Las prolelnas de membrana aCluan a menudo como
Protefnas de membrana 517 grandes oomplejos 531
Las prolelnas de membrana pueden eslar asociadas a Muchas protelnas de membrana difunden en el plano
la bicapa lipfdica de varias maneras 518 de la membrana 531
se considera que, en la mayorfa de prote(nas Las c~lulas pueden connnar a lipidos y a protelnas en
transmemhrana, las regiones de la cadena polipeplldiea dorninios especfncos de la membrana 534
que CrU7.mlla bicapa lipfdlea presenlan una La superficie celular estli recubierta con residuos
eonformaci6n en heliee a 519 de azucar 535
Las prolefnas de membrana I>ueden solubilizarse y Las selectinas son protefnas de membrana que se
purificarse mediante detergentes 521 unen a carbohidratos de la superficie celular y que
E1lado citoplasm~tico de las protelnas de membrana se median adhesiones celulares transitorias en el torrente
puede estudiar en "fantasmas de eriuociw 522 sangufneo 536
La espe<:trina es una protefna del citoesquelelo asociada Resumen 538
no covalelllemente a la cara ciloplasmtilica de la
membrana del erilrocilo 524 BiblJograffa 538

xxiv fndice de materlas

Transporte de moIecuJas pequefias a traves de la membrana
y base i6nica de la excitabilidad de la membrana
Princlpios de InullIIporte. tram de membrana 542 El potencial de membrana de las cilulas animales
Las bicapas Upfdicas libres de prOlcfna son alIa mente depende prindpalmentc de los canales de fuga de K' y del
lmpermeables a los lones 542 gradiente de I{' a traves de 18 membrana plasml'itlca 500
Existcn dos c1ases principalcs de protcfnas de lransporte Cuando se para la bomba de Na'K', el pOlencial de
a trav~ de membrana: protcfnas Iransponadoras reposos 5610 decae Icnlamenle 561
y prolefnas de canal 543 La unci6n de una Q!lula nerviosa depende de su
EJ transpone activo esla mediado por protcmas esuuctura alargada 563
lransportadoras aoopladas a una fuente energetica 543 los canales i6nlcos regulados por voltajc son los
La tecnologCa del DNA recombinante ha revolucionado responsables de la generaci6n de pOienciales
cl estudlo de las prolefnas de lranslXlrte a trav~s de acci6n en celulas excitables eleclricamente 565
de membrana 544 la mieUnizacion incrementa la velocldad y la eflclencla
Se pueden utiLizaJ" ionororos como herramientas para de la propagacion de los potenciales de accion en las
incrementar la permeabUidad de las membranas c~lulas nerviosas 567
a detennlnados iones 545 El reglstro de zona indica que cada uno de los canales
Resumen 54. de Na' se abre siguiendo la ley deltodo 0 nada 567
Los canales cationicos regulados por voltaje eSl4n
Prolefnas transportadoras y Iransporte activo a leavb relaclonados evoluliva yestrucluralmcnte 570
de membrana 547 En las sinapsis qufmicas los canales ionicos regulados
la bombas Na'-K' de la membrana plasm4lica es por IranSmisor lransforman senales qufmicas
unaATPasa 548 en senales elecmcas on
la ATPasa de Na'-K' es necesarla para manlener el equilibrio Las sinapsis qufmicas pueden ser excitadoras
osm6tico y estabilizarel volumen celular 550 o inhibidoras 573
A1gunas bombas de ca1, tambl~n son ATPasas unidas a Los reccplOres de acetJlcolina de las uniones
membrana 551 neuromus<;ulares son canales calidnicos reguJados
A1gunas enzimas Iigadas a membrana que sintelizan ATP son por transmisor 574
ATPasas de transpone que setuan en sentido Opueslo 5S3 los canales i6nicos r~ados por transmlsor son
Eluansporte activo puede ser Impulsado por gradientes las dianas principa es de la acci6n de drogas
idnicos 553 pslcoaetivas 575
las protcfnas de transpone impulsado por Na' de la la transmisidn neuromuscular implica la activaci6n
membrana plasm4lica regulan el pH citosdlico 554 secuencial de aI menos cualro grupos de canales i6nicos
En las d!1u.las epiteliales, la dlstrihucl6n asim~trlca regulados on
de protefnas uansponadoras pennite el uanspone El potencial poslin4ptico principal de una newona
lranscelular de solutos 555 reprCSCnl3 la suma espacial y temporal de muchos
A1gunas ATPasas lransportadoras de membrana son pe<Juenos polenciales poslsinapticos 578
hom61ogas a lasATPasas transportadoras de eucariotas, La integracidn neuronal requicre la combinaci6n de al
que particlpan en la resistencla a drogas y en la fibrosis menos tres tlpos de canales de K' diferentcs 580
qufstica: la superfamilia de lransponadores ABC 555 La potenciaclon a largo plaza en el hipocampo de los
Resumen 558 mamfferos depende de la entrada de Ca1. a tra~
de canales receptores NMDA 582
Canales IdnJros y prop'edades elearicas de las membnmas 558 Resumen 584
Los canales idnicos son selectivos para el ion y nuctuan entre
estados abiertos y cerrados 559 Blbllograf!a 565

CapI.uIo
Compartlm.ientos intracelulares y clasificaci6n de prote(nas 12
La conlpartlmentacl6n de las dlulas 8uperiore$ 589 Unas senales de localizacl6n nuclear dirigen las proteCnas
loons las c~lu.las eucariotas denen la misma colecciOn nucleares hacla el nucleo 601
b4sica de org4nulos rodeados de membrana 589 Las macromolkulas son transponsdas activamente hacla
La relaci6n IOpol6gica de los OrgAnul05 rodeados de denlro y hacla fuera del micleo a travb de los poros
membrana puede ser inlerprelada en tenninos nucleaTes 603
de sus orfgenes evolutivos 592 La envohura nuclear se desorganiza durante la mitosis 604
Las prolefnas pueden desplazarse entre compartimienlOS El transporte entre el nucleo y el citosol puede ser
de direrentes maneras 594 regulado evilando el acceso a la maquinaria
Los ~ptidos seftal y la regidn senal deterrninan el destino transponadora 605
celu1ar correcto de las protefnas 596 Resumen 606
l.alI d!lulas no pueden construir de IIOVO sus organu.los
rodeados de membrana: necesitan Infonnacl6n del EJ tcansporte de protefnas aJ Interior de mllocondrlas
propio organulo 597 y de c1orolllast08 607
Resumen 599 La translocaci6n hacia la matriz mitocondrial depende
de una sefta! tfpica de la matriz 607
FJ transporte de mollcula5 had. denlro y had. fuera La uanslocacidn hacia]a mauiz milocondrial depende
del nucleo 599 del gradiente eleeuoqufmico a tram de la membrana
Los poros nucleaces alraviesan la envoltura nuclear 600 intema yde la hidrolisis deATP 608

(ndlce de materlas xxv

Las proteCnas mitocondriales son importadas hacia Una partlcula de reconocimiento de senal (SRPj dirige
la matriz mediante un proceso de dos etapas. a travl!s los peptldos seftal para el ER a un receptor especlfico
de lugares de contacto que unen las membranas externa de la membrana del ER 623
e lnterna 609 La translocaci6n a travl!s de la membrana del ER no siempre
Las protelnas son importadas hacia el interior de la matriz requiere que se estl! produciendo el crecimiento de la
mitocondrial. en un estado desplegado 610 cadena polipeptfdica 623
La uni6n secuencial de las protelnas Importadas a las La cadena poJipeptldica pasa a travl!s de un poro acuoso
proteCnas mitondriales hsp70 'J hsp60 impulsa su en el aparato de translocaci6n 624
translocaci6n y ayuda al plegamiento proteico 611 EI pElptido senal del ER es eliminado de la mayorla de
El transporte de protefnas al espacio lntermembrana protelnas solubles despues de la translocaci6n 625
mltocondrlal requiere dos sefiales 611 En las protelnas transmembrana de un solo paso. un pElptido
Para dirigir el transporte de protefnas a la membrana senallnterno permanece en la bicapa llpfdica como una
tilacoidal de los c1oroplastos se necesha la parricipaci6n he!lce a que atraviesa la membrana 626
de dos pl!ptidos seMI 612 Combinaciones de senales de inicio y de paro de transferencia
Resumen 613 determinan la topologia de las protefnas transmembrana
de multipaso 627
Peroxisomas 614 las cadenas polipeptfdlcas translocadas se pliegan 'J se
Los peroxisomas utilizan el oxigeno molecular y ensamblan en ellumen del ER rugosa 629
el per6xldo de hldr6geno para realizar reacciones La mayorla de protefnas sintetizadas en el ER rugosa son
oxidativas 614 glucoslladas por la adici6n de un N-o!lgosacarido comun 630
Una corta secuencia senal dirige la importaci6n de A1gunas protefnas de membrana, poco despues de entrar en
protefnas hacia los peroxisomas 616 el ER, intercambian un cola transmembrana carboxilo
Reslllllell 616 terminal por un glucosilfosfatidillnositol (GPIl unldo
de forma covalente 632
EI redculo endoplasnuitloo 617
La rnayorfa de las bicapas lipfdicas de membrana son
los ribosomas adheridos a las membranas definen el ensarnbladas en el ER 633
ER rugosa 617
Las proteillas de illtercambio de fosfollpidos pueden
El ER lisa es abWldante en algwms celulas especializadas 618 transportar fosfolfpldos desde el ER a las mitocondrias
Las regiolles lisas del ER pueden separarse de las rugosas ya los peroxisomas 634
mediante centrlfugacl6n 620 Resumen 635
Los pl!ptidos senal fueron descubiertos por primera vez
en protelnas imponadas al ER 622 Blbliograffa 636

Tnifico vesicular mediante las rutas secretora y endodtica

Trwlsporte desde el ER al complejo de Goigi 642 Una regi6n senal en la cadena polipeptidlca proporciona
EI complejo de Golgi estll formado por una serie la clave para marcar una enzlma lisosomal con la manosa
de comparrimiemos ordenados 643 6-fosfato 659
Las protelnas residentes en el ER son selectivamente los defectos en la GIcNAc-fosfotransferasa causan una
recuperadas de la red del cis Golgi 644 enfermedad de acumulo lisosomal en humanos 659
las protefnas del Golgi vuelven al ER cuando las celulas Resumell 660
se tratan con la droga brefeldina A 645
Transporte desde III membrana plasmatlca vfa endosomas:
En e1 complejo de Golgi se procesan las cadenas de endocitosis 661
oligosacarido 646
CE!lulas fagoclticas especializadas pueden ingerir
las cisternas del Galgi esn!.n organlzadas en forma de series grandes particulas 661
secuenciales de compartimientos de procesamiento 647
Las vesiculas de pinocitosis se forman en la membrana
los proteog!ucanos son ensamblados en el complejo plasmlltica a partir de depresiones revesridas 662
de Galgi 649
las depresiones revestidas de datrina pueden actuar como un
los carbohidratos de las membranas celulares se encuentran mecanisme concentrador Internalizando macromoleculas
en la cara de la membrana que es topol6gicameme extracelulares especfficas 663
equivalente aI exterior de la celulas 650
las cEllulas Imponan colesterol par endocitosls mediada por
iCu~1 es el prop6sito de la glucosilaci6n? 650 receptor 664
Resumen 652 El material endocitado termina frecuentemente en los lisosomas 665
Transporte desde la red del trans Golg! 8 los IIsosomas 652 Determinadas protefnas son recuperadas de los endosomas
ternpranos 'J devueltas a la membrana plasrnlitlca 666
Los lisosomas son ellugar principal de digesti6n intracelular 652
La relaci6n entre endosornas ternpranos y lardlos es incierta 6GB
Los lisosomas son heterogeneos 654
las macromolE!culas pueden ser transferidas a travEls de las
las vacuolas de las plantas y de los hongos son lisosomas laminas de celulas eplteliales mediante transcitosis 6GB
muy verslltiles 654
Las celulas epiteliales tienen dos compartimientos
los materiales son transponados hasta los lisosomas a endosomales tempranos dlstintos pero un solo
traves de varias rutas 656 compartimlento endosomal tardio comun 669
Algunas protefnas citos6licas son transportadas Resumen 669
directamente a los Iisosomas para ser degradadas 656
Las enzimas lisosomales son c1asificadas en la red del Transporte desde 18 red dellmns GoIg! hasla la superncle
trans Goigi por un receptor proteico unido a membrana celular: exocllosls 670
que reconoce la manosa 6-fosfato 657 Parece que muchas protefnas y lfpidos son transponados
El receptor de manosa 6-fosfato viaja como una lanzadera. automaticamente desde el ER y el complejo de Golgi a
adelame y atrlls, entre determinadas membranas 658 la superficie celular 670

xxvi fndice de materias

Las vesfculas de secreci6n emergen por gemaci6n desde la EI ensamblaje del revestimienlO de clalrina conduce a
red del trans Goigi 671 la formad6n de la vesfcuia 680
A menudo las rcroteCnas son procesadas proteol.ltkamente las adaptlnas reconocen protefnas transmembrana
duranle Ia onnacWn de las vesiculas de secred6n 612 especfficas y las unen al revestlmienlo de c1atrina 684
Las vesIculas de secreci6n pennanecen cerca de la Las vesfculas revestldas de coat6mero median ellranspone
membrana plasmatica hasta que una seftalles hace vesicular no selectivo 685
liberar su contenido 673 Ellransporte vesiculardepende de proternas reguladoras
La exocltosls regulada es una respuesta localizildfl de la que unen GTP 666
membrana plasmatica 'I del citoplasma sub'Jllcente 674 Parece que ARF senll1Jzll el ensamblaje 'I el desensamblaje
Los componentes de la membrana de las vesfculas de del revestlmlento de coat6mero 686
secrecl6n se reciclan 674 Marcadores protelcos de or~anulo. lIamados
las vesfculu sinapticas se forman a partir de 105 endosomas 675 SNARE, colaboran en la ireccl6n deillanspone
Las celuias polarizadas diri~en las protefnas desde la red de vesfculas 687
del transGoI&:'llSta el ominio apropiado de la St' c~ que las protelnas Rab aseguran la especificidad de
membrana p matica 675 la uni6n de las veskulas 688
Resumen 677 La fusidn de vesfculas esta catalizada por una "maquinarla
de fusi6n de membrana~ 68'l
Mocanlsmos moklc:ulares deltransporte vesk:u.lu y La prOle!na de fusi6n de membrana mejor caraClerizada
mantenlmlento de la dJvenldad decompartim.lentos 67' est' simetizada por un virus 690
EI mantenlmiento de las difcrencias entre compllrtlmienlos Resumen 691
requiere un aporte de energla libre 678
Exlste rntis de un tipo de vesfculas revestidas 679 Blbllograffa 692

ea"....,
Conversi6n energetlca: m1tocondrlas y cIoropiastos 14
La mltocondria 699 En la cltocromo oxidasa, un Cf!ntro de hierro-cobre cataliz8
La rnitocondria presellla una membrana merna 'I una de fonna e6ciente la reducci6n del 0 1 723
membrana intema que deOne dos compartimientos Internos 700 Las transferencias de electrones est'n medladas por
La oxidacl6n mitocondrial empieza cuando se generan colisiones a1eatorias que se producen entre los dado res
grandes cantldades de acetil CoA a partir de plmvato '1105 acePto~s que difunden en la membrana
'I de ncidos grasos en el espacio de la matrjz 702 mltocondrl interna 725
EI cicio del dcldo cftrico oxida el gmpo acetilo del acetil CoA. Una gran calda lfpmenciaJ redox a trav!!s de cada uno de
generando NADH y FADH z para la cadena respiratoria 705 los tres complejos enzlmatlcos respiralOrios aporta
energfa para el bombeo de H' 725
En la membrana milocondrlal intema, un proceso
quinliosm6tico convierte la energfa de oxidaci6n en ATP 706 EI mecanismo del bombeo de H' se conoce mejor en
bacterlorrodopsina 726
Los e1ectrones son transferldos desde el NADH hasla el
oxlgeno. a trav& de tres grandes complejos enzlmatlcos Los ion6foros de W disipan el gradiente de H',
respiratorios 708 desacoplando asl el transpone de elecnones de la
slnlesls de ATP 727
La energfa Ilberada por el paso de los electrones a 10 largo
de Ia cadena respiratorla se a1macena en fonna de gradiente Normalmente el conlrol respiralOrio restrlnge el nujo de
electroqufmico de protones 8 Ilav& de la membrana electrones a tra~s de la cadena 728
mitocondrlallntema 710 Exislen desacoplantes naturales que transfonnan las
La energfa a1maCf!nada en el gradiente elecnoqulmico de mltocondrlas deJ lejido adipo50 marr6n en maqulnas
protones se utiliza para produclr ATP 'I rarlllranSportar generadoras de calor 728
metabolitos e lones inorgnnicos hacia e espaclo Todas las bacterlas utllium mccanismos quimiosm6tlcos
de la matrlz 710 para ahorrar energfa
La rdpida conversi6n de ADP en ATP en las mltocondrlas
mantiene una elevada relacl6n ATP-ADP en las celulas 711
Resumen ""
73.
La diferencla entre 40' y 4G; para que la hidnSlisis de ATP Ooroplastos y fotosinlnb 730
sea litil para la et!lula es necesario que tenga un valor muy EI c1oroplasto es un m1embro de una familia de orgtnulos
negativode4G 712 exclusivos de las planlas -105 plastidios 731
La resplraci6n celular es nolablemente eficiente 716 Los cloroplastos se parecen a las mitocondrias, pero tienen
Resumen 716 un companimiento adicional 733
Dos reacciones caracterfstlcas de los c!oroplllSIOS;
La cadena resplratoria y la ATP slntasa 717 la producci6n de ATP 'I de NADPH. lmpulsada par
A partir de las mltocondrias se pueden aislar particulas III Juz. y la conversi6n de COz en carbohidratos 733
invertidas funcionales 717 La fljacl6n del carbono estn cataJizadli por la ribulosa
La ATP sintasa puede ser puriflcada 'I de nuevo incorporada blsfosfalO carbonlasa 734
a las membranas 717 En el cicio de fijaci6n del carbona se consumen tres
La ATP slnlasa puede funcionar de manera reversible, molulas de ATP y dos molu1as de NADPH por
hidroli.tando ATP y bombeando H' 719 cada molenlla de COz fijada 735
La cadena respiratorla bombea H' a trav& de Ia En a1gunas plantas, la fijaci6n del carbono esta
membrana mltocondrlal intema 720 companimentada para facilitarel creclmiento a
Se han utilizado metodos espectr0se6picos pan Identificar concentraciones bajas de CO. 736
muchos transportadores de electrones de Ia cadena La fotosfntesis depende de la fotoqulmlca de las molkuJas
respiratorla no de clorofila 737
La cadena respiratorla contiene tres grandes complejos Un fotosistema contiene un centro de reaccl6n y un
enzlm'tlcos lncluidos en la membrana 721 complejo antena 738

(ndice de materias xxvii

En un centro de reaccl6n, la energia capturada por la EI crecimienlO y la divisi6n de los organulos manliene
dorofila genera un dador fuene de electrones a panir el numero de mitocondrias y de c1oroplastos en la cetula 752
deunodBlil 739 Generalmenle los genomas de los c1oroplastos yde las
En plantas y en cianobaclerias, Ia fotofosforilaci6n no mitocondrias son mol~ulas de DNA circulares 753
dclica produce NADPH yATP 740 Las mitocondrias y los cloroplaslOS contienen sistemas
Los c1oroplastos pueden producir ATP por fOlOfosforilaci6n genet.icos complelos 754
ddica sin generar NAOPH EI genoma del cloroplasto de las plan13s superiores contiene
J gradiente electroqufmico de protones es similar en apronmadamente 120 genes 755
las mitocondrias y los cloroplastos Los genomas mitocondriales presentan varias caracterfsticas
Como la membrana mitocondrial interna, 18 membrana soflJrendcmes 756
interna del c1oroplaslo conoene protelnas Las mitocondrias de animales conlienen el sistema genl!tico
transportadoras que facilitan el intercambio de mib simple de los conocidos 757
melabolitos con el chosol 743 lPor qul! los genomas mitocondriales en las plantas son
Los c1oroplastos lIcvan a cabo otros procesos biosintl!ticos 743 tan grandes? 758
Resumen 743 Algunos genes de org;!.nulos contlenen Intrones 758
Los genes mitocondriales se pueden distinguir de los genes
Evolucl6n de las cadenas de transporte de electrones 744 nucleares gracias a su herencia no nlendeliana
Probablemenle las cl!lulas mas primilivas produdan {citoplasm;!.tica} 759
ATP medianle fermentaciOn 744 En muchos organismo$, los genes de los org<l.nulos se heredan
La evoluciOn de la cadena de transporte eleclr6nko de la madre 760
conservadora de energfa capacit6 a las baclerias Los mutant~ diminutos en levadura demueslran Ia
anaerobk:as para utilizar compuestos organicos C)i:lraordinaria lmponancia det m'icleo celular en
no fennentables como fuenle de energfa 744 la biogenesi5 milocondrial 761
Las baCterias fotosintl!ticas, suministrando una fuente Las mitocondrias y los doroplaslOS contlenen prolefnas
inagotable de poder reduclor, supenlron el mayor especincas de tejido 762
obsl3cu1o de la evoluci6n de las cl!lulas 746 Las mitocondrias imponan la mayor parte de sus Ilpidos
Las cadenas de transporle electronico de los complejos mielllra5 que los c1oroplastos producen la mayor parte
fotosinttiticos de las cianobacterias produjeron ongeno de ellos 762
armosfl!rico y pennitieron nuevas formas de vida 746 Probablemente, tanto las milocondtias como los cloroplaslos
Resumen 750 han evolucionado a partir de bacterias endosimbioticllS 762
,Por qul! lqs cloroplastos y las mitocolldrias tienen sus
Los genomas de las mllocondrlas y de los c1oroplaslos 751 propjo~i~ntas geneticos? 764
La bios(nlesis de las milocondrias y de los c1oroplastos Resumen 765
supone la contrlbuclon de dos sistemas genl!ticos
diferentes 751 Bibllograffa 766

Capitukt
Transmisi6n de seiiales entre celulas IS
Prlndp'os generales de la seiiallud6n celular 771 Seiiall7.addn vfa receplOres de supertlde celular asociadas
Las mol~ulas sella! extracelulares son rcconocidas por a protefnas G 786
receptores especincos de la superficie 0 del interior Las proteinas G triml!ricas transmiten la senal intracelular
de las celulas diana 772 dcsde los receptores asociados II protefnas G 786
Las moll!culas secretlldas median tres formas de seftaliUlcion; Algunos receptorcs incrementan los lliveles intracelulares
la paractina, 10 sindptica y la endoctina 773 de AMP dcllco llctivando la odenll clclasa a traves de una
La sei\aliUlcion aUlOcrina puede coordinar declsioncs protefna G cstimuladora (GJ 767
de grupos de celulas identicas 774 Sc crcc que las proteinas G ttiml'irica5 se dcsensamblall
Las uniones comunicante5 permilen que la informacion cuando son aClivadas 768
de senaliUlcion sea companida por las cl!lulas vecinas 776 Algunos receplores disminuyen 105 niveles de AMP dclice
Cada clHula esl;!. programada para responder a combinacloncs inhibiendo la adenil ciclasa vfa una proteina G triml!rica
especlficas de moll!c::ulas senal 776 inhibidora (G) 791
Oiferenles cl!lulas pueden responder de fonna diferenle La proteina quinasa dependienle de AMP dclico (quinasa A)
ala misma sei\al qu{mka m media los efeclos del AMP dcUce 791
La concenuacl6n de una molecuJa puede ajustarse Divenas protelna sc:rina/nconina fosfatasas revierten
rapidamenle 5610 sl la vida media de la molkula es cona m rapidameme los efeclO5 de la quinasa A 793
EI gas ondo nftrico aellia como una sei\al, uniendose Para utilizarel Cal< como sel\a! intracelular, las reJulas
directamente a una enzlma en el interior de la celula han de mantener los niveles basales de cal.
diana n9 muybaj05 794
Las hormonas esteroideas, las honnonas tiro ideas, El Cal. octua como un mensajero intracelular ubicuo 795
los relinoidcs y la villimina 0 sc unen a receptores Algunos f(.'Ceptorcs relacionados con protefnas G activan
Intracelularcs que son protelnas regullldoras
el proceso de sei'lalizaci6n de fosfolfpidos de inositol
de genes octivados por ligando 779
activando la fosfolipasa C-~ 796
Se conocen tres clases de prote(nas receplOrlis de superficie
celular: las asociadas a canales ionicos, las asociadas EI inositol trlsfosfato (IPJ acopla la llctivaci6n del receptor
a protefnas G y las asociadas a enz.imas 782 con la liberacion de Ca2 ' del Eit 797
Los receptores de superficie celular, una vez activados, A menudo las oscUaciones de Cal. prolongan la respuesta
desencadenan la adicion de grupos fosfato a una red de inicial de cal. inducida por IPs 798
prolemas inlracelulares 783 J diacUglicerol aCliva la proteina quinasa C (quinasa Q 799
Resumen 784 La calmodulina es un receplor inlracelular de Ca2' ubicuo 801

xxviii fndice de materias

1 En las celulas animates la moyorla de acciones del Ca1.
se producen a lra\-es de prolefna quinasas dependienle5
de Ca"-calmodulina (quinasas CaM) 802
La utilizacion de oncogenes ~IC provocan cancer ha
permitido identificar OJU os oomponentes del proceso
de seFiaJizaci6n de los reccptores lirosina quinasa 822
Los procesos de Ca" y de AMP dcUco imcraccionan entre sf 803 las prOleinas de la superfamilia TGF.~ aclivan receptores
Mgunas prolcinas G lrimericas regulan dire<::tamente canales que son prOieina serina/neonina quinasas .23
16nicos 804 J receptor lransmembrana NOiCh media la inhibiciOn lateral
La olfacci6n y Ia vision dependen de receplores asociados a mediante un mecanlsmo d~nocido 823
prolefnas G y de canales i6nicos regulados poT nudooLidos Reslllllcn 82'
ckllcos 805
Las senales extracelulares son notablemenle amplificadas AdapladOn de las tt1ulu diana 825
mediante la utilizacion de mensajeros intracelulares y La adaptad6n lenla depende de Ia regulad6n por
de cascadas en.ziln3ticas 80' disminud6n del numero de receplores 825
Las celulas pueden responder de forma suhila a incrementos A menudo la adaptad6n r.lpida se produce por fosforilad6n
graduales de la concencrad6n de una senal exlracelular 808 de los receplores 82'
EI efcclO de a1gunas sei'lales puede ser recordado por la celula
Re.sllmell
''1111 Algunas formas de adaptad6n son debidas a cambios en
el proceso de sei'lali7.ad6n 82'
La adaplad6n desempel'la un papel crucial en la quimiolaxis
Sei\aIlzacl6n vl'a receplores de superfldc Iular asoclados
aenzlmas .12
baCleriana '27
La qUimiOlaxis bacteriana eSld mediada por una familia de
Los receplOres guanilalO delasa gcncran GMP cfdico cuatro rccefclOres Iransmembrana hom6logos y por un
dirCClarncnle '12 sislema de osforilaci6n que transmilc la senal 830
Los reccplorcs para la rnayor(a de los fBclOres de credmienlO En III quimiOlaxis bacterlana, III metHad6n del receptor es
son protcfnas transmernbrana que prescnlan actividad responsable de la adaplllCl6n 831
protefna tirosina quinasa especffica '13 Resumen 833
Los reslduos tirosina fosforilados son recollocidos por
protefnas con dominios 5HZ '15 La 16gica de la seilallzacl6n Intracelular: lecciolles de
Las prOlclnas Ras <:onSlituyen un eslab6n <:rudal en la "redes neuronales" basadas en los ordenadores 833
cascada intracelularde sel'lalizaci6n aClivada por Las redes ncuronales basadas en el ordenador pueden ser
receplOres proteina quinasa '1' ennenadas 834
Una prolefna 5H adapaladora acopla los receplores Las redes de sei'lalizacl6n celular pueden observarse como
tirosina quinasa con Ras: evidencias que provienen redes neuronales enlrenadas por la evolud6n 835
del desarrollo del ojo de Drosophilo
Ras acliva una cascada de fosforilaciones serinaJueonina
'17 Las redes de senalizad6n capacilan a las celulas para
responder a complejos palrones de sei'lales ertracelulares 836
que aetiva la MAP-quinasa .1. Las redes setial son robuslllS 83'
La activklad de los receptores asodados a lirosina quinasa Rl'fllmen
depende de tirosina quinasas que no son receptores
83'
820 "--
Algunos receptores son prolerna lirosina fosfalasas 821 BlbliograIfa 838

CapilUlo
EI ciloesquelelO 16
La naluraleza del c1loesquelelo 84. Mlcrottibulos 860
EJ cltoplasma de una celula eucariola eSld organizado Los rnicrotubulos son cilindros huccos formados por
espacialmeme por 105 filamcnlos de aClina, tubulina 860
los microtubuJos y los filamentos lntermedios 84' Los microtubulos son cstructurllS muy hibiles, sensibles
La dlmlmica de los microttlbulos crnana del centrosoma 84' a drogas antimil6tlcas espcc!flcas 861
l..a red microtubular puede cncontrar el centro de la <:elula 84' El alargamicnto de un mtcrottlbulo es un proceso r:l.pido,
Determinadas protcfnas motoras utllizan 1.. red microtubular micntras que la nucleacl6n de un nuevo microtubulo
como gu!a para posicionar los orgllnulos rodeados de C'S un proceso lemo .62
membrana 84' Los dos extremos de un micronibulo son diferentes y
EI oortex de aClina puede generar y manlener la polandad crecen a velocidades direremes 863
celular 84. Los centrosomas son ellugar primario de nucleacl6n
Nonnalmemc los filamenlos de aClina y los microuibulos de los microlubulos en las celulas animales 864
aCluan juntos polarizando la et!lula '50 En las celulas animales los microlubulos se despolimerizan
W funciones del ciloesqueleto son diffdles de esludiar 831 y repolimerizan continuameme 866
Resumtm 852 La hidrolisis de GTP puede explicar la ineslabilidad

FUamenl05lnlermcdlos 852
dinamica de los mlcrOlubulos individuales 86'
La inestabilidad dinamica de los microldbulos
los filamentos intermedios son polfmeros de protefnas propordona un prindpio organi%ador par.l.1a
fib""", 853 morfogenesis celular 868
W et!lulas epileliales preseman una familia muy diversa Los microtdbulos sufren una lema ~madurad6n~como
de filanlentos de queratina 854 resultado de modificaciones post.uaduccionales de
Muchas c~lulas no epileliales presenlan sus propios sus subunidades de lubulina 869
filamenlos intermedios citoillasmdlicos diferendales 856 Las prOlelnas asociadas a mlcrOlubulos (MAP) se unen
La Idmina nuclear esla conSlilulda por un ll~ especial a los microlubulos y modifican sus propiedades 870

I
de prOlefnas de filamenlOS inlermedios.: as lamininas 85' Las MAP colaboran en la generaci6n de regiones
Los filamentos imermedios proporclonan cslabilidad ciloplasmdticas functonalmcnte distintas 870
mccdnlca a las celulas animales '58 La quinesina y la dinelnll dirlgcn el movimienlo de
Resume'l .60 los orgdnulos a 10 largo de los rnicrotubulos 871

fndlce de materlas xxix

La velocldad y la direcd6n de desplazamiento a 10 largo de Protefnas de entrecruzamiento con diferentes propiedades
los microtubulos son espccfficas del dominio globular organizan ensamblajes particulares de actina 895
de las protelnas motoras 872 Las prOlefnas de uni6n a la actina con propiedades diferentes
Resumen 873 esnin construldas a panir de m6dulos semejantes 897
La gelsolina, cuando se activa por Ca 2 fragmenta los
Clllos y cenlrfolos 874 filamentos de actina B97
Los dlios se mueven por el batido de un axonema En las celulas eucariotas se han encontrado multiples
-un complejo haz de microtubulos 674 tipos de miosina 898
La dinelna dirige el movimiento de los dUos y de los fiagelos 676 En celulas no musculares pueden formarse transitoriamente
Cilios y fiagelos crecen a partir de corpusculos basales que ensamblajes semejantes a los musculares 900
estan muy fntimamente relacionados con los centrlolos 877 Los contactos focales permiten que los filamentos de actina
Los centrfolos suelen aparecer por dupUcaci6n de los se extiendan hacia el substrato 902
centrlolos preexistentes 878 Los microvilli ilustran de que forma los haces de filamentos
Resumen 879 entrecnlzados de actina pueden estabilizar zonas locales
de la membrana plasmatica 902
Fliamentos de actina 880 EI comportamiento de la corteza celular depende de un
[.(Is filamentos de actina son delgados y fiexibles 8BO equilibrio de interacciones cooperativas y competitivas
La actina y la lubulina polimerizan por mecanismos
entre una gran colecci6n de protefnas de Uni611 a la actina 904
pareddos BBO La migraci6n de las celulas animales compona tres
El comportamiento dinamico de los filamentos de actina subprocesos distintos dependientes de actina 906
requiere la hidr6lisis del ATP B84 EI mecanismo de la locomod6n celular puede ser
Las funciones de los filamentos de actina son inhibidas por disecciomtdo geneticamente 907
drogas estabilizadoras y desestabilizadoras del pollmero 885 Resumen 90B
La molecula de actina se une a pequeftas protefnas que
ayudan a controlar su polimerizad6n 885 El musculo 908
M",,-\<._ ~\",I._~ml....~v.. <i~t,d~ 'i>\.\. oo~<k {~<l\'\\a~ d~ ';j.'1';j.\'\<::.<!.,
Las miofibirillas estan formadas por ensambJajes repetitiyos
microespinas y lamel\podios dinamicos que contienen de fllamentos gruesos y de)gados '9)t)
actina 667 La contracd6n se produce por el deslizamiento de los
EI borde frontal de avance de las celulas m6viles nuclea filamentos de miosina y de actina entre sf 910
la polimerizad6n de la actina 88B Las cabezas de miosina "camlnan" hacia el extremo menos
Algunas bacterias pat6genas utilizan la actina para moverse de los filamentos de actina 913
dentro y entre las celulas BB9 La contracd6n muscular se inlcia por un aumento repentino
La polimerizad6n de la actina en el c6rtex celular esta de la concentraci6n de Ca 2 citos6lico 915
controlada por receptores de la superficie celular 890 La troponina y la troporniosina median la regulaci611 de la
Proteillas G heterOlrimericas y pequ.ei'las GTPasas transmitell contracci6n delmusculo esqueletico por el Ca" 916
sei'lales desde la superficie celuhh al c6rtex de actina 892 Otras prOlefnas accesorias mantienen la arquitectura de la
Los mecanismos de polarizad6n celli@! pueden ser miofibrilla y Ie propordonan su elasticidad 916
analizados en las celulas de levadura 893 La misma maquinaria contractU, en una forma modil1cada. se
Resumen 894 encuentra en el muscuJo cardfaco y en el musculo liso 917
En muchas celulas, la activad6n de la miosina depende de la
Prote(nas de uniOn a la actina 894 fosforUaci6n de la cadena Iigera de la miosina 918
Un dtoesqueleto unido de manera sendlla a la membrana Resumen 920
proporciona soporte mecdnico a la membrana plasmlhica
de los eritrocitos 894 Blbllograffa 920-

Capfmlo
EI cicio de la divisi6n celuJar 17
La estrategla general del cicio celular 926 La acumulaci611 y la destrucci6n de ciclina controla la
La replicad6n del DNA nuclear ocurre durante una fase activaci6n y la inactivaci6n de MPF 937
especffica de la Interfase: la fase 5 927 La degradaci6n de la ciclina desencadena la salida de la
Paralelamente al crecimiento continuo de la ciilula, mitosis 939
durante el cicio celular se producen una serie de EI MPF puede actuar como autQcataHtico. estimulando
procesos discretos 929 su propia activaci6n 939
Un sistema de control central desencadena los procesos EI MPF activo induce los procesos subordinados de la mitosis 939
esenciales del cicio celular 929 EI sistema de control del cicio celular permite tiempo suficiente
El control del cicio celular es un mecanismo basado en para que se produzca una ronda de replicaci6n del
una protefna quinasa 931 DNA en cada imerfase 940
Resumen 933 Un bloqueo de la re-replicaci6n asegura que ningUn segmento
de DNA se replique mas de una vez en cada cicio celular 94 I
E1 cicio celular de los embrlones tempranos y la Juncl6n EI paso por la mitosis hace desaparecer el bloqueo a las
delMPF 933 re-replicaciones 941
EI crecimlento del oocito de Xellopus estll equilibrado Resumen 943
por la divisi6n del huevo 934
Un regulador citoplasmatico. el MPF. contrala la entrada Las levaduras y la gen~tlca molecular del slslema de
en la mitosis 935 control del cicio celular 943
Las oscilaciones de la actividad MPF controlan el cicio El crecimiento celular requiere una Interfase prolongada
de divisi6n celular 936 con puntos de control del cicio celular 944

xxx (ndice de materias

Las levaduras de fisi6n y de gemacl6n cambian de forma a La regulacion del creclmiento y de la proliferacion de
medida que van progresando a 10 largo del cicio celular 945 las cEllulas de mamifero se estudia nonnalmente en
Las mutacioncs del cicio de division celular detienen el cicio lineas celulares cuhivadas 957
en puntas especfficos; las mutaciones wee permiten al cicio Los faetores de credmiento estimulan In proliferacion
saltarse un punta de control de tamal'io 945 de cEllulas de mamlfero 957
Las subunidades del MPF en las levaduras son hom6logas EI crecimiemo cclular y la division celular pueden ser
a las del MPF en animales 947 regulados independientemente 959
La actividad del MPF esta regulada pOT fosforilaci6n y Las celulas pueden retrasar su division entrando en un estado
desfosforilaci6n 948 especializado de no-crecimiento 960
El mecallismo de activacion del MPF controla eJ tamana La ausencia de suero evita el paso por el punto de control G] 961
de las levaduras de fisi6n 948 EI sistema de control del cicio celular puede desensamblarse
Para la mayorfa de las cclulas el punta de control principal nlpidamente pero solo puede ensamblarse de nuevo,
del cicio celuJar se encuclltra en ellnicio de G1 949 lentamente 962
La prOle(na Cdc2 se asocia con la cidina G j para conduclr Las celulas veeinas compiten par los faetores de crecimiento 963
ala celula mas alia del Inieio 949 Las celulas animales normales en eultivo necesitan anclarse
Las clclinas G1 median rnuchos de los controles que actuan para superar el Inido 964
en el lnido 951 Estudios en celulns cnncerosns revelanla existencin de genes
La quinasa de lnido pone en marcha la fabricacion de los implicados en el control de la proliferaci6n celular 966
componentes necesarios para la replicacion del DNA 952 Los factores de crecirniemo desencadenan cascadas
Los controles par retroallmentadon aseguran que las cEllulas de sei'lales intracelulares 967
completen un proceso de cicio celular antes de comenzar Las ciclinas y la Cdk son inducidas par factores de crecimiento
el siguiente 952 tras un largo retras.o 968
El DNA dai'iado genera una sei'ial que retrasa la mitosis 953 La protelna retinoblastoma acttia manteniendo la
Generalmente los controlesporretroalimentacion en el proliferaci6n bajo control 968
cicio celular dependen de sei'iales inhibidoras 95. La probabilidad de entrar en GG aumenta can el mlrnero
Resumen l 955 de divislones celulares: la senescencla celular 969
EI euerpo se genera y se mantiene mediante complieados
Controles de la division celular en los anlmales patrones rcguladores de la division celular 971
pluricelulares 955 Resume/l 972
El sistema de control del cicio celular es m~s elaborado
que el de las levaduras 956 Blbllograffa 973

Cap{culo
Los mecanlsmos de la dlvisl6n celular 18
Vision de conjunto de la fase M 977 Las cromatidas hermanas se separan repentillamente
Trcs caracterfsticas son exclusivas de la fase M: ell la anafase 995
la condensaci6n cromosomica, el huso mitotico La anafase se retrasa hasta que lodos los cromosomas se
yelanillocontnlctil 977 posicionan en la placa rnetafasica 996
La division celular depende de la duplicaci6n del centrosoma 978 Dos procesos diferentes separan las crornatidas en la
Tradicionalmente la fase M se divide en seis estadios 980 anafase 996
Los org~nulos ciloplasmMicos grandes se fragmentan durallle EI desensarnblaje de los microtubulos cinetoc6ricos se
la fase M asegurando que se heredan correctamente 984 produce dural1le la anafase A 996
Resumen 985 Dos fucrzas distintas podrfan contribuir a la anafase B 998
En la telofase se recompone la envoltura nuclear a1rededor
Mitosis 985 de los grupos de cromosomas 999
Laformaci6n del huso mitotico en unacelula en fase M Resumen 1000
se acompafta de cnmbios sorprendentes en las propiedades
dimlmicas de los mlcrotubulos 986 Cltoclnesls IOlll
Las interacdones entre microlubulos orientados en EI huso rnitotico detennlna ellugar de la scgmentaci6n del
direcciones opuestas conducen el ensamblaje del huso 986 citoplasma durante la citocinesis 1001
Los cromosomas replicados se unen a los microtubulos por EI huso se reposiciona especfficamente creando divisiones
sus cinetocoros 988 celulares asimetricas 1002
En los cromosomas de la levadura los complcjos proteicos La actina y la miosina generan las fuerF.as necesarias para la
cinetoc6ricos se ensamblan siguiendo secuencias segmentaci6n 1003
especfficas de DNA centroml!rico 989
En casos especiales, delerminados componentes celulares se
Los cinelOcoros capmran los microtubulos nucJeados en puedell segregar a ulla sola cl!lula hija 1005
los palos del huso 990
En las celulas de las plantas superiores, la citocinesis ocune
Los extrcmos ~m~s" de los microlubulos cinetoc6ricos pueden mediante un mecanismo especial 1006
ai'iadlr y perder subunidades de tubulina mientras estan
adheridos al cinetocoro 99 I Una red de citoesqueleto determina el plano de division
de las cEllulas vegetales 1007
Los palos del hus.o repelen los crornosomas 991
La elaborada fase M de los organismos superiores
Las cromlltidas hijas se unen a polos opuestos del huso evoJucion6 gradualmente a partir de organismos
medianle sus cinetocoros 992 procariotas de fisi6n 1009
Fuerz.as bipolares equilibradas mantiellen a los cromosomas Reslmlen 1011
en la placa metafllsica 992
Los microll1bulos son dinllmicos en el huso metafasico 993 BlbUografia 1011

fndJce de materias xxxi

 -
Parte
Las celulas en su contexto social IV
CapflUlo
Adhesi6n celular, uDiones celulares y matriz extracelular 19
UnIOIlef; celulares 1018 Los proteoglucanos de superficie celular acman como
Las uniones estancas forman una barrera de pcrmeabilidad correceplorcs 1048
selectiva a travE!s de los cpi/elios 1019 Las colligcnas son las pr01c1nas mas abundames de la
Las uniones de anclaje coneclan el citoesqueleto entre malriz extracelular 1048
celulas 0 entre Ja cl'iluJa y la matriz extracelular 1021 Las moleculas de colagella son sccretadas con unas
Las uniones adherentes conectan haces de fibras extensiones no helicoidales en cada una de las regiones
de actina entre cclulas 0 entre la ccluJa 'J 13 matriz terminales 1051
extraceJular 1022 Despues de su secrecion. las moleculas fibrilares de
Los desmosomas conectan filamentos intemledios procol~gena son degradadas hasta moMculas
entre c~lu[as; [os hemidesmosomas los unen a de col~gena, [as cuales se organizan en fibrillas 1052
[a lamina basal 1024 Las cohlgenas asociadas a fibrillas organizan estas fibrillas 1053
Las uniones de lipo gap ~rmite}l el paso directo de Las cl!lulas participan de [a organizacion de las fibras de
pequeflas moll!culas e 1~1\llas 1026 co[agena que secretan ejerciendo lensiones mec~nicas
Los conexones de las unlones de tipo gap estan compuestos sobre la malriz 1054
por seis subunidades 1027 La elastina confiere a los tejidos su elasticidad 1055
La mayor parte de [as cellilas embrionarias est~n acopladas La fibronectina es 1m protefna extracelular adhesiva que
entre sf durame las primeras etapas del desarrollo contribuye a la adhesion de [a ce[ula a la matriz 1057
mediante uniones de tipo gap 1028 Las diversas formas de fibronectina son producto de una
La pemleabilidad de las uniones de tipo gap esta regulada 1029 maduracion a1temativa del RNA 1058
En los vegetales, [os plasmodesmos realizan muchas Las g[ucoproteinas de [a matriz ayudall a delerminar
de las funciones de [as uniones de tipo gap 1030 las vias de migracion ce[lliar 1059
Resumen 1031 !...1S moleculas de colagena de tipo IV se ensamb[an
formando una red laminar que facilita la formacion
Adhesion Intercelular 1032 de [a lamina basal 1059
Existen dos vias fundamentales mediante las cua[es las La lamina basal esta compuesta fundamentalmente por
celulas animales se unen para formar tejldos 1032 co[agena de tipo IV, proteoglucanos del tipo heparan
su]fato, laminilla y entactina 1060
Las celu[as de vertebrados disociadas pueden reagregarse
en tejidos organizados mediante rnecanismos de adhesion Las laminas basales realizan divcrsas y complejas funciones 11162
selectiva celula-celula 1033 La degradaclon de los componentes de la matriz extracelular
Las cadherinas median la union celula-cl!lula rlepcndicnte esta estrechamente controlada 11165
de Ca~' en los vertebrados 1035 Resumen 1066
Las cadherinas median la adhesion cclula-c~lu[aa traves
de un mecanismo homofilico 1036 Receplores de la malriz exlracelular en celulas anlmales:
La adhesion interceJular independicmc de Ca~' esta mediada las Integrlnas 11167
principalmente por unas protefnas pcrtcnecienles a la Las integrinas son hcterodfmeros transrnembrana 1068
superfamilla de las inmunoglobulinas 1037 Las integrinas pueden inleraccionar con el citoesqueleto
Muchos tipos de moJeculas de superficie celular para unir las celulas a la matriz extracelular 11169
actuan paralelamcnte mediando la adhesion selectiva Las integrin3S permiten aI citoesqueleto y a la matriz
celula-cl!lula y celula-matriz 1038 extracelular comunicarse a traves de la membrana
Los contactos no adhesivos pueden ser los inlciadores plasmatica 11169
de fen6menos de adhesion intercelulat espec(ficos de Las cl!lulas pueden regular la actividad de sus integrinas 1070
tejido que poslcriormente son orientados yestabilizados
por contactos de union Las intcgrinas pucdcn activar cascadas de seflalizaci6n
1040 intracelular 1071
Resumen lO41 Resumen 1072
La malrlze,;tracelular de los anlmales 1041 La pared celular de los vegetales 1073
La matriz extracelular estd producida y orientada por las
La composici6n de la pared celular depcnde del tipo
cl!lulas que engloba 1042 celulat 1073
Las cadenas de Fclucosaminoglucano (GAG) ocupan grandes
vohlmenes, ormando geles hidratados Las fuerzas de lension de las paredes celulares permiten
1043 a las celulas vegetales desarrollar una presion
Parece que el adda hialuronico facilita la migracion de turgenda 1074
cel\tlar durante la morfogellcsis y la reparaci6n
La pared celular esta constituida por mlcrofibrillas de
de los tejidos 1044 ceJulosa ermclejidas con una red de poHsaCliridos
Los proteoglucanos estan compuestos por cadenas de yprotcfnas 1074
GAG unidas covalentemente a una proteina central 1045 Los micron1hulos orieman la deposicion de la pared
Las cadenas de protcoglucanos pueden regular las celular 1076
actividades de moleculas secrcladas de sel'ializaci6n 1046 Resumen 1078
Las cadenas de GAG pueden estar altamente otganizadas
en la matriz extracelular 1047 Bibliograf(a 1079

xxxii fndice de materias

 Cl!lulas germlnaJes y fecundacl6n
Las venlajll5 del sexo 108' Un oocito cst.' altamente especializado para su desarrollo
En los animales pluricelulares. 18 rase diplolde es oompleja lndcpendlcnte. presentando grandes reservas nutritivas
y larga mlcnlras que la haploide es senema y cona 1084 y una complcja cubiena proteclOra 1094
La reproducclon sexual confiere una venlaja oompelitiva Los oocitos se desarrollan porelapas 1095
a los organismos que se encuentran en un ambienle Los oochos crecen hasla alcanzar su gran tamano por
que cambia de forma imprevisible 1085 media de mecanislIlos especiales 1097
Resumen 1086 Resllmen 1099

Meiosis 1086 E5pennalowlde5 1099

La meiosis implica dos divisiones nucleares en lugar los espennatozoides esI~n altamente adaplados para
de una sola 1086 deposilar su DNA en un oocito 1099
La redisuibucl6n gl!:nica aumenla dcbido al En rnuchas especles de rnamf(eros los espennatozoides
entrecruzamiento entre las CTomatidas hom6logas se producen de manera continua 1100
no hermanas 1088 Res,lmen 1100
EI apareamlenlo meiotico crom0s6mico culmina con
la formaci6n del complejo slnapton~mico 1089 Fecundacldn 1103
Se cree que los n6dulos de recombinaci6n median los EJ contacto con la cubiena pelucida estimula al
intercambios de crom4ddas 1090 espermatlll.Oide a sufrir la reacci6n 3CrosOrnica 1104
los qulasmas desempei\an un Irnportante pape! en La reaa:i6n conical del oocito contribuye a
la segregaci6n cromos<imica dwante la meiosis 1091 asegurar que sea fecundado por un SlJIo
EJ apareamiemo de los cromosomas suuales asegum esperrnatllwide 1105
que tambl~n ellos se segreguen 109' Una protefna de fusl6n lransmernbrana de la membrana
La divisi6n mei61ica II es sernejame a la mitosis 109' plasm~lica del espennatozoide calaliza la fusi6n

Res.lmen 1094 espermatozoide-oocito 11116

EI espennatolde propordona un cenlrfolo al z.igoiO 1107
Qoc:llos 1094 Resumen 1108
EI oocllo es la tinica c~lula de un animal superior que es
capaz de desarrollarse produciendo un nuevo individuo 1094 BlbliografTa 1108

CapjlUlo
Mecanlsmos celulares del desarroUo 21
Movimlenlos morfog4!nlcos y la fonna del mapa lnterncciones induclivas gene ran nuevos tipos de c~lulas
corporal 1111 en un patr6n cada vez m~s detallado 1127
La polarldad del embrl6n de anfiblo depende de la Un sencillo gradiente de morf6gello puede organizar un
polarldad del huevo 1112 complejo patr6n de respuestas celulares 1129
La segmentacl6n produce muchas cl!lulas a partir de Las cl!lulas pueden reaccionar de forma distinta a una
una cl!lula hlicial 11\3 senal se~un el momento en que la reciban: funci6n
La blastula es ulla cavidad rodeada por un epitello 1114 de un re oj intracelular 113\
La gastrulacl6n transforma una esfera hueca de cl!lulas [;n los mam/feros. el protegido entorno uterino permite
en una estructura triestratlficada con un intestino un tlpo eXlnlOrdinario de desarrollo temprano 1131
prlmltlvo 1114 Todas las celulas del ernbri6n animal temprano denen
Los movimlentos de ~astrulaCl6n se organizan alrededor el mlsmo potencial de desarrollo 1133
del lablo dorsal de blastoporo 1116 Las cl!lulas madre embrionarias de los mamfferos
Camblos activos del empaquetamiento celular suministran muestran cdmo senales procedentes del entomo
una fuel'Ul conductora para la gastrulad6n 1117 puedcn controlar el rilmo y la vfa de desarrollo 1133
Las Ires capas gcrminales fonnadas por la gasttulaci6n Resumen 1135
lienen destinos distintos 1118
Memoria eelular, detennlnad6n celuJar y
El mesodermo situado a cada lado del eje del cuerpo se el conccpto de valores poslclonalC5 1135
fragmenla en somitos. de los que derivan las c~lulas
musculares 1120 A menudo las celulas quedan detennlnadas para su
futuro papel especiaJizado mucho ames de que
los pa.rones cambiantes de moleculas de adhesi6n celular se difercncien maniliestamente 1135
regulan los movimientos morfogenicos 1121
EI mornen.o de la dClerminaci6n celular puede ponerse de
Celulas mlgratorias invaden los tejldos del embri6n de manifiesto por medio de experimentos de uasplante 1136
fonna estrietamente conuolada 1122
La detenninaci6n y 13 diferenciaci6n celulares renejan
EI plano eslructural del cuerpo de los venebrados se forma la expresi6n de genes reguladores 1137
primero en mlnlatura y despub se mantiene a medida
que el cmbri6n crece 1124 EI eslado de determinaci6n puede eslar contfOlado por el
citoplasrna 0 puede ser Intrfnseco a los cromosomas 1138
Resumen 1124
r Las ululas de los tejidos en desarrollo recuerdan sus valores
D1verslfk:acldn celular en el embrlOn animallemprano 1125 posicionales 1139
Las diferenclas iniclales entre los blast6rneros de Xenopus EJ patron de valores posicionales controla 1a proliferaci6n
surgen a partir de la segregaci6n espacial de delenninantes ce!ular yse regula a naves de intercalad6n 1140
Resurrwn 1142
en el huevo
"'"
fndlce de malerias xxxIlI
EI gusano nemlitodo: los genes controladores del Los genes selectores home6dcos son esenclales para la
desarrollo y las leye5 del comportannento celular 1143 memoria de la informaci6n posicional de las ~Iulas
OJenorhabditis ekgons es anatomica y gen~ticamente de los discos imaginales 1176
sencillo 1143 LosJ::enes selectores home6ticos y los genes de polaridad
EI desarroUo del nemiilodo es praeticamnle invariable 1144 el segmenlo definen los companimienlos del cuerpo 1178
los genes de oonlrol del desarrollo definen las leyes del La expresion localizada de proteinas especfficas antecede
comportamiento celular que generan el mafia corporal 1145 la producclon de quelas sensitivas 1179
La inducclon de la vulva depcnde de un amplio conjunlo La inhlbiclon lateral regula el patron delallado de tipos
de genes controladores del desarrollo 1146 celuhues diferenclados IlBO
Pruebas gen~tlcas mlcr~Uin1rglcasrevelan la loglca los genes de control de desarrollo de Drosophila {ienen
del connol del desarro 10: el c10naje y la secuenciaclon homologos en los vertebrados 1182
de genes nos ayudan a descubrir su bioqufmica 1147 Los mamfferos Ilenen cualro complejos HOM homologos 1183
MUlaciones helerocnSnicas ldentifican los genes que los genes HOI definen los valores poslclonales en los
espedfican cambios en las leyes del comportamlento vertebrados lal como ocurre en los insectos 1184
celular a medida que transcurre el tiempo 1151 SUbconjunlos de los genes HOI se :I:resan distribuidos
E1"tempo del desarrollo no esl(rontrolado medianle a 10 largo de los dos ~ onogon es de las }'emlls
el cicio de division celular 1152 de las e:xIremidades e los vertebrados 1185
Las clHulas mueren ordenadamenle como pane del Resumen 1186
prognuna de desarrollo 1152
Resumen 1153 EI de51lrTOIlo vegetal 1187
EI desarrollo embrionario empieza con el
Drosophila y la gen~dca molecular del palrdn establedmiento del eje ralz-brote y se detiene en el
de formaclon. I. G~nesl! del mllpa corporal 1154 interior de la semiUa II"
EI cuerpo dellnsecto se construye medianle la modulacion Los mOdulos repelitivos de una planla son generados
de un panon fundamenlal de unidades de repetici6n 1155 !ecuencialmenle por los meristemos 1190
Drosophila Inkia su desarrollo como un sincitio 1156 La forma de cada nueva estruetura depende de la
Dos sislemas onogonales definen el mapa geomttrico orientacion de Ia divisiOn celular y de La expansion 1190
del embrion 1158 Cada mOdulo de la planta creee a panir de un conjunlo
Influencias procedentes de las Cl!:lulas que envuelven mlcrose6pico de primordios de un meristemo 1192
el huevo marcan el inicio del modelaje del embrion 1159 Seftales honnonales de largo alcance coordlnan
EI eje dorsoventral se define en el inlerior del embrlon los procesos del desarroUo en panes diSlanles
mediante una prote.[na reguladora de genes con de la planta 1193
un gradiente de concentraclon intranuclear 1160 Arabidopsls se utillza como organismo modelo para
EI sistema posterior define las c~lulas germlnales y la gen~tlca molecular de las plantas 1194
tambi~n los segmentos corporales posteriores 1162 Los genes selectores home6ticos definen las partes
EI mRNA locallzado en el polo anterior codifica una de una flor 1195
prolelna reguladora de genes que constituye el gradiente Resumen 1198
morfogt!nico anterior 1163
Tres dases de genes de segmenlaci6n subdivlden EI dC5at1'OJlo neural 1199
el embrion 1165 Las reservas de ncuronu generadas en el inkin del
La expresion localizada de los genes de segmenlacion desarrollo neural no se reemplazartn posterionnente 1200
esta regulada por una jerarqufa de senales de posicion 1166 EI momento y ellugar de nadmienlo de una neurona
EI prodUCIO de un gen de segmenlacion conlrola la expresion determinanin sus conexiones 12<)1
de otro gen generando un palnSn delallado Cada axon 0 dendrila se extiende gracias a un conn
los genes de polaridad del huevo gap y de regia par generan
un patrontransltorio que es recordado por otros genes
""
1169
de crccimiento situado en su extremo
El cono de crecimiento conduce ill lIil1'O a III neurita en
1203

Los genes de la polaridad de sesmento marcan las desarrollo a trav~s de una via definlda con precision 1205
subdlvlsiones lmslcas de ca a parasegmento 1169 Los telldos diana liberan (actores neurotr6ficos que
Resumen 1170 connolan el crecimienlo y la supervivencla de las
c~lulas nerviosas 1205
Drosophila y Ia genetka molecular del plItron Los valores posicionales de las neuronas gulan Ia
de fonnackSn.lI. Genea selec:toru home6ticos formacion de mapas neuronales ordenados: doctrina
y model_Ie de las partes del cuerpo 1171 de Ia espedficidad neuronal 1Z<l7
los genes selCClores home6licos del com~le}o bithorax Los axones de lados opuestos de la retina responden
y del complejo Anlennapedia definen as diferencias de fonna distinla al gradiente de las molt!culas
entre parasegmentos 1171 repelemes delleetum 1207
los genes seleclores home6llcos codifican un sistema de Los patrones difusos de las conexiones sinllplicas
marcadores moleculares de direccion 1172 se definen mediante la eliminadon de la sinapsls
Las regiones de control de los genes seleclores homeoticos dependlente de activldad 1209
Bctuan como chips de memoria de informacion La experiencia moldea el patron de conexlones sinllpticas
poslcional 1172 del cerebra 1210
La mosca adulta se desanolla a panir de un conjunlo Reliumen 12l!
de discos Imaginales que contienen In(onnacion
posicional 1174 BlbUograf{a IZIZ

xxxiv fndJce de materlas

 capItulo
Celulas diferencladas y conservaci6n de los tejidos 22
Manlenlmlento del est.do dlferendado IZl9 La m&luJa 6sea contiene las ~lulas madre hemalo~licas 1247
La mayorCa de las ceIuJas diferendadas rocuerdan $ll Las cElulas madre pluripolcnciaJes dan Iugar a 1000S los
canieter esenciallncluso en un nuevo entomo 1221 lipos de celulas sangufneas 1249
E1 eslado diferenciado se puede modular por 1'1 COlOma EI mimero de celulas san~rneas especializadas se ampUflCa
celular 1221 por divtsiones de celu as progenilontS determinadas 125<)
Resumen 1222 Los faetores que ~an la hemalopoyesis pueden
analitarse en tlvo 1251
Tejkloseon ceIulas pennanentes 1222 La erilropoyesis depende de la hormona eritropoyetina 1252
Las cEluias del centro del cristalino del ojn de un aduho En la produceidn de los neutr6fi1os y de los macrofagos
son residual del embri6n 1223 InOuyen mUltiples CSF 1253
La mayona de las celulas permanentes renuevan sus Las celulas madre hematopoyelicas dependen del comaclo
compo(: las celulas fOlOrreceplOras de la retina 1224 con cl!lulas que expresan el faclOr Steel 1255
Resumen 1226 El comportamiento de una cl!lula hematopoyl!tica depende
parclalmente del azar 1255
RenovaclcSn por blpartlclcSn simple 1227
La regulacion de la supervivencia celular es tan importante
Las funciones del hrgado como interfase enlre el tracto como la reguladon de III prollferadon celular 1256
dlgestivo y la sangre 1227
Resumen 1256
La pl!rdlda de celulas hep4ticllS estimula la proliferati6n
de celulas hepaticas 1230 Genesis, modulacldn y regeneracldn del nnisculo
La regeneracion requiere el crecimlento coordinado de los esqueletlco 1258
consutuyentes de los tejidos 1231 Las nuevas celulas del musculo esqueletico se fonnan
Las celulas endoteliales revisten todos los vasos sangulneos 1231 por fusi6n de los mioblastos 1260
l..as nuevas celulas endoteliales se gene ran por biparticion Las fibm musculares pueden modular sus propiedades
simple de celulas endoteliales ya existentes 1232 mediante cambios de las protelnas isofonnas que
Los capilares se forman mediante proliferaci6n 1233 """"n
En el adullO perslsten algunos mioblastos como celulas
1261

La angiogenesis esta controlada por factores de crecimiento madre qulescentes 1261

Uberados por los lejldos proximos 123'
Rnumen 1'"
Raumen 1235
loll;nbroblastos yaus lnnSformadones:: la familla
Renovaddn por medIo de cilulas madre: I. epidermis 1230 de 13.5 d1u1u d~ teJldo conJuntlvo 1262
las celulas madre pueden dlvidirse sin IUnite y dar lugar Los fibroblastos cambian sus caracterlslicas en respuesta
a una progenie diferenciada 1237 a sei\ales de la matrizextracelular 1263
Las celulas madre epidennicas se encuentran en La matriz exrracelular puede innuir en la diferenciaci6n
la capa basal 1238 de las celulas deltejido conjuntivo, afeclando a su
Las celulas epidennicas en diferenciaci6n sintetizan adhesion y a su forma 1264
una secucncia de queratinas diferentes a medida Distintas mol~ulas seftal aCluan de forma secuencial
que maduran 1239 regulando la produccion de adipocitos 1265
Las celulas madre epidennlcas son un subconjunto de EI hueso se remodela contlnuamente por medio de las
las celulas basales 1240 celulas que 10 constituyen 1265
La prollferacion de las celulas basales se regula en funci6n Los osteoblastos segregall matriz osea, mlelltras que los
del grosor de la epidermis 1241 osteoclastosla erosionan 1266
Las cEilulas secretoras de la piel est:!.n agmpadas en Durante el desarrollo, los osteocillstos erosionan el cartl1ago
glilnduJas que tienen su propill cim!tica de poblaci6n 1242 y se abren paso en el hUl:so 1269
Resllmen 1243 La estmclura del cuerpo cst:!. estabilizada mediante su
armaz6n de tejido conJuntlvo y mediante la cohesi6n
Renovacl6n por medlo de celulas madre plurlpotenclales: selectiva de las celulas 1269
formacl6n de las celulas sangufneas 1243
Resumen 1271
Existen U"es tipos prlncipales de gl6bulos blancos;
los granulodlos, los monocitos y los Iinfocitos 1244 A~ndlce Catillogo de las c~lulas del cuerpo humano adulto 1271
La produccion de los distintos tipos de celulas sangumeas
en la medula 6sea se halla controlada individualmente 1246 Blbllografla 1274

Capftuk!
El sistema inmunitario Z3
Base celular de la InmunJdad 1280 Los marcadores de superficie celular permiten distinguir
EI sistema inmunitario humano est' compuesto por y separar las celulas T de las cl!lulas B 1283
billones de linfocilos 1260 Eisistema inmunitario actua mediante la selecci6n clonal 12114
Los linfodtos B producen las repuestas humorales con La mayona de antigenos estimulan muchos clones
r anticuerpos; los Iinfocitos T producen las respuesla diferentes de Iinfodtos 1266
mediadas por celulas 1281
La mayona de 10slinfociloS recirculan continuamente 1266
Loslinfocilos se desarrolllln en los organos linfoides
primarios y reacclonan con los anlfgenos extranos La memoria inmunologlca se debe a la expansi6n clonal
en los organos llnloides secundarios 1282 y a la madurad6n de los linfocitos 1288

Indlce de materias
La falta de respueSla ante los ant(genos propios cs debida Las mol&ulas MHC y 1a presentacl6n del antrgeno
a una lolerancia inmunoldgica adquirida 1289 a las celulas T 1317
Resumen 1291 Ex.islen dos c1ases principalcs de moh!culas MHC 1317
Esludios por difraccldn de rayos Xrevelan ellugar de
Propledades funclonales de 10. anllcuerpot 1291 unidn al antfgeno de las protelnas MHC asl como
Los receplores de las celulas Bespedflcos para los el peplido de unidn 1319
anllgenos son moleculas de anticuerpo 1291 Las moleculas MHC de c1ase I y de c1ase Illienen
Las celulas B pueden ser estimuladas a segregar fundones distintas 1321
anticuerpos en una placa de cuhivo 1292 Las prolefnas CD4 y CD8 actl.ian como oorreceptores
Los anlicuerpos lienen dos lugares Identicos de unJ6n de unidn a MHC en las celulas T oolaboradoras y
aI anlfgeno 1292 ciloldxicas. respectivamente 1322
Una molecula de antlcuerpo estlt compuesta por dos Resumen 1322
cadenas ligeras ldt'!nlicas y dos cadenas pesadas
idt'!ntlcas 1293 Las dhl'" T cltot6xicas 1323
Existen cinco c1ases diferentes ,decadenas pesadas. Las cBulas T c1tol6xicas reconocen fragmenlos
cada una de las cuales tien~roPiedadeS biol6gicas de prote{nas vlricas en la superficie de celulas
dislintas 1293 infectadas por virus 1323
Los anticue~ pueden tener cadenas Iigeras Ie 0 A. los transponadoresABC codificados por MHC trnI1sfieren
pero no e ambos tipos 1296 fragmenlos peptfdicos desde el cltoso[ hasta
La intensidad de una inte11lcddn antfgeno-anticuerpo Ia luzdel ER 132.
depende tanto del mlmero de lugares de unidn ocupados Las celulas T citotdxicas Inducen a las cBuias diana
como de 1a afinidad de cada lugar de uni6n 1297 infectadas a deslruine a sf mismas 1325
La utilizacl6n del oomplemento por los anticuerpos Resumen 1326
contribuye a la lucha oont11llas infecciones baeterianas 1298
Resumen 1301 C4!lulas T oolaboradoru y actIvad6n de las cil.ulas T 1326
Las celulas T colaboradoras reconocen fragmenlos
La estroctun Rna de los antlcuerpol 1302 de protefnas antllnicas endocitadas. asociadas
Las cadenas Iigeras y las cadenas pesadas presentan con protefnas MHC de clue II 1327
regiones conslanles y regiones variables 1302 Las celulas T oolaboradoras se aetivan por las ct'!lulas
Las cadenas Iigeras y las cadenas pesadas contienen presentadoras de antfgeno 1328
Ires regiones hipervariables cada una. que en conjunlO 1 receptor de una cl!lula T forma parte de un gran
forman ellugar de unldn al antJgeno 1303 complejo de sel'ializacldn en la membrana plasmlttica 1329
Las cadenas Iigeras y las cadenas pesadas estltn plegadas Para aetlvar la cl!lula T colaborad011l se requieren dos
en dominios rcpetltivos similares 1303 senales slmultltneas 1329
Estudios por difraccidn de rayos Xhan revelado la eslruetura Las ct'!lulas T colaborad011l5, una vez activadas. se
tridimensional de los dominios de las Ig y de sus lugares estlmulan a sf mismas y a Olras ct'!lulas T para proliferar
de uni6n al antlgcno 1304 mediante la secreci6n de Interleuquina-2 1331
Resumen 1307 Para responder ante un antlgeno. la mayona de las
ct'!lulas Bnecesltan la partidpaddn de las ct'!lulas T
La generacldn de la dlvcl'llidad de los antlcuerpos 1307 colaboradoras 1331
Durante el desarroUo de las ct'!lulas B. los genes de los La aCtlvacldn de las cl!lulas B por dlulas T colaboradoras
anticuerpos se cnsmnblan a partir de segmcntos se produce tanto por sei'lales unidas a la membrana
gl!nicos aisllldos 1307 como por sel'iales segrcgadas 1332
cada regldn Vesta codlncada por Ollis de un segmento Algunas c~lulas T colaboradoras act ivan las ct'!lulas T
g~nico 1308 dtot6xlcas y los macrdfagos mediante la secrecldn
La unidn impredsa de los segmentos gt'!nlcos aumenta de Interleu<luinas 1333
la diversidad de las reglones V 1310 Resumen 1334
La hlpermutacldn somatlca dlrlglda por el antlgeno acaba
de afinar las respuestas de antlcuerpos 1310 Seleccldn del repertorlo de celulas T 1335
La unidn de los segmentos gt'!nJcos de los 8nticuerpos Las celulas T ~ue reconocen pl!ptidos asociados a
eSta regulada ast'gurando que las cl!lulas B sean las O1ol&u as MHC proplas son seleccionadas
monoespecrficas 1311 posltlvamente durante su desarrollo en el timo 1335
Cuando las ce1u1os Bson estlrnuladas por un anlfgeno. Las celulas T en desarrollo que reaccionan fuertemente
pasan de la producci6n de antlcuerpo ligado a la con los pt'!plidos propios unldos!l mol&ulas MIIC
membrana a la produccidn de la forma segregada propias son eHminadas en el tlmo 1338
del mismo antlcuerpo 1312 A1gunas formas alt'!licas de O1ol&ulas MliC no son
Las celulas B pueden cambiar la clase de anticuerpo efectivas en la presentacidn de antfgenos especfficos
que producen 1313 a las celulas T: genes de la respuesta inmunJlaria (/r] 1338
Resumen 1314 EI papel de las protefnas MIiC en la presentacidn del
antfgeno a las ct'!lulas T proporciona una explicaddn
Los receptoteS de las celulas T y sus subclases 1315 de las reacdones de trasplante y del polimorfismo MHC 1338
Los receptores de la celula T son helerodlmeros similares Las moleculas de reconocimiento inmunilario penenecen
a los anrlcuerpos 1315 a una antigua 5uperfamilia 133.
Las diferentes r~ueslas de las ct'!lulas T e51:\n mediadas Resumen 1340
por distintas ases de celulas T 1316
Resumen 1316 BlbUografia 1341

xxxvi rndice de materlas

 CallfIU]O
Cancer 24
1 cancer como un proceso de mlcroevoluddn 134' Difercntcs investigaciones sobre la base gen~tica del cancer
Los canceres dificrcn en fundon del tipo celular del convergen sobre disfunciones de un mismo pequci'lo
quedcrivan 134. gmpo de prolo-oncogenes 1369
La mayana de canceres derivan de una sola c~lula Un rOlo-oncog~n pucde ser convertido en onoo~nico
anormal 1348 e muchas mancras 1370
Probablemenle 101 mayona de canceres se inician por Las acciones de los oncogenes puede ensayarse
un cambio en 13 secuencia de DNA de una celuJa 134. individualmenlc 0 combinadas entre sf en tatones
Iransgenicos 1372
Una sola mutacidn no es sufidente para causar dim::er 1350
La perdida de ulla copia de Ull gen 5upresorde
Los canceres evolucionan mediante etapas lenlas a (umores puede gencmf predisposicion hereditaria
partir de c~lulas allcradas benignas 1352 aI ancer 1373
La progresidn de los tumores implica rondas sucesivas
La ~rdida del gen supresor de rumores de retinoblastoma
de mUlacl6n y selecci6n nalural 1354 illlerviene en muchos dnceres distinlos 1375
EJ de5arrollo de un clrn::er puede eslareslimulado
par faclore:s que no aheran la secuencia de DNA los virus de DNA tumorales aclivan la maquinaria
de replicad6n del DNA de Ia celula como pane de
de las cEluias 135' su eslflllegia para sobrevivir 1376
La mayo"a de canceres se producen jXW combinaciones
Los virus de DNA tumorales activan Ia maquinaria de
evitables de caU$ll5 ambtentales ~ 1356 replicaci6n de Ia celula bloqueando la aa:i6n de
J La bUsqueda de curaciones para el er es dura pero los genes dave supresores de tumores 13n
no imposible 1358 MUlaciones en el gen p53 inhabililan eI freno de
EJ crecimienlo cancel'OSO depende a menudo de emergencia de la proliferaci6n celular ycollducen
des6rdenes de la diferenciaci6n celular 1359 a una incslabilidad genElica 1378
Para fonnar metastasis, las eEluias caneerosas han Los clnceres colon-rec1a1es se desarrollan lentamente,
de sercapaces de cruzar la lo1mina basal 1360 a tra~ de una sueesi6n de cambios eslrocturales
Las mUlaciones que aumenlan la frecuencia de mUlaci6n visibles 1379
aceleran eI desarrollo del clncer 1361 Las mUlaciones que conducen aI clncercolon-rectal
FJ incremento de la capacidad de mUlar de las celulas pueden ser idenlificadas euminando las celulas
cancerosas confiere a eslas celulas una dena capacidad cancerosas y esludlando las faroilias propensas
de evadirse de la destrocci6n producida pordrogas a desanolJar clncer 1381
anticancerosas 1363 Dcleciones geneticas en las celulas cancerosas
Resumen 1364 colon-reclales revelan lugares de JM!rdlda de genes
supresores de tumores 1382
GenEtic. molecular del cAncef' 138' Las elapas de la progresi6n lumoral puede correlacionarse
Los retrovirus pueden aetuar como veclOres para los con dClcrminadas mUlacioncs 1382
oncogenes que modifiean el componamienlO celular 1365 Cada caso dc co1ncer sc caractcriza por su propia sucesi6n
Los renoviros recogcn oncogenes par accidente 1367 de lesioncs gcnelicas 1383
Un retrovirus puede transformar WHI celula huesped Restlmell 1384
inserlando su DNA en un lugar pr6ximo a un
protoonoogen del huesped 1369 8lbllografra 138'

(ndlce de materias xxxvii

Lexico de terminos utillzados en esta edici6n

allolaetose:: alolaC1osa
annealing::: onion, enlace
8ntipon:: Iransl'0rte de lntercamblo
antisense:: antisentido, sin sentido
backstitching:: punto hacia atr(l,s
beads on a string:: cuentas ensarladas
blofl '" transferencia
branch migration:: migration de la cadena
boundary:: limite
budding yeasl '" levadura de gemaci6n
bulk lesion:: gran lesion
cap", capucha. caperuza
capping:: fonnaci6n de la apucha 0 caperuza
catabolite activator protein:: pmlCrOa activadora de los catabolitos
chromosome walking" caminar por el cromosoma
cleavage = fragmentacion
cloth oftissue nuid = codgulo de plasma
cloverleaf = estructura en hoja de tr!lbol
cluster = grupo. 8gregaci6n
coaled pits:: depresiones revestldas (0 recublertas)
coaled vesicles:: ves{culas reveslidas (0 recubienas)
cohesive ends extremos cohesivos
E

coiled coil:: hl!lice sobreenroUada

combinatorial gene regulalion:: regulad6n Inica por combinad6n
core:: micleo. zona cenuai
cosmidll '" c6smidos (clones de C elegans en \"eClores del fago lambda)

C
oouflIerpan :: complemefllario
crossing-over" entrecruzamiento
cross-strand exchange:: intercamblo cruzado de cadenas; entrecruzamlento
decondensallon" desespirallzllcl6n
deep-elch:: subllmaci6n
depurination:: despurinad6n
derepressed:: desreprimido (operOn inducible)
directs:: gula
DNA-looping model for enhancer aClion" modele de acd6n de los aetivadores mediante asas
de DNA
domain shuffiing '" bamjado de los dominios
donor junction acceplOr:: enlace entre la regi6n dadom y la aceplora
donor splice junclion:: regi6n dadora en la maduraci6n
double minUle chromosomes:: pares de cromosomas diminulos
down-stream:lt en direccl6 3'
down regulation" reguJaci6n por disminuci6n
ear vesicle'" vesicula audltiva
engineered:: conSlruido in lJi/ro
enhancer elemelll '" elememo aetivador ("enhancer". aumentador. activador)
ezpression veclOrs '" veclores de expresi6n
feedback", renoalimemad6n
fingerprinl '" an.6Iisis de huellas daclilucs
fiston yeasl '" levadum de fiOOn
foolprinling", anaJisis de huellas
frameshifting'" modificad6n de 18 paUla de leclUra
freeze-drying", UofiUzacwn
freeze-etch'" grabado por oongelacl6n
fruit fly:: mosca del vinagre
gap junctions'" unlones comunicantes, uniones de tipo "gap~
gel-mobility shift studies:: experimenlos de retencl6n en geles
gene casseues '" caseues genicas
gene regulalOry prolein '" protelna reguladora de genes. protelna reguladora
generallranscription machinery:: maquinaria general para la llanscripci6n
genetic linkage '" Iigamiento genelico
hairpin:: horquilla
helix-turn-helix '" helice-vueIta-helice
helper virus '" virns auDliaf
heleroduplex joint '" uni6n helerodliplex
Holliday junCllon '" intermedio de Holliday
housekeeping'" constitutive

xlvi Nota de los traductorcs

 hybride selection" seleccl6n de hlbridos
hybride Ion" Ion hldruro (l.1)
Input" aporte
Insertional mutagenesis '" mutag~nesis por inserci6n
Interspersed repeated DNAs: secuencias repetidas intercaladas de DNA
iaclOse repressor protein" protefna represora de la lactosa
lagging strand" hebra retardada, hebra retrasada
lampbrush: plumulados [cromosomas)
large T-antlgen: antlgeno T grande
leader" gufa
leading strand: hebra conductora
leak" fuga (del K')
left-handed" lev6gira
Ugand: Iigando
mapp (to): haur un mapa
master gene: gen patron
maling-type '" tipo de apareamlemo
membrane zlppering mechanism" clerre de la membrana por cremallera
midbrain" mesenuralo
mismatch" error de apareamiemo
natural killer" ctIu1as agresoras naturales
nkk"muesca
NMR:: resonanda magne..lca nuclear
notochord:: notoconla
nuclear run on: run on nudear
M
M

nuclease-hipersensitive slle:: zona hipersensible a las nucleasas

nucleosome phasing:: distribuci6n de los nudeosomas en fase
off" Inactivado
on:: aetivado
output" salida
palch: mancha. porci6n. zona
patch clamp recording: rcgislro de zona
patching:: parcheamlento
pauem" patron
pellet:: precipltado
phase varlation" camblo de rase
photobleaching: fotoblanqueamienlo
playing head. aparnto reproductor
pollmerase chain reaction:: reacci6n en cadena de 1a pollmerasa
pool "aeervo
primase" primasa
primer" cebador
prlmosome:: primosoma
probe:: sonda
probe (to): sondar
processing" maduraci6n
proofreading mechanism" verlncaci6n de lectura
puff:: aSIl, protubernncla, lazo
puise-field gel electrophoresis = electroforesis en gel de campo pulsante
rate = propord6n, relaci6n
reading frame" paUla de lectura
recording patch" reglstro de zona
replication bubble: burbuja de replicacl6n
replication forc. horqullla de replicad6n
reporter gene" gen informative
restrlcuion fragmelll length polymorphism" polimorflsmo de longitud de fragmentos de
restricci6n
reverse genetics" gen~lica reversa, genl!!tica inversa
right-handed: dextr6girol
scanning: barrldo
sea squirt" ascldia
selfassembly = aUioensamblado
self splicing: automaduntci6n
selfish: egofsta. Interesado
SEM = microscopla electronica de barrido
SCmliki forest virus. virus semliki forest
sequence-specific DNA-binding protein:: protefna que se une a secuenclas espedfkas de:! DNA
shadowing = sombreado
shotgun" perdigonada
shulfling = mezdado, barajado

Nota de los traductores

xlyU
sinaplonemal: sinaplon~mico
single-slnllld DNA-binding prOlein: protefna de union aI DNA de una sola hebra
sile specific recombination: recombinacion de silio especifico
size: centro, lugar
slot: muesca
snRNP: RPNsn
solid bead: superficie de cuentas
space-filling model: modelo tridimensional
spliceosome: espliceosoma
splicing: madurati6n por corte y empalme
slable transcription complex: completo transcripcional eslable
staggered: escalonados, proluberamcs
staggered joint: union solapada, enlace 0 union de exrremos protubcrantes
start site: lugar de Initiation
start sile for RNA symhesis '" IJunto de inicio de la sintesis de RNA
step'" etapa
Slepwise: gradualmenle
SlOp codons '" codones de terminad6n
strand '" hebra, cadena
stringency '" rigor, grado, exigenda
subslractive hybridization: hibridaci6n subslractiva
subvert '" deslruir, traslomar
supercoil: sobreenroUado
swivel", desenml1amiento alrededor de la cadena imaeta
symport '" cotransporte unldirecclonal
target '" diana
TATA box '" caja TATA
template", patron, molde
tight junction", union hermetica, union fuene, uni6n estable
time-lapse microcinema: microcinematograffa a intervalos
tomato bushy stunt virus: virus achaparrado peludo dellomale
transcripts'" lranscritos
transposable", transponlble
transposases" lransposasas
trigger'" poner en marcha, disparar
trimming: ajuSle
tum off a gene", dcsactivar un gen
tum on a gene" actilr,n un gen
two-dimensional polyacrylamide-gel electrophoresis: elcclroforesis bidimensional en gel de
pollacrilamida
underfocus '" desenfocado
unipon '" lransporte sencl1lo
unwing" desenrollnr
upstream'" en direcclol1 5'
upstream promotor clemen I "elemento promotor en direcci6n 5', clemenlo promolor
video-enhanced COnlmst lighl microscopy: microscopia de contrasle vfdeo-ampliflcadn
western blotting'" lransferencia de prote[nas desde un gel de poliacrilnmlda a un mIra de
nallon 0 nltrocclulosa, lrnnsfcrencia de tlpo western
whisker" pelo, flceo
wind" enrollar, empa<luclar
wing bud", YClIla de ala
wobble (tcrccru base) '" b.1lanceo
zinc finger", dedos de cinc

xlviii NOla de los lraduclores

Introduccion
alacelula

El scntido de la escala: estas

eleclronrnicrograffas tomadas a
ampliaciones cada vez mayores
muestran celulas bacterianas sabre In
punta de un alfi1er domestico. (Por
cortesra de Tony Brain y de Science
Photo Library.)
E1ectronmicrografia de barrido de dlulas de levadura en desarrollo. Estos eucariotas unicelulares generan por gemaci6n
pequei'ias celulas hijas cuando se mulliplican. {Por conesia de Iva Herskowitz y Eric Sc::habatach.J
La evoluci6n de la celula
I
Deede"mr'f~""
_Iap_ _

.De"'~
a 101 eutarlobll

--...-
.De"~""'.'"

Todas las criaturas vivas estan fonnadas por celulas -pequefios compartimien-
tos rodeados de membrana y lIenos de una soluci6n acuosa concentrada de
compuestos qufmicos. Las rarmas mas simples de vida son celulas solitarias que
se propagan dividh~ndose ell dos. Los organismos superiores, como nasolTOS
mismos, son como ciudades celulares en las que grupos ~ clHulas rea1izan fun-
ciones especiaLizadas y estan tmidos por intrincados sistemas de comunicaci6n.
Las ct'Hulas ocupan un punto intermedio en la escala de la complejidad biol6gi-
ca. Las estudiamos para aprender, por un lado. c6mo eslan fonnadas a partir de
las mollX:ulas y, porotro. c6mo cooperan para constirnir un organiSIno tan com-
plejo como un ser humano.
Se cree que lodos los organismos, y ladas las celulas que los constituyen,
descienden por evoluci6n mediante se/eccion natural de una cl!Hula ancestral co-
mun. La evoluci6n implica dos procesos esenciales: (I) la aparici6n de una
IJtlriacMrr al azar en la infonnaci6n genetica transmitida de un individuo a sus
descendientes, y (2) la selecci6u de la informaci6n genetica Que ayuda a su pona-
dor a sobrevivir y multiplicarse. La evoluci6n es el principio central de la biolo-
gfa, ya que nos ayuda a comprender la asombrosa diversidad del mundo vivo.
Este capitulo, al igual que todo ellibro, se ocupa de la progresi6n desde las
moleculas hasta los organismos pluricelulares. Estudia la evoluci6n de la celula,
primero como unidad viva constituida par partes menores, y luego como bloque
constitutivo de estructuras mayores. A lTaves de la evoluci6n presentamos los
componentes y actividades celulares que se tratanin con mayor detalle en los capf-
tulos siguientes. y en una secuencia m~s 0 menos igual. Empezando con los orige-
nes de la primera celula en la Tierra, estudiamos c6mo las propiedades de cienos
tipos de grandes moleculas permiten que se transmila y exprese la infonnaci6n he-
reditaria y penniten que se produzca la evoluci6n. Rodeadas por una membrana,
estas molecuIas constituyen la parte esencial de una cefula que se replica a sf mis-
ma Luego describimos la rransmisi6n principal que se produjo en el transcurso de
la evoluci6n, desde unas pequenas celulas parecidas a baeterias haSIa unas celulas
mucho mayores y complejas, tales como las que se encuenlTan en los animales y
plantas actuales. Finalmente, sugerimos la manera en que las celulas aisladas, de
vida Iibre. dierol1 lugar quiUs a los grandes organismos pluricelulares, espccialj-
Z<1ndose y cooperando eo la fonnaci6n de 6rganos Ian complejos como el cerebro.
Es evidente Que presentar la celula a trav~ de su evoluci6n tiene sus riesgos:
las grandes lagunas de nuestro conocimienro s610 pueden superarse par medio
de especulaciones quizas err6neas en muchos delaUes. No podemos retroceder
en el tiempo para conocer los fen6menos moleculares que tuvicron lugar hace

3
miles de millones de aflos. Pero algunos sucesos antiguos han dejado muchas
huellas para nuestro amilisis. Plantas ancestrales. ani males y tambien bacterias
estan preservadas como f6siles. Aun mas importante, todos los organismos ac-
tuales proporcionan evidencias de las caracterfsticas de los seres vivos del pasa-
do. Concretamente, las moleculas biol6gicas actuales son una fuente rica de in-
formaci6n sobre el curso de la evolllci6n, ya que ponen en evidencia semejanzas
fundamentales entre los mas dispares organismos vivos y nos permiten organi- o
zar las diferencias que existen enfre ellos construyendo una escala objetiva uni-
versal. Estas diferencias y similitudes moleculares representan para nosotros un
problema semejante al que se enfrenta un literato que intenta establecer cwil es
el texto original de un autor antiguo. comparando varios manuscritos diferentes
que han sido variados por repetidas copias y ediciones. La tarea es dura y la evi-
dencia es incomplela, pero al menos es posible proponer conjeturas inteligentes L.o--trampa
acerca de las principaJes'fases de la evoluci6n de las celulas vivas.
o
calor
Desde las moIecuias hasta la primera celula I Figura I-I Tfpicoexperlmenloque
simula las condiciones en la Tierra
En condiciones prebi6ticas se pueden formar primil.iva. Se calienta agua en un
moMcuJas bioI6gicas ,,2 aparalo cenado que contiene CI"..
NH1 YH2 Yse hace pasar una descarga
Las condiciones que reinaban en la Tierra durante los primeros mil mill ones electrica a traves de la mezcla gaseosa.
de aflos son aun tema de discusi611. lEstaba inicialmente (undida la sllperficie En e[ tubo en U se acumuJan
terrestre? lContenfa la atm6sfera amonfaeo, 0 metano? Sin embargo, todo el compuestos organicos.
munclo parece estar de acuerdo en que la Tierra era un lugar violento, con erup-
ciolles volcanicas, relampagos y lIuvias torrenciaJes. Existfa muy poea, 0 ningll-
na, eantidad de oxigeno libre, y no existfa lIna eapa de ozono que absorbiera la
radiaci6n ultravioleta del sol. La radiaci6n, mediante su acci6n fotoqufmica,
pudo haber contribuido a que la atm6sfera fuese rica en moleculas reaclivas y
alejadas de su equiJibrio qu(mico.
Es probable que bajo estas condiciones se produjeran moleculas organieas
(es decir, moleculas que contienen carbo no) simples. La prueba mas clara de HCHO formaldehido
ello procede de experimentos de laboratorio. 5i se toman mezclas de gases como
HCOOH lllcido f6rmlco
CO 2, CH 4, NH 3 YH2 , se calientan con agua y se activan mediante descargas eICc-
tricas 0 radiaei6n ultravioleta, se observa e6mo los gases reaccionan formando HCN cianuro de h;dr6geno
pequenas moleculas organicas -por 10 general, un pequeno numero de mohku-
las diferentes, eada una de elias producida en grandes cantidades (Figura I-I). CH1COOH dcido actltico

Entre estos productos se cuentan diversos compuestos, taJes como el cianuro de NHiCHiCOOH glicina
hidr6geno (HCN) y el formaJdehfdo (HCHO). que en soluci6n acuosa sufrcn ra-
pidamente reacciollcs posteriores (Figura 1-2). Y 10 que es mas importallte, se ,
CH1CHCOOH dc,do Ilictico
generan moleculas representativas de la mayorfa de las prillcipaJes c1ases de OH
moleculas organicas encOnlradas en las celulas como aminoacidos, ClZllcares y
las parinas y pirimidinas necesarias para sintetizar Illlcle6tidos. ,
NHiCHCOOH alanina
CH,
Aunque estos experimentos no pueden reproducir con loda exactitud las
condiciones primitivas de la Tierra, pallen de manifieslo el hecho de que la for-
ruaci6n de moleculas organicas es sorprendentemente facil. Y In Tierra en for-
,
NH -CHiCOOH aarcosina
CH,
maci6n tenfa inmensas ventajas sobre cualquier experimentador humano; era
muy grande y podfa producir una amplia gama de condiciones. Pero, sobre NHI-C-NHi uraa

todo. disponfa de mucho mas tiempa -cientos de mil10nes de afios. En tales cir- "
0

cunslancias, parece muy posible que. en algl1n lugar y en algun momento deter-
minados, muchas de las moleculas organicas simples que se encucntran en las
NH 2r HCOOH dcido npllrtico
CH,
,
celulas acruales se acumularan en concentraciones elevadas. CaOH
Figura I -2 Algunos de los
Pueden desarrollarse sistemas quimicos complejos compuestos que se pueden fonnar en el
en un entorno alejado de su equilibrio qufmico experimenlo descrlto en 10 Figura I-I.
Los compueslos indicados en color
Las molecliJas organicas simples como los aminoacidos y los nucle6tidos se son componentes importantes de las
pueden asociar formando grandes polfmeros. Un aminoacido puede unirse a celulas vivas aClUaJes.

4 Capltulo I : La evoluci6n de la c~lula

 ...
.. Figura 1-3 Fonnad6n de
poUnude6tJdos y de pollpipUdos.
Cuatro tipos de nudoolidos (aquf
represenladoscon las letrasA. U, Gy
C) pueden sufrir una polimerizaci6n
espontanea con ~rdida de agua. EJ
producto es una mezcla de
'\ polinucle6tidos de longitud y
secuencia aleatorias. De forma similar,
aminmicidos de diferenles tipos,
simbolizados aqu{ mediante nombres
abreviados de Ires lelras, pueden
polimerizar entre eUos fonnando
polipe:ptidos. Las prolenas aetuales
estl\n fannadas a partir de un conjunlo
otro formando un enlace peptfdico. mientras que dos nucle6tidos se pueden esl3ndar de 20 tipos de amlnoacidos.
uni.r entre cUos mediante un enlace fosfodiester. La repetici6n de estas rcaccia
nes da lugar a polfmeros lineales conocidos como polipeptidos y polinucle6ti-
dos, rcspectivamentc. En los organismos vivos actuales, los polipeptidos --eono-
cidos como protelnas- y los polinucle6tidos -en forma de iicldos rlbonuclelcos
(RNA) y iicldos desoxlrribonuclelcos (DNA)- son considerados habitualmente
los constituyentes m;1s importantes. Un restringido conjunto de 20 amino;1cidos
forman los bloques constirudvos universaJes de las protefnas, mientras que las
mollkulas de RNA y DNA est;1n construidas a partir de cuatra dpos de nucle6ti-
dos cada una. Aunque no sabemos por que se seleccionaron estos conjulltos de
mon6meros en particular para biosfntesis en lugar de ouos qufmicamente simi-
lares, veremos que las propiedades qufmicas de los poJimeros correspondientes
los haecn especialmcnte adecuados para desempet'iar sus funciones especfficas
en la celula.
Los primeros polfmeros pudieron formarse de varias maneras -par ejemplo,
mediante el caJentamiento de compuestos argo1nicos secas a gracias a la activi-
dad cataHtica de las elevadas concentraciones de poLifosfatos inorgo1nicos u
otros catalizadores inorganicos crudos. Los prodUCIOS obtenidos de reacciones
simiJares en el laboratorio son polfmeros de longitud variable y de seeuencia
alealoria, en los que la adici6n de un aminao1cido 0 de un nucle6tido en un mo-
mento dado depende principalmenle del azar (Figura 1-3). Sin embargo, una vez
formado, un poUmero puede influir sobre reacciones qufmicas posteriores ac-
luando como un catalizador.
EI origen de la vida requiri6 que en un conjunto de moh~cuJas de este tipo
hubiera algunas que tuvieran, al menos en parte, una propiedad crucial: la capa-
cidad de catalizar reacciones que generaran, direcla 0 indirectamente, la pro-
ducci6n de mo1s moleculas del propio catalizador. La producci6n de catalizado-
res con esta propiedad aUlogenerativa especial estuvo favorecida y las molecuJas
mas eficientes en generar su propia producci6n captaron los materiales crudos
elimin;1ndolos de los procesos de producci6n de otras subslancias. De esla rna-
nera puede concebirse el desarrollo gradual de un sistema qufmico complejo de
mon6meros orgIDlicos y de polimeros que actuaban juntos generando m;1s mo-
leculas de los mismos tipos, alimentadas por materiales crudos simples del en-
torno. Un sistema autocalaJftJco como este tendrfa las mismas propiedades que
creemos que son las caracterfsticas de la materia viva: estarfa formado par una
gran cantidad de moleculas interactivas seleccionadas al azar; tenderfa a autorre-
producirse; compeLirfa con OITOS sislemas dependientes de la misma materia
prima; y si se eliminara esta materia prima 0 si se mantuviera a temperaluras
err6neas que alteraran el balance de las velocidades de reacci6n progresarla ha-
cia el equilibrio qufmico y ~morirfa".
Pero, ique ripo de motecuJas pudo haber tenido propiedades autocataUticas
como eslas? En las celulas actuales los catatizadores mas vers;1tiles son dos poli-
peptidos, compuestos de muchos aminoo1cidos diferentes con cadenas laterales
quimicamente diversas y por tanlo capaces de adopl'ar diferentes fonnas Lridi-

Desde las mol~ulas hasta la primera c~lu1a 5



.....
11.11
+

Figura 1-4 Pollnucle6l.1dos como

patNSn. Se produce el enlace

prderencial entre pares de nucleOtidos

(C con G y A con U) mediante enlaces
qufmicos relativamente debiles
(arriba). Este apareamiento permite
que un polinucle6tido actue como
patr6n para la sfnlesis de Olro
mensionales erizadas de lugares reactivos. Sin embargo aunque los polipeplidos polinucicOtido (izquierda).
son verstitiles como calalizadores no conocemos sistemas por los que una de es
[as mol&:ulas pueda aUlorreproducirse especificando directamente 13 fonnaci6n
de otra de 13 misma secuencia.

Los polinucle6tidos son capaces de dirigir su propia sCnlesis'

Los polinucle6lidos lienen propiedades que contrastan con las de los polipepti-
dos. Su capacidad como catalizadores es mas limitada pero pueden dirigir direc-
tamente 13 fonnaci6n de copias exaclas de su propia secuencia. Esta capacidad
depende del apareamlenlo complementarlo de subun.idades de nuclootidos, el
cual pcmtite a un polinucle6tido actuar como patr6n en 13 fonnaci6n de atro.
En el caso m~s simple un polfmero compueslO par un nucle6tido (por ejemplo.
acido policilidflico 0 poli C) puede aLinear en su superficie las subunidadcs ne-
cesarias para genera.r Olro polinucle6tido, (en esle ejemplo el addo poliguanRico
o poli G) favoreciendo asf su polimerizaci6n fonnando poli G (Figura 14). Debi-
do a que las subunidades C se unen preferentemente a las subunidades G, y vi-
ceversa, a su vez la molEkula de poli G favorecera la sfntesis de mas poli C.
Consideremos ahora un polinude6tido con una secuencia de subunidadcs
mas compleja, concrelameme una molecula de RNA formada por cuatro tipos
de nucle6tidos con las bases uracHo (U), aden ina (Al, citosina (C) y guanina (G)
dispuestas siguiendo una secuencia particular. Debido al apareamienlo comple-
menlario entre las bases A y U, Yentre las bases G y C, cuando esta molccula se
anade a lIna mezcla de nucle61idos activados y bajo condiciones adecuadas, di-
rigira la polimcrizaci6n de una secuencia complemenlaria a la suya. La nueva
molccula de RNA resultante sera una especie de molde del original, de manera
que cada A del original corresponded con una U en la copia, y asf sucesivamen-
teo La sect/encia de nucle6tidas de la cadena original de RNA conticnc una Infor-
maci6n que esencialmente se conscrva en las cadenas complemel1larias recicn
formadas: una segunda operaci6n de copia, tamando la cadena camplementaria
como palr6n, da lugar a la secuencia original (Figura 1-5).
Estos mecanismos de molde 0 patr6n complementario son elegantemente Figura 1-5 Repllcacl6n de una
sencillos y se hallan en la base de los procesos de transferencia de informaci6n secuencla de polinude6tldo (en este
de los sistemas biol6gicos. La informaci6n genetica contenida en cada celula caso una molb::ula de RNA). En el
paso I. la molecwa original de RNA
aClua como pan6n en la fonnaci6n de
una mol&:ula de RNA de secuencia
complemenlaria. En el paso 2. esla
molecula complementaria de RNA
LA SECUENClA LA SECUENCIA aClua a su \'ez como pan6n, fomando

j j
ORIGINAl FORMA COMPlEMENTARIA
LA SECUENClA FORMA LA SECUENCIA
moleculas de RNA de secuencia igual a
COMPlEMENTARIA ORIGINAL la original. Puesto que cada molec-ula
pan6n puede producir numerosas
copias de la hebra complemenlaria.
estas reacciones pueden dar lugar a la
-multiplicaci6n- de la secuencia
original.

6 Capftulo 1 : La evolucl6n de la cllula

esl~ codificada en las secuencias de nucle6tidos de sus moleculas de polinucle6-
tidos, yesta informaci6n se transmite (heredal de generaci6n en generaci6n me-
dianle las interacciones entre los pares de bases complementarios.
Sin embargo, para que se produzcan estos mecanismos de molde se necesi-
ta la panicipaci6n de catalizadores: sin una cataJisis espedfica, la polimeriza-
ci6n sabre un patron es lema e ineficaz y adem~s la formaci6n de r~plicas co-
rrectas est~ c1aramellle dificuhada por la existencia de reacciones competitivas.
En la actualidad las funciones catalfticas que replican polinucle6tidos est~n pro-
porcionadas par protefnas alta mente especializadas, Ilamadas enzimas. En cl
~caldo prebi6tico" quiz~ hubiera polip~ptidos primitivos que colaboraron en al-
guna tarea catalftica. Sin embargo la existencia de moleculas con especificidad
catalftica adecuada debi6 ser escasa a no ser que el propio RNA fuese capax, de
alguna manera, de favorecer su propia producci6n. Volveremos a estudiar las re-
laciones recfprocas entre las sfmesis de RNA y las sfntesis de protefnas, de cru-
cial importancia en todas las c~lulas vivas. Pero primero consideraremos qll~
puede ocurrir con el RNA, ya que las moleculas de RNA pueden presentar varias
propiedades catalIticas ademlis de actuar como patrones de su propia replica-
ci6n. Concretamente, una molecuJa de RNA con una secuencia de nucle6tidos
adecuada puede actuar como catalizador en la replicaci6n apropiada de otra
molecula de RNA -el patr6n- cuya secuencia puede ser arbitraria. Se cree que la
especial versatilidad de las moleculas de RNA ha jugado un papel central en los
procesos del origen de la vida.

Las moleculas autorreplicantes estan sometidas

ala selecci6n natural]'
Las mollkulas de RNA no son unicamente cadenas de sfmbolos que contienen in-
fomlaci6n de una manera abstracta. Tambien tienen personalidades qu(micas
concretas que afectan a su componamiemo. Concretamente, la secuencia de nu-
c1e6tidos detemlina el modo en que la cadena se pliega en soluci6n. Del mismo
modo que los nucJe6tidos de un polinucJe6tido se pueden aparear con nucle6tidos
complementarios Iibrcs de su entomo formando un nuevo polfmero, tambien se
pueden aparear con residuos complementarios de nllcle6tidos del propio poHme-
roo Una secuencia GGGG de una regi6n de una cadena polinucleotfdica puede for-
mar una asociaci6n reJativameme fuene con una secuencia ecce de OlTa region
de la misma mol&ula. Dichas asociaciones producen diversos pliegues tridirnen-
sionales. y eJ conjumo de la molOCuJa adopta una forma tfpica que depende com-
pletamente de la secuenda de sus nucle6tidos (Figura \-6).
La estructura plegada tridimensional de un polinucle6tido afecta a su esta-
bWdad, a su acci6n sobre otras moleculas y a su capacidad de replicaci6n. de
modo que no todas las formas de polinude6tidos tendnin igual ~xlto en una
mezcla de repLicaci6n. Ademlis resuha inevitable que en cualquier proceso de
copia se produzcan errores y las copias imperfectas del original se iran propa-
gando. Por 10 tanto tras repetidas replicaciones se generar:in continuamente
nuevas secuencias variantes de nucle6tidos. En estudios de laboratorio se ha de-
mostrado que los sistemas replicanres de mol~culas de RNA sufren una especie
de selecci6n nalUral a traves de la cual predominan diferentes secuencias favo-
rabies, seg(in cuaIes sean las condiciones experimentales ulilizadas. La que es
mas irnponame, las moleculas de RNA pueden ser seleccionadas por su capaci
dad de unir especfficamente casi cualquier olro tipo de molecuJas. ESlo tambicn
se ha demostrado en experimenws ill vitro que se inician con una preparaci6n
de cortas moleculas de RNA de secuencias de nucle6tidos al azar sintelizadas ar
lifieialmente. Esta mezcla se haee pasar a tra~ de una columna lIena de una re
Figura 1-6 Conformacl6ndeuna
sina a la que se ha un ida alguna substancia determinada. las moleculas de RNA mol~a de RNA. EI apareamiemo de
que no se unen a esta substancia pasan a trav~s de la columna y son eliminadas; nucle6tidos enlre diferentes regiones
el pequeno numero de moltkulas que se unen a ella es relenida y utiJizado como de In propin cadena de polillucle6tido
patr6n para dirigir la producci6n de multiples copias de su propia secuencia. (RNA) hace que la molula adopte
Esla nueva preparaci6n de RNA, enriquecida en secuencias que se unen a la una forma particular.

Desdc las molecuJas hasta la prlmera ~Iula 7

substancia escogida, se utiliza entonces como material de partida para repetir de
nuevo el proceso. Tras varios de estos ciclos de selecci6n y reproducci6n la mez
cia de RNA consiste en mUltiples copias de un relativamente pequeno numero
de secuencias, cada una de las cuales se une a la substancia de ensayo casi espe
cfficamente.
Por consiguiente. una mol6:uJa de RNA tiene dos caracterfsticas especiales:
transporta informaci6n codificada en su secuencia de nucle6tidos que puede
transmitir mediante el proceso de repUcaci6n, y tiene una estructura plegada
\lnica que determina la manera en que interactuara con otras moleculas y res-
ponder<1. a las condiciones ambientales. Estos dos rasgos -uno de informaci6n y
el otro de funci6n- son las dos propiedades esenciales que se necesitan para la
evoluci6n. La secuencia de nuc1e6tidos de una molecula de RNA es analoga al
genotlpo -Ia infonnaci6n hereditaria- de un organismo. La estructura tridimen-
sional plegada es anAloga aI renollpo -Ia expresi6n de la informaci6n genetica
en la que actUa la selecci6n natural.

Algunas moleculas especializadas de RNA pueden catalizar

reacciones bioqufmicass
La selecci6n natural depende del entomo, y para una mol~ula de RNA que se
replica, un componente mtico del entomo es el conjunto de las ouas mol6:ulas
de RNA de la mezcla. Ademas de actuar como patr6n para su propia replicaci6n,
estas mol~ulas de RNA pueden catalizar la rotura y la formaci6n de enlaces co-
valcnles, incluyendo uniones entre nucle6tidos. Por ejemplo, algunas moleculas
dc RNA especializadas pueden catalizar cambios en otras moMculas de RNA cor-
tando \a secuencia de nuc1e6odos en un punto determinado; otros opos de mo-
leculas de RNA eliminan espontaneamcnte una porci6n de su propia secuencia
y reunen los extremos cortados (un proceso conocido como ~automaduraci6n
por corte y empalmc", self-splicing). Cada reacci6n catalizada por una mol~uJa
de RNA depende de una ordenaci6n especffica de los alOmOS que ronnan la su-
perficie de esta mollkula de RNA cataJftica Oa ribozima), la cual hace que algu-
nos grupos qufmicos de uno 0 mas de sus nuc1e6tidos sean altamente reactivos.
Ciertas actividades cataJiticas pudieron tener una importancia capital en el
caJdo primordial. Consideremos una molecula de RNA que catalice el proceso
de polimerizaci6n utiJizando cualquier mol6:ula de RNA como patr6n. (Esta ae-
rividad ribozima se ha demostrado directamente in vitro al menos de una forma
rudimemaria.) Esta molecula catalftica puede actuar sabre copias de sf misma,
replicandose con elevada velocidad y el1ciencia (Figura 1-7A). Al mismo tiempo,
puede promover la rcplicaci6n de orras moleculas de RNA vecinas (Figura 1-78).
Algunas de cstas moleculas pueden desarrollar acciones cataliticas que ayuden 0
dificuhen la supervivencia 0 la replicaci6n del RNA en otras vfas. Si los crectos
beneficiosos son recfprocos, diferentes tipos de mollkuJas de RNA, especializa
das en diferentes actividades, pueden desarrollar un sistema cooperativo que se
replique con una eficiencia extraordinaria.

La informaci6n fluye desde los polinucle6tidos

a los polipeptidos'
Todo 10 expueslo sugiere que haee entre 3,5 y 4 mil millones de ailos, unos siste-
mas autorreplicantes de moleeuJas de RNA, mezeladas con orras moleculas or-
g<1.nicas como algunos polipeptidos simples, iniciaron, en alglln lugar de la Tie
rra, el proceso de la evoluci6n. Sistemas can diferentes dotaciones de polfmcros
compitieron por los materiales precursores disponibles para construir copias de
ellos mismos, tal y como compiten los organismos aClUalmenle; el exilo depcn-
di6 de la exactitud y de la rapidez con que se producfan las copias, y de la estabi-
lidad de las rnismas.
Sin embargo, como destacamos anterionnente, aunque la estructura de los
polinuele6tidos esta bien adaptada aI almacenamiento y replicaci6n de la infor

8 CapftuJo I : La evoluci6n de la ct!:luJa

 Figura 1-7 Dlagramadetre1lpasos
IAJ 181
luc:esivos en 10 evoluckSn dellistema
aulorrepllcante de molkulas de RNA
que son capaees de dlrigir la sintesls
proleica.

Mol6cula de RNA c.lalltieo que

une nucleol,do, pIl.a .eproduci.
IU mllma Heuel'\Cla de nucleolido,
y PO' 10 tenlo IU mllma fo.ma.

lei
Femilia de moIeculllS de RNA
C11lalilie&' que SCI mantienan
mUlUamenle, calaillando una de
ellal II reproducci6n de I.. ~un.

EvoluciOn de nueval mollk:ul.. de RNA ce..lilicot, algunllS de lal cua1ltl unen

por II sola, .m;nokido, ecl;yadol. Por .pareamiMlo de basel. un. morkul.
de RNA codifteenle, eSlas mol6culal de RNA perm lIen que una secuencla de
RNA ltCIue como molde 0 pIltr6n pa.a la .Inlesl. de pollmerOI de aminokidos.
gene ndo asJ III .~.ici6n de IllS prime"l secuenciel proteul del8lminlldu
gen6ticemente. De ell.lorm., estal molkulllS lICIuan como 10' prime.o,
lId~tlldorftenlre un. Heuend. de nucl.olidos y una seeuencla de .minokldo.

maci6n, suS capacidades catalfticas son lirniradas respecto a las de los polipepti-
dos. y en las celulas modemas la replicaci6n eficiente de los polinuclootidos es
absolutamente dependiente de las proleinas. En el origen de la vida cualquier
polinucle6tido que dirigi61a sfntesis de un polipeptido util debi6 tener en el am-
biente competitivo de la evoluci6n una gran ventaja para sobrevivir.
Sin embargo, ide que manera podia la informaci6n codificada en sus se-
cuencias determinar las secuencias de otro tipo de polfmeros? Sin duda, los poli-
nucle6tidos debieron actuar como catalizadores unicndo determinados amino-
Acidos entre sf. En los organismos actuales, un sistema de colaboraci6n de
moleculas de RNA juega un papel central en la direcci6n de la sfntesis de polipep-
tidos -Ia smtesis proteica- pero en el proceso lambicn colaboran otms protcfnas
previamente sintelizadas. La maquinnria bioqufmica para la sfntcsis proteica
estA notablemente elaborada. Una molecula de RNA contiene In informaci6n ge-
nctica de un polipeptido delerminado, en forma de c6digo, mienrras que otras
moleculas de RNA actuan como adaptadores, uniendo cada una de elias un ami-
nortcido especffico. Estos dos tipos de mol~culas de RNA forman pares de bases
complementarias entre sf. pemlitiendo que las secuencias de nucle6tidos del
RNA codificante dirijan la incorporaci6n de aminoAcidos especfficos, transpor-
tados por el RNA adaptador, a la cadena polipeptfdica en crccimienlo. Probable-
mente los precursores de estos dos tipos de moleculas de HNA dirigieron la pri-
mera sfntesis proleica sin la ayuda de prote{nas (Figura 1-7C).

Dcsde las mollkuJas hasta la primera eelula 9

 En la actualidad, estos procesos de ensamblaje de nuevas protefnas tiencn
lugar en la superficie de los ribosomas -partfcuJas complejas compuestas par va-
rias grandes moleculas de RNA de otro tipo, y por mas de 50 tipos diferentes de
protefnas. En el Capftulo 5 veremos que este RNA ribos6mico juega un papel ca-
talftico central en el proceso de la sfntesis proteica y constituye mas del 60 % de
la masa ribosomal. AI menos en terminos evoJutivos, este RNA es el componente
fundamental del ribosoma.
Asf pues, parece que el RNA dirigi6 la si'ntesis primordial de protefnas, qui
zas de una forma torpe y primitiva. De esta manera eJ RNA fue capaz de crear
herram!entas -en forma de protei'nas- que permitieron conseguir una biosfnte
sis mas eficiente. Algunas de estas proteLnas pudieron ser utilizadas en la repli-
caci6n del RNA y en el propio proceso de producci6n de herramiemas.
La sfmesis de protefnas especificas bajo la direcci6n del RNA requiere la
evoluci6n de un c6digo a trave:s del cual una secuencia de polinucle6tidos espe-
cifique la secuenda de aminoAcidos que formara la protefna. Este c6digo -el 00-
digo gelleticrr se deletrea en forma de un ~diccionario de palabras de tres Ie
tras: diferentes tripletes de nucle6tidos codifican amino,kidos determinados. EI
c6d.igo parece haber sido seleccionado arbitrariamente (tal vez sometido a algu-
nos condicionantes), y lodavfa hayes practicamente eJ mismo en todos los orga-
nismos vivos. Esto sugiere c1aramente que todas las celulas actuales descienden
de una lfnea celular primitiva que desarroll6 el mecanismo de sfntesis proteica.

Las membranas definieron la primera celula7

Uno de Jos acontecimientos cruciales que condujeron a Ja formaci6n de Ja pri
mera ceJuJa debi6 de ser eJ desarrollo de una membrana externa. Por ejemplo,
las protefnas sintetizadas bajo el control de un determinado tipo de RNA no facio
litarian la reproducci6n de este tipo de RNA a menos que pennanecieran en sus
proximidades; ademas, mientras estas proteinas luvieran libertad para difundir
entre la poblad6n de molecuJas de RNA en replicaci6n, padrla benefidar por
igual a cualquier especie compelidora de RNA que estuviera presente. $i surgfa
una varianle de RNA que producia un tipo superior de enzima, la nueva enzima
no podfa contribuir selectiuamente a la supervivencia del RNA variante en la
compelencia de este con los Olros RNA. La selecd6n de las moleculas de RNA de
acuerdo con la caUdad de las protefnas que generaban no pudo empczar hasta
que apareci6 alguna forma de companimiento que retuviera las protefnas pro-
ducidas por cada moll!cula de RNA y que par 10 tanto hiciera que estas protc(nas
quedaran disponibles s610 para el RNA que las produjo (Figura 18).
Esta necesidad de contener es ejecutada facilmente por otro tipo dc moll!-
culas que poseen la sCllcilla propiedad fisicoquimica de ser alljipdticas, 10 cual Figura 18 D1buJo esquematlco que
consiste en que una zona de la molecula es hidrof6bica (insoluble en agual y muestra la ventaja evolutlva que
suponen los compartlmlentos
semeJantes a una alula. En una
mezcla de moleculas de RNA
SIN COMPARTlMIENTOS CON COMPARTlM1ENTOS autorreplicantes capaces de realizar la
sfntesis proleica (laJ como se iluslra en
la Figura 1-7), cualquier forma de RNA
mejorada que sea eapaz de producir
una protefna mas uti! debe compartir
eSla prolefna con IOOas sus
competidoras. Sin embargo, si el RNA
comPllr\lmie",lO eSlli encerrado en un compartimiento,

G- como por ejemplo una membrana

Iipfdiea, cuaJquier protefna que
prodUZC8 quedm confinada para su
uso exclusivo: entonces, el RNA puede

G- ser selecdonado en base a su

capacidad de sinletizar una prolefna
mejor.

10 Capftulo I : La evolucl6n de la cBula

otra hidroftlica (soluble en agua). Cuando tales moleculas se encuentran en un
medio acuoso se agregan poniendo en {mimo contact'o sus zonas hidrof6bicas y
estableciendo contacto con el agua por sus zonas hidroHiicas. Moh~culas anfipa-
ticas de fonna adecuada se agregan espomaneamente formando bicapas, que
generan pequenas vesfculas cerradas cuyo comenido acuoso se halla aislado del
medio extemo (Figura 1-9). Este fen6meno se puede reprOOucir en el tubo de
.... .
ACfITE

I'," I"
~ ",
ensayo simplement'e mezclando fosfolfpidos y agua: en condiciones apropiadas. losfolipidos
se formaran pequenas vcsfculas. Todas las celulas acruales estan delimitadas por
una membrana plasmlillca formada por molcculas anfipaticas -mayoritaria-
mente fosfolfpidos- en csta configuraci6n; en las membranas celulares la bicapa
lipfdica tambien contiene protcfnas anfipaticas. AI microscopio electr6nico es-
tas membranas aparecen como laminas de aproximadamente 5 nm de grosor,
con un aspecto triestratificado caracterfstico, debido aI empaquetamiento cola-
con-cola de las molecuJas de fosfolfpidos.
Probablemcnle, las primeras celulas rodeadas de membrana se formaron
por ensamblaje espontaneo de moleculas de fosfollpidos del caldo prebi6tico,
incluyendo una mezcla de moleculas autorrepJicantes de RNA y orras moleculas.
No est3. claro en que punto de la evoluci6n de la caraJisis biol6gica y sintesis pro- Figura t -9 Formacl6n de membranas
teica se fonnaron las primeras celulas. En cualquier caso, cuando las moleculas par fosfolfpldos. Dado que esl3S
de RNA fueron confinadas con una membrana cerrada pudieron empezar a evo- mol~ulas denen una cabeza

lucionar eficazmente como transportadores de instrucciones gcncticas: pudic- hidroffiica y unas colas Iipomicas, en
ron ser seleccionadas no solamente en base a su propia estructura, sino tambien una inlerfase aceite-agua se alinean
esponlAneamente con la cabeza hacia
por el efecto que ejercieron sobre otras molecuJas de su mismo compartimiento.
el agua y las colas en eI aceile. En agua
Las secuencias de nucle6ridos de las mol4kulas de RNA pudieron ser expresadas
se asodan fonnando bicapas
en el caracter de la celula como un todo. vesiculares cerradas, en las cuales las
colas lipoffiicas esn\n en conlaClO can
Todas las celulas actuales utJlizan el DNA olras colas y las cabezas hidroffilcas
como material hereditario3, 6, 8 esl1n expueslas al agua.

Evidentemente, el cuadra que acabamos de presentar es especulativo: no exis-

ten dams f6siJes que registreo los origenes de la primera celula. Sin embargo,los
organismos actuales y los experimentos realizados proporcionan prucbas bas-
tante convincenles de que los rasgos principales de esta historia evolutiva son
corrcctos. La sfntesis prebi6tica de pequeflas moleculas, la autorreplicaci6n de
las moleculas de RNA catalitico, la uaducci6n de las secuencias de RNA a se-
cuencias de aminoacidos y el ensamblaje de las moleculas lipidicas formando
compartimientos rodeados de membrana: todo esto debi6 de ocurrir durante la
genesis de la celula primitiva hace unos 3,5 0 4 mil mi1lones de ailos.
Resllita uti! comparar estas celulas primitivas con las celulas actuales mas
sencillas, los mlcoplasmas. Son pequenas bacterias de un tipo degenerado que
normalmente lIevan una vida parasitaria en estrecha asociaci6n con c~lulas ve-
getales 0 animales (Figura 1-10). Algunos tienen un diameuo de aproximada-
mente 0,3 11m y s610 contienen el acido nucleico suficiente para codificar la sfn
tesis de unas 400 protefnas diferentes. Algunas de estas protcfnas son cnzimas,
otras son proternas estruclUrales; otras se hallan en el interior de la celula; otras
eSI3.n incluidas en su membrana. En conjumo los micoplasmas sintetizan las pe-
quenas moleculas esenciales que no se encuenlran accesibles en el entomo, re-
distribuyen la energia necesaria para conducir las reacciones biosintelicas y
mantienen las condiciones apropiadas en el interior de la celula.
Probablemcnte, las primeras celulas de la Tierra fueron menos sofisticadas y
se dividfan mas lentamente y con menor eficicncia. Pero existfa una diferencia
mas fundamental entre las celulas primitivas y un micoplasma 0 cualquier otra
c~lula actual: la informaci6n hereditaria en tOOas las celulas vivas actuales esta
almacenada en el DNA y no en el RNA, que es como se supone que las celulas
primitivas a1macenaban la informaci6n hereditaria. Ambos tipos de polinucle6- ',m
tidos se encuentran en las celulas actualcs. pera actuan de una manera coopera- Figura 1-10 Splroplasma citrll, lin
tiva, ya que cada uno ha evolucionado en el sen lido de desempenar [areas espe- mlcoplasma que crec::e en dlulas
cializadas. Pequenas diferencias qufmicas haecn que cada uno de los dos tipos vegetales. (Par cortesfa de J. Burgess.)

Desde las moleculas hasta la primera celula II

de moleculas sean adecuadas para funciones diferentes. El DNA actua como de-
.J.tem.. lM do. en.1 RNA
posilario permanente de la informaci6n genetica y a diferencia del RNA se halla

G
en las celulas principalmente en fonna de doble hebra, compuesta por un par de pohp6ptodol
moleculas complemenlarias de poLinucle6tidos. Esla estructura de doble hebra + rudimentariOli
haee al DNA eelular mas robuslO y estable que el RNA; lambien detennina que el
DNA sea relativamenle faciJ de replicar (vease el Capftulo 3) y pemlite que acrue
un mecanismo de reparaci6n que uliliza la hebra inlacla como patr6n para la
correcci6n 0 reparaci6n de la hebra lesionada asociada. El DNA dirige la sfntesis
de moleculas espedficas de RNA. de nuevo par el principio de apareamiento de
pares de bases complementarias, aunque el apareamiento se produce aquf entre
I EVOlUClON DE RNA
ADAPTAOOftES

...tem.. WNdOli en.1 RNA

'G"~liillil
{ipas de nucle6lidos ligeramente diferentes. Luego, las moleculas de RNA resul-
tantes, de una sola hebra, realizan olras dos funciones primordiales: dirigen la
sfntesis proleica tanto como moleculas de RNA codifrcantes (RNA me"sajeros)
como de RNA catalfticos (RNA rioosdmicos y otros no mensajeros).
Brevemente, se sugiere que el RNA apareci6 antes que el DNA en el proceso
evolutivO, presentando las propiedades genetica y catalilica; posteriormente, el
DNA tom6 el relevo de la funci6 genetica primaria y las protefn3s se constiluye-
ron en los principales catalizadores, mientras que el RNA qllcd6 relcgado a prin-
cipal intcrmcdiario entre ambos (Figura 111). Con el advenimiento del DNA, las
! eVOLutiON DE NUEVAS ENZIMAS
QUE GENERAN DNA Y LO COPlAN
EN MDLt:eULAS DE RNA

c6lulu lICtu.le.
celulas pudieron ser eada vez m<1s complejas, ya que pudieron eontcner y trans-
mitir una cantidad de informaci6n genelica mayor de la que podfa almaeenarse
de forma estable en las moJeeulas de RNA.

Resumen
G- --
Figura 1-11 Eltadl05 propueslos para
Las c8.ulas vivas surgiero" probablemente ell la Tierra gracias a in agregacidll es- la evolucl6n desde sencill05 sistemas
pontdlletJ de molkulns, lUlU aproximadnmente 3,5 mil millonet de alios. Sobre la aulornpUcanles de molecuJas de
base de nuestros COllocimientos acerca de los orgallismos actunles y de las molkulas RNA hasta las dlulas actuales.
que contie,len, parece probable l/f4e el desarrollo de los mf!amismos autocotaUricos AClualmcnle el DNA es el depositario
fundamentales para los sistemas vivie'ltes empezara con la evoilleldn de [a",ilias de la in(ormad6n gem'idca y el RNA
de molkulas de RNA que podfall catalizar su propia replicaci6", Con el tiempo, aClua mayoritariamente como
intermediario de la smtesis prOleica.
IIIUl de estas famiiias de RNA catalfticos cooperativos debid de desarrollar in IUlbili-
dad de dirigir in sflltesis de polipiptUlos. Fillalmente, debido a que Itl aclllmdacwn de
catalizadores proteicos penllitid la eoo/m:wlI de d/ulas mAs compiejas y eficiet.tes, el
DNA de doble lJebra substitllyd al RNA como moilada mtis estable para el almacenaje
de las calltidades creeielltes de in[ormacidll genetica requerida por estas dlulas.

De los procariotas a los eucariotas'

Se cree que lodos los organismos que viven aetualmente sobre la Tierra derivan
de una unica celula primitiva nadda haee mas de tres mil millones de aoos. Esta
eelula, superando a sus compelidoras, lom6 la delantera en el proceso de divi-
si6n celular y evoluci6n y, con el tiempo, cubri6 de verde la Tierra y cambi6 la
composici6n de su atm6sfera, convirtiendola en el hogar de la vida inteligente.
Los parecidos familiares entre lodos los organismos son demasiado acusados
para ser explicados de otra manera. Un hilo importante a 10 largo de esle cami-
no evolutivo se produjo haee 1,5 mil miJIones de aoos, cuando ocurri61a transi-
ci6n desde las eelulas pequeoas con una estructura intema relativamenle send-
Ua -las dcnominadas celulas procarlotas, que incluyen los divcrsos tipos de
bacterias- hasta las eelulas eucariotas, mayores y radical mente mas complejas,
tal como las encontramos hoy en los animales y plantas superiores.

las celulas procariotas son estructuralmenle simples

pero bioqufmicamenle diversas 'o
Las baClerlas son los organismos mas sencillos que se cneuenlran en la mayorfa
de Mbitats naturales. Se trata de c61ulas esfericas 0 alargadas. gencralmente de

12 Capflulo I : La evoluci6n de la c61ula

 . PpSRs
Spirillum
r-'- Figura 1-12 Estructuras y tamafi08
de procarlotas. (A) Algunas celulas

una e.p;roqU8ta
r,~,
I t ,
., ~
: II
procariOlas dibujadas a escala.
rB) Micrografia ele<:lr6nica de una
secci6n longitudinal de una bacleria
(Escherichia coil): el DNA celular esta
An.!n.ena luna cianobacterial I '.
.. concenlrado en la regi6n patida de la
figura. (Pur conesia de E. Kellenberger.)

-
'
-_.. '-:O:~'

::11+ '-
, ";.~"
"<;,; ....... .
.
~~
-.;.
.. l
~
~~I
8acillu.gtande

_ Eldlerichia <:oIi

e
_
Staph)'fof;ocan

Ridlarrsia

'8'
un dioimelro de varios micr6metros (Figura l-12). A menudo poseen una envol-
tura protectora resistente. denominada pared celulLlr. por debajo de la cual una
membrana plasm<itica rodea a un un..ico compartimiento citoplasmoitico que
contiene DNA, RNA. protefnas y pequeflas moleculas. AI microscopio electr6ni-
co, este interior celular aparece como una matriz de textura variable y sin ningu-
na estructura interna organizada evidente (vease la Figura L128).
Las bacterias son pequefias y se pueden replicar a gran velocidad, simple-
mente dividi6ndose en dos mediante fisi6n binaria. Cuando el alimento es
abundante, "Ia sllpervivencia del m<is apto" significa generalmente la supervi-
vencia de los que pueden reprodllcirse con mayor rapidez. En condiciones 6pli-
mas, una misma celula procariota se puede dividir cada 20 minutos, y por 10 mn-
to dar lugar a 5 mil millones de celulas (aproximadamente el mismo numero de
la poblaci6n humana l1lundial actual) en menos de 11 horas. La capacidad de di-
vidirse con rapidez permite que las poblaciones de bacterias se adaplCn n1pida-
men Ie a los cambios de su ambiente. Por ejemplo, en condiciones de laboralorio
lIna poblaci6n de bact'erias mantenida en un gran recipiente evoluciona en unas
cuantas semanas, mediante mutaci6n espontanea y selecci6n natural, y consi-
gue utilizar como fucnte de carbono nuevos tipos de mol6culas de azlicar.
En la Naturaleza las bacterias viven en una gran variedad de nichos ecol6gi-
cos y mllcstran la riqueza correspondiemc a Sll composici6n bioqufmica. Se

bact"..; ... a""".6bicJI. qutl vi",... en

condK:ioneI Kid.. C111ient.. (po. e1"mplo.
bKtllria. del alufr,,)
AAOUE8ACTERIAS baallria. qutl vi",... "n condk:ioneI Alin. .
(procarloltl.1 extrernas(hal6fi1as al<t.......1
bKtaria ...".6t>M;oI. que redocen "I C<h
rnetllrlO (melanOg"n..)
PAOCARIOTA
ANCESTRAl baalrias gram positivas

Figura 113 Reladones famlUares

EUBACTERIAS cianobooaeriQ (algas lI'8fde.8l\llnl entre lin bacteria5 actuales. Las
(procariotnl flechas indican posibles vfas de
bKlerias pojrpurasloloslntetizadoras
evolud6n. El origen de las celulas
eucariotas se discute mas adelanle en
el texto.

Dc los procariotas a los eucarlotas 13

pUeden reconocer dos gropos distintos: las eu#XU;terias, que son las formas ml1s
habiluales y viven en el suelo, el agua y los organismos vivos; y las arque#XU;te
rias. que se encuentran en ambiemes Ian inc6modos como cienagas, prohmdi
dades marinas, aguas saJobres y Fuentes ~cidas calientes (Figura 1-13).
Existen especies de baCierias que pueden Ulilizar como alimento praclica-
mente cualquier tipo de molecuJa organica, incluidos azucares, aminol1cidos,
grasas, hidratos de carbono, poLipeptidos y polisacaridos. Algunas son capaces
incluso de obrener los l1tomos de carbono del CO 2 y los <110mos de n.itr6geno del
N2 A pesar de su simplicidad relaliva, las baclerias han sobrevivido durante ml1s
ticmpo que cualquier Olro organismo y todavfa constituyen el tipo de celulas
nuis abundante de III Tierra.

Las reacciones metab6licas evolucionan 10, II

Una bacleria que crezca en una soluci6n salina que contenga un unico lipo de
Fuente de carbona, como par ejemplo la g1ucosa, debe reaJizar un elevado nu-
mero de reacciones qu!micas. No 5610 debe obtener de la g1ucosa la energia qur
mica necesaria para muchos procesos vitales, sino que tambil~n debe utilizar los
l1tomos de carbona de la g1ucosa para sintetizar todos los tipos de moleculas or-
ganicas que la c~HuJa necesita. Estas reacciones estan catalizadas por cientos de
enzimas que trabajan en "cadenas" de reacciones, de forma que el produclo
de una reacci6n es el sustrato de la siguiente; estas cadenas enzimaticas, deno-
minadas uias metab6licas, se estudiarl1n en el capitulo siguiente.
Probablemente cuando empez6 la vida sabre la Tierra estas elabaradas re-
acciones metab6licas eran poco necesarias. Las celulas padron sobrevivir y cre-
cer gracias a las maleculas de su entoma. Pero a medida que se agataron estos
recursos naturales, la competencia par estas limitadas Fuentes de recursos Fue

metllboli1os esequibln

......~..~
metabolito eMqulbie

"""" ~ A----
en .. medio extemo

.---. Figura 114 Dosmanerasposiblesa

C
tram de las cuaJes pudleron
evoluclonar las vias metab6l1cas.
(A) La <:t!lula de la izquierda tiene a su
disposid6n una serie de substandas
afines lA, B, C, D) produddas por
sfntesis prebi6tka. Una de elias, la

2 C_Q A

substanda D, es mctab61icamente utiJ.
Cuando la cl!lula agota la reserva
disponible de D, obliene una ventaja
selectiva con 11'1 evolud6n de una
- _.....><c-C
nueva enzima que puede produdr 0 a
nueva eruime nueva enzima partir de la subslanda afin C.
Mediante una sene de pasos similares
pueden haber 5urgido vias melab6licas
J fundamentalmente importantes.
A (B) A la derec.ha, un compueslO A
metab6licamente util se halla
nueva anzima
disponible en abundanda. En el
transcurso de 11'1 evolud6n apare<:e una
enzima que, por casualidad, tiene la
capacidad de convertir la substanda A
en la substancla B. Luego se produ<:en
otr05 cambio! dentro de la <:l!lula. que
Ie permilen ulilizar la nueva
subslanda. La apand6n de otras

tAl ,,, enzimas puede dar lugar a una larga

cadena de reacr:iones.

J4 Capitulo I : La evoluci6n de la dlula

 Figural-IS Elenlacetl~ler.

tiol jcido e.rtxndlico

cada vez mas intensa. Los organismos que habfan desarrollado enzimas para fa-
bricar moleculas organicas posefan una gran ventaja selectiva. De esta manera,
se cree que la dotaci6n de enzimas de las celulas aumenl6 gradualmente. gene-
rando las vias metab61icas de los organismos actuates. La Figura 1-14 muestra
dos maneras plausibJes por las que podria habeT surgido una via metab61ica du-
Tame la evoluci6n.
5i las vias metab61icas evolucionaron por adici6n secuenciaJ de nuevas reac-
danes enzimalicas a las ya existcnlcs, las reacciones mas antiguas. aJ igual que
los anillos mas viejos del troneo de un arbol, deben de hallarse mas pr6ximas al
centro del ~arbol mClab61ico", donde se sinlelizan los bloqucs constitutivos lllO-
leculares basicos mas esenciales. Esta posici6n central delmctabolismo esta cla
ramente ocupada par los procesos qufmicos en los que intervienen los azucares
fosfato. Entre estos procesos el mas central probablemcntc es la secuencia de re
acciones conocida como glucollsls mediante la cualla glucosa puede ser degra
dada en ausencia de oxfgcno (es decir, de fonna Qflaer6bica). Las vias metab6li-
cas mas antiguas debieron ser anaer6bicas ya que no exist!a oxigeno Jibre en la
alm6sfera de la Tierra primiliva. La glucolisis se produce prncticamente en todas
las celulas vivas e impuJsa la fonnaci6n del compuesto adenosfn trifosfaco 0 ATP,
que es utilizado par todas las celulas como una ve~lil fuente de energfa qufmi-
ca. Algunos compuestos r;oesrer desempenan un papel fundamental en las reae-
ciones de uansferencia de energ{a de la glucolisis y en un gran numero de oUos
procesos bioquimicos basicos en los que dos moleculas organicas (un grupo tiol
y un addu carboxl1ico) se unen mediante un enlace rico en energia en el que in-
terviene el azufre (Figura 1-15). Se ha argumentado que esta simple pero pode-
rosa estrategia es una reliquia de procesos prebi6ticos. que relleja las reacciones
que tuvieron lugar en el ambiente suJfuroso volcanico de la tierra primitiva. an-
tes incluso de que el RNA huhiera empezado a evolucionar.
Conectados a estas reacciones centrales de la glucolisis se encuentran den-
tos de procesos quimicos diSlintos. Algunos de ellos son responsables de la sfn-
tesis de pequefias moleculas, muchas de las cuales SOil utilizadas en reacciones
posteriores para producir los grandes polimeros especfficos del organismo. Otras
reacciones se utiliZ81l para degradar a unidades qufmicas m<1s simples moleculas
complejas ingeridas como ali menta. Uno de los rasgos mas notables de estas re-
acciones metab6licas consiste en que se producen en todos los tipos de organ is-
mos, 10 cual sugiere que su origen es extremadamente antiguo.

Comparando secuencias de DNA se pueden deduci.r

relaciones evolutivas '1
Las enzimas que catalizan las reacciones metab6licas fundamentales, sin dejar
de desarrollar las mismas fundones esenciales, sufrieron modificadones pro-
gresivas a med.ida que los organismos evolucionaron hada fonnas divergemes.
Por esta raz6n la secuencia de aminoacidos del mismo tipo de enzima de dife-
rentes especies actuales proporciona un fndice extremadamente valioso de la re-
laci6n evolutiva existente entre esras especies. Los resultados obtenidos mues-
tran un estrecho paralelismo entre este fndice y los proporcionados por oUos
metodos. como por ejemplo el regisuo f6sil. Una fuente de informaci6n aun mas
J rica se halla presente en la c~lula viva en las secuencias de nucle6tidos del DNA.
Metodos modernos de anlilisis pcnnilen determinar estas sec/lencias de DNA en
un gran numero de especies y compararlas entre sf. Las comparaciones de se-
cuencias altamente conservadas. que tienen un papel central y por consiguiente

De los procariotas a los cucarlotas 15

-------- -
 hombre Figura 1-16 Relaclones evolutlvas
entre los organlsmos, deducldas a
partir de las secuenclas de
hongo nucle6tldos de los genes de la
mllil
subunJdad rlbosdmlca pequefta. Eslos
genes presentan secuencias altamenle
conservadas, que han cambiado Ian
L __ protOlOOS eiliados lentamenle que pueden ser utilizadas
para medir las relaciones filogen~ticas
L Oictyo$te/ium
abarcando el conjunlo entero de los
,..- EugMrY organismos vivos. Los datos sugieren
que los linajes de las plantas, animales
L tripaOOlOmll
y hongos divergieron de un ancestro
L mierosporidios comlirt relativamente tarde en la
historia de las dlulas eucariotas.
L Gi.rdi.
Halobacterium y E. coli son
procariotas; eI resto son eucariotas.
L
[===========~H:':""""::M:":m~ E. <OIl
Giardia, los rnicrosporidios, los
tripanosomas. Euglena, y los
protOZOOS ciliados son protistas
(eucariotas unicelulares). (Adaptado
durante la evoluci6n 5610 cambian lemamente, pueden poner de manifiesto pa- de M.L Sogin. J.H. Gunderson, H.I.
rentescos entre organismos Que divergieron hace tiempo (Figura 1-16), mientras Elwood, R.A. Alonso and DA. Peanie,
Que secuencias Que evolucionan rapidarnente pueden utilizarse para detenninar Science243:75-TI, 1989. C 1989 the
c6mo evolucionan especies fmimamente relacionadas. Es de esperar Que la con- AMS.)
tinua aplicaci6n de estos metodos permitira seguir el eurso de la evoluci6n con
una exaetitud sin preeedentes hasta el momento.

Las cianobacterias pueden fijar CO2 YN2 13

A medida Que se intensific6 la competencia par los materiaJes crudos necesarios
para sfntesis organica, los organismos eapaces de utilizar directamente de la at-
m6sfera atomos de carbona y de nitr6geno (en forma de COz y de Nz) tuvieron
mas venlaja. Sin embargo, aunque el COz Yel N2 eran muy abundantes, tambien
resuhaban muy estables, par 10 que era necesaria una gran cantidad de energfa y
un elevado numero de reacciones qufmicas complicadas para transformarlos en
formas utilizables -es decir, en moleculas organicas como los azl1cares simples.
En el caso del CO 2, el mecanismo principal que apareci6 para conseguir esta
transformaci6n fue la fotosfntesls, en la que la energfa radiante obtenida del sol
se utiliza para facilitar la conversi6n de CO 2 en compuestos orglinicos. La inter-
acci6n de la luz solar can una rnolccula de pigmento, la clorofila, excita un el~c
tr6n que pasa a un estado de mayor energfa. Cuando el electr6n cae de nuevo a
un nivel de menor energfa, la cnergra que se desprende impulsa unas rcacciones
qufmicas, facilitadas y dirigidas por moleculas proteicas.
Probablemente lIna de las primeras reacciones impulsadas por la luz solar fue
la generaci6n de "poder reductor". Los atomos de carbono y de nitr6geno del CO 2
ydel N2 atmosfericos se hallan en un estado oxidado e inerte. Una manera de con-
seguir que sean n1<1s reactivos para que participen en las reacciones de biosfntesis
consiste en reducirlos --es decir, en proporcionarles una mayor cantidad de elec-
trones. EUo se consigue en varias etapas. En la primera, se Iiberan electrones de
dadores debiles de electrones, y se transfieren a un dador fuerte de electrones, por
medio de la dorofila, a traves de una reacci6n en la que imerviene la Iuz; en el pro-
ceso de reducci6n el dador fuene de electrones se utiliza para reducir el COlO el
N l , EI estudio de los mecanismos de o[Qsfntesis en diversas bacterias actuales su-
giere Que una de las primeras fuentes de electrones fue el H;zS, siendo el producto
residual primario el azufre elemental. Mas tarde se lIev6 a cabo el proceso mucho
mas diffcU, pero en ultimo termino mas rentable, de obtener electrones del H20 y
el 0l fue Iiberado en grandes cantidades como producto residual.
Actualmente las cumobaclerias (conocidas tambien como algas azules) son
una via principal a traves de la cual el carbono y el nitr6geno son transformados

16 Capftulo 1 : La evolucl6n de la c~lula
en molttlilas org<\nicas, penelrando asf en la bios/era. Constituyen los organis+
mos mas autosuficientes de los que viven en la actualidad. AI ser capaces de "fl
jar" el CO 2 y el N 2 en mohkuJas organicas estan capacitadas. en una primera
aproximaci6n, para vivir linicamente del agua, del aire y de la luz solar; es pro-
bable que los mecanismos mediante los cuales 10 consiguen hayan pennanecido
esencialmente constantes durante varios miles de miUones de anos. Conjunta-
mente con otras bacterias que tienen algunas de estas capacidades. crearon las
condiciones adecuadas para la evoluci6n de otros tipos de organismos mas
comptejos: en Cllanto alglin tipo de organismos fue capaz de sintet'izar a partir
de material inorga.nico crudo la gama completa de componentes organicos celu
lares, Olros organismos pudieron subsistir alimentandose de los sintelizadores
primarios y de sus productos.

Las bacterias pueden realizar la oxidaci6n aer6bica

de las moleculas nutritivas 13
Actualmente mucha gente estc1 preocupada. yean raz6n, por las consecuencias
ambientales de las actividades humanas. Sin embargo. en el pasado otros orga-
nismos provocaron tambien (aunque mucho mlis lentamente) cambios revolu-
Figura 1-17 EI oxigeno atmos(~rico
cionarios en el medio ambiente de la Tierra. Est'e cambia resuJta especialmente
y el curso de la evolucl6n, Relaci6n
evidente en cuanto a la composici6n de la atm6sfera terrestre, que a traves de la entre los cambios en los niveles de
fotosfntesis (proceso que Liber6 oxfgeno) fue transformandose desde una mezela oxfgeno atmosferico y algunas de las
prc1cticarnente carente de oxigeno hasta una mezcla en la que el oxfgeno consti principales elapas que aI parecer
tuye un 21% del total (Figura 1-17). ocurrieron durante la evoluci6n de los
Puesto que el oxigeno es un elemenlo qufmico extremadamente reactivo. organismos vivos sobre la Tierra.
que puede interaccionar con la mayorfa de los constituyentes citoplasmaticos. Como se indica, las evidcncias
debi6 de ser t6xico para muchos organismos primitivos. al igual que 10 es para geol6gicas sugieren que pasaron mas
muchas bacterias anaer6bicas actuales. Sin embargo. esta reactividad tambien de mil millones de afios entre la
proporciona una fuente de energfa quImica, y por tanto no es sorprendente que aparici6n de las cianobacterias
haya sido utilizada por los organismos en el transcurso de la evoluci6n. Utilizan- {probablemenle el primer organismo
do oxfgeno, los organismos pueden oxidar de manera mas complela las molecu- que Iiber6 oxfgenoJ yel momento en
las que ingieren. Por ejemplo, en ausencia de oxigeno, la glucosa linicamentc que los niveles de oxfgcllo empezaron
a acumuJarse en la atm6sfera. Se cree
puede ser degradada hasta acido laetico 0 etanol. los productos finales de la g1u-
que este illlervalo rue debido
coLisis anaer6bica. Pero en presencia de oxigeno, la gJucosa puede ser degradada fundamemalmeme al rico apone de
completamente a CO2 y H2 0. De esta manera se puede obtener mucha mc1s hielTO fefTOSO disuelto en los oreanos,
energia por cada grarno de g1ucosa. La energia Jiberada en la respiraci6n -Ia oxi+ que reaccion6 con el oxfgeno liberado
daci6n aer6bica de las 1110lecuJas alimenticias- se utiliza para impulsar la sfnte- formando enormes dep6sitos de 6xido
sis de ATP. de una manera muy parecida a la que los organismos fotosinteticos de hierro.

NIVELES DE
OXIGENO EN LA imcio del acumulo
ATMOSfERA
('%1 10 -,:=::::::::::=,,;:::=::::=:::-:::::::=::;~r6Pido
;,;
d e 0, (M W' dill
IIbI oct.nos 10 utltl~l

TIEMPO
IMllES DE

~L~~~~
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011
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lo.od.no. M '--r-'
I
'( de 10. prime<1l primer. liberllei6rl origem de I.. c6lula. primeros
continente. ~'U'llt de olllg..,o por foto'intMicas vertebr.dos
form,clon viva. foto.lnte.la eucarlotllt
de I. T,err, I. r..piraclOn
p'imer.. c6lulas N,6bica primeroa anim.l.
fotoa.intttica. .. g..,er.lia V pl.nU. plurioalulares

De los procariot8s a los euearlotas 17

 seceion ultrafina de una dlula
CELULA ANIMAL animal indiferenciada
CELULA VEGETAL
E

,,
~ _ _ elo.oplasto d
mitocondria
membrana
plasm'liu
---H-I
.etk:ulo .7"--I~
endop!asm6lic:o

centrlolo
~--- eilosol --.,fl
,~"f--- complejo de ---IT
Golgi

~r--_ citoesquelelo. --.J.l.

filllmentOllO -

6 " - - - .......

fo----1f>-.311Illn'-----< I'

COMPLEJO OE GOLGI
Un sistema de stlculos apilados, Iimitados por membrana V
aplan8dos, impllcados en Ie modificacion, seleccion y
empaquetamiento de macromoleculas para la secreci6n 0 para
Ie 8llportacion 8 0lr08 6rganulos.

Alrededor del complejo de Golgi se ~ @~

encuentran numerosas vesiculas pequenas {!) - @~
rodoedas de membrana Ide mas de 50 oml. (?) ~~
58 cree que transportsn material dade al 0 ~
complejo de Goigi II los diferentes
compartimentos de III ulula.

18 """1-1 C6u1u eucariolas: esquema de sus prindpales org'n uJos.

 NUCLEO
El nudeo os 01 orgi!lnulo mob aparente
'1.-----~:.3~-'~D~'~m::;::::=--...." I
de la celula. ESla separado del citoplasma
por una envoltura farmada por dos membranas.
Todo oj DNA cromos6mico se encuentra
en 01 nucleo, empaquetado en fibres de
cromatine gracias 8 su 8sociaci6n con una
caolidad igual de protefnes histones.
EI contenldo nuclear. 01 nucleoplasma,
se comuniC8 con al citolol por medic de
unas aberturas de Ie envollura nuclear
denominadas pores nucleares.

nue~lo; un. 16brica

denlre del nUeIeo.
donde .. IIflsamblan
lot ribosomes d. te
,"".
crOffialina

CITOESQUELETO
En 01 citosol, unes agrupaciones de filementos proteicos
forman redos que Ie confiaten a III celula su forma y que
consliluven Ie base de sus movimientos. los Ifes
principatos tipos de elementos del citoesquelelo son:
MITOCONDRIAS
Aproximadamente del tamano de las bacterias. las mitocondrias son
las centrales energeticas de todas las cillulas eucariotas; utilizan la
energla obtenida combinando oxlgeno con moleculas nutritivas para
producir ATP.

1. microtubulo,
25nm
diametro
membrana inllma pleg.d.
lorm.ndo crest.,
~~-:;;
i
0,5
,m
2. filamentos tie actina
.:= 80m
diametro 1
3. filamentos intermedios
10nm I., laM' termlnale, d. el espaeio de I. m.tnz contiene
diametro 18 oKld.clOn tlenen lug una aoluciOn cancentr.d. de
en la m.mbr.n. lnterna muchas enzlmas dilerentes

ORGANULOS ESPECIALES DE LA CeLULA VEGETAL

Vacuole: Una vesicula muy grande.
Cioroplastos: Estos plastos, que contienen clorofila. son limitada por una membrana unitaria.
organulos rodeados por una doble membrana. y sa que ocupa hasta el 90% dal volumen
ern:uantran an todas las ptantas superiores. Un alaborado celular; Ie vacuola actua en la
sistema da mambranas en al interior del cloroplasto regulaci6n de Ie presi6n osm61ica
contiene el aparato fotosintetizador. y tambien an Ie digesti6n
intrecelular.
membrana elder.... lilacoide membrana pl.smjtica
membrana de la vacuola Uonopl8llo1
estroma
Pared celular: las celutas
vegetale. est'n rodeadas
por una pared rfgida formllda
por fibrillas de celulosa
depositadas en una mauiz
form ada por otrOI poIisadrido. PO''''
caluler ,[
1---- -5~m -
>oJ -< 0.110 II
membrane pl.",,6tica

19
producen ATP a partir de la energia de la luz solar. En ambos procesos existe una
serie de reacciones de transferencia electr6nica que genera un gradieme de H+
entre el exterior y el interior de un compartimiento rodeado por una membrana;
el gradienle de H' se utiliza luego para impulsar la sintesis del ATP. Actualmente,
la respiraci6n es Ulilizada por la gran mayona de organismos, incluidos la mayor
pane de los procarimas.

Las c~luJas eucariotas poseen varios organuJos caracterfsticoS'4

tQu~ sucedi6 con los organismos anaer6bicos, con los que habfa empezado la
vida, en cuanto se hie acumulando oxfgeno molecular en la atm6sfera? En un
mundo rico en oxfgeno, que no podfan utiJizar, se hallaban en franca desventaja.
Es indudable que algunos se extinguieron. Otros desarrollaron la capacidad de
respirar 0 encomraron nichos en los que escaseaba el oxigeno y en los que pu-
dieron continuar un lipo de vida anaer6bica. Otros, se transformaron en preda-
dores 0 partisitos de las celulas aer6bicas. Y algunos parece que descubrieron
una estrategia de supetvivencia mds astuta y mas rica de implicaciones para el
futuro: se cree que formaron una asociaci6n intima con un tipo aer6bico de ce- Figura 1-18 EI nt'icleo celular. E1
lula, viviendo en simbiasis con el. ~sta es la explicaci6n mas plausible del origen mkleo col1tiene la mayor parte del
de las celulas actuales de tipo cucarlola (Panel 11, ptigs. 18-19), que constit'u- DNA de la c~lula eucariOla. La figura 10
yen el tema principal de eSI'e libro. muestra en un corte ultrafino de una
Por definici6n, y a diferencia de las celulas procariotas, las ululas eucario- c~lula de mamffero, observada al

tas tienen un lIucleo ("caf}'OlJ~ en griego), que comiene la mayor parte del DNA microscopio electronico. No sabemos
celular y que esta rodeado por una doble membrana (Figura 118). Por consi- ct'imo y culindo se genero el mideo: en
guiente. el DNA se mantiene en un compartimiento. separado del resto del con- la Figura 12-5 se presenlan algLmas
tenido celular, el citoplasma, que es donde se producen la mayorfa de las reac- especulaciones sobre este origen. (Por
conesra de Daniel S. Friend.)
ciones metab6licas de la celula. Ademas, en el citoplasma se pueden distinguir
muchos orgdrlllios caracterfsticos. Entre ellos destacan dos pequeiios tipos de
corpusculos, las mitocondrias y los cloroplastos (Figuras 1-19 y 1-20). Cada uno
de ellos esta rodeado por su peopia doble membrana, que es qufmicamente dife-
rente de la membrana que envuelve aI nudeo. La presencia de mitocondrias

Figura 1-19 Un c1oroplasto_ Micrografia electr6nica
de un doroplasto de una c~lula de musgo.
mostrando su extenso sistema de membranas
intemas. Los sacos membranosos aplanados
contienen c1orofila y esl:ln dispuestos en pilas. 0
grana. Esle c1oroplasto contiene lambi~n grandes
8Cl1mulos de almid6n. (Por cortesfa de J. Burgess.)
Figura 1-20 Una mltocondrla. En casi
looas las cE:lulas eucariolas.las
milocondrias realizan la degradaci6n
oxidativa de las molulas nutrientes.
Tal como se observa en esla
mlcrografia electr6nica, presenlan una
membrana eXlema lisa y una
membrana lnterna allamenle
replegada. (Por cortesfa de Daniel S.
"rlend.)

20 Capftulo I : La cvolucl6n de la cl!lula

 constiluye un rasgo casi universal de las celulas ellcariotas, mientras que los
c1oroplaslos se encuentran I1nicamente en aqllcllas celulas eucariolas que pue-
den realizar fotosfnlesis --es decir, en las plantas, pero no en los animales ni en
los hongos. Se cree que ambos org<1nulos tienen un origen simbi6tico.

Las ct'HuJas eucariotas dependen de las mitocondrias

para su metabolismo oxidativo l5
Las mltocondrias muestran muchas similitudes con los organismos procariolas de
vida libre: por ejemplo, se parecen a menudo a las bacterias en cuanto a lamano y
fonna, contienen DNA, fabrican prolefnas y se reproducen dividiendose en dos.
Rompiendo las celulas eucariolas y separando los elementos que las constituyen,
es posible demostrar que las mitocondrias son responsables de la respiraci6n y
que esle proceso no se produce en nlnguna 01Ta parte de la celula eucariota. Sin las
milocondrias, las celulas de los animales y de los hongos serian organismos anae-
r6bicos que para oblener su energia dependerian del proceso relativameme poco
eficaz y anriguo de la glucolisis. Muchas bacterias aetuales respiran iguaJ que las
milocondrias, y parcee probable que las celulas eucariolas sean descendientes de
organismos anaer6bicos primitivos que sobrevivieron en un mundo que habfa pa-
sado a ser rico en oxfgeno incorporando bacterias anaer6bicas -manteniendolas n......
en simbiosis, debido a su capacidad de consumir el oxfgeno atmosferico y produ-
cir energfa. Ciertos microorganismos aetuales muestran c1aras evidencias de la via-
bilidad de esta secuencia evolutiva. Existen varios dentos de especies unicelulares
de organismos eucariotas que se parecen a la hipotetica celu1a eucariola ancestral
en que viven en condiciones pobres de oxfgeno (por ejemplo, en el intestino de los
animales) y no presentan milocondrias. Rceientemente, analisis comparalives de
secuencias nuclcotfdicas han sugerido que aI menus dos grupos de eslOS organis-
mos, los diplomolJados y los microsporidios, pudieron divergir muy lemprana-
mente dellinaje principal de las otras celulas eucariotas (Figura 1-21). Existe olro
eucariora,la ameba Pelomyxa palustris que a pesar de que carcee de milocondrias,
realiza un melabolismo oxidativo hospedando bacterias aer6bicas en su citoplas-
IAI
ma, manteniendo con elias una relaci6n simbi6tica pennanente. Por consiguiente,
los diplomonados y los microsporidios por una parte y Pelomyxtl por OIra, parecen Figura 1-21 EI diplomonado Giardia.
dos de los estadios propuestos en la evoluci6n de los eucariotas. (A) Dibujo, lal como se ve aJ
microscopio 6ptico. (B) Micrografia
(N. del T.) Onicamcnlc los mlcrosporidlos, prololoos endopanl.sitos, carccen de milocondrias. electr6nica de una secci6n
a traves del aplanado cuerpo de la
celula. Se cree que Giardia es uno de
los lipos celulares mas primitivos de
celula eucariota. Es nuclcado (de
hecho tiene dos nucleos idenlicos),
presenla citoesqueleto con actina y
tubulina y se desplaza mediante
nagelos tfpicos que contienen
microtubulos; sin embargo no tielle ni
mitocondrias ni c1oroplastos ni un
retfculo endoplasmatico normal ni
complejo de Golgi. Estudios de
secuencias de nucle6tidos indican que
esta al menos tan relacionado con las
bacterias como con OlIOS eucariotas.
de los que debi6 de diverger en etapas
lempranas de la evoluci6n. Giardia
vive como un panisito en el intestino y
en humanos puede causar
enfennedades. (A, segUn G.D. Schmidt
y LS. Roberts, Foundations of
parasitology. 4th Ed. St. Louis: Times
Mirror/Mosby. 1989; B, por conesfa de
Dennis Feely.)

, De los procariotas a los eucariotas 2\

 La adquisici6n de mitocondrias debi6 de tener muchas repercusiones. La ci.nobacllfia
membrana plasm<1tica, por ejcmplo, esl<1 fuenemente compromclida en el met8-
bolismo energetico en las celulas procariotas perc no en las eucariolas, en las que
esta funci6n crucial ha sido relegada a la mi(Qcondria Parece probable que la sepa-
raci6n de funciones de)6 Iibre a la membrana plasmatica eUcar10ta para desarroUar
otras caracteristicas importantes. Concretamente, dado que las celulas eucariotas
no necesitan mantener un marcado gradiente de H' a trav~ dc su membrana plas-
matica, tal como requieren las procariolas para la producci6n de ATP, rue posible
utili1.ar cambios controlados de la pcrmeabilidad i6nica de la membrana plasm<1ti-
ca con finalidad de senales celulares. Asr, aproximadamente al mismo tiempo en
que surgieron las celulas eucariolas, aparecieron en la membrana plasm<1tica va-
rios tipos de canales i6nicos. En la actualidad, en organismos supcriores estos ca-
nales median elaborados proccsos de seflales elearicas -especialmente en el siste-
ma nervioso- y controlan gran pane del comportamicnlo de organismos
eucariotas unicelulares de vida Iibre como los protozoos (ver m<1s adelamel. surco de segmentxi6n

Figura 1-22 Un parlente proximo de

Los c1oroplaslos son descendienles de una celula las clunobacterlas 3ctuales, que vlve
procariola incorporada 16 en una relaclon slmblotlca
pem18nenle dentro de otra celula.
Los cloroplastos realizan la fotosfntesis de una manera Illuy parecida a como 10 Los dos organismos redben elnombre
hacen las cianobacterias procariotas. caplando la luz solar en la c1orofi)a que conjulllo de CymlOpllOfa parado.m. La
esla unida a sus membranas. Algunos cJoroplastos guardan una estrecha seme- "cianobacteria" estti en el proceso de
janza ultraeSlructural con las cianobaclerias. siendo similares en lamano y en divisi6n. (Por cortesfa de Jeremy D.
la manera en que sus membranas porladoras de cJorofila est<1n apiladas (vease Pickeu-Heaps.)
Figura 1-20). Ademois, los cJoroplastos se reproducen por divisi6n y conrienen
DNA, con una secuencia de nucJedtidos casi identica a la de fragmentos del cro-
mosoma bacteriano. Todo ella sugiere cJaramente que los cJoroplaslos compar-
ten un ancestro com6n con las cianobacterias y que evolucionaron a partir de
procariotas que pasaron a vivir dentro de celulas eucariotas. Estos procanotas
realizaron fotosfntesis para sus huespedes como contraprestaci6n por la protec-
ci6n y por el ambiente nutritivo que estos (ilumos les suministraban. De hecho,
la simbiosis de celulas fotosintelizadoras con ouos tipos celulares es un fen6me-
no comun, y se pueden encontrar algunas celulas eucariOlas actuales que con-
tienen autenticas cianobacterias (Figura 1-22).

Figura 1-23 H1potetlco orlgen de los

dMconocido .nustro pr~riotl
.n.e.6bieo de los eUl;Iriolas
proca.iotl oneest1
eucarlotas 8cluales, por slmblosls de
procarlolas aeroblcos yanaeroblcos.
No se conace la relaci6n entre el
momenta en que se origin6 el nLlcleo
de los eucariotas y el momenta en que
la Ifnea de los eucariotas se separaron
de las arquebacterias y de las
eubacterias.

22 Capftulo I : La evoluclon de 18 c~lula

Tabla I-I Comparaci6n entre organlsmos procariOlas yeucariotss
Procarlotss Eucariotas
Organjsmos bacterias y cianobacterias protistas, hongos, plantas yanimales
Tamano celular general mente de 1a 10 ~m en dimcnsi6n lineal generalmenle de 5 a 100 Ilm en dimensi6n lineal
Metabolismo anaer6bico 0 aer6bico aer6bico
OrgIDlUlos pocos 0 ninguno nudeo, mitocondrias, doroplastDs, retfculo
endoplasm:.\tico, elc.
DNA DNA circular en el ciloplasma moleculas lineales de DNA muy largas que contienen
muchas regiones no codificantes; organizado en
cromosomas y rodeado por la envoltura nuclear
RNA Yprotefna RNA Yproteina sintetizados en el mismo RNA sintetizado y procesado en el nudeo; protefnas
companimiento sintetizadas en el citoplasma
Citoplasma sin ciloesqueleto: conientes citoplasmtHicas, cilOCSQueleto compueslo por filamentos proteicos;
endocilosis y ex.ocitosis ausentcs conicntcs citoplasm<1ticas, endocitosis yexocitosis
Divisi6n celular separaci6n de cromosomas por uni6n a la separaci6n de cromosomas mediantc un aparato: ct
membrana plasm<\tica huso mit6tico
Organizaci6n principalmcnle unicelular principal mente pluricclutar, con difcrenciaci6n de
celular muchos tipos celularcs

La Figura 1-23 muestra los orfgenes evolutivos de los eucariotas, de acuerdo

con la tcoria simbi6tica. Sin embargo, debemos subrayar que las mitocondrias y
los c1oroplastos muestran, ademtis de similitudes, imponantes diferencias con
respccto a las bacterias aer6hicas y a las cianobacterias acroales respectivamen-
teo Por ejemplo, su cantidad de DNA es muy reducida, de forma que la mayor
parte de las mollkulas a partir de las cuales estan constiluidos, son sintetizadas
en algun otro lugar de la ct'!lula eucarlota e importadas al organulo. Si bien pare-
ce que se originaron como bacterias simbi6ticas, han sufrido importames cam-
bios evolutivos y han pasado a ser altamente dependientes de sus huespedes y
sujetos a su control.
La mayorfa de los eucatiotas actuales tienen en comun las mitocondrias y
toda una constelaci6n de rasgos que los distinguen de los procariotas [[abla I-
I). Todos eslos rasgos acujan conjumamente proporcionando a las celulas euca-
tiotas un gran numero de capacidades diferentes de fonna que tan 5610 es posi-
ble especular sobre cu<i1 de ellos surgi6 ptimero. Sin embargo, la adquisici6n de
mitocondrias por una celula eucariota anaer6bica debe de haber side un paso
crucial en cl Cxito de los eucariotas al proporcionarles cl medio de utilizar Ulla
abundante (uente de energfa para la direcci6n de sus complejas actividades.

Las celulas eucariotas contienen una rica dotaci6n

de membranas internas
Las celulas eucariotas suelen tener un volumen mucho mayor que las procario-
tas (por 10 general, mtis de mil veres superior) y contienen una cantidad propor-
cionalmente superior de la mayoria de materiaJes celulares; una celula humana,
por ejcmplo, contiene 1000 veces mois DNA que una bacteria tfpica. Este gran ta-
mano plantea problemas. Puesto que todas las materias primas para las reaccio-
nes de biosfntesis que se producen en cl interior de una celu!a deben emrar y sa-
lir pasando a naves de la membrana plasmatica que recubre su superficie. y
puesto que en la membrana lambicn se producen imponantes reacciones, un
aumento en el volumen celular exige un aumento en la superficie celular. Pero la
geometrfa nos ensena que un aumento simple de 101 escala de una estructura in-
crementa el volumen aJ cuba de la dimensi6n lineal, mientras que el Area super-
ficial qucda aumentada 5610 at cuadrado. Por consiguientc, si la gran celula euca-
riota ha de conservar la misma proporci6n de superficie respccto al volumen
que presenta la celula procariota, debem suplementar su area superficial me-
diante drcunvoluciones, pliegues y otras transformaciones de su membrana.

De los procarlotas a los eucariotas 23

 .

fA 11110 fR rugolIO ribolOmas mitocoodria

Es probable que esto explique en parte la compleja profusi6n de membra- FIgura 1-24 RetlcukJendoplasmitJoo.
nas intemas, que es una caraclcrfstica basica de todas las celulas eucariOlas. Las Micrografia electr6nica de un cone
membranas roclean at n(ideo, a las mitocondrias y (en las celulas vegetates) a los uhrafino de una dlula de mamffero,
c1oroplastos. Forman un compartimiento laberlntico denominado reticula en- mostrando zonas lisas y zonas rugosas
del reticulo endoplasmatioo {ER}. Uls
doplasmlitlco (Figura 1-24), donde son silllelizados los IIpidos y las protefnas de
regiones lisas estan implicadas en el
las membranas celulares. asr como e1 material destinado a ser exportado por la
melabolismo Iipfdico mienlras que las
celuJa. Tamhien forman agrupaciones de s:jculos aplanados, que constituyen el regiones rugosas, lapizadas de
complejo de Golgi (Figura 1-25), que parlicipa en la modificaci6n y en ellrans- ribosomas, son lugares de sfntesis de
porte de las moMculas fabricadas en el reticula endoplasmatico. Las memhranas protefnas deslinadas a abandonar eI
rodean a los Ii.sosomas. los cuales conlienen reservas de las enrimas necesarias dlosol y entrar en otros
para la digesti6n intraceluJar, enzimas que de este modo no pueden atacar a las compartimienlos de la dlula. (Por
protemas y <'icidos nudeicos de la propia celula. De la misma manera, las mem- cones[a de George Palade.)
branas rodean a los peroxisomas, dondc se generan y degradan per6xidos pcli-
complejo de Goigi
grosamente reactivos durante la oxidaci6n par el oxIgeno de varios lipos de mo-
leculas. Las membranas tam bien forman pequefias vesiculas y, en las plantas,
una gran uacuola lIena de IJquido. Todas estas estructuras rodeadas de membra-
na corresponden a distintos companimientos intraciloplasm<'iticos. En una re-
Iula animal lipka, esl'OS compartimientos (u orginulos) ocupan casi la mitad del
volumen celular total. EI restante companimiento del citoplasma, que induye
todos los elementos celulares salvo los org;inulos delimilados por una membra-
na, suele recihir elnomhre de c1tosol.
Todas las estructuras memhranosas que acabamos de cit'ar se encucntran
dentro de la celula. Por consiguiente, tc6mo pueden ayudar a solucionar el pro-
blema mencionado al principio y suministrar a la celula un <'irea superficial que
sea suficienle para su gran volumen? La respuesla es que hay un intercambio con-
tinuo entre los compartimientos internos delimhados por memhrana y el exterior
de la relula. EsIO se consigue mediante la elldocitosis y la exocitosis, procesos que
se presentan unicamente en las celulas eucariotas. En la endocitosis, porciolles de I,m
la membrana superficial externa se invaginan y separan por estrangulaci6n, for- Figura 1-25 El complejo de Golgi.
mando unas vesfculas citoplasmaticas, rodeadas de membrana y que conliencn Micrograffa electr6nica de un corte
sustancias que se hallaban prcsentes en cl medio externo 0 que (ueron adsorbidas ultmfino de UlUl c~lula de mamffero,
en la superficie cclular. Partfculas muy grandes 0 incluso celulas extrafias enleras mostrando el aparato 0 complejo de
son capturadas por fagocilosis -una forma especial de endocitosis. La exocitosis es Golgi, que esli1 compueslo por saCl110S
el proceso inverso, por el cual unas vesfculas rodeadas de membrana, presentes membranosos aplanados dispueslos
en el intcrior de la celula, se fusionan con la membrana plasmatica y Iiberan su en mUltiples filas (vease tambien e1
Panel I-I, p;1gs. 18-19). EJ complejo de
comenido al medio extemo. De esla manera, las membranas que limitan a los
Golgi inlcrviene en la sfnlesis y
companimiemos siluados dentro de la relula incrementan cl area superficial
empaquetamiento de molulas
erectiva de la celll!a para los inlercambios de materia con el media exterior. deslinadas a ser scgregadas por la
Como veremos en capflulos posteriores, las divcrsas membranas y cam par- ~lula, asf como en el transpone de
timicntos rodeados por membrana de las cclulas eucariolas han Ilegado a ser al- protefnas recien sinletizadas hacia el
tamente especializados, algunos para la secreci6n, otros para la absorci6n, olros compartimiento celular adecuado.
para procesos especificos de bios(ntesis, elc. (Por conesfa de Daniel S. Friend.)

24 Capitulo 1 : La evoluci6n de la celula

 Figura 1-26 Actina. En eSla
micrograffa eJeclr6nica, preparada por
Ja tecnica de subJimaci6n, se observa
una red dc filamentos dc actina
subyacentc a la mcmbrana plasmatica
de una celula animal. (Cortesfa de
John HcuseL)

,OO~

Las celulas eucariotas tienen un citoesqueleto

ClIanto mayor es una relula, y cuanto mas complejas y especializadas son sus es-
tructuras inlernas, lanto mayor es la necesidad de mantener estas estructuras en
sus lugarcs apropiados y de controlar sus movimienlOS. Todas las celulas eucario-
las denen un esquelclo interno, el citoesqueJeto, quc confierc a la celula su fonna,
su capacidad de moversc y su habWdad para distribuir sus organulos y transportar-
los de una pane a olra de la relula. EI citoesquelelo esta compuesto por una red dc
filamemos proleicos, de los cuales dos de los mas irnportanlcs son los filametltos de
actina (Figura 1-26) Y los microtlibllJos. Los dos debieron aparecer en una ~poca
muy lemprana de la evoluci6n, ya que se presenlan en lodos los eucariolas de ma-
nera casi idemica. Ambos intcrvienen en la gencraci6n de los movimientos celula
res; los filamentos de actina, por cjcmplo, pcnniten a las celulas eucariolas replar, y
participan en la comracci6n muscular en los animales; mienlras quc los lllicroni-
bulos son los principalcs elemenlOS estructurales y generadores de fuer/..l de los cj-
lios Ylos jlagelos -las largas proyecciones que existen en la superlicie de algunas ce-
lulas, que se mucvcn como l:Higos y que silVen de uls(rumelllos de propulsi6n.
Los filalllcnios dc actina y los microtubulos (ambien son imprescindibles
para los movimienlOs ullernos que tienen lugar en el citoplasma de lodas las celu-
las eucariolas. As{, los microtllbulos del Ii/tso mitotico son una parte esencial de la
maquinaria utilizada habilualmcnlc para distribuir el DNA en dos parIes iguales
entre las dos celulas hijas, cuando ulla celula cllcariola se divide. Par cOllsiguien-
te, la celula eucariota no se podrfa reproducir sin los microlubulos. En este y ell
otros casos, el movimiento mediante difusi6n Iibre serfa demasiado ICllto 0 dcma-
siado aleatorio para resullar eficaz. De hecho, a mcnudo los org{l.llllios dc una ce-
lula eucariota parecen estar adheridos de manera directa 0 indirecta al citoesquc-
leto ycuando se mueven, ser propulsados a 10 largo de las v{as citoesqueleticas.

Entre los protozoos se encuentran las celulas

mlis complejas conocidas 17
La complejidad que puede alcanzar una celula eucariota se pone de manifiesto
sobre (odo en los prol.istas (Figura 127). Se trala de eucariotas unicelulares, de
vida generalmente Jibre, que son evolutivamente diversos (vease Figura 1-16) y
que muestran una asombrosa variedad de formas y comporlamientos distintos:
pucden ser fOlOsintetizadores a carnfvoros, m6viles 0 sedentarios. A menudo Sll
anatomfa celular es compleja e induye estructuras tales como cirros sensoriales,
fOlorreceptores, Oagelos, apendices a modo de paras, piezas bucales, Oechas ur-
ticantes y haces colltrckliles parecidos a mlisculos. Aunquc son celulas aisladas,
pueden ser tan complicadas y versMiles como muchos organismos pluricelula-
res. Es(o es valido sobre todo para el grupo de protistas conocido como prolozoos,
y est;1 particularmente bien iluslrado en el grupo conocido como cUlados.

De los procarlot3s a los eucariotas 25

 ~
B. ~
D.
I
Didini14m es un prolazoo cam1voro. Tiene un cuerpo globular, de aproxima- Figura 1-27 Grupo de protJSIU.
damenle 150 ~m de dhimelro rodeado por dos hileras de cilios: su extreme frontal lJustrando algunas de Iu enonnes
es aplanado salvo una protrusi6n parecida a un hocico (Figura 128). Didi"ium se varledudes que pueden hallarse entre
desplaza en el agua nadando a gran velocidad mediante el balido sincr6nico de esla close de organlsmo8
sus cilios. Cuanda encuentra una presa apropiada, por 10 general Paramecium, unleelulares. Estos dibujos estan
realizados a diferente escala, perc en
OlTO ripo de protozoa, dcspide desde la regi6n de su hadeo un gran mimero de
eada caso la barra represenla 10 ~m.
pequef'ios dardos paraJizantes. Luego Didi"ium se fija a Paramecium y 10 devora, Los organismos en (A), (B), (E), (F) e (I)
invirtiendose como una peJola hueca y rodeando a la otra cclula. que es ran gran- son ciliados: (C) es un euglelloide: (0)
de como el mismo. La mayor parte de este complejo comportamicnlo -nataci6n, es ulla ameba; (G) es un dinoflagelado;
paralizaci6n y captura de la presa- se genera por estructuras citoesqueletic.1& si~ (H) es un heliozoo. (De MA Sleigh,
tuadas inmediatamcnte por debajo de la membrana plasmlHica. En este c6rtex The Biology of Protozoa. London:
celular se encuentran, por ejemplo. los haces paralelos de microtubulos que for Edward Amold, 1973.)
man la parte central de cada cilio y que Ie permiten su movimiento de "remar".
Comportamientos depredadores de este tipo y el conjunto de caracterfsticas
de las que depende -tamano grande. capacidad de ragocitosis y habilidad para
moverse en persecuci6n de la presa- son tfpicas de los eucariolas. De hecho es
probable que estas caracterfsticas aparecieran en un esladio temprano de la
evoluci6n. haciendo posible la caplura de bacterias para su domesticaci6n como
mitocondrias y c1oroplastos.

En las celuJas eucariotas el material genetico

esta empaquetado de forma compleja
Las celulas eucariotas conlienen una gran cantidad de DNA. Como hemos dicho
anteriormente. las celulas humanas contienen unas mil veces maS DNA que una
bacteria tfpica. La longitud del DNA de las celulas eucariolas es Ian grande que

26 Capftulo 1 : La evolucl6n de la el!lu1a

 el peligro de enmaraftamiento y rotura resulta muy elevado. Probablemente por
esta raWn, aparecieron unas protemas que sOlo se encuentran en los eucariotas, las
histoTlas, que se unen al DNA Y 10 enrollan formando cromosomas, compaetos y
manejables (Figura 1-29). EI denso empaquetamiento del DNA en los cromosomas
es una parte esencial de los preparativos para la dJvisi6n celular en los eucariotas
(Figura 1-30). Todos los eucariotas (salvo una pequef\a excepci6n) tienen histonas
unidas a su DNA, y la importancia de estas protemas se re8eja en su notable con-
servacion a 10 largo de la evoluci6n: varias de las histonas de una planta de guisante
son casi exactamente iguales. aminoo.cido a aminoo.cido, a las de una vaca.
Las membranas que envuelven el mlc1eo de las clluJas eucariotas protegen
la estructura del DNA y la delicada maquinaria de control asociada, previenen
que se embrollen con el citoesqueleto m6vi1 y las resguardan de muchos de los
carnbios quimicos que se producen en el citoplasma. Tambi~n permiten separar
e independizar dos pasos cruciales de la expresi6n g~nica: (I) el copiado de las
secuencias de DNA a secuencias de RNA Uranscripcidn del DNA) y (2) la utiliza-
ci6n de estas secuencias de RNA para dirigir la sfntesis de prote(nas especfficas
(tTadllCxi6n del RNA). En las celulas procariotas no existe la divisi6n de estos
procesos en compartimientos -Ia traducci6n de las secuencias de RNA a proteE-
nas empieza en cuanto eslas secuencias se transcriben, incluso antes de que su
sfntesis haya terminado. Pero en los eucariotas (salvo en las mitocondrias y en
los c1oroplaslOs que en este aspecto, como en otros, se parecen mas a las bacte-
rias). los dos pasos que conducen desdc el gen hasta la proterna estan estricla-
mente separados: la transcripci6n ocurre en el mlc1eo, la traducci6n en el cito-
plasma. EI RNA ha de abandonar el mlc1eo antes de poder ser utilizado para
guiar la sintesis proteica. Mientras se halla en el mlc1eo sufre una serie de com-
plicadas transformaciones, durante las cuales se eUminan unas mnas delermi-
nadas de la molecuJa de RNA y olras se modifican (procesamiento del RNA).
Dcbido a eSlas complejidades, el material genetico de una celula eucariota
ofrece muchas mas oportunidades de conlrol que las existentes en las bacterias.
l00lJ m

Resumen Figura 1-28 Un protozoa devorando

a otto. Los ciliados son animales
Ins d/ulas vit.w actllales se clasifican en procnrioras (bcu:rerias y organismos afi- unicelulares que presentan una
m~) y ellcariotas. Almque presentall estrtlcturas relntivamenre sencillas, las dlulas inmensa dJversidad de formas y
procariotas puedetl ser bioqll(micametlte versdtiles y muy diferentes: porejempw, ell comportamientos. La fotograffa
_las bacterias ,,,,eden ellcollrrarse tOOas itu vias merab61icas principales, inelllidos superior muestra Didinium. un
los tres procesos ellergericos flllldamentales, 0 sea la gllU:olisis, la respiraci6n y la fo- prOtowo eIliado con posce dos bandas
tOS/lltesis. Las dill/as eucariotas son mayores y mds complejas que las celu/as 1Jraca- de cilios m6viles y una protuberancln a
rioms, y cOlltiellen "Ids DNA, ademds de otras componenres que permiten que este modo de hoeleo en su extremo
DNA sea modificado de mlUlera compleja. 1 DNA de la celula eucariota Std slruMo anterior. con la que eaptura sus presas.
En la micrografia inferior Didinium
en I'" micleo rotleado por una doble membrana, mienrras que el citoplasma contie-
esut devorando OITO protozoa,
ne nlllchos orras orgdnulos rambien delimitados por una doble membrana, entre los Paratrli!Cium. (Por cones(a de D.
que se cuentan las mitoco"drias, qlle reallurn la oxidaci6n de las molkulas del ali- Barlow.)
menro, yen las dlulas vegetales. los cloroplastos, que rMUzan la !otos(ntesis. Diver-
50S tfpos de prtlebas sllgieren q/le las mirocondrias y los cloraplasros son descendien-
res de cellilas lJrocariatas primitivas que se establecieroll comosimbiaflles denfro de
/lI1lI gran cell/Ill anaerobica. lAS diu/as eucariotas presentan rambMn la caracters-
fica de poseer WI citoesquelelo de fi/amellros proreicos qlle ayuda a organlzar el ciro-
plasma y proporciona la maquinaria para el movimiento.

/
De las celulas simples a los organismos
pluricelulares '8
Los organismos unicelulares, tales como las bacterias y los prOlOZOOS, han teni-
do tanlO exito aI adaplarse a una gran variedad de ambienles distinlOS, que
conslituyen mas de la mirad de la biomasa total de la Tierra. A diferencla de los

De las luJas simples a los organismos pluriceluJaces 27

organismos superiores. muchos de estos organismos unieelulares pueden sinte DNA
tizar a partir de unos ellantos nulrienles simples todas las suslancias que ne<:esi
tan y algunos de ellos se dividen m<1s de una vez cada hora. iCu<11 fue entonces la
ventaja selecliva que cOllelujo a la evoluci6n de los organismos pluricelulares?
La respuesta mi\s sencilla es que los organismos pluricelulares pueden ex
plotar recursos que ninguna c~lula aislada podrfa utdizar tan bien. Estc princi-
pio, aplicado por primera vez a una simple asociaci6n de c~lulas. ha lIegado all(-
mite en los organismos pluricelulares que conocemos. La pluricelularidad, por
ejemplo, pemlile que una planla lIegue a ser ffsicamente grande; que tenga ra!
ces en el suelo. donde un grupo de c~lulas pueden absorber agua y nutrientes; y
que tenga hojas en el aire. donde Olro grupo de c~lulas puede caplar eficazmen
te energ!a radiante del sol. En el tronco de la planta exislen c~lulas especializa
das que forman conduclos para el transpone del agua y de los nUlrienles enlre
las ralces y las hojas. Otro gropo de celulas especializadas fonna una capa de
coneza que impide la ~rdida de agua y hace posible un ambiente interno pro
tegido (v~ase el Panel 12, p<1gs. 30-31). La planta en conjunto no compite direc
tamente con los organismos unicelulares por su nicho ecol6gico; ha encontrado
una manera radical mente diferente de sobrevivir y multiplicarse.
Flguna 1-29 D1bujoesquemalkoque
A medida que aparecieron los diferentes tipos de animales y piamas. alle- Uustra como las protefnas
raron el medio ambicnte en el que se produjo la evoluci6n posterior. La super- denomlnadas hlstonas. de carga
vivencia en una jungla exige caracteristicas diferentes a las requeridas para 50- posltlva. ravorecen eI plegado del
brevivir en mar abicno. Las innovaciones en el movimiento. la percepci6n DNA en los cromosomas.
sensorial. la comunicaci6n, la organizaci6n social-todo ello permili6 a los orga
nismos eucariotas compeLir. propagarse y sobrevivir de manera cada vez mas
compleja.

Las celulas se pueden asociar formando colonias

Parece probable que uno de los primeros pasos en la evoluci6n de los organ is
mos pluricelulares fuera la asociaci6n de organismos uniceluJares formando co-
lonias. La manera mi\s sencilla de conseguirlo consisle en que las c~llIlas hijas
pennanezcan asociadas despues de cada divisi6n celular. A1gunas c~llIlas proca-
riotas muestran incluso un componamiento social semejante. aunque de una
manera primiliva. Las mixobacterias, por ejemplo, viven en el suelo y se aUmen
tan de mohkulas organicas insolubles que degradan medianle las enzimas de
cromosoma
gradames que segregan. Se manticnen unidas en colonias laxas, en las que las
enzimas digcslivas segregadas por las diSlintas celulas se ponen en comun, con
10 que aumenta la eficiencia de la alimcntaci6n (el efeelo "flotilla"). ESlas celulas
represenmn de hecho lllla sofisticaci6n maxima entre los procariotas, ya que
cuando el alimento disponiblc sc agota, las cl:Hulas forman agregados mas den-
sos y conslituyen un cuerpo fructlfero pluriccluJar (Figura 1-31), dcnlro del eual
las bacterias se difcrendan a esporas que pucden sobrevivir inclllSO en condicio-
nes extremadamente hostiles. Cuando las condiciones vuelven a ser nHis favora-
bles, las esporas del cuerpo fructffero germinan y producen un nuevo enjambre
de baclerias.
Las algas verdes (que no deben ser confundidas con las ~algas azules" proca
riotas a cianobacleriasJ son eucariotas que exislen en formas unicelulares. for- Flgufll 1-30 Dlbujo esquemlitlco de
mas coloniales y formas pluricelulares (Figura 1-32). Las diferentes especies de celulas eucarlolas en mitosis. Ala
algas verdes se pueden estudiar en orden de complejidad. ilustnindose as! el izquierda se mueslra una celula
tipo de progresi6n que ocurri6 probablemenle durante la evoluci6n de los ani- animal ya la derecha una celula
males y plantas superiores. las algas verdes unicelulares. como por ejemplo Chla- vegelal. La envohura nuclear se ha
mydomonas. se parecen a prOIOzoos nagelados, salvo en que presentan c1oro- rOIO. yel DNA. una \-ez replicado, se ha
condensado en dos dOlaciones
plaslos que les pennilen realizar la fOlosfmesis. En generos estrechamenle em (
complelas de cromosomas. cada una
parentados. grupos de celulas flageladas viven en colonias, unidas por una ma de las dos celulas en roonati6n recibe (
triz de mol~las extracelulares segregadas por las propias celulas. Las especies una dOlaci6n de cromosomas, los c
mas sencillas (las del genera eo"ium) presentan la forma de un disco c6ncavo cuales son desplazados por el huso d
formado por 4, 8, 160 32 c~lulas. Sus flagelos se mueven de manera indepen- mit6tico que esta compuesto d
diente. pero pueslo que lodos estan orientados en la misma direcci6n pueden mayoritariamente por microtUbulos. e

28 Capftulo I ; La evolucl6n de la celula D

 Figura J -31 Mlcrograffa elec:tr6nlca
de barrldo, de los cuerpos fruclfferos
fonnados por un myxobacterlum
(CllOlldromyces crocatus). Gada
cucrpo fructffero, empaquetado con
esporas, eSla ronnado por la
agrcgaci6n y diferenciaci6n de
aproximadamenle un mi1l6n de
mixobaClerias. (De P.L Grilione y J.
Pangborn.). Bacterial. 124:l558I565.
1975.)

0,1 mm

propulsar a la colonia por el agua. Todas las celulas son equjvalemes entre sf, y
cada una de elias se puede dividir dando lugar a una nueva colonia. En ouos ge-
neros se encuemran colonias mayores, siendo las mas espectaculares las del ge-
nero VO!IJOX, algunas de cuyas especies viven en colonias de 50 000 0 mas celuJas
unidas formando una esfera hueca. En Volvox, las distintas celulas que forman
una colonia estdn conectadas mediante finos puentes citoplasmdticos, de modo
que el batido de sus flagelos estd coordinado para propulsar a toda la colonia
como una pelota (Figura 1-32). Dentro de la colonia de Volvox existe un cieno
repano del uabajo entre las celulas; un reducido m.imero de eUas se ha especial i-
zado en la reproducci6n, sirviendo de precursoras de nuevas colonias. Las Olras
celulas son tan dependientes unas de Olras que no pueden vivir aisladas, y cl or-
ganisrno rnuere si se dcstruye la colonia.

Las celulas de un organismo superior se especializan y cooperan

En algunos aspectos, VollJOX es mAs parecido a un organismo pluricelular que a
una simple colonia. Todes sus flagelos se mueven sincr6nicameniC cuando Itl
colonia se despJaza en el agua, de forma que la colonia esta estrllctural y funcio-
naJmente polarizada y puede nadar hacia una fuente lejana de Iliz. Las celulas
reproducloras sllclen eslar confinadas en un extreme de la colonia, donde se di-
viden formando nuevas colonias cn miniatura que inicialmente permancccn
dcntro de la esfcra madre. Asf, y aunque de una manera primiliva, Voluox IllUCS-
Ira los dos rasgos csenciales de lodos los organismos pluricelulares: sus celulas
se especialiZlw y cooperalJ. Mediante la especializaci6n y la cooperaci6n las cclu-
las se combinan formando un t"inico organismo coordinado, con capacidades
mayores que las de cualquiera de las partes que 10 componen.
Los esquemas organizados de diferenciaci6n celular se presentan incluso en
algunos procariotas. Por ejemplo, muchos tipos de cianobacterias permanecen
agrupados despues de la divisi6n celular. formando cadenas fLIamentosas que
pueden alcanzar hasta un metro de longitud. A 10 largo del nJamento, y a inter- Lt lllve equivele en Clldill CllSO ill 50 11m
valos regulares, las diSlintas celulas adquieren un cardcter distintivo y se vuelven
Figura 1-32 Cuatro generos de algas
capaces de incorporar nitr6geno atmosferico en moleculas orgjnicas. Estas es- verdes, estrechamente
casas celulas especializadas realizan la fijaci6n del nitr6geno para las celulas ve- emparentados, mostrando una
dnas y comparten can elias los productos. Pero las celulas eucariotas han lIega- progresi6n desde una organlzacl6n
do mucho mds lcjos en este tipo de disuibuci6n organizada del lrabajo; elias, a unlceluJar hasta una organizacl6n
diferencia de las celulas procariotas, son las unidades vivas a panir de las cuales colonial ymultlcelular. (porconesfa
est~n conslruidos lodos los organismos pluricelulares m~s complejos. de David Kin.)

De las c~lulas simples a los organismos pluriceJuJares 29

 LA PLANTA La planta joven con flores que se presenta ala izquierds esta
epldermi. superior nervio prlnclp.1 conltituide por tres tipos de 6rganos: hojas, tall05 y raices.
ldel h.z1....-~,......,;...""o,!:" A su vez, cada 6rgano vegetal esta formado par Ires
~" ~ sistemas histol6gicos: el bSsico, el dermico y el vasculer.
,$' ~rviO En ultimo termino, los tres sistemas histol6gicos deriven
HOJA "'V' ~--
ffi8sOfilo
del.
hal.
de la aetividad proliferativa de una celula da los meristemOI
apicalel del brole y de la raiz, y cada uno de elias contiene
eslomu lpsfltnquiml) un numero relativamente redueido de tipos celulares
de II epidermis especiali18dos. En esle Panel se describen eslos Ires sistemas
inferior (del enris) Colenquim. histol6gicos comune., y las celulss que los forman.

LOS TRES SISTEMAS HISTOLOGICOS

La divisi6n O8lul8r, el crecimiento y I. diferenciacion dan
luger a sistemes histol6gicos confunciones especiali18d.s.
TALLO
TEJIOO EPlot:RMICO _I: se trata del recubrimiento
extemo protector de Ie plante que asta en contacto con
el media. Fecilila la capteciOn de agua y de iones en la.
ralces y regula el intercambio gaseoso en las hojas y en
los tallo$.
TEJIOO VASCULAR: El floema _I y el xitema_1
forman conjuntamente un sistema vascular continuo a
Ira""" de la planla. Este lejida conduce agua y solutos
entre 10& organos y tambi9n proporciona sopone
meeanico.
TEJIOO BAsICO Ic::::lI: Esle tejlda de empaquetamiento y
de IOporte ocupa la mayor parte del votumen de la p1anta
endodermis periciclo joven. lambien interviene en Ie fabricacion V
elmacenemienlo de elimento.
rnerislemol apicaletl d. r. rllz

EI sistema histol6gico basico contiene

TEJIDO BASICD tres tipo. celulares principales lIemados EI col6nquiml est' formado por diu las vivas similaras a las celulas
parenquimalicas excepto en que tienan
parenquima, col8nquima yesclerenquima. paredes calulares muy grueses y en que
las celulas parenqulm'tlcas 58 encuentran en todos los sistemas habitualmente son alargadas y lSI'n
histolOgical. Son celulas vivas, generelmente capaces de dividirse empaquetadas en fibras a modo de cuerdat..
posteriormente, y que presenten una pared celular primaria delgada. Son capaces de alargarse y de proporciona'
Estas celulas lienen varias funciones. Las celulas meristematicas soporte mecilnico al sistema histologico
apical V lateral de los brotes y de las ralces suministran nuevas celulas bilsico de las regiones de la planta en
necesar;as para el crecimlento. La produccion de elimento V de crecimiento. Las celulas colenquimatosas
almacen tiene lugar en las celulas fotosinlelicas de la hojaldenominadas son especialmenle abundantes en las
celulas del mes6fi1ol V deltallo; el parenquima de reserva forma el regiones subepid'rmicas de los lallos.
volumen de muchos frulOI y verduras. A causa de su capacidad
proliferaliva, las celules parenquimalicas actuan como c'lulas madre loc.liuclones tfpicas
cicstrizendo las heridas e Interviniendo en la regeneraci6n.
de grupo. de sopon~
de cliluln en un tsllo ,
fibru
esclere"quim6tlcas
hsz vascular
cole"quima
..
a
celulas meriSlemalic EI esclerenquime, como el colenquima, liene funciones de
de Ie raiz refueno y de soporte. Sin embargo,
hsz de fibr.. normalmenle Mta formltdo por celulas
muenss, con gruesas paredes celuleres
secundarias lignificadas incapaces de
celulM del alarglfSe cuando la planta creoe. los dos
ffi8sOfilo de tipos comunes son las fibras, que a menudo
I. hoj.
forman largos haces, y las esclereidas, qOl son
Una celula de transferencia, una forma celulas mas cortas y ramificadas existenles ..
especializada de celula parenquimatica, las cubiertlS de la semille y en el frUlo.

r=l 58 identiflCa f6cilmente gracias a unlS

complejas invaginaciones de la pared
calular primaria. EI incremento del 'rea de

~
la membrana plasmaticB bajo lSIal paredes
facilna el r'pido transporte de $OlL1Ios hacia
y desdelas celulas del sistema vascular.
e8lul. de L--'
trln.ferltflCis 10 11m

30 Pmell2 ModeIo8 celulares y tejklos con los que est4n constnddaslaa plantas aupertores.
 Estomas los pelos (0 tricomas) son apendices derivados
TEJIDO D~RMICO
de las dlulas epidermicas. Eltiste una gran
La epidermis ea la cubiarta primaria protectora variedad de formas; normalmente se
externa del cuerpo de la planta. las calulas de Ie encuentran en todes las partes de la planta.
epidermis tambien esten modificadas formando
[;J I.PilEi) r;: los pelos intervienen en la protecci6n,
los estomas y varios tipos de pelos.
Epidermis .
._~

L-'
Q,~
absorci6n y secreci6n; ejemplos:
'------'
100 101m

] cuticula
La epidermis lnormalmenta de una sola
capa de dlulas de grosorl cubre
completamenta al tallo. la hoja y la ralz
da la planta jovan. las dtulas estan vivas,
lienan gruesas paredes celulares primarias.
y estiln recubiertas apicalmente por una
cutfcula aspecial con una capa externa de
cera. las celulas est<in fntimamente unidas
siguiendo diferentes ordenaciones.
epidermis del hal epidermis
de una hoja de un taUo
'''"'
los estomas son aberturas de la epidermis,
principalmente en la cara inferior de Ie hoja
(envesl, que regulan el intercambio ga5OOso
en la ptanta. Esten form ados pOr dos dlulas pelos unicalulares j6vanes de la
epidermicas especializadas lIamadas cdlulss epidermis de la semilla del algod6n.
guards, las cuales regulan el diametro del Cuando estos crecen, las paredes se
poro. En cada epidermis. los estomas estan engruesan secundariamente con
distribuidoa siguiendo diferenles ordenaciones celulosa formando las fibras de algOO6n.
aspeciflCls de la especie.
Haces vasculares
Normalmanta en las refces hey un solo '--'
haz vascular. pero en los tallos hay 10).lm
varios haces. En las dicotited6nees
estos haces estan ordenados siguiendo
una estrkta simetria radial, pero an
las monocotiled6neas est<in disperses
de forma mas irregular.
, ..
un pelo pluricelular los pelot radicula,"
vaina de glandular da una deHmpel'ian una
escler6nquima hola de geranio importante lunciOn
en la capt/loeiOn de
floema a"ua alonas

par6nqulma

TEJIDO VASCULAR '------' Xilema

so 101m
EJ lloema y el xilema forman conjuntamente Elltilema transporta por la planta agua e iones
un h,l v.scula. Ilpieo de un Iello disueltos. las principales celulas conductoras
un sistema vascular continuo por toda la joven de un r.nunculo.
planta. En plentas j6venes normal mente son los elementos del vaso mostradas aqul,
esten asociadas a varios tipos celulares que en la madurez son celulas muertas que hen
distintos en los h&C6s vascu/ares. EI f10ema perdido la membrana plasmlitica. La pared
y el xUema son tejidos complejos. Sus celular 50 ha engrosado secundademente If
elementos conductores estan asociados con celulas sa ha lignificado
perenquimlitices que msntienen e intercambian materiales fuertemente. Como se ve
con ellos. Ademlis, varios grupos de celulas colenquimtiticas '" en la figura, gran parte de
v esclerenquimetlcas proporcionan soporte meclinico. las paredes terminales se
han eliminado, 10 cual
pequel'lo permite la formacion de
Floema plllCll er~ poro elemento tubos continuos muy

.~- T~
dev.to en largos.
membr.n&
pl.sm6tice el.ad.eul"
ext.emo \~=:~
dlula
acomp. ante SOJ.lm
'.ea
eriboll8
visiOn exterN! de un
:: 1 elemento de tubo
erloo.o en t:eiOn
g n elemento
de '0"$0 m~u,o

elernento de t\lbo eribolOi

los elementos del vaso estan
EI fioema participa en el transporte de los solutos organicos de la fntimamente asociadoss con celulas
planta. las dlulas conductoras principales (elementos) estan parenquimaticas deillilema que
alineades formando tubos Itamados tuoos criOOsos. los elamentos transportan activamente solutos
de los tubos cribosos maduros son cillulas vives. Interconectadas selecclonados hacla dentro y hacis
por perforaciones en sus paredes terminales que son plasmodesmos fuera de los elementos a traves de
ampliados y modificados (placas cribosasl. Estas cillulas mantienen su membrana plasmatica.
su membrana plasmatica pero han perdido sus nuclees y gran perte
de su citoplasma; por 10 tanIo, para su mantenimiento necesitan el
concurso de ce/u/as acompaflanres asociedas. Estas celulas Clilulas parenquim6ticas de1lrileml
acompanentes tianen la funcien adicional de 8Ctivar el trans porte de
moleculas elimenticias solubles hacia dentro y hacia fuera de los
elementos del tubo criboso a traves de las areas cribesas de ta pared.

31
La organizaci6n pluricelular depende de la cohesi6n
entre las c~luJas
Para formar un organismo pluricelular las celulas han de estar unidas entre sf de
alguna manera y los eucariotas han dcsarrollado diversos sistemas para satisfa-
cer esta necesidad. Como ya hemos dicho las celulas de Volvox no se separan
por completo despues de la divisi6n celular sino que permanecen conectadas
mediante puentes citoplasmaticos. En las plantas superiores, las clHulas no 5610
permanecen conectadas por puentes ciloplasmaticos (denominados plasmodes-
mas), sino que ademas quedan encerra~as en un rfgido conjullto de camaras
con paredes celul6sicas que han segregado las propias celulas (paredes cellJla-
res).
Las eelulas de la mayorla de los ani males earecen de paredes rfgidas y los Figura 133 Organlzaci6n corporal
puentes eitoplasmalicos son poco frecuemes. En lugar de ella, las celulas se ha- de Hydra. (A) Hydra oligactis ell SU
entorno natural: en estas especies de
Ilan unidas par una red relativameme laxa de grandes mole.colas organicas ex-
Hydra los tenl3culos se retraen para
tracelolares (denominada marriz e:ctracellllar) y por las adherencias entre sus eapturar las presas. las proyecciones
membranas plasm~hicas. Muy a menudo las uruones lado-a-Iado entre ce.lulas que se producen por gemaci6n del
las mantienen unidas formando una eapa pluricelular 0 epltello. cuerpo son hijos que se separanin del
padre. (8) Diagrama de la arquitectura
Las capas de c~lulas epiteliales envuelven celular del cuerpo de una Hydra tfpiea.
La capa externa de cl!lulas (ectodernlO)
un medio interno protegido es esencialmenle prote<:lOra,
De {ados los sistemas a traves de los que las eelulas animales estan relacionadas predadora y sensorial, mientras (IUe las
formando los tejidos pluricelulares, quizas la disposici6n epitelial es la que tiene el!lulas de la capa interna (endodermo)
una importancia mas fundamental. La eapa epitelial tiene para la evoluci6n de dcscmpenan fundamentalmcntc
los organismos pluricelulares complejos un significado muy parecido al que la funciones digcslivas. Ambas capas
cpitcliales tienen lambil!n una funci6n
membrana celular tiene para la evoluci6n de las ce.lulas aisladas complejas.
contractil 0 muscular que permite at
La imponancia de las capas epiteliales esta bien i1ustrada en otro grupo in- animal moverse. Los movimientos
ferior de animaJes, el de los celentereos. Este grupo induye las ane.monas de mar, estan coordinadas par cl!lulas
las medusas y los corales, asf como el pequeno organismo de agua dulce H)'tira. nerviosas que ocupan una posici6n
Los celentereos eslan constituidos por dos capas de epitelio, una eapa externa, 0 protejida en el interior de cada
ectodermo, y una eapa inlema a endodermo. La capa endodermiea rodea una ea- epileUo, formando una malla
vidad, el celenter61l, en donde se digiere el alimento (Figura 133). Entre las celu- imerconectada. (A, par cortesIa de
las endodermicas existen algunas que segregan enzimas digestivas al eelemer6n, Richard Manuel.)

r----'.,N~DO""D,."RCMCD'____, ECTODER~O

~, ..
interSlicial

dlula
epitelio-
muscular
celenteron
dlula
urticante
endodermo
ectodermo

capa muscular \ ClIpa mU$CUlar

Iransvllf'Ht longitudinal

IBI malfLzexttacelulaf lmesogl8ll1

32 Capitulo I : La evolucl6n de 13 ct:lula

 Figura 134 Hydro allmentandose.
Hydra puede realizar una amplia gama
de actividades bastante complejas.
Aquf se ha fotografiado un organiSnlO
solitario captllrando con sus
lentacu[os pequei'ias pulgas de agua:
en elliltimo panel se halln
introduclendo estas presns en su
celenteron para su digesti6n. (Cortesra
de Amata Homhruch.)

micntras que Olras absorben, continuando la digesti6n de las moJeculas de nu-

lrientes que aquellas enzimas habfan transformado. AI fonnar una capa epitelial
densa y coherente que impide que todas estas mol~cu.las se pierdan hacia el ex-
terior, las celulas endodermicas crean por sf mismas un medio arnbicrHe en el
celenler6n que es apropiado para sus propias tareas digeslivas. Las celulas ecto-
dermicas, oriemadas hacia el exterior pemlanecen especializadas para el con-
laCIO can el mundo exterior. En el ectodermo, por ejemplo, se haUan c~luJas que
contienen una capsuJa venenosa con un dardo enrollado que puede ser dispara-
do para matar los pequenos animales de los que se alimenta Hydra. La mayorfa
de las deml1s celulas ectodermicas a endodermicas tienen propiedades pareci-
das a las musculares, permitiendo el movimiento de Hydra. tal como debe ha
cerlo un predador.
Entre la doble capa de ectodermo y endodermo, se encuenlra otro cornpar-
timiento separado lanto del celenter6n como del media exterior. Aquf, se hallan
las ci/ulas Ileruiosas, ocupando estrechos espacios entre las celulas epiteliales,
por debajo de la superficie extema donde las IItliones ceill/ares (~cell jlltlctio1l5'1
especializadas entre las celulas epiteliales fonnan una barrera impermeable. EI
animal puede cambiar su forma y moverse par medio de contracciones de celu-
las del epitelio semejantes a las de las c~lulas musculares. y las celulas nerviosas
transmiten sci\ales eltktricas controlando y coordinando estas conlracciones
(Figuras 133, 1-34 Y 1-35). Como veremos mas adelante, las concentrac!ones de
iones orgl1nicos simples en el medio que rodea a una celula nerviosa son crucia-
les para su funcionamiento. La mayoria de celulas nerviosas -incluidas las nues-
tra5- estan disenadas para trabajar cuando se hallan en un medio que tenga una
composici6n i6nica similar a la del agua de mar. Este hecho probablemenre re-
Oeja las condiciones en las que evolucionaron las primeras celulas nerviosas. La
mayorfa de celcntereos, aunque no lodos, todavfa viven en el mar. Hydra, con-
cretamente, vive en el agu3 dulce. Es evidente que ha sido capaz de colonizar
este nuevo habitat, sabre lodo, gracias a que sus celulas nerviosas se hallan con-
tenidas en un espacio aislado del exterior mediante capas de celulas epiteliales

-~
que mantienen el ambiente interno necesario para el funcionamiento de las ce-
lulas nerviosas.

La comunicaci6n celula-celula controla el esquema espaciaJ

de los organismos pJuricelulares '9
Las celulas de Hydra no cstan lmicamente agrupadas mecanicamente y conecta-
_f
Figura 1-35 Hydra nadwldo. Hydra
das median Ie uniones que afslan el interior del ambiente exterior; tambien estan puede nadar, deslizarse sobre Sll base
comunicadas entre sf a 10 largo de todo el cuerpo. Si se secciona un extremo de o. como muestra el dibujo, desplazarse
una Hydra, las celulas restantes reaccionan ante la ausencia de la parte amputa- dando'lolteretas.

De las dlulas simples a los organismos pJuricelulares 33

 f

da adaptando sus caraClerfsticas y reordemindose regenerando un animal com-

pleta. Es evidenlc que tiertas sellales pasan de una parte del organismo a atra,
gobernando el desarrollo de su esquema corporal -que presenta tentl1culos y
una boca en un extrema y un pie en el otro. Adem<is, estas sef'lales son indepen
dientes del sistema nervloso. 51 una Hydra en des3rroUo se trata con una droga
que impide la fonnaci6n de celulas nerviosas, el animal resulta incapaz de mo-
verse, de alrapar las presas 0 de alimentarse. Sin embargo, su sistema digestivo
fundona aun con normalidad por 10 que el animal puede ser mantenido vivo
por cualquiera que tenga la paciencia de lntroducirle su alimento normal en la
boca. En estos animales alimentados artificialmente se mantiene el patr6n cor
poral normal de modo que las zonas perdidas son regeneradas, tal como oeurre
en los animales que tienen el sistema nervioso intaeto.
Los animales superiores m~ complejos han evolucionado a partir de unos
humildes antepasados parecidos a los celentereos. Estos animales superiores
deben su complejidad a un aprovechamiento m~ soflsticado de los mismos
principios b~icos de eooperaci6n celular en los que se basa la construccl6n de
Hydra. Las eapas de ululas epiteliales, revisten lodas las superficies extemas e
intemas del cuerpo, ereando compartimientos resguardados y ambientes inter-
nos controlados en los que las celulas diferenciadas realizan funciones especiaU-
zadas. Las celulas especializadas interaccionan y se comunican entre sf estable-
ciendo senales que determinan el cara-Cler de cada celula de acuerdo con su
situaci6n en el conjunto de la eSlructura. Pero para mostrar c6mo es posible ge-
nerar organismos pluricelulares con un lamano, una complejidad y una preci-
si6n como las exislentes en un <\rhol, una mosca 0 un mamffero, es necesario
estudiar con mayor detalle la secuencia de procesos que tienen lugar duranle el
desarroUo.

La memoria celular permite el desarroUo de patrones complejos

Las celulas de casi todos los organismos pluricelulares proceden de la divisi6n
repelida de una uniea celula precursora; eslas celulas constituyen un clofl. A me-
dida que continua la proliferaci6n y el cion crece, algunas de las celulas, como
ya hemos visto, se diferencian de las Olras en respuesta a los datos que les pro-
porcionan las celulas vecinas, adoplando normalmente una estructura diferen-
te, unas caracterfsticas qufmicas diferentes y una funci6n diferente. Es notable
que las celulas eucariotas y su progenie persistan en sus estados especializados
incluso despues de que las influencias que dirigieron originariamenle su dife-
renciaci6n hayan dcsaparecido -en otras palabras, estas celulas tienen una me-
moria. Por consiguienlc, su canicter final no esta determinado simplememe por
su ambiente final, sino ml1s bien por toda la secuencia de influencias a las que
han estado sometidas en el transcurso del desarrollo. Asf, a medida que el cuer-
po crece y madura quedan especificados detalles progresivamente ml1s finos del
esquema corporal adulto, creando un organismo de complejidad crecienle cuya
forma ultima es la expresi6n de una larga historia de desarrollo que es recordada
por las ctHulas.

Lns programas basicos de desarrollo tienden a ser

conservados en la evoluci6n20
La estruetura final de un animal reOeja su historia evolutiva la cual, como el de-
sarrollo. presenta una cr6nica de progreso desde 10 simple hasta 10 complejo.
iCUaJ es enlonees la conexi6n entre estas dos perspectivas, la de la evoluci6n por
un lado y la del desarrollo por otro?
Durante la evoluci6n muchos de los dispositivos de desarrollo que surgicron
en los organismos pluricelulares ml1s sencillos se han conservado como princi-
pios basicos para la construcci6n de sus descendiemes m~ complejos. Va he-
mas mencionado, por ejemplo, la organizaci6n de las celulas en epitelios. AJgu-
nos de los tipos celulares especializados, como por ejemplo las celulas nerviosas,

34 CapItulo I : La evolucl6n de la celula

se encuentran a nivel de casi todo el reino animal, desde Hydra hasta el hombre. Figura 1-36 Comparaelli" del
EslUdios moleculares, que discutiremas mas adelante en este libra, revelan un desarrollo embrlonarlo de un pez, de
sorprendentemente elevado mlmero de parecidos de desarrollo a un nivel gene- un annblo. de un reptll, de un p4Jaro
tieo fundamental, incluso entre especies tan remota mente relacionadas como y de una selec::c16n de mamrfero8. Los
los mamfferos y los inseclOS. Adema.s, en terminos anal6micos las primeras fases eSladios tempranos (arriba) son muy
similares pero los ullimos estadlos
del desarrollo de ani males cuyas formas adultas son radical mente diferentes son
(abajo) son mas divergenles. Los
a menudo sorprendentemente similares; se necesita experiencia para distinguir,
estadios tempranos estan dlbujados
par ejemplo. un embri6n temprano de pallo de un embri6n temprano humano mas 0 menos a eseala y los ullimos
(Figura 1-36). estadios no. (De E. Haeekel,
Observaciones de este tipO no son dificiles de comprender. Consideremos el Anthropogenie.oder
proceso mediante el cual. en el transcurso de la evaluci6n. aparece un nuevo Entwiekelungsgesehichte des
rasgo anat6mico -por ejemplo. un pico a1argado. Se produce una mutaci6n ale- Menschen. Leipzig: Engelmann. 1874.
aloria que modifica la secuencia de aminoacidos de una protefna y. por 10 tanIo, Par eortesfa de the Bodleian Ubrary.
su aetividad biol6gica, Esta alteraci6n puede afectar por casuatidad a las celulas Oxford.)
responsables de la formaci6n del pica, de tal manera que produzcan un pica
mas largo. Pero la mutaci6n ha de ser tambien compatible can el desarrollo del
resto del organismo: s610 entonces sem propagada por la selecci6n natural. La
formaci6n de un pico mas largo tendrfa poea ventaja selectiva si. en el proceso,
se perdiera la lengua 0 no lIegaran a desarrollarse los ofdos. Una eatastrofe de
este tipo es mucho mas probable si la mutaci6n afecta a acontecimientos que se
producen en las primeras fases del desarrollo que si afecta a los que ocurren cer
ca del final. Las primeras celulas de un embri6n son como los naipes de la base
de un casrillo de naipes -casi todo depende de ellas: una pequena alteraci6n de
sus propiedades, probablemenlc dar<i como resultado un desastre. Los pasos

De las,eelulas simples a los organlsmos plurieelulares 35

fundamentales han sido "congelados~ en procesos de desarrollo, del mismo
modo que el c6digo genetico 0 los mecanismos de sfntesis proleica han quedado
congelados en la organizaci6n bioqufmica basica de la celula. En cambio, las ce-
lulas producidas hacia el final del desarroUo (0 producidas lempranamenle pero
que forman estrucluras accesorias como la placenta, que no se incorporan al
cuerpo adulto) tienen mas Iiberlad para cambiar. Probablemente esla es la ra-
z6n de que los embriones de las diferenles especies se parezcan a menudo enlre
sf en las primeras fases y de que, a medida que se desarrollan, repilan los pasos
de la evoluci6n.

Las celulas som~ticas del cuerpo de los vertebrados muestran

m~s de 200 tipos diferentes de especializaci6n

La riquez.a de especializaciones djferentes que se encuentra en las celulas de un

animal superior es incomparablemente mayor a la que puede presentar cual-
quier procariola. En un venebrado se pueden distinguir facilmente m:is de 200
tipos celulares diferentes y es probable que muchos de estos lipos de c~lulas in-
c1uyan, bajo un mismo nombre, a un elevado mimero de variedades con dife-
rencias sutiles. EI Panel 1-3 (pags. 38-39) mueslra una pequena selecci6n de
ellos. En esta profusi6n de comportamientos especializados se puede observar,
en un mismo organismo, la asombrosa versatilidad de la cclula eucariota. Gran
pane de los conocimientos aCluales sobre las propiedades generales de las celu-
las eucariOlas procede del estudio de estos tipos especiaLizados de celulas que
muestran individualmente, hasla un grade excepcional. aspeclos que son basi-
cos para todas las celulas. Cada rasgo y cada organulo de cada prolotipo celular
que hemos esbozado en el Panel 1-1 (pags. 18-19) esta desarroUado hasta un
grado extraordinario 0 revelado con especial c1aridad en algl!n Lipo celular. Para
lomar un ejcmplo arbitrario, consideremos la uni6n neuromllscular, en la que
prolongaci6n
intervienen s610 tres tipos de cclulas: una celula muscular, una ccluJa nerviosa y de III eelulll
una celula de Schwann. Cada una de elias desempeii.a un papel muy distinlO (Fi- nervioslllllx6n)
gura 1-37). dlula de Schwann
generando la vaina
de mielina
J. La c~llIla muscular se ha especializado en la conlraccidn. Su cilOplasma
estci Ueno de filatnentos proteicos, incluido un elevado m"imero de fila-
mentos de actina, dispucstos organizadamente. Existcn tambi~ll llume-
rosas mitocondrias distribuidas entre los filamenlos protcicos, que sumi-
nistran ATP como combustible para el aparato contnictiJ.
2. La celulu nerviosa estimula al musculo a contraerse; transmite al muscu-
10 una sei'lal cxcitadora procedente del cerebro 0 de In medula espinaJ.
Por cOllsiguiente. In cclula nerviosa es extraordinariamente alargadu: su
cuerpo principal, que contiene el nucleo, puede hallarse n mas de un me-
tro de In uni6n can el ml'isculo. EI citoesqueleto esta dcsarrollado de for-
ma correspondiente manteniendo esta forma poco habitual de la celula y
lransponando cficazmente los materiales desde un extremo al otro de la
celulll de
misma. Pero la especiaJizaci6n mas crucial de la ctHula nerviosa radica en Schwann
su membrana plasm:hica, la cual contiene proteinas que aCluan como
bombas de iones y como etmales i6nicos. provocando Ull ll1ovimiento de
iones que equivalc a un nujo de electricidad. Aunque lodas las celulas
contienen estos canales y bombas en sus membranas plasmaticas, la c~
lula nerviosa los ha aprovechado de tal manera que un pulso de electrici
dad se puede propagar en una fracci6n de segundo desde un extremo al
otro de la celula, lransmitiendo asi una seoal.
Figura 1-37 Esquema de una aHula
3. Finalmente. las cclulas de Schwann estan especializadas en In produc-
nervlosa, con sus cilu1as de Schwann
ci6n masiva de membrana plasmatica, que disponen alrededor de la por- asociadas. entrando en contacto con
ddn alargada de la celula ncrviosa, depositando una lras otra sucesivas una cilu1a muscular a traves de una
capas de membrana, como si fucra un roUo de cinta, ormando una vaifla unldn neuromuscular. Diagrama
de mielina que aClua de aislame. esquemlitico.

36
___________.....IJ
Caphulo I : La evoluci6n de la c~lula
Los genes pueden ser activados y desactivados
Diversos tipos celulares espccializados de un mismo animal 0 planta superior a
menudo aparecen mn radicalmenle distintos como pucden serlo dos celuJas.
EsIO puede parecer paradojico ya que lodas las celulas de un organismo plurice-
lular eslAn estrechamente relacionadas al haberse formado recientemente a par-
Lir de una misma celula precursora --e16vu10 fecundado. Un linaje comlin impli-
ca genes similares; l.c6mo aparccen entonces las diferencias? En algunos casos
la especializacion celuJar implica la perdida de malerial gcnetico. Un ejemplo
extremo 10 constituyen los eritrocitos de los mamfferos. que en el transcurso de
la diferenciacion pierdcn por completo el micleo. Pero la imnensa mayona de las
cclulas de la mayor parte de espccies animales y vegetates conservan toda la in-
fonnacion gem'itica contenida en el ovulo fecundado. La especializaci6n depen-
de de aheraciones de la e:cpresi6" ge"ica y no de la perdida 0 adquisici6n de ge-
nes.
Incluso las bactcrias no producen simuJtAneanlcnte todos sus tipos de pro-
tefnas, sino que son capaces de ajuslar el nivel de sfnlesis a las condiciones ex-
tcrnas. Las prolefnas cspccfficamcnte necesarias para cl Olctabolismo de la lac-
tosa, por ejemplo, son produciclas par algunas baclcrias solo cuando pueden
disponer de cste azucar. Otras bacterias detienenla mayor parle de los procesos
metabolicos normales; cuando las condiciones son desfavorables para la prolife-
racion celular, algunas baClerias deLienen la mayor parte de los procesos meta-
b6licos normales y forman esporas que presenlan una pared externa, resislente,
impermeable y Wl citoplasma de composici6n alterada.
Las celuJas eucariotas han desarrollado mecanismos mucho mAs complejos
para controlar la expresion genica, y estos mecan.ismos afCClan a sistemas enle-
ros de productos genicos interactivos. Los grupos de genes son activados 0 inhi-
bidos en respuesla a sciiales lanlO extemas como inlemas. La composicion de
las membranas, el citoesquclelo. los productos secretores, incluso el metabolis-
mo y otros muchos rasgos, deben variar de manera coordinada cuando las celu-
las se diferencian. Los controles que hacen posible estos cambios han evolucio-
nado en los eucariotas hasta un grado no alcanzado por los procariOlas.
definiendo las complejas reglas del componamiemo celular que pueden generar
un organismo pluricelular organizado a partir de un simple huevo.

Comparaciones entre secuencias revelan centenares

de famllias de genes hom61ogos 12 ,21
A parte de las apariencias, la evolucion ha transformado el universe de las cosils
vivientes basla un grado que no tiene parangon. Un ser humano, una mosca,
una margarita, un hongo. una bacteria... parecen tan difcrentes entre sl que diff-
cilmente tiene scntido compararlos. Todos ellos son desccndicntes de un ances-
Iro comun y a medida que vamos estudiando su interior, encontramos mAs y
mAs evidencias de sus orfgenes comunes. Ahora conocemos que la maquinaria
molecular bAsica de la vida se ha conservado haSla un grado tal que probable-
mente habria sorprendido a los padres de la teorla de la evoluciOn. Como hemos
visto, todas las fonnas de vida tienen esencialmente la misma quunica. basada
en aminoAcidos. azucares. acidos grasos y nucle6tidos; todas sinletizan estos
costituyentes qumicos de una manera esencialmente similar; todas almacenan
la informaci6n geneLica en el DNA y la expresan a trav~ del RNA y de las protef-
nas. EI grado de conscrvaci6n de la evoluci6n es lodavfa mas sorprendeme
cuando examinamos en detalle las secuencias de nucleotidos de determinados
genes y de aminoacidos en dClerminadas protefnas. La suene es que las enzimas
baclerianas que catalizan cualquier reaccion en panicular. como la rOlUra de un
azucar de seis carbonos en dos azucares de tres carbonos a traves de la g1ucoli-
sis, tienen una secuencia de aminoAcidos (y una estruclura tridimensional) in-
equfvocamente similar a la de las enzimas qlle catalizan In misma reaccion en
los seres human os. Ambas enzimas -y de forma equivalente los genes que las es-

De las c~lulas simples olios organlsmos pluricelulares 37

--------~- ...
 TIPOS
CELULARES
Existen mh de 200
tipos diferentes de
diu III en el cuerpo
humano. Se hallen
formendo diversos
lipos de lejidos
como
ephelios
tejido conjunlivo
musculo
lejido nervioso
EPITELIOS
las diu las epiteliales forman capas celulares coherentes
denominadas epitelios, que revisten las caras intarnal y externas
del cuerpo. Existen muchos tipos especialilsdos de epiteliol.
las colulas absorbentes lenlarocitosl Iienen Colulal cilladas: tienen Celulas secreloras: se hallan
muchos microvilli qU8 sa proyectan a la cilios en su luperficie libre en la mayorla de las capas
superficie libre aumentando el ar8a de que baten sincr6nicamente epiteliales. Estas dlulas
absorci6n. para desplaur suslancias especializadas segregan
(p.ej., mUCOlidadel) por sustancias hada la
microvilli encima de la capa epitelial. superflCie de la capa celular.
eontllC!O
i---- I'min.
boN'
eilio$

las dlulas epiteliales adyacenles estan

la meyorla de tejidos
estan formados par
combinacioflBs de
varias tipos celulares.
unida! mediante uniones que confieren
a la capa celular su fuena meeanica y
que la hacen tambien impermeable a
las moleculas pequeflas. La caps He-- nUc:leo
descansa sobre una lamina basal.

TEJIOO CONJUNTIVO
los especios entre 6rganos y tejidos del cuerpo EI hueso elt' producido por dlula! denominadas
estan ocupados por tajido conjuntivo, formado osteoblastol, que segregan una malriz Las uJ.. de ealeio
principalmeme por una red de fibras proteicas extracelutar en la que mas larde se deposilartin M deposit.n .n I.
resistentel inmersas en un gel polisadrido. cristales de fosfalo calcico. m.WeKtraeelula,.
ESIa malriz axtracelular esla segregeda
principalmante por los fibroblastos.
, "

Dos lipos fundamentales
de fibra proteica extraceluler
/
Ion la colltgena
y la elastine. O.leoblto. unido.
por p,olongaelones matdz
celulares IKtraelllul.r
las dlulas adiposas son unas de las
mayores del cuerpo. Estas diu lIs
son responsables de la producci6n
y alm,cenamiento de grasa. EI
I
6()...1201lm

fibrobl&.tO' en leilda
eonJunllvo luo
nucleo y el citoplesml eSlim
desplazados hacia la periferia de la
celula por una gran gOla de Hpido. 1
TEJIOO NERVIOSO

__~~_ ,,~::::::~S~A~L1~D~AS::::::::::::::--~
~
:.- dllndrit~.
uon

--::::
LlEGAOAS
Elax6n conduce las ser'lales
electricas procedentes dal soma calular.
Estas senales son producidl! PO' un flujo de
iones a traves de la membrana de la .colula nervlosa.

eUfllpo 0 _ _-I-
10m. celul.r

La sinapsis es el luga' en el que

las colulas nervions, 0 neuronas, estan
especializadas en la comun~i6n. EI cerebro
y la modula espinal. por ejemplo, est8n
compuestos de una red de neuronas con
celulas glial8$ de IOSt'n.
Unas dlulas especialiladl5, denominadas
dlulas de SChwann u ollgodendrocitos, sa
disponen alrededor del ax6n formalldo
una vaina muhilaminar.
la neurona forma una uni6n
especlalizada con otrD neurona
(0 can una colula muscular). En II
sinapsis, las seneles pasan de una
neurona a otra (0 de una neurona
a una colula muscularl.

38 Panell-3 Algunos de los dHerentes tipos de ~1u1as existelltesen elcuerpo de un vertebrado.

 A menudo las celulas epiteliales MUSCUlO
secretoras estan agrupadas
formando una g"ndula que se Mediante su contracciOn. las celulas musculares generan fuerza
especializa en la secreci6n de meclinica. En los vertebrados exislen Ires t;pos principales:
una sustanda particular, Tal
como se ilustra, las gllindula8
exocrinas sagrega{l musculo esquehHico: mueve las articulaciones

.
por media de su contracciOn polente y rlipida.
determinados produclos
lcomo "grimas, mucosidades Cada musculo esta formado per un haz de
y jugos gaslricOS) al interior
de conductas. Les gllindulel
fibres musculares, cada una de las cuales
es une enorme c61ula plurinucleade.
endocrines segregan }
hormones a Ie
sangre.
conclueto
dell
_---1i.n
:: nUtleo
g"ndull . ;:./.. musculo

..:..:.: ::,~. c81ula musculal

con estriaciones
tendon trlll'lsYelSBlH

musculo Iiso: 58 hella en las paredes del tracto

SANGRE
Los eritrocilOI IgiObul08 rojosl son ce!ulas muy pequerias.
normalmenle sin nucleo ni membrenas internes, y
conlienen hemoglobina, protelna que se une al oxfgeno.
digestivo, la vsjiga. las arterias y las venas;
estli compuesto par finas <:elulas alargedas
lno estriadas), cada una con un solo nueleo.
I

'~-('
1 cm'de ..ngre COnliene IOlma nolmal es la
11.1
5000 millones de elilfocilOI de un disco biconcavo
los glObulos blancos (leucocitos) protegen de las infecciones.
La sangre contiene eproximadamenle un leucocito por cada
100 glObulos rojos. Aunque vfajan por sangre. pueden pasar
a traves de las paredes de los vasos sangulneos para realizar
su fundOn en los tejidos vecinos. Existen varios tipcs
distintos, entre eUos:
IinfocilOS: responsables de las respuestas inmunitarias.
tales como la producdOn de anticuerpos.
macrOfagos y neutr6filos: se desplazan hacia los focos de
infeccion, donde Ingieren bacterlas y residuos.
pared de un peq:~~':'~O~::::::~:-:::~~~~~j~~
vallO sangulnao
infeccion baClarians an
_ en su superficie. EI movimiento de
allajido conJuntivo - - -.....
musculo cardiaco: de carilcter interme<lio entre
.1 musculo esqueletico y el musculo lisa.
PrOduce el lalido cardiaco. Las celulas adyacenles
eSlan asociadas por uniones el6etricamente
conductoras, que hacen que las c61ulas se
conlraigan sincronicamente
C~LUlAS SENSORIAlES
Entre las celulas mils complejas del
cuerpo de los vertebrados se encuentran los eSlereocHioB son
las que detectan los estfmulos externos. muy rfgidos porqua
Las clilulas cilladas del oldo interno son estlln empaquetados
las detectoras primaries del sonido. con filamantos de
Se trata de celules epiteliales modificadas, actina
can microvilli especlales (estereociliosl
estos eslereocilios en raspuesta a
les vibraciones sonoras provoca
una senel electrica que pasa al
cerebro.

C~lULAS GERMINAlES
Tanto 101 espermaloloides como
los Ovulos son hap/oides, es decir,
que conlienen una sola dotaciOn de Los baslones de II retina del ojo son c8lulas
cromosomas. Un espermatozoide especializadas en la respuesta a la lUI. La
del macho se une a un Ovulo de la regi6n fotosensible contlene una gran
hem bra, formando, por sucesivas cantidad de discos membranosos len roja)
divisiones, un nuevo organismo en cuyas membranas se encuentra al
diploids. pigmento sensible a la lUI, la rodopsina.
La luz actua como una sena! eleetrica
lflecha verdet, que se transmite a dlulas
nervioses del ojo, las cuales canalizan la
sena! hasta 81 cerebra.

39
 -
Angiosperm,s Vanebrados
lBoat!o,i, hombre
9 ul..nt X....".,.
Judia <OM
Ub.eo ,..6n
1100
lirio U,ocordadO$ polio
Arab/dofis .seidl, codarnil
{Styela/
,,,.
IIlIon Insectos
rna_del
"~ vinagr. (DrrnophilaJ
mild'" C\IC8,lCha

Equinodermos
erizo de mar
8strell, de rna,
Cord.do. blltena ehinche (~/J$}

C,uaKeos

.,
,
.~
fTh,.,..,
holoturia
Cyc/opo 0.
:
.g
~
~

..,..
AJpilS

--
Al9nverdes

-..
C.kWllflrados
"",<0
InflnOfl de mal I
~

MoI'Ios clellimo

lev.dures -""'_ / Dit::ftIwt-'ium

=::.-~ . . / /' Dinollagelados

------- <';':\'l-.:L----~-.:.-l
I CiIJadoss
T"r.hymfl~

') I
........ III ParamfClum

Ame~

Euglenoideos
I
TripanOlomas
cloroplastoB

/ /k:======4
Microlpo,idlos
Oiplomonadinos
GI,lfdlll
__ I
CianobllClerllll (algas azul.a) - - - - - - - - - - ,

eacteria. purpura
-{
==
"""""='
ooii
:i~OC.J"d'i"

ArQuebllCteriu
H.lobM:te,ium
Mi"ob.8cterin_-"'",~_
Gram po.iti..... Btlcillul subrili.

-----'",----Eubacteriu

PROCARIOTA ANCESTRAl.

Figura 138 Relaclonesevolutlvas

entre algunos de los organlsmos
mendonados en este Ubro. las ramas
del arbol muestran vias de
descendencia comun, pero su longilud

l
no indica el paso del tiempo. (Tengase
en cuenta as! mismo Que el eje venicai
del diagrama muestra categorfas
principales de organismos, pero no
tiempo.J

40
pecifican- no s610 tienen una funci6n similar sino tambicn casi con seguridad
un origen evolutivo comun. Se pueden utiliutr estas relaciones para dibujar los
carninos evolutivos mas antiguos; comparando secuencias de genes y recono-
ciendo homologias se descubren paralelismos ocultos y similitudes entre orga-
nismos diferentes.
A menudo tambicn se encuemran parecidos familiares entre genes que co-
difican protefnas que realizan funciones relacionadas en un mismo organismo.
Estos genes tambien estan reladonados evolutivamcnte y su existencia revela
una estrategia basica a traves de la cual se ha originado la complejidad credente
de los organismos: los genes y zonas de genes se duplican y las nuevas copias di-
vergen de la original mediante mutad6n y recombinaci6n, para realizar nuevas
fundones adicionales. De esla manera, partiendo de un numero relativamenle
pequeno de genes en las celulas primilivas, la forma de vida mas compleja ha
llegado a desarrollar mas de 50 000 genes, como se cree que presenla un animal
o una planta superiores. A partir del estudio de un gen 0 de una prolefna, avan-
zamos en el conodmiento de toda una familia de genes 0 prolCfnas hom61ogos a
clla. Asf la biologfa molecular subraya la unidad del mundo viviente y nos pro-
pordona herramientas para descubrir los mecanismos gencrales que estan en la
base dc Sll infinita variedad de invenciones.
En el pr6ximo capitulo empezaremos la discusi6n de eSIOS mecanismos con
el eSllldio del componenle mas basico del kit de construcci6n biol6gica -las mo-
hkulas pequenas a partir de las que se sintetizan todos los componentes mayo-
res de las celulas vivas.

Resumen
La evoillci6n de los gralldes organismos pillricelillares depelldi6 de la capacidad de
las dl"las cilooriolas para expresar SII infomUJci611 '.ereditaria de mllcllas mal/eras
difenmres y para actllar de jonna cooperaliva como ,,,, colectivo IllIico. En los an;-
males ,,,,0 de los primeros desarroUosjJle probablemente la formaci6n de capas de
dlllias ep;teliales qlle separaron del ambiente exterior el espacio interior del cllerpo.
Ademds de eslas dlllias epileJiales tamb;~n se desarroUaron dlllUas neroiosas, c~lu
las tIIllSclllares y ceillfas del rejido colljuntilJO, tOOas las cllales $I! llalla" aClllafmen-
te ell fos animales mds sel/ciffos. La evolflci6n de fos a"imllfes y de las pill/ttas Sllpe-
riores (Figura 1-38) depelldi6 de fa proollcci61t de WI ",i",ero cadll vez mayor de
tipos cefllfares especializados y de melodos mas sofisticados de coordinacioll eltlre
eUos, reflejal/do ,m /lIimero cada vez mayor de efaborlufos sistemlls de cOl/trol de fa
expresi6n de los genes en los disti/ltos tipos cellllares.

Bibliograffa
General
Bendall. D.S., ed. Evolution from Molecules to Men. Cam-
bridge, UK: Cambridge University Press, 1983.
Evolution of Catalytic Function. Cold Spring Harbor Symp.
QlIam. BioI. 52. 1987.
Cunis, H.; Barnes. N.S. Biology, 5th ed. New York: Worth,
1989.
Darnell, J.E.; Lodish, H.F.: Baltimore, D. Biologfa Celular y
Molecular, 2.- ed., Capitulo 26. Barcelona: Edidones
Omega. SA, 1993.
Darwin, C. On the Origin of Species. London: Murray. 1859.
Reprinted, New York: Penguin, 1984.
Dawkins, R. The Blind Watchmaker. New York: Viking Pen
guin, 1988.
Margulis, LM.; Schwanz. K.V. Five Kingdoms: An Illustrated
Guide to the Phyla of Life 011 Earth. 2nd ed. New York:
W.H. Freeman, 1988.
Watson. J.D.; Hopkins, N.H.; Hoberts, l.W.; Steitz. IA; Wei-
ner, A.M. Molecular Biology of the Gene, 4th ed., Chap-
ter 28. Menlo Park. CA: Benjamin-Cummings. 1987.
Cltas
I. Lazcano, A.; Fox, G.E.; Oro, I.F. Ufe before DNA: the ori-
gin and evolution of early archaean cells. In The Evo-
lution of Metabolic Function (R.P. Mortlock, ed.). pp.
237-295. Boca Raton. FL: CRC Press, 1992.
Schopf, I.W.; Hayes, J.M.; Walter, M.R. Evolution of
earth's earliest ecosystems: recent progress and un-
solved problems. In Earth's Earliest Biosphere: Its
Origin and Evolution U.\\I. Schopf, ed.), pp. 361-384.
Princeton. NJ; Princeton University Press. 1983.
2. Miller, S.L. Which organic compounds could have oc-
curred on the prebiotic earth? Cofd Spring Harbor
Symp. Quam. Biof. 52:17-27, 1987.
3. Orgel, L.E. Molecular replication. Natllre 358:203-209,
1992.

B1bllograHa 41

4. Ellington. A.D.; Swslak, J..W. III vitro selection of RNA
molecules that bind specific ligands. Nature346:818-
822,1990.
Joyce, G.F. Directed molecular evolution_ SCi. Am.
267(6):90-97, 1992.
5. Bartel, D.P.; Swstak, '.W. Isolation of new ribozymes
from a large pool of random sequences. SCience
261:1411-1418,1993.
Cech, T.R. RNA as an enzyme. SCi. Am. 255(5):64-75,
1986.
6. Albens, B.M. The function of the hereditary materials:
biological catalyses reflect the cell's evolutionary
history. Am. Zool. 26:781-796, 1986.
Maizels, N.; Weiner, A.M. Peptide-specific ribosomes,
genomic tags, and the origin of the genetic code. Cold
Spring Harbor Symp. Quam. BioI. 52:743-749, 1987.
7. Cavalier-Smith, T. The origin of cells: a symbiosis be-
tween genes, catalysts, and membranes. Cold Sprillg
HarborSymp. Quant. BioI. 52:805-824,1987.
8. Muto, A., Andachi, Y.: Yuzawa, H.: Yamao, F.: Osawa, S.
The organization and evolution of transfer RNA
genes in Mycoplasma caprico/wll. Nue/. Acid Res.
18:5037-5043,1990.
9. Sogin, M.L. Early evolution and the origin of eukaryotes.
Curro Opl'lI. Genet. Devel. 1:457-463, 1991.
Vidal, G. The oldest eukaryotic cells. SCi. Am. 250(2):48-
57, 1984.
10. Woese, G.R. Bacterial evolution. Microbial. Rev. 51:221-
271,1987.
Zillig, W. Comparative biochemistry of Archaea and
Bacteria. CurT. Opin. Genet. DeveL 1:544-551, 1991.
II. Clarke, P.H. Enzyme in bacterial populations. In Bio-
chemical Evolution (H. Gutfreund, cd.), pp. 116-149.
Cambridge, UK: Cambridge Universiry Press, 1981.
De Ouve, G. Blueprint for a Cell: The Nature and Origin
of Life. Burlington, NC: Neil Patterson Publishers,
199!.
12. Li, W.-H.: Graur, O. Fundamentals of Molecular Evolu-
tion. Sunderland, MA: Sinauer Associates, 1991.
Sidow, A.: Bowman, B.H. Molecular phylogeny. CUrT.
Opi/!. Genet. Devel. 1:451-456, 1991.
13. Dickerson, R.E. Cytochrome c and the evolution of en-
ergy metabolism. Sci. Am. 242(3):136-153, 1980.
14. Cavalier-Smith, T. The origin of eukaryote and archae-
bacterial cells. Alln. N. Y. Acad. Sci. 503: 17-54, 19B7.
42 Caprtulo 1 : La evoluci6n de la ctilula
Gray, M.W. The evolutionary origins of organelles,
Trends Genet. 5:294-299, 1989.
Margulis, L Symbiosis in Cell Evolution. New York:
W.H. Freeman, 198!.
15. Gray, M.W. Origin and evolution of mitochondrial DNA.
AmlU. Rell. Cell Bioi. 5:25-50, 1989.
Sogin, M.L; Gunderson, J,H.; Elwood, H.J.; Alonso, RA;
Peattie, DA Phylogenetic meaning of the kingdom ,
concept: an unusual ribosomal RNA from Giardia
lamblin. SCience 243:75-77, 1989.
Vossbrinck, C.R.; Maddox, J.V.; Friedman, S.: Debrun-
ner-Vossbrinck, BA; Woese, G.R. Ribosomal RNA se-
quence suggest microsporidia are extremely ancient
eukaryotes. Nature326:411-414, 1987.
16. Bryant, D.A. Puzzles of chloroplast ancestry. Cllrr. Bioi.
2:240-242,1992.
17. Sleigh, M.A. Protozoa and Other Protists. London: Ed-
ward Arnold, 1989.
18. Buchsbaum, R, et al. Animals Without Backbones, 3rd
ed. Chicago: University of Chicago Press, 1987.
Field, K.G., et al. Molecular phylogeny of the animal
kingdom. Science 239:748-753, 1988.
Knoll, A.H. The end of the proterozoic eon. Sci. Am.
265(4):64-73,1991.
Levinton, ).S. The big bang of animal evolution. Sci. Am.
267(5):84-91,1992.
Shapiro, J.A. Bacteria as multicellular organisms. Sci.
Am. 258(6):82-89, 1988.
Valentine, f,W. The evolution of multicellular plants and
animals. Sci. Am. 239(3): 140-158, 1978.
19. Bode, P.M.; Bode, H.R. Paneming in Hydra. In Pattern
Fonnation (G.M. Malacinslci, S.V. Bryant, eds.), pp.
213-244. New York: Mcmillan, 1984.
20. Raff, RA; Kaufman, T.e. Embryos, Genes, and Evolu-
tion. New York: Macmillan. 1983.
Slack, I.M.W.: Holland. P.W.H.: Graham, G.F. The wory-
pe and the phylorypic stage. Nature 361:490-492,
1993.
21. Chothia, G. One thousand families for the molecular
biologist. Nature357:543-544, 1992.
Miklos, G.L; Campbell, H.D. The evolution of protein
domains and the organizational complexities of me-
tazoans. Curro Opill. Genet. Devel. 2:902-906, 1992.
.Pequefias moleculas,
energia y biosintesis 2
Los eomponentfti qufa.lcot
deuuoHuJa
Ordn bIoJ6Pyeroapa

del. eua"
a aUmento y laobtmddn
ee1u1ar
La bIotfnIaIt
c1eonl...
J" uew:16n

.~-
eat......... y .........

"Debo anunciarles que puedo preparar wea sin necesidad de ningun rin6n oi de
ninglin animal, ya sea un hombre 0 un perro." Esta frase, escrita haee 165 alios
porel joven quhnico a1em<1n Wohler, signific6 el final de la creencia en una ruer-
za vital especial existente en los organismos vivos que da lugar a sus propieda
des y prodUClOS caracterfsticos. Pero 10 que en la epoca de Wijhler fue una reve
laci6n, actualmente es de comun conocimiento -las criaturas vivas estoin hechas
de compuestos qufmicos. En la visi6n contemporanea de 1a vida no hay lugar
para el vilalismo -0 para cualquier cosa que quede fuera de las leyes de la qufmi.
ea y de la ffsica. Sto no quiere decir que en biologfa ya no existan misterios:
exiSlen muchas ;treas de ignorancia, tal como se pandTa de manifiesto en capr-
lulos posleriores. Pero deberlamos empezar a subrayar la gran canridad de fen6-
menos que se conocen.
Actualmente, disponemos de informaci6n detallada sobre las moltkutas
esenciales de la cetuta -no s610 de un reducido mlmero de molecutas, sino de
mlles de elias. En muchos casos conocemos sus estructuras qufmicas exactas y
sabemos COil exactitud c6mo son producidas y degradadas. En {erminos gene-
rales, conocemos c6mo ta energfa qufmica impulsa las reacciones biosinte{icas
de In cetuta, c6mo aCll1an en las celulas los principios de la lerrnodimimica ge-
nerando un orden molecular, y tambiE~n c6mo son controladas y coordinadas
las mirfadas de cambios qurmicos que se producen continuamenle d tIn: s
celulas. ,/,''/.~~ er C'l;,c.
En este caprlulo y en el siguienle resumimos brevememr, ~~ufmica de liii> ~
celula viva. Aquf nos ocuparemos de los procesos en los que i~ erviltn~n las ~l\o ~
ltkulas pequenas: de aquellos mecanismos a traves de los cUaJfis!Ja celtt1a s~nfeti- ,.~
za sus componentes qufmicos fundamentales y obtiene su en~~..rn.GaPitU1o 3liJ
describe las moleculas gigantes de la celula, que son polfmeros ~)1~ ?,~lecul"'ff
pequenas y cuyas propiedades son las responsables de la esp~e
procesos biol6gicos y de la transferencia de la informaci6n biol6gica. ~ _

Los componentes qufmicos de una celula

La qufmica celular se basa en los compuestos de carbona
Una celula viva estA compuesta por un reslringido conjumo de elementos, cua-
tra de los cuales (e, H, N yO) constituyen aproximadamente el 99 % de su peso.
Esta composici6n difiere notablemente de la de la corteza terrestre y pone de re-

43
- ------- -------


50
Figura 2-1 AbllndllJlcla relatlva de los
elementos quimlcos encontrados en

I OfgaO,.rnos
la corleza lerrestre (el mundo
Inanlmado), comparada con la
.. '"
~
I torte", ltrrestre
encontrada en los tejldos blandos de
los orgwllsmos vivos. La abundancia
~ relativa se expresa como el porcentaje
~ JO del mimero total de atom6s presentes.
> Asr, por ejemplo. aproximadamente
I cerca del 50 9b de los atomos de los

~
20
organismos vh'Os son atomos de
hidrogcno.
~
0
$

10

j
""M
, ,,
H C 0 c. N. P Si
M,
lieve un lipa c3ractcrfstico de qufmica (Figura 2-1). Leual es esta qufmica espe-
cial y cdlllo surgi6?
La substancia mas abundante de la celuJa viva es el agua. Conslituye aproxi
madamente el 70 % del peso de las celulas. La mayoria de reacciones intracelula-
res ocurren en un media acuoso. La vida en eSle planela empez6 en el mar, y las
condiciones que reinaban en aquel ambiente primitivo imprimicron un sella pcr
manenle en la qufmica de la materia viva. Todos los organismos han sido disei\a-
dos en base a las propiedades caraclerfsticas del agua, tales COIllO Sll cankleT po-
lar, su habilidad para formaT enlaces de hidr6geno y su alta tensi6n superficial.
Por ejemplo. el agua rodea complclamenlc a las moleculas palaTes mientras que
tiende a reunir las mol~culas no polares, farmando grandes agregados. En el Pa-
ne12-1 (pAgs. 50-51) se resumen algunas prapiedades impartantes del agua.
Apane del agua, la gran rnayorfa de las otras mol~culas de una c~lula son
compuestos de carbona, centro de atenci6n de la quimlca org:1nlca. EI carbona
destaca entre todos los elementos de la Tierra por su capacidad de formar gran-
des moleculas; en este aspecto Ie sigue el silicia, muy par debajo de el. Debido a
su reducido tamana y a los cuatro electranes de la capa externa el atomo de car-
bona puede formar cuatro enlaces covalentes fuertes can otras atomos. Y, 10 que
es mas import3ntc, se puede unir a atros atamos de carballo formando cadenas
y anillos, gencrando nsf mol~culas grandes y complcjas cuyo tamafio no ticne un
!fmite superior obvio. Los otros <1tomos abundantes en la celula (1-1, N Y 0) tam-
bien son pequei'los y capaces de formar enlaces covalentes muy fuertes (Panel 2-
2. pags. 52-53),
Un enlace covalente tfpico de una molecula biol6gica tiene lIna cnergfa de
entre 15 y 170 kcallmol. en funci6n de los titomos que esten implicados. Como
par tennillo media la ellergfa termica a 1a temperatura corporal solamente es de
0,6 kcallmoJ. incluso una colisi6n energetica can oITa molecula. muy poco pro-
bable. no sera capaz de romper un enlace covalente. Sin embargo. catalizadores
especfficos pueden romper a reorganizar rapidamenle los enlaces covalentes. La
Biologfa es posible gracias a la combinaci6n de estabilidad de los enlaces cova
lenles en condiciones fisiol6gicas y la capacidad de los catalizadores biol6gicos
(denominados enzimas) de romper y reorganizar estos enlaces de una manera
controlada y en detenninadas moleculas.
En principio, las simples reglas del enlace covalente entre el carbona y Olros
elementos penniten un numero infinitamente elevado de compuestos. Aunque el
numero de compuestos diferentes de carbono de una relula es muy grande. ullica-

44 Capftulo 2: pequenas molh:ulas. energfa y biosfntesis

7
mente representa una diminuta fracci6n de los que son te6ricamente posibles. En
algunos casos podemos encontrar una buena raz6n para explicar que esle 0 aquel
compueslO reaJiza una funci6n biol6gica del'enninada; pem con mayor frccuencia
parece que el compuesto "elegido'" fue una altemaliva entre orras muchas rarona
bles.. aJgo asf como un accidente (Figura 2-2). Cienos palrones y elementos de reac
ci6n, una vez establecidos en las celulas mas antiguas, fueron preservados con al
H H C<X>-
gunas variaciones a 10 largo de la evoluci6n. Aparentemente, el desarroUo de c 1- c.1. . /
nuevas c1ases de compuestos hIe necesario 0 util en muy contadas ocasiones.

Las celuJas utilizan cuatro tipos bc1sicos de moh~culas pequefiasZ

Cc1 N
H
CH
I
NH'
'

NH

I."~)
Ciertas combinaciones simples de thomos -tales como los grupos metilo (-CH:J, ' H c<xr
C' /
hidroxilo (-DH). carboxilo (-CoOln y amino (-NH 2)- se presenlan repetidamen- N N.........CH
te en las moleculas biol6gicas. Cada uno de estos grupos liene propiedades quf- ~H;
micas y ffsicas distintas que influyen sobre el comportamiento de cualquicr mo- N N
lecula en que se presente el grupo. EI Panel 2-2 (pags. 52-53) resume los tipos
principales de grupos quimicos y algunas de sus propiedades sobresalienles. H1 C<x>-

ro
Los pesos at6micos de H, C, N Y a son I, 12, 14 Y 16 respectivamente. Las C'C~
I
molecuJas orglinlcas pequeiias de la celula tienen pesos moleculares que osci- NH'
Ian entre 100 y 1000 ycontienen hasta unos 30 ~tomos de carbono. Normalmen- N '

IC se hallan librcs en soluci6n, donde algunas de elias forman un acervo de inter-

mediarios a partir de los cualcs se construyen largos polfmeros. denominados
macromoleculas. Tambien existen intermedjarios esenciales en las reacciones
quimicas que transfonnan la energfa derivada de los aJimentos en fonnas utiles
de energia (10 cual se discute mas adelante).
Las moleculas pequeiias representan una decima parte deltotaJ de materia
organica de una celula y (a grandcs rasgosJ s610 existen del orden de un millar de H2 COO-
C' /
lipos diferentes de elias (Tabla 2-). Todas las moleculas biol6gicas se sintetizan a
partir de los mismos compuestos simples y se dcgradan a estos mismos com-
puestos, ocurriendo la sfnlesis y la degradaci6n a traves de secuencias de cambios
qu(micos de aJcance limitado y siguiendo reglas precisas. Por consiguiente, los
c0 N
H
CH
I
NH'
'

compuestos de una clHula pueden ser c1asificados en un reducido mlmero de fa- Figura 2-2 Losorganlsmosvlvos
milias dist'intas. Dado que las macromoleculas de una c~lula) que constituyen el I1nlcamente slnletlzan WI reducido
lema del Capitulo 3 de este libro. estan formadas a panir de estas mismas mole- nl1mero de las moleculas orginlcas.
que en principia podrian produclr.
culas pequeiias, pertenecen a sus mismas familias.
De los seis aminoacidos que se
A grandes rasgos, podemos dccir que las celulas poseen cuatro grandes fami- muestrnn en ia figura. unicamente el
lias de moleculas organicas pequenas: los azUcares simples. los acldos grasus, los de ia pane superior (ellript6fano) es
amlnolicldos y los nucle6tidos. Cada una de estas familias conliene mllchos sintctizado por las celulas.
miembros diferentes, que prescnlan rasgos qulmicos cOlllunes. Aunque algunos
compuestos celulares no pueden clasificnrse en estas categorfas, las cuatro fami-
lias, junto con las macromoleculas fonnadas a partir de eUas, constiluyen un por-
centaje sorprendentemente elevado de la masa celular total ITabla 2-1).

Tabla 2-1 Composlci6n qufmica aproxlmada de unacelula bacteriana

Porcentaje del Nlimerode
peso celular tlposdecada
total moltkula
Agua 70 I
lanes inorganicos 1 20
Azlicares y precursores I 250
Amino<\cidos y precusores 0,' 100
Nucle6tidos y precursores 0,' 100
Acidos grasos y precursores I 50
Qlras moleculas pcquei\as 0,2 -300
Macromoleculas (prOlefnas, <\cidos 26,0 -3000
nucleicos y pol.isac<\ridosl

Los componentcs quUnicos de una ~Iula 45

 Figura 2-3 La estructura del
HPH monosacarldo g1ucosa, una hexosa
T simple. (A) rorma de cadena abierta
H/,C-OH H OH del azlicar. que esta en equilibrio con
t H C/ C
I
I
la forma cfclica 0 de anillo, mas
I' 'j'H H/" H eslable, que se muestra en (8). Ie) y
HO '\.~-t 0 (D) son modelos de espacio Ueno y de
H 6H bolas y varillas, respeclivameme, de
IAI 181 esla forma dclica U~~D.g1ucosa). La
forma de silla (E) es una
representaci6n ahemativa que se
utiliza frecuememenle debido a que
reneja de una forma mas exacla la
estruclura del azlicar. En {A}. (8) y (E)
las 0 de color rajo indican el atomo de
\..._~:L0H oxfgeno del grupo aldehfdo. Para una
revisKSn de las estruCluras y de las
propiedades qu{micas de los azUcares.
lEI vease el Panel 2-3, pags. 54-55.

Los azucares son las moleculas alimenticias de la celula 3

Los azucares mo1s sencillos -los monosaC<iridos-- presentan la f6rmula general
(CH 20)N' donde " es UI1 Ilumero cOlera comprendido entre 3 y 7. La g/uOOSlJ. por
ejemplo, (iene Ja f6nnula CsH l2 0 6 (Figura 23). Como se muestra en la Figura 23,
los azucaJes pueden preselllarse tanto en forma de anillo como en fanna de ca
dena abiena. En esla forma de cadena abierta, los azt1cares presentan un mime-
fa variable de gnlpos hidroxilo y un grupo aJdehfdo (H) C-Ol 0 un gmpo celona
() C-O). E) grupo aldehfdo 0 celona desempefia un papel especial En primer
lugar, pueden reaccionar con un grupo hidroxilo de la misma mol~cula convir-
liendo la mol~cula en un anillo; en esta fonna de aniJIo, pucde reconocerse el
carbona del aldehfdo 0 de la cetona originales ya que es el unico que eSll1 un ida
a dos tHomas de oxfgcno. En segundo lugar, una vez formado el anillo, este cm-
bono puede unirse a uno de los carbonos can un grupo hidroxilo de ouo azucar,
generando un disacdrido (Panel 2-3, pags. 5455). De esta misma forma la adi-
ci6n de mas monosacaridos da lugar a oligosacaridos de longitud crccicnte (tri-
sacaridos, tctrasacaridos, y asf sucesivamente), hasta lIegar a las grandes mole-
culas de poUsacarldos can miles de unidades de monosacaridos. Puesto que
cada monosacarido tiene varios grupos hidroxilo libres que pueden formar un
enlace COil otro monosacarido (0 con algun otro compuesto), el numero de es-
tructuras posibles de polisacaridos es enormemente elevado. Incluso un disaca-
ride simple, formado par dos residuos de glucosa, puede existir en II variedades
diferentes (Figura 2-4), mientras que tres hexosas diferentes (C 6 H I20J se puedcn
unir formando varios miles de trisacaridos diferentes. Por esta raz6n resulta muy
diffcH determinar la cstructura de un polisacarido determinado, ya que es necc-
sario conocer los lugares de uni6n de cada azucar a sus vecinos. Con los meta-
dos actuales, par ejemplo, se tarda mas ticmpo en determinar la disposici6n de
media docena de azlicares unidos (por ejemplo, los de Wla glucoprotelna), que
en determinar la secuencia de nucle6tidos de una moltkuJa de DNA que conten-
ga muchos miles de nucle6lidos en la que cada unidad se une a la siguiente
exactamellle de la mlsma forma).
La glucosa es el principal compuesto a1imemicio de muchas c~lulas. Una se-
ric de reacciones oxidativas (vease pag. 65) conducen desde esta hexosa hasta
varios derivados mas pequenos y, finalmente, hasta CO 2 y H20. EI resultado neto
se puede indicar asf:
~H 120, + 60 2 -+ GCO l + 6H 20 + energfa
En el transcurso de la degradaci6n de la glucosa se genera energfa y "poder re-
ductor", ambos esenciaJes para las reacciones de biosfntesis, que son captados y

46 Capftulo 2 : Pequcftas mol&ulas, energfa y biosfntesls

5
 Flguru 2-4 Once dlsacartdos
ronnad05 por dos unidades de
al-al o-glucosa. Aunque se direrencian
unicamente en el tipo de enlace entre
las dos unidades de giucosa, son
qufmicamenle direrentcs. Pucsto que
1- 2 los oligosacAridos asociados a las
prolefnas y a los Ifpidos pueden lener
mAs de seis lipos dlferentes de
azucares unidos, a trav~s de enlaces
como los i1ustrados a(luf, en
cl1- 3
disposiciones lineales y rarnHicadas, el
numero de tipos distintos posiblcs de
oligosaCliridos de que puede disponer
la ulula es extremadamente elevado.
al-4

al- >

H 20H
"..,.. ~O ....0'"
~l-a'

transportados rundamentalmente por dos mollkulas cruciales. denominadas

ATP y NADH. respectivamente. Mas adelante. en este mismo capitulo discuti-
mos la estructura y las funciones de estas dos mohkulas cruciales.
Los polisac.iridos simples. compuestos s610 por residuos de g1ucosa -princi-
palmente el glllcdgeflO en las c~lu1as animales y el almid6n en las c~lulas vegeta
Ies- son ulilizados para a1macenar energia que se utilizam en el futuro. Pero los
azlicares no se ulilizan exclusivamente para la producci6n y el almacenamiento
de energfa. Imponantes compuestos eslructurales extracelulares (tales como la
celulosa) esu1n rormados por polisacaridos senciUos. y a menudo secuencias no o~ /0
repetitivas de cadenas de moleculas de azucares, mas pequefias pero mas com- I'
plejas. estan unidas covalentemente a protefnas, forman do glucoprote(fllls, 0 a
Hpidos, formando glucolfpidos.
1"'
1"'
1"'
Los acidos grasos son componentes de las membranas celulares" 1"'
Una mol~ula de acido graso, como por ejemplo el dcido palm(tico (Figura 2-5)
1"'
presenta dos regiones caraclerfsticas: una larga cadena hidrocarbonada hidror6
1"'
bica (insoluble en agua) y qufmicamente no muy reactiva, y un grupo de acido
1"'
carboxilico, ionizado en soluci6n (COO-). extremadamenle hidromico (soluble
1"'
en agua) y que racilmenle reacciona con un grupo hidroxilo 0 un grupo amino
1"'
de otra mollkula formando ~steres y amidas. De hecho casi todas las moleculas
1"'
de acido graso de una c~lula eslan uoidas covalenlemente a olras mol~culas.
1"'
mediante su grupo acido carboxflico. EI gran numero de acidos grasos distilltos
1"'
que se encuentran en las c~lulas difieren en caracterfsticas qufmicas lales como
1"'
la longitud de la cadena hidrocarbonada y en el numero y la posici6n de los do-
1"'
C",
bles enlaces carbono-carbono que contienen (Panel 2-4, pags. 56-57). FlguraZ-S Acldo palnthico. 1 grupo
Los acidos grasos son una importanle Fuente de alimento ya que pueden ser Acido carboxilico (en rojo) estA
degradados produciendo por unidad de peso mas del doble de energfa uti! que represenlado en ronna ionizada. En el
produce la g1ucosa. Se almacenan en el citoplasma en forma de triacilgliceridos. centro se presenta un modelo de bolas
compuestos de tres cadenas de acidos grasos unidas a una mol&:u1a de g1icerol y varillas y a la derecha un modelo
(Panel 2-4, pags. 56-57); Estas mol~ulas constituyen las grasas animales que nos tridimensional de espacio lIeno.

Los oomponentes qu(mioos de una c~lula 47

 grupo grupo Figura 26 EI am..inoacldo alanlna.
amUl<! carbololo En la c~lula, ell la que el pH es cercano
a 7, cl aminoacido se halla en fonna
ionizada. Sin embargo, aI ser
H H incorporado a una cadena
I + I _
HN-C-COOH - H)N-C-COO polipeptfdica las cargas de los gropos
z I pH7 I amino y carboxilo del aminoacido Iibre
CH, CH,
desaparec:::en_ A la derocha de las
f~. f6nnulas eslructurales se mueslran
ionizadll
modelos de bolas y varillas y de
espacio lIeno. En el caso de la alanina,
la cadcna lateral es un gropo -eHJ

son familiares en nuesua experiencia diaria. Cuando es necesario oblener ener

gia, las cadenas de acido graso pueden ser liberadas de los lriacilgliceridos y ser
degradadas haSla unidades de dos carbonos. A continuaci6n, estas unjdades de
dos carbonos, que constilUyen el grupo acetilo de una rnoleCllla hidrosoluble
denominada acetil GoA, son degradadas a lraves de varias reacciones que liberan
energfa y que describiremos mas adelante.
Pero la funci6n mas importante de los acidos grasos reside en la construc-
ci6n de las membranas de la celula. Estas finas capas semipermeables que limi-
tan a lodas las celulas y envuelvcn sus organulos internos cstan compllestas fUIl-
damentalmente de fosfoUpldos, pequefias moleculas que se parecen a los
triaciglireridos en que estan conSlruidas en su mayor parte a partir de a.cidos
grasos y gJicerol. En los fosfolipidos. sin embargo. el g1icerol esta unido ados ca-
denas de acido graso y no a Ires. Ellugar reslante del glicerol esla acoplado a un
grupo (osfato, que a su vez esta unido a otro pequeno compueslO hidromico
como la etallolamino, la COlilla 0 la serino.
Cada molecula de fosfolfpido Hene una cola hidrof6bica --compuesta por las aXlremo amino
dos cadenas de acido graso- y una cabeza polar hidroFilica en la que se encuen- delllc;~a

tra el fosfalo. Si se coloca una pequena cantidad de fosfolfpido en agua. se exten-

dem sobre la superficie fonnando una monDeapa de moleculas de fosfolipido: TN-H
en eSla lamina las colas de las molecuJas quedan densamente empaquetadas Ph. H--CHrO
unas con OUas y dirigidas hacia el aire y las cabezas se hallan en contacto con el
o-~
agua (Panel 24. pags. 5657). Dos de estas laminas se pueden combinar. cola
contra cola. formando un "sandwich~' de fosfolfpidos. 0 blcapa IIpldlca, una es-
,
N-H
Ser H-C-OI1-OH
tructura extraordinariamente importante que es la base eslructural de todas las
membranas celuJares (como se discllte en el Capflulo 10).
o-~
N-H 0
Glu tt-t-CH,-CH,-ef.
I - , -
Los aminoacidos son las subunidades de las prote(nasS ()o~ 0

Los aminoacidos comunes son quimicamenle variados. pero lodos ellos contie-
,
N-H ,H
lV' H-C-CH1-CH2~CH2-CH1-N-W
nen un grupo de acido carboxfiico y un grupo amino, ambos unidos al mismo ()ooa<C 'H
alomo de carbono (Figura 2-6). Se ulilizan como subunidades en la sintesis de ;
las prolelnas, que son largos polfmeros lineales de aminoacidos unidos cabeza- ~
.l(1r.mo ca.boxilo
cola mediante un enlace peptfdico entre el grupo carboXl1ico de un aminoacido y d. la cadena
el grupo amino del aminoacido siguiente (Figura 2-7). Aunque exislen muchos
aminoacidos posibles. en las proteinas 5610 hay 20 aminoo.cidos comunes, cada F1gunl2-7 Pequefia parte de Wla
uno de eUos con una cadelJa lateral diferente unida alll.lomo de carbona a (Pa- molkula protelca. mostrando cuatro
nel 25, pags. 58-59). EsIOS mismos 20 aminoacidos se presentan una y otra vez amlnokldos. Cada aminoacido est:!
unido a1 siguienle mediante un enlace
en tOOas las proteinas, incJuidas las producidas por las bacterias. las plantas y los
covalenle que rec:::ibe el nombre de
animales. Aunque la selecci6n de estos 20 aminoll.cidos probablemente sea un enlace peptldico. Uno de estos enlaces
ejemplo de un accidenle evolutivo. la versatilidad quimica que proporcionan es peptfdicos se destaca sombrcado de
de una importancia vital. Por ejemplo. 5 de los 20 aminoacidos presentan cade- amarillo. Por 10 lanto, las protcfnas se
nas lalerales que pueden lransportar una carga (Figura 2-8) mientras que los denominan a voces polipeptidos. Las
Olros no estll.n cargados pero son reactivos de formas diferel1les (Panel 2-5, pags. cmleflos laremles de los aminoacidos
5859). COOlO veremos, las propiedades de las cadenas laterales de los aminmki- se rellrl.'Sclltan en rojo y los ;l.tomos de
dos detenninan las propiedades de las proteinas y constiluyen la base de las dis- un aminollcido (cl acido glUiamico) se
lintas y sofisticadas funciones desempefiadas por elias. dcstacan mediante el sombreadogris.

48 Capilulo Z: Pequefias mol&:ulllS, energfa y biosfntesis

 Flgurta2-8 La carga de las cadenas
lalcrales de los aminoacldos depende
del pH. En soluci6n acuosa los 4cidos
I carboxflicos pierden f4cilmenlc un H',
NH formaode un ion de carga negativa
I que se nambra mediante el 5ufijo
H,,, ~ -ala', como poT ejemplo aspartato 0
g1utamato. Con las ammas 5e produ~
t una sltuaci6n parecida ya que en
soluci6n acuosa toman H' fonnanda
I un ion de carga positiva (que no recibe
ningUn nombre especial). Eslas
HC-N rcacciones son rnpidamcnlc
I I reversibles. y la cantidad presenle de
HN CH las dos farmas. con carga y sin carga,
C' dcpende del pH de la soluci6n. A un
I pI-! elevado, los addos carboxfiicos
<;:H z
pH
rOO tlenden a estaT cargados y las aminas
sin carga, a un pH bajo sucede 10
ell l
I
<:;H z
1 contraria -los acidos carboxflicos
careccn de carga y las aminas esu1n
I cargadas. 1 pH en el que estan
cargados exactamente la miwd de los
t H
:-JF residuos de acido carboXllico 0 amina,
recibe el nombre de pK del
I HN
" ,CH aminoacido en cuesli6n.
COOH C
, COOH
I CH,
I
c;H,
En 1a celu1a, el pH es pr6ximo a 7,
y casi lados los acidos carboxflicos y
CH, I las aminas se encuentran en forma
<;H1 cargada.

ieido ieido hislidinl Irgininl

~p'l1ieo glutlimieo
pl(-4,7 pl(~.,7 pK.10,2 pK_12

Los nucle6tidos son las subunidades del DNA y del RNA'

En los nucle6tidos, uno de los diversos compuestos cfclicos que contienen nitr6-
gena (dcnominados a menudo bases porque en soluciones <icidas pueden com-
Figura 29 Estructura qu(mlea del
binarse con H') esta unido a un aZllcar de cinco carbonos (rioosa 0 desQxirrioosa) adenosfn trIfosfato (ATP). Se rnuestra
que tambien contiene un grupo fosfato, Existe illl claro parecido entre los dife- un modeJo de espacios ttenos (A), un
rentes anillos nitrogenados de los nucle6tidos. La citosilln (C), la {imina myel modelo de bolas y varillas (8) y la
uracilo (U) reciben el nombre de pirimidinas puesto que todos elias derivan de f6rmula estruclUrai (C). N6lese la
un aoillo de pirimidina hexagonal: la gllallina (G) y la adelli"a (A) son puri"as, presencia de cargas negalivas en eada
compuestas por un segundo aoillo pentamerico unido a1 aniUo hexamerico. uno de los lIes fosfalOS.

IdenOllnl

IAI IBI lei

Los componcntes qufmlcos de unacelula 49

 ENLACES DE HIDRCGENO
Debido a que asttln polarlzedes, dos
,. longitudes de enlece

0-1"
molecules de agua adyacentes
pueden formar une union conoelda enlece de hidr6geno
como enlace de hidrOgeno. los anlaces H O,28nm
de hidrOgeno tienen una fuena de
alrededor de 1/20 la de un enlace
covalante. I H 26 '/"" O-H-O- L.-..-J
H 0,104 nm
Los enlaces de hidr6geno son mas ,. enlace (jfI hidr6geno enlace covalente
fuertes cuando los 3 atomos sa
encuentran en linea recta.

ESTRUCTURA DEL AGUA

las moleculas de ague 58 unen entre 51
transitoriamente formando una red a traves de
enlaces de hidrogeno.lncluso a 3r<:, un 15% de
las moleculas de agua &stan unidas cada una a
I otras 4, en un ensamblaje de vida corta conocido
como -agrupaci6n oscilante-.

La naturaleza cohasiva del agua as responsabla

de muchas de sus propiedades eldraordinerias,
tales como la elevadatensi6n superficial, el alto
celor especlfico Vel elevado calor de vaporizaci6n.

MOLECULAS HIDROFILICAS E HIDROFCSICAS las moleculas no polares interrumpen la eSlruetura

dal agua formada por enlaces de H, sin formar
Debido a su naturaleze polar, les molecules de egua se agrupan interacciones favorables con molkulas de agua.
alrededor de los iones Vde otras moleculas polares. Por 10 tento son hidrof6bicas Vcasi insolubles
en ague.
H O-H

H-O
I
H ,
H
O-H
0 ,
I

H
0
H ............ H
H

I

uIIIH-O
I
H

". CI
-;\I H
H-O , O-H H H, O-H
I

,
I I 0,
H H 0
/
0
H , H H

~
H H O-H
H
las mol6euhts que puaden acomodarse en estructuras de eSle
tipo, formadas por mol6culaa de agua unidas por enlaces de
hidrOgeno, son hidrofilicas y relativamente solubles en agua.

50 Panel2-1 PropIedadet fI',{mk'M del .... y IU inJIuenda ~ eI comport.amlentode'" mok!cuIaI bIoIdIkas

MOLECULAS HIDROFOBICAS Y ESTRUCTURAS ACUOSAS

Las molecules que 80n no polaras y no pueden

formar enlaces de hidr6geno ~omo los
hidrocarbonos- 5610 lienen una solubilidad
en agua limileda, V se denominan hidrof6bicas.
Cuando estes molecules se aneuenlran en agua,
se forman 8 su alrededor estrueturas ordenades
de molecules de agua. Eslas cajes semejentes
a hielo son relativamenle mas ordenadas que
al agua libra y generan unll disminud6n de
entropla del media. En Ie figura se muestra
parte de una de estes estrUCfura5 (en rajal
alrededor de un hidrocarbono (en negro),
En Ie as'fuetura intacta cada atomo de oxigeno
lefreu/os rojas) puede estar coordinado
tetra6dricemente con OIrOS cuatro.

Acmos Y BASES Elagua, por sl mlsmll, liene una ligera tendencia a

ionizer.e. 8CtulIndo tento como acido debit y como
Un kido as una molecule que, en soluci6n. cede base debit Cuando actuB como 'cido libars un prot6n,
un ion H+ (prOI6nl. Por ejemplo, generando un ion hidroxilo. Cuenda actue como base
acepta un prolon formando un jon hidronio. En saludan
0
I ----->.
,0 &Cuola Ie mayona de protones estjn como iones
CH,-C ~ CH,-\ + hidronio.
\ H
OH 0- /
O-H IQ
",,'" boH prolon
H
/ \
H
Una base 85 una molecule que, en soludon. Beaple
un ion H+ (proton). Por ejemplo, Ji /
H

H' 0 0 + H-O
/ 0\
be,e prOlon 'tido H H
jon hidrOl<ilo ion hidronio

pH OSMOSIS
cone. 512 soluclones acuosss estlin separadas por una membrana que
deWen ,H unicamente permite el paso de las moleculas de agua, esta
molts/litro pahr' hada la soluci6n que contiene Ie mayor concentreci6n
La seidel de una solucion
se define como Ie ,,' r 1
de molecules solubles, un proceso denominado 6smosis.
", , .
concentracion de iones H+ 2
que posee. Por comodidad. ", I
, .: .. . . . . .
". . .,
'.' ..
ulilizamos Ie ascals de ... .
.~:. ~. ~ ~ "':':1'.

pH en Ie que
". 5
:.'.:'.~ .. ::.'.::1'. . . . ....
". ,
6
...
..........
::.'. .'!:::':I
. . " .' ...'. ...-..:-,.;..,;--
: ...

JI
;~~ 6 .... -~ ..
Pars el agua pure ~
,,'
10 '0
9

~ 11 " Este movimienlo del agua desde una soluci6n hipot6nica a una
<i
10
10 11 " soluci6n hipert6nica, puede provocar un aumento de Ie presi6n
10 " hidrostjtica en el compartimiento hipert6nico. Dos loluciones
"
I)
que lengan concentraciones identicas de solutos, es decir, que
10 '"
" sean osm6ticamente equilibredss, se dice que son isot6nicas.

51
 ESQUELETOS CARBONADOS
El papel car8cterlatico del carbona en Ie celuls S8 debe
8 su cep8cided de format enlaces covatentes con Olros o estrueturas ramificadas o anill05
alamos de carbono. Asl. 101 atomos de carbono 58
pueden unir formondo cadenas.

__"./c"" V
/C __
-C-C-
--C/ "C--
/\ /".
I ,.p'~P'- \ /\ /\ /\ I
Ulmbien como V V V \
representMlo
Ulmbi6n como
>-< reprnentitdo
tambien eomo
CO

ENLACES COVALENTES HIDROCARBUROS

Un enlace cov,lente SIt forma cuando dos lhomos se BCefClln
luficientemente V campartan uno 0 mal de sus electrones. En un
enlace lenciUo Ie camparta un electron de cada uno de los dos EI carbona y el hidr6geno forman
atomos; en un enlace dobls S8 campartan un total de cuatro electrones. juntos unos compuestos estables
Cade 'Iomo forma un nurnefo delerminado de enlaces covalentes, denominados hidrocarburos. Son
siguiendo una distribuci6n espaciel definide. Por ejemplo, 91 carbona no palates. no forman enlaces de
fonne cuetro enlaces Hocilla. distribuidos hacis los vertices de un hidr6geno Y. par 10 general, son
telraedro mienlr.s que 81 nitr6geno forma ues enlaces sencillos V al insolubles en agua.
oxlgeno forme dOl enlaces seociliOi. distribuidos como se muestra
en este panel.
Dos thomos unidos por dos
o mils enlaces covalentes H H
no pueden rotar libremenle
alrededor del eje del enlace.
Esta restricc;:i6n constituye
I
H-C-H H-~
ef factor limitante principal
I I
Los dobles enlaceslienen una distribucion especial diferente. H H
sobre la distribucion

t
tridimensional de muchas metlno grupomfliiO
macromoleculas.

CH,
/
H,C
\
RESONANCIA Y AROMATICIDAD CH,
/
La cadena de carbonos pueden incluir dobles Cuando se produce resonancla en H,C
enlaces. Si estos se encuentran en atomos de un compuesto clclico, se genera un \
CH,
carbonosalternos, los eleC1rones de enlace ani1lo aromatico. /
se mueven dentro de la molecula, H,C
estabilizando la eslructura en un fenomeno \
CH,
conocido como resonancia. H H /

\-1 \-1 C
H
?
H

-
H , H
H,C
\
CH,

,
/
/ \ I \ I H,C
C C-C C-C \
/ t \ / \ H H H #" H /
CH,
la estruetura verdadera H,C
sa halla entre eSlas dos H H \
CH,
\ / 1\ / /

;-\-<-\-1
/ / \
I~=-:~o I plIRe de II c:.denI
de un icido gnollO

52 PaDelZ.Z ......, . . . . . . . ....._ _ ... moMn. . '*~.

 COMPUESTOS C-o COMPUESTOS C-N
Muchas compuestos biol6gicos contienan un carbona unida a las aminas V amidas son dos importantes ejemplos de
un 0)(lg800. Por ejemplo: compuestos que conlienen un carbona unida a un nitr6geno.

alcohol H En aQua. las aminal 58 combinan con un ion H' y quedan

I EI-OH fee/be 81 nombre cargadas positivamente.
-C-OH
de grupo hidroxilo.
I
H -C-N-W
I /H
aldehldo ,0 I \H
-c

l
Por consiguiente. son basicas.
'H
EI e-o recibe el nombre Las amidas se forman por la combinacion de un acido y una
celona
\ C~O
de grupo carbonila.
amina. Son mas estables Que los esteres. A diferencia de las
aminas. en solucion acuosa no poseen carga. Un ejemplo 10

cl
constituye el enlace peptldico.

'eido carbo:lCflico 0 EI--eOOH recibe el nambr.

,0 +
- cI
-C
de grupa carboxilo. En 81
'OH
agua pierda un i6n
convierte en -COO-.
H~ y S8 'OH -C( I + H,O
N-C-

H
I I
lIsteres Los estares estan farmadas por la combinaci6n EI nitrogeno se presente tambien en diversos compuestos
de un aeido y un alcohol: clclicos: purines y pirimidinas

I
-C-C +
,0
I ~
I ,0
-(-C I + HlO N
A
NH,

C
/H

I 'oH HO-C- I 'o-C- I U citosina (una pirimidinal

I I O?C ..... N..... C....... H
kido alcohol ester
~

FOSFATOS
EI fosfato inorganico as un ion estable farm ada Sa pueden formar esteres fosfato entre un fosfato y
e partir del acido fosf6rico, H3PO... A menudo se un grupo hidroxilo libre.
represente como PI_
o lamb)'"
II
O-p-o -C-OH
I ?
+ 1"10- P-O
I ?
-C-O-p-O
repreftlrltado
I como
I
OH I 6" I 6" -C-O-0
I

La combinacion de un fosfato y un grupo carboxilo. 0 de dos 0 mes grupos fosfato, da lugar II un anhldrido etido.

0 0 ..m~n repreMntlodo
,0 I
-C + HO-P-O- ~
~ - l\ 0 + H,O
ro~

,0
'OH I
0" O-P-O-
I -C
I
0" '0--0

I
-O-P-OH +
I
0
I
0
HO-P-O-
I
~
~
I I
0
-O-P-O-P-O~

I I0"
+
0
H,o
18mb~n

-0--0-0
_.
representedo

0" 0" 0"

53
 HEXOSAS n.6 MONOSACARIDOS PENTOSAS n. 5
las hexosas mlls comune, son Los monosadridos son
glueosa fruetoR aldehfdos 0 cetonas Una pentosa frecuente as
H
" C
0
I
H
H-C-OH
(-<) (>-0) H
'c'
0

I I que lienen lambie" dos 0 mils grupos de I

H-(-OH H-C-O hidroxilo. Su fOrmula ganefel as (CH 20ln. Loa H-C-OH
I I mils simples son las Irioses (n. 3) tales como I
HO-(-H HO-C-H H-C-OH
I I H 0 I
H-(-OH
H-C-OH
I
H-(-OH
I
H-C-OH
'c"
I
H-C-OH
H-C-OH
I
I I H-(-OH I
H-C-OH H-C-OH I H
I I CHzOH
H H glicerlldehfdo luna aldosa) ribosa

CH 20H
I
C-O
I
CHzOH
o-glucosa (forma de cadena abierta) o-ribosa (forme de cadena abierta)
dihidroxiacetona (una caIOla)
(.
CH I OH
I
'<;--OH
7/H (/H
,( C
FORMACION DEL ANILLO
HO'''7H H/"
~3--{' 0 Et gropo aldehldo 0 cetona de un IZUcar
puede reaccionar con un grupo hidrOltilo.
H OH
H H H H
/ I I I
+ HO-(- -
\ -C
"0 I
-C-O-(-
I
OH
I
\
En los azucares mayoras (n > 4 l, esto
puede ocurrir denlro de Ie miama
molecula, formlindose un soilla
de 506 miembros.
SISTEMA DE NUMERACION
los 'Iomos de carbone de un 8ZUcaf
S8 numeran a partir del elctremo mas
a-o-glucoSI cercano al aldehldo 0 Ie cetona.

ESTEREOISOMEROS

ISOMEROS FORMASoYl
Los monosecaridos tienen muchos is6meros Clue (Jnicamente se Dos isameros Clue sean imagenes sspecularss uno del otro
diferencien en la orientaci6n de sus grupos hidroxilo -par ejemplo, tienen las mismas propiedades C1ufmicas y por ello reciben eI
III glucosa, III galactose y III mllnosa son isOmeros entre st mismo nombre, distinguiendolos mediante el prefi}o DOL

~
HPHO
HO
o-glU<:Ola
OH
HQ QH
gluco... manON

galllC'lON
OH

54 Panel2-03 Algunos dc los lipos de anicares encontrados habllualmcnle en las ctHulas.

 ENLACESaY~ DEAIVADOS DE LOS AZllcAAES
El grupo hidroxilo del carbono que presente el Los grupos hidroICilo de un monosacarido simple pueden ser sustituidos
aldehldo 0 II cetona puede pasar raptdamente de por alros grupes. Por ejemplo:
una posici6n a otr. Estas dos posiciones reciben

~ ~
Hl0HO
el nombre de a y It OOHO HO
HO OH
~O\ OH
HO
OH HO
NH,
~ ........ hldroxiloP OH
Q-gluconmlna
6cido l>glucur6nico

~
H20HO
HO
OH
HO
, NH
En CUBOIO un 8zUcar se une a otro. 58 congela III
forma a o~.
, C=o
CH,

OLiGOSACAAIDOS COMPLEJOS

En muchos casos, una secuencia

de azucares as no repetitiv8. Son
posibles muchas moleculas
diferenles. rales oligosadridos
complejos suelen estar uoidas NH ,
NH
8 protelnas 0 8 lipidos. I
~-O
un oligosadrido
,
(=0
CH,
CH, de grupo Hllgufneo

OH

55
 Existen centenares de tipos distlntos de tlcidas gre508. Algunos tlenen uno 0 mas dobles
ACIDOS GRASOS FRECUENTES
enlaces y sa dice Que son insaturados.
Sa Irata de ileidas carboKllicos con
una large cola hidrocarboneda. -0 0
,;
COOH COOH COOH C
I I I
CH, CH, CH,
I I I
CH, CH, CH,
I I I Eata dobls enlace
CH, CH, CH, origins une inclinaci6n
I I I / en Ie cadena
CH, CH, CH, ,,~o
I I I hidrocarbonada. EI
estdrico
CH, CH, CH, resto de Ie cadena
I I I puede girar
CH, CH, CH, libremente a traves
I I I de los otros enlaces
CH, CH, CH,
I I I e-c.
CH, CH, CH
I I II
CH, CH, CH
I I I
CH, CH, CH,
I I I
CH, CH, CH,
I I I
CH, CH, CH,
I I I
CH, CH, CH,
I I I
CH, CH, CH,
I I I
CH, CH, CH,
I ikido
I
CH, CH,
~'mflico
I Ie.. I
CH, CH,
kido kitto
..I"rico olelCo
tel" te,.l

GRUPO CARBOXILO

SI esttilibra, el grupe carboxilo de

un tlcldo grasa se loniza.

Para con mayor frecuencia estlll

unida II otros grupes formando
eslares
~o
C, I
0-(-
I
a.mldas.
 AGREGADOS L1P!DICOS POLIISOPRENOIDES

los 6cidos grasos tlenen una cabala largos polfmeros lineales

hidrofilica V una cola hldrof6bica. de isopreno

0-
En el agua pueden formar una
I
O-P-O-
petreuls superficial 0 pequei'las I
micalas. o

Sus derivados pueden formar grandes agregados unidos por Juenas hidrof6bicas:

los triacilglicllrldos forman grendes Los fosfollpidos Y glucollpido. forman bicepss

-
gatas asfliriess en 81 citoplasma celular. Iipldic8S que se cierra" sabre ,f mismes V constituyen
Ie base de todes las membranas celulsres.

200nm
om.1iI
- =:;=-
J---- 4 om - - - I

GLUcoLIplDOS
Al igual que los fosfollpidos. estos compuestos estan forrnados por una
r8gi60 hidrof6bica, que contiene dos largas colas hldrocarbonadss.
y una regl6n polar, que contiene en este csso uno 0 mas
residuas de azucar, perc no fosfalo.
H OH 0
I I H ,
residuo de

cr~'rH' azucar dolkol fosfato-utilizado para

transportar los azucares
activados duranta la slntasis
asociada a membrana de las
C-NH un glucollpido glU<:oprotelnas y de algunos
I I simple polisac8ridos.
regi6n hidrof6bka o

57
 Elatomo de carbono a as asimetrico. por 10
El AMINOACIDO ISOMEROS OPTICOS que 8ldsten dos isomercs especulares
La f6rmula general de un aminoacido es Co estereoisOmeros). 0 y l.

7~ Momo de e.rbono u

gropo __-Il;!l)....(!;.r-iili~
amino grl,lpo earboxilo
R:~gfUPOIN e-dena lalllf;lli
L
Habitualmente R es una cadena leteral de entre 20
polible. A pH 7 81 grupo amino V 81 grupo carboxilo
estan ionizedos.

R las protelna. constao exclusivemente de aminoacidos l.

FAMILIAS DE CADENAS LATERAlES BAslCAS

AMINOACIDOS
lisina arginine histidine
Los emino6cidos comunes (lys 0 KI fArg 0 RI IHisoHI
.. clasifican segun 5i sus
c.damlslaterales son H 0 H 0 H 0
I I I I I I
-N-C-C- ~N-C-C- -N-C-C-
6ctdas I I I I I I
!)jaicas H <;H1 H CH! H CH1
pol.res no cargadas I
no polare' CH!

EsIOS 20 eminoacidos se
pueden abreviar de dos
formas; por medio de
CH,

CH,
I -
I -
ESla grupo as muy
baBieD. va que su
cargl positIva
esta estllbilillld
CH
I
NH
I
1
;*;.
Estos nitr6genos tienen unllllfinidad
tres latres y por medio de
una 80la lelra.

AsI: alanine. Ala _ A

NH,
+
por resonaocia.

1 'H1N
~C
l\H 1
rellltivlImente debil por el H" V s610
son pardalmenle positivos a pH
neulrO.

58 Panel2--5 Los 20 am1ncNkIdOl que Jntervlenen en la smlesl. de las prote{nas.

 CAOENAS LATERALES ACIOAS CAOENAS LATERALES NO POLARES

6cido a~.rtic;o 6cido lutamico H 0

I n glicina
(Asp 0 OJ IGluoE) -N-(-(-
I I IGlyoGI
H 0 H 0 H H
I I I I
-N-C-C- -N-C-C-
I I I I alanina vali
H CHI H CHI
(AlaoA) (ValoV)
I I
CH,
;C, I H 0 H 0
o 0- I I I I
o
/, 0- -N-(-C- -N-C-C-
I I I I
H (H, H
/
CH J
CH
, CHl

Los amil'lOkidos cuyal caden".. Ilteraies no polares no leucina isoleucine

c.Ilr;adu IOn falallvamenta hidrofflicos y normalmente
Ie situ,n en el elrtarior de las protein." miantfes que las (Leu 0 U (11eu 0 II
cadena. lalMelel de aminokidOI no polaf81 t[eoden II
agregarse en eI interior de 1.1 proteln.s. los aminoacidos H 0 H 0
ron cadenas lateraln 6eldas IOn muy polare. y casi I I I I
siempn!llM hellen en la luperflcie de las mol6cuta, proteicas. -N-(-(- -N-(-C-
I I I I
El c6difitO de una leue, en orden alfabetico; H (Hz H CH
I CH)
/
(Hz
A.Ala G.Gly M_Mat S_Ser CH
/ I
C.ey, H_Hil N.Asn T_Thr CH J CH 1 CH,
0 ..., I.lleu P.Pro V_Val
E.Glu K. Lys Q_Gln W_Trp
F. Pha L. Leu R.Arg V_Tyr prolina fenilalanine
(Pro 0 PI (Phe 0 FI

_..
CADENAS LATERALES POLARES NO CARGADAS

(Asn 0 N) (Gin 0 Q)
-N-C-C-

(In realidld
/
CH z

II un iminokidol
Ct-I(
H 0
I U

Cli J
I I

H.,
-N-(-C-
I I
H 0

H 0 H 0
I n I I metlonin tript6fer)Q
-N-C-C- -N-C-C-
I I I I (Meto Ml (Trp 0 W)
H CHI H CHz
I I H 0 H 0
;C CH,
I II I II

NLPH'
o I -N-C-C- -N-(-(-
I I I I
H CH J H (Hz
I
CH
I '

-
Aunque Ie amide N no esta cargada S-CH,
II un pH "aulrO, .s polar. N
H
treonlna tirosina
(Ser 0 $) IThr 0 n (Tyr 0 V) H 0
I I
H 0 H 0 H 0 -N-(-C- cistefna
I I I I I I I I
-"'-C-c- -N-C-C- -N-(-(- H (Hz (Cys oC)
I I I I I I I
H H) H
.
CH-CH I H (Hz 'H
OH 00 Las ciste!nas apareadas permiten que se formen enlaces disulfuro

EI Qrupo ---oH es polar. i

'------00
en las prOlelnes.

58
BASES o
II
C
HC' NH adenine /N .... C
NH,
I u I uracilo HC
I
C
He -vc~
las bases son compuestos clclic08 con N,
va sean purinas 0 pirimidinas.
C
N 0
Hcf N H
It c I cltosln.
He ;./c~
N 0
H
H,C
"C T I
H

He C
timina ~v~o PURINA
NOMENCLATURA Los nombres pueden inducir a confusi6n, pero las llbreviaturas son clares.

BASE NUCLEOSIOO ABREV, Los nucle6tidos se ebrevian

con Ires letres mayuscules,
adenina adenosine A de Ie siguleme maner.:
BASE + AZUCAR NUCLfD.IOO
guanine guanosina G AMP _ adenosine mOflofosfato
dAMP _ desoxiadenosina monofosfato
chasina citidina C UDP uddina difosfato
ATP adenosine trifoslato
uracilo uridina U

limina limidina T

LOS NUCLE6TIOOS TIENEN OTRAS MUCHAS FUNCIONES

Transportsn energla en sus enlaces acido-anhfdrido. que son fkilmente

hidroHzablel.
NH,

o 0 0 (NN
I II II
"'"O-P-O-P-O- P-O-CH
I I I ' 0
0- 0- 0-

ejemplo: ATP (0 Dl OH OH

NH,
Sa combinen con alros grupes formando coenzimas.

HS-C
77
-c -N-(
17~ ~7~H17 1
-c -( -N - ( - ( -c -( -0- p-o- p-o -CH
Y N

I
H H
I I
H
I HI
H
I
H
I I
HQ CH)H
I I
0- 0-
I '
~......

ejemplo: eoenzime AlCoA)

OH OH

En la calula son utilizedos como molecules ser'lalizadores especfficas.

ejemplo: 0--CH 2 0
AMP cfclico (cAMP)

o=p---O OH
I
0-

61
Cada nucle6tido se nomhra en referenda a la tlnica base que contiene (Panel 2- elortremo 5' de Ie cadena

6, pags. 60-61). o
Los nucle6tidos pueden actuar como transportadores de energfa qufmica.
Destaca el ester trifosfato de adenina, ATP (Figura 2-9), que participa en la trans-
ferenda de energfa en cientos de reacdones celuJares distintas. Su fosfato termi-
nal se afiade utilizando la energfa de la oxidad6n de los alimentos, y puede ser
faciJmente separado por hidr6lisis liberando energ[a, la cual es utilizada en cual-
quier lugar de la celula en reacciones biosinteticas energeticameOle desfavora- o
bles. Como discutiremos mas adelante, otros derivados de nucie6tidos acll1an I
-O-p-O
de transportadores de grupos quJmicos particuJares como .atomos de hidrogeno NH,
I
o residuos de azucar, desde una molecuJa a otra. Adem~, un derivado crclico de o N
I
la adenina que cOOliene fosfato, el AMP cfclico, se utiliza como molkula univer-
sal de senalizaci6n dentro de las celulas y controla la velocidad de numerosas re-
acciones intracelulares diferentes.
CH,
"' .... N)

La importancia especial de los nucle6tidos estriba en el a1macenamiento de

la informaci6n biol6gica. Los nucle6tidos constituyen los elementos de cons-
trucci6n de los licidos nudelcos, largos polimeros en los que las subunidades de
nucie6tidos est.an unidas covalentemente gracias a la fonnaci6n de un ~ter fos-
fato entre el grupo hidroxilo 3' del residuo de azuca.r de un nucle6tido y el grupo
fosfato 5' del nucie6tido siglliente (Figura 2-10). Existen dos tipos principales de
.acidos nucleicos que se diferencian en el tipo de azlicar de su esqueleto polime-
rico. Los que se basan en el azlicar rioosa reciben el nombre de 'cldos rlbonu-
delcos,O RNA, y contienen las bases A, V, G y C. Los que se basan en In desoxi-
rribosa (en la que el hidroxilo de la posici6n 2' de la rlbosa esta sustituido por un o
I
hidr6genol se denominan addos desoxirribonucleicos, 0 DNA Ycontienen las O-p--O
bases A, T, G YC. La secuencia de las bases de un polimero de DNA 0 RNA repre- I
senta la informaci6n genetica de la celula viva. La capacidad de las bases de dife-
o
I
rentes moleculas de .acido nucleico para reconocerse unas a olras mediante in- CH,
teracciones no covalentes (denominadas apareamienlo de bases) --G con C y A
con T (eo el DNA) 0 con U (en el RNA)- coostituye, tal como se explicam en el
Capitulo 3, la base de toda 13 herencia y la evoluci6n. o
I
O-p=o
Resumen I
utremo 3' de la cadena
Los organlsmos viuos SO" sistemas qufmicos alll6nomos, qlle se alltopropagan. Es-
cdn fonllados por 1111 COlljlltltO caracterlstico pero limiUulo de peqllenas moMculas Figura 2-10 Un breve fragmento de
baslldas en el carbono que esellcialmente son las mlsmas en todas las especies vi- l'icldo desoxlrrlbonuclelco (DNA) de
lIlentes, Las pri"ciJHlfes categorlas SOli: lLukares, dcidos grasos, aminoocidos y '11I_ cuotro nuclc6tldos. Uno de los
clootfdos. /.,os azlkares constitllyell ullafuellte prlmQ.ria deenergfa qllfmica para las enlaces fosfodicsler, que Ilne
ceiulas y son illcorporados a polisacdridos para ei almace,U1mfellto de ellergfa. Los nucle6tidos adyacentes, se destaca en
dcidos grasos SOli tambLeIl importalltes para el almacenamiemo de ellergia, peru su amarillo y uno de los nucle6tidos se
flmcia'1l11M siglliflcarilJ(l estriba en la formacian de las membraflas de lD. celllia. Los deslaca sombreado en gris. EI DNA Y
polfmeros formados por amilloocidos constituye" macromofecufas 1I0tabiemerite su parlente prt'iximo el RNA son los
diversas y versdtiles colJocidas como prote/nas. /.,os lIuclootidos desempelJan WI pa- addos nucleicos de la celula.
pel central ellla transferellcia de ertergfa y tamblen son las sllbll/lidades a partir de
las cllales se constmyerr las macromoleculas de jnformaci6n, RNA y DNA

Orden biol6gico y energfa7

Las celulas han de obedecer las leyes de la ffsica y de la qu[mica. Las reglas de la
Illeeanica y de la transformaci6n de una fonna de energfa en otra se aplican a
una celula igual que a una mtiquina de vapor. Sin embargo, es necesario admitir
que una celula tiene unos rasgos asombrosos que, a primera vista, parecen colo-
carla en una categorfa especial. Es bien conocido que con el tiempo las cosas
abandonadas 3 su suene pasan a quedar desordenadas: los edificios se derrum
ban, los organismos muertos se descomponen, elc. Esta tendencia general se

62 Caprtulo 2 : Pequenas mol~uJas, energfa y biosCntesis

halla expresada en la segunda ley de fa lermodindmica, que afirma que el grado
de desorden del universo (0 de cualquier sistema aislado) s610 puede aumentar.
La asombroso es que los organismos vivos mantienen. a todos los niveles.
un alto grado de orden; y como se alimentan, se desarrollan y crecen, parece que
crean este orden a partir de materiales alimenticios que carecen de el. EI orden
resulta c1aramente aparente en grandes estructuras como el ala de una mariposa
o el ojo de un pulpo, en estructuras intracitoplasmaticas como una mitocondria
o un cilio, 0 en la forma y disposici6n de las moleculas a partir de las que estall
construidas estas eslructuras. Las atomos que las const..ituyen han sido captura-
dos, en ultimo termino, desde su estado relalivamente desorganizado del media
ambiente y unidos formando una estruclura determinada. Incluso una celula
que no crezca, requiere para sobrevivir unos procesos constantes de ordena-
ci6n, puesto que todas sus estrucruras organizadas estan sujetas a aheraciones y
deben ser reparadas continuamente. i,C6mo es esto posible desde el punto de
vista termodinamico? Veremos que la respuesta se balla en el hecho de que la
celula emite conslantemente calor a su ambiente y. por consiguiente. no es un
sistema aislado en el sentido termodinamico del termino.
entorno c6lula

EI orden biol6gico resulta posible gracias a la Iiberaci6n

de energfa calorlfica por parte de las c~lulas8
Como acabarnos de ver, la segunda ley de la tennodinamica afinna que la canti-
dad de orden del universo (es decir, de la celula mas su enlomo) siempre debe
disminuir. Por consiguiente, el aumento de orden dentro de la celula viva ha de ir
acompanado de un aumento aun mayor de desorden en el ambiente de la celula.
EI calor es energia en su forma mas desordenada --el choque al azar de las mo-
leculas- y la celula cede calor aI medio mediante reacciones que ordenan las
moleculas que la celula contiene. EI incremento del movimiento aI azar, inclui-
das las diSlOrsiones de los enlaces, de las moleculas del resto de universo genera
un desorden que compensa con creces el incremento de orden en la cclula, lal
como requieren las leyes de la termodinamica para los procesos espontaneos.
De eS(a forma, la Iiberaci6n de calor de una ccllLla al medio Ie permitc ordenarse
intemamente al mismo liempo que el universo en su conjunto se vuelve mas des-
ordenado (Figura 2-11).
I
Es importante precisar que la celula no consigue nada produciendo calor a
menos que las reacciones productoras de calor esten asociadas con los procesos
que generan orden molecular en la celula. Se dice que las reacciones asociadas
de esla forma estan acopladas. tal como explicaremos mas adelante. La que dis-
{ingue el metabolismo de una celula de la combusti6n ruinosa de un fuego es el
estrecho acoplamienlo que existe entre la producci6n de calor y el incremen-
to de orden.
La generaci6n de orden en el interior de las celulas se produce a expensas de
la degradaci6n de combustible energetico. Para las plantas la energfa deriva ini
cialmente de la radiaci6n eleclromagnelica del sol; para los animales deriva de
la energfa almacenadll en los enlaces covalentes de las moleculas organicas que
ingieren. Sin embargo, como estos nutrientes han sido producidos, a su vez, por Figura 2-11 AmUlsls lermodlnamlco
organismos fOlosintetizadores como las plantas verdes, de hecho el sol es la simple de una cBula viva. En el
fuente ultima de energfa para ambos lipos de organismos. esquema superior las mol&:ulas de la
celula y del resto del universo (su
entomo) se han representado en un
Los organismos fotosintetizadores utilizan la luz solar estado relativamcnte desordenado. En
para sintetizar compuestos orgdnicos9 el esquema inferior, la celula (gris) ha
liberado calor por medio de una
La energfa solar entra en el mundo vivo (la biosfera) gracias a la fOlosfntesis que reacci6n que ordena las moleculas de
realizan los organjsmos fotosintetizadores -plantas 0 bacterias. En la fotosfnte- su inlerior (verde). B calor incrementa
sis, la energfa electromagnetica se transfonna en energfa de enlace quimico. AI el desorden en el entomo de la celula.
misrno tiempo, una parte de la energia de la luz solar se transforma en energia de forma que aunque la celula crezca y
calorifica, y la liberaci6n de este calor al entomo incrementa el desorden del se divida se cumple el segundo
universo y, par consiguiente, irnpulsa el proceso fotosintetico. principio de la termodinamica.

Orden biol6gico yenergfa 63

 Las reacciones de la fotosfntesis se describen con detalle en el Capftulo 14. En
SOL
tenninos generales. podemos decir que se pueden distinguir dos etapas distintas.
En la primera elapa Oa de las reacciOlles actilXUias por !liltz ofase IlIInil1osa). la ra-

/1\
diaci6n visible captada por una molecula de pigmento impulsa la transferencia de
electrones desde el agua hasta el NADPH, yal mismo tiempo proporciona la ener-
gfa necesaria para la smtesis de ATP. En la segunda (la fase oscura). el ATP y el
NADPH se utilizan para impulsar una serie de reacciones de "fijaci6n de carbono~',
en las que el COzdel airese utiLiza para formarmolOCulasde azucar (Figura 2-12).
EI resultado llclo de la fOlosfnlesis. en 10 que se refiere a la plama verde. se
puede resumir en la siguieme ecuaci6n:
energfa + COl + HlO -+ azucar + 0z
Esla ecuaci6n simple esconde la compleja natura1eza de las reacciones de la fase
oscura. que abarcan numerosas reacdones consecutivas. Adem<\s, y aunque la
fijaci6n inidal del COl da lugar a azucares, las reacciones metab6licas subsi-
guiemes los convienen nipidamente en otras moltkulas. grandes y pequenas.
esenciales para la celula vegetal.

La energfa qufmka pasa de las plantas a los animales

Los animales y otros organismos no rotosintetizadores no pueden capturar di-
rectamente la energfa de la luz solar y, par ello. han de sobrevivir gracias a la
energfa ~de segunda mana'" que obtienen aI ingerir plantas 0 a la de "tercera
mano~'. obtenida al comer otros animales. Las moleculas orgmicas producidas
por las celulas vegetales suministran a los organismos que se alimentan de elias
tanto elementos estructurales para la construcci6n como combustible. Todos Figura 2-12 La (OlOS{ntesls. Las dos
los tipos de moleculas vegetales pueden servir para este prop6sitO -azucares. fases de la fOlosfnlesis en una planta
proteinas, polisac<\ridos, lfpidos y otros muchos compuestos. verde.
No todas las transacciones entre plantas y animales son unidireccionales.
Las plantas. los animales y los microorganismos han existido junlos en este pia-
nela durante lanto liempo que muchos se han convertido en una parte esencial
del medio ambiente de los olros. Por ejemplo, el oxfgeno Iiberado durante la fo-
tosfmesis se consume en la combuSli6n de las moleculas organicas reaJizada por
casi todos los organismos. y algunas de las moleculas de CO 2 que hoy se "lijan~)
en moleculas organicas mayo res en una hoja verde mediante la rotos(ntesis, an-
teayer fueron liberadas a la alm6srera pOT la respiraci6n de lin animal. Asf, la uti-
Iizaci6n del carbono es lin proceso dclico qlle abarca el conjunto de 130 biosrera y
cruza los lfmites de los organismos individuales (Figura 2-13). Analogamente, los

Figura 2-13 EI cicio del carbono. Los

thomas de carbona se incorporan a lAS
mol~culas org:lnicas del mundo vivo
gracias a la aClividad fOlosinlelizadora
de las plantas. las bacterias ylas algas
marinas. Pasan luego a los animales,
a los microorganismos yal material
org:lnico del suelo y de los oc~anos, a
trav~s de vfas cfclicas. El COl welve
a la atm6sfera cuando las moleculas
organicas son oxidadas por las celulas
o quemadas por el hombre en forma
COMBusTION de combustibles f{jsiles.
'(EROSION

64 CapftuJo 2 : pequenas molKulas, energfa y biosmtesis

 IAI
18'
FORMA06N DE
UN ENLACE
.~",f'.'!1!!
'"
.., H
COVALENTE
I
H-C-H
+ I
M" /......,.,_.J~
elflremo esteelfl..emo metana
H

A,TOMO 1 ATOMQ 2
tiene una
ca,ga parcial
posit,vlI
MOL.CULA
lien. una urge
.".ei,1 M98tivlI
clebido. un
exc:eso de
I
H
0
X
elee1rones I
H-C-OH
Flgun214 OxJdacl6n y reducd6n. (A) Cuando dos :l.lomos ronnan I
H
un enlace covalente, uno de los <homos tiene una mayor canlidad de
electrones de forma que adquiere una carga negativa parcial: se dice
que se ha reducido. mientras que el ouo adquiere una carga posiliva
metanal

I
.
8

parcial y se dice que se ha oxidado. (B) EI alomo de carbona del metana H

puede seT convenido en el del diOxido de carbona mediante 13
eliminaci6n sucesiva de sus alamos de hidr6geno. En cada paso los
H
"C=O
/
electrones son a1ejados del alomo de carbona. y el,itomo de carbona se
formalOehldo
va oxidando progresivamente. cada una de estas elapas es
energ~ticamente favorable dentro de la celula.
H
I
~itomos de nilr6gcno. de f6sforo y de azufre pueden seguirse. en principio. desde
una molecula biol6gica a otm. a tm~ de unos cielos similares aJ del carbono. HO
"
/
C-O

6cido f6rmico

Las c~lulas obtienen energfa mediante la oxidacion

de moleculas biol6gicas 10 O-C-=O
I
Los <homos de carbona y de hidr6geno de las mohkuJas que las celuJas loman dioxido de carbono
como aJimenlo pueden ulilizarse como combustible porque no se encuentran
en su forma m;1s esrable. La atm6sfera terreslTe conliene una gran call1idad de
oxfgeno. y en presencia de oxfgeno la forma energelicamente m;1s eSlable del
carbono es el CO2 , y la del hidr6geno es el H~O. Por consiguiente, una celula
puede obtcner encrgfa de las moleculas de glucosa 0 de las de protefna, penni-
tiendo que sus ;1tomos de carbono e hidr6geno se combinen con oxfgeno produ-
ciendo CO 2 y H20. respeelivamente. Sin embargo. la celuJa no oxida las molecu-
las en un solo paso, como ocurre en la eombusti6n. A lraves de la acci6n de
cat~lisis cspccfl1ea mediante enzimas especfficas. hace pasar las moleelilas a tra-
ves de un gran numero de rcacciones que s610 rara vez implican la adici6n direc-
ta de oxfgeno. Antes de estudiar estas reaeciones y de poder eomprender la fucr-
za impliisora que las mlleve. debemos aclarar que entcndemos por un proeeso
de oxidaci6n.
En cl sentido que antes hemos utilizado. la oxidaei6n no signifiea unica-
mente la adiei6n de ~Iomos de oxfgeno: el tennino se apliea de manera m<is ge-
neral a cualquicr reacci6n en la que se transfieran eleetrones de un .Homo a otro.
Oxfdacl6n. en este sentido, haee refereneia a la eliminaci6n de eleetrones. y re-
duccl6n -10 eontrario de oxidaci6n- significa la adici6n de eleetrones. Asr. cl FeZ'
se oxida si pierde un eleetr6n conviliendose en FeJ., y un .homo de eloro se re-
duce si acepta un electron convirtiendose en CI-. Tambien se utiljzan eSlos mis-
mos lerminos cuando 5610 se produce un desplazam.iemo parcial de eleclrones
entre <1tomos unldos por un enlace covaleme (Figura 2-14A). Por ejemplo, cuan-
do un <1lomo de carbono fonna un enlace covaJeme con un <\lorna con una gran
afinidad por los eleclTones, como el oxigeno. el eloro 0 el azufre. cede m<\s que
su pane correspondiente de eleclrones, adquiriendo una carga positiva parcial y
elllonces se dice que se ha oxidado. Contrariamentc un alomo de carbono en un
enlacc C-H lienc una carga de electrones mayor que la que Ie corresponde y por
clio se dice que est<\ reducido (Figura 2-148).
A menudo, cuando una molecuJa capla un electr6n (c-) lambien capta un
prot6n (H') (en soluci6n acuosa hay una gran camidad de protoncs Iibremente

Ordcn biol6glco y energfa 65

 -
asequibles). En cste caso el efeclo neto es la adici6n de un .homo de hidr6geno a .
13 molecula
I
el\8rgi'de
e<:livac::,6n

A pesar de que en esla reacci6n panicipa un prot6n y un electr6n. (en lugar de

solamente un electr6n), las lJidrogeflaciolles de este tipo son reducciones y las
reacciones conU'arias, las desllidrogetlacionesson oxidaciones.
La comhusLi6n de los maleriales alimenticios en una celuJa convierte los
alomos de C y de H de las mollkulas organicas (en las que se haUan en un eslado
relativamentc rico en electrones, 0 sea, reducido) en CO2 YH20, compuestos en
los que el C y el H han cedido electrones y. por consiguicntc. estan aJtamente
proceso de I, reaa;:i6n _
oxidados. EI paso de electrones desde el carbona y el hidrogeno hast3 el oxIgeno
perm.itc a lodos estos .homos a1canzar un estado mas estable. y por cUo la trans- FIgura 2-15 EI princlplo de la energfa
fonnaci6n es energeticamente favorable. de &ctlvacl6n. EI compuesto X se halla
en un estado metaestable ya que sl se
La degradaci6n de una mol&ula orgamca se realiza a traves de lJ"llIIsfonna en el compuesto Y se
Iiberant energla. Sin embargo, esta
una secuencia de reacciones catalizadas enzimliticamente '1
transici6n no ocurrirt a menos que X
Aunque la fonna energ~l..icamente mas favorable del carbono es el CO 2 Y la del pueda adquirir la energfa de actiuaei6n
hidr6geno es el H20, un organismo vivo no desaparece transfonnl1ndose en suficiente de su enlomo (mediante
humo por la misma raz6n que este Iibro no empieza a arder en cualquier mo- colisiones poco habituales con otras
mento: en ambos casos las molecuJas existen en niveles energ~ticos metaesla- molkulas) para suint la reacci6n.
bles y necesitan una energfa de aclivacl6n (Figura 2-15) para poder transfor-
marse en configuraciones ml1s estables. En el caso del Libro. la energfa de
activaci6n puede ser suminisuada por una ceriJla encendida Para una c~lula
viva. la combusl..i6n se puede obtener de una manera ml1s controlada. EI papel
de la ceriLia 10 realiza una colisi6n energ~tica poco habitual de una mol~cula can
otra. Ademl1s. las unicas moleculas que reaccionan son las que se hallan unidas
a la superficie de las ellzimas.
Como se explica en el Capfrulo 3. las enzimas son catalizadores proteicos al-
tameme especializados. Como lodos los deml1s tipos de calalizadores, aceleran
las reacciones reduciendo la energfa de activaci6n de un cambio qufmico deter-
minado. Las enzimas se unen fuertemente a las moleculas de su substrato y las
mantienen de lal forma que reducen notablemente la energfa de activaci6n de
una determinada reacci6n que reardena algunos enlaces covalentes. AI reducir
selectivamenle la energfa de activaci6n de una determinada reacci6n de las que
puede sufrir la moll!:cula unida, las enzimas determinan cuaI de las diferenles
vfas alternativas de rotura 0 formaci6n de enlaces covalentes se producirl1 (Figu-
ra 2-16). El producto liberado par la enzima tras la reacci6n enziml1tica podrl1
unirse a una segunda cnzima que catalice otra reacci6n. De esta manera, cada
una de las muchas moll!:culas de una celula pasan de una a otra enzima siguien-
do vfas espeCjicas de reacciones. determinando asi la qufmica celuJar. Ml1s ade-
lante discutiremos algunas vias centrales del metabolismo energelico.
EI exito de los organismos vivos se puede atribuir a la habilidad de las celu-
las para producir muchos tipos diferentes de enzimas. cada uno con propieda-
des especfficas. Cada enzima tiene una forma unica y une un conjunto determi-
nado de moleculas (liamadas substratos). de tal manera que la enzima acelera
una reacci6n delerminada normalmente unas 10]4 veces. Como ouos cataliza-
dores, las moltkulas de la enzima no cambian despues de participar en u.na re-
acci6n y par 10 tanto pueden actuar una y otTa vez.

Parte de la energfa Hberada en las reacciones de oxidaci6n

se acopla a la reacci6n de formaci6n de ATPI2
Las celuJas obtienen energfa util a partir de la "combusti6n" de la g1ucosa. uoica-
mente porque la queman de una manera muy compleja y controlada.
Mediante vias de reacci6n dirigidas par enzimas, las reacciones qufrnicas de s[nte-
sis, 0 reacciones anab6licas, que generan el orden biol6gico, estl1n estrechamente

66 Capitulo 2: Pequeftas molecuJas, energfa y biosfntesis

 Figura 2-16 CatMlsls enwmitlca.
(A) Un modelo de caja que iJustra de
que fonna las enzimas dirigen a las
molecuJas a naves de vfas
delerminadas. En este modelo, la
pe/ora verde representa el substrato
polencial de una enzima, (compuesto
X) el cual se desplaza arriba y abajo de
niveles energ~lioos a causa del
conslante bombardeo de las molkulas
de agua que coliswnan con ella. Las
cuano paredes de la caja represenlan
las barreras de energfa de aetivaci6n
para cuatro reacciones qurmicas
diferentcs cnergeticamenle favorables.
no c.l.liz.d. caUllillis enzim'tic. de IellCCiOn 1
'AI En la caja de In izquierda no se
produce ninguna de eslas reacciones,
ya que la energfa disponible gracias a
- _ motecul. con
_IMfgla much. mol4cul.. tienen las colisiones es insuficlente para
media c.ntidad -Via
UfIII
superar nioguna de las barreras
Mlflciltnte ~r. Mguir ..
reaoci6n catllllzlMUl energelicas. En la caja de la derecha. la
enzim"icamente catalisis enzimatica reduce la energfa
de activaci6n t'inicamcnte para la
casi no h.y ",018(111&8 reacci6n nt'imero I. Asf permite que,
qUll "nglWll. canti~ con la energfa disponiblc, se produzca
de energil tan
elevade ~ri. PI" esta reacei6n de forma que eJ
MgIII... tNCd6n en compuesto Xse uansfonna en eJ
IlJsencI. de Trn& compuesto Y. Entonces. el compuesto
Yse puede unir a Olra enzima que 10
lransforme en el compuesto Z. yasf
energi. PO' molkul, - sucesivamente. (B) Dislribuci6n de
'" cnerg(as Cll una poblnci6n de
moleculas identicas. Para que se
acopladas a las reacciones de degradaci6n, 0 catabOlicas, que proporcionan la
produzca una reacci6n qufmica
encrgfa. La diferencia crucial entre una reacci6n acoplada y una reacci6n no determinada, la energfa de la molkula
acoplada se ilustra mediante una analogfa mectinica en la Figura 2-17, en la (en forma de movimientos de
que una reacci6n qufmica energeticamente favorable se representa por las ro- traslaci6n, vibraci6n y rOlaci6n) ha de
cas que caen desde un acantilado. Normalmente la energra cinetica de las rocas eu:eder la energfa de aClivaci6n; en la
que caen se desperdiciarfa completamente en forma del calor generado cuan- mayorfa de los casas eslO nunca ocurre
do chocan contra el suelo (secci6n A). Pero mediante un cuidadoso dispositivo si no se produce una cattilisis
parte de la energfa cinetica podrfa ser utilizada para accionar una rueda de pa- enzimalica.
las que eleva un cubo de agua (secci6n B). Puesto que en la seed6n Bias rocas
5610 puOOen lJegar aI suelo accionando la ruOOa de palas, decimos que la reae-
ci6n espontlinea de la cafda de las rocas ha sido acoplada directamente a la reae-
ci6n no espontlinea de elevaei6n del cuba de agua. Dado que ahora pane de la
energfa se utiliza para realizar un lrabajo, las rocas lJegan al suelo con una velo-
cidad menorque en la secci6n A y se pierde menos energfa en forma de calor.
En las celulas las enzimas desempei'ian el papel de la rueda de palas de
nllestra analogfa, y acoplan la combusti6n esponttinea de los alimentos a reac-
danes que generan el nllcle6sido lrifosfato, ATP. De la misma forma que la
energ(a aCllffiuJada en el cubo de agua elevado de la Figura 2-17 se pllede lltilizar
poco a poco para impulsar diversas mtiquinas hidmuLicas (secci6n C), el ATP ae-
nia como dador convenienle y vers<tlil de energfa, impulsando muchas reaceio-
nes qufmicas direrentes Ilecesarias para la celula (Figura 2-18).

La hidr6lisis del ATP genera orden en las ctHuJas l3

tDe que forma aciUa el ATP como transportador de energ(a qu(mica? En las con-
diciones existentes en el citoplasma, la hidr6lisis del ATP Hberando fosfato inor-
g~nico (PI)' se produce gracias a la cal~lisis de una enzima, y Iibera una gran can-
tidad de energfa utilizable. Un grupo quImico que se halle unido mediante un

Orden bioJ6gico y energfa 67

 IAI 181 lei

TRABAJO
linL

.. _01, einic:a .. tr.ntllorma ~rttl de .. energl. aneta M utilize e+trY,ndo III _gr. potencial .Imacenada en el
unicamenlll en energr. e.Jorff~ un cuba de ~u.. pol' 10 Que .. liber. I'I'IoflI'IOI Cllbo de IIgIJll fievado H puede utilizer
ene'gill en fOl'ffia de c.1or par. impulsar dlvufSilS m6quinu
hldr6uliea$.

enlace reactivo de este lipo sen1 transferido a otm molecula; por ello se puede Flgun 2-17 Esquema de un modelo
considerar que el fosfato leonina! del ATP se balla en un eslado cu:livado. EI enla- meClinico que Uustra eI princlpio de
ce que se Tompe en esta reacci6n de hidr6lisis recibe. a veces, el nombre de ell- acoplamJento de las reacdones
lace de alta e"ergfa. Sin embargo. esle enJace no tiene nada de especial. Sim qul'mJcas. La reacci6n esponillnea
mostrnda en (A) puede servir como
plemenlc ocurre que en soluci6n acuosa la h..idr6lisis del ATP genera dos mo-
analogfa de la oxidaci6n directa de la
leculas (ADP y PJ de energra mucho menor.
g1ucosa a COl y H20, que unicamente
Muchas de las reacciones qurnicas de la celuJa son energeticamcmc desfa- produce calor. En (81, la misma
vorables. Estas reacciones son impulsadas por la energia liberada en la hidr61isis reacci6n csta acoplada a una segunda
del ATP a [raves de enzirnas que acoplan directamente la reacci6n dctcrminada reacci6n; esta segunda reacci6n puede
desfavorable con la reacci6n favorable de la hidr61isis del ATP. Entre estas reae- servir como analogia de la sfnlesis de
denes se encuentran las que intervienen en la sfntesis de las mol~culas biol6gi- ATP. La energia producida en una
cas, en el nansporte activo de las moleculas a naves de las membranas celulares fomm mas versatil, en (8) puede ser
yen la generaci6n de fuerza y de movimiento. Estos proceses desempcl'an un utilizada para impulsar otras procesos
papel vital en el establedmiemo del orden biol6gico. Por ejemplo, las macramo celulares, como se ve en (C). ElATPes
leeulas formadas en las reacdones de biosfntesis transportan informaci6n, cata 13 forma de energ(a mas versalil de las
c~lulas.
Uzan reacciones especfficas y son ensambladas en estructuras altamente orde
nadas. Vnas bombas situadas en las membranas mantienen la composici6n
interna especial de las celulas y permiten que las sefiales pasen al interior de las

FlguraZ-18 LamolecuJadeATP
.nergll ...quible slrve como lransportadorde energfa
parlilralMlo en las c:eluJas. Como se indica, la
telular y par.
~Ilteti. qulmiea
formaci6n de ATP desde ADP y fosfalO
inorganico, energ~ticamente
desfavorable, esta acoplada a la
oxldaci6n de molecuJas alimenticias.
-o-[-oH Ho-[-o-f
+ energil!:ticamenle favorable (rease la
Figura 2-17B). La hidr6lisisde esteATP
hasta ADP y fosfato inorganico
proporclona la energfa IleCf!Saria para
impulsar muchas reacdones celulares
imponanles.

68 Capftule 2 : Pequeftas molkulas. energfa y biosfntesis

cl!lulas y entre elias. Finalmente. la producci6n de fuerza y de movimiento per-
mite que el contenido ciloplasmatico de la cl!luJa sea organizado y que las pro-
pias celuJas se desplacen y se ensamblen fonnando tejidos.

Resumen
Las dlula.! vivas estdn altamente ordenada.s y, porcons/glliellte. IUln de generar or-
den dentro de ella.! mismas para sobrevivir y crear. Desde el punto de vista tenllo-
dirufmico esto solo es pasibie gracias a mla elltrada cont/mlD de energfa, parte de la
ellalias dlElias ceden a Sll efllomo e"forma de calor. La energfa procede en ,iftimo
term/no tk la radlacit'hl electromaguetica del sol, que im/mua la fonl/ocMn de mo-
MClIlas organicas e'J los organismosfotosi",etizadores como las plantas verdes. Los
anlmales obtiene'J Sll energfa ingir/endo estas molkulas orgdnicas y oxiddndolas
en una serie de reaeeiom~s catalizada.s ellzimdticamente y aooplada.s a laformaci6n
de ATP. En todas 1m dlldm el ATP es 1m dador general de energ(n y sullidr6Usis.
energeticamente favorable. esta acoplada a olTas reaee/olles, implllsmulo diversos
procesos energet/camente desfavomblet que genera" el elevado grado de orden
esencitJI para la vida.

EI alimento y la obtenci6n de la energfa celular J4

Las moIeculas alimenticias son degradadas en tres etapas,
para producir ATP
Las protefnas, los Ifpidos y los poJisac<iridos. que constituyen la mayor parte de
los alimentos que camemos. han de ser degradados a moleculas menores ames
de que nueSlras cl!lulas puedan utilizarlos. Se puede considerar que la degrada-
ci6n enzimalica. 0 calabolismo. de eSlas moleculas ocurre en nes elapas (Figura
2 19). Haremos un breve esbozo de estas etapas antes de esrudiar con mayor de-
4

talle dos de elias.

La fase I, llamada dlgesti6n, ocurre principalmente en el inlestino. Las
grandes moleculas poJimericas se escinden en sus subunidades monomericas
-las proteinas en aminoacidos. los polisacaridos en azucares y las grasas en aci-
dos grasos y gLicerol- mediante la acci6n de enzimas segregadas. La fase 2 ocu-
rre en el citoplasma despues de que las pequenas moMculas resultanles de la
fase I penetren en las celulas. donde sufren una degradad6n posterior. La ma-
yoria de los Momos de carbono e hidr6geno de los azucares se transforman en
piruvato, que penetra luego ell las mitocondrias, donde se transforma ell los
grupos acetilo del componente qufmicamente reactivo acetil coenzima A (acetil
CoA) (Figura 2-20). Tambien se producen grandes cantidades de acetil CoA me-
diante la oxidaci6n de los acidos grasos. En la fase 3. el grupo acetiJo del acetil
CoA se degrada completamente hasla CO2 YH20 en la mitocondria. En esta fase
final se genera la mayor pane del ATP. Mediante una serie de reacciones qufmi 4

cas acopladas. a1rededor de la mitad de la energfa que tooricamente se puede

obtener de la combusti6n de los carbohidratos y de las grasas hasta H20 y CO 2 se
canaJiza para impulsar la reacci6n energl!ticamente desfavorable Pi + ADP --+
ATP. Puesto que el reslo de la energfa de combusli6n se cede por la celula en for-
ma de calor, esla sfntesis de ATP crea un desorden neto en el universo. de acuer-
do con la segunda ley de la termodinamica.
A traves de la formaci6n de ATP, la energfa derivada originariamenle de la
combusti6n de los carbohidratos y de las grasas se reclistribuye en una forma de
energfa qufmica convenientemente empaquetada. AproJdmadamente llnns 109
moll!culas de ATP se encuentran en soluci6n por todo el espacio inlracelular de
una cl!lula dpica. donde su h.idr6lisis a ADP y fosfato es energeticamente favora-
ble y proporciona la energfa que impulsara un gran numero de diferentes reac-
ciones acopladas que, en sf mismas, son energeticamente desfavorables por 10
que de 10 contrario no se producirfan.

EI alimento y la obtenci6n de la energfa celular 69

 Figura 2-19 D1agrama slmpliflcado
de las Ires etapas del catabollsmo que
conducen desde eI aJimento huta los
ETAP" 1: productos reslduaJes. Esta serie de
t"nsform8d6n de ...
gral1d.. mol4cullt gr."" reacciones produce ATP, que luego es
........
~ tubunidade, utilizado para impulsar reacciones de
biosfntesis y otros procesos celulares
que requieren energia.

_do.
TAP" 2:

-
~.mc16n de 1ft
iIubunodades"mpl..
'-UI1IOeti1 CoA.
produc:ci6n de _
tarltics.d lifnitacle;

--
de "TP 'I' de HAOH

ETAP" 3:
ollideciOn~
del aeelil CoA hMta pade eduda. en
la.m. d. NAOH
H~yCOt.
.compaflada de Ie
produedOn de una
lJfan centided de
"TP Yda NAOH fOll'orilllCi6n
oxid.tiv.

0,

La glucolisis puede producir ATP incluso en ausencia de oxfgeno

La pane mas imponante de la fase 2 del catabolismo es una secuenda de reac-
dones conodda como g1ucoUsls -Ia !isis (rotura) de la glucosa. La glucolisis pue-
de producir ATP en ausenda de oxfgeno, y probablemente apareci6 pronto en la
historia de la vida, antes de que las actividades de los organismos fOiosinl61icos
introdujeran oxigeno en la atm6sfera. En la glucolisis una mol6cula de glucosa,
de seis alamos de carbono, se Iransforma en dos moleculas de piruvato, de tres
atomos de carbono cada una. Esta conversi6n se produce a travb.i de una se-
cuenda de nueve elapas enz.iml1ticas que generan intemlediarios que contienen
fosfato (Figura 2-21). La aHula hidroliza dos mollkulas de ATP para impulsar las
primeras etapas, pero produce cuatro mollkulas de ATP en las elapas finales, de
forma que se produce una gananda nela de ATP.
Desde un punto de vista 16gico, la secuenda de reacdones se puede dividir
en Ires panes: (I) en las elapas I a 4, la glucosa se Iransforma en dos mollkulas
de Ires atomos de carbona cada una, el glicera/dehfdo 3-fosfalo, transformad6n

70 Capitulo 2 : Pequeftas mollk:ulas, energfa y bioslntesis

 grupo 8Cetllo coenzima A Figura 2-20 EI acetll coenzlma A
I II (acetll CoAl, Este intermediario
melab6lico crucial se genera cuando
los grupos acedia producidos en la

",C-~-s-{-h-t-{-h
"" <;>""
o H H H H H
1--t-
H
Hi'"
6H
? ?
-+o-p-o-P
H}H 6- 6-
rase 2 del calabolismo se unen
covalenlemenle al coenzima A(CoA).

",0-"
[ ' - - - _ acet8tO

"-s-{-{-~-t-{-{-~-t-t
"" <;>"" <;>
H H H H H H
"j"'"
6H H)H
? ?
--{-o-p-o-p
6- 6-
CoA

que rcquiere un aporte de energfa en forma de hidr6lisis de ATP para surninis-

trar dos fosfatos; (2) en las reacciones 5 y 6, el grupo aldehfdo del gliceraldehfdo
3-fosfato se oxida a <icido carboxflico y la energfa de esta reacci6n se acopla a la
sfmesis de ATP a partir de ADP y fosfato inorg<in.ico; y (3), en las reacciones 7, 8 Y
9, las mismas moleculas de fosfalo que fueron afiadidas a los azlicares en la pri-
mera secuencia de reacciones son transferidas de nuevo al ADP fonnando ATP,
recuper<indose asf la inversi6n original de dos moleculas de ATP hidrolizadas en
la primera secuencia de reacciones (v~ase Figura 2-21).
AI final de la g1ucolisis, el balance energerico (por molecula de g1ucosa) es
un beneficio nelo de las dos moleculas de ATP que fueron producidas en las re-
acciones 5 y 6. PueslO que estas dos reacciones son las linicas reacciones de la
secuencia en las que se forma un enlace fosfato rico en energfa a partir de fosfa-
to inorg<inico, constituyen el corawn de la g1ucolisis. Por otra parte, estas reac-
ciones constituyen un exceleme ejemplo de c6mo las reacciones de la c~lula se
pueden acoplar para aprovechar la energfa l.iberada en las oxidaciones (Figura
2-22). El resultado tOlal es que un grupo aldehfdo de un azticar se oxida a <icido
carboxflico, que un grupo fosfato inorg<inico se transfiere a un enlace de alta
energfa del ATP y que una molecula de NAD' se reduce a NADH, una mol~cula
que desempei'ia un papel central en el merabolismo energetico, como discutire-
mos m<1s adelante. Este eleganle conjumo de reacciones acopladas fue proba-
blemente una de las primeras etapas metab6licas que aparecieron en la celula
durante Sll evoluci6n.
Para la mayoria de las celuJas animales la g1ucolisis tinicamentc es un prelu-
dio de la rase 3 del catabolismo, ya que el <icido piruvico que se fonna penetra
r<ipidarnente en las mitocondrias donde sem oxidado complctamente a CO 2 Y
H20. Sin embargo, en el caso de los organismos anaer6bicos (los que no utilizan
oxfgeno molecular) y para algunos lejidos como el musculo esquelerico que
pueden verse sometidos a condiciones anaer6bicas. la g1ucolisis por sf sola se
puede convertir en la fuente principal de ATP de la celula. las reacciones pro-
ducloras de cnergfa y anaer6bicas de este tipo, reciben el nombre defermenta-
dones. En estos casos las moleculas de piruvalO no son degradadas en la milo-
condria sino que permanecen en el citosol y, segtin el organismo de que se trate,
puedcn ser transformadas en ctanol y CO 2 (en las levaduras) 0 en lactato (en el
musculo), compuestos que luego son excretados. Estas reacciones posteriores
del piruvato utilizan el potencial reductor producido en la reacci6n 5 de la glu
colisis, regenerando asf el NAD' que se requiere para que continue la glucolisis,
como disclltiremos ell el Capftlilo 14.

EI ali menlo y la oblencl6n de cncrgfa celular 71

 1 Figura 2-21 GI ueoUsls. Cada ulla de
I glUCOH
las reacciones mostradas aquf estli
catalizada por una enzimn djferentc. En
1 1
la serie de reac dones dcsignadas como
1 glucose 6-10"-'10 I paso 4, un azuc ar de seis carbones es
, transfonnado e n dos azucares de tIes

, IruetOM 6fosfato I
carbon as, de m odo que a panir de esle
paso el numem de moleculas cs el

..... 1 3
doble. Las reac dalles 5 y 6 (en la rolla
amarilla) son Ias responsables de la
sfnlesis nela de moleculas de ATP y de
1 fructON 1.8-bislosf'IO I NADH (~ase Fi gura 2-22).

I--l dihidfoNcel:OfWI to.fIIto 1
I
"'I glarltde/'lldo 3-tosfalo 1

5
'1l!il!llI I
"', l,3-tMsfosfogliceralo 1 o'c/
I
H
IlJI=ido I
I 'D CHOH
I
CHzo(!)
"'I 3toslogtieerllo I
7
rHS~
"'I 2-fol'oglicllrl1o 1

'1 fot'a.nolpiruvfl1o I
9
'D REACCION

2xl_~P_"_W_'_"__

FIgura 222 Reaccloncs 5 y 6 de la g1ucolisls. En eSlas reacciones 13

oxidaci6n de un aldehldo a un dcido carboxflico eSIl'i acopJada a la
formaci6n de ATP yde NA.DH (vease lambicn Figura 2-21). Como se Indica
aquf, la reacd6n 5 empieza cuando la enzima gliceraldelJido 3-fosfato
deshidrogenastl (vease Figura 3-4.2) fonna un enlace covalente con el
carbono del grupo aldehldo del gliceraldehfdo 3-fosfato. Oespu~. el
hldrogeno (como Ion hidruro -un prot6n con dos electrones) es eliminado
del gTUpo aldehfdo del gliceraldehldo 3-fosfato y se transfiere aI importaRle
transportador de hidr6geno NAO' (vease Figura .2-24), Esle paso de REAcclON
oxidaci6n genera un grupo carbonilo de un azucar unido a la enzima
mediaRle un enlace de alta energfa (mostrado en raja). Enlonees. un ion

fosfato (Pi) de la soluci6n rompe este enlace generando en su lugar un o
enlace azucar-fosfalo de alta energfa (enlace rojo). En estas dos wtlmas
reacciones la enzima ha acoplado el proceso energeticamente favorable de
oxidaci6n de un aldehfdo con la fonnaci6n energeticameRle desfavorable
de un enlace fosfato de alta energfa, pennitiendo que la segunda reacci6n
sea dirigida por la primera. Finalmente, en e1 paso 6 de la g1ucoUsis el
grupo fosfalO reactivo recientemente creado es transferido aI ADP para
formar ATP, de}ando un grupo carboJdlico libre en el azlica! oxidado.

72 Capftulo 2: Pequeftas molecuJas, energfa y biosfntesis

 co, 0, Figura 2-23 Esquema slmpllflcado de
la etapa 3 del catabollsmo. EI proceso
CIClO FOSFORILACION
H,O produce primariamente grandes
CoA DEL ACIDO OXIDATIVA
call1idades deATP a panir deADPy de
CITRICO fosfato inorganico (1'1)' EI cicio del
e.... NAO" acido dtrico produce NADH, que
IADPI .. Pi lucgo es utilizado para dirigir In
producci6n de ATP a traves de la
fosforilaci6n oxidativa. Asf pues, el
NADH actua como intennediario
El NADH es el intermediario central en el catabolismo oxidativo celHral en la oxidaci6n de grupos
La generaci6n anaer6hica de ATP a partir de glucosa y a traves de las reacciones acetilo hasta CO 2 y H20 (Iambien juega
de la glucolisis es relativamente ineficiente. Los productos finales de 1a glucolisis un papel similar, aunque en menor
cantidad, el FADH 2).
anaer6hica concienen aun una gran cantidad de energfa qufmica que puede seT
Iiberada mediante su oxldaci6n posterior. La evoluci6n del catoboUsmo oxidati-
va (respiraci6n celular) 5610 result6 posible despues de que el ox:fgeno molecular
se huhiera acumulado en la atm6sfera terrestre, como resultado de la fotosfnte-
sis realizada por las cianohacrerias. Antes de ella, los procesos catab6licos anae-
r6bicos habfan dominado la vida sabre la Tierra. La adici6n aI proceso catab6li-
co de una fase dependienle de oxfgeno (fase 3 de la Figura 2-19) proporcion6 a
las celulas un merodo mucha mas potenre y eficaz de extraer energfa de las mo-
leculas alimenticias. ESla tercera fase empieza con el ciclo del dcido e(trieo (de-
nominado tambien cicio de los acidos tricarboxflicos 0 tambien, cicio de Krebs)
y termina can la fosforilaci6n oxidativa, procesos que se producen tanto en las
baclerias aer6bicas como en las mitocondrias de las celulas eucariotas.
En la Figura 2-23 se presenta una versi6n simplificada de los dos procesos
centrales del catabolismo oxidativo, En primer lugar, en el cicio del acido cftrico
los gnlpos acetilo de las moleculas de acelil CoA son oxidados hasta CO 2 Y
NADH. A cominuaci6n, en el proceso de fosforilaci6n oxidaliva el NADH genera- Flgura2-24 EI NAn' yel NADn. Estas
do reacciona con el oxigeno molecular (02) produciendo ATP y H20, a traves de dos moleculas son los Iransponadores
una complicada serie de etapas que implicah un transporte de electrones a tra- de electrones mas importantes en las
ves de una membrana. reacciones catab6licas. Sus estrucruras
se muestran en (A). NAO' es la abre-
vintura de Ilicotinamida adcliina
IAI
dillucleolido, reflejando el hecho de
que 1'1 mitad derecha de la moJecula,
tal como se indica en el dibujo, es el
monofosfata de adcnosina (AMP), La
Ho-H c ,fP parte de la molecula del NAD' conocida
como cl anWo de nicolinamida (som-
N " NH, breada en gris) es capaz de aceptar dos
electrones y un prot6n (en total un ion
hidruro, H-), fonnando NADH. En esta
p o~~ forma rcducida, el aniUo de nicotina-
H- mida tiene una estabilidad reducida
I debido a que ya no csta cstabilizada
por resonancia. Como consecuencia
de clio, el ion hidruro incorporado
eSta activado en el scntido de que es
facilmente transferido a Olras
p 0 p 0 moleculas.
RIBOSA (B) Ejemplo de una reacci6n en la
que participan el NAD' y el NADH, En
la oxidaci6n bio16gica de una moleculn
de substrata. como un alcohol. el
substrato pierde dos atomos de
161 hidr6geno. Uno de elias se al'lade
i
H-C-OH + NAD' - -
i
c=o + NADt1 + H'
como ion hidruro al NAD',
produciendo NADH, mienlras que cl
I otro se Iibera a la soluci6n como un
! prot6n [H').

EI alimento y 1a obtenci6n de energfa celular 73

 EI NADH, intermediario central en estos procesos, tambien 10 encontramos
como un producto de la glucolisis (vease Figura 2-22). Es un imporante trans-
porrador de pader reductor en las celulas. Como se ilustra en la Figura 2-24, est~
formado par la adici6n de un nudeo de hidr6geno y des electrones (un ion hi-
druro 1-1-) a la adenina nicotinamida dinude6tido (NAD'). Debido a que esta adi-
ci6n tiene lugar de una forma tal que el ion hidruro queda asociado a Irav~ de
una uni6n rica en cnergfa, el NADH actua en la celula como una fuenle adecua-
da de electIones f<1cilmente transferibles, de una forma semejante a como el ATP
acrua como una fuente adecuada de grupes fosfato f<1cilmente uansferibles.

El metabolismo esta dominado por el cicio del acido cftrico 1S

La funci6n primaria del cicio del <1cido cflrico consiste en oxidar los gropos ace-
tilo que entran en el cicio en fonna de molecuJas de acetil CoA. Las reacciones
fonnan un cicio porque el grupe acedlo no se oxida directamente, sino despu~
de haberse unido covalentemente a una molecula mayor, el oro/acetato, que se
regenera al final de cada vuelta del cicio. Tal como se i1ustra en la Figura 2-25, el
cicio empieza con la reacci6n que tiene lugar entre el acetil CoA y el oxalacetato,
fonnando una molkula de un <1cido tricarboxilico denominada dcido cftr;co (0
citraro). Luego se producen una serie de reacciones en las que dos de los seis
.1wmos de carbona del citrato se oxidan a CO2 , fonnando otra mol~cula de oxa-
lacetato, que inicia de nuevo el cicio. (Puesto que los carbonos que entran en
cada cicio se incorporan en lugares del citrato diferentes a los que se oxidan a
CO2, no seran oxidados hasta despu~s de varias vueltas del cicio.) EI CO2 produ-
cido en estas reacciones sale de la mitocondria (0 de la bacteria) por difusi6n y
abandona de la c~luJa.
La energfa que se libera cuando se oxidan los enlaces C-H y C-C del citrato
puede ser capturada de varias maneras diferentes en el transcurso del cicio del

1C$lll CoA 2C

Olfll'C$t&to 4C
1m . H' _~;::::'::::::"'L:.J
~~=4~
4C mll&to
Figura 2-25 El cicio del acldo cftrlco.
En las milOcondrias y en las baclerias
aerobicas los grupos acelilo
producidos a partir del piruvalo se
i!lOCilrltO llC oxidan Ilosierionnente. Los lIlOmos de
fum'fllO 4C
carbona de los gropos acelilo se
jNAD'1 Iransforman en CO z' mientras que los
co, k--I!1mI.H lIlomos de hidr6geno se transfieren a
las moleculas lransponadoras NAO' y
50 FAD. Alamos adicionales de oxigeno e
hidr6geno entran en el cicio en fonna
de agua en los pasos indicados con un
co,
aSlerisco (oJ. El ntlmero de carbonos
de cada molecula se indica en el
recuadro blanco. Para mas detaUes
~aseFigura 14-14.

74 capftulo 2: Pequeftas moltkulas, energfa y biosfntesis

acido dtrico. En lin paso del cicio (de succinil CoA a succinato) se genera un en-
lace fosfato rico en energfa mediante un mecanismo parecido al que se ha des-
crilO ames para la glucolisis. EI resto de la energfa de oxidaci6n que se captura
en el cicio se canaliza hacia la conversi6n de moleculas transportadoras de hi-
dr6geno -0 iones hidruro- en sus formas reduddas; en cada vuella del cicio. tres
moleculas de NAD' se convierten en NADH y un j1oll(n aden(/? dimtc/ootido
(FAD) se convierle en FADH 2 La energfa transportada por el hidr6geno aClivado
de estas moltkuJas transportadoras se utiliza en las reacciones de la fosforilaciol1
oxidatioo (que serA considerada con mas detalle mAs adelanle). las tinicas reae
dones descritas aquf que requieren oxfgeno molecular de la atm6sFera.
Los atomos de oxigeno adieionales necesarios para producir COl a partir de
los grupos acetilo que enttan en el cicio del acido citrieo no son suministrados
por el oxfgeno molecuJar. sino por el agua. En cada vueha del cicio. Ires molecu-
las de agua se rompen y sus Atomos de oxigeno se utilizan produciendo CO2, Al-
gunos de sus Atomos de hidr6geno emran a Formar parte de molkuJas del sus-
trato y. como los Atomos de hidr6geno de los grupos acelilo, final mente semn
lransferidos a molkulas transportadoras como el NADH.
En la c~lula eucariota, las mitocondrias son el cemro donde confluyen todos
los procesos catab6licos, tamo si empiezan desde azticares, desde grasas 0 des-
de protefnas. En efecto, adem;1s del piruvato, los acidos grasos y algunos amino-
acidos tambien pasan desde el citosol a las mitocondrias. y all( son transforma-
dos a acetiJ CoA 0 a alguno de los Olros intermediarios del cicio del Acido cftrico.
La mitocondria tambien acttia como punto de partida de reacciones de bioslllle-
sis. al producir unos compuestos de carbono vitales. [ales como el oxalacetato y
el aceloglutarato. Estas sustancias pueden ser transferidas de nuevo desde la
mitocondria al citosol donde aCltian como precwsoras para la sfntesis de mole
culas esenciales, como por ejemplo algunos aminoacidos.

En la fosforilaci6n oxidativa, la transferencia de electrones

aJ oxfgeno impuJsa la formaci6n de ATpIO, 16
La fosforIJacl6n oxldatlva es el tiltimo paso del catabolismo y el proceso en que
se Iibera la mayor parte de la energfa merab6lica. En esle proceso, las moleculas
de NADH y de FADH 2 transl1eren aI oxfgeno molecuJar (02) los electrones que
han obtenido de la oxidaci6n de las moleculas alimenticias. La reacci6n, que for
mal mente es equivalente a la combusti6n del hidr6gello en el aire forrnando
agua, Iibera una gran cantidad de energfa qufmica. Parte de esta energfa sc utili-
za para producir la mayor parte del ATP de la celula; el resto se Iibera en forma
de calor.
Aunque el proccso qufmico general de la oxidaci6n del NADH y del FADH 2
implica una transferencia de hidr6geno hasta el oxigeno, cada .itomo de hidr6-
geno se transl1ere como un electron y un prot6n (el ntideo de hidr6geno, 1-1').
Esto es posible debido a que el atomo de hidr6geno puede ser facilmente diso-
ciado en el electr6n y el pro16n (H+) que 10 constituyen. Entonces. el electr6n
puede ser transferido por separado a una molecuJa que tinicamente acepta elec.
trones, mientras que el prot6n permanece en la soluci6n acuosa. Por el mismo
razonamielllo. si sc transfiere un electr6n a una molecula que lenga una fuerte
afinidad por el hidr6geno, automaticamente se reconstituira un alomo de hidr6-
geno tomando un prot6n de la soluci6n. En el rranscurso de la fosforilaci6n oxi
dativa los electrones del NADH y del FADH 2 descienden a 10 largo de una cadena
de moleculas transportadoras, conocida como cadena de transporle electron]
co. La presencia 0 ausencia de Atomos de hidr6geno illlactos depende de la na-
turaleza del transportador.
En una celula eucariota, esta serie de transferendas elcctr6nicas a 10 largo
de la cadena de transporte elcctr6nico ocune en la membrana mitocondrlal in.
tema. en la que se hallan lodas las mol&:ulas transportadoras. En cada paso de
la transferencia, los eleclrones caen a un nivel energetico mas bajo, hasta que al
final son transferidos a las molkulas de oxfgeno. Cada molecula de oxfgeno (02)

EJ alimento y la obtencl6n de energfa celular 75

 ..
toma cuatro electrones de la cadena de transporte de electrones y cuatro proto-
nes de la soluci6n acuosa (onnando dos moleculas de agua. Las molecuJas de
oxfgeno tienen una gran afinidad por los electrones, por 10 que los electrones
unidos aI oxfgeno se encuentran en su estado energetico m<1s bajo.
La cadena de transpone de electrones es importante para la celula porque la
energia que se Iibera cuando estos electrones caen a estados energeticos mas
bajos se aprovecha de una manera remarcable. Como describimos en el Capftu-
10 14, transferencias particulares de electrones hacen que se bombeen protones
a trav~ de la membrana, desde el compartimiento mitocondrial interno hacia el
exterior (Figura 2-26). Asf, se genera un gradieme electroqufmico de protones a
traves de la membrana mitocondrial iOlerna_ Asu vel.. este gradieOle impulsa un
flujo de protones a traves de un complejo enzimarico especial de la misma
membrana mitocondrial haciendo que la enzima (A TP simasa) ai'iada un grupo
fosfato al ADP, generando por consiguiente ATP dentro de la mitocondria. Final-
mente, el ATP recien sintetizado se transfiere desde la mitocondria al resto de la
celula.

Los aminmicidos y los nucle6tidos forman parte

del cicio del nitr6geno
Hasla aquf hemos centrado nuestra discusi6n fundamentalmcl1te en el metabo-
lismo de los carbohidratos. No hemos hablado aun del metabolismo del njtr6ge-
no 0 del azufre. Estos dos elementos son constituyentes de las protefnas y de los
<1cidos nudeicos, los cuales son las dos dases de macromoleculas mas impor-
tantes en la celula y constituyen aproximadamente las dos terceras partes de su
peso seco. Los atomos de njtr6geno y de azufre pasan desde un compuesto has- Figura 226 Generad6n de un
ta otro y entre los organismos y su ambiente a traves de una serie de cidos rever- gradJentede U' a tram de una
sibles. membrana, medJante reacclonell de
Aunque el nitr6geno molecular es abundante en la atm6sfera terrestre, en transportc electronJco. Un electrOn
(onna de gas es no reactivo qufmicameOle. Onicamente a1gunas especies vivien- de aha energfa (pOT ejemplo, derivado
tes son capaces de incorporarlo a moleculas orgarucas, proceso denominado 6- de la oJddaciOn de un melabolilo)
jacl6n del nltrogeno. La fijaci6n del nitr6geno ocurre en ciertos microorganis- reeorre secuencialmenle los
mos y en algunos procesos geofisicos, como por ejemplo en la desca.rga de un transportadores A, Bye hasla un
rayo. Es esencial para toda la bios(era, pues sin esta fijaci6n no existirfa la vida estado energ~tico inferior. En eSle
esquema ellransporlador Best!
en este planeta. Pero unicameOle una pequefla parte de los compuestos niuoge-
dispueslo en la membrana de tal
nados de los organismos actuales representa productos frescos de fijaci6n del mallera que mientras pasa el electrOn
nitr6geno atmosferico. La mayor parte del nitr6geno organico ha est ado en cir- toma el H' de unlado de la membrana
culaci6n duraOle mucho tiempo. pasando de un organismo vivo a olro. Por con- y 10 libcra aJ otro lado. EJ gradientc
sigllieme, se puede decir que las reacciones de fijaci6n del nitr6geno realizan la resultante de H' corresponde a una
funci6n de mantener !lena aI maximo la reserva total de nitr6geno. ranna de encrgfa aJmacenada.
Los vertebrados reciben pnicticamente todo su nitr6geno a traves de la in- utilizada por atras protefnas de
gesta de prote!nas y de acidos nlldeicos. En el cuerpo estas macromoleculas se membrana de la miwcondria para
descomponen en sus componentes, amino:1cidos y nucle6tidos. los cuales luego ravorecer la ronnaci6n de ATP. como
son repolimerizados generando nuevas protemas y acidos nudeicos 0 son utili- sediscUle en el Capitulo 14.
zados para sintctizar otras moleculas. Aproximadamente la mitad dc los 20 ami-
no~cidos existcntes en las protefnas son amilloocidos esellciales (Figura 227)
para los venebrados: no pueden ser sintetizados a partir de otros ingred.ientes de
la dieta. Los otros aminoacidos sf que pueden ser sintetizados, utilizando una
enonne diversidad de materiales, inc1uyendo intermediarios del cicio del acido
chrico. Los aminoacidos esenciales son producidos en ouos organismos, gene-
ralmente a traves de rutas largas y energeticamente costosas que en el transcur-
so de la evoluci6n de los vertebrados se han ido perdiendo_
Los nucle6tidos necesarios para producir RNA y DNA pueden ser sintetiza-
dos utiJizando vias biosintcticas especializadas: no existen "nude6tidos esencia-
les"' que dcban ser proporcionados por la dieta. Todos los nitr6genos de las ba-
ses puricas i pirimidfnicas (y tambien algunos de los carbonos) derivan de los
abundantes aminoacidos glutamina, acido aspanico y glitina, mientras que
los azucares ribosa y desoxirrihosa derivan de la glucosa.

76 Capftulo 2 : Pequei'ias moleculas, cncrgfa ybiosfntesis

 Los aminoacidos que no son utilizados en procesos de biosfntesis pueden LOS AMINOAclOOS ESENClALES
ser oxidados generando energfa metab6lica. Muchos de SllS alomos de carbono
y de hidr6geno forman\n COlO H20 mientras que sus atomos de hidr6geno se- TREONINA
ran transport ados a traves de varias formas y apareceran como urea, que es ex MEnONINA
crelada. Cada aminoacido es procesado de forma diferente y existe una conste
LlSINA
laci6n entera de reacciones enzimaticas para su catabolismo.
VAUNA

Resumen LfUCINA

ISOLfUCINA
Las cilulas allimales obliemm la ellergfa a partir del alimento, sigrlielUlo Ires fases.
En lalase I las prolefllas, los polisaafridos y las grasas SOli trmufomrooos a moM HlSTIDlNA
culas petlueiias mediallte reacciolles exlTacelulo.res. Ell 10. I~ 2, estlu moleculas FEN1LALANlNA
Pf!illleiias SOIl tlegrtulo.das tlentro de ias dlulas, prod'4ciendo aatil GoA y ,,"a pe.
TRJPTOFANO
quena canlidad de ATP y de NADH. /!.stas son las unicas reaccionf!S qlle pllede'l pro-
poreionar ellergfa ,m ausenda de OX.geIlO. En ia I~ 3, las molkulas de aatil GoA
SO'I degrtuitulns ell las mitoco,rdrias, prod.u;;endo CO: Y dlomos de Ilidr6gello que
Figura 227 Los nueve amlnOliddos
se Imell a molk.das transportoooras, como por ejemplo el NADH. Los eleclro/les de
esenclales. Estos aminoacidos no
los dlomos de hidr6geno ptUall a traves de mUi compleja cadena de transportatio-
pueden ser sintetizados por las celulas
ns, que c'JIIdllce fillalmente a 10. reducci6n del oxfgeno molecular fomUindo agrUl. humanas y por 10 tanto deben ser
ImplIlsado$ por 10. energfa liberada en utos pasos de transferellcia de eleclrollu, suminislrados en la dieta.
los protOlles (II') SOl. traluporrados al exterior de In mitoco,.dria. EI gratliellle elec-
troqufnrioo tie prololles res,dtallle a travis de 10. membrana mitocotldrial i,,'ema
se IItiliza pam inrplllsar la $flltesis de la mayor parte del ATP alular.

La biosfntesis y la creaci6n de orden I7

En un momenta cualquiera en una celula se produccn miles de reacciones qufmi
cas diferentes. Las reacciones estan asociadas formando cadenas y redes. en las
que el producto de una rcacci6n se convierte en el subslrato de la reacci6n siguien-
Ie. La mayoria de las reacciones qu(micas celuJares pueden clasificarse de manera
aproximada, seg(ill pertenezcan al catabolismo 0 a la biosinlesis (anabolismo). Va
hemos discutido las reacciones catab6licas, por 10 que ahora vamos a estudiar las
reacciones de biosfntesis. Estos procesos empiezan en los compuestos intermedia-
rios de la glucolisis y del cicio del <1cido dtrico (yen otros compueslos rclacionados
con estos) ygeneran las mayo res y m<1s complejas molecuJas de la celula.

EI cambio de energ(a libre de una reacci6n determina

si esta puede producirse 0 00 18

A pesar de que las cnzimas aceleran las reacciones energeticamente favorables,

no pueden forzar que las rcacciones energeticamente desfavorables tcngan lu-
gar. En una analogfa con el agua, las enzimas por sf solas no pueden hacer que cl
agua fluya cuesta arriba. Sin embargo las celulas han de hacerlo para poder ere
eer y dividirse; han de formar moleculas altamente ordenadas y ricas en energfa
a partir de moleculas pequeflas y senciUas. Hemos visto que, de una manera ge-
neral, esto sc rcaliza mediante enzimas que acoplan reacciones energcticamente
favorables que consumen energfa (derivada fundamental mente del sol) y que
producen calor. a reacciones energeticamenre desfavorables que producen or-
den. Vamos a examinar en detalle c6mo se realiza este acoplamiento.
En primer lugar debcmos considerar mas cuidadosamente el termino "ener-
M

gClicamente favorable que hemos estado utilizando con bastante Iigereza sin
,

definirlo. Como se explica aI principio, para que una reacci6n qufmica tenga lu
gar esponttineamente unicamente ha de producir un incremento nero de desor
den en el universo. EI desorden se incrementa cuando la energia util <enegfa que
puede ser derivada para producir trabajo) se disipa en forma de calor: el criterio
de incremenlo de desorden puede expresarse de forma cuantilativa con la ener-
gia IIbre, G. ~ta se define de manera que los cambios de su valor, indicados por

La blosfntesls y la creacl6n de orden 77

,
.dC, miden la cantidad de desorden creado en el universo cuando tienen lugar
una reacci6n. Las reacciones energt1ricamenre favorables son, por definici6n,
aqllellas que Iiberan una gran cantidad de energfa Iibre, 0 en otras palabras, las
que tienen un valor negarillO de aG elevado y por tamo crean mucho desorden.
Un ejemplo familiar a escala macrosc6pica puede ser la "reacci6n~ por la que un
muelle comprimido se relaja hasta su estado expandido, liberando al medio
en forma de calor la energfa elastica que almacenaba. Las reacciones energetica-
mente favorables. con un .dG < O. presentan una elevada lendencia a ocurrir es-
ponuineamenle, aUllque su velocidad dependern de otros faclores, tales como la
existencia de ellzimas espedficas (vease mas adelanle). En cambio. las reaa;iQlles
energericamente desfavorabJes. con un valor positivo de aG, como aquellas en las
que dos aminoacidos se unen entre sf fonnando un enlace peptfdico, generan or-
den en el universo y por 10 tanto no se pueden producir espontaneamente. Reac-
ciones energeticamente desfavorables como estas 5610 se producirnn si estan
acopladas a una segunda reacci6n que tenga un valor de aG suficientemente ne-
gativo como para que el6G del proceso completo tambien resulte negativo.
EI curso de la mayorfa de las reacciones puede predecirse cuantitativamen-
teo Se han recogido una gran cantidad de datos tennodimimicos que hacen posi-
ble calcular los cambios de energfa libre para la mayorfa de las reacciones mas
importanles de la eelula. Emonces, el cambio global de energfa Iibre para una
via es la simple suma de los cambios de energia Iibre de cada una de las reaccio-
nes que la componen. Consideremos por ejemplo dos reacciones:
X--+YyC--+O
con valores de aG de + 1 Y-13 kcal/mol respectivameme. (Hay que reeordar que
un mol son 6 x 102' moleculas de la substancia_) Si estas dos reacciones pueden
ser acopladas. el aG de la reacci6n acoplada sera de -12 keal/mol. Asf. la reac-
ci6n desfavorable X --+ Y, que no ocurrira espomaneanlente, puede ser impulsa
da por la reaeci6n favorable C --+ 0, siempre que exista un meeanismo mediame
el cuallas dos reacciones plledan ser acopladas.

A menudo las reacdones de biosfnlesis estan acopladas

directamente a la hidr6lisis del ATP
Consideremos una reacci6n dpica de biosfntesis en la que dos mon6meros, A y
B, han de unirse a traves de una reacd6n de deshidralacl6n (denorninada lam
bien de cOlldensaci6n) en la que se libera agua:

A-H + B-OH -+ A-B + Hp

De forma casi invariable, la reacci6n inversa (denominada hJdr611slsJ, en la que
el agua Tompe el compuesto farmada por el enlace covalente AB, sera la reae
ci6n energeticamente favorable. Por ejemplo, este es el caso de la hidr6lisis a sus
suhunidades de las protefnas, los <icidos nucleicos y los polisacaridos.
La estrategia general que permite a la celula producir A-B a partir de A-H y B-
OH, implica una secuencia de reacciones a uaWs de las cuales la sntesis cnergcli-
camenle desfavorable del compuesto deseado se aeapla a una reacci6n energclica-
mente mas favorable (vease Figura 2-17). Como se explica en la Figura 2-28 la
hidr6lisis del ATP tiene un aG muy negativo y es la fueme habitual de energia Iibre
que se uliliza para impulsar las reacciones biosinteticas de la ceJula. En la via aeo-
plada desde A-H y 8-01i hasta A-B,la energia de hidr6lisis del ATP transfonna pri-
mero B-OH en un compueslo iOlennedio de mayor energia, que luego reacciona
directa.mente eon A-H dando A-B. EI mecanismo mas simple eonsiste en la transfe-
rentia de un fosfato desde el ATP hasta B-OH fonnando B-OPOJ (0 sea, 8-0-), en
cuyo caso la via de reacciones unicamenle estara fonnada por dos pasos:
I. 8-0H +ATP --+ B-O-+ ADP
2. A-H + B-O---+ A-B + PI

78 Capftulo 2 : Pequeftas moll~culas, energfa y biosintesis

h t
 adeoolina trifolfato Figura 2-28 Hidrolisls del ATP. La
hidr6lisis del fosfato terminal del ATP
,,{-o-[-o-f libera, depcndiendo de las condiciones
intracelulares. enne II y 13 kcal/mol
de energfa utilizable. Esta reacci6n
tiene un o.G muy negativo debido a
varios faclOres. La Iiberaci6n del grupo
H,O fosfato terminal elimina una repulsi6n

r
-o-P-QH --1
desfavorable entre cargas negativas
adyacentes. Ademas. el ion fosfato
inorganico {PJ Iiberado esta
estabilizado por resonancia y por la
'"
fosfato fonnadon favorable de un enlace de
hidrogeno con el agua.

adenosit\8 dlfolfato

Puesto que el intennediario B-O- se fonna s610 lransiloriamente. las rcaccio-

nes g10bales que se producen son:
A-H + B-OH --+ A-B Y ATP -+ ADP + PI
La primera reacci6n. de por sf energeticamente desfavorable. es impulsada a
producirse acopl<1ndola directamenle a la segunda reacci6n energclicamenlc fa-
vorable (la hidr6lisis dcl ATP). Un ejemplo de reacci6n biosintelica acoplada de
este lipo es la sfntesis del amino<1cido g1utamina. mostrada en la Figura 2-29.
EI AG de la hidr61isis del ATP a ADP y fosfato inorganico (PI) depende de las
concentraciones de los tres reactantes. y en las condiciones habituales de una
celula es enlre -II y-13 kcallmol. En principio, esta reacci6n de hidr6lisis pue-
de utilizarse para impulsar una reacci6n desfavorable con un AG de, qllizas.
+10 kcal/mol, siempre que exisla una vfa de reacciones adecuada. Para alglmas
reacciones de bios(ntesis, sin embargo, ~13 kcal/mol pllede ser insuficiente. En
estos casos, la reacci6n de hidr6lisis del ATP puede ser alterada de manera que
inicialmente produzca AMP y pirofosfato (PP j ). EI pirofosfato sen!. hidrolizado en
segundo paso (Figura 2-30). En su conjunto el proceso produce un cambio de 'cido glullimico
energfa libre total disponible de aproximadamente -26 kcal/mol.
tC6mo se acopla la energfa de hidr6lisis del pirofosfam a una reacci6n bio-
sintetica? Se pucdc iluslrar una de las vfas considerando de nuevo la sfntesis del
glutlmina
compuesto A-B a panir de A-H y B-OH. Mediante una eozima apropiada. B-OH
puede ser converlido a l1aves de su reacci6n con el ATP en un intcrmediario de Figura Z~Z9 Ejemplo de reaccl6n
alta energfa B-O--. La reacci60 completa consla ahora de Ires pasos: bioslnU!tJca de deshldratacl6n
Impulsada por la hldr6l1sis del ATP.
I. B-OI-1 + ATP -+ B-O-- + AMP En primer lugar, el acido g1utAmico es
2.A-H + B-O---+A-B + PPI transfonnado en un intermediario
fosforiiado de alIa energfa (que
3. PPI + H20 -+ 21'1 corresponde ai compueslO B-O-
descrilo en el texto), el cual reacciona
Ylas reacciones g10bales son
con el amonio fonnando glutamina.
A-H+B-OH-+A-B y ATP+H 20-+AMP+2PI En esle ejemplo, ambos pasos lienen
lugaren ia superficie de ia misma
Dado que una eouma acelera por iguallas direcciones hacia adelante y hacia enzima, la glwamina sinroso.
amb de la reacci6n que calaliza. el compuesto A-B puede ser deslruido por re- Ob~rvese que, para mayor c1aridad,
combinaci6n can pirofosfato (el inverso del paso 2). Pem la reacci6n energetica- esIas moioculas se mueslran en sus
mente favorable de la hidr6lisis del pirofosfato (paso 3) eslabiliza el compuesto formas no cargadas.

La biosmtesis y ia creacl6n de orden 79

 o Figura 2-32 Transferencla de un
",I
o~

C/ grupo carboxlJo mediante la

coenzlma blotlna. La biolina
(mostmda en verde) actlla como
,)-0
H
molKula tmnsponadom del gropo
carbonlo (en raja), En la secuenda de
CH, reacciones mostradas aquf, la biotina
I eslcl unida covalenlemenle a la enuma
C-O piruvalo carboxilasa. Un grupo
I

@
+
o
, "-C
cr
carboxilo activado, derivado de un ion
bicarbonalo (UCOi) se acopla a la
biolina a Imves de una reacci6n que
piruva10
requiere un apone de energfa
procedente de la hidr6lisis de una
mol~ula de ATP. A continuacion eSle
0, /0
C
grupo carboxito se transfiere al gropO
I mClilo del piruvaw fonnando
CH, oxalaCClalO.
I
co, o
C=O
I
C
o " "- 0-
O>U,lacelllto
pirUVlllo ~rboxilllSll

rimas actuaJes, como el ATP, el aeetil CoA y el NADH. De acuerdo con este pun-
ta de vista, estas moleculas debieron evolucionar con un nucledtido unido cava-
lentemente debido a 1a utilidad que suponia este nucle6tido para la uni6n de la
coenzima en un mundo de RNA. 7-DEHiDROCOlESTEROl

La biosfntesis necesita poder reductor

Hemos visto como en las c~lulas se producen continuamente reacciones de oxi-
daci6n y de reducci6n. La energfa qu{mica de las mohkll..Ias alimenticias se Libe-
ra mediante reacciones de oxidaci6n, mientras que para producir moleculas
biol6gicas la cetula necesita -entre otras casas- lIevar a cabo una serie de reae
cioncs de reducci6n que requieren un aporte de energfa qufmica. Aplicando el
principio de las reacdones acopladas que hemos descrito en p:1ginas anteriores,
las c~lulas canalizan directamente la energfa qufmica derivada del catabolismo
hada la sfntesis del NADH (por ejemplo, vease Figura 2-22), EI enlace de alta
m::mD. H'
energfa que se forma entre cl hidr6gcno y el anillo de nicotinamida, dando lugar
al NADH proportiona energfa para reacdones enzimalicas dcsfavorables, trans
firiendo el hjdr6geno (como ion hidruro) a otra mol~ula. Por ello se dice que el
NADH, y tambien el NADPH (estrechamente relacionado con el y en el que se
puede convenir can faciLidad) son transponadores de "poder reductor". Ambos
se utilizan como coenzimas en numerosos tipos de reacciones de reducci6n.
Para saber c6mo ocune la transferencia de hidr6geno en la practica. consi
deremos un solo paso de biosfntesis: la Ultima reacci6n de la via de sfntesis de la
mol~ula lipfdica co/esterol. En esta reacei6n. dos atomos de hidr6geno se ana-
den al anillo csteroide polidclico. reduciendo un doble enJace carbono-carbono. COlESTEROl
Como en la mayona de reacciones de biosfmesis. los constituyentes de los dos
~1tomos de bidr6geno que son nccesarios en esta reacci6n son suministrados en Figura 2-33 Fase final de una de la5
forma de ion hidruro del NADPH mas un prot6n (HO) de la soluci6n (H- + Ho = rulllS de biosintesis que conducen a la
2H) (Figura 233). Como en el NADH, el ion hidruro del NADPH que debe ser formaci6n del colesterol. La
transferido forma parte de un anillo de nicotinamida y se separa facilmeme reduccion del enlace C=C se consigue
medianle la transferencia de un Ion
debido a que el anillo puede adoptar un estado aromMico mlts estable si pierde
hidruro procedente de la mol~ula
el ion hidruro (vease Figura 2-24). Por consiguiente, tanto el NADH como el
lransportadora NADPH, mas un
NADPH mantienen este ion hidruro a traves de un enlace de alta energfa y, a prolon (U') de la soluci6n,

82 Capflulo 2 : Pequefias mollkulas. energfa y biosfntesis

 Figura 234 La eSI.n1ctura del NADPH. Se diferencia de la del NADH
(vl'!asc Figura 2-24) I1nicamcnte por la presencia de un grupo fosfato
adicionaJ. eI cual permite que el NADPH sea reconocido selcctivamente .nillode
nlcotln.mld.
por enzimas implicadas en la biosfnlesis.

partir de el, puedeo transferirlo a olra molecuJa siempre que exista la enzima
adecuada para catalizar la transferencia.
La diferencia eOlle el NADH y el NADPH es trivial desde el punto de vista
quimico: el NADPH tiene un grupo fosfato mas. en una zona de la molecula ale
jada de la regi6n activa (Figura 2-34). Este grupo fosfato extra carece de impor-
tancia para la reacci6n de transferencia del ion hidnuo. pero sirve de asa para
unir el NADPH como coenzima. Por regia general, el NADH se une a enzimas
que catalizan reacciones catab6licas. mienuas que el NADPH acnla con enzimas que
o
catalizan reacciones de biosfntesis. AI tener las dos coenzimas que actuan en pro-
cesos diferentes. la celula puede mantener la relaci6n NADPH:NADJ alta para
aponar el poder reductor necesario para los procesos de biosfntesis mientras
cb
que. simuJtl1neamente. puede mantener la relaci6n ADH:NAO' baja para tener
NAD' disponible para aceptar electrones durante el catabolismo.

AClOOS NUCLEICOS
.
glUCOM glue6geno
.
o o

Inergfa de I. hidroli,i,
del nliCleoeido IrifOllfalO
0------

tl
o-p-o-
o
I
I
OH
tl o
o=p-o-
I
I
OH

RNA 0 o

~
,oH CH,oH

gluc6geno
o H 0
H
~O\j
-.J'F-(L 0-----
tl 01-1
H,o
J ,
energl. de I. hidroli,;,
del nliClaO,ldo trllo.f.to
tl o OH
I
D=P-o-
I
PRorelNAS o
I I
protein. emlnokldO O-p-o- CH,
I
I'?
--~--C-C-N-C-C
~,O
N-C-C
7 ,0 o
nliCle6lido I
CH,
I I I H"
R H 11 I
R " OH OH OH
RNA

HtO 1I energf. de I. hidrOll,i,

del nliCleo.ido trlfO$f.lo OH OH

Figura 2-35 Sfntesls de macromolkuJu. Esbozo de las reacciones de polimerizaci6n

H 0 R 0 H
mediante las cuales se sinlctizan Ires dases de polimeros biol6gicos, mostrando que en
I I I I 1 , 0 cada caso 1a sfntesis Implica la perdida de agua (deshidrataci6nl. En la figura no se
----C-C-N-C-C-N-C-C
I I HI I RI 'OH mueslra el consumo de nude6sidos trifosfato ahamente energeticos, necesaria para
R H H activar cada mon6mero antes de su adici6n. Por el conuario, la reaccion inversa -Ia
proIeln. degradacl6n de los tres tipos de polfmeros- se produce mediante la simple adici6n de
agua (hidr6Iisis).

La blos{ntesls y la creacl6n de orden 83

 POllMERIZACION POR LA CABEZA (p. e;" PflOTEfNAS. AC1DOS GRASOS) POLIMERIZAC'ON POR LA COLA (p. ej., DNA, RNA, POUSAcARIDOS)

_ _"'0+."'0 0~+0').-J1
/' I
-1 -1
cede mon6melo Ilenspone un enlece cede mooomero !rllnspone
(';\ rico en energ;e que ser6 utilizedo pere (;\ un enlllCe rico en energle
\.!.I I, edici6n de, mooomelo siguiente

_...."-'0 .\v +
0"'~P~'~
Los polfmeros biol6gicos se sintetizan mediante la repetici6n Figura 2-36 lntennedlarlos actlvados
de reacciones elementales de deshidrataci6n en reacclones de polimerizacl6n. Se
compara el crecimiento de poiimeros
Las principales macromollkulas sintetizadas por las relulas son los polinucle6li- por la cabeza y por la cola.
dos (DNA y RNA), los polisadridos y las proteinas. Son extraordinariarnente di-
versos en cuanto a eslructura, e induyen las mollkulas mas complejas conoci-
das. A pesar de eUo. se simetizan a partir de un numero relativamente reducido
de pequenas mol&:ulas (denominadas momjmeros a sublmid"desl. a travt!s de
una reslringida gama de reacciones qufmicas,
En la Figura 2-35 se muesua un esbozo sobresimplificado del mecanismo de
adici6n de mon6meros a las protefnas, a los polinude6tidos y a los polisae<tri-
dos. A pesar de que en las reacciones de sfmesis de cada poJ[mero participan di-
feremes tipos de enlaces covalentes, diferemes enzimas y diferentes coenzimas,
existen similitudes b~sicas enlre eUas. Como se indjca por el sombreado en rojo,
en cada caso la adici6n de subunidades se produce por una reacci6n de deshi-
drataci6n que supone la eliminaci6n de una mol~cula de agua de las dos mole-
culas que reaccionan.
Como en el caso general que hemos eslUdiado en la p~gina 79, la formaci6n
de estos poJ[meros requiere el aporte de energfa qufmica, la cual se consigue
mediante la estrategia esu1ndar de acoplar la reacci6n de bioslntesis a la hidr6li-
sis ellerg~ticamente favorable de un nucle6sido trifosfato. En los Ires tipos de
macromol&:ulas se degrada par 10 menos un nucle6sido trifosfato generando pi-
rofosfato, que se hidro[iza inmediatamente aumentando la fuerza impulsora de
la reacci6n. En [a Figura 2-31 ilustramos e[ mecanisme utilizado para la sflllesis
de polinudc6tidos.
Los intermediarios activos de [as reacciones de polimerizaci6n pueden origi-
narse de dos maneras distintas, produciendose la po[imerizaci6n por la cabeza 0
por la cola de [os mon6meros. En la polimeriulci6n por la cahezn, el enlace aClivo
esta presente en el extremo del polfmero en crecimiento, y por 10 tanlO debe ser
regenerado cada vez que se anade un mon6mero. En eSle caso, cada mon6mero Figura 2-37 {pdgina opuesta} A1gunas
contiene el grupo activo que sera utilizado para reaccionar con el siguicnte mo- de las reacclones qufmicas que se
n6mero de la serie (Figura 2-36). En la polimeriztlci6n por la cola, el enlace activo producen en la ceiula. tA} El esquema
uansportado por cada mon6mero se uti1iza para la adici6n del propio mon6mc- mucslra unas 500 reacciones
roo Para la sfntesis de macromolecuJas biol6gicas se utilizan ambos tipos de poli- metab61icas comunes, represemando
merizaci6n. La sfntesis de polinucle6lidos y de algunos polisacaridos simples, por cada especie qillmica con un cfrculo.
ejemplo. se produce mediante 1a polimerizaci6n por la cola, mientras que la sfn- En rojo se presentan las reacciones
tesis de las prolefnas ocurre pOT el sistema de poljmerizad6n por la cabeza. cenlrales de la glucolisis y del cicio del
~cido cftrico. Una ce1ula de mamffero
Ifpica sinteliza masde 10 000
Resumen prolemas diferemes. la mayor pane de
las cuales son enzimas. En el segmenlo
Normnlmenle In lddr61isis tift AlP se QlX)pIa a n!(I(riones mergetuxmrellte tle:sfauom-
escogido de fonna arbirraria en esle
bles, CQnl{) In biosllitesis de ""u:romolllCulas, mMimlte In tmnsferellcin de gnlpos fosfato laberinlo metab6lico (sombreado en
fonluuuIo illrennedinrios fosforllados rmctivos. Como aJwra Ja maa:i6t1 ",rergitica~ amarillo). se sinletiza coleslerol a
menle dafavorable se lUlIII,ft1o orergericaJ,rentefavorable, se dJa ~ eI A17' lmpldsn Ja panir del acetil CoA. Aia derecha y por
rma:i6u. Lm moIkulns pollmhwl.S conw las protef,aas, los tfddos uucldcos y 101 poIisa deba;o dellaberinto, este segmenlO
afrldo.s. se ",rsambJall a partir de pequeiia.s nwlkulns precursoms actlmdtu medJonle escogido se muestra con mayor
n!I':ItI:ioues repetidn.s de deshidrotiJd6u lmpulsadas de esta fonnn. Orms molkulns rMb detalle (8).

84 capftulo 2: Pequcnas mollkulas, energfa ybiosfntesis

 Iret molkul., de aeelil CoA

2C0A5H-1
~H2COO;o
CH J-Cj=-CH 2C,
OH SCoA
1'lldroximeti1glutlrtl CoA

2 CoASH -
-----J..-
r-- 22 NADPH
NADP~
~H2COO
CH)-C-CH 2-CH 10H
OH

l-opemenil pirofolfeto

CH,
ISOMERIZA~~
CH1-C-CHCHP-@-
dimeti'-ljl pltofotl.to

CfH1 ~Hl
CHl -C=CHCH 2CH 2-C=CHCHP-@-

g6ta"ir p;tofosfeto

~
i.openI8nir
IAI pirofosfeto

PP,

~Hl ~Hl ~Hl

CHrC=CHCH2CH2-C=CHCH2CH2-C=CHCHp-(f)-

fflmesil pitof06f.to
J.-- NAOf'H
2 Pf', -t--- NADP+
DOS MOlECUlAS CON[lENSADAS
I

HOI~""-/ (
NADP'NADPH
I HO'~""-/
+W
0;0101l8roI 7dehldrocolesterO! lanosterol escl.lal."o

'"

85
tiutU, delwmiluwu roenzimas, tmnsflenm otms grupos qllfmicos en el trtlnScurso de In
biosfntesis: el NADPH por ejemplo. tmlufli!re llidr6ge1lO en fon"a Iii? "n prot6n y dos
el:trtnln (lOll hidroroJ. mientms que el acetil GoA tmnsJkre KrulJ'OS acet/lo.

Coordinaci6n entre catabolismo y bioslntesis1 9

EI melabolismo eslti organizado y regulado
La Figura 2-37 nos da una idea de 10 complicada que resulta una celula cuando
se considera como una m~quina qufmica; la figura es un esquema que tan s610
muesua algunas de las etapas enz.im~ticas de una celula. Todas estas reacciones
tienen lugar en una celuJa que tiene menos de 0.1 mm de di~melro. y cada una
de elJas requiere la participaci6n de una enl.ima, la cuaJ, a su vel.. es el producto
de una serie de reacciones de uansferencia de informaci6n y de sfnlesis protei-
ca. Para una molecula pequei'ia tfpica -por ejemplo, el aminm1cido ser;lla- po-
demos encontrar mas de media docena de enl.imas que pueden modificarlo de
diferentes maneras: uniendolo al AMP (adenilarlol preparandolo para la sfntesis
de prolefnas, degradarlo a glidna, transformarlo en piruvalo preparandolo para
su oxldacl6n, acetilarlo mediante aeeti! CoA 0 transferirlo a un acido graso pro-
dudendo fosfatidilserina. Todas eSlas diferentes vfas compilen por la misma
molecula de serina. AI mismo tiempo se esta produdendo una lucha similar a
eSla. para miles de pequei'ias moleculas. Se podrfa pensar que lodo el sistema
debe eslar equUibrado tan finamente que cualquier trastomo menor. tal como
un cambio temporal de la diela, pod ria lener resuhadlJs desaslrosos.
De hecho. la celula es asombrosamenle estable. Siempre que es penurbada,
reacciona hasta recuperar su estado inicial. Puede adaptarse y continuar su fun-
ci6n de una manera coherente durante periodos de ayuno 0 de enfennedad.
MUlaciones de muchos tipos puedcn eliminar una reacci6n de una delenninada
vfa, y a pesar de ella -siempre que se cumplan denos requisitos minimos-Ia ce-
lula sobrevive. Esto es asf porque en las celulas existe una elaborada red de me-
canismos de control que regulan y coordinan la velocidad de sus reaeeiones. Al-
gunos de los niveles superiores de control se estudiaran en capfluJos posteriores.
Aquf nos limitaremos a deseribir los mecanismos mas simples que regulan el
flujo de pequei'ias moleculas a traves de las diferenles vfas metab6licas.

Las fas melab6licas eSlan reguladas a traves de cambios

de la actividad enzimatica20
Las concenlraciones de las diversas moleculas pequef~as de LIlla celula estan
amoniguadas freme a cambios importantes, mediante un proceso conoddo como
rcgulacl6n por retroallmentacl6n (feedback) que adapta el flujo de metabolitos a
traves de una via detenninada mediante un aumento 0 una disminuci6n tempo-
ral de la actividad de enzimas cruciales. Por ejemplo. la enzima inicial de una se-
rie de reacciones suele estar inhibida por retroaJimeutaci611 IIegativa del producto
fmal de eSla via: si se acumulan grandes cantidades del producto finaJ. automati-
camenle queda inhibida la entrada de mas precursores a la vfa (Figura 238).
Cuando las vfas se ramifican 0 se cruzan, cosa que sucede a menudo, general-
menle existen varios punloS de control mediante diferentes produclos fmales. La
complejidad de estos procesos de control por retroalimenlaci6n queda ilustrada
en la Figura 239, que muestra el esquema de regu1aci6n enzimatica observado
en un grupo de vias metab6licas de aminoacidos relacionados.
La regulaci6n por retroalimentaci6n puede actuar casi inslanlaneamente y
es reversible; ademas. un produclo final dado puede activar enl.imas conducto-
ras de otras vfas e inhibir enl.imas que producen su propia sfntesis. Se conoce
bien la base molecular de este tipo de comrol pero debido a que su estudio re-
quiere unos conocimientos determinados sobre la estruclura de las proternas,
no entraremos en el hasta el Capftulo 5.

86 Capitulo 2: Pequenas mol&:ulas. energfa y bloslntesls

 Las reacciones catab6licas pueden revertirse mediante
un aporte de energfa21
Regulando unas cuantas enzimas de pumos clave de la red melab6lica pueden
consegujrse cambios a gran escala que afecten el metabolismo de toda la relula.
Por ejemplo, un patr6n especial de regulaci6n por retroalimenlaci6n pcrmite
inhibici6n pol
que una relula pase de la degradaci6n de glucosa a la biosmtesis de glucosa (de-

YJ
rllll(Hlimenl&ci6n
nomjnada gluconeogenesis). La necesidad de la g1uconeog~nesis es especialmen-
te aguda en los pcrfodos de ejercicio violemo, cuando la gJucosa necesaria para
la comracci6n muscular debe ser generada por las celulas hep<1.ticas, y tambien
en perfodos de ayuno, en los que, para sobrevivir, la glucosa debe ser sintetizada
a partir del gJicerol de las grasas y de los arnino<1.cidos. Z
La degradaci6n normal de la gJucosa hasta piruvato, por la gJucolisis, est<1.
FIgura 238 lnhlblcl6n por
eatalizada por Varlas enzimas que acnian en serie. La mayorfa de las reaeciones
retroalimenlaci6n de una via de
catalizadas por estas enzimas son f<1.cilmente reversibles, pero tres de estas reae
biosrntesis. cada letra represenla una
ciones (los mlmeros 1,3 Y9 en la secuencia de la Figura 221) son c1arameme pequel\a molecula diferente, y cada
irreversibles. De hecho, el importame cambio de energfa Iibre que se produce flecha negra simboliza una reaccion
en estas reacciones es 10 que normalmeme impulsa la secuencia de reacciones en catalizada por una enzima direrenle.
la direcci6n de la degradaci6n de la g1ucosa. Para que las reacciones se produz- El prodUCIO final Z inhibe la primera
can en direcci6n opuesta y se pueda formar g1ucosa a partir de piruvato, es ne- enl.ima que es la unica que 10 sinleliza.
cesario superar cada una de eSlas tres reacciones. Ella se consigue medianle tres de ronna que Z conlrola su propio
reacciones a1ternaLivas, catalizadas enzimMicamente, que son impulsadas nivel en la celula.. se trata de un
"cuesta arriba~ gracias a un aporte de energfa qufmica (Figura 2-40). Asr, cuando ejemplo de retroalimemaciOn negatilJa
una moJecula de glucosa se degrada ados molecuJas de piruvato, se generan dos (feedback negativo).

Figura 2-39 Inhlblclon por

"p"rt310
retroalimentad6n en la slntesls de los
amlnod.c1dos IIslna, metJonlna,
treonlna e lsoleuclna, en las
baclertas. En este diagrama cada
reaction catalizada por una enzima
esta representada por unaf/echo
llegra. mientras que las llechas rojas
indican las posiciones en las que los
productos "retroalimentan"
inhibiendo las enzimas. Observese que
tres enzimas diferentes (denominadas
isoenzimas) calalizan la rcacci6n
inicial, y que cada una de elias esta
inhibida por un producto distinto.

Coordinacl6n entre calabolismo y blosfntesis 87

 Figura 240 Comparacl6n entre las
reacclones que producen g1ucosa
P,
durante la g1uconeog~nesls y las
reacclones que degradan la g1ucosa
H,o durante la g1ucollsls. Las reacciones
de dcgradaci6n {g1ucolfticasl son
glueou 6-fosfato cnergthicamenle ravorables (el cambio

, de energfa Iibre es inferior a cero),

mienlras que las reacciones de sinlesis
requieren un aporle de energfa. Para
fruetosa 6--fosfato sinletizar glucosa se necesitan
direrentes -enzimas de derivaci6n~
P, necesarias para -sahar" las reacciones
3 1,3 Y9 de la g1ucolisis. El fluio total de
H,o compuestos entre la g1ucosa y el
piruvato est~ detenninado poT
fructon l,&.bi.fosfBto
mecanismos de control por
retroalimentaci6n que aettian
controlando el metabolismo de las
moleculas que participan en estos
Ires pasos.
p,--.j

_.
P,

, HAD'

, ,
l,3-bisfoslogllceralo x2

,
3-lolfoglicer'lO
"
7

2-!osloglieerllto
"
,
lostoonol iWYlllo
"
loopl
CO,

AD
9 olUllaoe"to
"
ADP
CO,

"

moh~culas de ATP pero la reacci6n inversa de la gluconeogenesis requiere cuatro

moh~culas de ATP y dos mohkulas de GTP, 10 Cllal, en lotal, es equivalenlc a la
hidr6lisis de seis moleculas de ATP por carla moltkula de glucosa sintctizada.
las reacciones de desvfo de la Figura 2-40 deben estar conrroladas. de rna
oera que se degrade glucosa rapidamcme cuando se necesile energia y se'sintc
lice g1ucosa cuando 1a celula este repleta de energia. Si ~as reacciones pudieran
producirse en ambos sentidos sin restricciones, enviarian grandes cantidades de

88 Caprlulo 2 : Pequeiias mol&ulas, energfa y biosfntesis

metabolitos hacia adelame y hacia amb, siguiendo unos ciclos fl1tiles que con
sumirian grandes cantidades de ATP sin ningl1n objetivo concrelO.
La elegancia de estos mecanismos de control puede i1ustrarse con un ejem
plo clave. EI paso 3 de la g1ucolisis es una de las reacciones que debe ser supera-
da durante la fonnaci6n de g1ucosa (v~ase Figura 2-40). Normalmente el paso
implica la adici6n a la fructosa 6-fosfalO de un grupo fosfato procedente del ATP,
y esta cataLizado por la enzima fosfofructoquinasa. Esta enzima es aClivada por
AMP, ADP Y fosfato inorganico e inhibida por ATP, cilrato y <icidos grasos. Asf
pues, la enzima se activa par la acumulaci6n de los productos de In hidr6lisis del
ATP cuando el aporle de energfa es bajo y se inacliva cuando la cantidad de
energfa (en formn de ATP) 0 el aporte de alimentos, como pueden ser :1cidos gra-
sos 0 citrato (derivado de los aminoacidos) son abundanles. Lafructosa hisfosfa-
lasa es la enzima que cataUza la reacci6n inversa (In hidr61isis de fruclosa 1,6
bisfosfato a fruclosa 6-fosfato, que conduce hacia la formaci6n de g1ucosa); eSla
enzima esta regulada de manera opuesta por el mismo sistema de reuoinhibi-
ci6n, de forma que se estimula cuando la fosfofructoquinasa se inhibe.

Las enzimas pueden activarse e inhibirse mediante

modificaciones covalentesU
Los sistemas de control por relroalimentaci6n que acabamos de describir 'per-
miten que las velocidades de las secuencias de reacciones esten reguladas de
manera continua y aUlomatica, segundo a segundo, en respuesta a flllCt1l3cio-
nes del metabolismo. Las celulas disponen de varios disposilivos para regular
las enzimas cuando los cambios de su aclividad han de ser mas prolongados,
del orden de minUlos u horas. ESlos sistemas impUcan In modificaci6n covalen-
Ie reversible de las enzimas. Casi siempre estas modificaciones se consiguen
medjanle la adici6n de un grupo fosfato a un residuo dctcrminado de serina, de
lreonjna 0 de tirosina de la enzima. EI fosfato procede del ATP y su transferencia
esla calalizada por una familia de enzimas conocidas como prote{na qllinasas.
En el Capftulo 5 describiremos como la fosforilaci6n puede alterar la fonna de
una enzima, aumenlando 0 inhibiendo su actividad_ La eliminaci6n posterior del
grupo fosfato, que reviene el efeclo de la fosforilaci6n, se consigue mediante una
segunda enzima denominada protefllfl fosfatasa. La modificaci6n covalenle de las
enzimas afiade otra dimensi6n aI control metab6lico, ya que pennile que las vfas
de reacci6n especfficas sean reguladas por seflales (como las homlOnas y factores de
crecimiento) que no estan relacionadas con los propios intermediarios metab6licos.

Las reacciones estan compartimentadas, tanto dentTO

de las c~lulas como dentro de los organismos23
No lodas las reacciones metab61icas de una celula se producen dentro del mis
rno compartimienlo citoplasmatico. Pueslo que diferentes enzimas se hallan en
diferentes compartimientos de la celula, el Oujo de los componentes quimicos
esta canalizado, tanto fisica como qufmicamente.

24 molkulas
de piruvato Figura 2-41 Estructura de la
8 Irlmeros de + 12 mol6culas piruvato-deshJdrogenasa. Esle
de dihidrolipoil desurbo"ilase
lipoamida
reductase deshldrogenasa complejo enzimfitico cataUza 1[1
transllCatllasa conveni6n de pirnvato en acetiJ eoA.
Se trata de un ejemplo de un gran
complejo multienzilmitico en el que
los intermediarios de la reacci6n pasan
direclamente de unas enzimas a Otras.

Coordinacion entre calabolismo y biosfntesis 89

 La forma m~s simple de esla segregaci6n espacial se produce cuando dos enzi-
mas que calalizan reacciones secuenciales forman un complejo enzimalico, y el
produclo de la primera enzima no ha de difundir a traves del citosol para encontrar
la segunda enzima. En cuanto ha terminado la primera reacci6n empieza la segun-
da. Algunos grandes agregados enzim~ticos realizan tada una sene de reacciones
sin perder el contacto con el substrato. Por ejemplo, la oansformaci6n del piruvalo
en acetil GoA ocurre en tres pasos qufmicos que se producen sobre ellruslllo gran glucoli,l, en
.1 cltoeol
complejo enzimatico (Figura 2-41); en la s[ntesis de los ticidos grasos, una secuen-
cia de reacciones alin mas larga est~ calalizada por un Unico conjunto de enzimas.
No resulla sorprendente que algunos de los mayores complejos enzim~licosest~n
destinados a la sfntesis de macromolOCulas como las proleinas y el DNA.
EI siguiente nivel de segregaci6n espacial en las relulas se refiere aI confina-
miemo de enzimas relacionadas funcionalmeme dentro de la misma membrana 0
dentro de los compartimienlos acuosos de un orgAnulo que esl~ rodeado por una
membrana. EJ melabolismo oxidativo de la g1ucosa constituye un buen ejemplo de
ello. Despues de la gtucolisis. el piruvato se oansporta activamente desde eI cit'osol
hasta eI compartimiento interno de la mitocondria, el cual contiene lodas las enzi-
mas y metabolitos que intervienen en el cicio del ~cido citrico (Figura 2-42). Ademo1s
la propia membrana mitocondrial intema contiene todas las enzimas que catalizan
las reacciones siguientes de la fosfonlaci6n oxidativa, incluidas las enzimas implica
das en la transferencia de electrones desde eI NADH al 02 Ylas implicadas en la s{n-
tesis del ATP. Porconsiguiente, la milocondria puede ser considerada como una pe-
quefia f.ibrica produetora de ATP. An3.logamente, otros organulos celulares, como el
n(ieleo, el complejo de Golgi y los lisosomas, pueden ser considerados como com-
panimiemos especializados donde se encuenoan confinadas enzimas relacionadas
funcionalmente y que realizan tareas especfficas. En cierto sentido, la c~lula viva es
como una ciudad, con muchos servicios especializados concentrados en diferemes
areas, intensamenle inlerconecladas por diversas vias de comunicaci6n.
La organizaci6n espacial de los organismos pluricelulares se extiende m~s aM
de la c~lula individual. Los diferentes lejidos del cuerpo lienen diferentes gropos
de enzimas y realizan conlribuciones dislintas a la qufmica del organismo com-
plelo. Ademas de las diferencias entre los diferemes tipos de c~lulas de un mismo
organislllo en cuanlo a productos especializados como las hormonas 0 los anti-
Figura 2-42 Segregacldn de los
cuerpos, tambi~n ex.isten diferencias considerables en cuanto a las vias melab6li
dlversos pasos de la degradacldn de la
cas uhabhuales~. Aunque pnlcticamente todas las celulas contienen las enzimas \ glucosa en la celula eucarlota. La
de la glucolisis, del cicio del acido cftnco, de la sfntesis y de la degradaci6n de los gtucolisis se produce en el citosol,
Ifpidos y del metabolismo de los aminoacidos, los niveles de eSlos procesos en mientras que Jas reacciones del cicio
los diferentes tejidos estan regulados de forma diferente. Las c~lulas nerviosas, que del tlcido cltrico y de la fosforiJaci6n
probablemente son las c~lulas m~s ex.igentes del cuerpo, carecen casi toralmente oxidativa ocurren unicamente cnlas
de reservas de gluc6geno y de atidos grasos, dependiendo casi por completo del mitocondrias.
aporte de glucosa de la sangre. Las c~lulas hep~ticas proporcionan glucosa a las 11-
bras musculares que se coniracn activamente, y reciclan de nuevo a glucosa eJ aci-
do I~clico producido por estas celulas museulares (Figura 243). Toclos los tipos de
reJulas tienen sus rasgos metab61icos caracteristicos y cooperan inlensamente,
lanto en el eslado nomlal como en la respuesla al ejercicio, al estres y al hambre.
Figura 2-43 Representacldn
esquemlhlca de la cooperacldn
metabdllca entre las cBulas hepaticas
y las fibras muscula.res. EI principal
combustible de las fibras musculares
en activa contracci6n es la glucosa,
gran parte de la cual estoi suministrada
por las celulas hep.aticas. El oicido
loictico, prodUClO final de la
degradaci6n anaer6bica de la g1ucosa
por g1ucolisis en el musculo, se
transforma de nuevo en g1ucosa en el
hfgado mediante el proceso de
gluconeogenesis.

90 Capftulo 2 : Pequeftas mol~ulas, energfa y bios[ntesis

Resumen
Los mucl,os miles tk reaeeiones quEmicas distintas realizadas sitlwltdllet1menle
por "na celtd" estdn estreclmmente coordhuulas. Diversos mectlnismos de control
regrdm, las m:tivltUules de las etlZimas clave, en respuesla " las oo"diciones cam-
bitmles de la celula. Una forn,,, ""'ycon",n de regulaciOn estriba ell Ia in/'ibicion
por retroalimentadon, rdpidallleme reversible, ejercida por el prod'u:to filltd sobre
Ia primera ellZima de 111m uEa. Una forma mas prolongada de regulac/on '",plica Ia
modijicaci611 q"Emica de IIna emi",a porotra enz.inra, a nrenudo mediantefosfori-
Iacwn. Comb/naciOlles de mecanlsmos reguladores plleden prod"c/r CIImbios im-
portalltes y prolongados ell el metabollsmo de Ia celllla. No todas las reneeiones ce-
lulares se prodllcen ik"tro del m;smo oompartimiellto intracellllar, de fornul que
la segregad6n espadal, mediante membranas intenuu, permite que 10$ Orglfnulos
Sf! espedalicen en Inreas bioqllEmicas.

Bibliograffa II. Fothergill-Gilmore, LA. The evolution of the glycolytic

General
Becker, W.M.; Deamer, D.W. The World of the Cell, 2nd ed.
Redwood City, CA: Benjamin-Cummings. 1991.
Herrion. '.; 'acobson, G.; Marmur. J.: Panom, W. Papers in
BiochemiSlrY. Reading. MA: Addjson-Wesley. 1984.
Lehninger. A.L; Nelson. D.L; Cox, M.M. Principios de Bio-
qufmica, 2.- ed. Barcelona: Ediciones Omega. SA, 1993
Mathews. C.K.; van Holde. K.E. Biochemistry. Menlo Park.
CA: Benjamin-Cummings, 1990.
Str}'er. L Biochemistry.3rd cd. NewYorlc: W.H. Freeman, 1988.
Cltas
l. Alkins, P.W. Molecules. New York: Scientific American
Library. 1987.
Henderson, LJ. The Fitness of the Environment. Boston:
Beacon, 1927; reimpresi6n 1958. (lJn analisis clasico y
de facilleclUra.)
2. Ingraham. '.L.; Maal0e, 0.; Neidhardt, F.C. Growth of
the Bacterial Cell. Sunderland, MA: Sinauer, 1983.
3. Sharon, N. Cnrbohydratcs. Sci. Am. 243(5):90-116, 1980.
4. Robertson, R.N. The Lively Membranes. Cambridge, UK:
Cambridge University Press, 1983.
5. Branden, C.; Tooze, J. Introduction to Protein Structure.
New York: Garland, 1991.
6. Saenger, W. Principles of Nucleic Acid Stnlcture. New
York.: Springer, 1984.
7. Hess, S.; Markus, M. Order and chaos in biochemistry.
Trellds Biochem. Sci. 12:45-48, 1987.
Schr6dinger, E. What Is Life? Mind and Matter. Cam-
I bridge. UK: Cambridge University Press, 1969.
8. Atkins, P.W. The Second Law. New York: ScientificAme-
rican Books, 1984.
Dickerson. R.E. Molecular Thermodynamics. Menlo
Park, CA.: Benjamin, 1969.
Klotz, I.M. Energy Changes in Biochemical Reactions.
New York.: Academic Press, 1967.
9. Youvan, D.C.; Marrs. B.L Molecular mechanisms of
photosynthesis. Sci. Am. 256(6):42-49, 1987.
10. Leehninger, A.L Bioenergetics: The molecular Basis of
Biological Energy Transformations, 2nd ed. Menlo
Park, CA: Benjamin-Cummings, 1971.
Racker, E. From Pasteur to MitcheU: a hundred years of
bioenergetics. Fed.. Proc. 39:210-215,1980.
pathway. Trends Bioc/lem. Sci. 11:47-51, 1986.
12. Upmann, F. Wanderings of a Biochemist. New York:
Wiley. 1971.
13. Schlenk, F. The ancestry. binh and adolescence of ATP.
Trends Bioc/lem. Sci. 12:367-368, 1987.
14. Abeles, R.H.; Frey. PA; Jencks, W.P. Biochemistry. Bos
ton: lones and Bartlett. 1992.
McGilvery. R.W. Biochemistry: A Functional Approach.
3rd ed. Philadelphia: Saunders, 1983.
15. Kornberg. H.L Tricarbmcylic acid cycles. Bioessays
7:236-238, 1987.
Krebs, IIA The history of the tricarboxylic acid cycle.
Perspecl. Bioi. MelI_ 14:154170, 1970.
Krebs, HA; Martin, A. Reminiscences and Reflections.
Oxford, UK: Clarendon Press; New York: Oxford Uni-
versity Press. 1981.
16. Pullman, M.E., el al. Partial resolution of the enzymes
catalyzing oxidative phosporylation.]. Bioi. Cilem.
235:3322-3329,1960.
17. Prigogine. I.; Stengers, l. Order out of Chaos: Man's New
Dialogue with Nature. New York: Bantam Books.
1984.
18. Eisenberg, D.; Crothers, D. Physical Chemistry with Ap-
plications to the Life Sciences. Menlo Park, CA: Ben-
jamin-Cummings.1979.
Kauzrnann, W. Thermodynamics and Statistics: With
Applications to Gases. New York: Benjamin, 1967.
19. Martin, B.R. Metabolic Regulation: A Molecular Appro-
ach. Oxford, UK; Blackwell Scientific, 1987.
Newsholme, E.A.; Start, C. Regulation in Metabolism.
New York: Wiley, 1973.
20. Pardee, A.B. Molecular basis of biological regulation:
origins of feedback inhibition and atlostel)'. Bioessays
2:37-40, 1985.
21. Hess, B. Oscillating reactions. Trends Biocllem. Sci.
2:193-195,19n.
22. Cohen, P. Control of Enzyme Activity, 2nd ed. London:
Chapman and Hall, 1983.
Koshland, D.E., Jr. Switches thresholds and uluasensiti-
vity. Trends Biochem. Sci. 12:225229, 1987.
23. Banks, P.; Banley, W.; Bin, M. The Biochemistry of the
Tissues, 2nd ed. New York: Wiley, 1976.
Sics, H. Metabolic Companmentation. New York: Aca-
demic Press, 1982.

BibJiograffa 91
Macromoh~culas:
estructura, forma
e informacion
3
.-.... ......-

AI considerar 1a mrnsici6n desde las pequenas molecuJas de la celula hasta las ma-
cromoleculas gigantes, asistimos a mucha mAs que a un simple aumenlo de [ama-
flo. Aunque las protemas. los acidos nucleicos y los polisacAridos estan construidos
a partir de 1m3 colecci6n restringida de aminoacidos. nucle6tidos y aziicares res-
pectivamcmc, pueden presentar propiedades unicas y realmenle sorprendentes,
que les confieren unas caracterfsticas muy lejanas a sus precursores qufmicos. Las
rnacromolcculas biol6gicas estan compucstas de varios cientos -a veccs de millo-
nes- de .homos unidos entre elias fonnando disposicioncs espadales definidas de
forma muy precisa. Cada una de eslas macrornoleculas contiene una infonnaci6n
fiUy espedfica. Incorporadas a su estruclura, existen series de mensajes biol6gicos
que pueden ser lefdos cuanda estas macromolecuJas internccionan con orras mol~
culas, penniti~ndoles desarroUar una funci6n detenninada.
En esle capitulo examinaremos las estructuras de las macromolkulas, dedi-
cando un inleres especial a las protemas y a los <icidos nucleicos y explicando romo,
a 10 largo de la evoluci6n, se han adaptado para desalTollar funciones detennina-
das. Consideraremos los principios por los cuales eslas macromol~culas catalizan azlH:ares. aminoikidos
transformaciones quimicas, construyen complejas estructuras multimoleculares. y nuciaotido, .0,5' nm
generan movimiento y -mucho mas fundamelHal que todo esto- almacenan y
transmiten infonnaci6n hereditaria.
prOleina. globulares ~2-'O nm

Procesos de reconocimiento molecular'

Las macromol~culas tienen un peso molecular que normalmente oscila entre
10 000 Y I miJI6n, y un lamano intermedio entre las moleculas organicas de la ribosoma _30 nm
c~lula. tratadas en el Caprlulo 2, y los grandes agregados macromoleculares y or-
ganulos, que sen\n objeto de estudio de capltulos posteriores (Figura 3-1). Una
pequefla molecu]a, la del ab'lla, constituye e[ 70% de la masa total de [a celula;
casi todo el resto de la masa son macromoleculas (Tabla 3-1).
Tal como se ha descril'O en el Capitulo 2, una macromolecula se ensambla a
panir de subunidades de peso molecular menor. que se 'afladen una tras otra
Figura 3-1 Comparacl6n entre el
fonnando un largo polimero a modo de cadena (vcase Figura 235). General- tamafto de las moleculas proteicas y
mente, en la construcci6n de cada cadena participa u.nicamente una familia de el de otTOS componentes celulares.
subunidades: los aminoacidos se unen a otros aminoacidos fonnando las protcf- Los ribosomas son importantes
nas, los nucle6tidos se unen a orros nucle6tidos formando los acidos nucleicos; agregados macromoleculares
y los azu.carcs se unen a Olros azu.cares formando los polisacaridos. Puesto que compuestos por unas 60 protefnas y
la secuencia exacla de las subunidades cs crucial para la funci6n de una molecu- moleculas de RNA.

93
Tabla 3-1 Composlcl6n qufmlc:a aproxlmada de una baclerla tfplca y de una celula
de mamffero Ifpica
Porcenlaje del peso tolal de la eelula
E. ooIi
Componente Baaeria Ciluta de mamifero
H,O 70 70
lanes inorgtnicos (Na', K', Mgz', I I
Cat., CI-, etc.)
Algunos metaboLitos pequenos 3 3
Prote{nas 15 18
RNA 6 1,1
ONA I 0,25
FosfoHpidos 2 3
Olros Ifpidos 2
Polisacaridos 2 2

Volumen celular total: 4xlo-9 cm 3

Volumen celular relativo: 2000

Las prOlefnas. los polisacaridos, el DNA y el RNA son macromoleculas. Los Ifpidos generaimen-
Ie no se c1asifican como macromoh!culas, a pesar de que lienen algunas de sus caraclerlsricas;
por ejemplo, la mayorfa de ellos se sintClium como polfmeros lineales de una mol~ula menor
(el grupo acetil de acetil CoAl y se aUlocnsamblan formando grandes estructur3s {membranasl.
N6lese que eI agua y las proreinas comprenden la mayor pane de la masa lanto de las celulas de
mamffero como de las bacrerias.

la, su biosfntesis requiere me<:anismos que aseguren que cada subunidad ade-
cuada se coloque en el polfmero en la posici6n exacta de la cadena.

Las interacciones especfficas de una macromol~cu]a

dependen de enlaces d~biles no covalentesZ
Una cadena macromolecular se mantiene unida por medio de enlaces covafemes,
que son suficientemente fuenes como para preservar la secuencia de subunidades
durante largos periodos de tiempo. A pesar de que la secllencla de subunidades de-
termina la informaci6n contenida en una macromohkula, la utilizacion de esta in-
fonmtci6n depende en gran medida de otros enlaces mllcho mas debiles, los enlaces
110 coualeTlles. Estos enlaces dcbilcs se fonnan entre diferentes regiones de la misma
macromolecula, y tambicn entrc difcrcnles macromoleculas. Por clio, est'Os enlaces
detenninan en gran medida tanlO la eSlmClura tridimensional de las cadenas ma-
cromoleculares como la manera en que eslas estruCIUras interaccionan entre si.
Los enlaces no covalentes que se presentan en las moleculas biol6gicas, sue-
len c1asificarse en tres tipos: enlaces 16n1OO5. enlaces de hIdr6geno y atracclo-
nes de van der Waals. Dlra imponante fuerza debil se genera por la estructura
tridimensional del agua, la cual tiende a UniT los gropos hidrof6bicos con el fin
de minimizar su efeclo destructor de la red de moleculas de agua unidas por en-
laces de hidr6geno (vease Panel 2-1, p~gs. SO-51). Esla expulsion de la soluci6n
acuosa genera 10 que algunas veces se considera como un cuano lipo de enlace

",,~ Figura 3-Z Energfas comparallvas de

C-c algunos aconteclmlentos molecula.res
Importantes de la celula. N6tese que
ENERG.;rICO
CONTENIOO ,~;::===::==F::::::= los valores de energia se muestran en

.,.,,
IkceVmoll 0,1 una escaJa logar((mica.
iOn e
~.,

94 Capftulo 3: Macromoleculas: estructura, fonna e informacl6n

Tabla 3-2 Enlaces qu(mlcos covalentes y no covalentes
Fuerza (kcaUmol)-
11 po de enlace Longitud (nro) En ellKKlo En el agltil

Covalente 0,15 90 90
16nico 0,25 80 3
Hidr6geno 0,30 4 I
Alrncciones de van der Waals (por oitomo) 0,35 0,1 0,1

'La fuerza de un enlace se puede medir 00010 la energia necesaria para romperlo, que aquf se
presenta en kalorias por mol (kca!/moll. (Una tilocalorfa es la call1idad de energia necesaria
para incremenlar en ,- C la lemperatura de 1000 g de agua. Una unidad allernativa de uso 00-
mun es el kilojoule. kJ, igual a 0,24 kcal.) La fuerza de cada enlace son los lttomos que eslan im-
pllcados en su formad6n. y del ambiente preciso en el que se halla el enlace; los valores de la
labia 501amente son, por 10 tanto. una gufa aproximada. N6tese que cl ambiente 8CU050 de una
celula disminuye enormemente la fuerza de los enlaces i6nioos y de hidr6geno entre mol&:ulas
diferentes a las de agua (PaneI3-!, pags. 96-97). La longitud de enlace es la diSlancia entre los
ccnlros de los atomos diferenlcs al hidr6gcno que participan en el enlace.

d~bil no covalente. En el Panel 3-1, paginas 96-97, se exponen las caracteristicas

principales de estos cuatro tipos de enlaces debiles.
En un medio acuoso. los enlaces no covalenles son de 30 a 300 veces mas
d~biles que los enlaces covalentes (Tabla 3-2) y s610 (jgeramente mas fuertes que
la energfa media de las colisiones termicas a 37C (Figura 3-2). Por consiguieme,
un unico enlace no covalente -a diferencia de 10 que ocurre con un enlace cova-
lente- resulta demasiado debit para resistir los movimientos lermicos que tien-
den a separar las molk:ulas, por 10 que son necesarios numerosos enlaces no
covalentes para manrener unidas dos superficies moleculares. Entre dos superfi-
cies 5610 se pueden formar un elevado numero de enlaces no covalentes si exis-
len un elevado numero de alomos de estas superficies que esten adaptados unos
a los Olros (Figura 3-3), 10 cual determina la especificidad de reconocimiento
biol6gico, como ocurre entre una enzima y su substrata,
Como se explica en la parte superior del Panel 3-1, los atomos se comportan
casi como si fueran pesadas esferas de un radio delerminado (su "radio de van
der Waals"l. EI requerimienlo de que dos Momos no pueden solaparse limita los
angulos de enlace posiblcs de una cadena polipeptfdica (Figura 3-4). Estas y Figura 3-3 Enlaces no covalentes.
otras inlcracciones estericas reducen substancialmente el numero de disposi- Mancra en que los enlaces d~biles
ciones tridimensionalcs (0 conforll1acionesl que son posiblcs. A pesar de ella, median los procesos de
una larga cadena flexible como por ejemplo la de una prote(na, puede plegarse reconocimienlo entre las
en un numero enorme de diferentcs posibilidades, teniendo cada conformaci6n macromoleculas.

)) II~
- - W))
las 'lIperf,(:iM de las mol6cllin A

/
II V B VA VC seMla~n m.1 V
un~mente .on CIIPKft de
)) form.r unes clIllnlM enl.en
cl4!ibiles; el moYimiento Iillrmk;:o
las separ. rli~menle
Il .~

"'~
III molkulll A encuentra ,I'z'r
01rlll molkul.. lB. C V01 111I ,uperflCies de las moikullll A
V 0 se adaplIIn bien. por 10 que
(( pueden formar un numero
sufoc:iente de enlaces d41bil" que
permite resiSlir el moy;mlenlO
I'rmlco, permanec:iendo unldlll

Procesos de reconocimlento molecular 95

 FUERZAS DE VAN DER WAALS
A una dist80cia corta, 2 .homos cualesquiera mueSlren una debit Cada tipo de 810mo liene un radio, conocido como radio
inteftlcci6n de enlace debido a sus carges eleetricas fluctuantes. de van der Waall, en el que las fuer:MS de van der Waals
Esta fuerza recibe 91 nombre de 81r8cci6n de van der Waals. Sin eSlan equilibradas.
embargo dos lhomos se repelen muy energeticamente 5i 58 los
ltCefCa damasiado. Esta repulsi6n de van der Waals desempefla
un papel importante limitaodo las posibles conformacionas de
una malku!a.
1.2 A 2.0 A. 1.5 A. 1.4A.
(0.12 om) (0,2 rom) {O,15roml (O,14roml
Dos atomos 58 atraen entre si por fuenas de van der Waals haste
que Ie distancis entre ellos iguale Ie suma de sus radios de van der
Waals.. A pesar de que estes atracciones de van der Waals son
individualmente muy debiles, pueden ser importantes cuando dos
superficies macromolecularal Ie adaptan muy bien una a olra.
. .. ..-------------'
:;

ENLACES QUIMICOS DEBILES

Las moleculas orgllroicas pueden interaccioner con otras
o dill8ncillllnirl 101 "omos- mohkulas a Iraves de fuerzes no covalenles de alcaroce
reducido.
equilibrio dll varo dllr Waall optlmo aro 111111 puroto

ENLACES DE HIDRC>GENO
Un atomo de hidr6geno as com partido por dos atomos
lambos electronegativos, como 81 0 V el Nl formlmdose
un enlace de hidr6geno.

~",NH 1111111111111
II

lIolace eoVa11l011l enlKII dellidrOgeno Tlpicamente, los enlaces quimicos debiles tienen una
_ 0.1 nm de largo _ 0,2 rom dlliargo fuerza 20 veces inferior a la de un enlace covalenle. 5610
son suficientemenle fuertes para fljer dOl mol8c:ulas cuando
LOl enlaces de hidr6geno son mas fuertes se forma simultaneamenle un numero elevado de ellos.
cuando los tres lhomos se hallan en linea recta:

"O-H 11111111110", "/N-HIIIIIIIIIIOl' ENLACES DE HIDRC>GENO EN EL AGUA

Les rnohlculas que pueden formar enlaces de hidr6geno coro
Ejemplos en macromoleculas: otras lambhln pueden, allernativamente. former enlaces de
hidr6geno con molecules de agua. Debido a esta compelencia
Dos cadenas polipeptldical de aminollcidos unidas con las moleculas de ague los enlaces de hidr6geno form ados
por enlaces de hidrOgeno. entre dos moleculas disueltas en agua son relalivamenle
I debilas.
I llrolace
I I I pIIptldieo
I C-OI1lIlIlII1 H-N
I I I
R-(-H R-C-H t+-C-R I
I I I C-
(=01111111111 H-N I I
I I I

Dos bases, G y C, unidas par enlaces de hidrOgeno

en el DNA 0 en el RNA.
H I
-(--C-N
1 I
c-
H, )N-H.O~ I I I
(-C ~( H
H-(
r N_H-N
I
I
-c
N-C ( I
/ ~OnDl!IIH- N"
'H
INTERACCIONES HIDROFOSICAS
EI aQua unal08 grupos hidrof6bicos con objeto
de minimizer los efeelos destructores de estos
grupos sobre Ie red de enlaces de hidrOgeno
del agu8. A menudo se dice que los grupos
hidrof6bicos que se manlienen unidas de asIa
manera estiin uoidal por puentes hidrof6bicos.
8 paser de que Ie atracci6n esta generada en
raelided por una repulsi6n de las molecules
de ague.

ENLACES IONICOS EN SOLUCIONES ACUOSAS

Los grupos cargedos eShin prOlegidos

por sus inlereccian" eon las mohkulas
de agUB. Por ella, los enlaces i6nicos
en solucion &Cuosa son bastante debiles.

,0
-c,

ENLACES IONICOS
I 0
-o-p-o H
I
10 H 00
Las inlefacciones ionicas 58 producen entre 0- I_ / 06:0
grupos tOlalmante cargados (enlace ionical H-O- H x::Y
o entre grupos parcialmenta cargados.
Ademas, los enlaces ionicDs sa debilitan par la presencia

,. de sales, cuyos atomos forman los conlraiones que se

distribuyen alrededor de los iones de carga opuesta.

~))IIII(~L : : - -
,. CI N~ 0

~))IIII((l'C-
(I Na~

La medida de Ie intensldad de la desestabilizaci6n de la

donde D. constante diehktrica
(l para el vado, 80 para el agua)
r. distancia de separaci6n
En ausencia de agua, les fuen.as i6nicas
son muy intenses. Son responsebles
de Ie dureze de minerales tales como
el marmol yel IIgala.
interaccl6n par sales supone una estima cuantitatlva
del numero total de enlaces i6nicos implicados.
De todos modos, los enlaces i6nicos
son muy importantes en los sistemas
biol6gicos. Una enzime que se una a
un substrato cergado positivamente
a menudo presentarll en ellugar
apropiado un resto de eminoacido
cargedo negetivemente.

crista! de
NaCI
 IAI IImino'cido

o ,
II I
HJ /C

~; ~ lrc
C'YJ
"'" 'cIV N
I' I "" II
H 0

enlaces polipeptfdicos

Figura 34 Umltaclones esterlcas de los lingulos de enlace en

una cadena pollpeptfdlca. (Al Cada aminoacido conlribuye con
Ires enlaces (en mja) a su cadena polipeptfdica. EI enlace
peptfdico es plano (sombreado en grisJ y no pCITTlite rotaci6n. Por
phi
el contrario, se puede producir rotaci6n sobre del enlace C~- C
~a esle Angulo de rotaci6n se Ie denomina psi (\jfl- y sobre el
enlace N~ C~-a este lingula de rotaci6n se Ie denomina phi (!.pl. 181
EI grupo R representa W13 cadena lateral de un aminoacido. (B)
La conformaci6n de los alamos principales de una cadena
proteica viene determinada por un par de angulos psi y phi para
carla amino;kido; dehido a las colisiones estericas entre los
aminoacidos, la mayorfa de los pares de angulns phi y psi no
tienen lugar. En esle gnifico, Hamado de Ramachandran, cada
punta representa un par de angulos obsetvados en protefnas.
(B, de 1. Richardson, Adv. Prot. Cllem. 34:, 174-175, 1981.)

una colecci6n diIerente de interacciones debiJes denlro de la cadena, yes la fuer-

za total de eslas interacciones 10 que determina que confomlaciones se formanin.
La mayona de protefnas de una celula se pliegan de forma estable de una sola
manera: durante el curso de la evoluci6n la secuencia de subunidades de aminoaci-
dos ha sido seleccionada de fonna que una delerminada confonnaci6n puede for-
mar muchas mas interacciones favorables en la propia cadena que cualquier otra.

Figura 3-5 Cuando varlas

subunldades se unen entre sf de una
fonna regular. se genera una hellce.
En primer termino se presenla la
interacci6n entre dos subunidades y
delras aparecen las helices que
resullan de eSla interacci6n. Las
helices que se presentan aquf son de
(Al dos, (B) tees a (el y (D) seis
unidades par vuella. En la parte
superior de la figura se puede obsetvar
la disposici6n de las subunidades
desde la parte superior de cada helice.
N6tese que la Mlice (D) liene un paso
de vuelta mas ancho que la ht'!licc (e).

IAI 181 ICI IDI

98 Capftulo 3: Macromohkulas: estructura, forma e informacl6n

Una helice es un motivo estructural cornun en las estructuras
biol6gicas generadas a partir de subunidades repetidas3
A menudo, las estructuras biol6gicas estan formadas por subunidades que son
muy similares las unns a las OlIas -<:omo aminoacidos 0 nucle6tidos-. formando
una larga cadena repetitiva. Si todas las subunidades son identicas. normalmen-
te ocurre que las adyacentes en la cadena se unen de una unica manera, ajustan-
do sus posiciones relativas de forma que se minim..ice la energfa libre de contacto
entre elias. En eSle caso. cada subunidad se colocam exactamente en la misma
posici6n en rclaci6n a sus Subwlidades adyacentes, de modo que la subunidad 3
se unim a la subunidad 2 de la misma forma en la que la subunidad 2 se ha uni-
do a la suhunidad I. y asf sucesivamente. Debido a que es muy raro que las sub-
unidades se unan formando una linea recta, generalmente estas uniones origi-
nan una hellce -una estructura regular que se parece a Wla escaIera de caraeal.
como se ilustra en la Figura 3-5. En funci6n de la direcci6n de giro de la escalera
dc caracol. 13 helice se denomina dextr6gira 0 lev6gira (Figura 3-6). Esta caracte-
ristica no varia cuando la helice se coloea cabeza abajo, pero es la inversa cuan-
do se reOeja en un espejo.
......
levOgir8
hel;':'
dextr6girll

las helices son elementos habiluales de las estructuras biol6gicas, tanto si Figura 3-6 Comparad6n entre una
las suhunidades son moleculas pequefias que estan unidas entre sf de fonna co- hBlce 1ev6glra y alTa denr6glra.
valente (como en el DNA), como si son grandes moleculas proteicas unidas en- Como referenda. es uti! recordar que
tre sf por fuerzas no covalentes (como en los fLIamemos de actina). Esto no es los lomillos habiluales. que avanzan
sorprendenlc. Una helice es una estructura que en absoluto es excepcional, ge- cuando se les hace girar en el sentido
nerada simplemcnte por la uni6n, una conlIa olIa, de muchas subunidades si- de las agujas de un reloj, son
mjlares, de forma que cada una adopta exaClamente la misma relaci6n espacial dextr6giros. N6tese que cualquier
con la subunidad anterior. helice conserva el mismo sentido de
giro (y por 10 tanto su caraclerfslica de
seT dcxlr6gira 0 1ev6gira) aunque se la
La difusi6n es el primer paso hacia el reconocimiento molecular" coloque boca abajo.
Para que dos moleculas se unan entre sf deben entrar en estrecho contacto. EsIO
se consigue gracias a los movimientos termicos que hacen que las moleculas se
desplacen, 0 (il/llndal/, desde sus posiciones de partida. Puesto que las molecu-
las de un Jrquido colisionan y se separan f<lpidameme unas de otras, una deler-
minada molecuJa se mueve primero en una direcci6n y luego en otra, en un
"movillliento al azar" (Figura 3-7). La distancia media que recorre cada tipo de
molecula desde su punto de partida es proporcional a la rafz cuadrada del tiem-
po lllilizado. es decir, si una molecula determinada necesita por termino media
1 segundo para desplazarse I ~m, necesitara 4 segundos para desplazarse 2 ~m,
100 segundos para desplazarse 10 ~m, etc. Por 10 tanto, la difusi6n es eficaz para
que las molcculas se desplacen a distancias limitadas, pera no es eficaz para dis-
tancias largas.
Experimentos rcalizados inycctando a celulas colorantes fluoresccntes y
atras moleculas marcadas demuestran que la difusi6n en el choplasma de male-
culas pequenas es casi tan rapida como en el agua. Una molecula deltamano del
ATP Ilccesilara s610 0,2 segundos aproximadamente para difundir hasta una dis-
tancia media de 10 ~m -el diametro de una celula animal pequena. Sin embargo,
las grandes macromoleculas se desplazan mucho mas lentamente. No 5610 pre-
sentan velocidades de difusi6n intrfnsecamente mas lentas sino que ademas su
movimiento se ve relardado por frecuentes colisiones con otras muchas macro- Flgum 3-7 Un recorrido aI azar. Las
moleculas que se mantienen en su lugar mediante asociaciones molcculares en molOOtlas de una solud6n se
el citoplasma (Figura 3-8). desplazan aI azar debido a continuas
colisiones con Olras molecuJas. Este
movimiento permile a las pequenas
Los movimientos termicos unen a las moleculas moMculas difundir de una zona a otra
yluego las separan de la ce:lula en perfodos de tiempo
sorprendenlcmente cartos; pueden
Los encuentros entre dos macromoleculas 0 entre una macromolecula y una dlfundir a traves de looa una cetula
molecula pequena, se producen al azar, por difusi6n simple. Un encuentro pue- tfpica de mamIfero en menos de un
de condllcir inmcdiatamente a la fonnaci6n de un complejo (en cuyo caso se segundo.

Procesos de reconocimlento molecular 99

dice que la velocidad de formaci6n es(a Iimitada por /(1 clift/sian). A)(ernaliva-
mente, la velocidad de formaci6n del complejo puede ser mas lema, por necesi-
tar que se produzca un reajuste de la estruc(ura de una a de ambas mohkulas,
antes de que las superficies interactivas puedan adaptarse una a la otra, de for-
ma que a menudo las dos moleculas que colisionan se separaran una de la otra,
sin lIegar a unirse. En ambos casas, cuando las dos moleculas interactivas se han
acercado suficientemente una a la aim, forman entre elias mUltiples enlaces d~
biJes, que persislen hasta que el movimiento termico aJ azar hace que las mole-
culns se disocien de nuevo (Figura 3-3).
Par regia general, cuanta mas fucrtc es la uni6n de las rnoleculas que forman
cl complejo, lanto mas baja es su velocidad de disociaci6n. En un casa extrema,
la energfa total de los enlaces formados puede ser insignificanle en comparaci6n 100 nm
can la del movimiento lemlico, par 10 que las dos moleculas se disociaran tan nt- Figura 3-8 MacromolOCulas en el
pidamente como se han unido. En el otro caso extremo, la energfa (otal de los en- cltoplasma celular. FJ dibujo esta hecho
laces es tan alta que la disociaci6n se produce muy raramente. Las interacciones aproximadamente a escala, e ilustra eI
abarrotamiento que existe en el
fuenes se producen en la reluJa cuando la funci6n biol6gica requiere que las dos
citoplasma Onicamente se represeman
macromoleculas permanezcan estrechamente asociadas durante largo tiempo las macromol&ulas: los RNA se han
-por ejemplo, en el caso de una prote[na regu1adora que debe permanecer unida dibujado en azul, los nbosomas en
al DNA para inhibir la expresi6n de un gen. Las imeracciones dcbiles se producen verde y las proleinas en rojo. En el
cuando la funci6n requiere un cambia r.1pido de la estructura del complejo -por ciroplasma las macromolecuJas
ejemplo, cuando las dos protefnas que interaccionan han de cambiar de pareja, difunden de una (onna relativamente
durante los movimientos de una maquina proteica. lenta debido a que imern.ccionan con
muchas ouas macromoltkulas; por el
La constante de equilibrio constituye una medida contrario, las moltkulas pequei'ias
de la fuerza de interacci6n entre dos moltkulas5 difunden casi tan r;ipidamente como 10
hacen en cl a~;ua. (Adaptado a panir de
La fuerza exacta del enlace entre dos moleculas es un fndice uti! de la especifici- D.S. Goodsell, Trends ill Biocllem. Sci.
dad de su interaci6n. Para ilustrar c6mo se mjde la fuerza de enlace, considcre- 16:203-206, 1991.l

EJEMPlO:
Yelocided de COf\I!el'lte I< concentrllCiOn LI COI'aCenlreci6n de lID' moIecul. de II> que hay un. soI.lI ~
disoeillCiOn - de ditoeiae!6n de AB en u"" ~Iul. lrpb de mlImlfero Ide un yolumen .proxim.oo de
2000 pm~ IS .prOl<im,dllmente de 10-11 M.
....IOClded de dl$OCi-elOn _ ... IA81 Si esle cerul. eontiene 10'" copies dele proler", A y 10' copilll
de Ie prole'ne 8.
2
IAI_tO"'M y [81_10"'M
yeloeidad de conatente de I< eoneentracl6n I< coneentreci6n Supongemol qae te prote'l'le A II ul'le I Ie proteil'le 8 eon
asoeieci6n - uoeieci6n de A de B ul'le K _ 101M-'.
Ylloeidad de uociacl6n. 1co..1AI lSI Le relecl6n entre el numero de molilcules de A unida! y el
de molilculee de A libr.. ser' [ABlIIAI, y como
[A8l_ K[81 n01 M '1(10'" Ml _ 10
EN El EQUILIBRia; IAI
podemol "perer que dentro de III cillule de cede di.~
yeloeided de '$OC;acioo _ veloeid.d da di$OCiaclOn mol6eules de A que 58 helleo uoides. 8. UN> elltil litKe.
to..lAl [81 - loA IA8l
Repiti,ndo los cl>lculos ~re K .. 10'" M-'. obMfVeremos que
tA81 to.. K c:onsu1\le de equihbrio unite""nle elrede<lor de un. de eedll cien mol6eules de A
lAI181 ..... deben de ~1l'rM unides. 8.

1'1gun 3-9 Princlplo del equilibrio. El equilibrio entre las moleculas Ay BYel complejo AB se mantiene gracias aI balance entre las
dos reacciones opuestas indicadas en (I) y (2). Como se expresa en (3), la relaci6n entre la constante de asociaci6n y la dedisociaci6n
es igual a la coflStame de equilibria (10 para la reacci6n. Las mol&:ulas Ay Bhan de chocar para poder reaccionar por 10 que la
velocidad de sfntesis del complejo AB C5 proporcional al producto de las concentraciones individuales de los reactantes Ay B. Por eso
en 1'1 expresi6n final de Kaparece el producto IAI x IB], donde I ) indica "concentraci6n deMo
Como se ha definido tradicionalmente, en la ecuaci6n de un equilibrio qu(mico las concentracioncs de los productos aparecen
en el numeradory las de los compueslos que reaccionan, en el denorninador. As!, la constanle de equilibrio en (3) es para la reacc16n
de asociacion A + B -+ AB, mientras que la invcrsa de esta fracci6n serla la constallle de equilibrio para la reacci6n de disociacioll
AB -+ A+ B. Sin embargo, al rererirse a interacdones de uni6n scncilia, es menos conruSO hablar de constmlte tie afillidad 0 coflstaflte
de asociacion (en litros por mol); cuanto mayor es el valor de la conSlante de asociaci6n (K,.l, mayor es la fuerza de uni6n entre Ay B.
EI reclproco de K. es la constance de disor;iacion (en moles por iiuo); cuanto menor es el valor de la constanle de disociaci6n (KJ
mayor es la fuerza de uni6n entre Ay B.

100 Capitulo 3: MacromolecuJas: eslructura, forma e informaci6n

mas una reacci6n en la que la moltkula A se une a la moh~cula B. Esta reacci6n
continuara hasla alcanzar un PUllto de equilibrio, en el cualla velocidad de for- Tabla 3-3 La relacl6n entre las
dlferenclas de energfa IIbre y las
maci6n y 1a de disociaci6n son iguales (Figura 3-9). Las concelllraciones de A, de conslantes de equilibria
By del complejo AB en eSle punto de equilibria se pueden utilizar para determi-
nar una conSlanle de equilibria (K) para la reacci6n, tal como se explica en la Constanle de Energfa IIbre
Figura 3-9. Esla conStante recibe a veces el nombre de consliUlle de afinldad, y equlllbrio
deAB menos
habilualmente se lltiliza como medida de la fuerza de enlace entre dos moll~cu energfa libre
lAB] =K
las; cuanto mds fuerte sea el enlace. tanto mds elevado sera el vaJor de la cons deA+B
lante de afinidad. IAIiBI
(lilros/mol) (kcallmol)
La constante de equilibrio de una reacci6n en la que se en]azan dos mollku
las esta directamente relacionada con el cambio de energia libre estandar del 10' -7,1
enlace (60'). median Ie la ecuaci6n descrita en la Tabla 3-3. En eSla labia lam- 10' -5,7
bien se indican los valores de 60' correspondiemes a varios valores de K. En sis- 10' -4.3
temas biol6gicos, las constantes de afinidad para interacciones de enlace senci- 10' -2,8
110 norrnalmeme oscilan entre 1()3 y 10llliuosfmol; esto corresponde a energias 10 -1,4
de enlace en el intervalo de 4 a 17 kcalfmol, que puede provenir de unos 4 a 17 I o
enlaces de hidr6geno. 10-' 1,4
lO-z 2,8
10~ 4,3
Los litomos y las moleculas se mueven rlipidamente6 10 5,7
10~ 7, I
las reacciones quimicas de una celula tienen lugar a velocidades asombrosa-
mente elevadas. Una molecu]a de una enzima tipica, por ejemplo. cataliza unas Si 5C permite que la reacOOn A + B ~ Ue-
1000 reacciones por segundo y aJgunas enzimas como la catalasa pueden conse gue al equilibrio. las canlidades relativas
guir velocidades de mas de 1()6 reacciones por segundo. Cada reacci6n requiere de A. B y AS dependentn de las diferen
que una molecula de enzima se encuemre con otra de substrato, por 10 que velo cias de energfa libre. 6(7. entre ellos. los
vaiores de la tabla conesponden a 3~
cidades como eslas 5610 son posibles gracias a que las moleculas se mueven a (3100t..1. Yestm calculados a partir de la
velocidades suficientemente rapidas. Los movimienlos de las moleculas pueden ccuaci6n
c1asificarse de forma general en tres calegorfas: (I) el movimiento de una mole-
cula de un lugar a Olro (movimienlo de translaci6n), (2) el rapido movimiento IABI
alras y adelante de los :l.tomos unidos de forma covaleme respeclo a OlrO (vibra- Ml'=-RTln--
ci6n), y (3) las rOlaciones. Todos estos movimiemos son importanles para unir o [AliBI
entre sf las superficies de moleculas que interaccionan.
lAB! ,-A(;" 1 frT -1'.(;"106138
Las velocidades de los movimientos moleculares pueden medirse por diver- --=e =e '
[AliBI
sas tecnicas especlrosc6picas. que indican que una gran prolefna globular esta
girando constanlemente, rotando sobre su eje, alrededor de un mil16n de veces Aqul. toG" viene dado en kllocalorlas por
por segundo. Las velocidades de enCllentros par difusi6n originados por movi- mol y repre5enta la dilerencia de energla
rnienlOs de lraslaci6n son proporcionales a la concentraci6n de la molecula que llbre en condiciones estandar (en las que
todos los componentes se hallan a con-
difunde. Si el ATP, por ejemplo, se haUa presente a su concenlraci6n illlracelular cCnlradones de 1,0 molesflitro); T cs la
habitual de I mM, cada lugar de una molecula proteica sera bombardeado con temperatura en grados Kelvin (oK).
moleculas de ATP por unas 106 colisiones aJ azar cada segundo. Para una con- Princlpios similares a estos se aplican in-
celllraci6n de ATP 10 veces menor, el numero de colisiones descenderfa a 105 y eluso al easo mas sencillo de una reac-
ei6n A ~ A", segun el eual una molecula
asf sucesivamente. pucde inlerconvertirse entre dos estados
De forma eXlremadamente rapida, en cuanto dos moleculas han colisiona- Ay A' que se diferencian en un derto va-
do y se hallan en una orientaci6n relativa adecuada, puede producirse entre lor de IJ.G". En el equilibrio. la relacl6n
elias una reacci6n qufmica. Teniendo en cuenta 10 rapidamente que se mueven entre eJ mlmero de moleculas de ambos
tipos es igual a la relad6n
y reaccionan las moleculas, las velocidades de cataJisis enzimalica observadas
no parecen Ian eXlraordinarias. INI = e-I'.O"IR"f.
IAI
Los procesos de reconocimiento molecular As!. a panir deesta labia podcmos ver que.
nunca pueden ser perfectos? si la tnmsid6nA -tAO tiene un cambio de
energla llbre fa\'Orable de 4,3 kcal/mol.
Todas las moleculas lienen energia -Ia energia cinetica de sus movimienlos de en el equilibria habra mas de 1000 mole-
traslaci6n, de vibraci6n y de rotacion y la energfa potencial almacenada en sus culas en el esladoA' que en el csladoA.
distribuciones electronicas. A traves de las ooUsiones moleculares, esta energfa
se dislribuye aleatoriamente a (Odos los alomos presentes, de forma que la rna-
yorfa de alomos tendr.!n niveles de energia cercanos aJ valor media, y tan 5610
una pequena proporci6n de eUos presemaran niveles energelicos muy altos.
A pesar de que las oonforrnaciones 0 estados favorables que adople una molecula

Procesos de reconoclmiento molecular 101

senin las que supongan menor energfa libre (veanse pags. 78-79). como conse-
cuencia de colisiones extraordinariamente violentas se producen estados de alta
energfa. Es posible calcular la probabilidad de que, a una temperatura dada un
atomo 0 una molecula este en un estado de una determinada energfa (vease Ta-
bla 3-3). La probabilidad de un estado de alta energfa disminuye respecto a la de
uno de baja energfa a medida que la diferencia entre los valores de la energfa Ii-
bre de ambos aumenta. Sin embrago, esta probabilidad unicamente es igl.lal a
cera cuando la diferencia de energfa es infinita.
Debido a que las colisiones moleculares son fortuit as, de vez en cuando
ocurren pequenas "reacciones secundarias". A consecuencia de ello, una celula
comete errares continuamente. Se produciran ocasionalmente incluso las reac-
ciones que son energeticamente muy desfavorables. Por ejemplo, dos aromos
unidos uno al otro por un enlace covalente, pueden ocasionalmente estar so-
metidos a una energfa especial de colisi6n, y separarse. Analogamente. la espe
eificidad de una enzima por su substrato no puede ser absoluta ya que el reeo-
nocimiento de una molecula como diferente de otra nunca puede ser perfecto.
Unieamente se podrfan evitar por completo los errores si la celula desarrollara
mecanismos que tuvieran diferencias de energfa infinitas entre las alternativas.
Puesto que esto no es posible, las celulas se yen forzadas a toterar un cierto nivel
de error, y han desarrollado una gran variedad de reacciones espeeiales de repa-
raci6n para corregir los errores mas perjudiciales.
Por otro lado, los errores son esenciales para la vida. Si no fuera par las equi-
vocaciones ocasionales en el proceso de mantenimiento de las secuencias de
DNA, probablemente la evoluci6n no habrfa tenido lugar.

Resumen
La secuencia de subunidLuies de una macromotecula contiene una inJontlacwn que
determina el perfil tridimensional de su Silperfkie. Este perfil, a Sil vez, controla el
reconocimlento entre una molkula y otra 0 entre distintas zonas de una misma
molkuia, mediante enlaces dibiles, no covalentes. Las fuerzas de atraccwn son de
cltatro tipos: enlaces 16nicos, atracciones de van der Waals, enlaces de hidrogeno e
interacciones entre grupos no polares causadas par su expulsiOn hidroJ6blca del
aglut. Dos molkulas se reconocerdn Ilna a otra mediante un proceso en el que pri-
mero se encuentran por difusiOn al azar, se unen de Jonna transitorla y luego se dl-
socian. Generalmente, la Jilerza de esta interaccwn se expresar ell Jonna de una
constante de eqllillbrio. Puesto qlle la linica manera de conseguir que el reconocl-
miellto sea InJalible consiste en hacer que la energfa de enlace sea infinitamente
grande, las cilllias vivas constantemente cometen errores; los que son intolerables
son corregidos mediante procesos especiales de reparacwn.

A.cidos nucleicos
Los genes estan formados por DNA9
Desde que el hombre ha sembrado cosechas 0 ctiado animaJes, resulta obvio que
cada semilla 0 cada 6vulo fecundado debe de contener escondido un plan 0 dise-
no para el desarrollo del organismo. En la epoca modema, la ciencia de la genetica
se desarroll6 alrededor de la premisa de que existfan onos elementos invisibles
portadores de informaci6n, denominados genes, que son distribuidos a cada una
de las celulas hijas cuando la celula madre se divide. Por consiguiente, antes de di-
vidirse una celula ha de hacer una copia de sus genes para pader ceder a sus celu-
las hijas una colecci6n completa de ellos. Los genes de los espermatozoides y de
los 6vulos transmiten la informaci6n genetica de una generaci6n a la siguiente.
La herencia de los caracteres biol6gicos debe implicar la existencia de es-
quemas de <llamos que sigan las leyes de la ffsica y de la qufmica: en atras pala
bras, los genes deben estar formados por moteculas. Al principia, la naturaleza

102 Capftulo 3: Macromolecu]as: estructura, forma e informacion

de eSlas moltkulas resultaba diffcil de imaginar. iQU~ Iipo de molecula podrfa
ser almacenada en una celula, dirigir las actividades de un organismo en desa-
rroUo y ademcts sercapaz de una replicaci6n exacla y casi i1imilada?
Hacia finales del siglo XIX, los bi610gos habfan reconocido ya que los trans
ponadores de la informaci6n hereditaria eran los cromosomas que resullan visi-
bles en el nueleo cuando una c~lula empieza a dividirse. Pero la evidencia de
que es el ctcido desoxirribonucleico (DNA) de estos cromosomas la substancia
de la que estern formados los genes se obtuvo mucho mcts tarde a partir de unos
estudios sobre bacterias. En 1944 se demosrr6 que la adici6n de DNA purificado
de una cepa de bacteria a otra cepa tigeramente diferenle, conferfa a esta segun
da cepa propiedades heredilarias caracteristicas de la primera. Como hasla en
tonces se habfa crefdo que tan s610 las prolefnas presentaban una complejidad
conformacional suficiente como para ser ponadoras de la informaci6n gen~tica,
este descubrimiento conslituy6 una sorpresa y no fue aceptado de forma gene-
ral hasta principio de los afios 1950. Acrualmente, la idea de que el DNA contie-
ne la informaci6n genetica -almacenada en su larga cadena de nucle6tidos- es
tan fundamental para el pensamiento biol6gico que a veces rcsulta diffcil darse
cuenta del enorme abismo inteleClual que llen6 este concepto.

Las moleculas de DNA consislen en dos largas cadenas

unidas por pares de bases complemenlarias 1o
AI considerar la simpUcidad de la qufmica del DNA resulta comprensible que los
genetistas ruvieran dificuhades en aceplar que el DNA es la csencia de los genes. Figura 3-10 La doble h~Uce de DNA.
Una cadena de DNA es un largo polfmero no ramificado, compueslo unicamente (A) Una corta seccilin de la doble
por cuatro tipos de subunidades. Estas subunidades son los desoxirribonucle6ti- h~lice del DNA. Se presentan cuatro
dos que contienen las bases adenina (A), citosina (0, guanina (G) y tintina m. pares de bases complementarias. Las
bases se representan en gris y los
Los nucJe6lidos estctn unidos por enlaces covaIentes fosfodiester entre el carbona
azlkares desoxiribosa en azul. (8) La
5' de un grupo desoxirribosa y el carbona 3' del siguienle (Panel 2-6, pctgs. 60-61).
ht!:lice vista desde uno de sus extremos.
Los cuatro tipos de bases eSlern fijados a esla cadena de azucar fosfalo repetitiva, Nlitese que las dos hebras del DNA
casi como cuatro tipos diferentes de cuentas ensanadas en un coUar. avanzan en direcciones opuestas y que
iC6mo una larga cadena de nucJe6tidos puede codificar las instfUcciones cada par de bases se manliene unido
para lodo un organismo, 0 incluso linicamente para una sola c~lula? Y, ic6mo por dos 0 Ires enlaces de hidr6geno
pueden copiarse estos mensajes de una generaci6n de celulas a la siguiente? Las (~ase lambit!:n Panel 32. pags. 104
respueslas se hallan en la estructura t.ridimensional de la molecula de DNA. 105).

final S'de til

oode" e~tremo S' arriba

eje de Ie
"fliu

" 3'0
01
)"-....0
o

aZUellr

~
o
O-~,O-
o enlace
enteeede
,?:.=:J\ fosfodiesler
.... r extremo
hidrOgeno lou 3' arriba
IAI 181

ACldos nucleicos 103

 DNAYANA ESQUELETO DE AZUCAA FOSFATO DEL ANA
En esta mitad del panel sa presents Ie
estructura del ANA y en Ie otre mitad G,)-----,base
Ie del DNA. Tanto el DNA como el ANA
son polimeros lineales de nucleotidos
(....ease Panel 2-6. poigs. 60-61). EI RNA
sa diferencia del DNA en Ires aspectos: ribose

1. Ie columna vertebral de azucer

fosfato presenta ribose en lugar de BKtremo 5'
desoxirribosa
aI'

r:
2. presents Ie base de uracilo (U) en
lugar de limine (T) o\ ".-cr10
,~o
3. existe en forma de habra sancilla a'" \
o~) N " , " ,o'f\
en luger de una haliee de dabls
habra.
o G'(\1.Iii-....
! union 3' union 5' ! \ 0 .......
j V.......
enlace foslodiesler 0"'" \
Cf

LAS CUATAO BASES DEL ANA

guanine cito.ina adenine

a
II 1"'
C
H............. C, ...... H
Nr "'c "",N~
II ~CH
N C

~
0-7 'N ........
,~
'H H/
I
C
"'''N'' C - 'C..
_1-
HE BAA SENCILLA DE ANA
EI RNA as una habra sancilla, para presenta conas zonas de
apareamientos de bases complementarias que pueden formarse
por un proceso al azar. Estas regiones de apareamiento de bases
pueden verse en electronmicrografias como ramas de la
cadena extendida.

ELECTAONMICAOGAAFIA DEL ANA

esqueleto azucar fosfato

(COr1es{a de Peter Welieuer.1

104 Pane;l32 Estrueturasdel DNA ydel RNA.

 ESQUELETO DE AZUCAR FOSFATO DEL DNA LAS CUATRO BASES DEL DNA FORMANDO
DOS PARES DE BASES
r.;:l---~--~b8se
e~tremo S'

desoxirribose

,,0

C
N
0 N &<\EInl~ N

..I _".H_..I _. 3, (
esqueleto de ezuc8r fosfato

La formaci6n especifica de enlaces de hidr6geno entre

G y C y entre A V T (A y U en 91 RNA) genera los peres
de bases complementaries.

DOBLE HELICE DEL DNA

En una molecule de DNA, sa
encuenlran apareadas dos 3'
cadenas antiparalelas cuyas
secuencias de nucle6tidos son
complementaries, generando
una doble helice dextr6gira
de aproJ(imadamente 10 pares
de nucle6tidos por vuelte de Ie
haliee. En Ie parte superior de 5'
asia figure se presents una 5'
ilustraci6n esqueml!ltica y en
Ie inferior un modelo llano
de 18 doble hal ice del DNA.

6strra principal OSIris se<:undaria

 A principios de los alios 1950, analisis por difracci6n de rayos Xde muestras CCCTGTGGAGCCACACCCTAGGGTTGGCCA
de DNA estiradas hast'a conseguir libras, sugirieron que la molecula de DNA es ATCTACTCCCAGGAGCAGGGAGGGCAGGAG
un polfmero helicoidal (ormado por dos hebras. No era sorprendenle que el CCAGGGCTGGGCATAAAAGTCAGGGCAGAG
CCATCTATTGCTTACATTTGCTTCTGACAC
DNA tuviera una estructura helicoidal pues, como ya hemos visto, es muy fre-
AACTGTGT'I'CACTAGCAACTCAAACAGACA
cueme la formaci6n de una helice si cada una de las subunidades vecinas de un CCATGG'I'GCACCTGACTCCTGAGGAGAAGT
polimero esta onentada regularmente. Pero el hecho de que el DNA tenga dos CTGCCGTTACTGCCCTGTGGGGCAAGGTGA
hebras fue crucial. Constiruy6 el dato que condujo, en 1953, a la construccl6n de ACGTGGATGAAGTTGG'l'GGTGAGGCCCTGG
un modelo que se adaptaba al esquema de difracci6n de rayos X observado y, GCAGGT'I'GGTATCAAGGTTACAAGACAGGT
can ella, solucionaba el rompeeahezas de la eshUctura y de la funci6n del DNA. TTAAGGAGACCAATAGAAAC'I'Q>GCATGTG
GAGACAGAGAAGACTCTTGGGTTTCTGATA
Un rasgo esencial del modelo consistfa en que todas las bases de la molocula
GGCACTCACTCTCTcGCCTATTGGTCTAT
de DNA se haUan en el interior de la doble helice, mientras que los arucares fosfa- 'MTCCCACCC'I'TN:iGCTGCTGG'I'GGTCTAC
to se disponen en el exterior. Esta distribuci6n supone que las bases de una de las ~TC'I"TTGAGTCCTTT
hebras deben estar extraordinariamente cerca de las de la 01Ta hebra, y el modele GGGGAT'CTGTCCACTCCTGATG:TGT1'ATG
propuesto requerfa un apareamiento complementario entre una base ponca (A 0 GGCAACCCTAAGGTGAAGGCTCATGGCAAG
~AGTGATOGCCTG
G, cada una de las cuales presenta dos anillos) de una de las cadenas y una base
~CTTT
pirimidInica IT 0 C, cada una de las cuales presenta un solo anillo, por 10 que es
de menortamafio que una base pUrica) de la otta cadena (Figura 3-10). c=ACGlGGA~
Tanto la evidencia obtenida a partir de los primeros experimentos bioquf- AGTCTA~rGlIIICIlIOC
micos como las condusiones derivadas de los modelos moleculares sugirieron eCl ICI I I IClAI'GGTTAAGrTCAn:JrCA.T
que el apareamlento de bases complementarlas (tambicn llamado pares de ba- ~IW;N;a;T~

ses de Watson y Crick) se formaran entre A y T por un lado y entre G y C por otro. AGM.'1'GGGAAACAGACGTGA'I'TGCATCA
GTG'rGGAAG1'Ct'TCGT'lTrAGTI'TC
Los anlilisis bioquImicos de preparaciones de DNA de diferemes especies han
'MT1'ATT1'GC1'GT1'CATAACAATTGTTTTC
demostrado que, a pesar de que la composici6n de nucle6tidos del DNA varia 1 I 1 IGn IM1'TC'I'TGCl I ICI lilt t I tI
notablemente (por ejemplo, desde un 13% a un 36% de residuQs de A en el DNA CTTCTCCGCM.1'TTTTACTATTATACTTAA
de diferentes tipos de bacterias), se cumple una regia general que dice que, TGCCTTAACA'M'G'l'GTATAACAAAAGGAAA
cuantitativamente, IGI =ICI y (AI =ITI. La conshUcci6n de modelos moleculares TATC'1'CTGAGA.TACATTAAGTAACT1'AAAA
revel6 que el nl1mero de enJaces de hidrogeno efectivos que pueden formarse AAAAAJ::TTTACACAGTCTGCCTAGTACATT
ACTA'1'1'TGGAATATATGTGTGCTTATTTGC
entre G y C 0 emre A y T era mayor que para otra combinaci6n cualquiera de es ATATTCATAATCTCCCTACTTTATTTTCTT
tas bases. Asf pues, el modelo de doble Mlice para el DNA explicaba de forma TTAT'lTTTMTTGATACATMTCATTATAC
elegame la bioqufmica cuantitativa. ATATTTATGGGTTAAAGTGTAATGTTTTM
TATGTGTACACATATTGACCAAATCAGGGT
AATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCT
La estructura del DNA proporciona una explicaci6n TTCTTCTTTTAA"fATACTTTTTTGTTTATC
del proceso de la herencia 11 TTATTTCTAATACTTTCCCTAA"fC'l'CTTTC
TTTCAGGGCMTAATGATACAATGTATCA"f
Un gen comiene informaci6n biol6gica en una forma que ha de ser copiada GCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATMCAG
exactameme y transmitida desde cada cclula a todas sus celulas hijas. Las imp Ii TGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAAT
caciones del descubrimiento de la doble helice del DNA rueron imponantes, ya AT'I'TCTGCATATAAATATTTCTGCATATAA
que la estructura suglrl6 inmediatamente c6mo se efectuaba la transfercncia de ATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTG
CTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTC
informaci6n. Puesto que cada hebra contiene una secuencia de nucle6tidos que
TGCTTTTATTTTATGGTTGGGATAAGGCTG
es exactamente complemenlaria de la secuencia de nucle6tidos de la otra hebra, GATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTT
en realidad ambas hebras contienen la misma informaci6n genetica. Si llama- GCTAATCATGTTCATACCTCTTATCTTCcr
mos a las dos hebras A y A', la hebra A puede servir de molde 0 patr61l para pro- CCCACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTCTG
dllcir una nueva hebra A', mientras que de la misma forma la hebra A' puede mi- TGTGCTGGCCCATCACTTTGGCAAAGAATT
lizarse para producir una nueva hebra A. Asf, la informaci6n genetica puede ser CACCCCACCAGTGCAGGCTGCCTATCAGAA
AGTGGTGGCTGGTGTGGCTAATGCCCTGGC
copiada mediante un proceso en el cualla hebra A se separa de la hebra A' per-
CCACAAGTATCACTAAGCTCGCTTTCTTGC
mitiendo que cada una de ambas hebras sirva de patr6n para la producci6n de TGTCCAATTTCTATTAAAGGTTOCTTTGTT
una nueva hebra complementaria. CCCTAAGTCCAACTACTAAAC~TA
Como consecuencia directa del mecanismo de apareamiento de bases, re- TTATGAAGGGCCTTGAGCATCTGGATTCTG
suha evidente que el DNA contiene informaci6n gracias a la secuencia lineal de CCTAATAAAAAACATTTATTTTCATTGCAA.
TGATGTATTTAAATTATTTCTGAATATTTT
ACTA.a..a_".AGGGAA.TG1'GGGAGGT'CAG'r
TTTAAAACATAAAGAAATGATGAGCTGTTC
Flgun 3-11 Secuenda del DNA del gen humano que codJDca la Il-globlna. AAACCTTGGGAAAA TACACTATATCTTAAA
EI gen codifica una de las dos subunidades de la molecuta de Ia hemoglobina, C"rCCA~

que en todos los indivlduos adultos rranspona el oxfgeno por 1a sangre. crM'l'GCACA~CCTGA'l'GC
CTATGCCTTATTCATCCC1'CAGAAAAGGAT
Solamente se presenta la secuencia de una de las dos hebras del DNA (1a
TCTTGTAGAGGCTTGATTTGCAGGTTAAAG
~cadena codificanle"l, ya que Ia om Dene la secuencia complemenlaria. La
11 I lOCTATGCTGTATTTTACATTACn'AT
secuencia debe leerse de izquierda a derecha y en Uneas sucesivas de arriba a
TGTTTTAGCTGTCCl'CATGAATGTCI 1I It:
abajo de la p4gina, como si se tratara de un tenD !lonnal en espano!.

106 Caprtulo 3 : MacromoltkuJas: eshUctura, forma e informacl6n

 Clldenll plltr6n 3' Figura 3-12 Sfntesls de DNA. La
adici6n de un desoxirribonucle6lido al
clldllna reci'n extremo 3' de una cadena
5' sintetizlldll
polinucleolidica es la reacci6n
fundamental a traves de la cuaJ se
sintetiza el DNA. Como se muestra en
0 'fH' la figura, es el apareamiento de bases
BASE
I I 11111 BASE 0,
entre el ribonucle6tido que se anade y
,
O""p-O-
una hebra ya existenle de DNA (la
0
hebra patron) 10 que condiciona que la
nueva hebra de DNA tenga una
secuencia de nucle6tidos
BASE 0 ,
CH, compiemenraria.
11I1I1I1 BASE
0,
O-p-o-
,
0

000
II II II L,=,--,IIIIIIIIIl--='ASE=-------.J
-O-P-O-P-O-P-O-CH
I I I 2
0- 0- 0-

OH
~-------'~' 0 ~H2
daSOKirribonucle6aido trifoafato qua antra BASE 0
O..,P-o-
,
o

sus nucle6tidos. Cada nucle6tido -A, C, ToG- puede ser considerado como una
letra de un alfabeto sencillo de cuatro letras que es utilizado para escribir los
mensajes biol6gicos en forma lineal en una ~cinta de teleimpresora". Los orga-
nismos se diferencias entre sf porque sus respectivas moleculas de DNA poseen
diferentes secuencias de nucle6tidos, y por consiguiente, diferentes mensajes
biol6gicos.
Puesto que el nllmero de posibles secuencias diferentes en una cadena de
DNA de 11 nucle6tidos de largo es de 4~, la variedad biol6gica que se puede gene-
rar utilizando una modesta longitud de DNA es, en principio, enorme. Una celu-
la animal trpica contiene un metro de DNA (3 x 109 nucle6tidos). Utilizando un
abecedario lineal de cuatro letras, un gen humano extraordinariamente peque-
no puede llenar una cuarta parte de una pagina de texto (Figura 3-11), mientras
que la informaci6n genetica exislente en una celula humana permitiria lIenar un
libra de mas de 500 000 paginas.
Aunque el principia en el que se basa la replicaci6n genica es elegame y
simple, la maquinaria real con la que se realiza esta copia en la celula es compU-
cada y esta compuesta par un complejo de prate(nas que forman una "maquina
de replicaci6n". La reacci6n fundamental es la indicada en la Figura 3-12, en la
que la enzima DNA polimerasa cataliza la adici6n de un desoxirribonucle6tido at
extrema 3' de una cadena de DNA. Cada nucle6tido anadido a la cadena es, en
realidad, un desoxirribonucle6sido trifosfato; la liberci6n del pirofosfato de este
nucle6tido activado y su hidr6lisis posterior proporcionan la energfa para la re-
acci6n de repllcacl6n del DNA, convirtiendola de forma efectiva en una reae-
ci6n irreversible.

Acldos nuclelcos 107

 La replicaci6n de una helice de DNA empieza por la separaci6n local de sus dobls htllics partsrne dB DNA
dos hebras de DNA complementarias. Cada hebra actua luego como patr6n para
la formaci6n de una nueva molecula de DNA, mediante la adici6n secuencial de
~

~
desoxirribonucle6sidos trifosfato. EI nucle6tido que debe ser anadido en cada
caso se selecciona mediante un proceso durante el cual se fonna un par de bases
complememarias con el nucledtido siguieme de la hebra patr6n madre, gene-
r~ndose as{ una hebra hija de DNA que tiene una secuencia complementaria a la
de la hebra patr6n (Figura 3-12). La infonnaci6n genetica se duplica en su totali-
A REPlICACION

dad -es deeir, se Ilegan a formar dos dobles helices completas de DNA, cada una
de las cuales es identica en cuanto a secuencia de nucle6tidos a la helice de DNA
madre que sirvi6 de pau6n. Puesto que al aeabar el proceso, cada molecula de
DNA hija esta fonnada por una cadena original y otra recien sillletizada, se dice
que el mecanismo de replicaci6n es semiconservativo (Figura 3-13).

Los errores en el proceso de replicaci6n del DNA

generan mutaciones lZ
Una de las caracterfsticas m-'s impresionantes de la replicacl6n del DNA es su
exactitud. Se utilizan diversos mecanisrnos "carrectores de galcradas" para eli-
minar llucle6tidos situados incorrectamente; como consccucncia de ella, la se-
cuenda de nucle6tidos de una lllolecula de DNA se copia con menos de Ull error
por cada 10'" nucle6tidos anadidos. Sin embargo, de vez en cuando la maquina-
ria de la repHcaci6n salta 0 ai\ade algunos nucle6tidos, 0 coloca Ulla T donde de-
berfa existir una C. 0 una A en lugar de una G. Cada uno de los cambios de este
tipo en la secuencia de DNA constituye un error genetico lIamado mutaci6n,
que seni copiado en todas las generaciones futuras de celulas, ya que las secuen-
clas de DNA "equivocadas~ se copian tan fielmente como las correetas". La htllices de DNA hijal:
consecuencia de un error de estc tipo puede ser muy importante, ya que un solo
cambia de un nucle6tido puede tener grandes efeetos sobre la celula, depen- Figura 3-13 La repllcacl6n
semlconservatJva del DNA. En cada
diendo dellugar donde haya oeurrido la mutaci6n.
cicio de replicaci6n, cada una de las
A principios de los anos 1940, los genetistas demostraron de fonna conclu- dos hebras de DNA son utilizadas
yente que los genes especifican la estructura de las protefnas. Por eso, una muta- como palron para la fonnaci6n de una
ci6n en un gen causada por una alteraci6n en la seeuencia de su DNA puede hebra complemenlaria de DNA. Por
acarrear la inactivaci6n de una protefna y no producir ningl1n efecto, por 10 que consiguieme, las hebras originales
se Ie llama muraci6n sifenciosa. Muy raramente, una mutaci6n origina un gen permanecen inalleradas a 10 largo de
con una funci6n util, mejorada 0 nueva. En este caso los organismos ponadores muchas gcncraciones celularcs.
de la mutaci6n tendrAn una vemaja, ya traves de la selecci6n natural el gen mu-
tado puede Ilcgar a substituir con cl ticmpo al gen original de la poblaci6n.

La secuencia de nucle6tidos de un gen determina la secuencia

de aminmicidos de una prote(na l3
EI DNA es relativamente inerte qufmicamente. La informaci6n que contiene se
expresa indirectamente a traves de ouas moleculas: el DNA dirige la sfntesis de
RNA especfficos y de moleculas de protefna que, a su vez, dctcrminan las pro-
piedades ffsicas y quimicas de la celula.
Aproximadamente aI mismo tiempo en que los biofisicos analizaban la es-
tructura tridimensional del DNA por difracci6n de rayos X, los bioqu[micos estu-
diaban intensamente la estructura qufmica de las protefnas. Se sabia ya que las
protefnas son cadenas de anlina<\cidos unidos por enlaces peptfdicos secuencia-
les, pero todavfa no se conoela con certeza que cada tipo de protefnas consiste
en una secuencia caracterlstica de aminoacidos; pero a principios de los ai\os
1950, cuando se lIeg6 a conacer la secuencia de la pequeiia proteina insulina
(Figura 3-14), se descubri6 que cada tipo de protefna consiste en una secuencia
de amino~cidos lipica. AI igual que el conocimiento de la estructura del DNA
ejerci6 una influencia crucial sobre la composici6n de la base molecular de la
genetica y de la herencia, la determinaci6n de la secuencia de la insulina conSli-
tuy6 la clave para comprender la estructura y la funci6n de las protefnas. Si la in-

108 Capftulo 3: Macromoleculas: eslructura, forma e Inform:tcl6n

Cadena A Figura 3-14 Set:uencla de
s, s, amln04c1dosde la Insullna bovina. La
G-I-V-E-a-C-C-A-5-V-C-5-L-Y-a-L-E-N~Y~C~N
, I , 21 insuJina es una protefna muy pequena
~ .....5 formada por dos cadenas
Cadena B 5, S,
P-V-N-O-H-l-C-G-S-H-l-V-E-A-l-V-L-V-C-G-e-R-G-F-F-Y-T-P-K-A polipeplfdicas. Wla de 21 y la olta de
, 30 30 residuos de a.minml.cidos. Cada
cadena presenta ulla secuencia de
aminoll.cidos caracteristica
delerminada gem'!ticamenle. Los
sui ina tenia una secuencia definida, geneticamente determinada, 10 mas proba- sfmbolos de una letra utilizados para
ble era que lambicn la luvieran las demas proteinas. Ademas, parecfa razonable nombrar los aminotcides son los que
suponer que las propiedades de una protefna dependerfan del orden exacto en se indican en el Panel 2-5, pll.gs. 58-59;
el que se hallaran dispueslos sus aminoacidos constituyentes. los enlaces s-s indicados en roja son
Tanto el DNA como las prolefnas estan compuestos por una secuencia lineal enlaces disulfuro enlte residues de
de subunidades, y el ana..lisis bioquimico de las protefnas producidas por genes cisleina.lnicialmenle la proleina se
mUlantcs demoslr6 que las dos secuencias son co-lineales --es decir, 105 nuc1e6- sinletiza como una unica larga cadena
tides del DNA esuin dispuestos en un orden que coresponde al orden de 105 ami- polipeptfdica (coclificada par un (jnico
noa.cidos en la prolefna que especifican. Result6 evidenle que la secuencia del gen), la coal se divide poslerionnenle
D A contiene una especificaci6n codificada de la secuencia prolcica. La prc- rormando las des cadenas.
gunta central de la biologfa molecular pas6 a ser entonces c6mo una celula tra~
duce una secuencia de nucle6lidos del DNA a una secuencia de aminoacidos de
una prolcfna.

Porciones de la secuencia de DNA se copian en moleculas

de RNA para guiar la sfntesis de protefnas l4
La sfntesis de una protefna implica copiar regiones especfficas del DNA (los ge-
nes) en otro lipo de polinucle6lido quimica y funcionalmente diferente, conoci-
do como tic1do r1bonuc1elco 0 RNA. AI igual que el DNA, el RNA esta compuesto
por una secuencia lineal de nucle6tidos, pero presenta dos pequei\as diferencias
qulmicas respeclo al DNA: (I) el esqueleto de azticar fosfato del RNA conliene r1-
bosa en Iugar de desoxirribosa, y (2) la base timina (n esta substituida por uraci-
10 (Ul, una base muy estrechamenle relacionada que tambien se aparea con A
(vease Panel 3-2, pags. 104-105).
El RNA contiene toda la informaci6n de la secuencia de DNA de la que ha
sido copiado y mantiene las propiedades del DNA de apareamiento de bases.
Las molcclilas de HNA se sintelizan a traves de un proceso conocido como
Iranscrlpcl6n del DNA, que en muchos aspectos se parece al de la replicaci6n
del DNA, ya que lIna de las dos hebras del DNA acttia como patr6n sobre el que
sc examinan las posibilidades de apareamiento de bases de los ribonucle6tidos.
Cuando se consigue un bllen ajllste con el DNA patr6n, el ribOtlllcle6tido es in-
corporado como una unidad ligada covalentemente. De esta forma. la cadena de
RNA que esta creciendo 10 hace llude6tido a nude6tido.
La transcripci6n del DNA se diferencia de la replicaci6n el DNA en varios
puntos imponantes. Por ejemplo, el RNA producido no permanece asociado al
DNA. Inmedialamente detras de la regi6n en la que se aftaden los ribonucle6li-
dos, la helice original del DNA se forma de nuevo y la molecula de RNA se sepa-
ra. Por consigl.liente. las moleculas de RNA tienen una sola hebra. Adem;\s, las
moleculas de RNA son relativamente cortas en comparaci6n con las de DNA, ya
que son copiadas a partir de una regi6n limilada del DNA -suficienle para pro-
dudr una 0 varias protefnas (Figura 3-15). A los transcrilos de RNA que dirlgen la
sfntesis de molcculas de prolefna, se les llama moleculas de RNA mensaJero
(mRNA). Otros Iranscrilos de RNA actUan como RNA de rransferellcia (tRNA) 0
bien forman los componenles del RNA ribos6mico (rRNA) 0 parlfculas ribonu-
deoproleicas mas pequei\as.
La cantidad de RNA sintelizado a partir de una regi6n delerminada de DNA
esta controlada por prote(nos regu/adoras de ta actividad genica. que se unen a
lugares especfficos del DNA cerca de las secuencias codifical1les de un gen. En
cualquier celula y en cualquier momelllo dado, algunos genes se esu1n ulilizan-

Acidos nucieicos 109

 EUCARIOTAS PROCARIOTAS
Figura 3-15 La transferencla de
lnfonnacl6n desde el DNA hasta la
.''''' proteina. La lransferencia tiene lugar a
travl!s de un Inlennediario de RNA
lIamado RNA mensajero (mRNA). En

.. ONA
~-.,....--
las c~lulas procariolas el proceso es
ro1s simple que en las celulas

mRNA
I TJlAHSCllO'OOH eucariolas. En eucariotas, las regiones
codificanles del DNA (situadas en los

proteitWI
I TJIAOUCCION
exones, dibujados en color) est.tn
separadas por regiones no codificantes
(Jlamadas inrrones). Tal como se indica
en la figura, eslos intrones pueden
eliminarse a tra~ de una reacci6n,

mRN'~A::~::::-:: C8lalizada por enzimas, de

maduraci6n por corte y empalme
~ TRADUCCION (splicing) del RNA, fonnando asf Wla
mol&:uJa de mRNA.

do para sinlelizar RNA en grandes cantidades mientras que otros genes no se

lranscriben en absoluto. En cada generaci6n celular, a partir de un gen activo
pueden sintelizarse centenares de transcritos de RNA a partir del mismo seg-
mento de DNA. Cada mollkula de mRNA puede ser traducida dando lugar a mu-
chas centenares de copias de una cadena polipeptidica, por la que la informa-
ci6n conlenida en una pequena regi6n del DNA puede dirigir la slntesis de
millones de copias de una proterna delenninada. La prorema jibro(na, por ejem-
1'10, es el componente mayoritario de la seda. En cada ~Iula de la glandula de la
seda, un solo gen de fibrofna genera I ()4 copias de mRNA. cada una de las cuales
dirige 1a sfntesis de 1(}'i mollkulas de fibrofna -produciendose un 10lal de l(}'t
moleculas de fibroina en 5610 4 dfas.

Las mohkulas de RNA de eucariotas son cortadas y

recombinadas, e1imin~ndose secuencias intr6n lS
En las c~lulas bacterianas la mayarra de las proteinas estAn codificadas por una
unica secucncia de DNA, larga e ininlerrumpida, que se copia sin ninguna alte-
raci6n 0 rnodificaci6n previa, producicndo una mohkula de mRNA. En 1977, los
bi61ogos rnoleculares quedaron asombrados ante el descubrimienlo de que la
mayorfa de los genes eucariotas presentan sus secuencias codificantes <Uamadas
exones) inlerrumpidas por secuencias no codificantes (Ilamadas inrrones). Para
producir una proteina, primcro sc transcribe lodo e[ gen, incluyendo tamo sus
intrones como sus exones y generando una molecula de mRNA muy larga --el
transcrito primario. Anles de que esta maJecula de RNA ahandone el nucleo, un
complejo de enzimas procesadoras de RNA elimina todas las secuencias de in-
trones produciendo asf una molecula de RNA mucha mAs corta. Despues de que
esla maduraci6n del RNA. Uamada madurad6n por corte y empalme del RNA
(RNA spUclng) haya concluido, la mollkula de RNA se desplaza hasta el citoplas-
rna conslituyendo ahora una molecula de mRNA que dirige la sfntesis de una
molecula de una proteina deterrninada (Figura 3-15).
Este sistema de transferencia de in(onnaci6n en eucariotas, aparentemente
ruinoso, se ha desarroUado probablernente debido a que supone que la sfntesis
de prolerna es mucho mas versalil. EI transcrilo primario de RNA de algunos ge-
nes, por ejemplo, puede madurar por corte y empalme de diferentes fonnas,
produciendo diferentes rnRNA dependjendo del tipo de celula y del estadio de
desarrollo. EsIO permite sintetizar diferentes protefnas a partir del mismo gen.
AdemAs, como la presencia de numerosos intrones facilita los procesos de re-

110 Capftulo 3: Macromoleculas: cstructura, fonna e informacl6n

 1.- posici6n 2.- posici6n 3." posici6n
Figura 316 EJ c6dlgo genetlco, En el
(ox1:romo 5') (oxtromo 3') transcurso de la sfntesis proteica, los
I U C A G I grupos de tres nucle6tidos (codollcs)
de una rno1ecula de mHNA son
lraducidos a aminmtcidos de acucrdo

U
Ph. Soc Ty, C" U
Ph. Soc Ty, C" C con las rcglas indicadas aquf. Los
L" Soc STOP STOP A codones GUG y GAG, par ejemplo. se
L" Soc STOP T', G
traducen a v;\lina ya acido glutamico
respectivamcnte, Observese que los
L" Pm His A,g u codones que presentan U a C como

C L"
L"
L"
P,o
P,o
Pm
His
Glo
Glo
A,g
A,g
A,g
A
G
C segundo nucle6tido tienden a codificar
los aminoacidos mas hidrof6bicos
(comparese con el Panel 2-5,
pags.58-59).

A
110 Th, Aoo Soc U
II. Th, Aoo Soc C
II. Th, LV' A,g A
Mol Th, LV' A,g G

V.I AI. Ao,

G
G' U
V" AI. Ao, Gly C
V.I Alo GI, Gly A
V.I AI. GI, Gly G

combinaci6n genetica entre exones, probablemence este lipo de disposici6n ge-

niea ha side extraordinariamente importante en los albores de la histeria de la
evoluci6n de los genes -acelerando los procesos por medio de los cuaJes los or-
ganismos desarrollaron nuevas protefnas a partir de partes de otras ya existen-
les, en lugar de tener que desarrollar completamente nuevas secllencias.

Las secuencias de nucle6tidos del mRNA son "Iefdas" en grupos

de tres y traducidas a amino<icidosl 6
Las reglas a traves de las que se traduce la secuencia nllcleotfdica a seeuencia de
aminoi1eidos de una prolefna, el denominado c6dlgo geneHco, fueron descifra- 5' r
das a principios de los an os 1960, Se demostr6 que la seeucncia de nucle6tidos ,~~~~!AU
de la molecliia de mRNA que actua como intermediario, era lefda en orden eon-
-leu-S,,--v.I--Thr-
secutivo. en grllpos de tres, Cada triplete de nucle6tidos, denominado lin cod6n,
determina un aminoacido. Puesto que el RNA es un polfmero lineal de euatro
=
nucle6tidos diferentes, existen 4 3 64 tripletes de cod6n pasibles (recllerdese
que 10 importante es la secucl1cia de nllcle6tidas de un triplete). Habitualmente
en las protefnas tan s610 se encuentran 20 aminoacidos diferentes de mado que - Ser--A"--L,,--Pro-
la mayorfa de aminoacidos deben ser especificados por varios codones; es decir,
el c6digo genetieo es dcgencmdo, El e6digo (ilListrado en la Figura 3-16) ha sido
altamente conservado a traves de la evoluci6n: con pocas excepciones, es igllal 3 ..... ~ ~ iollol.Iio ioli.Il.IIo
en organismos tan diversos como las bacterias, las plantas y el hombre, - Gln-A,g--Ty,-Hi.-
En principio, cada secllencia de RNA puede ser lefda siguiendo una de las
tres posibles palaas de tectum diferentes que pueden darse segUn ellllgar en que Figura 317 Las tres pautas de lectura
empiece el proceso de deeadificaci6n (Figura 3-17). En easi lodos los casos uni- posibles en la senlesls proleica. En el
camente L1na de estas pautas de leelura prodllcini una protefna ftmcionaJ, Pues- proceso de traducci6n deuna
to que no exjsten signos de puntuaci6n salva al principio y al final del mensaje secuencia de nucle6tidas (awl) en una
de RNA, la pauta de lectura se eSlablece en el inicio del proceso de tradllcci6n y secuencia de amillmicidas (IJerdeJ,la
se mantiene a partir de enlOnces. secuencia de nucle6tidos de un mRNA
es lefda desde el extrema 5' hacia el
extrema 3', en grupos consccutivos de
Las moteculas de tRNA emparejan los amino<icidos 3 nucle6tidos. Par consiguiente, segl1n
con los grupos de nucle6tidosl 7 cua! sea la "paUla de lectura" utilizada,
cada secuencia de RNA puede
Los cod ones de una molecula de mRNA no reconoeen directamente los amino- codificar, en principio, Ires secuencias
acidos que especifican, como haeen las enzimas con su substrata, La traduccl6n de aminoacidos completamente
de un mRNA a protefna depende de una molecula "adaptadora" que reconoce difercntes entre sf.

Acidos I1uclcicos III

 nucl&6tido 1 nucl&6tido 76
union del .minokldo
(eKtremo J'
con un

"'58:=~~~~~
nucl&6lldo 711 aminoacido
(elctremo J') 5518 unido)

nucleotido 1 58-"
(extrema 5')

G
,,-<6;=====
239 - ,I----10.a5

...
4s.-10'-----
",----
H

inleraccion..
poco habitual..
enlre bMM

'81 anlico06n lei

un amino~cido y un gropo de tres nucle6lidos. Estos adapladores son un gropo Figura 3-18 tRNA para Ja fenUalanlna
de pequei"tas mol~ulas de RNA conocidas como RNA de transferencia (tRNA). en Jevadura. (AI La molenl1a esta
cada una de las cuales liene una longitud de unos 80 nucle6tidos. dibujada adoptando una
Una molt'icula de IRNA presenta una confonnaci6n tridimensional plegada, conformaci6n de "cruce en trebor
Que se mantiene en parte por interacciones no covalentes de apareamientos de para dCSlacar los pares de bases
bases como las Que manlienen unidas las dos hebras de la ht'ilice de DNA. Sin complementarios (harras grises carlas)
que se forman en regiones helicoidales
embargo, en la mol~cuJa de IRNA. Que es de una sola hebra, los pares de bases
internas de la molecula. {B) Se muestr.l.
complementarios se forman entre residuos de nucle6tidos de la misma cadena. en forma de esquema la conformad6n
la cual hace Que la mol~cula de tRNA se pLiegue de una forma caraclerfSlica. Que real de la molecula, basada en anaIisis
es importanle para su funci6n de adaplador. Cuatro cortos segmentos de la mo- por difracd6n de rayos X. Los pares de
I~cula presenlan una estructura en doble h~lice, dando lugar a una mol~cula bases complementarios se indican
que parece un "cruce en lr~bol~ en dos dimensiones. Esle cruce en Irebol esta como oorras grises largas. Ademas, en
mas plegado formando una conformaci6n en forma de L que se manliene por roja se presentan los nucle6tidos que
interacciones de enlaces de hidr6geno mas comptejas (Figura 318). En cada ex- panicipan en interacciones no
tremo de la "L" exislen dos grupos de residuos de nucle6tidos desapareados, habituales de apareamiemo de bases y
que son especialrnenle importantes para la funci6n de la molecula de IHNA en la que mantienen unidas diferemes
s(nlesis de protefnas: uno de los grupos forma el Clmicod6f1, cuyas bases pueden zonas de la rnolecula. Eslas parejas
aparearse con las de un triplete complementario de una molecula de rnHNA eel estan numeradas y conecladas por
/flleas de color rojo tanto en (Al como
cod6n), mientras que La secuellcia CC4 del extremo 3' de la molecula de tllNA
en (B). En (B) los pares de bases estan
esta unido de forma covalentc a lIna secllcncia de aminoacidos (Figura 3-l8A). nurnerados. (e) Una de las
intcracciones de apareamiento de
EI mensaje de RNA se lee de un extremo aI otro bases poco habituales. Aqu1, una base
por un ribosomal 8 intcracciona a traves de enlaces de
hidr6geno con olras dos; algunas de
EI proceso de reconocimiento de los codones, Que transfiere 13 informaci6n gc- eSlas Mtriples bases~ colaboran para
netica del mRNA vfa tRNA a la proterna, depende de inleraccioncs entre pares de manlener plegada esta molecula de
bases del mismo tipo de las que median la transferencia de informaci6n geneti- tRNA.
ca del DNA al DNA ydel DNA al RNA (Figura 3-19). Sin embargo, la mec~nica de
ordenaci6n de las mol~culas de tRNA sobre el mRNA es complicada y requiere
de la presencia de un rlbosoma, que es un complejo de m~s de 50 prolefnas di-
feremes asociadas a varias mol~cuJas de RNA estruClural (rRNAl. Cada ribosoma
es una gran m~quina sintetizadora de prolefnas en la Que las moltkulas de IRNA
se colocan por sf mismas para leer el mensaje gen~lico codificado en la secuen-
cia de las mol~ulas de mRNA. El ribosoma encuenlra primero un punlo especf
fico de inicio en la mol~ula de mRNA, Que establece la paula de lectura y deter
mina el extremo amino terminal de la prolefna. Luego, a medida que el
ribosoma se desplaza a 10 largo de la moltkula de mR A, va lraduciendo, cod6n
a cod6n, la secuencia de nucle6lidos a secuencia de amino~cidos, utilizando

112 Caprlulo 3: Macromolkulas: estructura, fonna e informaci6n

 E
5'
"iif~~Jl"i1i1ii,i!i~m~R~N~A
U A A AGe G U G A
3'

DNA 5'

i
z

T'- A
c
C
c
c

~
Pro
cadena de
mRNAen
5' :recim;ento tRNA emrante,
.lltrlrno.-",,::::c:-::::::::-:-:::::-- eldremo ellrgMto con un
amino - cadena pollpeploda carboxHo aminokido
IAI '81 IIfl crecimiento

moleculas de tRNA para ai'\adir aminoacidos al extrema por el que In cadena po- Figura 3-19 Aujo de informacIOn en
Jipeptfdica esta creciendo (Figura 3-20). Cuando un ribosoma tlega a1 final del III sfntesls proteica. (A) Los nucle6ddos
mensaje. tanlO ~I como el extrema carboxilo terminal de la protefna reci~n sintc de 1a molkula de mRNA se unen
tizada se Jiberan del extrema 3' de la moJecuJa de mRNA y quedan libres en el ci- formando una copia complementaria
toplasma. de un segmento de una hebra de DNA
Los ribosomas actuan con una eficiencia notable: en I segundo. un solo ri- (B) Luego, estos nucle6tidos, en grupes
bosoma bacteriano anade aproximadamente unos 20 aminoacidos a una cadena de trcs. se unen a conjuntos
polipeplfdica en formaci6n. En el Capitulo 6 se ofrecen mas detalJes sobre la es- complementarios de tres nucle6ddos de
la regi6n anticod6n de delenninadas
tructura de los ribosomas y sabre el mecanisme de la sfntesis prOleica.
mol~las de tRNA En el oun extremo
de cada dpo de las molecuJas de !RNA,
Algunas mol~u1as de RNA actuan como catalizadores l9 un aminoocido detenninado se
mantiene unido a tTaves de un enlace de
TradicionaLmente se ha considerado que las moltkulas de RNA son simples cade- aha energia, ycuando se produce el
nas de nucle6tidos. con una qumica relativamente poco interesante. En 1981. apareamiento, este aminoacido es
esta concepci6n qued6 destrozada por el descubrimiento de una molecuJa de anadido a1 extremo en crecimiento de la
RNA con actividad cataHtica, con un tipo de reactividad qufmica tan sofisticada cadena proteica AsLla traducci6n de la
como la que los bioqllfmicos habran asociado exclusivamente a las prote{nas. Las secuencia de nucle6tidos del mRNA a
moleculas de RNA ribos6mico de los protozoos cHiados Tetrahymena se sinteti- una secuencia de aminrnkidos depcnde
zan inicialmente como un largo precursor. a partir del cua! se sintetiza uno de los del aparamiento de bases
rRNA por una reacci6n de corte y empalme (splicing) del RNA. [...1 sorpresa surgi6 complernentarias entre un cod6n del
mRNA y eJ anticod6n correspondiente
ante e[ descubrimienlo de que eSla reacci6n de corte y empalme podfa desarro-
del tHNA. Por consiguienlc, la base
lIarse in vitro en ausencia de protefnas. Por consiguiente, se demoslr6 que la se-
molecular de la trallsferencia de
cuenda intr6n presenta una actividad cataUtica, semejante a la dc una cnzima informaci6n Cilia traducci6n es Illuy
que lJeva a cabo la reacci6n de dos etapas que se illistra en la Figura 3-21. A conti- similar a la de la replicacl6n y a la de la
nuaci6n, se sintetiz6 en un tubo de ensayo la secllencia de 400 nuc1e6tidos de transcripci6n del DNA, N6tese que
tanto la sfntesis como la traducci6n del
mRNA se inician en el extrema 5',

ribosoma mRNA
,,,
....b...nid.de. ,ibo.6mlca
eparad..
Figura 3-20 Sfntesis de una protefna
por ribosomos unJdos a una molkula
de mRNA. Los ribosomas ~ unen a una
) senal de iniciaci6n que se halla cercana
elltremo J' al extremo 5' de la molecuJa de mRNA y
eJrtremo 5'
luego se desplazan hacia eI extrema 3',
sinletizando la pIOIei'na a medida que
avanzan. A menudo varios ribosomas se
desplazan simultaneamente sabre un
polipeptido en clllc,miento
mismo mRNA, de fonna que cada uno
de elias fabrica una cadena
polipeptktica independiente pern
Kt~tica a las otras; tOOa esla eslruetura
recibe el nombre de polirribosoma.

Acidos nucJelcos 113

 nucle6tido Figura 3-21 Una mol&:ula de RNA
n., /
mo16culs de ANA automadurativa. EI diagrama muestra
5':::=U~CU~~G~
GUAA=::03' precursore la reacci6n de automaduraci6n en la
que una secuencia intr6n cataliza su
sllCuencia propia escisi6n de una mol~eula de
del intr6n RNA ribosomal en Tetrahymena.
Como se muestra en la figura, el
proeeso se inicia cuando un

I nucle6tido G se af~ade a la secuencia

del intr6n. y en esta reacci6n se rompe
la cadena de RNA; entonees, el nuevo
3'~ extrema 3' de la cadena de RNA ataea
5':::~U~CUGUAA~:::3'
GA intermlldiario al otro extremo del intr6n,
5' A
transitorio completlindose la reacci6n.
A

I molkula
5': ::1lZ!i!ZIi!'.IZI UCUUAA c=z::::::l!::: 3' daRNA
madufa
+
G~G3'
5' A
A secuencla
dellntron
eliminllda

iongitud del intr6n y se comprob6 que era capaz de plegarse formando una com-
pleja superficie y podia actuar como una enzima en reacciones con atras moltku-
las de RNA. Puede, por ejemplo, juntar dos substratos determinados -un nucle6-
tido de guanina y una cadena de RNA- y catalizar su uni6n covalente cortando 1a
cadena de RNA en un lugar especffico (Figura 322).
En esta reacci6n tipo, de la cllal el primer paso se presenta simu\ado en 1a
Figura 3-21, 1a propia secuencia intr6n acma de fonna repetitiva cortando nu-
merosas cadenas de RNA. A pesar de que la maduraci6n del RNA por corte y em-
palme se realiza habitualmente par sistemas que no son autocatalfticos (vease
Capitulo 8), en diferentes tipos de celulas, incluyendo hongos y bacterias. se han
descrito RNA automadurativos can secuencias intt6n relacionadas con la de Te-

Figura 322 Unareaccl6n catallzada

por la secuencla lntnSnica purl.Ocada
de Tetrahymena. En esta reacci6n, que
eorresponde aI primer paso de1a Figura
3-21, tanto el substrato espedfieo -una
mol~cula de RNA substrato molerola de RNA- como un nucleOtido
G se mantlenen estrechamente unidos a
la superficie de la molecula catalftiea de
+ RNA EnlOnces el nucleOtido se une
G eovalentemente a la mol6:ula de RNA

~ mo"",~
substrato rompiendola en un lugar
\ nucle6tido
detenninado. La liberaci6n de las dos
productos RNA cadenas de RNA resultantes deja libre la
celli/ilea secuencia del intr6n p'ara posteriores
de ANA
ciclos de reacci6n.

114 Capftulo 3 : Maeromoll~eulas: estruetura. forma e informacion

 OCH)

J..
CH l
!N-",mil m<rt I
I

_... c
c
HO
0,
T
NH
-~
/,C=O
i\;
ENLACE
PEPTfolCO
RECll:N
FORMADO
o
c
c

OH
5-
+
puromicina, una mo!l!cula
c (

que mimetiz8 un
eminoacillRNA
~

Figura 3-23 Una reaocl6n peptldll

"
mimetiz8 un IRNA (raja)
unido til Cte.minal de transferasa eatallzada por una
un poliptlptido en
mol~ula de RNA rlbosdmleo
crecimiento (azul)
desprotelnlzada. La moltkula de
puromicina mimetiza un tRNA
cargado con el aminmicido tirosina y
trahymena. Este hecho sugiere que estas secuencias de RNA podrfan haber apa- en las celulas aetua como un potente
recido antes de que las IIneas evolutivas de las celulas procariotas divergieran, inhibidor de la sfntesis de prote'nas
haee 1,5 mil millones de aims. aiiadiendose aI extremo en
Recientemente se han descubierto a1gunas otras familias de RNA catalfticos. crecimiento de una cadena
Por ejemplo, la mayorfa de los tRNA se sintetizan inicialmente como un RNA polipeptfcUca. En este modelo de
precursor mas largo, y se ha descrito una mol~cula de RNA que juega el papel reacci6n el extremo de la cadena
catalftico principal en un complejo RNA-proteina que reconoce estos precurso- polipeptfdica en crecimiento esta
mimetizado por un hexanuc1e6tido (ell
res y los corta en lugares especfficos. Se conace tam bien una secuencia catalftica
rojo, representando un tRNA) que esta
de RNA que desempena una funci6n importante en e( cicio vital de numerosos
unldo covalentememe a la N-formil
viroides de plantas. Todavfa es mas destacable que ahora se sospecha que los ri- metionina (que representa el
bosomas ejercen su funci6n principalmente por catalisis basada en moltkulas polipeptido). Una gran molecula de
de RNA, de forma que las protefnas del ribosoma jugarfan un papel de apoyo de rRNA aitameme purificada cataliza la
los RNA ribos6rnicos (rRNA), que constituyen mas de la mitad de la masa del ri adici6n de puromizina a la N-formil
bosoma. EI rRNA largo, por ejemplo, tiene una actividad peptidil transferasa que metionina, formando un nuevo enlace
puede catalizar la formaci6n de nuevos enlaces peptfdicos (Figura 3-23). peptfdico y liberando el
lC6mo Ie es posible a una molecula de RNA actuar como una enzima? EI hexanuc1e6tido.
ejemplo del tRNA indica que las moleculas de RNA pueden plegarse de rormas al-
tamente espedficas. En la Figura 3-24 se presenta una estructura tridimensional
propuesta para el nucleo de la secuencia intr6n automadurativa de Tetrahymena.
Interacciones entre diferentes zonas de esta molecula de tRNA (amUogas a los
poco habituales enJaces de hidr6geno en mo1eculas de tRNA -vease Figura 3-18)
son responsables de plegados posteriores que generan una compleja superficie

Figura 3-24 Visl6n tridimensional

del micleo eataUtlco de la secuencla
Intr6nlca de RNA ilustradaen las
Flguras3.21 y3.22. (Al La molecula
plegada, con las interacciones de
" enlaces de hidr6geno en rojo. Esta
molecula, de unos 240 nuc1e6tidos, se
presenta inmediatamente despues del
corte inieal del extrema 5' del intr6n
(amarillo). (B) Dibujo esquermhico de

...gII_Ii'";';";";;.,......
5'-1
,
l . - 3'
la molecula presentada en (A), en su
forma desplegada. (Adaptado de L
81(6n 81(6n
Jaeger, E. Westhoffy F. Michel,). Mol.
IAI 18' Bioi. 221: 11531164, 1991.)

Acidos nudeicos 115

tridimensional con actividad cataUtica. Una yuxtaposici6n de atomos poco fTe-
cuente puede estirar enlaces covalentes y, par 10 tanto, conseguir que determina-
dos alOmOS de la cadena plegada del RNA sean exrraordinariamente reactivos.
Como se explica en el Capitulo I, el descubrimiento de las mol&:ulas de RNA
con actividad catalftica ha cambiado profundamente nuestra visi6n de romo
aparecieron las prillleras celulas.

Resumen
La i"fornuu:l611 gem!tica se Iralla ell la secue"cia lineal de ,wcloot/dos tiel DNA.
CacM moUClila {k DNA CQlIs/sm etl Illla doble I,illee formatlil a partir de dos Ilebras
complemelltarlas de nuclootitlos, emfJ'.rejadas metliame elllaces {k Iritlrogeno elltre
los pares de bases G-C y A T. La duplicaci611 de la informacl611 gelletica se prodlU:e
medil'lnte la polimerlznci6n de lUra nuelJll hebra complementaria decada IHla de las
dos hebrll$ prlmitillll$ de la doble hilice, durante ei proceso de replicad61l del DNA.
Ln expresi6n de In informad6n genetlca almacenada ell el DNA comprende Ia
traducd6n de lllra secuencia lineal de nllcle6tidos del DNA a llna seclJencia co-liJlool
de amit,06cidm de utra prote(na. U" segmellto acDtado de DNA se copia primero e"
una hebra complementaria de RNA. Ste trmucrito primarlo es cortado y mempal-
mado (spliced) elimind,ldose las SlIellclas de intrones y gelleralldo IIna molkula
de mRNA. Finalmellle, el mRNA es rradlfcido a protelna a travis de "11 complejo
conjlllllo de reacciom!s que tienen lugar ell lUi rlbosoma. LAs ami,,06eltlos Iltillza-
dos para in slntesls proteiea son ,widos primero a una famllia de molkulas de
tRNA, ealla IIna de las cuales reemlOce, mediante InteraeelOlles de apareamle'lto
de bases eom"leme"larlas, gTllpos determlnados de tres "uclootidos del mRNA.
A courinutu:i6I1, la secuellcia de "ucloolidos del mRNA es lelda de un extremo al
otro en gmpos de Ires, de acuerdo con un c6digo genet/co universal.
Orras molkulas de RNA acrdan ell las celulas como agentes cataUticos seme-
jaures a las emlmas. SIns ",olleulas de RNA se pliegall generando ulla sllperjicle
que contiene lIuele6tldos que lum adqllirido IIlIa reacrividad extraordi'raria. U"O
de ettos catalizndores es el rRNA grallde del ribosoma, que catallza Ia fonrurci6" de
enlaces peptfdicos dumnte In s(ntesis proteien.

Estructura de las protefnasZo

Las celulas estan fonnadas en gran parte por protefnas, que constituyen m<1s de la
mitad del peso seco de la celula (Tabla 3-1). las prolefnas determinan la forma y
la estroclura de la celula y tambien actuan como los principales instrurnentos de re-
conocimiento molecular y como catalizadores. A pesar de que es derto que el DNA
almacena la informaci6n para generar una celula enlera, tiene poca influencia di-
recta sobre los proc:esos celulares. EI gen de la hemoglobina, por ejemplo, no puede
transportar oxfgeno: esta es una propiedad de la prote(na especificada por el gen.
Las moleculas de DNA y de RNA son cadenas de nucle6tidos, quimicamente
muy semejantes entre sf. En cambio, las protefnas estan formadas par un con-
junto de 20 amino:1cidos muy diferentes, cada uno de los cuales presenta una
pelsonalidad quflllica distinta (vease Panel 2-5, pags. 58-59). Esta variedad hace
posible la enonne vetsatiLidad de las propiedades qu(micas observada en las dis-
tintas protefnas, y posiblemente explica por que durante la evoluci6n se han se-
leccionado las prolefnas en lugar de las Illoleculas de RNA para catalizar la ma-
yorfa de las reacciones celulares.

La forma de una moJecula proteica esta determinada

par la secuencia de sus aminoacidoszl
Muchos de los enlaces de una larga cadena palipeptidica permiten la libre rota-
ci6n de los alomos que unen, 10 eua) confiere a) esqueleto de la prOlefna una
gran flexibilidad. Por 10 tanto, cualquier mol&:ula proteica puede, en principio.

116 Capitulo 3 : Macromol~ulas: estructura, forma e informacl6n

adoptar un mlmero iii mit ado de formas diferentes (con!ormaciolles). Sin embar- pollpllptido desplegado
go, la mayorfa de las cadenas polipeptfdicas se pliegan adoptando una sola can
clldellas laterales cadenas IlIterales
formaci6n particular. Esto es debido a que los esqueletos de los diferentes ami- polares no polares
noacidos, a modo de cadenas lateraJes de la cadena principal, sc asocian entre sf
y con el agua formando varios enlaces no covalentes debiles (vease Panel 3-1,
pags. 9697). Sicmpre que las eadenas laterales apropiadas se encuentren en po-
siciones cruciales en la cadena, se desarroUaran irnponantes fuerzas que haeen
que una conformaci6n particular sea especiaJmente estable.
La mayorfa de las proteinas pueden plegarse espantaneamente en su forma
oorrceta. Debido al tralamiento oon algunos disolventes. puede conseguirse que
una protefna se despliegue, 0 desllatllralice, obteniendose una cadcna polipeptf-
dica flexible que ha perdido su eonfonnaci6n nativa. NonnalmcllIe cuando se
relira el solvente desnaturalizante, la proleina se pliega espantaneamente adop-
tando su conformaci6n original, 10 cual indica que tada la inforrnaci6n necesaria
11
para detenninar el plegamiento se halla contenida exclusivarnente la secuencia
de aminoaeidos.

Uno de los factores mlis importantes que condicionan el plcgamiento de
una protcfna es la disuibuci6n de sus cadenas laterales palares y no palares. Las
cadenas latcrales hidrof6bicas. muy abundantes, tienden a agruparse en el inte-
rior de la moltkula, 10 cualles permite evitar el contacto con el entorno acuoso
(como las gOlas de aceite se vuelven a unir despues de haber sido dispersadas
meclinicarnente en el agua). Par el contrario. las eadenas laterales palares tien-
den a disponerse cerea de la parte externa de la moltkula proteica. donde pue- I. legiOn <:entrel 1'$ cadellllS I'terel_
hldrofObicll polllle&. "tu,des en I'
den interactuar con el agua y con otras moleculas polares (Figura 3-25). Puesto conliene les supelficie exterior de
que los enlaces peptfdicos tambien son polares, tienden a interactuar entre si cadenes I' mol6cur.. ptHtden
l'ter,l_ no form,r enl,ces de
y can las cadenas lateraJes polares. para formar enlaces de hidr6geno (Figura pol'res hidlOgeno
326); casi lodos los residuos palares enterrados dentro de la protcfna est:1n apa-
reados de esta forma (Figura 327). As! pues, los enlaces de hidr6gcno desempe- confOlmllci6n pl~ad, en un
amblente I(:U050
nan un papel impartante en mantener unidas diferentes rcgiones de la cadena
palipeptfdica de una molecula proteica plegada, y son de una importancia cru- Figura 325 PJegado de una prolerna
cial para muchas de las interacciones de enlace observadas en las superficies de adoptando una conformaeleSn
las proteinas. globular. Las cadenas laterales de los
aminoocidos polares tienden a situarse
en cl exterior de la prote'na, donde
pucden interacdonar can el agua; las
cadenas laterales de los aminoacidos
lkldo glut,mlnlco
i i no polares quedan enterradas en el
interior. formando un mlclco
o H 0 hidrof6bico "escondido" del agua.
II I II
-C-~-C-C
I I
o o H CH 2
I II I I I I I
-C-C-N-C- -c C-N-C- CH,
I I I I I I I
Ii H 0#C . . . . . 00

I
I
-~JLN~~-
I I
o
I
CH2
/H

H
0/
I
CH2
H" H
I I
-N-C-C-N-
I I
-N-C-C-N-
I I
I I I I
H 0 H 0

...........
_do _ _
___ ~ D ' t _
....,
C*dena . . . . . . . un
..-
_...-
. . . . . . hidI,-1C)

_do"-
Flgun 3-26 Enlaces de hJdnSgeno.
Algunos de los enlaces de hidr6geno
(indicados en color) que se pueden
fonnar enlJe los amino.kidos de una
proterna. Los enlaces peplidicos se
presentan sombreados en gris.

Estructura de las prolefnas 117

 Figura 3-27 DetaIles de enlaces de
hldr6gcno en una prolefna. En esta
regi6n de la enzhna lisozima, se
forman enlaces de hidr6geno entre dos
caJenas laterales [azul), entre una
cadena lateral y un ~l.tomo de un enlace
peptfJico (amarillo) 0 entre l\tomos de
Jos enlaces peptidicos (rojol. Para
referenda, vease Figura 3-26. (Seglln
CX Mathews y K.E. van Holde.
Biochemistry. Redwood City. CA.:
Benjamin/Cummings, 1990.)

Las protefnas secremdas 0 las protefnas de la superficie celular a menudo

forman enlaces covalelltes adicionales intracatenarios. De forma mas notable, la
formaci6n de enlaces dlsuLfuro (tambien denominados enlaces $-$) entre los
dos grupos -$H de dos cistcfnas cercanas de una cadena polipeptfdica plegada
(Figura 3-28) a menudo sirven para estabilizar la estructura tridimensional de
protefnas extracelulares. Estos enlaces no son necesarios para el plegamiento es-
pedfico de las protefnas ya que el plegamiento de las prolefnas normal mente
tiene lugar en presencia de agentes reductores que impiden In formaci6n de en-
laces S-S. De hecho. muy raramente se forman enlaces S-S (si es que se forman
alguna vez) en moleculas proteicas que se hallen en el citosol. ya que la elevada
concentraci6n de agentes reductores -SH en el citosol rompe estos enlaces.
EI resultado neto de todas las interacciones individuales entre aminoacidos
consiste en que la mayorfa de las moleculas proleicas se pliegan espontaneameme
adoptando conformaciones caraclenslicas y definidas de forma predsa. Las que
sol'l. compactas y g10bulares tienen un mlc1eo interno compuesto de grupos de ca-
denas laterales hidrof6bicas -dispueslas siguiendo lIna ordenaci6n densa, casi cris-
talina- mienlras que la superficie exterior, muy compleja e irregular, esta fommda
por las cadenns laterales mas polares. La localizaci6n y las caracterfsticas qufmicas
de los difercntes atomos de esta intrincada superficie, hacen que cada protefna sea
Unica y permiten a la molecula fijarse a otras superficies macromoleculares y a cier-
tas moltkulas pequeflas (vease mas adelante). Desde los puntos de vista qufmico y
estructural, las protefnas son las moleculas conocidas mas sofisticadas.

Figura 3-28 Formaci61l de un enlace

,,-'' disulfuro. El dibujo ilustra lao.
o~ I : fonnaci6n de un enlace Jisulfuro
Ii
\./
C" I (covalentel entre las cadenas lateraJes
tisteina C de residuos de cistefna vecinos. en una
N
/ '-(H o~idanles proterna.
/ '-
/' H SH
\ SH reductores

cf'
'c 'c/ CH

steiq
'- /
H
N"-. ,,/
,r

118 Capitulo 3 :Macromoleculas: estructura, forma e informacl6n

Diferentes cadenas proteicas presentan esquemas
de plegamiento iguaJes22
Aunque l'Oda la infonnaci6n necesaria para el plegamiento de una cadena pro-
leka se halla contenida en su secuencia de aminoacidos, aun no hemos aprcn-
dido a ~Iecr" esta informaci6n y asi poder predecir la estruClUra tridimensional
detallada de una proteina a partir de Sll sccuencia. Por consiguiente, la confor-
maci6n plegada s610 puede ser determinada mediante un elaborado oTllilisis par
difracci6n de rayos X de cristales de la prolerna, 0 si la prolc(na es muy pequena
por tecnicas de resonancia magnetica nuclear (vease Capitulo 4). Hasla ahora
can estas tecnicas se han analizado completamente mas de 100 tipos de protei
nas. Cada una de eslas proteinas tiene una confonnaci6n especffica Ian irregular
y complicada que necesitariamos un capitulo entero de esle libro para describir
lodos los delalles I.ridimensionales de cada una de cUas.
AI comparar las estructuras tridimensionales dc diferentes mol6:ulas protei-
cas, se pone de manifiesto que, aunque la confonnaci6n completa de cada protef-
na es unka, cn diferentes regiones de eslas macromolecuJas aparecen repetidos
varios esquemas de plcgamicnto. Dos de estos esqucmas son particularmente fre-
cuentes, porque resuJtan de las interacciones regulares par enlaces de hidr6geno
entre los prapios enlaces pcptfdicos mcts que entre las cadenas laterales de algunos
amino:kidos. Ambos patrones de plegamiento fueron predichos correclamente en
1951 at estudiar los modelos basados en los difercntes esquemas de difracei6n de
rayos X de la seda y del cabello. Los dos patrones regulares de plegamienlo descu-
biertos entonces reciben hoyel nombre de Idmina 13, que se presenla en la fibrofna
de la seda, y de helia a, que se presenta en la protema a-queratina de la piel y de
sus fonnaciones tales como el cabello, las uiias y las plumas.
EI mideo de la mayorfa (aunque no de todas) de las prolefnas globulares pre-
senla extcnsas regiones de Ilbnlna p. En el ejemplo de la Figura 329, que mues
Ira parte de una molecula de anlicuerpo, se forma una Idmi"a p onripara/efa

I~
Figura 3Z9 La hi-mina 8 es una
estruetura frecuente fonnada por
zonas de cadenas poUpeptfdkas en
las protefnas g1obuJares. En la parte
2.5nm superiorse muestra un dominio de 115

1
aminoticldos de una moMcula de
inmunoglobulina: consiSle en una
estructura en fonna de sandwich de
dos ltiminas 11, una de las cuales se
presenta en color. En la parte inferior
se muestra en detaIle una I!mina 11
antiparalela perfecta, siendo R las
QOC\eN ~ter.1
cadenas laterales de los amin04cidos.
de un .minokkto .......
y O~rvese que cada enlace peptfdico
est! unido a traves de un enlace de
hidrogeno a un enlace peptfdico
vecino. Las estructuras lamtnares
reales de Ins prolefnns globulares
suelen ser alga menos regulares que la
lamina 11 dibuJada aquf, y adem!s la
mayana de I"minas se hailan
ligeramente defonnadas (v~ase Figura
3-31).

1.39 nm

Eslructura de las prolefnas 119

 NN,

IAI 181

cuando una cadena polipeptidica extcndida se pliega sobre sf misma hacia ade- Figura 3-30 Una hBlce 0 es olra
lanle y hacia atnis, de forma que cada secci6n de la cadena queda orientada en eslructura rrecuenle ronnada por
direcci6n opuesta a la de las secciones inmediatas. EslO da lugar a una estructu zonas de la cadena poUpeptldlca de
ra muy rfgida que se maOliene por enlaces de hidr6geno entre los enlaces pePlj- una protcrna. (A) La molecula de
dicos de las cadenas vecinas. A menudo lanto las laminas p antiparalelas como mioglobina. cuya funci6n es
las ldmillas p paralelas. estrechamente relacionadas con las anlcriores (ranna- uansportaroxfgeno, tiene 153
amin~cidos de longilud y presenla
das por regiones de cadenas polipeptfdicas que estan orientadas en la misma di-
una helice a (dibujada en color).
recci6nl, actuan como una llama sobre 1a que se estruclura la prolcfna globular. (B) Delalle de una helice a perfecta.
Se genera una hB.lce a cuando una misma cadena polipeptfdica gira regular- (C) Como en el caso de la lamina jJ,
mente sobre si misma dando lugar a un cilindro rfgido en el que carla enlace pep- cada enlace pepddico esnl. unido a un
tfdico eSla unida regularmente por enlaces de hidr6geno a otros enlaces peptfdi- enlace peptfdico vecino a lraVeS de
cos vecinos de la cadena. Muchas proternas g10bulares contienen breves regiones un enlace de hidr6geno. ObsclVcse que
de eSlas helices Cl (Figura 3-30). Las porciones de las prolefnas transmembrana para mayor c1aridad en (B) se han
que atraviesan la bicapa lipfdica casi siernpre son helices a debido a las constric- ornitido tanto las cadenas laterales Ique
ciOllCS impuestas por el ambiente lipfdico hidrof6bico (veasc Capftulo 10). sobresalen radialmente a todo 10 largo
Normalmente, una Milke a aislacla no es estable par sf sola en ambientes de la helicey que en (el se sei'lalan
acuosos. Sin embargo, dos helices a idenlicas que presenten una disposici6n re- como Rl como los <'ltomos de hidrogeno
pClitiva de cadenas lalerales no polares se enrollan progresivamenlc una alrede- en el carbono IX de cada aminollcido
(vease lambien Figura 3-31).
dor de la otra formando una estruClura especialmenle cslable denominada litli-
ce sllperenrollada (vease p<tg. 132). En muchas prolefnas fibrosas se presenlan
largas zonas de helices superenrolladas semejantes a varillas, como en las fibras
intraceluJares de a-queralina que refuenan la piel y sus apendices.
En la Figura 3-31 se presentan modelos de espacio lIeno de una helice a y de
una lamina p, con y sin sus cadcnas laterales.

Las proteinas son moleculas asombrosamente versi1tiles13

Debido a la variedad de las cadenas laterales de sus aminm\cidos, las protefnas
son notablemente versatiles en cuanto al tipo de estructuras que pueden fonnar.
Veamos. por ejemplo, dos abundantes protefnas segregadas por las celulas del
lejido conjuntivo -Ia col<tgena y la elastina- ambas presenles en la matriz extra-
celular. En las moltkulas de cohigena, tres cadenas polipeptfdicas distintas ricas
en el amino<\cido prolina y con un aminoacido glicina de cada tres residuos, es-
tan cnrolladas entre sf generando una Iriple helice regular. Estas moleculas de

120 Capftulo 3: Macromol~cu1as:estructura, forma C Informacl6n

 Figura 3-31 Modelos espadaJes
IA)
compactas de una hellce Q y de una
himIna P con (derecha) y sin
(lu/lderdnj las cadena' laternJes de
sus amlnoacldos. (AI Una helice a
(parle de la estruClura de 13
mioglobinal. {OJ Una regi6n de
lAmina I! (parte de la eslruetura de un
dominio de una inmunogiobuJinal. En
las rotogrnfias de la izquierda. cada
cadena lateral esl<i represenlada por
un unico atomo sombreado en negro
(los grupos R de las Figuras 3-29 y
3-30), mienlras que a la derecha se
muestra la cadena lateral entera. (Par
cortesfa de Richard J. Feldmann.)

181

colagena estan, a su vez, empaquetadas fonnando fibrillas en las que las mole-
cuJas de colagena adyacenles eslan unidas por enlaces covalentes cruzados en-
tre los residuos vednos de Iisina. dando a las fibriLlas una enorme resislencia a la
tensi6n (Figura 3-32).

fibrll elhlicll

JJ(m:I~=:::;i:!====E~::;:::;:j[;::0j-secc'6n
5Onm_l~:i corte de una
l~. __ fib"UlIdflcolligenll

/ ~ mol6cuillde

/ / ~~ """"'
300,'.'om

EXTENSION RElAJACION
1
1,5nm
tripl.
htil,c;e de

IAI 1 "''''M molkuta de elaslina

Figura 3-32 Contraste entre la coL1igena y la elastina.

<Al La coltfgena es una triple Mlice formada por tres cadenas proteicas
~~'"Iaaftruz.do
_

exlendidas que se enroscan entre sf. En el espacio extracelular muchas

molOCulas de colagena, en fonna de varilla, estan entrelazadas medianle
enlaces cruzados formando fibrilias de col~gena inextensibles (aTriba)
con una resistencia a la atracci6n semejante a la del aeero. (B) Las cadenas I.'
polipeplfdicas de elasrina est~n unidas entre sf mediante enlaces cruzados,
formando fibras elisticas. Cuando la fibra es estirada, cada molecula de elastina
se desenroUa adoplando una conformad6n m~s extendida. El notable contraste
entre las propiedades fisicas de la elastina y las de la coJagena radica por
completo en que sus secuencias de amino~ddosson difercntcs.

Estructura de las prote(nas 121

 La elastina es un caso que se encuentra en el extrema opuesto. Sus cadenas
poJipeptfdicas, relativamente libres y desestructuradas, estan unidas por enlaces
covalentes cruzados, generando una trama elAstica parecida aI caucho que per-
mite que tejidos tales como los de las arterias y de los pulmones se defonnen y
dilaten sin sufrir ninglln dano. Tal como se ilustra en la Figura 3-32, la elastici-
dad es debida a la capacidad de las distintas molttlilas prOleicas para desenro-
lIarse de manera reversible cada vez que se les apUque una fuerza de tensi6n.
Hay que destacar que la misma estructura qufmica bAsica -una cadena de
aminoo.cidos- pueda formar tantas estructuras diferentes: una trama elAstica se-
mejante aI caucho (elastina), un cable inextensible con una resistencia a la ten-
si6n semejante a la del acero (coIAgena) 0 cualqujer otra de entre la amplia va- triple htlice
deeol8gena
riedad de superficies catalfticas de las protemas globulares que act(jan como de 29 nO' de
enzimas. La Figura 333 ilustra y compara la gama de fonnas que en principio longitud
podrfa adoplar una cadena polipeptfdica de 300 aminoAcidos de longitud. Como
ya hemos dicho, la confonnaci6n adoptada realmente por una protefna deler-
minada depende de su secuencia de aminoacidos. ""auae
45 nm de largo

Las prote{nas presentan diferentes niveles

de organizaci6n estructuralZ4
AJ describir la estruetura de una protema, resulta (jtil distinguir varios niveles de
organizaci6n. La secuencia de aminoAcidos se denomina estruetura prlmaria de
la prolefna. Las interaociones regulares de enlaces de hidr6geno entre fragmenlos "mine PdII
7>(7)(0,8nm
contiguos de la cadena polipeptidica dan lugar a Mikes a y a lAminas p, 10 eual
constituye la estructura secundaria de la prolema. AdemAs, ciertas combinacio-
nes de MUces a y himinas p se empaquetan fonnando unidades g10bulares enla-
zadas de forma compacta, cada una de las cuales se deoominan domlnlo protei- we.e de
co. Nonnalmente los dominios est1n construidos a partir de una zona de una 4,3 nm
dediAmetro
cadena polipeptrdica de entre 50 y 350 aminoacidos, y parece que son las unida-
des basicas a partir de las cuales se construyen las prote(nas (v~ase mas adelan-
C8'dene extendide de
tel. Mientras que las protefnas mas pequefias pueden presentar un solo dominio, 100 nm de Iongitud
las protemas mayores presentan varios de ellos, nonnalmente conectados por ca-
denas polipeptrdicas de longilud relativamente variable. Finalmente, los polip~p Figura 3-33 A1gunas Connas y
lamaftos que puede presenlar una
tidos individuales a menudo se asocian constituyendo subunidades de mol~culas
molkula protelca liplca de 300
mayores, a veces denominadas agregados moleculares 0 romplejos proteicos, en reslduos de amInOl(cldos de longltud.
los cuales las subunidades estan unidas entre sf por un elevado mimero de d~bi La estructura adoptada estll.
les interacciones no covalentes; en el caso de protefnas extracelulares, a menudo determlnada por la secuencla de
estas interacciones eSlan estabilizadas por enlaces disulfuro. aminoll.cidos. (Adaptado de D.E.
La estructura tridimensional de una vrotefna puede representarse de dife- Metzler, Bioqufmica. Barcelona:
rentes maneras. Consideremos la extraordinariamente pequefia protefna inhibi- Ediciones Omega SA. 19B1.)
dora de la tripsina pancreatica basica (BPTI, de Basic Pancreatic Trypsin Inhibi-
tor), que contiene 58 residuos de aminoacido plegados en un solo dominio. La
BPTI puede representarse como una imagen estereosc6pica mostrando todos
sus atomos a excepci6n de los de hidr6geno (Figura 334A) 0 como un modelo
molecular espacial en eJ que la mayorfa de los detalles no puedan observarse de
fonna muy clara (Figura 3-34B). Tambien puede representarse de una forma
mas esquematica, omitiendo todas las cadenas laterales de los residuos de ami-
noacidos y todos los atomos reales, de forma que sea foicil de seguir el curso de la
cadena polipcptfdica principal (Figuras 3-34C. DyE). Una prote(na de tamano
medio tiene alrededor de seis veres mAs residuos de aminoAcidos que la BPTI, y
muchas protefnas son de un tamafio mas de 20 veces mayor. Dibujos esquemA-
ticos como e;los son fundamenlales para representar la estructura de protefnas
grandes como estas. En este libro se utilizarAn de forma habitual.
La Figura 3-35 muestra romo se puede resolver la estructura de una gran pro
tema en diferentes niveles de organizaci6n, consuuyendo cada nivel sobre el ante-
rior de una fonna jertrquica Estos niveles de complejidad organizatIva creciente
pueden corresponder a las etapas a traves de las que una protema acabada de sin-
tetizar se va plegando hasta alcanzar su estructura nativa dentro de la relula.

122 Capftulo 3: Macromol~as:estructura, fonna e infonnaci6n

 IAI IBI

NH, NH,

eaOH
eOOH ICI IDI lEi

Figura 3-34 Proteina Inhlbidora de la trlpslna pancrelitlca bulca (BPTI, de Basic

Pancreatic Trypsln inhibitor). Conformaci6n tridimensional de esta pequena protefna,
vista en 5 representaciones utilizadas habitualmenlc. (A) Representaci6n estcreosc6pica
que muestra la posici6n de todos los ;itomos exceplo los de hidr6geno. La cadena principal
se presenta en Uncas gruesas y las cadenas laterales en !foeas finas. {BJ Modelo molecular
mostrando el radio de van derWaals de todos los atomos (vease Panel 3-1, pags. 96-97).
(C) Modelo de esqueleto de alambre compuesto por ]foeas que conectan los carbonos ex a 10
largo del esqueleto polipeptfdico. (OJ uModelo de cinea" que representa todas las regiones
de interacciones regulates por enlaces de hidr6geno, en forma de helices (helices a) 0 como
grupos de llechas (laminas lJ),las cuales apuntan hacia el extremo carboxilo terminal de la
cadena. (E) "Modelo de tubo" que muestra el curso de la cadena polipeptldica omitiendo
cuaJquier detalle de ella. En los (res paneles de la pane inferior de Ja figura el motiuo en
IlOrqllilla beta se ha dibujado en verde. Tengase en cuenta que el nudeo de todas las
protefnas globulares esta dcnsamenle empaquetado de ,homos. Por 10 tanto, la impresi6n
de una estructura abiena producida por la observaci6n de los modelos (C), (0) Y{El es
enganosa. (8 y C poc conesfa de Richard J. Feldmann; A y 0 por cortesia de Jane Richardson.)

123
 dominio

aubunldad proteica (mon6merol mol6cula proteice (dlmarol

estructure estructure cuetarnaria

H(:underie estructural8rcierie

Los dominios esttin form ados por cadenas polipeptfdicas Figura 335 Tres nlveles de
que se pliegan adelante y atras, generando delgadas organlzacl6n de una protelna. La
estruetura tridimensional de una
circunvoluciones en la superficie de la protefna2A prote{na puede describirse en
Un dominio proteico puede concebirse como la unidad estructural basica de Il~rminos de diferentes niveles de

una eslructura proteica. EI nucleo de cada dominic esta compueslo fundamen- plegamicnto. cada uno de los cuales se
talmente par un conjumo interconectado de laminas p, helices a 0 de ambas ca- colIslruye sobre el nivel precedenle de
sas. Eslas eslructllras secundarias regulares estan favorecidas debido a que per- una fonna jernrquica Aquf, estos
niveles se iluslran utilizando la
milen la formaci6n de una gran canlidad de enlaces de h..idr6geno entre los
protefna activadora de catabolito
alOmOS del esqueleto de la proteina, 10 cual es esencial para estabilizar el inle- (CAP, de Catabolite Activator Protein).
rior del dominio, donde el agua no es asequible para ronnar enlaces de hidr6ge- una pro(cfna reguladora de genes
no con el oxfgeno polar del carbonilo 0 con el hidr6geno de la amida del enlace bacterianos que presenta dos
peptfdico. dominios. Cuando el dominio mayor
Existe un numero Iimitado de maneras de combinar helices (X con laminas P se une a AMP dc1ico pravoca un
para fonnar una estructura globular, par 10 que determinadas cornbinaciones de cambio de conformaci6n dc la
estos elementos, denominadas motlvos, !;e presentan repetidamente en el nu- protelna que permite al dom.inio
e1eo de muchas protefnas no relacionadas entre sf. Un ejemplo de ello 10 consti- mcnor unirsc a una secuencia
wye el motjlJO ell 110rqllilla beta encomrado en la BPTI (coloreado en verde en la especflica dc DNA. La secuencia de
Figura 3-340). Consiste en dos cadenas j3 antiparalelas unidas por una fina vuel- aminotkiclos se denomina estrucrura
la formada por un asa de la cadena polipeptidica. Otro ejemplo es el motiuo pr;mar;a y cl primer !livel de
plegamiemo estructura secunda,ia. Tal
betaalfa-beta, en el que dos cadenas p paraJelas eslan conecladas par un tramo
como se indica sombreado en
de MLice 0. (Figura 3-36). En el Capi'lulo 9 se comenlan olros motivos comunes,
amarilto. la combinaci6n de los niveles
como los diferentes motivos asociados a DNA enconlrados en diversas familias de plegamiento segundo y tercero
de prOlefnas reguladoras de genes. mostrados aqui. se denomina
Varias combinaciones de motivos fonnan el dominio proteico, en el cualla habitualmeme esrrucrura rercinria yel
cadena polipeptfdica tiende a curvarse arriba y abajo a 10 largo de lOda la estruc- roano nivel Oa uni6n de subunidades)
tura, a veces fonnando una lamina p 0 una helice n, y cambiando de direcci6n estructum cllaternaria de una prolefna.
suhitamente dando una vuelta cerrada cuando Uega a la superficie del dominic. (Modificado de un dibujo de lane
Como resuhado de ello, un dominio tipico es una eslructura compacta, la super- Richardson.)
fide de la cual esta recubierta de asas protuberames de cadenas polipeptidicas
(Figura 3-37). las regioTles eTl asa, de longitud variable y superficie irregular, a
menudo forman los lugares de uni6n para otras moleculas. Debido a que las re-
giones en asa estan expuestas al agua, son ricas en aminoacidos hidrof(licos, por
10 que frecuentememe se pueden prededr sus posiciones a partir de un estudio
detallado de la secuencia de amino:icidos de la proteina.

124 Capftulo 3 : Macromol~ulas: estructura, fonna e lnfonnaci6n

De entre la gran cantidad de cadenas polipeptfdicas
posibles, linicamente un nlimeco relativamente
pequeno de elias llegaria a sec litH
Puesta que cada uno de los 20 aminaacidos es qufmicamenle distinto y cada
uno de elias puede, en principio, presentarse en cualquier pasici6n de una
cadena proteica, exislen 20 x 20 x 20 x 20 =160 000 pasibles cadenas polipeptfdi-
cas diferentes de 4 aminaacidos de langitud 0, amUogamente, 20" posibles cade-
nas polipeptfdicas diferenles de " aminmkidos de longitud. Ase se padrfan pro-
ducir mas de 1(fl90 prolefnas diferentes de una longitud de 300 aminoacidas, es
dedr, de un {amana normal.
Sabemos sin embargo que tinicamente un pequeno llumero de estas posi-
bles protefnas adopcarfa una conformaci6n tridimensional estable. La gran ma-
yorfa de cadenas tendrfa un gran 1ll1mero de con formaciones diferentes de Figura 3-36 Ejemplo de un mollvo
energfa aproximadamellle igual, cada una de elias con propiedades qufmicas protelco habitual. En el motiva beta-
distilHas. Estas protefnas con propiedades tan variables no sedan Ihiles, y par alfa-beta, dos cadenas pllralelas
consiguiente, sedan eliminadas por la selecci6n natural durallle el transcurso de adyacentes que forman una lamina ~
la evoluci6n. Las protefnas actuales tienen una estructura y unas propicdades estan conectadas a traves de una
qufmicas sorprendentemente sofisticadas debido a sus propiedades tinicas de helice 0:. Como en el caso del motivo
plegado. No s610 sucede que la secuenda de aminoacidos es tal que condiciona de horquilla bela. destacado en la
Figur<f 3-34. este motivo se halla en
que s610 resulte extremadamente estable una sola de las conformaciones pasi-
muchas protelnas dlferentes.
hies, sino que ademas esta conformaci6n tiene la forma y las propiedades quf-
micas adecuadas para permitir que la protefna real ice una funci6n catalftica 0
estructural determinada en la celula. Las protefnas estan construidas de una rna-
nera tan precisa que el cambio de tan s610 unos cuantos alomos de un amino-
<icido puede trastornar toda la estructura y provocar una alteraci6n carastr6fica
de la funci6n de la protefna.

Normalmente las nuevas proteCnas se desarrollan

por alteraciones menores de proteCnas antiguas 25
Las celuJas disponen de mecanismos geneticos que permiten que durante la
evoluci6n los genes se dupliquen, se modifiquen y se recombinen. Por consi-
guiente, una vez se ha desarrollado una protefna con propiedades de superficie
titHes, su estruc{Ura basica puede ser incorporada a muchas orras prorefnas.
A menudo, las prolefnas de funci6n relacionada aunque diferente, de organismos Figura 3-37 Modelos de cinlade In
eslructura tridimensional de algunos
domlnlos de prolefnas organlzados de
fonna dlferenle. (A) Citocromo b~. una
prote(na de dominio unico compuesto
casi completamente par helices 0-
(B) Dominio que Wle NAD' de la lactico
deshidrogcnasa. compuesto poruna
combinaci6n de helices (( y de laminas~.
(Cl Dominio variable de una cadena
ligera de una ilrnmnoglobulina,
compuesto por un &1.ndwich de dos
laminas~. En estos tres ejemplos las
helices a sc presentiUl en v"erde mientras
que las cadenas organizadas en laminas
~ se sefialan como flechtlS rojtlS. N6tese
que generahnente la cadena
polipeplidica cruza hacia adelante y
hacia atras a !TaveS de todo el dominio,
adoplando curvas cerradas solamente
en la supcrficie de la proteina.
A menudo las regiolles ell asa (amarillo)
oonstituyen los lugares de lmi6n de
Olras moleculas. (Dibujos por oortes(a
'A, '81 ,e, de Jane Richardson.)

Structura de las protefnas 125

[A[ flgura 3-38 (A) Comparacl6n de las
149 186 secuenclas de am1noliddos de d05
QUlMOTRIPS1NA ------ANTPOALOOASLPLlSNTNCKK- -VWGTKIKDAM I CAGAS- mlembros de la famUia de enzImas
1111 II I III I I III serina proteasas. Se mueslran las
ELASTASA ------GQlAQTlQOAYlPTVDVAICSSSSYWGSTVKNSMVCAGGOG
zonas carboxilo terminales
(aminoacid05149 a 245) de las dos
GVSSCMG~fGGPl VCKKNGAWTl va I VSWGSS- TCSTS- TPGVVARVTAl VNWvQOTLAA N
protefnas. Los aminoacidos identicos
I I 1111111 I II I I I I I I II I I I se presenlan conectados por barras de
VRSGCOGDSGGPLHCLVNGOYAVHGVTSFIISRLGCNVTRKPTVFTRIISAYISWINNVIASN color y se destaca el residua de serina
187 "m\ 245
dellugar activo de la enzima (posici6n
195). En las secciones de la cadena
[81 polipepUdica encerradas en cajas
A _ AJ. .. al,,,008 s _ Sot< .. MOna
amarillas, cada aminoacido ocupa una
G .. Gly .. 1il1ic;ina rill .. Met .. InllIionon.I
C .. C\'S .. c:il181na H .. H,s" h'$tiditWI N .. Asn .. ~raglO' T .. Th, .. tr~irnI posici6n espacial allamente
o .. A.p .. k>do asp4rtco I .. 1'- .. isoleYcina P .. Pro .. proli.... II .. V.l .. vali.... equivaJente en 1a estructura
E .. Glu .. KKIo glUlimieo Ie " l p -lillON o .. Gin .. gilA.",...... W .. T.p .. tnptotano tridimensional de las dos enzimas
f .. Phe .. feoUL.nirnl L .. Leu .. Iwcioll R .. Arg .. arg'tlIN1 V .. r.,.. .. tirosi....
(vease Figunt. 339). (B) Los e6digos
estandar de una letra y de tres lerras
que se utilizan para designar los
actuales. tienen secuencias de aminoacidos similares. Se ha crefdo que estas fa- amino4cidos. (Modificado de J. Greer,
milias de protefnas evolucionaron a partir de un gen ancestral unico que duran- Proc. NaIL Acad.. ScL USA. n: 3393-
te el transcurso de la evoluci6n se duplic6 dando Jugar a alros genes en los que 3397. 1980.)
gradualmente se fuemn acumulando diferentes mutadones. genenlndose asf
prolemas con funciones nuevas.
Consideremos la familia de las enzimas que degradan prOle{nas (enzimas
proleolfticasl denominadas serlna proteasas. que inc1uye a las enzimas digesti-
vas qu.imotripsina, tripsina y elastasa y a1gunas de las proteasas de la cascada
enzimc1tica de la coaguJad6n de la sangre y de la fijad6n del complemento. AI
comparar dos de estas prolemas se observa que aJrededor de un 40% de las posi-
dones de sus secuendas estc1n ocupadas por el mismo aminoc1ddo (vl!ase Figu-
ra 338). La semejanza de sus conformaciones tridimensionales, delerminadas
medianle crislalograffa de rayos X, es aun mas notable: la mayor parte de los
complicados giros y wehas de sus cadenas polipeptidicas. de varios cienlOs de
aminoc1cidos. son idl!nlicos (Figura 3-39).
EI caso de las serina proleasas se repite en cenlenares de otros casas de fa-
milias proteicas. En muchos casos, la secuendas de aminoacidos han divergido
mucho mtis que en el caso de las serina proleasas, de forma que no podemos es-
tar seguros de In relaci6n familiar entre dos protefnas sin determinar sus estruc-
.
turas lridimensionales. Por ejemplo, las protefnas a2 de levadura y la protefna

Figura 3-39 ComparaclcSn entre las

confonnaclones de las dos serlna
proteasas presentadas en la Flgun
HOOC 3-38. La elastasa se presenla en (A) y la
quimotripsina en (B). A pesar de que
ambas protefnas solamente tienen
iguales los aminoacidos que se senalan
en vertk, sus confonnaciones son muy
similares. E1lugar activo. senalado con
un drculo mjo. presenta un residuo
activo de serina {vease Figura 35n. La
quimolripsina presenta mas de dos
extremos de cadenas palipepUdicas ya
que se forma par la rolura proteolftica
del quimotripsin6geno. un precursor
inactivo.
aUIMOTIlIPSlNA

(AI 181

126 CapftuJo 3: Macromoll!culas: eslnlctura, (orma e lnfannad6n

 IAi 181

NH,

lei

levlldur. TfllTlfNWiT!I1i'ifilnf'fiT'l
H,NGHRFTKENVRllESWfAKNIENPYLDTKGlENLMKNTSLSI K I
RTAFSSEOk~~lK8EINEN- -RYLTERRROQLSSELGlN S COOH
0r0Jph1l.

angrelada de Drosopllikl son dos proteinas regu1adoras de genes de la familia figunl3-40 Comparad6n de
homeodominio. Solo son iguales en 17 de sus 60 residuos de amino<1cidos. de homodomJnJos de unI6n at DNA de
forma que 5610 resuha evidenle la relaci6n que exisle entre ambas cuando se dos organlsRlOSseparados pol' mas de
comparan sus estructuras tridimensionales (Figura 3-40). mJl mUlones de mas de evolucl6n.
(A) Eslrucrura esquemalica.
A menudo. los diferentes miembros de una gran familia de protefnas (ienen
(8) Localizaci6n de las posiciones de
funciones baslanles diferentes. Algunos de los cambios de amino:icidos que di-
los carbonos Q. las estructuras
rerencian estas enzimas fueron seleccionados en el transcurso de la evoluci6n
tridimensionales mostradas fueron
probablemente porque daban tugar a cambios en la especificidad del subslralo y delerminadas par cristalografia de
en las propiedades reguJadoras. confirUindoles las distintas funciones que pre- rayos Xde la protefna a2 de la levadura
sentan en la actualidad. Otros cam bios de aminoacidos parecen ser "neutros", (verde) y de la protefna angrelada de
no teniendo efectos ni beneficiosos ni perjudicales sobre la estruclUra y la fun- Ormopllila (raja). (C) Comparacl6n de
ci6n basicas de una prole(na. Pues[Q que la mutaci6n es un proceso aleatorio, las secuencias de amino3cidos de la
tamblen debieron producirse muchos cambios perjudiciales que alteraron la cs- rcgi6n de las protefnas mostradas en
tructura tridimensional de eslas protefnas 10 suficiente como que resultaran (A) y (B). Los puntos lIaranjll senalan la
inactivas. Estas prote(nas inaclivas debieron perderse en cuanto los organismos poslci6n de un inserto de Ires
individuales que las producfan se encontraron en una situaci6n de dcsvcntaja y aminoacidos de la proteina a2.
fueron eHminados por la selecci6n ninura!. Por consiguiente no debe sorpren- (Adaptado de C. Wolberger el at. Cell
67: 517-526, 1991.)
demos que las celulas contengan grupos enteros de cadenas polipeptfdicas an-
nes que lienen ancestros comunes pero funciones diferentes.

Las nuevas protefuas pueden desarrollarse por recombinaci6n

de dominios polipeptfdicos preexistentes26
Cuando una relula ha producido un cierto nurnero de superficies proteicas esta-
bles, se pueden generar nuevas superficies con diferemes propiedades de uni6n,
mediante la combinaci6n de dos 0 mas protefnas a traves de imeracciones no
covalemes, produciendo un complejo prote;co. Este proceso de uni6n de protef-
nas g10buJares que genera agregados proteicos mayores y funcionales es habi-
tual en las celuJas. Muchos complejos proteicos tienen pesos molecuJares de
mas de un mill6n de daltons, a pesar de que un una cadena polipeptfdica tfpica
liene un peso molecular de aJrededor de 40 ()()() daltons (entre 300 y 400 amlno-
acidos) y de que un numero relativamente reducido de cadenas alcanza un ta-
maf\o tres veces superior a este.
Un camino alternativo de generar una nueva prOle(na a partir de cadenas
preexistemes consiste en unir las secuencias de DNA correspondiemes, pradu
ciendose un gen que codifica una larga cadena polipeptfdica unica. Se cree que

Estruetura de las protefnas 127

 dominio X dominio A dominio X dominio B Figura 3-4l Evolucl6n de un nuevo
lugarde unl6n a un Uganda. EI
principio general par el cual la
yuxlaposici6n en el curso de
la evoluci6n de superficies de proteina
sepamdas ha permitido incrementar el
numero de prolefnas que presentan
nuevos lugares de uni6n para alms
mol~culas {ligolldos. v~ase pilg. 135}.
Como se indica aqui. a menudo los
lugares que interaccionan con los
ligandosse Iocalizan en la inlerfase
las prolefnas en las que diferenles zonas se pliegan de fomla independicnte en enl.re los dos dominios proleicos y
dominios g10bulares distinlos, han evolucionado de esta forma, quizas despu~s estan fonnados por regiones en asa de
de existir duranle prolongados periodos de liempo como complejos proleicos la superficie de la proleina (~ase
tambi~n Figura 3-42).
fonnados a partir de polip~ptidos independienles. Muchas proteinas (ienen una
estructura "muhidominio~ de este tipo, y tal como cabrfa esperar a rafz de las
consideracioncs evolulivas mencionadas antes, a menudo ocurre que un punto
importante de uni6n a otra molecula se encuentra en ellugar en el que se yuxta-
ponen dos dominios diferentes (Figura 3-4l). Asi, en el casa de la protefna multi-
dominio cuya eslructura tridimensional se muestra en la Figura 3-42, la superfi-
cie prOleica de un dominio que une NAn- aparentemente se combina con la
superficie de un segundo dominio que une un azucar, constiluyendo parte de
un proceso de evoluci6n de un lugar activo que uriliza NAn- para catalizar la
oxidaci6n de un azl1car.
Exislc OIra manera, especialmente frecuente en las largas protefnas fibrosas
como la colagena, de rculilizar una secuencia de aminoacidos (veasc Figura 3-32).
En estos casas se forma lIna estructura a partir de ml1hiples repeticiones inler-
nas de una. secuencia ancestral de aminoacidos. Es evidente que la uni6n de se-
cuencias de aminoacidos a traves de la uni6n de secuencias preexislcnlcs de
DNA codificante es una eslTalegia mucho mas eficaz para la celuJa que la aller-
nativa de oblener nuevas secuencias proteicas mediante mUlaci6n aleatoria del
DNA.

Figura 3-42 Estructura de la endma

g1ucoUtica g1iceraldehfdo 3-fosfalo
deshldrogcnasa. La protefna est<'i
compuesta por dos dominios, (lue aquf
sc prcsclllall en colores diferentes. con
rcgiones de h(!lice a (represenladas
I>or cilindros) y zonas de l<'imina ~
(representadas como flechas). Los
detalles de la reacci6n que cataliz..1 eSla
cnzima se muestran en la Figura 2-22.
N61ese que los Ires substralos que
inlerviencn en la reacci6n se unen a la
enzima en una regi6n inlermedia entre
los dos dominios. (por cortesia de Alan
J. WonacOH.)

128 Capitulo 3 : Macromol&:uJas: eslfUClura, forma e informaci6n



PRon::fNA CAP EGF

H2N .. COOH H:N eOOH

REPRESOR LAC aUIMOTRIPSINA

HIN" caOH H2N~COOH
REPRESOR CRa UROOUINA8A
H2N ..... HlN COOH
PROTEfNA aUINASA OEPENDIENTE DE cGMP FACTOR IX
H:N eOOH H2N<{l COOH
SU8UNlDAD REGULAOORA DE LA pROTEINA aUINASA DEPENDlENTE DE cAMP PlA$MINOGENO
HIN CDOH HlN COOH

IAI 100 lImirn>&cidos IB)

Las homologfas estructurales pueden contribuir en la asignaci6n Figura 3-43 Barajado de domlnlos.
de funciones a las protemas descubiertas recientementeZ1 Durante la evoluci6n de las prolefnas
se produjo un extenso harajado de
EI desarrollo de ttknicas de secuenciaci6n nipida del DNA ha penni lido deter- bloques de secuencias de protefna
minar la secuencia de amino<1cidos de un gran numera de protefnas a partir de (mddu/os proteicos). En la figura, las
las secuencias de nucJe6tidos de sus genes. Asi, el disponer de una siempre cre- zonas senaladas con marC8S de la
dente base de datos sobre protefnas haec posible realizar de forma rutinaria un misma forma y color eslan
esrudio exhaustivo pOT ordenador para buscar posibles secuencias hom61ogas relacionadas evolulivamenle pero no
enlle la de una prolefna acabada de simetizary las de otr3S protefnas estudiadas son id~nticas. (A) La protena
activadora de gen por catabolilos
previamentc. A pcsar de que, poT ahara, solarneme se han secuenciado un pe-
(CAP, de Catabolile Cen Activalor
queno porcentaje del total de protefnas de los organismos cucariOtas, resuha ha- Prolein) presenta un dominio
bimal ya enconlrar que una protefna que se acaba de secuenciar es hom610ga a {lridngliia azul} que se une
alguna regi6n de otra protefna conocida, 10 cual indica que la mayorfa de las especfficamente a una secuencia de
protefnas pueden descender de un numero de tipos de protefnas ancestrales re- DNA, y un segundo dominio
lativamente reducido. Como era de esperar, a menudo las secuencias de muchas (rectdngula roja) que une AMP cfclico
protefnas grandes muestran signos de haber evolucionado a traves de la uni6n (v~ase Figura 3-35). EI dominio que se
de dominios preexistenles generando nuevas combinaciones de ellos, un proce- une a DNA esta relacionado con el de
so conocido como barajado de dominios rdomain shuffling") (Figura 3-43). muchas olTas prolernas reguladoras de
Estos estudios comparativos entre proteinas lambien son imporlantes debi- genes, como las protefnas represoras
do a que normal mente una relaci6n esuuctural supone una relaci6n funcional. lac y cro. Ademas, se han encamrado
Asf, el descubrir una homologfa entre la secuencia de aminoacidos de la protef- das capias del dominio que une AMP
ddlco en prote(na quinasas de
na estudiada y la de una prote[na de funci6n conocida puede suponer el ahorro
eucariotas reguladas por la uni6n de
de muchos ai\os de investigaci6n. Tales homologfas enlTe secuencias indica ron, nude6tidos cfclicos. (B) Las serina
por ejemplo, que algunos genes reguladores del cicio celular en celulas de leva- proteasas sernejantes a quimotripsina
dura y olros genes que inducen la transformaci6n de celulas de mamffero en ce- estan farmadas par das dominios
lulas cancerosas son protefna quinasas. De eSla forma se pudo reconocer que (marro/lJ. En algunas proteasas
muchas de las prolefnas que controlan la genesis de la forma de la mosca del relaciomldas que estlln fuertemente
vinagre Drosophila son protefnas reguJadoras de genes, mientras que otras pro- reguladas y mas especializadas los dos
tefnas lam bien implicadas en este control se pudieron clasificar como serina dominias proteasa estan coneclados a
proteasas. uno 0 mas dominios hom6logos a
EI descubrimiento de homologfas entre dominios tambien puede ser uti! en dominios encolltrados en el faclor de
otro sentido. Resulta mucho mas diffcil determinar la estructura tridimensional crecimiento epidemtico (llexdgollo
de una protefna que conocer SU secuencia de aminoacidos. Sin embargo, es 1'0- verde), a la protefna que une calcio
(trial/gulo amarillo) 0 aI nominio
sible intuir la conformaci6n de un dominio de una protefna que se acaba de se-
~kringle~ (clUldrado azul) que
cuenciar si este dominio es hom61ogo a ouo dominio de una prolefna cuya con-
conlienen tres enlaces disulfuro
formaci6n ha sido determinada anleriormenre par difracci6n de rayos X. i1uernos.
Asumiendo que los giros y torcimientos de las cadenas polipeplfdicas estAn con-
servados en ambas protefnas a pesar de las diferencias que eristan en la secuen-
cia de amino<icidos, a menudo se puede esbozar la estruclura de una nueva pro-
tefna con una exactitud razonable (Figura 3-40).
Cada ana se anaden muchas nuevas secuencias de protefnas a la base de
datos, can 10 que paulatinamente se incrementa la posibilidad de encontrar ho-
mologfas utiles. La comparaci6n entre secuencias de prolefnas es una herra-
mienta de 13 biologfa celular cada dfa mas imponante.

Estructura de las protefnas 129

 Figura 3-44 Formad6n de un dfmero. partlrde
un 1010 tJpo de subunJdad protek:a. Una protefna
con un solo lugar de uni6n que reconozca una zona
de sf misma. a menudo genera dfmeros siml!tricos.
Normalmente, estos dfmeros se asoclan con otras
dlmero subunidades ormando tetnimeros yagregados
mayores (no se muestra).

Figura 3-45 Modelo de clot. de un

Las subunidades proteicas pueden ensamblarse dmero formado. partir de dos
forrnando grandes estrueturas21 lubunldades protelClll'lldintlClll'l
(mon6men:MI). La prote!na mos[rada
Los mismos principios que penniten que varios dominios proteicos se asocien es la protefna activadora de gen por
formando lugares de uni6n, tambi~n permiten la formaci6n de estructuras mu- catabolito (CAP) de bacteria ilustrada
cho mayores en la c~lula. las estrueturas supramoleculares tales como los com- previamente en la Figwa 3-35. (Por
plejos enzim~ticos, los ribosomas, los filamentos proteicos, los virus y las mem- cortes!a de 'ane Richardson.)
branas no se sintetizan en forma de moltkulas gigantes unidas covalentemente;
en Jugar de eUo se forman por agregados no covalentes de muchas moltkulas
prefonnadas, que en la estruclura final se denominan subunidades.
EI uso de subunidades pequei'las para construir grandes estructuras presenta
varias ventajas: (I) la construcci6n de una gran estructura a partir de una 0 aJgu-
nas subunidades menores repetidas reduce la cantidad de infonnacl6n gen~tica
necesaria; (2) puesto que las subunidades se asocian a trav~ de mUltiples enlaces
de energfa relativamente baja, tanto el ensamblaje como la disgregaci6n resultan
f~ci1es de conuolar; y (3) el ensamblaje de subunidades minimiza los errores en la
slntesis de la estructwa ya que en el uanscwso del ensamblaje pueden actuar
mecanismos de correcci6n que exduyan las subunidades defectuosas.

Un solo tipo de subunidad proteica puede interaccionar consigo

misma formando agregados geom~tricos reguJares 29
51 una protefna tiene un lugar de uni6n que es complementarlo de una regi6n de
su propia superOcie, se ensamblar~ espontaneamente formando una estructura
mayor. En el caso m~s sencillo, un centro de uni6n se reconoce a sf mlsmo y for-
rna un dfmero slmt!trlco. Muchas enzimas y otras protefnas forman dfmeros de

eJtrueturn ensamDh.d... Figura 3-46 Cuando un 1010 tJpo de

lubunJdad protelca Interacdon.
collligo misma, se pueden generar
anWos 0 hiUces. En la Figura-3-S se
muestra c6mo se forma una hiLice; se
genera un onillo en lugar de una hillce
si las subunidades se unen entre eUas,
deteni~ndose el crecimiento de 10
cadena.

~,,,,,-"-
Inillo

de uniOn

130 Cap{tuJo 3: MacromolkuJas: estnletura, forma e lnformacldn

 Figura 3-47 Un marnenlo de acdna.
En este imponanle filamento, que se
discule en detalle en el C8.pftulo 16,
existen aproximadameme dos
subwtidades proteicas g10bulares por
vuelta.

este tipo, que frecuentemente acn1an como subunidades en la formaci6n de

agregados mayores (Figuras 3-44 y 3-45).
Si ellugar de uni6n de una protefna es complementario de una regi6n de su
superficie Que no incluya al propio lugar de uni6n, se formant una cadena de sub-
unidades. Determinadas orientaciones de los dos lugares de uni6n harAn que
la cadena se clerre pronto sabre sf misma formando un anillo de subunidades
(Figura 3-46). Sin embargo es mas frecuente que se produzca un largo polfmero
de subunidades; cuando cada subunidad se una a la siguiente de forma idenLica,
las subunidades del poUmero se dispondrtn siguiendo una helice prolongada
indefinidamente (vease Figura 3-5). Unfilamento de actina, por ejemplo, es una
estructura helicoidal formada a partir de una sola subunidad: una prOlerna glo-
bular denominada actina; los filamentos de actina son componemes mayorita-
rios del citosol de la mayorfa de las celulas eucariotas (Figura 3-47). Como discu-
timos mas adelan1e las protemas g10bulares tambien pueden asociarse con
moltkulas semejantes formando grandes himinas 0 rubos (vease Figura 3-49).

A menudo las protemas superenroUadas colaboran en la

construcci6n de grandes estructuras en las C~luJas30
Normalmente cuando la resistencia mectnica es especialmente importan1e, los
agregados supramoleculares se consrruyen a paror de subunidades fibrosas en
lugar de subunidades g1obulares. Es10S agregados pueden estabilizarse por un
gran mlmero de regiones de comaC10S protema-pro1efna que se producen cuan-

Flgu ra 3-48 Estructura de una heIke

luperenroUada. En (A) se presenta una
h~lica a sencilla, con las cadenas
laterales de los amino4.cidos sucesivos
sef\aladas siguiendo la secuencia de
siele elementos "abcdefg" (de abajo a
arriba). En esta secuencia los
amlno4.cidos a" y d" colnciden sobre
la superficie del cillndro formando una
"banda" (seftalada en rajo) que gim
lentamenle alrededor de la h~lice a.
Tfplcamente, las prolemas que forman
h~llces superenrolladas tienen

l
b.nd. dl amino4.cidos hidrof6bicos en las
.mlno6cldo.
hldrof6blco. posiclones ~a- y d~. Por 10 tanIO, como
".- V "d" se mucstra en (B), las dos h~lices a
11 nm pueden enroscarse una sobre la otra de
fonna que las cadenas laleralcs

J hldrof6blcas de una h~lice a"

interaccionen con las cadenas laterales
hidrof6bicas de Ia otTa, mienuas que
las OlraS cadenas laterales, mAs
hidroffiicas, quedan expuestas
Iibremenle al enlomo acuoso. (C) La
HOOC COOH cstruClum al6mica de una h8ice
superenrollada, determinada por
cristalograffa de myos x.. Las cadenas
laterales en mjo son hidrof6bicas. (C,
O,!inm
de T. Alber, Curr. Opin. Genn. DeveL
IAl 181 ICI 2:205-210, 1992. 0 Currem Science.)

Estruetura de las prolelnas 131

 Figura 3-49 Las subunldades

.-
I'mina proteicas globuJares empaquctadas
amp'qllet.d/l de forma hexagonal pueden generar
de forma
heKagonml tanto una himina plana como un
IUbo
.ubunid8'd

lubo
hellcoida'

do las subunidades se enrollan una respeclo a la otra fonnando una hCliee mul-
tihebra. Una unidad estruetural particulannenle estable utilizada repctidamenle
en esle sentido. es la denominada hellce superenrollada (coiled-coU). Se forma
por el apareamiento de dos subunidades de helice a que tienen una distribu-
ci6n repetida de cadenas laterales no polares. Normalmente las dos subunida-
des de helice a son idenlicas y corren en paralelo (es decir. en la misma direc-
ci6n amino-carboxilo terminal). Se enroUan gradualmeme una alrededor de la
otra generando un filamemo rfgido de un dioimetro de unos 2 nm (Figura 348).
En algunas familias de prolefnas reguladoras de genes las helices superenroUa-
das actuan como dominios de dimerizaci6n. Mas frecuemememe. una hClice
superenrollada puede extenderse mas de 100 nm y actuar como un bloque de
construcci6n de una gran estruclura fibrosa. como el filamenlo fino en la celula
muscular.

Las prote'nas pueden ensamblarse formando laminas,

tubos 0 esferas31
Algunas subunidadcs proleicas se ensamblan formando laminas planas en las
que las subunidades sc disponell siguiendo un patr6n de anillos hexagollales.
A veces. las protefnas especializadas en trallsporte a IraveS de memhrallas pre-
sentan una disposici6n de este tipo en el interior de la bicapa lipfdica. Un pe-
queno cambio de la geometrra de las subunidades puede hacer que una lamina
hexagonal se convierta en un tubo (Figura 3-49) 0, si se producen lllaS eambios,
en lIna esfera hueca. Moleculas proleicas tubulares y esfericas quc se uncn espe-
cfficamente al UNA y al DNA forman la cubiena de los virus.
La formaci6n de eSlructuras cerradas, como anillos, tubos y esferas, propor-
ciona una estabilidad adicional al incremenlar el numero de enlaces que se
puedcll formar entre las suhunidades proteicas. Ademas, debido a que estrllclU-
ras como eSlas se forman por interaciones coaperativas mutua mente depen-
dienles entre subunidades, puede inducirse la formaci6n a la disgregaci6n del
complejo a Iraves de cambios relativamenle peqllenos que afeclen a las Sllhuni-
dades individuales. EsIOS prindpios quedan ilustrados de forma espectacular en
las protefnas cdpsides de muchos virus simples que adoplan la forma de una es-
fera hueca. A menudo. eSlas cubiertas estan farmadas par dentos de subunida-
des proteicas identicas que envuelven y protegen el addo nucleico vfrico (Figura
3-50). La protefna de estas c<1psides ha de lener une estructura panicularmenle
adaptable, ya que ha de establecer muchos tipos diferel1les de conlaCIOS y tam
bien alterar su dispasici6n para pennitir la salida del addo nucleico al iniciar la
multiplicaci6n wrica cuanda el virus ha entrada en la celula.

Muchas estructuras celulares son capaces de autoensamblarse'2

La infonnaci6n necesaria para el ensamblaje de muchas agregados macromole
Clllares celulares ha de hallarse en las propias subunidades. ya que en condido-

132 Capftulo 3: Macromol~ulas:estructura, forma e infonnaci6n

 Ires dlmeros Figura 3-50 Estructura de un virus
esrerlco. En muchos virus se
empaquclan subunidadades proteicas
idcnticas generando un caparaz6n
esferico {una capside) que contiene el
Pllrt(culll
lneomplet.I genoma vfrico compueslo de RNA 0 de
DNA (vcase Figura 6-72). Por razones
geomclricas, no se pueden
empaquelar de una forma simelrica
precisa m6s de 60 subunidades

1_;0,0 do "",y~;'o idCnlicas. Sin embargo, cuando

pUeden existir pequei'las
dominio de cortez, irregularidades estrucrurales, se pUede
generar una capside mayor utilizando
b.uo <te eonexiOn m6s subunidades. Por ejemplo, el virus
dominio del tomate achaparrado rTBSV, de
do._ Tomato Bushy Stunl Virus) es esferico,
ORNA
de unos 33 run de di1metro, formado
par 180 copias identicas de una
protema de la dpside de 386
amino6cidos y un genoma de RNA de
4500 nucle6tidos. Para formar una
c4pside tan grande.la proleina ha de
poder colocarse en Ires ambienles alga
diferentes, cada uno de los cuales se
presenta en color en la panicula de la
figura. Tambien se muestra una
propuesta sobre el proceso de
ensamblaje; la estructura
tridimensional precisa se ha
determinado par difracci6n de rayos X.
(Dibujos par cortesia de Sieve
partJcul' Harrison.)
virica
intlletll
190 dlme.oll

nes adecuadas las subunidades aisladas puedes ensamblarse espont<1neamente

en el tubo de ensayo dando lugar a la estruclura final. 1 primer agregado ma-
cromolecular del que se dcmostr6 que era capaz de autoensamblarse a partir de
sus elementos constituyentes fue cl virus del mosaico del rabaCD (TMV, de To-
bacco Mosaic Virus). Este virus es una larga varilJa en la que un cilindro de pro
tefna se halla dispuesto a1rededor de un nucleo helicoidal de RNA (Figura 351).
Si se mezclan en soluci6n el RNA y las subunidades proleicas disociadas, se ob
serva que se recombinan formando partfculas vfricas completamente activas. EI
proceso de ensamblaje es sorprendentemente complejo e incluye la formaci6n
de anillos dobles de protefna que actuan como intermediarios que se anaden a
la cubierta vfrica en crecimiento.
Otro agregado macromolecular complejo que se puede reensamblar a partir
de sus elementos constituyentes es el ribosoma bacteriano. Eslos ribosomas es
tan compuestos por unus 55 ll1ol~culas proteicas diferentes y 3 moleculas dire
rcntes de rUNA. Si los 58 componcntes se incuban en condiciones apropiadas, es
pontaneamcnte forman la estructura original. L.o que es mas importantc, estos
ribosontas rcconstruidos son capaces de lIevar a cabo sfntesis proleica. Como ca-
bia espcrar, el proceso de rccnsamblaje de los ribosomas sigue una vfa especffica:
primero ciertas protefnas se fijan aI RNA; luego, eSle complejo es reconocido por
otras prOlefnas, y asf sucesivamente hasta que la estructura esta completa.
Todavfa no esta claro c6mo se regulan algunos de los procesos mas compli-
cados de autocnsamblaje. Por ejemplo, parece que muchas estructuras de la c~
Illla ticncn una longitud exactamente definida, que es muchas vcces superior a

Estructura de las prOieinas 133

la de las macromoleculas que las componen. En muchos casos todavfa constiru-
ye un enigma c6mo se consigue esta deterrninaci6n de la longitud. En la Figura
3-52 se Uustran tres posibles mecanismos de este proceso. En el caso mas send-
110, un nucleo proteico u otra macromolecula proporciona un soporte que deter- 181
milla el lamano final del ensamblaje. &lte es el mecanismo que determina la Figura 3-51 Estruetura del virus del
longitud de la particula TMV en la que el nucleo esta constituldo por la cadena mosalco del tabaco. (A) Mierograffa
de RNA. De forma similar se ha demostrado que es una protefna de nucleo la electrdnica del virus del mosaieo del
que dctermina la longitud de los filamentos finos del musculo y de las largas co- tabaco [fMv, de Tobacco Mosaic Virus)
las de algunos virus bacterianos (Figura 3-53). fonnado par una uniea larga molecula
de RNA rodeada por una cubiena
proteica ciHndrica que estA compuesta
No todas las estructuras biol6gicas se forman por una densa disposicidn helicoidal
par autoensamblaje33 de subunidades proteicas identicas.
(H) Modelo que muestra pane de la
Algunas estructuras celulares mamenidas por enlaces no covalentes no son ca- estruetura del TMV. Una molecuJa de
paces de autoensamblarse. Una mitocondria, un cilio 0 una miofibrilla no pue- RNA de una sola hebra, de 6000
den formarse espontAneamente a partir de una solud6n de sus componentes nucle6tldos, se empaqueta fonnando
macromoleculares porque parte de la informaci6n necesaria para el ensamblaje una cubierta helicoidal consnuida a
es suministrada por enzimas especiales y por otras proternas celulares que reali- partir de 2130 copias de una protefna
zan la fund6n de plantiUa 0 patr6n y que no aparecen en la estructura final una de cubierta de 158 residuas de
vez ensamblada. Incluso a1gunas estructuras pequei\as carecen de a1guno de los amino'c1do de longirud. En ellUbo de
ingredientes necesarios para su ensamblaje. Por ejemplo en la rormad6n de un ensayo a partir de RNA purificado y
pequeno virus bacteriano la estructura de la cabeza, compuesta por un solo tipo de molkulas de proteina se pueden
de suhunidad proteica, se ensambla sabre un annaz6n transitorio compuesto autoensamblar partfculas del virus con
plena capacldad de Infeccl6n. (A por
par una segunda protema. Puesto que esta segunda protefna no aparece en la
conesfa de Robley Williams; Bpor
partfcula vfrica fmal, la estructura no puede reensamblarse espontaneamente cortesia de Richard J. Feldmann.)
despu~s de haber side disgregada. Se conocen olras ejemplos en los que la de-
gradaci6n proteolftica es un paso esendal e irreversible del proceso de cnsam-
blaje. eSte es el caso de las capsldes de dertos virus bacterianos e incluso de al- Figura 3-52 Tres poslbles sistemas a
gunos agregados proteicos senciUos, como por ejemplo la protefna estructural travts de los que se pUede formar un
colagena y la hormona insulina (Figura 3-54). Sobre la base de estos ejemplos re- gran agregado protelco de una
lativamente simples parece muy probable que el ensamblaje de una estructura longttud delermlnada.
Ian compleja como una mitocondria 0 un cilio irnplique por un lado una orde- (A) Coensamblaje a 10 largo de un
naci6n espadal y temporal suministrada por otros componentes celulares. y por nucleo proteico a1argado 0 de otm
otro procesos irreversibles catalizados por enzimas degradativas. macromolb;ula, las cuales acnian como
dispositivo de med.ida de longitud
(H) EI final del ensamblaje se produce
debido a la tensl6n que se aeWnula en
la estruetUr8 poliml!:rica a medida que
se van ai'ladiendo mas subunidades, de
forma que a panir de una dena
longltud, la energfa necesaria para
anadir otra subunidad a la cadena es
excesiva. (C) Ensamblaje tipo "pie de
rey", en el cuai dos tiposde moleculas
semejantes a un rodillo, de longitud
diferente, forman un complejo
(AI ENSAMBlAJE SOBRE (Sl TENSION ACUMULAOA lCI PIE DE REV escalonado que croce hasta que sus
UN NUCLfO finales coincideD exactamente.

134 CapUulo 3: Macromoll!culas: estructura, fonna e infonnacldn

 Resumen
LA conf0muu:i6n triLI/mens/annl de una molkukl proleka estd detem,inadn por su
semmda de Qminodcldos. LA estrudUm pkgtula estd esMblUuula por intema:iones
no colJaknta entre dlferenus ZOtJaS de In caderul polipeptfdiaJ. Los aminodcidos cu)'O
residuo es hidrof6bim tientltm a "gruptJIV m eltnterlor de Ia molkula; las inlemcd~
nn I.omles por enlaces de hldr6gmo entre los f!tIlaas peptfdlcos vedlUlS tum lugar a
h6lca a y 14minas p. ,.',U;#UUprolefnas RconstTuyen a pal1irde unldadi!:s modulLtres
que son reg10nn gtolJlllares conoddas wmo domlnlos; tfpkaltU'nle las proteJnm pe-
queiUu presenUJn un unico domlnio mientras que las protefnas m4s grande:s tienen
oorWs dominios un.idos mITe sf a trtwh de wrtas zonas de lao c:adi'nn polipeptfdka.
A medida qUI! las protefnasfueron evoludona~ los domlnlos fueron modifiaindose
y rombiJufndos#! ron otros domlnlos co1U~ndoseas( nlmw prote(ruu.
Las proteCnas pueden unine entre sf fonnando gra'ules estructuras a travis de
las mlsmas fuerzas no coMlenle$ que determinan el plegado de las protefnas. Las
protefmu que presentan lugare. de uni6" para .u propla .uperjkle se pueden en-
.amblarfonnando dfmero., anillo. cerratlos estmctllras esferlcas 0 polfmero.llell-
coldales. Algumu mezda.s th protefnas y th tkido. nudelco e puetkn emamblar
eS/Jotltdtleamente en 1m tllbo th ensayo produdendo estructllras romplejas pern
m,u:Jro. procesos th etlsamblaje pre.entan pasos irreversible. de modo que no todas l00"m
las e.tnu:turas de la dlula .on capace. th reensamblarse e.ponttfneamente de. Figura 3-53 E1ectronmJcrograf(a del
puh de haber .ido disoc:ltufns ell IIU elementos comtltuyentes. baeterl6rago lambda. La punta de la
cola del virus se une espedficamente a
una protefna detenninada de Ia
Las protefnas como catalizadores" superficie de una c8u1a bacteriana, y a
conlinuad6n un DNA densamenle
empaquer:ado, Siluado en Ia cabeza de:!
las propiedades qUfmicas de una molecula proleica dependen casi complela-
virus, es lnyectado a Ia U1ula a tra~ de
mente de los residuos de amin04cidos que quedan expueslos en su superficie y Ia cola del virus. La cola liene una
que son capaces de formar enlaces Mbiles no covalenles con otras moJeculas. longitud precisa, determinada por eI
Cuando una molecu)a proleica se une a otra molecula, a esta segunda moJecula mecanismo que se muestra en Ia
se la denomina Ugando. Puesto que la inleracci6n eficaz entre una molecuIa pro- FiguI1l3-52A
leica y un Iigando requiere que se fonnen simult4neamente emre ambas molecu-
las varios enlaces debiJes, los unJcos Ugandos que se pueden fijar fuenemente a proJntulin.
una prolefna determinada son los que se adaptan exactamente a su superficie. ( zC
La regi6n de una protefna que se asocia con un Ugando recibe el nombre de
lugar de unl6n de dicha protefna y suele tener forma de cavidad, constituida por
una disposici6n espedfica de amin04cidos en la superficle de la protefna. A me- G SH

IJ PI},~ml,"" '::KIfIOO
nudo estos amin04cidos pertenecen a zonas muy distantes de la cadena poli-
peptfdica (Figura 3-55) y represenlan una pequefia fraccl6n del numero tOlal de
aminoo1cidos presentes. EI resto de la molecula proteica es necesario para man-
__."'."~"~":I
Itll.bilindo por
lener la cadena polipeptfdica en posici6n correcta y para sumlnislrar lugares de ~" dJ.uJturo
unJ6n adicionales con finalidad reguladora; normahnente el interior de la protef- S-S
na unicamente es imponanle en coanlo confiere a la superficie de la molecula
una forma y una rigidez adecuadas.

La conformaci6n de una protema determina

sus propiedades qufmicas 20
A menudo los residuos superficiales de una proteina interaccionan de tal mane-
ra que alleran la reactividad qufmica de algunos residuos detenninados de ami-
noAcidos. Estas interaciones son de diferentes tipos.
S-SI
!
I. _-
elimlnKi6n del p6p1ido
de unl6n. quedando
,$I un. molkuJ.
camp,,", de Insulin.,

Figura 3-54 La honnona pollpeptfdka insulina no puede fonnarse de

nuevo de forma espontinea II se rompen sus puentes d1su1furo. se simetiza
7
=
I, redueci6n "p.r.
como una gran prolerna (proinsulina},la cual es dividida por una enzima irreverslblemenlt

+.
despu~s de que la cadena polipeplfdica se haya plegado adoptando una forma [ las cIos cadenas
especffica. La escisi6n de parle de la cadena polipeptldlca de la proinsulina SH SH SH SH
supone una ~rdida irreparable de la infonnaci6n necesaria para que la
proteina se pliegue espOnlll.neamente aqoptando su conformaci6n normal.
~i"""-",;-
.'SH SH
! )
=
1 Las protemas como catalizadores 135
 Figura 3-55 Lugar de unl6n a llgando
de la prote(na activadora de un gen
por catabollto (CAP, de Catabolite
Gene Activator Protein). La uni6n por
enlaces de hidr6geno entre CAP y su
ligando, el AMP cfclico (verde) se
determind6 por analisis cristalogrMico
de rayos X del complejo. Como se
indica, las dos subunidades id~nticas
del dimero cooperan rormando este
lugar de uni6n (v~ase lambi~n Figura
3-45). (por conesfa de Tom Sieitz.)

En primer lugar, zonas vecinas de la cadena polipeptfdica pueden inlerac-

cionar de manera que reslrinjan el acceso de moh~cuJas de agua a olras zonas de
la superficie prOlcica. Puesto que las mol~culas de agua tienden a forma enlaces
de hidr6geno, compiten con los Iigandos por cienos residuos de amino~cidos de
la superficie protcica (Figura 3-56). Por oonsiguiente, la intensidad de los enla-
ces de hidr6geno (y de las interacciones i6nicas) entre las prolefnas y sus Iigan-
dos queda ahamcnte incrementada cuando las moJeculas de agua son excluidas.
A primera vista resuha diffcil imaginar un mecanismo que pueda excluir de la
superficie de una prolefna una mol~cula tan pequefla como la del agua sin afec-
tar el acceso del propio ligando. Sin embargo, y debido a su clara tendencia a
formar enlaces de hidr6gcno. las moleculas de agua se haHan formando una am-
ptia fed mantenida por estos enlaces (vease Panel 2-1, p~gs. 50-51) y a menudo
el separarse de la red e introducirse en una grieta de la superficie proteica resul-
la energt'hicarnente desfavorabte para las distintas molcculas individllales.
En segundo lugar, la agrupaci6n de residuos de aminoacidos polares veci-
nos puede attcrar Sll rcaclividad. Por ejemplo, si debido at plegamicnto de ta
protcfna varias cadenas laterales con carga negativa son inducidas a agruparse,
en conlra de su reputsi6n mutua, ta afinidad de cada residua de aminoacido por
un ion de carga positiva aumel1la marcadamente. Determinadas cadenas latera-
les pueden tambien interaccionar una con otra a traves de enlaces de hidr6geno,
1l
los cuales pueden activar grupos laterales normalmente no reactivos (como el
-CHzOH de la serina, que se mueSlra en la Figura 3-57) transfonnandolos en
grupos altamente reactivos capaces de intervenir en reacciones que generan 0
rompen enlaces covalentes delerminados.
Por consiguiente, la superficie de cada molecula proteica tiene una reactivi-
dad quimica caracterfslica que depende no s610 de las cadenas lalerales de ami-
noacidos que quedan al descubierto, sino que depende tambien de la exacta
Figura 3-56 Compelencla por la
orienlaci6n de eslas cadenas el1lre sL Por esta raz6n, dos confonnaciones Iigera-
formacl6n de enlaces de hldr6geno.
mente diferentes de la misma molecula proteica pueden ser enormemente dire- La habilidad de las moleculas de agua
rentes en cuanto a sus propiedades quLmicas. para ravorecer la rormaci6n de enlaces
A menudo, cuando la reactividad de las cadenas laterales resulla insuficien- de hidr6geno oon grupos de la
te, las proleLnas utilizan la ayuda de detenninadas molecuJas no polipeptldicas superficie de la protefna reduce
que fijan a su superficie. Estos Iigandos actuan de coenzimas en las reacciones notablemente la tendencia de estos
catalizadas enzimaticamente y pueden estar tan fuertemente unidas a la prolef- grupos a unirse unos con otros.

136 CapCluJo 3: Macromol6:ulas: estructura, fonna e infonnaci6n

 H H selina r8e<:t;v8
o I Sal 195 o I .. \ ! ...
II _t:'I
(-0'-' H-N
...... C::::" ~
""I:N H-O-CH II
(-0"
c -8 '-
--HIIIHN? 'N-H:: Q-CH --.r.... 2
'-"1/ ' \ / ..... I , .......

I
C=C Hi$57
I
c=c
H H
IBOrdenaclon de
los enlacn de
hidr6geno

oa que lIegan a format pane efectiva de la propia prolcfna. Ejemplos de este Figura 357 Un amino;icldo
caso los hallamos en los grupos hema (que contienen hierro) de la hemoglobina exlraordJnarlamente reactivo en el
y de los citocromos, en la r;ami"a pirofas/ato de las enzimas implicadas en la lugaractivode llDa enzima. EI
transferencia de grupos aldehido y en la biotina de las enzimas que participan ejemplo que se muestra es la "triada
ell la transfercncia de grupos carboxilo. La mayana de coenzimas son mollkulas catalftica que se preselUa en la
organicas muy complcjas, seleccionadas en base a la reactividad qUlmica Que quimotripsina, en la elastasa y en Olras
serina proteasas (vease Figura 3-39).
adquieren cuando se unen a 1a 5uperficie de una proteins. Ademas de su lugar
La cadena lateral del Jidda aspartico
reactivo, una coenzima tiene alros residuos que la fijao a su proteina huesped
induce a la hislidina a eliminar el
(Figura 3-58). La Figura 3-59A mueslra un modelo espadal compaclo de una en- prol6n de la serina 195,10 cual aCliva la
zima un ida a su cocnzima. senna para fonnar un enlace covalenle
can el substrata de la enzima
EJ primer paso de la cataIisis enzim;itica hidrolizando un enlace peptfdico
como se i1ustra en la Figura 3-64.
es la unj6n del substrato35
Una de las fundones m:is imponanlcs de las proteinas consisle en actuar como
enzimas. catalizando reacciones qufmicas determinadas. En eSle caso elligando
es la mohkula de substrata y la uni6n del substrata a la enzima es un preludio
esencial de la reacci6n qufmica (Figura 3-59B). Si denominamos a In enzillla E,
al subslrato S y al producto P, la reacd6n basica es E + S ~ ES ;::: EP;::: E + P.
A partir de esta simple represcntaci6n de una reacd6n catalizada por una cnzima,
podemos vcr que existe un Ifmile a la camidad de subslrato que cada mor.kula
de enzima puede pracesar en un tiempo dado. Si se incremcnta In concentra-
ci6n de substrata, la velocidad a la que se forma el produclo tam bien se incre-
menta, hasta alcanzar un valor maximo (Figura 3-60). En este punta la moltkula
de cozima sc halla saturada de substrata y la veloddad de reacci6n (dcnominada
Vn'b) depcnde unicamentc de In velocidad a la que sea procesada la malccula de
substrata. Est'a veladdad dividida par la concentraci6n de la enzima constituye Figura ]-58 Coenzimas. Las
coenzimas, como la tiamina pirofosfato
[fPPJ mostrada aquf en gris. SOil
caenzime
l>Cquenas moleculas que se unen a la
superficie de una enzima permitiendole
catalizar reacciones especfficas. La
reactividad del TPP depende de suo
Atomo de carbona "acfdico, que
imcrcambia rnpidamente su Atomo de
hidr6geno por un Aloma d;carbona
de una molecuJa de substrata.
Probablemente Otra5 regiones de la
<:entra molecula de TPP acnian como ~asas
leKtivo
mediante las cuales la enzima manliene
ala coenzima en posici6n correcta.
Probablemente las coenzimas
evoludonaron primero en un "mundo
de RNA ~ donde se unfan a moleculas
de RNA para colaborar con elias en los
procesos de catAlisis (se discute en eI
Capflulo t).

Las proleCnas como catalizadores 137

 Figura 3-59 Modelo! de espaclo
Ueno, genendos por ordenadorI de
dOl enzimas. En (A) se presenta el
c1u)(:romo c unido a su coenzima
hemo. En (8) se presenta la lisozima de
la clara de huevo, con un substrato
oUgosactrido unldo. En ambos casas
el Uganda unldo se presenta en mjo.
(Por cortesfa de Richard J. Feldmann.)

IAI 101

el m1mero de recambio. A menudo el m1mero de recamhio es de aproximada

mente 1000 mollkulas de substrato procesadas cada segundo por cada mol&:ula
de enzima pero puede Jlegar a alcanzar valores mayores en casos extremos.
EI otro parAmerro cin~tico utiJizado con frecuencia para cat8cterizar a una
enzima es su ~, que es la concentraci6n de substato que permile aJcanzar la
mitad de la velocidad mwma de la reacci6n (Figura 3-60). Una KM baja significa
que 1a enz.ima alcanza su mAxima velocidad catalitica a una baja concenrraddn
del substrata, y por 10 general indica que la enzima se une a su substrata fiUy
fuertemente.

Las enzimas aceleran las reacciones estabilizando determinados

estados de transici6n36
Las enzimas consiguen que las reacciones qufmicas se produzcan a velocidades
extremadamente allas -mucha mc1s que a traves de cualquier cauUisis sintetica.
Esta eficiencia puede ser atrlbuida a varios factores. En primer lugar, la enzima
actua aumentando la concentracl6n local de las mol~culas de substraro en ellu-
gar catalltico y manteniendo los alomos adecuados en una orientaci6n correcta
para 1a reacci6n que se producira a continuaci6n. Sin embargo, 10 mas impor-
lame es que una parte de la energfa de fijaci6n contribuye directamente a la ca-
talisis. Antes de formar los productos finales de 1a reacci6n, las mol~culas del
substrata pasan a traves de una serie de formas intermedias de geometrfa y dis- Figura 3-60 Cln~ca enzlmlhlca. La
tribuci6n electr6nica a1teradas y son las energfas libres de estas rormas interme- velocidad de una reacci6n enziImhica
dias y en especial las de los estad05 de translci6n mas inestables, los principales (V) aumeRla cuando aurnenta la
concentracl6n del substrato, hasta
determinantes de la velocidad de la reacci6n. Las enzimas presentan mayor aft
alcanzar un valor mUimo (V..J. En
nidad por estos estados inestables de transici6n de los substratos que por sus
este puntO, todos los lugaTes de unl6n
al substrata de las molecuJ.as
enzim!ticas I!Stlln ocupados;"y la
velocidad de la reaccl6n est! Iimitada
por la velocidad del proceso de
cal<tlisis sobre)a 5uperficie de la
enzima. Para la mayoria de las enzimas
la concentraci6n de substrato a la que
la velocldad es igual a la mitad de la
velocldad mltxlma (K,..) constituye una
medlda de la fuerza con que la enzima
se une al substrato: cuanto mayor es el
valor de la K"" menor es la fuerza de
~ conc.ntraclon d. lubllrllto- uoi6n.

138 Capftulo 3: Macromoloculas: estructura, forma e Informacl6n

formas estables, y estas interacciones disminuyen las energfas de los estados de energla de actlvecion para una
raecei6n no ceta1izllda
transici6n acelerando as! una reacci6n determinada (Figura 361).
Una clara demostraci6n de c6mo al estabilizar un estado de transicl6n se pue-
de incrementar enonnemente la velocldad de la reacci6n la constituye la produc-
ci6n intencionada de anticuerpos que acttlan como enzimas. Consideremos por
ejemplo la hidJ"6lisis de un enlace amida, que es similar aI enlace peptfdico que
une aminolicidos adyacentes en las protemas. En una soluci6n acuosa un enlace
amida se hldroliz.a muy lentamente mediante el mecanismo ilustrado en la Figura
3-62A. En el compuesto intennedio central, 0 estado de transici6n, el carbono car
bonilo se halla unido a euatro litomos situados en los v~rtices de un tetraedro. Se
puede obtener un antieuerpo que actUe como una enzima generando anticuerpos
que se unan fueltemente a un anAlogo estable de este compuesto intermedio terrae-
progreso _
drico, muy inestable, tal como se ilustra en la Figura 3-628. Este anticuerpo catalf- de la raeoei6n
tico se une aI compuesto intennedio tetraedrico y 10 estabiliza, incrementando as! eIMugla de 8ctiveci6n pera
mlls de 10000 veces la velocidad de hidr6lisis espontanea del enlace amida. una reecci6n eelalinda

Figura 3-61 Las enz.lmll5 aceleran las

Las enzimas pueden facilitar la formaci6n y la rotura de enlaces reacclones qubnicas dismlnuye:ndo 1&
covalentes a trav6i de una catalisis acida y bcisica simultaneaS7 eoergfa de actJvad6n. A menudo
tanto las reacciones no catalizadas (A)
Las enzimas son mejores cataliz.adores que los antieuerpos catalfticos. Ademlis como la cataHzada por una enrima (8)
de unirse fuertemente al estado de transici6n, ellugar activo de una enzima con- se producen a tra~ de diversos
tiene atomos situados en el espacio de fonna precisa que aceleran la reacci6n a1- estados de transici6n. El eslado de
terando la distribuci6n de los electrones de los atomos implicados en la fonna transici6n de mayor energfa (S' y ES')
ci6n y la rotura de los enlaces covalentes. Los enlaces peptfdicos, por ejemplo, es el que detennina la energfa de
activaci6n y Iimita la velocidad de la
pueden ser hidJ"olizados en ausencia de una enzima exponiendo un polipeptido
reacci6n (S=subslrato; P=producto de
a una base fuerte 0 a un acido fuerte, como se explica en la Figura 3-638 y C. Sin la reacci6n).
embargo, las enzimas son tlnicas en hacer posible la catAlisis acida y blisica si-
multanea, ya que impiden que los residuos acidos y bllsicos necesarios se com-
binen unos con otros (como ocurrirla si estuvieran en soluci6n) aI mantenerlos
unidos a la rfgida estructura de Ja protefna (Figura 3-630).
Hay que precisar la adecuaci6n entre una enzima y su substrato. Un pequeno
cambia introducido mediante ingenierfa gen~tica en ellugar activo de una enzima
puede tener consecuencias extraordinarias. Por ejemplo, aI reemplazar illl c1cido g1u-
tamico por un l1cido aspArtico en una enzima se desplaza la posici6n del ion carboxi-
lato catalftico alrededor de 1A (aproximadamente el radio de un l1tomo de hidr6ge-
no), y eUo es suficiente para reducir la actividad de la enzima mis de clen veces.

FIgura 3-62 AntJcuerpoa calalfllcos.

(AI HIDROLISIS DE UN ENLACE AMIDA
La estabUizaci6n de un estado de
translcl6n por un anticuerpo genera

--N-H +,
H
o~--
H H
una enzima. (A) La reacci6n de la
hlclr6Usis de un enlace amida se
produce a lra~ de un imermedio
tetraidrico, que es el eslado de
Iransici6n de alta energfa de la
reacci6n. (B) La mol~ula mostrada a
IBI ANAlOGO DEL ESTAOQ DE TRANSICIClN PARA LA HIQftOUSlS DE LA AMIDA la izquierda se uni6 covaientemenle
a una proteina y se utiliz6 como
o anlfgeno para generar un anlicuerpo
II
_c~/\_ que result6 unirse fuertemenle a la

'~;>-o
regi6n de la mol~u1a sei'lalada en
amarillo. Este anticuerpo tambien se
une fuertemente aI eslado de
Iransici6n en (A), por 10 que actua
NO , 0
}-OH como una enzima que calaliza
eficientemenle la hidr6lisis del enlace
amida de la molecuJa que se mueslra a
laderecha

Las protefnas como catalizadores 139

 ,,0,
N
,,0,
N
Figura 3-63 Cal3llsls aclda y cat3llsls
baslea. {A} EI inicio de la reacci6n no
0 0 c3taJizada que se presenta enla Figura
MUY
LENTO RAPIOO RAPlDO RAP100 3-62A se ha dibujado aqu!. Ulilizando
eI sombreado en azul como un
/C"H
-N e- indicador esquematico de la
H H diSIribuci6n eloclronica del agua yde
los enlaces carbonilo. (8) Un acido
, ,0
d=J
e
, e,0
00 tiende a dar un prol6n (H') a Olras
.homos. En combinaci6n con el
I I oxigeno del carbonilo, un acido haee
IN no catjliSl, 181 ~lti.6clda 1<1 caUihsi. bbica 101 eatf,litis que los electrones tiendan a separarse
ik:ida y b'5lU del carbona carbonilo, haciendo que
esle 'Iomo alraiga mucho mas
fuertememe eI oxfgeno electronegativo
de la molecula de agua que ataca el
enlace. (C) Una base tiendea caplar
Ademas, las enzimas pueden incrementar las velocidades 1-1-: en eombinaci6n cun un hidrOgeno
de reacci6n formando enlaces covalentes intermedios de la molecula de agua atacante, una
con sus subslTatos31 base haee que los eloctrones se
desplaeen hacia el oxfgeno de la
Ademas de los mecanismos comentados antes. muchas enzimas aceJeran la veloci-
moll!cula de agua. haciendo que
dad de Ia reacci6n que eataUzan interaetuando de manera covalente con uno de sus cunstituya un grupo mas reactivo del
substratos, de modo que el substrato queda unido a un residuo de aminoocido 0 a carbona carbonilo. {OJ AI presentar
una molecuJa de coenzima. Generalmente cuando un substrata entra en ellugar de una dis posicion adocuada de alomos
uni6n de la enzima. se une oovalentemente a ella y entonces reacciona con un se- en su superficie. una enzima puede
gundo substrato sabre la superficie de la enzima que rompe el enlace covalente que realizar una eal3lisis acida y basica
se aeaba de ronnar. AI final de cada cicio de reacciones se regenera la enzima Iibre. simultaneamcnlC.
Consideremos. par ejemplo. el mecanismo de acci6n de las serina proleasas.
La reacci6n que catalizan. la hidr6lisis de un enlace peptidico. esta enormemente
acelerada debido a la afinidad de la enzima por el compuslO intennediario tetrae-
drico de 13 reacci6n. Pero una serina proteasa hace mucho mas que 10 quc hace un
tfpico anticucrpo calalilico: en lugar de esperar a que una mollkula de oxfgeno del
agua ataque el carbono carbonilo, hace que la reacci6n transcurra mucho Iluis ro-
pidamente ulili7..ando en primer lugar para eSle fin una cadena laleral de un amino-
acido siruada en el lugar adecuado (la serina activada de la Figura 3-57). Este paso
rompe el enlace pcplfdico pero Iibera la enzima unida eovalentemenle al gnlpo
earboxllo. Enlonees, en un segundo paso muy rapido, esle eompuesto intennedio
covalellle se destruye por la adici6n catalizada enzimatieamente de una molecula
de agua, 10 eual completa la reacci6n y regenera la enzima libre (Figura 3-64). A pe-
sar de que est'a reacd6n en dos etapas es menos directa que la reacd6n en una cla-
pa (en la que cl at;ua se ailadc direemmente al enlace peptfdieo), es mucho mas ra-
pida debido a que cada ctapa liene una energfa de aclivaci6n relativamcnle baja.

Las enzimas aceleran las reacciones qufmicas pero no pueden

hacerlas energ~licamentemas favorables
Par muy Sofislicada que sea una enzima. no puede haecr que la reacci6n qufmica
que calaJiza resulte m~s 0 menos favorable desde el plUltO de vista energetico. La
enzima no puede alterar In direrencia de energfa Iibre que exisle entre los subs-
tralOS iniciaJes y los prodUCIOS finales de la reacci6n. Como ocurrc en las simples
interacciones de enlace antes mencionadas, cuaJquier reacci6n qufmica tiene un
puntO de equilibrio en el que los flujos de la reacci6n en arnbas dirccciones son
iguales; por consiguienle. en esle punto ya no se produce ninglin cambia nelo de
concentrnci6n (vease Figura 3-9). $i una enzima acelera la velocidad de la rcac-
ci6n en un sen lido A + B -t AB en un factor de I ()'I. tambien debe acelerar en un
factor de 10' la velocidad de la reacci6n contraria AB -t A + B. EI cociellleentre las
velocidades de una y olra reacciones depende unicamente de las concemracio-
nes de A. de B y de AB. FJ punlo de equilibria es siempre exactamente el mismo.
independicntemente de si la reacci6n csta catalizada par una enzima 0 no.

140 Capftulo 3 : Macromolb::ulas: estructura. fonna e infonnacl6n

 ...
inlermedi.,10

So,
---CH1
'I.0-. \\c /C
0 a'H
1
...
---CH1
'e'rHdrico

0 C~NHl ---CH
1,
0
~ /C
a NH
~
I'" / ,ubslrfllO
'O-C/ O-c
H NH polipeptfdico
I
'H
~ Ita....-
~COOH
HNH
~ ~COOH
H

~COOH
Hi.;)
-' H
H"~)
-' H
primer
tiber.
~ptido

tA, ,., ,e,

Interme(li,rio
lelllledllco
So,
---CH 2
,O-C\\
0
/
C NH~

I
o
H
N.
'H
H.. ; )

-' H

'0' lEI ,F)

Las enzimas pueden determinar el sentido de una vfa acoplando Figura 3-64 A1gunas enzlmas forman
determinadas reacciones a la hidr6lisis del ATp39 enlaCe!! covalenCe!! con lIUll sublllraCos.
En el ejemplo mosrrado aquf, un grupo
La celuJa viva es un sislema quimico que se halla lejos del equilibrio. EI producto carbonilo de una cadena polipeptldica
de cada enzima suele actuar como substrato de olra enzima de 1a vfa metab6lica (en verde) fonna un enlace oovalente
yes consumido rapidamenle. to que es mas importante. por medio de las vfas con un re!!iduo de serina activado
catalizadas enzimaticamente descrilas en el CapftuJo 2, muchas reacciones son especfficamenle (vease Figura 357) de
impuJsadas en una direcci6n gracias a su acoplamiemo a la h..idr6lisis energetica- una serina proleasa (en grisl, el cual
mente favorable del ATP a ADP y fosfato inorganico. Para que eSla cstralegia sea rompe la cadena polipeptldica.
efectiva, los niveles de ATP se manlienen en unos vaJores nada ccrcanos a los de Cuando la porci6n no unida de In
equilibrio, con un cocienle elevado entre ATP y sus producloS de hidr6lisis (vea- cadena pollpeplJdica se ha ale/lido por
difusi6n, se produce un segundo paso
se Capftulo 14). Por consiguiente, este acelVO de ATP acnla como una "balerfa
en el cual una molecula de agua
de reserva" mameniendo un flujo continuo de alomos y de energfa a traves de la hidroliza el nuevo enlace covalente
celula a trav~ de vfas determinadas por las enzimas presemes. Para un sistema fonnado. separando asf la porci6n de
vivo.la proximidad al equilibrio qufmico significa degeneraci6n y muerte. la cadena polipeplldica de la superficie
de la enzima y liberando la serina para
Los complejos multienzim.hicos ayudan a incrementar ouo cicio de reacci6n. N6tese que en
la velocidad del melabolismo celular"O esta reacci6n los inlcrmediarios
tClraedricos ineslables {en tq"ari/lol
La eficiencia de las enzimas respecto a su fund6n accleradora de las reacciones son los estados de uansici6n, y que
qufmicas es crucial para el mantenimiento de la vida. En efecto, las cclulas hall ambos son cSlabilizados por In enzima.
de luchar contra procesos inevitables de degencraci61l que avanzan inexorable-
mente hacia el equilibrio qufmico. 5i las velocidades de las reacdoncs deseables
no fueran superiores a las de las recciones opuestas, la celula pronlo morirfa.
Midiendo la velocidad de utilizaci6n del ATP podemos tener una idea aproxima-
da de la velocidad a la que se procude el metaboJismo celular. Una celula tfpica
de mamrfero recambia (es decir, degrada por completo y substituye) todo su
acervo de ATP, cada I 02 minulos. Para cada celula esta renovaci6n representa
la utilizaci6n de una 107 moleculas de ATP por segundo (y para el cucrpo huma-
no, aproximadamente un gramo de ATP cada minuto).

Las protefnas como calallzadores 141

 La velocidad de las reacciones celulares es elevada gracias a la eficiencia de
los cataJizadores enzimaticos. De hecho. muchas enzimas importantes trabajan .... .. ......
de una forma tan eficiente que es imposible mejorarla: en eslOs casos el factor Ji-
milante de la velocidad de la reacci6n no es la velocidad intrfnseca de la acci6n . ......
. ...
enzimatica sino la frecuencia a la que la enzima imeraciona con Sll substrato. De
una reacci6n como l!sta se dice que esta limitada por la difllsi6n.
5i una reacci6n esta limjtada por la difusi6n, su velocidad depende de las Figura 3-65 Compartlmentacl6n. Se
concentraciones de la enzima y del substrato. Asi, para que una secuencia de reo puede conseguir un gran incremento
acciones se produzca con gran rapidez ha de existir una elevada concenlraci6n en la concentraci6n de las moleculas
interactuantes al confinarlas en el
de cada uno de los intermediarios melabOlicos y de cada una de las enzimas que
mismo compartimiento rodeado de
intelVienen en eUa. Dado el enorme mlmero de reacciones diferentes que se de- membrana. en una celula eucariota.
sarrollan en una cl!lula, existen !fOlites a las concentraciones que se pueden ai-
canzar de los substratos. De hecho. la mayorfa de metabolitos se hallan a con-
centraciones micromolares (10-4 M) Y las enzimas a concenrraciones mucho
menores. tC6mo es posible mamener velocidades metab6licas muy elevadas?
La respuesla reside en la organizaci6n espacial de los componentes ce1u1arcs.
Las velocidades de reacci6n pueden ser incremenradas sin aumenlar la concentm-
ci6n de los substratos, reuniendo las diversas enzimas implicadas en una secuencia
de reacciones y formando un gran complejo proteico denominado complejo mul-
tienziJlll1tico. De esta manera. el producto de la enzima A es transferido directa-
mente a la enzima 8, y asr sucesivamente hasla el prodUClO final, con 10 que las ve-
locidades de difusi6n no Iimitan la velocidad de reacci6n ni siquiera cuando la
concentraci6n de substrato en toda la celula es muy baja. Estos complejos multien-
z.imaticos son muy frecuentes (en la Figura 2-41 se mostraba la estructura de uno
de eUos, la piruvato deshidrogenasal e intelVienen en casi todos los aspectos del
metabolismo, incluyendo los procesos geneticos centrales del DNA y del RNA, y en
la sintesis de prote(nas. De hecho es posible que muy pocas enz.imas de las relulas
eucariotas difundan Iibremente en soluci6n. Par el comrario, la mayona de las en-
z.imas pueden haber desarroUado zonas de uni6n que les permitan conccntrarse
can otras prot'e(nas de funci6n relacionada en determinadas regiones de la celula,
incrementandose asf la velocidad y la eficiencia de las reacciones que catalizan.
Las celulas disponen ademas de otro sistema de incrementar la velocidad de
las reacciones metab6Ucas. tste depende del enorme sistema de membranas in
tracelulares de las celulas eucariotas. Estas membranas pueden segregar ciertas
substancias y las enzimas que aetuan sobre elias, dentro del mismo comparti-
mien to rodeado de membrana, como el reticulo endoplasmacico 0 el nucJeo ce-
lular. Si, por ejemplo. e[ compartimienlo oeupa un total de un 10% del voillmen
cellllar, la concenlraci6n de los reactanles dentro del compartimienlo ser!o 10
veces mayor que en una celulo similar no compartimentada (Figura 3-65). Las
reacciones que podrfan estar Hmitadas por la velocidad de difusi6n. pueden de
esta manera incrementar su velocidad en este mismo factor.
En el Capitulo 5 se dan mas detalles de In estructura y funci6n de las protefnas.
En el se discute de que forma las celulas construyen diminulas maquinas proteicas.

Resumen
La jiUl/(m biol6gica de una protefna tkpende de ins propiedades qufm/CtU thtalla-
\
dns de su Sllperftcle. Los lugares de "nidn para lignndos estnn constituldos por ctlVl-
dndn de la superfide en IllS Qurles dilWSllS ctJLIenns llItemks se localimn de una for-
mn preci.s:n gmdas al plegtrmieuto de In protefna. Dt!estnfomm, Inscadenas Intemles
de am/nodclilos IIornudmellte no reoct;oos puede hallarse activadas. lAs em/mIlS
acelemn ellormemente las veIoddndef de las rMccli11ln unJendose a los esUJdos de
trans/ddn de alia energfa, de unn fomUl esp;la/mellte intensa; IlImbUn desarrollan
caMIisis dddtu y bdsiCtU ,imultdneamente. A mf'nlldo, Ins velocidatles de las rwu:d.o-
1U!S enzinuftlCllS son 'Lin rtfpldas que dnialmente esMn lim/tndas por III difiui6m las
veloddades putden /ncremenlarse min nufs Illas enzimas que actUnn iii! fomlll
cuenc:ial se halla IInldasfonnando lin m/sma complejo muflienzinufti.co 0 s/ las enzi-
mas y SIU "4bstratos se halllln cvlljiruulas en el m/smo compartimienlo de III ciluIa.

142 Capftulo 3: Macromolkulas: estructura, forma e informaci6n

 Bibliograffa
General
Branden, C.; Tooze. J. Inlroduction 10 Protein Structure.
New York: Garland, 1991.
Gesteland, R.F.; Atkins, J.F., eds. The RNA World. Cold Spring
Harbor, NY: Cold Spring Harbor LaboralOry Press, 1993.
Judson, H.F. The Eighth Day of Creation: Makers of the Re-
volution in Biology. New York: Simon & Schuster, 1979.
Lehninger. A.L.: Nelson, D.L.; Cox. M.M. Principios de Bio-
qufmica, 2.' ed. Barcelona: Ediciones Omega. SA, 1993.
Mathews, G.K.; van Holde. K.E. Biochemisti)'. Menlo Park. CA:
Benjamin/Cummings, 1990.
Schulz, G.E.; Schirmer, R.H. Principles of Protein Structure.
New York: Springer. 1979.
Suyer, L Biochemistry. 3rd ed. New York: W.H. Freeman,
1988.
Vael, D.: Vael, J.G. Bioqufmica. Barcelona: Ediciones Ome-
ga, SA. 1992.
Watson, J.D., et aI. Moleodar Biology of the Gene, 3rd ed.
Menlo Park. CA: Benjamin-Cummings. 1987.
elias
I. Cantor. C.R.; Schimmel. P.R. Biophysical Chemistry,
Part I and Part III. New York: W.H. Freeman, 1980.
Eisenberg, D.; Crothers, D. Physical Chemistry with Ap-
plications to the Ufe Sciences. Menlo Park, CA: Ben-
jamin-Cummings, 1979.
Pauling. L The Nature of the Chemical Bond, 3rd ed. II.
haca, NY: ComeU University Press, 1960.
Whitesides, C.M.; Mathias, J.P.; Seto, C.T. Molecular
self-assembly and nanocbemistry: a chemical strat-
egy for the synthesis of nanostructures. Science
254:13121319,1991.
2. Abeles, R.H., Frey, PA; Jencks, W.P. Biochemistry. Bos-
ton: Jones and Bartleu, 1992.
Fersht, A.R. The hydrogen bond in molecular recogni-
tion. Trends Biochem. Sci. 12:301-304, 1987.
3. Cohen, C.; Parry, DAD. a-helical coiled coils-a wide-
spread motif in proteins. Trends Biachem. Sci.
11:245-248,1986.
Dickerson, R.E. The DNA helix and how it is read. Sci.
Am. 249(6):94-111, 1983.
4. Berg, H.C. Random Walks tn Biology. Princeton, NJ:
Princeton University Press, 1983.
Einstein, A. Investigations on the Theory of Brownian
Movement. New York: Dover, 1956.
Lavenda, S.H. Brownian motion. Sci. Am. 252{2):70-85,
1985. __
5. Lehninger, AL Bioenergetic: The Molecular Basis of
Biological Energy Transfonnations, 2nd ed. Menlo
Park, CA: Benjamin-Cummings, 1971.
6. Karplus, M.; McCammon, IA The dynamics of pro-
teins. Sci. Am. 254(4):42-51, 1986.
Karplus, M.; Petsko, G.A. Molecular dynamics simula-
tions in biology. Narllre347:63J-639, 1990.
McCammon, LA.; Harvey, S.c. Dynamics of Proteins
and Nucleic Acids. Cambridge, UK: Cambridge Uni-
versity Press, 1987.
7. Kirkwood, T.B.; Rosenberger. R.F.; Galas, 0.1.; cds. Accu-
racy in Molecular Processes: Its Conttol and Relevanre
to UvingSysterns. London: Olapman and HaD, 1986.
8. Berg. P.; Singer, M. Dealing with Genes. The Language of
Heredity. Mill Valley, CA: University Science Books, 1992.
BlbUograffa
Rosenfield, I.; ZifT. E.; Van Loon, B. DNA for Beginners.
London: Writers and Readers Publishing Cooperati-
ve. New York: Oistribuido en EE UU por Norton,
1983.
Saenger, W. Principles of Nucleic Acid Structure. Berlin:
Springer, 1984.
9. Moore, I. Heredity and Development, 2nd ed. New
York.: Oxford University Press. 1992.
Olby, R. The Path to the Double Helix.. Seattle: Univer-
sity of Washington Press. 1974.
Stem, G.S.: Calendar, A.Z. Molecular Genetics: An intro-
ductory Narrative. 2nd ed. San Francisco: W.H. Free-
man, 1978.
10. Watson, J.D.; Crick, F.H.C. Molecular structure of nu-
cleic acids. A structure for deoxyribose nucleic acid.
Narure 171:737-738,1953.
II. Felsenfeld, C. DNA. Sci. Am 253(4):58-66, 1985.
Meselson. M.: Stahl, F.W. The replication of DNA in
coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 44:671-682. 1958.
Watson, J.D.; Crick. F.H.C. Genetic implications of the
structure of deoxyribonucleic acid. Nature 171:964-
967,1953.
12. Drake, J.W. Spontaneous mutation. AmlU. Rev. Genet.
25:125-1465,1991.
Lindahl, T. Instability and decay of the primary Structu-
reofONA. Narure362:709-715, 1993.
Wilson, A.C. Molecular basis of evolution. Sci. Am.
253(4):164-173,1985.
13. Sanger, F. Sequences, sequences, and sequences. Annu.
Rev. Biochem. 57:1-28,1988.
Thompson, E.O.P. The insulin molecule. Sci. Am.
192(5):36-41,1955.
Yanofsky, C. Gene structure and protein structure. Sci.
Am. 216(5):80-94,1967.
14. Brenner, S.; Jacob, F.; Meselson. M. An unstable inter-
mediate carrying information from genes 10 riboso-
mes for protein synlhesis. Nature 190:576-581, 1961.
Darnell, J.E.. Ir. RNA. Sci. Am. 253(4):68-78,1985.
15. ChambOll, P. Split genes. Sci. Am. 244(5):60-71, 1981.
Steitz, JA Snurps. Sci. Am. 258(6):58-63, 1988.
Witkowski, JA The discovery of "spiltH genes: a scienti-
fic revolution. Trends Biocllem. Sci. 13: 11 0-113, 1988.
16. Crick, P.H.C. The genetic code: Ill. Sci. Am. 215(4):55-62,
1966.
The Genetic Code. Cold Spring Harbor Symp. Quam.
BioI. 31, 1965.
17. Rich, A.: Kim, S.H. The three-dimensional structure of
transfer RNA. Sci. Am. 238(1 ):52-62, 1978.
18. Lake, JA. The ribosome. Sci. Am. 245(2):84-97, 198L
Watson, 1.0. Involvement of RNA in the synthesis of
proteins. Science 140:17-26, 1963.
zamecnik, P. The machinery of protein synthesis.
Trends Bioc/lem. Sci. 9:464-466, 1984.
19. Altman, S.: Baer, M.; Guerrier-Takada, c.; Viogue. A.
Enzymatic cleavage of RNA by RNA. Trends Biocllem.
Sci. 11:515-518, 1986.
Cech. T. RNA as an enzyme. Sci. Am. 255(5):64-75, 1986.
Cech, T. Fishing for fresh catalysts. Narure 365:204.205,
1993.
Michel. F.: Westhof. E. Modelling of the three-dimen-
sional architeclure of group I catalytic introns based
on comparative sequence analysis. j. MoL BioL
216:585-610,1990.
143
 Noller, H.F. Ribosomal RNA and translation. Aflrlu. Rev.
Biochem. 60:191-227, 1991.
Noller. H.F.; Hoffarth. Y.; Zimniak, L Unusual resistan-
ce of peptidyltransferase to protein extraction proce-
dures. Sciellce 256: 1416-1419, 1992.
20. Branden, c.; Tooze, J. Introduction to Protein StruclUre.
New York: Garland. 1991.
Creighton, T.E. Proteins: Structure and Molecular Prop-
erties. 2nd ed. New York: W.H. Freeman, 1993.
Dickerson. R.W.; Geis, I. The Structure and Action of
Proteins. New York: Harper & Row, 1969.
Schulz, G.E.; Schinner, RH. Principles of Protein Struc-
ture. New York: Springer, 1990.
21. Anfinsen, C.B. Principles that govern the folding of pro-
tein chains. Science 181:223-230, 1973.
Baldwin, RL Seeding protein folding. Trends Biochem.
Sci. 11:&9, 1986.
Creighton, T.E. Disulphide bonds and protein stability.
Bi(H!SSQ}'!8:57-63,1988.
Richards, F.M. The protein folding problem. Sci. Amer.
264(1):54-63,1991.
Rupley. lA.; Gratton, E.: Careri, G. Water and globular
proteins. Trends Biochem Sci. 8: 18-22, 1983.
22. DooliuJe, R.F. Proteins. Sci. Am. 253(4):88-99, 1985.
Milner-White, E.).: Proet, R. Loops, bulges, turns and hair-
pins in proteins. Trends Biochem Sci 12:189-192, 1987.
Pauling. L: Corey. R.B. Configurations of polypeptide
chains with favored orientations around single
bonds: two new pleated sheets. Proc. Nall. Acad. Sci.
U$A37: 729-740,1951.
Pauling, L: Corey, R.B.: Branson, H.R. The structure of
proteins: two hydrogen-bonded helical configura-
tions of the polypeptide chain. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 27:205-211, 1951.
Richardson. J.S. The anatomy and taxonomy of protein
structure. Adv. Proleitl Cilem. 34:167-339. 1981.
23. Scoll, J.E. Molecules for strength and shape. Trends Bio-
cllem. Sci. 12:318321, 1987.
24. Branden, c.: Tooze, J. Introduction to Protein Structure.
New York: Garland, 1991.
Hardie, D.G.; Coggins.I.R. Multidomain Proteins-Struc-
ture and Evolution. Amsterdam: Elsevier, 1986.
25. Doolittle, RF. The genealob'Y of some recently evolved ver-
tebrate proteins. Trends Biochem. Sci. 10:233-237, 1985.
Neurath, H. Evolution of proteolytic enzymes. Science
224:350-357.1984.
26. Blake, C. Exons and the evolution of proteins. Trends
Bioc/lem. Sci. 8:1113, 1983.
Gilbert, W. Genes-in-pieces revisited. Science 228:823-
824,1985.
McCarthy. A.D.; Hardie, D.G. Fatty acid synthase: an
example of protein evolution by gene fusion. Trends
Biocllem. Sci. 9:60-63,1984.
Rossmann, M.G.; Argos. P. Protein folding. AnnlL Rev.
Biocllem. 50:497-532.1981.
27. Gehring. W.l. On the homeobox and its significance.
Biocssays 5:3-4: 1986.
Hanks. S.K.: Quinn. A.m.; Hunter, T. The protein kinase
family: conserved features and deduced phylogeny of
the catalytic domains. Science 241 :42-52, 1988.
Shabb, J.B.: Corbin. J.D. Cyclic nucleotide-binding do-
mains in proteins having diverse function. j. Bioi.
Chem. 267:5723-5726, 1992.
144 CaprtuJo 3 : Macromo1eculas: estructura, fonna e infonnad6n
Thornton, J.M.; Gardner. S.P. Protcin motifs and databa-
se searching. Trends Bioclzem. Sci. 14:300-304, 1989.
28. Bajaj. M.; BlundeU. T. evolutiOn and the tertiary structure of
protcins.Amm. Rev. Biop/lys. Bioellg. 13:453-492. 1984.
K1ug, A. From macromole<::ules 10 biological assemblies.
Biosci. Rep. 3:395-430, 1983.
Metzlcr, D.E. Bioqufmica. Barcelona: Ediciones Omega,
SA.. 1981. eEl Capftulo4 describe romo las macromole-
culas sc empaquetan fonnando grandes ensamblajes.)
29. Caspar, DLD.; Klug, A. Physical principles in the con-
struction of regular viruses. Cold Spring Harbor
Symp. Qualll. Bioi. 27:1-24. 1962.
Goodsell. D.S. Inside a living cell. Trends Biochem. Sci.
16:203-206,1991.
30. Cohen, c.; Parry, DA.D. a-helical coiled coils-a wide-
spread motif in proteins. Trends Biochem. Sci.
11:245-248,1986.
31. Harrison. S.C. Multiple modes of subunit association in
the struclures of simple spherical viruses. Trends Bio-
ellem. Sci. 9:345-351.1984.
Harrison. S.c. Viruses. Curr. Opin. Smu. Bioi. 2:293-
299,1992.
Hogle. J.M.; Chow, M.; Filman, 0.1. The structure of po.
Iio virus. Sci. Am. 256(3):42-49, 1987,
Rossmann, M.G.: Johnson, J.E. Icosahedral RNA virus
Slructure. Amm. Rev. Bioc/tem. 58:533-573, 1989.
32. Fraenkel-Conrat, H.; Williams, R.C. Re<::onstitution of
active tobacco mosaic virus from its inactive protein
and nucleic acid components. Proc. Nad. Acad. Sci.
USA 41:690698, 1955.
Hendrix, R.W. Tail length determination in double-
stranded DNA bacteriophages. Curro Top. Microbiol.
InmuUlol. 136:21-29, 1988.
Nanlba, K.; Caspar, 0.1..0.: Stubbs, G.). Computer graphics
representation of levcls of organization in tobacco mo-
saic virus structure. Scie'lce227:773-n6, 1985.
Nomura, M. Assembly of bacterial ribosomes. Sciellce
179:864-873,1973.
Trinick, J. Understanding the functions of titin and ne-
bulin. FEBS Leu. 307:44-48. ]992.
33. Mathews, C,K., Kutter, E.M.: Mosig, G.; Berget. P.B.
Bacteriophagt: T4, Chaps. 1 and 4. Washington, DC:
American Society of Microbiologists, 1983.
Steiner, D.P.; Kemmler. W.: Tager, H.5.; Peterson, ).D.
Proteolytic processinnn in the biosynthesis of insulin
and other proteins. Fed. Proc. 33:2105-2115, 1974.
34. Dressler, D.; Potter, H. Discovering Enzymes. New York:
SdentificAmerican library, 1991.
Fersht, A. Enzyme Structure and Mcchanism, 2nd ed.
New York: W.H. Freeman, 1985.
35. Fersht, A.R.; Leatherbarrow, R.J.: Wells, T.N.C. Binding
energy and catalysis. Trends Biocllem. Sci. II :321-
325,1986.
Hansen, D.E.; Raines, RT. Binding energy and enzyma-
tic catalysis. }. Chem. Educ. 67:483-489, 1990.
36. Lerner, RA.: Benkovic, S,J.; Schultz, P.G. At te crossro
ads of chemistry and immunology: catalytic antibo-
dies. Science 252:659-667, 1991.
Lerner, RA.: Tramontano, A. Catalytic antibodies. Sci.
Am. 258(3):5870. 1988.
Wolfenden, R Analog approaches to the structure of the
transition stale in enzyme reactions. Accounts Chem.
Res. 5:10-18, 1972.
37. Knowtes, J.R. Tinkering with enzymes: what are we lear-
ning? ScienceZ36:1252-1258, 1987.
 Knowles, J.Jt Enzyme catalysis; not different, just better.
Natllre350:121-124,1991.
38. Stroud, n.M. A family of protein-cutting proteins. Sci.
Am. 231(1):74-88,1974.
39. Wood, W.B.; Wilson, '.H.; Benbow, R.M.; Hood, LE. Bio-
chemistry, a I'roblem Approach, 2nd ed. Menlo Park.,
CA: Benjamin-Cummings, 1981. (Capftulos 9 Y 15 Y
problemas anexos).
Bibljograffa
40. Hames, S.l.; Weitzman, P.D.J. Organization of citric acid
cycle enzymes into a multienzyme cluster. FEBS Lett,
201 :267-270, 1986.
Berg. O.G.; von Hippel, P.H. Diffusion-controlled macro-
molecular interactions. Amlu. Rell. Biophys. Biophys.
Bioc/lem. 14:131-160, 1985.
Reed, 1-,.; Cox, D.'. Multienzyme complexes. In The
Enzymes, 3rd 00. (P.O. Boyer, ed.), Vol. I, pp. 213-
240. New York..: Academic Press, 1970.
145
Como se estudian
las celulas 4
-0bMI II" .,,_Z'
......._ .. ~ ..I . I..1

.==::::. ....

Las c~lulas son pequenas y complejas. Resulta dificiJ observar su eslructura y

descubrir su composici6n molecular, perc todavfa resuJta mc1s diffcil dilucidar
c6mo fundooan sus componentes. Lo que podemos aprender sobre las ce;lulas
depende de las hcrramientas que tengamos a nuestra disposici6n; de hecho, los
mayores avances de la ciencia son frecuentemente fruto de la introducci6n de
nuevas tecnicas de estudio. Por consiguiente, para entender la biologfa celular
contemponinea es nccesario conacer alga acerca de estos melodos de estudio.
En este capitulo vamos a revisar brevemente algunos de los principales meto-
dos usarlos para esludiar las celulas. Empezaremos con las tecnicas utilizadas para
examinar las celulas como un todo y despues continuaremos con las Mcnicas utili-
zadas para analizar sus constituyentes macromoleculares. Nuestro pumo de partida
seni la microscopia; la biologia celular empez6 con la microscopia 6ptica, la cua! to-
davia es una herramienta esencial, junto con los imaginativos Inventos m<1.s recien-
tes basados en haces de clcetrones y otras fonnas de radiaci6n. Desde la observa-
ci6n pasiva, nos desplazaremos hasta la intervenci6n aCliva: consideraremos c6lllo
las celulas de diferemes tipos pueden ser separadas de los tejidos y crecer fuera del
cuerpo, y c6mo se pueden romper las celulas y aislar de fonna punl sus orgfululos y
constituyemes macromolecularcs. Por ultimo, discutiremos c6mo podemos detce-
tar, seguir y cuantificar los lipos individllales de moJecuias e iones en el imcnor de la
celula. La tecnologfa del DNA recombinante ha revolucionado nuestro conocimicn-
to sabre la funci6n celular, pero debido a que se lrala de un apartado importame en
sf mismo y depende del conocimiento de los mecanismos gcneticos bAsicos, este
conjunlo de poderosas metodos se considera en detalle en el Capftulo 7.
A pesar de que los mClodos lienen una impollancia bAsica, 10 que rcsulta real-
menle interesame es 10 que nos permiten descubrir. Por 10 lanto, proponernos
que el presente capflulo se utilice como referenda y se lea en conjund6n con los
11ltimos capftulos dellibro, mas que como una imroducci6n a elias.

Observaci6n de la estructura de las celulas

con el microscopio I
Una celula animal (fpica mide entre 19 y 20 ~m de di<1.metro, es decir, unas cinco
veces menos que la menor partfcula visible a simple vista. Por ella, hasta que no
se dispuso de buenos microscopios 6pticos, a principios del siglo XIX, no se des-
cubri6 que lodos los tejidos vegetales y animales son agregados de c~lulas. Este
descubrimienlo, propuesto por Schleiden y Schwann en 1838 como la leorla ce-
lular, marca el nacimiento formal de la biologia celular.

147
 Las c~lulas animales no s610 son diminutas, sino que tambi~n son incoloras
y trasllicidas; par ello, el descubrimiento de las principales caracterfstieas inter
nas de las c~lulas dependi6 del hallazgo, a finales del siglo XiX, de diversos colo-
rantes que proporcionaron el contraste sufieiente para haeerlas visibles. A prin-
cipios de los afios 1940 se desarroll6 el microscopio electr6nico. mueho mas
poderoso que el 6pLico. Sin embargo, antes de que su utilizaci6n permiLiera el
eonocimiento detallado de las complejidades de la estruetura intema de la celu-
la, se hizo necesario el desarrollo de nuevas tecnicas para la preservaci6n y colo-
raci6n de las clHulas. Hasta ahora la microscopia depende tanto de las tecnicas
para la preparaci6n del especimen como del rendimiento del propio microsco-
pia. En las secciones que siguen, vamos a discutir tanto los instrumentos como
la preparaci6n de las muestra, y empezaremos por el microscopio 6ptico.
La Figura 4-1 muestra el grado de detalle que puede a1canzarse can la mi-
croseopia 6pLica modema en eomparaci6n con el de la microscopia electr6nica.
En la Tabla 4-1 se resumen algunos de los hitos hist6ricos en el desarrollo de la
microseopia 6ptica.
bacterl.

Tabla 4-1 Algunos descubrlmlenlos en In hlstorla de In mlcroscoplll 6ptlca

1611 Kepler sugiri6 una manera de construir un microscopio compueslo.

1655 Hooke miliz6 un microscopio compueslO para descubrir unas pequenas
celdiUas en cortes de eorcho, a las que denomin6 ~c~lulas~. vln...
ribo.olTll
1674 Leeuwenhoek infonn6 de su descubrimienlO de los protozoos. Nueve anos
mlis larde observ6 bacterias par primera vez.
1833 Brown public6 sus observaciones microsc6picas de las orqufdeas y describi6
cJaramente elmic1eo celular.
1838 Schlelden y Schwann propusieron la teoria celular. afirmando que la eeluJa
nucleada es la unidad estructural y funcional de las plantas y de los animales.
1857 Kolllker describi61as mitocondrias de las celulas musculares.
1876 Abbt: analiz.6los efectos de la difracci6n en la fonnaci6n de la imagen en el
microscopio y mostr6 la manera de optimizar el diseno de los microscopios.
1879 Flemming describi6 con gran cJaridad el comportamiento de los cromosomas
durante la mitosis de las ct!:lulas animales. 0.1 om
1881 Rettlus describi6 muchos tejidos animales con una precisi6n que lodavfa no (I Al
ha sido superada por ningun especialista de microscopia 6plica. En las dos
dt!:cadas siguientcs, tanto el como CnJai y Olros hist61ogos disei'iaron mt!:todos Figura 4 J Poder de resolucl6n.
de tinci6n y establecieron las bases de la anatomfa microsc6pica. Tamai'ios de las celulas y de sus
1882 Koch utiliz6 colorantes de anilina para tei'iir microorganismos e idenLific6 las coml>onentes, dibujados sabre una
bacterias que causan la tuberculosis y el c6lera. Enlas dos d6cadas siguientes escala logarftmica, indicando el
OIrOS bacteri61ogos como KJebs y Pasteur idenLificaron los agentes causantes intervalo de resolucl6n del ojo
de otras muchas enfermedades, examinando al microscopio preparaciones humano y de los microscopios 6plico y
tei'iidas. electr6nico. En microscopia se utilizan
1686 zeiss construy6 una serie de lelltes, siguiendo las leyes de Abbe, que normaimenle las siguienles unidadcs
permitieron a los especialistas en microscopia la resoluci6n de estructuras de longilud:
siluadas en los Ifmiles te6ricos de la resoluci6n de la luz visible.
11m (micr6melro) = I~m
1898 Goigi observ6 y descubri6 por primera vezel complejo de Golgi, impregnando nm (nan6melro) = I~m
las ~Iulas con nitrato de plata. A(unidad AngstrOm) = IOID m
1924 Lacassagne y colaboradores desarrollaron la primer tecnica autorradiogrMica
para localizar el polonio radiactivo en muestras biol6gicas.
1930 Lcbedeff disefi6 y construy6 el primer microscopio de contraste interferencial.
En 1932 lernieke invent6 el microscopio de contraste de fases. Estos
adelantos pennitieron observar por primera vez en detalle c~lulas vivas no
tenidas.
1941 Coons utiliz6 anticuerpos acoplados a colorantes f1uorescenles para detectar
anlfgenos celuJares.
1952 NomllJ'S1d ide6 y patem6 el sistema de contrasle interferencial para el
microscopio 6ptico, que aun lIeva su nombre.
1981 Allen e Inoue perfeccionaron la microscopia 6ptica de contraste vfdeo-
amplificada.
1988 Se generaliza el uso de los microscopios de rastreo confocal.

148 Capftulo 4: C6mo se estudlanlas celuJas

 2 ONDAS EN FASE 2 ONOAS OESFASAOAS Figura 4-2 Interferenda entre oodas
lumLnosas. Cuando dos ondas de luz
se comhinan enfa.se, la amplilud de 1a
onda resultante es mayor y la
luminosidad queda incrementada. Dos
ondas de luz desfasadas se anulan
parclaJmente una a Otnl., produciendo
una onda de menor amplilud, y por
consiguiente, de menor intensidad
luminosa.

OS(;urid.d

,,,

EI microscopio 6ptico puede resolver detalles

situados a 0,2 J.lrn de distancia 2
En general, un haz de una radiaci6n de una longitud de onda determinada no
puede uLilizarse para examinar detalles estructurales mucho mas pequefios que
su propia longitud de onda: e5to supone una limitaci6n fundamental de los mi-
croscopios. As! pues, el lfmite de resoluci6n de un microscopio 6ptico esta de-
lenninado por la longitud de onda de la luz visible, que abarca desde 0,4 J.1ffi
(para el violeta) basta 0,7 J.Lm (para el mjo lejano). En la prnetica, las bacterias y
las mitocondrias. que tienen aproximadamente 500 run {O,S ~l de diametro,
son las estrueturas mas pcqueiias que se pueden observar nftidamente aI mi
croscopio 6ptico; los detalJes mas pequeiios que estas dimensiones quedan os
curecidos por los efectos de la nalura1eza ondulatoria de la Iuz. Para compren-
der el porque de este efecto, hemos de estudiar 10 que Ie sucede a un haz de
ondas luminosas cuando atraviesa las lentes de un microscopio.
Dada su naturaleza ondulatoria. la luz no sigue exactamente la linea recta
idealizada de sus rayos pred.icha por la 6ptica geometrica. Por el contrario. cuan-
do las ondas luminosas viajan a traves de un sislema 6ptico 10 haeen por una di-
versidad de rutas tigeramente direrentes, de manera que se interfieren eOlre
elias generando efectos opticas de difraai6n. Si dos trenes de ondas que alcan-
zan el mismo punto por diferentes caminos estan exaclamente en fase, con
coincidencia de las crestas y de los scnos, se refuerzan cl uno al otro aumentan-
do la luminosidad. Por el contrario, si los trenes de ondas estan desfasados, in-
tcrfieren uno con otro y se an ulan total 0 parcialmente (Figura 4-2). La inciden-
cia de la luz sobre un objeto altera las relaciones de fase de las ondas lum..inosas,
produciendo complejos efectos de interferencia. A gran aumento la sombra de
un borde recto, por ejemplo, iluminado con una luz de longitud de onda unifor
me, aparece como un conjunto de Iineas paralelas. mientras que la de una man-
cha circular apareee como un conjunto de aomos concentricos (Figura 4-3). Por
la misma raWn, observado a lrave. del microscopio un punto aparece como un
disco borroso, mientras que dos objetos puntuales prdximos entre sf ofreeen
imagenes superpuest'as y pueden Ilegar a confundirse en una sola imagen. La
perfecci6n de las lenles, por alia que sea, no puede supcrar esta Iimitaci6n im
puesta por la naturaleza ondulatoria de la Iuz.
La separaci6n liJnite a la que dos objetos pueden verse scparados -conocida
como lfrn.Ite de resolud6o- depende tanto de la longitud de onda de la luz como
de la apertura nwnerica de las lentes del sistema utilizado (Figura 44). En las me-
jores condiciones posibles: con luz violeta Oongitud de onda, ), = 0,4 ~) Yuna
apertura nwnerica de 1,4, ellfmitc de resoluci6n trorico que se puede obtener con
el microscopio 6ptico es tan 5610 de 0.2 J.Lrn. Esta resoluci6n ya fue a1canzada por

Figura 4-3 Efectos de borde. F.feclos
de inlerferencia observados a gran
aumcnto cuando 1a luz pasa por el
los fabricantes de microscopios a finales del siglo XIX y con los microscopios con borde de un ohjelo s6lido colocado
tempor6neos producidos en seric, muy raramente se alcanza. Aunque es posible entre la ruente de luz y cl ohservador.

Obscrvaci6n de la estruclum de las ct!lulas con el microscoplo 149


LEoms RESOlUCtON: el poder de rlsoluelon de un
microscopio depende de Ie emplitud del cono
de iluminllciOn Y. por 10 tanto, de I lente.
objelivo V oonden.ador. 5e calcule con II
IMAGEN
f6rmule
Figura 44 Apertura numerica. Paso
de los rayos luminosos cuando
atraviesan una muestra transparente
en un microscopio, ilustrando el
concepto de apertura numerica y su

'!!J
muesl'. ~
I. lentl objetivo
eolecle un cone
de lUI gt:l'Ieflndo
unelmegen
en donde:
resolucion. 0,61 ~
" ..n8

e_ m'tad de" .lnchu,. angul" del cono

de r.yos oolectedol por I, lente
relaci6n con ellfmite de resoluci6n.

~
objellvo dude un punla lfpico de I.

/"'l I' Ienle coodenAdor muestrelcomo ,. maxima enehur."

---
enloea un eooo de de 180". I' "Ilor de senD IIliene un
,eyol luminosos valor mjJ<imo de 11
en ~ uno de los n .. Indice de rel~i6n del medjo
punlOll de te (normeJmente .". 0 .eel!e) q~ ~rI
LUZ mlHlSlr. I. mu"!r, de I,. Ientu objetiYO y
oondon.....
A.. Iongitud de ond_ de I. lUI utiliu&l
(per. Iw b1l1nu .. ul,llle no<m.lmenta
eI velor de 0,53 j.lml

APEI'l'TURA NUMefUCA: en Ia ee::~ .nterior. milYOl' 85" resoluci6n y I. brillantel de II

el nlor n wn9 .. denomll\ll tlpeftUf. numlkica
de ~ Ientes IAN) y .. una funciOn 0. 11,1
CIIPKidad de eoI:c.r I. Iuz. p .-Ienln MCIIS
nt. valor no puede ... ",,'(Of de 1 pero~..
Ienl" sumerQidM .n _ite puede lleQollr ....
de 1,4. CUanlO mayor ... III .pertUrll numliriCII
Imagen \11 ~.nu" es importante en
microscopie de fluoresoenci.l. Sin emNrgo.
estI ventllja se obtielMl 'Kpens.. de dillll<'lCiM movimienlo del brllZO
de Ir.bajo muy tofUS V de profundidlldn de del micr6tomo
CIImpo muy pequen...
muestr1l iocluida en

~(Y~~:::;:~'O
agrandar una imagen tanto como se desee -po ej . proyecta.ndola sobre una pan-
taUa- nunca resulta posible resolver aI m..icroscopio 6ptico dos objetos que esten ~ cintll de cartn
fi~
separados menos de 0,2 ~m: dichos objetos apareceran como uno solo.
Mas adelante podremos ver c6mo la interferencia y la difracci6n pueden ser
cinlll de cortes .abre
utilizadas para estudiar celulas vivas sin teiiir. En primer lugar vamos a esnldiar el porUObjelOl,
c6mo se pucden hacer preparaciones permanentes de celulas para su observa- tenidos y monlados
con un cubr&objelos
ci6n al microscopio y c6mo se utiJizan los colorantes qufmicos en estas prepara-
dones para incremCIHar la visibiJidad de las estructuras celuJares.

Para la observaci6n microsc6pica, normalmente

los tejidos son fijados y seccionados
ocular
Para hacer preparaciones permanentes que despues puedan ser tei'lidas y visua-
Iizadas al microscopio, en primer lugar las celulas se han de tratar can un fijador
que las inmovilice. las mate y las preserve. En terminos qufmicos, 101 tljacl6n
hace a las celulas permeables a los colorantes y establece puentes cruzados en-
tre sus molcculas, de modo que estas queden estabilizadas y bloqllcadas en su
posici6n original. Algunos de los primeros procedimientos de fijaci6n consistfan
en una breve inmersi6n cn acidos a en disolventes organicos tales como el alco- lenle objetlve
hol. Los proccdimientos acttlales suelen comprender aldehfdos activos, particu-
larmente el formaldehfdo y el glutaraldehfdo, que forman enlaces covalentes
con los grupos amino libres de las protc(nas y par 10 lanto forman puentes cru-
zados entre prolefnas adyacentes.
La mayorfa de las muestras de tejidos son demasiado gruesas para que sus
relulas sean examinadas directamenle a alta resoluci6n. Por consiguienle. des-
pu~ de la fijaci6n. los lejidos suelen ser cortados en finas rebanadas (seccio-
nes). con un micrOtomo, una maquina dOl ada de una cuchilla de melal muy afi-
lada que (unciona de manera parecida a un cortafiambres (Figura 45). Las EXAMEN Al MICROSCOPIO 6POCO
secciones que se utilizan para ser observadas al microscopio 6ptico. normal-
Figura ...5 Obtend6n de secdones de
menle tienen entre) y 10 ~m de grosor y son extendidas en la superficie de un un telldo. Un lejido induido se corta
portaobjelos. con un micrOlomo, como paso previo
Por 10 general los tejidos son muy blandos y fragiles, incluso despu~ de la para su observaci6n al microscopio
fijaci6n, de forma que antes de la obtenci6n de los cortes, es necesario IncJuJrlos 6ptico.

150 Capftulo 4 : C6mo se estudian las cl!lulas

en un medio de soporte. Los medios mas utilizados son ceras 0 resinas. En esta
do Hquido, estos medias penetran y rodean todo ellejido; entonces, pueden ser
endurecidos (por enfriamiento 0 por polimerizaci6n) para formar un bloque 00-
lido que pueda ser conado facilmente con el micr610mo.
Existe el grave peligro de que cualquier tratamiento ulilizado para la fijaci6n
pueda a1terar de manera no deseada la estruetura de la celula 0 sus consliluyen-
tes molecuJares. La congelaci6n rapida proporciona un melodo alternativo que,
de algona manera, evita eSle peligro eliminando la nccesidad de fijaci6n y de in-
clusi6n. EI tejido congelado puede ser conado direclamente con un criOSlato
-un micr610mo especial que se manliene en una camara frfa. Aunque, las sec
clones par congelacl6n conseguidas de esta manera lienen la ventaja de evirar
algunos artefactos, pueden presenrar otro ripo de complicaciones: la estrllctllra
nativa de algunas molt'kuJas como las protefnas estct bien conservada pero nor-
malmente la estructura de las Cellilas se rompe por los crisrales de hielo.
Habitualmenle, el paso siguiente aI de obtenci6n de las secciones (por cual-
quier metodo) es su tinci6n.

Los diferentes componentes de la celula pueden

sec tefiidos selectivamente3
EI comenido de la mayorfa de las celulas (de las que el agua represema un 70%
de su peso) no presenta demasiados elementos que impidan el paso de los rayos
de luz. Por ello, casi todas las celulas en su estado nawral, aunque esten lijadas y
seccionadas, son casi invisibles al microscopio 6ptico convencional. Una mane-
ra de hacerlas visibles es tenirlas con colorantes organicos selectivos.
A principios del siglo XIX la demanda de coloralllcs para tenir los productos
de la industria lexlil condujo a un perfodo fe:rul para la qu(mica organica. Se ob-
serv6 que algunos de los coloranles teiUan los lejidos biol6gicos y que sorpren-
dentemente, a menudo mostraban una preferencia por determinados compo-
nentes de la celuJa -el nueleo 0 las membranas, por ejemplo- haciendo visibles
eslas estructuras internas. En la actualidad disponemos de una rica variedad de
colorantes organicos, con nombres tan pintorescos como uerde de malaq/lira,
negro Suddn 0 azul de Coomassie, cada uno de los cuales presenta una afinidad
especCfica por cienos componentes celulares. EI colorante Ilematoxilina, por
ejemplo, tiene afinidad por las molt'kulas con carga negativa, y por ello revela la
distribuci6n del DNA, del RNA y de las protefnas acidas de la celula (Figura 4-6).
No obstante, desconocemos la base qufmica de la especilicidad de muchos colo-
mntes.

Figura 46 Una sec:cl6n de leJlda

tefiida. Secci6n de piel humana,
tenida COli una combinaci6n de
coiorantes, hemalOxiiina y rosina, que
se utilizan habilualmente en
histologl'a

Observaci6n de la estructura de las celuJas con el microscopio 151


3 Ngundo filtro de corte; eUmlne
las Hllal.. de fluorll5Cflr'H:ia no
deNedes y deja pllSllr Ie
fluorllllC&ncla verde de emisiOn,
de 520 a 560 nm
FUENTE
OELUZ H 2 2 et98Jo de renurA ordenadas:
r.lleiela Iw de Iongilud de onda
menor de 510 om pe.o lransm;le
la lut de longilud de onda
_ _---' aupefior a510 nm
1 pri~ filtro de corte: unoc.ment.
deia pasar Ie Iu.t lllul de una
Iongilud de onde entre .50 y ~ nm lente objetivo
Flgura4-7 Sistema6ptkodeun
modeIno mk:ro8ropio de OUOl't!lilOenda.
FJ juego de flItros consla de dos fLItros de
corte (I Y3J y de un espejo dicrok:o (de
nmUl1lS ordenadas) (2). En esl.e ejemplo
se mue:strn un juego de 61tros adewado
para la detecci6n de Ia f1:uoresc::encia de
la Ouorescefna. En esle Iipo de
microscopios es especialmente
importanle que la lenteobjet.ivo tenga
una elevada apenura numerica, ya que
para una amplificaci6n dada la brillantez
de la imagen fiuorescenle es
proporcionaJ a la CUarla palencia de la
apenura nu~rica ('I6lse tambien
Figura4-4).

~o_o eo

La relativa (alta de especificidad de estos colorantes a nivel molecular ha esti

mulado el disefto de procedimienlos de linci6n mas racionales y seleclivos y ha
permitido en particular el desarrollo de m~todos que revelan protefnas espedficas
y olras macromoleculas celulares. Existe. sin embargo, el problema de consegulr
una sensibilidad adecuada para estos prop6sitos. Como una c~lula cualquiera pre- fluore_lna lverdel
scnta pocas copias de cada una de la mayorla de las macromol&:ulas, a menudo
una 0 dos molecuJas de colorante unidas a cada macromolecuJa resultan invisi-
bles. Una posibWdad de resolver este problema consiste en incrementar eI nume-
ro de molecuJas de colorante asociadas a cada macromol&:ula individual. Asf, a1-
gunas enzimas pueden ser locaJizadas en las oHulas mediante su actividad
catalftica: cuando son expuestas a un substrato molecular apropiado. cada mol~
cula de enzima genera muchas mol&:ulas visibles de producto, las cuales pueden
ser localizadas. Un m~todo alternativo al problema de la sensibilidad consiste en
la utilizaci6n de compuestos Ouorescentcs, como explicamos a continuaci6n.

Mediante Ia microscopia de fluorescencia se pueden localizar

tetremetilrodemin8lrojel
moMculas en las c~lulas de forma especffica
Agura4-8 CokwantesOoorescentes.
las moleculas nuorescentes absorbcn la luz de una determinada longitud de Estruetura de 13 ftoorescefna y de 13
onda y emiten luz de otra longitud de onda mas larga. Si un componente de este tetramelilrodamina, dos coIonmles
tipo es i1uminado a su longitud de onda absorbente y visualizado a trav~ de un ulilizados habilualmenle en mkroscopia
filtro que sdlo permita pasar la luz de longitud de onda igual a la de la luz emitida, de Ouorescencia. La ftuoresceina emile
el componente aparece brillante sobre un fondo OSCUto. La intensidad y el color luz amariIJo.\'crdosa cuando se aetNa
de la luz es una propiedad caracterfstica de la molecula nuorescente utilizada. con luz de una Iongitud de ollda...
Los colorantes Ouorescentes utilizados para la tinci6n celular son detecta- adecuada. micntrns que 13 rodamina
emile luz raja. Las zonas de las mol6culas
dos con la ayuda del mlcroscopio de Duorescencia. Este microscopio es similar
que sesei'laJan en "amnja indican la
al microscopio convencional, a excepci6n de que la luz incidente, procedente de
posici6n de un grupa qufmicamente
una potente fuente, atraviesa dos series de filtros -uno para interceptar la luz reactivo; nonnalmente. en esta posici6n
antes de que lIegue a la muestra yotro para filtrar la Iliz obtenida a partir de la se fonna un enlace covaJenle entre el
muestra. EI primer mtro se selecciona de manera que s610 permita el paso de las coloffintc y una protefna (u oU'a
longitudes de onda que excilan a un dcterminado colorante nuorescente, mien- molecvla). Direromes versiones
tras que el segundo filtro bloquea esta luz y permite el paso de las longitudes de comerciaJes de estos coloranles con
onda emitidas cuando el colorante emite nuorescencia (Figura 4-7). difcrentes tiposde grupos reactivos
la microscopia de fluorescencia se utiliza habitualmente para detectar es- permilc utilizarlos axno diana de grupos
pecfficamente protefnas u otras moleculas en c~lulas y tejidos. Una tecnica muy -SH 0 de grupos -NH z de prolefnas.

152 Capftulo 4: C6mo se estudian las c~luJas

 .' .,
tubulin!

"~
r
actin!

, ..
) ,,~. '.'t
,
DNA Figura 4-9 Mlcroscopla de
fluorescencla. Micrograffas de una
zona de la superficie de un embri6n
temprano de Drosophila, en el que se
!I'. "'\:' ') :~j{'"
'..
han marcado los microlubulos con un
"
, ,
.
~ .)0'"1,';" ,,' .. anticuerpo acoplado a Duorescelna
. .
I
.. -
,,-~~.
"
. _ (panel de la iulllierda) y los filamentos

.:. ", .~
,4<:
.J-. ._
," .'
, de aClina con un anlicuerpo acoplado
a rodamina (panel centra/). Ademots,
los cromosomas se han marcado con
un tercer colorante que unicamenle
emite Duorescencia cuando se une a
DNA (panel de la derecha). En este
estadio, lodos los nucleos del embri6n
comparten un mismo citoplasma. y
utilizada y potenle consisle en acoplar covalentemenle un colorante fluorescen- est4n en el estadio de melafase de la
te a mol~las de un anticuerpo, el cual se puede utilizar entonces como un re- mitosis. Las tres micrografias fueron
activo muy especffico y verscitil que se une selectivamente a las macromol~ulas tomadas en la misma regi6n de un
que reconoce en las c~lulas 0 en la matriz extracelular. Con esta finalidad, fre- embri6n fijado, utilizando Ires juegos
cuenlemente se utilizan dos colorantes tluorescentes: lafluorescelna, que cuan- de filtros diferentes en el microscopio
do es excilada por luz azul emite una tluorescencia amarillo-verdosa intensa, y la de Duorescencia (vease lambi~n Figura
rodamina, que cuando es excitada con una luz verde-amarilla emile una fluo- 4-7). (Porconesla de Tim Karr.)
rescencia de color rojo inlenso (Figura 4-8). Acoplando una mol~uJa a la fluores-
cefna y otta a la radamina, en la misma celuJa puede delenninarse la dislribu-
ci6n de dos molecuJas diferentes; ambas mol~las son delecladas separadamente
en el microscopio cambiando las dos series de mtros, uno especffico para cada
colorante. Como se mueSlra en la Figura 4-9, de la mjsma fonna se pueden utili-
zar ttes coloranles fluorescenles para distinguir tres tipos de mol~culas en la
misma c~lula.
Acrualmente se han desarrollado importanles melodos, que expljcaremos
posteriormenle, que capacilan a la microscopia de fluorescencia para seguir
cambios en la concentraci6n yen la locaJjzaci6n de moleculas especfficas en el
interior de la celula lIiva (vease pag. 195).

Las celulas vivas se pueden observar con nitidez en un

microscopio de contraste de fases 0 de contraste de
fases interferenciaJ2. s Flgura4-10 Dosslstemaspara
La posibilidad de que algunos componentes de la celuJa puedan perderse 0 dis- Incrementar el contraste en el
torsionase durante la preparaci6n de las muestras no ha dejado de preocupar a mlcroscoplo 6ptlco. En (A), las zonas
los especialistas en microscopia. La unica solud6n a eSle problema es examinar tel'lidas de la ccluJa reducen la
amplitud de las ondas Juminosas de
una longitud de onda determinada
que pasan a traves de ellas. De esta
(A) luz Incident! (8) tuz incid!nte
forma se obtiene una imagen en color
de la c~Hula. visible mediante la
observaci6n habituaL En (B), la luz que
pasa a trav6l de la c~lula viva, no
leftida, no suITe ningUn caQlbio
importanle de amplitud y. por
consiguiente, muchos de sus detalles
no se pueden observar directamente,
aunque se amplifique enonnemente la
imagen; sin embargo, se producen
cambios de lase en las ondas
luminosas cuando estas pasan traves
de la c~lula. y estas alleraciones
puedcn hacerse visibles aprovechando
efectos de interferencia utilizando un
microscopio de contraste de fases 0 de
oontraste de fases interferencial.

Observacl6n de la eslructura de las ceJ.ulas con el microscopio 153

las celulas mientras aun estdn vivas. sin ninglin tipo de fijaci6n ni de congelaci6n. Flgur. 4-11 Cuatro tipos de
Para este prop6sito son utiles microscopios con sistemas 6pticos especiales. mlcroscoplo 6ptk:o. (1\) Imagen de un
Cuando la luz pasa a trav~ de una celula viva, la rase de la onda luminosa fibroblasto en cultivo obtenida
varfa en relaci6n aI fndke de refracci6n de la celula: la luz que pasa a trav~ de mediante la transmision directa de luz
una zona relativamenre gruesa 0 densa de la celula. como por ejemplo el nucleo. a ltavl'!s de la cl'!lula, locnica conocida
se retrasa y su rase queda desplazada de ronna correspondiente respeclo a la de como micrCJSCOpia de campo claro.
Las otras imll.genes fueron obtenidas
la luz que ha pasado a traves de una regi6n adyaceme de ciloplasma. mds fina.
Ulilizando las tl'!cnicas descritas en
E! mlcroscoplo de conlrasle de fases y el mlcroscopio de conlrasle de fases In-
cI texlo: (8) microscopia de contraSle
lerferencial aprovechan los erectos de intenerencia que se producen cuando se de rases; (0 microscopia de contrasle de
combinan estos dos grupos de ondas. creando de esla forma una imagen de la fases inlerferencial de Nomarski: y
eslructura celular (Figura 4- 10). Ambos tipos de microscopios 6pticos se utilizan (O) microscopia de campo OSCUTO. Con
habitualmente para visualizar celulas vivas. los microscopios mll.s modemos se
Una manera mtis sencilla de observar algunas de las caracterfsticas de una pueden oblener los cuatro tipos de
celula no tef'lida consiste en utilizar luz dispersada por sus diversos componen- imll.gcnes, simplememe cambiando
tes. En el mlcroscoplo de campo oscuro, los rayas luminasas del sistema de Bu- algunos de los sistemas opticos.
minaci6n son dirigidos dcsde la parte lateral, par 10 que s610 penelra en las Icn-
les del microscopic la luz dispersada. Por consiguiente. la ct'Hula aparece como
un objelo i1uminado sabre un fonda negro. La Figura 4-11 muestra im<1genes de
una misma celula oblenidas mediante cuatro tipos diferentes de microscopios
6pticos.
Una de las grandes vcmajas del microscopio de contraste de fases, del mi-
croscopio de contraste de fases interferencial y del microscopic de campo oscu-
ra estriba en que los tres permiten observar las celulas en acci6n y estudiar los
movimicntos implicados en procesos como la mitosis 0 la mjgraci6n celular.
Puesto que muchos movimientos son demasiado lentos para ser observados a
tiempo real, normalmente resulta uti! hacer peliculas 0 vfdeos por el sistema de
aceleraci6n de movimiento (microcinematografia). En estos casos. se tOlllan fo-
tograffas sucesivas. separadas por breves perfodos de tiempo. de modo que
cuando la pelfcula 0 el video registrados se proyeclan a la velocidad normal los
acontecimjenlOS aparecen muy aceJerados.

Mediante l~nicas electr6nicas las imagenes pueden ser

amplificadas y analizadas6
Reciemememe. los slslemas electnSnicos de imagenes y la tccnologfa asociada
de procesamlento de imligenes han tenido un impaclo importame en la mi-
croscopia 6plica. No 5610 han permitido superar ciertas Iimhaciones prticlicas
de los microscopios (debidas a limilaciones en el sistema 6ptico). sino que tam-
bien han superado dos limllaciones fundamenlales del ojo humano: el ojo no

154 Capflulo 4: C6mo se estudlan las ce:Julas

 puede ver luz extremadamente Mbil y no puede pcrcibir pequeflas direrencias
en intensidad de luz sobre un rondo brillante. El primero de estos problemas
puede solucionarse adaplando a un microscopio una clmara de vfdeo altamen-
te sensible a la luz (del tipo de las que se utilizan para vigilancia nocturnal. Con
eUa es posible observar relulas durante largos perfodos de dempo y con muy
baja inlensidad de luz, evitando de esta manera los erectos dai'iinos de la 102 in-
tensa (y caliente) prolongada. Estos sistemas de illtellslfu:addn de inufgenes son
especialmcmc importantes para visualizar molfkulas fluorescenles en las eelu-
las vivas.
Dado que las imoigenes producidas por las clmaras de video son de tipo
electr6n.ico. pueden ser digitalizadas, imroducidas en un ordenador y procesa-
das de varios modos para extracr inrormaci6n latente en estas imligenes. Este
procesamiento de fa imagen haee posible la eompensaci6n de los fallos 6ptieos
de los mieroscopios, pudiendo alcanzar el limite te6rico de resoluci6n del mi-
croscopio 6ptico. Por otra pane, utilizando sistemas de video acoplados a proce-
sadores de imagenes puede incrementarse el contraste, superandose las limita-
ciones del ojo en la detecci6n de pequefias diferencias. A pesar de que este
procesamiento tambi~n incrementa los efectos aleatorios de las irregularidades
del sistema 6ptico, este "ruido" puede eliminarse electr6nicamente restando
una imagen de un area cn blanco del campo de observaci6n. De esta manera,
pequefios objetos transparentes que antes eran imposibles de distinguir del fon-
do, pueden ser visibles.
EI alto contraste alcanzable en la microscopia de inlerferencia asistida por Figura 4-12 AmpUando los Umltes de
ordenador haee posible la visualizaci6n de pequefios objetos tales como micro- detecd6n.im~enes al microscopio
tubulos (Figura 4-12), los cuales tienen un diametro de 0,025 p.m, menor de una eJectronico de microtUbuios no
dfk.ima parte de la longhud de onda de la lux. Los micronibulos individuales ten.Jdos, visualizados por microscopia
tambien pueden ser vistos en un microscopio de fluorescencia si previameme de contraste de fases interferencial
han sido marcados con Ouorescencia (vease Figura 4-62). En ambos casas, sin seguida de un procesamiento
embargo, los inevitables efectos de difracci6n dan una imagen a1tamente borrosa, e1ectr6nk:o de iml1genes. W Imagen
de fonna que estos microrubulos aparecen con un wametto de at menos 0,2 J1Ol, original no proct:sad.a. (B) Resultado
10 cual haee imposible distinguir un microtUbuio sencillo de un haz de varios final del proceso electr6nico que
microtubulos. incrementa marca.damente el
contrastey roouceel Mruido M . Apesar
de que los microlubulos unicamente
Gracias al microscopio de barrido confocal es posible obtener lienen O,0251J.rn de dil1metro, aparecen
im~genes de complejos objetos tridimensionales 7 como unos ftJamentos mas gruesos
debido a efectos de difracci6n. (Par
Como hemos visto, para poder ohselVar un tejido aI microscopio 6ptico conven- oortesfa de Bruce Schnapp.)
cional, se ha de conar en ~cciones; cuamo mds inas sean las secciones
mas definidas seran las imagenes. En el proceso de oblenci6n de las secciones, sin
embargo, se pierde informaci6n respecto a la tercera dimensi6n. i,C6mo enton-
ces se puede obtener una imagen de la arquitectura tridimensional de una celula
o de un lejido? i,C6mo se puede ver la estrucrura tridimensional de una muestra
que por una u otta raz6n no puede haber side previamente cortada en seccio-
nes? $i se observa una muestra fina con un microscopio 6ptico convencional, la
imagen obtenida al enfocar un nivel determinado resuha degradada y borrosa
por la informaci6n que queda fuera de foco de las zonas de la muestra situadas
encima y debajo del plano focal. A pesar de que este problema se puede superar
mediante complejos procesadores de imagenes apJicados a las im<1genes de los
diferentes pianos locales, el metodo resulla leoto y COSIOSO desde el punlo de
vista infonn<1tico. EI mlcroscoplo de barrldo confocal aporta otta soluci6n, mAs
direcla, para conseguir el mismo resuhado final: utiliza metodos electr6nicos de
imagen que permiten enfocar un plano escogido de una mueSlra fina eliminan-
do 1a luz que proviene de las zonas fuera de foco superiores e inferiores a esle
plano. Asf se obtiene una imagen nftida de una fina sea:i6n 6pricn. A panir de se-
ries de secciones 6pticas de este tipo oblenidas a diferentes profundidades, ar-
chivadas en un ordenador, resulta sencillo reconstruir una imagen tridimensio-
nal. El microscopio de barrido confocal es para los microscopistas 10 que la TAC
(tomograffa axial computadorizada) de barrido fue (par diferentes razones) para

Obscrvaci6n de 1a eslructura de las celulas oon el microscoplo 155

 -
IAI 181
i.
lei

~
Figura 4-13 El mlcroscoplo de

00
-.
barrldo confocal de fluorescencla .
" Este simple diagrama muestra que la
dlafr.gmu
" disposid6n basica de los componentes
eon'~le.
6plicos es similar a la del microscopio
de fluorescenda esltndar mostrado en
la Figura 4-7, exceptoen que en ~stese
utiliza un laser para i1uminar una
pequei'ia mancha de luz cuya imagen
se enfoca en un solo punto de la
muestra (A). La Ouorescencia emitida
par este punto de la mueslra se enfoca
en un segundo (confocal) diafragma
(8). La IlIZ emilida par el resto de la
muestra no se enfoca en este
puntD diafragma, por 10 que no contribuinl. a
"f~ fonnar la imagen final (q. Mediante
un barrido de 1a mancha de luz par
una m.-!r. fluor~t. . . i4uminll Ie lu:z f1uorescente Ia Iw q.... procede 0&1 rMlo tada la muestra se obliene una imagen
con un punta enfoeedo de lul emitida pot el punto de punlas de t, muestt.
proeedenta de un diafTagflWl de Ia muestnl estll en estin hler. de foco del bidimensional rouy tina exactamente
loco. se enfOCil en el diafragma. pof 10 q.... del plano de foco, la cual no estJi.
diafragma If alcanza _'n e>;luidoa cui
II detector compleu~del detector
degradada significativamente par 1a
IlIZ procedente de otras regiones de la
muestra.
los radi61ogos para estudiar el cuerpo humano: ambos sistemas proporcionan
imagenes detalladas de secciones del interior de una estructura intacta.
Los detalles 6plicos del microscopio de barrido confocal son complejos. pero
la idea Msica cs sencWa. como se i1ustra en la Figura 4-13. Generalmenlc el mi-
croscopio utiJiza una 6ptica Ouoresceme (~ase Figura 4-7), pero en lugar de illl-
minar tada Ja muestra a 1a vez. como se haec habitualmente. en carla inslanle el
sistema 6ptico enfoca un pequeno punto luminoso en una profundidad detcrmi
nada de la muestra. Se necesila una fuente de lux que produzca puntas luminosos
muy briJlantes; habitualmente se utilizan fuentes laser cuya luz haya pasado a tra-
ves de un diafragma. La fluorescencia emitida par el material iluminado se recoge
y produce una imagen a la entrada de un detector de luz adecuado. Sc coloca un
diafragma en el detector, en ellugar que es confoctll con el punto luminoso ~ue
es precisamente donde los rayos luminosos emitidos por el punta iluminado de la
muestra estan enfocados. Asi, la luz de este punto de la muestra converge sobrc
esta apertura y entra en el detector. Conlrariamente, la luz que proviene de las re-
giones fuera del plano focal del punto luminoso tambien eSI<1n fuera de foco en el
diafragma, por 10 que resulla ell gran manera excluida del detector (Figura 4-14).
Para oblener una imagen bidime:lsi~n?, se recoge secucncialmcnte la infonna-
ci6n de cada punto luminoso de p ana focal mediante un barrido par todo el
campo a observar (como ocurre en una pantalla de televisi6n) y se presenta en
Figura 4-14 Comparacl6n entre la
mlcroscopla convenclonal y la
confocal. Estas dos micrografias
proceden del mismo embri6n intaeto
de DrosopfliJa en eslado de g4,slrula,
tenido con una sonda Ouorescente
para filarnentos de aClina. La imagen
convendonal no procesada (A) resulta
borrosa debido a 1a presencia de
eslrueturas fluorescentes situadas par
encima y par debajo del plano focal.
En la imagen confocal (B) esla
infonnaci6n fuera de foco se ha
eliminado, resultando una bien
definida secci6n 6ptica de la ~Iula del
embri6n. (Por conesfa de Richard
Warn y Peter Shaw.)

156 Capftulo 4: Cdma se cstudian las relulas

Tabla 42 Prlnclpales aconteclmlentos en la evolucl6n del mlcroscoplo
electronloo y de su apIJcacl6n a la blologfa celular
1897 I.J. Thomson anunci61a exlstencia de partfeulas cargadas negativamente. ml'is
tarde denominadas eEoclranes.
1924 de BrogUe propuso que un electr6n en movimiento tiene un comportamient'o
ondulante.
1926 Busch demostro que era posible enfocar un haz de electrones utilizando una
lenle magn~tica cilfndrica. Asf estableci610s fundarnentos de la 6ptica
electr6nica.
1931 Ruska y colaboradores oonstruyeron el primer microscopio electr6nico de
tl'ansmisi6n.
1935 Knoll demostr6 que era posible construir un mieroscopio electrdnico de
barrido. Tres ailos mlis tarde. Von Ardenne construy6 un prototipo.
1939 Siemens constnlyd el primer mieroscopio electr6nico de transmisi6n oomercial.
1944 WUllams y Wyckoff introdujeron la t~nica de la metalizaci6n de las muestras.
1945 Porter, Claude y Fullan utilizaron el microscopio eleeu6nico para observar
dlulas cultivadas. despu~ de fijarlas y contrastarlas con 0506'
1948 Pease y Baker obtuvieron cortes finos (0,10.2 J.lm de grosor) de material
biol6gioo.
1952 Palade, Porter y Sj&trand desarrollaron m~todos de fijaci6n y de obtenci6n de
cortes uhrafinos que permitieron observar por primera vez muchos
organulos intracelulares. En una de las primeras aplicaciones de estas
t~nicas. H.E. Huxley demostro que el muscuJo esquel~tico contiene
ordenaciones superpuestas de flJarnentos proteicos. apoyando asf la
hip6tesis de los ~fiIamentos deslizantes~ de la contracci6n muscular.
1953 Porter y Blum diseilaron el primer u1tramicrdtomo que foe ampliamente
aceptado. incorporando muchas de las caraeteristicas introducidas con
anterioridad por Claude y SJ&trand.
1956 Glauert y colaboradores demostraron que la resina epoxi Amldire era un medio
de inclusi6n altamente efieaz para la microscopia electr6nica. Cinco ailos
mas tarde. Lun introdujo otTa resina Epa" para la inclusi6n.
1957 Robertson describi61a estructura trilaminar de la membrana eelular,
observada por primera vez at microscopio electrdnico.
1957 Las t~nicas de criofractura desarrolladas inicialmente por Steere fueron
perfecdonadas por Moor y MiihJethaier. Mas tarde (1966), Branton
demostr6 que la criofractura permite visualizar el interior de la membrana.
1959 Slnger uliliz6 anticucrpos acoplados a ferritina para deleetar mol~cuJas de la
c~lula al microscopio electr6nico.
1959 Brenner y Home desarrollaron la t~enica de la tinci6n negativa, invent'ada
cuatro anos anles por Hall, convirti~ndola en una l~cnica de aplicaci6n
rutinaria para vlsuaJizar virus, bacterias y fiJamentos proteicos.
1963 SabaUnl, Bensch y Hartnett introdujeron el glutaraldehfdo (generalmente
seguido de OS06) como fijador mas utilizado en microscopia electr6nica.
1965 Cambridge Instruments construy6 el primer microscopio eleclr6nico de
barrido, de tipo comercial.
1968 de Rosier y Klug describieron las tecnicas para la reoonstrucci6n de las
estructuras tridimensionales a partir de micrograffas electronicas.
1975 Hen.derson y Unwln detenninaron por primera vcz la estructura de una
protefna de membrana mediante reconstrucci6n por ordenador de
micrograffas electr6nicas de muestras no tef'iidas.
1979 Heuser, Reese y colaboradores desarrollaron una t~nica de grabado pro(undo
con una alta resoluci6n, basada en una congelaci6n muy ntpida.

son enfoeados fonnando una imagen -de una manera anlloga a como se (anna
la imagen en el microscopio 6ptico- sobre una plaea (otografica a sabre una
pantalla fluorescente. Puesto que los eleclTones que han sido dispersados han
desaparecido del haz, las regiones densas de la muestra aparecen como lireas de
un flujo bajo de elecnones. que aparecen negras.

158 Capftulo 4: C6mo se estudian las c6ulas


I f::l I---fuente lumlno..
<j:::>-l80tes eondensadot"'"
filamento Figura 4- J 7 CaraclerfstJcas
- '!'\CtIndescente
(luente de electrone.l prtnclpales de un mlcroscoplo 6ptlco,
de un mlcroscoplo eJectr6nlco de
/1',," Iransmlsl6n y de un mlcroscoplo
elec:tr6nlco de barrldo. EI dibujo pone
leOies

b,~~:=- musllt' 11/ defleclOt del h.l

de relieve las similitudes generales del
disei'io de estos tipos de microscopios.
Ienles objetivo _ Mienlrns que las lentes del
microscopio 6ptico son de vidrio. las
del microscopio eleclr6nico son
bobinas magneticas. Los dos tipos de
IMAGEN microscopios electronicos requieren
Ienla SOBRE UNA
PANTAlLA que la muestra se coloque en el vado.

IMAGEN
08SERVAOA
IMAGEN SOBRE
H
"c,0
OlRECTAMENTE
UNA PANTAlLA
FUJOflESCfNTE
I
CH,
I
CH,
MICROSCOPlO MfOlOSCOPlO ELECTRONICO MICAOSCOPlO ELECTRONICO I
0f'TIC0 DE TRANSMISIQN DE BAARlDO CH,
I
o
,C" H

Para podec sec estudiadas at microscopio electr6nico, las glutataldehldo

muestras biol6gicas requieren una preparaci6n especial9
Figura 4-18 Dos f1jadores qufmlcos
En los primeros tiempos de su aplicaci6n a materiales biol6gicos, el microscopio que se utlllzan habltualmente en
eleclr6nico revel6 la existencia en las cEHulas de una gran camidad de estructu mlcroscopla eleclronlca. Los dos
ras inimaginables. Sin embargo. antes de que se pudieran hacer estes descubri- grupos reaclivos a1dehfdo del
mjentos. los espeeialistas en microscopia electr6nica tuvieron que dcsarrollar glutaraldehfdo Ie penniten establecer
nuevos procedimientos de inclusi6n, de corte y de linci6n de los lejidos. enlaces cruzados entre diversos tipos
Puesto que las muestras para microseopia eleetr6nica han de ser expucstas de moleculas. fonnando uniones
a un vado muy inlenso, no es posible la observaei6n de las mueSlras vivas y hu covalemes entre ellos. EI tetr6xido de
osmio es reducido por numerosos
medas. Normalmente los lejidos son protegidos por fijaci6n -primero con gill'
compuestos organicos con los que
tarafdehfdo. que une eovalentemenle las mohkulas proteicas a SliS vecinas, y
forma complejos mediame puentes
despues con tetr6xido de osmio, que une y estabiliza las bicapas lipfdicas y tam cnlzarlos. Resullll especialrnente uti!
bien las protefnas (Figura 4-18). Puesto que los eleetrones tienen un poder pe para la fijaci6n de las membranas
netrante mlly limitado, normal mente los tejidos fijados son eortados en seecio celulares, ya que reacciona con los
nes eXlremadamente no
as (de 50 a 100 nm de espesor-aproximadamente 1/200 dobles enlaces c-c existentes en
del espesor de una celula) antes de pader observarlos. Esto se logra deshidra- muchos <icidos grasos.
tando la muestra e infiltn1ndola con una resina monomeriea que polimeriza for-
mando un bloque s6lido de phistico; el bloque se puede cortar mediante L1na
euchilJa de vidrio 0 de diamante, en un micr6tomo especial (ultramicr610mo).
Estas seccio1les ultrafinas, libres de agua y de otros solventes vol<itiles, se reeo tejma de cobre recubiert. con una
pellcula de carbona vIa de plhtico
gen sabre una pequena rejiUa metaliea circular para observarlas al microscopio
cinll de cortes setiado.
(Figura 4-19).
En el microscopio eleclr6nico. el conlraste depende del numero at6mico de
los ciiomos de la mueslIa: cuanto mas elevado sea el numero at6mico mayor nu-
.............
...............
~~
i::::;;'~
... .. ....-.
- ~
ultlafinos ~ un. muelttta

mero de electrones sercin dispersados y, por 10 tanto, mayor scrci el contrasle oble- illllllllllllllllll.
nido. Las moleculas biol6gicas estcin compuestas por cilomos de numero at6mico
muy bajo (fundamenlalmente de carbono, oxigeno. nitr6geno e hidr6geno). Para ..............
............
- -.
h."~,,,.,,,._

~

I - - - 3 mm-----ool
hacerlas visibles, nonnalmente sc contraslan (antes 0 despu~ de seccionarlas)
con sales de melales pesados tales como el osmio. el uranio y el plomo. Los dire
FJsura4-19 EsquemadcunareJlUa
remes eomponentes celulares apareceran con diferentes grados de contraste, en de cobre utllizada como soporle de
funci6n de su diferente imensidad de contrastado "de terudo" con estas sales. Los los corles ultrafinos de una muestra,
Ifpidos, por ejemplo. tienden a eontraslarse de oscuro con el osmio, revclando asf en la mlcroscopla electr6nlca de
la localizaci6n de las membranas celulares (Figura 4-20). tnmsmlsl6n.

Observaclon de la estrueluta de las ~ulas con el microscopio 159

 pared
celular

milocondria

pinto
vacuol.

nUcleo

Complejo
de Golgi

10 11m

En algunos casos, en seccioncs ultrafinas se pueden localizar determinadas Figura 4-20 Seccl6n ult.rafina de una
macromollkulas mediante t~cnicas adaptadas de la microscopia 6ptica. Cierms c~lula apical de la rafz de una

enzimas celulares pueden ser detectadas incubando la muestra con un substrato grammea, cont.raslada can osmlo y
cuya reacci6n conduzca aJ dep6sito locaJ de un precipitado denso a los electro- otros lanes de melales pesados. Se
nes (Figura 4-21). Alternativamente, como veremos en las p<1gs. 197-198, dire- observan facilmente la pared celular,
el nl1c1eo, las vacuolas. las
reotes anticuerpos pueden acoplarse a una enzima indicadora (normal mente
mitocondrias. el reticula
endoplasmatico, el complejo de Goigi
y los ribosomas. (Por conesfa de Brian
Gunning.)

Figura 4-21 ElectrollllUcrografia de

una c~lula, mostrando la local1zacl6n
de una delermlnada enzlma (la
nucle6tJdo dHosfalasa) en eI
complejo de Goigi Una secci6n
ullrafina de la clilula se ineuM con un
substrato que, aI reaccionar con la
enzima, fonn6 un precipitado
electrodenso. (Por conesfa de Daniel S.
Friend.)

160 Capftulo 4: C6mo se estudlan las c~lulas

peroxidasa) 0 a una molecula densa a los electrones (normalmente pequenas es
feras de oro metl1.lico, denominadas partfculas de oro c%idtJ!) y ser utUizados
para localizar las macromoleculas que reconocen (vease Figura 4-63).

Mediante la microscopia electr6nica de barrido se pueden

obtener imligenes tridimensionales 'o
Efectivamente, las secdones ultrafinas son cones bidimensionales de un tejido y
no revelan la disposid6n tridimensional de los componentes celulares. Aunque
la tercera dimensi6n puede ser reconstruida a pamr de dentos de secciones se-
riadas (Figura 4-22), ello supone un proceso largo y tedjoso.
Afonunadamente existen sistemas mas direcCOS de obtener una imagen tri-
dimensional. Uno de estos sistemas consiste en examinar las muestras con un
mlcroscoplo electrdnlco de barrido (SEM, de Scanning Electron Microscope). 9
que suele ser mas pequeno y sencillo que el microscopio electr6nico de transmi
si6n. Mientras que el microscopio elcctr6nico de transmisi6n utiliza los elcctro- Figura 4-22 ReconstnJcd6n
nes que han atravesado la muestra, el microscopio electr6nico de barrldo utiliza lrldlmenslonal a partir de secdones
los elcctrones dispersados 0 emitidos a partir de la superfide de la muestra. La serladas. Amenudo las secciones
muestra a examinar se fija, se sea y se recubre con una capa delgada de un me- ultratinas individuales conducen a
tal pesado. A continuaci6n la muestra es barrida por un haz foealizado de elcc impresiones erroneas. En este
ejemplo, la mayona de las secdones
trones. La cantidad de electrones dispersados 0 emitidos cuando este haz pri-
de una c~lula que contiene una
mario bombardea consecutivamente cada uno de los puntos de la superficie
mitocondria ramificada parecen
metalica es medido y uLilizado para controlar la intensidad del segundo haz, que comener dos 0 lres mitocondrias
se mueve sincr6nicamente con el haz primario y forma una imagen sobre una diferentes. Ademas, a partir de las
pantalla de televisi6n. De esta manera se construye una imagen completa y muy secciones 4 y 7 se podrfa deducir que
ampliada de la supcrficie de la muestra. una mitocondria se halla en el proceso
La tecnica de SEM proporciona una tremenda profundidad de foeo; ade- de divisi6n. Sin embargo, a partir de
mas, debido a que el grado de dispersi6n de los elcctrones depende del Angulo los cortes seriados se puede
relativo entre el haz y la superficie. 1a imagen tiene puntos brillanles y sombras reconSlruir la verdadera forma
oscuras que Ie confieren un aspeclo tridimensional (Figura 4-23). Sin embargo tridimensional.
solamente sc pueden examinar detalles superficiales, y en la mayorfa de mode-

Figura 4-23 Mlcroscopla electr6nlca

de barrldo. Eleclronmicrograffa
obtenida con un microscopio de
barrido, moslrando la disposici6n
c6nica que adoptan los estereocilios
que se proyeclan desde la superficie de
las celulas ciliadas del ofdo interno tAl.
Para comparar,la misma estruclura se
muestra observada por microscopia
6ptica de contraste de fases
interferencial (B) y por microscopia
electr6nica de secd6n fina (C). (Por
cortesfa de Richard Jacobs y James
Hudspeth.)

Observacl6n de la eslrUetuta de las cl'!:Julas con eJ microscopio 161

los de SEM la resoluci6n alcanzable no es muy elevada (aproximadamente 10 nm,
con un aumento efectivo de hasta 20000 veces); por consiguiente, est'a t~cnica
se utiBza para estudiar c~lulas enreras 0 tejidos y no organulos celuJares (v~ase
Figura 4-32).

EI sombreado metalico permite el examen a alta resoluci6n

de detalles superficiaJes, mediante el microscopio electr6nico
de transmisi6n II
Figura 4-24 Electroron.lcrografIllS de
EI microscopio electr6nico de rransmisi6n puede ser ulilizado para estudiar la
molkulas aisladas de la protein.
superficie de una muestra -y generalmente a mayor resoluci6n que en un mi- mJoslna que han sJdo sombreadll5
croscopio electr6nico de barrido- de fonna que pueden verse macromolkulas con platloo. La miosina es uno de los
individuales. Al igual que para la microscopia electr6nica de barrido, sobre la componentes principales del aparalo
muestra seca se evapora una fina pelicula de un metal pesado, como el platino. cont:r.ielil del mUsculo; como se
El metal se vapori7.a desde un angulo oblkuo de manera que se forma una capa mueslra aquf, se compone de dos
que en algunos lugares es mas gruesa que en otros -un proceso conocido como cabezas giobulares unidas por un talla
sombreado porque se crea un efecto de sombras que da una imagen can apa- coml1n. (Por cortes!a de Anhur Elliot.)
riencia tridimensional.
Algunas muestras cubiertas de esta manera son suficiememente fmas 0 sufi-
cientemente pequelias para que el haz de electrones penetre en elias directamen-
te; ~te es el caso de las mol~ulas, los virus y las paredes celulares (Figura 4-24). muestrfl
Pero para el caso de las muestras mas gruesas, el material organico ha de ser eli-
minado por disoluci6n despues del sombreado, de fonna que tan 5610 quede la
fina repliw metAlica de la superficie de la muestTa. La r~pliea se refuerza con una
peUcuJa de carbono para que pueda ser colocada en una rejiUa y examinada al
microscopio electr6nico de transmisi6n de la manera habitual (Figura 4-25).
81 me",l pesadoevlPO~_de
un fillmenlO ~sombrel~
La microscopia electr6nica de criofractura y la de grabado lemuestra /
por congelaci6n proporcionan una nueva visi6n
del interior celular lZ ,/
Qtros dos m~todos que utilizan r~plicas metalicas han sido particularmente uti- ,~~~
les en Ja biologfa cclular. Uno de ellos, el de la microscopia electr6nica de erlo
pelleull protectori de cerbono eVlporedl
fraetura, constituye un sistema de visualizar el interior de las membranas celu- er.clme de II muestrl
lares. Las c~lulas se congelan a la temperatura del nitr6geno Uquido (-196"Cl en
presencia de un crioproteclor (un anlicongelante) para impedir la distorsi6n pro-
vocada par la fonnaci6n de cristales de hielo, yel bloque se fracciona con la hoja
I I
de una cuchilla. A menudo, el plano de fractura pasa a trav~s del centro hidrof6-
bieo de las bicapas Iipfdicas, exponiendo as( el interior de las membranas cclula~
res. Las caras de fractura resultantes se metalizan con platino, y las r~plicas se
Ie r'pilci SI coioci Bobre II SUperflcll
observan al microscopio electr6nico (como en la Figura 4-25). Estas r~plicas es- de un potente dlsolvente a fin da
tan Ilenas de pequenas protuberancias, !lamadas partfcillas intramembralla, ellmlnlr II mUllstrl
que corresponden a grandes proternas de la membrana. Esta t~cnica proporcio-
na una via adetuada y espectacular para visualizar la distribuci6n de este tipo de
prote(nas en el plano de la membrana (Figura 4-26). 4

Qtro m~todo importante de r~plica es la microscopia de grabado par conge-

lacl6n (freeze-etch), que puede ser utilizado para examinar tanto el interior
como el exterior de las celulas. En esta t~enica las c~lulas tambien se congelan
Ie r'plice H IIVI Y recoge con una rlljml
muy rapidamente -utilizando por ejemplo un dispositivo especial para colocar la de cobra para BU llXernen micrOlC6plco
muestra contra un bloque de cobre congelado por ejemplo can helio I{quido- y el
bloque congelado se fragmenta con la hoja de una cuchilla, como acabamos de
describir. Pero en este easo el nivel de hielo disminuye alrededor de las c~lulas (y
en menor medida dentro de las c~lulas) mediante la subLimaci6n del agua en el
,_aI
vado a medida que aumenta la temperatura (un proceso denominado deshidra- Figura 4-25 Preparad6n de una
tad6n porcongelaci6n) (Figura 4-27). Las zonas de la c~lula expuestas a est'e pro- dpUca melallzada de Iasuperflcle de
ceso de grabado son sombreadas como antes, para conseguir una replica de pla- una muestra. Observese que el grosor
tina. Esta l~nica expone estructuras del interior de la c~Jula y puede revelar su del metal refteja los contomos de la
organizaci6n tridimensional con una c1aridad excepcional (Figura 4-28). 5uperficie de la muestra original.

162 Capftulo 4 : Cdmo se estudian las celuJas

 Figura 426 E1ectronmlcrograffa de
una crlo(ractura de la membrana del
lJlacolde de un c1oroplaslO de una
celula vegetal. Las membranas del
tilacoide, que Uevan a cabo la
fOlosfntesis, se encuenlran apiladas en
mulliples capas (vease Figura 14-39).
E! plano de fraclura se ha desplazado
de capa a capa, pasando a lraves de
cada bicapa Iipfdica y exponiendo las
prolemas lransmembrana que tienen
un lamano en el inlerior de la bicapa
suficiente para harer sombra y
aparecer como particulas
intramembrana en esta replica de
platina. Las pankulas mayores que se
aprecian en la membrana son eI
fotosistemall completo -un complejo
de multiples protefnas. (Por cortesfa
de LA. Siaehelin.)

L.-J
0,1 j.lm

PuCSlO que 10 que se observa aI microscopio son las replicas metcilicas sombrea-
das y no las propias mucstras, ambos metodos. la criofraetura y el sombreado por
congelaci6n, pueden utilizarse para estuwar celuJas congeladas sin (jjar. evit<1ndose
pues el riesgo de obtener anefaetos producidos por el proceso de la fijaci6n. FIgura 4-21 La mlcroscopla
electnSnlca por criofnctura. La
La tinci6n negativa y la microscopia crioelectr6nica permiten mueSlra es rapidamence congelada y el
bloque de hielo es fraclurado can una
observar macromoltkulas a alta resoluci6n 13 cuchilla (A). Enconces, el nivel de hielo
Aunque las macromollkulas aisladas, tales como el DNA 0 las grandes prote{nas, se reduce por sublimacion del agua en
pueden seT f<1cilmcnte visualizadas con el microscopio electr6nico si se vaporizan el vado, de fonna que las eSlructuras
con un metal pesado para darles contraste (vease Figura 424), se pueden visuali de la celula que se encuentran cerca
del plano de fractura quedan al
zar sus dctalles finos utiJizando tlnci6n negaliva. En este caso, las mollkuJas co-
dcscubierto (6). Acontinuacion, se
locadas sobre lIna fina pelfcula de carb6n (que resulra casi transparente a los
prepara una replica de la superficie
electrones), se lavan con una soJllci6n concentrada de una sal de un metal pesa- todavfa congelada (tal como se
do, como eJ acetato de uranilo. Una vez seca la muestra, una pelfcula muy fina de describe en la Figura 4-25) y se
la sal metalica cubre la pellcllia de carb6n por todas partes cxccpto por donde ha cxmnina al microscopio clcctr6nico de
sido cxcluida debido a la presencia de ulla macromolecula adsorbida. Puesto que lransmisi6n.

(Al FRACTURA In dOB cefes de frseturs de Ie (Sl GRABAOO

membrene elfteme de Is envoltur.
nucleer

PlIInlcule Buperl"ocie elrterne de la

hielo greNdo inlermembrene membrana pl~'lice y
del or~nulo rodeado de
membrana
cilOPlasme!
gfa~ ~~

Observaclon de la estructun de las c~lulas con el microscopio

-
163
 -
Figura 428 Ordenacl6n regular de
los nJarnentos protelcos de un
ml1sculo de insecto. Para obtener esta
imagen, las celulas musculares fueron
nipidamcnte congeladas en belio
Hquido. fraclUradas a traves del
citoillasma Ysomctidas a grabado
profundo. Luego. se preparo una
replica metalizada que se examin6 a
gran aumento. (Por conesfa de Roger
Cooke y John Heuser.)

0,1 11m

la macromollkula pennite que los electrones pasen mucho mas racilmente que a
traves del metal pesado circundante. se crea una imagen inversa 0 negativa de la
macromolOCula. La tinci6n negativa es especial mente util para visualizar grandes
agregados macromolecuJares. tales como virus 0 ribosomas. y para observar la
estructura en subunidades de los 6lamentos pmteicos (Figura 4-29).
Tanto la tinci6n negativa como el sombreado son capaces de proporcionar
visiones de alto contraste de la superficie de pequenos conjuntos macmmolecu
lares; ambas tlknicas, sin embargo, tienen una resoluci6n limitada por el tama
no menor de las part{culas mctaLicas utiJizadas en el sombreado 0 en la tinci6n.
Metodos mas recientes proporcionan una altemativa que ha pennitido la visua
lizaci6n directa a alta resoluci6n de incluso las caracteristicas internas de estruc
turas trid.imensionales tales como los virus. En esta tecnica. lIamada mlcrosco
pia crloelec:trdnJca. sobre una rejilla de microscopia se prepara una capa muy
delgada (-100 nm) de muestra hidratada que es rapidamcnte congelada. Se re-
quiere un porta-objetos especial para colocar esta muestra a -IGCrC cn cl vado
del microscopio. donde puede ser visualizada directamente sin neccsidad de fl
jaci6n, tinci6n, 0 sccado. La homogeneidad de la capa de agua vitrificada y la
utilizaci6n del contraste de rases bajo foco pennite la obtenci6n de im<igenes
sorprendentemente c1aras de estas muestras no fijadas (Figura 4-30).
Independientemente del metodo utilizado. a1 microscopic electr6nico lIna
molecula de prOlcfna unicamente da una imagen, debil y poco definida. EI in len-
to de oblener una mejor informaci6n prolongando cl tiempo de inspccci6n 0 101
intensidad de i1uminaci6n resulta contraproducente. ya que can ella se dana el
objeto a examinar. Por consiguiente, para descubrir los detalles de la estructura

Figura 4-29 E1e<:lronmlcrograffa de

marnentos de acdna .,or tlnc:16n
negatlYL Cada filamento dene
aproximadamente 8 nm de di1metro y.
aI examinarlo detenidamente. se
observa que est! formado por una
cadena helicoidal de moleculas
gIobulares de actina. (Porconcs(a de
RogcrCrnig.)

164 Capftulo 4 : C6mo se estudlan las a9.ulas

 Figura 4-30 Mlcrosoopla electr6n1ca
de un virus. W VlJUS Semlild forest no
teNdo en un capa fina de agua
vitrificada, observado aI microscopio
crioelectronico a -16QOC. Como en
microscopia 6ptica, el contraste de
rases se puede utilizar para obtener
Ulla imagen de una muestra no lefiida.
Mediante m~todos de prot:esamiento
de imagcnes se puede t:ombinar un
gran numero de estas imagenes
produciendo una imagen
tridimensional de alia resoluci6n.
(Par t:ones{a de Stephen Fuller.)

molecular es necesario combinar la informaci6n obtenida de muchas moleculas

con el fin de eliminar los errores alcalorios de la imligenes individuales. Esto cs
posible para virus 0 filamenlos proteicos, en los que las suhunidades individuales
se presentan ordenadas de forma regular y repetida; tambicn es posible para
cualqu..ier substancia que pueda formar ordenamienlOS cristatinos en dos dimen-
siones en los que una gran cantidad de mollkulas presenten una orientaci6n
identica y posiciones espaciales regulares. Sabre una microfotografia de un orde-
namient'O de cualqu..ier tipo se pueden aplicar las ttknicas de procesamiento de
imagenes para obtener la imagen media de una moltkula individual. revelando
asf dClalles oscurecidos por el "ruido" aleatorio de la fotograffa original.
Este sistema de reconslrucci6n de imagencs ha permitido oblener con una
resoluci6n de 3,5 nm la estructura interna de virus recubiertos y oblcncr la forma
de una molecula individual de protefna a la extraordinaria resoluci6n de 0,35 nm
(vease Figura 10-31). Sin embargo, la microscopia electr6nica, incluso en sus for-
mas mas sofisticadas, no consigue obtener una descripci6n completa de la es-
tructura molecular, ya que los atomos en una molecula estAn separados por dis-
tancias de tan 0010 0, I 00,2 om. Para resolver la cstructura molecular a detalle
at6mico, se necesita otra tecnica que utilice rayos Xen lugar de electrones.

Resumen
Actualmente disponemos de muelms tunlcas de mlcroscopia 6ptlca (Iue nos per-
miten la observac16n de las dlulLu. Las dlulas que han sido fiJadns y teiiidas se
pueden estudiar al mlcroscoplo 6ptlco convenclonal, mlentras ql,e para localiulr
molkulas espedficas en las dlulas u pueden utiliulr anticuerpos marcados y es-
tudiar su localizaci6n mediante el mlcrosc:opio de fluorescenda. El microsc:opio de
barrido confocal proporciona finas ucciones 6pticas y puede utiliulrse para no.
conslTUir inufgenes trilIimensionola. Ltu dlulas vilJQ.S u pueden oburvar utllizon-
00 tknkas de contraste defuses. contraste de fases Inurferen.clal 0 6pticas de enm-
po oscuro. Todos los tipos de microscopla 6ptlca son mas fdciks utillzando tienlau
electr6nlcas de procesanrlento de lnrtfgenes, las cunles amplijican fa sensibilldad e
increme,.Um la resollU:16I1.
Par" determinar la eslructura detailada de las membranas y de los organulos
celulares se requiere ulla re$Oluci6n mayor, la cunl se pl4ede aluuuar con el micros-
copio electr6nico de lTansmisi6n. Se pueden obtener inufgenes trldimensionoks de
las &uperficies de dlulas y tejidos mediante micrwcopia electr6nica M barrido.
mienlTas que el interior de las membranas y tk las dlillas puede oburvarse, rap-
tivamente. mediante la crlofractura y la microscopia de grabado por congelacl6n.
Tamblin puede lIiswllizone ftkilmente Ia fonna de macromoUc:ulas aisladas, d
han s/dq prelliamente $Ombreatlas con un metal pesado 0 contorneadiJs por tinci6n
negativa, "tilizando la nrlcroscopia electr6nica.

Observacl6n de la estructura de las ctlulas con el microscoplo 165

 Aislamiento y crecimiento de celulas en cultivo 14
A pesar de que al microscopio pueden ohservarse las estructuras de los orga-ou-
los y de las macromol~culas de 13 cl!lula, 13 comprensidn molecular de 13 celula
requiere un anMisis bioqu[mico detallado. Desgrnciadamente los procedimien-
lOS bioqufmicos requieren gran cantidad de celulas y siempre empiezan rom-
piendolas. Si 1a muestra es un trow de tcjido, se mezclaran entre sf fragmentos
de IOOas sus cclu1as y 5i, como ocurre en Ja mayana de los casos, eJ tejido tenia
celulas de varios tipos diferentes. se originara una gran confusi6n. Con el objclo
de preservar toda la informaci6n que sea posible sobre carla uno de los tipos ce-
lulares. los bi61ogos celulares han desarroUado tecnicas de disociaci6n de celu-
las a partir de los tejidos y de separaci6n de los distintos tipos celulares. Como
resuhado de estas tecnicas, pueden analizarse poblaciones relativamente homo-
geneas de celulas -ya sea directamente 0 despues de que su numero se haya in-
crementado notablemenle permitiendo que las celulas proliferen en cultivo.

Las c~lulas de un tejido pueden ser aisladas y separadas

en diversos tipos celulares 15
EI primer paso del aislamiento de celulas a partir de un tejido que contiene una
mezcla de tipos celulares consiste en romper la matriz eXlracelular y las uniones
interceluJares Que mamienen unidas entre sf las celulas. Normalmcnte las mejo-
res recuperaciones de celulas disociadas viables son las obtenidas de tejidos fe-
tales 0 neonatales, tipicamente tratandolos con enzimas proteolitfcas (como la
uipsina y la colagenasa) y con agentes (como el acido etilendiamfn lelraacetico
o EDTA (de ethylendiaminlelraacetic acid)) Que une, 0 quela, cl Caz. del Que de-
pende la adhesi6n celula-celula. Entonces. los lejidos pueden ser disociados en
celulas individuates y viables, mediante agitaci6n suave.
Para separar los diferentes lipos celulares a panir de una suspensi6n celular
mixta se utilizan diversos metodos. Uno de ellos consiste en aprovechar las dire-
rcntes propiedades fisicas de las celulas. Por ejemplo, las celulas grandes pue-
den separarse de las pequenas y las celulas densas de las ligeras. mediante cen-
trifugaci6n. Estas tecnicas se describirtin al hablar de la scparaci6n de organuJos
y de macromoleculas, para 10 cual fueron desarrolladas originalmente. Qua
aproximaci6n se basa en la tendencia de algunos lipos celulares a adherirse
fuertemente al cristal 0 at plastico, 10 cual permile separarlas de celulas que se
adhieran menos fuenemente.
Una mejora importante de esta ultima tecnica dependc de las propiedades
especfficas de uni6n de los anticuerpos. Los anticuerpos que se unen especffica-
mente a la superficie de un solo tipo celular de un tejido pueden acoplarse a va-
rios tipos de matrices --como colAgeno, esferas de polisacAridos 0 pltistico- for-
mando una silperficie de afillidad a la que unicamente se uniran las celulas
reconocidas par los anticuerpos. Las celulas unidas se recuperan mas tarde
mediante agilaci6n suave, mediante el tratamiento con Iripsina para digerir las
protefnas Que median la adhesi6n, o. en el caso de matrices digeribles (como la
colagena). mediante la degradaci6n de la propia matriz can enzimas (como la
colagenasa).
La lecnica mas sofislicada de scparaci6n celuJar sc basa en el marcaje espe-
cffico de las celulas con anticuerpos acoplados a un colorante Ouorescente y
poslerior separaci6n de las celulas marcadas de las no marcadas mediante un
c1aslflcador celular actlvado por Ouorescencia. En este aparato las celulas pa-
sao en "ma india" a traves de un haz laser determinandose la fluorescencia de
cada celuJa. Un poco mas adelante de la corriente de celulas. una boquilla vibra-
loria forma diminUlas gotitas. la mayorfa de las cuales contienen una 0 ninguna
celula. Las gotitas Que cOnlienen una sola celuJa reciben autom,1licamenle una
carga electrica positiva 0 negativa en el momento de fomlarse, dependjendo de
si la celula es fluoresccnte 0 no 10 es; a continuaci6n, las gotitas son desviadas
por lin intenso campo elect rico hada un contenedor apropiado. Los grupos de

166 Capftulo 4: C6mo se esludlan las c~lulas

----------- I)"l
 ,----:::I--boquilla de vibrldor
IIIi..r
peQuetlo g.upo de GOtas
carglldas negalivament8 - [ -
cJebido Ie detllCCi6n
de una eelu" fluo<escente
Figura 4-31 Selecdonador de dlulas
uhr-onieo acLivado por nuorescenda.
- - lIUSfMIMi6n eelular
Cuando una aHuia pasa a trav~ del
rayo hiser, es seleccionada de acuerdo
con su f1uoresceneia. las gotitas que
contienen una sola dlula reciben una
carga ncgativa 0 positiva, segUn sea 120
celula fluorescente 0 no. Luego. las
"!'la' que cafaa
IUgolll$
gotitas son desviadas mediante un
campo electrico, en funei6n de su
carga, hac!s los tubas de recog!da.
Tengase en cuenta que 120
dOlectores concentraci6n celular debe ser 1201 que
120 mayorfa de las gOlitas no contengan
ninguna celula; 120 mayor parte de las
- gotitas. pues. fluiran aI contenedor
pequeflos grupos de
residual, junto con las gOlitas que
++]' gotas cargadn
r positiv8men" debido conlengan mas de una dlula. E$le
Ie delllCCi6f1 de uoa
ee1ula no flt.>OfeteC!nl8 mismo aparato se puede utilizar
.2000 V
tambien para separar CTOmosomas
marcados con fluorescencia de OITOS
no marcados. proporcionando un
valioso material de partida para el
aislamiento y mapaje de genes.

eoleetor(le
dlulu

'.ueo par. 901" no duvi.da,

celuJas que se forman ocasionalmente son deleetados por su mayor dispersi6n

de luz y no reciben carga, de forma que caen en un contenedor residual. Eslas
m<iquinas pueden seleccionar I relula entre 1000 Yc1asificar Ufias 5000 celulas
por segundo (Figura 4-31).
Cuando. medianle alguno de los metodos rnencionados, se ha obtenido lIna
poblaci6n uniforme de celuJas, esta poblaci6n puede utilizarse directamenle
para analisis bioqufmicos. Alternativamente, esta poblaci6n celular constituye
un material de partida adecuado para cl cuJtivo celular, permitiendo esludiar el
complejo comportamienlo de las celuJas bajo las condiciones eslrictamcnle de-
finidas de una placa de cultivo.

Las ceJ.ulas pueden cultivarse en una placa de cultivo l6

La mayona de tipos celulares tanto vegetales como animales sobreviven, se mul-
tiplican e incluso expresan propiedades diferenciales en una placa de cullivo en
condiciones adecuadas. Las relulas pueden visualizarse 201 microscopio 0 anali-
zarse bioqumicamenle, y se pueden estudiar los efeclos de 120 adici6n 0 elimina-
ci6n de moleculas detenninadas tales como hormonas 0 factores de crecimien
to. Ademas, en cultivos mixtos pueden estudiarse las interacciones entre un tipo
celulary otTO. A menudo se dice que los experimenlos con celulas cultivadas han
sido realizados in vitro (literal mente "en vidrio~) para diferenciarlos de los ex-
peri men los rcali7.ados en organismos intactos, que se dice que han sido realiza-
dos in vivo (literalmente "en el organismo vivo"). Estos dos terminos pueden re-
sultar confusos porque a menudo se utiUzan en un sentido diferente por los
bioqufmicos, para los que in vitro se refiere a las reacciones bioqufmicas que se
producen fuera de la celula mientras que in vivo se refiere a cualquier reacci6n
que se produce dentTO de una celula viva.

Aislamiento y crecimienlo de ~Iulas en cuJtlvo 167


EI cultivo de tejidos empez6 en 1907 con un experimento dcstinado a finali-
zar una controversia de In ncurobiologfa. La h..ip6tesis que se examinaha era co-
nocida bajo el nombre de teorfa neuronal. la cual afinnaba que cada fibra ncr-
viasa es una prolongaci6n de una sola celula nerviosa y no el produclo de 13
fusi6n de varias celuJas. Para dilucidar esta polemica se coJocaron pequenos
rragmentos de medula espinal en plasma coagulado en una camara humeda y
caliente y se obscrvaron aI m..icroscopio a intervalos regulares de tiempo. AI cabo
de un dea mas 0 menos, se pudo observar que las distintas celuJas nerviosas emi-
dan prolongaciones largas y finas hada el plasma coagulado. De esta mancra
qued6 demostrada la teorla neuronal y se establecieron las bases de 13 revolu-
ci6n del cuhivQ celular.
Los experimentos originales de 1907 implicaban el cultivo de pcqueflos
fragmentos de tejido. 0 explantes. En la actualidad. los cullivos se preparan ha-
bitualmente a partir de suspensiones de celulas oblenidas por disociaci6n de te
jidos. como se ha descrito mas arriba. A duerencia de las baclerias. la mayor par LJ
10~m
te de las celulas de los tejidos no estan adaptadas a creccr en suspcnsi6n, de
forma que necesitan una superficie s61ida sobre la que poder ctecer y dividirse. Figura 4-32 Ululas en cultivo.
Actualmenle este soportc 10 const.ituye una supcrficie de plastico de una plaea Electronrnicrografia de barrido de
de cultivo (Figura 432). Sin embargo distintos t.ipos celulares tienen rcqueri- fibroblastos de rata creciendo sobre
mientos direrentes. de forma que algunos de eUos no creccn 0 no se diferencian una 5uperficie phistica en cuhivo de
a menos que la plaea de cuhivo esle recubierta de componenles de malriz extra tejidos. (POl cortesfa de Guenter
Albrecht -Buehler.)
celular. como el col<1geno 0 la laminina.
Los cultivos preparados directamente a partir de los lejidos de un organis
mo. con 0 sin fraccionamiento previo. reciben el nombre de culUvos primarios.
En la mayorfa de los casas, las celulas de los cultivos primarios puetlen recupe
rarse de la placa de cult.ivo y utilizarse para format un gran numero de culUvos
sec:undarios. De esta forma las celulas puetlen ser subcuhivadas repetidamenl'e
durnnl'e semanas 0 meses. A menudo estas celulas muestran propietlades dife
renciadas dpicas de sus orlgenes: los fibroblaSIOS continuan segregando coh\ge-
no; las celulas derivadas del musculo esqueJetico embrionario se fllsionan for-
mando fibras musculares gigantes que se contraen esponlaneamenle en la placa
de cu.ltivo; las Ct:!luJas nerviosas emilen axones que son excilables electricamcnle
y que eSlablecen sinapsis con ott3S celulas nerviosas; las celulas epiteliales for
man exlens..1S laminas con muchas de las propiedades de un epitelio intacto.
?oesto que estos fen6mcnos se producen en los cultivos, resllitan accesibles al
eSludio a Iraves de sistemas y tecnicas que no se pueden aplicar en los tejidos in-
metos.

Los medios definidos quimicamente, libres de suero, permiten

la identificaci6n de factores de crecimiento espec(ficosl 7
Hast'a principios de los ailOs 1970 el cultivo de tejidos era algo asf como lIna
mezcla de ciencia y brujerfa. Aunque los coagulos plasmaticos ftleron sllbstillli-
dos por piacas de medios Ifquidos conteniendo cantldades especfficas de pcque
flas mohkulas como sales, g1ucosa. aminoacidos, y vitaminas, la mayorfa de los
medios incillfan lambicn una proporci6n mal definida de una mezcla de macro-
moleculas en fonna de suero de cabaUo 0 de suero fetal de temera, 0 un exu3cto
crudo de embri6n de poUo. EsIOS medios todavia se utilizan aelualmcnle para la
mayorfa de cultivos rutinatios ITabla 4-3) pero resultan inadecuados para el es-
ludio de las necesidades de macromoleculas que un tipo eelular delerminado
riene para prosperar y runcionar nonnalmente.
Esla dificullad ha conducido al desarroUo de medios Iibres de suero dejinidos
quimicamente. Ademas de las pequenas molecuJas habituales esl'OS metlios deli
nidos cont.ienen una 0 m~s proteinas especificas que la mayorfa de celulas nece-
sitan para sobrevivir y proljferar en cult.ivo. Enlre eUas se encuentrnn los (actores
de creclmlento que estimuJan la proliferaci6n y la transferri/Ul que transporta
hierro aI interior de las celulas. La mayorfa de las molecuJas senalizadoras prolei
cas extracelulares esenciales para la supervivencia, desarroUo y proliferaci6n de

168 CapftuJo 4: C6mo se estudjan las celulas

Tabla 4-3 Composlci6n de un medio tJplco adecuado para el cutlvo de ceJulas de mam(fero

Prolefnas (necesarlas en medlos

qufmlcamente definldos,
Aminolicidos Vltamlnas Sal.. Varlos Jlbres de suero)

Arginina Biolina NaCI Glucosa Insulina

Cisterna Colina Ka Penicilina Transferrina
Glutamina Folato NaH,P0 4 Eslreptomicina Factores de credmiento espedfico
Histidina Nicotinamida NAHC01 Raja fenol
lsoleucina Pantotenato CaCI 2 Suero total
Leucina Piridoxal MgCI,
Usina Tiamina
Metionina Ribonavina
Fenilalanina
Treonina
Tript6fano
Tirosina
Valina
La glucosa se utiliza a concentraclones de 5 a 10 rnM. Todos los aminoAcidos son de la forma Lycon una ados excepciones se utilizan a can
cenlrac!oneli de 0.1 a 0,2 rnM: las vilaminfls se utHizan a concentraclones 100 veces menores, es declr. alrededor de I ~M. EI suere, que gene
ralmente es de caballo 0 de lemera, se ai\ade hasta (onnar ellO% del 'IOlumen total. La penicilina y la eSlreptomicina son antibi6ticos que se
utllizan para inhibir el crecimlento de las bacterias. EI rejo (enol es un colorante indicador del pH, que pennlte seguir la variacl6n de color
para asegurar que el pH sea de 7,4 apreximadamenle.
Generalmente los cultivos se mantienen en recipienteli de plistico 0 de vidrio, con una superflcie preparada adecuadamenle que penni
ta la adherencla de las cilulas. Los recipientes se conservan en una estu(a de culti'lO a 370<:. en una alm6s(era de 5'" de CO. y95'" de aire.

deterrninados tipos celulares se han descubierto a trave. de estudios de cultivos

celulares y la busqueda de nuevas mohkulas ha sido enorrnemente facilitada por
la asequibilidad de medios definidos quimicameme y Iibres de suero.

Las Ifneas celulares eucariotas constituyen una fuenle ampliamente

utilizada para la obtenci6n de c~lulas homogeneas l8
La mayorfa de las celulas de los vertebrados mueren tras un m'imero fin ito de di
visiones en cultivo: por ejemplo. las celulas cUlaneas humanas en CUllivo sobre- Tabla 44 A1gunas !neas celulares
viven durante algunos meses. dividiendose unicamente entre 50 y 100 veces an utlllzadas habltualmente
tes de moriT. Se sugiri6 que esta vida Iimitada estaba relacionada con la vida Unea
lirnitada del animal del que derivan las celulas. Sin embargo, en cultivo ocasio- ceJular Tlpo celular y orlgen
naJmenle surgen algunas celuJas que han sufrido algun cambio genetico que las
haec realmente inmortales. Estas celulas proliferan indefinidamente y pueden 3T3 fibroblasto (rat6n)
propagarse como una linea celular (Tabla 4-4). BHK21 fibroblasto (hamsler sirio)
Las Iineas celulares preparadas a partir de celulas cancerosas difieren de las MOCK celula epitelial (perro)
preparadas a partir de celulas normales, en varios aspectos; por ejemplo. a me HeLa celula epiteUal (humana)
nudo las Uneas de celulas cancerosas crecen sin fijarse a ninguna superficie y PtK I celula epitelial (rata
proliferan en una placa de cultjvo hasta una densidad mucho mayor que la de canguro)
las celulas norrnales. Experimentalmente pueden inducirse propiedades simila- L6 mioblasto (rata)
PCl2 celula cromafinica (rata)
res a e.tas en celulas norrnales mediante la transformad611 con un virus 0 con
SP2 celula plasmcttica (rat6nj
una substantia qumica inductora de tumores. Las !neas celulares transforrna-
das resuhantes son capaces de provocar tumores si se inyectan a un animal Las Muchas de estas \[neas celulares den
Ifneas celulares, tanto transformadas como no transfonnadas, resultan extrema- van de Iwnores. Todas ellas son capaccs
damente utiles para la investigaci6n celular como fuente de un numero muy ele- de mulliplicarse indefinidamente en cui
livo y expresan por 10 menos algunas de
vado de celulas de un tipo uniforme. especialmente porque se pueden guardar las propiedades diferenciales de su ori
en nitr6geno Iiquido a -196C durante un perfodo indefinido de tiempo, y des gen celular. Las celulas BHK 21, HeLa y
pues de descongeladas todavfa son viables. Sin embargo, es imponante recono $P 2 son capaces de crecer en suspen
cer que las celulas de ambos tipos de lineas celulares casi siempre difieren de sus si6n: las olras lineas celulares requieren
un substrato de cultivo s6lido para multl-
celulas progenitoras de los tejidos de las que derivan, en algunas caracteriSlicas plicarse.
imporlantes.

AJslamiento y credmiento de celulas en cultivo 169

 po

A pesar de que todas las ctHulas de una !fnea celular son fiUy similares entre
sf, a menudo no son identicas. La uniformidad genetica de una linea celular
puede mejorarse con el donaje celular, mediante el cual se afsla una tlnica celu-
la y se Ie permite proliferar hasta formar una gran colonia. Un clon es cualquier
poblaci6n de celulas derivadas de una unica celula ancestral. Una de las aplica-
ciones mas imponantes del c10naje celular ha sido el aislamiento de Ifneas celu-
lares mutantes con defectos en determinados genes. A menudo el estudio de las
celulas que son defectuosas en una protefna determinada revela muchos datos
sobre la funci6n que tiene esta prolefna en las celulas normales.

Las celulas pueden fusionarse formando celulas hfbridas l9

Es posible fusionar una celula con otra fonnando una celula combinada con dos
nucleos separados, denominada heterocarlonte. La fusi6n se suele realizar tra-
tando una suspensi6n de celulas con ciertos virus inactivados 0 con polietilen
glicol, que a1tera las membranas plasmaticas de las celulas de tal forma que es-
tas tienden a fusionarse entre sf. Los heterocariontes ofrecen la posibilidad de
mezelar los componentes de dos celulas diferentes para estudiar sus interaccio-
nes. Por ejemplo, el nueleo inerte de un eritrocito de polio cuando es expuesto
por fusi6n celular aI citoplasma de una celula en cultivo en crecimiento, se reac-
tiva produciendo RNA y con el tiempo, replicando su DNA. La primera prueba
directa de que las protefnas de membrana son capaces de desplazarse en el pIa-
no de la membrana plasmatica se OblUVO de un experimento en el que se fusio-
naron celulas de ral6n con celulas humanas: aunque las protefnas de superficie
de las celulas de rat6n y de la celula humana inicialmente estaban confinadas en
sus propias mitades de la membrana plasrnMica del heterocarionte, rapidamen-
te difundieron y se mezclaron por toda la superficie de la celula.
Con el tiempo, el heterocarionte sufrira una mitosis, produciendose una c~
lula hfbrlda en la que las dos envolturas nucleares se han disgregado permitien-
do que todos los cromosomas se agrupen en un gran m1c1eo unico (Figura 4-33).
Aunque estas celulas hlbridas puedan ser c10nadas generando Ifneas celulares
hfbridas, las celulas hfbridas iniciales tienden a ser inestables y a perder cromo-
somas. Por razones desconocidas estas celulas hfbridas hombre-rat6n pierden
de forma predominante cromosomas humanos. Estos cromosomas se pierden
de manera a1eatoria, dando lugar a diversas Uneas celulares hfbridas hombre-ra-
t6n diferentes, cada una de las cuales contiene algunos (0 uno solo) cromoso-
mas humanos. Este fen6meno ha permitido determinar la localizaci6n de genes
en el genoma humano. Por ejemplo, llnicamente las celulas hfbridas que contie-
nen el cromosoma humano II sintetizan la insulina hrnnana, 10 cual indica que
eJ gen que codifica la insulina se halla situado en el cromosoma 11. Estas mis-
Figura 4-33 Produccl6n de celu)as
tres clones de c4ilules hlbridas. hlbrldas. Celulas humanas se iusionan
ceda uno de los cuales conserva con celulas de ral6n. produciendose
SUSPENSION Of DOS TlPOS un nCimero reducldo de cromOBomas heterocariontes (cada uno de ellos
CELULARES. CENTRlfUGACION humenos diferentes iunto con toda
Y AOICION Of UN AGENTE DE la dotaclon cromosomlca del raton conteniendo dos 0 mlis nucleos) que
fUSION posleriormente danin lugar a celulas
fUSION CELULAR Y EL MEDIO SELECTIVO SOLO hfbridas (cada unade elias can un
fORMACION DE PERMITE PROUFERAR A
HETEROCARIDNTES, LOS HETEROCARIONTES. Unico micleo fusionado). Estas ctHulas
QUE POSTERIOAMENTE:::::=::;~ LOS CUALES SE CONVIERTE~N!j,~~t:: hJbridas en particular resultan titHes
SON CULTlVADOS -::: EN CElULAS HfBRIDAS I para 10caJizar genes humanos en los
~ _."". . (i) ....... QUE POSTERIORMENTE
-- '6J '"'"' SERAN CLONADAS cromosomas. ya que la mayorfa de fos
'" cromosomas humanos se pierden
n'ipidamenle de manera aleatoria, con
10 que quedan clones que conservan
tan 5610 uno 0 unos cuantos genes.
A menudo, las celulas hfbridas
producidas por fusi6n de otros tipos
fibrOblesto c4ilula tumoral heterocarionte c4ilule hfbride celulares conservan Ja mayorfa de sus
humano de raton cromosomas.

170 Capitulo 4 : C6mo se estudlan las celulas

)
Tabla4-5 Algunos de los hllos en el desarroUo del cuilivo de telldos

1885 Roux demostr6 que las ci!lulas embrionarias de polio pueden manlenerse vivas
en una soluci6n salina, fuera del cuerpo del animal.
1907 Harrison cultiv6 mi!dula espinal de anfibio en un coagulo Iinflitico,
demostrando asf que los axones se producen como prolongaciones de eelulas
nerviosas.
1910 Rous indujo un tumor utilizando un extracto filtrado de ci!lulas tumorales de
polio, que mas tarde se demostr6 que contenfan un virus de RNA (virus del
sarcoma de Rous).
1913 Carrel demoslr6 que las eelulas podfan crecer en cultivo durante mucho
tiempo, siempre que fueran alimentadas regularrnente y bajo condiciones
asepticas.
1948 Earle y colaboradores aislaron eelulas de 120 Ifnea celular L y demostraron que
en cultivo tisular forman clones de celulas.
1952 Gey y colaboradores estableeieron una Unea continua de celulas derivada de
carcinoma cervical humano, que mas tarde se convirti6 en 120 eonocida Ifnea
eelular HeLa.
1954 LevI-Montaldnl y colaboradores demostraron que el faclor de crecimiento
nervioso (NGF, de Nerve Growth Factor) estimula el erecimienlo de los
axones en cultivo.
1955 Eagle desarroll61a primera investigaci6n sistematica sobre los requerimientos
nutricionales escnciales de las celulas en eultivo y encontr6 que las celulas
animaJes se pueden propagar en una mezcla definida de pequefias moleculas
suplemenlada con una reducida proporci6n de protefnas sericas.
1956 Puck y colaboradores seleccionaron mutantes con requerimientos de
crecimiento alterados a partir de ceJulas HeLa en cultivo.
1958 Ternln y Rubin desarrollaron un metodo cuantitativo para 120 infeeci6n de
cultivos de eelulas de poUo mediante eillirus del sarcoma de Rous purificado.
En 120 d~da siguiente Stoker, Dulbecco, Green y otros vir61ogos
establecieronlas caracteristicas de 6ta y de otras transformaciones rlricas.
1961 Hayfllck y Moorhead demostraron que los fibroblastos humanos en cultivo
mueren tras un numero fin ito de divisiones.
1964 L1uJe8eld introdujo el medio HAT para el crecimiento selectivo de hlbrldos
celulares somaticos. Junto con 120 teenica de 13 fusi6n eelular, este medio hizo
accesible 120 genetica de las eelulas somaticas.
Kato yTakeuchl obtuvieron una planta compieta de zanahoria a panir de una
sola celula de rafz de zanahoria manlenida en cultivo.
1965 Ham introdujo un medio definido, sin suero, capaz de permitir el crecimiento
clonal de ciertas eelulas de mamffero.
Harris y Watkins produjeron los primeros heterocariontes de celulas de
mam(fero, mediante la fllsi6n indllcida yfricamente de celulas humanas y de
ci!lulas de rat6n.
1968 Augustl-Tocco y SalO adaptaron 201 cullivo ei!lulas nerviosas tumorales de rat6n
(neuroblastoma) y aislaron clones que eran excitables electricamente y
producfan prolongaciones nerviosas. En esta epoca se aislaron otras celulas
diferenciadas, entre elias Ifneas celulares hepaticas y de musculo esqucletico.
1975 Kohler y Milstein produjeron las primeras IIneas cellilares de hibrldomas que
scgregaban anticuerpos monoclonales.
1976 Sato y colaboradores publicaron el primero de una serie de inforrnes,
demostrando que para creeer en un medio sin suero, las Ifneas celulares
diferentes requieren mezclas diferentes de hormonas y de factores de
crecimiento.
1977 Wigier y Axel y colaboradores desarrolJaron un eficiente metodo pard.
introducir genes humanos de copia linica en el interior de celulas cultivadas,
adaptando los metodos desarroUados inicialmente por Graham y van der Eb.

mas celulas hibridas lambien se utilizan como fuente de DNA humano para prc-
parar Iibrerfas de DNA de cromosomas humanos. Mas adelante en este capftulo
aprenderemos de que forma se han utilizado las celuJas hibridas en la produc-
ci6n de anticuerpos monoclonales.

Aislamiento y credmlento de celulas en cuJtivo 171

 En la Tabla 4-5 se enumeran algunas de las etapas mas importantes del de-
sarrollo del cultivo en tejidos.

Resumen
Habitlullmente los teJldos de organlsmos mllY jO'lenes se plletlen disociar en sus
componentes celulares, a partir de los cludes p"eden purljiMne diferentes tipos ce-
lulares individunJes, los cuaks pueden utilizarse para su andlisis bioqulmico 0
para establecer c.Iltivos celulares. Mltc/uu tipas de c/lldiU animales y vegetales $0-
breviven y prallferan ell 'ilia placa de crdtil/O si se In smninistra el "'edio de CllltilJO
adecuado contenielldo nutrlentes y factores de crecimie"to espedflcos. Aunqlle la
mayorla tk las ciluw allimaks mueren despuh de un nd"'era flnito de divislones,
en los adtivos surgen espontallMmente UtuU c/lulas variantes inmortales que pue-
den ser mnnlenldas lndejinld/lmente como llneas celulares. Los clones derlvados de
UM "niM dl"ln ancestral hacen pasible aislnr poblnciones "niformes de cilulas
n",tantes con tkfectos ell UM saln pratelna.. Plteden jusiOlrane dos tipas diferentes
de cilulasfamufndose heterocarlontes (celulas con dos ndcleos), que pueden utill-
zane para esnullar las interacciones entre los componentes tk las dos celulas orlg;-
Mles. Con el tiempo los '.elerocarlontes fomran ciluw hlbrldns (con un nlfe/eo fu-
slonado), las cualn praporciOlum un mitada nlllY adecwulo para loetdizar ge'teS
ell los cromosanuu.

Fraccionamiento de las celulas y amllisis

de sus moleculaszo
Aunque los an;flisis bioqufmicos requieren la disgregad6n de la delicada analO-
mfa de la cl!lula, se han desarrolJado ml!todos suaves de separad6n que preser-
van la funci6n de los diversos componentes celulares. De la misma forma que materilll en $8dimentllCio"

un tejido puede ser disgregado en sus diferemes lipos celulares vivos, tambi~n la
celula puede ser fracdonada en sus organu.los y macromoll!culas fundonales.
En eSla secd6n vamos a centrarnos en los melodos que permiten [a purificaci6n
de organulos y de macromol~culas. En el Capitulo 7 se discuten las poderosas
tecnicas del DNA recombinante, utilizadas para analizar genes y prolefnas.

Los organulos y las macromoltkulas pueden separarse

por ultracentrifugaci6n 21
Las c~lllias pueden disgregarse de varias maneras: pueden somelerse a shock os-
m6tico 0 a vibraciones ultras6nicas, pueden hacerse pasar a trav~s de un pequeno
orifido 0 pueden molerse. Estos procedimientos rompen muchas de las membra-
nas de la celula (inc1uidas la membrana plasmatica y las membranas del reticulo
endoplasmalico) y los fragmelllos se unen inme<Uatamente formando pcquel'las
vesfculas cerradas. Sin embargo, si estos procedimientos de disgregad6n se apli-
molor
can cuidadosamente, dejan fundamental mente imactos diversos organu.los como
el nuc1eo, las milocondrias, el complejo de Golgi, los lisosomas y los peroxisomas. Figura 4-34 La ultracentrifuga
Asf, la suspensi6n de celu.las queda reducida a un espesa sopa (denominada 110- preparatlva. La muestra se coloca en
mogenado 0 exrracto) que contiene una gran diversidad de partfculas unidas a unos tubos que quedan insertados
membrana. cada una de un lamano, una carga y una densidad caraclerfsticas. Si en un aniIlo de orificios cilindricos de
un rotormetaIico. La rnpida rotaci6n
se ha escogido cuidadosamenle el medio de homogeneizad6n (mediante el siste-
dcl rotor genera unas fuerz.as
ma de prueba y error para cada orgtnulo), las diferenles partfculas -incluyendo las
centrifugas enormes. que provocan la
vesiculas derivadas del retfculo endoplasmatico. llamadas microsomas- conservan sedimentaci6n de las partfculas de la
la mayor parte de sus propiedades bioqufmicas originales. muestra. EI vado disminuye el
A continuad6n, se pueden separar los diferentes componemes de este ho- rozamienlO, con 10 que el rotor no se
mogenado. EslO iinicamente es posible gracias aJ desarrollo comercial, a princi- calienta tanto y eI sistema de
pios de los ai\os 1940, de un instrumento conocido can el nombre de uJtracen- refrigeraci6n puede manlener la
trffuga preparalJva, en el que los preparados de celulas rotas se exponen a altas muesua a 40<:..

172 Capftulo 4 : C6mo se estudian las ~Iulas

)
velocidades de giro (Figura 4-34). Este tratamiento separa los componentes ce-
lulares en funci6n de su tamano Y Sll densidad: en general. las unidades mayores
experimentan mayores fuerzas centrffugas y se desplazan par el tuba mas rapi-
damente. A una velocidad relativamente reducida sedimentan los componemes homogenado
celular
de tamano mayor, como los nudeas y las celulas enteras, formando un precipi-
!'ado (pellet) en el fonda del tubo de la cemrffuga; a una velocidad alga superior
se deposila un precipitado de milOcondrias, y a velocidades aun mas allas y con
perfodos de cemrifugaci6n mas prolongados, se pueden recoger primero las CENTRIFUGAC16N A VELOCIOAO BA.JA
pequei\as vesfculas cerradas y luego los ribosomas (Figura 4-35). Todas estas I
(racciones son impuras pero se pueden eliminar muchos de sus contami- ..: .. : '.::
nantes resuspendiendo de nuevo los precipiados y repitiendo varias veces el
procedjmiento descrito de cemrifugaci6n. ~~i~~
'.' el prllcipitado
;:~;.';~.. cantlen. celul..
EI m~todo de centrifugaci6n constituye el primer paso de la mayorfa de l~ . enter... nucl_
fraccionamiemos, pero 5610 separa los componentes que son muy diferentes en _~__ yeitoesqu.leto
tamano. Se puede obtener un mayor grado de separaci6n colocando el homage- SOBRENAOANTE SOMETlDO A
nado como una eslrecha banda en la parte superior de una soluci6n salina dilui- CENTRIFUGACI6N A VELOClDAO MEDIA
da que Ilene el tubo de centrffuga. Cuando se centrifuga, los diversos compo- I
nentes de la mezcla se desplazan a traves de la soluci6n salina como series de ... :.:
bandas distintas. cada una a difereme velocidad, en un proceso denominado ve- ~:r;i, el prllcipiUdo
locldad de sedlmentacl6n (Figura 4-36). Para que el proceso sea efectivo. las ": . tonliene
bandas deben ser protegidas del mezclado por convecci6n, 10 cual sucede habi- [:'~.~~.: miIocondrin.
'.-' :.~: lisosomasy
tualmente cuando una soluci6n densa (por ejemplo, una que comenga organu- ~ _ peroxlsoma.
los) se halJa en la parte superior de otra de menor densidad (Ia soluci6n salina). SOBRENADANTE SOMETlOO A
Esto se consigue rellenando el tubo de centrifuga con un gradiente de sacarosa CENTRIFUGAC16N A VElOCIDAD ALTA
preparado con un aparato especial de mezclado; el gradienle de delJsidad resul- I
tante, con la zona mas densa en el fonda del tubo, consigue que cada una de las '.,: ....
regiones de la soluci6n salina sea mas densa que cualquier soluci6n superior :., el preeipitado
evhando asf el mezclado por convecci6n que djslOrsionarfa la separaci6n. .,; ::;. conliene
Cuando el homogenado es sedimemado a traves de estos gradientes de den- ':.:.: . mlcrosoma. y
:'. . pequeflas
sidad, los diferentes componentes celulares se separan en distintas bandas que ~ _ VfllcuLas
pueden ser recolectadas individualmente. La velocidad a la que sedimenta cada SOBRENAOANTE SOMETlDO A
uno de los componcntes depende fundamental mente de su tamano y de su for- CENTAIFUGACl6N A VELOCIDAD MUY ALTA
ma, y suele expresarse como coeficiente de sedimentaci6n 0 IJ{li0r s. Las ultracen- I
lrffugas aCluales pueden alcanzar velocidades superiores a 80 000 rpm y produ-
cir fuerzas de mas de 500 000 veces la de la gravedad. A estas enormes fuerzas se el preelpitado
contiena
pueden separar entre sf en funci6n de su tamaf\o inclllso las macromoleculas ribosomas.
peqllei'ias como las moleculas de tRNA y las enzimas sencillas. Rlitinariamente virus y grandos
_ maeromolkula.
se ulilizan los coeficientes de sedimentaci6n de los complejos macromolecula- ~:
res para determinar la masa total del complejo y, par tanto, el numero de sub-
unidades de cada tipo que presentan. Figura 4-35 Fracclonamlento celular
La ultracentrffllga se utiliza tam bien para separar los componentes cellilares por centrtrugacl6n. Ccntrifugaciones
en funci6n de su demidad de flotaci6n, independiemememe de su tamai'lO. En rcpelidas a velocidades
eSle caso, la muestra normalmente se hace sedimentar a traves de un gradiente progresivameme mayores fmcclOllan!.n
discontinuo que contiene una concenuaci6n mllY elevada de sacarosa 0 de clo- los extractos celulares en sus
ruro de cesio. Cada componeme celular empieza a descender par el gradiente componenle5. En general, cuanlo
como en la Figura 4-36, hasta que lIega a una zona en la que la densidad de la 50- menor sea el tamaflo del componente
luci6n es igual a Sll propia densidad. En este lugar del tuba el componente flola subcelular mayor ser.l.la fuerza
y ya no puede desplazarse mas. Por consiguiente, en el tubo de la centrffuga se centrffuga necesaria para s&limentarlo.
forman series de bandas distintas, siendo las bandas que contienen los compo- Los valores tipicos de las di\'ersas
etapas de cenlrifugaci6n mostradas en
nentes de mayor densidad de flotaci6n las que se halJan mas cerca del fondo del
la figura son las siguienles:
tuba de centrffuga. EI metodo, denominado equilibria de sedimenlacl6n, es su- vel. baja: 1000 veres la gravedad
ficientemente sensible para separar macromoleculas que han incorporado i56- durante 10 minutos
topos pesados, como el l3(: 0 el 15N de las mismas macromolecuJas no marcadas. vel. media: 20000 veces la gravedad
De hecho, el metoda del c10rura de cesio fue desarrollado, en 1957, para separar duranle 20 minulos
el DNA marcado del no marcado producido despues de la exposici6n de una po- vet aha: 80 000 veres la gravedad
blaci6n de bacterias en crecimiento a precursores de nucle6tidos can UN; este durante I hora
experiment'o c1asico proporcion61a prueba directa de la replicaci6n semiconser- vel. muy ISO OOOveces la gravedad
vativa del DNA. alta: durante 3 horns

Fraccionamiento de las ce.lulas y anlllisis de sus moleculas 173

 IAI IBI P1gunt 4-36 Comparacl6n entre
f'--"!-- muest los metodos de velocldad de
sedJmentad6n yequillbrto
muutrt desedlmentad6n. En velocidad de
gfldieol. de
lacerOSI sedbnentaci6n W,la muestra se coloca
eslabilil.dor g dilntl sobre una soluci6n diluida de sacarosa y
diKontinuo
de .-e.rOH los componentes subcelulares
II.g.,20-10'Jl01 sedimenlan a diferentes vekx:idades de
I acuerdo con su lamano. Para estabilizar
CENTRIFUGACION

I I las bandas que sedbnentan y evitar que

se mezclen por fen6menos de
convecci6n originados por pequenas
diferendas de lemperarura 0 de
_" t- componoent. de concentraci6n de los solulOS. eI tuoo
MdimenlKiOn Ienta contiene un gradiente continuo de
sacarosa que aumenta de concenlntCi6n
hacia cl fonda del moo {tfpicamenle
desde 5~ a ~ de sacarosa}. Despue;
I
FRACOONAMIENTO
de la cenuifugaci6n, los diferentes
componenles pueden recogerse por
I separado: el sistema mas sencillo de
hacerlo consiste en periorar eJ tuOO de
componente
de balj. la cenlrffuga y recoger cl media gota a
den,id,d gola, lal como i1usl:r.lla figura. En el
componentl equilibria de sedimeotad6n (8) cuando
de ,It, los componentes subcelulares se
densided cenuifugan en un gradienle, pueden
despiazaise arriba y abajo hasla que
a1canzan una mna en que su densidad
esta comprendida entre Iasdensidades
vecinas del gradiente. Aunque aquf se
presenta un gradiente de sacarosa, para
scparaci6n de prolemas y de acidos
nucieicos se utilizan habitualmente
gradientes de densidad preparodos con
Los detalJes moleculares de los procesos celulares complejos cioruro de cesio. las bandas finales, en
unicamente se pueden descifrar en sistemas lib res de c~luJas22 cl equilibrio, se pueden recoger como
en (A).
Los estudios de org<1nulos y de olros grandes componentes subcelulares obleni-
dos por ultracentrifugaci6n han constituido avances muy importanle en la de-
terminaci6n de la !llllciones de los diferentes componentes de 1a celula. Asf por
ejemplo, diferentes experimentos sabre mitocondrias y cloroplastos purificados
por cenlrifugaci6n demostraron la funci6n central de estos org<1riulos en las in-
terconversiones energlhicas. Analogamente, las vesfculas formadas de nuevo a
partir de fragmentos del retfculo endoplasmatico liso y rugoso (microsomas)
han sido separadas unas de Olras y analizadas como modelos funcionales de es
tos mismos compartimentos en las celuJas intactas. Una eXlensi6n de eSla apro-
ximaci6n hace posible estudiar otros procesos biol6gicos Iibres de todas las
complejas reacciones laterales que ocunen en la celula, y sin las constricciones
de tener que mantener las celuJas como un todo. Por eUo, los extractos celulares
fraccionados que mantienen su funci6n biol6gica (denominados sistemas IIbres
de celulas) son ampliamente utilizados en biologfa celuJar.
Uno de los primeros exitos de este sistema de estudio fue la deducci6n del
mecanismo de s{ntesis proteica. EI punto de partida 10 constituy6 un extracto ceo
lular crudo que era capaz de traducir las molecutas de RNA a protefna. EI fraccio
namiento de cste extracto dio lugar a ribosomas, tRNA y varias enzimas, que, en
conjunto, constituyen la maquinaria de la sfnlesis proteica. Una vez se dispuso de
los componentes individuales purificados, fue posible ponerJos 0 quitarlos uno a
uno del media de incubaci6n, consiguiendose asf definir el papel exaeto de cada
uno de esros componentes. Mcis tarde se utiliz6 este mismo sistema de traducci6n
in vitro para descifrar el c6digo genetico, usando polirribosomas sintcticos de se

174 CapftuJo4: C6mo se esludian las celuJas

cuencia conocida como ~RNA mensajero" (mRNA) para ser lraducido. Hayen dfn
se utilizan diversos sistemas de traducci6n in vitro para determinar romo las pro-
tefnas recicn sintetizadas son clasificadas y dirigidas a diversos compartimentos
intracelulares y tambicn para identificar las protefnas que son codificadas por pre-
paraciones purificadas de mRNA -un paso imponante en los metodos de clonnje
genico. En la Tabla 4-6 se presentan algunos de los hitos del desarrollo de los me-
todos utilizados en el fraccionamiento de extractos celulares.
Una gran cantidad de la informaci6n que hoy en dfa conocemos acerca de la
biologfa molecular de la celula, se ha descubierto estudiando sistemas Iibres de
celulas. Para clrar algunos de los muchos ejemplos, estudios de este tipo se han
utilizado para analizar los detaUes molecuJares de la replicaci6n y In transcrip-
ci6n del DNA, de la maduraci6n por corte y empalme del RNA (splicing), de la
contracci6n muscular y del movimiento de partlculas a 10 largo de los microtti-
bulos. Los sistemas Iibres de celulas se han utilizado en estudios de procesos tan
complejos y a1tamente organizados como el cicio de divisi6n celuJar, In separa-
ci6n de cromosomas sabre el huso mit6tico y los procesos de transporte vesicu-
lar implicados en los desplazamientos de las protemas desde el retfcuJo endo-
pl;1smico, a traves del complejo de Golgi hasta la membrana plasm<1.tica. EI
amllisis de un sistema libre de ~luJas supone la sepnraci6n completa final de 10-
dos sus componentes macrornoleculares individuales y en particular de tOOas
sus prote{nas. Ahora consideraremos c6mo se puede lograr esta separaci6n.

Tabla 4-6 Algunos de los prindpales aoonteclm1entos del desarrollo de la

uJtracentrlfuga y de la preparacl6n de extractos Ubres de celuJas
1897 Buchner demostro que los extractos de levadura. libres de celulas, pueden
fermentar los azucares produciendo di6xido de carbono y etanol, con 10 que
se establecieron las bases de la enzimologfa.
1926 Svedberg desarroU61a primera ultracentrlfuga analitica y In utiliz6 para estimar
el peso molecular de la hemoglobina, que cifr6 en 68 000 daltons.
1935 Plckels y Beams introdujeron varias caracterfsticas nuevas en el discl\o de la
ultracentrffuga, que condujeron a su utilizaci6n como instrumento
preparalivo.
1938 Behrens emple61a ultracentrifugaci6n diferencial para separar los micleos del
citoplasma de celulas hepaticas, tecnica que luego desarrollaron Claude,
8rachet, Hogeboon y otros durante los mos 1940 y principios de los 1950
para el fraccionamiento de organulos celulares.
1939 Hut demostr6 que los cloroplastos aislados, cuando se i1uminaban, podian
efectuar reacciones de fotoS(n1esis.
1949 Szem;-Gyttrgyt demostr6 que las miofibrillas aisladas de celulas de musculo
esqueletico se cOutraen aI anadirlesATP. En 1955 Hofmann-Berling
desarro1l6 un sistema libre de celulas similar a este para eSludiar el
movimiento ciliar.
1951 Brakke utiliz61a centrifugaci6n en gradiente de densidad en soluciones de
sacarosa para purificar un virus vegetal.
1954 de Duve aisl6lisosomas por centrifugaci6n y, mas tarde, peroxisomas.
1954 Zamecnlk y colaboradores desarrollaron el primer sislema libre de celulas que
reali.taba sfntesis proteica. Aello sigui6 una decada de intensa actividad de
investigaci6n, duranle la cual fue dilucidado el c6digo genetico.
1957 Meselson, Stahl y Vlnograd desarrollaron la centrifugaci6n en gradiente de
densidad en soluciones de doruro de cesio para separar <1.cidos nudeicos.
1975 Dobberstein y Blobel demostraron la translocaci6n de protefnas a traves de
membranas, en sistemas libres de celulas.
1976 Neher y Sakmann desarrollaron el registro de zona para medir la actividad de
canales i6nicos aislados.
1983 Lohka YMasuJ produjeron extractos concentrados a panir de huevos que ;11
vitro realizaban el cicio celuJar completo.
1984 Rothman y colaboradores reconstiruyeron in vitro el trtl.fico de vesfcuJas de
Golgi utilizando un sistema libre de celulas.

Fracclonamlento de las cBuJas y anliUsls de sus molkulas 115

 Figura 4-37 Separacl6n de moleculas
pop"

mueltr.
I fil.. jo del
aolvente
pequeftas mediante cromatograffa
50bre papel. Despues de aplicar la
muestra en un exlremo del papel (el
.n el "origen") y de secarla, se permile que
origin una soluci6n que contiene una mez.cla
de dos disolventes fluya lentamente a
10 largo del papel por capilaridad, Los
diferentes componentes de la muestra
se desplazan 50bre el papel a
velocidades distinlas, en funci6n de su
Las prote(nas pueden separarse mediante cromatograffa23 solubilidad relativa en el solvente que
Uno de los m~lodos de utilidad m<ts general para el fraccionamiento de las pro- es adsorbido preferentemente por el
leinas es el de Ja cromatograf(a, tecnica desarrollada para separar pequenas papel. EI desarrollo de esla lecnica
moleculas como azucares y amino<tcidos. Un tipo muy comtin de cromatografia, revolucion61os anaJisis bioquimicos
durante los anos 1940,
lodavia muy ulilizado 3ctualmente para separar pequeflas moleculas, es la cra-
marogm!fa de partici6". Tfpicamente, una gala de la muestra se aplica como
una mancha en una hoja de material absorbente, que puede ser papel (cromato-
grafla de papefJ 0 una hoja de phtslico 0 de cristal recubierta de una fina capa de
un material absorbeme inerte. como celulosa 0 gel de silice (cromacogra!fa ell
capa final. A conlinuaci6n, se deja que una mezcla de disolventes. como por
ejemplo el agua y un alcohol. impregne la hoja desde uno de sus extremos: a me-
dida que elliquido se va desplazando a lraves de la hoja, va separando las mol/!-
culas de la muestra en funci6n de su solubiJidaa en cada uno de los dos disol-
ventes. los disolventes se escogen de forma que uno de eUos se adsorba con
mayor intensidad en el material absorbente que el otto formando una capa de
disolvente estacionaria en la superficie de la hoja. En cada regi6n de la hoja las
moleculas se equilibran entre el disolvente estacionario y el m6vil: las que son
mas solubles en el disolvenle ruertemente adsorbido son relativamente relarda-
das porque consumen mas liempo en la eapa eSlacionaria, mientras que las que
son mas solubles en el olro disolvenle se mueven mas rapidamente. Despues de
un cierto numero de horas, la hoja se seca y se tine para localizar la siruaci6n de
las diferentes molceulas (Figura 437).
Las prolcfnas se suelen fraccionar mediante la cromalOgrafla ell columlla,
en la que una mezcla de prOlcinas en soluci6n se haec pasar a lraves de lIna co-

.olvenle uplicldo de forml Figura 4-38 Separaci6n de moleculas

.plic8l::i6n continul I lu purte superior
de la dul. columna de,de un mediante cromatograffa en columna.
mueev. grun dep6,ito de solvente La muestra se aplica en la parte
superior de una columna cilfndrica de
vidrio 0 de phistico, que comiene una
matriz s6lida permeable, por ejemplo
de eelulosa, inmersa en un solvcnte, A
continuaci6n se haee pasar
lentamente a naves de la columna una
gran canlidad de solvente,
recogiendolo en tubos separados a
medida que sale de la parte inferior de
la colwnna, Los di"ersos com~ponentes
de la muestra se desplazan a distintas
velocidades a traves de la columna
m.lril quedando asf rraccionados en tubas
t61id. distintos.
0 0

~~"lJ
~ ~
po'-
luba <tI
~..."

tiempo mol6eulll frlCCionldll

elutd,. If .eeogtdll

176 Capflulo 4 : C6mo se estudian las cclulas

?
 flujo de .olvente f1ujo de 1IOIvente flujo de solvenle

I I I
e- .. e- e-!-e-
e .... olere (\ .c e \
~
esferaconun

- - ..feres porou.
_- e"-. .. '!;;-- cerg&de \
..
....
substrato

...... ,
.. .. ..... ...- potltlvemente .......,- ido
-e.. .. .. .." , :valentemente
..t- e _e- ... mol6cule de
_.+ .-... e cerge negetive
t- - 1ft........
e.
..t-e-unida , "'e ~~T
mo!tk:ula de
enllffi;II
eo- eo- _..
~_' ~>";d'
e" molkule pequel\e
ret;llrd~
eo- .. _ mol4cul. de
e" ..eo- .... e e!- <:,rge positive
e-- molkul;ll grencle

I
OIf1lt proleln..

eo- hbre
no reterdede .....
I \
"' pasan ;llII;llVU
de Ie met"I

tAl CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IB) CROMATOGRAFIA DE FILTRAtiON ICl CROMATOGRAFfA DE AFINIDAD

'ONICO ENGEL

Figura 4-39 Tres lJpos de matriz utlllzad05 en cromatogTB.na. En la cromatografia de intercambio i6nico (A) la rnatriz
insoluble presenta cargas i6nicas que retardan las molkulas de carga opuesta. Las matrices utilizadas habitualmenle para
separar protefnas son la dietilaminoetilcelulosa (DEAE-c:elulosa). de carga positiva. y la carboximetilcelulosa (eM-
celulosa) y la fosfocelulosa, de carga negativa. La fuerza de uni6n entre las mol~ulas disueltas y la matm de imen::ambio
ionico depende de la fuerza i6nia y del pH de la soluci6n eluyente que alraviesa la columna, panimelros que pueden
variarse de una manera sislemtitica (como en la Figura 4-401 para conseguir una separaci6n mas dectiva_ En la
cromalografia de mlraci6n en gel (8)la malriz es inene pero porosa. las molkulas suficienlemenle pequeilas para
peneuar en el interior de la matriz se reuasan y viajan mtis lemameme a lrav~ de la columna. En el comercio exislen
bolitas de polisactiridos con puentes cruzados (dextrano 0 agarosa) en una amplia gama de tamafios de para adecuadas
para el rraccionamiento de molk:ulas de diversos pesos moleculares, desde menos de 500 hasta mas de 5 x 10' dalions. La
cromalOgraffa de afinidad (0 utiliza una malriz insoluble que estti unida covaJenlemente a un ligando especifico, como
por ejemplo una molkula de anlicuerpo 0 un subslrato enzimtitico. que se unirti a una prolefna determinada de la
mueslra. Las mol~ulas de enzima que se han unido a substralOS inmovilizados en columnas de eSle tipo se puerlen eluir
con una soluci6n concenlrada del substralo en forma Iibre. mientras que molkulas que se han unido a amicuerpos
inmovilizados pueden eluirse disociando el complejo anlfgeno-amicuerpo con soludones concentradas de sales 0 con
soluciones de pH alto 0 bajo. Amenudo se consiguen purificadones elevadas con un solo paso a traves de estas columnas.

lumna que contiene una matriz s6lida porosa. Las diferentes protefnas de In mez-
cia se van retrasando mAs 0 menos a causa de su interacci6n con la matriz de la
columna y pueden recogerse por separado en su estado fundonal nativo a medi-
da que fluyen por el extremo inferior de la columna (Figura 4-38). En fund6n del
tipo de matriz que se utiJice, las protefnas se pueden separar seg(m su carga (cro-
matograffa de intereambio i6nico), su hidrofobiddad (cromatograffa hidrof6bi-
ea), su tamaf'io (cromatograffa de filtraci6nj, 0 su capaddad para unirse a deter-
minados grupos qufmieos (cromatograffa de afinidad).
Actualmente se comercializan un gran mlmero de tipos diferentes de matriz
para cromamgraffa (Figura 4-39). Las columnas de imercambio i61lico estan lIe-
nas de pequenas bolitas que comienen cargas positivas 0 negativas, de modo
que las protefnas se separan en fund6n de la disposid6n de cargas de su super-
fide. Las columnas 1Iidrof6bicas estan llenas de unas bolitas con cadenas latera-
les hidrof6bicas que sobresalen de elias, de modo que las protefnas que tengan
regiolles hidrof6bicas al descubierto quedan retardadas en su tn1nsito por la co-
lumna. Las COlllmTlas defiltraci6Tl eTl gel, que separan protefnas en fund6n de su
tamano, comienen diminUlas bolhas porosas: a medida que van descendiendo
por la columna, las mol~culas sufidemememe pequefias para penetrar en los
poros pasan sucesivamente por el interior de esras esferas, mientras que las mo-
Ilkulas mlis grandes permanecen en la solud6n Ouyendo entre las esferas, y por
10 tanto, eluyen Ollis rlipidameme a traves de la columna y salen primero. Ade-
mas de permitir la separad6n de las moltXuJas, la cromatograffa de filtraci6n en
gel constituye un buen sistema para determinar el tamaf'io de las moltXulas.
Este tipo de cromatograffa en columna no produce fracdones altamenle pu-
rificadas sl se parte de una mezcla compleja de protefnas: un unico paso a trav~
de una columna suele incrementar la propord6n en la mezcla de una protefna
determinada en no ma..s de veinte veces. Pueslo que la mayorfa de las protefnas

Fracclonamiento de las ee:lulas y amUisis de sus mol~uJas 177

 (Al CROMATQGRAF(A DE INTERCAMBIO IONICO Figura 4-40 PuriOcad6n de prote'nas
por cromatografCa. Resultados Ifpicos
que se obtienen cuando se utilizan
1 sllcesivamenle tres pasos
.,;; cromalograficos diferentes para
purificar una protefna.. En esle ejemplo
se fraceion6 un extraCIO complelo
I 3
hacl~ndolo pasar primero a Iraves de
una resina de inlercambio i6nico
empaquelada en una columna (A). La
columna se lav6 y las protefnas se
eluyeron haciendo pasar desde la parte
numo de fr.eciones _ L...J superior de la columna una soluci6n
w.. f t ~ IN reeogen," melelen
y .. eplic:en e Ie coIumne ~g...lente de sal a una concentraci6n
progresivamenle mayor. Las protelnas
(81 CROMATOGRAFfA DE FllTRACI6N EN GEL
con menor afinidad por la resina de
intercambio i6nico pasaron
1 direclamente a Ira\'~ de la columna y
fueron recogidas en las primeras
fracciones eluidas que salieron por la
parte inferior de la columna. Las
restantes prolefnas fueron eluidas de
manera secuencial de acuerdo con su
afinidad por la resina -las unidas mAs
intensamente necesilaron una
concentraci6n de sal mas elevada para
numero de fr.eclones _ L-...J ser eluidas. La prolefna de inler~ sali6
HW frKeIones .. 'eeogen, .. metelen en fonna de un pequeno pico y se
y .. eplieen ele column.- algulente deleclo por su aClividad enzim:ttica.
leI CROMATOGRAftA DE AFINIOAD Las fracciones con actividad fueron
recogidas y aplicadas a una segunda
columna de fl1traci6n en gel {B). La
posicion de eluci6n de la prole(na
.,;; lodavfa impura fue delerminada de
nuevo por su actividad enzimalica, y
las fracciones aclivas fueron recogidas
J!
y purificadas hasta homogeneidad
medianle una columna de afinidad (e)
que conlenfa inmovilizado un
substrato de la enzima.

numero de fr.celona, _ "----J

se rKogan Vmete len estes frKelones, que
eho.e eontlenen Ie protelne eltemente
pl.lrlfieeda

representan individualmente menos del 1/1000 de Ja protefna celuJar total, para

conseguir purificarlas suele ser necesario utilizar sucesivamente varios tipos di
ferentes de columnas para conseguir la pweza suficiente (Figura 4-40). Un pro-
cedimiento ml1s eficiente, conocido como cromatograffa de aflnIdad, utiliza in-
teracciones de enlace, importantes desde el punto de vista biol6gico, que se
producen en la superficie de las protefnas. Por ejemplo, si un substrato enziml1-
tico se acopla covalentemente a una matm inerte, como pueden ser pequefias
esferas de un polisacoirido, la enzima espedfica de este substrato fijado a la co-
lumna serl1 retenida en la matrix y podrl1 ser eluida navada) en forma casi pura.
De fonna similar, puede inmovilizarse un DNA cono de secuencia disenada es
pecfficamente y utilizarse para purificar protemas que se unan al DNA y que reo
conozcan esta secuencia de nucle6tidos en los cromosomas (Figura 9-23). Alter-
nativamente, se pued.en acoplar anticuerpos espedficos a una mal.riZ para
purificar mol~u1as proteicas reconocidas par los anticuerpos. Debido a la ele-
vada especificidad de estas coJumnas de afinidad, algunas veces se pueden con-
seguir, en un solo paso, purificaciones del orden de 1000 a 10 000 veces.

178 Capftulo 4 : C6mo se estudlan las cl!lulas 11

ilIt ooiiIU
 La resoluci6n de las columnas convencionales de cromatograffa estl1 limita-
da por la falta de homogeneidad de las matrices (como la celulosa), la cual gene-
ra un flujo desigual de los disolventes a traves de la columna. Se han desarrolJa-
do nuevas resinas cromatognUicas (la mayorfa basadas en compuestos de s!lice)
en forma de diminutas esferas (de 3 a 10 J.lm de diameuo) que pueden ser empa-
quetadas mediante un aparato especial formando un lecho uniforme en la co-
lunma. Con estas colwnnas de cromatografia liquida de alta resolud6n (HPLC.
de Higll Performance Liquid Chromatography) se a1canza un alto grado de sepa-
raci6n. Como las colwnnas de HPLC contienen partfcu1as empaqueradas de for-
ma muy compacta, la velocidad de Oujo a traves de eUas es practicamente nuJa a
menos que se apliquen a1tas presiones. Por esta raz6n, normalmente estas ma-
trices se empaquetan en cilindros de acero y requieren un sistema sofisticado de
bombas y vaJvulas para forzar a Ouir el disolvente a lraveS de la columna a la pre-
si6n suficiente para producir un flujo deseado de aproximadamente un volumen
de columna por minuto. En la cromatograffa en columna convencional, la velo- OH
cidad de flujo debe ser lenta (a menudo de aproximadamente un volumen de I
CH,
columna por hora) para dar tiempo a los solutos a que se fraccionen en equili- I
brio con el interior de las grandes partlcuJas de la matriz. En la HPLC los solutos CH,
se equUibran rapidamente con el interior de las diminutas esferas, de manera I
SH
que solutos con diferentes afinidades por la matriz son separados entre sf de for-
ma muy eficiente, siempre a rapida velocidad de flujo. Esto pennite que muchos 50s
fraccionamientos puedan realizarse en cuesti6n de minutos, mientras que para
obtener una separaci6n pobre en la cromatograffa convencional se requieren Flgura4-41 EldetergentedodecU
horas. Por consiguieme, la HPLC se ha convertido en el metodo escogido para .uUato a6dIco (SOS) YeI &gente
reduclor tJ-mercaptoelan01. EsIOS dos
muchas separaciones de protemas y de pequeflas molecuJas.
reactivos qufmicos se ulillzan para
solubilizar prolemas para
Mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS, elecrroforesis en gel de poliacrilamida
pueden determinarse el tamafio y la composici6n con SOS. EI 50S se presenta aquf en su
de subunidades de una protema2.4 fonna lonizada.

Las prQ(efnas suelen tener una carga neta positiva 0 negativa, que refleja la de
los aminoacidos cargados que contienen. Si se aplica un campo electrico a una
soluci6n que contenga una molecula proteica, la prorefna migrara a una veloci
dad que dependera de su carga neta, de su tamaflo y de su forma. Esta tecnica,
conocida como electroCoresl.s, se utiliz6 inicialmente para separar mezclas de
prote!nas tanto libres en soluciones acuosas como incluidas en una matriz s61i-
da porosa tal como el almid6n.
A mediados de los aflos 1960 se desarroU6 una versi6n modificada de este
mtitodo --<:onocida como electroCoresis en gel de pollacrUamlda con 5DS (0
5DS-PAGE, de SDS PolyAcrilamide-GeI Electrophoresis), que ha revolucionado
los sistemas de anaJisis rutinarios de las protemas. Como matrlz inerte a traves
de la que migran las prote!nas, se utiliza un gel de poliacrilamida can numerosos
puentes cruzados. Normalmente el gel se prepara inmedlatamente antes de uti-
lizarse mediante la polimerizaci6n a partir de los mon6meros; el tamaflo del
poro del gel puede ajustarse de forma que sea el adecuado para retrasar la mi
graci6n de las moleculas proteicas de interes. Las prote!nas no se colocan en una
soluci6n acuosa simple, sino en una soluci6n que contiene un patente detergen-
te de carga negativa, el dodecll sulfato s6d1oo, 0 SDS (de Sodium Dodecyl
Sulfate) (Figura 4-41). Como este detergente se une a las regiones hidrof6bicas
de las molecuJas proteicas, haciendo que se desplieguen las cadenas polipeptfdi-
cas, las diferentes molecuJas proteicas quedan liberadas de sus asociaciones con
otras moleculas proteicas 0 lip!dicas y se disuelven libremente en la soluci6n del
detergente. Ademas, se suele afladir un agente reductor como el mercaproetanol
(Figura 441) con objeto de romper los enlaces s-s que pudieran existir en las
prote{nas, de forma que puedan analizarse separadamente todos los polipepti-
dos constitutivos de las moleculas que tengan varias subunidades.
LQue sucede cuando una mezcla de protemas solubilizadas con 50S se so-
mete a electroforesis a traves de una lAmina de gel de poliacrilamida1 Cada mo-

FracdonamJento de las cBulas y anlUlsls de sus molkulas 179

 IAI ml,lllstrll cargada en el IBI protelna con dOl
gel mediante una pipeta tubunldad8l, A 'I B.
unleln entre ,I mediante protelne de una
un enlace disulfuro sole subunidad
A , C

~s~
I

~~rj~
~ molecule. de _~- - ~
",,!~iii;lr- SOS e.rgedll C
-~ -- _ _- neg8tiYemente
A
I --, I
eLECTROfORESIS EN GEL DE POUACR1LAMlDA

Figura 4--.Z Electroforesls en gd de poliacrlJamlda con 5DS (5DS-PAGE).

(A) Aparato. (8) Las distintas cadenas polipeptfdicas forman un complejo con
las molkulas cargadas negalivamente de dodecil suUalo s6dico {50S} y.
enlances, migran en forma de complejo protelfla-SDS cargado
negalivamenle. a lI'avl!s de un gel poroso de poliacrilamida. PueslO que 18
velocidad de migraci6n en estas condiciones es mayor cuaola menor sea cl
poli~plido. esla t~nica puedc utilizarse para determinar de una forma
aproximada el peso molecular de una cadena polipeptfdica, asf como la
composici6n de subunidades de una prolena. Sin embargo, si la protelna
conllene una gran cantldad de carbohidratos, se desplazara de fonna
an6mala por el gel, de forma que su peso molecular aparente estlmado por la
SDS-PAGE sera err6neo.

li!cula de protelna se une a una gran cantidad de moli!culas del de(ergente, car-
gadas negalivamente, que anulan la carga intrfnseca de la protefna y hacen que
cuando se aplica un voltaje la protefna migre hada el elec(rodo positlvo. Las
protefnas del misma lamana tienden a componarse de forma idcntica ya que
(I) su estructura naliva est<1 completamente desplegada por el SOS, por 10 que
presentan la misma forma, y (2) unen la misma cantidad de SOS y por tanto lie-
nen la misma cantidad de carga negativa. Las protefnas grandes, con mayor car-
ga, est<1n sujetas a grandes fuerzas electricas pero tambicn a mayores resist en-
das. En soluci6n libre. ambos efectos podrfan contrarrestarse, perc en las redes
del gel de poliacrilamida, que actua como un filtro molecular. las grandes prOler-
nas son remrdadas mucho m<is severameme que las pequel\as. En consecuen-
cia, una mezda compleja de protefnas es fraccionada en series de bandas protei-
cas discrelas. que se hallan ordenadas en funci6n de su peso molecular (Figura
4-42). Las prctefnas mayoritarias se detectan fiicilmente tiniendo el gel con un
colorante como el azul de Coomassie, mientras que las protefnas minoritarias se
pueden visualiz.ar en los geles tratados con una sal de plaia (pudiendose det'ecmr
en cada banda una camidad tan pequena como 10 ngde proleina)_
La electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS es un procedimiento m<1s
poderoso que cualquier Olro metodo anterior de anaJisis de protefnas, principal-
mente debido a que puede utiliz.arse para separar (odos los tipos de protefnas,
induyendo las que sean insolubles en agua. Pueden resolverse protefnas de
membrana, proteinas componenles del citoesquelelo y prolefnas que forman
parte de grandes agregados macromolecuJares. Debido a que el metodo separa
los polipeptidos en funci6n de su (amano, tambicn proporciona informaci6n so-
bre el peso molecular y la composici6n de subunidades de cualquier complejo

180 CapftuJo 4: C6mo se estudian las celulas

 Pigura 443 AmUlsls de mueslras proteicas por eleclroforesls en gel de
pollacrllamlda con 5DS. La fOlOgraffa mueslra un gel que se ha utilizado para
deteclar las protefnas presentes en los sucesivos eSladJos de la purificaci6n
2 3 . , .. ""
--,;". mole<:ullir

de una enzima. EI carril izquierdo (carril I) contiene la mezela compleja de ""00

prolefnas en el exlraclO celular de panida, y cada uno de los carnIes
sucesivos analizan las proteinas oblenidas despu~ de un fraccionamienlO
cromatografico de la muestra de proteinas analizada en el carril anterior
(v~ase Figura 4-40). En cada carri! secarg61a misma cantidad de protefna
(10 ~gl. Normalmenle, cada proteina aparececomo una fina banda tel'lida; . . 000
sin embargo, las bandas se ensanchan cuando contienen demasiada
proleina. (Por cortesla de Tim Formosa.)

proteico. En la Figura 443 se presenta una fOlografia de un gel utilizado para

analizar cada una de las sucesivas elapas de la purificaci6n de una protefna.

Mediante electroforesis bidimensional sobre gel

de poliacrHamida, se pueden resolver mas
de 1000 proternas sobre un mismo geJ2S 15 000
Dado que en un cromatograma las bandas muy pr6ximas lienden a superponer-
se, cualquier m~lodo unidimensional de separaci6n, como la eleclroforcsis en
gel de poliacrilamida con SDS 0 la cromatografia, s610 pueden resolver un m1-
mero relativamente reducido de prolefnas (par 10 general menos de SO). Par el
comrario. la electroforesls bidimensional sabre gel, que combina dos procedi-
mientos diferenles de separaci6n, puede ser utilizada para resolver mj,s de 1000
prolefnas diferentes, en forma de un mapa proleico bidimensional.
En el primer paso, las prolefnas son separadas en funci6n de su carga. La
muestra se disuelveen un volumen reducido de una soluci6n que contcnga un de-
lergenle no i6nico (no cargado) y un reactivo desnaturalizante como la urea 0 el
mercaploelanol. Esta soluci6n disuelve. desnaruraliza y disocia lodas las cadcnas
polipeptldicas sin allerar su carga intrfnseca. Luego. las cadenas polipeplfdicas
son fraccionadas mediante un procedimiemo denominado cnfoque lsoclectrlco 0
Isoelectroenfoque, que se basa en el hecho de que la carga nela de una molecula
proleica varia con el pH de la soluci6n. Para cada protefna existe un pH caracter{s-
lico, denominado pUf/lO isoefectrico, al que la proterna no prescnta carga nela y.
por 10 tanto, no migrant en un campo eltktrico. En el isoeleclroenfoque [as prolef- Figura 4-44 Separaci6n de mol:ulas
nas son sometidas a electroforesis en un tubo estrecho de gel de poliacrilamida en proleicas por isoelectroenfoque. A pH
el que se ba establecido un gradienle de pH mediante unas mezclas de amortigua- bajo (elcvada concentraci6n de H') los
dores especlales. Cada protefna se desplaza hasta la zona de gradiente que presen- gru!)OS ~cido carboxilo de las protcfnas
la un pH igual a su punto isoehktrico. y alli pennanece inm6vil (Figura 4-44). J!sla ticnen tendencia a quedar sin carga
es la primera dimcnsi6n de la electroforesis bidimensional sobre gel. (-COOlI) y los grupos nitrogcnados
En el segundo paso, el estrecho gel que contiene las protefnas separadas sc b~sicos. a quedar cargados {por

somete otra vez a electroforesis, perc en una direcci6n perpendicular a la utiliza ejemplo. -NHJ'J confiriendo a la
da en el primer paso. Esta vez se aiiade 50S, y las prolefnas son separadas en rnayorla de las proteinas una carga
neta positiva. Aun pH elevado. los
gropos ~cido carboxilo eSlan ca.rgados

._M
<1J <1J <1J negalivamente (-COO-) y los grupos
blisicos tienden a estar sin_carga (por

...
.unpH~.

ejemplo. -NH z), confiriendo a la

i'
J
I '
,
I ~-nl.
posithr.....
: ..

I
I
.....
. . "'''pumo~
mayorfa de las protefnas una carga
neta negativa. Asu pH isoelkrrico una
proleina ca.rece de carga neta debido a
que las cargas positivas y negalivas se
anwan. AsI, cuando un tubo que
.I 8

0'
. I
.....-....-
..... pH ...o.
'.-
- -'
.. ~

.dtI~......
"~~;INH'.
_ _ dtI
care- -... POlio 0;0"-

..pt'(IMIM ....
conliene un determinado gradiente de
pH se somete a un campo el~lrico
intenso, cada tipo de protefna migra
~~- ~_.
~IK06n"pH
-....:rico _ 1.5 hasta formar una banda bien
delimitada en su pH isoel~trico, como
0 0 0 se muestra en la iluslraci6n.

Fraccionamiento de las relulas y amUisis de sus molkulas 181

 b'.leo _ gradieote lIStable de pH _ 'cldo Figura 4-45 Electrororesls

.------- -- - -, bidimensional sobre gel de

;
100
----=
..
-.-- ---
.-.--~, ~
..... :;;;:
poUacrUamlda. En este gel se separan
todas las protelnas de una bacleria
E. coli; cada mancha corresponde a una
cadena polipeptfdica diferente. Las
protefnas fueron separadas primero de

- . _. . .
acuerdo con sus puntos isoel&:tricos
mediante isoelectroenfoque, de
... -..=
-z- izquierda a derecha Despu~ fueron

- .-
racclonadas de nuevo segl1n sus pesos

...- -.
~.-
moleculares medJanle electroforesis

- -
en presencia de SDS, de arriba a abajo.
~-
-~
- .- ........
_--:..- - "'~J~~
Observese que las distintas protelnas

-... --
se hallan presentes en cantidades muy
, dlferentes. La bacteria fue alimentada

- - con una mezcla de aminoacidos

marcados COD radiois6topos, de

- -
manera que tOOas sus protefnas
resultaron radiaetivas y pudieron
fllcilmente delectarse mediante
autorradiografia (vease pag. 191}.
(Por conesfa de Patrick O'Farrell)
funci6n de su tamano. como en el caso de la 50S-PAGE de una dimensi6n: el es-
trecho gel original se empapa en 50S y se sirna en un borde de una I.t\mina de gel Figura 4-46 Transferenda de tlpo
de poliacrilamida-SOS. a trav~ del cual cada caetf"r. _polipeptCdica migra for- Western (Western blotting) 0
Immunoblottlng. TOOas las protefnas
mando una mancha discrela. esta es la segunda dimensi6n de la electroforcsis
de dlulas del tabaco en divisiOn
bidimensional sobre gel de poliacriJamida. Las unicas protefnas que no se resol-
mantenidas en cultivo se separaron
vedan serfan las que tuvieran un tamano identico y un punto isoeh!ctrico idenli- prirnero mediante electroforesis
co, 10 cual es relativamente poco frecuente. Par este sistema pueden deleclarse bidimensional sobre gel de
sobre el gel incluso cantidades lraza de cada una de las cadenas polipeptfdicas, poliacrilamida, como se muestra en la
mediante diversos procedimientos de tinci6n -0 por medjo de autorradiograffa Figura 4-45, Ysus posiciones se
si la muestra estaba marcada con un radiois6topo. En un mismo gel bidimensio- revelaron mediante una tinciOn sensible
nal se pueden scparar hasta 2000 cadenas polipeptCdicas -10 cual consrituye la a las protefnas (A,). Las protelhas
mayor parte de las prolefnas de una bacteria- (Figura 4-45). Este sistema liene separadas en un gel identico a! anterior
un poder de resoluci6n tan elevado que pennile diferenciar fdcilmente dos pro- se transfirieron a un papel de
tefnas identicas entre sf que solamente se diferencian en un solo amino~cido nltroeelulosa, eI cua! se incubti con un
cargado. anticuerpo que reconoce las protefnas
que durante la mitosis resultan
Teas su resoluci6n tanto en geles unidimensionales como bidimensionales,
fosforiladas en reslduos de treOnina. Se
una delerminada protefna puede identificarse exponiendo IOdas las protefnas
revel61a posici6n de la docena de
presences a un anticuerpo especffico que ha side acoplado a un is6topo radiacti- prOlefnas de este tipo que son
vo, a una enzima facilmente detectable 0 a un colorante l1uorescente. Por conve- reconocldas por este anticuerpo,
niencia, normalmente esto se realiza despues de que todas las protefnas presen- mediante un segundo anticuerpo unido
tes en el gel se han transferido (mediante "blotting") a una lamina de papel de a unaenzima (B). (DeJA. Traas,A.F.
nitrocelulosa, como describiremos mas adelante para los <icidos nucleicos (vea- Bevan. I.H. Doonan, J. Cordewenery P.l.
se Figura 7-13). Este metodo de detecci6n de protefnas se denomina rrans[erell- Shaw. PlantjoumaJ2:723-732, l992, con
cia de ripe Western (Western blottillg)(Figura 4-46). penniso de Blackwell Scientific Publ)

"'t ' I
IB'

182 Capftulo 4: C6mo se estudJan lu cBuJu

Tabla 47 Hltos en el desarrollo de la crornatograffa y de la electrororesls y de su
apllcaclon a las rnol6:ulas blologicas

1833 Faraday describi6 las leyes rundamentales sobre el paso de la electricldad a

traves de soludones i6nicas.
1850 Runge separ6 compuestos qufmicos inorgAnioos en fund6n de su adsorci6n
dUerencial sobre el papel. t6:nica precursora de las posteriores separadones
cromatograficas.
1906 Tswett invent6la cromatografla en columna, pasando extractos de petr61eo de
hojas de plantas a traves de colurnnas de greda en palvo.
1933 Tlsellus introdujo la electororesis para separar protefnas en solud6n.
1942 Martin y Synge desarrollaron la cromatograffa de partici6n, que dos anos mas
tarde condujo a la crornatograffa en papeL
1946 Steln y Moore determinaton por primera vez la composici6n de aminoaddos
protelna
de una protefna utilizando inidalrnente una columna cromatografica de nelive
alrnid6n y desanollando posteriormente la cromatograffa sobre resinas

1955
intercambiadoras de iones.
Smithies utiliz6 geles preparados con almid6n para separar las protefnas
sericas mediante electroforesis.
Sanger cornpleto el antiisis de la secuenda de aminoacidos de la insulina

~ ..
bovina, que fue la primera protefna que se secuendo.
1956 Ingram produjo las primeras -huellas dactilares- de protelnas, demostrando
que la direrencia entre la hemoglobina de la anemia falciforme }' la I
lA INCUBACION CON
hemoglobina normal radica en la variad6n de un solo aminoaddo. TRtPSINA GENERA
1959 Raymond introdujo los geles de poliacrilamida, mejores que los de almid6n, UNA MEZClA Of PEPTlDOS
para separar protefnas por electroforesis: en los anos siguientes, OrnSleln y
Davis desarrollaron mejores sistemas de amortiguadores que permitieron la
I

Ct4-
separaci6n a elevada resolud6n.
1966 Malzel introdujo el uso del dodecil sulfato s6dioo (50S) para mejorar la
electroforesis en gel de poliacrilamida de las protelnas.
1975 O'Farrell idoo el sistema bidimensional sobre gel para anaHzar mezclas de
protelnas; la electroforesis en gel de poliacrilamida con SOS se combin6 con
la separad6n segun el punto isoelectrico.

lA CROMATOGRAFlA Y LA
ELECTROFDRESIS PRODUCEN
En la Tabla 47 se presentan algunos hitos en el desarrollo de la cromatogra UN MAPA DE DOS DIMENSIONES,
ffa y la electroforesis, o "HUELLA DACTllAR", DIAGN6STICD
DE lA PROTEINA

La hidr6lisis selectiva de una proteCna genera un conjunto

caracterCstico de fragmentos pepdd.icos 26 I
Aunque el peso molecular y el punto isoelectrico son rasgos caracterlsticos de
una protefna, la identificad6n inequfvoca de una protefna se basa, en ultimo

.~

-
t~rmino, en la determinad6n de su secuencia de aminoaddos. La primera fase
de este proceso, que consiste en la rotura de la proteina en fragmentos mds pe
quenos, puede propordonar por sf misma mucha informaci6n uti! que ayude a
caracterizar la mol~cula. Disponemos de enzimas proteolfticas y de reactivos
~

!

.
quimicos que rompen las protefnas entre determinados residuos de aminoad
dos (Tabla 48). La enzima IripsillQ, por ejemplo, cona por ellado carboxilo de - - cromeIOQrefie._
los residuas de Iisina 0 de arginina, mientras que el compuesto qu{mico bromu
ro de ciandgeno cona los enlaces peptfdicos proximos a los residuos de metioni Figura 447 ConfecehSn de un mapa
na. Puesto que estas enzimas y compuestos quimicos aCluan en un numero rela peplfdJco, 0 hueUa dactllar, de una
tivamente reduddo de lugares de una proteina, lienden a produdr un numero protefna. En esle casc, la protefna fue
digerida oon uipsina, genenindose una
relativamente pequeno de p~ptidos, que son baslante largos. Si una mezcla de
mezcla de numerosos fragmentos
~ptidos como ~sta se sepala mediante cromatograffa 0 elecuoforesis, el patr6n
polipeptfdicos pequenos diferentes.
resultante,o mapa peplfdico, tiene un valor de diagn6stico de la protefna a par que luego se fraccionaron en dos
tir de la cual fueron generados los peptidos, y a veces recibe el nombre de "hue dimensiones mediante electroforesis y
Ua daetilar" de la protefna (Figura 447). cromatografia de panici6n. EI patr6n
La detenninaci6n de las "hueUas daetilares" de las protefnas fue desarroUa de manchas obtenido tiene valor
da en 1956 como un sistema para comparar la hemogJoblna normal con la forma diagn6stico para la protefna analizada.

Fracdonamlento de las ~Iulas y an4lisis de sus mol~as \83

Tabla 48 Algunos de los reactlvos utUlzados nonnalmente para romper los
enlaces peptldlcos de las proleCnas

AmlnOlictdo 1 Amlnolictdo 2
Eflzima
Tripsina LysoArg cualqu.iera
Quimotripsina Phe. Trp 0 Tyr cualquiera
Prateasa VB Glu cualquiera
Compuesto qll(mico
Bromuro de cian6geno Mel cualquiera
2Nitro5tiocianobenzoato cualquiera ey,
Se indica la especificldad por 105 amin04cidos de ambos Iados del enlace que se rompe. El gru.
po carooxiJo del aminoocido I se Iibera por la rotura; este aminoticldo queda a la izquierda del
enlace pepddico tal como se escribe normalmente (ve3Se Panel 2-5. p,tgs.. 5859).

mutante de la protefna encontrada en pacientes que sufien de anemia [aId/or-

me. Se encontr6 un solo ~plido diferente entre ambas formas de hemoglobina.
diferencia que mc1s tarde se atribuy6 a un solo aminoc1cido cargado, demostrlin
dose por primera vez que una mutaci6n puede cambiar un solo aminmtcido de
una protefna.

Mediante mliiquinas automatizadas pueden anaJizarse

secuencias cortas de arninoliicidosZ7'
Cuando una protefna ha sido fragmentada en pequenos peptidos. el siguiente
paso 16gico del anAlisis consiste en determinar la secuencia de aminol1cidos de
cada fragmento pepddico aislado. Esto se realiza mediante una serie repetida
de reacciones qUfmicas, proceso ideado originalmente en 1967. Primeramente el
peptido se expone a un compuesto qufmico que linicamente forma un enlace
covalente con el grupo amino Iibre del extremo amino terminal del peptido.
Luego, este compuesto quJmico es activado mediante su exposici6n a un <1cido
debil, con 10 que se rompe especfficamente el enlace peplfdico que une el ami
no<1cido amino terminal a la cadena polipeptfdica; seguidamente el aminmkido
que se ha separado se identifica utilizando metodos cromatogr<1ficos. A conti
nuaci6n, el peptido restante, que tiene un amino<1cido menos, se somete a la
misma secuencia de reacciones, y as( sucesivamente hasta que lodos los amino-
l1cidos del peptido hayan sido determinados.
La naturaleza reilerativa de estas reacciones conduce por s( misma a la auto-
matizaci6n; existen ml1quinas comerciales. denominadas secuencladores de
aminolfcldos, que permiten la determinaci6n autom<1tica de la secuencia de
aminoc1cidos de fragmentos peptfdicos. El paso final del proceso consiSle en co
locar las secuencias de aminol1cidos de los diferentes fragmenlos peptfdicos en
el orden en que se presentan en la cadena peptfdica intacta. Tradicionalmente
esto se realiza comparando y superponiendo las secuencias de diferellles grupos
de fragmentos peptfdicos obtenidos mediante fraccionamiento de la misma
prOlefna utilizando dUerentes enzimas proteolfticas.
Los adelantos tecnol6gicos han aumentado marcadamenle la velocidad y la
sensibUidad de la delerminaci6n de la secuencia de amino<1cidos de protefnas.
permiriendo el anAiisis de muestras djminutas; en una sola nache y a partir de
pocos microgramos de prorcfna -Ia cantidad djsponible a partir de una unica
banda en un gel de poUacrilamida- se puede obtener la secuencia de varias do-
cenas de amino~cidos del extremo ammo tenninal de un peptido. Esle procedi-
mienlo ha resultado imponante para caracterizar muchas prolefnas celulares
minoritarias, como los receptores para las honnonas esteroideas y polipeptIdi
cas. Frecuentemente la determinaci6n de tan s610 20 aminol1cidos de la secuen

184 Capflulo 4: C6mo se estudian las ~Iulas

cia de una proleina es suficienre para lograr diseftar una sonda de DNA que per-
mita c10nar su gen (vease Figura 7-27). Una vez se ha aislado el gen, el resto de la
secuencia de amino:jcidos de la prolefna se puede deducir en referencia al c6di-
go genelico. &la es una gran ventaja porque, incluso con automatizaci6n, la de-
lerminaci6n directa de la secuencia completa de una proteina resulta ser una la-
rea dificil. Una proleina de 100 residuos puede ser secuenciada en un mes de
trabajo imenso, pero la dificultad se incrementa extraordinariamente tanlO con
la longilud de la cadena polipeptidica como con las particularidades qufmicas
de los fragmentos peplfdicos individuales que impiden que el proceso sea ruti-
nario. Dado que la secuenciaci6n del DNA puede hacerse de una forma m:js ro-
pida y sencilla (vease Capitulo 7), generalmente las secuencias de la mayoria de
las protefnas se delenninan, en la actualidad, a panir de la secuencia de nucle6-
tidos de su gen.

La difracci6n de cayos Xpor crislaJes de prOlelna puede revelar la

eslCuctura exacta de una protema2tl
Apartir de la secuencia de aminoAcidos de una protefna pueden a menudo pre-
decirse los elementos de la estructura secundaria de la proteina, como las ht!1i-
ces a que alraviesan la membrana, asf como el parecido de la proteina con otras
protefnas conocidas. Sin embargo por ahora no es posible deducir de forma se-
gura el plegamiento tridimensional de la protema a partir de su secucncia de
amino~cidos, y sin conocer la estruClura detallada no es posible comprender las
bases molecuJares de su funci6n. La principal tecruca que se ha utilizado para
delenninar la estructura tridimensional de las molecuJas, incluidas las prolefnas
a nivel at6mico, es la crlstalograHa de rayos X.
Los rayos X, como la loz, son una forma de radiaci6n electromagnetica, pero
de una longitud de onda mucho menor, tfpicamente de alrededor de 0,1 nm (el
di~metro de un <1tomo de hidr6geno). Si se dirige un haz estrecho y paralelo de
rayos Xa una muestra de una proleina pura, la mayorfa de los rayos X pasar~n a
su traves. Sin embargo una pequei'la fracci6n de euos seran dispersados por los
<1lomos de la muestra. Si la muestra es un cristal bien ordenado, los haces dis-
persados se reforzaran unos a otros en ciertos puntos (vease Figura 4-2) yapare-
cer~n como manchas de difracci6n cuando los rayos X sean recogidos sobre un
delector (Figura 4-48).
La posici6n e intensidad de cada mancha en el patr6n de dJrraccl6n de ra-
yes Xcontiene informaci6n sobre las posiciones de los a.tomos en el criSlal qlle
intentamos dedllcir. La dedllcci6n de la estructura lridimensional de una gran
molccula a partir del palr6n de difracci6n de su crislal es una tarea compleja, y
no se consigui6 para una mohkula de prolefna hasta 1960. Recientemenle los
amllisis de difracci6n de rayos X se han aUlOmatizado cada vez mas, y ahara el
proceso mtis lenlO es el de la producci6n de cristales proteicos adecuados. Ella
requiere grandes cantidades de una protefna muy pura y a menudo, supone
allOS de lanteo en la busqueda de las condiciones de crislalizaci6n adecuadas.
Todavfa hay muchas prolefnas, especial mente proteinas de membrana, que han
resislido lodos los intemos de crislalizaci6n.
EI produclo inmediato de un analisis de un patron de difracci6n es un com
plejo mapa tridimensional de densidades elecu6nicas. Interprelar este mapa re-
sulta una tarea complicada, y requiere la secuencia de amino<1cidos de la protei
na. Fundamenlalmenle mediante prueba y error se consigue correlacionar la
secuencia y el mapa de densidades electr6rucas mediante un ordenador, inten-
tando conseguir el mejor resuhado. La fiabiLidad del modele al6mjco final de-
pende de la resoluci6n de los datos crislalOgraficos iniciales: una resoluci6n de
0,5 nm puede producir un mapa de baja resoluci6n del esqueleto polipeptfdico,
mientras que una resoluci6n de 0,15 nm permite situar todos los ~lomos (excep-
to los de hidr6geno) en la moltkuJa. A menudo, un modelo at6mico completo
resulta demasiado complejo para ser observado directamente, pero a partir de c!
se pueden derivar versiones simplificadas que muestren las caracteristicas es-

Fracdonamlento de las ctlulas y am'ilisis de sus moltkulas 185

 Figura 4-48 Crlstalografla de rayos X. (A) Cristal proteico de ribulosa
bisfosfato carboxilasa, una enzima que jucga un papel crucial en la fijaci6n
de CO~ durante In fotos!ntesis. (B), Patr6n de difracci6n de rayos X obtenido a
partir del cristal. (el Modelo simplificado de la estructura de la protema
obtenido a partir de 1a informaci6n de la difracci6n de myos X. EI modelo
at6mioo complelo es diffcil de intcrpretar. pero esta versi6n muestra
clammente sus caracterfsticas eslrueturales (h~lices a en verde, laminas II en
raja). (A, porcortesfa de C. Bmnden: B, porcortesfa de). Hajdu e I.
IAI Andersson: C, adaptado del original cedido por B. Furugren.l

tructurales esenciales de 1a estructura (vease Figura 3-34). Mediante cristalogra-

ffa de rayos X se ha determinado la estructura de varios centenares de protefnas,
10 cual es suficienre para empezar a entrever familias de estructuras comunes.
A menudo, estas estructuras resultan mas conservadas durante la evoluci6n que
las secllcncias de aminoacidos que las forman.

Tambi~n se puede determinar la estructura molecular

utilizando espectroscopia de resonancia magn~tica
nuclear (NMR)"
La espectroscopia de resonancla magnetlca nuclear (NMR, de Nuclear Magne-
tic Resonance) se habra utilizado para analizar la estructura de pequenas mole-
culas y actuaJmente se utiliza cada vcz mas para estudiar la escructura de peque-
fias proternas 0 de dominios proteicos. A diferencia de la cristalografl'a de rayos
X, la NMR no requiere tener una muestra cristalizada; simplemente necesita un
pequefio volumen de una soluci6n proteica concentrada, la cuaJ se coloca en un
fuerte campo magnetico.
Algunos nticleos atllmicos, particulannente los de hidrllgeno, denen un mo-
mento magnetico 0 esp(n: es decir, tienen una magnetizacilln intrfnseca, como
una barra magnetica. EI espfn se alinea en el interior de un fuerte campo magnl!-
tico, pero puede variarse a un estado semiaJineado aJ ser excitado en respuesta a
una aplicaci6n de pulsos de radiofrecuencia (RF) de radiacilln electromagnetica
Cuando los nticleos de hidrogeno excitados se relajan a su estado alineado, emi-
ten radiaci6n RF.la coaJ puede ser medida y expresada en fonna de espectro. La
naruraleza de la radiacilln emitida depende del ambiente de cada nueleo de hidro-
geno, de fonna que si se excita un nticleo influintla absorci6n y la emisi6n de ra-

186 Caprtulo4: C6mose estudian lascBuias

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diaci6n de otto nudeo que esl~ suficienlemenle cerca de ~1. Por tanto es posible. Figura 4-49 Espectroscopla de NMR.
mediante una ingeniosa elaboraci6n de la tecnica b<\sica de NMR conodda como (A), ejemplo de los dalos oblenidos a
NMR bidimensional, distinguir las se~ales procedentes de nudeos de hidr6geno de panir de un aparato de NMR. se lrala
diferentes residuos de amin04ddos e identificac y medir los pequenos cambios de de un espectro bidimensional de NMR
estas senales que ocurren cuando estos nucleos de hidr6geno se acercan sufiden derivado del dominio carboxilo
terminal de la enzima celulasa. Las
temente como para interactuar entre sf: la magnitud del cambio revela la dislanda
manchas representan inleracciones
entre el par de 4tomos de hidr6geno que interactlian. De esta fonna. la NMR pue
enlre ;jtomos de hldr6geno que en la
de aportar informad6n sobre las distancias entre zonas de la moltxula de prOlefna. protefna son casi vecinos. Direrentes
Combinando esta inronnad6n con la de la secuenda de amin04cidos, es posible. programas de c;jlculo par ordenador
en principio, descubrir la estructura tridimensional de la protefna (Figura 4-49). junto con la secuencia de
Por razones tt!cnicas, por espcctroscopia de NMR solamente se pueden de- aminoAcidos, que debe ser conocida,
tenninar las estructuras de pequenas protefnas, como m4x.imo de entre 15000 Y permiten derivar posibles estructuras
20000 dahons, y resulta muy improbable que el m~lodo pueda abordar el estu- compatibles. En (B) se presentan
dio de mol~culas mayores de 30 000-40 000 daltons. Sin embargo, muchos do- superpucstas 10 estructuras, cada una
minios funcjonales de protcfnas son mucho mas pequei'los que estos tamanos, y de las cuales satisrace tan bien como
a menudo pueden obtenerse en forma de estructuras estables, analizables por las dem;js las distancias de
NMR. Ello resulta especialmenle uti! cuando la protefna se ha resistjdo a ser cris cOllstrlcci6n caJculadas. EI conjunto
talizada. Por ejemplo, de csta forma se han determinado las estrucluras de los de estructuras constituye un buen
indicador de la estructura
dominios de uni6n a DNA de varias protemas reguladoras de genes. La NMR
tridimensional mas probable. (Par
tambit!n se utiliza con ~xito para investigar moJeculas no proteicas, y por ejem conesfa de P. Kraulis.)
plo resulta valiosa como m~todo para descubrir las estructuras de las complejas
cadenas hidrocarbonadas lalerales de las glucoprotefnas.
En la Tabla 49 se recogen algunos hitos del desarrollo de la cristalograffa de
rayos X y de la NMR.

Resumen
Las poblaciones celulnres plrethn ser analizadas bioqu{micamente. disgregtfndolas
y jraccionando su contenido por ultracentrifugaci6tL Posterlores jracclonilmlenlos
permiten el desarrollo de sistemas libres de dlulas; estos sistemll$ son necesarlos
para determinar los tktalln mokculares de procesos cel"lnres compleJos. De esta
manera, adlUJlmente se eshulian. por ejempw, la s(ntesis proteJea, la replicaci6n
del DNA, la maduraci6n del RNA Y llarlos ripos de rransporre intracelldar. 1 peso
molea,lary In composJd6n de subunidades de incluso m"y peq"enll$ cantittaths de
Unil prote(na u pueden determinilr mediante ekc:troforesis en gel de poliacrllnnd-
dLf con SDS. En electroforesis bldimensJonal en gellns protefnas u re:suelven como
mandl/IS separtulns mminnte lsoel.ectroenfoque en Unil dimell$16n seguJdo de elec
trofore:sls en gel de poUm:rilnmida con SDS en In segundo dJmensi6n. Esuu separa-

Fraccionamiento de las Iulas y an4lisis de sus moloculas 187

 -
Tabla 4-9 Hltos del desarrollo de 18 crlstalograffa por rayos X y de su llpIJcacl6n a
las mol&:uJas blol6g1cas

1864 Hoppe-Seyler cristalizaron ydieron nombre a la protefna hemoglobina.

1895 Rontgen observ6 que cuando los rayos cal6djcos (electrones) inciden sabre lin
blanco de metal, se produce una nueva forma de radiaci6n penetranle. que
denomin6 rayos X.
1912 von Laue obtuvo los primeros modelos de difracci6n de rayos X. hacienda
pasar rayos X a trav~ de un crislal de sulfuro de zinc.
W.l- Bragg propuso una relaci6n simple entre un patron de difracci6n de rayos
X y la disposici6n de los l1tomos en el crislal que produce este palr6n.
1926 Summer obtuvo cristales de la enzima ureasa a panir de extractos de judras. y
demostr6 que las protefnas tiellen actividad calalftica.
1931 Pauling public6 sus primeros ensayos sobre ~Ia naturaleza del enlace
qufmico", detallando las reglas del enlaee covalente.
1934 Bernal y Crowfoot presenraron los primeros modelos delallados de difraeci6n
de rayos Xde una protefna, oblenidos a partir de crislales de la enzima
pepsina.
1935 Patterson desarroll6 un m~todo analitieo para detenninar las distancias
inlerat6micas a partir de los datos de difracci6n de rayos X.
1941 Astbury obtuvo el primer patron de difracci6n de rayos X del DNA.
1951 Paulin y Corey propusieron la estructura de una oonfomlaci6n helicoidal de
una cadena de aminoo.cidos L, -Ia heliee a- y la estruclUra de la himina tJ" la
presencia de las cuales mAs tarde fue descrila en numerosas protefnas.
1953 Watson y Crick propusieron el modelo de doble helice del DNA, basandose en
los patrones de diITacci6n de rayos Xobtenidos por Franldln y Wllldns.
1954 Perutz y colaboradores desarrollaron m~todos de atomos pesados para
solucionar el problema de fases en la cristalograffa de las protefnas.
1960 Kendrew describi6 la primera estruelura detallada de una proterna (la
mioglobina de cachalote) hasta una resoluci6n de 0,2 nm, y Perutz propuso
una eSlruetura de resoluci6n menor de la hemoglobina, una prolerna mayor
que la anlerior.
1966 Phillips describi61a eSlructura de la Lisozima,la primera enzima que fue
analizada en detalle.
1971 ICimcr propuso la ulilizaci6n de NMR bidimensional, y Wuthrich y
colaboradores durante los primeros afios de la decada de 1980 utllizaron por
primera vez cSle metodo para resolver la cstructura de una protefna.
1976 Kim y Rich, y K1ug y colaboradores describieron la cstructura tridimensional
del tRNA, dClcrminada mediante difracci6n de rayos X.
1977-1978 Holmes y KJug detcrminaron la estructura del virus del mosaieo del
tabaco (TMV), y Harrison y Rossman determinaron la estruetura dc dos
pequefios virus esfCricos.
1985 Michel y colaboradorcs determinaron la primera eS[TUctura de una prolcfna
Iransmembrana (un lugarde reacci6n fotosintetico) mediante eristalograffa
de rayos X. Hcnderson yeolaboradores ob[uvieron la estruetura de la
baeteriorrodopsina, una praterna transmembrana, mediante melodos de
microscopia elcctr6nica entre 1975 y 1990.

clones elet:troforiticas plledetl apllcarse 111Cluso a prote(t/as que t/om.almente SOli

ilUolubln en agua.
Las prot.e{nas mayorltarlas de extraetOS cellllares solubles plteden ser purlftca-
das por cromatogrofta en columna; dependiendo del tipo de matm de la colullllla,
se pueden sepam prote(nas biol6gicamenle activas, en fimci6n de Stl peso mol,,-
Iar, de su hldrofoblddad, de sus auacterlstkas de carga, 0 de su aJinidNt por otras
molkulas. En umr purljlcacl6n tfpica, Ia muestra se pam sucrsivametlte a travis th!
varlas columnas diferentes -las fracciom!s enrlqlU!cidas obtenidas elf ,ma COI"""M
se apUcan a Ia columna siguiente. Una ve:z que Ia prote(na iM sido purlftcada '.asta
homogeneidad, se pueden estudiar con detalle sus actividaLks blol6gicas. AdemAs,
se plteth determimrr umr pequeRa pord6n de su secuencia de amlnodcuros y, sabre
ella, se puetk donar Ia secuencia de DNA qIU codiftca la prote(na rompleta; a par-

188 Capftulo 4: Cdn10 se estudian las celulas

tir de In secuencia de nute6tidos del DNA cwruulo se pltede deducir la secuencia
ch aminoacidos IYstante. La secuencia de aminotkilWs e$ necesaria para chiem';
nar Ie estructurn tridimensional de una prole{na, pero no e$ suficiente. Para deter
minar esta esiruclllrn a una resoluL:l6n at6mica, las prote{1UU mayores se han de
crislalizar y esllUJiar por difraccl6n de rayos X La estruetura ch pequeiias prole{
IUJ$ en soluci6n se p.tede delerminar utlUzando an4.llsls de resonaru;ia I7UlgnitlM
nuclear.

Siguiendo el rastro y cuantificando las molt~culas

del interior de las celulas
Los metodos c1asicos de microscopia ofrecen buenas visiones de la arquileclUra
de la celuJa, pero no demasiada informaci6n sobre la qu{mica celular. En biolo-
gfa celular a menudo resulta importanle delerminar las cantidades de delermi-
nadas mohkuJas y conocer d6nde se haUan localizadas en el interior de la c~lula
y de que manera cambia su cantidad 0 loca1izaci6n en respuesta a seliales extra-
celuJares. Las moleculas de interes varian desde pequelios iones inorganicos
como el Ca2. 0 el W hasla grandes moltkulas como determinadas protefnas, mo-
Ilkulas de RNA 0 de DNA.
Se han desarrollado melOdos sensibles para cuantificar cada uno de eslos li-
pos de moleculas y para seguir el comportamienlo dimlmico de la mayorfa de
elias en las celulas vivas. En esta secci6n describimos de que manera se pueden
introducir sondas especfficas en el interior de la celula viva para monitorizar las
condiciones qufmicas del citosol. Adem3S se presentan otros dos melOdos de
detecci6n ampliamente utilizados en biologfa celular: los que utilizan radiois6-
topos y los que ulilizan anticilerpos. Ambos metodos son capaces de detectar
con una gran sensibilidad una moltkuJa determinada en una mezcla compleja:
en condiciones 6ptimas pueden detcctar menos de 1000 copias de una moltkula
en una muestra.

Los atomos radiactivos pueden ser detectados

con una gran sensibilidad30
La mayorfa de los elementos que se presentan en la naturaleza son una mezcla
de isdtopos ligeramente diferentes. Estos is6topos se diferencian entre sf por la
masa de sus mlc1eos at6micos, pero como tienen el mismo mlmero de electro-
nes, tienen las mismas propiedades qllfmicas. Los 1lI1c1cos de los is6topos ra-
diactivos, 0 racliois6topos, son inestables y sufren desintegraciones de forma Tabla 4-1 0 Algunos radlols610POS
alealoria en el tiempo, produciendo diferentes alomos. En el transcurso de estas uUllzados habltualmenle en la
desintegraciones emilen partfculas energeticas subat6micas como electrones, 0 invesllgacl6n biol6glca
radiaciones como los rayos"!. Utilizando sistemas de s{ntesis qufmica para incor-
porar uno 0 mas alomos radiactivos a pequeflas moltkulas de interes, como un Perlodo
azocar 0 un amino<1cido, se puede seguir el destino de esta moltkula durante de semi
ls6topo deslntegracl6n
cualquier reacci6n biol6gica.
Aunque los radiois6ropos naturales son poco frecuenles (a causa de su ines- up 14 dfas
labilidadl, se pueden producir en grandes cantidades en reaClores nucleares en 1111 8,1 dIas
los que diferentes <ttomos se bombardean con panfculas de aha energfa. Como "S 87 dIas
resultado de ello, hoy disponemos de las formas marcadas radioisot6picamente "C 5570 anos
de muchos compuestos importantes desde el punto de vista biol6gico rrabla "Ca 164 dfas
4-]0). La radiaci6n que emiten se delecta de diversas maneras. Los electrones 'H 12,3 anos
(panfculas I}l pueden ser detectados en un contador Geiger por la ionizaci6n que
Los isdtopos estan enumerad05 en orden
producen en un gas, 0 pueden ser cuantificados con un comador de cellfefleo decrecienle de la energfa de 1a radiaci6n ~
gracias a las pequelias chispas de luz que generan en un Uquido de centclJeo. Es (electroncs) que emiten. EI IS'! tambl~n
los metodos hacen posible la medida de la cantidad de un radiois610PO determi- emite radiaci6n 1. EI periodo de semldes-
nado que existe en una muestra biol6gica. Tambi~n es posible determinar la 10- inlegmcidn es el tiempo necesario para
que se desintegre un 50' de los lhomos
caljzaci6n de un radiois6topo en una muestra utiJizando una autorradiografla, de un isdtopo.
como describiremos posteriormente. Todos estos m~todos de detecci6n son ex-

SlguJendo el rastro y euantificando las molecuJas del inlerior de las ~Iulas 189
traordinariamente sensibles: en condiciones favorables pueden dctectar casi to
das las desintcgraciones que se producen -y par 10 tanto casi todos los alamos
radiaclivos que se dcsinlcgran.

Los radiois6topos se utilizan para marcar las moleculas

en las celulas y en los organismos y seguirles la pista31
Una de las primeras aplicaciones de la radiactividad a la biologfa consisti6 en se
guir la rula qufmica del carbono durante la fOlosmlesis. Se manruvieron algas
verdes unicelulares en una atm6sfera que contenla CO2 marcado radiactivamen-
Ie ('CC0 2) y, lras pcrfodos variables de tiempo despu~s de haber side expueslos a
la luz solar, se separaron sus conlenidos solubles medianle cromalograffa en pa-
pel. Colocando una hoja de pelicula fotogrAfica sobre el cromalograma seeo se
delectaron las pequefias molkulas que eonteman ICC derivado del CO 2, De esta
manera se identificaron los principales componentes de la via (otosinlelica, des
de el CO2 hasta el azuear.
Las molkulas radiaetivas pueden ser utilizadas para seguir el curso de casi
lodos los proceses celulares. Un experimento tipico puede consistir en aiiadir a
las c~lulas un precursor en su forma radiactiva. Las mol~culas radiactivas se
mezclaran con las moleculas preexistentes no marcadas; ambos tipos de mole-
culas semn tratados de forma identica por la c~lula ya que wlo se diferencian cn
el peso de su n!.ideo at6mico. Se podrcin seguir los cambios de la locaJizaci6n 0
de la forma qufmica de las moleculas radiactivas en funci6n del tiempo. A me-
nudo, se puede aumcnt3l" la resoluci6n de estos experimentos utilizando un pro-
tocolo de marcaje denominado de pulso y caza, en el que el material radiaclivo
(el plllso) se aftade linicamente durante un perfodo de liempo muy cono y des
pues es eliminado mediante lavado ysubstituido par moleculas no radiaclivas. A
inlervalos regulares de tiempo se taman muestras y en cada una de elias se iden-
tifiea la forma qufmiea a se loealiza la radiaclividad (la caul) (Figura 450). Los
experimentos de pulso y caza combinados con la aUlorradiograffa (vease mas
adelante) han sido imponantes par ejemplo para dilucidar el camino seguido
por las protefnas de secreci6n desde el reticulo endopM.smico hasta el exterior
celular (Figura 4-51).
EI mareaje radioisot6pico solamente es valioso como sistema para diferen
dar moleculas que son qufmicamente identicas pero que tienen historias dire
rentes -por eJemplo, moleculas que se diferencian en su momento de sfntesis.
De esta manera, por ejemplo, se demostr6 que casi lodas las moleculas de una
celula viva son degradadas y reemplazadas por otras cominuamente, incluso
cuando la c~lula no est1\. creciendo y aparenlemente se encucntra en cSlado es
racionario. ESlos procesos de "recambio" que algunas veces tiene lugar muy len-
tamentc. scrfan imposibles de detectar sin el uso de radiois6topos.
Actualmenle casi todas las pequeflas moleculas comunes estan disponibles
comercialmente en forma radiactiva y practicamente cualquier moleeula biol6-
gica, por muy complicada que sea, puede marcarse can radiact'ividad. Los com
puestos se pueden marear con radiactividad incorporando alomos radiactivos
en posiciones determinadas de su estructura, 10 cual permite seguir los diferen-
Figura 4-50 L6g1ca de un .
experimento tfpico de pulso yawl
PULSO utUlzando radlois6lopos. Los
recipientes marcados con A, 8, CYD
representan companimentos
diferentes de la aHula (delectados
mediante tec:nicas de aUlorradiografia
ode fraccionamiento celular) 0 bien
compuestos qufmicos diSllnlOS
(detectados mediante cromalografia U
OlroS metodos qufmicos). En la Figura
4-51 se presentan resultados reales de
un experimento de pulso ycaza

190 Capftulo 4 : C6mo se estudlan las cBulas

tes destinos de distintas zonas de una misma molecuJa durante las reacciones Figura 4-5J AUlorradlograffa al
biol6gicas (Figura 4-52). mlcroscoplo electr6nico. Resullad05
Una de las aplicaciones importantes de la radiactividad a la biologfa celular de un experimento de pulso y caza en
consiste en la localizaci6n por autorradlograffa de compuestos radiactivos en el que ~Iulas B pancre,hicas se
secciones de celulas enleras 0 de lejidos. En este procedimiento las celulas vivas mantuvieron durante 5 minul05 con
son expuestas brevemente a un puJso de un compuesto radiactivo delenninado leucina 'H (el pulso) ya conlinuaci6n
se colocaron en un medio con un gran
y se incuban durante un periodo variable de tiempo -para permitir que el com
exceso de leucina no marcada (la
puesto se incorpore- antes de fijarlas y tratarlas para microscopia 6ptica 0 elec caza). Una gran cantidad del
tronica. Cada preparaci6n es recubierta posteriormente con una tina pelfcuJa de aminocicido se incorpora a la insulina.
una emulsi6n fotognifica y se coloca en la obscuridad varios dfas durante los la cua! es una proteina de secreci6n.
cuales parte del radiois6topo se desintegra. Entonces la emulsi6n se revela y se Tras 10 minulos de caza, la protefna
delermina la posici6n de la radiactividad en cada celula mediante la posici6n de marcada se ha desplazado desde el
los granos oscuros de plaIa generados (vease Figura 4-51). Asf por ejempto, la in- retfculo endoplasmatico rugosa hasta
cubaci6n de celulas con un precursor radiactivo del DNA (limidina 'H), muestra las cislemas del Goigi W, donde se
que el DNA se slntetiza en el mlc1eo y permanece all. En cambio el marcaJe de puede localizar mediante los granos
la celulas con un precursor radiactivo de RNA (Ilridina JH) revela que el RNA se negros de plata de la emutsi6n
sintetiza inicialmente en el mlc1eo de la celula perc que luego se desplaza rapi- fotogralica. Tras los 45 minutes de
damente hacia el citoplasma. Las moleculas marcadas con radiactividad tam- cllza siguientes la prote(na marcada se
encuentra en los granulos de secreci6n
bien pueden ser detectadas por autorradiograffa despues de haber sido sepa-
electrodensos (B). Los pequefios
radas de otras mol~culas mediante electroforesis en gel: de esta manera sc
granos de plata redondeados que se
detecta habilualmente la posici6n tanto de las protefnas (vease Figura 4-45) aprecian aquf se han producido
como de los <1cidos nucleicos (vease Figura 7-5). Adem<1s cuando se luilizan mo- utjJjzando un revelador fotogrMico
leculas de acidos nucleicos marcadas radiactivamente como sondas para buscar especial y no deben confundirse con
mol~culas de c1cidos nucleicos complememarias a elias, se utiliza la autorra- los PUntOS negros similares que
diogra[fa para detectar la posici6n y la camidad de eSlas moJeculas que sc hibrl- aparecen en los m~todos de marcaje
dan con la sonda, tanto sobre un gel como sobre la secci6n de un tejido (vease inmunol6gico (por ejemplo, en la
Figura 7-20). Figura 4-63). Experimentossimilares a
los de la figura resuJlaron imponanles
para establecer las rulas Intracelulares
Las concentraciones de los iones se pueden medir de las prolefnas de secreciOn reeien
mediante electrodos intracelulares32. slntetizadas. (Conesia de LOrci, en
Diabetes 31;538-565,1982. C 1982
Una posibiJidad de estudiar la qUlJnica de una celula viva individual consiste en
American DiabelesAssociation Inc.)
inserlar la punta de una fina pipeta de vidrio direclamente en el inlerior de la ce-
lula, una lecnica desarroUada por los electrofisi61ogos para estudiar vohajes y
Rujos de corrienle a traves de la membrana plasmatica. Para ello se confeccio-
nan microeJectrodos inlracelulares a partir de finos tubos de vidrio estirados al
fuego hasla que la punta tenga un diAmetro de una fracci6n de micr6melro. Es-
tos tubos se Uenan con una soluci6n conductora (normalmente una sal simple
como el KCI en agua). La punta del microelectrodo puede ser introducida en el
ciloplasma a traves de la membrana plasmatica, la cual se cierra alrededor del

Siguiendo eI rastro y cuanliflcando las molkulas del interior de las ~Iulas 191
 Figura 4-52 Moleculas marcadas
radlol50t6plcamente. Tres rarmas
radiactivas deIATP, disponibles
comercialmente. Los ~tomos
radiactivos se mueslran en rojo.
Tambien se indica la nomenclatura
utilizada para identificar la posici6n y
eltipo de los atomos radiactivos.

ATPI2.s.lHl

tubo adhiricndose fntimamenle al vidrio de forma que la celula se altera relati-

vamente poco.
Los microelectrodos son utiles para estudiar el interior celular de dos mane-
ras: pueden ser transformados en sondas para medir las concentraciones intra-
celulares de iones inorganicos comunes como el H~, el Na', el K', cl CI-, el Ca 2 y
el Mg2., y pueden utilizarse como micropipetas para inyectar rnoleculas en las
cclulas. EI principio que permite medir las concenlraciones i6nicas can un mi-
croeleclTodo es el miSlllO que el del pHmetro corrienle. La tendencia de los
iones a difundir a favor de su gradiente de concentraci6n puede ser equilibrada
por un campo elcctrico de sentido opuesto; cuanto mayor sea el gradiellie de
concentraci6n mayor tendni que ser el campo ehktrico. Asr, la magnilud del
campo electrico necesario para mantener el gradicnte de conccntraci6n en un
equilibrio estable nos proporciona una medida de la magnitud del gradienle de
concentraci6n. Para determinar la concentraci6n de un ion determinado se ha
de miJizar un material que solamente sea permeable a eSle ion, formar con este
material una lamina 0 barrera Ysituarla entre la soluci6n del ion cuya coneen-
lraci6n queremos determinar y una soluci6n patr6n de concentraci6n del ion
conocida. La diferencia de potencial electrico a traves de la membrana selectiva
cuando no exista flujo de iones sera directamente proportional a la relaci6n de
concentraciones del ion delenninado a ambos lados de dicha membrana (La teo-
ria relacionada con el lransporte i6nico a traves de la membrana plasmatica se
explica en el Panel 11-2.) En la practica. la punta del microelectrodo se lJena con
un compuesto organico apropiado que hace de barrera permeable selectiva aI
ion escogido cuya cOllcentraci6n se desea medir. Entonces, se inserta el micro-
electrodo junlo can un microelectrodo de referencia en el imerior de una ~Iula,
como se muestra en 1a Figura 4-53.

192 Caprlulo 4: C6mose estudlan las celulas

 voltfmelro Figura 453 Mlcroelectrodo lon-
etectrodo Ion-..lectivo selectlvo ullUzado para medlr la
precinto de gom.
concentracl6n Intracelular de un
determlnado Ion. En (A) se muestTa el
disposilivo experimental. (8) i1ustra 1a
soIuci6n de ICCI
conslrucci6n de un microelectrodo
I YJ'--_-electrodo
refereno::ia
de de concenltlClOn
conoeida permeable seleclivamenle al K. En
conductor de general, la punla del microelectrodo
plata ion-selec.tivo intracelular est;j
construida de un cristal especial 0 eSla
llena de un compuesto orgAnico
resina intereambladora especial que la hace permeable
de iones unleamente
permeable all(' exclusivamente al ion escogido. El
reslo dellUbo esta lIeno de una
solucl6n acuosa del ion a una
concentracl6n conocida, en la que se
halla $umergido un conductor
"" '81 metaJlco que est<'i conectado a un
tenninal de un voltfmetro. E1 otro
terminal del volt{metro est<'i conectado
Mas recientemente la tecnica de microelectrodos se ha adaptado a1 eslUruO de forma similar a un microelectrodo
del transporte i6nico a traves de canales prateicos especializados (denominados de vtdrio, que actua de referencia, el
canales i6nicos) situados en una pequena cantidad de membrana plasmlhica. Cllal tiene la puma abiena y conliene
En este caso, un micraelectrodo de vidrio de larga punta se presiona suavemen- una soluci6n conductora sencilla.
te sobre la membrana plasmlhica de una celula, en lugar de intraducirlo en la Ambos mlcroelectrodos.
celula atravesando elicha membrana (Figura 4-54). EntOllces resulta posible es- empaquelados conjuntamente.
lUdiar el comportamienro electrico de la pequena zona de membrana que queda atraviesan la membrana plasrnrttica de
la cl!lula que se quiere eSludiar. El
recubriendo la punta del electrodo, se haUe todavia unida a la celula 0 separada
voltaje que mide el \'oltimelro, que es
de ella (Figura 4-55). Esta tecnica, conocida como reglslro zonal ("patch-clamp igual a la diferencla de potencial a
recording") ha revolucionado el estudio de los canales i6nicos. Como se explica traves de la barrera permeable
en el CapituJo II, consthuye una de las pocas tecnicas de biologfa celular que selectivamenle. revela la
permite estudiar a tiempo realla funci6n de una sola molecula prateica. concemracl6n del ion en la et!:lula..

Los cambios rtipidos en las concentraciones i6nicas

intracelulares se pueden medir mediante
indicadores emisores de luz33
Los electrodos sensibles a iones unicamente revelan la concentraci6n i6nica de
un punto de la celula. Ademas, su respuesta es lenta y en ocasiones irregular
para iones que se hallen presentes a concentraciones muy bajas, como es el caso
del Cal... Por ello. estos electrodos no son adecuados para medir los rapidos y
transitorios cambios intracelulares de la concentraci6n de Ca2., que tan impor-
mntes son en la resplieSta celuJar a sei'iales extracelll.lares. Estos cambios pueden
ser analizados mediante la utiJizaci6n de indicadores i6nicos sensibles, cuya
emisi6n de luz refleja la concentraci6n local del ion. Algunos de estOS indicado-
res son luminiscentes (emiten luz espontaneamente) mientras que otras son
fluorescentes (emilen luz cuando son expuestos a 1a luz). La aecuori"a es una
protefna luminiscente, aislada a partir de ciertas medusas marinas, que emite
luzen presencia de Ca2. y responde a los cambios de concentraci6n de Ca2. en el

Figura 4-54 Mlcroplpetas utlllzadas para el reglstro zonal ("patch-clamp

rec::ordlng"). Se muestra unA cflulA en bast6n del ojo de una saJamandra,
manlenida por una plpeta de sllccl6n mlentras que una pipeta de v1drlo de
punla fina, presionada contra la ci'!lula de forma que el vtdrio se haila en
fntimo contacto con la membrana plasm~tica, actOa de microelectrodo.
Generalmente se utiliza un anilugio electr6nico para mantener el voltaje
conslante y a un valor delerminado. (De T.O. Lamb. H.R. Matthews y V.Torre,
]. Physiol. 37:315-349, 1986.)

Siguiendo el rastro y cuantificando las mollkulas dellntertor de las dlulas 193

 -
Flgura4-55 lascuatro
conflguraclones eslandar utUlzadas
para el reglstro zonal. En primer
mlcrop!pete
de ...idrio
_+-_-;j lugar.la boca de la pipeta de registro
uoi6n Iler""'ice se presiona conna la membrana
celular de forma que se forme una
cenellOnko uni6n henn~tica (arriba). Entoncesse
puede regisuar la corriente que entra
en la pipeta a trav~ de la zona de
membrana (A) unida a Ia celula 0 (B)
C1TOPlASMA
separada de ella. exponiendo la

-----:::::::----
superficie citoplasmalica de la
membrana plasmatica.
Altemativarnenle. la zona de
membrana se puede romper mediante
una succi6n suave. de forma que el
interior del electrodo quede en
comunicaci6n directa con el imerior
de lac~lula (Cl: en esta ultima
configuraci6n en c~lula total" se
puede registrar el componarniento
elktrico de la c~lula de fonna similar a
como se haria con un microelectrodo,
pero con la opci6n adicional de poder
lA) ZONA DE LA lSI ZONA DE LA ICI CONFIGURACt6N (0) ZONA DE LA alterar la composici6n quimica de la
MEMBRANA UNIOA MEMBRANA SEPARAOA EN "ctLULA TOTAl" MEMBRANASEPARAOA
ALActLULA DE LA ctLULA (CON DE LA ctLULA (CON c~lula permitiendo que diferentes
EXPOSICION DE LA EXPOSICION DE LA compuestos difundan desde la pipeta,
CARA crrOPlASMA fICA) CARA EXTRACElULARI de punta relativamente ancha, aI
citoplasma. La configuraci6n (D) se
intervalo de 0,5 a 10 mM. Si por ejemplo se microinyecta en un huevo, la aecuo- obliene a trav~ de la configuraci6n (C)
rina emite un destello de luz en respuesta a la subita y localizada Iiberaci6n de separando la pipela de la c~lula de
Ca2. que se produce en el interior del citoplasma cuando el huevo es fertiliwdo fonna que un fragmento de la
(Figura 4-56). membrana plasmatica adyacente se
repliegue sobre la punta de la pipeta,
Recienlemenle se han sintetiwdo indicadores fluorescentes de Ca 2 que se
sellandose a ella. En (D) se hal1a
unen hlertemente al Ca 2" y que cuando estan lib res son excirados a longitudes expuesta no la superficie
de onda Iigeramente mas largas que cuando estan unidos a el. Midiendo la pro- ciloplasmatica de la membrana (como
porci6n de inlensidad nuoresccnte a las dos longitudes de onda de excitaci6n, ocurre en (8)1 sino la superficie
puede determinarse la proporci6n de concentraciones entre el indicador unido exterior de la membrana.
a Ca 2 y el indicador libre. Esta diferencia proporciona una medida precisa de la
concentraci6n de Ca 2' Iibre. Dos populares indicadores de este tipo, denomina-
dos qui,,-2 y{llra-2, son utiles para estudiar los cambios de las concentraciones
intracelulares de Ca 2 en diferentes zonas de la celuJa, visualizandolas mediante
un microscopic de fluorescencia (Figura 4-57). Existen indicadores nllorescentes
semejantes a estos (Hiles para medir otros iones; par ejemplo, algunos de elias se
utilizan para medir H', Ypor 10 tanto, el pH intracelular. Algunos de estos indica-
dores pueden entrar en las celuJas por difusi6n, par 10 que no se han de microin-
yectar, 10 cual permitc controlar aJ microscopio de fluorescencia un gran mime-
ro de celuJas simuhaneamente. La construcci6n de nuevos tipos de indicadores
y su utilizaci6n con los modernos metodos de amilisis de imagenes pueden ha-
cer posible el desarrollo de mlHodos rapidos y precisos similares a estos que nos
penn.itan analizar las variaciones de las concemraciones intracelulares de djfe-
rentes pequenas moleculas.

Existen diferentes sistemas que permiten introducir

mol~uJas en una celula para las que la membrana
celular sea impermeable34
A menudo resulta uti! poder introducir en la celuJa mol~uJas que no puedan
atravesar la membrana, como anticuerpos que reconocen determjnadas protef-
nas intracelulares, prOle{nas celulares normales que han sido marcadas con un

194 Caprtulo 4 : C6mo se estudlan las ceJulas

.
 Figura 456 La protefna luminlscente aecuorlna emile luz en presencia de
Cat. IIbre. En esta figura se ha inyeclado aecuorina a un huevo de pez
medaka.la cual lia difundido por el dlosol. Aconlinuaci6n. el huevo se ha
fecundado con un espennalozoide, y se lia examinado con la ayuda de un
intcnsificador de imagenes. Las cuatro fOlograflas que se presentan aquf
fueron lomadas a intervalos de 10 segundos mirando hada abajo el punto
donde entr6 el espermatozoide. Las imttgenes revelan una onda de Iiberaci6n
de calcio libre en el dtosol a panir de reservorios intracelulares juslo por
dcbajo dellugar donde enlr6 el espennalozoide, tal como se indica en el
diagrama de la izquierda. (fotograflas reproduddasde I.e. Gilkey. LF. laffe,
E.B. Ridgway y G.T. Reynolds. J. Cell Bioi. 76:448-466. 1978. Con permlso de
copyright de The Rockefeller University Press.)

compuesto fluorescente 0 moleculas que afectan la conducta de la celula. Una

aproximaci6n consisle en microinyectar eslos compuestos a la celula a traves de
una micropipela de vidrio. Una tecnica espe<:ialmente uli! es la denominada d-
toqubnica analoga fluorescente, mediante la cual una protefna delerminada se
acopla a un colorante fluorescenle y se microinyecla en una celula; de esta ror-
rna, se puede seguir el destino de la proleina inyeclada can un microscopic de
Ouorescencia, a medida que la celula crece y se divide. Si se marca lubulina (Ia
subunidad de los microlubulos) por ejemplo con un colorante que emila fluo-
rescencia en el rojo. se puede seguir la dinamica de los microlubulos segundo a
segundo en la reluJa viva (Figura 4-58).
Tambien se pueden microinyeclar antieuerpos en una celula, para bloquear
la runci6n de la molecula que reconocen. Por ejemplo, la inyecci6n de antieuer-
pos anti-miosina-II en un huevo recundado de erizo de mar impide que el huevo
se divida en dos, a pesar de que la divisi6n nuclear se produce normalmente.
Esla observaci6n demostr6 que la miosina desempei'la un papel esencial en el
proceso contr<1ctil que divide el eiloplasma durante la divisi6n celular. pero que
no es necesaria para la divisi6n nuclear (vease Figura 18-34).
A pesar de que la microinyecci6n es una teeniea ampliamenle utilizada, su-
pone la inyecci6n de cada eeluJa una por una; por esta raz6n solamente resuha
posible estudiar varios eiellios de celulas simultaneamente. Olras aproximacio-
nes pcrmiten permeabilizar simultaneamenle grandes poblaciones de celulas.
Par ejemplo, utilizando potcntes ehoques electrieos 0 agentes qufmieos. como
bajas concentraciones de dctergentes, se puede romper parcial mente la eSlrue-
tura de la membrana plasm<1tiea de la celula, haciendola mas permeable. La tee-
niea eleelriCa tiene la ventaja de generar grandes poros en la membrana plas-
maliea. sin daf\ar las membranas intraeelulares. Los poras se mantienen
abiertos durante intervalos de liempo que pueden oscilar entre millutos y horas,
dependiendo del tipo celular utilizado y de la c1ase de choque elect rico que se
aplique; asf, a traves de los paras las macromoltkuJas pueden enlrar (y salir) del
dlosol r<1pidamente. Si el tralamienlo ha side limitado, un elevado porcentaje
de las celulas tratadas consigue reparar sus membranas plasmaticas y sobrcvive.

Figura 4-57 Visuallzacl6n Inlncelular de la concenlracl6n de Cat.

utllb.ando un Indleador nuorescenle. EI ramificado ~rbol de dendritBS de
una el!:lula de Purldnje del cerebra recibe mas de 100 000 sinapsis de otras
neuronas. La senal de salida de la eelula se transporta por un unico axOn, que
aquf se ve saliendo del cuerpo eelular en la parte inferior de la rigura. Esla
imagen de la concentrad6n intracelular de calcio de una dlula de PurkinJe
(del cerebra de un cobaya) se obtuvo utilizando una ctmara de gran
sensibilidad y el indicador fluorescente sensible al cr-. fura2. La
eoncemraci6n de Caz-libre esl~ represenlada por diferentes colores, siendo
la mayor concenlradOn el color rojo y la menor el azul. las mayores
eoneentraciones de cr- se presentan en los cemenares de ramas de
denditras. (Porcones{a de D.W. Tank, IA Connor, M. Sugimori y R.R. Uinas.)

Siguiendo eI raslro y cuantificando las moleculas dellnlerior de las eelulas 195

 Figura 458 Cltoqufmlca Duorescente
amfloga. Micrograffa f1uorescente del
borde conductor de un fibroblasto que
ha sido inyectado con tubuJina marcada
con rodamina. Los microtubulos de toda
la cliluJa han incorporado las molkulas
de tubuJina marcadas. Asf. se puede
detectar los microlubulos
individualmente y se puede seguirsu
componamiento dilllimico medianle un
sistema de ordenadorque incremenle la
imagen. como se muestra aquL A pesar
de que parece que los microrubulos
tienen WlOS 0.25 11m de grosor, se trata
de un efecto 6ptico; en realidad su
diametro es de tan 5610 una dOCima
pane de este valor. (Por cortes{a de
P. Sammeh y G. Sorisy.)
Un tercer m~todo para introducir grandes moleculas en la c~lulas consiste en
provoear la fusi6n can la membrana plasmatica de vesiculas de membrana que
contengan estas mollkulas. Estos tres m~todos. ampliamente utilizados en bio-
logla celular. se ilustran en la Figura 4-59.

.:eMa eolocada en una solueion vesicYlII limlteda par membrana

de la substancia X. entre dos conteniendo la $\lb$tancia X
mk:roplpetll electrodos. y lujeta II lhocks elktricol
muycorlOi
~~:ij~ de vidrio
conlenirtndo '.' .
~:::!: Ie IUbsUlncia X
......~
_-...4\:.. .-....
If -/J .~. ~ .

I I
la fusion de membranas inducida. antre
mlcrolnyeccl6n los poros tranlitoriol practicadoilln la
mllmbrana permiten que la subltencla X III vlliculll y la membrana plasmiltica
de la aublrtancill X
entra en la cllluia antel de que" vuelvlln de la cillula diana, libera la substancia X
en la c'lula
a solder en el citoplasma
I

I I
tA, ,., ,e,
Figura 4-59 Metodas ulillzados para lntroduclr en una dlula una substancla para la
cualla membrana es Impenneable. En (A) la substancia es inye<:lada a trav!!s de una
micropipela, aplicando una presi6n o. si la subslantia eSla cargada ell!ctricamente,
aplicando un vollaje que obligue a la substantia a pasar al interior de la c!!lula como una
comente i6nica (tocnica denominada iOnfo!oresis). En (B) la membrana celular se haee
lransitoriamente penneable a la substantia que queremos inlroducir. rompiendo la
estruetura de Ia membrana mediante un breve pero intenso shock. ell!ctrico (por ejemplo
de 2000 voltios por centimetro durante 200 microsegundosl. En Ie) se usa un sistema de
fusi6n de membranas. Se pueden cargar vesiculas rodeadas de membrana con la
subSlanda deseada y luego inducirlas a fusionarse con la cl!lula diana.

196 Capftulo 4 : Cdmo se estudian las celuJas

.
La activaci6n inducida por la luz de mol~culas precursoras
"empaquetadas" facilita el estudio de la dimimica intracelular35
La complejidad y rapidez de muchos procesos intracelulares, como la acci6n de
las mollkulas sei'lal 0 el movimiento de las protefnas del citoesqueleto, los hace
diffciles de estudiar a nivel unicelular. Idealmente, cualquier mol~cula de inter~s
se puede inuoducir en una c~lula viva en un momento preciso y en un lugar de
la c~lula determinado, y posterionnente seguir su comportamiento, as{ como la
respuesta de la c~lula. Sin embargo, la microinyecci6n es limitada debido a la di
ficullad de controlar ellugar y el momento de la descarga del compuesto que se
microinyecta. Una aproximaci6n mucho mas poderosa supone sintetizar una
forma inactiva de la molkula de interes, introducirla en la ~Iula y aclivarla su-
bitamente y en un lugar escogido de la ~Iula enfocando sabre eUa un fino haz
de luz. Se han sintetizado precursores inaclivos fotosensibles de este lillO, deno-
minados molkulas empaquetadas, de una gran variedad de pequei'las molku-
las, incluyendo el Ca2., el AMP dclico, eI GTP Yel inositol trifosfato. las molecuJas
empaquetadas se pueden introduci.r en las ceJuias vivas mediante cualquiera de
los m~todos descritos en la Figura 4-59, y posteriormente se pueden activa.r me-
diante un fuene pulso de luz p.rocedente de un laser (Figura 4-60). Se puede uti-
lizar un microscopio para enfocar el haz de luz sobre cualquier regi6n de la ~Iu
la. de forma que el experimentador puede controlar exactamente d6nde y
cuando se liberacl la molkula. De esta fonna. par ejemplo, se pueden estudiar
los efectos instantaneos de la Iiberaci6n en el citosol de una molkula seii.a1 in-
tJacelular.
las molkulas empaquetadas Ouorescentes son herramientas con un gran
futuro. Se construyen uniendo un colorante fluorescente fotoactivable a una
prote{na purificada. Es importante que la protema modificada siga siendo biol6-
gicamente activa: a diferencia de 10 que ocurre con el marcaje con radjoisdtopos
(cuya diferencia linicamente consiste en el m1mero de neutrones del nudeo del
atomo marcado), el marcaje con colorantes empaquetados Ouorescentes ai\ade
a la superficie de la protefna un gran gropo extra, el cual faciJmente puede alte
rar las propiedades de la prote(na. Mediante prueba y error suele encontrarse fa-
cilmente un protocolo de marcaje salisfactorio. Cuando se dispone de una pro-
tefna marcada biol6gicamente ac(iva, resulta posible seguir su comportamiento
en el interior de las c~lulas vivas. Por ejemplo, se puede introducir tubulina mar-
cada con fluorescefna empaquetada en los microtubulos del huso mit6tico:
cuando se i1umina una pequei'la regi6n del huso mit6lico con un laser, la tubuli-
na marcada se vuelve fluorescente, de forma que ahora se puede seguir su movi-
miento a 10 largo de los microtlibulos del huso (Figura 4-61). En principio, esta
misma t~cnica se puede aplicar a cualquier protefna.

Se pueden utillzar anticuerpos para detectar y alslar

rnoltkulas determinadas36
1..05 anticuerpos son protemas producidas por los vertebrados como defensa
contra las infecciones (v~ase Capftulo 23). Se diferencian del resto de las protef-
nas en que son producidos en millones de formas diferentes, cada una de las
FlgUl1l4-60 Molecules
empaquetadas. Esquema general que
muestra de qu~ fonna un deri9ado de
una mol~la empaquetada sensible a
la luz (aquJ designada XJ se puede
convertir, mediante un flash de luz UV,
en su fonna Iibre activa Incluso los
iones eaz' .se pueden empaquetar
indirectamente; en este caso se utiliza
2.......... .un quelante de cr-, el cua! se inactiva
............. Xtm'l 'eX 2 u. . . . . lItIdtb6du JX)r fot6lisis, Iiberando asr eI ca 2 que
Ueva unido.

SiguJendo el rastro y cuantificando las mol6:ulas del interior de las ~Iulas 197
 F1gura 4-61 Detennlnacl6n del Oujo de mkrottibulosen eI huso mlt6lJco
utllizando Duorescena empaquetada unJda a tubullna. (A) Un huso en
metafase fonnado in vitro a partir de un extracto de huevos de Xenopus ha
incorporado tres marcadores fluorescentes; tubulina unida a rodamina (rojo)
para marcar todos los microtubulos, un colorante azul unido aI DNA que
marca los cromosomas y Ouorescefna empaquetada unida a tubulina, que
lambien se incorpora en todos los mlcrotlibulos pero que resulla invisible
debido a que no es Ouorescente hasta que no haya sido activada por luz
uJtravioleta En (8) se utiliza un haz de luz ultravioleta para desempaquelar
localmeme la f1uoresce[na empaquetada unida a tubulina principalmeme en el
lado izquierdo de la placa metaf4sica. Durante los siguientes minutos (despues
de un minuto y medio en C y de dos minutos y medio en D) se observa que la
senal de tubulina unida a fluorescefna desempaquetada se desplaza hacia el
polo Izquierdo del huso, 10 cual indica que la tubulina se desplaza
continuamente hacia los polos a pesar de que el huso (visuallzado a traves de la
f1uorescencia de la tubulina marcada con rodamina roja) perrnanece casi
inalterada. (De K.E. Sawin yT.J. Mitchison.J. Cell. Bioi. 112:941-954, 1991, con
permiso de copyrighl de l11e Rockefeller University Press.)

cuales tiene un lugar de uni6n difcrcnt'e que reconoce espedfica~ente a una

mol~cuJa diana (denominada amfgello). La exacta especificidad de los anticuer-
pos frente a los antfgenos los convierte en poderosas herramientas para la biolo-
gfa celular. Marcados con colorantes fluorescentes (fluorocromos) resultan muy
valiosos para localizar en las celulas detenninadas mollkulas mediante micros-
copia de fluorescencia (Figura 4-62); marcados con partfculas densas a los elec-
trones, como pueden ser esferas de oro coloidal, se utilizan para localizar con
una alta resoluci6n moleculas determinadas aI microscopio electr6nico (Figura
4-63). Como herramientas biol6gicas se utilizan para delectar y cuantificar mo-
leculas en extrac(Qs celuJares y para identificar protefnas delerminadas, despues
de que estas hayan sido aisladas por electroforesis en gel de poliacrilamida (vea-
se Figura 4-46). Los anticuerpos se pueden acoplar a una matriz inene con el fin 10 11m
de formar una columna de afinidad, la cual se uliliza para purificar macromole-
culas especfficas a partir de un extracto celular, 0 en el caso de que la molecula
se halle en la superficie de la cclula, para seleccionar ripos determinados de ce-
lulas vivas a partir de una poblaci6n heterogenea.
Frecuenlemente, la sensibilidad de los anticuerpos como sondas para la de-
tecci6n de molcculas determinadas en las celulas y en los tcjidos se incremenla

Figura 4-62 Inmunofluorescencla.

(A) Electronmicrograffa de la zona
cortical de una celula epitelial en
cuJtivo, mostrando la distribuci6n de
los microlubulos y de OlroS filamentos.
(8) La misma ~rea pero tei'iida con un
al\licuerpo Ouorescente anti-tubulina,
la subunidad proteica de los
microtubulos, utilizando la tlknica de
la inmunociloqufmica indirllCla (vease
Figura 4-64). las fiechas indican
mlcrottlbulos individuales f~cilmente
reconocibles en ambas figuras. (De M.
Osborn, R. Webster y K. Weber, f. Cell.
BioL 77;R27-R34, 1978. Reproducido
can penniso de copyright de The
Rockefeller University Press.)

IAI
10",m

196 Capftulo 4: C6mo se estudian las celulas

...
mediante metodos de amplificaci6n de sefial. Por ejemplo, a pesar de que se lisosoma nucloo dense
puede unir directamente una molecula marcadora, como un colorante fluores-
cente, a un anticuerpo que ser<1 utilizado para el reconocimiento especffico (el
anticuerpo primario), se consigue una sefial mayor utilizando el anticuerpo pri-
mario y luego detect<1ndolo con un grupo de anticlIerpos secundarios que se
unan a el (Figura 4-64).
Los metodos de amplificaci6n m<1s sensibles utilizan una enzima como mo-
lecula marcadora, unida al anticuerpo secundario. Asf por ejemplo, se puede
utilizar la fosfatasa alcalina, una enzima que en presencia de los reactivos ade-
cuados produce fosfato inorg<inico que genera un precipitado coloreado. ESle
precipitado revela la presencia del anticuerpo secundario que est<1 acoplado a la
enzima, y por 10 tanto, la localizaci6n del complejo antfgeno-anticuerpo al que
se ha unido el anticuerpo secundario. Como cada molecula de enzima actua ca-
talfticamente generando varios cientos de moleculas de producto, este sistema
permite 1a detecci6n de diminutas cantidades de antfgeno. Sabre este principio
se han desarrollado inmunoeTlSayos unido a una enzima (ELISA, de Enzyme-Lin-
ked ImmunoSorbem Assay), que se utilizan habitualmente en medicina como
test sensibles -por ejemplo como prueba de gestaci6n 0 de varios tipos de infec-
ciones.
La mallera m<1s sencilla de preparar anticuerpos es inyectando varias veces
una muestra de un anrfgeno a Ull animal, como un conejo 0 una cabra, y luego
recogiendo suero rico en anticuerpo. Este antisuero contiene una mezcla hetero- 1 "m
genea de anticuerpos, cada uno de los cuales ha sido producido por una celula Figura 4-63 InmunoiocaJizacl6n en
secretora de anticuerpos diferente (un Iinfocito B). Los diferentes anticuerpos mlcroscoplaelectnSnlca. Micrograffa
reconocen diversas zonas de la molecula de antfgeno y tambien impurezas de la electr6nica de una celula seeretora de
preparaci6n de anrfgeno que se inyect6. A veces, la especificidad de un antisuero insulina, en la que las moJecuias de
por un antfgeno determinado puede aumentarse eliminando las moleculas de insulina se han marcado con
anticuerpo que se unen a otras moleculas; por ejemplo, un antisuero producido anticuerpos anti-insulina unidos a
contra una protefna X puede hacerse pasar a traves de una columna de afinidad pequefias esferas de oro coloidal (cada
de antfgenos Yy Z, para eliminar asf todos los anticuerpos anti-Y y anti-Z del an- una de las cuales aparccen como
puntos negros). La mayor parte de la
tisuero. Sin embargo, la heterogeneidad de los antisueros a menudo ha Iimitado
insulina se halla almacenada en las
sus aplicaciones. zonas densas de las vesfculas
secretoras; adem(is, a1gunas de estas
Las lfneas celulares de hibridomas constituyen una fuente zonas densas se degradan vfa
permanente de anticuerpos monoclonales31 lisosomas. (De L Orci, Diaberologia
28:528-546, 1985.)
En 1976 qued6 solucionado el problema de la heterogeneidad de los anticuerpos
gracias aI desarrollo de una nueva tecnica que revolucion6 el uso de los anti-
cuerpos como herramientas para la biologfa celular. La tecnica se basa en pro-
Figura 4-64 Inmunocltoqufmlca
pagar un clon de celulas a partir de una unico linfocito B secretor de anticuer-
Indlrecla. EI metodo es muy sensible
pos, con 10 que se pueden obtener grandes cantidades de anticuerpos. El debido a que el anticuerpo primario es
problema pr<1ctico, sin embargo, es que los linfocitos B tienen una vida limita- a su vez reconocido por muchas
da en cultivo. Para solucionar esta limitaci6n, se fusionan Unfocitos B individua- mo1eeulas del anticuerpo secundario.
les productores de anticuerpos, procedentes de un rat6n 0 una rata inmuniza- El anlicuerpo secundario esta unido
dos, con celulas derivadas de un- tumor "inmortal" de linfocitos B. De la mezcla covalentemente a una moJecula
heterogenea resultante de celulas hfbridas se seleccionan aquellos hfbridos que marcadora que 10 haee Meilmente
presentan tanto la capacidad de producir un determinado anticuerpo como la detectable. Entre las mo1eeulas
capacidad de multiplicarse indefinidamente en cultivo. Estos hlbrldomas se marcadoras mas ulilizadas se
encuenlran los eolorantes fluorescefna
y rodamina (para microscopia de
anticuerpos primarios: anticuarpos secundarios: fluoreseencia), la enzima peroxidasa
anticuerpos de conaio anlicuorpos dirigidos contra de rahano (tanto para microscopia
dirigidos contra el el enticuarpo de conoiD. marcador
antlgono A acoplados can una molecule / 6plica convencional como para
antlgono A marcadora microscopia electr6nica).la ferrilina
inmovilizado ~~ ~ {protefna que contiene hierro} 0

lL~-L~~
esferas de oro coloidal (para
microseopia electr6nica) y las enzimas
fosfatasa a1calina 0 peroxidasa (para su
detecci6n bioqufmica).

Siguiendo el rastro y cuantificando las moleculas del interior de las celulas 199
 r.ton inmunil.do line. celul'f muteote derlv.d. Figura 4-65 Preparacl6n de
con el entlgeno X de uo tumor de Iiolocito. B hlbrldomas que segreguen
anllcuerpos monoclonales

4.'..
homog61eos contra un antigeno
delennlnado 00. EI medio de
crecimienlo selectivo utilizado
condene un inhibidor (la
aminopterinal que bloquea las rut3S
c6lull productoft de ~ nonnales de biosfntesis a travk de las
otlcuerpos ao(i-X ----ee " que se sintetizan los nucle6tidos. Por
liofoeitOI B (monr'" 101I (e$ta. dllul.. cracenio
lodefiommeol8 en uo
media normal pero morir'o en el medlo Mlectivol consiguiente, las relulas han de utilizar
poeoI dl.. de cultivol
una rula paralela para sintetiz.ar sus
~ tcidos nucleicos, y la Ifnea celular
, FUSION
produetOI de II fulioo coIocados
mulante a la que se fusionan los
linfocitos B nonnales es derectuosa
en muhipln places de C\lltivo .oticuerpo ent].X para esta via Puesto que ninguno de
I MQ.egeOO los dos tipos celulares utilizados para

1.......II.w.\!1 la fusi6n initial puede vivir separado

del otro, tan ~Io sobreviven las relulas

I I I
uoamenl8 101 hibridomu creceo eo el media Mlectivo
hfbridas.

ubJ.1

permiti, que I,.

dllulas .. mutllpliquen
y comprober I, eJlmenei, de
.nticuerpos .oti-X en el sobren.deote

101 ctonn po.itivos conetituyeo

un. fuentl contiou. de
eotlcuerpo Inti-X

propagan como clones individuales, cada uno de los cuales conslituye una fuen-
te permanente y estable de un antlcuerpo monoclonal (Figura 4-65). ESle anti-
cuerpo reconocera un unico tipo de lugar antigenico -por ejemplo, un grupo de-
terminado de seis eadenas laterales de aminoacidos de la superficie de una
prote(na. EI hecho de que la especificidad sea uniforme haee de est'Os anticuer-
pos monoclonales una herramienta mucho mas uti! que los antisueros conven-
cionales, los cuales normalmente contienen una mezcla de anticuerpos que re-
conocen una gran variedad de diferentes determinantes antigenicos, incluso en
macromoll~cuJas pequenas.
Sin embargo, la mayor venlaja de la lecnica de los hibridomas consisle en
que se pueden producir anticuerpos monoclonaJes contra moleculas no purifica-
das, que unicamente constituyen un componente minoritario de una mezcla
compleja. En un antisuero ordinaria oblenido contra una mezcla, el ntimero de
molecuJas de anticuerpo que reconocen los componentes minoritarios de la
mezcla puede ser demasiado pequeno para lIegar a ser utilizable. Perc si los linfo-
citos B que producen lodos estos anticuerpos se hallan en hibridomas y se se-
lecciona un cion hibrid6mico a partir de esta gran mezcla de clones, eSle cion de-
terminado se puede propagar indefinidamente con 10 que se producini el anti-
cuerpo deseado en grandes cantidades. Por 10 tanto, en principio se puede ge-
nerar un anticuerpo monoclonal contra cualquier prote(na de una mezcla bio-
l6gica; una vez se ha conseguido el anticuerpo, se puede utilizar como sonda

200 Cap{tuJo 4 : C6mo se estudian las c8u1as

7
espedfica tamo para averiguar y 10caJizar la protefna que induce su formad6n
como para purificar esta protefna y estudiar su estructura y su fund6n. Dado que
unicamente se han aislado el 5% de las 10 000 protefnas que tiene aproximada-
mente una c~lula de mamffero, muchos de los anticuerpos monoclonales genera-
dos cOntra mezclas impuras de protefnas identifican nuevas protefnas en extrac-
{OS celuJares fracdonados. Con la utilizad6n de los anticuerpos monodonales y
la tecnologfa del donnje g~nico (v~ase mas adelante) no va a ser diffdlla identifi-
caci6n y caraclerizaci6n de nuevas protefnas y de nuevos genes; el problema sera
detenninar su funci6n, ya menudo el sistema m<1s poleme de hacerlo es utilizan-
do la tecnologfa del DNA recombinante, como se discule en el Capftulo 7.

Resumen
Adualmente u dispone de Will gran mlmero de tk'Jicas que pem.ltetl det.ectar, "Ul-
dlry seglllr casl C1UJlqlller molkuln de intem en el illterior de 1I1U1 d""a. C'UJIq.der
moliCldn plleck ur "mnrcnda" mediante In iJu:orporaci61l de UIlO 0 "ufs dtomas m-
dlm:tivos. Los mkleos de estos dtomos se desintegran, emitiendo UIUI radlncl6,. ql4(!
pennlte tktectar In molbla marcadn y rrtuQr sus movlmielltos y Sll metabolismo
en In dlula. Entre el elevado mfmero de aplicacio1U!s de los radiois6topm a In bio-
logia ulular, u puede destncnr el a,uSlisis de las mas metnb6llcas mediante mlto-
dos de Plltso Y ctI.UI Y La det.emllnnc16n de un elevado ndmero de molkulas "ullvl-
dualmente mediante La autorradiograjUL
Los coloralltesjluorescetltes tambiin se puedell IIti1lzar para medlr las conestl-
traclones de defem,illados iOlles en cllulas imlividllnles. ;ncluso ell zonas colll:retas
de una dlllla. Los micrcH!lectrodos de vidrio, que empezaron a ur lmpresclndibles
en el estlldlo de potenclales de membralUl y de corr/elltes 16nlcas a travh de In
membrtma plasmdtica. nct'UJlmente proporc;otlnll una altenratlva para medlr las
conuntraclOlles illtraulJlLares de lones detem.itlados. Tamblill pUedeli Jltlliulrse
como mlcroplpetas para inyectar a las cllulas molkulas para IllS qlle las membra-
nas son Impem.eables. oomo protelnas marcadns ootljllloresuinn yatltiClIerpos. Se
puede segllir el comportamiento dituSmloo y los mOlllmientos de mucl.os tipos de
malkllias ell ",ra el'uln ,'iva cotlstruyendo "Il precllrsor lnaet/I/O "empatluetlldo",
el clUJI puede ser itJtrodueido etl ",Ia dlJI1n y act/llaliO ell IIna regi6" dererminada
deln d/llia mediante IlIla reaccl6n estlmulada por La luz.
Los ant/cuerpos tambiln son lIerramlentas uersdtiles y senslbles para detectar
y localiulr molk,das blol6gicas detenllinndns. Los uertebrados producen mlJiones
de molkutas de alltlcuerpo distitltas, cadn Imn de las cludes tielle w, Illgar de
unM" qlle recolloce IUIa regi6" determillmla de Imn macromoMcllla. La tlentca (wi
IIlbridoma permite la obtellci6n, en cnntidades casi illmitathu, de anrJcl~e'1)os mo-
Iloclollales, CO'I /Ilia especiftctllad ",liea. Se puedell obteller tUltlcuerpos mouoelo-
tudes COlltra, ell principlo, cualqllier macromoikuln cel/llar; estos m.tlcllerpos mo-
Iloclonales plleden ser utilizados para Jocalizar y pllriftcar la moilclIlLI que el
a"ticJlerpo recolloce y, por 10 menos en algullos casos, mrallzar suJII/.cid".

Bibliograffa
General
Canlor. C.R.; Schimmel, P.R. Biophysical Chemistry, 3 vols.
New York: W.H. Freeman, 1980. (Una extensa exposi-
cion de los principios fisicos en que se basan muchas
tlknicas bioqufmicas y bioffsicas.)
Freifelder, D.M. Physical Biochemistry. 2nd ed. New York:
W.H. Freeman, 1982.
Van Holde. K.E. Physical Biochemistry. Englewood Cliffs,
N): Prentice-Hall, 1985.
Cltas
I. Bradbury, S. An Incroduction to the Optical Microscope,
2nd ed. Oxford, UK: Oxford University Press, 1989.
Fawcen. D.W. A Textbook of Histology, 11th ed. Phila-
delphia: Saunders, 1986.
Lacey. A.J., ed. light Microscopy in Biology. A Practical
Approach. Oxford, UK: IRL Press, 1989.
2. Hecht, E. Optics. 2nd ed. Reading. MA: Addison-Wesley,
1987.
Slayter. E.M.; Slayter, H.S. light and Electron Micros-
copy. Cambridge, UK; Cambridge University Press,
1992.

Blbliograffa 201
 Spencer. M. Fundamentals of Light Microscopy. Cam
bridge. UK: Cambridge.lJniversity Press, 1982.
3. Boon, M.E.: Drijver. '.S. Routine Cytological Staining
Methods. London: Macmillan, 1986.
Hayat, M.A. Cytochemical Methods. New York:: WLley-
Uss.1989.
4. Haugland. R.P. Handbook of Fluorescent Probes and
Research Chemicals. 5th ed. Eugene, OR: Molecular
Probes. Inc., 1992.
Ploem, 1.5.; Tanke, H.J. Introduction to Fluorescence
Microscopy. Boyal Microscopical Society Handbook
No. 10. Oxford. UK: Oxford Scientific Publications.
1987.
Wang, Y.-L, Taylor, D.L, eds. Fluorescence Microscopy
of Living Cells in Culture, Parts A & B (Methods in
Cell Biology. Vols. 29 and 30), San Diego, CA: Acade-
mic Press, 1989. (Una completa gura que abarca mu-
cho mlis que la microscopia de Ouorescencia basica.)
Willingham. M,C.; Pastan, I.H. An Atlas oflmmunoOuo-
rescence in Cultured Cells. Orlando, FL Academic
Press, 1985.
5. lernike, F, How 1 discovered phase contrast. SCience
121:345349,1955.
6. Allen, R.D. New observations on cell architecture
and dynamics by video-enhanced contrast optical
microscopy. AlJllU. Rev. Biophys. Biopllys. Cliem.
14:265-290,1965.
Herman, B.; Jacobson, K., eds. Optical Microscopy for
Biology. New York: Wiley-Liss. 1990.
Inoue. S. Video Microscopy. New York: Plenum Press,
1986.
Shotton. 0 .. ed. Electronic Light Microscopy: Techni-
ques in Modem Biomedical Microscopy. New York.:
Wiley-Uss.I993.
7. Minsky. M. Memoir on inventing the confocal scanning
microscope. Saming 10:128-138,1988,
Pawley, J.B" ed. Handbook of Confocal Microscopy, 2nd
ed. New York: Plenum Press, 1990.
White, I.G.: Amos, W.B.; Fordham, M. An evaluation of
confocal versus conventional imaging of biological
structures by fluorescence light microscopy. j. Cell
BioI. 105:4148, 1987.
8, Pease, D,c.; Porter, K.R. Electron microscopy and ultra-
microtomy.}. Cell Bioi. 91:287s292s, 1981.
9. Hayat, M.A. Principles and Techniques of Electron Mi-
croscopy. 3rd ed. Boca Raton, FL: CRC Press, 1989.
Wischnitzer, S. Introduction to Electron Microscopy.
Oxford: Pergamon, 1981.
10. Everhart. T.W.: Hayes. T.L The scanning electron mi-
croscope. SCi. Am. 226(1):54-69. 19n.
Hayat. MAlntroduction to Biological Scanning Electron
Microscopy. Baltimore: University Park Press, 1978.
Kessel, R.G.: Kardon, R.H. Tissues and Organs. New
York: W.H. Freeman, 1979. {Un alias de tejidos de
vertebrados vistas mediante microscopia electr6nica
de barrido.l
Pawley. I.B.: Walther, P.; Shih, 5.-1.; Malecki, M. Early reo
suits using high-resolution, low-voltage. low-lempe
ratureSEM.j. Microsc. 161:327-335, 1991.
II. Sommerville, I.; Scheer, U., eds. Electron Microscopy in
Molecular Biology: A Practical Approach. Oxford: IRL
Press,1987.
202 CapftuJo 4 : Cdmo se estudlan las luJas
12. Heuser, ,. Quickfreeze, deep-etch preparation of sam-
ples for 3-D electron microscopy. Trends Biocllem.
Sci, 6:64-68,1981.
Pinto da Silva, P.: Branton, D. Membrane spliting in fre-
eze,etching.}. Cell Bioi, 45:598605. 1970.
13. Chiu, W. Electron microscopyorrrozen. hydrated biolo-
gical specimens. An"ll. Rev. Biopllys. Biopllys. Cllern.
15:237-257,1986.
Darst, SA: Edwards. A.M.: Kubalek:, E.\.; Kornberg.
R.D. Three-dimensional structure of yeast RNA poly-
merase II al 16A resolution. Cell66:121-128, 1991.
Unwin, N. Nicotinic acetylcholine receptor at 9 A reso-
lution. /. Mol. BioI. 229: 1101-1124, 1993.
Unwin, P.N.T.: Henderson, R. Molecular structure de-
termination by electron microscopy of unstained
crystal specimens. /. Mol. Bioi. 94:425-440, 1975.
14. Freshney, R.1. Culture of Animal Cells: A Manual of Ba
sic Techniques. New York: Liss, 1987.
15. Herzenberg. LA.: Sweet, R.G.: Herzenberg. LA. Fluores-
cence-activated cell sorting. SCi. Am. 234(3):108-116,
1976.
Kamarck:, M,E. F1uorescenceactivated cell sorting of
hybrid and transfected cells. Methods l1zymol.
151:150-165,1987.
Nolan, G.P.: Hering, S.: Nicolas, I.-F.: Herzenberg, L.A.
Fluorescence-activated cell analysis and sorting of
viable mammalian cells based on beta-D-galactosi
dase activity after transduction of E. coli lac Z. Proc,
Narl. Acad. Sci. USA 85:26032607, 1988.
16. Harrison, R.G. The outgrowth of the nerve fiber as a
mode of protoplasmic movement. /. Exp. Zoot, 9:787-
848,1910.
17. Ham, R.G. Clonal growth of mammalian cells in a che-
mically defined, synthetic medium. Proc, Natl. Acad.
Sci. USA 53:288-293, 1965.
l.evi-Monlalcini, R. The nelVe growth factor thirty-five
years later. Sciellce237:1 154-1 162, 1987.
1.00, D.T.: Fuquay, 1.1.; Rawson, C.L.; Barnes, D.W. Exten-
ded culture of mouse embryo cells without senescen-
ce: inhibition by serum. SciCllce236:200-202, 1987.
Sato, G.H.: Pardee. A.B.: Sirbasku, D.A., eds. Growth of
Cells in Hormonally Defined Media. Cold Spring
Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory. 1982.
18. Hay. R., et al., eds. American Type Culture Collection Ca-
talogue of Cell Unes and Hybridomas. 6th ed. Rockvi-
lle. MD: American Type Culture Collection, 1988.
19. Ruddle. F.H.; Creagan, R.P, Parasexual approaches to the
genetics of man. Amlll. Rev. Genet. 9:407-486, 1975,
20. Colowick:, S.P.: Kaplan, N.O., cds. Methods in Enzymol-
ogy. Vols, 1-. . . . San Diego. CA: Academic Press.
1955-1994. (Una serie de varios vohimenes'que con-
tiene artfculos basicos y especfficos sobre muchos
procedimientos.)
Cooper, T.G. The Tools of Biochemistry. New York: Wi-
ley, 1977.
Deulscher, M.P., ed. Guide to Protein Purification
(Methods in Enzymology, Vol. 182). San Diego, CA:
Academic Press, 1990.
Scopes, R.K. Protein Purification, Principles and Practi
ce, 2nd ed. New York.: Springer-Verlag. 1987.
21. Claude. A. The coming of age of the cell. Science 189:
433-435, 1975.
\
 de Duve, C.; Beaufay, H. A short history of tissue fractio-
nation.}. Cell BioI. 91 :293s-299s, 1981.
Mese]son, M.; Stahl, F.W. The replication of DNA in Es-
cllericllia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 47:671-682,
1958. (La centrifugaci6n en gradiente de densidad se
utiliza para demostrar que 1a replicaci6n del DNA es
semiconservativa.)
Palade, G. Intracellular aspects of the process of protein
synthesis. Science 189:347-358, 1975.
Sheeler, P. Centrifugation in Biology and Medical Scien-
ce. NewVork: Wiley, 1981.
22. Morre, OJ.; 'Iowell, K.E.; Cook, G.M.W.; Evans, W.H.,
eds. Cell Free Analysis of Membrane Traffic. New
Vork: Liss, 1966.
Nierenberg, M.W.; Matthaei, I.H. The dependence of
cell-free protein synthesis in E coli on naturally oc-
curring or synthetic polyribonucleotides. Proc. Natl.
Acad. Sci USA 47:1588-1602, 1961.
Racker, E. A New look at Mechanisms in Bioenergetics.
New Vork: Academic Press, 1976. (Sistemas libres de ce-
lulas en Ia comprensi6n del metabolismo energetico.)
Zamecnik, P.C. An historical account of protein synthe-
sis, with current overtones-a personalized view. Cold
Spring Harbor Symp. Qllallt. Bioi. 34:1-16, 1969.
23. Dean, P.D.G.; Johnson, W.S.; Middle, FA Affinity Chro-
matography: A Practical Approach. Arlington, VA:.IRL
Press, 1985.
Gilbert, M.T. High Performance Liquid Chromato-
graphy. Littleton, MA: John Wright-PSG, 1987.
24. Andrews, A.T. Electrophoresis, 2nd ed. Oxford, UI(; Cla-
rendon Press, 1966.
LaemmJi, U.K. Cleavage of slructural proteins during
the assembly of the head of bacteriophage T4. Natu.re
227:680-685, 1970.
Hames, B.D.; Rickwood, D., eds. Gel Electrophoresis of
Proteins: A Practical Approach, 2nd ed. New Vorl:::
Odord University Press, 1990.
25. Celis, J.E.; Bravo, R., eds. Two-Dimensional Gel Electrop-
horesis of Proteins. New Vork: Academic Press, 1984.
O'Farrell, P.H. High-resolution two-dimensional elec-
trophoresis of proteins.}. Bioi. Cllem. 250:4007-4021,
1975.
26. Cleveland, D.W.; Fischer, S.G.; Kirschner, M.W.; La-
emmli, U.K. Peptide mapping by limited proteolysis
in sodium dodecyl sulfate and analysis by gel elec-
trophoresis. j. Bioi. Chem. 252:1102-1106, 1977.
Ingram, V.M. A specific chemical difference between
the globins of normal human and sickle-cell anemia
hemoglobin. Natllre 178:792-794, 1956.
27. Edman, P.; Begg, G. A protein sequenator. Ellr. j. Bio-
cilem.1:80-9I,I967.
Hewick, R.M.: Hunkapiller, M.W.; Hood, LE.; Dreyer,
W.I. A gas-Liquid solid phase peptide and protein se-
quenator.f. BioI. Olem. 256:7990-7997,1981.
McCloskey, JA., ed. Mass Spectrometry (Methods in
Enzymology, Vol. 193). San Diego, CA: Academic
Press, 1990.
Sanger, F. The arrangement of amino acids in proteins.
Ad,l. Protein Olem. 7:167, 1952.
Walsh, K-A.; Ericsson, LH.; Parmelee, D.C.; Titani, K.
Advances in protein sequencing. Amlu. Rev. Bio-
cllem. 50:261-264,1981.
28. Brandem, C.; Tooue, J. Introduction to Protein Structu-
re. NewVork: Garland, 1991.
Bibliograffa
Glusker, J.P.; Trueblood, K.N. Crystal Structure Analysis:
A Primer. Oxford, UK: Oxford University Press, 1985.
Kendrew, J.e. The three-dimensional structure of a pro-
tein molecule. Sci. Am. 205(6):9611 I, 1961.
Perutz, M.F. The hemoglobin molecule. Sci. Am.
211(5):64-76,1964.
29. Cooke, R.M., Cambell, 1.0. Protein structure determina-
tion by nuclear magnetic resonance. Bioessays 8:52-
56,1988.
Shulman, R.G. NMR spectroscopy of living cells. Sci.
Am. 248(1):86-93, 1963.
Wuthrich, K. Protein structure determination in solu
tion by nuclear magnetic resonance spectroscopy.
Science 243:45-50, 1989.
30. Chase, G.D.; Rabinowitz, J.L Principles of Radioisotope
Methodology, 2nd ed. Minneapolis: Burgess, 1962.
Dyson, N.A. An Introduction to Nuclear Physics with
Applications in Medicine and Biology. Chichester,
UK: Horwood, 1981.
Valow. R.S. Radioimmunoassay: a probe for the fine
structure of biologic systems. Science 200:1236-1245,
1978.
31. Calvin, M. The path of carbon in photosynthesis. Sciell-
ce 135:879889, 1962. {Descripci6n de una de las pri-
meras aplicaciones de los radiois6topos en biologfa.}
Hershey, A.D.: Chase, M. Independent functions of viral
protein and nucleic acid in growth of bacteriophage.
j. Cell. Physiol. 36:39-56, 1952.
Rogers. A.W. Techniques of Autoradiography, 3rd ed.
New Vork: Elsevier/North Holland, 1979.
Slater, R.I., ed. Radioisotopes in Biology: A Practical Ap-
proach. NewVork: Oxford University Press, 1990.
32. Ammann, D. Ion-Selective Microelectrodes: Principles,
Design and Applicalion. Berlin: Springer-Verlag,
1986.
Auerbach, A.; Sachs, F. Palch damp studies of single io-
nic channels. All/III. Rev. Biophys. Bioe"g. 13:269-302,
1984.
Neher, E. Ion channels for communicalion betweeen
and within cells. Science 256:498-502, 1992.
Sakmann, B. Elementary steps in synaptic lransmission
revealed by currents through single ion channels.
Science 256:503-512, 1992.
33. Grynkicwicz, G.: Poenie, M.; Tsien, R.V. A new genera-
tion of Ca 2 indicators with greatly improved fluores-
cence properties. f. Bioi. Cliem. 260:3440-3450, 1985.
Tsien, ltV. Fluorescent probes of cell signaling. A/IIIU.
Rev. NCllrosci. 12:227-253, 1989.
34. Celis, I.E.; Graessman. A; Loyter, A., eds. Microinjection
and Organelle Transplantation Techniques. London:
Academic Press, 1986.
Chang, D.C.: Chassy, B.M.; Saunders, 'A; Sowers, A.E.
Guide to Electroporation and Electrofusion. New
Vork: Academic Press, 1991.
Gomperts, B.D.; Fernandez, '.M. Techniques for mem-
brane permeabilization. Trends Biecllem. Sci. 10:414-
417,1985.
Ostro, MJ. Uposomes. Sci. Am. 2560}:102-111, 1987.
Ureta, T.; Radojkovic, ,. Microinjected frog oocytes: a
first-rate test tube for studies on metabolism and its
control. Bioessays 2:221-226, 1985.
35. Adams, S.R.: Tsien, R.V. Controlling cell chemistry with
caged compounds. Annu.. Rev. Physiol. 55:755-784,
1993.
203
 Gurney, A.M. PhOlolabile caged compounds. In Fluo-
rescent and Luminescent Probes for Biological Acti-
vity (W.T. Mason, ed.). London: Academic Press,
1993.
Sawin, K.E.; Theriot, JA.; Mitchison, T,f. Photoactiva-
tion of Ouorescence as a probe for eytoskeletal dyna-
mics in mitosis and cell motiliry. In Fluorescent and
Luminescent Probes for Biological Activity (W.T. Ma-
son, cd.). London: Academic Press. 1993.
Walker. J.w.; Somlyo, AV.; Goldman, Y.E.; Somlyo. A.P.;
Trentham, D.R. Kinetics of smooth and skeletal mus-
cle activation by laser pulse photolysis of caged ino-
sitoll,4's-triphosphate. Nature 327:249-252, 1987.
36. Anderton, S.H.; Thorpe. R.C. New methods of analysing
for antigens and giycoproteins in complex mixtures.
Tmmullol. Today. 1:122-127, 1980.
Coons, A.H. Histochemistry with labeled antibody. TfIt.
Rev. Cytof. 5:1-23,1956.
204 Capftulo 4: C6mo se estudlan las celulas
Harlow, E.; Lane, D. Antibodies. A Laboratory Manual.
Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Labora-
tory, 1988.
Wilson, L; Matsudaira, P., cds. Antibodies in Cell Biol-
ogy (Methods in Cell Biology, Vol. 37). New York:
Academic Press. 1993. .
37. Clncban, T. et al. Makin antibody fragments using pha-
ge display libraries. Nature352:624-628, 1991.
Kang, A.S.; Barbas, C.F.; Janda, K.D.; Benkovic, S.I.; Ler-
ner, RA. Linkage of recognition and replication func-
tions by assembling combinatorial antibody Fab li-
braries along phage surfaces. Proc. Natf. Acad. Sci.
USA 88:4363-4366, 199 I.
Milstein, C. Monoclonal antibodies. Sci. Am. 243(4):66-
74, 1980.
Yelton, D.E.; Scharff, M.D. Monoclonal antibodies: a po-
werful new tool in biology and medicine. AI/IIII. Rev.
Biochem. 50:657-680,1981.
enetica molecular
II
Fund6n de las protefnas
Mecanlsmos gen~ICOI
blislCOfJ
Tecnologfa del DNA
recombinante
EI ndcleo celular
EI control de 18 expresl6n
geruca

E1ectronmicrograffa de barrido de cromosomas

humanos en metafase.
Wor corlesfa de Terry D. Allen.)
 ~~ ~ ~e
~. ~ ~
e ~~~ ~
~
e ill ~
~

Serie de seis irnagenes de un modeJo anal6mico de un poliovirus, cuya estructura tridimensional se conace con
exactitud a partir de crislalograffa de cayos X. Carla imagen esta ampliada tres veces respecto a la anterior,
hasta que al final podemos ver una regi6n del virus a nivel de resoluci6n al6mica. En el centro de la ultima
imagen puede verse claramentc la cadena laleral del aminoacido tript6fano. (Por cartesia de James Hogle).
 undon de las proteinas
5
las protefnas como
ml1qulnas

Nacimiento, ensamblaJe y
muerte de las protefnas

protefnas constituyen la mayor parte de la masa seca de la celula y desempe-

las funciones predominantes de la mayoria de los procesos biol6gicos. Sin
bargo, para pader entender 10 que son las protefnas, primero hay que inten-
eolender c6mo es una celula. En el CapItulo 3 presentamos una introducci6n
mental de 1a estruc(Ura de las protefnas, junto con una visi6n general de las
cromoleculas biol6gicas, discutiendo su qUlmica y su conformaci6n. Sin em-
o. las protefnas no son s610 rfgidos grumos de material de superficie qufmi-
ente reactiva. Disponen de zonas m6viles estructuradas de manera muy
edsa, cuyas actiones mecanicas estan acopladas con cveotos qufmicos. Preci-
cote es este acoplamiento entre qUlmica y movimiento 10 que provee a las
teinas de capacidades extraordinarias que estan en la base de todos los pro
os dinamicos de las celulas vivas. Sin comprender c6mo acnJan las protefnas
rna rnoleculas can zonas rn6viles resulta dificil apreciar el resto de la biologfa
lular.
En este capitulo, que inicia las secciones mas avanzadas del Iibro, utiliza-
s ejemplos seleccionados para mostrar de que manera funcionan las protef-
, no s610 como catalizadores sino tambien como sofisticados transdUClOres
movimientos, integradores de sefiales, y componentes de maquinas protei-
compuestas par muchas subunidades. La discusi6n se basa en avances que
revclado las estructuras tridimensionales detalladas de muchas prot.efnas;
alta los principios generales e intenta sen tar las bases de descripciones de
tructuras cclulares especfficas y de procesos que se detallan en capftulos pos-
riores.
En la ultima pane del caphulo describimos la vida y la muerte de las protei
F -desde su plegamiento, guiado por chaperones moleculares, hasta su des-
rucci6n por proteolisis dirigida- poniendo enfasis en la constmcci6n molecular
la mayona de las protefnas y de los complejos proteicos.

s protefnas como maquinas

~ pezaremos considerando de que manera se puede alterar la conformaci6n de

a protefna dehido a la uni6n de olra molecula denominada Ugando. Demos-
emos las profundas implicaciones de este fen6meno aparentemente simple
cribiendo algunas de las muchas maneras por las que las celulas utilizan [as
teraciones de las proteinas inducidas por ligandos.

207
 0- O 0- 0- 0-
I I I I I
-O-P-O-P-O-P-O-CH 0 - r - 0 - P -O-CH
8 U I ' II II '
000 0- o 0
ATP I + ADP
+ o=p-o-
I
o
I
CH,

HO

.,~ glucou 5-fosfato

La uni6n de un ligando puede cambiar la conformaci6n F ~ra 5-1 La reacci6n catalizada por
de una protefna l la hexoquinasa. En el primer paso de
la degradaci6n de la g1ucosa se
El primer ejcmplo lrata de la enzima hexoquinasa, la cual csla presente en casi transfiere un grupe> fosfalo desde el
Iaclas las relulas. Esta enzima cataliza una etapa temprana del metaboUsmo de ATP hasta la g1ucosa, fonnando
los azucares -Ia transferencia del fosfato terminal de una molccula de ATP a la g1ucosa 6-fosfato. Emonces la g1ucosa
glucosa, formando g1ucosa 6-fosfato (como se discule en el Capitulo 2). La hcxo- 6-fosfalo es procesada mediante series
quinasa se une fuertemcnte a g1ucosa, 10 cual incrementa notablemente la afini- de Olras enzimas que calalizan la
dad de la enzima por el ATP, que se une a un lugar vecino de la protelna. Enton- cadena de reacciones conocidas como
g1ucolisis. La g1ucolisis lransfonna la
ces, algunas cadenas latcrales de determinados aminoacidos de la protefna
g1ucosa en piruvato y produce una
catalizan la transferencia del fosfato, y los dos prodUCIOS -Ia glucosa 6-fosfato y
ganancia neta de moleculas de ATP
el ADP- se liberan, acabando el cicio de reacci6n (Figura 5-1). para la celula (vease Figura 2-21).
La hexoquinasa de levadura esta compuesta por dos dominios. Los lugares
de uni6n para la g1ucosa y para el ATP sc haHan en una hendidura situada enlle
estos dominios, y cuando la glucosa se une, los dominios sc desplazan uno hacia
el o(ro cerrando la hendidura (Figura 5-2).
Estc Lipo de desplazamienro de dominios en respuesta a la uni6n de un li-
gando es un proceso habitual y facil de explicar. En el caso de la hcxoquinasa, en
la cara interna de cada dominio exislen lugares de uni6n para diferenles zonas
de la molccula de glucosa. EI cambio desfavorable de la energfa libre de la protcf-
na que ocurre cuando los dominios se desplazan uno respccto al otro cerrando
la hcndidura queda mas que compensado por la energfa libre Iiberada cuando la
hendidura se cierra sobre la glucosa; en olras palabras, los enlaces no covalentes
que forma la glucosa con la protcfna ~unen" los dos dominios, uno contra otro,
haciendo que la protcfna salte de una conformad6n abierta a Olra ccrrada.

dominio 1 mea 5-2 E1 camblo de

conformaci6n de la hexoqulnasa
causado par la unl6n de g1ucosa. las
Uneas trazan el Clnso del esqueleto
hidrocarbonado de la hexoquinasa.
Estas eslruCluras fueron delenninadas
por analisis de difracci6n de rayos X de
criSlales de la prOlelna, sin y con
g1ucosa. La uni6n de g1ucosa cambia Ia
proleina desde una confonnaci6n
abierta a una confonnaci6n t:errada.

dominio 2

208 CapftuJo 5; Funci6n de las proteinas

 Como diSCUlimos a continuacion, las proteinas cuyos cambios de confor- Figura 5-5 Uni6n cooperatlva
maci6n acoplan dos lugares de uni6n separados de su molecula, han sido selec- causada por el acopJamiento
cionadas durante la evoluci6n ya que penniten a la celula relacionar la presencia conformacional enlre dos lugares de
de una molecula a la presencia 0 ausencia de cualquicr otra molecula. Este tipo unl6n distantes. En cste ejemplo tanto
de acoplamiento conformacional se denomina a/osteria. Una protefna cuya acti- la glucosa como la molecula X se unen
mejor a la confom13ci6n cerrada de
vidad esla regulada de esla fonna se denomina proceina a/osu!rica y la uansici6n
una proteina con dos dominios. Tanto
que surre se denomina transici6n alosterlca . la glucosa como la subslancia X
dirigen [a proleina hacia su
Dos Iigandos cuyos lugares de uni6n estan acoplados pueden confonnaci6n cerrada, por 10 que cada
afectar recfprocamente la uni6n del otro2: ligando colabora con el otro p.Ha que
se una a la proleina. Asi pues, sc dice
Cuando dos Iigandos prefieren unirse a la misma conformaci6n de una prote(na que la glucosa y la molecula X se unen
aloslcrica, consideraciones lennodimimicas basicas aseguran que cada Iigando de fonna cooperaliva a la proteina.
incrementa la afinidad de la protema por el Olro Iigando. ESle concepto se deno- L1 figura es muy similar a las Figuras
mina conex16n (linkage). Esta bien i1ustrado por el ejemplo considcrado en la Fi- 5-3 y 5-4; la (mica diferencia es que
gura 5-5, en el que la uni6n de la glucosa a la hexoquinasa incrementa la afinidad mientras que ellugar de uni6n para el
de la enzima por la molt~cula X, y viceversa. La relad6n de conexi6n es cuantitali- ATP se localiza en la hendidura de la
vamcnte rcciproca de forma, por ejemplo, que si la glucosa dene un gran efeclo hexoquinasa. ellugar de uni6n para la
molCcula X se localiza fuera de esta
sabre la union de X, X tambien tendra un gran efeclo sobre la uni6n de glucosa.
hendidura.
Si dos Iigandos se unen a conformaciones diferelltes de una protelna aloste-
rica, 1<1 conexi6n sera negativa. Por regia general un Iignndo estabiliza la confor-
maci6n particular de la proteina a la que se une; si esta conformacion es dife-
rente de la favorecida par el otTO Iigando, la union del primer ligando dillcultara
la uni6n del segundo Ugando. As!, si el cambio de conformacion inducido por la
glucosa reduce la afinidad de In proteina por la mo[ecula X, In uni6n de X dismi-
nuira [n afinidnd de la proteina por la glucosa (Figura 5-6).
Las relaciones mostradas esquem<iticamente en las Figuras 5-5 y 5-6 estan en
la base de In biologia celular. Parecen tan obvias que hoy las damos por sentadas.
Pero su descubrimiento, en 1950, seguido por una descripd6n general de la alos-
terfa en 1960, result6 revolucionario. En estos ejemplos X se une a un lugar que cs
diferenle del lugar donde ocurre la cataIisis, par 10 que no liene por quc haber
ninguna relati6n con la glucosa 0 con cualquier olro ligando que se una allugar
aClivo. En el caso de enzimas que esten regu1adas de esta manera, la molecula X
puede activar (Figura 5-5) 0 inactivar (Figura 5-6) la enzima. Por Illecanismos de
esle tipo las proteinas aloslericas pueden actuar como inlerruplores generales
que permiten que una molecula de una celula afecte el destino de otra molecula.

Las transiciones alostericas colaboran en la regulaci6n

del metabolismo3
Como describimos en el Capitulo 2, a menudo el produclo final de una via mela-
b6lica inhibe la enzima que inicia dicha via. Debido a csta retroa/imelltaciolllle-

210 Capftulo 5: Funcl6n de las protefnas

 Figura 5-6 Uni6n competltlva generada por el acoplamicnto
conformacional entre dos lugares de uni6n distantes entre sf. EI diseiio de
esta figura es el mismo que el descrito para la Figura 5-5, pero aquf la
molecula Xprefiere unirse a la conformaci6n abierta, mientras la glucosa
prefiere la cerrada, Ahara la glucosa y la molecula Xdirigen In proteina hacia
conformaciones opuestas (cerrada y abierta respectivamente). por 10 que la
presencia de uno de los ligandos interfiere con la uni6n del otro. Figura 5-7 Cinetica de actividad
enzimatica respccto a la
concentraci6n de Ugando inhibldor,
sobre el flujo de la via, la concentrad6n intracelular del producto final se para enzimas a10stericas fonnadas
por diferente mimero de
~::;~e aproximadamente constame a pesar de los grandes cambios de las
t . nes quimicas de la celula. En este tipo de reglilaci611 por retroinhibici6n subunidades. En el caso de una
enzima can una sola subunidad (linea
'dones alostericas son esenciales. Por ejemplo, las enzimas que actlian
roja).la disminuci6n desde e190%
.., -~od'pio de una via generalmente pueden existir en dos conformaciones. Una hasta el 10% de actividad (indicada par
es aCliva y une al substrato en su lugar activo catalizando su conversi6n pllnlOS en la curva) requiere un
-a substanda de la via. La otra es una conformaci6n inactiva que une al incremento en la concentracion de
",,,,,,-,aD final de la via en un lugar diferente, ellugar regulador. Cuando se acu- inhibidor de unas 100 veces. La
e:J. producto final se une a la enzima transformandola en su conformad6n actividad enzimatica se calcula a partir
I"'''''''''' n~ase Figura 2-38). de la relacion de e(lui!ibrio simple
fua enzima que participa en una via metab6lica tambien puede ser aetivada K=[I] (PI/liP]. donde P es la protelna
rransici6n alosterica inducida por la uni6n de un ligando. En este caso el activa, I es el inhibidor e IP es la

I
,~~:~es una molecula que se acumula cuando la ceJula es defidente en un proteina inactiva unida al inhibidor.
no de la via; como elligando se une preferentemente a la forma activa de ~sta es la curva que se aplicarfa a

. a, dirige la enzima hacia su conformati6n activa. Muchas enzimas que cualquicr union simple emre dos
molcculas Ay B (vcase Figura 3-9) .
.cpan en procesos catab6licos que producen ATP propordonan ejemplos de
Comrariameme una enzima alosterica
.:roalimentaci6n positiva; estas enzimas son estimuladas por un incremen- formada por varias subunidades puede
concentraci6n de ADP, que (iene lugar cuando los niveles de ATP dismi- responder a variaciones de la
Para estas enzimas el ADP tiene un papel puramente regulador, en con- concentracion de inhibidor de una
ron el papel de substrata que juega el ATP en la funci6n de la hexoquinasa. manera semejante a un interruptor: la
respuesta escalonada se debe a que el
ligando se une a la protefna de una
forma cooperativa. como se explica en
la Figura 5-8. La /fllea verde represema
el resullado tetirico esperado en el
caso de union cooperativa de dos
moleculas de inhibidor a una enzima
15ubllnidad alosterica con 2 subunidades, y la lillea'
2 slIbllnidades azlll el resultado te6rico esperado de

~~/4 slIb"nidadas
una enrima con 4 subunidades. Como
indican los pumos de las CUlvas. las
enzimas mas complejas caen del 90%
allO% de actividad can incrementos
menores de la concentraci6n de
5 inhibidor que la enzima compuesta
concentraci6n de inhibidor_ por una sola subunidad.

",~","'nascomo maquinas 211


;

'Hguru 5-8 Una tnmsid6n cooperaUva aJosterlca. Diagrama esquematico enzlme ective
que ilustra de que forma la conformad6n de una subunidad pucde afcctar la

~
de sus ve<:inas, en una proteifla simetrica compuesta por dos subunidades
alostcricas identicas. La union de una sola molecula de un ligando Inhibidor
(amarillo) a una subunidad de la enzima se produce con dificultad debido a
que modifica la conformaci6n de esta subunidad, y por 10 tanto destruye la
simetrfa de la enzima. Sin embargo, cuando se ha completado este cambio
conformacional, la energia obtenida aI recuperar la estructura simetrica de la
protefna hace que la segunda conformadon una elligando mucha mAs
fdcilmente, sufriendo el mismo cambio conformacional que la otra
subunidad. La union de la pomera molecula de ligando incrementa la
afinidad de la OIra subunidad por la misma molecula de ligando. por 10 que la
respucsta de la enzima a variaciones de la concentraci6n delligando es
mucha mas marcada que la de una enzima monomerica (~ase la Figura 5-7).

A menudo las protefnas fonnan agregados simetricos

que sufren transiciones alostericas cooperativas-4
Una enz.ima que estl~ regulada por retroalimenta~i6n negativa y que conste de
una sola subunidad con un unico lugar regulador, puede disminuir desde el9O%
hasta el 10% de actividad en respuesta a un incremento de unas 100 veces de la
concentraci6n delligando inhibidor (Figura 5-7.U"ea raja). Aparentemente, las
respuesl'as de este tipo no son suficientemente marcadas para una regulaci6n
celular 6ptima, y la mayona de enzimas que sc acuvan 0 inhiben por la uni6n de
un ligando consisien en agregados simetricos de subunidades identicas. Me-
djante esta disposici6n, la uni6n de una molecula de ligando al lugar de uni6n
de una de las subunidades puede provocar una alteraci6n alostcrica en esta sub-
unidad que puede ser transmitida a la otra subunidad vecina, favoreciendo asi
que esta tambien una otra molecula de ligando. Como resultado de esta transi-
ci6n alosterica cooperariva, una variaci6n relativamenle pequeiia de la coneen-
traci6n delligando en la celula puede hacer pasar todo el agregado de una con-
formaci6n casi complctamente activa a otra casi completamentc inactiva, a vice-
versa (Figura 5-7, ff"ea azul).
Los principios que permiten que se produzca una transici6n cooperativa del
~todo 0 nada~ son mas facHes de visualizar en el caso de una enzima formada
por un dimero simCtrico. En el ejemplo mostrado en la Figura 5-8, la primera
molccula delligando inhibidor se une con una gran dificultad ya que Sll uni6n
destruye una interacci6n favorable entre las dos molcculas idenlicas del dimero.
Sin embargo, ahora se une mucho mas facilmente la segunda molecula de Iigan-
do ya que su uni6n recupera los contactos mon6mcro-mon6mero del dfmero si-
metrico (y tam bien inaclivando completamcnte la enzima). Puede obtenerse
una respuesta incluso mas marcada a la uni6n de un ligando mediante agrega-
dos mayo res, como en el caso de la enzima formada par 12 cadcnas polipeptfdi-
cas que discutiremos a continuaci6n.

La transici6n alosterica de la aspartato transcarbamilasa

se conoce a nivel at6micos
Una de las enzimas utilizadas en los primeros estudios de retroalimcntaci6n ne-
gativa es la aspartato transcarbamilasa de E. coli. Cataliza la importante reacci6n
carbamilfosfato + aspartato -+ N-carbamilaspartato, que inicia la sintesis del
anillo pirimidinico de los nucle6tidos C, U YT. Uno de los productos finales de
esta vfa, el chosin trifosfato (CfP), se une a la enzima inactivandola cuando las
concentraciones de CfP son elevadas.
La aspartato transcarbamilasa es un gran complejo formado por seis sub-
unidades reguladoras y seis subunidades cataliticas. Las subunidades cataliticas
estan dispuestas en forma de dos trimcros. cada uno de elias dispuesto como un
triAngulo equilatero. Ambos trimeros se mantiencn uno contra otro a traves de

212 CapUulo 5: Fund6n de las proteinas

 l'Igura 5-9 Translcl6n entre los
ENZJMA INACT1VA: ESTAOO T
estados R yT en la enzima aspartato
tnUlscarbamilasa. La enzima esta
subunidadel
compuesta por un complejo de seis
reguladoras. / X /....~ subunidades catalfticas y seis
subunidades reguladoras. La
eslructura de las fonnas inaetivas
(estado n y de las foooas aetiyas
{esfado mse han determinado por
cristalograffa de rayos X. La cnzima
se inhibc cuando aumenta la
concentraci6n deCfP. Cada una de
las subunidadcs reguladoras puede
unir una mo1ecula de CTP, cl cual es
uno de los productos finales de la via.
Mediante esta regulaci6n por
retroalimcntaci6n ncgativa se impidc
1 que la via produzca m:1s cantidad de
CTP de la que nccesita la c~lula.
(Basado en K.L Krause. K. W. Volz Y
W.N. lipscomb. Proc. Natf. Acad. Sci.
USA82:1643-1647.1985).

'om
ENZIMAACTlVA: ESTAOO R

UTa 510 Parte dellnterruptor

sl(no de la subunldad catalftlca de la
aspartato transcarbamilasa.
Variaciones en las interacciones entre
enlaces de hidr6geno indicadas son
parcialmente responsables del -saito
que sufre ellugar activo de esta
eozima desde la conformaci6n activa
(amarilla) a la inactiva. Los enlaces
de hidrogeno se indican como finas
Ifneas rojas. Los aminoacidos que
participan en las interacciones entre
las dos subunidades se indican en
rojo mienlras que los que fonnan eI
lugar activo de la enzima se muestran
en azul. La parte superior de la figura
mueslra ellugar catalftico en el
interior de la enzima; la parte inferior
muestra la superficic externa de la
cnzima. (Adaptado de E.R. Kantrowitz
yW.N. lipscomb, Trends Biochem. Sci.
15:53-59.1990,)

estado T tinactivol
estado R (activol

213
las subunidades reguladoras, que hacen de puente entre elias. La molccula com
pleta puede sufrir transiciones aloslericas del ~todo 0 nada" entre dos conforma
ciones, los estados T ("tenso") y R ("relajado") (Figura 5-9).
La uni6n de los subslratos (carbamilfosfato y aspartato) a los trimeros cata
Hticos empuja a la aspartato transcarbamilasa a su estado R, cataliticamente ac
tivo, del que entonees se disocian las moleculas de CIl', reguladoras. Contraria-
mente, la uni6n de CfP a los dfmeros reguladores empuja la enzima a su estado
T, cataliticamente inactivo, del cual se disocian los subslratos. Este "tira y anoja"
entre el Cfr y los subslratos es identico, en principio, al descrito previamente en
la Figura 5-6 para el caso de una protefna alostcrica mas sencilla. Sin embargo,
aqui el tira y anoja ocurre en una molecula simctrica con muchos lugares de
uni6n, por 10 que el efecto es una lransici6n alosterica cooperativa que puede
aClivar la enzima rapidamente cuando se acumulan los suhslratos (transfor-
mandala en su eSlado H) 0 inactivarla repentinamente cuando se acumula err
(transformandola en su estado n.
Una combinaei6n de bioqufmica y de cristalograffa de rayos X ha rcvclado
una gran cantidad de fascinantes detalles de esta transici6n alosterica. Cada sub-
unidad reguladora tiene dos dominies, y la uni6n de erp haec que ambos domi-
nios se desplacen une respecto al etre, de forma que actuan como un clevador
que hace rotar los Ir(meres catalfticos acercandolos entre sf, en el estado T (vea-
se Figura 5-9). Cuando esto ocurre se forman enlaces de hidr6geno entre las su-
bunidades catalfticas opuestas que ensanchan la hendidura que forma el lugar
activo en cada subunidad cataUtica, destruycndo asi los lugares de uni6n para el
substrato (Figura 510). Anadiendo grandes cantidades de substrato se obtiene
el efccto contrario, favoreciendo la fonnaci6n del estado R mediante la uni6n de
molecuJas de substrato en la hendidura de cada subunidad catalftica y oponien-
dose asi aI cambio conformacional descrito. Las conformaciones intennedias
entre los estados R y T son inestables, de fonna que la enzima fundamentalmen-
te salta entre las fonnas R y T, produciendose una mezcla de ambas farmas. la
composici6n de la eual varia en funci6n de las eoncentraciones relativas de erp
y de substratos.

La fosforilaci6n de proteinas es un mecanismo

habitual de dirigir transiciones alostericas
en las celulas eucariotas6
En una bacteria como E. coli la actividad de las protefnas esta regulada funda
mentalmente por una miriada de pequefias moleculas de la celula, que se unen
espedficamente a dcterminadas proteinas causando transidones alostericas
que contrelan la actividad de estas protefnas. Muchas de las protefnas reguladas
de esta manera son enzimas que catalizan reacciones melab6!icas; otras trans-
ducen sefiales 0 activan 0 inactivan genes (como ejemplo, vease la Figura 927).
Sin embargo, algunas protefnas bacterianas estan controladas de forma diferen-
Ie -mediante la uni6n covalente de un grupo fosfato a una cadena lateral de un
aminoaddo. Cada grupo fosfato tiene dos cargas negativas, por 10 cual su uni6n
a una protefna puede generar un cambio eslruclural, por ejemplo atrayendo en-
tre sf ados grupos de aminoacidos cargados positivamente (Figura 5-11). A su
vez, un cambio de este tipo que ocurra en un lugar de la proteina puede alterar
la confonnad6n de otra zona de la protema -por ejemplo controlando a1osteri-
camente la actividad de un lugar de uni6n aiejado.
La fosforilaci6n reversible de las protefnas es la estrategia mas utilizada para
controlar la actividad en las celulas eucariotas. Se cree que mas del 10% de las
to 000 protefnas de una celula tipica de mamffero se fosfarilan. EI fosfato se
transfiere desde una molecula de ATP mediante una prorefna qU;lIasa y es elimi
nado mediante una protefnQ fosfatasa. Las celulas eucariotas contiencn una
gran variedild de estas enzimas, muchas de las cuales juegan un papel central en
la sefializaci6n inlracelular (como se discute en al Capftulo IS).

214 Capitulo 5: Funcl6n de las protefnas

 II ura 5-11 lnnuencla de un gropo
fosfalo sabre una proteina. EI grupo
(os(ato. cargado negalhoamente, que se
muestm aquiesta unido
covalentemente a una cadena lateral
de una treonina de la proteina quinasa
dependiente de AMP cfelice que
grupo fosfato se discute en el Capitulo 15. Como se
determin6 por cristalograffa de rayos
x, el fosfato esta rodeado de diversas
t:adet\'3.s \"3.\.era\es de am\no:ic\.dos
t.a,~aui.\'" \l1:l",\'\w'3.men\e lie\a \ll\.)\l\'3.
prO\el.na. lJ\dapmdo de S.S, Tay\or el
a\., AtutU. Rev. Cell. BioI. Iblo'1.9-<\G2,
1992. ClI992 Annual Reviews Inc.)

:::~eucariota contiene muchas protefna quinasas

. ._ _ quinasas que fosferilan protefnas cn las celulas eucariotas pertene-

familia de enzimas, las cuales contienen un dominio catalftico de
~:~:~<lo: s {quinasal similar (Figura 5-12), Los diversos miembros de la fa-
n diferentes secuencias de amineacidos a ambos lades del domi-
a menudo dentro del dominio tienen diferentes secuencias for-
.-eanse las cnbezas rojas de fleclla en la Figura 5-12). Algunas de
.,.,......... adicionales de aminoacidos permiten que cada quinasa reco-
.",~.._-Xamente el conjunto de protefnas que fosforila. Olras secuencias
en que cada quinasa este regulada de fonna diferente. de manera
activada 0 inhibida en respuesta a diferentes sefiales especfficas.
...ils~>im,os mas adelante.
"'''''~",ndo las diferencias en la secuencia de aminoacidos entre los
una familia proteica puede construirse un "arbol evolutivo~, que al
a el patr6n de dupJicaci6n genica y de divergencia que ha dado lu-
(vease Figura 8-76). En la Figura 5-13 se presenta un arbol evolu-
tema quinasas. No resulta sorprendente que a menudo las quina-
funciones relacionadas se localicen en ramas vecinas del arbol:
todas las proteina quinasas que participan en procesos de Sei'laliza-
.'*'~ I05forilando cadenas laterales de tirosina se hallan agrupadas en la

:
:,:~:::::r izquierda del fuho\. las otras Quinasas mostradas fosfori.\an ca-
de serina 0 de trconina. y muchas de elias estan agrupadas. al pa-

5-12 Estroclura tridimensional de un dominlo proteina quJnasa.

dUUellira del dominio quinasa de la quinasa dependien,e de AMP cfdico.
"'Upt'rpuestas al dibujo de la es'ructura, las cabezas de flec1la rojas indican
.nares en que se han encontrado insertos de entre 5 y 100 aminoacidos en
miembros de la familia de protefna quinasas. Estos insertos estan
ocalizados en asas sobre la superficie de la enzima, donde otros ligandos
lDleractuan con la protelna. Asi. los insertos difcrencian las distintas quinasas
-:onfuiendoles la capacidad de interaccionar can otras protefnlls, EI ATP
dador de un grupo fosfato en la reacciOn) y el peptido que sera fosforilado
unen en el Jugar activo de la enzima, que llbarca desde el asa que une el
g;rupo fosfato (amarillo) hasta el asa catalitica (naranja). (Adaptado de
DR Knighton et aL Science235:407-414. 1991.0 1991theAAAS.)

!I!!!!'__ como maquinas 215

 Cdc 7

MA>
, . I,
Arbol e\loluti\lo de
algunas prote{na qulnasas. A pesar de
que las cclulas eucariotas superiores
KSSl ERKl contiencn cenlenares de tales
.ecepto.
enzimas, en fa figura s6lo se mueSlran
POGF algunas de las que se discuten en este
subf receptor Cdk2 libra.
:Ie liroslll' EGF Cd02
~ llaseS

s~
quinalUl dependiente
LcIc de AMP eielico
quinlllUl
RlIf depend'ente
de GMP eklico
Mos P'Olelllll quinllSlI C

uin8SlI de la quinllf.l dependienlll

de CII '/Calmodulinll
'
clIden, lige.a
de la miosina
~iClieCdO,C,-
de ,e<-eploru de Ie ,

recer, segun su funci6n --en la seftalizaci6n transmembrana, en la amplificaci6n

de scnales, en cl control del cicio celular, elc.
En la Figura 5-14 se i1ustra la reacci6n basica catalizada por una protefna
quinasa. Un gropo fosfato es transferido desdc una molecula de ATP hasta un
grupo hidroxilo de una cadena laleral de una serina, una trcenina 0 una tirosina
de una protefna. Esta reacci6n es esencialmente unidireccional debido a la gran
cantidad de energia libre liberada cuando se rompe el enlace fosfalo-fosfalo,
produciendose ADP (vease Figura 2-28). Sin embargo, las fosforilaciones calali-
zadas por prote(na quinasas pueden revertirse mediante un segundo gropo de
enzimas denominadas protema fosfatasas, las cuales eliminan el fosfato (vease
Figura 5-14). Hay varias familias de protefna fosfalasas, algunas de las cuales son
muy especfficas eliminando grupos fosfato unicamenle de una 0 unas cuantas
protefnas, mienlras que otras son relalivamente inespecfficas, actuando sobre
una gran diversidad de protefnas. EI nivel de fosforiJaci6n de una protefna dcter-
minada en una celula en un momento dado dcpende de las actividades relativas
de las protefna quinasas y fosfalasas que actuan sobre ella.

La estructura de la proteina quinasa Cdk muestra de qu~ forma

una proteina puede actuar como un microchips
EI centenar de protefna quinasas diferentes que tiene una celula eucariota estan
organizadas en complejas redes de etapas senalizadoras que ayudan a coordinar

Las enzlmas que

r- ~
contro\an \a foslort\ad6n de las
9ro\e{na!!. en \a!!.d]u\as.la teacci6n
PRO~iNAQUINASA~ catalizada por una ptotema quinasa

=;,'. . ~
senna.
treonine
o tirosina
_
:2)0

- =--.J
I
0-
-p-o-

o
afiade un fosfato a una cadena lateral.
de un aminoocido. mientras que la
teacci.6n cat-alb.ada pot una {os{alasa
e!imina este fosfato.

"- PRoreINAFO$fATASA

I
p,

216 Capftulo 5: Funci6n de las protefnas

 celulares, dirigen el ciclo celular y transmiten sefiales extracelula- ENTRADAS
",,..-,,,de la celula, Muchas de las sefiales implicadas han de ser integra- is"'' ha
."n.fica,das. Cada protefna quinasa (y otras protefnas sefializadoras) ac- anadido este
fosfato?
memos de procesamiento, 0 "microchips" en los procesos de
Una parte importante de la regulaci6n de estas proteinas proviene
e ejercen los fosfatos que les afJ.aden otras protefna quinasas de la
..."'....na,dos grupos fosfato activan la proteina mientras que otros grupos

ema quinasa dependiente de c1clina (Cdk, de Cyclin-Dependent

constituye un buen ejemplo de un elemento de procesamiento
Las quinasas de esta clase son los componentes centrales del siste-
-n celular de las celulas eucariotas (como se discute en el Capitulo
celula de vertebrado, una enzima Cdk se act iva e inhibe sucesiva-
Il!lD'aS la celula atraviesa las diferentes fases de su cicio de divisi6n, y
activada afecla a varios aspectos del comportamiento celular a tra- la Cdk qu;nasa s"" act iva s610 silas
fteclOS sobre las prolefnas que fosforila. Ahora conocemos la estruc- respuestas a todas las preguntas
son si
""""...nsional de las enzimas de esta importante clase de protefna quina-
-....izaremos para demostrar de que forma una protefna puede actuar SALIDA
microchip.
ema Cdk s610 es activa como protefna quinasa cuando esta unida a Figura5-15 UnaCdkcomoun
Uamada ciefina. Sin embargo, como se ilustra en la Figura 5-151a elemento integrador. En el Capitulo
17 se discute la funci6n de cstos
riclina s610 es una de las tres entradas de informaci6n necesarias
reguladores centrales sobre el cicio
Ia Cdk ademas, se ha de afiadir un fosfato a una cadena lateral de
celular.
..."".......ada treonina y se ha de eliminar otro grupo fosfato de la protefna
unido covalentemente a una cadena lateral de una determinada ti-
la Cdk integra un conjunto especifico de componentes celulares
161 lugar de act;vaci6n
NH,
~ __--I-I de la fosforilaci6n

+
+
+

-t-~
activaci6n de la
losforilaci6n
sobre lreonina

pfiptido

AT'

Estntctura tridimensional de una Cdk. (A) Diagrama de la estructura

.aa:minada por amllisis de difracci6n de rayos X. En rojo claro se muestra
p '...~ IDientras que sus tres fosfatos se representan en amarillo. (B) El proceso
~. . ,.oaD. activaci6n de la enzima ineluye la fosforilaci6n de una treonina
Clllizada en la cola de una asa flexible (rojo) que, de no eSlar fosforilada,
&:QSO del substrato proteico allugar activo del dominio quinasa. Esta activaci6n
_ _ _,..=Ia uni6n de cielina, como se ilustra cn la Figura 5-17. (A, adaptado de fosfolreonina

U"'_.ftal., Namre363:595602, 1993. 1993 Macmillan Magazines Lid.)

I!!'"' como maquinas 217

-una ciclina, una protefna quinasa y una protefna fosfatasa- y se activa unica-
mente en el caso de que cada uno de estos componentes adquiera su estado
de actividad adecuado. Por ejemplo, algunas ciclinas aumentan y disminuyen de
concentraci6n en determinadas etapas del ciclo celular, incrementando gra-
dualmente de cantidad hasta que repentinamente empiezan a ser destruidas en
un punto determinado del ciclo. La repentina destrucci6n de una ciclina (por
proteolisis dirigidal inmediatamente inhibira ulla enzima Cdk determinada, 10
cual constituye un importante sistema de controlar determinados procesos in-
tracelulares, como por ejemplo la mitosis.
La estructura tridimensional de la Cdk (Figura 5-16A) sugiere una explica-
ci6n molecular para la rcgulaci6n de esta enzima. La protefna Cdk en sf misma
es inactiva, por dos razones: su lugar de uni6n al AlP esta distorsionado yexiste
una asa de unos 20 aminoacidos que bloquea el acceso del substrato al centro
activo. La uni6n de la ciclina par un lado eUmina la distorsi6n y par otro permite
la adici6n de un grupo fosfato activador a la cola del asa flexible; se cree que este
fosfato es alrafdo por un hueco formado por aminmkidos eargados positiva-
mente, de forma que el asa se estira y baja permitiendo el acceso allugar activo
(Figura 5-J613). Sin embargo, la uni6n de la ciclina tambicn pcrmite la rapida
adici6n de un fosfato inhibidor, que interfiere t:0n ellugar del ATP, 10 cua[ colo-
ca la Cdk en un estado inactivo. Finalmente, la quinasa es aelivada cuando una
fosfatasa especflica elimina el fosfato inhibidor (Figura 5~ 17).

Las proteinas que unen e hidrolizan GTP son reguladores

celulares ubicuos!l

Hemos descrito de que forma la celula puedc utilizar la adici6n la eliminaci6n
de grupos fosfato de una protefna para controlar la aClividad de la protefna. En
los ejemplos discutidos hasta ahora eI fosfato es transferido desde una molecula
de AlP a una cadena lateral de un aminoacido de la protefna, a traves de una re-
acci6n catalizada por una prolefna quinasa espedfica. Las celulas eucariotas
tambien utilizan otra vfa para controlar [a actividad de las proteinas mediante la
adici6n 0 eliminaci6n de fosfatos. En este caso, el fosfato no se afiade directa-
mente a la protefna; por el contrario, forma parte del dinucle6tido de guanina
GTP, el cual se une fuertemente a la protefna. Cuando la proteina esta unida a
GTP, es activa. La perdida del grupo fosfato ocurre cuando el GTP unido es hi-
drolizado a GDP, a traves de una reacci6n catalizada por la propia protefna;
cuando la proleina esta unida a GDP, es inactiva.
Las protefnas que unen GTP (tambien denominadas GTPasas debido a que
tambien cataUzan la hidr6lisis de GIP) constituyen una gran familia de protef-
nas, que tienen un dominio globular de uni6n a GTP similar. Cuando el GIP
unido es hidrolizado a GOP, este dominio sufre un cambio de conformaci6n que
inactiva la proteina. En la Figura 5-1B se ilustra la estructura tridimensional de Figura 5-17 Modelo detailado de la
una pequefia proteina que une GIP, denominada Ras. activaci6n de la Cdk. Este modelo.
basado en la estructura tridimensional
de la Cdk, explica por que Cdkse
inacliva s610 si se cumplen las tres
asa que bloquea el P inhibidor
condiciones diferentes que se indican
lugar del substrato ,, ,, en la Figura 5-15. En el paso A se une
,, ,, una cidina. 10 cual conduce a la uni6n
del fosfato inhibidoren el paso B. La
fosforilaci6n activadora se produce en
el paso C, peru la enzima s610 se aeliva
despues de que se haya eliminado el

-
A B c - D
P aclivador
fosfato inhibidor, en el paso D. La
degradaci6n repentina de la cidina,
tras el paso D, hace que la enzima se
ENZIMA ENZIMA inactive, liber<induse el fosfato
INACTIVA ACTIVA
activador, con 10 que el sistema
L- LA OEGRAOACI6N OE LA CICLINA RESTAURA LA ENZIMA INACTIVA ~ vuelve al estado inactivo inicial.

218 Capftulo 5: Funci6n de las protefnas

 Figura 5-18 Estructura de la
proteina Ras, en su forma unida a
GTP. Esta protelna relativameme
pequena ilustra la estructura de un
dominio de uni6n a GTP. que se halla
presente en otras protefnas que unen
GTP (como ejemplo, vease Figura
5-20). Las regiones mostradas en roja
cambian su conformaci6n cuando la
moleCllla de GTP es hidrollzada a GOP
y fosfato inorganieo por la proteina; el
GOP queda unido a la protelna
mienlras que el fosfato inorganieo es
Iiberildo. Mas adelante se explica el
papel especial que juega la heliee
n
interruptor en las proteinas
relacionadas can Ras (vease Hgura
5-20).

........ Ras juega un papel crucial en la seflalizaci6n celular (como 5e

.apflUlo IS). Unida a GTP es acliva y estimula cascadas de fosfori-
"emas en la celula. Sin embargo, generalmeole esta en su forma
a GOP. 5e activa cuando cambia la moil~cula de GOP que tiene
de GTP, en respuesta a senales extracelulares como facto res de
se unen a receplores de la membrana plasmMica (vease Figura
teina Ras actlia como un interruptor si-no, cuya actividad esta
la presencia 0 ausencia de un fosfato extra sabre una molecula
la actividad de la proteina Cdk esta controlada par la presen-
grupos fosfato sabre determinadas cadenas laterales de amino-
guraS-17).

etnas controlan la actividad de las protefnas

GYP, determinando si se une GDP 0 GTPIO
. 13 proteina Ras y de otras protefnas que unen GTP esta controla-
~ 1""""" reguladoras que determinan cuando se une GOP y cuando
"'idad de la proteina Cdk esta controlada por ciclinas, prote(na
ema fosfatasas. Ras se inactiva por una proteina activadora de
c,. Je GTPase-Accivating Protein), la cual se une a la proteina Ras in-
-.lrolizar la molecula de GTP que Beva unida, formandp GOP -que
rtemente a ella- y fosfato inorganico (PI) -que es rapidamente
ema Ras quedara en su conformaci6n inactiva, unida a GOP,
nie con una proteina liberadora de nucle6tidos de guanina
e Nucleotide Releasing Protein), la cual se une al complejo
laccc..lo que Ras Iibere su GOP. El lugar, ahora vacio, de uni6n a nu-
pado inmediatamente por una molecula de Grp (el GTP esta
aula a concenlraciones mucho mayores que las de GOP), por 10
... Ras mediante la adid6n il1directa del fosfato eliminado por la
;Po Asi, en derto sentido los papeles de GAP y de GNRP son ana-
proteina fosfatasa y de la protefna quinasa, respecrivamente (Fi-

lliil:io.. alosterica de la protema EF-1\I muestra de que manera

..-ecuIas pueden generar grandes movimientos ll
t'S uno de los miembros de una familia de GTPasas regllladoras
-;Ia una de las cuales esta farmada par un dominio de uni6n a

- -_ _.m~f1llinas 219
 ENTRADA DE LA SENAL ENTRADA DE LA SENAL Hgura5-19 Comparaci6nentrelos
dos principales mecanismos de
seiializaci6n de las celulas eueariotas.

o
En ambos casas una prolefna de seiial
es activada mediante la adici6n de un
grupo fosfalo, e inactivada mediante la
PROTEINA
QUINASA eliminaci6n de este fosfaw. Para
'A~P~PC:P' enfatizar las simililudes de ambos
procesos, ATP y GTP se han dibujado
comoAPPP y GPPP, YADP YGDP
como APP y GPP respectivamente,
PROTEiNA GAP Como se muestra en la Figura 5-17, la
FOSFATADA adici6n de un fosfato a una protefna
~
Q
tambien puede inhibirla.
'c
" ~"-
P

SALIDA DE LA SENAL SALIDA DE LA SENAL

(AI SENALIZACION POR FOSFORILACION (8) SENALIZACION POR PROTEiNA aUE UNE GTP

GTP de unos 200 aminoacidos. En el transcurso de la evolucion, este dominio

tambien se ha unido a otros dominios proteicos, generando una gran familia de
protefnas que unen GTP, entre las que se hallan las proteinas G trimericas aso-
ciadas a receptores (discutidas en el Capitulo IS), proteinas reguladoras del tn1-
fico de vesiculas entre compartimientos intracelulares (discutidas en el Capitulo
13) y proteinas que se unen al RNA de transferencia y que son necesarias para
que se produzca la sintesis proteica en los ribosomas (discutidas en el Capitulo
6). En cada caSD, una importante actividad biologica esta controlada por un
cambio en la conformacion de la protefna, producido por la hidrolisis de GTP en
un dominio semejante a Ras.
La proteina EF-Tu proporciona un buen ejemplo de como acttian los com-
ponentes de esta familia de proteinas. EF-Tu es una molecula muy abundante
en celulas bacterianas, donde acttia como un factor de elongacion en la sfntesis
proteica, cargando en el ribosoma cada moleCll1a aminoacil-tRNA. La molecula
de tRNA forma un fntimo complejo con la forma de EF-Tu unida a GTP. En este
complejo el aminoacido unido al tRNA esta enmascarado; su desenmascara-
miento, necesario para que se produzca la sintesis proteica, tiene lugar sobre el
ribosoma cuando el tRNA es liberado tras la hidr6lisis del GTP unido a EF-Tu (la
Figura 6-31 ilustra el funcionamiento de EF-Tu, preciso como un reloj).
La estructura tridimensional de EF-Tu, tanto en su forma unida a GTP como
a GOP, se ha determinado par cristalografia de rayos X. Estos estudios revelan
como ocurre el desenmascaramiento del tRNA. La disociacion del fosfato inor-
ganico (PI). procedente de la reaccion GTP-+ GOP + P;, genera una ligerfsima de-
tormaci.6n I.de unas decimas de nan6metro) del \u'?,ar de uni.6n a G'TP, tal como
ocune en la pTOte'ma 1\as. 'Es\e '\igero movimien\o, equiva'\ente imicamente a a\-
gunas veces el di{l.lnetTO de un atomo de hidr6geno, genera un cambia de con-
lCJl:maC\Cm I:\ue. se. \1m\1a'ba a l() 1aI'b() de. una \1\e.1.<\ cmcial de. n.e\i.e,e (1, l\amada he-
lice interruptor, en el dominio semejante a Ras de 10. protelna. AI parecer 10.
helice interruptor actua como un pestillo que se une espedficamente a una zona
de otro dominio de 10. molckula, manteniendo \0. proteina en una cantormaci.6n
cerrada". E\ cambia de contormacion desem:adenado pOI \a hidr6\isis de Gl'P
hace que 10. helice interruptor se desenganche, dejando que los dominios de 10.
protelna, ahora separados, se desplacen una distancia de unas 4 nanometws, \i.-
berando aSI la molecula de tRNA que estaba unida (Figura 5-20).
Este ejemplo pone de manifiesro de que forma las celulas aprovechan 7a~
bios qUlmicos sencilJos que oeurren sobre la superficie de pequeilos dommlOs

220 Capitulo 5 : Funci6n de las protefnas

 lugar /'\.
de union / '
deltRNA dominio 1

hlltlice
interruptor
dominio 2

dominio 3

IBI

teicos para modificar grandes protefnas con sofisticadas funciones. En la Figura 5-20 EI gran camblo
ici6n de Has a EF-Tu hemos entrado en un mundo que "huele" a biologfa. conformaclonal de EF-Tu esta
producldo poe la hldr6lisls de GTP.
(Al Estructura tridimensional de EF-Tu
teinas que hidl'Olizan ATP realizan trabajo mecanico cuando une GTr. El dominio superior
las celulas 12 es hom6logo a la protefna Ras y la
Mike n en rojo es la ~helice
cambios alostericos de forma pueden utilizarse para regular reacciones qui- interruptor~ que se desplaza cuando el
-:as. pero tambien para generar movimientos ordenados en las celulas. Su- GTP se ha hidrolizado, como se
lI'lgartlos, por ejemplo, que se necesita una protefna que "camine" a 10 largo de muestra en la Figura 518. (B) EI
:ina hilo, como es el caso de una molecula de DNA. En la Figura 5-21 se cambio de conformaci6n de la helice
...estra esquematicamente c6mo una proteina alosterica puede hacerlo adop- interruptor en el dominio I hace que
p..,.-", una serie de cambios conformacionales. Sin embargo, si no hubiera nada los dominios 2 y 3 giren, como una
dirigiera estas modificaciones para que siguieran una secuenda ordenada, sola unidad. unos 90" hacia el
~"'''' perfectameme reversibles y la protefna se desplazarfa al azar, arriba y observador.liberando el tRNA. {A,
a 10 largo del filamento. adaptado de Berchtold et al.. Nature
Podemos considerar la situaci6n desde otro punto de vista. Como el movi- 365:126-132,1993. 1993, Macmillan
r<.''''''' direccional de una protefna produce (rabajo. las leyes de la termodiml- Magazines Ltd; B. par concsia de
Mathias Sprinzl y Rolf Hilgcnfcld.l
dieen que un movimiento como este ha de consumir energia libre de otra
de 10 contrario la protefna podrfa utilizarse para eonstruir una maquina
imiento continuo). Por 10 tanto, sean cuales fueren las modificaciones
mttoduzcamos en el modelo mostrado en la Figura 521, como ailadir ligan-
que favorezcan determinadas conformaciones, sin un aporte de energia la
a proteica deambulara sin rumbo.
.como se puede conseguir que las modificaciones conformacionales sean
;-eccionales? Para lograr que todo el cicio se produzca en una direcd6n
ron que una cualquiera de sus etapas sea irreversible. Una manera de
"."'"",00 ~':. \l\\'\\'l:a:<:. c\ ro..~c'Q:t\\.",mo C\ue ac.abamm; de describir Qara diri.gi.r las
a.\o'2>\et\c.as en una tm:M.cu\o. ""u)\eko. melii..an\e \30. ni..uT6\\ilS <\e Con.
debido a la gran cantidad de energia libre que se \ibera cuando se
~~:~"'~:GfP, resuha muy improbable que la proteina EF-Tu pueda ailadir
e una molecula de fosfato al GOP, invirtiendo asf la hidr6lisis de

221
 Figura 521 Una prote(na alosterlca "que anda". Apesar de que sus tres
conformaciones diferenles Ie permilen desplazarse al azar adclame 'J atnis
miCnlras se mantiene unida a un filamento.la prote(na no puede moverse
uniformemente en una sola direcciOn.

I t
GTP. Este mismo principio se aplica a la hidr6lisis del ATP, y la mayoria de las
proleinas que son capaces de caminar en una direcci6n recorriendo largas dis-
tancias (la lIamadas mOlOres proteicos) 10 hacen hidrolizando ATP.
En el modelo allamente esquematico de la Figura 5-22,la uni6n de ATP im-
pulsa la transfonnaci6n del motor proteico de la conformaci6n I a la conforma-
ci6n 2. Entonces, el ATP unido se hidroliza produciendo ADP y fosfalo inorgani-
co (P~, \0 cual genera un cambio de la confonnaci.6n 2 a \a conformad6n 3.
Finalmente. la Iiberaci6n del ADP y del PI' que estaban unidos a La protefna, im-
pulsa a la protefna de nuevo a adoplar la conformaci6n 1. Las transiciones I ~ 2
--+ 3 --+ 1 estan impulsadas por la energfa de hidr6lisis del ATP, por 10 que estas
series de cambios conformacionales seran efectivamente irreversibles en condi-
ciones fisiol6gicas (es decir, la probabilidad de que el ADP se recombine con Pj
formando ADP por la ruta 1 --+ 3 --+ 2 --i 1 es extremadamente baja). Asf pues, el
cicio entero de reacciones se producirn unicamente en una direcci6n, haciendo
que la molecula proteica se desplace siempre hacia la derecha en este ejemplo.
Muchos protefnas generan movimientos direccionales a traves de este mecanis-
mo, incluyendo las DNA lie/icasas, enz.imas que se impulsan a si mismas a 10 lar-
go del DNA a velocidades Ian elevadas como 1000 nucleOtidos por segundo.

La estructura de la miosina revela de que forma

los muscuJos generan fuerza l3
En el Capitulo 16 discutimos de que manera diversos movimientos celulares es-
tan producidos por motores proteicos que se desplaz.an rapidamenle a 10 largo
de filamentos proteicos, dirigidos par ciclos repetidos de hidr6lisis de ATP (vea-
se Figura 5-22). EI mejor conocido de estos motores proteicos es la miosina, cu-
yos movimientos dirigidos a 10 largo de filamentos de actina genera movimien-
tos intracelulares y conlracci6n muscular. Las estructuras tridimensionales de la
miosina (y de la actina) se han determinado mediante amllisis de cristalografia
de rayos X, 10 cual nos permile vislumbrar el mecanismo interno de un motor It UNION
DE AlP
biol6gico. La estructura del dominic de la cabeza de la miosina (Figura 5-23) su-
giere de que forma la hidr6lisis de ATP se puede acoplar a la generaci6n de fuer-
za. 5e cree que la uni6n y la hidr6lisis del ATP generan una serie de cambios de
conformaci6n ordenados que desplazan la punta de la cabeza unos 5 nan6me-
~===,
tlOs, como se Hustra esquematicamente en la Figura 5-24). Este movimienlO,
acoplado a la formaci6n y rotura de interacciones con la actina, repitiendose en
HIOROLISIS
cada cicio de hidr6lisis del ATP, propulsa la moltkula de miosina unidireccional
mente a 10 largo del filamento de actina (vease Figura 16-91). Asf en la miosina,
como en la prolefna EF-Tu discutida anteriormente. una pequefia penurbaci6n
del lugar de uni6n del nucle6lido, a traves de transiciones alostericas que au-
mentan el efecto, genera movimientos proteicos ordenados mucho mas acusa-
dos, que estan en la base de la biologfa celular.
C::==:::::::;:==3
I llBERACION

0bF>+
ADP
Flgun. 5-22 Una protema alostt:rlca "motor". Una transicion ordenada
entre tres confonnaciones esui impulsada par la hidr61isis de una molkula
de ATP unida a ella. Dcbido a que una deestas transiciones esui acoplada a la
hidt6lisis de ATP. el cicio es esendalmente irreversible. AI repetirse el cicio la
protefna se desplaza siempre en la misma direccion (hacia la derecha en la
figural a 10 largo del fiJamento .

222 Capftulo 5 : Fun<:i6n de las prole[nas
 Lugar de uni6n Figura 5-23 Estructura de la cabeza
de la actina de la mloslna. En este diagrama
~

estereosc6pico del dominio cabeza de

la miosina. se produce hidr6lisis de
ATP en eill/gar activo. ELC indica la
cadena Iigera eseneial (de Essential
Ught Chain) mientras que RLC indica
la cadena ligera reguladora (de
Regulatory Light Chain); ambas
contribuyen. a 10 largo de la cadena
pesada de la miosina. al dominio
cabeza. (De I. Rayment et al.. Science
261:50-58. 1993. 1993 the AAAS.)

ElC

(einas alostericas unidas a membrana y dirigidas por ATP

en actuar como bombas i6nicas 0 trabajar en sentido
~"''fSO, sintetizando ATp14
mas de generar fuerza mecanica, las proteinas alostericas pueden lltilizar la
""'Zia de la hidr6lisis del ATP para realizar otras formas de trabajo, como el
especifico de iones al interior 0 al exterior de la ceJula. Un importante
10 al respecto es la ATPasa Na'K'. que se encuenlra en la membrana plas-
p-"""de todas las celulas animales, y que bombea 3 Na' hacia el exterior de la
y 2 K' hacia el interior en cada cicio de cambios conformacionales dirigi-
~r la hidr6lisis del ATP (vease Figura II-II). En la mayorfa de las celulas
oomba impulsada par A'TV consume mas del 30% del total de In energia que
, ....,re la celula. Bombeando continuamente Na' hacia el exterior y K+ hacia el
~r, mantiene la concenrraci6n de Na+ mucho menor en el interior de la ce-
e en el exterior y la de K+ mucho mayor en el interior que en el exterior,
-~do asf dos gradiente i6nicos (en direcciones opuestas) a traves de la
.'c""b,rana plasm<itica. Estas y otTOS gradienres i6nicos a teaves de diferentes
canas de la celula pueden almacenar energfa, tal como 10 hace una dife-
de nivel de agua a cada lado de las paredes de una presa. La energfa se
. .c_. . para dirigir cambios conformacionales en una gran variedad de proteinas
cericas asociadas a membrana, que realizan (rabajo util. EI gran gradiente de
rraves de la membrana plasmatica, por ejemplo. dirige muchas otras bom-
-rrIleicas unidas a dicha membrana, que transportan glucosa 0 determina-
zminoacidos hacia el interior de la celula; tanto la glucosa como los aminoa-
. son arrastrados hacia el interior mediante el influjo simultaneo de Na' que
cuando el Na- se desplaza a favor de su gradiente de concentraci6n. Figura 5-24 Vision conceptual de un
gran cambio de conformacl6n en la
miosma, probablemente causado por
,, la union e hidr6lisis deATP. Este
,, modelo eSla basado en la estructura
,, uni6n e hidr61isis
mostrada en la Figura 5-23. En el
siguiente paso en el proceso de

, ,,, deATP hidr6lisis. la molecula de fosfato

, , inorganico produeida (arribn) se Ilbera
,, , , ala soluei6n. (Segtln L Rayment et al.,
Science 261 :58-65. 1993. 1993 the
AAAS.)

":::.l',_,einas como maquinas 223

 Las bombas alostericas asociadas a membrana dirigidas por la hidr6lisis de
ATP tambien pueden actuar en sentido inverso, utilizando la energfa del gra-
diente i6nico para sintetizar ATP. De hecho, la energfa asequible en el gradiente
de H a traves de la membrana mitocondrial interna se utiliza de esta forma por
el complejo proteico aloslerico unido a membrana, ATP sintasa, el cual sintetiza
la mayor parte del ATP que necesita la celula animal, tal como disculiremos en el
Capftulo 14.

Las transiciones alostericas acopladas energeticamente permiten

a las proteinas actuar como motores, como relojes, como facto res
de ensamblaje 0 como transductores de informaci6n '5
Muchas protefnas sufren cambios conformacionales ordenados acoplados a la
liberaci6n de energfa que se produce cuando un nucle6sido trifosfalO (t"mlo ATP
como GTP) se hidroliza a nucle6sido difosfato (ADP 0 GOP rcspectivamenle). Al-
gunos de estos cam bios comprenden la union covalente del grupo fosfato a la
protcfna (fosforilaci6n proteica), pero muchos Olros no, como la miosina. Gene-
ralmcnte cada cambio se desencadcna par un evcnto especffico (la uni6n de la
miosina a la actina, por ejemplo, desencadena la hidr6lisis de ATP por la miosi-
na), 10 cual marca una direccion y ordena las inleracciones de las macromolecu-
las en la celula.
La capacidad de Ulilizar la cnergfa de un nudc6sido trifosfato para dirigir
cambios alostericos en protefnas ha resultado crucial para la evoluci6n de las celu- Figura 5-25 Algunos dlspositlvos
las, exactamcnte de la misma forma en que Ja capacidad de utiJizar Ja energia eJec- fahricados con prole(nas. En eSlos
trica ha resultado crucial para el desarrollo de la recnologfa moderna. En ambos ejcmplos In cllcrgfa dc hidr6lisis de
casos se han abierto cnormes posibilidades para desarrollar aparatos utHes. Por nuclc6sido trifosfato se utiliza para
ejemplo, protefnas como Cdk actuan como interruptores integradores sofisticados dirigir cambios de conformaci6n en
(vease Figura 5-15), recibiendo la informaci6n del entomo de la cclula y del estado prote(nas alostericas. (Al Un
trnnsductor de informaci6n, como una
del cicio celular y utilizandola para coordinar el comportamiento de la celula. Mo-
prote(na quinasa. (Bl Un motor, como
tores proteicos, como la miosina, se desplazan unidireccionalmente a 10 largo de
la miosina. (Cl Un reloj, como EFTu
filamentos generando varios tipos de movimientos y generando orden en el inte- que relrasa el ensamblaje de un
rior de la celula. Proteinas como EF-Tu acttian como instrumentos medidores de complejo activo para asegurar que los
tiempo, mejorando la fidelidad de importantes reacciones biol6gicas (vease Figura complejos incorrectos se disocien
6-31). Otras prote(nas utilizan la energia Iiberada par la hidr6lisis de un nucle6sido {Unea (/fscontinua). (D) Un factor de
trifosfato para catalizar el ensamblaje de detenninados complejos proteicos. En la ensamblaje que genera grandes
Figura 5-25 se recoge un resumen de estas diferentes posibilidades. estructuras.

IAI (81
p
I I I I

07 'r:mI
"'\
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St \ SJ
IADPI
TRANSDUCTOR DE INFORMACI6N MOTOR

lei 101

224 Capitulo 5 : Fund6n de las protefnas

 ( (
r:m r:m
FI~ra "'-2.1 Una "mliqulna protelca". A menudo, los complejos prolcicos
contienen una 0 mlls subunidades que pueden moverse de una forma
ordenada, dirigidas por un cambia energelico favorable que ticne lugar en
una molecula de substrato unida aI complejo (vease Figura 5-22).
Movimientos proteicos de esle tipo son especialmente utiles para la cclula si
ocurren en un gran complejo proteico en el que, como se ilUSlra aqui. se
pueden coordinar las aClividades de varias subunidades.

~ menudo las prote(nas forman grandes complejos

lue actuan como maquinas proteicas l6
~ el progreso desde las pequefias protefnas hasta las grandes proteinas forma-
las por muchas dominios. las funciones que puede realizar una proteina son
:ada vez mas elaboradas. Sin embargo, las tareas mas imprevisibles las Ilcvan a
:abo grandes agrcgados prolcicos fomlados por muchas subunidades indivi-
luales. Actualmente es posible reconstruir la mayoria de los procesos biol6gicos
m. un sistema libre de celulas en el tubo de ensayo, y como puede observarse
!ada proceso central de una cclula -como la replicaci6n del DNA, del RNA 0 la
ilntesis de protefnas, la formaci6n de vesiculas 0 la seflalizaci6n transmembra-
la- esta catalizado por un complejo de mas de 10 protefnas. En eslas mliquinas
~rotelcas la hidr61isis de moleculas de nucle6sidos trifosfato (ATP 0 GTP) unidas
Ila propia maquina dirige cambios de conformaci6n ordenados en las protefnas
IOdividuales, permitiendo que todas las proteinas del complejo se muevan de
nrma coordinada. Dc esta forma, par ejemplo, las enzimas apropiadas se des-
plazan directamente hacia posiciones donde son necesarias para producir reac-
Hones cn serie, en lugar de esperar a que se produzcan colisiones aleatorias de
~da uno de los componentes necesarios. En la Figura 5-26 se ilustra una analo-
pa mecanica sencilla.
Las celulas han desarrollado maquinas proteicas por la misma raz6n que los
bumanos hemos inventado maquinas mecanicas y electr6nicas: las manipula-
nones que eslan espacial y lemporalmente coordinadas a traves de procesos de
uni6n son mucho mas eficientes desarrollando casi cualquier tarea que la ulili-
r.aci6n secuencial de cada uno de los acontecimientos individuales.

Resumen
las prolefruu alostiricas cambian reversiblemente th oonfornuu:i6n cuando thter-
..imulos Ugundos 51! unen a.1Il superficie. A menudo los cambios producidos par lin
ligando afectan a atro Ugando, y este tipo th relaciOn entre dDs lugures th unron de
ligandos proporc:iofUI un mecanlsmo crucial de regular procesos celulares. Por
rjemplo, los procesos metabOllcos estlfn oontrolados par rerroaUmentm:wn: algu-
-s molimlas pequenas inhiben y otras actioon a enzimas iniciales thl proceso.
Gnreralmente las enz/11UJS reguladas de esta nrnnera forman ensamblajes simitri-
pennitiendo qlle 51! prodlucan cambios oonfonnacionnies cooperativos que ge-
n respuestas escalonadas a los ligandos.

225
-~.~----------------~

l.o' co.mblo!> de ton{onn.o.ci.6n de \u.s VTolebuu vueden eslo.r d\riwoos de unn

mattern Iwidirecc:iOllaJ por In utilizacion tk energfa qllfmica. Por ejemplo, aoo-
plando cambias alostericos a la hit/rolisis de ATP las protefnas puedell tksarrollar
rrabajo util, como generar IIna fuerza meainica 0 oombear jOlles a tmiffls de ulla
membrum1. Las estructllras tridimensionales de varias protelnas, determilllidas
por cristalografla lie raros X. han revelado de quefomul un pequeno cambia local
generado por In i.idr6Usis de lin mu:k6sidD trifas/alo u amplifica dnndo I"gar
cambiol mayores en alTOs '''gares de In protefna; de esta forma estas proteltulS SOl!
capaces de actuar como tmnsductores de in!onJllu;i6n, matares, relojes 0 factores
de ellSllmblaje. Se lamlan "mdquinas protelc:as" altamente eficiemes mediante in
incorpomci61l de lIIuduu $ubunidades proteiau dl{erentes a ,m gran agregado, en
el clud los mouimielltos alostericos de cadn col1l,xmente individual est4n coomina-
dos para realiLar In mayorla. si no todns, las reacciones biol6giros.

Nacimiento, ensamblaje y muerte de las protefnas

Hemos descrito algunos de los extraordinarios inslrumcntos celulares formados
por protefnas. Ahora consideraremos de que manera se forman y se deslruyen
eslOS instrumentos. EI mccanismo de la sintesis proteica se discute en olra par
Ie. Ahora empezaremos considerando c6mo se pliega y c6mo se ensambla una
proteina a medida que va abandonando el ribosoma en forma de cadena poli-
peptidica.

Se cree que las protefnas se pliegan a traves

de un intermediario globular fundido 17
Muchas prolefnas purificadas se pliegan ill vitro de forma adecuada despues de
haber sido desplegadas. por 10 que durante muchos aFlos se pens6 que las prolef-

PROCESOS ACCIDENTES Figura 5-27 VIsl6n actual del

PROCESOD
PlEGAOO AcnVADO DESACTIVAOOS IRRECUPERABLES plegamiento proteico. Una proteina
acabada de sintetizar nipidamel11e
adquiere un estado de "globulo
fundido" (vease Figura 5-28).
Despues, mas lelltamellte. se
producen plegamielllOs a traves de
multiples etapas, algunas de las cual~
produdrlan la muerte de la proterna
sin la ayuda de chaperollas
moleculares. AJgunas moleculas
pueden no conseguir plegarse
globulo
fundido correctamente y seran reconoddas y
degradadas por enzimas proteolfticas
(vcase Figura 5-39).

/ catalisis por
chllperon~

~~

proteina
P.......
~~"'.IUI
correctamente chaP8r~

226 Capitulo 5 : Funci6n de las protemas

 Figura 5-28 Estructura de un
gl6bulo fundido. (Al La forma de
gl6bulo fundido del dtocromo b562
es mas abierta y menos ordenada
que la protefna nativa, moslrada en
{Bl. N6tese que el gl6bulo fundido
comiene la mayor pane de la
estruetura secundaria de la forma
nativa. aunque los fmales de las
helices a estrin deshilachados y una
de estas helices s610 estri formada
pardalmente. (Por cortesfa de
Joshua Wand).

IAI IBI

-.:="""adoptar todas las conformadones posibles mientras se van plegan-

que consiguen adoptar la conformaci6n de menor energfa posible, la
ne que es el estado correcta de la prote(na. Ahara sabemos que esro
pesar de las ahas veloddades que adquieren los movimiemos mole-
_=,.'~ una protefna (vease pag. 101), para cualquier prmeina grande existen
_=',ov", mas conformaciones posibles de las que se pueden explorar duran-
_ segundos que tarda la proteina en plegarse. Ademas, la existencia
rnutantes que tiellen defectos especfficos de plegamiento indica
_ la evoluci6n se ha ida seleccionando una secuencia de aminoaci-
,",,,,"",,,nada, no s6lo en funci6n de las propiedades de la estructura final
n por la capacidad de plegarse rapidamclltc adoptando su confor-

dad de algunas proteinas purificadas y desnaturalizadas de recu-

:>-ucurras nativas par si mismas ha hecha pasible disecar experimen-
esos del plegamiento de las proteinas. Las protefnas se pliegan
.xmando estructuras en las que se ha fonnado la mayor parte
de la estructura secundaria final (helices 0: y laminas 13) y en las
""~,,,,,,,,,,,tos se disponen de una forma cxtraordinariamente semejame a
:1Ja 527). Esta conformad6n extraordinariamente abierta y flexi-
......--:-:='-.... gl6blllo fLmdido (mohen globule) (Figura 5-28) es el punta de
ft'lCe'SO relativamente lento en el que se producen muchos ajustes
~."'-'="-=' ~erales intentando formar correctamente la estructura terdaria.

:
::::~ ~-eriores hada la conformad6n final se han de produdr diferen-
~ de ellos pueden condudr a plegamientos incorrectos a no
la colaborad6n de una chaperona molecll/ar. protefnas espe-
cuya fond6n consiste en ayudar a otras protefnas a plegarse
....,,,=,,,,.., emucturas estables y activas (Figura 5-27).

:::::,mOleCUlares fadlitan
l8
: de las proteinas
rculares se identificaron por primera vex en las bacterias.
'::.~; ::::: mutantes de E. coli que eran incapaces de utilizar bacte-
f."plicarse. Estos mutantes producen versiones ligeramen-
p:mentes de la maquinaria de chaparones, reladonada
estI"fs par calor 60 y 70 (hsp60 Yhsp70, de Heat-Shock Pro-
""...""=defectuosas en determinadas etapas del ensamblaje

".lo1Il!!i5!!!iiiEV muene de las protefnas 227

 deSCIlI111da
por proteoljS4

mllquinarill

r!f
ribosomll
maquinarill
semejlll'\le
a hsp60

protelna plegada correctamente

maquinaria
semejllnte
a hsp60

proteina plegada correcta

Las celulas eucariotas tienen familias de protefnas hsp60 y hsp70, de forma Figura 5-29 Dos famillas de
que diferentes miemhros de las familias actuan en compartimientos cclulares chaperonas molec::ulares. Las
distintos. Asi, como discutimos en el Capitulo 12, las mitocondrias contienen sus protefnas hsp70 acluan de forma
propias moleculas hsp60 y hsp70, diferentes de las que actuan en el dtoso], yen lemprana, reconociendo pequcii.as
el reticulo endoplasmatico existe una hsp especial OIamada Blp) que colabora zonas de la superficie de las protefllA
en el plegamiento de las proteinas. Las protefnas semejames a hsp60
aCluan mas larde y forman una
Tanto las proteinas hsp60 como las hsp70 actuan con un reduddo numero de
especie de contenedor denlro del
protefnas asociadas, cuando colaboran en el plegamiento de otras proteinas. Pre- se transfieren las protefnas que todao
sentan afinidad por las zonas hidrof6hicas asequibles que muestran las protefnas no se han plegado completameme.
plegadas de forma incompleta e hidrolizan ATP, posiblemente uniendose y liberan- ambos casos, ciclos repetidos de
dose de su proteina en cada cicio de hidr61isis del ATP. Originalmeme se pens6 que hidr611sis de ATP contribuyen a que
las chaperonas moleculares s610 actuaban impidiendo la agregaci6n promiscua de proteinas hsp sigan cietos de uni6n l
las protefnas todavia no plegadas (de ahf su nombre; chaperon signifiea "dama de Jiberaei6n de la prOleina e1iente,
compania de senoritas"). Sin embargo ahora se cree que tambien interactuan mas facilitando su plegamienlO.
fntimamente con sus "c1ientes" produciendo efectos que podrian asemejarse a un
"masaje proteico". Las chaperonas se unen a las regiones hidrof6bicas expuestas, y
dan un masaje a las regiones de la protefna que estan medio plegadas a partir del
intermediario globular fundido, eamhiando su estructura de tal manera que pro-
porciona a la proteina otra posibilidad de plegarse (vease Figura 5-27).
En otros aspectos los dos tipos de proteinas hsp actuan de forum diferenle. Se
cree que la maquinaria hsp70 actua precozmentc en la vida de lUla proteina, unien-
dose a eadenas de unos siete aminoacidos hidrof6bicos antes de que la protefna se
libere del ribosoma (Figura 5-29). Por el contrario, las protefnas semejantes a hsp60
forman una estructura parecida a un gran barril (Figura 5-30) que actua mas tarde
en la vida de la proteina; se cree que esta chaperona fonna una "camara de aisla-
miento" dentro de la cual se colocan las proteinas a media plegar, y se les facilita un Figum 5-30 Estructura de una
entomo favorable dande puedan intentar volverse a plegar (vease Figura 5-29). chaperona semejante a hsp60,
Estas chaperonas moleculares se denominan proteflJas de estres par calor determlnada por mlcroscopia
debido a que su s{ntesis se incrementa natablemenle tras una breve exposici6n electronlca. En (A) se muestra un gran
numero de paniculas contrastadas
negativameme y en (B) un modele
tridimensional de una de cslas
partfculas. obtenido par melOdos de
procesamicmo de imagenes basados
en ordenador. Tanto en procariotas
como en cllcariotas se encuentran
estructuras simiJares, parccidas a un
gran barril. A este lipo de proleina se It'
denomina hsp60 en las mitocondrias.
groEl en bacterias y TepI en el
citosol de las celulas de vertebrados.
(A, de B.M. Phipps el aI., EMBO).
10:1711-1722,1991; B, de B.M. Phipps
et aL Nature361:475477, 1993.
10Qnm 10 nm Macmillan Magazines Ltd.)

228 Capitulo 5 : Funci6n de las protefnas

 a elevadas temperaturas (por ejemplo, 42C). Ello parece retlejar
de retroalimentaci6n que responde a un incremento de la canti-
medio desplegadas (como las producidas por las elevadas lem-
Conna que se incrementa la sintesis de chaperonas que ayudan a
i"Olverse a plegar.

:
:~ temas contienen series de moh~culas plegadas
mdependiente l9
'lIegamiento de una protefna acabada de sinlelizar empieza conla
~:;;.,_.JIldeterminado nLimero de dominios estructurales estables, que se
~ con unidades funcionales, y que parecen tener orfgenes evolulivos
En otros aparmdos dellibro discutimos los proccsos por los que se
e"o'Olucionado las protcfnas, poniendo de relieve de que manera se
- proteinas mediante el barajado de exones que codificaban domi-
de proteinas utiles (veanse pags. 413-424). La evoluci6n ha
"""""_:"lIDOS de estos dominios en forma de unidades plegadas que retie-
..,,"""".. induso c.uano.() son separados de la proteina -bien sea par
. ...,'" -'a, bien, de manera mas eficiente, por tecnicas de ingenierfa
minios proteicos de este tipo, que muy a menudo panicipan en

:
:~~::ti,o de exones, se denominan m6dulos; ahora que conocemos
de DNA de centenares de genes, se ha puesto de manifiesto la im-

:~~~~.,.:"': m6dulos.
proteicos tienen tipicamente entre 40 y 100 aminoacidos de
~eii.o tamano y Sll capacidad de plegarse indepcndientemente

: :~';;:,,;:: detcrminar la estructura tridimensional de muchos de ellos en

Ie tecnicas de NMR de elevada resoluci6n, la cual es una alter-
-~=_'flte a la cristalografia de rayos X. En la Figura 5-31 se i1ustran al-

Figura 5-31 Estructuras

tridimensionales de algunos m6dulos
proteicos. En estos diagramas, las
zonas de Iamirlil ~ se presentan como

flee/laS y los extremos NyC estan

marcados como bolas rojas. (Adaptado
de M. Baron, D.G. Norman e J.D.
Campbell, Trends Biocliem. Sci. 16: 13-
17, 1991 yD.}. Leahye{ aI., Science
.J 258:987991, 1992. de AMS.)

cit! complemenlo mOdulo de fibrone<:tina m6dulo de factor

3e conllol lipo 1 de crecimieflto

modulo de mOdulo de fibronEK:tina m6dulo

-"rloglobulina de lipo 3 kringle

_ _L~blajey muerte de las protefnas 229

 N.N

guoos m6dulos tfpicas. Cada uno de elias tiene un nl\c1eo con una eSlructura es- il :17 Larga estructura
table farmada por cadenas 0 por laminas 13, del que salen asas de cadenas poli- formada a partir de series de mOd
peptidicas menos ordcnadas (mostradas en uerde). Idealmente las asas estan si- en Hnea. Aqui se muestran cineo
fuadas formando lugarcs de uni6n para atras mohkulas. como se ha dcmostrado m6dulos de fibronectina de tipo 3
para el plegado de las inmunoglobulinas que foe rcconocido primero en las mo- formando una disposici6n repetitiv
Eslrueturas similares se encuenmm
leculas de anticuerpo (~ase Figura 2335). Es posible que el exita evolUlivo de los
varias mol6culas de matriz
m6dulos basados en laminas ~ se deba al hecho de que constituyeron unidades extracelular. Se cree que interaed
adecuadas para la generaci6n de nuevas lugares ~ uni6n para ligandos. a traves entre cadenas laterales de los exrrem
de variaciones en estas asas que sobresalen del n(ideo del m6dulo. de los m6dulos proporcionan rigide:l.
las cstructuras de eSle lipo.
Los m6dulos confieren versatilidad y a menudo median
las interacciones protefna-proteina I9, 20
Una segunda caracterfstica de los m6dulos proteicos que explica su utilidad es la
facilidad can la que pueden ser integrados en otras protefnas. Cinco de los seis
m6dulos que se i1ustran en la Figura 5-31 tienen sus extremos C y N (sei'lalados
con bolas rajas) en extremos opucstos del m6dulo. Estas disposiciones ~en li-
nea" significan que cuando un DNA que codifica un m6dulo de este tipo se du-
plica en tandem, 10 cual es habitual en la evoluci6n de los genes (como se discu-
te en el Capitulo 8). los m6dulos duplicados sc pueden acomodar facilmente en
la protelna. De esta forma estos m6dulos pueden unirse en serle tanlO consigo
mismos (Figura 5-32) como con otros m6dulos en !fnea, fonnando largas estruc~
turas. Habimalmente se encuentran estructuras rfgidas y largas compueslas por
series de m6dulos, tanto en moleculas de la maniz extracelular como en regio-
nes de protefnas receptoras sitlladas en la sllperficie celular.
Oiros m6dulos, como el ~kringle que se mlleSlra en la Figura 5-31. son de
tipo "enchufe". Tras redistribucioncs gen6micas pucden ser facilmcntc acomo-
dados en forma de inserto en una regi6n de un asa de otra proteina. Algunos de
estos m6dulos acttian como lugares de uni6n espedficos de otras prolefnas 0 de
otras estructuras celulares. Un ejemplo importante al respecto es el dominio
SH2. que puede unirsc fuertemente a una regi6n de una cadena polipeptidica
que contenga cadenas laterales fosforiladas de lirosina. Como cada dominio
SH2 tambien reconoce otras caracteristicas dcl polipeplido. s610 se une al sub~
grupo de proteinas que contiencn tirosinas fosforiladas. La presencia de domi-
mos SH2 en una proteina Ie permite formar complejos con protefnas que se fos-
forilen en tirosinas en respuesta a procesos de scnalizaci6n celular (Figura 5-33).

dominio SH2 --::1"'l:=:!t-"1 lira 3 Los domlnlos 5HZ

una prOlei... quinasa
loslorila la prolalna A
median las reacclones de ensamblaje
de las protefnas que dcpcnden de
fosforllaclones. En la Figura 15-49 se
ilustra la estruetura de un dorninio
5H2. que tiene ta forma de un m6dulo
tipo "enchufe".
'as proteina, A V8
saanumblan

230 Capftulo 5 : Funci6n de las proteinas

 Figura 5-34 Tres sistemas a traves de
, los que se pueden unir entre sf dos
'\( superficie 1 protefnas. 5610 se muestran las zonas
que interactuan de las dos protefnas.
superfi<;ie 2
(A) Una superficie rfgida de una
'I proteina puede unirse a una larga asa
de cadena polipeptfdica (una
"cuerda") de otm proteina. (8) Dos
helices 0: pueden unirse entre sf
IA) SUPERFICIECUERDA lei SUPERFICIESUPERFICIE formando una helice superenrollada.
(C) A menudo dos superficies rfgidas
complementarias unen entre sf dos
complejos proteicos que S8 forman y se deshacen como resultado de carn- prolcfnas.
Ia fosforilaci6n de la prorefna juegan un papel central en la transducci6n
","'lesextracelulares en sefiales intracelulares. como se describe en el Capf-

teinas pueden unirse unas a otras a traves

""""ntes tipos de interfases
irUlaS pueden unirse entre sf al menDS de [res mancras: en muchos casos
.,,,",,,"n de 1a superlicie de una protefna contacta con un asa extendida de
.~'"",a polipeprfdica (una "cuerda") de otra protclna (Figura 5-34A). Las in-
_=0...' de este tipo permitcn, por ejemplo, que e1 dominio SH2 reconozca
rilarla de otra protefna, y tam bien permiten a una prmcfna quinasa
_",,:".as protefnas que fosforilara (vease Figura 5-168).
_:mdo tipo de inleracciones entre la superficie de dos protefnas consis-

:
:';~~:iento de dos helices a, una de cada protcfna, formando una helice
a (Figura 5-348). Este tipo de interacciones entre protc(nas se halla
1lII!"".... tamilias de proteinas reguladoras de genes, como se discute en el Ca-
=bargo, el sistema mas comun de interacci6n entre dos protefnas con-
acoplamiento preciso entre dos superficies rfgidas, una de cada pro-
5-34Cl. Las inreracciones de este tipo puedell ser muy fuertes, ya
Uf' fannar un elevado numero de enlaces si las superficies se acoplan
- misma raz6n, eSlas interacciones superficie-superficie pueden ser
....n amenre especfficas, permitiendo que una protefna seleccione a
"rri'~
determinada de entre los muchos miles de protefnas que presenta
aJC<U'iota superior.

.""00' D Yla proteolisis selectiva aseguran los ensamblajes

00 nada
as forman grandes agregados can otras proteinas. Ella requiere
'erna se una selectivamente a Olras protefnas simultaneamente.
resu.lta crucial que cada complejo proteico se forme de modo efi-

f'lgura 5-35 La coneJd6n facillta un

~)
ensambiaje de tipo todo 0 nada de los
compleJos prote!cos. Como se indica,
cada una de las dos protefnas X e Y
inducen un cambio alosterico en una

..........~~ J Y
la lJni6n de Y
facilita la uni6n de X
complejo d~bil
tereera proterna (mostrada en azul),
que permile la uni6n de la otm
protefna. Como resultado de ella,
solamente el complejo formado par las
tres protefnas es suficientemente
fuerte para existir en la celula, 10 cual
resul{a efectivo en el ensamblaje del
complejo fuorte
tipo todo a nada.

. .----~~.~..........."'rt'" .1... I.." nrntf'fnas 231

ciente, y que otros complejos parciales, cuya formacion interferirfa can la fun-
cion del complejo final, se formen en cantidades mfnimas. Por ella, debe haber
mecanismos que aseguren que los ensamblajes se produzcan por sistemas del
todo 0 nada.
Un mecanismo importante radica en el fen6meno de la collexi6n (linkage),
que hemos descrito antes. Gracias a la conex.i6n, si un ligando cambia la confor-
macion de una protefna alosterica de forma que la protefna se una a otro ligan-
do de forma mas eficiente, el segundo Iigando puede, a su vez, incrementar 1a
afinidad de la protefna por el primer Ugando (vease Figura 5-5). Este mismo
principio se aplica a las interacciones protefna-proteina. Cuando dos protefnas
se unen entre sf, a menudo una de elias incrementa su afinidad par una tercera
protefna. Debido a esta conex.i6n el complejo de las tres proteinas sent mas esta-
ble que cI complejo de una sola protefna. Un mecanismo de este tipo puede pro-
dudr un ensamblaje dellipo todo 0 nada (Figura 3-35).
Aunque se produzcan mecanismos de ensamblaje del tipo todo a nada que di-
rijan la conformacion de complejos proteicos completos, a no ser que la celula pre-
sente las cantidades exactas de las proporciones adecuadas de cada protefna del
complejo, sobraran protefnas no ensambladas. De hecho, la celulas no siempre
producen sus componentes en las cantidades precisas; sin embargo, las celulas
son capaces de degradar selectivamente cualquier complejo proteico mal ensam-
blado (Figura 5-36). Asf pues, las cclulas necesitan disponer de un sofisticado siste-
ma para identificar las protefnas ensambladas de forma anormal y para destruirlas.
Efectivamente, las celulas eucariotas contienen un elaborado conjull1o de protef-
nas que permile dirigir especfficamente los ensamblajes incompletos de eSle tipo
hacia la maquinaria de degradacion proteica, como discutiremos a cominuacion.

La proteolisis dependiente de ubiquitina es la responsable

principal del recambio proteico selectivo en los eucariotas21
Una de las fundones de los mecanismos intracelulares de proteolisis es, como
acabamos de decir, reconocer y eliminar las pratefnas no ensambladas. Otra de
las funciones consiste en desechar las protefnas daiiadas 0 mal plegadas (vease
Figura 5-27). Otra es conferir una carta vida media a ciertas prareinas normales
cuya concentracion ha de cambiar nipidamente en respuesta a alteraciones del
estado de la celula; muchas de estas protefnas de carta vida son degradadas n1-
pidamente de forma habitual, mientras que otras, especialmente las ciclinas,
son estables hasta que son degradadas repentinamente en un determinado mo-
menta del cicio celular. Aquf discutiremos fundamentalmente como se degra-
dan las protefnas en el citosol, pera tambien se praducen procesos importantes
de degradacion en el retfculo endoplasmatico (ER) y. como se discute en el Capf-
tulo 13, en los Usosomas.
La mayorfa de las proteinas que son degradadas en el citosol son liberadas a
grandes complejos proteicos denominados proteosomas, de los que hay mll-

estable Figura 5-36 La proteollsls de los

componentes sobrantes de un
complejo protelco Implde que St'
acumulen en la celula. La degrada.
mostrada aqui requiere que una
proteina no ensamblada sea
reconocida por enzimas que Ie
agreguen ubiquitina. de forma
covalente. como se discute en eI -

PROTEOLISIS

sus<:eptible de
degradad6n

232 Capftolo 5 : Funcl6n de las protcfnas

 100 om 10 nm

dispersas por toda la celula. Cada proteosoma consiste en un cHin- Figura 5~37 Un proteosoma.
armada por multiples proteasas distintas, cuyos lugares activos, al En (A) se muestra un gran numero
una camara central. Cada extremo del cilindro esta ~cerrado" de particulas contrastadas
complejo proleico formado por al menos 10 tipos de polipeptidos, negativamentc. En (B) sc presenta un
cuales hidrolizan ATP (Figura 5~37). Se cree que estos tapones modclo tridimcnsional de un complejo
ionan las protefnas que deberan ser deslruidas, unil~ndose a de proteosoma complelo, obtenido
por procesamiento de imagenes en un
=-"dci'endolas en la camara del cilindro; alii las protefnas son degrada-
ordenador. se presentan muchas
.....os peptidos, los cuales son Iiberados al exterior. copias de estas estructuras,
-""",,~mas actuan sobre protefnas que han sido marcadas especffica- distribuidas por toda la celula, dondc
_ su destrucci6n, mediante la adici6n covalente de una pequena pro- actuan como bid6n de basura para las
tina (Figura 5-38). La ubiquitina existe en todas las celulas, Iibre prolefnas cclularcs no deseadas.
ntemente a protefnas. La mayorfa de las protefnas ubiquitinadas (Micrograffas clecu6nicas por cortcsla
~,...das para ser degradadas. (Algunas proteinas de larga vida como las de Wolfgang Baumeister, de I.M.
ien estan ubiquitinadas, pero en estos casos la funci6n de la ubi- Peters et al.,]. Mol. BioL 234: 1993.)
onocida.) Diferentes procesos proteollticos depelldiel/tes de llbi-
,;,...zan enzimas que conjugan ubiquitina, estruclUralmeme similares
diferentes, asociadas con subunidades de reconocimiento que las
- las protefnas que presentan alguna seflal determinada de degrada-
a de conjugaci6n afiade ubiquitina a un residuo de lisina de la luga. de uni6n a unas
cadenas laterales de
. y posteriormente ai'Jade series de ubiquitinas adicionales, for- lisina de proteinas
cadena multiubiquitina (Figura 5-39), la cual, al parecer, es recono- /
etteptor proteico especffico del proteosoma. eaOH
teinas desnatura\izadas 0 mal p\egada~, a~i como \a~ ?Ioteinas que
oacidas oxidados 0 anormales, son reconocidas y degradadas por
.-~~ -:-nteolftico dependieme de ubiquitina. Probablemente, las enzimas
---,,,,,oubiquitina reconocen sei'Jales que estas protefnas tienen expuestas
",,=::r ido a su mal plegamiento 0 a su alteraci6n qu(mica; se cree que es-
secuencias de aminoacidos 0 motivos conformacionales que en
nonnales se hallan en su interior. es decir. inasequibles.
:eso proteolftico que reconazca y destruya las protefnas anormales
distinguir entre proteinas camp/etas que tienen conformaciones
- - . - rIa gran cantidad de polipeptidos que estan creciendo sobre los

ra 5-38 Estrqctura tridimensional de la ublqultina. Esta proleina

tiene 76 residuos de aminoacido. La adici6n dc cadcnas de ubiquitina a
')fOteina provoca que esta protefna sea degradada por el proteosoma
Figura 5-39}. (Basada en S. Vijay-Kumar. C.E. Bugg, K.D. Wilkinson y
Cook. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3582-3585. 1985.) "Utleo hiafO\6bico globular

~_..... fll5aJD.blaje y muerte de las protefnas 233

 proteine citos61ica diana complejo ubiquitina-proteina
grupo amino E P-P,
NH --- de Ie cadena NH, O.C--O-~-C ~-i--o

H'N~
~
1 lateral de una
,
T
lisina

_ _0_' , 0 U",RA"ON A
H,N
2

complejo enz;mjtico
de ubiquitinar:iOn
, CooH
ubiquitina
'----'I
COOH
J UN PftOTEOSOM.A

ura 539 DegTadad6n protelca dependlente de ublquillna. En el paso I,

una protefna diana (conteniendo una senal de degradaci6n) es rcconocida
por el complejo enzimatico de ubiquitinaci6n. Entonces. en el paso 2. series
repetidas de reacciones bioquimicas unen molkulas de ubiquitina entre sf,
produciendo una cadena de multiubiquitina. unida al gropo amino t de una pequeo'los pl!ptidos
cadena lateral de una lisina de la protema diana. Finalmente..en el paso 3, el
proleosoma cona la protelna diana en series de pequenos fragmentos.

ribosomas (as1 como los polipeptidos que acaban de ser liberados de los riboso-
mas) y que todavia no han adoptado su conformaci6n plegada normal. Puede
demostrarse experimentalmente que este no es un problema trivial: si sc anade
puromicina a las celulas -un inhibidar de la smtesis de las prolefnas-Ias proler
nas que se acaban de forma prematura son eliminadas rapidamenlc mcdiante
un proceso dependiente de ubiquitina. Una posibilidad es que las protefnas for-
madas normalmente esten protegidas temporalmente por la maquinaria de tra-
ducci6n 0 por mohkulas de chaperones. Otra posibilidad serfa que las proleinas
nacientes y acabadas de sinletizar son de hecho vulnerables a la proleolisis pero
se pliegan adoptando su conformacion nativa muy rapidamenle, antes de poder
ser marcadas para su deslfucci6n por proteolisis.

La vida media de una protefna puede sec detecminada

por enzimas que alteran su extremo N22
Una caracterfstica que tiene una influencia importante en la estabilidad de una
protefna es la naturaleza del primer aminoacido (del extremo N) de su cadena
polipeptfdica. Hay una estrecha relaci6n, denominada la regia Nterminoi entre
la vida media in vivo de una protefna y la identidad de Sll aminoacido N-termi-
nal. En lodos los organismos estudiados, desde baclcrias hasla mam[feros, exis-
ten dislintas versiones de la regia N-tenninaJ. Los aminoacidos Mel, Ser, Thr,
Ala, Val. Cys, Gly y Pro, par ejemplo. protegen las protefnas en la levadura S. ce-
revisiaecuando se presentan en el extrema N; estos aminoacidos no son recono-
cidos por los componentes de marcaje del proceso de la regia N-terminal mien-
tras que los mros 12 aminoacidos atraen un ataque proteolftico. Todavia se han
de identificar la mayorfa de las protefnas que son rapidamcnle degradadas por
el sistema de la regia N-Ierminal (que actua tanto en el citoplasma como en el
nucleo). Sin embargo, se sabe que no es frecuente la presencia de aminoacidos
desestabilizantes en el extremo N de las protefnas del citosol. pero que es habi-
tual en las proleinas que han sido uansportadas a otros compartimienlOs. Por
clio, una hipmetica funci6n del proceso de la regia N-Ierminal serra degradar las
protefnas que normalmente actuan en el ER, en el complejo de Golgi 0 en otros
compartimientos delimitados par membrana. pero que por alguna raWn se han
quedado 0 han vuelto al cilosol.
No se conace lodavia de que fonna se expenen los aminoacidos desestabili-
zantes en el extremo N de las proteinas acabadas de sintetizar. Como se discute

234 Cap(tulo 5: funci6n de las proteinas

 inicialmente todas las prmeinas son sintetizadas con una me-
fonnil-mctionina en las bactcrias) en su extremo N. A menu-
. que es un aminoacido estabilizante en 1a regia N-tenninal, es
- .lila aminopeplidasa especifica. Sin embargo. las aminopeplida-
..etualmente eliminan la metionina N-tenninal si y 5610 si el se-
ida rambit!lt es un aminoacido estabilizante en la regia N-tenni-
conocemos las proteasas que producen substratos fisiol6gicos
ta regia N-tcrminal, ni las secuencias que son reconocidas como
Ilisis.
-noaddos N-terminales desestabilizantes. como cl aspartato y el
n reconocidos directamentc por el componente scnalizador del
regia N-terminal. En lugar de clio. son modificados par la enzima
"uoteina transferasa, que une 13 arginina. uno de los aminoacidos
es reconodbles directamente. al extrema N de las protefnas que
"\iUtato 0 glutamato como aminoacido N-terminal. Asf. la arginina
ldo desestabilizante primario en la regIa N-terminal, mientras
y el glutamato son aminoacidos desestabilizantes secll/ldarios.
laS existcn tambicn aminoacidos desestabili7.3ntes rerciarios -Ia
g1utamina- los cuales desestabilizan a traves de su Iransforma-
r una amidasa especffica, a los aminoacidos desestabilizanles se+
ata y glutamato.
se da el casu de que el aminoacido N-lerminal de una prolefna
a hidr6lisis por los reactivos utilizados en los secuenciadores de
protcfnas lienen un aminoacido N-lenninal modificado ("bID-
modificaci6n mas frecuente es la acetilaci6n. Se cree que esta mo-
un papel prolegiendo las proteinas de larga vida de ser dcgrada-
0, experimemos recientes con mutantes de levaduras que
- principales especies de acetilasas N-terminales, muestran que la
~tas protefnas no acetiladas siguen manteniendo vidas largas. Asi.
a :"J-acetilaci6n de estas protefnas esta por dcscifrar.

....~ _ _nto de Sit nacimiento, ellUlI ribosoma, Imsta Sit I1Il1erte IJor proteoli-

:
:::':::::::.~"": prote{nas son aCOllllJmiadas por chaperones moleculdres y por
de slipervivellcia cllya f/luciOn es "dar nUlSajes" a Sll forma. repa-
"., ~rlas. Las prote{Ims mal plegadas SOli irulucidas. en primer lugar, a
r correctamente mediaute la participaci61l tk los chaperones more-
__,',,"'D 0 IlSp70; si esto fracasa. son acopladn.s a IIbiqllitilta y, as{, marcadas
......Uhu ell los proteosOJlms.
las prote{rms estall compuesUlS por dominios modulares disaetos
"" evolllcwn se han yuxtapuesto par dupliroci6n y barajado de las se-

rjicos para otras molkula.s, inclll}'erulo otras prote{lItu, y a memulo

las protelnas se erunmblenformando grandes complejos. El prillcipio
aplica de que lonna las cilula.s Illilizan las lraJlSiciollu ulosteric:as
r estos complejos proteioos, por sistemas del todD 0 rmda.

Citas
I. Steitz. T.A.; ShDham, M.: Bennett, W.S. Jr. Structural dy-
namics of yeast hexokinase during catalysis. Pili/os.
Tral/s. R. Soc. LOlld. (8iol.) 293:4352,1981.
Tooze. J. Introduction to Protein Structure. 2. Monad, J.: Changeux, I.-P.; Jacob, F. Allosteric proteins and
- Garland, 1991. celluJar control systems.). Mol. Biol. 6:306-329, 1963.
_.E. Proteins: Structures and Molecular Proper- Pcrutz, M. Coopcrativity and Allosteric Regulation in Pro-
ed. New York: W.H. Freeman, 1993. teins. Cambridge. UK: Cambridge University Press, 1990.

235
3. Koshland, D.E., Jr. Control of enzyme activity and meta-
bolic pathways. Trends Biochem. Sci. 9: 155-159, 1984.
Umbarger, H.E. The origin of a useful concept-feedback
inhibition_ Prolein Sci. I: 1392-1395, 1992.
4. Canlor, e.R.; Schimmcl, P.R. Biophysical Chemistry.
Pan Ill: The Behavior of Biological Macromolecules,
Caps. 15 ad 17. New York: W.H. Freeman, 1980.
Dickerson, R.E.; Geis, I. Hemoglobin: Structure, Func-
tion, Evolution and Palhology. Menlo Park, CA.: Ben-
jamin-Cummings, 1983.
Monad, J.; Changeux, I.-P.; J:lcob, F. Allosteric proteins and
ceUular control systems. J. Mol. BioL 6:306-329, 1963.
5. Kantrowitz, E.R.; Lipscomb, W.N. Escllerichia coli aspar-
tate transcarbamylase: the relation between strllCtu-
re and function. Science 241 :669-674, 1988.
Kantrowitz, E.R_; Lipscomb, W.N. Escherichia coli aspar-
tate transcarbamoytase: the molecular basis for a
conccrted allosteric transition. Trends. Biocllem. Sci.
15:53-59,1990.
Schachman, H.K. Can a simple model account for the
a\\os\enc transition of aspartate lranscarbamoy\ase?
J. Biot. Olem. 263:1858318586. 1988.
6. Fischer. E.H.; Krebs, E.G. Conversion of phosphorylase
b to phosphorylase a in muscle extracts. J. BioI.
Clwl1I. 216:121-132,1995.
lohnson. L.N.; Barford. D. The effects of phosphoryla-
tion on the structure and function of proteins. All/Ill.
Rev. Biophys. 8io11l01. Stmct. 22: 199-232, 1993.
7. Cohen, P. The structure and regulation of protein phos-
phatases. An"u. Rev. Biocllcm. 58:453508, 1989.
Hanks. 5.K., Quinn, A.M.; I-Iunter, T. The protein kinase
family: conserved features and deduced phylogeny of
the catalytic domains. Sciellcc241:42-52, 1988.
Taylor, 5.5.; Knighton, D.R.; 7.beng. I.; Ten Eyck, L.F.;
Sowadsld, I.M. Structural frnmework for the protein
Idnase family. AmlU. Rev. Cell BiaL 8:429-462. 1992.
8. DeBondt, H.L; Rosenblatt, J.; lancarik, I.; et al. Crystal
structure of cyclin-dependent Idnase 2. Nature
363:595-602. 1993.
9. Bourne, H.R.; Sanders, D.A.; McCormick, F. The GTPase
superfamily: conserved structure and molecular me-
chanism. Nature 349:117-127, 1991.
Wittinghofer, A.; Pai, E.F. The structure of ras protein: a
model for a universal molecular switch. Trends Bio-
cllem. Sci. 16:382-387. 1991.
10. McCormick, F. rll5 GTPase activating protein: signal
transmitter and signal teminator. Cell 56:5-8, 1989.
11. Berchtold, H.; Reshetnikova, L; (leiser, e.OA; ct at
Crystal structure of active elongation factor Tu reve-
236 caprtulo 5: Funci6n de las protemas
als major domain rearrangements. Nature 365:121
132.1993.
Kjeldgaard, M.; Nissen, P.; Thirup, 5.; Nyborg, J.
crystal structure of elongation factor EF-Tu
77,enllllS aquatiCllS in the GTP conformation. 5
l/lre 1:35-50,1993.
12. Hill, T.L. Biochemical cycles and free energy transdl.
tion. Trends Biodlem. Sci. 2:204-207, 1977.
13. Rayment. I.; Holden, I-I.M.; Whittaker, M.; et a!. 5tru
re of the actin-myosin complex and its implicatX.
or muscle contraction. Science 261 :58-65, 1993.
14. Hokin, L.E. The molecular machine for driving the a
pled transports of Na' and K' is an (Na + K)-aetr
ted ATPase. Trends Biochem. Sci. 1:233-237, 1976.
Jencks, W.P. How docs a calcium pump pump cal .
]. BioI. Chem. 264: 18855-18858, 1989.
15. Alberts, B.; Miake-Lye. R. Unscrambling the pUzzk
biological machines: the importance of the
Ce1168:415-420, 1992.
16. Alberts, B.M. Protein machines mediate the basic
tic processes. Trends Genel. 1:26-30, 1985.
17. Udgaonkar. 1.8.: Baldwin, R.t. NMR evidence f
early framework intermediate on the folding pa
of ribonuclease A. Natllre 335:694-699, 1988.
Kuwajima, K. The molten globular state as a clue for
derstanding the folding and cooperativity of
lar-protein structure. Proteins 6:87103, 1989.
18. Agard, DA To fold or not to fold. Science 260: 1903:
1993.
Georgopoulos, c.: Welch, W.I. Role of the major
shock proteins as molecular chaperones. AnllLL
Cell Bioi. 9:601634. \993.
Martin, ).; Langer, T.; Boteva, R.; et al. Chaperonin-
diated protein folding at the surface of groEL throu
a molten globulclike intennediate. Nature 35~
42,1991.
19. Baron, M.; Norman, D.G.; Campbell, 1.0. Protein
les. Trends Biocllem. Sci. 16:13-17, 1991.
2.0. Koch. CA.; Anderson, D.; Moran, M.P.; Ellis, C.; Pa",
T. 5H2 and 5H3 domains: elements that control'
actions of cytoplasmic signaling proteins. ~
252:668-674,1991.
21. Hershko. A.; Ciechanover, A. The llbiquitin system
protein degradation. Amlt/. Rev. Biochem. 61:-
807,1992.
Rechsteiner. M.: Hoffman, L.; Dubiel, W. The mul
talytic and 265 proleases. j. BioI. Chern. 268:
6068, 1993.
22. Varshavsky, A. The N-end rule. Cefl69:725-735, 1992...
MecanisDlOS
geneticos basicos

La capacidad de las celulas de mantener un elevado grado de orden dentro de

un universo caotico, depende de la informacion genetica que se expresa, se
mantiene y a veces mejora, mediante los procesos geneticos basicos -la sfntesis (
replicaci6n del DNA
reparaci6n del DNA
recombinaci6n genetica
7
DNA
de protefnas y del RNA, la reparaci6n del DNA, la replicaci6n del DNA y la recom-
binaci6n genetica. En estos procesos, que producen y mantienen las protefnas y 3. ' i1 IimliIIIW-5,3'
los acidos nucleicos de una celula (Figura 6-1) la informacion de una secuencia transcripci6n del DNA
lineal de nucleotidos se utiliza para especificar otra cadena lineal de nucleotidos (sintesis de RNA)
(una molecula de DNA 0 de RNA) 0 una cadena lineal de aminoacidos (una mo-
lecula proteica). Por ella, los acontecimientos sobre los que se basan los proce- J RNA
5' " . . " , . . " , , , , , , , . . , 13'
sos geneticos son unidimensionales y conceptualmente simples, en compara- ~TL-JL-JL-JL-JL-J
cion con la mayorfa de los procesos celulares, los cuales son el resultado de la
informacion contenida en las complejas superficies tridimensionales de las mo-
codones 1 sintesis de proteinas

PROTEfNA
leculas proteicas. Quiza esta sea la razon de que entendamos mejor los mecanis-
mas geneticos que muchos otros procesos celulares. H2N~COOH

En este capftulo examinaremos la maquinaria molecular que repara, replica aminoacidos

yen ocasiones altera el DNA celular. Veremos que la maquinaria depende de en-
Figura 6-1 Los procesos geneticos
zimas que cortan, copian y recombinan secuencias de nucleotidos. Tambien ve-
basicos. Se cree que los procesos que
remos que estas y otras enzimas pueden ser parasitadas por virus, plasmidos y se muestran aqui se producen en todas
elementos geneticos transponibles, los cuales no solo dirigen su propia replica- las celulas actuales. Probablemente,
cion sino que tambien pueden alterar el genoma celular mediante procesos de sin embargo, en etapas muy
recombinacion genetica. tempranas de la evoluci6n de la vida
Sin embargo, en primer lugar reconsideraremos un topico central mencio- existieron celulas mas sencillas que no
nado brevemente en el Capftulo 3 -los mecanismos de sfntesis de RNA y de pro- tenian ni DNA ni proteinas (vease
tefnas. Figura 1-11). N6tese c6mo una
secuencia de tres nucle6tidos (un
cod6n) de una molecula de RNA
Sintesis de RNA y de proteinas codifica un aminoacido determinado
de una proteina.
Las protefnas constituyen mas de la mitad de la masa seca total de una celula, y
su sintesis es de importancia capital para el mantenimiento, crecimiento y desa-
rrollo de la celula. Se produce en los ribosomas. Depende de la colaboracion en-
tre diversos tipos de moleculas de RNA y empieza con una serie de etapas prepa-
ratorias. Primero, sobre el DNA que codifica la protefna que se va a sintetizar, se
ha de copiar una molecula de RNA mensajero (mRNA). Mientras tanto, en el ci-
toplasma, cada uno de los 20 aminoacidos a partir de los cuales se construira la
protefna, se han de unir a su molecula especffica de RNA de transferencia (tRNA),
y las subunidades del ribosoma sobre el cual se va a generar la nueva protefna,

237
se han de volver a cargar con factores proteicos auxiliares. La sfntesis de protef-
nas comienza cuando todos estos componentes se encuentran en el citoplasma
y forman un ribosoma funcional. Cuando una molecula de mRNA se desplaza
progresivamente a traves de cada ribosoma, la secuencia de nucleotidos de la
molecula de mRNA es traducida a la secuencia de aminoacidos correspondiente,
produciendo una cadena proteica determinada, especificada por la secuencia de
DNA de su gen. Empezaremos por considerar como se sintetizan en la celula las
diferentes moleculas de RNA.

La RNA polimerasa copia el DNA a RNA:

el proceso de la transcripci6n del DNA!
El RNA se sintetiza sobre un molde de DNA, a traves de un proceso conocido
como transcripci6n del DNA. La transcripcion genera los mRNA que transportan
la informacion para la sfntesis de las protefnas, los RNA de transferencia, los RNA
ribosomales y otros tipos de moleculas de RNA con propiedades estructurales y
catalfticas. Estas moleculas de RNA son sintetizadas por enzimas RNA polimerasa,
que generan una copia de RNA de una secuencia de DNA. En celulas eucario-
tas tres tipos de moleculas de RNA polimerasa sintetizan diferentes tipos de RNA,

RNA polimerasa Figura 6- 2 Sintesis de una moh~cula

de RNA por la RNA polimerasa. La
enzima se une ala secuencia promotor
5'
del DNA e inicia la sfntesis a partir de
3' esta senal promotor. Completa la
3' 5' sfntesis hasta la senal de terminaci6n.
Tras ello, la polimerasa y la cadena
HELICE DE lugar de inicio de la transcripcion completa de RNA se liberan. Durante
DNA
ABRIENDOSE la elongaci6n de la cadena de RNA,la
polimerizaci6n alcanza una velocidad
5' de 30 nude6tidos par segundo a 37C.
3'
3' 5' Por consiguiente, una cadena de RNA
de 5000 nucle6tidos tarda unos tres
INICIACION DE UNA CADENA
DE RNA POR UNION DE minutos en sintetizarse.
LOS DOS PRIMEROS
RIBONUCLEOSIDOS
TRIFOSFATO
5'
3'
3' 5'
ELONGACION DE LA
CADENA DE RNA EN
DIRECCION 5' A 3'. POR
LA ADICION DE
RIBONUCLEOSIDOS
TRIFOSFATO
5'
3'
3' 5'
desplazamiento _ - - - - - ' ' -
continuo de la
corta region
cadena de RNA y
de helice de
nueva formacion de
DNA/RNA
la helice de DNA
5'
3'
3' 5'
ERMINACION Y L1BERACION
DE LA POLIMERASA Y DE LA
CADENA DE RNA ACABADA

5':;;;
}

238 Capftulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 cadena patron Reacciones de elongacion
de DNA
3' de la cadena, catalizada por una
cadena de RNA enzima RNA polimerasa. En cada
en crecimiento paso, se seleeciona un nuevo
5' I ribonucleosido trifosfato en hase a su
oI capacidad de formar pares de bases
-o-p=o con la cadena de DNA expuesta, que
I
oI e,-------.'IIIIIIIIIL...--_-----' actlia como molde 0 patron; entonees,
H2C un ribonucleosido monofosfato se
agrega al extremo 3'-OH de la cadena
de RNA en crecimiento (flecha de color
oI OH rojo) y se libera un pirofosfato (dtomos
-o-p=o dibujados en ro;o). Asi la nueva cadena
I BASE
oI de RNA crece nucleotido a nucleotido,
en direccion 5' -a-3', y su secuencia es
H2 C
complementaria a la de la cadena
patron de DNA. La reaccion esta
impulsada tanto por la variacion
3' OH OH favorable de energia libre que
oII 0
II
~
\.)(
acompafia la liberacion del
pirofosfato, como par la subsiguiente
-0-P-0-P-0-P-0-CH 2
I I I hidrolisis del pirofosfato hasta fosfato
0_ 0_ 0_ inorganico (vease Figura 2-30).

OH OH

ribonucleosido trifosfato entrante

direccion 5' a 3'

del. crecimiento
de la cadena

5'

como se describe en el Capitulo 8. Se cree que estas RNA polimerasas han deri-
vado durante la evolucion de una unica enzima presente en las bacterias, que
media toda la sintesis de RNA bacteriano.
La RNA polimerasa bacteriana es una gran enzima formada por multiples
subunidades, asociada con varias subunidades proteicas adicionales que entran
y salen del complejo DNA-polimerasa en diferentes momentos de la transcrip-
cion. Moltkulas libres de RNA polimerasa colisionan aleatoriamente con el cro-
mosoma bacteriano, uniendose muy debilmente a la mayor parte del DNA. Sin
embargo, la polimerasa se une muy fuertemente cuando entra en contacto con
una secuencia especffica de DNA, Hamada el promotor, que contiene ellugar de
iniciaci6n para la sintesis del RNA, y sefiala ellugar en el que debe iniciarse la
sintesis del RNA. Las reacciones que se producen a continuacion se sefialan en
la Figura 6-2. Despues de unirse al promotor, la RNA polimerasa abre una region
localizada de la doble helice, de forma que expone los nucleotidos de ambas ca-
denas de una pequefia zona de DNA. Una de las dos cadenas expuestas del DNA
actua como patron para el apareamiento de bases complementarias con mono-
meros de ribonucleosido trifosfato entrantes, dos de los cuales son unidos entre
si por la polimerasa y se inicia una cadena de RNA. Entonces, la molecula de po-
limerasa se mueve progresivamente a 10 largo del DNA, desenroHando la helice
de DNA 10 necesario para exponer una nueva region de la cadena patron para el
apareamiento de bases. De esta forma, la cadena de RNA va creciendo nucleoti-
do a nucleotido en direccion 5' -a-3' (Figura 6-3). El proceso de elongacion de la
cadena continua hasta que la enzima encuentra una segunda secuencia especial

Sfntesis de RNA y de protefnas 239

 (A) SENAL DE INICIO

-35 -10 +1
I I I
5' - T A G T G T A III j[J J
IliT GAT A G A A G C ACT C T A clllIIlllllllllll C T C A A TAG G T C C A C G - 3' DNA
3' -
I
A T C A CAT A ACT G T ACT A T C T T C G T GAG AT GAT A T A A GAG T TAT C C A G G T G C -
1
lugar de inicio ! TRANSCRIPCI6N
5'

cadena patron de DNA 5'. 3' RNA

(8) SENAL DE TERMINACI6N

5' - C C C A C T T C C G [fl/llllfl!llillJf'/!iffl!1"ff4 AWfI!//I$fIJI!iIi'f; A ACT T T C T T T A A T G A - 3'

3' - G G G T G T C G G C G G T C A A G G C G A C C G C C G T A A A AT T G A A A G A A AT T ACT - 5'

cadena patron de DNA/ 1 TRANSCRIPCI6N Jigura 0-4 Senalesdeinicioyde

tenninaci6n para la sfntesis de RNA por
5' - C C C A C A G C C G C C A G U lie:: C; C U G G C G G C -OH 3' una RNA pollinerasa bacteriana. Aqui la
cadena inferior de DNA es la cadena
transcrito de RNA 1 PLEGADO RAplDO DEL RNA patron y la secuencia de la cadena
superior corresponde a la del RNA que se
UCc sintetiza (notese la substituci6n de U del
U G
RNAporT en eIDNA). (A) Lapolimerasa
GIIIIII C
A 111111 U empieza a transcribir en ellugar de inicio.
CIIIIII G cadena de RNA plegada Dos cortas secuencias (sombreadas en
CIIIIII G colabora en la terminacion
GIIIIIIC de la cadena verde) situadas a entre -35 y -10
CIIIIII G nucleotidos del inicio, determinan d6nde
CIIIIIIG se ha de unir la polimerasa; relativamente
GIIIIII C
A /\
cercanas a ellas, dos secuencias de
5 ' - CCCAC li -OH 3' hexanucle6tidos, espaciadas
adecuadamente una de otra, especifican
el promotor de la mayona de genes de E.
del DNA, la senal de stop (terminaci6n), en cuyo momento la polimerasa se para, coli. (B) Una senal de terrninaci6n (stop).
liberandose tanto del DNA patron como de la cadena de RNA recien formada. La RNA polimerasa de E. coli se para
Por convenio, cuando se habla de una secuencia de DNA asociada a un gen, cuando sintetiza varias U consecutivas
(sombreadas en azul) a partir de una serle
se trata de la secuencia que no es la patron y se escribe en direccion 5' a 3'. Este
complementaria de varias A consecutivas
convenio se ha adoptado ya que la secuencia que no es la patron corresponde a de la cadena patron siempre que haya
la secuencia del RNA que se fabrica. acabado de sintetizar una secuencia de
En la Figura 6-4 se presentan las secuencias de nucleotidos que actuan nucleotidos de RNA autocomplementaria
como lugares de inicio y de terminacion para la RNA polimerasa bacteriana. Las (sombreada en verde), la cual
secuencias de nucleotidos encontradas en muchos ejemplos de un tipo particular nipidamente formara una helice en
de region de DNA (como un promotor) se denominan secuencias consenso. En las horquilla que es crucial para parar la
bacterias, los promotores fuertes (los que estan asociados a genes que producen transcripcion. La secuencia de
nucleotidos de la regi6n auto-
complementaria puede ser muy variable.
lugar de entrada del
ribonucleosido trifosfato Figum 0-5 DesenroUarniento ynuevo
cadena de RNA enroUarniento del DNA por la RNA
desplazada
pollinerasa. A medida que la molecula
de RNA polimerasa avanza, va
desenrollando continuamente la doble
3' helice de DNA por delante dellugar
5' donde se produce la polimerizacion y
volviendo a enrollar las dos cadenas de
DNA por detras de este lugar,
desplazando la cadena de RNA acabada
de formar. Sin embargo, de forma
lugar que transitorla se forma una corta region de
lugar que vuelve desenrolla
a enrollar helice RNA-DNA y el RNA final se libera
corta region de como una molecula de una sola cadena,
helice RNA/DNA copia de una de las dos cadenas del DNA

240 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

grandes cantidades de mRNA) tienen secuencias que se aparean fuertemente
con las secuencias promotoras consenso (como en la Figura 6-4A) mientras que
los promotores debiles (los que estan asociados con genes que producen canti-
dades relativamente pequenas de mRNA) se aparean peor con estas secuencias.
3', ~
8610 se utilizan zonas seleccionadas de un cromosoma cccccccccccccc
para producir moIeculas de RNA2
A medida que una molecula de RNA polimerasa se va desplazando a 10 largo del
5'-==========;
3'1I!!I
GGGGGGGGGGGGGG

DNA, en ellugar activo de la enzima se va formando una doble helice RNA-DNA.

Esta helice es muy corta ya que, en cuanto la polimerasa ha acabado de pasar, se \ doble helice de DNA
vuelve a formar la doble helice DNA-DNA que desplaza la cadena de RNA recien
formada (Figura 6-5). Como resultado de todo ello, cada cadena completa de
RNA se libera del patron de DNA como una molecula libre de una sola cadena, y
de una longitud aproximada de entre 70 y 10 000 nucleotidos.
\
En principio, cualquier region de la doble Mlice del DNA podria ser copiada
ados moleculas de RNA diferentes -una copia de cada una de las dos cadenas
del DNA. Sin embargo, en cada region del DNA unicamente una de las dos cade-
nas se utiliza como patron. La cadena de RNA formada tiene una secuencia de
nucleotidos equivalente a la de la otra cadena no utilizada como patron. La ca-
dena que sera copiada varia a 10 largo de cada molecula de DNA, y en cada gen
viene determinada por el promotor. Como se ilustra en la Figura 6-4 un promo-
tor es una secuencia de DNA orientada que situa a la RNA polimerasa en una u
Figura 6-6 La orientaci6n de la RNA
otra direccion y esta orientacion determina cual de las dos cadenas de DNA sera polimerasa determina cuaJ. de las dos
copiada (Figura 6-6). En genes vecinos la cadena de DNA que sera copiada a cadenas de DNA actuara de patr6n.
RNA puede ser diferente 0 la misma (Figura 6-7). Puesto que la cadena de DNA que
Tanto la RNA polimerasa bacteriana como las RNA polimerasas de eucario- actua como patron ha de ser recorrida
tas son unas moleculas complicadas, formadas por multiples subunidades y una desde su extremo 3' hasta el extremo 5'
masa total de mas de 500 000 daltons. Sin embargo, algunos virus bacterianos (vease Figura 6-3), la direccion en la
codifican RNA polimerasas de una sola cadena, de una quinta parte de esta que se desplace la RNA polimerasa
masa y que catalizan la sintesis de RNA como minima tan bien como la enzima determinani, como se indica en este
de la celula huesped. Posiblemente la presencia de multiples subunidades es im- diagrama, cua! de las dos cadenas de
portante desde el punto de vista de la regulacion de la sintesis de RNA, que toda- DNA sera utilizada.como patron para
via no se ha definido completamente. la sfntesis de RNA. A su vez, la
direcci6n del movimiento de la RNA
En este breve esquema de la transcripcion del DNA hemos omitido muchos
polimerasa viene determinada por la
detalles: en muchos casos han de ocurrir otros procesos complejos antes de que orientaci6n de la secuencia promotor
se pueda producir una molecula de mRNA. Por ejemplo, las proteinas regulado- a la que la RNA polimerasa se une
ras de la expresi6n genica colaboran en la determinacion de las regiones del DNA inicialmente.
que seran transcritas por la RNA polimerasa, desempenando asi un papel im-
portante en cuanto a determinar que proteinas seran sintetizadas por una celu-
lao Ademas, aunque en los procariotas las moleculas de mRNA se sintetizan di-
rectamente por transcripcion del DNA, en las celulas eucariotas superiores la
mayoria de transcritos de RNA son considerablemente alterados -mediante un
proceso denominado maduraci6n par corte y empalme (splicing) del RNA- antes
de abandonar al nucleo celular y entrar en el citoplasma como moleculas de
mRNA. Todos estos aspectos de la produccion de mRNA seran estudiados con
detalle en los Capitulos 8 y 9, donde consideramos el nucleo celular y el control
de la expresion genica, respectivamente. Ahora supongamos que una celula ha Figura 6-7 Direcciones de
transcripci6n a 10 largo de una

....
corta porci6n de un cromosoma
cromosoma de E. coli transcritos de RNA bacteriano. N6tese c6mo algunos

\ ,ooboo ,
genes son transcritos a partir de una
I cadena de DNA mientras que otros 10

11==
5'

II
3'
gen a

gen b gen c
I
~

5000 pares de nucle6tidos

.
1=
gen f gen 9
~II

I
II
3'

5'
son a partir de la otra cadena de DNA.
En la figura se muestra
aproximadamente el 0,2% del
cromosoma de E. coli. (Adaptado de
D.L. Daniels et aI., Science 257: 771-
777,1992.)

Sfntesis de RNA y de protefnas 241

producido moleculas funcionales de mRNA y procedamos a estudiar como estas el aminoacido
OH extreme 3'
moIeculas dirigen la sfntesis de protefnas. se une aqui

extreme 5'
Las moIeculas de RNA de transferencia actuan
como adaptadores que traducen secuencias
de nucle6tidos a secuencias de proteina3
asaT
Todas las celulas contienen un conjunto de moleculas de RNA de transferencia
(tRNA), cada una de la cuales es una pequefia molecula de RNA (la mayorfa de
elIas tienen una longitud de entre 70 y 90 nucleotidos). Los tRNA se unen por
uno de sus extremos a un codon especffico de la moIecula de mRNA y por el otro
aI aminmicido especffico para este codon, y de esta forma permiten que los ami-
noacidos se alineen de acuerdo con la secuencia de nucleotidos del mRNA. Cada nucle6tidos
modificados
tRNA esta disefiado para transportar uno solo de los 20 aminoacidos que se utiIi-
zan para la sfntesis de protefnas: un tRNA que transporta glicina se denomina
tRNAGLY, y asf sucesivamente. Cada uno de los 20 aminoacidos tiene, como mfni-
mo, un tipo de tRNA asignado, mientras que la mayona de aminoacidos dispo- l-----.J
nen de varios tipos de tRNA. Antes de que un aminoacido se incorpore a una ca- anticod6n
dena proteica, se une por su extrema carboxilo al extrema 3' de una molecula Figura 6-8 La estructura en "hoja de
apropiada de tRNA. Esta union cumple dos funciones. La primera y mas impor- trebol" del tRNA. Se trata de una
tante, unir covalentemente cada aminoacido con un tRNA que presenta un anti- visi6n de la molecula mostrada en la
cod6n adecuado -el anticodon es la secuencia de tres nucleotidos complemen- Figura 6-9, despues de desplegarla
taria del codon de tres nucleotidos de la secuencia de mRNA, especffica de este parcialmente. Existen muchas
aminoacido. El apareamiento codon-anticodon permite que cada aminoacido moleculas diferentes de tRNA,
se coloque en una cadena de protefna en crecimiento de acuerdo con 10 que se incluyendo como minima una por
establezca en la secuencia de nucleotidos del mRNA, consiguiendo asf que el co- cada aminoacido diferente. A pesar de
digo genetico se utilice para traducir la secuencia de nucleotidos a secuencia que estas diferentes moleculas de
proteica. Esta es la funcion "adaptadora" esencial de la molecula de tRNA: con tRNA se diferencian en su secuencia de
nucle6tidos, todas presentan los tres
uno de sus extremos unido a un aminoacido y el otro apareado con un codon, el
tallos acabados en asa y un brazo
tRNA convierte secuencias de nucleotidos en secuencia de aminoacidos. aceptor de un aminoacido. La
La segunda funcion de la union del aminoacido consiste en activar el amino- molecula de tRNA de la figura
acido, generando en su extrema carboxflico una union rica en energfa, de forma transporta fenilalanina (Phe), por 10
que pueda reaccionar con el gropo amino del aminoacido siguiente en la secuen- que se denomina tRNAPhe. En todas las
cia formando un enlace peptidico. El proceso de activacion es necesario para la moltkulas de tRNA el aminmicido se
sfntesis proteica ya que los aminoacidos no activados no se pueden afiadir direc- une al residuo A de la secuencia CCA
tamente a la cadena polipeptidica en crecimiento. (Por el contrario, el proceso re- del extrema 3' de la molecula. En
verso, en el cual se hidroliza un enlace peptidico por la adicion de una molecula barras rojas se presentan
de agua es energeticamente favorable y puede ocurrir espontaneamente.) apareamientos de bases
La funcion de una molecula de tRNA depende de su estructura tridimensio- complementarias.
nal, que se halla plegada de forma muy precisa. Algunos tRNA se han cristaliza-
do y por anaIisis de difraccion de rayos X se ha podido determinar su estructura

Figura 6-9 La estructura plegada de

una molecula de tRNA tipica. Dos
visiones de la conformaci6n
tridimensional de la molecula,
determinada por difracci6n de rayos X
N6tese que la moIecula tiene forma de
L, con uno de sus extremos adaptado
para aceptar el aminoacido, yel otro
extrema contiene los tres nucle6tidos
del anticod6n. Cada asa esta coloreada
de acuerdo con la Figura 6-8.

242 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 o

HN~O/H S

~
/H
H N
I N
H N~O H
H

adici6n a G de dos grupos metilo adici6n a U de dos hidr6genos adici6n a A de un grupo isopentenil substituci6n de un oxfgeno de U
IN, N-dimetil G) (dihidro U) (N'-isopentenil A) por un sulfuro (4-tiouridina)

tridimensional completa. Para plegar una molecula de tRNA se requiere tanto el Figura 6-10 Algunos de los
apareamiento de bases complementarias como interacciones poco habituales nucle6tidos poco usuales
entre bases (vease Figura 3-18). Las secuencias de nucleotidos de las moleculas encontrados en las moleculas de
de tRNA de muchos organismos diferentes revelan que las moleculas de tRNA tRNA. Estos nucle6tidos se producen
por modificaci6n covalente de
pueden formar los bucles y las zonas de bases apareadas necesarias para formar
nucle6tidos normales, despues de
una estructura de "cruce de carreteras en forma de trebol" (Figura 6-8), y que
haberse incorporado a la cadena de
posteriormente esta estructura se pliega adoptando la conformacion en forma RNA. En la mayoria de las moleculas
de L detectada en los amilisis cristalograficos. En la estructura nativa, el amino- de tRNA, a1rededor del 10% de los
acido se une a un extremo de la "L" mientras que el anticodon se localiza en el nucle6tidos estilll modificados (vease
otro extrema (Figura 6-9). Figura 6-8).
Los nucleotidos que forman parte de una cadena de acidos nucleicos com-
pleta (tal y como ocurre con los aminoacidos de las protefnas), pueden ser mo-
dificados covalentemente, modificandose asf la actividad biologica de la mole-
cula de acido nucleico. Modificaciones post-transcripcionales de este tipo son
especialmente comunes en las moleculas de tRNA, las cuales presentan muchos
nucleotidos diferentes modificados (Figura 6-10). Algunas de estas modificacio-
nes de los nucleotidos afectan a la conformacion y apareamiento de bases del
anticodon, facilitando el reconocimiento del codon del mRNA apropiado por la
molecula de tRNA.
Figura 6-11 Activaci6n de los
aminOlicidos. Las dos etapas del
Unas determinadas enzimas acoplan cada aminmicido proceso a traves del que se activa un
con su molecula apropiada de tRNA4 aminoacido (cuya cadena lateral aqui
se indica como R) para la sintesis de
Es la molecula de tRNA, y no el aminoacido que esta lleva unido, la que determi-
proteina, mediante una enzima
na ellugar en el que sera afiadido el aminoacido durante la sfntesis de protefnas. aminoacil-tRNA sintetasa. Como se
Esto fue establecido a traves de un ingenioso experimento en el cual un amino- indica, se utiliza la energia de hidr6lisis
acido (la cistefna) fue transformado qufmicamente en otro aminoacido diferente del ATP para unir, mediante un enlace
de alta energia, cada aminoacido a su
molecula de tRNA. En primer lugar el
R OH aminoacido se activa mediante la
I .p-0
H 2 N-C -c aminoacido uni6n de su grupo carboxilo a un AMP,
I "OH formando una aminodcido adenilado;
H
tRNA
la formaci6n del enlace con el AMP,
que normalmente es una reacci6n
desvaforable, esta favorecida pOI la
hidr6lisis de la molecula de ATP que
R
I .p-0 cede el AMP. Sin abandonar la enzima
H 2 N-C-C,- . sintetasa, el grupo carboxilo unido aI
R
~ ~8denina I 0 AMP es transferido a un grupo
H N-C-C.p-
aminoacido adenilado 2 I " hidroxilo del azucar del extrema 3' de
H 0
la molecula de tRNA. Esta
transferencia une el aminoacido,
mediante un enlace ester activado, aI
tRNA formando la molecula final de
~,adeftina aminoacil-tRNA. La enzima sintetasa
AMP no se muestra en la figura.

Sfntesis de RNA y de protefnas 243

 (A) (B)
Figura 6-12 Estructura del enlace
aminoacil
tRNA
aminoacil-tRNA. El extremo carboxilo
del aminoacido forma un enlace ester
con la ribosa. Como la hidrolisis de
este enlace ester esta asociada con una
variacion de energia libre muy
,--- favorable, se dice que un aminoacido
I unido de esta forma esta activado.
I 0 0 (A) Esquema de la estructura.
I ~ / (B) Estructura real correspondiente a
I T o~ / la region recuadrada de (A). Como en
I H-T-R I C
I la Figura 6-11, el "grupo R" del
I NH z I H-C-R aminoacido indica una de las 20
L I I cadenas laterales posibles (vease Panel
NH z aminoacido
2-5, pags. 58 y 59).

(la alanina), y posteriormente fue unido al tRNA especifico de la cisteina. Cuan-

do estas moIeculas de tRNA "hfbridas" se utilizaron para la sintesis de proteinas
en un sistema libre de celulas, en cada uno de los puntos en los que se utilizo
este tRNA se inserto el aminmicido incorrecto. Asi pues, la fidelidad del proceso
de sintesis de proteinas depende de la fidelidad del mecanismo que normal-
mente une especificamente cada uno de los aminoacidos activados con sus mo-
Ieculas de tRNA correspondientes.
iDe que manera una molecula de tRNA acaba unida covalentemente a uno
de los 20 aminoacidos que precisamente es su pareja apropiada? El mecanismo
depende de la actividad de las enzimas denominadas aminoacil-tRNA sinteta-
sas, que acoplan cada aminoacido a su grupo de moleculas de tRNA apropiadas.
Existe una enzima sintetasa diferente para cada aminoacido (20 sintetasas en to-
tal): una de ellas une glicina a todas las moleculas tRNAGly, otra une alanina a to-
das las moIeculas tRNAAla, y asi sucesivamente. La reaccion de acoplamiento que
genera una molecula de amionacil-tRNA esta catalizada en dos etapas, tal como
ilustra la Figura 6-11. En la Figura 6-12 se muestra la estructura del enlace ami-
noacido-RNA.
A pesar de que las moleculas de tRNA actuan como el adaptador final en la
etapa de transformacion de la secuencia de nucleotidos a secuencia de aminoaci-
dos, las enzimas aminoacil-tRNA sintetasas son adaptadores de la misma impor-
tancia para el proceso de decodificacion (Figura 6-13). Asi, el codigo genetico es
traducido por medio de dos conjuntos de adaptadores que actuan secuencial-
mente, cada uno de los cuales empareja una superficie molecular a otra con una
gran especificidad; su accion combinada asocia cada secuencia de tres nucleoti-
dos de la molecuIa de mRNA -cada codon- con su aminoacido determinado (Fi-
gura 6-14).

Los aminoacidos se van afiadiendo al extremo carboxilo terminal

de una cadena polipeptidica en crecimiento
La reaccion fundamental de la sintesis proteica es la formacion de un enlace
peptidico entre el grupo carboxilo del extremo de una cadena polipeptfdica en
crecimiento y el grupo amino libre de un aminoacido. Por consiguiente, una ca-
dena proteica se sintetiza paso a paso desde su extrema amino terminal hasta su Figura 6-13 Reconocimiento de una
molecula de tRNA por su aminoacil-
extremo carboxilo terminal. A 10 largo de todo el proceso, el extremo carboxilo
tRNA sintetasa. Para este tRNA
de la cadena polipeptidica permanece activado por su union covalente a una (tRNAGln), la presencia de
moIecula de tRNA (una molecula de peptidil-tRNA). Este enlace covalente rico determinados nucleotidos tanto del
en energia se rompe en cada ciclo de reacciones, pero inmediatamente es subs- anticodon (en La parte inferior) como
tituido por otro enlace identico con el aminoacido que se acaba de afiadir a la del prazo del tRNA que acepta el
cadena (Figura 6-15). Asi, cada aminoacido que es afiadido lleva consigo la ener- aminoacido permiten que el tRNA sea
gia de activacion necesaria, no para su propia adicion a la cadena sino para la reconocido especificamente por la
del siguiente aminoacido -10 cual constituye un ejemplo de un tipo de polimeri- sintetasa (azul). (Por cortesia de Tom
zacion "por la cabeza" descrito en el Capitulo 2 (Figura 2-36). Steitz.)

244 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

aminoacido
(tript6fano)

tRNA especffico
del tript6fano (tRNATrP)

uni6n del tript6fano el tRNATrp se une

al tRNATrp
al cod6n UGG

RESULTADO NETO: EL TRIPT6FANO ES SELECCIONADO POR SU COD6N

5' 3'
mRNA

El c6digo genetico es degenerado 5 Figura 6-14 El c6digo genetlco se

traduce por medio de dos
En el transcurso de la sfntesis de protefnas, la maquinaria de la traducci6n se des- "adaptadores" asociados
plaza en direcci6n 5'-a-3' a 10 largo de una molecula de mRNA, y lee la secuencia secuencialmente. EI primer adaptador
de nucle6tidos de este mRNA de tres en tres. Como hemos visto, cada aminmici- es la enzima aminoacil-tRNA sintetasa,
do esta especificado por un triplete de nucle6tidos (cod6n) de la molecula de que acopla un aminoacido
mRNA que se aparea con una secuencia de tres nucle6tidos complementaria, del determinado a su tRNA
extremo anticod6n de una molecula de tRNA determinada. Puesto que tan s610 correspondiente; el segundo
uno de las muchos tipos de moleculas de tRNA de una celula puede aparearse adaptador es la moIecula de tRNA
cuyo anticod6n se une a la secuencia
con cada cod6n, el cod6n determina el residuo de aminoacido especffico que
de nucIe6tidos apropiada (cod6n) del
sera afiadido al extremo de la cadena polipeptfdica en crecimiento (Figura 6-16).
mRNA. Un error en cualquiera de estos
El RNA esta compuesto por cuatro tipos de nucle6tidos, por 10 que existen dos procesos hara que el aminoacido
64 posibles secuencias diferentes de tres nucle6tidos (4 x 4 x 4), y la mayorfa de que se incorpora a la protefna sea
ellas se presentan en alglin lugar de la secuencia de la mayorfa de las moleculas err6neo.
de tRNA. Tres de estas 64 secuencias no codifican ninglin aminoacido sino que
determinan el final de una cadena polipeptfdica; reciben el nombre de codones

H 0
H 0 H H 0 o
I II I I II ,f
I II ---.,......---1~ H 2 N- -C N-C-C-N -C
H2 N-C-C
I T
R]
I
R3
I
H
R1

Oft
peptidil tRNA unido al
extremo carboxilo de la
cadena polipeptfdica en molecula de tRNA Iiberada
crecimiento de su uni6n al peptido

nueva molecula de tRNA

unida al extremo carboxilo
Figura 6-15 Incorporaci6n de un aminoacido a una prote{na. de la cadena polipeptfdica
Una cadena polipeptfdica crece por la adici6n progresiva de aminoacidos a en crecimiento
su extrema carboxilo terminal. La formaci6n de cada enlace peptfdico es
energeticamente favorable debido a que el carboxilo terminal de la cadena en
crecimiento ha sido activado mediante su uni6n covalente a una molecula de
tRNA. La uni6n peptidil-tRNA que activa el extrema en crecimiento se
regenera en cada cicIo. Las cadenas laterales de los aminoacidos se han
abreviado como R], R2 , R3 Y R4 Como referencia, todos los atomos del
segundo aminoacido de la cadena polipeptfdica estan sombreados en gris.

Sintesis de RNA y de prote{nas 245

 Figura ll-I (; Decodificaci6n de una molecula de mRNA. Cada aminmicido cadena polipeptfdica en crecimiento
que es aftadido al extrema en crecimiento de una cadena polipeptfdica, es
seleccionado mediante el apareamiento de bases complementarias entre el
anticod6n de la molecula de tRNA que 10 transporta y el cod6n siguiente.de la
cadena de mRNA.

de terminaci6n (stop codonsJ. Por 10 tanto, quedan 61 codones para especificar 50Illliiliiiiil_...........iAI!~
unicamente 20 aminmicidos diferentes. Por esta raz6n, la mayoria de los amino-
acidos estan representados por mas de un cod6n (Figura 6-17) por 10 que se dice
que el c6digo genetico es degenerado. Dos aminoacidos, metionina y tript6fano,
tan s610 tienen un cod6n cada uno. Estos aminoacidos son los menos abundan-
tes de las proteinas. aminoacil
tRNA
La degeneraci6n del c6digo genetico implica 0 que existe mas de un tRNA
para cada aminoacido 0 que una misma molecula de tRNA puede aparearse con
mas de un cod6n. De hecho se producen ambas cosas. Para algunos aminoaci-
dos existe mas de una molecula de tRNA, y algunas moIeculas de tRNA estan
construidas de tal manera que unicamente exigen un apareamiento exacto de
las dos primeras posiciones del cod6n, de forma que pueden tolerar un adapta- 2
ci6n defectuosa (0 balanceo) en la tercera. Este balanceo en el apareamiento de
bases explica por que muchos de los codones alternativos para un mismo ami- /
nmicido se diferencian entre ellos unicamente en el tercer nucle6tido (vease Fi-
gura 6-17). El balanceD estandar de pares de bases hace posible acomodar los 20
aminoacidos a 61 codones con tan s610 31 moleculas diferentes de tRNA; en una
III
mitocondria animal, un "balanceo" mayor permite que se produzca sintesis de
proteinas con tan s610 22 moIeculas diferentes de tRNA (vease Capitulo 14).

Los acontecimientos de la sfntesis proteica

estan catalizados sobre el ribosoma6
Las reacciones de la sintesis de proteinas que acabamos de describir necesitan
que una compleja maquinaria catalitica las guie. Por ejemplo, el extrema de la
cadena polipeptfdica por el que se produce el crecimiento debe mantenerse ali-
neado con la moIecula de mRNA para asegurar que cada cod6n sucesivo del
mRNA encaje de forma precisa con el anticod6n de una molecula de tRNA, y no
se salte un nucle6tido, ya que ello cambiaria la pauta de lectura (vease Figura 3-
17). Este y todos los demas acontecimientos de la sintesis de proteinas estan ca-
talizados por los ribosomas, que son grandes complejos de moleculas de RNA y
de proteina. Los ribosomas de procariotas son muy similares a los de eucariotas
en cuanto a disefio y funci6n. Cada uno de ellos esta compuesto por una subuni-
dad pequefia y una subunidad grande, que se mantienen juntas formando un
Figura 6-17 El c6digo genetico. Debajo
complejo de una masa de varios millones de daltons (Figura 6-18). La subunidad
de la abreviatura de tres letras de cada
pequefia se une al mRNA y a las moleculas de tRNA, mientras que la subunidad aminoacido, se presenta la abreviatura
grande cataliza la formaci6n de los enlaces peptidicos. estandar de una letra. Los codones estcin
Mas de la mitad del peso de un ribosoma es RNA, y cada dia es mas evidente escritos con el nucle6tido 5' terminal a la
que el RNA ribos6mico (rRNA) desempefia un papel central en las actividades izquieItla. Observese que la mayona de
cataliticas del ribosoma. A pesar de que la moIecula de rRNA de la subunidad los aminoacidos estan representados por
pequefia del ribosoma tiene un tamafio variable en funci6n del organismo de mas de un codon y que normalmente la
que se trate, su complicado plegamiento esta muy conservado (Figura 6-19); variaci6n reside en el tercer nucle6tido
tambien existen claras homologias entre las moleculas de rRNA de las subunida- (vease tambien Figura 3-16).

AGA UUA AGC

AGG UUG AGU
GCA CGA GGA CUA CCA UCA ACA GUA
GCC CGC GGC AUA CUC CCC UCC ACC GUC UAA
GCG CGG GAC AAC UGC GAA CAA GGG CAC AUC CUG AAA UUC CCG UCG ACG UAC GUG UAG
GCU CGU GAU AAU UGU GAG CAG GGU CAU AUU CUU AAG AUG UUU CCU UCU ACU UGG UAU GUU UGA
Ala Arg Asp Asn Cys Glu Gin Gly His lie Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val stop
A R D N C E Q G H L K M F P S T W y V

246 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 T
+
- 25 nm

subunidad subunidad ribosoma

pequeiia grande

Figura 6-18 mribosoma. Modelo tridimensional del ribosoma bacteriano

visto desde dos angulos diferentes. En esta estructura se han determinado las
posiciones de muchas protefnas ribosomales mediante microscopia electr6nica,
tanto para visualizar las posiciones en las que se unen anticuerpos especfficos
como para medir la emisi6n de neutrones de ribosomas que contienen una 0
varias protefnas deuteradas. (A partir de JA. Lake, Ann. Rev. Biochem. 54:507-
530, 1985. 1985 por Annual Reviews Inc.)

des grandes de los ribosomas de diferentes organismos. Los ribosomas contienen Figura 6-19 EstnIctura del rRNA en la
un elevado mlmero de proteinas (Figura 6-20), pero muchas de elIas tienen una subunidad pequefia. Este modelo del
secuencia muy poco conservada durante la evolucion, e incIuso un mlmero sor- rRNA 16S de E. coli es indicativo del
prendente de elIas no parecen ser esenciales para la funcion del ribosoma. Sin complejo plegamiento que esta en la
base de las actividades cataliticas de los
embargo se ha sugerido que las proteinas ribosomales incrementan la funcion de
RNA del ribosoma. La moIecula de rRNA
los rRNA y que son las moleculas de RNA y no las moIeculas de proteina del ribo- 16S contiene 1540 nucle6tidos, yesta
soma las que catalizan la mayona de las reacciones del ribosoma. plegada en tres dominios: e15' (azul), el
central (raja) y e13' (verde). (Adaptado
EI ribosoma se desplaza, paso a paso, a 10 largo de S. Stem, B. Weiser y H.P. Noller,
]. Mol. Bioi. 204:447-481, 1988)
de la cadena de mRNA7
Un ribosoma contiene tres lugares de union para moleculas de RNA: uno para
mRNA y dos para tRNA. Un lugar, lIamado ellugar de uni6n peptidil-tRNA 0 Iu-
gar P acoge ala moIecula de tRNA que esta unida al extrema de la cadena polipep-
tidica en crecimiento. Otro lugar, lIamado Iugar de uni6n aminoacil-tRNA 0
Iugar A acoge a la molecula de tRNA entrante cargada con un aminoacido. Para
que una molecula de tRNA se una fuertemente a cualquiera de estos dos lugares es
necesario que su anticodon forme los pares de bases adecuados con el codon
complementario de la moIecula de mRNA que esta unida al ribosoma. Los lugares
Ay P estan tan cerca el uno del otro que las dos moIeculas de tRNA se yen forzadas
a aparearse con codones adyacentes de la molecula de mRNA (Figura 6-21).
EI proceso de elongacion de la cadena polipeptidica sobre un ribosoma se
puede considerar como un cicIo de tres etapas discretas (Figura 6-22):
1. En la etapa 1, una molecula de aminoacil-tRNA queda unida allugar A va-
cante del ribosoma (adyacente allugar P, que esta ocupado) mediante la
formacion de pares de bases con los tres nucIeotidos del mRNA (codon)
que estan expuestos en ellugar A.
2. En la etapa 2, el extremo carboxilo de la cadena polipeptidica se desacopla
de la moIecula de tRNA dellugar P y se une a traves de un enlace peptidico
al aminoacido que se halla unido a la molecula de tRNA que se halla en el
lugar A. Esta reaccion central de la sintesis de proteinas (vease Figura 6-15)
esta catalizada por una enzima peptidil transferasa. Recientes experi-
mentos de sintesis proteica con ribosomas han demostrado que esta catali-
sis esta mediada no por una proteina sino por una region especifica de la

Sintesis de RNA y de proteinas 247

 708 808

M 2 500 000
M 4200 000

508
/ 308 608
/ 408

M 1 600 000 M 900 000 M 2 800 000 M 1 400 000

/
rRNA 58
\rRNA 238 rRNA 168
/ / \~
rRNA 58 rRNA 288 rRNA5,88
/
rRNA 188

c::::; c::::; c::=;

~
120
eJ2?SS ~ 120 160
1900
nucle6tidos 2900 1540 nucle6tidos nucle6tidos
nucle6tidos nucle6tidos
nucle6tidos
4700
nucle6tidos

34 proteinas 21 proteinas -49 proteinas -33 proteinas

molecula mayor de rRNA de la subunidad mayor del ribosoma (vease Figu- Figura 6-20 Comparaci6n de las
ra 3-23). estructuras de los ribosomas de la
celula procariota y de la celula
3. En la etapa 3 el nuevo peptidil-tRNA del lugar A se transloca allugar P eucariota. Normalmente, los
cuando el ribosoma se desplaza a 10 largo de la molecula de mRNA. Esta componentes ribosomales se designan
etapa requiere energfa y esta impulsada por series de cambios conforma- por sus "valores de S", los cuales
cionales de uno de los componentes del ribosoma, mediante la hidr6lisis indican su velocidad de sedimentaci6n
de una molecula de GTP. en una ultracentrffuga. Vease c6mo a
pesar de las diferencias en cuanto a
Como una parte del proceso de translocaci6n de la etapa 3, la molecula libre mlmero y tamafto de sus rRNA y de sus
de tRNA que se ha generado en ellugar P durante la etapa 2 se libera del riboso- protefnas, ambos tipos de ribosomas
rna y vuelve a formar parte del acervo citoplasmcitico de moleculas de tRNA. Asf, tienen una estructura casi identica y
al completarse la etapa 3, ellugar A, que se halla desocupado, puede aceptar una actuan de forma muy similar. Por
ejemplo, a pesar de que los rRNA 18S y
28S del ribosoma eucariota contienen
muchos nucle6tidos extra que no se
encuentran en sus anaIogos
bacterianos, estos nucle6tidos estan
subunidad
grande del peptidil presentes en multiples insertos que al
tRNA ---+.........-.... I----t-- aminoacil
ribosoma tRNA parecer sobresalen como asas, de
subunidad forma que la estructura basica de cada
lugar de pequeiia del rRNA es muy semejante.
uni6n al ribosoma 5' 3'
mRNA
mRNA

Figura 6-21 Los tres lugares principales de uni6n de un ribosoma a

moleculas de RNA. Ala izquierda se presenta un ribosoma vacio y a la
derecha un ribosoma cargado. La representaci6n del ribosoma utilizada en
esta y en las tres figuras siguientes es muy esquemMica. Para una visi6n mas
exacta, veanse Figuras 6-18 y 6-25.

248 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 Figura 6-22 Fase de elongaci6n de la sintesis proteica sobre un ribosoma.
EI cicio de tres etapas representado aqui se repite una y otra vez durante la
sintesis de una cadena de proteina. En la etapa 1, una molecula de aminoacil-
tRNA se une allugar A del ribosoma; en la etapa 2 se forma un nuevo enlace
peptidico; en la etapa 3, el ribosoma se desplaza una distancia de tres
nucle6tidos a 10 largo de la cadena de mRNA, liberando la molecula de tRNA
anterior y "reseteando" el ribosoma, de forma que se puede unir el nuevo
aminoacil-tRNA. Como se indica en la Figura 6-21, ellugar P se ha dibujado a
la izquierda del cromosoma y ellugar A a la derecha.

nueva molecula de tRNA unida al siguiente aminoacido, la cual vuelve de nuevo

a iniciar el ciclo. En condiciones optimas, en una bacteria cada ciclo tarda alre-
dedor de 1/20 de segundo, de forma que la sintesis de una proteina de tamafio
medio de 400 aminoacidos se lleva a cabo en unos 20 segundos. Los ribosomas
se desplazan a 10 largo de una molecula de mRNA en direccion 5'-a-3', la cual
tambien es la direccion de la sintesis del RNA (vease Figura 6-3).
En la mayoria de las celulas, la sintesis de proteinas consume mas cantidad
de energia que cualquier otro proceso biosintetico. Para sintetizar cada uno de
los enlaces peptidicos se utilizan por 10 menos cuatro enlaces fosfato ricos en
energia: dos de estos enlaces fosfato se requieren para cargar cada molecula de
tRNA con su aminoacido (vease Figura 6-11) y los otros dos impulsan las etapas
del ciclo de reacciones que tienen lugar en el ribosoma durante la sintesis pro-
piamente dicha -uno se utiliza en la union del aminoacil-tRNA en la etapa 1
(vease Figura 6-31) y el otro en la traslocacion del ribosoma en la etapa 3.

Cuando se alcanza uno de los tres tipos de codon de terminacion,

....;.a.Iii.GilA
la cadena proteica se libera del ribosoma8
3'
Tres de los 64 codones posibles (UAA, UAG Y UGA) de una molecula de mRNA
son codones de terminacion (stop codons), que finalizan el proceso de la traduc-
cion. Unas proteinas citoplasmciticas denominadasfactores de liberaci6n se unen
directamente a cualquier codon de terminacion que llegue allugar A del riboso-
rna. Esta union modifica la actividad de la peptidil-transferasa, haciendo que
ahora catalice la adicion, al peptidil-tRNA, de una molecula de agua en lugar de la
de un grupo amino libre de un aminoacido. Como consecuencia de esta reaccion
el extremo carboxilo de la cadena polipeptidica en crecimiento queda libre de su
union a una molecula de tRNA. Como normalmente la cadena polipeptidica en
crecimiento se hallaba unida al ribosoma exclusivamente a traves de esta union,
inmediatamente queda libre en el citoplasma. Entonces, el ribosoma libera el
mRNA y se disocia en sus dos subunidades (Figura 6-23), las cuales podran volver
a ensamblarse sobre otra molecula de mRNA, iniciando asi un nuevo proceso de
sintesis mediante el proceso que describiremos a continuacion.

El proceso de iniciacion establece la pauta de lectura

para la sfntesis proteica9
En principio, una secuencia de RNA puede ser decodificada mediante una de las
tres pautas de lectura diferentes posibles, cada una de las cuales determinara
una cadena polipeptidica completamente diferente (vease Figura 3-17). Lo que
determina cual sera la pauta de lectura utilizada realmente es la union del ribo-
soma a la molecula de mRNA. Durante la fase de iniciaci6n de la sintesis protei-
ca, las dos subunidades del ribosoma se unen entre si en el punto exacto del
mRNA en el que ha de empezar la cadena polipeptidica.
El proceso de iniciacion es complicado, y comprende varias etapas cataliza-
das por proteinas denominadas factores de iniciaci6n (IF, de Initiation Fac-
tors), algunos de los cuales esta compuesto, a su vez, por varias cadenas poli-
peptidicas. Debido a la complejidad del proceso, muchos de los detalles de

Sfntesis de RNA y de protefnas 249

Figura 6-23 Fase final de la
smtesis proteica. La uni6n del
factor de liberaci6n a un cod6n de
terminaci6n finaliza la traducci6n;
subunidad ribos6mica
el polipeptido completo se libera y pequefia con faclores

I
el ribosoma se disocia en sus dos de iniciaci6n unidos
subunidades independientes.
--'
iJllII.UyC"G 3' UNION ~L mRNA

r-IN~L
tlnn--__. FACTOR DE
AUG
LA BUSQUEDA LE

I
PER MITE RECON
L1BERACION
ELCODDN DE
A UN CODON
INICIACIDN UNIE
DE TERMINACION
EL IRNA DE INI

lIIjI.UCyG 3'
5'----111

IRNA
iniciador
en el

5'----11
lugar P

"'--3'
SE UNE UN
AMINOACIL
IRNA (elapa 1)

5'---" "'--3' SE FORMAEL

PRIMER ENLACE
PEPTfDICO (elapa 2)

AUGAACUGGUAGCGAUCG
5' " " " " " " " ' ' ' ' 3'

5'----111 "--3'
etc.

iniciaci6n todavia no estan bien establecidos. Sin embargo, esta claro que cada Figura 6-24 Fase de iniciaci6n de la
ribosoma se ensambla sobre una molecula de mRNA, siguiendo dos etapas; uni- sfntesis proteica. Las etapas 1 y 2 se
camente despues de que la subunidad pequefia del ribosoma unida a los facto- refieren a las de la reacci6n de
res de iniciaci6n encuentre el cod6n de iniciaci6n (AUG, vease a continuaci6n) elongaci6n mostrada en la Figura 6-22.
se podra unir la subunidad mayor del ribosoma.
Antes de que el ribosoma pueda empezar una nueva cadena de proteina, ha
de unir una molecula de aminoacil-tRNA en su lugar P, donde normalmente
unicamente se hallan unidas moleculas de peptidil-tRNA. (Como hemos expli-
cado previamente, durante la etapa 3 del proceso de elongaci6n el peptidil-tRNA
se transloca allugar P). Para este proceso se requiere la participaci6n de una
molecula especial de tRNA. Este tRNA iniciador provee el aminoacido que inicia

250 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

la cadena proteica, y siempre transporta metionina (aminoformil metionina en
bacterias). En eucariotas la moIecula de tRNA iniciadora se ha de cargar en la sub-
unidad pequefia del ribosoma despues de que se haya unido a una molecula de
mRNA. Un importante factor de iniciaci6n llamado factor de iniciacion 2 de euca-
riotas (eIF-2, de Eucaryotic Initiation Factor 2) es necesario para colocar el tRNA
'~\ -~
'f..
iniciador sobre la subunidad pequefia. Una molecula de eIF-2 se une fuertemente
a cada moIecula de tRNA iniciadora en cuanto este tRNA adquiere la metionina, molecula
yen algunas celulas la velocidad de todo el proceso de sfntesis de protefnas esta detRNA
) entrante
controlado por este factor de iniciaci6n (vease Figura 9-82).
Como se describe con mas detalle en la pr6xima secci6n, la subunidad pe-
quefia del ribosoma ayuda a la moIecula de tRNA iniciadora que lleva unida a
encontrar un cod6n especial AUG (el codon de iniciacion) en la moIecula de
mRNA. En cuanto estp ha ocurrido, los diferentes factores de iniciaci6n que pre-
Figura 6-25 Modelo tridimensional
viamente se habfan asociado con la subunidad pequena del ribosoma se liberan,
de un ribosoma bacteriano que se
permitiendo que una subunidad grande de ribosoma se una con la pequefia. De- halla actuando. La subunidad
bido a que la molecula de tRNA iniciador esta unida en ellugar P del ribosoma, pequefia (verde oscuro) y la subunidad
la sfntesis de la cadena proteica puede iniciarse directamente mediante la uni6n grande (verde claro) fonnan un
de una segunda molecula de aminoacil-tRNA allugar A del ribosoma (Figura complejo a traves del cual se va
6-24). De esta forma se ensambla un ribosoma completo y funcional con una ca- deslizando el mRNA. A pesar de que se
dena de mRNA engarzada (Figura 6-25). A continuaci6n se desarrollan las etapas desconocen las vias exactas por las que
posteriores de la fase de elongaci6n de la sfntesis de protefnas, tal como hemos transcurren el mRNA y la proteina
descrito anteriormente (vease Figura 6-22). Como todas las cadenas polipeptfdi- naciente, se sabe que la adici6n de un
cas has sido iniciadas por una moIecula de tRNA iniciadora, todas las protefnas arninoacido tiene lugar en la regi6n
recien sintetizadas tienen una metionina (el derivado aminoformil de la metio- general mostrada, con los tRNA unidos
nina en bacterias) como residuo extremo amino. A menudo, esta metionina es al "bolsillo" formado entre las
subunidades mayor y menor.
eliminada muy poco despues de que se haya incorporado, mediante la acci6n de
(Modificado a partir de lA Lake,
una aminopeptidasa especffica; este proceso de reajuste es importante ya que el Annu. Rev. Biochem. 54:507-530, 1985.
aminoacido colocado ala izquierda del extremo amino puede determinar la vida 1985 por Annual Reviews Inc.)
media de la protefna en la celula mediante su efecto sobre un sistema de degra-
daci6n dependiente de ubiquitina (vease Figura 5-39).
Evidentemente, ellugar correcto de iniciaci6n sobre la molecula de mRNA
ha de ser seleccionado por la subunidad pequefia en concierto con los factores
de iniciaci6n pero en ausencia de la subunidad grande, por 10 cual probable-
mente los ribosomas se forman a partir de dos subunidades independientes.
Acontinuaci6n consideraremos c6mo se produce este proceso de selecci6n.

7-metilguanosina extremo S' del mRNA Figura 6-26 Estructura de la

HO OH "capucha" ("cap") del extremo 5' de
las moleculas de mRNA eucariotas.
N6tese la poco habitual uni6n 5'-a-5'
de la 7-metilguanosina, cargada
positivamente, y de la metilaci6n del
grupo 2' hidroxilo de la primera ribosa
del RNA. (EI segundo azucar no esta
uni6n
nunca metilado.)
trifosfato
S'-a-S'

Sfntesis de RNA y de protemas 251

 Figura 6-27 Comparaci6n entre las
estructuras de las moleculas de RNA
~ mensajero de procarlotas y
p p ~p)ll-.I'llII_. __. _ . _ _ _"~ eucarlotas. A pesar de que ambos
AUG 1 AUG
AUG 1 tipos de mRNA se sintetizan con un
grupo trifosfato en el extremo 5', la
molecula de mRNA eucariota adquiere
rapidamente una capucha en el
extrema 5', que es una parte de la
estructura que la subunidad pequefia
del ribosoma reconoce. Por 10 tanto, la
5' 5' 3'
sintesis proteica empieza en un cod6n
<)G C!p~ ~~~~~~~~~~ AAAAA de iniciaci6n cercano al extremo 5' del
AUG mRNA. En los procariotas, por el
5'cap
I contrario, el extrema 5' no tiene
ninglin significado especial. En el
interior de una cadena de mRNA
clave:
pueden existir muchos lugares de
lugares de uni6n secuencias secuencias no codonesde uni6n al ribosoma (denominadas
al ribosoma codificantes codificantes terminaci6n
secuencias Shine-Dalgarno) , cada uno
de los cuales dara lugar a la sintesis de
una proteina diferente.

En celulas eucariotas, normalmente s6lo se sintetiza un tipo

de cadena polipeptidica sobre cada molecula de mRNAIO
Tipicamente, una moIecula de RNA mensajero contiene varias secuencias AUG,
cada una de las cuales puede codificar metionina. En eucariotas, sin .embargo,
normalmente tan solo una de estas secuencias sera reconocida por el tRNA ini-
ciador, actuando asi como codon de iniciacion. lComo puede el ribosoma dis-
tinguir este codon de iniciacion?
Los RNA de eucariotas (a excepcion de los que se sintetizan en mitocondrias
y cloroplastos) son profundamente modificados en el nucleo inmediatamente
despues de su transcripcion (vease Capitulo 8). Dos de estas modificaciones mas
generales son la adicion de una estructura de "capucha" ("cap"), compuesta de
un residuo de 7-metilguanosina unido al trifosfato del extrema 5' (Figura 6-26), y
la adicion de una cadena de unos 200 residuos adenflicos ("poli A") al extrema
3'. Todavfa no esta bien establecido el papel que juega el "poli A" en el proceso
de traduccion (vease Figura 9-87). Sin embargo, se sabe que la estructura en "ca-
pucha" del extrema 5' es esencial para la sintesis de proteinas. Experimentos lle-
vados a cabo con extractos de celulas eucariotas han demostrado que la subuni-
dad pequefia del ribosoma se une primero al extremo 5' de una cadena de
mRNA ayudada por el reconocimiento de la capucha 5' (Figura 6-24). Entonces,
esta subunidad se desplaza a 10 largo de la cadena de mRNA transportando su
molecula de tRNA iniciador en busca de un codon AUG de iniciacion. Aparente-
mente, los requerimientos de un codon de iniciacion no son muy exigentes, ya
que habitualmente la subunidad pequefia selecciona el primer AUG que en-
cuentra; sin embargo, parece que en este proceso de seleccion son importantes
algunos nucleotidos cercanos al AUG. En la mayoria de los RNA de eucariotas en
cuanto se ha seleccionado un codon de iniciacion cercano al extrema 5' ya no se
utilizara como codon de iniciacion ninguno de los otros muchos codones AUG
mas alejados de la cadena. Como resultado de todo esto, normalmente sobre
cada molecula de mRNA tan solo se sintetiza un tipo de cadena polipeptidica
(para excepciones, vease pag. 498).
En las bacterias el mecanismo de seleccion de codones de iniciacion es dife-
rente. Los mRNA de bacteria no tienen estructura en capucha en 5'. En lugar de
ello, presentan una secuencia de iniciacion especifica de mas de 6 nucleotidos
de longitud, que puede presentarse en multiples lugares de la misma molecula
de mRNA. Estas secuencias estan situadas entre cuatro y siete nucleotidos en di-
reccion 5' a partir del AUG, y generan pares de bases con una region especifica

252 Capitulo 6: Mecanismos geneticos basicos

 cadena Un polirribosoma.
polipeptidica
Dihujo esquelll<ltico de un
completa
polirribosoma mostrando de que
forma una serie de rihosolllas pueden
traducir simultaneamente la misma
molecula de mRNA.

100 nm

del rRNA en el ribosoma, sefialando el inicio del proceso de sintesis de proteinas

en este codon de iniciacion cercano. Los ribosomas bacterianos, a diferencia de
los ribosomas de eucariotas, se unen directamente a una zona interna de una
rnolecula de mRNA, reconociendo un codon de iniciacion e iniciando una cade-
na polipeptidica. Como resultado de ello, normalmente los RNA mensajeros de
bacteria son policistr6nicos -10 cual significa que codifican multiples proteinas
traducidas por separado a partir de la misma molecula de mRNA. Por el contra-
rio, los mRNA de eucariotas son tipicamente monocistr6nicos, es decir, sobre
cada molecula de mensajero unicamente se traduce una unica especie de cade-
na polipeptidica (vease Figura 6-27).
(A)
100 nm
La union de varios ribosomas a una misma moIecula
de mRNA genera polirribosomas 11
La sintesis completa de una proteina dura entre 20 y 60 segundos de promedio. In-
cluso durante este breve intervalo de tiempo, normalmente tienen lugar multiples
iniciaciones sobre cada molecula de mRNA que esta siendo traducida. En cuanto
un ribosoma ha traducido una secuencia de aminoacidos suficientemente larga
como para dejar libre el camino, un nuevo ribosoma salta sobre el extrema 5' de la
rnoIecula de mRNA. Las moleculas de mRNA como esta, denominadas polirribo-
somas 0 polisomas, estan formadas por varios ribosomas colocados sobre el mis-
rno mRNA y espaciados unicamente unos 80 nucleotidos (Figuras 6-28 y 6-29). Los

Figlll"a (j-29 Electronmicrografias de un polirribosoma tipico de una celula

eucariota. (A) Sublimaci6n profunda; (B) secci6n ultrafina. Generalrnente
el citoplasrna celular esta lieno de polirribosomas como este, algunos de los
cuales se deben hallar libres en el citosol y otms adhefidos a membrana. (8)
(A, cortesia de John Heuser; B, cortesia de George Palade.) 400 nm

Sintesis de RNA y de proteinas 253

polirribosomas son caracterfsticos de las celulas. Pueden ser aislados y separados
de los ribosomas sencillos del citosol mediante lisis celular y ultracentrifugaci6n
(Figura 6-30). El mRNA purificado a partir de estos polirribosomas puede utilizarse
para determinar si la protefna codificada por una secuencia determinada de DNA
(--7ii~"~dir:
polirribosomas
ribosomas
sencillos
esta siendo sintetizada activamente en estas celulas utilizadas para preparar los 80S
polirribosomas. Estas moleculas de mRNA tambien pueden utilizarse como mate- ,---,

t
rial de partida para la preparaci6n de librerfas especializadas de cDNA (como se
discute en el Capitulo 7). t.)
En los eucariotas la envoltura nuclear mantiene separados los procesos de III '0
'"0E lIl~
transcripci6n y de sintesis de protefnas. Sin embargo en los procariotas el RNA mu
C:c:
III Q)Q)
es accesible a los ribosomas en cuanto se sintetiza. Asf, los ribosomas empiezan 0
.0 "i~
Uu
a sintetizar una cadena polipeptidica por el extrema 5' de la molecula de mRNA Q) Q).-
"0:2
"0
naciente y van siguiendo detras de la RNA polimerasa a medida que esta com- 0
Q;
eO.
Q)8.
pleta la cadena de mRNA E Eo:
.~ ." 0
c: c:o.

En los eucariotas, la velocidad general de smtesis de protemas Figura 6-30 Aislamiento de

esta controlada por factores de iniciaci6n12 polirribosomas. Los polirribosomas se
pueden separar de los ribosomas
Como discutiremos en el Capftulo 17, las celulas de un organismo pluricelular sencillos (y de sus subunidades) por
s610 se multiplican cuando se encuentran en un medio en el que son estimula- sedimentaci6n de una
das por factores espedficos de crecimiento. A pesar de que los mecanismos a ultracentrifugaci6n. Este metodo se
traves de los que actuan los factores de crecimiento todavia no estan completa- basa en el hecho de que en un fuerte
mente establecidos, uno de sus mayores efectos ha de ser el incrementar la velo- campo gravitacionallos grandes
cidad de todo el proceso de sfntesis proteica, ya que las celulas duplican su con- agregados moleculares se mueven mas
tenido de proteina antes de dividirse. iQue es 10 que deterrnina la velocidad de rapidamente que los pequefios.
sfntesis de protefnas? Cuando se depriva a celulas eucariotas en cultivo de nu- Generalmente la sedimentaci6n se
trientes, se produce una marcada reducci6n de la velocidad de la iniciaci6n de la realiza a traves de un gradiente de
cadena polipeptidica. Esta reducci6n es el resultado de la inactivaci6n del factor sacarosa para evitar mezclas por
convecci6n. N6tese que la mayona de
de iniciaci6n de la sfntesis eIF-2 (vease Figura 9-82). Los factores de iniciaci6n
las cadenas polipeptidicas en
necesarios para la sfntesis de protefnas son mucho mas numerosos y complejos
crecimiento (linea raja) estan
en eucariotas que en procariotas, a pesar de que al parecer realizan la misma asociadas al polirribosoma.
funci6n basica en ambos casos. Muchos de los componentes adicionales pue-
den se protefnas reguladoras que responden a diferentes factores de crecimien-
to, colaborando en la coordinaci6n del crecimiento y de la proliferaci6n en los
Olganismos pluricelulares. En las bacterias son necesarios controles menos
complejos ya que generalmente crecen todo 10 rapidamente que les permite la
asequibilidad de nutrientes del medio.

La fidelidad de la sintesis de proteinas esta incrementada gracias

ados procesos independientes de correcci6n de galeradas13
El porcentaje de errores en la sfntesis de protefnas puede estimarse siguiendo la
frecuencia de incorporaci6n de un aminoacido en una proteina que normal-
mente carece de dicho aminoacido. Se pueden observar asi porcentajes de error
de alrededor de un aminOlicido incorporado err6neamente pOl cada 104 amino-
acidos incorporados, 10 cual significa que unicamente una de cada 25 moleculas
de protefna de tamafio medio (de unos 400 aminoacidos) deberfa contener un
error. La fidelidad del proceso decodificador depende de la precisi6n de los dos
principales mecanismos de adaptaci6n discutidos anteriormente: la uni6n de
cada aminoacido a su molecula correspondiente de tRNA y el apareamiento de
bases de los codones del mRNA con los anticodones del tRNA (vease Figura 6-
14). No es sorprendente que las celulas hayan desarrollado mecanismos de "co-
rrecci6n de galeradas" 0 "verificaci6n de lectura" (proofreading) que les permi-
tan reducir el numero de errores en estos dos procesos cruciales de la sintesis de
protefnas.
Para disminuir el numero de errores en estos dos procesos, se utilizan dos
mecanismos fundamentalmente diferentes, cada uno de los cuales es represen-
tativo de dos estrategias utilizadas en otros procesos celulares. Ambos suponen

254 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 aminoacil tRNA unido factor de Figura 6-31 La correcci6n cinetica de
~ctO'd' ,'oogoc"" elongaci6n
pruebas selecciona la molecula
cadena
polipeptidica
en crecimiento
~ correcta de tRNA sobre el ribosoma.
En esta visi6n mas detallada de la
t etapa 1 de la fase de elongaci6n de la
sintesis de proteinas, se Hustra c6mo,
elongaci6n en el acontecimiento inicial de uni6n,
de la cadena
(etapas 2 y 3) una molecula de aminoacH-tRNA
unido al factor de elongaci6n se aparea
transitoriamente con el cod6n del
/
RNA mensajero
lugar A. Este apareamiento dispara la
camino de salida de las hidr6lisis de GTP por el factor de
lugar P lugar A mohkulas de tRNA incorrectas
elongaci6n, 10 cual permite que el
factor se disocie de la molecula de
aminoacH-tRNA, la cual ahora puede
el consumo de energfa libre ya que, como se ha discutido en el Capftulo 2, el in- colocarse correctamente en ellugar A y
cremento del orden en la celula tiene un precio. Para mejorar la exactitud de la participar en la elongaci6n de la
union del aminoacido al tRNA se utiliza un mecanismo relativamente sencillo. cadena (vease Figura 6-22). Asi en el
Muchas aminoacH-tRNA sintetasas tienen dos lugares activos diferentes, uno mecanismo de sintesis de proteinas
existe un tiempo de espera entre la
que lleva a cabo la reaccion de carga mostrada anteriormente (Figura 6-11) y el
uni6n de la molecula de aminoacH-
otro que reconoce un amino<icido incorrecto que se halle colocado en una mole- tRNA y su asequibilidad para la sintesis
cula de tRNA, y 10 libera por hidrolisis. El proceso de correccion es costoso ya de proteina. Como resultado de ello,
que, para ser efectivo, tambien ha de liberar una fraccion apreciable de amino- unicamente los tRNA que tienen el
acidos colocados correctamente. En la replicacion del DNA actua un proceso de anticod6n correcto pueden
correccion de galeradas en dos etapas como este (vease Figura 6-42). permanecer apareados al mRNA
Otro proceso mas sutH de "correccion cinetica de pruebas" se utiliza para me- durante un tiempo suficientemente
jorar la fidelidad del apareamiento codon-anticodon. De hecho, antes hemos ofre- largo como para ser afiadidos a la
cido una vision simplificada de este acoplamiento. Cuando las moleculas de tRNA cadena polipeptidica en crecimiento.
se han unido a su aminoacido, forman un complejo con una protefna abundante El factor de elongaci6n, que es
denominada factor de elongaci6n (BF, de Elongation Factor), que se une fuerte- una proteina abundante, se designa
mente al extremo aminoacfdico del tRNA y a una molecula de GTP. Este complejo, como EF-Tu en los procariotas y como
EF-l en eucariotas. En la Figura 5-20 se
y no el tRNA libre, es el que se acopla con el codon apropiado en una moIecula de
Hustra el extraordinario cambio de la
mRNA. El factor de elongacion que se ha unido permite que se produzca un aparea- estructura tridimensional de EF-Tu
miento correcto codon-anticodon pero impide que el aminoacido se incorpore a generado par la hidr6lisis de GTP.
la cadena polipeptfdica en crecimiento. Sin embargo, el reconocimiento inicial del
codon activa al factor de elongacion para que hidrolice el GTP que lleva unido (a
GDP y fosfato inorganico), de forma que ahora el factor puede disociarse del ribo-
soma sin llevarse el tRNA al que estaba unido, y de esta forma permite que se pro-
duzca la sfntesis de la protefna. La participacion del factor de elongacion supone
un ligero retraso entre el apareamiento de bases codon-anticodon y la elongacion
de la cadena polipeptfdica, que Ie proporciona a la moIecula de tRNA unida la
oportunidad de salir del ribosoma. Una molecula de tRNA colocada incorrecta-
mente genera un numero de enlaces de hidrogeno en el apareamiento de bases
codon-anticodon mucho menor que un tRNA colocado correctamente; por ello,
un tRNA incorrecto se une mas debilmente al ribosoma y por tanto se disocia con
mayor facilidad durante este perfodo. Debido a que el retraso introducido por el
factor de elongacion hace que la mayorfa de las moIeculas de tRNA colocadas
incorrectamente abandonen el ribosoma sin ser utilizadas para la sfntesis de pro-
tefnas, este factor incrementa la relacion entre los aminoacidos incorporados
correctamente y los incorporados incorrectamente en la protefna (Figura 6-31).

Muchos inhibidores de la sintesis de proteinas en procariotas

resultan utiles como antibi6ticosl 4
Muchos de los antibioticos mas eficaces utilizados en la medicina moderna
actuan inhibiendo la sfntesis proteica bacteriana. Algunos de estos farmacos
aprovechan las diferencias estructurales y funcionales que existen entre los ribo-
somas de procariotas y de eucariotas, a fin de afectar preferentemente a los ri-
bosomas de procariotas. Esta selectividad permite utilizar algunos de estos com-

Sfntesis de RNA y de protefnas 255

Tabla 6-1 Inhibidores de la sintesis de RNA 0 de la de proteinas

Inhibidor Efectosespecificos
Actuando unicamente sobre procariotas*
Tetraciclina bloquea la uni6n de los aminoacil-tRNA allugar A del ribosoma
Estreptomicina impide la transici6n desde el complejo de iniciaci6n ala
elongaci6n de la cadena por el ribosoma, y provoca errores de
decodificaci6n
Cloranfenicol bloquea la reacci6n de la peptidil transferasa en los ribosomas
(etapa 2 de la Figura 6-22)
Eritromicina bloquea la reacci6n de translocaci6n en los ribosomas (etapa 3
de la Figura 6-22)
Rifamicina bloquea la iniciaci6n de las cadenas de RNA uniendose a la RNA
polimerasa (impide la sintesis de RNA)
Actuando sobre procariotas y sobre eucariotas
Puromicina se une al extremo de la cadena en crecimiento provocando la
liberaci6n prematura de las cadenas polipeptidicas en
formaci6n
Actinomicina D se une al DNA bloqueando el movimiento de la RNA polimerasa
(impide la sintesis de RNA)
Actuando unicamente sobre eucariotas
Cicloheximida bloquea la reacci6n de translocaci6n en los ribosomas (etapa 3
de la Figura 6-22)
Anisomicina bloquea la reacci6n de la peptidil transferasa en los ribosomas
(etapa 2 de la Figura 6-22)
a-Amanitina bloquea la sintesis de mRNA preferentemente por medio de la
uni6n a la RNA polimerasa II
*A menudo, los ribosomas de las mitocondrias (y de los cloroplastos) de eucariotas se parecen
a los de los procariotas en su sensibilidad frente a los inhibidores. Por ello, algunos de estos an-
tibi6ticos pueden tener efectos perjudiciales sobre las mitocondrias de humanos.

puestos en el cuerpo humano a concentraciones relativamente elevadas sin que

resulten demasiado t6xicos. Debido a que los diferentes antibi6ticos se unen a
regiones diferentes de los ribosomas bacterianos, a menudo inhiben pasos dife-
rentes del proceso de sintesis. En la Tabla 6-1 se muestran algunos de los anti-
bi6ticos mas habituales de este grupo, indicandose sus efectos especificos. La ta-
bla tambien presenta otros inhibidores de la sintesis de proteinas utilizados
habitualmente, algunos de los cuales actuan sobre las celulas eucariotas; eviden-
temente estos ultimos no pueden utilizarse como antibi6ticos.
Muchos de los compuestos enumerados en la Tabla 6-1 bloquean especifica-
mente diferentes pasos del proceso que ocurre desde el DNA hasta la proteina,
por 10 que son utiles en estudios bio16gicos. Entre los farmacos utilizados mas ha-
bitualmente en experimentos de este tipo, estan el cloranfenicol, la cicloheximida
y la puromicina, todos los cuales inhiben especificamente la sintesis de proteinas.
En una celula eucariota, por ejemplo, el cloranfenicol unicamente inhibe la sinte-
sis proteica de los ribosomas de las mitocondrias (y de los doroplastos en las
plantas), 10 cual refleja probablemente el origen procariota de estos organulos
(vease Capitulo 14). Por otra parte, la cidoheximida unicamente afecta a los ribo-
somas del citosol. La diferente sensibilidad a estos farmacos del proceso de sinte-
sis de proteina proporciona un poderoso sistema para determinar en que com-
partimiento celular se produce la traducci6n de una proteina determinada. La
puromicina es especialmente interesante ya que es un analogo estructural de una
molecula de tRNA unida a un aminoacido; el ribosoma la confunde con un ami-
noacido autentico y la incorpora covalentemente al extrema carboxilo terminal
de la cadena polipeptidica en crecimiento, causando asi la terminaci6n prematura
y la liberaci6n de este polipeptido (vease Figura 3-23). Como podria esperarse, la
puromicina inhibe todos los tipos de sintesis de proteinas.

256 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

iC6mo evolucion6 el proceso de la sintesis de proteinas?15
Los procesos moleculares relacionados con la sfntesis de protefnas parecen
inexplicablemente complejos. A pesar de que podemos describir muchos de
elIos, no tienen ningtin sentido conceptual respecto a c6mo se producen la
transcripci6n del DNA, la reparaci6n de DNA y la replicaci6n del DNA. Tal como
hemos visto, en los organismos actuales la sfntesis de protefnas se centra en una
maquina ribonucleoproteica muy grande, el ribosoma, que consiste en una serie
de protefnas dispuestas alrededor de un mlcleo de moleculas de rRNA. iPor que
existen toda esta serie de moleculas de rRNA y c6mo lIegaron a desempefiar un
papel tan dominante en la estructura y en la funci6n del ribosoma?
Antes de que se descubriera el mRNA, a principios de los afios 1960, se sos-
pechaba que la gran cantidad de RNA que existe en los ribosomas actuaba como
"mensajero", transportando informaci6n genetica del DNA a las protefnas. Aho-
ra sabemos, sin embargo, que todos los ribosomas de una celula presentan un
juego identico de moIeculas de rRNA, las cuales no desempefian ninguna fun-
ci6n de informaci6n de este tipo. En los ribosomas bacterianos se ha demostra-
do que pequefias regiones de algunos rRNA tienen funciones catalfticas en el
proceso de sfntesis de protefnas. Como hemos mencionado el rRNA mayor de la
subunidad mayor del ribosoma tiene actividad peptidil transferasa; ademas, el
rRNA de la subunidad pequefia del ribosoma forma una pequefia heIice por apa-
reamiento de bases, con la secuencia de iniciaci6n de las moleculas bacterianas
de mRNA, la cual permite colocar el cod6n de iniciaci6n AUG vecino sobre ellu-
gar P. Se forman una gran variedad de interacciones de este tipo entre las mole-
culas de tRNA y los rRNA de bacterias, a pesar de que en estas interacciones par-
ticipan bases del rRNA alejadas en la secuencia de nucle6tidos, 10 cual sugiere
eomplejos conjuntos de interacciones que dependen de la estructura terciaria
de los rRNA.
, La sfntesis de protefnas tambien depende, de una forma fundamental, de
una gran cantidad de protefnas diferentes que se hallan unidas a los rRNA en los
ribosomas (vease Figura 6-20). La complejidad de un proceso que depende de
un mimero tan elevado de componentes diferentes que interactuan entre sf ha
heeho que muchos bi610gos hayan perdido la esperanza de poder lIegar a cono-
eer c6mo se produjo la evoluci6n del proceso de sfntesis de protefnas. Sin em-
bargo, los descubrimientos recientes acerca de las moleculas de RNA con activi-
dad enzimatica han aportado un nuevo punto de vista sobre el proceso. Como
se discute en el Capftulo 1, probablemente las primeras reacciones biol6gicas
utilizaron moleculas de RNA, y no de protefna, como catalizadores. En las celu-
las primitivas, las moleculas de tRNA debieron de generar superficies catalfticas
sobre sf mismas, que les permitieron unirse especfficamente a aminoacidos sin
neeesitar la participaci6n de las enzimas aminoacil-tRNA sintetasas. De forma
parecida, las moleculas de rRNA debieron de ser suficientes por sf solas para
eonstituirse como un "ribosoma" completo, plegandose de formas complicadas
y generando un intrincado conjunto de superficies que guiaron el apareamiento
de los tRNA con los codones del mRNA y catalizaron la polimerizaci6n de los
aminoacidos unidos a los tRNA (vease Figura 1-7). A 10 largo del curso de la
evoluci6n, se han agregado protefnas individuales a esta maquinaria, cada una
de elIas haciendo el proceso un poco mas exacto yeficiente, 0 afiadiendo con-
troles de regulaci6n. Desde este punto de vista la gran cantidad de RNA de los
ribosomas actuales puede ser un remanente de una etapa muy temprana de la
evoluci6n, antes de que las protefnas hubieran lIegado a dominar la catalisis
biol6gica.

Resumen
Antes de que pueda iniciarse la slntesis de una determinada protelna, ha de sinteti-
zarse el mRNA correspondiente mediante el proceso de transcripci6n del DNA. En-
tonees, una subunidad pequena del ribosoma se une a la molecula de mRNA en un

Sfntesis de RNA y de protefnas 257

codOn de iniciacion (AUG) que es reconocido por una molecula determinada de
tRNA. A continuacion una subunidad mayor de ribosoma se une completando el ri-
bosoma e iniciando la fase de elongaciOn de la sfntesis de protefnas. Durante esta
fase, los aminoacil-tRNA, cada uno de los cuales transporta un aminoticido deter-
minado, se unen secuencialmente al codOn apropiado del mRNA a traves de la for-
macion de pares de bases complementarias con el anticodOn del tRNA. Cada uno de
los aminoticidos es aiiadido al extremo carboxilo terminal de la cadena polipeptf-
dica en crecimiento, mediante un cicio de tres etapas secuenciales: uniOn del ami-
noacil-tRNA, formaciOn de un enlace peptfdico, y translocaci6n del ribosoma. El ri-
bosoma progresa codOn a codOn en direccion 5'-a-3' a 10 largo de la motecula de
mRNA, hasta que alcanza uno de los tres tipos de codones de terminaciOn que exis-
ten. Entonces, un factor de liberacion se une al codOn de terminaciOn, con 10 que se
Jinaliza la traduccion y el polipeptido acabado se libera del ribosoma.
Los ribosomas de las celulas procariotas son muy homologos a los de las celu-
las eucariotas, a pesar de que se presentan diferencias substanciales entre ellos en
cuanto al numero y al tamano de sus componentes de rRNA y de protefna. El papel
predominante de los rRNA en la estruetura y funcion de los ribosomas puede refle-
jar el origen ancestral del proceso de sfntesis de protefnas, el cual parece que evolu-
ciono en un ambiente dominado por la catdlisis mediada por los RNA.

Mecanismos de reparaci6n del DNA16

La supervivencia a largo plazo de una especie puede aumentar gracias a cambios
geneticos pero la supervivencia de los individuos requiere estabilidad genetica. El
mantenimiento de esta estabilidad genetica no s6lo requiere que exista un meca-
nismo extremadamente exacto de copia de las secuencias de DNA antes de cada
divisi6n celular, sino que tambien requiere que exista un mecanismo que permita
reparar las numerosas lesiones accidentales del DNA que ocurren continuamen-
teo La mayoria de los cambios espontaneos de este tipo que tienen lugar en el
DNA son transitorios ya que inmediatamente son eliminados mediante un proce-
so de correcci6n denominado reparacion del DNA. Tan s6lo muy de vez en cuan-
do uno de estos procesos de mantenimiento del DNA no se produce 0 fracasa, 10
cual supone la producci6n de un cambio permanente en el DNA. Un cambio de
este tipo se denomina mutaci6n. Si una mutaci6n se produce en una posici6n vi-
tal de la secuencia del DNA puede provocar la muerte del organismo.
Antes de pasar a estudiar estos mecanismos de replicaci6n y de reparaci6n
del DNA, examinaremos brevemente c6mo se van manteniendo las secuencias
de DNA de una generaci6n a la siguiente.

Las secuencias de DNA se mantienen con un elevado

grado de fidelidad 17
La velocidad en que se producen cambios estables en las secuencias de DNA (la
frecuencia de mutacion) s6lo puede estimarse de forma indirecta. Uno de los sis-
temas consiste en comparar la secuencia de aminmicidos de una proteina deter-
minada pero procedente de varias especies distintas. El porcentaje de aminOlici-
dos diferentes se puede comparar con el mlmero estimado de arios transcurridos
desde que las dos especies se separaron de su antepasado comun, tal como se
determina a partir de registros f6sHes. De esta manera se puede calcular el pro-
medio de arios que se necesitan para que un cambio genetico se fije como una
alteraci6n en un aminoacido de una proteina. Debido a que cada uno de los
cambio de este tipo reflejara probablemente la alteraci6n de un solo nucle6tido
en la secuencia del DNA del gen que codifica esta proteina, este valor puede ser
utilizado para estimar la media del numero de arios que han de transcurrir para
que se produzca una mutaci6n estable en el gen.
Calculos como estos siempre subestiman la frecuencia real de mutaci6n, ya
que la mayorfa de las mutaciones deben afectar a la funci6n de la proteina, y de-

258 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

ben desaparecer de la poblaci6n por selecci6n natural. Sin embargo, existe una
familia de proteinas cuya secuencia parece no ser importante, por 10 que los ge-
nes que las codifican pueden acumular mutaciones sin sufrir ningl1n tipo de se-
lecci6n en contra. Estas proteinas son los fibrinopeptidos -fragmentos de 20 re-
siduos de aminoacidos que son eliminados de la proteina fibrin6geno cuando
esta se activa dando lugar a lafibrina, durante el proceso de la coagulaci6n de la
sangre. Dado que la funci6n de los fibrinopeptidos aparentemente no depende
de su secuencia de aminoacidos, pueden tolerar cualquier cambio que se pro-
duzca en su secuencia. EI anaIisis de la secuencia de los fibrinopeptidos indica
que una proteina de tamafio medio de 400 aminoacidos puede verse alterada
aleatoriamente por una variaci6n en un aminoacido cada 200 000 afios. Mas re-
cientemente, la tecnologia de secuenciaci6n del DNA ha hecho posible compa-
rar las secuencias de nucle6tidos del genoma que no codifican para protefna. La
comparaci6n de secuencias de este tipo en varias especies de mamiferos ha per-
mitido obtener caIculos de la frecuencia de mutaci6n durante la evoluci6n, que
estan en estrecho acuerdo con las obtenidas a partir de los estudios de los fibri-
nopeptidos.

Las frecuencias de mutaci6n observadas en celulas proliferativas

son ~onsistentes con los valores evolutivos estimados1 8
La frecuencia de mutaci6n puede ser estimada de manera mas directa, obser-
vando la velocidad a la que aparecen cambios geneticos espontaneos en una
gran poblaci6n de celulas observadas durante un periodo de tiempo relativa-
mente corto. Ello puede llevarse a cabo estimando la frecuencia con la que apa-
recen nuevos mutantes en poblaciones muy grandes de animales (por ejemplo,
colonias de la mosca del vinagre 0 colonias de ratones), 0 estudiando alteracio-
nes en proteinas especificas de celulas que crecen en cultivo. Los valores obteni- '" 200
-0
dos siguiendo ambos tipos de estrategia unicamente son aproximados pero con- '"C.l
cuerdan con una frecuencia de un cambio en un par de bases par cada 109 pares 5c.", 160
de bases, en cada generaci6n celular. Por consiguiente, un gen que codifique ~.g
~ "<3
una proteina de tamafio medio (que contenga unos 103 pares de bases codifi- :c .~ 120
cantes) sufrira una mutaci6n cada 106 generaciones celulares. Este numero es, al E."
'" E
menos aproximadamente, consistente con la frecuencia de mutaci6n estimada ~ 0'"
0 80
-0 0
0-
descrita antes, segl1n la cual se produce una mutaci6n en un gen de tamafio me-
"'o"
dio cada 200 000 afios. .~ 40

'"
La mayorfa de mutaciones de las protefnas resultan perjudiciales 200 400 600 800 1000
y son eliminadas por selecci6n natural 19 millones de arias desde la divergencia
de las especies
Cuando se representa el numero de aminoacidos diferentes de una determinada
protefna en dos organismos que difieren respecto al tiempo transcurrido desde Figura 6-32 Diferentes protefnas
que estos organismos divergieron durante la evoluci6n, se obtiene una linea ra- evolucionan a velocidades muy
zonablemente recta. Es decir, cuanto mas tiempo haga que los arganismos di- diferentes. Comparaci6n entre las
vergieron, mayor es el numero de diferencias que existen entre sus proteinas. frecuencias de cambio de aminoacidos
Por conveniencia, la pendiente de esta recta se puede expresar en terminos de encontradas en la hemoglobina, en el
"unidad de periodo evolutivo" para esta proteina, es decir, el promedio de tiem- citocromo c y en los fibrinopeptidos.
po necesario para que en una secuencia de 100 residuos de aminoacidos aparez- La hemoglobina y el citocromo c han
ca un cambio de un aminoacido. Cuando se comparan varias protefnas, se ob- variado mucho mas lentamente
serva que cada una de ellas presenta una velocidad de evoluci6n diferente pero durante la evoluci6n que los
fibrinopeptidos. Para determinar los
caracterfstica (Figura 6-32). Puesto que se supone que todos los pares de bases
indices de mlmero de cambios por ano
del DNA deben estar sujetos a la misma frecuencia aproximada de mutaci6n al (como se expresa en la Tabla 6-2), es
azar, estas diferencias en las frecuencias deben reflejar diferencias en la proba- importante destacar que dos
bilidad de que un organismo con una mutaci6n al azar en la proteina de que se organismos que divergieron de un
trata pueda sobrevivir y propagarse. Evidentemente cambios en la secuencia de antepasado comun hace 100 millones
aminmicidos son mucho mas nocivos para algunas proteinas que para otras. A de afios se hallan separados entre si
partir de la Tabla 6-2 podemos estimar que aproximadamente 6 de cada 7 cam- por 200 millones de anos de tiempo
bios al azar de aminoacidos son perjudiciales para la hemoglobina, 29 de cada evolutivo.

Mecanismos de reparaci6n del DNA 259

Tabla 6-2 Frecuencias observadas de cambio de las secuencias de aminOllcidos de
varias proteinas a 10 largo del tiempo evolutivo

Unidad de tiempo evolutivo*

Proteina (en millones de anos)
Fibrinopeptido 0,7
Hemogiobina 5
Citocromo c 21
HistonaH4 500

'La "unidad de tiempo evolutivo" se defme como el tiempo promedio necesario para que apa-
rezca el cambio de un aminOlicido aceptable en la protefna indicada, por cada 100 aminoacidos
de la protefna.

30 10 son para el citocromo c, y pnicticamente todos son contraproducentes

para la histona H4. Puede asumirse que los individuos que fueron portadores de
mutaciones perjudiciales de este tipo fueron eliminados de la poblaci6n por se-
lecci6n natural.

Para que exista la vida tal como la conocemos, es necesario

que se den bajas frecuencias de mutaci6n19
Debido a que la mayoria de las mutaciones son perjudiciales, ninguna especie
puede permitir que se acumulen en grandes cantidades en sus celulas germina-
les. Mas adelante discutiremos por que la frecuencia de mutaci6n observada, a
pesar de ser tan baja, al parecer limita a unas 60 000 el mlmero de proteinas
esenciales que cualquier organismo puede codificar en su linea germinal. Como
extensi6n de este mismo argumento, una frecuencia de mutaci6n diez veces su-
perior limitarfa a un organismo a unas 6000 proteinas esenciales. En este caso, la
evoluci6n probablemente se habria detenido en un organismo no mas complejo
que la mosca del vinagre.
Mientras que las celulas germinales han de estar protegidas contra elevadas
frecuencias de mutaci6n para mantener la especie, las otras celulas de un orga-
nismo pluricelular (sus celulas somdticas) han de estar protegidas de cambios
geneticos para poder salvaguardar el individuo. Los cambios de nucle6tidos en
la celulas som<iticas pueden facilitar el proceso de selecci6n natural que permita
la supervivencia de la celula mas adaptada a expensas del resto del organismo.
En el caso extremo, la proliferaci6n celular descontrolada conocida como cancer
es la causa de aproximadamente el 30% de las muertes que ocurren en Europa y
America. Existen evidencias de que estas muertes son debidas mayoritariamente
a la acumulaci6n de cambios en la secuencia del DNA de las celulas som<iticas
(vease Capitulo 24). Probablemente, un incremento del orden de diez veces de
la frecuencia de mutaci6n causaria un incremento desastroso de la incidencia
de cancer al acelerar la velocidad a la que aparecerian variantes de las celulas
somaticas. Asi pues los eucariotas dependen de la extraordinaria fidelidad con la
que se perpetuan las secllencias de DNA, tanto para la perpetuaci6n de especies
con 60 000 proteinas (estabilidad de las celulas germinales) como para la pre-
venci6n del proceso canceroso resultante de las mutaciones de las celulas soma-
ticas (estabilidad de las celulas som<iticas).

EI hecho de que las frecuencias de mutaci6n sean bajas significa

que los organismos relacionados han de estar formados
esencialmente por las mismas proteinas20
Los humanos, como genero diferenciado de los grandes simios, existen desde
hace tan s610 unos cuantos millones de afios. Por consiguiente cada gen ha teni-

260 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 URACILO

DESAMINACION
por hidr61isis desplazamiento
espontanea (p. ej., tautomerico
citosina a uracilo)

GUANINA

DESPURINACION
por hidr61isis
espontanea (p. ej.,
eliminaci6n de guanina)

do la posibilidad de acumular un numero relativamente reducido de cambios de Figura 6-33 Desaminaci6n y

nuele6tidos, y la mayoria de estos cambios habnin sido eliminados por selecci6n despurlnaci6n. Estas reacciones
natural. AI comparar, por ejemplo, un humano con un mono se observa que las hidroliticas son dos reacciones
molecuIas de citocromo c difieren unicamente en un 1% de sus residuos de ami- qufmicas espontaneas frecuentes, que
nmicidos y las de hemoglobina en un 4%. Una gran parte de nuestra herencia originan graves lesiones del DNA de las
nHulas. La figura s610 muestra un
genetica debi6 de configurarse antes de que apareciera Homo sapiens, durante
ejemplo especffico de cada tipo de
la evoluci6n de los mamiferos (que se inici6 hace unos 300 millones de afios), reacci6n.
o ineluso antes. Debido a que las proteinas de mamiferos tan diferentes como
las ballenas y los hombres son muy similares entre si, los cambios evolutivos
que han dado lugar a estas espectaculares diferencias morfol6gicas entre los
diferentes mamiferos han tenido que producirse con un numero sorprendente-
mente bajo de cambios en los materiales de que estamos formados. Por el con-
trario, se cree que los principales responsables de estas diferencias morfol6gicas
son diferencias en el patr6n temporal y espacial de la expresi6n genica durante
el desarrollo embrionario, que determina el tamafio, la forma y otras caracterfs-
ticas del adulto. En el Capitulo 8 discutiremos los mecanismos que probable-
mente constituyen la base de estos cambios en la expresi6n genica durante la
evoluci6n.

Si no fueran corregidas, las alteraciones espontaneas del DNA

podrian cambiar rapidamente las secuencias del DNA21
EI fisico Erwin Schroedinger sefial6 en 1945 que, fuese cual fuese la naturaleza
quimica del material hereditario (desconocida en aquel momento), un gen tenia
que ser extremadamente pequefio y estar formado de pocos Momos. En caso
contrario, el elevado numero de genes necesarios para generar un organismo no
cabria en el nueleo celular. Por otro lado, y debido a su reducido tamafio, cabia
esperar que un gen sufriera importantes cambios como consecuencia de reac-
dones espontaneas inducidas por colisiones termicas aleatorias con moleculas
del disolvente. Esto planteaba un grave problema, ya que los datos geneticos im-
plican que los genes esten compuestos de una substancia extraordinariamente
estable, en la cuallos cambios espontaneos (mutaciones) se producen con una
frecuencia muy baja.
Este dilema es real. EI DNA sufre cambios importantes debido a fluctuacio-
nes termicas. Actualmente sabemos, por ejemplo, que cada dia se pierden unas

Mecanismos de reparaci6n del DNA 261

 -
O-.-CH
z _

--p=o -------p=o -------p=o - - - - - - - p=O 0

/10- /10- /10- /10-
(A)

Figura 6-34 Resumen de las alteraciones espontaneas que requieren

reparaci6n del DNA. (A) Se indican los lugares de cada nucleotido que se
sabe que se modifican por oxidacion espontanea (flechas rajas), ataque
hidrolitico (flechas azules) 0 metilacion descontrolada por el dador de grupos
metilo S-adenosil metionina (flechas verdes); la frecuencia de cada proceso se
indica por el grosor de cada flecha. En la Figura 6-33 se ilustran con mas
detalle los dos tipos de procesos hidroliticos mas frecuentes. (B) Estructura
de un dfmero de timina, un tipo de alteracion introducida en el DNA de
celulas expuestas a radiacion ultravioleta (como la luz solar). Se puede formar
un dfmero similar entre dos bases de pirimidina vecinas cualesquiera
(residuos CoT) del DNA. (A, a partir de T. Lindahl, Nature 362: 709-715, 1993.
1993 Macmillan Magazines Ltd.)

I
(B)

5000 bases puricas (adenina y guanina) del DNA de cada celula humana debido
a la destrucci6n termica de enlaces N-glucosidicos entre estas bases y la desoxi-
rribosa (despurinaci6n). An81ogamente, se estima que la desaminaci6n de citosi-
na a uracHo en el DNA se produce a una velocidad de 100 cambios por genoma y
dia (Figura 6-33). Las bases del DNA tambien estan sujetas a cambios debido,
por un lado, ala acci6n de metabolitos reactivos (como las formas reactivas del
oxfgeno) que pueden alterar la capacidad de apareamiento de las bases, y por
otro, a la acci6n de la luz ultravioleta del sol, que puede favorecer la formaci6n
de un enlace covalente entre dos bases de pirimidina en el DNA (formandose,
por ejemplo, un dimero de timina, como el que se muestra en la Figura 6-34B).
Estos son s610 algunos de los muchos cambios que pueden 'ocurrir en nuestro
DNA (Figura 6-34A). Cabria esperar que la mayoria de estos cambios condujesen
ala eliminaci6n de uno 0 mas pares de bases de la cadena hija de DNA despues
de la replicaci6n del DNA, 0 a la substitucion de un par de bases (por ejemplo,
cada desaminaci6n C ~ U transformaria un par de bases C-G en un par de bases
T-A, puesto que el U es muy parecido ala T, y forma un par de bases comple-
mentarias con A). Como hemos visto, una elevada frecuencia de cambios de este
tipo tendria consecuencias desastrosas para los organismos.

262 Canftulo 6 : Mecaoismos e:eneticos bcisicos

 Figura 6-35 Reparacion del DNA. Las tres etapas comunes de la mayona de esqueleto de
azucar fosfato
tipos de procesos de reparaci6n del DNA son la escisi6n (etapa 1), resintesis
(etapa 2) y nueva uni6n (etapa 3). En la etapa 1 se elimina la zona alterada; en copia 1 pares de
bases unidas
las etapas 2 y 3 se repone la secuencia de DNA original. La DNA polimerasa ] por un enlace
llena el hueco generado en el proceso de escisi6n (etapa 2) y la DNA ligasa copia 2 de hidr6geno
suelda el extrema del trozo recien sintetizado al resto de la cadena (etapa 3).

I
ALTERACION
EI proceso de la soldadura consiste en la nueva formaci6n del enlace DE LA
fosfodiester rota (vease Figura 6-37). co PIA 1

copia 1

La estabilidad de los genes depende de la reparaci6n del DNA22 copia 2

ELiMINACION
A pesar de los miles de cambios al azar que se producen cada dfa en el DNA de
una celula humana debido a la energfa termica, en una celula promedio s610 se etapa 1
j DE LA REGION
ALTERADA DE
LA COPIA 1
acumulan unos cuantos cambios (mutaciones) estables cada ano. Hoy sabemos
que menos de uno de cada mil cambios accidentales de las bases del DNA pro-
voca una mutaci6n; el resto de los cambios son eliminados, con una eficacia ex-
traordinaria, mediante el proceso de reparaci6n del DNA. Existe una amplia va-
copia 1

copia 2
IIILIII 3' 5'

riedad de mecanismos de reparaci6n, cada uno de ellos catalizados por un LA DNA POLIMERASA

I
SINTETIZA UNA NUEVA
conjunto diferente de enzimas. Casi todos dependen de la existencia de dos co- etapa 2 COPIA 1 SOBRE LA
pias de la informacion genica, una en cada cadena de la doble helice del DNA: si COPIA 2, INTACTA, QUE
la secuencia de una de las cadenas cambia accidentalmente, la informacion no
se pierde irreversiblemente ya que todavia queda una segunda copia de la infor-
maci6n en la secuencia de nucle6tidos de la otra cadena. El proceso basico de la
copia 1

copia 2
DJDDI. TODAVfA SE CONSERVA

reparaci6n del DNA se ilustra esquematicamente en la Figura 6-35. Tal como se LA DNA L1GASA
indica en ella, el proceso supone tres etapas:
1. La porci6n alterada de la cadena de DNA es reconocida y eliminada por
etapa 3
j SUELDA LA
MUESCA

unas enzimas especiales llamadas nucleasas de reparaci6n del DNA, que hi- copia 1
drolizan los enlaces fosfodiester que unen los nucleotidos alterados al resto
de la molecula de DNA. Ello produce un "hueco" en esta region de la helice copia 2

de DNA.
RESULTADO NETO: SE RECUPERAN DOS
2. Otra enzima, la DNA polimerasa. se une al extrema 3'-OH de la cadena COPlAS CORRECTAS

cortada de DNA y va colocando nucleotidos, uno a uno, utilizando la infor-

maci6n "correcta" de la otra cadena (patr6n).
3. El hueco, 0 muesca de la cadena danada desaparece cuando el peptido que
ha sintetizado la DNA polimerasa se suelda gracias a la acci6n de una ter-
cer tipo de enzima, la DNA ligasa, 10 cual completa el proceso de restaura-
ci6n.
Tanto la DNA polimerasa como la DNA ligasa juegan un importantfsimo pa-
pel general en el metabolismo del DNA; ambas actuan, por ejemplo, en los pro-
cesos de la replicacion y de la reparaci6n del DNA. En las Figuras 6-36 y 6-37 se
ilustran las reacciones que catalizan estas dos enzimas.

Las alteraciones del DNA pueden ser eliminadas

por mas de una via23
Los detalles de la etapa de escision en el proceso de reparacion del DNA depen-
den del tipo de alteraci6n de que se trate. Por ejemplo, la despurinacion, que es
con diferencia la lesion mas frecuente de las que tienen lugar en el DNA, produ-
ce un azucar desoxirribosa que ha perdido su base (vease Figura 6-33). Este azu-
car es rapidamente reconocido por la enzima AP endonucleasa, la cual corta el
esqueleto fosfodiester del DNA en ellado 5' dellugar alterado. Despues de la es-
cisi6n de un residuo azucar-fosfato por una enzima fosfodiesterasa, se recupera
la secuencia de DNA inalterada mediante la acci6n de una DNA polimerasa y
una DNA ligasa (vease Figura 6-35).
Una via de reparaci6n relacionada con esta, denominada reparaci6n por
eliminaci6n de bases implica la actuaci6n de una bateria de enzimas diferentes

Mecanismos de reparacion del DNA 263

desoxirribonucleosido
trifosfato HO
~'~P -..... ::;,3'-=-==-=-....5..:. cadena desoxirribonucle6sido
entrante HO p P P _ cebadora trifosfato
entrante
"=-'='I'='I'='~-=t .. - cadena
.-.....................""--".......-...P-. - patron
5' 3'

direcci6n 5' a 3'

de crecimiento jl........, HO P P P P
de la cadena "c----'
p p p p p p

(A) (8)

llamadas DNA glucosilasas. Cada DNA glucosilasa reconoce a un tipo de base de Figura 6-36 La enzima DNA
DNA alterada y cataliza su eliminaci6n hidrolftica. Existen como minima seis ti- polimerasa. (A) Reacci6n catalizada
pos de estas enzimas, entre las que se encuentran las que eliminan C desamina- par la DNA polimerasa. Esta enzima
das, A desaminadas, diferentes tipos de bases alquiladas u oxidadas, bases con cataliza la adici6n de un
desoxirribonucle6tido al extrema 3'-
anillos abiertos y bases en las que un enlace doble carbono-carbono se ha con-
OH de una cadena de polinucle6tidos
vertido accidentalmente en un enlace sencillo carbono-carbono. Como ejemplo
(la cadena cebadora) que se halla
del mecanismo general que actua en todos los casos, en la Figura 6-38A se pre- apareada a una segunda cadena
senta la eliminaci6n de una C desaminada por la uracil DNA glucosilasa. La re- patron. La nueva cadena de DNA crece
acci6n de la DNA glucosilasa produce un azucar desoxirribosa que ha perdido su en direcci6n 5' a 3'. Debido a que cada
base. Dado que este azucar fosfato es el mismo substrato reconocido pOI la AP uno de los desoxirribonucle6tidos
endonucleasa, los pasos siguientes en el proceso de reparaci6n tienen lugar de la trifosfato que van entrando han de
misma forma que para los lugares despurinados. La importancia de la elimina- aparearse con los de la cadena patr6n
ci6n de las bases de DNA desaminadas accidentalmente ha sido demostrada di- para poder ser reconocidos por la
rectamente. En bacterias mutantes que carecen de la enzima uracil DNA gluco- polimerasa, esta cadena determina
silasa, la frecuencia normalmente baja de cambio espontaneo de un par de cual de los cuatro posibles
bases C-G a un par de bases T-A aumenta unas veinte veces. desoxirribonucle6tidos (A, C, GoT)
Las celulas disponen de una via de reparaci6n por eliminaci6n de nucle6ti- sera afiadido en cada momento. Como
en el caso de la RNA polimerasa, la
dos capaz de eliminar casi cualquier tipo de lesi6n del DNA que genere un cam-
reacci6n esta impulsada por una
bio importante en la doble helice del DNA. Entre las "grandes lesiones" se en- variaci6n muy favorable de energia
cuentran las que se generan a traves de la reacci6n covalente de las bases del (vease Figura 6-3). (B) Estructura de
DNA con grandes moleculas de hidrocarbonos (como el compuesto carcin6geno una molecula de DNA polimerasa de
E. coli, deterrninada por cristalograffa
de rayos X. Este dibujo Hustra c6mo, al
5'1 I I I I I I I parecer, actl1a la polimerasa durante la
"jp p
sfntesis del DNA durante el proceso de
pI pi "Tp p
reparaci6n. (B, adaptado de L.S. Beese,
PI "jp Pi "TP p p
enlace V. DerbyshireyT.A. Steitz. Science
fosfodiester P p p p
260;352-355, 1993. 1993 the MAS.)
roto pi "Tp p
Pl :::IP P
pI "Tp pl: "Tp pI p

3'1 I I 15' I I I I I I I I

Figura 6-37 Reacci6n catalizada por la DNA ligasa. Esta enzima suelda un
enlace fosfodiester roto. Tal como se muestra, la DNA ligasa utiliza una
molecula de ATP para activar el extrema 5' de la muesca (etapa 1) antes de
formar el nuevo enlace (etapa 2). De esta forma, la reacci6n energeticamente
desfavorable de soldadura de la muesca esta desplazada por el proceso
energeticamente favorable de hidr6lisis del ATP. En el sfndrome de Bloom,
una enfermedad humana hereditaria, los individuos presentan una
deficiencia parcial de DNA ligasa y, en consecuencia, son deficitarios en el
proceso de reparaci6n del DNA, 10 cual supone un incremento dramatico de
la incidencia de cancer.

264 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 dimero de pirimidinas
C desaminada I
/ A
GCTUATCC C T A C G G T C T ACT A T G G
5' pares de bases 5' pares de bases
] unidas por enlaces ] unidas por enlaces
3'~~~141l!1~~~11 de hidrogeno 3' de hidrogeno
CGAGTAGG G T A C C

U-1 URACIL DNA

GLUCOSILASA
A
G G T C T ACT A T

GCT ATCC

IIIiIIII
helice de DNA
con una base GAT G C C A GAT GAT A C C

..............
perdida
CGAGTAGG A
C G G T C T ACT A T G
DNA
LA AP ENDONUCLEASA
HELICASA
Y UNA FOSFODIESTERASA
ELiMINAN EL AZUCAR
FOSFATO

II
GCT ATCC C T A

m r
G

JlLlll[
CGAGTAGG
helice de DNA
con un hueco de
un nucleotido
GATGCCAGATGATACC
helice de DNA
con un hueco de
12 nucle6tidos

DNA POLIMERASA DNA POLIMERASA 1

1 YDNA L1GASA Y DNALIGASA

GCT_CATCC C T A C G G T C T ACT A T G G

lIIIIIII
CGAGTAGG GATGCCAGATGATACC

Figura 6-38 Comparaci6n entre los dos principales sistemas de reparaci6n del DNA. (A) Reparaci6n por eliminaci6n de
bases. Este proceso empieza con una DNA glucosilasa. En este caso la enzima uracil DNA glucosilasa elimina una citosina
accidentalmente desaminada. Tras la acci6n de esta glucosilasa (0 otra DNA glucosilasa que reconoce otro tipo de
alteraci6n) el azucar fosfato con la base perdida es eliminado mediante la acci6n secuencial de la AP endonucleasa y de
una fosfodiesterasa, las mismas enzimas que inician la reparaci6n de lugares despurinados. Entonces, el hueco de un
solo nucle6tido es rellenado por la DNA polimerasa y la DNA ligasa. El resultado neto es que el U que se gener6 por una
desaminaci6n accidental ha sido cambiado, recuperandose una C. El nombre de la AP endonucleasa proviene del hecho
de que reconoce cualquier lugar de la helice del DNA que contenga un azucar desoxirribosa cuya base se haya perdido.
Estos lugares pueden aparecer tanto por la perdida de una purina (lugares apurfnicos) como por la perdida de una
pirimidina (lugares apirimidfnicos). (B) Reparaci6n por eliminaci6n de nucle6tidos. Despues de que un complejo
multienzimatico reconozca una gran lesi6n, como un dfmero de pirimidinas (vease Figura 6-34B), se realiza un corte
a cada lado de la lesi6n y una DNA helicasa asociada elimina toda la zona dafiada de la cadena. El complejo
multienzimatico de las bacterias deja el hueco de 12 nucle6tidos que se muestra en la figura; el que se produce en el DNA
de humanos es mas del doble de grande.

benzopireno) 0 con varios dfmeros de pirimidina T-T, T-C YC-C generados por
la accion de la luz solar. En estos casos existe un gran complejo multienzimatico
que "rastrea" el DNA buscando, en lugar de un determinado cambio de una base
por otra, distorsiones de la doble helice. Cuando se detecta una gran lesion el es-
queleto fosfodiester de la cadena anormal que contiene la lesion (un oligonucleo-
tido) es cortado a cada lado de la distorsion y se elimina de la doble helice del
DNA mediante la accion de una enzima DNA helicasa (como se discute mas ade-
lante). A continuacion, se repara el pequeno hueco producido en la cadena del
DNA, mediante los metodos habituales, mediante una DNA polimerasa y una
DNA ligasa (Figura 6-38B).
La importancia de estos procesos de reparacion se refleja en la gran inver-
sion que realizan las celulas en el mantenimiento de enzimas de reparacion del
DNA. Un extenso anaIisis genetico de una levadura sugiere que cada celula con-

Mecanismos de reparaci6n del DNA 265

tiene mas de 50 tipos diferentes de genes que codifican funciones de reparaci6n
del DNA. Se cree que en la especie humana los pOcesos de reparaci6n del DNA
son al menos tan complejos como en la levadura. Los individuos que presentan
la anormalidad genetica xeroderma pigmentosum, por ejemplo, son deficitarios
en una gran cantidad de procesos de reparaci6n que, segUn puede compObarse
mediante ancilisis genetico, requieren como minima siete pOductos genicos di-
ferentes. Estos individuos desarrollan severas lesiones de piel, como el cancer de
piel, debido ala acumulaci6n de dimeOs de pirimidina en las celulas que se ha-
lIan expuestas al sol.

Las celulas pueden producir enzimas de reparaci6n de DNA

en respuesta a las alteraciones del DNA24
Las celulas han desarrollado varios mecanismos que les permiten sobrevivir en
un mundo agresivo. A menudo, una agresi6n ambiental extrema activa una ba-
terfa de genes cuyos pOductos pOtegen a la celula de los efectos de la agresi6n.
Uno de los mecanismos de este tipo que expresan todas las celulas es la respues-
ta al shock termico, la cUal es evocada por la exposici6n de las celulas a tempera-
turas anormalmente altas; entre las proteinas "de shock termico" ("heat-shock-
proteins") que se inducen se encuentran algunas de las que al parecer colaboran
en la estabilizaci6n y en la reparaci6n de las pOteinas celulares parcialmente
desnaturalizadas (vease Figura 5-29).
Muchas celulas presentan tambien mecanismos que les permiten sintetizar
enzimas de reparaci6n del DNA en respuesta a una alteraci6n severa del DNA. El
ejemplo mejor estudiado es la respuesta SOS en E. coli. En esta bacteria, cual-
quier bloqueo de la replicaci6n del DNA genera una senal (al parecer se trata de
un exceso de DNA de una sola cadena) que induce un incremento de la trans-
cripci6n de mas de 15 genes diferentes, muchos de los cuales codifican pOtei-
nas que actl1an en la reparaci6n del DNA. En primer lugar la senal activa la pO-
teina RecA de E. coli (vease mas adelante) que destruye una pOteina reguladora
de un gen que actua negativamente (un represor), la cual a su vez normalmente
suprime la transcripci6n de la colecci6n completa de genes del SOS. Estudios so-
bre bacterias mutantes deficitarias en diferentes partes de la respuesta indican
que las pOteinas que se sintetizan en esta respuesta tienen dos efectos. En pri-
mer lugar, y tal como era de esperar, la inducci6n de enzimas de reparaci6n del
DNA incrementa la supervivencia de la celula. Cuando mutantes deficitarios en
estos factores de la respuesta SOS son tratados con algUn agente que altera el
DNA, como la radiaci6ri ultravioleta, una pOporci6n extraordinariamente eleva-
da de ellos mueren. En segundo lugar, incrementa marcadamente el numeO de
errores que se producen en la copia de las secuencias del DNA por 10 que algu-
nas de las pOteinas que se sintetizan en estos momentos aparecen con elevadas
frecuencias de mutaci6n, por 10 que tambien aumenta la variabilidad genetica
de la poblaci6n. Esta parte de la respuesta tiene un pequeno efecto en la super-
vivencia a corto plazo; posiblemente se trata de una ventaja ya que incrementa
las probabilidades de que sobreviva una celula mutante mejor adaptada.
El sistema de reparaci6n del DNA que se activa durante la respuesta SOS no
es el unico sistema reparador de DNA inducible que se conoce. Las bacterias tie-
nen otO sistema que se activa especfficamente por la presencia de nucle6tidos
metilados en el DNA, Yexiste como minima un sistema inducible de reparaci6n
del DNA en las celulas de levadura. Tambien se ha descrito que algunas celulas
eucariotas se adaptan a las alteraciones del DNA de una forma similar a la que
hemos descrito para bacterias.

La estructura y las propiedades quimicas de la doble helice

del DNA hacEm que sea facil de reparar25
La doble helice del DNA parece una estructura 6ptima para ser reparada. Como
se discute en el Capitulo 1, se cree que el RNA apareci6 durante la evoluci6n an-

266 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 DESAMINACION DE A DESAMINACION DE G DESAMINACION DE 5-METll C

r
hipoxantina xantina 5-metil citosina timina

(A) (B)

tes que el DNA y es probable que inicialmente el c6digo genetico estuviera escri- Figura 6-39 Desaminacl6n de
to en los cuatro nucle6tidos A, C, G YU. Ello plantea par que se reemplaz61a nucle6tidos de DNA. En cada caso el
U del RNA por la T (que es 5-metil U) del DNA. Hemos visto que la desamina- Momo de oxfgeno afiadido a partir de
ci6n espontanea de C la transfarma en U, pero que este hecho es inofensivo la reacci6n con el agua esta coloreado
gracias a la uracil DNA glucosilasa (Figura 6-38A). Podemos imaginar que cual- en raja. (A) Los productos de
desaminaci6n espontanea de A y
quier enzima de reparaci6n encargada de detectar y eliminar estos accidentes
de G se pueden reconocer como no
no podria distinguir estos nucle6tidos de los nucle6tidos U normales de una naturales cuando ocurren en el DNA,
molecula de DNA que contuviera U. Por ello, no es sorprendente que no se uti- por 10 que son facilmente detectados y
lice U en el DNA. reparados. La desaminaci6n de C a U
Esta linea de argumentaci6n esta corroborada por la observaci6n de que esta ilustrada en la Figura 6-33 y T no
cada posible proceso de desaminaci6n en el DNA produce una base no habitual, tiene grupo amino para desaminar.
la cual, por 10 tanto, puede ser detectada y eliminada directamente mediante (B) En el DNA de vertebrados un
una DNA glucosilasa especifica. La hipoxantina, par ejemplo, es la base purica escaso porcentaje de los nucle6tidos C
mas simple que es capaz de aparearse especificamente con C. Sin embargo la hi- estan metilados, 10 cual contribuye al
poxantina es el producto directo de la desaminaci6n de A. La adici6n de un se- control de la expresi6n genica. Cuando
gundo grupo amino ala hipoxantina genera G, la cual no puede formarse espon- estos 5-metil nucle6tidos C se
taneamente a partir de A por desaminaci6n espontanea y cuyo producto de desaminan accidentalmente, forman
T. Esta T se apareara con una G de la
desaminaci6n es tambien unico (Figura 6-39A).
cadena opuesta, formando un par de
En el DNA de los vertebrados ocurre una situaci6n especial, ya que algunos
bases equivocado.
nucle6tidos C determinados estan metilados en secuencias CG especificas de
genes inactivos 00 cual se discute en el Capitulo 9). Como se ilustra en la Figura
6-39B, la desaminaci6n accidental de estos nucle6tidos C metilados produce el
nucle6tido natural T, el cual forma un apareamiento err6neo con el nucle6tido
G de la otra cadena del DNA. Para colabarar en la protecci6n de estos nucle6ti-
dos C metilados contra estas mutaciones, una DNA glucosilasa especial recono-
ce los nucle6tidos de T en las secuencias TG, eliminando T. Sin embargo, este
mecanismo de reparaci6n del DNA debe ser relativamente ineficiente ya que
los nucle6tidos C metilados son lugares habituales de mutaci6n en el DNA de los
vertebrados. Aunque en el DNA de humanos solamente alrededor del 3% de
los nucle6tidos C estan metilados, las mutaciones en estos nucle6tidos consti-
tuyen aproximadamente una tercera parte de las mutaciones de una sola base
que se han observado en enfermedades hereditarias humanas (vease tambien
Figura 9-71).
Mientras que las propiedades quimicas de las bases aseguran que los proce-
sos de desaminaci6n seran detectados, la reparaci6n exacta -y la respuesta fun-
damental del dilema de Schroedinger- depende de la existencia de diferentes
copias de la informaci6n genetica en las dos cadenas de la doble helice. Tan s610
en el caso muy improbable de que ambas copias se lesionen simultaneamente
en el mismo par de bases, la celula se quedara sin ninguna copia "buena" para
utilizarla como patr6n de la reparaci6n del DNA. Incluso en este caso, se han de-
sarrollado mecanismos que en algunos casos son capaces de reparar la altera-
ci6n. Estos mecanismos de reparaci6n requieren que en la celula se halle pre-
sente una segunda helice de DNA de la misma secuencia, y utilizan mecanismos

Mecanismos de reparaci6n del DNA 267

de recombinaci6n genica para transferir la informaci6n perdida desde una heli-
ce de DNA a la otra -un proceso denominado conversion genica, tal como discu-
tiremos mas adelante.
Unicamente en algunos virus muy pequefios, cuyos genomas tienen unos
pocos cientos de nucle6tidos, la informaci6n genetica es almacenada en DNA de
una sola cadena 0 en moIeculas de RNA. Los tipos de sistemas de reparaci6n que
hemos descrito no pueden actuar en estos casos, y la probabilidad de que en es-
tos virus ocurra un cambio de un nucle6tido es muy elevada. Parece que unica-
mente los organismos cuyos genomas sean muy pequefios pueden permitirse
codificar su informaci6n genetica en estructuras que no sean una doble helice
deDNA.

Resumen
La fidelidad con la que se mantienen las secuencias del DNA en los eucariotas supe-
riores puede ser estimada a partir de las frecuencias de cambio durante la evolu-
cion de las protenas no esenciales y de las secuencias de DNA no codificante. Esta
fidelidad es tan elevada que una linea germinal de mamifero, con un genoma de
3 x 1(J9 pares de bases, estd sujeta a una media de tan solo entre lOy 20 cambios
de pares de bases cada ano. Sin embargo resulta inevitable que en una celula tipica
de mamifero los diferentes procesos qumicos lesionen cada dia miles de nucleoti-
dos del DNA. La informacion genetica se puede almacenar de forma estable en la
secuencias del DNA gracias a que existen numerosos tipos de enzimas de reparacion
que "patrullan" continuamente el DNAy reemplazan los nucleotidos alterados.
El proceso de reparacion del DNA depende de la presencia de una copia de la
informacion genetica en cada cadena de la doble Mlice del DNA. Una lesion acci-
dental de una de las dos cadenas se puede eliminar mediante la accion de una enzi-
ma de reparaci6n, sintetizdndose a continuaci6n la cadena correcta a partir de la
informaci6n de la cadena no alterada. La mayor parte de las alteraciones en las ba-
ses del DNA son eliminadas mediante uno de dos procesos principales. En la repa-
racion por eliminacion de bases una base alterada es eliminada mediante una en-
zima DNA glicosilasa, seguida de la eliminaciOn del azucarfosfato resultante. En la
reparaci6n por eliminaci6n de nucle6tidos, una pequeiia region de la cadena veci-
na a la alteraci6n es eliminada de la helice del DNA, como un oligonucle6tido. En
ambos casos el pequeno "hueco" que queda en la helice de DNA es rellenado me-
diante la acci6n secuencial de una DNA polimerasa y una DNA ligasa.

Mecanismos de replicaci6n del DNA26

Ademas de mantener la integridad de las secuencias del DNA mediante los me-
canismos de reparaci6n del DNA, todos los organismos vivos han de duplicar su
DNA de una forma muy exacta, antes de cadadivisi6n celular. La replicacion del
DNA supone unas velocidades de polimerizaci6n de aproximadamente 500 nu-
cle6tidos por segundo en las bacterias, y de unos 50 nucle6tidos por segundo en
los mamiferos. Evidentemente, las enzimas de replicaci6n han de ser exactas y
nipidas. La rapidez y la exactitud se consiguen mediante un complejo multienzi-
matico de varias proteinas que dirige el proceso y constituye una complicada
"maquina de replicaci6n".

Tal como ocurre para el proceso de reparaci6n del DNA,

el fundamento del proceso de replicaci6n es
el apareamiento de bases27
La utilizaci6n del DNA como patron se refiere al proceso en el que la secuencia
de nucle6tidos del DNA (0 de determinadas zonas del DNA) es copiada median-
te el apareamiento de bases complementarias (A con T 0 con U y G con C), pro-

268 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

duciendo asi una secuencia de acido nucleico (de DNA 0 de RNA) complemen-
taria a la patr6n. El proceso comporta el reconocimiento de cada nucle6tido del
DNA por un nucle6tido complementario no polimerizado y requiere que las dos
cadenas de la helice de DNA se separen por 10 menos un momenta para que los
grupos dadores y aceptores de los enlaces de hidr6geno de cada base queden li-
bres para el apareamiento de las bases. De esta forma se alinean ordenadamente
los nucle6tidos libres adecuados y polimerizan mediante una reacci6n cataliza-
da enzimaticamente, formando una nueva cadena de acido nucleico. En 1957 se
descubri6 la primera de estas enzimas que catalizan la polimerizaci6n de nucle6-
tidos, la DNA polimerasa. Se demostr6 que los substratos de esta enzima son los
desoxirribonucle6sidos trifosfato, los cuales son polimerizados sobre una cade-
na patr6n de DNA. El mecanismo de esta reacci6n es el que se ha descrito en la
Figura 6-36 para la reparaci6n del DNA. Este descubrimiento llev6 al posterior
aislamiento de la RNA polimerasa, de la que se supuso, correctamente, que utili-
zaba ribonucle6sidos trifosfato como substrato.
Durante la replicaci6n del DNA, cada cadena del DNA antiguo actua como
patr6n de la formaci6n de una nueva cadena entera. Dado que cada una de las
dos celulas hijas de una celula que se divide hereda una helice de DNA que
contiene una cadena antigua y otra acabada de sintetizar (vease la Figura 3-13),
se dice que el DNA se replica de manera "semiconservativa" por la DNA poli-
merasa.

La horquilla de replicaci6n del DNA es asimetrica28

AnaIisis autorradiograticos efectuados a principios de los afios 1960 sobre cromo-
somas enteros en replicaci6n marcados con un breve pulso de timidina 3H, un pre-
cursor del DNA, revelaron la existencia de una regi6n concreta de replicaci6n que
se desplaza a 10 largo de la doble helice paterna de DNA. Debido a su estructura en
forma de Y, esta regi6n activa del DNA recibe el nombre de horquilla de replica-
ci6n del DNA. En la horquilla de replicaci6n se sintetiza el DNA de las dos helices
hijas mediante un complejo multienzimatico que contiene la DNA polimerasa.
Inicialmente el mecanismo mas sencillo de replicaci6n del DNA parecia ser el
crecimiento continuo de las dos nuevas cadenas, nucle6tido a nucle6tido, a medi-
da que la horquilla de replicaci6n se desplazaba de un extremo a otro de la molecu-
la del DNA. Pero debido a que en la helice de DNA las dos cadenas se hallan en
orientaci6n antiparalela (vease Figura 3-10 y Panel 3-2, pags. 104-105), este meca-
nismo requeriria que una de las cadenas hijas creciera en direcci6n 5' a 3' y la otra
en direcci6n 3' a 5'. Una horquilla de replicaci6n de este tipo requeriria dos enzi-
mas DNA polimerasa diferentes. Una de ellas polimerizaria en direcci6n 5' a 3', de
forma que cada nucle6tido trifosfato entrante transportara la activaci6n del trifos-
fato necesaria para su propia activaci6n, mientras que la otra enzima deberia des-
plazarse en direcci6n 3' as', actuando segt1n el mecanismo denominado "creci- Figura 6-40 Modelo incorrecto de la
replicaci6n del DNA. A pesar de que el
mecanismo que se indica en la figura
pueda parecer el mecanismo mas
sencillo para la replicaci6n del DNA,
no es el que utiliza la celula. N6tese
que en este esquema las dos cadenas
de DNA hijas crecerfan de forma
continua, utilizando la energfa de
p P 3' hidr6lisis de los fosfatos amarillos para
afiadir el nucle6tido siguiente a cada
P P 5' cadena. Ello requerirfa que las cadenas
pudieran crecer tanto en la direcci6n
azucar 5' a 3' (abajo) yen la direcci6n 3' a 5'

5'~OH3
(arriba). Nunca se ha descubierto la
existencia de uQa enzima que catalice
la polimerizaci6n de nucle6tidos en
trifosfato base direcci6n 3' as'.

Mecanismos de replicaci6n del DNA 269

 5' Figura 6-41 Estructura de una
horquilla de replicaci6n del DNA.
Debido a que las dos cadenas de DNA
(coloreadas) se sintetizan en la
direcci6n 5' a 3', el DNA sintetizado
sobre la cadena retrasada es producido
hebra patron
hebra patron conductora en forma de cortas moleculas de DNA,
retrasada denominadas fragmentos de Okazaki.

3' 5' 3' 5'

miento por la cabeza" en el que el extremo de la cadena de DNA que esta creciendo
transporta la activacion del trifosfato necesaria para la adicion del nucleotido si-
guiente. A pesar de que la polimerizacion "por la cabeza" tiene lugar en diversos
procesos bioqufmicos (vease Figura 2-36), no ocurre en la sfntesis del DNA; nunca
se ha encontrado una DNA polimerasa que actue en direccion 3' a 5' (Figura 6-40).
leomo se consigue, pues, la sintesis del DNA en direccion 3' a 5'? La respuesta
fue sugerida por primera vez a finales de los afios 1960 gracias a experirnentos en los
que a una preparacion de bacterias en crecirniento se afiadfa durante breves segun-
dos una preparacion de timidina 3H altamente radiactiva, de forma que unicamente
resultaba marcada radiactivamente la zona de DNA que se acababa de replicar, es
decir, justo detras de la horquilla de replicacion. Este sistema selectivo de marcaje
revelola existencia de zonas de DNA en la horquilla de crecimiento de la bacteria de
entre 1000 y 2000 nucleotidos de longitud, que hoy se conocen con el nombre de
fragmentos de Okazaki. (Mas tarde se describieron intermediarios de replicacion
como estos en eucariotas, pero de una longitud de tan solo entre 100 y 200 nucleoti-
dos.) Se demostro que estos fragmentos de Okazaki se sintetizan Unicamente en di-
reccion 5' a 3', Yque despues de su sfntesis se unen entre sf generando largas cade-
nas de DNA, mediante la enzima DNA ligasa, la misma enzima que rellena y suelda
los "huecos" durante la reparacion del DNA (vease Figura 6-37).
Una horquilla de replicacion tiene una estructura asimetrica. La cadena hija
de DNA que se sintetiza de manera continua recibe el nombre de cadena con-
ductora, y se sintetiza antes que la cadena hija, que se sintetiza de forma discon-
tinua y que recibe el nombre de cadena retrasada. La sfntesis de la cadena retra-
sada es mas lenta debido a que debe esperar a que la cadena conductora
exponga la cadena patron sobre la que se sintetizara cada uno de los fragmentos
de Okazaki (Figura 6-41). La sfntesis de la cadena conductora mediante un me-
canismo discontinuo de "punto hacia atras" significa que para la replicacion del
DNA unicamente se necesita la DNA polimerasa 5' a 3'.

EI elevado grado de fidelidad del mecanismo de replicaci6n

del DNA requiere la existencia de un mecanismo
de "correcci6n de galeradas"29
La fidelidad del proceso de copia durante la replicacion del DNA es tan alta que
solo se produce, aproximadamente, un error en la replicacion de cada 109 pares
de bases, tal como requiere el mantenimiento del genoma de los mamfferos, de
3 x 109 pares de bases de DNA. Esta fidelidad es mucho mas alta que la esperada,

270 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

dado que las parejas estandar de bases complementarias no son las unicas posi- o~

~~
bles. Por ejemplo, pequefios cambios en la geometrfa de la helice permitiran que
se formen dos enlaces de hidr6geno entre G y T en el DNA. Ademas, en el DNA habra C*
cebadora ~)_~Ol-\
normal aparecen transitoriamente formas tautomericas raras de las cuatro bases ~~
T T T T ""- )
del DNA, en proporciones de 1 parte por cada 104 0105 Estas formas no se apa- 5'_ p OH.-/ ~
rean correctamente a no ser que haya cambios en la geometria de la helice: por ~~O/-(
ejemplo, la escasa forma tautomerica de C se aparea con A en lugar de con G. Si 3'_ P P P P P P P P _
la DNA polimerasa acepta que se formen apareamientos incorrectos de bases A A A A A A A A A
entre un desoxirribonucle6sido trifosfato entrante y el patr6n de DNA, el nucle6- \ una forma tautomerica rara de

I
tido incorrecto sera incorporado en la nueva cadena de DNA, produciendose hebr~ C (C*) se aparea con A y as! se
patron incorpora a la hebra cebadora
una mutaci6n. La elevada fidelidad del proceso de replicaci6n del DNA depende por la DNA polimerasa
de mecanismos de "correcci6n de galeradas" 0 "verificaci6n de lectura" (proof-
T T T T C*
reading mechanism) que elimina errores generados de esta forma. P P P P OH
Un importante proceso de "correcci6n de galeradas" depende de las espe-
dales propiedades de la enzima DNA polimerasa. A diferencia de las RNA poli- p P P P P P P P
merasas, las DNA polimerasas no inician una nueva cadena de nucle6tidos AAA A A A A A A
uniendo entre si dos nucle6tidos trifosfato: necesitan de forma absoluta la pre- ei nipido desplazamiento
sencia de un extrema 3' -OR de una cadena cebadora sobre la que afiadir los nu-
cle6tidos siguientes (vease Figura 6-36). Ademas, las moleculas de DNA que pre-
sentan errores de apareamiento (0 con falta de algl.1n apareamiento) de
nucle6tidos en el extremo 3' -OR de la cadena cebadora no son efectivas como
T
P
T
P
l
tautomerico de C* a citosina
normal (C) destruye su
apareamiento con A
T
P
T (,
P
0'0

cadena patr6n. Las moIeculas de DNA polimerasa son capaces de trabajar con
cadenas de DNA defectuosas de este tipo mediante la utilizaci6n de una subuni- P
A A
dad 0 dominio catalitico que corta cualquier residuo desapareado del final de la
ei extrema 3'OH no apareado

l
cadena cebadora. El proceso de corte mediante esta actividad correctora exonu- de la hebra cebadora bloquea
cleasa 3' a 5' continua hasta que se ha eliminado un numero de nucle6tidos del su alargamiento posterior
por acci6n de la DNA polimerasa
extrema 3' suficiente como para regenerar un extremo con bases apareadas que
~
pueda cebar la sintesis de DNA. De esta forma, la DNA polimerasa actua como T T T T (, 0'0 ~~O/-(
una enzima "autocorrectora" que va eliminando sus propios errores de polime- P P P P
rizaci6n a medida que avanza por el DNA. La Figura 6-42 Hustra c6mo puede es-
perarse que este proceso de "autocorrecci6n" elimine los errores de aparea-
miento de bases.
El requerimiento de la presencia de un extremo de DNA formado por un
perfecto apareamiento de bases es esencial para que se den las propiedades de
C
rPW=-OH
~
1 1a actividad de la exonucleasa
3' a 5' unida a la DNA polimerasa,
genera un extremo 3'-OH con
bases apareadas en la hebra
"autocorrecci6n" de la DNA polimerasa. Para una enzima de este tipo, aparente- cebadora
mente no es posible iniciar la sintesis en completa ausencia de un cebador sin
-nu- T T T T

---
perder ninguna de sus caracteristicas discriminatorias entre bases apareadas y 0H
desapareadas del extremo 3' -OR en crecimiento. Por el contrario, las enzimas
RNA polimerasas implicadas en la transcripci6n genica no necesitan ser autoco-
rrectoras: los errores en la transcripci6n del RNA no pasan a la generaci6n si- AAA AAAAAA

guiente, y la existencia ocasional de una molecula defectuosa no es relevante. la DNA polimerasa continua el
proceso de adici6n de
Las RNA polimerasas son capaces de iniciar una nueva cadena de polinucle6ti- nucle6tidos al extremo 3'-OH
dos en ausencia de cebador, y se observa una frecuencia de error de aproxima- de la hebra cebadora

damente 1 de cada 10\ tanto en la sintesis del RNA como en los procesos de tra-
ducci6n de las secuencias de mRNA a secuencias de proteina.

8610 la replicaci6n del DNA en direcci6n 5' a 3' permite la

existencia de un eficiente proceso de correcci6n de errores
Probablemente la necesidad de que el proceso sea exacto explica por que la re-
Figura 6-42 "Correcci6n de
plicaci6n del DNA unicamente tiene lugar en la direcci6n 5' a 3' de la cadena. Si
galeradas" 0 "verificaci6n de lectura"
existiera una DNA polimerasa que afiadiera desoxirribonucle6sidos trifosfato de durante la replicaci6n del DNA.
forma que produjera el crecimiento de la cadena en direcci6n 3' a 5', el extremo
5' en crecimiento transportaria el trifosfato activador en lugar de hacerlo el mo-
nonucle6tido entrante. En este caso los errores de polimerizaci6n no serian sim-
plemente eliminados por hidr6lisis ya que la sintesis de un extrema 5' desnudo
terminaria inmediatamente la sintesis de DNA. Por consiguiente resulta mucho
mas facH corregir una base mal apareada que acaba de ser afiadida al extremo 3'

Mecanismos de replicaci6n del DNA 271

 que una base que ha side afiadida al extrema 5' de una cadena de DNA. Por 10
tanto, aunque el tipo de mecanisme necesario para la replicacion del DNA que
se muestra en la Figura 6-41 parece a primera vista mucho mas complejo que el ::3'
incorrecto mecanisme de la Figura 6-40, resulta mucho mas exacto porque su-
pone la sintesis de DNA unicamente en direccion 5' a 3'.
DNA primasa

Una enzima especial que polimeriza nucle6tidos sintetiza cortas

moleculas cebadoras de RNA sobre la cadena retrasada30
Para el caso de la cadena conductora unicamente es necesario un cebador espe-
::3'
cial al inicio de la replicacion; en cuanto se ha establecido la horquilla de repli- Figura 6-43 Sintesis del cebador de
cacion, la DNA polimerasa dispone continuamente de un extremo de cadena RNA. Representaci6n esquematica de
con bases apareadas sobre el que sintetizar la nueva cadena. Sin embargo la la reacci6n catalizada por la RNA
DNA polimerasa dellado retrasado de la horquilla completa un corto fragmento primasa, la enzima que sintetiza los
de DNA en tan solo 4 segundos, tras 10 cual ha de empezar a sintetizar otro frag- cebadores de RNA cortos sobre la
mento completamente nuevo en un punto situado mas adelante de la cadena cadena retrasada. A diferencia de la
patron (Figura 6-41). Para generar estas cadenas cebadoras de bases apareadas DNA polimerasa, esta enzima puede
que son necesarias para que actue la DNA polimerasa, se necesita un mecanis- iniciar una nueva cadena
mo especial. El mecanismo incluye una enzima denominada RNA primasa (del polinucleotfdica uniendo entre sf dos
ingles "primer", cebador, 0 tambien enzima generadora de cadenas cebadoras de nucle6sidos trifosfato. La primasa se
detiene despues de la sfntesis de un
RNA) que utiliza ribonucleosidos trifosfato para sintetizar cebadores (primers)
polinucle6tido corto dejando el
de RNA cortos (Figura 6-43). En los eucariotas, estos cebadores tienen aproxima-
extrema 3' de este cebador a
damente 10 nucleotidos de longitud y son sintetizados a intervalos sobre la ca- disposici6n de la DNA polimerasa.
dena retrasada, para despues ser elongados mediante la DNA polimerasa consti-
tuyendo los fragmentos de Okazaki. La sintesis de cada fragmento de Okazaki
acaba cuando esta DNA polimerasa se encuentra con el RNA cebador unido al
extrema 5' del fragmento anterior de DNA. Para producir una cadena continua
de DNA a partir del gran numero de fragmentos sintetizados sobre la cadena re-
trasada, rapidamente actua un sistema especial de reparacion del DNA que eli-
. mina el RNA cebador y 10 substituye por DNA. A continuacion, la ligasa une el
extremo 3' de cada fragmento de DNA al extrema 5' del fragmento anterior,
completando asi el proceso (Figura 6-44).
iPor que se ha de sintetizar un RNA cebador, que luego se tendni que elimi- sintesis de un nuevo
nar, en lugar de utilizar un cebador de DNA que no seria necesario eliminar? El cebador de RNA.
RNA lIevada a cabo par
argumento de que una polimerasa autocorrectora no puede iniciar cadenas de cebador la RNA primasa
novo tambien implica 10 contrario: una enzima capaz de iniciar cadenas de novo
no puede presentar un sistema eficiente de autocorreccion. Por consiguiente,
cualquier enzima que inicie la sintesis de los fragmentos de Okazaki producini,
3'====_=5~'
S I __~3~'~"=5~'_ r
cadena jla DNA polimerasa se une
necesariamente, una copia relativamente incorrecta (con por 10 menos un error retrasada al nuevo cebador de RNA.
patron iniciando un nuevo
cada 105 bases). Incluso aunque la cantidad que se conserva de esta copia en el fragmento de Okazaki
producto final constituye una parte tan pequefia como el 5 % del genoma total
(por ejemplo 10 nucleotidos por cada fragmento de DNA de 200 nucleotidos), el
incremento resultante de la frecuencia general de mutacion seria enorme. Por
3':====_=5~'3~'~.==:_=~5'_ r
S

consiguiente, parece razonable concluir que la utilizacion de moleculas de RNA

como cebador en lugar de moleculas de DNA debio suponer una poderosa ven-
taja, ya que los ribonucleotidos del cebador marcan automaticamente estas se-
cuencias como "copia mala" que debe ser eliminada.
I ia DNA polimerasa acaba
el fragmento de DNA

3':::::_=:::::_:5~'_3'
5'

el viejo cebador de RNA

es eliminado y remplazado
por DNA
j
Figura 6-44 Sintesis de uno de los muchos fragmentos de DNA sobre la
cadena retrasada. En los eucariotas, los cebadores de RNA sobre la cadena
retrasada se presentan a intervalos de unos 200 nucle6tidos, y cada uno de
3' :::::':::::::_:~5~'_
5' 3'
la soldadura de las hendi.dura.s
ellos tiene unos 10 nucle6tidos de longitud. El cebador es eliminado por una mediante la DNA ligasa une
enzima especial de reparaci6n que reconoce una hebra de RNA de una helice
RNAIDNA y la elimina; ello produce una hendidura que es rellenada pOI una
j fragmentos de Okazaki a la,
nueva cadena de DNA en "
crecimiento
DNA polimerasa y una DNA ligasa, como hemos visto para el proceso de
reparaci6n de DNA (vease Figura 6-35). 3':::::::::::_:~5~'
s _r
272 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos
 Figura 6-45 Ensayo utilizado para medir la actividad de las DNA helicasas. """"""","";""11111111111;111;1""'1111111
Un corto fragmento de DNA se hibrida con una larga cadena de DNA de
cadena sencilla, formando una regi6n de doble helice. A medida que la
helicasa va avanzando por la cadena de DNA de cadena sencilla, la doble
la DNA helicasa
se une
j
helice se va deshaciendo, liberando el fragmento corto de DNA. Esta reacci6n
requiere la presencia tanto de la proteina helicasa como de ATP. El
movimiento de la helicasa esta alimentado energeticamente par la hidr6lisis
del ATP (vease Figura 5-22).

Unas proteinas especiales ayudan a abrir la doble helice del DNA

por delante de la horquilla de replicaci6n31
La doble helice de DNA ha de ir abril~ndose nipidamente por delante de la har-
quilla de replicaci6n, de maneraque los desoxirriboncle6sidos trifosfato entran-
tes puedan aparearse con los de la cadena patr6n. Sin embargo, la doble helice
de DNA es muy estable en condiciones normales: los pares de bases estan tan
bien encajados en su lugar, que para separar las dos cadenas en el tuba de en-
sayo se requieren temperaturas pr6ximas a las de ebullici6n del agua. Por esta
raz6n, para poder copiar una moIecula de DNA, la mayorfa de las DNA polime-
rasas requieren que la cadena patr6n se haya separado de su cadena comple-
"
mentaria. Para abrir la doble helice y poner al descubierto la cadena patr6n del
DNA que sera copiada por la DNA polimerasa, son necesarias unas proteinas
adicionales. Dos tipos de protefnas de replicaci6n contribuyen a este proceso
-las DNA helicasas y las protefnas de uni6n al DNA de una sola hebra.
Las DNA helicasas fueron inicialmente aisladas como protefnas que hidrolizan
AIP cuando se unen a moIeculas de DNA de una sola cadena. Como se describe en
el Capftulo 5, la hidr6lisis de AIP puede hacer variar de forma cfclica la forma de
una molecula proteica, permitiendo a la protefna realizar alglin trabajo mecanico.
Las DNA helicasas utilizan este principio para desplazarse rapidamente a 10 largo
de cadenas de DNA de una sola cadena; cuando encuentran una regi6n de doble
helice, contimlan desplazandose par la misma cadena, desenroUado asf la helice
(Figura 6-45). Previamente hemos descrito como actua una helicasa de reparaci6n
especial en la reparaci6n par eliminaci6n de nucle6tidos (vease Figura 6-38B).
EI desenrollamiento de la helice de DNA patr6n en la horquilla de replica-
cion puede, en principio, estar catalizada par dos DNA helicasas que actuan de
forma concertada, una de elIas desplazandose par la cadena conductara y la otra
desplazandose por la cadena retrasada. Estas dos helicasas deberian desplazarse
en direcciones opuestas a 10 largo de una moIecula de DNA de cadena sencilla, y
par 10 tanto, deberfan ser dos enzimas diferentes. En efecto, ambos tipos de
DNA helicasa existen, pero algunos estudios en bacterias demuestran que la
DNA helicasa que desempefia el papel principal es la de la cadena conductara,
par razones que pronto quedaran aclaradas.
Las proteinas desestabilizadoras de la helice -tambien lIamadas protefnas
de union a DNA de una sola cadena (SSB, de Single Strand DNA-Binding pro-
teins) se unen a cadenas de DNA abiertas, sin recubrir las bases de la cadena, las
cuales, por 10 tanto, quedan disponibles para actuar como patr6n. Estas protef-
nas no son capaces de abrir directamente una larga cadena de DNA, pero cola-
boran con las helicasas estabilizando la confarmaci6n desenrollada de las cade-
nas sencillas. Ademas, su uni6n cooperativa recubre completamente las regiones
de DNA de cadena sencilla de la cadena retrasada previniendo asf la formaci6n
de cortas helices en forma de harquilla que impedirian la actuaci6n de la DNA
polimerasa (Figura 6-46).

Una molecula de DNA polimerasa m6vil se mantiene

unida al DNA mediante un anillo deslizante32
La mayarfa de las DNA polimerasas s610 sintetizan, par sf mismas, cortas cade-
nas de nucle6tidos antes de separarse del DNA patr6n. Esta tendencia a dejar ra-

Mecanismos de replicaci6n del DNA 273

 regi6n de una sola Figura 6-46 Efecto de las proteinas
cadena de DNA
patr6n. presentando
que se unen a una sola hebra sobre la
cortas regiones en estructura de DNA de una sola hebra.
...... forma de "h~rquilla" Debido a que cada molecula proteica
por apareamlento
de bases se une preferentemente a otra
molecula que ya se ha unido
mon6meros de proteina ,~ previamente (union cooperativa),
que desestabilizan ~ sobre las cadenas monocatenarias de
lahelice

5'
3' m~",,-
_ " .

.- DNA se forman largas hileras de estas

prote(nas. Esta uni6n cooperativa
provoca un estiramiento de la cadena
patr6n de DNA, facilitando el proceso
de polimerizaci6n. Las "helices en
horquilla" que aparecen en la
molecula de DNA de cadena sencilla se
producen por apareamiento de bases
entre cortas regiones de secuencias
la uni6n cooperativa de la proteina estira la cadena
complementarias dentro de la propia
cadena; son semejantes a las pequefias
helices que se forman en todas las
pidamente la moIecula de DNA permite a la moltkula de DNA polimerasa, que moIeculas de RNA.
acaba de sintetizar un fragmento de Okazaki sobre la hebra retrasada, reciclarse
nipidamente, empezando de nuevo a sintetizar el siguiente fragmento de Okaza-
ki sobre la misma hebra. Sin embargo, esta nipida disociaci6n supondria una di-
ficultad para que la polimerasa sintetizara largas cadenas de DNA en la horquilla
de replicaci6n, si no existiera una proteina accesoria que actua como una abra-
zadera regulada. Esta abrazadera mantiene la polimerasa firmemente unida al Figura 6-47 El anillo deslizante
DNA cuando se desplaza, pero la libera en cuanto la polimerasa separa. regulado que une la DNA polimerasa
iC6mo puede impedir una abrazadera que la polimerasa se disocie sin im- al DNA. (A) Estructura del anillo
pedir al mismo tiempo que la polimerasa se desplace rapidamente a 10 largo de deslizante de E. coli, con una helice de
DNA afiadida para indicar c6mo se
la molecula de DNA? La estructura tridimensional de la proteina abrazadera, de-
coloca la prote(na aIrededor del DNA.
terminada por difracci6n de rayos X, indica que esta proteina forma un amplio En las celulas eucariotas existe una
anillo alrededor de la helice de DNA. Un lado del anillo se une a la DNA polime- prote(na similar. (B) llustraci6n
rasa, y el anillo completo se desliza libremente a medida que la polimerasa se esquematica de c6mo se cree que la
desplaza a 10 largo de la cadena de DNA (Figura 6-47). El ensamblaje de la abra- abrazadera une una moIecula m6vil de
zadera alrededor del DNA requiere hidr6lisis de ATP por proteinas accesorias es- DNA polimerasa aI DNA. (A, de x.-P.
peciales que se unen ala abrazadera y al DNA; se desconoce c6mo se desensam- Kong et aI., Cell 69:425-437, 1992.
bla la abrazadera cuando se separa del DNA. Cell Press.)

DNA polimerasa

5'"",,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,...

'..
3' ..

r-
dos mitades de
la abrazadera
" " ' " deslizante

5'"""""""",,,,,,,,,,,,,,
3'...........................

polimerasa unida
alDNA
(B)
(A)

274 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 Figura 6-48 Protelnas de la
\.~~cadena conductora patr6n horqullla de replicaci6n del DNA,

~
Se ilustran los principales tipos de
proteinas que actl1an en la horquilla de

c~de~a recian
DNA polimerasa sobre la replicaci6n, mostrando sus posiciones
" _ cadena conductora
slntetlzada - \o\,,~ en el DNA.

halice de DNA
padre
el pr6ximo fragmento "
de Okazaki
empezara aqui ~

~ ~NA2ce:b:a:do;r~~; ~~~::
DNA helicasa

DNA primasa
fragmento de Oka~~~i.:/ __
protefnas que se
unen a una sola hebra
cadena retrasada patr6n

DNA polimerasa sobre la cadena retrasada

(acabando de sintetizar un fragmento de Okazaki)

En la horquilla de replicaci6n, una serie de protefuas cooperan

entre sf formando una "maquina de replicaci6n"33
Apesar de que hemos presentado la replicaci6n del DNA como un proceso en el
que participan una serie de protefnas de replicaci6n que actuan independiente-
mente unas de las otras, en realidad muchas de estas protefnas se hallan unidas
entre sf fo.rmando un gran complejo multienzimatico que se desplaza rapida-
mente a 16 largo del DNA. Este complejo puede compararse con una diminuta
maquina de coser compuesta por piezas proteicas y accionada por la hidr6lisis
de moleculas de nucle6sido trifosfato. A pesar de que este complejo de replica-
ci6n s610 se ha caracterizado completamente en la bacteria E. coli y en algunos
de sus virus, el de los eucariotas es muy similar (vease pag. 383).
Las funciones de las subunidades de esta "maquina de replicaci6n" se resu-
men en el diagrama bidimensional de la Figura 6-48 que muestra el complejo
de replicaci6n completo. En la horquilla de replicaci6n actuan dos moleculas de
DNA polimerasa identicas, una en la cadena conductora y la otra en la cadena
retrasada. La helice de DNA se va abriendo mediante la acci6n de la molecula de
DNA polimerasa de la cadena conductora que actua de forma concertada con
una molecula de DNA helicasa que se va desplazando por la cadena retrasada; la
apertura de la helice esta favorecida por moleculas de protefnas desestabilizado-
ras de la doble helice, que se unen de forma cooperativa. Mientras que la mole-
cula de la DNA polimerasa que actua sobre la cadena conductora puede proce-
der de una forma continua, la molecula de DNA polimerasa que actua sobre la
cadena retrasada ha de volver a empezar a intervalos, utilizando como cebador
cortos segmentos de RNA sintetizados por una molecula de RNA primasa.
La eficiencia de replicaci6n aumenta notablemente gracias a la estrecha
asociaci6n de todos estos componentes proteicos. La molecula de primasa se
une directamente a la DNA helicasa, formando una unidad sobre la cadena con-
ductora, denominada prlmo~oma.Alimentado por la DNA helicasa, el primoso-
rna se desplaza con la horqullia y va sintetizando cebadores de RNA a medida de
avanza. De forma similar, la molecula de DNA polimerasa que sintetiza DNA so-
bre la cadena retrasada se desplaza de forma coordinada con el resto de protef-
nas, sintetizando una sucesi6n de fragmentos de Okazaki; para acomodar este
ordenamiento, se cree que la cadena patr6n de DNA se va plegando de nuevo tal
como se indica en la Figura 6-49. Asf pues, las protefnas de replicaci6n se man-
tienen unidas entre sf formando una gran unidad (masa total> 106 daltons) que

Mecanismos de replicaci6n del DNA 275

 cadena conductora patr6n Figura 6-49 Una horquilla de
replicaci6n en tres dimensiones.
Visi6n actual de la situaci6n de las
protefnas de replicaci6n sobre la
horquilla de replicaci6n, cuando la
horquilla se desplaza. Se ha
modificado la estructura
bidimensional de la Figura 6-48,
plegando el DNA sobre la cadena
DNA primasa conductora de forma que la molecula
de la DNA polimerasa de la cadena
DNA llelicasa retrasada y la molecula de la DNA

~
polimerasa de la cadena conductora
'(\;\\ '" cadena retrasada formen un complejo enzimatico. Este
\.:~~ patr6n proceso de plegamiento tambien'
cebador
DNA polimerasa sobre :":\.~~ consigue que el extremo 3' de cada

c?de~a :":\.~
la cadena retrasada - : . \.: complejo de Okazaki quede situado
fragmento de (acabando de sintetizar recian cerca dellugar de inicio del siguiimte
Okazaki un fragmento de Okazaki) slntetlzada --- \.:
fragmento de Okazaki (comparese con
la Figura 6-48). Debido a que la DNA
polimerasa de la cadena retrasada se
une a las otras protefnas de
se desplaza nipidamente a 10 largo del DNA, permitiendo la sfntesis de DNA en replicaci6n, puede reutilizarse
las dos direcciones de la horquilla de una forma coordinada y eficiente. continuamente para sintetizar
Esta maquina de replicaci6n de DNA va dejando tras de sf series de frag- fragmentos de Okazaki; de esta forma,
mentos de Okazaki sobre la cadena retrasada, los cuales todavfa contienen en deja facilmente el fragmento de DNA
sus extremos 5' los pequefios trozos de RNA que actuaron como cebadores para que acaba de sintetizar y se desplaza
su sfntesis. Estos trozos de RNA deberein ser eliminados y los fragmentos de DNA hasta el fragmento de cebador de RNA,
deberan ser unidos entre sf mediante enzimas reparadoras de DNA que actua- necesario para que se inicie la sfntesis
rein detnis de la horquilla de replicaci6n (vease Figura 6-44). del nuevo fragmento de DNA. N6tese
que una de las helices de DNA hijas se
dirige hacia la parte inferior derecha,
Un sistema de correcci6n de galeradas que elimina los errores de mientras que la otra 10 hace hacia la
replicaci6n producidos por la maquina de replicaci6n34 parte superior izquierda de la figura.
Las bacterias como E. coli son capaces de dividirse cada 30 minutos, por 10 que
es relativamente sencillo estudiar grandes poblaciones buscando raros mutan-
tes que tengan alterados determinados procesos. Una clase interesante de mu-
tantes son los que contienen los llamados genes mutadores que incrementan de
forma notable la frecuencia de mutaci6n espontanea. No es sorprendente que
estos genes mutadores codifiquen una forma defectuosa de la exonucleasa co-
rrectora de pruebas 3' a 5' (discutida antes), que es una subunidad de la enzima
DNA polimerasa (vease Figura 6-42). Cuando esta protefna es defectuosa, la
DNA polimerasa ya no corrige de forma efectiva y en el DNA se van acumulando
una serie de errores de replicaci6n, que normalmente son eliminados.
EI estudio de otros mutantes de E. coli que presentan proporciones de mu- r

r
taciones anormalmente elevadas ha permitido descubrir otro sistema de lectura error de una
hebra acabada
1
UNION DE PROTEfNAS
CORRECTORAS DE ERRORES
de sintetizar

Figura 6-50 Modelo de la correcci6n de errores de apareamiento en

eucariotas. Las dos protefnas que se muestran estan presentes tanto en
bacterias como en celulas eucariotas: MutS se une especificamente a una
~
MutS MutL
1
EL RASTREO DEL DNA
DETECTA HUECOS EN
LA NUEVA HEBRA DE DNA
pareja de bases err6nea mientras que MutL recorre el DNA vecino buscando
una hendidura. Cuando encuentra una hendidura MutL dispara la
degradaci6n de la cadena cortada, a todo 10 largo de la hendidura. Como en los
eucariotas las hendiduras se encuentran fundamentalmente en las cadenas 1
ELiMINACION DE LA HEBRA
acabadas de replicar, se eliminan selectivamente los errores de replicaci6n. En
las bacterias el mecanismo es el mismo excepto en que en el complejo otra
protefna (MutH) corta las secuencias GATC no metiladas (es decir, acabadas
SfNTESIS REPARADORA
de replicarl. iniciando el proceso que se ilustra aquf. Conocemos el
mecanismo porque estas reacciones se han podido reconstituir en un sistema 1
DE DNA

libre de celulas conteniendo protefnas bacterianas purificadas y DNA.

276 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

de pruebas 0 de verificaci6n de lectura que normalmente elimina errores de re- origen de replicaci6n
II
plicaci6n que no son detectados por el sistema de la exonucleasa. Este sistema
i!i!ii!i!!;III!!!!;I!I!!!!i!!!!!!l!!i!!!!:i:::!'!I!II:iiiiiiililillill,
de correccion de errores de apareamiento (mismatch proofreading) (tambien
denominado sistema de reparaci6n de errores de apareamiento, mismatch repair
system) se diferencia del sistema de reparaci6n del DNA que hemos descrito
APERTU~A
DNA
LOCAL
DE LA HELICE DE
I
previamente en que no depende de la presencia de nucle6tidos anormales en el
DNA que puedan ser reconocidos y eliminados. En lugar de ello, este sistema de-
tecta la distorsi6n sobre el exterior de la helice que resulta de un desajuste entre 11111illllllllllllI111111Iiilliii:iiiiliiC>
bases normales que no son complementarias. Si este sistema de correcci6n de
galeradas reconociera simplemente un error de ajuste en una cadena de DNA SINTESIS DEL RNA
CEBADOR
1
acabada de replicar y eliminara aleatoriamente uno de los dos nucle6tidos que
no encajan, podria cometer el error de "corregir" la cadena patr6n original, de
forma que una de cada dos ocasiones mantendria el error. Para que un sistema III i 'I II 111I1I11i11
de correcci6n de galeradas sea realmente efectivo, ha de ser capaz de distinguir
cmil es el nucle6tido equivocado y eliminarlo de la cadena (el error de replica- LA NUEVA CADENA DE DNA
INICIA LA S[NTESIS DE LA
1
ci6n) de forma especifica. CADENA CONDUCTORA
El sistema de reconocimiento utilizado por el sistema de correcci6n de erro-
res de apareamiento de E. coli depende de la metilaci6n de determinados resi-
",' Ii II'

I
duos A del DNA. Transcurrido un cierto tiempo despues de que A se haya incor-
porado a la cadena de DNA acabada de sintetizar, se afiaden grupos metilo a
todos los residuos A que se encuentren en la secuencia GATe. Debido a que uni- LAS CADENAS CEBADORAS
camente contendnin secuencias GATC no metiladas las cadenas acabadas de DE RNA INICIAN LA SfNTESIS
DE CADENAS ADICIONALES
sintetizar y que se hallen justo detnis de la horquilla de replicaci6n, sera posible DE DNA
distinguir estas cadenas de las originales que se han utilizado como patr6n. ~.Jlililiiliiliiiillliiiiiilj"".'ililillilill"~
Mas recientemente se han descubierto proteinas en eucariotas que son ho- liii"" ~ ,"';:
m610gas en su secuencia de aminoacidos a algunas de las proteinas bacterianas l!\\il\jt!"!!i"~I'I'I}llilllliilllilllll\ll\\i~\ ~'
que catalizan la correcci6n de errores. Como era de esperar, cuando en una ce- horquilla 1 horquilla 2
lula de levadura se eliminan los genes que codifican estas proteinas, la propor-
ci6n de mutaciones puede incrementarse en mas de 100 veces. Sin embargo, 5e generan cl05 horquillas de replicaclon
cornplctas, una de las cuales sn dcSpt<L':il
puede haber algunas diferencias importantes entre los mecanismos de correc- hacia la izquierda con la cadena conc!lJctnrc1
ci6n de errores de bacterias y de eucariotas, ya que el mecanismo para distinguir en la parte superior y la c<-1denA rt.:Hlo:Siic1a
en Ii.! irJlor ior d,c> L:1 fifJ\Hil, y Id utril
la cadena acabada de sintetizar de la cadena patr6n en donde se halle un error que S8 despli:lz;:1 hdCid Id dcrt~ch;:1,
no puede depender de la metilaci6n del DNA como en las bacterias, pues algu- con la cadena CO!lc1uctora en la par1e
inferiur y la cadena retrasach-l (~I-l lil iJdrtc
nos eucariotas, como las levaduras y Drosophila, no metilan ninguna base de su superior
DNA. Se sabe que las cadenas de DNA acabadas de sintetizar estan repletas de
muescas en numerosos lugares, y se ha sugerido que en las celulas eucariotas es- Figura 6-51 Iniciaci6n de la
tas muescas (nicks, roturas de una de las dos cadenas) constituyen la sefial que horquilla de replicaci6n. La figura
ilustra el proceso que participa en la
dirige las correcciones a la cadena adecuada (Figura 6-50).
iniciaci6n de la horquilla de
replicaci6n, en el origen de la
Las horquillas de replicaci6n se inician en el origen replicaci6n (vease tambien Figura
de la replicaci6n35 6-52).

Tanto en las bacterias como en los mamiferos, las horquillas de replicaci6n se ori-
ginan en una estructura denominada burbuja de replicaci6n, una regi6n en la que
las dos cadenas de la helice de DNA se separan una de la otra, actuando como pa-
tr6n para la sintesis de DNA (Figura 6-51). Se ha demostrado que en las bacterias,
en las levaduras y en varios tipos de virus que crecen sobre celulas eucariotas las
burbujas de replicaci6n se generan en secuencias especiales de DNA que reciben
el nombre de origenes de replicacion y que pueden tener una longitud de 300 nu-
cle6tidos. Por razones que no resultan claras, en los cromosomas de mamiferos
resulta muy diffcil caracterizar estos origenes de replicaci6n a nivel molecular.
En el caso de algunos origenes de replicaci6n bien definidos, ha sido posible
reproducir in vitro la reacci6n de la horquilla de replicaci6n. Estos estudios in vitro
revelan que en bacterias y en virus bacterianos, la formaci6n de la horquilla se
produce como se ilustra en la Figura 6-52. Multiples copias de unas prote(nas ini-
ciadoras se unen a lugares especificos del origen de replicaci6n enrollando el DNA
a su alrededor y formando un gran complejo DNA-proteina. Entonces, este com-
plejo une la DNA helicasa y la coloca sobre una zona de DNA de una sola cadena,

Mecanismos de replicaci6n del DNA 277

 origen de replicaci6n helice paterna Figura 6-52 Protefnas que inician la
rl-------'---"----'--.:...:....:.----'-----,1 de DNA
repllcaci6n del DNA. 5e indican los
principales tipos de protefnas que

I
UNION DE LA PROTEfNA DE
INICIACION AL ORIGEN
DE REPLICACION
participan en la formaci6n de la
horquilla de replicaci6n en el origen de
replicaci6n de E. coli y del bacteri6fago
lambda. El conocimiento de los

I
UNION DE LA DNA mecanismos que aqui se indican se
HELICASA A LA obtuvo de estudios in vitro mediante la
PROTEfNA DE INICIACION
utilizaci6n de mezclas de proteinas
altamente purificadas. Las etapas
posteriores generanin la iniciaci6n de
LA HELICASA SE UNE
ALDNA
tres cadenas mas de DNA (vease
J Figura 6-51) mediante un mecanismo
que todavia no esta aclarado. Para la
replicaci6n de E. coli, la proteina de

I iniciaci6n es la proteina dnaA y el

LA HELICASA ABRE LA HELICE Y
UNE LA PRIMASA, FORMANDO EL
PRIMOSOMA
primosoma esta compuesto por las
proteinas dnaB (DNA helicasa) y dnaG
(RNA primasa).

I
LA S[NTESIS DEL CEBADOR PERMITE
DNA primasa QUE LA DNA POLIMERASA INICIE LA
PRIMERA CADENA DE DNA

DNA cebador del RNA

polimerasa
I
en una region adyacente ala helice. Tambien se une la DNA primasa formando un
primosoma, el cual se desplaza a partir del origen y genera un cebador de RNA que
inicia la primera cadena de DNA. Rapidamente, las otras proteinas se ensamblan
formando dos complejos proteicos de replicacion que se desplazan a partir de este
origen en direcciones opuestas (vease Figura 6-51); asf, se continua sintetizando
DNA hasta que se ha replicado todo el DNA patron de cada horquilla.
En el Capitulo 8 se discute en detalle la iniciaci6n de la horquilla de replica-
cion en los cromosomas de eucariotas. .

Las DNA topoisomerasas evitan que el DNA se enrede

durante la replicaci6n36
Cuando hemos descrito (de forma incorrecta) la helice de DNA como una "escale-
ra" plana, hemos ignorado el "problema del enrollamiento y empaquetamiento"
que se presenta durante la replicacion del DNA. Cada 10 pares de bases replicadas
en la horquilla corresponden a una vuelta completa del DNA que se replica alrede-
5'
dor del eje de la doble helice. Por consiguiente, para que la horquilla de replica-
cion pueda desplazarse, todo el cromosoma que se halla por delante de la horqui-
lla tendrfa que girar rapidamente (Figura 6-53), 10 cual exigirfa la utilizacion de
cadena de DNA acabada
grandes cantidades de energfa para el caso de los cromosomas largos. Durante la _de sintetizar
replicacion del DNA se utiliza una estrategia altemativa: unas protefnas conocidas 5'
como DNA topoisomerasas forman un "eslab6n giratorio" en la helice del DNA.
Figura 6-53 El "problema del
Puede pensarse que una DNA topoisomerasa es una especie de nucleasa re-
enrollamiento" que aparece durante
versible que se une covalentemente a un fosfato del DNA rompiendo un enlace
el proceso de repllcaci6n del DNA. 5i
fosfodiester de una cadena del DNA. Dado que el enlace covalente que une la to- se trata de una horquilla de replicaci6n
poisomerasa al fosfato del DNA retiene la energfa del enlace fosfodiester roto, la bacteriana que se desplaza a 500
reaccion de rotura es reversible; la nueva formaci6n del enlace fosfodiester es ra- nucle6tidos por segundo, la helice
pida y no requiere ninglin aporte adicional de energfa. En este aspecto el meca- paterna de DNA, anterior a la
nismo de union es diferente al que presenta la enzima DNA ligasa, que hemos horquilla, ha de girar a 50 revoluciones
discutido previamente (vease Figura 6-37). por segundo.

278 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

Figura 6-54 Reacci6n reversible de
formaci6n de una muesca en el DNA,
catallzada por una enzima DNA
topoisomerasa I eucariota. Tal como
se indica, estas enzimas forman un
enlace covalente transitorio con el
DNA, permitiendo asf la libre rotaci6n
alrededor del enlace covalente unido
al fosfato azul.
resultado de ello, la replicaci6n del DNA podrei ocurrir con la rotaci6n de tinica-
mente un corto tramo de helice -la zona que se halla justa por delante de la hor-
quilla. El problema amilogo a este que aparece durante la transcripci6n del DNA,
se resuelve de una forma similar a la descrita.
Un segundo tipo de DNA topoisomerasa (la topoisomerasa II) forma una
uni6n covalente con ambas cadenas de la helice de DNA al mismo tiempo, ge-
GD
r-O
dos dobles helices
de DNA circular
estan entrelazadas

una DNA topoisomerasa

nerando transitoriamente una rotura en las dos cadenas del DNA. Estas enzimas de tipo II se une de
se activan por determinadas zonas del cromosoma en las que dos dobles helices se
cruzan entre sf. Cuando la topoisomerasa se une a un lugar de cruce como este,
(1) rompe una de las dobles helices, de forma reversible, generando una "puer-
ta", (2) hace que la otra doble helice pase a traves de esta rotura, y (3) vuelve a
(J) I
manera covalente
y reversible a las
dos cadenas del
DNA, interrumpiendo
la doble helice verde
y generando una
unir las cadenas de DNA que habfa rota y se separa del DNA. De esta forma, las + "puerta" proteica

DNA topoisomerasas de tipo II pueden separar de forma eficiente dos cfrculos

de DNA entrelazados (Figura 6-55). Esta misma reacci6n evita que se generen los
graves problemas de embrollamiento que, de otra forma, aparecerfan durante la
replicaci6n del DNA. Por ejemplo, se han aislado unas celulas de levadura mu-
la puerta de la topoisomerasa
tantes que producen, en lugar de la topoisomerasa II normal, una versi6n que se se abre y se cierra. dejando
inactiva a 37C. Cuando las levaduras mutantes se calientan hasta esta tempera- pasar la otra helice de DNA
tura, sus cromosomas se entrelazan de forma que en el proceso de la mitosis no
pueden separarse. La utilidad de la topoisomerasa II para desenmarafiar los cro-
mosomas puede ser facilmente comprendida por cualquiera que haya intentado
deshacer un lio de un hilo de pescar sin la ayuda de unas tijeras.

La replicaci6n del DNA en los eucariotas es basicamente

OO
similar a la de los procariotas37 laS2dObies
helices de
La mayorfa de 10 que conocemos respecto ala replicaci6n del DNA procede de es- DNA circular
. se han separado
tudios sobre sistemas multienzimaticos purificados a partir de bacterias y de bac-
teri6fagos, que son capaces de realizar in vitro la replicaci6n del DNA. El desarro-
llo de estos sistemas en los afios 1970 fue facilitado en gran manera gracias a la
disponibilidad de mutantes en diversos genes de replicaci6n que pudieron utili-
t'-O la reaci6n
inversade

~o~~/~~te
zarse para identificar y purificar las correspondientes protefnas de replicaci6n.
Mucho menos es 10 que se conoce acerca de los detalles de la enzimologfa
de la replicaci6n del DNA en eucariotas, sobre todo debido a 10 diffcil que resulta
obtener mutantes deficientes en procesos de replicaci6n. Sin embargo, los me-
canismos basicos de la replicaci6n del DNA, incluyendo la geometrfa de la hor-
O0 de la
topOisomerasa
restaura una
doble helice
intacta

Figura 6-55 DNA topoisomerasa II.

quilla de replicaci6n y los componentes de la maquina de replicaci6n multipro- Ejemplo de una reaccion de "paso a
teica, son similares en los eucariotas y en los procariotas fvease Figura 8-35). La traves de la helice de DNA", catalizada
principal diferencia estriba en que el DNA eucariota no se replica en forma de por una topoisomerasa de tipo II.
DNA desnudo sino en forma de cromatina, en la cual el DNA esta estrechamente A diferencia de la topoisomerasa de
asociado a unas protefnas denominadas histonas. Tal como se describe en el Ca- tipo I, estas enzimas requieren la
pftulo 8, estas histonas forman unas estructuras parecidas a discos sobre las que hidr6lisis de ATP, yalgunas de elias
se enrolla el DNA eucariota, generando una unidad estructural repetitiva deno- puede introducir en el DNA tension
minada nucleosoma. Los nucleosomas estan distribuidos a 10 largo del DNA, a superhelicoidal (vease pag. 468). En
intervalos de 200 pares de bases, 10 cual puede explicar por que en los eucariotas eucariotas las topoisomerasas de tipo
los fragmentos de Okazaki se sintetizan sobre la cadena retrasada a intervalos de II se hallan exclusivamente en celulas
entre 100 y 200 nucleotidos en lugar de a intervalos de entre 1000 y 2000 nucle6- proliferantes; en parte por esta razon,
se utilizan como populares dianas para
tidos como ocurre en las bacterias. Los nucleosomas tambien pueden actuar
farmacos anticancerosos.
como barreras que frenan ligeramente el movimiento de las moleculas de DNA
polimerasa, 10 cual puede explicar por que las horquillas de replicaci6n se des-
plazan a una decima parte de la velocidad a la que se desplazan las horquillas de
replicaci6n en las bacterias.

Resumen
Una DNA polimerasa autocorrectora cataliza la polimerizacion de nucleotidos en
direcciOn 5' a 3', copiando un patron de DNA con una fldelidad notable. Puesto que
las dos cadenas de una doble helice de DNA son antiparalelas, esta slntesis 5' a 3'

280 Capitulo 6 : Mecanismos gemWcos,basicos

del DNA solo puede ocurrir de forma continua en una de las dos cadenas (la cadena
conductora) de la horquilla de replicacion. En la cadena retrasada se sintetizan pe-
queftos fragmentos de DNA mediante un proceso de "pespunte". Debido a que la
DNA polimerasa autocorrectora no puede iniciar la sintesis de una cadena de DNA,
estos fragmentos de DNA sobre la cadena retrasada se inician mediante cortas mo-
leculas de cebador de RNA, las cuales serlin eliminadas mas tarde y substituidas
porDNA.
La replicacion del DNA requiere la cooperacion de muchas proteinas, entre las
cuales se encuentran: (1) una DNA polimerasa y una DNA primasa, que catalizan la
polimerizaci6n de nucleosidos trlfosfato, (2) DNA helicasas y proteinas desestabili-
zadoras de la helice, que colaboran en abrir la helice de DNA que se va a copiar,
(3) una DNA ligasa y una enzima que degrada los cebadores de RNA, uniendo los
fragmentos de DNA de la cadena retrasada sintetizados de forma discontinua, (4)
una DNA topoisomerasa que actdan solventando problemas de enrollamiento y en-
maranamiento de la helice, y (5) proteinas iniciadoras que se unen a secuencias de-
terminadas de DNA en el origen de la replicacion y catalizan la formacion de una
horquilla de replicacion en este lugar. En ellugar de origen de la replicaciOn, sefor-
ma una estructura proteina-DNA especializada que entonces carga una DNA heli-
casa sobre el DNA patron. Entonces se agregan otras prote{nas formando una "mti-
quina de replicaciOn" multienzimtitica, que cataliza la sintesis del DNA.

Recombinaci6n genetica38
En las dos secciones anteriores hemos estudiado los mecanismos a traves de los
cuales las secuencias de DNA de las celulas se mantienen con muy pocos cam-
bios, de generaci6n en generaci6n. A pesar de que esta estabilidad genetica es'
crucial para la supervivencia a corto plazo, a largo plazo la supervivencia de los
organismos puede depender de la variaci6n genetica, mediante la cualla celula
puede adaptarse a las variaciones del ambiente. Asi, una propiedad importante
del DNA en las celulas es su capacidad de experimentar reordenaciones que dos dobles helices hom61ogas de DNA
pueden hacer variar tanto las combinaciones particulares de genes que se hallan
presentes en el genoma de cualquier individuo como el programa y el nivel de
expresi6n de estos genes. Estas reordenaciones de DNA estan generadas me-
diante la recombinaci6n genetica. Se conocen dos grandes tipos de procesos de
recombinaci6n genetica: la recombinaci6n general y la recombinaci6n especifi-
cade lugar.
En la recombinaci6n general, el intercambio genico se produce entre se-
cuencias hom6logas del DNA, generalmente localizadas sobre dos copias del
mismo cromosoma. Uno de los ejemplos mas importantes al respecto es el in-
tercambio de secciones entre cromosomas hom6logos en el transcurso de la
meiosis. Este "entrecruzamiento" ("crossing-over") se produce entre cromoso-
mas que se hallan estrechamente superpuestos durante las primeras etapas de
la formaci6n de 6vulos y espermatozoides (se estudia en el Capitulo 20), y per-
mite que diferentes versiones (alelos) del mismo gen se presenten y sean proba-
das en combinaci6n con otros genes, 10 cual incrementa la posibilidad de que
por 10 menos algunos miembros de una poblaci6n sobrevivan en un ambiente
cambiante. A pesar de que la meiosis s6lo se produce en los eucariotas, la venta-
ja de este tipo de intercambio de genes es tan grande que el apareamiento y la
reordenaci6n de los genes mediante la recombinaci6n general se han extendido
tambien a las bacterias.
La recombinaci6n especifica de lugar no se produce unicamente entre DNA
hom6logos. Por el contrario, el intercambio se produce entre cortas secuencias
moleculas de DNA que se han entrecruzado
de nucle6tidos (sobre una 0 ambas moleculas de DNA que participan) reconoci-
das especificamente por una enzima de recombinaci6n especifica de lugar. As! Figura 6-56 Recombinaci6n general.
pues, la recombinaci6n especifica de lugar altera las posiciones relativas de las La rotUTa y nueva uni6n de dos dobles
secuencias de nucle6tidos en los genomas. En algunos casos, estos cambios es- helices hom6logas da lugar ados
tan disefiados y organizados, tal como ocurre cuando un virus bacteriano inte- moIeculas de DNA "entrecruzadas".

Recombinaci6n genetica 281

grade en un cromosoma bacteriano es inducido a dejar el cromosoma bajo con- moleculas de DNA que se han entrecruzado
diciones de estres (vease Figura 6-80); en otros casos, los cambios son aleatorios,
como sucede cuando la secuencia de DNA de un elemento transponible se in-
serta de forma aleatoria en un lugar del cromosorpa.
AI igual que para la replicaci6n del DNA, la mayor parte de 10 que sabemos
acerca de la bioquimica de la recombinaci6n genetica procede de estudios reali-
zados sobre organismos sencillos, especialmente sobre E. coli y sobre virus.

La recombinaci6n general esbi guiada por interacciones

de apareamiento de bases entre cadenas complementarias
de dos moIeculas hom61ogas de DNA39
La recombinaci6n general implica la existencia de unos intermediarios del in- III i IIIIIII iii Iii Ii i iii iii i
tercambio entre cadenas de DNA, dificiles de entender. A pesar de que la via '" 1"11 I I I I I I I I I I I I I I I I I II

exacta que se sigue en el proceso de recombinaci6n general puede ser ligera-

mente distinta en organismos diferentes, detallados amilisis geneticos de virus union heteroduplex, donde las cadenas
procedentes de dos helices de DNA
sobre el apareamiento de bacterias y de hongos sugieren que el resultado gene- diferentes forman oares de bases
ral de este proceso de recombinaci6n siempre es el mismo: (1) dos moleculas
hom610gas de DNA se "entrecruzan", es decir, sus dobles helices se rompen y los Figura 6-57 Una uni6n heteroduplex.
Esta estructura junta dos moIeculas de
dos extremos rotos se unen con los extremos opuestos formando de nuevo dos
DNA en ellugar donde se han
dobles helices intactas, pero cada una de elIas compuesta por partes de cada entrecruzado. Este tipo de uni6n tiene,
una de las dos moleculas iniciales de DNA (Figura 6-56). (2) Ellugar de inter- a menudo, varios cientos de
cambio (es decir, ellugar de la Figura 6-56 en el que la doble Mlice de color rojo nucle6tidos de longitud.
se une a la doble helice verde) se puede producir en cualquier lugar de la secuen-
cia de nucle6tidos de las dos mOlecUIas de DNA que participan en el proceso.
(3) En ellugar de intercarnbio, una cadena de una de las moIeculas de DNA queda
unida mediante apareamiento de bases a la otra molecula de DNA, genenindose

proteina
recBCD

+
111111!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!IIIIIIIII1II1111IIII11111111111111111111I11I11II111111IIII1I1111111
Figura 6-58 Una forma de iniciar
un proceso de recombinaci6n. La

I
UNION AL FINAL DE
LA DOBLE HELICE Y RecBCD es una enzima necesaria para
POSTERIOR que se produzca la recombinaci6n
DESPLAZAMIENTO
general en E. coli. La proteina entra en
el DNA desde uno de sus extremos y,

\
lazo de cadena
sencilla de DNA,
que se va desplazando
lugar de
reconocimiento
I ROTURA POR LA
SECUENCIA DE
RECONOCIMIENTO
entonces, utiliza energia derivada de la
hidr6lisis de moIeculas de ATP que se
hallan unidas para autopropulsarse en
una direcci6n determinada a 10 largo
del DNA a una velocidad aproximada
de unos 300 nucle6tidos por segundo.

Ihi"hi"!i"!iill!i"iII"~I"iII"iII"""I""""""'''''''''ii1!i''!i''hihi!i'''IIII''''''
En un lugar especial de
reconocimiento (una secuencia de
DNA de 8 nucle6tidos desperdigada
3' por el cromosoma de E. coll) se corta el

I DESPLAZAMIENTO
DEL PELO DE UNA
SOLA CADENA
lazo que ha sido generado por la
proteina recBCD y que se va
desplazando, y entonces, tal como se
muestra en la figura, se genera un
"pelo" monocadena que sobresale de
la doble helice. Este "pelo" puede
iniciar el proceso de recombinaci6n
genetica apareandose con una Mlice
3' hom610ga (vease Figura 6-59).

282 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos blisicos

 Figura 6-59 EI intercambio inicial de
cadenas entre dos dobles helices
hom61ogas de DNA que estlin
sufriendo un proceso de
una de las intercambio recombinaci6n general. La formaci6n
cadenas queda inicial entre
muesca al descubierto cadenas de una muesca en una cadena del DNA
+ I
libera dicha cadena, la cual invade la
segunda helice y forma una corta
regi6n de apareamiento entre bases.
Solamente pueden aparearse de esta
forma, y por 10 tanto iniciar un proceso
de recombinaci6n general, dos
moleculas de DNA cuya secuencia de
nucle6tidos sea complementaria. Se
sabe que existen algunas enzimas que
pueden catalizar cada uno de los pasos
una union solapada (que normalmente se denomina union heteroduplex) entre mostrados en la figura (veanse Figuras
las dos dobles helices (Figura 6-57). La regi6n heteroduplex puede tener una 6-58 y 6-62).
longitud de varios cientos de bases apareadas; mas adelante se explicara c6mo
se forman estas uniones. (4) En ellugar de intercambio no se altera la secuencia
de nucle6tidos; el proceso de rotura y uni6n ocurre de una forma tan precisa,
que ni se pierde ni se gana un s610 nucle6tido. A pesar de esta precisi6n la re-
combinaci6n general crea moIeculas de DNA cuya secuencia es nueva: la uni6n
heteroduplex puede contener un pequeno numero de errores en el apareamien-
to de bases, y 10 que es mas importante, habitualmente los dos DNA que se en-
trecruzan no son exactamente el mismo a cada lado de la uni6n.
El mecanismo general de recombinaci6n asegura que s610 se produzcan in-
tercambios entre dos regiones de doble helice de DNA que presenten secuencias
notablemente hom610gas. La formaci6n de una uni6n heteroduplex requiere
esta homologia ya que en ella participa una larga regi6n de apareamiento entre
bases complementarias entre una cadena de una de las dobles helices originales
y una cadena de la otra doble helice. Pero, lc6mo se forma esta regi6n heterodu-
plex y c6mo se reconocen entre sf las dos regiones del DNA en la zona de entre-
cruzamiento? Por 10 que sabemos, el proceso de reconocimiento ocurre median-
te interacciones directas de apareamiento de bases. La formaci6n de pares de
bases entre cadenas complementarias de dos moleculas de DNA dirige el proceso
de recombinaci6n general, permitiendo que este ocurra unicamente entre largas
regiones de DNA cuyas secuencias se hallen apareadas.

La recombinaci6n general puede iniciarse en una muesca de una

cadena de la doble helice de DNA40
Cada una de las dos cadenas de una molecula de DNA se halla enrollada de for-
ma helicoidal alrededor de la otra. Por consiguiente, solamente se pueden pro-
ducir largas interacciones entre bases de dos dobles helices si primero se genera
una muesca (nick) en una cadena de una de elIas que permita los procesos de
desenrollamiento y nuevo enrollamiento de las cadenas, procesos necesarios
para que se produzca un heteroduplex con otra moIecula de DNA. Por esta mis-
rna raz6n, cualquier intercambio de cadenas entre dos dobles helices de DNA re-
quiere al menos dos muescas, una en una de las cadenas de cada una de las dos
dobles helices que interactuan. Finalmente, para que se produzca la uni6n hete-
roduplex que se muestra en la Figura 6-57, cada una de las cuatro cadenas pre-
sentes se ha de cortar para que pueda unirse a otra cadena diferente. En la re-
combinaci6n general, estos procesos de formaci6n de las muescas y nueva
uni6n estan coordinados de forma que unicamente se producen cuando se ha-
llan presentes dos helices de DNA que presentan dos largas regiones de secuen-
cia complementaria.
A partir de diferentes fuentes resulta evidente que para que se inicie el pro-
ceso de recombinaci6n general es suficiente con que se produzca una sola

Recombinaci6n genetica 283

 interacciones que no producen apareamiento interacciones que producen apareamiento

A A A A
A

B B B
NUCLEACI6N RAplDO PROGRESO
A
DE LA HELICE "EN CREMALLERA"
C C C C C
I
E
D D D D
D
C
E E E E
E E E E
D

"'- E

muesca en una cadena de una molecula de DNA. Por ejemplo, agentes qufmicos Figura 6-60 Hibridaci6n del DNA. Se
o tipos de radiaci6n que introducen una muesca en una cadena, desencadenan vuelven a formar dobles helices de
un proceso de recombinaci6n genetica. Ademas, se ha demostrado que una de DNA a partir de sus cadenas separadas
las protefnas especiales que son necesarias para que se produzca la recombina- a traves de reacciones que dependen
ci6n en E. coli -la protefna RecBCD- produce muescas en las cadenas sencillas de la colisi6n al azar de dos cadenas
complementarias (vease pag. 322).
de las moleculas de DNA. La protefna RecBCD tambien es una DNA helicasa
Muchas de estas colisiones no son
que hidroliza ATP y se desplaza a 10 largo de la helice de DNA exponiendo tran- productivas, como se muestra a la
sitoriamente sus cadenas. Combinando sus actividades nucleasa y helicasa, la izquierda, pero algunas de ellas dan
protefna RecBCD genera un "pelo" de una sola cadena en la doble heIice de lugar a cortas regiones en las que se
DNA (Figura 6-58). En la Figura 6-59 se muestra de que forma este "pelo" puede producen apareamiento entre bases
iniciar una interacci6n de apareamiento de bases entre dos dobles helices com- (nucleaci6n del DNA). Entonces, un
plementarias que se hallen estiradas. rapido proceso "en cremallera"
completa cada helice. Cada cadena de
DNA puede utilizar este proceso de
Las reacciones de hibridaci6n del DNA proporcionan "prueba y error" para encontrar su
un modelo sencillo para la fase de apareamiento de bases pareja complementaria entre los
en la recombinaci6n general41 millones de cadenas de DNA no
apareadas. AI parecer, todos los
En su forma mas sencilla, la reacci6n central de apareamiento de bases de la re-
procesos de recombinaci6n general se
combinaci6n general puede ser simulada en un tubo de ensayo permitiendo que inician mediante un reconocimiento
una doble helice de DNA se forme de nuevo a partir de sus cadenas separadas. de cadenas complementarias
Este proceso, denominado renaturalizaci6n del DNA 0 hibridaci6n del DNA tie- mediante este sistema de "prueba y
ne lugar cuando una rara colisi6n al azar yuxtapone secuencias nucleotfdicas error".
complementarias de dos cadenas sencillas de DNA, 10 cual permite la formaci6n
de una corta zona de doble helice entre elIas. Este proceso relativamente lento
de nucleaci6n de fa helice viene seguido de un proceso "en cremallera" muy ra-
pido, en el que la doble helice crece aumentando al maximo el mlmero de inter-
acciones entre pares de bases (Figura 6-60).
La formaci6n, de esta manera, de una doble helice requiere que las cadenas
de DNA se hallen en una conformaci6n abierta, desplegada. Por esta raz6n, las
reacciones de hibridaci6n in vitro. se desarrollan a elevadas temperaturas 0 en
presencia de disolventes organicos como la formamida; estas condiciones per-
miten "fundir" las cortas helices en horquilla que se forman cuando se producen
interacciones entre pares de bases en una cadena que se pliega sobre sf misma.
Las celulas bacterianas no pueden soportar condiciones tan severas como estas,
por 10 que para abrir las helices utilizan una protefna desestabilizadora de la he-
lice, la protefna SSE. Esta protefna es esencial en E. coli tanto para la replicaci6n
del DNA como para la recombinaci6n general; se une fuertemente de forma co-
operativa al esqueleto de azl1car-fosfato de cualquier regi6n de una sola cadena
de DNA, colocandola en una conformaci6n extendida con sus bases asequibles.
(vease Figura 6-46). En esta conformaci6n extendida, una cadena de DNA puede
formar pares de bases tanto con una molecula de nucle6sido trifosfato (en el

284 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos ba.sicos

 Figura 6-61 Estructura de la
proteina RecA. Se muestra una cadena
de tres mon6meros de RecA, con la
posici6n del ATP marcada en rojo. Las
esferas blancas muestran las
posiciones posibles que ocupan los
filamentos de DNA de cadena sencilla,
de forma que cada tres nucle6tidos
(tres esferas) interaccionarian con
cada mon6mero de RecA. (De R.M.
Story, LT. Weber y T.A. Steitz. Nature
256:318-325,1992. 1992 Macmillan
Magazines Ltd.)

proceso de replicaci6n del DNA) como con secciones complementarias de otra

cadena de DNA (en el proceso de recombinaci6n genetical. Cuando las reaccio-
nes de hibridaci6n se desarrollan in vitro bajo condiciones que reproducen las
del interior de la celula, la proteina SSB actua a una velocidad 1000 veces supe-
rior a la de la nucleaci6n de la helice de DNA, esto es, a la velocidad general del
proceso de formaci6n de la doble helice.

La proteina RecA permite a una moIecula de una sola cadena

de DNA aparearse con una regi6n hom6loga de una doble helice
enE. COli 42
El proceso de recombinaci6n genetica general es algo mas complejo que las sim-
ples reacciones de hibridaci6n descritas anteriormente. En el curso de la recom-
binaci6n general una hebra de DNA derivada de una doble helice puede invadir
otra doble helice (vease Figura 6-59). En E. coli, este proceso requiere la partici-
paci6n de la proteina RecA, producida por el gen reeA, gen que en 1965 fue iden-
tificado como esencial para la recombinaci6n entre cromosomas. Largamente
perseguido por los bioquimicos, en 1976 este escurridizo producto genico fue fi-
nalmente purificado hasta homogeneidad y pudo ser caracterizado en detalle
(Figura 6-61). Como proteina desestabilizadora de la doble Mlice (SSB), la protei-
na RecA se une fuertemente a una cadena de DNA, formando agregados alta-
mente cooperativos, dando lugar a un filamento nucleoproteico. Este filamento
tiene algunas propiedades caracterfsticas. Por ejemplo, tiene mas de un lugar de
uni6n al DNA, por 10 que puede unirse simultaneamente y mantener juntas a
una cadena sencilla y a una doble helice de DNA. Estos lugares permiten a la
proteina RecA catalizar una reacci6n de varias etapas (denominada sinapsis)
entre una doble helice de DNA y una regi6n hom610ga de una cadena de DNA.
La etapa crucial de la sinapsis ocurre cuando una regi6n de homologia es identi-
ficada mediante un apareamiento inicial de bases entre secuencias complemen-
tarias de nucle6tidos. En este caso en la etapa de nucleaci6n participa una es-
tructura de triple cadena en la que el DNA de cadena sencilla forma aparea-
mientos no habituales de bases con el surco mayor del DNA de doble heIice
(Figura 6-62). Esta interacci6n inicia al proceso de apareamiento mostrado
previamente en la Figura 6-59, y de esta forma inicia el intercambio de cadenas
entre dos dobles helices recombinantes de DNA. Diversos estudios in vitro su-
gieren que la proteina SSB de E. coli coopera con la proteina RecA facilitando
estas reacciones.

Recombinaci6n genetica 285

 DNA DE DNA DE Figura 6-62 Sinapsis de DNA
ENTRADA SALIDA catalizada por la protema RecA.
Experimentos in vitra indican que
5' entre estructuras de una sola cadena
de DNA recubierta de protefnas RecA
3'
(rajo) y una doble helice (verde), se
forman diferentes tipos de complejos.
En primer lugar, se forma un complejo
sin que se produzca apareamiento de
bases que se transforma en un
complejo con apareamiento de bases
Una vez se ha producido el proceso de sinapsis, la corta region heteroduplex en cuanto se encuentra una regi6n de
farmada por cadenas procedentes de dos moltkulas diferentes de DNA se alarga secuencia hom610ga. Probablemente
mediante una migraci6n de las cadenas dirigida por una proteina, que tambien este complejo es inestable ya que esta
esta catalizada par la protefna RecA. La migraci6n de la bifurcaci6n 0 de las ca- formado por una forma de DNA poco
denas (branch migration) puede producirse en cualquier punta en el que dos usual, y genera un DNA heteroduplex
cadenas sencillas de DNA de la misma secuencia intenten emparejarse con la (una hebra verde y la otra raja) mas
misma cadena complementaria; una region no apareada de una de las cadenas una hebra sencilla desplazada de la
sencillas de DNA desplazara a otra cadena sencilla que se halle apareada, de for- helice original (verde); asf, la estructura
ma que el punto de la bifurcacion se desplazara sin que vaffe el numero total de mostrada en este diagrama migra
pares de bases del DNA. El punto de bifurcacion tiende a desplazarse esponta- hacia la izquierda enrollando el DNA
de "entrada" y produciendo el DNA
neamente en ambas direcciones, de forma que no resultarfa sencillo que el pro-
"de salida". El resultado neto es un
ceso de recombinacion se completara de forma eficiente (Figura 6-63A). Debido intercambio de hebras identico al
a que la protefna RecA cataliza la migracion unidireccional del punto de bifurca- descrito anteriormente en la Figura
cion, facilmente se produce una region heteroduplex de varios cientos de pares 6-59. (Adaptado de S.C. West, Annu.
de bases de longitud (Figura 6-63B). Rev. Biochem. 61:603-640, 1992.
La catalisis de la migracion de la bifurcacion depende de otra propiedad de Annual Reviews Inc.)
la protefna RecA. Ademas de presentar dos lugares de union al DNA, la protefna
RecA es una ATPasa DNA-dependiente con un lugar adicional para unir e hidro-
lizar ATP. Cuando la proteina esta unida aATP se asocia mucho mas fuertemen-
te con DNA que cuando esta unida a ADP. Ademas, las moleculas RecA unidas a
ATP se unen preferentemente a un extremo de un filamento de proteinas RecA,
y entonces el ATP se hidroliza a ADP. Los filamentos de proteinas RecA que se
forman sobre el DNA pueden entonces presentar muchas de las propiedades di-
namicas de uni6nque presentan los filamentos del citoesqueleto farmados a
partir de actina 0 de tubulina (discutidas en el Capitulo 16); par ejemplo, esta ca-
dena proteica presenta la habilidad de girar como una noria, de forma unidirec-
cional, a 10 largo de una cadena de DNA, 10 cual puede dirigir la reacci6n de mi-
graci6n de la bifurcacion, tal como se muestra en la Figura 6-638.

ITi~:::::::::::::::::::;:::;;;~l;
3' Figura 6-63 Dos tipos de migraci6n de
las cadenas, observados en
3' experimentos in vitro. (A) La migraci6n
3' 5' 5'
espontanea es un tipo de proceso en el
que las cadenas se mueven arriba y
abajo, de forma aleatoria, con 10 que
t progresa muy poco sobre distancias

~:;;':';;::
3'
largas. Por el contrario, la migraci6n
dirigida por la protefna RecA (B) se
III~jjljill produce a una \Telocidad uniforme y en
direcci6n del una sola direcci6n; puede estar dirigida
ensamblaje de las par el ensamblaje polarizado del
t -.
proteinas RecA
filamento de protefnas RecA sobre la

!I~:::;::::::::::::::::;;:;;;::;:::;;~"
(A) MIGRACION ESPONTANEA DE
LAS CADENAS
(B) MIGRACION DIRIGIDA POR PROTEfNA
cadena sencilla de DNA, la cual ocurre
en la direcci6n indicada. Ademas, en la
recombinaci6n participan helicasas que
catalizan la migraci6n de cadenas
dirigida por protefnas, incluso con mas
eficiencia.

2R6 r.lInftnl0 I'> : Mecanismos I!eneticos basicos

La recombinaci6n genetica general habitualmente supone des helices
hem61egadas
un intercambio cruzado de cadenas 0 entrecruzamiento 43 de DNA

Parece que el paso mas dificil y mas lento del proceso de recombinaci6n genica
general es el intercambio de una cadena sencilla entre las dos dobles helices
(vease Figura 6-59). Tras este intercambio inicial, parece que la ampliaci6n de la
regi6n de apareamiento y el establecimiento de otros intercambios entre cade-
nas de las dos dobles helices que se hallan en estrecho contacto son procesos ra-
pidos. Durante estos procesos, a menudo se produce la eliminaci6n de una pe-
FORMACl6N DE UNA
quefia cantidad de nude6tidos y la resintesis local de DNA, de forma parecida a MUESCA E INTERCAMBIO
como ocurre en los procesos de reparaci6n del DNA. Debido al elevado mlmero DE CADENAS
de posibilidades que pueden darse, es facH que diferentes organismos puedan
seguir diferentes pasos en este punto. En la mayoria de los casos, sin embargo,
se forma una importante estructura intermediaria, un intercambio cruzado de
cadenas 0 entrecruzamiento (cross-strand exchange), en la que participan las
dos helices de DNA. En la Figura 6-64 se muestra una de las vias mas sencillas a
traves de la cual se puede formar esta estructura:
FORMACl6N DE UNA
En el intercambio cruzado de cadenas (tambien denominado "union de Ho- I MUESCA E INTERCAMBIO
lliday") las dos helices homologas de DNA que inicialmente se aparearon se + DE CADENAS
mantienen unidas mediante el intercambio mutuo de dos de las cuatro cadenas
presentes, una de cada helice. Para mantener esta estructura no es necesario
que se rompan pares de bases; la estructura presenta dos propiedades impor-
tantes: (1) el punto de intercambio entre las dos dobles helices hom610gas de
DNA (en la Figura 6-64, ellugar donde las dos cadenas se cruzan) puede migrar
rapidamente en una u otra direcci6n siguiendo las helices, mediante una migra-
cion de doble cadena; (2) el intercambio cruzado de cadenas consta de dos pares I UNI6N DE LAS
de cadenas: uno de cadenas cruzadas y el otro de cadenas no cruzadas. Sin em-
+ CADENAS ROTAS
bargo, la estructura puede isomerizar al sufrir la serie de movimientos de rota-
cion que se muestran en la Figura 6-65, de forma que las dos cadenas que origi-
nalmente no se entrecruzaban ahora si que se entrecruzan, y viceversa.
Con el fin de regenerar dos helices de DNA separadas y de conduir asi el
proceso de apareamiento, las dos cadenas entrecruzadas se han de cortaro Si
las dos cadenas entrecruzadas se cortan antes de la isomerizaci6n del entrecru-
zamiento, las dos helices originales de DNA se separan en forma casi inaltera-
da, habiendose intercambiado un fragmento muy corto de DNA de una sola ca- des meh3culas de DNA
dena. Sin embargo, si las dos cadenas entrecruzadas se cortan despues del unidas per un
entrecruzamiente
proceso de isomerizaci6n, un trozo de cada una de las dos helices originales de cadenas
quedara unido, mediante una uni6n heteroduplex, a una zona de la otra helice
de DNA: en otras palabras, las dos helices de DNA se habran entrecruzado (vea- Figura 6-64 Formaci6n de un
se Figura 6-65). entrecruzamiento de cadenas. Existen
La isomerizacion de las cadenas cruzadas puede ocurrir espontaneamente a muchas vias diferentes que pueden
una cierta velocidad, pero tambien puede estar dirigida enzimaticamente 0 re- conducir desde un entrecruzamiento
entre cadenas (vease Figura 6-59) a un
gulada por las celulas de alguna otra forma. Probablemente, durante la meiosis
intercambio de cadenas, aunque en la
se produce algtin tipo de control, cuando las dos dobles helices de DNA que se figura se muestre una sola de ellas.
emparejan se constrifien en una elaborada estructura denominada complejo si-
naptonemico (como se discute en el Capitulo 20).

La conversi6n genica se produce combinando procesos

de recombinaci6n general y de sfntesis limitada de DNA44
Una ley fundamental de la genetica dice que la contribuci6n genetica de cada
uno de los padres al hijo es identica: se hereda un juego completo de genes del
padre y otro de la madre. Asi, cuando una celula diploide entra en meiosis
produciendo cuatro celulas haploides (vease Capitulo 20), exactamente la mitad
de los genes de estas celulas han de proceder de la madre (los genes que la celula
diploide hered6 de la madre) y la otra mitad, del padre (los genes que la celula di-
ploide hered6 del padre). En un animal pluricelular, como es el caso del hombre,
no es posible comprobar directamente si se cumple esta predicci6n, pero en

Recombinaci6n genetica 287

 Figura ()-()5 Isomerizaci6n de un entrecruzamiento de cadenas. Si no se dos cromosomas
hom61ogos
ha producido la isomerizaci6n, el corte de las dos cadenas cruzadas finaliza
el intercambio sin que se haya producido entrecruzamiento. Si se produce
isomerizaci6n (etapas B y el, el proceso de corte de las dos cadenas
produce dos moleculas de DNA que se han entrecruzado (abajol. Por
consiguiente, se cree que la isomerizaci6n es necesaria para que el proceso
de rotura y nueva uni6n de dos dobles helices hom610gas de DNA de lugar a
una recombinaci6n general. La etapa Aya se ha ilustrado antes (vease
Figura 6-64).

FORMACI6N DE UNA

otros organismos, como en los hongos, en los que es posible recuperar y anali-
zar cada una de las cuatro celulashijas producidas por meiosis a partir de una
A
j
ESTRUCTURA DE INTERCAMBIO
DE CADENAS CRUZADAS

unica celula, se pueden encontrar muchos casos en los que aparentemente se

han violado las reglas geneticas estandar. Por ejemplo, ocasionalmente la meio-
sis produce tres copias de la version materna (alelos) de un gen y una sola copia
del alelo paterno, 10 cual pone de manifiesto que una de las dos copias del alelo
paterno ha sido cambiada a una copia del alelo materno. Este fenomeno se co-
noce como conversion genica. A menudo ocurre en asociacion con los procesos
de recombinaci6n genetica general, y se cree que es importante en la evolucion
de ciertos genes (vease Figura 8-74). Parece ser que la conversion genica tiene
unas consecuencias directas sobre los mecanismos de recombinacion general y
de reparacion del DNA.
Durante la meiosis, se forman uniones heteroduplex en los lugares de entre-
cruzamiento de cromosomas homologos maternos y paternos. Si las secuencias
maternas y paternas son ligeramente diferentes, la union heteroduplex puede
incluir algunos errores de apareamiento de bases. Estos errores en la doble heli-
ce pueden ser corregidos por la maquinaria de reparacion del DNA, la cual pue-
de eliminar los nucleotidos de la cadena paterna y reemplazarlos por nucleoti-
dos complementarios a los de la cadena materna, 0 viceversa. La consecuencia
de ese sistema de reparaci6n sera una conversion genica. Tambien se puede dar
una conversion genica mediante otros mecanismos, pero todos ellos requieren
la existencia de algun tipo de proceso de recombinacion que una entre sf dos co-
pias de dos secuencias de DNA fuertemente relacionadas. Debido a que se gene-
ra una copia extra de una de las dos secuencias de DNA, en el proceso tambien
ha de participar una pequefia parte de biosfntesis de DNA. Estudios geneticos
muestran que normalmente la conversion genica afecta a pequefias zonas de
DNA, y que en muchos casos unicamente se cambia una parte de un gen. CORTE DE LAS DOS
CADENAS DE DNA CRUZADAS
La conversion genica tambien puede ocurrir en celulas en mitosis, aunque
esto solo se produce raramente. Tal como ocurre en celulas en meiosis, proba-
blemente los procesos de conversion genica que se producen en las celulas en
mitosis aparecen como consecuencia de procesos de reparacion de apareja-
miento de bases en el DNA heteroduplex. En la Figura 6-66 se ilustra otro meca-
nismo que probablemente se produce en celulas en mitosis y en celulas en
meiosis.

Los mecanismos de correcci6n de errores pueden evitar

la recombinaci6n genetica promiscua entre dos secuencias
de DNA mal apareadas 45
Como hemos discutido antes, la recombinaci6n general se dispara cuando dos
cadenas de DNA de secuencia complementaria se emparejan formando un hete-
roduplex entre dos dobles helices (vease Figura 6-64). Experimentos lIevados a
cabo in vitro con protefna RecA purificada muestran que puede ocurrir el empa-
rejamiento de forma eficiente incluso cuando las secuencias del DNA no se apa-
reen bien -por ejemplo, cuando solo un promedio de cuatro de cada cinco nu-
cleotidos formen parejas de bases. Siendo asf, ide que forma pueden las celulas cromosomas que se
han entrecruzado
de vertebrados evitar la recombinaci6n general promiscua entre los varios cen-

288 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 Figura 6-66 Proceso de
recombinaci6n general que puede
causar conversi6n genica. EI proceso
muesca empieza cuando se produce una muesca
S / ~
).1 en una de las cadenas de la helice de
helice de DNA
DNA raja. En la etapa Iia DNA
3' 5' 3' 5'
polimerasa inicia la sintesis de una
helice de DNA copia extra de una de las cadenas de la
Mlice raja, desplazando la copia
original como una hebra sencilla. Esta
la DNA polimerasa desplaza una cadena
de la helice roja; entonces, esta hebra
se aparea con la helice verde
1 etapa 1 hebra sencilla se aparea con la region
homologa de la Mike verde, como se
......................................... muestra en la Figura 6-59. En la etapa

.........E- . 2, la corta region no apareada de la

cadena verde producida en la etapa I
es degradada, completandose la
transferencia de secuencias de
la DNA polimerasa se para, el exceso
de DNA de cadena sencilla es degradado
por nucleasas y todos los cortes reparados
1 etapa 2
nucleotidos. EI resultado normalmente
se observa en el siguiente cicio celular,
despues de que la replicacion del DNA
haya separado las dos cadenas no
apareadas (etapa 3). Como se describe
,
............................................... en el texto, la reparacion de errores de
apareamiento de pares de bases en
una union heteroduplex tambien
la replicaci6n normal del DNA produce
tres alelos rojos y un alelo verde
del gen X
1 etapa 3
produce conversion genica.

RESULTADO NETO: UN ALELO VERDE DEL GEN X SE HA

CONVERTIDO EN UN ALELO ROJO

tenares de copias de DNA de secuencias estrechamente relacionadas que se ha-

Han repetidas en sus genomas- (vease pag. 423) ?
A pesar de que no conocemos la respuesta a esta pregunta, diversos estudios
en bacterias y levaduras han demostrado que los mismos sistemas de correcci6n
de errores de apareamiento que eliminan los errores de replicaci6n (vease Figura
6-50) tambien interrumpen los procesos de recombinaci6n genetica general entre
secuencias de DNA que se emparejan de forma imperfecta. Se conoce, por ejem-
plo, que los genes hom610gos de las dos bacterias estrechamente relacionadas Es-
cherichia coli y Salmonella typhimurium generalmente no se recombinan, a pesar
de que, como sabemos, sus secuencias de nucle6tidos son identicas en un 80%;
sin embargo, cuando el sistema de correcci6n de errores de apareamiento se halla
inactivado por mutaci6n, la frecuencia de estos procesos de recombinaci6n inter-
especies se incrementa unas 1000 veces. As!, sabemos que el sistema de correc-
ci6n de errores de apareamiento reconoce normalmente las bases mal apareadas
de un intercambio de cadenas inicial e impide los pasos posteriores necesarios
para que se produzca la rotura y nueva uni6n de las dos helices emparejadas. Este
mecanismo protege el genoma bacteriano de cambios de secuencia que, de otra
forma, se producirian mediante recombinaci6n con moleculas de DNA que oca-
sionalmente entran en la celula. Se cree que en las celulas de vertebrados, que
contienen muchas secuencias de DNA estrechamente relacionadas, este mismo
tipo de sistema de correcci6n ayuda a impedir que se produzcan procesos de re-
combinaci6n promiscua que, de otra forma, mezclarian el genoma (Figura 6-67).

Enzimas de recombinaci6n especffica de lugar ponen y quitan

del genoma secuencias especiales de DNA46
Adiferencia de la recombinaci6n general, la recombinaci6n genetica especitlca
de Ingar esta guiada por una enzima de recombinaci6n que reconoce secuen-

Recombinaci6n genetica 289

 / secuencias repetidas, similares pero no identicas " " Figura 6-67 La correcci6n de errores
impide que se produzca
recombinaci6n general a partir de
genomas desestabilizados que
1 contienen secuencias repetidas.
1
LA DETECCI6N DE UN ERROR
Estudios en bacterias y levaduras
sugieren que el sistema de correcci6n
de errores descrito previamente en la

j
ABORTA EL APAREAMIENTO E
IMPIDE LA RECOMBINACI6N Figura 6-50 tiene la funci6n adicional
!,rmRCAMBIO DE CADENAS descrita aqui.

=?::v=e:~::~--=c=~~_ r= - -
OCURRE RECOMBINACI6N 51 LA

1 CORRECCI6N DE ERRORE5 FALLA

cias especfficas de nucle6tidos presentes en una 0 en ambas mohkulas de DNA

que se recombinan. No es necesario que se produzca un apareamiento de bases
entre las moleculas de DNA que se recombinan, e incluso cuando este se produ-
ce, la uni6n heteroduplex que se forma es tan s610 de unos cuantos pares de ba-
ses de longitud. Separando y volviendo a unir moltkulas de DNA de doble hebra
en lugares determinados, este tipo de recombinaci6n permite que varios tipos
de secuencias de DNA se desplacen dentro y entre cromosomas.
La recombinaci6n especffica de lugar fue descubierta como el sistema me-
diante el cual un virus bacteriano, el bacteri6fago lambda, traslada su genoma
dentro y fuera del cromosoma de E. coli. En su estado integrado el virus esta es-
condido en el cromosoma bacteriano y se replica como parte del DNA del hues-
ped. Cuando el virus entra en una celula, se sintetiza una enzima codificada por
el genoma del virus, la llamada integrasa lambda. Esta enzima cataliza un proce-
so de recombinaci6n que se inicia cuando mUltiples copias de la proteina inte-
grasa se unen fuertemente a una secuencia especial del DNA del cromosoma cir-
cular del bacteri6fago. Ahora, el complejo resultante DNA-proteina puede unirse
a otra secuencia especial de DNA del cromosoma bacteriano, uniendo estrecha-
mente entre sf el cromosoma de la bacteria y del bacteri6fago. Entonces, la inte-
grasa cataliza las reacciones necesarias de corte yempalme, utilizando una corta
regi6n de homologia de secuencia para formar en el punto de uni6n una dimi-
nuta uni6n heteroduplex (Figura 6-68). La integrasa se parece a una DNA topo-
isomerasa en que forma una uni6n covalente reversible con el DNA en ellugar
en el que rompe la cadena de DNA.
El mismo tipo de mecanismo de recombinaci6n especffica de lugar puede
realizarse a la inversa por el bacteri6fago lambda, permitiendole salir de su lu-
gar de integraci6n en el cromosoma de E. coli para multiplicarse rapidamente
en la celula bacteriana. Esta reacci6n de eliminaci6n esta catalizada por un
complejo de la enzima integrasa y otra protefna del bacteri6fago, la cual se sin-
tetiza por el virus unicamente cuando la celula huesped esta estresada. Si los
lugares reconocidos por una enzima de recombinaci6n como esta se sueltan, en-
tonces el DNA comprendido entre ellos en lugar de ser eliminado sera invertido
(vease Figura 9-57).
Muchas otras enzimas que catalizan procesos de recombinaci6n especifica
de lugar se parecen a la integrasa lambda en que requieren una corta regi6n de
secuencias identicas de DNA sobre las dos regiones de la helice de DNA que se

290 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos blisicos

 cromosoma circular del Figura 6-68 La inserci6n de DNA del
bacteriofago lambda
bacteri6fago lambda en el
( cromosoma bacteriano. En este
cromosoma
secuencias de ejemplo de reeombinaci6n especifiea
lugar de union
bacteriano de lugar la enzima integrasa lambda se
-=======::::::====== une a una secuencia de DNA "de
complejo proteico union" de eada cromosoma, mientras
LA INTEGRASA
SE UNE
1 de la integrasa lambda
!
haee cortes que generan eortas
seeuencias hom6logas de DNA;
entonees la integrasa cambia las
hebras y las une, formando una uni6n
heterodl1plex de 7 pares de bases de
CATAuSIS DE
ROTURA Y
1 longitud. Cada una de las reacciones
NUEVA UNION
de rotma de cadenas y de uni6n de
DE LA DOBLE eadenas requiere nuevas uniones, que

=H=EBRA=;;~Sii2~;P=_ estan producidas por la DNA

topoisomerasa, mientras que la
energia de rotma de un enlace
fosfodiester se almacena en una union

t--
LAINTEGRASA
SE DISOCIA

=======:::-::::=======:::::=====-
I I
covalente transitoria entre el DNA y la
enzima (vease Figura 6-64).

DNA del bacteriofago integrado en el

cromosoma bacteria no

van a unir. Debido a este requerimiento, cada una de las enzimas de esta clase es
relativamente exigente respecto a las secuencias de DNA que recombina, de for-
ma que puede esperarse que catalice un proceso determinado de uni6n que sea
litil para el virus, el plasmido, el elemento transponible 0 la celula que la presen-
teo Estas enzimas pueden utilizarse como herramientas en animales transgeni-
cos para estudiar la influenciade determinados genes sobre el comportamiento
celular, como se ilustra en la Figura 6-69.
Las enzimas de recombinaci6n especifica de lugar que cortan y vuelven a
unir dos dobles helices de DNA, a menudo 10 hacen de una manera reversible:
como el caso del bacteri6fago lambda, el mismo sistema enzimatico que une dos
moleculas de DNA tambien puede separarlas de nuevo, recuperando de forma
precisa la secuencia de ambas moleculas originales de DNA. Por ella, este tipo
de recombinaci6n se denomina recombinaci6n conservativa espec(fica de lugar
para distinguirla de la recombinaci6n transposicional espec(fica de lugar, meca-
nisticamente diferente, que exponemos a continuaci6n.

La recombinaci6n transposicional puede insertar un elemento

genetico m6vil en cualquier secuencia de DNA47
Muchas secuencias m6viles de DNA, incluyendo muchos virus y elementos
transponibles, codifican integrasas que insertan su DNA en un cromosoma a tra-
ves de un mecanisme diferente del que utiliza el bacteri6fago lambda. Como la
integrasa lambda, cada una de estas enzimas reconoce una secuencia especifica
de DNA del elemento genetico m6vil cuya recombinaci6n cataliza. A diferencia
de la enzima de lambda, sin embargo, estas enzimas no requieren una secuencia
de DNA "diana" especifica y no forman ninguna uni6n heterodliplex. En lugar
de ello, introducen cortes en ambos extremos de la secuencia lineal de DNA del
elemento genetico m6vil y catalizan un ataque directo de estos extremos de
DNA sobre la molecula de DNA diana, rompiendo dos enlaces fosfodiester cer-
canos de la molecula diana. Debido a como estan construidos estos cortes, en la
molecula de DNA recombinante quedan dos pequeuos huecos de una sola heli-

Recombinaci6n genetica 291

 ---<=
unidad de transcripci6n gen de interes sin
ACTIVACI6N TEMPORAL

a
el promotor
DE LA ENZIMA DE
lugares reconocidos por
RECOMBINACI6N
la enzima de recombinaci6n gen marcador eliminado
del cromosoma
gen marcador I
~~_:.
cromosoma promotor lugar de terminaci6n :_~ gen de interes
1M !

cromosoma con
el gen de
+
interes activo
proteina marcadora
(A)

INCREMENTO BREVE
DE TEMPERATURA
DURANTE EL
Figura 6-69 Utilizaci6n de una

~
DESARROLLO PROLIFERACI6N
. .....
. . 41 EMBRIONARIO _ 41 CELULAR enzima de recombinaci6n especffica
I
de Iugar para activar un gen en un
, grupo de celulas en un animal
celulas ocasionales transgenico. La moltkula de DNA
pierden el gen marcador cada una de las celulas de un cion mostrada ha sido disefiada de forma
y expresan el gen de de celulas que ha perdido el gen
(B) interes marcador expresara el gen de interes
que el gen de interes s610 se transcribe
cuando se activa una enzima de
recombinaci6n especifica de lugar, la
cual elimina el gen marcador y une el
promotor cerca del gen de interes. La
enzima de recombinaci6n esta
ce, una a cada extremo del elemento m6vil; estos huecos son rellenados par una codificada por otra molecula de DNA
DNA polimerasa, completandose asi el proceso de recombinaci6n. Tal como se (no se muestra en la figura) que se ha
ilustra en la Figura 6-70, este mecanismo genera una carta duplicaci6n de la se- disefiado de forma que s610 se
cuencia de DNA diana adyacente; estas duplicaciones flanqueantes constituyen produzca la enzima cuando aumenta
el sella que permite reconocer un proceso de recombinaci6n especifica de lugar, la temperatura. Arnbas moleculas de
de este tipo. DNA se introducen en los cromosomas
A partir del bacteri6fago Mu se ha purificado en forma activa una integra- del mismo animal transgenico.
Cuando la temperatura de este animal
sa de este tipo. Como la integrasa del bacteri6fago lambda, realiza todas las
se incrementa de forma transitoria, se
operaciones de corte y empalme sin necesidad de ninguna fuente de energia
produce un breve incremento masivo
(como el ATP). Existen enzimas semejantes a esta en organismos tan diversos de la sintesis de la enzima de
como las bacterias, las moscas del vinagre y los humanos -como discutire- recombinaci6n, la cual produce una
mos mas adelante, todos estos arganismos contienen elementos geneticos m6- reorganizaci6n del DNA en una celula
viles. ocasional, eliminandose el gen
marcador y activandose
simultaneamente en gen de interes.
Resumen (B) La estrategia puede utilizarse para
Los mecanismos de recombinacion genetica permiten que grandes zonas del DNA activar permanentemente un gen de
de doble helice puedan desplazarse de un cromosoma a otro. Existen dos grandes interes en pequefios clones de celulas
clases de sistemas de recombinacion. En la recombinacion general, las reacciones de un animal en desarrollo. Los clones
iniciales se basan en extensas interacciones entre pares de bases de cadenas de las pueden ser identificados por la
perdida del producto del gen
dos dobles helices de DNA que se recombinan. Como resultado de ello, solamente se
marcador el cual, por ejemplo, puede
produce recombinacion general entre dos moMculas de DNA que sean homologas, y variar la pigmentaci6n de la celula. Asi
aunque el proceso traslada secciones de DNA entre cromosomas, normalmente no pues, esta tecnica permite estudiar el
altera ni la secuencia ni el orden de los genes en el cromosoma. Por otra parte, la re- efecto de la expresi6n de cualquier gen
combinacion espec(jica de lugar altera las posiciones relativas de las secuencias de de interes en un grupo de celulas de un
nucleotidos en los cromosomas, debido a que las reacciones de apareamiento de- animal intacto.
penden del reconocimiento, mediado por una protena, de las dos secuencias de
DNA que se recombinan, de forma que no es necesaria la presencia de una larga se-
cuencia homologa. Los mas comunes son dos tipos de mecanismos de recombina-
cion especificos de lugar: (1) recombinaciOn conservativa espec(jica de lugar, que
produce un heteroduplex muy corto y por 10 tanto requiere alguna zona de secuen-
cia de DNA que sea la misma en las dos moMculas de DNA, Y (2) la recombinaciOn
transposicional espec(jica de lugar, que no produce heteroduplex y habitualmente
no requiere ninguna secuencia espec(jica sobre el DNA diana.

292 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 DNAvirico ,
integrasa
c Ji ' enlace
I / fosfodiester

l
la integrasa corta 0
la secuencia m6vil de DNA 3'
-C-O
~ C-l'
. P 0/
---+ "H i

cromosoma 5'
diana ~3'=::!::Ii==:;5'
I H!'3'-l' ,rn"o
virico sobre el
2:NA V
J 5'3' 3'5'
grupo
atacante
00
l
C-5'

3'5' 5'
DNA diana

======-==:::;5' 3'h % C-
-C-9..t'\'9-
3'
/

3'

l
la muesca es
rellenada por la
reparaci6n del DNA H ~ 0 H ~ prot6n
5'3' 3'5' delagua
cromosoma .;.5'=:::::;:::;D=N=A=v=ir=ic=o=in=te=g::r=ad::;:o:::;::=::;3'
diana 3' ~ JJ 5' C-5'
cortas repeticiones de la secuencia nuevo enlace /
(A)
de DNA diana fOSfOdieste~O 3'
O-C/
/0 P
3-;-C H/ ---+
00 grupo que
se libera
Virus, phismidos y elementos (8)

geneticos transponibles 48 Figura 6-70 Recombinaci6n

transposicional especifica de lugar.
En la descripci6n que hemos realizado de los mecanismos geneticos basicos, he- (A) Generalidades de los procesos de
mos destacado su ventaja selectiva para la celula. Hemos visto que la supervi- rotura y nueva uni6n de una hebra que
vencia de la celula a corto plazo depende por completo del mantenimiento de la conducen a la integraci6n del DNA
informaci6n genetica mediante el proceso de reparaci6n del DNA, mientras que lineal de doble hebra de un retrovirus
la multiplicaci6n de la celula requiere que se produzca una replicaci6n del DNA (raja) en un cromosoma de una celula
rapida y exacta. En una escala de tiempo mas larga, la aparici6n de variantes ge- animal (azul). En una etapa
neticas, de las que depende la evoluci6n de las especies, esta grandemente facili- endonucleasa inicial, la enzima
tada por la reordenaci6n de los genes y las ocasionales redisposiciones de se- integrasa hace una muesca en una
cuencias del DNA generadas por la recombinaci6n genetica. Ahora vamos a hebra a cada uno de los extremos de la
examinar un grupo de elementos que al parecer actd.an como parasitos, alteran- secuencia de DNA virico, exponiendo
un grupo 3'-OH que sobresale. Cada
do en su propio beneficio los mecanismos geneticos de la celula. Estos elemen-
uno de estos extremos 3'-OH dirige el
tos geneticos son interesantes en si mismos. Ademas, como pueden utilizar a
ataque de un enlace fosfodiester sobre
fondo el metabolismo de la celula huesped para poder multiplicarse, se usan la cadena opuesta de un lugar
como poderosas herramientas para estudiar la maquinaria normal de la celula. seleccionado al azar de un cromosoma
Muchas secuencias de DNA pueden replicarse de forma independiente del diana. Ello inserta la secuencia de DNA
resto del genoma. Estas secuencias presentan diferentes grados de independencia virico en el cromosoma diana, dejando
de sus celulas huesped. De ellas, los cromosomas de los virus son los mas inde- cortas muescas a cada lado, que son
pendientes porque tienen un revestimiento proteico que les permite moverse li- rellenadas por procesos de reparaci6n
bremente de una celula a otra. En diferentes grados, los virus estan estrechamente del DNA. Debido a que la muesca se
relacionados con los pldsmidos y con los elementos transponibles, que son secuen- liena, este tipo de mecanismo produce
cias de DNA que carecen de revestimiento, por 10 que son mas dependientes de cortas repeticiones de la secuencia de
las celulas huesped y han de replicarse dentro de una unica celula y su descenden- DNA diana (de entre 3 y 12 nucle6tidos
de longitud, en negro, dependiendo de
cia. Todavfa mas primitivas son algunas secuencias de DNA, de las que se sospe-
la enzima integrasa) a cada lado del
cha que son m6viles porque se encuentran repetidas muchas veces en cada cro-
segmento de DNA integrado. (B) Una
mosoma celular. Sin embargo, se desplazan 0 se multiplican tan raramente que no visi6n a nivel at6mico del ataque por
esta claro si deben ser consideradas como elementos geneticos independientes. un extrema de una cadena de DNA
Empezamos la discusi6n con los virus, que son los elementos m6viles mejor de (A) a un enlace fosfodiester del
conocidos. Seguiremos con las propiedades de los plasmidos y de los elementos DNA diana (azul). Este mecanismo se
transponibles, algunos de los cuales tienen un gran parecido con los virus y, de parece al usado en la maduraci6n del
hecho, pueden haber sido sus antecesores. Las secuencias de DNA muy repetiti- RNA yes claramente diferente de la
vas de los cromosomas de vertebrados, se discuten en el Capitulo 8. actividad semejante a topoisomerasa
de la integrasa lambda. (Adaptado de
K. Mizuuchi,J. BioI. Chern. 267:21273-
Los virus son elementos geneticos m6viles49 21276, 1992.)
Los virus fueron descritos por primera vez como agentes causantes de enferme-
dades, que se pueden multiplicar unicamente en el interior de celulas y que, en
virtud de su diminuto tamafio, atraviesan los filtros ultrafinos que retienen in-

Virus, plasmidos y elementos geneticos transponibles 293

cluso las bacterias mas pequenas. Antes de la utilizaci6n del microscopio, la na-
turaleza de los virus era oscura, aunque se sospechaba que podian ser genes
desnudos que de alguna manera habian adquirido la capacidad de desplazarse
de una celula a otra. El desarrollo de la ultracentrifugaci6n, hacia los anos 1930,
hizo posible la separaci6n de los virus de los componentes de las celulas hues-
ped, y a principios de los anos 1940 se generaliz6 la idea de que todos los virus
contienen acidos nucleicos. La idea de que los virus realizan funciones semejan-
tes a las de los genes se confirm6 gracias a estudios realizados en virus de bacte-
rias (bacteri6fagos). En 1952 se demostr6 que el DNA del bacteri6fago T4, pero
no su proteina, penetra en la celula huesped bacteriana e inicia los procesos de
replicaci6n que conducen a la producci6n de varios cientos de virus dentro de
cada celula infectada.
Estas observaciones hicieron considerar a los virus como elementos geneti-
cos rodeados de una cubierta protectora que les permite desplazarse de una ce-
luIa a otra. A menudo, la multiplicaci6n virica per se es letal para las celulas den-
tro de las que se produce; en muchos casos, la celula infectada, repleta de virus,
se rompe (se lisa) permitiendo asi a los virus hijos acceder a celulas vecinas. Mu-
chas de las manifestaciones clinicas de la infecci6n virica reflejan este efecto ci-
tolitico de los virus. Par ejemplo, tanto los granitos de herpes formados par el vi-
rus del herpes como las lesiones causadas par la viruela reflejan la rotura de las
celulas epiteliales de un area local de la pie!.
El tipo de acido nucleico de un virus, la estructura de su envoltura, la mane-
ra que tiene de entrar en la celula huesped y su mecanismo de replicaci6n den-
tro de la celula huesped, varian considerablemente de un tipo de virus a otro.

La cubierta exterior de un virus puede ser una capside proteica

o una envoltura membranosa50
Inicialmente se pens6 que la cubierta externa de los virus estaba formada por un /DNA
virus { a
s610 tipo de moIecula proteica. Se creia que las infecciones viricas empezaban ~.:" proteina de la
por la separaci6n del cromosoma virico (su acido nucleico) de la cubierta protei- or cubierta
PENETRACION EN UNA CElULA
ca, y que a continuaci6n se producia la replicaci6n del cromosoma dentro de la Y lIBERACION DEL DNA

.....
celula huesped, generandose muchas copias identicas. Despues de la sintesis de
nuevas copias de la envoltura proteica especifica del virus sobre moleculas de ....
.. .
RNA mensajero codificadas por el virus, podia producirse la formaci6n de parti-
culas viricas hijas mediante el ensamblaje espontaneo de esta cubierta proteica =:::== DNA
/ ...........

"
rodeando los cromosomas viricos hijos (Figura 6-71). TRANSCRIPCION REPLICACION
Ahara se sabe que estas ideas sobresimplifican extraardinariamente la di-
versidad de ciclos vitales viricos que existen. Por ejemplo, la proteina de cubierta /'
------------- RNA ===DNA
que rodea el acido nucleico de la mayoria de los virus (la capside) contiene mas 1 TRADUCCION
de un tipo de cadena polipeptidica, a menudo dispuesta en varias capas (Figura
6-72). En muchos virus, ademas, la capside proteica esta recubierta a su vez par
una membrana formada por una bicapa lipidica que contiene proteinas. Mu- \::~~i~~
delaC;bie~
~
chos de estos virus recubiertos adquieren su envoltura durante el proceso de
ENSAMBLAJE DE LAS
brote de la membrana plasmatica (Figura 6-73). Este proceso de gemaci6n per- PARTfCULAS VfRICAS HIJAS
mite a las particulas viricas abandonar la celula sin romper la membrana plas- Y SALIDA DE LA CElULA
matica y, par 10 tanto, sin matar a la celula. En la Figura 6-74 se presentan elec-
tronmicrografias que enfatizan las diferencias que existen entre las envolturas
viricas.

Los genomas viricos se presentan en una gran variedad de

formas viricas y pueden ser tanto de DNA como de RNA51 Figura 6-71 El cicio vital vfrico mas
sencillo. EI virus hipotetico mostrado
Como hemos visto anteriarmente la doble helice de DNA es estable y faci! de re- aqui esta formado por una pequefia
parar. Si una cadena de un polinucle6tido se estropea de farma accidental, su molecula de DNA de doble cadena,
cadena complementaria permite que la alteraci6n pueda ser corregida de forma que codifica una sola proteina de la
adecuada. Sin embargo, este proceso de reparaci6n no es importante para el capside virica. Ninguno de los virus
caso de los pequenos cromosomas viricos que tan s610 contienen varios cientos conocidos es tan sencillo.

294 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

de nucle6tidos. La probabilidad de ser alterados accidentalmente es muy peque- Figura 6-72 Capsides de algunos
fia comparada con el riesgo que tiene un genoma celular que contiene millones virus, a eseala. (A) Virus del tomate
de nucle6tidos. achaparrado peludo; (B) poliovirus;
Asi pues, la informaci6n genetica de un virus puede almacenarse y transpor- (C) virus de simio 40 (SV40); (D) virus
tarse en varios tipos de formas no usuales, como el RNA en lugar del DNA. Un necrosante satelite del tabaco. Las
estructuras de todas estas capsides
cromosoma virico puede ser una cadena sencilla de RNA, una helice de doble
han sido determinadas por
cristalograffa de rayos Xy se conocen a
nivel at6mico. (Por cortesfa de Robert
Grant, Stephan Crainic y James M.
Hogle.)
>protefnas
transmembrana de
la envoltura vfrica

la nucleocapside
....
.-..
.....
induce el ensamblaje
de las protefnas de
protefna de envoltura Figura 6-73 Adquisici6n de una
la capside envoltura viriea. (A) Electron-
micrograffa electr6nica de un corte
~omosoma
vfrico GEMACION
ultrafino de una celula animal de la
que estan saliendo por gemaci6n
(DNAo RNA) varias copias de un virus con envoltura
(virus Semliki forest). (B) Visi6n
esquematica del ensamblaje de la
envoltura y del proceso de gemaci6n.
Mientras que la bicapa lipfdica que
bicapa Iipfdica~-
rodea la capside es parasitada
directamente a partir de la membrana
virus
hijos
plasmatica de la celula huesped, las
l1nicas protefnas de esta bicapa
lipfdica estan codificadas por el
L-.-J
genoma virico. (Por cortesfa de M.
(A) (B)
100 nm Olsen yG. Griffiths).

Virus, plasmidos y elementos genetieos transponibles 295

 Figura 6- 74 Las envolturas de los virus. (A) Electronmicrografias con tinci6n
negativa, (todas ala misma escala) de partfculas viricas.
(A) Bacteri6fago T4, un virus de DNA, muy grande, que infecta a E. coli. El DNA
se halla en la cabeza del bacteri6fago y es "inyectado" a la bacteria a traves de
la cola cilindrica. (B) Virus X de la patata, un virus vegetal fIlamentoso que
contiene un genoma de RNA. (C) Adenovirus, un virus de DNA que puede
infectar celula humanas. La superficie extema de este virus esta formada por
una capside proteica. (D) Virus de la gripe, un virus animal muy grande que
tiene DNA y cuya capside proteica esta rodeada por una envoltura de tipo
bicapa lipidica, que contiene una especie de espinas de glucoproteinas viricas.
(A por cortesfa de James Paulson; B por cortesfa de Graham Hills; C por
cortesfa de Mei Lie Wong; D por cortesfa de R.c. Williams y H.W. FisheL)

cadena de RNA, una cadena circular sencilla 0 una cadena sencilla y lineal de
DNA. Ademas, a pesar de que algunos cromosomas viricos son dobles helices li-
neales, tambien son habituales dobles helices circulares de DNA y dobles helices
lineales mas complejas. Por ejemplo, algunos virus tienen moleculas proteicas
unidas covalentemente a los extremos 5' de sus cadenas de DNA; las dobles heli-
ces de DNA de los poxvirus, muy grandes, tienen sus cadenas opuestas unidas
covalentemente por sus extremos a traves de uniones fosfodiester (Figura 6-75).

Los eromosomas virieos eodifiean enzimas implieadas

en la replieaci6n de su acido nucleieo 52
Cada tipo de genoma requiere trucos enzim<iticos especiales para su replicaci6n,
y de esta forma, ha de codificar no s610 la protefna de la envoltura sino tambien
una 0 mas de las enzimas que necesita para la replicaci6n del acido nucleico
virico.
La cantidad de informaci6n que un virus transporta al interior de una celula
para asegurar su replicaci6n selectiva varfa notablemente. Por ejemplo, el DNA
del bacteri6fago T4, un virus relativamente grande, contiene unos 300 genes, en-

DNA de doble
RNA de una sola hebra
...-_~

--- -
DNA de una sola hebra hebra circular

RNA de doble hebra DNA de una sola DNA de doble hebra

hebra circular

DNA de doble hebra con

o DNA de doble hebra
con proteinas terminales
unidas covalentemente
los extremos soldados

C======:JO
Figura 6-75 Dibujo esquematieo de diversos tlpos de genomas virieos. Los virus mas

pequefios s610 contienen unos cuantos genes, y pueden presentar un genoma de DNA 0
de RNA; los virus mayores contienen cientos de genes y tienen un genoma de DNA de
doble cadena. Algunos ejemplos de estos tipos de virus: hebra sencilia de RNA -virus del
mosaico del tabaco, bacteri6fago R17, polivirus; doble hebra de RNA -reovirus; hebra
sencilla de DNA -parvovirus; hebra sencilla circular de DNA -bacteri6fagos M13, <j>X174;
doble hebra circular de DNA -SV4Q Ypoliomavirus; DNA de doble hebra -bacteri6fago T4,
herpes virus; DNA de doble hebra con proteinas terminales asociadas covalentemente
-adenovirus; DNA de doble hebra con extremos soldados covalentemente -poxvirus. Los
extremos peculiares de algunas de estas moleculas de DNA (asf como sus formas
circulares) superan la dificultad de la replicaci6n de los liltimos nucle6tidos del final de la
cadena de DNA (veanse pags. 362 y 389).

296 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

tre los cuales al menos 30 aseguran la nipida replicaci6n del cromosoma T4 en o- ~ subu.nidades de la DNA
topolsomerasa
su celula huesped, E. coli (Figura 6-76). La replicaci6n del DNA de T4 presenta la
- - DNA helicasa
caracteristica especial de que en su DNA se incorpora 5-hidroximetil-C en lugar
______ DNA primasa
de C. La composici6n de bases poco usual del DNA de T4 hace que se pueda dis-
- - DNA helicasa
tinguir facilmente del DNA del huesped, y asi protegerse selectivamente de la ac- - - DNA polimerasa
ci6n de nucIeasas tambien codificadas en el genoma de T4, las cuales degradan
" subunidades de la DNA
pues unicamente el DNA de E. coli. Otras proteinas alteran las moleculas de RNA polimerasa
polimerasa de la celula huesped de modo que a diferentes estadios de infecci6n
50-
transcriben diferentes juegos de genes del bacteri6fago, de forma apropiada a
las necesidades del fago.
Los virus mas pequefios de DNA, como el virus del simio SV40 y el diminuto
miles de
bacteri6fago M13, transportan una cantidad de informaci6n genetica mucho pares de
menor. Estos virus dependen mucho mas de las enzimas de la celula huesped, nucJeotidos
para llevar a cabo la sintesis de su DNA, parasitando la mayoria de las proteinas
de replicaci6n del DNA de la celula huesped. Sin embargo, la mayoria de los vi-
rus de DNA codifican proteinas que inician selectivamente la sintesis de su DNA,
100-
reconociendo una secuencia especial de nucIe6tidos en el virus que actua como
origen de replicaci6n. Este hecho es esencial ya que asi el virus puede superar las
sefiales celulares de control que, de otro modo, harian que el DNA virico se re-
plicara de acuerdo con el DNA de la celula huesped, es decir, duplicandose tan
- - DNA ligasa
s610 en cada cicIo celular. Todavia no comprendemos c6mo las celulas eucario-
tas consiguen regular la sintesis de su DNA. Los mecanismos utilizados por los
virus para escaparse de esta regulaci6n -los cuales resultan mucho mas accesi-
_ _ proteina de union a DNA
bles para ser estudiados- pueden suponer avances en el estudio de estos meca- de una sola hebra
nismos reguladores.
Los virus RNA presentan unos requerimientos muy especializados para su - - subunidad de la DNA
replicaci6n, ya que para reproducir sus genomas, han de copiar las moleculas de topoisomerasa
RNA, 10 cual significa polimerizar nucIe6sidos trifosfato sobre un patr6n de RNA.
Figura 6-76 El cromosoma del
Normalmente las celulas no tienen enzimas que lleven a cabo estas reacciones, bacteri6fago T4, mostrando la
par 10 que para poder replicarse, incIuso los pequefios virus RNA han de codifi- situaci6n de los mas de 30 genes que
car sus propias enzimas polimerasa dependientes de RNA. A continuaci6n va- intervienen en la replicaci6n del DNA
mos a estudiar con mas detalle algunos mecanismos de replicaci6n de varios ti- de T4. El genoma del bacteri6fago T4
pos de virus. esta formado por mas de 169 000 pares
de nucle6tidos que codifican mas de
300 protefnas diferentes.
Tanto los virus RNA como los virus DNA se replican mediante
la formaci6n de cadenas complementarias53
La replicaci6n de los genomas de los virus RNA, como en el caso de la replica-
ci6n del DNA, tiene lugar a traves de la formaci6n de cadenas complementarias.
En la mayoria de los casos de virus RNA, este proceso esta catalizado por enzi-
mas RNA polimerasas RNA-dependientes (replicasas). Estas enzimas estan codi-
ficadas por el cromosoma RNA virico y a menudo se incorporan a las particulas
viricas hijas, de forma que en cuanto uno de estos virus penetra en una celula,
inmediatamente se empieza a replicar el RNA virico. En todos los casos, las re-
plicasas se hallan empaquetadas dentro de la capside de los virus llamados virus
RNA de cadena negativa, como es el caso del virus de la gripe y el virus de la esto-
matitis vesicular. Los virus de cadena negativa se denominan de esta manera
porque la cadena que infecta no codifica proteinas, sino que es su cadena com-
plementaria la que transporta las secuencias codificantes. Por ella, la cadena
que infecta no puede actuar en ausencia de una replicasa que ya este formada
previamente. Por el contrario, el RNA de los virus RNA de cadena positiva, como
es el caso de los polivirus, pueden actuar como mRNA, y producir una replicasa
en cuanto entra en la celula; por ello el genoma desnudo es, en si mismo, infec-
cioso.
La sintesis del RNA virico siempre empieza en el extrema 3' del RNA patr6n,
empezando en el extrema 5' de la nueva molecula de RNA virico y progresando
en direcci6n 5' a 3' hasta que alcanza el extremo 5' del RNA patr6n. Para la sinte-
sis del RNA virico no existen mecanismos correctores de errores, y las frecuen-

Virus, phismidos y elementos geneticos transponibles 297

cias de error son similares a las que se presentan en la transcripci6n del DNA (al-
rededor de un error por cada 104 nucle6tidos sintetizados). Esta no es una defi-
ciencia demasiado importante ya que el cromosoma RNA es relativamente cor-
to. Por ello, los genomas de todos los virus RNA son mas cortos que los de los
grandes virus DNA.
Todos los virus DNA comienzan su replicaci6n en un origen de replicaci6n
en el que se une una proteina iniciadora especial que atrae a las enzimas de re-
plicaci6n de la celula huesped (Figura 8-34). Sin embargo, existen muchos pro-
cesos diferentes de replicaci6n. La complejidad de estos diferentes esquemas de
replicaci6n refleja, en parte, los problemas de replicar los extremos de una mole-
cula lineal sencilla de DNA, utilizando una DNA polimerasa que no puede em-
pezar la sintesis sin un cebador (veanse pags. 270-271). Los virus DNA han solu-
cionado este problema de maneras muy diversas: algunos tienen genomas
circulares de DNA, los cuales, pues, no tienen extremos; otros tienen genomas li-
neales de DNA que repiten sus secuencias terminales 0 que acaban en un lazo;
otros tienen unas proteinas terminales especiales que actuan directamente de
cebadores de la DNA polimerasa (vease Figura 6-75).

Los virus utilizan la maquinaria de tnffico intracelular

de sus celulas huesped54
Todos los virus tienen una cantidad limitada de acido nucleico en su genoma,
por 10 que han de parasitar procesos de la celula huesped para la mayoria de las
etapas de su producci6n. De hecho, debido a que habitualmente los productos
viricos se sintetizan en grandes cantidades durante la infecci6n y debido tam-
bien a que durante su ciclo vital los virus siguen una ruta secuencial a traves de
los compartimientos de la celula huesped, las celulas infectadas por virus se han
utilizado como importantes modelos para trazar las rutas de transporte intrace-
lular y para estudiar que reacciones biosinteticas esenciales estan compartimen-
talizadas en las celulas eucariotas. Figura 6-77 Estructura del virus
Los virus recubiertos que afectan a las celulas animales, en los cuales el ge- Semliki forest. Dibujo esquemMico de
noma esta incluido en una membrana de bicapa lipidica, han utilizado la com- una secci6n transversal (A) y visi6n
partimentalizaci6n de la celula hasta un grado especialmente preciso. Seguir el tridimensional propuesta (B) del virus.
(C) Reconstrucci6n tridimensional de
ciclo vital de un virus recubierto es hacer un "tour" a traves de la celula. Un
la superficie del virus obtenida por
ejemplo bien estudiado es el virus Semliki forest, que consiste en un genoma de
micrograffas crioelectr6nicas de
cadena sencilla de RNA rodeado por una cdpside formado por una envoltura eico- especimenes no contrastados. EI virus
saedrica (20 caras) dispuesta de forma regular y compuesta por muchas copias tiene una masa total de 46 millones de
de una proteina (denominada proteina C). La nucleocdpside (genoma + capside) daltons. (B, adaptado de s.c. Harrison,
esta rodeada por una bicapa lipidica situada muy cerca, que contiene unica- Curro Opin. Struct. Biol. 2:293-299,
mente tres tipos de cadenas polipeptidicas, codificadas por el RNA virico. Estas 1992. Current Science; C, por cortesfa
protemas de envoltura forman heterotrimeros situados en la bicapa lipidica y de Stephen Fuller.)

proteinas proteina C bicapa

de envoltura de la capside lipidica
20 nm
(A) (8) (C)

298 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

que interacruan con la proteina C de la nucleonipside, uniendo la membrana Figura 6-78 CicIo vital del virus
con la nucleocapside (Figura 6-77). Las zonas glucosiladas de las proteinas de Semliki forest. EI virus parasita la
envoltura siempre estan situadas en el exterior de la bicapa lipidica, y cada trf- celula huesped para la mayor parte de
mero forma una "espina" que al microscopio electr6nico se ve sobresaliendo de sus procesos biosinteticos.
la superficie del virus (Figura 6-77C).
La infecci6n se inicia cuando una proteina de envoltura del virus se une a
una proteina de una celula normal que actua como su receptor en la membrana
plasmatica de la celula huesped. Entonces el virus utiliza el proceso endocftico
normal de la celula para entrar en ella mediante endocitosis mediada por recep-
tor, y es liberado a los endosomas vecinos (como se discute en el Capitulo 13).
Sin embargo, en lugar de ser transferido desde los endosomas a los lisosomas, el
virus se escapa de los endosomas gracias a las propiedades especiales de una de
sus proteinas de envoltura. AI pH acido del endosoma esta proteina hace que la
envoltura virica se fusione con la membrana del endosoma, liberando la nucleo-
capside desnuda en el citosol. La nucleocapside pierde su cubierta en el citosol,
liberando el RNA virico, que entonces es traducido por los ribosomas de la celula
huesped produciendo una RNA polimerasa codificada por el virus. Esta enzima,
a su vez, produce muchas copias del RNA virico, algunas de las cuales actuan
como moleculas de mRNA dirigiendo la sintesis de proteinas estructurales del
virus -la proteina C de la capside y las tres proteinas de la envoltura.
Las proteinas de la capside y de la envoltura, recien sintetizadas, siguen vias
separadas a traves del citoplasma. Las proteinas de la envoltura, como las pro-
teinas de la membrana plasmcitica de la celula huesped, son sintetizadas en los
ribosomas que se hallan unidos al ER rugosa; por el contrario, la proteina de la
capside, como las proteinas citos6licas de la celula, se sintetiza por ribosomas
que no se hallan unidos a membrana. Las proteinas recien sintetizadas de la
capside se unen al RNA virico recientemente replicado, formando nuevas nucle-

Virus, pllismidos y elementos geneticos transponibles 299

ocapsides. Las proteinas de la envoltura, por el contrario, son insertadas en la
membrana del ER, donde son glucosiladas, transportadas hasta el complejo de
Golgi y liberadas a la membrana plasmatica (Figura 6-78).
Finalmente las nucleocapsides viricas y las proteinas de la envoltura se en-
cuentran en la membrana plasmcitica. Como resultado de una interacci6n espe-
cffica con un grupo de proteinas de envoltura, la nucleocapside forma una gema
cuya envoltura contiene proteinas de envoltura embebidas en lfpidos de la celu-
la huesped. Por ultimo, la gema se libera, de forma que aparece un nuevo virus
independiente de la celula. El agrupamiento de las proteinas de la envoltura
mientras se ensamblan alrededor de la nucleocapside durante la gemaci6n viri-
ca hace que las proteinas plasmaticas de la celula huesped queden excluidas de
la partfcula virica final. Figura 6-79 Dos virus recubiertos
que geman a partir de dos dominios
de la membrana plasmatica
Diferentes virus recubiertos geman a partir diferentes. Las electronmicrografias
de diferentes membranas celulares 55 muestran que un tipo de virus
Todas las proteinas de envoltura viricas son proteinas transmembrana que son recubierto gema a partir de la
sintetizadas en el ER. Como otras proteinas del ER, transportan senales que las membrana apical mientras que el otTO
dirigen a determinadas membranas de la celula (vease Capitulo 13). Su localiza- 10 hace a partir de la membrana
plasmatica basolateral de la misma
ci6n final determina ellugar en que se producira la gemaci6n de los virus. Las If-
celula epitelial mantenida en cultivQ.
neas celulares epiteliales, por ejemplo, pueden formar laminas celulares polari- Estas celulas crecen con su superficie
zadas cuando se cultivan sobre superficies apropiadas como filtros porosos basal en contacto con la placa de
recubiertos de colagena. Cuando estas celulas polarizadas, que mantienen dife- cultivo. El area marcada en cada
rentes dominios de membrana plasmatica basolateral y apical son infectadas esquema corresponde a la
por virus, algunos de ellos (como el virus de la gripe) geman exclusivamente a electronmicrografia que se indica.
partir de la membrana plasmcitica apical mientras que otros (como el virus de (Micrograffas por cortesia de E.
Semliki forest y el virus de la estomatitis vesicular) geman exclusivamente a par- Rodriguez-Bouland yD.D. SabatinL)
tir de la membrana plasmcitica basolateral (Figura 6-79). Esta polaridad de ge-
maci6n indica que las proteinas de envoltura presentan senales de direcciona-
miento apical 0 basolateral, las cuales dirigen las proteinas a un solo dominio de
la superficie celular; las proteinas, a su vez, hacen que el virus se ensamble en
este dominio.
Otros virus tienen proteinas de envoltura con diferentes tipos de senales de
direccionamiento. Por ejemplo, Herpes virus es un virus de DNA que se replica

el virus de la gripe gema unicamente el virus de la estomatitis vesicular gema unicamente

a partir de la membrana plasmatica apical a partir de la membrana plasmatica basolateral

300 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

en el mlcleo, donde se ensambla la nucleocapside, y luego adquiere una envol-
tura mediante gemaci6n a traves de la membrana nuclear interna en ellumen
del reticulo endoplasmcitico; asf pues, las protefnas de la envoltura han de ser
transportadas especfficamente desde la membrana del reticulo endoplasmcitico
a la membrana interna nuclear, probablemente via la bicapa lipfdica que rodea
los poros nucleares. Por el contrario, flavivirus gema directamente en ellumen
del retfculo endoplasmcitico y bunyavirus gema en el complejo de Golgi, 10 cual
indica que sus protefnas de envoltura transportan senales para su retenci6n en
el reticulo endoplasmcitico y en las membranas del Golgi respectivamente. Tras
la gemaci6n, las partfculas recubiertas de los virus herpes, flavivirus y bunyavi-
rus quedan solubles en el lumen del retfculo endoplasmcitico y del Golgi, y se
desplazan hacia la superficie celular exactamente como si fueran protefnas de
secreci6n; en la red trans del Golgi se incorporan a vesfculas de transporte y son
secretados de la celula por el proceso de secreci6n constitutiva (discutido en el
Capitulo 13).

Los eromosomas virieos pueden integrarse

en los eromosomas del huesped56
No siempre el resultado final de la entrada de un cromosoma virico en una celula
es su inmediata multiplicaci6n produciendo un gran numero de virus hijos. Mu-
ehos virus entran en un estado de latencia en el que sus genomas se hallan pre-
sentes en la celula huesped pero en forma inactiva, de forma que no producen
progenie. La latencia virica se descubri6 cuando se observ6 que la exposici6n de
baeterias aparentemente no infectadas por virus a los rayos ultravioleta inducfa
la formaci6n de progenie de bacteri6fagos. Experimentos posteriores demostra-
ron que estas bacterias lisogenicas contienen en su cromosoma un cromosoma
virieo latente pero completo. Estos cromosomas viricos integrados reciben el
nombre de provirus.
Los bacteri6fagos que pueden integrar su DNA en los cromosomas bacteria-
nos se conocen como bacteri6fagos temperados. El ejemplo prototfpico es el bac-
teri6fago lambda, que ya hemos estudiado. Normalmente, cuando lambda in-
fecta una celula huesped E. coli adecuada, se multiplica produciendo varios
cientos de particulas hijas que son liberadas cuando la celula bacteriana se lisa;
este proceso se denomina infecci6n Utica. Mas raramente, los extremos libres de
las moleeulas de DNA infectantes se unen formando un DNA circular que queda
integrado en el cromosoma circular huesped de E. coli mediante un proceso de
reeombinaci6n especffico de lugar. La bacteria lisogenica resultante, que trans-
porta el cromosoma provirico lambda, se multiplica normalmente hasta que
se somete a una agresi6n ambiental, tal como la exposici6n a luz ultravioleta 0
a radiaciones ionizantes. La debilitaci6n resultante de la celula induce al virus
integrado a dejar el cromosoma del huesped y a comenzar un ciclo normal de
replieaci6n virica. De esta forma, el provirus integrado no ha de perecer nece-
sariamente con la celula huesped lesionada sino que tiene la oportunidad de
eseapar hacia otras celulas de E. coli (Figura 6-80).

La sfntesis eontinuada de algunas protefnas virieas puede

transformar a las eelulas en eaneerosas 57
Las eelulas animales, asi como las bacterias, pueden ofrecer una alternativa de
erecimiento lftico a los virus. Las celulas permisivas permiten a los virus DNA
multiplicarse lfticamente, 10 cual destruye la celula. Las celulas no permisivas
permiten entrar a los virus DNA pero no les permiten multiplicarse lfticamente;
en un pequeno porcentaje de estas celulas, el cromosoma virico puede integrarse
en el genoma de la celula huesped, donde es replicado can el cromosoma hues-
ped, 0 puede formar un plasmido -una moltkula circular de DNA- que se replica
de una forma controlada sin matar a la celula. Algunas veces estas infecciones
no permisivas producen un cambio genetico en la celula huesped, llevandola a

Virus, plasmidosy elementos geneticos transponibles 301

 celula bacteriana Figura 6-80 Cicio vital del
bacteri6fago lambda. EI genoma
cromosoma huesped
lambda contiene unos 50 000 pares de
nucle6tidos y codifica unas 50
bacteriofago , ~ protefnas. Su DNA de doble cadena
lambda ADSORCION DE LA CELULA
HUESPED E INYECCION DEL DNA
puede presentarse en forma lineal y en
forma circular. Tal como muestra la
figura, en la bacteria E. coli el
bacteri6fago se puede multiplicar por
via Utica 0 por via lisogenica. Cuando
el bacteri6fago se hace crecer en
1 EL DNA ADOPTA FORMA CIRCULAR
estado lisogenico, una lesi6n de la
celula hace que el DNA virico
integrado (provirus) salga del
cromosoma huesped e inicie el
INTEGRACION DEL DNA
EN EL CROMOSOMA
HUESPED
r acontecimiento
de induccion
SfNTESIS DE LAS
PROTEfNAS VIRICAS
NECESARIAS PARA
LA FORMACION DE
LOS NUEVOS VIRUS
crecimiento Utico. La entrada y salida
del DNA del cromosoma son
acontecimientos de recombinaci6n
genetica especificos de lugar,
catalizados por la protefna integrasa

)
de lambda (vease Figura 6-68).

DIVISION CELULA~
REPLICACION RAplDA

j DEL DNA VfRICO L1BRE

Y EMPAQUETAMIENTO
EN PARTICULAS VIRICAS

LA L1SIS CELULAR LIBERA

EL DNA VfRICO INTEGRADO SE REPLICA
1 UN GRAN NUMERO DE

.z,-;,
JUNTO CON EL CROMOSOMA HUESPED VIRUS L1BRES
PRODUCIENDO NUEVAS COPIAS DE DNA
VfRICO INTEGRADO

vfA L1S0GENICA VfALfTICA

proliferar de una forma descontrolada, transformandose pues en su equivalente

canceroso. En este caso, el virus DNA se denomina virus DNA tumoral y el pro-
ceso transformaci6n neopldsica mediada por virus. Los virus tumorales de DNA
mas extensamente estudiados son dos papovavirus, el SV40 y el polioma. Su ca-
pacidad transformante se atribuye a algunas proteinas viricas que cooperan diri-
giendo las celulas quiescentes a proliferar -es decir, dirigen las celulas de la fase
Go a la fase S. En las celulas permisivas, el cambio a la fase S (la fase del ciclo ce-
lular en la que se sintetiza el DNA) hace que el virus disponga de todas las enzi-
mas replicantes de la celula huesped, enzimas que son necesarias para la sintesis
del DNA virico. La sintesis de estas proteina viricas por un provirus en una celula
no permisiva se produce superando algunos de los mecanismos normales de
control del crecimiento de la celula y de toda su descendencia. De esta manera se
sabe que algunos virus de DNA tumorales que infectan a humanos contribuyen
al desarrollo de algunos tipos de canceres humanos (aunque se sabe que en la
gran mayoria de canceres humanos no participan virus tumorales).

Los virus tumorales RNA son retrovirus58

Para uno de los grupos de virus RNA, el de los llamados virus tumorales RNA, la
infecci6n de una celula permisiva conduce a menudo a una liberaci6n no letal
(por gemaci6n) de virus hijos a partir de la superficie de la celula y simultanea-

302 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 5' Figura 6-81 Transcriptasa inversa.
hebra de RNA patr6n (A) Estructura tridimensional de la
el lugar activo de la
polimerasa sintetiza
enzima de HN-l (el virus del SlDA),
una hebra de DNA detenninada por cristalografia de rayos
X. (B) Vision esquemMica de un modelo

\
direcci6n del
desplazamiento
sobre su actividad sobre un RNA patron.
Notese que el dominio polimerasa
(aTrUlrilla) tiene un dominio RNAsa (raja)
de la enzima
unido covalentemente que degrada una
hebra de RNA en una Mlice RNAIDNA

\ Esta actividad ayuda a la polimerasa a

convertir la Mlice lnbrida inidal en una
doble Mlice de DNA (A, por cortesfa de
Tom Steitz; B, adaptado a partir de LA
Kohlstaedt et al., Science 256:1783-1790,
1992. 1992 theAAAS.)
(A) (B)

mente a un cambio genetico en la celula infectada que la transforma en cance- Figura 6-82 CicIo vital de un retrovirus.
rosa. EI mecanismo a traves del cuallos virus RNA pueden generar una altera- EI genoma del retrovirus consiste en una
ci6n genetica permanente no qued6 acIarado hasta que se descubri6 la enzima moIecula de RNA de unos 8500
transcriptasa inversa, la cual transcribe las cadenas de RNA de estos virus a nucleotidos; en cada partfcula virica se
DNA complementario que se integra en el genoma de la celula huesped. Los vi- hallan empaquetadas dos de estas
rus tumorales RNA -entre los que se cuentan el primer virus tumoral bien co- moleculas. La enzima transcriptasa
nocido, el virus del sarcoma de Rous- son miembros de una gran cIase de virus inversa es una DNA polimerasa que
conocida como retrovirus. Estos virus se denominan de esta manera porque en primero produce una copia de DNA a
una parte de su cicIo vital revierten los procesos normales de transcripci6n del partir de la molecula del RNA virico y
DNA a RNA. luego produce una segunda cadena de
DNA sobre la primera copia de DNA,
La enzima transcriptasa inversa es una DNA polimerasa poco habitual que
generando asf una copia de doble Mlice
puede utilizar como patr6n tanto RNA como DNA (Figura 6-81); esta codificada de DNA a partir del genoma de RNA La
por el RNA del retrovirus y se halla empaquetada dentro de cada capside virica integradon de este DNA de doble
durante la producci6n de nuevas particulas viricas. Cuando el RNA de una sola cadena en el cromosoma huesped,
cadena del retrovirus entra en la celula, la transcriptasa inversa transportada en catalizada por una protefna virica es
el interior de la capside primero hace una copia en DNA de la cadena de RNA, necesaria para la sfntesis de nuevas
dando lugar a una helice hibrida DNA-RNA que es utilizada por la misma enzi- moleculas de RNA virico por la RNA
rna para generar una doble helice de dos cadenas de DNA. Los dos extremos de polimerasa de la celula huesped.

INTEGRACION DE
LA COPIA DE DNA
EN EL CROMOSOMA
DNA HUESPED DNA integrado

DNA

RNA
LA TRANSCRIPTASA
INVERSA PRODUCE UNA
DOBLE HELICE DNNRNA
Y UNA DOBLE HELICE
DNNDNA c:
t
RNA

DNA

RNA
TRANSCRIPCION

muchas.~=~~~~=-
copias
1
-
de RNA

capside
TRADUCCION 1
1/ -
proteina de la capside \ \; ~'; ENSAMBLAJE DE MUCHAS
PARTfcULAS ViRICAS.
+
PENETRACION EN
LA CELULA Y PERDIDA
DE LA ENVOLTURA
~ ".1'. .
..., \'
proteina de la envoltura ~ ~ " . ,
CADA UNA CONTENIENDO
TRANSCRIPTASA INVERSA

+
transcriptasa inversa

Virus, plasmidos y elementos geneticos transponibles 303
la molecula de DNA lineal del virus son reconocidos por una integrasa codifica-
da por el virus, que cataliza la inserci6n del DNA virico en pnicticamente cual-
quier sitio del cromosoma celular del huesped (vease Figura 6-70). El siguiente
paso del proceso de infecci6n es la transcripci6n del DNA virieo integrado me-
diante una RNA polimerasa de la celula huesped, produciendo grandes cantida-
des de moIeculas de RNA viricos identicas al genoma original. Finalmente, estas
moleculas de RNA son traducidas generando una capside, una envoltura y pro-
teinas con actividad transcriptasa inversa. Estas proteinas se empaquetan con el
RNA generando nuevas particulas viricas que salen de la celula por gemaci6n de
la membrana plasmatica (vease Figura 6-82).
Tanto los virus tumorales RNA como los DNA transforman las celulas porque
la presencia permanente del DNA virico en la celula produce la sintesis de nuevas
proteinas que alteran el control de la proliferaci6n de la celula huesped. Los genes
que codifican estas proteinas se denominan oncogenes. A diferencia de los virus
tumorales DNA, cuyos oncogenes tipicamente codifican proteinas viricas esen-
ciales para la multiplicaci6n del virus, los oncogenes transportados por los virus
tumorales RNA son versiones modificadas de genes normales de la celula hues-
ped que no son necesarias para la replicaci6n del virus. Dado que en la capside
del retrovirus tinicamente se puede empaquetar una cantidad limitada de RNA, a
menudo las secuencias oncogenicas adquiridas reemplazan una parte esencial
del genoma del retrovirus. En los Capitulos 15 y 24 discutiremos de que forma
los oncogenes viricos han proporcionado indicios importantes sobre las causas
y sobre la naturaleza del cancer y de los mecanismos normales que controlan el
crecimiento y la divisi6n en los animales pluricelulares. Tambien discutiremos de
que manera la integraci6n al azar del DNA virico en los genomas puede alterar los
genes normales, afectando asi el comportamiento celular (vease Figura 24-24).

EI virus del SIDA es un retrovirus 59

En 1982 apareci6 una nueva enfermedad de transmisi6n sexual que fue asociada
a una forma no habitual de cancer (el sarcoma de Kaposi) y una gran variedad
de infecciones no habituales. Ambos problemas reflejan una severa deficiencia
del sistema inmunitario -especificamente de los linfocitos T colaboradores (T
helpers)- por 10 que la enfermedad se denomin6 sindrome de inmunodeficiencia
adquirida, SIDA (Acquired Immune Deficiency Syndrome, AIDS). Cultivando
linfocitos de pacientes en una fase inicial de la enfermedad, se aisl6 un retrovirus
que ahora se sabe que es el agente causal del SIDA, enfermedad que se ha dise-
minado rapidamente como una epidemia y que amenaza con causar la muerte
de millones de personas en todo el mundo.
El retrovirus, llamado virus de la inmunodeficiencia humana (HW, de Hu-
man Immunodeficiency Virus) entra en los linfocitos T colaboradores uniendose
a una proteina de membrana plasmcitica funcionalmente importante denomi-
nada CD4 (discutida en el Capitulo 23). El virus HN tiene dos caracteristicas que
Ie hacen especialmente mortifero. En primer lugar, el virus acaba matando las
celulas T colaboradoras que infecta en lugar de vivir en simbiosis con ellas como
hacen la mayoria de los demas retrovirus, y las celulas T colaboradoras son de
vital importancia en nuestra defensa contra la infecci6n. En segundo lugar, el
provirus tiende a permanecer en un estado de latencia en los cromosomas de
una celula infectada sin producir virus hasta que es activado por un suceso raro
y desconocido; esta habilidad de esconderse complica enormemente cualquier
intento de tratar la infecci6n con farmacos antiviricos.
La mayoria de la investigaci6n actual sobre el SIDA intenta entender el cicIo
vital de HIV. Ya se ha determinado la secuencia completa de nucIe6tidos del
RNA virico. Ello ha hecho posible identificar y estudiar cada una de las proteinas
que codifica. Se esta utilizando la estructura tridimensional de su transcriptasa
inversa (vease Figura 6-81) para colaborar en el diseno de nuevos farmacos que
inhiban la enzima. En la Figura 6-83 se presenta un mapa genetico de HN que
muestra los nueve genes de este retrovirus.

304 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 ~
Figura 6-83 Mapa del genoma del
HIV. El genoma consta de unos 9000
vif_~ nef

vpr

vpu
tat
nucle6tidos y contiene nueve genes,
cuyas localizaciones se seiialan en
verdey en rojo. Tres de los nueve genes
caperuza5~, IIIIIIIII~11IIII-113' (los verdes) son comunes a todos los
' - - - - - - - - - extremos repetidos - - - - - - - - - - ' .
retrovirus: gag codifica protefnas de
I 111111121 12 capside, env codifica protefnas de
gag 211121111 env envoltura y pol codifica la
pol transcriptasa inversa (vease Figura
6-81) y la integrasa (vease Figura 6-70).
EI genoma HlV es extraordinariamente
Algunos elementos transponibles estan estrechamente complejo, ya que contiene seis
pequeiios genes (en rojo) ademas de
relacionados con los retrovirus60 los tres (en verde) que normalmente
Debido a que muchos virus pueden entrar y salir de los cromosomas de sus celu- son necesarios para el ciclo vital del
las huesped, se cree que cualquier cromosoma grande debe contener varios pro- retrovirus. AI menos algunos de estos
virus. Probablemente estos genomas tambien contienen diversas secuencias pequeiios genes codifican protefnas
que regulan la expresi6n de genes
m6viles de DNA, que no forman partfculas viricas y que no pueden abandonar la
viricos y es tentador especular que es
celula. Estos elementos transponibles tienen una longitud media que oscila
esta complejidad extra 10 que hace a
desde algunos cientos a varios miles de pares de bases, y normalmente en cada HlV tan mortffero. Como indican las
celula hay multiples copias de ellos. Estos elementos pueden ser considerados lfneas rojas, para producir las
como diminutos panisitos que estan escondidos en los cromosomas. Ocasional- protefnas Rev y Tat hace falta que se
mente, cada elemento transponible puede activarse para desplazarse a otro lugar produzca maduraci6n del RNA
del DNA de la misma celula, un proceso denominado transposici6n catalizado (splicing, vease Figura 8-7).
por su propia enzima de recombinaci6n especifica de lugar. Estas integrasas,
tambien denominadas transposasas, a menudo estan codificadas en el DNA del
propio elemento de transposici6n. La mayoria de los elementos transponibles se
desplazan muy raramente (la mayorfa de los elementos de las bacterias, tan s610
una vez cada 105 generaciones celulares aproximadamente), por 10 que a menudo
resulta diffcil distinguirlos de partes no m6viles del cromosoma. No se conoce si
la activaci6n de su desplazamiento es muy rapida 0 no.
Las transposiciones se pueden producir por varios mecanismos. Una gran
familia de elementos transponibles utilizan un mecanismo que es indentico a
una parte del ciclo vital de un retrovirus. Estos elementos, denominados retro-
transposones, estan presentes en organismos tan diversos como las levaduras,
las moscas y los mamfferos. Uno de los retrotransposones mejor conocidos es el
denominado elemento Tyl de las levaduras. La primera etapa de su transposi-
ci6n es la transcripci6n de todo el elemento transponible, produciendo una copia
RNA del elemento, que tiene una longitud de mas de 5000 nucle6tidos. Este
transcrito codifica una enzima transcriptasa inversa que hace una copia de la
molecula de RNA a DNA de doble cadena a traves de un intermediario hfbrido
RNA/DNA que imita los primeros estadios del proceso de infecci6n por un retro-
virus (vease Figura 6-82). La analogfa continua ya que la molecula de DNA circular
utiliza una integrasa para integrarse en un lugar del cromosoma seleccionado al
azar. A pesar del enorme parecido con el retrovirus, el elemento Tyl no tiene una
envoltura proteica funcional, por 10 que s610 puede desplazarse por el interior
de una celula y de su progenie.

Otros elementos transponibles se transfieren directamente

a sf mismos desde un lugar a otro del genoma61
A diferencia de 10 que ocurre con los retrotransposones, muchos elementos
transponibles parecen no poder existir libres fuera del cromosoma del huesped;
las transposasas que catalizan sus desplazamientos pueden actuar sobre el DNA
del elemento transponible siempre que este este integrado en el cromosoma del
huesped. La transposasa se une a una corta secuencia que esta repetida en una
orientaci6n opuesta a cada extremo del elemento, permitiendo asf que estos ex-
tremos se puedan unir mientras se cataliza el posterior proceso de recombina-

Virus, phismidos y elementos geneticos transponibles 305

 cortas secuencias repetidas invertidas
intermediarios transitorios
_,I
- , \', _[
- cromosoma dador
elemento transponible en el
5'
+ 3~ vuelto a unir
cromosoma dador A ]
3' 5'
5'
3'
,
,
l 3' ~
& w_ _

/
3'

5'
cromosoma diana B
cortas secuencias repetidas de DNA
diana en el cromosoma B

ci6n. Para el caso de algunos elementos transponibles, el mecanismo de trans- Figura 6-84 Desplazamiento directo
posici6n difiere unicamente en que la moIecula lineal de DNA que se va a inte- de un elemento transponible de un
grar ha de ser eliminada de una moIecula de DNA mas larga, dejando una mues- Iugar a otro de un cromosoma. Los
ca en el cromosoma vacante (Figura 6-84). Posteriormente, esta muesca se elementos transponibles de este tipo
vuelve a soldar, pero en el proceso a menudo la secuencia de DNA es alterada, 10 pueden ser reconocidos por sus
"secuencias de DNA repetidas
cual produce una mutaci6n en el antiguo lugar del cromosoma.
invertidas" (en naranja) de sus
Otros elementos transponibles se replican cuando se desplazan. En el caso extremos. Diferentes experimentos
mejor estudiado, en primer lugar se genera una conexi6n covalente entre el ele- demuestran que la repetici6n de estas
mento transponible y un lugar diana seleccionado al azar; entonces esta cone- secuencias, las cuales pueden ser de
xi6n dispara la sfntesis localizada de DNA que genera una copia del elemento tan s610 20 nucle6tidos, es todo 10 que
transponible replicado insertada en un nuevo lugar del cromosoma, mientras necesitan para sufrir una
que la otra copia permanece en ellugar original (Figura 6-85). El mecanismo transposici6n mediante una
esta estrechamente relacionado con el mecanismo no replicativo que acabamos transposasa especial asociada con el
de describir y comienza casi de la misma manera; de hecho, algunos elementos elemento. El mecanismo mostrado
transponibles se pueden desplazar mediante ambos sistemas. aqui esta estrechamente relacionado
Ademas de desplazarse por sf mismos, todos los tipos de elementos transpo- con el utilizado por un retrovirus para
nibles pueden, de forma ocasional, desplazar 0 reordenar secuencias de DNA integrar su DNA de doble hebra en un
cromosoma (comparese con la Figura
vecinas del genoma de la celula huesped. Por ejemplo, frecuentemente generan
6-70). A pesar de que la hendidura
deleciones de secuencias adyacentes de nucle6tidos, 0 las transportan a otros
izquierda del cromosoma dador se
lugares. La presencia de elementos transponibles hace que las reordenaciones lIena, a menudo el proceso altera la
de las secuencias del DNA de los cromosomas sean mucho menos estables de 10 secuencia de DNA, generando una
que se habfa creido previamente, y probablemente los elementos transponibles mutaci6n en ellugar dador (no se
son responsables de muchos cambios evolutivos importantes del genoma (como muestra).
se discute en el Capitulo 8).
iTambien son importantes los elementos transponibles desde el punto de
vista evolutivo como los precursores mas antiguos de los virus? A pesar de que
casi con toda seguridad los precursores de los retrovirus fueron retrotransposo-
nes, todos los elementos transponibles actuales dependen muy claramente de los
mecanismos basados en las reacciones del DNA. Sin embargo, se cree que celulas
muy primitivas debieron tener genomas de RNA en lugar de DNA, de forma que
hemos de contemplar el metabolismo del RNA como el origen Ultimo de los virus.

Probablemente la mayoria de los virus evolucionaron

a partir de plasmidos62
Incluso los virus mas grandes, dependen en gran medida de sus celulas huesped
para la biosintesis: por ejemplo, no se conoce ningdn virus que sea capaz de sin-
tetizar sus propios ribosomas 0 de generar el ATP que necesita. Evidentemente,
por tanto, las celulas han debido desarrollarse antes que los virus. Probablemen-
te, los precursores de los primeros virus fueron pequenos fragmentos de acido
nucleico que desarrollaron la capacidad de multiplicarse de forma independien-
te de los cromosomas de sus celulas huesped. Estos elementos de replicaci6n in-
dependiente, llamados plasmidos, pueden replicarse indefinidamente fuera del
cromosoma huesped. Existen plasmidos de DNA y plasmidos de RNA y, como
ocurre con los virus, contienen una secuencia especial de nucle6tidos que actua

306 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

como origen de replicaci6n. Sin embargo, a diferencia de los virus, los plasmidos elemento genetico transponible
en un cromosoma
no pueden sintetizar una envoltura proteica y por 10 tanto no pueden desplazar-
se facilmente de una celula a otra.
Los primeros plasmidos RNA debieron parecerse a los viroides encontrados
en algunas celulas vegetales. Estas pequefias moleculas circulares de RNA de tan
s610 300 0 400 nucle6tidos de longitud se replican a pesar de que no codifican
ninguna protefna. Al no tener envoltura proteica, los viroides existen como mo- complejo proteico
leculas de RNA desnudo y tinicamente pasan de una planta a otra cuando las su-
perficies de las celulas dadora y aceptora se hallan alteradas, de forma que no 1 formado

existe una barrera de membrana para el paso de los viroides. Puede esperarse
que bajo la presi6n de la selecci6n natural, estos elementos de replicaci6n inde-
pendiente adquirieran secuencias de nucle6tidos de la celula huesped que les
facilitaran su propia multiplicaci6n, entre las que habrfa secuencias que codifi-
can protefnas. En efecto, algunos plasmidos actuales son bastante complejos,
codificando protefnas y moleculas de RNA que regulan su replicaci6n y protef-
nas que controlan su separaci6n en celulas hijas. Los mayores plasmidos cono-
cidos son cadenas circulares de doble helice de DNA de mas de 100 000 pares de 1
serie de complicados procesos en
bases de longitud. los cuales la secuencia de DNA
Probablemente, el primer virus apareci6 cuando un plasmido RNA adquiri6
un gen que codificaba una protefna de capside. Sin embargo, una capside puede
en un nuevo lugar I
transponible es replicada e insertada

contener una pequefia cantidad de acido nucleico; asf pues, un virus esta limita-
do al mlmero de genes que puede contener. Destinados a conseguir la maxima
utilidad de su limitado genoma, algunos pequefios virus evolucionaron solapan-
do genes, estrategia seglin la cual una zona de la secuencia de nucle6tidos que
codifica una protefna, es utilizada (en la misma 0 en otra pauta de lectura) para
codificar una segunda protefna. Otros virus desarrollaron capsides mayores, con
10 que pudieron acomodar mayor mlmero de genes.
Dotados de su habilidad tinica de transferir secuencias de acidos nucleicos a
traves de barreras de especie, los virus jugaron casi con toda seguridad un im-
portante papel en la evoluci6n de los organismos que infectaron. Muchos de
ellos se recombinaron frecuentemente con el genoma de su celula huesped y
con alglin otro genoma, y de esta forma, pudieron tomar al azar pequefias piezas
del cromosoma del huesped y trasladarlas a otras celulas 0 a otros organismos.
Ademas, las copias integradas del DNA virico (provirus) han llegado a convertir-
se en una parte normal del genoma de la mayorfa de los organismos. Como nueva copia insertada
ejemplos de provirus como estos pueden citarse la familia de bacteri6fagos
Figura 6-85 Desplazamiento
lambda y eillamado retrovirus end6geno, encontrado en numerosas copias en
repllcativo de un eleniento
el genoma de los vertebrados. El DNA virico integrado puede ser alterado de for- transponible en el interior de un
ma que ya no pueda producir un virus completo pero que todavia pueda codifi- cromosoma. EI elemento que se
car protefnas, algunas de las cuales pueden ser titiles para la celula huesped. Asf muestra se replica durante la
pues, tal como ocurre con el proceso de la reproducci6n sexual, los virus pueden transposici6n, de forma que su
acelerar la evoluci6n facilitando el mezclado de los acervos de genes. movimiento tiene lugar sin que el
El proceso por el cuallas secuencias de DNA se transfieren entre genomas elemento se escinda de su lugar
de diferentes celula huesped mediante un virus, se denomina transducci6n del original. Las dos secuencias repetidas
DNA. Algunos virus que transducen DNA con frecuencias particularmente altas, invertidas de DNA que nonnalmente
son utilizados en investigaci6n para trasladar genes de una celula a otra. Los vi- tlanquean los dos extremos de los
rus y sus parientes pr6ximos, los plasmidos y los elementos transponibles, tam- elementos transponibles, se indican en
naranja. AI iniciarse la transposici6n,
bien son importantes para la biologfa celular en muchos otros aspectos. Gracias
la transposasa corta una de las dos
a su relativa simplicidad, por ejemplo, los estudios sobre su reproducci6n han
cadenas de DNA a cada extremo del
progresado de una forma extraordinariamente rapida y han iluminado muchos elemento transponible, y entonces el
de los mecanismos geneticos basicos de la celula. Ademas, tanto los virus como elemento actua como patr6n para la
los plasmidos han sido elementos cruciales en el desarrollo de la tecnologfa del sfntesis de DNA. Esta sfntesis empieza
DNA recombinante, que describiremos en el Capitulo 7. por la adici6n de nucle6tidos a los
extremos 3' de las secuencias de DNA
del cromosoma. Se conocen mas
Resumen detalles de este proceso, pero son
Los virus son partfculas infecciosas formadas por una molkula de DNA 0 de RNA demasiado complejos para poder ser
(el genama vfricoJ empaquetada en una cdpside proteica, la cual, en el caso de los ilustrados aqul.

VIrUS, plasmidos y elementos geneticos transponibles 307

 virus recubiertos, estd rodeada por una membrana del tipo de una bicapa lipidica.
Tanto la estructura del genoma vlrico como sus sistema de replicaci6n varia consi-
derablemente de un tipo de virus a otro. Un virus puede multiplicarse unicamente
en el interior de una celula huesped, cuyos mecanismos geneticos controla en bene-
ficio de su propia reproducci6n. Un resultado habitual de la infecciOn vlrica es la
lisis de la celula infectada, con liberaci6n de partlculas vlricas infecciosas. En algu-
nos casos, sin embargo, el cromosoma vlrico se integra en un cromosoma de la celu-
la huesped, donde es replicado como un provirus con el genoma huesped. Se cree
que muchos virus han evolucionado a partir de pldsmidos, que son moleculas de
DNA 0 de RNA autorreplicantes pero sin la capacidad de envolverse por sl sOlas en
una cubierta proteica.
Los elementos transponibles son secuencias de DNA que se diferencian de los
virus en que unicamente son capaces de multiplicarse en el interior de su celula
huesped yen las celulas descendientes de ella; como los pldsmidos, no pueden exis-
tir de forma establefuera de las celulas pero a diferencia de los pldsmidos, normal-
mente se replican como una parte integrante de un cromosoma. Sin embargo, algu-
nos elementos transponibles estdn estrechamente relacionados con los retrovirus y
pueden desplazarse de un sitio a otro del genoma mediante la transcripci6n inversa
de un intermediario de RNA. A pesar de que tanto los virus como los elementos
transponibles pueden considerarse como partisitos, muchas de las reordenaciones
de las secuencias de DNA que ellos generan son importantes para la evoluci6n de
las celulas y de los organismos.

Bibliograffa 4. Cavarelli, J,; Moras, D. Recognition of tRNAs by amino-

General
Judson, H.F. The Eighth Day of Creation: Makers of the Re-
volution in Biology. New York: Simon & Schuster, 1979.
Lewin, B. Genes IV. Oxford, NY: Oxford University Press,
1990.
Stent, G.S.; Calendar, R. Genetics: An Introductory Narrati-
ve, 2nd ed. San Francisco: W.H. Freeman, 1978.
Watson, J.D.; Gilman, M.; Witkowski, J.; Zoller, M. Recombi-
nant DNA, 2nd ed. New York: W.H. Freeman, 1992.
Citas
1. Chamberlin, M. Bacterial DNA-dependent RNA poly-
merases. In The Enzymes, 3rd ed., Vol. 15B (P. Boyer,
ed.), pp. 61-108. New York: Academic Press, 1982.
Gralla, J.D. Promoter recognition and mRNA initiation
by Escherichia coliEscr 70 Methods Enzymol. 185:37-
54,1990.
Kerppola, T.K.; Kane, C.M. RNA polymerase: regulation
of transcript elongation and termination. FASEB ].
5(13):2833-2842, 1991.
2. Collado-Vides, J.; Magasanik, B.; Gralla, J.D. Control site
location and transcriptional regulation in Escherichia
coli. Microbiol. Rev. 55(3):371-394,1991.
Murphy, S.; Moorefield, B.; Pieler, T. Common mecha-
nisms of promoter recognition by RNA polymerases
II and III. Trends Genet. 5(4):122-126,1989.
Travers, A.A. Structure and function of E. coli promoter
DNA. Grc Grit. Rev. Biochem. 22(3):181-219,1987.
3. McClain, W.H. Transfer RNA identity. FASEB]. 7(1):72-
78,1993.
Rich, A; Kim, S.H. The three-dimensional structure of
transfer RNA Sci. Am. 238(1):52-62, 1978.
Sprinzl, M.; Hartmann, T.; Weber, J.; Blank, J.; Zeidler, R.
Compilation of tRNA sequences and sequences of
tRNA genes. Nucleic Acids Res. 17 Suppl.: 1-172, 1989.
acyl-tRNAsynthetases. FASEB]. 7(1):79-86,1993.
Freist, W. Mechanisms of aminoacyl-tRNA synthetases:
a critical consideration of recent results. Bioche-
mistry 28(17):6787-6795,1989.
Schimmel, P. Aminoacyl tRNA synthetases: general
scheme of structure-function relationships in the
polypeptides and recognition of transfer RNAs.
Annu. Rev. Biochem. 56:125-158, 1987.
5. Crick, F.H.C. The genetic code. III. Sci. Am. 215(4):55-62,
1966.
The Genetic Code. Gold Spring Harbor Symp. Quant.
BioI., Vol. 31, 1966.
Wong, J.T. Evolution of the genetic code. Microbiol. Sci.
5(6):174-181,1988.
6. Brimacombe, R. RNA-protein interactions in the Esche-
richia coli ribosome. Biochimie 73(7-8):927-936,
1991.
Stern, S.; Powers, T.; Changchien, L.-M.; Noller, H.F. RNA-
protein interaction in 30S ribosomal subunits: folding
and function of 16S rRNA Science 244(4906):783-790,
1989.
Yonath, A.; Wittman, H.G. Challenging the three-di-
mensional structure of ribosomes. Trends Biochem.
Sci. 14(8):329-335, 1989.
7. Nierhaus, K.H. The allosteric three-site model for the ri-
bosomal elongation cycle: features and future. Bio-
chemistry 29(21) :4997-5008, 1990.
Noller, H.F. Peptidyl transferase: protein, ribonucleo-
protein, or RNA? ]. Bacteriol. 175(17):5297-5300, 1993.
Watson, J.D. The involvement of RNA in the synthesis of
proteins. Science 140:17-26,1963.
8. Craigen, W,J.; Lee, C.C.; Caskey, C.T. Recent advances in
peptide chain termination. Mol. Microbiol. 4(6):861-
865,1990.
Tate, W.P.; Brown, C.M. Translational termination: "stop"
for protein synthesis or "pause" for regulation of gene
expression. Biochemistry 31 (9):2443-2450, 1992.

308 Capitulo 6 : Mecanismos geneticos basicos

 9. Gualerzi, e.O.; Pon, C.L. Initiation of mRNA translation
in prokaryotes. Biochemistry 29(25):5881-5889, 1990.
Hunt, T. The initiation of protein synthesis. Trends Bio-
chern. Sci. 5:178-181, 1980.
10. Jacques, N.; Dreyfus, M. Translation initiation in Esche-
richia coli: old and new questions. Mol. Microbiol.
4(7):1063-1067,1990.
Kozak, M. Comparison of initiation of protein synthesis
in procaryotes, eucaryotes, and organelles. Microbiol.
Rev. 47:1-45,1983.
Kozak, M. Structural features in eukaryotic mRNAs that
modulate the initiation of translation. ]. BioI. Chern.
266(30):19867-19870,1991.
Yoon, H.; Donohue, T.F. Control of translation initiation
in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Microbiol. 6(11):
1413-1419, 1992.
11. Hesketh, J.E.; Pryme, I.F. Interaction between mRNA, ri-
bosomes and the cytoskeleton. Biochem. ]. 277(Pt
1):1-10,1991.
Rich, A Polyribosomes. Sci. Am. 209(6):44-53, 1963.
Ryazanov, A.G.; Ovchinikov, L.P.; Spirin, A.S. Develop-
ment of structural organization of protein-synthesi-
zing machinery from prokaryotes to eukaryotes.
Biosystems 20(3):275-288,1987.
12. Hershey, J.W.B. Overview: phosphorylation and transla-
tion control. Enzyme 44(l-4):17-27, 1990.
Lindahl, L.; Hinnebusch, A Diversity of mechanisms in
the regulation of translation in prokaryotes and lo-
wer eukaryotes. Curro Opin. Genet. Dev. 2(5):720-726,
1992.
Merrick, W.e. Mechanism and regulation of eukaryotic
protein synthesis. Microbiol. Rev. 56(2):291-315,
1992.
13. Riis, B.; Rattan, S.I.; Clark, B.F.; Merrick, W.e. Eukaryo-
tic protein elongation factors. Trends Biochem. Sci.
15(11):420-424,1990
SolI, D. The accuracy of aminoacylation-ensuring the fi-
delity of the genetic code. Experientia 46(11-12):1089-
1096,1990.
Thompson, R.C. EFTu provides an internal kinetic stan-
dard for translational accuracy. Trends Biochem. Sci.
13:91-93,1988.
14. Jimenez, A. Inhibitors of translation. Trends Biochem.
Sci. 1:28-30, 1988.
Lord, J.M., Hartley, M.R.; Roberts, L.M. Ribosome inac-
tivating proteins of plants. Semin. Cell Bioi. 2(1):15-
22,1991.
Perentesis, J.P.; Miller, S.P.; Brodley, J.W. Protein toxin
inhibitors of protein synthesis. Biofactors 3(3):173-
184,1992.
15. Campbell, J.H. An RNA replisome as the ancestor of the
ribosome.]. Mol. Evol.32(1):3-5, 1991.
Lake, J.A Evolving ribosome structure: domains in ar-
chaebacteria, eubacteria, eocytes and eukaryotes.
Annu. Rev. Biochem. 54:507-530,1985.
Orgel, L.E. RNA catalysis and the origin of life. J. Theor.
BioI. 123:127-149, 1983.
16. Barnes, D.E.; Lindahl, T.; Sedgwick, B. DNA repair. Curro
Opin. Cell Bioi. 5(3):424-433, 1993.
Friedberg, E.C. DNA Repair. San Francisco: W.H. Free-
man, 1985.
WeYrick, R.; Buchwald, M. Mammalian DNA-repair ge-
nes. Curro Opin. Genet. Dev. 3(3):470-474,1993.
Bibliograffa
17. Behe, M.J. Histone deletion mutants challenge the mo-
lecular clock hypothesis. Trends Biochem. Sci. 15(10):
374-376,1990.
Wilson, AC.; Carlson, S.S.; White, T.]. Biochemical Evo-
lution. Annu. Rev. Biochem. 46:573-639, 1977.
Wilson, A.C.; Ochman, H.; Prager, E.M. Molecular time
scale for evolution. Trends Genet. 3:241-247,1987.
18. Drake, J.W. Comparative rates of spontaneous muta-
tion. Nature 221:1132, 1969.
Drake, J.W. Spontaneous mutation. Annu. Rev. Genet.
25:125-146,1991.
19. Ohta, T.; Kimura, M. Functional organization of genetic
material as a product of molecular evolution. Nature
233:118-119, 1971. (Las frecuencias de mutaci6n li-
mitan elmimero maximo de genes en el organismo.)
Smith, K.C. Spontaneous mutagenesis: experimental, gene-
tic and other factors. Mutat. Res. 277(2): 139-16, 1992.
Vulliamy, T.; Mason, P.; Luzzatto, L. The molecular basis of
glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency. Trends
Genet. 8(4):138-143,1992.
20. Loomis, W.F. Similarities in eukaryotic genomes. Compo
Biochem. Physiol. 95B(1):21-27, 1990.
21. Lindahl, T. Instability and decay of the primary structu-
re of DNA Nature 362(6422):709-715,1993.
Schrodinger, E. What Is Life? Cambridge, UK: Cambrid-
ge University Press, 1945.
22. Kornberg, A; Baker, TA. DNA Replication, 2nd ed. New
York: W.H. Freeman, 1992. (Los Capftulos 4 y 6 des-
criben las DNA polimerasas; el Capitulo 9 describe la
DNA ligasa; el Capitulo 21 abarca la enzimologia de
la reparaci6n del DNA)
23. Hoeijmakers, J.H. Nucleotide excision repair I: from E.
coli to yeast. Trends Genet. 9(5):173-177,1993.
Hoeijmakers, J.H. Nucleotide excision repair II: from E.
coli to mammals. Trends Genet. 9(6):211-217, 1993.
Sancar, AZ.; Sancar, G.B. DNA repair enzymes. Annu.
Rev. Biochem. 57:29-67,1988.
24. Elledge, S.J.; Zhou, Z.; Allen, J.B. Ribonucleotide reduc-
tase: regulation, regulation, regulation. Trends Bio-
chern. Sci. 17(3):119-123, 1992.
Walker, G.C. Inducible DNA repair systems. Annu. Rev.
Biochem. 54:425-457,1985.
Witkin, E.M. RecA protein in the SOS response: milesto-
nes and mysteries. Biochimie 73(2-3):133-141,1991.
25. Perutz, M.F. Frequency of abnormal human haemoglo-
bins caused by C-7T transitions in CpG dinucleoti-
des. J. Mol. BioI. 213(2):203-206,1990.
26. Baker, T.A.; Wickner, S.H. Genetics and enzymology of
DNA replication in Escherichia coli. Annu. Rev. Genet.
26:447-477,1992.
Kornberg, A; Baker, TA. DNA Replication, 2nd ed. New
York: W.H. Freeman, 1992.
So, AG.; Downey, K.M. Eukaryotic DNA replication.
Crit. Rev. Biochem. Mol. BioI. 27(1-2):129-155,1992.
27. Linn, S. How many pols does it take to replicate nuclear
DNA? Cell 66(2):185-187, 1991.
Meselsohn, M.; Stahl, F.W. The replication of DNA in E.
coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 44:671-682, 1958.
Young, M.C.; Reddy, M.K.; von Hippel, P.H. Structure and
function of the bacteriophage T4 DNA polymerase holo-
enzyme. Biochemistry 31 (37):8675-8690, 1992.
28. Inman, R.B.; Schnos, M. Structure of branch points in repli-
cating DNA: presence of single-stranded connections in
lambda DNA branch points.]. Mol. BioI. 56:319-325, 1971.
309
 Ogawa, T.; Okazaki, T. Discontinuous DNA replication.
Annu. Rev. Biochem. 49:421-457,1980.
Thommes, P.; Hubscher, U. Eukaryotic DNA replica-
tion. Enzymes and proteins acting at the fork. Eur. ].
Biochem. 194(3):699-712, 1990.
29. Echols, H.; Goodman, M.F. Fidelity mechanism in DNA
replication. Annu. Rev. Biochem. 60:477-511, 1991.
Fersht, A.R Enzymatic editing mechanisms in protein
synthesis and DNA replication. Trends Biochem. Sci.
5:262-265, 1980.
Goodman, M.F.; Creighton, S.; Bloom, L.B.; Petruska, J.
Biochemical basis of DNA replication fidelity. Crit.
Rev. Biochem. Mol. BioI. 28(2):83-126,1993.
30. Crouch, RJ. Ribonuclease H: from discovery to 3D
structure. New Bioi. 2(9):771-777, 1990.
Kaguni, L.S.; Lehman, I.R Eukaryotic DNA polymerase-
primase: structure, mechanism and function. Bio-
chim. Biophys. Acta 950(2):87-101,1988.
Rowen, L.; Kornberg, A. Primase, the dnaG protein of
Escherichia coli: an enzyme which starts DNA chains.
]. Bioi. Chern. 253:758-764, 1978.
31. Lohman, T.M. Helicase-catalyzed DNA unwinding. ].
BioI. Chern. 268(4):2269-2272, 1993.
Meyer, RR; Laine, P.S. The single-stranded DNA-bind-
ing protein of Escherichia coli. Microbiol. Rev.
54(4):342-380, 1990.
Thommes, P.; Hubscher, U. Eukaryotic DNA helicases:
essential enzymes for DNA transactions. Chromoso-
rna 101(8):467-473, 1992.
32. Kong, x.-P.; Onrust, R; O'Donnell, M.; Kuriyan, J.
Three-dimensional structure of the beta subunit of E.
coli DNA polymerase III holoenzyme: a sliding DNA
clamp. Cell 69(3):425-437, 1992.
33. Alberts, B.M. Protein machines mediate the basic gene-
tic processes. Trends Genet. 1:26-30, 1985.
Nossal, N.G. Protein-protein interactions at a DNA rep-
lication fork: bacteriophage T4 as a model. FASEB].
6(3):871-878,1992.
Stukenberg, P.T.; Studwell-Vaughan, P.S.; O'Donnell, M.
Mechanism of the sliding beta-clamp of DNA polyme-
rase III holoenzyme.]. Bioi. Chern. 266(17):11328-11334,
1991.
34. Barras, F.; Marinus, M.G. The great GATC: DNA methy-
lationinE. coli. Trends Genet. 5(5):139-143, 1989.
Heywood, LA.; Burke, J.F. Mismatch repair in mamma-
lian cells. Bioessays 12(10):473-477, 1990.
Modrich, P. Methyl-directed DNA mismatch correction.
]. BioI. Chern. 264(12):6597-6600, 1989.
35. Echols, H.Nucleoprotein structures initiating DNA re-
plication, transcription, and site-specific recombina-
tion.]. BioI. Chern. 265(25):14697-14700,1990.
Georgopoulos, C. The E. coli dnaA initiation protein, a pro-
tein for all seasons. Trends Genet. 5(10):319-321, 1989.
Salas, M. Protein-priming of DNA replication. Annu.
Rev. Biochem. 60:39-71,1991.
36. Drlica, K. Bacterial topoisomerses and the control of
DNA supercoiling. Trends Genet. 6(12):433-437, 1990.
Sternglanz, R DNA topoisomerases. CU". Opin. Cell
Bioi. 1(3):533-535, 1989.
Wang, J.C~ DNA topoisomerases: why so many? ]. Bioi.
Chern. 266(11):6659-6662, 1991.
37. Gruss, C.; Sogo, J.M. Chromatin replication. Bioessays
14(1):1-8, 1992.
310 Capitulo 6: Mecanismos geneticos basicos
Wang, T.S.-F. Eukaryotic DNA polymerases. Annu. Rev.
Biochem. 60:513-552,1991.
38. Roeder, G.S. Chromosomes synapsis and genetic re-
combination: their roles in meiotic chromosome se-
gregation. Trends Genet. 6(12):385-389,1990.
Sadowski, P.D. Site-specific genetic recombination:
hops, flips and flops. FASEB]. 7(9):760-767, 1993.
Whitehouse, H.L.K. Genetic Recombination: Under-
standing the Mechanisms. New York: Wiley, 1982.
39. Camerini-Otero, RD.; Hsieh, P. Parallel DNA triplexes,
homologous recombination, and other homology-
dependent DNA interactions. Cell 73(2):217-223,
1993.
Smith, G.R Homologous recombination in E. coli: mul-
tiple pathways for multiple reasons. Cell 58(5):807-
809,1989.
West, S.C. Enzymes and moleclar mechanisms of gene-
tic recombination. Annu. Rev. Biochem. 61:603-640,
1992.
40. lloyd, RG.; Sharples, G,J. Genetic analysis of recombina-
tion in prokaryotes. CU". Opin. Genet. Dev. 2(5):683-
690,1992.
Lohman, T.M. Escherichia coli DNA helicases: mecha-
nisms of DNA unwinding. Mol. Microbiol. 6(1):5-14,
1992.
Weinstock, G.M. General recombination in Escherichia
coli. In Escherichia coli and Salmonella Typhimu-
rium: Cellular and Molecular Biology (EC. Neid-
hardt, ed.), pp. 1034-1043. Washington, DC: Ameri-
can Society for Microbiology, 1987.
41. Bradley, S.G. DNA reassociation and base composition.
Society for Applied Bacteriology Symposium Series
8:11-26,1980.
Gotoh, O. Prediction of melting profiles and local helix sta-
bility for sequenced DNA. Adv. Biophys. 16:1-52, 1983.
Wetmur, J.G.; Davidson, N. Kinetics of renaturation of
DNA.]. Mol. BioI. 31:349-370, 1968.
42. Eggleston, A.K.; Kowalczykowski, S.C. An overview of
homologous pairing and DNA strand exchange pro-
teins. Biochimie 73(2-3):163-176, 1991.
Kowalczykowski, S.C. Biochemical and biological func-
tion of Escherichia coli RecA protein: behavior of mu-
tant RecA proteins. Biochimie 73(2-3):289-304, 1991.
Roca, A.I., Cox, M.M. The RecA protein: structure and func-
tion. Crit. Rev. Biochem. Mol. BioI. 25(6):415-456, 1990.
43. Holliday, R The history of the DNA heteroduplex. Bioes-
says 12(3):133-142,1990.
Kowalczykowski, S.c. Biochemistry of genetic recombina-
tion: energetics and mechanism of DNA strand exchan-
ge.AnnlL Rev. Biophys. Biophys. Chern. 20:539-575, 1991.
Messelsohn, M.S.; Radding, C.M. A general model for ge-
netic recombination. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72:358-
361,1975.
44. Fogel, S.; Mortimer, RK.; Lusnak, K. Mechanisms of
meiotic gene conversion or "wanderings on a foreign
strand." In The Molecular Biology of the Yeast Sac-
charomyces Cerevisiae: Life Cycle and Inehritance
(J.N. Strathern, ed.), pp. 289-340. Cold Spring Harbor,
NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1981.
Kobayashi, I. Mechanisms for gene conversion and ho-
mologous recombination: the double-strand break
repair model and the successive half crossing-over
model. Adv. Biophys. 28:81-133, 1992.
 Kourilsky, P. Molecular mechanisms of gene conversion
in higher cells. Trends Genet. 2:60-62, 1986.
45. Radman, M. Mismatch repair and the fidelity of genetic
recombiantion. Genome 310):68-73, 1989.
Rayssiguier, C.; Thaler, D.S.; Radman, M. The barrier to
recombination between Escherichia coli and Salmo-
nella typhimurium is disrupted in mismatch repair
mutants. Nature 342(6248):396-401, 1989.
46. Landy, A Dynamic, structural, and regulatory aspects of
lambda site-specific rcombination. Annu. Rev. Bio-
chem. 58:913-949, 1989.
O'Gorman, S.; Fox, D.T.; Wahl, G.M. Recombinase-me-
diated gene activation and site-specific integration in
mammalian cells. Science 251(4999):1351-1355,1991.
Stark, W.M.; Boocock, M.R; Sherratt, D.J. Catalysis by
site-specific recombinases. Trends Genet. 8(12):432-
439,1992.
47. Mizuuchi, K. Transpositional recombination: mecha-
nistic insights from studies of mu and other ele-
ments.Annu. Rev. Biochem. 61:1011-1051, 1992.
48. Borg, D.E.; Howe, M.M., ed. Mobile DNA Washington,
DC: American Society for Microbiology, 1989.
Ioklik, W.K., ed. Virology, 2nd ed. Norwalk, CT: Apple-
ton & Lange, 1985.
Levine, a. Viruses. New York: Scientific American Li-
brary, 1992.
49. Hershey, AD.; Chase, M. Independent functions of viral
protein and nuclec acid in growth of bacteirphage. ].
Gen. Physiol. 36:39-56, 1952.
Brock, T.D. The Emergence of Bacterial Genetics. Cold
Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 1990. (El Capitulo 6 ofrece una perspectiva his-
t6rica de la investigaci6n sobre bacteri6fagos.)
50. Fields, B.N., ed. VIrology. New York: Raven Press, 1985.
(Los Capitulos 3 y 4 discuten la estructura de la capsi-
de virica y las membranas viricas, respectivamente.)
Simons, K.; Garoff, H.; Helenius, A How an animal virus
gets into and out its host cell. Sci. Am. 246(2):58-66, 1982.
51. Fields, B.N., ed. VIrology. New York: Raven Press, 1985.
(El Capitulo 5 resume los tipos de genomas viricos.)
Gierer, A; Schramm, G. Infectivity of ribonucleic acid from
tobacco mosaic virus. Nature 177:702-703, 1956.
Strauss, E.G.; Strauss, I.H. RNA viruses: genome structu-
re and evolution. Curro Opin. Genet. Dev. 1(4):485-
493,1991.
52. Borowiec, IA; Dean, F.B.; Bullock, PA; Hurwitz, I. Binding
and unwinding-how T antigen engages the SV40 origin
ofDNA replication. Cell60(2):181-184, 1990.
Carlson, K.; Overvatn, A Bacteriophage T4 endonuclea-
ses II and N, oppositely affected by dCMP hydroxy-
methylase activity, have different roles in the degra-
dation and in the RNA polymerase-dependent
replication of T4 cytosine containing DNA Genetics
114(3):669-685,1986.
Cohen, S.S. Vrrus-induced Enzymes. New York: Colum-
bia University Press, 1968.
53. David, c.; Gargouri-Bouzid, R; Haenni, A-L. RNA repli-
cation of plant viruses containing an RNA genome.
Prog. Nucleic Acid Res. Mol. BioI. 42:157-227,1992.
Bibliograffa
Kornberg, A; Baker, T.A DNA Replication, 2nd ed. New
York: W.H. Freeman, 1992. (Los Capitulos 17 y 19
describen la replicaci6n de los fagos DNA y virus ani-
males.)
54. Kielian, M.; Iungerwirth, S. Mechanisms of enveloped
virus entry into cells. Mol. Bioi. Med. 70):17-31,1990.
White, I.M. Membrane fusion. Science 258(5084):917-
924,1992.
Zhao, H.; Garoff, H. Role of cell surface spikes in alpha-
virus budding.]. Virol. 66(12):7089-7095, 1992.
55. Griffiths, G.; Rottier, P. Cell biology of viruses that as-
semble along the biosynthetic pathway. Semin. Cell
Bioi. 3(5):367-381,1992.
56. Campbell, AM. Thirty years ago in genetics: prophage
insertion into bacterial chromosomes. Genetics
133(3):433-438, 1993.
Friedman, D.1. Interaction between bacteriophage
lambda and its Escherichia coli host. Curro Opin. Ge-
net. Dev. 2(5):727-738, 1992.
57. Tooze, I. DNA Tumor Viruses. Molecular Biology of Tu-
mor Viruses, 2nd ed., Part 2. Cold Spring Harbor, NY:
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1980. (El Capi-
tulo 4 describe la transformaci6n por los virus SV40 Y
polioma.)
zur Hausen, H. Viruses in human cancers. Science
254(5035):1167-1173,1991.
58. Baltimore, D. VIral RNA-dependent DNA polymerase.
Nature 226:1209-1211, 1970.
Varmus, H. Retroviruses. Science 240:1427-1435, 1988.
Whitcomb, I.M.; Hughes, S.H. Retroviral reverse tran-
scription and integration: progress and problems.
Annu. Rev. Cell Bioi. 8:275-306, 1992.
59. Gallo, RC.; Montagnier, L. The clrronology of AIDS re-
search. Nature 326(6112):435-436, 1987.
60. Boeke, I.D.; Chapman, K.B. Retrotransposition mecha-
nisms. Curro Opin. Cell Bioi. 3(3):502-507, 1991.
Corces, V.G.; Geyer, P.K. Interactions of retrotranspo-
sons with the host genome: the case of the gypsy ele-
ment of Drosophila. Trends Genet. 7(3):86-90, 1991.
Sandmeyer, S.B. Yeast retrotransposons. Curro Opin.
Genet. Dev. 2(5):705-711, 1992.
61. Gierl, A.; Frey, M. Eukaryotic transposable elements
with short terminal inverted repeats. Curro Opin. Ge-
net. Dev. 1(4):494-497, 1991.
Haniford, D.B.; Chaconas, G. Mechanistic aspects of
DNA transposition. Curro Opin. Genet. Dev. 2(5):698-
704,1992.
Mizuuchi, K. Mechanism of transposition of bacterio-
phage mu: polarity of the strand transfer reaction at
the initiation of transposition. Cell 39:395-404, 1984.
62. Levine, A Vrruses. New York: Scientific American li-
brary, 1992. (El Capitulo 10 discute la evoluci6n de
los virus.)
Novick, R.P. Plasmids. Sci. Am. 243(6):102-127,1980.
Symons, RH. The intriguing viroids and virusoids: what
is their information content and how did they evolve?
Mol. Plant-Microbe Interact. 4(2):111-121,1991.
311
Tecnologia del DNA
recolDbinante

Hasta principios de los afios 70, el DNA era la molecula de la celula que planteaba
mas dificultades para su anaIisis bioqufmico. Enormemente larga y qufmicamen-
te mon6tona, la secuencia de nucle6tidos del DNA tan s6lo podia ser estudiada a
traves de caminos indirectos -tales como la determinaci6n de la secuencia de las
protefnas 0 del RNA, 0 el anaIisis genetico. Actualmente la situaci6n ha cambiado
por completo. De ser la macromoIecula celular mas diffcil de analizar, el DNA ha
pasado a ser la mas facil de estudiar. Hoy en dfa es posible separar regiones deter-
minadas del DNA, obtenerlas en cantidades practicamente ilimitadas y determi-
nar su secuencia de nucle6tidos a una velocidad de varios cientos de nucle6tidos
al dfa. Mediante variaciones sobre estas mismas tecnicas, un gen puede ser alte-
rado (sometido a ingenierfa) y ser transferido a celulas en cultivo 0 (con mas difi-
cultad) a la linea germinal de animales, donde el gen modificado se incorpora
como parte funcional y permanente del genoma.
Estos adelantos tecnicos han tenido un impacto espectacular en la biologfa
celular, permitiendo el estudio de las celulas y sus macromoIeculas mediante
sistemas que antes eran inimaginables. Por ejemplo, han proporcionado la ma-
nera de determinar las funciones de muchas protefnas recien descubiertas y de
sus dominios y de desenmarafiar los complejos mecanismos que regulan la ex-
presi6n genica en eucariotas. Tambien han hecho posible disponer de grandes
cantidades de protefnas minoritarias que regulan el desarrollo y la proliferaci6n
celular. A nivel comercial resulta muy prometedor el uso de tecnicas de este tipo
para la producci6n a gran escala de hormonas proteicas y de vacunas que antes
eran disponibles I1nicamente con un gran coste y trabajo.
La tecnologla del DNA recombinante constituye una mezcla de tecnicas, al-
gunas de las cuales son nuevas y otras han sido adoptadas de otros campos de la
ciencia, como la genetica microbiana (vease Tabla 7-1). Las mas importantes son:

1. la rotura especffica del DNA mediante nucleasas de restriccion, que facilita

enormemente el aislamiento y la manipulaci6n de los genes individuales;
2. la secuenciacion rapida de todos los nucle6tidos de un fragmento purifica-
do de DNA, que hace posible determinar los limites precisos de un gen y
de la secuencia de aminoacidos que codifica;
3. la hibridacion de los dcidos nucleicos que hace posible localizar secuencias
determinadas de DNA 0 de RNA, con una gran exactitud y sensibilidad, uti-
lizando la capacidad que tienen estas moleculas de unirse a secuencias
complementarias de otros acidos nucleicos;

313
 4. el clonaje del DNA, mediante el cual se puede conseguir que un fragmento
de DNA se integre en un elemento genico autorreplicante (pIasmido 0 vi-
rus) que habita en una bacteria, de tal manera que una molecula simple de
DNA puede ser reproducida generando muchos miles de millones de co-
pias identicas; y
5. la ingenieria genetica, mediante la cual se pueden alterar secuencias de
DNA produciendo versiones modificadas de los genes, los cuales se pue-
den reinsertar en celulas u organismos.
En este capftulo se describini como la tecnologfa del DNA recombinante ha
creado nuevas vias de aproximacion experimental que han revolucionado el es-
5' o@}[D{!J ~3'
tudio de la biologfa celular.
3'~~5'
CORTE

Fragmentaci6n, separaci6n y secuenciaci6n

de moleculas de DNA 1
Antes de los afios 70 parecfa imposible aislar un gen de un cromosoma. A dife-
rencia de las protefnas, los genes no existen en las celulas como entidades inde-

-
pendientes, sino como regiones de una molecula de DNA de gran tamafio. Aun-
que las moleculas de DNA se pueden fragmentar mecanicamente al azar en
pequefios trozos, un fragmento que contenga un gen aislado sera uno entre

,'~tl'
cientos de miles de otros fragmentos, indiferenciables por su tamafio. leomo se
puede purificar un gen? Debido a que todas las moleculas de DNA estan forma-
das por una mezcla aproximadamente equivalente de los mismos cuatro nucleo-
3'~~5'
tidos no pueden separarse, como se hace con las protefnas, segl1n procedimien-
CORTE

Tabla 7 -1 Algunas de las etapas principales del desarrollo de la tecnologia

"ii "
del DNA recombinante

1869 Miescher aisl6 por primera vez el DNA.

s
1944 Avery demostr6 que es el DNA y no la protefna el que contiene la 3'o@~5'
informaci6n genetica durante la transformaci6n bacteriana. CORTE
1953 Watson y Crick propusieron el modelo de la doble Mlice para la
estructura del DNA, basado en los resultados de rayos X de Franklin y
Willdns. Figura 7-1 Secuencias de nucle6tidos
del DNA reconocidas por cuatro
1957 Kornberg descubri6 la DNA polimerasa, la enzima que ahora se utiliza
para producir sondas de DNA marcadas. nucleasas de restricci6n ampliamente
utilizadas. Como ocurre en estos
1961 Marmur y Doty descubrieron la renaturalizaci6n del DNA, estableciendo
la especificidad y la posibilidad de las reacciones de hibridaci6n de los ejemplos, estas secuencias suelen
acidos nuclE~icos. tener seis pares de bases y ser
1962 Arber proporcion6 la primera evidencia de la existencia de las nucleasas "palindr6micas" (esto es, las
de restricci6n del DNA, que condujo a su posterior purrificaci6n y secuencias de ambas hebras son
utilizaci6n en la caracterizaci6n de la secuencia del DNA por parte de iguales entre sf si se gira la helice 180
Nathans y H. Smith. grados alrededor del centro de la corta
1966 Nirenberg, Ochoa y Khorana dilucidaron el c6digo genetico. regi6n de helice que es reconocida).
1967 Gellert descubri6 la DNA ligasa, la enzima utilizada para unir fragmentos Las enzimas cortan las dos cadenas de
de DNA. DNA en ellugar de la secuencia de
1972-1973 Se desarrollaron las tecnicas de clonaje del DNA en los laboratorios de reconocimiento 0 cerca de ella. En el
Boyer, Cohen, Berg y colaboradores, en la Universidad de Stanford y en caso de algunas enzimas como Hpa I,
la Universidad de California en San Francisco. el corte libera extremos romos; en
1975 Southern desarro1l6la hibridaci6n tras transferencia sobre gel, para la otros casos como por ejemplo Eco RI,
detecci6n de secuencias especfficas de DNA. Hind III y Pst I, el corte es escalonado y
1975-1977 Sanger y Barrell y Maxam y Gilbert desarrollaron metodos rapidos de crea extremos cohesivos. Las nucleasas
secuenciaci6n del DNA. de restricci6n se obtienen de varias
1981-1982 Palmiter y Brinster produjeron un raton transgenico; Spradling y Rubin especies de bacterias: Hpa I de
produjeron moscas del vinagre transgenicas. Hemophilus parainjluenzae, Eco HI de
1985 Mullis y colaboradores inventaron la reacci6n en cadena de la Escherichia coli, Hind III de
polimerasa (PCR, de Polimerase Chain Reaction). Hemophilus injluenzae y Pst I es de
Providencia stuartii.

314 Capftulo 7: Tecnologfa del DNA recombinante

tos basados en su diferente carga, composici6n 0 propiedades de uni6n. Ade- , ,,, i i i
TAAT
i 3'
5'
mas, aunque fuera posible disefiar un procedimiento de aislamiento, la cantidad
de DNA necesaria para aislar un gen en cantidad util para experimentos poste- 5' ,,, +
,,, , i i i
ATAT
i 3'
5'
31 I I
riares serfa muy elevada.
La soluci6n a todos estos problemas apareci6 con el descubrimiento de las
TTAA ,,,, i
AATT
3'
5'
endonucleasas de restricci6n. Estas enzimas, que pueden aislarse de bacterias, cor-
tan la molecula de DNA de doble cadena en lugares discretos definidos por la se-
,,,, i
TTAA 3'
5'
cuencia de nucle6tidos, produciendo fragmentos de DNA de doble cadena de ta-
uni6n
mafios definidos. Distintas especies de bacteria fabrican diferentes endonucleasas
de restricci6n con distintas especificidades de secuencia, y es relativarnente facil AATT
5' i i i i i i i i i 3'
encontrar una endonucleasa de restricci6n que libere un fragmento de DNA que 3' I 5'
incluya a un determinado gen. El tarnafio del fragmento liberado puede ser utiliza- TTAA
do para purificar parcialmente el gen de una mezcla. Mas importante aun, el frag- ,,,, i
TAAT
i i 3'
5'
mento de DNA sirve, frecuentemente, como material de partida para la produc~
ci6n del gen muy puro en cantidades ilimitadas mediante clonaje del DNA.
,,, , i
ATAT
3'
5'
+
Empezaremos esta secci6n explicando c6mo se utilizan las endonucleasas
de restricci6n para producir fragmentos de DNA, y c6mo estas moleculas de
i,,, i
TTAA
3'
5'
DNA (y otras) se separan en funci6n de su tamafio. A continuaci6n expondre-
mos c6mo, despues de purificar y amplificar el fragmento de DNA mediante clo- Figura 7-2 Muchos tipos de
naje, se puede determinar la secuencia en que se encuentran los nucle6tidos en nucleasas de restriccl6n producen
fragmentos de DNA con extremos
la molecula, mediante la secuenciaci6n.
cohesivos. Los fragmentos de DNA
que tengan los mismos extremos
Las endonucleasas de restricci6n cortan las moleculas de DNA cohesivos se pueden unir mediante
en secuencias nucleotfdicas especfficas2 apareamiento de bases
complementarias entre sus extremos
Muchas bacterias producen unas enzimas denominadas nucleasas de restric- cohesivos, tal como se ilustra en la
cion, que las protegen, degradando las moleculas de DNA que han sido trans- figura. En este ejemplo, los dos
portadas al interior de las bacterias par los virus. Cada enzima reconoce una fragmentos de DNA que se unen entre
secuencia especffica del DNA de entre cuatro y ocho nucle6tidos. Cuando estas sf fueron producidos por la nucleasa
secuencias se presentan en el genoma de la propia bacteria, estan "camufladas" de restricci6n Eco RI (vease
gracias a la metilaci6n de un residuo A 0 de un residuo C; cuando estas secuen- Figura 7-1).
cias se presentan en un DNA extrafio, generalmente no se hallan metiladas y son
por tanto atacadas por la nucleasa de restricci6n. Se han purificado muchas nu-
cleasas de restricci6n de diferentes especies bacterianas y actualmente existen
mas de 100 de estas enzimas comercializadas, la mayona de las cuales reconocen
diferentes secuencias de nucle6tidos.
Algunas endonucleasas de restricci6n cortan el DNA generando secuencias
cortas de DNA de cadena sencilla en los extremos del fragmento (Figura 7-1).
Este tipo de extremos se denomina cohesivo pues es complementario en secuen-
cia al que genera la misma endonucleasa de restricci6n en cualquier otro frag-
mento (Figura 7-2). Los extremos cohesivos permiten unir facilmente fragmentos
de DNA obtenidos con la misma endonucleasa de restricci6n (0 con otra que
genere los mismos extremos cohesivos). Las moleculas de DNA producidas me-
diante la uni6n de dos 0 mas fragmentos de DNA se denominan moleculas de
DNA recombinantes, y han hecho posible nuevas aproximaciones al estudio de
los procesos biol6gicos.

Los mapas de restricci6n muestran la distribuci6n de pequefias

secuencias nucleotfdicas a 10 largo del cromosoma3
Una nucleasa de restricci6n determinada cortara cualquier doble helice de DNA
extrafda de una celula, generando una serie de fragmentos de DNA (conocidos
como fragmentos de restriccion). Comparando los tamafios de los fragmentos de
restricci6n generados a partir de una regi6n genica determinada tras el trata-
miento con una combinaci6n de diferentes nucleasas de restricci6n, se puede
construir un mapa de restriccion de esta regi6n que muestre la localizaci6n de
cada punto de corte (de restricci6n) en relaci6n con los puntos de restricci6n ve-
cinos (Figura 7-3). Dado que cada nucleasa de restricci6n reconoce diferentes

Fragmentaci6n, separaci6n y secuenciaci6n de mohkulas de DNA 315

 EXPERIMENTO molecula de DNA de 10kb CONCLUSION: La enzima A corta cerca
de un extremo de la molecula. La enzima

Jl _,
B puede cortar tanto en el mismo extremo

(
...----- como cerca del otro extremo. EI tamaiio
de los fragmentos generados por ambas
enzimas actuando conjuntamente elimina
la primera alternativa y permite concluir que
el orden de corte de las nucleasas de
el corte con las nucleasas el corte con la nucleasa el corte con la nucleasa restricci6n es el que se muestra aqui.
de restricci6n A y B de restricci6n A genera de restricci6n B genera
conjuntamente genera dos fragmentos dos fragmentos A B
tres fragrentos 1 T T
1 2kb 5kb 3kb

2kb=== 2kb= 3kb= L- 10kb - - - - - '

3kb=== 8kb====== 7kb======

5kb====
suma = 10kb suma = 10kb suma = 10kb

secuencias cortas de DNA, un mapa de restricci6n refleja la disposici6n de se- Figura 7-3 Mapa de restrlcci6n.
cuencias de nucle6tidos especfficas en la regi6n. Esto significa que se pueden Sencillo ejemplo que ilustra c6mo se
comparar diferentes regiones de DNA (comparando sus mapas de restricci6n), sin distribuyen los lugares de corte de
tener que determinar sus secuencias de nucle6tidos. Por ejemplo, comparando diferentes nucleasas de restricci6n
los mapas de restricci6n que se presentan en la Figura 7-4, podemos determinar (conocidos como dianas de
restricci6n), unos respecto a otros,
que las regiones del cromosoma que codifican las cadenas de hemoglobina en el
sobre moltkulas de DNA de doble
hombre, en el orangutan y en el chimpance han permanecido fundamentalmente helice, dando lugar a un mapa de
inalteradas durante los entre 5 y 10 millones de afios transcurridos desde que es- restricci6n. (kb = kilobases; una
tas especies divergieron por primera vez. Los mapas de restricci6n tambien son abreviatura que designa tanto 1000
importantes para el clonaje del DNA y para la ingenieria genetica, permitiendo nucle6tidos como 1000 pares de
localizar un gen de interes en un fragmento de restricci6n determinado y facili- nucle6tidos.)
tando asf su aislamiento.

abc 9 dd* ~f i hbmihmf 9 hbmihc ma d b 9 fe

humano ~;il\l1Ul!_~ll\lli:.J.J.:III1II~~nlll1llll1lIlblU ".l.[((lm~lId.2bllJ.I!.lllIlIiLIlIIIIIIIIIlIIIll.I.111lII1II1II
1212 11111

e
abc 9 d mf i hbmihmf 9 hbmihc ma d gOb 9 f e
chimpance ~.ffi~mn$_bl\lnHn"1!1 Hlmlml~flllfli ! 111.illll bIII .8 11_ _IIIJJlIl2IlI.n 1.1(( , J .211IUIllII1.U~U.IIIUIlIIIII2I1212U ~111'221

b c gad h b ihef i 9 h b ihc a d 9 f e

chimpance
Ii mwmooll mn Hlntl1 81 J I I 1111 IBn 1~III~U_.JI_1 I_If(( J L I_I! , ! I 2.nbn I I III 11111s1I11 III
pigmeo

abe 9 d ~f i hbmih~f 9 i hbmihc ma d ~ 9 f

gorila ~\W._l\I\\\II\I\_ _l.a~a_~_~."11Jdlll.IAII ~llnJ.11II 1121111121111_121111. 11111111111111111

orangutan

b
b c 9
_ l I f i l i l l i l .11111111111111 111m .1.llb II Iiii III I

a e 9 d
d a ih f
J. 111111 1II.11I111~1_11ll1
f
m

h
.1
bmihf i h

b hf
bmih ma d
b&~.11 .blmCJIIU~1111

b he d
cb 9
Ilkllll 211 1111

b 9 a f
III I 11_ 1111 1111111
f
III

gib6n b11ll1lll1UII_11211 III dU1111 II III I II 11II1ll11I1I~1ll_!UII1212111121 bIIbl 11.1 IC .11I~!Inb..III.111 Ibab _1211111 1111111111112111111i11

o 10 20 30 40
miles de pares de nucle6tidos de DNA

Figura 7-4 Mapas de restrlcci6n de DNA humano y de DNA procedente de varios primates, de un grupo de genes que
codiflcan la hemoglobina. En cada mapa, los dos cuadrados rojos indican las posiciones del DNA que corresponden a
los dos genes de la a-globina. Cada letra representa un punto de corte de una nucleasa de restricci6n diferente. Como
en la Figura 7-3, la 10calizaci6n de cada uno de los cortes se determin6 comparando los tamafios de los fragmentos de
DNA generados al tratar los DNA con las diferentes nucleasas de restricci6n tanto de forma individual como en distintas
combinaciones. Es de destacar que el chimpance, el primate mas pr6ximo al hombre, presenta el mapa de restricci6n
mas parecido, mientras que el gib6n, que de los considerados es el mas alejado, presenta el mapa mas divergente
-incluyendo tres inserciones de DNA. (Por cortesfa de Elisabeth Zimmer y Allan Wilson.)

316 Capitulo 7: Tecnologia del DNA recombinante

 Figura 7-5 La electroforesis en gel es una poderosa tecnica que permite separar carriles
moleculas de DNA en funci6n de su tarnaiio. En los tres ejemplos que se presentan 1 234
-6000
aquf, la electroforesis va de arriba a abajo, de forma que las moltkulas mayores de
DNA -y por ello de movimiento mas lento- estan cerca de la parte superior del gel.
En (A) se utiliza un gel de poliacrilamida de poros pequefios para fraccionar
moltkulas de DNA de cadena l1nica. En el rango de tamafios de 10 a 500 nucle6tidos,
pueden separarse unas de otras las moltkulas cuyo tamafio se diferencia en tan s610
un nucle6tido. En este ejemplo, los carriles dell al4 representan los productos de
cuatro reacciones diferentes de secuenciaci6n de DNA. El DNA a secuenciar se ha
replicado artificialmente a partir de un extremo fijo hacia un punto variable de
terminaci6n, produciendo una serie de replicas parciales de longitud variada. (En la pares de
nucle6tidos
Figura 7-8 se explica c6mo se obtiene este conjunto de replicas parciales.) En el carril
1 se encuentran las replicas parciales que terminan en G; en el carri121as que
terminan en A; en el carri13 aquellas terminadas en T; y en el carril 4 las que
terminan en C. Debido a que las moleculas de DNA del experimento se encuentran
marcadas radiactivamente sus posiciones se pueden determinar mediante
autorradiograffa, como se muestra. En (B) se utiliza un gel de agarosa de poros de
tamafio medio para separar moleculas de DNA de doble hebra. Este metodo es mas
utilizable en el rango de tamafios de 300 a 10 000 pares de nucle6tidos. Estas
moleculas de DNA son fragmentos de restricci6n producidos a partir del genoma de
un virus bacteriano, y se han detectado mediante la fluorescencia que emiten -1000
despues de ser tefiidos con bromuro de etidio. En (C) se ha utilizado la tecnica de (8)
electroforesis en gel de agarosa de campo pulsante para separar 16 cromosomas
diferentes de levadura (S. cerevisiae) cuyo tamafio oscila entre 220 000 Y2 500 000
pares de nucle6tidos. El DNA se ha tefiido como en (B). Sobre este tipo de geles se
pueden separar moltkulas de DNA de tamafios tan grandes como 107 pares de
nucle6tidos. (A, por cortesia de Leander Lauffer y Peter Walter; B, por cortesfa de Ken
Kreuzer; C, de D. Vollrath y RW. Davis, Nucleic Acids Res. 15:7876, 1987. Con
12- -2,5
autorizaci6n de Oxford University Press.) 4- millones
15-
7/

16-
Las moIeculas de DNA de diferentes tamaiios pueden separarse 13- -950000
mediante la electroforesis en ge14
'"
E
o
Durante los primeros arios de la decada de 1970 se descubri6 que se podia deter- ~ 2- pares de
minar con exactitud la longitud y la pureza de las moleculas de DNA utilizando 14- nucle6tidos
~ 10-
los mismos metodos de electroforesis en gel que se habfan demostrado titiles ~ 11-
para el ancilisis de las cadenas proteicas. Actualmente el proceso es mas sencillo o 5- -610000
Ci; 8-
que para las proteinas; dado que en las moleculas de acido nucleico cada nucle6- E
,"
tido presenta una tinica carga negativa, no es necesario utilizar el detergente c 9-

cargado negativamente SDS que se requiere para conseguir que las moleculas de 3-
proteina se muevan de una manera uniforme hacia el electrodo positivo. Para el 6-
caso de fragmentos de DNA menores de 500 nucle6tidos de largo, existen geles 1- -220000
de poliacrilamida especialmente disefiados que permiten la separaci6n de mole-
culas que se diferencien en un solo nucle6tido de longitud (Figura 7-5A). No
obstante, los poros de los geles de poliacrilamida son demasiado pequefios para (A) (C)
permitir que moleculas largas de DNA puedan atravesarlos; para separar estas
moleculas en funci6n de su tamafio, se utilizan geles mucho mas porosos formados
par soluciones diluidas de agarosa (un polisacarido aislado de algas marinas) (Fi-
gura 7-5B). Ambos metodos de separaci6n de DNA son ampliamente utilizados
tanto con finalidad analitica como preparativa.
Una variaci6n reciente de la electroforesis en agarosa, llamada electroforesis
en gel de campo pulsante, hace posible la separaci6n de moleculas enormes de
DNA. La electroforesis en gel ordinaria no consigue separar estas moleculas por-
que el campo electrico uniforme las extiende adoptando configuraciones ser-
penteantes que viajan a traves del gel a una velocidad que es independiente de
su longitud. Pero, alteraciones frecuentes en la direcci6n del campo electrico
fuerzan a las moleculas a reorientarse para poderse desplazar. Este proceso de
reorientaci6n es mas lento cuanto mayor es la molecula y por ella las moleculas
progresivamente mas largas se van retrasando respecto a las mas cortas. Por ello,

Fragmentaci6n, separaci6n y secuenciaci6n de moIeculas de DNA 317

en geles de campo pulsante los cromosomas enteros tanto bacterianos como de Figura 7-6 Para marcar con
levaduras aparecen como bandas discretas y pueden ser aislados e identificados radiactlvldad las moleculas de DNA,
en base a su tamafio (Figura 7-5C). Un cromosoma tipieo de mamifero, de 108 pa- se utllizan rutlnarlamente dos
res de bases, es demasiado grande para poderlo aislar aun con este metodo, pero procedimientos. (A) La DNA
si que pueden aislarse e identificarse grandes regiones si el DNA cromosomieo se polimerasa I marca todos los
nucle6tidos de una molecula de DNA,
corta primero con endonucleasas de restriecion que reconocen secuencias muy
y por 10 tanto puede utilizarse para
poco frecuentes (por ejemplo, una vez cada 106 0107 pares de bases). generar sondas de DNA muy marcadas
Evidentemente, en los geles de agarosa 0 de poliacrHamida las bandas de radiactivamente. (B) La polinucle6tido
DNA seran invisibles a menos que el DNA este marcado 0 tefiido de alguna ma- quinasa marca I1nicamente los
nera. Un metoda sensible de tincion del DNA consiste en sumergir el gel despues extremos 5' de las hebras de DNA; asi
de la electroforesis en el colorante bromuro de etidio que, cuando se halla unido pues, cuando despues de marcar se
al DNA, es fluorescente con luz ultravioleta (Figura 7-5B y C). Un metoda de de- fracciona la molecula de DNA
teccion incluso mas sensible que este consiste en la incorporacion de un radio- mediante nucleasas de restricci6n, tal
isotopo a la molecula de DNA antes de la electroforesis; habitualmente se utiliza como se muestra en la figura, pueden
el 32p ya que puede ser incorporado en los fosfatos del DNA y emite particulas p obtenerse facilmente moleculas que
muy energetieas que son faciles de detectar por autorradiografia (Figura 7-5A). contengan una I1nica hebra marcada
en el extrema 5'. El metodo en (A) se
emplea para producir tambien
Las moIeculas purificadas de DNA pueden ser marcadas in vitro moleculas de DNA no radiactivo que
con radiois6topos 0 con marcadores quimicos5 contienen un marcador quimico
especifico que puede ser detectado
Para afiadir distintas marcas a las moleculas de DNA aisladas se utilizan funda- con un anticuerpo adecuado (vease
mentalmente dos sistemas. El primero utiliza una enzima de E. coli, la DNA poli- Figura 7-18).
merasa I , para insertar un gran mlmero de nucle6tidos radiactivos (habitual-
mente marcados con 32P) 0 compuestos quimieos en cada molecula de DNA
(Figura 7-6A) generando asi "sondas de DNA" altamente marcadas para las reac-
ciones de hibridaci6n de acidos nucleieos (vease mas adelante). El segundo me-
todo utiliza la enzima polinucle6tido quinasa de bacteri6fagos para transferir un
tInieo 32p marcado desde el ATP hasta extremo 5' de cada cadena de DNA (Figura
7-6B). Dado que la quinasa incorpora un s610 32p en cada hebra de DNA, estas
cadenas de DNA no son 10 suficientemente radiactivas como para utilizarlas
como sondas; pero dado que solo estan marcadas en uno de sus extremos, son
extraordinariamente tItHes para la secuenciaci6n del DNA y para el estudio de
las huellas del DNA ("footprinting"), tal como explicaremos a continuaci6n.

318 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 fragmento inicial de DNA de una sola hebra lugar de rotura Figura 7 -7 Metodo qufmico de
marcado con 32p en su extrema 5'
3~p . ._ _ T C G A secuenciaci6n de DNA. (A) El proceso
3'
\9-- III I I II IIi 18 se inicia con la obtencion de un
un procedimiento quimico que 17

I rompe la cadena por los residuos 16 conjunto de moleculas de DNA de

15
A genera fragmentos radiactivos 14 doble cadena marcadas en un extrema
de diferentes longitudes 13
12 por el metodo descrito en la Figura
3~p 11
\9 111111111111111111111_ 10 7 -6B. En la primera etapa las cadenas
3~p
9 de la doble helice se disocian y se
\9 IIII1 I Ii III 8
someten a un tratamiento suave con
3~J11 U 1111 7
un agente qUfmico que destruye una
6
5 de las cuatro bases (en este caso los
3~... 1111_1111111111111111111111111111.11 4 residuos A). Debido a que el
t
fragmentos
t
fragmentos
tratamiento es suave solo se rompe
radiactivos no marcados 3 una A por molecula, al azar. Esto
I I
2 genera una colecci6n de fragmentos
estos fragmentos son separados por de DNA de diferentes longitudes, que
electroforesis en gel en funci6n
estrictamente de su longitud; por reflejan los lugares en que se
autorradiografra se detectaran (B) 5' encontraban las A en el DNA original.
(A) unicamente los fragmentos la secuencia de DNA, lerda
radiactivos
Los fragmentos se separan en un gel y
directamente desde la parte
inferior del gel a la superior, es
se detectan por autorradiograffa:
solamente los fragmentos que poseen
rGCACrr GAACGCAi GCT
1 1 8 un extrema 5' terminal fosfato 32p
aparecen en el gel y su tamafio indica
la distancia desde el extrema marcado
hasta la base A. (B) Para determinar la
Los fragmentos aislados de DNA pueden ser secuencia completa, se realizan
rlipidamente secuenciados6 procedimientos similares a cuatro
muestras separadas de la misma
Afinales de los anos 70 se desarrollaron metodos que permitieron determinar de moltkula de DNA marcada en su
manera simple y nipida la secuencia nucleotfdica de cualquier fragmento de extrema 5', utilizando compuestos
DNA purificado. Como resultado de ello, se han obtenido las secuencias de DNA qufmicos que rompan el DNA de
completas de muchos cientos de genes de mamfferos, incluyendo los que codi- forma preferente por T en la primera
fican la insulina, la hemoglobina, el interferon y el citocromo c. La cantidad de muestra, por C en la segunda, por G en
informacion respecto a secuencias de DNA es muy grande (muchos millones de la tercera y por A en la cuarta. Los
fragmentos resultantes son separados
nucleotidos) por 10 que deben utilizarse ordenadores para almacenarla y anali-
en carriles paralelos del mismo gel,
zarla. Se han determinado varias secuencias continuas de DNA de mas de 105 como los que se muestran en la Figura
pares de nucleotidos; entre elIas se encuentran el genoma entero del virus de 7-5A, obteniendose un patron de
Epstein-Barr (que infecta a humanos y causa la infeccion de mononucleosis) y bandas de DNA radiactivas a partir de
el genoma entero de cloroplasto vegetal, asf como el cromosoma completo de la las cuales se lee la secuencia de DNA.
levadura. Se han descrito dos potentes metodos de secuenciaci6n del DNA: en El nucle6tido mas cercano al extrema
la Figura 7-7 se describe el metodo qu(mieo, y en la Figura 7-8 el metodo enzima- 5' de la secuencia se determina
tieo. Este ultimo metodo, basado en la sintesis in vitro de DNA en presencia de mirando el gel al nivell (en la parte
nucle6sidos trifosfato terminadores de cadena, se ha convertido en el metoda inferior del gel) y observando en que
mas comun para secuenciar el DNA. carril aparece la banda (T). El mismo
Estos dos metodos de secuenciaci6n del DNA son tan rapidos y seguros que, procedimiento se utiliza para
tal como se ha indicado anteriormente, el sistema mas facil y exacto de determi- determinar el nive12, luego para e13 y
asf sucesivamente, hasta obtener la
nar la secuencia de aminoacidos de una protefna consiste en determinar la se-
secuencia completa. La ilustraci6n
cuencia de nucleotidos de su gen: se genera un clon de cDNA a partir del mRNA presenta el metodo de manera
apropiado (ver mas adelante), se determina la secuencia de nucleotidos y se uti- idealizada; en realidad los
liza el c6digo genetico como diccionario para traducir esta secuencia en una se- tratamientos qufmicos son menos
cuencia de aminoacidos. Aunque en principio existen seis pautas diferentes de especfficos de 10 que se muestra.
lectura por medio de las cuales la secuencia de DNA se puede traducir a proteina
(tres por cada hebra), generalmente se reconoce la correcta por ser la unica que
no presenta un gran numero de eodones de terminaei6n (Figura 7-9). Habitual-
mente se determina una pequeno trozo de la secuencia de aminoacidos de la
protefna pUrificada para confirmar la secuencia determinada a partir del DNA.
A medida que se han perfeccionado los metodos de determinaci6n de secuen-
cia de DNA, los cientfficos han empezado a vislumbrar la posibilidad de determinar
la secuencia completa del genoma humano, unos 3 x 109 pares de bases. Debido a
que dicha secuencia contendrfa la secuencia de todos los RNA y de todas las protef-

Fragmentaci6n, separaci6n y secuenciaci6n de moIeculas de DNA 319

(A) precursores desoxirribonucle6sido C pequena cantidad de Figura 7-8 Metodo enziJDlltico de
trifosfato normales Ad
C GA ----- didesoxirribonucle6sido
secuenciaci6n de DNA. (A) El DNA a
(dATP, dCTP, dGTP y T A rG ICT trifosfato (ddATP)
dTTP) TAT C G A secuenciar se utiliza por la DNA
AACI TC A T
GrG~~r polimerasa como molde en la sfntesis
la incorporaci6n (infrecuente) de
in vitro, de una serie de replicas
cebador para la DNA didesoxirribonucle6sido bloquea el parciales que comienzan siempre en el
poilmerasa crecimiento posterior de la mismo sitio, pero que terminan en
5' \ ) molecula de DNA
~GCTACCTGCATGGA puntos diferentes a 10 largo de la
CGATGGACGTACCTCTGAAGCG"I11~ cadena de DNA. La clave de este
3' / - 5'
molecula de DNA de una
metoda radica en la utilizaci6n de
sola hebra a secuenciar didesoxirribonucle6sidos trifosfato,
que no tienen el grupo desoxirribosa
3'-OH, presente en los nucle6tidos
(8)
5'.I.nUI BUIIIIIIII 3' ] DNA de doble normales; cuando un nucle6tido
3' 5' hebra modificado de esta forma se incorpora
a una cadena de DNA, bloquea la
3' 'CG,rAT)If:A~ITC}l\GG,rC 5'
DNA de una sola adici6n del nucle6tido siguiente. En el
hebra
5'_3' ejemplo que se muestra, el didesoxi
cebador marcado + DNA polimerasa ATP (ddATP) compite con un exceso
+ exceso de dATP de desoxiATP (dATP), de modo que
dTTP
dCTP cada cadena de DNA sintetizada en el
dGTP tubo de ensayo por la DNA polimerasa
I terminani al azar en una A diferente
1+ ddATP 1+ ddCTP 1+ ddGTP de la secuencia. Esta reacci6n genera,
por tanto, una escalera de fragmentas
_AT _ATGTC _ATG
de DNA similar a la mostrada
_ATGTCA _ATGT _ATGTCAGTC _ATGTCAG
anteriormente por el metoda qufmica

rr=-
IIIIIATGTCAGTCCA _ATGTCAGT _ATGTCAGTCC IIIIIATGTCAGTCCAG
(Figura 7-7); estos fragmentos se
detectanin gracias a un marcaje

j (qufmico 0 radiactivo) que incorpora a

bien el oligonucle6tido (naranja) 0
3'
uno de los desoxirribonucle6sido
trifosfatos (verde) usados para
extender la cadena de DNA. (B) Para
determinar la secuencia completa, se
utilizan cuatro nucle6sido trifosfatos
terminadores de cadena (raja)
diferentes en cuatro reacciones de
sfntesis separadas, sobre el mismo
molde de DNA. Cuando los productas
5'
de estas cuatro reacciones se analizan
A T C G
en cuatro carriles paralelos en un gel
de poliacrilamida, la secuencia de
DNA puede deducirse de una manera
amiloga a como se hace en el metoda
nas posibles que se necesitan para configurar un ser humano, su conocimiento nos qufmico descrito en la Figura 7-7B.
proveerfa de un "diccionario del ser humano", que podrfa facilitar el futuro estudio
de la celula y de los tejidos. La secuenciacion del DNA a esta escala implica necesa-
riamente el desarrollo de metodos de secuenciacion automatizados que reduzcan
considerablemente el costa de la secuenciacion al menos en cinco veces.

Las huellas del DNA revelan los lugares donde

las proteinas se unen ala moIecula de DNA7
Se puede utilizar una modificacion de una tecnica de secuenciacion de DNA
para determinar las secuencias nucleotfdicas reconocidas par las protefnas de
union al DNA. Algunas de estas protefnas juegan un papel central en la determi-
nacion de la activacion de algunos genes en una celula determinada, mediante
su union a secuencias de DNA reguladoras, las cuales habitualmente se localizan
fuera de la regiones codificadoras del gen. Para entender como actuan estas pro-
tefnas, es importante identificar las secuencias especfficas de DNA a las que se

320 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

Figura 7-9 LocaUzacl6n de las reglones
de secuencla de DNA que coditlcan una
protefna. En principio, cualquier regi6n
de la secuencia de DNA puede codificar
seis diferentes secuencias de
aminoacido, dado que cada una de las
tres pautas de lectura de cada hebra se
puede utilizar para codif'icar un
polipeptido. La secuencia de nucle6tidos
siempre se lee en sentido 5'-a-3', y
codif'ica un polipeptido desde su
extremo amino (N) a su extremo
carboxilo (e). En una secuencia de
nucle6tidos al azar se deberfa encontrar
una secuencia de terminaci6n para la
sfntesis de proteina cada 21
aminoacidos de media (una vez cada 63
nucle6tidos). En esta muestra de 48
nucle6tidos cada una de esas seftales
(codones de terminaci6n) se han
coloreado en verde; Unicamente la pauta
de lectura 2 no contiene ninguno. (B)
Bl1squeda en una secuencia de 1700
pares de bases de DNA de una posible
secuencia codificante de protefna. La
informaci6n se representa como en (A),
en verde para cada cod6n de
terminaci6n. Todas las posibles regiones
entre seftales de inicio y terminaci6n de
sfntesis de protefna (vease pag. 249) se
representan como barras rojas. S610 la
pauta de lectura 1 codifica una protema,
de 475 aminoacidos de longitud.
Figura 7-10 Tecnica de las huellas de
DNA (DNA footprlnting). (A) Este
metoda requiere de una molecula de
DNA marcada radiactivamente en un
extremo (vease Figura 7-6B). La protefna
que se muestra se une fuertemente a
una secuencia espedfica de DNA de
siete nucle6tidos de longitud,
protegiendo asi a estos siete nucle6tidos
del agente que fragmentara la cadena. Si
se desarrolla esta misma reacci6n sin la
protefna que se une al DNA, en el gel se
puede observar un escalonado
completo de bandas (no se muestra). (B)
Un registro real de huella utilizado para
determinar ellugar de uni6n para una
protefna humana que estimula la
transcripci6n de determinados genes
eucariotas. Estos resultados permiten
localizar ellugar de uni6n unos 60
nucle6tidos en direcci6n 5' a partir del
lugar de inicio de la sfntesis del RNA. El
agente que se utiliz6 para fraccionar la
cadena fue una pequefta molecula con
hierro que normalmente corta en cada
enlace fosfodiester con
aproximadamente la misma frecuencia.
(B, por cortesia de Michele Sawadogo y
Robert Roeder.)

321
unen. EI metodo estandar utilizado con esta finalidad es el denominado huella
en el DNA (DNA footprinting). Se marca con 32p un fragmento puro de DNA por
uno de sus extrema (vease Figura 7-6B) Ya continuacion se corta con una nude-
asa 0 con un reactivo que produzca cortes al azar en los enlaces fosfodiester de
la doble helice del DNA. Los subfragmentos resultantes de la hebra marcada se
separan en un gel y se detectan por autorradiograffa, de forma que se puede
comparar el patron de bandas de un DNA fragmentado en presencia de una pro-
tefna que se una a el con el patron del mismo DNA fragmentado en ausencia de
cromosoma que cromosoma que
tal protefna. Cuando la protefna se halla presente, cubre los nucleotidos de la contiene 1 copia contiene 5 copias
zona del DNA a la que se une, protegiendo la rotura de los enlaces fosfodiester. del gen A del gen A
En consecuencia, los fragmentos marcados que contienen ellugar de union del
DNA a la protefna desapareceran, dejando un hueco en el patron del gelllamado
"huella" (footprint) (Figura 7-lOA). En la Figura 7-lOB se muestra la huella de
una protefna que activa la transcripcion de un gen eucariota.

I
Resumen 1
fragmentaci6n y desnaturalizaci6n del
DNA cromos6mico
La tecnolog(a del DNA recombinante ha revolucionado el estudio de la celula. El
desarrollo de esta tecnolog(a no fue nunca previsto ni planeado. Por el contrario, es
el fruto de la confluencia de multitud de nuevas habilidtules de los investigadores fragmentos de DNA
de una sola hebra
trabajando en distintas dreas para manipular las secuencias de DNA, que en un
momenta dado se hacen 10 sujicientemente poderosas como para permitir a los in-
vestigadores aislar cualquier gen deseado, y, despues de su amplijicaciOn, determi-
nar su estructura en detalle, tanto a nivel genico como de sus productos. Elementos
esenciales de esta tecnolog(a son la capacidad de trocear los cromosomas en frag-
1_-- ( ':l./'"\,~(""
rJ- >
.....1J-rf"
h~r..(/~"
adici6n de una sonda de DNA
l, --_I
mentos con extremos conocidos, y los metodos de separacion y secuenciaciOn de di- -r.__-. _'<-..cion ada y radiactiva,
chos fragmentos. La fragmentacion del cromosoma se realiza mediante enzimas e incubaci6n para ~;;:;;;~
permitir que se
producidas por bacterias y que estas usan para destruir las moleculas de DNA in- produzca la
vasoras. Estas enzimas, denominadas endonucleasas de restricciOn, se purijican y hibridaci6n
se utilizan para cortar el DNA de doble cadena en secuencias cortas especificas. Los
fragmentos resultantes de DNA se pueden separar unos de otros en funcion de su
tamano mediante electroforesis, desplazando la meula de fragmentos a traves de
los poros de un gel. En ciertas condiciones se pueden separar moleculas de DNA
que difieran en unicamente una base, y visualizarlas como bandas discretas. Los
metodos de secuenciacion utilizan estos potentes metodos de separacion: despues
de la electroforesis, se determina la secuencia de nucleotidos de una molecula de
DNA a partir del patron de bandas de DNA marcado que se observa cuando uno de
sus extremos estd marcado y el otro termina aleatoriamente en un nucleotido se-
leccionado unico (A, G, CoT).

Hibridaci6n de acidos nucleicos8

Cuando una solucion acuosa de DNA se calienta a lOOC 0 se expone a un pH Figura 7-11 Medida del m1mero de
muyalto (pH ~ 13), se rompen las bases complementarias que normalmente copias de un determinado gen en una
mantienen unidas entre sf a las dos cadenas de la doble helice y la doble helice muestra de DNA, mediante
se disocia rapidamente en dos hebras separadas. Durante muchos aiios se con- hibridacion de DNA. En estos
sidero que este proceso, llamado desnaturalizaci6n del DNA, era irreversible. Sin experimentos se utiliza un fragmento
embargo, en 1961 se descubri6 que si se mantienen hebras complementarias de de DNA de una sola hebra, al que
habitualmente se denomina sonda de
DNA a 65C durante un perfodo prolongado, forman de nuevo una doble helice
DNA. La sonda puede estar marcada
(proceso denominado renaturallzacion 0 hibridacion del DNA). Reacciones de de forma especial de modo que pueda
hibridaci6n similares a esta se producen entre dos cadenas cualesquiera de aci- ser distinguida del enorme exceso de
do nudeico de una sola hebra (DNA:DNA, RNA:RNA 0 RNA:DNA) siempre que DNA cromos6mico. En este ejemplo, la
ambas cadenas tengan una secuencia de nudeotidas complementaria. En esta marca es un is6topo radiactivo;
secci6n se explicara c6mo se pueden utilizar estas reacciones especificas de hi- alternativamente, como marca se
bridacion para detectar y caracterizar secuencias nudeotfdicas especificas tanto pueden utilizar nucle6tidos marcados
en moleculas de RNA como de DNA. qufmicamente (vease Figura 7-18).

322 Capitulo 7 : Tecnologfa del DNA recombinante

 5' :=====::;11:111===11:1112:11:':1'j;
3'
ex6n 1 intr6n
3 5' ---------3'
ex6n 2

lIlil~ImlIIl!l~~I$IIlI!!i iiMI.ml Ilmlill

DNA gen6mico clonado
1

51 RNA mensajero
Figura 7-12 Uso de la teeniea de
hibridaci6n de acidos nucleieos para
determinar la regi6n de un fragmento
clonado que esta presente en una
DESNATURALIZACION DEL DNA
molecula de RNA. El metodo
secuencia intr6nica E HIBRIDACION CON RNA mostrado se basa en el uso de una
nucleasa que unicamente corte la
3'~5'DNA
5' 3' RNA
cadena de DNA no apareada con RNA.
Tal como se muestra, se determinan
las posidones de los intrones en los
DNA degradado 1
EL TRATAMIENTO CON LA NUCLEASA
S1 DEGRADA LAS MOLECULAS DE
genes eucariotas; de la misma forma se
: ....
\ ACIDO NUCLEICO DE UNA SOLA HEBRA
puede determinar el inido y final de
una molecula de RNA.
3' -&'UII Ii mil ..... 5'
5' 3'

'"
"iii
~
ex6n 2 ~
ex6n 1 ~
a;

gel de agarosa alcalino

La hibridaci6n de acidos nucleicos proporciona un metoda sensible

para la detecci6n de secuencias determinadas de nucle6tidos9
La velocidad de formaci6n de la doble belice esta limitada por la velocidad a la
que colisionan las dos cadenas complementarias del acido nucleico, la cual
depende de la concentraci6n de las cadenas en la soluci6n. Por 10 tanto, la ve-
locidad de hibridaci6n puede utilizarse para determinar la concentraci6n de
cualquier secuencia determinada de DNA 0 de RNA en el seno de una mezcla
de otras secuencias. Este ensayo requiere un fragmento pure de una cadena
sencilla de DNA cuya secuencia sea complementaria a la del acido nucleico
(DNA 0 RNA) que se desea detectar; el DNA se puede obtener por clonaje 0, si la
secuencia es corta, se puede sintetizar por metodos quimicos. En cualquier caso,
el fragmento de DNA debe estar marcado (mediante radiois6topo 0 por un me-
todo quimico) de forma que durante el curso de la reacci6n de hibridaci6n se
pueda seguir su incorporaci6n a moleculas de doble cadena. La moIecula de
DNA de cadena sencilla utilizada de esta forma como indicador se denomina
sonda de DNA (probe); una sonda de DNA puede comprender desde 5 hasta mi-
les de nucle6tidos de longitud.
Las reacciones de hibridaci6n mediante sondas de DNA son tan sensibles y
selectivas que pueden utilizarse para detectar secuencias complementarias cuya
concentraci6n sea incluso de una sola moIecula por celula (Figura 7-11). Asi, es
posible determinar el m1mero de copias de una secuencia particular de DNA (la
contenida en la sonda) que se hallan presentes en el genoma celular. Se puede
utilizar esta misma tecnica para buscar genes relacionados pero no identicos;
por ejemplo, una vez ha side clonado un gen interesante a partir de ratones 0
gallinas, se puede utilizar una parte de esta secuencia para localizar el gen co-
rrespondiente en humanos.
Alternativamente, la sondas de DNA pueden utilizarse en reacciones de hibri-
daci6n con RNA en lugar de DNA, para detectar cuando una celula esta expresan-
do un gen determinado. En este caso, se hibrida una sonda de DNA que contiene
parte de la secuencia del gen, con RNA purificado a partir de la celula en cuesti6n,
con el fin de determinar si el RNA celular contiene moIeculas complementarias al

Hibridaci6n de acidos nudeicos 323

DNA de la sonda, y si es asf, que cantidad. En metodos mas elaborados, la sonda
de DNA se trata con nucleasas especfficas despues de la hibridaci6n para deter-
minar las regiones exactas de la sonda que se han apareado con moleculas de
RNA de la celula. De esta forma se pueden determinar los lugares de principio y
final para la transcripci6n del RNA; de la misma manera se pueden identificar de
forma precisa los lfmites de las regiones de los transcritos primarios que son cor-
tadas y eliminadas durante la rnaduraci6n por corte y ernpalrne (splicing) (vease
Figura 7-12).
Durante. el desarrollo embrionario un gran mlmero de genes se expresan 0
se reprimen siguiendo patrones elaborados. La hibridaci6n de sondas de DNA
con RNA de la celula permite determinar cuando un gen particular se expresa 0
no; ademas, cuando la expresi6n de un gen se altera, se puede determinar si el
cambio es debido a controles que actuan sobre la transcripci6n, sobre la madu-
raci6n del RNA 0 sobre la traducci6n de las moleculas de mRNA maduro a protef-
na. La utilizaci6n de los metodos de hibridaci6n se halla tan extendida en la bio-
logfa celular que es diffcil imaginar c6mo se podrfa haber estudiado sin ellos la
estructura y la expresi6n genica.

Las transferencias Northern y Southern facilitan la hibridaci6n con

moleculas de acidos nucleicos separadas electroforeticamente lO
A menudo las sondas de DNA se utilizan en combinaci6n con la electroforesis en
gel para detectar moIeculas de acidos nucleicos que tengan una secuencia com-
plementaria a toda 0 a una parte de la sonda. Antes de llevar a cabo la reacci6n
de hibridaci6n, la electroforesis separa las diferentes moleculas de RNA 0 de
DNA de una mezcla, de acuerdo con su tamafio; podremos estar seguros de que
la hibridaci6n fue especffica si con la sonda se marcan moIeculas de un unico 0
de muy pocos tamafios. Ademas, la informaci6n obtenida respecto al tamafio
puede ser muy valiosa en sf misma. Un ejemplo servira para ilustrar este punto.
Supongamos que se desea determinar la naturaleza del defecto de un rat6n
mutante que produce cantidades anormalmente bajas de alburnina, una protef-
na que segrega el hfgado a la sangre, normalmente en grandes cantidades. En
primer lugar, habra que recolectar muestras de tejido hepatica identicas de un
rat6n mutante y de uno normal (este ultimo servira de control); las celulas se
disgregan con un detergente fuerte para inactivar las nucleasas celulares, que en
caso contrario podrfan degradar los acidos nucleicos. A continuaci6n, se separa
el RNA y el DNA de los otros componentes celulares: las protefnas presentes se
desnaturalizan completamente y se eliminan mediante extracciones continua-
das con fenol -un potente solvente organico que es parcialmente miscible en
agua; los acidos nucleicos, que permanecen en la fase acuosa, se precipitan con
alcohol para separarlos de las moIeculas pequefias de la celula. Entonces se se-
para el DNA del RNA aprovechando su diferente solubilidad en alcohol y se de-
grada cualquier acido nucleico contaminante de los tipos que no queremos es-
tudiar, mediante tratamiento con enzimas altamente especfficas -tanto RNasas
como DNasas.
Para analizar los RNA que codifican la albumina, mediante una sonda de
DNA que reconozca a este RNA, se utiliza una tecnica Hamada transferencia
Northern (Northern blotting). Primero, mediante electroforesis en gel las dife-
rentes moleculas de RNA intacto se separan en bandas, tanto de los hfgados mu-
tantes como de los normales. Entonces, para hacer que las moleculas de RNA
sean accesibles a las sondas de DNA, se hace una replica del gel mediante la
transferencia de las moIeculas de RNA desde el gel de la electroforesis hasta una
hoja de papel de nitrocelulosa 0 de nailon. Las moleculas de RNA que se hibri-
dan con la sonda de DNA radiactiva (por contener parte de la secuencia normal
del gen de la albumina) se localizan mediante la incubaci6n del papel con una
sohici6n que contenga la sonda y detectando la sonda hibridada por autorradio-
graffa, 0 mediante metodos qufmicos (Figura 7-13). Dado que las moleculas pe-
quefias de acidos nucleicos se desplazan mas rapidamente a traves del gel que

324 Capitulo 7 : Tecnologfa del DNA recombinante

 bloque de papel absorbente filtro de nitrocelulosa con acidos
nucleicos fuertemente unidos
filtro de
nitrocelulosa

patrones de RNA
marcados, utilizados
como marcadores
gel de
de tamaiio
agarosa FILTRO CON LOS ACIDOS
esponja
NUCLEICOS SEPARADOS
soluci6n HIBRIDADOS CON LA
tamp6n SONDA MARCADA bolsa de
ACIDOS NUCLEICOS SEPARADOS DE ACIDOS GRASOS SEPARADOS, TRANSFERIDOS plastico
ACUERDO CON SU TAMANO, MEDIANTE A UN PAPEL DE NITROCELULOSA POR SUCCION sell ada
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA DEL TAMPON A TRAVES DEL GEL Y DEL PAPEL

Figura 7-13 Deteccion de moIeculas de RNA 0 de DNA de una secuencia

especifica, mediante hibridacion sobre filtro. En un gel de electroforesis se
DESPUES DE ELiMINAR LA SONDA
pueden fraccionar tanto mezclas de mollkulas de RNA de cadena sencilla MARCADA, LAS BANDAS
(transferencia Northern) como moltkulas de DNA de doble cadena COMPLEMENTARIAS A LA SONDA
producidas por digesti6n con una nucleasa de restricci6n (transferencia SE REVELAN MEDIANTE METODOS
DE DETECCION ESPECfFICOS DEL
Southern). Todas las moltkulas, separadas, se transfieren a una membrana de MARCAJE
nailon 0 de nitrocelulosa, por capilaridad. EI filtro se expone a la sonda de
DNA marcado durante un tiempo prolongado, en condiciones en que se
favorece la hibridaci6n. Posteriormente el filtro es lavado intensamente de
forma que s610 aquellas moltkulas de RNA 0 de DNA que estan inmovilizadas posici6n
de los bandas
en el filtro y que hibridan con la sonda, queden marcadas, las cuales detectadas
marcadores
aparecen como bandas en el filtro. En el caso de la transferencia Southern es de tamano
necesario separar las dos hebras de DNA en el filtro antes del proceso de
hibridaci6n, 10 que se consigue exponiendo el DNA a condiciones alcalinas
desnaturalizantes despues de la electroforesis.

las mas grandes, se puede determinar el tamaiio de las moIeculas de RNA de

eada una de las bandas que se unen a la sonda, utilizando como referencia la
migraci6n de moleculas de RNA de tamaiio conocido (patrones de RNA). De esta
manera se puede descubrir que las celulas hepaticas del rat6n afectado fabrican
albl1mina de tamaiio normal y en cantidades narmales; alternativamente podria
ocurrir que el RNA de la albl1mina se detectara en cantidades muy reducidas.
Otra posibilidad seria que el RNA de la albl1mina mutante fuese anarmalmente
carta, y par 10 tanto, se desplazara a traves del gel muy rapidamente. En este
easo la transferencia del gel se podria volver a estudiar mediante sondas de DNA
mas selectivas que revelasen que zona del RNA esta ausente.
Para caracterizar la estructura del gen de la albumina en el rat6n afectado se
utiliza un metoda anaIogo, Hamado transferencia Southern (Southern blotting)
que en lugar de analizar en RNA, estudia el DNA. En primer lugar, mediante nu-
cleasas de restricci6n se corta el DNA aislado generando fragmentos que se pue-
dan separar facilmente. A continuaci6n, los fragmentos se separan de acuerdo
can su tamaiio mediante electroforesis en gel y mediante transferencia e hibri-
daci6n se identifican los fragmentos que son complementarios a la sonda de
DNA para la albumina, tal como se ha descrito para el caso del RNA (vease Figu-
ra 7-13). Repitiendo este procedimiento pero utilizando diferentes nuc1easas de
restricci6n, se puede construir un mapa de restricci6n de la regi6n del genoma
que codifica la albumina. Sobre este mapa se puede determinar si el gen de la al-
bl1mina ha sido reordenado en los ratones afectados -por ejemplo, mediante la

Hibridaci6n de acidos nUcleicos 325

 lugares de corte (dianas) Figura 7-14 Algunos de los cambios
de la nucleasa de restriccion
cortar, desnaturalizar de la secuencia de DNA que produceD
e hibridar
un polimorflsmo de 10Dgitud de los
+
fragmeDtos de restricci6n (RFLP).
(Al En muchos individuos de la

(8) i
, ,..
cambio de un unico nucleotido
:t
cortar, desnaturalizar
e hibridar poblaci6n, una nucleasa de restricci6n
corta en tres lugares distintos el DNA
cOmos6mico que se muestra,
cortar, desnaturalizar pOduciendo dos fragmentos de DNA;
(C)
,.t .:t.. e hibridar
+
uno de los cuales puede detectarse par
L--J hibridaci6n con una sonda DNA
duplicaci6n de secuencia
mediante transferencia Southern.
en A, 8 y C, la sonda RFlP ( _ )
detecta fragmentos de DNA de
(Bl En otOs ejemplos del mismo
diferentes tamaiios cOmosoma se observa que el cambia
de un nucle6tido en la secuencia
delecion 0 insercion de una secuencia corta de DNA, pero sin embargo no es po- reconocida por la nucleasa de
sible detectar de este modo la presencia de sustituciones de una unica base. restricci6n evita que esta actue en la
diana central. En estos casos la sonda
marcada detecta un fragmento de
EI amilisis de los polimorfismos de longitud de los fragmentos DNA de tamafio mayor como un RFLP.
de restricci6n (RFLP) facilita el amilisis genetico (el Aun mas, en otros cromosomas se
de los grandes genomas l l ha producido una duplicaci6n de parte
de la secuencia de modo que se
Los genomas de gran tamafio se pueden mapar tanto fisica como geneticamen- produce un aumento en el tamafio del
teo Los mapas ffsicos se basan en el amilisis directo de las moIeculas de DNA que fragmento de DNA detectado con la
constituyen cada cromosoma. Incluyen tanto mapas rl.e restriccion como colec- sonda marcada. Este tipo de RFLP es
ciones ordenadas de clones genomicos de DNA (vease Figura 7-29), que se pueden comun en regiones que contienen
considerar como representaciones incompletas 0 parciales del mapa fisico com- secuencias cortas muy repetidas, tales
pIeto que sena la secuencia lineal continua de todos los nucleotidos que forman el como GTGTGT....; el numero de veces
genoma. Los mapas geneticos de Iigamiento, a diferencia de los anteriores, se ba- que se repite la secuencia corta es muy
san en la frecuencia de entrecruzamiento de dos 0 mas caracterfsticas que sirven variable en la poblaci6n, de forma que
de marcadores en el cruzamiento. Un marcador genetico puede ser cualquier lugar cada individuo contiene un mlmero
en el genoma que, cuando varia, produce variaciones apreciables en el individuo diferente (de 4 a 40l de repeticiones en
cada locus concreto. A este tipo de
que 10 porta haciendolo distinguible del resto de la poblacion. Si la modificacion
repeticiones se las conoce como
es muy poco frecuente se la denomina mutaci6n; si es comun, se la denomina microsatlHites 0 VNTR (de Variable
polimorfismo. Los mapas geneticos de ligamiento se construyen siguiendo el pa- Number afTandem Repeat: numero
tron de heredabilidad de tales variantes geneticas. variable de repeticianes en tandem).
Tradicionalmente, los mapas de ligamiento han dependido de la identifica-
cion de mutaciones por sus caracteristicas fenotipicas como el color de los ojos
o los grupos sanguineos. Recientemente los metodos del DNA recombinante
han permitido utilizar como marcadores geneticos pequefias secuencias de
DNA que pueden diferir entre individuos de la poblacion sin producir ningl1n
efecto detectable en el organismo. Uno de los marcadores geneticos de este tipo
mas utilizados se basa en que pequefios cambios en la secuencia de DNA pueden
modificar los patrones de corte de las endonucleasas de restriccion. Por ejemplo,
una substitucion de una base en una region del cromosoma puede alterar una
secuencia de reconocimiento de una endonucleasa de restriccion, produciendo
importantes diferencias en las longitudes de ciertos fragmentos de restriccion
del DNA en esa zona. Asimismo pueden variar las longitudes de los fragmentos
de restriccion debido a pequefias inserciones 0 delecciones que afecten a un
numero reducido de bases. A estas pequefias diferencias entre individuos se las
denomina polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricci6n (RFLP,
de Restriction Fragment Length Polymorphism). Un RFLP es tanto mas util cuan-
to mas frecuente sea la poblacion, ya que existe una probabilidad mayor de que
los padres de un cierto individuo porten marcadores diferenciables. Esta es una
de las razones de que la base de los marcadores RFLP mas utiles sean las secuen-
cias cortas repetidas que se encuentran en numero muy variable en los diferentes
individuos (Figura 7-14).
Los RFLP son utiles para el mapaje genetico gracias a que las diferencias de
tamafio de fragmentos que un individuo hereda se detectan con gran facilidad

326 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 lugares de corte (dianas) ELECTROFORESIS EN GEL Y Figura 7-15 Detecci6n de un RFLP
de la nucleasa de restricci6n TRANSFERENCIA SOUTHERN CON por transferencia Southern. En este
~ ~ 3m (cromosoma
SaNDA DE DNA MARCADA
ejemplo se utiliza el metodo para
materno) diferenciar los cromosomas paterno y
materno en una regi6n del cromosoma
: ~~~~~~======
.
.
.
.
3p (cromosoma
paterno) 3 de un individuo. Una variante de este
t metodo utiliza peR (vease Figura 7-32)
la diana de restricci6nj CORTAR EL DNA CON UNA 3p para amplificar selectivamente la
desaparecida crea
un RFLP NUCLEASA DE RESTR"CCION regi6n de DNA apropiada, antes del
tratamiento con la nucleasa de

-- .... -
- 3m
I11III

I11III
IIIIiIIIIiiIIII
.... ==3m

==3P
restricci6n. En ese casu los fragmentos
de restricci6n son mucho mas
abundantes que otros fragmentos de
DNA de la muestra y se pueden
I11III
la sonda detecta diferentes visualizar directamente tifiendo el gel,
LT fragmentos de DNA para
fragmento detectado por las regiones hom610gas de
evitando la necesidad de transferencia
la sonda de DNA los cromosomas materna e hibridaci6n con sondas marcadas.
y paterno, revelando un RFLP

mediante transferencia Southern utilizandouna sonda DNA complementaria a

dieha region (Figura 7-15). Ademas, los RFLP permiten relacionar el mapa gene-
tieo con el mapa ffsieo: por un lado sirven como verdaderos marcadores geneti-
cos, como el color de ojos; por otro lado las sondas DNA que permiten detectar-
los son secuencias DNA que se pueden localizar con relativa facilidad en el mapa
ffsieo mediante hibridacion de DNA.
Si se localizan dos marcadores genetieos en dos cromosomas diferentes, la he-
redabilidad de ambos es independiente, es decir la probabilidad de coheredabilidad
es de 50:50. Esto tambien es cierto para aquelios marcadores que se encuentren en
los extremos opuestos de un mismo cromosoma, debido a la elevada probabilidad
de que se separen a causa de la alta frecuencia de entrecruzamiento que tiene lugar
en la meiosis, durante la farmacion de oocitos y de esperma. Cuanto mas cercanos
se encuentren en el cromosoma tanto mayor es la probabilidad de no ser separados
par entrecruzamientos entre elios y por 10 tanto ser coheredados par la progenie
(ligados). Mediante el estudio de la coheredabilidad en grandes grupos familiares
de un gen de interes (por ejemplo, alglin gen relacionado con determinada enfer-
medad) y un gran mlmero de RFLP individuales, se pueden identificar ciertos RFLP
que cohereden frecuentemente con dieho gen (ello requiere el estudio de gran n11-
mero de individuos, como se explica en la Figura 7-16). Por tanto, se pueden locali-
zar las secuencias de DNA que rodean a dieho gen. A partir de ahf es posible, en al-
gunos casos, identificar incluso el DNA del propio gen, mediante tecnieas que se
describen mas adelante (vease Figura 7-30). De este modo se han conseguido iden-
tificar los genes responsables de algunas enfermedades humanas, permitiendo
que sean analizadas en detalle las protefnas que codifican.
Esta claro (vease Figura 7-16) que cuanto mas pr6ximo se localiee un marca-
dor RFLP al gen mutante de interes, tanto mas facil resulta localizar sin ambi-
giiedades dieho gen. Para facilitar dieho estudio se esta realizando un gran es-
fuerzo para establecer un mapa de alta resoluci6n de distribuci6n de RFLP del
genoma humano, con miles de marcadores RFLP espaciados 106 nucle6tidos de
media. Dos marcadores separados esta distancia deberfan coheredarse una
media de 99 de cada 100 casos. Con dieho tipo de mapa sera relativamente facil
utilizar en humanos estudios de ligamiento genetieo para localizar un gen que
ha sido identifieado solo por el efecto de su mutaci6n, permitiendo su localiza-
ci6n en uno 0 en unos cuantos clones gen6mieos muy grandes de una librerfa
gen6miea ordenada. Su aislamiento podrfa realizarse entonces rapidamente.

Las moIeculas sinteticas de DNA facilitan el diagn6stico

prenatal de enfermedades geneticas 12
AI mismo tiempo que los mierobi610gos desarroliaban las tecnicas de clonaje del
DNA, los qufmieos arganieos mejoraron los metodos para sintetizar cadenas

Hibridaci6n de I1cidos nucleicos 327

 par de cromosomas par de cromosomas Figura 7-16 AnaIisis de
materna con la enfermedad paterno sa no
entrecruzamiento genetico utilizando
gen defectuoso
un marcador RFLP. En el ejemplo se
causante de la "'-- estudia la coheredabilidad de un
enfermedad "'-- fenotipo humano (en este caso una
enfermedad genetical con un
marcador RFLP --------
unicamente en esta marcador RFLP. Si los individuos que
copia del cromosoma heredan la eilfermedad tambien
~ heredan casi siempre el marcador
oocito - - - - - r - - - - - e s p e r m a RFLP, el gen que causa la enfermedad
y el marcador RFLP estanin
probablemente pr6ximos en el
cromosoma, como se muestra en la
figura. Para demostrar que un
ligamiento es estadfsticamente
significativo se han de analizar cientos
de individuos. Es de destacar que el
ligarniento no sera absoluto excepto si
el marcador RFLP se localiza en el
mismo gen. En los demas casos el
RFLP y la enferrnedad genetica se
separaran con una cierta frecuencia
CONCLUSI6N: el gen causante de la enfermedad cohereda con el marcador RFLP de la madre
enferma en el 75% de la progenie que padece la enfermedad. Si se observa la misma correlacion en
debido al entrecruzamiento mei6tico
otras familias que sufren esta enfermedad el gen causante de ella se localizara en este cromosoma, durante la formaci6n del oocito 0 del
en una posicion cercana al marcador RFLP. esperma: es 10 que ha ocurrido en el
caso del par de cromosomas de la
cortas de DNA. Actualmente estos oligonucle6tidos de DNA se fabrican de forma derecha.
rutinaria mediante maquinas que, en una noche, pueden construir automatica-
mente cUalquier secuencia de hasta 120 nucle6tidos de largo. Esta capacidad
para fabricar moleculas de DNA de secuencia deseada hace posible redisefiar
genes a voluntad, 10 cual constituye una herramienta importante de la ingenieria
genetica como se explicara mas adelante. Otro usa importante de dichos oligo-
nucle6tidos sinteticos es el de sondas marcadas para detectar las secuencias ge-
n6micas correspondientes mediante hibridaci6n de DNA. Mediante el empleo
de diferentes temperaturas en la reacci6n de hibridaci6n es posible escoger la
severidad de la hibridaci6n: por encima de cierta temperatura s610 hibridaran
aquellas secuencias que sean identicas, 10 que permite detectar genes mutantes,
de gran utilidad en el diagn6stico prenatal de enfermedades hereditarias.
Mas de 3000 enfermedades geneticas humanas son atribuibles a defectos en
genes. La mayoria de estas mutaciones son recesivas: unicamente son perjudi-
ciales en los individuos que heredan de ambos padres la copia defectuosa del
gen. Un objetivo importante de la medicina moderna consiste en la identifica-
ci6n, antes del nacimiento, de los fetos que portan las dos copias defectuosas del
gen, de forma que si 10 desea, la madre puede interrumpir el embarazo. En la
anemia falciforme, por ejemplo, se conoce cual es la alteraci6n exacta de nucle6-
tidos del gen mutante (la secuencia GAG se halla cambiada por GTG en la hebra
de DNA que codifica la cadena ~ de la hemoglobina). Para el diagn6stico prenatal
de esta alteraci6n se sintetizan dos oligonucle6tidos de DNA -uno correspon-
diente a la secuencia del gen normal en la regi6n de la mutaci6n y el otro corres-
pondiente a la secuencia mutante. Manteniendo esta cortas secuencias (de
aproximadamente 20 nucleotidos) y seleccionando una temperatura de hibrida-
cion a la que solo sean estables las helices perfectamente apareadas, estos oligo-
nucle6tidos se pueden utilizar como sondas para distinguir entre las dos formas
del gen. Asf pues dichos oligonucle6tidos pueden utilizarse como sondas marca-
das para diferenciar entre dos formas del gen mediante transferencia Southern
del DNA aislado de celulas fetales recolectadas mediante amniocentesis. Un feto
portador de dos copias del gen de la cadena ~ se detectara facilmente pues s610
presentara hibridaci6n con el oligonucle6tido complementario a la secuencia de
DNA mutante. El diagn6stico supone el aislamiento de DNA de celulas fetales
obtenidas mediante amniocentesis y la utilizaci6n de las sondas de oligonucle6-

328 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

tidos sobre una transferencia Southern. Un feto afectado se puede reconocer
porque su DNA se hibridizani unicamente con el oligonucle6tido que es comple-
mentario de la secuencia del DNA mutante.
En el caso de muchas otras anomalfas geneticas no se conoce la variaci6n
exacta de la secuencia de nucle6tidos. Sin embargo, es posible el diagn6stico
prenatal de un m1mero cada vez mayor de estas anomalfas mediante transferen-
cia Southern para analizar las variaciones especfficas del genoma humane
(RFLP en la Figura 7-16) que, segt1n se sabe, estan fntimamente unidas al gen de-
fectuoso.
Se pueden utilizar metodos similares para determinar la susceptibilidad in-
dividual a sufrir una determinada enfermedad. Por ejemplo, individuos que han
heredado copias an6malas de ciertos genes presentan un riesgo superior de pa-
decer ciertas formas de cancer, por 10 que deben tomar medidas preventivas
para incrementar en 10 posible sus posibilidades de disfrutar de una vida sana.

La hibridaci6n poco rigurosa permite identificar

genes relacionados de forma indirecta13
Durante la evoluci6n aparecen nuevos genes mediante mecanismos de dupli-
caci6n y divergencia de genes antiguos y mediante la reutilizaci6n de regiones
de genes antiguos para generar nuevas combinaciones. Por esta raz6n, muchos
genes tienen una familia de parientes pr6ximos en alguna parte del genoma, y
es probable que algunos de enos tengan una funci6n relacionada. Se requieren
metodos laboriosos para aislar los clones de DNA correspondientes al primer
miembro de unafamilia genica de este tipo. Sin embargo, utilizando las secuen-
cias de este primer gen como sondas de DNA, se pueden aislar de una forma.re-
lativamente sencilla otros genes que producen protefnas que tienen funciones
relacionadas. Dado que es improbable que los nuevos genes tengan secuencias

B Figura 7-17 Comparaci6n de las

v
~
condiciones de hibridaci6n rlgurosas

~
mezcla de moleculas
de DNA de una sola
(stringent) y poco rigurosas (reduced
h stringency). En la reacci6n de la
+ ""
izquierda (condiciones rigurosas), la
soluci6n se ha colocado pocos grados
por debajo de la temperatura a la que
~E desnaturaliza una helice de DNA
F perfecta (su temperatura de fusion), de
forma que las helices imperfectas que
_------1"----_ se pueden formar bajo las condiciones
(
hibridaci6n en
1
hibridaci6n en
poco rigurosas de hibridaci6n de la
derecha son inestables. Para encontrar
formamida al formamida al
50%. a 42C 50%. a 35C genes que no son identicos pero que
estan relacionados con el gen A, se
! B ! utilizan las condiciones de hibridaci6n

l/~
poco rigurosa de la derecha.

1: __ c~~
unicamente A forma tanto A como C y E forman
una doble helice estable dobles helices estables

HIBRIDACICN HIBRIDACICN
RIGUROSA POCO RIGUROSA

Hibridaci6n de licidos nucleicos 329

 o Figura 7-18 Unmarcadorqub:nico
para las sondas de DNA. EI nucle6tido
modificado que se muestra puede ser
incorporado al DNA por la DNA
esta regi6n es aun
polimerasa, de forma que la molecula
accesible para el de DNA se puede utilizar como sonda
apareamiento y detectarse de forma eficiente. La
de bases
con A base del nucle6tido que se muestra es
H
un amilogo de la timina, en la que se
ha reemplazado el grupo metilo en T
con un espaciador unido al esteriode

~
vegetal digoxigenina. Se puede
O~~-O-~-O-~-O
o 0 0
0
visualizar mediante un anticuerpo
especffico unido a un marcador visible
I
0-
I
0-
I
0- como un colorante fluorescente. Otras
moIeculas, como la biotina por
OH H ejemplo, se pueden unir a los
nucle6tidos, y se detectan de un modo
similar.

identicas, las hibridaciones con la sonda de DNA se realizan en condiciones

"poco rigurosas" (reduced stringency) -definidas como aquellas condiciones
que permiten apareamientos imperfectos con la secuencia de la sonda, forman-
do una doble helice estable (Figura 7-17). A pesar de que la utilizaci6n de condi-
ciones poco rigurosas de hibridaci6n conlleva el riesgo de obtener una senal fal-
sa de una regi6n aleatoria que presente una corta secuencia hom610ga en una
secuencia de DNA no relacionada, es~os falsos positivos se pueden eliminar me-
diante una investigaci6n mas profunda.
Este metoda constituye una de las utilidades mas potentes de la tecnologfa
del DNA recombinante. Por ejemplo, esta aproximaci6n ha permitido aislar una
familia completa de proteinas de uni6n al DNA que actuan como directores de
la expresi6n genica durante el desarrollo embrionario en Drosophila. Esta tecni-
ca tambien ha hecho posible el aislamiento de miembros de esta misma familia
genica de otros organismos, incluyendo el hombre.

Las tecnicas de hibridaci6n in situ permiten localizar

secuencias especfficas de acidos nucleicos
en los cromosomas y en las celulas14
Los acidos nucleicos, como otras macromoleculas, ocupan posiciones muy de-
terminadas en las celulas y en los tejidos, de forma que cuando estas moleculas
se extraen por homogeneizaci6n, se pierde una gran cantidad de informaci6n
potencial. Por ello, se han desarrollado tecnicas en las que, de forma similar a
como se utilizan los anticuerpos marcados, se utilizan in situ sondas de acido Figura 7 -19 Hibrldacl6n in situ para
nucleico para localizar secuencias determinadas de acidos nUcleicos, tanto en localizar genes especfficos en los
cromosomas como en determinados tipos celulares. Estas tecnicas se denomi- cromosomas. En la figura se han
nan hibridaclon in situ. Sondas altamente marcadas con is6topos radiactivos utilizado seis sondas diferentes para
pueden ser hibridadas con cromosomas que hayan sido expuestos brevemente a determinar la posici6n de su secuencia
un pH muy elevado para romper los pares de bases de su DNA. Asi pueden vi- nucleotfdica en el cromosoma 5 en
sualizarse las regiones cromos6micas que han fijado la sonda durante la hibrida- metafase. Las sondas estaban marcadas
ci6n. Originalmente estos metodos se desarrollaron utilizando sondas DNA muy quimicamente y se han detectado
mediante anticuerpos marcados con
radiactivas, que se detectaban mediante autorradiograffa. Sin embargo es posi-
fluorocromos. Se muestran las dos
ble mejorar la resoluci6n espacial del metodo si se utilizan sondas de DNA mar- copias del cromosoma 5 alineadas.
cadas qufmicamente en lugar de radiactivamente. Para ella las sondas se sinteti- Cada sonda detecta dos puntos en cada
zan con nucle6tidos especiales que incorporan cierta cadena lateral (Figura cromosoma dado que un cromosoma
7-18), y las sondas hibridadas se detectan mediante anticuerpos (u otros ligan- metafasico tiene su DNA replicado y ,
dos) que reconocen especificamente dicha cadena lateral (Figura 7-19). por ella contiene dos helicEls de DNA
Tambien se han desarrollado metodos de hibridaci6n in situ para poner de identicas (vease Figura 8-4). (Cortesia
manifiesto la distribuci6n de moleculas de RNA determinadas en celulas en el in- de David C. Ward.)

330 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 Figura 7-20 Hibrldaci6n in situ para
la locallzaci6n de RNA en los tejidos.
Autorradiograffa de una secci6n de un
embri6n muy joven de Drosophila que
se ha sometido a hibridaci6n in situ
utilizando una sonda radiactiva de
DNA complementaria de un gen que
participa en el desarrollo de los
segmentos. La sonda se ha hibridado
con el RNA del embri6n, y el patr6n de
distribuci6n de los granos de plata
expuestos revela que el RNA
sintetizado sobre el gen (llamado ftz) se
100 IJrn localiza en bandas altemas de tres 0
cuatro celulas de grqsor, a 10 largo del
embri6n. En este estadio del desarrollo
terior de tejidos. En este caso los tejidos no se exponen a pH alto para que el DNA (blastodermo celular), el embri6n
cromos6mico se mantenga en forma de doble hebra y no pueda unirse ala sonda. contiene unas 6000 celulas. (De E.
En lugar de ello, el tejido se fija suavemente de manera que el RNA se mantenga de Hafen, A. Kuriowa yW,J. Gehring, Cell
37:833-841, 1984 Cell Press.)
tal forma que pueda hibridarse cuando el tejido se incube con una sonda de DNA
complementaria. De esta forma se pueden observar los cambios de patr6n de ex-
presi6n genica en los tejidos. Por ejemplo, en el embri6n de Drosophila estos pa-
trones han proporcionado nuevas ideas sobre los mecanismos que diferencian las
celulas que se hallan en posiciones diferentes durante el desarrollo (Figura 7-20).

Resumen
En las reacciones de hibridaci6n de dcidos nucleicos, las cadenas sencillas de DNA 0
tle RNA colisionan al azar unas con otras, probando rtipidamente miles de millones
tle posibles apareamientos. En condiciones severas de hibridaci6n (una combinadOn
tle solvente y temperatura en las que una doble helke pe1fecta es estable), dos cadenas
se apareardn formando una molkula."hfbrida" solamente si sus secuencias son muy
complementarias. La enorme especiflcidad de la reacciOn de hibridacwn permite que
se pueda marcar cualquier molkula sencilla de DNA 0 RNA Y utilizarla como sonda
para encontrar su cadena complementarla incluso en una celula 0 extracto celular
que contenga millones secuencias de DNA 0 RNA dlferentes. Frecuentemente se utili-
zan sondas de este tipo para detectar los dcidos nucleicos que corresponden a genes
tleterminados, tanto para facllitar su purificaci6n y caracterizaci6n a partir de ex-
tractos celulares, como para localizarlos en el interior de las celulas, teJidos y organis-
mos. Asimismo, utilizando reacciones de hibridaci6n poco rigurosas, se puede utili-
zar una sonda preparada a partir de un gen de un organismo dado para detectar los
genes que estdn relaclonados evolutivamente -tanto en el mismo organismo, donde
los genes relaclonadosformarlan parte de unafamilia genica, como en otros organis-
mos, donde pondria de maniftesto la historia evolutiva de dieha secuencia.

Clonaje de DNA15
Mediante las tecnicas de clonaje de DNA un fragmento de DNA que contiene un
gen de interes se inserta en el genoma de DNA purificado de un elemento gene-
tieo autorreplicante -generalmente un virus 0 un pllismido. Por ejemplo, es po-
sible unir, en el tuba de ensayo, un fragmento de DNA que contiene un gen hu-
mana con el cromosoma de un virus bacteriano, e introducir la nueva molecula
de DNA recombinante en una celula bacteriana. A partir de una unica molecula
recombinante que infecta a una unica bacteria, los mecanismos de replicaci6n
normales del virus pueden producir mas de 10 12 moleculas de DNA virico identi-
cas cada dia, amplificando asi el DNA humano insertado. EI plasmido 0 virus
usado de esta forma se conoce como vector de clonaje, y se dice que el DNA pro-
pagado mediante inserci6n en el se ha clonado.

Clonaje de DNA 331

 plasmido de DNA lineal con
los extremos cohesivos
plasmido de
DNA circular A

APAREAMIENTO

~AATTT
UNION

'
Q.nJ:lC::~;Y CORTE MEDIANTE COVALENTE POR
UNA NUCLEASA
DE RESTRICCION ACCION DE LA DNA
L1GASA plasmido que contiene

iI', TOJ: '

~i j , i I ~
un inserto de DNA
cromos6mico
TTAA
uno de los muchos fragmentos de DNA
producidos al cortar un cromosoma de DNA
con la misma nucleasa de restricci6n Figura 7-21 Formaciondeuna
molt~culade DNA recombinante. Los
extremos cohesivos producidos por
muchas nucleasas de restricci6n
Se puede eonstruir una libreria de DNA utilizando veetores permiten que dos fragmentos de DNA
videos 0 veetores plasmfdicos1 6 se unan mediante interacciones entre
pares de bases complementarias
Para clonar un gen se empieza construyendo una librer(a de DNA (una genoteca)
(vease Figura 7-2). Los fragmentos de
-una colecci6n de fragmentos de DNA clonado, incluyendo (probablemente) al DNA unidos de esta manera pueden
menos un fragmento que contenga el gen de interes. La genoteca puede cons- soldarse de forma covalente a traves de
truirse utilizando como vector tanto virus como plasmidos, y en general se man- una reacci6n muy eficiente catalizada
tiene en una poblaci6n de celulas bacterianas. Los principios basicos de los me- por la enzima DNA ligasa. En este
todos utilizados para clonar genes son los mismos para cualquier tipo de vector ejemplo, se forma un plasmido
utilizado, aunque pueden diferir en algunos detalles. Para simplificar, en este ca- recombinante que contiene un inserto
pitulo ignoraremos estas diferencias, e ilustraremos los metodos en referencia al de DNA cromos6mico.
clonaje en phismidos.
Los vectores plasmfdicos utilizados para el clonaje de genes son pequefias
moleculas circulares de DNA de doble cadena, derivadas de grandes plasmidos
un gran numero de plasmidos, cada uno de
que aparecen de forma natural en bacterias. Generalmente suponen una peque- los cuales contiene un inserto de DNA
fia parte del total del DNA de la celula huesped, pero pueden ser separados facil- diferente. uno de los cuales
es el que nos interesa
mente gracias a su menor tamafio respecto a las moleculas de DNA de los cro-
mosomas, las cuales son mucho mayores y sedimentan por centrifugaci6n. Para 0000
utilizar los plasmidos circulares de DNA como vectores de clonaje, una vez puri- 0000
ficados se cortan con una nucleasa de restricci6n para generar moleculas linea- 00
les. El DNA de la celula que se va a utilizar en la construcci6n de la genoteca
tambien es cortado con la misma nucleasa de restricci6n, y los fragmentos de

........
restricci6n resultantes (entre los que se encuentran los que contienen el DNA
que va a ser clonado) se afiaden a los plasmidos cortados y se cierran, formando
moleculas circulares de DNA recombinante. Estas moleculas recombinantes,
que contienen insertos de DNA ajeno, son unidas covalentemente mediante la
enzima DNA ligasa (Figura 7-21). I I I
solamente son resistentes al
El siguiente paso en la preparaci6n de la genoteca consiste en introducir las
antibi6tico y crecen las bacterias
moleculas circulares de DNA recombinante en bacterias que se han hecho tem- que portan un plasmido
poralmente permeables al DNA; se dice que estas celulas han sido transfectadas
con el plasmido. A medida que estas celulas crecen y se dividen, los plasmidos l l l
recombinantes tambien se van replicando y produciendo un m1mero enorme de b4 *d*d
A 1
copias de DNA circulares que contienen el DNA ajeno (Figura 7-22). Muchos plas- ensayo para las colonias
midos bacterianos transportan genes que les confieren resistencia a los antibi6ti- que contienen el cion de
DNA que interesa. Estas
cos, una propiedad que puede utilizarse para seleccionar las celulas que han sido
colonias se inoculan
en un gran cultivo

Figura 7-22 Purificacion y ampliflcacion de una secuencia espec{flca de

DNA por clonaje de DNA en una bacteria. Cada bacteria que contiene un
I'
plasmido recombinante se desarrolla en una colonia de celulas identicas,
visible como un punto sobre placas de agar nutritivo. Inoculando la colonia de
interes en un cultivo lfquido se puede obtener un gran mlmero de moleculas
purificaci6n del DNA
plasmidico I
000
de DNA plasmidicas, cada una de las cuales contiene el mismo fragmento de
DNA insertado. 80
332 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante
 5'
mRNA 3' Figura 7-23 Sfntesis de eDNA. Se
AAAAAAA obtiene una eopia en DNA (eDNA) de
una moIeeula de mRNA mediante la
UNION DEL CEBADOR
enzima transeriptasa inversa (vease
5'
1 3' pag. 303), formandose asf una heliee
- tf'tf'ttf' hfbrida DNA/RNA. El tratamiento del
SE HACE UNA COPIA EN DNA TTTTTTT hfbrido DNA/RNA con aIeali degrada
MEDIANTE LA TRANSCRIPTASA

5'
1 INVERSA
3' 5'
3'
seleetivamente el RNA hasta
nucle6tidos. La cadena sencilla de
Htf'tf't
TTTTTTT
cDNA que permanece es copiada por
3' la DNA polimerasa formando una
5'
TRATAMIENTO CON ALCALI doble heliee de cDNA. Tal como se
3' 1 PARA DEGRADAR EL RNA
indica, tanto la transcriptasa inversa
J..-------------
el ex.tremo 3'I LA DNA POLIMERASA UTILIZA ESTOS
-TTTTTTT

5'
como la DNA polimerasa requieren un
eebador para poder iniciar la sfntesis.
En el easo de la transeripci6n inversa
del eDNA BUCLES EN HORQUILLA COMO CEBADORES
forma lazos PARA SINTETIZAR UNA CADENA se utiliza un pequeno oligonude6tido,
en horquilla COMPLEMENTARIA en este ejemplo se ha hibridado un
3' oligo(dT) con la larga cola poli-A
ffi'1-, A'f1\.1'I'l-. A'f1\.11~ A'f1\.1'~ A'f1\...~ A'f1\.1"ttf'tf'tf' earacterfstiea del extrema 3' de la
'UP<!J,V 'UP(JJ}"" "l!.XU,V "lLP<UI''' 'l!.P'W '\T T T T T T T mayoria de mRNA. Es de destacar que
5'
la mayor parte de las moleculas de

5'
I TRATAMIENTO CON NUCLEASA S1
PARA ROMPER EL BUCLE

tf'ttf'tt
3'
eDNA producidas carecen de extremos
eohesivos; las moIeculas que poseen
extremos romos se pueden donar
mediante diferentes proeedimientos
3 TTTTTTT
5' que son similares (pero menos
eopia de eDNA de doble cadena realizada a partir de un mRNA original eficientes) a los descritos en la
Figura 7-21.

transfectadas con exito; si la bacteria se hace crecer en presencia del antibi6tico,

solamente sobreviviran las celulas que contengan los plasmidos. Cada una de las
bacterias que fue transfectada contendra, en general, un fragmento de DNA inser-
tado diferente; este inserto sera heredado por toda las celulas de la progenie de la
bacteria que formaran una pequefia colonia en una placa de cultivo.
La colecci6n de muchas pequefias bacterias supervivientes contiene la Ii-
brena de DNA, formada por un gran mlmero de insertos de DNA diferentes. El
problema es que s610 unas cuantas de ellas tendran insertos de DNA con el gen
de interes. Es necesario identificar dichas bacterias a fin de recuperar el DNA de
interes en forma pura y en cantidades titHes. Antes de describir c6mo puede ha-
cerse esto, es necesario describir una segunda estrategia en la construcci6n de
Iibrerias de DNA muy utilizada en el clonaje de genes.

Dos tipos de librerias de DNA cumplen diferentes prop6sitos1 7

El procedimiento de cortar el genoma completo de una celula mediante una nuclea-
sa de restricci6n, tal como se acaba de describir, en ocasiones recibe el nombre de
aproximaci6n de la "perdigonada" al clonaje de genes. Produce una gran cantidad
de fragmentos de DNA -para una celula de mamffero, del orden de un mill6n- que
generaran por tanto millones de colonias diferentes de celulas transfectadas. Cada
una de estas colonias estara compuesta por un clon derivado de una sola celula an-
tecesora, y por 10 tanto, contendni un pIa.smido recombinante con un inserto de la
misma secuencia de DNA gen6mico. Se dice que un plasmido como este contiene
un clon de DNA gen6mico, y la colecci6n completa de plasmidos se denomina
una libreria de DNA gen6mico. Sin embargo, debido a que el DNA gen6mico se
ha cortado al azar en pequefios fragmentos, t1nicamente algunos de estos frag-
mentos contendran genes enteros; muchos de ellos tan s610 contendran una parte
de un gen y la mayona de los clones de DNA gen6mico obtenidos del DNA de una
celula eucariota superior contendran DNA no codificante, el cual, como se vera en
el Capitulo 8, constituye la mayor parte del DNA de estos genomas.

Clonaje de DNA 333

 ,--- gen A --, gen B Figura 7 -24 Difertmcias entre clones
If
iii i i' I Iii 1 ill 111111111~I 1111II! 111111111Iii icrom~~~mico 11111
,--- gen A --,
"1111111111
gen B
11 11111
de eDNA y clones gen6mieos. En este
ex6n intr6n 1 DNA n.o
transcnto 1 TRANSCRIPCI6N 1 ejemplo, el gen Ase transcribe muy
poco mientras que el gen B10 hace
DIGESTI6N POR UNA NUCLEASA
DE RESTRICCI6N transcritos
deRNA -
- --- --- frecuentemente, y ambos genes
contienen intrones (verde). En los
clones de DNA gen6micos se incluyen
tanto los intrones como el DNA no

== == lImUl1 fragmentos de DNA

_
MADURACI6N 1 transcrito, de forma que muchos
1
---
DEL RNA clones contendran s610 una parte de la
secuencia codificante de un gen. En

I
CLONAJE DE DNA
mRNA
- I I
los clones de cDNA no hay secuencias
de intrones ya que se han eliminado en
el proceso de maduraci6n del RNA
TRANSCRIPCI6N INVERSA Y CLONAJE
para formar el mRNA, y por ella
1
contienen una secuencia codificante

-
continua.

--
clones de DNA gen6mico clones de cDNA

Una estrategia altemativa consiste en iniciar el proceso de clonaje seleccio-

nando las secuencias de DNA que se transcriben a RNA, y que, por 10 tanto, pro-
bablemente corresponden a genes. Ello se realiza mediante la extracci6n del
mRNA (0 de una subfraccion purificada del mRNA) de las celulas, ya continua-
cion, haciendo una copia de DNA eomplementario (eDNA) de cada una de las
moleculas de mRNA presentes; esta reacci6n esta catalizada por la enzima trans-
criptasa inversa de retrovirus, la cual sintetiza una cadena de DNA sobre un mol-
de de RNA. Las moleculas de DNA de una sola cadena sintetizadas por la trans-
criptasa inversa se transforman en moleculas de DNA de doble cadena mediante
la DNA polimerasa, y estas moleculas se insertan en vectores viricos 0 plasmidi-
cos y se clonan (Figura 7-23). Cada uno de los clones obtenidos de esta forma se
denomina clon de eDNA, y la colecci6n completa de clones derivados de una
preparacion de mRNA constituye una librena de eDNA.
Existen importantes diferencias entre los clones de DNA genomico y los clones
de cDNA Los clones gen6micos representan una muestra al azar de todas las se-
cuencias de DNA de un organismo, y salvo muy raras excepciones, sera el mismo
independientemente del tipo celular que se haya utilizado para prepararlo. Par el
contrario, los clones de cDNA solo contienen las regiones del genoma que se han
transcrito a mRNA; las celulas de diferentes tejidos contienen diferentes juegos de
moleculas de mRNA, por 10 que se obtendra una libreria de cDNA diferente en fun-
cion del tipo celular empleado para su construcci6n.

Los clones de eDNA eontienen seeuencias

eodifieantes eontinuas 18
La utilizacion de una libreria de cDNA para el clonaje de genes tiene varias ventajas.
Asi, algunas celulas especializadas producen grandes cantidades de determinadas
proteinas y en estos casos la cantidad de mRNA que codifica esta proteina se pro-
duce en un exceso tal que la libreria de cDNA preparada a partir de estas celulas
estara muy enriquecida en las moleculas cDNA que codifican esta proteina, 10
cual facilita la identificacion del clan deseado en la libreria (Figura 7-24). Por
ejemplo, la hemoglobina se fabrica en grandes cantidades en los eritrocitos en de-
sarrollo; por ella los genes de globinas fueron de los primeros en ser clonados.

334 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 La caracterfstica mas importante de los clones de cDNA es que contienen la linfoeitos T Iinfoeitos B
secuencia ininterrumpida de un gen. Frecuentemente los genes eucariotas con-
sisten en pequefias secuencias cortas de DNA codificante (exones) separadas por
regiones largas de DNA no codificante (intrones); la producci6n del mRNA supo-
ne la eliminaci6n de las secuencias no codificantes del transcrito de RNA inicial y
la union entre sf de todas las secuencias codificantes. Ni las celulas bacterianas ni
las levaduras realizan estas modificaciones sobre el RNA producido a partir de un
gen de una celula eucariota. Asf pues, si la intencion del proceso de clonaje estri- <jr...r<)
f"o.J mRNA de los
linfocitos T
ba tanto en deducir la secuencia de aminoacidos de una protefna a partir de la ~
del DNA, como en producir grandes cantidades de la protefna expresando el gen (~
clonado en una bacteria 0 en una levadura, es mucho mejor partir del cDNA. LA TRANSCRIPTASA
Las librerfas gen6micas (genotecas) y las librerfas de cDNA constituyen re- INVERSA
~~~ SINTETIZA DNA
cursos inagotables ampliamente utilizados en investigaci6n. Hoy en dfa, muchas
de estas librerfas son tambien asequibles comercialmente.

Pueden prepararse Iibrerias de eDNA a partir de poblaciones

seleccionadas de moltkulas de mRNA19
Cuando se prepara cDNA a partir de celulas que expresan el gen de interes a ni-
veles extremadamente altos, la mayorfa de los clones pueden contener la se-
eopias de
cuencia del gen, la cual puede asf seleccionarse con un esfuerzo mfnimo. Para el eDNA
caso de genes transcritos de forma menos abundante, antes de hacer la librerfa
de cDNA pueden utilizarse diversos metodos para enriquecer la poblaci6n de
RNA con el mRNA de interes. Por ejemplo, si se dispone de un anticuerpo contra
la protefna, puede utilizarse para precipitar selectivamente los polirribosomas HIBRIDACI6N CON EXCESO
aislados (veanse pags. 253-254) que contengan las cadenas en crecimiento del DE mRNA PROCEDENTE
~-.-'" DE LOS L1NFOCITOS B
polipeptido de que se trate. Como estos ribosomas tambien contienen el mRNA
que codifica la protefna, el precipitado estara enriquecido en el mRNA deseado,
en un factor de aproximadamente 1000 veces. eDNA de los eseasos
El procedimiento de la hibridaci6n substractiva supone una potente alter- mRNA presentes
unieamente en los
nativa para enriquecer la mezcla con una secuencia particular de nucleotidos, linfoeitos T
antes de proceder al clonaje de los cDNA. Este procedimiento de seleccion puede
utilizarse, por ejemplo, si se dispone de dos tipos celulares estrechamente rela-
cionados procedentes de organismos de la misma especie, pero tales que s610
uno de ellos produzca la protefna 0 protefnas de interes. Fue utilizado inicial-
mente para identificar protefnas receptoras de superficie presentes en los linfoci- UNA COLUMNA DE
tos T y no presentes en los linfocitos B. Tambien puede utilizarse cuando una ce- HIDROXIAPATITA
ELiMINA TODOS LOS
lula que expresa la protefna tiene una mutante que no la expresa. EI primer paso HIBRIDOS DNA/RNA
del proceso consiste en sintetizar las moleculas de cDNA utilizando el mRNA del
tipo celular que fabrica la protefna de interes. A continuaci6n, estos cDNA se hi-
bridan con un gran exceso de moIeculas de mRNA del segundo tipo celular. El es-
caso mlmero de secuencias de cDNA que no encuentran pareja de mRNA com-
eDNA purifieados que
plementaria, y que por 10 tanto probablemente representan las secuencias de eorresponden a los mRNA
mRNA que tinicamente estan presentes en el primer tipo celular, son purificadas earaeteristieos de los
Iinfoeitos T
por un procedimiento bioqufmico sencillo (una columna de hidroxiapatita) que
separa las moleculas de acidos nucleicos de cadena sencilla de las de doble cade- Figura 7-25 Hibridacion
na (Figura 7-25). Ademas de constituir un poderoso sistema para clonar los genes substractiva. Aquf la Menica se utiliza
cuyos productos estan restringidos a un determinado tipo celular especializado, para purifiear clones de eDNA raros
las librerfas de cDNA preparadas tras hibridaci6n substractiva son titiles para de- que eorn)sponden a mRNA, presentes
en linfocitos T pero no en linfocitos B.
finir las diferencias de expresion genica entre dos tipos celulares relacionados.
Como ambos tipos eeliuares estan
muy relacionados, muehos de los
Para identificar los clones de interes en una Iibreria de DNA mRNA seran eomunes a ambos tipos
puede utilizarse tanto una sonda de DNA como un ensayo celulares; el metodo de hibridaci6n
para la protefna expresada20 substractiva es, por ello, una potente
herramienta para obtener
A menudo la etapa mas diffcil del proceso de clonaje de genes consiste en iden- preparaciones enriquecidas en las
tificar las escasas colonias de la librerfa que contienen los fragmentos de DNA moleculas especializadas que
de interes. Esto es especialmente cierto en el caso de librerfas gen6micas, en las diferencian ambas celulas.

Clonaje de DNA 335

 disco de papel absorbente

INCUBAR CON LA
SONDA Y LAVAR
colonias que contienen
el plasmido de interes

sonda de DNA EXPONER EL PAPEL

marcada " A LA PELICULA

::~;'I
..
radiactivamente '\ FOTOGRAFICA

placa de petri con DNAunido

colonias de bacterias _ _,""""""",,",..L al papel
que contienen
phlsmidos
recombinantes
posici6n de las
colonias deseadas
detectadas por
autorradiografia
RECOGER EL DISCO DE PAPEL L1SADO DE LAS BACTERIAS
DE LA PLACA PARA OBTENER Y DESNATURALIZACION
LA R~PLlCA DE LAS COLONIAS DEL DNA

Figura 7-26 Una ttknica eflciente que normalmente se utlliza para

encontrar las colonias bacterlanas que contienen un clon de cDNA
determinado. Se hace una replica del cultivo presionando un disco de papel
absorbente contra la superficie. Esta replica se trata con aIcali (para romper
las celulas y desnaturallzar el DNA plasmfdico) y se hibrida con una sonda
radiactiva de DNA. Las colonias que se han hibridado con la sonda se
detectan por autorradiograffa (vease tambien Figura 7-22).

que para identificar un determinado gen de mamffero se ha de identificar una

celula bacteriana de entre un mill6n de celulas. La tecnica utilizada mas frecuen-
temente consiste en una forma de hibridaci6n in situ, que aprovecha la exquisita
especificidad de las interacciones entre pares de bases que se producen entre dos
moleculas complementarias de acidos nucleicos. Se transfieren (blotting) a un fil-
tro colonias crecidas en placas de cultivo, de forma que quedan adheridos algu-
nos miembros de cada colonia bacteriana. Estas colonias adheridas, conocidas
como replicas, se tratan con aIcali y se incuban con una sonda radiactiva de DNA
que contiene parte de la secuencia del gen que va a ser seleccionado (Figura 7-26).
Si es necesario, de esta forma se pueden estudiar millones de clones bacterianos
hasta encontrar uno que hibride con la sonda.
Para encontrar el clon que interesa es necesario disponer de la sonda ade-
cuada. C6mo construirla dependera de la informaci6n de que se disponga del
gen a clonar. En muchos casos, la protefna de interes ha sido identificada me-
diante estudios bioqufmicos y purificada en pequefias cantidades. Una cantidad
tan pequefia como unos cuantos microgramos de la protefna pura es suficiente
para determinar la secuencia de los 30 primeros aminoacidos. Utilizando el c6digo
genetico, a partir de esta secuencia de aminoacidos se puede deducir la secuencia
correspondiente de nucle6tidos (con algunas ambigiiedades que corresponden a
aquellos aminoacidos que son codificados por diferentes codones). Entonces, utili-
zando metodos qufmicos, se sintetizan dos juegos de oligonucle6tidos escogidos
para reconocer diferentes zonas de la secuencia de nucle6tidos predicha del gen
(Figura 7-27). Aquellas colonias de celulas que hibriden con ambos nucle6tidos
son buenos candidatos para contener el gen deseado, y se afslan para una carac-
terizaci6n posterior (vease mas adelante).
Las sondas tambien se pueden obtener de otras formas. Si se dispone de an-
ticuerpos que reconozcan la protefna producida por el gen, es posible marcarlos
y utilizarlos como sonda para encontrar aquel clon que sea productor de la pro-
tefna, y por ella que contendra el gen buscado. Tambien se puede usar como
sonda cualquier otro ligando capaz de unirse a la proteina codificada por el gen:

336 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

region conocida de una secuencia de aminoacidos
H2N--- --COOH
codones posibles
5' GGA GUA AGA AUG GAC UGG AAC UAC GAA CCA UUA AGC ACA UGG GAA AUG AAC CAA UGG UUC GUA AGA GCA 3'
GGC GUC AGG GAU AAU UAU GAG CCC UUG AGU ACC GAG AAU CAG UUU GUC AGG GCC
GGG GUG CGA CCG CUA UCA ACG GUG CGA GCG
GGU GUU CGC CCU CUC UCC ACU GUU CGC GCU
CGG CUG UCG CGG
CGU CUU UCU CGU
regiones de secuencia
codificante con menor
ambigi.iedad

oligonucleotidos
sinteticos usados
como sondas
(16 posibilidades) (8 posibilidades)

si codifica un proteina receptara, por ejemplo, elligando que normalmente se Figura 7-27 Selecci6n de regiones de
une es un buen candidato a sonda especifica. una secuencia de aminmicidos
Siempre que sea necesario detectar la proteina codificada par el gen y el conocida para hacer sondas sinteticas
propio gen, es necesario construir un tipo de libreria de cDNA especial. Se pre- de oligonucle6tidos. De hecho, una
para utilizando vectores viricos 0 plasmidicos especiales, denominados vectores secuencia de nucle6tidos determinada
codifica una sola protefna, pero la
de expresi6n, que permiten la sintesis de grandes cantidades de la proteina codi-
degeneraci6n del c6digo genetico
ficada par el DNA ex6geno en las bacterias transfectadas. significa que varias secuencias de
nucle6tidos diferentes codifican la
La traducci6n in vitro facilita la identificaci6n misma protefna, y es imposible
del clon de DNA correcto21 anticipar emil de elIas sera la correcta.
Debido a que es deseable utilizar como
Cualquier metoda que se utilice para aislar clones especificos a partir de librerias sonda una mezcla de oligonucle6tidos
gen6micas 0 librerias de cDNA detecta muchos falsos positivos. Se necesita, con una proporci6n de la secuencia
pues, una dosis suplementaria de ingenio para discriminar entre estos clones y correcta de nucle6tidos tan alta como
los autenticamente positivos. La tarea se facilita cuando el clon deseado codifica sea posible, se escogen las secuencias
una proteina que ha sido bien caracterizada mediante otros sistemas. En este con menos indeterminaciones, como
caso, se comprobara, mediante diferentes metodos, si alguno de los fragmentos se muestra en la figura. En este
ejemplo se deben sintetizar los 8
de DNA clonados codifica la proteina apropiada. Por ejemplo, el DNA clonado se
oligonucle6tidos muy similares que se
puede insertar en un vector de expresi6n, de modo que la proteina se produzca
indican, que se usaran como sonda
en grandes cantidades en bacterias. Asimismo se puede obtener la molecula de sobre una librerfa de DNA, y la mezcla
RNA correspondiente del DNA clonado, ya sea mediante sintesis in vitro con RNA de los 16 oligonucle6tidos se utilizara
polimerasa purificada (vease Figura 7-36), 0 mediante una tecnica denominada para verificar por hibridaci6n todos los
selecci6n de hfbridos. En este Ultimo metodo se mezcla RNA celular en un gran posibles clones positivos de la primera
exceso con moleculas de una sola hebra del DNA candidato, y los hibridos busqueda, a fin de encontrar los que
DNA/RNA se utilizan para poder aislar las moleculas de mRNA complementarias codifican la proteina deseada. Cada
de la mezcla. El mRNA purificado de esta forma se utiliza para la sintesis de prote- oligonucle6tido se marca en el
ina en un sistema libre de celulas con aminoacidos radiactivos, y la proteina ra- extrema 5' despues de ser sintetizado
diactiva producida se caracteriza y se compara con la esperada a partir del clon por metodos qufmicos (vease
DNA buscado. La coincidencia de resultados en alguna de estas aproximaciones Figura 7-6B); altemativamente, el
es la que nos permitira concluir que el fragmento de DNA clonado codifica la pro- oligonucle6tido se puede marcar en el
propio proceso de sfntesis mediante la
teina buscada.
incorporaci6n de un nucle6tido
modificado (vease Figura 7-18).
La selecci6n de clones de DNA solapados permite "caminar" por
el cromosoma hasta un gen vecino de interes22
Muchos de los genes mas interesantes -par ejemplo los que controlan el desarro-
110- se conocen tan s6lo a traves de ancilisis geneticos de mutantes en organismos
tales como la mosca del vinagre Drosophila y el nemcitodo Caenorhabditis elegans.
Los productos proteicos de estos genes son conocidos y pueden hallarse en canti-
dades muy pequefias en unas cuantas celulas, 0 producirse unicamente durante
un determinado estadio del desarrollo. Sin embargo, es posible establecer mapas
cromos6micos que reflejen las posiciones relativas de los diferentes genes en el

Clonaje de DNA 337


-
Figura 7-28 Utilizaci6ndel

cion A t PREPARAR UNA SONDA DEL EXTREMO DEL CLON A solapamiento de clones de DNA para
encontrar un nuevo gen, mediante la
t EMPLEAR LA SONDA PARA IDENTIFICAR EL NUEVO CLON
tecnica de "caminar por el

RESULTADO: UNA COLECCI6N

DE CLONES DE DNA SOLAPADOS
Y ORDENADOS QUE CUBREN
TODA LA REGI6N CROMOs6MICA
cion B

-
a::::;: ,;;:;;:.:\::,::;;;,:;::;:.
t PREPARAR UNA SONDA DEL EXTREMO DEL CLON B

t EMPLEAR LA SONDA PARA IDENTIFICAR EL NUEVO

cion C
::;:\!; '1\;: :;:::.
t etc.

t
CLON
cromosoma". Para aumentar la
velocidad del proceso, resulta optimo
utilizar mollkulas de DNA clonadas
muy largas. Para localizar el cion
siguiente mediante el procedimiento
de "caminar por el DNA", se purifica
un fragmento carta de DNA (y se
marca radiactiva 0 qufmicamente) de
cion D t uno de los extremos del clan
etc.
identificado anteriormente: si se utiliza
gen clonado previamente 0 marcador genetico
el extrema derecho, par ejemplo, el
W,,;.LI (""H.,,;:.:l E~H;1 h" :'; lI'''! l' '" WI! i I ) avance se realizani hacia la derecha,
DNA cromos6mico como se ilustra en el ejemplo. La
nuevo gen de interes
direcci6n del "paseo" por el cromosoma utilizacion de pequefios fragmentos
del extremo del clan reduce la
probabilidad de que la sanda contenga
secuencias de DNA repetidas que
cromosoma a partir de estudios de ligamiento (vease Figura 7-16). Cuando un hibridarfan con numerosos clones de
gen mapado se ha clonado, se pueden identificar los clones de una libreria de diferentes regiones del genoma, con 10
DNA gen6mico que corresponden a genes vecinos, utilizando una tecnica co- que se interrumpiria el "paseo".
nocida como "caminar por el cromosoma". Una vez identificados estos, se ca-
racterizan mediante las tecnicas descritas en este capitulo a fin de identificar su
estructura y su funci6n.
El proceso de "caminar por el cromosoma" se inicia a partir de un clon de
DNA 0 un marcador RFLP del que se sabe que esta muy pr6ximo al gen de interes.
Un extrema de este clon se utiliza para preparar una sonda DNA que se usara
para localizar clones gen6micos mediante hibridaci6n. Despues de aislar este
segundo clon se utiliza el extrema mas alejado del anterior para preparar una se-
gunda sonda DNA, que tambien se utilizara para aislar nuevos clones gen6micos.
De este modo se puede ir caminando por el cromosoma, clon a clon, en pasos de
unos 30 000 pares de bases 0 mas, en ambas direcciones (Figura 7-28).
Pero, ic6mo se puede determinar cuando se ha acabado el gen de interes
(identificado originalmente mediante una mutaci6n deleterea), dado que el cami-
no recorrido generalmente es demasiado largo para poder determinar la secuencia
completa de DNA? En el caso de organismos muy utilizados en experimentaci6n
como moscas del vinagre, nematodos, Arabidopsis, levaduras y ratones, la prueba
definitiva se obtiene al introducir la forma correcta del gen en un individuo mu-
tante, produciendo un organismo transgenico (vease Figuras 7-45 y 7-49). Si la
mutaci6n original era recesiva, el individuo transgenico debe recuperar la funci6n
normal. En otras ocasiones, como en el caso del estudio de los genes humanos, no
es posible obtener transgenicos y por ello se aplican criterios menos severos,
como se describe mas adelante (vease Figura 7-30).

clones en
vectores
c6smidos
l --- -
_
_
1II\lIIll1I _ _
1IIIIllIllllI _
1IIIIIlI\\\\\lI_
II\IIIlIIlIIIII __

1IIIIlIIIIIIIII1IIIIIlI\\\\\lI_
II\IIIlIIlIIIII
1IIIIlIIIIIIIII_
Figura 7-29 Clones de DNA
gen6micos solapados. La coleccion de

clones
enYAC [-~~~;;;; clones que se muestran cubren una
pequefia region del cromosoma del
gusano nematodo Caenorhabditis
elegans y representa un 0,3 % del
:-.' IIlIIIIIIIIlIII. .IIlIIIIIIIIlIII ;' genoma total. (Adaptado de J. Sulston
cromosoma 3 sup5 unc-32
et al., Nature 356: 37-41, 1992.
- 300 000 pares de bases 1992 MacMillan Magazines Ltd.)

338 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 gen humano mutado, localizado en algun Figura 7-30 Clonaje posicional. El
lugar de este mill6n de pares de bases ~
~ pOcedimiento requiere la utiIizaci6n
de un gen humano mutante cuya
1 -
( (

ETAPA
I ) ) 5 herencia pueda detectarse en muchos
marcador RFLP X marcador RFLP Y grupos familiares gracias al fenotipo
que causa dicha mutaci6n. Etapa 1,
mapaje genetico: se identifican

---------------
solapamiento de clones de DNA
marcadores RFLP, que coheredan con

ETAPA 2 -
-7
(
---------------
x Y
)
(
-
el fenotipo mutante, y se utilizan para
posicionar el gen en margen de unas
106 pares de bases (una megabase,
alrededor dell % de la longitud de un
cOmosoma humano tipico). Etapa 2,
secuencias de DNA conservadas en el rat6n ensamblaje de una librerta de clones

ETAPA 3 -
-7
(

X
,< ~ ~ \

\
~ Y
5
(
-
ordenados: se obtienen clones de DNA
gen6mico que cubran la totalidad de la
regi6n comprendida entre dos
marcadores RFLP que flanquean el
secuencias de DNA conservadas que gen. Etapa 3, busqueda de secuencias
codifican un mRNA adecuado de DNA conservadas: se identifican las

~ ~
porciones de cada clon DNA que
4 - ( (
-
ETAPA
-7
X Y
5 hibridan con DNA de rat6n;
unicamente las regiones del
cOmosoma humano cuya secuencia
gen cuya secuencia esta alterada en los de nucle6tidos sea importante, estanin
humanos que presentan el fenotipo mutante
suficientemente conservadas durante

/ - la evoluci6n para formar una helice

5 -I
( (

ETAPA
X Y
5 hibrida de DNA (una de las hebras de
DNA humano y la otra de DNA de
rat6n). Etapa 4, busqueda de mRNA
adecuados: las secuencias de DNA que
Se estan construyendo librerias gen6micas de clones mas pObablemente contienen el gen
ordenados para organismos seleccionados23 mutante son el subconjunto de
secuencias de DNA conservadas que
Sera mucho mas sencillo identificar genes mutantes a medida que se conozca mas
codifican mRNA en los tejidos en los
completa y sistematicamente la secuencia del genoma normal. Utilizando metodos que se expresa el fenotipo mutante.
relacionadQs con los descritos para "caminar por el cromosoma", ha sido posible or- Etapa 5, bUsqueda de diferencias entre
denar (mapar) un juego casi completo de grandes clones gen6rnicos a 10 largo de los las secuencias de DNA de los genes
cromosomas de la bacteria E. coli, la levadura Saccharomyces cerevisiae, la mosca del mutantes. Cuando se analizan las
vinagre Drosophila, la planta Arabidopsis y el nematodo C. elegans. Estos grandes mutaciones deletereas de un gen
clones, cada uno de los cuales tiene aproximadamente 30 000 pares de bases de lon- humano tipico, alrededor de 1 de cada
gitud, se han preparado en vectores del bacteri6fago lambda llainados c6smidos, los 10 resulta ser una delecci6n facilmente
cuales se han disefiado especialmente para aceptar unicamente grandes insertos de detectable por analisis Southern como
DNA. Son necesarios algunos miles de clones c6smidos para cubrir todo el genoma una cambio del tamafio de un
de un organismo como C. elegans 0 Drosophila. Para mapar todo el genoma huma- fragmento de restricci6n. Por esta
no siguiendo este sistema, se tendrfan que ordenar mas de 100 000 de estos clones raz6n, generalmente se empieza
estudiando el DNA de muchos
c6srnidos, 10 cual, aunque es tecnicamente posible, llevarfa mucho tiempo. Ademas,
pacientes humanos que padezcan la
se pueden clonar fragmentos de DNA humano mas de 10 veces mas largos que los
misma enfermedad, utilizando sondas
clones c6srnidos (300 000 hasta 1,5 millones de pares de bases) en forma de cromo- identificadas en la etapa 4, buscando
somas artificiales en celulas de levadura (YAC, de Yeast Artificial Chromosomes, cro- cambicis de este tipo. Si la mutaci6n no
mosomas artificiales de levadura); en principio el genoma humano se puede mapar es detectable como una delecci6n,
con 10 000 clones de este tipo (vease Figura 8-5). para identificar al gen de interes se
Sin duda, en un futuro pr6ximo seran asequibles un conjunto de clones ge- deberan utilizar otOs metodos mas
n6micos de librerfas de DNA centralizadas para el uso de todos los investigado- laboriosos que sean capaces de
res. Para cada organismo de los que se estudian habitualmente existira una li- detectar cambios de una sola base.
brerfa completa, en la que cada inserto de DNA estara catalogado de acuerdo
con su cromosoma de origen, y numerado secuencialmente con respecto a la
posici6n de todos los demas fragmentos de DNA derivados del mismo cromoso-
rna. Asf, se podra empezar a "caminar por un cromosoma", simplemente obte-
niendo de la librerfa todos los clones que cubren la regi6n del genoma que con-
tiene el gen mutante de interes.

Clonaje de DNA 339

El clonaje posicional de DNA revela la presencia
de genes de funciones imprevistas24
Miles de enfermedades geneticas humanas son debidas a alteraciones en un solo
gen. La comprensi6n que tenemos de dichas enfermedades esta siendo revolu-
cionada por la tecnologfa del DNA, que permite donarlo y secuenciarlo, revelan-
do los defectos precisos de cada paciente. De esta forma se ha p04ido demostrar
que la causa de la distrofia muscular de Duchennne es una proteina an6mala del
citoesqueleto en las celulas musculares, y que la fibrosis quistica es debida a un
canal de doro an6malo en las celulas epiteliales. Estos conocimientos permiten
afinar el diagnostico, y disenar nuevos tratamientos.
A pesar de que las tecnicas que se han utilizado para aislar diferentes genes
humanos han diferido dependiendo de la enfermedad que producen, reciente-
mente se ha desarrollado una aproximacion que permitira aislar cualquier gen
humano responsable de un rasgo 0 causante de una enfermedad. Se ha denomi-
nado clonaje posicional pues parte de un mapa de ligamiento que permite loca-
lizar el gen en el genoma (Figura 7-30). Cuando esta aproximacion es directa
puede suponer la dedicaci6n de 10 a 100 personas en un ano para aislar un gen.
Sera mucho mas sencillo una vez que se disponga de tecnologias de secuencia-
cion de DNA mucho mas rapidas y automaticas, y que se conozca la secuencia
completa del DNA del genoma humano: el mapaje genetico indicara inmediata-
mente que genes son los primeros candidatos, permitiendo su analisis directo
en los pacientes individuales. Es probable que se puedan analizar de este modo
las funciones de miles de genes humanos.

Mediante una reaccion de polimerizacion en cadena se pueden cadenas de DNA complementarias separadas
_ _ _ _ _ 5'
clonar segmentos de DNA en un tubo de ensayo25 3'
cebadores
La asequibilidad de DNA polimerasas purificadas y de oligonudeotidos de DNA p
sintetizados quimicamente ha hecho posible donar rapidamente secuencias 5'
es..eC.if.iC.O.S'&- 3'
determinadas de DNA, sin necesidad de utilizar ninguna celula viva. La tecnica,
denominada reacci6n en cadena de la polimerasa (peR, de Polymerase Chain
Reaction) permite amplificar mas de mil millones de veces un DNA obtenido a
! sintesis de DNA

partir de una region seleccionada de un genoma, siempre y cuando previamente 3' 5'
se conozca al menos una parte de su secuencia de nudeotidos. En primer lugar
se utilizan porciones de la secuencia que rodean la region que va a ser amplifica-
da, para disenar dos oligonucleotidos sinteticos de DNA, cada uno de los cuales
3'
es complementario de cada una de las cadenas de la doble helice de DNA, y que
corresponden a sitios opuestos de la region a amplificar. Estos oligonudeotidos X pares de nucle6tidos
se utilizan como cebadores para la sintesis in vitro de DNA, catalizada por una
Figura 7-31 lnicio de la reacci6n en
DNA polimerasa, y determinan los extremos del fragmento final de DNA que se cadena de la polimerasa (PCR) para la
obtiene (Figura 7-31). amplificaci6n de secuencias
El principio de la tecnica PCR se ilustra en la Figura 7-32. Cada cido de re- especfficas de nucle6tidos in vitro. El
acci6n requiere un breve calentamiento para separar las dos cadenas del DNA DNA aislado de celulas se calienta para
genomico de doble helice (etapa 1). EI exito de la tecnica depende del uso de separar su dos cadenas
una DNA polimerasa especial aislada de una bacteria term6fila y que es mucho complementarias. Estas cadenas se
mas estable a temperaturas elevadas que la polimerasa comun, de modo que no hibridan con un gran exceso de dos
se desnaturaliza por calentamientos repetidos. EI enfriamiento posterior del oligonucle6tidos (de 15 a 20
DNA en presencia de un gran exceso de los dos oligonudeotidos permite su hi- nucle6tidos de longitud) sintetizados
bridaci6n especifica con las secuencias complementarias de DNA (etapa 2). La por metodos qufmicos y que son
mezda se incuba con DNA polimerasa y los cll;atro desoxirribonucle6sidos tri- identicos a secuencias que distan entre
sf X nucle6tidos (donde Xvaria
fosfato, de forma que las regiones del DNA que se hallan en direccion 3' de los
generalmente entre 50 y 2000
cebadores, se sintetizan selectivamente (etapa 3). Para conseguir una amplifica-
nucle6tidos). Los dos oligonucle6tidos
ci6n especifica del DNA se requieren 20 0 30 ciclos de reacciones. Cada cido actuan como cebadores para la sfntesis
dura aproximadamente 5 minutos, y un procedimiento automatico permite el in vitro de DNA catalizada por la DNA
donaje en un sistema libre de celulas de un fragmento de DNA, en pocas horas, polimerasa, que copia la secuencia de
comparado con el tiempo de varios dias que se requiere para el donaje por los DNA que hay entre ambos
metodos estandar. oligonucle6tidos.

340 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 Figura 7-32 Ampliflcaci6n por PCR. EI metodo PCR produce, en cada cicIo
de sintesis de DNA, una cantidad doble de la precedente, de una moleculade
tamafio unico. Cada cicIo esta formado por tres etapas, como se describe en
el texto. Despues de muchos cicIos de reacci6n la poblaci6n de moleculas de
DNA esta dominada por un fragmento de DNA unico, de X pares de bases,
siempre que la muestra de DNA original contenga la secuencia que se
esperaba que existiera entre los dos oligonucIe6tidos. En el ejemplo, tres
cicIos de reacci6n han producido 16 cadenas de DNA, 8 de las cuales tienen la
misma longitud (amarillo); pero despues de tres cicIos mas, 240 de las 256
cadenas seran de X nucIe6tidos de longitud.

EI metodo PCR es extremadamente sensible: en una muestra puede detectar

una sola molecula de DNA. De una forma similar se pueden analizar cantidades
traza de RNA, transformando este RNA en secuencias DNA mediante la acci6n
de la transcriptasa inversa. La tecnica de clonaje mediante PCR esta substituyen-
do con rapidez a la de transferencia Southern para el diagn6stico de enfermeda-
des geneticas y para la detecci6n de infecciones viricas muy tenues. Tambien
constituye una tecnica prometedora para la medicina forense, ya que permite
analizar cantidades pequefias de sangre u otros tejidos -tan pequefias como una
sola celula- e identificar a la persona de la que procede pOI sus caracteristicas
geneticas (Figura 7-33).

Resumen
El clonaje de DNA permite seleccionar una copia de cualquier secuencia de RNA 0
de DNA entre millones de otras secuencias de una celula, produciendo cantidades
ilimitadas de ella en forma pura. Las secuencias de DNA son amplijicadas despues
de cortar el DNA cromos6mico con una nucleasa de restricci6n e insertar los frag-
mentos de DNA resultantes en el cromosoma de un elemento genetico autorrepli-
cante (un ptasmido 0 un virus). Cuando se utiliza un ptasmido como vector, la "li-
breria gen6mica de DNA" resultante se mantiene en el interior de millones de
celulas baeterianas, cada una de las cuales porta un fragmento diferente de DNA
clonado. La colonia portadora del fragmento de interes se identiftca mediante hi-
bridaci6n con una sonda DNA, 0, despues de expresar el gen 0 el fragmento genico
clonado en la celula huesped, mediante un sistema que detecte el producto genico
deseado. Las celulas de la colonia identijicada se dejan proliferar produciendo
grandes cantidades delfragmento de DNA deseado.

Clonaje de DNA 341

 huella genetica por PCR Figura 7-33 UsodePCRenmedicina
VNTR1 VNTR2 VNTR3 forense. (A) Si se utilizan dos
oligonucle6tidos que flanquean un
cromosoma cromosoma microsatelite particular, 0 secuencia
materna paterno
VNTR (vease Figura 7-14Cl, para
amplificar un DNA por PCR, se
obtienen diferentes bandas de DNA
individuo
secuencias cebadores A para cada individuo. Una de estas
repetidas para bandas contiene la secuencia VNTR
de un locus amplificaci6n repetida que fue heredada de la madre
VNTR
tI PCR
y la otra contiene la secuencia VNTR
repetida que foe heredada del padre.
(B) La gran cantidad de bandas de
DNA obtenidas de un conjunto de
PCR diferentes reacciones PCR, cada una
de las cuales amplifica el DNA de una

I I ~ individuo
secuencia VNTR diferente, pueden
utilizarse como "huella genetica" para
8 identificar a cada individuo de forma
electroforesis -
casi exclusiva. El material de partida
en la reacci6n PCR puede ser un
(A) simple cabello olvidado en la escena
de un crimen.
numero de repeticiones PCR
0 5 10 15 20 25 30 35

I I II I I
III I I I individuo
C

I II II I
electroforesis -
~ ~ ~
3 pares de cromosomas
(8) hom61ogos

El proeedimiento que se utiliza para aislar clones de DNA euya seeueneia eo-
rresponda a la de un mRNA es el mismo, con la exeepei6n de que, en vez de utilizar
fragmentos gen6mieos al azar, el material de partida es un DNA obtenido mediante
eopia de un mRNA, denominado eDNA. A difereneia de los clones gen6mieos, los
clones de eDNA eareeen de seeuencias intr6nieas, siendo por ello los clones de elee-
ei6n para expresar y earacterizar el produeto proteieo de un gen.
El metodo PCR es una nueva forma de clonaje de DNA que se realiza en un sis-
tema libre de celulas, utilizando una DNA polimerasa termoestable purifleada.
Este tipo de amplijieaei6n de DNA supone un eonocimiento previo de la seeueneia
geniea pues son neeesarios dos oligonucle6tidos sintetieos que flanqueen la seeuen-
cia a amplijiear. Sin embargo, el metodo de clonaje por PCR tiene la ventaja de ser
mueho mas rapido y sencillo que los metodos de clonaje estandar.

Ingenieria de DNA26
Los metodos que se han descrito hasta el momenta en este capitulo permiten en
principio determinar la organizaci6n y la secuencia nucleotidica de cualquier
cromosoma, incluyendo aquellos que forman el genoma humano. En esta sec-
ci6n se describinin variaciones y modificaciones de dichos metodos que han re-
volucionado el estudio de las funciones de los genes, los RNA y las proteinas.

342 Capitulo 7 : Tecnologfa del DNA recombinante

Se pueden construir moIeculas de DNA de cualquier secuencia
uniendo fragmentos de DNA27
Como hemos visto, las moIeculas de DNA recombinante se obtienen general-
mente usando la enzima DNA ligasa para unir dos moleculas de DNA con extre-
mos cohesivos compatibles. En el caso de la construcci6n de una librerfa de
DNA, uno de los fragmentos de DNA es el vector, derivado de un pl<ismido bacte-
riano 0 de un virus, mientras que el otro es un fragmento cromos6mico 0 una
molecula de cDNA (vease Figura 7-21). Esta molecula de DNA recombinante
puede, a su vez, ser usada como vector para donar moleculas de DNA adiciona-
les y, paso a paso, repitiendo el proceso de donaje, es posible unir diferentes
moleculas de DNA. Asf es posible construir moleculas de DNA que son distintas
de cualquiera que exista de forma natural (Figura 7-34).
Los sintetizadores automaticos de oligonude6tidos son capaces de producir
cualquier moIecula de DNA de hasta 100 nude6tidos. Su secuencia es determinada
por el experimentador; estas moleculas pueden unirse unas con otras por medio
de etapas de donaje sucesivas en diferentes combinaciones, a fin de producir
largas moleculas de DNA. Sin embargo, en la mayor parte de los casos las secuen-
cias de DNA de interes para el bi610go celular son las que codifican dominios pro-
teicos que ya existen en la naturaleza. Es posible usar la reacci6n en cadena de
la polimerasa (PCR) tanto para amplificar secuencias nudeotfdicas naturales
como para redisefiar sus extremos, de forma que puedan amplificarse y unirse
eficientemente dos secuencias naturales cualquiera (Figura 7-35). Actualmente
en muchos casos es mas facil producir nuevas moleculas de DNA mediante PCR y
clonajes sucesivos que unan segmentos de DNA seleccionados que a partir de
fragmentos sintetizados qufmicamente.

Es posible producir grandes cantidades de moIeculas de RNA Figura 7-34 El clonaje seriado de
homogeneas mediante transcripci6n de DNA in vitro28 DNA puede utilizarse para unir una
serie de fragmentos de DNA
Las moleculas de RNA puras son de utilidad en numerosos estudios de biologfa procedentes de diferentes genes.
celular. En el caso de que el RNA codifique una protefna, disponer de grandes Todas las moilkulas que se
representan son de doble hebra.
secuencias codificantes Despues de cada etapa de inserci6n de
secuencia a unir
DNA, el plasmido es clonado para
codificante A secuencia codificante B
purificar y amplificar la nueva
molecula recombinante. El plasmido

SEPARACION DE HE BRAS Y UNION DE

CEBADORES PCR CON COLAS 5' (<:J )
1 recombinante es cortado con una
nucleasa de restricci6n y utilizado
QUE CONTIENEN D1ANAS DE RESTRICCION como vector para el siguiente
5' 111!!!!!!~---3' fragmento de DNA.

3' ... 5' 5'~

3'I11III IIIIIIII5'

3':==~15'
5'1
I
13'
MUCHOS CICLOS DE PCR PRODUCEN
COPIAS DE LAS SECUENCIAS A Y B CON
LOS EXTREMOS MODIFICADOS DESEADOS

3"01
5'CI
I
====:5' 3'
Figura 7-35 La "manufactura" de los
extremos de los fragmentos de DNA
A B
CORTAR LOS EXTREMOS CON LA facilita la precisi6n de su uni6n. La
1 NUCLEASA DE RESTRICCION
1 reacci6n peR permite modificar los
! extremos de cualquier fragmento de

A
. UNION DE LOS
I
B
DNA que va a ser amplificado, para
facilitar su clonaje. Los
~RAGMENT~ oligonucle6tidos sinteticos usados
aqui como cebadores contienen
extremos 5' elegidos para crear una
union exacta de la secuencia codificante A diana de corte para una nucleasa de
con la secuencia codificante B restricci6n particular.

Ingenieria de DNA 343

cantidades de esa especie pura facilitani el estudio, por ejemplo, de la madura- moleeula de DNA de doble hebra,
eonstruida por ingenieria genetiea
cion del RNA y de la sfntesis de la protefna; si el RNA tiene una funcion catalftica,
esta actividad podni ser analizada en sistemas libres de celulas. Sin embargo, un
gran ntimero de los RNA celulares se encuentran en pequefias cantidades, y es
muy diffcil su purificaci6n de los muchos miles de otros RNA presentes en un ex-
(-.lIIIIIlIi--I11111!!,-....)
promotor virieo seeue~?la que
tracto celular. La ingenierfa genetica proporciona el mejor sistema de purificar espeelflea el RNA
especies puras de RNA, gracias a hacer accesible moldes de DNA puros que per- I CORTE CON UNA NUCLEASA
+ DE RESTRICCION
miten producir cualquier molecula de RNA.
Esta tecnica utiliza RNA polimerasas viricas que son especialmente eficientes.
Para preparar el molde de DNA apropiado, se elona el DNA que codifica el RNA de
forma que se una a un segundo fragmento de DNA que contenga la sefial de inicio

!
INCUBACION CON RNA
(promotor) para la RNA polimerasa virica. Esta molecula de DNA recombinante POLIMERASA MAs

...._~ 1
NUCLEOSIDO TRIFOSFATOS
pura se mezela con la RNA polimerasa virica y los cuatro ribonuele6sidos trifosfato
utilizados en la sfntesis de RNA. Durante una incubacion a 37C se produce gran
cantidad del RNA deseado mediante transcripci6n in vitro (Figura 7-36).
( t
Utilizando vectores de expresi6n es posible producir grandes RNA [ 5' 3'
5' 3'
cantidades de proteinas celulares minoritarias29
Hasta hace muy poco, las unicas protefnas de una celula que podfan estudiarse I ELiMINAR EL DNA
con facilidad eran las relativamente mas abundantes. A partir de varios cientos ~ Y LA PROTEfNA

de gramos de celulas se puede purificar una protefna abundante -que constitu- moleeulas
ya ell % 0 mas de la protefna total- mediante pasos cromatograficos secuencia- de RNA
puras
les, llegando a obtener quizas 0,1 g (100 mg) de protefna pura. Esta cantidad de
protefna es suficiente para realizar una secuenciacion de aminoacidos conven- Figura 7-36 Se pueden obtener in
cional, para desarrollar un an8.lisis detallado de su actividad biol6gica 0 enzima- vitro grandes cantidades de cualquier
tica (si es conocida) y para generar anticuerpos que puedan ser utilizados para molecuia de RNA usando una RNA
localizar la protefna en el interior de la celula. Ademas, si se consigue obtener polimerasa virica. Para utilizar estas
cristales apropiados (10 cual normalmente constituye una tarea diffcil), sera po- enzimas extraordinariamente
sible determinar la estructura tridimensional de la protefna mediante tecnicas eficientes es necesario que en el molde
de difracci6n de rayos X. De esta manera, se han analizado la estructura y la fun- de DNA este construido de forma que
ci6n de muchas protefnas abundantes, entre las que se hallan la hemoglobina, la la corta secuencia de DNA que
especifica el promotor virica sea
tripsina, algunas inmunoglobulinas y la lisozima.
adyacente a la secuencia de DNA que
La inmensa mayorfa de los miles de protefnas diferentes de una sola celula
codifica la molecula de RNA que se va
eucariota, ineluidas algunas de las protefnas mas interesantes, se hallan presen- a sintetizar. Como se indica, el
tes en cantidades muy reducidas. Resulta extremadamente diffcil, cuando no es extremo 3' del RNA se determina al
imposible, obtener mas de unos cuantos miligramos de material puro de la ma- cortar el molde DNA con una nucleasa
yoria de estas proteinas minoritarias. Una de las contribuciones mas trascen- de restricci6n de diana unica.
dentales del elonaje del DNA y de la ingenierfa genetica a la biologfa celular es
que han hecho posible la manufactura en grandes cantidades de cualquiera de
las protefnas celulares, ineluyendo las minoritarias.
En principio es posible producir grandes cantidades de una proteina pura si se
sintetiza gran cantidad de mRNA que codifica dicha proteina y despues se traduce
en un sistema libre de celulas que contenga los numerosos componentes necesa-
rios para la sfntesis de proteinas, ineluyendo ribosomas, RNA de transferencia, en-
zimas de traduccion, etc. Esta aproximacion se usa en ocasiones aunque es mucho
mas eficiente producir tanto el mRNA como la protefna en una celula viva, utilizan-
do un vector de expresi6n (Figura 7-37). Este vector esta disefiado para producir
grandes cantidades de mRNA estable que sera traducido eficientemente a proteina
en el interior de la bacteria, levadura, 0 celula de mamifero. A fin de evitar que la
elevada sfntesis de la protefna extrafia interfiera con el crecimiento de la celula
transfectada, los vectores de expresion se suelen disefiar de modo que la sintesis de
la protefna extrafia se inicie poco antes de recolectar las celulas (Figura 7-38).
Debido a que la protefna deseada fabricada por un vector de expresion se pro-
duce en el interior dela celula, ha de purificarse del resto de las protefnas de la ce-
lula huesped mediante cromatografia, tras la lisis celular; pero debido a que se halla
en cantidades importantes (entre un 1% Yun 10% del total de la protefna celular),
habitualmente la purificaci6n puede conseguirse facilmente en unas cuantas eta-

344 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 Figura 7-37 Producci6n de grandes cantidades de una protema por clonaje vector de expresi6n plasmidico,
DNA de doble hebra
de una secuencia codificante de una proteina en un vector de expresi6n
plasmidico. EI pllismido se ha construido de forma que contiene un
promotor muy activo, capaz de dirigir la sfntesis de una gran cantidad del
mRNA que codifica la protefna, en las celulas transfectadas.
. >Z )

pas. Existe una gran variedad de vectores de expresi6n, cada uno de los cuales esta
construido para que actue en el tipo celular en el que se va a producir la protefna.
De esta forma, las celulas pueden ser inducidas a fabricar grandes cantidades de
protefnas utiles desde el punto de vista medico -como insulina y hormona del cre- INSERTAR LA SECUENC~A
cimiento humanas, interfer6n y antfgenos vfricos para producir vacunas. De forma DE DNA QUE CODIFICA
LA PROTEfNA
mas general, estos metodos hacen posible producir protefnas en cantidades sufi-

(---_..)
cientemente grandes para poder estudiar detalles de su estructura y de su funci6n,
qu~ antes estaban reservados unicamente a unas cuantas protefnas.

Los genes marcadores permiten analizar la funci6n

de las secuencias de DNA reguladoras30 TRANSFECTAR CELULAS
CON EL DNA
La transcripci6n de un gen esta controlada por secuencias de DNA reguladoras

...
RECOMBINANTE
que no se transcriben. Estas secuencias determinan que celulas expresaran el gen y

(--~ )
bajo que condiciones, como se explica en el Capftulo 9. En eucariotas superiores
dichas secuencias se pueden encontrar situadas a muchos miles de pares de bases
par delante 0 por detras de las secuencias que se transcriben, y actuan en dife-
t
rentes combinaciones controlando la expresi6n genica. Las secuencias de DNA
reguladoras de un gen se pueden identificar mediante una manipulaci6n que
supone reemplazar parte de la secuencia codificante par otra diferente (denomi-
nada secuencia marcadora) seleccionada, debido a que la protefna que codifica
se detecta con facilidad mediante tinci6n citol6gica simple 0 ensayo enzimtitico.
Las secuencias reguladoras se identificaran uniendo diferentes regiones de se- RNA protelna
sobre-expresado sobre-expresada
cuencia anterior 0 posterior del gen a la secuencia marcadora. Cuando se trans-
fecten celulas con estas moleculas de DNA recombinante el nivel de expresi6n
de la protefna marcadora, el momenta en que se produce esta y la especificidad
celular, reflejaran la funci6n de las secuencias reguladoras que contiene cada
construcci6n de DNA (Figura 7-39).
tiempo a
42C
31
Los organismos mutantes revelan mejor la funci6n de un gen
Supongamos que se ha clonado un gen que codifica una protefna recien descu-
bierta. lC6mo podremos descubrir la funci6n que desarrolla esta protefna en la
celula? Este es un problema actualmente muy habitual en biologfa celular,
pero sorprendentemente diffcil de resolver, ya que ni la estructura tridimensio-
nal de la protefna ni la secuencia completa de nucle6tidos de su gen son sufi- DNA
helicasa
dentes para determinar la funci6n de la protefna. Ademas, muchas protefnas
-tales como las que tienen funciones estructurales en la celula 0 las que nor-
malmente forman parte de un gran complejo enzimtitico- carecen de una acti-
vidad obvia cuando estan separadas de los otros componentes de su unidad
funcional.

Figura 7-38 Producci6n de grandes cantidades de una proteina utilizando

un vector de expresi6n plasmidico. En este ejemplo se han transfectado
bacterias con la secuencia codificante de una enzima, la DNA helicasa
(flecha); la transcripci6n de esta secuencia codificante se encuentra bajo el
control de un promotor virico que es activo unicamente a temperaturas de
37C 0 superiores. Se ha analizado la protefna celular total por electroforesis
en gel de poliacrilamida con SDS, tanto de bacterias cultivadas a 25C (no se
produce helicasa), como de las mismas bacterias cultivadas a 42C durante
dos horas. (Fotograffa cortesfa de Jack Barry.)

Ingenieria de DNA 345

(Al MCILEC:U!J!l,S [)ECINAORIIGIl\IAU:S Figura 7-39 Uso de una proteina
marcadora para localizar las regiones
secuencia codificante celulas de DNA reguladoras que determinan
de la proteina X 'A BCD E F' el patr6n de expresi6n de un gen. En
normal

1 2 3
lugar de inicio de la
CIIlIIIIII
patr6n normal de expresi6n
este ejemplo la seeuencia eodifieante
de la proteina X se reemplaza par la
" secu~ncias /
sintesis de RNA del gen X secuencia eodificante de la proteina Y,
reguladoras que
determinan la expresi6n
y se Ie afiaden diferentes
del gen X secuencia codificante eombinaciones de fragmentos de DNA
de la proteina marcadora Y
recombinada , que eontienen seeuencias eandidatas a
_ _ _~_~_~"Z1R!.!I!I!iIe!I]I!J!
2 3 c::::::::= - CIIlIIIIII ser reguladoras. Se mide la eapacidad
de expresion de las moleeulas
recombinantes en una eoleecion de
eelulas de mamifero transfeetadas. En
los estudios sobre eelulas eueariotas se
(B)
suelen utilizar dos genes mareadares,
la enzima ~-galaetosidasa(~-gal) y la
-----3-~ claranfenicol aeeti! transferasa (CAT).
Ambas son enzimas baeterianas y su
---2~--~~111!:!!- presencia se mide faei!mente
mediante ensayos de actividad
enzimcitica simples y muy sensibles sin
que interfieran las enzimas del
2~i..I]:!I]]11 huesped.

(Cl CONCLUSIONES -Ia secuencia reguladora 3 activa el gen X en las celulas B

-Ia secuencia reguladora 2 activa el gen X en las celulas D, E y F
-Ia secuencia reguladora 1 inactiva el gen X en las celulas D

Una aproximacion que ya hemos comentado (vease Capitulo 4), consiste en

inactivar la proteina a estudiar mediante un anticuerpo especffico y observar
como esto afecta a las celulas. A pesar de que esta estrategia proporciona una
poderosa via para estudiar la funcion proteica, para el caso de un proteina intra-
celular el efecto es transitorio ya que el anticuerpo microinyectado se diluye du-
rante la proliferacion celular 0 es destruido por degradacion intracelular. Asi-
mismo, muchos anticuerpos -incluso los que se unen fuertemente a alguna
region de la proteina diana- son incapaces de bloquear la funcion de la proteina.
Las aproximaciones geneticas proporcionan una solucion convincente a
este problema. Los organismos mutantes que carecen de una determinada pro-
teina pueden indicar nipidamente cwil es la funcion de la molecula normal. Aun
son mas utiles los mutantes que sintetizan una version de la proteina que es sen-
sible a la temperatura, es decir, que se inactiva por un pequeno aumento (0 dis-
minucion) de la temperatura del medio, pues en esos mutantes la anomalfa pue-
de ser manifestada 0 no simplemente modificando la temperatura. Antes del
desarrollo de la tecnologia del clonaje de DNA se identificaron numerosos genes
mediante esta aproximacion, determinando los procesos afectados por la muta-
cion. La aproximacion genetica ha sido aplicable de forma mas general a los or-
ganismos que se reproducen muy rapidamente -como las bacterias, las levadu-
ras, los gusanos nematodos y las moscas del vinagre. Tratando estos organismos
con agentes que alteran su DNA (mutagenos), se pueden aislar nipidamente un
gran numero de mutantes y detectar y aislar los que presentan un defecto parti-
cular que interese. Por ejemplo, mediante el estudio de poblaciones de bacterias
tratadas con un mutageno que detenga la sintesis de DNA cuando las bacterias
se transfieren desde 30C hasta 42C, se aislaron muchos mutantes sensibles a la
temperatura en los genes que codifican las proteinas bacterianas necesarias
para la replicacion del DNA. Posteriormente, estos mutantes fueron utilizados
para identificar y caracterizar las proteinas correspondientes responsables de la
replicaci6n del DNA. De una forma similar se ha utilizado la aproximacion gene-
tica para demostrar la funci6n de las enzimas implicadas en las principales rutas

346 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

metabolicas debacterias, asf como para descubrir numerosos productos genicos
responsables del desarrollo ordenado del embrion de Drosophila.
Los humanos no nos reproducimos nipidamente, ni tampoco somos tratados
intencionadamente con mutagenos. Ademas, cualquier humano que presente un
defecto serio en algl1n proceso esencial, como el de la replicacion del DNA, morira
antes de nacer. No obstante, en la poblacion humana aparecen espontaneamente
algunas mutaciones que son compatibles con la vida -por ejemplo defectos en liso-
somas 0 en receptores de la superficie celular, especificos de tejido. EI anaHsis de los
fenotipos de los individuos afectados, conjuntamente con estudios de sus celulas
cultivadas, han aportado pruebas unicas sobre importantes funciones celulares. A
pesar de que estos mutantes son extremadamente escasos, se ponen de manifiesto
de forma muy eficaz debido a una caracteristica especifica de los humanos: los indi-
viduos mutantes llaman la atencion sobre sf mismos buscando cuidados medicos
especiales.

Pueden fabricarse "a medida" celulas y organismos

que contengan genes alterados32
Apesar de que normalmente no resulta dificil obtener mutantes deficientes en un
determinado proceso, como pueden ser los procesos de la replicacion del DNA 0
del desarrollo del ojo, el encontrar una mutacion que suponga el defecto de una
protefna determinada puede suponer muchos afios de trabajo. Recientemente la
tecnologia del DNA recombinante ha hecho posible una aproximacion genetica di-
ferente a este problema, mediante la cual se parte de una protefna y se genera una
celula 0 un organismo mutante en el que la protefna (0 su expresion) sea anomala.
Dado que esta nueva aproximacion invierte la direccion tradicional del anaHsis ge-
netico (del gen ala protefna), habitualmente se la denomina genetica inversa.
La genetica inversa parte de una protefna que haya sido aislada de una celula
y que presente propiedades interesantes. Si el punto de partida es una protefna, se
clona el gen que la codifica y se determina su secuencia de nucleotidos. Posterior-
mente se altera la secuencia bioqufmicamente, creando un gen mutante que codi-
fique una version alterada de la protefna. El gen mutante se transfiere a un celula,
en la que puede integrarse a un cromosoma mediante recombinacion genetica y
pasar a formar parte de la dotacion permanente del genoma celular. Si el gen se
expresa, la celula y todos sus descendientes sintetizaran una protefna alterada.
Si la celula original utilizada para la transferencia del gen es un huevo fe-
cundado, se podra obtener un organismo completo que contenga el gen mutan-
teo Algunos de estos organismos transgenicos transmitiran el gen alterado a su
progenie como una parte de su linea germinal. Actualmente se realizan de forma
rutinaria transformaciones geneticas de este tipo sobre organismo tan complejos
como la mosca del vinagre y algunos mamfferos (Figura 7-45). De hecho es tec-
nicamente posible transformar de esta forma incluso organismos humanos, si
bien estos experimentos no se realizan por temor a las aberraciones imprevisi-
bles que pueden darse en tales individuos.

Los genes se pueden redisefiar para que produzcan protefnas

de cualquier secuencia que se desee33
Con la finalidad de facilitar los estudios de genetica inversa, es posible modificar
tanto la secuencia codificante de un gen como sus regiones de regulacion de
modo que se modifiquen tanto las propiedades de la protefna, como la cantidad
de ella que se sintetiza 0 el tipo celular en que se produce.
Para alterar los genes de forma mas sutil (a menudo es deseable que la pro-
tefna que codifican difiera de la original en un solo 0 en unos cuantos aminoaci-
dos) son necesarias tecnicas especiales. El primer paso consiste en la sfntesis
qufmica de una corta molecula de DNA que contenga la porcion alterada de la
secuencia nucleotfdica del gen. Este oligonucleotido sintetico de DNA se hibrida
con un plasmido de DNA de una sola cadena que contenga la secuencia de DNA

Ingenieria de DNA 347

que se quiera alterar, utilizando condiciones que permitan el apareamiento im- Figura 7-40 Utilizaci6n de
perfecto de cadenas de DNA (Figura 7-40). EI oligonucleotido sintetico se utiliza oligonucle6tidos sinteticos para
ahara como cebador para la sfntesis de DNA mediante la DNA polimerasa, gene- modificar las regiones de los genes
nindose asf una doble helice de DNA que incorpora al gen la secuencia alterada. que codifican proteinas. Unicamente
A continuacion, el gen modificado se inserta en un vector de expresion de forma se muestran dos de los muchos tipos
de cambios que se pueden generar
que la protefna redisenada se pueda sintetizar en gran cantidad, suficiente para
mediante la ingenierfa genetica,
estudios detallados. Utilizando esta tecnica se pueden cambiar determinados utilizando sistemas como este. Por
aminoacidos de una protefna y analizar que parte de la cadena polipeptfdica es ejemplo, con un oligonude6tido
importante en procesos tan importantes como su plegamiento, las interacciones apropiado se puede substituir mas de
protefna-ligando 0 la cataIisis enzimMica. un aminoacido cada vez, 0 se pueden
eliminar uno 0 mas aminoacidos.
Habitualmente las proteinas de fusi6n son de gran utilidad Como se indica, dado quepor este
para analizar la funci6n proteica34 procedimiento s610 se altera una de las
dos cadenas del DNA del pIasmido
En una protefna se suelen encontrar regiones de pocos aminoacidos que son res- recombinante, tinicamente la mitad de
ponsables de determinar su localizacion en la celula, 0 su estabilidad despues de las celulas transfectadas acabaran
ser sintetizada. Estas regiones especificas de la protefna se pueden identificar fu- conteniendo el plasmido que presente
sionandolas con una protefna marcadora, facilmente detectable, que carezca de el gen mutante deseado. N6tese que
dichas regiones, y siguiendo su comportamiento en la celula (Figura 7-41). Estas en la figura no se ilustra la mayoria de
protefnas de fusi6n se producen mediante las tecnicas del DNA recombinante que la secuencia del plasmido.
se han descrito previamente. Par ejemplo, numerosas protefnas nucleares contie-
nen una 0 mas secuencias cortas especificas que acman de senal para su importa-
cion par el mlcleo, despues de ser sintetizadas en el citosol. Se han conseguido
identificar dichas regiones uniendo artificialmente, mediante la tecnica de fusion
genica, diferentes regiones de protefnas nucleares a una protefna citoplasmatica.

348 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 region funcional de la Figura 7-41 Dos estrategias para el

~
estudio de la funcion de las protefnas
que utilizan ingenierfa genetica. En la
estrategia A, se anade una nueva
funci6n a una proteina marcadora
protefna marcadora
"l epftopo aiiadido a la proteina X
mediante su uni6n a un pequeno
fragmento de la proteina normal X. En

~
la estrategia B, se realizan pequenas
modificaciones ala proteina normal X,
protefna X aiiadida a y su comportamiento es seguido, a fin
la protefna marcadora
epitopo aiiadido a la protefna X de compararlo con el de la proteina
normal, gracias ala detecci6n de un
pequeno epitopo anadido en uno de
sus extremos. Ambas estrategias se
han utilizado para analizar la
el estudio del efecto de la region la determinacion del comportamiento
transferida sobre la protefna marcadora del epftopo en la celula permite estructura y la funci6n de las senales
permite determinar la funcion de dicha estudiar la funcion de la region de transporte al micleo que se
region mutada de la protefna encuentran en las proteinas nucleares
(vease Capitulo 12).
Sin embargo, no es posible transferir en forma de una secuencia corta de
aminOlicidos todas las senales importantes que contienen las proteinas, a una
proteina marcadora. Por ejemplo, la senal responsable del transporte al lisoso-
rna desde el complejo de Golgi, de las enzimas lisosomales. recien sintetizadas
consiste en una "regi6n senal", cuya formaci6n requiere. que la enzima lisosomal
se pliegue correctamente de forma que zonas distantes en la secuencia queden
localizadas pr6ximas en el espacio. Para identificar estos casos se puede utilizar
la estrategia de marcaje de epftopos. Tambien se ha de producir una proteina
de fusi6n, pero en este caso a la proteina normal se Ie anade un peptido corto de
8 a 12 aminOlicidos (el "epitopo") que es reconocido por un anticuerpo -de ahi
su nombre. Asi, mediante el uso del anticuerpo anti-epitopo, es posible seguir
las proteinas de fusi6n en las celulas incluso en presencia de una gran cantidad
de proteina normal, siendo por tanto posible determinar el efecto sobre la locali-
zaci6n celular de cualquier alteraci6n de aminOlicidos en la proteina de fusi6n
(estrategia Ben la Figura 7-41).

Los genes normales son facilmente reemplazables por mutantes,

tanto en bacterias como en algunos eucariotas inferiores35
A diferencia de los eucariotas superiores (que son pluricelulares y diploides), las
bacterias, las levaduras y el hongo filamentoso Dictyostelium existen general-
mente como celulas individuales haploides. En estos organismos es posible
substituir, con elevada frecuencia, un gen normal por otro introducido en forma
de molecula de DNA artificial, mediante recombinaci6n hom6loga (vease pag.
281), de forma que es facil producir celulas en las que el gen mutante substituya Figura 7-42 Reemplazarniento y
al gen normal (Figura 7-42A). De esta forma es posible que las celulas produzcan adicion genicos. Es posible reinsertar,
en los cromosomas de un organismo,
un gen que ha sido alterado. En
gen normal X bacterias y en organismos haploides

(A)
==-u
==--:===========~= cromosoma
(8)
como la levadura, frecuentemente se
reemplaza el gen normal, en un
+ proceso denominado
REEMPLAZAMIENTO ADICI6N reemplazamiento genico (Al; en estos
G~NICO gen mutante X GENICA
casos s610 permanece en la celula el
gen mutante. En los eucariotas
EL GEN MUTANTE SE INSERTA EN
EL GEN MUTANTE REEMPLAZA EL GEN NORMAL
UN NUEVO LUGAR DEL CROMOSOMA superiores es mas frecuente el
l l fen6meno de adici6n genica que el de

==-I--===~=
:~..
==-l
==-'l1li1====:===~ reemplazamiento genico; en esos
casos la celula u organismo
transformados contienen el gen
s610 es activo el gen mutante ambos genes son activos mutado ademas del gen normal.

Ingenierfa de DNA 349

una forma alterada de la proteina 0 de la molecula de RNA en lugar de la forma
normal de la moIecula. Si el gen mutante es completamente inactivo y su pro-
ducto genico realiza una funcion esencial, la celula morin!; pero en aquellos ca-
sos en los que la mutacion sea menos severa, pueden usarse para reemplazar al
gen normal, de forma que la celula mutante sobreviva, aunque el proceso para el
que se requiere el gen sea anomalo. Con frecuencia el mutante de eleccion es
uno que presente un producto sensible a la temperatura, que funcione normal-
mente a una temperatura pero que se inactive cuando las celulas sean colocadas
a una temperatura superior 0 inferior.
La capacidad de realizar reemplazamientos genicos en eucariotas superiores,
unido a la potencia del analisis genico estandar en estos organismos haploides,
es la causa que explica en gran parte por que los estudios sobre estos organis-
mos han sido tan importantes para desentrafiar aquellos procesos que son co-
munes a todos los eucariotas. Los reemplazamientos genicos son mucho menos
frecuentes en eucariotas superiores por razones que atin se desconocen.

Genes desarrollados por ingenierfa genetica pueden

crear mutaciones dominantes especificas
en los organismos diploides 36
Los eucariotas superiores, como los mamiferos 0 la mosca del vinagre, son di-
ploides, es decir, tienen dos copias de cada cromosoma. Ademas, la transfeccion
con un gen modificado conduce generalmente a una adici6n genica mas que a
un reemplazamiento genico: el gen modificado se inserta en una posicion al
azar en el genoma, de modo que la celula (0 el organismo) acaba con un gen
mutado ademas de sus copias normales (Figura 7-42B).
Dado que en el caso de eucariotas superiores es mucho mas facH obtener
una adicion genica que un reemplazamiento genico, podria ser enormemente
litH el poder generar mutaciones dominantes negativas, de forma que un gen
modificado fuera capaz de inactivar a sus copias normales en la celula. Una
aproximacion ingeniosa y prometedora consigue este objetivo aprovechando la
especificidad de la reaccion de hibridacion entre dos cadenas complementarias
de acido nucleico. Normalmente solo se transcribe a RNA una de las dos hebras
de una zona determinada de la doble helice de DNA, siempre la misma para
cada gen. Si mediante la ingenieria genetica se fabrica un gen clonado de tal ma-
nera que solo se transcriba la hebra opuesta del DNA, el resultado sera un RNA
antisentido que presentara una secuencia complementaria a la de los transcri-
tos de RNA normales. Cuando se sintetiza en cantidades suficientes, a menudo

gen normal X cromosoma Figura 7-43 Estrategia del RNA

antisentido para obtener mutantes
negativos dominantes. Los genes
ADICI6N
mutantes que se han construido de
GENICA gen X alterado para producir forma que se produzca RNA
RNA antisentido
antisentido, es decir la secuencia de
RNA complementaria a la producida
- =:=~""":=:s==:==- 1I!!i'> por el gen normal X, pueden hacer que
se forme RNA de doble cadena en el
TRANSCRIPCI6N
interior de la celula. Si se produce una
RNA <il.Ir-_IIIIIIIl_1Il11 RNA gran cantidad de RNA antisentido,
normal --III!III..-j.~ J antisentido podni hibridar -e inactivar- una gran
l parte del RNA normal del gen X.
T A pesar de que en el futudo es posible
que de esta forma se puedan inactivar
:;:===.~ doble he lice de RNA

LA FORMACI6N DE UNA DOBLE HELICE RNA/RNA IMPIDE LA
genes en la actualidad ha dado buenos
resultados con algunos genes
SINTESIS DE LA PROTEINA PRODUCTO DEL GEN NORMAL X y no con otros.

350 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 complejo de complejo de complejo de Figura 7-44 Efecto dominante
proteina normal proteina mutante proteina normal
y mutante negativo de una protefna. En el
ejemplo. un gen se modifica para
producir una protefna mutante que
impida que las copias normales de la
misma protefna realicen su funcian.
En este caso la protefna normal ha de
formar un complejo de varias
subunidades para ser activo, y la
proteina mutante bloquea la funcian,
ACTIVO INACTIVO INACTIVO
pues al unirse al complejo 10 hace
inactivo. De esta forma una I1nica
copia de un gen mutante localizado en
el RNA antisentido se hibridani con el RNA "con sentido" fabricado por los genes cualquier parte del genoma puede
normales, inhibiendo asi la sintesis de la proteina correspondiente (Figura 7-43). inactivar los productos normales
Un metoda similar consiste en sintetizar cortas moleculas de acido nucleico por producidos por otras copias genicas.
metodos quimicos 0 enzim<iticos, e inyectarlas (0 introducirlas de alguna otra
forma) en la celula, bloqueando de nuevo (aunque solo temporalmente) la pro-
duccion de la proteina correspondiente.
Por razones desconocidas la aproximacion del RNA antisentido frecuente-
mente fracasa en la inactivaci6n del gen deseado. Una estrategia alternativa para
obtener una mutaci6n dominante negativa se basa en el hecho de que muchas
proteinas actuan como parte de grandes complejos proteicos. Para inactivar es-
tos complejos basta incluir en ellos un elemento no funcional. Asi pues, disefian-
do un gen que produzca grandes cantidades de una proteina mutante que sea
inactiva pero que se una al complejo, es posible conseguir una celula en que todos
los complejos sean inactivos a pesar de la presencia tanto de formas normales
como mutantes de la proteina (Figura 7-44).
Si una proteina es necesaria para la supervivencia de la celula (0 del organis-
mo), un mutante dominante negativo morira, haciendo imposible analizar la
funci6n de la proteina. Para evitar este problema, se puede acoplar el gen mutan-
te a secuencias de control que permitan la producci6n de la proteina mutante
s610 en ciertas condiciones -por ejemplo, en respuesta a un incremento de tem-
peratura 0 a la presencia de moleculas sefial especificas. Aquellas celulas 0 orga-
nismos que contengan mutantes dominantes negativos inducibles pueden ser
privados de la funci6n de la proteina normal en cualquier momenta y estudiar el
efecto producido. Es muy probable que en el futuro, las tecnicas para producir
mutantes dominantes negativos para inactivar genes especificos sean utilizadas
ampliamente para determinar las funciones de las proteinas en los organismos
superiores.

Genes sometidos a ingenierfa genetica se pueden insertar

de forma permanente en la linea germinal de un rat6n
o de la mosca del vinagre, produciendo animales
transgenicos37
La ultima prueba de la funci6n de un gen alterado consiste en reinsertarlo en un
organismo y estudiar que efectos produce. Idealmente, parece que 10 mejor seria
reemplazar el gen normal por el gen alterado, de forma que pueda analizarse la
funci6n de la proteina mutante en ausencia de la proteina normal. Como se ha
descrito previamente, esto s610 puede conseguirse plenamente en el caso de
algunos organismos haploides, pero en el caso de los eucariotas superiores, los
fen6menos de integraci6n que conduzcan a un reemplazamiento de genes
ocurren muy raramente. El DNA extrafio puede, por el contrario, integrarse fa-
cilmente al azar en el genoma. Por ejemplo, en mamiferos los fragmentos linea-
les de DNA introducidos son rapidamente unidos por sus extremos mediante
enzimas celulares, formando largos tandems que normalmente son integrados
en el cromosoma aleatoriamente. A este respecto, los oocitos fecundados de ma-
mifero se comportan como las demas celulas de mamifero. Un oocito de rat6n al

Ingenieria de DNA 351

 Figura 7-45 Comparaci6n entre los
procesos estandar utilizados para
obtener ratones y Drosophila
transgenicos. En estos ejemplos, el
gen inyectado en el oocito del rat6n da
lugar a un cambio en el color de la piel
mientras que el gen inyectado en el

oocito fecund ado @ 50}m 50?m 0 embrion temprano

embri6n de la mosca da lugar a un
cambio de color en el ojo. En ambos
organismos se ha encontrado que
l algunos de los animales transgenicos
tienen insertos de DNA en mas de un
MICROINYECCION DEL GEN
DE INTERES, EN FORMA DE
~ C:I
~ MICROINYECCION DEL GEN
~ DE INTERES INSERTADO EN
lugar del cromosoma.

DNA LINEAL, EN EL PRONUCLEO

MASCULINO
I
+
lLA SECUENCIA DE DNA DE
UN ELEMENTO TRANSPONIBLE

embrionO
Q:rion
INTRODUCCION DE . .: celulas germinales
VARIOS EM BRIONES primordiales
DE ESTE TIPO EN UN
RATON PSEUDO-
PRENADO ALGUNOS EMBRIONES
SE CONVIERTEN EN MOSCAS
CUYAS CELULAS GERMINALES embrion normal
CONTIENEN EL GEN DE INTERES

NACIMIENTO 1
-'
;IIi
.

~
embrion ftz-

TRAS UNA BIOPSIA, SE ESTUDIA

~ TODAS LAS MOSCAS
SUPERVIVIENTES SE
LA PRESENCIA DEL GEN EN LAS CRUZAN PARA BUSCAR
CELULAS SOMATICAS DE LOS EL GEN EN LAS CELULAS
DESCENDIENTES, Y EN LOS GERMINALES
RATONES SELECCIONADOS QUE
SE HAN CRUZADO, SE ESTUDIA
LA PRESENCIA DEL GEN EN
SUS CELULAS GERMINALES embri6n ftz- transformado con
el gen ftz LI --'

200IJm

Figura 7-46 Rescate genetico.

RATON TRANSGENICO DROSOPHILA TRANSGENICA Comparaci6n entre una larva de
Drosophila normal y dos larvas
copias del gen, ordenadas en tandem, una copia sencilla del gen se inserta mutantes que contienen genes Jtz
se insertan al azar en un cromosoma al azar en un cromosoma de cada defectuosos. Una de las larvas con un
de cada celula celula gen defectuoso (jtz-) ha sido
gen gen gen gen gen transformada mediante la inyecci6n,
-- -
I
cadena de genes ordenados en tandem
I
-
<)
extremos DNA del elemento transponible
en un huevo de uno de sus ancestros,
de un clon de DNA que contiene el gen
jtz de secuencia normal. Esta
secuencia de DNA afiadida se ha
integrado de forma permanente en
que se Ie han inyectado 200 copias de una molecula lineal de DNA, probable- uno de los cromosomas de la mosca,
mente dara lugar a un rat6n que contendra en alglin lugar aleatorio de uno de de forma que se hereda y expresa
fielmente. EI gen Jtz es necesario para
sus cromosomas un tandem de copias del gen inyectado (Figura 7-45). Si el cro-
el desarrollo normal de la mosca, y la
mosoma modificado tambien se halla presente en las celulas de la linea germi- adici6n de este gen al genoma provoca
nal (oocitos y espermatozoides), el rat6n pasara a su descendencia los genes que la recuperaci6n de los segmentos de la
ha adoptado: los animales que han sido alterados de forma permanente de esta larva, que habfan desaparecido en el
manera se denominan organismos transgenicos, y a los genes extranos, trans- organismo jtz-. Para detalles de la
genes. Generalmente el gen normal tambien esta presente, por 10 que s610 se tecnica utilizada para conseguir
manifestaran los efectos dominantes de la modificaci6n. A pesar de ello, los ani- animales transgenicos, vease Figura
males transgenicos han aportado informaci6n muy valiosa para entender c6mo 7-45. (Por cortesfa de Walter Gehring.)

352 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 Figura 7-47 Inactivaci6n genica
preparacion del gen modificado por ingenieria
genetica
selectiva por recombinaci6n
hom61oga en el rat6n. DNA c1onado
DNA c1onado del gen diana de raton se modifica por ingenieria
I"e genetica de modo que se Ie inserta un
ELiMINAR LA REGION gen bacteriano, denominado neo, que,
1 CENTRAL Y REEMPLAZARLA
CON EL GEN neo
tras integraci6n en un cromosoma de
rat6n, confiere a las celulas la
resistencia a una droga (droga X) que
t ANADIR EL GEN tk en caso contrario resultaria leta!. En un
extremo del DNA c1onado de rat6n se
P") ( afiade un gen virieo, el gen tk. La
el gen neo confiere el gen tk confiere integraci6n de tk en un cromosoma de
resistencia a la droga X sensibilidad a la droga Y rat6n hace sensibles a las celulas a otra
droga (droga Y). La mayor parte de las
(A) fenomeno frecuente de (B) fenomeno infrecuente de inserciones que tienen lugar en el
recombinacion no homologa recombinacion homologa cromosoma son a! azar, y casi siempre
,$1 1['Z]:''\I'IIlI' 1
incluyen ambos extremos del DNA
modificado (A). Si se seleccionan las
{ '~I {I I
celulas, poco frecuentes, capaces de
I ':1'111"'" ; r ' ;,Aft ;
crecer en presencia de ambas drogas,

~/1:,:~;:~~,
se obtendnin colonias de celulas en las
que se ha incorporado, por
recombinaci6n hom610ga, el centro
del DNA modificado sin los extremos;
rl::~nci~\:) sensii:idad a ; !esistencia":>la ausencia del gen ri muchas de estas celulas mostranin un
reemplazamiento genico similar al
la droga X la droga Y la droga X confiere a la celulas
resistencia a la droga r mostrado en (B).
LA CELULA MUERE LA CELULA SOBREVIVE

se regulan los genes de mamifero y como ciertos genes (denominados oncoge- cerebro medio cerebelo

nes) producen cancer.

Tambien es posible producir moscas del vinagre transgenicas, en las que co-
pias tinicas de un gen se han insertado al azar en el genoma de Drosophila. En
este caso la estrategia consiste en insertar primero el fragmento de DNA entre
las dos secuencias terminales de un elemento transponible particular de Dro-
sophila, denominado elemento P. Las secuencias terminales del elemento P Ie
permiten integrarse en los cromosomas de Drosophila si la enzima transposasa
del elemento P tambien se halla presente (vease pag. 305). Por 10 tanto, para ha-
cer moscas del vinagre transgenicas, el DNA adecuadamente modificado se in-
yecta en un embrion muy joven de la mosca del vinagre con un plasmido que
contenga el gen que codifica la transposasa. Normalmente, cuando se hace esto
y como resultado del proceso de transposicion, el gen inyectado entra en la linea
germinal en forma de una copia tinica (Figuras 7-45 Y7-46).

El direccionamiento genico hace posible obtener ratones

transgenicos que carecen de determinados genes38
Si se introduce una molecula de DNA que contiene un gen de raton mutado en Figura 7-48 Rat6n transgenico en
una celula de raton, frecuentemente se inserta al azar en el cromosoma, pero que se han ellminado, por
una vez de cada mil, reemplazara una de las dos copias del gen normal por re- recombinaci6n hom61oga, ambas
copias de un gen del factor de
combinacion homologa. Aprovechando estos fenomenos infrecuentes "de direc-
crecimiento Wnt-l. CA) Secci6n de
cionamiento genico" (gene targeting) es posible inactivar cualquier gen en una cerebro de un embrion normal.
celula de raton por reemplazamiento genico. Este metodo se completa con el (B) Secci6n de cerebro de un embri6n
proceso en dos etapas que se describe a continuacion, permitiendo la obtencion mutante, que carece de cerebelo y de
de un raton con un gen defectuoso. la mayor parte del cerebro medio, y
En primer lugar, el fragmento de DNA que contiene el gen mutante deseado morini in utero. (Fotografias cortesia
(0 parte del gen) se transfecta en una linea especial de celulas germinales pluri- de Mario CapecchL)

Ingenierfa de DNA 353

 Figura 7-49 Procedimiento utilizado
discos de hoja incubados para obtener una planta transgenica.
con Agrobacteria modificada (A) Esquema del proceso. Se corta un
discos tomados de por ingenieria genetica
hoja de tabaco durante 24 h. disco de una hoja y se cultiva en

-1lT-
presencia de Agrobacteria portadora
de un phismido que contiene tanto un
marcador seleccionable como el
transgen deseado. Las celulas de la
periferia del disco, heridas, secretan
callos ~I medio selectivo s610 substancias que atraen Agrobacteria,la
_ - - - - _ / ~ermite proliferar a cualles inyecta el DNA. S610
las celulas vegetales
que han adquirido
sobreviven aquellas celulas que
el DNA de la expresan el marcador selectivo, es
bacteria decir aquellas que han recibido el DNA
adecuado, y formanin un callo.
tallos Manipulando los factores de
crecimiento que recibe el callo se
puede inducir la formaci6n de tallos
que enraizaran y se desarrollaran
crecimiento
dando lugar a una planta adulta
de la plantula portadora del transgen.
enraizada (B) Preparaci6n del plasmido
(A) recombinante y su transferencia ala
planta adulta que celula de la planta. Un plasmido de
porta el transgen
que estaba Agrobacterium, portador de la
originalmente en secuencia de T-DNA se modifica para
la bacteria incluir un marcador seleccionable
(por ejemplo, el gen de resistencia a
kanamicina) y el transgen deseado,
entre los 25 pares de bases repetidos
del T-DNA CuandoAgrobacterium
reconoce una celula vegetal, inyecta
citoplasma una cadena de DNA en el citoplasma
transgen gen marcador de la celula utilizando el mecanismo
de interes seleccionable
que normalmente transfiere la
secuencia de T-DNA.
plasmido
recombinante

en Agrobacterium ~~~L~~!~~~~-!

repeticiones de 25 pares
de nucle6tidos del T-DNA

EL DNA SE EXTRAE DEL pLASMIDO EN FORMA LINEAL

Y SE TRANSFIERE DIRECTAMENTE A LA CELULA VEGETAL.
(8) DONDE SE INTEGRARA EN EL CROMOSOMA VEGETAL

potentes derivadas del embrion (denominadas celulas madre embrionarias 0 ce-

lulas ES -de Embrionic Stem Cells), que crecen en cultivo celular. Tras un perfo-
do de proliferacion celular, las escasas colonias de celulas en las que se ha podi-
do producir un reemplazamiento genico, se afslan mediante doble seleccion con
drogas (Figura 7-47). De entre elIas se identifican las colonias correctas median-
te PCR 0 transferencia Southern: contendnin secuencias de DNA recombinante
en las que el fragmento insertado ha reemplazado todo 0 parte de una copia del
gen normal. En la segunda etapa, celulas individuales de la colonia identificada
se recogen con una micropipeta y se inyectan en un embrion temprano de ra-
t6n. Las celulas madre embrionarias transfectadas colaboran con las celulas del
embrion huesped para formar el rat6n de apariencia normal (vease Figura 21-
32); una gran parte de estos animales quimericos, induyendo en casos favora-
bles celulas de la linea germinal, proceden de las celulas madre modificadas arti-

354 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

ficialmente. Estos animales se cruzan para obtener machos y hembras, cada uno
de los cuales son heterocigotos para el reemplazamiento genico (es decir, tienen
una copia normal y una copia mutante del gen). Cuando se cruzan estos dos ra-
tones, una cuarta parte de su descendencia debe ser homocigota respecto al gen
modificado. El estudio de estos homocigotos permite examinar la funci6n del
gen modificado en ausencia del gen normal.
La capacidad de preparar ratones transgenicos que carecen de un gen
normal conocido ha sido un gran avance, y actualmente esta tecnica se utiliza
ampliamente para analizar las funciones de diversos genes de mamffero (Figu-
ra 7-48).

Las plantas transgenicas son importantes tanto para

la biologia celular como para la agricultura39
Cuando una planta sufre un dafio en muchos casos puede reparar el dafio me-
diante un proceso por el cual celulas diferenciadas se "desdiferencian", prolife-
ran y rediferencian en otros tipos celulares. En algunos casos las celulas desdife-
renciadas pueden llegar a formar un meristemo apical, que puede generar una
planta completamente nueva, incluyendo los gametos. Esta notable plasticidad
de las celulas vegetales puede ser utilizada para generar plantas transgenicas a
partir de celulas cultivadas.
Cuando se cultiva un trozo de tejido de una planta en un medio esteril que
contiene nutrientes y factores de crecimiento adecuados, muchas de las celulas
son estimuladas a crecer indefinidamente de una forma desorganizada, produ-
ciendo una masa de celulas relativamente indiferenciadas denominada callo. Si
se manipulan adecuadamente los nutrientes y los reguladores del crecimiento,
es posible inducir la formaci6n de meristemos apicales y radiculares en el callo,
pudiendo, en muchas especies, regenerar la planta completa.
Los cultivos de callos se pueden disociar tambien mecanicamente en celulas
aisladas, que creceran y se dividiran como un cultivo en suspensi6n. En un gran
mimero de plantas -entre las que se incluyen el tabaco, la petunia, la zanahoria,
la patata y Arabidopsis- a partir de celulas aisladas se pueden obtener pequefios
grupos de celulas (un clon), a partir de los cuales se puede regenerar una planta
completa. Del mismo modo que se puede obtener un rat6n transgenico por ma-
nipulaci6n genetica de celulas embrionarias en cultivo, pueden obtenerse plan-
tas transgenicas a partir de celulas vegetales aisladas cultivadas, transfectadas
con DNA (Figura 7-49).
La capacidad de producir plantas transgenicas ha acelerado el progreso en
muchas areas de la biologfa celular vegetal. Ha jugado un papel importante, por
ejemplo, en el aislamiento de receptores para los reguladores del crecimiento y
en el analisis de los mecanismos de morfogenesis y de expresi6n genica en plan-
tas. Ha abierto nuevas posibilidades en agricultura que pueden beneficiar tanto
al agricultor como al consumidor. Ha hecho posible, por ejemplo, modificar el
contenido de lfpidos, almid6n y protefnas de reserva almacenadas en las semi-
lias, aumentar la resistencia de las plantas a plagas y virus, y crear plantas modi-
ficadas que toleran habitats extremos como margenes de concentraci6n de sal 0
suelos encharcados.
La mayor parte de los avances en la comprensi6n del desarrollo animal pro-
cede de estudios sobre la mosca del vinagre Drosophila y del nematodo Caenor-
habditis elegans, que son abordables para el analisis genetico extensivo asf como
para la manipulaci6n experimental. Los progresos en la biologia del desarrollo de
las plantas han sido mucho mas lentos comparativamente. La mayor parte de los
organismos que se han encontrado mas adecuados para el analisis genetico tie-
nen ciclos vitales largos y genomas enormes, 10 cual ha hecho de su estudio gene-
tico clasico y molecular una labor que requiere mucho tiempo y esfuerzo. Por
ella se ha dedicado especial atenci6n a una planta pequefia de crecimiento rapi-
do, Arabidopsis thaliana, que tiene grandes ventajas para ser escogida como
"planta modelo" (vease Figura 21-93).

Ingenierfa de DNA 355

Resumen
La tecnologfa del DNA recombinante ha revolucionado el estudio de la celula. Las
tecnicas de ingenieria del DNA pueden utilizarse para crear cualquier gen mutante
e insertarlo en el cromosoma de las celulas, de forma que pase a ser una parte per-
manente del genoma. Si la celula utilizada para esta transferencia de genes es un
huevo fecundado (para un animal) 0 una celula vegetal totipotente en cultivo, se
obtendrdn organismos transgenicos que expresardn el gen mutante y 10 pasardn a
su progenie. Es especialmente importante para el bi6logo celular la posibilidad que
proporciona esta tecnologfa de alterar celulas de manera espectjica -permitiendo
discernir el efecto que tiene sobre una celula el cambio de una sola protefna que ha
sido mutada intencionadamente por tecnicas de "genetica inversa".
Las consecuencias prdcticas de la tecnologfa del DNA recombinante tambien
abarcan otras posibilidades. Se pueden utilizar las bacterias, las levaduras 0 inclu-
so celulas de mamifero para, mediante ingenierfa genetica, producir una protefna
en grandes cantidades, 10 cual hace posible analizar en detalle la estructura y la
funci6n de esta protefna, 0 utilizar la protefna como una vacuna 0 como un fdrma-
co con jinalidad medica.

Bibliograffa Maxam, AM.; Gilbert, W. A new method for sequencing

Citas
1. Sambrook, J.; Fritsh, E.F.; Maniatis, T. Molecular Clo-
ning: A Laboratory Manual, 2nd ed. Cold Spring
Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press,
1989.
Watson, J.D.; Tooze, J. The DNA Story: A Documentary
History of Gene Cloning. New York: W.H. Freeman,
1981.
Watson, J.D.; Tooze, J.; Kurtz, D.T. Recombinant DNA: A
Short Course. New York: W.H. Freeman, 1983.
2. Kessler, c.; Manta, V. Specificity of restriction endonu-
cleases and DNA modification methyltransferases-a
review (Edition 3). Gene 92:1-248,1990.
3. Danna, K.J. Determination of fragment order through
partial digests and multiple enzyme digests. Methods
Enzymol. 65:449-467, 1980.
Nathans, D.; Smith, H.O. Restriction endonucleases in
the analysis and restructuring of DNA molecules.
Annu. Rev. Biochern. 44:273-293, 1975.
4. Andrews, AT. Electrophoresis, 2nd ed. Oxford, UK: Cla-
rendon Press, 1986.
Evans, G.A. Physical mapping of the human genome by
pulsed field gel analysis. Curro Opin. Genet. Dev. 1:75-
81, 1991.
Southern, E.M. Gel electrophoresis of restriction frag-
ments. Methods Enzymol. 68:152-176,1979.
5. Lehman, LR DNA polymerase I of Escherichia coli. In
The Enzymes, Vol. 14A (P.D. Boyer, ed.), pp. 16-38.
New York: Academic Press, 1981.
Richardson, C.c. Polynucleotide kinase from Escheri-
chia coli infected with bacteriophage T4. Nucleic
Acids Res. 2:815, 1971.
Rigby, P.W.; Dieckmann, M.; Rhodes, c.; Berg, P. Labe-
ling deoxyribonucleic acid to high specific activity in
vitro by nick translation with DNA polymerase L ].
Mol. Bioi. 113:237-251,1977.
6. Griffin, H.G.; Griffin, AM. DNA sequencing. Recent in-
novations and future trends. Appl. Biochern. Biotech.
38:147-159,1993.
DNA Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:560-564,1977.
Maxam, AM.; Gilbert, W. Sequencing end-labeled DNA
with base-specific chemical cleavages. Methods
Enzyrnol. 65:499-560, 1980.
Prober, J.M.; Trainor, G.; Dam, R; et al. A system for ra-
pid DNA sequencing with fluorescent chain termina-
ting dideoxynucleotides. Science 238:336-341, 1987.
Sanger, F.; Nicklen, S.; Coulson, AR DNA sequencing
with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 74:5463-5467, 1977.
7. Cartwright, LL.; Kelly, S.E. Probing the nature of chro-
mosomal DNA-protein contacts by in vivo footprin-
ting. Biotechniques 11:188-203,1991.
Galas, D.J.; Schmitz, A. DNAse footprinting: a simple
method for the detection of protein-DNA binding
specificity. Nucleic Acids Res. 5:3157-3170, 1978.
Tullius, T.D. Physical studies of protein-DNA complexes
by footprinting. Annu. Rev. Biophys. Biophys. Chern.
18:213-237, 1989.
8. Schildkraut, c.L.; Marmur, J.; Doty, P. The formation of
hybrid DNA molecules and their use in studies of
DNA homologies.]. Mol. Biol. 3:595-617, 1961.
Wetmur, J.G. Hybridization and renaturation kinetics of
nucleic acids. Annu. Rev. Biophys. Bioeng. 5:337-361,
1976.
Wetmur, J.G. DNA probes: applications ofthe principles
of nucleic acid hybridization. Critical Review in Bio-
chern. Mol. BioI. 26:227-259, 1991.
9. Berk, AJ.; Sharp, P.A. Sizing and mapping of early ade-
novirus mRNAs by gel electrophoresis of SI endonu-
clease digested hybrids. Cell 12:721-732, 1977.
Gerhard, D.S.; Kawasaki, E.S.; Bancroft, F.C.; Szabo, P.
Localization of a unique gene by direct hybridization.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:3755-3759, 1981.
Pardue, M.L.; Gall, J.G. Molecular hybridization of ra-
dioactive DNA to the DNA of cytological prepara-
tions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 64:600-604, 1969.
Wallace, RB.; Shaffer, J.; Murphy, RF.; et al. Hybridiza-
tion of synthetic oligodeoxyribonucleotides to <l>X174
DNA: the effect of a single base pair mismatch. Nu-
cleicAcids Res. 6:3543-3557, 1979.

356 Capitulo 7 : Tecnologia del DNA recombinante

 10. Alwine, J.C.; Kemp, D.J.; Stark, G.R Method for delection
of specific RNAs in agarose gels by transfer to dia-
benzylozymethyl-paper and hybridization with DNA
probes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5350-5354,1977.
Southern, E.M. Detection of specific sequences among
DNA fragments separated by gel electrophoresis. J.
Mol. BioI. 98:503-517,1975.
Thomas, P.S. Hybridization of denatured RNA and
small DNA fragments transferred to nitrocellulose.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:5201-5205, 1980.
11. Chang, C.; Meyerowitz, E.M. Plant genome studies: re-
striction fragment length polymorphism and chro-
mosome mapping information. Curro Opin. Genet.
Dev. 1:112-118, 1991.
Kidd, K.K. Progress towards completing the human lin-
kage map. Curro Opin. Genet. Dev. 1:99-104,1991.
Pourzand, C.; Cerutti, P. Genotypic mutation analysis
byRFLP/PCR Mutat. Res. 288:113-121,1993.
12. Gilbert, F.; Marinduque, B. DNA prenatal diagnosis.
Curro Opin. Obstet. Gynecol. 2:226-235,1990.
Lathe, R Synthetic oligonucleotide probes deduced
from amino acid sequence data. Theoretical and
practical considerations.]. Mol. BioI. 183:1-12, 1985.
13. McGinnis, W.; Garber, RL.; Wirz, J.; et al. A homologous
protein-coding sequence in Drosophila homeotic ge-
nes and its conservation in other metazoans. Cell
37:403-408, 1984.
14. Stephenson, E.C.; Pokrywka, N.J. Localizatino of bicoid
message during Drosophila oogenesis. Curro Top.
Dev. BioI. 26:23-34,1992.
Trask, B.J. Gene mapping by in situ hybridization. Curro
Opin. Genet. Dev. 1:82-87, 1991.
15. Ausubel, F.M.; Brent, R; Kingston, RE.; et al., eds. Cu-
rret Protocols in Molecular Biology. New York: Wiley,
1993.
Drlica, K. Understanding DNA and Gene Cloning. New
York: Wiley, 1984.
16. Cohen, S.N. The manipulation of genes. Sci. Am.
233(1):24-33, 1975.
Foster, T.J. Plasmid-determined resistance to antimi-
crobial drugs and toxic metal ions in bacteria. Micro-
bioI. Rev. 47:361-409,1983.
Hanahan, D. Studies on transformation of Escherichia
coli with plasmids.J. Mol. BioI. 166:557-580, 1983.
Novick, RP. Plasmids. Sci. Am. 243(6):102-127,1980.
17. Lennon, G.G.; Lehrach, H. Hybridization analyses of
arrayed cDNA libraries. Trends Genet. 7:314-317,
1991.
Maniatis, T., et al. The isolation of structural genes from
libraries of eucaryotic DNA. Cell 15:687-701, 1978.
18. Okayama, H.; Berg, P. High-efficiency cloning of full-
length cDNA. Mol. Cell BioI. 2:161-170, 1982.
Southern, E.M. Genome mapping: cDNA approaches.
Curro Opin. Genet. Dev. 2:412-416, 1992.
19. Calvet, J.P. Molecular approaches for analyzing differ-
ential gene expression: differential cDNA library
construction and screening. Pediat. Nephrol. 5:751-
757,1991.
Hedrick, S.M.; Cohen, D.l.; Nielsen, E.A.; Davis, M.M.
Isolation of cDNA clones encoding T cell-specific
membrane-associated proteins. Nature 308:149-153,
1984.
20. Yang, J.; Ye, J.; Wallace, D.C. Computer selection of oligo-
nucleotide probes from amino acid sequences for use
in gene library screening. Nucleic Acids Res. 12:837-
843,1984.
Young, R.A.; Davis, RW. Efficient isolation of genes
using antibody probes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA
80:1194-1198,1983.
Bibliografia
21. Hope, l.A.; Struhl, K. GCN4 protein, synthesized in vitro,
binds HIS3 regulatory sequences: implications for
general control of amino acid biosynthetic genes in
yeast. Cell 43:177-188, 1985.
Ricciardi, RP.; Miller, J.S.; Roberts, B.E. Purification and
mapping of specific mRNAs by hybridization-selec-
tion and cell-free translation. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 76:4927-4931,1979.
22. Stubbs, L. Long-range walking techniques in positional
cloning strategies. Mammalian Genome 3:127-142,
1992.
23. Burke, D.T. The role of yeast artificial chromosomes in
generating genome maps. Curro Opin. Genet. Dev.
1:69-74,1991.
Carrano, A.V.; de Jong, P.J.; Branscomb, E.; et al. Con-
structing chromosome- and region-specific cosmid
maps of the human genome. Genome 31:1059-1065,
1989.
Coulson, A.; Kozono, Y.; Lutterbach, B.; et al. YACs and
the C. elegans genome. Bioessays 13:413-417, 1991.
Hauge, B.M.; Hanley, S.; Giraudat, J.; et al. Mapping the
Arabidopsis genome. Symp. Soc. Exper. BioI. 45:45-56,
1991.
24. Harris, A.; Argent, B.E. The cystic fibrosis gene and its
product CFTR Semin. Cell BioI. 4:37-44, 1993.
Hyser, C.L. Unraveling the mysteries of Duchenne and
Becker muscular dystrophy. Mol. Chern. Neuro-
pathol. 10:15-20,1989.
Wicking, C.; Williamson, B. From linked marker to gene.
Trends Genet. 7:288-293, 1991.
25. Allen, R.W.; Wallhermfechtel, M.; Miller, W.V. The appli-
cation of restriction fragment length polymorphism
mapping to parentage testing. Transfusion 30:552-
564,1990.
Bottema, C.D.; Sommer, S.S. PCR amplification of spe-
cific alleles: rapid delection of known mutations and
polymorphisms. Mutat. Res. 288:93-102,1993.
Nelson, D.L. Appliations of polymerase chain reaction
methods in genome mapping. Curro Opin. Genet.
Dev. 1:62-68, 1991.
Pourzand, C.; Cerutti, P. Genotypic mutation analysis
by RFLP/PCR. Mutat. Res. 288:113-121,1993.
Saiki; RK.; Gelfand, D.H.; Stoffel, S.; et al. Primer-direc-
ted enzymatic amplification of DNA with a thermos-
table DNA polymerase. Science 239:487-491,1988.
26. Olson, M.V. The human genome project. Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 90:4338-4344, 1993.
Szostak, J.W. In vitro genetics. Trends Biochem. Sci.
17:89-93,1992.
27. Itakura, K.; Rossi, J.J.; Wallace, RB. Synthesis and use of
synthetic oligonucleotides. Annu. Rev. Biochem.
53:323-356, 1984.
28. Melton, D.A.; Krie~, P.A.; Rebagliati, M.R; et al. Efficient
in vitro syntheSIS of biologically active RNA and RNA
hybridization probes from plasmids containing a
bacteriophage SP6 promoter. Nucleic Acids Res.
12:7035-7056, 1984.
29. Abelson, J.; Butz, E., eds. Recombinant DNA. Science
209:1317-1438,1980.
Balbas, P.; Bolivar, F. Desi~n and construction of ex-
pression plasmid vectors III E. coli. Methods Enzymol.
1985: 14-37, 1990.
Gilbert, W.; Villa-Komaroff, L. Useful proteins from re-
combinant bacteria. Sci. Am. 242(4):74-94,1980.
Mille, LX Baculoviruses: high-level expression in insect
cells. Curro Opin. Genet. Dev. 3:97-101,1993.
Rose, A.B.; Broach, J.R Propagation and expression of
cloned genes in yeast: 2-micron circle-based vectors.
Methods Enzymol. 185:234-279, 1990.
357
30. Alam, J.; Cook, J.L. Reporter genes: application to the
study of mammalian gene transcription. Anal. Bio-
chem. 188:245-254, 1990.
Bellen, H,J.; Wilson, C.; Gehring, W,J. Dissecting the
complexity of the nervous system by enhancer detec-
tion. Bioessays 12:199-204, 1990.
31. Jockusch, B.M.; Zurek, B.; Zahn, R; Westmeyer, A;
Fuchtbauer, A Antibodies against vertebrate microfi-
lament proteins in the analysis of cellular motility
and adhesion.]. Cell Sci. S14:41-47, 1991.
Lederberg, J.; Lederberg, E.M. Replica plating and indi-
rect selection of bacterial mutants. ]. Bacteriol.
63:399-406,1952.
Nusslein-Volhard, c.; Weischaus, E. Mutations affecting
segment number and polarity in Drosophila. Nature
287:795-801, 1980.
32. Kaiser, K From gene to phenotype in Drosophila and
other organisms. Bioessays 12:297-301,1990.
Landel, C.P.; Chen, S.; Evans, G.A. Reverse genetics us-
ing transgenic mice. Annu. Rev. Physiol. 52:841-851,
1990.
Provost, G.S.; Kretz, P.L.; Hamner, RT.; et al. Transgenic
systems for in vitro mutation analysis. Mutat. Res.
288:133-149, 1993.
33. Baase, W.A.; Eriksson, AE.; Zhang, X,J.; et al. Dissection
of protein structure and folding by directed mutage-
nesis. Faraday Discuss. 93: 173-181, 1992.
Sharon, J.; Kao, C.Y.; Sompuram, S.R Oligonucleotide-
directed mutagenesis of antibody combining sites.
Int. Rev. Immunol. 10:113-127, 1993.
34. Garoff, H. Using recombinant DNA techniques to study
protein targeting in the eucaryotic cell. Annu. Rev.
Cell Biol. 1:403-445, 1985.
Kelly, J.H.; Darlington, G,J. Hybrid genes: molecular ap-
proaches to tissue-specific gene regulation. Annu.
Rev. Genet. 19:273-296, 1985.
358 Capitulo 7 : Tecno1ogia del DNA recombinante
35. Leclerc, D.; Brakier-Gingras, L. Study of the functic)ll of
Escherichia coli ribosomal RNA through site-directed
mutagenesis. Biochem. Cell BioI. 68:169-179, 1990.
Scherer, S.; Davis, RW. Replacement of chromosome
segments with altered DNA segments constructed in
vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76:4951-4955,1979.
Struhl, K. The new yeast genetics. Nature 305:391-397,
1983.
36. Herskowitz, l. Functional inactivation of genes by domi-
nant negative mutations. Nature 329:219-222, 1987.
Weintraub, H.; lzant, J.G.; Harland, RM. Anti-sense
RNA as a molecular tool for genetic analysis. Trends
Genet. 1:22-25, 1985.
37. Boyd, A.L.; Samid, D. Review: molecular biology of
transgenic animals.]. Anim. Sci. 71(S3):1-9, 1993.
Palmiter, RD.; Brinster, RL. Germ line transformation
of mice. Annu. Rev. Genet. 20:465-499, 1986.
Rubin, G.M.; Sprading AC. Genetic transformation of
Drosophila with transposable element vectors. Sci-
ence 218:348-353, 1982.
Smith, P.A.; Corces, V.G. Drosophila transposable ele-
ments: mecanisms of mutagenesis and interactions
with the host genome. Adv. Genet. 29:229-300, 1991.
38. Babinet, c.; Morello, D.; Renard, J.P. Transgenic mice.
Genome 31:938-949,1989.
Gossen, J.; Vijg, Transgenic mice as model systems for
studying gene mutations in vivo. Trends Genet. 9:27-
31,1993.
Gridley, T. Insertional versus targeted mutagenesis in
mice. New BioI. 3:1025-1034, 1991.
39. Davey, M.R; Rech, E.L.; Mulligan, B,J. Direct DNA trans-
fer to plant cells. Plant Mol. BioI. 133:273-285, 1989.
Walden, R; Schell, J. Technique in plant molecular bio-
logy-progress and problems. Eur. ]. Biochem.
192:563-576, 1990.
EI nueleo celular
8
ElDNA~ko,1U
-p ...
La de ...
a ___

.....1rarIde del CI'OIIIMO_

SIo,-,,,--
.0-_,__
doI.NA

....-. .mnaaudeu

1 DNA de una celula eucariota se halla confinado en el nlieleo, que ocupa alre-
dedor del 10% del volumen celular. EI nudeo esta delimilado por una envo!tura
flllclear (armada por dos membranas concentricas. Estas membranas estern per-
foradas a intervalos por poms nucleaTes. a traves de los cuaJes se produce el
lransporte activo de determinadas molecuJas entre el nucleo y el choplasma. La
envollura nuclear estc1. conectada directamente con la membrana del reticula
endopl<tsmico y se mantiene por dos redes de filamentos inlennedio5: una de-
nominada fdmina nuclear. farmada por una fina l<imina que recubre 1a mem-
brana nuclear intema, mientras que la atTa, organizada de forma menos regular.
rodea la membrana nuclear extema (Figura 81)
Como ocurre con los procariolas actuaJes, muy probablememe los ances-
tros de las cl!luJas eucariotas carecfan de nudeo; s610 podemos especular por
qu~ apareci6 durante la evoluci6n un compartimiento nuclear separado, que
aisla al DNA de la aetividad del citoplasma. Dos caracterfsticas especiales de las
ctilulas cucariotas nos sugieren posibles expticaciones. Una de elias es la existen-
cia del citocsqueleto, compuesto principalmcnte por microtubllios y filamentos
de actina, responsable del movimienlo de la celula. Las bacterias, cuyo DNA se
encucntra en C011lacto directo con el citoplasma, carecen de dichos filamentos y

FIgura &-1 Seccl6n tnrnsversal de un

DNA y p,olelnas n!.icleo celuJar trpico. La envoltura
.soe~dllt lc,omeli~l
nuclear estli fonnada por dos
membranas de las cuales la exterior es
continua con la membrana del reticulo
endoplasmlitico (vease tambien Figura
12-9). Las bicapas lipfdicas de las
membranas nucleares intema y
extema estill asociadas en los poros
filemenl," nucleares. Dos redes de filamentos
inlermecllol mic'Olubulos
intermedios (verde) proporcionan
soportc meclinico a la envohura
nuclear; los filamentos del interior del
mlc1eo forman una fina Mmino
nllclear. EI espacio inlerior del relCulo
memb,,,ne nuel"" externe] I I endoplllsrnrttico (lumen del ER) se ha
membrene nuclear interna enyo lure nue ear
coloreado en amarillo.

359
se desplazan mediante estructuras externas como los flagelos. Por ello, una de envoi lura membrana
nuclear plasm6tica
las funciones de la envoltura nuclear de los eucariotas podr(a ser la de proteger
las largas y fragHes mohkulas de DNA de las fuerzas mecanicas generadas por
los filamentos citoplasmaticos. . .
Una segunda caracterfstica diferencial de las celulas eucariotas es la existen-
cia de un procesamiento del RNA previo a su traducci6n a protefna. En las celu- NUCLEO
las procariolas [a s(ntesis del RNA (transcripci6n) y la sfntesis de prolefnas (tra-
ducci6n) tienen lugar simultaneamente: los ribosomas traducen el extremo 5' de ======ONA
la molecula de RNA mientras todavia se eSla transcribiendo su extremo 3'. Por I
RNA
TAANSCA'P-
cl6N OEL ONA

.. :
ello existen pocas oportunidades de modificar el RNA antes de ser traducido a
protefna. En eucariotas, por el contrario, la transcripci6n (nuclear) esta separada

~
tanto temporal como espacialmente de la traducci6n (citoplasrnatica). Los
transcritos de RNA en el nucleo se empaquelan inmediatamente en complejos
MADU~ACI6N
ribonucleoproteicos y son sometidos aI proceso de madllracion ("splicing") del PDR CORTE Y
RNA, en el cual se eliminan algunas zonas de la secuencia de nucle6tidos. Las __ RNA
EMPALME DEL

protefnas de empaquetamienlo se desprenden cuando ha finalizado la madura-

ci6n del RNA, y esle es transportado desde el nucleo aI citosol, donde los riboso-
mas empiezan a traducir el RNA a protefna (vease Figura 8-2). Tal como se vera
mas adelante, el proceso de maduraci6n del RNA es una etapa intermedia im- ~,.
I TRANSPORTE
DEL RNA

ri~sr:l:
portante en la transmisi6n de informaci6n genelica en eucariotas. Para la cclula
supone un cierto numero de ventajas, incluyendo la capacidad de permitir que
r ":1-TR"ADUCCI6N DEL
un mismo gell codifique mas de una protefna. Todo ello podria ayudar a explicar ~ RNA MENSAJERO
por que las celulas eucariotas tienen un nucleo en el que se puede desarrollar la
maduraci6n del RNA en ausencia de interferencias por parte de los ribosomas " " protelna
(Figura 8-3).
En este capitulo se describira c6mo las proteinas empaquetan el DNA en C1TOSOL
cromosomas, c6mo estos se pliegan y se organizan en el nucleo, y c6mo se repli-
can durante cada cicio de divisi6n celular. Posteriormente se diSCUlira la sfntesis
y el procesamiento de RNA, y finalmenle se describira c6mo se organiza la infor- Figura 8-2 Sfntesls de protefnas (DNA
maci6n en el genoma eucariola, y c6mo se ha alcanzado dicha organizaci6n du- --+ RNA --+ protefna) en eucar:lotas. Las
rante la evoluci6n. La envohura nuclear se analiza en detalle en el CapituJo 12 en celu1as eucariotas han desarrollado
relaci6n con el transporte selectivo de macromolecuJas desde y hacia el nueleo. numerosos eompartimientos rodeados
AlIi lam bien se presenta un esquema hipotetico de c6mo podrfa haber evolucio- de membrana que separan los
nado el compartimiento nuclear (vease Figura 12-5). diferentes grupos de reacciones
enzimatieas, 10 que las haee mas
eficientes. El n(icleo es uno de estos
compartimienlos. La envoltura nuclear
mantiene a los ribosomas fundonales
fuera del nucleo, evitando que los
uanscritos de RNA sean uaducidos a
protefnas, hasta que hayan sido
proeesados extensamente y
Iransportados al exterior del n(icleo. al
citosol. Asf pues, las elapas de
maduraci6n y de transporte del RNA se
inlerponen entre la transcripci6n del
DNA y la traducci6n del RNA.

Figura 8-3 La envoltura nuclear

mantlene el compartlmlento nuclear
llbre de organulos c1toplasmatlcos.
envoltura Esta imagen obtenida con el
nuclear
microscopio eleetr6nieo muestra una
seeci6n ultrafina de un huevo de erizo
de mar, con un n(icleo contrastado de
una forma extraordinariamente
uniforme y un dtoplasma densarnente
lIeno de organuJos. (Par conesla de
David Begg y Tim Hunt.)

360 Capitulo 8 : EI nuelco celular

EI DNA cromos6mico y su empaquetamiento i
Durante los primeros 40 anos de eSle siglo los bi61ogos descartaban la posibilj-
dad de que eJ DNA de los cromosomas eucariolas oontuviera la informaci6n ge-
netica. debido fundamental mente a que creran que los I1cidos nucleicos estaban
(armadas unicamente por una secuencia repetida de cualro nucle6tidos (tal
como AGCfAGCfAGCr...). Sin embargo, acrualmente sabemos que una moM-
cula de DNA es un polimero lineal extraordinariamente largo y no ramificado,
que contiene muchas millones de nucle6tidos organizados siguiendo una se-
cuencia regular pero no aJ azaT, y que la informaci6n genelica de una celula estl1
contenida en el orden lineal de los nucietStidos de su DNA. EI c6digo genetico
estl1 escrito con "palabras~ de Ires nucle6tidos (codolles. cada uno de los cuales
especilica un aminoacido. como se describe en Capitulo 6) que solventan el pro-
blema de acumular una gran canlidad de infonnaci6n genctica en un reducido
espacio: cada miJI6n de "Ielras~ (nucle6lidos) ocupa una distancia lineal de s610
3,4 x lOs nm (0,034 em) y un volmnen de alrededor de 10' nm J {Io-IS cmll.
Cada molecula de DNA sc cmpaqueta en un cromosoma; cl lotal de infor-
maci6n genetica contenida en los cromosomas de un organismo constiluye su
gcnoma. EI genoma de la bacteria E. coli eSla fonnado par 4,7 x 1()6 parejas de
nucle6tidos de DNA, en una linica rnolecula de DNA de doble helice (un cromo-
soma). Por el contrario, el genoma humano estA formada por 3 x 109 parejas de
nucle6lidos, en 24 cromasomas {22 autosomas diferentes y 2 cromosomas se-
xuales diferentesl. es decir esta formado por 24 moleculas de DNA distintas
--cada una de las cuales conticne enlre 50 x 10' Y 250 x 1()6 pares de bases de
DNA. Las moleculas de DNA de ese tamano tienen una longitud de entre 1,7 Y
8.5 em cuando estan descnrolladas, y una vez se han eliminado las prote[nas
cromos6micas pueden rompcrsc debido aI menor efeeto mecanico.
En los organismos diploides, como nosotros mismos. existen dos copias de
cada tipo de cromosoma, uno heredado de la madre y el 01(0 procedenre del pa-
dre (con la excepci6n de los cromosomas sexuales en los machos, en los que el
cromosoma Yprocede del padre y el X de la madre). Asf, una celula humana tfpi-
ca contiene 46 cromosomas y 6 x 1()9 parejas de nuc!e6tidos de DNA. Otros ma-
miferos presentan genomas de un lamano similar a eSle. Te6ricamente. esta
cantidad de DNA se podrfa empaquetar en un cubo de 1,9 Il-m de lado. A efeclos
comparativos, 6 x 109 letras en este Iibro podrfan ocupar mas de un miU6n de
paginas, y serfa necesario un espacio unas 10 11 veces mayor.
En esta secci6n se consideraran las relaciones que existen entre las molecu-
las de DNA, los genes y los cromosomas, analizando c6mo se pliega el DNA for-
mando una eSl(uctura compacta y ordenada -el cromosoma- que alin asf per-
mite el acceso a su informaci6n genetica. Es importanle recordar que los
crornosomas de una celula cambian su estructura y actividad en funci6n de la
fase del cicio celular: en mitosis, ofase M, se encuentran muy condensados y son
transcripcionalmente inactives; en la atra fase, mucho mas larga, del cicio celu-
lar, denominada interfase. estan mucho menos condensados y son activos din
giendo continuamenle la sfntesis de RNA.

Cada molecula de DNA que forma un cromosoma ha de contener

un centr6mero, dos tel6meros y varios orfgenes de replicaci6nz
Para que una molecula de DNA fonne un cromosoma funcional debe ser capaz
de algo mas que de dirigir la sfntesis de RNA: ha de ser capaz de propagarse,
lransmitiendose eficazmente de una generaci6n a la siguiente. Ello requiere tIes
tipos de secuencias especializadas en el DNA. cada una de las cuales sirve para
uni.r las prole[nas que gu[an los mecanismos de replicaci6n y la segregaci6n de
los cromosomus. Estudiando levaduras, cuyos cromasomas de pequeno tamano
son senciIJos de manipular con los metodas del DNA rccombinanle, se han pa-
dido identificar las secuencias de DNA mfnimas necesarias para estas funciones.
Se han identificado dos de los Ires elementos anteriores eSludiando pequenas

EI DNA cromos6mico y su empaquetamiento 361

moleculas de DNA circular que se pueden replicar como pldsmidos en celulas
de la levadura Saccharomyces cereuisiae. Para poderse replicar, estas moleculas
necesitan una secuencia de nucle6tidos especffica que actt1a como orlgen de
repllcacl6n del DNA; como se vera mas adelante, es posible identificar los nu-
merosos or(genes de repJicaci6n presentes en cada cromosoma de levadura par
la capacidad que confieren a una molecliia de DNA que contenga uno de ellos,
de replicarse independientemente del cromosoma huesped. Un segundo ele-
menlO de secuencia denominado centr6mero es el responsable de unir la mole-
cula de DNA que 10 contiene al huso mit6tico durame la divisi6n celular. Cada
uno de los cromosomas de levadura comiene un solo cemr6mero. Cuando esta
secuencia se inserta en un plasmido, asegura que cuando la celula se divida,
cada una de las celulas hijas recibira una de las dos replicas de la molecula de
DNA del plasmido recien duplicado.
EI tercer element a imprescindible es el tel6mero; es necesario que exista
uno de elias en cada extremo del cromosoma lineal. Si un cromosoma circular
que contenga un centr6mero y un origen de replicaci6n se rompe en un punta,
de forma que aparecen dos extremos de DNA libres, COlllinua teniendo la capa-
cidad de duplicarse y de unirse al huso mit6tico, pero pllede lIegar a perderse en
las celulas de la progenie. Ello es debido a que la replicaci6n de ambas cadenas
en la horquilla de repJicaci6n requiere la presencia de una secllencia adyacente
ala secuencia a replica! que actue de molde para un cebador de RNA (vease Fi-
gura 6-44). Dado que nunca podra haber un patr6n de este tipo para los t1ltimos
nucle6tidos de una molecula de DNA lineal, seran necesarios mecanismos espe-
ciales para impedir que en cada cicio cellilar estas hebras de DNA se vayan acor-
tando. Este problema de la "replicaci6n del extremo", 10 han resuelto las bacle-
rias y muchos virus teniendo como cromosoma una molecula circular de DNA.
Las celulas eucariotas han desarrollado una secuencia telomerica especial situa-
da en los extremos de cada cromosoma. Esta secuencia repetida sencilla es am-
plificada peri6dicamente por una enzima especial. denominada relomerasa, 10
cual compensa la perdida de algunos nucle6tidos del DNA telomerico que se
produce en cada cicio celular y permite que el cromosoma lineal se repJique
completamente.
En la Figura 8-4 se resumen las fundones de los tres elementos de secuencia
del DNA que son necesarios para que un cromosoma lineal de levadura se trans-
mita integro de generad6n en generaci6n. Estos elementos de secuencia son re-
lativamente cortos (tfpicamente menos de 1000 pares de bases cada uno) y por
ello solamente utilizan una pequefi.a fracci6n de la capacidad de almacenar in-
formaci6n del cromosoma. Son los tres mismos tipos de elementos que al pare-
cer son necesarios para mantener un cromosoma en las celulas human as, ape-

G, S G, M Figura 8-4 Funclones de las Ires

secuencia
lelomlirica- secuenclas de DNA necesarlas para
produclr un cromosoma eucarlola
lineal estable. Cada cromosoma tiene
eecullncia _ muchos origcnes de replicaci6n, un
del origen de cemr6mero y dos tel6mcros. El
rapliC8ci6n cemr6mero mantiene unidas Jas dos
+ copias del cromosoma y las une-a
Iraves de un complejo de protelnas
secuancia denominado cinelocoro- aJ huso
cenlromlirica mit6tico, de forma que durante la
mitosis se distribuye una copia a cada
celuJa hija. En la parle superior de los
diagramas se indican [as fases del ciclo
celuJar correspondiel1tes a las
~ ~ diferentes fases de replicaci6n y
burbuja de c1nelo<;oro cromosomas hijos an scgregaci6n del cromosoma.
replicaci6n c~lul6s separadss /

362 CapItulo 8 : EI nucleo celular

 VECTOft CROMOS6M1CO ARTIFICIAl DE LEVADURA DNA HUMANO F1xun 85 Construccl6n de un
cromosoma artificial de levadura
ORI CEN (VAG, de '"yeast artificial
A chromosome"). Un vectorYAC
pennile el donaje de moleculas de
DNA de gran lamana. TEL.. CEN yORI
son respeclivamcnte las secucncias del

Tn
, lel6mero, cenlr6mcro y dcl origcn de
replicaci6n de DNA de la levadllra
Saccharomyces cerevisiae. BamU 1y
~mH1
EcoR I son Ins nlldeasas de restricci6n
BamHl que conan la doble helice de DNA. Las
secuencias denominadas Ay B
OlGESOON CON
BamH1 y EeoR1 codifican enztmas que se utilizan

-
como marcadores que se pueden
m Tn seleccionar para pennilir el
AORI ~N + ' aislamienlo rapido de las ct!:lulas de
br"o Izquierdo brew dere<;ho fragmentOI cromos6micol grandes levadura lransformadas ponadoras de
un crornosoma artificial. (Adaptado
UNI6N DE DNA Y TAANSFORMACl6N DE LAS C~LULAS
de D.T. Burke, G.F. Carle y M.V. Olson.

,
-
DE LEVADURA Sciellce236: 606-812, 1987. Cll987
m AORI CEN " ..._ _ Tn AAAS.)

" --tl~r. Vi'nl, Oi)" 'I

II II I
5,6 x 10' pares de nucleOlidos hasta 10' pares de nucleOlidos 3,9 x 101 peru de nucle6lidos

CROMOSOMA ARTIFICiAl DE LEVAOURA CON DNA HUMANO INSCRTADO

sar de que hasta el momento en el hombre s610 se han caracterizado bien las sc
cuencias telomericas. Aunque la versi6n de levadura de dichas secuencias no es
funcional en celulas de eucariQlas superiores. los mctodos de DNA recombinan-
te han permitido unir los elementos de secuencia de levadura a molecuJas de
DNA humano, que entonces pueden replicarse en celulas de levadura como cra-
mosomas artificlaJes. De esta forma se pueden utilizar ululas de levadura para
preparar Iibrerias de DNA gen6mico humano (vease pag. 339) en las que cada
clon DNA (propagado como un cromosoma artificial) puede cOnlener alrededor
de I mjIJ6n de pares de bases de secuencia de DNA humano (Figura 8-5).

La mayor parte del DNA cromos6mico no codifica

prote(nas esenciales ni RNN
Parece que en los genom3s de los organismos superiores existe un gran exceso
de DNA. Desde mucho tiempo antes de que fuera posible examinar directamen
te la secuencias de nucle6tidos del DNA fue evidente que las cantidades relativas
de D A del genoma haploide de diferentes organismos no estaban sistematica-
mente relacionadas con la complejidad del organismo. Las celulas humanas,
por ejemplo, contienen alrededor de 700 veces mas DNA que la bacleria E. coli
miemras que algunos anfibios y relulas de plantas conticnen 30 veces mas DNA
que las cclulas humanas (vcase Figura 86). Adem<\s el contenido e1e DNA de los
genomas de diferenles cspecies de anfibios puede variar hasta lOa vcces,
Los genclistas de poblaciones inlcntaron estimar que canlidad del DNA de
los organistllos superiorcs codifica prolcfnas esencialcs 0 moleculas de RNA, ba-
sandose en la siguiente aproximaci6n indirecta, Cualquier gen esll1, inevitable
mente, sometido a un riesgo de mUlaci6n -un fen6meno accidental que altera.
aI azar, determinados nude6tidos. Mientras mayor sea el numero de genes de
un organismo tanto mayor sera la probabilidad de que se produzca una muta-
ci6n en al menos uno de eUos. Debido a que muchas mutaciones destruyen la
funci6n del gen en el que se producen. la tasa de mUlaci6n fija 1I111fmile del nu
mero de genes esencialcs de los que cualquier organismo pucde dcpender para

El DNA cromos6mico ysu empaquetamiento 363

 Figura 8-6 No exJste relacl6n entre la
micoplaSlTlll E. coil cantldad de DNA y Ja oompleJldad del
, :

BACTERlAS ; llMIdur.
organlslno. La cantidad de DNA del
genoma haploide varia en un rango de
HQNGOS Jiil..... \lulun'. azucena 100000 veces desde el procariola de
PlANTAS menor lamano -el micoplasma- a las
INSECTOS celulas mll.s voluminosas de algunas
plantas yanfibios. Es de destacar que
MOlUsecS _ _ "'!'!'''. el tamano del genoma humano (3)( 10'
t.burdt't
PECES CARTlLAGINQSOS pares de nucle6tidos) es mucho menor

TElEOsTEos :~;::';l~.",~= ~1.

ANF1810S
na
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lfit6n
que el de muehos organismos que
parecen ser m1s seneillos.

REPTtLES

pAJAAOS
humano
MAMIFEROS II
r, r 1i,rr r111r1
1~ 1~ 1~ 1~ 1~ 10'0 10"
numero de pares de nl.lCleotidos por gerlOma haploide

su supervivencia: si son demasiados, el desastre es casi seguro, como serfa el

caso de una compleja maquina que dependiera de muchos componentes que
pueden faDar. CoD este argumento y con la velocidad de mutaci6n obselVada se
concluye que s610 un pequeno porcenlaje del genoma de los mamfferos esla im-
plicado en la reguJaci6n 0 codificaci6n de prolefnas esenciaJes. Posleriormenle
veremos que esta conclusi6n esla apoyada por otras evidencias.
La consecuencia mas imponante de la argumenlaci6n anlerior es que, aun-
que el genoma de mamffero conliene en principio una caOlidad de DNA sufi-
cienle para codificar alrededor de 3 millones de prolefnas de tamano media (3 x
10' nucle6Iidos), la fidelidad limitada con la que se manLienen las secuencias de
DNA implica que Ilingun mamffero (ni cualquier otro organislllo) puede estar
formado par mas de unas 60 000 protefnas esenciales. As! pues, desde el punto
de vista genetico, los humanos no pueden ser mas de 10 veces mas complejos
que la mosca del vinagre Drosopl,ila, de la que se ha estimado que tiene unos
5000 genes esenciales.
Cua]quiera que sea la misi6n del DNA no esencial que se halla presente en
los crornosomas de los organismos superiores {se disclilira mas adclantel. 105
datos que se mueslran en la Figura 8-6 dejan claro que, para una celula, el pre-
sentar una gran cantidad de DNA extra no representa ninguna Iimitaci6n impor-
tante. Mas aun, frecuentemente las regiones codificantes esenciales estan inte-
rrumpidas por largas secuencias de DNA no codificanle.

Cada gen produce una molecula de RNA4

La funci6n primaria del genoma es codificar molecuJas de RNA. Regianes selec-
cionadas de la secuencia de nucle6tidos de DNA son copiadas en fonna de se-
cuencias complementarias de RNA, el cual 0 bien codifica una protema (si es
mRNA), 0 forma un RNA Mestructural", como las moleculas de RNA de lranspor-
te (tRNA) 0 de RNA ribosomal (rRNA). Cada regi6n de la Mike de DNA que pro-
duce una molecula de RNA funcional constiluye un gen.
En los eucariotas superiores son habituales los genes de mas de 100 000 pa-
res de nucle6tidos, y algunos comienen mas de 2 millones de pares de nucle6ti-
dos ITabla 8-1); sin embargo, para codificar una protefna de tamano media (far-
mada por 300 0 400 amino:1cidos) solamente son necesarios lOOO pares de
bases. La mayor parte del DNA extra esta formado por largas secuencias de DNA
no codificante interrumpidas por fragmentos relativamenle cortos de DNA codi-

364 Capftulo 8: EI nucleo celular

Tabla 8-l Tamaiio de aJgunos genes humanos en miles de nuclc6Udos

TamaRo Tamano Nl1merode

delgen delmRNA intrones
p-g1obina 1.5 0,. 2
Insulina 1,7 0,' 2
Protefna quinasa C II 1,4 7
A1bumina
Calalasa
Receptor LOL
25
3'
.5
I,.
2,1

5.5
14
12
17
FaclorVlll 186 9 25
TIroglobulina 300 8.7 3.
Distrofina* m:1s de 17 mas de
2000 50

Una forma an6mala de este gen causa la diSlrofia muscular de Duchenne.

El tamai\o del gen especlficado corrcsponde tanto a la rcgi6n que se transcribe como a las re-
giones de DNA reguJadoras pr6ximas (compHado de datos suministrados por Victor McKusickl.

fieanle. Las secueneias codifieantes se denominan exones y las seeuencias inler-

medias (no eodifieanles) se denominan intrones. Duranle el proeeso de conver-
si6n de las moltkuJas de RNA (Iranscritas desde un gen y par clio denominadas
trmw::ritos primarios de RNA), a moleculas de mRNA, se eliminan las secuencias
imr6nicas (vease Figura 8-2); esle proceso se denomina maduraci6f1 del RNA
("RNA splicing"), que se disculini mas adelante.
los grandes genes eSlan rormados por una larga secuencia de exones e in-
Irones alternos; la mayor parte del gen esta rormado por secuencias intr6nicas.
Ademas, cada gen conticne SClleflcias reguladoras que son responsables de ase
gurar que el gen se transcribe en el momenta y en el tipo celular adecuado. En el
Capftulo 9 se discmira el runcionamiento de dichas secuencias reguladoras. Mu-
chas secuencias reguladoras se encuentran localizadas por delanle ("upstream",
en direcci6n 5') dellugar donde se inicia la transcripei6n del RNA, pero tambicn
se pueden localizar por debajo. ("do\omstream~,en direcci6n 3') dellugar donde
finaliza la transcripci6n del RNA, 0 incluso en los intrones y exones. En la Figura
8-7 se i1ustra esquclm1ticamcnte un cromosoma tfpico de vertebrados, y se dela-
lIa la organizaci6n de uno de sus muchos genes.

cromo,oma de 1,5 If 1oJ' pl"'e. de r\l.lcle6tido.; contiene IIprOlfimadamentll 3000 gene. Figura 87 Org8Jll.zacldn de los genes
en un cromosoma tfplco de
,.---_-----'J~-::-- ----, vertebrado. Unas protefnas que se
r
:.1
0.5% del cromosom.; conli,n, 15 genes
II. I. .. 1 I:
unen a las regiones reguladoras del
DNA condicionan que un detennlnado
gen se transcriba 0 no; aunque en el
esquema se han reprcscmado las
secuencias reguladoras en direccidn 5'
r un 9'n de 1ft poll'" (Ie nuele6tidos 1 del gen, tambien pueden Localizarse en

~:::~~:;'~~3IB'BI~3'E~IE'~I~E31~~~~'~~~~1~~.~~~=
el interior de los intrones. en los
=
I I
II ! I' I I I II I I I exoncs 0 en la regidn situada en
...gi6<l de DNA regul&dora intr6n elf On
direccitin 3' del gen, las secuencias de
los introncs son eliminadas del
TAANSCRIPCION DEL DNA
transcrito primario de RNA que
codifica una prolefna, produci~ndose
5' 3' una molecula de RNA mensajero
I

!J,"~;,
I f I
f I I f I' (mRNA). Los valores que se indican en
tr,lnacr;IO prim'lio de RNA

5'_3'
I
MADURACION
DEL RNA
f
introniC8
SlK:uenci.
la figura ace rca del numero de genes
por cromosoma son una estima
,"fnima,
mRNA e>t6nica

El DNA cromos6mico ysu cmpaquclamiento 365

noacidos, de modo que cualquier cambio en cualquier posici6n resulta delet~
reo para 1a c~lula. Esta suposici6n se ha podido verificar en levaduras, en las que
es posible mUlar in vitro una histona dada e introducirla en el genoma de la Ie-
vadura en lugar del gen normal. Como se predijo. se observ6 que la mayor parte
de las mutaciones eran letales; algunas que no 10 eran producfan cambios en el
patr6n normal de expresi6n g~nica (discutido en el Capitulo 9). Las histonas HI
son mayores (fonnadas por unos 220 aminoacidos) y han sido menos conserva-
das evolutivamente que las histonas nucleos6micas.

La asociaci6n de las histonas con el DNA conduce a la formaci6n

de los nucleosomas, las partfculas unitarias de la cromatina7
$i se desenrollara la doble h~lice de DNA de cada uno de los cromosomas huma-
nos, 130 cadena resultante podrfa rodear el nucleo de la c~lula miles de veces. Las
histonas cumplen un papel primordial en el empaquetamienlo de forma orde-
nada de est'a enormemente larga molecula de DNA en el interior de un 1ll1cleo de
tan s610 unos cuantos micr6metros de diametro. Su papel en el empaqueta
rniento del DNA es importallle par una segunda raz6n. Como se ha podido ver,
no IOdo el DNA del cromosoma esta empaquetado de la misma forma; parece
que la manera en la que se encuentra empaquelada una dctcrminada regi6n del
genoma en la cromatina de un determinado lipo celular influye en la actividad
de los genes que contiene.
Nuestra comprensi6n de 130 est.ructura de la cromatina recibi6 un fuerte im-
pulso con la descripci6n de la unidad fundamental de empaquetamiento. cono-
cida por nucleosoma, que confiere a esta el aspecto de una "cadena de cuentas~
cuando se observa al microscopio elect.r6nico despues de tratamiemos que des-
haecn los empaquetamiemos de orden superior (Figura 8-9). La larga "cadena~
de DNA puede romperse en "cuentas" de nucleosoma por digesti6n mediante
enzimas que degradan el DNA, como por ejemplo con la enzima bacteriana nu-
c1easa micrococal (las enzimas que degradan tanto el DNA como el RNA se de-
nominan nucleasas, las enzimas que solamente degradan el DNA se denominan
desoxirrilxmucleasas. 0 DNasas). Una digesti6n corta con nucleasa micrococal
5610 degrada el DNA existente entre los nucleosomas. EI resto se encuentra pro-
tegido de la digesti6n y permanece como fragmentos de DNA de doble cadena
de unos 146 pares de nucle61idos de longitud. unidos a un complejo especffico
de 8 histonas nucleos6micas (el octdmero de IJislOllas). Los nucleosomas obtcni-
dos par este m~todo se han conseguido cristalizar y analizar mediante difrac-
ci6n de rayos X. Cada partfcula tiene una forma de disco, con lm diametro de al- Figura 8-9 Nucleosomas observados
al mlcroscoplo electronico. Estas
rededor de II nm y eontienc dos copias de cada una de las 4 histon<ls
eleclronmicrograffas muestran fihras
nucleos6micas, H2A, H2B, 1-13 Y 1-14. Este oetamero de hlslonas forma un llllcleo de crornatina, anles y despues de ser
proteico alrededor del cual la heliee de DNA de doble cadena da dos vuehas (v~a expucstas a tratamientos que
se Figura 8-10). dcscomprimen 0 "descondensan~ la
estructum nativa, produciendo la
forma de ~cadena de cuentas~. La
estructurn nathoa conocida como fibra
de 30 nm (se discule m:l.s adelante) se
muestra en IA). La fanna
descondensada de "cadena de
cuentas~ de la cromatina se muestra
en (8), a los mismos aumentos. En la
Figura 8-30 se presentan dibujos
esquem:l.ticos de las relaciones
exiSlcntes entre estas dos formas de la
cromatina. Estas electronmicrografias
fueron tomadas por medio de
modificaciones del procedimienlo
explicado en la Figura 8-45. lA, por
cortesfa de Barbara Hamlako: B,l>or
cortesfa de Victoria Foe.)

EI DNA cromo56mico y su empaquetamlento 367

 Figura 810 Naturaleza del
181 nucleosoma. En CA) se observan dos
DNA espaciador histon8S de centro
del nucleosoma orientaciones de la cstruetura
tridimensional del octamero de
histonas; el modo en que el DNA se
enrolla a su alrededor se representa
por un tuba azul (superior) y por una
serie de Hneas paralelas (inferior). Dos
LA NUCLEASA
dfmeros H2A-H2B (azul) flanquean un

.o rrES~:'AaDDR
I
DIGIERE El DNA
tetrameros H3-H4. Asf, el oetamero de

. --
histonas esta cornpucsto por dos de
cada una de las histonas H2A. 1-12B, 1-13
I I Y1-14, con una masa total de 100 000
unidad repetida dahons. (B) EI nucleosoma esta
de 200 pares de

I nuclootidos
farmado por dos vueltas completas de
DNA (83 pares de bases por vuelta)

cuenta
nucleos6mica
() WT ,\nm
alrededor de un nucleo oetamerico de
histonas, mas el DNA separador
adyacente. La parle del nucleosoma
libarada l

DISOCIACI6N A que hasta ahora hemos denominado

Jj
oc"mi c:..z
nucleo hist6nico
ELEVAQA
CONCENTRACI6N
DE SAL
"cuenta" nucleos6mica se libera de la
cromatina por digesti6n del DNA con
nucleasa microcoea1. En eada "euenta"
de nucleosoma, alrededor de 146 pares
de nucle6tidos de doble heliee de DNA
(alrededor de 1,8 vueltas) permanecen
I
DISOCIACI 6 N
DNA duplex de
146 pares de bases enrollados alrededor de un nucleo
octamerico de histonas. (A, eortesia de
1 Evangclos Moudrianakis.)

H2A H2B
"' "'
En la cramatina no digerida, el DNA se extiende como una doble helice con-
tinua entre los Iludeosomas. Cada nucleosoma esta separado del siguiente por
una regi6n de DNA espaciador, de longilud variable cone 0 y 80 pares de nucle6-
tidos. Los Ilucleosomas se repiten a intclValos de 200 pares de nucle6tidos (vea-
se Figura 8-10). Asf pues, un gen eucariota de JO 000 nucle6tidos de longitud po-
drfa estar asociado a 50 nucleosomas. y cada celula humana, con 6 x 109 pares de
bases, puede contener unos 3 x 107 nucleosomas.

La posici6n de los nudeosomas en el DNA viene determinada por

la tendencia del DNA a formar budes estrechos y por la presencia
de otras protefnas de uni6n al DNA8
Expetimentos in vitro can cromatina aislada sugieren que en condiciones fisio-
16gicas los ocuimeros de histonas generalmente permanecen flios en una posi-
ci6n determinada del DNA, puesto que su intcnsa uni6n al DNA evita su dcsliza-
miento a uno y otro lado a 10 largo de la helice del DNA. Existen dos factorcs
principales que determinan la posici6n de los nucleosomas sobre el DNA. Uno
es la dificultad de doblar la doble helice en dos vueltas cerradas alredcdor del
octamero de histonas, un proceso que requiere una compresi6n importantc
del surco estrecho de la helice. Dado que las secuencias ricas en AT en el surco
estrecho Se comprimen mas facilmente que las ricas en G-C, cada octamero de
histona tiende a colocarse por sf mismo en el DNA de forma que incremente al
maximo la riqueza en A-T del SlUCO estrecho de la helice de DNA (Figura 8-1l) .
......... Asf pues, un segmento de DNA que contenga regiones cortas ricas en A-T, sepa-
radas por vueltas enteras de DNA, sera mucho mas facil de doblar alrededor del
nucleosoma que una regi6n de DNA que no tenga estaS propiedades. Esto pro-

368 Capftulo 8 : EI m1cleo celular

 Flgura8-11 Curvatura del DNA en un
nucleosoma. La hetice de DNA da dos
vueltas alrededor del octamero de
histonas. Este diagrama esta dibujado
aproximadamente a escala para
illistrar c6mo se eomprime el surco
menor en la parte inleriordel giro.
Debido a ciertas caracter(sticas
eSlructurales de la molCcula de DNA,
las parejas A-T tienden a aeomodarse
preferencialmente en el surco menor.
DNA del
nucleosoma

bablemente explica el caso de localizadones muy predsas de nudeosomas so-

bre el DNA, como es el caso de los genes de rRNA 5S, cada uno de los cuales tie-
ne un unico nudeosoma en una posici6n lmica. Si se mezda in vitro el DNA de
genes rRNA 5S con una mezcla de las cuatro histonas nucleos6micas puras, se
produce la formad6n de nucleosomas en la misma posid6n en que se eneuen-
tran in vivo. Sin embargo, parece que para la mayor parte de las secuencias de
DNA del cromosoma no existe una localizaci6n preferencial de los nucleosomas;
el nucleosoma puede oeupar cualquiera de una serie de posiciones posibles en
la secuencia de DNA.
El segundo factor que influye en el posicionamiento de los nUcleosomas es
la presencia de otras proteinas unidas fntimamente al DNA que evitan la forma-
ci6n de nucleosomas. Por esta raz6n algunas regiones del DNA carecen de nu-
deosomas, incluso en regiones de miles de pares de bases de longitud. Estas re-
giones pueden deteetarse mediante el tratamiento del nudeo eelular eon
eantidades muy pequenas de lIna desoxirribonucleasa I (DNasa I), enzima que a
estas bajas concentraciones s610 digiere las secuencias de DNA Iibres de nucleo-
somas y no los cortos segmentos de DNA espaciador que se hallan entre elias.
Frecuentemente eslos lugares hipersenslbles a nucleasas coinciden con las re-
giones reguladoras de los genes (Figura 8-12). La primera evidencia que apoy6
esta hip6tesis procedi6 de experimentos realizados can el virus de simio SV40,
cuyo cromosoma, circular, esta organizado utilizando las histonas producidas
por la CIHula huesped. En el cromosoma de SV40 se localiza frecuentemente una
regi6n de 300 pares de bases libre de nucleosomas siluada muy cerca de las se-
cuencias en las que se inicia la sfntesis del DNA y RNA vfrico. Aunque en esta re- .,.J,_-...H........_ .
gi6n se unen varias protefnas de uni6n a DNA espedficas de secuencia, no 10 H3 H4 H2A H28 H1
protegen de la degradaci6n par nudeasas como 10 haee el Iludeosoma, raz6n "' ~

por la cual es una zona sensible a DNasa I. 103 pares de nucle6tidos

Por defecto el DNA en las celulas eucariotas se encuemra asociado com ple- Figura 812 Locallzaci6n de los sltlos
tamente con nUcleosomas, y muchas de las regiones libres de nudeosomas es- hlpersenslbles a nucieasas de las
tan generadas por acci6n de las prolefnas de regulaci6n genica como parte del reglones reguladoras de los genes
proeeso de aetivaei6n de la transeripci6n del DNA (discutida en el Capftulo 9). actlvos. Los genes mostrados cadifiean
En aquellos lugares en los que los nudeosomas se sillian de forma precisa, po- histonas (HI, HM, H26, 1-l3y H4) en
dna haber exisljdo una presi6n selectiva para manlener el DNA espaciador ad- Drosophila. Las j1echas IlOrizontales
yacente Iibre de nudeosomas, para facililar su reconocimiento por las protefnas representnn cada uno de los genes en
de uni6n a DNA especfficas de secuencia. la direcci6n de la transcripci6n del
DNA, que siempre tiene lugar desde el
extrema 5' al extrema 3' del rranscrito.
Habitualmente los nucleosomas se empaquetan con la histona Aunque los lugares hipersensibles a In
Hl formando estructuras regulares de orden superior9 nucleasa rj7.ecllas rajas verticales) se
suelen presentar en los extremos 5' de
EI DNA espaciador que conecta nUcleosomas adyacentes puede ser de longitud un gen, como se ilustra nqllf, plleden
variada dado que los nucleosomas se posicionan en funci6n de la flexibilidad lo- encontrarse en cualquier alra posici6n
cal de la helice de DNA y de la distribuci6n de otras protefnas unidas a secuen- (vcase Figura 9-34).

EI DNA eromos6mico y su empaquetamiento 369

 Flgum8-13 La nbrade cromalina de
30 nm. Modelo propuesto para
cxplicar c6mo la forma dc cadcna de
cucntas~ de la cromatina se
empaquela Cll la libra de 30 nm,
observada en microscopia elcclr6nica
(veasc Figura 89AI en (A) vista
IAI superior. y en {BI viSla lateral. Esle lipo
de empaquetamiemo s610 requiere
una molecula de hislOna HI por
cias especfficas del DNA. A pesar de que en la mayor parte del DNA cromos6mi- nudeosoma (no mostrado en la
co se fonnan largas cadenas de nucleosomas. en una ceJula viva es poco proba- figural. Aunque se conoce la posici6n
ble que la cromatioa se disponga en la forma de "collar de cuentas~. En lugar de en que se une la hiSlona HI aJ
ello, los nucJeosomas se empaquetan uno sabre ono adoplando disposiciones nudeosoma (vease Figura 8-15), se
desconoce su posici6n en eSla fibra.
regulares en las que el DNA se encuentra incluso mas condensado. Asf pues, si
(Vcase tambicn Figura 8-14.)
se obscrvan al microscopio electr6nico nucleos celulares somelidos a lisis suave,
se aprecia c6mo la mayor parte de la cromatioa se encuentra organizada en fi-
bras de un diametra de aJrededor de 30 om, que es considerablemente superior
31 diametro de la cromatioa en forma de "coUar de cuentas". En la Figura 8-13 se
representa uno de los modelos que se han propuesto para explicar de que forma
los nucleosomas estan empaquetados en la libra de cromatina de 30 nm. Tales
modelos represenlan una estructura idealizada, dado que tanto la variaci6n de
longilud del DNA espaciador producida por las preferencias de situaci6n de los
nuc!eosomas, como la presencia ocasional de secuencias de DNA libres de nu-
c!eosomas produciran irreguJaridades en la estructura de la libra de 30 nm (v~a
se Figura 8-14).
Se cree que las mol~cuJas de histona HI. de las que existen seis subtipos
muy relacionados en una c~lula de mamffero, son responsables del empaqueta-
mienlo de los nucleosomas formando la eslructura de libra de 30 om. En la mo-
lecula de la histona HI se puede diferenciar una regi6n globular central, l11uy
conservada evolutivamenle. unida a los "brazos" amino y carboxilo tenninales,
menos conservados. Cada molecula de histona HI se une a traves de su regi6n
globular a un lugar unico del nucleosoma, mientras que los brazos entran cn
contacto con Olros lugares de las histonas del nucleo 0 de los nucleosomas adya Figura 8-14 Regiones Ilbres de
centes, permitiendo que se empaqueten de forma repetida regularmcllte (Figura nucleosomas en la fibra de 30 nm.
8-15). Secci6n esqucll11hica de [a cromalina
mostrando la intcrrupci6n dc su
CSlructura regular par regiones conas
Resumen cn las que el DNA cromos6mico es
Ull gell se define como u"a secllellcia nucleotfdlca ell ulla molecula tie DNA que ae- cxtraordinariamente sensible a 13
tlla como ,ma ,mltILJtlfltllcional para la producci6" de Will molecula tie RNA. Ull digcsli6n por DNasa I. En cada uno de
esos silios hipersensibles a nudeasas,
cromosoma estd fomuulo ,ror una molkula uniea de DNA lineal muy larga qlle
parcce que un nudeosoma ha sido
colltlene IIna serle numerosa de genes. Utrn molkulLl de DNA cromos6mico colltie-
desplazado dcl DNA por una 0 mas
ne asimismo otros tres tipos de secuetu:las de nucledtidos fw.clollalmente lmpor- prolcrnas dc uni6n a DNA espccfficas
tnntes: orlgenes de replia.ci6" y tel6meros. que permitetlla correcta replicacl611 tiel de secucncia. En el capftulo 9 se
DNA, Y el centromero. que es Ilecesarlo para 'mlr ILl molk"lt' tie DNA at I",so mlt6- discUie de que fonna son capac~
tico. asegr,ratUlo Sll segregaci6" predsa en las celJdas hijas. El gelloma Illlploltie eslas prolCroas de unirse fuenemente
I",mano cotltietle 3 x 1(' pares de m,cle6tidos, distribllidos ell 22 a"tosomas y 2 aIDNA.

1
fibril de JOtlm

370 C3pftulo 8 : EI nucleo celular

cromosomas sex.udes. Se cree fl"e s610 IUra pequenn parte de esle DNA cod/fica pro-
telnas. "'''i "Ob'':. COOH
En dlulas eucariotas el DNA se ellCllentra ,mido a lIt1a masa /grurl de ',istonns, H2N " , . " . . , . -
fonntlndo lllUI unillad repetitlva de partlculas de DNAy proleltla detlominadas ",,- hl,ton.. HI
cleosomas. EI ""e1rosa",a etUffomrtulo por un n/ideo Ot:lamirico de prote(nns l.is
tonas alretkdor del Clurl el DNA dn dos vueltas. La fadllilad em, In que lin segme"to
de DNA p.tede dohlnrse sufklimtemetlte para enoolver el mideo de histonns depen.
de de su sec.rencla mu:leotldica. A.mque lray excepc/ones, los nucleosomas u sueun
empaqllelnrjllntos, COli in ayuda de moMculas de In hisrona HI, adoprando dlspo-
sit:iones regrdnres qllefomran linn fibra th 3Q nm nuclftlsomll
H1SEUNEA

La estructura global de los cromosomas

I UNA REGION
ESPEdFICA DEL
NUClEOSOMA

Habiendo descrito el DNA y las prolefnas a partir de las que se organiza el cro-
masoOla, a continuaci6n abordaremos la organizaci6n del cromasoma en una
esca[a mayor. Si un cromosoma humano se estirara de forma que lJegara a pre-
sentar en toda su longitud la estructura de fibra de 30 nm, alcanzarfa aproxima-
damenle 0, I em de [ongitud, y podrfa rodear el nLideo celular l1u1s de 100 veces.
I) El EMPAQUETAMIENTO
Es evidente que debe existir un nive[ de compactaci6n superior. EI DNA no s6[0 Of LOS NUCLEOSOMAS
se empaqueta con histonas en nudeosomas espaciados regularmente, que a su ESTA MEDIAOO PaR LA
HISTONA H1
vez se empaquetan en la fibra de 30 nm, sino que es empaquelado y organizado
por otras protelna en una serie de subdominios de diferenle naturaleza. Esle
empaquetamiento de orden superior es uno de los aspectos ml1s fascinantes y
menos conocidos de la cromatina_ Aunque las bases moleculares son aUn un
misterio. se cree que eSle empaquelamiento liene un papel crucial en la regula-
ci6n de la transcripci6n genica_ En esta secci6n se explicarti 10 que se conoce de
la estrucfUra de nivel superior de la cromatina y se examinarnn las evidencias
Flgun8-15 Mecanismoporelcualse
que demuestran su importancia funcional. cree que la hl$lona HI ayudaa
empaquelar los nuclC050mas
Los cromosomas plumulados contienen bucles adyacenles. 1 nucleo globular de HI
de cromatina descondensada 'o se une a cada nucleosoma cerca del
lugar donde la doble helice de DNA
Aunque empaquetados en forma de cromatina. la mayor parte de los cromoso- enlra y sale del octamero de hiSlonas.
mas en las cclulas interfasicas (no en milosis) son demasiado finos y enmarafia- Cuando esla presente la histona HI.
dos para que se puedan visualizar con claridad. Sin embargo, en algunos casos (lucdan protegidos de la digesti6n con
excepdonales. es posible observar la estructura completa de un cromosoma in- nucleasa micrococal 166 pares de
terf<1.sico. Par ejemplo, los cromosomas de los oodtos en crecimiento apareados bases del DNA. respecto a los 146
en la meiosis (huevos inmaduros) son muy activos en cuanta a sfntesis de RNA, pares de bases de los nucleosomas que
carecen de HI (vease Figura 8-10).
y suelen presentar grandes y esponjosos budes de cramatina recubiertos de
RNA reden uanscrito empaquetado en comp[ejos de RNA-protefna. Debido a
eSle forro del DNA. estos cromosomas plumulados son daramente visib[es in-
duso al microscopio 6plico. con el que se ve que estan organizados en una serie
de grandes budes de cromatina que se extienden a partir de un eje cromos6mi-
00 lineal (Figura 8-16).
En la Figura 8-17 se represenla esquemAticamenle la estructura del cromoso-
rna plumulado. Desde el eje del cromosoma se exlienden grandes bucles de CTO-
matina descondensada. Mediante experimentos de hibridaci6n de acidos nuclei-
cos se ha podido demostrar que cada bude siempre contiene los mismos genes, y
que pennanece extendido de la misma fonna durante el crecimiento del oocito.
Otros experimentos han demostrado que la mayor parte del DNA del bude se
esl~ transcribiendo aClivamente en RNA. Sin embargo, la mayor parte de la cra-
malina no se encuentra en los budes sino que pennanece muy condensada en
los crom6meros. que generalmenle no se transcriben. Se ha propuesto un modelo
general de cromosoma basado en estos estudios. en el que las fibras de 30 nm se
extenderfan perpendicularmenle al eje mayor del cromosoma (Figura 8-18).
Los cromosomas plumulados son un buen ejemplo de una caracterfslica re-
currente de la cromatina que se analizar~ en esta secci6n -cuando [a cromatina

La eSlruclura global de los croll1osomas 37\

 Figura 816 Mlcrograffa 6pllca de un
cromosoma plumuJado de un oocIlO
de anfiblo. En una rase inicial de la
diferenciaci6n, cada cromosoma se
replica para empezar 1a meiosis, y los
cromosomas hom61ogos replicados se
aparean ronnando esla eslrnctura muy
ext.endida que contiene un total de
cuatra cromatidas. EI eslado de
cromosomas en escobill6n puede
persistir durante meses 0 ai'los
mientras el oocito elabora
posteriormente un acl1.mulo de mRNA
y de olros mnteriales que seran
utilizados para su desarrollo en un
nuevo individuo. (Conesfa de Joseph
G. Gall.)

se transcribe acLivamenie se encuenlra en una estruclUra ext'endida; cuando la

cromat'ina estc1 condensada, es inactiva; y las unidades estructurales de regula-
ci6n son regiones grandes, domini os bien definidos.

f--------O.5mm--------< Figura 8-17 Estnlctura de un

CROMOSOMAS PlUMULADOS uomosoma plwnulado. EI conjumo
APAREAOOS de cromosomas plumulados en
muchos anfibios contiene un total de
aproximadamente 10000 budes
cramalfnicos diferentes, quedando el
DNA restante muy condensado en los
cromt1meros. Cada bude corresponde
qui..ma 1I. una secuencia panicular de DNA.
Cada cl!lula contiene cuatro copias de
cada bude, dado que cada uno de los
cromosomas consiste en dos
crom:ltldas hcrmanas muy juntas,
crom6mero como se Tlluestra en In pane superior
-~lJ[}--- 81e del esquema. Esta estructura en cuatra
hebras es muy caracteristica de eSla
REGION
DE UN SOLO
lase del desarrollo del oocito (Ia rase
CROMOSOMA diplotl'!nica de la meiosis, vl'!ase Figura
20-9).

PEQUENA REGION
I
1o ,m
""'. "
cromatina
elflendida

DEL CROMOSOMA

CROMATIOAS
MOSTRANOO LAS
HERMANAS
l
::'::=;::~~~:t:=::ilL
/ 1111

cromatina eapaciadora crom6mero lormado

entre dife,enl.. de c,omalina
crom6merOi muy condenll8da

372 Capftulo 8: EI micleo celular

Tambi~n se pueden apreciar dorninios estructurales organizados dominio en bvcle
en 13 cromatina interfasica en los cromosomas poJjt~nicosll
Por una espccializaci6n (diferente a la descrita en los cromosomas plumulados),
tambil~n es posible visualizar la eSlructura de la cromalina en cienas cclulas de
insectos. Muchas de las celulas de las larvas de mosca crecen hasla alcanzar ta-
manos enormes despuCs de repeLidos ciclos de sintesis de DNA que no van se-
guidos de divisi6n celular. Las celuJas gigantes resuhanles cenlienen miles de
veces la dOlaci611 normal de DNA. Una celula con una dotaci6n de DNA mayor
de la normal, y, como es habitual, con mas cromosomas de 10 normal, se dene- plole(n" que formen el eje del ClomotOffi8
mina poliploide. Sin embargo en algunos tipos celulares de la larva de la mosca,
Figura 8-18 Modelo de eslruclura del
Ladas las copias de los cromosomas se disponen de forma contigua formando un
cromosoma. Se muestra una secci6n
unico cromosoma politbJico gigante. EI heche observado en algunas cclulas gi- de un CTomosoma plegado rormando
una serle de dominies en bude, cada
uno de los coales pesiblemente
contiene entre 20 OOOy 100000 pares
de nucle6tidos en fonna de DNA de
doble cadena condensado en la fibra
de cromatina de 30 nm.

cromosomes
mitatico. normeln
e Ie m..."e eecele

Figura 819 Dlbujo detallado de lodo

cl conJunia de cromosomas
pollll!nlcos de una ghindula sallval dc
Drosof,II11n. ESIOS cromosomas han
sido extendidos para su visualizaci6n.
aplaslandolos contra un portaobjelos.
Drosophila tiene cuatro pares de
cromosomas. y en el esquema se
encuentran las cuatro parejas. Pero
bre~o cada cromosoma csta lntimamente
l~quierdo del apareado con su hom6logo, (de modo
crOmOtome 3 que aparece como Wla eslruclura
Unica). 10 cual no ocurre en la mayor
panc de los nudeos (exceplo en
meiosis). Normalmenle los cualro
cromosomas polil~nicosse
encuentran unidos per regiones
pr6ximas a los centromeros que se
agregan ronnando un cromocenlro-
unico de gran lamano (regi6n
coloreada); en esla preparaci6n. sin
embargo. el CTomocentro se ha rolO en
dos partes per erecto del proceso de
extensi6n empleado. (Modificado de T.
S. Painter, I. Hered. 25: 465-476, 1934.)

373
gantes de insectos que pasan directamente de un estado polit~nico a un estado
poliploide demuestra que la estructura b<1sica de un cromosoma polit~nico debe
ser similar a la de un cromosoma normal.
Los cromosomas poUt~nlcos son faciJrnente visibles al microscopio 6ptico
dcbido a su gran tamano y a que aI disponerse las diferentes cadenas de cro-
matina una a1lado de otra con gran precisi6n, aumenta mucho el diametro del
cromosoma y evita el enrollamiento. Son cromosomas interfasicos activos
transcripcionalmeme, como los cromosomas plumulados. La politenia se ha es-
tudiado especialmente en las c~lulas de las glandulas salivares de 1a larva Dro-
sophila, en las cuales el DNA se ha replicado a 10 largo de 10 cidos sin separa-
ci6n de las cromatidas hennanas de forma que se aLinean 1024 (= 2 UI) cadenas
id~nticas (Figura 8-19).
En los cromosomas polit~nicos observados con microscopia 6ptica son visi-
bles bnndas oscuras e itlterl){lIIdas clams (Figura 8-20). Cada una de las bandas e
interbandas corresponde a un conjullto de 1024 secuencias id~nticas de DNA
dispuestas en paralelo. Alrededor del 85% del DNA de los cromosomas politeni-
cos corresponde a las bandas, y el 15% reslante a las interbandas. La cromatina
de las bandas se tifle mas que 130 de las interbandas debido a su mayor grado de
empaquetamiento (Figura 8-2 n. Se estima que, dependiendo de su tamano,
cada una de las bandas contiene de 3000 a 300 000 pares de bases par fibra de
cromatina. Dado que cada una de las bandas puedc reconocerse par su tamano
y su posici6n, se han numcrado para djsponer de un mapa del cromosoma poli-
tenico. En el genoma de Drosophila se conocen apraximadamente 5000 bandas
y 5000 interbandas.

Los diferenles dominios de la cromalina de los cromosomas

politenicos pueden empaquelarse y desempaquelarse
como una unidad l 2: Figura 8-20 Mlcrograffa obtenlda
con el mlcros:oplo optlco de una
Mucho antes de que se conociera la estructura de la cromatina, estudios sobre porclon de cromosoma poUt~nlco de
los cromosomas politenicos revelaron que la transcripci6n genica va acompafla- una glandula saliva! de Drosophila.
da de un cambio impon3me en el empaquetamiento del DNA, dado que es fre- 50 pueden apreciar con c1aridad los
cuente que bandas cromos6micas concretas se descondenscn cuando los genes diferenles palrones reconocibles en
que contienen se activan, y se vuclvan a condensar cuando estos genes se hacen bandas cromosamicas. Las bandas son
quiescentes. regiones que presenlan elevadas
En cada momento se pueden identificar las regiones de un cromosoma poli- concentraciones de cromatina. Se
t~nico que son transcritas, marcando las celulas durante un carta perfodo de encucntran en los cromosomas
licmpo can el precursor radiactivo midina-lH y localizando por flutorradiograffa interf;1slcos y constituyen una
caracterfstica especial de los
los RNA transcritos (Figura 8-22). Estc amtiisis revela que las regiones cromos6-
crornosornas politenicos gigantes. (Par
micas mas activas estan descondcnsadas, formando los puffs cromos6mJcos, cortesfa de Joseph G. Gall.)
facilmente observables.

Figura 8-ZI Electroninlcrograffa de

un corte ultrafino de una pequeoa
porclon de un cromosoma poUt~nk:o
de Drosophila. se pueden distinguir
c!aramente unas bandas de distinto
grosor (BJ separadas por interbandas
(I) formadas par cromatina menos
condensada. (Por conesfa de Viek.ko
Sorsa.)
(
B

374 Capftulo 8: EI nuc1co cclular

 Uno de los principalcs factores que conuolan la aclividad de los genes de
los cromosomas politt'!nicos de Drosophila es la honnona esteroidea ecdisolla,
cuyos niveles aumentan y disminuyen peri6dicamenle durante el desarrollo lar-
vario, indudendo la transcripci6n de los diferentes genes que codifican las pro-
teinas que necesita la larva del insecto para cada muda y para la fase de pupa.
A medida que el organismo pasa a travt'!s de la~ distintas fases del desarrollo,
surgen nuevas puffs y desaparccen los antcriores, al ser activadas y dcsaclivadas
las unidadcs de transcripci6n, y se producen diferentes RNt\ y protcfnas (Figura
8-23). Del estudio de los puffs, especia]mente cuando son relativamente peque-
fias y aun se pueden dislinguir las bandas de los crolllosomas, parece deducirse
que la mayorfa de puffs provienen del desenrollamiento de una unica banda
cromos6mica (Figura 8-24). EI estudio de elecuonmicrograffas de secciones ul-
trafinas de estos puffs muestra c6mo el 0 A de la cromatina estA mucho menos
condensado que en la libra de cromatina de 30 nm. Estas observaciones sugie-
ren que la cromatina de una banda puede descondensar como una unidad du-
rante 1a uanscripci6n.

Es probable que tanto las bandas como las interbandas

de los cromosomas politenicos contengan genes!')
EI hecho de que el pau6n de las bandas e interbandas de los cromosomas pol itt'!-
nioos de Drosophila sea lijo sugiri6 a los primeros citogenetistas que cada banda
podria corresponder a un gen Unico. Los estudios de fTecuencia mutacional que
han permitido a los genetistas estimar que Drosophila tendria alrededor de 5000
genes, un numero aproximadamente igual aJ numero de bandas cromos6micas, Figura 8-Z2 Sintesls de RNA a 10 largo
apoyan esta hip6tesis. Ademas, cuando se realizaron experimentos intensivos de de un cromosoma pollt~nJcogtgante.
aislamiento de mutantes correspondientes a una pequefia regi6n de cromosoma En eSla 3utorradiograffa de un
que contiene alrededor de 50 bandas, se aislaron 50 genes esenciates. Aunque cromosoma (de la glandula salival del
con estas tt'!cnicas no es posible determinar si un determinado gen se encuentra insecta Cllirotlomus tertlans) marcado
en una banda 0 en una interbanda, las obscrvaciones sugieren que una banda con uridina-Jlt se apreclan los lugaTes
de tamafio media podrfa contener las secuencias de DNA codificantes de una de smtesis de RNA como zonas
cubiertas con granos de plata oscuros,
protefna esencial.
en proporci6n a su actividad. (De C.
Resultados mas recientes, y el hecho de que en los anaJisis gent'!ticos descri-
Pelling, Cllromosoma 15:71-122, 1964.)
lOS anterionnente no se habnan tenido en cuenta aquellos genes que no son

---
Figura 8-23 Puffs cromos6mlcos.
Serie temporal de fOlografras que
~
71CO

c
.,......
~., muestran c6mo se forman y
desapareccll]os ~puffs" cnlos

--...
cromosomas polilenicos de

- ."~ Drosoplliln melallogaslcr, durante el

'''F -
-~ - .- .. '.-
,;

;:;;
desarrollo larvario. Se muestra una
regi6n del bmw izquierdo del
cromosoma 3. Presenta 5 grandes

---~-. ...--
>SB
puffs" en las ululas de la ghindula
It< . salival, carla uno de los cuales es activo
,oeD "'"' durante Ull corto perfodo de liempo.
;r La serie dccambios que se mueSlran

- 1-
,
.~
,
en la flgura tienen lugar durante un
per(odo de 22 horas, y siguen un
patr6n reproducible durante el

.r - -
1- - _...-
desarrollo del organismo. (Por conesfa
, , - de Mkhael Ashburner.)

>80

ti
,
-- .- ...-

.... ~
~
Z

La estructura global de los cromosomas 375

 esenciales para la supervivencia en el laboratorio (donde los depredadores no slntuis de RNA
existen y se facilitan tanto la comida como el apareamiento). hacen improbable I ... I
la veracidad de la hip6tesis "una banda un gen". Por ejemplo, se ha cJonado un
fragmento continuo de 315 000 pares de bases del genoma de Drosophila, y se
....
, '\~{ ~f
.... -\~..
~~.:- ......
han usado zonas de este fragmentos para localizar todos aquellos mRNA produ-
cidos en esta regi6n. Asf se localizaron 3 veces mas mRNA que bandas corres-
'l4'ft
1
',
0' ,
pondfan a esa rcgi6n del genoma, indican do que cada banda contienc probable- '.;~: ... '
mente varios genes. Ademas, en los cromosomas politenicos se ha mostrado r)!" .
directamente que se produce mRNA tanto de bandas como de interbandas. ,,~~,
"',v/",'
. ,
Aunque aun es motivo de controversia, se ha propuesto que en los cromoso- .f....
mas politenicos el DNA se organiza en bucJes de forma similar a como 10 hace en
los cromosomas plwnulados. De acuerdo con esle modelo la formaci6n de puffs 10"m
corresponderfa a la descondensaci6n de uno 0 mas de los dominios en bucJe.
Figura 824 Autorradlograffa de un
Independientemente de que este modelo sea correcto 0 no, los resultados ante-
puff alslado de un cromosoma
riores muestran que al menos algunos cromosomas interfasicos se encuentran polltenlco. En la pardon de
organizados en una estructura de dominios secuenciaJes perfectamente defini- cromosoma que se deslaca se eSla
dos, cada uno de los cuales contendrfa tfpicamente un pequeno nlunero de ge- produdelldo sfntesis de RNA, por 10
nes cuya transcripci6n estarfa regulada de forma coordinada. Podrfa ser que to- cual presenta ntarcaje can uridinaJH.
dos los cromosomas interfasicos se enconlraran empaquetados en estructuras (Par cortesfa de Jose Bonner.)
ordenadas de acuerdo con los mismos principios.

La cromatina est:i menos condensada en las regiones

que son transcripcionaimente activas l4
Estudios de los puffs de los cromosomas politenicos sugieren que la estructura
de la cromatina de los genes transcritos se encuentra descondensada selectiva-
mente. Apoyan esta sugerencia experimentos de diferente naturaJeza. Cuando
se alslan nucJeos de celulas de vertebrados y se exponen a la enzima DNasa I, aJ-
rededor del 10 % del genoma se degrada preferencialmente. Aunque una peque-
fia parte de estas secuencias degradadas corresponden a los lugares hipersensi-
bles que se han descrito anteriormente, la mayor parte corresponde a genes que
se estaban transcribiendo: por ejemplo, en diferentes tipos celulares del mismo

Figura 8-25 Dlgesti6n de la

cromatlnacon DNasa I. La enzima
corta en primer lugar par los lugares
hipersensibles a las nucleasas (no
gen qlJe sera
visibles aquf, vease Figura 8-12) y
lranscrito dentro luego degrada de fonna selecliva DNA
de elglJnas tanto de los genes que se transcriben
horas 981'\ que se esta activamente como de los que han sido
tr8nscribiendo
ectiv8menle e RNA
activados pero aun no han comenzado
a transcribirse.

regiOne~
TRATAMIENTO CON DNase I
PANCREATICA
CrOm8tins condens8da
normelmenta

(
..&IIJh;
,.;<!S'" .~~
. -..."'-
--.........
r,fl /
,,'I' ~ DNA degrededo

~
376 Capftulo 8: EI m1cIeo celular
organismo se degradan diferenles secuencias de DNA en funci6n de que genes
se estahan transcribiendo en estos tipos celulares, Cabe remarcar que induso
aquelJos genes que se nanscriben muy pocas veces en cada generaci6n celular,
son sensibles a la acci6n de la nucleasa, 10 que indicarfa que es mas un estado
especial de la cromatina que el proceso de uanscripci6n de DNA en sf mismo 10
que haee a est'as regiones especialmente aecesibles a la digesti6n (Figura 8-25).
La cromatina en este estado accesible se denomina cromatlna aetlva, y parece
que su estruetura eSla allerada de forma que el empaquelamiento de los nucleo-
somas es mellOr.

La cromatina activa es bioqufmicamente diferente l5

tOUe diferencia la eromatina aetiva de la inactiva? La respuesta a esta pregunta
requerira la purificaci6n y caracterizaci6n de las protefnas cromos6micas que
son propias de cada una de elias, Se han realizado algunos avances hacia esa
meta can el desarrollo de melOdos bioqufmicos disei'lados para aislar cromatina
activa basandose en Sll estado relativamente descondensado. EI anaIisis de las
proteinas eromos6micas de la fracci6n de cromatina activa sugiere 10 siguiente:
(1) la histona Hl parece unirse COil menos fuerza a al menos algun tipo de ero-
matina activa; algunos subtipos particulares de esta histona podrfan estar repre-
sentados preferentemenle. (2) Aunque en la cromatina activa las cuatro histonas
nucleos6micos estan presenles en cantidades normales, parecen estar altarnente
aeetiladas cuando se comparan con las mismas histonas de la cromatina inactiva.
(3) La histona nucleos6mica H2B parece eSlar menos fosforilada en la cromatina
inactiva, (4) La cromatina activa esta muy enriquecida en una forma v~iante
menor de la hislona H2A que se encuentra en muchas especies, incluida
Drosophila y el hombre. (5) Los nudeosomas de la cromalina activa se unen se-
leetivamente ados pequei'las proteinas cromos6micas similares, denominadas
HMG 14 YHMG 17, De'acuerdo con su presencia exdllsivamente en la cromati-
na activa estas proteinas del "grupo de elevada movilidad" (HMG, de High-Mo-
bility-Group) se encuentran en cantidad suficiente para unirse a I de cada 10
nucleosomas de la cromatina total; ademas, su secuencia de aminoacidos ha
side muy conservada durante la evoluci6n, 10 que implica que cumplen funcio-
nes imponantes,

Figura 8-26 La heterocromatlna es

lnactlva transcripclonalmente.
Autorradiograffa de una seccion
ultrafina de un nucleo celular de una
ceJula que ha sido marcada can un
pulso de uridina- 3 H para marcar los
lugares donde se produce la sfntesis
envottura del RNA (granos de plata), Las areas
nuclear
bu:mcas son regiones de
heterocromalina, que tiende a
empaquelarse en la region interior de
helerocromat,na
perifllrica
la envoltura nuclear. NormaJmente la
heterocromalina suele lefiirse de
oscuro en las eleclronmicrograf(as
(por ejemplo, vease Figura 8-71), pero
debido aJ metoda especial de
preparacion de eSla muestra han
quedado de color claro. Como se
puede observar, Ja mayor pan.e de la
sfntesis de RNA tiene lugar en la
eucromatina que rodea las areas de
heterocromalina. (Por cortesfa
de Stan Fakan.)

La estructura global de los cromosomas 377

 Todos 0 alguno de estos cam bios podrian jugar un papel importante en el CTomosoms
j i
desempaquetamiento de la eromatina de los genes activos, contribuyendo a ha-
eer el DNA aeeesible como molde para la sfntesis de RNA; sin embargo son neee-
sarios mas resultados experimentales para poder eomprobar esta idea. En el Ca-
pitulo 9 se exponen los mecanismos que pueden controlar la transici6n entre
eromatina aetiva e inacriva.
ceotr6mefo

La heterocromatina esta muy condensada

yes transcripcionalmente inactiva l6
Los estudios realizados en los alios 30 con microcopia 6plica diferenciaron entre
dos tipos de cromatina en el mlcleo inlerfasieo: una forma altamente eondensa-
da denominada hererocromatina y todo el reSlO, que esta menos eondensada,
denominada eucromatlna. La heteroeromatina fue identificada originalmente
porque perrnaneee extraordinariamente compaetada durante la interfase; pos- '--'
CTom,l.,tids
teriormente se encontr6 que era transcripcionalmente inacriva (Figura 8-26). En Figura 827 DlbuJo de un
una celula tipica en interfase, aproximadamente el 10% del genoma se encuen- cromosoma metafli.slco tiplco. Cada
tra empaquetado en heterocromatina. Aetualmente parece claro, por 10 que se crOlmitida hija conliene una de las dos
ha descrito anteriormente, que la eucromatina existe al menos bajo dos formas: molcculas hijas idCllIicas de DNA que
alrededor del 10% esta en la forma de cromatina activa, que es la menos conden- se han generado previamente en el
sada, mientras el resto es eucromatina inactiva, que esta mas condensada que la ciclo cclular por la replicaci6n del
eucromatina activa pero menos que la heterocromatina. Asf pues se cree que DNA.
la heterocromatina podrfa ser una clase especial de cromatina inactiva en trans-
cripci6n que podrfa tener otras funciones. Par ejemplo, en mamfferos y en muchos
otros eucariotas superiores el DNA que rodea a cada centr6mero esta formado
por secuencias de nucle6tidos simples y repetidas. Este DNA satelite constituye
la mayor parte de la heteroeromatina en dichos organismos.

Los cromosomas mit6ticos estan formados por cromatina

en su forma mas condensada 17
Con excepci6n de unos cuantos casos muy especializados, como son los cromo-
somas plumulados y politenicos descritos anteriormente, la mayor parte de los
cromosomas en interfase estan demasiado extendidos, son tan delgados, yestan
tan entremezclados que no son deteetables. Por el comrario, los cromosomas de
casi todas las eelulas son perfectamente visibles durante la mitosis, cuando se
empaquetan formando unas estructuras mucho mas condensadas. Este empa-
quetamiento, que reduce una longitud de DNA de 0,5 cm a alrededor de 5 11m,
haec posible que el huso mit6tico segregue los cromosomas en las celulas hijas
sin romperlos. Esta condensaci6n esta acompafiada de la fosforilaci6n de todas
las histonas HI de la celula en cinco de sus residuos de serina. Debido a que la
histona HI colabora en el empaquetamiento de los nucleosomas (vease Figura
815), parece probable que su fosforilaci6n desempeile un papel causal en la
eondensaci6n de los cromosomas.
La Figura 8-27 muestra un cromosoma mJt6tico tfpico durante la memfase
mit6tiea. Las dos moleculas de DNA hijas producidas par replieaci6n del DNA '--'
0.1 ~m
durante la fase S del cicio de divisi6n celular, estan plegadas por separado, for-
mando dos cromosomas hermanos (den om in ados cromdtidas hermallas) man- Figura 8-28 Electronmlcrograf!a de
tenidos juntos POt sus centr6meros. Normalmente, estos cromosomas mit6ti- barrldo de una regl6n cereana a un
cos estan cubiettos por diversas moleculas, entre las que se cuentan grandes extremo de un cromosoma m1t6tico
t(plco. Se cree que cada protuberancia
camidades de tibonucleoprotefnas. Una vez eliminada est a envoltura, en las
representa la parte superior de un
electronmicrograffas se puede observar que cada cromatida esta organizada en dominio en forma de bude. Es de
bucles de ctomatina que proceden de un eje central (Figuras 8-28 y 8-29). Algu- destacar que es posible diferenciar
nos experimentos demuestran que el orden en que aparecen detetminadas ca c1arameilte las dos cronuhidas
racterfs(ieas visibles de un eromosoma mit6tico representa, aproximadamente, hermanas tal como se han
el arden de los genes a 10 largo de la molecula de DNA. Para ilustrar el modo representado en la Figura 8-27. (De
.tan organizado como se pliega y empaqueta la larga helice de DNA, en la Figura M.P. Marsden y U.K. Laemmli. Cell 17:
8-30 se ha reptesenrado cada cromAlida como una serie de dominios en bucle 849-858.1979, Cell Press.)

378 Capftulo 8: EI m1c1co celular

 Figura 8-29 Electronmicrograffa de
una sola cromatida de un cromosoma
mltotlco. EI cromosoma (de un
insecto) fue tralado para revelar los
bucles de fibras cromat!nicas que
proceden de un eje central de la
cromatida. Estas micrograffas apoyan
la idea de que en todos los
cromosomas la cromatina esta
doblada en series de dominios en
forma de bucle (vease Figura 8-18).
(Por cortesfa de Victoria Foe.)

Figura 8-30 Modelo del

fregmento cono de Tnm
empaquetamlento de la cromatlna.
une doble h6lice
de DNA
'1. I1uslracion esquematica de algunos de
los muchos grados de
empaquelamiento de la cromalina que
T
11 nm
se han poslulado para explicar el allo
crometine en te grado de empaquelamiento del
forma de 'cadene 1 cromosoma metafasico.
de cuentes' 0
'cuentn ensartadas

nucleosomes
compeetedos en
T
30 nm
lorma de fibre de
crometine de 30 nm

secc,6n del
cromosome en una
forme eKtllnd,de
T
""om
1

_~o~od~<.. ~ .~
de un cr.omosome
metefAslCO
_
T
70Qnm
, " , ,
1
ctomosome
~~ T
m.ufA&lco 1400nm
completo

La estructura global de los cromosomas 379

 IBI

muy pr6ximos, organizados en una helice compacta; tam bien se representan cs Flgura8-31 Micrograf!asde
quematicamente todas las clapas de empaquelamiento que podrfan preceder a nuorescenda de tres parejas de
esta estructura. cromosomas humanos mostrando
Se cree que la forma condensada de la cromatina que constituye los cromo- el patron de bandas. En {Al los
somas mit6ticos es similar a la de la heterocromatina en Sll grade de compacta- cromosomas fueron tellidos call el
colnrante Hoescht33258 especilico del
ci6n. No es sorprendente que se haya dererminado que los cromosomas mit6ti-
par de bases A-T que tifte las bandas G,
cos son inactivos transcripcionalmente: la sfntesis de RNA cesa cuando el yell (8) con ei colorante olivomicina,
cromosoma se condensa. Probablemente 1a condensaci6n de la cromatina impi- especffico del par de bases G-C que
de el acceso de la RNA polimerasa aJ DNA, aunque tam bien podrfan estar impli- tii'ie las bandas R. Las baITas indican la
cados arras faelates. posici6n del centr6mero. Obscrvese
que estos patrones de las bandas son el
reverso el uno del otro. ya que las
Cada uno de los cromosomas mit6ticos presenta un patr6n
bandas que son claras en (Al son
caractedstico de grandes dominios estructurales 18 oscuras en (8), y viceversa. Las bandas
EI conjunto de los 46 cromosomas humanos en mitosis se denomina el carloll- G tambien se ti!"ien can el metodo de
po humano. Metodos de tinci6n ideados durante los wtimos 25 afJos han per- Giemsa -de ahf su nombre- mientras
mitido la identificaci6n inequfvoca de cada uno de los cromosomas. Algunos de que las bandas R deben su nombre al
hecho de ser el patr6n "reverso" de las
estos metodos requieren la tinci6n de los cromosomas mit6ticos con colorantes
bandas G. (De K.F. Jorgenson, ).1-1. Van
que son fluorescentes linicamente cuando se fijan a cieTlos tipos de secuencias
de Sande, y e.c. Lin. ClJromosoma 68:
de DNA. Aunque estos colorantes tienen una especificidad muy baja y parecen 287-302, 1978.)
distinguir sobre todo entre el DNA rico en pares de bases A-T (bandas G) y el
DNA rico en pares de bases G-C (bandas R), dan lugar en cada cromosoma mi-
t6tico a un atractivo patr6n reproducible de finas bandas (vease Figura 8-31).
De esta forma cada cromosoma se puede identificar y numerar, como se ilustra
en la Figura 8-32. Se sabe que tanto las bandas G como las R contienen genes.
Estas bandas no estan relacionadas con las descritas previamente en los cromo-
somas politenicos de insectos, que se cree corresponden a regiones de cromati-
oa condensada; en los cromosomas mit6ticos humanos, toda la cromatina esta
condensada y las bandas se forman por la uni6n selectiva de tiertos colorantes.
Mientras que en una banda de un cromosoma politenico parece haber s610 unos
cuantos genes, una banda tfpica de un cariotipo humano contiene algunos cen-
tenares de ellos.
Examinando los cromosomas humanos durante las primeras etapas de la
mitosis, cuando estan menos condensados que en la metafase, ha side posible
establecer que la dotaci6n haploide total contiene por 10 menos 2000 band as di-
ferenciables de DNA rico en pares de bases A-T. Estas bandas se fusionan pro-
gresivamente a medida que avanza la coodensaci6n durante la mitosis, dando
lugar a un mlmero menor de bandas mas gruesas.
Las bandas de los cromosomas mit6ticos se han detectado en especies tan
diversas como la mosca y el hombre. Adetmis, el patr6n de bandas exacto de un
dcterminado cromosoma ha permanecido inalterado durante largos perfodos de
tientpo; par ejemplo, se han localizado cromosomas con un patr6n de band as
comparable al humano, en chimpances, en gorilas y en orangutanes (aunque en

380 Capitulo 8: EI nuclen celular

 Figura 8-32 Mapa estandar del
patron de bandas de cada cromosoma
del carlotlpo humano. Este mapa se
dctennin6 en la ctapa dc prometafase
mit6lica. Los cromosomas del I al22
eSI:in ordenados segull su tamano; una
celula diploide contiene dos de cada
uno de estos cromosomas, adem:is de
dos cromosomas X (hembra) 0 un X y
un Y (macho). Las 850 bandas que se
muestran en el esquema son bandas G,
que se tifien con reactivos que parecen
ser especificos para las secuencias
ricas en A T. Las proruberancias
coioreadas en verde sobre los
cromosomas 13. 14, 15. 21 y22 indican
la posici6n de los genes que codifiean
11 los RNA ribos6micos grandes; las
10
3
4 8
1
8
" Irneas uerdes marean la posici6n de
. caela centr6mero. (Adaptado de U.
5 Franke. Cytogenet. Ceil Genet. 31 : 24-
32. 1981.)
2

!~

-~-i-~-~- -~
14
"
16
" "I 20
50 mlilones de pares
de nucleOtidos de DNA
22

"
el hombre se ha producido la fusi6n de dos cromosomas, 10 cual ha dado [ugar a
los 46 cromosomas que presenta a diferencia de los 48 de las atras especies cita-
das). Esto sugiere que la organizaci6n espacial de los cromosomas que ponen de
manifiesto las bandas puede seT de gran importancia para la funci6n cromos6-
mica. El porque de la exislencia de estas bandas constituye un misterio. Incluso
las mas fillas de elias representadas en la Figura 8-32 podrfan contener mas de
un mi1l6n de pares de nucJe6tidos, que es casi el tamaflo de un genoma bacte-
Tiano, yes de esperar que la composici6n media de pares de bases sea alealOria
en eslOs grandes fragmenros de DNA.

Resumen
Los cromosomas se CkSCOluWlISatl generalmente durante in interfme, de forma que
es diflcil discernir su estrllchlra. Existell ,wtables excepciones, como par ejemplo los
especializados cromosomas plul1J11indos tk los oocitos de vertebrudos 0 los cromo-
somas poUlinicos de cilldas secretoras gigalltes tk i"sectos. Los estudios tk ambos
tjpos de cromosomas interftisicos sugieren que cada tum de las largas moUculas de
DNA de uti cromosoma esttf divididn e" 1111 gratl mimero de dominios discretos que
se pUegatJ de matJertl lliferente. Tanto en los cromosomas plwmdados como en los
politetJicos las regiotJes que esttfll sintetiza"do activamente RNA SOli las menos con-
densadas. Deforma similar, como se estima por la se'lSibilidLul a lI"cleasas, alrede-
dar tkl 10% tkl DNA de las cilulas en hlterfase tk vertebrados se encuen(ratl ell mla
conformaciOn relativameflte tkscontk'lSadt, {I'le se correladolla COli la (rallscrip-
cion tkl DNA ell diclJaszollas. Esta "cromatina activa" es biOllu{micamentedistillta
de las regiones mtis condensadas, illactivas, tk in cromatitJa.

La estructura global de los cromosomas 381

 Todos los cromosomas fUlqllieren ,ma conformaciOn altamente co,uie/lsatla
durante In mitosis. C"ando se Wiell defomm especfica, los cromosomas mit6ticos
presentan Ima estnlctllra en bandas {I"e pem,ite reconocer sill ambigll('{latles a
cada ,mo de los cromosomas; estLU bamlas colltiellell milfolles de pares de ''''cle6ti-
dos y sarI el reflejo de ,um ',e'ereogeneidad de la estnlctllra del cromosoma qlle min
no se compre,lde.

Replicaci6n del cromosoma

Antes de que una celula se divida. ha de realizar una copia de cada uno de sus
cromosomas, proceso que realiza durame una parte de la inlerfase denominada
fase de sfntesis de DNA 0 rase 5 del cicio celular; a la parte del cicio celular que
precede a la fase 5 se Ie denomina Gap 1 (de Mintervalo") 0 GI' Ya la que Ie sigue
Gap 2,0 Gz (vease Figura 17-3). En una celula eucariota tfpica la rase 5 dura apro-
xim3damente 8 horas. AI final, cada cromosoma se ha replicado produciendo dos
copias completas, que pennanecen unidas por sus centr6meros hasta la rase M
que Ie sigue poco despues (Figura 8-27). La duplicaci6n de los cromosomas re-
quiere tanto la replicaci6n de la larga moltkula de DNA de cada cromosoma
como el ensamblaje de un nuevo conjunlo de prorcmas cromos6micas sobre esle
DNA, ronnando la cromatina. En el Capitulo 6 se discute la enzimologfa de la re-
plicaci6n del DNA y se describe la estrucrura de la IlOrq"illa de replieDdo", en la
que se produce la sfntesis de DNA siguiendo un mecanismo semiconselVativo
(veanse Figuras 6-48 y 6-49). En el Capftulo 17 se considera c6010 esta regulado el
inicio de la rase S, en el seno de una discusi6n mas general sobre el control del ci-
cio celular. En la presente secci6n describimos el patron de rases de la replicaci6n
de los cromosomas eucariotas y su relaci6n con la esrructura del cromosoma.

Secuencias espedficas de DNA acruan como orfgenes

de replicaci6n l9
En el CapItulo 6 se vio que se han caracterizado los orfgenes de replicaci6n en
bacterias como secuencias especfficas de DNA que permiren a la maquinaria de
replicaci6n del DNA unirse a la doble helice y desplazarse ell direcciones opues-
las, formando las llorquiflas de replicaci6n. Par analogia, es de espcrar que los
origenes de replicad6n eucariola tambien sean secuencias especfficas de DNA.
Como se mcnclon6 previamcnte, la blisqueda de orfgenes de replicaci6n en los
cromosomas eucariotas ha sido especialmentc fructffera en las celulas de In Ie-
vadura Saccharomyces cereuisiae. Los pOlentes melodos que se han dcsnrrollado
para su aislamiento se basan en el uso de unas celulas Tllutanles de Icvadura que
carecen de un gen esencial, de forma que s610 sobrevivin\n en cl media sclectivo
si se les agrega un plasmido que porte una copia funcional del gen perdido.
Cuando se introduce en la celula de levadura un plasmido bacteriano que poria
el gen esencial, no sera capaz de replicarse independientemente del cromosoma
huesped porque el origen de replicaci6n bacteriano no fUllciona en la celula de
levadura. SI se insertan fragmentos al azar de genoma de levadura en un plasmi-
do bacreriano, una pequefla fracci6n de las moleculas recombinantes ponar<1 un
origen de replicaci6n de levadura, y por eUo sera capaz de replicarse en celulas
de levadura. AqueUas celulas mutantes de levadura que porten dicho pl,bmido
podran prolirerar en medio selectivo pues se les ha apollado una copia funcio-
nal del gen normal (Figura 8-33). Las secuencias de DNA identificadas por su
presencia en plasmidos aislados de estas celulas se han denominado sewellcias
de replicadotl awo/loma (ARS, de AUlOnomously Replicating Sequences). Re-
cientemente se han aislado un cierto nu.mero de ARS, demostrandose que se tra-
ta de autenticos orfgenes de replicaci6n cromos6micos, justificando la estrategia
que se ha seguido en su aislamiento.
Se ha demostrado que una secuencia de II nucle6tidos, la secuencia central
consenso, es esencial para la funci6n de origen de replicaci6n en levadura; todos

382 GapftuJo 8: EI micleo celular

 I,.um.nlo d. DNA de ,egmento de DNA de Figura 833 Estrotegla utlllzada para
lev.du.a, seleccionado levadura que conl;ene
alua, una seeuenci8 ARS Identlncar secuenclas de repllcacl6n
aut6noma en levaduras. Una
\ vector plamfdi<:o secuencia de DNA identificada de esta
q~oo",;.~

CJ
forma se denomin6 inicialmente
el gen de I.
histidina secuencia de replicaci6n aUl6noma 0
HOS HOS ARS, pues capacita 31 pl4smido que la
contiene a replicarse Iibremente en 1a
I I c~Hula hu&ped s.in necesidad de
introduc:e;Qn del DNA p18$mklioo en ~lul.. de levadura que ca,ecen incorporarse en sus cromosomas.
del gen de histidin8 y que. pol' 10 U1nto. no puedlln crece' en iIlUsenciill
de hi,tidiM

ctllula, 1'8n,lorm8das obtenid8S ctlluills trllnslorm8das obtenidss

con un. I.ecuenci,l bIIj8 8n I,lS
que 31 DNA del pl.hmido Sll h8
integr8do 8n el Cfomosoma
de I. lev.du
con un.lrecuenci. elev.d. en
I,. que los c1rculos de DNA
plllSmidico H replican
independientemente del
Cfomosoma hUMped origen de replicaeian de SV40
\

los orfgenes de repLicaci6n conocidos contienen copias casi identicas de dicha DNA
secuencia, espaciadas en una regi6n de unos 100 nucle6tidos. Eslas secuencias ~-[!]
de DNA son reconocida por un gran complejo de protefnas que parece que esta ~ .nl!geno T

implicado en el proceso de iniciaci6n. Aunque se han idelltificado a1gunas pro- [!][!]

babies secuencias de origen de replicaci6n en eucariotas, hasta el momenta no
se canacen las protefnas que se unen a elias. CAMBIO
CONFORMACIONAL
EN EL ANTfGENO T
Un sistema eucariota libre de celulas replica el cromosoma
de un virus de simio'lO
==:@c==:
En una bacteria un complejo multienzimatico que incluye la DNA polimerasa, la
DNA primasa y la DNA helicasa desplaza la horquilJa de rcplicaci6n (vease Figu
ras 6-48 y 6-49); este complejo se ensambla en el origcn de rcplicaci6n a traves
de una reacci6n que requiere la presencia de una protcfna iniciadora que se une
espccflicamente aJ origen de replicaci6n en el DNA (v~ase Figura 652).
Se han hechos nwncrosos intentos para reconstruir el sislema de replica-
r=:
ci6n eucariota en el tubo de ensayo. Para eUo serfa necesario identificar lodas las
enzimas necesarias y describir la funci6n de cada una de elias en la horquilla de Flguf1l 8-34 Iniclaci6n de la
replicaci6n. EI sistema de replicaci6n ill vitro que mejor ha funcionado por el repllcacl6n del DNA del genom8 del
momento permite la replicaci6n del virus de simio SV40. ESle virus parasita la virus SV40. La prolefna de iniciaci6n
relula huesped, usando de esta celula lodo 10 necesario para su replicaci6n, con (antfgeno T) es codificada por el virus,
excepci6n de una protefna, el amfgeno T de SV40, una prot'eina multifuncional y reconoce especi(icamente los
de gran tamano que permite al virus evitar los commies normales y por ella re- origcnes de repUcaci6n viricos.
plicarse mas deprisa que la ~lula huesped. AI origen de replicaci6n de SV40 se Despues de abrir la doble helice de
unen dos hexameros del antfgeno T, reconociendo el exterior de la doble helice. DNA en el origen, el antigeno Taenia
como una DNA helicasa,
Despues, en un proceso Que no se comprende bien, el antigeno T unido cambia
desplazandose desde el origen y aI
de conformad6n separando las dos hebras de DNA del origen. Esta interesante
mlsmo tiempo abriendo la doble
protefna tiene una tercera funci6n: utilizando la energfa de hidr6lisis del ATP ac- Mlice. Acontinuaci6n los
Ilia como DNA heLicasa, desplazandose a 10 largo del DNA y separando las dos componentes celulares de la
hebras a su paso, ronnando una burbuja de replicacion (Figura 834). Los com maquinaria de replicaci6n se
ponentcs celuJares de la maquinaria de replicaci6n sc cnsamblan en la burbuja cnsamblan en la burbuja de
fonnando dos horquillos de repUcocl6n que se desplazan dcsde el origen en di- replicaci6n formando las horquillas de
recciones opuestas. replicaci6n (vcase Figura 8-35).

Replicaci6n del cromosoma 383

 Figura 8-35 Horqullla de repllcackSn
" ~tr6n de 1. CIldeol gur. en mamfferos. Esla horquilla se ha
esquematizado de fonna que destaque
la homologfa con 1a horquilla de
replicaci6n baeteriana descrila en e1
Capflulo 6. Aunque ambas horquillas
utUlzan los mismos componenles
baskos, 1a horquilla de mamiferos
difiere en dos aspectos imponantes. FJ1
primer lugar. se emplean dos DNA
polimerasas. una para la cadena gufa y
DNA heliCll$ll oua para la relrasada Es bastaOle
ceblldor de RNA 1'r'll~noTu probable que la polimerasa de la cadena
hom6Iogo oeM)
,omlllnio de Ok.llki / gura est~ adaplada a manlener una
uni6n ruerte con el DNA, mientras que
proternlll de union I Ie
cadena sencill. de DNA
la polimerasa de la cadena retrasada
debe scr capaz de soltarse del molde y
volvcrse a unir cuando se sintetiza el
nuevo fragmcnto de Okazaki. En
DNA polimeras.
(sabre ,I patrOn dele caden. ret.ned.l st..'gUndo lugar, In DNA primasa de
mamffcros es una subunidad de la DNA
polimerasa de la cadena relrasada,
mielllras que en baclerias esta asociada
con la DNA helicasa.
Aunque la horquilla de replicaci6n es similar a la que se encucntra en proca-
rioms. los experimenlos con SV40 han mostrado que en eucariotas existen al
menos dos tipos diferenles de DNA poLimerasa: DNA polimerasa (l (alfa) en la
cadena retrasada, y la DNA polimerasa delta l) (delIa) en la cadena gufa (Figura
835). En los procariotas, sin embargo, en ambas hebras de la horquilla de repli
caci6n actua un mismo tipo de DNA polimerasa (vease Figura 648).
Todavfa no se ha descubierto la prote(na que nonnalmenle inicia la replica-
ci6n de los cromosomas de mamfrero. Por cUo se desconoce si aClua en la hor-
quilla como el anlfgeno T, a modo de DNA helicasa, 0 bien. si como en los pro-
cariotas. se necesita una protelnn iniciadora espedfica y la DNA helicasa.

Los orfgenes de replicaci6n de los cromosomas eucariotas

se activan en grupos21
En el Capftulo 6 se describe c6mo, en las bacterias, se inician dos horquillas de
replicaci6n en cada origen y c6mo avanzan en direcciones 0plleslas. desplazan-
dose a lIna velocidad de alrcdcdor de 500 nucle6tidos por segundo hasta que se
ha replicado la tOlalidad del DNA circular del eromosoma. El tamafto del geno-
rna bacteriano es pequeno, de modo que las dos horquillas permilcn duplicar
lodo el cromosoma en menos de 40 minutos. Dado el Iamano muy superior de
la mayor parte de los cromosomas eucariotas, parece poco probable que s~ re-
pljcaci6n se inicie en un unico origen.
En los primeros aftos de la deeada de 1960 se desarroU6 un metodo que per-
mhi6 el estudio del mecanismo general de replicaci6n del cromosoma eucario-
tao Se hacen crecer celulas humanas en cultivo. exponiendolas durante perfodos
cortos de tiempo a timidina- 3 H, con 10 que se consigue que el DNA sintetizado
durante ese tiempo sea fuertemente radiactivo. La disLribuci6n del DNA radiac-
tiva se determina por autorradiograffa: se obtiene el DNA de las celulas median-
te lisis suave. se extiende sobre un portaobjetos de vidrio y se recubre con una
emulsi6n fotogrMica. Los tiempos de marcaje utilizados son cortos, de modo
que la horquiUa de replicaci6n reeorre 5610 unos cuantOS micr6melros, 10 cua! se
pone de manifiesto a! microscopio 6ptico en forma de Ifneas de granos de plata
a 10 largo de la molecula de DNA. a pesar de que esta no es visible a! microscopio
6plico. De este modo es posible determinar tanto la velocidad de replicaci6n
como la direcci6n en la que se desplazan las horquillas de replicaci6n (Figura
8-36). A partir de las velocidades estimadas mediante diferentes liempos de

384 Capflulo 8: EI ndelco celular

.
 --
origen de replic8ci6n
-- DNA
Figura 8-36 Los expcrlmentos que
demostraron el patr6n de
desplazamlento de las horqulllas de
repllcacl6n durante la rase s. El DNA
PULsa DE 10 MINUTOS DE
de nueva sfntesis en las celulas
MARCAJE CON TIMIDINA 3H humanas en cultivo se marc6
brevemente COil un pulso de timidina
tritiada (timidina-lH) de elevada
IAI
actividad especffica. En eJ experimento
granos de pleta
LA CAZA" EN EL MEDIC NO MARCADO que se iJustra en (Al Jas celulas se
DURANTE 10 MINUTOS REDUCE lOS lisaron y el DNA se extendi6 sobre un
NIVELES DE PRECURSOR INCQRPQAADO
portaobjelos de vidria que fue
recubierto por una emuJsi6n
(B) ====;~:.:..:..:..:.~r"""~~~.J:~-r~W1~'~.~~Il:i'~'~(!i4?i&~4~_~.:..:.:~:l==:<t:,:::~",~,*"~w~"'Ji\i~a'=~.=~\iS~w;r.\;~'lilIIG~'~ ..:..:..j'>>=== ratognl.fica. Tras algunos meses de
exposici6n se reve16la emulsi6n, y
burbuje de replicacl6n burbuja de replicaci6n apareci6 una \fnea de granos de plata
sobre el DNA radiactivo. E1
experimento en (B) es igual que el de A
marcaje, se deduce que la horquilla de replicaci6n se desplaza a unos 50 nuc1e6- pero despues del nlarcaje las celulas se
tidos por segundo. ESla velocidad es una decima parte de la velocidad estimada incubaron en un media libre de
radiactividad, con 10 cual el DNA
de dcsplazamicnto de la horquilla de replicaci6n en bacterias, 10 cual probable-
sintetizado qued6 mareado menos
mente refleja 1a dificultad que supone replicar el DNA estrechamente empaque- intensamente. Se observ6 que las
lado en 1a cromatina. . parejas de trazas oseuras en (B)
Tal como se ha comentado anteriormente, se cree que un cromosoma hu- presentaban regiones de mellor
mana de tamaf\.o media esta farmado por una molecula de DNA de unos 150 mi- marcaje en direcciones opuestas,
llones de pares de nucle6tidos. La replicaci6n de una mohkula de este tamano a demostrando eJ desplazamiellto
partir de una horquilla de repHcaci6n que se desplazara a una velocidad de 50 bidireccional de Ja horquilta de
nucle6tidos por segundo, requerirfa 0,02 x 150 x l()& =3 x 106 segundos (alrede- replicaci6n a partir de un origen de
dor de 800 horas). Como se esperaba, los experimentos antes descrilos revelaron replicaci6n comun (vease Figura 6-51).
que en cada eromosoma eucariota en replieaci6n aetuan numerosas horquillas En esta figura se presenta el DNA
de replicaci6n que se desplazan simultaneamente. Mas aun, exislen regiones del coloreado en raja unicamenle como
cromosoma que presentan numerosas horquillas de replieaci6n muy juntas, una ayuda para la interpretaci6n del
autorrad.iograma; el DNA no marcado
mienlras que otras regiones del mismo eromosoma no presenta ninguna. Qtros
no es visible en estos experimentos. Se
experimentos posteriores han demOSlrado 10 siguiente: (1) los orfgenes de repli- cree que una horquill!l de repJicaci6n
caci6n tienden a ser activados en grupos de enlre 20 y 80 unidades (denomina- s610 se detiene cuando encuentra oITa
dos unidades de replicaci6n). (2) A 10 largo de la fase S se van activando nuevas horquil1a desplazandose en direcci6n
unidades de replieaci6n hasla que todo el DNA esta replieado; (3) Dentro de una opuesta 0 cuando alcanza el extrema
unidad de replieaci6n, los orfgenes de replicaci6n estan espaciados a intelValos de un cromosoma; de esta forma se
de entre 30 000 Y 300 000 pares de nucle6tidos; posiblemente exista un unieo replica la totalidad del DNA.
origen de replieaci6n par bucle de la cromatina. (4) Como oeurre en las baete-
rias, las horquillas de replicaci6n se forman por parejas y se desplazan en senti-
dos opuestos desde un punto de origen comun dando lugar a una burbuja de re-
plicaci6n; dichas horquillas se detienen s610 euando se eneuentran con otra
burbuja de replieaci6n en erecimiento 0 cuando alcanzan un extremo del ero-
mosoma. De esta manera muehas horquillas de replieaci6n pueden actuar de
fonna independiente sobre cada eromosoma y formar de este modo dos helices
hermanas completas de DNA (vease Figura 8-36).

Regiones distintas del mismo cromosoma se replican

en diferente momento2.2
La replicaci6n del DNA en la regi6n situada entre dos orfgenes de replicaci6n,
requiere tan s610 a1rededor de 1 hora para completarse, segun las estimas reali-
zadas de las mayores distancias conoeidas entre orfgenes de replicaci6n y la ve-
locidad de desplazamiento de la horquilla de replicaci6n. Sin embargo, en las
cclulas de mamffero la rase S dura alrededor de 8 horas. Esto implica que no to-
dos los orfgenes de replicaci6n son activados simuhaneamente Y.que cada uni-
dad de replicaci6n (que contiene un grupo de entre 20 y 80 orfgenes de replica-
ci6n) este replicando s610 dmante una pequena parte de la fase S.

Repllcacl6n del cromosoma 385

 iExiste una activaci6n al azar de las diferentcs unidades de replicaci6n, 0
bien existe un orden definido de replicaci6n de las diferentes regiones del geno-
rna? Un experimento que puede responder a esta pregunta consiste en el marca-
je de poblaciones celulares sincronizadas, con el analogo de la timidina bromo-
desoxiuridina (BrdU), durallle diferentes perfodos de tiempo a 10 largo de la fase
S. Posteriormente, en la fase M, se pueden reconocer las regiones del cromoso-
rna rnit6tico que han incorporado BrdU en su DNA gracias a su distintas propie-
dades de tinci6n, 0 mediante el uso de anticuerpos anti-BrdU. Los resultados
muestran que diferentes regiones de cada cromosoma se replican en un orden
reproducible dtuante la fase S (Figura 8-37). Ademas, como era de esperar a partir
de la observaci6n de grupos de horquillas de replicaci6n visualizados por auto-
rradiograffa, el momento en que se realiza la replicaci6n est a coordinado en
grandes regiones de cromosoma.

La cromatina muy condensada se replica tardfamente en la fase

5, mientras que la cromatina activa se replica tempran0 23 Figura 8-37 D1ferentes reglones de
un cromosoma se replican en
Parece que el orden en que se activan los orfgenes de replicaci6n depende, aI
dlferentes momentos de la fase S.
menos en parte, de la estructura de la cromatina en la que se encuentren. Se Estas micrografias, obtenidas con el
describi6, por ejemplo, que durante la interfase la heterocromatina permanece microscopiu optico, muestTan
en una conformaci6n fiUy condensada (similar a la cromatina mit6tica), mien- cromosomas mitoticos tenidos en los
tras que la cromatina activa adquiere una conformaci6n descondensada que que se ha marcado de forma
probablemente es necesaria para permitir la sfntesis de RNA. La heterocromati- diferendaJ eJ DNA en replicad6n
na se replica muy tardfamente en la fase S, sugiriendo que el orden de replica- durante intervalos definidos de la fase
ci6n esta relacionado con el empaquetamiento del DNA en la cromatina. Esta S. En estos experimenlOs, las celulas se
sugerencia esta de acuerdo con el orden en que se replican los dos cromosomas hicieron crecer en presencia de BrrlU
X en una celula de hernbra de mamffero. A pesar de que ambos cromosomas (un amilogo de limidina) yen allsencia
contienen esencialmente las rnismas secuencias de DNA, unicamente uno de de timidina para marcar el DNA
ellos es activo transcripcionalmente mientras que el otro no 10 es (se discute en unifonnemente. Desplles las celulas
fueron expueslas a pulsos breves de
el Capftulo 9). Casi todo el crornosorna X inactivo se encuentra condensado en
timidina en ausenda de BrdU durante
heterocromatina y su DNA se replica tardfamente al final de la fase S, mientras la fase S temprana, media 0 tardia.
que su horn610go activo esta menos condensado y se replica a 10 largo de toda la Dado que el DNA sintetizado durante
fase S. Estos hechos apoyan la hip6tesis de que las regiones del genorna cuya el pulso con timid ina es DNA de doble
cromatina esta menos condensada durante la interfase, y por ello son mas acce- helice con timidina en una cadena y
sibles a la maquinaria de replicaci6n, se replican primero. Experimentos de auto- BrdU en la otTa, se tine mas
rradiograffa muestran que las horquillas de replicaci6n se desplazan a velocida- intensamente que el otro DNA (que
des similares a 10 largo de toda la fase S, de forma que el grado de condensaci6n contiene BrdU en las dos cadenas) yse
de la cromatina afectarfa a1 tiempo de iniciaci6n de las horquillas de replicaci6n visualiza como bandas brillantes
pero no a su velocidad una vez formadas. fjlechas) en estos negativos. Las lfneas
La relaci6n que se ha sugerido entre la estructura de la cromatina y el mo- discontinuas conectan posidones
mento en el que se produce la replicaci6n del DNA se apoya asimismo en estu- similares de las tres copias del
cromosoma mostrado. (Por cones(a de
dios en los que se ha medido el momento en el que se replican determinados ge-
Elton Stubblefield.)
nes. Los resultados muestran que en todas las celulas estudiadas, los genes
constitutivos, que estan siempre activos, se replican muy temprano ell la fase S
en todas las celulas estudiadas. Por el contra rio, los genes que s610 son activos
en unos cuantos tipos celulares generalmente se replican temprano en la fase S
en las celulas en que son activos y mas tarde en las que son inactivos.

Las unidades de replicaci6n tardfas coinciden con las bandas

ricas en A-Ten los cromosomas metafasicos24
Parece que muchas de las unidades de replicaci6n corresponden a distintas
bandas cromos6micas que se hacen visibles mediante varios procesos de fija-
ci6n y tinci6n usados para obtener los cariotipos. Como se ha dcscrito previa-
mente, en el complemento haploide de cromosomas de una celula de mamffero,
durante las primeras fases de la mitosis se pueden distinguir unas 2000 bandas
oscuras, las bandas dcas en A- T (bandas G), separadas por un tlumero igual de
bandas claras ricas en G-C (bandas R). Es curiosa que las bandas ricas en A-T Y

386 Capftulo 8: EI nucJeo celular

las bandas ricas en G-C se repliquen en diferentes momenlOs de la fase S. Expe-
rimenlOS como el descrito en la Figura 8-37 sugieren que la mayor parte de las
bandas ricas en G-C se rcplican durante la primera mitad de la fase S mientras
que la mayor parte de las bandas ficas en A-T 10 hacen en la segunda mit ad de
la rase S. Se ha sugerido que los genes de expresi6n conSlitutiva se encuentran
localizados fundamentalmente en las bandas ricas en G-C. mientras que los ge-
nes de expresi6n especffica de lipo celular -Ia gran mayorfa de los cualcs ser~11
inaclivos en muchas c~luJas- estan situados en las bandas ficas en A-T. Como
se coment6 previamente. actualmente consriruye un complelo misterio por qu~
el genoma de los mamfferos ha de estar segregado en eslOS grandes bloques aJ
lemos de cromalina -muchos de eUos de un tamano similar a un genoma baCle-
riano. Tambi~n se desconoce cuantos de los orfgenes de replicaci6n presentes
en una unidad de repJicaei6n se aclivan aJ mismo tiempo. Un posibilidad es que
la eromatina de las unidades de replicaei6n tardfas permanezca condensada aun
despu~ del final de la rase M, y 5610 se descondense en la segunda milad de la
fase S. permitiendo 5610 enronees el aceeso simuJtaneo a todos sus orfgenes de
replicaci6n. En este caso, la replicaci6n "todo 0 nada- del DNA de una unidad
de replicaci6n podrfa ser el reflejo de la descondensaci6n en bloque de grandes
dominios de cromatina.

EI patr6n ordenado de activaci6n de los orfgenes de replicaci6n

puede contribuir a la memoria de la c~luJa25
En huevos en divisi6n de muchas especies. ell los cuaJes se encucnlran almaee-
nadas grandes cantidades de los componentes dc la eromalina (como las hisro
nas) que se precisan para fabricar un nuevo nudeo, la fase S es ex(remadamente
breve. Como se i1uslra en la Figura 8-38, una corta fase S implica el usa de un
numero excepcionalmente grande de orfgenes de replicaci6n espaciados a inter-
vaJos de s610 unos euantos miles de pares de nucle6tidos (a diferencia de las de-
cenas 0 centenares de miles de pares de nucle6tidos que separan los orfgenes de
replicaci6n durante el desarrollo mas tardfo). EI hecho de que cuaJquier DNA ex-
(fano introducido en el interior de un huevo de rana feeundado se replique, pa-
rece indiear que posiblemente en ese modelo eelular no se requiera una sceuen-
cia especffiea de DNA para formac un origen de replicaei6n.
Asf pues, la replicaci6n del DNA puede considerarse como un proceso po-
tencialmente muy n1pido que en algunas c~luJas esta sujelo a un complejo siste-
ma de regulaci6n que reslringe la iniciaci6n de las horquillas de replicaci6n, de
modo que diferentes regiones del genoma se replican en diferentes mOtnenlos.
Se ha sugerido, por ejemplo, que la eromatina que se replica temprano se en-
sambla en parte can una serie de protefnas eromos6micas especiales que se han
producido durante la fase GI' de modo que euando una regi6n cromos6mica se
ha deseondensado formando cromatina act iva, su ceplicaci6n temprana haec
que reclute prolefnas que Ie ayudaran a mantener su estado descondensado de
una generaci6n a la siguieote. Desde este punta de vista, el momento en que se
produce la replicaci6n del DNA eontribuiria al proeeso de la memoria celular ,
que faci.lita la transcripci6n continua de los genes expresados.

Figura 838 En nucleos embrionarios en divisl6n nliplda actoan un gran

nomero de orlgenes de repUcackSn. En estas elccLronmicrograHas de
cromalina descondensada de un embri6n lemprano de Drosophila, se
observa que las burbujas de replicaci6n (flechas) eslm muy pr6ximas. En eSle
embri6n los perfodos entre algunas divisiones nucleares sucesivas son de
unos 10 minulos. Debido a que los orfgenes de replicackSn ulilizados son
muy proldmos (distan 5610 unos cuantos miles de nucle6tidos), 5610 se
requiere alrededor de un minuto para replicar el DNA exhllell1e entre ellos.
(Por conesfa de Victoria Foe.)

RepUcacl6n del cromosoma 387

Factores unidos a la cromatina aseguran que cada regi6n
del DNA s610 se replique una vez 26
En una fase S normal, cl genoma se ha de replicar completo y una sola vcz. Tal
como se ha descrito previamente, en muchas celulas eucariolas el proceso de
replicaci6n del DNA es asincr6nico y puede durar baslante tiempo. Debido a
que los origenes de replicaci6n se activan en diferentes momentos en diferenles
regiones del cromosoma, hacia la pane media y final de la fase S, algunos ya han
sido replicados completamente mienU"as otros aun no han empezado a hacerlo.
Asf pues se plantea un imponante problema de "regisrro~ durante las etapas
media y final de la fase S. Aquellos orfgenes de replicaci6n ya utilizados se han
duplicado, y son, aI menos respecto a sus secuencias de DNA, esencialmente
iguales a los que aun no se han activado. Sin embargo, en cada fase S cada ori-
gen de replicaci6n debe ser utilizado una sola vez. iC6mo se puede controlar
eSle proceso?
Algunos experimentos de fusi6n celular han aponado importantes c1aves
para la comprensi6n del problema. Cuando se fusionan celulas en fase S con
celulas en fase G.. se induce la sfntesis de D A en el ntlcleo de las celulas en fase Figura 8-39 Dos mecanlsmos que lie
han propuesto para expUcar el
G,tlo cual sugiere que la transici6n de fase GI as est'ii mediada par un activador
bloqueo de la re-repllcacI6n. Esle
de la sfnlesis de DNA, que difunde. Por el comrario, cuando las celulas en fase S
bloqueo, que protege aI DNA repl.icado
se fusionan con cl!lulas en fase G2 (es decir, celulas que acaban de complelar la de una poSierior replicaci6n en el
fase S), en el ntlcleo G2 no se induce la s(ntesis de DNA. Dado que la sfntesis de mismo cicio celular, es crucial para
DNA contintla inalterada en el ntlcleo en fase S, implica que el ntlcleo en G2 es marcar las zonas ya replicadas, pero se
incapaz de iniciar nuevos procesos de replicaci6n porque todo su DNA se en- desconoce su nalUraleza molecular.
cuenlra bloqueado de alguna forma. Por ejemplo, un inhibidor Que no difunde Normalmente, el bloqueo lermina
de la replicaci6n puede haberse unido fuertemente aI DNA. Un inhibidor de es- durante la mitosis, aunque en algunos
cas caracterfsticas que se uniera a la cromatina recien formada en In cola de las lipos celulares especializados (las
horquillas de replicaci6n podrfa explicar el hecho de que el DNA replicado una cl'!lulas salivares gigantes de
vez no volviera a hacerlo dentro de la misma fase S (vease Figura 8-39A). Otra Drosophila. por ejemplo) se elimina el
alternativa igualmente plausible consistirfa en la existencia de unas proteinas bloqueo sin necesidad de milosis,
iniciadoras 0 "factores permisivos~, unidas debilmente at DNA, que serran nece- hacienda posible la formaci6n de
cromosomas poIite"icos gigantes.
sarias para la replicaci6n y que se destruirfan 0 inactivarfan por el paso de la
(A) Modelo basado en la adici6n de un
horquilla de replicaci6n (1;igura 8-39B). Sea cual sea la naturaleza del bloqueo de
inhibidor a tada la cromatina ya
la re-replicaci6n del DNA, ha de ser eliminado en el momento de la mitosis (0 un replicada; (8) madelo basado en la
poco antes), ya que {ras la divisi6n celular, el DNA del ntlcleo G1 que aparece en presencia de una proteina iniciadora,
las celulas hijas ya no estti protegido de la replicaci6n. o "factores pennisivos~, que aCluarian
Se ha padido observar que los fragmentos de DNA bacteriano que se repli- una unica vez y que deberfan unirse al
can cuando se inyectan en un huevo fertilizado de rana pueden quedar 3fecta- DNA s610 durante la milosis.

IAI 181
protein.. Iniciodorn unidas dlibilmente
/ I \
DNA G, ~ONA
I
~
~
5
~

I
h61ic:es de DNA hi.., de
Ie etomolino pl"olegido prolel.no i~iei.ooro .......-\ I t
===========1~:-':'::""'""
==1 mK!'VO

MITOSIS PERMITE QUE SE UNAN

~ITOSISEUMINA EllNHIBlOOR
A Al DNA OTRAS Pfl:OTEINAS
INICtADORAS

eI DNA del nUdeo '"' f _ G1 .. puede voIve< a rep/icer

G,
==f*=t= ==t=t===t==

388 Capitulo 8: EI ntlcleo celuJar
dos por un bloqueo de la re-replicaci6n. Asl pues, el mecanismo responsable del
bloqueo no puede depender de un origen de replicaci6n aJlamente especffico. EI
bloqueo no afecta al virus SV40, probablemente debido a que su antfgeno T suo
minislra tanto las funciones de iniciador como de DNA helicasa. subsliluyendo
a los componentes celulares amllogos y evadiendo de esle modo los comroles a
los que estan sujetos.

Amedida que el DNA se replica, se van ensarnblando

nuevas histonas en la cromatina27
En cada cicio celular son necesarias una gran camidad de hiSlonas, aproximada-
menle la misma C3filidad en masa que el DNA sintelizado, para fonnar la nueva
cromalina. Por esta raz6n, muchos organismos poseen varias copias de cada
uno de los genes de las hislonas. Por ejemplo, en las c~HuJas de venebrado se en-
cuentran alrededor de 20 copias de un grupo de secuencias, carla uno de los
cuales contiene los cinco genes de las histonas.
Adiferencia de 10 que sucede con muchas protefnns. que se sintetizan conti-
nuamcnte a 10 largo de toda In interfase, las histonas se sinteliznn mayoritnrin-
mente en la fase S, durante III que el nivel de los mRNA de hiSlonas se incremen-
la uoas 50 veces como resulmdo del efeclo combinado de un aumento de la
velocidad de transcripci6n y una reducci6n de su velocidad de degradaci6n. De
bido a un mecanismo que depende de las propiedades especiales de su extremo
3' (se discule en el Capitulo 9) cuando la sfntesis de DNA lermina al [mal de la
rase S (0 cuando se aiiaden inhibidores que detienen la sfnlesis de DNA prema-
turamcnle), los mRNA de las histonas mayores se degradan en cuesti6n de mi-
nUlos. Por el contrario, las moleculas de histona son nOlablemente eslables y
pueden sobrevivir toda la vida de In celula. La estrecha relaci6n entre la Slntesis
de DNA y la de histonas puede ser debida a un meeanismo de retroalimentaci6n
que conlrole los niveles de histonas libres asegurando que ~te sea el adecuado
para la canlidad de DNA de nueva s(ntesis.
Cuando las hislonas se han ensamblado en nucleosomas, raramente. 0 nun
ca, Iiberan el DNA al que eslan unidas. Sin embargo, a medida que la horquiJIa
de replicaci6n avanza, ha de alravesar de alguna forma los nucleosomas pal'er-
nos, los cuales parecen eslar adaptados a pennitir el paso a su traves lamo para
la transcripci6n como para la replicaci6n. Seglin una de las hip6tesis propues-
las, cada nucleosoma se dividirfa durante la replicaci6n del DNA en dos Ymedios
nucleosomas", permitiendo el acceso de la DNA polimerasa al DNA nucleos6mi
co desenrollado (Figura 840).
EI DNA de nueva sfntcsis ccrcano a una horquilla de replicaci6n hereda las
histonas palernas, pero tambi~n necesha de una cierta canlidad de histonas de
nueva sfntesis para complelar su empaquetamiento en cromalina (v~ase Figura
840). Exislen algunas evidencias que sugieren que un ensamblador de nudeo-
somas viajaria con la horquilla de replicaci6n, empaquelando el DNA recien sin-
lClizado, en cuanlo emerge de la maquinaria de replicaci6n. La cromatina de
nueva sfnlesis requiere, sin embargo. al menos una hora para eslar complela-
mente madura; hasta esle momento, por ejemplo, las histonas nuevas son mas
sensibles de 10 normal a enzimas que son capaces de modificarlas. Desconoce-
mas cuales son las diferencias qufmicas entre la cromatina madura y la inmadu-
ra, pero se cree que la maduraci6n implica tanto modificaciones covalentes de
las histonas como uni6n de otras protefnas a la cromatina.

Los tel6meros son secuencias cortas, repetidas, ricas en G, que se

made" at extremo de los cromosomas par acci6n de la telomera.sa28
Como ya se ha descrito, la DNA polimerasa no puede replicar completamente el
extrema de una molecula lineal de DNA de un modo ordinario, y clio ha conducido
al desarrollo de unas secuencias de DNA especialcs lIamadas tel6meros, situadas
en el extremo de los cromosornas eucariotas. Estas secuencias que son simUares

Repllcacl6n del cromosoma 389

 regiOn centrlll del nucleoSOlnll Figura 840 Modelo especulal1vo

=====i~'''d'';'::C::
que muestra cOmo 51! podrfa abrlr
un nudeosoma para pennllir la
repUcacl6n del DNA. Despuk de que
pase la horquilla de replicad6n. el
nucleosoma 51! reensamblarfa. De esle
modo las histonas del mlcleo
pennanecerian en 1000 momento
unidas a1 DNA. A pesar de que segUn eJ
diagrama los v;ejos nucleosomas se
heredan inlaclOS por la helice de DNA
sintelizada sabre la cadena
conduClora. exislen ev;dendas de que
eI nucleosoma se ha heredado inlacto
por cualquiera de las dos hebras
nuevlII caden.as de DNA hermanas de la molecula de DNA.
Asimismo, isle es solamente uno de
185 dos mitlldet de III Ionll cantral del
horquilill dll nuclaosoma", encuentran unidas a una [os muchos modelos diferentes
repllcacion de las moltk:uln hljas de DNA posibles.
El NUClE9S0~SE VUElVE A ENSAMBLAR

R~===================='pronto otro oct,mero de

L hilton.. " un;r' a asIa

~ooo====ti2T========= ~7=1n~~~~}a

entre sf en organismos Ian diferentes como los protozoos, los hongos.las plantas
y los mamrreros, consisten en muchas copias de secuencias cartas, en tandem,
que comienen bloques de G. En humanos esla secuencia es GGGl"A.
EI problema de replicar los extremos de los cromosomas esta resueho de
manera ingeniosa por acci6n de la enzima telomerasa. Esla enzima reconoce la
cadena rica en G de una secuencia telomerica repetida y 1a aJarga en direcci6n 5'
a 3'. En ausencia de una cadena de DNA complemenlario, la telomerasa simeli-
za una copia de la secuencia repclida empleando un molde RNA que es un com-
ponente de la propia cnzima. La cnzima contiene, por lanto, la informaci6n ne-
cesaria para manlener las caracter{sticas de la secuencia telomerica. Despues de
varios cidos de extensi6n por la lelomerasa, se puede completar la replicaci6n
dcl extrema del cromosoma empleando dichas extensiones como molde para la
s{nlesis de la cadena complememaria por 1a DNA polimerasa (Figura 8-41).
Dado que el proceso de rceorte y recuperaci6n de las secuencias del lel6mero
esta equilibrado 0010 aproximadamenle, cada extrema de cromosoma conliene
un numero variable de repeliciones en tandem, que, en general, son de varios
dentos de pares de bases de longilud.

Resumen
Studios In vitro ikl vinu de slmlo SV40 como sistema modelo sugieren que tonto
en las cilultu eucarloUl$ como en las procarloliU la repllcacl6n ikE DNA Sf! inicia
con Ia un16n al DNA th .,,10 DNA Ilelicasa, mediada par una protelna iniciadora
que, d su ve:t, Sf! halla unldn tl1 orlgen de replicad6n. En el orlgen de replicaci6n Sf!
fonna una bUrbUJd de repllau:16n parefecto de dos horquillas de replicncwn que Sf!
dleJdn una de Ia otra. En los eucarlottu superlores, parece que durante Ia fase S los
orlgent!S de replicaci6n vednos Sf! activan en grupos, denominados Ullidades de re
pllcad6n, cuyos orlgenes Sf! hallan Sf!parados unos 100 000 nucle6ruros de media.
Dado qlle Ia horquilla de replicaci6n se desplaza a Imos 50 nllcle6tidos par segun
do, s6Io Sf! necesitarln una hord para la sntesis de DNA de llna unldtul de replica.
cl6n. A traves de una ftlSe S tlplCd de 8 horas se van acrivatuIo las dijere'Jtes ,mldn

390 Capftulo 8: EI nudeo celuJar

 eadeNl paterna Figura 841 Repllcaclon del
J'

.&
/
TTGGGGlTGGGGTIGGGGTTG tel6mero. La figura resume las

I
iMAACCCC .... reacciones implicadas en la fonnaci6n
5" c:ade1lII .eQl!n s,ntel".cl., ,ncomplet.
LA TUOMERASA de las secuencias repetidas ricas en G
se UNE que fonnan los extremos de los
J'

I
I

LA TELOMERASA MARGA
Meece

LOS EXTREMOS 3'

S'

(.Inl''';' de ONA sobre

I
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG
CCCAAC

lelomer.sa con RNA plltr6n unido

aimesi. por
. . aecl6n d. r.
telomer...
cromosomas (leI6meros) de diversos
organismos eucariotas, tal como
sugieren los experimenlos realizados
en el ciliado Tetrallymena. La cadena
un mold. RNA) incomllieta recien sintetizada es

I
J'
TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTrG copiada en la cadena retrasada de la
I AAeece CCeeMe horquilla de replicaci6n (vcase Figura
S'
TERMINACION DE LA CADENA
6-41). Como se ha indicado, la
RETRASADA PaR LA DNA telomerasa es un complejo de prolefna
POUMERASA (,Intes" de
DNA sob un molds DNA)
y RNA que conliene un patron de RNA
para la sfntesis de una secuencia
J'
I lTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG telomerica rica en G. Eslas
I ecce CCCCAACCCCAACCCC repeticiones son GGGlTG en
S'
DNA Tetrallymella, pem son GGGITA en
polimer&$ll humanos 'i Gl_l"" en la levadura
Saccharomycescercllisiae. Se cree que
la cadena relrasada se completa can la
tks de replicaci6n &lgldendo una secue",;la detenrlinada en parte por In estmctllm acci6n de la DNA polimeras..1 Ct. que
de,fU cromatina, slendo las regiones mas
oolldensada$ de In cromatina las ,UUnlit! pona la actividad primasa en una de
tn iniciar ,1" replicaci6n. La correspondencia entre ,midndes de repllcaci6n y las sus subunidndes (vt'!ase Figura 8-35).
bandas que contlenen millonts de ,Jares de bases observadas en los cromosomas
mJt6tk:os ew:arlotclS sugieren que las ,midades de re/'llcacMn ,wdrlan correspo"-
der a dominios estnlct"raws diferentes de ia cromatilla l",erfllsien.
Despues deqm~ ptue In horquilln de repliau:i6n, in estmctllra de ia croltlati'la
Ie recupera mediante In adici6n a las antiguM histonaslleredadas por las lIIolkll-
las de DNA hijas. de mtevas histonns y de otras prote(IIas cromos6micas.. Se prodlU:e
,m bloqlU!O JoroJ de Ja re-repJk:tu:i6n, de naturaJez.a tksconocida. qlle illlpide que se
prothua una nueva repliMCi6n de las regiones ya repliaulas, Ilasta que et cromo-
soma pase por una mitosis; este bJoqueo es necesario para asegurar qlle aula re-
gi6n de DNA se repliqlle IIna soia lJf!Z etl aulafaseS.
La repliau:i6n de los extremos de los cromosonuu se resueJve oon IIna estnlctll'
m renninaJ espedalizada (el reMmeroJ y lma enzima (In retomerasaJ que extie,ule
ala estructura IItltizando un moltk! RNA que es parte de In propia leJomemsn.

Sfntesis y procesamiento del RNA

Hasta aqu! hemos considerado de qu~ forma se organi7..an los cromosomas en
glandes complejos de DNA y proteinas, y romo se duplican estos complejos an-
tes de que una cl!lula se divida. Sin embargo, la principal funci6n de un cromo-
soma es actuar como un molde para la sfntesis de moleculas de RNA, ya que s610
asf la cl!luJa puede utilizar la infomlaci6n gen~rica almacenada en los cromoso-
mas. En Ia cl!lula sc produce una gran cantidad de sintesis de RNA: la velocidad a
1a que se incorporan los nucle6tidos al RNA durante la interfase es 20 veces ma-
yor que la velocidad a la que se incorporan al DNA durante la fase S.
La sfntesis de RNA, tambi~n denominada transcrlpc::16n del DNA, es un pro-
ceso muy selectivo. En la mayona de las cl!luJas de mamffero 5610 se copian a sc-
cuencias de RNA funcionales (RNA mensajero maduro 0 RNA estructural) alredc-
dar del I % de las secuencias de llucle6tidos del DNA. La selccci6n ticnc lugar a
dos niveles, que se abordanin, par ese orden en csta sccci6n: (1) se transcribe
5610 una parte de la secuencia de DNA, produciendo RNA nucleares, y (2) tan s610
una pequena porci6n de las secuencias de nucle6t.idos de los RNA nucleares so-
brevive tOOas las ctapas del proceso de maduraci6n del RNA que preceden a la
exportaci6n de las moleculas de RNA al citoplasma. Comenzaremos describiendo
las RNA polimerasas, las enzimas que catalizan tada la transcripci6n del DNA.

Sfntesls y procesamlento del RNA 391

 lubunidad W de E. coli 11407 .minojcidOII Figura 8-42 Orlgen cornun de las
HINI H.I II I I COOH RNA pollmerasas baclerlanas y
Iev.dur. eucarlolas. La sirnilitud de las

..
HtNl. 1 S COOH secuencias de aminoocidos entre la
subunidad po de la RNA polimerasa de
Drosophif.
E. coli Yla subunidad mayor de la RNA
HtNI.
COOH polimerasa II eucariota sugiere un
origen e\'olutivo cornun para las
enzimas de baclerias y de celulas
eucariolas. Se cree que la subunidad P'
Las RNA polimerasas intercambian subunidades se une al DNA. las secuencias de las
cuando inician cada cadena de RNA29 regiones destacadas como barrll5
verde! tienen una homologia superior
Como se describi6 someramente en el Capitulo 6, la transcripci6n se InICla al70% entre levadura y Drosopllila, y
cuando la molecula de RNA polimerasa se une a una secuencia promotora del m:b del 40% entre Drosoplli/a y coli.
DNA de doble helice. A continuaci6n, en una etapa de iniciaci6n compleja no Una secuencla llnica de fund6n
bien comprendida, las dos cadenas de DNA se separan loca[mente formando un desconocida (de siete aminod.c1dos) se
complejo abierto. En esta elapa la cadena molde queda expuesta, y puede ini- rcpitc 26 vcces en el extremo carboxilo
ciarse la sfntesis del RNA complementario. Entonces la polimerasa empieza a de la subunidad de levadura y m<'is de
dcsplazarse a 10 largo de III cadena molde, extendiendo [a cadena de RNA en crc- 40 veces en la subunidad de
cimiento en la direcci6n 5' a 3' mediante la adici6n secuencial de ribonucle6ti- Drosophila (10 cual se indica aquf
dos trifosfato, hasta que alcan7A1 una sel/at de para rterminnci6/1 0 SlOp) momento mediante e(rcl/los tJl?rdes). Ellias
en el que la cadena de RNA formada y la molecula de RNA polimerasa se separan repcticiones se fosforilan como parle
del DNA. Cada molecula de RNA representa, pues, una copia en cadena senciUa del proceso que inkia la slntesis de
una cadena de RNA en eucariolas
de la secuencia nucleotidica de una cadena de DNA de una regi6n relativamente
(vease Figura 9-30). (De A.L Greenlear
pequei\a del genoma (vease Figura 6-2). Este segmento transcrito de DNA se de- el al., en RNA Polymerases and the
nomina unkind de tmnscripci611. Regulation orTranscription [W.S.
Generalmente las RNA pollmerasas estan fonnadas por multiples cadenas Reznikoffel aI., eds.l, pp. 459-464, New
polipeptfdicas de pesos moleculares de 500 000 daltons 0 maS. Las enzimas de Yorl, Elsevier, 1987.)
bacterias y de eucariOlas est<in relacionadas evolutivamente (Figura 8-42). Debido
a que la enzima bacteriana ha resultado mas facil de estudiar, sus propiedades lubunidad (J
proporcionan una base para la comprensi6n de sus enzimas hom61ogas euca-
riotas. La enzima de . coli contiene 4 subunidades diferentes; a, 13, fl', yo; exislen
\.~
. . . . . . . . . . . . . . . .- lorm. iniei.t de II
dos copias de la subunidad a y una de cada una de las demas. Se ha determinado RNA poIim.r...
la secuencia de amjnoAcidos de cada una de estas subunidades a partir de la de-
tenninaci6n de la secuencia de nucle6lidos de su gen. \
La subunidad sigma (a) de la polimerasa de E. coli juega un papel espedfico
en la iniciaci6n de la transcripci6n: permite a la enzima encontrar las secucncias
promotoras a las que se ha de unir. Despues de que se sintct'iccn alrededor de 8
nucle6tidos de una molecula dc RNA, la subunidad 0 se libera (elapa 4 cn la Fi-
gura 8-43), yen su [ugar se unen a la polimerasa una serie defactores de elonga-
, ...-.... 1 complejo cerrado

figura 8-43 DLagrama esquemalico de las efapa5 de la Inklad6n de la sintesls

de RNA (transcripd6n del DNA) Cltlallzada por La RNA pollmerasa. Las etapas
que se indican se han descrito gracias a esrudios reaiizados sobre la enzima de
, . complejo Ibi.rto

wli. Se muestm una molicula de DNA querontiene una secuencia promotom

para la potimemsa de coli. La enzima [onna en primer lugar un romplejo UNION DE lOS
FACTORES DE +U':U~~~LA (J

cermdo en eI que las doscadenas de DNA pennanecell rompJetametlte ElONGACION

apareadas. En la siguiente elapa,la enzima calaliza la separad6n de las des
cadenas un poco mAs de una vueha de la h8icede DNA. I"onnando un complejo lonna d.- I. RNA
abierro en eI que eI molde queda expuesto para eI inicio de la cadena de RNA. Sin polimerna en
I.se de .longKi6n ':oon~-"-,
embargo Ia polimerasa que Ueva unida Ia subunidad G se romporta como si

esluviera fijada aI promolor. parece incapazde avanzarcon 13 elongaci6n de la
cadena de RNA y [recucntemente reviene aI complejo cerrddo liberando una
cona cadena de RNA. Tal como se indica, la conversi6n a una polimerasa aetiva
""r:c:en.
s' de FlNA
que aiarga la cadena de RNA requiere la Iiberad6n de los raetores de iniciaci6n naclenta
(la SubWlidad G en el caso de la enzima de roll) y gcneralrncllIe supone la
uni6n de otras protefnas que actt1an como [actores de elongaci6n. SINTESIS MASI\lA DE RNA

392 Capftulo 8: EI nucleo celular

ci6n --que son imporlantes para el credmiento y la terminaci6n de la cadena.
Los faclores de elongaci6n incluyen algunas protefnas que, aunque bien carac-
terizadas, tienen fllnciones min no comprendidas completamente. EI inicio de la
transcripci6n es un punto de control imponante mediante el cualla c~lllla pue-
de regular la expresi6n de un gen; por esta rawn se discutira en detalle en el Ca-
pilulo 9.

En las ctHulas eucariotas. el RNA se sintetiza por tres

RNA polimerasas diferentes30
8 mecanismo de la transcripci6n del DNA es simiJar en ClHulas eucariotas y en
celulas procariotas como E. coli, pero la maquinaria es considerablemente mas
compleja en los eucariotas. En eucariOlas tan diversos como levadura y el hom-
bre, por ejemplo, hay tres tipos de RNA polimerasas, cada uno de los cuales es
responsable de la transcripci6n de diferentes grupos de genes. Estas enzimas
-denaminadas RNA polimerasas I, JI Y 111- son estructuralmente similares entre sf
y tienen algunas subunidades en camlin aunque otras subunidades son caracte-
rfslicas de cada una de elias. Cada una de estas enzimas es mas compleja que la
RNA polimerasa de . coli y se cree que estiin fonnadas por 10 a mas cadenas po_
Iipeptfdicas. alra diferencia importante entre la enzima bacleriana y la eucariola
es que, mienlras la enzima bacteriana purificada puede unirse directamente a1
promotor. las polimerasas eucariolas requieren la presencia de proteinas de ini-
ciaci6n adicionales que se unan a1 DNA antes de que la enzima pueda hacerlo. Es
por ello que hasta 1979 no fueron accesibles sistemas con todos los componentes
necesarios para hacer posible el estudio in vitro de los mecanismos de iniciaci6n
en c~lulas eucariotas. Dado que las proteinas de iniciaci6n y sus imeracciones
con las polimerasas estan fntimanlente relacionadas con el control del inicio de
la transcripci6n, sc discutiran en detalle en el Capfrulo 9.
Inicialmeme, las tres RNA polimerasas eucarimas se diferenciaron entre sf
por sus diferencias qufmicas durante la purificaci6n asf como por su sensibilidad
a a-amallililla, una toxina aislada a partir del hongo venenoso Amanita phafloi-
des. La RNA polimerasa I no se ve afectada por la (X-amanilina, la RNA polimerasa
lies muy sensible ala (oxilla y la RNA pollmerasa III es moderadamente sensible.
La scnsibilidad de la sfntesis de RNA ala (X-amanitina es todavfa un metodo habi-
tual para delerminar que polimerasa es la responsable de la transcripci6n de un
determinado gen. Estos estudios indican que lOdos los genes cuyos mRNA scran
traducidos posleriormente a prolefna, son transcritos por la RNA pollmcrasa II.
las otms dos polimerasas transcriben exclusivamente RNA que tiene funciones
cataHticas 0 estructuralcs principal mente como parte de la maquinaria de sfnte-
sis de protefnas: la pollmcrasa I produce los RNA ribos6micos de gran tamaf'io y
la pollmerasa III produce una ciena variedad de RNA de pequef'io tamano y muy
cstables -incluyendo el pequeno RNA ribos6mico 55 y los RNA de transferencia.
Sin embargo, la mayor parte de los RNA pequefios que forman las snRNP, que
seran descritas mcis adelante cuando se considere el procesamiento de RNA. son
lranscritos por la RNA polimerasa II.
Las cclulas de mamffcro contienen tipicamente alrededor de 20 000 a 40000
10~m
moleculas de cada una de las RNA polimerasas, y los resultados de estudios rea-
lizados con celulas en cultivo muestran que las concentraciones de dichas enzi- Figura 8-44 Un ndeleo celular tfplco
mas estan reguladas individual mente de acuerdo con la velocidad de crecimien- v1suallz.ado mediante microscopla
to celular. electr6nlca uliUzando el
procedlmienlo descrlto en la Figura
&.45. Se puede observar c6mo sale del
La RNA polimerasa II transcribe algunas secuencias de DNA nudeo lisado una gran cantidad de
mucho mas frecuenlemente que otras3l cromalina. 5610 la cromalina mM
extema de esta marafla estara
Dado que la RNA polimerasa II es la que sintetiza lodos los precursores de suficientemenle descondensada como
mRNA y por ella detennina qu~ protemas sintetizara una c~lula, la mayor pane para que sea posible observaria con
de la descripci6n que sigue se centrara en sus actividades y en las caracterfsticas detalle a mayor aumento. (Por cones!a
de sus productos. Aunque los experimentos realizados con polimerasas purifica- de Victoria Foe.)

Sfntesis y procesamiento del RNA 393

das y ractores de transcripci6n j" vitro son esenciales para establecer el meca- gol. que cOllliene cjlulll
I b.j. con<:entrloCi6n de SliM
nismo de la transcripci6n, tambien se pueden aprender muchos aspectos del
patr6n de transcripci6n de una celuJa, observando al microscopio electr6nico
I
genes en acci6n, con su RNA poLimerasa ~cazada" en el acto de transcripci6n.
Electronmicrograrfas de secciones ultrafinas de nucleos interfasicos mues
tran acumulos granulares de cromatina (vease Figura 871), pero revelan muy
,
.. det.rgente
.. polieni6n
poco acerca de c6mo son transcritos los genes. Se obtienen imagenes mucho
mas informativas si se rompe el nucleo y se extiende la cromatina sobre una reji-
lIa ponamuestras del microscopio electr6nico (Figuras 8-44 y 8-45). En el punto
mas alejado del nucleo lisado la cromatina esta 10 suficicntemente desconden-
sada como para poder observar las estructuras de fibras de cromatina en cuen I
r6pid.menle .. recubren COil
tas ensartadas que se mostr6 previameme en la Figura 898.
ulle aoluci6n concentrade
Las molt~culas de RNA polimerasa implicadas en la transcripci6n aparecen de llaIfflSl
como partfculas globulares unidas a una molecula de RNA. Habitualmente las reciplenle
partIculas que represeman moleculas de RNA polimerasa II activas se observan de pl611ico
como unidades individuales, sin moleculas vecinas. Esto indica que la mayorfa de ~~I~:::I-Ii"dO celul.r
los genes se transcrihen con poca frecuencia a precursores de mRNA, de modo

lJ::::~;t'0IUCi61l
que la RNA polimerasa finaliza completamente la mmscripci6n antes de que otra de SIC. rosa
molecula la inicie de nuevo. Sin embargo, en ocasiones se ha observado que mu- rejili.
chas moleculas de RNA polimerasa (y sus transcritos de RNA asociados) se hallan 10' nllei.o. Ie 111111 lellilmenle
juntas, rormando un grupo. Estos grupos apareeen sobre los relativameme pocos y I. cromllill' Ie d6lconden
genes que se transcriben con gran frecuencia (Figura 846). La longitud de las
moll!culas de RNA que se unen a estos grupos se incrementa en el sentido de la
I
cenlrifugaci6n
transcripci6n, produciendo un patron caracterfstico. Este patron define el lugar
de inicio y de paro de la RNA polimerasa II para una tmidad transcripcional espe- ~ ~~:$-::s:.....
I raSlO.
cffica (Figura 8-47). ':?:--;,.";.::..";-&."'t celul.rfll
Estudios bioqufmicos han confirmado y arnpLiado los resultados obtenidos

"-
"""-
con la microscopia eleetr6nica, Uegandose a tres conclusiones principales : l .oll>flm:f-ir-'.....
I. las moleculas de RNA polimerasa de celulas eucariotas, como ocurre con
las de los procariotas, inician y terminan la transcripci6n en lugares espeer I
ficos del cromosoma.
2. La longitud media de la molkula de RNA ya lerminada, producida por la
RNA polimerasa II en una unidad de transcripci6n, es de aproximadameme
G rejiJI. con los
nlicleollilldot

7000 nuc1e6tidos, aunque son bastante rrecuenles las moleculas de RNA de

longitudes que oscilan entre 10 000 Y20 000 nude6tidos. Eslas longitudes,
I COnlr lldo y
.-nT"lno sombreldo can
superiores a los 1200 ll11cledlidos de RNA necesarios para codificar una pro- 1 meille. pelldol
t'cfna media de 400 amino<1cidos, ponen de manificSIO que la estructura de
los genes eucariotas es peculiar, particularmente debido a la presencia de obllrv.ci6n de II cromlllnl II
largos intrones, que, como se verl1 mas adelanle. son eliminados posterior- mlcroscoplo .lectr6nico
mente del RNA.
Figura 845 Metodo para exllllUnar la
3. Aunque la uelocidad de crecimielllO de la cadena observada para todos los cromatlna de un mideo celular
RNA es de alrededor de 30 nucle6tidos por segundo, diferentes sitios de mediante m1croscopla electronlca.
Los mldeos son primero lisados. se
eliminan los reslOS celulares y la
cromalina se extiende sobre una rejilla.

F1gw"a .... EItronmkrognffa"

una regi6n de cromatina portadora de
un sen que est' sJendo transcrito a una
[rec:uenda extraordlnariamente
elevada. Se pueden observar muchas
molkulas de RNA polimerasa II con sus
transc:rilOS en crecimienlo.la direcci6n
de la Iranscripci6n es de izquierda a
dereclta {vease Figura 8-471. (Dc V.E.
Foe, L E. Wilkinson yC.O. Laird, Q!{f
9: 131-146, 1976.01976 Cell Press.)

394 Capftulo 8: El mldeo celular

 tr.nserito
Tabla 8-2 Poblacl6n de moleculas de mRNA de una ellula de mamlTero Hplca d,RNA
unldo
dirllCCi6n de despl.zamienlo
Copiaspor N6merode N6mero total de" polin..-rn. y de C:r:imi,nto

cB.uJa de eada secuenclu de de mol6=ulas de III c:adeNi de RNA
secuencia mRNA dHerenles demRNA
demRNA de cada c1ase de cada clase
S'
Clase abundante 12000 x 4 = 48000
Clase intermedia 300 x 500 = 150000
Clase poco frecucnte 15 x 11000 = 165000

La clasificacionlle los mRNA en s610 tres clases discretas es bastante arbitraria; en muchlls ce- It
lulas se observa una distribuci6n mas continua en cuanto a abundancla se refiere. Sin embargo,
en una celula se pueden observar un tOlal de 10000 a 20 000 especles diferentes de milNA, es-
tando la mayor parte de elias presentes a concentraciones muy baJas (de 5 a 15 mollX:ulas par J lfI~al
Iniclo
de

celula). La mayor parte del RNA citoplasmallco es rRNA, y sOlo del 3 al 5% es mRNA. una rela-
ci6n consistenle can la presencia de alrededor de 10 ribosomas par molecula de mRNA. Este DNA de doble Mlic,
tipo particular de teula de mamifero conriene en 5U citoplasma alrededor de 360 000 molku-
las de mRNA. Figun 8-47 Unidad de lTanscr:lpd6n
Ideal.lzada. EI esquema muestra romo
la imagen obtenida con el microscopio
electr6nico (vease Figura 8-46)
inicio para RNA potimerasa II tienen diferentes !reclle"cias de i"iciaci611, demuestra tanto la direcci6n de 1a
de forma que ciertos genes se transcriben con frecuencias mils elevadas transcripcion como loslugares de
que otros. Como se indica en la Tabla 8-2, la mayorfa de los genes que se inicio y final de la unidad.
transcriben s610 forman unas cuantas moleculas de mRNA.

Los precursores de los RNA mensajeros son modificados

covalentemente en sus dos extremos32
En las celuJas eucariotas el mRNA se produce en varias etapas. Las molecuJas de
RNA recien sintetizadas en el nllclco por la RNA polimerasa II se denominan
transcritos primarios: a todos eslos transcritos se les dio el nombre de RNA hete-
rogeneo nuclear (hnRNA) por la gran variabilidad que existfa en el lamano del
RNA, en contraste can el menor tamano y mas uniforme de las secuencias de
RNA que codifican protefnas. En seguida veremos que la mayor parte de esta va-
riabilidad se debe a la presencia de largas secuencias intr6nicas en los lranscri-
lOS primarios. Estos lranscrilos son modificados en sus extremos S' y 3' a medida
que se simetizan, de una forma caraclerfstica que los diferencia c1aramente de
,,"rllmo 5' del transerito mRNA
los producidos por las Olras RNA polimerasas. Estas modilicaciones se utilizarils
S' 3'
posteriormeme en el ciloplasma como seliales de que dichos transcritos han de pppNpNp
ser traducidos a proteinas.
En primer lugar, al extremo S' de la molecula de UNA (el primer extrema sin-
telizado duranle la transcripci6n) se Ie aiiade una capenua (cap) mediante la
adici6n de un nucle6tido G metilado. Esta modificaci6n (capping) ocurre casi
ppNpNp
inmediatamente, despues de que se hayan sintetizado tan 5610 unos 30 nuclc6ti-
dos, y supone la condensaci6n del grupo trifosfato de una molecula de GTP can
un difosfato del extrema 5' del transcrito inicial (Figura 8-48). Posleriormente,
esta caperuza 5' jugara un papel importante en la iniciaci6n de la sfnlesis de
GpppNpNp _
Figura 8-48 Reacclones de rormacl6n de la caperuza en el extremo 5' de los
transcr:ltos de la RNA pollmerasa II. EI exiremo en caperuza final contiene
un nuevo enlace S'-S' entre ci residuo 7-metil G cargado posilivamcnte y el
extremo 5' del transcr!to RNA (vease Figura 6-26). Se cree que al menos
algunas de las enzimas necesarias para este proceso estan unidas a la HNA
e I
CHJ -GpppNpNp
aflaclil un grupo
de metilo.'. b...

e I
polimerasa ll, ya que a los transcritos de las RNA I)olimerasas J y III no se les al'iadir un grupo
anaden caperuzas, y a que esta reacci6n ticne lugar muy poco desp'-!es de de metilo. I. ribo..
iniciarse la transcripci6n de la cadena de RNA. La letra N se utiliza para
representar cualquiera de los cuauo ribonucle6lidos. aunque el nucle6tido CHJ-GpppNpNp
que suele iniciar una cadena de RNA lucie ser una purina (A 0 G). (De A.J. I
CH,
Shatldn, Bioessays 7: 2752n, 1987.0 tCSU Press.)

S[ntesi5 y procesamienlo del RNA 395

 fllCtor de FlguraB-49 SCnteslsdeun lranscrllo
elongaci6n prfmarlo de RNA (un precursor de
RNA polimefasa II I luger de inicio mRNA) por la RNA poUmerasa II. Esle
., del RNA
lugar de union de diagrama se inicia can una polimerasa
/ ... eol.. poll-A DNA que acaba de empezar la smtesis de
una cadena de RNA (elapa 4 de la
tnlnscrito de Figura 8-43). EJ reconocimiento de una

=:::!~.~~~R~N~,"=K=.="='="===F:Ofl=MAC=="'=N=DE==LA=CAPE==R=U=ZA====
senal de poliadenilaci6n provoca el
corte de 13 cadena en crecimiento y 13
poliadenilaci6n. En las levaduras, la
oGPf>~
~

ELONGAclON DE LA CADENA
pollmerasa lermina la sEmesis poco
despu&, perc en las cilulas eucariotas
5' cap superiores frecuenlemente continua la
Iranscripcl6n durante miles de

~CRECI.M'ENTO DE LACA-DENA
l1ucl~lidos mas. Parece que cuando la

o Gppp -----~ CONTINUA, PERO EL TRANSCRITO
RNA polimerasa ha poliadenilado el
COR~CARECE DE CAPERUZA EN EL
_..r-__
transcrito, cambia sus propiedades; ya
EXTREMO 5' Y ES DEGRAOADO no cs capaz de seguir cortando y
RAplDAMENTE poliadcnilando las secuencias
8 postcriores, y tlene una mayor
Gppp ~---___ .3' probabilidad de responder a las
~

-IJ ADlelON DE - ...... /1

/
sef'iales de terminaci6n de la cadena y
de Iiberarse. La hip6tesis mas simple,

l
COLAS POllA -~
que se presenla en la figura, es que
despu~ del corte del transcrilo se
TERMINACION
8 Iibere un factor de elongaci6n (0 mas

~-
s' e.p
-------~,~......-::~~-=-~~:~"
polt A
de uno) de la polimerasa.

prolefnas; ademas, parece que esla caperuza proteje al transcrito de RNA en ere
cimiento de su degradaci6n.
En muchas transcrilos de RNA polimerasa II, el extrema 3' se define no por el
final de la rranscripci6n sino por una segunda modificaci6n, segiin 1a cual el
transcrito en crecimiento cs cortado en un lugar especffico y al extrema 3' cortado
se Ie af'iade una cadena de poll-A mediante 1a acci6n de una polimerasa diferente.
La sei'lal para el corte consiste en la aparici6n en la cadena de RNA de la secuen-
cia AAUAAA localizada entre 10 y 30 nucle6tidos par dclante dellugar de corte,
ademas de unas secuencias poco caracterizadas par detr;1s dcllugar de corte. In-
mediatamente despues del corte, una enzima poUmerasa de poli-A anade de 100
a 200 residuos de acido adenRico (en forma de poli-A) al extremo 3' de la cadena
de RNA completando el transcrlto prlmarlo de RNA. Sin embargo, la polimerasa
continua transcribiendo de forma infructuosa durante cientos 0 miles de nu-
c1e6tidos, haSla que se produce el final de la transcripci6n en alguno de los lu-
gares de terminaci6n posteriores; probablemente, la molecula extra de RNA
generada de esta forma carecera de la caperuza en 5' y sera degradada rapida-
mente (Figura 8-49).
La cola poH-A parece tener varias funciones. (I) Como se describira des-
pues, colabora en la exportaci6n del mRNA maduro desde el nucleo; (2) se cree
que influye en la estabUidad de al menus algunos mRNA en el citoplasma; (3) pa-
reee servir como una senal de reconocimiento para el ribosoma que se requiere
para una traducci6n eficiente del mRNA Esta ultima funci6n -en combinaci6n
con la caperuza 5'- podrfa permitir a un ribosoma determinar si el mRNA esta
intacto antes de consumir energfa y precursores al iniciar su Iraducci6n.
Aunque los transcrilos de la RNA polimerasa II suponen mds de la mitad del
RNA que sitlletiza una celula, como se vera mas adelante estos transcritos son

396 Capftulo 8: El nucleo celular

Tabla 8-3 Datos selecclonados sobre eanlldades de RNA en una e~lula
de mam(rero l(plca

Cantldad conslante
(porcentaje del RNA Porcentaje de la
celular total) s(ntesls de RNA total
Precursores del rRNA nuclear 4 39
J.,
rRNA citoplasm:1tico 71

hnRNA nuclear 7 58
J.,
mRNA citoplasmatico 3
RNA pequenos estables 15 3
(la mayor pane tRNA)
Los datos iocluidos en la labia proceden del an4l.isis de una \fnea celular de fibroblastos de Ta'
tOO (d1ulas L) en cwtNo. Cada celula contiene Z6 pg de RNA (5 x 10" nude6tklos de RNA), de
los cua!el alrededor del 14"" estan loca1izados en el nucleo celular. (As( pues, el nueleo conlie-
ne unas dos veces mu DNA que RNA.) Durante la imerfase. cada minUio polimerizan a RNA
una media de 200 x 10' nucledtidos., 10 cual corresponde aproximadamente a 20 \leres la \leloci
dad de IOfntesilO de DNA durante la fase S. Hay que destacar que aunque la mayor pane del RNA
sinletizado sea hoRN.... la mayor pane se degrada en el nueleo. Como resultado de ello. eI
mRNA produeldo. panir del hnRNA es 5610 una fracci6n minontaria del RNA total de la celula.
(ModiflClldode B.P. Brandhorsl y E.H. McConkey,). MoL BioL 85: 451-563.1974.)

inestables, y por 10 tanto de vida corta. Asf pues, el hnRNA del micleo celular y el
mRNA citoplasmatico, derivado de ~I, 5610 constituyen una pequena parte del
total de RNA de una celula ffabla 8-3). A pesar de que su concenlraci6n es relati-
vamente baja, estas moh~culas de RNA se pueden purificar de forma eficiente
gracias a la presencia de sus largas colas de poH-A. Cuando se hace pasar una
mezda de RNA celular total a traves de una columna cromatogn1fica lIena de
poli dT unido a un soporte s6lido, el apareamiento complementario de las bases
entre T y A haec que las molcculas que presentan colas poH-A queden retenidas
en la columna; posteriormente, estas molecuJas unidas pueden Iiberarse para su
analisis. Este procedimiento se lltiliza ampliamente para separar las 1110leculas
de hnRNA y de mRNA de las de RNA ribos6mico y de RNA de transfercncia, pre-
dominantcs en la celula.
OnieamclHc tiencn caperuzas 5' y colas poH-A los transcritos de la RNA poli.
merasa II. Esto parecc deberse a que tanto la reacci6n de formaci6n de la cape-
ruza como la de adici6n de poli A son llevadas a cabo por enzimas que se unen
selectivamente a la RNA polimerasa II. As( pues, si un gen que normalmente se
transcribe por la polimerasa II, se separa de su promotor mediante metodos de
DNA reeombinanle y se une a un promotor reconocido por la RNA polimerasa [
o por la polimerasa III, los transcritos de RNA producidos por dichas polimerasas
no seran modificados por adici6n de caperuzas 0 poliadenilados. Los requeri-
mien lOS para la formaci6n de la caperuza y para la poliadenilaci6n de los pre-
cursores de los mRNA podrfa explicar par que en los eucariotas eSlos RNA son
sintetizados por un tipo espedfico de RNA poljmerasa.

EI procesamiento del RNA elimina largas secuencias

nucleotfdicas del interior de las moleculas de RNA33
EI descubrimiento cn 19n de los genes imerrumpidos fue completamentc ines-
perado. Estudios previos realizados en bacterias mostraron que sus genes esta-
ban formados por una cadena continua de nucle6tidos, necesarios para codifi-
car 13 secuencia de amino:kidos de una protefna, y no parecfa exislir ninguna

Srnlesis y procesarnienlo del RNA 397

raz6n obvia para que un gen tuviera que estar organizado de Olra manera. Los
primeros indicios de que los genes de c~lulas eucariotas no eran continuos como
los genes bacterianos se produjeron cuando los nuevos m~lOdos que perrnitieron bucl. del il'll'On
comparar con precisi6n las secuencias de DNA y de mRNA se aplicaron a los
mRNA producidos por un adCtlov;m.s humano (un virus DNA de gran tamano).
La regi6n del DNA vfrico responsable de la codificaci6n de estos RNA contenfa cola poli"
secuencias que no se encontraban en los RNA maduros. R~pidamenle se descar-
t6 la posibilidad de que b.;ta fuera una caracteristica propia de los virus, ya que se
encontraron resultado similares en el gen de la tl-g1obina y en el de la ovoalbu.mi-
na de venebrados. Como se ha citado previamente. las secuencias presentes en el
DNA y omitidas en el RNA se conocen como ;mrotles, mientras que las presentes
en ambas moleculas se denominan exOIJe5 (veanse Figuras 8-SO y 8-51).
Antes del descubrimiento de los intrones era un misterio el significado del
hnRNA y su relaci6n con el mRNA. Se conoda desde hada tiempo que la mayor Flgura8-SO Prlmera evidencla de la
parte del RNA sintetizado por la RNA polimerasa II era degradado con rapidez exIstencia de lnlrones en los genes
en el nucleo. Las mol~culas de hnRNA de celulas en cuhivo pueden ser marca- eucarlolas. La evidencia fue aportada
das radiactivamente por exposici6n breve a uridina- 3 J.! y scguidas durante un por la teenica de los "budes R"
largo perfodo de liempo. Este tipo de experimento mostr6 que eltamailO medio II1cdianie la cual al microscopio
de las moltkulas de hnRNA en la poblaci6n marcada decrece con rapidez, desde electr6nico se visualizan complejos de
una media de 7000 nucle6tidos, hasta alcanzar el tamaf\o de las mol~culas de mRNA y DNA apareados. Se purinca
un mRNA extraordinariamente
mRNA citoplasmaticas (una media de 1500 nucle6tidos) despu~s de s610 30 mi
abundante, como el de la li-globina 0
nutos; aproximadamente 31 mismo tiempo, moleculas de RNA marcadas radiac- el de la ovoalbt.imina, a partir de las
tivamente empezaban a abandonar el nucleo como moleculas de mRNA. Sin cl!!lulas especializadas que 10
embargo, tan 5610 el 5% de la masa del hnRNA marcado alcanzaba alguna vez el producen. Cuando esla preparaci6n de
citoplasma; el resto se degradaba en pequenos fragmemos en el !lucleo a 10 lar- mRNA de cadena sencilla se hibrida,
go de un perfodo de una hora. Parecfa un extrailo derToche. EI misterio se hiw en una soluci6n apropiada. con un
aun mayor cuando se supo que a pesar de que las molecuJas de hnRNA se ha- fragmenlo de DNA donado de doble
dan cada vez mas cortas, mantenfan SU caperuza 5' y su cola poli-A en 3'. cadena que cOnliene el gen que
El descubrimiento de los intrones aport6 la explicaci6n de este misterio: el codifica el lORNA, el RNA puede
transcrito primario de RNA es una copia complera del gen, que contiene tanto desplazar una de las cadenas del DNA
las secuencias de los exones como de los intrones, y estas uhimas se eliminan e hibridarse en las regiones en las que
del interior del transcrito de RNA produciendo una molecula de mRNA que co exisla una complementariedad de
secuencia, fomando regiones de
difica directamente una protefna (v~ase Figura 315). Las secuencias codifican-
helice DNA-RNA. las regiones de DNA
tes de RNA de cada extrema de la secuencia de un ex6n se unen con las del ex6n
que no se hibridan con las secuencias
adyacente eliminado las secuencias de intr6n comprendidas entre elias, siguien- de RNA se visualizan daramenle como
do una reacci6n denominada maduracl6n del RNA par corte y empalrne (RNA budes de DNA de doble cadena. Cada
splicing). La maduraci6n del RNA ticne lugar en el m1c1eo, fuera del alcance de uno de estos budes (numerados dell
los ribosomas; el RNA se exporta al citoplasma unicarnentc cuando cl procesa- III 6) corresponden a un intr6n de la
rnicnto ya ha lerminado. sccucncia del gen.
Debido a que muchos genes de mamffero conlienen mucha mas cantidad
de secuencia de intrones que de exones (vease Tabla 8-1, pag. 365). la madura-
ci6n del RNA puede explicar la conversi6n de moleculas de hnRNA muy largas
en moleculas de mRNA citoplasmatico mucho menores.
Antes de discutir la distribuci6n de los intrones en los genes eucariotas y al-
gunas de sus consecuencias para la funci6n celuJar, es necesario explicar de qu~
fonna la maquinaria enzimlitica de la maduraci6n del RNA reconoce y elimina
las secuencias de los intrones.

Los transcritos hnRNA son inmediatamente recubiertos

por prote(nas y snRNJ4
A diferencia de 10 que OCUrTe en las bacterias, en los eucariotas parece que el
RNA reci~n sintefizado se condensa inmediatamente formando una serle de
partIculas ribonucleoproteicas muy pr6ximas. Cada una de elias est~ fonnada
por unos 500 nucle6tidos de RNA recubiertos de un abundante complejo de pro-
tefnas que actua empaquctando y condensando todos los transcritos de RNA en
crecimiento, de una forma que recuerda a los complejos de DNA y proleinas de
los nucleosomas. Estas partfculas hnRNP (de Heterogeneous Nuclear Ribonu

398 CapftuJo 6: EI nucleo eelular

 Figura 8-51 Regl6n transcrlta del gen de la p-g1oblna humana. Se indica la CCCTGTGGAGCCACACCCTAGGGTTGGCCA
secuencia de la cadena de DNA que corresponde a la secuencia de mRNA, ATC'I'ACTCCCAGGAGCAGGGAGGGCAGGAG 5'
can la secuencia correspondiente al transcrilo primario limitada Jlor una CCAGGGCTGGGCATAAAAG'I'CAGGGCAGAG
l(nea de color verdey los nucle61idos de las tres regiones codificantes
(exones) sombreados en amarii/o. Es de destacar que el ex6n I comprende
CCATCTATTGCTT ] ~
una secuencia lfder 5', yque el ex6n 3 comprende una secuencia 3' no
traducida; aunque estas secuencias se hallan en el mRNA no codifican
aminoacidos. Se han recuadrado los nucle6tidos GTy AG, muy conservados,
en el inicio y final de los introncs (vease Figura 853); tambicn se sefiala con
un recuadro ellugar de corte del transcrito primario y la sefial de
poliadenilaci6n cerca del extrema 3' del gen (AATAM, vease Figura 849). .Ji
cleoprotein Particles, particulas riborlucleoproteicas nucleares heterogelleas) re-
sultantes pueden ser purificadas despues de tratar ligeramente los nucleos con
ribonucleasas a concentraciones suficientes para degradar s610 el RNA espacia-
dar que existe entre ellas. Cada partfcula tlene un diametro de unos 20 mn, que
es el doble del de un nucleosoma, y el nudeo proteico, mucho mas complejo y
menos caracterizado, esta formado al menos por ocho prolefnas distintas. A ex-
cepci6n de las histonas, las protefnas que forman este nucleo son las mas ahun-
dantes del nucleo de la celula. A1gunas de elias contienen un dominio de W10S 80
aminoacidos, repetido frecuentemente, y com un a muchas otras protefnas de
uni6n a RNA.
Las partfculas hnRNP suelen distorsionarse por las lecnicas dasicas de pre-
paraci6n de extensiones de cromatina para la observaci6n al microscopio elec-
tr6nico de genes en fase de transcripci6n (vease Figura 8-45). Sin embargo estas
micrograffas revelan la existencia sobre muchos transcritos de RNA de unas par-
tfculas especialmente estables y menos frecuentes, cuya posici6n sugiere que
juegan un papel en la maduraci6n del RNA. ESlas panfculas se generan muy ra-
pidamente sobre secuencias especfficas de RNA -en las uniones intr6n-ex6n 0
cerca de ellas- y, cuando el transcrilO crece, estas particulas se unen en parejas
dando lugar a un complejo mayor que se cree es el espliceosoma (de "splicing",
maduraci6n), que cataliza la maduraci6n del RNA (Figura 852).
AnaIisis bioqufmicos han revelado que en el nucleo se encuentran muchos
complejos de protefnas con pequefias moleculas de RNA (generalmeme RNA de
250 nucle6tidos 0 menos). A estos complejos se les denomina arbitrariamente
RNA VI, U2, ... , V12. Estos complejos conocidos como ribonucleoprote(nas nu-
cleares pequeiias (snRNP, de Small Nuclear RihoNucleoProleins y pronunciado
"snurps") recuerdan a los ribosomas, pues cada uno de ellos contiene un con-
junto de prote(nas que esta acomplejado con una molecula de RNA estahle. Sin
embargo son mucho menores que los ribosomas -250 000 dalrons frente a los
4,5 millones de dallons de un ribosoma- y tienen una relaci6n proteina/RNA
algo superior. A1gunas protefnas se encuentran en difercntes partfculas mientras
que Olras son especfficas de un solo tipo de elias. Este hecho se pudo demostrar
por primera vez en el suero de enfermos de lupus erilomatoso sisremico, enfer-
medad en la que se fabrican anticuerpos dirigidos contra una 0 mas protefnas de
sus snRNP: por ejempl0, se localiz6 un anticuerpo que reconocfa las partfcu.las
snRNP VI, U2, VS Y V4/U6, Yahora sabemos que todas estas partfculas tienen ~ TTr1'C>TlGcAA
una protefna en comun. TGATGTATTTAAATTATTTCTGAATATTTT 3'
Parece que las snRNP individuales reconocen secuencias especfficas del aci ACTAAAAAGGGAA TGTGGGAGGTCAGTGCA
TTTAAAACATAAAGAAATGATGAGCTGTTC
do nucleico mediante la complementariedad de bases RNA-RNA. A1gunas estan
AMCCTTGGGAAAATACACTATATCTIAAA
irnplicadas en la maduraci6n del RNA; se sabe que una de elias esta implicada CTCCATGAAAGAAGGTGAGGCTGCAACCAG
en la reacci6n de corte que genera el extremo 3' de los RNA de histonas rech~n CTAATGCACATTGGCAACAGCCCCTGATGC
sintetizados, mientras que las funciones de las otras es desconocida. La eviden- CTATGCCTTATTCATCCCTCAGAAAAGGAT
cia de que las snRNP participan en la maduraci6n del RNA procede de experi- TCTTGTAGAGGCTTGATTTGCAGGTTAAAG
mentos de procesamiento de RNA in vitro, as( como de analisis de levaduras TTT'TGCTATGCTGTATTTTACAITACTTAT
TGTTTTAGCTGTCCTCATGAl\TGTClllrc
rnutantes en a1guno de los componentes de la snRNP.

Sfntesis y procesamiento del RNA 399

 Figura 8-52 Espllceosomas.
{A} Eloclronmicrografias de cromatlna
descondcnsada mOSlrando grandcs
oomplcjos ribonucleoproteicos
ensamblados en los lugares de corte 5'
y 3 fonnando el espficeosomn. Apanir
de un gen codificante de una protelna
del corion de Drosophila, se estan
produciendo transcrilos RNA, de
modo que se han delcnninado las
posiciones de los lugares de corte
sobre ellranscrilo primario de RNA.
Como se observa en el esquema (8) la
mayor pane de los Iranscritos de RNA
Las secuencias intr6nicas se eliminan de las mol~culas tienen una 0 dos grandcs paniculas
de RNA en forma de lazo35 RNP ccrca de sus eXlremos 5', En la
parte inferior se mucstra un esquema
Los intrones tienen un lamano que oscila desde 80 hasla ml1s de 10000 nucle6li- del gen. Cuando en un transcrito se
dos. A diferencia de los exones, su secuencia de nucle6tidos exacta no parece ser presentan dos part(culas lcfrclilos
importante. Asf pues los intrones han acumulado una gran cantidad de muta- abler/OS de (Bl], tienen un lamano
cianes durante la evaluci6n; en Illuchas casas es posible alterar la mayor parte medio de 25 nm y se presentan en las
de la secuencia de un intr6n sin que la funcianalidad del gen se yea afectada. proxlmidades de los lugares de corte 5'
Todo ella ha lIevado a la idea de que las secuencias inlr6nicas no lienen ninguna y 3' de la pequena secuem:ia intronica
funci6n sino que son "chatarra~ gentH.ica, hip6tesis que se discutir.1 con detalle (228 nucle6tidos), cerea del extremo 5'
al final del capitulo. las linicas secuencias de los intrones que estan muy conser- de los Iranscrilos. Frecuentemenle, los
vadas son las que son necesarias para su eliminaci6n. Asf pues, en cada uno de transcritos mas madums. y mas largos
de los dos genes presentan una
los extremos de un inu6n exislen secuencias consenso que son casi identicas en
parllcula de mayor lamano [cfrcllfos
todos los intrones conocidos, y que no se pueden a1lerar sin afectar gravemenle
wrtlnen (B}I en la region del intr6n.
el proceso de maduraci6n normal del transcrito de RNA. En la Figura 8-53 se
que probablemente es el resullado de
muestran estas secuencias de fronlera dellugar de corte 5' (Iugar dador) y del la asociacKin estable de las dos
lugar de corte 3' (lugar aceptor) de los intrones de eucariotas superiores. las re- partfculas menores y que represenla eI
acciones de corte y posterior empalme se han de realizar can una gran precisi6n, espliceosoma ensamblado. Dado que
ya que un error en un solo nucle6lido haria variar la paula de lectura de la se- en algunas ocasiones (incluyendo el
cuencia del mRNA resultanle, produciendo un mensaje sin sentido. ejemplo mostrado en esta figural el
La via por la que se eliminan las secuencias intronicas de los lranscrilOS pri- proceso de cOrle y eliminacion de los
marios de RNA se ha deducido median Ie estudios in vitro en los cllalcs se prepa- intrones tiene lugar mientras el
ra, mediante la transcripci6n con RNA polimerasa purificada de un fragmenlo extremo 3' de 101 moJecula eSla siendo
de DNA adecuado, una especic unica de RNA que contienc lin lJnico intr6n (vea- tr<lnscrito, probablemenle para que se
se Figura 7-36). Cuando se anaclen esl'aS moleculas de RNA a un cxtraeto eelular. dl! este proceso no es necesaria la
presencia de 10 cola poH-A en el
empieza la maduraci6n a traves de una reaeci6n enzim<1tica en dos etapas, las
extremo 3'. Debido a las condiciones
cuales requieren una incubaci6n prolongada con ATP, la presencia de determi-
ulilizadas para la obtencl6n de la
nadas prolefnas en el eXlraelO, las partfculas snRNP U I, U2, US, Y U4/U6, Yuna cromntina, la mayor parte de las
serie de protefnas adicionales; eslOs componentes se ensamblan formando un protcfnas hnRNP han sido eliminadas
gran complejo ribonucleoproleico, el espliceosoma. La earaeterizaci6n de las de los transcrilos de la micrograffa.
especies de RNA que aparecen como intermediarios durante la reacci6n y de las (Adaplado de Y.N. Osheim. D.L Miller
partfculas snRNP necesarias lIev6 aI descubrimienlO de que el inlr6n se escinde yA.L Beyer. GellU 143-151. 1985. C
en forma de /tao, siguiendo las vfas de maduraci6n que se muestran en las Figu- Cell Press.)
ras 8-54 y 8-55.
Se han descrito algunas funciones individuates para a1gunas de las snRNP.
Por ejemplo snRNP U I se une allugar de corte 5' del inu6n guiado por la com-
plemenlariedad de secuencia del RNA U I con la secuencia de nueve nuc1e6tidos
consenso (v~ase Figura 8-53). Debido a que el RNA es capaz de aetuar como una FIgura 8-53 Secuencia consenso para
~ lugares de corte 5' y3' usados en 18
..euenelll lMCuenei. secuenei. marlurad6n del RNA en los eucariolas
,'"d~.cu""';~"I --,,"'~I";"~I~"C"'--- ;3;~_ superiores. La secuenda indicada
C A G corresponde a la de la cadena de RNA:
5--0 AGGU 0 AGU A AG 0 --- 3' los dinucle6tidos casi invarianle5, GU y
A G A AG, de ambos extremos del intron se
te(:ueocl. conlenSQ 5' para el punto de sllCuencia consenw 3' para han dCSlacado en amarillo (v~ase
lugar de corte 5' ("Iugar dador") r/lmllicllci6n A ellugar de corte 3' ("lugalllCeptor") lambil!n Figura 8-51).

400 Capflulo 8: Elnucleo cclular

 lugar de corte 5' U2 snRNP luger de corte 3' Figun 854 Mecanismo de
U1 snRNP
secuenc(a se<:uenc(a secuencia maduracl6n por corte y empalme del
5'
'-,'ii"".'~'iiii'"~!=:;~==~~~=~;:::;=:::J.'i',diiiel
del inlran exon
3' molecula
RNA. La maduradOn del RNA esla
pretu"Ora
catalizada por el espliceosoma

Y6 demRNA formado poria uniOn de las snRNP VI,

US, U4/U6. etc. EN$AM8lAJE DEL U2, US Y U4/U6 (mostradas como
ESPUCEOSOMA clrculos verdes) y de OlrOS
componentes (no mostrados).
-::::=::" ETAPA 1
Despues del ensamblaje del
FORMACION DEL LAZO
US Y CORTE PaR El LUGAR espliceosoma, la reacdOn tiene lugar
DE COATE S' en dos elapas: en la etapa I un
"-~~'~\:;j.-" -'\- ,'_IioI~
~-"
nucleOtido A especial de Ia secuencia
intr6nica siluado cerca dellugar de
u. cone 3' reacciona con la secuenda de
UO/U.

~
ETAPA2 conedellugar 5', la cual es cortada; el
CORTE POR El LUGAR
DE CORTE 3' Y UNION
eXlremo 5' conado de la secuenda del
DE lOS EXONES inlr6n se une covalentemente a este
nucle6tidoA. fonnando un nucleOtido
ramificado, como se aprecia en la
secuencla del inlrOO libentdo
Figura 8-55. En la etapa 2, el extremo
::::::;:~~~~
~
en forma de I.s.lO lter6
degradado del nUc:1eo1 3'-OH del primer exOn que estaba
expuesto en la primera elapa, se anade
U, "" al inkio del segundo ex6n, cortando la

+ mRNA ~uro
mol~ula por ellugar de cone 3'; las
dos secuencias ex6nicas quedan
S 3' lsecuencia. ,xOOica. unidasl unidas y el intr6n se libera en fonna de
lazo. EJ complejo completo del
espliceosoma sedimenta a 605,10 que
indica que es casltan grande como un
enzima, tanto el RNA como los componentes proteicos del espliceosoma po- ribosoma. Estas reacdones de
dnan ser los responsables de cataJizar eJ corte y la formaci6n de las uniones co- madurad6n tienen lugar en el mlc1eo y
valentes necesarios en la maduraci6n del RNA. producen moleculas de mRNA a partir
de los transcritos primarios de RNA
(moleculas precursoras de los mRNA).
Habitualmente de cada transcrito de RNA se eliminan
muchas secuencias intr6nicas36
Debido a que el espliceosoma parece reconocer fundamentalmente una secuen-
cia consenso que delimita la frontera del intr6n (y estas secuencias consenso son
similares para todas las secuencias de intr6n), ellugar de corle 5' (Iugar dador)
del extrema de un intr6n se puede unir allugar de corte 3' (Jugar aceptor) de Cllal-
quier atro intr6n. Asf pues, cuanda se crea artificialmente una tllolecula de RNA,
con lugarcs dadores y aceptores de diferentes intrones insenados, frecuelllemen. '~-------------\
te el RNA existcnte entre ellos es reconocido por el espliccosoma yeliminado.
A la vista de este resultado, es sorprendenre que los genes de los vertebrados
contengan haSla 50 intrones (vease Tabla 8-1, pag, 365). 5i durante la madura.
oI ""
_
ci6n del RNA se desaparea cllalquiera de los lugares de corte 5' con cualquiera o-p-o
de los 3', podrfan perderse algunas secuencias codificantes del mRNA, can con- I extrema S' de la
secuencias desastrosas. Sin embargo la maquJnaria de maduraci6n del RNA pre- O~o_ / secuencia dellnlr6n
viene, de alguna forma, estos errores, garantizando que cada Iugar de corte 5' ~(l
s610 se aparee con ellugar de corte 3' mas pr6ximo siluado en sentido 5'3' en la ? O-'-Ol~!fl
o-p-o- ~ ~
i,~ ? ""
Flgun 855 Eslruc'UI'1l de la cadena nunlfk:ada de RNA que se fonna
dunnle la maduncl6n del RNA. EJ nucleOtido A mostrado en amarillo en la
~o-r~
figura es el nucleOlido que se destaca en la Figura 8-54. La ramificaci6n se o-~-o- IX
fonna en la primera elapa de la reacciOn de maduradOn iluslrada all{,
cuando el extremo 5' del intron se acopla covalenlemenle a12' -OH de la
6,,)' ?
o-p-o-
, I
ribosa del nucleOtido AIocalizado a unos 30 nucleOtidos del extremo 3' de la I
secuencia dellntron. La cadena ramificada pennanece en ellnlr6n escindido extreme 3' de Ia
. . _---,1r
I)'

yes responsablede su fonna en lazo (veRSe Figura 8-54). sec:uencla del intr6fo

Sentesls y p~lenlo del RNA 401

 trBnscrilo primuio de RNA Figura 8-56 Maduracl6n del
inicio slICuenciB slICuencia paro transcrlto prlmarlo de RNA del gen de

@GPpp-l ,
Al
rD3 ~TD:"~' 6T""'"
7". \f'
02 A2 04 A4
~k D6 A6 07
)
A7
I AAA-OH
3'
la ovoaJbtimlna de gallina. El
esquema muestra la eliminaci6n
ordenada de siete intrones, necesaria
para oblener una moh~cula de mRNA
funcional. Ellugar de corte 5' (lugar
0'
dador) se sel'lala can una 0 y ellugar
L ~8OOO nucleotidos -.J de corte 3' (\ugar aceptor) con una A.

I
SECUENCIAS INTR6NICAS
ELiMINAOAS POR LA
MAOURACI6N DEL RNA

inicio para
I I
()Gppp- AAA-OH mRNA
3'
"
TRAOUCCI6N

H,N -11l1li111- COOH protelnB

ovoBlbuminB

secuencia Uneal del RNA (Figura 8-56). $e desconoce c6mo se produce este apa-
reamiento secuencial de los lugares de corte, aunque se cree que el ensamblaje
del espJiceosoma, ya durante el crecimiento del transcrito de RNA (vease Figura
8-52), juega un papel importante en cuanto a asegurar el apareamienlo correcto
de los lugares de corte. Ademas, existen evidencias de que la conformaci6n tridi-
mensional adoptada por las secuencias de intrones y exones en ellranscrito de
RNA es importante. Sin embargo, se vera en el Capftulo 9 que este patr6n de ma-
duraci6n sencillo 5'-3' puede modificarse por mecanismos de control especiali-
zados que permitirfan a illl gen unico producir diferentes mRNA y de esta forma
diferentes protefnas.

El estudio de la talasemia revela de que forma la maduraci6n

del RNA puede permitir que las protefuas evolucionen!J7
Las lecnicas del DNA recombinante han hecho de los mutantes humanos un re-
curso cada vez mas importame para los estudios geneticos de los mecanismos ce-
lulares. Por ejemplo, existe un grupo de enfermedades geneticas humanas deno-
minadas sl:ndromes de talasemla, que en el individuo afectado producen un nivel
anormalmente bajo de hemoglobina -la prolefna transportadora del oxfgeno en
la sangre. En mas de 50 de estos mulanles se ha delerminado la alteraci6n de la
secuencia del DNA; en una gran parte de ellos se presentan alteraciones en el pa-
tr6n de la maduraci6n del RNA. As!, se ha detectado que un cambio de un nucle6-
tido puede inactivar un lugar de corte. Sorprendentemente, a partir del analisis de
los mRNA producidos en estos individuos mutantes se ha observado que la perdi-
da de un lugar de corte no evita la eliminaci6n de ese intr6n sino que en muchos
casos ellugar de corte complementario se une a un lugar de corte "crfptico" situa-
do en las proximidades; frecuentemente se generan una serie de maduraciones
a1ternativas, de modo que en lugar de producirse una sola protefna se generan
una serie de prOlefnas alleradas (vease Figura 8-57). Otros cambios de un nucle6-
lido crean un nuevo lugar de corte cambiando una secuencia de un intr6n 0 ex6n
en una secuencia consenso de maduraci6n. Estos resultados apoyan la idea de
que en los eucariotas superiores 1a maduraci6n del RNA es un proceso flexible, y
sugieren que las variaciones del patr6n de maduraci6n causadas por mutaciones
al azar podrfan ser una via importante en la evoluci6n de genes y organismos.

402 Capflulo 8 : EI nllcleo celular

 (AI TRANSCRITO PRIMARIO DE LA ~GLDBINA (B) EL CAMBia DE UN NUCLEOTIDO GENERA
DE UN ADULTO NORMAL OTRO LUGAR DE CORTE
ex6n ex6n ex6n

_'''_C',,''oo:2_/~-:::::::: :.0::,,_....,;':. AAAA _A1"_--"'-.-------- -"'-~-

intrones
mRNA con el ex6n 2 meyor
se forma \In mRNA normal e penir de los
tres exones

mRNA con \In ex6n extra insenedo

entre los exones 2 V 3
(C) CAMBia OE UN SOLO NUCLEOTIDO QUE
DESTRUYE UN LUGAR DE CORTE NORMAL
Y PERMITE LA APARICION DE LUGARES
DE COATE cAfPTICOS" ALTERNATIVOS

-,w-...__-:,:- ------------ "--- AAAA (D) CAMBia DE UN NUCLEOTIDO QUE DESTRUYE

UNA SENAL DE POlIADENILACION

verios mANA con \In ex6n 1

_'->W__"'::::::::: ::~:_:WF=!!EE===:J AAAA

BConado 0 elergado

mRNA con \lne rogi6n 3' no trad\lcide enormelmente lerga

-<_:::>::::_~AAAA
mRNA con 01 ox6n 3 alergedo

Probablemente la maduraci6n del RNA catalizada Figura 857 Ejemplos de

por el espliceosoma evolucion6 a partir de mecanismos procesamlento anonnal del
transcrlto primarlo de la pg1oblna en
de automaduraci6n36 humanos con 13talasemla. Ellugar
El descubrimiento del intermediario en lazo en la maduraci6n nuclear de los afectado por la mutad6n se ha
RNA confundi6 inicialmente a los bi610gos moleculares. ;,Por que se utiliza esta senaJado con una cabeza negra de
vfa compleja cuando aparentemente parece mas simple unu los lugares de corte jlecha. Las cajas coloreadas en azul
5' y 3' en una primera etapa, y luego cortar y volver a unir? La respuesta parece oscuro representan los tres exones
normaJes, mostrados previamellte en
encontrarse en la manera como evolucion6 el espliceosoma.
la Figura 8-51, y las Uneascominuas
Como se ha explicado en el Capftulo I, se cree que las primeras celulas utili-
rajas unen los lugares de corte 5' y 3'
zaban moleculas de RNA --en lugar de protefnas- como catalizadores principales utilizados en la madurad6n del
y que almacenaban [a informaci6n genetica en moleculas de RNA --en lugar de transcrito primario de RNA produddo
moleculas de DNA. Posiblemente, en aquellos tiempos las reacciones de corte y por el gen. Las cajas coloreadas de azul
empalme de RNA catalizadas por RNA jugaron un importante papel; aun existen claro indican nuevas secuendas que
algunos intrones que presentan capacidad de autorrecorte -por ejemplo, en [os debido a Ja mutaci6n quedan incluidas
genes nucleares de rRNA de Tetrahymena, en e[ bacteri6fago T4, y en algunos en la mohkula final de mRNA, Hayque
genes mitocondriales y de cloroplaslos. Una secuencia intr6nica con automadu- destacar que cuando una mutaci6n
raci6n se puede identificar en el tubo de ensayo incubando una mo[ecu[a de elimina un Jugar de corte normal.
RNA pura que contenga la secuencia intr6nica y observando la reacci6n de ma- aparecen uno 0 mas lugares de corte
~crfpticos" alternativos, que se
duraci6n; tambien se puede identificar a partir de la propia secuencia del RNA,
aparean con eJ Jugar de corte
dado que una gran parte de esta ha de ser conservada para que al plegarse forme
remanente, como ocurre en (C). (De
una superficie catalftica en ia molecula del RNA. Se pueden diferenciar dos gro-
5.1'1. Orkin en The MoJecular Basis of
pos principales de intrones con capacidad de automaduraci6n. Los intrones del Blood Diseases [G. Stanatoyannopoulos
gmpo I, que inician [a reacci6n de automaduraci6n uniendo un nucle6tido G a et aI. eds.], pp. 106-126. Philadelphia:
la secuencia del intr6n; la G es activada formando e] grupo que rompera el pri- Saunders, 1987.)
mero de los enlaces fosfodiester cortado durante el proceso de maduraci6n (el
enlace del [ugar de corte 5'). En los intrones del grupo Jl el grupo atacante es un
residuo A especialmente reactivo, y se genera un intermediario en lazo. El resto
de los mecanismos de la reacci6n son similares. Se cree que ambos representan
vesligios de mecanismos muy primitivos (Figura 8-58).
AI parecer durante la evoluci6n del proceso de madwaci6n del RNA nuclear, se
ha conservado la vfa de reacci6n utilizada por los intrones de automaduraci6n del
tipo II, siendo reemplazada la funci6n catalftica por un espliceosoma independien-
te. As. [os pequei'ios RNA U1 YU2 podrfan ser, por ejemplo, [os remanentes de las

Sfntesis y procesamiento del RNA 403

 Grupo I Grupo II Figura 8-58 Las dos c1ases oonocidas
de intrOMs de eutOmadurllOi6n de Intrones de automaduraciOn de intrones de aUlomaduracl6n. Los
intrones del grupo I unen un
nucle6tido G libre a un lugar espedfieo
para iniciar el proceso (vease Figura 3-
sllOuencia seeuencia seeuencia 21). Los inlIones del grupo II usan,

5''''_
3' de un e)(6n 5' de un e)(6n 3' de un e)(6n para el mismo prop6sito, un
LI."3' mol6cula de RNA
precursora
'\::_.3' nucle6tido A especialmente reactivo
de la propia secuencia del intr6n. Se
han dibujado los dos mecanismos
resaltando sus similitudes. En ambos
mecanismos participan proteinas que
comribuyen n aeelerar In reacci6n,
pero la eatalisis esta producida por el
G

5'
RNA del intr6n. El mecanismo
intermediario
~_3' utilizado por los intrones del grupo II
..........,
0" 3'
transitodo forma un lazo, recordando la vfa
catalizada p~r el esplieeosoma
I (compararconla Figura 8-54). (DeT.R.
Ceeh, Cel/44: 207210, 1986.@Cell
lam
Press.)

5n 0"
secuencia
intr6nica
escindida
3'
0"

5' +
3'
secuencia de los
e)(Ones unidoB

secuencias catalfticas que originalmente estuvieron presentes en los intrones. Pro-

3'

bablemente al desaparecer las funciones calaliticas de los intrones y pasar al espli-

ceosoma desaparecieron tambien las Iimitaciones a In evoluci6n de las sccuencias
inrr6nicas, permitiendo que muchas de elias evolucionaran rapidamente.

El transporte de los mRNA al citoplasma se retrasa

hasta que la maduraci6n se ha completado 39
Se cree que las moleculas de rnRNA rnaduras son reconocidas por protefnas re-
ceploras del complejo del poro nuclear y transportadas activamente al citoplas-
rna (discutido en el Capftulo 12). Por el comrario, las principales protefnas de las
parlfculas hnRNP y varias de las rnoleculas de procesamiento unidas al RNA es-
tan confinadas en el nucleo, aunque ocasionalmente algunas de elias pasan aJ
citoplasma con el mRNA antes de ser separadas nipidamente y devueltas al nu-
cleo (Figura 8-59).

protelnaB
FIgura 8-59 Transporte de
5' citoplasmlitlcDB moleculas de mRNA a lraw!s de los
de uni6n al RNA poros nucleares. (A) lIustraci6n
esqucmatica del cambio que al parecer
ocurre en las protcfnas unidas a la
molecula de RNA cuando se desplazan
hacia el exterior del nucleo.
(B) Electronmicrografia de una gran
molecula de mRNA producida en una
glandula salival de insecto:
aparentemente, esta molecuia [j1eclla)
ha sido ~cazada" en el momento en
que salfa del micleo al citoplasma.
InrtiCU".'e-.-\.~
RN' A>, __ protein, de (B, de'B.j. Stevens yH. Swift,f. Gel/Bioi
uni6n a poliA 31: 55~ 71-: 1966, ~n.pel1lliso de
copyright de The"Rockeeller ~
IAI 161 200 I'm University Press.)

404 Capftulo 8: El nucleo celular

 Estudios reaHzados en mutantes de levadura sugieren que para los RNA que
contienen intrones este proceso s610 es posible cuando ha finalizado completa-
menle la maduraci6n del RNA. Cuando una mutaci6n crca un defecto en la ma-
quinaria de maduraci6n, los precursores del mRNA no procesados pcrmanecen
en el nucleo, mientras que los mRNA que no necesilan maduraci6n {Io que in-
duye la mayor parle de los mRNA en esta sencilla c~lula eucariotal. son trans-
portados normalmente al citoplasma. Esta observaci6n es consistenle con la
idea de que los RNA son retenidos por los componenles de los espliceosomas,
que at parecer forman grandes agregados en el interior de los nucleos eucario-
las. Estos agregados podrfa.l1 aClUar como "islas de maduraci6n~ (Figura 8-60);
aunque se desconoce c6mo est<tn formados y c6mo funcionan, podrfan ser an<t-
logos alllJ1cleolo, una estructura nuclear mucho mayor en tamano y mas conspi-
cua, y de la que se conoce mejor su organizaci6n y su funci6n.
EI nucleolo es ellugar donde se procesa.l1 las moleculas de RNA ribos6mico
(rRNA) a partir de un precursor de mayor tamano, las cuales se ensamblan en los
ribosomas por uni6n de prolefnas ribosomales. Antes de discutir la estructura Figura 8-60 Poslbles "Islas de
del nuch~olo. es necesario considerar c6mo se sintetizan los precursores de los maduracl6n" (spUcing Islands).
rRNA a partir de los genes de rRNA. Inmunofluorescencia de un nudeo de
fibroblasto humano con un anticuerpo
monoclonal que detecta las paniculas
Los RNA ribos6micos y los RNA de transferencia se sintetizan snRNP imphcadas en la maduraci6n
sobre conjuntos de genes id~nt.icos dispuestos en tandem 40 de los precursores de las molu1as de
Muchas de las protefnas mayoritarias de una c~luJa diferenciada. como por mRNA. Las partfculassnRNP se
ejemplo la hemoglobina de los eritrocilOs 0 la mioglobina de la fibra muscular. presenlan como grandes agregados,
que podrfan actuar como "islas de
son sintetizados a partir de genes que estan presentes en una sola copia par ge-
maduraci6n~. EI anlicuerpo delecta
noma haploide. Estas protefnas son abundantes porque cada una de las muchas prolefnas especilicas que estan
moltx:ulas de mRNA transcritas a partir deJ gen puede ser traducida generando presentes en algunas de las snRNP que
unas 10 mol~culas por minuto. Normalmente csto producira en cada nueva ge- acluan en el espliceosoma. (POl
neraci6n celular mas de 10 000 mol~culas de protefna por molecula de mRNA. cortesfa de N. RingcrlZ.)
Sin embargo, este proceso de amplificaci6n no es posible para la sfntesis de los
RNA que forman los ribosomas, ya que las moleculas de RNA son el producto li-
nal del gen. Para poder construir sus 10 miLIones de ribosomas, cada c~lula euca-
riola superior ha de sintetizar en cada generaci6n celular mas de 10 millOllCS de
capias de cada uno de los tipos de mol~cuJas RNA ribos6micas. De hecho la c~
lula puede producir cantidades adccuadas de eSlos rRNA gracias a que dispone
de multiples copias de los genes rRNA que codifica.l1 RNA ribos6micos.
Induso E. coli necesita siele capias de los genes rRNA para manlener las ne-
cesidades celularcs de ribosomas. las c~lulas humanas contienen alrededor de
200 capias de genes rRNA por genoma haploide, dispersas en pequenos grupos
sabre cinco cromosomas diferentes, mienlras que Xenopus contiene alrededor
de 600 copias en lIll grupo unico situado en un solo cromosoma. En las celulas
cucarioms. las capias multiples de cada uno de los genes de rRNA, alta mente
conservados, se localizan organizadas en tandem en las que cada gen (dc 8000 a
13000 nucle6tidos de longitud. dependiendo del organismo) se encuentra sepa-
rado del adyacente por una secuencia de DNA no transcrita denominada DNA
espaciador, el cual puede variar mucho en cuanlo a lamano y a sccucncia. Como
se ven1 posteriormentc las capias multiples de los genes organizados en tandem
tienden a coevolucionar.
La organizaci6n en tlindem de los genes rRNA es facil de visualizar en pre
paraciones de cromatina extendida. debido a su organizaci6n repetida y a que
son lranscritos con gran frecuencia. Las mol~cuJas de RNA polimerasa y los
transcritos asociados a elias estan tan densamente empaquetados (aproximada-
mente 100 por gen) que los lranscritos se observan situados perpendicularmen-
Ie al eje de la moll!cula de DNA. de forma que cada unidad de transcripci6n pre-
senta eJ aspecto de un "<trbol de navidad" (Figura 8-61). Tal como se ha cit ado
anteriormente (v~ase Figura 8-47), la parte mas cstrecha de dichos "<trboles" co-
TTcsponde aI lugar donde se inicia la transcripci6n, donde los transcritos son
mas cortos. mientras que el Olro extremo de la unidad de transcripci6n del gen

Slntesis y procesamiento del RNA 405

 Figura 8-61 Transcrlpdon de los
genes rRNA organlzados en tandem,
vtsuallzados can el microscoplo
electronlco. En la imagen superior,
a menor aumento, se observa
claramente el patron altemo de genes
en transcripcion activa y de DNA
espaciador no transcrito. AI parecer las
partfculas mayores del extrema 5' de
cada uno de los transcritos de cada
rRNA (imagell illferior) representan el
inicio del ensamblaje del ribosoma; las
moleculas de RNA polimerasa tambil!n
son daramente visibles como series de
puntos a 10 largo del DNA. (Fotograffa
superior de V.E. Foe, Cold Spring
HarborSymp. Quant. Bioi. 42: 723-740,
1976; fotograffa inferior par cortesfa de
Ulrich Scheer.)

rRNA queda elaramente definido por la desaparici6n sdbita de las moleculas de

RNA polimerasa y de sus transcritos,
Los genes rRNA son Iranscriros por la RNA polimerasa I; cada gen produce el
mismo transcrito, En humanos, este transcrito se conoce como rRNA 45$ y tiene
una longitud de 13000 nuele6tidos. Antes de que abandone el ndeleo formando
parte de particulas ribos6micas ensambladas, el rRNA 455 es cortado producien-
do una copia de cada uno de los rRNA 285 (aJrededor de 5000 nucle6tidos), de los
rRNA 185 (aJrededor de 2000 nuele6tidos) y de los rRNA 5,85 (aproximadamente
160 nucle6ridos). AI obtenerse los tres rRNA a partir del mismo transcrit'o se ase-
gura una producci6n equilibrada de eUos, La secuencia remanente de cada trans-
crito primario (unos 6000 nuele6tidos) se degrada en el nddeo (Figura 8-62). 5e
cree que estas secuencias extra podrian jugar un papeltemporal en el ensamblaje
del ribosoma, que se inicia n\pidameme con la uni6n de aJgunas protefnas al
transcrito rRNA 455 en el nLieleo.
Otro conjunto de genes organizados en tandem y separados por DNA espa-
ciador no transcrito es el que codifica el rRNA 55 de la subunidad ribos6mica
grande (el dnico rRNA que se transcribe de forma aislada), Los genes de rRNA 55
s610 tienen 120 pares de nude6tidos de longitud y, como ocurre con un gran nd-

ANA 455 precursor del rANA Figura 8-62 Patron de

s
I-OH
~
procesamlento de la molecula
P"~~~~~~~~;:=::.
I
DEL RNA
I-
13000 nucle6tidos
PAOCE5AMIENTO regiones de 1& sll(:uencia
nucleotldlc& que 5e
degr&dsn
prec::ursora RNA 455 en tres RNA
riboscSmicos separados. Casi la mitad
de las secuencias nudeotfdicas de este
precursor se degradan en el nucleo,
rANA 185
rRN~,85 . . . .'iiRNiiAiiii'.8S.1111!
S' 3' S' 3' ~ 3'

rRNA 55 producido
S' 3' en OlrO lugar

incorporado en Is subunidad incorporlldo en la 5ubunidlld

ribos6mice pllquei'ia ribos6mics grande

406 Capftulo 8: EI m1cleo celular

mero de genes que codifican RNA de pequeno tamano (especialmeme los genes
de tRNA), son transcritos por la RNA pofimerasa 1/1. En el hombre existen alrede-
dar de 2000 genes de rRNA 55 organizados en tandem en un unico grupo situado
lejos de los Olros genes rRNA. 5e desconoce la raz6n de que este tipo de rRNA se
transcriba de forma aislada.

EI nucleolo es una maquina productora de ribosomas 40

La transcripci6n continua de multiples copias genicas asegura lin aporte adecua-
do de moleculas de rRNA, que son rapidameme empaquetadas can las protefnas
ribosomales formando ribosomas. EI empaquetamiento se realiza en el nucleo,
en una estmctura de gran tamano y bien diferenciada denominada el nucleolo.
EI nucleolo contiene grandes bucles de DNA procedentes de varios cromosomas,
cada uno de los cuales contiene uno 0 mas grupos de genes rRNA. Cada uno de
estos grupos se denomina regi6n organizadora nucleolar. Los genes son trans-
critos con gran frecllencia par la RNA polimerasa I. EI inicio del empaquetamien-
to de los rRNA puede obselVarse a1 microscopio electr6nico: el extremo 5' de
cada rranscrito se line a un granulo rico en proteina (vease Figura 8-61). Estos
gninulos, los cuales no se ha obselVado que interaccionen con ninglin otro tipo
de transcrito, represenlan probablemente la primera interacci6n RNA-protein a
que tiene lugar en el nucteolo.
La funci6n biosintetica delnucleolo se puede poner de manifiesto por marca-
je radiactivo mediante pulsos cortos con uridina- 3 H. Despues de vaTios pulsos, se-
parados por intelValos en los que se incuha con un medio no marcado, se pueden
separar los genes rRNA del cromosoma mediante fraccionamiento subcelular, y se
puede conseguir un aislamiento del nucleolo marcado, en forma bastante pura
(Figura 863). Estos experimentos han moslrado que el transcrito de 455 es empa-
quetado formando un gran complejo con proteinas procedentes del citoplasma
donde se sintetizan tadas las prote[nas de la celula. En eSla etapa se incorporan
tanto la mayor parte de las 80 prote[nas que forman el ribosoma como el rRNA 55.
Para el procesamienlo del rRNA 455 y para dirigir el proceso de ensamblaje son
necesarias otras moleculas. Asf pues, el nucleolo contiene otras prolefnas de
uni6n a1 RNA Yciertas partfculas ribonucleoproleicas (incluyendo snRNP U3), las
coales, segl1n parece, colaboran en la construcci6n de los ribosomas. Cuando las
subunidades ribo56micas son exportadas aI citoplasma en su forma definitiva, es-
lOS componentes permanecen en el nucleo. Un componente especialmente nota-
ble de estos complejos es la nucleolina, una protefna de uni6n a RNA, abundante y
bien caraclerizada, que aI parecer 5610 recubre transcritos ribos6rnicos; esta protef-
na se tine can plata, tal como ocurre con el nucleolo.
A medida que se procesa, la molecula de rRNA 455 va perdiendo algo de
RNA y de prolefna y luego se divide fonnando los diferenles prectusores de las

10 cromosomas interftlsicos dascondensados Figura 8-63 EI nucloolo.

contribuyen e Ie formaci6n del nucillolo con Represemaci6n muy esquematica de
sus bucles de DNA proouctores de rRNA
una celula humana, en la que se
muestran las aportaciones a un (mico
gran nucleoiD de los bucles de
crornatina que contienen los genes de
rRNA de 10 cromosomas diferentes.
Los nucleolos purificados resultan

-
ROTURA
MECANICA
muy utiles para los estudios
bioqufmicos de la funci6n nucleolar;
para oblener estos nucleulos, los
bucles de la cromatina se han de
nucleO aislado separar mecanicamente de sus
con bucles
cromos6micoa cromosomas, lal como se muestra en
rotos el dibujo.
envoltura nu~,~,,~.:,::::=:::""
Sfntesis y procesamiento del RNA 407
 Figura 864 Funcl6n del nuclrolo en
la sflltesls de los riboSOffilI5. EI
transcrito rRNA 455 se empaqueta en
bucle de DNA orgllnl~ador nuc;leol,r una gran panJcula ribonucleoproleica
Q8n rRNA
que conliene muchas proteinas
ribos6micas procedentes del
TRANSCRIPClON I prec::oaor
ciloplasma. Mientras permanece en el
nuclrolo, elerlas regiones de esla
~ de rANA 46S
.....

.-------~I partfcula son eliminadas a medida que

-,
se transforma en las subunidades
protei",s
ribosOmil:lls
producidas
M"
c::itoplnm.
~~~~
proleil:a

.."...... .'..
RNA Y prot.i",
_-~
rib0s6micas inmaduras mayor y
menOL Se cree que estas dos
subunidades 5610 a1canzan su forma
funelonal final cuando son
..." "".---..j .etidados.
impbcadol en lransponadas individualmente a
,,~o
NUCl.EOlO tra~ de los poms nucleares hacia eI
ciloplasma celuJar.

N6cuo

CfTOSOL

c:=-
El TRANSPORTE V:::J
LA )
ACTlVActON GENERAN
( RlBOSOMAS FUNCIONAlES

rRNA rANA 5,8S

rlINA 55
185 .RNA 28S

lIUbunidlld S~ subunidlld
40S ~ J.V.t 60S

subunidades ribos6micas: mayor y mellor (Figura 8-64). A los 30 minutos del

pulso de marcaje radiaclivo, emergen del nucleo y aparecen en el ciloplasma ce-
lular las primeras suhunidades ribos6micas pequenas maduras, con su rBNA
185. EI ensamblaje de la subunidad ribos6mica mayor madura, con sus rBNA
285,5,85 Y55, (arda alrededor de una hora en aparccer; por ello, el nucl~olo con
tiene mas subunidades ribosomicas grandes incompletas que subunidades pe-
queiias incomplel8s.
Las ultimas elapas de la maduraci6n ribos6micas s610 se producen cuando
estas subunidades son lJansferidas al ciloplasma. Esle retraso evita que riboso-
mas funcionales puedan tener acceso en el nucleo a las moleculas de hnRNA, 10-
dav{a procesadas de forma incompleta.

EI nucMolo es un subcompartimiento nuclear muy organizado4

A la vista de 10 que se conoce actualmente sabre 1a funci6n del nucl~olo, es posi-
ble explicar pane de su estructura. AI microscopio optico, el gran nuch~olo esfe-
roidal es la estructura mi1s palente del nucleo de una relula no mit6tica. Fue es-
tudiado can delenimiento por los primeros citologos de tal modo que en una
revisi6n aparecida en 1898 ya se pudieron char unas 700 referencias. En la deea-
da de 1940, los cil61ogos habfan demostrado que el nucl~lo contiene elevadas
concentraciones de RNA y de protefnas; pero su funci6n principal en la sfntesis
del RNA ribos6mico y en el ensamblaje de los ribosomas no fue descubiena has-
ta los af\os 60.

408 Capitulo 8: EI nucleo celular

 heterocromatina perifltrica

envoi lura
nuclear

nucleoio

componente -~"
granular

centro
", .."". fibrilar

IAI IB)

AI microscopic electr6nico se pueden observar algunos de los delalles de la Figura 8-65 Electronmlcrograf(a de
organizaci6n nucleolar. A diferencia de los organulos citoplasmati~os, el nucleo- una secclon ullranna de un nucleolo
10 carece de membrana que 10 delimite; en vez de ello, parece estar constituido de un nbroblaslo humano,
por la uni6n especffica que forman entre sf, como una gran malla y de una rna- mostrando sus tres zonas diferentes.
nera aun desconocida. los precursores ribos6micos no lerminados. En una elec- (Al Vista del mlcleo entero. (8) Imagen
a mayor aumento del nucleolo. (Por
tronmicrograffa representativa en el nticleo se pueden distinguir tres regiones
cortes(a de E.G. Jordan y M.J.
parcialmenle diferenciadas (Figura 8-65): (1) un componenre debilmel1le con-
McGovern.)
trastado, el centro fibrilar, que cOl1liene DNA que no esta siendo transcrito acti-
vamente, (2) un comp0rlente fibrilar derlso que contiene moltkulas de RNA en
proceso de transcripci6n; y (3) un componente granular, que contiene precurso-
res de las particulas ribosomales maduras.
EI tamano del nucleolo refleja su actividad, y par ello varIa notablemente en
los diferentes lipos celulares y puede variar dentro de una misma celula. Por
ejemplo, el nucleolo es muy pequeno en ciertas celulas vegetales en estado de
latencia, pero puede ocupar hasta el 25% del volumen nuclear lotal en celulas
que esten produciendo cantidades de protefna anormalmente elevadas. Las di-
ferencias de tamai'io se deben en gran medida a las variaciones del componente
granular, que probablemente esta regulada a nivel de la Iranscripci6n genica ri-
bos6mica: la cromatina cxtendida observada con el microscopio electr6nico
muestra que tanto la fracci6n de genes ribos6micos activados como la velocidad
a la que se transcribe cada gen pueden variar seglin las circunSlancias.

Despu~s de cada mitosis, el nucleolo se ensambla de nuevo

en determinados cromosomas42
EI aspecto del nucleolo cambia espectacularmente durante las distintas fases del
cicio celular. A medida que la celula se aproxima a la mitosis, el nucleolo dismi-
nuye de tamano y luego, euando los cromosomas se condensan y se detiene 10-
talmente la sfntesis de RNA, desaparece: en general las celulas metafasicas no
tienen nucleolo. Cuando se inicia de nuevo la sfntesis de RNA ribos6mico, al fi-
nal de la mitosis (en la lelofase), reaparecen diminutos nucteolos en las localiza-
dones cromos6micas de los genes de RNA ribos6mico (Figura 8-66).
En el hombre, los genes de RNA ribos6mico estan localizados cerca del ex-
tremo de cada uno de los 5 cromosomas distintos que se muestran en la Figura

Sfntesls y procesamlento del RNA 409

8-32 (es decir, en 10 de los 46 cromosomas de una celula diploidel. Por consi
guiente, despues de la mitosis de una celula humana se forman 10 pequei'ios nu (!)
clt~olos aunque rara vez se pueden observar ya que ereeen rapidamente y se fu enYOllllra~
nuc;lear
sionan formando el gran nucleolo tfpico de la celula interfasica (Figura 867).
i.Que sueede con el RNA y con las prolefnas componentes del nuclrolo que
se ha disgregado duranle la mitosis? Parece Que par 10 menos una parle de estos
nucl60lo G preparaci6n
eomponenles qlleda distribuida sobre la superficie de lodos los eromosomas G, de la mitosil
met'afasicos y es Iransportada a los nucleos de las dos eelulas hijas. Cuando, du-
rante la telofase. los cromosomas se deseondensan, estos componentes nucleo- G
lares "viejos" ayudan a restablecer los nuclrolos que aparecen nuevamente.
G
Los cromosomas ocupan territorios discretos
en el nucleo interf~sico.43
(!)
Como acahamos de ver, cuando se forma el nucleolo, determinados genes, loca I
disoeia06n CY ,,,.-
0,-,...
lizados en diferentes cromosomas, se encuentran reunidos. i,Estan las olras par- nllCleolar
'
Ies del cromosoma tam bien ordenadas no-al azar en el nucleo? Est'a pregllnta,
planteada por los cienlificos de finales del siglo diecinueve, todavfa no ha side
respondida salisfacloriameme.
I , ',
..../
:

I met.llI5lI
Exisle un cierto orden en la configuraci6n que siempre tienen los cromoso- ,-,
mas aI finalizar la milosis. Justo antes de Que la celula se divida, los cromosomas , ',
, __I ana''''
son atrafdos hacia cada uno de los dos palos de huso mit6tieo, mediame micrOlu-
bulos unidos a los centromeros; asf pues, los centromeros marcan el camino, y los
brazos distales de los eromosomas (terminados en los tel6merosl 10 siguen des-
@ ,
telo'_

pues. En muchos mlc1eos interf~icos, los cromosomas tienden a retener esla

orientaci6n, denominada orientaci611 RabJ, durante loda la interfase, con sus cen
@'0

Ir6meros dirigidos hacia un polo del nudeo y sus tel6meros dirigidos hacia el polo
opuesto (Figura 8-GSA). En algunos casas, el nudeo esta orientado de forma espe-
reaSOCiaciOn
nucleolar @o.
cffica en la eelula: en el embri6n lemprano de Drosophila, por ejemplo. lodos los
centr6meros se dirigen hacia la cara apical (Figura 8-688). Eslas orienlaciones nu
@ preparaci6n
G, para I.
c1eates fijas podrfan tener imponantes efeclos sabre la polaridad celular, aunque
es diffcil disei'lar experimentos que permilan eslUdiar eSla posibilidad. (j) replitaciOn
del DNA
En muehas celulas los cromosomas no se pueden distingulr entre sf durante
la inlerfase. Por ello, es diffciJ asegurar e6mo estan realmenle dispueslos. Sin
embargo, los eromosomas politenicos giganles de la larva de Drosophila son una
G
exccpci6n de este principio. En este caso, las bandas eromos6mieas se plleden
observar con la suficienle c1aridad como para determinar las posiciones especf
G
ficas de detcrminados genes en los nucleos intactos, mediame secciones 6plicas (;) replitaci6n
y 16cnlcas de reconSlrucci6n. Los resultados de estos analisis sugieren que cl del DNA
conjunto de los eromosomas inlerfasicos no estan muy ordenados: aunque se
t'icnde a mantcner la orienlaci6n Rabl, frecuentemente ocurre que dos eelulas
(;)
aparentemcnte idcnticas presentan distribuciones diferentes de eromosomas. Figura 866 CambJos morfoldglcos
del nucleolo de una celula humana
durante el cicio celular. En este
diagrama 5610 se ha represenlado el
nticleo celular. En muchas celulas
eueariotas \a membrana nuclear se
rompe durante la mitosis, 10 cual se ha
indieado con I(neas discontinuas.

Flgun. 8-67 Fusl6n nucleolar.

Micrografias obtenidas con el
microscopio 6ptico. de fibroblastos
humanos en cultivo. mostrando varias
etapas de la rusi6n de los nucleolos.
(Por cones(a de E.G. Jordan y
J. McGovem.)

410 Capftulo 8: El nucleo celular

 Figura 8-68 Orlenlacl6n polarizada de los cromosomas en las ctHulas VISTA
Interfllslcas del embrl6n temprano de Drosophila. (Al Diagramas de la LATERAL
orieIHaci6n R3bl, con lodos los tel6meros apuntando hada el polo opuesto. En DEL NUCLEO
el embri6n, cada nl1c1eo se alarga, tal como se muestra en 13 figura,
(B) MicrografTa a poco aumento del embri6n de Drosoplli/a en cI estado de
blaslodermo celular. Los cromosomas de cada nl1e1eo interfdsico sc han tei'iido
COli un colorante Iluorescente, Hay que destacar que 1a regi6n mds tei'iida (el
telOmero. centrOmeros
cromocentro). que contiene las regiones cemromericas de cada uno de los
erlvohur. nucle..
cuatro cromosomas (v~se Figura 8-19), esta orientada hacia la superficie
exterior del embri6n y por ello se dirige hada la membrana apical de cada una IAI
de las ct!:lulas. (Por conesfa de John sedat.)

EI analisis de los cromosomas politenicos indica tambien que eada eromo

soma ocupa su propio lerritorio en el nucleo interfasico -es decir. que los dire
rentes eromosomas no estan entremezclados eompletamente (Figura 869).
Otros experimentos han mostrado que los cromosomas no politenieos tambien
tienden a ocupar regiones concretas y restringidas en el nucleo interfasieo. Ex
perimentos de hibridaci6n in sitll con una sonda de DNA apropiada, por ejem-
plo, pueden seguir un solo cromosoma en celulas htbridas de mamffero en culti-
va (Figura 8-70). Parece que la mayor parte del DNA de cada cromosoma ocupa
unicamente una pequefia porci6n del nucleo interfasico, 10 cual sugiere que
cada cromosoma permanece condensado y organizado mientras permite que al
gunas zonas de sU DNA sean aetivas en la sntesis de RNA.

iEstli muy ordenado el micleo?44

EI interior del nudeo no es una mezcla at azar de lodos sus componentes: RNA.
DNA Yprotefnas. Va hemos descrito que el nucleolo esta organizado como una
maquina eficiente de construcci6n de ribosomas. y que aparentemente algunos
grupos de componentes de esplieeosomas estan organizados en islas de madu-
,.,
raci6n del RNA (vease Figura 8-60). EI orden tambien es apreciable al observar
electronmicrograffas de las regiones situadas alrededor de los poras nucleares:
la cromatina que se encucntra unida a la membrana nuclear intema (cromatina
extraordinariamente condensada y por eUo daramente visible en las electronmi-
crograffas) estrt cxcluida de una regi6n considerable de las proximidades yalrede-
dor de los poros nucleares. delimitando una via entre el citoplasma y el nucleo-
plasma (vease Figura 8-71), Ademrts. en algunos casas se ha encontrado que los
paras nucleares estrtn bien organizados en la envoltura nuclear (vcase Figura 8-72).
Figura 8-69 Pareja de imagenes
Este orden podrfa ser el rcflejo de la organizaci6n propia de la lrtmina nuclear a la estereosc:6plcas trld1mellslonales de
que el poro est'rt unido, la dlsposlcl6n de los cromosomas
iExiste en el inrcrior del nucleo un esqueleto, anaJogo al citoesquelcto, sobre polllt!:nlcos de un nticleo senclllo de
el que se organicen los componentes nucleares? Muchas bi610gos cel11lares creen las gllindulas sallvales de Drosoplllla.
La estructura esferica es elnuclt!:olo; In
posici6n de cada cromosoma se
representa por una linea que
recorrerfn el eje del cromosoma. Los
tel6meros tienden a silllarse en la
supcrficie de la envoltura nuclear
opuesta a la zona en la que se situa el
nuclt!:olo. donde se agrupan todos los
centromeros. Los cromosomas de
estos micleos no quedan enmarai'iados
nunea. pero sus pliegues precisos y su
disposici6n respecto a los cromosomas
vecinos varia de un nl1c1eo a otro.
Aparte de esto. los nucleos son
idt!:ntJcos. (Para ser miradas con los
ojos cruzados; por cortesfa de Mark
Hochstrasser y John Sedat.)

Sfntesis y procesamiento del RNA 411

 Flgura8-70 Marcajeselectlvodeun
cromosoma en el m1cleo de una
ctHula de mamfrero en cultlvo,
durante la Inlerfase. En (A) y (8), a la
derecha se mueslra un nodeo
inlerfasico Iibre de restos
ciloplasm~licos, mientras que a la
izquierda se ven cromosomas
mil6ticos procedenles de una segunda
celula. W Resuhados de la hibridad6n
in situ (usando una sonda
nuorescenle) para detectar un
cromosoma humano en una lInea
celular hlbrida hombre-hamster. En
lei (8) se muestra la misma preparaci6n
pero con lodo el DNA marcado con un
segundo colorante fluoresccntc.
(C) Dibujo esqllcmihico del
que sf. La matriz Iluclear 0 (Illdamio se ha definido como e\ material insoluble crQmOSQma humano en el nuclco
que perrnanece en el nucleo despul!s de Lilla serie de elapas bioqufmicas de ex- inlcrfl'lstco mostrado en (Al, a una
lracci6n. Se ha demostrado que algunas de las prote(nas que 10 constituyen unen cscala ligeramellle superior.
secucncias de DNA denominadas regiones SAR 0 MAR (de regiones asociadas a (A y B por conesfa de Joyce A. Kobori
y David R. Cox.)
la matriz (Matrix-Associated Regions) 0 regiones asociadas al andamio (Scaffold-
Associated Regions). $e ha poslulado que estas secuencias de DNA sedan las que
forman la base de los bucles de 105 cromosomas (vease Figura 8-18). Mediante es-
tos ILlgares de uni6n de los cromosomas. la marriz podrla ayudar a ordenar los
cromosomas, localizando genes, y regular la rranscripci6n y replicaci6n del DNA
denlro del nucleo. Sin embargo aun se debate 5i la matriz celular es una estructu
ra presente 0 no en celuJas intactas, debido a que sus componentes eslructuraJes
todavfa no se han podido identificar completamenle.

Resumen
La RNA pollmerasa, elizillla que cataliza In trallscripd6" tiel DNA, es uua molkula
rompleja formadtl por mJlarru cadenas polipeprtdicas. En las dlulas ellcariotas
existe" tres RNA polimerasns dellomiruulas I, II Y Ill, relac:iO'uu/as elJOlutivamente
entre s{ y COil In RNA polimerastl bacterialta, y que presentan algrmas slIb,lllidades
ell cO'",ln, Se cree que despuis tie Inic:iar la transcrlpci611, cada enzima libera "'Ia 0
mm s"b"nidades y se Ime a otms enzimas IIecesarias !Jara el creeimiellto, Ia termi
lIacl611 y la modificaci611 tie in catleml tie RNA.
IA mayor parte del mRNA tie las cellllas se protluce por 1111 proceso complejo
qlle Ie bllela COllin s{lItesis del RNA Ileteragellea II"clear OmRNAj. La RNA polime
rastlll IJratluce el trallscrUo primario ImRNA. Posterlonmmle ,e Ie aflade un lIucle6

Figura 8-71 Electronmkrograffa del

micleo de una dlula de mamffero. Es
de destacar que la cromatina
envolture condensada que rodea la envoltura
nucleer nuclear esta exduida de las regiones
pr6x1mas a los poros nucleates. (Par
.....
nuclur
conesfa de Larry Gerace.)

crometine
condensede

mlcleo

412 Cnpftulo8:Elnucleocellilar
tido especial a su extremo 5' y es cortado y poliadenilado ell su extrema 3'. /lab/-
tunlmente, las molklllas de RNA modlFI.CtUltu estdn sujeras allno 0 nub procesos tie
recorte de las Sf!Cueliclas intT6"icas, ell los eludes estas Sf!Cllencias stm ellml,uulas
del hnRNA. por fUur reacci6n ootaliznda por fUur gran partfcIlIn ribonltcleoproteica
denomlnadn espliceosoma. E" este proa!so de madIlNlcl6", se elimlna Iii mayor
parte de In masa del transcrito primario de RNA, Y se degrada en elmicleo. Como
resultado de ello, lIImque la rasa de produccl6n de ImRNA sllpone tfpicamente Iii
mltad de Iii sflltesls thl RNA rotal, el mRNA prodlleido represellla s610 alretfedor del
3% de In OOlltidad de RNA presellte en ellalquier momento ell In celuln.
A difenmefa de los genes tille eotliflooll proteb,as, transerltos por la RNA poll-
merasa ll, los genes que codifietm III mayor parte tie fos RNA estruetllrafes SOil
trallscritos por las RNA poiimerasas I y llJ. eenerafmente estos genes esufI, presen-
tes en el gelloma ell ,miltiples coplas y esttfll orgmlizados en grupos de gimes e" M,,-
demo La RNA polimerasa III prodllce IIl1a gtlnlll de molkulas de RNA pequenos y es-
tables, elltu las qlle se lJalliin los tRNA y el pequefio RNA 5S del rlbosoma. IA RNA
polimerasa I prodllU la gra" molk,da precllT"Sora de rRNA (RNA 455) qlM co"tle'le
los rRNA mayores. Con Iii exupci6" tie los ribosomas de eloroplastos y mltocon-
drias, tados los ribosomas celllinres se e"samblan ,m el n1tcliolo -lin orgtfnulo in-
tranuclear fonnado alrededor de los genes de rRNA orgallluuJos en Mntiem, que se
'U1Cllentran Telmldos a pesar de estar sitlJados en dlfeTelltes cromosomtu. Figura 872 ElectronmJcrograffa
oblenlda por crlofraclura de la
envoltura nuclear alargada de una
Organizaci6n y evoluci6n del genoma nuclear espora de helecho. se deslaea 10
disposicl6n ordenada en lfneas
paraJelas de los compJejos de poros
Gran pane de la hisloria evoluliva se halla grabada en los genomas de los orga-
nuclearcs. En las envolturas nucleares
nismos aCluales y se puede descifrar a partir de un an:Uisis cuidadoso de sus se- de olras eelulas se han dcscrilO tanto
cuencias de DNA. Hasla el momento se han secuenciado decenas de millones de grupos concenrrados de poros
nucle6tidos y ya podemos empezar a intuiT c6mo han evolucionado durame nucleares como areas
demos de millones de aiios los genes que codifican ciertas proteinas. Los estu- extraordinariamente libres de ellos,
dios sobre cambios ocasionales que ocurren en los cromosomas acluales pro- especialmenle orientados con respeclo
porcionan c1aves adicionales para comprender los mecanismos que se han pro- a Olms estruetums de la celula. (Por
ducido por un cambio evolutivo en el pasado. En esta secci6n se consideranm eones!a de Don H. Nonhcote: de K.
algunos de los principios generales que han surgido a panir de estos estudios de Robens y D. H. Nonhcole. Atlerose.
genetica molecular, haciendo enfasis en la organizaci6n y evoluci6n del genoma Acta7J: 102-120.1971.)
nuclear de los eucariolas superiores.

Los genomas se van ajustando de forma precisa por mutaciones

puntuales y se remodelan radicalmente 0 aumentan de tamaiio
por recombinaci6n gen~tica45
las secuencias de nucle6lidos del DNA se han de replicar con precisi6n. y se han
de conservar. En el Caphulo 6 se explican los elaborados mecanismos de la replj-
cad6n y de la reparaci6n del DNA que penniten que las secuencias de DNA se
hereden con una fidelidad exuaordinaria; s610 cambian al azar aproximadamen-
Ie un par de nucle6tidos por mil cada 200 000 afios. Pero incluso siendo asf, en
una poblaci6n de 10 000 individuos cada subsliluci6n posible de nucle6tidos
ser~ ensayada unas 50 veces en ellranscurso de un mill6n de anos, 10 cua! es un
cono lapso de liempo en relaci6n al de evoluci6n de las especies. La mayor pane
de la variabiJidad creada de esta forma ser~ desvenlajosa para el organismo y en
la poblaci6n sem seleccionada en contra. Por el conlrario, cuando una variame
poco frecuente sea ventajosa seni rapidameme propagada por selecci6n natural.
En consecuencia, puede esperarse que en cualquier especie dada la funci6n de
la mayoria de los genes se in1 optimizando por mutaci6n pumual al aznr y selec-
d6n.
Las mutaciones puntuales son un mecanismo eficienle para el ajuste preciso
del genoma, y los progresos evolutivos a largo plazo han de depender de cam-
bios geneticos mlls radicales. La recombinaci6n genclica provoca grandes re-
ajusles del genoma con una frecuencia sorprendeme: el genoma puede expan-

Orgartizaci6n y evoluci6n del genoma nuclear 413

dirse 0 conlraerse por duplicaci6n 0 deleci6n; SUS diferentes zonas se pueden
translocar de una regi6n a otra generando nuevas combinaciones. Las zonas que
componen los genes -los exones y los elementos reguladores- se pueden met-
dar como si fueran m6dulos independientes generando proteinas que tienen
funciones complelamenle nuevas. Ademas, las capias duplicadas de los genes
tienden a divergir por mUlaciones posteriores y se especializan en funciones su
tilmente difcrenlcs. Poreslos sistemas el genoma puede evolucionar volvicndose
cada vez mas complejo y sofislicado. En un mamffero, por ejemplo. exislen mul-
tiples formas variantes de casi lodos los genes: diferentes genes de aClinas para
los diferentes lipos de celulas contracliles, diferentes genes de opsillas para la
percepci6n de las luces de diferenles colores, diferentes genes de la colagena
para los diferellles tipos de lejidos conjuntivos, etc. La expresi6n de cada gen
esta regulada de acuerdo a sus funciones precisas y especificas. Ademas, la se-
cuenciaci6n del DNA pone de manifiesto que muchos genes comparten segmen
tos modulares parecidos, pero apane de ello. son muy diferentes: se encuentran
can frecuencia motivos de secuencia comunes en proteinas no relacionadas de
otra forma.
La recombinaci6n genelica, proceso en el que un cromosoma intercambia
malerial genetico con otro, es fundamental para crear estas familias de genes y
de segmenlOS genicos. En el CapftuJo 6 se discutieron los mecanismos molecula
res tanlO de la recombinaci6n general como de la recombinaci6n espedfica.
Aqui se consideran1.n algunos de sus efeclos sobre el genoma.

Las secuencias repetidas en tandem de DNA tienden

a permanecer inalteradas46
Habituahnente las duplicaciones genicas se atribuyen a raros accidentes catali-
zados por alguna de las enzimas que median ptocesos recombinanles. Sin em-
bargo, los eucariotas superiores poseen un eficiente sislema enzimatico capaz
de unir los dos exlremos de una molecula de DNA rota, por 10 que tanlO las du-
plicaciones como las inversiones, deleciones y translocaciones de segmenlos de
DNA lambicn pueden ocurrir como consecuencia de una uni6n em\tica de frag
memos de cromosomas que se habran rota, de alguna forma, en mas de un lu-
gar. Cuando varias secuencias duplicadas de DNA se unen cabeza con cola, se
dice que estan repelidas e'l td'idem. Cuando aparece una primera repetici6n en
tandem, se puede eXlender rapidamente a grandes series de repeliciones en 16.n- DNA ropetido en t6ndem
/ \
dem mediante fen6menos de enlrecruzamiento desigual aun entre crornalidas
hermanas, dado que la gran cantidad de secuencias apareables es L11' substrata
ideal para la recombinaci6n general (Figura 8-73). La duplicaci6n de DNA segui-

da de entrecnlzamiento sccucncial desigual produce la amplificacion del DNA,
un proceso que frecuenlemenle contribuye a la formad6n de cancer incremen-
lando el nlimero de copias de cierlos genes {proto-oncogenes} que facilitan la
I ",COM"NA"ON
aparici6n de cancer (veasc Figura 2427).
Los genes repctidos en tandem aumentan y disminuyen de numero debido
a entrecruzamiento desigual (vease Figura 8-73). Por 10 lanlO, podria esperarse
+
que 5610 se mantengall en grandes cantidades par selecci6n natural si las copias
extra son bcneficiosas para el organismo. Ya hemos hablado de los cientos de
genes repelidos en tandem que codifican el precursor mayor del RNA ribos6mi-

Figura 873 Una familla de genes
co; estas copias de genes son necesarias para mantener la demanda de nuevos repetldos organlzados en tltndem
ribosomas de las celulas en credmiento. De manera similar, los vertebrados lie- gana y plerde copias con frecuenda
debldo a procesos de
nen grupos de genes repelidos en IAndem que codifican OlroS RNA estrUClura-
enlreCruzamlenlo deslgual entre los
les, incluyendo el rRNA 55, los snRNA U I YU2, Yalgunos grupos de genes repelj cromosomas hennanos que
dos de las histonas que producen grandes cantidades de las histonas necesarias contlenen los genes. Este fen6meno es
durante cada fase 5. frecuente debido a que las largas
5e podria esperar que en el transcurso de la evoluci6n las secuencias de los regiones de secuencia de DNA
genes que manlienen una disposici6n en t<illdem -y del DNA espaciador no hom610g0 son un buen substrato para
transcrito elllre elias- podrfan derivar de forma especial. AI exislir muchas ca- el proceso de recombinaci6n gen~tica
pias del mismo gen, podrfa existir poca selecci6n contra mutaciones al azar que general (discutido en el Capitulo 6).

414 Capftulo 8; EI nucleo celular

 genes Figura 8-74 Dos procesos que
,---------repetidos---------,
en t~ndem conversi6n contribuyen a mantener iguales entre
11 sf a todas las sec:uenclas de DNA
organlzadas en tandem. (Al El
muteci6n conversi6n continuo incremento y reducci6n del
mlmero de copias genicas en una
organizaci6n en tandem, producidos
expansT6n J conversi6n por la recombinaci6n desigual (vease
I Figura 8-73) ticnde a homogenizar
todas las secuencias genicas asociadas.
contracci6n J conversi6n
. (B) En la conversi6n genies una copia
del gen Bcnia como molde, pasando la
totalidad 0 parte de su sccuencia a una
etc.
I
etc.
segunda copia del gen. En los
eucariotas superiores eSle proceso se
IA) HOMOGENEIZACION POR RECOMBINACION IBI HOMOGENEIZACION POR presenta cllsi exclusivamente entre
OESIGUAL ENTRE CROMOSOMAS HERMANOS CONVERSION Gl:NICA
copias de genes situadas pr6ximas en
cl cromosoma: en los eucariotas
infcriores como hongos, donde se ha
alterasen una 0 algunas de las copias del gen; ademas, muchos de los cambios estudiado con mayor detalle, no esta
rcsrringido a genes pr6ximos.
de nucle6tidos ocurridos en las largas regiones no transcritas podrfan no tener
consecuencias funcionales. Sin embargo, generalmente las secuencias de los ge-
nes repetidos en tandem y sus DNA espaciadores son casi identicos. Se cree que
dos son los mecanismos responsables de este hecho. Primero, fen6menos recu-
rrentes de entrecruzamiento desigual pueden causar la expansion 0 la contrac-
ci6n de las disposiciones en tandem, y simulaciones por ordenador demuestran
que esto tiende a mantener las mismas secuencias (Figura 8-74A). Segundo, la
cOllversi61l genica -proceso por el cual una porci6n de secuencia de DNA cambia
aI copiar una secuencia similar presente en un lugar diferente del genoma, como
se describe en el Capftulo 6 (Figura 8-748)- pllede actllar homogeneizando las
secuencias de DNA relacionadas. Aunque la conversi6n genica no requiere que
los genes esten repetidos en u1ndem, en los eucariotas superiores parece que es
mas frecuente entre aquelJos que se encuencran pr6x:imos.
EI desplazamiento de una copia de un gen dispuesto en tandem hasta otra
localizaci6n cromos6mica 10 protegera de ambas ill.fluencias homogeneizado-
ras. Asf pues, la translocacl6n genica accidental es lIna etapa importante en la
evoluci6n de nuevos genes: permite a la secuencia translocada evolucionar in-
dependientemente, de modo que pueda adquirir lluevas funciones que puedan
beneficiar al organismo.

La evoluci6n de la familia de los genes de la globina muestra

que las duplicaciones al azar contribuyen a la evoluci6n
de los organismos47
Ademas de generar nuevos conjunlos de genes repetidos en tandem, las dupli-
caciones de DNA han jugado un papel general mas importante en la evoluci6n
de nuevas protefnas. La familia de los genes de las globinas proporciona un
buen ejemplo de ello, pues su historia evolutiva ha sido especialmeme estudia-
da. Las inconfundibles hornologfas en cuanto a la secuencia de aminoacidos y a
la eslructura que existe entre los genes aClUales de globina indican que lodos
ellos han de derivar de un gen ancestral cornun a pesar de que algunos de ellos
ocupen ahora localizaciones ampliamente separadas en el genoma de los maml-
feros.
Considerando las diferentes formas de la protelna en organismos pertene-
cientes a diferentes niveles de la escala filogenetica, podemos reconstruir algu-
nos de los fen6menos del pasado que han dado lugar a las diversas formas de
hemogJobina transportadoras de oxfgeno. Una molecula como la hemoglobina
debe necesariamente permitir a los organisrnos pluricelulares que la posean cre-
cer hasta adquirir un gran tamano, puesto que los grandes animales no pueden

Organlzacl6n y evolucl6n del genoma nuclear 415

confiar la oxigenaci6n adecuada de sus lcjidos.exclusivamenle a la difusi6n del la globlna de cadena tinlea une
una moltK:ula da mdgeno
oxfgeno a traves de la superficie corpor'll. A consccuencia de clio sc enCUetllran
moleculas similares a la hemoglobina en lodos los verlebrados y en algunos in-
vertebrados. La molecula lransportadora de oxfgeno m~s primitiva es una cade-
na polipeptfdica de globina de unos 150 aminoacidos, que se encuentra en mu-
chos gusanos marinos, en insectos y en peces primilivos. Sin embargo, la
molecula de hemoglobina de los venebrados superiores esta compuesla por dos
tipos de cadenas de gJobina. Parece que hace unos 500 millones de ailos, duran-
te la evoluci6n de los peces superiores ocurrieron unas mUiaciones y duplicacio-
lugar de uni6n
nes genicas. Estos fen6menos eslablecieron inicialmenle dos genes de g10binas del OJllgeno al
grupo hemo EVOLUCION Of
Iigeramente diferentes, que codificaban las cadenas de hemoglobina ( l y ~ en el UNASEGUNOA
genoma de cada individuo. En los venebrados superiores cada molecula de he- CADENAOE
GLOBINAPOR
moglobina es un complejo de dos cadenas a y dos cadenas ~ (Figura 8-75). Esta OUPLICAC16N
eSlructura es mucho m<is eficiente que una sola molecula de globina. Los cuatro Gl,NICA SEGUIOA
Of MUTAClON
lugares de uni6n al oxfgeno de la molecula aJJ2 interaccionan entre sf. Esla inte-
racci6n provoca un cambio alosterico cooperativo en la molecula cuando capta
y Iibera oxfgeno, que permile a la hemoglobina tomar y Iiberar el oxfgeno con
una eficiencia muy superior a la de la versi6n de cadena unica.
M<is tarde, durante la evoluci6n de los mamfferos, aparentemente el gen de
la cadena j} sufri6 una mUlaci6n y duplicaci6n, dando lugar a una segunda cade-
na dellipo j} que se sintetiza especfficameme en el fetc. La molecula de hemoglo-
bina resullanre tiene una afinidad superior por el oxfgeno que la hemoglobina del
aduJto y, por 10 lanto, colabora en la lransferencie. de oxfgeno desde la madre al
feto. Posteriomlenle, el gen de esla nueva cadena de ripo p mul6 y nuevamenle
se duplic6, produciendo dos nuevos genes, E y y, produciendose la cadena E de
forma mas temprana durante el desarroUo (formando 2) que la cadena y fetal,
que forma ~Y2 (vease Figura 9-52). Aun mas tarde, duranle la evoluci6n de los
globina de euatro cadena. que una
primates, hubo una duplicaci6n de la cadena j}, dando lugar aI gen &de la globina euatlo moltkulas de oxlgeno de
y con el a una forma minoritaria de la hemoglobina (C1;z~) que s610 se encuentra forma cooptK"ativa
en los primales aduJtos (Figura 8-76). Cada uno de eS(Qs genes duplicados se ha
ido modificando por mUlaciones puntuales que afectan a las propledades de la Figura 8-75 Comparacl6n de la
molecula final de la hemoglobina, y por camhios en las regiones reguladoras que estructura de las g10blnas de cadena
determinan el momenlO y el nivel de expresi6n del gen. dnlca yde cuatro cadenas. La globina
EI result ado final de los procesos de dupticaci6n genica que han dado lugar de cuatro cadenas mostrada es la
a la variedad de cadenas de globina se puede ver clararnenle en los genes que hemoglobina, que es un complejo de
surgieron a partir del gen J3 original, los cuales eSlan dispuestos como series de dos cadenas de globlna ex ydos ~. La
secuencias hom61ogas de DNA localizadas a unos 50 000 pares de llucle6tidos globina de cadena sencilla forma, en
una de Olra. En otro cromosoma humano se localiza una agrupaci6n similar algunos invertebrados, un dCmero que
pero para los genes derivados del gen a globina. Dado que los grupos de los ge- se asocia cuando une oxCgeno, 10 que
represcntarfa un intcmlcdiario en la
nes a y ~ de las globinas se encuentran en crornosomas diferentes en aves y ma-
evoluci6n de las globinas de cuatro
mfferos perc en el mismo cromosoma en la rana Xenopus, se cree que el fen6- cadenas.
meno de Iranslocaci6n scpar6 los genes hace aproximadamente 300 millones de
ailos (vease Figura 8-76). Probablemente estas translocaciones comribuyeron a
la estabilizaci6n de los genes duplicados con funciones distintas mediante su
prolecci6n de los procesos homogeneizadores que actlian sobre genes muy pr6-
ximos y de secuencla similar (vease Figura 8-74).
En los conjuntos g6nicos de la a y 13 globina existen varias secuencias de DNA
de la globina duplicadas que no son genes funcionales. Son ejemplos de pseudo-
genes. Tienen una gran semejanza con genes funcionales pero han sido inuliliza-
dos mediante mutaciones que impiden su expresi6n. La exislcncia de dichos
pseudogenes no es sorprendenle, pues no es de esperar que cada dupllcaci6n ge-
nica conduzca aJ desarroUo de un nuevo gen funcional. Ademas, las secuencias
de DNA no funcionaJ no se eliminan rapidameme del DNA, como indica la gran
canlidad de DNA no codificante presente en los genomas de mamfferos, tal como
se ha descrilo previamente.
Cuando se hayan comparado las secuencias de DNA de muchas familias g6-
nicas en muchos animales de complejidad crecieme, podremos conocer una
parte irnportante de nueslra historia evolutiva (vease tambien la Figura 7-4).

416 CapftuJo 8 : EI nucleo celular

 Los genes que codjfjcan nuevas protefnas se pueden crear cromosoma cromo,oml
mediante la recombinaci6n de exones 45 "
,----, 11

EI papel de la duplicaci6n de DNA en la evoluci6n no esta limitado a la gene-

YlriOS
genes (I , fl' , ,
raci6n de grandes familias gcnicas. Tambien puede ser importante en la genera-
ci6n de genes sencillos. La prolefnas codificadas por los genes creados de esta \ \ / I //
fonna pueden ser reconocidos por la presencia de dominios proteicos similarcs
repelidos, los cuales pueden eSlar unidos covalentemente enlrc sf, formando se- '00
ries. Por ejemplo, las inmunoglobulinas (Figura 8-77) y las albuminas, asf como
muchas prolefnas fibrosas (como las colagenas) estan codificadas por genes que
han evolucionado por duplicaciones repetidas- de una secuencia de DNA pri-
mordial.
En genes que han evolucionado de esta manera, y tambicn en muchos OlroS
genes, a menudo ocurre que cada ex6n codifica una unidad proteica plegada in-
dividual, 0 dominio. Se cree que la organizaci6n de las secuencias codificantes
del DNA en fonna de estos exones separados por largos intrones, ha facililado de
forma notable la evoluci6n de nuevas protefnas. Por ejemplo, las duplicaciones
necesarias para fonnar un solo gen codificante de una proteina con dominios re- Agura 8-76 Esquema evolutlyo de las
petidos pueden ocurrir por TOtura y reuni6n del DNA en cualquiera de los largos cadenas de gJobina portadorns de
intrones 0 en cualquier punlo de un ex6n codificante de un dominio proteico oxfgeno en la 5llIlgre de los anlmaJes.
util; si no hubiera intrones, en el gen original s610 podria haber unos cuantos lu- EI esquema haee enfasis en la familia
gares en los cuales un intercambio por recombinaci6n entre moleculas hennanas de las globinas IJ. Una duplicaci6n
de DNA podna duplicar el dominio. Los imrones, al permitir que la duplicaci6n recienle del gen de la cadena yprodujo
tenga lugar potencialmente en mumos puntos en lugar de tan solo unos cuantos, 'f y 't. que son eadenas fetales de tipo
incrementan en gran medida la probabilidad de que ocurra un fen6meno de du- IJ con runciones identicas. En la parte
plicaci6n favorable. superior de la figura se muestran las
localizaciones de los genes de globina
Por csta misma raz6n, la presencia de intrones incrementa en gran medida la cn cl genoma humano.
probabilidad de que un fen6meno de recombinaci6n fortuito genere un hfbrido
funcional a1 unir dos secuencias de DNA inicialmente separadas que codifican
distintos dominios proteicos de forma que ambos dominios se conserven en la
prote(na hfbrida que codifica el nuevo gen (vcase Figura 8-81, por ejemplol. En
. muchas protefnas acluales se pueden ver los resultados esperados de estas re- ndena ~sada

combinaciones (vease Figura 343). Asr, se cree que la gran separaci6n cntre los
exones que codifican dominios individuales en los eucariotas superiores acelera
el proceso por el cuallos fen6menos de recombinaci6n genetica al azar gencran
nuevas proteinas utiles. Esto pod ria ayudar a explicar el exito de la evoluci6n de
estos organismos tan complejos.

La mayorfa de las protefnas se han originado probablemente

a partir de genes altamente fragmentados 48 cadena ligera

El descubrimiento, en 1977, de los genes fragmemados. fue incsperado. Hasta

entonces todos los genes que se habfan analizado con detalle eran genes bacle-
rianos, los cuales no tienen intrones. Las bacterias tampoco lienen mlcleo ni sis- HOOC COOH
temas de membranas intern as, tienen genomas mas pequei'ios que cl de las ce-
Iulas eucariOtas y tradicionalmeme se considera que se parecen a las celulas mas Figura 8-77 Esquema representando
sencillas a partir de las que han derivado las celulas eucariotas. No es sorpren Wla molecula de antlcuerpo
dent'e que la mayona de los bi610gos pensaran inicialmente que los introncs (inmunoglobullna). Esta molecula es
eran un rasgo extrafio y aparecido tardiameme en la linea de los eucariOtas. Sin un complejo de dos cadenas pesadas y
embargo, ahora parece mas probable que los genes fragmemados tengan un ori- dos ligeras. idenlicas enlre sf. eada
gen muy antiguo y que las bact'erias hayan perdido sus intrones despucs de que una de las cadenas pesadas contiene
hayan evolucionado sus protefnas. cuatro dominios similares unidos
covalcnlemcnle. mientras que las
La idea de que los imrones son muy antiguos es compatible con los concep-
cadenas Iigeras contienen dos de estoS
tos actuales de la evolucion proleica mediante recombinaci6n de prueba yerror
dominios. cada dominio est'
de exones que codifican distilltos dominios proteicos. Ademas, se han obtcnido codificado por un ex6n diferente, yse
evidencias del antiguo origen de los inlrones mediante el examen del gen que cree Que todos ellos han evolucionado
codifica la ubicua triosafosfaro isomerasa. La triosafosfato isomerasa desempefia por duplicaciones seriadas a partir de
un papel esencial en el melabolismo de tOOas las celulas, catalizando la inler- un eron ancestral unico.

Organizacl6n y evolucl6n del genoma nuclear 417

 50 IImlno6cidol Figura 676 EI antiguo origen de los
IAI
,
posiel6n de 10. Inlronel en el mlliz
I
r
I genes fragmentados. (A) Comparaci6n
H,N
I eaOH entre la eslmctura de los cxones del
gcn de la triosafosfato isomerasa de las
plantas y de los animales. Las
posicion de 1oI1nt,OnM en 101 Yertebf"ado.
posicioncs de los intrones que son
Id~nlicas en cl mm {grano} y en los
vertebrndos se han marcado con
IBI progenoltl cabezas de fJccha IIerdes. y las que son
1111111111111 diferenles, con cabezas de fJedUl
awles. Dado que se eslima ellicmpo
, de divergencia entre planlas y
animales en mil millones de aoos.los
intrones deben compartir el mismo
eubKteri.. que formeron origen. (8) Esbom de romo puede
los eIoropllltos y
I.. milOCOt"ldti.. haber evolucionado un gen
IIIIIIIIIIIII~
------ I
delerminado. Las secuencias ex6nicas
se muestran en roja y las intr6nicas en

I
gris. El gen i1ustrado codifica una
j I I . I
......
hipotetica prolefna necesaria para

--
todas las celulas. Como la triDsa
fosfato isomerasa, esta protema debe

f. coil
(bacterial
S.CfII'~

A$pergillu.
1.1. lUll
marz yerteb.1IdolI
o haber evolucionado a1canzando su
eslmctura uidimensional final anles
llevadure' I......' (planll.l (animal"' de que los Iinajes de las eubaeterias,
arquebaeterias y eucariolas se
separaran de una celula antecesora
comtln -designada como ~progenote~.
conversi6n entre cl gliceraldehfdo-3 fosfato y la dihjdroxiacetona fosfato -un La linea disconlinua uerde marca los
paso central en In glucolisis y en In gluconeogenesis (vease Figura 2-21 l, Compa- momentos aproximados en que se
rando la secuencia de aminoacidos de esta enzima de varios organismos es posi- produjeron fen6menos de
hie deducir que la enzima cvolucion6 antes de la divergencia de los procariotas y endosimbiosis que dieron lugar a las
los cucariotas, a partir de un ancestro cornun; las secuencias de amino<icidos milocondrias y a los doroplaslos
(veanse pags. 21-22). (A. de W. Gilben,
humanas y bacterianas son identicas en un 46%. Et gen que codifica In cnzima
M. Marchionni y G. McKnight, Cell
tiene 6 intrones en los verlebrados (polio y humano) cinco de los cuales est:!..n 46: 151-154, 1967. CCeIl Press.)
precisamenle en la misma posici6n que en el ma(z. Esto implica que estos cinco
intrQnes estaban prescntes en el gen anles de que se separaran las plantas y los
animales en la genealogfa eueariota, haec un tiempo estimado de 109 afIDs (Figu-
ra 8-78).
En general, los diminutos organismos unicelularcs estan sometidos a una
ruerle presi6n selecliva para reproducirse mediante divisi6n celular a la maxima
velocidad perrnitida por las concentraciones de nutrientes y por el entorno. Por
esto, han de minimizar la cantidad de DNA innecesario que dcben sinletizar en
cada cicio de divisi6n. Para grandes organismos que vivcn de la depredaci6n
-en los que el tamano es una vcntaja- y para los organismos pluricclulares en ge-
neral-en los que las velocidad de divisi6n celuJar est:!.. Iimitada por olres requeri-
mientos- no exisle esta fuerte presi6n selectiva para eliminar el DNA sllperfluo
del genoma_ Este argumento puede ayudar a explicar por qu~ las bacterias han
perdido sus inlTones mientras que los eucariotas los han mantenido. Eslo tam
bi~n expUca por qu~ el hongo pluriceluJar Aspergillus dene cinco intrones en el
gen de la triosafosfato isomerasa rnientras que Saccharomyces, muy simiJar, no
Uene ninguno.
iCulil es el mecanismo por el que se pierden los intrones? La p~rdida preci-
sa de intrones por deleciones al azar de pequeiios fragmentos de DNA debe
ocurrir muy raramente, mientras que la perdida precisa y selectiva de intrones
no es rara en las c~luJas euca.riotas (y posiblemente fue tambi~n rrecuente en los
ancestros de las bacterias aetuales). Mientras que la mayorfa de los venebrados
denen sOia un gen de la insulina. con dos intrones, las ratas poseen un segundo
gen, vecino al anterior, con un 5010 intr6n. Este segundo gen parece surgir me
wante duplicaci6n g~nica, relativamente reciente y con la consiguiente perdida

418 Capitulo 8: EI m1c1eo celular

Tabla 84 Las lres famlllas prlnclpaJes de elementos transponlbles
Genes en el elemento
Estrnctura completo Sistemas de desplazamlento EJemplos
codifica transposasa se desplaza como DNA, ya sea elemento P (Drosophila)
por escisi6n 0 siguiendo la vfa Ae-Os (maiz)
COrias repeticlones invertidas replicativa Tn3 e lSI ( coli)
en cada extremo Tam3 (drag6n)

eodifica una transeriptasa se desplaza vfa un intermediario Copia (DrosoplJilnJ

inversa y se parece a un de RNA producido por el Ty (Ievadura)
repeticiones terminales largas y retrovirus promotor en el LTR THE-I (humanos)
repetidas de forma directa Bsl (mafz)
(LTRO) en los extremos
codifiea una se desplaza vfa un intennediario elemento F (Dro.soplllla)
lnanscriptasainversa de RNA que probablemenle esta LI (humanos)
Poli-A en el extremo 3' del Cin4 (maa)
producido par un promOlor
transcrilO de RNA; a menudo
en el extremo S' esui lruncado vecino

Elitos elementos tlenen una longitud de enlle 2000 y 12000 pares de nucleOtidos: cada familia contiene muchos miembros, de los que en esla
labia se reladoJ1M algunos,
LTR, de long reunlna! repeats.

de uno de sus intrones. Dado que la perdida de imrones requiere la uni6n exacta
de las secuendas de DNA codificanles, se supone que este nuevo gen surgi6 a
partir de una incorporaci6n poco freeuente en el genoma de una copia de DNA
del mRNA del gen apropiado, del cual se habfan eljminado con precisi6n los in-
trones. Actualmente sabemos que los RNA mensajeros se pueden copiar en DNA
a travf!s de la actividad de la lranscriptasa i,wcrsa (vease pag. 303), y se cree que
las enzimas de recombinaci6n podrian permitir ocasionaLmente que estas co-
pias se aparcaran con la secuencia original, la cualluego serfa "corrcgida" a una
forma Iibre de intrones por un proceso de conversi6n g~nica. Esle mecanismo
de perdida de intrones se ha podido demostrar en ellaboralorio empleado las
polentes lecnicas de analisis genetico disponibles en S. cerelJisiae,
Las transcriplasas illversas no se requieren en las vias geneticas mas impor-
tantes, pero son producidas en las celulas por elementos transponibles especffi-
cos (v~ase Tabla 8-4), nsf como por lodos los retrovirus. Como se vera mas ade-
lanle, la produccl6n de copias DNA de fragmentos de genoma mediante
transcripci6n inversa ha contribuido de diferellles formas a la evoluci6n de los
genomas de los organismos superiores.

Una fracci6n mayoritaria del DNA de los eucariotas superiores

est:i form ada por secuencias de nucle6tidos repetidas
y no codificantes49
Los genomas de las clilulas eucariolas no s610 contiencn intrones, sino que lam-
bif!n presentan un gran mimero de copias de otras secuencias de DNA, aparen-
temente no esenciales. que no codifican protefnas. La presencia de estas se-
cuencias repctidas de DNA en los eucariotas superiores se puso de manifiesto en
primer lugar medianle una tecnica de hibridaci6n que mide el numero de copias
genicas. En estc proceso el genoma se rompe mecanicamente en conos frag-
menlOS de DNA de doble helice. de aproximadamente 1000 pares de nucle6ti-
dos, y estos fragmemos se desnaturalizan produdendose cadenas sencillas de
DNA. La velocidad con In cual los fragmemos de DNA de cadena sencilla de la
mezcla se welven a unir fonnando fragmemos de doble hebra, en condiciones
en las que la confonnati6n de la doble b~lice es eSlable, depende de cuanlO
liempo tarde cada fragmento en encontrar una secuencia complemenlaria con
la que aparearse, 10 que a su vez depende de la concentraci6n de los fragmemos

Organizad6n y evoluct6n del genoma nuclear 419

 DNA Figura 879 DNA satellte. Se muestra
ATAAACTATAAACTATAAACT
una secuencia senciUa de DNA satelite
5'~;;=;:'~$~.~,~,~_~,=";~.~.~.~g=t~,~'.~.~.~~:
J'= a ' '4 , 3'
S'
de Drosopllila. Consiste en muchas
repeticiones de una secuencia de siete
TATTTGATATTTGATATTTGA
nude6tidos organizadas en serie, y se
presentan en miUones de copias por
genoma haploide de Drosophila.
adecuados en la mezcla. Generalmente esta reacci6n es muy lema. Por ejemplo,
el genoma haploide de una c~lula de mamIfero formam. aproximadamente 6 mi-
llones de fragmentos de 1000 nucle6tidos cada uno; cualquier fragmento cuya
secuencia se halle en una sola copia tendra que colisionar al azar con 6 miJIones
de cadenas no compJememarias para encontrar la suya.
Cuando el DNA de una celula humana se analiza de esta forma en condicio-
nes que requieran un emparejamienlo perfecto (condiciones de elevada severi-
dad, vease Figura 7-17), alrededor del 70 % de las hebras de DNA se aparean tan
lentamente como se podr(a esperar para una gran colecci6n de fragmcnlos de
secuencia unica (no repetida). requiriendo varios dfas para un apareamiento
completo. Pero el 30% rest ante de las hebras se unen mucho mas rapidamente.
Est'as hebras contienen secuencias que estan repetidas much as veces en el geno-
rna, y por 10 tanto colisionan con una hebra complemenlaria de una forma rela-
tivamente rei-pida. La mayorfa de estas secuencias de DNA altamente repetidas
no codifican prOle(nas. y son de dos tipos: aproximadamcnte una tercera parte
son DNA slllelites repetidos en tandem, de los que trataremos a continuaci6n. y
el resto son DNA repetidos illtercalados. La mayorfa de estas tiltimas secuencias
de DNA derivan de unas cuantas secuencias de DNA transponibles que se han
multiplicado hasta dar lugar a un alto numero de copias en el genoma humano.

Las secuencias de DNA satl!lite no tienen

ninguna funci6n conocida59
Nonnalmente. las hebras de DNA que en un experimento tipo como el que se
acaba de describir forman doble hebra mas rapidamente son repeticiones en
tandem muy largas de una secuencia de nuc1e6tidos carta (Figura 8-79). La uni-
dad repeliliva de una secuencia de este tipo puede estar compuesta de tan 5610
uno 0 dos nucle6tidos; sin embargo, muchas de las repeliciones son largas, yen
mamfferos estan formadas tfpicamente por variantes de una corta secuencia or-
ganizada en repeticiones de unos cuantos centenares de nude6tidos. Estas re-
peticiones en tandem de una secuencia senci11a se denominan DNA satelites de-
bide a que las primeras secuendas de este tipo que fuerOll descubiertas tenian
una proporci6n poco habitual de nucle6tidos, 10 que hizo posible su aislamiento
del grueso del DNA celular como un componente minoritario (0 "sattmte"). Ge-
neralmente las secuencias de DNA sat~lite no se transcriben y muy a menudo
estan localizadas en la helerocromatina asociada con las regiones centromericas
de los cromosomas. En algunos mantfferos, un solo tipo de secuencia satelite
constituye el 10% 0 mas del DNA, e incluso puede Uegar a ocupar un braze eOle-
ro de un cromosoma. de tal modo que la celula contiene mUiones de copias de la
secuencia repetida basica.
Parece que las secuencias sat~Lite de DNA han cambiado en el curso de la
evoluci6n de una fonna extraordinariamente rapida, e incluse han cambiado
sus posiciones en los cromosomas. Por ejemplo, cuando se comparan dos cro
mosomas mit6ticos hom610gos de cualquier humano, algunas de las secuencias
de DNA satelite se encuentran dispuestas de manera notablemente diferente en
los dos cromosomas. Ademas, en contraste con el alto grado de conservaci6n de
las sccuencias de DNA de cualquier parte del genoma, general mente existen
marcadas diferencias en las secuencias del DNA sat~lite de dos especies Intima-
mente relacionadas. Todavfa no se ha encontrado ninguna funci6n para las se-
cuencias de DNA satelite: por elmomento, los experimentos disenados para de-
moslrar que estas secuencias participan en el aparcamiento de cromosomas 0
en la organizaci6n nuclear no han conseguido revelar ningun tipo de evidencia

420 Cap((ulo 8: EI nucleo celular

 en este sentido. Par 10 tanto se ha sugerido que estas secuencias repetidas son
una forma extrema de secuencias "de DNA egofsta", cuyas propiedades asegu-
ran su propia rctcnci6n en el genoma pero que no hacen nada para ayudar a la
supervivencia de las clilulas que los contienen. Otras secuencias que habilual-
mente se consideran como egofslas son los elementos rrallspollibles, que expli-
camos a conlinuaci6n.

La evoluci6n de los genomas se ha acelerado mediante al menos

tres tipos de elementos transponibles:a
Generalmente los genomas contienen muchas variedades de elementos trans-
ponlbles. Estos segmentos de DNA IUeron descritos por primera va en el mafz,
y varios de ellos han sido secuenciados y caracterizados. Los elementos trans-
ponibles de eucariotas se han estudiado muy ampliamente en Drosophila, don-
de se conacen mAs de 30 variedades, que oscilan entre 2000 y 10 000 pares de
nucle6tidos de longitud y est<1n presentes en mimero de entre 5 y JO copias por
cl:lula diploide.
Se pueden distinguir a) menos tres grandes c1ases de elementos transponi-
bles en funci6n de las peculiaridades de organizaci6n de su secuencia (Tabla
84). Algunos elementos se desplazan de un lugar a ouo entre cromosomas, en
forma de DNA, mientras que muchos otros se mueven via un intennediario de
RNA, como se describe en el CapItulo 6. En cualquier casa se pueden multiplicar
y extender desde un lugar de un genoma a multitud de otros puntos, compor-
t<indose algunas veces como parAsitos perjudiciales para la salud.
Parece que los elementos transponibles constituyen al menos ellO% de los
genomas de los eucariotas superiores. Aunque la mayoria de estos elementos se
desplazan s610 muy raramente, el movimiento de otros elementos tiene un im-
portante efecto sabre la variabilidad de las especies. Por ejemplo. m<1s de la mi-
tad de las mutaciones espont<1neas examinadas en Drosophila son debidas a la
inserci6n de un elemento transponible en 0 cerca del gen mu(ado.
Las rnutaciones pueden ocurrir cuando un elemento se inserta en Ull gen a
cuando se des plaza a cualquier O(ro lugar. Todos los elemelllos Iransponibles
conocidos provocan una "duplicaci6n especffica de lugar~ corta. a consccuencia
de su propio mecanismo de inserci6n (vease Figura 670); general mente cuando
los elementos lransponibles salen, dejan parte de est'a duplicaci6n -a menudo
acompai\ado de olros cambios locales en la secuencia (Figura 880). ASI, un ele
menlO transponible elllra y sale de los cromosomas, provocando una varicclad
de adiciones y deleciones de secuencias cortas de nuc1e6t'idos.
Los elementos transponibles tambien contribuyen a la diversidad del geno
rna de otro modo. Cuando dos elementos transponibles que son reconocidos
par la misma enzima de recombinaci6n especffica de lugar (rrcl/Isposasa), se in-
tegran en puntos vecinos del cromosoma, el DNA situado entre ellos puede ser
un substrato para la transposici6n de la transposasa. Ello proporciona una vfa Figura 880 Algunos camblos
particularmente efectiva para la duplicaci6n y barajado de los exOlJes (exoll producldos en el DNA cromos6mJco
por los elementos transponlbles. La
inserci6n de los elementos
elemenlO transponibles siempre provoca una
eromosome trensponible pequei'la duplicad6n de la secuencia
123456789 .. ABCDEF
dellugar de inserci6n. de entre 3 a 12

! INSEROON DEL ELEMENTO TRANSPONIBLE

EN UN NUEVO LUGAR DEL CAOMOSOMA,
123458ABCOEF58789
pares de bases. dependiendo del
elemento transponible. Las enzimas de
recombinaci6n especifica de lugar
~ I asociadas con el elemento

..,....
duplicaci6n de Ie MCOIIncie CAMBIOS DE SECUENClA PROVOCAOOS
del h.oger de inserei6n POR EL ELEMENTO TRANSPONIBLE transponible pueden produdr su
eliminaci6n del cromosoma. proceso
123458A58789 123456511789 1234566556789 1258789 en el que frecuentemente no se
i i i
0 0 0
recupera la secuencia del DNA
-=i~ Incomplete del ncl-.i6n preciu esclsiOn con MCuencie etei.iQn eon cromos6mico original. como se
elemento Irenlj)OOiblll dejendo .. duplicaci60 elllfll in\/enidll delfleiOn muestra en los roatro eje:mplos.

Organlzacl6n yevolucl6n del genoma nuclear 421

.1
 elemenlos trens nibles Figura 881 Ejemplo de baraJado de
e~6n 1A
exones que puede estu provocado
e~6n 2A e~6n 3A
/ por los elementos transponlbles.
GEN A Que conUene dos elemenlOs Cualldo ocurre que dos elementos del
Irensponibl8ll slmillr8ll en loslntron8ll
mislnO tipo (DNA raja) se insertan uno
le,min.les repetidOll
ESOSION ANOMAlA DEL EXON 2A POR UNA
cerca del otro en el cromosoma, los
TRANSPOSASA QUE RECONOCE LOS mecanismos de Iransposici6n pueden
TERMINALES REPETlDOS usar los extremos de dos elememos

fregmento
del GEN A .....+--t'f \ /
uOn 2A e~On 18 ex6n 28 e~6n 38

lNSERClON EN EL INTERIOR DEL GEN 8

~1~E'~I:
diferenles {en lugar de los dos
extremos del mismo elemenlol y de
esla forma se desplazara el DNA que
habra entre ellos a un nuevo sitio del
cromosoma. Dado que los intrones
e~On 18 e~6n 28 e~On 2A ex6n 3B
son relalivamente m!s largos que los
/ exones. es frecuente la inserd6n de un
GEN B con un
e~On eXlr.
nuevo ex6n en el interior de un intron
preexistenle.

shuffling), por 10 que estos elementos pueden ayudar a crear nuevas genes (Fi-
gura 8-81).

Los elementos transponibles afectan frecuentemente

ala regulaci6n g~nicaS:
Se ha observado que, can frecuenda. las redistribudones de las secuendas de
DNA provocadas par los elementos lransponibles alteran el momenta, el nivel, a
el patr6n espadal de expresi6n de los genes cercanos. sin afectar 13 secuenda de
la proterna 0 del RNA que codifica el gen. Eslo puede cambiar un aspecto sulil

del desarrollo del animal planta. como la forma de un ojo de una flor. Podrfa
esperarse que la mayorfa de estos cambios en la regulad6n genica fueran perju-
didales para un organismo, pero algunos de eUos podrian aportar nuevas bene-
fidos y de esta ma.l1era se extenderian en la poblaci6n por selecd6n natural.
Los ereclos sobre la regulaci6n genica son comunes, en parte, debido a que
el movimiento de un elemento Iransponible suele arrastrar con el nuevas se-
cuencias que aCllIan como lugares de uni6n para protefnas de uni6n a DNA es-
pedficas de secuencia. incluyendo lransposasas y las protefnas que regulan In
transcripci6n del DNA del clemen to transponible. Por 10 tanto, estas secuencias
pueden actuar como sccuencias reguJadoras denominadas Increme.l1tadores 0
actlvadores (enhancers) (vease pag. 451), y afectar la uanscripci6n de genes 10-
Caliz.1dos en las proximidades. Frecuentemente est'Os efectns son la causa de la
evoluci6n de las celulas cancerosas, en las que se pueden crear oncogenes por la
transposici6n de tales secuencias reguladoras en las proximidades de un proto
oncogen, como se describirA en el Capftulo 24.
La organizaci6n de los genomas de los eucariota superiores, can largas se-
cuencias de DNA no codincanle intercaladas can secuencias comparativamente
cortas de DNA codificante, proporciona un c6modo ~campo de jucgo" para 1a
integraci6n y supresi6n de secuencias de DNA m6viles. Dado que la transcrip-
ci6n genica pucde estar regulada desde dislancias de decenas 0 miles de pares
de nucle6lidos de un promolor, pod ria esperarse que muchos de los cambios
resuhanles en el genoma arectaran a Ja expresi6n genica; par cl conlrario, cabe
esperar que relativamcnte pocos cambios rompieran los conos exones que con-
tienen las secuencias codificantcs.
tEste gran exceso de DNA no codificante de los eucariota superiores puede
habcrse vista favorecido par la selecci6n durante la evoluci6n a consecucncia de
Ja fJexibilidad reguJadora que proportiona a los organismos que presentan una
gran variedad de elementos lransponibles? Lo que se conoce sobre los sistemas
reguladores que controla.l1 los genes de los orga.l1ismos eucariotas superiores es
consistente con esta posibilidad. Al parecer Jos amplificadores, como los exones.

422 Capftulo 8: EI nuclen celular

acnian como m6dulos direrentes; la aClividad de un gen depende de la suma de
influencias recibidas por su promolOr a partir de un conjunto de amplificadores
(vease Figura 944). AI desplazar estos m6duJos activadores por lodo el genoma,
los elementos transponibles pueden permitir que la regulaci6n genica sea opti-
mi7.ada para la supcrvivencia de los organismos a largo plazo.

Las 'jexplosiones de transposici6n" provocan cambios catastr6ficos

en los genomas e incrementan la diversidad biol6gica53
Otro rasgo unico que caracteriza a los elementos transponibles como mUldgenos
es su tendencia a sufrir Largos periodos quiescentes durante los cuales pennane-
cen fijos en sus posiciones cromosOmicas, seguidos por un periodo de intenso
movimicnlo. Su transposici6n, y por consib'Uiente so acci6n mutagenica, se activa
de vcz en cuando en unos cuantos individuos de una poblaci6n de organismos.
EsIOS cambios calaSlr6ficos en los genolllas, denominados explosiones de trallS-
posici6n (transposition bUTStS), pueden implicar transposiciones casi simultaneas
de varios tipos de elemenlos transponibles. Las explosiones de transposici6n
fueron observadas por vez primera en las plantas de maiz que eslaban sujetas a
rolUra cromos6mica repetida. Tambien rueron observadas en cruces enlre cier-
las cepas de moscas -un ren6meno conocido como disgenesis hfbrida. Cuando
OCUITcn en la linea germinal, illducen multiples cambios en el genoma de la pro-
gcnie individual dc la mosca 0 In plantn.
Mediante cl cambio simullaneo de varias propiedades de un organismo, las
explosiones de lransposici6n incrementan la probabiJidad de que dos nuevos
rasgos que son utiles conjunlamente pero de nulo valor seleclivo por si mismos,
aparezcan en un individuo de una poblaci6n. En varios tipos de plantas existen
evidencias de que las explosiones de transposici6n pueden ser activadas por es-
Ires ambienlal severo, creando una variedad de organismos de la progenie mo-
dificados al azar, algunos de los cuales pueden adaptarse mejor a las nuevas
condiciones que sus padres. Parece que, al menos en estas plantas, ha evolucio-
nado un mecanismo de activaci6n de los elememos lransponibles para que ac-
lIjen como mutagenos y creen un amplio rango de organismos variantes cuando
esta variaci6n es mas necesaria. Asi, los elementos lransponibles no son necesa-
riamenle parasilos desorganizadores; por el contra rio, ocasionalmente pueden
actuar como simbiontes utiles que colaboran en la supervivencia, a largo plazo,
de las especies cuyos genomas habitan.

Aproximadamente un 10% del genoma humano consiste en dos

familias de elementos transponibles54
EI DNA de los primales es especial, al menos en un aspecto: comiene un elevado
nl1mero de copias de dos secuencias de DNA transponibles que parecen haber
invadido nuestros cromosomas. Ambas secuencias se desplazan mediante un
proceso mediado por RNA que requiere de la presencia de una transcriptasa in-
versa. Uno de elias es el elemenlo Iransponible L1, que se parcce aI elemenlo F
de Drosophila, y al elemento Cin4 delmafz; al parecer codifica una transcriptasa
inversa (vease Tabla 84, pag. 419). Los elementos tTansponibles han evoluciona-
do en general con sistemas de control par retroalimentaci6n que Iimitan severa-
mente su mimero en cada celula (salvando por 10 tanto a la celula de un desastre
potencial); sin embargo, el elemento LI en los humanos constituye aproximada-
mente un 4 % de la masa tOlal del genoma.
Menos habitual incluso es la secuenclaAlu, que es muy corta (aproximada-
mente 300 pares de nucle6tidos) y que se desplaza igual que un elemento trans-
ponible, creando duplicaciones especificas de lugar cuando se inserta. Sill em-
bargo, deriv6 a partir de un gCll de RNA 7SL, internamcnte delecionado de una
celula huesped, el Cllal codifica el componcnte RNA de la partfcula de reconoci-
mienlO de senal (SRP) que actua en la sintesis proteica (vease Figura 12-39); por
10 tanto no esla claro si la secuencia Alu se tiene que considerar como un ele-

Organlzacl6n y evoluci6n del genoma nuclear 423

mento rransponible 0 como un pseudogen m6vil, poco habitual. Estd presente Mcuenciu AJu MclHlncillS B'
humllnll$ de rllt6fl
en aproximadamente SOO 000 copias por genoma haploide y conslituye un 5% ,--,
del DNA humano; par 10 tanto esl<i presente, en promedio, una vez cada 5000
pares de nucle6tidos. El DNA A/u es transcrilO a panir del promotor del RNA ,
500 000
c:opias ......
00'000

7S1.., un promotor de la polimerasa III que es interno a1 transcrito, de tal modo

que cuando se desplaza transporta la infonnaci6n necesaria para su propia
transcripci6n. Sin embargo, para poder desplazarse precisa tamar prestada una
actividad transcriptasa inversa.
Las comparaciones de la secuencia y de las posiciones de las secuencias se-
mejantes ally AlII en diferentes mamfferos sugieren que estas secuencias se han
mulliplicado hasta el clevado numero de copias actuales, bastante recientcmente
(Figura 8-82). Es diffcil imaginar que estas secuencias tan abundantemente repe-
tidas en nuestro genoma no tengan efectos importantes en la expresi6n de los 60
muchos genes cercanos. Por ejemplo, icwmtas de nuestras cualidades exclusiva-
mente humanas se deben a estos elementos parAsitos?
Figura 8-82 Patron de evolucl6n
Resumen propueslo para las abundantes
secuendasAlu humanas. En el
Las secuencUu de DNA ftmciotudes de los KE'nonuu de los eucarlotas superlores po-
genoma de ral6n se encuenlra 81, un
recen esror couslrllidas a partir de peqll.eiios m6dulos gelllficos de al mellos dos Ii- elemento transponible similar aAlu.
pas. Los ",6dulos de secuencUu codiftctlllles esldn oombinados ell nmWtud de for- Se cree que ambas secuenclas de DNA
mas producielldo prote{nas, mlenlra$ que los ",6d"los de U!'CuencUu regllUuloras transponlbles han evolucionado a
esldn repartidos a 10 largo de gralldes extenslones de secuellclas 110 codlJlctmtes y partir dcl gen RNA 7SL Sin embargo,
regJllan In expres16n de los genes. Tanto las sec"ellclas codlf1cantes COIIIO las reg"- basados en la distribuci6n y homologla
ladoras Upicamel/te se orgallium ell mOdulos mellores a Ilnos Clumtos clentos de de secuencia de estos elementos
IUlcte6tidos, y en conjlltlto solo sllpmre'lllIItI peqlleilafracc16n del tolal de DNA. altamente repetidas, se cree que el
En los gellomas se prodllC:e IUlll graIl uarletlml de procesos de recomb"racMn mayor incremento del numera de
gellefica, que provocall la tllI.plicacJ6n y trallslacad6n al lULlr de Ins UCllellclas de copias ha tenida lugar
DNA. AIgzmos tie estos cambios t:reIIII dl.plicados de genes enteros, de los que pr.e- independienlemente en cl rat6n
yen el hombre. (Adaptada de P.L
dell emlucionar IIuevas ft,nciolles. Otros produam nuevas prote{nas me:u:lnudo
Deininger y G.R. Daniels, Trends Gen.
uones 0 mOOiftcnnrkJ In expresM/I de lliejos gelles al expollerlos a nuevas SKuen- 2:76-80.1986.)
cUu reguladora.s. Este tipo de mez.cln de secuencia.s, de gran imparranda para la
euoluci6n de los organlsmos, se ve mllY faciUtada por In estnlCfura partida de los
genes de los eucarlotas superlores y por el 1llw de que alOS genes esufn j'rocllellte-
mente controlados por secuellcias reguladoras alejadns.
En los gelwmas existen nlllc1lOs tipos de erementos fransponibles. Colectiua-
mellte, collsfifllyen "Ids del 10% de la IIlllSQ del gelloma de Drosophila y de los ller-
tebrados. Ocasionalmellte, en las dlillas germinales OCllrren "exploslones de trailS-
posici6n" que IJfOlJOCall llUlCllos clltllbios Ileredltarlos ell la expresi6n gelllca del
intlilliduo. Se cree que los elementos transponibles "all jU8{1{lo "n papel evollltilJO
especial ell In generacl611lW In tliversltlad de los orgtltllsmos.

Bibliograffa DePamphilis, M.L Origins of DNA replication that func-

Cltas
I. Adolph, K.W., ed. Chromosomes and Chromatin, Vois.
1-3. Boca Raton, Fl..: eRC Press, 1988.
Felsenfeld, G. DNA. Sci. Am. 253{4}:58-67, 1985.
Hsu, T.C. Human and Mammalian Cytogenetics: A His-
torical Perspective. New York: Springer-Verlag, 1979.
Stewart, A. The funcional organization of chromosomes
and the nucleus-a special issue. Tre1lds Gellet. 6:377-
379.1990.
2. Burke, D.T.; Carle, G.F.; Olson, M.V. Cloning of large
segments of exogenous DNA into yeast by means of
artificial chromosome vectors. Science 236:806-812,
1987.
tion in eucaryotic cells. Curro Opi/l. Cell Bioi. 5:434-
441. 1993.
Murray, A.W. Quomosome structure and behavior.
Trends Biocliem. Sci. 10:112-) IS. 1985.
Price, C.M. Centromeres and telomeres. Cllrr. Opill. Cell
Bioi. 4:379-384, 1992.
3. Gall, J.G. Chromosome structure and the C-value para-
dox. j. Cell BioI. 91 :3s- I4s, 19B I.
Ohta, T.; Kimura, M. Functional organization of genetic
material as a product of molecular evolution. Nature
233:118-119,1971.
4. Ruby, S.W.; Abelson, I. Pre-mHNA splicing in yeast
Trends Ge'let. 7:79-85,1991.
5. Wtlson, A.C.: Ochman, H.; Prager. E.M. Molecular time
scale for evolution. Trends. Gellet. 3:241-247, 1987.

424 CapfluJo 8: EI nucleo celular

 6. Grunstein, M. Histones as regulators of genes. Sci. Am.
267(4):68-746,1992.
Isenberg, I. Histones.Amm. Rev. Biocllem. 48:159-191,1979.
Smith, M.M. Histone structure and function. Curro Opin.
Cell BioI. 3:429-437, 1991.
WeUs, D.E. Compilation analysis of histones and histo-
ne genes. Nucleic Acids Res. 14:rI19-rI49, 1986.
7. Chromatin. Cold Sprillg Harbor Symp. QlUlIlt. BioI., Vol.
42, 1978.
Kornberg, R.D.; Kiug, A. The nucleosome. Sci. Am.
244(2):52-64,1981.
McGhee, 1.0.; Felsenfeld, G. Nuc1eosome structure.
Allnu. Rev. Biocllem. 49: 1115-1156, 1980.
Richmond, T.I.; Finch, J.T.; Rushton, B.; Rhodes, D.;
Klug, A. Suucture of the nucleosome core particle at
7A resolution. Nature311:532-537, 1984.
8. Gross, D.S.; Garrard, W.T. Nuclease hypersensitive sites
in chromatin. Annu. Rev. Biocllem. 57:159-198, 1988.
Simpson, R.T. Nucleosome position in vivo and ill vitro.
Bioessays4:172-176,1986.
Svaren, I.; Chalkley, R. The structure and assembly of
active chromatin. Trends Genet. 6:52-56, 1990.
Travers, A.A. DNA bending and nucleosome position-
lng. Trends Biochem. Sci. 12: 108-112, 1987.
Zhang, L.; Gralla, 1.0. In situ nucleoprotein structure in-
volving origin-proximal SV40 DNA control elements.
NucIeicAcids Res. 18:1797-1803, 1990.
9. Hansen, J.c.; Ausio, 1. Chromatin dynamic and the mo-
dulation of genetic activity. Trends Biochem. Sci.
17:187-191, ~992.
Pederson, D.S.; Thoma, F.; Simpsoll, R. Core particle, fi-
ber, and trancriptionally active chromatin structure.
Amlll. Rev. Cell BioI. 2: 117-147, 1986.
Swedlow, I.R., Agard, D.A.; Sedat, J.W. Chromosome
structure inside the nucleus. Curro Opin. Cell BioI.
5:412-416,1993.
Zlatanova, J.; Yaneva, J. Histone HI-DNA interactions
and their relation to chromatin structure and func-
tion. DNA Cell BioI. 10:239-248, 1991.
10. BeUini, M.; Lacroix, I.-C.; Gall, I.G. A putative zinc-bind-
ing protein on lampbrush chromosome loops. EMBO
j. 12:107-114, 1993.
Bostock, c.J.; Stunner, A.T. The Eucaryotic Chromoso-
me, pp. 347-374. Amsterdam: North-Holland, 1978.
Callan, H.G. Lampbrush chromosomes. Proc. R. Soc.
Lond. (Biol.J 214:417448, 1982.
Reznik, N.A.; Yampol, G.P.; Kiseleva, E.V.; Khrislolyubo-
va, N.B.; Gruzdev, A.D. Functional and structural
units in the chromomere. Genetica 83:293-299,1991.
II. Agard, D.A.; Sedat. J.W. Three-dimensional architecture
of a polytene nucleus. Nature 302:676-681, 1983,
Beermann, W. Chromosomes and genes. In Developmen-
tal Studies on Giant Chromosomes ryv. Beermann, ed.),
pp, 1-33. New York: Springer-Verlag. 1972.
Zhimulev, I.F.; Belyaeva, E.S. Chromomeric organizaton
of polytene chromosomes. Genetica 85:65-72, 1991.
12. Ashbumer, M.: Chihara, c.; Meltzer, P.; Richards, G. Tempo-
ral control of puffing activity in polytene chromosomes.
Cold SpringHarborSymp. Quam. BioI. 38:655-662, 1974.
Lamb, M.M.: Daneholt. B. Characterization of active trans-
cription units in Halbiani rings of Chironomous tenums.
Cell 17:835-848, 1979.
Bibliograffa
Thummel, C.S. Puffs and gene regulation-molecular in-
Sights into the Drosophila ecdysone regulatory hie-
rarchy. Bioessays 12:561-568,1990.
13. Bossy, H.; Hall, .LM.; Spierer, P. Genetic activity along
315 kb of the Drosoplll'la chromosome. EMBO ].
3:2537-2541,1984.
Friedman, T.B.; Owens, KN.; Burnett, J.B.; Saura, A.D.;
Wallrath, L.L. The faint band/interband region 28C2
to 28C4-5(-) of the Drosophila melanogaster salivary
gland polytene chromosomes is rich in transcripts.
Mol. Cell. Gellet. 226:81-87, 1991.
Judd, B.H.; Young, M.W. An examination of the one cis-
tron: one chromomere concept. Cold Spring Harbor
Symp. Quant. BioI. 38:573-579, 1974.
14. Croston, G.E.; Kadonaga, I.T. Role of chromatin structu-
re in the regulation of transcription by RNA polyme-
rase 11. Curro Opin. Cell BioI. 5:417-423, 1993,
Nacheva, G.A.; Guschin, D.Y.; Preobrazhenskaya, OV.; et
al. Change in the pattern of histone binding to DNA
upon trancriptional activation. Cell 58:27-36, 1989.
Svaren, I.; Horz, W. Histones, nucleosomes and trans-
cription. Curro Opin. Genet. Dev. 3:219-225,1993.
IS. Allis, C.D., et al. hvI is an evolutionarily conserved H2A
variant that is preferentially associated with active
genes.]. BioI. Chem. 261:1941-1948, 1986.
Bradbury, E.M. Reversible histone modifications and
the chromosome cell cycle. Bioessays 14:916, 1992.
Trelnethick, 0.1.; Drew, H,R. High mobility group pro-
teins 14 and 17 can space nucleosomes i1l vitro. }.
BioI. Cllem. 268: 11389-11393, 1993.
Turner, B.M. Histone acetylation and control of gene
expression. j. Cell Sci. 99: 13-20, 1991.
16. Brown, S.W. Heterochromatin. Science 151:417-425, 1966.
Pimpinelli, S.; Bonaccorsi, S.; Gaui, M.; Sandler, L. The
peculiar genetic organization of Drosophila hete-
rochromatin. Trends Genet. 2:17-20,1986.
17. Georgiev, G.P.; Nedospasov, SA; Bakayev, V.V. Supra-
nucleosomallevels of chromatin organization. In The
Cell Nucleus (H. Busch, ed.), Vol. 6, pp. 3-34. New
York: Academic Press, 1978.
Kitsberg, D.; Selig, S.; Cedar, H. Chromosome structure
and eukaryotic gene organization. Curro Opin. Gellet.
Dev. 1:534-537, 1991.
Marsden, M.; Laemmli, U.K. Metaphase chromosome
structure: evidence for a radial loop model. Cell
17:849-858,1979,
18. Bickmore, W.A.; Sumner, A.T. Mammalian chromosome
banding-an expression of genome organization.
Trends Genet. 5: 144-148, 1989.
Holmquist, G. DNA sequences in G-bands and R-bands.
In Chromosomes and Chromatin Structure (KW.
Adolph, ed.), Vol. 2, pp. 75122. Boca Raton, FL: CRC
Press, 1988.
Lewin, B. Gene Expression, Vol. 2: Eucaryotic Chromo-
somes, 2nd ed. ,pp. 428-440. New York: Wiley, 1980.
19. DePamphilis, M.L Origins ofDNA replication that function
in eukaryotic cells. Curro Opill. Cell BioI. 5:434-441, 1993.
Marahrens, Y.; Stillman, B. A yeast chromosomal origin
of DNA replication defined by muJtiple functional
elements. Science 255:817-823, 1992.
Struhl, K.; Stinchcomb, D.T.; Sherer, S.; Davis, R.W.
High-frequency transformation of yeast: autono-
mous replication of hybrid DNA molecules. Proc.
Nat/.Acad. Sci. USA 76:1035-1039,1979.
425
20. Dodson, M.; Dean, F.B.; Bullock, P.; Echols, H.; Hurwitz,
J. Unwinding of duplex DNA from the SV40 origin of
replication by T antigen. Science 238:964-967, 1987.
Stillman, 8.: Bell, S.P.; Dutra, A; Marahrens, Y. DNA repli-
cation and the cell cycle. Ciba Found. Symp. 170:147-
156; discussion 156-160, 1992.
21. Bonifer, c.; Hecht, A.: Saueressig, H.; Winter, D.M.; Sip-
pel, AE. Dynamic chromatin: the regulatory domain
organization of eukaryotic gene loci.]. Cell. Biochem.
47:99-108,1991.
Huberman, JA.; Riggs, AD. On the mechanism of DNA
replication in mammalian chromosomes. ]. Mol.
Bioi. 32:327-341, 1968.
22. Craig, I.M.: Bickmore, WA. Chromosome bands-fla-
vours to savour. Bioessays 15:349-354, 1993.
Stubblefield, E. Analysis of the replication pallern of
Chinese hamster chromosomes using 5-bromodeox-
yuridine suppression of 33258 Hoechst fluorscence.
Chromosoma 53:209-221,1975.
23. Lima-de-Faria, A; Jaworska, H. Late DNA synthesis in
heterochromatin. Nature 217:138-142, 1968.
24. Bickmore, WA.: Sumner, A.T. Mammalian chromosome
banding-an expression of genome organization. Trends
Genet. 5:144-148,1989.
25. Mechali, M.; Kearsey, S. Lack of specific sequence re-
quirement for DNA replication in Xellopus eggs com-
pared with high sequence specificity in yeast. Cell
38:55-64, 1984.
Riggs, AD. DNA methylation and late replication prob-
ably aid cell memory, and type 1 DNA reeling could
aid chromosome folding and enhancer function.
Phil. Trails. R. Soc. Wnd. (Biol.) 326:285-297, 1990.
26. Blow, I.J. Preventing re-replication of DNA in a single
cell cycle: evidence for a replication licensing factor.
]. Cell Bioi. 122:993-1002, 1993.
Coverley, D.; Downes, C.S.; Romanowski, P.; Laskey,
R.A Reversible effects of nuclear membrane permea-
bilization on DNA replication: evidence for a positive
licensing factor.]. Cell Bioi. 122:985-992, 1993.
Rao, P.N., Johnson, R.T. Mammalian cell fusion: studies
on the regulation of DNA synthesis and mitosis. Na-
ture225:159-164,1970.
Wanka, F. Control of eukaryotic DNA replication at the
chromosomal level. Bioessays 13:613-618, 199J.
27. Almouzni, G.; Clark, D.J.; Mechali, M.; Wolffe, A.P.
Chromatin assembly on replicating DNA itl vitro. Nu-
cleic Acids Res. 18:5767-5774, 1990.
Russev, G.; Hancock, R. Assembly of new histones into
nucleosomes and their distribution in replicating chro-
matin. Proc. NatL Acad. Sci. USA 79:3143-3147, 1982.
28. Blackburn, E.H. Telomeres. Trends Biochem. Sci. 16:378-
381. 1991.
Blackburn, E.B.; Szostak, I.W. The molecular structure
of centrorneres and telomeres. Amlu. Rev. Biochem.
53:163-194,1984.
Vogt, P. Potential genetic functions of tandem repeated
DNA sequence blocks in the hwnan genome are ba-
sed on a highly conserved ~chromatin folding code. ~
Hum. Genet. 84:301-336, 1990.
29. Chamberlin, M. Bacterial DNA-dependent RNA poly-
merases.ln The Enzymes, 3rd ed. (P. Boyer, ed.), Vol.
15B, pp. 61-108. New York: Academic Press, 1982.
Gill, S.c.; Yager, T.D.: von Hippel, P.H. Thermodynamic
analysis of the transcription cycle in coli. Biophys.
Chem. 37:239-250, 1990.
426 CapItulo 8 : El micleo celular
Kerppola, T.K.; Kane, C.M. RNA polymerase: regulation
of transcript elongation and termination. FASEB ].
5:2833-2842,1991.
30. Chambon, P. Eucaryotic nuclear RNA polymerases.
Annu. Rev. Biocllem. 44:613-638, 1975.
Geiduschek, E.P.; Tocchini-Valentini, G.P. Transcription
by RNA polymerase IIJ. Annu. Rev. Biochem. 57:873-
914,1988.
Senlenac, A. Eucayotic RNA polymerases. CRC Crit. Rev.
Biochem. 18:31-91, 1985.
Young, RA. RNA polymerase II. Annu. Rev. Biocllem.
60:689-715,1991.
31. Foe, V.E.; Wilkinson, L.E.: Laird, C.D. Comparative orga-
nization of active transcription units in Oncopeltus
fasciatus. Cell 9: 131-146, 1976.
Lewin, B. Gene Expression, Vol. 2: Eucaryotic Chromo-
somes, 2nd ed., pp. 708-7l9. New York: Wiley, 1980.
Miller, O.L The nucleolus, chromosomes, and visualiza-
tion of genetic activity.]. Cell BioL 91: 15s-27s, 1981.
32. Nevins, j.R. The pathway of eukaryotic mRNA forma-
tion. All1lU. Rev. Biochem. 52:441-466, 1983.
Proudfoot, N.J. How RNA polymerase II terminates
transcription in higher eukaryotes. Trends Biocllem.
Sci. 14:lO5-110, 1989.
Wickens, M. How the messenger got its tail: addition of
poly(A) in the nucleus. Trends Biocllem. Sci. 15:277-
281,1990.
33. Criclc, F. Split genes and RNA splicing. Science 204:264-
271,1979.
Dreyfuss, G.; Matunis, M.j.; Pinol-Roma, S.: Burd, e.G.
hnRNP proteins and the biogenesis of mRNA. A/IIIIl.
Rev. Bioellem. 62:289-321. 1993.
Hickey, D.A.; Benkel, B.F.: Abukashawa, S.M. A general
model for the evolution of nuclear pre-mRNA in-
trons. j. Tllear. Biol. 137:41-53, 1989.
34. Dreyfuss, G.; Swanson, M.S.; Pifiol-Roma, S. Heteroge-
neous nuclear ribonucleoprotein particles and the
pathway of mRNA formation. Trends Biochem. Sci.
13:86-91,1988.
Guthrie, C. Messenger RNA splicing in yeast: clues to
why the spliceosome is a ribonucleoprotein. Science
253:157-163,1991.
Guthrie, C.; Patterson, B. Spticeosomal snRNAs. Annu.
Rev. Genet. 22:387-419,1988.
Samarina, O.P.; Krichevskaya, AA.; Georgiev, G.P. Nu-
clear ribonucleoprotein particles containing messen-
ger ribonucleic add. Nature 210: 1319-1322, 1966.
Steitz, JA "Snurps." Sci. Am. 258(6):56-63, 1988.
35. Balvay, L.; LibrL D.; Fiszman, M.Y. Pre-mRNA secon-
dary structure and the regulation of splicing. Bioes-
says 15:165-169, 1993.
Padgett, RA; Grabows\cj, P.}.; Konarska, M.M.; Seiler, S.;
Sharp, PA. Splicing of messenger RNA precursors.
Amlu. Rev. Bioc/lem. 55:11191150, 1986.
36. Aebi, M.; Weissman, C. Precision and orderliness in
splicing. Trends Genet. 3:102-107, 1987.
Goguel, V.; Liao, x..; Rymond, B.C.; Rosbash, M. Ul
snRNP can influence 3' -splice site selection as well as
5'-splice site selection. Gelles Dev. 5:1430-1438, 1991.
37. Orkin, S.H.; Kazazian, H.H. The mutation and poly-
morphism of the human ~-globin gene and its su-
rrounding DNA. AmlU. Rev. Genet. 18:131-171, 1984.
38. Cech, T.R. The generality of self-splicing RNA: relation-
ship to nuclear mRNA splicing. Cell 44:207-210, 1986.
Saldanha. R.; Mohr. G.; Belfort, M.; LambowilZ, A.M.
Group I and group II introns. FASEBj. 7:15-24, 1993.
39. Brown, J.D.; Plumpton, M.; Beggs, '.0. The genetics of
nuclear premRNA splicing: a complex story. Amo"ie
Vall Leeuwenhoek 62:35-46, 1992.
Green, M.R. Pre-mRNA processing and mRNA nuclear
export Cllrr. O,Ji". Cell Bioi. 1:519525,1989.
Iim~nezGarcfa, LF.; Spector, D.L '" vivo evidence that
transcription and splicing are coordinated by a re-
cruiting mechanism. CeJ173:47-59, 1993.
Spector, D.L Nuclear organization of pre-mRNA pro-
cessing. Curro Opi". Cell Bioi. 5:442-447, 1993.
40. Long. E.O.; Dawid, LB. Repeated genes in eucaryotes.
AmlU. Rev. Bioc1lem. 49:727-764,1980.
Miller, O.L The nucleolus, chromosomes, and visual-
ization of genetic activity. }. Cell Bioi. 91:15s-27s,
1981.
WiUiams, S.M.; Robbins, LG. Molecular genetic analysis
of Drosopllila rONA arrays. Trends Genet. 8:335-340,
1992.
41. Fischer, D.; Weisenberger, D.; Scheer, U. Assigning func-
tions to nucleolar structures. Qlro"WSO"W 101:133140,
1991.
Hadjiolov, AA. The Nucleolus and Ribosome Biogen-
esis. New York: Springer.verlag, 1985.
Jordan, E.G.; Cullus. c.A., eds. The Nucleolus. Cambrid-
ge, UK: Cambridge University Press, 1982.
Larson, D.E.; lahradka, P.; Sells, B.H. Control points in
eucaryotic ribosome biogenesis. Biocllem. Cell Bioi.
69:5-22,1991.
42. Anastassova-Kristeva, M. The nucleolar cycle in man.}.
GeliSci. 25:103-110,1977.
McClintock, B. The relation of a particular chromosomal
element [Q the development of thenucleoli in zea
Mays. Z. Zellforscll. Mikrosk. AMt. 2I:294323, 1934.
43. Haaf, T.; Schmid, M. Chromosome topology in mam-
malian interphase nuclei. Exp. Cell Res. 192:325-332,
1991.
Hochstrasser, M.; Sedat, I.W. Three-dimensional orga-
nization of DrosOIJhila melarwgaster Interphase nu-
clei. ll. Chromosome spatial organizaton and gene
regulation.). Cell Bioi. 104: 1471-1483, 1987.
Manuelidis, L. A view of interphase chromosomes. Sci-
ellce250:1533-1540, 1990.
44. Dessev, G.N. Nuclear envelope structure. Curr. Opill.
Cell Biol. 4:430-435,1992.
Gasser, S.M.; LaemmJi, U.K. A glimpse at chromosome
order. TrelldsGellet. 3:16-22,1987.
Gerace, L; Burke, B. Functional organization of the nu-
clear envelope. AlJllu. Rev. Celf Bioi. 4:335-374,1988.
45. Doolittle, R.F. Proteins. Sci. Am. 253(4):88-99, 1985.
Holland, S.K.; Blake, C.C. Proteins, exons, and molecu
lar evolution. BioSYSlems 20: 181-206, 1987.
46. Kourilsky, P. Molecular mechanisms for gene conver-
sion in higher cells. Trends Gellet. 2:60-63, 1986.
Roth, D.B.; Porter, T.N.; Wilson, J.H. Mechanisms of
nonhomologous recombination in mammalian cells.
MoL CeiL BioI. 5:2599-2607. 1985.
Smith, G.P. Evolution of repeated DNA sequences by
unequal crossover. Sciern:e 191 :528-535, 1976.
Bibliograffa
Stark, G.R.; Wahl, G.M. Gene amplification. A1lllll. Rev.
Bioclu~m. 53:447-491,1984.
47. Dickerson, R.E.; Geis, I. Hemoglobin: Structure, Func-
tion, Evolution, and Pathology. Menlo Park, CA Ben-
jamin-Cummings.1983.
Efstratiadis, A., et al. The structure and evolution of the
human ~-g1obin gene family. Cefl21:653-668, 1980.
48. Anderson, C.L; Carew, WA.; Powell, j.R. Evolution of
the Adh locus in, the Dros9pllila willistolli group: the
loss of.an intron, and shift in codon usage. Mol. Biol.
/101. 10:605-618, 1993.
Doolittle, W.F. RNA-mediated gene conversion? Trellds
Gellet. 1:64-65, 1985.
Nyberg, A.M.; Cronhjon, M.B. Intron evolution: a statis-
tical comparison of two models. j. TJloor. BioI.
157:175-190,1992.
49. Britten, R.I.; Kohne, D.E. Repeated sequences in DNA.
Science 161:529-540, 1968.
Jelinek, W.R.; Schmid, C.W. Repetitive sequences in eu-
karyotic DNA and their expression. AnIlU. Rev. Bio-
cllem. 51:813844, 1982.
SO. Craig-Holmes, A.P.; Shaw, M.W. Polymorphism of hu-
man constitutive heterochromatin. Science 174:702-
704,197!.
Hsu, T.C. Human and Mammalian Cytogenetics: A His-
torical Perspective. New York: Springer-Verlag, 1979.
John, B.; MikJos, G.LG. Functional aspects ofsateUite DNA
and heterochromatin. lTl Rev. CytoL 58:1-114.1979.
Orgel, LE.; Crick, F_H.C. Selfish DNA: the ultimate para-
site. Nature 284:604-607,1980.
51. Berg, D.E.; Howe, M.M., eds. Mobile DNA..Washington,
DC: American Society for Microbiology, 1989.
OOring, H.-P. Starlinger, P. Molecular genetics of trans
posable elements in plants. AmlU. Rev. Gellel. 20: 175-
200,1986.
Finnegan, D.I. Eukaryotic transposable elements and
genome evolulion. Tre,lds Gellet. 5:103-107, 1989.
McClintock, B. ControUing elements and the gene. Cold
Spring Harbor Symp. Quant. BioI. 21: 197-216, 1956.
52. Coen, E.S.; Carpenter, R. Transposable elements in An-
ti"hilllUIl majlls: generators of genetic diversity.
Trends Cellet. 2:292296, 1986.
O'Kane, C.I.; Gehring, W.J. Detection in siw of genomic
regulatory elements In Drosophila. Proc. Narl. Acad.
Sci. USA84:91239127, 1987.
53. Gerasimova, T.!.; Mizrokhi, L.}.; Georgiev, G.P. Transpo
sition bursts in genetically unstable Drosophila me/a-
IlOgaster. Nature309:714-716, 1984.
McClintock, B. The significance of responses of the ge-
nome to challenge. Sciellce226:792801, 1984.
Walbot, V.; Cultis, C.A. Rapid genomic change in higher
plants. AmlLL Rev. Plallr PlIysiol. 36:367-396, 1985.
54. Deininger, P.L; Daniels, G.R. The recent evolution of
mammalian repetitive DNA elements. Trends Gellet.
2:76-80, 1986.
Ruffner, D.E.; Sprung, C.N.; Minghetti, P.P.; Gibbs, P.E.;
Dugaiczyk. A. Invasion of the human albumin-a-fe-
toprotein gene family by Alu, Kpn, and rwo novel re-
petitive DNA elements. Mol. Bioi. Evol. 4:1-9, 1987.
Weiner, A.M.; Deininger, P.L; Estratiadis, A. Nonviral
retroposons: genes, pseudogenes, and transposable
elements generated by the reverse flow of genetic in-
formation. Annu. Rev. 8iocllem. 55:631-661, 1986.
427
,.

(A,

10'

Palrones de expresi6n g~nica dependientes de posici6n. en cualro embriones transg~nicos direrentes de Drosophila.
Cada embri6n liene, insertada en su genoma, una sola copia de una gen de la fI'galactosidasa bacteriana. Dependiendo del
cromosoma en el que se haya producido la Inserci6n, distinlOs activadores cercanos de Drosophila hacen que el gen se exprese
siguiendo un patron que corresponde a (A) traquea y mesoectodermo, (O) sistema nervioso, (el celulas gHales del sistema nervloso
central mas un patron repetilivo en cada segmento, 0 (D) mt'iscul0. (Por conesfa de Yuh-Nul1gJan.)
Patrones de expresiongenica dependientes de posicion, en cuatro embriones transgenicos diferentes de Drosophila.
Cada embrion tiene, insertada en su genoma, una sola copia de una gen de la ~-galactosidasa bacteriana. Dependiendo del
cromosoma en el que se haya producido la insercion, distintos activadores cercanos de Drosophila hacen que el gen se exprese
siguiendo un patron que corresponde a (A) traquea y mesoectodermo, (B) sistema nervioso, (C) celulas gliales del sistema nervioso
central mas un patron repetitivo en cada segmento, 0 (D) musculo. (Par cortesfa de Yuh-Nung Jan.)
EI control de
la expresi6n genica

El DNA de un organismo codifica todas las moleculas de RNA y de proteina ne-

cesarias para la construccion de sus celulas. Sin embargo, la descripcion com-
pleta de la secuencia de DNA de un genoma -tanto los pocos millones de nucleo-
tidos de una bacteria como los escasos miles de millones de nucleotidos del
genoma humano- no nos permitiria reconstruir un organismo, como tampoco
podriamos reconstruir una obra de Shakespeare a partir de una lista de palabras
inglesas. En ambos casos el problema radica en saber como se utilizan los ele-
mentos de secuencia de DNA 0 las palabras de la lista. lEn que condiciones se
produce cada uno de los productos genicos y, una vez producido, que hace?
En este capitulo se abordanl la primera parte de este problema -las reglas
que determinan que en cada celula solo se expresen especificamente una selec-
cion de genes. Los mecanismos que controlan la expresion de los genes actuan a
varios niveles, que trataremos aqui. Sin embargo, el capitulo se inicia con una
introduccion a algunos de los principios basicos del control genico en los orga-
nismos pluricelulares.

Introducci6n at control genico

Los distintos tipos celulares de un organismo superior suelen diferir profunda-
mente tanto en estructura como en funcion. Si comparamos, por ejemplo, una
neurona de mamifero con un linfocito, observaremos que las diferencias son tan
grandes que se hace dificil imaginar que ambas celulas contienen el mismo ge-
noma. Por esta razon y porque la diferenciacion celular suele ser irreversible, los
biologos inicialmente sospecharon que durante el proceso de diferenciacion de
las celulas los genes se deberian perder de modo selectivo. Sin embargo, actual-
mente sabemos que la diferenciacion celular depende generalmente de cambios
en la expresion genica y no de la perdida de genes.

Los distintos tipos celulares de un organismo pluricelular

contienen el mismo DNAl
Los tipos celulares de un organismo pluricelular se diferencian unos de otros
porque sintetizan y acumulan distintos juegos de moIeculas de RNA y de protei-
nas. Ello 10 consiguen sin alterar de modo irreversible su DNA. La mejor eviden-
cia de la conservacion del genoma durante la diferenciacion celular proviene de
una serie de experimentos clasicos con ranas. Cuando se inyecta el nUcleo de una

429
 --,-
-- -

seccion de
zanahoria
~

proliferacion
--
masa celular en celulas
separadas
en un medio
una sola
celula
--
cion organizado
de celulas en
division
embrion
joven
planta
joven
,
zanahoria

liquido
enriquecido

celula totalmente diferenciada de rana en un huevo cuyo mlcleo ha sido elimi- Figura 9-1 Regeneraci6n de una
nado, el mlcleo "dador" inyectado es capaz de programar el huevo receptor para planta completa a partir de una Unica
que produzca un renacuajo normal. El renacuajo contiene un espectro completo celula diferenciada. En muchos tipos
de celulas diferenciadas, las cuales han adquirido sus secuencias de DNA a partir de plantas, las celulas diferenciadas
del m'i.cleo de la celula dadora original, 10 cual significa que la celula dadora dife- retienen la capacidad de
"desdiferenciaci6n" de modo que una
renciada no ha perdido ninguna secuencia importante de DNA. En experimen-
sola celula puede generar un clan de
tos realizados con varias piantas se ha llegado a una conclusi6n similar. En estos celulas descendientes, que despues
experimentos se cultivaron fragmentos de tejido diferenciado en un medio de podrei dar lugar a una planta entera.
cultivo sintetico y de estos fragmentos se disociaron celulas individuales. A me-
nudo cada una de estas celulas es capaz de regenerar una planta adulta entera
(Figura 9-1).
Otra prueba de que durante el desarrollo de los vertebrados ni se pierden ni
se reorganizan grandes bloques de DNA proviene de la comparaci6n de los pa-
trones de bandas que se detectan en los cromosomas mit6ticos condensados de
distintos tipos celulares (vease Figura 8-32). SegUn este criterio, parece que los
conjuntos de cromosomas de todas las celulas diferenciadas del cuerpo humano
son identicos. Ademas, la comparaci6n de los genomas de diferentes celulas, ba-
sados en tecnicas de DNA recombinante, muestran, por 10 general, que los cam-
bios de expresi6n genica que subyacen al desarrollo de los organismos pluricelu-
lares no van acompafiados de cambios en las secuencias de DNA de los genes
correspondientes (para una excepci6n importante de este principio, vease Figu-
ra23-27).

Distintos tipos celulares sintetizan distintos conjuntos de protefnas2

Un primer paso para tratar de entender la diferenciaci6n celular podrfa consistir
en averiguar cuantas diferencias existen entre dos tipos celulares dados. Aunque
la respuesta a esta cuesti6n fundamental todavia se nos escapa, podemos hacer
algunas afirmaciones generales:
1. Muchos procesos son comunes a todas las celulas. Por 10 tanto, dos celulas
cualesquiera de un organismo presentaran muchas proteinas en comun.
Entre elIas se encuentran algunas proteinas abundantes que suelen ser fa-
ciles de analizar, como por ejemplo las proteinas estructurales principales
del citoesqueleto y de los cromosomas, algunas de las protefnas esenciales
para las membranas del reticulo endoplasmtitico y del complejo de Golgi y
las protefnas ribosomales. Muchas protefnas poco abundantes, como las
distintas enzimas implicadas en las reacciones centrales del metabolismo,
tambien son comunes a todos los tipos celulares.
2. Algunas proteinas son abundantes en las celulas especializadas en las que
actuan pero no se pueden detectar en ningun otro tipo celular, aunque se
utilicen metodos muy sensibles. La hemoglobina, por ejemplo, s6lo se pue-
de detectar en los eritrocitos.
3. Si se comparan las, aproximadamente, 2000 proteinas mas abundantes (las
que se hallan presentesen mas de 50 000 copias por celula) de distintos ti-
pos celulares del mismo organismo, utilizando electroforesis bidimensio-
nal en geles de poliacrilamida, sorprendentemente se detectan muy pocas

430 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 diferencias. Tanto si se comparan dos lineas celulares en cultivo (por ejem-
plo lineas de celulas musculares y nerviosas) como si se escogen celulas de
dos tejidos de roedor (por ejemplo el higado y el pulmon), la inmensa ma-
yoria de las proteinas que se detectan en ambos tipos celulares se sinteti-
zan en proporciones que difieren en menos de cinco veces; en los dos tipos
celulares solo aparecen en cantidades muy diferentes un pequeno porcen-
taje de las proteinas.
Estudios sobre el numero de secuencias de mRNA distintas de una celula
sugieren que cada celula tipica de un eucariota superior sintetiza entre 10 000 Y
20 000 proteinas distintas. La mayoria de ellas son demasiado escasas para que
puedan ser detectadas a partir de extractos celulares mediante electroforesis bi-
dimensional en gel de poliacrilamida. Si estas proteinas celulares menores difie-
ren entre las diferentes tipos celulares en la misma magnitud en la que difieren
las proteinas abundantes, 10 cual es 10 mas probable, es posible que el numero
de proteinas diferentes suficientes para crear grandes diferencias de morfologia
y comportamiento celular sea bastante pequeno (quiza solo de varios cientos).

Una celula puede cambiar la expresi6n de sus genes

como respuesta a sefiales externas3
La mayor parte de las celulas especializadas de un organismo pluricelular son
capaces de alterar su patron de expresion genica como respuesta a senales ex-
tracelulares. Por ejemplo, si se expone una celula del higado a una hormona glu-
cocorticoide, se incrementa dramaticamente el nivel de produccion de algunas
proteinas especificas. Los glucocorticoides se liberan durante periodos de ayuno
o de ejercicio intenso e indican al higado la necesidad de producir mas glucosa a
partir de aminoacidos u otras pequenas moleculas; el conjunto de las proteinas
cuya produccion se induce incluye enzimas como la tirosina aminotransferasa,
que contribuye a convertir tirosina en glucosa. La produccion de estas proteinas
recupera sus niveles normales cuando la hormona desaparece.
Otros tipos celulares responden a los glucocorticoides de diferente manera.
Por ejemplo, los adipocitos reducen la produccion de tirosina aminotransferasa,
mientras que otros tipos celulares no responden a los glucocorticoides de ningu-
na forma. Estos ejemplos ilustran una caracteristica general de la especializa-
cion celular -frecuentemente diferentes tipos celulares responden en diferente
forma a la misma senal extracelular. Subyaciendo a esta especializacion existe
una serie de rasgos que no cambian, y que confieren a cada tipo celular sus pro-
piedades caracteristicas. Estos rasgos reflejan la expresion constante de diferen-
tes conjuntos de genes.

La expresi6n genica se puede regular en muchas de las etapas

de la via que conduce desde el DNA al RNA Ya las proteinas4
Si las diferencias que existen entre los distintos tipos de celulas dependen de los
genes concretos que estas celulas expresan, la que nivel se ejerce el control de la
expresion genica? La via que conduce desde el DNA a las proteinas esta formada
par muchas etapas, y en principio todas ellas se pueden regular. Asi, las celulas
pueden controlar la sintesis de proteinas (1) regulando el momenta y la frecuen-
cia de la transcripcion de genes concretos (control transcripcional), (2) contro-
lando el modo de maduracion 0 procesamiento de los transcritos primarios de
RNA (control del procesamiento del RNA), (3) seleccionando los mRNA madu-
ros que van a ser exportados al citoplasma (control del transporte de RNA), (4)
seleccionando los mRNA citoplasmaticos que van a ser traducidos por riboso-
mas (control traduccional), (5) desestabilizando selectivamente algunas mole-
culas de mRNA citoplasm<itico (control de la degradaci6n de los mRNA), 0 (6)
activando, inactivando 0 ubicando de modo selectivo las proteinas ya sintetiza-
das (control de la actividad proteica) (Figura 9-2).

Introducci6n al control genico 431

 -- Figura 9-2 Seis etapas en las que se

- ~ ..
puede controlar la expresi6n genica
en los eucariotas. En este capitulo s610

-
degradaci6n 5
... C.. L
N.U ...O.. . .
.. E CITOPLASM. A. control de la
de los mRNA se comentan las etapas de la 1 ala 5. La
regulaci6n de la actividad proteica
1 2 3 (etapa 6) se describe en el Capitulo 5;
control control del control del esta incluye activaci6n e inactivaci6n
transcripcional procesamiento transporte control control de
traduccional 4 la actividad
reversible par fosforilaci6n proteica asi
del RNA del RNA
proteica como inactivaci6n irreversible por
6 degradaci6n proteolftica.
II1II-

Para la mayoria de genes, los controles transcripcionales son los mas impor-
tantes. Esto tiene sentido ya que de todos los posibles puntos de control ilustra-
dos en la Figura 9-2 solamente el control transcripcional asegura que no se sinte-
ticen intermediarios superfluos. A continuacion se describiran los componentes
de DNA y proteinas que regulan la iniciacion de la transcripcion genica. AI final
del capitulo se describiran los otros mecanismos que permiten regular la expre-
sion de los genes.

Resumen
EI genoma de una celula contiene en La secuencia de su DNA la informacion para
producir miles de protefnas y moIeculas de RNA diferentes. Una celuLa expresa, tf-
picamente, solo algunos de sus genes, y los diferentes tipos celuLares de los organis-
mos pluriceluLares se forman porque expresan diferentes conjuntos de genes. Ade-
mas, las celulas pueden cambiar el patron de expresion de sus genes en respuesta a
cambios en su ambiente, tales como seiiales que provengan de otras celulas. Aun-
que totlas las etapas implicadas en La expresion de un gen pueden en principio estar
reguladas, el punta de control mas importante en La mayorfa de los genes es La ini-
ciacion de la trascripcion a RNA.

Motivos estructurales de union a DNA en las

proteinas de regulacion genica5
lComo puede una celula determinar cuaIes de sus miles de genes se han de
transcribir? Como se ha expuesto en el Capitulo 8, la transcripcion de cada gen
esta controlada por una region de DNA proxima allugar donde se inicia la trans-
cripcion. AIgunas regiones reguladoras son simples y actuan como interruptores
activados por una senal unica. Otras regiones reguladoras son complejas y actuan
a modo de minusculos microprocesadores, respondiendo a una variedad de se-
nales, que interpretan e integran para decidir si activan 0 no el gen vecino. Sean
simples 0 complejos, estos dispositivos interruptores constan de dos tipos de
componentes fundamentales : (1) cortas secuencias de DNA definidas, y (2) pro-
teinas de regulaci6n genica que las reconocen y se unen a elIas.
Iniciaremos la discusion de las proteinas de regulacion genica describiendo
como fueron descubiertas.

Las proteinas de regulacion genica se descubrieron utilizando

tecnicas de genetica bacteriana6
Los analisis geneticos realizados en bacterias durante los anos cincuenta aporta-
ron las primeras evidencias de la existencia de proteinas de regulaci6n genica
capaces de activar 0 desactivar conjuntos especificos de genes. Unos de estos re-
guladores, el represor lambda, esta codificado por un virus bacteriano, el bacte-
ri6fago lambda. El represor inactiva los genes del virus que codifican los compo-

432 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

nentes proteicos de las nuevas partfculas viricas y por ella capacitan al genoma
virico para permanecer en el cromosoma bacteriano como un pasajero silencioso,
multiplicandose con la bacteria cuando las condiciones son favorables al creci-
miento bacteriano (vease Figura 6-80). El represor lambda fue de las primeras
proteinas de regulaci6n genica que se caracterizaron, y continua siendo una de
las mejor conocidas como se vera mas adelante. Otros reguladores bacterianos
responden a condiciones nutricionales inactivando conjuntos de genes que co-
difican grupos de enzimas del metabolismo que ya no se necesitan. Por ejemplo,
el represor lac, la primera de estas proteinas bacterianas que se descubri6, inac-
tiva la producci6n de proteinas implicadas en el metabolismo de la lactosa
cuando esta no se encuentra disponible en el medio.
La primera etapa hacia la comprensi6n de la regulaci6n de los genes fue el
aislamiento de cepas de bacteria y de bacteri6fago lambda mutantes incapaces
de inactivar determinados grupos de genes. En aquel tiempo se propuso, y pos-
teriormente se demostr6, que la mayona de esos mutantes eran deficitarios en
proteinas que actuaran como represores especificos de esos grupos de genes.
Debido a que estas proteinas, como la mayona de las proteinas reguladoras, se
encuentran en pequefias cantidades, su aislamiento fue muy dificil y largo. Se
purificaron mediante fraccionamiento de extractos celulares en series de colum-
nas cromatograficas (veanse pags. 176-179). Una vez aisladas, se observ6 que las
proteinas se unian a secuencias de DNA pr6ximas a los genes que regulaban. Las
secuencias de DNA que reconocian fueron determinadas mediante una combi-
naci6n de genetica clasica, secuenciaci6n de DNA y experimentos de huella en
el DNA (descritos en el Capitulo 7).

El exterior de la helice de DNA puede ser leido por proteinas7

Tal como se ha descrito en el Capitulo 3, el DNA de un cromosoma esta formado
por una doble helice muy larga (Figura 9-3). Las proteinas reguladoras deben re-
conocer secuencias especificas en el interior de esta estructura. En un principio
se pens6 que para ser capaces de distinguir una secuencia de DNA de la otra, es-
tas proteinas deberian acceder a los enlaces de hidr6geno entre pares de bases
en el interior de la doble helice. Sin embargo, actualmente se sabe que las protei-
nas reguladoras pueden reconocer la informaci6n acerca de la secuencia de DNA
desde el exterior de la doble helice, sin necesidad de abrirla. El borde de cada surco
manor
par de bases esta expuesto en la superficie de la doble helice, presentando un
patr6n caracteristico de aceptores y dadores de enlaces de hidr6geno y parches
hidrof6bicos reconocibles por proteinas, tanto en el surco mayor como en el
menor (Figura 9-4). Pero, unicamente en el surco mayor los patrones son unicos
para cada uno de los cuatro apareamientos de bases (Figura 9-5). Esta es la ra-
surco
z6n de que la mayona de las proteinas de regulaci6n genica se unan al surco ma- mayor
yor, como se vera.
A pesar de que los rasgos mas importantes reconocidos por las proteinas re-
guladoras son los grupos dadores y aceptores de enlaces de hidr6geno, no son
los unicos; la secuencia de nucle6tidos determina asimismo la geometria global
de la doble helice.

La geometrfa de la doble helice de DNA depende

de la secuencia de nucle6tidos8
Durante los 20 afios siguientes al descubrimiento de la doble helice del DNA en
Figura 9-3 Estructura de doble
1953, se pens6 que el DNA tenia siempre la misma estructura mon6tona, con
helice del DNA. Se sefiala el surco
exactamente 36 de giro de helice entre pares de nucle6tidos adyacentes (10 pa- mayor y el menor en el exterior de la
res de bases por vuelta de la helice) y una geometria helicoidal uniforme. Sin doble helice. Los Momos se han
embargo esta visi6n, que procedia del estudio estructural de mezclas de DNA coloreado coma sigue: carbono, azul
heterogeneo, cambi6 cuando se resolvieron las primeras estructuras tridimen- oscuro; nitrogeno, azul claro;
sionales de secuencias cortas de DNA mediante cristalografia de rayos X y espec- hidrogeno, blanco; oxigeno, rojo;
troscopia NMR. Mientras que los primeros estudios mostraban una imagen me- fosfora, amarillo.

Motivos estructurales de uni6n a DNA en las protefnas de regulaci6n genica 433

 surcO maYor surco maYOr Figura 9-4 C6mo es
posible reconocer los
apareamientos de bases a
partir de sus bordes sin
necesidad de abrir la

doble helice. Se muestran

las cuatro configuraciones
posibles de pares de bases,
con los dadores de enlaces
de hidr6geno indicados en
azul, los aceptores de
enlace de hidr6geno en
rajo y los propios enlaces
de hidr6geno como series
de lfneas rajas cortas y
paralelas. Los grupos
SUrco men of metilo que forman
surco maYOr sufCO maYor
protuberancias
hidrof6bicas se han
indicado en amarillo, y los

.
;itomos de hidr6geno que
estan unidos a carbono y
son por tanto inaccesibles
a los enlaces de hidr6geno
I\II\H-N se sefialan en blanco.

Surco menOf

dia de una molecula de DNA idealizada, los ultimos mostraron que cualquier se-
cuencia nucleotfdica presenta irregularidades locales, como pares de bases incli-
nados 0 angulos de giro mayores 0 menores a 36. Estos rasgos unicos pueden
ser reconocidos por las protefnas reguladoras.
Un caso especialmente remarcable de estructura distinta a la mas comun es
la que se observa en el caso de secuencias nucleotfdicas que producen la curva-
tura de la doble helice. Algunas secuencias (por ejemplo, AAAANNN, donde N
puede ser cualquier base excepto A) forman una doble helice con una irregulari-
dad pronunciada que produce una curvatura moderada; si esta secuencia se re-
pite a intervalos de 10 nucle6tidos en una larga molecula de DNA las curvaturas
se suman y estas moleculas aparecen inusualmente curvadas cuando se obser-
van con el microscopio electr6nico (Figura 9-6). Figura 9-5 Un c6digo de
reconocimiento del DNA. EI borde de
cada base, visto directamente desde el
surco mayor 0 desde el surco menor,
surco mayor surco menor
contiene un patr6n distintivo de
CLAVE: aceptores y dadores de enlaces de
G C G C hidr6geno y de grupos metilo. Cada
= H aceptor de enlaces
de hidr6geno uno de los cuatro apareamientos de
A T A T
= H dador de enlaces bases posibles proyecta un patr6n de
de hidr6geno rasgos unicos. Sin embargo desde el
C G C G
o = atomo de hidr6geno surco menor se confunden los
patrones para G-C yC-GyparaA-Ty
T A T A
o = grupo metilo T-A. EI c6digo de colores es el mismo
que se ha utilizado en la Figura 9-4.

434 Capftulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 Figura 9-6 Electronmicrograffa de
fragmentos de helices de DNA muy
curvadas. Los fragmentos de DNA
proceden del pequeno DNA circular
mitocondrial de un tripanosoma. A
pesar de que los fragmentos s610
tienen unos 200 pares de bases,
muchos de ellos se han doblado hasta
formar un cfrculo completo. Un DNA
normal de este tamafio s610 podria
doblarse hasta producir arcos de una
cuarta parte de una estas
circunferencias (una curvatura Iigera y
uniforme hacia la derecha). (De J.
Griffith, M. Bleyman, C.A. Rauch, P.A.
Kitchin y P. T. Englund, Cell 46 : 71 7-
724, 1986. Cell Press.)

Un rasgo relacionado e igualmente importante de la estructura del DNA es

la deformabilidad de la doble helice. Para una proteina que debe reconocer y
unirse a una secuencia concreta de DNA, debe existir un apareamiento estrecho
entre el DNA y la proteina, y frecuentemente la conformacion normal del DNA
se distorsiona para aumentar este apareamiento (Figura 9-7). El coste energetico
de tal distorsion depende de la secuencia nucleotidica. En el Capitulo 8 ya se dis-
cutio un caso similar en relacion con el ensamblaje del nucleosoma: algunas se-
cuencias de DNA soportan mejor que otras la curvatura que se requiere para ro-
dear el nucleosoma. De una manera similar, algunas proteinas reguladoras
inducen una curvatura brusca en el DNA cuando se unen a el (Figura 9-8). En (A) (B)

general, dichas proteinas reconocen secuencias de DNA que se curvan con faci-
lidad. Figura 9-7 Deformaci6n del DNA
inducida por la uni6n de protefnas.
La figura muestra los cambios en la
Secuencias cortas de DNA son componentes fundamentales estructura del DNA, desde la forma
de los interruptores geneticos9 regular de B-DNA (A) a una forma
distorsionada de B-DNA (B), que se
Ya hemos visto como se puede detectar una secuencia nucleotidica especifica observa cuando una protefna
como un patron de rasgos estructurales en la superficie de la doble helice del reguladora bien conocida (el represor
DNA. Secuencias nucleotidicas particulares, cada una de ellas con una longitud del bacteri6fago 434) se une a
de menos de 20 pares de bases, actuan como componentes fundamentales de secuencias especfficas de DNA. La
los interruptores geneticos, al actuar como lugares de reconocimiento para la facilidad con la que esta secuencia de
uni6n de proteinas de regulaci6n genica especificas. Se han identificado cente- DNA se deforma afecta
nares de estas secuencias de DNA, cada una de ellas reconocida por una unica frecuentemente a la afinidad con la
proteina reguladora 0 por una serie de ellas muy relacionadas. En la Tabla 9-1 se que la protefna se une a ella.
listan algunos ejemplos de estas proteinas junto con las secuencias que recono-
cen.
Ahora volvamos a las proteinas de regulaci6n genica -el segundo. compo-
nente fundamental de los interruptores geneticos- que reconocen cortas se-
cuencias de DNA especificas contenidas en una doble helice mucho mayor.

Las proteinas de regulaci6n genica contienen motivos

estructurales que pueden leer secuencias de DNAlO
En biologia, el reconocimiento molecular generalmente se basa en el ajuste
exacto entre las superficies de dos moleculas, y el estudio de las proteinas de re-
gulaci6n genica ha suministrado algunos de los ejemplos mas evidentes de este Figura 9-8 Curvatura del DNA
principio. Una proteina de regulaci6n genica reconoce una secuencia de DNA inducida por la uni6n de la proteina
especifica porque la superficie de la proteina es complementaria a la superficie activada por catabollto (CAP). CAP es
de la molecula de DNA, con sus rasgos estructurales caracteristicos en esa re- una protefna reguladora de E. coli. Si la
gi6n. En la mayona de los casos la proteina establece un gran numero de contac- protefna no esta unida la helice de
tos con el DNA, incluyendo enlaces de hidrogeno, enlaces i6nicos e interaccio- DNA es recta.

Motivos estructurales de uni6n a DNA en las protefnas de regulaci6n genica 435

Tabla 9-1 Algunas proteinas reguladoras y las seeuencias de DNA que reeonoeen

Nombre Seeuencia de DNA reeonocida*

Bacterias represor lac AATTGTGAGCGGATAACAATT
TTAACACTCGCCTATTGTTAA
CAP TGTGAGTTAGCTCACT
ACACTCAATCGAGTGA
represor lambda TATCACCGCCAGAGGTA
ATAGTGGCGGTCTCCAT
Levaduras GAL4 CGGAGGACTGTCCTCCG
GCCTCCTGACAGGAGGC
MATa2 CATGTAATT
GTACATTAA
GCN4 ATGACTCAT
TACTGAGTA
Drosophila Krlippel AACGGGTTAA
TTGCCCAATT
Bicoid GGGATTAGA
CCCTAATCT
Mamiferos Spl GGGCGG
CCCGCC
Oct-l ATGCAAAT
TACGTTTA
GATA-l TGATAG
ACTATC
Cada una de las protefnas de esta tabla puede reconocer un conjunto de secuencias de DNA
estrechamente relacionadas entre sf, pero por conveniencia en la tabla s610 se indica una se-
cuencia para cada protefna.

nes hidrof6bicas. Aunque cada uno de los contactos es debil, los 20 0 mas con-
tactos que se establecen en la interfase DNA-protefna actuan conjuntamente
asegurando una interacci6n que es altamente especffica y muy fuerte (Figura
9-9). De hecho, las interacciones DNA-protefna se encuentran entre las interac-
ciones moleculares mas fuertes y especfficas de las conocidas en biologfa.
Aunque cada uno de los ejemplos de reconocimiento protefna-DNA es uni-
co en sus detalles, los estudios de cristalograffa de rayos X y de espectroscopia

Figura 9-9 Uni6n de una protefna

reguladora at sureo mayor del DNA.
S610 se muestra un tipo de contacto
sencillo. Tfpicamente la superficie de
interacci6n entre la protefna y el DNA
ha de presentar 20 0 mas de estos
contactos, implicando diferentes
aminoacidos, de forma que cada uno
de ellos contribuye ala energfa de
uni6n de la interacci6n protefna-DNA.

436 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Figura 9-10 EI motivo estructural de
uni6n a DNA helice-giro-helice. EI
motivo se muestra en (A), donde cada
cfrculo blanco representa el carbona
central de un aminoacido. La helice a
carboxilo terminal (rojo) se denomina
helice de reconocimiento ya que
participa en el reconocimiento de las
secuencias espedficas en el DNA.
Como se muestra en (B) esta helice se
heliee de ajusta al surco mayor del DNA donde
reeonocimiento entra en contacto con las bases
apareadas (vease tambien Figura 9-4).

COOH

(A) (6)

NMR de alrededor de 30 complejos de proteinas reguladoras con sus secuencias

especificas han mostrado que la mayor parte de dichas proteinas contienen uno
de entre una pequefia serle de motivos estructurales de uni6n a DNA. Cada uno de
estos motivos utiliza tanto helices a como laminas 13 para unirse al surco mayor
del DNA; este surco, como ya se ha visto, contiene suficiente informaci6npara
permitir distinguir una secuencia de DNA de cualquier otra. El ajuste es tan bue-
no que es tentador especular que las dimensiones de las unidades estructurales
basicas de los acidos nucleicos y de las proteinas evolucionaron juntas para per-
mitir que estas moleculas se pudieran ajustar mejoL

El motivo helice-giro-helice es uno de los motivos de uni6n Figura 9-11 A1gunas protemas
helice-giro-helice de uni6n al DNA.
a DNA mas simples y comunesl l Todas las protefnas se unen al DNA
El primer motivo estructural de uni6n a DNA que se descubrl6 fue el hence-giro- como dfmeros en los que las dos
hence. Identificado orlginalmente en proteinas bacterlanas, se ha encontrado en copias de la helice de reconocimiento
centenares de proteinas de uni6n a DNA tanto eucariotas como procariotas. (cilindro rojo) estan separadas por
Consta de dos helices a conectadas pOI una corta cadena de aminoacidos, que exactamente una vuelta de la doble
forma el "giro". Las dos helices se mantienen en un cierto cingulo fundamental- Mlice (3,4 nm). La segunda Mlice del
motivo Mlice-giro-helice se ha
mente pOI interacciones entre ambas helices. La helice mas pr6xima al extrema
coloreado en azul, como en la Figura
carboxilo se denomina la helice de reconocimiento pues se adapta al surco mayor 9-10. El represor lambda y la protefna
del DNA; las cadenas laterales de sus aminoacidos, que difieren de una proteina a cro controlan la expresi6n de genes del
otra, juegan un papel muy importante en el reconocimiento de las secuencias de bacteri6fago lambda, y el represor de
DNA especificas a las que se une la proteina (Figura 9-10). tript6fano y la protefna activadora
Aparte de la regi6n de helice-giro-Mlice la estructura de las proteinas que de catabolito (CAP), controlan grupos de
contienen este motivo varia enormemente (Figura 9-11). Asipues, cada proteina genes de E. coli.

represor del tript6fano proteina ero fragmento de la proteina fragmento DNA

de lambda represora de lambda de CAP

Motivos estructurales de uni6n a DNA en las protefnas de regulaci6n genica 437

presenta su motivo helice-giro-helice al DNA de una forma unica, un rasgo que
se cree que aumenta la versatilidad del motivo helice-giro-helice al aumentar el
numero de secuencias de DNA con el motivo se pueden reconocer. Ademas, en 3'
la mayoria de estas proteinas partes de la cadena polipeptidica que estan fuera 5'
del dominio helice-giro-helice tambien establecen contactos importantes con el
DNA, ayudando a obtener interacciones ajustadas muy finamente.
El grupo de proteinas heIice-giro~helice que aparece en la Figura 9-11 de- Figura 9-12 Una secuencia especffica
de DNA reconocida por la protefua
muestra un rasgo comtin a muchas proteinas de union a secuencias especificas
cro del bacteri6fago lambda. Los
de DNA. Se unen como dimeros simetricos a secuencias de DNA que estan for- nucle6tidos coloreados en verde se .
madas por dos "medios-lugares" muy similares, tambien organizados simetrica- encuentran dispuestos
mente (Figura 9-12). Esta disposicion permite que cada monomero proteico es- simetricamente, permitiendo que cada
tablezca un conjunto casi identico de contactos e incrementa enormemente la mitad de la secuencia especffica sea
afinidad de union: como primera aproximacion, al duplicar el numero de con- reconocida de la misma manera por
tactos se duplica la energia libre de la interaccion pero se eleva al cuadrado la una subunidad de una proteina
constante de afinidad. dimerica, tambien mostrada en verde.

Las proteinas de homeodominios son una clase especial

de proteinas helice-giro-helice 12
Poco despues de que se descubrieran las primeras proteinas de regulacion geni-
ca en bacterias, analisis geneticos en la mosca del vinagre Drosophila permitie-
ron descubrir una clase de genes importantes, los genes selectores home6ticos,
que juegan un papel importante organizando el desarrollo de la mosca. Como se
describira en el Capitulo 21, se ha demostrado que estos genes tambien partici-
pan de forma destacada en el control del desarrollo de animales superiores. Mu-
taciones en estos genes producen el cambio de una parte del cuerpo de una
mosca en otra parte, demostrando que las proteinas que codifican controlan in-
terruptores del desarrollo.
Cuando se determinaron las secuencias de algunos de los genes selectores
home6ticos a principios de la decada de 1980, se demostr6 que cada uno de
ellos contenia una secuencia casi identica de unos 60 aminoacidos que definia
este tipo de proteina y a la que se denomin6 homeodominio. AI resolverse la es-
tructura tridimensional del homeodominio se descubri6 que sostenia un motivo
helice-giro-helice similar al de las proteinas reguladoras bacterianas, aportando
una de las primeras indicaciones de que los principios de la regulaci6n genica Figura 9-13 Un homeodominio
establecidos en bacterias tambien son validos para los organismos superiores. unido a su secuencia especffica en el
S610 en Drosophila, se han descrito mas de 60 proteinas homeodominio y se han DNA. EI homeodominio se pliega en
identificado proteinas con homeodominio en practicamente todos los organis- tres helices que se empaquetan
estrechamente por interacciones
mos que se han estudiado, desde la levadura hasta el hombre.
hidrof6bicas (A). La regi6n que
En la Figura 9-13 se muestra la estructura del homeodominio unido a su se- contiene las helices 2 y 3 se parece
cuencia de DNA especifica. Mientras que el motivo helice-giro-helice de las pro- mucho al motivo estructural helice-
giro-helice, con la helice de
reconocimiento (rojo) estableciendo
contactos importantes con el surco
mayor (B). Por ejemplo, la asparagina
de la helice 3 entra en contacto con
una adenina tal como se muestra en la
Figura 9-9. Tambien se establecen
contactos con pares de bases en el
surco menor mediante un brazo
flexible unido a la helice 1. EI
homeodominio mostrado aqui
procede de una proteina reguladora de
levadura, pero es casi identico ados
homeodominios de Drosophila que
interaccionan con el DNA de forma
similar. (Adaptado de C. Wolberger et
al., Cell 67: 517-528,1991. Cell
Press.)

438 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Figura 9-14 Un tipo de proteina con
25 1 dedo de zinc. Esta protefna pertenece
HOOC---N'K, 23 3 V
/K/ --- NH2 a la familia de protefnas con dedos de
/H C, zinc CyS"Cys-His-His, llamadas asf por
V G los aminml.cidos que unen el zinc. Este
R/ I
, l dedo de zinc procede de una protefna
Q, / de rana, de funci6n desconocida.
H 19 6 C
I I (A) Dibujo esquematico de la
R E secuencia de aminoacidos del dedo de
~ I zinc. (B) La estructura tridimensional
I R
l I del dedo de zinc esta formada por una
I 5 lamina ~ antiparalela (aminoacidos 1
~ I all0), seguida de una helice a
5
,K /
F 10
(aminoacidos 12 al24). Los cuatro
, /
V aminoacidos que unen el zinc (Cys 3,
E Cys 6, His 19 e His 23) mantienen
(A)
12 fuertemente unido un extrema de la
heIice a al otro extrema de la lamina ~.
(Adaptado de M.S. Lee et al., Science
teinas reguladoras bacterianas esta frecuentemente inmerso en diferentes regio- 245: 635-637, 1989. 1989 the AASS.)
nes estructurales, el motivo helice-giro-helice de los homeodominios esta siem-
pre rodeado por la misma estructura (que forma el resto del homeodominio), 10
cual sugiere que el motivo es presentado al DNA siempre de la misma forma ba-
Figura9-15 Uni6naDNAdeuna
sica. Ademas, estudios estructurales muestran que proteinas de levaduras y de proteina con dedo de zinc. (A) La
Drosophila con homeodominio reconocen el DNA casi de la misma forma, a pe- estructura de un fragmento de una
sar de que existe :una identidad entre ellos de s610 17 de 10s.()O aminoacidos. protefna reguladora del rat6n unida a
su secuencia espedfica en el DNA. Esta
Existen diferentes tipos de motivos de union a DNA protefna reconoce el DNA a traves de
tres dedos de zinc del tipo Cys-Cys-
en forma de dedos de zinc 13 His-His (vease Figura 9-14)
El motivo helice-giro-helice esta formado exclusivamente por aminoacidos. Sin organizados en repetici6n directa.
embargo, un segundo grupo importante de motivos de uni6n a DNA utiliza una (B) Los tres dedos de zinc tienen
o mas moIeculas de zinc como elemento estructural. Aunque todos los motivos secuencias de aminoacidos similares y
que utilizan zinc se han denominado dedos de zinc (zinc fingers), esto se refie- entran en contacto con el DNA de
forma similar. Tanto entAl como en
re s610 a su aspecto en diagramas esquem<iticos que datan de su descubrimien-
(B) el Momo de zinc de cada dedo se
to inicial (Figura 9-14A). Estudios estructurales posteriores han permitido de- ha representado como una pequefia
mostrar que realmente se trata de diferentes grupos, de entre los que s610 se esfera. (Adaptado de N. Pavletich y C.
describiremos. El primer tipo fue descubierto inicialmente en la proteina que Pabo, Science 252: 819-817, 1991.
activa la transcripci6n del RNA ribosomal eucariota. Se trata de una estructura 1991 the MAS.)

COOH

COOH

(A) (8)

Motivos estructurales de uni6n a DNA en las proteinas de regulaci6n genica 439

 Figura 9-16 Una proteina con declo
de zinc de la familia de los receptores
intracelulares, unida a su secuencia
especffica de DNA. Este es un ejemplo
de una proteina con dedo de zinc del
tipo Cys-Cys-Cys-Cys, denominada asi
por los aminoacidos que unen el
Momo de zinc. Se muestra un dimero
de la proteina de union aI DNA (rojo) , y
se han eliminado todas las cadenas
lateraIes excepto las coloreadas en
amarillo, que forman contactos con el
DNA (verde). (Adaptado de B.F. Luisi et
aI., Nature 352: 497-505, 1991. 1991
Macmillan Magazines Ltd.; fotograffa
cortesia de Jay Thomas.)

simple, formada por una helice a y una lamina ~, mantenidas unidas por el zinc
(Figura 9-14B). Este tipo de dedo de zinc se encuentra frecuentemente agrupa-
do con otros dedos de zinc adicionales, organizados uno detnis de otro de
modo que la helice a pueda contactar con el surco mayor del DNA, formando
una serie casi continua de helice a a 10 largo del surco. De esta forma se obtiene
una interaccion DNA-protefna fuerte y especffica a traves de la repeticion de
una unidad estructural basica (Figura 9-15). Una ventaja particular de este mo-
tivo es que la fuerza y especificidad de la interaccion DNA-protefna se pudo
ajustar durante la evolucion mediante cambios en el mlmero de repeticiones de
los dedos de zinc. Resulta diffcil de imaginar como podrfan organizarse en for-
ma de dominios repetidos cualquiera de los otros motivos que se discuten en
esta seccion.
El otro tipo de dedos de zinc se encuentra en la gran familia de protefnas re-
ceptoras intracelulares (descritas en el Capftulo 15). Forma una estructura dife-
rente (similar al motivo procariota helice-giro-helice) en el que dos helices a se
mantienen juntas mediante dos Momos de zinc. De forma similar a las protefnas
helice-giro-helice, forman dfmeros que permiten a una de las dos helices a de
cada subunidad interaccionar con el surco mayor del DNA (Figura 9-16). Aun-
que la estructura de los dos tipos de dedos de zinc es diferente, comparten dos
rasgos importantes: ambas utilizan zinc como elemento estructural y ambas uti-
lizan la helice a para reconocer el surco mayor del DNA.

Las laminas p tambien pueden reconocer el DNN4

En los motivos de union a DNA descritos hasta el momenta tan solo se utiliza-
ban helices a como estructura capaz de reconocer secuencias especfficas de
DNA. Sin embargo, un grupo de protefnas reguladoras ha desarrollado una es-
trategia de reconocimiento diferente y no menos ingeniosa. En este caso la in-
formacion sobre la superficie del surco mayor es lefda por una lamina ~ de dos
hebras, con las cadenas laterales de los aminoacidos extendidas desde la lamina
hacia el DNA, como se muestra en la Figura 9-17. Como en el caso del reconoci-
miento mediante helice a, este motivo en lamina ~ puede reconocer muchas se-
cuencias de DNA diferentes; la secuencia de DNA exacta reconocida depende de
los aminoacidos que formen la lamina 13.

El motivo cremallera de leucina esta implicado tanto en el

reconocimiento del DNA como en la dimerizaci6n 15
Muchas protefnas reguladoras reconocen el DNA como dfmeros, probablemen-
te debido a que, como se ha visto, se trata de una forma simple de alcanzar una
elevada especificidad de union (vease Figura 9-12). Habitualmente, la region de

440 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Figura 9-17 La proteina represora
bacteriana met. La protefna represora
bacteriana met regula los genes que
catalizan la sfntesis de metionina.
Cuando este aminoacido es
abundante, se une al represor
causando un cambio en la estructura
de la protefna que Ie permite unirse
fuertemente al DNA, inactivando la
sfntesis de las enzimas. (A) Para poder
unirse fuertemente al DNA, el represor
met ha de estar acomplejado con
S-adenosil metionina, mostrada en
rojo. Se muestra en verde una
subunidad de la protefna dirnerica, y la
otra se muestra en azul. Las dos
laminas ~ que se unen al DNA estan
formadas por una cadena de cada
1a proteina responsable de la dimerizaci6n es diferente a la que es responsable subunidad, mostradas en azul oscuro y
verde oscuro. (B) Diagrama
de la uni6n al DNA (vease Figura 9-11). Sin embargo, un motivo combina ambas
simplificado del represor met unido al
funciones de una forma elegante y econ6mica, el motivo del cremallera de leu-
DNA, que muestra como las laminas ~
dna. Se denomina asi por la forma en que dos helices a, una de cada mon6me- de doble hebra del represor se unen al
ro, se mantienen unidas formando un corto enrollamiento (descrito en el Capi- surco mayor del DNA. Para una mayor
tulo 3). Las helices se mantienen unidas por interacciones entre las cadenas claridad se han omitido las otras
laterales hidrof6bicas de algunos aminmicidos (frecuentemente leucinas), que regiones del represor (A, adaptado de
se extienden desde un lado de cada helice. Exactamente despues del dominio de W. Somers y S. Phillips, Curro Opin.
dimerizaci6n, las dos helices a se separan una de otra formando una estructura Struc. BioI. 1: 89-98, 1991, Current
en forma de Y, 10 que permite a sus cadenas laterales contactar con el surco ma- Sciences; B, adaptado de S. Phillips,
yor del DNA. Asi pues el dimero pinza la doble helice como una pinza de tender Nature 359: 387-393, 1992. 1992
ropa en un tendedero (Figura 9-18). Macmillan Magazines Ltd.)
Las proteinas reguladoras que contienen una cremallera de leucina pueden
formar tanto homodimeros, en los que los dos mon6meros son identicos, como
heterodimeros, en los que los mon6meros son diferentes. Debido a que los hete-
rodfmeros se forman tfpicamente a partir de proteinas con especificidad de
uni6n al DNA diferente, la capacidad de la cremallera de leucina de formar hete-
rodfmeros incrementa enormemente el repertorio de especificidades de uni6n a
DNA que pueden presentar estas protefnas. Por ejemplo, en la Figura 9-19 se
muestran tres posibles especificidades de secuencia que se podrian obtener con
s610 dos mon6meros, mientras que se podrian obtener seis a partir de unica-
mente tres mon6meros, y asf sucesivamente. Este es un ejemplo de control com-
binatorio, en el que son las combinaciones de protefnas, mas que las protefnas
individuales, las que controlan un proceso celular. Es uno de los mecanismos
mas importantes que utilizan las celulas eucariotas para controlar la expresi6n
genica. Como se discutira mas adelante, la formaci6n de complejos heterodime-
ricos entre protefnas reguladoras es uno de los varios posibles mecanismos com-
binatorios para el control de la expresi6n genica.
Existen numerosos tipos de protefnas con cremalleras de leucina, y no todas
elIas pueden formar heterodimeros con cualquier otra. De otra manera, la canti-
dad de interrelaciones entre los circuitos de regulaci6n genica de una celula se-
ria tan grande como para producir el caos. Que un heterodimero se forme 0 no

Figura 9-18 Un dfmero en cremallera de leucina unido al DNA. Dos

dominios de union al DNA en forma de helice a (abajo) dimerizan a traves de
la region de la cremallera de leucina ("leucine zipper") (arriba) formando una
estructura en Yinvertida. Cada uno de los brazos de la Yesta formado por
una helice a simple, una de cada monomero, que entra en contacto con la
secuencia especffica de DNA en el surco mayor. Cada una de las helices a se
une a una mitad de la estructura simetrica del DNA. (Adaptado de T.E.
Ellenberger et al., Cell 71: 1223-1237, 1992. Cell Press.)

'Motivos estructurales de uni6n a DNA en las proteinas de regulaci6n genica 441

 Figura 9-19 La heterodimerizaci6n
de proteinas con cremalleras de
leucina permite alterar su
especificidad de uni6n al DNA. Los
homodfmeros de cremallera de
DNA :3J.a1.1ill: leucina se unen a secuencias de DNA
simetricas, como se muestra en los
dibujos de la izquierda y del centro.
Estas dos protefnas reconocen
depende de c6mo se ajusten las superficies hidrof6bicas de las dos helices a que diferentes secuencias de DNA, como
se indica por las regiones coloreada en
forman la cremallera, 10 que a su vez depende de la secuencia de aminoacidos
rajo y azul en el DNA. Estos dos
de las dos regiones de la cremallera. Asf, cada protefna de la celula que tenga
mon6meros diferentes se pueden
una cremallera de leucina s6lo podra formar dfmeros con una pequena fracci6n combinar formando un heterodfmero
de otras protefnas con cremalleras de leucina. que ahora reconoce una molecula de
DNA hfbrida compuesta por una
EI motivo helice-bucle-helice tambien esta implicado en la regi6n raja y una azul.
dimerizacion y la union al DNA16
Otro motivo importante de uni6n al DNA, relacionado con el dedo de leucina, es
el motivo helice-bucle-helice (HLH, de Helix-Loop-Helix), que no se ha de con-
fundir con el h(Hice-giro-helice descrito pieviamente. Un motivo HLH esta for-
mado por una helice a corta conectada por un bucle a una helice a mas larga, La
flexibilidad del bucle permite que una de las helices se doble y quede alineada
con la otra. Como se observa en la Figura 9-20, esta estructura de dos helices se
une tanto al DNA como al motivo HLH de otra protefna con motivo HLH. Del
mismo modo que las protefnas con dedo de leucina, esta segunda protefna pue-
de ser la misma (obteniendose un homodfmero) 0 diferente (obteniendose un
hctcrodfmero), y es la helice a que sale de la superficie de dimerizaci6n la que
establece contactos especfficos con el DNA.
Algunas de las protefnas HLH carecen de la extensi6n de helice a responsa-
ble de la uni6n al DNA. Estas protefnas truncadas pueden formar heterodfmeros
con protefnas con motivo HLH completo, pero los heterodfmeros son incapaces
de unirse estrechamente al DNA ya que s610 pueden formar la mitad de los con-
tactos necesarios, Asi pues, la heterodimerizaci6n aporta a la celula tanto un
medio de crear dfmeros con una especificidad de secuencia de DNA hibrida,
como un litH mecanismo de control que permitirfa a una celula iriactivar protef-
nas reguladoras especfficas (Figura 9-21).

Aun no es posible predecir la secuencia de DNA que

es reconocida por una protefna reguladora 17
Los motivos de uni6n a DNA que se han descrito previamente aportan un sopor-
te estructural desde el que se extienden las cadenas laterales de los aminoacidos
contactando con pares de bases especfficos en el DNA. Seria razonable pregun-

Figura 9-20 Un dimero de proteina

helice-bude-helice unido al DNA. Los
cuatro mon6meros se mantienen
unidos en un haz de cuatro helices:
cada mon6mero contribuye con dos
helices a conectadas mediante un
bucle flexible de protefna (rajo). A las
dos helices a que se proyectan desde el
ovillo se une una secuencia de DNA
especffica. (Adaptado de Ferre-
D'Arnare et aI., Nature 363: 38-45, 1993.
1993 Macmillan Magazines Ltd.)

442 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 homodimero HLH activo heterodimero HLH inactivo Figura 9-21 Regulacion inhibidora
por las proteinas HLH truncadas. F.l
motivo HLH es responsable tanto de la
dimerizacion como de la union a DNA.
Ala izquierda, un homodimero HLH
reconoce una secuencia simetrica de
DNA. A la derecha, la union de una
protefna HLH completa a una protefna
HLH truncada que carece de la helice
ex de union al DNA forma un
DNA heterodfmero incapaz de unirse
fuertemente al DNA. Si la protefna
truncada esta presente en ex~eso
puede bloquear la homodimerizacion
de la protefna completa y de este
tarse si se trata de un codigo de apareamiento aminmicido-par de bases sencillo: modo impedir su union al DNA.
por ejemplo, ies siempre el par de bases G-C el que se une a un cierto aminmici-
do? La respuesta parece ser no. En el Capftulo 3 se describio que a partir de solo
20 aminmicidos era posible obtener superficies de pnicticamente cualquier for-
ma y naturaleza qufmica, y una protefna reguladora utiliza diferentes combina-
ciones de las cadenas laterales de sus aminoacidos para crear una superficie que
sea exactamente complementaria a la de la secuencia de DNA que reconoce. Pa-
rece. por 10 tanto que un mismo par de bases puede ser reconocido de muchas
formas. Sin embargo, es posible que pronto los biologos moleculares puedan
entender suficientemente bien el reconocimiento de DNA-protefna como para
poder disefiar protefnas que reconozcan cualquier secuencia de DNA.

Un ensayo de movilidad en gel permite detectar con gran facilidad

protefnas que se unen a una secuencia especffica de DNN8
Los analisis geneticos que fueron la clave para aislar las protefnas reguladoras de
bacterias, levaduras y Drosophila son muchas veces imposibles dellevar a cabo
en vertebrados. Por ello, el aislamiento de las protefnas de regulacion genica de
los vertebrados tuvo que esperar al desarrollo de diferentes aproximaciones ex-
perimentales. Muchas de ellas se basan en la deteccion en un extracto celular de
una protefna de union a DNA que reconoce especfficamente una secuencia de la
que se sabe es importante para controlar la expresion de un gen particular. La
forma mas comiln de detectar protefnas de union a secuencias especfficas de
DNA es usar una tecnica que se basa en el efecto que tiene la union de una pro-
teina sobre la migracion de moleculas de DNA en un gel, bajo un campo electri-
co.
Una molecula de DNA esta fuertemente cargada negativ<;lmente, por 10 que
cuando se somete a un campo electrico se desplaza con rapidez hacia el electro-
do positivo. En geles de poliacrilamida las moleculas de DNA se separan en base
a su tamafio debido a que las moleculas menores son capaces de penetrar con
mayor facilidad que las mayores en la fina malla del gel. La presencia de molecu-
las de protefna unidas a las moleculas de DNA provocaran un desplazamiento
mas lento del DNA a traves del gel; en generalla movilidad del DNA se reducira
tanto mas cuanto mayor sea el tamafio de la molecula de protefna unida. Este fe-
nomeno es la base del andlisis de retraso en gel (gel-mobility shift assay), que per-
mite detectar incluso trazas de protefnas de union a DNA especfficas de secuen-
cia. En este ensayo se utiliza un fragmento corto de DNA, de longitud y secuencia
determinadas (producido por clonaje de DNA 0 por sfntesis qufmica) que es
marcado.radiactivamente y se mezcla con un extracto celular; la mezcla se carga
en un gel de poliacrilamida y se analiza por electroforesis. Si el fragmento de
DNA corresponde a una region cromosomica en la que, por ejemplo, se unen va-
rias protefnas de union a secuencias especfficas, laautorradiograffa revelara una
serie de bandas de DNA, cada una de las cuales sufrini un retraso distinto, 10 que
representa diferentes complejos DNA-protefna. Las protefnas responsables de

Motivos estructurales de uni6n a DNA en las protefnas de regulaci6n genica 443

 fragmento de DNA Figura 9-22 Amllisis de retraso en gel.
fragmento de DNA
radiactivo
1III!I
celular
.C1
radiactivo + extracto EI principio del ensayo se muestra
esquematicamente en (A). Se mezcla
un extracto de una linea celular

.,c:t
, C4 productora de anticuerpos con un
~C2 fragmento de DNA marcado

~C5
radiactivamente, que contiene
~Co
alrededor de 160 nucle6tidos de una
~C3 CI>
"0 secuencia de DNA reguladora de un
c: gen que codifica la cadena ligera del
C6 '0
_ _ _ _ _ _ DNA libre 'u anticuerpo producida por la linea
~
E celular. EI efecto de las protefnas del
CI>
<.>
c:
o<.> extracto sobre la movilidad del
fragmento de DNA se analiza por
electroforesis seguida de
e
(/)
C1- autorradiograffa. Los fragmentos de
C1 '0; DNA libres se desplazan rapidamente
~
-C4 hacia la base del gel, mientras que los
C4
C2
~ -C5 que se unen a protefnas son
~
a; retardados; la observaci6n de 6 bandas
C5
C3 I -~
-DNAlibre
de retraso sugiere que en el extracto
existen 6 diferentes protefnas de uni6n
<lL-----L__.L.-_----L_ _..l-_ _--l
C6
10 20 30 40 a DNA especfficas de secuencia
DNA libre (indicadas como Cl a C6). (Para una
(A) (B) numero de fracci6n eluida de la columna
resultado del gel con una concentraci6n creciente de sales mayor simplicidad los fragmentos de
DNA con mas de una protefna unida se
han omitido en la figura.) En (Bl, el
extracto fue fraccionado por una
cada una de las bandas de retraso en el gel se pueden ir separando unas de otras tecnica cromatografica estandar
mediante fraccionamiento del extracto celular (vease Figura 9-22). (arriba) y cada fracci6n se mezcl6 con
el fragmento radiactivo de DNA y se
carg6 en un carrH de un gel de
La cromatografia de afinidad de DNA facilita la purificaci6n poliacrilamida, analizeindose como en
de proteinas de uni6n a secuencias especificas de DNA19 (A). (B, modificado de C. Scheidereit,
A. Heguyy R.G. Roeder. Cell, 51: 783-
Una vez se conoce la secuencia de DNA reconocida por una proteina regulado- 793, 1987. Cell Press.)
ra, es posible utilizar un metodo de purificaci6n particularmente potente, deno-
minado cromatograffa de afinidad de DNA. Por metodos quimicos se sintetiza
un oligonucle6tido de doble cadena de la secuencia adecuada, y se une a una
matriz porosa insoluble, como por ejemplo la agarosa; la matriz con el oligonu-
cle6tido unido se utiliza para construir una columna que unin! selectivamente
las proteinas que reconozcan la secuencia de DNA (Figura 9-23). De esta forma
se han conseguido sin gran esfuerzo purificaciones tan grandes como de 10 000
veces.
Aunque en los eucariotas superiores muchas de las proteinas que se unen a
secuencias especfficas de DNA estan presentes en unos cuantos miles de copias
en cada celula (y generalmente s6lo representan un 1/ 50 000 de la proteina total
de la celula), mediante cromatograffa de afinidad es posible aislar suficiente can-
tidad de proteina pura como para obtener una secuencia parcial del extrema
amino terminal. A partir de esta secuencia se puede sintetizar un oligonucle6tido
que puede utilizarse como sonda para identificar el clon de cDNA correspondien-
te, ya que hibridara especificamente con la secuencia que codifica la proteina
(descrito en el Capitulo 7). El clon perrnite conocer la secuencia de aminoacidos
completa y producir la proteina en cantidades ilimitadas.
En algunos casos, el clon cDNA que codifica una proteina de uni6n a DNA
especffica de secuencia, se ha obtenido de una forma mas directa utilizando un
segundo metoda aun mas potente que la cromatograffa de afinidad a DNA. Este
metodo se inicia con una genoteca de cDNA construida con un vector de expre-
sian apropiado (descrito en el Capitulo 7). Una colonia individual de bacterias
(si el vector de expresi6n es un plasmido), 0 una placa de lisis (si el vector usado
es un virus) producira grandes cantidades de la proteina que codifica el cDNA

444 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 todas las proteinas proteinas de uni6n Figura 9-23 Cromatograffa de
celulares a DNA de la etapa 1
afinidad de DNA. En la primera etapa
ETAPA 1 ETAPA2
todas las proteinas que pueden unir

: . DNA se separan del resto de las
proteinas celulares en una columna
que contiene una gran cantidad de
secuencias diferentes de DNA. La
mayoria de las proteinas de uni6n a
columna con una matriz columna con una matriz secuencias especificas de DNA tienen
que contiene DNA de que contiene 5610
muchas secuencias en general una afinidad debit por el
diferentes DNA (no especifica) y son retenidas en
la columna. Esta afinidad es debida

el lavado con
soluciones de baja
salinidad eluye las
el lavado con soluciones
de salinidad media eluye
todas las proteinas no
es ecificas para
.:
~.

-1 fundamentalmente a interacciones
i6nicas, de forma que las protefnas
pueden ser eluidas de la columna
mediante soluciones de una
concentraci6n salina moderada. En
una segunda etapa, la mezcla de
proteinas que no se
unen a DNA proteinas de uni6n a DNA se pasa a
traves de una columna que contiene
ellavado con soluciones ~ exclusivamente DNA de una secuencia
el lavado con soluciones ... de salinidad elevada eluye particular. Tipicamente la mayoria de
de salinidad media eluye las escasas proteinas que
muchas protein as que proteinas de uni6n a DNA se uninin,
especificamente
se unen a DNA
debilmente, mediante interacciones
inespecificas. Estas senln eluidas de
nuevo mediante soluciones de
salinidad moderada, dejando en la
que contiene. Para localizar la colonia que produce la proteina buscada se utiliza columna aquellas proteinas
como sonda el oligonucleotido que contiene la secuencia de union especifica, (generalmente una 0 muy pocas) que
marcado radiactivamente, para hibridar replicas en filtros de miles de colonias se unen especificamente, y por ella
individuales (vease Figura 7-26). Se seleccionan las pocas colonias que produz- firmemente, ala secuencia de DNA
can la protefna que se une especificamente al oligonucleotido marcado, se puri- particular. Estas proteinas retenidas se
pueden eluir utilizando soluciones de
fican y se analizan para localizar la que produce la proteina buscada.
elevada concentraci6n de sales.
Debido a que estas tecnicas han sido desarrolladas recientemente, solo se
han podido caracterizar algunos de los muchos cientos de proteinas de union a
DNA especificas de secuencia que se cree estan presentes en las celulas de los
eucariotas superiores.

Resumen
Las protefnas de regulaci6n genica reconocen cortas secuencias espedficas de DNA
de doble helice y de ese modo determinan cOOles de los miles de genes de una celula se
han de transcribir. Se han identificado centenares de protefnas de regulaciOn genica
en un amplia variedad de organismos. Aunque cada una de estas protefnas tiene
una serle de rasgos unicos, muchas se unen al DNA como homodfmeros 0 heterodf-
meros que reconocen al DNA mediante uno de entre un pequeno numero de motivos
estructurales, que incluyen el motivo helice-giro-helice, el homeodominio, los dedos
de zinc, las cremalleras de leucina y el motivo helice-bucle-helice. La secuencia de
aminodcidos que se pliega en el dominio de reconocimiento determina la secuencia
de DNA que sera reconocida. Se han desarrollado algunas potentes tecnicas para
identificar y purificar las protefnas de uniOn a secuencias especificas de DNA.

Como funcionan los interruptores geneticos 20

En la seccion anterior se han descrito los componentes basicos de los interrup-
tores geneticos -las proteinas de regulacion genica y las secuencias especificas
de DNA que estas proteina reconocen. En esta seccion se discutira como actl1an
estos componentes para activar e inactivar genes como respuesta a una variedad
de sefiales.

C6mo funcionan los interruptores geneticos 445

 Hace solo 40 anos la idea de que los genes se podfan activar e inactivar fue
revolucionaria. Este concepto fue un gran avance, y nacio del estudiode como
las bacterias eran capaces de adaptarse a cambios en la composici6n del medio
de crecimiento. Estudios paralelos realizados con el bacteri6fago lambda llega-
ron a muchas conclusiones similares y contribuyeron a establecer las bases de 10
que sabemos actualmente respecto a c6mo se regula la expresi6n de los genes. A
las celulas eucariotas se aplican los mismos principios aunque la enorme com-
plejidad de la regulaci6n genica en los organismos superiores, combinada con la
complicacion de que el DNA en dichos organismos se encuentra empaquetado
en forma de cromatina, crea nuevas posibilidades para el control, como se vera
mas adelante. Comenzaremos, sin embargo, con el ejemplo mas sencillo -un in-
terruptor abiertol cerrado en bacterias que responde a una senal unica.

EI represor de tript6fano es un interruptor simple

que activa y desactiva genes en bacterias21
EI cromosoma de la bacteria E. coli, un organismo unicelular, esta formado por
una molecula de DNA circular de alrededor de 5 x 106 pares de nucleotidos. Este
DNA es sufidente para codificar 4000 protefnas, aunque simultaneamente solo
se fabrican algunas de estas protefnas. E. coli regula la expresi6n de muchos de
sus genes de acuerdo con la disponibilidad de fuentes de alimento que son acce-
sibles en el medio. Son cinco los genes que en E. coli codifican la produccion del
aminoacido tript6fano, y estan organizados en un grupo en el cromosoma,
transcribiendose desde un unico promotor como una larga molecula de mRNA
(Figura 9-24). Tal como se ha descrito en el Capitulo 6, el promotor es la secuen-
cia de DNA especffica que dirige la union de la RNA polimerasa al DNA, abrien-
do la doble helice e iniciando la sfntesis de una molecula de RNA. Sin embargo,
cuando hay triptOfano presente en el medio y este penetra en la celula (por
ejemplo cuando la bacteria se encuentra en el tracto digestivo de un animal que
acaba de ingerir protefnas), estas enzimas ya no se necesitan y su producci6n se
detiene.
Actualmente conocemos con gran detalle las bases moleculares de este in-
terruptor. Dentro del promotor que dirige la transcripci6n de los genes biosin-
teticos de triptofano se encuentra un operador. Este operador es simplemente
una corta secuencia de DNA regulador, de secuencia definida, que es reconoci-
da por una protefna reguladora helice-giro-helice denominada represor del
tript6fano (vease Figura 9-11). El promotor y el operador se encuentran organi-
zados de forma que cuando el operador esta unido al represor del triptOfano se
bloquea el acceso de la RNA polimerasa al promotor, de modo que se impide la
expresion de las enzimas productoras de tript6fano (Figura 9-25). Este bloqueo
esta regulado de una forma ingeniosa: la protefna represora solo puede unirse
al DNA del operador cuando se ha unido a su vez ados moltkulas del aminoaci-
do triptOfano. Como se ve en la Figura 9-26, la union de tript6fano desplaza los
motivos helice-giro-helice del represor de modo que se pueden presentar de
manera apropiada en el surco mayor del DNA; sin triptOfano, los motivos que-
dan en el interior de la protefna y la protefna es incapaz de unirse al operador.
Asf pues, el represor del triptOfano es un dispositivo simple que controla la pro-
duccion de las enzimas biosinteticas del triptofano, activando 0 desactivando
dicha producci6n en funcion de la disponibilidad de triptofano libre. A este
Figura 9-24 Los genes agrupados que
promotor
codiflcan la sfntesis del trlpt6fano en
,------, E D C B A E. coli. Estos cinco genes se
_II

..... ~
l
~ ~ ~ ~
cromosoma de E. coli

molecula de mRNA
transcriben como una sola moIecuia
de mRNA, rasgo que permite que su
expresi6n sea regulada de manera
coordinada. Los grupos de genes

...
transcritos como un unico mRNA son

enzimas de la biosfntesis del tript6fano
comunes en bacterias. A cada uno de
esos grupos se Ie denomina un oper6n.

446 Capitulo 9 : EI control de la eipresi6n genica

 promotor Figura 9-25 Activaci6n y
I I
-35 +1 desactivaci6n de los genes para el
L-.J
operador

~
inicio de transcripci6n
tript6fano. Si el nivel de triptofano en
el interior de la celula es bajo, la RNA
polimerasa se une al promotor y
transcribe los cinco genes del operon
de tript6fano (trp). Sin embargo, si el
tript6fano
nivel de triptofano es alto, el represor
.Ai' represor inactivo de tript6fano se activa uniendose al
operador, impidiendo la union de la
RNA polimerasa
RNA polimerasa al promotor. Siempre
1-==jilepresor a:ivo que el nivel de tript6fano se reduzca, el
===--.----'~
- represor libera su triptofano y se
inactiva, permitiendo que la
mRNA~ polimerasa inicie la transcripcion de
LOS GENES ESTAN ACTIVOS LOS GENES ESTAN INACTIVOS estos genes.

modo de regulaci6n se Ie denomina control negativo ya que la forma activa de

la proteina de uni6n a DNA desactiva los genes, y a las proteinas reguladoras
Figura 9-26 La union del tript6fano a
que actuan de este modo se las denomina represores transcripcionales 0 protef-
la proteina represora del tript6fano
nas represoras genicas.
cambia la confonnaci6n del represor.
El cambio conformacional capacita a
Los activadores transcripcionales activan los genes22 esta protefna reguiadora para unirse
fuertemente a una secuencia
En el Capitulo 6 se vio que la RNA polimerasa de E. coli puede unirse a un pro- especffica de DNA y bloquear la
motor e iniciar la transcripci6n del DNA. Sin embargo, algunos promotores bac- transcripcion de los genes que
terianos son poco funcionales por si mismos, ya sea porque son poco reconoci- codifican las enzimas necesarias para
dos por la RNA polimerasa 0 porque esta tiene dificultades en abrir la helice de la produccion de tript6fano (eloperon
DNA en el inicio de la transcripci6n. En cualquier caso estos promotores de es- trp). En la figura se muestra la
casa funci6n pueden recuperar la funcion normal mediante proteinas regulado- estructura tridimensional de esta
ras que se unen en un lugar proximo del DNA, contactando con la RNA polime- protefna bacteriana con motivos
rasa de forma que incrementan enormemente la probabilidad de que se inicie el helice-giro-helice, tanto unida al
triptofano como libre, determinada
transcrito. Este modo de regulacion se denomina control positivo porque la for-
pOl difraccion de rayos X. La union del
ma activa de la proteina de union al DNA activa los genes, y las proteina regula- triptofano aumenta la distancia entre
doras que funcionan de este modo se denominan activadores transcripcionales 0 las dos helices de reconocimiento del
protefnas activadoras genicas. homodfmero, permitiendo al represor
Como en el caso del control negativo por un represor transcripcional, un ac- adaptarse estrechamente al operador.
tivador transcripcional puede actuar como un interruptor genetico simple. Por (Adaptado de R. Zhang y et al., Nature
ejemplo, la proteina activadora bacteriana CAP (de Catabolite Activator Protein, 327:591-597,1987. 1987 Macmillan
proteina activadora por catabolito), activa los genes que capacitan a E. coli para Magazines Ltd.)

tript6fano

~
l

LOS GENES ESTAN ACTIVOS LOS GENES ESTAN INACTIVOS

Como funcionan los interruptores geneticos 447

 (A)
REGULACI6N NEGATIVA REGULACI6N POSITIVA
(6)
una protein a activadora unida impide la transcripci6n una proteina activadora unida permite la transcripci6n

protefna activadora RNA polimerasa

proteina represora unida

unida :?8~ G_E_N_I_N_A_CT_I_V_O GEN ACTIVO

UN LlGANDO
SE UNE A LA
PROTEINA
REGULADORA f\ Jf\ 5'
mRNA

3'
Y LA SEPARA
DEL DNA
i *
II
LA ADICI6N DEL UGANDO
ACTIVA EL GEN POROUE
~ proteina
LA ADICI6N DEL UGANDO
SEPARA LA PROTEfNA
DESACTIVA EL GEN POROUE
REPRESORA
SEPARA LA PROTEfNA
ACTIVADORA

GEN INACTIVO GEN ACTIVO

UN LIGAN DO

r.
SE UNE A LA

~It
PROTEINA mRNA
REGULADORA
CAPACITANDOLA
PARA UNIRSE
5' 3'
LA EUMINACI6N DEL represor inactivo
ALDNA UGANDO ACTIVA EL proteina
GEN POROUE SEPARA
LA EUMINACI6N DEL
LA PROTEfNA REPRESORA
UGANDO DESACTIVA EL
GEN POROUE SEPARA
LA PROTEfNA ACTIVADORA

usar fuentes alternativas de carbono cuando la glucosa, su fuente preferida, no Figura 9-27 Resumen de los
es accesible. La disminucion de los niveles de glucosa en el medio induce un in- mecanismos que utilizan las
cremento del nivel de la moh~cula sefializadora intracelular AMP ciclico (cAMP), protefnas reguladoras de genes para
que se une ala protefna CAP, capacitandola para unirse a secuencias de DNA es- controlar la transcripci6n en los
pecificas proximas a ciertos promotores, y de este modo activa los genes adecua- procariotas. (A) Regulaci6n negativa;
(B) regulaci6n positiva. Observese que
dos. En este caso la expresion del gen diana es inducida 0 reprimida en funcion
la adici6n de un ligando inductor
de que los niveles de cAMP sean altos 0 bajos respectivamente. En la Figura 9-27 puede activar un gen ya sea separando
se resumen las diferentes maneras en que se puede controlar un gen por control del DNA a una protefna represora de
positivo 0 negativo. genes (panel superior izquierdo) , 0
Los activadores y los represores transcripcionales tienen un disefio similar capacitando a una protefna activadora
en muchos aspectos. Por ejemplo, tanto el represor del triptofano como el acti- de genes para que se una al DNA
vador transcripcional CAP presentan un motivo helice-giro-helice y requieren la (panel inferior derecho). Del mismo
presencia de un pequefio cofactor para unirse al DNA. De hecho, se sabe que al- modo, la adici6n de un ligando
gunas protefnas bacterianas (incluyendo CAP y el represor del bacteriofago inhibidor puede desactivar un gen
lambda) actuan como activadoras 0 como represoras en funcion de la posicion separando del DNA a una protefna
exacta de la secuencia de DNA que reconocen en relacion al promotor: si ellugar activadora de genes (panel superior
de union a la protefna solapa el promotor, la polimerasa no puede unirse y la derecho) 0 capacitando a una protefna
represora de genes para que se una al
protefna actua como represor (Figura 9-28).
DNA (panel inferior izquierdo).

Un activador transcripcional y un represor transcripcional

controlan el oper6n lac 23
Es posible disefiar interruptores geneticos mas complicados combinando con-
troles negativos y positivos. Por ejemplo, el operon lac en E. coli, a diferencia
del operon trp, esta controlado por controles transcripcionales negativos y po-
sitivos: el represor lac y la protefna CAP respectivamente. El operon lac codifica
las protefnas necesarias para transportar el disacarido lactosa al interior de la
celula para su utilizacion metabolica. CAP, como ya se ha visto, capacita a la

448 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Figura 9-28 Algunas proteinas reguladores bacterianas actuan bien represor de lambda RNA polimerasa
activadores 0 como represores de la transcripcion dependiendo del
emplazamiento concreto de sus secuencias de union al DNA. Un ejemplo de
ella es el represor del bacteri6fago lambda. La proteina actua como un
activador transcripcional aportando un contacto favorable a la RNA 7...JIL...1- - - - , I - - - J
operador promotor
polimerasa (arriba). En la parte inferior de la figura el operador se localiza un
la transcripcion
par de bases mas pr6ximo al promotor, y en vez de ayudar a la polimerasa, es activada por
ahora compite con esta por la uni6n al DNA. EI represor lambda reconoce a el represor de
lambda
su operador mediante un motivo helice-giro-helice, como se muestra en la
Figura 9-11.

bacteria para utilizar fuentes de carbono altemativas a la glucosa, como por

ejemplo la lactosa. Serfa sin embargo im1til para CAP inducir el oper6n lac si no ~
operador
L...I_ _--,1_ _----1

hubiera lactosa disponible, y el represor lac asegura que el oper6n lac este inac- promotor
la transcripcion
tivo en ausencia de lactosa. Esta organizaci6n permite al oper6n lac responder es reprimida por
integrando dos seiiales diferentes, de forma que s610 se activa cuando las condi- el represor de
ciones son las adecuadas: no debe de haber glucosa pero sf lactosa. Cualquier lambda

otra de las tres combinaciones posibles de seiiales mantiene al oper6n inactivo

(Figura 9-29).
La 16gica simple de este interruptor genetico atrajo la atenci6n de los bi610-
gos desde hace 50 aftos. Como se ha explicado anteriormente, las bases molecu-
lares de este interruptor fueron descubiertas gracias a una combinaci6n de ge-
netica y bioqufmica y aport6 los primeros detalles sobre c6mo se realiza el
control de la expresi6n de los genes. Aunque en los organismos superiores se
utilizan las mismas estrategias para controlar la expresi6n genica, los interrupto-
res geneticos son mucho mas complejos.

La regulaci6n de la transcripci6n en las celulas eucariotas

es compleja 24
El mecanismo de interruptor sensible ados seiiales que controla el oper6n lac es
elegante y sencillo. Sin embargo, es diffcil imaginar la complejidad que se aiiade
al sistema cuando se han de tener en cuenta muchas mas seiiales que pueden

lugar
de union Figura 9-29 Control dual del operon
lugar de de la RNA lugar de inicio para la sintesis de RNA lac. Los niveles de glucosa y de lactosa
union polimerasa
de CAP (promotor)
,--------, I
I controlan el inicio de la transcripcion
del operon lac a traves de sus efectos
_1!;\~'$')'14,tll"!!.
sobre la proteina represora de lac y
~ sobre CAP. La adicion de lactosa
operador gen lacZ
incrementa la concentraci6n de
alolactosa, que se une a la proteina
-80 -40 40 80
represora y la separa del DNA. La

--
LI_--'-_--LI_--'-_--L_--'-_--L1_ - - , -_ _I pares de nucleotidos
adicion de glucosa reduce el nivel de
+GLUCOSA OPERON INACTIVO porque AMP ciclico; como la proteina
'. ";>Ii CAP no esta unida
+LACTOSA represora CAP ya no tiene AMP ciclico
unido, la proteina CAP se libera del
represor
DNA y el oper6n se activa. En la Figura
+GLUCOSA OPERON INACTIVO tanto
porque el represor lac esta 9-8 se muestra como la proteina CAP

-
-LACTOSA
unido como porque la induce una curvatura en el DNA al
CAP proteina CAP no 10 esta
represor unirse; aqui no se muestra para
simplificar el esquema. LacZ, el primer
-GLUCOSA \' ,,}',":,Y ;"i"; ;~~~%~
OPERON INACTIVO porque
-LACTOSA el represor lac esta unido gen del operon lac, codifica la enzima
p-galactosidasa, que rompe la lactosa
en galactosa y glucosa.
-GLUCOSA
OPERON ACTIVO
+LACTOSA
RNA ~.~

C6mo funcionan los interruptores geneticos 449

regular la transcripcion del operon: el espacio necesario para colocar secuencias
reguladoras desbordaria nipidamente todo el espacio disponible leomo han
conseguido los eucariotas superar estas limitaciones y crear interruptores gene-
ticos mas complejos?
La regulacion de la transcripcion en los eucariotas difiere de la de las bacte-
rias en dos aspectos fundamentales. En primer lugar, las RNA polimerasas euca-
riotas no pueden iniciar la transcripcion por si mismas. Requieren la presencia
de una serie de proteinas, denominadas facto res generales de transcripci6n, que
han de ensamblarse en el promotor antes de que la transcripcion pueda iniciar-
se. Este proceso de ensamblaje presenta multiples etapas en las que la velocidad
de inicio de la transcripcion puede aumentar 0 disminuir como respuesta a se-
fiales de regulacion, y muchos proteinas reguladoras eucariotas actuan influyen-
do en estas etapas. En segundo lugar, muchas proteinas reguladoras de eucario-
tas pueden actuar incluso cuando se encuentran unidas al DNA a miles de
nucleotidos de distancia del promotor que regulan, 10 que significa que un de-
terminado promotor puede estar controlado por un numero casi ilimitado de se-
cuencias reguladoras dispersas por el DNA. A continuacion consideraremos es-
tas dos caracteristicas de la regulacion genica eucariota.

Las RNA polimerasas eucariotas requieren factores

de transcripci6n generales25
EI descubrimiento inicial de que las RNA polimerasas eucariotas purificadas no
podian iniciar la transcripcion in vitro llevo al descubrimiento y purificacion de
proteinas adicionales, los denominados factores generales de transcripci6n,
necesarios para este proceso. Estas proteinas no son simplemente subunidades
perdidas de la polimerasa; tienen que ensamblarse formando un complejo so-

r-.
bre el DNA en ellugar promotor con el fin de poder reclutar a la RNA polimerasa
TATAA
en ese lugar.
La Figura 9-30 muestra como se cree que se ensamblan los factores genera~

t------
les de transcripcion en los promotores utilizados por la RNA polimerasa II
(Pol II), la polimerasa que transcribe la gran mayoria de los genes eucariotas. El TFIID
proceso de ensamblaje se inicia con la union de TFIID a la secuencia TATA, una
secuencia corta de DNA de doble cadena formada esencialmente por nucleoti-
dos T y A. La secuencia TATA es un componente de casi todos los promotores
utilizados por Pol II y se encuentra localizada tipicamente 25 nucleotidos por

--
TFIIB
delante dellugar de inicio de transcripcion. TFIID esta compuesto por muchas
subunidades; la responsable de reconocer la secuencia TATA se denomina TBP
(de TATA Binding Protein) (Figura 9-31). Una vez se ha unido TFIID a su lugar
de union en el DNA, los demas factores de transcripcion y la RNA Pol II tambien
seunen.
Despues de que la RNA Pol II se haya unido al promotor, se ha de separar
del complejo de factores generales de transcripcion para poder iniciar la trans-
';1
TFIIH l RNA polimerasa II

Figura 9-30 Ensamblaje de los factores generales de transcripci6n

necesarios para la iniciaci6n de la transcripci6n por la RNA polimerasa II.
, En la primera etapa TFIID se une especfficamente ala secuencia TATA.
A continuaci6n TFIIB se une al complejo, seguido par la RNA polimerasa II
(Pol II) acompafiada de TFIIF. A continuaci6n TFIIE y TFIIH se unen al l
actividad protefna quinasa (TFH

complejo. En presencia de ATP, TFIIH fosforila Pol II, can 10 que se activa la
funci6n polimerasa y se inicia la transcripci6n. Ellugar de fosforilaci6n es
una larga cola polipeptfdica que se extiende desde la subunidad mayor de Pol
II. En los mamiferos esta formada par 52 repeticiones de la secuencia de
aminoacidos YSPTSPS (vease Figura 8-42) y las que son fosforiladas son las
cadenas laterales de los aminoacidos serina (S) y treonina (T) de esta
secuencia. Los facto res generales de transcripci6n han sido muy conservados
evolutivamente: par ejemplo, algunos de ellos,aislados a partir de celulas
SE INICIA LA TRANSCRIPCION
humanas, pueden ser reemplazados par los equivalentes delevadura.

450 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Figura 9-31 Estructura
tridimensional de TBP. La estructura
de esta subunidad de TFIID recuerda
una silla de montar que se adapta a la
doble helice de DNA. Aunque la
proteina presenta una gran simetria,
esta formada por una tinica cadena
COOH polipeptidica. Es probable que
originalmente esta proteina fuera un
dimero, y que el gen codificante del
mon6mero original se duplicara y
fusionara a 10 largo de la evoluci6n.
TBP reconoce el DNA mediante un
motivo diferente a los discutidos en
este capitulo. No se conoce ninguna
otra proteina que se una al DNA de la
misma forma, 10 que quizas sea un
reflejo del papel tinico de TBP en la
celula: participa en el inicio de la
cripci6n. Una etapa clave en el inicio de la transcripci6n es la realizada par transcripci6n de todos los genes.
Aunque no se muestra en la figura, el
TFIIH, una subunidad de la cual es una quinasa que fosforila Pol II. AI menos en
DNA es deformado severamente por la
algunos promotores parece que esta fosforilaci6n libera la polimerasa y permite
uni6n de TBP. Esta deformaci6n -dos
que se inicie la transcripci6n. rizos separados por una zona de DNA
Las otras dos RNA polimerasas que se encuentran en eucariotas, RNA poli- desenrollado- puede ser una marca
merasa I (Poll) y RNA polimerasa III (Pol III), tambien requieren una serie de que ayude a atraer a los demas factores
factores generales de transcripci6n. Aunque TBP es necesario para las tres poli- generales de transcripci6n. (Adaptado
merasas, los demas factares son diferentes de los que se ensamblan en los pro- de D.B. Nikolov et al., Nature 360: 40-
motares Pol II, y la uni6n de TBP en los promotares Pol I y Pol III no depende de 45, 1992. 1992 Macmillan Magazines
una secuencia TATA en el DNA. Ltd.)

Los incrementadores 0 activadores controlan

los genes a distancia26
Result6 una gran sorpresa para muchos bi610gos la demostraci6n, en 1979, de
que DNA situado a miles de nucle6tidos de distancia de un promotor eucariota
puede activar la transcripci6n desde el promotor. Actualmente se sabe que estas
secuencias incrementadoras a activadoras (enhancers) actuan como lugares de
uni6n de proteinas reguladoras que activan a incrementan la transcripci6n y
que este tipo de "acci6n a distancia" es mas la regIa que la excepci6n para las
proteinas reguladoras en las celulas eucariotas. Este fen6meno tambien ocurre,

Figura 9-32 Activacion genica a

RNA polimerasa
bacteriana en un distancia. (A) NtrC es una proteina de
NtrC
complejo cerrado regulaci6n genica bacteriana que

::-II..._-~~~~====
activa la transcripci6n facilitando la
transici6n entre el complejo cerrado y
incrementador r=:promotor el abierto de la RNA polimerasa
..
o activador
(descrito en el Capitulo 8). Aunque no
es frecuente en las RNA polimerasas
ADP bacterianas, la transici6n que estimula
NtrC requiere la hidr6lisis de ATP.
interm.edi~~iO~~
de actlvaclon
(B) Se puede ver en las micrografias de
microscopia electr6nica la interacci6n
en bucle
de NtrC y RNA polimerasa, asi como el
bude de DNA que las separa. Aunque
la activaci6n genica mediante budes
1 de DNA es poco frecuente en
::-11 GENACTIVO
bacterias, es tipica de las proteinas
reguladoras eucariotas. (B, cortesia de
(A) Harrison Echols.)

Como funcionan los interruptores geneticos 451

 doble halice
de DNA 100
~
E
'"> 80
0-e
J!
Q)
c: 60
-0
or:;
E
100 1:
Q)
40
pares de nucle6tidos 0
c:
0
0
20

0
500 1000 1500 2000
(AI 500 pares de nucle6tidos (8) (C) separacion de los lugares de uni6n
en pares de nucle6tidos

aunque con menor frecuencia, en procariotas. ieOmo pueden ejercer su funcion Figura 9-33 La uni6n de dos
estas protefnas a tales distancias? Se han propuesto muchos modelos, pero parece proteinas a lugares dlstantes de la
que el mas simple serfa el mas correcto. El DNA existente entre el incrementador doble hetice de DNA puede aumentar
y el promotor se doblarfa permitiendo que las protefnas unidas al incrementa- considerablemente la probabllidad
dor interactuaran directamente con uno de los factores generales de transcrip- de que ambas proteinas interactt1en.
(A) La union de una proteina a la otra
cion 0 con la propia RNA polimerasa (Figura 9-32). El DNA actuarfa como una
mediante una asa de DNA de 500 pares
cuerda, provocando que las protefnas unidas al incrementador, incluso a miles de nucleotidos aumenta su frecuencia
de nucleotidos de distancia, colisionen repetidamente con las protefnas unidas de colision. En la figura, la intensidad
al promotor. Este es el mismo efecto que se esperarfa obtener incrementando la de azul retleja la probabilidad de que
concentracion local de protefna en el promotor (Figura 9-33). la proteina raja se encuentre en cada
una de las posiciones del espacio
respecto de la proteina blanca. (B) La
Una regi6n de control eucariota esta formada por un promotor tlexibilidad del DNA es tal que una
y por las secuencias de DNA reguladoras 27 secuencia cualquiera forma un pliegue
Debido a que las protefnas reguladoras pueden controlar la transcripcion inclu- de 90 0 , de vertice redondeado, cada
so cuando se encuentran unidas al DNA lejos del promotor, las secuencias de 200 pares de nucleotidos
DNA que controlan la expresion de un gen pueden estar dispersas sobre largas aproximadamente. Asi, cuando dos
proteinas estan unidas por solo 100
extensiones de DNA. Aquf se utiliza el termino regi6n de control del gen para in-
pares de nucleotidos, su contacto
dicar las secuencias de DNA necesarias para iniciar la transcripcion del gen, y las queda relativamente restringido. En
necesarias para regular la frecuencia con que tiene lugar esa iniciacion. Asf pues, estos casos, la interaccion proteica es
un promotor eucariota consta de un promotor, donde se ensamblan los factores mucho mas facH si los dos lugares de
generales de transcripcion y la polimerasa, mas todas las secuencias regulado- union para las proteinas estan
. ras a las que se unen las protefnas reguladoras para controlar la velocidad de ese separados por una distancia mUltiple
proceso de ensamblaje sobre el promotor (Figura 9-34). de 10 pares de nucleotidos, la cual
En eucariotas superiores no es inusual encontrar las secuencias reguladoras sitl1a a ambas proteinas sobre la
a distancias tan largas como 50 000 pares de bases, aunque la mayor parte de las misma cara de la helice de DNA (que
secuencias de DNA actuan como DNA "espaciador" y no son reconocidas por contiene 10 nucleotidos por vuelta) y,
ninguna protefna reguladora. En este capftulo utilizamos el termino gen para in- por 10 tanto, en el interior del bucle de
dicar el DNA que se transcribe en RNA (vease Figura 9-34), aunque seglin la idea DNA, donde mas facHmente pueden
interactuar. (C) Concentracion efectiva
clasica de gen deberfa incluir tambien la region de control. Las diferentes defini-
teorica de la proteina raja en la
ciones proceden de los modos distintos en que historicamente se han ido identi-
posicion donde esta unida la proteina
ficando los genes, y los descubrimientos modernos han complicado el sentido blanca, en funcion de la separacion
de este termino -mas adelante, en este mismo capftulo, volveremos a esta idea. entre ambas. (C, cortesia de Gregory
Aunque muchas protefnas reguladoras se unen a secuencias incrementado- Bellomy, modificaci6n de M.C.
ras y activan la transcripcion genica, algunas actuan como reguiadores negati- MossingyM.T. Record, Science
vos, como se vera mas adelante. En contraste con el pequeno numero de facto- 233:889-892, 1986. 1986 the AAAS.)
res generales de transcripcion, que son protefnas abundantes y se ensamblan en
los promotores de todos los genes transcritos por Pol II, existen miles de diferen-

452 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 facto res Figura 9-34 Region de control de un
generales de protefnas de
transcripci6n
gen eueariota tipieo. EI promotor es la
regulaci6n
I I genica secuencia de DNA donde se
ensamblan los facto res generales de
gen X -----, I
~D transcripci6n y la polimerasa. EI rasgo
mas importante del promotor es la
caja TATA, una corta secuencia de
secuencia DNA promotor pares de bases A-T YT-A que es
reguladora espaciador . reconocida por el factor general de
t transcrito de RNA

la regi6n de control del gen X

transcripci6n TFIlD. EI punto de inicio
de la transcripci6n esta localizado
tfpicamente a 25 pares de bases por
debajo de la secuencia TATA. Las
tes protefnas reguladoras. Estas protefnas varian de gen a gen, y cada UN.a se en- secuencias reguladoras actuan como
cuentra presente en cantidades muy pequefias en cada celula. Muchas de ellas lugares de uni6n para las protefnas
reguladoras, cuya presencia en el DNA
reconocen su secuencia especffica de uni6n utilizando uno de los motivos es-
afecta la velocidad de iniciaci6n de la
tructurales de uni6n a DNA que hemos descrito previamente. Estas protefnas
transcripci6n. Estas secuencias se
permiten que cada gen pueda ser activado 0 desactivado especfficamente. En pueden encontrar adyacentes al
cada tipo celular de un eucariota superior existe una colecci6n diferente de pro- promotor, muy lejanas por delante de
tefnas reguladoras. el 0 incluso por detras. Se cree que los
bucles de DNA permitirfan que las
Muchas proteinas activadoras aceleran el ensamblaje de los protefnas situadas en cualquiera de
estas posiciones interactuaran con las
factores generales de transcripci6n28 protefnas que se ensamblan en el
La mayorfa de las protefnas reguladoras que activan la transcripci6n de los ge- promotor. Mientras que los facto res
nes -es decir la mayor parte de las protefnas activadoras genicas- tienen un di- generales de transcripci6n son
sefio modular que consta de al menos dos dominios. Habitualmente uno de similares para todos los genes
ellos contiene uno de los motivos estructurales capaces de reconocer una se- transcritos por la RNA polimerasa II,
las protefnas reguladoras y las
cuencia reguladora especffica en el DNA que hemos descrito previamente. En el
posiciones de sus secuencias de uni6n
caso mas sencillo existe s610 otro dominio que entra en contacto con la maqui- en relaci6n con el promotor son
naria de transcripci6n y acelera la frecuencia de inicio de transcripci6n. Este tipo distintas para cada gen.
de disefio modular fue demostrado mediante experimentos en los cuales me-

(A) Figura 9-35 Estruetura modular de una protema de

aetivacion geniea. Esquema de un experimento de cambio
. [ ~~ ~~t~~~~racfdico de dominios proteicos que revela que las funciones de
protelna 0
GAL4 dominio de GAL4 de uni6n a DNA y de activad6n de la transcripd6n residen en
uni6n al DNA gen lacZ diferentes dominios de la protefna activadora genica GAlA
il1l'4'\'1iill \i de levaduras. Es posible reconstituir un activador funcional
TATA
GEN ACTIVO a partir de una pord6n del extrema carboxilo de la protefna
GAlA si se fusiona, mediante tecnicas de fusi6n genica, con
RNA
(B) el dominio de uni6n a DNA de una protefna reguladora

p~ot~f~a
qUlmerica
lexA-
[I! o bacteriana (la protefna lexA). Cuando la protefna hIbrida
resultante, levadura-bacteria, es producida en celulas de
levadura, activara la transcripci6n de los genes de levadura
GAL4 que presenten insertada en su proximidad la secuenda de
reconocirniento de la protefna bacteriana. (A) La activad6n
normal del gen por la protefna GAlA. (B) La protefna
I;M reguladora quimerica requiere la secuencia de uni6n a
lugar de uni6n TATA GEN INACTIVO DNA de lexA para su actividad.
al DNA de GAL4
Normalmente GAlA es responsable de activar la
transcripci6n de los genes de levadura que codifican las
enzimas que convierten galactosa en glucosa. Para los
experimentos que se muestran en la figura se fusionaron la
regi6n de control de esos genes con el gen lacZ de E. coli,
que codifica la enzima ~-galactosidasa (vease Figura 9-29).
~-galactosidasa es una enzima muy facil de detectar, y por
lugar de uni6n TATA ello es un marcador conveniente para seguir los niveles de
GEN ACTIVO
al DNA de lexA expresi6n determinados por una regi6n de control genico;
RNA lacZ sirve como un gen marcador (vease pag. 345).

Como funcionan los interruptores geneticos 453

 Figura 9-36 Modelo para la acci6n de los activadores acidicos. La proteina secuencia de union
activadora genica GAlA, unida al DNA en la vecindad del promotor, facilita la .. a DNA para GAL4

"
incorporaci6n de TFIIB al naciente complejo de factores generales de
transcripci6n. Las proteinas activadoras unidas al DNA incrementan la
velocidad de transcripci6n hasta 1000 veces, 10 que es consistente con una
afinidad debil y no especifica entre el activador y los facto res generales de
transcripci6n (un cambio en la afinidad de 1000 veces corresponde a un ~G
:
, TFIID
\

rGA~
TFIIB

de -4 kcal/mol, que puede alcanzarse por unos cuantos enlaces no ~-"',.~!i!iii~;;;:::

TATA GEN
covalentes debiles).

diante tecnicas de ingenierfa genetica se crearon protefnas hfbridas que conte-

nfan el dominio de activacion de una protefna fusionado con el dominio de
union a DNA de otra protefna diferente (Figura 9-35).
En una de las clases de protefnas activadoras genicas, el dominio de activa-
ci6n presenta en su superficie un gmpo de aminmicidos cargados negativamen-
te (acfdicos). Estos activadores acidicos actuan acelerando el ensamblaje de los
factores generales de transcripci6n en el promotor. En principio, cualquiera de
las etapas de ensamblaje que se muestran en la Figura 9-30 puede ser la etapa li-
mitante en el proceso de inicio de la transcripci6n. En algunos promotores la
etapa limitante es la entrada de TFIIB en el complejo, y se cree que los activado-
res acfdicos contribuyen a superar esta limitaci6n facilitando al ensamblaje de
TFIIB en el complejo (Figura 9-36). Otras protefnas activadoras parecen actuar
uniendo TFIID al DNA, mientras que otras pueden activar latranscripci6n por
diferentes mecanismos.
En principio, el proceso de ensamblaje en el promotor podrfa tener mas de
una etapa limitante, y el nive! maximo de transcripci6n podrfa depender de va-
rios activadores genicos unidos a la regi6n anterior, de modo que cada uno de
ellos acelerarfa una etapa diferente. Asf, no resulta diffcil comprender c6mo va-
rias protefnas reguladoras, cada una de ellas unida a una secuencia reguladora
diferente, podrfan controlar la transcripci6n de un gen eucariota. Pero, indepen-
dientemente de cum sea el mecanismo preciso de acci6n, para que una protefna
reguladora pueda influir en la transcripci6n de su promotor diana ha de estar
unida directa 0 indirectamente al DNA.

Las proteinas represoras pueden inhibir la transcripci6n

de diferentes formas 29
Las proteinas activadoras eucariotas actuan de una manera similar en principio
a la que hemos descrito para los activadores genicos bacterianos: catalizan la ac-
ci6n de la polimerasa contactando con la maquinaria de transcripci6n. Sin em-
bargo, no todas las protefnas reguladoras eucariotas activan la transcripci6n. Tal
como hemos indicado, muchas de ellas actuan como proteinas represoras geni-
cas impidiendo la transcripci6n. A diferencia de los represores bacterianos mu-
chas de estas protefnas no actuan compitiendo con la polimerasa por el acceso
al DNA. A pesar de que su mecanismo preciso aun no esta completamente esta-
blecido, parece que diferentes represores tienen diferentes mecanismos de ac-
cion, tres de los cuales se describen en la Figura 9-37.
Ademas de las protefnas represoras que actuan sobre genes individuales, las
celulas eucariotas pueden utilizar otros mecanismos para impedir la expresi6n
de los genes en grandes regiones del cromosoma. Este mecanismo se basa en la
modificaci6n de la estmctura de la cromatina, 10 cual se discutira mas adelante.

Las proteinas reguladoras de genes de celulas eucariotas

frecuentemente se ensamblan formando pequeiios
complejos sobre el DNA30
Aunque algunas protefnas reguladoras de celulas eucariotas puede actuar inde-
pendientemente, la mayorfa de ellas forman parte de un complejoformado por

454 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Figura 9-37 Tres maneras de actuar
de las proteinas represoras
(A) eucariotas. En el primero CAl las

uni6n
competitiva
al DNA

/
~

~gar de uni6n
TATA
-. proteinas activadoras y represoras
compiten por la union a la misma
secuencia de DNA regulador. En la
segunda CBl ambas proteinas pueden
unir DNA, pero el represor forma un
lugar de uni6n del represor
del activador
complejo can el dominio de activaci6n
del activador, evitando que entre en
(8) contacto can la maquinaria de
transcripcion. En el tercero cel el
bloqueo de represor interacciona can un nacicntc
la superficie 4WA% complejo de facto res generales de
de activaci6n TATA
II
lugar de uni6n lugar de uni6n
transcripcion, impidiendo que el
proceso de ensamblaje continue. En la

1
del activador del represor Figura 9-21 se ilustra un cuarto
lugar de uni6n
mecanismo de control negativo: la

.....__d-;\,
lugar de uni6n del activador
inactivacion de activadores genicos
por heterodimerizaci6n.

(C)

interacci6n directa
con los facto res
generales de
transcripci6n TFIID

TATA

diferentes polipeptidos, cada uno de los cuales tiene una funcion distinta. Fre-
cuentemente el complejo se ensambla unicamente en presencia de la secuencia
de DNA adecuada. Por ejemplo, en algunos casos bien estudiados, dos proteinas
reguladoras con una baja afinidad una de la otra cooperan para unirse a una se-
cuencia de DNA, secuencia a la que son incapaces de unirse por si mismas inde-
pendientemente. Una vez unidas al DNA, el dimero expone una superficie que
es reconocida por una tercera proteina portadora de un dominio de activacion
que activa la transcripcion (Figura 9-38). Este ejemplo ilustra un principio gene-
ral importante: interacciones proteina-proteina que son demasiado debiles para
ensamblar las proteinas en solucion pueden ser suficientes para producir el en-
samblaje sobre el DNA; de esta forma la secuencia de DNA actuaria como un
centro de nucleacion para el ensamblaje de complejos de proteinas.
Una proteina reguladora determinada puede participar en mas de un tipo
de complejo regulador. Una proteina puede actuar en un caso como parte de un
complejo que activa la transcripcion, y en otro caso como parte de un complejo
que la inhibe (vease Figura 9-38). Asi pues, individualmente las proteinas regula-
doras eucariotas no tienen ninguna funcion activadora 0 represora pero actuan
como unidades reguladoras que se utilizan para construir complejos cuya fun- Figura 9-38 A menudo, las proteinas
cion final dependera del ensamblaje de todos sus componentes. reguladoras de genes eucariotas se
Ya hemos visto como la formacion de los heterodimeros de proteinas regu- ensamblan sobre el DNA formando
ladoras en solucion suponia un mecanisme de control combinatorio de la ex- pequefios complejos. En CAl se
presion de los genes. EI ensamblaje de pequenos complejos de proteinas regula- muestran cinco proteinas reguladoras
doras sobre el DNA es un segundo mecanismo de control combinatoric (vease de genes. La naturaleza de la funcion
Figura 9-38). del complejo que forman depende de
la especificidad de la secuencia de
(A) EN SOLUCl6N (8) EN DNA
DNA que nuclea su ensamblaje. En CBl
un complejo activa la transcripci6n
~ genica mientras que otro complejo
,
.
...........
TRANSCRIPCl6N
"'ACTIVADORA '!!!III TRANSCRIPCI6N
REPRESORA reprime la transcripcion. Notese que la

~>~'I~JI
proteina dibujada en verde forma parte
It GEN ACTIVO GEN INACTIVO
tanto del complejo de activacion como
del de represi6n.

C6mo funcionan los interruptores geneticos 455

 Figura 9-39 Distribuci6n no
uniforme de cuatro proteinas
reguladoras en un embri6n temprano
de Drosophila. En este estadio el
embrion es un sincitio, con muchos
nucleos en un citoplasma comun.
Aunque no estci claro en estos dibujos,
todas las protefnas se concentran en
0000000 00000000 00) los nucleos.
fJ'0 "~I
a,&

Kruppel
00 .~. .. . .
~ooo\i OO~

Los complejos interruptores geneticos que regulan el desarrollo

de Drosophila estan formados por m6dulos menores 31
Dado que las proteinas reguladoras se pueden situar en muchos lugares a 10 lar-
go de largas distancias en el DNA, que pueden ensamblarse formando comple-
jos en cada uno de estos lugares y que los complejos pueden influir de diferentes
maneras sobre el ensamblaje ordenado de los factores generales de transcrip-
cion en el promotor, podria existir un numero casi ilimitado de posibilidades de
crear interruptores geneticos complejos para el control de la expresion de los ge-
nes eucariotas.
Un ejemplo especialmente interesante de un complejo de ese tipo, un inte-
rruptor genetico de multiples componentes, es el que controla la transcripcion
del gen de Drosophila even-skipped (eve), la expresion del cual juega un papel
importante en el desarrollo del embrion de Drosophila. Si el gen se inactiva por
mutacion, muchas partes del embrion no se forman, y el embrion muere en una
fase temprana del desarrollo. Tal como se discute en el Capitulo 21, en la etapa
mas temprana del desarrollo en la que se expresa eve, el embrion es una unica
celula gigante que contiene multiples nucleos y un solo citoplasma comun. El ci-
toplasma no es uniforme, sino que contiene una mezcla de proteinas regulado-
ras que se distribuyen no uniformemente a 10 largo del eje del embrion, suminis-
trando informaci6n posicional para distinguir entre una parte del embrion y otra
(Figura 9-39). (En el Capitulo 21 se describe como se establecen estas diferen-
cias.) Aunque inicialmente los nucleos son identicos, rapidamente empiezan a
expresar genes diferentes ya que estan expuestos a diferentes proteinas regula-
doras. Por ejemplo, el nucleo proximo al extremo anterior del embrion en desa-
Figura 9-40 Las siete franjas de la
rrollo esta expuesto a un conjunto de proteinas reguladoras diferente al que in- proteina codificada por el gen even-
fluye en el nucleo del extremo posterior del embrion. skipped (eve) en un embri6n de
Las secuencias de DNA regulador del gen eve estan disenadas para "leer" las Drosophila en desarrollo. Dos horas y
concentraciones de las proteinas reguladoras en cada posicion a 10 largo del eje media despues de la fecundacion, el
del embrion, interptetando esta informacion, de forma que el gen eve se expre- huevo se fijo y tino con anticuerpos
sa en siete franjas, cada una de las cuales tiene una anchura de cinco a seis nu- que reconocen la protefna Eve (verde)
cleos, y situadas con precision sobre el eje anteroposterior del embrion (Figura y anticuerpos que reconocen la
9-40). lComo se ha podido procesar esta informacion? A pesar de que los deta- protefna Giant (roja). Cuando las
lIes moleculares aun no son conocidos, del estudio de eve y de otros genes de protefnas Eve y Giant se encuentran
Drosophila con una regulacion similar ya se han podido extraer algunos princi- presentes ala vez, la tincion aparece
pios generales. amarilla. En este momento del
desarrollo el huevo contiene
La region reguladora del gen eve es muy larga (aproximadamente 20 000 pa-
aproximadamente 4000 nucleos. Tanto
res de nucleotidos). Esta formada por una serie de modulos reguladores simples, la protefna Eve como Giant se
cada uno de los cuales contiene multiples secuencias reguladoras y es responsa- encuentran situadas en el nucleo, y las
ble de una franja de expresion de eve en el embri6n. Esta organizacion modular franjas de eve tienen una anchura de
se demuestra en experimentos en los que un modulo concreto (por ejemplo, el unos cuatro nucleos. En la Figura 9-39
que especifica la franja 2) se extrae de su posicion normal delante del gen, se si- se muestra el patron de tincion de la
tua delante de un gen marcador y se reintroduce en el genoma de Drosophila protefna Giant. (Cortesfa de Michael
(Figura 9-41A). Cuando se examinan embriones en desarrollo derivados de las Levine).

456 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 m6dulo de m6dulo de m6dulo de
la franja 3 la franja 2 la franja 7

.
M

TATA gen eve

J
f (B)

m6dulo de TATA gen lacZ

la franja 2
(A)

(C)

moscas portadoras de la construcci6n de DNA, se observa la expresi6n del gen Figura 9-41 Experimento
marcador exactamente en la posici6n de la franja 2 (Figura 9-41B). Experimen- demostrativo de la construcci6n
tos similares a este demuestran la existencia de otros m6dulos reguladores, cada modular de la regi6n reguladora de
uno de los cuales especifica una de las otras seis franjas. eve. (A) Se tom6 una regi6n de 480
pares de nucle6tidos de la regi6n
reguladora de eve y se insert6 por
EI gen eve de Drosophila esta regulado delante de un promotor que controla la
por controles combinatorios32 sintesis de ~-galactosidasa(el producto
del gen lacZ de E. coll). (B) Cuando se
El estudio detallado del m6dulo regulador de la franja 2 ha dado indicios de introdujo esta construcci6n artificial en
c6mo "lee" e interpreta la informaci6n posicional. Esta regi6n contiene secuen- el genoma de embriones de
cias de reconocimiento para dos protefnas reguladoras (Bicoid y Hunchback) Drosophila, los embriones expresaron
que activan la transcripci6n de eve, y para otras dos protefnas reguladoras ~-galactosidasa (detectable mediante
(Kriippel y Giant) que reprimen su transcripci6n (Figura 9-42). (Las protefnas re- tinci6n histoquimica) precisamente en
guladoras de Drosophila suelen tener nombres descriptivos que reflejan el feno- la posici6n de la segunda de las siete
tipo que resulta de la inactivaci6n por mutaci6n del gen que las codifica.) Las franjas de eve (C). (B YC, cortesia de
concentraciones relativas de estas cuatro protefnas determinan que complejos Stephen Small y Michael Levine.)
se formanin en el m6dulo de la franja 2 que activan la transcripci6n del gen eve.
La Figura 9-43 muestra las distribuciones de las cuatro protefnas reguladoras en Figura 9-42 Detalle del m6dulo de la
la regi6n del embri6n de Drosophila donde se forma la franja 2. Aunque no se franja 2 de eve. EI segmento de la regi6n
conocen los detalles exactos, es probable que para inactivar el m6dulo de la de control de eve identificado en la
franja 2 sea suficiente que cualquiera de los dos represores este unido al DNA, figura anterior contiene secuencias
mientras que para activarlo al maximo sea necesario que se unan ambos activa- reguladoras, cada una de las cuales une
dares Bicoid y Hunchback. Asf pues, esta unidad integra las cuatro informacio- alguna de cuatro proteinas reguladoras.
nes posicionales de forma que el modulo de la franja 2 se activa (yen conse- A partir de experimentos geneticos
cuencia se activa la transcripci6n del gen eve) s610 en aquellos mlcleos en los sabemos que estas cuatro proteinas son
que los niveles tanto de Hunchback como de Bicoid son elevados y no exista ni responsables de la expresion correcta de
Kriippel ni Giant. Esta combinaci6n de activadores y represores solo ocurre en la franja 2 de eve. Por ejemplo, las
moscas deficientes en los dos
una region del embri6n temprano; asf pues, en cualquier otro caso el m6dulo de
activadores Bicoid y Hunchback no
la franja 2 esta inactivo (y por ella es silencioso).
expresan la franja 2 de eve de forma
Previamente hemos descrito dos mecanismos de control combinatorio de la eficiente. Cuando las moscas son
expresi6n genica -heterodimerizaci6n de las protefnas reguladoras en soluci6n deficientes en cualquiera de los dos
(vease Figura 9-19) y ensamblaje de combinaciones de protefnas reguladoras en represores, Giant y Kriippel, la franja 2
pequenos complejos en el DNA (vease Figura 9-38). Es bastante probable que se hace mas amplia cubriendo una zona
ambos mecanismos participen en la compleja regulaci6n de la expresi6n de eve. anormalmente grande del embrion. Las
regiones de union a DNA para estas
proteinas se han determinado a partir
~ ~ de su clonaje, sobrexpresion en E. coli,
purificaci6n y experimentos de

L--
DD D D
m6dulo de la franja 2: 480 pares de nucie6tidos - - - - - - - - '
determinacion de huella en el DNA
ifootprinting), tal como se ha descrito en
el Capitulo 7. EI diagrama superior
muestra que en algunos casos las

~. Kruppel y su lugar
- - - - - - de uni6n
--={]=-----
Bicoid y su lugar
- - - deuni6n
secuencias de union se pueden solapar
de forma que las proteinas pueden
competir por su union al DNA. Por

Giant y su lugar
- - - - de uni6n
T Hunchback y su
--'---- lugar de uni6n
ejemplo, se cree que la union de
Kriippel y Bicoid en ellugar situado mas
a la derecha es mutuamente excluyente.

C6mo funcionan los interruptores geneticos 457

 aquf se forma Figura 9-43 Distribuci6n de las
la franja 2 de eve
i I protemas reguladoras responsables
de asegurar que eve se exprese en la
'"'"(5
franja 2. La distribuci6n de estas
".!!l
::J
proteinas se determin6 mediante
Ol
~ tinci6n de ~n embri6n de Drosophila
'"'"c: con anticuerpos dirigidos contra cada
'Qi una de las cuatro proteinas (Figura 9-
e
c- 39). La expresi6n de eve en la franja 2
Ol
ocurre s610 en la posici6n donde los
"c:
'0 dos activadores (Bicoid y Hunchback)
'(3
~ estan presentes y los dos represores
E
Ol
(Giant y Kriippel) ausentes. Por
u
c:
o ejemplo, en embriones de moscas que
u
carecen de Kriippella franja 2 se
posterior_ expande en direcci6n posterior. De
una manera similar, la franja 2 se
expande en direcci6n posterior si las
Ademas, la regulaci6n del m6dulo de la franja 2 descrita ilustra un tercer tipo de secuencias de uni6n a DNA de Kriippel
control combinatorio. Dado que las secuencias reguladoras del m6dulo de la se inactivan mediante mutaci6n y esta
franja 2 se encuentran repetidas y dispersas por todo el DNA, se pueden unir si- regi6n se reintroduce en el genoma.
multaneamente muchos conjuntos de proteinas reguladoras, influyendo asi at EI propio gen eve codifica una
promotor del gen. El promotor integra sobre la transcripci6n las influencias de proteina reguladora que, despues de
todas las protefnas unidas (Figura 9-44). que se establezca su patron de
La regulaci6n de la expresi6n de eve es un ejemplo extremo de control com- distribucion en siete franjas, regula a
su vez la expresi6n de otros genes de
binatorio. Siete combinaciones de proteinas reguladoras -una combinaci6n
Drosophila. A medida que progresa el
para cada franja- activan la expresi6n de eve, mientras que muchas otras combi-
desarrollo, el embrion se subdivide en
naciones (todas las que se encuentran en las regiones entre franjas) mantienen regiones cada vez mas finas que daran
el gen silencioso. Se cree que los otros m6dulos de franja tienen un diseno simi- lugar finalmente a las diferentes partes
lar at descrito para el m6dulo de franja 2, siendo capaces de leer informaci6n po- del cuerpo de una mosca adulta, tal
sicional suministrada por otras combinaciones de proteinas reguladoras. La re- como se describe en el Capitulo 21.
gi6n de control completa ocupa 20 000 pares de nucle6tidos y es capaz de unir
mas de 20 protefnas distintas. Asi pues, una regi6n compleja y grande esta cons-
truida a partir de una serie de m6dulos de menor tamafio, cada uno de los cua-
les esta formado por una serie de secuencias cortas de DNA reconocidas por
proteinas reguladoras especificas. Un requerimiento importante de esta estrate-
gia es la ausencia de relaciones entre los m6dulos: el estado de uno de los m6du-
los no influye sobre el de los restantes. Se desconoce c6mo se consigue este ais-
lamiento molecular. Sin embargo, de esta forma un unico gen puede responder
a una enorme cantidad de senates combinadas.

En mamiferos las regiones de control tambien estan formadas

a partir de m6dulos reguladores sencillos33
Se ha estimado que un cierto porcentaje de la capacidad de codificaci6n de un
genoma de mamifero esta dedicado a la sintesis de proteinas que actuan como

complejo activador Figura 9-44 Integraci6n en un

fuerte complejo de proteinas promotor. Varios grupos de p~oteinas
reguladoras silencioso
reguladoras pueden actuar.
conjuntamente influyendo sobre un
promotor, como hacen en el modulo
de la franja 2 de eve ilustrada
previamente en la Figura 9-42. Aun no
se conoce en detalle como se consigue
RNA polimerasa y factores la integraci6n de numerosas senales.
generales de transcripcion

TATA

458 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 , . . . - - - - - - - - regiones de control genico - - - - - - - - ,

lugar de adici6n de poli-A

l
DNA

400
pares de nUcle~6~t~id~o:.s_ -----~

r o D
CPl \ /OCTA'...

GATA-l GATA-l GATA-l GATA-l

NFl SplfTEF2
-220 -30 +2200 +2400

reguladores de la transcripci6n genica. Esto es un reflejo de los complejos con- Figura 9-45 Modelo para el control
troles que regulan la expresi6n de los genes en los mamiferos. Por ejemplo, es del gen de f3-globina humano. El
frecuente encontrar un gen con una r~gi6n de control con una longitud de diagrama muestra algunas de las
50 000 pares de nuele6tidos, en la que muchos m6dulos, cada uno de los cuales protefnas reguladoras que se cree que
contiene un cierto numero de secuencias reguladoras que unen proteinas regu- controlan la expresion durante el
desarrollo de los eritrocitos (vease
ladoras, se encuentran separados por largas secuencias de DNA espaciador.
Figura 9-52). Algunas de las protefnas
Uno de los ejemplos mejor conocidos de regi6n reguladora compleja en ma-
mostradas, como CP1, se encuentran
miferos es la del gen de ~-globinahumann, que se expresa exelusivamente en los en muchos tipos celulares, mientras
eritrocitos y en un momenta determinado de su desarrollo. La expresi6n del gen que otras, como GATA-1, son propias
esta controlada por un conjunto complejo de proteinas reguladoras, algunas de de algunos tipos celulares, incluyendo
las cuales actuan como activadores y otras como represores (Figura 9-45). Se a los eritrocitos, y por ello se cree que
cree que las concentraciones (0 actividades) de muchas de estas proteinas regu- contribuyen a la expresion especffica
ladoras cambian durante el desarrollo, y que s610 una combinaci6n particular de de tipo celular de los genes de
todas elIas induce la transcripci6n del gen. Como se vera mas adelante, el gen de Pglobina. Tal como se indica con las
la ~-globina se encuentra sometido a un segundo nivel de control, superior, que flechas de dos cabezas, algunas de las
implica cambios en la estructura de la cromatina. secuencias de GATA-1 se solapan con
las de otras proteinas reguladoras; se
cree que la ocupacion de estos lugares
Asu vez, la actividad de una proteina de regulaci6n genica por GATA-1 excluye la union de otras
puede estar regulada34 proteinas. (Adaptado de B. Emerson,
En 'Gene Expression: General and
La estrategias de regulaci6n del gen eve y del gen humano de la ~-globina son si- Cell-Type Specific' [M. Karin ed.]
milares en cuanto a que la regi6n de control responde a una amplia serie de pro- pp. 116-161. Boston: Birkhauser, 1993.)
teinas reguladoras. Sin embargo, el caso de Drosophila es poco frecuente en
cuanto a que es la distribuci6n espacial de las proteinas reguladoras en el cito-
plasma la responsable de controlar la expresi6n del gen. Ya se ha dicho que el em-
bri6n temprano de Drosophila es una unica celula gigante que contiene miles de
nueleos en un citoplasma comun y que las proteinas reguladoras se encuentran
distribuidas en complejos patrones espaciales de forma que distintos nueleos es-
tan expuestos a diferentes concentraciones de las proteinas. Estas proteinas regu-
ladoras entran al nueleo activando 0 reprimiendo directamente la transcripci6n
de sus genes diana. En muchos embriones de otros organismos los diferentes nu-
deos se hallan en celulas diferentes, y la informaci6n posicional extracelular debe
o bien pasar a traves de la membrana plasmlitica 0 bien, mas a menudo, generar
sefiales en el citosol que puedan llegar a influir en el genoma.
El mecanismo por el que las sefiales extracelulares comunican su mensaje a
traves de la membrana plasmatica se describe en el Capitulo 15. Aqui s610 abor-
daremos las etapas finales de las cascadas de sefializaci6n intracelular activada
por sefiales extracelulares -las etapas en las que se modifican las proteinas regu-
ladoras. En muchos casos la proteina reguladora se encuentra en el interior de la
celula en una forma inactiva, que otra sefial puede modificar, activandola. Por

C6mo funcionan los interruptores geneticos 459

 SiNTESIS DE UNION A UN FOSFORILACION DE ADICION DE Ul'iIA DESENMASCARAMIENTO ESTIMULACION DE LA
LA PROTEfNA UGANDO LA PROTEfNA SEGUNDA SUBUNIDAD ENTRADA AL NUCLEO

INACTIVA

I e .inhibidor
'=' _ proteina
inhibidora

~"b"";d'd f-v F V

~
e ::::::> (
t- d.

uni6n al DNA nucleo

8-~~ba~~ii~:~6n
ACTIVA __

"~I"~
(A)
"",
(Bl
'""
(Cl
~,~

(D)

~,~

(El
-- "",
(F)

ejemplo, la protefna puede ser activada par fosforilaci6n catalizada por una pro- Figura H-46 Algunos mecanismos de
tefna quinasa, 0 puede liberarse de un complejo que de otro modo mantendrfa a regulaci6n de la actividad de las
la protefna reguladora secuestrada en el citosol impidiendo su entrada al nucleo. prote{nas reguladoras en las celulas
En la Figura 9-46 se ilustran estas y otras farmas de controlar la actividad de las eucariotas. (A) La protefna reguladora
protefnas reguladoras. de genes s610 se sintetiza cuando es
necesaria y sufre una proteolisis nipida
que evita su acumulaci6n.
Las bacterias utilizan subunidades intercambiables (B) Activaci6n par uni6n a un ligando.
de la RNA polimerasa para colaborar en el control (e) Activaci6n par fosforilaci6n.
de la transcripci6n genica35 (D) Formaci6n de un complejo con
otra protefna que actua como dominio
Ya hemos resaltado la importancia de las protefnas reguladaras que se unen a las activador de la transcripci6n.
secuencias reguladoras de DNA e indican al aparato transcripcional si se ha de (E) Desenmascaramiento de un
iniciar 0 no la sfntesis de la cadena de RNA. Aunque este es el principal mecanis- dominio de activaci6n par
mo de control del inicio de la transcripci6n tanto en eucariotas como en proca- fosfarilaci6n de una protefna
riotas, algunas bacterias y sus virus utilizan una estrategia adicional basada en las inhibidora. (F) Estimulaci6n de la
subunidades de la RNA polimerasa intercambiables. Como se describi6 ya en el entrada al nueleo por eliminaci6n de
una protefna inhibidara que mantenia
Capftulo 8 , la subunidad sigma (aJ es necesaria para que la RNA polimerasa reco-
ala protefna incapaz de entrar al
nozca un promotor. Algunas bacterias producen diferentes subunidades sigma,
nueleo.
cada una de las cuales puede interactuar con el nucleo de la RNA polimerasa y di-
rigirla especfficamente hacia diferentes promotares. Esta estrategia permite des-
activar un gran grupo de genes y activar otro simplemente reemplazando una
subunidad sigma por otra. La estrategia es eficiente pues evita la necesidad de ac-
tuar sobre los genes uno a uno, y es utilizada frecuentemente por los virus para
activar conjuntos de genes nipida y secuencialmente (Figura 9-47).

RNA polimerasa can el RNA polimerasa can la subunidad

factor sigma de la bacteria virica semejante a sigma
~
l-. _28
...

l
j ~
-

i
m&

il-.~_34
...

l;
j ~
~

I
il-.~_ (DNA VfRICO

~, . <:::Ie::>
28 34
genes tempranos genes medias genes tardios

Figura 9-47 Subunidades intercambiables de la RNA polimerasa como estrategia de control de la expresi6n genica en
virus bacterianos. El virus bacteriano SPO 1, que infecta a la bacteria B. subtilis, utiliza la polimerasa bacteriana para
transcribir sus genes tempranos. Uno de los genes tempranos, denominado 28, codifica un factar similar a la subunidad
sigma que se une a la RNA polimerasa, desplazando ala subunidad sigma bacteriana. Esta nueva forma de polimerasa
inicia especfficamente la transcripci6n de los genes "medios" de SPOl. Uno de los genes medios codifica otra subunidad
similar a la subunidad sigma, desplazando a su vez al factor producto del gen 28 y dirigiendo ahora la RNA polimerasa a
la transcripci6n de los genes "tardfos". Este Ultimo grupo de genes codifica las protefnas que empaquetanin el
cromosoma virico en una cubierta virica y lisanin la celula. Asf pues, esta estrategia permite que se expresen una serie de
genes viricos en un orden particular, permitiendo un control nipido, controlado temparalmente, de la replicaci6n virica.

460 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 CAGATTGAAACGTCa::: GGCCG AAAACAAAATCAACAAA
CAGATTGAAACGTCGrGGCCAAAAACAAAATCAACAAA

Drosophila melanogaster
~~
U~
n -----v-

--==:_-t1_============
-==: C- -V--
inicio del RNA inicio de la secuencia
codificante de la
100 pares de nucle6tidos protein a engrailed

En un cierto sentido, los eucariotas utilizan una estrategia similar al dispo- Figura 9-48 Comparaci6n entre
ner de tres RNA polimerasas (I, II, YIII), que comparten algunas de sus subuni- partes de la regi6n reguladora situada
dades. Por contraste, los procariotas utilizan el mismo mlcleo basico de RNA po- en direcci6n 5' a partir del gen
limerasa, que modifican con diferentes subunidades sigma. engrailed de dos especies de
Drosophila. Se presenta la
comparaci6n de las secuencias de
Los interruptores geneticos han evolucionado gradualmente Drosophila melanogastery de
Drosophila virilis, senalandose en rojo
Hemos visto que las regiones de control de los genes eucariotas se distribuyen so- las secuencias con un 90% de
bre largos fragmentos del DNA, mientras que las de los procariotas estan pr6xi- identidad. En la parte superior se
mas al inicio de transcripci6n. Sin embargo, algunas proteinas reguladoras proca- indica a modo de ejemplo la secuencia
riotas reconocen secuencias de DNA localizadas a muchos pares de nucle6tidos real de un fragmento comparado. Las
del promotor. El ejemplo del bucle de DNA en E. coli mostrado en la Figura 9-32 secuencias conservadas senalan
se parece al mecanismo por el cuallas proteinas reguladoras eucariotas actuan a posiblemente los lugares donde se
distancia. De hecho, este caso fue uno de los primeros ejemplos de formaci6n de deben unir importantes protefnas
bucles en el DNA implicados en la regulaci6n de los genes e influy6 en gran medi- reguladoras, mientras que los bucles
da en los estudios posteriores de las proteinas de regulaci6n genica eucariotas. indican lugares donde han ocurrido
Parece probable que el desarrollo de los interruptores genicos en estructu- inserciones 0 deleciones de
nucle6tidos, ya que estas dos especies
ras densamente empaquetadas a partir de interruptores mayores sea la respues-
han evolucionado desde un ancestro
ta a una presi6n evolutiva de las bacterias hacia el mantenimiento de un geno-
comtin hace alrededor de 60 millones
rna de pequeno tamano. (Este mismo argumento se ha utilizado para justificar la de anos. (Por cortesfa de Judith A.
ausencia de intrones en las bacterias, como se ha visto en el Capitulo 8.) Sin em- Kassis y Patrick H. O'Farrell.)
bargo, esta compresi6n tiene un coste, yes el de imaginar c6mo pueden modifi-
carse con facilidad para incluir nuevos niveles de control. La forma extendida de
las regiones de control eucariota, con m6dulos reguladores discretos separados
por largas secuencias de DNA espaciados, podrian facilitar el mezclado de los
m6dulos durante la evoluci6n, tanto para crear nuevos circuitos reguladores
como para modificar los ya existentes. Desentranar la historia evolutiva de las
regiones de control representa un reto fascinante, y muchas de las claves podran
encontrarse elIas secuencias de DNA actuales (Figura 9-48).

Resumen
La transcripci6n de cada uno de los genes en las celulas es activada
0 desactivada
por protetnas de regulaci6n genica. En procariotas estas protetnas se unen habi-
tualmente a secuencias espectficas de DNA proximas allugar de inicio de la trans-
cripcion por la RNA polimerasa y, dependiendo de la naturaleza de la prote(na re-
guladora y de la localizacion precisa de su secuencia de union, pueden tanto

C6mo funcionan los interruptores geneticos 461

activar como reprimir la transcripcion del gen. Sin embargo, la flexibilidad de la
doble helice de DNA permite que protefnas unidas en lugares distantes influyan en
la RNA polimerasa en ellugar promotor, al doblarse el DNA que los separa. Esta ac-
cion a distancia es muy comun en las celulas eucariotas, en las que protefnas regu-
ladoras unidas a secuencias distantes miles de nucleotidos del promotor controlan
la expresion del gen.
Aunque las RNA polimerasas procariotas pueden iniciar la transcripcion por sf
mismas, las polimerasas eucariotas requieren el ensamblaje previa sobre el lugar
promotor de factores generales de transcripciOn. Estos factores se ensamblan en un
cierto orden, que se inicia con la union del TFIID ala secuencia TATA, una secuencia
de DNA situatla justa por delante de muchos lugares de inicio de laRNA polimerasa.
El proceso de ensamblaje ordenado de los factores generales de transcripciOn pre-
senta varias etapas en las que se puede regular la iniciaciOn de la transcripciOn, y se
cree que muchas protefnas reguladoras de los genes eucariotas actlian facilitando
(control positivo) 0 limitando (control negativo) este proceso de ensamblaje.
Mientras que la transcripcion de un determinado gen procariota solo estd con-
trolada por una 0 dos protefnas reguladoras, la regulacion de los genes eucariotas
es mucho mas compleja, de acuerdo con el gran tamaiio de su genoma y la gran va-
riedad de tipos celulares que presentan. Por ejemplo, la region de control del gen
eve de Drosophila comprende 20 000 pares de nucleotidos de DNA Y tiene secuen-
cias de union para mas de 20 protefnas reguladoras. Algunas de estas protefnas son
activadores transcripcionales, mientras que otras son represores transcripcionales.
Estas protefnas se unen a secuencias reguladoras organizadas en una serie de mo-
dulos reguladores dispersos a 10 largo del DNA.

Estructura de la cromatina
y el control de la expresi6n genica36
Como se describi6 en el Capitulo 8, los genomas de las celulas eucariotas se en-
cuentran muy compactados, consiguiendose que las largas moleculas de DNA
quepan en el interior de la celula y puedan ser manejadas facilmente. EI primer
nivel de compactaci6n es el enrollamiento del DNA alrededor de las histonas
formando los nucleosomas. EI segundo nivel de compactaci6n consiste en que
los nucleosomas se empaquetan en fibras de 30 nm, Finalmente, en la hetero-
cromatina, confinada a determinadas regiones del genoma que en interfase
muestran una estructura extraordinariamente condensada, se observa un orden
de empaquetamiento todavia superior.
lC6mo pueden acceder al DNA del interior de esta estructura densamente
empaquetada los factores generales de transcripci6n y las proteinas regulado-
ras? Y, lc6mo afecta el empaquetamiento de la cromatina al"control de la e~pre
si6n genica? En esta secci6n veremos que de los estudios de la estructura de la
cromatina y sus efectos sobre la expresi6n genica se han podido extraer dos
principios generales. En primer lugar, los nucleosomas no son ningtin obstaculo
serio ni para las proteinas reguladoras ni para las RNA polimerasas. Los incre-
mentadores pueden actuar a pesar de ellos, las histonas que bloquean un pro-
motor pueden ser desplazadas y, una vez ha comenzado la transcripci6n, Pol II
puede transcribir a traves de los nucleosomas sin desorganizarlos. Incluso las
polimerasas bacterianas, que no encuentran nucleosomas in vivo, pueden
transcribir a su traves, 10 cual sugiere que el nucleosoma esta construido de
modo que pueda ser atravesado con facilidad (Figura 9-49).EI segundo principio
general es que algunas formas de empaquetamiento del DNA de orden superior
hacen el DNA inaccesible tanto para las proteinas reguladoras como para los
factores generales de transcripci6n. Asi el empaquetamiento del DNA en estruc-
turas de orden superior juega un papel clave en el control de la expresi6n genica
en eucariotas, sirviendo para mantener silenciosas grandes secciones del geno-
rna -en algunos casos de forma reversible y en otros de forma irreversible.

462 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 Figura 9-49 Modelo hipotetlco para
dimero H2A-H2B explicar la capacidad de las RNA
polimerasas para transcrlbir a traves
de los nucleosomas sin provocar su
desplazamiento. La polimerasa
primero desplaza un dfmero H2A-H2B
(vease Figura 8-10), 10 que permite su
entrada en el nucleosoma. En la
siguiente etapa, la polimerasa
(A) (B) dimero H3-H4 (C) empujarfa el DNA, alejandolo del
dfmero H3-H4 que se encuentra a
continuaci6n, continuando la
transcripci6n. El dfmero H2A-H2B
desplazado es recapturado por el
nucleosoma, y se desplaza el otro
dfmero H2A-H2B situado
simetricamente, permitiendo repetir el
(0)
RNA polimerasa proceso y la salida de la polimerasa del
abandonando el nucleosoma. (De K.E. van Holde et al.,
nucieosoma ]. Bioi. Chern. 267: 2837-2840,1992.)

La transcripci6n del DNA que esta empaquetado

en nucleosomas se puede activar 37
En la seccion anterior vimos un modelo sencillo de como la transcripcion de un
gen era activada por una proteina reguladora (vease Figura 9-36).tComo se ha de
modificar dicho modelo para tener en cuenta la presencia de los nucleosomas ?
Para empezar por el principio, tde que forma afectan los nucleosomas la union
de las proteinas activadoras a las secuencias reguladoras en el DNA? En algunos
casos las secuencias reguladoras se encuentran en cortas regiones libres de nu-
cleosomas, de forma que no existe ninglin impedimento para esta interaccion.
No se sabe como ciertas regiones se mantienen libres de nucleosomas, aunque,
como ya se describio en el Capitulo 8, ciertas regiones de DNA son demasiado ri-
gidas y no admiten la torsion necesaria para la formacion del nucleosoma. Sin
embargo, en otros casos la secuencia reguladora se encuentra empaquetada en
un nucleosoma, 10 cual no impide que al menos algunas proteinas activadoras
puedan reconocerla y unirse a ella. La proteina reguladora, una vez unida, parece
desestabilizar el nucleosoma, que entonces se desensambla al menos parcial-
mente. Aun se desconoce que tipos de proteinas reguladoras pueden conseguir
este efecto y como tiene lugar.
En cambio, los factores generales de transcripcion parecen incapaces de en-
samblarse sobre un promotor empaquetado en un nucleosoma. De hecho, este
grado de empaquetamiento podria haber evolucionado al menos en parte en el
sentido de asegurar que no se produzca una iniciacion de la transcripcion, debil
o banal (es decir iniciacion sin la union previa de una proteina activadora). Sin
embargo, parece que la union de una proteina activadora a miles de nucleotidos
de distancia podria desplazar, aparentemente, un nucleosoma del promotor y
entonces seria posible el ensamblaje de los factores generales de transcripcion.
El desplazamiento podria ocurrir bien como consecuencia de una actividad dis-
tinta de la proteina activadora, 0 ser una consecuencia indirecta de los contactos
que la proteina activadora establece con los factores generales de transcripcion
para facilitar su ensamblaje en el DNA (Figura 9-50).

Algunas formas de la cromatina impiden la transcripci6n38

Aunque se puede transcribir DNA empaquetado en nucleosomas, en algunas
formas especiales de cromatina el DNA parece ser inaccesible a las proteinas ac-
tivadoras. Se cree que estas formas inactivas de la cromatina, que incluyen a la

Estructura de la cromatina y control de la expresi6n genica 463

 lugar de Figura 9-50 Un modelo que
uni6n del protefna expllcarfa el desplazamiento de los
activador activadora
nucleosomas durante la iniciaci6n de
la transcrlpci6n en eucarlotas. Una
protefna activadora unida poseerfa
una segunda actividad de eliminaci6n
TATA de los nucleosomas del promotor,
EL ACTIVADOR
exponil~ndolo a los facto res generales
DIRECTAMENTE
DESENSAMBLA de transcripci6n que podrian
LOS NUCLEOSOMAS ensamblarse. En un modelo distinto,
no mostrado aquf, el desplazamiento
de los nucleosomas ocurre como

~V"
".,...----~TATA -
consecuencia de la inducci6n del
ensamblaje de los factores generales
de transcripci6n; la protefna
EL ACTIVADOR activadora, por ejemplo, puede
TAMBIEN FACILITA permitir el ensamblaje inicial de los
EL ENSAMBLAJE DE factores generales de transcripci6n en
LOS FACTORES
GENERALES DE presencia de un nucleosoma y, una vez
TRANSCRIPCION ensamblados, estos factores
desestabilizarfan el nucleosoma. Se
conoce muy poco el mecanismo
subyacente al desplazamiento de los
nucleosomas. Las histonas pueden
sencillamente soltarse del DNA, 0, de
acuerdo con un modelo alternativo,
permanecer unidas a el (vease
Figura 8-40).

cromatina especialmente condensada denominada heterocromatina (descrita

en el Capftulo 8), contienen protefnas especiales que hacen que su DNA sea es-
pecialmente inaccesible.
Observaciones realizadas en la levadura S. cerevisiae ilustran c6mo algunos
tipos de cromatina pueden impedir la transcripci6n de un gen. El gen ADE2,
cuya expresi6n es facilmente detectable, se expresa constantemente en su posi-
ci6n normal del cromosoma. Sin embargo, cuando se transloca experimental-
mente al extrema de un cromosoma su transcripci6n se detiene, aunque la celu-
la contenga todas las protefnas que se requieren para transcribirlo. El DNA
pr6ximo al extrema de los cromosomas (los tel6meros) esta empaquetado en
una forma de cromatina especialmente inaccesible, y se cree que ese tipo de
empaquetamiento es el responsable de mantener al gen ADE2 translocado inac-
tivo, proceso denominado silenciamiento. El silenciamiento de genes localiza-
dos cerca del extrema del cromosoma se extiende por unos 10 000 pares de nu-
cle6tidos y se ha observado en muchos genes ademas de ADE2; el efecto de
silenciamiento parece reducirse gradualmente a medida que se incrementa la
distancia desde el te16mero. El mecanisme de silenciamiento no es conocido,
pero parece que supone un ensamblaje cooperative de protefnas en el DNA que,
una vez establecido, es heredable a traves de la replicaci6n del DNA (vease Figu-
ra 9-51A).
El silenciamiento del gen ADE2 es un ejemplo de un efecto de posici6n, en
el que la actividad de un gen es dependiente de su posici6n en el genoma. Los
efectos de posici6n se detectaron en primer lugar en Drosophila (Figura 9-51B),
pero en la actualidad ya se han descrito en muchos otros organismos, y se cree
que son un reflejo de los diferentes grados de empaquetamiento de la cromatina
en diferentes puntos del cromosoma, y de la tendencia de estos estados a exten-
derse incluyendo a los genes situados en las proximidades. Posteriormente,
cuando analicemos los mecanismos de la memoria celular, volveremos a esta
idea.

464 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 (A) Figura 9-51 Efectos de posicion en la
expresi6n genica. (A) EI gen ADE2 de

o
levadura en su posici6n cramos6mica
tel6mero tel6mero
"""'j ~<:~:>,~UJ.j::; """""'-
normal se expresa en todas las celulas
de levadura. Cuando se desplaza a una
gen ADE2 en su posici6n normal
en el cromosoma posici6n pr6xima al extremo del
colonia blanca cromosoma de levadura, el gen se
de celulas de silencia en muchas pero no en todas
levadura
las celulas de la poblaci6n. La ausencia
del producto genico de ADE2 provoca

un bloqueo en la via biosintetica de
gen ADE2 pr6ximo al tel6mero adenina, con 10 que se acumula un
pigmento roio. La celula fundadora de
colonia roja la colonia que presenta varios sectores
de celulas de tenfa el genADE2 inactivo, por 10 que
levadura con
sectores blancos la mayor parte de la colonia es roja.
Normalmente las colonias de levadura
son blancas. Las secciones blancas en
(B) los bordes de la colonia roja son clones
gen white en
de celulas en las que el genADE2 se ha
una posici6n activado espontaneamente. La
normal presencia de estos sectores indica que
:<*:~~\~\'**;
heterocromatina
los estados activos 0 inactivos del gen
ADE2 son heredables cuando el gen se
~inversi6n cromos6mica
/ encuentra pr6ximo al tel6mera, un
tema que se discute en la pr6xima
infrecuente
secci6n.

: .~ ~'~'4"$;r\~I"

gen white pr6ximo

(B) Los efectos de posici6n se
pueden observar tambien en el caso
del gen white de Drosophila. Las
a la heterocromatina moscas salvaies poseedoras de un gen
white tienen los oios raios. Si el gen
white se inactiva por mutaci6n, los
ojos se vuelven blancos (de ahf el
Antes de que los genes de globina de mamffero puedan nombre del gen). En moscas con una
transcribirse, puede ser necesaria una etapa de descondensaci6n39 inversi6n cramos6mica que desplaza
al gen white cerca de la regi6n
Otro ejemplo de c6mo la cromatina condensada puede evitar la expresi6n geni- heteracromatfnica, las moscas tienen
ca procede de los estudios de los grupos de genes de ~ globina de pollos y de hu- los ojos moteados, con manchas rajas
manos. Los cinco genes del grupo, que se extienden sobre 50 000 pares de nucle- y blancas. Las manchas blancas
6tidos de DNA, se transcriben exclusivamente en celulas eritrobhisticas (es decir, representan celulas en las que el gen
celulas sangufneas dellinaje de los eritrocitos). Asimismo, cada gen es activado white es silencioso, y las manchas rajas
en una etapa diferente del desarrollo (Figura 9-52) y en diferentes 6rganos: el representan areas en las que se
gen de E globina se expresa en el saco vitelino embrionario, el y en el saco viteli- expresa el gen white. Se cree que las
no y en el hfgado fetal, y el 0 y el ~ inicialmente en la medula 6sea adulta. Previa- diferencias se deben a 10 lejos que se
expanda la heteracramatina durante el
mente hemos descrito (vease Figura 9-45) una serie de protefnas necesarias para
desarrollo temprano del oio. Como en
activar al gen humano de la ~ globina en el momenta y lugar adecuados; cada
el caso del gen ADE2 de levadura, una
uno de los otros genes de globina tiene una serie de protefnas reguladoras simi- vez establecido, el estado de expresi6n
lares, muchas de las cuales son comunes a varios de ellos. Sin embargo, ademas de white es heredable, praduciendo
de la regulaci6n individual de cada uno de los genes de globina, parece que el grupos de muchas celulas que
grupo de genes esta sujeto a otro control de activaci6n/inhibici6n que supone expresan white y grupos de celulas en
cambios globales en la estructura de la cromatina. las que white es silencioso. (De 1.1.
Algunas de las primeras evidencias de estos cambios proceden de estudios Sandell y VA Zakian, Trends Cell Biol.
de los genes de globina a digestion por DNasaI en micleos aislados. En celulas 2: 10-14, 1992.)
en las que los genes de globina no se expresan, el DNA de dichos genes es resis-
tente a DNasaI, 10 cual indica que se encuentra empaquetado en forma de cro-
matina condensada. En cambio, en celulas eritroblasticas todo el grupo es sensi-
ble a la DNasaI, 10 que es un indicio de que la estructura de la cromatina
localmente ha cambiado, haciendo al DNA mas accesible ala enzima. EI DNA se
encuentra aun empaquetado en nucleosomas, pero se han perdido los niveles
de empaquetamiento de orden superior. Este cambio en el grado de empaqueta-

Estructura de la cromatina y control de la expresi6n genica 465

 100 000 pares de nucle6tidos 'c"
:0
o
locus de grupo de genes del tipo C>
control de la
region I
de la ~ globina
I
'"
"t:l

~~.~
'';:

~
'"
III
'iii

gen de la ~ globina
'" 0
.~ 12 24 36 t 12 24 36 48
III
NACIMIENTO edad en semanas
(A) (8)

miento del DNA ocurre aun antes de que se inicie la transcripcion de los genes Figura 9-52 EI grupo de los genes del
de globinas, sugiriendo que los genes estan regulados en dos etapas. En la pri- tipo de la II globina de humanos.
mera etapa, la cromatina que contiene el grupo de genes de globina se descon- (A) La regi6n cromos6mica grande
densa, 10 cual al parecer facilita el acceso de algunas de las proteinas reguladoras comprtmde 100 000 pares de
nucle6tidos, y contiene los cinco genes
al DNA. En la segunda etapa, las proteinas reguladoras restantes se ensamblan
de gIobina y una regi6n de control del
en el DNA y dirigen la transcripcion de cada uno de los genes (Figura 9-53).
locus (descrita en el texto).
Se cree que los cambios extensos que sufre la estructura de la cromatina pro- (B) Variaciones de la expresi6n de los
pios de la primera etapa requieren una region de DNA denominada region de genes del tipo de la p globina durante
control del locus 0 LCR (de Locus Control Region), que se encuentran a bastante varias fases del desarrollo de los
distancia por delante del grupo de genes (vease Figura 9-52). Ha side posible es- humanos. Cada una de las cadenas de
tablecer la importancia de la LCR a partir del estudio de ciertos pacientes con un globina codificadas par estos genes se
tipo concreto de talasemia, una forma severa de anemia., Se ha visto que en estos combina con una cadena de la
pacientes ellocus de ~ globina se mantiene silencioso en las celulas eritroblasti- a. globina formando la hemoglobina
cas, a pesar de tener el gen de ~ globina y las regiones reguladores intactas; el de- de los gl6bulos rojos. (A, segl1n F.
fecto consiste en la delecion de ciertas zonas que eliminan total 0 parcialmente la Grosveld, G.B. van Assendelft, D.H.
LCR. Asimismo, el gen de ~ globina en las celulas eritroblasticas se mantiene re- Greaves, y G. Kollias, Cell 51:975-985,
sistente a DNasaI, 10 que indica que es incapaz de seguir el proceso normal de 1987. Cell Press.)
descondensacion propio del desarrollo de las celulas eritroblasticas.
Experimentos posteriores utilizando ratones transgenicos han confirmado
el gran efecto que LCR tiene sobre la expresion de los genes de globina. Por ~, ETAPA 1
ejemplo, cuando el gen de ~ globina humano y sus regiones reguladoras (las SE AlTERA LA ESTRUCTURA
mostradas en la Figura 9-45) se insertan en diferentes regiones del genoma del DE LA CROMATINA
raton, el gen se expresa en un nivel bajo, dependiendo del lugar de insercion. ~
Este comportamiento es tipico de los genes de mamifero, e indica que la posi-
cion del gen afecta su expresion (Tabla 9-2). Cuando se incluye la LCR con el
gen, el gen de ~ globina se expresa a un nivel elevado en las celulas eritrobhisti-
cas independientemente dellugar de insercion, indicando que la LCR puede su-
~ ETAPA2
SE ACTIVA El GEN
perar los efectos de posicion.
Aunque se han identificado algunas proteinas que se unen a LCR, se desco-
noce cwil es el mecanisme que modifica la estructura del locus completo de la ~
! RNA polimerasa

globina. En la siguiente seccion exponemos algunas de las ideas que podrian ex-
plicar como se producen estos cambios. protein a \.
reguladora
RNA
No se conocen los mecanismos que forman la cromatina activa
El modelo hipotetico para explicar la activacion global de las globinas, que se es- Figura 9-53 Las dos etapas por las
quematiza en la Figura 9-53, implica que en los eucariotas existen proteinas de cuales se actlvan algunos genes,
union a secuencias especificas de DNA que actl1an descondensando la cromatina incluidos los del grupo de genes de las
en un area local del cromosoma que podria tener decerias de miles de pares de globinas. En la etapa 1 se modifica la
estructura de una gran regi6n de la
nucleotidos de longitud. Alternativamente, los cambios en la estructura de la cro-
cromatina, descondensandose en
matina observados en los genes activos podrian ser una consecuencia automciti- preparaci6n para la transcripci6n. En
ca, mas que un requisito previo, del ensamblaje de factores de transcripcion, de la etapa 2, las protefnas reguladoras
la RNA polimerasa, 0 de ambos, en un promotor. Hemos visto que el ensamblaje (representadas en este esquema
de los factores generales de transcripcion en los promotores parece acompafiarse simplificado por una unica protefna)
de cambios en la distribucion de los nucleosomas en ellugar de ensamblaje; po- se unen a lugares especfficos de la
siblemente esta pequefia perturbacion se pueda transmitir a largas distancias por cromatina induciendo la sfntesis del
alglin mecanisme de propagaci6n desconocido. RNA (transcripci6n).

466 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

Tabla 9-2 La expresi6n de un gen transferido a un rat6n generalmente presenta
efectos de posici6n del cromosoma, con diferentes niveles de actividad genica en
animales transgenicos derivados de forma independiente

Porcentaje del total de mRNA en

Saco Copias genicas
vitelino Hfgado Est6mago Cerebro por celula
Gen end6geno 20 5 0,1 0 2
Animal transgenico 1 3,4 1 0,1 0 4
Animal transgenico 2 4,8 30 1,3 0 4
Animal transgenico 3 4,4 13 4,7 0 4
Animal transgenico 4 0,4 0,4 0 0 12

En estos experimentos llevados a cabo con el gen de la aifa-fetoprotefna de raton, el fragmento de

DNA inyectado en el huevo del raton fertilizado incluye 14000 pares de nucleotidos de secuencia
5'-flanqueante, donde se localizan tres incrementadores (enhancers) que afectan la expresion de
este gen. Se utiliz6 la tecnica de hibridizacion para comparar el nivel de mRNA producido por el
gen inyectado con el que normaimente produce el gen endogeno de la aifa-fetoproteina en los teji-
dos fetaies indicados. (Datos de R.E. Hammer et ai., Science 235:53, 1987.)

Tengan 0 no los eucariotas protefnas capaces de descondensar dominios de

la cromatina, es valioso especular acerca de c6mo podrfan hacerlo estas protef-
nas. Actualmente s6lo podemos imaginar este rilecanismo. En la Figura 9-54 se
esquematizan tres posibilidades. Se trata de tres modelos muy distintos, 10 cual
es un indicio de 10 lejos que estamos de comprender la transici6n entre la cro-
matina activa e inactiva.

La tensi6n superhelicoidal del DNA pennite la acci6n a distancia40

Uno de los tres modelos que se recogen en la Figura 9-54 implica la existencia de
cambios topo16gicos en un bucle cerrado de DNA de doble cadena que conduce a

:c locus de
wa~ .
cromatlna norma I en
el dominio'en bucle
Figura 9-54 Tres modelos propuestos
para explicar la influencia a gran
control distancia de una regi6n dominio de
delareg~ C control sobre la actlvidad genica. Se

----1------.
PUNTa DE ENTRADA PUNTa DE GIRO ACTIVO
LUGAR DE LA NUCLEACI6N
PARA EL ENSAMBLAJE
postula que el bucle de cromatina
mostrado representa un dominio
cromosomico en bucle completo
DE LA PROTEiNA DEL DOMINIO DE a DESENSAMBLAJE (descrito en el Capitulo 8), que puede
CROMATINA DE PROTEiNAS DE
QUE SE DESPLAZA CONSTRENIDA CUBIERTA SaBRE LA contener mas de 100 000 pares de
1 1 :1ATINA
nucleotidos de DNA. Cada modelo
propone una funci6n diferente para el

[()
:J L 0 j \-
~~~
.~ cIt
lugar LCR. EI mecanismo actual
causante de los efectos a gran
distancia es desconocido, y se podrfan
proponer otros mecanismos.

I
ALTERACI6N DE LA
I
LA TENSI6N
LA GAN~NCIAa
PERDIDA DE PROTEiNAS
CROMATINA, CATALIZADA SUPERHELICOIDAL DE CUBIERTA ALTERA LA
ALTERA LA
paR PRaTE fNA CROMATINA ESTRUCTURA DE LA
CROMATINA
I'-. ----1----_--.11
cromatina activa

Estructura de la cromatina y control de la expresi6n genica 467

 DNA con un extremo libre DNA con los extremos fijos Figura 9-55 La tensi6n
superhelicoidal del DNA origina su
I~~~~~~~~'"'O\
'\\\::\,~,
1--~~~~~~~~~'"'4 sobreenrollamiento. (A) En el caso de
una moltkula de DNA con un extrema

I I
desenrollamiento de 10 pares desenrollamiento de 10 pares
de bases del DNA (una vuelta
libre (0 con un corte que actue como
de bases del DNA (una vue Ita
de la halice) de laMlice) un pivote de giro), la doble helice de
DNA gira una vuelta cada 10 pares de
nucle6tidos que se abren. (B) 5i se
,~""'OV...o---...:;~
ilL
~.,
I'lli. ~;0\,,"'--
~.,\
"-'" .~
... ""'\;~. impide la rotaci6n, la tensi6n
superhelicoidal que se genera en el
la halice de DNA ha la hal ice de DNA forma DNA abre la helice. Una forma de
de girar una vuelta un sobreenrollamiento acomodar esta tensi6n es incrementar
(A) (B)
el giro de la helice de forma que haya
11 pares de nucle6tidos en vez de 10
la formaci6n de DNA sobreenrollado, una conformaci6n que adopta el DNA en res- por vuelta de helice, como en el
puesta a una tension superhelicoidal. El DNA sobreenrollado se ha podido estudiar ejemplo; sin embargo, la doble helice
especialmente en pequefias moleculas circulares, como los cromosomas de algu- de DNA resiste dicha deformaci6n
nos virus y phismidos. Sin embargo, estas rnismas consideraciones se pueden apli- dobhindose en bucles sobreenrollados.
car a cualquier regi6n de DNA cuyos extremos sean incapaces de rotar libremente De este modo se forma un
sobreenrollamiento en el DNA por
-como por ejemplo en un bucle de cromatina anclado firmemente a la base.
cada 10 pares de bases abiertas. El
En la Figura 9-55 se ilustra una manera sencilla de visualizar las limitaciones sobreenrollamiento formado aquf es
topo16gicas que provoca el sobreenrollamiento del DNA. En un DNA de doble un sobreenrollamiento positivo (vease
cadena cuyos extremos esten fijos se forma un sobreenrollamiento para com- Figura 9-56).
pensar cada 10 pares de nucle6tidos que se han abierto (desenrollado) en la heli-
ce; la formaci6n de este sobreenrollamiento es favorable energeticamente pues
permite al resto de las regiones en las que las bases aun permanecen apareadas
recuperar el giro normal de la helice.
En bacterias como E. coli existe un tipo especial de DNA topoisomerasa II, de-
nominada DNA girasa, que, empleando la energfa de hidr6lisis del ATP, sobreenro-
lla constantemente el DNA, manteniendolo siempre bajo tensi6n. Estos sobreen-
rollamientos son sobreenrollamientos negativos, y tienen el sentido de giro opuesto
a los sobreenrollamientos positivos que se muestran en la Figura 9-55 y que se for-
man cuando una regi6n de la doble helice se abre. Asf, cuando se abre una regi6n
de la doble helice de DNA en una bacteria, mas que crearse un sobreenrollamiento
positivo, 10 que ocurre es que se elimina un sobreenrollarniento negativo. Dado
que durante este proceso se reduce la tensi6n superhelicoidal del DNA, la apertura Figura 9-56 Sobreenrollamiento de
de la doble helice de DNA en E. coli es energeticamente favorable comparada con un segmento de DNA debido a una
la apertura de la doble helice de un DNA que no este sobreenrollado. protefna que patrulla la doble helice
Las DNA topoisomerasas de tipo II eucariotas eliminan tensi6n superheli- de DNA. Los dos extremos del DNA
que se muestran son incapaces de
coidal mas que producirla (se describe en el Capftulo 8). Por ello, la mayor parte
rotar uno respecto al otro libremente,
del DNA de una celula eucariota no esta bajo tensi6n. Sin embargo el desenrolla-
y se asume que la protefna que se
miento de la doble helice esta asociado con la etapa de iniciaci6n de la trans- desplaza tambien es incapaz de rotar
cripci6n. Ademas, una molecula de RNA polimerasa en movimiento (asf como libremente. En estas condiciones el
otras protefnas que desenrollan el DNA) tendera a generar tensi6n superhelicoi- movimiento de la protefna causani la
dal positiva en el DNA por delante y tensi6n superhelicoidal negativa por detras acumulaci6n de un exceso de vueltas
(Figura 9-56). Asf, estos efectos topo16gicos podrfan generar tales fuerzas en un de helice por delante y un deficit de
vueltas por detnis, como se muestra en
la figura. Las evidencias
experimentales sugieren que una
molecula de RNA polimerasa en
movimiento produce
sobreenrollamiento de este modo; la
tensi6n superhelicoidal que genera por
delante hace mas dificil abrir la doble
helice, pero esta tensi6n ha de facilitar
la liberaci6n del DNA de los
nucleosomas ya que la separaci6n del
DNA de las histonas del nucleo del
SOBREENROLLAMIENTO NEGATIVO SOBREENROLLAMIENTO POSITIVO nucleosoma ayuda a rela:jar la tensi6n
se facilita la apertura de la helice se dificulta la apertura de la helice superhelicoidal positiva.

468 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 lugar concreto que se propagaran a traves de todo un dominio de la cromatina.
Sin embargo aun se desconoce si algun fen6meno de este tipo esta implicado en
los cambios a gran escala de la estructura de la cromatina.

Resumen
Los genomas de los organismos eucariotas esttin empaquetados en la cromatina.
Algunas formas de cromatina estdn tan condensadas que los genes que contienen
son silenciosos transcripcionalmente. A pesar de que se desconocen los detalles de
este tipo de empaquetamiento, se cree que podrla tratarse de un mecanismo utiliza-
do por las celulas para silenciar grandes regiones de sus genomas. En algunos casos
es posible revertir este silenciamiento, activtindose los genes que conten(an, pero la
manera en que ocurre es tambien desconocida.
En formas de cromatina menos condensada el DNA se encuentra aun empa-
quetado en forma de nucleosomas. Los nucleosomas posicionados en el punto de
inicio de la transcripci6n bloquean el ensamblaje de los factores generales de trans-
cripci6n. Estos nucleosomas parecen desplazarse, por un mecanismo desconocido,
cuando la transcripci6n se activa por prote(nas reguladoras.

Mecanismos geneticos que originan

tipos celulares especializados 41
Aunque los organismos unicelulares han de ser capaces de activar y desactivar
genes, los organismos pluricelulares ademas requieren interruptores geneticos
capaces de generar y mantener sus diferentes tipos celulares. En particular,
cuando una celula de un organismo pluricelular se diferenciil hacia un tipo celu-
lar determinado, generalmente la elecci6n de destino se mantiene a 10 largo de
muchas generaciones celulares, 10 que significa que los cambios de expresi6n
genica implicados en la elecci6n deben recordarse. Este fen6meno de memoria
celular es un requisito previo para la creaci6n de tejidos organizados y para el
mantenimiento de tipos celulares diferenciados. Por el contrario, los cambios
simples de la expresi6n de los genes tanto en eucariotas como en procariotas
son temporales; por ejemplo, el represor de triptOfano reprime la expresi6n de
los genes del triptOfano en la bacteria unicamente en presencia de tript6fano; en
cuanto desaparece del medio los genes son activados de nuevo, y los descen-
dientes no tendnin memoria de que sus antecesores fueron expuestos al tript6-
fano. Sin embargo, incluso en los procariotas es posible heredar algunos cam-
bios en la expresi6n genica.
En esta secci6n examinaremos de que forma los mecanismos de regulaci6n
genica pueden combinarse entre sf para formar interruptores que, una vez acti-
vados, sean recordados por las sucesivas generaciones celulares. Empezaremos
considerando algunos de los mecanismos geneticos mejor conocidos de diferen-
ciaci6n celular que actuan en bacterias y en levaduras.

Los cambios de fase de las bacterias son provocados

por reorganizaciones del DNA42
Hemos visto que en las celulas eucariotas la diferenciaci6n generalmente no im-
plica cambios detectables en las secuencias de DNA. En cambio, en algunos pro-
cariotas se pueden alcanzar patrones de regulaci6n genica hereditarios a base de
reorganizaciones especificas del DNA que activan 0 desactivan a genes concre-
tos. Dado que todos los cambios que se producen en una secuencia de DNA son
copiados con exactitud en las replicaciones posteriores del DNA, cualquier esta-
do de actividad genica alterado se heredara por toda la progenie de la celula en
la que se ha dado la reorganizaci6n. En principio, algunas de estas reorganiza-
ciones son reversibles y en tales casos, si consideramos perfodos de tiempo sufi-
cientemente largos, se establecen patrones de actividad genica alternante.

. Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 469

 segmento que se invierte Figura 9-57 Cambios en la expresi6n
I I
promotor H2 represor promotor H1
genica mediante inversiones de DNA
en bacterias. Transcripci6n altemante
(A) C:::]ili '.l ;;C:r de dos genes de flagelina en una
ACTIVO ACTIVO ACTIVO *.i INACTIV6
t bacteria Salmonella, causada por un
RNA

+
ijJ.l/J.-

protefna
...
t
+

protefna
el represor bloquea
la sfntesis de H1
_---'/
suceso sencillo de recombinaci6n
especifica de lugar que invierte un
pequeno segmento de DNA que
contiene un promotor, de modo que
H2 represora
en la orientaci6n (Al activa la
transcripci6n del gen HZ de flagelina
asi como la proteina represora que
promotor H2 represor promotor H1
bloquea la expresi6n del gen de
(8) c:= INACTIVO INACTIVO
c:::
ACTIVO ACTIVO
flagelina HI. Cuando el promotor se
invierte (B), deja de activar al gen HZ y
segmento que se invierte + al represor, y el gen HI que ahora esta
+
RNA

....
f>.fI

protefna
libre de represi6n, se expresa. El
mecanismo de recombinaci6n se
activa raramente (alrededor de una vez
H1 en 105 divisiones celularesl. Asi, la
producci6n de uno u otro tipo de
flagelina tiende a ser hereditaria en
En la bacteria Salmonella se presenta un mecanismo de diferenciaci6n celu- cada clon de celulas.
lar de este tipo, conocido por cambio de fase, que ha sido muy estudiado. Aun-
que en eucariotas superiores no existe el modo de diferenciaci6n equivalente, sf
tiene un efecto importante sobre ellos, ya que es el mecanismo que utilizan algu-
nas de las bacterias causantes de enfermedades para i.Ll ser detectadas por el sis-
tema inmune. El cambio de la expresi6n genica en Salmonella se produce por la
inversi6n esponidica de un segmento especffico de DNA de 1000 pares de nu-
cle6tidos que afecta la expresi6n de la protefna de la superficie celular flagelina,
para la que la bacteria tiene dos genes. La inversi6n esta catalizada por una enzi-
rna de recombinaci6n especffica de lugar, 10 que cambia la orientaci6n de un
promotor situado en el interior de los 1000 pares de nucle6tidos que se invierten.
Con el promotor en una de las orientaciones la bacteria sintetiza un tipo de flage-
lina; con el promotor en la otra orientaci6n la bacteria sintetiza el otro tipo de fla-
gelina (Figura 9-57). Dado que las inversiones se dan muy raramente, cuando se
producen se generan clones enteros de bacterias con un tipo u otro de flagelina.
Probablemente este fen6meno del cambio de fase evolucion6 porque pro-
tege a la poblaci6n bacteriana contra la respuesta inmune de sus huespedes ver-
tebrados. Si el huesped fabrica anticuerpos contra un tipo de flagelina, las esca-
sas bacterias cuya flagelina sea distinta debido a una inversi6n genica podran
sobrevivir y multiplicarse.
Las bacterias que se afslan de los medios naturales suelen presentar cambios
de fase para uno 0 varios rasgos fenotfpicos, pero generalmente estas "inestabili-
dades" se eliminan en las cepas estandar dellaboratorio. S610 se han estudiado
unos cuantos mecanismos subyacentes a este proceso y no todos consisten en in-
versiones de segmentos de DNA. Por ejemplo, una bacteria que provoca una en-
fermedad humana de transmisi6n sexual comun (Neisseria gonorrhoeae) evita el
ataque inmune mediante una variaci6n hereditaria de las propiedades de su su-
perficie, que se genera por conversion genica (descrito en el Capftulo 6) mas que
por inversi6n genica. Este mecanismo depende de la protefna de recombinaci6n
RecA, y transfiere secuencias de DNA desde "cassettes genicas" silenciosas a un
gen que se expresa; este mecanismo tiene la ventaja de que genera mas de 100 va-
riantes de una protefna mayoritaria de la superficie bacteriana.

En levaduras, algunas proteinas reguladoras

determinan la identidad del tipo celular 43
Debido fundamentalmente a su gran facilidad de crecimiento y de manipula-
ci6n genetica, las levaduras se han analizado con gran detalle como organismo

470 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 modelo para el estudio de los mecanismos de control genico en eucariotas. La
levadura comun de panadero, Saccharomyces cerevisiae, ha sido especialmente
util por su capacidad de diferenciarse en tres tipos celulares, aunque el mecanis-
mo difiere en algunos aspectos basicos del que usan las celulas de plantas y ani-
males. S. cerevisiae es un eucariota unicelular que puede existir tanto en estado
haploide como diploide. Las celulas diploides se forman por un proceso deno-
minado apareamiento, en el que dos celulas haploides se fusionan. Para que
dos celulas haploides se puedan aparear han de diferir en su tipo de aparea-
miento (sexo). En Saccharomyces cerevisiae, existen dos tipos de apareamiento, a
y a, especializados en el apareamiento mutuo. Cada uno de allos produce un
molecula senal especifica (factor de apareamiento) que difunde, y una protefna
receptora. Estas moleculas capacitan a la levadura, respectivamente, para comu-
nicarse y para reconocerse y fusionarse con celulas del tipo contrario. Las celu-
las diploides resultantes, denominadas at a, presentan caracterfsticas propias
que las distinguen de los tipos parentales: no son aptas para el apareamiento
pero pueden formar esporas (esporular), generando celulas haploides por meio-
sis en situaciones de carencia de nutrientes.
Los mecanismos por los cuales se establecen y mantienen estos tres tipos de
celulas ilustran algunas de las estrategias que se han descrito previamente para
cambiar el patron de expresion genica. El tipo de apareamiento de la celula ha-
ploide viene determinado por un unico locus genetico, ellocus del tipo de apa-
reamiento (MAT, de Mating-Type Locus), que en la celula de tipo a codifica una
unica protefna reguladora, aI, y en una celula de tipo a codifica dos protefnas
reguladoras, al y a2. La protefna al no tiene ningl1n efecto sobre la propia celu-
la de tipo a, pero 10 tendra sobre la celula diploide resultante del apareamiento: Figura 9-58 Control del tipo celular
en levadura. El tipo celular en
mientras tanto la celula de tipo a fabrica la protefna reguladora por defecto. En
levaduras esta controlado pOI tres
cambio, la protefna a2 actua en la celula a como un represor transcripcional que
proteinas reguladoras (aI, a2 y all
reprime los genes especificos de a, mientras que al actua como un activador producidas por ellocus MAT. Se
transcripcional que activa los genes especificos de a. Cuando se fusionan las ce- transcriben diferentes grupos de genes
en las celulas haploides de tipo a, a y
diploides (tipo a/a). Las celulas
proteinas reguladoras conjunto de genes haploides expresan una serie de genes
tipo celular
producidas por el locus MA T controlados por MA T especificos de celula haploide (hSG) y
o bien un grupo de genes especificos
MCM1
a

a
a aSG
ACTIVO
de a (aSG) 0 de a (aSG). Las celulas
diploides no expresan ninguno de
estos genes. Las proteinas aI, 0.2, yal
(haploide) aSG controlan muchos genes diana en cada
INACTIVO
hSG
tipo de celula mediante su uni6n, en
a1
(sin efecto) ACTIVO diferentes combinaciones, a las

aII
secuencias reguladoras situadas por
MCM1
delante de estos genes. Es de destacar
a que la proteina 0.1 es activadora,
l-a2 aSG
mientras que 0.2 es represora, yambas
INACTIVO
a actuan en combinaci6n con una
(haploide) proteina reguiadora ubicua
a 1 . MCM1
aSG deno~inadaMCMl. En la celula
ACTIVO diploide, 0.2 y al forman un
a1 a2
hSG heterodimero que desactiva un grupo
ACTIVO
distinto de genes (entre los que se

a a II
a l-a2
MCM1

aSG
incluye el gen que codifica la proteina
activadora 0.1) de los que inactivaba 0.2
y MCMl. Este ejemplo relativamente
INACTIVO simple de control genico es un buen
a/a
(diploide) aSG ejemplo de control combinatorio de la
INACTIVO expresi6n genica (vease Figura 9-38).

a2 a1 a2-t~a1 hSG
Las proteinas al y 0.2 reconocen en
ambos casos su secuencia de uni6n
I INACTIVO mediante un homeodominio (vease
Figura 9-13).

Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 471

lulas de los dos tipos de apareamiento la combinacion de las protefnas regula-
doras al y a2 genera un patron de expresion genica completamente distinto al
de cualquiera de las celulas progenitoras. En la Figura 9-58 se esquematiza el
mecanismo por el cuallos genes especfficos del tipo de apareamiento se expre-
san en cada uno de los tres tipos celulares. Se trata de uno de los primeros ejem-
plos de control genico combinatorio y min es uno de los mejor conocidos a nivel
molecular.
Aunque en muchos laboratorios las cepas de S. cerevisiae se mantienen es-
tables durante muchas generaciones, algunas cepas aisladas del medio natural
cambian repetidamente entre los tipos celulares a y a por un mecanismo de re-
organizacion genica que recuerda el de cambio de fase en N. gonorrhoeae, aun-
que el mecanismo en detalle parece ser particular de levadura. En cada uno de
los extremos del locus MAT del cromosoma de la levadura existe un locus silen-
cioso que codifica las protefnas reguladoras especfficas del tipo de apareamien-
to: en un lado codifica al y a2, y en el otro al. En cada division celular sucesiva
el gen activo en ellocus MAT es eliminado y substituido por una nueva copia del
locus silencioso del tipo de apareamiento opuesto. Este mecanismo se ha deno-
minado mecanismo cassette pues el cambio supone eliminar un gen de la posi-
cion "activa" y su substitucion por otro. El cambio es reversible porque aunque
el gen original en ellocus MAT se elimina, queda siempre una copia silenciosa
en el genoma. Nuevas copias de DNA realizadas a partir de los genes silenciosos
actuan como cassettes desechables que seran insertadas alternativamente en el
locus MAT que actua como "cabezallector" (Figura 9-59).
Resultados de tests geneticos sugieren que las cassettes silenciosas se man-
tienen inactivas por el mismo mecanismo que silencia los genes localizados en
el extremo de los cromosomas de levadura (vease Figura 9-51A): el DNA en un
locus silencioso parece estar empaquetado en forma de cromatina inactiva.

Dos proteinas fagicas que se reprimen mutuamente su sintesis

determinan el estado del bacteri6fago lambda44
La observacion de que a partir de la informacion genica de un solo nueleo soma-
tico se pueda desarrollar un vertebrado 0 una planta elimina la posibilidad de
que los cambios irreversibles en el DNA sean la causa principal de la diferencia-
cion de las celulas eucariotas superiores (a pesar de que estos constituyen una
parte esencial del proceso de diferenciacion de los linfocitos -descrito en el Ca-

gen silencioso gen silencioso Figura 9-59 Modelo de las cassettes

tipo" locus MAT tipo a para la alternancia de tipo de
apareamiento en la levadura. EI
se inserta la cassette
a nueva cambia de cassettes se da por un
proceso de conversi6n genica que se
dispara cuando la nucleasa realiza un
corte de doble cadena en una
TIPO DE APAREAMIENTO ex secuencia especffica del DNA en el
locus MAT. A continuaci6n se elimina
el DNA cerca del corte y se substituye
se elimina la cassette
" antigua par una copia de la cassette silenciosa
del tipo de apareamiento opuesto.

TIPO DE APAREAMIENTO a

se inserta una
cassette lZ nueva

472 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

pitulo 23). Aunque, en principio, los cambios reversibles de secuencias de DNA,
similares a los descritos en los casos de Salmonella y de las levaduras, pueden
ser responsables de algunos de los cambios hereditarios de expresi6n genica que
se observan en los organismos eucariotas superiores, actualmente no dispone-
mos de ninguna evidencia que demuestre su existencia.
Sin embargo, existen otros mecanismos, como los que ya se han descrito en
este capitulo, que son capaces de producir un patr6n de expresi6n genica here-
ditario que presente una serie de estados discretos estables. En las celulas euca-
riotas no se comprende completamente ninguno de estos mecanismos, pero los
estudios sobre el bacteri6fago lambda han aportado mucha informaci6n a nivel
molecular, de un interruptor genetico que puede alternar, "flip-flop", entre dos
estados estables, 10 que podrfa ser un modelo de interruptor que tambien actua-
ra en el desarrollo de los eucariotas superiores.
Previamente hemos descrito que este virus bacteriano puede permanecer
integrado en el DNA de una celula de E. coli en condiciones favorables, de forma
que se replica automaticamente cada vez que la bacteria se divide, en lugar de
multiplicarse en el citoplasma y matar a su huesped. El cambio entre estos dos
estados viene mediado por dos proteinas codificadas por el genoma virico. El ge-
noma consta de unos 50 genes que en los dos estados se transcriben siguiendo
patrones muy diferentes. Por ejemplo, en un virus que se ha de integrar se pro-
ducini la proteina integrasa, necesaria para insertar el DNA del virus en el geno-
rna de la bacteria y al mismo tiempo se han de reprimir la producci6n de las pro-
teinas viricas implicadas en la replicaci6n del virus. Una vez se ha escogido entre
uno de los dos patrones de expresi6n, este se mantiene estable.
No podemos aqui detenernos en los detalles de este complejo sistema: regu-
lador de la expresi6n genica, pero destacaremos algunas de sus caracteristicas
generales. En el coraz6n del sistema se encuentran dos proteinas reguladoras de
genes sintetizadas por,el virus: la proteina represora lambda (proteina el), des-
crita anteriormente, y la proteina ero. Estas proteinas bloquean cada una de
ellas la sintesis de la otra, organizaci6n que permite tinicamente dos estados po-
sibles. En el estado 1 (el estado de profago) el represor lambda ocupa el opera-
dor, bloqueando la sintesis de represor y tambien activando su propia sintesis. Figura 9-60 Version simplificada del
En el estado 2 (el estado Utico) la proteina cro ocupa un lugar diferente en el ope- sistema regulador de tipo
rador, bloqueando la sintesis del represor y activando su propia sintesis (Figura interruptor, que determina el estilo
9-60). En el estado de profago la mayor parte del DNA del virus integrado de for- de crecimiento del bactericSfago
ma estable no se transcribe; en el estado lftico este DNA se transcribe extensa- lambda en la celula huesped E. coli.
mente, se replica, se empaqueta en nuevos bacteri6fagos, y se libera cuando se En el estado estable 1 (estado de
lisa la celula huesped. profago) el bacteriofago sintetiza la
protefna represora en grandes
Cuando la bacteria huesped va creciendo bien, el virus tiende a adoptar el
cantidades, que activa su propia
estado 1, permitiendo que el DNA del virus se vaya multiplicando nipidamente,
sfntesis e inactiva la sfntesis de varias
conjuntamente con el cromosoma huesped. Cuando se dana la celula huesped, protefnas del fago, entre las que se
un virus integrado se transforma del estado 1 al estado 2, se multiplica en el cito- cuenta la protefna cro. En el estado
plasma de la celula y se escapa rapidamente de ella. Esta conversi6n esta induci- estable 2 (estado lftico) el bacteriOfago
da por proteinas reguladoras bacterianas que inactivan la proteina represora. sintetiza la protefna cro en grandes
Sin embargo, en ausencia de tales interferencias el represor de lambda bloquea cantidades, la cual inactiva la sfntesis
tanto la producci6n de la proteina cro como activa su propia sintesis, y este bu- del represor, de forma que se
de de retroalimentaci6n positiva es el que ayuda a mantener el estado de profa- sintetizan muchas protefnas vfricas y
comienza la replicacion libre del DNA
del virus en la celula de E. coli,
produciendo finalmente numerosas
astado astable 1: estado de profago estado estable 2: estado Utieo
sa sintetiza la proteina represora de lambda se sintetiza la proteina ero partfculas vfricas y matando la celula.
Este ejemplo muestra como dos
protefnas reguladoras pueden
eI ero eI ero
combinarse en un circuito
ACTIVO INACTIVO INACTIVO opera or ACTIVO produciendo dos estados estables.

RNA RNA

Como se muestra en la Figura 9-11,

represor proteina
tanto el represor lambda como la
protefna cro reconocen el operador
I '.. de lambda ero
mediante un motivo helice-giro-helice.

Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 473

 Figura 9-61 Diagrama esquematico
que muestra c6mo un bucle de
retroalimentaci6n positiva puede
generar memoria celular. La protefna
A es una protefna reguladora que
activa su propia transcripci6n. Todos
los descendientes de la celula original
recordanin que la celiIla progenitora
el efecto de la senal
puntual es recordado
recibi6la senal que inici6 la
par tadas las celulas producci6n de la protefna.

T descendientes

la proteina A
no se sintetiza
ya que normalmente
es necesaria para su
propia transcripci6n

go estable. Los bucles de retroalimentacion positiva son un rasgo caracteristico

de muchos circuitos de memoria celular (Figura 9-61).
Un principio general importante que se deriva del caso del bacteriofago
lambda es que s'e puede conseguir un sofisticado patron de comportamiento con
un escaso mlmero de proteinas reguladoras de genes que afectan reciprocamen- Figura 9-62 Efecto
te su sintesis y su actividad. Sabemos que las celulas eucariotas utilizan variacio- de la expresi6n de la
nes de esta sencilla estrategia para establecer y mantener patrones de expresion protefna MyoD en
fibroblastos. Como
genica hereditarios. Por ejemplo, algunas proteinas reguladoras implicadas en el
se muestra en la
establecimiento del plan de desarrollo de Drosophila (descrito en el Capitulo 21), micrografia de
estimulan su propia transcripcion, de modo que se crea un bucle de retroali- inmunofluores-
mentacion positiva que estimula su sintesis continuada; al mismo tiempo estas cencia, los
proteinas reprimen la transcripcion de los genes que codifican otras proteinas fibroblastos de la piel
reguladoras importantes. se han convertido en
celulas musculares
por efecto de la
La expresi6n de una proteina reguladora critica puede disparar expresi6n inducida
la expresion de una bateria de genes situados por debajo experimentalmente
(en direccion 3')45 del gen myoD. Los
fibroblastos
En general se trata de una combinacion de proteinas reguladoras, mas que de
crecieron en cultivo,
una proteina unica, la que determina donde y cuando se ha de transcribir un gen yfueron
eucariota. Pero aunque el control sea combinatorio, una unica proteina puede transfectados tres
ser decisiva para cambiar una celula de una via de desarrollo 0 estadQ de dife- dfas antes de la
renciacion a otro. Un ejemplo notable procede de los estudios de diferenciacion observaci6n con un L----.J
de una fibra muscular in vitro. plasmido 20 ~m
Una fibra muscular esqueIetica de mamifero tipica es extremadamente lar- recombinante que
ga y contiene muchos nucleos. Se forma por fusion de muchas celulas precurso- contiene la secuencia codificante de
ras denominadas mioblastos. La fibra muscular madura se diferencia de otras myoD. Aunque s610 un porcentaje
celulas por un gran numero de proteinas caracteristicas, que incluyen tipos es- pequeno de los fibroblastos incorpora
pecificos de actina, miosina, tropomiosina y troponina (todas elIas forman parte el DNA y produce la protefna MyoD,
del sistema contractil), creatina fosfoquinasa (propia del metabolismo tipico de estas celulas se fusionan formando
miotubulos alargados, que se muestran
las celulas musculares), y receptores de acetilcolina (que hacen a la membrana
tenidos con anticuerpos que detectan
sensible a la estimulacion nerviosa). En mioblastos proliferantes estas proteinas una protefna especffica del musculo.
especificas de musculo y sus mRNA estan ausentes 0 se encuentran presentes en Las celulas tenidas estan mezcladas
baja concentracion. Cuando los mioblastos empiezan a fusionarse unos con con una capa confluente de
otros, todos estos genes se activan en un proceso coordinado que es parte de la fibroblastos, cuyos nucleos se pueden
transformacion general que presenta su patron de expresion genica. apreciar en la imagen. Cultivos control
Todo este programa de diferenciacion del musculo puede desencadenarse transfectados con otro plasmido no
en fibroblastos de la piel en cultivo y en algunos otros tipos celulares introdu- contienen celulas musculares.

474 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

ciendo cualquier gen que codifica uno de los miembros de una familia de protef-
nas helice-bucle-helice -las denominadas proteinas miogenicas (por ejemplo
MyoD, Myf5 0 miogenina)- que normalmente se expresan unicamente en fibras
musculares (Figura 9-62). En el DNA adyacente a muchos genes especfficos de
musculo se pueden detectar secuencias de union a estas protefnas. A partir de
estudios con ratones transgenicos parece que el modo de accion de MyoD y
MyfS implica la activacion de miogenina: si se elimina el gen de miogenina por
insercion genomica dirigida, las celulas musculares no pueden diferenciarse.
Es probable que tanto los fibroblastos como otros tipos celulares que se
convierten en fibras musculares por las protefnas miogenicas hayan acumulado
una serie de protefnas reguladoras que pueden cooperar con las protefnas mio-
genicas activando los genes especfficos del musculo. Desde este punta de vista
serfa una combinaci6n de protefnas reguladoras, mas que una simple protefna,
la que determiriarfa la diferenciacion celular. Esta idea es consistente con el he-
cho de que algunos tipos celulares no se convierten en fibras musculares por ac-
cion de miogenina 0 protefnas relacionadas; dichas celulas, probablemente no
habrfan acumulado las otras protefnas reguladoras necesarias.
A continuacion veremos como el control combinatorio tiene implicaciones
importantes tanto para la evolucion como para el desarrollo de los organismos
pluricelulares.

El control genico combinatorio es la norma en los eucariotas46

Ya hemos discutido como pueden actuar de modo combinado multiples protef-
nas reguladoras controlando la expresion de un determinado gen. Sin embargo,

celula embrionaria Figura 9-63 La importancia para el

desarrollo del control combinatorio.
Este esquema muestra c6mo las
combinaciones de unas cuantas
protefnas reguladoras pueden generar
muchos tipos celulares diferentes
durante el desarrollo. En este esquema
INDUCCI6N DE LA PROTEfNA REGULADORA simple la decisi6n de sintetizar una de'
un par de protefnas reguladoras
(representadas por cfrculos
numerados) se toma deJ>pues de cada
divisi6n celular. Siendo conscientes de
IIZQUIERDA I I DERECHA I su posici6n en el embri6n, la celula
hija situada hacia la izquierda del
celula A celula B embri6n siempre escoge sintetizar la
protefna par, mientras que la situada
INDUCCI6N DE LAS PROTEfNAS REGULADORAS hacia la derecha en el embri6n
sintetizanin la impar. Se asume quela
producci6n de cada protefna
reguladora es autoperpetuante
(contribuyendo asf a la memoria
celular). Asf pues, las celulas en un
clon en crecimiento contendrfan un
celula C celula D celula E celula F mlmero creciente de protefnas
reguladoras. Es de destacar que en este
INDUCCI6N DE LAS PROTE[NAS REGULADORAS. Y ejemplo, puramente hipotetico, se han
generado ocho tipos celulares (G a N)
con cinco protefnas reguladoras
diferentes. Si se continua el esquema,
se pueden llegar a especificar 10 000
tipos celulares con s610 25 protefnas
reguladoras diferentes.
celula G celula H celula I celula J celula K celula L celula M celula N

Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 475

como demuestra el ejemplo de las protefnas miogenicas, el control combinato-
rio significa min mas: no solo cada uno de los genes esta regulado por la accion
de numerosas protefnas reguladoras, sino que cada protefna reguladora partici-
pa en el control de muchos genes. Ademas, aunque algunas protefnas regulado-
ras como MyoD 0 miogenina son especfficas de un unico tipo celular, es mas
frecuente que una protefna reguladora determinada este activa en una variedad
de tipos celulares, en diferentes partes del cuerpo y en distintos momentos del
desarrollo. En la Figura 9-63 se ilustra esquematicamente como el control genico
combinatorio hace posible generar una gran cantidad de complejidad biologica
con un numero relativamente reducido de protefnas reguladoras.
El control combinatorio permite que una protefna reguladora dada no tenga
necesariamente una funcion unica y claramente definida, como por ejemplo la
de activacion de un grupo determinado de genes 0 la de determinacion de un
cierto tipo celular. En lugar de ello, puede tener diferentes funciones que se sola-
pan con las de las otras protefnas reguladoras. Estas protefnas se podrfan com-
parar con las palabras de un idioma: se utilizan con diferentes sentidos en una
variedad de contextos y raramente se utilizan aisladas; una combinacion ade-
cuada es la que contiene la informacion necesaria para especificar un proceso
de regulacion genica.
Una consecuencia del control genico combinatorio es que el efecto de afia-
dir una nueva protefna reguladora a una celula dependera de la historia anterior
de la celula, pues esta historia determina que protefnas reguladoras se encuen-
tran ya presentes en la celula. Asf durante el desarrollo una celula puede acumu-
lar una serie de protefnas reguladoras que pueden no alterar la expresion genica.
Cuando se expresa el ultimo miembro de la combinacion requerida de protefnas
reguladoras, se completa el mensaje regulador, provocando grandes cambios en
el patron de expresion genica. Este modelo, como ya hemos visto, puede expli-
car el fenomeno de transformacion dramcitico de un fibroblasto en una fibra
muscular por la adicion de una unica protefna reguladora. Asimismo podrfa jus-
tificar la diferencia, descrita en el Capftulo 21, entre los procesos de determina-
cion celular, por los cuales una celula queda determinada a seguir una cierta
ruta de diferenciacion y un destino, y el proceso de diferenciacion celular por el
cual una celula determinada expresa su caracter especializado. Un rasgo esen-
cial de estas ideas es que, una vez que se empieza a expresar una protefna regu-
ladora, puede actuar manteniendo su propia expresion, contribuyendo de este
modo a la memoria celular como se discutira de nuevo mas adelante.
El control genico combinatorio tiene otra importante consecuencia para la
evolucion. Dado que las protefnas reguladoras no son exclusivas de un circuito
de regulacion 0 de un gen diana particular, cambio sutiles en elIas pueden pro-
ducir cambios substanciales en el comportamiento de las celulas.

Se hereda un cromosoma X inactivo47

Hemos visto anteriormente que las protefnas reguladoras pueden producir pa-
trones de expresion genica heredables tanto en celulas eucariotas como proca-
riotas. En la Figura 9-61 se ilustra un posible mecanismo, basado en un bucle de
retroalimentacion positiva en el control de la expresion de un gen. Exclusiva-
mente en eucariotas existe un mecanismo adicional, que permite que se herede
el patron de organizacion de la cromatina. Posiblemente el ejemplo mas drama-
tico al respecto sea la inactivacion de uno de los dos cromosomas X en las celu-
las de las hembras de mamffero.
Los cromosomas X e Y son los cromosomas sexuales de los mamfferos: todas
las celulas femeninas contienen dos cromosomas X, mientras que las masculi-
nas contienen un cromosoma X y un cromosoma Y. Probablemente debido a
que una dosis doble de los productos del cromosoma X podrfa resultar letal, las
celulas femeninas han desarrollado un mecanismo para mantener inactivado
permanentemente en cada celula uno de los dos cromosomas X. En el raton esto
ocurre entre el tercero y el sexto dfas de desarrollo, cuando, en cada celula uno

476 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 celula de un embrion temprano Figura 9-114 Inactivaci6n del X.
Xm Herencia clonal de un cromosoma X
condensado e inactivo, que tiene lugar
en las hembras de los mamfferos.

CONDENSACION DE UN CROMOSOMA
X SELECCIONADO AL AZAR

HERENCIA DIRECTA DEL PATRON DE CONDENSACION DEL CROMOSOMA

'-- ----'1 L-I -'

en este cion solo es activo el cromosoma X m en este cion solo es activo el cromosoma X p

de los dos cromosomas X, al azar, se condensa en forma de heterocromatina.

Este cromosoma se puede ver al mieroscopio optieo durante la interfase como
una estructura diferente conocida como corpusculo de Barr, localizado cerca de
la membrana nuclear, y se replica al final de la fase S. La mayor parte de su DNA
no se transcribe. Este cromosoma X inactivo se hereda fielmente, por 10 que
cada hembra es un mosaieo compuesto de grupos clonales de celulas en los que
s610 es activo el cromosoma X heredado del padre CXp) y otro mlmero aproxima-
darnente igual de grupos de celulas en las que tinieamente es activo el cromoso-
maXheredado de la madre 0Cm). En general, en el animal adulto tanto las celulas
que expresan ~ como las que expresan ~ se distribuyen en pequefios grupos,
10 cual refleja la tendencia de las celulas hijas de permanecer cerca unas de las
otras durante las tiltimas etapas del desarrollo embrionario y del crecimiento
(Figura 9-64).
El proceso de condensacion que forma la cromatina condensada (hetero-
cromatina) en un cromosoma X tiene la tendencia a producirse de forma conti-
nua a 10 largo del cromosoma. Ello se ha demostrado mediante estudios utili-
zando animales mutantes en los que uno de los cromosomas X se ha unido a
una porcion de un autosoma (un cromosoma no sexual). En estos cromosomas
hfbridos a menudo sucede que algunas regiones del autosoma que son adyacen-
tes al cromosoma X inactivado se encuentran condensadas en heterocromatina
de forma que los genes que contienen se encuentran inactivados de una manera
hereditaria. Esto sugiere que la inactivacion del cromosoma X se produce me-
diante un proceso cooperativo, que puede imaginarse como una especie de
"cristalizacion" de la cromatina que se extiende desde un lugar de nucleacion si-
tuado en el cromosoma X. De hecho, se ha localizado genetieamente un tinieo

Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 477

 12345 12345 1 2 3 4 5
t 'E
limite
genes
pronto en el embri6n en desarrollo, se forma la heterocromatina y se extiende sobre
I
12345 la eucromatina vecina hasta distancias diferentes en diferentes celulas
+ ~ ~ ~
~SLOCACI6N
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

l b~C~'OMOSOMAS ~ ~
proliferaci6n de la celula
~
12345
~ ~ ~
'i
heterocromatina
it'*
eucromatina

cion de celulas con cion de celulas con los cion de celulas sin
el gen 1 inactivo genes 1, 2 Y 3 inactivos ningun gen inactivo

(A) (8)

centro de inactivaci6n en el cromosoma X: fragmentos rotos de cromosoma X no Figura 9-65 Fen6meno de

sufren inactivaci6n a menos' que induyan dicho centro. variegaci6n por efecto de posici6n en
Una vez se ha establecido la estructura condensada de la cromatina, un pro- Drosophila. (A) Normalmente, la
ceso desconocido hace que la estructura sea heredada de esta forma durante to- heterocromatina (rojo) no ocupa las
das las sucesivas replicaciones del DNA. Sin embargo este cambio no es absolu- regiones adyacentes de eucromatina
(verde) debido ala existencia de limites
tamente permanente ya que el cromosoma X inactivado se reactiva en el proceso
especiales de secuencias, de
de formaci6n de las celulas germinales en la hembra. naturaleza desconocida. Sin embargo,
en algunas moscas que heredan ciertas
Los genes de Drosophila y de levadura tambien pueden inactivarse translocaciones cromos6micas, este
por caracterfsticas hereditarias de su estructura cromatinica48 limite no esta presente. (B) Durante las
primeras fases del desarrollo de estas'
Hemos descrito dos ejemplos de efectos de posici6n sobre la expresi6n genica moscas, la heterocromatina se
-uno en Drosophila y otro en levadura- que se parecen en diferentes aspectos a extiende sobre el DNA cromosomico
la inactivaci6n del cromosoma X (vease Figura 9-51). En ambos casos, una forma vecino, alcanzando diferentes
especfficamente condensada de cromatina impide la expresi6n de algunos ge- distancias en celulas diferentes.
nes, y en ambos casos el estado de condensacion de la cromatina es hereditario. Pronto, esta expansion se detiene,
En las moscas que presentan reordenaciones cromos6micas, fenomenos de pero el patron establecido de
heterocromatina se hereda, de tal
separaci6n y reagrupamitmto que situan la mitad de una regi6n de heterocro-
modo que se producen grandes clones
matina cerea de una region de eucromatina tienden a inactivar los genes eucro- de celulas descendientes que
matfnicos cercanos. La situacion es amiloga a la fusi6n de un autosoma de ma- presentan los mismos genes vecinos
mifero con un cromosoma X inactivado, tal como se acaba de describir; los condensados en forma de
fen6menos de inactivacion son muy similares a estos: la zona de inactivacion se heterocromatina, y por 10 tanto,
expande desde el punto de separaci6n del cromosoma hasta cubrir uno 0 mas inactivos (de aquf la apariencia
genes. Ademas, mientras que el grado del efecto de expansion es diferente en di- "variegada" de algunas de estas
ferentes celulas, la zona inactivada establecida en una celula embrionaria se he- moscas; vease Figura 9-5IB). Este
reda de una manera estable por toda la progenie celular (Figura 9-65). El ejem- fenomeno se asemeja en muchos
plo de efecto de posici6n que se describe en la Figura 9-51 tambien comparte aspectos a la inactivacion del
algunos rasgos con la inactivaci6n del cromosoma X, como son el efecto de ex- cromosoma X que se produce en los
pansion y la heredabilidad del estado de condensacion de la cromatina. mamfferos.
Aun no ha sido probado que lainactivacion del cromosoma X y los efectos
de posicion ob~ervados en moscas tengan un mecanismo comun, pero el para-
lelismo entre ellos es notable. La identificaci6n y clonaje recientemente de algu-
nos genes de Drosophila y de levadura necesarios para el efecto de posicion per-
mitira descubrir, probablemente, los mecanismos moleculares implicados en
estos fenomenos. En la Figura 9-66 se muestra un esquema hipotetico de c6mo
podria explicarse el efecto de expansi6n y la naturaleza hereditaria del estado de
condensacion de la cromatina.
Independientemente de su base molecular, el empaquetamiento de deter-
minadas regiones del genoma formando cromatina condensada es un tipode
mecanismo regulador que no se presenta en las bacterias. El fen6meno crucial
de esta forma de regulaci6n genica exc1usiva de los eucariotas es el almacen de

478 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 .......
gen inactivo

~CCOJ
gen activo

~
Figura 9-66 Esquema general que
permite la herencia directa de estados
de expresi6n de genes durante la

.............. ,'t),
kPLICACION DEL DNA

""I ~~o~~~~.~:~~:Ltel
una unIon proteina libre
REPLICACION DEL D~

I- ~.CO.C-~
no se unen
proteinas
I
replicaci6n del DNA. En este modelo
hipotetico, porciones de un grupo de
protefnas reguladoras de la expresion
genica, que se unen entre sf de forma
cooperativa, se transfieren
directamente desde la helice paterna
cooperativa de DNA (arriba a la izquierdal a ambas
Mlices hijas. Entonces, el grupo de
~OIC protefnas heredado de cada una de las
lOS DOS GENES HIJOS SON INACTIVOS lOS DOS GENES HIJOS SON ACTIVOS
helices hijas provoca que se unan a el
otras copias de la misma protefna
reguladora. Como la union es
cooperativa, el DNA sintetizado a
una memoria estable de estados genicos en una estructura cromatfnica heredi- partir de una Mlice paterna de DNA
taria, en lugar de tratarse de un mecanisme de retroalimentacion estable de ge- identica a la anterior, pero que no
nes autorreguladores de protefnas reguladoras que pueden difundir de un lade a presenta las protefnas unidas (arriba a
otro del nticleo. Se desconoce si los mecanismos de este tipo acttian solo en la derechal, permanecera libre de ellas.
grandes regiones inactivas de los cromosomas 0 si tambil~n pueden hacerlo a ni- Si estas protefnas unidas inactivan la
vel de uno 0 de unos cuantos genes. transcripcion de un determinado gen,
el estado inactivo del gen se heredani
directamente, como en el ejemplo. Si
Cuando las celulas de vertebrados se dividen, pueden heredar el la union cooperativa de las protefnas
patr6n de metilaci6n del DNA49 requiere secuencias especfficas de
DNA, estos fenomenos estanin
Los nucleotidos del DNA pueden ser modificados de forma covalente, yen verte- limitados a regiones de control genico
brados la metilacion de citosina parece constituir un mecanisme importante especfficas; sin embargo, si la union se
para distinguir genes activos de los que no 10 son. La molecula de 5-metilcitosina puede propagar a todo 10 largo del
(5-metil C), tiene la misma relacion con la citosina que la timidina con el uracilo, cromosoma, podrfa explicar el efecto
y de manera similar no afecta al apareamiento de bases (Figura 9-67). La metila- de expansion asociado con los estados
cion en el DNA de vertebrados esta restringida a los nucleotidos citosina (C) en heredables de la cromatina que se
'la secuencia CG, que esta apareada exactamente con la misma secuencia (en di- discute en el texto.
reccion opuesta) de la otra hebra de la helice del DNA. Consecuentemente, un
sencillo mecanisme permite que un patron preexistente de metilaci6n del DNA
se herede directamente por las moleculas de DNA hijas. Una enzima Hamada
metilasa de mantenimiento acttia preferentemente sobre las secuencias CG apa-
readas previamente con una secuencia CG metilada. A consecuencia de eHo, el
patron preexistente de metilacion de la cadena parental de DNA acttia como un
molde para la metilacion de las cadenas de DNA hijas, haciendo que el patron
sea heredado directamente a traves de la replicacion del DNA (Figura 9-68).
Las bacterias producen enzimas que han sido muy titiles para el estudio de
la metilacion en las celulas de vertebrados. Utilizan la metilacion en A 0 en C en
una secuencia especffica a fin de protegerse de la accion de sus propias nuclea-
sas de restriccion. Por ejemplo, la nucleasa de restriccion HpaII, corta la secuen-
cia CCGG siempre y cuando la C central no este metilada. Asf la susceptibilidad
de una molecula de DNA a ser cortada por la HpaII puede utilizarse para detec-
tar si determinados puntos del DNA estan metilados 0 no. La heredabilidad de
los patrones de metilacion en vertebrados se puede estudiar en celulas en culti-
va utilizando en primer lugar enzimas metiladoras bacterianas para introducir
grupos metilo en las citosinas, y despues utilizando nucleasas de restriccion
para seguir la heredabilidad de dichos grupos. La enzima utilizada normalmente
citosina 5-metilcitosina
para introducir bases 5-metil C en secuencias determinadas CG es la enzima
HpaII metilasa, que normalmente protege a la bacteria contra su propia nuclea- H H H H

Figura 9-67 Formaci6n de 5-metilcitosina por metilaci6n de una citosina metilacion

en la doble helice del DNA. En los vertebrados este fenomeno esta
restringido a citosinas (Cl escogidas que forman parte de la secuencia CG.

Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 479

 CH3 CH 3
I I

citosina no
metilada \ CH
y citosina
metilada
5'
ACGTATCGT

3'1,1I.WUII.5'
TGCATAGCA
3'
__
m_et_i1a_c_i6_n....... :: II.WUII.::
ACGTATCGT

TGCATAGCA
I 3.
I
ACGTATCGT I I CH3
5' 3' no reconocido reconocido

3'1I.WUII.5'
TGCATAGCA
replicaci6n
del DNA
por una enzima
metilante de
mantenimiento
por una enzima
metilante de
mantenimiento
CH 3
I
CH 3 I
ACGTATCGT
metilaci6n 5'!I"li~~~3'
. III1I11II
3' . . . . . . . . . . . 5'
TGCATAGCA
I
CH3

sa de restriccion. Si se utiliza esta enzima para metilar la C central de la secuen- Figura 9-68 De que forma se pueden
cia CCGG de una molecuia clonada de DNA que luego se introduce en una celu- heredar con precisi6n los patrones de
la de vertebrado, se puede demostrar que el patron de metilacion se mantiene metilaci6n del DNA. En los DNA de
como hemos descrito: cada secuencia individual metilada CG se mantiene a 10 vertebrados, una gran cantidad de las
largo de muchas divisiones, mientras que las secuencias CG no metiladas per- bases de citosina de la secuencia CG
estan metHadas (vease Figura 9-67).
manecen sin metilar.
Dada la existencia de una enzima
La existencia de la metilasa de mantenimiento explica la herencia automliti- metHante dirigida par grupos metHo
ca de nucleotidos 5-metil C, pero dado que normalmente no metila DNA no me- (la metHasa de mantenimiento), una
tilado previamente, no puede explicar como se afiadio el primer grupo metilo a vez se ha establecido un determinado
un organismo vertebrado. Si se inyecta DNA completamente carente de metila- patron de metHacion del DNA, cada
cion a un huevo de raton fertilizado, se afiadinin grupos metilo a casi cada se- punto de metHacion se hereda en el
cuencia CG (con una importante excepcion que se discutira mas adelante). Se DNA descendiente, tal como se
cree que este efecto es debido a otra actividad metilasa de establecimiento pre- muestra en esta figura. Esto implica
sente en el huevo. Como se vera, la metilacion de novo tambien ocurre durante que los cambios en los patrones de
los procesos de diferenciacion de celulas especializadas, aunque se desconoce metHacion del DNA se pueden
como se realiza. perpetuar en toda la progenie de una
celula.

En las celulas de los vertebrados la metHacion del DNA

refuerza las decisiones del desarroll0 50
Aunque en un principio se propuso que la metilacion del DNA podrfa jugar un
papel dominante en la generacion de los diferentes tipos celulares de mamffe-
ros, actualmente se Ie reconoce un papel mas suti!. En algunos invertebrados,
incluyendo a Drosophila, el DNA no esta metilado y sin embargo el proceso de
diversificacion de los diferentes tipos celulares parece ser similar entre Droso-
phila y los vertebrados. Algunas observaciones apoyan la idea de que la metila-
cion del DNA en vertebrados esta relacionada con la inactivacion genica, pero
que solo es un mecanismo de refuerzo de una decision adoptada previamente
por otro mecanismo. Asf pues experimentos con la enzima Hpall demuestran
que en general el DNA de los genes inactivos esta mas fuertemente metilado que
el de los genes activos. Sin embargo, cuando un gen que estaba inactivo se activa
durante el desarrollo pierde parte de su metilacion unicamente despues de ha-
ber sido activado. De manera similar, el cromosoma X femenino descrito ante-
riormente, primero se condensa e inactiva, y solo posteriormente incrementa el
nivel de metilacion de sus genes.
Entonces, ique hace la metilacion? Y, icual es su utilidad para el organismo?
Tenemos al menos dos indicios importantes al respecto. Primero, se puede pre-
parar el DNA correspondiente a un gen de actina especffico de musculo en dos
formas, una completamente metilada y otra sin metilar. Cuando estas dos versio-
nes del gen se introducen en celulas musculares en cultivo, ambas se transcriben

480 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 "".'& i,rn"~"pci'"
protefnas factores generales Figura 9-69 De que forma la
metilaci6n del DNA puede ayudar a
inactlvar genes. La uni6n de las
GEN proteinas reguladoras y de los factores
ACTIVO generales de transcripci6n cerca de un
promotor activo impide la metilaci6n
del DNA por un mecanismo
desconocido. Si la mayona de estas
PERDIDA DE LAS PROTEiNAS
REGULADORAS proteinas de uni6n al DNA especfficas
de secuencia se disocian, como ocurre
GEN INACTIVO
& cuando el gen se inactiva, la secuencia

I
PERO MEN GOTEO u
de DNA puede metilarse, 10 que
impedini que se unan otras proteinas e
NUEVA MEnlAC'ON DEL DNA
inactivara completamente el gen.

=_6
I
~HHHHi-----
UN'ON DEPROrriNAS

.MET"C_
GEN
COMPLETAMENTE
INACTIVO

a la misma elevada velocidad. Sin embargo, cuando se introducen en fibroblas-

tos, que normalmente no transcriben el gen, el gen no metilado es transcrito a ni-
vel bajo pero mucho mas alto que el del gen ex6geno metilado 0 que el del gen
end6geno del fibroblasto (que tambien esta metilado), que no se transcriben en
absoluto. Segundo, a partir de experimentos bioquimicos se ha podido identificar
en vertebrados una proteina que se une fuertemente al DNA Yque contiene nu-
cle6tidos 5-metil C agrupados. Se cree que la uni6n de esta proteina empaqueta
el DNA metilado de tal forma que 10 hace especialmente resistente ala activaci6n
por la maquinaria de transcripci6n. Estos experimentos sugieren que la metila-
ci6n del DNA se utiliza en vertebrados fundamentalmente para asegurar que
cuando un gen se inactiva quede completamente inactivado (Figura 9-69).
Los experimentos realizados para comprobar si una secuencia de DNA que
se transcribe con gran frecuencia en un tipo celular determinado de vertebrado
10 hace 0 no en otro tipo celular han demostrado diferencias de velocidad de
transcripci6n entre dos tipos celulares del orden de mas de 106 veces. Genes inac-
tivos de vertebrados se transcriben mucho menos que genes inactivos de bacte-
rias, en los que las mayores diferencias conocidas en cuanto a la velocidad de
transcripci6n entre genes expresados y no expresados son de aproximadamente
1000 veces. La metilaci6n del DNA podria ser la responsable de al menos una
parte de esta diferencia. Ademas, como se vera mas adelante, la metilaci6n del
DNA es necesaria para al menos un tipo de memoria celular.

La actividad gen6mica heredable

requiere la metilaci6n del DNA51
La celulas de mamfferos son diploides, conteniendo un grupo de genes heredado
, del padre y otro de la madre. Se han encontrado pocos casos en los que la expre-
si6n de un gen dependa de si se ha heredado del padre 0 de la madre. Este fen6-
menD se ha denominado actividad gen6mica heredable 0 marcaje del genoma
(genomic imprinting). Aunque no fue descubierto de ese modo, se han observado
ejemplos notables en experimentos con ratones transgenicos. Por ejemplo, es po-
sible obtener ratones transgenicos en los que una de las dos copias normales del
gen que codifica elfactor de crecimiento similar ala insulina-2 (IGF-2, de Insulin-
like Growth Factor-2") se ha inactivado por mutaci6n. Este rat6n, heterocigoto, se

Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 481

desarrolla normalmente si el gen defectivo Igf-2 procede de la madre, pero pre-
sentan graves anomalias, creciendo solamente la mitad de 10 que es normal, si el
gen defectivo Igf-2 procede del padre. La explicaci6n se obtuvo del anaIisis poste-
rior de estos ratones transgenicos y de ratones normales. Tanto en los ratones
normales como en los transgenicos s610 se transcribe la copia del gen Igf-2 pater-
no, mientras que el gen obtenido de la madre es silencioso: se dice en este caso
que el gen obtenido de la madre ha sido marcado (imprinted).
Aunque los mecanismos de marcaje del genoma no estan daros, es muy pro-
bable que participe la metilaci6n del DNA. Asi, en ratones transgenicos defectivos
en la metilasa de mantenimiento, el marcaje del gen Igf-2 materna no se produce
10 que nos indica que el mecanismo que permite diferenciar las copias materna y
paterna del gen Igf-2 implica la metilaci6n del DNA. Tambien es muy interesante
el hecho de que los ratones que carecen de metilasa de mantenimiento mueran en
el estado de embriones tempranos. Esto podria ser la consecuencia de un marcaje
del genoma defectuoso, pero tambien se podria argtiir que el fallo primario fuese
la imposibilidad de reforzar las decisiones del desarrollo por metilaci6n del DNA,
10 que conduciria a que los miles de genes inactivos que existen en una celula de
vertebrados mantuvieran una velocidad de transcripci6n minima.

En los mamiferos, las islas ricas en CG estan asociadas

con alrededor de 40 000 genes52
Debido al funcionamiento de la via de reparaci6n de DNA, los residuos C metila-
dos en el genoma tienden a ser eliminados en el curso de la evoluci6n. La des-
aminaci6n accidental de una C no metilada da lugar a U, base que habitualmen-
te no esta presente en el DNA, por 10 que es reconocida facilmente por la enzima
de reparaci6n de DNA, la uracilo DNA glucosilasa, eliminada y luego reemplaza-
da por una C (se describe en el Capitulo 6). Pero la desaminaci6n accidental de
una 5-metil C no puede ser reparada de este modo, porque el producto de la
. desaminaci6n es una T que, por 10 tanto, no se puede diferenciar de los otros re-
siduos T no mutantes del DNA. Aunque existe un sistema especial de reparaci6n
para eliminar estos mutantes T (vease pag. 267), muchas de estas desaminacio-
nes no son detectadas, por 10 que los residuos C del genoma que estan metilados
tienden a mutar a T durante la evoluci6n.
A 10 largo de la evoluci6n mas de tres de cada cuatro CG se han perdido por
este sistema, dejando a los vertebrados con una deficiencia notable en este di-
nude6tido. Las secuencias CG que todavia existen estan distribuidas de una for-
ma desigual por el genoma; en determinadas regiones, de 1000 a 2000 pares de
bases de longitud, las secuencias CG estan presentes a densidades de entre 10 y
20 veces su densidad media en todo el genoma; estas zonas reciben el nombre
de Islas CG. Estas islas, con algunas notables excepciones, parecen mantenerse
no metiladas en todos los tipos celulares. Se ha observado que rodean los pro-
motores de los llamados genes de mantenimiento (housekeeping genes) -genes

isla CG Figura 9-70 Las Islas CG que rodean a

intrones exones
los promotores en tres genes
de la dihidrofolato reductasa
DNA constitutivos de mamfferos. Los
RNA recuadros amarillos muestran la
5' ~ 3'
longitud de cada isla. Observese
tambien que, como ocurre con la
gen de la hipoxantina fosforribosil transferasa mayorfa de los genes de mamffero, los
i'iii"!!"'ii'W;kj"::;'_ -"!i,i'!E!<i,hW!','iii Ii'i'i.';"- "'i;'.."i,'..i,:i"!;~/i':" "-"''""f.',',":",i';,'.'!t -')ii';-;'" ''''''if.'4~;;.'_O" DNA
exones (rojo oscuro) son cortos en
RNA
5' ~ 3' relaci6n con los intrones (rojo claro).
(Adaptado de A.P. Bird, Trends Genet.
3:342-347, 1987.)

10000 pares de nucle6tidos

482 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 5'
.,-
DNA DE UN ANCESTRO DE LOS INVERTEBRADOS
j
....
Figura 9-71 Un mecanismo que
explica tanto las marcadas
deficiencias de secuencia CG como la
metilaci6n de la mayorfa
de secuencias CG en la
linea germinal
I RNA presencia de islas CG en los genomas
de los vertebrados. Las lfneas negras

muchos millones de
aiios de evoluci6n
I I
1000 pares de nucle6tidos
i an; -----DN~D:-:~-VER:'BRADOS
-
marcan la localizaci6n de un
dinucle6tido CG no metilado en la
secuencia de DNA, mientras que las
lfneas rojas marcan la localizaci6n de
un dinucle6tido CG metilado.
s
isla CG

que codifican el elevado mlmero de proteinas que son esenciales para la viabilidad
celular y que, por 10 tanto, se expresan en muchas celulas (Figura 9-70). Ademas,
muchos de los genes especijicos de tejidos, que codifican proteinas necesarias s610
en determinados tipos de celulas, tambien estan asociados con las islas CG.
La distribuci6n de las islas CG puede explicarse si se asume que la metila-
ci6n CG fue adoptada en vertebrados como un mecanismo de evitar el inicio de
la transcripci6n en los segmentos inactivos del genoma (Figura 9-71). En celulas
de la linea germinal de vertebrados -ellinaje celular que da lugar a oocitos y a
espermatozoides- la mayor parte del genoma esta inactivo y metilado. Durante
largos periodos de tiempo de evoluci6n, sus secuencias CG metiladas se han
perdido por medio de fen6menos de desaminaci6n accidental que no han sido
reparados correctamente. Sin embargo, las secuencias CG de las regiones que
rodean los promotores de muchos genes, induyendo sus genes de manteni-
miento, se mantienen no metiladas en las celulas de la linea germinal, y por 10
tanto pueden ser reparadas despues de fen6menos de desaminaci6n esponta-
nea. Estas regiones se han conservado como islas CG.
El genoma de mamifero (aproximadamente 3 x 109 pares de nude6tidos)
contiene un mlmero estimado de 40 000 islas CG. La mayoria de las islas marcan
los extremos 5' de la unidad de transcripci6n y por 10 tanto, probablemente del
gen. Puesto que es posible donar especificamente el DNA situado alrededor de las
islas CG, esta tecnica proporciona un buen metodo para encontrar nuevos genes.

Resumen
La gran cantidad de tipos celulares de los animales y de las plantas se genera por
medio de mecanismos que provocan que en diferentes celulas se transcriban dife-
rentes genes. Muchas celulas animales especializadas pueden mantener sus carac-
teres tlpicos cuando crecen en cultivo, por 10 que los mecanismos reguladores de la
expresi6n genica que estan implicados en la generaci6n de estos tipos celulares han
de ser estables y heredables, dotando a la celula de una memoria de la historia de
su desarrollo. Los procariotas y las levaduras proporcionan modelos de sistemas
que son accesibles para estudiar los mecanismos de la regulaci6n genica. Algunos
de estos mecanismos pueden ser relevantes en la generaci6n de tipos celulares espe-
cializados de los eucariotas superiores. Uno de estos mecanismos implica una
interacci6n competitiva entre dos (0 mas) protefnas patr6n de regulaci6n genica,
cada una de las cuales estimula su propia sfntesis e inhibe la sfntesis de la otra: esto
crea un mecanismo de flip-flop que hace alternar a la celula entre dos patrones de
expresi6n alternativos. Los bucles de retroalimentaci6n positiva directa 0 indirecta,
que permiten a las protefnas reguladoras mantener su propia sfntesis, son un me-
canismo general de la memoria celular.
En los eucariotas la transcripci6n estd controlada generalmente por combina-
ciones de protefnas reguladoras. Se cree que cada tipo celular en un eucariota supe-
rior contiene una combinacwn especial de protefnas reguladoras que aseguran la

Mecanismos geneticos que originan tipos celulares especializados 483

expresi6n de exclusivamente los genes apropiados para ese tipo de celula. Una pro-
telna reguladora se puede expresar en diferentes circunstancias y en general estti
implicada en el control de muchos genes.
Ademds de las protelnas de regulaci6n que difunden, en los eucariotas tambien
se utilizan ciertos estados de compactaci6n de la cromatina, heredables, para regu-
lar la expresiOn genica. En vertebrados tambien participa la metilaci6n del DNA,
especialmente para reforzar las decisiones sobre expresiOn de los genes que se han
tornado previamente por otros mecanismos.

Controles post-transcripcionales
Aunque las fonnas predominantes de regulaci6n de la mayorfa de los genes son
los controles de la iniciaci6n de la transcripci6n genica, otros controles pueden
actuar posteriormente en la via del RNA a la protefna modulando la cantidad de
producto genico que se produce. Aunque estos controles post-transcripcionales,
que acttian despues de que la RNA polimerasa se haya unido al promotor y haya
iniciado la transcripci6n, son menos frecuentes que los controles transcripciona-
les, son cruciales para muchos genes. Parece como si cada una de las etapas que
pueda ser regulada en la expresi6n genica, sera regulada en alguna circunstancia
para algunos genes.
Consideraremos las variantes de regulaci6n post-transcripcional en un or-
den temporal, de acuerdo con la secuencia de procesos con los que se va encon-
trando una molecula de RNA desde que comienza la transcripci6n (Figura 9-72).

La atenuaci6n de la transcripci6n causa una terminaci6n

temprana de algunas moIecuias de RNA53
INICIO DE LA
En bacterias la expresi6n de ciertos genes es inhibida por la terminaci6n prema- TRANSCRIPCION
tura de la transcripci6n, en un fen6meno denominado atenuacion de la trans- ~a transcripci6n

t-
POSIBLE
cripcion. En algunos de estos casos la cadena de RNA naciente adopta una es- ATENUACION J~ se detiene
tructura que provoca interacciones con la RNA polimerasa que abortan su
transcripci6n. Cuando se requiere el producto genico, ciertas protefnas regula- MADURACION
V CORTE DEL secuencias
doras se unen a la cadena de RNA naciente e interfieren con la atenuaci6n, per- EXTREMO 3' de mRNA no
funcionales
mitiendo de ese modo que se termine la transcripci6n.
En los eucariotas la atenuaci6n de la transcripci6n ocurre segtin una varie- EXPORTACION
DESDE EL ~ reten~lon
.. en
dad de mecanismos. Por ejemplo, tanto en adenovirus como en HIV (el virus NUCLEO el nucleo

causante del SIDA), las protefnas que se ensamblan en el promotor parecen po-
der detenninar si la polimerasa puede pasar a traves de ciertos lugares de ate-
---it ti---
LOCALIZACION
nuaci6n mas adelante. Estas protefnas pueden diferir de una celula a otra, y la ESPACIAL EN EL l __~_--..
CITOPLASMA . l )
celula puede controlar el grado de atenuaci6n para genes particulares.
!
t-
POSIBLE
EDICION DEL RNA
La maduraci6n altemativa del RNA puede producir diferentes
formas de proteina a partir de un mismo gen54 INICIO DE LA
TRADUCCION traducci6n
bloqueada
Tal como se ha descrito en el Capftulo 8, muchos genes se transcriben en primer
POSIBLE !
t-
lugar en fonna de precursores largos de mRNA que son recortados por una serie RECODIFICACION
de etapas de procesarniento, al final de las coales se obtiene la moMcula madura TRADUCCIONAL
de mRNA. Una de esas etapas es la maduraci6n del RNA por corte y empalme POSIBLE
ESTABILIZACION RNA degradado
(RNA splicing), en la que se eliminan las secuencias intr6nicas del precursor del t>EL RNA
mRNA. Frecuentemente una celula puede madurar un precursor de diferentes
fonnas, de modo que se pueden obtener polipeptidos finales diferentes a partir CONTINUA LA
SINTESIS DE PROTEINA
de un mismo gen -segtin un proceso que se denomina maduracion altemativa
del RNA (Figura 9-73). Una proporci6n substancial de los genes de los eucariotas Figura 9-72 Posibles controles post-
superiores produce mUltiples protefnas de este modo. Cuando existen diferentes transcripcionales de la expresi6n
posibilidades de maduraci6n en varias posiciones del transcrito, un tinico gen genica. Es probable que en un gen
puede producir docenas de protefnas diferentes. Sin embargo, las altemativas determinado s610 se utilice alguno de
en el proceso de maduraci6n son frecuentemente mucho mas limitadas, y s6lo estos controles.

484 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Figura 9-73 Cuatro patrones de
maduracl6n altemativa de RNA. En
1 cada caso Madura un solo tipo de
2 transcrito de RNA de dos formas
alternativas, produciendo dos mRNA
distintos (l y 2). Los recuadros azul
oscuro indican secuencias ex6nicas
1
2 que se presentan en ambos mRNA. Los
recuadros azul claro indican
secuencias ex6nicas que s610 se
presentan en uno de los mRNA; estos
1 recuadros estan unidos pOI lfneas rojas
2 para indicar d6nde se eliminan las
secuencias intr6nicas (amarillas).
(Adaptado con permiso de A.
Andreadis, M. E. Gallego, y B. Nadal-
1
2
Ginard, Annu. Rev. Cell BioI. 3:207-242,
1987. 1987 Annual Reviews, Inc.)

se pueden obtener algunos tipos de protefnas a partir de cada unidad de trans-

cripci6n.
En algunos casos la maduraci6n alternativa del RNA ocurre porque existe
una "ambigiiedad de intr6n": el mecanismo estandar de espliceosoma que eli-
mina los intrones (descrito en el Capftulo 8) es incapaz de distinguir claramente
entre dos 0 mas apareamientos alternativos de puntos de maduraci6n 5' y 3', de
tal modo que en diferentes ocasiones se toman diferentes decisiones de forma
fortuita. Cuando ocurre este fen6meno de maduraci6n alternativa constitutiva,
se producen varias versiones de protefna codificada por el gen en todas las celu-
las en las que este se expresa.
Sin embargo, en muchos casos la maduraci6n alternativa del RNA no es
constitutiva sino que esta regulada. En los casos mas simples la maduraci6n al-
ternativa permite pasar de sintetizar protefnas no funcionales a protefnas fun-
cionales. Por ejemplo, la transposasa que cataliza la transposici6n del elemento
P de Drosophila se produce en una forma funcional en celulas germinales y en
una forma no funcional en celulas somaticas de la mosca, permitiendo al ele-
mento P extenderse por el genoma de la mosca sin causar dafios en las celulas
somaticas. La diferencia en la actividad del elemento transponible viene provo-
cada por una secuencia intr6nica del RNA de la transposasa que s6lo se elimina
en la celulas germinales.
La maduraci6n del RNA se puede regular tanto negativamente, mediante
una molecula reguladora que evita que la maquinaria de maduraci6n acceda a
una secuencia de maduraci6n determinada en el RNA, 0 positivamente, me-
diante una protefna reguladora que dirige la maquinaria de maduraci6n hacia
una secuencia de procesamiento que de otra forma quedarfa oculta (Figura
9-74). En el caso de la transposasa de Drosophila, la etapa clave del procesa-
miento esta bloqueada en las celulas somaticas por regulaci6n negativa.
Ademas de cambiar la producci6n de una protefna funcional por otra no
funcional, 0 a la inversa, la regulaci6n de la maduraci6n del RNA puede generar
versiones diferentes de la protefna en diferentes tipos celulares, de acuerdo con
las necesidades de la celula. Por ejemplo, de este modo se produce en las celulas
nerviosas una variante especializada de la protefna tirosina quinasa codificada
por el proto-oncogen src (Figura 9-75). Las variantes especfficas de tipo celular
de otras protefnas se producen del mismo modo.

La determinaci6n del sexo en Drosophila depende de una serie

de procesos de maduraci6n alternativa regulada del RNA55
En Drosophila la sefial primaria que determina si a mosca se desarrol1ara como
macho 0 hembra es la relaci6n cromosomas XI autosomas. Individuos con una re-

Controles post-transcripcionales 485

 *-
Figura 9-74 Control negativo y
positivo de la maduraci6n altemativa
represor
del RNA. (A) Control negativo, en el
(A) CONTROL transcrito primaII:::::::::J_
rio _ que un represor se une a un transcrito
NEGATIVO primario en el tejido 2, evitando de ese
modo que la maquinaria de
m,',,";" hloq,,," maduraci6n elimine la secuencia del
_ _ _ _ _ _ _ mRNA ____-== mRNA intr6n. (B) Control positivo, en el que
la maquinaria de maduraci6n es
incapaz de eliminar una secuencia
intr6nica particular sin ayuda de una

activador
proteina activadora.
transcrito prima rio
(B) CONTROL
POSITIVO

_-===- mRNA
_ _ _ _ _ _ _ mRNA

lacion cromosomas XI autosomas de 1 (narmalmente dos cromosomas Xy dos se-

ries de autosomas) se desarrollan como hembras, mientras que los que presentan
una relacion de 0,5 (normalmente un cromosoma Xy dos series de autosomas) se
desarrollan como machos. Esta relacion parece determinarse de alglin modo en
las primeras fases del desarrollo y desde entonces es recordada por cada celula.
Hay tres productos genicos cruciales que estan implicados en la transmision de la
informacion sobre esta relacion a muchos otros genes que especificaran los rasgos
propios de machos y hembras (Figura 9-76). En la Figura 9-77 se indica que la de-
terminacion del sexo en Drosophila depende de una cascada de fenomenos de
maduracion regulada del RNA, que implican a estos tres productos genicos.
La determinacion del sexo en Drosophila aporta el ejemplo mejor conocido
de una cascada de regulacion basada en la maduracion del RNA. No esta claro
par que la mosca utiliza esta estrategia. Dtros organismos (nematodos, por
ejemplo) utilizan un sistema completamente diferente para la determinacion del
sexo -basado en controles transcripcionales y traduccionales. Ademas, la via de
determinacion de macho en Drosophila requiere que se produzcan continua-
mente una serie de moleculas de RNA no funcionales, 10 que parece ser un gasto
innecesario. Se especula que esta cascada de maduracion del RNA es un antiguo
mecanisme de control, procedente de una etapa evolutiva en la que el RNA era
la molecula biologica predominante y los controles de la expresion genica debfan
basarse completamente en interacciones RNA-RNA.

Un cambio en el punto de rotura del transcrito de RNA Figura 9-75 La maduraci6n

y la adici6n de poli A pueden cambiar el extremo altemativa regulada del RNA produce
carboxilo terminal de una proteina56 fonnas especiflcas del tipo celular de
un producto genico. Aqui se
En eucariotas el extremo 3' de una molecula de mRNA no esta determinado, representa el proceso de generaci6n de
como en bacterias, par la finalizacion de la sfntesis de RNA por la RNA polimera- dos proteina quinasas ligeramente
sa. Por el contrario, esta determinado par una reaccion de rotura del RNA que distintas a partir del gen src, porque la
secuencia del ex6n A s610 se incluye en
disposicion de los exones que codifican protefna del gen src la forma propia de las celulas
nerviosas. La forma neural de la
DNA proteina Src contiene un lugar de
2 3 A 4 5 6789101112
fosforilaci6n extra y se cree que
1000
ademas tiene una actividad especifica
pares de nucleotidos superior. En el esquema s610 se
muestran los exones que codifican
mayorfa de las celulas celulas nerviosas
proteina (coloreados) (el ex6n 1, que
H2N eOOH H2N eOOH forma la secuencia 5' lider del mRNA,
23456789101112 2 3A45 6 7 8 9 10 11 12 no se muestra). (SegUn J.B. Levy et al.,
protefna Src de 533 aminoacidos protefna Src de 539 aminoacidos Mol. Cell BioI. 7:4142-4145,1987.)

486 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

esta catalizada por otros factores mientras el transcrito se esta alargando (vease
Figura 8-49). Una celula puede controlar ellugar de corte de modo que cambie
el extremo carboxilo de la proteina resultante (que esta codificado por el extre-
mo 3' del mRNA).
Un cambio de este tipo que ha sido bien estudiado es el que media el cam-
bio en la sintesis de moleculas de anticuerpo, de unidas a la membrana a secre-
tadas, durante el desarrollo de los linfocitos B. Muy pronto durante la vida de
una celula B, el anticuerpo que produce dicha celula se ancla en la membrana
plasmatica, y alIi actua como receptor del antigeno. La estimulaci6n por el anti-
geno hace que estas celulas se multipliquen y empiecen a secretar su anticuer-
po. La forma secretada del anticuerpo es identica a la forma unida a la membra-
na, excepto en cuanto a su extrema carboxilo terminal. En el caso de la forma
unida a la membrana, en este extremo la proteina tiene una larga cadena de mosca macho 0 hembra

aminoacidos hidrof6bicos que atraviesa la bicapa lipidica de la membrana,

mientras que en el caso de la forma secretada, presenta una cadena mucho mas Figura 9-76 Determinaci6n del sexo
corta de aminoacidos hidrofi1icos. Por 10 tanto, el cambio de la forma unida a la en Drosophila. Los productos genicos
membrana a la forma secretada requiere una secuencia diferente de nucle6tidos que se muestran act11an en una
en el extremo 3' del mRNA; esta diferencia se consigue a traves del cambio en la cascada secuencial para determinar el
longitud del transcrito primario de RNA causado por un cambio en el lugar de sexo de una mosca de acuerdo con la
relacion entre cromosomas Xy
corte del RNA, como se describe en la Figura 9-78.
autosomas. Los genes se denominan
sex-lethal (Sxl), transformer (tra) y
La definici6n de gen se ha de modificar debido al descubrimiento doublesex (dsx) debido a los fenotipos
de la maduraci6n alternativa del RNA57 que resultan cuando son inactivados
por mutacion. La funcion de estos
El descubrimiento de que habitualmente los genes eucariotas contienen intro- productos genicos es transmitir la
nes y de que sus secuencias codificantes se pueden unir de varias formas ha informacion acerca de la relacion
planteado nuevas cuestiones sobre la definici6n de 10 que es un gen. El gen fue cromosomas X/autosomas a los
definido por primera vez en terminos moleculares a principios de los afios 40, a muchos otros genes que estan
partir del trabajo sobre genetica bioquimica del hongo Neurospora. Desde en- implicados en la generacion de los
tonces, un gen ha sido definido operacionalmente como una regi6n del genoma fenotipos relacionados con el sexo.
que se segrega durante la meiosis como una sola unidad y que da lugar a un ras- Estos otros genes acttian como dos
go definible en terminos fenotipicos, tal como ojos rojos 0 blancos en Drosophi- juegos alternativos: aquellos que
especifican rasgos de hembra y
la 0 semillas lisas 0 rugosas en los guisantes. Los trabajos en Neurospora mostra-
aquellos que especifican los rasgos de
ron que la mayoria de genes corresponden a una regi6n del genoma que dirige la macho (vease Figura 9-77).
sintesis de una sola enzima. Esto permiti6 enunciar la hip6tesis de que un gen
codifica una cadena polipeptidica. La hip6tesis result6 ser extremadamente pro-
vechosa para la investigaci6n posterior; a medida que se iban descubriendo mas
detalles sobre los mecanismos de la expresi6n genica, durante los afios 60, se fue
identificando un gen como una porci6n de DNA que es transcrito en RNA y que
codifica una sola cadena polipeptidica (0 un solo RNA estructural, como mole-
culas de tRNA 0 de rRNA). El descubrimiento de los genes partidos a finales de
los afios 70 se pudo encajar facilmente en la definici6n original de gen a condi-
cion de que se considerara que una cadena polipeptidica estuviera especificada
por el RNA transcrito a partir de alguna secuencia de DNA. Sin embargo, ahora
esta claro que muchas secuencias de DNA de las celulas de los eucariotas superio-
res producen dos 0 mas proteinas distintas mediante la maduraci6n alternativa
del RNA. Entonces, lc6mo se tiene que definir un gen?
En los casos relativamente raros en los que a partir de una sola unidad de
transcripci6n se produzcan dos proteinas eucariotas muy diferentes, se conside-
ra que las dos proteinas est an codificadas por genes distintos que se solapan en
el cromosoma. Sin embargo, parece complicar la cuesti6n de forma innecesaria
el considerar que la mayoria de las proteinas modificadas producidas por madu-
racion alternativa del RNA derivan de genes solapados. Una alternativa mas ra-
zonable es la de modificar la definici6n original de gen y considerar como gen a
cualquier secuencia de DNA que es transcrita como una unica unidad y que co-
difica un conjunto de cadenas polipeptidicas relacionadas Cisoformas proteicas).
Esta definici6n de gen tambien comprende a aquellas secuencias de DNA que
codifican variantes producidas por procesos post-transcripcionales diferentes a

Controles post-transcripcionales 487

 Figura 9-77 La cascada de cambios
en la expresl6n de genes que
determlnan el sexo de una mosca

",'.""':1;:"'" 3'

3'
1II1II1II~oqueado
lugar de corte depende de la maduracl6n
altematlva del RNA. Una relaci6n
entre cromosomas Xy autosomas de
0,5 produce el desarrollo de un macho.
~ Ser macho es la salida por "defecto" en
proteIn a producida no funcional
eel proteina Sxl
funcional
la que ambos genes Sxl y tra se
transcriben pero sus RNA son

I~gar
procesados constitutivamente para
lugar de corte regulado 3' producir moIeculas de RNA no

r:. ~
de corte funcionales, y el transcrito dsx madura
AI para producir una protefna que
inactiva los genes que especifican los
~
protelna producida no funcional ~ proteina Tra
~ funcional
rasgos de hembra. Una relaci6n entre
cromosomas Xy autosoma de 1
dispara la via de diferenciaci6n en el
4li2~"""'"rt, embri6n al activar temporalmente un

'".""~.
promotor en el gen Sxl que controla la
sfntesis de una protefna Sxl funcional.
Sxl es una protefna reguladora de la
1ll1II1II1.ii.u maduraci6n con dos lugares de acci6n:

protelna NF'IM\\l!
l C protelna N
l C
(1) se une a un transcrito Sxl
producido constitutivamente,
Dsx L I '\ Dsx E Il!:'\
400 aa 150 aa que son 400 aa 30 aa que son produciendo una maduraci6n
I especlficos de I l!speclficos de especffica de hembra que contribuye a
+ macho + hembra la producci6n continua de una
REPRIME LOS GENES DE REPRIME LOS GENES DE protefna Sxl funcional, y (2) se une al
DIFERENCIACI6N DE HEMBRA DIFERENCIACI6N DE MACHO RNA de tra que se produce
l l constitutivamente, produciendo una
maduraci6n alternativa del transcrito,
DESARROLLO DE MACHO DESARROLLO DE HEMBRA
de forma que se produce una protefna
reguladora Tra inactiva. La protefna
Tra actda como la protefna
la maduraci6n alternativa de RNA, tales como el desplazamiento de pauta en los constitutiva Tra-2 produciendo la
ribosomas (ribosomal frameshifting), y la edici6n del RNA (RNA editing), que se forma de maduraci6n del RNA de dsx
describinin mas adelante. especffica de hembra; este codifica
una forma femenina de la protefna
Dsx, que inactiva especfficamente los
EI transporte de RNA desde el m1cleo puede ser regulado58 rasgos masculinos. Los componentes
Parece ser que un transcrito primario de RNA es al menos diez veces mas largo de esta via fueron identificados
que la molecula de mRNA madura que se genera a partir de el por maduraci6n inicialmente a traves del estudio de
por corte y empalme del RNA. Se ha estimado incluso que s610 una veinteava mutantes de Drosophila que tenfan
parte aproximadamente de la masa total del RNA fabricado abandona el m1cleo alterado su desarrollo sexual. El gen
dsx obtuvo su nombre (sexo doble 0
celular. Por 10 tanto, parece que una fracci6n substancial de los transcritos pri-
doublesex) de la observaci6n de que las
marios (quizas la mitad) pueden ser completamente degradados en el m1cleo sin
moscas que carecen de este producto
lIegar a generar ninguna molecula de RNA que alcance el citoplasma. Los RNA genico expresan rasgos tanto
descartados pueden ser aquellos a partir de cuya secuencia no se pueda fabricar masculinos como femeninos.
ninguna molecula de mRNA; por otro lado, algunos RNA pueden representar Observese que cuando tanto la
moleculas potenciales de mRNA, funcionales unicamente en algunos tipos celu- protefna Sxl como Tra se unen a los
lares, no lIegando en los otros a alcanzar el citoplasma. Esto puede conseguirse lugares especfficos en el RNA, Sxl es un
mediante su direccionamiento selectivo hacia la degradaci6n intranuclear, 0 represor que actda negativarnente
porque se les bloquea selectivamente la salida del nucleo. bloqueando un corte, mientras que
A pesar de que existen pocas evidencias s6lidas para cualquiera de estos ti- Tra actda positivamente como
pos de control, cada uno de ellos es una posibilidad real. En particular, se sabe activador que induce un corte (vease
que la exportaci6n de RNA a traves de los poros nucleares es un proceso activo Figura 9-74).
que requiere en muchos casos que los RNA tengan una caperuza especial en el
extrema 5' y una cadena poli-A en el extremo 3' (descrito en el Capftulo 8). Re-
querimientos de este tipo tienen sentido pues mantienen lejos del citoplasma
una serie de moleculas de RNA desechables (como por ejemplo las secuencias

488 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 el RNA se corta por el RNA se corta por
aquf, dando lugar al aquf, dando lugar al
transcrito corto transcrito largo
I
punto de maduracf6n 5' punto de maduracf6n 3' I
5' (dador)! + I (sceptor) + 3'

f
hid
3' 5'
II
TRANSCRIPCION
_-----------------J l"" ....
( __--I
1
dajOr
codon de para I

t
I=::::]~C=J:. . . . . .
acelPtor
0...
. .AAAAAA
cod6n de para II

I
3'
d,,:d6" r'' " I
11:1=:J_I=:JIAAAAAA 3'
( (
no se elimfns Is secuencia intr6n
secuencia intr6nica eliminada porque se ha perdido la uni6n
por procesamiento del RNA del aceptor de maduraci6n

.1IIIlI
IILILI:,
codon de para II

I.. AAAAAA 3'

I
h
cod6n de para I
dador
IIt==:J~I.~:::::JAAAAAA3'

1 TRADUCCION 1 TRADUCCION

====:::I COOH :========1- caOH

I ~
peptido terminal hidrof6bico peptido hidrofilico terminal

intr6nicas eliminadas en el proceso de maduraci6n). Sin embargo, tener los ex- Figura 9-78 La regulacl6n del punto
tremos adecuados no es suficiente para el transporte: cada moltkula de mRNA de segnientaci6n del RNA y la adici6n
permanece confinada en el m1cleo hasta que todos los componentes del espliceo- de poll A determinan 811a molecwa de
soma se han separado de el (Figura 8-54). Asi pues, cualquier mecanismo que anticuerpo sera secretada 0
evite que se termine el proceso de maduraci6n del RNA puede, en principio, blo- permanecera onida a la membrana.
En los linfocitos B no estimulados
quear la salida de estos RNA del m1cleo.
(izquierda) se produce un largo
transcrito de RNA; la secuencia
Algunos RNA esbm localizados en regiones especificas intr6nica que se halla cerca de su
del citoplasma59 extrema 3' es eliminada por
maduraci6n del RNA dando lugar a
Cuando una nueva molecula de mRNA eucariota pasa a traves de un poro nu- una moIecula de mRNA que codifica
clear y alcanza el citoplasma, se encuentra con ribosomas que 10 traducen en una molecula de anticuerpo que se
una cadena polipeptidica. Si la cadena de mRNA codifica una proteina que esta unira a membrana. Por el contrario,
destinada ala secreci6n 0 a expresarse en la superficie celular, sera dirigida ha- despues de la estimulaci6n por el
cia el reticulo endoplasmatico (ER) por una secuencia senal situada en el extre- antfgeno (derecha) el transcrito
mo amino de la proteina; la secuencia senal sera reconocida por el mecanismo primario de RNA es cortado por
de dasificaci6n de proteinas de la celula en cuanto sea sintetizada. Este meca- delante dellugar de maduraci6n, junto
nismo direcciona todo el complejo, mRNA, ribosoma y proteina naciente, hacia a la secuencia del Ultimo ex6n. Como
resultado de ello, algunas secuencias
la membrana del ER, donde se sintetizara el resto de la cadena polipeptidica,
del intr6n que es eliminado del
como se describe en el Capitulo 12. En los demas casos la proteina es sintetizada transcrito largo permanecen como
en ribosomas libres en el citoplasma, donde las senales presentes en la propia secuencias codificantes en el transcrito
secuencia del polipeptido la pueden dirigir hacia otros compartimientos del in- corto. Estas son las secuencias que
terior de la celula. codifican la porci6n hidroffiica del
Ademas existen otros casos en los que los mRNA son dirigidos hacia posicio- extrema carboxilo terminal de la
nes intracelulares especificas por senales existentes en la propia secuencia de molecula de anticuerpo secretada.
mRNA y antes de que sea traducida en una secuencia de aminoacidos. Estas se-

Controles post-transcripcionales 489

nales se localizan generalmente en la region 3' no traducida (UTR) de la moIecu-
la de mRNA -la regi6n comprendida entre el cod6n de paro de la traducci6n y el
punto de inicio de la cadena poli-A (vease Figura 9-78). Un ejemplo notable de
ello se produce en el huevo de Drosophila, en el que el mRNA que codifica la
proteina genica bicoide se une al citoesqueleto cortical del extremo anterior del
huevo en desarrollo. Cuando se dispara la traducci6n de este transcrito por la fe-
cundaci6n, se genera un gradiente de la proteina bicoide que tendni un papel
fundamental en el control del desarrollo de la parte anterior del embri6n (mos-
trado en la Figura 9-39 y descrito con mayor detalle en el Capitulo 21). Algunos
mRNA de las celulas somaticas se situan de manera similar. Por ejemplo, en los
fibroblastos de mamifero en cultivo, el mRNA que codifica actina se localiza en
el c6rtex rico en filamentos de actina debido a una senal UTR 3', posiblemente
debido a que es ventajoso para la celula situar los mRNA pr6ximos a los lugares
en los que se van a necesitar las proteinas que codifican. Esta forma de control
genico post-transcripcional, donde el mRNA se situa en una parte de la celula, se
ha conocido recientemente y aun no esta claro cuantos mRNA se situan de este
modo. En la Figura 9-79 se ilustra el papel de las UTR en ellocalizaci6n de los
mRNA en regiones particulares del citoplasma.

La edicion del RNA puede cambiar el sentido

del mensaje del RNA60
Los mecanismos moleculares utilizados por las celulas han sido una continua
fuente de sorpresas. Un ejemplo de ello es el fen6meno de maduracion trans de
RNA, que ocurre en todos los transcritos en tripanosomas (el protozoo parasito
responsable de la enfermedad del sueno). Todos los mRNA de los tripanosomas
poseen una secuencia lider 5' con caperuza que se transcribe aparte y que luego
se anade al extrema 5' de los transcritos RNA mediante maduraci6n del RNA por
corte y empalme de dos moIeculas inicialmente no relacionadas entre sf. Esta
maduraci6n trans tambien se utiliza para anadir un lfder 5' a varios mRNA de los
nematodos y para combinar los transcritos de RNA separados que forman la se-
cuencia codificante de algunas proteinas de mitocondrias y cloroplastos en las
celulas de las plantas. La maduraci6n por corte y empalme entre transcritos Figura 9-79 Importancia de la UTR
puede proporcionar un atajo para la evoluci6n de nuevas proteinas; los pocos en la localizaci6n de mRNA en
casos que se conocen de uni6n de exones de este modo pueden ser remanentes regiones especfflcas del citoplasma.
evolutivos de un proceso mas extenso que predomin6 en las celulas ancestrales. Drosophila puede ser transfectada con
una molecula de DNA recombinante
que codifica un mRNA en el que una
secuencia marcadora bacteriana
gen bacteriano para UTR 3'
(codificando ~-galactosidasa) esta
regi6n reguladora l3-galactosidasa a estudiar unida a una secuencia UTR 3'
de Drosophila (gen lacZl ,-------, SECUENCIA DE DNA RECOMBINANTE
INSERTADA EN EL GENOMA DE escogida. De acuerdo con la eleccion
DROSOPHILA de la UTR 3', en las celulas
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ transcrito de RNA embrionarias el mRNA puede estar
deslocalizado, localizado en su region
sonda complementaria basal 0 en su region apical. (A) La
(A) empleada para la hibridaci6n
in situ molecula de DNA recombinante
utilizada para analizar los efectos de
los diferentes UTR 3'. (B) La
tres posibles destinos para la localizaci6n
de mRNA en las celulas epiteliales de un hibridacion in situ (para las secuencias
embri6n temprano de Drosophila de ~-galactosidasa)muestra que la
apical
region UTR 3' determina la
localizacion del mRNA en la celula

I
embrionaria. (C) Fotograffa de un
mRNA localizado apicalmente
detectado por hibridacion in situ. Las
celulas que contienen este mRNA
basal
estan organizadas en franjas a 10 largo
UTR 3' UTR 3' UTR3' del eje del embrion (C, cortesfa de
deslocalizada basal apical
(B) (C) David Ish-Horowitz).

490 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 Otro mecanismo sorprendente es el proceso denominado edicion del RNA
que altera enormemente los transcritos de RNA. En este proceso, descubierto
en transcritos que codifican proteinas en las mitocondrias de los tripanosomas,
se insertan uno 0 mas U (0 se eliminan, aunque con menor frecuencia) en re-
giones seleccionadas del transcrito, provocando grandes modificaciones tanto
en la pauta de lectura original como en la secuencia, con 10 que cambia el senti-
do del mensaje. En el caso de algunos genes, la edici6n es tan extensa que mas
de la mitad de la secuencia son nucle6tidos U que se han insertado durante el
proceso de edici6n. La informaci6n que especifica exactamente c6mo se ha de
editar el transcrito inicial de RNA esta contenida en las moleculas de RNA de 40
a 80 nucle6tidos de longitud que se transcriben por separado. Los denominados
RNA guia tienen un extremo 5' que es complementario en secuencia a un extre-
mo de la regi6n del transcrito que se ha de editar; a continuaci6n existe una se-
cuencia que especifica el conjunto de nucle6tidos que se han de insertar en el
transcrito y posteriormente una serie continua de nucle6tidos U. El mecanismo
de edici6n es sorprendentemente complejo, transfiriendo los nucle6tidos U del
extrema 3' del RNA guia directamente al transcrito, tal como se ilustra en la Fi-
gura 9-80.
Tambien se ha encontrado edici6n extensa de secuencias de RNA en las mi-
tocondrias de muchas plantas, de modo que casi cada mRNA se edita de una
forma u otra. Sin embargo, en este caso las bases se cambian de C a U en el RNA,
sin inserciones ni deleciones de nucle6tidos. Frecuentemente muchas de las C
presentes en la molecula de mRNA estan afectadas por la edici6n, cambiandose
elIO % 0 mas de los aminoacidos que codifica el mRNA.
S610 podemos especular acerca de las razones que justifican que el tripano-
soma 0 las mitocondrias de plantas hagan un uso tan extenso de la edici6n del
RNA. Las sugerencias que parecen mas razonables parten de la premisa de que
el sistema genetico mitocondrial es primitivo. Existen evidencias de que la edi-
ci6n esta regulada de forma que se produzcan diferentes mRNA en diferentes
condiciones, de modo que la edici6n del RNA deberfa entenderse como una for-
ma primitiva de cambiar la expresi6n de los genes. Los tripanosomas son euca-

c:: 3'
~---------5'
RNAguia 2
Figura 9-80 Edlci6n del RNA en la
mltocondrla de los trlpanosomas. Los
RNA guia tienen en su extremo 3' una

cola poli-U -L--- 3'

5
'
serle de poly U, que ceden los
nucle6tidos U a determinados lugares
RNAguia 1 del transcrito de RNA que no se
aparean con el RNA guia; asi la cola
poly-U se va acortando a medida que
--------~~""'!"'!'~~~~-3' se va produciendo la edici6n del RNA

~j
IIIIIIIIII
(no se muestra). La edici6n se inicia
nucle6tidos en el RNA
APAREAMIENTO generalmente cerca del extremo 3' Y
guia especificando
lugares con CON EL RNA GU[A 1
nucle6tidos U ausentes nucle6tidos U ausentes progresa hacia el extrema 5' del
C--""-J ~
3 transcrito de RNA, como se muestra,

5'----------__ 'L
5'
"""'!"'!"""!'~-- ......... 3' debido a que la "secuencia de anclaje"
en el extrema 5' de muchos RNA guia
puede aparearse s6lo can las
EDICION SEGUIDA POR EL secuencias editadas.
1 APAREAMIENTO AL RNA GU[A 2

l~5'
5'----------i~!""1'!"I~1~1~1--------3'

t EDICION nucle6tidos U insertados

5'---------------~-3'

Controles post-transcripcionales 491

riotas unicelulares muy antiguos que se separaron muy pronto de la linea evolu-
tiva que conduce a las plantas, a los animales y a las levaduras (vease Figura 1-
16). Posiblemente, la versi6n extremada de la edici6n del RNA que tiene lugar en
sus mitocondrlas es un rasgo de las celulas primitivas de las que procede, en las
cuales es probable que la mayor parte de la catalisis fuera realizada por molecu-
las de RNA en vez de por proteinas.
La edici6n del RNA, en una versi6n mucho mas reducida, tambien se produ-
ce en los mamfferos. El primer caso descrito corresponde al gen de la apolipo-
protefna B, en el que el proceso de edici6n del RNA crea dos tipos de transcritos:
en uno de enos el cambio de C por U crea un cod6n de paro que produce una
forma truncada de esta proteina de gran tamafio, y que se expresa de forma es-
pecffica de tejido. En otro caso un cambio en el centro de la molecula de mRNA
cambia un solo aminmicido en un canal i6nico del cerebro, alterando la permea-
bilidad del canal al Ca2+. En el caso de la apolipoproteina B la edici6n se realiza
de una forma muy directa: una protefna se une a una secuencia especffica del
mRNA y cataliza la desaminaci6n de C aU. Se desconoce si en los otros casos de
edici6n del RNA en mamfferos y plantas este proceso esta catalizado por protef-
nas en esta misma forma, 0 si se utilizan cortos moldes de RNA como en tripa-
nosomas.
A continuaci6n describimos los controles que actlian sobre la traducci6n de
los mRNA a protefnas.

Las celulas eucariotas y procariotas utllizan estrategias

diferentes para especificar ellugar de inicio de la traducci6n
en una molecula de mRNA61
En el mRNA de bacterias siempre se encuentra, unos cuantos nucle6tidos por
delante del cod6n de inicio AUG, una secuencia de seis nucle6tidos muy conser-
vada, la secuencia Shine-Dalgarno. Esta secuencia se aparea con el RNA 16S de la
subunidad ribos6mica pequena situando correctamente el cod6n de iniciaci6n
AUG en el ribosoma. Esta interacci6n es muy importante para una buena efi-
ciencia de iniciaci6n y aporta a la celula bacteriana un mecanismo sencillo para
regular la sintesis de proteinas. Muchos de los mecanismos de control traduc-
cional en bacterias suponen el bloqueo de la secuencia Shine-Dalgarno, ya sea
cubriendola con una protefna unida 0 bien incorporandola en una regi6n de
apareamiento de bases en la molecula de mRNA.
Los mRNA de eucariotas no contienen secuencias Shine-Dalgarno. En su lu-
gar, la selecci6n de un cod6n AUG como inicio de la traducci6n viene determi-
nada fundamentalmente por la proximidad al extremo caperuza 5' de la molecu-
la de mRNA, que es ellugar por el que la subunidad ribos6mica pequena se une
al mRNA e inicia la busqueda de un cod6n de inicio AUG (descrito en el Capftulo
6). Los nucle6tidos que rodean inmediatamente ellugar de inicio de la traduc-
ci6n tambien influyen en la eficiencia con que sera reconocido el cod6n AUG
durante el proceso de busqueda. Si este lugar de reconocimiento es suflciente-
mente debil, las subunidades ribos6micas buscadoras ignoraran el primer co-
d6n AUG y podran escoger el segundo cod6n AUG en su lugar. Este fen6meno,
denominado barrido impreciso Oeaky scanning) es una estrategia empleada fre-
cuentemente para producir dos 0 mas protefnas a partir del mismo mRNA, que
difieran en su extremo amino terminal. Por ejemplo, permite a algunos genes
producir la misma protefna con y sin peptido senal unido a su extremo amino,
de forma que la misma proteina se pueda dirigir ados compartimientos celula-
res diferentes.
Otra importante diferencia entre la traducci6n procariota y eucariota es que
los ribosomas eucariotas se disocian rapidamente del mRNA cuando termina la
traducci6n. Asf, la reiniciaci6n en un cod6n AUG intemo de una pauta de lectu-
ra abierta es mucho menos eficiente en eucariotas que en procariotas. Juntando
estas dos diferencias -la busqueda que se realiza a partir del extrema 5' y la ca-
pacidad limitada que tienen de empezar la traducci6n a partir de un cod6n AUG

492 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 mRNA subunidad ribos6mica 605
metionil-tRNA iniciador

e1F-2
activo
.---L- f
Pi

subunidad ribos6mica 405 e1F-2

inactivo

intemo- se podrfa explicar por que la inmensa mayona de los mRNA eucariotas Figura 9-81 El papel de eIF-2 en la
codifican una Unica proteina y por que habitualmente el primer cod6n AUG des- iniciaci6n de la sintesis de proteinas.
de el extremo 5' es ellugar de inicio de la traducci6n.
Unos cuantos mRNA eucariotas y viricos inician su traducci6n mediante un
mecanismo ligeramente diferente que supone la iniciaci6n en el interior mas
que una busqueda a partir del extremo. Estos mRNA contiene secuencias nucleo-
tidicas complejas, denominadas lugares de entrada del ribosoma internos, donde
se unen los ribosomas independientemente de la estructura caperuza 5', ini-
ciando la transcripci6n en el primer cod6n AUG que encuentran. Los detalles de
este mecanismo son desconocidos.

La fosforilaci6n de un factor de iniciaci6n

regula la sintesis de proteinas62
Las celulas eucariotas reducen su velocidad de sintesis de proteinas en respuesta
a una gran variedad de situaciones, que incluyen la carencia de factores de creci-
miento, la infecci6n por virus, el choque termico y la entrada en la fase M del ci-
do celular. Se cree que la mayor parte de esta regulaci6n es responsabilidad del
factor de iniciaci6n eIF-2, el cual es fosforilado por proteina quinasas especifi-
cas, 10 que reduce la velocidad de sintesis de proteinas.
En la Figura 9-81 se esquematiza la funci6n normal de eIF-2. Esta proteina
forma un complejo con GTP e interviene en la uni6n del metionil-tRNA inicia-
dor a la subunidad ribos6rnica pequefia, que a su vez se unira al extrema cape-
ruza 5' y comenzara el barrido a 10 largo del mRNA. Cuando se reconoce el co-
d6n AUG, el GTP unido se hidroliza a GDP por acci6n de la proteina eIF-2,
provocandose un cambio conformacional de esta y liberandose de la subunidad
ribos6rnica pequefia. En ese momenta se une una subunidad ribos6rnica grande
formando un ribosoma completo capaz de iniciar la sintesis de proteinas.
Debido a que e1F-2 se une fuertemente a GDP, es necesaria la acci6n de una
proteina de liberaci6n del nucle6tido de guanina (vease Figura 15-50), denomina-
da eIF-2B, para liberar el GDP de forma que e1F-2 pueda unir una nueva molecula
de GTP y ser reutilizada (Figura 9-82A). La reutilizaci6n del e1F-2 no es posible
cuando esta fosforilado, pues en ese caso la uni6n de e1F-2 y eIF-2B es especial-
mente fuerte, 10 que impide que se realice el intercambio de nucle6tidos. En una
celula existe mucha mas cantidad de e1F-2 que de eIF-2B, de forma que incluso
una pequefia fracci6n de e1F-2 puede atrapar a casi todo el eIF-2B accesible, con
10 cual se evitarfa la reutilizaci6n incluso del e1F-2 no fosforilado, 10 que reduce
en gran medida la sintesis de proteinas (Figura 9-82B).
Cuando se reduce la actividad de un factor general de traducci6n, como elF-
2, sena de esperar una reducci6n de la traducci6n de todos los mRNA por igual.
Sin embargo, al contrario de 10 esperado, la fosforilaci6n de e1F-2 tiene efectos

Controles post-transcripcionales 493

 protefna liberadora de nucle6tido Figura 9-82 El cicio de eIF-2. (A) El
guanina, eIF-2B
reciclaje del factor e1F-2 mediante una
enzima liberadora del nucle6tido de
e1F-2 guanina (eIF-2B). (B) La fosforilaci6n

(
e1F-2
inactivo activo

de e1F-2 controla la sintesis de
proteinas al secuestrar eIF-2B.

( A)

eIF-2B

e1F-2
inactivo t
~ GOP I

~ PROTEfNA e1F-2 FOSFORILADO

QUINASA FOSFORILA SECUESTRA TODO
e1F-2 EL eIF-2B, FORMAN DO
(B) UN COMPLEJO INACTIVO

selectivos, y se observa incluso activaci6n de la traducci6n de mRNA especificos.

Por ejemplo, este mecanismo permite a las levaduras adaptarse al ayuno de cier-
tos nutrientes, mediante la reducci6n de la sintesis de todas las proteinas excep-
to de aquellas que se necesitan para la sintesis de los nutrientes ausentes. Los
detalles de este proceso se han estudiado en un mRNA especifico de levaduras
que codifica una proteina denominada GCN4, proteina reguladora necesaria
para la activaci6n de muchos genes que codifican proteinas importantes para la
sintesis de aminoacidos. La proteina GCN4 se produce por una activaci6n espe-
cifica de la traducci6n de su mRNA producida por una deficiencia de aminoaci-
dos en el medio, inducida por la fosforilaci6n de eIF-2. La reducci6n de la activi-
dad de eIF-2 produce un aumento de la sintesis de la proteina GCN4 por un
mecanismo complejo basado en la competici6n entre lugares de inicio de tra-
ducci6n correctos e incorrectos cerca del extrema 5' del mRNA de GCN4.
La regulaci6n del nivel de eIF-2 tambien es importante para las celulas de
mamifero como parte del mecanismo por el cual pueden ser inducidas a entrar
en un estado estable no proliferativo (denominado Go) en el que la velocidad de
sintesis de proteinas de reduce a alrededar de una quinta parte de la velocidad
habitual en las celulas proliferantes (descrito en el Capitulo 17).

Las proteinas que se unen a la regi6n 5' lider de los mRNA

intervienen en el control traduccional negativ063
Algunas moleculas de mRNA yen bloqueada su traducci6n par protefnas repre-
soras de fa traducci6n que se unen al extrema 5' del mRNA cerca del extremo,
donde deberia iniciarse la traducci6n. Este tipo de mecanismo se denomina
control traduccional negativo (Figura 9-83). Fue descubierto por vez primera en

mRNA

Figura 9-83 Control traduccional negativo. Esta forma de control es 5'..R AUG
! PARO
~ '3'
ejercida por una proteina de uni6n a una secuencia especifica de RNA que HzN COOH ACTIVO .
actua como un represor de la traducci6n. La uni6n.de la proteina a una protefna
molecula de mRNA reduce la velocidad de traducci6n de este mRNA. Se
conocen algunos casos de este tipo de control traduccional; la ilustraci6n se PARO
refiere al mecanismo que induce la sintesis de ferritina (una proteina de 5' AUG ~ 3'
almacenamiento de hierro) cuando la concentraci6n de hierro libre en el no se sintetiza proteina INACTIVO
citosol se reduce; la proteina represora de la traducci6n sensible a los niveles protefna represora
de hierro se denomina aconitasa (vease tambien Figura 9-86). de la traducci6n

494 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

 LA ESTABILIDAD DE LOS mRNA NATURALES Figura 9-84 Establlidad del RNA.
Tres RNA distintos con vidas medias
secuencia codificante 3' UTR muy diferentes. La degradaci6n
i 1'-' continua y nipida de las moltkulas de
5' AAA3' mRNA de ESTABLE > 10 horas
~globina mRNA que codifican varios factores de
5' AAA 3' crecimiento permite que su
mRNA de factor INESTABLE 30 minutos
concentraci6n vade con rapidez en

5'--------lS3'
de crecimiento
respuesta a senales extracelulares. La
mRNA LASfNTESIS 1 hora cuando la celula
de histona DEL DNA esta sintetizando DNA.
vida media del RNA del factor de
MODUlASU pero 12 minutos cuando crecimiento viene determinada por
ESTABILIDAD la celula no sintetiza DNA una senal, que condiciona su nipida
degradaci6n, en la regi6n 3' no
traducida (UTR 3') (vease Figura 9-85).
bacterias en las que permite a las proteinas ribos6micas presentes en exceso re- Las histonas son necesarias
primir la traducci6n de sus propios mRNA -constituyendo un mecanisme de re- especialmente para construir la nueva
gulaci6n par retroalimentaci6n negativa. cromatina formada durante la sfntesis
En las celulas eucariotas una forma de control negative traduccional parti- del DNA; un cambio notable en su
cularmente bien estudiada permite que la sintesis de la proteinaferritina, de al- estabilidad ayuda a confinar la sfntesis
macenamiento de hierro, se ajuste nipidamente al nivel de iones de hierro solu- de histonas ala fase Sdel cicio celular.
bles. La regulaci6n par hierro depende de una secuencia de aproximadamente
30 nucle6tidos en la secuencia lider 5' de la molecula de mRNA de la ferritina.
Este elemento de respuesta al hierro se pliega formando una estructura en forma
de bucle que se une a una proteina represora de la traducci6n denominada aeoni-
tasa, que bloquea la traducci6n de cualquier secuencia de RNA que se encuentre
par detnis (vease Figura 9-83). La aconitasa es una proteina que une hierro y la
exposici6n de la celula al hierro produce su disociaci6n del mRNA de la ferritina,
liberando el bloqueo de la traducci6n e incrementando la producci6n de ferriti-
na hasta 100 veces.

La expresi6n genica puede estar controlada por variaciones

de la estabilidad del mRNA64
La mayoria de los RNA de una celula bacteriana son muy inestables: tienen un
periodo de vida media de aproximadamente 3 minutos. Debido a que los mRNA
bacterianos se sintetizan y degradan con rapidez, las bacterias pueden adaptarse
nipidamente a los cambios ambientales.
Los mRNA de las celulas eucariotas son mas estables. Algunos, como los que
codifican la ~-globina, tienen un periodo de vida media de mas de 10 horas. Sin
embargo, otros tienen un periodo de vida media de menos de 30 minutos. A me-
nudo, los mRNA inestables codifican proteinas reguladaras, tales como factores
de crecimiento y proteinas de regulaci6n genica, cuyos niveles cambian nipida-
mente en las celulas (Figura 9-84). Muchos de estos mRNA son inestables debido
a que contienen secuencias especificas que estimulan su degradaci6n. Por ejem-
plo, cuando mediante tecnicas de DNA recombinante se transfiere la secuencia
larga rica en nucle6tidos A y U en la regi6n 3' no traducida (UTR) de algunos
mRNA inestables, a otros mRNA estables, estos se vuelven inestables. Esta se-
cuencia rica en AU parece acelerar la degradaci6n del mRNA estimulando la eli-
minaci6n de la cola poli-A que se encuentra en el extremo 3' de muchos mRNA
eucariotas. Contrariamente, otros mRNA inestables contienen lugares de reco-
nacimiento para endonucleasas especificas que cartan el mRNA en sus regiones
UTR 3' (Figura 9-85).
La estabilidad de un mRNA puede cambiar en respuesta a senales extracelu-
lares. Asi par ejemplo, las harmonas esteroideas afectan a una celula no s610 in-
crementando la transcripci6n de determinados genes sino tambien incremen-
tando la estabilidad de varios de sus mRNA. Por el contrario, la adici6n de iones
hierro a las celulas reduce la estabilidad del mRNA que codifica la proteina re-
ceptara que se une a la proteina de uni6n al hierro transferrina, con 10 que se re-
duce la producci6n del receptor. Parece ser que la desestabilizaci6n del mRNA
del receptor de transferrina esta mediada par la misma proteina de uni6n al

Controles post-transcripcionales 495

 DOS MECANISMOS EUCARIOTAS PARA LA DEGRADACI6N DEL mRNA Figura 9-85 Control de la
degradaci6n del RNA. Determinadas
secuencia codificante 3' UTR secuencias especiales en la regi6n 3'
I Ii I no traducida (UTRl de los mRNA
5' mil 1ji!!li\\l1AAAAA 3' 5' II' AAAAA 3'
L...J inestables son las responsables de su
5'
secuencia rica en AU
P=::IIlI\\'IIlA 3'
5'
l Mill AAAAA 3'
nipida degradaci6n. Como se ha
indicado, las secuencias ricas en AU
que se encuentran en las UTR 3' de
l muchos mRNA de vida carta son las
degradaci6n degradaci6n responsables de la eliminaci6n nipida
una secuencia de 50 nucle6tidos rica una secuencia repetida en la secuencia de la cola poli-A, 10 que hace inestable
en AU y conservada evolutivamente UTR 3' permite el corte de la regi6n UTR 3' aI mRNA. Otros mRNA contienen
en la regi6n UTR 3' favorece la por una endonucleasa especffica.
eliminaci6n de la cola poli-A, 10 que Los fragmentos son degradados con secuencias en su UTR 3' que actl1an
hace que el mRNA sea inestable rapidez como lugares de corte para
endonudeasas especificas.

RNA que controla la traducci6n del mRNA de la ferritina. En este caso, la aconi-
tasa se une ala UTR 3' del mRNA del receptor de transferrina provocando un in-
cremento en la producci6n de receptor, probablemente al impedir la acci6n de
secuencias que, de otra manera, activarian la degradaci6n del mRNA. Cuando se
afiade hierro la aconitasa es liberada del mRNA con 10 que se reduce la estabili-
dad de este (Figura 9-86).

La degradaci6n selectiva del mRNA esta acoplada a la traducci6n65

El control de la estabilidad del mRNA en celulas eucariotas se comprende mejor
para el caso de los mRNA que codifican histonas. Estos mRNA tienen una vida
media de aproximadamente 1 hora durante la fase S del cielo celular (cuando se
necesitan nuevas histonas) pero se degradan en cuesti6n de minutos cuando se
detiene la sfntesis de DNA. Si se inhibe la sfntesis de DNA con una droga durante
la fase S, los mRNA de las histonas se vuelven inestables inmediatamente, quizas
porque la acumulaci6n de histonas libres en ausencia de DNA que unir aumenta
la velocidad de su degradaci6n.
La regulaci6n de la estabilidad de las histonas depende de un corto tallo y Figura 9-86 Dos controles post-
un buele 3' que reemplaza la cola poli-A del extremo 3' de otros mRNA (vease fi- traduccionales controlados par
gura 9-84). Despues de que el mRNA de las histonas se haya sintetizado por la hIerro. En respuesta a un incremento
en la concentraci6n citos6lica de
hierro, una celula aumenta su sfntesis
CARENCIA DE HIERRO
de ferritina para unir el hierro extra (Al
y reduce la sfntesis de receptores de
aconitasa citos61ica aconitasa citos61ica
transferrina para reducir la
importaci6n de hierro (B). Ambas
mRNA del receptor respuestas estan mediadas por la
5'_...,..... mRNA de ferritina AAA 3' de
5' . . transferrina
iliiiiiiiiiiiiiiiil _
AAA3' misma protefna reguladora de
~ bloqueo de la traducci6n ~ el mRNA es estable y se traduce respuesta aI hierro, la aconitasa, que
reconoce rasgos comunes en las
SE SINTETIZA RECEPTOR DE TRANSFERRINA estructuras en tallo y bude de los
mRNA que codifican la ferritina y el
receptor de transferrina. Cuando la
aconitasa une hierro, se disocia del
EXCESO DE HIERRO mRNA. Debido a que el receptor de
transferrina y la ferritina estan
reguladas por diferentes tipos de
mecanismos, sus niveles responden de
forma opuesta a las concentraciones
mRNA del receptor
de hierro, a pesar de estar regulados
mRNA de ferritina 5,IIIIIIIIIIIide .iiiiliiiii..._ _
. .transferrina par la misma protefna sensible aI
5' AAA3'
hierro. (Adaptado de M.W. Hentze et
~ el
-- - --
mRNA - - AAA 3'
se traduce

SE SINTETIZA FERRITINA
:~"'.I_
~ el mRNA se degrada

~!:. .~ i i _ - = = ...
ll_!._l_ _I!I._ccCc'~"'w'c
i
aI., Science 238: 1570-1573, 1987; J.L.
Casey et aI., Science, 240: 924-928,
(A) (B) 1988.)

496 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

RNA polimerasa II, una reacci6n de segmentaci6n especial, que requiere un
apareamiento de bases con un pequeno RNA de una particula ribonucleoprotei-
ca crea este extremo 3'. Si por metodos de DNA recombinante se transfiere este
extrema 3' a otros mRNA, tambien se vuelven inestables cuando se para la sinte-
sis de DNA. Por 10 tanto, como ocurre en otros tipos de mRNA, la velocidad de
degradaci6n esta fuertemente influida por senales pr6ximas al extremo 3', don-
de se cree que empieza la degradaci6n del RNA.
Si en medio de una secuencia codificante de un mRNA de una histona se in-
serta un cod6n de paro, el mRNA ya no se degrada rapidamente. Por 10 tanto se
ha sugerido que la nucleasa responsable de la degradaci6n de los mRNA se une
al ribosoma y que la mayor parte del mRNA de la histona ha de ser traducido an-
tes de que la nucleasa pueda empezar a digerir el extrema 3' del mRNA. Esta hi-
p6tesis podria explicar por que la mayona de los mRNA inestables se estabilizan
selectivamente cuando las celulas se tratan con el inhibidor de la sintesis protei-
ca cicloheximida. El acoplamiento de la degradaci6n del mRNA a la traducci6n
puede ser un mecanisme para asegurar que las moleculas de mRNA recien sin-
tetizadas en una celula eucariota no sean destruidas hasta que se hayan traduci- Figura 9-87 EI control de la longitud
de la cola poH-A afecta tanto ala
do al menos una vez.
estabUidad como ala traducci6n del
mRNA. (A) la mayoria de los mRNA
EI control citoplasmatico de la longitud de las cadenas de poli-A tiene colas poH-A que exceden la
puede afectar tanto ala traducci6n como ala estabilldad del mRNA66 longitud minima de 30 residuos A. Las
colas de determinados mRNA pueden
La poliadenilaci6n inicial de una molecula de RNA (descrita en el Capitulo 8) tiene alargarse 0 cortarse especfficamente
lugar en el mlcleo aparentemente de forma automatica para casi todos los precur': en el citosol, 10 cual influye en la
sores de mRNA eucariotas (siendo una excepci6n los mRNA de las histonas descri- traducci6n de estos mRNA. (B) Se ha
tos previamente). Una vez en el citoplasma,las colas poli-A de 200 nucle6tidos de propuesto un modelo para expHcar la
longitud de muchos transcritos, son recortadas paulatinamente durante algunos estimulaci6n de la traducci6n que se
dfas. No se han observado colas poli-A mas cortas de 30 residuos A, 10 que sugiere observa al incrementar la longitud de
que esta sena la longitud minima necesaria para la estabilidad del mRNA. Asimis- la cola poH-A. Las subunidades
ribos6micas grandes pueden ser
mo, la longitud de algunas colas poli A esta controlada especfficamente, bien por
recicladas directamente, una vez han
adici6n selectiva de poli-A bien por eliminaci6n selectiva de poli A (Figura 9-87A).
acabado la cadena proteica, desde
Docitos y huevos en maduraci6n constituyen un ejemplo notable de control cerca del extremo 3' de una molecula
de la expresi6n genica mediante adici6n de poli A a mRNA especfficos. En estas de mRNA al extrema 5' para iniciar de
celulas gigantes parecen estar inactivas muchas de las vias de degradaci6n de nuevo la sintesis de una molecula de
mRNA, de forma que las celulas puedan fabricar grandes cantidades de mRNA proteina, por proteinas especiales de
como preparaci6n para la fertilizaci6n. Muchos de los mRNA se almacenan con uni6n a la secuencia poH-A (rojo).

l corte y adici6n de la cola pol i-A

subunidad ribos6mica pequena
en el cod6n de iniciaci6n
mRNA
l alargamiento de la cola poli-A

NUCLEO

--_.....)
CITOSOL
(~------
conjunto de mRNA traducibles
, subunidad ribos6mica
grande
LAS PROTEfNAS UNIDAS

tt perdida gradual de poli-A

de todos los mRNA
A LA COLA POLl-A
CATALIZAN LA ENTRADA
DE LA SUBUNIDAD
J
, RIBOSCMICA GRANDE

(A)
l
...
...... degradaci6n rapida de mRNA
.,.
(B)
inicio de la traducci6n por el
ribosoma completo

Controles post-transcripcionales 497

colas poli-A de s610 10 a 30 residuos A en sus extremos 3' yen esta forma no se
traducen. En ciertos momentos del desarrollo, cuando son necesarios los pro-
ductos codificados por estos mensajeros, se les anade poli A al extrema 3', 10 que
estimula notablemente la iniciaci6n de su traducci6n. En la Figura 9-87B se ex-
plica c6mo la adici6n de poli A al extremo 3' puede afec:tar al inicio de la traduc-
ci6n pr6ximo al extrema 5' del mRNA.

Algunos mRNA contienen sefiales de reconocimiento que

interrumpen el proceso normal de la traduccion67
Los controles traduccionales descritos hasta el momenta afectan la velocidad
con la cual se inician las nuevas cadenas de protefna sobre una molecula de
RNA. Normalmente, la traducci6n, una vez se ha iniciado, llega automaticamen-
te hasta el final, Sin embargo, existen casos especiales, en los que por un proceso
denominado recodificaci6n traduccional se puede modificar la protefna que fi-
nalmente se produce.
La forma de recodificaci6n observada con mayor frecuencia es la de cambio
de pauta de lectura traduccional. Este tipo de recodificaci6n es muy frecuente en
retrovirus, permitiendoles sintetizar mas de una protefna a partir de un mismo
mRNA. Estos virus suelen producir tanto las protefnas de la capside (proteinas
Gag) como la transcriptasa inversa y la integrasa (proteinas Pol) a partir del mis-
mo transcrito de mRNA. Los virus necesitan muchas mas copias de la protefna
Gag que de la protefna Pol, y muchos de ellos consiguen ajustar sus produccio-
nes relativas teniendo los genes gagy pol en pautas de lectura diferentes, con un
cod6n de para al final de las secuencias codificantes de gag que puede ser elimi-
Figura 9-88 El cambio de pauta de
nado por un cambio de pauta de lectura traduccional poco frecuente. El cambio
lectura traduccional es necesario
de pauta de lectura ocurre exclusivamente en un cod6n particular y requiere
para producir la transcriptasa inversa
una senal de recodificaci6n, que parece que es un rasgo estructural de la secuen- y la integrasa de un retrovirus. La
cia de RNA siguiente a este lugar (Figura 9-88) transcriptasa inversa virica y la
Principios similares a este se utilizan en algunas otras formas de recodifica- integrasa se producen por el corte de
ci6n en lugares especfficos del mRNA. Asf pues, se han descrito senales de reco- la gran protefna de fusi6n Gag-Pol,
dificaci6n que provocan un cambio de pauta de lectura de +1 en lugar del-l que mientras que las protefnas de la
actua en los RNA viricos y que se muestra en la Figura 9-88. En otras ocasiones la capside del virus se producen a partir
secuencia nucleotfdica que rodea al cod6n de paro 10 hace ser debil, de forma del corte de la protefna Gag, mas
que se afiaden aminoacidos adicionales al final de la cadena polipeptfdica. Mas abundante. Tanto la protefna Gag
sorprendente aun es el mecanisme descubierto recientemente que inserta el como la protefna de fusi6n se inician
aminoacido modificado selenocisteina en una cadena proteica. La selenocistef- en el mismo punta, pero la protefna
na, que es esencial para la funci6n de algunas enzimas, contiene un Momo de Gag termina en un cod6n de para de la
misma pauta de lectura (no mostrado);
selenio en lugar del atomo de azufre de la cistefna y se encuentra unida a una
el cambia de pauta de lectura indicado
molecula de tRNA especial. El tRNA tiene afinidad hacia una senal de recodifica- elimina este cod6n de paro,
ci6n presente en las moleculas de mRNA que codifican protefnas que utilizan permitiendo la sfntesis de la protefna
selenocistefna. La selenocistefna se incorpora en codones UGA especiales, que de fusi6n mas larga. EI cambia de
en muchos otros casos podrfan haber servido como codones de paro deteniendo pauta de lectura ocurre debido a que
la sfntesis de protefnas. ciertos rasgos de la estructura local'del
RNA (induyendo un bude de RNA que
no se muestra) hacen que el tRNALeu
unido aI extrema carboxilo del
polipeptido en crecimiento se deslice
un nude6tido hacia atras sobre el
ribosoma, de modo que ya no se
aparea can el cod6n UUA que ha
especificado su incorporaci6n, sino
can el cod6n UUU; el siguiente cod6n
en la nueva pauta de lectura (AGG)
especifica una arginina en lugar de una
glicina. La secuencia que se muestra
procede del virus del SIDA, HIV.
SIN CAMBIO DE PAUTA DE LECTURA CAMBIO DE PAUTA DE LECTURA (Adaptado de T. Jacks et aI., Nature
(90% de los ribosomas) (10% de los ribosomasl 331: 280-283, 1988.)

498 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica

 cola
3'

EL RNA I
REGULADOR SE
UNEALRNAII
ELRNAIY
EL RNA II
3' FORMAN
UNA HELICE
PERFECTA

RNAI forma activa forma inactiva

del RNA II del RNA II

Es muy probable que las reacciones catalizadas por RNA Figura 9-89 Estrategia del RNA
tengan un origen muy antiguo 68 antisentido para regular el munero de
phismidos en una bacteria. La
Todos los mecanismos de control post-transcripcional descritos en esta secci6n interacci6n reguladora entre dos
dependen de que una determinada molecula de RNA sea reconocida especffica- moleculas de RNA mantiene constante
mente para un tratamiento especial, como la maduraci6n edici6n 0 degrada- el mimero de copias de pllismido en la
ci6n. En algunos casos este reconocimiento esta realizado por proteinas espe- familia ColEl de los pllismidos de DNA
cializadas de uni6n al RNA. Sin embargo, en otros casos, el reconocimiento de bacteriano. El RNA I (de
secuencias de RNA especfficas es nevado a cabo por otras moleculas de RNA que aproximadamente 100 nucle6tidos de
largo) es un RNA regulador que inhibe
utilizan el apareamiento RNA-RNA como parte de su mecanismo de reconoci-
la actividad del RNA II (de
miento. Por ejemplo, se sabe que los apareamientos RNA-RNA juegan un papel
aproximadamente 500 nucle6tidos de
importante en la traducci6n, en la maduraci6n del RNA en otras formas de pro- largo) en la iniciaci6n de la replicaci6n
cesamiento del RNA y en la edici6n del RNA que tiene lugar en tripanosomas. del DNA del pllismido. La
Intentando diseccionar los mecanismos de control post-transcripcional se ha concentraci6n del RNA I se incrementa
entrado de neno en el mundo del RNA. en proporci6n al mimero de moltkulas
Las moleculas de RNA tienen otros papeles reguladores en la celulas. La es- de DNA plasmfdico en la celula, de
trategia del RNA antisentido para la manipulaci6n experimental de celulas con- modo que a medida que el mimero
siste en impedir que las celulas expresen un gen determinado (vease pag. 350) aumenta se inhibe su replicaci6n. El
mimetizando un mecanismo normal del que se sabe que regula la expresi6n de RNA I tiene una secuencia
algunos genes seleccionados en bacterias, y puede ser que la celula 10 utilice mas complementaria a la del extrema 5' del
ampliamente de 10 que hasta ahora se habia creido. Un ejemplo bien conocido RNA II. En el RNA II, la secuencia 2 es
de este tipo de mecanismo es el que forma el control por retroalimentaci6n de la complementaria tanto de la secuencia
1 como de la secuencia 3, y se desplaza
iniciaci6n de la replicaci6n del DNA de una gran familia de plasmidos de DNA
de una a la otra mediante su uni6n al
bacterianos. Este controllimita el numero de copias de plasmido que una celula RNA I; por 10 tanto el RNA I altera la
puede contener, evitando que el plasmido mate a la celula por un exceso de re- conformaci6n de la secuencia 4
plicaci6n (Figura 9-89). inactivando el RNA II. (Seglin H.
Los estudios de las reacciones catalizadas por el RNA son de un gran interes Masukata y J. Tomizawa, Cell 44:125-
desde el punto de vista evolutivo. Tal como describimos en el Capitulo 1, parece 136,1986.)
que las primeras celulas carecfan de DNA y podrian haber contenido pocas 0
ninguna proteina. Muchas de las reacciones catalizadas por RNA parecen ser f6-
siles moleculares -descendientes de la compleja red de reacciones catalizadas
por RNA que se cree dominaron el metabolismo hace 3,5 mil millones de afios.
La tecnologia del DNA recombinante ha permitido que, utilizando RNA polime-
rasas, se puedan producir in vitro grandes cantidades de RNA puros de una se-
cuencia determinada cualquiera (vease Figura 7-36), haciendo posible estudiar
la quimica detallada de las reacciones catalizadas por RNA. A partir de la com-
prensi6n de muchas de estas reacciones, los bi610gos tienen la esperanza de ser
capaces de trazar la via por la cual evolucion6 la primera celula viva.

Resumen
Muchos de los pasos de la ruta que va desde el RNA hasta la prote{na estdn regula-
dos por las celulas para controlar la expresiOn genica. Se cree que la mayoria de los
genes estdn regulados en multiples niveles, aunque habitualmente predomina el

Controles post-transcripcionales 499

control de la iniciacion de la transcripcion (control transcripcionalJ. Sin embargo,
algunos genes son transcritos a un nivel constante y activados y desactivados exclu-
sivamente por mecanismos reguladores post-transcripcionales. Estos procesos in-
cluyen (1) la atenuacion del transcrito por su prematura ftnalizaciOn, (2) seleccion
alternativa del punto de maduracion, (3) control de la jormacion del extremo 3' por
ruptura y adiciOn de poli-A, (4) control del transporte desde el nu.eleo al citoplasma,
(5) localizacion de mRNA en lugares particulares de la celula, (6) edicion del RNA,
(7) control de la iniciacion de la traduccion, (8) degradaciOn regulada del mRNA, y
(9) recodiftcacion traduccional. La mayorla de estos procesos de control requieren
el reconocimiento de secuencias espectjicas 0 de estructuras que sean reguladas en
la molecula de RNA. Este reconocimiento se puede llevar a cabo ya sea por una pro-
te{na reguladora 0 por una molecula reguladora de RNA.

Bibliografia Yamamoto, K. Steroid receptor regulated trancription of

General
Branden, e.; Tooze, J. Introduction to Protein Structure.
New York: Garland, 1991.
Darnell, J,; Lodish, H.; Baltimore, D. Biologfa celular y mole-
cular, 2." ed. Barcelona: Ediciones Omega, S.A., 1993.
Lewin, B. Genes, 4th ed. New York: Wiley, 1990.
Schleif, R. Genetics and Molecular Biology. Reading, MA:
Addison-Wesley, 1986.
Stent, G.S.; Calendar, R Molecular Genetics: An Introductory
Narrative, 2nd ed. San Francisco: W.H. Freeman, 1978.
Watson, J.D.; Hopkins, N.H.; Roberts, J.W.; Steitz, J.A.; Wei-
ner, A.M. Molecular Biology of the Gene, 4th ed. Menlo
Park, CA: Benjamin-Cummings, 1987.
CUas
1. Gurdon, J.B. The developmental capacity of nuclei ta-
ken from intestinal epithelium cells of feeding tadpo-
les.]. Bmbryol. Exp. Morphol. 10:622-640, 1962.
Gurdon, J.B. The generation of diversity and pattern in
animal development. Cell 68:185-199, 1992.
Nomura, K; Komamine, A. Identification and isolation
of single cells that produce somatic embryos at a high
frequency in a carrot suspension culture. Plant Phy-
siol. 79:988-991, 1985.
Steward, F.C.; Mapes, M.O.; Mears, K Growth and orga-
nized development of cultured cells. Am. ]. Bot.
45:705-713, 1958.
Wareing, P.F.; Phillips, J.D.J. The Control of Growth and
Differentiation in Plants, 3rd ed. Oxford, UK Perga-
mon Press, 1986.
2. Garrels, J,I. Changes in protein synthesis during myoge-
nesis in a clonal cell line. Dev. BioI. 73:134-152,1979.
3. Lucas, P.e.; Granner, D.K. Hormone response domains
in gene transcription. Annu. Rev. Biochem. 61:1131-
1173,1992.
Miesfeld, RL. The structure and function of steroid re-
ceptor proteins. Crit. Rev. Biochem. Mol. BioI. 24:101-
117,1989.
Pilkis, S.J.; Granner, D.K Molecular physiology of the
regulation of hepatic gluconeogenisis and glyucoly-
sis. Annu. Rev. Physiol. 54:885-909, 1992.
specific genes and gene networks. Annu. Rev. Genet.
19:209-252, 1985.
4. Darnell, J.E., Jr. Variety in the level of gene control in eu-
caryotic cells. Nature 297:365-371, 1982.
Derman, E., et al. Transcriptionai control in the produc-
tion ofliver-specific mRNA's. Cell 23:731-739, 1981.
5. Ptashne, M. A Genetic Switch, 2nd ed. Cambridge, MA:
Cell Press and Blackwell Press, 1992.
6. Gilbert, W.; Millier-Hill, B. The lac operator is DNA.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 58:2415-2421, 1967.
Jacob, F.; Monod, J. Genetic regulatory mechansism in
the synthesis ofproteins.J, Mol. BioI. 3:318-356,1961.
Kaiser, A.D. Mutations in a temperate bacteriophage af-
fecting its ability to lysogenize, E. coli. Virology 3:42-
61,1957.
Ptashne, M. Specific binding of th 'A. phage repressor to
'A. DNA. Nature 214:232-234, 1967.
7. Seeman, N.C.; Rosenberg, J.M.; Rich, A. Sequence speci-
fic recognition of double helical nucleic acids by pro-
teins. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73:804-808, 1976.
8. Crothers, D.M.; Steitz, T.A. Transcriptional activation by
Escherichia coli CAP protein. In Transcriptional Re-
gulation (S.L. McKnight, K.R Yamamoto, eds.). Cold
Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 1992.
Dickerson, RE. DNA structure from A to Z. Methods
Enzymol. 211:67-111, 1992.
Hagerman, P.J. Sequence-directed curvature of DNA.
Annu. Rev. Biochem. 59:755-781, 1990.
Harrison, S.C. Molecular characteristics of the rgulatory
switch in phages 434 and 'A.. In Transcriptional Regu-
lation (S.L. McKnight, KR. Yamamoto, eds.). Cold
Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 1992.
van der Vliet, P.e.; Verrijzer, C.P. Bending of DNA by
transcription factors. Bioessays 15:25-32, 1993.
9. Miller, J.H.; Reznikoff, W.S., eds. The Operon. Cold
Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 1978.
Mitchell, P,J.; Tijan, R Transcriptional regulation in
mammalian cells by sequence-specific DNA binding
proteins. Science 245:371-378, 1989.
Verdier, J.-M. Regulatory DNA-binding proteins in ye-
ast: an overview. Yeast6:271-297, 1990.

500 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica

10. Harrison, S.C. A structural taxonomy of DNA-binding
domains. Nature 353:715-719, 1991.
Pabo, C.O.; Sauer, RT. Transcription factors: structural
families and principles of DNA recognition. Annu.
Rev. Biochem. 61:1053-1095,1992.
Steitz, TAo Structural stuaies of protein-nucleic acid in-
teraction: the sources of sequence-specific binding.
Q. Rev. Biophys. 23:205-280, 1990.
Wright, P.E. Solution structures of DNA-binding do-
mains of eukaryotic trancription factors. In Trans-
criptional Regulation (S.L. McKnight, K.R Yamamo-
to, eds.). Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 1992.
11. Harrison, S.C.; Aggarwal, AX DNA recognition by pro-
teins with the heliz-turn-helix motif. Annu. Rev. Bio-
chem. 59:933-969, 1990.
Laughon, A.; Scott, M.P. Sequence of a Drosophila seg-
mentation gene: protein structure homology with
DNA-binding proteins. Nature 310:25-31, 1984.
Sauer, RT.; Yocum, RR; Doolittle, RF.; Lewis, M.;
Pabo, C.O. Homology among DNA-binding proteins
suggests use of a conserved super-secondary structu-
re. Nature 298:447-451,1982.
12. Scott, M.P.; Tamkun, J.W.; Hartzell, G.W. The structure
and function of the homeodomain. Biochim. Biophys.
ACta 989:25-48, 1989.
Wuthrich, K; Gehring, W. Transcriptional regulation by
homeodomain proteins: structural, functional and
genetic aspects. In Transcriptional Regulation (S.L.
McKnight, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring Har-
bor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
13. Coleman, J.E. Zinc proteins: enzymes, storage proteins,
transcription factors, and replication proteins. Annu.
Rev. Biochem. 61:897-946,1992.
Miller, J.; McLachlan, A.D.; Klug, A. Repetitive zinc-bin-
ding domains in the protein transcription factor IlIA
from xenopus oocytes. EMBO]. 4:1609-1614,1985.
Rhodes, D.; Klug, A. Zinc fingers. Sci. Am. 268(2):56-59,
62-65, 1993.
14. Knight, KL.; Sauer, RT. Biochemical adn genetic analy-
sis of operator contacts made by residues within the
beta-sheet DNA binding motif of Mnt repressor.
EMBOj. 11:215-223, 1992.
Schwabe, J.W.R DNA between the sheets. Curro BioI.
2:661-663,1992.
15. Alber, T. Protein-DNA interactions: how GCN4 binds
DNA. Curro BioI. 3:182-184,1993.
Lamb, P.; McKnight, S.L. Diversity and specificity in
transcriptional regulation: the benefits of heterotypic
dimerization. Trends Biochem. Sci. 16:417-422, 1991.
Landschulz, W.H.; Johnson, P.F.; McKnight, S.L. The leu-
cine zipper: a hypothetical structure common to a
new class of DNA-binding proteins. Science 240:1759-
1764,1988.
McKnight, S.L. Molecular zippers in gene regulation.
Sci. Am. 264(4):54-64, 1991.
O'Shea, E.; Rutkowski, R; Kim, P.S. Evidence that the
leucine zipper is a coiled coil. Science 243:538-542,
1989.
16. Benezra, R; Davis, RL.; Lockshon, D.; Turner, D.L.; Wein-
traub, H. The protein Id: a negative regulator of helix-
loop-helix DNA-binding proteins. Cell 61:49-59, 1990.
Garrell, J.; Campuzano, S. The helix-loop-helix domain:
a common motif for bristles, muscles and sex. Bioes-
says 13:493-498, 1991.
Bibliograffa
Lassar, A.B.; Davis, RL.; Wright, W.E.; et al. Functional
activity of myogenic HLH proteins requires hetero-
oligomerization with E12/E47-like proteins in vivo.
Cell 66:305-315, 1991.
Murre, C.; McGaw, P.S.; Baltimore, D. A new DNA bind-
ing and dimerization motif in immunoglobin enhan-
cer binding, daughterless, MyoD, and myc proteins.
Cell 56:777-783, 1989.
Tapscott, S,J.; Weintraub, H. MyoD and the regultaion
of myogenesis by helix-loop-helix proteins. j. Clin.
Invest. 87:1133-1138,1991.
17. Pabo, e.O.; Sauer, RT. Transcription factors: structural
families ana principles of DNA recognition. Annu.
Rev. Biochem. 61:1053-1095,1992.
18. Fried, M.; Crothers, D.M. Equilibria and kinetic of lac
repressor-operator interactions by polyacrylamide
gel electrophoresis. Nucleic Acids Res. 9:6505-6525,
1987.
Shaffer, C.D.; Wallrath, L.L.; Elgin, S.C.R Regulating ge-
nes by packaging domains: bits of heterochromatin
in euchromatin? Trends Genet. 9:35-37, 1993.
19. Kadonga, J.T. Purification of sequence-specific binding
proteins by DNA affinity chromatography. Methods
Enzymol. 208:10-23, 1991.
Kadonaga, J.T. Mfinity purification of sequence-specific
DNA binding proteins. Proc. Nat. Acad. Sci. USA
83:5889-5893, 1986.
Rosenfeld, P.J.; Kelly, T.J. Purification of nuclear factor I
by DNA recognition site affinity chromatography. ].
BioI. Chem. 261:1986.
Vinso, C.R; LaMarco, KL.; Johnson, P.F.; Landschulz,
W.H.; McKnight, S.L. In situ detection of sequence-
specific DNA binding activity specificied by a recom-
binant bacteriophage. Genet. Dev. 2:801-806, 1988.
20. Beckwith, J. The operon: an historical account. In Esche-
richia coli and Salmonella typhimurium: Cellular and
Molecular Biology (F.C. Neidhart, J.L. Ingraham, K.B.
Low, et al., eds.), Vol. 2, pp. 1439-1443. Washington,
DC: American Society for Microbiology, 1987.
Jacob, F.; Monod, J. Genetic regulatory mechanisms in
the synthesis of proteins. ]. Mol. BioI. 3:318-356,
1961.
Ptashne, M. A Genetic Switch, 2d ed. Cambridge, MA:
Cell Press and Blackwell Press, 1992.
Yanofsky, C. Transcriptionall regulation: elegance in de-
sign and discovery. In Transcriptional Regulation
(S.L. McKnight, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring
Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press,
1992.
21. Sigler, P.B. The molecular mechanism of trp repression.
In Transcriptional Regulation (S.L. McKnight, K.R
Yamamoto, eds.). Cold Spring Harbor, NY: Cold
Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
Yanofsky, C.; Crawford, I.P. The tryptopphan operon. In
Escherichia coli and Salmonella typhimurium: Cellu-
lar and Molecular Biology (F.C. Neidhart, J.L. Ingra-
ham, KB. Low, et al., eds.), Vol. 2, pp. 1231-1240.
Washington, DC: American Society for Microbiology,
1987.
22. Bushman, F.D. Activators, deactivators and deactivated
activators. Curro BioI. 2:673-657, 1992.
Englesberg, E.; Irr, J.; Power, J.; Lee, N. Positive control
of enzymes synthesis by gene C in the L-arabinose
system.]. Bacteriol. 90:946-957, 1965.
501
 Hoopes, B.C. McClure, W.R Strategies in regulation of
transcription initiation. In Escherichia coli and Sal-
monella typhimurium: Cellular and Molecular Bio-
logy (F.e. Neidhart, J.L. Ingraham, KB. Low, et al.,
eds.), Vol. 2, pp. 1231-1240. Washington, DC: Ameri-
can Society for Microbiology, 1987.
Johnson, A.D.; Poteete, AR; Lauer, G.; et al. A repressor
and Cro-components of an efficient molecular
switch. Nature 294:217-223, 1981.
Ptashne, M.; Jeffrey, A; Johnson, AD.; et al. How the A
repressor and Cro work. Cell 19:1-11, 1980.
23. Beckwith, J. The lactose operon. In Escherichia coli and
Salmonella typhimurium: Cellular and Molecular
Biology (F.e. Neidhart, J.L. Ingraham, KB. Low, et al.,
eds.), Vol. 2, pp. 1444-1452. Washington, DC: Ameri-
can Society for Microbiology, 1987.
Gralla, J.D. lac repressor. In Transcriptional Regulation
(S.L. McKnight, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring
Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press,
1992.
24. Beardsley, T. Smart genes. Sci. Am. 265(2):86-95,1991.
Buratowski, S.; Sharp, PA Initiation of transcription by
RNA polymerase II. In Transcriptional Regulation
(S.L. McKnight, K.R Yamamoto, eds.). Cold Spring
Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press,
1992.
Johnson, P.F.; McKnight, S.L. Eukaryotic transcriptional
regulatory proteins. Annu. Rev. Biochem. 58:799-839,
1989.
Zawel, L.; Reinberg, D. Initiation of transcription by
RNA polymerase II: a multi-step process. Prog. Nu-
cleic Acid Res. Mol. BioI. 44:68-108, 1993.
25. Geidsuschek, E.P.; Kassavetis, GA RNA polymerase III
transcription complexes. In Transcriptional Regula-
tion (S.L. McKnight, KR Yamamoto, eds.). Cold
Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory
Press, 1992. ' Ptashne, M.; Gann, AA.F. Activators and targets. Nature
Gill, G. Complexes with a common core. Curro BioI.
2:565-567, 1992.
Hernandez, N. TBP, a universal eukaryotic transcription
factor? Genes Dev. 7:1291-1308,1993.
Hisatake, K, et al. The p250 subunit of native TAT box-
binding factor TFIID is the cell-cycle regulatory pro-
tein CCG1. Nature 362:179-181,1993.
Peterson, M.G.; Tijan, R Transcription: the tell-tail trig-
ger. Nature 358:620-621, 1992.
Reeder, RH. Regulation of transcription by RNA poly-
merase I. In Transcriptional Regulation (S.L. McK-
night, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring Harbor, NY:
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
Roeder, RG. The complexities of eukaryotic transcrip-
tion initiation: regulation of preinitiation complex
assembly. Trends Biochem. Sci. 16:402-408, 1991.
Ruppert, S.; Wang, E.H.; Tijan, R Cloning and expres-
sion of human TAF,,250: a TBP-associated factor im-
plicated in cell-cycle regulation. Nature 362:175-179,
1993.
White, RJ.; Jackson, S.P. The TATA-binding protein: a
central role in transcription by RNA polymerases I, II
and III. Trends Genet. 8:284-288, 1992.
26. Drapkin, R; Merino, A; Reinberg, D. Regulation of RNA
polymerase II transcription. Curro Opin. Cell BioI.
5:469-476,1993.
502 Capitulo 9 : EI control de la expresi6n genica
Hochschild, A Protein-protein interactions and DNA loop
formation. In DNA Topology and Its Biological Effects
(N.R Cozzarrelli, J.C. Wang, eds.). Cold Spring Harbor,
NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1990.
Kustu, S.; North, AK.; Weiss, D.S. Prokaryotic transcrip-
tional enhancers and enhancer-binding proteins.
Trends Biochem. Sci. 16:397-402,1991.
Milller, H.-P.; Schaffner, W. Transcriptional enhancers
can act in trans. Trends Genet. 6:300-304, 1990.
North, A.K.; Klose, K.E.; Stedman, KM.; Kustu, S. Pro-
karyotic enhancer-binding proteins reflect eukaryo-
te-like modularity: the puzzle of nitrogen regulatory
protein e.]. Bacterial. 175:4267-4273, 1991.
Schleif, R DNA looping. Annu. Rev. Biochem. 61:199-
223,1992.
27. Adhya, S. Multipartite genetic control elements: com-
munication by DNA looping. Annu. Rev. Genet.
23:227-250,1989.
Johnson, P.F.; McKnight, S.L. Eukaryotic transcriptional re-
gulatory proteins. Annu. Rev. Biochem. 58:799-839, 1989.
Mitchell, P.J.; Tjian, R Transcriptional regulation in
mammalian cells by sequence-specific DNA-binding
proteins. Science 245:371-378, 1989.
Serfling, E.; Jasin, M.; Schaffner, W. Enhancers and eukar-
yotic gene transcription. Trends Genet. 1:224-230, 1985.
28. Brent, R; Ptashne, M. A eukaryotic transcriptional acti-
vator bearing the DNA specificity of a prokaryotic re-
pressor. Cell 43:729-736, 1985.
Greenblat, J. Protein-protein interactions as critical de-
terminants of regulated initiation and termination of
transcription. In Transcriptional Regulation (S.L.
McKnight, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring Har-
bor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
Lin, Y-S.; Green, M.R Mechanism of action of an acidic
transcriptional activator in vitro. Cell 64:971-981,
1991.
346:329-331, 1990.
29. Goodbourn, S. Negative regulation of transcriptional
initiation in eukaryotes. Biochim. Biophys. Acta
1032:53-77,1990.
Herschbach, B.M.; Johnson, A.D. Transcripted repression
in eukaryotes. Annu. Rev. Cell BioI. 9:479-511, 1993.
Jackson, M.E. Negative regulation of eukaryotic trans-
cription.]. Cell Sci. 100:1-7, 1991.
30. Guarente, L. Mechanism and regulation of transcriptio-
nal activation in eukaryotes: conserved features from
yeasts to humans. In Transcriptional Regulation (S.L.
McKnight, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring Har-
bor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
Herr, W. Oct-l and Oct-2: differential transcriptional re-
gulation by proteins that bind to the same DNA se-
quence. In Transcriptional Regulation (S.L. McK-
night, K.R Yamamoto, eds.). Cold Spring Harbor, NY:
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
Johnson, A A combinatorial regulatory circuit in bud-
ding yeast. In Transcriptional Regulation (S.L. McK-
night, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring Harbor, NY:
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
Martin, KJ.; Green, M.R Transcriptional activation by
viral immediate-early proteins: variations on a com-
mon theme. In Transcriptional Regulation (S.L. McK-
night, KR Yamamoto, eds.). Cold Spring Harbor, NY:
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
 Thompson, C.C.; McKnight, S.I. Anatomy of an enhan-
cer. Trends Genet. 8:232-236, 1992.
Yamamoto, K.R; Pearch, D.; Thomas, J.; Miner, J.N.
Combinatorial regulation at a mammalian composite
respones element. In Transcriptional Regulation (S.L.
McKnight, K.R Yamamoto, eds.). Cold Spring Har-
bor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
31. Pankratz, M.J.; Jackle, H. Making stripes in the Drosop-
hila embryo. Trends Genet. 6:287-292, 1990.
St. Johnston, D.; Nusslein-Volhard, C. The origin of pat-
tern and polarity in the Drosophila embryo. Cell
68:201-219,1992.
Scott, M.P.; O'Farrell, P.H. Spatial programming of gene
expression in early Drosophila embryogenesis. Annu.
Rev. Cell BioI. 2:49-80, 1986.
Small, S.; Levine, M. The initiation of pair-rule stripes in
the Drosophila blastoderm. Curro Opin. Genet. Dev.
1:255-260, 1991.
32. Jackle, H.; Sauer, F. Transcriptional cascades in Drosop-
hila. Curro Opin. Cell BioI. 5:505-512,1993.
Small, S.; Kraut, R; Hoey, T.; Warrior, R; Levine, M.
Trancriptional regulation of a pair-rule stripe in Dro-
sophila. Genes Dev. 5:827-839,1991.
33. Crossley, M.; Orkin, S.H. Regulation of the beta-globin
locus. Curro Opin. Genet. Dev. 3:232-237, 1993.
Evans, T.; Felsenfeld, G.; Reitman, M. Control of globin
gene transcription. Annu. Rev. Cell BioI. 6:95-124, 1990.
Higgs, D.R; Wood, W.G. Understandig erythroid diffe-
rentiation. Curro BioI. 3:548-550, 1993.
Minie, M.; Clark, D.; Trainor, C., et al. Developmental
regulation of globin gene expression. ]. Cell Sci.
16(Suppl.):15-20, 1992.
34. Berk, A.J. Regulation of eukaryotic transcription factors
by post-translational modification. Biochim. Biophys.
Acta 1009:103-109, 1989.
Hunter, T.; Karin, M. The regulation of trancription by
phosphorylation. Cell 70:375-387, 1992.
35. Stragier, P.; Losick, R Cascades of sigma factor revisi-
ted. Mol. Microbial. 4:1801-1806,1990.
36. Grunstein, M. Histones as regulators of genes. Sci. Am.
267(4):68-74B, 1992.
Kornberg, RD.; Lorch, Y. Chromatin structure and
transcription. Annu. Rev. Cell BioI. 8:563-587, 1992.
Svaren, J.; Harz, W. Histones, nucleosomes and tran-
cription. Annu. Rev. Cell BioI. 8:563-587, 1992.
Winston, F.; Carlson, M. Yeast SNF/SWI transcriptional
activators and the SPT/SIN chromatin connection.
Trends Genet. 8:387-391,1992.
Wolffe, A. Chromatin: Structure and Function. San Die-
go, CA: Academic Press, 1992.
37. Croston, G.E.; Kadonaga, J.T. Role of chromatin structu-
re in the regulation of transcription by RNA polyme-
rase II. Curro Opin. Cell BioI. 5:417-423, 1993.
Fedor, M.J. Chromatin structure and gene expression.
Curro Opin. Cell BioI. 4:436-443, 1992.
Grunstein, M. Nucleosomes: regulators of transcription.
Trends Genet. 6:395-400, 1990.
Kornberg, R.D.; Lorch, Y. Irresistible force meets immo-
vable object: transcription and the nucleosome. Cell
67:833-836, 1991.
Struhl, K. Gene expression: chromatin and transcription
factors: who's on first? Curro BioI. 3:220-221,1993.
Bibliograffa
Workman, J.L.; Taylor, I.C.A.; Kingston, RE. Activation
domains of stably bound GAL4 derivatives alleviate
repression of promoters by nucleosomes. Cell
64:533-544, 1991.
38. Aparicio, a.M.; Billington, B.L.; Gottschling, D.E. Modi-
fiers of position effect are shared between telomeric
and silent mating-type loci in S. cerevisiae. Cell
66:1279-1287,1991.
Gottschling, D.E.; Aparicio, a.M.; Billington,B.L.; Za-
kian, VA Position effect at S. cerevisiae telomees: re-
versible repression of Pol II transcription. Cell
63:751-762,1990.
Henikoff, S. Position effect and related phenomena.
Curro Opin. Genet. Dev. 2:907-912,1992.
Wilson, C.; Bellen, H,J.; Gehring, W.J. Position effects on
eukaryotic gene expression. Annu. Rev. Cell BioI.
6:679-714,1990.
39. Dillon, N.; Grosveld, F. Transcriptional regulation of
multigene loci: multilevel control. Trends Genet.
9:134-137,1993.
Evans, T.; Felsenfeld, G.; Reitman, M. Control of globin
gene transcription. Annu. Rev. Cell BioI. 6:95-124,
1990.
Grosveld, F.; Antoniou, M.; Berry, M.; et al. The regula-
tion of human globin gene switching. Philos. Trans.
R. Soc. Lond. (BioI.) 339:183-191,1993.
Minie, M.; Clark, D.; Trainor, C.; et al. Developmental
regulation of globin gene expression. ]. Cell Sci. 16
(Suppl.):15-20, 1992.
40. Ausio, J. Structure and dynamics of trancriptionally ac-
tive chromatin.]. Cell Sci. 102:1-5, 1992.
Freeman, LA; Garrard, W.T. DNA supercoiling in chro-
matin structure and gene expression. Crit. Rev. Eu-
kar. Gene Express. 2:165-209,1992.
Hsieh, T.S. DNA tipoisomerases. Curro Opin. Cell BioI.
4:396-400, 1992.
Wang, J.C. DNA topoisomerases: why so many?]. BioI.
Chem. 266:6659-6662, 1991.
Svaren, J.; Chalkley, R The structure and assembly of
active chromatin. Trends Genet. 6:52-56, 1990.
41. Gene expression and differentiation. Curro Opin. Genet.
Dev. 2:197-303,1992.
42. Berg, D.E.; Howe, M.M., eds. Mobile DNA. Washington,
DC: American Society for Microbiology, 1989.
Johnson, RC. Mechanism of site-specific DNA inver-
sion in bacteria. Curro Opin. Genet. Dev. 1:404-411,
1991.
Meyer, T.F.; van Putten, J.P. Genetic mechanisms and
biological implications of phase variation in pathoge-
nic neisseriae. CUn. Microbial. Rev. 2 (Suppl.):SI39-
SI45,1989.
Pillus, L. An acquired state: epigenetic mechanisms in
transcription. Curro Opin. Cell BioI. 4:453-458, 1992.
Prescott, D.M. DNA gains, losses, and rearrangements
in eukaryotes. Dev. BioI. 6:13-29, 1989.
Robertson, B.D.; Meyer, T.F. Genetic variation in patho-
genic bacteria. Trends Genet. 8:422-427, 1992.
van de Putte, P.; Goosen, N. DNA inversions in phages
and bacteria. Trends Genet. 8:457-462,1992.
43. Dolan, J.W.; Fields, S. Cell-type-specific transcription in
yeast. Biochim. Biophys. Acta 1088:155-169,1991.
Herskowitz, I. A regulatory hierarchy for cell specializa-
tion in yeast. Nature 342:749-757,1989.
503
 Johnson, A A combinatorial regulatory circuit in bud-
ding yeast. In Transcriptional Regulation (S.L. Mc-
Knight, K.R. Yamamoto, eds.). Cold Spring Harbor,
NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1992.
44. Ptashne, M. A Genetic Switch, 2d ed. Cambridge, MA:
Cell Press and Blackwell Press, 1992.
Ptashne, M.; Jeffrey, A; Johnson, AD.; et al. How the A
repressor and Cro work. Cell 19:1-11, 1980.
Scott, M.P.; O'Farrell, P.H. Spatial programming of gene
expression in early Drosophila embryogenesis. Annu.
Rev. Cell BioI. 2:49-80, 1986.
45. Braun, T.; Rudnicki, M.A.; Arnold, H.-H.; Jaenisch, R.
Targeted inactivation of the muscle regulatory gene
Myf-5 results in abnormal rib development and peri-
natal death. Cell 71:369-382, 1992.
Hasty, P.; Bradley, A; Morris, J.H.; et al. Muscle defi-
ciency and neonatal death in mice with a targeted
mutation in the myogenin gene. Nature 364:501-506,
1993.
Miller, J.B.; Everitt, E.A.; Smith, T.H.; Block, N.E.; Domi-
nov, J.A. Cellular and molecular diversity in skeletal
muscle development: news from in vitro and in vivo.
Bioessays 15:191-196,1993.
Nabeshima, Y.; Hanaoka, K.; Hayasaka, M.; et al. Myo-
genin gene disruption results in perinatal lethality
because of severe muscle defect. Nature 364:532-535,
1993.
Weintraub, H.; Davis, R.; Tapscott, S.; et al. The myoD
gene family: nodal point during specification of the
muscle cell lineage. Science 251:761-766,1991.
46. Buckingham, M. Making muscle in manunals. Trends
Genet. 8:144-149,1992.
Garcfa-Bellido, A Homeotic and atavic mutations in in-
sects. Am. Zool. 17:613-629, 1977.
Giere, A Molecular models and combinatorial princi-
ples in cell differentiation and morphogenesis. Cold
SpringHarborSymp. Quant. Bioi. 38:951-961,1974.
Johnson, P.F.; McKnight, S.L. Eukaryotic transcriptional
regulatory proteins. Annu. Rev. Biochem. 58:799-839,
1989.
Sprague, G.F., Jr. Combinatorial associations of regula-
tory proteins and the control of cell type in yeast.
Adv. Genet. 27:33-62, 1990.
47. Ballabio, A; Willard, H.F. Manunalian X-chromosome
inactivation and the XlST gene. Curro Opin. Genet.
Dev. 2:439-447,1992.
Lyon, M.F. X-inactivation: controlling the X chromoso-
me. Curro Bioi. 3:242-244, 1993.
Lyon, M.F. Epigenetic inheritance in mammals. Trends
Genet. 9:123-128, 1993.
Lyon, M.F. Some milestones in the history ofX-chromo-
some inactivation. Annu. Rev. Genet. 26:17-28, 1992.
Riggs, AD.; pfeiffer, G.P. X-chromosome inactivation
and cell memory. Trends Genet. 8:169-174, 1992.
48. Eissenberg, J.C. Position effects variegation in Drosophi-
la: towards a genetics of chromatin assembly. Bioes-
says 11:14-17,1989.
Henikoff, S. Position-effect variegation after 60 years.
Trends Genet. 6:422-426, 1990.
49. Barras, F.; Marinus, M.G. The great GATC: DNA methy-
lationinE. coli. Trends. Genet. 5:139-143,1989.
Holliday, R. Epigenetic inheritance based on DNA
methylation. Exs 64:452-468, 1993.
504 Capitulo 9 : El control de la expresi6n genica
50. Bird, A The essentials of DNA methylation. Cell 70:5-8,
1992.
Cedar, H. DNA methylation and gene activity. Cell 53:3-
4,1988.
Graessmann, M.; Graessmann, A DNA methylation, chro-
. matin structure and the regulation of gene expres-
sion. Exs 64:404-424, 1993.
Tate, P.H.; Bird, AP. Effects of DNA methylation on
DNA-binding proteins and gene expression. Curro
Opin. Genet. Dev. 3:226-231, 1993.
51. Bird, AP. Genomic imprinting: imprints on islands.
Curro Bioi. 3:275-277, 1993.
Haig, D.; Graham, C. Genomic imprinting and the
strange case of the insulin-like growth factor II recep-
tor. Cell 64:1045-1046, 1991.
Li, E.; Bestor, T.H.; Jaenisch, R. Targeted mutation of the
DNA methyltransferase gene results in embryonic
lethality. Cell 69:915-926, 1992.
Sasaki, H.; Allen, N.D.; Surani, MA DNA methylation and
genomic imprinting in manunals. Exs 64:469-486, 1993.
52. Antequera, F.; Bird, A CpG islands. Exs 64: 169-185, 1993.
53. Jones, K.A. HIV trans-activation and transcriptional
control mechanisms. New BioI. 1:127-135, 1989.
Landrick, R.; Yanofsky, C. Transcription attenuation. In
Escherichia coli and Salmonella typhimurium: Cellu-
lar and Molecular Biology (F.C. Neidhart, J.L. Ingra-
ham, K.B. Low, et al. eds.), Vol. 2, pp. 1276-1301.
Washington, DC: American Society for Microbiology,
1987.
Yanofsky, C. Operon-specific control by transcription
attenuation. Trends Genet. 3:356-360, 1987.
54. Black, D.L. Activation of c-src neuron-specific splicing
by an unusual RNA element in vivo and in vitro. Cell
69:795-807, 1992.
Green, M.R. Biochemical mechanisms of constitutive
and regulated pre-mRNA splicing. Annu. Rev. Cell
Bioi. 7:559-599, 1991.
Rio, D.C. RNA binding proteins, splice site selection,
and alternative pre-mRNA splicing. Gene Express.
2:1-5,1992.
55. Baker, B.S. Sex in flies: the splice of life. Nature 340:521-
524,1989.
56. Peterson, M.L. Balanced efficiencies of splicing and clea-
vage-polyadenylation are required for mu-s and mu-
mmRNAregulation. Gene Express. 2:319-327, 1992.
57. Beadle, G. Genes and the chemistry of the organism.
Am. Sci. 34:31-53,1946.
58. Izaurralde, E.; Mattaj, I.W. Transport of RNA between
nucleus and cytoplasm. Semin. Cell Bioi. 3:279-288,
1992.
Maquat, L.E. Nuclear mRNA export. Curro Opin. Cell
Bioi. 3:1004-1012,1991.
59. Davis, I.; Ish-Horowicz, D. Apical localization of pair-
rule transcripts requires 3' sequences and limits pro-
tein diffusion in the Drosophila blastoderm embryo.
Cell 67:927-940, 1991.
Kislauskis, E.H.; Singer, R.H. Determinants of mRNA lo-
calization. Curro Opin. Cell Bioi. 4:975-978, 1992.
60. Agabian, N. Trans splicing of nuclear pre-mRNAs. Cell
61:1157-1160,1990.
Chan, L. RNA editing: exploring one mode with apolipo-
protein B mRNA Bioessays 15:33-41, 1993.
 Sioof, P.; Benne, R RNA editing in trypanosome mito-
r chondria: guidelines for models. FEBS Lett. 325:146-
151,1993.
[ Sollner-Webb, B. RNA editing. Curro Opin. Cell BioI.
3:1056-1061,1991.
61. Fouillot, N.; Tlouzeau, S.; Rossignol, J.-M.; Jean-Jean, O.
Translation of the hepatitis B virus P gene by riboso-
mal scanning as an alternative to internal initiation.
]. Virol. 67:4886-4895, 1993.
Lindahl, L.; Hinnebusch, A Diversity of mechanisms in
the regulation of translation in prokaryotes and lower
eukaryotes. CU". Opin. Genet. Dev. 2:720-726, 1992.
Oh, S.K.; Sarnow, P. Gene regulation: translational ini-
tiation by internal ribosome binding. Curro Opin. Ge-
net. Dev. 3:295-300,1993.
62. Hinnebusch, AG. Involvement of an initiation factor and
protein phosphorylation in translational control of
GCN4 mRNA Trends Biochem. Sci. 15:148-152, 1990.
Rhoads, RE. Regulation of eukaryotic protein synthesis by
initiation factors.]. BioI. Chem. 268:3017-3020, 1993.
Sarre, T.F. The phosphorylation of eukaryotic initiation
factor 2: a principle of translational control in mam-
malian cells. Biosystems 22:311-325,1989.
63. Melefors, 0.; Hentze, M.W. Translational regulation by
mRNA/protein interactions in eukaryotic cells: ferri-
tin and beyond. Bioessays 15:85-90, 1993.
Bibliograffa
64. Sachs, A.B. Messenger RNA degradation in eukaryotes.
Cell 74:413-421, 1993.
Theil, E.C. Regulation of ferritin and transferrin recep-
tormRNAs,J. BioI. C}lem. 265:4771-4774,1990.
65. Marzluff, W.F. Histone 3' ends: essential and regulatory
functions. Gene Express. 2:93-97, 1992.
66. Wickens, M. In the beginning is the end: regulation of
poly(A) addition and removal during early develop-
ment. Trends Biochem. Sci. 15:320-324, 1990.
67. Bock, A.; Forchhammer, K.; Heider, J.; Baron, C. Seleno-
protein synthesis: an expansion of the genetic code.
Trends Biochem. Sci. 16:463-467, 1991.
Hatfield, D.; Oroszlan, S. The where, what and how ofri-
bosomal frameshifting in retroviral protein synthesis.
Trends Biochem. Sci. 15:186-190, 1990.
Weiss, RB. Ribosomal frameshifting, jumping and read-
through. Curro Opin. Cell BioI. 3:1051-1055,1991.
68. Eguchi, Y.; Itoh, T.; Tomizawa, J. Antisense RNA. Annu.
Rev. Biochem. 60:631-652, 1991.
Noller, H.F.; Hoffarth, V.; Zimniak, L. Unusual resistan-
ce of peptidyl transferase to protein extraction proce-
dures. Science 256:1416-1419, 1992.
Weiner, A.M. mRNA splicing and autocatalytic introns:
distant cousins or the products of chemical determi-
nism? Cell 72:161-164, 1993.
505
Organizacion interna
de lacelula

EJeclronmicrograffa de vesiculas
sencillas y recubiertas de la carn.
inlema de la membrana plasm4tica de
una celuJa heptitica de rat6n. Tambit!:n
se pueden observar numerosos
mamenlos de queratina.
(De N. Hirokaway ,. Heuser,
Cefl30:395-406, 1982.)
Simulad6n por ordenador de una bicapa de fosfolipidos de 0,8 nm en el agua. Los alOmOS de f6srom
se muestran en verde, los de nitr6geno en azuloscuro, los de oxfgeno Iipfdico en rojo, los grupos
lenninales de las cadenas en magenta y otms alomos de carbona en gris; los alomos de hidr6geno
del carbono se han omitido. las molOCul.as de agua se muestran en amarillo (oxfgeno) y blanco
(hidr6genol. (De R.M. Venable, Y. Zhang. B.J. HardyyR.W. Paslor, Science 262:223228, 1993.)
Estructura de
lamembrana 10
....de---.

Las membranas celulares son cruciales para la vida celular. La membrana plasmtt-
lIca roden a la celula, deHniendo su extcnsi6n y mamcniendo las diferencias esen-
dales entre el contenido de 1a celula y su entomo. Dentro de la celula eucariota, las
membranas del retfculo endoplttsm..ico, del complejo de Golgi, de las mitocondrias
y de atros org<iIlUlos delimitados por membrana mantienen las difcrencias carae-
terfsticas entre los contenidos de carla org<1nulo y et citosol. Los gradientes i6nicos
Que se estable<:en a traves de las membranas, generados por In acrividad de prolei-
nas de membrana especializadas. pueden sec usarlos para sintetizar ATP. dirigiT el
movimienlo transmembranoso de solutos seleccionados 0, en celulas nerviosas y
musculares. para producir y transmitir senales eloctricas. En IOOas las relulas, la
membrana plasmatica comiene tambien prolefnas que actlian como sensores de
Figura 101 Trcs visiones de una
senales eXlernas, permitiendo que la celula carnhie en respuesta a indicaciones
membrana celuiar.
ambienlales; estas proteinas sensoras, 0 receptores, transficrcn informaci6n, en lu-
(Al E1eclronmicrograffa de una
gar de iones 0 de moltkulas, a tra~ de la membrana. membrana plasmatka (de un
Aunque realicen diferentes funciones, todas las membranas biol6gicas tie- eritrocito humano) en secc::i6n
nen una estructura basica comun: una finfsima capa de moltkulas Ijpfdicas y transversal. (B y C) Dibujos
proteicas, que se mantienen unidas fundamental mente par interacciones no co esqucmaticos que mucstran en dos y
valentes. Las membranas celutares son estruclUras dinamicas, nuidas y la mayo- tres dimensiones la membrana cclular.
rfa de sus moltkulas son capaces de desplazarse en el plano de la membrana. (A, por cortesfa de Daniel S. Friend.)

i
] ~~..
',m

IA)
1 lipidiCll

molecula de lIpide
molkula de prole!na

de IIpido mOlecule de prolelne

'8' lei

509
 Las mollkulas Iipfd.icas est<1n dispuestas en forma de una dohle capa continua
de unos 5 nm de grosor (Figura 10-1 I. Esta bicapa lipfdica constiluye la estructu-
ra blisica de la membrana y actlia de barrera relativamente impermeable al paso
de la mayona de moltkuJas hidrosolubles. Las moltkulas proteicas, que normal-
mente se hallan "disueltas" en la bicapa lipid.ica, median la mayona del resto de
funciones de la membrana, por ejemplo transportando mollkulas especfficas a
trav~s de ella 0 catalizando reacciones asociadas a la membrana, como la sfnte-
sis de ATP. Algunas protefnas de membrana acnian de eslabones estructurales
que relacionan la membrana plasmlitica con el citoesqueleto y/o con la matriz
extracelular de las c~lulas adyacentes, mientras que otras prote(nas acruan
como receptores que reciben y transducen las senales qurmicas procedentes del
entomo celular. Como podna esperarse, las membranas son estructuras asim~
tncas: la composici6n Jipfdica y proteica de sus caras interna y exlerna es dife-
rente reOejando las diferentes funciones realizadas por ambas superficies.
En este capitulo consideraremos la estructura y la organizaci6n de los dos
constituyentes principales de las membranas biol6gieas -los Ifpidos y las proter-
nas. Si bien prestaremos especial alenei6n a la membrana plasmMica, muehos
de los eonceptos son aplicables a las membranas intcrnas. Las funciones de las
membranas eelulares se eonsiderarlin posteriormente. Su papel en la sfntesis del
ATP seni diseutido en el Capftulo 14; su papel en el transpone transmembrano-
so de pequenas mollkulas, en el Caprtulo II y su papel en la transmisi6n eelular
de senales y en la adhesi6n eelular, en los Capftulos 15 y 19. En los Capftulos 12 Y
J3 se discutin1n las earactensticas de las membranas internas de 1a relula (endo-
membranas) y el rn1fico de protefnas a traves y entre elias.

La bicapa lipfdica I
La blcapa llpfdica ha sido establecida como la base universal de la estruetura de
la membrana celular. Es (lieil de ohservar en una electronmierograffa convencio-
nal, aunque son necesarias Ilknicas especializadas, como difracci6n de rayos Xy
tl!cnicas de eriofractura, para revelar los delalles de su organizaci6n. La estruetura
en bicapa puede alribuirse a las propiedades espec:;iales de las mollkulas lipfdicas,
que haeen que dichas mollkuJas se ensamblen espontlineamente formando bica-
pas, incluso en sencWas condiciones anificiales.

Los lfpidos de las membranas son moIeculas anfipciticas

que espontaneamente forman bicapas l
Las mol~culas Iipidieas son insolubles en agua pero se disuelven facilmente en
disolvenles orgAnieos. Constituyen aproximadamente un 50 % de la masa de la
mayorfa de las memhranas plasmaticas de las c~lulas animales, siendo easi todo
el resto protemas. Existen unas 5 x 1()6 mollkuJas Iipfdicas en una secci6n de bi-
capa lipfdica de I JllIl x I (.lm, 0 aproximadamente 10' mol~u1as Iipidicas en la
membrana plasmlitiea de una relula animal pequena. Todas las mollkulas lipidi-
cas en las membranas celulares son anfipdticas (0 anfiffiicas) -es decir, tienen un
extremo hidroftJico ("que se siente atrafdo por el agua" 0 polar) Yun extremo hi-
drof6bico ("que rehuye el agua" 0 no polar). Las mas abundanles de estas mol~
culas son los fosfolfpidos. Los fosfolipidos tienen una cobeza polar y dos colas hi-
drocarbonndas hidrof6bicas (Figura 10-2). Las colas suelen ser Acidos grasos, y
pueden tener diferente longitud (nonnalmente contienen de 14 a 24 Atomos de
carbono). Normalmente una de las colas presenta uno 0 mcis dobles enlaces cis
(es decir, es insaturada) mientras que la otra nonnalmente no tiene dobles enla-
ces (es decir, es saturada). Como se muestra en la Figura 10-2, cada doble enlace
cis genera una suave curvatura en la cadena. Las difercncias de longitud y de gra-
do de saturaci6n entre las eolas hidrocarbonadas son imponantes porque afec-
tan la capacidad de las moll!culas de fosfolfpidos para empaquetarse una contra
otra y, por 10 tanto, afectan la fluidez de la membrana (vease m~s adelante).

510 Capftulo 10: Estructurade la membrana

 grupo polar
lhidrofllicol
de III abeza

c-o c-o
2 {><, {><,
?" ?"
iH1
?"
iH1
?"
iH1
iH1

iC',
H1
'",
!"
""..
grupo no

lhidrolobio::o)
de lacola
,
!"
?',
?"
?"
\0'
~H doble enlace

'c:.
?" 'c:.
?" 'Q.,
?" q.,
?"
?"
"',
'",
'",
IAI 181 101

Figura 102 Las zonas de una mol&:uJa de fosfollpldo. La

fosfalidilcolina, represenlada de forma esquematica (A),
como f6rmula qufmica (B), como modele espacial compacta (0
yen forma de sfmbolo (0). La curvalura debida al doble enlace
cis esta exagerada en los dibujos para hacerla mas visible.

La forma y la naturaleza anfipo1liea de las mol~las Iipfdicas es 10 que deter-

mina que estas mollkulas formen espontAneamente bieapas lipfdicas en solu-
ci6n acuosa. Cuando las moltkuJas anfipo1ticas se eneuentran rodeadas par to-
das panes par un ambiente aeuoso, licnden a agregarse de tal manera que sus micela
colas hidrof6bicas se esconden en el interior y sus cabezas hidromicas quedan lipldica
expuestas a! agua. Dependiendo de Sll forma, pueden conseguir esta disposi-
ci6n, de una de dos maneras: plleden formar micelas esf~ricas, con las colas ba-
cia e1 interior, a pueden formac lo1minas bimoleculares, 0 bicapas, can las colas
hidrof6bicas escondidas entre dos capas de cabezas hidromicas (Figura 10-3).
Debido a su forma eUi:ndrica, la mayorfa de los fosfolfpidos de membrana for-
man espontAneamente bieapas en un entomo acuosa. Adcmo1s, estas bicapas Upf-
dieas tienden a cerrarse sabre sf mismas fonnando eompartimientos hennctieos.
eliminando asf los bordes Ubres en los que las colas hidrof6bicas podrfan estar en
contaeto con el agua. Por esta misma raz6n, los companimientos formados por bi-
capas lipfdicas tienden a cerrarse de nuevo despues de haber sido mtos.
Ademas de sus propiedades de autoensamblaje y de autosellado, una bicapa
lipfdica liene olras earaeterfsticas que haeen de eUa una eslructura idea! para Flgun 10.3 Mil::e1adelJpldosy
constituir las membranas eeluJares. Una de las mo1s importantes es su nuidez. blcapa Upfdlca vistas en settl6n
que, como veremos, es crucial para muchas de sus funciones. transversal. Las molt'iculas de lfpido
forman, cspontaneamente, estructuras
como ~stas ell cl agua. La forma de la
La bicapa Lipfdica es un tluido bidimensionaF molecula Iipfdica determina curti de
estas eSlructuras se forma. Las
Sorprendentemente. no fue hasta principios de los aftos 1970 que los investigadores molKulas lipfdicas en forma de cufta
reconocieron por primera vez que las distintas moleculas Iipfdieas pueden difundir (arriba) forman micelas, mienlras que
Ubrememe dentm de las bicapas Iipfdicas. La demostraci6n inicial procede de unos las mol~as de fosfolipidos de fonna
estudios sabre bicapas Iipfdicas sinteticas. Dos tipos de estas bicapas sinteticas han dlfndrica (abajo) fonnan bicapas.

La bicapa lipfdica 511

resultado muy utiles en los estudios experirnentales: (I) bicapas producidas en for-
ma de vesiculas esfericas, denominadas Uposomas, cuyo tamafio puede variar de 25
nm a I J.U1l de diametro segUn cual sea el sistema de preparaci6n (Figura 10-4), y (2)
bicapas planas, denominadas membranas neg:rm, formadas a lraves de un agujero
situado en una separaci6n entre dos compartimientos acuosos (Figura 10-5).
Se han utiHzado diversas t~nicas para med.ir el desplazamiento de las mole-
culas lipfdicas y de sus diferentes regiones. Por ejemplo. se pucde construir una
mol~ula Iipfdica cuyo grupo de cabeza polar Ueve una marca de espln", tal
M

como un gropo nitroxilo (:>N-D), Que contiene un electr6n desapareado cuyo es-
pin genera una senal paramagnetica Que se puede medir mediante espectrosco-
pia de resonancia de espfn electr6nico (ESR, de Electron Spin Resonance'). (Los
principios de esla tecnica son similares a los de la resonancia magnetica nuclear.
Que se disCUlen en el Capfmlo 4). Mediante el espectro ESR se puede medir el
movimienlo y la orienlaci6n de un Ifpido marcado denlro de una bicapa. Estos
estudios demuestran Que las moleculas de fosfolfpido de las bicapas artificiales
rarameme migran de un lado a otro de la monocapa. Este proceso. denominado
"flip-flop", se produce menos de una vez al mes en cllalquier molecu]a lipfdica.
Por otro lado, las moleculas lipfdicas intercambian facilmenle su Illgar con el de
las moleculas vecinas deniro de una monocapa (_\07 veces por segundo). Ello da
lugar a una nip ida difusi6n lateral, con un coeficiente de difusi6n (0) de aproxi-
madamente 1()-3 cm 2 /segundo. 10 cual significa Que una moh~cula lipfdica pro-
medio difunde la longilud de una gran celula bacleriana (-211m) en aproxima-
damenle 1 segundo. Adem:is, estos eslUdios indican Que las moleculas Iipfdicas
giran con gran rapidez alrededor de sus ejes longiludinales y que sus cadenas hi-
drocarbonadas son flexibles (Figura 10-6).
Vnos estudios similares han sido realizados con moleculas lipfdicas marca-
das, en membranas biol6gicas aisladas y en celulas enteras relativamenle senci-
lias como micoplasmas, bacterias y g16bulos rojos (erilrocitos) anucleados. En
general, los resultados de estos estudios son los mismos Que los Que se obtienen
con bicapas artificiales, y demuestran Que el componenle lipfdico de las mem-
branas biol6gicas es un I{Quido bidimensional en el que las moleculas constitu-
yemes son Iibres de moverse lateralmente; aI igual que en las bicapas sinlelicas, Figura to-4 Uposomas.
las moleculas de fosfolJpido se hallan restringidas a su propia monocapa. Este (AI Electronmicrograffa de vesrculas de
confinamiento crea un problema para su sintesis. Los fosfolfpidos son sintetil.3- fosfolfpldos (liposomasl en agua. sin
dos s610 en una de las monocapas de la membrana, la cual se sintetiza principal- fijar ni lenir. N6tese que la eSlruclura
mente en la monocapa citos6lica de la membrana del retfculo endoplasmatico bilaminar de las vesiculas es
claramente aparente. (B) Dibujo de un
{ER, de Endoplasmic Reticulum); si ninguna de estas moleculas recientemente
pequeno liposoma esferico visto en
formadas pudiera migrar hacia la ona mitad de la bicapa lipfdica, no se podrfa seccl6n transversal. Normalmente los
formar mas bicapa. Este problema se soluciona gracias a un tipo especial de en- Iiposomas se utilizan como modelo de
zimas unidas aI ER lIamadas tTamlocadoras de JosJolfpidos, que catalizan un ro1- membrana en estudios
pido flip-flop de fosfolfpidos especfficos desde la monocapa donde han sido sin- expcrimemales. (A, par conesfa de
telizados hasta la rnonocapa opuesta, como se discule en el Capitulo 12. Jean Lell8ull.)

.... .... E dilusi6n lateral

:.0::: \ ,
I flip-flop

/ :1~~Y8l
,ow"e)
,
I I
blcIo~ Ilpldic:a (membrana ""lIral
FlguT'8 10-5 Representacl6n en seccl6n tnrnsversaJ de una blcapa lIpfdJca
slnu!tlca, denomJnada membrana negra. Esta bicapa planar se fonna a FlguT'810-S Movllidad de los
traves de un pequeno agujero en una pared que separa dos compartimlentos fosfoUpldos. Los lipos de movimienlOS
acuosas. l.as membranas negras se mUlzan para medir las propledBdes de posibles de las moleculas de
permeabilldad de las membranas Brtificlales. fosfolfpido en una bicapBlipfdica.

512 Capftulo 10: EStrucIUTll de la membrana

La fluidez de una bicapa lipidica depende de su composici6n 3
La fluidez de las membranas celulares es biol6gicamentc imponante. Algunos
procesos de transpone y a1gunas actividades enzim<1.ticas, por ejemplo, pueden
detenerse cuando la viscosidad de la bicapa se incrementa experimentalmente
mas aU~ de un nivel umbra!. La nuidez de una bicapa lipfdica depende tanto de
su composici6n como de la temperatura, como ha side demostrado por estudios
en bicapas sinteticas. Una bicapa simetica, producida a partir de un unico tipo
de fosfolfpido, pass de un estado Uquido a unestado cristalino rigido (0 gel) en ""'""
hidrOCllrbornldel
inNluredN eon
un punto de congelaci6n caracterfstico. Este cambio de estado recibe el nombre dab," enlllCel cis
de traflsicio" de/ase, y la temperatura a la que se produce es m~s baja (es decir, Figura 10-7 lnOuencladelosdobles
la membrana resulta mas diffcil d~ congelar) si las cadenas hidrocarbonadas son enlaces cis en las cadenas
conas 0 tienen dobles enlaces cis. Una mellor longitud de la cadena reduce la hldrocarbonadas.la presencia de
tendencia de las colas hidrocarbonadas a interaccionar entre sf. y los dobles en- dobles enlaces hace m<ts diffcil el
laces cis producen pliegues en las cadenas hid.rocarbonadas que dificultan su empaquetamiento de las cadenas, 10
empaquetamiemo, de forma que las membranas permanecen fluidas a tempe- cual hace que la bicapa lipfdica sea
ratums mas bajas (Figura 107). Bacterias, levaduras y otros organismos cuyas md.s diffcil de congelar.
temperaturas varfan con la de su entoroo, controlan la composici6n de los aci-
dos grasos de sus Ifpidos de membrana para mantener una fluidez relativamente
COllstante; en caso de que la temperawra disminuya se sintetizan acidos grasos
can mas dobles enlaces cis. de manera que evitan una perdida de fluidez de la
bicapa por efecto de la disminuci6n de la temperatura.
Sin embargo, la bicapa Jipidica de muchas membranas celulares no est3
compuesta exclusivamente por fosfoUpidos; habitualmente contienen ademas,
colesterol y glucolipidos. Las membranas plasmaticas de eucariotas contienen
cantidades especialmente elevadas de colesterol (Figura 10-8) -hasta una pro-
porci6n de m.as de una molecula de colesterol por cada molecula de fosfoUpido.
Las moleculas de colesterol refuerzan el car.acter de barrera permeable de la bi-
capa Iipfdica. Se orientan en la bicapa con sus grupos hidroxilo pr6ximos a las
cabezas polares de las moleculas de fosfolipidos; sus anillos esteroides, pianos y
rfgidos, interacroan can -yen parte inmovilizan- las regiones de las cadenas hi-
drocarbonadas que son mas cercanas a los gropos polares de la cabeza, dejando
el resto de la cadena m.as flexible (Figura 10-9). AI disminuir la movilidad de los
primeros grupos CH1 de las cadenas hidrocarbonadas de las moleculas de fosfo-
Ifpidos, el colesterol hace a la bicapa Iipidica m.as rfgida en eSla regi6n y de ese
modo disminuye la permeabilidad de la bicapa a moleculas solubles pequenas.
Aunquc de eSla manera el coleslerol tiende a hacer menos fluidas las bicapas Ji- Figura 108 Estruetura del colesterol.
pfdicas, a las a1tas concenlraciOllcs en que se presenta en la mayorfa de las La molccula de colesterol,
mcmbranas plasllHiticas de eucariotas lambien impide que las cadenas hidro- rcprcsentada mediante su f6rmula (Al.
carbonadas se junten y cristalicen. De esta manera, el colesterol inhibe posibles mediante un esquema (B) y mediante
transiciones de fase. un modelo espacial compacta (C).

OH ] grupo poler de CIlbele

_rueture
pl.ner rlgida
de lot enillos
_el"1)id&of;
CHJ "cH)
CH ,
'iH,
)Hz grupo
hidrOCllrbonedo
1CHHz no poler de cole

/'-
CH J CH J

IAI (8),

La blcapa llpfdlca 513



En la Tabla 10-1 se com para la composici6n Lipfdica de distintas membranas

biol6gicas. Observese que a menudo las membranas plasml1ticas baclerianas es-
3
.W"'"
] depolar"
t<in compuestas principalmente por un unico tipo de fosfolfpido y no contienen
colesterol; la estabilidad mecAnica de estas membranas estl1 asegurada por la
pared celuJar que las recubre (vease Figura l 1-]4). Contrariamenle. la composi- E
c
2 .] c:abeza
' ;,"
endurecida
por at
ci6n de la membrana celular de la mayorfa de las relulas eueariolas es ml1s va-

.] ;'"
eolesterol
riada. conleniendo no s610 grandes cantidades de colesterol, sino tambi~n una
mezcla de diferentes fosfolfpidos. Cuatro gropos de fosfolfpidos predominan en '
mu
la membrana plasml1tica de muchas celulas de mamfferos: [osfatidilcolina. es- fluida
fingomieiina. fos[atidiiseri"a y [osfatidilelanolamina. Las eSlrocturas de estas
moleculas se muestran en la Figura 10-10. N6tese que tan s610 la fosfatidilserina
tiene una earga neta negativa, cuya importancia trataremos posterionnente; las Figura 10-9 FJ coleslerol en una
orras tres molecuJas son electricamente neutras a pH fisiol6gico. prescntando bkapa Upfdlca. Dibujo esquemlitico
una carga negativa y otm positiva. En conjunto. estos cuatro fosfolIpidos consti de una molecula de colesterol
tuyen mAs de la mit'ad de la masa de lipidos de la mayorfa de las membranas inleractuando con dos molecuJas de
fosfoHpido en una de las laminas de
(vease Tabla 10-1). Otros fosfolfpidos. tales como los [os[olfpidos de inositol. son
una bicapa lipfdfca.
funcionalmeme imponantes pero se hallan en cantidades relativamenle peque-
iias. En el Capitulo 15 se describe el papel crucial que desempef\an los fosfoUpi-
dos de inositol en las seiializaci6n celuJar.
Cabe preguntarse por qu~ la membrana plasml1tica eucariota contiene tal
variedad de fosfolfpidos. con gropos de cabeza que difieren en tamano. fonna y
carga. Podemos empezar a comprender este porque si pensamos en los Ifpidos
de la membrana como en un disolvenle bidimensional de las protefnas de la
membrana, al igual que el agua constituye un disolvente tridimensional para las
prolefnas en una soluci6n acuosa. Como veremos. cienas protefnas de membra
na unicamente puedan actuar en presencia de gropos de cabeza de delennina
dos fosfolfpidos. de la misma fonna que muchas enzimas en soluci6n acuosa re
quieren un ion determinado para presentar actividad.

La bicapa lipdica es asimetrica 4

En las membranas plasm<1ticas que han sido analizadas. la composici6n Iipfdica
de las dos mitades de la bicapa lipfdica es marcadamenle diferente. En la mem-
brana del gl6bulo rajo humano, la mayorfa de las moleculas Iiprdicas que tienen
colina -{CH3hN'CH 2CH 20H- en su grupo de cabeza (que es, fosfatidilcolina yes-

Tabla 10-1 Composlcl6n IIpfdlca aproxlmada de dlierentes membranas celulares

Porcenlaje de lipldo total en peso
u
.~ .3
~
E
~ ~
E E

~

-.
~
~o
.E
.,,--
'1: ~
0
u
.~

~
E
i! '0
~3
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eg l:: ~ <\I
0.0 E ,E.!
E~
.0 '0
E.
.S geE
_"X "~
",,0 '
"~ :s! .- E ~."

Upldo :;:J! ""

:;:." :;: :;:-~
~

'"
" 0
"'"
Colesterol 17 23 22 3 6
Fosfatidil-
etanolamina 7 18 15 35 17 7.
Fosfatidilserina
Fosfatidilcolina 2.
7
17

I.
2
3.
5
5
"ozas

Es6ngomielina
Glucolfpidos
19
7
18
3
8
28

trazas "ozas
Otros 22 13 8 21 27 30

514 Capftulo 10: Estructura de la membrana

 CH, Figura 10-10 Cuatrodelos
CHl..... l ...... cH J prtnclpaJes rosrolfpldos de las
7'fH' membranas plasmlhlcas de las
d1ulu de mamffero. O~rvese que
lantO en CSla figura como en las
'fH' siguienles, los diferenles grupos de la
?
Q=-p-00
cabez.a se represe.ntan mediante
sfmbolos diferentes. Todas las
I mollkulas Upfdicas que se presentan
?" ?
'fH-'fH-CH'
derivan del gticerol excepto la
esfingomlelina que deriva de la serina.

It 7H
H -0

fotfatidiletanolamina fosfatidilserlna fosfatidilcolina nfingomielina

fingomielinal se enCUenlTan en la mitad exterior de la bicapa IipCdica, mientras

que la mayona' de moMculas de fosfolfpido que contienen un grupo amino pri-
mario terminal (fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina) se hallan en la mitad in-
terior (Figura 10-11). Dado que la fosfatidilserina, de carga negativa, estc1locali-
zada en la monocapa interior, existe una importante diferencia de carga entre
las dos monocapas.
La mayorfa de las membranas de una c~lula eucariota, induyendo la mem-
brana plasmc1tica, se sintetizan en el relfculo endoplasmc1tico (ER) yes alii donde
se genera la asimetrfa de los fosfoUpidos por translocadores que trasladan espe-
cificamente mol~culas de fosfol.fpidos de una monocapa a otra (se discute en el
Capftulo 12). Esta asimelrfa Iipfdica puede ser funcionalmente importante. La
enzima prore(na quinasa C, por ejemplo, se activa en respuesta a variadas sef'ia-
les extracelulares; se une a la cara citoplasmatica de la membrana, donde se ha-
Ua concentrada la fosfatidilserina, y requiere este fosfolfpido cargado negativa-
mente para actuar. De modo similar los fosfolipidos de inositol se concentran en
la cara citoplasmatica de la membrana plasmatica de la c~lula eucariota. Estos
fosfolfpidos minoritarios son escindidos en dos fragmentos por enzimas especf-
ficas que son activadas por sei\ales extracelulares. Ambos fragmentos actUan
luego dentro de la c~lula como mensajeros solubles que permiten la difusi6n de
la sei\al hacia el interior de la re!ula, como se discutim en el Capitulo 15.

FlguralO-11 ladJstribud6n
aslmt!:triCll de los rosrolfpldos yde los
g1ucoUpldos en la blCllp8 Upfdlca de
ESPACIO EXTRACElUlAR los g16bulos rajos humanos. Los
sfmbolos utllizados para los
rosfolfpidos son los inlroducidos en la
Figura 10-10. Ademn, los glucolfpidos
se han dibujado con grupos de cabeza
polar de forma hexagonal (azul). se
cree que el coleslerol {no dibujadol se
dlstrlbuye casi a partes iguales en
CITOSOL ambas monocapas.

La blcapa Upfdlca 515

En la superficie de todas las membrana plasmaticas
hay glucolfpidos'
Las mol~culas Iipidicas que presenlan una asimetrfa mlls marcada en cuanto a
su distribuci6n en las membranas celulares son las mol~culas Iipfdicas que
contienen azucares denominadas g1ucoUpJdos. Estas asombrosas moleculas se
encuentran exclusivamente en la mitad no citoplasmlitica de la bicapa Iipfdica.
donde aI parecer se autoasodan formando microagregados medianle la fonna-
ci6n de enlaces de hidr6geno entre eUas. En la membrana plasmatica sus gro-
pos az.ucar qued.an aI descubierto en la superficie de la cl!lula (Figura 10-11).10
cual sugiere que deben desempenar alguna funci6n en las interacciones de la
cl!lula con su entomo. La distribuci6n asimetrica de los glucolfpidos en la bica-
pa resulta de la adici6n de gropos azucar a las moleculas Iipfdicas en el lumen
del complejo de Goigi. el cual es topograficamente equivalenle aJ exterior de la
relula (se discute en el Capftulo 13).
Los glueolfpidos se presentan probablemenle en las membranas plasmliti-
cas de todas las celulas ani males, constiluyendo aproximadamente un 5% de las
moleeulas lipfdicas de la monocapa exterior. Ademas se encuentran en algunas
membranas intracelulares. Los glucolfpidos mas eomplejos. los gangU6sldos,
conticnen oligosacaridos con uno 0 m<1s residuos de acido si;1!ico, 10 que les pro-
porciona una earga neta negativa (Figura 10-12). Los gangli6sidos son mlls
abundanles en la membrana plasmAtica de las celulas nerviosas. en donde cons 4

tituyen aproximadamenle un 5-10% de la masa Iipfdica total. aunque tambien se

encuentran en casi todos los tipos celulares en cantidades mucho mas rcduci-
das_ Hasta el momento se han identificado mas de 40 gangli6sidos diferenles.
Por ahora no se dispone mas que de indicios acerca de cuaJes podrfan ser las
funciones de los g1ucoUpidos. Una posible pista procede de su localizaci6n: en la
membrana plasmatica de las celulas epiteliales, por ejemplo. los g1ucolipidos se
eneuentran confinados en la superficie apical, donde podrfan ayudar a proteger
la membrana de las condiciones adversas que rrecuenlemente existen allf (como
pH bajo y enzimas degradativas). Los g1ucoUpidos con carga, como los ganglj6si-
dos. pued.en tener importancia debido a sus efectos eltktricos: su presencia alte-
rarfa el campo electrico a tIav~ de la membrana y la concentraci6n de iones
-especialmente Caz,_ en su superficie extema. Los g1ucolfpidos pueden tambil!n

Figura 1012 Molkulasde

g1ucoUpldos. Los galactocerebr6sldos
(Al son lIamados glucoUpidos lIf!utros
porque el azlicar que fonna su grupo

"7 "
de cabeza noesI4 cargado. Un
gang.li6sido (B) siempre conliene uno
o m4s residuos de 4cido si41ico

i i
0 0 (tambitn lIamado 4cido N-acetil
H-~H-~H2 H-~H-~H2 neuramfnico 0 NANA) cargados
H7H H7H negalivamente. cuya eslruetura se
muestra en (C). Mientras que en
" -0 " -0 bacterias y en plantas casi lodos los
g1ucolpidos derivan del glicerol. como
la mayorfa de fosfolfpidos, en las
ct~lulas animates casi siempre se

tHO" generan a partir de es6ngosina. un

.
alcohol amino derivado de la serillu
HOH

r
como en el caso del fosfolfpldo
I$fingomielina (vtase Figura 10-10).
H 20H Gal = galaclosa; Glc = glucosa.
GalNAc~= N-acetil galaclosamina; eSlos
(A) llBIaclocBrebr6sido (8) llBnllli6sido G M, Ires aztlcares no eSl4n cargados.

516 Capftulo to: Estructura de la membrana

 =

desempcnar un papel en el aislamiento electrica, ya que se hallan en gran cami

dad en la mitad no ciloplasmatica de la bicapa de la membrana mielfnica. que
aisla electricamente los axones de la celula nerviosa. Ademas se cree que desem-
pefian alguna funci6n en los procesos de reconocimiento celular. EI gangli6sido
GM1 (vease Figura 10-12), por ejemplo. acrua como receptor de superficie ceJular
para 1a taxilla bacteriana que provoca la diarrea dcbilitant'c del wlera. La toxina
del c61cra tinicamente se fija y pelletTa en aquellas cclulas que tienen GM1 en su
superficic. incluidas las celulas del epilclio intestinal. Su ingreso en la ce\ula pro-
voca un incremento prolongado de la concentraci6n intracelular de AMP cfclico
(se discute en el Caphulo J5), la cual genera, en cl imestino, un gran eflujo de Na'
y de agua. Aunque la fijaci6n de las loxinas bacterianas no puede ser la funci6n
normal de los gangli6sidos, estas observaciones sugieren que eslos glucolfpidos
tambi(!n pueden actuar como recept'Ores de moltkulas extracelulares habituales.
Esta suposici6n se apoya en la evidencia crecieme de que los glucolipidos pue-
den ayudar a las c(!lulas a unirse a la matrix extrace)ular y a olras c(!)ulas. como
disculiremos mas adelame.

Resumen
La! membrunas blol6gicas estd" formlldas por una doble Cllpa continua de moli-
cuUu lipfdkus. en la que est4n inmeruu INJrUu proteftuu de membrana. Esta bien-
pa lipfdic:a es fluUla. y Uu distintus moUculas lipfdicas ptu!den dijundir rtfpida-
nf1mte dentro de ." propla monocapa. La mayorla de las moUculns lipfdictu, sill
embargo. cad nUIIea realizan de forma espolltdnea flip-flop de una monOCllpa a la
otra. La! molkulas lipfdic:as de Uu membranus son anfipdtictu y aigrmus de ellas
(losfosfol(pidos), CUtlniW se colocall en agrill, se ,men espolltdneamellte entre sffor-
maniW blcapas; las blcapasfonnan CO"")(Irtimientos cerrcuros que tiellell una gran
tendencla u valverse a ,mir si se rompen. Existen tres clases pritlcllJllles de molic,,-
las lipfdicas de membrana -los fosfoU'Jidos, el co/esterol y los glucol(pidos- Y In
composicl6n lipfdlcll de III monocapa utemn es difcmmte a to. de In intemn, 10 ql.e
refkja las diferentes Junclones de las dos c:aras de una membrana celular. En las
membranas plasmAlicas de los difere,rtes tipos de cilulas, al igual que en los diver-
sos compartimientos membranosos internos de las ciiulas eucarlotas, u prrsetllan
diferentes mez.clas de Upidos. Algunas prote(nas unidas a La membrana 1U!a!sitan
Upidos con grupas polares espedfioos para aduar. /0 que al parecer explialrla, al
menos en parte, por qui las membranas elu:ariotas conliemn ripos tatl diversos de
molkulas llpfdictu.

Proteinas de membrana"
Aunque la estructura b;isica de las membranas biol6gicas esta detenninada por
la bicapa lipfdica. la mayorfa de sus funciones especfficas estan desempenadas
por protefnas. Por consiguiente, la cantidad y el tipo de protefnas de una mem-
brana son muy variables: en la vaina de mielina, cuya funci6n principal consiste
en aislar los axones nerviosos, menos de un 25% de la masa de la membrana es
protefna, mientras que en las membranas dedicadas a la transducci6n energ(!ti-
ca (tales como las membranas internas de las mitocondrias y de los c1oroplaslosl
aproximadamente un 75% de su masa es prolefna. La membrana plaslll<1tica
normal esta situada entre ambos extremos, con aproximadamenle un 50% de la
masa toml en forma de protema. Debido a que las moleculas lipfdicas son pe-
queflas en comparaci6n con las proteicas, en todos los casas hay mas mol(!culas
lipfdicas que proteicas -alrededor de 50 moleculas de Ifpidos por cada moltkula
de protefna en una membrana que contenga un 50% de protefna en masa. Como
los Ifpidos de membrana, es comun que las prolefnas de membrana lIeven ado-
sadas cadenas de oligosacaridos. Asf la superficie que la c(!lula presema al exte-
rior posee una gran cantidad de carbohidratos, 10 que forma un gfucocafiz 0 Cll-
bierta ceill/ar (discutido mas adelante).

Prole{nas de membrana 517

Las protefnas de membrana pueden estar asociadas
ala bicapa lipfdica de varias maneras7
Las distintas protefnas de membrana est'an asociadas a las membranas de dife-
remes maneras, como se i1ust'ra en la Figura 10-13. Muehas protefnas de mem-
brana atraviesan la bicapa lipfdiea, de forma que parte de su masa se situa a
eada lado de la membrana (ejemplos 1 y 2 de la Figura 10-13). Como sus vecinas
Iipfdieas, estas protemas transmembrana son anfipatieas, tienen regiones que
son hidrof6bicas y regiolles hidroffJicas. Las regiones hidrof6bieas se situan en el
interior de 1a membrana y se relacionan con las colas hidrof6bieas de las molt!-
Figura 10-13 Selssl.stemasde
colas lipfdieas del interior de la bicapa. Las regiones hidroffiieas se haJlan ex-
asoclad6n de las protemas con la
puestas aI medio aeuoso de ambos lados de la membrana. EI ead.eter hidrof6bi- membrana Uprdica. Se cree que la
co de a1gunas de estas protefnas aumenta por la uni6n eovaJente de una 0 mas mayorfa de proteinas transmembrana
cadenas de acido graso que se encuentren insenadas en la mitad citoplasmatica atraviesan la bieapa como una helice a.
de la bieapa (vt!ase el ejemplo 1 de la Figura 10-13). Otras proteinas de membra- unica (I) 0 en fonna de mUltiples
na se localizan en el chosol y se asocian con la bicapa tan wlo a travt!s de una 0 helices a. (2); algunas de estas
mas cadenas de acidos grasos a las que estan unidas covaJentemente, 0 por otro protemas de paso unico" y de paso
tipo de cadenas Iipfdicas Ilamadas grllpos prenil (vease el ejemplo 3 de la Figura multiple" estan unidas
10-13 y la Figura 10-14). Existen otras prot'efnas eompletamente expueslas a la covalentemente a cadenas de aodos
superficie celular extema, ancladas a la bicapa unicamente por medio de una grasos insertados en la monocapa
uni6n covaJente (vfa un oligosaearido especffico) aI fosfatidilinosit'ol de la mono- citoplasmatica (I). Otras protemas de
eapa lipfdiea externa de la membrana plasmatica{vease el ejemplo 4 de la Figura membrana estan unidas a la
membrana Unicamente a traves de su
10-13). Las proteinas unidas a lfpidos del ejemplo 3 se han generado como pro-
uni6n covalente a un lipido, como una
teinas solubles en el citosol y posterionnente se han trasladado directamente cadena de acido graso 0 un grupo
hacia las membranas uniendolas eovalememente a un grupo lipidieo (Figura 10- prenil de la monocapa cilOplasmalica
14). Las protefnas del ejemplo 4, sin embargo, se sintetizan como protefnas (3) 0 bien, menos habitualmente, a
transmembrana de "paso unito.. en el ERi mientras pennanecen en el ER, el seg- uav6i de un oligosacarido a un
mento transmembranoso de la protefna se escinde y se Ie aflade un glucosllfos- fosfolfpido minoritario, el
ralldillnosilol (GPI, de glyeosylphosphalidylinositoll, de forma que la prOleina fosfalidilinositol. en la monocapa no-
queda llnida a la superfieie no citoplasmatica de la membrana 0010 por medio citoplasmi1tica (4). Finalmenle,
de eSle andaje (vease Capftulo 12). Las proteinas que se unen a la membrana muchas protefnas estan unidas a la
con un GPI de anclaje se distinguen faeilmente mediante el uso de la enzima membrana tan 5610 mediante
fosfolipasa C especffica para fosfatidilinositol. que separa especffieamente eslas interacciones no covalentes con otras
protefnas de sus anclajes, separandolas asi de la membrana. protefnas de membrana (5) y (6). En la
Figura 10-14 se iJustra c6mo se fonna
A1gunas protefnas que no ocupan totalmente el interior hidrof6bieo de la bi-
la estructura de (3). Los detalles de
eapa lipidica estan unidas a una u OlTa cara de la membrana mediante interae- estos diversos sistemas a traves de los
ciones no covalentes con otras protefnas de membrana (veanse los ejemplos 5 y cuales las protefnas de membrana se
6 de la Figura 10-13). Muchas de elias puedcn ser liberadas de la membrana me- asocinn con la bicapa lipfdica, se
diante procedimiclltos de extracci6n relat'ivamente suaves, como la exposici6n a discutcn en el Capftulo 12.

b", [
lipldiea

518 Capitulo 10: Estruetura de la membrana

 tAl proleina unlda a la IB) proleina unlds .Ia Figura 10-14 La unl6n covalentc de
n'lembrana par un. n'lfln'lbrana par un cualqulera de los dos tJpcM de grupos
cadena de kido g,aso grupa prenil
Upklkos puede ayudar a localizar una
protdna solubledentro de una
membrana, despu& de su sfutesls en
eI c1losol. (AI Una cadena de kido
graso {mirfstico 0 palmfticol se une a
un grupo amino terminal de una
o glicina por medio de un enlace amida.
-f- CI -
I
O - CH, (B) Un grupo prenil (sea famesil 0 un
grupo geranilgeranil mAs largo-ambos
enlece .mid. entre
CH, relacionados con el coleslerol) se haUa
~
f' '"
un glupo amino enla<:a tioelel unido, mediante un enlace !iot!:ler, a un
H-N / termlna'yun 1_ _ entre una cisteina residuo cislerna situado a cuatro
!/"
,~po ''',''
kido greso
C-O residuos del carboxilo terminal Tras
enaSOl , esla prenilnci6n.los Ires amlnmkldos

~::r:.[- -.r termlnales son separados de la cadena

y el nuevo carboxilo terminal se metila
antes de ser insertado en la membrana.
las estructuras de los dos Hpidos que
slrven de anc1aje, se ilustran en la parte

N\/\f\J\/'vC-O.
~ inferior: (C) un anc1aje miristil (una
cadena de llcido graso saturado de 14
-t.r<..J-(CH,..... carbonos), y (0) un anclaje famesil
Ie) anclaje miristil (0) ane'aja farnni'
(una cadena hidrocarbonada
insalurada de 15 carbonos).

solueiones de muy alta 0 baja fuerza i6nica 0 de pH extremo. que interfieren con
las interacciones proteicas pero mantienen intacta la bicapa Jipfdica. De manera
operacional a estas prote(nas se les denomina protefnas perlfl!rlcas de mem-
brana. Por el contrario las protefnas transmembrana. varias protefnas unidas a
la bicapa por cadenas de acidos grasos y algunas otras protefnas fntimamente
unidas a la membrana, no pueden ser Iiberadas por estos me:todos. por 10 que se
les denomina protefnas integrates de membrana.
Habitualmente la manera en que una protei'na se asocia a la bicapa Iipfdica
es un indjcativo de la funci6n de la prole(na. Asf, s610 las protefnas transmem-
brana pueden acruar en ambos lados de la bicapa 0 traosponar moleculas a tra-
v~ de ella. Algunos receptores celulares de superficie, por ejemplo, son protef-
nas transmembrana que se unen a las moleculas seflal en el espacio extraceluJar
y generan diferentes seflales intracelulares en el lado opuesto de la membrana
plasmatica. Por el contrario, las protefnas que s610 actlian en un lado de la bica-
pa Iipfdica, generalmente esran asociadas can la monocapa lipfdica 0 con el do-
minio proteico de aquellado de la membrana. Por ejemplo, un grupo de protef-
nas relacionadas con la sei'iaJizaci6n intracelular estan unidas a la cara citos6lica
de la membrana plasmatica por uno 0 mas grupos Iipfdicos a los que eslan cova-
lentemente unidas.

Se considera que, en la mayorfa de proteinas transmembrana,

las regiones de la cadena polipeptfdica que cruzan la bicapa
lipfdica presentan una conformaci6n en helice a6.11
Una protefna transmembrana se orienta siempre en un unico sentido deotro de
la membrana. Este hecho refleja tanto la asimetrfa del sistema mediante el cual
la prolefna se ha sintetizado e insertado en la bicapa Lipfdica en el ER, como la
diferencia entre las funciones que desempefian los dominios citoplasmatico y
no citoplasmatico de la protefna. Estos dominios estan separados por segmemos
de la cadena polipeptfdica que atraviesan la membrana. se hallan en contacto
con el ambiente hidrof6bico de la bicapa Iipfdica y estan compuestos, en gran
parte. por residuos de amino~cidos de cadena lateral no polar. Debido a que las
uniones peptfdicas son en sf mismas polares y dado qu.e el agua no esta presente

Protcfnas de membrana 519

 Figura 1015 Un segmento de una cadena pollpeptfdlca que atravlesa la
blcapallpfdJca en fomla de hellce ex. En la figura s610 se ha dibujado el
esqueleto del carbono ( l de la cadena polipeptfdica, con los amino<\cidos
hidrof6blcos en verde y amarillo. EI segmento polipeptfdico que se muestra
en la figura es una parte del centro de reacci6n fotosint~tico bacteriano que
se i1ustra en la Figura 10-33, cuya estructura fue determinada por andlisis de ESPACIO
difracci6n de rayos X. (Basado en datos de J. Deisenhofer el aI., Nature 200) EXTRACELULAR
318:618624, 1985. yde H. Michel et al.. EMBOJ. 5:11491158.1986.)

en este ambiente. lodas las umones peptfdicas penenecientes a la porci6n de la

cadena embebida en la bicapa tienden a formar enlaces de h..idr6geno entre sf.
Esle lipo de uniones se maximiza si la cadena polipeptldica forma una h~lice are
gular al cruzar la bicapa; se cree que la mayoria de los segmentos de las cadenas
polipeptfdicas que alraviesan la membrana se hallan en esla confonnaci6n (Figu
ra 1015): en las protemas transmembrana de paso tlnlco la cadena polipeplfdica
crma una sola vez (~ase el ejemplo 1 de la Figura 1013), mientras que en las
protefnas transmembrana de muJtlpaso la cadena polipeplfdica cruza multiples ClTosal
veces la bicapa (v~ase el ejemplo 2 de la Figura 10-13). Una manera altemativa de
que las uniones peptfdicas puedan satisfacer sus requerimientos de enlaces de hi
dr6geno es que las multiples hebras transmembrana de la cadena polipePlfdica
se dispongan en lAmina P fonnando un ~barril cerrado~ (denominado barril (JJ.

(AI GLUCOFORINA

8 _L-~_J-,------.J 8L-_ _~ ~_
o 50 100 o 100 200
numero de amino'cidO numero de amlno'cidO

1-1gura 1016 LocalIzaci6n en una cadena pollpeptfdlca, medlanle el uso de

gniflcos de hldropatfa, de potenclales segmentos en hellce a que atravlcslm la
membrana. L, encrgfa !ibm neeesaria para transferir segmcntos suceslvos de
ulla cadena polipeptfdica de un solvente no polar aI agua se calcula a partir de la
composici6n aminoacfdica de cada segrnento usando los datos de un modele
de componentes. Estos c4Iculos se realizan para segmentos de un tamano fijo,
(usualmcnte alrededor de 10 residuos de amino<1cidos), comcnzando COil cada
aminoocido succsivo de la cadena. EI ~fndice de hkIropatfa~ del segmento se
esquematiza en el eje Ycomo funci6n de su localizaci6n en la cadena. Un valor
positivo indica que se necesita energfa libm para la traflsferencia hacia el agua
(es decir, que el segmento es hidrof6bico) yel \'il1or asignado es un fndice de la
tantidad de energfa que se necesita. Los picos del fndice de hidropati"a aparecen
en la posici6n de los segmentos hidrof6bicos de la secuencia de aminoocidos.
Se ilustran dos ejemplos de las proteInas de membrana que se disculen
posterionneme en este capftuJo: (A) la g1ucoforina dene un unico segmento que
auaviesa 1a membrana en h8i.ce a y un pica col'TeSpOndiente en el test de
hidropat!a: (8) Ia baeteriorrodopsina tielle siete segment05 que atraviesan la
membrana en hBice a y siele picos correspondientes en el gr.Uico de hidropalfa
(Adaptado de D. Eisenberg. Annu. Rev. Biochem. 53:595-624, 1964.)

520 Capftulo 10: Estructura de la membrana

Esta estructura de muJtipaso transmembrana se observa en las poritlas, unas
protefnas que trataremos m<is adelante. La fuerte tendencia a fonnar el maximo
numero de enlaces de hidr6geno en ausencia del agua tambien implica que pro-
bablemenle la cadena polipeptidica que entra en la bicapa la arraviesa comple-
lamente antes de cambiar de direcci6n, ya que la curvatura de la cadena supon-
drfa una disminuci6n de las interacciones regulares de enlaces de hidr6geno.
Probablememe por eSla raz6n es por 10 que todavfa no se ha eSlablecido ningun
ollgosacllri~os
ejemplo de una protefna de membrana cuya cadena polipeptfdica atraviese Ian
5610 parcialmence In bicapa Iipfdica.
Como es muy diffcil lograr que las protefnas transmembrana cristalicen.
5610 unas Cllantas han sido esrudiadas en su totalidad por cristalograffa de rayos
X (disclltida mas adelante); pero de IOOas las demas protefnas transmembrana
conocemos las estructuras tridimensionales plegadas. Las tecnicas de donaje y
secuenciaci6n del DNA, sin embargo. han revelado las secuencias de aminoaci-
dos de muchas prolefnas transmembrana, y a partir de un an;t1isis de la secuen-
cia proleica a menudo es posible predecir que partes de la cadena polipeptfdica
atraviesan la bicapa Iipfdica en forma de helice ct. Los segmentos que contienen
cerca de 20-30 residuos de aminoacidos can lin alia grado de hidrofobicidad son
bastante largos para atravesar la membrana de esta manera y a menudo pueden 8H
ser identificados por medio de un test de lIidropatla (Figura 10-16). Como son
suficientes to 0 menos residuos para atravesar una bicapa Iipldica a modo de
una hebra p extendida. 1a misma estralegia se usa para identificar los segmentos Figura 16-17 Unatfplcaprotefna
que atraviesan la membrana fonnando un barril p. transmembrana de "paso dnlco".
N6tese que 1a cadena polipeptIdica
La gran mayorfa de las proleinas transmembrana se haUan g1ucosiladas. En
alraviesa la bicapa lipfdica en fonna de
e) caso de los glucoUpidos, los residuos de azucar se aftaden en la luz del retlculo
h~lice (l dextr6gira y que tanto las
endoplasmal.ico y en la del complejo de Goigi (veanse Gapitulos 12 y 13) por 10 cadenas de ollgosacarido como los
que las cadenas de oligosacarido se hallan siempre en ellado no ciloplasml1lico enlaces disulfuro se hallan en la
de la membrana. Otro tipo de asimetrfa resulta del caracterfSlico ambiente re- superfidc no citos61ica de 18
ductor del citosol, que imp'ide la formaci6n de enlaces disuJfuro (S-S) inter a membrana, No se fonnan enlaces
intracatenarios entre los residuos cistefna del dominio citos6lico. Estos enlaces disulfuro entre los grupos sulfhidrilo
se fonnan en ellado no cilos61ico de la membrana. donde pueden tener un pa- localizados en el domino
pel importance estabilizando la estructura plegada de la cadena polipeptfdjca dtoplasm<itico de la prote!na. debido a
(Figura 10-17) 0 bien asociando 1a cadena can ouas cadenas polipeptfdicas. que eI ambienle reductor del citosol
mantiene eslOS grupos en su fonna
redudda (-5H).
Las protefnas de membrana pueden solubilizarse
y purificarse mediante detergentes9
En general, las protefnas transmembrana (y tambien algunas otras protefnas
fuertemente unidas a la membrana) pueden ser sotubilizadas unicamente par
medio de agentes que rompan las asociaciones hidrof6bicas y destruyan la bica-
pa lipfdica. De entre estos compuestos que alteran las propiedades bioquimicas
de la membrana. los m~s utiles son los detel'gentes. pequenas moleculas anfipa-
ticas que tienden a fonnar micelas en el agua (Figura 10-18). AI mezclarlos can
las membranas, los extremos hidrof6bicos de las moleculas de detergente se
unen a las regiones hidrof6bicas de la zona externa de las protefnas de membra-
na. desplazando asf las molecuJas Upfdicas. PueslO que el otro extremo de las

rii~~~~;J
molecula de detergente es polar. 1a uni6n detergenl.e-protefna tiende a disolver
en agua a las protein as de membrana (a pesar de que algunas moleculas lipfdi- cola
hidrol6bica
cas inl.ensamente asociadas a las prolefnas quedan unidas a estos complejos; vea-
se Figura 1O-19). Los extremos polares (hidrof11icos) de los detcrgentes puedell
grupo
estar cargados (ser i6nicos) como en el caso del dodecil slIl/alo sOdico (50S. de de e.be!ll
Sodium Dodecyl SuJfate~) 0 no cargados (ser no i6nicos) como en el caso de los hldrofilico
delergentes de tipo Trit6n. En la Figura 10-20 se presenla la estructura de estos
delergentes de uso comun. ~ 10-18 Miceladedete'1lenleen
Con delergemes i6nicos fuertes como el 50S, pueden solubilizarse incluso el agua, vista en secc:16n transversal.
las protefnas de membrana mas hidrof6bicas. 10 cual permite su analisis me- Las moltkuias de detergenle son .
diante electroforesis en gel de poliacriIamida con SDS (vease Capftulo 4), un pro anfip4ticas debido a que lienen un
cedimiento que ha revolucionado el estudio de las protefnas de membrana. AJ extremo polar y otro extremo no polar.

Prote{nas de membrana 521


prolelna de membrana
'"' una bicapa llpldica
Figura 10-19 SolubUizaclcSn de
protefnas de membrana con un
dctergente suave. EI detergente
+ desbarata la estructura de la bicapa
lipfdica y coloca las protefnas en
solucicSn en forma de complejos
protefna-Ifpido-detergente. Los
mice'., de mon6me,os fosfolfpidos de la membrana tambien
detergen'e de dele,gente
se solubilizan por el delergente.

compIe;o hidrosoluble de mk:eln solublOi

protelnallpido-delllrgenle mixu, oe
lipido-de,e,gente

unirse a sus "nucleos hidrof6bicos", e5(OS dctcrgentes fuertes despliegan (des-

naturalizan) las prolefnas, inactiVlindoLas y por tanto, haci~ndolas no utilizables CHr-{HJ CHj
para esrudios funcionaJes. No obstante, las protefnas pueden ser f~cilmenle pu-
CH,
rificadas en su forma desnaturalizada por el 5DS. y en algunos casas, aI eliminar I
el detergente, las prolefnas purificadas pueden ser renaruralizadas. con recupe- CH]-~-CHj
raci6n de su actividad funcionaJ.
Muchas protefnas hidroC6bicas de membrana pueden ser solubiJizadas y :J'C''iH
posteriormente purificadas en forma activa, a veces complcl'amene nomlal,
mediante el uso de dctcrgentes suaves, como el Trit6n X-IOO, que se une a los
segmentos de la prote(na que atraviesan 1a membrana. De eSla manera se puc-
'(H
den reconstruir sistemas de protefnas de membrana funcionalmente acrivos a H,
partir de sus componentes purificados, 10 que proporciona un poderoso medio H,
de am1lisis de la activtdad de dichos sistemas.

Ellado citoplasrnatico de las protefnas de membrana

se puede estudiar en "fantasmas" de eritrocito 10
Se tiene mds informaci6n de la membrana plasmatica del gl6bulo rojo hllmano
(Figura 10-22) que de cualquier otra membrana eucariola, 10 cual es debido a dis
timas causas. Los gl6bulos rojos se pueden oblener en gran Illimero (por ejcmplo
de los bancos de sangre) y cstan relativarnente poco contaminados por otros Ii-
pos celulares. Dado que no ticnen ni !lucleo n.i organulos intracelulares. la unica
membrana que poseen es la membrana plasm<iti'.;3, de forma que puede ser ais- H
lada sin contaminaci6n de membranas internas, 10 cual evtta un grave problema docedillulfato sOdico Trit6n X1OO
que se presenta en las preparaciones de membrana de otros tipos celuJares en los (SOS)
que la membrana plasmatica constituye menos del 5% del total de membrana de
la relula. Exponiendo las reluJas a un medio en el que la concentraci6n de sal sea Figura 10-20 Estrueturadedos
menor que 1a del interior celular, resuJla facti preparar membranas celulares de detergentes utl1lzados
habltualmcnle. EI dodecil sulfalO
eritrocito. vadas 0 -fantasmas". En estas condiciones el agua nuye hacia el inte- s6dico (SDS), un detergenle ani6nico,
rior de los eritroeitos. hincMndolos y rompiendolos (Usis).liberando la hemoglo- y elTril6n X-IOO, un delergente no
bina (la principal proterna no peneneciente a la membrana). Los fantasmas de i6nico. La porci6n hidrof6bica de cada
membrana pueden ser estudiados mientras todavia estan abiertos (en cuyo caso delergcnte se muesrra en verde, y la
cualquier reactivo puede interaccionar con las moleculas por ambas caras de 1a porci6n hkIroffiica en azuL OWrvese
membrana) 0 puede dejarse que se suelden de nuevo de modo que los reaetivos que la zona marcada entre corchetes
que se utilizarAn 5610 puedan actuar sobre la earn externa. Ademas, y puesto que del Trit6n XlOO se repite unas ocho
a partir de fantasmas de eritrocitos tambien se pueden preparar vesfculas solda- ,.."..

522 Capitulo J0: Estructura de la membrana

 ATP_NIlK Figura 1021 U50dedetergentes

'""!!~"~~""S' ~Pt
suaves parasolubUizaT. punDcary

CrrOSOL
tU. .... ~ ''''''']
""" hptd~
reconstltuir slstemu de protefuu de
membrana fundonales. En esle
ejemplo se purifican molOCulas

~
:"""
..... '., funcionales de la ATPasa Na'-K' y se
.. .,' I . incorporan a vesiculas de fosfolfpidos.
"
.. ", , La ATPasa Na'K' es una bomba i6nica
protelnll. de membrane
aolubilizadas ill:'" mlCele. de deterl18nt,
~ monomerol
que se halla presente en la membrana
plasmlhica de la mayorla de las celulas

~
-)ffi"; + :~~'(: :;~I:'
animales; uliliza la energfa de
hidr6lisis delATP para bombear Na'
hacia fuera de la celula y K' hacia el
,
:.
~
-: .1 mlcel.. de Upido-detergenle Interior, como se discute en el
~. t.
.\ :. ,J CapftuJo 11 .
PURlFICACION DE
AlP... Ne'-K'

,~:;~" EliMINACION DEL

'" :'JI/!K,' - - - - . I DETERGENTE
'!flit,: ,,r.
.... .
o .. ' ,
AQICION DE ('-----
:' fl ,
FOSFOl!PlOOS
"J.'
lm~cl&dos eon
det... gento)
mice' de
delergenta
.. mon6merOi

AW... N.'-K'
i_po.oDd<! .. u ...
vesicula de fosfolipido.

das iflvertidas (Figura 10-23), es posible estudiar por scparado los ladas extcmo e
interno (citoplasmdticol de la membrana. EI usa de los fanlasmas de eritrocito
soldados y no soldados hizo posible demostrar por primcra vez que algunas pro-
u:fnas de membrana atraviesan la bicapa Iipfdica (vease mAs adelante) y que la
composici6n lipfdica de las dos mitades de la bicapa es diferente. Estos hechos, al
igual que muchos principios b:isicos demostrados iniciaLmente en membranas
de eritrocim, se han generalizado a las membranas de las celulas nucleadas.

Flgun 10-22 FJectronmicrognft'. de

barrido de eritrocltos humllIIOI. Las
celulas deReR una fonna bic6Rcava y
carecen de n"c1eo. (Por cortesfa de
Bernadette Chailley.l

Prote(nas de membrana 523

 ~
~C

<SOLOAOO
<0

fantuma aoldaclo
:
fentume permeable
Figura IO-Z3 Preparacl6n de
fantasmas de eritroclto, soldados y
no soldados. y de vesiculas Ndel
derecho" y"del reves". Tal como se ha
indicado, los erilrocitos se rompen en
un unico punto, produciendo
fantasmas con un solo agujero. Las
USIS
HIPQTONICA 'Ill....' vesfculas mas pequei'ias se producen
rompiendo mecanicamente los
ranlasmas; la orientaci6n de 13
membrana en eslas vesfculas puede
ser lanto con la earn exterior original
vulcul.. vuell" del reds hacia el exterior 0 vueha del re~.
dependiendo de las condiciones
i6nicas ulilizadas durante el
procedirnienlo de rotuta.
la o riemaci6n" de una proreina de membrana puede delerminarse de va-
M

rias O1aneras. Una de elias consiste en utiJizar un reactivo marcador (por ejem-
plo, uno que comenga una marca radiacliva 0 fluorescenle) que se una covalen
temenle, y que sea soluble en agua, es dedr, que no pueda penelrar en la
.....
molecular
aproximado
bicapa. por 10 que 5610 se unira a grupos espedficos del lado asequible de la
/ ' espectrin. (l
membrana. A conlinuaci6n, se solubilizan las O1embranas can un detergente. se
separan las protefnas por eleclroforesis en gel de poliacrilamida can SDS. las espectrin. II
..........oquinna
protefnas marcadas se deteclan ya sea por su radiactividad (mediante autorra-
diograffa sobre gel) 0 por su fluorescencia (exponiendo el gel a luz uluaviolela).
Ulilizando este sistema de marc;aje vectorial es posible determinar c601o se halJa
orientada una prolefna de membrana en dicha membrana. delectada como una
prolelne
banda sobre el gel: par ejemplo, si se marca lanto desde ellado externo (cuando 100 000 band. 3
se marcan cclulas intactas 0 fantasmas con la membrana soldada) como desde JO 000
82 ooo-ii glucoforffUI
-proteln.a
el lado inlerno (citoplasmatico, cuando se marcan vesfculas invertidas). debe banda 4, 1
ualarse de una prolefna transmembrana. Una via alternativa a ~sta consiste en
exponer tanto la superficie eXlerna como la superficie imerna a enzimas proteo-
Iflicas que no atraviesen la membrana: si una protefna queda parcialmenre dige- '" 000 --lI -.etin.
rida por eSle lralamienlo de ambas superficies, debe trararse de una prolefna
rransmembrana. Ademas, para determinar si una zona especffica de una prolef-
na lransmembrana esra expuesta a un lado u otro de la membrana, se pueden
ulilizar anticuerpos marcados que se unen unicamente a una determinada reo
gi6n de la protefna.
Al estudiar las protefnas de la membrana plasmMica del gl6bulo roje huma-
no mediante electroforesis en gel de poliacrilamida Call SDS, se dctectan aproxi-
madamente 15 bandas proteicas principales, cuyos pesos moleculares oscilan
entre 15000 Y250 000. Tres de estas protefnas -Ia espectrina, la gillcoforina y la
banda 3- constituyen mas del 60% (en peso) de la protefna lotal de la membra- 'A' '81
na (Figura 1O-24). Cada una de eslas Ires prolefnas esla dispuesla en la mem- Figura 10-24 Patron de electroforesls
brana de diferellle manera. Por clio las utilizaremos como ejemplo de las Ires en gel de poUacrlJamlda con SOS de las
maneras principales conocidas en que las proteinas se asocian can las membra proternas de la membrana de gJ6bulos
nas, no ~Io en los gl6bulos rojos, sino lambien en otros tipos celulares. rojos humanos. EJ gel en (AJ esta teilido
con azul de Coomassie. Fl dibujo {BJ
indica la posici6n en el gel de a1gunas de
La espectrina es una prote(na del citoesqueleto asociada
las prOleinas mayoritarias; la
no covalentemente a la cara citoplasmatica gJucoforina se muestra en color roja
de la membrana del eritrocito ll para dislinguirla de la proteina banda 3.
En el dibujo se han omitido olms
Muchas de las moleculas de proleina asociadas con la membrana del eritrocilo
bandas del gel. La gran cantidad de
humano son prolefnas perifericas de membrana asociadas con eJ lado citoplas-
carbohidralOs de las molecu.las de
malico de la bicapa Iipfdica. la mas abundante de eslas proteinas es la especlri-
glucoforina retarda so migraci6n, por 10
na, una barra larga. delgada y flexible, de aproximadamente 100 nm de longitud, que lie desplazan casi tan lentamente
que consliluye aproximadamenle e125% de la masa total de las protefnas aso como las molecutas de la protefna
ciadas a la membrana (unas 2,5 x lOS copias por celula). Constituye el principal banda 3, que son mocha mayores.
componente del entramado proteico (el ciroesquefelO) que se extiende por el in- (A, porconesla de Ted Steck.l

524 Capftulo 10 : Eslructura de la membrana

 CAOENAo
eaOH

union flellible domlnlo de 106

entre dom;niOI llmlnokldOI de longllud

CAOENAII
(A) Flguna 10-25 Mole.:ullU de especuina de eritrocltos humanos. La prOlena
esl<1 dibujada esqucmaticamente en (A) y tal como se ve al microscopio
elecu6nico cn (B). Cada heterodfmcro de espectrina consiste en dos cadenas
polipeplfdicas antiparalelas, flexibles y Iigeramente emrelazadas, !Iamadas 0-
y~, que se unen entre sf mediame multiples enlaces no covalentes que se 'B! l00nm
presenlan incluso en ambos extremos. Ala izquierda esla el extrema
"cabeza" fosforilado, donde se asocian dos dfmf'rns, formando un tetramero.
Tanto la cadena a como la cadena ~ eSldn compuestas principalmente de
dominios repetidos de 106 aminoacidos de longilud. En (8) las mol&:ulas de
espectrina se han sombreado con platino. (A, adaplado de D.W. Speicher y
V.T. Marchesi, Nalure311:177-180, 1984; 8, porcortesfa de D.M. Shotton, can
penniso de D.M. Shotton, B.E. Burke y D. Branlon,!. Mol. Bioi. 131:303-329,
1979, CAcademic Press Inc.lLondon) Ltd.)

terior de la membrana celular del eritrocito, rnanteniendo la integridad eSlructu

ral y la forma bic6ncava de su membrana (vease Figura 10-22): si se ext rae el d-
toesqueleto de los fantasmas de erilrocilo en soluciones de baja fuerza i6nica, la
membrana se fragmenta formando pequefias vesfculas.
La espt::cuina es un heterodfmero formado por dos grandes subunidades es-
tructuralmente similares (Figura 10-25). Los heterodfmcros se autoasocian
cabeza con cabeza, formando lerrameros de 200 nm de largo. Las colas de cinco
o seis tetrameros se enlazan entre sf mediante su uni6n a filamentos conos de
actina y a otras protefnas ciloesquelthicas (entre eUas, la prote/na banda 4,1)
formando un "complejo de uni6n". EI resullado final es una red deformable que
se extiende pOl" tulia la superflcie citoplasmalica de la membrana (vease Figura
10-26). ESle citoesqueleto basado en la espectrina permite al eritrocito resistir el
esrres que sufre su membrana a medida que es empujado a traves de los esrre-
chos capHares. Ralones y humanos que poseen anomalfas geneticas en la espec
trina, presentan anemia y sus gl6bulos rajos son esfericos (en lugar de c6ncavos)
y anormalmente fragiles; la severidad de la anemia se incrementa con el grado
de deficiencia de la espectrina.
La protefna que es la principal responsable de sujetar el cilocsqueleto de es-
pectrina a la membrana plasm<1tica del eritrocito se identific6 mediante la uni6n
de cspectrina marcada radiaclivamente a membranas de gl6bulos rojos de las
que se habfan retirado espectrina y orras protefnas perifericas. Estos experimen-
tos demostraron que la uni6n de la espectrina depende de una gran prolefna in-
tracclular de uni6n Uamalia anquJrlna, que se une tanlO a la espectrina como al
dominio dloplasrn<1tico de la protefna transmembrana banda 3 (vease Figura
10-26). La anquirina conecta algunas moleculas de la protefna banda 3 a la es-
pectrina, unieodo asf la red de espectrina a la membrana; tambien reduce nota-
blemente la velocidad de difusi6n de las moleculas de banda 3 en la bicapa Iipf-
dica. EI ciloesqueleto de espectrina tam bien se une a la membrana a rraves de
otro mccunismo que dcpende t.I~ la prolefna banda 4,1 mencionada con anterio-
ridad. Esta prolerna, que se une a la especrrina y a la actina, tambien se une al
dominio ciloplasmatico de la proterna banda 3 y a la gillcoforina, la oua protef
oa transmembrana mayoritaria en los eritrocitos.
Por debajo de la membrana plasmatica de las celulas nucleadas exiSle una
red de dtoesqueleto analoga a la descrila, pero mucho mas elaborada y compti-
cada. Esta red, que constituye la regi611 c..:ortical (0 c6rtex) del dlOplasma, es rica

Protemas de membrana 525

161 ----""
 .etin. aducina

protefna npectrina
banda 4,1

tropomfo.in.

lAl gJucoforina
100nm

Agura 10-26 El cltoesqueleto basado en la espectrlna dellado

cltoplumitJco de la membrana del erltroelto humano. Dibujo esquemlitico
(A) y electronmicrograffa (B). La disposid6n que se muestra en (Al se ha
deducido principalmenle a partir de estudios sobre las interncciones in v;rro
de protefnas purifieadas. Los drmeros de espectrina asociadas cabeza-con-
cabeza forman tetrimeros que se haJlan unidos formando una red por medio
de complejos de uni6n compuestos de conos filamentos de actina (que
cOnlienen unos 13 mon6meros de actina), tropomiosinaque probablemente
determina 13 longitud de los filamentos de actina, proteina banda 4, I Y
aducina (aumentado en la casilJa de la Lzquierda). El citoesqueleto estli unido
a la membrana mediante la W1I6n indirecta de los letrlimeros de espectrina a
algunas protcfnas banda 3, a trav~s de moleculas de anquirina y tambi~n por
medio de la uni6n de la proterna banda 4,1 ala glucoforina {no se muestra]_
La electronmicrograffa de (B) mueslra eI citoesqueleto de la earn
clloplasmlitiea de la membrana del eritrocito despu& de su fijaci6n y tinci6n
negativa. La red de espectrina se ha estirado a prop6sito para pennitir
observar los detalles de su estruClura; en la d!lula normal, la trama mostrada
debe ocupar unicamente una decima parte de esta lirea. (B, por cones(a de T.
181
Byers y D. Branton, Proc. Nat!. Acad. Sci. USA 82:61536157, 1985.l

en filamemos de actina que at parecer se unen a la membrana plasmatica de nu-

merosas maneras, En el c6rtex de c~lulas nucleadas tam bien existen proternas
estructuralmente hom610gas a la espectrina, a la anquirina y ala protefna banda
4,1, perc su organizaci6n y funci6n no son tan conocidas como 10 son en los eri-
trocitos. El citoesqueleto cortical de celulas nucleadas y su interacci6n con la
membrana plasmMica se discuten en el Capftulo 16.

La glucoforina attaviesa la blcapa Iipfdica del gl6bulo mjo,

fonnando una h~lice a senciUa lO
La giucofortna es una de las dos protefnas mayoritarias que se hallan expuestas
en la superficie externa del g16bulo rojo humane y fue la primera prote!na de
memb.{ana de la que se pudo determinar su secuencia campleta de aminaaci
dos, Como la prore(na modele nansmembrana de la Figura 10-17, la g1ucoforina
es una pequef\a glucopcotefna transmembrana (131 residuos de aminoacido) de
paso unico que se halla colocada con la mayorta de su masa en la superflcle ex
terna de la membrana, donde se localiza su cola amino terminal hidrofflica. En
esta zona de la protefna se hallan unidos todos los carbohidratos (aproximada-
mente unos 100 residuos de azucar distribuidos en 16 cadenas laterates distintas
de oligosacaridos), que representan el 60% de la masa total de la molecula. De
hecho, la gran mayoria del total de carbohidratos de superficie del eritrocito (in-
c1uyendo mas del 909b del Acido siAUco, y por 10 tanto la mayor pane de la carga

526 Capftulo 10: Estructura de la membrana

negaliva de superficie de la celula) estl1n unidos a moJeculas de glucoforina. prolel~ Ir.n.membran.
EI extremo carboxilo terminal hidrofflico de la glucoforina esll1 expuesto ha-
cia el citoplasma. mientras que exisle un segmento a-helicoidal hidrof6bico
direa:i6n
de unos 23 aminol1cidos de longitud. que atraviesa la bicapa no polar (vease de frllCl.UrI
Figura 1O-16A).
A pesar de que en cada celuJa hay ml1s de un miJI6n de moleculas de gluco-
bicapa
forina, todavfa se desconoce la funci6n de esta g1ucoprotefna. De hecho, los in- IIpldica
dividuos cuyos erilrocilos carecen de esta protefna parecen estar pcrfectamentc
sanos. Aunque la g1ucoforina es exclusiva de los gl6bu[os rojos, su estructura es FRACTURA CON
CUCHILLA
representativa de una c1ase frecuenle de prmemas de membrana que atraviesan
la bicapa lipfdica en forma de helice a. Por ejemplo. muchos receplOres de su-
perficie penenecen a esta c1ase de prote{nas.

La banda 3 de la membrana celular del eritrocito es una protefna

de membrana multipaso que cataljza cl cotransporte ani6nico 12
cara de IrllCl.ura E carl de fractura P
A diferencia de 10 que sucede con la glucoforina. se sabe que la protelna banda 3 al detcubierto al descubierto
desempena un papel importante en la funci6n de la celula. Su nombre deriva de
la posici6n relativa que ocupa respeclo a las otras prote{nas de membrana en Figura 10-27 EJectTonmlerograffa
una electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (vease Figura LO-24). Como oblenJda tras erlorractura. EI dibujo
la glucoforina. la banda 3 es una protefna transmembrana. pero de mUltiple muestra c6mo esta lcemea orrece
Im~genes del Imerior hidrorobico de 1a
paso, que atraviesa la membrana en una confonnaci6n altamente plegada: at
mitad eitoplasm~liea(0
parecer la cadena polipepddica (aproximadamente 930 residuos de amino<1.cido protopJasmatica) de la bicapa
de longitud) atraviesa la bicapa hasl"a 14 veces. eada gl6buJo rojo contiene apro- (denominada cara P) y de la milad
ximadamente 10' cadenas polipeptfdicas banda 3. que {onnan dfmeros en la extema de la bicapa (denominada cara
membrana. E). Despu~s del proceso de
La principal funci6n de los gl6bulos rojos es la de transportar O~ desde los criofractura ilustrado aquf, IllS l;:llrllS de
pulmones hasta los tejidos y ayudar al transporte de CO 2 desde los tejidos hast a rractura se mctalizan con platino y
los pulmones. La prolefna banda 3 es de importancia crucial en [a segunda de carbOn, por digestion se elimina el
estas funciones. EI CO 2 es 5610 levemenle soluble en agua y por ello es transpor material org~nico y la r~plica de
tado por el plasma sangufneo en forma de bicarbonato (HCO;>. que se fonna y platino resullame se observa al
se rompe dentro de los g16bulos rojos par una el12.ima que catali.za la reacci6n microscopio electr6nico (~ase
tambi~n Figura 4-27).
HzO + CO z H HCOi + H'. La protefna banda 3 actua como un transportador de
aniones. que pennite que el HCO; cruce la membrana intercambiandose can CI-.
A) hacer que la membrana del eritrocito sea libremente permeable al HCOi. este
transponador incrementa la cantidad de CO2 que la sangre puede lIevar hasta los
pulmones.
Tras aplicar la tecnica de la criorractura (por la cuallas celulas son congela-
das en nitr6geno Hquido y el bloque resultante de hielo se fractura can una cu-
chilla) pueden verse at microscopio e[ectr6n.ico las protefnas banda 3 como par-

Rgura 10-28 Electronmlcrograffa de

crioraclun. de g16buJos roJos
humanO$. Observese que la rlf'nsidad
car. P de las partfculas inlramembrana es
superior en la cara protoplasmatica (P)
que en Is canl externa (E). (Por cortesia
de L Engstrom y D. Branton.)

car. E

Protemas de membrana 527

 plano de la fraetura Figura 10-29 Probables destlnos de
las molocuJas de g1ucoforina y de 10
81lua eldracelular protema banda 3 de la membnna del

_.do
cOr"Qelada
eritroc:llo durante 13 criofractura.
citoplasma
Cuando la bicapa Iipfdica se parte, 0 la

_.do
congailldo
milad inlerior 0 la milad exterior de
gJucofOliIlll cada protefna trnnsmembrana es
extrafda de la monocapa congelada a
la que esta asociada; la prolefna tiende
a pe.nnanf"Cf'r en 18 monoc:apa en 18
que se haUa la mayor parte de su
volumen. Por esta raz6n, las molkulas
de la protefna banda 3 nonnalmente
quedan asociadas a la earn de (ractura
interna (Pl; puesto que tienen
suficicnte masa por encima del plano
de (ractura, pueden observarse como
l>artfculas intramembrana.
NormaJmente las mol&:ulas de
CITOSOL
glucoforin8 pennanecen unidas a la
cara de (ractura exterior (El, pera se
cree que sus colas ciloplasmdticas
trw/as ;lItramembralla diferenciadas. HI plano de la fraclUra tiende a pasar a tra- lifm!'n una masa insuficienle para Que
v~s de la mitad hidrof6bica de los Ifpidos de la membrana, separando las mem- sean vistas.
branas en sus dos monocapas (Figura 10-27). Las caras de !raclura expuestas se
metalizan con platina, y la r~plica de platino resultame se observa al microsco-
pia eleclr6nico. Cuando se estudian de esta manera,las membranas celulares de
los eritrocitos humanos aparecen salpicadas de particulas intennembrana de ta-
mano relativamente homog~neo (7,5 nm de diametro) y dislribuidas al azar (Fi-
gura 10-28). Se cree que estas partfculas son principalmente mollkulas de banda
3: cuando se reconstituyen bicapas Iipfdicas sinteticas con mollkulas de protef-
na banda 3 y las bicapas se fracturan, se observan estas tfpicas particulas inter
membrana de 7,5 run. La Figura 10-29 ilustra la raz6n por la que par criofractura
de membranas celulares de gl6bulos rojos se observan las mol~ulas de banda 3
pero probablememe no las moleculas de g1ucoforina.
En el Capftulo II se considera c6mo una protefna transmembrana como la
banda 3 puede, en principio, pennitir el transporte pasivo de mol~culas polares
a traves de la bicapa no polar. Pero para un detallado conocimiento de c6mo
funciona realmente una prote(na transportadora se necesita la infonnaci6n
exacta sabre su disposici6n tridimensional en la bicapa. La primera protefna de
transporte en la membrana plasmatica de la que se conociemn estos dctalles es
una protefna denominada bacteriorrodopsi"a, que en la membrana plasmatica
de ciertas bacterias aCllla como una bomba de protones (H') activada por la luz.
La estructura de la bacteriorrodopsina es similar a la de muchas Olras proteinas
de membrana y merece que se Ie dedique un breve par~ntesis aquJ.

La bacteriorrodopsina es una bomba de prolones que atraviesa

F1sun 1030 D1bujoesquemliueode
la bicapa en forma de siele helices 0. 13 la bacteria lIalobat:rerium haJoblum
La ~membrana purpura" de la bacteria Halobacterillm Italobillm es una mancha que muestra las manchas pWpUJ'll de
especializada de la membrana plasmatica Que coniiene un unico tipo de mole- membrana que conUenen las
cula proteica,la bacteriorrodopslna (Figura 10-30). Cada mollkula de bacterio- molecutas de bacteriorrodopslnL
Eslas bacterias, que viven en aguas
rrodopsina contiene un unico grupo Que absorbe la 102, 0 crom6oro (denomi-
s:tlohre.o; c10ncle se hallan expuestas a
nado retina!), Que da a la protefna su color purpura; el retinal est<'i relacionado
grandes cantidades de luz solar, han
con la vitamina Ayes identico al crom6foro encontrado en la rodopsina del bas- dcsarrollado una gran canlidad de
toncito retiniano de los venebrados (se discute en el CapflUlo 15). El retinal estA protefnas activadas por la luz,
unido covalentemente a un residuo de lisina de la proterna; cuando es activado inc1uyendo la bacteriorrodopsina que
por un fot6n de luz, el crom6foro excitado cambia inmediatamente de forma es una bomba de protones activada
provocando una serie de pequenos cam bios conformacionales en la protefna, 10 por la luz presente en su membrana
que da lugar a la transferencia de uno 0 dos H' desde el interior hasta el exterior plasmlltlca.

528 CapftuJo 10 : Estructura de la membrana

 Figura to31 Estructura
tridimensIonal de una moikub de
baeteliorrodopsina. La cadena
pollpeptfdlca cruza Ja blcapa en forma
de siete hilices a. Se muestra la
localizaci6n del crom6foro y el
CITOPlASMA
probable camino que siguen los
protones durante el cido de bombeo
activado por la Iuz. Se cree que al ser
activado por un fot6n. el crom6foro
pasa un II' a la cadena lateral del
acido aspartico 85 (esfera rosa
marcada 85). Posteriormente, se cree
que otras tres transrerencias de H'

'om '"-==: completan el cicio -desde el addo

aspartico 85 a1 espacio extraeelular,
dt:l>de eI acillo asp4nlco 96 (csfem rosa
marcoda 96) a1 cromMoro y desde el
dtosel al addo aspMtico 96 (vt!ase
Figura 1436). (Adaptado de R.
Henderson et al). MoL BioL 213:899-
929,1990.)

ESPACIO
EXTRACElULAR

de la ceJula (~ase Figura 1436). Baja luz brillante cada mol~cula de baeteriorro-
dopsina puede bombear varios cientos de protones por segundo. La transferen-
cia de protanes impulsada pot la luz establece un gradiente de H- a trav~ de 1a
membrana plasm,h..ica, que a su vez impuJsa la sfntesis de ATP pot una segunda
proteina de la membr:ma plasm:1lica de In celuJa. Asf 18 bacteriorrodopsina cs
parte de un transductor de energfa solar que provee a la relula bacteriana de
energfa.
Para poder comprcnder la funci6n de una protema transmembrana multi
paso a rtivel molecular, sera. necesario locali~r con precisi6n cada uno de sus
atamos, 10 cual generalmentc requierc estudios de difracci6n de rayos X de
grandes cristales tridimensionales de In prolefna. Dada su naturaleza anfipMica.
estas prote(nas son extremadamente dif(Ciles de cristalizar. Sin embargo, las nu-
merosas molk:ulas de baeteriorrodopsina de la membrana purpura estan orde-
nadas en forma de un cristal bidimensional planar, 10 que ha hecho posible de-
terminar su estructura tridimensional y su orientaci6n en la membrana, hasta
una resoluci6n de 0,3 nm, por medio de una aproximaci6n altemativa que usa
una combinaci6n de microscopia electr6nica y an:llisis de difrncci6n clcctr6ni-
ca. Esle procedimiento (denominado crislalograjIa elecrronica) es anl1Jogo al es-
tudio de los cristales tridimensionales de proteinas solubles mediante el anaJisis
de la difracci6n de rayos X. aunque por dicho m~todo se obtienen menos deta-
lies estrueturales. Como se i1ustra en la Figura 10-31, estos estudios han demos-
trado que cada molk:ula de bacteriorrodopsina estl1 plegada en siete Mlices (l
densamente empaqueladas (cada una de unos 25 aminoacidos) que pasan en
angulo mas 0 menos recto a traves de la bicapa lipfdica.
La bacteriorrodopsina es un miembro de Wla gran superfamilia de prolefnas
de membrana, de estructuras similares pero can funciones diferentcs. Asf por
ejemplo, la protefna receptora de luz, rodopsina, de los bastones de la retina de
vertebrados y muchos receplores proleicos celuJares de superficie que se unen a
mollkulas mensajems extraceluJares. tambi~n est~ plegados en siete hilices (X

Protefnas de membrana 529

 '81

mon6mero. de perina

membrana

J bactarlana
aKtarna

transmemhrana. Estas protefnas no actuan como transportadores sino como FlgurnlO-32 Estruetura
transductores de sefiales; cada una responde a una sefial extracelular activando trldlmenalonal de un trimero de
otra protefna dentro de la c~lu1a, la cual genera una sefial qufmica en el dtosol. porto. de Rhodobtu:ter CApsulahu
como se discute en el Capftulo 15. detennlnado porcri$Wognffa de
rayos X. W Cada mon6mero consiste
en un bamlll de 16 cadenas
Las porlnas son prote(uas transmembrana formadoras de antiparalelas que (orman un canal
canales que cruzan la membrana en forma de un barril JJ 14 transmembrana Ileno de agua. (B) Los
mon6meros se asocian apretadamente
Como se discuti6 con anterioridad, algunas protefnas transmemhrana multipa- formando trfmeros, los cuaies poseen
so no tienen sus segmenlOS transmemhrana organizados en forma de h~lices (l tres canales separados para la difusi6n
sino de una lamina ~ cerrada (un barril ~). Los ejemplos mejor estudiados de de solutos pequefios a travtls de la
este tipo de prote(n~" "nn las porinas. que se encuentran en la membrana exter- membrana bacteriana eXlema. Una
na de muchas bacterias. Estas protefnas pertenecen a un pequeno grupo de pro- larga espiral de la cadena polipeptfdica
tefnas transmembrana cuya estruetura at6mica ha sido determinada completa- (se muestra en raja), que conecta dos
mente mediante eristalograffa de rayos x.. cadenas Il. se proyeeta hada eJ interior
Muehas baeterias, entre elias coli, tienen una membrana extema que rodea del lumen de carla canal.
su membrana plasmatica (v&se Figura 11-14). La membrana externa esta perfora- estrech4ndolo hasta fonnar una
secci6n tranlIversai de 0,6)( 1nm.
da por varia!> parinas fonnadoras de canales. 10 que pennite a detenninados solu-
V\daptado de M.S. Weiss et al. FEBS
tos h..idroffficos de hasta 600 daltons difundir a tra~ de la bicapa Lipfdica externa. Leu. 280: 379-382.1991.)
Las porinas (y las protefnas fonnadoras de canales relacionadas estrueturalmente
con elias de la membrana de mitocondrias y cloroplastos) tienen una lamina ~ en
tugar de una helice ex como estructura transmembranosa primordial.
La estructura at6mica de una porina aislada de la membrana externa de una
Meteria rotosint~tica se determin6 mediante cristaJowaffa de rayos X en J 990.
Consiste de un trfmero en el que cada mon6mero fonna un barril ~ tubular, que
atraviesa la bicapa Iipfdica y canriene un canallieno de agua en su centro. EI ba-
rril estil formado a partir de 16 cadenas antiparalelas de l&nina p, que se curvan
10 suficiente como para fonnac una estruetura eiUndrica (Figura 10-32). Cadenas
palaces laterales revisten el interior del canal aeuoso, mientras que cadenas no
polares se proyectan desde el exterior del barril interactuando con el nucloo hi-
drof6bico de la bicapa lipfdica.

530 Capftulo 10: Estructura de la membrana

 Figura 1033 Estrnctura
tridimensional del centro de reacd6n
rotoslnt~tlcode la bacteria
Rhodopseudomonas viridis. La
estnlctura se determin6 par amilisis de
difraccl6n de rayos X de cristales de
este complejo proleico
lransmembrana. EI complejo esta
formado par cuatro subunidades, 1.. M,
H Y un cltocromo. Las subunidades L y
M forman el nudeo del centro de
reacci6n y cada una contiene cinco
helices (l que atraviesan la bleapa
Iipfdica La localizaci6n de varias
coenzimu rranspanadoras de
electrones se muestra en negro.
(Adaplado de un dibujo de J.
Richardson, basado en datos de J.
Deisenhofer, O. Epp, K. Mild, R. Huber
y H. Michel, Nature318:618-624, 1985.)

Las prote(nas de membrana acwan a menudo

como grandes complejosl5
Hasta la fecha la mas compleja estructura de una protefna transmemhrana que ja
mas ha sido cstudiada mediame crislalograffa de rayos X es el centro de reacci61l
!otosinrerico hacleriano, cuyn estruclura at6mica se defini6 en 1985. Los resultados
de estc anaIisis fueron de importancia general en la hiologfa de memhranas par
que dcmostraron par primera vez que multiples polipeplidos pueden asociarse en
una membrana formando una compleja maquinaria proteica (Figura 1033). En el
Capftulo 14 disculimos c6mo acluan eSlos complejos folosintelicos capturando la
energfa lumfnica y us:1ndola para bombear H' a traves de la membrana. A menudo
las prole{nas de membrana estan dispuestas forrnando grandes complejos, no
wlo para captar varias formas de energia, sino tambien para transducir las senaJes
extracelulares en intracelulares (10 Cllal se discute en el Capitulo 15).

Much.. protemas de membrana difunden en el plano

de la membrana l6
Como ocurre con los Upidos de membrana, las pWlenas no saltan (j1ipf1op) a
traves de la bicapa, sino que giran alrededor de un eje aproximadameme per-
pendicular al plano de la bicapa (difwi6n rotaciona/). Ademas, muchas proler-
nas de membrana son capaces de desplazarse lateralmente por la membrana
(difusidn latera/). La primera evidencia de que algunas protenas de la membra
na plasmaLica son m6viles en el plano de la membrana fue obtenida en 1970
mediante un experimento en el que se rusionaron artil'icialmente reluJas de ra-
t6n con cl!lulas humanas, produciendo cl!luJas hibridas (heterocorionres). Para

Protefnas de membrana 531

distinguir las protefnas de membrana plasmatica de rat6n de las humanas se
utilizaron dos anticuerpos con distinlO marcaje. Aunque al principio las protei-
nas de rat6n y las humanas estaban confinadas a su propia mitad del heteroca-
rlome reclt!n formado, las dos ciases de protefnas difundieron y se mezciaron
ocupando. a la media hora, toda la superficie del heterocarionte (Figura 10-34).
Poco despues Sf obtuvieron otras evidencias de la movilidad proteica de la
membrana gracias al descubrimiento de los procesos lIamados agrupamiento
(patching) y formaciDn de caperuzn (capping). Cuando los Iigandos. como los
anticuerpos. que tienen mM de un lugar de uni6n (par ella lIamados Iigandos
mulltlJQlemes) Sf unen a protefnas espedficas de la superficie celular. las protei-
nas tienden a agregarse. mediante enlaces cruzados, formando grandes grupos
(patches), )0 cual indica que las proteinas son capaces de desplazarse lateral-
mente por la bicapa Iipfdica. Una vez ronnados los agregados en la superficie de
una c~luJa capaz de moverse, como un leucocito, son trasladados activamente a
uno d~ los palos celuJares. formando una caperuza (0 ~cap", Figura 10-35).

C~LULA Cl:LULA protelna Y

DE RATON HUMANA ~ de membrana

proteloe de
membr.n.
V prolel", de
IFUSION CElUlAR membren.
- - protafn. )(
de membrana

~ adlCi6n d nticuerpoe
AGRUPAMENTo .n~X

HETEROCARIONTE
1
grupode
pfoteinal X

.nlicuerpos I AI contre enlic:uerpol lAl contra

proteIn. de membf".oe e protelnllS de membrana
de rat6n, mercedOI con humane, me:edo. con
FORMACIONI
nuorescencll leI >-e rodamlna leI DE UNA
CAPERUZA

tiempo. 0 mlnutOI

INCUBACION A 37"C caperwa de

proteIn.. X

Figura 10-35 Agrupamlentoy

fonnad6n de una caperuza de una
protefna de la superflde a!lular en un
tiempo l minutos leucoclto. Los anticuerpos bivalentes
enlrecruzan las molOCulas proteicas a
Figura 10-34 Experimento que muestra 18 mezclade protefnu de membrana las que se unen. Esto hace que estas
plaMniitica que se produce en dlulu hfbrldas rat6n-humanas. Inicialmente las moloculas formen grandes grupos, los
prolefnas de rat6n y las protefnas humanas est"n con6nadas a sus proplas mitades de la cuales son arrastrados activamCntC
membrana plasmatica del heterocarionte reden fonnado, pero se van entremezclando. hacla el extremo posterior de la celula
Los dos anticuerpos que se usan para visualizar las protefnas se pueden distinguir en un y ronnan una "caperuza. EI.
microscopio de f1uorescenda dado que la fluorescefna es verde y la rodamina es roja. centrosoma, que gobiema la polaridad
{Basado en observadones de LO. Fryey M. Edidin,J. Cell SCi. 7:319-335, 1970, con la antero-poslerior de la celula, se
autorizaci6n de The Company of Biologists.) mueslra en Ilamllja.

532 Capftulo 10: Estructura de la membrana

 .............. ~ MARCil,
~

I
BlANOUEO

1
Itt
~~~ I
Ie)
liempo_

FIgura 1D-36 MedlckSn de la

veJoddad de difusl6n lateral de una
"U"~'"9_ ~ prolena de membrana plasm'tka,

~~
mediante la Iknlca FRAP. Una
prolefna espec{fica se mares. sabre la
superficie de la celula, con un
anticuerpo monovalenle nuorescenle
que se une sola mente a esta protefna
1 RECUPERA,CI6N I (para simpUficar. no se muestran Olras
protefnas). Lucgo se blanquean los
anticuerpos de una pequena area

ulilizando un biser, la intensidad de 1a
nuorescencia se va recuperando a
medida que la molOOtlas blanqueadas
I., 18) difunden hada el resto de Ja supert'icie
celular y que las moleculas no
blanqueadas difunden a la zona
La velocidad de difusi6n lateral de las proteinas de membrana puede medir- iluminada con ell{iser. (Vista lateral en
se utilizando la tecnica de rccllperaci6n de fluorescellcia despues de [Ofobianquea- A y superficial en B.) (e) Grllfico que
miento (FRAP, de Fluorescence Recovery After Photobleaching). Habitualmente muestra la velocidad de rccupcraci6n,
este metoda camparta el marcaje de 13 proteina de superficie que se prelcnde Cuanlo mayor es el coeficiente de
estudiar. con un Iigando especffico nuorescentc. como un anticucrpo Ouares- difusi6n de la prolefna de membrana,
centc. (Es imponante que se utilicen los fragmentos monovalenlcs de los anti- mayor es la velocidad de recuperaci6n.
cuerpos, que 5610 poseen un Jugar de uni6n al antfgeno, para evilar la rormaci6n
de enlaces cruzados entre moleculas vecinas.) wego, elligando Ouorescente es
blanqueado en una pequci'la oirea mediante un rayo l:iser, y se mide el tiempo
que tardan las protefnas de membrana adyacentes que transportan mol~ulas
de anticuerpo fluorescente no blanqueadas, hasta difundir en el area blanquea-
da (Figura 10-36). A partir de estas mediciones se puedcn caJcular los cocficien-
tes de difusi6n de la protc(na de superficle celular que habfa sido marcada. Los
valores de los coeficientes de' difusi6n para las diferentes prOlefnas de membra-
na en celulas diferentes son muy variables, pero estan tfpicamente comprendi-
dos entre una decima 0 una centesima parte de los valores correspondientes
para las molecuJas de fosfolfpidos de la misma membrana.

Flgun. to-37 Dlagr-ama de una ct!!luJa epilellal en el protei.". A

que see rnuestn. como una protefna de membn.na
plasmaUca see haJla connnada en un dominio
membrana
particular de la membrana, La protcfna A(enla zona plasmjllea
apical de la membrana) y la protefna B(en la zona apical
basal y basolaterall pueden dlfundir laleralmenle en membrana
sus dominios respeclivos pem no pueden entrar en el prOlelna B
pla5m'lice
Olm, en parte debido a la uni6n celular especial lat8f1l1
denominada unldn estrecha 0 estanaJ. 19ualmenle,
las molOCulas Iip[dicas de la monocapa exterior (no
ciloplasml1lica) de la membrana plasmatica, tampoco
pueden difundir entre ambos dominios, pem los
Irpidos de la monocapa inlerior (ciloplasmatica) s[
I
pueden haccllu (IIU ~ muestra), Ijmina Dasel

Prote[nas de membrana 533

 Figura 10-38 Tres domlnlos de la membrana
plasmdOca de esperma de cobaya, deflnidos perte anterior
] de Ie ClIbele
medJante antJcuerpos monoclonales. (A) es
Ull t:S({ut:llla ul;ll;lspt:rma de cobaya y cada uno
perte POlteriw
] de Ie eebeze
de los Ires pares de micrografIas (8), (e) y (0)
muestra una tinci6n inmunoOuorescente de
superfieie celuJar utilizando diferentes
anticuerpos monoclonales (a la derecha) junto
a una micrograffa de oontraste de fase de la
misma celula (a la izquierda). 1 anticuerpo
utilizado en (8) 5610 marca la eabeza anterior
del espennalozoide, el de (C) 5610 marea la
pane posterior de lacabeza yel de (D) 5610
marca la cola. (Cortesia de Selena Carroll y
Diana Myles.) IA)

Las c~lu]as pueden confinar a IIpidos y a protemas

en dominios especfficos de la membrana l7
8 reconocimiento de que las membranas biol6gicas son Ou.idos bidimensiona
les constituy6 un gran avance en la comprensi6n de la estructura y de la funci6n
de la membrana. Ha quedado claro, sin embargo, que la representaciOn de la
membrana como un mar Iipfdico en el cual tOOas las protefnas flotan libremen-
te, es una sobresimplificaci6n. Muchas c~lulas tienen sistemas que les penniten
lirnitar sus protefnas de membrana en dominios especfficos de la bicapa lipidica
continua. Por ejemplo, en c~lulas epiteliales como las que revisten el intestino 0
los tt1bulos del rif16n, cienas enzimas de la membrana plasmc1lica y algunas pro-
ternas de transpone estc1n Iimitadas a la superficie apical de la c~lulas mientras
que ouas protefnas se hallan confinadas a las superficies basal y lateral (Figura
10-37). Esta distribuci6n asimetrica de las protefnas es a rnenudo esencial para
la funci6n del epitelio, como se discute en el Capitulo II. La composici6n Iipidi-
ea de estos dos dominios de membrana tambi~n es diferente, 10 cual demuesrra
que las celulas epiteliales pueden evitar la difusi6n de las moleculas lipidicas y
protelcas entre los domlnlos. Experimentos con !ipidos marcados, no obstante,
sugieren que s610 estc1n confinadas de esta manera las moleculas Iipfdicas de la
monocapa externa. Se cree que la separaci6n tanto de moleculas de prole(na
como de moJElculas Jipfdicas se mantiene, aI menos en parte, por las barreras
formadas por un ripo especffico de uniones intercelulares (IIamadas wliolles es-
trechas 0 estancas, discutidas en el Capftulo 19). Esta claro que las protefnas de
membrana que forman estas unlones Intercelulares no pueden dlfundir lateral-
mente entre las membranas que estdn interactuando
Una celula tambien puede crear dominios de membrana sin utilizar uniones
inlercelulares. El espermatozoide de mamfferos, por ejemplo, es una celula aisla-
da que presenta varias zonas estructural y funcionalrnente distintas delimitadas
por una membrana plasm~tica continua. Cuando se observa un espermalOzoide
por microscupia de IrllnunoOuorescencla utUlzando dlferemes antlCuerpos que
reaccionen con antfgenos de superficie, se constata que la membrana plasmc1tica
presenta aI menos tres dominios diferentes (Figura 10-38). En algunos casos, los
antfgenos son capaces de difundir dentro de los Iimites de su propio dominio: se
desconoce c6mo se evita que abandonen dichos dominios.
En los dos ejemplos que se aeaban de considerar, tanto la difusi6n de las
moleculas de Ifpidos COIllU la lit: proldnas t::Han cunIinada a domlnlos especlall-
zados dentro de una membrana plasmatiea continua. Las celulas tambien tie-
nen sistemas mas drnsticos para inmovilizar cienas protemas de membrana.
Uno de eUos es[~ c1aramente representado en la membrana pliIpura de Halo-,
bacterium. Alii las moleculas de bacteriorrodopsina se ensamblan formando
grandes cristales bidimensionales en los que las moleculas proteicas individua-
les est6.n relativamente fijas unas respecto a las otras; los gnuu.ll:s agrt:K<Hlus de

534 Capitulo 10: Estructura de la membrana

 Figura 10-39 euatm sistemas medlante)os cuales se puede restringlr la
movUklad lateral de detennlnadas proteinas de membrana plasmll.tlca.
Las proteinas pueden aUloensamblarse formando grandes agregados
(como en el caso de Ja bacteriorrodopsina en la membrana pUrpura de
Halobacterium) W; pueden estar rrabadas por interacciones con agregados lAl
macromoleculares del exterior (D) 0 del interior {C} de la celula, 0 pueden
interactuar con prOlefnas de la superficie de otra celula (D).

eSle tipo difunden Illuy lentamellt~. VII sisL~ma mas eumlln de rcsrrlngir la mo-
vilidad lateral de prote(nas de membrana especfficas consiste en unirlas a en-
samblajes macromoleculares del interior 0 del exterior de la c~lula. Hemos visto
romo algunas protemas de la membrana del eritrocito estl1n ancladas aI citoes
queleto interior, en OtrOS tipos celulares, las prote(nas de la membrana plasmati-
,.,
ca pueden anclarse al ciroesqueleto 0 a la matriz extracelular 0 a ambos. En la
Pigura 10-39 se resumen los cuatro sistemas de imnuvilizar prut~inas espedfieas
de membrana.
rei
l8
La superficie celular esta recubierta con residuos de azl1c.ar
Las prote(nas de membrana, por regia general, no sobresalen desnudas al exte-
rior celular, sino que esti1n decoradas, cubiertas 0 escondidas pur carbuhiuratus
presenles en la superficie de lodas las c~lu1as eucariotas. Estos carbohidralOS se
encuentran en rorma de cadenas de oligosacarido unidas covalenlemente a las
prOle[nas de membrana (glucoprote(nas) ya Irpidos (g1ucolfpidos) y como cade-
nas de polisacaridos de molkulas proreoglucanos inregrales de membrana. Los
proteogJucanos, que consisten en largas cadenas de polisacaridos unidas cava
Icntcmente a un nucleo proteico, se encuentran principalmente en eJ exterior
celular como pane de la malriz extracelular (discutida en el Capitulo 19); pem
en el caso de los proteoglucanos inlegrales de membrana, el nucleo proteico se
eXliende a lraves de la bicapa lipfdica 0 esla anclado a la bicapa mediante un
g1ucosilfosfatidWnositol (GPl).
E1termino cubierra ceJular 0 gJucocdliz se utiliza a menudo para describir la
zona de 10 superficic celular rica en ca.rboh.idralos. Esta zona puede ser visuali-
zada por medio de diversos colorantes, como el rojo de rmenio (Figura 10-40), 0
tambi~n por su afinidad a prote(nas que se unen a carbohidralos, Ilamadas lectJ-
nas, que pueden ser marcadas con una tinci6n fluorescente u otro marcador vi-
sible. A pesar de que la mayor parte de los carbohidratos est'an unidos a moltku-
las inlT(nsecas de la membrana plasmAtica, habitualmente el glucocaliz contiene
odem6.s glucoprotcfnos y protcoglucanos que han sido secrctados al espacio cx-

glucocjlil ciloplasma nUcleo Flgum 10-40 lacublertacelular,o

g1ucocMiL Electromicrograffa de la
superfide de un Iinfocito COnll'lt.~faclo
con rojo de rutenio para mostrar la
cubierta celular. (Por cortes!a de A.. M.
Glauert y G. M. W. Cook..)

200nm

Prolc(nas de membrana 535

 glucoprote!nll glucoprOlefnll Figura 1041 D1agramaslmplificado
IfllnSmembrenll edllOrbida
de lacublerta celular (gIucoc8llzl. La
residuo de IlIlIcal cubierta cehilar esta fonnada por las
cadenas laterales de oligosacaridos de
los glucolfpidos y de las glucoprotefnas
cubier1'
celuillf intcgrales de membrana y por cadenas
Iglucocjlizl de polisaclridos de protooglucanos
integraJes de membrana. Ademas, en
muchas celulas los proteoglucanos y
g1ucoprolcmas adsorbidos {no
mostrados aquO oontribuyen a la
fonnaci6n del glucocatiz.. N6tese que
todos los carbohidratos se hallan en la
superficie no citoplasmatica de la
membrana.

uacelular y que luego son adsorbidos en la superficie celular (Figura 10-41). Mu-
chas de estas macromohkulas adsorbidas son componentes de la matriz extra-
celular, de forma que ellJmite donde termina la membrana plasmthica y donde
se inicia la mauiz extracelular es s610 una cuesti6n semantica.
Las cadenas laterales de oligosacaridos de las glucoprote(nas y de los glucolJ-
pidos son extremadamente diversas en cuanto a la organizaci6n de sus azucares.
A pesar de que habitualmente contienen menos de 15 residuos glucfdicos, eSlos
residuos eSlan a menudo ramificados y los azucares pueden estar unidos entre sf
mediante diversos enlaces covalentes. Esta distribuci6n es c1aramente diferente
de la de los residuos de aminoacidos de una cadena polipeptidica, que eslan
unidos por uniones peptfdicas id~nticas. AI unirse entre sf, tres residuos gIucfdi-
cos pueden incluso formar cienlos de lrisacciridos diferentes. En principio la di-
versidad y la posici6n expuesta de eslos polisac<iridos en la superficie celular les
hace especialmente indicados para lomar parte en procesos de reconocimienlo
celular, pero durante muchos aflOS ha existido poca evidencia de eSla presunla
funci6n. Parecfa ser que el papel de la cubierta celular podfa ser meramente de
protecci6n frcntc a daiio mecanico y qUfmico y de mantener objelos extra nos y
otras c~lulas a distancia, impidiendo indeseables interacciones prote(na-protef-
na. De hecho. es probable que ~sta sea una parte importante de Sll funci6n. Re-
cielHemente, sin embargo, se ha determinado que las lectinas lInidas a membra-
na plasmatica reconocen oligosacaridos especfficos de glucolfpidos de la
superficie celular, mediando asf diverg~s proeesos transitorios de adhesi6n celu-
la-celllla, entre los cuales se cuentan los que aeurren en las inleracciones esper-
ma-6vulo. coagulaci6n sangufnea, reeireulaei6n de linfocitos y resplicstas inlla-
matorias.

Las selectinas son protemas de membrana que se unen

a carbohidratos de la superficie celular y que median
adhesiones celuJares transitorias en el torrente sanguineo l9
Uno de los ejemplos mejor comprendidos del reconocimiento protefna-carbohi-
dram se dOl en las respuestas innamatorias. cuando los Linfocitos (de la c1ase de-
nominada lIelltrdfilos) son reclutados desde la sangre hacia una zona de inlla-
maci6n en un Icjido. usualmente para ayodar a combatir una infecei6n local.
Inicialmente, los neutr6fi1os se adhieren suavemente a las relulas endoteliales
que limitan los vasos sangufneos de la zona y poslerionnente se adhieren mas
fuertemente y migran fuera de los Yasos sangu(neos. arrasu.indose entre las re-
lulas endoteliales adyacentes. EJ inicio del proceso de adhesi6n implica el rceo-
nocimient'o prolefna-carbohidrato. Los mediadores qufmicos locales Iiberados

536 Caprlulo 10: Estructura de la membrana

 glu<:oproteln.
glucolipido
oligosac.6rido

-
dominlo lectin.
dominio tem.ianl EGF
> dominlo. repetldo.
SElCTlNA P

'A) 'BI
Figura 1042 La Inleraccldn protefna-carbohldrato que lnlcla la adhesldn
tran,ltoria de neutr6rnos al.. c:4lullUi endoteUaJes en las zonas de lnDamacl6n.
(A) El dominio lcelina de una P-selectina se une a1 oligosac4.rido espedfioo
moslrado en (8), que esui presente lanto en la gluooprotefna de la superfide cOOt<
celular como en las mol&:ulas de g1uoolfpido. EI dominio lectina de las selectinas lei
es hom61ogo a los dominios lectina encontrados en muchas otms prolefnas
animales que se unen a carbohidralos; dado que la uni6n a sus Ugandos giucfdicos
requiere Ca 2-. se les llama {duns de tipo C En (0 se muestra la eSlruClura
tridimensional de uno de estos dominios lectina, detenninado por cristalograffa de
= =
rayos X; su enlace glucrdioo aparece de color azul. Gal galactosa; GIcNAc N-
= =
acelilglucosamina; Fuc ruoosa; NANA 4cido sialico.

por las c~lulas en el IUj;1;ar de la inflamaci6n seiializan a las celulas endoteliales

de la regi6n para que expresen una g1ucoprote[na transmembrana denominada
P-seleeti/lO, que pcrtenece a la familia de moleculas de adhesi6n celula-celuJa
lJamada selectlnas. Las selectinas contienen un dominio leclina de uni6n a car-
bohidratos, en el extremo de un ensanchado ~tallo" proteico que se extiende
desdc la superficic ccluJar (Figura IO42A). EI dominio de lcclina de Ja P-selecti-
na reconoce ci oligosacdrido especffico, como se muestra en la Figura 10-428.
Dado que este oJigosac<trido se expresa en las lJlohkulas de glucoHpido y de gJu-
coprotefna de la superficie de los neutr6ftlos, estos se adhieren especfficamente
a las celulas endoteliales que Iimitan los vasos sangufneos de la zona in flam ada.
La uni6n de cada dominic de lectina a su oligosac<trido especffico es de rela-
tivamenle baja actividad y al parecer tanto la asociaci6n como la posterior disa-
ciaci6n de dicha uni6n, ocurren n1pidamente. Ello pennite a las selectinas unir a
las paredes de los capilares las celulas sangufneas en tninsit'o, permitiendo al
mismo liempo que las celuJas adheridas, impulsadas por el flujo sangufneo, sc
desplacen a 10 largo del endOlelio hacia la zona inflamada. Este desplazamienlo
continua haSla que Olro mecanismo de adhesi6n celuJa-celuJa, mediado por un
tipo distinlo de prolefnas transmembrana, denominadas i1ltegrinas (discutidas
en el Capfrulo 19), se activa y refuerza la adhesi6n, permitiendo a los ncutr6filos
detener sus movimienlO y arrastrarse fuera de los capilares sangufneos hacia el
lejido. Cuando los Linfocitos migran fuera del torrente sangu(neo hacia el n6ctulo
linf<ttico tiene lugar una secuencia de eventos de adhesi6n simiJar med.iada por
selectinas e integrinas (vease Figura 239).
Diversas selectinas se expresan en la superficie de los leucocitos, plaquel3S y
celulas endoteliales, panicipando en una amplia gama de interacciones transi-
torias celula-celuJa dentro del torrente sangufneo.

Prolemas de membrana 537

Resumen
Mlentras qm la bialpa IIptdlctJ detennlnn la estruetunll bdslca de hu membranas
bio~ las proteltUU SOfi Ius TeSfNrlSUbles de la mayorla tk las ftmclones de 1m
membranas, adUando de receptores espedfkos, enzimas 0 prote{1UJ$ de transporte
y arras mm:hasfundones. Muchas prote{nlU de membrana atravieulII la blcapa II-
pfdiaJ: en algfUuu de eslas prou{nas transmembrana Ia t:iUU?na th polipepridos
crum la blcapa como Ima l,iUce a dnica (prote{ruu de paso dnico)j en otras, inclui-
das hu responsables thl transporn transmembrana de lones y otras pequeRas mo-
lkuw solublu en agua. ~ eadelra pullpt:ptldial cruza fa blcapa uarilU veces, ya
$Men serlesth hilicuo: a como ltfmiruu p enfomuJ thun barril cerrtUlo (prote{1UJ$
de paso mdltiple). Drras prou{ruu a.socUJdas a la membrana no atrn"leson la biM
pa peru en Mmblo se hallan unldas a una Mm u otra tk Ia membrana. Muc#UU tk
estas prote{nQS se unen a prote{ruu trnnsmembrana mediante interacclones no co-
valentes. pero arras estdn unld4s por medlo de la uni6n covalente a grupos UpUli
cos. Como oc;-urn am las molkulus Upldicas de In blcapa, muchas prote(nas de
membrana son capaces de difundir rtfpldamente en el plano de la membrana. Par
otro lado, las dlulas tlenen sistemas para InmovUlzar prote{ruu espee{jicas de
membrana y para conflnar lamo prou{nas de membrana como molklltns lip{dicas
a domin/os particulares de una bicapa IIpidica continua.
fn la membrana phumdllca de lodas las dluhu eucarlotlU, Ia mayorla de
las prote{nas que qlUdall al descubierto wbre In 6uperflcle celular y algunas de las
molkulm lipUlicas de la monocnptJ UpfdlctJ merna tienen cadenas de oligosacdrl-
dos unldtu coualentemente. Algunas numbranQS plasmdtictu ramblen contknen
moliadas Integrates tk proteoglucanos con auknas de pollsacdrldos erpuntas a
la superJfcie. Esta cubierta de azdcares ayuda a proteger fa superJfcle celular del
dano mt'Ctfnioo y qu{mlco, y algunas de hu cadenas th oligosactfrldos son reconoc;-I-
das por prote{ruu que se mum a carbolddl'atQS de In sIIpt:rJlcie cehllar (lectlnas) ql#
intervlenen en procesos de atlhesi6n dhlla-dlula. espec{jlcos y transilorios.

Bibliograffa 2. Bangham, A.D. Models of cell membranes. In Cell

General
Bretscher, M.S. The molecules of the cell membrane. Sci.
Am. 253(4):100-109. 1985.
Gennis, R.B. Biomcmbrnncs: Molecular Srrucrure and Func-
tion. New York: Springer-Verlag, 1989.
'ain, M.K. Introduction to Biological Membranes. 2nd ed.
New Yon::: Wiley, 1988.
Singer, 5.1.; Nicolson, G.L The fluid mosaic model of the
stnJClUre of cell membranes. Science 175:720-731, 1972.
Cit. .
3. Brelscher, M.S.; Munro, S. Choleslerol and the Goigi ap-
1. Ceve, G.; Marsh, D. Phospholipid Bilayers: Physical
Principles and Models. New York: Wiley, 1987.
Quinn, P.I.; Cherry, R.I., eds. Structural and Dynamic
Properties of lipids and Membranes. London: Port-
land Press, 1992.
Tanford, C. The Hydrophobic Effect: formation of Mi-
celles and Biological Membranes. New York: Wiley,
1980.
Vance, D.E.; Vance, J.E., eds. Biochemistry of Upids. li-
poproteins and Membranes, New Comprehensive
Biochemistry, Vol. 20. New York: Elsevier, 1991.
van Meer, G. Lipid traffic in animal cells. Armu. Rev. Cell
Biul. 5:247-275,1969.
Membranes: Biochemistry, Cell Biology and Pathol-
ogy (G. Weissmann, R. Claiborne, eds.), pp. 2434.
New York: Hospital Practice, 1975.
Devaux, P.F. Upid transmembrane asymmelry and flip-
flop in biological membranes and in lipid bilayers.
Curro Opirl. Stmet. Bioi. 3:469-494,199:1.
Edldin, M. Rotational and laiera! diffusion of membrane
proteins and lipids: phenomena and funclion. Curro
Top. Membr. Tramp. 29:91-127, 1987.
Kornberg. R.D.; McConnell. H.M. Lateral diffusion of
phospholipids in a vesicle membrane. Prot. Nad.
Acad. Sci. USA 68:2564-2568,1971.
paralUs. Science261:12801281, 1993.
Chapman, D.: Benga, G. Biomembrane fluidity-studies
of model and natural membranes, In Biological
Membranes (D. Chapman, ed.), Vol. 5, pp. I-56. Lon-
don: Academic Press, 1984.
de Kruiff, B., et al. lipid polymorphism and membrane
function. In The Enzymes of Biological Membranes, Vol
1, Membrane Suucture and DynamiCS, 2nd eel ~.
Manonasi, eel), pp. 131-204. NewYooc P1enwn, 1985.
Kimelberg. H.K. The influence of membrane flUidity on
the activity of membrane-bound enzymes. In Dyna-
mic Aspects of Cell Surface Organization. Cell Surfa-
ce Reviews (G. Poste, G.L Nicolson, eds.), Vol. 3, pp.
205-293. Amsterdam: Elsevier, 1977.

538 Capftulo 10: Estruclura de la membrana

 Yeagle, P.L Cholesterol and the ceU membrane. Bio-
ellim. Biopllys. Acra 622:267-267, 1985.
4. BrelSCher, M. Membrane structure: some general prin-
ciples. Science 181:622-629, 1973.
Devaux, P.F. Protein involvement in transmembrane li-
pid asymmetry. AntilL Rev. Biophys. 8iomol. Stmct.
21:417-439,1992.
Newton, A.C. Interaction of proteins with lipid head-
groups: lessons from protein kinase C. Annu. Rev.
Biophys. BiomoL Srnu:r. 22:1-25, 1993.
Rothman, J.; Lenard, J. Membrane asymmetry. Science
195:743-753,1977.
5. Huomori, S. Glycosphingolipids. Sci. Am. 254(5):44-53,
1986.
Weigandt, H. The gangliosides. Adv. Neurocmm. 4:149-
223, 1982.
6. Branden, C.; Tooze.. J. Int.JOducliulI \u Prutt:ill Structure,
pp. 202-214. New York: Garland, 1991.
Unwin, N.; Henderson, R. The structure of proteins in
biological mebranes. Sci. Am. 250{2j:78-94, 1984.
7. Chow, M.; Der, C.}.; Buss, J.E. Siructure and biological
effects of lipid modifications on proteins. Curro Opirl.
Q?ll BioI. 4:629-636, 1992.
Cross, G.A. Glycolipid anchoring of plasma membrane
proteins. Annu. Rev. Q?ll Bioi. 6:1-39,1990.
Englund, P.T. The structure and biosynthesis of g1ycosyl
phosphatidytinosilol protein anchors. Antlu. Rev.
Biocllem.62:121-138,l993.
Jennings, M.L. Topography of membrane proteins.
A.mlu. Rell. BiodlCm. 58:999-1027,1989.
Singer, S.'. The structure and insertion of integral pro-
teins in membranes. A,,,,u. Rev. Cell 8io/. 6:247-296,
1990.
8. Eisenberg, D. Three-dimensional structure of membra-
ne and surface proteins. Annu. Rev. BiOC/Je",. 53:595-
623,1984.
Engelman, D.M.; Steitz. T.A.; Goldman. A. Identifying
nonpolar tTansbilayer helices In amino acid sequences
of membrane proteins. Annu. Rev. Biopllys. Biophys.
Cllem.. 15:321-353, 1986.
Fasman, G.D.; Gilbert, W.A. The prediction oftransmem-
brane prolein sequences and their confonnation: an
evaluation. Trends BiocJlem. Sci. 15:89-92, 1990.
Kyte. J.; Doolittle, R.F. A simple method for displaying
the hydropathic character of a protein. }. Mol. Bioi.
157:105-132.1982.
Popot. J.-L. Integral membranes prolein structure: trans
membrane a helices as aulonomous folding domains.
Curro Opin. Struet. Bioi. 3:512-540. 1993.
9. Helenius, A.; Simons, K. Solubilization of membranes
by detergents. Biochim. Biop'IYS. Acta 415:29-79.
1975.
Momal, M. Functional reconstitution of membrane
proteins in planar lipid bilayer membranes_ In Tech-
niques of the Analysis of Membrane Proteins (C.1.
Ragan. R.J. Cherry. eds.). pp. 97-128. London: Chap-
man & Hall, J986.
Racker. E. Reconstitution of Transporters. Receptors
and Pathological Stales. Orlando. FL: Academic
Press, 1985.
Silvius, J.R. Solubilization and functional reconstitution
of biomembrane componencs. AllllU. Rev. Biopllys.
Diomol. Struct. 21 :323-346. 1992.
Blbliograffa
10. Agre, P.; Parker, J.C. eds. Red Blood Cell Membranes:
Structure, Function, Clinical Implications. New York:
Marcel Dekker, 1969.
Dretscher, M. Membrane structwe: some general prin-
ciples. Science 161:622-629, 1973.
Marchesi, V.T.; FuMmayr. H.; Tomita, M. The red cell
membrane. Annu. Rev. Biochem. 45:667-698, 1976.
Steck., T.L. The organization of proteins in Ihe human
red blood cell membrane.}. Cell 8iol.62:1-19. 1974.
II. Bennen, V.: Lambert, S. The spectrin skeleton: from red
cells to brain.}. Clin. Invest. 87: 1483-1469. 1991.
Bennen, V.; Gilligan. D.M. The spectrin-based membra-
ne structure and micron-scale organization of Ihe
plasma membrane. Annu. Rev. Cell Bioi. 9:27-66.
1993.
Branton, D.; Cohen. C.M.; Tyler. J. Inleraction of cytos-
keletal proteins on the humon erythrocyte membrQ-
ne. Ce1l24:24-32.198I.
Davies, K.A.; Lux, S.E. Heredity disorders of the red cell
membrane skeleton. Trends Genet. 5:222-227, 1989.
Pumplin, D.W.; Bloch, R.]. The membrane skelelon.
Trends Cell Bioi. 3: 113-117. 1993.
12. Alper, S.L. The band 3-related anion exchan~er (AEl
gene family. Annu. Rell. Pllysiol. 53:549-564, 1991.
Jennings, M.L. Structure and function of te red blood
cell anion transport prolein. Annu. Rell. Biophys.
Chern. 18:397-430, 1989.
Kopito. R.R. Molecular biology of the anion exchanger
gene family. Int. Rev. Cytol. 123:177-199, 1990.
Reithmeier. RAP. The erythrocyte anion transporler
(band 3). Curro Opin. StrllCt. Bioi. 3:515-523, 1993.
13. Henderson. R. Baldwin, J.M.; Ceska, T A; zemlin, F.;
Beckmann. E.; Downing. K.H. Model for the structure
of baeteriorhodopsin based on high-resolution elec-
tron cryo-microscopy.}. Mol. Bioi. 213:899-929, 1990.
Henderson. R.; Unwin. P.N.T. Three-dimensional model
of purple membrane obtained by electron micros-
copy. Nature 257:26-32. 1975.
Mathies, R.A.; Un, S.W.; Ames. J.B.; Pollard, W.T. From
femtoseconds to biology: mechanism of bacleriorho-
dopsin's light-driven proton pump. Antlu. Rev.
Biophys. Bi01lys. Cliem. 20:491-518,1991.
Stoeckenius, W. The rhodopsin-like pigments of halo-
bacteria: lighl-energy and signal transducers in an
archaebacterium. Trends Biocllem. Sci. 10:483-486.
1965.
14. Cowan. S.W. Bacterial parins: lessons from three high
resolution SlCUctures. Curro Opin. StruCJ. BioI. 3:501-
507,1993.
Shlnner. T.; Rosenbusch. J.P. Prokaryotic and eukary-
otic porins. Cllrr. Opin. Strucr. Bioi. 1:539-545. 1991.
Schulz, G.E. Bacterial porins; structure and funcllon.
Curr, Opin. Cell Bioi. 5:701-707, 1993.
Weiss, M.S.; Wacker, T.; Neslel. U.; et a1_ The structure
of porin from rhodobacJer capsularus at 0.6 nm reso-
lution. FEBS urI. 256:143-146, 1989.
15. Deisenhofer. ,.; Epp, 0.; Mill. K.; Huber, R.; Michel, H.
The structure of the protein subunits in the pho-
tosynthelic reaction centre of Rllodopseudomofllu vi-
ridisat 3 A resolution. Nature318:618-624, 1985.
Deisenhofer. J.; Michel. H. High-resolution structures of
photosynthetic reacllon centers. Annu. Rev. Biopllys.
Bioplty~. Cite",. 20:247-266, 1991.
539

Rees, D.C.; Komlya, H.; Yeates, T.O.; Allen,I.P.; Feher, G.
The bacterial photosynthetic reaction center as a
model for membrane proteins. Anrlu. Rev. Biochem.
58:607-634,1989.
16. de Petris. 5.; Raff, M.e. Normal distribution, patching
and capping of lymphocyte surface immunoglobulin
studied by electron microscopy. Nature New Bioi.
241:257-259,1973.
Edldin, M. Molecular association and membrane do-
mains. C/lfT. Top. Membr. Transp. 36:81-96,1990.
Frye, LD.; Edidin, M. The rapid intermixing of ceU sur-
face antigens after formation of mouse-human het-
erokaryons.}. Cell Sci. 7:319-335,1970.
Jacobson, K.; Ishihara, A.; Inman, R. Lateral diffusion of
proteins in membranes. Allnu. Rev. PhysioL 49:163-
175,1987.
Sheetz, M.P. Glycoprotein mobility and dynamic do
mains in fluid plasma membranes. Annu. Rev.
Biophys. BiomoL Srrucr. 22:417-431,1993.
17. Gumbiner. B.; Louvard, D. Localized barriers in the pla-
rna membrane: a common way to fonn domains.
Trends Biochem. Sci. 10:435-438, 1985.
Jacobson, K.; Vax, W.LC. Domains in biological mem-
branes. Com",. MoL Ce1l8iophys. 8:1-114, 1992.
Myles, D.G.; Primakoff. P. Sperm surface domains. In
Hybridoma Technology in the biosciences and Medi-
cine (fA Springer, ed.), pp. 239-250. New York: Ple-
num, 1985.
540 Capitulo 10: Estructura de la membrana
Simons. K.; van Meer, G. Upid sorting in epithelial cells.
Biochemistry 27:6197-6202, 1988.
Edidin, M. Patches, posts and fences: proteins and plasma
membrane domains. Trends Cell BioL 2:376-380, 1992.
18. Drickamer, K.; Taylor, M.E. Biology of animal lectins.
An/lu. Rev. Cell Bioi. 9:237-264, 1993.
Dwek. RA, et aI. Analysis of g1ycoproteinassociated oli-
gosaccharides.Annu. Rev. Biochem. 6:65-100,1993.
Parelch, R.B. Effects of glyucosylation on prolein func-
tion. CU". Opill. Struet. DioL 1:750-754,1991.
Paulson, ,.e. Glycoproteins: what are the sugar chains
for7 Trends Biocllem. Sci- 14:272-276, 1989.
Sharon, N.; Us. H, Carbohydrates in cell recognition.
Sci. Am. 268(1):82-89, 1993.
19. Bevilacqua, M.P.; Nelson, R.M. Selectins. j. Clin. Invest.
91:379-387,1993.
Cummings. R.O.; Smith, D.F. The selectin family of car-
bohydrate-binding proteins: structUre and importan-
ce of carbohydrate ligands for cell adhesion. BioEs-
says 14:849-856, 1992.
Lasley, LA. Selectins: interpreters of ceU-specifc car-
bohydrate information dUring inflammation. Science
258:964-969,1992.
Lawrence. M.B.; Springer, T.A. Leukocytes roll on a se-
lectin al physiologic flow rates: distinction from and
prerequisite for adhesion through integrins. Cell
65:859-873. 1991.
Transporte de
pequenas cl -
Illelllbran .;
de la excitab
Dlelllbrana

Debido a su interior hidrof6bico, la bicapa lipidica de una celula constituye una

barrera altamente impermeable ala mayoria de las moleculas polares. Esta fun-
cion de barrera es de una importancia crucial ya que permite a la celula mante-
ner en su citosol ciertos solutos a concentraciones diferentes a las que estan en
el fluido extracelular y en cada uno de los compartimientos intracelulares en-
vueltos por una membrana. Sin embargo, para poder utilizar esta barrera las ce-
lulas han tenido que desarrollar sistemas para transportar especificamente mo-
leculas hidrosolubles a traves de sus membranas y asi poder ingerir los
nutrientes esenciales, excretar los productos residuales del metabolismo y regu-
lar las concentraciones intracelulares de iones. El transporte de iones inorgani-
cos y de pequefias moleculas organicas hidrosolubles a traves de la bicapa lipidi-
ca se consigue mediante proteinas transmembrana especializadas, cada una de
las cuales es responsable de la transferencia de una molecuia 0 un ion especifi-
cos 0 de un grupo de moleculas 0 iones afines. Las celulas tambien pueden
transportar a traves de sus membranas macromoleculas e incluso grandes parti-
culas, pero los mecanismos que intervienen en estos casos son muy diferentes
de los utilizados para transferir pequefias moleculas, por 10 que se estudian en
los Capitulos 12 y 13. La importancia del transporte a traves de las membranas
queda puesta de manifiesto por el hecho de que casi e120% de los genes identifi-
cados hasta ahora en E. coli estan asociados a estos procesos de transporte.
Iniciamos esta capitulo considerando algunos principios generales que
guiaran nuestra discusi6n sobre la manera en que las pequefias moleculas cru-
zan las membranas celulares. Por 10 tanto consideraremos las dos clases princi-
pales de proteinas de membrana que median el transporte: las proteinas trans-
portadoras, las cuales tienen partes m6viles que les permiten transportar
moleculas especificas a traves de la membrana, y las proteinas de canal, que for-
man un estrecho poro hidrof6bico que permite el desplazamiento pasivo de pe-
quefios iones inorganicos. Las proteinas transportadoras pueden acoplarse a
una fuente de energia y catalizan un transporte activo; la combinaci6n de una
permeabilidad selectiva pasiva y un transporte activo genera grandes diferencias
de composici6n del citosol respecto al fluido extracelular (Tabla 11-1) 0 al fluido
del interior de los organulos envueltos en membrana. Concretamente, generan-
do diferencias de concentraci6n i6nica a traves de la bicapa lipidica, las mem-
branas celulares son capaces de almacenar energia potencial en forma de gra-
dientes electroquimicos, los cuales se utilizan para impulsar varios procesos de
transporte, para transportar sefiales electricas en celulas excitables eIectrica-
mente y (en mitocondrias, cloroplastos y bacterias) para fabricar la mayor parte

541
Tabla 11-1 Comparacl6n de las concentraclones i6nicas en el interior y el exterior
de una ceIula de mamffero
Componente Concentraci6n intracelular Concentracl6n extracelular
(mM) (mM)

Cationes
Na+ 5-15 145
K+ 140 5
Mg2+ 0,5 1-2
Ca2+ 10-4 1-2
H+ 7 x 10"""5 (10-7,2 M 0 pH 7,2) 4 x 10-5 (10-7,4 M 0 pH 7,4)

Aniones
CI- 5-15 110

Puesto que la celula debe tener la misma cantidad de cargas + que - (es decir, ha de ser eIectri-
camente neutral, ademas de CI- la celula contiene muchos otros aniones que no se presentan
en esta tabla; de hecho, la mayona de los constituyenes celulares estan cargados negativamente
(HCOi, P043-, protefnas, acidos nucleicos, metabolitos que contienen grupos fosfato y carboxilo,
etc.). Las concentraciones dadas para Ca"+ y Mg"+ corresponden a las de los iones libres. En las
celulas, hay un total de aproximadamente 20 mM Mg"+ Y 1-2 mM Ca"+ pero en su mayor parte
ambos cationes estan unidos a protefnas y a otras substancias; en el caso del Ca"+, una elevada
cantidad se encuentra almacenada en vados organulos.

del ATP celular. Centramos la discusi6n principalmente en el transporte a traves

de la membrana plasmcitica pero, como discutiremos en capitulos posteriores,
en las otras membranas de la celula eucariota existen mecanismos similares a
los que describiremos. En la Ultima parte de este capitulo centramos la atenci6n
principalmente en las funciones de los canales i6nicos de las celulas nerviosas,
ya que es en estas celulas donde las proteinas de canal adquieren el maximo ni-
vel de sofisticaci6n, permitiendo que redes de celulas nerviosas desarroUen las
MOLECULAS
extraordinarias caracteristicas de las que es capaz el cerebro humano. HIOR0F68ICAS

Principios de transporte a traves de membrana l

lniciamos esta secci6n describiendo las propiedades de permeabilidad de bica-
pas lipidicas sinteticas, libres de proteina. A continuaci6n, introducimos algunos
GRANDES
terminos utilizados para describir los diversos tipos de transporte a traves de MOLECULAS
membrana y algunas estrategias para caracterizar las proteinas y los procesos POLARES NO
que participan en eUos. CARGADAS

Las bicapas lipfdicas libres de protefna son altamente
impermeables a los iones2 .
Con tiempo suficiente, practicamente cualquier molecula acabara difundiendo
a traves de una bicapa lipidica libre de proteina a favor de su gradiente de con- ~
centraci6n. Sin embargo, la velocidad a la que se produce esta difusi6n varia bicapa
enormemente, dependiendo en parte del tamafio de la molecula y, principal- lipidica
mente, de su solubilidad relativa en aceite. En general, cuanto menor es la mole- artificial

cula y cuanto mas soluble en aceite (es decir, cuanto mas hidrof6bica 0 no polar
Figura 11-1 Permeabilldad relativa
es) mas rapidamente difunde a traves de una bicapa. Las moleculas pequenas
de una bicapa Upidica sintetica a
no polares tales como el O2 (32 daltons) yel CO2 (44 daltons), se disuelven facil-
diferentes tipos de molecuIas. Cuanto
mente en las bicapas lipidicas y por 10 tanto difunden con rapidez a traves de menor sea la molecula y,lo que es mas
eUas. Las moIeculas polares no cargadas tambien difunden rapidamente a traves importante, cuanto menor sea el
de una bicapa si su tamafio es suficientemente reducido. Por ejemplo, el agua mlmero de enlaces de hidr6geno que
(18 daltons), el etanol (46 daltons) y la urea (60 daltons) atraviesan rapidamente establezca can el agua, mas
una bicapa; el glicerol (92 daltons) 10 hace con menor rapidez, y la glucosa (180 rapidamente difundira a traves de la
daltons) practicamente no la atraviesa (Figura 11~1). membrana.

542 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 Por el contrario, las bicapas lipidicas son altamente impermeables a todas permeabilidad elevada
las moIeculas cargadas (iones), por muy pequefias que sean: la carga y el elevado
grado de hidratacion de tales moleculas les impiden penetrar en la fase hidro-
10~2
carbonada de la bicapa. Asi, las bicapas sinteticas son 109 veces mas permeables
al agua que a los iones, incluso a los de reducido tamafio como el Na+ 0 el K+ (Fi-
gura 11-2).
4
10

Existen dos clases principales de protefnas de transporte a traves urea

glicerol _
de membrana: protefnas transportadoras y protefnas de canal 1
10 6
Como las bicapas lipidicas sinteticas, las membranas celulares permiten el paso
tript6fano _
por simple difusi6n del agua y de las moleculas no polares. Sin embargo, las glucosa -
membranas celularestambien son permeables a diver~as moleculas polares que 10 8
atraviesan con gran lentitud las bicapas lipidicas sinteticas, tales como iones,
azucares, aminoacidos, nucleotidos y muchos metabolitos celulares. Unas pro-
teinas de membrana especiales son las responsables de la transferencia de estos
solutos a traves de las membranas celulares. Estas proteinas, que reciben el
nombre de proteinas de transporte a traves de membrana, se presentan en mu-
chas formas y en todos los tipos de membranas biologicas. Cada proteina esta K+-
10~12
destinada al transporte de un tipo particular de moleculas (tales como iones, Na+-

azucares 0 aminoacidos) y con frecuencia unicamente de una cierta especie mo-

lecular de la clase. La especificidad de las proteinas de transporte fue sugerida
10~14
por primera vez a mediados de los afios 1950 gracias a unos estudios en los que
se encontro que unas mutaciones en un solo gen suprimian la capacidad de las permeabilidad baja
bacterias para transportar unos azucares determinados a traves de su membrana
plasmatica. Actualmente se han descubierto mutaciones similares en personas Figura 11-2 Coeflcientes de
permeabilidad (cm/seg) para el paso
que sufren diversas enfermedades hereditarias, las cuales afectan al transporte
de diversas moltkulas a traves de
de un soluto determinado en el rifion, en el intestino 0 en ambos tejidos. Por bicapas lipidicas sinteticas. EI flujo de
ejemplo, los individuos que presentan la enfermedad genetica cistinuria son in- un soluto a traves de la bicapa es
capaces de transportar ciertos aminoacidos (incluyendo la cistina, el dimero for- direetamente proporcional a la
mado por la union, a traves de un enlace disulfuro, de dos cisteinas) tanto desde diferencia de sus eoneentraciones a los
la orina como desde el intestino hacia la sangre; de la acumulacion de cistina en dos lados de la membrana.
la orina resulta la formacion de "piedras" de cistina en los rifiones. Multiplieando esta diferencia de
Todas las proteinas de transporte a traves de membrana que han sido estu- eoneentraci6n (en moles/em3) por el
diadas con detalle suficiente para poder establecer su orientacion en la membra- eoeficiente de permeabilidad (em/seg)
na, son proteinas transmembrana multipaso -es decir, su cadena polipeptidica se obtiene el flujo del soluto en moles
atraviesa la membrana varias veces. Se cree que estas proteinas establecen una por segundo por eentimetro cuadrado
via continua de proteina a traves de la membrana, permitiendo asi el transporte de membrana. Por ejemplo, una
diferencia de eoneentraci6n de
de solutos especificos sin que lleguen a entrar en contacto directo con el interior
tript6fano de 10-4 moles/em3 (10-4/10-3
hidrofobico de la bicapa lipidica. L =0,1 M) producirfa un flujo de 10-4
Existen dos clases mayoritarias de proteinas de transporte de membranas: moll em3 x 10-7 em/seg = 1O-11
las proteinas transportadoras y las proteinas de canal. Las proteinas transporta- moles/seg a traves de 1 em2 de
doras (tambien denominadas transportadores, carriers 0 permeasas) se unen al membrana, es decir, de 6 x 104
soluto especifico que va a ser transportado y sOOen una serie de cambios confor- moltkulas/seg a traves de 1 f.l.m 2 de
macionales que permiten la transferencia del soluto a traves de la membrana. Por membrana.
otro lado, las proteinas de canal no se unen al soluto sino que forman poros hi-
drofi1icos que atraviesan la bicapa lipidica; cuando estos poros estlin abiertos
permiten que determinados solutos (habitualmente iones inorganicos de tamafio
y carga apropiados) puedan pasar a su traves, y por 10 tanto atravesar la membra-
na (Figura 11-3). No sorprende que el transporte a traves de las proteinas de canal
se produzca a velocidad mucho mayor que a traves de proteinas de transporte.

EI transporte activo esta mediado por protefnas transportadoras

acopladas a una fuente energetica1,3
Todas las proteinas de canal y muchas proteinas de transporte tan solo permi-
ten que los solutos atraviesen la membrana de forma pasiva ("cuesta abajo")
-un proceso llamado transporte pasivo (0 difusi6n facllitada). Si la molecula

Principios de transporte a traves de membrana 543

 - ] bicapa
Iipfdica
[
lugar de uni6n al soluto
poro
acuoso
(A) PROTEfNA TRANSPORTADORA (B) PROTEfNA DE CANAL

transportada carece de carga, la direcci6n del transporte pasivo viene determi- Figura 11-3 Vision esquematica de
nada tan s610 por la diferencia de concentraci6n a los dos lados de la membrana dos clases de protemas de transporte
(su gradiente de concentraci6n). Sin embargo, si el soluto tiene una carga neta, su a traves de membrana. Se cree que las
transporte se ve influido tanto por su gradiente de concentraci6n como por el protefnas transportadoras alteman dos
gradiente electrico a traves de la membrana (el potencial de membrana). El gra- conformaciones de forma que ellugar
de uni6n al soluto es accesible
diente de concentraci6n y el gradiente electrico pueden combinarse para calcu-
secuencialmente desde un lado de la
lar la fuerza neta de direcci6n del flujo, 0 gradiente electroqu{mico, para cada bicapa, y luego desde el otro lado. Por
soluto cargado. En el Capftulo 14 discutimos este aspecto mas detalladamente. el contrario, una protefna de canal
De hecho, casi todas la membranas plasmMicas tienen una diferencia de poten- forma un poro lleno de agua que
cial (gradiente de voltaje) a traves de ellas, siendo habitualmente el interior ne- atraviesa la bicapa, a traves del cual
gativo con respecto al exterior. Esta diferencia de potencial favorece la entrada a pueden difundir determinados iones.
las celulas de iones cargados positivamente y se opone a la entrada de iones car-
gados negativamente.
Las celulas tambien necesitan protefnas de transporte que bombeen activa-
mente ciertos solutos a traves de la membrana en contra de su gradiente electro-
qufmico ("cuesta arriba"); este proceso, conocido como transporte activo, esta
siempre mediado por protefnas transportadoras. En el transporte activo la acti-
vidad bombeadora de la protefna de transporte es direccional ya que, tal como
explicaremos mas adelante, esta acoplada a una fuente de energfa metab6lica
como la hidr6lisis del ATP 0 a un gradiente i6nico. Asf pues, el transporte media-
do por protefnas de transporte puede ser activo 0 pasivo, mientras que el trans-
porte mediado por protefnas de canal siempre es pasivo (Figura 11-4).

La tecnologia del DNA recombinante ha revolucionado el estudio

de las proteinas de transporte a traves de membrana4
Debido ala dificultad de obtener cristales tridimensionales de las protefnas que
atraviesan la membrana varias veces para estudios de cristalograffa de rayos X,
no conocemos la estructura tridimensional detallada de las protefnas de trans-
porte a traves de membrana a las que nos referiremos. Por ello, no entendemos
los mecanismos moleculares que estas protefnas utilizan para transportar deter-

Figura 11-4 Comparacion entre un

mohlcula transportada transporte pasivo a favor de un

O~OI
gradiente electroquimico y un
transporte activo en contra de un
; canal
gradiente electroquimico. Mientras
que la difusi6n simple y el transporte
pasivo mediados por protefnas de
bicapa [ transporte (difusi6n facilitada) ocurren
Iipfdica
espontaneamente, el transporte activo
requiere de una entrada de energfa
metab6lica. Unicamente las protefnas
transportadoras pueden realizar
difusi6n difusi6n difusi6n
simple mediada mediada por transporte activo, mientras que tanto
, por canal transportador, las protefnas transportadoras como las
TRANS PORTE PASIVO TRANSPORTE ACTIVO protefnas de canal pueden mediar
(DIFUSI6N FACILITADA) difusi6n facilitada.

544 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 minados solutos a traves de la bicapa lipfdica. Sin embargo mediante otros me-
todos se han obtenido importantes datos, especialmente mediante la tecnologfa
del DNA recombinante.
Una vez se ha clonado y secuenciado el DNA que codifica una protefna
transportadora, se puede deducir la secuencia de aminoacidos de la cadena poli-
peptidica y se puede estimar el mlmero de helices a transmembrana mediante el
analisis de graficos de hidropatfa (se discute en el Capftulo 10). Se pueden utilizar
anticuerpos desarrollados contra peptidos sinteticos que corresponden a deter-
minados segmentos de la cadena polipeptfdica para determinar que segmentos
se hallan expuestos a uno y otro lado de la membrana. Ademas, se puede alterar
la secuencia de DNA que codifica zonas especificas de la protefna mediante mu-
tagenesis especifica de lugar, y el mRNA mutante correspondiente se puede in-
yectar a celulas de mamffero mantenidas en cultivo 0 a oocitos de Xenopus,
donde dirigira la sfntesis de protefnas mutantes cuya actividad transportadora
puede entonces estudiarse facilmente. De esta forma, se pueden identificar los
residuos de aminoacido y los segmentos de protefna que son funcionalmente
importantes. Sin embargo, los resultados de estos estudios deben interpretarse
con precauci6n ya que a veces una pequena carga en una zona de la protefna
puede tener grandes efectos en la conformaci6n de toda la protefna y, por 10
tanto, en su funci6n, incluso aunque la zona alterada no participe directamente
en la funci6n estudiada. Sin embargo, como veremos, esta estrategia ha resulta-
do ser de una gran utilidad.
La tecnologfa del DNA recombinante tambien ha contribuido de otra mane-
ra at conocimiento de las protefnas de transporte a traves de membrana. Cuando
se ha aislado el DNA que codifica una protefna, generalmente resulta relativa-
mente sencillo utilizar este DNA como sonda para aislar secuencias de DNA re-
lacionadas que codifican protefnas hom610gas. Estos estudios han revelado que
el transporte a traves de membrana esta mediado por un mlmero sorprenden-
temente pequeno de familias de protefnas, cuyos miembros tienen estructuras
relacionadas entre sf y, probablemente, mecanismos de acci6n relacionados y
un origen evolutivo comun. Sin embargo una familia determinada puede con-
tener un gran numero de protefnas diferentes, e incluso a menudo los miem-
bros de una familia pueden presentar muchas variantes (denominadas isofor-
mas) producidas tanto por genes diferentes a traves de transcritos de RNA
procesados de forma diferente a partir de un mismo gen. En algunos casos las
isoformas difieren en su actividad transportadora, en su momenta de expresi6n
durante el desarrollo, en su distribuci6n tisular, en su 10calizaci6n en la celula 0
en cualquier combinaci6n de estas propiedades. En otros casos, el sentido de
esta heterogeneidad resulta poco claro.
Antes de discutir con detalle las diferentes clases de protefnas transporta-
doras a traves de membrana y los conocimientos conseguidos mediante estas
tecnicas, consideraremos brevemente otra clase de moleculas que pueden in-
crementar selectivamente la permeabilidad de las bicapas lipfdicas. Estas mole-
culas proporcionan un ejemplo sencillo de alguno de los principios discutidos
anteriormente.
ion transportado

Se pueden utilizar ion6foros como herramientas para incrementar

la permeabilidad de las membranas a determinados iones5 bicapa [
lipfdica
Los ion6foros son pequenas moleculas hidrof6bicas que se disuelven en las bi-
capas lipfdicas e incrementan su permeabilidad a determinados iones inorga-
nicos. La mayorfa de ellos estan sintetizados por microorganismos (probable- formador transportador
mente como armas contra competidores 0 contra presas). Son ampliamente del canal m6vil

utilizados por los bi610gos celulares en estudios sobre membranas sinteticas, ce- Figura 11-5 Un transportador i6nico
lulas 0 organulos celulares, como herramientas para incrementar la permeabili- m6vil y un ion6foro formador de
dad i6nica de la membrana. Existen dos clases de ion6foros -transportadores canal. En ambos casos el flujo neto de
m6viles y formadores de canal (Figura 11-5). Ambos tipos actuan rodeando la iones se produce unicamente a favor
carga del ion transportado de forma que pueda atravesar el interior hidrof6bico de gradiente electroqufmico.

Principios de transporte a traves de membrana 545

 Figura 11-6 Estructura de un canal
de gramicidina. El canal esta formado
por la asociaci6n de dos peptidos
identicos por sus extremos amino
terminales. Cada cadena esta plegada
formando una helice ~ como una
lamina ~ enrollada. (A) Vista lateral y
(B) (B) vista superior. Los esqueletos
o peptidicos que rodean el canal se
(e) 0 0 muestran en azul y en verde oscuro
mientras que en verde claro se
representa el espacio ocupado por las
cadenas laterales hidrof6bicas que
sobresalen. La bicapa lipfdica se
(A) (D)
muestra en gris. (C) muestra el tamafio
de los iones K+ no hidratados mientras
que (D) muestra una vista superior de
de la bicapa lipfdica. Dado que los ion6foros no estan acoplados a fuentes de una helice a que atraviesa la
energfa, s610 perrniten el movimiento neto de iones a favor de su gradiente elec- membrana, para compararla con la
troqufmico. helice ~. N6tese que la helice a no
forma poro, de manera que por sf sola
La valinomicina es un ejemplo de un transportador m6vil. Se trata de un
no puede formar canal. (De
polimero en forma de anillo que transporta K+ a favor de su gradiente electroquf- S. Weinstein, B.A. Wallace, E.R. Blout,
mico, tomando K+ de un lado de la membrana, difundiendo a traves de la bica- I.S. MorrowyW. Veatch, Proc. Natl.
pa, y liberando el K+ al otro. El ion6foro A23187 constituye otro ejemplo de trans- Acad. Sci. 76:4230, 1979.)
portador ionico movil, pero transporta cationes divalentes como Ca2+ y Mg2+.
Normalmente actua como una lanzadera intercambiadora de iones, transpor-
tando dos H+ hacia el exterior de la celula por cada cation divalente que trans-
porta hacia el interior celular. Cuando una celula se expone aA23187, el Ca2+en-
tra al citosol desde el liquido extracelular a favor de su enorrne gradiente
electroqufmico. Por ello, este ion6foro se utiliza ampliamente en biologia celular
para incrementar las concentraciones de Ca2+libre en el citosol, mimetizando
asi algunos mecanismos de sefializaci6n celular (discutidos en el Capitulo 15).
La gramicidina A es un ejemplo de ion6foro forrnador de canal. Se trata de
un peptido lineal de unicamente 15 residuos de aminmkido, todos ellos con una
cadena lateral hidrof6bica, por 10 que constituye el canal i6nico mas sencillo y
mejor caracterizado de los conocidos. Se cree que dos moIeculas de gramicidina
se unen, cola con cola, a traves de la bicapa lipidica formando un canal trans-
membrana (Figura 11-6), que permite selectivamente que los iones monovalen-
tes fluyan a favor de sus gradientes electroquimicos. Estos dimeros son inesta-
bles y se estan formando y disociando constantemente, de forma que el tiempo
medio de apertura de estos canales es alrededor de 1 segundo. Con un elevado
gradiente electroquimico la gramicidina A puede transportar unos 20 000 catio-
nes por canal abierto cada milisegundo, 10 cual es 1000 veces mas de 10 que pue-
de transportar una molecula de transportador m6vil en el mismo tiempo. La
gramicidina es sintetizada por ciertas bacterias, quizas para matar otros micro-
organismos colapsando los gradientes de H+, Na+ y K+, que son esenciales para la
supervivencia de la celula; ha sido utilizada con exito como antibi6tico.

Resumen
Las bieapas lipfdicas son altamente impermeables a la mayoria de moteculas pola-
res. Para transportar pequenas moteeulas solubles en agua haeia el interior 0 hacia
el exterior de las eelulas 0 de los eompartimientos intracelulares delimitados por
membrana, las membranas eelulares eontienen varias protetnas de transporte,
eada una de las cuales es responsable de transferir un determinado soluto 0 elase
de solutos a traves de la membrana. Existen dos elases de protetnas de transporte a
traves de membrana -transportadoras y de canal; ambas forman vias eontinuas de
transporte a traves de la bicapa lipfdica. Mientras que el transporte mediado por
protetnas transportadoras puede ser activo 0 pasivo, el mediado por protetnas de

546 Capitulo 11 : Transporte de moIeculas pequeiias a traves de la membrana

canal es siempre pasivo. Los iOnOforos, pequeiias moleculas hidrof6bicas sintetiza-
dm por microorganismos, pueden utilizarse en estudios de celulas u orgdnulos ~
o
a.
como herramientas para incrementar la permeabilidad de las membranas celula- ~ Vmax
res a determinados iones inorgdnicos. ~.,
"C
"C
~ 2Vmax
'<3
Proteinas transportadoras y transporte activo o
a;
>
a traves de membranal, 6
KM concentracion d e -
la molecula transportada
El proceso por el cual una proteina transportadora transfiere una molecula de
soluto a traves de la bicapa lipidica se parece a una reacci6n enzima-substrato, y Figura 11-7 Comparaci6n entre la
los transportadores implicados en este proceso se comportan como enzimas es- cim!tica de la difusi6n simple y la de
pecializadas ligadas a la membrana. Cada tipo de proteina transportadora tiene difusi6n mediada por transportador.
uno 0 mas lugares de uni6n especificos para su soluto (substrato). Cuando el Mientras que la velocidad de la
transportador esta saturado (es decir, cuando todos estos lugares de uni6n estan primera siempre es proporcional a la
concentraci6n de soluto, la de la
ocupados), la velocidad de transporte es mcixima. Esta velocidad, indicada como
segunda alcanza un maximo Wmax)
Vmax' es caracteristica del.transportador. Cada proteina transportadora tiene ade-
cuando la proteina de transporte esta
mas una constante caracteristica de uni6n para su soluto, K w igual a la concen- saturada. Cuando el transporte se
traci6n del soluto cuando la velocidad de transporte es la mitad del valor mcixi- produce a mitad de la velocidad
mo (Figura 11-7). Como con las enzimas, la uni6n del soluto puede ser maxima, la concentraci6n de soluto se
bloqueada especificamente por inhibidores competitivos (que compiten por el aproxima a la constante de union (KM )
mismo lugar de uni6n y que pueden ser transportados 0 no por el transportador) del transportador para el soluto y es
o por inhibidores no competitivos (que se unen a algiln otro lugar y que alteran anaIoga a la KM de una enzima para su
especificamente la estructura del transportador). Sin embargo, a diferencia de substrato. La grMica se refiere a un
las reacciones enzima-substrato normales, el soluto transportado no suele ser transportador que transporta un
modificado covalentemente por la proteina transportadora. soluto; las cineticas del transporte
Algunas proteinas de transporte simplemente transportan un soluto de un acoplado de dos 0 mas solutos (vease
lado a otro de la membrana a una velocidad determinada por la Vmax Yla KM ; re- el texto) son mas complejas, aunque
muestran basicamente el mismo
ciben el nombre de transportadores sencillos 0 uniportes (uniporters). Otras,
fen6meno.
de cinetica mas compleja, actuan como transportadores acoplados (coupled
transporters), en los que la transferencia de un soluto depende de la transferen-
cia simultanea 0 secuencial de un segundo soluto, ya sea en la misma direcci6n
[transporte unidireccional 0 simporte (symport)) 0 en direcci6n opuesta
[transporte de intercambio 0 antiporte (antiport)] (Figura 11-8). La mayoria de
las celulas animales, por ejemplo, toman glucosa del fluido extracelular, donde la
concentraci6n del azucar es alta en relaci6n a la del citosol, mediante un trans-
porte pasivo a traves de transportadores de glucosa que actuan como transporta-
dores sencillos. Existen varios de estos transportadores de glucosa, todos elIos
pertenecientes ala misma familia de proteinas hom610gas con 12 posibles helices
ex transmembrana. En cambio, las celulas intestinales y las renales captan glucosa
de la luz del intestino y de los tubulos del rift6n respectivamente, donde la con-
centraci6n del azucar es baja. Estas celulas transportan la glucosa a traves de su
membrana plasmcitica mediante un transporte unidireccional con Na+. Como se

mohlcula transportada / ion cotransportado Figura 11-8 Tres tipos de transporte

~.
mediado por transportadores. El
Or. diagrama esquematico muestra

)J.. ~(.. b;o.~

proteinas transportadoras actuando

I
I ~ ~ lipfdica
como un transportador sencillo
(uniporteJ, como un transportador
acoplado unidireccional (simporte) y
como un transportador acoplado de

! /\ /\ intercambio (antiporte).

UNIPORTE I SIMPORTE
ANTI PORTE I
transporte acoplado

Protefnas transportadoras y transporte activo a traves de membrana 547

 Figura 11-9 Modelo hipotetico que
"pong" <====> "ping"
0
muestra de que forma un cambio de
conformaci6n de una protema
00 0 transportadora podria medlar la
difusi6n facilitada de un soluto. La
n
gradiente protefna transportadora puede existir
electrnuimico en dos estados de conformaci6n
diferentes: en el estado "pong" los
lugares de uni6n para el soluto A son
accesibles desde el exterior de la
proteina transportadora que
media la difusi6n facilitada
bicapa; en el estado "ping" estos
mismos lugares de uni6n son
accesibles desde el 010 lado de la
bicapa. Se propone que las
discute en el Capitulo 10, la proteina banda 3, del eritrocito humano es un trans- transiciones entre ambos estados se
portador anionico que intercambia Cl- por HC03. producen al azar, de forma
Aunque se desconocen los detalles moleculares, se cree que las proteinas completamente reversible. Por 10
. transportadoras transfieren los solutos a traves de la bicapa mediante un cambio tanto, si la concentraci6n de A es
mayor en el exterior de la bicapa, se
conformacional reversible que alternativamente expone primero el lugar de
unini una mayor cantidad de A a la
union al soluto a una cara de la membrana y luego a la otra. En la Figura 11-9 se
protefna transportadora de
muestra un modelo esquem<itico de como puede actuar una proteina transpor- conformaci6n "pong", produciendose
tadora de este tipo. Actualmente se sabe que los transportadores son proteinas un transporte neto de A a favor de su
transmembrana de multipaso, por 10 que es altamente improbable que actuen gradiente elec1oqufmico.
girando en el interior de la membrana 0 como una lanzadera de una cara a otra a
traves de la membrana, como se creia antes.
Tal como se explica mas adelante, una modificacion relativamente peque-
fia del modelo mostrado en la Figura 11-9 es suficiente para unir la proteina
transportadora a una fuente de energia (como la hidrolisis del ATP [vease Figu-
ra ll-ll] 0 un gradiente ionico), y poder bombear un soluto cuesta arriba, en
contra de su gradiente electroquimico. De hecho, el estudio comparado de al-
gunas proteinas transportadoras de bacteria y de celulas de maI11ifero coincide
con la idea de que las diferencias necesarias en el disefio molecular" entre una
proteina transportadora que media un transporte activo y otra que trabaja de
forma pasiva, son minimas. Algunos transportadores, que en las bacterias utili-
zan energia almacenada en un gradiente de H+ a traves de la membrana plas-
m<itica bacteriana para dirigir la captacion activa de diferentes azucares, son
estructuralmente similares a los transportadores pasivos de glucosa de las ce-
lulas animales; dada la importancia de los azucares como fuente energetica no
resulta sorprendente que esta superfamilia de transportadores de azucares sea
muyantigua.
Empezamos nuestra discusion sobre el transporte activo considerando una
proteina transportadora que desempefia un papel crucial en la generacion y el
mantenimiento de los gradientes de Na+ y de K+ a traves de la membrana plas-
m<itica de las celulas animales.

La bomba de Na+-K+ de la membrana plasmatica es unaATPasa7

La concentracion de K+ en el interior celular es tipicamente de 10 a 20 veces mas
alta q~e en el exterior, mientras que ocurre 10 contrario para el Na+ (vease Tabla
11-1, pag. 542). Estas diferencias de concentracion se mantienen mediante una
bomba de Na+-K+ que se halla en la membrana plasm<itica de practicamente to-
das las celulas animales. La bomba actua como un transportador de intercambio
(antiporte), bombeando de forma activa Na+ hacia el exterior de la celula en con-
tra de su gradiente electroquimico y K+ hacia el interior. Como se explica mas
adelante, el gradiente de Na+ debido ala bomba regula el volumen celular a tra-
yes de sus efectos osmoticos y tambien se utiliza para dirigir el transporte de
azucares y de aminoacidos hacia el interior de la celula. Casi una tercera parte
de toda la energia que consume una celula animal tipica se utiliza para impulsar
esta bomba. En las celulas nerviosas eIectricamente activas que, como veremos

548 Capitulo 11 : Transporte de moltkulas pequefias a traves de la membrana

 Figura 11-10 LaATPasadeNa+-K+.

I
gradiente
electroqufmico
de sodio
o
n
gradiente
electroqufmico
de potasio
Esta protefna transportadora bombea
activamente Na+ hacia el exterior y K+
hacia e1 interior de 1a ce1u1a, en contra
de sus gradientes electroqufmicos. Por
cada molecula de ATP hidrolizada
dentro de la celu1a, se bombean tres

l ~
Na+ hacia el exterior y dos K+ hacia el

e
interior. La ouabafna, inhibidor
especffico de 1a bomba, y el K+
compiten por e1 mismo lugar dellado
externo de la ATPasa.

mas adelante, durante la propagaci6n del impulso nervioso ganan continua-

mente pequefias cantidades de Na+ y pierden pequefias cantidades de K+, la can-
tidad de energia utilizada en la bomba de Na+-K+ se acerca a los dos tercios de
los requerimientos totales energeticos de la celula.
Un progreso importante en el conocimiento de la bomba de Na+-K+ se reali-
ZQ en 1957 gracias al descubrimiento de una enzima que hidroliza el ATP a ADP
y fosfato y que necesita Na+ y K+ para su actividad 6ptima. Un dato importante
que relacion6 esta ATPasa de Na+-K+ con la bomba de Na+-K+ fue la obseivaci6n
de que un inhibidor conocido de la bomba, la ouabaina, tambien inhibe la ATP-
asa. Pero la prueba crucial de que la hidr6lisis del ATP proporciona de alguna
manera la energia para impulsar la bomba se obtuvo en unos estudios efectua-
dos con fantasmas de eritrocito en los que podfan variarse las concentraciones
de iones, ATP y farmacos a ambos lados de la membrana, observandose luego
los efectos sobre el transporte i6nico y sobre la hidr6lisis del ATP. Se encontr6
que (1) el transporte de Na+ y de K+ esta estrechamente acoplado a la hidr6lisis
del ATP, de tal modo que un proceso no puede producirse sin el otro; (2) el
transporte i6nico y la hidr6lisis del ATP s610 pueden ocurrir cuando existe Na+ y
ATP dentro de los fantasmas, y K+ en el exterior; (3) la ouabafna unicamente tie-
ne efectos inhibidores cuando se encuentra fuera de los fantasmas, donde com-
pite por el centro de uni6n del K+; y (4) por cada molecula de ATP hidrolizada
(cada molecula de ATPasa puede hidrolizar 100 moleculas de ATP por segundo),
se bombean tres Na+ hacia el exterior y dos K+ hacia el interior (Figura 11-10).
Aunque estos experimentos suministraron evidencias concIuyentes de que
el ATP proporciona la energia necesaria para el bombeo de iones Na+ y K+ a tra-
yeS de la membrana plasmMica, no explicaban c6mo se halla acoplada la hidr6-
lisis del ATP al transporte i6nico. Una explicaci6n parcial se obtuvo con el ha-
llazgo de que durante el cicIo de bombeo el grupo fosfato terminal del ATP se
transfiere a un residuo de acido aspartico de la ATPasa y luego este grupo fosfato
se hidroliza, como se explica en la Figura 11-11.
En fantasmas de eritrocito la bomba Na+-K+ puede revertirse, produciendo
ATP: cuando experimentalmente se incrementan los gradientes de Na+ y de K+
hasta el punto en que la energia almacenada en estos gradientes electroqufmi-
cos es mayor que la energfa qufmica de la hidr6lisis del ATP, estos iones se des-
plazan a favor de sus gradientes electroqufmicos y se sintetiza ATP a partir de
ADP Yfosfato porlaATPasa de Na+-K+. Asf pues, la forma fosforilada de laATPa-
sa (paso 2 en la Figura 11-11) puede relajarse ya sea donando su fosfato al ADP
(del paso 2 al paso 1) 0 cambiando su conformaci6n (del paso 2 al paso 3). EI he-
cho de que el exceso de la variaci6n de energfa libre se utilice para sintetizar ATP
o para bombear Na+ hacia afuera del fantasma depende de las concentraciones
relativas de ATP, ADP Yfosfato y de los gradientes electroqufmicos de Na+ y de K+.
La ATPasa de Na+-K+ se ha purificado y se ha visto que consiste en una gran
subunidad catalftica transmembrana de multipaso (aproximadamente de 1000

Protefnas transportadoras y transporte activo a traves de membrana 549

 1
ESPACIO EXTRACELULAR

Figura 11-11 Modelo esquematico

del cicio de bombeo de la ATPasa de
Na+-K+. La uni6n del Na+ (1) yla
posterior fosforilaci6n por ATP (2) en
la cara citoplasmatica de la ATPasa
inducen a la protefna a un cambio de
residuos de aminoacido de longitud) y en una glucoprotefna mas pequefia, de conformaci6n que transfiere el Na+ a
paso unico, asociada a ella. La subunidad catalftica tiene centros de uni6n para traves de la membrana y 10 libera al
Na+ y para ATP en su superficie citoplasmlitica, y para K+ en su superficie externa exterior (3). A continuaci6n, la uni6n
y durante el ciclo de bombeo se fosforila y desfosforila de forma reversible. La de K+ sobre la superficie exterior (4) y
funci6n de la glucoprotefna es incierta, aunque se sabe que es necesaria para el la consiguiente desfosforilaci6n (5)
transporte intracelular de la subunidad catalftica hasta la membrana plasmlitica. devuelven a la protefna a su
Se puede reconstituir una bomba Na+-K+ funcional a partir del complejo purifi- conformaci6n original, transfiriendo
el K+ a traves de la membrana y
cado: la ATPasa se solubiliza en detergente, se purifica y se mezcla con los fosfo-
libenindolo en el citosol (6).
lipidos adecuados; cuando se elimina el detergente, se han formado vesiculas de
Estos cambios de conformaci6n
membrana que en presencia de ATP bombean Na+ y K+ en direcciones opuestas son anaIogos a las transiciones
(vease Figura 10-22). ping ~ pong que se muestran en la
Figura 11-9, a excepci6n de que en
La ATPasa de Na+-K+ es necesaria para mantener el equilibrio este caso la fosforilaci6n dependiente
de Na+ y la desfosforilaci6n
osm6tico y estabilizar el volumen celularB dependiente de K+ de la protefna, que
Debido a que la ATPasa de Na+-K+ bombea tres iones cargados positivamente ocurren de una manera ordenada,
hacia el exterior de la celula por cada dos que bombea hacia el interior, es elec- permiten a la protefna realizar un
trogenica; es decir, dirige una corriente neta a traves de la membrana tendiendo trabajo util. A pesar de que, para
a crear un potencial electrico, con el interior negativo en relaci6n al exterior. Sin simplificar, se ha dibujado un solo
lugar de uni6n al Na+ y un solo lugar de
embargo, este efecto de la bomba en sf mismo no contribuye mas de un 10% al
uni6n al K+, en realidad la bomba
potencial de membrana. Como veremos, el 90 % restante depende tan s610 indi- presenta tres lugares de uni6n al Na+ y
rectamente de la bomba. dos al K+. Ademas, aunque se ha
Por otra parte, la ATPasa de Na+-K+ desempefia un papel mas directo en la demostrado que la ATPasa salta entre
regulaci6n del volumen celular: controla las concentraciones de solutos dentro dos estados conformacionales, existen
de la celula, y por consiguiente regula las fuerzas osm6ticas que pueden hacer evidencias de que ella ocurre a traves
que la celula se hinche 0 se retraiga (Figura 11-12). Como se explica en el Panel de series de cambios
11-1, las celulas contienen una gran concentraci6n de solutos incluyendo nume- conformacionales mas complejos
rosas moleculas organicas cargadas negativamente (los denominados aniones durante el cicIo real de bombeo.

550 Capitulo 11 : Transporte de moltkulas pequeiias a traves de la membrana

 crenado normal hinchado Iisado Figura 11-12 Respuestadeun

e.
erltroclto bumano a cambios de la
osmolaridad (tambien denominada
ERITROCITO
tonicltkul) del Boldo extracelular.
Debido a que la membrana plasmlitica
es libremente permeable at agua, el
concentraci6n
i6nica del espacio agua se desplazara bacia el interior 0
extracelular bacia el exterior de las celulas a favor
HIPERT6NlCA ISOT6NICA HlPOT6NICA MUY
HIPOT6NICA de su gradiente de concentraci6n, un
proceso denominado osmosis. Si las
celulas se colocan en una soluci6n
hipotonica (por ejemplo, una soluci6n
jijos) Ylos cationes que las acompafian y que son necesarios para equilibrar la que contenga una baja concentraci6n
carga, todos los cuales generan un elevado gradiente osm6tico que tiende a "chu- de soluto, y por 10 tanto una elevada
par" agua hacia el interior de la celula. En las celulas animales este efecto es con- concentraci6n de agua), se producrra
trarrestado por un gradiente osm6tico opuesto generado a causa de las elevadas un movimiento neto de agua hacia el
concentraciones de iones inorgamcos -sobre todo de Na+ y de a-- del medio ex- interior de las celulas, originando su
tracelular. LaATPasa de Na+-K+ mantiene el equilibrio osm6tico bombeando Na+ hinchamiento y explosion (lisado).
Contrariamente, si las celulas se
hacia el exterior, que vuelve a entrar a favor de su gradiente electroquimico; el a-
colocan en una soluci6n hiperronica,
se mantiene en el exterior debido al potencial de membrana.
se encogerlin.
La importancia de la ATPasa de Na+-K+ en el control del volumen celular se
pone de manifiesto por el hecho de que las celulas animales se hinchan y pue-
den llegar a reventar si se tratan con ouabaina, que inhibe la ATPasa de Na+-K+.
Evidentemente, las celulas disponen de otros sistemas de solucionar sus proble-
mas osm6ticos. Las celulas vegetales y muchas bacterias estan protegidas contra
el hinchamiento excesivo y la rotura mediante paredes celulares semirrigidas
que rodean sus membranas plasmaticas; en las amebas el exceso de agua que
penetra por 6smosis se recoge en unas vacuolas contractiles que vierten peri6di-
camente su contenido al exterior (vease Paneill-l). Pero para la mayona de las
celulas de los animales, laATPasa de Na+-K+ resulta crucial.

Algunas bombas de Ca2+ tambien son ATPasas

unidas a membrana9
Las celulas eucariotas mantienen unas concentraciones de Ca2+muy bajas en el
citosol (_10-7 M), en comparaci6n con las concentraciones extracelulares de
Caz+, mucho mas elevadas (-lo-a M). Asi, una entrada de Caz+, aunque sea pe-
quena, a la celula, incrementa significativamente la concentraci6n de Ca2+libre
en el citosol. El tlujo de Ca2+a favor de gradiente de concentraci6n en respuesta
a senales extracelulares constituye una forma rapida de transmisi6n de estas se-
nales a traves de la membrana plasmatica. Por 10 tanto el mantenimiento de un
elevado gradiente de Ca2+ es importante para la celula. El gradiente de Caz+se
mantiene en parte por la acci6n de bombas de Ca2+que existen en la membrana
plasmatica, las cuales transportan Ca2+de forma activa hacia el exterior de la ce-
lula. Se sabe que una de estas bombas es una ATPasa, mientras que la otra es un
transportador de intercambio (antiporte) impulsada por el gradiente electroqw-
mica de Na+.
La bomba de Caz+mejor conocida es una ATPasa unida a la membrana del
reticulo sarcoplasmdtico de las fibras musculares. El reticulo sarcoplasmatico
-una tipo especializado de reticulo endoplasmatico- forma una red de sacos tu-
bulares en el citoplasma de las celulas musculares que acma como reservorio in-
tracelular de CaZ+. (Cuando un potencial de acci6n despolariza la membrana de
la celula muscular, se libera CaZ+del reticulo sarcoplasmatico hacia el citosol, es-
timulando la contracci6n muscular, como se discute en el Capitulo 16.) La bom-
ba de Caz+, que constituye alrededor del 90% de la proteina de membrana del or-
ganulo, es la responsable del bombeo del Ca2+desde el citosol hacia el interior
del reticulo sarcoplasmlitico. (El reticulo endoplasmatico de las celulas no mus-
culares contiene una ATPasa dependiente de Caz+similar a esta, aunque en me-
nor cantidad, por 10 que es mas dificil de purificar.)

Protemas transportadoras y transporte activo a traves de membrana 551

 ORIGEN DE LA OSMOLARIDAD INTRACELULAR
Las macromoleculas por sf mismas
contribuyen muy poco a la osmolaridad
del interior celular ya que, a pesar de su
gran tamai'io, cada una de elias cuenta como
una sola molecula y hay relativamente pocas
de elias en comparacion con el numero de
pequei'ias moleculas que hay en la celula.
Sin embargo, la mayo ria de macromoleculas
biologicas estan muy cargadas y atraen
muchos iones inorganicos de carga opuesta.
Debido a su elevado numero, estos
contraiones contribuyen de forma importante
a la osmolaridad intracelular.
EL PROBLEMA
Debido a los facto res enunciados mas arriba, <)
una celula que no controle su osmolaridad
tendra en su interior una concentracion
total de solutos mayor que en el exterior.
Como resultado de ellO, la concentracion 8
de agua sera mayor en el exterior que en
el interior de la celula. Esta diferencia en la
concentracion de agua a traves de la
membrana plasmatica hara que el agua se
desplace continua mente hacia el interior de
la celula debido al proceso de osmosis,
causando su rotura.
LA SOLUCION
Las celulas animales y las bacterias controlan
su osmolaridad intracelular bombeando
activamente hacia el exterior iones
inorganicos, como el Na+, de forma que su
citosol contiene una concentracion total de
iones inorganicos menor que la del fluido
extracelular, compensando asf su exceso
de solutos organicos.
Como resultado del transporte activo y
de los procesos metabolicos, la celula
contiene una elevada concentracion de
pequeiias moleculas organicas, tales
como azucares, aminoacidos y
nucleotidos, para las cuales la membrana
plasmatica es impermeable. Como
la mayorfa de estos metabolitos estan
cargados, tam bien atraen contraiones.
Tanto los pequei'ios metabolitos como
sus contraiones tienen una repercusion
importante en la osmolaridad intracelular.
<)
8
Las celulas vegetales evitan su
hinchamiento mediante su pared rfgida, de
forma que pueden tolerar diferencias
osmoticas a traves de sus membranas
plasmaticas: aparece una preslon interior
que, en el equilibrio, impide que entre mas
agua.
8
8
<) <)
8
<) <) 8
8 8
8 <)
8 <)
8 <) <)
<) 8
8 <)
<) 8 <) 8
Normalmente la osmolaridad dellfquido
extracelular es debida principal mente a pequeiios
iones inorganicos. Estos iones se filtran lentamente
a traves de la membrana plasmatica hacia el
interior de la celula. Si no son bombeados hacia
el exterior y si no existen otras moleculas en el
interior de la celula que interactuen con ellos
influyendo en su distribucion, pueden lIegar a
equilibrarse manteniendo la misma concentracion
dentro y fuera de la celula. Pero la presencia en
la celula de macromoleculas cargadas y de
metabolitos que atraen a estos iones genera
el efecto Donnan: hace que en el equilibrio, la
concentracion total de iones inorganicos
(y por tanto, su contribucion a la osmolaridadl
sea mayor dentro que fuera de lei celula.
Muchos protozoos consiguen no hincharse
de agua a pesar de que mantienen una
diferencia osmotica a traves de la membrana
plasmatica, expulsando agua periodicamente
mediante vacuolas contractiles especiales.
<)
8 8
 La ATPasa de Ca2+puede ser analizada bioqufmicamente mediante los mis-
mos metodos que los utilizados para laATPasa de Na+-K+ y se ha encontrado que
ambas bombas actuan de una forma muy similar. En efecto, estudios de secuen-
ciacion de DNA indican que las ATPasas de Na+-K+ y de Ca2+son protefnas ho-
mologas. En cada caso, la gran subunidad catalftica se presenta en varias isofor-
mas, se cree que tiene alrededor de 10 posibles helices a que atraviesan la
membrana y que se fosforila y desfosforila durante el ciclo de bombeo.

Algunas enzimas ligadas a membrana que sintetizan ATP son

ATPasas de transporte que actuan en sentido opuesto lO
Tanto la membrana plasmlitica de las bacterias como la membrana interna de
las mitocondrias y la membrana tilacoidal de los cloroplastos presentan una
enzima analoga a las dos ATPasas de transporte mencionadas anteriormente,
pem que normalmente actua en sentido opuesto. En lugar de ser la hidrolisis
del ATP la que impulsa el transporte ionico, en este caso es un gradiente de H+ a
traves de estas membranas el que dirige la sfntesis de ATP a partir de ADP y fos-
fato. Este gradiente de H+ se genera durante el proceso de transporte de electro-
nes de la fosforilacion oxidativa (en bacterias aerobicas y en mitocondrias) 0
mediante la bomba de H+ activada por la luz (bacteriorrodopsina) en Halobac-
terium. Como ocurre con las ATPasas de transporte, la enzima que normalmen-
te sintetiza ATP, Hamada ATP sintasa, puede trabajar en ambas direcciones de-
pendiendo de las condiciones: puede hidrolizar ATP y bombear H+ a traves de
la membrana 0 puede sintetizar ATP cuando fluyen H+ a traves de la enzima en
la direcci6n opuesta. En la mayorfa de las celulas, la ATP sintasa es responsable
de la generaci6n de la mayorfa del ATP celular, como se discute en detalle en el
Capftulo 14.

EI transporte activo puede ser impulsado por gradientes i6nicos l l

Muchos sistemas de transporte activo no son impulsados directamente por la
hidrolisis del ATP sino por la energfa almacenada en gradientes ionicos. La ener-
gfa libre liberada durante el desplazamiento de un ion inorganico a favor de su
gradiente electroqufmico se utiliza como fuerza impulsora para bombear otros
solutos en contra de sus gradientes electroqufmicos. Asf pues, todas estas protef-
nas actuan como transportadores acoplados -algunos como transportadores
unidireccionales, otros como transportadores de intercambio. En la membrana
plasmatica de las celulas animales el ion cotransportado cuyo gradiente electro-
qufmico proporciona la fuerza impulsora para el transporte activo de una se-
gunda molecula normalmente es el Na+. El Na+ que entra en la celula durante
este transporte es bombeado hacia el exterior mediante la ATPasa de Na+-K+, la
cual, al mantener el gradiente de Na+, impulsa indirectamente el transporte de
las otras moleculas que se cotransportan con el Na+. (Por esta razon se dice que
los transportadores impulsados por iones median transportes activos secunda-
rios, mientras que se dice que las ATPasas median transportes activos primarios.)
Las celulas epiteliales del intestino y del rinon, por ejemplo, contienen varios
sistemas de transporte unidireccional a traves de la membrana plasmatica que
son impulsados por el gradiente de Na+. Cada sistema importa especfficamente
ala celula un pequeno grupo de azucares 0 de aminoacidos relacionados. En es-
tos sistemas el soluto y el Na+ se unen a diferentes lugares de la protefna trans-
portadora; el Na+ tiende a entrar a la celula a favor de su gradiente electroqufmi-
co, por 10 que, en cierto sentido, "arrastra" al azucar 0 al aminoacido hacia el
interior de la celula. Cuanto mayor sea el gradiente electroqufmico de Na+, ma-
yor sera la velocidad de entrada del soluto ala celula; por el contrario, si la con-
centracion de Na+ en el fluido extracelular se reduce fuertemente, el transporte
de soluto se detiene.
En bacterias y en levaduras, asf como en muchos organulos envueltos por
membrana de las celulas animales, la mayorfa de los sistemas de transporte acti-

Protefnas transportadoras y transporte activo a traves de membrana 553

vo impulsados por gradientes i6nicos dependen del gradiente de H+ y no del de
Na+, 10 cual refleja la predominancia en estas membranas de las ATPasas de H+
respecto ala pnictica ausencia de ATPasas de Na+. El transporte activo de mu-
chos azucares y aminoacidos en bacterias, por ejemplo, esta impulsado por el
gradiente de H+ a traves de la membrana plasmatica.

Las proteinas de transporte impulsado por Na+ de la membrana

plasmatica regulan el pH citos6lico1 2
La estructura y la funci6n de la mayorfa de las macromoleculas estan notable-
mente influenciadas por el pH, y la mayoria de ellas actuan de forma 6ptima a
un pH determinado. Por ejemplo, las enzimas lisosomales actuan mejor al bajo
pH (-5) de los lisosomas mientras que las enzimas citos6licas actuan mejor a pH
casi neutro (-7,2) del citosol. Por 10 tanto, resulta crucial que las celulas contro-
len el pH de sus compartimientos intracelulares.
La mayoria de la celulas tienen en su membrana plasmatica uno a varios ti-
pos de sistemas de transporte de intercambio impulsados por Na+, que regulan
el pH intracelular (citos6lico) (pH) manteniendolo alrededor de 7,2. Estas protei-
nas usan la energia almacenada en el gradiente de Na+ para reducir la acidez eli-
minando el exceso de iones H+ consumidos 0 producidos en la celula a conse-
cuencia de las reacciones que producen H+. Se utilizan dos mecanismos: los H+
son transportados directamente al exterior de la celula 0 se importa HC03- al in-
terior de la celula para neutralizar los H+ del citosol. Uno de estos transportadores
de intercambio que utiliza el primer mecanismo es un intercambiador de Na+-H+
que acopla la entrada de Na+ a la salida de H+. Otro transportador, que utiliza una
combinaci6n de ambos mecanismos, es un intercambiador de CI--HCO; impul-
sado por Na+ que acopla la entrada de Na+ y de HC03" a la salida de Cl- y H+ (de
forma que entra NaHC0 3 y sale HCn. El transportador Cl--HC03" impulsado por
Na+ es dos veces mas efectivo que el transportador de Na+-K+, en el sentido de
que por cada Na+ que entra en la celula bombea hacia el exterior un H+ y neutra-
liza otro H+. Si existe HC03" asequible, como ocurre habitualmente, este trans-
portador es el mas importante en la regulaci6n del pHi. Ambos transportado-
res de intercambio estan regulados por el pHi' incrementando su actividad
cuando el pHi desciende.
En algunas celulas existe un tercer transportador dependiente de Na+ que
desempefia un papel importante en la regulaci6n del pHi. Este transportador
unidireccional de Na+-HC03 transporta un Na+ al interior de la celula con uno 0
varios iones HC03". En contraste con los otros dos transportadores que acaba-
mos de describir, este simporte es electrogenico ya que su efecto neto es trans-
portar cargas negativas al interior de la celula. Cuanto menor es el voltaje en el
interior de la celula, mayor es su transporte. En consecuencia, en las celulas que
presentan este transportador -principalmente las celulas de la glia del sistema
nervioso- el pHi es sensible a cambios en el potencial de membrana. Parece que
esta sensibilidad permite a estas celulas colaborar en la regulaci6n del pH extra-
celular local del cerebro en respuesta a cambios de su actividad electrica.
Un intercambiador de CI--HC03 independiente de Na+, similar a la proteina
banda 3 de la membrana de los eritrocitos discutida en al Capitulo 10, tambien
juega un papel importante en la regulaci6n del pHi de algunas celulas nucleadas.
Como los transportadores dependientes de Na+, el intercambiador de Cl--HC03"
esta regulado por el pHi' pero en este caso el desplazamiento de HC03" se produ-
ce normalmente hacia el exterior de la celula, a favor de su gradiente de concen-
traci6n. La velocidad de eflujo de HC03" y de influjo de Cl- incrementa cuando el
pHi aumenta, disminuyendo asi el pHi cuando el citosol empieza a ser demasia-
do alcalino.
Como se discute en el Capitulo 13, el bajo pH de los lisosomas, asi como el
de los endosomas y de las vesiculas de secreci6n, se mantiene por ATPasas de-
pendientes de H+ que utilizan energia de hidr6lisis de ATP para bombear H+ desde
el citosol hacia el interior de estos organulos.

554 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

En las celulas epiteliales, la distribuci6n asimetrica de protefnas
transportadoras permite el transporte transcelular de solutos13
En las celulas epiteliales, como las que participan en la absorci6n de los nutrien-
tes del intestino, las proteinas transportadoras se hallan distribuidas de manera
asimetrica en la membrana plasmatica y gracias a ello contribuyen al transporte
transcelular de los solutos absorbidos. Tal como muestra la Figura 11-13, los
transportadores unidireccionales acoplados a Na+ localizados en el dominio apical
(absortivo) de la membrana plasmatica transportan nutrientes de forma activa
hacia el interior de la celula, generando marcados gradientes de concentraci6n,
mientras que en el dominio basal y lateral (basolateral) existen otras proteinas de
transporte, independientes de Na+, que permiten que los nutrientes abandonen la
celula a favor de su gradiente de concentraci6n. La ATPasa de Na+-K+ que mantiene
el gradiente de Na+ a traves de la membrana plasmatica de estas celulas esta locali-
zada en el dominio basolateral. Se cree que tanto las celulas renales como las intes-
tinales utilizan unos mecanismos parecidos a este para bombear el agua desde un
espacio extracelular a otro.
Figura II -13 La distribuci6n
En muchas de estas celulas epiteliales, la superficie de la membrana plas-
asimetrica de las proteinas
matica se halla notablemente incrementada mediante la formaci6n de miles de
transportadoras en la membrana
microvilli, que se proyectan en forma de finas evaginaciones digitiformes de la
plasmatica de una celula epitelial
superficie apical de cada celula (Figura 11-13). Estos microvilli pueden aumentar intestinal da lugar al transporte
el area total de absorci6n de una celula mas de 25 veces, incrementando asi en transcelular de glucosa a traves del
gran medida su capacidad de transporte. epitelio intestinal. EI proceso que se
muestra genera el transporte de
glucosa desde la luz del intestino hasta
Algunas ATPasas transportadoras de membrana son hom6logas el fluido extracelular (desde donde
a las ATPasas transportadoras de eucariotas, que participan pasa a la sangre). La glucosa se
en la resistencia a drogas y en la fibrosis qufstica: bombea hacia el interior de la celula a
la superfamilia de transportadores AB04 traves del dominio apical de la
membrana por un cotransporte
EI Ultimo tipo de proteinas transportadoras que presentaremos es una familia de
unidireccional de glucosa impulsado
ATPasas transportadoras de una gran importancia clinica, a pesar de que sus por el Na+, y la glucosa pasa al exterior
de la celula (a favor de su gradiente de
concentraci6n) mediante difusi6n
facilitada, por una protefna
transportadora de glucosa diferente,
existente en los dominios basal y
lateral. El gradiente de Na+ que
impulsa el transporte acoplado
microvilli del unidireccional (simporte) de glucosa
dominic apical se mantiene mediante laATPasa de
Na+-K+ del dominio basolateral de la
transporte uni6n
unidireccional de estrecha membrana plasmatica, que mantiene
glucosa dirigido baja la concentraci6n intracelular
por Na+ de Na+.
dominic epitelio Las celulas adyacentes estan
lateral intestinal
conectadas entre sf mediante uniones
impermeables (llamadas uniones
estrechas 0 estancas), las cuales
protefna desempefian una funci6n dual en el
transportadora que
permite la difusi6n proceso de transporte ilustrado aquf:
facilitada de glucosa impiden que los solutos atraviesen los
epitelios entre las celulas, permitiendo
asf que el gradiente de concentraci6n
dominic de glucosa se mantenga a traves de la
basal
lamina de celulas, y tambien actl1an
fluido como barreras de difusi6n en la
extracelular
membrana plasmatica, confinando las
diversas protefnas transportadoras a
sus respectivos dominios de
BAJO
membrana (vease Figura 10-37).

Protefnas transportadoras y transporte activo a traves de membrana 555

 lipopolisacarido
Figura J J -J 4 Visi6n esquematica de
una pequefia secci6n de la doble
,
membrana de una bacteriaE. coli. La
bicapa porina
membrana intema es la membrana
Iipidica~
f
25 nm
externa L
lipoproteina
peptidoglucano
protefna soluble
plasmatica de la celula. Entre las
bicapas lipfdicas intema y extema
espaCi~ en el espacio existe un peptidoglucano rfgido y muy
peri-
periplasmatico
plasmatico poroso, compuesto de protefnas y

1 bicapa
lipidica/L
interna
r protefna de
transporte
polisacaridos, que constituye la pared
celular bacteriana; esta unido a
moleculas lipoproteicas de la
membrana extema y llena el espacio
periplasmdtico (solo se muestra una
pequefia parte del peptidoglucano).
Este espacio tambien contiene diversas
funciones normales en las celulas eucariotas se han descrito muy recientemen- moleculas proteicas solubles. Los
teo La primera de estas proteinas en ser caracterizada se encontr6 en bacterias. illamentos dibujados a trazos verdes
Ya hemos mencionado que la membrana plasmatica de todas las bacterias con- de la parte superior de la figura
tiene proteinas transportadoras que utilizan el gradiente de H+ a traves de la representan las cadenas de polisacarido
membrana para bombear varios nutrientes hacia el interior de la celula. Muchas de unas moleculas especiales de
de elIas tambien tienen ATPasas de transporte que utilizan la energia de hidr6li- polisacarido que forman una monocapa
sis del ATP para importar varios tipos de azucares, aminoacidos y pequefios extema en la membrana extema; para
peptidos. En bacterias como E. coli, que tienen doble membrana (Figura 11-14), mayor claridad Unicamente se han
dibujado algunas de estas cadenas.
las ATPasas de transporte se hallan localizadas en la membrana interna; existen
Las bacterias que presentan doble
mecanismos auxiliares que permiten captar los nutrientes y cederlos a los trans- membrana se denominan gram
portadores (Figura 11-15). negativas porque no retienen el colorante
Las ATPasas de transporte de la membrana plasmlitica de las bacterias per- azul oscuro utilizado en este
tenecen a la familia de proteinas de transporte mas amplia y diversa de las co- procedimiento de tincion. Las bacterias
nocidas. Se denomina superfamilia de transportadores ABC porque cada uno que presentan una sola membrana (y
de sus miembros contiene un "cassette" de uni6n al ATP (ATP-binding cassette) finas paredes celulares), como los
altamente conservado (Figura 11-16). Se han descrito mas de 50 transportadores estaillococos y los estreptococos,
ABC y, aunque habitualmente cada uno de ellos es especifico de un substrato 0 retienen el colorante azul, por 10 que son
de una clase de substratos determinados, la variedad de substratos transporta- denominadas gram positivas; su Unica
dos por esta superfamilia es enorme, incluyendo aminoacidos, azucares, polisa- membrana es analoga a la membrana
caridos, peptidos e incluso proteinas. Mientras que la mayoria de los miembros intema (plasmatica) de las bacterias
gram negativas.
de esta familia han sido descritos en procariotas, el numero de transportadores

soluto
Figura 11-15 Sistema auxiliar de
transporte asociado con las ATPasas
EXTERIOR de transporte de bacterias con doble
CELULAR membrana. El soluto difunde a traves
de protefnas formadoras de canal
MEMBRANA [
EXTERNA
(llamadas porinas) de la membrana
exterior y se unen a una proteina
periplasmdtica que se une a substratos.
Como resultado de ello, la protefna
que se une al substrato sufre un
cambio de conformacion que Ie
ESPACIO
PERIPLASMATICO
permite unirse a una protefna
transportadora de la membrana
plasmatica, la cual toma el soluto y 10
transfiere activamente a traves de la
bicapa mediante una reaccion dirigida
MEMBRANA [
por la hidrolisis del ATP. Para mayor
INTERNA sencillez del dibujo, se ha omitido el
(PLASMATICA) peptidoglucano; su porosa estructura
permite que tanto las protefnas que se
unen a los substratos como los solutos
solubles en agua se desplacen por
difusion simple a traves de el.

556 Capitulo 11 : Transporte de moltkulas pequefias a traves de la membrana

Tabla 11-2 Algunas familias de protemas transportadoras

Familia* Miembros representativos

Transportadores de azucares
ATPasas de transporte
de cationes
Transportadores ABC
Transportadores de intercambio
(antiporters) de aniones
(CI--HCOi)
Transportadores de intercambio
de cationes
Transportadores de intercambio
de cationes/aniones
Transportadores unidireccionales
impulsados por Na+
* Los miembros de una misma familia son similares entre sf en cuanto a secuencia de amino-
acidos y, pOl 10 tanto, se cree que han evolucionado a partir de una protefna ancestral comun.
transportadores pasivos de glucosa en celulas de
mamffero
algunos transportadores de azucares impulsados
por H+, en bacterias
ATPasas de Na+-K+
ATPasas de Ca2+
ATPasa de resistencia a multiples drogas (MDR)
en celulas de mamffero
ATPasas dependientes de protefnas de union a
substratos periplasm<iticos, en bacteria
ATPasa de resistencia ala cloroquina, en
P. falciparum
exportadores de feromonas de acoplamiento
sexual, en levadura
bomba de peptidos, en la membrana del ER de
vertebrados
protefna reguladora transmembrana de fibrosis
qufstica (CFTR)
protefna banda 3 en eritrocitos
intercambiador de aniones, en otras celulas
intercambiador de Na+-H+
intercambiador de Cl--HCOi dependiente de Na
Transportador unidireccional de glucosa y Na+,
en celulas intestinales
Transportador unidireccional de prolina y Na+,
en bacterias
Transportador unidireccional de Na+-HCOi, en
celulas gliales
dominios de union al ATP
Figura 11-16 Dibujo esquematico de
un transportador ABC tfpico.
(A) Diagrama topo16gico. (B)
Disposici6n hipotetica de la cadena
polipeptfdica en la membrana. EI
transportador esta compuesto por
cuatro dominios: dos dominios muy
hidrof6bicos, cada uno de elIos con
seis posibles segmentos
intramembrana que de alguna forma
deben participar en el proceso de
translocacion, y dos dominios
catalfticos que unenATP (0
"cassettes"). EI algunos casos las dos
mitades del transportador estan
formadas por un mismo polipeptido
(como en la figura) mientras que en
otros estan formados por dos
polipeptidos diferentes.

descritos en eucariotas es cada vez mayor. EI primero en ser identificado se des-

cubri6 gracias a su capacidad de bombear drogas hidrof6bicas hacia el exterior
de celulas eucariotas. Uno de estos transportadores es la protema de resistencia
a mUltiples drogas (MDR, de MultiDrug Resistance) cuya sobreexpresi6n en ce-
lulas cancerosas humanas puede hacerlas simultaneamente resistentes a una
gran variedad de drogas citot6xicas no relacionadas qufmicamente que son am-
pliamente utilizadas en la terapia del cancer. EI tratamiento con una de estas
drogas puede provocar la selecci6n de las celulas que sobreexpresan la protefna
transportadora MDR; el transportador bombea la droga hacia el exterior de la
celula, reduciendo asf su toxicidad y confiriendo resistencia a la celula contra
una gran variedad de agentes terapeuticos. En el protozoo Plasmodium falcipa-
rum se produce un fen6meno relacionado con este e igualmente siniestro, que
causa la malaria. Mas de 200 millones de personas han sido infectadas por este
parasito, que sigue siendo la mayor causa de muerte en humanos, matando mas
de un mill6n de personas cada ano. EI control de la malaria se ve entorpecido
por el desarrollo de resistencia a la droga antimalarica cloroquina; se ha detecta-
do un P. falciparum resistente que ha amplificado el gen que codifica el trans-
portador ABC que transporta cloroquina hacia el exterior de la celula.
EI numero de miembros conocidos de la superfamilia ABC de transportadores
en las celulas eucariotas crece rapidamente, y la Cunci6n normal de algunos de elios
va siendo cada vez mas clara. En levaduras, un transportador ABC es el responsable

Protefnas transportadoras y transporte activo a traves de membrana 557

de exportar una feromona de acoplamiento sexual (un peptido de 13 aminoaci-
dos) a traves de la membrana plasmatica de la celula de levadura. En la mayoria
de las celulas de vertebrados, un transportador ABC de la membrana del reticulo
endoplasmatico (ER) transporta activamente desde el citosol hasta el interior del
ER una gran variedad de peptidos producidos por la degradaci6n de protefnas.
Se trata de la primera etapa de un proceso de gran importancia en la supervisi6n
de las celulas por el sistema inmune (se discute en el Capftulo 23). Los fragmen-
tos de protefna transportados, una vez han entrado al ER, pueden ser transpor-
tados ala superficie celular donde son presentados para que los linfocitos T cito-
t6xicos puedan reconocerlos; si resultan ser extrafios al individuo (como por
ejemplo si derivan de un virus del interior de la celula), los linfocitos T matan a
la celula que los presenta. Otro miembro de la familia ABC ha sido descubierto
mediante estudios de la enfermedad genetica comtin denominada fibrosis quis-
tica. Esta enfermedad esta causada por una mutaci6n en un gen que codifica un
transportador ABC que acttia como un canal de Cl- en la membrana plasmcitica
de las celulas epiteliales. El canal es poco habitual en cuanto a que para abrirse
requiere la hidr6lisis de ATP y la fosforilaci6n dependiente de AMP cfclico. Debi-
do a que existen evidencias de que la protefna MDR tambien puede actuar como
canal de Cl- en algunas celulas (en este caso, no regulado por AMP cfclico sino
por el volumen celular), parece claro que al menos algunos transportadores ABC
pueden actuar como transportadores y como canales i6nicos. Sin embargo, to-
davfa resulta un misterio de que forma los transportadores ABC pueden actuar
de estas dos maneras tan diferentes y transferir a traves de la membrana estos ti-
pos de moIeculas tan distintos.
En la Tabla 11-2 se resumen algunas de las familias de las protefnas trans-
portadoras de las que hemos tratado.

Resumen
Las prote{nas transportadoras se unen a determinados solutos y los transportan a
traves de la bicapa lipidica, mediante cambios conformacionales que exponen el
lugar de uni6n al soluto secuencialmente a uno y luego al otro lado de la membra-
na. Algunas prote{nas transportadoras simplemente transportan un soluto "cuesta
abajo", mientras que otras pueden actuar como bombas transportando un soluto
"cuesta arriba" en contra de su gradiente electroquimico, utilizando para ello ener-
gia de hidr6lisis delATP 0 unflujo "cuesta abajo" de otro soluto (como el Na+) para
impulsar las series de cambios de conformaci6n necesarios. Estudios de clonaje y
secuenciaci6n de DNA muestran que las protefnas transportadoras pertenecen a un
pequeno numero de familias, cada una de las cuales contiene protefnas de secuen-
cias de aminoacidos similares que probablemente han evolucionado a partir de
una protefna ancestral comun, y que actnan a traves de un mecanismo similar. La
familia de ATPasas transportadoras de cationes, que incluye la ubieua bomba Na+-
[(+, constituye un ejemplo importante de ello; cada una de estas ATPasas contiene
una gran subunidad catalftica que secuencialmente es fosforilada y desfosforilada
durante el ciclo de bombeo. La superfamilia de transportadores ABC es especial-
mente importante desde el punto de vista clfnieo: incluye protefnas que son respon-
sables de la fibrosis qufstica, y tambien protefnas que confieren resistencia a drogas
en celulas cancerosas yen parasitos causantes de la malaria.

Canales ionicos y propiedades electricas

de las melnbranas 15
A diferencia de las protefnas transportadoras, las proteinas de canal forman po-
ros hidrofflicos que atraviesan la membrana. Una clase de protefnas de canal
que se encuentra en practicamente todos los grupos de animales forma las unio-
nes comunicantes (gap junctions) entre dos celulas adyacentes; cada membrana

558 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 plasmatica contribuye de la misma forma a la formacion del canal, que conecta
los citoplasmas de ambas celulas. Estos canales se discuten en el Capitulo 19,
por 10 que aqui no trataremos de ellos. Tanto las uniones comunicantes como
las porinas, las proteinas formadoras de canal de las membranas externas de las
bacterias, mitocondrias y cloroplastos (discutidas en el Capitulo 10), tienen po-
ros relativamente grandes y permisivos, que resultarfan desastrosos si conecta-
ran directamente el interior de una celula con el espacio extracelular. Por el con-
trario, la mayorfa de proteinas de canal de la membrana plasmcitica de las
celulas animales y vegetales conectan el citosol con el exterior celular, por 10 que
necesariamente han de tener poros estrechos altamente selectivos. Estas protei-
nas estan relacionadas especfficamente con el transporte de iones inorganicos,
por 10 que se denominan canales i6nicos. Respecto ala eficiencia de transporte,
los canales tienen ventaja sobre los transportadores ya que a traves de cada ca-
nal pueden pasar mas de 1 millon de iones cada segundo, 10 cual es una veloci-
dad mas de 1000 veces superior que eltransporte mediado por cualquier trans-
portador conocido. Por otro lado, los canales ionicos no pueden estar acoplados
a una fuente energetica, de forma que el transporte que median siempre es pasi-
vo ("cuesta abajo"). Asi, la funcion de los canales ionicos es permitir que iones
inorganicos especfficos, mayoritariamente Na+, K+, Ca2 +, 0 Cl-, puedan difundir a
favor de su gradiente electroquimico a traves de la bicapa lipidica. Esto no quie-
re decir, sin embargo, que el transporte a traves de canales ionicos no este regu-
lado. Por el contrario, veremos que la capacidad de regular el flujo de iones es
esencial para la funcion de muchos tipos celulares. Concretamente, las celulas
nerviosas se han especializado en la utilizacion de canales ionicos, y considera-
remos de que forma utilizan una gran variedad de tales canales para recibir,
conducir y transmitir sefiales.

Los canales i6nicos son selectivos para el ion

y tluctuan entre estados abiertos y cerrados1 5
Dos propiedades importantes diferencian los canales ionicos de los simples po-
ros acuosos. En primer lugar, presentan selectividad i6nica, es decir, permiten
que algunos iones puedan pasar y otros no. Esto sugiere que sus poros deben ser
suficientemente estrechos en algunos lugares como para permitir que los iones
entren en contacto intimo con las paredes del canal, de tal manera que solo los
iones de tamafio y carga adecuados puedan atravesarlos. Se cree que para poder
pasar a traves de la parte mas estrecha del canal, los iones que atraviesan los ca-
nales (en fila) tienen que deshacerse de la mayor parte 0 de todas las moleculas
de agua que llevan asociadas; este hecho limita la velocidad maxima de paso.
Asi, cuando aumenta la concentracion de un ion, el flujo de tal ion a traves del
canal aumenta proporcionalmente hasta que se alcanzan los niveles de satura- Figura 11-17 Dibujo esquematico de
cion, momenta en que se llega a la velocidad maxima de transporte. un canal i6nico tfpico, que Ouctda
La segunda diferencia importante entre los canales ionicos y los simples po- entre las conformaciones cerrada y
ros acuosos consiste en que los canales ionicos no estan abiertos continuamen- abierta. Una protefna
teo En lugar de ello, tienen "puertas" que se abren brevemente y luego se cierran transmembrana, vista en seccion
de nuevo, tal como se muestra esquemciticamente en la Figura 11-17. En la ma- transversal, forma un poro acuoso a
traves de la bicapa lipfdica,
unicamente cuando la compuerta esta
abierta. Se cree que las paredes
internas del poro se hallan recubiertas
de cadenas laterales de aminoacidos
polares, mientras que las cadenas
laterales hidrofobicas interactuan con
bicapa[
lipfdica
la bicapa lipfdica. EI poro se estrecha
hasta alcanzar, en una region
determinada, dimensiones atomicas
(el "filtro selectivo de iones"); esta
superficie superficie filtro selectivo
hidrof6bica hidrofflica a iones en el
region determina principalmente la
poro acuoso selectividad i6nica del canal.

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 559

 reguladas reguladas par reguladas par reguladas Figura 11-18 Canales i6nicos
par valtaje liganda (Iiganda liganda (liganda mecanicamente regulados. Dibujo esquematico de los
extracelular) intracelular)
diferentes sistemas a traves de los
cuales se pueden regular los canales
i6nicos.
CERRADOS

ABIERTOS

yaria de los casos las puertas se abren en respuesta a estfmulos especfficos. Los
principales tipos de estimulos que se sabe que causan la abertura de los canales
ionicos son cambios en el voltaje a traves de la membrana (canales regulados por
voltaje), estimulaciones mecanicas (canales regulados mectinicamente) y la union
de un ligando (canales regulados por ligando). Elligando puede ser un mediadar
extracelular -especfficamente un neurotransmisor (canales regulados por trans-
misor) 0 un mediadar intracelular, como un ion (canales regulados por ion), 0 un
nucleotido (canales regulados por nucle6tido) (Figura 11-18). La actividad de
muchos canales ionicos esta regulada, ademas, por fosforilacion y desfosfarila-
cion de proteinas; este tipo de regulacion se discute en el caso de los canales re-
gulados par nucleotido, en el Capitulo 15.
Hasta ahara se han descrito mas de 100 tipos de canales ionicos, y todavfa se
estan descubriendo mas. Son responsables de la excitabilidad electrica del mtis-
culo y median la mayorfa de formas de sefiales electricas en el sistema nervioso.
Una celula nerviosa tipica contiene 10 tipos diferentes 0 mas de canales ionicos,
localizados en diferentes dominios de su membrana plasmlitica. Sin embargo,
estos canales no solo se presentan en celulas excitables electricamente, sino que
tambien se hallan en todas las celulas animales y vegetales y tambien en micro-
organismos: por ejemplo, los canales ionicos son los responsables de propagar
la respuesta de cerrar las hojas de la mimosa, y permiten que los paramecios
unicelulares cambien de direccion despues de colisionar.
Quizas los canales ionicos mas comunes son los permeables principalmente
al K+, que se encuentran en la membrana plasmatica de casi todas las celulas ani-
males. Un importante subconjunto de estos canales se abre incluso en celulas no
estimuladas ("en reposo") por 10 que habitualmente se les denomina canales de
fuga de K+. Aunque este termino se refiere a una gran variedad de canales de K+
diferentes, dependiendo del tipo celular de que se trate, tienen una funcion co-
mtin: haciendo que la membrana plasmlitica sea mucho mas permeable al K+ que
a cualquier otro ion, juegan un papel critico en el mantenimiento del potencial de
membrana -la diferencia de potencial que se presenta a traves de todas las mem-
branas plasmliticas.

El potencial de membrana de las celulas animales depende

principalmente de los canales de fuga de K+ y del gradiente de K+
a traves de la membrana plasmatica15,16
Cuando existe una diferencia de carga electrica entre ambos lados de una mem-
brana, debido a un ligero exceso de iones positivos sobre los negativos en uno de
los lados y un ligero defecto en el otro lado, aparece un potencial de membrana.

560 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 Estas diferencias de carga pueden producirse tanto por un transporte activo
electrogenico (vease pag. 550) como por difusi6n i6nica pasiva. Veremos en el
Capitulo 14 que la mayor parte del potencial de membrana de la mitocondria
esta generado por la bomba electrogenica de H+ de la membrana intema de la
mitocondria. Las bombas electrogenicas tambien generan las mayor parte del
potencial electrico a traves de la membrana plasmMica de las celulas vegetales y
de hongos. Sin embargo en las celulas animales tipicas son los movimientos pa-
sivos de los iones los principales responsables del potencial electrico a traves de
la membrana plasmMica.
Como se ha explicado anteriormente, la ATPasa de Na+-K+ ayuda a mantener
el equilibrio osm6tico a traves de la membrana plasmatica, manteniendo baja la
concentraci6n intracelular de Na+. Como en el interior celular hay poco Na+, tie-
nen que existir otros cationes en cantidades abundantes que equilibren la carga
de los aniones fijos celulares -las moleculas cargadas negativamente que estan
confinadas en el interior celular. Este papel de equilibrador de cargas esta des-
empenado principalmente por el K+, que es bombeado activamente al interior
celular por laATPasa de Na+-K+ y que tambien puede desplazarse libremente ha-
cia el interior 0 el exterior de la celula a traves de los canales de fuga de K+. Debi-
do a la presencia de estos canales, el K+ se mantiene practicamente en un equili-
brio en el que la fuerza electrica, ejercida por un exceso de cargas negativas del
interior de la celula, atrayendo el K+ hacia el interior de la celula, equilibra la ten-
dencia del K+ a salir a favor de su gradiente de concentraci6n. El potencial de
membrana es la manifestaci6n de esta fuerza electrica y se puede calcular su va-
lor de equilibrio a partir del valor del gradiente de concentraci6n del K+. Los ar-
gumentos siguientes pueden ayudar a aclarar este concepto.
Supongamos que inicialmente no existe gradiente de voltaje a traves de la
membrana plasmMica (el potencial de membrana es cero) pero que la concentra-
ci6n de K+ es elevada en el interior de la celula y baja en el exterior. El K+ tendera a
salir de la celula a traves de los canales de fuga del K+, impulsado por su gradiente
de concentraci6n. A medida que el K+ vaya fluyendo hacia el exterior de la celula,
dejara detras suyo una carga neta negativa, creando asi un campo electrico 0 po-
tencial de membrana que tendera a impulsar de nuevo el K+ hacia el interior de la
celula. El reflujo neto de K+ cesara cuando el potencial de membrana alcance un
valor tal que la fuerza electrica que genere sobre el K+ equilibre exactamente el
efecto del gradiente de concentraci6n de este ion -es decir, cuando su gradiente
electroquimico de K+ sea cero. AI mismo tiempo, los iones Cl- se equilibran de
manera similar a como ocurre con el K+, pero dado que su carga es negativa, el
potencial de membrana mantiene la mayoria de estos iones fuera de la celula.
Esta condici6n de equilibrio en la que no hay flujo neto de corriente electrica a
traves de la membrana, define el potencial de reposo de la membrana para esta
.celula ideal. Una f6rmula sencilla pero muy importante, la ecuaci6n de Nemst,
expresa la condici6n de equilibrio de manera cuantitativa y, tal como se explica
en el Panel 11-2, permite calcular el potencial de reposo te6rico de la membrana
si se conoce la relaci6n de concentraciones i6nicas intema y extema. Sin embar-
go, como la membrana plasmatica de una celula real no es exclusivamente per-
meable a K+ y a Cl-, el potencial de reposo real generalmente no es exactamente
igual al que predice la ecuaci6n de Nemst para el K+ y el Cl-.

Cuando se para la bomba de Na+-K+, el potencial de reposo

s610 decae lentamente l5, 16
El mlmero de iones que se han de desplazar a traves de la membrana para gene-
rar el potencial de membrana es insignificante. Asi se puede pensar que el po-
tencial de membrana aparece debido a movimientos de carga que mantienen las
concentraciones de los iones practicamente inalteradas, y que se produce por di-
ferencias muy leves del mlmero de iones negativos y positivos que hay a las dos
lados de la membrana (Figura 11-19). Ademas, generalmente estos movimientos
de carga son rapidos, del orden de tan s610 unos cuantos milisegundos 0 menos.

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 561

 LA ECUACI6N DE NERNST Y EL FLUJO DE IONES
EI flujo de cualquier ion a traves de una protefna canal de
membrana esta dirigido por el gradiente electroqufmico
de este ion. Este gradiente representa la combinacion de dos
facto res: el gradiente de voltaje y el gradiente de concentracion
del ion a traves de la membrana. Cuando estas dos influencias
se equilibran una con otra, el gradiente electroqufmico del ion
es cero y no se produce flujo neto del ion a traves del canal.
EI gradiente de voltaje (potencial de membrana) en el que se
alcanza este equilibrio, se denomina potencial de equilibrio
del ion. Puede calcularse mediante una ecuacion que sera
deducida a continuacion, lIamada ecuacion de Nernst.

La ecuacion de Nernst es:

donde v = potencial de equilibrio en voltios

(potencial interne menos el
potencial externo)
Co Y Ci = concentraciones externa (de "outside")
e interna del ion, respectivamente
R = constante de los gases (2 cal mor' K-')
T = temperatura absoluta (oK)
F = constante de Faraday (2,3 x 104 cal V-,
mol-')

z = valencia (carga) del ion

In = logaritmo de base e

La ecuacion de Nernst puede deducirse de la siguiente forma: Para un ion monovalente,

Una moh~cula en soluci6n (un soluto) siempre se mueve
desde una regi6n de elevada concentraci6n hacia una regi6n
2,3 FRT = 58 mV a 20C y 61,5 mV a 37C
de baja concentraci6n, simplemente debido a la presi6n de
Asf pues, para un ion dado a 37C, V= + 61,5 mV para
los nUmeros. Consecuentemente, el movimiento a favor
Co / Cj = 10, mientras que V = 0 para Co / Ci = 1.,
de gradiente de concentracion viene acompaliado de una
Por ejemplo, el potencial de equilibrio del K+ (VK) es de
variaci6n favorable de energfa libre (dG < 0), mientras que el
61,5 10g,o([K+lo / [K+l j ) milivoltios (-89 mV para una celula tfpica
movimiento en contra de gradiente de concentraci6n viene
cuando [K+l o = 5 mM y [K+l j = 140 mM). A VK, no existe flujo neto
acompaliado de una variaci6n desfavorable de energfa Iibre
de K+ a traves de la membrana. De forma similar, cuando el
(dG> 0). (EI concepto de energfa libre se introduce y discute
potencial de membrana alcanza un valor de 61,5 10glO([Na+lo /lNa+]il,
en el Panel 14-1, pags. 714-715.) La variaci6n de energfa Iibre
el potencial de equilibrio del Na+ (VNa ), no existira flujo neto de Na+.
por mol de soluto que se ha desplazado a traves de la
Para cualquier potencial de membrana particular, VM , la fuerza
membrana plasmMica (dGconc ) es igual a -RTIn Co / Cj Si el
neta que tiende a empujar hacia el exterior de la celula a un
soluto es un ion, al moverse hacia el interior de una celula
determinado tipo de ion es proporcional a la diferencia entre VM
a traves de una membrana en la que se mantiene un voltaje V
y el potencial de equilibrio del ion: asf, para el K+ es VM - VK
en el interior respecto al exterior, generara una variaci6n
y para el Na+ es VM - VNa
adicional de energfa libre (por mol de soluto:que se haya
EI numero de iones que forman la lamina de carga adyacente
desplazado) de dGvolt = zFV. En el punta en el que el gradiente
a la membrana es despreciable comparado con el numero total
de concentraci6n y el de voltaje se hallen compensados
de iones del interior de la celula. Por ejemplo, el desplazamiento
exactamente, dGconc + dGvolt = 0 y la distribuci6n del ion se
de 6000 iones Na+ a traves de 1 Ilm2 de membrana transportara
hallara en equilibrio a traves de la membrana. Asf
suficiente carga para cambiar el potencial de membrana unos
zFV-RT In Co =0 100 mY. Como existen unos 3 x 107 iones Na+ en 1 Ilm3 de citosol,
Cj este desplazamiento de carga tendra un efecto despreciable sobre
los gradientes de concentraci6n a traves de la membrana.
y por tanto

v= RT In Co = 2,3 RT log,o Co
zF Ci zF Ci
 + - + - + - + +-+-+-+ + - + - + - + + - + - + Figura I I - I 9 Un pequeno flujo de
- + - + - + - - + - + - + - - + - + - +
+
+ + + lones transporta suficiente cantidad
+ - + - + - + +-+-+-+ + - + - + - + - + - + - de carga para generar una gran
- + - + - + - - + - + - + - - + - + - + + + + +
+-+-+-+ + - + - + - + + - + - + - + varlaci6n del potencial de membrana.
+ + +
+ - + - + + - + - + - + - + + + + + + Los iones que incrementan el
+ - + - + - + +-+-+-+ + - + - + - + + + + potencial de membrana se hallan
- + - + - + - + - + +- - + - + + + + + + situados en una fina capa superficial
+ - + - + - + +-+-+-+ + - + - + - + + + + 1 nm) muy cerca de la membrana,
- + - + - + - - + - + - + - - + - + - + + + + +
que se mantiene unida a ella debido a
+ - + - + - + +-+-+-+ + + - + + + + + +
-+-+-+- - + - + - + - - + + su atracci6n eIectrica con los iones de
+ + - + + - + -
carga opuesta (contraiones) delotro
equilibria exacto de cargas a cada lade de una pequena cantidad de iones positivos
la membrana; potencial de membrana = 0 (rajo) atraviesan la membrana de izquierda
lado de la membrana. Para una ctHula
a derecha, dejando tras de sf sus contraiones tipica, 1 microculombio de carga
negativos (rojo); este hecho provoca la (6 x 1012 iones monovalentes) par
aparici6n de un potencial de membrana
diferente de cera
centfmetro cuadrado de membrana
transferidos de un lado a otro de la
membrana genera una carga de
Resulta clarificador considerar que Ie ocurre al potencial de membrana si la aproximadamente 1 V. Esto significa,
par ejemplo, que en una celula esferica
ATPasa de Na+-K+ se inactiva de repente. Primero, se produce un bajada suave e
de 10 ~m de dhimetro, el mlmero de
inmediata del potencial de membrana. Esto se debe a que la bomba es electro-
iones K+ que han de fluir hacia el
genica y cuando se mantiene activa contribuye ligeramente a mantener el po- exterior de la celula para generar una
tencial de membrana ya que extrae tres Na+ por cada dos K+ que introduce en variaci6n del potencial de membrana
la celula. Sin embargo, al cerrar la bomba no se eliminan los componentes de 100 mY, linicamente es de
principales del potencial de reposo, que como se ha esbozado anteriormente 11100000 parte del total de iones K+
esta generado por un mecanismo de equilibrio del K+. Este desequilibrio persiste del citosol.
mientras se mantenga baja la concentraci6n de Na+ en el interior de la celula y
alta la de K+ en el exterior -normalmente varios minutos. No obstante, la mem-
brana plasm<itica es algo permeable a todos los iones pequenos, incluido el Na+.
Asi pues, si no funciona la ATPasa de Na+-K+ los gradientes i6nicos mantenidos
par la bomba iran disminuyendo y el potencial de membrana establecido por la
difusi6n a traves de los canales de fuga de K+ tambien ira disminuyendo. Cuando
entra Na+ el equilibrio osm6tico aumenta y entra agua a la celula (vease Panel
11-1, pag. 552). Pero si la celula no explota, se alcanzara un nuevo estado de re-
poso en el que el Na+, el K+ y el Cl- se encontraran en equilibrio a traves de la
membrana. En este estado el potencial de membrana es mucho menor que en
la celula normal, con una bomba Na+-K+ activa.
La diferencia de potencial a traves de la membrana plasmatica de una celula
animal en reposo varia entre -20mV y -200mV, dependiendo del organismo y
del tipo celular. A pesar de que el gradiente de K+ siempre tiene una influencia
principal en este potencial, el gradiente de otros iones (y el efecto desequilibran-
te de las bombas de iones) tambien tiene un efecto significativo: cuanto mas
permeable sea la membrana para un ion, mayor sera la tendencia del potencial
de membrana a alcanzar el valor de equilibrio de este ion. En consecuencia, casi
cualquier cambio de la permeabilidad de la membrana provocara un cambio en
el potencial de la membrana. Esta es la clave principal que relaciona la excitabi-
lidad electrica de las celulas con las actividades de los canales i6nicos.
Las celulas nerviosas 0 neuronas son especialistas de la excitabilidad electrica;
la mayor parte de nuestros conocimientos sobre este tema proviene de estudios
sobre estas celulas extraordinarias. Por 10 tanto, para poder situar la excitabilidad
electrica en su contexto, hemos de hacer una breve disgresi6n para revisar breve-
mente c6mo esta organizada una neurona tipica.

La funci6n de una celula nerviosa depende

de su estructura alargada 15
La tarea fundamental de la neurona es recibir, conducir y transmitir senales.
Para realizar estas funciones, normalmente las neuronas son extremadamente
alargadas: una celula nerviosa de un ser humano, que se extienda desde la me-
dula espinal hasta un musculo del pie, puede tener un metro de largo. Cada

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 563

 Figura 11-20 Diagrama esquematico
de una neurona tfpica de vertebrado.
Las flechas indican la direcci6n en la
que se transportan las senales. EI ax6n
conduce las senales en sentido de
.--:.~~._ ~==================:::~r~;;
alejarse del soma celular mientras que
las multiples dendritas reciben senales
de los axones de otras neuronas. Las
terminales nerviosas acaban sobre las
dendritas 0 el soma celular de otras
neuronas 0 sobre otros tipos celulares,
como fibras musculares 0 celulas
cuerpo 0 dendritas ax6n (desde menos de 1 mm ramificaciones terminales
soma celular hasta mas de 1 m de largo) del ax6n glandulares.

neurona consta de un cuerpo 0 soma celular (que contiene el mlcleo) y un cierto

mimero de largas y delgadas proyecciones que irradian desde este soma hacia
el exterior. Generalmente tienen un largo ax6n, que conduce las sefiales desde el
soma celular hacia dianas distantes y varias dendritas, mas cortas y ramificadas,
que se extienden desde el soma celular como antenas, proporcionando una ex-
tensa superficie que Ie permite a la neurona recibir sefiales procedentes de los
axones de otras celulas nerviosas (Figura 11-20). Las sefiales tambien se reciben Figura 11-21 ElcanaldeNa+
en el propio soma celular. Habitualmente el ax6n se divide en su extremo distal regulado.por voltaje puede adoptar
en numerosas ramas de forma que puede transmitir su mensaje a muchas celu- como minimo tres conformaciones
las diana simultaneamente. Ademas, la extensi6n de las ramificaciones de las (estados). Fuerzas internas,
representadas aquf como atracciones
dendritas puede ser muy grande -en algunos casos 10 suficiente como para que
entre cargas de diferentes zonas del
una sola neurona reciba hasta 100 000 contactos.
canal, estabilizan cada uno de los
A pesar del variado significado de las sefiales transportadas par las diferen- estados contra pequenas
tes clases de neuronas, la forma de estas sefiales es siempre la misma: cambios desestabilizaciones, pero una colisi6n
del potencial electrico a traves de la membrana plasmcitica de la neurona. La co- suficientemente violenta con otras
municaci6n tiene lugar debido a que una alteraci6n electrica producida en una moIeculas puede ocasionar que el
zona de la celula se propaga hacia otras zonas. Esta alteraci6n se ida debilitando canal "salte" de uno a otro de estos
al aumentar la distancia a la que se propaga a partir del origen, a no ser que se estados. EI estado de menor energfa
gaste energfa para amplificarla a medida que se propaga. En distancias cortas depende del potencial de membrana
esta atenuaci6n carece de importancia; de hecho muchas neuronas pequefias ya que las diferentes conformaciones
conducen sus sefiales de manera pasiva, sin amplificaci6n. Para comunicacio- tienen diferentes distribuciones de
nes a largas distancias, sin embargo, esta propagaci6n pasiva es inadecuada. Asf, cargas. Cuando la membrana esta en
reposo (muy polarizada) la
las neuronas mayores utilizan un mecanismo de sefializaci6n activo que consti-
conformaci6n de menor energfa libre,
tuye uno de sus rasgos mas sorprendentes: un estfmulo electrico que sobrepasa
y por tanto la mas estable, es la
una cierta intensidad umbral desencadena una explosi6n de actividad electrica cerrada. Cuando la membrana se
que se propaga rapidamente a 10 largo de la membrana plasmcitica de la neuro- encuentra despolarizada, la
na y que se mantiene por una amplificaci6n automatica a 10 largo de todo el re- conformaci6n abierta tiene una
corrido. Esta onda viajera de excitaci6n electrica, conocida como potencial de energfa menor, por 10 que el canal
acci6n 0 impulso nervioso, puede transportar un mensaje sin atenuaci6n desde tiene una alta probabilidad de abrirse.
un extrema de una neurona hasta el otro, a velocidades tan rapidas como 100 m/ Sin embargo, la energfa libre de la
seg 0 mas. Los potenciales de acci6n son consecuencia directa de la acci6n de conformaci6n inactivada es todavia
los canales regulados por voltaje, como veremos a continuaci6n menor, por 10 que, despues de un
perfodo de tiempo aleatorio dedicado
a este estado abierto, el canal se
inactiva. Asf pues, la conformaci6n
abierta corresponde a un estado
membrana
polarizada metaestable que unicamente puede
] existir de forma transitoria. Las jlechas
en rajo indican la secuencia de
/ cerrado
alteraciones que se producen como
consecuencia de una despolarizaci6n
membrana subita mientras que lajlecha en negro
despolarizada indica el retorno a la conformaci6n
original ya que es el estado de menor
energfa despues de que la membrana
inactivado abierto se ha repolarizado.

564 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 co Figura j 122 Un potencial de accion.
Q) <5
-"'0
c co
Un potencial de acci6n se dispara par
Q)-
"i: ::::s un breve pulso de corriente (mostrado
<5 E
U".j:i en el grafteo superior) que despolariza
'"
Q)
parcialmente la membrana. como se
o 2 muestra en el gnifico de potencial de
co membrana respecto al tiempo (grafteo
c
~ intermedio). La eurva en verde muestra
..c
E que el potencial de membrana puede
Q)

E> simplemente relajarse de nuevo hacia

~E el potencial de reposo tras el estimulo
"iii despolarizador si la membrana no
'0
cQ)
tuviera canales i6nicos regulados par
'0Co voltaje; este retorno relativamente
o 2 suave del potencial de membrana a su
valor inicial de -70 mV en ausencia de
o'" Q)
canales de Na+ es automatico debido al
~~+ eflujo de K+ a traves de los canales de
.g~~
CO C
_co cerrados abiertos inactivados cerrados K+, el cuailleva a la membrana de
'" "
Q)
nuevo al potencial de equilibrio de K'.
o 2
La eurva en rajo muestra el curso del
tiempo (milisegundos) potencial de accion causado por la
apertura y posterior inactivaci6n de los
canales de Na+ regulados par voltaje,
cuyo estado se muestra en la parte
Los canales i6nicos regulados por voltaje son los responsables inferior de la figura. La membrana no
puede disparar un segundo potencial
dela generaci6n de potenciales de acci6n en celulas de accion hasta que los canales de Na+
excitables eIectricamente 15 17 hayan vuelto ala conformaci6n
La membrana plasmatica de todas las celulas excitables electricamente (no solo cerrada (vease Figura 11-21); hasta este
de las neuronas sino tambien de las fibras musculares, celulas endocrinas y ooci- momento, la membrana se encuentra
en un estado refractario a la
tos) presentan canales i6nicos regulados por voltaje, que son los responsables
estimulaci6n.
de la generacion de los potenciales de accion. Un potencial de accion se dispara
par una despolarizaci6n de la membrana -es decir, por una variacion del poten-
cial de membrana hasta un valor menos negativo. (Veremos mas adelante de que
forma esta variacion puede estar causada por la accion de un neurotransmisor).
En las celulas nerviosas y en las fibras musculares esqueleticas. un estfmulo que
provoca una despolarizacion parcial de la membrana genera inmediatamente la
apertura de los canales de Na+ regulados por voltaje, 10 cual permite que entre en
la celula una pequefia cantidad de Na+ a favor de su gradiente electroqufmico. El
influjo de cargas positivas despolariza min mas la membrana, por 10 que se
abren mas canales de Na+, que admiten mas iones Na+, cuya entrada genera una
mayor despolarizacion de la membrana. Este proceso continua de una manera
auto-amplificante hasta que el potencial de la region determinada de la mem-
brana haya variado desde su valor de reposo -de aproximadamente -70 mV-
hasta el potencial de equilibrio del Na+ -de aproximadamente +50 mV- (vease
Panel 11-2, pag. 562). En este punto, cuando la fuerza electroqufmica neta im-
pulsora del flujo de Na+ es casi cero, la celula podrfa alcanzar un nuevo estado de
reposo con todos sus canales de Na+ abiertos permanentemente si la conforma-
ci6n abierta de los canales de Na+ fuese estable.
La celula se salva de este tipo de espasmo electrico permanente porque los
canales de Na+ tienen un mecanismo de inactivacion automatica que hace que
los canales se cierren rapidamente incluso cuando la membrana todavfa esta
despolarizada. Los canales de Na+ permanecen en este estado inactivado, en el
que no pueden volverse a abrir, hasta pasados algunos milisegundos despues
que el potencial de membrana recupere su valor negativo inicial. En la Figura
11-21 se ilustran esquematicamente estos tres estados distintos del canal de Na+
regulado por voltaje -cerrado, abierto, e inactivado. En la Figura 11-22 se indica
la contribucion de estas variaciones al aumento y la disminucion del potencial
deaccion.

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 565

 (A) propagaci6n Figura 11-23 Propagaci6n de un
potencial de acci6n a 10 largo de un
ax6n. (A) muestra los voltajes que se
registrarfan en un conjunto de
electrodos intracelulares colocados a
intervalos en el axon. (B) muestra los
cambios en los canales de Na+ y los
flujos de corriente (lineas de color
marron) que dan lugar a la
perturbacion migratoria del potencial
de membrana. La region del axon que
presenta la membrana despolarizada.
esta coloreada en raja. Notese que un
potencial de accion solo puede viajar a
partir dellugar donde se produce la
despolarizacion porque la inactivacion
o 2 3 de los canales de Na+ impide que la
tiempo (milisegundos) despolarizacion se extienda hacia
atras. (Vease tambien Figura 11-22.)

(8)

vista instantanea a t = 0
propagaci6n

cerrado inactivado abierto cerrado

repolarizada despolarizada repose

vista instantanea a t = 1 milisegundo

propagaci6n

cerrado inactivado abierto' cerrado

repolarizada despolarizada repose

La descripci6n que hemos hecho hasta aquf del potencial de acci6n unica-
mente afecta a una pequefia parci6n de la membrana plasmlitica. Sin embargo,
la despolarizaci6n auto-amplificante de esta porci6n es suficiente para despola-
rizar regiones vecinas. en las cuales se produce este mismo cicio. De esta mane-
ra el potencial de acci6n se propaga desde un punto inicial de despolarizaci6n
por toda la membrana plasmlitica, como se muestra en la Figura 11-23.
Ademas de la inactivaci6n de los canales de Na+, en muchas celulas nervio-
sas actlia un segundo mecanismo que ayuda a la membrana plasmatica activada

566 Capftulo 11 : Transporte de moh~culas pequeiias a traves de la membrana

a recuperar mas rapidamente su potencial negativo original, y asf poder trans-
mitir un segundo impulso. Los canales de K+ regulados por voltaje se abren, de
forma que el influjo transitorio de Na+ es rapidamente contrarrestado por un
eflujo de K+, que en muy poco tiempo situa a la membrana en el potencial de
equilibrio del K+ incluso antes de que se haya completado la inactivacion de los
canales de Na+. Estos canales de K+ responden a cambios del potencial de mem-
brana de forma muy semejante a como 10 hacen los canales de Na+, aunque con
una cinetica ligeramente mas lenta; por esta razon, a menudo se les denomina
canales de K+ retardados.
Los mecanismos electroquimicos del potencial de accion fueron estableci-
dos por primera vez gracias a unas famosas series de experimentos realizados en
las decadas de 1940 y 1950. Debido a que las tecnicas de estudio de los procesos
electricos en celulas pequefias todavia no se habian desarrollado, los experi-
mentos utilizaron las neuronas gigantes del calamar. A pesar de los muchos
avances tecnicos realizados desde entonces, la logica de los analisis originales
todavia continua sirviendo de modelo hoy en dia. En el Panel 11-3 se resumen
algunos de los experimentos clave originales.

La mielinizaci6n incrementa la velocidad y la eficiencia

de la propagaci6n de los potenciales de acci6n
en las celulas nerviosas 15,18
Los axones de muchas neuronas de vertebrados se hallan aislados por una vaina
de mielina, la cual incrementa notablemente la velocidad a la que el axon con-
duce un potencial de accion. La importancia de la mielinizacion se pone drama-
ticamente de manifiesto por la enfermedad desmielinizante de la esclerosis mul-
tiple, en la que la vaina de mielina de algunas regiones del sistema nervioso
central se halla destruida por un mecanismo todavia desconocido; cuando esto
ocurre, la velocidad de propagacion de los impulsos nerviosos se reduce nota-
blemente, a menudo con consecuencias neurologicas devastadoras.
La mielina esta formada por celulas accesorias especializadas, denominadas
celulas gliales -eelulas de Schwann en los nervios perifericos y oligodendrocitos en
el sistema nervioso central. Estas celulas gliales depositan, una sobre otra, capas
de su propia membrana plasmMica formando una apretada espiral alrededor del
axon (Figura 11-24), aislando asi la membrana del axon de forma que a su traves
casi no se escapa corriente. La vaina esta interrumpida a intervalos regulares por
n6dulos de Ranvier, donde se concentran casi todos los canales de Na+ del axon.
Debido a que las porciones del axon que estan recubiertas por la vaina tienen
excelentes propiedades de cable (se comportan electricamente mucho mejor
que los extraordinariamente bien disefiados cables submarinos telegraficos), la
despolarizacion de la membrana en un nodulo se transmite de forma pasiva casi
inmediatamente hasta el nodulo siguiente, un proceso denominado conducci6n
saltataria. Este tipo de conduccion tiene dos ventajas principales: los potencia-
les de accion viajan mas rapidamente y se ahorra energia metabolica ya que la
excitaci6n activa queda restringida a las reducidas regiones de la membrana
plasmMica del axon situadas en los n6dulos de Ranvier.

EI registro de zona indica que cada uno de los canales de Na+

se abre siguiendo la ley del todo 0 nada IS, 19
Las membranas plasmMicas de las neuronas y de las fibras musculares esqueleti-
cas contienen muchos miles de canales de Na+ regulados por voltaje, y la corrien-
te que atraviesa la membrana es la suma de las corrientes que fluyen a traves de
todos ellos. Esta corriente agregada puede ser registrada con un microelectrodo,
tal como se describe en la Figura 11-23. Sin embargo, tambien es posible regis-
trar las corrientes que fluyen a traves de canales individuales. Ello se consigue
mediante la tecnica del registro de zona (patch-clamp recording), un metodo
que revolucion6 el estudio de los canales ionicos permitiendo estudiar el trans-

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 567

 1. Los potenciales de accion se registran con un electrodo intracelular
EI axon gigante de calamar tiene un diametro aproximado de 0,5-1 mm V una
longitud de varios centfmetros. En el eje de la celula se puede introducir un
electrodo en forma de tuba capilar de vidrio que contiene una solucion
conductora, de manera que su punta quede situada dentro del citoplasma.
Con su avuda, se puede medir la diferencia de voltaje entre el interior
V el exterior de la celula -es decir, el potencial de membrana- cuando
un potencial de accion pasa rapidamente por el electrodo. EI potencial de
accion se desencadena por una breve descarga electrica en un extrema
del axon. No importa de que extrema se trate, va que la excitacion puede
viajar en cualquier direccion; tampoco importa la intensidad de la descarga
mientras exceda un cierto umbral: el potencial de accion es "todo 0 nada".

2. EI potencial de accion solo depende de la membrana plasmatica
de la neurona V de los gradientes de Na+ V K+ a traves de ella
Los tres iones mas abundantes, tanto en el interior como en el exterior
del axon, son Na+, K+ V CI-. Como en otras celulas, la bomba de
Na+-K+ mantiene un gradiente de concentracion: la concentracion de
Na+ es unas 9 veces menor en el interior del axon que en el exterior,
mientras que la concentracion de K+ es 20 veces mayor en el interior.
LQue iones son importantes para los potenciales de accion?
EI axon gigante del calamar es tan grande V robusto que es posible
extraer su citoplasma, como se hace con la pasta dentifrica de un tuba
V despues rellenarlo con soluciones artificiales puras de Na+, K+
CI- 0 S042-. De manera notable, si (V solo si) las concentraciones
de Na+ V K+ en el interior V el exterior del axon se aproximan aI
encontradas de manera natural, el axon propaga potenciales de
accion de forma normal. La parte importante de la celula en la
senalizacion electrica, por 10 tanto, ha de ser la membrana; los
iones importantes son el Na+ V K+; sus gradientes de concentraci .
a traves de la membrana han de proporcionar una fuente de
energia libre suficiente para impulsar el potencial de accion, ya
que se supone que las demas fuentes de energia metaboliea han
sido eliminadas mediante la perfusion.

axoplasma

canula
IIIIIIBIBIIIII. .
i"
liqUidO de perfusi6n flujo de Iiquido de perfusi6n
~tltll!l!i:il1ji'!ll"il~"\\l)!!Jl\\\i1\I\'
membrana del ax6n gigante

En reposo, la membrana es principalmente permeable al K+; de K+ , V se situa incluso mas cerca del potencial de equilibrio
se vuelve transitoriamente permeable al Na+ durante el para el K+ que el propio potencial de reposo: la membrana ha
potencial de accion perdido su permeabilidad para el Na+ V todavia se ha vuelto m
permeable al K+ que antes -es decir, los canales de Na+
En reposo, el potencial de membrana es cercano al potencial de
se han cerrado, V se han abierto canales adicionales de K+.
equilibrio para el K+. Cuando se cambia la concentracion externa
de K+, el potencial de reposo cambia bruscamente de acuerdo con
la ecuacion de Nernst para el K+ (vease Panel 11-2). En reposo, por
tanto, la membrana es principal mente permeable al K+: los canales de
fuga de K+ constituven la principal ruta ionica a traves de la membrana. Forma del potencial de
Si se varia la concentracion externa de Na+, no se altera el potencial aeci6n cuando el medio
de reposo. Sin embargo, la altura del pica del potencial de accion externo contiene ell00%,
varia marcadamente, de acuerdo con la ecuacion de Nernst para el Na+. 50%, 0 el 33% de la
Durante el potencial de accion, por 10 tanto, la membrana parece ser concentraci6n normal
permeable principal mente al Na+: se abren los canales de Na+. de Na+.
En la segunda parte del potencial de accion, el potencial de membrana
vuelve a un valor negativo que depende de la concentracion externa

4. EI voltaje constante revela como el potencial de membrana
controla la apertura V el cierre de los canales ionicos
EI potencial de membrana se mantiene constante en el axon, haciendo
pasar una corriente electrica a traves de un hila metalico descubierto
V colocado en el eje del axon; con otro electrodo intracelular se pueden
seguir las variaciones del potencial de la membrana. Cuando la
10 milisegundos- que transcurre mientras el potencial de
membrana se mantiene repolarizado (en reposo).
En un axon sin voltaje constante, la espiga del potencial de
accion esta producida por un avalancha de Na+ a traves de los
canales de Na+ abiertos; la inactivacion de estos V la apertura
de los de K+ devuelve la membrana al potencial de reposo.

'AI~] J
membrana se desplaza bruscamente de su potencial de reposo V se
mantiene en un estado despolarizado (A), los canales de Na+ se abren
rapidamente hasta que la permeabilidad de la membrana para el Na+
es mucho mayor que para el K+; entonces se cierran de nuevo de
manera espontanea. Los canales de K+ tambien se abren pero con un
cierto retraso, de manera que la permeabilidad para el K+ aumenta
cuando cae la permeabilidad para el Na+ (8). Si ahora se repite muv abierto
rapidamente el experimento, haciendo volver brevemente la
membrana al potencial de reposo V despolarizandola de nuevo, la
respuesta es diferente: la despolarizacion prolongada ha hecho que
los canales de Na+ entren en un estado inactivado V la segunda
despolarizacion no produce una subida V una bajada del potencial de
)81 l ::t
membrana similar a la primera. La recuperacion de los canales de este
estado supone un intervalo de tiempo relativamente largo-de
Figura 11-24 Mielinizaci6n. (A) Esquema de un axon mielinizado de
un nervio periferico. Cada celula de Schwann deposita su membrana
plasm<itica de forma concentrica alrededor del axon, formando un
segmento de vaina de mielina de aproximadamente 1 mm de
longitud. Para mayor claridad las capas de mielina no se han dibujado
tan densamente compactadas como 10 estan en realidad (vease B).
(B) Electronmicrografia de un corte de un nervio de la pata de una
rata joven. Se observan dos celulas de Schwann: una (abajoJ esta
empezando a mielinizar su axon, mientras que la otra ya ha formado
1~m
una vaina de mielina casI madura. (B. de C. Raine, en Myelin [Po
Morell, ed.]. New York: Plenum, 1976.)

porte a traves de una unica molecula proteica de canal situada en una pequefia
porci6n de membrana que se halle cubriendo la punta de una micropipeta (Fi-
gura 11-25). Esta simple pero poderosa tecnica permite estudiar las propiedades
detalladas de los canales i6nicos de cualquier tipo celular-, y ello ha llevado a
descubrir que incluso las celulas que no son excitables electricamente tienen ha-
bitualmente en su membrana plasmMica varios canales i6nicos regulados. Mu-
chas de estas celulas, como las levaduras, son demasiado pequefias para poder
ser estudiadas pOl el metodo electrofisio16gico tradicional de implantar un mi-
croelectrodo en el interior de la celula.
El registro de zona indica que cada uno de los canales de Na+ regulados por
voltaje se abre siguiendo la ley de todo 0 nada: los tiempos de apertura y cierre
son aleatorios pero cuando el canal esta abierto, siempre tiene la misma con-
ductancia, permitiendo que pasen unos 8000 iones pOl segundo a su traves. Por
10 tanto, la corriente agregada que atraviesa la membrana de una celula entera, a
traves de una gran poblaci6n de canales de Na+, no indica el grado de apertura
de un canal tipico individual sino el numero total de canales de su membrana
que se hallan abiertos en un momenta dado (Figura 11-26).
El fen6meno de regulaci6n por voltaje puede ser entendido en terminos de
simples principios fisicos elementales. El interior de una neurona 0 de una fibra
muscular en reposo tiene un potencial electrico de unos 50-100 mV mas negati-
vo que el medio externo. Esta diferencia de potencial puede parecer pequefia,
pero dado que se produce a traves de una membrana plasmatica de tan s610 5 nm
de grosOl, el gradiente de voltaje resultante es de aproximadamente 100000 V/cm.
Por 10 tanto, las proteinas de la membrana estan sujetas a un campo electrico
muy grande. Estas proteinas, como todas las demas, presentan en su superficie
varios grupos cargados y diversas uniones polarizadas entre sus Momos. Por
consiguiente, el campo electrico genera fuerzas sobre su estructura molecular.

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 569

 succi6n suave
1--1 ~m-l Figura 11- 25 Tecnica de registro de
zona. Debido a que la uni6n entre la
boca de la micropipeta y la membrana
es muy intensa, la corriente
unicamente puede entrar 0 salir de la
micropipeta atravesando los canales
de la zona de membrana que recubre
la boca de la micropipeta. Se utiliza un
dispositivo electr6nico que permite
mantener el potencial de membrana a
un valor constante predeterminado
mientras se registra la corriente i6nica
que atraviesa los canales individuales.
La ventaja de trabajar con la zona de
membrana separada de la celula es
que resulta mas facH alterar la
composici6n de la soluci6n a cada lado
de la membrana, para estudiar el
efecto de diferentes solutos sabre el
Probablemente las variaciones del campo eIectrieo de la membrana afectan de comportamiento del canal. La zona de
forma insignificante a muchas de las protefnas de membrana. Sin embargo, los membrana separada del resto de la
canales i6nieos regulados par voltaje pueden adoptar varias conformaciones al- celula tambien puede colocarse en la
temativas cuyas estabilidades dependen de la intensidad del campo electrieo. orientaci6n opuesta, con la cara
citoplasmatica de la membrana hacia
Cada conformaci6n es estable frente a pequefias alteraciones, pero puede saltar
ellumen de la pipeta (veanse tambien
("flip") a otra conformaci6n si sufre una sacudida suficiente par los movimien- Figuras 4-54 y 4-55).
tos termicos aleatorios del entomo, altenindose la estabilidad relativa de las
conformaciones abierta, cerrada e inactivada (vease Figura 11-21).

Los canales cati6nicos regulados por voltaje estan relacionados

evolutiva y estructuralmente20
Los canales de Na+ no constituyen el tinieo tipo de canal cati6nieo regulado par
voltaje que puede generar un potencial de acci6n: par ejemplo, los potenciales
de acci6n de algunas fibras musculares, oocitos y celulas endocrinas no depen-
den de canales de Na+ sino de canales de Ca2+ regulados por voltaje. Ademas, en
algunos tipos de celulas que narmalmente no son eIectrieamente activas se ha-
llan canales de Na+, de K+ 0 de Ca2+regulados por voltaje, cuya funci6n es desco-
nocida. En cada una de estas tres clases de canales cati6nieos regulados par vol-
taje existe una sorprendente diversidad estructural y funcional, generada tanto

Figura 11-26 Registros de corriente a traves de un tinico canal de Na+ regulado por
voltaje. Se utiliza una diminuta zona de membrana plasmcitica separada de una
celula muscular de embri6n de rata (vease Figura 11-25). La membrana foe
despolarizada por un abrupto incremento de potencial, como se indica en (A). Los
potencial de -40
(A)
membrana -90
:;~r:;~~S;;~~~~
(mV)
tres registros de corriente que se presentan en (B) provienen de tres experimentos
realizados sabre la misma zona de membrana. Cada una de las variaciones mayores (B)
de corriente de (B) representan la apertura y el cierre de un solo canal. El estudio o
comparativo de los tres registros muestra que, a pesar de que los tiempos de apertura 1
y cierre del canal varian considerablemente, la velocidad a la que la corriente fluye a corriente de 0
la zona de 1
traves del canal abierto es pnicticamente constante. Las fluctuaciones menores del membrana 0
registro de corriente provienen principalmente de ruido electrico de fondo del (pA) 1
aparato de medida. En (C) semuestra la suma de corrientes medidas en 144
repeticiones del mismo experimento. Esta corriente agregada es equivalente a la
(C)
corriente de Na+ habitual que se podrfa observar a traves de una zona de membrana
que contuviera 144 canales. Comparando (B) y (C) se puede observar que la variaci6n o
temporal de voltaje de la corriente agregada refleja la probabilidad de que cualquier corriente
agregada
canal individual se encuentre en el estado abierto; esta probabilidad disminuye con
el tiempo a medida que los canales de la membrana despolarizada adoptan su
conformaci6n inactivada. (Datos de J. Patlak y R. Horn,]. Gen. Physiol. 79:333-351, o 40 80
1982, con permiso de copyright de The Rockefeller University Press.) tiempo (milisegundos)

570 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 Figura 11-27 Modelo de la estructura

lJ bicapa
lipidica
dal canal de K +regulado por voltaje.
(A) Diagrama topol6gico mostrando
los principales dominios funcionales
de la cadena polipeptfdica de una
(A)
subunidad, con las seis posibles
COOH helices 0: transmembrana marcadas
CITOSOL
dell al 6. Se cree que las subunidades,
cada una de unos 600 aminmicidos, se
ensamblan formando un poro
transmembrana; en (B) s610 se
muestran dos de ellas. En los canales
de Na+ y de Ca2+regulados por voltaje
las 4 subunidades son dominios de
una unica larga cadena polipeptfdica,
pera se cree que su estructura general
es similar a esta. Parece que el
segmento de 20 aminoacidos (que se
muestra en rajo) situado en la regi6n
de uni6n entre las helices 5 y 6 se
extiende a traves de la membrana
como dos laminas ~ antiparalelas
formando el pora, como se muestra en
la figura. La cuarta helice 0: (azul) tiene
resfduos cargados positivamente en
casi cada tercera posici6n, 10 cual al
parecer Ie permite actuar como un
sensor al voltaje. AI menos en algunos
(B)
canales de K+ el dominio amino
terminal participa en la rapida
inactivaci6n del canal, como se ilustra
en la Figura 11-28.
por multiples genes como par maduraci6n alternativa de los transcritos de RNA
producidos a partir de un mismo gen. Sin embargo, la secuencias de aminoaci-
dos conocidas de los canales de Na+, K+ y Ca2+regulados par voltaje muestran
elevados grados de similitud, 10 cual sugiere que todos ellos pertenecen a una
gran superfamilia de pOteinas relacionadas evolutiva y estructuralmente.
Cada tipo de canal cati6nico regulado por voltaje esta compuesto de cuatO
dominios pOteicos hom610gos (en el caso de los canales de Na+ y de Ca2+) 0 de
cuatro subunidades identicas (en el caso de los canales de K+). Se cree que estos
cuatro dominios 0 subunidades se disponen a modo de costillas de un barril, 0-
deando un poO central, como se ilustra en la Figura 11-27. Los canales de K+ son
especialmente adecuados para estudiar las relaciones entre la estructura y la fun-
ci6n de los canales cati6nicos regulados por voltaje, ya que no estan farmados
por una gran cadena polipeptidica sino par subunidades identicas relativamente
pequefias. La secuencia de aminoacidos sugiere que cada una de las subunidades
de un canal de K+ contiene seis helices a que atraviesan la membrana, aunque,
de forma sorprendente, parece que ninguna de ellas forma el poO que conduce
los iones. Diversos estudios utilizando tecnicas de DNA recombinante sobre
proteinas de canal de K+ modificadas sugieren que un segmento de una cadena
polipeptidica de 20 aminoacidos se extiende a traves de la membrana formando
una lamina ~ antiparalela que bardea el poO: cuando se intercambia este ele-
mento entre dos canales de K+ con diferentes pOpiedades de permeabilidad, se
observa que las caracteristicas de permeabilidad dependen unicamente de este
segmento.
Se ha utilizado una apOximaci6n similar para identificar otras dos impar-
tantes regiones funcionales de las proteinas de canal de K+. Los 19 residuos ami-
no terminales de al menos una de estas pOteinas participan en la rapida inacti-
vaci6n del canal. Si se altera esta regi6n, la cinetica de inactivaci6n del canal
cambia, y si la regi6n se elimina completamente, se elimina la inactivaci6n.
AsombOsamente, en este ultimo caso se puede recuperar la inactivaci6n expo-

Canales i6nicos y propiedades eltktricas de las membranas 571

 REPOSO ABIERTO INACTIVADO Figura 11- 28 El modelo de "bola y
cadena" para la rapida inactivaci6n
de un canal de K+ regulado por
voltaje. Cuando la membrana se
despolariza el canal se abre yempieza
a conducir iones. Entonces, el canal
abierto es susceptible de ocluirse
(inactivarse) por la "bola" de 19
aminoacidos del extrema amino
terminal, que esta unida al propio
canal mediante un segmento de
cadena polipeptfdica desplegado que
actua como una "cadena". Para
simplificar s610 se muestran dos bolas;
niendo la cara citoplasmatica de la membrana plasm<itica a un pequeno peptido de hecho existen 4 de elias, una de
sintetico correspondiente al amino terminal eliminado. Estos resultados sugieren cada subunidad. Se cree que un
que la region amino terminal de cada canal de K+ actua como una pelota anclada mecanismo similar a este, utilizando
mediante una corta cadena, que ocluye el extremo citoplasm<itico del poro en un segmento diferente de la cadena
cuanto este se abre (Figura 11-28); se cree que un mecanismo similar a este actua polipeptfdica, actua en la inactivaci6n
del canal de Na+.
en la rapida inactivacion de los canales de Na+ regulados por voltaje, aunque pa-
rece que en este caso participa un segmento diferente de la protefna. Finalmente,
terminal nervioso
una de las helices a transmembrana altamente conservadas en todos los canales
cationicos regulados por voltaje conocidos contiene residuos de aminoacido car- neurotransmisor
en vesiculas
gados positivamente, distribuidos de una forma espaciada regularmente (vease
hendidura
Figura 11-27A). Se cree que esta helice podrfa actuar como sensor al voltaje en es- sinaptica
tos canales: si se altera alguno de estos residuos cargados, tambien se altera la _ _ _--canal
respuesta del canal al potencial de membrana. regulado por
transmisor
Se ha utilizado el mismo tipo de anaIisis, combinando la tecnologfa del DNA celula diana
recombinante y las tecnicas de electrofisiologfa, para caracterizar otras clase de postsimlptica
canales ionicos. Estos canales no se abren en respuesta a cambios del potencial SINAPSIS QUfMICA EN REPOSO

de membrana sino a la union de un neurotransmisor especffico.

En las sinapsis quimicas los canales i6nicos regulados por

transmisor transforman sefiales quimicas en sefiales eIectricas 15
membrana
Las senales neuronales se transmiten de una celula a otra a traves de lugares plasmatica
de la celula diana
especializados de contacto conocidos como sinapsis. El mecanismo habitual
de transmision es indirecto. Las celulas se hallan aisladas electricamente una de
otra, estando la celula presintiptica separada de la celula postsintiptica por una
estrecha hendidura sintiptica. Un cambio del potencial electrico en la celula pre-
SINAPSIS QUfMICA ACTIVA
sinaptica desencadena la liberacion de una pequena molecula senal conocida
como neurotransmisor, el cual se almacena en vesiculas sintipticas rodeadas de Figura 11-29 Una sinapsis quimica.
membrana y se libera por exocitosis. El neurotransmisor difunde rapidamente a Cuando un potencial de acci6n
traves de la hendidura simiptica y provoca un cambio electrico en la celula post- alcanza al terminal nervioso, estimula
sinaptica a traves de un canal i6nico regulado por transmisor (Figura 11-29). Una a dicho terminal a liberar su
vez el neurotransmisor ha sido secretado, es rapidamente eliminado, bien por neurotransmisor; el neurotransmisor
enzimas especfficas de la hendidura sinaptica bien por recaptacion -tanto por la se halla contenido en vesiculas
terminal nerviosa que 10 ha liberado como por las celulas gliales vecinas. La re- sinapticas y se libera al exterior celular
captacion esta mediada por varios tipos de protefnas transportadoras de neuro- cuando las vesiculas se fusionan con la
transmisor dependientes de Na+. La rapida eliminacion asegura la precision es- membrana plasmatica del terminal
nervioso. El neurotransmisor liberado
pacial y temporal de la senalizacion en la sinapsis: evita que el neurotransmisor
se une a los canales i6nicos regulados
afecte a las celulas vecinas y limpia la hendidura sinaptica antes de que se pro- por transmisor concentrados en la
duzca el nuevo pulso de liberaci6n de neurotransmisor, de forma que ala celula zona sinaptica de la membrana
postsinaptica se Ie puede comunicar el ritmo, repetido y rapido, de los procesos plasmatica de la celula diana,
senalizadores. Como veremos, la senalizaci6n a traves de sinapsis quimicas de abriendolos. El flujo de iones
este tipo es mucho mas vers<itil y adaptable que el acoplamiento electrico direc- resultante altera el potencial de
to a traves de uniones comunicantes en las sinapsis electricas (discutidas en el membrana de la celula diana,
Capftulo 19), tambien utilizadas por las neuronas aunque mucho menos fre- transmitiendo asi una senal desde el
cuentemente. nervio excitador.

572 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequenas a traves de la membrana

 Los canales i6nicos regulados por transmisor estan especializados en la
rapida conversion de senales qufmicas extracelulares en senales eIectricas, en
las sinapsis qufmicas. Los canales se hallan concentrados en la membrana
plasm<itica de la celula postsinaptica en la region de la sinapsis, y se abren
transitoriamente en respuesta a la union de moleculas de neurotransmisor,
produciendo asf un breve cambio de permeabilidad de la membrana (vease Fi-
gura 11-29). A diferencia de los canales regulados por voltaje responsables de
los potenciales de accion, los canales regulados por transmisor son relativa-
mente insensibles al potencial de membrana y por ella no pueden por sf mis-
mos producir una excitacion auto-amplificante. En lugar de ello producen
cambios locales de permeabilidad y por tanto cambios del potencial de mem-
brana, de intensidad proporcional al numero de moIeculas de neurotransmisor
liberadas en la sinapsis y al tiempo en que estas moIeculas persistan en ella.
Solamente se puede generar un potencial de accion a partir de este lugar si el
potencial de membrana local se incrementa suficientemente como para abrir
un mlmero suficiente de canales cationicos regulados por voltaje presentes en
la misma membrana de la celula diana.

Las sinapsis qufmicas pueden ser excitadoras

o inhibidoras 15,21

Los canales ionicos regulados por transmisor difieren en algunos aspectos im-
portantes. En primer lugar, como los receptores, tienen un lugar de union alta-
mente selectivo para el neurotransmisor liberado desde el terminal nervioso
presinaptico. En segundo lugar, como los canales, son selectivos al tipo de ion
que dejan pasar a traves de la membrana; ella determina la naturaleza de la res-
puesta postsinaptica. Los neurotransmisores excitadores, como la acetilcolina,
el glutamato y la serotonina, abren canales cationicos que generan un influjo de
Na+ que despolariza la membrana postsinaptica hacia el potencial umbral que
dispara un potencial de accion. Los neurotransmisores inhibidores como el
ticido y-aminobutirico (GABA) y la glicina, por el contrario, abren canales de Cl-,
10 cual suprime el disparo, polarizando la membrana postsinaptica.
Ya hemos discutido como la apertura de los canales ionicos despolariza una
membrana. El efecto de la apertura de los canales de Cl- puede entenderse de la
siguiente manera. La concentracion de Cl- es mucho mayor fuera que dentro de
la celula (vease Tabla 11-1, pag. 542). Por esta razon, la apertura de los canales
de Cl- tendera a hiperpolarizar la membrana al entrar mas iones eloro cargados
negativamente al interior de la celula, a no ser que el potencial de membrana sea
tan negativo que sea insuficiente para contrarrestar el elevado gradiente de Cl-.
(De hecho, en muchas neuronas el potencial de equilibrio para el Cl- es cercano
al potencial de reposo, 0 ineluso es mas negativo.) En aquel caso, la apertura de
los canales de Cl- hace mas diffcil despolarizar la membrana y, por 10 tanto, exci-
tar la celula. La importancia de los neurotransmisores inhibidores se demuestra
por los efectos de las toxinas que bloquean su accion: la estricnina, por ejemplo,
se une a los receptores de glicina bloqueando la accion de la glicina, 10 cual cau-
sa espasmos, convulsiones y la muerte.
No todas las senales qufmicas del sistema nervioso, sin embargo, actuan a
traves de canales ionicos regulados por ligando. Muchas de las moleculas senal
que son secretadas por los terminales nerviosos, ineluidos una gran variedad de
neuropeptidos, se unen a receptores que regulan, indirectamente, canales ionicos.
Estos receptores, denominados receptores relacionados con proteina G y receptores
relacionados con enzimas se discuten en detalle en el Capftulo 15. Mientras que la
senalizacion mediada por neurotransmisores excitadores e inhibidores que se
unen a canales ionicos regulados por transmisor generalmente es inmediata, sim-
pIe y breve, la senalizacion mediada por receptores relacionados con protefnas G
y por receptores relacionados con enzimas tiende a ser mucho mas lenta y mas
compleja, asf como de consecuencias mas duraderas.

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 573

Los receptores de acetilcolina de las uniones neuromusculares fibra muscular ax6n mielinizado nervio

son canales cati6nicos regulados por transmisor22

El ejemplo mejor estudiado de canales i6nieos regulados por transmisor es el re-
ceptor de acetilcolina de las fibras musculares esqueIetieas. Este canal se abre
transitoriamente por la liberaci6n de acetilcolina del terminal nervioso, en una
sinapsis neuromuscular -una sinapsis especializada entre una neurona motora
y una fibra muscular esqueIetiea (Figura 11-30). Este tipo de sinapsis ha sido es-
tudiada intensamente ya que es facilmente accesible a los estudios electrofisio-
16gieos, a diferencia de la mayorfa de sinapsis del sistema nervioso central.
El receptor de acetilcolina ocupa un lugar especial en la historia de los ca-
nales i6nieos. Fue el primer canal i6nieo que fue purificado, el primero del que terminales ax6nicos
se conoci6 la secuencia completa de aminoacidos, el primero en ser reconstitui- L-.J
10 11m
do funcionalmente en bieapas lipfdieas sintetieas y el primero para el que se re-
gistr6 la senal eIectriea de un solo canal abierto. Su gen tambien fue el primer Figura 11-30 Electronmlcrograffa de
gen de una proteina de canal que fue clonado y secuenciado. AI menos existen barrido a bajo aumento de una
dos razones que explican el rapido progreso en la purificaci6n y caracterizaci6n sinapsis neuromuscular de rana. Se
muestra la terminaci6n de un unico
de este receptor. En primer lugar, existe una fuente extraordinariamente riea de
ax6n sobre una tibra muscular
este receptor en los 6rganos eIectrieos de los peces electricos y de las rayas (estos esqueletica. (De 1. Desaki yY. Uehara,
6rganos son mtisculos modificados disenados para descargar un gran shock ]. Neurocyto[10:101-110, 1981, con
electrico sobre su presa). En segundo lugar, existen neurotoxinas (como la a- permiso de Chapman & Hall.)
bungarotoxina) en el veneno de ciertas serpientes, que se unen a dieho receptor
con una elevada afinidad (K. = 109 litros/mol) y especificidad, por 10 que pueden
ser utilizadas para purificarlo por cromatografia de afinidad. Tambien se puede
utilizar a-bungarotoxina fluorescente 0 marcada con radiactividad para localizar
y cuantificar los receptores de acetilcolina. De esta forma, se ha visto que el re-
ceptor se halla densamente empaquetado en la zona de la sinapsis neuromuscu-
lar de la membrana plasm<itiea de las fibras musculares (unos 20 000 recepto-
res/JIm 2), mientras que existen relativamente pocos de tales receptores en otros
lugares de esta membrana.
El receptor de acetilcolina de la fibra muscular esqueletiea esta compuesto
por cinco polipeptidos transmembrana, dos de un tipo y otros tres, codificados
por cuatro genes diferentes. Los cuatro genes tienen una secuencia muy similar,
10 cual implica que probablemente han evolucionado a partir de un gen ances-
tral comtin. Cada uno de los dos polipeptidos identieos del pentamero tiene lu-
gares de uni6n ala acetilcolina. Cuando dos moleculas de acetilcolina se unen al
complejo pentamerico, inducen un cambio de conformaci6n que abre el canal.
El canal permanece abierto durante aproximadamente 1 milisegundo y enton-
ces se cierra; como los canales de Na+ regulados por voltaje, la forma abierta del
canal receptor de acetilcolina tiene una vida media corta, y rapidamente salta a
un estado cerrado, de menor energia libre (Figura 11-31). Posteriormente, las
moIeculas de acetilcolina se disocian del receptor y son hidrolizadas por una en-
zima especifica (la acetilcolinesterasa) localizada en la sinapsis neuromuscular.

Figura 11-31 Tres conformaciones

del receptor de acetilcolina. La uni6n
de dos moleculas de acetilcolina abre
este canal i6nico regulado por
transmisor. Sin embargo, incluso
no ocupado cuando se halla unido a acetilcolina, el
/ y cerrado receptor s610 se halla en la
conformaci6n abierta muy
brevemente, antes de que el canal se
vuelva a cerrar. Entonces la
acetilcolina se disocia del receptor, 10
cual permite al receptor volver a su
conformaci6n original.
ocupado ocupado
y cerrado yabierto

574 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequeiias a traves de la membrana

 'Y 0 Figura 11-32 Modelo de la estructura
del receptor de acetllcolina. Cinco
lugares de subunidades hom610gas (a, a, /3, YY 0)
union a se combinan formando un poro
acetilcolina acuoso transmembrana. El poro esta
constituido por un anillo de cinco
helices a transmembrana, una de cada
subunidad. Probablemente el anillo de
helices a esta rodeado por un aro de
f
4nm
lamina /3 transmembrana formada por
los otros segmentos transmembrana
1 de las cinco subunidades. Parece que
en su conformaci6n cerrada el poro se
halla ocluido por las cadenas laterales
compuerta hidrof6bicas de cinco residuos de
leucina, uno de cada helice a, que
forman una compuerta cerca del
Una vez se ha liberado del neurotransmisor al que se habia unido, el receptor de centro de la bicapa lipfdica. Las
acetilcolina revierte a su estado inicial de reposo. cadenas laterales cargadas
Se ha determinado la forma general del receptor de acetilcolina y la dispo- negativamente situadas a cada lado del
poro aseguran que linicamente
sicion de sus subunidades, mediante una combinacion de microscopia electro-
atravesaran el poro iones cargados
nica y difraccion de rayos X de angulo pequeno sobre cristales bidimensiona- positivamente. Las dos subunidades a
les: las cinco subunidades estan dispuestas en anillo formando un canal contienen un lugar de uni6n a la
transmembrana lleno de agua, que consiste en un estrecho poro a traves de la acetilcolina; cuando la acetilcolina se
bicapa lipidica rodeado por zonas cilindricas de la molecula (Figura 11-32). En une a los dos lugares de uni6n, el canal
cada uno de los extremos del poro, unos grupos de residuos de aminoacido car- sufre un cambio de conformaci6n que
gados negativamente ayudan a excluir los iones negativos y facilitan que los abre la compuerta, posiblemente
iones positivos de diametro menor de 0,65 nm atraviesen el poro. El trafico nor- gracias a un desplazamiento de los
mal consiste principalmente en iones Na+ y K+, Y algunos iones Caz+. Asi, a dife- residuos de leucina. (Adaptado de N.
rencia de los canales cationicos regulados por voltaje, este canal tiene una baja Unwin, Cell/Neuron 72/10 [Supl.) 31-
selectividad a los cationes y la contribucion relativa de los diferentes cationes a 41, 1993 Cell Press.)
la corriente a traves de los canales depende fundamentalmente de sus concen-
traciones y de las fuerzas electroquimicas que los impulsan. Cuando la membra-
na de la fibra muscular se halla en su potencial de reposo, la fuerza neta de im-
pulso del K+ es cercana a cero ya que el gradiente de voltaje equilibra casi
totalmente el gradiente de concentracion de K+ a traves de la membrana (vease
Panel 11-2, pag. 562). Para el Na+, por el contrario, el gradiente de voltaje y el
gradiente de concentracion actuan en la misma direccion, impulsando el ion al
interior de la celula. (Lo mismo es valida para el CaZ+, pero la concentracion ex-
tracelular de Caz+es mucho menor que la de Na+, de forma que el Caz+contribu-
ye muy ligeramente a la corriente de entrada total.) Asi pues, la apertura de los
canales receptores de acetilcolina provoca un gran influjo neto de iones Na+
(unos 30 000 iones por canal cada milisegundo). Este influjo causa una despola-
rizacion de la membrana que senaliza al musculo a contraerse, como discutire-
mos mas adelante.

Los canales i6nicos regulados por transmisor son las manas

principales de la acci6n de drogas psicoactivas23
Los canales ionicos que se abren directamente en respuesta a los neurotransmi-
sores acetilcolina, serotonina, GABA y glicina, contienen subunidades que son
estructuralmente similares entre si, 10 cual sugiere que estan relacionadas evolu-
tivamente y que probablemente forman poros transmembrana de la misma ma-
nera, aunque su especificidad para el neurotransmisor y su selectividad para el
ion sean distintas. Los canales ionicos regulados por glutamato estan formados
por una familia distinta de subunidades, pero al parecer tienen un estructura ge-
neral similar. En cada caso, el canal esta formado por subunidades polipeptidi-
cas homologas, las cuales probablemente forman un pentamero que se asemeja
al receptor de acetilcolina (vease Figura 11-32). La comparacion de las Figuras

Canales i6nicos y propiedades elcktricas de las membranas 575

 Figura 11-33 Tres clases de protemas
de canal. Posible relaci6n entre el
mlmero de subunidades proteicas y el
diametro del poro. (Adaptado de
B. Hille, Ionic Channels of Excitable
Membranes, 2a ed. Sunderland, MA:
Sinauer, 1992.)
canales cati6nicos canales i6nicos uniones
regulados por regulados por comunicantes
voltaje transmisor (0 de tipo "gap")

11-27 Y11-32 pone de manifiesto las diferencias entre estos canales y los canales
cationicos regulados por voltaje, los cuales estan formados por un anillo de cua-
tro subunidades (0 dominios). Quiza como resultado de ello, los canales regula-
dos por transmisor tienen poros mas anchos y, por tanto, son menos estrictos en
su selectividad a iones. Las uniones comunicantes, formadas por un anillo de
seis subunidades, tienen poros mas anchos que permiten el paso de iones inor-
ganicos y de pequefias moleculas organicas (se discute en el Capitulo 19). Esta
posible relacion entre mimero de subunidades y la amplitud del poro se ilustra
en la Figura 11-33.
Cada uno de los tipos de canales ionicos regulados por transmisor tienen for-
mas alternativas de cada subunidad, codificadas por genes diferentes 0 genera-
das por la maduracion alternativa del RNA del mismo producto genico. Todo ello
se combina de diferente forma generando un conjunto de subtipos de canales ex-
traordinariamente diverso, con diferentes afinidades para el ligando, diferentes
conductancias de canal, diferentes velocidades de apertura y cierre y diferentes
sensibilidades a drogas y toxinas. Las neuronas de los vertebrados, por ejemplo,
tienen canales ionicos regulados por acetilcolina que se diferencian de los de las
fibras musculares en que habitualmente estan formados por dos subunidades de
un tipo y tres de otro; sin embargo existen al menos siete genes que codifican di-
ferentes versiones del primer tipo de subunidades y al menos tres que codifican
diferentes versiones del segundo, con una diversidad afiadida debida a la madu-
racion alternativa del RNA. Se pueden caracterizar diferentes subconjuntos de
neuronas sensibles a acetilcolina, con diferentes funciones en el cerebro, debido
a diferentes combinaciones de estas subunidades. Ello, en principio y con alguna
utilizacion en la practica, permite disefiar drogas que tengan como diana reduci-
dos grupos de neuronas 0 de sinapsis, influyendo asi especificamente determina-
das funciones cerebrales. De hecho, los canales ionicos regulados por transmisor
han sido durante mucho tiempo importantes dianas para las drogas. Un cirujano,
por ejemplo, puede hacer que los musculos se relajen durante una operacion blo-
queando los receptores de acetilcolina de las fibras musculares esqueleticas con
curare, una droga vegetal que se utilizo originariamente por los indios sudameri-
canos para envenenar sus flechas. La mayoria de drogas utilizadas en el trata-
miento del insomnio, de la ansiedad, de la depresion y de la esquizofrenia, ejercen
sus efectos sobre las sinapsis quimicas y muchas de elIas actuan uniendose a ca-
nales ionicos regulados por transmisor: tanto los barbituratos como los tranquili-
zantes, como el Valium y el Librium, por ejemplo, se unen a los receptores de
GABA potenciando su accion inhibidora al permitir que concentraciones mas ba-
jas de GABA abran los canales de Cl-. La nueva biologia molecular de los canales
revela la diversidad y los detalles de su estructura, permitiendo asi disefiar una
nueva generacion de drogas psicoactivas que actuaran mas selectivamente alige-
rando el sufrimiento de las enfermedades mentales.
Los canales ionicos son los componentes moleculares basicos a partir de los
cuales se construyen los elementos neuronales de la computacion y la sefializa-
cion biologica. Para poder entrever como pueden llegar a ser de sofisticadas las
funciones de estos elementos, consideramos ahora varios ejemplos que de-
muestran como actlian conjuntamente varios grupos de canales en la comuni-
cacion sinaptica entre celulas excitables electricamente.

576 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

La transmisi6n neuromuscular implica la activaci6n secuencial
de al menos cuatro grupos de canales i6nicos regulados1 5
La importancia que tienen para las celulas excitables eIectricamente los canales
i6nicos regulados puede ilustrarse siguiendo el proceso por el cual un impulso
nervioso estimula la contraccion de una celula muscular. Esta respuesta aparen-
temente simple requiere la activacion secuencial de al menos cuatro grupos de
canales ionicos regulados -todos ellos en pocos milisegundos (Figura 11-34).

1. EI proceso se inicia cuando un impulso nervioso llega al terminal nervioso

y despolariza la membrana plasmMica. La despolarizacion abre transito-
riamente los canales de Ca2+ regulados por voItaje de esta membrana.
Dado que la concentracion de Ca2+fuera de la celulas es mas de 1000 veces
mayor que la concentracion libre del interior de las celulas, el Ca2+fluye
hacia el interior del terminal nervioso. EI incremento de la concentracion
de Ca2+ en el citoplasma del terminal dispara la liberacion localizada de
acetilcolina en la hendidura sinaptica.
2. La acetilcolina liberada se une a los receptores de acetilcolina de la membra-
na plasmMica postsinaptica de'la fibra muscular, abriendo transitoriamente
los canales cationicos que se hallan asociados a estos receptores. EI influjo de
Na+ que se genera provoca una despolarizacion localizada de la membrana.
3. La despolarizacion de la membrana plasmMica de la fibra muscular abre
los canales de Na+ regulados por voltaje de esta membrana, permitiendo la
entrada de mas Na+, el cual despolariza la membrana. A su vez, esta despo-
larizacion abre mas canales de Na+ regulados por voltaje, de forma que se
forma una despolarizacion auto-propagante (un potencial de accion) que
se extiende por toda la membrana plasmMica (vease Figura 11-23).
4. La despolarizacion generalizada de la membrana plasmMica de la fibra
muscular provoca la apertura transitoria de canales ionicos de regiones es-
pecializadas (los tubulos transversos [T] -discutidos en el Capitulo 16) de
esta membrana. Esta apertura causa la apertura transitoria de canales de Figura 11-34 Sistema de canales
i6nicos de una sinapsis
liberaci6n de Ca2+ de regiones adyacentes de la membrana del reticulo sar-
neuromuscular. Estos canales i6nicos
coplasmMico, la cual provoca la liberacion al citosol de Ca2+almacenado regulados son esenciales para la
en el reticulo sarcoplasmMico. Este incremento repentino en la concentra- estimulaci6n de la contracci6n
cion citosolica de Ca2+provoca la contraccion de las miofibrillas de la fibra muscular par un impulso nemoso. Los
muscular. Todavia no conocemos cual es el mecanismo mediante el cual difere,ntes canales estan numerados
la activacion de los canales de Ca2 +regulados por voltaje de la membrana siguiendo la secuencia en la que se
del tubulo T conduce a la apertura de los canales de liberacion de Ca2 +de abren, tal como se describe en el texto.

SINAPSIS NEUROMUSCULAR EN REPOSO UNION NEUROMUSCULAR ACTIVADA

CANAL DE Ca 2+
REGULADO POR
VOLTAJE ~

CANAL CAT1QNICO
REGULADO POR
ACETILCOLINA

CANAL DE Na+
REGULADO POR
VOLTAJE

CANALREGULADO
reticulo membrana DE L1BERACION
sarcoplasmatico plasmatica DE Ca 2 +
muscular

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 577

 Figura 11-35 Soma celular de una
motoneurona de la medula espinal.
Sobre el soma celular y las dendritas
existen muchos miles de sinapsis
farmadas por terminaciones nerviosas.
Estas sinapsis suministran senales de
otras zonas del organismo controlando

I
el desencadenamiento de potenciales
de acci6n a 10 largo del ax6n de esta
gran celula.
0.1 mm

dendrita

1
terminaciones
presinapticas

la membrana del reticulo sarcoplasmatico. Sin embargo, ambas membra-

nas se hallan en intima contacto y ambos tipos de canales se hallan juntos
formando una estructura especializada (vease Figura 16-92). Por 10 tanto,
es posible que un cambio de conformacion inducido por voltaje del canal
de Ca2+ de la membrana plasm<itica abra directamente el canal de libera-
cion de Ca2+ del reticulo sarcoplasmatico a traves de un acoplamiento me-
canico (se discute en el Capitulo 16).

La activacion de la contraccion muscular por una neurona motora es comple-

ja, pero para que una neurona integre un elevado mlmero de sefiales de entrada y
las integre generando una sefial de salida adecuada se requiere una interaccion de
canales i6nicos incluso mas sofisticada, como discutiremos a continuaci6n.

EI potencial postsimiptico principal de una neurona

representa la suma espacial y temporal de muchos
pequefios potenciales postsimipticos1 5,24
En el sistema nervioso central una sola neurona puede recibir sefiales de miles de
otras neuronas. Por ejemplo, sobre una neurona motora media de la medula es-
pinal realizan sinapsis varios miles de terminales nerviosos; su soma celular y sus
dendritas estan casi completamente cubiertos por elIas (Figura 11-35). Algunas
de estas sinapsis transmiten sefiales desde el cerebro 0 desde la medula espinal;
otras transportan informacion sensorial desde los musculos 0 desde la piel. La
motoneurona puede combinar la informacion que recibe de todas estas fuentes y
reacciona generando potenciales de accion 0 permaneciendo en reposo.
De las muchas sinapsis que existen sobre una neurona, algunas tienden a
excitarla y otras a inhibirla. El neurotransmisor liberado en una sinapsis excita-
dora causa una ligera despolarizaci6n de la membrana postsinaptica denomina-
da potencial postsinaptico excitador (PSP, de postsinaptic potencial) mientras
que el neurotransmisor liberado en una sinapsis inhibidora generalmente causa
una pequefia hiperpolarizacion denominada PSP inhibidor. Como la membrana
de las dendritas y del soma celular de la neurona contiene pocos canales de Na+

578 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 Figura 11-36 Principio de la suma
temporal. Cada potencial de acci6n
2
presimiptico que llega a una sinapsis
produce un pequeno potencial
postsimiptico (PSP) (lineas negras).
-0 Cuando llegan sucesivamente varios
'"c.0 0
0 5 10 potenciales de acci6n a una misma
~
Q)
"0 tiempo (milisegundos) sinapsis, cada PSP producido se
co anade a la cola del PSP precedente,
'0
c: generando un PSP combinado
!
0
c. principal (lfneas verdes). Cuanto
0; mayor es la frecuencia de llegada de
"0 2
'" potenciales de acci6n, mayor es el
E
'0
c:
tamano del PSP combinado.
Q)

0
c.
0
> 0 5 10
E
0
u tiempo (milisegundos)
"-5-
.",
c:
'iii
'iii
0
c.
4
co
'0
c:
Q)

'0
c.

o
o 5 10
tiempo (milisegundos)

regulados por voltaje, generalmente un solo PSP no es suficiente para desenca-

denar un potencial de acci6n. Por el contrario, cada senal aferente queda tefleja-
da fielmente en un PSP de una magnitud graduada, que decrece con la distancia
a partir dellugar de la sinapsis. Si las senales llegan simultaneamente a varias si-
napsis de la misma regi6n del arbol dendrftico, el PSP total de esta zona sera, a
grandes rasgos, la suma de los PSP individuales, de forma que los PSP inhibido-
res contribuyen de manera negativa a esta suma total. Los PSP de las regiones
vecinas se propagan pasivamente a otras regiones y convergen en el soma celu-
lar. Como el soma celular es relativamente pequeno comparado con el arbol
dendrftico, el potencial de membrana del soma celular y de sus alrededores in-
mediatos sera mas 0 menos uniforme y estara compuesto por los efectos de to-
das las senales que llegan a la celula, cuya importancia dependera de la distancia
a la que se encuentra la sinapsis del soma celular. Se dice, por 10 tanto, que el
potencial postsinaptico pri\lcipal (PSP principal) del soma celular representa
una suma espacial de todos los estfmulos recibidos. Si predominan las senales
excitadoras, se generani una despolarizaci6n; si predominan las senales inhibi-
doras, se producira una hiperpolarizaci6n.
Mientras que la suma espacial combina los efectos de las senales recibidas
en diferentes lugares de la membrana, la suma temporal combina los efectos de
las senales recibidas en momentos distintos. Si un potencial de acci6n llega a
una sinapsis y desencadena la liberaci6n de un neurotransmisor antes de que un
PSP haya decafdo completamente, el segundo PSP se anade a la cola remanente
del primero. Si llegan muchos potenciales de acci6n siguiendo una sucesi6n ra-
pida, cada PSP se anade a la cola del PSP precedente construyendo un PSP prin-
cipal mantenido cuya magnitud refleja la velocidad de disparo de la neurona
presinaptica (Figura 11-36). Esta es la esencia de la sumaci6n temporal: traduce
lafrecuencia de las senales de entrada en magnitud de un PSP neto.

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 579

 (A) (B)
OJ
a.
'(3
c:
.~

C-
oo
C-

;;
E
-70
Figura 11-37 Codificaci6n del PSP
100 200 100 200 principal en forma de frecuencia de
tiempo (milisegundos) tiempo (milisegundos) descarga de potenciales de ,acci6n en
un ax6n. Comparando (Al con (Bl se
observa que la frecuencia de descarga
de cada ax6n aumenta con el
Conjuntamente, las sumaciones temporal y espacial proporcionan los me- incremento del PSP principal; en (el se
dios mediante los cuales las velocidades de descarga de muchas neuronas presi- resume la relaci6n general entre
mipticas controlan el potencial de membrana (el PSP principal) del soma de una ambos panimetros.
sola celula postsinaptica. El ultimo paso en la integraci6n neuronal realizado par
la celula postsinaptica es la generaci6n de una senal de salida, normalmente en
farma de potenciales de acci6n, con el fin de retransmitir una senal a otras celu-
las. La senal de salida es un reflejo de la magnitud del PSP principal del soma ce-
lular. Sin embargo, mientras que el PSP principal es una variable graduada de
manera continua, los potenciales de acci6n son de tipo todo 0 nada y de tamafio
uniforme. La unica variable existente en la senalizaci6n mediante potenciales de
acci6n es el intervalo de tiempo entre un potencial de acci6n y el siguiente. Por
10 tanto, para la transmisi6n a grandes distancias, la magnitud del PSP principal
se traduce, 0 se codifica, en la frecuencia de descarga de los potenciales de ac-
ci6n (Figura 11-37). Esta codificaci6n se consigue gracias a un grupo especial de
canales i6nicos regulados que se encuentran presentes a una densidad elevada
en la base del ax6n, en un punto adyacente al soma celular, en una regi6n cono-
cida como el cono 0 colina ax6nica (vease Figura 11-35).

La integracl6n neuronal requiere la combinaci6n de al menos

tres tipos de canales de K+ diferentes 15 25
Hemos visto que la intensidad de la estimulaci6n recibida par una neurona se
codifica. en las transmisiones a larga distancia, como frecuencia de potenciales
de acci6n que dispara la neurona: cuanto mayor sea la estimulaci6n mayor es la
frecuencia de los potenciales de acci6n. Los potenciales de acci6n se inician en
el cono ax6nico, unica regi6n de cada neurona en la que los canales de Na+ re-
gulados par voltaje son completos. Sin embargo, para realizar esta funci6n espe-
cial de codificaci6n, la membrana del cono ax6nico contiene como minima
otros cuatro tipos de canales i6nicos -tres de ellos selectivos para el K+ y uno se-
lectivo para el Ca2+. Las tres variedades de canales de K+ presentan propiedades
diferentes; nos referiremos a ellos con los nombres de canales de K+ activados re-
tardados, tempranos y activados por Ca2+. Para comprender par que son necesa-
rios varios tipos de canal, consideremos primero el comportamiento que se ob-
servaria si los unicos canales regulados por voltaje que existieran en la celula
nerviosa fueran los canales de Na+. Por debajo de un cierto umbral de estimula-
ci6n sinaptica, la despolarizaci6n de la membrana del cono ax6nico seria insufi-
ciente para desencadenar un potencial de acci6n. AI aumentar gradualmente la
estimulaci6n, se cruzaria el umbral; los canales de Na+ se abririan y se dispararia
un potencial de acci6n. El potencial de acci6n terminaria de la manera habitual,
par inactivaci6n de los canales de Na+. Antes de que se pudiera disparar otro po-
tencial de acci6n, estos canales deberian recuperarse de su inactivaci6n. Pero
esto requeriria que el voltaje de la membrana volviera a un valor muy negativo,

580 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana

 cosa que no se produciria mientras se mantuviera el intenso estimulo despolari-
zante (del PSP). Por consiguiente, se necesita otro tipo de canal para repolarizar
la membrana despues de cada potencial de accion y preparar a la celula para
que inicie otro potencial de accion. Esta tarea la llevan a cabo los canales de K+
retardados, que ya vimos previamente al estudiar la propagacion del potencial
de accion (vease pag. 565). Estos canales estan regulados por voltaje pero debido
ala lentitud de su cinetica solo se abren durante la fase de descenso del poten-
cial de accion, cuando los canales de Na+ estan inactivos. Su apertura permite
una salida de K+ que conduce la membrana de nuevo al potencial de equilibrio
del K+. Este potencial es tan negativo que los canales de Na+ se recuperan nipida-
mente de su estado inactivado. La repolarizacion de la membrana provoca tam-
bien el cierre de los propios canales de K+ retardados. Ahora el cono axonico se
halla en condiciones basales, de forma que el estimulo despolarizante proceden-
te de las senales sinapticas aferentes es capaz de generar un nuevo potencial de
accion. De esta manera la estimulacion sostenida de las dendritas y del soma ce-
lular conduce ala descarga repetitiva del axon.
Sin embargo, la descarga repetitiva no es suficiente por si sola. La frecuencia
de descarga tiene que reflejar la intensidad de la estimulacion y un simple siste-
ma de canales de Na+ y de canales de K+ retardados es insuficiente para ello. Por
debajo de un cierto Divel umbral de estimulacion constante la celula no produci-
ra descargas en absoluto; por encima de este umbral empezara bruscamente a
producir descargas a una velocidad relativamente rapida. Los canales de K+ tem-
pranos solucionan este problema. Estos canales tambien estan regulados por
voltaje y se abren cuando se despolariza la membrana, pero su sensibilidad es-
pecifica al voltaje y las cineticas de inactivacion son tales que actuan reduciendo
la velocidad de descarga a unos niveles de estimulacion que estan inmediata-
mente por encima del umbral necesario para generar la descarga. Asi, ayudan a
eliminar la discontinuidad en la relacion entre la velocidad de descarga y la in-
tensidad de la estimulacion. El resultado de ella es una velocidad de descarga
que es proporcional a la intensidad del estimulo despolarizante dentro de un
margen muy amplio (vease Figura 11-37).
Normalmente, el proceso de codificacion se modula posteriormente por los
otros dos tipos de canales ionicos del cono axonico que se mencionaron al princi-
pio -los canales de Ca2+ regulados por voltaje y los canales de J<+ activados por Ca2+.
Estos canales acttian conjuntamente disminuyendo la respuesta de la celula a una
estimulacion constante invariable -un proceso denominado adaptaci6n. Los ca-
nales de Ca2+son similares a los canales de Ca2+que intervienen en la liberacion
del neurotransrnisor de los terminales axonicos presinapticos; se abren cuando se
dispara un potencial de accion, permitiendo la entrada de Ca2+al interior del axon.
El canal de K+ activado por Ca2+es estructural y funcionalmente diferente de cual-
quier otro tipo de canal descrito anteriormente. Se abre en respuesta a una eleva-
ci6n de la concentracion de Ca2+en la cara citoplasmMica de la membrana de la
celula nerviosa. Supongamos que se aplica un intenso estimulo despolarizante
durante un largo periodo de tiempo, que desencadena un largo tren de potencia-
les de accion. Cada potencial de accion permite una breve entrada de Ca2+a traves
de los canales de Ca2+regulados por voltaje, de modo que la concentracion intra-
celular de Ca2+aumenta gradualmente hasta un nivel elevado suficiente para abrir
los canales de K+ activados por Ca2+. El aumento resultante de la permeabilidad de
la membrana al K+ hace que la membrana sea mas dificil de despolarizar, incre-
mentando el retraso entre un potencial de accion y el siguiente. De esta manera,
una neurona que es estimulada continuamente durante un periodo de tiempo
prolongado, disminuye gradualmente su capacidad de respuesta al estimulo cons-
tante. Este fenomeno, que tambien puede aparecer por otros mecanismos, permi-
te a una neurona, y de hecho al sistema nervioso en general, reaccionar de forma
sensible a un cambio, incluso cuando el nivel basal de estimulacion es muyeleva-
do. Esta es una de las estrategias que nos permite, por ejemplo, sentir un contacto
sobre el hombro e ignorar, en cambio, la presion constante de nuestros vestidos.
En el Capitulo 15 discutimos con mas detalle los procesos de la adaptacion.

Canales i6nicos y propiedades electricas de las membranas 581

 Otras neuronas realizan integraciones diferentes, reaccionando a sus sena-
les de entrada de miles de maneras diferentes, 10 cual refleja el diferente surtido
de miembros de diferentes familias de canales i6nicos que presentan en sus
membranas. Por ejemplo, en el sistema nervioso de los vertebrados existen al
menos cinco tipos conocidos de canales de Ca2+ regulados por voltaje. La multi-
plicidad de genes permite generar una multitud de diferentes tipos de neuronas
cuyo comportamiento electrico corresponda perfectamente a la tarea particular
que ejecutan.
Una de las propiedades cruciales de los sistemas nerviosos es la capacidad
de aprender y de recardar, 10 cual parece depender fundamentalmente de cam-
bios a largo plazo de determinadas sinapsis. Concluimos este capitulo conside-
rando un remarcable tipo de canal i6nico que participa de forma especial en al-
gunas formas de aprendizaje y memoria. Se halla localizado en muchas sinapsis
del sistema nervioso central, donde esta regulado tanto por voltaje como par el
glutamato, neurotransmisar excitadar. Tambien es ellugar de acci6n de la droga
psicoactiva fenciclidina, 0 polvo de angel.

La potenciaci6n a largo plazo en el hipocampo

de los mamfferos depende de la entrada de Ca2 +
a traves de canales receptores de NMDA26
Pnicticamente todos los animales pueden aprender, pero parece que los mamife-
ros pueden hacerlo excepcionalmente bien (0 eso es 10 que a nosotros nos gusta
creer). En el cerebro de los mamiferos, el hipocampo, una regi6n del c6rtex cere-
bral, juega un papel especial en el aprendizaje: cuando es destruido en ambos la-
dos del cerebro se pierde notablemente la capacidad de generar nuevos recuer-
dos, aunque los que se establecieron previamente hace tiempo, permanecen. De
manera correspondiente, algunas sinapsis del hipocampo presentan dram<iticas
alteraciones funcionales cuando se estimulan repetidamente. Potenciales de ac-
ci6n ocasionales y aislados de las celulas presinapticas no dejan vestigios durade-
ros, pero un corto estallido de descargas repetitivas provoca la potenciaci6n a
largo plazo (LTP, de Long-Term Potentiation), de manera que los siguientes po-
tenciales de acci6n aislados de las celulas presinapticas provocan una respuesta
enormemente aumentada en las celulas postsinapticas. El efecto dura horas, dias
o semanas, dependiendo del mimero e intensidad de los trenes de descargas re-
petitivas. Solamente presentan este efecto de potenciaci6n las sinapsis que fue-
ron activadas; las sinapsis de la misma celula postsinaptica que permanecieron
en reposo, no estan afectadas. Sin embargo, si en el instante en el que la celula
esta recibiendo un tren de estimulaci6n repetitiva a traves de un conjunto de si-
napsis, un potencial de acci6n alcanza otra sinapsis de su superficie, esta sinap-
sis tambien sufrira una potenciaci6n a largo plazo, incluso aunque un potencial
de acci6n aislado que alcanzara esta misma sinapsis en otro momenta no dejara
tales huellas.
La regIa fundamental en el hipocampo parece ser que la potenciaci6n a lar-
go plazo ocurre siempre que una celula presindptica descarga (una 0 mas veces)
en el instante en que la membrana postsindptica se encuentra intensamente des-
polarizada (tanto par descargas repetitivas recientes sobre la misma celula post-
sinaptica como por otros motivos). Existen claras evidencias de que esta regIa
refleja el comportamiento de una clase particular de canales i6nicos presentes
en la membrana postsinaptica. El glutamato es el principal neurotransmisor ex-
citador del sistema nervioso central y en el hipocampo, como en otros lugares, la
mayoria de las corrientes despolarizantes responsables de los PSP excitadores
son debidas a canales i6nicos regulados par ligando que acttlan de una forma
estandar. Sin embargo, la corriente tiene, ademas, un segundo componente mu-
cho mas intrigante, mediado par una subclase distinta de canales i6nicos regu-
lados par glutamato conocidos como receptores NMDA debido a que se activan
selectivamente par un analogo artificial del glutamato, el N-metil-D-aspartato.
Los canales receptares NMDA estan regulados de farma doble, abriendose s6lo

582 Capitulo 11 : Transporte de moltkulas pequefias a traves de la membrana

 celula el glutamato liberado
presinaptica por un terminal nervioso
presimlptico activado
abre canales receptores
de glutamato no de
NMDA, permitiendo
glutamato un influjo de Na+ que
despolariza la
membrana postsinaptica
r
la desfolarizaci6n elimina
el Mg +que bloquea los
canales receptores de
NMDA, 10 cual (unidos a
glutamato) permite que
entre Ca 2+ a la celula
postsi naptica

Mg 2 + receptor de membrana el incremento de Ca 2+ en el

I
glutamato no despolarizada citosol induce a la celula
receptor NMDA postsinaptica a producir una
de NMDA
senal retr6grada que actua
sobre el terminal nervioso
presinaptico

cuando se satisfacen simultaneamente dos condiciones: el receptor ha de estar

unido al neurotransmisor glutamato y la membrana ha de estar intensamente
despolarizada. La segunda condicion es necesaria para liberar Mgz+, que normal-
mente bloquea el canal en reposo, y significa que los receptores NMDA solo se
activan cuando los canales convencionales regulados por glutamato se hallan
activados y la membrana despolarizada. Los receptores NMDA son crfticos para
la potenciacion a largo plazo. Cuando se bloquean selectivamente mediante un
inhibidor especffico, la potenciacion a largo plazo no aparece, aunque la trans-
mision simiptica continua normalmente. Un animal tratado con este inhibidor
se comporta normalmente pero es incapaz de aprender tareas del tipo que, se-
gUn se cree, depende del hipocampo.
lComo intervienen los receptores NMDA en estos efectos extraordinarios?
la senal retr6grada produce
La respuesta radica en que estos canales, cuando estan abiertos, son altamente un cambio a largo plaza que
permeables al CaZ+, que actua como mensajero intracelular cerca de su lugar de permite al terminal liberar
una mayor cantidad de
entrada al interior de la celula postsinaptica, desencadenando los cambios loca- glutamato cuando sea
les responsables de la potenciacion a largo plazo. La potenciacion a largo plazo activado de nuevo

se previene cuando se mantienen los niveles de CaZ+ artificialmente bajos en la

celula postsimiptica inyectando el quelante de CaZ+ EGTA, y puede ser inducida
elevando transitoriamente la concentracion extracelular de Caz+ hasta niveles ar-
tificialmente altos. La naturaleza de los cambios a largo plazo desencadenados
por el Caz+ es incierta, aunque parece que implican alteraciones estructurales de
la sinapsis.
Los cambios a largo plazo se inician en la celula postsimiptica pero tambien
afectan a la celula presinaptica de forma que liberan mas glutamato del normal
cuando se activan posteriormente. La naturaleza de estos ultimos cambios en la
celula presimiptica es incierta, pero parece claro que algt1n mensaje puede pasar
de forma retrograda de la celula postsinaptica a la presimiptica cuando se indu-
ce la potenciacion a largo plazo. La naturaleza de la senal retrograda todavia es
desconocida, aunque como candidatos se han sugerido el oxido nitrico y el mo-
Figura 11-38 Eventos de sefializaci6n
n6xido de carbono. En la Figura 11-38 se presenta un modelo tentativo de algu- en la potenciaci6n a largo plazo.
nas de las etapas de la inducci6n de la potenciacion a largo plazo. Ademas de los
cambios a largo plazo de las celulas presimipticas, ilustrados en la Figura 11-38,
tambien se producen cambios a largo plazo en la celula postsinaptica que con-
tribuyen ala potenciacion a largo plazo.
Existen evidencias de que los receptores NMDA juegan un papel importante
en el fenomeno relacionado con el aprendizaje, no s610 en el hipocampo sino
tambien en otras zonas del cerebro. En el Capitulo 21 veremos, ademas, que los
receptores NMDA juegan un papel crucial en el ajuste del patron anatomico de
conexiones simipticas en base a la experiencia durante el desarrollo del sistema
nervioso.
Asi, los neurotransmisores liberados en las sinapsis, ademas de provocar se-
nales eIectricas transitorias, tambien pueden alterar las concentraciones de me-

Canales i6nicos y propiedades ehktricas de las membranas 583

Tabla 11-3 Algunas faroilias de canales i6nicos

Familia* Subfamllias representativas

Canales cati6nicos canal de Na+ regulado par voltaje
regulados par canales de K+ regulados par voltaje
voltaje (induyendo los retardados
y los tempranos)
voltajes de Ca2+regulados par canal
Canales i6nicos canales cati6nicos regulados par
regulados par acetilcolina
transmisar canales cati6nicos regulados por excitadares
serotonina
canales cati6nicos regulados
par glutamato**
canales de Cl- regulados par GABA
canales de Cl- regulados par glicina } inhibidares

* Los miembros de una misma familia son similares en secuencia de aminmicidos y, por 10 tan-
to, se cree que derivan de un ancestro comiln; dentro de las subfamilias, el parecido es habi-
tualmente mayor.
** Estos canales estan formados por distintas familias de subunidades pero se cree que tienen
una estructura global similar a la de los otros canales i6nicos regulados por transmisor.

diadores intracelulares que conllevan cambios a largo plazo en la eficacia de la

transmisi6n simlptica. Todavia no conocemos, sin embargo, de que forma estos
cambios se prolongan durante semanas, meses 0 durante toda la vida, a pesar
del recambio normal de los constituyentes de la celula.
En la Tabla 11-3 se resumen algunas de las familias de canales de las que he-
mos tratado en este capitulo.

Resumen
Las protefnas de canalforman poros acuosos a traves de la bicapa lipfdica y permi-
ten a los iones inorganicos de un tamano y carga adecuados atravesarla a favor de
su gradiente electroqufmico, a velocidades que son unas 1000 veces superiores a las
conseguidas por cualquier transportador conocido. Estos canales ionicos estan re-
gulados y habitualmente se abren de forma transitoria en respuesta a perturbacio-
nes especificas de la membrana, como un cambio en el potencial de membrana (ca-
nales regulados por voltaje) 0 la union de un neurotransmisor (canales regulados
por transmisor).
En la mayorfa de las celulas de animales, el canal retardado de K+ desempena
un papel importante en la generaeion del potencial de reposo en la membrana
plasmatica. Los canales cationicos regulados por voltaje son responsables de la ge-
neraeion de los potenciales de accion auto-amplificantes en las celulas excitables
electricamente, como las neuronas y fibras musculares esqueleticas.
Los canales ionicos regulados por transmisor convierten senales qufmicas en
etectricas en las sinapsis qUfmicas: los neurotransmisores excitadores, como la aee-
tilcolina y el glutamato, abren de forma transitoria canales cationicos regulados
por transmisor, despolarizando asf la membrana postsinaptica haeia el potencial
de disparo, para iniciar un potencial de aecion; los neurotransmisores inhibidores,
como el GABAy la glicina, abren canales de Cl- regulados por transmisor, suprimen
la generaei6n del potencial de aecion al hacer la membrana postsindptica mas pola-
rizada. Se cree que una subclase especial de canales ionicos regulados por glutama-
to, denominados canales receptores NMDA, son muy permeables al Ca2 +, el cual
puede desencadenar cambios a largo plazo en las sinapsis, los cuales al parecer
participan en algunasformas de aprendizaje y de memoria.
Los canales i6nicos aetUan juntos de formas muy complejas, controlando el
comportamiento de las celulas electricas excitables. Una neurona tfpica, por ejem-

584 Capitulo 11 : Transporte de mohkulas pequefias a traves de la membrana

 plo, recibe miles de senales excitadoras e inhibidoras, combintindolas mediante su-
maci6n temporal y espacial y produciendo un potencial postsinaptico (PSP) princi-
pal en el soma celular. La magnitud del PSP principal se traduce en velocidad de
generaci6n de potenciales de acci6n por medio de canales cati6nicos de la membra-
na del cono ax6nico.
Bibliograffa
Citas
1. Hille, B. Ionic Channels of Excitable Membranes, 2nd
ed. Sunderland, MA: Sinauer, 1992.
Martonosi, A.N., ed. The Enzymes of Biological Mem-
branes, Vol. 3, Membrane Transport, 2nd ed. New
York: Plenum Press, 1985.
Stein, W.D. Channels, Carriers and Pumps: An Intro-
duction to Membrane Transport. San Diego, CA: Aca-
demic Press, 1990.
Tosteson, D.C., ed. Membrane Transport: People and
Ideas. Bethesda, MD: American Physiology Society,
1989.
2. Anderson, O.S. Permeability properties of unmodified
lipid bilayer membranes. In Membrane Transport in
Biology (G. Giebisch, D.C. Tosteson, H.H. Ussing,
eds.), Vol. 1, pp. 369-446. New York: Springer-Verlag,
1978.
Finkelstein, A. Water movement through membrane
channels. Curro Top. Mernbr. Transp. 21:295-308,
1984.
Walter, A.; Gutknecht, J. Permeability of small nonelec-
trolytes throught lipid bilayer membranes. ]. Mernbr.
Biol. 90:207-217, 1986.
3. Stein, W.D., ed. Ion Pumps: Structure, Function and Re-
gulation. New York: Liss, 1988.
Tanford, C. Mechanism of free energy coupling in active
transport. Annu. Rev. Biochern. 52:379-409, 1983.
4. Griffith, J.K., et al. Membrane transport proteins: impli-
cations of sequence comparisons. Curro Opin. Cell
Biol. 4:684-695, 1992.
Kaback, H.R Molecular biology of active transport:
from membrane to molecule to mechanism. Harvey
Lect. 83:77-105,1989.
Lodish, H.F. Anion-exchange and glucose transport
proteins: structure, function and distribution. Harvey
Lect. 82:19-46, 1988.
Numa, S. A molecular view of neurotransmitter recep-
tors and ionic channels. Harvey Lect. 83:121-165,1989.
Seeburg, P.H. The molecular biology of mammalian
glutamate receptor channels. Trends Neurosci.
16:359-365, 1993.
5. Dobler, M. Ionophores and Their Structures. New York:
Wiley-Interscience, 1981.
Pressman, B.C. Biological applications of ionophores.
Annu. Rev. Biochern. 45:501-530,1976.
Wallace, B.A. Gramicidin channels and pores. Annu.
Rev. Biophys. Biophys. Chern. 19:127-157,1990.
6. Henderson, P,J.F. The 12-transmembrane helix trans-
porters. Curro Opin. Cell Biol. 5:708-721, 1993.
Uiuger, P. Electrogenic Ion Pumps. Sunderland, MA: Si-
nauer, 1991.
L Blbllo...affa
Stein, W.D. Transport and Diffusion Across Cell Mem-
branes. Orlando, FL: Academic Press, 1986.
7. Glynn, I.M.; Ellory, C., eds. The Sodium Pump. Cam-
bridge, UK: Company of Biologists, 1985.
Horisberger, J.D.; Lemas, V.; Kraehenbiihl, J.-P.; Rossier,
B.C. Structure-function relationship of Na,K-ATPase.
Annu. Rev. Physiol. 53:565-584, 1991.
Mercer, RW. Structure of the Na,K-ATPase. Int. Rev. Cy-
tol. 137C:139-168, 1993.
Shull, G.E.; Schwartz, A; Lingrel, J.B. Amino acid
sequence of the catalytic subunit of the (Na+-K+)
ATPase deduced from a complementary DNA. Natu-
re 316:619-695, 1985.
8. Glynn, I.M. The Na+-K+ transporting adenosine triphos-
phatase. In The Enzymes of Biological Membranes,
2nd ed. (A. Martonosi, ed.), Vol. 3, pp. 34-114. New
York: Plenum Press, 1985.
Sweadner, K,J.; Goldin, S.M. Active transport of sodium
adn potassium ions: mechanism, function and regu-
lation. New Engl. ]. Med. 320:777-783, 1980.
9. Carafoli, E. Calcium pump of the plasma membrane.
Physiol. Rev. 71:129-153,1991.
Jencks, W.P. How does a calcium pump pump calcium?
]. Biol. Chern. 264:18855-18858,1989.
MacLennan, D.H.; Brandl, C,J.; Korczak, B.; Green, N.M.
Amino acid sequence of a Ca2+, Mg2+-dependent
ATPase from rabbit muscle sarcoplasmic reticulum,
deduced from its complementary DNA sequence.
Nature 316:696-700, 1985.
Sachs, G.; Munson, K. Mammalian phosphorylating ion-
motiveATPases. Curro Opin. Cell Biol. 3:685-694,1991.
Schatzmann, H.J. The calcium pump of the surface
membrane and of the sarcoplasmic reticulum. Annu.
Rev. Physiol. 51:473-486, 1989.
10. Hinkle, P.e.; McCarty, RE. How cells make ATP. Sci.
Am. 238(3):104-123,1978.
Nicholls, D.G. An Introduction to the Chemiosmotic The-
ory, 2nd ed. San Diego, CA: Academic Press, 1987.
Senior, AE. ATP synthesis by oxidative phosphoryla-
tion. Physiol. Rev. 68:177-231,1988.
11. Kinne, R; Hannafin, JA; Konig, B. Role of the NaCl-KCl
cotransport system in active chloride absorption and
secretion. Ann. N. Y. Acad. Sci. 456:198-206, 1985.
Scott, D.M. Sodium cotransport systems: cellular, mole-
cular and regulatory aspects. Bioessays 7:71-78,1987.
Semenza, G.; Kessler, M.; Schmidt, U.; Venter, J.C.; Fra-
ser, e.M. The small-intestinal sodium glucose co-
transporter(s). Ann. N. Y. Acad. Sci. 456:83-96, 1985.
Wright, E.M.; Hager, K.M.; Turk, E. Sodium cotransport
proteins. Curro Opin. Cell Biol. 4:696-702,1992.
Wright, J.K.; Seckler, R; Overath, P. Molecular aspects of
sugar:ion transport. Annu. Rev. Biochern. 55:225-248,
1986.
12. Boron, W.F. Intracellular pH regulation in epithelial
cells. Annu. Rev. Physiol. 48:377-388, 1986.
585
 Boron, W.F. Intracellular pH Regulation. In Membrane
Transport Processes in Organized Systems (T.E. An-
dreoli, J.F. Hoffman, D.D. Fanestil, S.G. Schultz, eds.J,
pp. 39-51. New York: Plenum Press, 1987.
Chesler, M.; Kaila, K. Modulation of pH by neuronal ac-
tivity. Trends Neurosci. 15:396-402, 1992.
Rudnick, G. ATP-driven H+-pumping into intracellular
organelles. Annu. Rev. Physiol. 48:403-413, 1986.
Thomas, R.c. Cell growth factors bicarbonate and pHi
response. Nature 337:601, 1989.
13. Almers, W.; Stirling, C. Distribution of transport pro-
teins over animal cell membranes. ]. Membr. BioI.
77:169-186,1984.
Handler, J.S. Overview of epithelial polarity. Annu. Rev.
Physiol. 51:729-740, 1989.
14. Ames, G.F.L. Bacterial periplasmic transport systems:
structure, mechanism and evolution. Annu. Rev. Bio-
chem. 55:397-425,1986.
Gottesman, M.M.; Pastan, I. Biochemistry of multidrug
resistance mediated by the multidrug transporter.
Annu. Rev. Biochem. 62:385-427, 1993.
Higgins, C.F. ABC transpoters: from microorganisms to
man. Annu. Rev. Cell Biol. 8:67-113,1992.
Kartner, N.; Ling, V. Multidrug resistance in cancer. Sci.
Am. 261(3):44-51,1989.
Welsh, MJ.; Anderson, M.P.; Rich, D.P.; et al. Cystic fi-
brosis transmembrane conductance regulator: a chlo-
ride channel with novel regulation. Neuron 8:821-
829,1992.
15. Hall, Z.W. An Introduction to Molecular Neurobiology,
pp. 33-178. Sunderland, MA: Sinauer, 1992.
Hille, B. Ionic Channels of Excitable Membranes, 2nd
ed. Sunderland, MA: Sinauer, 1992.
Jessell, T.M.; Kandel, E.R Synaptic transmission: a bidi-
rectional and self-modifiable form of cell-cell com-
munication. Cell 72 (Suppl. 1):1-30, 1993.
Kandel, E.R; Schwartz, J.H.; Jessell, T.M. Principle of Neural
Science, 3rd ed., pp. 34-224. NewYork: Elsevier, 1991.
Nicholls, J.G.; Martin, A.R; Wallace, B.G. From Neuron
to Brain, 3rd ed. Sunderland, MA: Sinauer, 1992.
Unwin, N. The structure of ion channels in membranes
of excitable cells. Neuron 3:665-676, 1989.
16. Baker, P.F.; Hodgkin, A.L.; Shaw, T.L. The effects of
changes in internal ionic concentration on the elec-
trical properties of perfused giant axons. ]. Physiol.
164:355-374, 1962.
Hodgkin, A.L.; Keynes, RD. Active tranport of cations in
giant axons from Sepia and Loligo. ].Physiol. 128:26-
60,1955.
17. Hodgkin, A.L.; Huxley, A.F. Currents carried by sodium
and potassium ions through the membrane of the
giant axon of Loligo.]. Physiol. 116:449-472, 1952.
Hodgkin, A.L.; Huxley, A.F. A quantitative description of
membrane current and its application to conduction
and excitation in nerve.]. Physiol. 117:500-544, 1952.
Katz, B. Nerve, Muscle and Synapse. New York: Mc-
Graw-Hill,1966.
18. Huxley, A.F.; Stampfli, R Evidence for saltatory conduc-
tion in peripheral myelinated nerve fibres. ]. Physiol.
108:315-339, 1949.
Morell, P., ed. Myelin, 2nd ed. New York: Plenum Press,
1984.
Morell, P.; Norton, W.T. Myelin. Sci. Am. 242(5):88-118,
1980.
586 Capitulo 11 : Transporte de moleculas pequefias a traves de la membrana
19. Neher, R; Sakmann, B. The patch clamp technique. Sci.
Am. 266(3):28-35, 1992.
Sakmann, B. Elementary steps in synaptic transmission
revealed by currents through single ion channels.
Science 256:503-512, 1992.
20. Armstrong, C.M. Voltage-dependent ion channels and
their gating. Physiol. Rev. (Suppl. on Forty Years of
Membrane Current in Nerve) 72:S5-S13, 1992.
Catterall, WA. Cellular and molecular biology of voltage-
gated sodium channels. Physiol. Rev. (Suppl. on Forty
Years of Membrane Current in Nerve) 72:S15-S48, 1992.
Hoshi, T.; Zagotta, W.N.; Aldrich, RW. Biophysical and
molecular mechanisms of Shaker potassium channel
inactivation. Science 250:533-538, 1990.
Jan, L.Y.; Jan, Y.N. Structural elements involved in spe-
cific K+ channel functions. Annu. Rev. Physiol.
54:537-555,1992.
Perney, T.M.; Kaczmarek, L.K. The molecular biology of
K+ channels. Curro Opin. Cell BioI. 3:663-670, 1991.
21. Hokfelt, T. Neuropeptides in perspective: the last ten
years. Neuron 7:867-879,1991.
22. Changeux, J.-P.; Galzi, J.-L.; Devillers-Thiery, A.; Ber-
trand, D. The functional architecture of the acetyl-
choline nicotinic receptor explored by affinity labe-
lling and site-directed mutagenesis. Q. Rev. Biophys.
25:395-432, 1992. '
Karlin, A. Explorations of the nicotinic acetylcholine re-
ceptor. Harvey Lect. 85:71-107,1991.
Lester, HA. The permeation pathway of neurotransmit-
ter-gated ion channels. Annu. Rev. Biophys. Biomol.
Struct. 21:267-292,1992.
Unwin, N. Neurotransmitter action: opening of ligand-
gated ion channels. Cell 72 (Suppl.):31-41, 1993.
Unwin, N. Nicotinic acetylcholine receptor at 9 A reso-
lution.]. Mol. BioI. 229:1101-1124,1993.
23. Betz, H. Ligand-gated ion channels in the brain: the ami-
no acid receptor superfamily. Neuron 5:383-392, 1990.
Sargent, P.B. The diversity of neuronal nicotinic acetyl-
choline receptors. Annu. Rev. Neurosci. 16:403-443,
1993.
Snyder, S.H. Drugs and the Brain. New York: W.H. Free-
man/Scientific American Books, 1987.
Tallman, J.F.; Gallager, D.W. The GABAergic system: a
locus of benzodiazepine action. Annu. Rev. Neurosci.
8:21-44,1985.
24. Barrett, J.N. Motoneruon dendrites: roles in synaptic in-
tegration. Fed. ProG. 34:1398-1407,1975.
Fuortes, M.G.F.; Frank, K.; Becker, M.C. Steps in the
production of motoneuron spikes. ]. Gen. Physiol.
40:735-752,1957.
25. Baxter, DA.; Byrne, J.H. Ionic conductance mechanisms
contributing to the electrophysiological properties of
neurons. Curro Opin. Neurobiol. 1:105-112, 1991.
Connor, JA.; Stevens, C.F. Prediction of repetitive firing
behavior from voltage clamp data on an isolated
neurone soma.]. Physiol. 213:31-53, 1971.
Meech, RW. Calcium-dependent potassium activation
in nervous tissues. Annu. Rev. Biophys. Bioeng. 7:1-
18,1978.
Rogawski, MA. The A-current: how ubiquitous a feature
of excitable cells is it? Trends Neurosci. 8:214-219, 1985.
Tsien, RW., et al. Multiple types of neuronal calcium
channels and their selective modulation. Trends
Neurosci. 11:431-438,1988.
26. Bekkers, J.M.; Stevens, C.F. Computational implications
of NMDA receptor channels. Cold Spring Harh.
5Symp. Quant. BioI. 55:131-135,1990.
Bliss, T.V.; Collingridge, G.L. A synaptic model of me-
mory: long-term potentiation in the hippocampus.
Nature 361:31-39, 1993.
Daw, N.W.; Stein, P.S.; Fox, K. The role of NMDA recep-
tors in information processing. Annu. Rev. Neurosci.
16:207-222,1993.
Bibliograffa
Madison, D.V.; Malenka, RC.; Nicoll, RA. Mechanisms
underlying long-term potentiation of synaptic trans-
mission. Annu. Rev. Neurosci. 14:379-397, 1991.
Stevens, C.F. Quantal release of neurotransmitter
and long-term potentiation. Cell 72 (Suppl.):55-63,
1993.
587
Compartimientos
intracelulares y
clasificacion de proteinas
12
--,_
-a.. COIDf*1I mlKldn de ...
aIuIIII ... altNw

.-
........
1 I _ d e_ _

1lI_.,...-..
IDterIorde. . ........ ,de
~
- PtiOiidlGiI_
-II reIfeuIo,~z mflII.

A direrencia de las baclerias. que generalmeme constan de un unico comparti

miemo rodeado por una membrana plasmatica, la celuJa eucariota es{~ suhdivi
dida en compartimientos rodeados por membrana, que son funcionalmenle dis-
timos. Cada companimiemo U organulo conliene su propia colecci6n de
enzimas. atras mol~ulas especiaUzadas y un complejo sistema de distribuci6n
que lranspona especHicamcmc los compuestos de un compartimiento a OIrO.
Para entender la celula eucariota es necesario conocer 10 que sucede en cada
uno de estos compartirnientos. c6mo se desplazan las mohkulas entre eUos y
c6mo se generan los compartimicntos a sf mismos y se conservan.
Las prolcfnas juegan un papel central en la compartimentaci6n de Wla ctHula
eucariot3. Catalizan las reacciones que tienen lugM en cada org<tnulo y transpor-
tan selectivamente pequei'las moh~culas hacia dentro y hacia fuera de Sll interior
o Ill/nell. Tambi~n acu.ian como marcadores especfficos de superficie de los org<t-
nulos que dirigen el destino de protefnas y de lipidos al org<tnulo apropiado. Una
e~lula de mam(fero conliene aproximadamente 10 mil millones (10 10) de mol~cu
las de protefna. de UllOS 10 000 tipos distintos. La sfnlesis de la mayorfa de lodas
estas prote(nas empieza en el citosol, el espacio comun que cngloba a los orgtinu-
los. Una vez sintctizada, eada protefna es transportada cspecfficamcntc al com
partimiento celular que la necesita. Por ella el tema central de eSle capftulo y
tambi~n del siguiente sent el trMico intracelular de proleinas. EI conocimienlO de
este Irtifico de protcinas dcsde un compartimienlo a otro permite empezar a
comprendcrcl desconeertarte laberinm de membranas inlracelulares.

La compartimentaci6n de las celulas superiores

En esta secci6n introducloria vamos a dar una visi6n general de los distintos
comparlimientos de la c~lulas y de las relaciones que exislen entre ellos. Para
poder hacerlo, hemos organizado los organulos conceprualmenle en un peque-
flo numero de familias, revisando wmo las protemas se djrigen a organuJos es-
pecfficos y c6mo atraviesan las membranas de los organulos.

Todas las c~lulas eucariotas tienen la misma colecci6n basica

de organulos rodeados de membranal
Muchos procesos bioqufmicos vilales ocurren en 0 sabre superficies de memo
brana. Asr, el metabolismo Iipidieo esl<i catalizado mayorilariamente por enzi-

589
r'

Figura 121 Los prlnclpales

oompartlrnJentos lntracelulares de
una d1ula animal. El c1tosol (grisl, el
retfcula endoplasm4.tico, eI complejo
de Golgi, el nl1cleo, las mitocondrias,
los endosomas,los lisosomas y los
peroxisomas son diferentes
oompartimientos que se hallan
pe1'ollisoma -t,H11 i:"'lf-t- complejo de Golgl aislados del resto de la celula
mitocondrla mediante, at menos, una membrana
dotada de penneabilidad selectiva.
retfeulo endopl8lm6tlco
\111-1- eon polirriboiomat
unlda,'I IU membr,na
pollrribosomas
libra nUcleo

>----15Iim .1

mas unidas a membranas y la fosforilaci6n oxidativa y 1a fotosfntesis requieren

una membrana semipermeable para acoplar el transporte de H+ con la smtesis
de ATP. Adem~s. los sistemas de membranas intracelulares no 0010 proporcio-
nan un area extra de membrana. sino que crean companimientos que estlin se
parados del dtosol, dando a la c~lula espacios acuosos funcionalmente especia-
lizados. Como la bicapa lipfdica de los organuJos de membrana es impermeable
ala mayoria de las moleculas hidrofl1icas, la membrana de cada orgAnulo ha de
disponer de protefnas transportadoras que son responsables de 1a importaci6n 0
exportaci6n de metabolitos especfficos. Cada membrana de un orgo1oulo ha de
tener tambi~n un mecanismo de imponaci6n y de incorporaci6n al orgAnuJo de
las protefnas espec(ficas que hacen que dicho orgAnulo sea unico.
En la Figura 12-1 se iJustran los compartimientos mAs imponantes comunes
a todas las c~luJas eucariotas. El nacleo contiene el genoma principal y es ellu-
gar m;is imponante de s(ntesis de DNA y de RNA.. EI citoplasma que 10 circunda
consiste en el citosol y los orgdnulos citoplasmo1ticos suspendidos en ~1. El citosol
constituye un poco mas de la mitad del volumen total de la c~lula y es el lugar
donde no s610 tiene lugar la sfntesis de protefnas sino tambi~n donde se desa-
rroHan la mayona de las reacciones del metabolismo intermediario celular -es
decir, el elevado mlmero de reacciones mediante las cuales algunas mol~culas
pequenas son dcgradadas y otras son sintetizadas proporcionando los elemen-
tos para la construcci6n de las macromol~culas (se explica en el Capftulo 2).
Aproximadamente la mitad del o1rea total de membrana de una c~lula se uti
liza para englobar los espacios laberfnticos del reticulo endoplasmdtico (ER). El
ER presenta muchos ribosomas unidos a su superficie citoplasmo1tica. los cuales
sintetizan protefnas integrates de membrana y protemas solubles destinadas a
ser segregadas 0 a ser transponadas a otros organulos. Veremos que existe una
diferencia imponante entre el sistema a tTaves del cuallas protemas son dirigidas
aI ER 0 a otros organulos citoplasmo1ticos: mientras que las pTOtefnas son translo-
cadas a otros orgo1nulos solamente cuando su sfntesis ha concluido, son translo
cadas al ER durante su sfntesis. por 10 que los ribosomas sobre los que se estlin
produciendo esto1n unidos a la membrana del ER. EI ER tambi~n produce los Ifpi-
dos del resto de la c~lula y tambi~n acnJa como a1mac~n de iones Ca 2 EI comple-
jo de Golgi consiste en una serie de compartimientos organizados en forma de sa
cos discoidales Ilamados cistemus del Golgi; recibe lfpidos y protefnas del ER y las
disrribuye hacia diferentes destinos intracelulares. generalmente modifico1ndolas
covalentemente durante el viaje.
las mitocondrias y (en las plantas) los cJoroplastos, generan la mayor parte
del ATP que se utiliza para desplazar las reacciones biosint~ticas que requieren
un aporte de energfa Iibre. Los lisosomas presentan enzimas digestivas que de

590 Capftula 12: Compartimientos Intracelulares ydaslflcacl6n de protelnas

Tabla 12-1 Volumenes relaUvos ocupados por los prlnclpales compartlmlenlos
lntracelulares en una c~lula hepallca tfplca (hepalocllo)
Compartlmlento PorcenlaJe del volumen Numero aproxlmado
IntrnceluJar celuJar total por celula*
Citosol 5' 1
Mitooondria 22 1700
Vesfculas del ER rugoso 9 1
Veskulas del ER liso y de Golgi 6
Nucleos 6 1
Peroxisomas 1 .00
usosomas 1 300
Endosomas 1 200

ose cree que lodas las cislemas del retkulo endoplasmatico liso y rugosa eslan conectadas, for-
mando un unico gran compartimiento. En cada celu1a el complejo de GoIgi esta organlzado en
un nl1mero discmo de grupos de ci$temas aplladas (dictiosomas) ytodavfa no se ha estab1ecido
claramente el grado de interconexi6n entre cUos.

gradan tanto orgAnulos muenos como maccomoltkuJas y partfculas captadas

del exterior de la ce:lula por endodtosis. En su camino hada los Jisosomas, las
macromollkulas y las partfcuJas endocitadas primero han de pasar por una serie
de companimiemos Jlamados endOSQmas. Los peroxisomas (tambi~n conocidos
como microcuerpos) son pequenos compartimientos vesiculares que canrienen
enzimas que panidpan en diversas reacciones oxidativas. En general, cada orgoi-
nulo rodeado por membrana realiza el mismo dpo de funcioncs boisicas en (0-
dos los tipos celulares pero varia en abundancia y puede (ener propiedades adi-
cionaJes que difieren de un dpo celuJar a otro de acuerdo con las funciones
especiaJizadas de las ce:lulas djferenciadas.
En su conjunto, estos orglinuJos ocupan casi la mitad del volumen celular [fa-
bla 12-1), y se requiere una gran canridad de membranas intracelulares para fabri-
carlos (odos. Asf, en las dos celulas de mamffero que se analizan en la Tabla 12-2.

Tabla 12-2 Canlldades relatlvas de tlpos de membrana en dos celulas eucarlotas

PorcentaJe de membrana
celular total
Celula exocrina
Tipo de membrana Hepatoci{o pancrc,hlca o
Membrana plasmlhka 2 5
Membrana del ER rugosa 35 60
Membrana del ER lisa 16 <I
Membrana del complejo de Golgi 7 10
Mitocondrias
Membrana extema 7 4
Membrana intema 32 17
Nucleo
Membrana intema 0,2 0.7
Membrana de las vesfcuJas secretoras no determinado 3
Membrana de los Jisosomas 0,4 no determinado
Membrana de los peroxisamas 0,4 no delerminado
Membrana del endosoma 0,4 no determinado
Eslas dos celu1as son de tamal\o muy diferente, ya que eI hepalocilo tiene como promedlo un
volumen de 5000 1lfTI'. en comparaci6n a los 1000 J.Im' de la celula exocrina pancreatica. Las
areas lotales de membrana celular se estiman en 110 000 J.lm: y 13 000 J.lrnz respec:;tlvamenle.

La compartlmentacl6n de las ~Iulas superiores 591

 lisosom.. Figura 12-2 Electronmlcrograffa de
una parte de una cBula hepitlca vista
en seccl6n transversal. Se indican
ejemplos de la mayona de los
principales companimientos
intracelulares. (Por conesr" de Daniel
S. Friend.)

IAI

161

el retfculo endoplasmatico tiene una superficie de membrana total que es 25 y 12

veces mayor respectivamenle que la membrana plasmatica. En term..inos de su-
perficie y de masa, pues, en la mayorfa de la celulas eucariOlas la membrana (CI
plasm<1tica es s610 una membrana minoritaria (Figura 12-2).
Los org<1nulos rodeados de membrana no se hallan dislribuidos al azar en el Figura 12-3 Organlzacl6n de
citosol; por el contrario, a menlldo oCllpan posiciones caracterfsticas. Asf, en la membranas espcciallzadas en las
bacterias. (Al ZOnas (patches) de la
mayorfa de celulas el complejo de Goigi esta cerca del mkleo mientras que la
superficie cclular, consislenles en
red de tubulos del ER se extiende a partir del nudeo por todo el dtosol. Estas dis- prolefnas espedalizadas de
tribuciones caraeterfsticas parecen depender de las interacciones de los organu- membrana. (8) Zonas invaginadas de
los con el ciloesqueleto: por ejemplo, la localizaci6n del ER y del complejo de membrana plasmatica que
Goigi depende de la red de microtubulos. Si se despolimerizan experimental- incremenlan la cantidad de membrana
mente los microtubulos con una droga, el complejo de Golgi se fragmenta y se disponible para funciones
dispersa por toda 1a celula y la red del ER se colapsa hacia el centro celular, 0 cspecializadas. como por ejemplo,
centrosoma, a partir del cual emerge la red de microtubulos (vease Capftulo 16). para fotosfntesis. (C) internalizaciOn
de las zonas invaginadas de
membrana, lonnando vesfculas cuya
La relaci6n topol6gica de los organulos rodeados de membrana eara interior es lopol6gicamente
puede sec interpcetada en t~rminos de sus orfgenes evolutivos2 equivaJenle a la cara exterior de la
celula En algunos tipos de baclerias
Para entender la relad6n que existe entre los compartimienlos de la celula, re-
fOlosinteticas se presentan vesfculas
suha uti! considerar c6mo pueden haber evolucionado. Se cree que los precUT-
de membrana de este lipo; su relacl6n
sores de las primeras celulas eucariotas fueroll organismos parecidos abaete- tOpo16gica con la superficie de la
rias, los cuales generalmente tienen membrana plasmatica pero no membranas celula es similar a la del ER, la del
inlemas. En estas celulas, por 10 tanto, la membrana plasmlitica realiza todas las complejo de Golgi, la de los
funciones dependientes de membrana, como el bombeo de protones, 1a sfntesis endosomas y la de los lisosomas en las
de ATP, y 1a sfntesis de Ifpidos. No obstante, las celulas eucariotas actuales tie- ~1u1as eucariotas.

592 Capftulo J 2 : Compartimientos intracelulares y c1asificacl6n de prolelnas

nen una dimensi6n lineal entre 10 y 30 veces mayor y un volumen entre 1000 y
10000 veces mayor que una bacteria tfpica como E. coli. Se puede proponer que
la profusi6n de membranas intemas responde en parte a una adaptaci6n a esl.e
incremento en tamai'lo: las cclulas eucariotas tienen una relaci6n entre superfi-
cie y volumen mucho menor, de fonna que probablemente el lirea de su mem-
brana plasmlitica es demasiado pequefia para conl.ener la gran cantidad de fun
ciones vitales ligadas a membrana que presenta una eelula.
Evidenl.emenl.e. 1a evoluci6n de las membranas intemas ha sido paralela a la
especializaci6n de la funci6n de las membranas. En algunas bacterias actuales
existen zonas (patches) especializadas de la membrana plasmatica en las que se
presentan una colecci6n determinada de proteinas de membrana que reaJizan
una serle de funciones relacionadas (Figura 12-3A). Estas porciones especializadas
de membrana, tales como la "membrana pUrpura~ en HaJobaclerium que contie-
ne bacteriorrOOopsina (se discute en el Capitulo 10) 0 los cromat6foros en las bac-
terias fotosinteticas (se discute en el CapitulO 14), representan org.1nulos primiti-
vos. En algunas baeterias fotosinteticas, estas zonas de membrana se han
transformado en zonas mlis elaboradas concretAndose en invaginaciones de la
membrana plasmlitica (Figura 12-38), mienrras que en orras bacterias parece que
estas invaginaciones se han separado completamente de 1a membrana plasm:1tica
formando vesfculas cerradas intracelulares rodeadas de membrana, cspecializa-
das en la fotosmtesis (Figura 12-30.
Puede esperarse que un organulo eucariota que se haya originado por el
procedimiento que se iJustra en la Figura 12-3 tenga un interior topol6gicamen
te equivalente al exterior de la celula. Veremos que este es el caso del ER. del
complejo de Golgi, del endosoma y del Iisosoma -asf como del gran mlmero de
intermediarios vesiculares de las vias secretora y endocltica (vesiculas de IrollS-
porle). Podemos por tanto pensar que todos estos org.1nulos son miembros de la
misma familia y que, tal como veremos en detaUe en el pr6ximo capftulo, sus in-
teriores se comunican intensamente entre sf yean el exterior de la celula vfa ve
sfculas de transporte que emergen par gemaci6n de un organulo y se fusionan
con otro (Figura 12-4). En bacterias los ribosomas se haUan unidos ala cara cjto-
s6lica de la membrana plasmlitica por 10 que el origen evolutivo de la membrana
del ER a partir de la membrana plasmatica puede explicar por que en las celulas
eucariotas los ribosomas se encuentran unidos a la membrana del ER.
Este esquema evollluvO tambien ofrece una explicaci6n razonable para la
arquitectura del nudeo, con su doble membrana. En las bacterias un unico cro
mosoma esta unido a puntos especiales del interior de la membrana plasmati-
ca. Es por 10 tanto posible que la doble envoltura nuclear se originara como una
Figura 12-4 Relaclones topo16glcas
invaginaci6n profunda de la membrana plasmlitica, tal como se mucstra en la
entre los compartlmlentos de una
Figura 12-5A. Este esquema podrfa explicar por que el compartimienl.o nuclear
c~lu1a eucarlota. Los espacios
es topol6gicamente equivalente al citosol. De hecho, en las c~lulas eucariotas topol6gicamente equlvalentes se
superiores la envoltura nuclear se rompe durante la mitosis, permitiendo que el presentan en raja. Los cicJos de
contenido nuclear se disperse por el citosol, una situaci6n que nUllca sucede gemaci6n y fusi6n permilen en
con el conlenido de ningtin otro orglinulo delimitado por membrana. Tal y principio que cualquier lumen se
comunique con cualquier Olro y con el
exterior celular. Lajlechas azules
indican la direcci6n de salida del
trtifico de vesfculas desde el ER hasta el
complejo de Goigi y la membrana
fR rug
plasmatica (o los Iisosomas) y los
puntas negros representan proteinas
que son segregadas por la relula.
Algunos organulos sin embargo-de
forma mas notable las mitocondrias y
(en plantas) los c1oroplasl05- no

[
m~",.".
envoltur. intern. panicipan en esta comunicaci6n
nllCl.., membnn. vesicular por 10 que estan aislados del
u,~

compleio Yftkula tnifico entre organulos que se muestra

de Go4gi 0. !Me,eo:i6n aqu{,

La compartlmentaci6n de las ~Iulas superiores 593

tAl VIA EVOLUTIVA PROPUESTA PARA EL NUCLEO V PARA EL RETICULO ENDOPLASMATtCO Figura 125 1Up6lesls sobre el orlgen
nlieleo
evolulivo de algunos orgulUlos
~Iula proearlota rodeados de membrana. Los orfgenes
.ncear.l membrana de las mitocondrias, de los
nuclear cJoroplastos, del ER y del nucleo
interna
celular pueden explicar las relaciones
membrana
,-, tOpol6giCM existentes entre estos
compartimientos intracelulares en
."~
DNA ribosomn unidos celulas eucariotas. (A) Posible via para
a membnma la evoluci6n del ER y del nUcleo. En
complejo a1gunas bacterias el DNA se halla
de poro unido a una Invaginaci6n de la
nuclear
membrana plasm!lica llamada
tSI VfA EVOLUTlVA PROPUESTA PARA LA MITOCONORIA
mesosoma. En celulas procariotas rouy
primilivas, una invaginaci6n de este
tipa pudo dar lugar a una envoltura
alrededor del DNA permitiendo
tP- todavfa el acceso del DNA a1 citosol
celular (necesaria para pennitir que el
c4ilula aucarlota DNA pueda dirigir la sfntesis de
.nce'tr.1 prote{nas). Probablemente esta
envoltura se gener6 completamente a
partir de la membrana plasm!tica.
produciendo un compartimiento
como tambien predice el esquema de la Figura 12-5A. el espacio entre las dos Iimitado par una doble membrana. Tal
membranas nucleares es topol6gicamente equivalente al exterior de la celuJa y como se i1ustra.la envoltura nuclear
es continuo con ellumen del ER. est! organizada mediante una capa
Como se discute en el Capftulo 14, las mitocondfias y los c1oroplastos difie- fibrosa denominada I4mina nuclear,
ren de los otros organulos rodeados de membrana en que presentan su propio que est! atravesada por canales de
genoma. La naturaleza de estos genomas y la estrecha simililud existente entre comunicaci6n denominados
las protemas de estos orgAnulos y las de algunas bact'erias actuales sugiere c1ara- complejOJ de poro nucleares. Dado que
mente que las mitocondrias y los c1oroplastos evolucionaron a partir de bacte- el nucleo est! rodeado par dos
fias que fueron ~engullidas~ por otras celulas con las que inicialmente vivieron membranas que continuan donde son
atravesadas por estos pams, ellumen
en simbiosis (se explica en los Capftulos 1 Y 14). De acuerdo con el esquema hi-
del nucleo es topal6gicamente
potetico de la Figura 12-56, la membrana mteroa de las m..itocondrias y de los equivalente aI citosol. Ellumen del ER
c1oroplastos corresponde a la membrana plasmatica original de las bactefias, es continuo con el espacio que se halla
mientras que el lumen de estos organulos evolucion6 a partir del citoplasma entre las membranas nucleares inlerna
bacteriano. Como podrfa esperarse de sus orfgenes. estos organulos permane- y externa, y es topol6gicamente
cen aislados del extenso trMico de vesfculas que conecta el interior de la mayoria equivalenle can el espacio
de los organulos entre sf y con el exterior de la celula. extracelular. (B) Se cree que las
Este esquema evolulivo agrupa los principales comparlimientos intracelula- mltocondrias (y los c1oroplastos) se
res de la celulas eucariotas en cinco grupos: (1) el nucleo y el dlosol, que se co- originaron mediante la incorporaci6n
munican entre sf a traves de los poros Il/lcleares. par 10 que son topol6gicamente de una bacteria a una celula eucariota.
continuos (a pesar de ser funcionalmente diferenles); (2) lodos los organulos Estas bacterias retuvieron su
que acnian en las rutas de secreci6n y de endocilosis -incluyendo el ER, el com- autonomia. Esta hip6tesis puede
plejo de Golgi, los endosomas. los Iisosomas, y numerosas c1ases de vesfculas de explicar par que ellumen de estos
org4nulos permanece aislado del
transporte; (3) las mitocondrias; (4) los plastos (s610 en plantas); y (5) los peroxi-
extenso tr.ifico de vesiculas que
somas (cuyos ongenes evolutivos seran explicados mas adelante). interconecta ellumen de muchos otros
compartimientos intracelulares.
Las protefnas pueden desplazarse entre compartimientos
de diferentes maneras'
Todas las protefnas empiezan a ser sintetizadas en el citosol, exceplo las que son
sintetizadas en los ribosomas de las mitocondrias y de los plastos. Su destino si-
guiente depende de su secuencia de aminoacidos, que puede presentar senates
de c1aslOcaci6n que dirigen su reparto hacia posiciones fuero del citosol. Mu-
chas proteinas no presenlan senales de c1asificaci6n y, en consecuencia. perma-
necen en el citosol como residentes pennanentes. Sin embargo, muchas otras
tienen sei'lales de c1asificaci6n especfficas que las dirigen desde el citosol hacia
el nucleo, el ER. las mitocondrias, los plaslos (en plantas), 0 los peroxisomas; las

594 CapftuJo 12: Compartlmlentos Intracelulares y cJasiflcacl6n de prolefnas

 Figura 12-6 Durante el transporte de las ves(culas se mantiene la bicllplllipldiclI
"polarldad" de la membrana. N6lese que tanlO para las prolefnas como para p.oteinll de membr'l'lll
los Iipidos la oricmaci6n original del comparlimienlo dador se mantiene en conlenido del lumel'l
la membrana del compartimiemo diana y que los maleriales solubles son
lransferidos de lumen a lumen.

cOMPARnMlENTO
senales de c1asificaci6n tambien pueden dirigir el transporte desde el ER hacia DAOOA
otros destinos celuJares.
Para enlender los principios generales por los que actuan las senales de c1a-
sificaci6n, es irnportante distinguir ues sistemas fundamentales diferentes me-
veak:ul. que Ie
diante los cuales las prote(nas se desplazan desde un compartimiento a olro.
'l~"---- gemaciOn,
produce PO'
(I) EI trafico de pmteinas entre el citosol y el nucleo tiene lugar entre espacios
topol6gicamente equivalentcs, los cuates estan en continuidad a traves de los GEMAClON I cU'fO
contenido Villi
le.tr.l'lspo<1ado
complejos de poro nucleares. Este proceso se llama transporte regulado porque

~
:.. vultulll de
el complejo de porn nuclear actua como puertas selectivas que pueden Irans- ::~... trlll'lsporte en
portar activamente macromoleculas espedficas y ensamblajes macromolecula- 01 citopillsm.
res, aunque lambien permiten difusi6n libre de moleculas pequenas. (2) En el FUSI6N 1
transporte transmembrana, tramlocadores proleicos unidos a la membrana di-
COMPARTIMIENTO
rigen ellransporte espedfico de protefnas a traves de la membrana desde el ci- OIANA
tosol hacia un espacio que es lopol6gicamenle distinto. Generalmente, la mole-
cula de proteina transportada ha de desplegarse para poder deslizarse a traves
de la membrana. Por ejemplo el transporte inicial de determinadas proteinas
desde el citosol hacia ellumen del ER a hacia el interior de las mitocondrias tie-
ne lugar de este modo. (3) En el transporte vesicular, las vesiculas de fransporle
C'" '.. j
.I . '.....
cargan protemas desde un compartimiento a otro. A medida que la membrana
de un compartimiento va produciendo vesfculas por gemaci6n, estas vesiculas ......' ....' '.

capturan un cargamento de mollXulas del lumen del compartimiemo. Tras el

transpone y la fusi6n can la membrana de otto compartimiemo, est'as vesfculas
descargan su cargamento en el interior de este otro compartimiemo. Par ejem-
pia la rransferencia de prot'efnas solubles desde el ER al complejo de Golgi tiene
lugar par este mecanismo. Dado que las protefnas transponadas no atraviesan
la membrana, 5610 se desplazan entre compartimientos que son topol6gicamen-
te equivalentes (Figura 12-6). En el Capitulo 13 explicaremos can mas detalle el
transpone vesicular. Los Ires sistemas mediante los que se transportan las prater-
nas entre distintos compartimientos se resumen en la Figura 12-7.
Cada uno de los tres sistemas de transferencia proteica gcneratmente est<1n
guiados sclectivamente por prolefnas receptoras complemenlarias que se hallan

CITOSOl
Figura 12-7 "Mapa de carreleras" slmpUncado dellrlinco prolelco. Las
protefnas pueden desplazarse de un companimiellto a otro por media de un ]
transporte regulado (ell raja). por medio de Iransporte transmembrana NUCLEO PEROXISOMA
(azul). 0 por medio de transporte vesicular (verde). Las sei'lales que dirigen el
camino de una protefna determinada a trav6 del sistema, determinando su MITOCONDRlA Pt..Asnoos
localizaci6n definiliva en la celula, estan contenidas en la secuenda de
aminoacidos de la prote(na. B viaje comienza con la sfnlcsis de una protcina
sobre un ribosoma y leonina cuando se ha alcanzado el destino final. En
cada una de las cstaciones intermedias (fE!C'uadrosJ se toma una dedsi6n
respecto a si la prole{na sem retenida en eI compartimiento a bien
...
RE'T1CUlO ENOOf'I.ASMAnco

GOlGI I
continuant el viaje. En principio. se requicre una sei'lal detenninada tanto
para relener la proleina en el companimienlo como para no retenerla. E1
l=MA~ III~ VESiCULAS DE I
SECREoON
destino a1temalivo es la rota porde/octo (en auscncia de sei'lal). Por ejemplo, ENOOSOMA II1II"
el transpone vesicular de prolcfnas desde el ER, a lraves del complejo de
Golgi, hasta la superficle celular. parece que no necesita ninguna senal
especifica; las sei'lales de retenci6n especificas se requieren por consiguiente
T
SUPERFICIE CElUlAR
1 I
para retener las proteinas en el ER y en el complejo de Golgi, cuyas proteinas
ClAVE:_ tn....sporte
especializadas residen allf.
_ tfllnsporte trlln.membr.nll
Utilizaremos repelidamente esta figura como gu{a a traves de esle
capitulo y del siguienle. destacando la rula panicular que sera explicada. _ trllnsporte vesicul.r

La compartlmentaclon de las c~lulas superlores 595

 PROTEfNA DESPLEGAOA PROTEfNA PLEGAOA Figura 12-8 Los dos sistemas
mediante los que se puede codlflcar

H2N&
IAI
_ '.oooH
fif- NH'
pllplido
MIl"
una seftal de lransporle en una
protelna. (Al La senal se halla en una
secuencia seneiUa ydisereta de
aminoacidos, Uamada peptido seftal,
que se halla expuesta en la protefna
plegada. Amenudo los peptidos seftal

-_ll!!z:::::;y --- ......, se presentan en uno de los extremos

~
,,~ de la cadena polipeptfdica (tal como se
H. . .
._. III!!!!!I"-COO+l H.N presenta en la figural, pero tambi~n se
pueden Iocalizar en cualquier otto
CooH
181 r&giones que contribuyen. 1.'OfmlCi6n de I. lon. sen., lugar de la proleina (Bl Se puede
formar una regiOn seftai mediante la
yuxtaposici6n de aminoacidos
procedentes de regiones que se
hallaban lJsicamente separadas antes
en el orgMulo de destino. Por ejemplo, si una proteina grande ha de ser impor- de que la protefna se plegara {como se
tada hacia el nucleo, ha de tener una sefial de clasificaci6n que sea reconocida muestra en 1a figural;
par protefnas receptoras asociadas con el complejo de paro nuclear. Si una pro- a1temativamente, la sei\al puede estar
lefna ha de ser transferida directameme a traves de una membrana. ha de tener fonnada por zonas separadas de Ia
superficie de la protefna plegada que
una senal de dasificaci6n que sea reconocida par eltranslocador de la membra-
se halJan separadas entre sf por
na que tiene que atravesar. Del mismo modo. si una proteina ha de ser incorpo- distancias fijas. En cualquier caso,la
rada en cierto tipo de vesfculas de transporte 0 retenida en ciertos org:1nulos. sus seftal de transporte depende de la
sei'iales de c1asificaci6n han de ser reconocidas par un receptor complementario conformaciOn tridimensional de la
de la membrana apropiada. protefna. Por esta raz6n, este tipo de
seflal resulta dilJcil ellocaJizar de
Los p~ptidos sefial y la regi6n sefial determinan el destino celular fonna precisa.
correcto de las protemas 4
Existen al menos dos tipos de sei'iales de c1asificaci6n en.las prolefnas. Uno de
eUos reside en una regi6n continua de la secuencia de amino:1cidos. tfpicamente
de 15-60 residuos de largo. Este peptido seoal es a menudo (pero no siempre)
eliminado de la protelna por una peptldasa de seoal especializada, una vez se
ha ejecutado la decisi6n de c1asificaci6n. EI otro tipo de sei'ial consiSle en una
disposici6n tridimensional caracterfstica de los aromos de la superficie de la
protefna, que se forma cuando se pliega la protefna. Los restos de aminoacidos
que conslituyen la regl6n seil.aI pueden ser bastante distanles el uno del Olro en
la secuencia lineal de aminoacidos. y generalmenle permanecen en la prolefna
madura (Figura 12-8). Los peptidos sei'ial son utilizados para dirigir las protefnas
desde el dtosol al ER, a las mitocondrias, a los cloroplaslos. a los peroxisomas y
al nueleo y tambien son utilizados para retener las protefnas en el ER. Las regio-
nes sei'ial identifican ciertas enzimas que han de ser marcadas can residuos de
azucar especfficos que luego dirigen a las protefnas desde el complejo de Golgi a
los lisosomas; las regiones sei'ial tambien se utilizan en otros pasos de e1asifica-
ci6n que estan menos caracl'erizados.
Para espccificar los diferentes destinos celulares se utili..zan diferenles tipos
de peptidos selia!. En general. las prolefnas que estM destinadas a ser transferi-
das al ER tienen, en su extremo amino lenninal, peptidos sei'ial que en la parte
central de su secuencia presentan entre 5 y IO residuos de amino~cidos hidrof6
bicos. La mayoria de estas protefnas pasaran despues desde el ER al complejo de
Golgi; no obstante. las protefnas que presentan en su extremo carboxilo lerminal
una secuencia detenninada de cuatro aminoacidos son retenidas pennanente-
mente en el ER. las proleCnas destinadas a las mitocondrias tienen peptidos se-
fial en los que se alleman restos de aminoacidos cargados posirivamenle con
restos de aminoacidos hidrof6bicos. las protemas destinadas a los peroxisomas
tienen habilualmente una secuencia de tres aminM.cidos en su extrema carboxi-
10. Muchas prolefnas destinadas al n(ideo tienen peptidos sei\al fonnados par
una agrupaci6n de residuos de aminoacidos cargados positivamente. la cual se

596 Capitulo 12: Compartlmientos lntracelulares y c1asificaci6n de protemas

Tabla 12-3 AJgunas secuendas tfplcas de ~ptidos senaJ
Pund6n del peptido senaJ EJemplo de pePl..ldO scnal
Importaci6n al ER 'H1 N-Met-Met-Ser-Phe-Val-Ser-Leu- Leu-Leu-Val
Gly-l1e-Leu-Phe-Trp-Ala -Thr-Glu-Ala-Glu-
Gln-LeuThrLysCysGlu-VaI-PheGln-
Retenci6n en ellumen del ER -Lys-Asp-Glu- Leu-COO-
Importaci6n a la mitoeondria 'H1 N-Met-Leu-Ser-Leu-Arg-Gln-Ser-lle-Arg-Phe-
Phe-Lys-Pro-A1a-Thr-Arg-Thr- Leu-Cys-Ser-
Ser-Arg-Tyr-Leu-Leu-
lmportaci6n aI m1c1eo -Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-ArgLys-Val-
Importaci6n a los peroxisomas -Ser-LysLeu-
Uni6n a membrana a IraV~ de 'H1 N-Gly-Ser-Ser-Lys-Ser-Lys-Pro-Lys-
la uni6n eovalenle del extrema
amino terminal allicido mirfstico
Los residuos de aminoliddos carglldos positivlImeme se muestran en rojo y los Cllrgados negad-
vamente en verde. En el reculldro amarillo se indlCli un gran bloque de amlnoliddos hidrof6bl-
cos. HJN' Indica el extremo lImino tcnninal de III protefna y COO- el carboxilo terminal.

encuenlra habitualmente en lugares internos de la cadena polipeplfdica_ En la

Tabla 12-3 se muestTan algunos p(iptidos seftal tfpieos.
La importancia de cada uno de estos p(iptidos senal en el destino de las pro-
lemas se ha visto en experimentos en los que el p~plido ha sido transferido des-
de una protefna a otra mediante t~cnicas de ingenierfa genetica: por ejemplo,
colocando el peptido sef'lal amjno terminal que especifica para el ER, aI princi-
pio de una protefna citos6lica, se consigue que ahora la prolefna se dirija al ER.
Todos los p~plidos senal que se hallan unidos a protefnas que tienen el mismo
destine son funcionalmente intercambiables aunqlle sus seellencias de amjno-
Acidos puedan variar mucho. A menudo. parece que para los procesos de reco-
nocimienro, las propiedades ffsicas de estos p~ptidos seoal. tales como la hidro-
fobicidad, son mas importantes que la secuencia exacla de aminoacidos.
Las regiones seftal son mucho m;1s dificiles de analizar que los peptidos sc-
nal; en consecuencia. se conoce mucho menos sobre su eslruclUra. Debido a
que resuJtan de un patr6n complejo de plcgamiento proleico tridimensional, no
pueden simplemente lransferirse de una protefna a otra.
En el Panel 12-1 (pag. 598) se ilustran los principales mClodos para estudiar
e6mo se dirigen las protefnas desde el dlosol a un compartimiento espeeflico y c6-
mo se translocan a trav~s de las membranas.

Las celulas no pueden construir de novo sus organuJos rodeados

de membrana: necesitan informaci6n del propio orgd.nulos
Cuando una c~lula se reproduce y se divide. tiene que duplicar sus org:1nulos ro-
deados de membrana. Normalmente las reJulas realizan esta duplicaci6n agran-
dando los orglinulos mediante la incorporaci6n en ellos de nuevas mol&:u1as, y la
posterior divisi6n de estos orglinulos agrandados. Posteriormente, los orglinuJos
hijos son diSlribuidos entre las dos eelulas hijas. Esta herencia es escnciaI ya quc
una celula no puede fabricar de novo eSlas membranas. Par ejemplo, si se elimina
completamente el ER de la celuJa, l.c6mo puede rceotlSlruirlo la celula? Las prote-
mas de membrana que definen el ER y realizan muchas de su funciones clave son
produclos del propio ER. No se puede fabricar un nuevo ER sin la exislencia pre-
via de un ER. 0 aI menos de una membrana que contenga los translocadores ne-
cesarios para importar protefnas especfficas hacia el ER (y que carezca de los
lranslocadores de Olros organulos, necesarios para importar prole(nas).
Asf, parece que la informaci6n necesaria para construir un organulo rodeado
de membrana no reside 5610 en el DNA que especifica las protcfnas del orglinulo.

La compartlmentacl6n de las celulas superiores 597

 Aproximaci6n par transfecci6n para definir
secuencias senal
Un sistema de mostrar que una secuencia sanal es
necesaria y suficiente para dirigir una protelna hacia
un compartimiento intracelular deteminado consiste
en crear una protelna de fusi6n en la que la secuencia
senal sa halle unida. mediante tecnicas de ingenieria
genetica, a una protelna que normalmente es residente
en el citosoL Despues de transfectuar celulas con el
eDNA que codifica esta prOlelna, se determina la
localizaci6n de Ie protel{ta de fusi6n mediante
inmunomarcaje 0 por fraccionamiento celular.
MCuenci .."..1. 0 b
'=:'
.:
gIIn que eodif"g un.
/Ii._
P'OIei'~
Aproximaci6n bioqulmica para estudiar el mecanismo de
transtocaci6n de la protelna
En este caso, una protelna marcada que contiene una secuencia senal
especifica es transportada in vitro al interior de organulos aislados.
Generalmente la protelna marcada es producida por traducci6n en un
sistema libre de dlulas de un mANA que codifica la proteina; sa utilizan
aminoacidos radiactivos para mSrcar la protelna seabads de sintetizar de
forma que pueda diSlinguirse de las muchas otras protelnss que se hallan
presentee en al sistema da traducci6n in vitro.
Habituatmenta se utilizan tres metodos para determinar si la proteina
msrcada se ha translocado al organulo;",..-:.,.,.,...=""=",..,.,-::;",,=,,,
1. proteJnII marcedIi 2. seevenet."", _ eUmiMdI
c:otr.c:donI con .. oro'nukJ mediante UftII protMA .-pec:ffiCII
cilosOlicll
.... ,,1\1I ~
Mcuencia .."..1
que .. tuI'" pi""'" en elinteriof

(' )
-
V
ptOlein. m.reada
con r8diec1:ividad

- &
ptote'~ '------'

I.
transportadl protein.. rltdiactivn en fiI\!Il 50s
al or-gjnulo
. . . . . . prot_ "- ~
I. MCueoci. . .filiI. ( . ,
ding. .. ptote'~ de fusiOn
aI orgjnulo A
.. MCueoci. Ml'lal b
dirigoe .. ptotelne de fusi6n
.1 or94onulo B
I
no

_~.""Ii
..-
cutncto .,...,.
at media de Incub.tci6n. .(S.'
"
(:.:;..~.
. . ""...:t ..
AJterando la secueocia senal utilizando mutagenesis
dirigida puede determinarseque caracteristicas
estructurales son importantes para su funci6n.
mero .. aftaden detergentn
qlMl rompen .. rnembfane del

PfOlai~~

Utilizando estos ensayos in vitro puede determinarse qua componentes

(prOleinas, ATP, GTP, etc.) son necesarios para procesos de transcripci6n.

Aproximaci6n genetica para el estudio del

mecanismo de translocaci6n de protelnss
en~lma an al CiIOSol:
la cliluia viva sin naceaila,
hillidina como nutriante
aparato de
transloellClon
ta elU;ma S8 ha d;rigido
al ER: I. celula muara at
colocarla en un medlo sin
hlstidina
no tode I. enzima M
hall. an al ER:" cilula vive
.unque M coloque an
euteneia de histidina
aparlllo de tran~, moan..
Para estudiar la translocaci6n de protelnas habitualmente se utilizan cetulas da
levadura con mutaciones en genes que codifican componentes de la
maquinarla de translocsci6n. Debido 0 que las calulas mutontes que no pueden
translocar protelnss a travas da sus membranas moriran, el truco consista en
disenar una estrategia que parmita aislar las mutaciones que unicamenta
causan un defecto parcial an la translocaci6n de protelnas.
Una via consiste en utillzar la inganiarla genatica para disenar diu las
especiales de levadura. Por ejemplo, Is enzima histidinol deshidrogenasa
raside normal mente en al citosol, donde es necesaria para producir el
amin6acido asencial histidina a partir de su precursor histidino!. Se construye
una cepa de levadura an la que el gen da la histidinol reductasa asta
substituido por un gan construido de forma que codifique una protelna de
fusi6n con una secuencla senal extra que diriga la protelna 01 interior del
retlculo endoplasmalico (ER). Cuando estas dlulas sa hacen cracer en ousencia
de histidina, mueren debido a que toda la histidinol deshidrogenasa esta
sacuestrada en el EA, donda no es fuocional. Sin embargo, las dlulas con
mutaciones que inactivan parcialmente el mecanismo de translocaci6n de
protelnas desde el citosol al ER sobreviviran debido a que habra suficiente
cantidad de deshidrogenasa relenida en el citosol para producir la histidina
necesaria. A menudo se obtienen celulas en las que la protaina mutante
todavla actua parcialmente a temperatura normal pero que es completamente
inactiva a temperaturas elevadas. Una dlula que transporte una de estas
mutaciones sensibles a la temperatura muere a temperaturas elevadas, tenga 0
no histidina, ya que no puede transportar ninguna proteina al ER. Ello permite
identiflC8r el gen normal que fue modificado por Ie mutaci6n, mediante la
transfecci6n de la dlula mutante con un vector plasmldico de Ievadura en el
que se han clonado fragmentos al azar de DNA gen6mico: el fragmento
especlflCO de DNA que recupara la celula mutante cuando sa hace crecer a una
temperatura elevada sera el que codiflC8 la versi6n salveje del gen mutante.

_ . . . . . . . JIll lIa ..........._ ......... ' . . . b ......)Qj(MadepnMefnu.b'h'6Jdellleiilf.nna..

Tamblen se requiere la inforrnaci6n epigemUica en fonna de aI menos una pro
tefna caracterfstica en la membrana del organulo, y eSla infonnaci6n es transmi-
tida desde la celula padre a las de la progenie en fonna del propio orgo1nulo. Pro-
bablemente esta lnfonnaci6n es esencial para la propagaci6n de la organizaci6n
celular en compartimientos, aI igual que la infonnaci6n en DNA es esencial para
la propagaci6n de las secuencias de nuele6tidos y de aminoo1cidos.

Resumen
lAs diuJas nu:arlottu conUm.en membNUUU illt1'act!hll4U1!$ que enderran aui la ml-
tad tk IU volumm tot4J. en complll'1imlentos inlrtJceluJal1!$ indillldutdlzados lJamo,.
dos orpf.nuios. En rodtu las c6ulas euauiow los prindpales tipos de orgdnulos r&-
deddos de membrana son el redcuJo endoplasm4tlco, el compkjo de Golgl. el nUdftJ,
las mltoc:ondrlas, los Usosonuu, los mdosomm y los peroxJsomns; las dluJas wpta-
les contienen. tJd.rm4s. plsstos. como por ejemplo los doropkutos. Cada orpf.nuJo
contlene prolelnm ctU'tJCRrlstiau que Msarrollan susjiuu:Wnes CtU'tICferlstiau.
Culutdo la prole/na th un orgdmllo acaba th seT sinleti:uul4, encuent1'tJ el ca
mlno esp:iflco que IuJ th segulrtk$de el ribosoma dotuh IuJ sldo slnletluula hasta
el orgdnulo do,.. tu:fJUlnf. gui4d4 por una senal esp:iJU:a que u holla prrsenle
en su seCIUUlCU, de aminodddos y qlU! aetda como un plptido seilal 0 como una re
gUSn seMl. Los plptldos Y las reglones seiMl son reconocidos por prole/lUIS repto
nu complDMntarlAs presentes en los ol'Jlfnulos th destino. lAs prole/lUIS q~ ac:tJtan
en el dlosol no prrsentan plptidos 0 reglon.es seilal y por 10 tanto pemulrtl!an en el
dtosol dapuh. seT dntetizados.

EI transporte de moleculas hacia dentro crrOSQl

y hacia fuera del nucleo Jl
II
NUCLEO II PEROXISOMA
La envoltura nudear encierra el DNA y define el companimiemo nuclear. Esto1
fonnada por dos membranas concentricas que, tal como hemos vista, son conti- MITOCONQRIA PlASnoos
nuas can el reUcuJo endoplasmo1tico. A pesar de que la membrana nuclear inler-
na y la extema son continuas, las dos membranas presentan distinla composi RETICUlO ENOOPlASMAncol
ci6n prOleica. La membrana nuclear intema contiene protefnas especfficas que H
actdan como lugares de uni6n de la ldmina nuclear que la soporta. Esla memo I GOLGI I
brana esto1 rodeada por la membrana nuclear extema, la cual sc parece enor
K II
memente a la membrana del retfculo endoplasmAtico, que forma un continuo
can ella (Figura 129). Como la membrana del ER rugoso, esta membrana exter-
L1S0S0MA
'I 19 VES (CULAS ~I
SECRECION
ENOOSOMA
na esta generalmente lapizada por ribosomas que se hallan trabajando en la sfn-
tesis de protefnas. Las protefnas fabricadas en estos ribosomas son transporta-
das al espacio entre las membranas intema y externa (el espacio perinuclear), el
1r Jl
SUPERFICIE CfLULAR
cual a su vez es continuo can la luz del ER (vease Figura 12-9).
Existe un tnUko bidireccional continuo entre el citosol yel nUdeo. La gran
camidad de protefnas que actt1an en el nddeo -incluyendo las hislonas, las
DNA y RNA polimerasas, las prote(nas reguladoras de genes y las protefnas de
procesamiemo del RNA- son importadas de forma selecliva desde el citosol
hacia el compartimienlo nuclear, donde son fabricadas. AI mismo liempo, los
tRNA y mRNA son sintetizados en e) compartimiento nudear y luego son ex-
portados aI cilosol. AI igual que el proceso de importaci6n, el proceso de ex-
portaci6n es selectivo; por ejemplo, los mRNA 5610 son exportados si han side
modificados correctamente en el nueleo por reacciones de procesamiento de
RNA. En algunos casas el proceso de lransporte es complejo: por ejemplo, las
prole(nas ribos6micas son fabricadas en el cilosol, importadas aJ nueleo -don-
de se ensamblan can RNA ribos6mlcos recien fabricados, fonnando partIculas-
y luego son exportadas de nuevo aI citosol como parte de la subunidad ribos6-
mica, cada uno de estos pasas implica transporte selectivo a lraves de la envol-
tura nuclear.

El transporte de molecuJas hacla dentro y bacia fuera del nucleo 599

 membrana Figura 12-9 La envoltura nuclear. La
nliCleer
eKterna envoltura nuclear de doble membrana
eslli. atravesada por poros nucleares y
membrana de! ER es cominua con el redculo
endoplasmalico. No se mueslran los
lumen del ER ribosomas que se hallan unidos en la
eara cilos6lica de la membrana del ER
yen la membrana eXlema del nucleo.

Figura 12-10 Disposld6n de los

complejos de porn nucleares en la
""'.
--"
perinuclear
nuclear 16mi~
nuclear
envollura nuclear. (A) Esbozo que
muestra una pcquei'ia regi6n de la
envo]tura nuclear. En una secci6n
lransversal el complejo de porn
nuclear aparece compueslO de tres
Los poros nucleares atraviesan la envoltura nuclear1 panes: (I) un componentecolumnar
que fonna el grueso de la pared del
En todas las celulas eucariotas, desde las levaduras hasta las humanas. la envol- poro; (2) un componeme anular, que
tura nuclear estd perforada por los poros 'Illcleares. Cada poro eslli consliluido extiende -radios hacia el centro del
por en una gran estructura discoidal conocida como el complejo del pora nu- poTO; y (3) un componeme luminal,
clear. que se ha eslimado que tiene un peso molecular de alrededor de 125 mi- que esla fonnado por una gran
Uones de dahons y se cree que eSld compuesto por mas de 100 prolefnas dife- glucoprolefna lransmembrana que se
rentes. ordenadas segun una sorprendenle simetrfa onogonal (Figuras 12-10 y cree que panicipa en el anclaje del
12-11). complejo a la membrana nuclear.
Ademas. existen fibriUas que
Cada complejo de poro presenta uno 0 mas canales acuosos abienos, a lra-
sobresalen desde la cara citos61ica 0
ves de los cuales pueden difundir pasivamente las moleculas solubles en agua
desde la cara nuclear del complejo. En
que son mlis pequenas de un determinado tamano. EllamaFlo erectivo de eslos la parte nuclear las fibrillas convergen
canales ha sido determinado inyectando moleculas marcadas (que no son com- fonnando eSlructuras en fonna de
ponentes nucleares) en el citosol y midiendo luego la velocidad de difusi6n hacia jaula. las cuales se muestran en una
el mlc1eo. Las moleculas pequenas (5000 daltons 0 menos) difunden ran nipida- fotograffa de microscopia electr6nica
mente que puede considerarse que la envoltura nuclear es Iibremente permea- de la cara nuclear de la envoltura
ble a elias. Una prolefna de 17000 daitons tarda 2 minulos en equilibrarse enlre nuclear de un oocito (B). (B, de M.W.
cl citoplasma y el nueleo; Ulla protefna de 44 000 daltons tarda 30 minut'Os. Una Goldberg y T.D. AUen.). cell Bioi.
protcfna globular mayor de 60 000 dahons parece que es cornpletamente inca- 119:1429-1440, 1992. con permiso de
paz de enlrar en el nucleo. Un andlisis cuantilativo de eSIOS daloS sugiere que el copyright de The Rockefeller
pora !luclear Hene un canal cilfndrico Ileno de agua de aproximactamenle 9 nm University Press.)

lIObunidad
anular

envohura

;!!!~~J nuclear
NUCLfO 181
.ubun~
columna,
membrana nuclear
interne
jaula nuclear
W ~~

600 Capftulo 12: Compartlmlenlos lntracelulares yclasificaci6n de proternas

 Figura 12-] 1 Elet:tronmlcrograffa y
ret:ollstnJcclon Informatica de
compleJos de poro nuclear. (Al y (B):
diferentes Ilerspectivas de complejos
de poros nucleares liberados de la
ellvoltura con detergente y
contrastados por tinci6n negativa. En
(B) algunos complejos de pOTO pueden
verse de lado. (el Reconstrucciones
tridimensionales mediante ordenador
que muestran vistas desde arriba,
inclinada y de lado de complejos de
poro. (De J.E. Hinshawy R. Milligan,
Cell 69: 1133-1141, 1992. @Cell Press.)

Figura 12-12 Poslblesv1asde

dlfuslon Ubre a traves del complejo de
pora nuclear. El dibujo muestra un
hipotetico diafragma insenado en el
interior del pora para restringir el
tamafio del poro del canal abieno a
9 nm, que es el tamailo de poro
estimado a partir de medidas de
difusi6n. Nueve nan6metros es un
diametro menor que la abertura
central observada en las imagenes de
ICI los complejos de poro nuclear
obtenidas a partir de
eleclronmicrograffas (0 a partir de
medidas durante el transporte activo
de diametro y 15 nm de largo; esle canal puede acupar 56[0 una pequei'la frac-
cuando se dilata el poro para permitir
ci6n del volumen total del pora (Figura 12- 12). el transporte de partfculas de hasta
Dado que muchas protefnas celulares son demasiado grandes para pasar 26 nm de diametro). Por 10 tanto es
por difusi6n a traves de los poros nucleares, la envoltura nuclear permite que el probable que algunos componentes
compartimienlo nuclear y el citosol mantengan diferentes conjuntos de protef- del poro se pierdan durante la
nas. Par ejemplo, los ribosomas cilOplaslllMicos maduros tienen un diametro de preparaci6n de las muestras para
30 nm, por 10 que no pueden difundir a traves de los canales de 9 om; su exclu- microscopia clectr6nica y que estos
si6n del nucleo asegura que tada la sfntesis proteica estan1limitadaen el dlosol. sean los que en condiciones normales
Pero, tc6mo impona el nlicleo las grandes moleculas que necesita, como las IimilCn la Iibre difusi6n a Iraves de la
DNA y RNA polimerasas cuyas subunidades lienen pesos molecuJares de cntre abertura central. Estos componentes
100 000 Y 200 000 daltons? Como explicaremos mas adelante, estas y muchas pueden formar un diafragma (0 un
tap6n) que se abra 0 se cierre
otras moleculas de proleina y de RNA se unen a proteinas receptoras localizadas
pennitiendo el paso de grandes
en los co.mplejos de poro y luego son transporladas activamenre a lraves de la
objetos durante el transpoTfe activo,
envoltura nuclear mediante los complejos de poro.
que esta mediado por una senal de
clasificaci6n (se explica mas adelante).
Unas sefiales de localizaci6n nuclear dirigen las prote(nas Apesar de que en algunas
nucleares hacia el micleo 6 preparaciones pueden observarse
unos tapones, no esta claro si son
En general, cuanto mas activa sea la transcripci6n nuclear, mayor sent el mlme- componentes del complejo de paro 0
ro de complejos de poro presentes en la envoltura nuclear. La envoltura nuclear material que esta siendo transportado
a traves suyo. Las reconstrucciones
[ridimensionales por ordenador
sugieren que los canales que permiten
la libre difusi6n podrfan no estar
localizados en el centro del complejo
de poro pero sf cerca del borde entre
los componentes coluffinares (vease
Figura 12-1 OA); eslo podrfa significar
IlImlll'lO de las tamllno de las p,otelnas que la difusion pasiva yel t.ransporte
p,oteinlls Queentran que ent'lln en ei n"c1eo
en el mlcleo po, mediante trllnsporte activo tienen lugar a [TaVeS de
difusi6n libre activo diferentes partes del cOllllllejo de pora.

EI trans porte de molecuJas hacia dentro y hacia fuera delllllcleo 601

(Al LOCALIZACION DEL ANTIGENO T QUE (Bl LOCALIZACION DEL ANTIGENO T ~UE FIgura 12-13 La funcl6n delasenal
PRESENTA LA SE ....AL DE IMPORTACION PRESENTA UNA SE .... AL DE IMPORTACION de locallzacl6n nuclear. Fotografias de
NUCLEAR DEL TIPO SALVAJE NUCLEAR MUTADA
...,1111. inmunofluorescencia que mueslran la
Pro-Pro,--j!!ilHiliHIRHiillf-l.- Val- Pro-Pro,--j.Hffil~__-Il__-II. Val-
..../11\,...
loealizaci6n celular del antfgeno T del
SV4Q conteniendo a no un peptido
corto que aelda como senal de
localizaci6n nulear. La forma salvaje
de la protefna del antigeno T contiene
Ja secuencia rica en lisina que se
indica y que es importada a su lugar de
acci6n en el nuc!eo, como se
demuestra mediante una tinci6n
inmunofluorescenle can un
anticuerpo contra el antfgeno T (A). 5i
el antfgeno T presenta una seilal de
loealizaci6n nuclear alterada (una
de una celula f[pica de mamffero confiene entre 3000 y 4000 complejos de poro. treonina que reemplaza a una lisina)
Si la celula esta sintetizando DNA, necesita importar aproximadamente loe mo- permanece en el dtoso! {Bl. (De D.
Kalderon. B. Roberts, W. Richardson
leculas de histona desde el citoplasma cada 3 minutes para poder empaquetar el
y A. Smith, Cell 39:499-509, 1964
DNA recien sintetizado en forma de cromatina, 10 cual significa que, por termi- Cell Press.)
no medio, cada pora ha de transponar alrededor de 100 moJeculas de histona
por minuto. Si la celula esta creciendo rapidamente, eada poro tambien ha de
transportar por termino medio 6 subunidades ribos6micas mayo res y menores
recien ensambladas por minUlO, desde el nDcleo, donde son producidas, hasta
el citosol. donde son utilizadas. Yesto es s610 una muy pequena parte dellrafico
total que pasa a traves de los poros nucleares.
Cuando las protefnas del nDcleo son extrafdas experimentalmente y mi-
croinyectadas de nuevo en el citosol, incluso las mas grandes se vuelven a acu-
mular en el mlcleo de una forma eficiente. La seleetividad de eSla importaci6n
nuclear reside en las senaJes de localizaci6n nuclear, que s610 eSlan presentes
en las protefnas nucleares. Estas senales se han definido con precisi6n en mu-
chas protefnas nucleares utilizando la teenologfa del DNA reeombinante. Pue-
den estar situadas en eualquier lugar de la secuencia de aminoacidos y general-
mente consisten en una seeuencia eorta (tfpieamente de enlre cuatro y oeho
aminoacidos), que es diferente en diferentes protefnas nucleares pero que es
rica en los aminoacidos cargados positivamente Iisina y arginina, y general men-
te presenta prolina. En muehas protefnas nucleares esta secuencia eSla pari ida
en dos bloques de dos a cuatro aminoacidos cada uno, con los bloques separa-
dos uno del otro par aproximadarnente diez aminoacidos. Se cree que las sena-
les forman bucles en la superficie de las protefnas.
Las sei'lales de localizaci6n nuclear fueron idenlificadas en primer lugar en
la protelna codificada por el virus SV40 Hamada anrfgeno T, la cual es neeesaria
para la replicaci6n del DNA virico en el nDcleo de la celula huesped. Normal-
mente el anlfgeno T se acumula en el nDcleo poco tiempo despues de ser sinleti-
zado en el citosol. No obstante, una mutaci6n en un unico aminoacido impide el
transporte al nDcleo (Figura 12-13). Asumiendo que esta mutaci6n se localiza en
una seeuencia senal de importaci6n a1 nDcleo, se fusionaron cortas secuencias
de DNA que eodifiean eSla regi6n del antfgeno T normal, con un gen que codifi-
ea una prolefna citos6lica. Se dererminaron las secuencias mas conas que hacian
que la prolefna de "fusi6n" resuhante fuera importada al mlc1eo, y asf se pudo
demostrar que la sei'lal de importaci6n nuclear del antfgeno T era una secuencia
de oeho aminoacidos contiguos localizados en una regi6n in lema de la cadena
polipeptfdiea (vease Figura 12-13). Experimenlos posteriores demostraron que
la seeuencia senal tambien puede ser funcional si es sinletizada como un peque-
no peplido y unida qui"micarnenle a una lisina seleecionada al azar de una pro-
tefna, la eual, en caso de no recibir eSle peptido, permaneceri"a en el citoplasma,
10 cual sugiere que la loealizaci6n precisa en la protefna de la senal de importa-
ci6n al micleo, no es importanre. De hecho, muehas protei"nas nucleares presen-
tan mas de una senal de localizaci6n nuclear.

602 CapfluJo 12: Compartlmienlos intraceluJares y c1aslflcaci6n de protefnas

 oro eoIoidal Figura 1214 Captacl6n de prole{nas

*
nucleares a Iravn de los compleJos de

I I poro nucleares. La flllcleoplasmilla es

-
una gran pratefna pentamerica del
0,1.
cabell
o 1\ nlicleo, que presenta dominios
.... plrtlculu de oro c~1
diferentes en la cabeza y en la cola. Las
cabezas pueden ser separadas de las
nlJc:leoplasminl cabel" col.. complejld.. con I.. col..
,ldillCtiva ,adillCtlv" ,adiaetiv.. de I. nucleopl..mina colas mediante fragmenlaci6n
proteolflica limitada. Cuando se
I I I I inyectan moJecuJas intactas de
MICAOINYECCION EN El CITOPLASMA DE OOCITOS DE XENOPUS
nucleoplasmina en el ciloplasma de
un coeito de rana. se acumulan
rnpidamenle en el nucleo a pesar de
que al parecer son demasiado
voluminosas como para pader
difundir pasivameme a traves del
coml>lejo de I>oro nuclear. La senal
necesaria para esla importaci6n
INCUBAC!6N
1 I I 1 nuclear reside en el dominio de Ia cola,
OETECOON MEDIANTE AUTORRAOlOGRAFIA OETECClON POR EM ya que el nucleo capla rnpidamente las
colas de la proteina pera no las
I I I I cabezas. EI papel de los poros

~
nucleares ell cSta imporlaci6n dirigida

(;)
por senal se puede demOSlrar
medianle eleclronmicroscopia
,""'" uliliz.ando colas de nucleoplasmina


acopladas a esferas de oro coloidal,
CAPTACION EN NO CAPTACION CAPTACION EN que son ftidlmente visualizables
LOS NUCLEOS LOS NUCLEOS CAPTACION EN LOS debldo a su elevada elcclrodensidad.
NUCLEOS A TAAV~S DE La uni6n de las colas de
LOS POAOS NUClEAAES nucleoplasmina dirigen la enlrada de
las partfculas de ora a traves de los
Las rnacrornoleculas son transportadas activamente hacia dentro poros nucleares (vease Figura 12-15).
y hacia fuera del nucleo a traves de los poros nucleares9
EI transpone activo de procefnas nucleares a traves de los paras nucleares puede
ser visualizado directamente recubriendo partfcuJas de oro can una proteina
nuclear, inyectando estas particulas en el citosol, y siguiendo su destino por elec-
tronmicroscopia (Figuras 12-)4 y 12-15).
La inleracci6n inicial de una prolefna nuclear can el complejo de para nu-
.,i'''']
clear requiere una 0 mas protcfnas citos6licas que se unen a las seftales de loea-
lizaci6n nuclear y colaboran dirigiendo a la prolefna nuclear hacia el complejo
. J

de poro, donde parece que se une a las fibriUas que se proyeclan a partir del ani-
110 del complejo. Entonces, la protefna nuclear se desplaza hacia el centro del \,.]
complejo de poro, donde es aetivamente transportada a lraves de la envoltura
nuclear mediante un proceso que requiere la hidr61isis de ATP (Figura 12-16).


Figura 12-15 VisuaJlzacl6n del proc::eso de Importad6n espedlica de una
--]
prote(na a travn de los poros nucleaTeS. E1eclfOnmicrografia que muestra
las esferasde oro ooIoidal revistiendo nucleoplasmina (vease Figura 12-14)
entrando en el nucleo a lraves de los poras nucleares (indicados mediante
....j
corcheles rojos). Cuando las esfcras de oro coloidal se recubren con la regi6n
de la cola de moleculas de nucleoplasm ina se obtlenen resultados similares a }
esIOS. Estas panfculas de oro lienen un diamelro mayor que el canal de
.}
difusi6n del complejo de pora. 10 cual implica que. para permitir su paso. se
ha inducido a abrirse un pora. Dado que las panfculas de oro se alinean en el
citosol antes de emrar en contaeto y de enlrar en el complejo de poro. se ha
sugerido que las fibrillas que se eXlienden hacia el citosol a panir del
,.
... },
complejo de pora (vease Figura 12-IOA) guran a las partfculas hacia su } J
deslino. (DeC. Feldherr. E. Kallenbach y N. Schultz.f. Cell Bioi. 99:2216-
2222. 1964, con permiso de copyright deThe Rockefeller University Press.)

EI transporte de mol6::uJas hacia dentro y hacia fuera del m'icleo 603

 factore. Figura 12-16 RepresentacleSn
citos6lico.
altamcnte esquematica del mecanlsmo
de transporte activo a traves de los
poros nudeares. Las prolemas y las
eslruClUras implicadas en el proceso de
transpone activo no son conocidas. Sin
embargo, sabemos que para la unieSn
inidal de las proleinas nucleares al
complejo se necesitan una coleccieSn
diversa de proleinascilos61icas
I

PASO 1 I PASO 2 NUCLEO reladonadas. Estas protemas, Uamadas
UNION; NOse TRANSPORTE: nudeoporinas, contienen un azUcar
REOUIERE ATP SE REOUIERE ATP simple (la N-acetilglucosaminal que
ayuda a su identificaci6n medianle el
Estudios realizados con varios t'amanos de particulas de oro indican que durante uso de lectinas y de anticuerpos
el proceso de transporte la abertura se puede dilatar hasta alcanzar 26 nm de espedficos. No se muestran las fibrillas
diameuo: parece que una estructura muy poco definida en el centro del comple- que se proyectan a partir del complejo
jo de pora act(ia igual que un diafragma de apertura controlada (close-fining). de poro y que se cree que ayudan a
abrie:ndose 10 necesario cuando es activado por una senal de una protefna de guiar a las protefnas nudeares al centro
grnndes dimensiones (ve:ase Figura 12-12). La base molecular de este mecanis- delporo.
mo y el mecanismo a trave:s del que aCl(ia bombeando macramole:culas hacia
demro y hacia fuera del n(ideo todav!a constituye un misterio.
Parece probable que la exportaci6n de nuevas subunidades ribosomales y
de RNA mensajero a trav~ de los poras nucleares dependa de un sistema de
rransporte selectivo. 5i se utilizan esferas de oro de 20 nm de dilimetro similares
a las utilizadas en la Figura 12-15, se recubren con pequenas mole:culas de RNA
(tRNA 0 RNA 55) de forma similar a como se realiz6 en los experimemos de nu-
c1eoplasmina. y luego se inyectan en el n(icleo de un oocito de rana. son rlipida-
menle transportadas a trave:s de los poros hacia el citoplasma. 5i. por otro lado,
estas partfculas son inyectadas en el citoplasma del OOcil0, no son transponadas
hacia el n(icleo sino que permanecen en el citoplasma. Parece que, ademcis de
contener receptores que reconocen las senales de importaci6n nuclear, el poro
comiene uno 0 mas receptores que reconocen moleculas de RNA (0 las protef-
nas unidas a elias) destinadas at dtosol. Utilizando diferentes tamanos de partf-
culas de oro, unas cubiertas por RNA e inyectadas en el n(icleo y otras recubier-
tas con senates proleicas de imponaci6n nuclear, se puede observar que un
mismo complejo de poro permite el trMico en ambas direcciones.
EI mecanismo de transporte macromolecular a traves de los poros nucleares
es fundamental mente distinto a los mecanismos de transporte implicados en la
transferencia de protefnas a traves de las membranas de otros organulos. La prin-
cipal diferencla radica en el becho que ellransporte nuclear no tlene lugar a tra-
ves de un transponador proteico que atraviesa una 0 mas bicapacas lipfdicas
sino a traves de un gran poro acuoso regulado. Parece que las protefnas Iluclea-
res son transportadas a traves de los paras, manleniendo dichas prolefnas su Figura 12-17 Lahimlnanuclear.
confonnaci6n completamente plegada, como ocurre con una subunidad riboso- Eleclronmicrograffas de pordones de
mal que es transportada como una panfcula ensamblada; por e\ comrario. para la Ill.mina nuclear en un DOCito de
ser transportadas a atros orgIDllllos, las protefnas tienen que desplegarse duran- Xenoplls preparado por sublimad6n y
te su transporte, como expl..icaremos mas adelante. sombrcado mct41ico. La lamina eSlli.
fonnada por una red regular de
filamentos inlermedios especializados.
La envoltura nuclear se desorganiza durante la mitosis 1o {Por cOrlesia de Ueli AebLl
La himlna nuclear es una red de subunidades proteicas interconecladas deno-
minadas laminlnas nucleares. Son un tipo especial de filamentos intennedios
{expl..icado en el Capftulo 16} que poJimerizan fonnando una red bidimensional
(Figura 12-17). Se cree que la l:imina nuclear da fonna y estabilidad la envohura
nu.clear, a la cual se halla anclada por la uni6n de los poras nucleares y la mem-
brana nuclear intema. Tambi~n se cree que la cromatina interacciona directa-
mente con la llimina nuclear, por 10 que la lcimina proporciona un uni6n estruc-
rural entre el DNA y la envoltura nuclear.

604 CapftuJo 12: Compartlmlentos lntraceluJares y c1aslficaci6n de protefnas

 poro nuclear
DNA
\
'amini"
membrana "...clear interne l It I
membra"a nuclear ellletneJ envo UI. nue HI

~
OSfORILACI6NDE
FusION DE LOS CROMOSOMAS LAS lAMtNINAS
ENVUEtTOS

NUCU:O EN INTERFASE ~
, vesicula de
e"voltur.
~ (-
I
t: ""","
~~~
.
TELOFASE "omo,om,
TARDfA

Clom61ida , ~
1"0 aZ lamininas
lasfolil.des

~,~aoN
PROFASf

FusION DE LAS VEsicULAS

DE LA ENVOtTURA NUCLEAR
DE LAS LAMININAS

TELOFASE TEMPRANA

Cuando el Hudeo se desorganiza durante la mitosis, la lamina nuclear se Figura 1218 Rotura y nueva
despolimeriza, al menos parcialmente. como consccuencia de In fosforilaci6n de fomUlcl6n de la envoi lura nuclear
las lamininas nucleares en el inicio de 1a mitosis. Al mismo liempo, los poras nu durante la mitosis. Se cree que la
c1eares se desorganizan en sus diversos componenles. La despolimerizaci6n de la fosforilacl6n de las lamininas ayuda a
lamina nuclear es probablemente un requisito previa para que la envo[tura nu disparar el desensamblaje de 13 Ijmina
nuclear, 10 eual a su \"e'l. causa la rolunl.
clear se rompa fonnando vesfculas de membrana las cuales, con el contenido
en (onna de vesfculas de la envohura
nuclear, se dispersan por todo el cilOsol. La reorganizaci6n de la lamina nuclear
nuclear. Parece que la desfosforilaci6n
tienen lugar cuando las lamininas nucleares son desfosforiladas y, como resulta- de la 14minas ayuda a revertir el
do de eUo, repolimerizan en las supcrficie de los cromosomas; entonces, la lami- proceso.
na nuclear reorganizada une las veskulas de la envollura membranosa nuclear,
las cuales se fusionan entre sf formando de nuevo una envoltura alrededor de
cada cromosoma 0 grupo de cromosomas. Durante eSle proceso los complejos
de poro nucleares tambien se rcorganizan. Los cromosomas envueltos se agru-
pan y sus membranas se fusionan formando una sola envollura nuclear. la eual
importa activamente tadas las pratefnas que presentan sei'iales de localizaci6n
nuclear (Figura 1218). Dado que la nueva envollura nuclear esta situada muy
cerca de la superficie de los cromosomas, excluye todas las protefnas de la celula
excepto las que estan unidas a los cromosomas mit6licos. Por 10 tanto, las prolei-
nas grandes se manlienen fuera del ndcleo interfasico a menos que presenten
sei'iales de localizaci6n nuclear.
las seiiales de localizaci6n nuclear no son eliminadas despues del transpor-
te bacia el ndcleo. Se supone que eSlo es asf porque las proteinas nucleares han
de ser importadas aI ndelco vacias veces, despues de cada divisi6n celular. Por el
contrario, cuando una moltkula de prole(na ha sido importada a cualquier otro
organulo rodeado de membrana, se transmite de generaci6n a generaci6n en el
interior del compartimiento y nllnca ha de ser translocada de nuevo. En esle
caso el peptido seoal de estas moleculas es a men lido eliminado desplles de la
translocaci6n proteica.

1 transporte entre el mlc1eo y el citosol puede ser regulado

evitando el acceso a la maquinaria transport adoral I
Como se explica en el Capftulo 9, la actividad de algunas prolernas de regulaci6n
g~nica esta controlada manteniendo estas protefnas fuera del compartimiento

E1 transporte de moJ~las hacla dentro y hacia fuera del nudeo 605

 ,el'lal de lou!iuci6n envoltura nuclear Figura 12-19 La Importacl6n nuclear
nuclear
,--,
del receptor de g1ucocortlcoldes. EI
lugar de uni6n CITOSOL NUCU;:O
de 18 hormol'la t hOrmOI'l'
.steroidea
receptor de glucocorticoides es una
prolefna reguladora de genes que en

~ ~""-PO~A
-
las celulas no Iratadas con honnonas
se halla en el citosol unida a la
prolefna chaperona hsp90. Cuando se
dominic <te tUII'IICripci6n activa por la union de la hormona
ul'li61'1al DNA esteroidea apropiada, la protefna
hsp90 se libera y el receptor se dirige aI
COMPLEJO RECEPTOR LA UNION DE LA HORMONA UNION DEL RECEPTOR ACTlVO nucleo gracias a una senal de
INACTlVO EN EL UBERA LA hsp90 Y EXPONE AL DNA ACTlVANOO LA localizacion nuclear; una vez se halla
CITOSOL LA SENAL DE LOCAUZACION TRANSCRIPC\ON en el nucleo. se une a secuencias
NUCLEAR
espedficas de DNA y regula la
lranscripciondeunacoleodonde
nuclear hasta que son necesarias en dicho compartimiento. La senal de localiza- genes discreta. (Se explica en los
d6n nuclear de estas protefnas puede ser inactivada por fosforilad6n. Otras, se Capftulos 9 y 15.)
unen a protefnas citos6licas inhibidoras que 0 bien las retienen en el dtosol-pro-
bablemente mediante interacciones con el citoesquelet'O 0 con organulos especf-
ficos- 0 bien enmascaran sus sel"a1es de localizaci6n nuclear. Cuando la c~Hula
recibe el estfmulo apropiado, la proteina es liberada de su anclaje citos61ico 0 de
sus sistema de enmascaramiemo yes uansponada hacia el nuc1eo (Figura 12-19).
La exponaci6n de RNA desde el nucleo puede estar controlada de una ma-
nera similar. Como la importaci6n activa hacia el nucleo, la exportaci6n tambien
requ.iere una sel"a1: en el caso de la mayorla de moleculas de RNA mensajero,
esta sei\a1la proporciona una modificaci6n caracterfstica, la estcuctura de cape-
ruza (cap) en el extrema 5' del RNA (se explica en el Capitulo 8). Los RNA pre-
mensajeros procesados de fonna incompleta denen esta caperuza, pero est<\n
unidos a la maquinaria nuclear de transcripci6n y de maduraci6n, la cual s610 Ii-
bera la molecula de RNA cuando se ha completado su procesamiento: estudios
geneticos realizados en levaduras han demostrado que las mutaciones que evitan
que el RNA pre-mensajero se relacione correctamente con la maquinaria de ma-
duraci6n provocan la exponaci6n de RNA no maduro. Onos RNA, como el UNA
de transferencia 0 el RNA ribos6mico, que no presentan la estruclur3 en caperu-
za en el extrema 5', primero han de ensamblarse con protefnas y entonces son
exportados como parte de estos complejos. Posiblemente las sel"ales de expona-
ci6n nuclear se encuentran en las subunidades proteicas de estos complejos, y
estas sef\aJes se activan despues del ensamblaje correcto con los componentes de
RNA. Sin embargo, no conocemos todavfa la naturaleza de estas seiiales.

Resumen
La envoU"ra nllclear estd fOntullM por "na membrana nuclear lnterna]l otra ex-
terna. La membmua 1IIlclear externa es continlUl con la ",embrallU del ER, ]I el es-
pacio entre bta]l la membrana nm:War intertul es continuo COil ellumell ckl ER.
Las molkulas de RNA, que sonfabrlautas en el ndcleo, y las sllbllllidades rlbos6",1-
cas, qlU~ son ensambladas camblin en el ndcleo, son exportadtu al cltosol, mle,lIrus
que todns las protefnas q'le son flltlelonales en elmi.cleo I,an sido silltetluulas en el
elrosol e Importadas. El illtercambio de materin1es elltre eilidcleo y el dtosol tlene
'''gar a traves de los poros mu;leares qlre proporr:iOllUli IIl1a ufa de paso a tmves de
la envolWra nuclear.
Las protefnas qlre presentan seMles de importad6n n"clear SOil tralUportadas
adiuamente haeia el nlkko a traves de los poros. mkntras qlre las molk"las de RNA
Y las s"b"nldadn rlbosomales reciin fabrkadas son lransportadas adlvamente ha-
cia a/llera, a traves de los poros. Dado qlU! este pipttdn senal no es elimi,uulo, las
protefnas "ueleares plleden ser importadas varias Pea'S, tid como se requlere cada
uez: q,re el nrfeleo u desorgnniUl en la mitosis. El lralUporte de las protefnas ,,,,elea-
res y de las molkulas de RNA a travis de los paros se Pltede reguMreuitando ell1Ca!'-
so deestas molkillas a M maquinaria tk transportede los poros nlu;leares.

606 Capftulo 12 : Compartimientos intracelulares y c1asificaci6n de protefnas

El transporte de protefnas al interior de CITOSOL

mitocondrias y de cloroplastosl 2 J Il
NUCLEO PEROXISOMA
Tal como se explica en el Capitulo 14, las mitocondrias y los c1oroplaslos son or-
ganu]os de dohle membrana que se especializan en la sfntesis de ATP, utilizan- MITOCONDRIA pLASTIDOS I
do la energfa producida mediante el transporte electr6nico y la fosforilaci6n
oxidativa en las mitocondrias y mediante la fosforilaci6n fotosintetica en los RETlcULO ENOOPLASMATICO
cloroplastos. A pesar de que ambos organulos contienen su pro pia DNA y su ,u.
maquinaria para la sfntesis proteica. la mayorfa de sus protcinas estan codifica- GOLGI
das en el mldeo celular y son imporladas desde e[ dlosol. Ademas, cada protef-
na importada ha de alcanzar el subcompartimiento determinado en el que es
funcional. En las mitocondrias exislen dos subcompartimienlos: el espaclo de
L1S0S0MA
I ~ VESICULAS DE
SECRECION
I
ENDOSOMA
la matriz y el espacio lntermembrana. Estos compartimientos estan definidos
por las dos membranas mitocondriales: la membrana interna, que encierra el
espacio de la matriz y la membrana cxterna que se haHa en contacto con el ci- I
1r
SUPERFICIE CELULAR
11
tosol (Figura 12-20A). En los cloroplastos existen estos dos subcompartimientos
mas otro adicional, el Ilamado espacio rilacoidal, que est a delimitado par la
membrana tilacoidal (Figura 12-208). Cada uno de estos subcompanimientos
contiene una colecci6n especffica de protefnas. Por 10 taOlo, el credmieOlo de
las mitocondrias y de los cloroplastos mediante la importaci6n de protefnas ci-
toplasmaticas constituye una proeza, que irnplica la traslocaci6n selectiva de
estas prorefnas a traves de vaTias membranas sucesivamente hasta alcanzar el
lugar apropiado.
Las protefnas codificadas por los genomas de estos organulos. que son rela-
tivamente pocas, estan localizadas principalmente en la membrana interna de
las mitocondrias y en la membrana tilacoidal de los doroplastos. Generalmente
los polipeptidos codificados por los organulos forman subunidades de comple-
jos proteicos cuyas otras subunidades estan codificadas por genes nucleaTes y,
por 10 tanto, son irnportadas desde el dtosol. La formaci6n de estos complejos
protei cos hfbridos requiere una sfntesis equilibrada de los dos ripos de subuni-
dades; el mecanisme a traves del cual esta coordinada la sfntesis proteica en dos
tipos diferentes de ribosomas localizados en dos membranas separadas, consti-
luye actualmente un misterio.

La translocaci6n bacia la matriz mitocondrial depende

de una sefial tfpica de la matrizl3
Generalmente, las protefnas imponadas a la matTiz mitocondrial son captadas
desde el citosol uno 0 dos minutos despues de su liberaci6n desde los polirribo-
somas Iibres. Casi siempre estas protefnas prccursoras mltocondriales poseen
un peptido senal (de entre 20 y 80 residuos de aminoacidosl en su extrema arni-

Figura 12-20 Los

(A) MITOCONDRIA (BI CLOROPLASTO
suboompartlmlentos de la
rnItocondria y del cioroplasto. La
topologfa del cloroplasto puede
derivarse de la topologfa de la
milocondria de una forma sencilia:
peUizcando las invaginaciones de la
membrana mitocondrial intema para
espacio entre dar lugar a vesfculas. se puede generar
membrenes un compartimiellto que es
membrana topol6gicamenle equivalente aI de las
intarne membrane vesiculas del tilacoide de los
especio antra Illacoidel
cloroplastos. Las vesiculas deltilacoide
mambranes
podrfan haber evolucionado de este
aspacio da la modo.
matriz (eslromal

EI transporte de protefnas at interior de mitocondrias y de c1oroplastos 607

 Figura 12-21 Un peptido senal para ia importaci6n deprote{nas a ia
mhocondrla. La citocromo oxidasa es un gran complejo multiprotcico
localizado en la membrana mitocondrial interna, donde actua como la
enzima terminal de la cadena de lransporte eleclr6nico (se explica en el
Capfrulo 14). (Al Los 12 primeros amino<lddos del precursor de la subunidad
IV de esta enzima son suficientes como peptioo seftal para dirigir el
transporte de es{a subunidad a la mitocondria, (B) Cuando el peptido sefial
se pliega en forma de helice Ct de 3,6 residuos par vuelta, y se observa dcsde
arriba de la helice, se observa que los residuos de aminoacidos eargados
positivameme (ell raja) se agrupan en una eara de la helice micmras que los
residuos de aminmlcidos no polares (ell verde) se hallan agrupados en la cara
opuesta. Todas las secucncias de los peptidos sellal mitocondriales pueden
potencialmeme formar una helice anfipatica como esta. Se cree que una
helice de este tipo es reconoeida par proternas reeeptoras especfficas de la
superficie mitocondrial. \8

no. Cuando las protefnas han sido importadas, el peptido seftal es rapidamente
climinado par una proteasa especffica (una peptidasa de seiialJ de la matriz mi-
tocondrial y probablemente degradado hasta aminoacidos en la matriz. EI pepti-
do seftal puede ser extraordinariamente sencillo. Experimentos de genetica mo-
lecular en los que se utiliza un peptido seftal de longitud progresivamente
menor, han demostrado que para seftalizar la importaci6n mitocondrial s610
son necesarios 12 aminoacidos en su extremo amino terminal. La uni6n experi-
mental de estos 12 residuos a cualquier protefna citop!'1"imatica hace que la pro-
teina resultanle sea dirigida a la matriz mitocondnal. Estudios de la ffsica de
peptidos seftal completos sllgieren que estos peptidos seftal pueden formar es-
tructuras anfipMicas de helice 0., en las que todos los restos cargados positiva-
mente se localizan en un lado de la helice y todos los restos hidrof6bicos se dis-
tribuyen'en el lado opuesto (Figura 12-21). $e cree que esta configuraci6n es
reconocida por protefnas receptoras especfficas de la superficie milOcondrial.

La translocaci6n hacia la matriz mitocondrial depende

del gradiente electroquimico a traves de la membrana interna
y de la hidr6lisis de ATpl4 .
Casi todo 10 que conocemos ace rca de los mecanismos moleculares de la impor-
taci6n proteica a las mitocondrias 10 hemos aprendido del amilisis de sistemas
de transporte reconstituidos en sistemas libres de cclllias. En primer lugar, se
purifican mitocondrias por centTifugaci6n diferencial a partir de Wl homogenei-
zado de celulas. A continuaci6n. estas mitocondrias se incuban con protefnas
precursoras mitocondriales marcadas radiactivamente. Generalmente las proter-
nas precursoras purificadas son transportadas hacia el interior de estas mito-
condrias de forma nipida y eficiente durante una breve incubaci6n in vitro.
Cambiando las condiciones de estos experimelllos in vitro, es posible establecer
los reqllerimientos bioqu(micos del transporte de protefnas hacia el interior de
las mitocondrias.
Tadas las farmas de transporte y de desplazamiento vectorial requieren
energ(a. En rnuchos sistemas biol6gicos la energfa esta suministrada por la hi-
dr61isis de ATP. No obstante, en el caso de la importaci6n mitocondrial tam bien
se requiere un gradiente electroqufmico a traves de la membrana mitocondrial
interna. Este gradiente se mantiene por el bombeo'de H' desde ia matriz al es-
pacio incermembrana durante el transporte electr6nico, impulsado por los pro-
cesos de transporte electr6nico en la membrana interna. La membrana mito-
condrial externa al igual que las bacterias gram negativas (vease Figura 11-14).
presentan grandes cantidades de una prolc(na formadora de poros Hamada po-
rina, par que son libremente penneables a los ioncs organicos y a los metaboli-
tos (aunque no a la mayorfa de protefnas) de modo que no es necesario mante-
ner ningUn gradiente a su traves. La energfa del gradienle electroqufmico a

608 Capftulo 12: Compartimientos intracclulares y c1asificaci6n de protefnas

traves de la membrana interna se utiliza como una baterfa para impulsar la
biosfntesis de la mayor parte del ATP de la celula, pero tambien se utiliza para
ayudar a impulsar la importaci6n de protefnas dotadas del peptido seftal de
importaci6n mitocondrial, que est:! cargado positivamente: cuando se anaden
ion6foros que disipan el potencial de membrana mitocondrial, se bloquea la
importaci6n de protefnas a la mitocondria. Todavfa no conocemos de que for-
ma el gradiente electroqufmico colabora impulsando la translocaci6n proteica.
La funci6n de la hidr6lisis del ATP se conoce mucho mejor, como veremos mas
adelante.

Las protefnas mitocondriales son importadas hacia la matriz

mediante un proceso de dos etapas, a traves de lugares de
contacto que unen las membranas externa e internalS
Como primer paso en la importaci6n mitocondrial, las protefnas precursoras
mitocondriales tienen que unirse a protefnas receptoras que se encuentran en la
membrana mitocondrial externa y reconocen los peptidos senal mitocondriaJes.
La etapa siguiente es el proceso de translocaci6n en sf mismo.
La protefna puede aJcanzar la matriz mitocondriaJ cruzando las dos mem- Figura 12-22 Las prolefnas que son
. branas una por una, 0 pasando a traves de ambas membranas a la vez. Para dis- transportadas a la malrlz
tinguir entre estas dos posibilidades, un sistema de importaci6n libre de celulas mllocondrial alravlesan de fonna
se enfrfa hasta temperaturas bajas, atrapando las protefnas en aJgl1n paso inter- transltorla tanlO la membrana
medio del proceso de translocaci6n. Las protefnas que se detectan en este paso extema como la Intema de la
mllocondrla, Cuando se incuban
tienen su extremo amino tcnninal en el espacio de la matriz (como 10 indica el
milocondrias aisladas a 5 <>C con un
hecho de que su peptido sefiaJ ya haya sido eliminados por la proteasa de matriz), precursor de una prole(na, el
pero la mayor parte de la protefna todavfa puede ser atacada desde el exterior de precursor s610 se Iransloca
la mitocondria por enzimas proteoliticas afiadidas externamcnte (Figura 12-22). parcialmenle. En la matriz
Este resultado demuestra que para cntrar cn la matriz las protefnas precursoras mitocondrial se elimina el peptido
pasan a traves de ambas membranas mitocondriales a la vez. Se cree que existen sei'ial amino terminal (en raja); la
dos protefnas transportadoras, una en la membrana extema y la otra en la inter- mayor parte de la cadena polipeptldica
na, y que sus funciones habitualmente se hallan acopladas permitiendo el trans- permanece fuera de la mitocondria
pone a traves de ambas membranas al misffio tiempo. Los electronmicroscopis- donde es accesible a enzimas
tas han detectado numerosos puntes de centacte en los cuales parece que se proteolfticas. AI volver a calentar la
unen las membranas mitocondriales externa e intema, 10 cual sugiere que los preparaci6n a 25 <>C, el proceso de
procesos de translocaci6n se producen en 0 cerca de estos puntos. translocaci6n se completa. Una vez se
halla en el interior de la mitocondria,
Aunque las protefnas precursoras son transportadas a trayes de ambas
la cadena polipeptfdica esta protegida
membranas a la vez, esta claro a partir de los experimentos descritos en la Figura de las enzimas proleolfticas aftadidas
12-22 que el proceso de imponaci6n tiene lugar en dos etapas distintas y que desde el exterior a menos que tambien
s610 la segunda se bloquea por temperaturas bajas. De ambas, la penetraci6n se anada un delergente para romper
inicial, que no se afecta por las bajas ternperaturas, es la que requiere el poten- las membranas mitocondriales, 10 que
cial de membrana: cuando una preparaci6n enfriada de mitocondrias que con- pennite la digesti6n de las protemas
tienen intermediarios parciaJrnente translocados, se vuelven a calentar, el pro- importadas.

5e necesite el se n&Cesita la
potencial de r-~"'-' hidr61isis de
membrana ATP

~'P"'"''
5'C 2S"C

!
+ proteasa
1 + detergenta

EI transporle de prole(nas allnterlor de mJtocondrias y de c1oroplastos 609

 INSERCION EN LA MEMBRANA, Figura 12-23 Importaclon de
IMPULSADA PDR EL GRADIENTE
ELECTROOufMICO
protefnas par la mltocondrla. EI
peptido sci'lal amino terminal del
precursor de la precursor proteico es reconocido por
protelna membrana milocondriallnlerna
CITOSOL
reccptores que al parecer existen en la
11/(r~" membrana externa de la mitocondria.
Se cree que la protelna es lranslocada
RECONOCIMIENTO ROTURA MEOIANTE MATRIZ a traves de ambas membranas
lugar de '-- f i N A PEPTIOAS& mitocondriales, a travl!s de lugares
protelr.8 raceptora conlaClO enlre____ OE SErilAL
las membranas ~
espedales de contacto 0 muy cerca de
LA TRANSLOCACION \ protelna mltocondrlal cUos. Este transporte esta impuJsado
A LA MATRIZ ~ mad ... ra inicialmente por eJ gradiente
REOUIERE ATP / electroqufmico existente a traves de la
PlIplido sellal
elimir.ado membrana interna, ydespues por la
hidr6lisis de ATP. En la matriz
milocondrial. el peptido senal es
eliminado por una peptidasa de senal,
formandose la proteina madura. EI
ceso de importaci6n se completa nipidamente (Figura 12-22), incluso aunque el peptido sei'lallibre es n'ipidamcme
potencial de membrana a traves de la membrana interna se haya disipado. Sin degradado.
embargo, esta segunda etapa del proceso de transporte requiere ATP. Por 10 tan-
to la primera etapa, que implica la inserci6n del peptido seilal y de las seeuen-
cias adyaeente en el interior de ambas membranas mitocondriales, es impulsada
por el gradiente eleetroqufmieo, y Ja segunda rase, en la cual el resto de cadena
polipeptfdica se desplaza hacia la matriz, requiere tanto hidr6lisis de ATP como
una temperatura fisiol6gica (Figura 12-23).

Las proteinas son importadas hacia el interior de la matriz

mitocondrial, en un estado desplegado l6
EI transporte de las prote(nas precursoras mitocondriales a traves de los puntos
de contacto de las membranas mitocondriales esta guiado por los miembros de
la familia de las proleinas chaperonas, [as cuales se expliean en el Capitulo 5. Es
diffcil de imaginar c6mo una protefna pJegada soluble en agua puede pasar a
traves de dos (0 incluso a t.raves de una) bicapas Iipfdicas mientras manliene su
conformaci6n tridimensional nativa. Se sabe que las protefnas citos6licas de
lipo chaperona (llamadas chaperoninas) penenecientes a la familia de las hsp70,
ademas de asegurar el correcto plegamiento de protefnas citos6licas, tienen una
funci6n importante en la imponaci6n de proleinas tanto hacia el interior de las
mitocondrias como hacia el ER, mediante su uni6n a los precursores en su esta
do desplegado durante la translocaci6n. Como se explica en el Capitulo 5, la Ii-
beraei6n de los polipeptidos recien sintetizados de la familia de prolefnas cha-
peronas hsp70 requiere la hidr6lisis de ATP, 10 eual supone parcialmente la
dependencia del ATP de las ultimas rases de la imponaei6n mitocondrial.
Las primeras evidencias sobre la funci6n esencial de las protefnas ehapero-
nas en la t.ranslocaci6n a traves de las membranas celulares intern as se obtuvie-
ron en estudios geneticos de levaduras. Cuando se inaclivan los genes que codi-
fiean ciertos miembros de la familia hsp70 de las protefnas chaperonas, los
precursores mitocondriales no son importados hacia las mitocondrias y se aeu-
mulan en el citosol. Se cree que los precursores recien sintetizados, a medida
que son Iiberados de los polirribosomas en el citosol, se unen a las proteinas
hsp70, las cuales evitan la agregaci6n 0 el plegamiento espontaneo de las protef-
nas precursoras antes de que se unan a los translocadores proteicos de la mem-
brana de destino. La energfa liberada por la hidr6lisis de ATP se utiliza para Iibe-
rar a las protefnas hsp70 unidas a medida que las prote(nas translocadas pasan a
traves de la membrana. Experimentalmente, la necesidad de hsp70 y de ATP en
el dtosol puede evitarse si las proteinas se mantienen desplegadas artificialmen-
te, per ejemplo, mediante un paso de desnaturalizaci6n en L1na solud6n con-
centrada de urea.

610 Capftulo 12: Compartimientos lntracelulares y clasificaci6n de protefnas

 espscio
-
t;'p; membrana mitocondrial
externa
Figura 12-24 La Importacl6n de
prote(nas hacla 1a maim
mitocondrlal requlere protemas
hsp70 en ambos lados de 1a doble
membrana mllocondrlal. Despues de
intermembrene
1'1 inserci6n inicial del peptido sei'ial y
de las porciones adyacentes de la
cadena pelipeptfdica, la cadena
Q......
;nembrana mitocondrial
desplegada se desliza a traves de lin
'"terna /"'"
MATRIZ canal que atraviesa ambas
hsp70 mitocondrial membranas. La hsp70citos6lica unida
se libera de la prote(na par media de
lIna reacci6n que depende de la
hidr6lisis de ATP. De forma
concomitante, la 1Jsp70 mitocolldrial
se une a regiones de la cadena
La uni6n secuencial de las protefnas importadas a las protefnas polipeptfdica que se hallan expuestas
mitocondriales hsp70 y hsp60 impulsa su translocaci6n yayuda en la matriz. estirando asf la prote(na
el plegamiento proteico 17 hacia el interior de la mitocondria.
Las prolefnas importadas no s610 son dirigidas a las mitocondrias por las protei-
nas chaperonas: una vez han sido Iiberadas en el interior, son recibidas en la
matriz par proteinas eSlrechamenee relacionadas con las hsp70. La hsp70 milo-
cOrldrial es crucial en procesos de importaci6n ya que las mitocondrias que con-
tienen form as mutantes de la protefna no son capaces de importar protefnas
precursoras. AI igual que su pariente citos6lico, la hsp70 mitocondrial tiene una
alta afinidad para las cadenas polipeptidicas no plegadas, y se une fuenemenle a
las protefnas imponadas a medida que emergen de los translocadores. A conei-
nuaci6n la hsp70 libera la protefna mediante una reacci6n dependiente de ATP.
Este cicio de uni6n y posterior liberaci6n dependiente de energfa puede propor-
cionar la fuerza impulsora para la importaci6n proteica despues de que la pro-
lefna se haya insertado inicialmente en el translocador (Figura 12-24): la uni6n
secuencial de muchas hsp70 mitocondriales puede empujar la protefna desple-
gada a traves del canal transmembrana hacia la matriz.
Despues de la interacci6n inicial con la hsp70 mitocondrial, muchas protei-
nas importadas son transferidas a otra protefna chaperona. la hsp60 miloco,,-
drial. Tal como se explica en el Capftulo 5, la hsp60 se pega a las cadenas poli-
peptfdicas no plegadas facilitando su plegamiento mediante una reacci6n
dependiente de ATP. La mayor parte de nuestro conocimiento aClual sabre la
funci6n de la hsp60 como protefna facilitadora del plegamienlo deriva de eslU-
dios sabre la importaci6n de protefnas en las mitocondrias.

EI transporte de protefnas al espacio intermembrana

mitocondrial requiere dos sefiales l8
Muchas de las funciones de las mitocondrias requieren protefnas que estan inte-
gradas en la membrana mitocondrial interna a bien que actuan en el espacio in-
termembrana. Estas protefnas son transportadas desde el citosol mediante los
mismos mecanismos que transportan protefnas hacia la matriz, pero mediante
varios sistemas se evita que finalicen su viaje en la matriz. En muchos casos las
protefnas precursoras son inicialmente transferidas hacia la matriz, tal como se
ilustra en la Figura 12-23. No obstante, estas protefnas presentan una secuencia
de aminoacidos muy hidrof6bica, situada muy eSlrategicamente despues del
peptido senal amino terminal que inicia la importaci6n. Una vez el peptido se-
nal ha sido eliminado por la proteasa de la matriz, la secuencia hidrof6bica ac-
toa como un peptido senal para volver a translocar la protefna de nuevo desde la
matriz a traves de la membrana interna. Posiblemente el paso final de esta ruta
implica un mecanisme similar al utilizado para dirigir protefnas codificadas par
las mitocondrias a traves de la membrana intema (Figura 12-25A). Mas adelante
veremos que un mecanismo parecido se utiliza para translocar protefnas hacia 0

E1 transporte de protcmas allnterior de mllocondrias y de c1oroplastos 611

 protelna dfIla proteina de la
membrana inlerna membrana interne
CITOSOl

.... -'-/~
piptido aetNIl
sfmeSIS PAOTEICA
,.,
MAT""

w MITOCQNORlAL lei

a trav~s de la membrana del ER y de la membrana plasmatiea proeariota, donde Figura 1225 La importacl6n de
ha sido esmdiado mlis intensamente. protelnll8 desde el cltosol a1 espaclo
Una ruta altemaliva hacia la membrana intema puede evitar la excursi6n Intermembrana 0 a la membrana
hacia la matriz. EI translocador en la membrana interna se une a la secuencia hi- Intenla de la mltocondrla. (Al Se cree
drof6biea que sigue al peptido sef\al amino terminal que inicia la importaci6n y algunas prolCfnas, para desplazarse
desde el dlosol a la membrana
evita Iransroeaciones posteriores a Iraves de la membrana interna. Los dos
interna, sigucn una mla que requiem
translocadores en las membranas externa e interna se dcsacoplan. 10 eual provo- la parlicij)ad6n de dos peplidos senal
ca quc el resto de la protefna sea empujada hacia el espacio intermembrana (Fi y de dos fen6menos de Iranslocacl6n.
gura 12258). Diferemes prolcfnas pueden utilizar una u olra de estas dos rutas En primcr lugar, la prolelna es
hacia la membrana interna 0 hacia el espacio imermembrana. No esta claro emil transpOTlada al espado de la matrlz,
de elias es la mas utilizada. como mucstTa la Figura 1223. Sin
DespueJ de que las prote[nas destinadas a la membrana interna hayan sido embargo. la eliminad6n del ~ptido
insertadas en la membrana, una proteasa imermembrana las fraeciona, Iiberan- sefta! (en rojo) utilizado para este
do la cadena polipepddjca madura como una prote[na soluble (Figura 12-25C). lranspoTle inicial desenmascara un
Finalmente, muchas de estas prole[nas se encuentran unidas, como prolefnas ~plido sef'ial hidrof6bico {elllUuallja}

de membranas perifericas, a la superficie extema de la membrana rrulocondrial adyacelUe siruado en el nuevo extrema
intema, donde forman subunidades de complejos proteicos que tambien con- amino. ula senal haec que la prote{na
se Inserle en la membrana interna
tienen protefnas transmembrana.
mediante el mismo sistema par el que
se inserlan en esla membrana las
Para dirigir el transporte de protemas a la membrana tUacoidai de proternas codificadas por el genoma
los cloroplastos se necesita la participaci6n de dos peptidos seiial l9 milocondrial. (8) Segtin un
mecanismo alternativo, la secuencia
EI transporte de prote[nas hacia el interior de los c1oroplastos se parece en mu- hidrof6bica que sigue a la sefial que
chos aspectos a1 transpone hacia el interior de las mitocondrias: ambos trans- dlrige hacia la matriz se une a un
pones se producen de manera post-transcripcional, ambos requieren energfa, y translocador y detiene la translocaci6n
ambos utilizan peptidos sel'Jal hidrof6bicos amino terminales que se eliminan a lraveS de la membrana interna.
despues de haber sido utilizados. 5i embargo, existe al menos una diferencia im EllIonces el resto de la protelna es
portante: las mitocondrias utilizan el gradiente eleclroqufmico a traves de su empujada hacia el espacio
membrana interna para ayudar a impulsar el transporte, micntras que los cloro- intermcmbrana y la secuencia
plastos, que tienen un gradienle electroquimico a traves de sus tilacoides pero hidrof6blca se Iibera en el interior de 18
membrana inlema. Esle mecanismo se
no de su membrana interna, parece que s610 utilizan la hidr61isis de ATP como
denomina la ruta de paro de
aporte energetico para la import'ad6n a lraves de su envohura extema de doble transferencia y se explica en detalle
membrana. m~s adelante. (e) AJgunas protelnas
A pesar de que los peptidos senal para el transporte aI interior de los c1oro 1
solubles del espado illlennembrana
plaslos son semejantes a los descritos anleriormente para ellransporte a milo- pueden utilizar tambien las nllas
condrias, en las celulas vegetales se hallan presentes tanto mitocondrias como mostradas en (A) yen (8) anles de ser
c1oroplaslos, y las protefnas han de escoger de manera adecuada entre eUos. En libcradas al cspado intennembrana
plantas, por ejemplo, si una enzima bacteriana se une experimentalmeme a una por una segunda peplidasa de seoal
secuencia amino terminal de una prote[na mitocondrial, es dirigida especffica- (con su lugar activo en el espacio
mente a las mitocondrias mientras que si se une experimentalmente a una sc- intennembrana). la cual elintina el
~ptido sefta! hidrof6bico.
cuencia amino terminal de una prote[na de c1oroplaslo, penetTa en los c1oro-
plastos. Por 10 tanto, probablemente los receptores de importaci6n de cada
organulo pueden reconocer las diferentes secuencias senal.
Los c1oroplastos tienen un compartimiento extra rodeado de membrana, el
dlacolde. Muchas protefnas de los c1oroplastos, entre las que se encuentran las
subunidades proteicas del sistema fotosintetico y de la ATP sintasa, son trans-

612 Capftulo 12: Compartimlenlos IntraceJulares yclasificaci6n de protefnas

 peptido ael'lal Figura 1226 La Iranslocacl6n aI
CITOSOL
de e1oroplaato
espaclo tilacoidal de los c1oroplastos.
L.1 caden.1 polipeptfdica precursom
contiene un peptido sef'i.11 amino
L1MINACICIN OEL E$TROMA terminal de c1oropl.1sto (ell rojo),
"PTIOO SE.Al Df'PLASTO seguido inmediatamente por un

-~j-
pcptido senal de tilacoide (en
prote(na
precuraora TRAN$LOCAC10N p4ptldo 8el'lal de naranjal. EI peptido sef'ial de
de tilacoide AL ESTROMA -- t1lllcolde acceaible cloroplasto inicia la transloeaci6n aI
OEPENOIENTE DE ATP ~, eSlroma a traves de un lugar de
receptor CUVII
existencla ae contaeto entre membran.1s, medianle
propone TRAN OCACION un mecanismo similar al ulilizado para
ALE CIO .-
membrana TILAC AL , la translocaci6n a la matriz
exlerna
mitocondrial. Entonces, este peptide
membrana senal es eliminado, desenmascarando
dellilllCOide proteins mlldure en el
eaPtieio del tilacoide el peptido seiial de tilacoide, el eual
inicia la lranslocaci6n a lra~s de la
membrana del tilacoide.

ponadas desde el citosol hasta la membrana tilacoidal. Como en el caso de algu-

nos preeursores milocondriales, estas protefnas son transponadas a su destino
final a traves de un proeeso en dos pasos. Primero pasan a traves de la envoltura
de doble membrana hacia el espacio de la matriz del cloroplaslo (llamado el es-
troms) y luego son nanslocadas hacia la membrana tilaeoidal (0 a traves de esta
membrana hacia el espacio tiJacoidall. Los preeursores de estas proleinas tie-
nen, a continuaci6n del peptido selial amino terminal del c1oroplasto, un pepli-
do senal hidrof6bieo dellilacoide. Despues de que el peplido senal amino termi-
nal haya side utiJizado para importar a la prolefna al estroma, es eliminado por
una proleasa selial del estroma (amiloga a la proteasa senal de la matriz mito-
eondria\J. Esta hidr6lisis desenmascara el peptido selial del tilacoide, el eual en-
tonees inicia el transporte a traves de la membrana tilacoidal (Figura 12-26).
19ual que en el caso de las mitocondrias, el segundo paso es la via utilizada para
insertar las protefnas eodificadas por el c1oroplasto en la membrana tiJacoidal;
probablemelUe el transloeador proteico que se utiliza es originario del anteeesor
bacteriano de los cloroplastos.

Resumen
A pesar de que las mitocondrias y los cloroplastos tienen sus propios sistemas ge
neticos, s6io producen una pequena proporclOn de sus propias protefnas. De Ile-
dlO, an;bos orgdtmlos importan desde el citosolla tnayorla de sus proteinas, utili-
zando en ambos casos mecanlsmos similares. Los procesos de transporte han sido
muy estudiados etJ t',itocondrlas, especialmente en levaduras. Una prolefna es
translocada ai espacio de la matriz mitocondrlal mediatlte ei paso a traves de lu-
gares de adllesMn entre ias membranas extema e intema, llamados lugares de
contaeto. La trmlSloeacMn en las mitocondrias estd impulsada por la IIidrolisis de
ATP Y por el gradlente electroqufmico a traves de ia membrana intema, mientras
que la tratlSiocacion etl los cloroplastos solo estd impulsada por la Ilidrolisis del
ATP. La proteina transportada atravlesa las membranas de las mltocondrias y de
ios cloroplastos elt e;tado desplegado. Las protefnas chaperonas de la familia de
las IISp70 citosolicas mantienen las proteinas precursoras en un estado desplegado
competente con la tramlocacwn. La I1Sp70 milocondrial se une a la cadena polipe-
tfdica que esta llegando a la matriz y parece que la implllsa luwla ei interior. Una
vez que la proteina se I.alla en ia matriz, otra proteina de estres, la hsp60, ayuda ai
plegamietlto de la proteina. 56io las protebJas que contie,.en un peptido se,lai es-
peciflco son translocadns Ilacia el interior de las mitocotldrias y los cloroplastos.
EI peptidQ senal se Imlla generalmetlte en ei extremo amino termitlal yes elimina-
do desplles tk la importacioll. EI trallsporte a la membra'Ja intema puede teller
lugar como 1m segll1.do paso sl en la prote{na importada se Jralla presente un pep

EI transporte de protefnas al interior de mitocondrias y de c1oroplastos 613

tldo seiialllidroj6bioo; este segundo peptido senal es desenmasarmdo cuamlo se eli
mina el primer plptido senaL De iguaijonPU!, en el caso de los cloroplastos In i",-
port0d6n dade el estroma hasta el tilncoith requiere un segundo piptido seilaL

Peroxisomas 20 CITOSOl I

Los peroxlsomas se diferencian de las mitocondrias y de los c1oroplaslos en mu- J 1

NUCLEO PEROXISOMA
chos aspectos, entre los que cabe deslacar que estos org<1nulos eSI<1n rodeados
por una unica membrana, y no preselllan ni DNA ni ribosomas, A pesar de estas MITOCONORIA pLASTIDOS
diferencias, se cree que los peroxisomas est<1n formados por un proceso similar
de importaci6n especffica de protefnas (y de Ifpidos) del citoso!' No obstante, RETlcUlO ENDOPLASMAnco
dado que los peroxisomas no poseen genoma, ladas sus prolefnas han de proce-
der del citOsol. Par eUo, los peroxisomas se parecen at ER en que son org<1nulos
.u.
GOlGI
aUlorreplicames, delimilados por una membrana unilaria y que existen sin ge-
noma propio. LlSOSOMA K: II9VESlcULAS DEI
Dado que no volveremos a Iralar de los peroxisomas en OlrO lugar de esle li- SECRECION
ENOOSOMA
bro, vamos ahora a detenemos a considerar las funciones de esla familia diversa
de organulos, antes de hablar de su biosfnlesis. Los peroxisomas se encuentran
en todas las celulas eucariotas. Presenlan enzimas oxidativas. como la calalasa y
lr
SUPERFICIE CElULAR
11
la /lralO oxidasa, a tan altas concentraciones que en algunas celulas los peroxiso-
mas se reconocen en electronmicrograffas por la presencia de un nucleoide cris-
tali no, principal mente compuesto de urato oxidasa (Figura 12-27).
Como en el caso de las mitocondrias, los peroxi""''llas son los principales lu-
gares de utilizaci6n de oxigeno. Una hip6tesis es que los peroxisomas son un
vestigio de un org:inulo antiguo, que en los amecesores primitivos de las celulas
eucariolas realizaba todo el metabolismo del ox:fgeno. Cuando el oxigeno produ-
cido por las baclerias fotosinteticas empez6 a acumuJarse en la alm6sfera pod ria
haber resultado altameme t6xico para la mayoria de las celulas. Los peroxisomas
pudieron haber contribuido a disminuir la concemraci6n de oxigeno en eSlas
celulas, a la vez que permitian utilizar su reactividad qufmica para realizar reae
ciones oxidativas utiles. De acuerdo con esle punto de visla. el desarrollo poste
rior de las milocondrias hizo que los peroxisomas se volvieran a1tamellle obsole-
tos. dado que muchas de las reacciones que ellos realizaban sin producir energfa
fueron acopladas a la formaci6n de ATP por medio de la fosforilaci6n oxidaliva.
Por 10 lanto, las reacciones oxidalivas que realizan aClualmente los peroxisomas
podrian ser las que siguen siendo uliles a pesar de la presencia de las mitocon-
drias.

Los peroxisomas utilizan el oxfgeno molecular y el per6xido

de hidr6geno para realizar reacciones oxidativasZI
Los peroxisomas se denominan asf porque generalmente contienen una 0 m<1s
enzimas que ulilizan oxfgeno molecular para eliminar atomos de hidr6geno a
panir de substralos organicos espedficos (aquf designados como R) a naves de
una reacci6n oxidativa que produce per6xido de IIidr6gello (HPJ:
Rl-4 + O2 -+ R + H 20 2
La calalasa Uliliza el H20 2 generado por olras enzimas del org<1nulo para
oxidar diversas substancias -como fenoles, acido f6rmico, formaldehfdo, yalco- L--J
hol- median Ie lIna reacei6n de "peroxidaci6n": H 20 2 + H'H 2 -+ R'+ 2Hp. Este 200 nm
tipo de reaccl6n oxidativa es particularmente importante en el hfgado y en las Figura 12-27 E1ectronmlcrogrllrfa de
celulas de rii\6n. cuyos peroxisomas destoxifican una gran variedad de molecu- Iresperoxfsomas de una celula de
las t6xicas que emran en la circulaci6n. Casi la mhad del elanol que bebemos es hfgado de rata. Las indusiones
oxidado a acelaldehfdo de esla manera. Adem<1s, cuando se acumula un exceso paracrislalinas electrodensas
de H20 2en la c~Hula, la cat'alasa lransforma H 20 2a H20 (2H 20 2 -+ 2l-40 + 02)' corresponden a la enzima uralo
Una de las funciones principales de las reacciones oxidalivas realizadas en oxidasa. (Por cortesfa de Daniel S.
los peroxisomas es la hidr61isis de las moleculas de licidos grasos, En un proceso Friend.)

614 Capitulo 12: Compartimlenlos lntracelulares yclasificad6n de protemas

 Figura 1228 E1ectronmk:rograffas de dos tJpos de peroxisomas encontrados en celulas vegetales. (A) Peroxisoma de
las halas, con un micleo paracristalino. de una c~lula del mes6fi1o de una hoja de tabaco. Se cree que la estrecha
asoclaci6n del peroxisoma con el c1amplas!o facilil3 el inlercambio de materiales eOlre estos organulos durante la
fOlorrespiraci6n. (B) Peroxisomas de una ctHula de un ootiledon almacenadora de !fpidas, de una semilla de lomate, 4
dfas despues de genninar. En este caso, los peroxisomas (glioxisomas) estotn asociadas con los cuerpos lipfdicos en los
que se almacenan los !fpidas. 10 Cllal reneja el pape] central de estos giioxisomas en 13 moviliz.ad6n de los Ifpidas y en su
utilizacl6n para gluconeog~nesisdurante 13 gcrminaci6n de la semilla. (A porcortesfa de P.I. Grubery E.H. Newcomb; 5,
porcortesfa de S.E. Frederick y E.H. Newcomb.)

Uamado Il oxidaciofl, las cadenas alquilo de los ~cidos grasos son acortadas se-
cuencialmente en bloques de dos ~tomos de carbona que son convertidos en
aceti] CoA y exponados desde los peroxisomas aI citosol para su reutiJizaci6n en
reacciones biosint~ticas. La p oxidaci6n en celuJas de mamffero tiene lugar tanto
en mitocondrias como en peroxisomas, sin embargo en levaduras y c~lulas vege-
tales esta imponante reacci6n se encuentra exclusivamente en los peroxisornas.
Los peroxisomas son org~nuJos extraordinariamente diversos: en distintas
c~lulas de un mismo organisrno pueden contener incluso rnuy distintos tipos de
enzirnas. Tarnbien pueden adaptarse de manera rernarcable a condiciones
carnbiantes. Par ejemplo, las celulas de levadura que crecen con azucar tienen
peroxisomas pequef'os, pero cuando crecen en metanol desarrollan grandes
peroxisomas capaces de degradar ~cidos grasos hasta acetil CoA por ,media de
la Il oxidaci6n.
En las plamas, los peroxisomas lienen funciones importantes. Se han estu-
diado intensamente dos tipos muy diferentes. Un tipo de peroxisomas est~ pre-
sente en las hojas, donde cataliza la oxidaci6n de un producto colateral de la re-
acci6n crucial que transforma el CO 2 en carbohidratos (Figura 12-28A). Este
proceso se denominafotorrespiracion porque utiliza 02 y Iibera CO2_ EI otro tipo
de peroxisomas se halla presente en las semiUas en genninaci6n, donde desem-

III Peroxisomas 615

pcnan una funci6n esencial transformando los <icidos grasos almacenados en
los Ifpidos de las semiJIas en azucares necesarios para el crecimiento de la planta
joven. Dado que esta conversi6n de grasas en azucares se realiza a traves de una
serie de reacciones conocidas como el ciclo del glioxilato, estos peroxisomas son
tambien denominados glioxisomas (Figura 12-288). En el cicio del g1ioxilato, dos
molecuJas de acetil GoA producidas por la degradaci6n de un <icido graso en el
peroxisoma, son utilizadas para fabricar <icido sucdnico, el cual sale del peroxi-
soma y es transformado en g1ucosa. EI cicio del g1ioxilaro no tiene lugar en la ce-
lulas animales. y pOT ella los animales son incapaces de transfonnar los <icidos
grasos en carbohidratos.

Una corta secuencia sefial dirige la importaci6n

de prote{nas hacia los peroxisomas22
Una secuencia especffica de tres amino<icidos localizada cerca del extremo car-
boxilo de muchas protefnas peroxisomales actua como sei'tal de importaci6n
(vease Tabla ]2-3). Si esta secuencia se une experimentalmcnte a una protefna
citos6lica, la protein a es irnportada a los peroxisomas. La importancia de este
proceso de importaci6n y de los peroxisomas se pone dram<1ticameme de mani-
fiesto en la enfermedad hereditaria humana llamada el slndrome Zellweger, en
el que un defecto en las protefnas de imponaci6n a los peroxisomas conduce a
una deficiencia peroxisomal grave. Estos individuos, cuyas celulas presentan
peroxisomas vados. tienen severas anomalias en el cerebra, higado, y rmones, y
mueren pronto despues del nacimiento. Se ha demostrado que una forma de
esta enfermedad es debida a una mutaci6n en el gen que codifica una proteina
integral de la membrana de los peroxisomas, llamada factor-} de ensamblaje de
peroxisomas.
Probablemente los peroxisomas tienen al menos una protefna expuesta en
su cara citos6lica, que acma como receptor que reconoce la senal de las protef-
nas que se imponan aI organulo. Anteriormente se pens6 que la cubierta~
membranosa del peraxisoma se fonnaba por gemaci6n desde el ER, mientras
que el contenido~ era importado desde el citosol. No obstante, actualmente
existen evidencias que sugieren que los peroxisomas siempre se fonnan a partir
de otros peroxisomas preexistemes mediante el crecimiento y la fisi6n del orga-
nulo, tal como se ha descrito previameme para las mitocondrias y plasws y para
el propio ER (Figura 12-29).

Resumen
Los peroxisomas esufn especlaIlzados en la realizaci6n de reacdotlcs oxidatilltl$ qlU
Ilfiliz.an OX/geM molecular. Generan per6xidiJ de hidr6gello, que es utilizado confi-
nes oxIdativos, y destruyen el erceso de per6xidD de hidr6geno por medio de la caUl
In.sa que contienen. Como en el caso de 1m mitocondrla.s y de los cloroplastos, los
:$
pl'"olelnll receptor.
npeeffica que cal.liza
I. Imponacl6n de
perpxisom.

.i:l.
~...,.
.Go

peroxLsorruu son orgtfnulos autorreplicantes. Dado que no presentan nl DNA ni ri- prot."".. ...--
, <8>_
bosonuu, tienen qlU importar todas sus prote/1IDS desde el cltosol. Utla scclUncia
especffica de tres aminod~idDs situada cerca del extremo carboxilo de muchas de
CRECJMfE~O PaR
-1;'91 ~
eslas prote{1IDS acnfa como una seilal de Importaci6n peroxisomnL CAPTAoON DE PROTEINAS
ClTOSOUCAS
ESPEdFlCAS f' 4t
Figura 12-29 Modelo del proceso a trav~del cualseensamblan los
.,..?>~
peroxJsomas. La membrana de 105 peroxisomas conliene prolefnas
receptoras de imponaci6n. Todas las protefnas peroxisomales, incluyendo las
nuevas copias del propio receptor de imponaci6n, eslill sinlelizadas por los
ribosomas citos6licos y despuk son transponadas hasta el orgli~ulo. Asf pues,
los peroxisomas se forman unicamente a partir de Olros peroxisomas ya
fonnados, mediante un proceso de crecimiento y fisl6n. Probablemente los
Ifpidos necesarios para fonnar las nuevas membranas peroxls0f!1ales tambi~n
son imponados. Mll.s adclante explicaremos c6mo los lfpldos fabricados en el
ER pueden ser lransportados a trav~s del ellosol hllSllllos orgll.nulos. peroxi.omu IIIJo.

616 Capftulo 12: Compartlmlentos Intracelulares y c1aslf1cacl6n de protefllas

El reticulo endoplasmatico 23 I CITOSOl

Todas las celulas eucariotas tienen un reticula endoplasmllUoo (ER de Endo-

1 IL
NUCLEO PEROXISOMA
plasmic Reticulum). Su membrana constituye nonnalmenle mas de la mitad del
total de la membrana de 1a celula (vease Tabla 12-2). Est;! organizado en (anna I MITOCONDRIA PLAsnoos
de una red laberlntica de tubulos ramificados y de s<iculos aplanados que se ex-
liende por todo el citoplasma (Figura 12-30). Se cree que los tubulos y saculos IRETlCulO ENOOPlASMAncol
estAn interconectados, de modo que la membrana del ER forma una lamina H
continua que define un unico espacio uuemo. Este espacia, a1tamente intrinca GOlGI I
do, se denomina ellumen del ER 0 lambicn el espado de las ues(culas del ER. y a
K:: II
menudo ocupa mas del 10% del volumen celular total (vease Tabla 12-1). La
membrana del ER separa el lumen del ER del chosol. y media la transferencia se-
llSOSOMA
'I 19 VEsiculAS DE
SECRECION
I
ENOOSOMA
lectiva de determinados compuestos entre estos dos companimientos.
EI ER juega un papel central en la biosfntesis celular. Su membrana es ellu-
gar de producd6n de todas las protefnas transmembrana y Ifpidos de la mayorfa
1r
SUPERFICIE C'ElULAR
II
de los organulos celolares, incluyendo el propio ER, el complejo de Golgi, los Ii-
sosomas, los endosomas, las vesfculas secretoras y la membrana plasmatica. La
membrana del ER tambi~n contribuye de forma importante a la formaci6n de
las membranas de las mitocondrias y de los peroxisomas, ya que produce los If-
pidos de estos org<l.nulos. Ademas. todas las protefnas que seran se.cretadas al
exterior celolar -y (ambi~n las que acabaran en elillmell del RE, en el complejo
de Goigi 0 en los Iisosomas- son inidalmente transponadas allumen del ER.

Los ribosomas adheridos a las membranas definen el ER rugoso Z4

EI ER extrae detenninadas protefnas desde el dtosol a medida que son sintetiza-
das. Estas protemas son de dos tipos: (I) protefnas transmembrana, que 5610 son
parcialmente nanslocadas a traves de la membrana del ER y que, por tanto, se
mantienen incluidas en ella, y (2) protemas solubles en agua, que son completa-
mente translocadas a (raves de la membrana del ER y Iiberadas allumen. Algunas
de las prote(nas transmembrana se mantienen en el ER, pero muchas otcas estan
deSlinadas a residir en la membrana plasmtitica 0 en la membrana de otro orgti-
nolo. mientras que las protefnas solubles en agua estan destinadas aI lumen de
un organulo 0 a ser segregadas. Todas estas prote(nas, independientemente de su
destino posterior, son dirigidas a la membrana del ER por el mismo tipo de p~pti
do senal y translocadas a trav~s de la membrana mediante el mismo mecanismo.
En las c~lulas de mamffero la imponaci6n de prolefnas al ER empieza antes
de que la cadena polipeptfdica se haya acabado de sintetizar --es decir, tiene lugar
a nivel cotraduccional. Este hecho diferencia este proceso del de la importaci6n
a las mitocondrias, a los c1oroplastos, al mlc1eo, y a los peroxisomas, en los cuales
la importaci6n es post-traducclonal y requiere diferentes tipos de peptidos se-
nal. Dado que habitualmente un extremo de la proteina esta translocado en el in-
terior del ER mientras el resto de la cadena polipeptfdica se esta fabricando, la

Figura 12-30 EI reticula

endoplasm'tlco. Micrograffa
f1uorescente de una c:elula c:u1tivada de
mamlrero, tefiida ron un antic;uerpo
que se une a una protelna retenida en
el ER. EI ER se extientle como una red
por todo el dtoplasma de la ct!:lula, de
fonna que todas las regiones del
dlosol se hallan cercanas a alguna
porci6n de la membrana del ER. (Por
cortesfa de Hugh Pelham.)

El retfculo endoplasmlitlco 617

 Figura 12-31 ElERrugoso.
Electronmicrograffa que muestra el ER
rugoso, el cual recibe su nombre de los
ribosomas que se hallan en la
superficie cit0s6lica. (Conesfa de L
Orcl.)

protc(na llllnCa es Iiberada aJ citosoJ y par consiguielltc no existe eJ peligro dc

que se pliegue antes de alcanzar el translocador de la membrana. Contrariamen-
re al caso de importaci6n posHraduccional de protefnas hacia el interior de las
mitocondrias y de los c1oroplaslos, en el caso de la importaci6n de protefnas al
ER las chaperoninas citos6licas no son necesarias para mantencr a la protcfna
desplegada. EI ribosoma que esta sintelizando la protefna esta unido directa-
mente a la membrana del ER. Estos ribosomas unidos a membrana recubren la
superficie de la membrana del ER, dando lugar a las regiones lIamadas reticulo
endoplasm.h.lco rugoso (Figura 12-31).
Par 10 tanto, en el dtosol existen dos poblaciones de ribosomas, separadas
espacialmente. Los ribosomas unJdos a membrana, unidos a la cara citos6lica
de la membrana del ER, se dedican a la sintesis de protefnas que simultanea
menle se translocan al interior del ER. Los ribosomas Jibres, no unidos a ningu-
na membrana, fabrican todas las demas protefnas codificadas por el genoma nu-
clear. Los ribosomas unidos a membrana y los ribosomas Iibres son estructural y
funcionalmente identicos. Difieren 5610 en las prolefnas que eslan fabricando en
un momento dado. Cuando un ribosoma empieza a fabricar una proteina con un
pept.ldo senal para el ER, la propia senal dirige a! ribosoma a la membrana del
ER. Dado que muchos ribosomas pueden unirse simultaneamente a una misma
mol~cula de mRNA, normal mente se forma lin poUrrlbosoma, el ella! se line a la
membrana de ER a trav~s de mtiltiples cadenas polipeprfdicns en crecimienlo
(Figura 12-32). Cada uno de los ribosomas asociados can una molecula de mRNA
de este tipo puede volver a! citosol en cunnto termina la traducci6n, cerca del ex-
tremo 3' de la molecula de mRNA. No obsrante, el mRNA por sf mismo tiende a
permanecer unido a la membrana del ER debido a la interacci6n de una pobla-
ci6n cambiante de ribosomas que se mantienen unidos a la membrana mediante
un receptor rihos6mico que los ayudan a mantenerse aUf. Por el cont.rario. si una
molecula de mRNA codifica una proteina que no tiene el ~ptido senal para el
ER, el polirribosoma que forma permanece libre en el dlosol y la prolefna pro-
dUCIO de esta sfntesis es Iiberada en el propio citosol. Par 10 tanto, s610 se unen a
las membranas rugosas del ER las moleculas de mRNA que codifican protefnas
que tienen un peptide senal para el ER; las rnoleculas de mRNA que codifican to-
das la dernl1s protetnas, permanecen Iibres en el citosol. Se cree que cada riboso-
Flgunl 12-32 PoUrrlbosomas.
rna individual se rnueve al azar entre estas dos poblaciones de molecuJas de
Electronmicrograffa de una secciOn
mRNA segregadas (Figwa 12-33). u1trafina de polirribosomas unidos a la
membrana del ER. En algunos lugares
EI ER lisa es abundante en aJgunas celulas especiaJizadas25 el plano de la secciOn carta a trav~ del
ER en paralelo a la membrana, dando
las regiones del ER que carecen de ribosomas unidos se denorninan retfculo en- una visiOn del patrOn en roseta de los
doplasnllitlco Usa, 0 ER lisa. En una gran rnayoria de celulas estas regiones son polirribosomas. (Par cortesfa de
cscasas, y s610 exlste una pequena regi6n del ER que es parcial mente lisa y par- George Palade.)

618 Capftula 12: Comparlimlentos lnlracelulares y c1asificacl6n de prolefnas

 10. mRNA que codifiCllrl una
polirrioosoml lib.e
Figura 12-33 lUbosomas llbres y
prote!PlII citos61ictJ permllrlecen
en III CIIOIOI unldos a membrana. Tanto para
librss en 81 <:;\0.01 \

......
sintelizar las protefnas que
5'. J'_5'~3' permanecernn en el dtosol como para

~ ,~
sintelizar las que seran transporladas
al ER, se uliliza el misma aeervo de
ribosomas. 1.0 que dirige al ribosoma

~No~m!=.::"~
~ de r'bosom., en II titosol
correspondieme a la membrana del ER
es 1a presencia del ptiptido sella! para
ER en la cadena polipeptfdica que se
5' 3' _ 5' P'Plido esl~ sinletizando. La molt:cula de
3' tel'\11
doER
mRNA puede pennanecer unida a! ER,
fonnando parte de un polinibosoma,
10. mRNA qUI oodiflClll'I protein.. pollrriboeoma uflldo. I,
que Mr'" dirigidas heea. el mientras que los ribosomas que se van
membr_ del ER, II lIa""
ER permlneun unidol r:te multiples 0ItdeI'l desplazando sobre ella son reciclados;
,J.atmembnnll _'M aI final de cada cicio de sfntesis de
proteina. las subunidades del
ribosoma se liberan volvil!ndose a
incorporar al acervo comun del Cilosol.
cialmenle rugosa. Est'a regi6n se denomina elementos transicionaJes porque de
eUa emergen las vesfculas que lransponan proteinas y Ifpidos recien sintctizados
hacia el complejo de Golgi. No obstante, en determinadas celulas especializadas
el ER liso es abundanle y tiene atras funciones. Concrctamente, es particular-
mente predominantc en celulas especializadas en el metabolismo lipfdico. Por
ejemplo, las celulas que sinlelizan hormonas esteroideas a partir del colesterol
(ienen un ER Iiso muy amplio que comiene las enzimas necesarias para rabricar
colesleral y para modificarlo dando lugar a las hormonas (vease Figura 12-34).
El principal tipo cellLlar del hfgado, el hepalocito, nos proporciona otro
ejemplo. Es el principal lugar de producci6n de particulas lipoproteicas pa.ra la
exportaci6n: estas partfculas transportan los Ifpidos por la corrieme sangu{nea a
olros lugares del organismo. Las enzimas que simetizan los componenlCS lipfdi-
cos de las Iipoprolefnas estan locaLizadas en la membrana del ER Iiso, la cual
taro bien contiene enzimas que catalizan una serie de reacciones que desloxifi-
can las drogas liposolubles y compuestos producidos por el metabolismo que
resultan perjudiciales. Las reacciones ciedesloxificacion mas estudiadas estan ca-
talizadas por la familia de enzimas de la familia de la cilocromo P450, las cuales
catalizan una serie de rcacciones sabre dragas solubles en Ifpidos 0 sabre meta-
bolitos que de otro modo podrfan acumularse a niveles t6xicos en las membra-
nas celulares. y las convicrtcn Cll meleculas suficientemenre hidrosolubles como
para abandonar la celula y ser secretadas por la orina. Puesto que el ER rugoso
no puede albergar por sf mismo un numero suficienlemenle elcvado dc estas y
de otras enzimas ncccsarias para estes procesos, una proporci6n importante de
la membrana del hepatocito consiste normalmente en ER lisa (Figura 12-35 y vea-
se Tabla 12-2).

Figura 12-34 Abundante ER 1150 en

una celuJa secrelora de hormonas
esteroJdeas. Esla electronmicrografia
es de una ctilula de Leydig secretora de
lesloslerona de los testfculos
humanos.

El retfculo endoplasmlitlco 619

 Figura 12-35 Reconstruccl6n
tridimensional del ER rugosa y 1150 de
una celula heplillca. El ER rugosa
forma ordenados montones de
cistcrnas planas, cada una de las
cuales tiene un espacfo luminal de
cnte 20 y 30 nm de ancho. La
membrana del ER lisa esta conectada a
estas cisternas y forma una fina red de
tubulos de entre 30 y 60 nm de
diametro. (De R.V. Krstif,
Ultrastructure ofthe Mammalian Cell.
New York: Springer-Verlag, 1979.)

Cuando la circulaci6n recibe grandes cantidades de ciertos compuestos, ta-

les como la droga fenobarbital, el hfgado sintetiza en cantidades extraordinaria-
mente elevadas las enzimas de destoxificaci6n, y en unos cuantos dras el ER lisa
duplica su area superficial. Tras la eliminaci6n de la droga, el exceso de mem-
branas del ER lisa parece eliminarse especfficamenle a traves de un proceso de-
pendiente de Iisosomas Ham ado autofagocirosis (explicado en el Capftulo 13). Se
desconoce c6mo se regulan estos espectaculares cambios.
Gtra funci6n del ER en la mayorfa de celulas eucariotas es la de secuestrar
Ca 2 del dtosol. La liberaci6n de Ca 2 en el citosol a partir del ER, y su posterior
recaptura, median muchas respuestas rapidas a las sefiales extracelulares, como
se explica en el Capftulo 15. EI almacenamiento de Ca 2> en ellumen del ER esta
facilitado por las altas concentradones de protefnas de uni6n a Ca2> presentes
en el ER. En algunos tipos celuJares, quizas en la mayorfa de ellos, existen regio-
nes especfficas del ER especializadas en el almacenamiento de Ca 2>. Por ejem-
plo, las celulas muscuJares tienen una abundante regi6n especializada del ER
liso, Hamada reticulo sarcoplasmdtico, la cual secuestra Ca 2 > del citosol por me-
dio de una ATPasa de Ca2 que bombea Ca 2;; la liberaci6n de Ca 2 y la posterior
recaptaci6n del Ca2.. POt el retfculo sarcoplasmatico median la contracci6n rapi-
da y la relajaci6n de la miofibrillas durante cada cicio de contracci6n muscuJar
(explicado en el Capftulo 16).
A continuad6n explicaremos las dos funciones mas importantes del ER: la
sfntesis y modificad6n de protefnas, y la sfntesis de lfpidos.

Las regiones lisas del ER pueden separarse de las rugosas

mediante centrifugaci6n26
Para estudiar las funciones y las caracterfsticas bioqufmicas del reticula enda-
plasmMico, es necesario aislar su membrana. A primera vista, esto puede pare-
cer una tarea imposible ya que el ER esta extraordinariamente entremezclado
con oleos componentes del citoplasma. Afortunadamente, cuando se rompen
par homogeneizaci6n los tejidos a cclulas, el ER se fragmenta en numerosas ve-
sfculas pequei'ias y eerradas (-100 nm de diametra), denominadas mIcrosomas,
que resultan relativamente faeiles de purifiear. Los microsomas derivados del ER
rugoso estan tapizados de ribosomas, y reciben el nombre de microsomas rllgo-
sos. Los ribosomas se encuentran siempre en la superficie exterior de dichos mi-
erosamas, siendo su interior biaqufmieamente equivalente al espado luminal
del ER (Figura 12-36). Dado que pueden ser purificados en su forma funcional,
los microsomas rugosos son especialmente litiles para el estudio de muchos
procesos que realiza el ER rugoso. Para el bioqufmico representan autenticas pe-
queilas versiones del ER rugoso, todavia capaces de sintetizar protefnas, glueosi-
lar protefnas y sintetizar Ifpidos.

620 Capftulo 12: Compartimiemos intracelulares y c1asillcacl6n de protefnas

IAI '------' 18( '------'
200nm 200 nm

En estos homogenados tambh~n se encuentran muchas vesfculas de ramana Figura 12-36 Electronmlcrografias
similar aI de los microsomas rugosos, pem sin rihosomas unidos a elIas. Estos de rlbosomas. Cuando se rompen
microsomas Usos derivan en parte de porciones lisas del ER y en parte de frag- celulas par homogeneizaci6n, las
mentos vesiculados de la membrana plasmatica, del complejo de Golgi, de los cisternas del ER rugoso (Aj se
endosomas y de las milocondrias (la proporci6n depende del tipo de tejido de fragmentan formando pequenas
que se trate): Por consiguiente, mientras que los microsomas mgosos pueden vesfculas cerradas, denominadas
microsomas rugasos {Bj. De forma
sec equiparados a porciones rugosas del ER, los orfgenes de los microsomas lisos
similar, el ER lisa se fragmenta
no resultan faciles de determinar. Una excepci6n importame la constituye el hf- formando pequeftas vesfculas que
gada. Debido a las enormes cantidades de ER lisa existentes en el hepalocito, la carecen de ribosomas, yque se
mayor parte de los microsomas Usos de los homogenados hepaticos derivan del denominan microsamas Usos. (A,
ER liso. cortesfa de Daniel S. Friend; B, cortesfa
Como los ribosomas contienen grandes cantidades de RNA, los microsomas de George Palade.}
rugosos son mas densos que los mlcrosomas Iisos. Por consiguiente, los micro-
somas rugosos pueden separarse de los demas mediante una cenlrifugaci6n en
equilibrio (Figura 12-37). Cuando se comparan propiedades tales como la activi-
dad enzimatica 0 la composici6n polipeptfdica de los microsomas rugosos con
las de los lisos oblenidos de un tejido como el hfgado, se observa que son nota-
blemente similares, aunque no identlcas: aparentemente la mayorfa de los com-
ponentes de la membrana del ER pueden difundir libremente entre las regiones
rugosa y lisa de la membrana, tal como cabrfa esperar de un sistema de flujo
continuo de membrana. No obstante, los mlcrosbmas rugosos presentan mas de
20 protefnas que no estan presentes en los microsomas lisos, demoslJando Que
debe de existir algun mecanismo restrictivo para un conjunto de proleinas de la

Figura 12-37 Procedimlento de

aJslamJento utiilzado para purlficar
mlcrosomas rugosos y iisos a partir
del ER. Cuando los dos tipos de
ER'".:'7R' 000 los mlcrosomes lisos microsomas se sedimentan hasta el
:0 mezcle
homoge
0
0 0 0.:""
00'
centrl-
fugscloPl
tie nan menor densidad.
por 10 que dejen de
sedimentsr y floten e
equilibria a Iraves de un gradiente de
sacarosa, se separar<ln uno de otTO en

00-:- QOOO-
.' nalzede
concentraciOPles base a sus diferentes densidades.
menores de sscsross
() Iiso ~~O los microsomas rugosos
microsomes lisos tlenen una elevada
'. y mlcrosomes
rugosos
densided, por 10 qua
dejsPl de sedimenter y
flolan a concePllraciOPles
de Sllcarose elevades

tuba COPl un gredlenle de concentrecioPles

crecientes de secsrose

EI ret{culo endoplasmlUlco 621

 Figura l2-38 La hlp6tesls seRal
original. Visi6n simplificada de la
translocaci6n de una protefna a travt'!s
subunidades de la membrana del ER, tal como se
ribosomicas proteins receptora
libres IIsocilldll a un poro
propuso originalmente. Cuando el
peptido seii.al emerge del ribosoma,
5' dirige al ribosoma hacia un receptor
proteico de la membrana del ER. Se
mRNA
postula que a medida que va siendo
sintetizado, el polipt'!ptido se va
translocando a travt'!s de la membrana
del ER rugoso, atravesando un pora
proteico asociado con el receptor. EI
peptido seii.al es eliminado durante el
proceso de traducci6n y la proteina
madura es liberada allumen del ER
inmediatamente despues de ser
sintetizada. En la acrualidad sabemos
que en tt'!rminos generales la hip6lesis
es correcta, pero ademas de los
componentes que se muestran en esta
figura, son necesarios otTOS. Por
ejemplo, la peptidasa de seii.al es un
membrana del ER. Algunas de las protefnas de este conjunto aylldan a mantener complejo formado por cinco diferentes
unidos los ribosomas al ER rugoso, mientras que OlTas posiblemente producen cadenas polipeptfdicas unidas a la
la forma aplanada de esta parte del ER (vease Figura 12-35). No esr<i claro si estas membrana, con un complejo
procefnas de membrana son retenidas formando grandes agregados bidimensio- aparentemente asociado con cada
nales en la bicapa Iipfdica 0 por el contrario son mantenidas en su lugar median- para de translocaci6n.
te interacciones con una red de protefnas estructurales en una u oua cara de la
membrana del ER.

Los peptidos sefial fueron descubiertos por primera vez

en protefnas importadas al ERz7
Los peptidos serial (y con ellos la estrategia basada en la utilizaci6n de un pepti-
do sei\al para dirigir el transpone de proteinas) Cueron descubienos par primera
vez, a principios de los arios 70, en protefnas de secreci6n que son translocadas
a traves de la membrana del ER como primer paso hacia su final descarga de la
celula. En el experimento clave el mRNA codificante de una protefna de secre
ci6n fue traducido mediante ribosomas in vitro. Cuando de este sistema libre de
celulas se omitfan los microsomas, la protefna sintetizada era ligeramente ma-
yor que la protefna normal secretada; esta longitud extra era debida a la presen-
cia de un peptido /fder amino terminal. No obstante, en presencia de microso-
mas derivados del reticulo endoplasmatico rugoso se producfa una protefna de
tamano correcto. Estos resultados fueron explicados mediante la hip6cesis de la
seoal, la cual postulaba que la secuencia lider actua de peptido senal dirigiendo
la protefna de secreci6n hacia la membrana del ER; una vez en ella y antes de
que la cadena polipeptidica este completa, el peptido es hidrolizado por una
peptidasa de seflal de la membrana del ER (Figura 12-38).
De acuerdo con la hip6tesis de la seflal, la protefna secretada ha de ser em-
pujada allumen del microsoma durante su sfntesis in vitro. Esto puede ser de-
mostrado mediante un tratamiento con proteasas: una protefna recien sintetiza-
da fabricada en ausencia de microsomas es degradada al afiadir una proteasa,
mientras que la misma protefna pero fabricada en presencia de microsomas
permanece intacta, a consecuencia de la protecci6n que Ie proporciona la mem-
brana microsomal. Cuando en un sistema in vitro similar a este se traducen pro-
teinas que carecen de peptido seflal, estas protefnas no son importadas a los mi-
crosomas y par 10 tanto permanecen susceptibles al tratamiento con proteasas.
La hip6tesis de la sef'ial ha sido comprobada cuidadosamente mediante ex-
perimentos geneticos y bioqufmicos, y pllede aplicarse tanto a celuJas vegetales

622 Capftuio 12: CompanimJemos IntTacclulares y c1asificaci6n de prote(nas

como animaJes, a translocaciones proteicas a uaves de membranas plasmJl.ticas
de procariotas y. como hemos visto, a las membranas de mitocondrias, c1oro-
plastos y peroxisomas. Ademas. los peptidos lider amino terminales gufan no
s610 las protefnas de secrcci6n sino tambien los precursores de todas las prOlef-
nas fabricadas en el ER. incluyendo las protefnas solubles y las protefnas de
membrana. La funci6n de senalizaci6n de est'Os peptidos lider ha side demosLra-
da dircctamcnte mediante la utilizaci6n de nknicas de DNA recombinante.
uniendo secuencias senaJ a proteinas que normalmente no las presentan; las
proteinas de fusi6n resultantes son dirigidas aJ ER.
Los sistemas libres de celulas en los que se produce transporte de protefnas
han proporcionado poderosos procedimientos de ensayo para identificar, puri-
fiear y estudiar los diversos componentes de la maquinaria molecular responsa
ble del proceso de importaci6n de protefnas aI ER.

Una partfcula de reconocimiento de senal (SRPj dirige los peptidos

seftal para el ER a un receptor especffico de la membrana del ER2tI
EI peptido senal es dirigido a la membrana del ER por 10 menos medianle dos
componentes: una panJcuJa de reconoclmJento de la sefial (SRP. de SignaJ-Re-
cognition Particle~), que se une aI peptido senal y viaja de forma cfclica entre la
membrana del ER y el citosol, y un receptor de SRP. tambien conocido como pro-
fef"a desembarcadero (docking). presente en la membrana del ER. La SRP fue
descubierta al observarse que lavando microsomas con soluci6n salina se elimi
naba su capacidad de importar proteinas de secreci6n. Esta capacidad de impor
taci6n puede restablecerse afladiendo a la preparaci6n de microsomas el sobre
nadante que contiene el extracto salino. A partir de este extraclo se purific6 el
Ufactor de translocaci6n" y se delermin6 que era una panicula compleja fonnada
por seis eadenas polipeptfdicas unidas a una pequefia molecula de RNA (Figura
12-39). La SRP y el receptor de SRP estan presentes en todas las celulas eucariotas
y lambien posiblemente en las celuJas procariolas.
A medida que el peptido va emergiendo del ribosoma, la SRP se va uniendo
aI peptido seflal. Esto provoca una pausa en la s(nlesis proteica, 10 que posible-
mente da al ribosoma tiempo suficiente para unirse a la membrana del ER anles
de que se complete la sfntesis de la cadena polipeprfdica, asegurando asf que la
domlnlo de
protefna no se Iiberan\ al citosol. ESlo puede proporcionar un mecanismo de se rlH:onoclmlento
guridad ya que mllchas protefnas de secreci6n y prolefnas lisosomales son hi SRP RNA del P1!ptldo ae"al

-~~--~
drolasas que pueden provocar estragos en el cilosol. Las cellilas que secretan
grandes cantidades de hidrolasas toman la precauci6n anadida de disponer de
altas concentraclones de inhibidores de hidrolasas en su citoso!.
Una vez formado. el complejo ribosoma-SRP se une al receptor de SRP, el
cual es una protefna integral de membrana expuesta en la superficie citos6lica domlnlo de para
de la membrana del ER rugoso. Enlances la SRP es liberada, y un aparalo de de la tradllCCI6n
lugar de uni6n
translocaci6n todavfa poco caracterizado transfiere la cadena polipeprfdica na- SRPreceptor
ciente a trav~s de la membrana (Figura 12-40). Dado que una de las protefnas
25 nm
SRP y ambas cadenas del receptor de SRP contienen dominios de uni6n a GTP,
se cree que los eambios conformacionales que Iienen lugar duranle los ciclos de Figura 12-39 OlbuJo muy
uni6n de GTP e hidr6lisis (explicado en el Capftulo 5) aseguran que la Iiberaci6n esquematlco de la partkula de
de la SRP lenga lugar 5610 despues de que el ribosoma se haya acoplado corree- reconoclmlenta de la sefta) (SRP).
tamente con el aparato de translocaci6n en la membrana del ER. Una SRP es un complejo alargado que
contiene seis subunidades proleicas y
una molecu.J.a de RNA (SRP RNA). Un
La translocaci6n a traves de la membrana del ER no siempre extremo de la SRP se une a un peptido
requiere que se este produciendo el crecimiento de la cadena sef'lal de la cadena polipeptfdica en
polipeptfdica" crecimiento. mientras que el otro
extrema se une aI ribosoma y frena la
Como hemos viSIO. la translocaci6n de protemas aI interior de las milocondrias. traducci6n. EI RNA de la partlcula
de los c1oroplastos y de los peroxisomas es posl-tradllccional. es decir que se puede interaetuar con el RNA
produce despues de que la proteina haya sido sintetizada completamente y se ribos6mica. (Adaptada de V. Siegel Y
haya Iiberado aJ citosol. mientras que nonnalmente la rranslocaci6n a travts de P. Waiter.Nmure320:82-84, 1986.)

EI reticula endaplasm4tlco 623

 particula de llICOOOCimiento de Ia Ml\eIISRP)

~
SRP OESPlAZADA
Y AEClCLAOA

/1""~""'" \.

"
LA UNION DE LA LA SRPUNlOAAL
SRP CAUSA UNA 8OSOMA 51: UNE AL
PAUSA EN LA RECEPTOR DE SRP DE
TRAOUCaON LA MEMBRANA DEL
EA SELECTlVAMENTE

~ptido sefilllltll
III cadenll
poIipeplldQ nacientll

proteinll receptora de la .........

SRP 81'\ la mamb'ana
del ER rugosa

FIgun 12-40 De que fonna los peptldos senal y la SRP dlrigen los rlbosomas a la membrana del ER. Se cree que la SRP
yel receplOr de SRP acUlan de forma concertada. La SRP se une a1 peptido seftal que se halla expuesto y al ribosoma,
induciendo una pausa ell la lraducd6n. EI receptor de SRP de la membrana del ER, que esla formado por dos cadenas
polipeptidicas, une el complejo SRPribosoma. A trav~ de una compleja reacci6n todavfa rnuy poco conocida que
implica multiples prOlcfnas de uni6n a GTP, la SRP es Ilberada dcjando al ribosoma sobre la membrana del ER. Enlonces
un aparato de translocad6n de la membrana del ER fonnada par varias subunidades praleicas inserta la cadena
polipeptfdica en la membrana y la transfiere a leaves de la bicapa Iipfdica.

la membrana del ER sucede durante la traducci6n (es decir, es cocmducc:iollaf).

ESlo explica par que los ribosomas se unen a la membrana del ER perc no a la
cara citoplasmatica de otros organulos. Un ribosoma unido al ER nlgoso puede
utilizar la energfa de la sfntesis proteica para forzar a la cadena polipeptfdica en
crecimiento a traves del canal formado par el translocador en la membrana del
ER. No obslante, estudios recientes de translocaci6n in vitro en el ER han de
mostrado que una pequena minoria de determinados precursores proteicos
pueden ser importados aI interior del ER desPll~S de que se haya terminado su
sfnlesis, demostrando lIsf que la Iranslocaci6n no siempre requiere de la traduc
ci6n continua. La translocaci6n proteica posHraduccional puede tener lugar in
c1uso de modo mas frecuente a Iraves de la membrana del ER en celulas de leva-
dllras y a trav~ de la membrana plasmdlica baeteriana (la cual se cree estd
evolutivamente relacionada con el ER; v~ase Figura 125). En ambos casos la
translocaci6n requiere hidr61isis de ATP, y en tjacterias tambi~n es necesario un
gradieme electroqufmico. A partir de componentes bactcrianos se ha reconsli
tuido un aparato dc Iranslocaci6n; uno de estos componcnlcs es una ATPasa
que se cree que ayuda a cnsartar la protefna en la membrana (Figura 12-41).
Dado que las protefnas que utilizan una ruta de translocaci6n posttraduccional
son Uheradas primero en el citosol, su plegamiento se evita mediante su un.i6n a
proteinas chaperonas citos6licas, tal como hemos visto que sucede en la irnpor
taci6n posttraduccional hacia el interior de m..itocondrias ycloroplastos.

La cadena polipeplfdica pasa a trav~s de un pora acuoso

en el aparato de translocaci6n30
Durante mucho tiempo se ha discutido si las cadenas polipcptidicas son transfe
ridas a traves de la membrana del ER, en comacto directo con la bicapa Iipfdica
o a traves de un poro de un translocador proteico. En la actualidad existen fuer-
res evidencias de la existencia de un translocador proleico. Normalmente, el

624 Capftulo 1Z: Compartimlentos intracelulares y c1asificacl6n de protefnas

.
 COOH COOH Figura 12-41 Translocacl6nde una
protefna a traves de la membrana
plasmatlca bacterlana. En este
modelo esquematico, despues de que
un receptor del aparato de
translocaci6n se haya unido al peptido
CITOSOL
sefial amino terminal de una protefna,
un translocador prateico impulsado
por energfa empuja la prote[na a traves
de la membrana, desplegando la
complejo de cadena polipeptfdica durante el
translocaci6n
impulsado por
proceso. La energfa es proporcionada
energla por la hidr61isis de ATP y por un
gradiente electraqu'mico a trav1!s
de la membrana.
poro del translocador esta tapado con la cadena polipeptfdica que esta en tran-
sito a traves de la membrana. Sin embargo, cuando experimentalmente las cade-
nas nadentes se liberan de los ribosomas mediante la droga puramidna, los po-
ras pueden ser detectados mediante corrientes i6nicas que Duyen a traves suyo.
A pesar de que los poros son 10 sufidentemente grandes para permitir el paso de
una cadena polipeptfdica desplegada, se derran cuando el ribosoma es elimina-
do de la membrana (Figura 12-42). Par 10 tanto el para parece ser una estructura
dinamica, abriendose cuando un ribosoma can una cadena polipeptfdica na-
ciente se une a la membrana y cerrandose cuando el ribosoma se Iibera despues
de que la sfntesis de la protefna haya finalizado.

El peptido sefta! del ER es eliminado de la mayorfa de prolefnas

solubles despu':;s de la translocaci6n31
Figura 12-42 DemostraclcSn de la
Hemos visto que en los cloroplastos y en las mitocondrias los peptidos sefial son existencla de poro!! acuosos de
eliminados de las pratefnas precursoras despues de cruzar la membrana. De translocaclcSn protelca en la
modo pareddo, los peptidos amino terminales sefial para el ER son eliminados membrana del ER. EI diseno
mediante una peptidasa sefial situada en la cara luminal de la membrana del ER. experimental es similar al mostrado en
Sin embargo, el peptido por sf mismo no es sufidente para que se produzca la la Figura 10-5, con una bicapa lipfdica
que separa dos companimientos
hidr6lisis de la senal por la peptidasa: se requiere un punto de hidr6lisis adya-
acuosos. Cuando se anaden
cente que es reconoddo por la peptidasa. Mas adelante veremos que los pepti- micrasomas rugosos a uno de los
dos senal del ER no se "encuentran en el extremo amino terminal sino en el inte- compartimientos, ocasionalmente se
rior de la cadena polipeptfdica, no presentan estos puntos de reconodmiento y fusionan can la bicapa lipfdica
nunca son eliminados. Por el comrario, sirven para retener protefnas transmem- incorporando una porci6n de la
brana en 1a bicapa lipfdica despues de que se ha terminado el proceso de trans- membrana del ER (con ribosomas) a la
locad6n. bicapa. Cuanda se ai'lade la draga
EI peptido amino terminal sefial para el ER de una protefna soluble tiene puramicina (en azul ascl/ra) a eSle
por sf mismo dos fundones de sefiaJizad6n: ademas de dirigir la protefna a la mismo compartimiento, se une
membrana del ER, se cree que acttia como senal de lnlelo de transferenela, per- covalentemente al extremo carbaxilo
maneciendo unido al aparato de translocad6n, mientras que el Testo de la pro- terminal de la cadena polipeptfdica y
la libera del ribosomll; en estas
condiciones se pueclen detectar poras
de tamano unifonne debido a
CONTROL EXPERIMENTAL
incrementos puntua!es en la
LOS 10NES NO PUEDEN LOS laNES PASAN L1BREMENTE conductllncia el1!ctrica a trav1!s de la
PASAR A TRAV~S DEL A TRAV~S DEL TRANSLOCADOR
TRANSLOCADOR PROTEICO membrana (el flujo i6nica responsable
PROTEICO 1-c~-">!cnOSOL del incremento en la conductancla
eIectrica se indica can laflecha
Iii puromicina amarilla). Si los ribosamas se eliminan
libera la cadena de la membrana mediante lavados con
polipeptfdic8 soluciones de concentraci6n elevada
del ribosoma
de una sal, los poras no se detectan, 10
cua! indica que la uni6n de los
ribosomas son necesarios para abrir (0
ensamblar) el pora (no se muestra).

El retfculo endoplasmlitlco 625


Figura 1243 Translocacl6n de una
protefna soluble a traves de la
membrana del Elt En esle modelo
hipotetico se postula que el
trnnslocador proteico de la membrana
puede estar en dos estados
alternativos -activo e inactivo. Cuando
se une un peptido senaJ para el ER
(que acn1a como iniciador de la
transferencial el translocador adopta
un estado activo y comienza a
transrerir la cadena polipeptrdica a
trav~ de la membrana lipidica, como

Iranslocador un bucle. Es este estado ronna un poro

prOleico acuoso a trav~ de la membrana que
inae1ivo puede ser detectado
elcctrofisiol6gicamente si la cadena
polipepddica es liberada (vease Figura
12-42). Cuando la proteina ha sido
lranslocada complelamente, el
lranslocador reviene a una
Coati confonnad6n inaetiva que ya no
LA PEPTlDASA DE SENAl LIBERA LA puede oonducir iones a lEaves de la
PROTEINA MADURA AlINTERIM membrana, pero que esta abieno a la
DEL lUMEN DEL ER
bicapa Iiprdica, pe.nnitiendo que el
peptido senal hidrof6bico difunda
lema va atravesando la membrana y ronnando un gran bucle en ellumen del ER. hada el exterior de la bicapa, donde es
Una vez que el extrema carboxilo ha pasado a traves de la membrana. el peptido rapidamente degradado. Para mayor
sei\a1 es liberado del poro de translocaci6n, hidrolizado por la peptidasa de senal. daridad, en ~ta y en las dos figuras
y rapidamentc degradado hasta aminoacidos mediante otras proteasas del ER, siguientes los ribosomas se han
mientras que la prolefna es liberada aI interior del lumen del ER (Figura 12-43). omitido del dibujo.

En las prote{nas transmembrana de un solo paso, un p~ptido

senal interne permanece en la bicapa lipidica como
una helice <X que atraviesa la membrana32
El proceso de trallslocaci6n de las protefnas destinadas a pcrmanecer en la
membrana es mas complejo que el de las protefnas solubles, ya que algunas zo-
nas de la cadena polipeptfdica son translocadas a traves de la bicapa lipfdica
miemras que otras no 10 son. Sin embargo, todos los tipos de inserci6n de las
prOlefnas de membrana pueden ser consideradas como variantes de la secuen
cia de fen6menos que acabamos de describir para la transferencia de prolcfnas
solubles en la luz del ER. Empezarcmos describiendo las Ires vfas a {raves de las
cuales las protc(nas transmcmbrana de paso unico (veasc Figura 1013) son in-
sertadas en el ER.
En el casu m<1s simple, un peptido senal amino terminal inicia In nansloca-
ci6n igual que para el casu de una proleina soluble, pero un segmento adicional
hidrof6bico de la cadena polipeptfdica frena el proceso de transferencia antes
de que toda la cadena polipeptfdjca se haya translocado. Esle pe:ptJdo de paro de
t.ranSferencia ancla la proteina en la membrana despues de que el peptido senal
del ER (iniciador de transferencia) sea Iiberado del translocador y eJiminado (Figu-
ra 12-44). EI peptido de paro de transferencia fonna un solo segmento a helicoidal
que atraviesa la membrana, con el extremo amino lenninal de la proteina en la
cara luminal de la membrana y el exuemo carhoxilo en la cara citos6lica
En los Otros dos casos el peptido senal no se haUara en el extremo amino
tenninal de la prolefna sino que es inlerno. AI igual que los peptidos sei\al ami-
no lenninales, el peptido senal interno es reconocido por la SRP, la cual siNe de
puente entre el ribosoma que fabrica la proteina y la membrana del ER y actua
como sellal de inicio de transferencia que empieza la translocaci6n de la protei-
na. Despues de Iiberarse dellransJocador, el peplido intemo de inicio de trans-

626 Capftulo 12: Compartimientos lntraceJulares y c1asificacl6n de prote(nas

 II Figura 12-44 C6moselntegraenla
membrwla del ER una prote(na
transmembrana de un solo paso con
un peptido seoal conado. En este
CITOSQL
modele hipotclico el praceso de
translocaci6n cOlranslocaci6n se irilcia
por un pt'!ptido seiial amirlo terminal
de ER (rajo) que actlia como una seoal
de inicio de transferencia, como en la
Figura 12-43, Sin embargo, ademas del
pt'!ptido de inicio de transferencia la
protefna contiene un pt'!ptido de para
de transferencia (llarallja). Cuando el
pcptido seoal de para de transferencia
luga. de union del luger de uni6n del entra en el translocador e interactua
P!iptido llidrof6bico pllptldo hidrof6bico con un lugar de uni6n delerminado, el
LUMEN
de para de de inicio de translocador pasa a su estado inactivo
I transferencia trllllsferencill
y descarga la proteina lateralmente en
protelnll trenslOClldo'lI
la bicapa lipfdica,

ferenda permanece en la bicapa Iipfdica como lIna helice (l que atraviesa la

membrana. Sin embargo los peplidos internos de inicio de transferencia se pue-
den unir al aparato de translocaci6n en cuaiquicra de las dos direcciones, y la
orientaci6n del peptido de inicio de transferencia inscnado determina, a su vez,
que segmento proteico {el que precede 0 e! que sigue at peptido de inicio de
transferenciaJ se desplazara a traves de la membrana hacia ellumen del ER. En
un caso la prOlcfna de membrana resuhante tcndra su extrema carboxiJo en la
eara luminal (Figura 12-45A) mientras que en el otro en ellado luminal estara su
extrema amino (Figura 12-458). La orientaci6n del peptide de inicio de transfe-
rencia depende de la distribuci6n de los aminoacidos cargados vecinos, tal como
se describe en el pie de la figura.

Combinaciones de sefiales de inicio y de paro de transferencia

determinan la topologfa de las protefuas transmembrana
de multipaso33
En las protefnas transmembrana de multipaso la cadena polipeplJdica atravie-
sa repetidamenle, de una pane a otra, la bicapa lipidica (vease Figura 10-13), Se
cree que en eslas prole(nas un peptide senal interno actua como seflal de inicio
de transferencia iniciando la Iranslocaci6n, la cual continua haSla que se alcan-
za un peptido de paro de transferencia. En las proteinas de doble paso, por
ejemplo, el polipeplido se libera de la bicapa en eSle estadio (Figura 12-46). Las
proteinas multipaso mas complejas, en las cuales exislen muchas helices Ct. hi-
draf6bicas que atraviesan la bicapa, un segundo peptido de inicio de Iransferen-
cia reinicia la translocaci6n,de la cadena, la cual se produce hasta que se alcanza
el siguiente peptido de final de transferencia, y asf sucesivamente para posterio-
res peptidos de inicio y de para de transferencia (Figura 12-47).
Una secuencia sefial hidrof6bica determinada actuara como un peptido de
inicio 0 de paro dependiendo de su localizaci6n en la cadena polipeptfdica, ya
que se puede cambiar su funci6n si se modifica su localizaci6n en la protefna
utilizando tecnicas de DNA recombinante, As! la distinci6n entre peptidos de
inicio y de paro de transferencia depende, fundamentalmente, del orden en el
que se suceden en la cadena polipepHdica naciente. Parecc que la SRP empieza
buscando los segmentos hidrof6hicos de la cadena polipept!dica desplegada
empezando por su extremo amino terminal, y va progresando hacia el extremo
carboxilo terminal, en la misma direcci6n en la que se sintetiza la protefna. La
SRP reconoce el primer segmento apropiado y por 10 tanto fija la "pauta de lecru-
ra": si se ha iniciado la translocaci6n. el pr6ximo segmento hidrof6hico adecua-

El reticula endaplasmlitica 627

 NN. Figura 12-45 C6mo una protema
transmembrana de un solo paso con
un ~plldo seftaJ interno se integra en
la membrana del Eft. En este modelo
hipotelico un peptido seRal ER interno
que aCllla como sella! de inicio de
transferencia se une al translocador de
tal Conna que su extrema cargado m1s
positivamente pennanece en el citosol.
Si en la cadena existen mlis
aminoll.c1dos cargados posltivamente
Inmedlatamente antes del nt1cleo
hldrof6blco del peptido de fnldo de
transferencfa de los que hay despues
de el, en el extremo carboxilo terminal,
el peptido de inicio de transCerenda se
inserta en ellranslocador en In
orientaci6n mostrada en (A) y el brazo
prolel",. ~dUfa ltfl
I, membra",. ct.1 ER carbonic terminal del bude insenado
se desliza a tra~ de la membrana. Sin

I' secuencill
- -
embargo, si existen m1s aminMcidos
cargados positivamente
inmediatamente despues del m1deo
""'alae hidroC6blco del peptido de fnido de
Innn. en
direcel6n transferenda de los que hay antes de
opuesta el, en su extremo amino terminal, el
peptido de Inleio de transferenda se
inserta en el translocador en la
orientaci6n mostrada en (B). y seni el
braze amino terminal del bude
insertado el que se deslizar' a traves
de In membrana. Debido a que la
translocaci6n no puede Inlclarse antes
de que salga del ribosoma una
'" secuencia de Inicio de Iranslocaci6n, la
translocaci6n de In porcl6n amino
NN.
protei",. mad"",
en
I, membrana del ER
lerminal de la protema mostrada en
(B) solamente puede ocurrir despues
de que se haya sintetizado
do sen1 reconocido como un p~ptido de para de lransferencia, 10 cual originara completamente esta secuencla. N6tese
que la regi6n de la cadena polipeptfdica comprendida entre ambos segmentos que existen dos camlnos para Insertar
hidror6bicos resulte ensanada a trav~s de 1a membrana. Un proceso similar de una protelna transmembrana de un
bl1squeda continua hasta que todas las regiones hidrof6hicas de la prolefna se solo paso cuyos aminoiicidos amino
insenan en la membrana. terminales se localicen en ellumen
Puesto que las protefnas de membrana siempre son insertadas a partir de la del ER: el que se muestra en In Figura
12-44 yel quese muestra aquf.
eara citos6lica del ER y siguiendo este sistema programado. todas las capias de
la misma cadena polipeptfdica tendedn la misma orientaci6n general en la bica-
pa. EsIO genera una membrana del ER asimetrica en la que los dominios de pro-
lefna expuestos en una cara son diferentes de los que esuin expuestos en la otra.
Esta asimetrfa se mantiene durante los diversos procesos de gemaci6n y fusi6n
de membrana que se producen at transportar las protefnas fabricadas en el ER a
otras membranas celulares (explicado en el Capftulo 13). Por 10 tanto la via por
la cual una protefna recien sintetizada es insertada en la membrana del ER de
termina la orientaci6n de la prOlefna tambien en otras membranas.
Cuando en el laboratorio se disocian proternas de una membrana y se reo
constituyen en vesiculas lipfdicas artificiales, general mente se obtiene una mez-
cia al az.ar de orientaciones demrofuera de las protefnas. Par ella, parece que la
asimetrfa de las prote(nas que se observa en las membranas celulares no es debi-
da a las propiedactes inherentes de la prote(na sino que es eJ resultado del proce-
so por el que las prote(nas son insenadas en la membrana del ER desde el cito-
sol.

628 Capftulo 12: Compartlmientos lntracelulares y claslficad6n de protemas

 Figura 12-46 C6mo se Integra en la
membrana del ER una proteina de
doble paso con una secuencla seow
Interna. En este modelo hipotetice un
CooH eOOH peptido sel'lal para el ER interne aCllla
P'plido de
pero de como una sel'lal de inicio de
NH,
Irensferenele transferencia (como en la Figura 12-
P'Ptido de 45) e inicia la transferencia del brazo
inieio de carboxilo tenninal de la cadena
trensferenele polipeptldica. Cuando entra en el
translocador un peptido senal de paro
de transferencia, descllrga
lateralmente la proteina en la
membrana.

protefne rnlldura
de doble paso a
traves de fa
rnernbrsne

Las cadenas polipeptfdicas translocadas se pliegan

y se ensamblan en ellumen del ER rugoso 34
Muchas de las prote(nas presentes ellumen del ER solameme esta.n en (fansito,
en ruta hacia otros destinos; sin embrago, oltas residen normalmente en el ER y
se hallan en elevadas concemraciones. Estas prote{nas resldentes del ER pre-
seman en su extrema carboxilo terminal una senal de retenci6n del ER, de cua-
tro amino<1cidos, que es responsable de que la protefna quede retenida en el ER
(vease Tabla 12-3). Algunas de estas protefnas actuan como catalizadores que
ayudan a otras muchas protefnas que son translocadas aI ER a plegarse y a en-
samblarse de forma correcta. Una de estas protefnas residentes del ER es la pro-
tefna disulfuro isomerasa (PDf), la eual cataliza la oxidacion de los grupos sulfbi-
drilo libres (SH) formando enlaces disulfuro (SS). La mayorfa de los residuos
cistefna de los dominios proteicos expuestos aI espacio extracelular 0 a11umen
de los org<1nulos est<1n unidos por puentes disulfuro. Sin embargo, los enlaces Figura 12-47 Inserclon de 10 proteina
disulfuro no se forman en los dominios expuestos al citosol debido al ambiente multlpaso de membrana rodopslna
reductor de este ambiente. en 18 membrana del ER. La rodopsina
es la protefna sensible a la luz de los
fotorreceptores de las celulas en
baSion de la retina de los mamfferos.
(Al Un gnifico de hidrofobicidad
identifica siele cortas regiones
hidrofobicas en la rodopslna. (B) La
COOH region amino terminal acrna como
CITQSQL
peptido de inicio de transferenda,
responsable de que la region amino
terminal anterior atraviese la
membrana del ER. Los peptidos
hldrof6bicos siguientes actuarlin
LUMEN
a1ternativamente de inlclo de
transferencla y de paro de
100 200 transferencia. (C) La rodopslna
numero de arnlno'cldos ICI
madura, una vez integrada, tiene su
extremo amino terminallocalizado en
ellumen del ER y su extremo amino
terminallocalizado en el dtosol. Los
lIexdgonos azules represent3Jl
oligosacliridos unidos covalentemente.

El reticula endaplasmlitica 629

 Otra proteina residente del ER es una proteina chaperona conodda como
proteina de unJ6n (DiP, de binding protein), que estructuralmente esta relado-
nada con las protefnas hsp70, y como elias reconoce protefnas plegadas incorrec-
tamente, y tambien subunidades proteicas que no han sido ensambladas en sus
complejos otigomericos finales. Se cree que BiP, al igual que otras proteinas cha-
peronas, se une a secuendas de aminoaddos expuestos que normalmente estan
escondidos en el interior de las cadenas polipeptfdicas que estan correClamellle
plegadas 0 ensambladas. Cuando BiP se ha unido evita la agregad6n de las pro-
tefnas y ayuda a mantener las proteinas en el ER (y por tanto fuera del complejo
de Goigi y de otras elapas posteriores de la ruta se secreci6n); tambien aYl.lda a
que las protefnas se plieguen correctamente. Como en el caso de las proteinas de
la familia hsp70, las cuales unen proteinas no plegadas en el dlosol y fadlitan su
importad6n hacia las mitocondrias y hacia los c1oroplastos, la protefna RiP hi-
H0
droliza ATP para obtener la energfa necesaria para plegar las protefnas. I U
N-C-C-;X
I I
rj Thr
""
Como hemos visto anteriormellle para la hsp70 mitocondrial (vease Figura
12-24), la uni6n de HiP a una cadena polipeptfdica que esta emergiendo en ellu-
HjCH'
cadEl08 latEl.ralt =0
men del ER puede ayudar a estirar la protefna hacia el interior del ER. Este proce- de 8spa.aglo8 I
NH
so puede ser particularmente importante en prolefnas que enlran en el ER tras su
traducd6n, ya que en este caso no existen ribosomas unidos a la membrana que
empujen a la proteina nadente a traves del translocador durante su sintesis.

La mayorfa de proteinas sintetizadas en el ER rugoso son

glucosUadas par la adici6n de un N-oligosacarido comtin35
La adici6n covalenle de azucares a las protefnas es una de las principales fundo-
nes biosinteticas del ER. La mayorfa de las protefnas solubles y unidas a la mem-
brana que son fabricadas en ellumen del ER, incluyendo las destinadas a ser
transportadas al complejo de Golgi, a los Iisosomas, a la membrana plasmatica 0 glucosa
al espacio extracelular, son glucoprotefnas. Por el contrario, muy pocas protef-
maoosa
nas del dtosol estan glucosiladas, y las que 10 estan contienen una modificad6n
de azucares muy simple: la adici6n de un grupo N-acetilglucosamina a un resi- Nacetil glucosamioa. 0
duo serina 0 !reooina de la proteina.
Un avance importante en la comprensi6n del proceso de glucosUad6n pro- Figura 12-48 Estructuradel
teica fue el descubrimienro de que en el ER se transfiere en b/oque a las prote(nas 0llgOS8ctirido unldo 8 asparaglna
un oligosacArido prefonnado (compuesto de N-acetilglucosamina, manosa y glu- (uDldo a N) que es aftadldo a la
casa y conteniendo un total de 14 residuos de azucar). Dado que este oligosacArido mayona de las protemas en la
siempre es transferido al grupo NH z de la cadena lateral de un residuo de aspa- membrana del ER rugoso. Los cinco
ragina, se Ie denomina N-oligosacdrido (N-linked) 0 unido a asparagina (Figura residuos de azucar mostrados en el
recuadro gris forman la ~regi6n
12-48). La transferencia esta catalizada por una enzima, una transferasa de oligo-
central" de este oligosacarido. En cl
sacdrido que se halla unida a la membrana, y cuyo lugar activo esta expuesto a la
complejo de Goigi se produce una
superfide luminal de la membrana del ER, 10 cual explica par que las proteinas profunda reordenaci6n y recorte de los
dtos6licas no son glucosiladas de esta manera. EI oligosaciirido precursor se azucares y en muchas prolefnas
mantiene en la membrana del ER mediante una molecula lipfdica especial lIa- I.1nlcamente sobreviven a este proceso
mada doUcol y es transferido a la asparagina diana a traves de una sola etapa en- estos cinco residuos. Solamente se
zimatica inmediatamente despues de que este aminoacido aparezca en ellumen gJucosilan las asparaginas que se
del ER durante la translocad6n de la protefna (Figura 12-49). Dado que muchas hallan en la secuenciaAsnX-SeroAsn
protefnas son importadas al ER de forma cotraducdonal, casi siempre los N-oli- X- Tllr, siendo Xcualquier aminoacido
gosacaridos son af'iadidos durante la sfntesis proteica. Que no sea la prolina. Eslas dos
EI oligosacarido precursor unido a lipido se une al dolicol mediante un enla- secucncias se presentan en
ce fosfato de alta energfa, el cual proporciona la energfa de activad6n necesaria frecuencias mucho menores en
para la reacci6n de glucosilad6n ilustrada en la Figura 12-49. EI oligosacarido se g1ucoprotefnas Que en protefnas
citos61icas no glucosiladas;
va construyendo antes de ser transferido a la protefna, azucar a azucar, unido a
evidentemente ha habido una presi6n
esta molecula de lfpido que, a su vez, esta unido a la membrana. Los azucares selecliva en contra de estas secuencias
son activados primero en el dtosol mediante la fonnaci6n de intermediarios durante la evoluci6n de las protefnas,
azucar-nllcfootido, que ceden su azucar (directa 0 indirectamente) allfpido, si- probablemenle porque \a
guiendo una secuencia ordenada. En parte a traves de este proceso, el oligosaca- glucosiJaci6n en demasiados residuos
rido unido al Iipido es translocado desde la cara cilos6lica a la luminal de la podrfa interferir con el plegamiento de
membrana del ER (Figura 1250). la protefna.

630 Capftulo 12: Compartimlenlos IntraceluJares y cJasificaci6n de prolefnas

 -
Figura 12-49 GlucosJlacl6n de una
proteIn. en el ER. Gasi
Inmediatamente despues de que la
cadena pOlipeplfdica entre en el
NH, NH,
lumen, se glucosila sobre los residuos
de asparaguina diana. EI oligosacMido
que se muestra en la Figura 1248 se
trans6ere a I. asparaguina como una
unidad intacta, a tra~s de una
reacei6n catalizada por la oligosacaril
transferasa, una enzima unida a
membrana Existe una copia de esta
enzima asociada con cada
l.nlI1Slocador proteico de I. membrana
del ER.

figura 12-50 Slntesls del precUJ'SOr

del oUgosadrido unJdo a Upklo de I.
de I. membrana del ER rugoso. EI
oligosacarido se va cooslruyendo
azucar a az6car, sobre ellipido
transponador dolicol (un
poliisoprenoide. vease Panel 2-4). El
dolicol es largo y muy hidrof6bico; sus
22 unidades de cinco carbonos pueden
atravesar el grosor de la bicapa lipfdica
mas de tres veces, de Conna que el
oligosacarido que se une a! el queda
firmemente anclado a la membrana. EI
b~palipidic. de Ie primer grupo de azucar se une a!
membrana del ER
dolicol a traves de un enlace
LUMEN CITOSOl plrofosfato. Este enlace de alta energfa
activa el oligosacarido para su
transferencia desde ellfpido hasta una
cadena lateral de la asparagina de un
polipeptido naciente sobre la cara
luminal del ER rugoso. La sfntesis del
oligonucle6tido comienza en la cara
citos6lica de la membrana del ER, y
continua sobre la cara luminal,
P P (GleNAeh despues de que el lfpido intermediario
(Man)s (GlcNAch haya sido transferido
l---
5~Men (por flip-nop) a !raves de la
t-5~ membrana. Todas las reacciones
SALTO"t"FLIP-flOf>"1 P P (GlcNAelr(Mllnll postcriores de lransferencia de
EN LA MEMBRANA glucosilos que se producen en la cara
lumina! del ER se producen a panir de
dolicol.P.glucosa y de dolicol-P-
dador de mll00u, construldo manosa; cslos monosacaridos, unidos
pa.r1ir de dolicol 'OS,.lo., a lipidos, que se hallan activados, se
de GDP-mII00N sintetizan a panir de dolicol fosfato y
de UDP-g1ucosao GDP-manosa sobre
la cara cit0s6lica del ER, y

3X~~
dador de glueoN c:onltru;cto posterionnente, segUn parece, son
pan;r de dollcol 'osf,lo Y transponados (por flip-nop) a traves
UDP'i!Juco...
de la membrana del ER. Abreviaturas;
IGIcI:rlM.n),jGlcNAcll P GlcNAc = N-acetilglucosamina;
Man = manosa; Glc = g1ucosa.

EI retfcuJo endoplasmlitlco 631

 Toda la diversidad de estructuras de N-oligosacaridos que se presentan en
las glucoprorefnas maduras se produce por modificaci6n posterior de la estruc-
tura de oligosacarido precursora. Todavfa en el ER, se eliminan de los oligosaca-
ridos de muchas glucoprotefnas tres residuos de glucosa y uno de manosa (vea-
se Figura 12-48). Estos ~recortes" 0 ~procesamiento" del oligosacarido continuan
en el complejo de Goigi. y se explican en el Capftulo 13.
Los N-oligosacaridos son, can gran diferencia, los oligosacaridos mas cornu-
nes de los que se encuentran en las glucoprotefnas. Menos frecuentemente, los
oligosacaridos estan unidos al grupo hidroxilo de la cadena lateral de un residuo
de serina, de treonina 0 de hidroxilisina. Estos O-oligosacdridos se forman en el
complejo de Golgi a traves de vfas que aun no son conocidas completamente (se
discute en el Capftulo 13).

Algunas protefnas de membrana, poco despues de entrar en el ER,

intercambian una cola transmembrana carboxilo terminal por
un glucosilfosfatidilinositol (GPI) unido de forma covalente 36
Como hemos explicado en el Capftulo 10, algunas enzimas citos6licas catalizan
la adici6n covalente de un acido graso a determinadas prote(nas, colahorando
en la direccionalidad de estas protefnas hacia las membranas celulares. En el ER
rugoso se produce un proceso catalizado por enzimas relacionado con este: el
extremo carboxilo de algunas protefnas de membrana destinadas a la membra-
na plasmatica se unen de forma covalente a un residua de azucar de un glucoli-
pido. Esta uni6n se forma en el lumen del ER a traves del mecanismo i1ustrado
en la Figura 12-51. y afiade a la protefna un andale de g1ucosUfosfatldlUnosltol
(GPI, de glycosylphosphatidilinositol) que contiene dos acidos grasos. En el mis-
mo proceso se elimina el segmento transmemhrana de las protefnas. Cada vez
F1guraI2-S1 Unl6naunanclajede
es mayor el numero de protefnas conocidas de la membrana plasmAtica que son g1ucosllfosfaddiUnosltol. En cuanlo la
modificadas de esta manera. Dado que estas protefnas eSlan unidas al exterior sfntesis de la protefna ha fmalizado,la
de la membrana plasmatica exclusivamente a traves de su anclaje GPI, en princi- protefna precursora pennanece unida
pio pueden ser liberadas de las celulas en fonna soluble en respuesta a sefiales a Ie membrana del ER a traves de una
que activen una fosfolipasa de la membrana plasmatica. Por ejemplo, los parasi- secuencia hidrof6bica carboxilo
tos Iripanosoma utilizan este mecanismo para liberar su cubierta de prolefnas terminal de entre 15 y 20 residuos de
unidas a GPI si son atacados por el sistema inmunilario. aminoacido, de forma que el resto de
la protefna queda en ellumen del ER.
En menos de un minuto, una enzima
La mayorfa de las bicapas lipfdicas de membrana del ER corta la protefna, libenindola de
son ensambladas en el ER37 su extremo carbmdlo terminal, que la
unfa a la membrana, y
La membrana del ER produce casi todos los lfpidos de membrana necesarios
simultaneamente une el nuevo
para la elaboraci6n de nuevas memhranas celuJares, incluyendo los fosfolfpidos
extremo carboxilo tenninal a un grupo
y el colesterol. E! principal fosfolfpido fabricado es la fosfatidilcolina (tambien amino de un inlermediario gJucosii.
fosfatidilinositol prefonnado. La sei'ial
que especifica eSla modificaci6n se
eaOH glucosil foslatidilinositol halla contenida en la secuencia
CITOSOL
hidrof6bica carboxilo terminal y en
algunos aminoacidos adyacentes a ella
sobre la eara luminal de la membrana
del ER; si esta sei'ial es ai'iadida a atras
protefnas, estas tambien son
modlficadas de esta fonna. Debido a
p
este anclaje Iipfdico al que se une de
fonna covalenle, la protema
proteina I,Inida
permanece unida a la membrana;
covaler'lternenle todos sus restos de aminoacido se
a un IIpldo que hallan expuestos a la cara luminal del
Ie enela e la
membrena ER y, por 10 tanto, sobresaldran hacia
el exterior celular si la protefna es
transponada a la membrana
plasmatica.

632 Capftulo 12 : Compartlmientos intracelulares y c1asiflcaci6n de protefnas

 <p
CH 2-CH-CH 2
I I
OH OH
glleetol
eell gruo CoA 3-fo.f.IO CDP<olina

eMP

'. o
D-

moSO<.

Ilpktica
bko""
del eR
:::::=;::=~!W

LUMEN

lIamado lecitina), que puede formarse en tres etapas a partir de dos o1cidos gra Figura 12-52 Sfntesls de
sas, glicerofosfato y colina. Cada etapa esta catalizada por enzimas de la memo fosfattdJlcolina. Este fosfolfpido es
brana del ER que tienen sus lugares activos dispuestos hacia el drosal, donde se sintetizado a partir de aeil coenzima A
encuentran los metabolitos necesarios. Por 10 tanto las srntesis de fosfoHpidos (aeil graso CoAl, g1iceroI3-fosfalo y
riene lugar excJusivamente en la mitad citos6lica de la bicapa lipfdica. Ella pri- eitldfn-blsfosfocolina (COP-colina).
mera etapa, las aei! transferasas afiaden consecutivamente dos !icidos grasos al
glicerofosfato produciendo dcida fosfaddico, un compuesto que es suficiente-
mente insoluble en agua como para permanecer en la bicapa lipfdica despues de
sec sintetizado. Esta etapa es la que haee ereeer la bicapa lipfdica. Las otras ela-
pas posteriores determinan el grupo de eabeza de la mol~cula lipfdiea reci~n
sintetizada, y por 10 tanto la naturaleza qufmica de la bicapa, pero no suponen
un erecimiento nelO de la membrana (Figura 12-52). Los otras dos fosfolfpidos
mayoritarios de membrana -Ia fosfatidiletanolamina {PEl y la fosfatidilserina
(PSl- al igual que el fosfolfpido minorilario fosfatidiJinositol (PI), son sinleliza-
dos de esta manera.
Como la sfntesis de fosfolfpidos tiene lugar en la mitad citos6liea de la bicapa
lipfdica, ha de existir un mecanismo que transfiera alguna de las mol~culas de
fosfolfpido reeien sintetizados hacia la otra mitad de la bicapa. En bicapas Iipfdi
cas sint~ticas, los Ifpidos no son capaces de "sallar" ("flip", de flip-Oop) de esla
manera. En el ER, sin embargo, los rosrolipidos se equiJibran a tra~ de la mem
brana en cuesti6n de minutos, 10 cual es al menos unas tOO 000 veces mc'is rc'ipido
de 10 que puede representar el Dip-flop espontlineo. Se cree que eSle movimien-
to rc'ipido transbicapa eSlc'i mediado por translocadores de fosfolfpldos especffi-
cos de grupos de cabeza. Concretamente, parece que la membrana del ER con-
tiene un translocador (una "flipasa") que transfiere, entre la cara citoplasmc'itica

E1 retfculo endoplasm4tlco 633

y la cara luminal, fosfolfpidos que conlengan colina -pero no elanolamina-, se bica~ lipidic.
rina, 0 fosfolipidos que conlengan inosilol. Esto significa que la fosfatidilcolina asim6t,ju del
,etlculo
alcanza la cara luminal mucho mt\s rapidamente que los otros fosfolfpidos. De }
endoplaafMtico
esta fonna el translocador mantiene la bicapa y es responsable de la distribuci6n
asimetrica de los Upidos en la bicapa (Figura 1253). lA S1NTESIS De UPlOOS ANAoE
El ER tambien produce colesterol y ceramida. La ceramida es fabricada por FOSFOUPlOOS A lA MITAO
CllosOUCA Of lA BICAPA
condensaci6n del aminot\cido serina can un ctcido graso hasta fonna el amino
alcohol esfingosina; luego se afiade un segundo ctcido graso, fonn<tndose la cera
mida. La ceramida es exportada al complejo de Golgi, donde actua como precur
sor de la sintesis de dos tipos de Ifpidos: se afiaden cadenas de oligosac<tridos
fonnando los glucoesfingolfpidos (glucoUpidos), y se translieren los gropos de UNA PROTEINA ESPECIFlCA

I l}
cabeza de la fosfocolina desde la fosfatidilcolina a otras moleculas de ceramida, CATALlZA El SALTO"I-FUP",
Of OET'ERMINADAS MOLt!:CUlAS
fonnando esfingomieUna. Asf, ambos glucolipidos y la esfingomielina son pro
ducidos relativamente tarde en el proceso de sintesis de membrana. Dado que
son producidos por enzimas expuestas al lumen del complejo de Golgi, se en
.=....
Ertos
De FOSFOl[PIOO DeSDe lA
MIlAO clTOS6ucA A lA MllAO
LUMINAl

cuentran exc1usivamente en la mitad no citos6lica de las bicapas Iipfdicas que

los presentan. MI~~~ ~ :::':;;~::::.
06g~6 ,cg de I. blc.p.

~M~plEFI
Las protemas de intercambio de fosfolfpidos pueden transportar
fosfolfpidos desde el ER a las mitocondrias y a los peroxisomas38 Figura 12-53 Papel de los
transloc:adores Upfdlcos en la
Como se discute en el Capftulo 13, la membrana plasmcttica y las membranas blosfntesls de la blcapa UpfdlCL las
del complejo de Golgi, de los Iisosomas y de los endosomas forman parte de un nuevas mol~u1as Iipfdicas se van
sistema de membranas que se comunica can el ER por media de vesfculas de ai'tadiendo exclusivamente a la milad
transpone que transfieren tanto las proteinas como los IJpidos. Las mitocon cit0s6lica de la bicapa y no pueden
drias, los plastos y los peroxisomas no fonnan parte de este sistema, por 10 que "sahaT" (flip) de forma esponuinea de
requieren mecanismos diferentes para la irnportaci6n de protefnas y de Ifpidos una monocapa Iipfdica a la otra. Por
ella, para que se produzca Ja
necesaria para su crecimiento. Va hemos visto que la mayorfa de las proteinas de
transferencia de determinadas
mitocondrias y plastos y todas las de los peroxisomas son imponadas posHra molOCulas a la mitad luminal y asf 1a
duccionalmente desde el dtosol. Aunque las mitocondrias modifican algunos de membrana pueda crecer como una
los Ifpidos que imponan, no sintetizan Ifpidos de nouo; en cambio, tienen que bicapa, se hace necesaria la
obtener eSlOS Ifpidos por transferencia desde el ER, donde son simetizados, 0 participaci6n de protefnas
tienen que oblenerlos de fonna menos dJrecta desde el ER por medio de otras translocadoras de fosfolfpidos
membranas celuJares. En cualquier caso son necesarios mecanismos especiales ("mpasas"). Debido a que la Oipasa de
para que se produzca la transferencia. Ja membrana del ER reconoce
En experimentos in lJitro se ha demostrado que unas proteinas de transporte preferenlCmente y transfiere grupos de
solubles en agua -Ilamadas protefnas de lntercamblo de fosfolfpldos (0 prote( cabeza que contengan colina, se
1Ias de tra1ls!erellcia de !os!ollpidosl- tienen la capacidad de transferir moleculas genera una membrana asimetrica con
individuales de fosfolipidos entre membranas. Cada protefna de intercambio reo la monocapa luminal (1a cual produce
conoce s610 determinados tipos espccfficos de fosfolfpido. La transferenda entre la mltlld exterior de la bicapa de la
membrana plasmatica) altamente
bicapas lipfdicas se produce cuando la prOlefna "extrac una mollkula de fosfo](
M

M
enriqueclda en fosfatidilcolina.
pido de una membrana y luego difunde por la celuJa can ellfpido "enterrado en
su lugar de un.i6n. Cuando encuentra otm membrana, la prolefna de intercambio
tiende a descargar la mollkula de fosfolLpido en la nueva bicapa (Figura 12-54).
Se ha propuesto que la fosfatidiJserina es imponada a la milocondria de esta rna-
nera. siendo luego descarboxilada para recuperar la fosfatidiJetanolamina, mien
tras que la fosfatictilcolina es imponada intaeta.
Las proteinas de intercambio actuan distribuyendo fosfolfpidos al azar entre
todas las membranas de la celula. En principio, de este proceso de intercambio
al aur puede resuJtar un transpone neto de Ifpidos desde una membrana rica
en detenninados lipidos a otra pobre en ellos, pennitiendo que las moleculas de
fosfatidilcolina y fosfatidilserina, por ejemplo, sean transferidas desde el ER,
donde son sintetizadas, hasta la membrana milocondrial 0 hasta la membrana
peroxisomal. Puede ser que las mitocondrias y los peroxisomas sean los unicos
org<tnulos "pobres en Iipidos~ del citoplasma y que un intercambio de est'e tipo
sea sufidente, aunque pueden existir otras mecanismos mas especificos que
transporlen fosfolipidos a estos organulos.

634 Caprtulo 12: Companlmlentos Intracelulares y c1astncacl6n de protefnas

 Figura 12-54 Protefnas lntercambladoras de fosfoUpldos. Debido a que los
fosfolfpidos son insolubles en agua, su transferencia entre membranas membrllnll
del ER citosol
requiere la participaci6n de una protelna transponadora. Las protefnas de
intercambio de fosfolfpidos son moleculas hidrosolubles que transportan
una sola molecula de fosfoHpido a la vez: pueden tamar una molecula
lipfdica de una membrana y liberarla en otra membrana, redistribuyendo asf
los fosfolfpidos entre los compartimientos rodeados de membrana. La
transferencia de fosfatidilcolilla (PC) desde el ER hada la mitocondria puede
ocurrir. en principio, sin aporte exterior de energfa debido a que la
concentraci6n de PC es alta en la membrana del ER (donde se sintetiza) y
baja en la membrana mitocondrial externa. Puede predecirse que debe existir
una flipasa en la membrana mitocondrial externa que equilibrc las
concentraciones de lfpidos entre las dos mirades de Ja membranas externa, y
un mecanismo de transferencia de Ifpidos entre la membrana milOcondriaJ
grupo de protelna
externa y la interna. Sin embargo. estos procesos todavfa no se han cabela de III intercemb;edore
descubierto. fosfatidilcolina de fosfolipidos

Resumen
La extensa red del ER actda de Jtibrica de produccMn de casi tados los Upidos celula-
res. Adenuis, la mayor parte de la sfntesls proteica celldar tiene Illgar en la slJperficie
citos61itx1 del ER: todas las prote{nas destinadas a la secrecwn y todas las prote{nas
destinadns al prapio ER, at complejo de Golgi, a los llsosomas, a los elUlosolnas y ala
membrana plasm4tica, primero son imponadas al interior del ER desde el dtosoL
En ellumen del ER las protefnas se pliegan y oligomerium, se Jonnan los enItu:es dl-
sulfuro y se aiiadenlos N-oligosacdridos.
S610 son importadns al interior del ER las protefnas que presentQlI WI peptido
senal hldrof6bko. EI peptido selial es reconocido por una partfcula de reconoci-
mLento de senal (SRP, de Signal Recognition Particle) que se wle a la cadena poli-
peptldka naclente y al ribosoma y dirige tado el conjwlto a una protefna receptora
de la superJicie de la membrana del ER. Esta unian a la membrana inkia 1111 proce-
so de translocacwn qUi! arrastra un buck de la cadella polipeptfdica a traves de la
membrana del ER a travh de un poro hidrofllico de ,wa protefna trQl,stocadora.
Las prote{nas soillbies destinadas al lume" del ER, a ser secretadas 0 a ser
transferidas alillmen de otros orgdnulos, primera pasall completamente al interior
del lumen del ER. Las protefnas tralrsmembrana destilladas al ER 0 a otras mem-
branas de la dlula, son translocadas a traves de la membrana del ER pero no SOli
llberadas ai interior del lumen sino que pennanecen ancladas a la bicapa a travh de
una 0 nuts regiones de su cadena polipeptfdka, o../lellt:oidales, que atrauiesDl' la
membrana. Estas pordones Ilidrofablcas de la protefna pueden aetuar durante el
proceso de transloctu:wn, bien como piptido de Inkio de transferencla 0 bien como
senal de para de transferenda. Cuanda ,m pollpeptido colltlelle varios peptldos de
Inkio de transfere"ciayde para de transJerencla, atrauesard m"cllIl$ veces la bicapa.
La asimetrla de fa s{ntesis de Upidos, inserclan proteica y glucosilaci611 en el ER
establece la polaridad de las membranas de todos los demm orgdnulos que son
abastecidos con lfpidos y protefnas de membrana por el ER.

EI retfculo endoplasmatico 635

Bibliografla
General
Blcbel, G. Control of intracelular protein traffic. Methods
Enzymof. 96:663-682, 1983.
Neupert. W.; lill, R. New Comprehensive Biochemistry:
Membrane Biogenesis and Protein Targeting, Vol. 22.
Amsterdam: Elsevier, 1992.
Osborne. M.A.; Silver, P.A. Nucleocytoplasmic transport in
the yeast Saccharomyces cerevisiae. Annu. Rev. 8io-
chern. 62:219-2$4,1993.
Palade. G. Intracellular aspects of the process of protein
synthesis. Science 189:347-358. 1975.
Warren, G. Membrane partitioning during cell division.
Annu. Rev. Bioclzem. 62:323348, 1993.
CUas
I. Bolender, H.P. Stereological analysis of the guinea pig
pancreas.}. Cell BioL 61:269287, 1974.
Fulton, A.B. How crowded is the cytoplasm? Cell 30:345-
347,1982.
Kelly, R.B. Associations between microtubules and in-
tracellular organelles. Curro Opin. Cell Bioi. 2: 105
108,1990.
Weibel, E.R.; Staubli, W.; Gnagi, H.R.; Hess, FA Correla-
ted morphometric and biochemical studies on the li-
ver cell. I. Cell Bioi. 42:6891, 1969.
2. Blobel, G. Intracellular protein topogenesis. Proc. Narf.
Acad. Sci. USA 77:14961500,1980.
Morden, C.W.; Delwiche, C.F.; Kuhsel, M.; Palmer, '.0.
Gene phylogenies and the endosymbiotic origin of
plastids. Biosystems 28:7590, 1992.
Schwarz. R.M.; Dayhoff, M.O. Origins of prokaryotes,
eukaryotes, mitochondria, and chloroplasts. Science
199:395403. 1978.
Voelker, D.R. Organelle biogenesis and intracellular li-
pid transport in eukaryotes. Microbial. Rev. 55:543-
560, 1991.
3. Bradshaw, R.A. Protein translocation and turnover in
eukaryotic cells. Trellds Biocllem. Sci. 14:276-279,
1989.
Sabatini, D.O.: Kreibichi. G.; Morimoto, T.; Adesnik, M.
Mechanisms for teh incorporation of proteins in
membranes and organelles. j. Cell BioI. 92: 1-22, 1982.
4. Blobel, G.; Walter, P.; Chang, C.N.; et al. Translocation
of proteins across membranes: the signal hypothesis
and beyond. Symp. Soc. Exp. Bioi. 33:9-36, 1979.
Deshaies, R.I.; Schekman, R. A yeast mutant defective at
an early stage in import of secretory protein precur
sors into the endoplasmic reticulum. j. Cell BioI.
105:633-645, 1987.
GarofT, H. Using recombinant DNA techniques to study
protein targeting in the eukaryotic cell. Annu. Rev.
Cell Bioi. 1:403-445,1985.
Oliver, 0.8.; Beckwith, ,. E. coli mutant pleiotropically
defective in the export of secreted proteins. Cell
25:765-772,1981.
von Heijne, G. Protein targeting signals. Curro Opin.. Cell
Bioi. 2:604-608, 1990.
5. lones, H.D.; Schliwa, M.; Drubin, D.G. Video micros-
copy of organelle inheritance and motiliry in bud-
ding yeast. Cell MotiL Cytoskeleton 25:129-142, 1993.
636 Capftulo 12: Compartimlentos lntracelulares y c1aslficacl6n de protelnas
Warren, G. Membrane partitioning during cell division.
Alltlu. Rev. Biochem. 62:323-348, 1993.
6. Dingwall. C.; Laskey, R. The nuclear membrane. Science
258:942947,1992.
Newport, I.W.; Forbes, D.'. The nucleus: structure, func-
tion and dynamics. Anml. Rev. Biocllem. 56:535-565,
1987.
Nigg, EA; Baeuerle, PA, Luhrmann, R. Nuclear im
port-export: In search of signals and mechanisms.
Cefl66:1522,1991.
Silver, PA How proteins enter the nucleus. Cell 64:489-
497,1991.
7. Altey, C.W.; Radermacher, M. Architecture of the Xeno-
pus nuclear pore complex revealed by three-dimen-
sional cryo-electron microscopy. /. Cell BioI. 122:1-
19, 1993.
Forbes, D.'. Structure and function of the nuclear pore
complex.Annu. Rev. Cell BioL 8:495-527,1992.
Gerace, L Molecular trafficking across the nuclear pore
complex. Om. Opin. Cell Bioi. 4:637-645, 1992.
Hinshaw, J.E.; Carragher, B.a.; Milligan, R.A. Archltec-
lure and design of the nuclear pore complex. Cell
69:1133-1141, 1992.
Pante, N.; Aebi, U. The nuclear pore complex. I. Cell
Bioi. 122:977-984, 1993.
8. Dingwall, C.; Laskey, RA Nuclear targeting sequen-
ces-a consensus? Trends Biochem_ Sci. 16:478481,
1991.
Goldfarb, D.S.; Garil!py, '.: Schoolnik, G.; Kornberg, R.D.
Synthetic peptides as nuclear localization signals.
Nature322:64I-644,1986.
Kalderon, D.; Roberts, D.L; Richardson, W.O.; Smith,
A.E. A short amino acid sequence able to specify nuc-
clear localion. Cell 39:499-509, 1984.
Yamasake, L.; Lanford, R.E. Nuclear transport: a guide
to import receptors. Trends Cell Bioi. 2: 123-127, 1992.
9. Adam, SA; Gerace, L Cytosolic proteins that specifi
cally bind nuclear localization signals are receptors
for nuclear Import. Cell 66:837-847, 1991.
Dingwall, C. Transport across the nuclear envelope:
enigmas and explanations. Bioessays 13:213-218,
1991.
Fcldherr, C.M.; Akin, D. EM visualization ofnucJeoeyto-
plasmic transport processes. Electron Microsc. Rev.
3:7386, 1990.
Michaud, N.; Goldfarb, D.S. Multiple pathways in nu-
clear transport: the import of U2 snRNP occurs by a
novel kinetic pathway. I. Cell Bioi. 112:215223, 1991.
Newmeyer, D.O. The nudear pore complex and nucleo-
cytoplasmic transport. Curro Opin. Cell BioI. 5:395
407,1993.
to. Chaudhary, N.; Courvalin, J. Stepwise reassembly of the
nuclear envelope at the end of mitosis. }. Cell Bioi.
122:295-306, 1993.
Glass, J.R_; Gerace, L Lamins A and C bind and assemble
at the surface of mitotic chromosomes. /. Cell BioL
111:10471057,1990.
Peter, M.; Heitlinger, E.; Haner, M.; Aebi, U.; Nigg, EA.
Disassembly or ill vitro fonned lamin head to-tail
polymers by cdc2 kinase. MBO I. 10:1535-1554,
1991.
Weise, C.; Wilson, K.L Nuclear membrane dynamics.
CurT. Opin.. Cell BioL 5:387-394, 1993.
II. Ding-vall, C. If the cap fits .... Curro Bioi. 1:65-66, 1991.
Eckner, R; Ellmeier, W.; Bimstiel, M.L. Mature mRNA 3'
end formation stimulates RNA export from the nu-
cleus. EMBO]. 10:3513-3522, 1991.
Izaurralde, E.; Mattaj, l.W. Transport of RNA between
nucleus and cytoplasm. Semin. Cell Biol. 3:279-288,
1992.
Miller, M.W.; Hanover, JA. Regulation ofmacromolecu-
lar traffic mediated by the nuclear pore complex. Cell
Bioi. 1m. Rep. 16:791-798, 1992.
Moll, T.; Tebb, G.; Surana, U.; Robitsch, H.; Nasmyth, K.
The role of phosphorylation and the cdc2B protein ki-
nase in cell cycle-regulated nuclear import of the S.
cerevisiae transcription factor SWI5. Cell 66:743-758,
1991.
12. Archer, E.K.; Keegstra, K. Current views on chloroplast
protein import and hypotheses on the origin of the
transport mechanism. j. Bioenerg. Biomem. 22:789-
810,1990.
Attardi, G.; Schatz, G. Biogenesis of mitochondria.
Amm. Rev. Cell BioI. 4:289-333, 1988.
Glick, B.; Schatz, G. Import of protein into mitochon-
dria.Amlu. Rev. Genet. 25:21-44, 1991.
Pfanner, N.; Rassow, J.; van der Klei, I.J.; Neupert, W. A
dynamic model of the mitochondrial protein import
machinery. Cell 68:999-1002, 1992.
Smeekens, S.: Weisbeek, P.; Robinson, C. Protein trans-
port into and within chloroplasts. Trends Biochem.
Sci. 15:73-76, 1990.
13. Roise, D.; Schatz, G. Mitochondrial presequences. j.
Bioi. Cllem. 263:4509-4511, 1988.
Vestweber, D.; Schatz, G. DNA-protein conjugates can
enter mitochondria via the protein import pathway.
Nature 338: 170-172, 1987.
14. Beasley, E.M.; Wachter, C. Schatz, G. Putting energy into
miLOchondrial protein import. Curro Opitl. Cell Bioi.
4:646-651,1992.
Weinhues, U.; Neupert, W. Protein translocation across
mitochondrial membranes. Bioessays 14:17-23, 1992.
15. Pfanner, N.; Rassow, J.; Wienhues, U.; et al. Contact si-
tes between inner and outer membranes: structure
and role in protein translocation into the mitochon-
dria. Biochim. Biopllys.Acta 1018:239-242, 1990.
Pon, L.; Moll, T.; Vestweber, D.; Marshallsay, B.; Schatz,
G. Protein import into milOchondria: ATP-dependent
protein translocation activity in a submitochondrial
fraction enriched in membrane contact sites and
specific proteins. j. Cell Biol. 109;2603-2316, 1989.
Schleyer, M.; Neupert, W. Transport of proteins into mi-
tochondria: translocational intermediates spanning
contact sites between outer and inner membranes.
Cell 43:339-350, 1985.
16. Deshaies, RJ.; Koch, B.D.; Werner-Washburne, M.;
Craig, EA.; Schekman, R. A subfamily of stress pro-
teins facilitates translocation of secretory and mito-
chondrial precursor polypeptides. Nature 332:800-
80S, 1988.
Eilers, M.; Schatz, G. Protein unfolding and the energet-
ics of protein translocation across biological mem-
branes. Cell 52:481-483, 1988.
Wienhues, D.; Becker, K; Schleyer, M.: et aI. Protein fol-
ding causes an arrest of preprotein translocation into
mitochondria in vivo. }. Cell Bioi. 115:1601-1609,
1991.
Bibllograffa
17. Hendrick, J.P.; Hartl, F.U. Molecular chaperone func-
tions of heat-shock proteins. Amm. Rev. Biochem.
62:349-384, 1993.
Kelley, W.L.; Georgopoulos, C. Chaperones and protein
folding. Curro Opill. Cell Bioi. 4:984-991,1992.
Koll, H.; Guiard, B.; Rassow, J.; et al. Antifolding activity
of Ilsp60 couples protein import into the mitochon-
drial matrix with export to the intermembrane space.
Cell68:1163-1175,1992.
Scherer, P.; Krieg, U.c.; Hwang, S.T.; Vestweber, D.;
Schatz, G. A precursor protein partly translocated
into yeast mitochondria is bound to a 70 kd mito-
chondrial stress protein. EMBO]. 9:4315-4322, 1990.
18. Glick, B.S.; Beasley, E.M.; Schatz, G. Protein sorting in
mitochondria. Trends Biodlem. Sci. 17:453-459, 1992.
Glick, B.S.; Brandt, A.; Cunningham, K; et aI. Cytochro-
mes cl and b2 are sorted to the intermembrane spa-
ce of mitochondria by a stop-transfer mechanism.
Cell 69:809-822, 1992.
Hartl, F.U.: Ostermann, J.: Guiard, B.; Neupert, W. Suc-
cessive translocation into and out of the mitochon
drial matrix: targeting of proteins to the intennem-
brane space by a bipartite signal peptide. Cell
51:1027-1037,1987.
19. Knight, I.S.; Madueno, F.; Gray, J.C. Import and sorting
of protein by chloroplasts. Biochem. Soc. Trans.
21:31-36,1993.
Robinson, c.; Klosgen, RB.; Herrmann, RG.; Shackle-
ton, J.B. Protein translocation across the thylakoid
membrane-a tale of two mechanisms. FEBS Lett.
325:67-69,1993.
Smeekens, S.; Weisbeek, P.; Robinson, D. Protein trans-
port into and within chloroplasts. Trends Biocllem.
Sci. 15:73-76, 1990.
Theg, S.M.; Geske, F.S. Biophysical characterization of a
transit peptide directing chloroplast protein import.
BiodJemistry 31 :5053-5060, 1992.
20. deDuve, C. Microbodies in the living ceU. Sci. Am.
248(5):74-84,1983.
Lazarow, P.B. Genetic approaches to studying peroxiso-
me biogenesis. Trends Cell Bio1.3:89-93, 1993.
Lazarow, P.B.; FUjiki, Y. Biogenesis of peroxisomes.
Annu. Rev. Cell Biol. 1:489-530,1985.
21. Taiz, L.; Zeiger, E. Plant Physiology, pp. 229-233; 288-
290. Redwood City, CA: Benjamin/Cummings, 1991.
Titus, D.E.; Becker, W.M. Investigation of the glyoxyso-
me-peroxisome transition in germinating cucumber
cotyledons using double-label immunoelectron mi-
croscopy.}. Cell Bioi. 101: 1288-1299, 1985.
Tolbert, N.E.; Essner, E. Microbodies: peroxisomes and
glyoxysomes.f. Cell Biol. 91:271s-283s, 1981.
22. Borsl, P. Peroxisome biogenesis revisited. Biocliim
Biop/IYs. Acta 1008: 1-13, 1989.
Lazarow, P.B. Peroxisome biogenesis. Curro Opin. Cell
Bioi. 1:630-634, 1989.
Shimozawa, N.; Tsukamoto, T.; Suzuki, Y.; et al. A hu-
man gene responsible for Zellweger syndrome that
affects peroxisome assembly. Science 255: 1132-1134,
1992.
Subramani, S. Targeting of proteins into the perosixo-
mal matrix.]. Memb. Bioi. 125;99-106,1992.
Valle, D.; Gartner, J. Human genetics: penetrating the
peroxisome. Nature 361 :682-683, 1993.
637

23. DePierre, J.W.; Dallner, G. Structural aspects of the
membrane of the endoplasmic reticulum. Biocllim.
Biopllys. Acta 415:411-472, 1975.
Lee, G.; BoChen, L. Dynamic behavior of endoplasmic
reticulum in living cells. Cefl54:37-46, 1988.
Preuss, D.; Mulholland, J.: Kaiser, C.; et aI. Structure of
the yeast endoplasmic reticulum: localization of ER
proteins using immunofluorescence and immuno-
electron microscopy. Yeast 7:891-911, 1991.
Vertel, 8.M.; Walters, L.M.: Mills, D. Subcompartrnents
of the endoplasmic reticulum. semin. Cell Bioi.
3:325-341, 1992.
24. Adelman, M.R.; Sabatini, D.O.; Blobel. G. Ribosome-
membrane interaction: nondestructive dissasembly
of rat liver rough microsomes into ribosomal and
membranous components. J. Cell Bioi. 56:206-229,
1973.
Borgese, N.; Mok, W.: Kreibich, G.: Sabatini, D.O. Ribo-
somal-membrane interaction: in vitro binding of ri-
bosomes to mirosomal membranes. /. Mol. Bioi.
88:559-580, 1974.
Garda, P.O.; Walter, P. Full-length pre-proa-factor can
be translocated across the mammalian microsomal
membrane only if translation has nOl tenninated. /.
Celf Bioi. 106:1043-1048, 1988.
Nunnari, J.; Walter, P. Protein targeting to and translo-
cation across the membrane of the endoplasmic reli-
culum. Curro Opin. Cell Bioi. 4:573-580, 1992.
Rapoport, T.A. Transport of proteins across the endo-
plasmic reticulum membrane. Science 258:931-936,
1992.
25. Jones, A.L.; Fawcett, D.W. Hypertrophy of the agranular
endoplasmic reticulum in hamster liver induced by
phenobarbital. J. Hislocllem. Cytocllem. 14:215-232,
1966.
Mori, H.; Christensen, A.K. Morphometric analysis of
Leydig cells in !.he normal rat testis. J. Cell Bioi.
84:340-354,1980.
Vila, A.: Podini, P.; Panzeri, M.: et a!. The endoplasmic-
sarcoplasmic reticulum of smooth muscle: immu-
nocytochemistry of vas deferens fibers reveals specia.
lized subcompartments differently equipped for the
control of Cat. homeostasis. }. Cell Bioi. 121:1041-
1051, 1993.
26. Dallner, G. Isolation of rough and smooth microso-
mes-general. Metll. Enzym. 31:191-201,1974.
deDuve, G. Tissue fractionation-past and present. J. Cell
BioI. 50:20d55d, 1971.
27. Blobel, G.: Dobberstein, B. Transfer of proteins across
membranes.]. Cell Bioi. 67:835-851,1975.
Kaiser, G.A.; Preuss, D.: Grisafi, P.; Hotstein, D. Many
random sequences functionally replace !.he secretion
signal sequence of yeast invertase. Scie/lce 235:312
317,1987.
Milstein, G.: Brownlee, G.: Harrison, T.; Mathews, M.B.
A possible precursor of immunoglobulin light chains.
Nat. New Bioi. 239:117-120,1972.
Simon, K.: Perara, E.: Lingappa, V. Translocation of glo-
bin fusion proteins across the endoplasmic reticu-
lum membrane in Xenopus laevis oocytes.]. Cell Bioi.
104:1165-1172,1987.
von Heijne, G. Signal sequences: the limits of variation.
}. Mol. Bioi. 184:99-105, 1985.
638 Capftulo 12: Compartimientos intracelulares y c1asificaci6n de protefnas
-
28. Gilmore, R. The protein translocation apparatus of the
rough endoplasmic reticulum, its associated pro
teins, and the mechanism of translocation. Curro
Opin. Cell Bioi. 3:580-584. 1991.
Meyer, 0.1.; Krause, E.: Dobberstein, B. Secretory pro-
tein translocation across membranes-the role of the
"docking protein.~ Nature 297:647-650, 1982.
Siegel, Y.: Walter, P. Each of the activities of signal re-
cognition particle (SRP) is contained within a distinct
domain: analysis of biochemical mutants ofSRP. Cell
52:3949, 1988.
Simon, S. Translocation of proteins across the endo-
plasmic reticulum. Curro Opill. Cell Bioi. 5:581-588,
1993.
Walter, P.; Ungappa, V.R. Mechanism of protein trans-
location across the endoplasmic reticulum membra-
ne. Annu. Rev. Cell Bioi. 2:499-516, 1986.
29. Hann, B.G.: Walter, P. The signal recognition particle in
S. cerevisiae. CeIl67:131134, 1991.
Sanders, S.L.; Schekman, R. Polypeptide translocation
across the endoplasmic reticulum membrane.]. Bioi.
Chem. 267:13791-13794,1992.
Widener, W.; Driessen, A.}.; Hartl, F.U. The enzymology
of protein translocation across the Esclleric/iia coli
plasma membrane. Amlll. Rev. Biecllem. 60:101-124,
1991.
Zimmermann, R.; Meyer, 0.1. 1986: a year of new in-
sights into how proteins cross membranes. Trends
Biocllem. Sci. 11:512-515, 1986.
30. Crowley, K.S.; Reinhart, G.D.; Johnson, A.E. The signal
sequence moves through a ribosomal tunnel into a
noneytoplasmic aqueous environment at the ER
membrane early in translocation. Cell 73: 1101-1115,
1993.
Deshaies, R.J.; Sanders, S.L.; Feldheim, D.A.; Schekman,
R. Assembly of yeast Sec proteins involved in translo-
cation into the endoplasmic reticulum into a mem
brane-bound multisubunit complex. Nature 349:806-
808,1991.
Gorlich, D.: Prehn, S.: Hartman, E.: Kalies, K.U.; Rapo-
port, T.A. A mammalian homolog of SEC61p and
SECYp is associated with ribosomes and nascent
polypeptides during translocation. Cell 71:489503.
1992.
Nicchilta, G.; Migliaccio, G.; Blobel. G. Reconstitution of
secretory protein translocation from detergem-solu-
bilized rough microsomes. Methods Cell Bioi. 34:263-
285, 1991.
Simon, S.M.; Blobel, G. A protein-conducting channel in
the endoplasmic reticulum. Cell 65:371-380, 1991.
31. Blobel, G.: Dobberstein, B. Transfer of proteins across
membranes.}. Cell Bioi. 67:835-851,1975.
Dalbey, R.E.; von Heijne, G. Signal peptidases in prokar-
yotes and eukaryotes-a new protease family. Trends
Biocllem. Sci. 17:474-478, 1992.
32. High, S.; Andersen, S.S.; Gorlich, D.; et al. Sec61p is ad-
jacent to nascent rype 1and II signal-anchor proteins
during their membrane insertion. ]. Cell Bioi.
121:743750,1993.
High, S.; Dobberstein, B. Mechanisms that detennine
the transmembrane disposition of proteins. Curro
Opill. Cell BioI. 4:581-586, 1992.
Singer, S.J. The structure and insertion of integral pro-
teins in membranes. Amm. Rev. Cell Bioi. 6:247-296,
1990.
 Thrift, R.N.; Andrew, D.W.; Walter, P.; Johnson, A.E. A
nascent membrane protein is located adjacent to ER
membrane proteins throughout its integration and
translation.}. Cell Bioi. 112:809-821, 1991.
von Heijne, G. Transcending the impenetrable: how
proteins come to terms with membranes. Biochim.
Biophys. Acta 974:307-333, 1988.
33. Engelman, D.M.; Steitz, TA; Goldman, A. Identifying
nonpolar transbilayer helices in amino acid sequen-
ces of membrane proteins. Annu. Rev. Biophys.
Biophys. Chern. 15:321-353, 1986.
Hartmann"E.; Rapoport, TA; Lodish, H.F. Predicting the
orientation of eukaryotic membrane-spanning pro-
teins. Proc. Nat/. Acad. Sci. USA 86:5786-5790, 1989.
Kyte, J.; Doolittle, H.F. A simple method for displaying
the hydropathic character of a protein. j. Mol. BioI.
157:105-132,1982.
Wessels, H.P.; Spiess, M. Insertion of a muJtispanning
membrane protein occurs sequentially and requires
only one signal sequence. Cell55:61-70, 1988.
34. Doms, R.W.; Lamb, R.A.; Rose, IX; Helenius, A. Folding
and assembly of viral membrane proteins. Virology
193:545-562,1993.
Gaut, J.R.; Hendershot, L.M. The modification and as-
sembly of proteins in the endoplasmic reticulum.
Curro Bioi. 5:589-595, 1993.
Gething, M.J.; Sambrook, I. Transpot and assembly pro-
cesses in the endoplasmic reticulum. Sernin. Cell
Biol. 1:65-72, 1990.
HelenillS, A.; Marquardt, T.; Braakman, I. The endoplas-
mic reticulum as a protein-folding compartment.
Trends Cell Bioi. 2:227-231. 1992.
Marquardt, T.; Helenius, A. Misfolding and aggregation
of newly synthesized proteins in the endoplasmic re-
ticulum.]. Cell Biol. 117:505-513, 1992.
35. Abeijon, C.; Hirschberg, C.B. Topography of glycosyla-
tion reactions in the endoplasmic reticulum. Trends
Biochem. Sci. 17:32-66, 1992.
BlbUograffa
Hart, GW. Glycosylation. Curro Opin. Cell Bioi. 4:1017-
1023, 1992.
Kelleher, D.l.; Kreibich, G.; Gilmore, R. Oligosaccharyl-
transferase activity is associated with a protein com-
plex composed of ribophorins I and II and a 48 kd
protein. Cell 69:55-65, 1992.
Kornfeld, R.; Kornfeld, S. Assemblyof asparagine-linked oli-
gosaccharides.Annu. Rev. Biochem_ 54:631-664, 1985.
Snider, M. A function for ribophorins. Curro Bioi. 2:43-
45, 1992.
36. Brown, DA Interactions between GPI-anchored pro-
teins and membrane lipids. Trends Cell Bioi. 2:338-
343. 1992.
Ferguson, M.A. Colworth Medal Lecture. Glyucosyl-
phosphatidylinositol membrane anchors: the tale of
a tail. Biocllern. Soc. Trans. 20:243-256, 1992.
Moran, P.; Caras, I. Proteins containing an uncleaved
signal for glycopohspohatidylinositol membrane an-
chor attachment are retained in a post-ER compart-
ment.}. Cell BioI. 119:763-772, 1992.
37. Bishop, W.R.; Bell, R.M. Assembly of phospholipids into
cellular membranes: biosynthesis, transmembrane
movement, and intracelluJar translocation. Armu.
Rev. Cell BioI. 4:579-610,1988.
Davidowicz, E.a. Dynamics of membrane lipid metabo-
lism and turnover.Allllu. Rev. Biocllem. 56:43-61, 1987.
van Meer, G. Transport and sorting of membrane lip-
pids. Curro Opin. Cell Bioi. 5:661674,1993.
38. Dawidowicz. E.A. Lipid exchange: transmembrane mo-
vement, spontaneous movement, and protein-me-
diated transfer of lipids and cholesterol. Curro Top.
Memb. Tra1lsp. 29:175-202, 1987.
Dowhan, W. Phospohlipid-transfer proteins. Curro
Opin. Cell BioI. 3:621625,1991.
Pagano. R.E. Lipid traffic in eukaryotic cells: mecha-
nisms for intracellular transport and organelle-speci-
fic enrichment of lipids. Curro Opin. Cell Bioi. 2:652-
663, 1990.
639
Trmco vesicular
mediante las rutas
secretora y endocitica

Todas las ~Iulas han de comunicarse con su entomo. En una c~lula procariota
esta comunicaci6n tiene lugar a traves de su membrana plasm<ttica: asf, por
ejemplo, las enzimas digestivas son secrctadas hacia el exterior ceJular y los pc-
quenos metaboLitos generados por 1a digesti6n son captados por proteinas de
transpone presentes en la membrana plasmatica Por el comrario, las c~lulas cuca mOSOl
riatas han adquirido un elaborado sistema membranoso interno que les permile
captar las macromol~ulas por un proceso denominado endocitosis, y ponerlas
NUClEO PEROX/SOMA
en contacto con enzimas digestivas que se almacenan intracelularmente en los Ii-
SOSOffias; como consecuencia de ello, a medida que se van produciendo, los me- MrTOCONORlA PlAsnoos
tabolitos de la digesti6n van saliendo de los lisosomas directamentc hacia el dta-
sol. Ademas de proporcionar un sistema de regulaci6n de la digesti6n de las RE'T1cUlO ENDOPLASMAnco
macromol~ulas mediante la vfa endocfrica, el sistema membranoso interno per-
mite que las c~lulas eucariotas puedan regular Ja Iiberaci6n al exterior de las pro
tefnas y glucidos acabados de sintetizar. Todas las mol~ulas que viajan a 10 largo
de eSla vfa biosinu!tica y secretora pasan por numerosos companimiemos, por 10 lIS0S0MA
que la celuJa puede modificar esta molecula en varios pasos controlados, almace-
ENOOSOMA
narla hasta que se necesile, y entonces descargarla en un dominio de la superficie
celular determinado mediante un proceso Hamado exocitosis. En la Figura 13-1 se
muestran las rutas endochica y la biosinletica-secretora. SUPERFICIE CElULAR

CITOSOl Figura 131 las rotas secretora y

endodtlca. En este ~mapa de
carreteras~ sobre el tTifico de las
proternas biosintetizadas. que fue
inuoducido en el Capftulo 12,
aparecen coloreadas tanto la rula
secretora como la endocftica.

GEMACIQN

Figura 13-2 Tmnsporteveslcular.las

vesfculas de transporte emergen por
gcmaci6n de un compartimienlo Yse
fusionan con olro.

641
 lisosome
Figura 133 Loscompartlmlentos
lntracelulares de una c~luJa eucariota

membrana nuclear
O =G-- endosome lmpllcados en la nita bloslntelJca-
secretora y en la vfa endodlJca. Cada
compartimiento Iimita un espacio que
es topo16gicamentc equivalcntc al
reticula endoplasm'tlco 0 I exterior de la c~lula. Un lumen
/ 0/ o
endosome
temprano cualquiera se comunica con otro
cualquiera mediante vesiculas de
transporte. En la TUta biosintetica-
secretora (flec1Jas rojas) las proleInas
son transportadas desde el ER a la
membrana plasm:Hica 0 (vfa
endosomas tardfos) a los lisosomas. En
la TUta endocftica (J1echas verdes) las
o ~ e'TOSOL
moJeculas son ingeridas mediante
vesiculas fonnadas a partir de la
membrana plasmatica, conducidas a
'------'"-------'

red del dictio-

L'=:;-'
red del
--@_ los endosomas tempranos y, vfa
cis 80ma trans vesicula endosomas lardios, a los Iisosomas.
Goigi Goigi SlICretora Muchas moJeculas endocitadas son
recuperadas de los endosomas
complejo de Goigi
tempranos y retornadas a la superficie
celular para ser reutilizadas; de forma
similar, algunas mol~culas son
Ellumen de carla uno de los compartimientos que participan en la rula bio recuperadas de los endosomas tardIos
sint~ticasecretoray en la endocftica es topol6gicamente equivaleme al exterior ydevueltas al complejo de Golgi, y
de la celula. Ademas, lodos los compartimienlos estan en cOffilUlicaci6n perma- algunas son recuperadas del Golgi y
nente entre sf, por 10 menos mediante las numerosas vesiculas de transporte que devueltas al ER. Todas eSlas TUtas de
continuamente emergen por gemaci6n de una membrana y se fusionan con otta recuperaci6n se muestran can las
(Figura 132). EJ traftco esta altamente organizado: la via biosintthica-secretora va jlechas llZllles.
hacia afuera desde el ER a1 complejo de Golgi y a la superficie celular. con una
ruta lateral que va a los lisosomas; por otro lado, la fa endocftica va bacia aden-
tro, desde la membrana plasmatica a los endosomas y lisosomas (Figura 13-3).
Para poder realizar su funci6n, cada vesfcula de transporte que emerge de
un compartimiento ha de IOmar s610 las protefnas apropiadas y unicamente ha
de fusionarse con la membrana diana apropiada. Asi, por ejemplo, una vesicula
que va del complejo de Golgi a la membrana plasmatica no puede lIevarse prolef-
nas que deben residir en el complejo' de Golgi, y s610 ha de fusionarse con la
membrana plasmatica y no con olros organulos. Asimismo, a pesar de participar
en eSle Dujo constante de componentes de membrana, cada organulo ha de
mantener su propia identidad diferencial. En este capitulo consideraremos la
funci6n del complejo de Golgi, de los Iisosomas, de las vesiculas de secreci6n y
de los endosomas, y veremos las vfas par las cuales estos organulos estan inter-
conectados. En la parte final consideraremos los mecanismos moleculares de la
y
gemaci6n fusi6n que se dan en todo transpone vesicular, y discutiremos el CITOSOL

problema fundamental de c6mo, a pesar de este transporte, se mantienen las di 4

1 Il
ferencias en los compartimientos. I NUCLEO PEROXISOMA

I MITQCONDRIA pLASTIDOS
Transporte desde el ER al complejo de Goigi I
RETlcULO ENOOPLASMATIC
Como ya hemos vista en cl Capitulo 12, las protefnas sintetizadas de novo entran .&
en la ruta biosintthica-secrelOra cuando atraviesan la membrana del ER desde cl GOLGI I
citosol. EI transporte posterior, desde el ER al complejo de Goigi y desde este a la
superficie celular 0 a cualquier otro sitio, tiene lugar a traves de vesiculas. Estas
vesiculas transfieren las protefnas de una membrana a otra 0 de un lumen a
L1S0S0MA

ENDOSOMA
r Ilbt vEsrcuLA~sl
SECRETORAS

otro, mediante ciclos de gemaci6n y fusi6n (vease Figura 12-7). La via que va
desde el ER, pasando por el complejo de Golgi, hasta la superficie celular se lla- H
ma a menudo via por deJecta ya que parece que las proteinas no necesitan pre- SUPERFICIE CELULAR I

642 Capitulo 13 : Tranco vesicular mediante las rutas secretora yendodtica

sentar detenninadas sei'iales para seguirla: cualquier protefna que entre en el ER
(y se pliegue y se forme correctamente) seni transportada automaticamente a
lraves del complejo de Goigi hacia la superficie celular, a menos que contenga
sei'iales que 0 bien la detengan en algUn compartimiento de la ruta a bien la des-
vien, pasando por el complejo de Golgi, hacia los lisosomas 0 las vesfculas de se-
crcci6n.
En esta secci6n vamos a centramos en el complejo de Golgl, que es un im-
portante punta de sfntesis g1ucfdica y un lugar de c1asificaci6n y distribuci6n de
los productos del ER. Muchos de los polisaco1ridos celulares son sintetizados en
el complejo de Golgi, entre eUos la pcctina y la hemicelulosa de la pared celular
de las plantas y la mayorfa de los g1ucosaminoglucanos de la matriz extracelular
de las c~luJas animales (v~ase Capftulo 19). Pero el complejo de Golgi lambi~n
constituye una zona de paso de los productos del ER, de manera que una gran
parte de los g1ucidos que fabrica el Golgi se unen como cadcnas de oligosacAri-
dos a las protefnas y Ifpidos que el ER Ie cnvfa. Algunos oligosacaridos actuan
como sei'iales que dirigen dcterminadas protefnas hacia vesfculas que las envia- Figura 134 El complejo de GolgL
ro1n a los Iisosomas; Olras prQ(emas y Upidos, una vez adquiridos los oligosacAri- W Dibujo tridimensional del complejo
dos apropiados en el complejo de Golgi, son distribuidas mediante vesfculas de de Golgi, a partir de micrografras de
transporte a otras partes de la c~lula. una ~Iula se<:retora animal.
(8) E1ectronmlcrograrra de un
complejo de Golgi de una ctlula
EI complejo de Goigi estli formado por una serie de vegetal (del alga verde
compartimientos ordenados% Chlam}'lomonasJ, visto en seccl6n
EI complejo de Golgi se localiza normalmente cerca del nuclen celular, y en una transversal. se pueden observar dos
c~lula animal a menudo est<1 cerca del cenrrosoma, 0 centro celillar. Est<1 farma- dictiosomas. Generalmentc, en las
celulas vegetales el complejo de Golgi
do por una serie de cisternas Limitadas por una membrana y de forma aplanada
es mb diferenclado y esta mas
que se parecen a un mont6n de platos. Normalmente estes dlctlosomas del GoI-
c1aramente separado de los OlTOS
gI preseman emre cuatro y seis cisl'emas (Figura 134). EI mimero de dictioso- sistemas membranosos intracelulares
mas del Goigi por c~lula varia enormemente en funci6n del tipo celuJar: algunas que en las c~lulas animales. (A, a panir
c~lulas animales tienen un gran dictiosoma, mientras que ciertas c~lulas vegeta- deA. Rambourge Y. C1ennont, Eur.J.
les presentan cientos de dictiosomas muy pequei'ios. Cell BioL 51;189-200, 1990; B, por
Multitud de pequefias vesfculas se hallan asociadas a los dictiosomas del conesfa de George Palade.)
Golgi, agrupadas en la cara contigua al ER y a 10 largo de los anillos dilatados de
cada cisterna (v6asc Figura 13-4). Se cree que estas ves{culas del Colgi son vesf-
culas de transporte de protefnas y de Upidos hacia y desde el Golgi y entre las
cistemas del Golgi. Durante su paso a traves del complejo de Golgi, las molecu-
las transportadas suf'ren una serie de modificaciones covaJentes ordenadas.

e.r. e4

Y'
"d
del cia
Go'<l'

cistern.
[
cis
eiltem.
_1M
cisterM
'r..n,

red del
~
GoIg> [ veskul.. de
MereeKm

lAl e.rl InIns ,.,

Transporte desde el ER aI complejo de Golgt 643
 Flgun. 13-5 Cilula caUclforme del Intestino delgado. Esla dlula esta MeteeiOn de muc:u Ir...e,
especializada en la sec.rec.i6n de mucus. una mezda de g1ucoproteinas y de la $Uperftele .p;eal
de proteogiucanos sintetizados en el ER y en el complejo de Golgi. El
complejo de Golgi esta altamente polarizado, 10 cuaJ facllita la descarga
del mucus mediante exocitosis en la superficie apical de la cll!lula. (De
R.V.Krst~, Uustrated Encyclopedia of Human Histology. New York.:
Springer-Verlag, 1984.)

Los dicliosomas del Goigi tienen dos caras diSlinlas: una cara cis (0 cara de
vesfculll
entrada) y una cara trans (0 cara de salida). Ambas caras eSlan. conectadas a con mucus
unos companimiemos especiales, (ormados por una red de eslTUcturas tubula 4

res y cisternas, que son, respectivameme, la red del cis Golgi ({ambi~n llamada
compartimienro imermediario 0 de salvamento) y la red del trans Golgi. Las
protemas y Ifpidos entran por la red del cis Golgi en vesfculas de lranspone que
provienen del ER y salen por la red del trans Golgi en vesfculas de transporte con
destino a la superficie celular 0 a otro compartimiemo. Se cree que ambas redes
complejo~_~
son importantes en la c1asificaci6n de las protefnas: las protefnas que entran en de Golgi
la red cis pueden seguir a trav~s del Goigi 0 bien volver al ER; las proteinas que
salen de la red trans estl1n c1asificadas segUn su destino sea los lisosomas, las ve-
sfculas de secreci6n 0 la superficie celular.
EI complejo de Golgi es prominenle en las relulas que eslcrn especializadas
en la secreci6n, tales como las relulas caJiciformes del epilelio intestinal, las cua-
les secrelan al intestino grandes cantidades de maco rico en polisacl1ridos. En
c~lulas de este tipo, se forman grandes vesiculas a partir de la cara traIlS del
complejo de Golgi, el cual se encara hacia el dominio de la membrana plasmati-
ca por el qu~ tiene lugar la secreci6n (Figura 13-5).

Las prote(nas residentes en el ER son selectivamente recuperadas

de la red del cis Golgl'
Las vesfculas destinadas aI complejo de Golgi emergen desde regiones especiati-
zadas del ER lIamadas elementos translclonales, cuya membrana no ceoe ribo-
somas adheridos y se encuentra a menudo entre el ER rugoso y el complejo de 10",m
Golgi (Figura 13-6). Se cree que eslas vesfculas no son selectivas. Transponan
cualquier proteina desde el ER al complejo de Golgi, aunque puede haber senales
que favorezcan este proceso. No obstante, existe un requerimiento esencial para
que una proteina salga del ER: ha de estar correctamente plegada y formada. Las
protefnas que no tienen la conformaci6n correcta 0 que estl1n incompletas son
retenidas, 0 bien unidas a la protefna de uni6n especial HiP (discutido en el Capi-
tulo 12) 0 bien formando agregados que no pueden ser empaquelados, y final-

membf.na Figura 13-6 Electronmkrografiade

n...elee. los elementos transkionaletll y de la
ER rugose red del cis Goigi. De los elementos
transicionaJes del ER emergen
vesfculas de transporte por gemaci6n;
estos elementos transicionales estan
elemenlo. casi completamente libres de
transicion.l" ribosomas y se fuslonan can 18 red del
cis Golgi, trans6r1endo asf protemas y
red del
lfpidos acabados de sintetizar desde el
cis Go"'l
ER hasla el complejo de Golgi. (Por
cortesia de Brij J. Gupta.)

644 Capitulo 13: TrlUlco vesicular mediante las rutas secretora y endodUca
 Figura J 3-7 Meam.lsmo utlllzado
para retenee lu protemll5 resldft1tes
en eI ER. Las prolefnas residenles en el
ER que se escapan haem la red del cis
Golgi son devueJtas aI ER medianle
recttpl:or transpone vesicular. Un receptor de
proteic:o membrana en la red cis Golgi captura
rllsldllnte las prolefnas y las conduce, en
lin illER
vesfculas de transpone, hacia el ER.
Las condiciones i6nicas presenle5 en
el ER separan las protefnas de su
protlllnll
resldllntll ~-.I._ receptor, de forma que el receptor
lin illER regresa a la red del cis Golgi para ser
reutilizado. Se han enconlrado
tambi~n receptores que reconocen la
~''"==--''
red del dietiosom. ~,=~
red d.,
sella! de relenci6n en ER en las
cis tre". cistemas cis. medial y trans del Golgi.
Goigi GoIgI De esta manera, la recuperaci6n de
protefnas del ER empieza en la red del
cis Golgi, peeo la ruta de retorno
tambi~n funciona en las clsternas mAs
menle son degradadas en el propio ER. AsI pues, la salida desde el ER puede ser
trans del Golgi. En ellumen del ER se
considerada como un control de calidad: si la prote(na no se pliega 0 no se forma producen Inleracciones enlte las
correctamente, es descartada. De hecho, el ER parece que es uno de los prindpa- prolefnas resldentes en el ER, que
les lugares de la ce:lula donde se degradan protemas (los otros son los lisosomas, ayudan a su relenci6n. Estas
como veremos mAs adelante, y el dtosol, como vimos en el CapItulo 5). interacclones retardan la salida de las
Las proteInas que estAn bien plegadas no necesitan ninguna sei'ial especffica protefnas del ER en relaci6n con las
para que sean transportadas fuera del ER, pero aqueUas que, como la prOlefna protefnas que han de ser secreladas
SiP, se encuentran en el lumen del ER necesitan una sei'ial para quedarse en e:l. (prOlefnas de secreci6n). En
Esta retenci6n de las protefnas solubles residentes en el ER estA mediada por una experimentos en los que se ha
sei'lal de c1asificaci6n constituida por una corta secuencia, de cuatro aminoAci eliminado la sei'tal de relenci6n de Eft
dos: KDEL (lys-Asp-Glu-Leu) u otta similar (ve:ase Tabla 12-3). Si, por ejemplo, de la prolema BiP, se observa c6mo la
mediante ingenierfa gene:tica se elimina esta senal de retenci6n en ER de la protef- BiP abandona eJ ER Yes secretada por
las cBuJas: ahora bien, su saijda del ER
na BiP, se observa romo esta prote(na es secretada al exterior de la ce:lula; y si la
tiene lugar mas lenlamenle que las
seoal se transfiere a una protefna que normalmente es secretada, ahora queda re- prolefnas de secreci6n bonafide, 10
tenida en el ER. Esta senal de retenci6n no consisre en un anclaje de las prolefnas cual indica que BiP es parcialmenle
residenles en ellumen del ER sino en una recuperaci6n selectiva despue:s de que relenida en el ER mediante
hayan sido transportadas en vesfculas y descargadas en la red del cis Golgi. En la interacciones d~biles con otras
red del cis Golgi, un receptor de membrana especffico une a todas las protefnas prolcfnas.
que presenran la sei'ial de retenciOn en ER y las empaqueta en vesfculas de trans-
pone especiales que las devuelve al ER. As! pues, para estas protefnas residentes
el ER es como una prisiOn abierta: no hay nada que implda que salgan, pero si 10
hacen, son transponadas de nuevo aI interior del ER (Figura 13-7).

Las protefnas del Golgi vuelven al ER cuando las c~lulas

se tratan con la droga brefeldina A4
EI continuo retorno de las protefnas residentes en el ER desde la red del cis Golgi
implica que el transporte entre estos dos orgAnulos tiene lugar en ambas direc
ciones. Como ya se menciona en el pie de la Figura 13-7, los receptores que reco-
nacen la seftal de retenci6n en ER se encuentran tambie:n en los compartimien-
tos mts trans del Golgi, de manera que quizA existe una ruta de retorno desde
ellos al ER. La importancia de esta ruta de retorno se ilustra muy bien usando la
droga brefeldlna A, la cual bloquea la secreciOn de protefnas ya que desorganiza
el complejo de Gotgi. En ce:lulas tratadas con brefeldina A, el complejo de Golgi
desaparece y sus proteInas se acaban encontrando en el ER, donde se mezclan
con las propias del ER. Cuando se elimina la droga, el complejo de Golgi se vuelve
a organizar y sus protemas retoman a sus companimientos (Figura 13-8).
Para explicar estas observadones, se ha propuesto que la brefeldina A blo-
quea el transpone hacia delante -desde el ER aI complejo de Golgi- sin afecfar

Transporte desde el ER aI complejo de Golgi 645

 compleio de Golgi ER Figura 13-8 Electronmlcrografl'as
que muestran el efecto del
tralamlenlo can brereldlna Asobre el
complejo de Goigt. Una tinci6n
histoquImica pennile ver la
locaIizaci6n de una enzima del Golgi
(una manosidasal anles (AI y dos boras
despue. (B) del tralamiento con
brereldina Asabre fibroblaslos en
cullivo. N6tcse que despues del
tratamiento, la enzima pasa de las
cislemas cis y medial del Goigi aI ER Y
a la membrana nuclear, que es
continua con el ER. (Por cortesfa de
Jennifer Uppmcott-S<:hwartz y Lydia
Yuan.)

al transporte de retorno -desde el Goigi al ER (Figura 13-9). En este sentido, la

droga provocarfa que las protefnas del complejo de Goigi se vaciasen al ER me-
diante la ruta de retorno y, cuando la droga desapareciese,la via hacia delante se
encargarfa de devolver las protefnas del Golgi a sus companimientos.

En el complejo de Golgi se procesan las cadenas de oligosacaridoS

Como se ha descrito en el Capitulo 12, en el ER se af\ade un mismo tipo de N
oUgosawldo a muchas prote[nas diferentes, y este oligosacarido sc modifica
profundamente mientras las prote{nas todavfa estan en el ER. En el complejo de
Golgi se producen modificaciones posteriores, dependiendo de la protema. EI
resultado es que en las g1ucoprotefnas de mamffero se encuemran dos grandes
tipos de N-oligosacliridos, los oligosacdridos complejos y los oligosacdridos ricos
ell marlosa. Algunas veces ambos tipos de oligosacaridos estan unidos (en luga-
res diferentes) a la misma cadena polipeptfdica. Los oligosacWidos ricos en rna-
nosa no presentan azucares que hayan sido aftadidos en el complejo de Golgi.
5610 contienen dos N-acetilglucosaminas y muchos residuos de manosa. cuyo
numero a menudo se acerca al numero de residuos que se haUan presentes en el
precursor del oligosaclirido original unido a Upido, del ER. Por el contrario, los
oUgosac4ridos complejos pueden tener mas de las dos moleculas de N-acelil- Figura 139 Ruta de retorno
g1ucosamjna originales y tambien pueden presentar un numero variable de ga- propuesta que va desde e1 complejo
de Golgt at ER. Mientras que la rula
hacia delante precisa de vesrcu1as de
lransporte y tiene lugar
RUTA HAClA DELANTE independienlemenle de los
lbloqulII&d1l por
III brlllfllldlnll A) mlcronlbulos, se cree que la rota de
retorno preclsa de unos tubuJos
membranosos que emergen del
complejo de Golgi hacia e1 ER
siguiendo los microlubuJos (los cuales
ER son fragmentados por drogas como el
/ "",,'''' red del nocodazol). Como ya hemos dicho
f'lln,
Golgi alllcrionnente, la brefeldina Aevita la
uni6n de las cubiertas que son
necesarias para la gemaci6n de las
vesfcu1as de transporte, de manera que
bloquea los pasos del transporte
vesicular hacia dclante y mantiene
intacto el proceso de transporte hacta
RUTA DE RETORNO atr~s, dependienle de lubulos de
(bloquIII8dII por 1111 nocodlllOIi membrana.

646 CapUulo 13: TnUico veslcuJar mediante las rutas secretora yendocftica
 Rgura13-10 EJemplosdelasdos
,, clues prlndpales de ollgosadrldos

...H
,H

X
unldos a asparagina
(N-ollgosac4ridos) enconlrados en
g1ucoprotefn811 maduras. En {BJ se
mueSlra un oligosacdrido complejo y

'"'., en (C) un oligosacdrido rico en

manosa. Todo oligosaclrido complejo
lAl co
,, ,., conSla de una region central (en color
en A) que deriva del N-oligosaclrido
original aftadido en el ER y que consla
CLAVE
de forma caracteristica de dos
o. II/-acelilglucosamina IGlcNAcI N.acelilglucosaminas (GIcNAc) y lres
manosas (Man). Adem4$, exiSle una
manou IManl
region tennirwl que contiene un
galactON IGall numero variable de unidades de
ijJ. (6cido I;'I;CO, 0 NANA)
kido l\Iecetilneur.mfnico ICI
trisacaridos (Nacetilglucosamina-
galaclOsa-acido siaJico) unidas al
nucleo de manosas. Frecuentemenle
la regi6n tenninal esta truncada y
conliene 5610 GIcNAc y galactosa (Gal)
05610 GIcNAc. Nonnalmenle se puede
lactosas y de residuos de <icido sililico, y en algunos casos, de fucosa. 8 <icido afladir un residuo de fucosa at nucleo
sil1lico tiene una imponancia especial porque es el unico residua de az(icar de de GIcNAc unido a la asparagina (Asn).
las glucoprOlefnas con una carga negativa neta (Figura 13-10). AIr pues, aunque las elapas de
Los oligosacaridos complejos se generan mediante una combinaci6n de procesamienlo Yposlerior adici6n de
modificaciones posleriores del oligosaclirido original, anadido en el ER, y por la azucares estan ordenadas
adici6n de nuevas azucares. EI hecho de que un determinado oligosacarido se eslrietamenle, los oLigosacaridos
mantenga rico en ffianosa 0 sea procesado viene determinado fundamental- complejos pueden ser helerogeneos:
mente IXlr su configuraci6n sobre la prolefna a la cual se halla unida: si el oligo- por ejemplo, mientras que el
saurido es estericamente accesible a las enzimas procesadoras del Golgi. es pro- oligosacMido complejo que se muestra
bable que se convierta en una forma compleja; si es inaccesible a eUas, es en la figura liene Ires ramas
terminales, lambit'!n es habitual
probable que se mantenga como una forma rica en manosa. E1 proceso que ge-
encontrar oligosacaridos con dos 0
nera cadenas de oLigosac<tridos compJejos sigue la v{a allamente ordenada que
con cuatro ramas, en fUllci6n de la
se mueslra en las Figuras 13-11 y 13-12. glucoproleina de que se trale y de la
ct'!lula en la que se fabrique_ Tambi~n
las cisternas del Goigi estan organizadas en forma de series se encuenlran oligosacaridos
hibridos~ con una rama de Man y Olra
secuenciales de compartimientos de procesamientofi
de GIcNAc-Gal. Los tres aminoacldos
Las proleinas exportadas desde el ER entran aJ primero de los compartimienlos que en eSla figura se presenlan en
del Goigi (el compartlmlento cis), que se cree que es continuo con la red del cis color conslituyen la secuencia
Golgi; luego se desplazan al siguiente compartimiento (el compartlmlento m~ reconocida por la enzima oligosacaril
dial, fonnado por la cislerna central del dictiosomaJ, y fmalmente se desplazan transferasa que anade el oligosaclrido
al compartlm.lento trans, donde se complela la g1ucosilaci6n. Se cree que ellu- iniclal a la prolefna. Abreviaturas: Ser =
men del compartimienlo trails continua con la red del trans Golgi, donde las serina; 11tr = lreonina; X = cualquier
aminoacldo.
prote{nas se segregan en diferemes vesiculas de transporte y se Iiberan a sus
dCSlinos finales -Ia membrana plasmatica, los lisosomas, 0 las vesiculas de se-
creci6n.
Estas rulas de procesamjenlo de oligosacAridos lienen lugar seglin una se
cuencia ordenada en el dictiosoma, en el que cada cisterna contiene sus propias
enzimas. Las protefnas se madifican a trav~ de sucesivas etapas a medida que
van de cistema en cislerna a traves del dietiosoma, de fonna que las cistemas
constituyen una unidad de procesamienlo multiple. Esta companimemaci6n
podrfa parecer innecesaria, ya que cada cnzima s610 aClua sobre su glucoprotef
na despu~s de que haya sido convenientemenle procesada por la enzima anle
rior. Sin embargo, parece claro que el procesamiento tiene lugar lanlO en una
secuencia espacial como en una secuencia bioqufmica: asf, las enzimas que ca-
talizan las primeras etapas se localizan en las cislemas mas cis del dictiosoma,
mientras que las que cata1izan las wtimas etapas se encuenlran en las cisternas
mAs trans.

Transporte desde el ER at complejo de Golgf 647

 ,,

..
glucosidasa I

manosldasa II
manosida5a I N-acetllglucosamina del Golgi
glucosldasa II del Goigi
' '
ma.nosidasa dal ER transferasa I

se obtiene el

l!I"A"'
,, "'r oligosacllrido
completo al
atladir dos
GlcNAc,
tres Gal
ytres NANA

I
Oel pr6ximo
se afiade aqu!
,.,.-~

CLAVE: 0 .. N-acetilglucosamina (GlcNAcl . . . mano5alMan! . . . glucosa lGlcl

Figura] 3-1] Procesamlenlo de los ollgosacliridos en el ER y en el complejo de Golgi. EI proceso es altamente

ordenado, de forma que cada uno de los pasos depende de las reacciones anteriores de cada serle. EI procesamiento
comienza en el ER con la eliminacl6n de los residuos de glucosa del oligosacarido inicialmente transferido a la prote[na.
A continuaci6n, una manosidasa de la membrana del ER elimina un determinado residuo de manOS8. En los dictiosomas
del GoIgi, la manosidasa I elimina tres residuos mas de manosa y la N-acetilglucosamina transferasa I afiade un residuo
de GIcNAc, 10 cual permite que la manosidasa II elimine dos residuos mas de manosa. As!, se obtlene el nucleo final de
tres residuos de manosa que se presenta en un oligosacarido complejo. En este estadio, el enlace que existe entre los dos
residuos de GIcNAc del nucleo del oligosacarido se vuelve resistente al ataque de una endoglucosidasa altamente
espec[fica (Endo-H). Todas las estructuras posleriores son resistentes a Endo-H, por 10 que se utiliza el tralamiento con
esta enzima para distinguir los complejos de oligosacaridos ricos en manosa. Por ultimo, como se muestra en la Figura
13-10, se afiaden residuos de GlcNAc, de galactosa y de acido sialico. Algunos oligosacaridos pueden escaparse del
procesamiemo del complejo de Golgi, mientras que Olros seguiran el proceso que se muestra, con algunas variantes. La
complejidad del proceso depeode del tipo de prolefna y de la localizaci6n en la protefna del residuo de asparagina al que
se halla unido el oligosacarido.

UDP-GlcNAc UDP-Gal CMP-NANA Flgura1312 Elapasftnalesenla

sfntesls de un oligosacl1rldo complejo. La
adici6n progresiva de residuos de azucar
se produce en los companimientos de las
cistemas del complejo de Golgi. Tres
tipos de enzimas glucosil transferasa
acnlan de forma secuencial, uti1izando
como substrato azucares que han sido
activados mediante su uni6n a
determinados nucle6tidos (los que se
indican en la figural. Las membranas de
las cisternas del Golgi conlienen
glucoprotelrla protefnas transponadoras
transmembrana especfficas que permiten
a cada azucar-nucle6tido eotrar por
intercambio con su producto nucle6tido
monofosfato. que es liberado despues de
que el azucar se una a la protefna en la
cara luminal (no se muestra). En la pane
superior de la figura se muestra la
estruclura de los compuestos azucar-

- - -
rlucla6sido
difosfatasa
nucle6tido UDP-N-acetilglucosamlna,
UDP-galacrosa y CMP-N-acido
acetilneuramCnico.

648 Capftulo 13: Tratico vesicular mediante las rulas secretora y endodtlca
 Figura 1~13 Contnlstado hlstoqu(mlco que demuestnl que el complejo de
Golgt esul bloqu&nlcamente poJartzado. La serle de electTonmicrograffas
muestra e1 complejo de Golgi sin contTastar (A), contrastado con osmio (B), el
cua] es reducido preferentemenle por las cisternas del companimienw cis, y
contrastado revel.ando la localizaci6n de una enzima especffica (e y OJ. La
enzima nucle6sido difosfatasa (v~ase Figura 1312) Sf! haUa en las cisternas
del transGolgi (C), mienl.nlS que la enzima fosfatasa 'cida marca la red del
trails Golgi (D). (Por conesfa de Daniel S. Friend.)

Se cree que el transporte de protefnas entre las diferentes cisternas del Golgi
tiene lugar mediante vesiculas de transporte, las cuales surgen por gemaci6n de
una cisterna y se fusionan con la siguienre. Se supone que las vesiculas que se
desplazan entre las cisternas del Golgi no selecciollan la carga, como ya sucedfa
con las que viajan desde el ER al complejo de Golgi. AsI, cualquier protefna solu-
ble 0 de membrana que no sea considerada residente puede entrar en las vesicu-
las de transporte y desplazarse a trav~s de la ruta biosint~tica-secretoradesde la
cisterna cis a la trans pasando por la medial. Casi todo 10 que sabemos sobre el
mecanismo molecular del transpone vesicular fue descrito originalmeme utili-
zando sistemas in vitro para medir el transporte proteico entre las cisternas del
Golgi (vease Panel 13-1, pags. 682-663). Los electronmicroscopistas han visto pe-
quenos nibulos membranosos que parecen interconectar algunos dictiosomas,
y es posible que a trav~ de eslas estruclUras tenga lugar alglin tipo de transfe-
rencia de material desde una cisterna a la siguiente.
Las diferencias funcionales entre las subdivisiones cis, medial y traIlS del com-
plejo de Golgi fueron descubiertas mediante la localizaci6n, lanlO por fracciona-
miento fisico del organulo como por eleclTonmicroscopia marcando con anlicuer-
pas las enzimas implicadas en el procesamiento de los N-oligosacaridos en
distintas regiones del organulo. Por ejemplo, se encontr6 que la separaci6n de los
residuos de manosa y la adici6n de N-acetilglucosamina tenfa lugar en el compar-
limiento medial, mientras que la adici6n de galaetosa y de acido siAlico ocurrfa en
el companimiento trans y en la red del trans Golgi (Figura 13-13). La comparti-
mentaci6n funcional del complejo de Golgi esta resumida en la Figura 13-14.

Los proleoglucanos son ensarnblados en el complejo de GoIgF

No s610 son las cadenas de N-oligosacArido de las protefnas las que son alteradas a
medida que las prolefnas pasan a traves de las cislernas del GoIgi, en su camino
desde el ER a sus deslinos finales; muchas prolefnas lambicn son modificadas de
olras fonnas. Por ejemplo, algunas prolefnas tienen azucares afiadidos a los grupos
OH de las cadenas laterales de determinadas serinas 0 (reoninas. Como el creci-
miento de las cadenas de N-oligosac<1ridos, esta O-g1ucosllacltSn esta calalizada
por series de enzimas glucosillransferasas que utilizan compuestos azucar-nucle6-
tide en ellumen del Golgi para anadir residuos de azlicar, uno a uno, a una prolef-
na. Habirualmente primero se anade la N-acetilgalactosamina, y a continuaci6n un
numero variable (desde unes pocos a 100 mas) de reslduos de amcar.
De tOOas las protefnas glucosiladas, las que 10 estan mas son algunas prate(-
'las nucleares de proteogluamos, las cuales son modificadas en el complejo de
Golgi produciendo proteoglucanos. Tal como se explica en el Capflulo 19, esto
implica la polimerizaci6n de una 0 mas cadenas de glucosaminog/uCQtlo (largos
polfmeros no ramificados compueslos por unidades repetidas de disac<1ridosl
vfa una uni6n a xilosa en las serinas de las protefnas nucleares. Muchos prOleo-
glucanos son secrelados y pasan a ser componentes de la matriz extracelular,
mientras que otros permanecen anclados a la membrana plasmalica. DtTOS
constituyen el componente principal de substancias como el moco que es secre-
tado formando una cubierta protectora sobre muchos epitelios.
Los azt1cares incorporados a los g1ucosaminoglucanos son altamente sulfata-
dos inmediatamente despues de que los polfmeros se hayan fonnado en el com-
plejo de Golgi, 10 cual ayuda a dar la elevada carga negativa que presentan los pro-

Transporte desde el ER a1 complejo de Golgi 649

 Figura 13-14 Compartimentacl6n
runclonal del complejo de Goigl. La
localizaci6n de cada una de las etapas
de procesamiento que se muestran en
la figura ha sido determinada por
medio de la combinaci6n de tecnicas,
cnlre las que se encuenlran el
subfraccionamienlo de las membranas
del complejo de Goigi y la
eleclronmicroscopia tras la linci6n con
anlicuerpos especfficos contra a1gunas
de las enzimas espedficas de
procesamienlo. La localizaci6n de
muchas 011'35 reacciones de
procesa.miento todavfa no ha side
detenninada. A pesar de que 5610 se ha
podido demost1'3r la existencia de lrCS
compartimiemos de cistemas. a veces
cada uno de eUos esta rormado per un
grupa de dos 0 mas cistemas
secuenciales, y es pesible que haya
subdivisiones aun per descubrir.
Tambien podrla ser que hubiese 5610
Ires compartimientos funcionalmente
disdlltos y que las cistemas extra
reprcsentascn mt11tiples copias de uno
de las Ires unidades funcionales. No
obstante. no esta claro si cada enzima
esta restringida a una cisterna
conereta 0 si su distribuci6n varia a 10
largo del dictiosoma -de mane1'3 que
teoglucanos. Algunos residuos de tirosina tambien son sulfatados en eSle estadio. las enzimas que aetlian primero estan
En ambos casos la sulfataci6n depende de un dador de sulfato (3'-fosfoadenosina- presenles mayoritariamente en las
5'-fosfosulfato,o PAPS, de 3'-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate), que es trans- cisternas cis del Golgi, mientras que las
que aCllian mas larde eSlan sobretodo
portado desde el dtosol a1lumen del compartimiento tram del Golgi,
en las cistemas traIlS del Golgi.

Los carbohidratos de las membranas celulares se encuentran

en la cara de la membrana que es topol6gice.mente equivalente
at exterior de la celula8
Dado que lodos los oligosacliridos son incorporados en cl lade luminal del ER y
del complejo dc Golgi, 13 distribuci6n de carbohidratos en las protefnas de
membrana y en los Ifpidos es asimetriea. Tal como ocurre con la asimctrfa de la
bicapa lipfdica, la orientaei6n asimetrica de estas moleculas glueosiladas se
mantiene durante su transporte a la membrana plasmlitica, a las vesfeulas de
secreci6n, 0 a los Iisosomas. Por 10 tanto, los oligosacaridos de todas las glueo-
protefnas y glucolfpidos de las membranas intraeelulares correspondientes se
encucntran encarados hada el lade luminal, mientras que en la membrana
plasmatica se encuentran encarados hada el exterior de la celula (Figura 13-15),

iCual es el prop6sito de la glucosilaci6n?9

&iste una diferencia imponantc entre la construcd6n de un oligosacarido y la
sintesis de ouas macromoleculas como el DNA, el RNA 0 las protefnas, Mientras
que los <iddos nucleicos y las protefnas son copiados de un molde a traves de una
serie repetida de pasos identicos y utilizando Ja(s) misma(s) enzima(s). los car-
bohidratos complejos requieren una enzima diferente en cada paso. de fonna
que cada producto de una reacd6n es reconocido como el substrato exclusivo
por la siguiente enzima de la serie. Dado 10 complicadas que son las vfas que han
tenido que evolucionar para sintetizar estos oligosac3ridos, parece probable que

650 Caprtulo 13 : TnUico vesicular mediante las rutns secretora yendodtica

 Figura 1315 Los azucares de las
glucoprotefnas de membrana y de los
gll.lcoJipldos estan orlentados hacla
afuera del choso!. La orientaci6n que
liene una protcina transmembrana en
la membrana del ER se mantiene
'!',",CCn._--jj-_VIIS{Cule de cl.lando esta protefna es lransportada a
(Il tral1sporte otras membranas. Los puntos
coloreados del final de cada molecula
., ~f-_compleio de gJucoproteina representan el
r de Goigi
N-oligosacarido atiadido a las
proleinas en ellumen del ER. N6tese
,-",--",,_veS[CUlil da que estos residuos de azlicar estan
=- tral1sporte
confinados en ellumen de cada uno de
los organulos internos de la clliula, y
polirribosomas que despues de que la vesicula de
Ul1idOB II transporte se haya fusionado con la
membrill1l1
1111 illER membrana plasmatica aparecen
expueslos hacia el espacio
extracelular. Lo mismo sirve para los
residuos de azucar de los gillcolfpidos
y los O-oligosacaridos producidos en
el complejo de Goigi.

formando parte de los glucolfpidos y de las glucoprolefnas desempenen funcio-

nes irnportantes, aunque todavia se desconocen la mayorfa de estas funciones.
La N-glucosilaci6n, por ejemplo, es predominanle en todos los eucariotas.
incluyendo las levaduras. pero no se present a en procariotas. En la mayorfa de
las protefnas transportadas a traves del ER y del complejo de Goigi -un proceso
que es exclusivo de las celulas eucariotas- se hallan presentes uno 0 mas N-oli-
gosacaridos. por 10 que se crey6 que su funci6n era la de colaborar en los proce-
sos de transporte. No obstante, por regia general las drogas que bloquean deter-
minados pasos de la glucosilaci6n no interfieren con el transpone (con la
importante excepci6n del transpone a los lisosomas, que se explicara mas ade-
Ian Ie). Ademas, las celuJas mulantes que tienen bloqueados varios pasos de glll-
cosilaci6n del Golgi son viables en cultivo y transportan protefnas normalmente.
En ausencia de g1ucosilaci6n la mayorfa de la protefnas retienen sus actividades
normaJes, aunque algunas no se pliegan correctamenle sin sus oligosacaridos
normaJes, y por 10 tanto precipitan ell et ER y no son transportadas.

Figura 13-16 Estrl.lctura

tridimensional de un pequeno
N-oligosacarldo. La estruClUra fue
determinada por am\lisis
cristalognifico de rayos X de una
glucoprote{na, Este oligosacarido tan
s610 comiene 6 residuos de azlicar,
mientras que el N-oligosac<\rido
transferido inicialmente a las protefnas
en el ER tiene 14 residuos de azucar
(vease Figura 12-48). (A) Modelo del
esqueleto del compllesto, en el que se
muestran lodos los atamos excepto los
de hidr6geno; (B) modelo espacial en
el que la asparagina se presenta en
negro. (Por cortesia de Hichard
Feldmann.)
IAI IBI

Transporte desde el ER at complejo de Golgi 651

 Dado que las cadenas de azucar denen una IJexibilidad limitada, inc1uso los
N-oligosaearidos mas pequenos sobresalen de la superficie de las glueoprotef4
nas (Figura 13-16), de forma que pueden limitar [a aproximaci6n de otras rna
cromoleeulas a la superfide de la glucoprotefna. De esta manera, por ejemplo, la
presencia de oligosacaridos tiende a haeer que una glucoprotefna sea relativa-
mente resistenre a la digesti6n par proreasas. Podrfa ser que los oligosacaridos
provinieran originalmente de una celula eucariota ancestral que tuviera una cu-
bierta protectora, la eual, a diferenda de la rfgida pared celular bacleriana, per-
mitiera a la celula una derta libertad para cambiar de forma y para moverse.
Desde enronces los oligosaearidos pueden haber sido modificados en el sentido
de que tambien sean titHes para otros fines: por ejemplo, las seleetinas ~polisa
cMidos unidos a [as protefnas de la superficie celular- intelVienen en la adhe-
si6n entre dos ce[ulas, como ya se vio en el Capftulo 10.

Resumen
El complejo de Golgi recibe las proteinas ruMII silltetizadas y los lfpidos del ER, Y
los distrlbuye a la membrana plasmdtica, a los lisosomas y a las vesiculas de secre-
cion. Se trata de una estmctura polarlzado., foromda par una a mds hlleras de cis-
ternas en forma de disco, organizadas como series de por 10 menos tres comparti-
mientos secuenclales distintos bioquimica Yftmcionalmente, llamatlos cis, medIal
y trans. Las cistenuu cis y trans esttfll conectadas a estaciolles de clasificacion, lla-
madas la red del cis y trans Golgi, respectivamente. Las proteinas bien plegadas son
transportadas indiscrlminadilmente desde ellumen y la membrana del ER a la red
del cis Golgi, pera las resldentes del ER son devueltas. Las proteinas destinadas a
las vesiculas secretoras, a La membrana plasmdt/ca y a los lisosomas se desplazan a
tralJf!s del diet/osoma en la direcciOn cis a trans, pasando desde una cisterna a la si-
gidente, en serie. Finalmente, las proteinas alcmJUln La red del trans Golgi, desde
donde eada tipo de proteina parte a su dest/"o finai. Todas estas etapas de trans
porte tienen lugar mediante vesiculas, las cuales surge" por gemaciOlI de ""a mem-
bralUl y se[usionan con otm.
El complejo de Golgi, a diferencio. del ER, contiene nlltchos compuestos tl.Zucar-
nucle6tUW; una diversidad de enzimas glucosU transferasas utilizan estos sltbstra--
tos para realizar reaa:lones de glucosilaciOn, tanto en moMculas de lfpido como {ie
proteilUl, a medlda que ~tas van pasando a traws del complejo de Golgi. Los N-oli-
gosactfridos, par eJemplo, que se anaden a las proteinas ell el ER, son a menudo mo-
dificados por elimllUldon de residlws de manosa y par lUilciOn de azlkareslUiieio-
nales -como ia N-acetilgiucosamilla, la galactosa y el tfcldo sitflico. Ademds, el Golgi
es ellugar donde se produce ia O-giucosilaciOn y donde las cadenas de glucosamilw-
glucanos se ailaden a las proteinas centrales de proteoglucano formmukJ proteoglu-
callOS. En el ultimo compartimiento del Golgi tamblin tiene lugar ia sulfataciOn de
tl.ZUcares de proteoglucanos y de detenninadas t/rosilUlS de las proteinas.

CITOSOL I
'fransporte desde la red del trans Golgi a los lisosomas 1 L
NUCLEO PEROXISOMA
AI parecer, todas las prmefnas que pasan a traves del complejo de Golgi, excepto
las que son retenidas en el como residentes permanentes, son clasifieadas en la MITOCONORIA pLASTIDOS
red del trans Golgi de aeuerdo con su destino final. E[ mecanismo de clasifica-
ci6n esta especialmente bien estudiado para el caso de las protefnas destinadas
al lumen de los Iisosomas. En esta secci6n vamos a considerar este proeeso de
transporte selectivo. Empezaremos con una breve descripci6n de la estruetura y
,
RETlcULO ENOOPLASMATICoj

GOLGI
de 1a funci6n de los Iisosomas.
L1S0S0MA J<t I~ VESiCULAS",,!
SECAETORAS
Los lisosomas son ellugar principal de digesti6n intracelular 10 ENDOSOMA pi

Los Usosomas son vesfculas membranosas que contienen enzimas hidrolfticas 1r

urilizadas para [a digesti6n intraeelular control ada de macromoleculas. Contie- SUPEAFICIE CELULAA I

652 Capftulo 13: Trafico vesicular medJante las rutns secretora y endocftica
 Flgun 13-17 Usosomas. Las
0,05-0,5 tim hidrolasas 'c1das son enzimas
hidrolfticas que estlin activas en

-..
HIOflOlASAS AooAs

gltJc>oidaslts
lipaM
Ia.f.....s
sulfltasn
condiciones 'c.idas. Blumen se
mantiene a un pH 'tido mediante la
acciOn de una bomba de H' siluada en
la membrana. la cual utiliza la energia
de hidrOlisis del ATP para bombear H'
al interior dellisosoma.
loslolipuas

ClTOSO<.

nen alrededor de 40 tipos de enzimas hidroliticas, entre las que se encuentran

proteasas, nucleasas. glucosidasas, lipasas. rosfolipasas, rosfatasas. y sulfatasas.
Todas elias son hldrolasas addas. cuya actividad 6plima se expresa a un pH cer-
cano a 5, que es el pH que se mantiene en el interior de los Iisosomas. En este
sentido el cilosol est~ doblemente protegido contra el alaque de su propio siste-
ma digestivo. Normalmenle. la membrana del lisosoma mantiene las enzimas
alejadas del citosol. pero en el caso incluso de que se produzca alguna fuga, la
dependencia ~cida de la actividad de eSlas enzimas protege el contenido del ci-
losol (cuyo pH es de aproximadamente 7,2).
Como en el caso de otros org~nulos intracelulares, ellisosoma no sOlo con-
tiene una dotaci6n caracterfstica de enzimas sino una membrana envolvenie
tambien caracterfstica. La membrana Iisosomal contiene, por ejemplo, prolef-
nas de transporte que permiten que se escapen los productos finales de la diges-
ti6n de macromoleculas. como los amino~cidos. azl1cares y nucle6tidos, de tal
manera que estos productos puedan ser excretados 0 reutilizados por la celula.
Tambien contiene una bomba de protones que utiliza la energia de hidr61isis del
ATP para bombear H' al interior del Iisosoma, manleniendo asi el lumen a un
pH ~cido (Figura 1317). La mayarfa de las proteinas de la membrana Iisosomal
estan altamente glucosiladas, 10 cual puede ayudar a protegerlas de las prOleasas
Iisosomales del lumen.
Como veremos mas adelante, los materiales endocitados son inicialmenle
descargados a unos organulos lIamados endosomas antes de ser liberados a los
lisosomas. Los endosomas tamblen lienen bombas de H' que mantienen su lu-
men a un pH bajo. aunque no tan bajo como el de los lisosomas <Figura 1318).
Veremos wma estas diferencias de pH son a menudo usadas para unir 0 separar
las moleculas de sus receptores durante el transporte vesicular a 10 largo de la
ruta endocftica.

Figura 13-18 EI bajo pH de los Usosomas y endosomas. Las protelnas

marcadas con una sonda fluorescente sensible .11 pH (fluoresceina) y que son
endocitadas por las cl!lulas. pucdcn ser ulilil.adas para medir el pH en
end050mas y Iisosomas. Los diferentes colores son una muestra del pH que 13
sonda fluorescente enCUCtllra en estos organulos. El pH en los IiSOSOrllllS
(raja) cs alrededor de 5, mientras que el pH en los diversos tipos de
endosomas (azul y verde) va de 5,5 a 6.5. Este ml!todo fue usado
originalmenle en la dl!cada de 1890 por Metchnikoff, quien alimentaba
cl!lulas fagodticas medianle partfculas de tomasol y observaba c6mo variaba
su color del azul aI rojo despul!s de la ingestiOn. (Por cortesfa de Fred
Maxfield y Kenneth Dunn.)

Transporte desde la red del trans Golgi a los Usosomas 653

 Figura 13-19 Vlsuallzacl6n h1stoquimlca de los llsosomas.
Eleclronmicrograffa de dos secdones de una celula contrasladas para poner de
manifiesto la localizad6n de la fosfatasa <'icida, una enzima marcadora de
Iisosomas. Los grandes organulos rodeados de membrana, que conlicnen
precipilados densos de fosfato de plomo son lisosomas. Su diversa morfologfa
reneja variadones de la cantidad yde 1a naturalcza del malerial que esutn
digiriendo. Los precipitados sc producen cuando ellejido fijado con
glularaldehrdo (para fijar las enzimas en su sitio) se incuba con un subslrato de
la fosfalasa en presencia de iones plomo. En el panel superior se indican
mediante jlechas rajas dos pequei'ias vesiculas que probablemenle trnnsponan
hidrolasas desde el complejo de Golgi. (Por conesia de Daniel S. Friend.)

Los Usosomas son heterog~neosll

Los Iisosomas fueron inkialmenle descubiertos mediante el fraccionamiento
bioqufmico de extractos celulares, y mas tarde fueron observados al microscopio
electr6nico. Son extraordinariamente diversos en cuanto a forma y lamano, pero
por procesos histoqufmicos pueden ser identificados como miembros de una fa-
milia unica de org1nulos, utilizando el precipitado producido por la acci6n de
una hidrolasa 4cida sobre su substrato, para mosuar que org1nulos contienen la
enzima (Figura 13-19). Ulilizando esle criterio, los lisosomas se halJan en Ladas
las relulas eucariotas.
La heterogeneidad de la morfologfa Lisosomal contrasla con la uniformidad
relativa de la mayorfa de los demas org1nulos celulares. La diversidad refleja la
ampLia variedad de funciones digestivas mediadas por las h.idrolasas <1cidas,
como la digesti6n de desechos intra y extracelulares, la digesli6n de microorga-
nismos fagocitados, e incluso la nutrici6n celular. Por esta raz6n, a veces se con-
sidera a los Iisosomas como una colecci6n helerogenea de org4nulos distinlOS
cuya caracterfslica cornun es un elevado contenido de enzimas hidrolflicas.
Como veremos a continuaci6n, es especialmente dificil aplicar una definici6n
mas ajuslada que esta en las celulas vegetales.

Las vacuolas de las plantas y de los hongos son lisosomas

muy versatiles 'Z
La mayorfa de ctHulas vegelales y hongos (incluyendo las levaduras) lienen Wla 0
varias vesiculas muy grandes y Ilenas de fluido. lIamadas vacuolas, que ocupan
m4s del 30% del volumen celular -cerca del 90% en algunos tipos cellilarcs (Fi-
gura 13-20). Las vacuolas se parecen a los Iisosomas de las cclulas animalcs por-
que tienen numcrosas enzimas hidroliticas, perc sus funciones son muy diver-
sas. Las vacuolas vegetales pueden actuar como almacen de nlltrientes y de
produclos de desecho, como compartimiento de degradaci6n, incrementando el
volumen celular de una forma econ6mica (Figura 13-21), y controlando la pre-
si6n de turgencia (la presi6n osm6tica que empuja hacia afuera la pared celular
y que impide que 1a planta se marchite). En una misma celula se encuentran a
menudo difcrenlcs vacuolas con diferentes funciones (por ejemplo, digesti6n y
a1macenamiento).
La vacuola es importanle como aparalO homeoSlatico, perrnitiendo a las ce-
lulas vegelales resislir grandes variaciones de su entomo. Por ejemplo, cuando el
pH del medio disminuye, el Dujo de H' hacia el cilosol es controlado, aI menos
en parte, aumentando ellransporte de H+ a la vacuola. de manera que el pH del
chosol se rnantiene constanle. De fonna parecida, muchas cf!lulas vegelales
mantienen una presi6n de lurgencia casi constanle a pesar de grandes cambios
en la osmolaridad del fluido que les rodea. Esto 10 consiguen cambiando la pre-
si6n osm6tica del cilosol y de la vacuola --en parte por la hidr6lisis y resfntesis
controlada en la vacuola de algunos polimeros como el polifosfato, y en parte
por la alteraci6n del transporte de azucares, aminolicidos y ouos melabolitos a

654 CapCtuio 13: TrMIco vesicular medianle las rutas secretora y endodtlca
 Figura 13-20 Lasvaeuolasdeuna
eeiula vegetal. Esta
electronmicrograffa de eelulas de una
haja javen de tabaeo muestTa c6mo el
citoplasma estli reducido, debido a la
enorme vacuola, a una delgada capa
que contiene numerosos cloroplastos
dispuestos contra la pared celular. La
membrana de la vacuola recibe el
nombre de tonoplasto. (Por cortesla de
,. Burgess.)

IraVeS de las membranas plasmatica y vacuolar. La presi6n de lurgenda controla

estos flujos regulando las actividades de los diferentes transportadores de cada
bicapa lipidica.
Las substandas almacenadas en las vacuo[as vegetales varian entre las dire-
rentes especies, desde la goma al opio yal aromatizante del ajo. A menudo, los
productos almacenados iienen una fund6n melab6lica. Por ejemplo, las protei-
nas pueden ser guardadas durante aftos en las vacuolas de algunas celulas de
muchas semillas, como los guisantes y las judfas. Cuando estas semillas germi-
nan, las protefnas son hidrolizadas y los aminoacidos que se movilizan propor-
donan alimento al embri6n. Los antodanos, pigmentos que se encuenlran en
las vacuolas, dan color a los petalos de muchas flores atrayendo los inseclos po-
linizadores, mientras que las moleculas nodvas que se tiberan de las vacuo[as
cuando una planta es comida 0 dafiada, proporcionan un sistema de defensa
contra los depredadores.

Figura 13-21 EI papel de la vacuola

cordones II en e) control del tamalio de las eeluias
vegetales. Es posible conseguir un
citoplllsm.!Jticos

1/
aumento del volumen celular sin que
pllred se produzca un aumento del volumen
celulsr del citosol. La relaj8ci6n local de la
.

ifJ
pared permite una expansi6n celular
va/ola impulsada por la turgencia que
conlleva la captaci6n de agua en el
interior de una vacuola en expansi6n

~u
(vease Figura 19-67). Finalmenle el
nucllKl
ciloplasma queda confinado a un
delgado estrato periferico,
comunicado can la regi6n perinuclear

G~
mediante cordones citoplasmMicos
transvacuolares que contienen haces
de filamentos de actina (no se
muestran).

Transporte desde la red del trans Golgl a los Iisosomas 655

Los materiales son transportados hasta los lisosomas
a traves de varias rutas l3
En general, los Iisosomas son puntos de encuentro donde convergen diferentes
corrientes del tnifico inlracelular. Las enzimas digestivas son descargadas a ellos
mediante una ruta que va por el ER y el complejo de Golgi, mientras que las subs-
tancias que deben ser digeridas Ilegan a ellos a traves de por 10 menos tres vfas.
De eslas tres vfas, la mejor estudiada es la que siguen las macromoleculas
que SOil endocitadas. De forma breve (mas adelante discutiremos los detallesJ,
las moleculas endocitadas son inicialmenle transferidas a unas vesiculas intra-
celulares pequenas e irregulares, lIamadas endosomas tempranos. Desde elias,
algunas de las moleculas endociladas son seleccionadas y recicladas a la mem-
brana plasmarica, mientras que otras se dirigen a los endosomas tardfos. Allf, los
materiales que van a ser digeridos se encuentran con las hidrolasas lisosomales
que provienen del complejo de Golgi, debido a la fusi6n de las vesiculas de
transporte de am bas mtas. EI interior de los endosomas tardios es medianamen-
te acido (pH -6), Yse cree que es ellugar donde empieza la digesti6n hidrol!tica
de las molecuJas endocitadas. A partir de los endosomas tardfos se forman los Ii-
sosomas, a pesar de que no se sabe exactamente c6mo ocurre. Durante este pro-
ceso de conversi6n, algunas moleculas de la membrana de los endosomas son
eliminadas y se produce una disminuci6n del pH interno.
Todas las celulas disponen de una segunda ruta que aporta maleriales a los
lisosomas para su degradaci6n, mediame la cual pueden ser destruidas partes
obsoletas de la propia celula -un proceso denominac1o autofagia. En una celula
hepatica, por ejemplo, una mitocondria tiene und \ .Ja media de 10 dfas. En las
imagenes de microscopia elcctr6nica de celulas normales se pueden observar li-
sosomas conteniendo (y probablementc digiriendo) mitocondrias asf como
otras organulos. Al parecer, el proceso de digestj6n supone que el organulo sea
envueho por membranas derivadas del En, gencrandose un alllOfagosoma. Se
cree que el autofagosoma se fusiona con un lisosoma (o un endosoma tard(o). El
proceso esta altamente regulado, de forma que durante la remodelaci6n celular
se pueden seleccionar diferentes componentes celulares y ser destinados a su
destrucci6n: por ejemplo. el ER Iiso que prolifera en una celula hepatica en res-
puesta a la droga pentobarbital (discutido en el Capflulo 12) es eliminado selec-
tivamente por medio de la autofagia cuando esta draga es retirada.
Como veremos mas adelante. la tercera ruta que proporciona materiales a los
lisosomas s610 tiene lugar en celulas que estan especializadas en lafagocitosis de
grandes partfculas y de microorganismos. Estas celulas (macr6fagos y neutr6fi1os
en vertehrados) pueden ingerir grandes objems y fonnar un Jagosoma. Se cree que
el fagosoma se transfarma en lisosoma de la misma fanna que hemos explicado
para el caso del autofagosoma. Estas tres rutas se resumen en la Figura 13-22.

Algunas protefnas citos6licas son transportadas directamente

a los lisosomas para ser degradadas l4
Podrfa existir una cuarta nita de degradaci6n proteica que condujese hasta los Ii-
sosomas: algunas protcfnas poseen ciertas senales en su superficie [Uamadas se
cuencias KFERQ, de Iisina (K), fenilalanina (Fl, glutamato (EJ,.arginina (R) y gluta-
mina (Q)) que son responsables de su selecci6n para ser descargadas en los
lisosomas y degradadas. Es pasible que las secuencias KFERQ unan estas protef-
llas a determinados organulos que vayan a ser autofagocilados, de manera que
de forma indirecta tambien serfan destruidas. Alternativamente, puede existir un
transportador especffico en la membrana dellisosoma que reconozca estas sena-
les y transfiera directamente las prolefnas a traves de la membrana lisosomal.
Se conocen antecedentes de mecanismos no convencionales que desplazan
protefnas a traves de las membranas. Algunas de las protefnas que son secretadas
al exterior de la celula, como el factor basico de crecimiento de los fibroblastos 0 la
interleuquina-I, Ilegan a la superficie celular sin haber pasado nunca por la ruta

656 Capftulo 13: Tnifico vesicular mediante las rutas secretora y endocftica
 Figura 13-22 Tres rutas de
degradacl6n en los IIsosomas. Cada
mta conduce a la digesti6n intracelular
de materiales derivados de diferentes
f&go90m&
orfgenes. Los compartimientos
resultantes de estas tres mtas pueden,
a veces, ser diferenciados
morfol6gicamente -a ello se deben los
terminos "autofagolisosoma".
"fagolisosoma", etc, No obstante, estos
lisosomas s610 pueden diferenciarse
por los diferentes materiales que estan
digiriendo,

&utof&gi&

clasica a traves del ER y del complejo de Goigi. En la mayorfa de los casos no se co-
noce que membrana es atravesada por la prote(na 0 c6mo se cataliza su Iransporte
transmembrana. En el caso de un pequeno peptido de levaduras, el faclor feromo-
na a, se sabe que el transporte tiene lugar directamente a traves de la membrana
plasmatica mediante una bomba proteica impulsada por ATP que pertenece a la
familia proteica de los transportadores ABC (discutido en el Capitulo 11). Asf, es
posible que bombas parecidas a esta proporcionen sistemas de transporte "priva-
dos", cada uno de ellos especializado en la transferencia de un pequeno y especifi-
co grupo de pTOtefnas a traves de una membrana en particular.

Las enzimas lisosomales son clasificadas en la red del trans Goigi

por un receptor proteico unido a membrana que reconoce
la manosa 6-fosfatol 5
Ahora consideraremos con mas decalle el sistema que conduce la otra mitad del
trMico hasta los lisosomas -las hidrolasas lisosomales especializadas y las protef-
nas de membrana. Ambos tipos de protefnas se sintetizan en el ER rugoso y son
transportadas a traves del complejo de Goigi. Las vesiculas de transporte que
conducen estas protein as hasta los endosomas tardfos -los cuales forman mas
tarde los lisosomas- parten de la red del trans Golgi, incorporando las proteinas
lisosomales y excluyendo todas las demas protefnas, que seran empaquetadas
en otras vesfculas de transporte y seran descargadas en otros lugares.
tC6mo son reconocidas y seleccionadas las prote(nas Iisosomales can la
precisi6n necesaria? Para las hidrolasas lisosomales la respuesta es conocida. Es-
tas hidrolasas presentan un solo marcador en forma de grupos de manosa 6-fos-
fato (M6P), los cuales son aftadidos exdusivamente a los N-oligosacciridos de es-
tas enzimas lisosomaJes solubles, probablemente mientras estan en ellumen de
la red del cis Goigi. Los grupos M6P son reconocidos por los receptores M6P,
que son protefnas transmembrana presentes en la red del trans Golgi. Estos re-
ceptores unen a las hidrolasas lisosomaJes y ayudan a concentrarlas en vesiculas
de transporte especfficas que surgen por gemaci6n de ia red del trans Goigi y
acaban fusiomindose con los endosomas tardios, descargando su contenido en
ellumen de estos organulos. Como veremos mas adelante, los receptores M6P
son empaquetados en vesiculas de transporte espedficas en la red del trans Gol-
gi mediante unas proteinas de recubrimiento especiales que se ensamblan en la
sup~rficie citos6lica de la membrana y permiten la gemaci6n de las vesiculas
~esde la red del trans Golgi.

Transporte desde la red del trans Goigi a los lisosomas 657

 TAANSPORTE DEPENOIENTE
dMdo DE RECEPTOR
81 ER
UNI6N Al
RECEPTOR M6P

maOOQ5-
1001al0 IM6Pl
-----
cubien8 d.
clatrinll

fetep!:or M6P lin I..

RECIClAJE DEL RECEPTOR Vft.IeuI.. recubierl

.............
de el'lri~ qu. ~gen

....
"",n""
....
red del
Irem

EI receptor de manosa 6fosfato viaja como una lanzadera, FlguraI3-Z3 Transportedelas
adelante y atr:is, entre determinadas membranas l6 hldrolasas UsosomaJes reclbJ
slntellzadas a los Usosomas. los
EI receptor de la manOS3 6-fosfato une su oligosacarido especffico a pH 7 en la precursores de las hidrolasas son
red del trans Goigi y 10 Iibera a pH 6, que es el pH del interior de los endosomas cliquctados con grupos manosa
lardios. Asi en CUaniD L1egan al interior de estos endosomas tardios, las enzimas 6-loslalo (M6P) en la red del cis Golgi.
lisosomales se disocian de los receplores M6P y empiezan a digerir el material y separados de looas las demas
endocitado transferido desde los cndosomas tempranos. Una vez han liberado prolcfnas en la red dellTans Goigi. Esta
las enzimas, los receptores son recuperados y devueltos a la membrana de la red separaci6n ocurre porque las vesiculas
del trails Golgi, mediante ves!culas de transpone que surgen por gemaci6n de rccubiertas con c1atrina que emergen
I)or gemaci6n de la red dellrallS Goigi
los endosomas tardios (Figura 13-23). No se sabe si el Iranspone de vuella al
presenlan elevadas concentraciones
complejo de Golgi requiere un peptido seflal especffico en la cola ciloptasm<1tica de receptores espccfficos de manosa
del receptor M6P 0 sl tielle lugar por defecto. Este proceso de reciclaje de mem- 6fosfato, los cuales unen las
bralla desde el endosoma tardfo bacia el complejo de Golgi es similar al reciclaje hidrolasas Iisosomales. Estas vesiculas
que ocurre entre otros subcompartimientos de las rutas secretora yendocitica se fusionan con los endosomas tardfos.
que veremos m<1s adelantc. AJ bajo pH de los endosomas tardlos.
EI proceso de claslficaci6n de las bidrolasas lisosomales es el modelo mejor las hidrolasas se disocian de sus
conocldo de los diversos fen6menos de clasificacl6n mediados por vesfculas de nx:eptores. los cuales se rccicJan hacia
Iransporte que lienen lugar en las celulas eucariotas. Aunque no es probable que el complejo de Golgi para ser
en todos los casos se utilice un marcador oligosaearido. la estrategia general es reutiJizados en siguienles rondas de
seguramente t(pica de Olros proeesos de clasifieacl6n mediados por vcsfculas. La transporte. La posterior eliminaci6n
earga es reconoclda y recogida por los receptores de earga unidos a la membra- del foslato de la manosa de las
hidrolasas disminuye la probabilidad
na, durante el proceso de gemacl6n de vesfculas espeeifieas reeuhienas de c1a-
de que las hidrolasas vuelvan de nuevo
trina. Estas ues{clIlas cargadas se fusionan eon una membrana diana espeeifica. al complejo de Goigi. unidas al
la earga es liberada en cl eompartimiento diana y los reeeplores vadas vuelven a receptor.
su compartimiento original.
No toda la earga que esta destinada a aeabar en los Jisosomas lIega a su des-
tino. Pareee que algunas de las hidrolasas lisosomales consiguen escapar del
proeeso de empaquetamiento en la red del trails Golgi y son transponadas, vfa
la tuta por defecto, a la superficie eelular, desde donde son secretadas al nuido
extracelular. No obstante, algunos receptores M6P tambien van a la membrana
plasm,Hiea para rccapturar a las hidrolasas lisosomales escapadas y devolverlas
mediante endocilosis mediada por reaplor a los Lisosomas vfa endosomas tcm-
pranos y tardIos.
Esta mta basl4rero foe originalmente descubierta en celulas humanas que
eran geneticamente defcctuosas en una hidrolasa lisosomal espedfica. Un ejem-

658 Capftulo 13: Tr.1fI.co vesicular mediante las rutas SCCTetora yendocltica

;. 7
plo de ella es la enfermedad de Hurler. en la cualla enzima necesaria para la ro-
tura de los glucosaminoglucanos no es funcional. En estos individuos mutantes
se acumulan en los lisosomas grandes cantidades de compuestos no digeridos.
Por esta raz6n estas enfermedades se conocen con el nombre de enfermedades
de aClhnlllo lisosomal. euando se cuhivan las celulas de individuos mutatlleS, se
observan los mismos defectos intracelulares. No obstante, si se hace un coculti-
vo enfre las celulas mulantes y celulas de un individuo normal, dejan de obser-
varse los defectos. Las celulas mutantes son rescatadas porque pueden caplar
del medio de cultivo la hidrolasa Iisosomal que no tienen. Mas adelante veremos
c6mo el estudio de estas enfermedades han permilido conocer una parte impor-
tante del mecanismo de clasificaci6n de las hidrolasas Iisosomales.

Una regi6n sefial en la cadena polipeptfdka proporciona la clave

para marcar una enzima lisosomal con la manosa 6-fosfatol 7
EI sistema de clasificaci6n que segrega las hidrolasas lisosomales y las dirige ha-
cia los endosomas tardios funciona porque en el complejo de Golgi se anaden
grupos de manosa 6-fosfato tan s610 a las glucoprotein as adecuadas. ESle mar-
caje especffico requiere un reconodmiento tam bien especffico de las hidrolasas
por la enzima del Golgi responsable de afiadir los grupos M6P. Dado que todas
las glucoprotefnas abandonan el ER con las cadenas de Noligosacaridos identi-
cas, la senal para anadir las unidades M6P a los oligosacaridos ha de residir en
alguna parte de la cadena polipeplfdica de cada hidrolasa.
La adici6n de grupos M6P a las hidrolasas lisosomales est a catalizada por
dos enzimas que act11an de rnanera secuencial (Figura 13-24). La primera es una
fosfotransferasa con un lugar de reconocimiemo que une especfficamente la hi-
drolasa, y un lllgarcatalitico; la senal reconodda por ellugar de reconodmiento
no es un peptido senal sino una regi6n senal dependiente de conformad6n (vea-
se Figura 12-8). Cuando la hidrolasa esta unida, la fosfotransferasa aflade grupos
GlcNAcP a una 0 dos de las manosas de cada cadena de oligosacarido (Figura
13-25). Entonces una segunda enzima elimina el residuo GlcNAc. creando el
marcador de la manosa 6-fosfato (vease Figura 13-24).
La mayorfa de las hidrolasas lisosomales tienen varios oligosacaridos, par 10
que adquieren muchos residuos de M6P, 10 cual amplifica enonnemente la se-
nal. As!, mientras que una hidrolasa lisosomal se une al sHio de reconodmiento
de la fosfolransferasa con una constante de afinidad (K,) de aproximadamente
105litros/moI. la hidrolasa multifosforilada se une al receptor M6P con una Ka de
aproximadamente 109 litros/mol. 10 eua] supone un incremento en la afinidad
de 10 000 veces.
H
,
Los defeclos en la GlcNAc-fosfotransferasa causan una IGICNAC
fosfotrlll"lsforaso

enfermedad de acumulo Iisosomal en humanos 18

Las enfermedades de aClimulo lisosomai estan causadas por defectos geneticos It
que afectan a una 0 mas de las hidrolasas Iisosomales, 10 cual provoca una acu-
1I1ulaci6n en los lisosomas de sus substratos no digeridos. Este acumulo tiene

Figura 13-24 Sfntesls del marcador manosa6fosfato sobre una hldrolasa

IlsosomaJ. La sfntesis ocurre en dos pasos. En primer lugar, la GIcNAc G.N",
fO$foglucosids&a
I
t'-
fosfotransferasa transfiere residuos de GlcNAc-P a la posici6n 6 de diversos
residuos de manosa de los N-oligosacaridos de la hidrolasa tisosomal. En
segundo lugar, una fosfogluCQsidasa etimina el residuo GlcNAc. generando el 0- 0- H2
marcador manosa 6-fosfato. La prirnera enzima esta activada
espedficarnentc par una zona sefial presente en las hidrolasas lisosornales
(vease Figura 13-25), mientras que la fosfoglucosidasa es una cnzima no
espedfica. Esta rnodificaci6n de determinados residuos de manosa en la red
del cis Golgi protege las manosas de ser eliminadas por las manosidasas que
mas tarde encontrarlin en el cornpartimiento medial del Golgi. manoss 6-fosfato

Transporte desde la red del trans Golgi a los Usosomas 659

 hidrolan li.o.omal

UNI6N DE LA ZONA SCNAl

~
llUGAROE
RECONOCIMIENTO

TRANSFERENClA
DElGRUeo
Gk:NAc -(t) A
P UNAMANOSA
DEllUGAR
CATAL1nCo
1IlfP\'P'--
~ UNl6N -- -
~
AllUGAR
CATALfncO
UOP-Gk:NAc
l!I0 hid,ol.sa 1;_O~1 con un
UMP grupo GIcNAe-W unido
a una manon de un
luger calaHtico lug., dtI ol;gosa~rido
fGConocimienlO

consecuencias patol6gicas profundas. Habilualmente, se producen como con- Figura 13-25 Reconoclmlento de una
secuencia de una mutaci6n en un gen estruclural que codifica una hidrolasa li- hldroluallsosamal. La enzima
sosomal; este es el caso de la enfermedad de Hurler, mencionada anleriormente. GlcNAc fosfotransferasa, que reconoce
No obstante, la forma m<is dram<itica de una enfermedad de acl1mulo Iisosomal las hidrolasas lisosomales en el
es una alteraci6n muy poco frecuente denominada enfermedad de inc!usi6n ce- complejo de Golgi. tiene un lugar
cataHtico y un lugar de rf!(;onocimlento
lular (efljermedad ce/ularl). En esta enfermedad la mayorfa de las enzimas hi-
separados. E1lugar catalftico une
drolrticas han desaparecido de los Iisosomas de los fibroblastos y sus substratos NoligosacMidos ricos en manosa y
no digeridos se acumulan formando grandes "inc1usiones" en las celulas de los UOP-GIcNAc. Ellugar de
pacientes. La enfermedad celuJar1 es debida a un solo defe<:to genico que, como reconocimiento se une a una zona
en el caso de la mayona de las deficiencias geneticas, es recesivo -es decir, s610 senal que I1nicamente se encuentra
presentan la enfermedad los individuos que tienen defectuosas las dos copias sabre la superfiae de las hidrolasas
del gen. lisosomales.
En la enfermedad celular-I lodas las hidrolasas que han desaparecido de los
lisosomas se hallan en la sangre; la anomalia se produce por un error en el proce
so de c1asificaci6n de estas hidrolasas en el complejo de Golgi, error que provoca
que las hidrolasas sean secretadas en lugar de ser rransponadas a los Iisosomas.
Este error de c1asificaci6n es debido a una GIcNAc-fosfotransferasa defectuosa 0
ausente. En este casa, las enzimas Iisosomales no son fosforiladas en la red del cis
GoIgi, por 10 que no son captadas por los receptores M6P ni empaquetadas en las
vesfculas de transpone apropiadas en la red del traits Golgi. Por el contrario, las
hidrolasas son transportadas a la superficie celular y son secretadas por la ruta
por defecto. En realidad esta fue la primera evidencia de la exislencia de una ruta
por defecto; y comparando bioqurmicamente las hidrolasas lisosomales con las
de los pacientes de la enfermedad celular-I se descubri6 que la manosa 6-fosfato
era la sef\al de clasificaci6n lisosomal y se comprendi6 toda la ruta de clasifica-
ci6n de las hidrolasas Iisosomales.
En la enfermedad celular-I los Ijsosomas de algunos tipos celulares, como
los hepatocitos, contienen una dotaci6n normal de enzimas Iisosomales. Este
hecho impliea que tiene que existir otta vfa para dirigir las hidrolasas a los liso-
somas, la eual se udliza en algunos dpos celulares pero no en otros. Se descono-
ce la natura1eza de esta vfa independiente de M6P. De manera similar, las protei-
nas de la membrana lisosomal son c1asificadas en todas las celulas desde la red
del trans Golgi hasta los endosomas tardios, a trav~ de una via independienre
de M6P. No esta claro todavfa por qu~ las celulas necesitan m<\s de una via de
c1asifieaci6n para construir un lisosoma, aunque quiza no sea sorprendente que
en prote[nas solubles y unidas a membrana acttien mecanismos diferentes.

Resumen
Los llsosomas esUfn especializados ell In digesti6n illtracellllnr. Co"tieflen protef-
nas de membrana caracterlstlcas y IIna ampliLI varledad de el/.zimas '.idrol(tic:as
qlle trabaJan meJora pH 5, que es el pH /ntemo tk las llsosamas. El pH dc/do tk los

660 Capitulo 13: Tranco vesicular mediante las rutas secrctora yendocfUca
llsosomas se numtiene por Will bomba de ATP de su membrana, que imp"lsa proto-
nes. Las protenas lisosomales recMn slntetizadas son transferidas al IlImerJ del ER,
son transportadas a tra~ (ul complejo de Golgi, y '"ego condlU:idas por medlo de
vescul.as de tmnsporte desde la red del trans Golgi a los elUwsomas tardfos.
Las hidrol.asas lisosomales contlene" N-oligosactfrilWs ql~ son modijietUlos
(;(JlJ(l.lentemellte de "na forma caraeterlst/ea en la red del cis Golgi, de manera ql~e
sus residuos de manosa son fosforiltufos. Estos grllpos de ulllnosa 6-fosfato (M6P)
son reconocidos por UII receptor de la red del trans Golgi, el cual separa las IJidrola-
sas del nsto de las moleculas y aylul.a a empaqlletarlas en el Interior de vesculas de
transporte, las cuales desCllrgtUl su conten/do ell los emtosomas tardos y desplI~s
en los lisosomas. Estas veseulas de tmnsporle aetlia" como 1m serv/do de trans-
porte que desplaza el receptor M6P de 1m '"gar a otro, e"tn la red del trans Golgi y
los e"dosomas tardos. El hajo pH de los endosonuu tardos disocia las lIidrolasas
lisosomales de Sll receptor, luu:iendo que el transporte de las hidrolasas sea Imidi-
nee/anal.

Transporte desde la membrana plasmatica via CITOSOL

endosomas: endocitosisl 9 j Jl
NUCLEO PEROXISOMA
Las rutas que llevan hacia los lisosomas desde la superficie celuiar empiezan con
la endocltosis, mediante la cuallas celulas captan macromohkulas, sustancias MITOCONDRIA pLASTIDOS
particuladas y, en casos especiales, otras celulas.
La substancia que va a ser ingerida es rodeada progresivamenle por una pe- !RET[CULO ENDOPLASMATICol
quena porci6n de la membrana plasmatica, que primero se invagina y luego se es
{rangula formando una vesfcula intracelular que contiene el material ingerido. En GOLGI

USOSOM~I I~
funci6n del tipo de vesfculas que se forman, se pueden discinguir dos tipos de en-
docitosis: la pillocirosis ("bebida de la celula"), que implica la ingesti6n de fJuidos y VES[CULA:sl
SECRETORAS
de solutos vfa pequenas vesfculas (S150 nm de diametro); y lafagocitosis ("comida I ENOOSOMA
de la celula") que compona la ingesti6n de grandes partfculas tales como microor-
ganismos 0 restos celuiares, mediante grandes vesiculas llamadasfagosomas, gene- 1t
ralmente de diametro superior a 250 nm. Aunque la mayorfa de las celulas eucario- SUPERFICIE CELULAR

tas ingieren continuamente fluidos y solutos par pinocitosis, las grandes particulas
son ingeridas principalmente par celuJas fagocfticas especializadas.

Colulas fagocfticas especializadas pueden ingerir grandes partfcuJas20

La fagocitosis es una forma especial de endocitosis en la que se ingieren grandes
partfculas, tales como microorganismos y restos de celulas, vfa grandes vesfculas
de endocitosis llamadas fagosomas. En los protozoos, la fagocilosis constituye
un sistema de alimentaci6n: las grandes partfculas atrapadas en los fagosomas
acaban en los lisosomas, y los productos de los procesos digestivos posteriores
pasan al dtoplasma donde son utilizados como alimento. La mayor(a de las ceo
lulas de los organismos pluricelulares son incapaces de ingerir grandes partfcu-
las de forma eficaz. En el intestino, las grandes partfculas de alimento son frac-
cionadas fuera de las celulas antes de ser captadas por elias. En la mayorfa de los
animales la fagocitosis es importante en otras procesos diferentes al de la nutri-
ci6n, y la lIevan a cabo celulas especializadas que son fagocitos "profesionales".
En los mamfferos existen dos tipos de gl6bulos blancos que actuan como fagoci-
{as: los macr6fagos (que ademas de encontrarse en la sangre, se hallan amplia-
mente distribuidos en los lejidosl y los neut:n:Sfiios. Estos dos tipos de celulas
proceden de un precursor cornun (discutido en Caprtulo 22), y nos defienden
contra las infecciones mediante la ingesti6n de los microorganismos invasores.
Los macr6fagos tambien desempenan un importante papel en la eliminaci6n
tanto de celulas viejas y lesionadas como de restos celulares. En terminos cuan-
titativos, esta ultima funci6n es la mas importante: en cada uno de nosotros los
macr6fagos fagocitan mas de 1011 eritrocitos viejos cada dia.

Transporte desde la membrana plasml!tica via endosomas: endocitosls 661

 Mientras que las vesiculas endocfticas implicadas en la pinocitosis son pe-
queJ1as y uniformes, el diametro de los fagosomas esta determinado por el tipo
de partfcuJas que ingieren. y pueden lJegar a ser tan grandes como la propia ce-
lula fagocftica (Figura 13-26). Los fagosomas se fusion an con los lisosomas, yel
material ingerido es degradado; en los Iisosomas permanecen subslaneias no
digeribles, formando cuerpos residuales. Algunos de los componenles de la
membrana plasmalica inrernalizada son reeuperados del fagosoma medianle
vesiculas de transporte y devueltos a la membrana plasllHltiea.
Para que una partfcula sea fagoeitada, primero ha de unirse a la superfide
del fagocito. No obSlallle, no se ingieren todas las partfculas que pueden unirse.
Los fagocitos tienen toda una gama de receptores de superficie especializados
que se encuentran unidos funcionalmente a la maquinaria fagocftiea de la celu-
lao A difereneia de la pinoeitosis, que es un proceso eonstitutivo que oeurre eon- Figura 1326 Fagocitosls por un
tinuamente, la fagocitosis es un proceso regulado en el que los receptores acti- macr6fago. Electronmicrografla de
vados transmiten la selial al interior de la celula, iniciandose la respuesta. Los barrido de un macrMago de rat6n
fagocitando dos eritrocitos
reguladores mejor caraeterizados de este proceso son los antieuerpos, que nos
modificados quimicamente. Las
protegen contra los microorganismos infeeeiosos uniendose a su superficie for- flee/I'as rojas indican los bordes de las
mando una cubierta en la que las colas de los antiellerpos (llamadas regiones Fe) finas extensiones (pseud6podosJ del
se hallan expuestas al exterior. Esta eubierta de antieuerpos es reeonocida en- macr6fago que se proyectan como
lonees por los receptores Fc de la superficie de los maer6fagos y de los neutr6fi1os collares engullendo los eritrocitos. (Por
(vease Figura 2320). La uni6n de part[culas recubierlas por anticuerpos a estos cOrlesfa de Jean Paul Revel.l
receplores induce a la celula fagocftiea a extender pseud6podos que engullen a
la partkula, formando un fagosoma (Figura 13-27).
Se han caraClerizado algunas olras clases de r"C''" (Ores que provocan fago-
citosis: por ejemplo, los que reconocen el complemenlo (una c1ase de moleculas
que circulan por la sangre y que colaboran con los anticuerpos marcando las ce-
lulas indeseables para ser destiuidas, discutido en Capitulo 23), y los que reco-
nocen directamente oligosacaridos de la superficie de dertos microorganismos.
No se sabe que receptores de los macr6fagos reconocen las celulas viejas 0 da-
iiadas, aunque se sospecha que en algunos casos estan implicadas las protefnas
de adhesi6n eelular de la familia de las integrinas (discutido en Capftulo 22).

Las vesiculas de pinocitosis se forman en la membrana

plasmatica a partir de depresiones revestidas 21
Pnkticamenle lodas la celulas eucariotas ingieren continuamente zonas de su
membrana plasmatica en forma de pequefias vesiculas pinocflicas (endocfticas)

Figura 13-27 Fagocitosls por un

bacteri~
neutr6fiJo. Electronmicrograffa de WI
neutr6filo fagocitando una bacteria
que se hallaba en proceso de divisi6n.
(Por cOrlesfa de Dorothy F. Bainton.)
-jr-.c---e-pseud6pOdo

membr~n8
pl8sm~tlca

662 Capftulo 13: TrMico vesicular mediante las rutas secretora yendodtica
L-..J
0.1 11m

que posteriormente relaman a la superficie de la celula. La velocidad a la que se Figura 13-28 Formacl6n de vesCculas
internaliza la membrana plasm<itica en este proceso de plnocitosis varia de un revestidas de c1atrlna a partir de la
tipo celular a otro, pero normalmente es bastante elevada. Por cjemplo, un ma- membrana plasmatlca.
cr6fago ingiere carla hora una cantidad de fluido igual al 25% de su propio volu- Electronmicrograffas que ilustran la
men. Esto significa que cada minuta ha de ingerir un 3% de su membrana plas- probable secuencia de
acontecimientos durante la formaci6n
ma.tica, 0 un 100% en media hora. Los fibroblastos presentan una velocidad
de una vesfcula rcvestida de clatrina a
menor, mientras que aJgunas amebas ingieren la membrana plasmarica lodavia
partir de una dcpresi6n revestida de
mas nipidamente. Dado que el area de la superficie y el volumen celular no varfan clatrina. Las depresiones y las
durante este proceso, esta claro que tada la membrana que desaparece por en- vesiculas revestidas que apareeen en
docilosis se ha de if aftadiendo por exocirosis (el proceso contrario, discutido las fotograffas son mueho mayores que
mas adelanle). En este sentido, endocitosis y exocitosis son procesos Iigados que las que se presentan en las celulas de
se puede considerar que constituyen un cicio endocftlco-exocftico. tamano normal. InteMenen en la
Normalmente, la parte endocitica de este cicio empieza en regiones espe- eaptaci6n de lipoprolefnas en un gran
cializadas de la membrana plasmtitica Ilamadas depreslones revestidas de c1a- oocito de gallina, fonnando la yema
trlna (clathrin-coated pits), que ocupan aproximadamente un 2% del area lotal del huevo. En In superficie extracelular
de la membrana plasmMiea. En electronmicrografias de las membranas plasma- de la membrana plasm<ltica puede
lieas estudiadas mediante las tecnieas de congelaci6n rapida par sublimaci6n verse una eapa ele<:trodensa que
(rapid freeze, deep-etch) estas depresiones aparecen como invaginaciones de la eorresponde a las lipoprote[nas
asociadas a su receptores. (Por conesfa
membrana plasmatica reveslidas en su superficie interna (citos6lica) con estruc-
de M.M. Perryy A.B. Gilbert, de]. Cell
turas densas. Estos revestimientos estan farmados por clatrina, la cual, junto Sci. 39;257-272. 1979, can permiso de
con atras protemas, forma una estructura caracterfstica que discutiremos mas The Company of Biologists.)
adelante. La vida media de las depresianes revestidas de clatrina es cona: un mi-
nuto despues de haber sido formadas, se invaginan hacia en interior de la celula
y se separan de la membrana formanda las vesiculas revestidas de c1atrloa (Fi-
gura 13-28). En fibroblastos aislados se ha estimada que aproximadamente cada
minuto, 2500 vesfculas revestidas de clatrina abandonan la membrana plasm<iti-
ca. Estas vesfculas revestidas son mas transitorias incluso que las depresiones
revestidas: segundos mas tarde de ser formadas, se despojan de su revestimiento
sienda asf capaces de fusionarse con los endosomas tempranos. Dado que las
depresianes revestidas de clatrina estan Ilenas de tluido extracelular, cuando se
invaginan formando vesfculas revestidas tambien se internalizan las substancias
disueltas en el nuido extracelular -un proceso denominado endocltosls de la
fase Dulda.

Las depresiones revestidas de clatrina pueden actuar

como un mecanismo concentrador internalizando
macromoleculas extracelulares especfficas22
En la mayorfa de celulas anirnales, las qepresiones y las vesfculas revestidas de
clatrina proporcionan una ruta eficiente para captar macromaleculas especffi-

Transporte desde la membrana plasmalica vea endosomas: endocitosis 663

 -
cas del fluido extracelular, un proceso Ilamado endocltosis mediada por recep- 22 nm
tor. Las macromoleculas se unen a receptores complementarios de la superficie
celular (protefnas transmembrana), se acumulan en depresiones revestidas, y
entran en la celula en forma de complejos receptormacromolecuJa en vesfculas
recubiertas de clatrina. EI proceso es muy similar al empaquetamienro de las hi
drolasas Hsosomales en el complejo de Goigi. AlIf, como hemos visto, las molecu
las que han de ser transportadas tambien se unen a receptores especfficos de la
membrana (receptores M6P) y son capturadas en vesiculas de membrana que
abandonan el compartimiento y se desplazan por el citosol. Ademas, la gemaci6n
desde el complejo de Golgi de vesfculas cargadas can las enzimas lisosomales
tambien tienen lugar mediante un revestimiento de clatrina (vease Figura 1323). moillcula de
lodoHpido
Como discutiremos mas adelante, se supone que, tanto para la membrana plas mohk:ula de tlster
matica como para la del Golgi, la formaci6n del recubrimiento en la cara citos6li de coleSlerol
ca es la responsable de la invaginaci6n. protrusion superficlel de
La endocitosis mediada por receptores proporciona un mecanisme de con Ie molkule proleice
centraci6n selectivo que incrementa la eficiencia de la internalizaci6n de deter Figura 1329 Upoprotena de baja
minados ligandos mas de 1000 veces. De esta manera se pueden captar especffi densldad (LDL). Cada partfcula
camente y en grandes cantidades componentes incluso minoritarios del fluido esferica tiene una masa de 3 x IQ6
extracelular, sin internalizar el gran volumen correspondiente de fluido extrace daltons. En la regi6n central contiene
lular. Un ejemplo bien conocido y fisiol6gicamente importante es el proceso alrededor de 1500 mol~culas de ~steres
mediante el cuallas celulas de los mamfferos captan el colesterol. de colesterol esterificado con acidos
grasos de cadena larga. Esta regi6n
central esta rodeada de una monocapa
Las celulas importan colesterol par endocitosis Iipfdica de unas BOO mol~culas de
mediada par receptor 23 fosfolfpido y unas 500 de colesterol no
Muchas celulas animales captan colesterol por endocitosis mediada por recep esterificado. Ademas presenta una
unica mol~cula de protefna, de unos
tor y asf adquieren la mayor parte del colesterol que necesitan para la sfntesis de
500 000 daltons, que organiza la
las membranas. 5i esta ingesti6n se bloquea, el colesterol se acumula en la san partfcula y que es la responsable de la
gre y puede contribuir a la formaci6n en las paredes de los vasos sangufneos de uni6n especffica de las LOL a las
plaeas ateroscler6ticas (dep6sitos de 1fpidos y de tejido fibroso que causan apo protefnas receptoras de la superficie
plejfas e infartos de miocardio al impedir la' circulaci6n sangufnea). De hecho, de las c~lulas.
fue a traves del estudio de humanos con una alta predisposici6n genetica por la
aterosclerosis que se conoci6 por primera vez el mecanismo de endocitosis me
diada por receptor.
La mayor parte del colesterol se transporta en la sangre unido a protefnas, Figura] 330 Re<:eptores normales y
formando unas partfculas conocidas como llpoprotefnas de baJa densldad, 0 mutantes de LDL. (Al Protefnas
LOL (de Low Density Upoproteins; Figura 1329). Cuando la celula necesita co receptoras de LDL unidas a una
lesterol para la sfntesis de membranas, produce protefnas receptoras de LDL y depresi6n revestida de la membrana
plasmJ1tica de una c~lula nonnal. EI
las insecta en su membrana plasmatica. Una vez en la membrana, los receptores
receptor humano de LDL es una
de LDL difunden hasta asociarse con depresiones revestidas de clatrina que se
glucoprotefna transmembrana de paso
hallan en proceso de fonnaci6n (Figura 13-30A). Dado que las depresiones reo unico compuesla de unos B40 residuos
de aminoJ1cido, de los cuales
unicamente 50 se hallan en ellado
LDL citoplasmatico de la membrana.
I (B) Celula mutanle en la que las
protefnas receptoras de LOL son
IAI anormales porque carecen del
re<:eplor proleico dominic eiloplasmJ1tlco que les
de LOL pennite unirse a las vesfculas
h.lgar de union revestldas. Estas e~lulas unen LOL
a la depreslon depruion revestlde
revest ida de cletrine pero no pueden eaptarlas. En la
mayona de poblaciones humanas, uno
de cada 500 individuos liene un gen
que codifiea un receptor de LOL
IBI a1terado, y como consecuencia de ella,
liene una elevada probabilidad de
membrana morir prematuramente de un infano
pl8lm'tlce de miocardia debido a la
aterosclerosis.

664 Capitulo 13: TrMico vesicular medIante las mtas secretora y endocftica
 vestidas se separan constantemente de la membrana formando vesfculas reves-
tidas, cualquier partfcula de LOL que se halle unida a los receptores en las de-
presiones revestidas es n\pidarnente internalizada. Despues de desprenderse de
su cubierta de c1atrina, las vesfculas de endocitosis liberan su contenido en los
endosomas tempranos, que se encuentran cerca de la periferia celular. Una vez
en eJ compartimiento endosomal, las LOL pasan a los endosomas lardios y de
ellos a los Iisosomas, donde se hidrolizan los esteres de colesterol dando lugar a
colesterol Iibre, que de esta forma queda a disposici6n de la celula para la bio-
sfntesis de membrana. 5i se acumula demasiado colesterollibre en la celula, esla
detiene tanto la sfntesis de colesterol como la sfntesis de protefnas receptoras de
LDL, con 10 que la celula produce y absorbe menos colesterol.
Esta via regulada para la absorci6n del colesterol est~ perturbada en algunos
individuos que heredan unos genes defectuosos para la producci6n de protefnas
receptoras de LDL y, por consiguiente, sus celulas no pueden captar LDL de la
sangre. Los niveles elevados de colesterol en sangre resuJtantes predisponen
a estos individuos a una aterosclerosis prematura, y la mayona de ellos mueren a
una edad temprana de un infarto de miocardio como consecuencia de alteracio-
nes de las arterias coronarias. La anomalfa se puede atribuir al receptor de LDL,
el eual puede estar ausente 0 ser defectuoso -bien en su lugar de uni6n extrace-
lular para las LDL 0 bien en ellugar de uni6n intraeelular que fija el receptor aI
revestimiento de las depresiones revestidas de clatrina (vease Figura 1330B). En
este wtimo caso, el numero de protefnas receptoras que unen las LDL es nor-
mal, pero no pueden localizarse en las regiones revestidas con clatrina de la
membrana plasm~tica. Aunque las LDL se unen a la superficie de estas eelulas
mutantes, no se incorporan a la celula. Este hecho demuestra directamente la
importancia que tienen las depresiones revestidas de clatrina respecto a la en-
docitosis mediada por receptor del colesterol.
Se han deseritom~sde 25 reeeptores diferentes que participan en la endoci-
IOsis mediad a por receptor de diferentes tipos de moleculas, y todos ellos apa-
rememente uti!izan la misma ruta de las depresiones revestidas de clatrina. Mu-
chos de estos receptores, como el receptor de las LDL, entran en las depresiones
revestidas independientemente de si se han unido 0 no a sus ligandos especffi
cos; otros entran s610 si se han unido a su ligando especffico, 10 cual sugiere que
es necesario un cambio conformacional induido por elligando para- Ilegar a las
depresiones. No obstante, no todas las protefnas de la membrana plasm~tica se
aeumulan en depresiones revestidas de clatrina, 10 cual indica que estas depre-
siones acnJan como mtros moleculares recogiendo ciertas protefnas de la mem-
brana plasm~tica (receptores) y excluyendo a otras. Estudios de electronmicros-
copia de celulas cultivadas expuestas a diferentes Iigandos (que se han marcado
para hacerlos m~s visibles al microscopio elecrr6nico) han demostrado que en
una misma depresi6n revestida se agrupan muchas c1ases de receptores. La
membrana plasm~rica de una depresi6n revestida de clatrina puede acumular
probablemente unos 1000 receptores de varias clases. Aunque todos los comple
jos receptor-ligando que utilizan esta ruta endocftiea terminan aparentemente
en el mismo compartimiento endosomal, el destino posterior de las moleculas
endocitadas varia, como veremos ahara.

EI material endocitado termina frecuentemente en los lisosomas24

El compartimJento endosomal puede ser reconocido al microscopic electr6nico
anadiendo aI medio extracelular una molecuJa facilmente detectable, como la en-
zima peroxidasa, y pennitiendo que las celulas la capren por endocitosis a dife-
rentes tiempos. La distribuci6n de la molecula despues de ser caprada revela que
el compartimiento endosomal es como una serie de tubulos heterogeneos rodea-
dos de membrana y vesfculas que se distribuyen desde la periferia de la celula
hasta la regi6n perinuclear, donde a menudo se observan cerca, aunque ffsica-
mente separados, del complejo de Golgi. Mediante estos experimentos de marca-
je pueden distinguirse rapidameme dos series de endosomas: aI cabo de un mi

Transporte desde la membrana plasm~t1ca vfa endosomas: endocltosls 665

*
 Figura 1331 Relacl6nentrelos
end050mas tardlos y otros
compartJmlentos membran05OS. (A)
CeluJas cultivadas de riMn de hamster
;oven (BHK, de Baby Hamster Kidney)
fueron Incubadas en una soluci6n
conteniendo la enzima peroxidasa.
durante IS minutos, 10 cual es
suficiente para que 1a peroxidasa sea
caplada por endocitosis de fase Ouida
y transportada hasta los endosomas
lardfos. pero no suficiente para que
haya lIegado a los lisosomas. Despu&
de que las celulas fuesen fijadas y
expuCSlas a un substrato de In
peroxidasa, el produclo de la reacci6n
se hizo denso a los electrones
mediante la fijaci6n con teu6xido de
osmio. (8) Reconstrucciones seriadas
de endosomas tardfos (azul), EH
(amarillo), y complejo de Goigi (raja) a
partir de electronmicrograflas, una de
las cuales se muestra en (A). La
reconstrucci6n fue dibujada a parlir de
18 secciones ultrafinas seriadas. En (Al
nuto, las mol&:ulas endocitadas aparecen en los endosomas tempranos, justa el nucleo se indica con una N y en (B)
par debajo de la membrana plasmo1tica, y al cabo de 5-15 minutos en los endoso- se muestra en verde. (A, de M. Marsh.
mas tardios, allado del complejo de Golgi y cerca del nucleo (Figura 13-31). G. Griffiths. G. Dean. I. Mellman y A.
Como ya mencionamos, el inlerior del compartim..ienlo endosomal es o1cido Helenius. Proc. NOlL Acad. Sci. U~
(pH -6) debido a la presencia en 13 membrana del endosoma de bombas dirigi 83:2899-2903, 1986: B, por cortes!a de
das por ATP que bombcan H desde el citosol hacia ellumen. En general, los en- Man: Marsh.)
dosomas tardios son mo1s ticidos que los tempranos. Este ambiente o1cido juega
un papel crucial en la funci6n de estos orgo1nulos. Se cree que una ATPasa de Ho
vacuolar similar 0 identica a esta es la responsable de la acidificaci6n de todos
los orgAnuJos endociticos y exocfticos. incluyendo ragosomas, lisosomas. deler-
minados compartimientos del complejo de Golgi y muchas vesrculas secretoras
y de transporte.
Va hemos visto c6mo los materiales endocitados que 1Iegan a los endosomas
t'ardfos se mezclan con hidrolasas Iisosomales recien sintetizadas y acaban en
los Iisosamas. No obstante, muchas moleculas se salvan cspecfficamente de su
,cslrucci6n y son recidadas desde los endosomas tcmpranos hacia la membra-
na plasmtitica, mediante vesfculas de transporte. Como resultado de ella, s610 se
degradan las moleculas endocitadas que no son recuperadas de los endosomas.

Determinadas prote(nas son recuperadas de los endosomas

tempranos y devueltas a la membrana plasmliticalS
EI compartimiento endosomal primario actua como la principal estaci6n de c1a-
sificaci6n en la rula endocftica, tal como 10 hace la red del trans Golgi en la vfa
biosintelica-secretora. En el ambiente o1cido del endosoma temprano, muchos
receptores internalizados cambian su conformaci6n y liberan su Iigando, como
tambien ocurre en los receplores M6P con sus hidrolasas Iisosomales en los aun
mo1s o1cidos endosomas lardios. Normalmente, los Iigandos endocilados que se
disocian de sus receptores en el endosoma temprano estAn predestinados a ser
destruidos en los Iisosomas, conjuntamente con los otros contenidos del endo-
soma no unidos a membrana. No obstante, algunos otros I,igandos endocitados
permaneccn unidos a sus receptores y companen su destino.
EI destino de los receplores -y de algunos Iigandos unidos a ellos- varia se-
gUn cl tipo de receplor de que se trate: (1) la mayona de ellos retoman al mismo
dominio de la membrana plasm:itica de donde proceden; (2) algunos viajan has-

666 CaprtuJo 13: Tr;1flco vesicular mcdJante las rutas secretora y endocftlca
 Figura 13-32 Poslbles desHnos de los receptores transmembrana que han
sldo endocitados. Se muestran tres rutas que parten del compartimiemo 1. recichtjt
endosomal en una cclula epitelial. Los receptores que no son recuperados
especfficamente de los endosomas siguen la ruta desde el compartimiento
endosomal hasta los iisosomas, donde son degradados. Los receptores
recuperados pueden retornar tanlo a1 mismo dominio de la membrana
plasmAtica del que partieron (reciclajel como a un dominio diferente de la
membrana plasmalica (transcitosis). Si el ligando que es endocilado con su
receptor sigue unido a el en el entomo l'icido del endosoma, seguira la misma
ruta que el receptor; en caso eontrario, sera deseargado en los lisosomas.
~lisosoma
nucleo
mambrana
la los lisosomas, donde son degradados; y (3) otros relOman a un dominio dife- plasmatica

basolate.al
rente de la membrana plasmatiea, mediando asf un proceso Uamado transcilosis
(Figura 13-32).
EI receptor de LOL sigue la primera de estas rutas. Se disoda de su ligando
LOL en el endosoma y es reciclado hacia la membrana plasmarica para su reutili-
zaci6n, mientras que la LOL descargada es transportada a los Iisosomas (Figura
13-33). Un reciclaje similar a este, aunque mas complejo, riene lugar despues de la
endocitosis de la transfcrrlna, una prolefna que transporta hierro por la sangre.
EI receptor de la transferrina de la superfide celular descarga la transferrina, con
el hierro unido, en los endosomas tempranos mediante un proceso de endocitosis
mediada por receptor. EI bajo pH del endosoma haee que la transferrina libere el
hierro que Iransporta. La transferrina Iibre de hierro (Ilamada apotransferrina)
permaneee unida a su receptor y es reciclada a la membrana plasmalica como un
complejo receplor-apotransferrina. Cuando relorna al pH neutro del fluido extra-
celular, la apolransferrina se disocia del receptor, par 10 que puede volver a unir
hierro y empezar de nuevo el cicio. De esta forma, la rransferrina actua como una
lanzadera entre el fluido extracelular y el compartimiento endosomal, evitando
entrar en co.nlacto con los lisosomas y repartiendo el hierro que las celulas necesi-
tan para crecer.
La segunda ruta que pueden seguir a partir de los endosomas los receplOres
endodtados es la que sigue el receptor que une a1faclorde crecimieflto epidermi-
co (EGF, de Epidermal Growth Factor), una pequella protefna que eSlimula la di-
visi6n de las celulas de la epidermis y de otros tipos celulares. A diferenda de los
receptores de LOL, estos receptores unicamente se acumulan en depresiones re-
vesridas despues de haber unido EGF. Ademas, muchos de ellos no se redclan
Figura 1333 Endocltosisde LOL
medlada por receptor. N6tese que en"
el ambienle acido del endosoma, la b
~ de lOt membraM pla$mjl~ LDL se disocia de su receptor. Despues
de una serie de pasos (vease Figura
CITOSOl 13-34), la WL acaba en los lisosomas,
ENDOClTOSIS donde se degrada y se libera en forma
\ / RETORNO DE
libre el colesterol que contenfa. EI
vesicula ~' EliMINACION DEL
LOS RECEPTORES
OE LOLA LA receptor proteico de LDL vuelve a la

-
revntida .... REVESTIMIENTO
endosoma temprano MEMBRANA
/ PLASMATICA membrana plasml'itica vfa lransporte
" APARICION DE VESICULAS
de vesfculas que, tal como se muestra
en la figura. brotan de la regi6n tubular
DE TRANSPORTE
FUSION CON EL del endosoma. Para simplificar el
ENOOSOMA
dibujo, se muestra un solo receptor de
\ LDL que entra en la celula y que
I relorna a la membrana plasmatica.
Estc ocupado 0 no. tfpicamente cada
.,-~......
.. .. I receptor de LDL realiza un cicio
COleSlerOI
..
....' : :.'......
........... ....
completo. hacia ademro y de nuevo
hacia la memhrami de la celula, cada
....; ..... ::'.
libre
' '.
'

enzimas 10 minutos, dando un total de varios

hidrolfticas ciemos de vueltas en su vida media de
li.osoma 20 horas.

Transporte desde la membrana plasm~lica via endosomas: endocitosis 667

 Figura 13-34 La vfa endocftJca desde la membrana plasmatlca a los
Ilsosomas. Ellransporte desde los endosomas tempranos a los endosomas
lardios tiene lugar mediante grandes ves(culas de transporte endosomal, las
cuales contienen una gran cantidad de membrana invaginada y por ella
reciben el nombre de cuerpos muitivesicuiares. No esta claro sl deben ser
"C>\ 0
I ,/
0 /
considerados como elldosomas de mediana edad que se desplazan hacia el erldosoma ~
interior celular a medida que madman, 0 bien como unos compartimientos temprerlO ~
de transporte distintos. Su movimiento tiene lugar mediame microtubulos y
puede ser experimentalmente bloqueado con drogas que los despolimericen. I microtubulo

Finalmente, puede que los endosomas tardfos se conviertan en lisosomas. TAANSPORTE

Entre los endosomas temprallos y la superficie celular existen unas vesfculas MEDIAOO PaR
de transporte que reciclan material. mientras que otro tipo de vesfculas MICROTUBULOS I ~
hacen 10 mismo entre los endosomas tardios y la red del/fans Golgi. ....... 0 -
erldosome JVl.-O
tardio L7'-' '- 0--
sino que acaban en los lisosomas, donde son degradados con el EGF. Por consi-
guiente, la uni6n de EGF conUeva un descenso en la concenlraci6n de los recep-
I red del
~ tr,rlS
tores de EGF en la superficie celular -un proceso llarnado regulaci6n por dismi- !isosome ~ Goigi
nuci6n (down regulation). Como resultado de ella, la concentraci6n delligando
sefial en el medio cxtracelular regula el numero de maleculas de receptor com-
plementario de la superficie de la celula diana (discutido en Capftulo 15).

La relaci6n entre endosomas tempranos y tardfos es incierta26

No esta claro c6mo se desplazan las moleculas endocitadas de un comparti-
miento endosomal a otto y acaban en los lisosomas. Una hip6tesis serfa que los
. endosomas tempranos van desplazandose lentamente hacia el interior de 10. ce-
lula y pasan a ser endosomas tardfos; estos se convierten en lisosomas como re-
sultado de su fusi6n can las vesiculas que transportan hidrolasas desde 10. red del
trans Golgi, de su continuo reciclaje de 10. membrana y de su incremento de 10.
acidificaci6n. Olra hip6tesis serfa que los endosomas lempranos y tardios son
dos compartimientos separados y que el transporte entre elias tlene lugar a tra-
YeS de un compartimiento intermediario de transporte -mediante una red dina-
mica de tUbulos 0 mediante el desprendimiento de trozos del endosoma tem-
prano que son transportados aI interior celular, donde se fusionan con los
endosomas tardios (Figura 13-34). Los endosomas tempra~s y tardios se dife-
rencian, en reaUdad, en su composici6n proteica: concretamente, estan asocia-
dos con diferentes protefnas rab, las cuales son importantes para dirigir el trans-
porte vesicular, como veremos mas adelante (vease Tabla 13-1, pag. 689).

Las macromoleculas pueden ser transferidas a traves de las

himinas de celulas epiteUales mediante transcitosis 27
Algunos receptores de la superficie de las celulas epiteUales polarizadas transfie-
ren macromoleculas espedficas desde un espacio extracelular a otro, mediante
un proceso Uamado transcitosls. Estos receptores siguen la tercera via descrita a
partir de los endosomas (vease Figura 13-32). Las ratas recien nacidas, por ejem-
plo, obtienen anticuerpos de la leche materna (que les ayudan a protegerse de
las infecciones) transportandolos a traves de su epiteUo intestinal. EI lumen del
intestino es algo acido, y a esee bajo pH los anticuerpos de la leche se unen a re-
ceptores especfficos de la superficie apical (absortiva) de la celulas epiteliales del
intestino y son internalizados via depresiones y vesiculas revestidas de cJatrina,
y transferidos a los endosomas tempranos. Los complejos receptor-anticuerpo
permanecen intactos en los endosomas y son recuperados en vesfculas de trans-
porte que se fusionan con el dominio basolateral de la membrana plasmatica. Al
ser expuestos al pH neutro del fluido extracelular, los anticuerpos se disocian de
sus receptores y entran en el torrente circulatorio de los recien nacidos. En la
madre, la secreci6n de estos anticuerpos a la leche tam bien tiene lugar por
transcitosis, pero en direcci6n opuesta, desde la sangre hasta la leche. Otras ma-

666 Capitulo 13 : Tnillco vesicular mediante las rulas sccrClora y cndocftica

 .. .
, Figura 1335 Dos compartlmlentos
endosomales tempranos dlstlntos en
.' ,, ,, una c~JuJa epltellal. Los dominios
basolateraJ y apical de la membrana
unIOn
, I plasmtitica comunican con dislinlos
membrana@)_ -() compartimientos endosomales
aSlrecha plasmAliea
apical membrana tempranos, a pesar de que las
plnmAtie. mol~ulas endocltadas en ambos
endosoma apical dominios que no tienen senales para
temprano
basalaleral su reciclaje 0 lransellosis se
, I encuentnln en un compartimlenlo
endosomal tardio comun anles de ser
digerldas en los llsosomas.

membfana
pl..mlilie.
basalalefal

mfferos, incluidos los humanos, tambie;n transportan anlicuerpos a la leche de

esta manera, pero los anticuerpos permanecen en el intestino del reei~n naeido
y no entran, como pasa en las ratas, en el torreme ciTculatorio.
EI hecho de que los diferentes receptores puedan seguir diferentes caminos
a partir de los endosomas impliea que, ademas de un lugar de uni6n para el Li-
gando y olro para la depresi6n revestida, muchos receptores tambi~n han de
presentar senales de c1asificaei6n que los gufen desde el endosoma hasta la vesf-
cula de transporte apropiada, y por 10 tanto a la membrana adecuada de la c~lu
la. Se deseonoce todavia la naturaleza de estas senales.

Las celuJas epiteliales tienen dos compartimientos endosomales

tempranos distintos pero un solo compartimiento endosomal
tardio comun.28
En e~lulas epiteliales polarizadas, la endocitosis ocurre tanto en el dominio ba-
solateral de la membrana plasm<itica como en el apical. EI material endoeitado
en cada dominio eotra primero en un eompartimiento endosomal temprano
que es unieo en este dominio. Esto permite que los receplores endoeitados sean
reeiclados a su dominio original de membrana, a menos que eOl1lengan sefiales
que les obliguen a Iransitar al olTo dominio. Las mol~culas endoeitadas desde
eada dominio que no son recuperadas en los endosomas tempranos son trans-
portadas a un compartimiemo endosomaJ tardfo comun, situado cerca del cen-
tro de la c~lula, y aeaban siendo degradadas en los lisosomas (Figura 13-35).

Resumen
Las dluku ingkren maeromolkulns por endocitosis: tkterminadas regionn tk 10
membrana plasnuftktl se invag/nan y se desprenden !omumao vesiculas etuloclli.
cas; mudlaS tk laJ particulas y molkuJas endocitattas acaban en los lisosomas,
doruli son degradadn.s. lA endocitosis tiene lugar tanto constitutilJQmenle como en
respuestn a seiinln e..rtracelulores.
lA en.dodtosis es tan frecuenle en mucluu dluJas que una importantefrtu:d6n
tk 10 membrana plasnuftico es intemalizada cada hom. Los componentes tk 10
membrana plasnuftktl {prote{nas y lfpUlDsJ son continuamenle tkuueltos a 10 su-
perficie celulor mediante un gran cklo endocftico-uodtko medlado prlru:ipal

Transporte desde la membrana plasmti.tiea vfa endosomas: endocilOSis 669

mente par depresiones y veslc.das revestida$ de clatrlna. Muchos receptores de Ia
superjide celular que SIt unen a nuu:romolkulas umu:elulares espedJicas acaban
loaJliz4IIdou en Ins depreswnn revestidas de ctatrlna y, "or io wnW, son internali-
zndos en veslculas tw:ubkruu de tlatrlna -un proce.so denominado endodtosis me-
diada por rt!Uptor. Las veslculas endocfticas N!lJle$tidas piertkn nfpidamente su cu
bkrta de clatrlnn y SIt [wronan con los endosonuu temprano$. La mnyorla de
ligatulos SIt separan de sus reaptons en el ambiente dcido de los endosonuu y actI
ban en los lisosonuu, mientras que Ia mayorln de reaptons son redclado.s a Ia su
perftciecelular mediante ueslculas de transporte, y son reutilizados. Pero los compk
jos receptorligatulo pueden seguir otms ndm desde el compartimiento endosomaL
En algunos casos tanto el receptor como eiligando acaban degrtuldndose e" los liso
somas, dando lugar a Ia "regulaei6n por disminucwn del receptor. En otros casas,
H

ambos son transferldos a un dominio de Ia membrana plasnuftiat diferente y, por 10

tanto, elligando es liberado por exocitosis en una superficie de Ia dlula diferente de
In deorigen -un proce.so llanuulo transcitosis.

CITOSOl
Transporte desde la red del trans Golgi hasta la
superficie celular: exocitosis29
NUClEO PEROXlSOMA

Habiendo considerado el sistema digestivo interno de la celula y los diversos ti MITOCONDRIA PlASnoos
pos de trarko de membranas que convergen en los lisosomas, ahora volveremos
al complejo de Goigi y examinaremos las rutas secretoras que conducen al exte RETiCUla ENDOPLASMATICO
rior celular, Norrnalmente, las vesiculas de transporfC destinadas a la membrana
plasm<1tica abandonan el trans Golgi siguiendo un flujo constante. Las protefnas
de membrana y los Ifpidos de estas vesfculas aportan nuevos componente a la
membrana plasm<1tica celular, mientras que las prote{nas solubles de estas vesf
culas son secretadas al espacio extraceluJar. La fusi6n de las vesfcuJas con la
membrana plasm:itica se llama exocllosis. De esla forma, por ejemplo, las cl!lu
las producen y secretan la mayoria de los proteogJucanos y g1ucoprotefnas de la
matriz e:ctrtu:elillar, como se discule en el Capitulo 19. SUPERFIOE CElUlAA
Todas las cl!lulas necesilan esla ruta de secrecl6n constitutiva. No obslante,
las uluJas especializadas en la secreci6n disponen de una segunda nlla seerelo
ra en la que las protefnas solubles y otras subslancias se almacenan primero en
vesiculas de sec;reci611 y son segregadas m<1s tarde. ~Ia es la ruta de secrecl6n reo
gtdada, que se encuenna principalmeme en cl!lulas especializadas en secrelar
rapidamenle productos como las hormonas, neuronansmisores 0 enzimas di
gestivas, cuando es necesario (Figura 13-36). En eSla secci6n considerarcmos el
papel del complejo de Golgi en eSlas des rutas de secred6n y compararcmos los
mecanismos que intervienen en ambas.

Parece que muchas protefnas y Ifpidos son transportados

automaticamente desde el ER y el complejo de Golgi
ala superficie celuJar 30
En una celula capaz de realizar secreci6n reguJada, antes de abandonar la red
del trans Golg! se han de separar por 10 menos tres tipos de prolefnas: las desli
nadas a los Iisosomas (vfa endosomas tardfos), las destinadas a las vesfculas de
secreci6n y las deslinadas a ser descargadas inmediatamente en la superficie ceo
lular. Va hemos visto que las protefnas destinadas a los Iisosomas son seleccio
nadas para su empaquetamiento en vesfculas de Iransporte especfficas (me
diante la M6P en el caso de las hidrolasas lisosemales), y se cree que sel'iales
an:ilogas a estas dirigen las prote{nas cmpaquetadas al interior de las vesfculas
de secreci6n. La mayorfa de las otras protefnas son transportadas directamenle
a la superficie celular mediante una rum par derecto no selectiva (las prolefnas
que deben ser selectivamente dirigidas a un dominio de la superficie celuJar 0 a
otro son excepciones) (Figura 133n. Asf, se ha propuesto que en una cl!lula no

670 CapftuJo 13: Tr.1flco vesicular mediante las rutas secrelora y endocftica
 proteinlll r&ci'n flBur8l3-36 Larntadesecred6n
"rllet'lWS PlIr. lipldos de membrana
Stl SlCrecl6n regulada y constltutiva. Las dos rulas
pllllm6tlca rec"n
constllullv. .intetizados divergen en la red del traIlS Golgi. Muchas
SECRECION prolefnas solub1es son segregadas
~ CONSTfTUT1VA
continuamente de Ia c6u1a a tnl.v~ de la
....-' - \ fuli6n de
membr1ln. nita ~ St'tTrdOn oonstitutim (tamb~n
no regulMie Uamada nita par defectol. que acnia en
protltint. de membr.nt lodas las cetu1as. Esta v{a lambH!n nutre a
plllm6ticl reci6n Ia membrana plasmatica con protdnas y
,inletlzeda.
IIpidos acabados de sinletizar. Las ci1u1as
C1TOSOl

-- -
aMlal d. tipo especiaJizadas en 18 secreci6n wnbilm
~ hormontl 0 d. disponen de una rota de SreCi6n
nttllOlr_mitor
reglilada, medianle la cual detenninadas
/' protefnasde la red del. tmnsGolgi son
tr.n.ducc'On
dtlsel'ial conducidas en vesfculas de secreci6n.

\ SECREC16N
REGULADA
donde las prOiemas son empaqueladas y
concentradas hasta que unasenal
cxtracelularestimula su sccrcci6n. La
ve.lcula de .&CreciOn sccrcci6n regulada de PC<luenas
complejo de Goigi que elmllcena prOIl/nU 1110lceulas, como la histamina. tiene lugar
de .&creccI6n y Olru
'llblrtanci de fonna similar: estas molkulas son
activamcnle lransponadas desde el citosol
a vesfculas de secred6n ya (armadas. All!, a
menudo, se cornplejan con determinadas
polarizada, tal como las celulas de la serie blanca de la sangre 0 los fibroblastos.
macromolOCulas (proleoglucanos en el
si las proleinas del lumen del ER no son especfficamente relenidas como resi-
caso de la histamina). de manem que
dentes del ER 0 del complejo de Golgi 0 no son seleccionadas para las rutas que puedcn ser almacenadas en grandes
llevan a la secreci6n regulada 0 a los Jisosomas, seran autom4ticamente trans- canlidades sin producir una presldn
portadas a traves del complejo de Golgi hasta la superficie celular mediante la osm6tica excesi\'amente elevada.
via secretom constilul.iva. Veremos que en celulas polarizadas, en las que se han
de transferir diferentes productos a diferemes dominios de la superficie celular,
las opciones son un poco m4s complejas.
Figura 1337 Los procesos de
dasUlcacl6n de prote(nas en la red
Las vesfcuJas de secreci6n emergen por gemaci6n del 'rons Goigi meJor conocldoa. Las
desde 10 red del trans Golgl" prolefnas marcadas con manosa
6fosfalo son dirigidas hacia los
Las celuJas que est4n especializadas en secrelar rapidamente algunos de sus Jisosomas (via endosomas tardfos)
producfoS en respuesta a una senal concentran y almacenan estos produClOS en mediante vesIculas de transporle
vesfculas de secrecl6n (frecuentemente denominadas grd/lulos de secrecion 0 recubienas de c1atrina (v~ase Figura
IJesfculas de nucleo demo porque se obselVan micleos densos cuando se miran al 13-23). Las protefnas cuyas senales les
microscopic elecII6nico). Las vesfculas de secreci6n se forman por gemaci6n de dlrlgen hacla vesrculas de secrecl6n
vesfculas recubienas de clatrina, a panir de la red del tram Golgi, y libetan su son concentradas en grandes vesrculas
recublertas de c1atrlna, que
rapidamente pierden su recubrimiento
transformllndose en vesiculas de
melela de protelnll cl..lrlClClOn secrecl6n -un proceso que
oesviO MEDIAOO POR UNA I1nlcamente liene lugar en c~lulas
SEtiiAl HACIA lOS USOSOMAS
secretoras especializadas. Al parecer.
/ en c~lulas no polarizadas.las protefnas
, r~orde
mana,. IHotfato
que no presentan caraClerislicas
especiales son lransportadas hacla la
\ superficie celular por defeclO a Ira\"6
de la ruta de secreci60 coostirutiva En
cilulas polarizadas. sin embargo, las

, prolefnas de secreci6n y las de

membrana plasmatica son dirigidas
selectivamenle hacia el dominio apical
o hacia el dominio basolaleral de la
\
membrana plasmalica, de forma que
al menos una de estas dos rulas ha de
eSlar medlada por una senal, como
ER
complejo de GOI;! veremos mlls adelantc.

Transporte desde la red del 'rails Goigi hasta la superflcle celular: exocllosls 671
conlenido al exterior celular en respuesta a una senal eXlraceluJar. El produclo
secretado puede ser tanlo una mollkula pequefia (como la histamina) como una
proteina (como una honnona 0 una enlima digestiva).
Las protefnas destinadas a las vesiculas de secreci6n (a menudo denomlna-
das proreinas de secreciOn) son empaquetadas en vesfculas adecuadas en la red
del (ram Goigi. En este caso, parece que el mecanismo implica la agregaci6n se-
lectiva de las protefnas de secreci6n. Estos agregados se pueden deteclar al mi-
croscopio electr6nico como material electrodenso en el lumen de la red del
trans Goigi. Se desconoce cual es la ~senal de clasificaci6n" que dirige a las pro-
tefnas de secreci6n a estos agregados, pero se cree que es una zona senal que
presentan muchas protefnas de esta c1ase. $i un gen que codifica una prote(na
de secreci6n se transfiere a una c61ula secretora de otro tipo, que normal mente
no fabrica esta protefna, la proteina extrafta se empaqueta de manera apropiada
en vesiculas de secreci6n.
Tampoco se conace c6mo se segregan los agregados de las prolefnas de se-
creci6n en las vesfculas secretoras. Las vesiculas de secreci6n contienen protef-
nas de membrana especiates, algunas de las cuates pueden actuar como recep
tores uniendo el material agregado en la red del (railS Golgi. No obstante, los
agregados son demasiado grandes para que cada mollkula de la protefna secre-
tada pueda unirse a su propio receptor, como se propone para el U'anspone de FIgura 13-38 Formacl6n de vesfculas
de .secred6n. Esla electronmicrografTa
enzimas Iisosomales. La captura de los agregados en las vesiculas de secreci6n
mUC$lra algunas vesiculas de sccreci6n
puede parecerse mas a la caplaci6n de panfculas por fagocilosis en la superficie rormdndose a panir de la red del traIlS
celular, la cual tambh~n puede estar mediada por membranas revestidas de c1a- Golgi en una ct'Hula ~ del pdncreas
trina. secretora de insulina. Para locaJizar las
Despues de que las vesfculas de secreci6n inrnaduras emerjan de la red del moleculas de clatrina se ha utilizado
trans Golgl, su cubierta de c1atrina es eliminada y su contenido se condensa attn un anticuerpo conjugado con esferas
mas -hasta unas 200 veces respeclO a su concenlraci6n en el lumen del Goigi de oro coloidal (puntos negrQs). Las
(Figura 13-38). La condensaci6n tiene lugar de repente y parece que es debida a vesfculas de secreci6n inmaduras
la acidificaci6n del lumen de la vesfcula, inducida por una bomba de H- impul- (cabezas de flecha negras), que
sada por ATP de la membrana de la vesfcula. Debido a que las vesiculas maduras conlienen la prolema precursora de la
son tan densas, la relula secretora libera grandes cantidades de material por insuHna (proinsulinaj, se hallan
exocitosis en cuanlO es necesario (Figura 1339). revestidas de c1atrina En cuanto la
vesfcula se ha fonnado, esle
recubrimiento de datrina es
A menudo las protefnas son procesadas proteolfticamente rapidamenle eliminado, ya que no se
durante la formaci6n de las vesfcuJas de secreci6n32 encuentra en las vesIculas de secreci6n
maduras, las cuales tienen un nudeo
La condensaci6n no es el unico proceso por el que se ven afectadas las protefnas muy denso (cabezas de flec/la vadas).
de secreci6n a medida que las vesfculas de secreci6n maduran. Muchas hormo- (Por cortesfa de Lelio Orcl.)
nas polipeplfdicas y neuropepUdos, asf como muchas enzimas hidrolfticas secre-
tadas, se sintetizan como prOlefnas precursoras inaclivas, a partir de las cuales
tienen que ser Iiberadas las mol~culas aclivas por proleolisis. Se cree que esta hi-

Figura t3-39 Exocltosls de vesfcuh15

de secrecl6n. La eleclronmicrografia
mueslra 1a liberad6n de insulina desde
una vesfcula de secreci6n de una
c~lula ~ pancreatica. (Par cortes{a de
Lelia Ord. de LOrd, J-D. Vassali, y A.
Perrclet, Sci. Am. 256: 8594,1988.)

672 Capftulo 13 : Tntfico vesicular mediante las mlas secreton. yendodlica

 pro-opioconina FIBUra 1340 Rutasallematlvasde
procesamlento de Ia prohormona
H,N
_ido /
pro-oplocortlna. los cones iniciales

.."" son realizados por proteasas unidas a

la membrana que conan cerca de
pares de residuos aminoacidos

- - '"
corticolropina p-tipotropina

I IACTNI
/ I cargados positivamente (Lys-Arg. Lys-
Lys, Arg-Lys, 0 Arg-Arg). Mediante
reacciones accesorias se obtienen los
u-MSH r-tipolropina p-MSH IHndorlina
productos de secreci6n finales.
Diferentes tipos celulares tienen
diferenles tipos de enzimas, de
dr61isis empieza en la red del trans Golgi, y continua en las vesiculas de secreci6n manera que el mismo precursor
ya veces en el fluido extracelular despul!s de que haya ocurrido la secreci6n. Mu- prohormonal pucde ser usado para
chas polipl!ptidos secreados tienen, por ejemplo, una prosecuencia amino termi- producir dlferentes hormonas
nal que es eliminada justo antes de la secreci6n, formAndose la protefna madura. peptfdicas. Por ejemplo, en el16bulo
Estas protefnas se sintetizan, pues, como preproprole{nas, en las que la prese- anterior de la hip6fi.sis a panir de la
clUmcia consisle en el pl!ptido senal del ER que se elimina en el ER rugoso. En pro-opioconina 5610 se producen
la conicitropina (ACTH) y la
OlroS casas las moll!culas peptfdicas senal se sintetizan como poliprote{nas que
P-lipotropina, mientras que en el
contienen ml1ltiples copias de una ntisma secuencia aminoacfdica. En casas aun 16bulo intennedio se producen
mM complejos una variedad de moll!culas peptfdicas senal son sinletizadas principalmente aMSH, y-Iipotropina,
como partes de una linica poliprotefna que es la precursora de los mUltiples pro- P-MSH Ypendorfma.
ductos finales, los cuales son cortados individualmente a panir de la cadena poli-
peptfdica inicial; la misma poliprotefna puede ser procesada de formas diferentes
produciendo diferentes pl!ptidos en diferentes tipos celulares (Figura 13-40).
iPor qu~ es tan cornun el procesarniento proteolftico en la ruta de secreci6n?
Algunos de los peptidos producidos asf, como las encefalinas (neuropeptidos de
cinco aminoAcidos con una actividad parecida a la morfina), son demasiado cor-
tos en sus fonnas maduras para ser cotransportados hacia ellumen del ER 0 para
poder tener las senales necesarias para empaquetarse en las vesiculas secretofaS.
En el caso de las enzimas hidroUticas secretadas, 0 de cualquier proteina cuya ac-
tividad pueda ser peligrosa en el interior de la ~Iula, el retraso en la activaci6n
por rotura hasta que la prot'ema lIega a una vesicula de secreci6n 0 hasta que ha
sido secretada, proporciona una clara vemaja en la prevenci6n de que acme pre-
maturamente dentro de la ceJuia en la que ha sido simetizada.

Las vesfculas de secreci6n permanecen cerca de la membrana

plasmatica hasta que una sefiaJ les hace liberar su contenido!l5
Una vez cargada, una vesfcula secretora tiene que ir allugar de secreci6n, don-
de debe esperar hasta que la cl!lula reciba la senal de secreci6n. En algunas cl!-
lulas ellugar de secreci6n estA lejos del complejo de Golgi. Las celulas nervlosas
proporcionan el ejemplo mM extremo. Las prote(nas de secreci6n, como los
neurotransmisores peptidicos que deben ser Iiberados aI final del ax6n, son sin-
tetizadas y empaquetadas en vesfculas del cuerpo celular, donde se sittlan los ri-
bosomas, el ER y el complejo de Golgi. Entonces deben viajar a 10 largo del ax6n
hasta a1canzar el terminal ax6nico -una distancia muy cona 0 de mM de un me-
tro. Como se vio en el Capftulo 16, las vesiculas utilizan protemas motoras uni-
das a su superficie para propulsarse a 10 largo de los nticrorubuJos axonales, la
oriemaci6n de los cuales gufa este trMico a 10 largo del ax6n en la direcci6n
apropiada. En las celulas epiteJiaies polarizadas los microtubuJos pueden tener
un papel similar dirigiendo las vesfculas de secreci6n hacia la superficie que co-
rresponda.
La ultima etapa de la ruta secretora regulada es la Iiberaci6n del produclo
por exocitosis. La senal de secreci6n es a menudo un mensajero qufmico, como
una hormona, que se une a los receptores de la superficie celular. La aClivaci6n
de estos receptores genera senales intraceluJares, que incluyen a menudo un in-
cremento transitorio de la concentraci6n de Caz. Iibre en el citosol. En el caso de
un ax6n nervioso, la senal de exocitosis nonnalmente es una excitaci6n ell!ctrica

Transporte desde la red del trans Golgi hasta la superficle celular: exocitosls 673
 Figura 13-41 ElcctronmJcrograffas
que muestran el pnx:eso de exocltosls
en ct:lulas cebadas de rata. La celula
de (A) no ha sido estimulada. La c~lula
de (B) ha sldo aetivada, por un ligando
extracelular soluble, para segregar la
histamina que tenfa almacenada. Las
vesiculas que contienen hislamina
aparecen oscuras, mienlras que las
que la han liberado son c1aras. EI
material que queda en las vesiculas
vadas consiste en una red de
proleoglucanos a la que nonnalmenle
se halla unida la hislamina
almacenada. Cuanda la vesicula
secretora se ha fusionado can la
membrana plasmatica, la membrana
de la vesicula sccrelOra actua
normalmente como diana a la cual se
-un potencial de acci6n- que se ha producido par la uni6n de un transmisor unen otms vesfculas de sccreci6n. AsI,
qufmico a los receptores de la superficie celular. EI potencial de acci6n provoca la c~lula de (8) presenta grandes
una entrada de Cal. en el terminal ax6nico a traves de canales de Cal + depen- cavidades delimitadas por las
dientes de voltaje. Mediante un mecanismo desconocido, la repentina entrada membmnas fusionadas de muchas
de Cal., 0 alglin otro lipo de sei\al intracelular en la celuJa secretora, dispara la vesiculas secretoras vadas. que ahora
exocitosis, provocando que las vesfculas de secreci6n se fusionen con la mem- se hallan en continuidad con la
brana plasmatica y liberen su contenido al espacio extracelular. membrana plasmtitica. Esta
continuidad no siempre es patente en
el plano del corte realizado a lraves de
La exocitosis reguJada es una respuesta localizada la c~lula. (De D. Lawson, C. Fewtrell,
de la membrana plasm'tica y del citoplasma subyacente 34 B. Gomperu y M. Raff. j. Exp. Med.
142:391-402,1975. con penniso de
La histamina es una pequei\a mol6:u1a segregada por las celuJas cebadas, me-
copyright de The Rockefeller
diante la ruta regulada, como respuesta a Iigandos especfficos que se unen a los University Press.)
receptores de su superficie. La histamina es la responsable de muchos sfotomas
desagradables, tales como el prurilo 0 los estornudos, que acompai\an a las re-
acciones alergicas. Si se incuban celulas cebadas en un media que contenga un
estimulante soluble, se observa que la exocitosis se produce par toda la superfi-
cie celular (Figura 13-41). Sin embargo, esta no es una respuesta generaHzada de
tada la celula, ya que si el ligando estimulador est a artilicialmente fijado a una
superficie s61ida de modo que 5610 puede interaccianar can una regi6n localiza-
da de la superficie de la celula cebada, la exocitosis queda restringida a la regi6n
en la que la celula entra en contacto con elligando (Figura 13-42). Clarameme,
distintos segmentos de la membrana plasmarica pueden actuar con indepen-
dencia del resto de la membrana. Como resultado de elio, la celula cebada, a di-
nocleo
ferenda de una celula nerviosa. no responde como un todo cuando esta estimu-
lada; la aClivaci6n de los receplOres, las sefiales intracelulares resultantes y la
exocitosis posterior estan localizadas en la regi6n particular de la celula que ha
sido exdtada.

Los componentes de la membrana de las vesfculas de secreci6n

se reciclan 3S
Cuando una vesfcula secretora se fusiona con la membrana plasmatica, su con-
tenido se descarga desde la celula por exocitosis y su membrana pasa a formar

Figura 13-42 La exocltosls como una respuesta locaI.Izada.

EJcclfOnmicrogrnfia de una c;~lula cebada que ha sldo estimulada para segregar
histamina por un eslimulante acoplado a una amplia esfcm s6lida. La exocitosis
se ha producido unicamcntc en [a region de la c~lula que se halla cn contaeto
can esta superficie. (Dc D. Lawson, C. Fewtrcll y M. Raff. j. Cell. Bioi. 79:394-400, superficie regi6n de
1978. can pennlso de copyright de The Rockcfeller Unlvcrsity Prcss.) e~ocitolil

674 Capftulo 13: Trafico vesicular mediante las rutas secretora y endodtica
parte de la membrana plasmatica. Este hecho podrfa incrementar notablemente
el area de [a superficie de [a membrana p[asmatica, pero s610 ocurre de forma
transitoria ya que constantemente son eliminados de la superficie ce[ular com-
ponentes de membrana mediante endocitosis, y este proceso es por 10 menos
tan rapido como 10 ha sido el de adici6n de componentes por exocitosis. Est'a
eliminaci6n devuelve las prote(nas de [a membrana de la vesicula secretora a la
red del trans Goigi (probablememe vfa endosomas), donde pueden ser utiliza-
das de nuevo. Este recidaje mantiene un estado estacionario de distribuci6n de
componentes de membrana entre los diversos compartimientos celulares. La
cantidad de membrana vesicular que se afiade temporalmente a la membrana
plasmMica puede ser enorme: cuando una celula acinar del pancreas es estimu-
lada para secretar sus enzimas digestivas, en la membrana plasmatica apical
(cuya area es de s610 30 J.Im 2) se insertan aproximadamente 900 J.l.m~ de mem-
brana vesicular.

Las vesiculas simipticas se forman a partir de los endosomas36

Las CIHuias nerviosas (y algw1as celulas endocrinas) tienen dos tipos de vesiculas
secretoras. Como acabamos de ver, estas celulas empaquetan protefnas y pepti-
dos en vesiculas de secreci6n de contenido denso por la ruta tipica, y son libera-
das mediante la ruta de secreci6n regulada. No obslante, eslas celulas utilizan
ademas otra c1ase especializada de pequefias vesiculas de secreci6n (-50 nm de
diametro) que se forman de manera diferente. ESlas vesiculas slmiplicas alma-
cenan neurotransmisores pequefios, como la acetilcolina, el glutamato y el aci-
do y+aminobutfrico (GABA), que se usan en las sinapsis qllfmicas para que dos
celulas se comuniquen rapidamenle (y, en algunos tejidos endocrinos, en comu-
nicaciones locales). Cuando un potencial de acci6n lIega al terminal nervioso,
las vesiculas Iiberan Sll contenido en una fracci6n de un milisegundo -algllnas
neuronas disparan mas de 1000 veces por segundo- Iiberando vesiculas simipti-
cas cada vez. Esto precisa un nipido relleno de las vesiculas, que al parecer no se
generan a partir de la membrana del Golgi, sino mediante reciclaje local de la
membrana plasmalica, como se indica a continuaci6n. Se supone que los com-
ponentes de la membrana de las vesiculas sinaplicas son descargados inicial-
mente a la membrana plasmatica mediante la rula de secreci6n constitutiva y
entonces son recuperados por endocitosis y transferidos a los endosomas, desde
los cuales se agrupan y surgen por gemaci6n para formar las vesiculas sinapti-
cas. Los componentes de la membrana de las vesiculas incluyen transportadores
especializados en la captaci6n de neurotransmisores del cilosol, donde son sin-
tetizados. Una vez lien as con el neurotransmisor, las vesfculas vuelven a la
membrana plasm<ilica, donde esperan hasta que la celula es estimulada. Des-
pues de que Iiberen su conlenido, los componentes de su membrana son recu-
perados de la misma manera y relltilizados otra vez (Figura 13-43). Se pllede ob-
servar el cieJo completo, desde la endocitosis hasta la exocitosis, afiadiendo un
marcador, como la peroxidasa, aI medio externo y siguiendo su paso a los endo-
somas y Sll vuelta a la superficie celular en vesfculas sinapticas.

Las celulas polarizadas dirigen las proteinas desde la red del trans
Golgi hasta el dominio apropiado de la membrana plasmatica!37
La mayorfa de las celulas de los tejidos estan polarizadas y lienen dos (ya veces
mas) dominios de membrana diferentes hacia los cuales van dirigidos diferen+
tes tipos de vesiculas secremras. Aparece, pues, el problema general de c6mo se
organiza la salida del complejo de Goigi para que se manlengan las diferencias
enlre un dominio membranoso y olro. Una eel lila epitelial tfpica, por ejemplo,
tiene lin dominio apical, que da al lumen y que a men lido tiene estfllcturas es-
pecializadas como los cilios 0 los microvilli, y un dorninio basolateral, que com-
prende el resto de la celula. Los dos dominios estan separados por un anillo de
uniones estrechas 0 eslancas (vease Figura 23-35). Estas uniones especializadas

Transpone desde la red del trafts Goigi hasla la superficie celular: exocitosls 675
 (DLiBERACI6N DE LOS
COMPONENTES DE LA
VESICULA SINAPTICA
EN LA MEMBRANA
PLASMATICA
@ENDOCITOSIS DE LOS
COMPONENTES DE LA
VESICULA SINAPTICA
Y L1BERACI6N EN EL
ENDOSOMA
@GEMACI6N DE LA
VESICULA SINAPTICA
DESDE EL ENDOSOMA
@CARGADEL

.....
NEUROTRANSMISOR
A LA VESiCULA
SINApTICA

.. :. @SECRECI6NDEL
NEUROTRANSMISOR
POR EXOCITOSIS EN
RESPUESTA A LA
ACTIVACI6N CELULAR

entre celulas (discutidas en el Capitulo 19) impiden que las prolefnas. y los lfpi- Figura 13-43 La formacion de
dos en la hemimembrana exterior, se desplacen entre las regiones apical y baso- vesiculas slmiptlcas. Estas vesiculas
lateral, de manera que no 5610 la composici6n proteica sino tam bien 1a lipfdica diminutas y unifonnes se encuentran
de los dos dominios de membrana son diferentes. Concretamente, la regi6n de s610 en celulas nerviosas y en algunas
celulas endocrinas, donde almacenan
la membrana apical esta muy enriquecida en glucolfpidos, los cuales se piensa
y secretan pequenos
que protegen a esta superficie del dana que puedan producir, por ejemplo, las
neurotransmlsores.
enzimas digestivas y el bajo pH que se encuentra en lugares como ellumen del
intestino. Las protefnas de la membrana plasmatica que eshin unidas a 1a bicapa
lipfdica mediante un glucosilfosfatidilinosilol {GPO !ambien se encuentran ex-
c1usivamente en la membrana plasmalica apical. Si a una proteina que normal-
mente es transferida a la superficie basolateral se Ie anade. mediante manipula-
ci6n genetica, una secuencia de uni6n a un GPI, se observa que la protefna es
descargada en la superficie apical. Las proteinas unidas a GPI parecen asociarse
con glucolfpidos y pueden ser transportadas a la misma regi6n de la superficie
celular como resuJtado de esta asociaci6n. Sin embargo. se desconoce c6mo tie-
ne lugar esta selecci6n.
En principio, las diferencias entre los dominios de la membrana plasm<itica
no son las que determinan la descarga de los componentes de la membrana
apropiados. La que ocurriria seria que los componentes de la membrana po-
drfan ser descargados en cualquier punto de la superficie celular y entonces ser
estabilizados selectivamente en algunas posiciones y eliminados selectivamente
en otras. Esta estrategia de descarga al azar y retenci6n 0 eliminaci6n selectiva
parece que funciona en determinados casos; no obstante, hay ejemplos muy
c1aTOs donde la transferencia est<i dirigida especfficamente. Asf, a menudo, las
celulas epiteliales secretan una serie de productos en su superficie apical-como
las enzimas digestivas 0 el moco, en el caso de las celuJas que se encuentran en
el intestino- y otra serie de produclos en la superficie basolateral-como la lami
nina y OtTOS componentes de la l<imina basal. Esle tipo de celulas deben tener
mecanismos para dirigir las vesfculas que Ilevan cargas distintas, rodeadas de
distintos tipos de membranas, a diferenles dominies de la membrana plasmati
ca. Examinando celulas polarizadas en cultivo, se ha vist'O c6mo las protefnas
que salen del ER destinadas a los diferentes dominios viajan juntas hasta que lie
gan a la red del trans Goigi. Allf son separadas y enviadas mediante vesfcuJas de
secreci6n 0 de transporte al dominie de la membrana plasmarica apropiado. En
algunos casos las protefnas basolaterales y las apicales tienen distinlas seflales
de c1asificaci6n que las dirigen al dominic correspondiente -0 direclamente 0
r,
676 Capftulo 13 : Tnifico vesicular mediante las rutas sccrctora yendocflica
 v..leul~ de vesk;ul~ de' endotom. lemp'~no Figura 1344 CiasIRcacl6n de las
tr~nsporte lr~nsporte
b.soleleral prote{nas de la membrana plasmlhlca
basol~IIIr~1 ~pie.1
en una celula epltellal polarizada. Las
prolefnas recien sinlelizadas pueden
a1canzar su dominio de la membrana
plasmll.tica apropiado mediante una
vfa directa (AI 0 indirecta (8). En la vfa
indirecta una prote{na es recuperada
del dominio de la membrana
plasmll.tica inapropiado por
endocilosis y luego transportada aI
dominio CQrreclo via endosomas
tempranos -eli decir, por lranscitosis.

IA) CLASIFICACtON DIRECTA DE LAS IBI CLASIFICACION INDIRECTA

PRDTEINAS DE MEMBRANA EN vIA ENOOSOMAS termlnalet
LA REO OEl TRANS GOlGt nelVl~s

indirectameme vfa endosomas (Figura 1344); en otros casas 5610 las protei:nas
destinadas a uno de los dos dominios membranosos tienen una sei'tal de c1asifi-
caci6n, mientras que el otro dominio no requiere de ninguna sefial (yes alcan-
zado por una ruta por defecto).
Una c~lula nerviosa es un ejemplo Iimile de c~lula polarizada: la membrana
plasmAtica de su terminal ax6nico esla especializada en enviar sei'tales a olras
c~luJas, y la membrana plasmatica de su soma celular y dendritas esta especiali-
zada en recibir sei'taJes de otras cl!luJas nerviosas. Estos dos lipos de dominios de
la membrana plasmatica no son 5610 funcionaJmente distinlOS sino que tambi~n
Henen una composici6n proleica distinta. Estudios del trMico de proteinas en
c~lulas nerviosas en CUllivo indican que, en 10 que respecla a rransporte vesicu-
lar desde la red del trans Golgi a la superficie celular. la membrana plasmalica
del soma celular nervioso y de las dendritas es equivalente a la membrana baso-
lateral de una celula epitelial polarizada, mientras que la membrana plasmatica

membrane
del ax6n y de los lerminales nerviosos es equivalente a la membrana apical de la plnm'tice
bnolaterel
misma celula (Figura 13-45). Asf, una protefna que eSle destinada a un dominio dendritas

--
espec!fico en una celula epitelial. lambien 10 eS[a, y en el dominio equivalenle,
en una celula nerviosa.
ee!Ules c6lul.
epitel

Resumen
Figura 13-45 Comparad6n entre dos
lAs proteflUU plUden ser secretadas de Ima dlula por uocitosis a travis de una tJpos de dlulas polarlzadas. Teniendo
roto. regul.adtJ 0 COnstirutilHL En las rulas reguladtu las nwlkulas son alnuu:ena- $dlo en cuenta los mecanismos
diu ~n vufculas de secreci6n 0 en vesiculas sln4pticas, las cualn no u Jusionan con utilizados para dirigir las prolefnas
Ia membrana plasm4.tica liberaruro su contenido, hasta ql.e u recibe una seiial u- hacia los diferentes dominios de una
lracelular. Este empaquetamlento dentro de estas ueskuta.s. que tlene lugar en Ia c~lula, la membrana plasm<tlica del
soma celular nervioso y las dendrilas
red del trans Golgi, (IS prec:edJdo por una colUknsaci6n selectiva de las protefnas.
parecen ser equivalentes aI dominic
Las vesfculas silUfptlau son proplas de las dJulas nerviosas y d~ aJgulUU dlulas
basolaleral de una celula epitelial
endocrllUUi u forman a partir de los endosomas y son responsables de Ia secrecwn polarizada. mienlras que la membrana
regldada de pequeiios neurotransmisores. Mientras que las nltas regrlladas s610 plasm.hiea de una axon y los
actdan en c:ilulas ~ espedaliuulas, en todas las c:ilulas existe una nita de termlnales nerviosos aetuart'an como
secreci6n constitutiva:lf'ray lin trallsporte vesicular continuo dew Ia red del trans el dominio apical de una celula
Golgi a la membrana plasmatlca. epilclial.

Transporte desde la red del trailS Goigi hasta la superflcle celular: exochosls 677
 Las protefnas fabricadas en el ER son automdticamente rransferidas a la red
del trans Golgi y tkspu~ a la membrana plasnuftica a traves tk la rum coustituti-
va, par tkfecto, a menos que sean captadtu en otras mtas 0 retenidas par seiiales tk
clasificacidn especlflcas. No obstante, en las dlulas palarizadas las mtas de tralU-
pam desde la red del trans Golgi a fa membrana plasmtftica preseutan un control
selectiIJo asegurando que diferentes tipos de protefnas de membrarUl y llpidos sean
transferidos a los tlominios de la membrana plasmdtica apropiados.

Mecanismos moleculares del transporte vesicular y CITOSOL

mantenimiento de la diversidad de compartimientos""
NUCLEO PEROXISOMA
Ahora vamos a tratar la cuesti6n mas importante del treifico vesicular. Hemos visto
que la celula contiene 10 0 mas compartimientlJ, Iimitados por membrana, qu(- MITOCONDRIA pLASTIDOS
micamente distintos y que el transporte vesicular media un intercambio conrinuo
de componentes entre ellos (vease Figura 13-3). En presencia de este intercambio RETICULO ENDOPLASMATICO
masivo, ic6mo mantiene su caracter especializado cada compartimiento?
Para contestar a esta pregunta primero hay que considerar que es 10 que de- GOLGI
fine el caracter de un compartimiento. Por encima de todo, parece que es la na-
LlSOSOMA
turaleza de la membrana que 10 delimita: los marcadores expuestos en la super-
ficie citos6lica de la membrana gufan la direcci6n de las vesfculas, asegurando ENDOSOMA
que s610 se fusionen con el compartimiento adecuado, dictando por 10 tanto el
patr6n del trafico entre un companimiemo y otro.
Una vez detenninada la presencia de distimos marcadores para cada com- SUPERFICIE CELULAR
partimiento, el problema radica en explicar c6mo se mantienen componemes
especfficos de membrana a una concentraci6n elevada en un compartimiento y
baja en otro. La respuesta depende, fundamentalmente, del mecanisme de for-
maci6n de las vesiculas de transporte y de fusi6n, por el cual zonas de la mem-
brana, enriquecidas 0 no de componentes espedficos, son transferidas de un
compartimiento a otro.
Ya hemos visto c6mo la generaci6n de una vesfcula de transporte conlleva el
ensamblaje de una cubierta especial en la cara citos6lica de la membrana que
genera la vesfcula. Estas cubierta actlian como un dispositivo que "chupa" la
membrana rica en ciertas prote(nas y pobre en otras hacia afuera del comparti-
miento, de forma que las protefnas pueden ser transponadas de forma espedfi-
ca a otro compartimiento. Consideraremos c6mo se forman estas cubienas y de
que estan compuestas. Tambien comentaremos c6mo lIegan las prote(nas a la
membrana diana correcta y c6mo se fusionan entonces descargando su conteni-
do en el6rgano correspondiente. Veremos c6mo una combinaci6n de genetica y
bioqufmica ha descubierto una variedad de prOlefnas de uni6n a GTP que ayu-
dan a controlar el transporte vesicular. Acoplando la hidr6lisis de GTP a otros
procesos catalfticos, ayudan a controlar la direcci6n del transporte vesicular
uniendo la Iiberaci6n y la fusi6n de vesfculas al gasto de energfa libre, y garanti-
zan su fidelidad velando por la precisi6n con la que la vesfcula de transporte re-
conoce su membrana diana espedfica. Las estrategias geneticas y bioqufmicas
basicas que se han utilizado para estudiar la maquinaria molecular implicada en
el transporte vesicular estan perfiladas en el Panel 13-1, paginas 682-683.
De todos modos, antes de comentar los detalles de la maquinaria, es util tra-
tar el problema desde su base, estudiando los principios basicos generales que
se deben aplicar a cualquier proceso de transporte vesicular unidireccional.

EJ mantenimiento de las diferencias entre compartimientos
requiere un aporte de energfa libre38
S~gamos que tenemos dos compartimientos, delimitados por membrana,
conectados por vesfculas de transporte que circulan de uno a otro, y que la dife-
rencia entre ambos compartimientos radica s610 en la concentraci6n de un uni-

678 Capftulo 13 : Trafico vesicular mediante las rutas secretora yendocftica

 lanzadera de Figura 13-46 La energfa qufmlca es
compartimienlO A vesIculas de Irllnsporte compartimiento B
utlllzada para consegulr que en el
trans porte vesicular sea
unldirec:c1onal. En este ejempJo
hipotetico, la protefna P es una bomba

proteina P
o de I-{' dependienlede ATP. La
concenlraci6n de protones en el
compartimiento A es baja y alia en el
compartimiento H. Debido a la alta
concentraci6n de P en el
compartimiento H, ellumen de este
organuJo poseera un pH mucho menor
co tipo P de protefna unida a membrana. Si el sistema se deja que tienda aI equi- que eJ compartimiento A. Si P sufre un
librio, a traves del trMico de vesiculas de transporte entre los compartimienlOs cambio de conformaci6n dependiente
las concentraciones de P se equilibrarlan y la diferencia entre compartimientos de pH que Ie permita cnlrar en las
desaparecerfa. La diferencia puede ser mantenida utilizando energfa libre para vesfculas que se forman a partir del
transferir activamente moltkulas de P en una direcci6n, en contra de su gradien+ compartimiento A (pH eJevado) pero
te de concentraci6n. La protefna P podrfa ser secuestrada en la membrana for- que a su vez Ie impide entrar en las
vesrculas que se producen a partir del
madora de vesfculas de transporte del compartimiento en el cual esla a baja
compartimiento B (pH bajo), el flujo
concentraci6n, par ejemplo, y mantenerse fuera de las vesfculas en formaci6n
de P es unidireccional. Mientras se
de los compartimientos en los que esta en concentraci6n elevada. Esto serfa po- mantenga la diferencia de pH entre
sible gracias a un cambio de conformaci6n de la prolefna conducido directa 0 ambos compartimientos debido a la
indirectamenle por la hidr61isis de ATP 0 GTP en la membrana generadora de utilizaci6n continua de energfa libre
vesfculas por gemaci6n (Figura 13-46). Aunque este ejemplo es mucho mas sim- en forma de hidr6lisis de ATP para
ple que cu'!.!quier sistema conocido usado por las celulas, Hustrar por que tiene mantener la bomba de H'. se
que haber un aporte de energfa Iibre que medie el transporte directional selecti- conservara el gradieme de
va de vesfculas de transporte, entre compartimientos rodeados de membrana. concentraci6n de P entre los dos
El transporte direccional selectivo es de una importancia central en la orga- compartimielltos. Como comentamos
nizaci6n de la celula eucariota. Empezaremos nuestra discusi6n de los mecanis- en el Capftulo 12, la mayorfa de las
mos moleculares que Ie sirven de base considerando c6mo se forman las vesfcu+ membranas nunca se crean de novo
sino que crecen por expansi6n de
las de transporte.
membrana ya existente. Por 10 tanto,
aunque este modelo simple no explica
Existe mas de un tipo de vesiculas revestidas 39 c6mo se fonn6 inidalmente el
gradiente de P entre los
La mayorfa de vesfculas de transpone se forman a partir de regiones revestidas compartimientos, proporciolla un
especializadas de la membrana, por 10 que generan vesiculas revestidas de una ejemplo de c6mo la celula puede
red de prolefnas distintas de las que recubren la superficie citos61ica. Antes de ulilizar energfa para mantener el
que la vesfcula se fusione con la membrana receptora, este recubrimiento ha de can'icter de sus compartimienlos.
eliminarse para permitir que las dos membranas interaccionen directamente.
Existen dos tipos de vesfculas revestidas bien caracterizadas -las revestidas
de c1atrina y las revestidas de coat6mero (de coat, cubierta) (Figura 13-47). Las

Figura 13-47 Comparacl6n entre las

veskulas revestldas de ciatrlna y las
revestldas de coat6mero. (AJ
Electronmicrograffa de vesfculas
revestidas de clatrina.
(B) E1ectronmicrograffa de cistemas
del Golgi de un sistema libre de celulas
en el cual aparecen por gemaci6n
vesfculas revestidas de coat6mero en
el tubo de ensayo. Observese c6mo las
vesfculas revestidas de datrina lienen
una estructura regular mas obvia.
(Cortesfa de Lelio Orci. de L. Orci, B.
Glick y J. Rothman. CeIl46:171-164,
1986 Cell Press.)

, ,
IAI 100nm 181 lOOnm

II
Mecanlsmos moleculares del transpone vesicular y mantenlmiento de la diversidad de compartimlentos 679
 Figura t348 Caveolasenla
membrana plasmltlJca de un
flbroblaslo humano.
(Al Elecuonmicrograffa de fibroblastos
en secci6n transversal mostrando las
caveolas como indentaciones
profundas de la membrana
(AI plasmll.tica. (B) Electronmicrograffa de
gravado por congelaci6n que muestra
numerosas caveolas en la cara
citoplasmll.tica de la membrana
plasmll.tica. Su cubierta parece que
estll. constituida por hebras
distribuidas concenlricamenle. que
oontienen la protelna caveolina.
Observese que las caveolas dlfieren en
tamano y eSlructura de las depresiones
revestidas de clatrina. una de las
CUBics se observa en la parte superior
IS' derecha de (B). (Gonesfa de R.G.W.
Anderson, de K.G. Rothberg el al., Cell
68:673-682, 1992.@CellPress.)

ves(cu/as revescidas de clatrina, como hemos vista antcriormente, median el

transporte selcctivo de los receptores transmembrana. como el receptor M6P
desde 1a red del trans Goigi. 0 el receptor de LDL desde la membrana plasmatica,
ambos con cualquier molkula soluble Que se haya unida a cUOS, quedando atm-
pada en el lumen de la vesfcula. Las ues(culas reuesridas de coat6mero, por el
conlTario, median el transpone vesicular no selectivo desde el ER y las cistemas
del Golgi.
Puede haber un tercer tipo de vesfcuJa revestida. La membrana plasmatica
de la mayorfa de celulas presenta invaginaciones morfol6gica y bioquimicamen+
te diferenciadas. denominadas caurolas (Figura 13-48); aunque su funci6n es in-
dena, una posibilidad serfa que estas caveolas generaran vesiculas revestidas de
caveoJina. Si esto es asf, no esta claro qu~ transportarfan estas vesfculas ni cual
serfa su destino, y par ahara no se pude decir nada mc\s de eUas.
Parece que las vesiculas revestidas median la transCerencia direccionaJ de ti-
pos especfficos de membrana. Normalmente esta transfercncia eSIt\ equiJibrada
por un flujo de membrana en direcci6n opuesla, tamo en forma de vesfculas de
tipos no tan caracterizados. como por medio de sacos alargados 0 tubulos de
membrana que avanzan a 10 largo de los microrubulos (v~ase Figura 139).

El ensamblaje del revestimiento de clatrina conduce

ala formaci6n de la vesfcula 40
EI principaJ componente proteico de las vesCcuJas recublertas de clatrina es la Figura 13-49 Depreslones
propia clatrina, un complejo proleico aJlamente conservado a 10 largo de la evo- revestldas de clatrlna y vesiCulas. Esta
luci6n. Consist'e en tres cadenas polipeptfdicas grandes y tres pequenas que jun- eJec1ronmicrograffa por grabado por
tas forman una estruclura de tres patas denominada frisquelion. Los trisqueLions congelaci6n muestra numerosas
de c1atnna se unen dando lugar a un esquelelo en forma de cesto convexo for- depresiones revcstidas de c1atrina y
mada por hex3:gonos y pentligonos, generando depresiones revestidas en la cam vesiculas en la superficie interior de la
ciloplasmlitica de las membranas (Figura 13-49). Baja condiciones adecuadas en membrana plasmll.tica de fibroblaSlos
el tubo de ensayo, los trisquelions aislados se reasocian espontlineamente for- en cultivo. Las celuJas se congelan
nipidamente en helio Ifquido, se
mando agregados~picamentepali~dricos, incluso en ausencia de las vesfculas
fracturan y se graban por congelaci6n
de membrana que estos cestos normalmente incluyen (Figura 13-50). para exponer la superficie de la
Se cree que la formaci6n de una yema revestida de c1atrina se produce por . membrana plasm~tica. (De I.Heuser,
fuerzas generadas par el ensamblaje de las protefnas de la cubierta sobre la su- ). Cell Bioi. 84:560-683, 1980, con
perficie cilos6lica de la membrana (Figura 13-51). No se conoce que inicia el permiso de copyrighl de The
proceso de uni6n a una regi6n particular de la membrana oi c6mo se libera la Rockefeller University Press.)
~/

680 Capftulo 13: TrMlco vesicular mediante las rutas sccretora y endodtlca
 e3derla penda

cadena IIg.er,

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'8'
Figura 13-50 EslnJetura de la cublerta de c1atrina. (A) Eleetronmicrograrra de
trisquelions de c1atrina sombreados con platino. Aunque no puede observarse en
las micrograrras, cada trisquelion esta compuesto par 3 cadenas pesadas y 3
cadenas Iigeras de c1atrina. (B) Dibujo esquematico de la distribuci6n probable de
los trisquelions en la superficie de las vesfculas revestidas de c1atrina. Se muestran
dos trisquelions, las cadenas pesadas de uno se han dibujado en rojo y las del otro
en grit: las cadenas Iigeras de ambos se presenlan en amarillo. La distribuci6n
superpuesta del los brazos llexibles del trisquelion proporclona fuerza mecdnica y
llexibilidad. Ob~rvese que el final de cada brazo del trisquelion se dobla hacla
dentro, por 10 que su dominio amino terminal forma una cublerta intermedla.
(e) Reconstruccl6n tridimensional de la cubiena de clatrina compuesta por 36
trlsquelions organizados en una red de 12 penuigonos y 6 heJffigonos. La cublerta
pollgonal exterior. en raja, representa las patas superpuestas de los trisquellons de
c1atrina: la cublerta Intermedia, en verde, eSla formada por los dominlos amino
termlnales de los trlsquelions: y la cubierta interior. en lUlIl, rcpresenla las
protefnas adaptadoras que comentaremos mas adelante. Aunque la cubierta Figura 13-51 Ensamblajey
mostrada es demaslado pequel'la para incluir una vesfcula de membrana, los desensamblaJe de la cubler18 de
reveslimlentos de clatrina de las vesfculas estan construldos de forma similar a c1atrlna. Parece que el ensamblaje de
lSsta, a partir de 12 pentdgonos yun numero superior de hexagonos. tA, de E. 'la cubierta de clatrina induce una
Ungewlckell y D. Branlon, Nature 289:420-422, 19B I, Cl 19BI Macrnl11an Journals curvatura en la membrana que
Ltd.; B, de I.S.Nathke et aI., CeIl68:899-910, 1992. e Cell Press: C. de G.P.A. Vigers, conduce a la formaci6n de yemas
RA. Crowtbery B.M.F. Pearse, EMBO). 5:2079-2085, 1986.) revestidas de tamal'lo unifonne. EI
desprendimiento de la yerna formando
una vesfcula supone el proceso mas
complejo de fusi6n de membrana, que
comentaremos mas adelante. Aunque
las cubiertas eSI3n constituidas por
muchos componenles proteicos, en
este esquema simpli6cado 5610 se
muestra la datrina. EI revestimiento de
DESENSAMBLAJE las vesfculas recubiertas de datrina se
DE LA CUBIERTA elimina inmediatamente despu~ de la
fonnaci6n de la vesfcula, mientras
que, como verernos mas adelanle, la
cubiena de coat6mero se elimina
'NSAMIllAJI! --J"FORMACl6N FORMAOON despu& de que las vesiculas entren en
DELACUBIERTA OELAYEMA DE LA VESfCULA
contaeto con su membrana diana.

Mecan..lsmos moJeculares del transporte vesicular y mantenlmJento de 1a dJversldad de compartimientos 681

 SISTEMAS L1BRES DE CELULAS PARA EL ESTUDIO DE LOS COMPONENTES
Y QEL MECANISMO DEL TRANS PORTE VESICULAR
EI transporte vesicular puede sar reconstituido en sistemas lihres de celulas. La primera vel qua sa consigui6 fue para at case
de los dictiosomas del complejo de Goigi. Cuando se aislen los dictiosomas y sa incuban en presencia de cilosol y de ATP
como fuente de energla, las vesiculas emergen paf gemaci6n desde los bordes de los dictiosomas y parece que transporten
proteinas entre las cisternas. Siguiendo al procasamiento progresivo de los ofigosacaridos de una glucoprotefna y su
desplazamienlo entre un compartimiento del Goigi y al siguiente, as posible seguir al proceso del transporte vesicular.

Para seguir al transporte, sa incuban juntas dos poblaciones de dictiosomas de Golgi. La poblaci6n ~dadora~ se alsla a partir
de celulas mutantes que carecen de la enzima N-acetilglucosamina (GlcNAc) transferasa I V que han sido infectadas con un
virus; debido a la mutaci6n, la principal glucoprotelna vlrica no puede ser modificada con GlcNAc en el complejo de Goigi de
la celulas. EI dictiosoma dal Goigi ~ecaptor~ asttl aislado de la celulas salvajes no infectadas V que por 10 tanto contienen una
copie correcta de GlcNAc transferasa I. pero carecen de la glucoprotefna virica. En la mezda de dictiosomes del Goigi la
protelna vfrica adquiere GlcNAc, 10 cual indica que el Goigi dador se fusion a con al compartimiento medial del Goigi aceptor.
Este transporte dependiente de glucosilaci6n puede seguirse midiendo la transferancie de 3H-GlcNAc desde UDP_3H-GlcNAc a
la glucoprotafna vldca. EI transporte s610 se produce en presencia de ATP V de ciloso!. Fraccionando el cttosol. se han
idantificado protelnas aspeclficas citos6licas necesarias para la formaci6n V la fusi6n de las vesiculas de transporte.

SE INCUBAN JUNTOS + CITOSOL + ATP + 3H-GlcNAc

DICTIOSOMA OIL GOlGI OADOR otenOSOMA DEL LGIACEPTOR

trans

no so ariado GlcNAc a III se lIi'lade 3H-GlcNAc a III glucoproleina

glucoproloina virico en la cisterna mediBI

Sistemas Iibres de celulas similares a este se han utilizado para estudiar el transporte desde la red medial hasta la red del
trans Golgi, desde la red del trans Goigi hasta la membrana plasmtltica. desde los endosomas hasta los lisosomas y desde la
red del trans Golg; hasta los endosomes tardlos.

APROXIMACIONES GENETICAS AL ESTUDIO DEL TRANS PORTE VESICULAR

los estudios geneticos de celulas de levadura mutantes deficientes en la secrecci6n a temperatura elevada hen permitido
identificar mas de 25 genes que participan en la via de secreci6n. Muchos de estos genes mutantes codifican protelnas
sensibles a temperatura, las cuales a 25C actuan normal mente. pero cuando se eleva la temperatura a 35C. algunes de elias
fracasan an el transporte de protefnes desde et EA haste al complejo de Goigi. otras desde una cisterna a olra del Golg!. y otras
desde el complejo de Golgt hasta la vacuole (ellisosome de les levadurasJ 0 hasta la membrana plasmtltica.

Une vez se identifican, por este sistema, algunas protefnas necesarias para que se produzca la secreci6n, se pueden identificar
ganes que codifican proteinas que interaccionan con elias mediante un fen6meno lIamado supresi6n multicopla. Una protefna
mutante sensible a la temperatura elevada a menudo tiene una afinidad demasiado baja por las protelnas con las que
habitualmenle interacciona y se une. Sin embargo, si las protelnas de interacci6n se producen a una concentraci6n muy
superior a la normal, se da una uni6n suficiente para paliar el defecto. Para ello, celules de levadura con una mutaci6n sensible
a la temperatura en un gen que participa en el transporte de vesiculas, se transfectan con un vector plesmfdico de levadura en
la cual se han clonado fragmentos al azar de DNA gen6mico de levadure. Como el pltlsmido se mantiene en las celulas en un
numero de copias elevado, los que porten genes intaetos sobreproduciran el producto normal del gen y permitirtln a un
reducido numero de celulas sobrevivir a temperatura elevada. los fragmentos de DNA relevantes, que probablamente codifican
protefnas que interaccionan con la protelna mutada original, pueden ser aislados de tas celulas supervivientes.

las aproximaciones geneticas y bioqulmiCB6 se complementan, y muchas de las protelnas implicadas en el transporte vesicular
hen<iido idenlificadas independientemenle a traves de estudios bioqulmicos de sistemas libres de celules de mamlferos y a
traves de estudios geneticos en levaduras.

682 PaDel131 Estrategias udlb:adas per. estudi.r los mecanismos moleculares impUcados en eI transporteWllkular.-
SISTEMAS DE CELULAS SEMIINTACTAS PARA
EL ESTUDIO DEL l'RANSPORTE VESICULAR
glucoprotelna VSV bloqueada
Ellransporte de vesiculas tamblen puede esludiarse en enla red del trans Gol9i
dlulss cuya membrane plasmillica haye sido previemente
permeabilizada perl! permitir librementa 81 paso, hacia
denlro 0 hecla luera, de molecules pequenas y de
macromolecules. La permeebilizsci6n se consigue
mediante rOlUra flsies 0 mediante 81 tntlamiento con
tOllinas baeterionas que abren grandes orificios en la
membrana plasmatica. estas celulas semi-inlactas son
particulermente Utile. pare estudiar 01 transporte desde
sistemas de membrana extendide que se fragmentan
durante los procedimientos de homogeneizaci6n
convencionales, como liS al easa del ER y de Ie fed del
trsns Goigi.

Las dlulss semi-inlaet85 58 han vtitizado para aistar

vesiculas de transporte que median el transporte desde la IB) 200C
red del trans Golgi hasta la membrana plamlltica apical. membr.na pl.smitica .pteal
Las celu!as 58 cultivan a una temperatura baja {NC) de agujMeada medi.nte PlIpel
de nit.ocelulosa
manera que el tr'flCO de membrena desde la red del rrans
Goigi hasta la superflde de la celula estll bloqueado, y por
10 tanto la protelna vlrica principal 58 halla atrapada en el
trans Golgi tAl. Cuando las celulas 58 permeabilizan
ldepositando un uozo de papel de nitrocelulosa sobre
elias y posteriormente retir'ndolo para romper la
membranal. el dtosol sale de las dlulas dejando los
sistemas de membrana (B). Entonces se levanta el bloqueo
por temperatura y 58 anade chosel fresco y ATP, 10 cual
h&Ce que las vesiculas que contienen la glucoproteina
vinca se desprendan de la red del trans Golgi por
gemaci6n y salgan de las celulas semi-intactas a uaves de
los orificios de la membrana plasmatica IC). las vesiculas
sa recogen V se purifican usando un anticuerpo que
reconozca la cola citoplasmlltica de la glucoproleina
transmembrana del virus, 10 cual permite identificar las
proteinas que configuran la5 vesiculas de transporte. +citosol
(CI 370C
+ATP

bloqueado por
mutantes

GH"~

10J

anli(;ulrpo conua
la cola cill0s6lica
d. Ie glucoprotelna
"'rio>

bloqueado por bloqueado por las protelnas de transporte apic.ll 58 puritican

mutantes mutanles mediante IU union I una columna
A,B,C 0,'" con un 8n1icuerpo especfflCO

683
yema formando la vesicula revestida. Una vez la vesicula se desprende, la cu-
hierta se pierde rapidamenle. EI mecanismo por el cual se desprende tam poco
se conoce, pero se ha demostrado que in vitro una proteina chaperona de la fa-
milia hsp70 actDa como una ATPasa de eliminacion de to. cubierta que utiliza la
energfa de la hidr6lisis de ATP para eliminar la cuhierta de las vesiculas revestidas
de datrina. Sin embargo, en la c~lula ha de actuar alglin mecanismo de control
adicional para evitar que la cubierta de clatrina se elimine de la yema revestida de
datrina antes de que tenga tiempo de formar una vesfcula, a pesar de que la cu-
bierta persiste mas tiempo en la yema que en la vesfcula. Una posibilidad es que
la perdida de la cubierta este controlada por Ca2., el cual puede unirse a las ca-
denas ligeras de clatrina y desestabilizar la cubierta de clalrina. Las bombas de
Ca~' de la membrana plasmatica bomhean Ca2+ hacia el exterior de la celula y
por 10 tanto la concentraci6n de Ca~' se mantiene extremadamente baja en 1a
cara citos6lica de la membrana, 10 cual permite que las depresiones se manlen-
gan revestidas; pero una vez las vesfculas revestidas se forman y migran alejan-
dose de la membrana, se encuentran con concentraciones de Ca2+ mayores, que
podrfan desencadenar la perdida del revestimiento.
Normalmente las vesfcuJas pinocfticas revestidas de datrina son de tamano
pequeno y uniforme, pero la datrina tambien esta irnplicada en la formaci6n de
vesiculas mayores, tanto de vesiculas de secreci6n que contienen grandes agre-
gados de proteina como de fagosomas que contienen grandes partfculas. En es-
tos casos la c1alrina no forma revestimientos completos sino que se concenlra
en detenninadas zonas de las vesiculas que se forman. Parece que la formaci6n
de los parches de datrina ayudan a que la membrana se doble, pero el gran ta-
mafio de la carga unida a los receptores evita que la membrana se pliegue 10 su-
fidente como para pennitir que se fonne un revestimiento completo.

Las adaptinas reconocen protemas transmembrana especfficas

y las nnen al revestimiento de clatrina41
Se cree que el ensamblaje de la cubierta de las vesfculas revestidas tiene dos fun-
dones como minimo: proporciona la fuerza mecanica para "estirar" hacia el ex-
terior la membrana, fonnando una yema, y ayuda a capturar receptores de
membrana especfficos junto con las moleculas a las que estan unido~. Una se-

Figura 13-52 Transporteselectlvo

~If~
medJado porves(culas revestldas de
c1atrtna. Las adaptinas se unen tanto a
los trisquelions de c1atrina como a los
receptores de carga.

~".~
t
ELiMINACION
Of VEsiCULAS

--L
FORMACION
OE VEsicULAS
rlK:eplor
de carga

k-----" clatrina

684 Capitulo 13 : TnUlco vesicular mediante las rutas secretora y endocftica

gunda moltkula principal de recubrimiento presente en estas vesiculas, un com- motecula de carga
membrana
plejo formado por muchas subunidades Uamado adaptina, participa en ambas pla,malica
funciones. Las adaptinas son necesarias tanto para unir el revestimiemo de cla-
trina a la membrana como para atrapar diversos receptores proteicos trans-
membrana, los cuales capturan mollkulas especfficas en el interior de la vesicu-
la. De este modo un grupo seleccionado de moleculas a transportar, unidas a sus
receptores de carga especlficos, se incorporan allumen de cada una de las vesicu-
las de transporte revestidas de clatrina acabadas de formar (Figura 13-52).
Las vesiculas revestidas de clatrina no son todas iguales. Hemos visto, por
ejemplo, que algunas de elias, las que participan en el tn\nsito desde el complejo
de Golgi hasta los endosomas tardios, son ricas en receptores M6P; otras, que
participan en la ruta desde la membrana plasmatica a los endosomas tempra-
nos, son ricas en receptores de compuestos extracelulares como las LOL. Aun-
que parece que el revestimiento de clatrina en si mismo es el mismo en cada
caso, las adaptinas son diferentes y median la captura de diferentes receptores. adepllna
Las adaptinas reconocen peptidos sefial en la cola citoplasmatica de los re- Figura 13-53 Pcptldo seoaJ para la
ceptores. Una secuencia caracterfstica de cuatro residuos de aminoacido, que pa- endo<:ltosls. Se cree que los diversos
rece que fonna un giro brusco en la cadena polipeptfdica, es una parte esencial reeeplOres proteicos de superficie
de la sena/ de elldocitosis compartida par los receptores de la superficie celular eelular que son endocitados en las
que participan en la endocitosis mediada por receptor a partir de la membrana vesfeulas de c1atrina eompartcn esta
plasmMica (Figura 13-53). Por el contrario, en la red del trans Golgi las adaptinas sel'lal, la eual es reconocida por las
reconocen una secuencia de aminoacidos fosforilados enla zona carboxilo tenni- adaptinas que aetllan en la endocitosis
nal de los receptores M6P. mediada por receptor desde la
membrana plasmatica. Los
aminoacidos mostrados aquf son una
Las vesiculas revestidas de coat6mero median parte esenciaJ de la senal.
el transporte vesicular no selectivo42
Se cree que las vesiculas revestldas de coat6mero median el transpone vesicu-
lar no selectivo de la ruta por defecto, que induye el transporte desde el reticulo
endoplasmatico al complejo de Golgi, de una cisterna del Golgi a otra y desde la
red del trans Golgi a la membrana plasmatica (Figura 13-54). Ninguno de estos
procesos de transpone requieren que las vesiculas que se forman capturen una
carga especffica en su lumen.
El revestimiento de estas vesfculas consiste en parte en un gran complejo
proteico lIamado coal6mero, formado par siete subunidades proteicas de reves-
timiento (liamadas COP, de coat protein). Por 10 menos una de elias, presenta
homologfa de secuencia con las adaptinas de las vesiculas revestidas de c1atrina,
pero existen importantes diferencias de comportamiemo entre el revestimiento
de coat6mero y el de c1atrina. AI contrario que las cubiertas de clatrina, las de
coat6meros no se autoensamblan sino que necesitan ATP que dirija su forma-

endosoma Figura 13-54 Transporteveslcular

Ir,\I)
;Off I '--
sclC(:t1vo y no sclectlvo en cclulas no
polarizadas. Se postula que el
transporte no selectivo (eonstitutivo)
(j1echas azules) esta mediado por
vesiculas revestidas de eoat6mero,
mientras que diversas formas de
transporte seleclivo (mediado par
senal) (jIechas rajas) se lleva a cabo
mediante vesiculas revestidas de
clatrina. En eelulas polarizadas se
membrana
plasmaticll requiere una vfa adieional desde la red
del trans Golgi mediada porscnaJ.

'-c==-'=~'L..--...J 1I6!Ilc1iia secretora

dietiosoma red del
ER ~ trans
Goigi

Mccanismos molcculares del transporte veslculary mantenimiento de la diversldad de compartimientos 685

ci6n y en lugar de separarse en cuanto la vesicula se desprende de la membrana
dadora, la cubierta de coat6mero se mantiene hasta que la vesicula alcanza su
membrana diana.
Parece que tanto el ensamblaje como el desensamblaje del revestimiento
de coat6mero depende de una protefna denominada ARF, que tambien podrfa
participar en el ensamblaje de las cuhiertas de clalrina. Es una de las much as
proteinas de uni6n a GTP que son componentes clave en el control del trans-
porte vesicular. Antes de comentar las particularidades de ARF, nos detendre-
mos a revisar algunas propiedades de regulaci6n generales de las proteinas de
uni6n a GTP.

EI transporte vesicular depende de protefnas reguladoras

que unen GTP43
Como se comenta en el Capitulo 5, las celulas contienen extensas familias de
proteinas reguladoras que unen GTP. Estas proteinas actuan como interruptores
moleculares que pueden alteroar entre dos estados conformacionales -uno acti-
vo, onido a GTP yotro inactivo, unido a GOP- y acttian como reguladores de
muchos procesos celulares complejos. Las protefnas de uni6n a GTP acruan en
un ciclo que depende tipicamente de dos componentes auxiliares: una prote(na
liberadora de Il/lcle6tidos de guanina (GNRP, de Guanine Nucleotide Releasing
Protein) que cataliza el intercarnhio de GOP por GTP y una proteflla activadora
de GTPasa (GAP, de GTPase Activating Protein) que desencadena la hidr6lisis del
GTP unido.
Muchas protefnas reguladoras que unen GTP tienen un grupo Iipfdico uni-
do covalentemente que les permite unirse a la membrana, y parlicipan en una
gran variedad de procesos dependientes de membrana en la celula. 5e han des-
crito dos clases estructuralmente distintas: las proteinas de UIli61l 0 GTP mOllO-
mericas (tambien lIamadas GTPaso monomericas), constituidas por una sola ca-
dena polipeptfdica, y las prote(nas de uni6,1 a GTP trimericas (tambien lIamadas
proteinos Gl, constituidas por tres subunidades distintas. Aunque estudios con
inhibidores muestran que ambas clases de protefnas juegan un papel esencial
en e1 transporte vesicular, las funciones de las GTPasas monomericas estan mas
claras, por 10 que trataremos de elias aquf.

Parece que ARF sefializa el ensamblaje y el desensamblaje

del revestimiento de coat6mero 44
ARF es una GTPasa monomerica con una cola de acido graso, y se cree que juega
un papel crucial en el ensamblaje y desensamblaje del revestimiento de coat6-
mero. En el citosol se encuentra alta mente concentrada en la forma descargada,
unida a GOP. Parece que la membrana dadora desde donde va a generarse una
vesicula revestida de coat6mero contiene una protefna especffica Iiberadora de
nucle6tidos de guanina que hace que ARF Iibere su GOP y una GTP en su lugar
(la concentraci6n de GTP en el chosol es mayor que la de GOP). 5e cree que la
uni6n de GTP hace que ARF exponga la cola de acido graso, que se inserta en
la bicapa Iipidica de la membrana dadora. Cuando ARF se ha unido, reduta las
subunidades del coat6mero, que se unen a el. EI ensamblaje de la cubierta de
coat6mero, formado por ARF can GTP y por las protefnas de coat6mero, estira la
membrana induciendola a que forme una yema, que entonces se desprende
como 10 hace una vesicula revestida (Figura 13-55).
Cuando la vesicula revestida de coat6mero alcanza su membrana de desti-
no, una protefna especffica de la membrana diana, activadora de GTPasa, activa
ARF para que hidrolice el GTP que lIeva unido hasta GOP. 5e cree que esto pro-
voca un cambio de conformaci6n en la protefna ARF de manera que la cadena
de acido graso se desprende de la membrana, causando el desensamblaje del re-
vestimiento y permitiendo que se produzca la fusi6n de la membrana, como ve-
remos. Por 10 tanto ARF puede considerarse como una proteina que detecta las

686 Capflulo 13: Tr<Uico vesicular mediante las rutas secretora yendodtica
 vesicula reeubierte de coet6mero FIgura 13-55 Modelo actual sobre la
fonnacl6n de las vesfculas revestldas
de coat6mero. (A) La proteina ARF-
GOP, soluble e inactiva, se une a una
ARFGOP
inactive y soluble protefna liberadora de nucle6lidos de
guanina (GNRP) en la membrana

<it>
cole de 'cido
graso
coel6mero
dadora, 10 cual provoca que ARF libere
su GOP yse una a GTP, EI GTP
desencadena un cambio
conformacional en ARF dejando
expuesta su cadena de acido graso,
que se inserta en la membrana dadora,
membranJ
dedora 'l1 (B) Ahora, la protefna ARF-GTP activa
unida a la membrana recluta
proM/ne Iiberadora 1M nucle6tldos de subunidades de coat6mero de la
,,"_ _R gu.nln'IGNRPI membrana. Esto haee que la
membrana forme una yema. El
IAI IBI posterior acontecimiento de fusi6n de
membrana separa y Jibera la vesfcula
revestida. La droga brefeldina A
bloquea la formaci6n de la cubiena de
eireunstancias y genera la senal apropiada, tanto para el ensamblaje de la cu- coat6mero inhibiendo la reacci6n de
bierta y la gemaci6n de la vesfcula como para el desprendimiento de la cubierta intereambio de GDP porGTP. Ello
y su fusi6n a la membrana, como sera el caso. Aun mas importante, si existe bloquea el trafico de las vesfculas
una prOlefna liberadora de nucle6tidos de guanina en la membrana dadora y una revestidas de c1atrina desde el ER a
proteina activadora de GTPasa en la membrana receptora, la direcci6n de trans- traves del complejo de Galgi, haciendo
porte esta definida: mediante el cicio de hidr6lisis de GTP y el intercambio que el complejo de Galgi vacfe su
GDP/GTP, ARF facilita la transferencia en una "olea direcci6n. contenido en el ER, como se explica en
la pagina 646.

Marcadores proteicos de organulo, Uamados SNARE, colaboran

en la direcci6n del transporte de vesiculas 45
Las vesiculas de transporte, sean 0 no selectivas allOmar la carga del comparti-
miento dador, han de ser a1tamente selectivas en coanto a la membrana diana a
la que se fusionan, Esto sugiere que todos los tipos de vesiculas de transporte de
la celula han de expresar marcadores de superficie que las identifiquen segun
su origen y su carga, y que sean reconocidos por receptores de las membranas
diana. Aunque el mecanismo de este reconocimiento no se conoce, existe una
hip6tesis atractiva que supone la participaci6n de unas prolefnas denominadas
SNARE (por razones que se comentan mas adelante), de las cuales existen gro-
pos complementarios v-SNARE en la membrana de la vesicula y t-SNARE en la
membrana diana (t de larget. diana) (Figura 13-56). Las prolefnas SNARE estan
bien caracterizadas en las celulas nerviosas, en las cuales se cree que median la
uni6n de las vesiculas sinaptieas a la membrana plasmMica dellerminal nervio-

Figura 13-56 Papel propuesto para

las protefnas SNARE en la dlreccl6n
o N\8..PQ!Mh del transporteveslcular. Grupos
complementarios de SNARE en las

-0- vesfculas (v-SNARE) y de SNARE en las

membranas diana (t-SNARE)
determinan la selectividad del
contaclO de las vesfculas de lransporte
con su membrana diana. Las protefnas
v-SNARE, que estAn coempaquetadas

-Oc- ,
COMPARTlMIENTO
con las protelnas de la cubiena
durante la fonnaci6n por gemaci6n de
las vesiculas de transporte desde la
membrana dadara, se unell a las
I-SNARE complementarias de la
membrana diana.

Mecanismos moleculares del transporte vesicular y mantenimiento de la diversldad de compartimientos 687

 Figura 13-57 Papel propuesto para
las protelnas Rab garantl7.ando la
especlftcldad de la unl6n entre lu
vesfculas de transporte y I.
protelM liberlldore de me.mbrana diana. La prote!na
nucle6tiOoll de guanine liberadora de nucle6tidos de guanina
en la membrana dadora reconoce una
proleina Rab especifica y la induce a
inlercambiar su GOP por GTP. Este
y-SNARE
! yulcule de
cambio altera la conformaci6n de la
proteina Rab, exponiendo su grupo
lipfdico unido covalenlemente, el cual
trans porte
R.bGOP ~_ anda la proterna Rab a la membrana.
soluble ~grupo Ilpld.co La proteina Rab-GTP pennanece
unlda a la superfiele de la vesicula de
transporte despu6; de que ~Ia se
\ separe de la membrana dadora. Una
prole[na v-SNARE de la superfiele de la
vesfcula se une a una I-SNARE de la
membrana diana. inmovilizando
parelalmenle la vesicula. Entonees, la
prolefna Rab hidroliza su GTP
anclando la vesfcula a la membrana
diana y libentndose aI eltosol como
Rab-GOP, desde donde puede ser
reutillzada en una nueva ronda de
transporte. La vesfcula se fuslona
entonces can la membrana diana.
N61ese que los revestimientos de la
so en preparaci6n para la exocitosis: en la vesicula simtptica existe una v-SNARE vesfcula han sido omitidos del
yen la cara ciloplasmAlica de la membrana plasmAtica existe una t-SNARE com- esquema para mayor c1aridad.
plementaria.

Se cree que las protemas Rab aseguran la especificidad

de la uni6n de las vesfcuJas 46
En la relula exislen muchos sistemas de membrana por 10 que el proceso de
uni6n de las distintas veslcuJas ha de ser altamente selectivo. Una vesfcula pue-
de inspeccionar muchas membranas potencialmente diana antes de que su
v-SNARE encuentre una I-SNARE complementaria. Segun un punto de vista,
este proceso crucial de reconocimicnto estA controlado por miembros de una
familia de protefnas GTPasas monom~ricas lIamadas protel'nas Rab, que con-
trolan que la interacci6n entre v-SNARE y tSNARE sea correcta. SegUn este en-
foque. las protefnas Rab estAn unidas a la superficie de las vesiculas revestidas
que se estAn formando en la membrana dadora. Cuando una vesicula encuentra
la membrana djana adecuada. la uni6n de v-SNARE a (-SNARE permite que la
veslcuJa permanezca unida durante el tiempo necesario para que la proteina
Rab hidrolice el GTP que lIew unido, 10 cua! bloquea a la vesfcuJa en la membra-
na diana. preparAndola para la fusi6n posterior con eUa (Figura )3-57).
Las c~lulas eucarioras tienen muchos tipos de proteinas Rab. cada una de
las cuales estA asociada con un orgAnulo rodeado de membrana particular que
participa en la vfa de secreci6n 0 en la vfa endocflica. Cada uno de estos orgAnu-
los presenta por 10 menos una prOlefna Rab en la superficie chos6lica (Tabla 13-
1). La primera prote(na Rab (Ilamada Sec4) fue descubierta en levaduras me-
diante la selecci6n de mutaciones (Ilamadas mutaciones SEq que interfieren en
el proceso de secreci6n. Posteriormente se vio que se trataba de un componente
de las vesfculas de secreci6n necesario para su uni6n a la membrana plasmlitica;
las mutaciones que los modifican evitan que las vesfculas de secreci6n viertan su
contenido at exterior. Las secuencias de amino~cidosde estas protefnas Rab son
mas diferentes entre sf en su zona carboxilo terminal; experimemos de inter-

688 Caprtulo 13: Tr.1fico vesicular mediante las rutassecretora y endocftlca

Tabla 13-1 LocaUzaciones subcelulares de algunas protefnas Rab
Proteina- Organulo
Rab! (YPT!) ER Y complejo de Golgi
Rab2 ER transidonal, red del cis Goigi
Rab3A vesfculas de secred6n
Rab4 endosomas tempranos
Rab5 membrana plasmatica
Rab6 dsternas del trans y del medial Golgi
Rab7 endosomas tardfos
Rab9 endosomas tardfos, red del fTans Goigi
Sec4 vesfculas de secreci6n
Todas estas protefnas se han hallado en c~lulas de mamffero excepto Sec4 e Yf'T1, que son
protefnas de levadura.

cambia de extremos usando tecnicas de ingenierfa genetica indican que es pre-

cisamente este extrema el que determina la localizaci6n intracelular de cada
miembro de la familia, probablemente permitiendole que se una a un factor da
dor de nucle6tidos de guanina complementario, situado en la superficie del or
ganulo particular (vease Figura 13-57). Antes de que las SNARE fueran las candi-
datas como las proteinas marcadoras de organulos que gufan el transporte de
vesfculas, se crefa que las protefnas Rab ejercfan esta funei6n por su notable dis-
tribuci6n especffica entre los organulos. Sin embargo, actualmente se sabe que
algunas protefnas Rab son funcionalmente intercambiables, ya que mediante
experimentos de ingenierfa se ha podido localizarlas en otros organulos. Por 10
tanto no pueden constituir la unica explicaci6n de la selectividad del transporte
vesicular.
Figura 13-58 Modelo actual sabre la
fusl6n de vesfculas medlada por
La fusi6n de vesiculas esta catalizada por una umaquinaria prolefna. Una compleja maquinaria
de fusi6n de membrana"-41 de fusi6n cataliza la fusi6n de una
vesfcula de transporte con su
Cuando la vesfcula de transporte ha reconoeido su membrana diana y se ha uni membrana diana. S610 han sido
do a eUa, la vesfcula ha de liberar su carga mediante la fusi6n de membrana. Sin caracterizados dos de los
embargo, la fusi6n de la membrana no se produce siempre inmediatamente. componentes proteicos del complejo
Como hemos visto, en la exoeitosis regulada la fusi6n no ocurre hasta que es des- de fusi6n: NSF (proteina de fusi6n
encadenada por una senal extracelular. sensible a N-etilmaleimida, de N-
La uni6n y la fusiOn son dos procesos distintos y separables. Es posible, ethylmaleimide-sensitivejilsion
por ejemplo, evitar la fusiOn perc no la uni6o, manteniendo los niveles de Ca2+ protein) y SNAP (protefnas solubles de
eitos6lico rouy bajos. Ello provoca la acumulaciOn de vesfculas unidas, pem no acoplamiento a NSF, de soluble NSF
attachment proteins). (NEM es un
fusionadas, con su membrana diana. La uni6n sOlo requiere que las dos mem-
compuesto quimico que modifica los
grupos Ubres SH expuestos en las
superficies proteicas y por 10 tanto
inactiva prolefnas cuyos gropos SH
SNAP NSF
expuestos scan necesarios para su
~, actividad.) Las prolefnas SNARE
vesicula de
transporte IG@Rllb-GDP
fueron identificadas por primera vez
Inmovilizada
como receptores de SNAP (de aquf su
nombre): unen lanto v-SNARE como
I-SNARE. La uni6n de SNAP pennile
que NSF se una. Este complejo, con la
ayuda de acil Coa y prolefnas aun no
identificadas. calaliza la fusi6n de las
dos bicapas lipfdicas. NSF es una
ATPasa que hidroliza ATP liberando el
ENSAMBLAJE DE LA . . MEMBRANA " '_ _'" complejo una vez ha realizado su
MAQUINARIA DE FUSION DE FUSION trabajo (no se muestra).

Mecanismos molcculares del transporte vesicular y mantenimlento de la diversidad de compartlmientos 689

 kido nucleieo vlrieo
cubierta del viru'

ESPACIO
E~ACElULAR

CITOSOL
iiMiC--I-- proteins
de fusi6n

ENDOCITOSIS DE UN VIRUS
RECUBIERTO Y TRANSPORTE
HASTA UN ENDOSOMA.
LA OlSMINUCI6N DEL pH
EXPONE lOS lUGARES
HIDROF6BICOS DE LAS
PROTEINAS DE FUSI6N
IAI '--------'
O,21Jm

Figura 13-59 Entrada en las celulas de una plaga de virus de ave.

(Al Electronmicrograffas que muestrall c6mo es endocitado un virus en una
vesicula reveslida de c1atrina, c6mo es conducido a un endosoma. y c6mo se
escapa de el fusionandose con la membrana del endosoma. (B) Dibujo
esquematico de la forma en que unas protefnas de fusi6n de la sUllerficie del
virus median su salida del endosoma. (A, cortesfa de Karl Matlin y Hubert LAS REGIONES HIDROF6BICAS
Reggio, de K.S. Mallin et al.. 1. Cell BioI. 91:601-613,1981, con permiso de
copyright de The Rockefeller University Press.) I DE LAS PROTEfNAS OE FUSI6N
Sf INSERTAN EN LA MEMBRANA
DEENDOSOMA

branas se acerquen 10 suficiente como para permitir que las protefnas que so-
bresalen de la bieapa lipfdica interaccionen entre sf y se adhieran. La fusi6n
requiere una aproximaci6n mayor, quedando las membranas a 1,5 nm una de
otra de manera que puedan juntarse. Para que se produzca esta apro:d.maci6n,
FUSI6N DE LAS BICAPAS
se ha de desplazar el agua de la superficie hidrofflica de la membrana -proceso Y lIBERACI6N DEL ACIOO
que es altamente desfavorable desde el punto de vista energetico. Parece proba- J NUClEICO EN EL CITOSOl

ble que todas las fusiones de membrana en las celulas sean catalizadas por pro-
tefoas de fusi6n especializadas que proporcionen un camino para atravesar esta
barrera energetica. EI mecanismo todavfa se conoce muy mal. En el caso de las
vesfculas de transporte revestidas de coat6mero, por 10 menos, la fusi6n con la

~CITOSOL
membrana diana requiere ATP, GTP, acil CoA, y diversos componentes protei-
cos. Se conocen dos componentes proteicos, denominadas NSF y SNAP (por ra-
zones que se explican en el pie de la Figura 13-58), que reaccionan de forma cf-
clica con las membranas que se van a fusionar y el citosol. Las SNAP se unen IB(
tanto a v-SNARE de la membrana de la vesicula como a t-SNARE de la membra-
na diana, iniciando el ensamblaje del aparato de fusi6n, el cual cataliza la fusi6n
de las dos bicapas lipfdicas en la interfase membranosa de la vesfcula diana (Fi-
gura 13-58).

La protefna de fusi6n de membrana mejor caracterizada

est3. sintetizada por un virus 48
La fusi6n de membranas es importante en otros procesos ademas de serlo en el
transporte de vesiculas; se conocen can detatle las fusiones de membrana mas
simples, que son las catalizadas par protefnas viricas de fusi6n vfricas. Las protei-
nas viricas de fusi6n juegan un papel crucial permitiendo la entrada de los virus
recubiertos (los cuales tienen una cubierta membranosa de tipo bicapa lipfdica)
al interior de las celulas que infectan (comentado en el Capftulo 6). Los virus
como el virus de la gripe, par ejemplo, entran en la cclula par endocitosis media-
da por receptor y son transportados hasta los endosomas. EI bajo pH de los endo-
somas activa una proleinas de fusi6n de la cllbierta del virus que cataliza la fusi6n
del virus can las membranas del endosoma, permitiendo asf al acido nucleico vf
rico escapar a.l citoso!, donde se puede replicar (Figura 13-59).

690 Capitulo 13: TrMico vesicular mediante las rutas sccretora y endodlica
 protelne de fusl6n de Ie Figura 13..60 Modelo para expUcar

hidrof6bicos
de fusi6n.
escondidos
1
gripe en la membrana
peplidos de Ie cltlule 1
CAMBIO CONFORMACIONAL
QUE EXPONE LOS P~PTIOOS
DE FUSI6N HIDROF6BICOS
membrana plesmltlice
de la cltlule 2 CITOSOL DE
LA C~LULA 2
como una protefna de fusl6n de
membrana catallza la fusion de la
blcapa IIpCdlca. Una celula que
expresa en su superficie la proteina de
fusion de la gripe se fusiona
pH bsjo nl.pidamcnte can sus celulas vecinas
una vez sc ha expuesto a pH bajo. Los
procesos de fusion se producen a
traves de un paso inlermedio (0 y E)
(A) sncfaje trsnsmembrans 181 lei CITOSOL DE
LA C~LULA 1 en el que solo se fusionan las capas
lipidicas extcriorcs de la membrana,
mientras que las dos capas internas se
mantienen separadas. Incluso se han
oblenido formas mUlanles de la
protefna de fusion que permilen que la
reaccion se desarrolle solo hasta este
eslado intermedio.

Se han c1onado los genes que codifican varias protefnas de fusi6n y se han
utilizado para transfectar celulas eucariot'as en cultivo. Estas celulas Iransfecta-
das expresan las prote[nas vfricas en su superficie, y bajo condiciones adecuadas
se fusionan entre sf formando celulas gigantes multinucleadas. En el caso mejor
estudiado, el del virus de la gripe. la estructura tridimensional de la protefna de
fusi6n ha sido determinada por cristalograHa de rayos X. Se ha demostrado que
el pH bajo induce un cambio de conformaci6n importante en la protefna de fu-
si6n, que expone una regi6n hidrof6bica. antes escondida, en la superficie de la
prote'na, que ahora puede interaccionar con 1a bicapa lipfdica de 1a membrana
diana. Parece que una agrupaci6n de regiones hidrof6bicas de este tipo en pro-
tefnas de fusi6n muy cercanas une las dos bicapas Iip[dicas manteniendolas
muy cerca una de la otra, de forma que se desestabilizan y se fusionan {Figura
13-601.
Recientemente, en mamffero se ha identificado una protefna semejante a
las vfricas. y se cree que media la fusi6n de las membranas plasmaricas del
esperma y del huevo que se produce en la fecundaci6n (se comenta en el Capf-
tulo 20). Como resaltan todos estos ejemplos, bajo circunstancias normales las
membranas no se fusionan facilmenle. La fusi6n de membranas requiere 1a par-
ticipaci6n de protefnas especiales y esta. sometida a commies selectivos -una
restricci6n que es crucial tanto para mantener la identidad de la celula en sf mis-
rna como para mantener la individualidad de cada uno de los compartimienlos
imracelulares.

Resumen
Las diferenciWi entre los compartimientos membranosos de una uiula se mantie-
nen gracias a un aporte de energla libre, que im/lulsa el transporte selectiuo y diri
gido de componentes particulares de membrana desde un compartimiento a otro.
Las ves{culas de transporte se generan a partir de regi.ones revestida.! especializadas
de la membrana dadora. El ensamblnje de In cubierta colabora en In formm:i6n de
la ves{cula. Existen dos lipos bien caracterizados de ves{culas revestida.!: las ves{cu-
las revestida.! de datrina, que median el transporte vesicular selectiuo tksde la
membrana pULSmdtica y la red del trans Golgi, y las ves{culas relJf!stidas de coat6
mero, que permiten el transporn vesicular no selectluo dew el ER a las cisternas
del Golgi. Las adaptinas proporcionan una uni6n molecular elltre las cubiertas de
clatrina y los receptores espec{jicos de membrana y por to tanto medlan la capta-
ciOn selectiva de moleculas a transportar por las ves{c"las revestida.! de clatrina.
Las ves{culas revestidas han de perder su cubierta parafusionarse con la membra-

Mccanismos moleculares dellransporte vesicular y mantenimienlo de la diversldad de compartlmienlos 691

na diana apropiada: en cuanto las vesClllas entrmJ en contacto con Sil membrana
diana, los revestimientos de clatrinase pierden.
Diversos tipos de GTPasas monomericas. incillyendo ARF y las prote{1Ul$ nab,
partieipan en Ia regulnci6n de varias etapas del transporte vesicillar, incluyendo la
genuu:i6n de las IIf!s{clllas, el contm:to COli la membrana diana y la fusiOn. Las pro-
te{1Ul$ ARF, Rub, Y v-SNARE se incorporan a las ves{cillas de transporte dllrante la
gemaci6n y aseguran q"~ las ves{w.1as s610 entregllen su colltellido al comparti-
miento rodeado de membrana apropiado: se cree que ARF media el ensamblaje de
In cubierta de coat6mero (y probabiemente el de clatrinaJ y el desensamblaje de In
cubierta de coat6mero, mientras que las prote{1Ul$ Rub parece que asegllran Ia es-
peciflcidad de uniOn anclando la veskula a la membrana diana cuando interm:-
cimum SNARE complemenmrias de la membrana diana y de la veS{Cllla. Por 10 ron-
to, la fusi6n de membranas esttf catalizada por varias prote{1Ul$ citos6licas,
inclllyemw SNAP y NSF, que se unen entre s{formando un complejo de fusiOn en el
lugar de anclaje.

Bibliograffa 3. Hauri, H.-P.; Schweizer, A. The endoplasmic reticulum-

General
Gal, S. Raikhel, N.V. Protein sorting in the endomembrane
system of plant cells. Curro Opin. Cell Bioi. 5:636-640,
1993.
Gmenberg, J.; Clague, M.J. Regulation of intracellular mem-
brane transport. Curro Opin. Cell Biol. 4:593-599, 1992.
Pryer, N.K.; Wuesthube, L.J.; Schekman, R Vesicle-media-
ted protein sorting. Annu. Rev. Bioc/lem. 61:471-516,
1992.
Rothman, l.E. The reconstitution of intracellular protein
transport in cell-free systems. Haruey Leet. 86:65-85,
1992.
Citas
1. Balch, W.E. Molecular dissection of early stages of the
eukaryotic secretory pathway. Curro Opin. Cell Bioi.
2:634-641,1990.
Hauri, H.-P.; Schweizer, A. The endoplasmic reticulum-
Colgi intermediate compartment. Curro Opill. Cell
Bioi. 4:600-608, 1992.
Saraste, J.; Kuismanen, E. Pathways of protein sorting
and membrane traffic between the rough endopla-
mic reticulum and the Golgi complex. Semin. Cell
Biol. 3:343-355, 1992.
Schwaniger, R; Plutner, H.; Bokoch, G.M.; Balch, W.E.
Multiple GTP-binding proteins regulate vesicular
transport from the ER to Golgi membranes. ). Cell
BioI. 119:1077-1096, 1992.
2. Driouich, A.; Faye, L.; Staehelin, L.A. The plant Golgi ap-
paratus: a factory for complex polysaccharides and
glyucoproteins. Trends Biocliem. Sci. 18:210-214,
1993.
Griffing, L.R Comparisons of Golgi structure and dyna-
mics in plant and animal cells. }. Electron Microsc.
reck 17: 179-199, 1991.
Mollenhauer, H.H.; Morre, OJ. Perspectives on Golgi ap-
paratus fonn and function. ]. Electron Microsc. Tecll.
17:2-14,1991.
Rambourg, A.; Clennont, Y. Three-dimensional electron
microscopy: structure of the Golgi apparatus. Eur. j.
Cell Bioi. 51:189-200,1990.
Golgi intermediate compartment. Curro Opin. Cell
Bioi. 4:600-608,1992.
Lippincott-Schwartz, J. Bidirectional membrane traffic
between the endoplasmic reticulum and Golgi appa
ratus. Trends. Cell BioI. 3:81-88,1993.
Pelham, H.R Recycling of proteins between the endo-
plasmic reticulum and Goigi complex. Curro Opill.
Cell Bioi. 3:585-591, 1991.
4. Doms, R.W.; Russ, G.; Yewdell, l.W. Brefeldin A redistri-
butes resident and itinerant Golgi proteins to the en-
doplasmic reticulum.}. Cell Biol. 109:61-72, 1989.
Graham, T.R; ScOIl, PA; Emr, S.D. Brefeldin A reversibly
blocks early but not late protein transport steps in the
yeast secretory pathway. MBO}. 12:869-877. 1993.
Lippincou-Sch\\lllrtZ, j.; Yuan, L; Tipper, c.; et al. Brefel-
din A's effects on endosomes, Iysosomes, and the TGN
suggest a general mechanism for regulating organelle
structure and membrane traffic. Celf67:601-616, 1991.
Pelham. H.R. Muhiple targets for Brefeldin A. Cell
67:449-451,1991.
Takizawa, PA.; Yucel, IX; Veit, B.; et al. Complete vesi-
culation of Goigi membranes and inhibition of pro-
tein transport by a novel sea sponge metabolite, iIi-
maquinone. CeIl73:1079-1090, 1993.
5. Balch, W.E.: Dunphy, W.G.; BraeH. W.A.: Rothman, J.E.
Reconstitution of the transport of prOieins between
successive compartments of the Golgi measured by
the coupled in incorporation of N-acetylglucosami-
ne. Cell39:405-416. 1984.
Komfeld, R.; Kornfeld, S. Assembly of aspargine-Unked oli-
gosaccharides.AnrlU. Rev. Bioc/lem. 54:631-634, 1985.
Schachter, H.; Roseman, S. Mammalian giycosyltrans-
ferases: their role in the synthesis and function of
complex carbohydrates and glycolipids. In The Bio-
chemistry of Glycoproteins and Proteoglycans (w.l.
Lennarz, ed.), Chap. 3. New York: Plenum Press, 1980.
6. Armstrong, J. Latest episodes in the Golgi serial. Curro
Biol. 2:335-337, 1992.
Graham, T.R.; Emr, S.D. Compartmental organization of
Golgi-specific protein modification and vacuolar
protein sorting events defined in a yeast seclB (NSF)
mutant.}. Cell Bioi. 114:207-218, 1991.

692 Capftulo 13 : TrMico vesicular mediante las rutas secretora y endodtica

 Machamer, C. Targeting and retention of Golgi mem-
brane proteins. Curro Opin Cell Bioi. 5:606'-612, 1993.
Mellman, I.; Simons, K. The Golgi complex: i'l vitro veri-
tas? Cell 68:829-840, 1992.
Rothman, J.E.; Ord, L Movement of proteins through
lhe Goigi stack: a molecular dissection of vesicular
transport. FASEBj. 4:1460-1468,1990.
7. Esko, J.D. Genetic analysis of proteoglycan structure,
function and metabolism. Curro Opin. Cell Bioi.
3:805-816,1991.
Jentoft, N. Why are proteins O-glycosylated? Trends Bio-
cllem. Sci. 15:291-294, 1990.
Ruoslahti. G. Struccure and biology of proteoglycans.
Annu. Rev. Cell Bioi. 4:229-255, 1988.
8. Hirschberg. C.B.; Snider, M.D. Topography of gJyoosyla-
tion in the rough endoplasmic reticulum and Golgi
apparatus. A"nu. Rev. Biochem. 56:63-87, 1987.
9. Varki, A. Biological roles of oligosaccharides: all of the
theories are correct. Glyoobiology3:97-13O, 1993.
West, CM. Current ideas on significance of protein gly_
oosylation. Mol. Cell BioclJem. 72:320, 1986.
10. Bainton, D. The discovery of Iysosomes. ). Cell Bioi.
91:66s-7&,1981.
Kornfeld, S.; Mellman, I. The biogenesis of Iysosomes.
Annu. Rev. Cell BioL 5:483-525. 1989.
II. Holzman. E. Lysosomes: A Survey. New York: Springer-
Verlag, 1976.
12. Boller. T.; Wiemken, A. Dynamics of vacuolar compart-
mentation. AmJU. Rev. PUlllt Physiol. 37:137-164,
1986.
Klionsky, 0.1.; Herman. P.K.; Emr. S.D. The fungal vacu-
ole: composition, function. and biogenesis. Micro-
bioi. Rev. 54:266-292, 1990.
MaHle. P. Biochemistry and function of vacuoles. Annu.
Rev. Plant Pllysiol. 29:193-213,1978.
Vitale, A.; Chrispeels, M.J. Sorling of proteins to the va-
cuoles of plant ceUs. Bioessays 14:151-160,1992.
13. Dunn. W.A.. Jr. St'udies on the mechanisms of auto-
phagy: formation of the autophagic vacuole. [Two ar-
ticles.1 j. Cell Bioi. 110: 1923-1933, 1935-1945, 1990.
Helen ius, A.; Mellman, I.; Wall. D.; Hubbard, A. Endoso-
meso Trends Bioellem. Sci. 8:245-250, 1983.
Lawrence, B.P.; Brown, W.I. Autophagic vacuoles ra-
pidly fuse wilh pre-existing Iysosomes in cultured he-
patocytes.j. Cell Science 102:515-526, 1992.
Noda, T.; Farquhar, M.G. A non-aulOphagic pathway for
diversion of ER secretory proteins to lysosomes. J.
Cell Bioi. 119:85-97. 1992.
Takeshige, K.; Saba. M.; Tsuboi, S.; Noda, T.; Ohsumi, Y.
AUlOphagy in yeast demonstrated with proteinase-
deficient mutants and conditions for its induction.].
Cell Bioi. 119:301-311, 1992.
14. Dice. J.F. Selective degradation of cytosolic proteins by
Iysosomes. Arlll. N. Y. Aauf. Sci. 674:658-664. 1992.
Klionsky, 0.1.; Cueva, R.; Yaver, O.S. Aminopeptidase 1
of Saccharomyces cerevisiae is localized to the vacuo-
le independent of the secretory pathway.]. Cell Biol.
119:287-299,1992.
15. Dahms, N.M.; Lobel, P.; Kornfeld. S. Mannose 6-phos-
phate receptors and lysosomal enzyme targeting. }.
Bioi. Chern. 264:12115-12118, 1989.
von Figura. K. Molecular recognition and targeting oflyso-
somal proteins. Curr. Opin. eellBioL 3:642-646,1991.
Bibliograffa
16. Brown, W.j.; GooilllOuse, J.; Farquhar, M.G. Mannose6-
phosphate receplOrs for lysosomal enzymes cycle
between the Golgi complex and endosomes. j. Cell
Bioi. 103:1235-1247, 1986.
Duncan, I.R.; Kornfeld, S. Intracellular movement of
two mannose-6-phosphate receptors: return (0 the
Golgi apparatus.}. Cell Bioi. 6:617-628-1988.
Johnson, K.F,; Kornfeld, S. The cytoplassmic tail of the
mannose 6-phosphate/insulin-like growth factor-II
receptor has two signals for lysosomal enzyme sort
ing in the Golgi.}. Cell Bioi. 119:249-257. 1992.
17. Baranski. T.J.; Cantor. A.B.; Kornfeld, S. Lysosomal
enzyme phosphorylation: protein recognition deter-
minants in both lobes of procathepsin 0 mediate its
interactions wilh UDP-GIcNAc:lysosomal enzyme N-
acetylglucosamine-l-phosphotransferase. }. Bioi.
Chern. 267:23342-23348. 1992.
Baranski. T.!.; Faust, P.L; Kornfeld, S. Generation of a
lysosoma enzyme targeting signal in the secretory
protein pepsinogen. CeIl63:281-29I, 1990.
von Figura, K. Molecular recognition and targeting orty-
sosomal proteins. CU". Opin. Cell BioL 3:642-646,
1991.
18. Amara, 1.; Cheng. S.H.; Smith. A. Intracellular protein
trafficking defects in human disease. Trends Cell BioL
2:145-149,1992.
Kornfeld, S. Trafficking of lysosomal enzymes in normal
and disease states.]. C/i". Invest. 77: 1-6, 1986.
Neufeld, E.F.; Urn, T.W.; Shapiro, LJ. Inherited disor-
ders of lysosomal metabolism. Annu. Rev. Biocllem,
44:357-376. 1975.
19. Watts, C.; Marsh, M. Endocytosis: what goes in and
how?}. Celf Sci. 103:1-8.1992.
20. Aggeler, J.; Werb, Z. Initial events during phagocytosis
by macrophages viewed from outside and inside the
cell: membrane-particle interactions and c1athrin. }.
Cell Bioi. 94:613-623,1982.
Frank, M.M.; Fries, LF. The role of complement in in-
flammation and phagocytosis. lmmwl. Today
12:322-326,1991.
Griffin, F.M., Jr.; Silverstein, S.C. Segmental response of
lhe macrophage plasma membrane to a phagocytic
stimulus.}. Exp. Med. 139:323-336, 1974.
Mellman, l. Endocytosis and antigen processing. Semill.
fmmullOl. 2:229-237,1990.
21. Brodsky, F.M. Uving with clamrin: its role in intracellu-
lar membrane traffic. Sciellce 242:1396-1402, 1988.
Robinson, M.S. Coated vesicles and protein sorting. }.
Cell Sci. 87:203-204. 1987.
22. Brodsky. F.M.; Hill. B.L.; Acton, S.L.; et aI. Clathrin light
chains: arrays of protein motifs that regulate coated-
vesicle dynamics. Trends Bioc/lem. Sci. 16:208-213,
1991.
Morris, S.; Able, S.; Ungewickell, E. Clathrin-coated ve-
sicles. Curro Opi". Cell BioL 1:684-690. 1989.
Smythe, E.; Warren. G. The mechanism of receptor-me-
diated endocytosis. Ellr. j. Biochern. 202:689-699. 1991.
23. Brown, M.S.; Goldstein. J.L Koch's postulates for cho-
lesterol. Ce1l71:187-188. 1992.
Brown, M.S.; Goldstein, J.L. A receptor-medjated path-
way for cholesterol homeostasis. Science 232:34-47,
1986.
24. He1enius. A.; Mellman, I.; Wall, D.; Hubbard. A. Endoso-
meso Trellds. Biochem. Sci. 8:245-250, 1983.
693
 McCoy, K.L. Contribution of endosomal acidification to
antigen processing. Semill.lmmullol. 2:239-246,1990.
Mellman, I.; Fuchs, R; Helenius, A. Acidification of the
endocytic and exocytic pathways. AIlfIU. Rev. Bio-
chem. 55:663-700,1986.
Robinson, D.G.; Depta, H. Coated vesicles. AIIIlU. Rev.
Plam Physiol. Plant Mol. Biol. 39:53-99, 1988.
Schmid, S.L. Toward a biochemical definition of the en-
dosomal compartment. Studies using free flow elec-
trophoresis. Subcell. Biochem. 19:1-28, 1993.
25. Bomsel. M.; Mostov, K. Sorting of plasma membrane
proteins in epithelial cells. Curro Opill. Cell BioI.
3:647-653, 1991.
Hansen, S.H.; Sandvig, K.; van Deurs, B. Molecules in-
ternalized by clathrin-independent endocytosis are
delivered to endosomes containing transferrin recep-
tors.]. Cell BioI. 123:89-97, 1993.
Mayor, S.; Presley, I.F.; Maxfield, F.R. Sorting of mem-
brane components from endosomes and subsequent
recycling to the cell surface occurs by a bulk flow
process.]. Cell BioI. 121: 1257-1269, 1993.
Sorkin, A.; Waters, C.M. Endocytosis of growth factor re-
ceptors. Bioessays 15;375-382, 1993.
26. Dunn, K.W.; Maxfield, F.R Delivery of ligands from sor- "
ring endosomes to late endosomes occurs by malU-
ratio.n of sorting endosomes. j. Cell BioI. 117:301-310,
1992.
Hopkins, C.R Selective membrane protein trafficking:
vectoral flow and filter. Trends. Biocllem. Sci. 17:27-
32, 1992.
Nelson, W.J. Cytoskeleton functions in membrane traf-
fic in polarized epithelial cells. Semin. Cell Bioi.
2:375-385, 1991.
Parton, RG.; Schrotz, P.; Bucci, C.; Gruenberg, I. Plasti-
city of early endosomes.]. Cell Sci. 103:335-348, 1992.
Rodman, J.S.; Mercer, RW.; Stahl, P.O. Endocytosis and
transcytosis. Curro Opill. Cell Bioi. 2:664-672, 1990.
27. Apodaca, G.; Domsel, M.; Arden, J.; et aI. The polymeric
immunoglobulin receptor. A model protein to study
rranscytosis.}. Clin.lnvest. 87:1877-1882, 1991.
Mellman, 1.; Fuchs, R.; Helenius, A. Acidification of the
endocytic and exocytic pathways. Anllll. Rev. Bio-
chem. 55:663-700,1986.
Mostov, K. The polymeric immunoglobulin receptor.
Semin. Cell BioI. 2:411-418, 1991.
28. Bomsel, M.; Prydz, K.; Parton, R.G.; Gruenberg, J.; Si-
mons, K. Endocytosis in filter-grown Madin-Darby
canine kidney (MOCK) cells.]. Cell BioI. 109:3243-58,
1989.
Fujita, M.; Reinhart, F.; Neutra, M. Convergence of api-
cal and basolateral endocytic pathways at apical late
endosomes in absorptive cells of suckling rat ileum
in vivo. j. Cell Sci. 97:385-394, 1990.
Haun, H.P.; Matter, K. Protein traffic in intestinal epi-
thelial cells. Semin. Cell Bioi. 2:355-364, 1991.
Matlin, K.S. W(h)ither default? Sorting and polarization
in epithelial cells. Curro Opill. Cell BioI. 4:623+628,
1992.
Simionescu, M.; Simionescu, N. Endothelial transport
of macromolecules: lranscytosis and endocytosis. A
look from cell biology. Cell BioI. ReI!. 25:1-78, 1991.
29. Hong, W., Tang, B.L. Protein trafficking along the exocy-
totic pathway. Bioessays 15:231-238, 1993.
694 Capftulo 13: TnUi.co vesicular mediante las rutas secretora yendocftlca
Kelly, RB. Secretory granule and synaptic vesicle for-
mation. Curro Opin. Cell Biol. 3:654-660,1991.
30. Burgess, T.L; Kelly, R.B. Constitutive and regulated secre-
tion ofprotcins.Armu. Rev. Cell Bioi. 3:243-294,1987.
Stoller, T.).; Shields, D. The propeptide of preprosoma-
tostatin mediates intracellular transport and secre-
tion of alpha-globin from mammalian cells. I. Cell
Bioi. 108:1647-1655, 1989.
van Meer, G. Transport and sorting of membrane lipids.
Curro Opin. Cell Biol. 5:661-673,1993.
31. Davidson, H.W.; McGowan, C.H.; Balch, W.E. Evidence
for the regulation of exocytic transport by protein
phosphorylation.]. Cell Bioi. 116: 1343-1355, 1992.
Orci, L.; Ravazzola, M.; Amherdt, M.; et al. The trans-
most cisternae of the Golgi complex: a compartment
for sorting of secretory and plasma membrane pro-
teins. Cell 51 :1039-1051, 1987.
Tooze, 1. Secretory granule formation. The morpholo-
gist's view. Cell Biopllys. 19: 117-130, 1991.
32. Bruuone, R The molecular basis of enzyme secretion.
Gastroemerology. 99:1 1571176, 1990.
Douglass, I.; CiveUi, 0.; Herbert, E. Polyprotein gene ex-
pression: generation of diversity of neuroendocrine
peptides. Annu. Rev. Biocllem. 53:665-715, 1984.
I" Neurath, H. Proteolytic processing and regulation.
E1Izyme45:239-243,1991.
33. Burgoyne, R.D.; Morgan, A. Regulated exocytosis. Bio-
cllem.j. 293:305-316,1993.
34. Arvan, P.; CaSlle, D. Protein sorting and secretion gran-
ule formation in regulated secretory cells. Trends Cell
Bioi. 2:327-331, 1992.
Thomas, P.; Almers, W. Exocytosis and its control at the
synapse. Curro Opi1l. Neurobiol. 2:308-311, 1992.
35. Heuser, J. The role of coated vesicles in recycling of sy-
naptic vesicle membrane. Cell Bioi. Int. Rep. 13:1063
1076,1989.
Meldolesi, 1. Dynamics of cytoplasmic membranes in
guinea pig pancreatic acinar cells. l. Synthesis and
turnover of membrane proteins. I. Cell BioI. 61:1-13,
1974.
von Grafenstein, H.; Roberts, C.S.; Baker, P.F. Kinetic
analysis of the triggercd exocytosis/endocytosis se-
cretory cycle in cultured bovine adrenal medullary
cells. I. Cell Bioi. 103:2343-2352, 1986.
36. Bauerfeind, R; Huttner, W. Biogenesis of constitutive
secretory vesicles, secretory granules, and synaptic
vesicles. Curro Opin. Cell Bioi. 5:628-635,1993.
Kclly, R.B. Secrelory granule and synaptic vesicle for-
mation. Cllrr. Opill. Cell Bioi. 3:654-660,1991.
37. Hubbard, A.L Targeting of membrane and secretory
proteins to the apical domain in epithelial cells. Se-
min. Cel/Biol. 2:365-374, 1991.
Hunziker, W.; Mellman, I. Relationships betwecn sort-
ing in the exocytic and endocytic pathways of MDCK
cells. Semi". Cell Biol. 2:397-410, 1991.
Lisanli, M.P.; Rodriguez-Boulan, E. Polarized sorting of
GPI-linked proteins in epilhelia and membrane mi-
crodomains. Cell Biol./nt. Rep. 15:1023-1049, 1991.
Mostov, K.; Apodaca, G.; Aroeti, B.; Okamoto, C. Plasma
membrane protein sorting in polarized epithelial
cells. I. Cell Bioi. 116:577-583, 1992.
Simons, K.; Wandinger-Ness, A. Polarized sorting in
epithelia. CeIl62:207-210, 1990.
38. Bennett, M.K.; Scheller, R.H. The molecular machinery
for secretion is conselVed from yeast to neurons.
PNAS 90:2559-2563, 1993.
Franzusoff. A. Beauty and the yeast: compartmental or~
ganization of the secretory pathway. Semifl. Cell Bioi.
3:309-324,1992.
Kreis, T.E. Regulation of vesicular and tubular membra-
ne traffic of the Golgi complex by coat proteins. Curro
Opin. Cell Bioi. 4:609-615, 1992.
Rothman, '.E. The reconstitution of intracellular protein
transport in cell-free systems. Harvey Leer. 86:65-85,
1992.
Schekman, R. Genetic and biochemical analysis ofvesi-
cular traffic in yeast. Curro Opin. Cell Biol. 4:587-592,
1992.
Warren, G. Intracellullar transport: vesicular consump-
tion. Nature 345:382-383, 1990.
Waters, M.G.; Griff, I.e.; Rothman, I.E. Proteins involved
in vesicular transport and membrane fusion. Curro
Opin. Cell BioI. 3:615-620,1991.
39. Anderson, R.G.W. Plasmalemma caveolae and GPI-an
chored membrane proteins. Curro Opill. Cell Bioi.
5:647-652,1993.
Dupree, P.; Parton, R.G.; Raposo, G.; Kurzchalia, T)V.;
Simons, K. Caveolae and sorting in the tralis-GOlgi
network of epithelial cells. EMBO}. 12:1597-1605.
1993.
Kreis. T.E. Regulation of vesicular and tubular membra-
ne traffic of the Golgi complex by coat proteins. Curro
Opin. Cell BioI. 4:609-615, 1992.
Orci, L.; Glick, B.S.; Rothman, I.E. A new type of coated
vesicular carrier that appears not to contain dalhrin:
its possible role in protein transport withing the Gol-
gi stack. Cell46:171~ 184, 1986.
Sargiacomo, M.; Sudol, M.; Tang, Z.-L.; Usanti. M.P. Sig-
nal transducing molecules and glycosyl-phosphati-
dyl inositol-linked proteins form a caveolin-rich inso-
luble complex in MOCK cells.]. CefJ BioI. 122:789-808,
1993.
Schmid, S. Biochemical requirements for the formation
of dathrin and COP-coaled transport vesides. Curro
Opin. CefJ BioI. 5:621-627, 1993.
40. Anderson, R. Dissecting dathrin-coated pits. Trellds
Cell Bioi. 2: 177-179, 1992.
DeLuca-Flaherty, C.; McKay, D.B.; Parham, P.; Hill, B.L
Uncoating prOlein (hsc70) binds a conformationally
labile domain of dathrin light chain LCa to stimulate
ATP hydrolysis. Cell 62:875-887, 1990.
Gao, 8.; Biosca, 1.; Craig, E.A.; Greene, LE.; Eisenberg, E.
Uncoating of coated vesicles by yeast hsp70 proteins.
/. Bioi. Chern. 266:19565~ 19571, 1991.
Nathke, 1.5.; Heuser, I.; Lupas, A.; et aJ. Folding and tri-
merization of clathrin subunits at the triskelion hub.
Cell 68:899-910, 1992.
Pearse, B.M.; Robinson, M.S. Clathrin, adaptors, and
sorting. Amlll. Rev. Cell Bioi. 6: 151-171, 1990.
41. Chang, M.P.; Mallet, W.G.; Mostov, K.E.; Brodsky, F.M.
Adaptor self-aggregation, adaptor-receptor recogni-
tion and binding of a-adaptin subunit to the plasma
membrane contribute to recruiunent of adaptor
(AP2) components of clathrin-coated pils. EMBO /.
12:2169-2180,1993.
Blbllograffa
Trowbridge, I.S. Endocytosis and signals for internaliza-
tion. Curro Opin. Cell BioI. 3:634-641, 1991.
42. Kreis, I.E, Regulation of vesicular and tubular membra-
ne traffic of the Golgi complex by coat proteins. Curro
Opill. Cell Bioi. 4:609-615,1992.
Pfeffer, S.R.; Rothman, J.E. Biosynthetic protein trans-
port and sorting by the endoplasmic reticulum and
Golgi. Amm. Rev. Biochem. 56:829-852, 1987,
43. Balch, W.E. From G Minor to G Major. Curro BioI. 2:157-
160,1992.
Bourne, H.R.; Sanders, D.A.; McCormick, F. The GTPase
superfamily: a conselVed switch for diverse cell func-
tions. Nature 348: 125-132, 1990.
Melancon, P. Vesicle traffic: "G Whizz." ClIrr. BioI.
3:230-233, 1993.
44. Magee, T.; Newman, C. The role of lipid anchors for
small G proteins in membrane trafficking. Trends
Cell BioI. 2:318-323,1992.
Ord, L.j Palmer, 0.1.; Amherdt, M.; Rothman, J.E. Coa-
ted vesicle assembly in the Golgi requires only coato-
mer and ARF proteins from Ihe cytosol. Nature
364:732-734, 1993.
Serafini, T.; Orci, L.; Amherdl, M.; et al. ADP-ribosyla-
lion factor is a subunit of the coat of Golgi-derived
COP-coated vesicles: a novel role for a GTP-binding
protein. CeJl67:239-253, 1991.
45. Hennell, M.K.; Carciaarraras, I.E.; Elferink, LA.; et al.
The syntaxin family of vesicular transport receptors.
CeIl74:863-873,1993.
Sollner, T.; Whiteheart, S.W.; Brunner, M.; et aI. SNAP
receptors implicated in vesicle targeting and fusion.
Nature362:318-324,1993.
46. GOud, B. Small GTP-binding proteins as compartmental
markers. Semin. Cell Biol. 3:301-307, 1992.
Lombardi, D.; Soldati, T.; Riederer, M.A.; et al. Rab9
funclions in transport berween late endosomes and
the trans Golgi network. EMBO/. 12:677-682, 1993.
Marsh, M.; Cutler, D. Membrane traffic: taking the Rabs
off endocytosis. Curro Bioi. 3:30-33, 1993.
Zerial, M.; Stenmark, H. Rab GTPases in vesicular trans-
port. Curro Opin. Cell BioI. 5:613-620, 1993.
47. Sztul. E.S.; Melancon, P.; Howell, K.E. Targeting and fu
sion in vesicular transport. Trends Cell BioI. 2:381-
386, 1992.
Waters, M.G.; Griff, I.C.; Rothman, J.E. Proteins involved
in vesicular transport and membrane fusion. Curro
Opill. Cell Bioi. 3:615-620,1991,
Zimmerberg, I.; Vogel. S.S.; Chernomordik, L.V. Mecha-
nisms of membrane fusion, Amlll. Rev. Biophys. Bio-
mol. Slrucl. 22:433-466, 1993.
48. Blumenthal. R.; Schoch, e.; Pud. A.: Clague, M.l. A dis-
section of steps leading to viral envelope protein-
mediated membrane fusion. Ann. N. Y. Acad. Sci.
635:285-296.1991.
Doms, R.W. Protein confonnational changes in virus-
cell fusion. Methods Enzymol. 221:61-72,1993.
White, j.M. Membrane fusion. Science 258:917-924,
1992.
Wiley, D.C.; Skehel, J.J. The structure and function of
the hemagglutinin membrane glycoprotein of in-
fluenza virus. A,I1lU. Rev. Biocllem. 56:365-394. 1987.
695
Mitocondrias parecidas a caracoles de una c~lula epitelial de caracol, visualizada
por electronmicroscopia de alto vohaje.
Conversion energetica:
mitocondrias y
cloropla~tos

Las mJtocondrlas. que estlin presentes en todas las celulas, y los plastos (espe
cialmentc los c1oroplastos) que se presentan exclusivamenle en las plantas.
transfonnan la energfa en rarmas utiJizables para impulsar reacciones celulares.
De acuerdo con su importancia en el metabolismo. generalmente constituyen
una parte importante del volumen celular total. En electronmicrograrfas una de
las caracterfsticas morfol6gicas de las milocondrias y de los c1oroplastos es la
gran cantidad de membrana intcrna que contienen. Como veremos, esla mem-
brana juega un papel crucial en la funci6n de estos orgdnulos transformadores
de energfa mediante la provisi6n de un substrata estructural para los procesos
de lransporte de electrones.
Aunque las milocondrias convierten la energia derivada de combustibles
qufmicos y los e1oroplastos convierten la energia derivada de la luz solar, los dos
tipos de organulos se organizan de manera similar; ademas, ambos producen IIIlect.ones de
ellllvada enlllrg,a
grandes cantidades de ATP a traves del mismo mecanismo. Esta deslacada can
c1usi6n surgi6 de los detallados estudios lIevados a cabo durante los ultimos
treinta anos.
La ruta eomun mediante la eua! las mitocondrias, los e1oroplaslos y hast'a las
bacterias se proveen de energfa para sus funciones biol6gicas actua a traves de gradilllnllll
un proceso conocido como el acoplamiento quimiosm6tico. La energfa de los elecl.oqulmico
de prOlones
nulrienles y de la luz solar es utilizada para impulsar una bomba de protones Iransmembrene
(bomba de W) unida a la membrana que transfiere protones de un lade al Olro
de la membrana. Estas bombas generan un gradiellte efectroqufmico de protones
a traves de la membrana que es utilizado en varias reaeciones que requieren
energia cuando los protones son captados por protefnas asociadas a la membra-
/1\
Iransporte .ln11ll8i8 rOlaci6n
activo a d. del f111~10
na (Figura 14-0. Concrelamente, entre estas maquinas se encuentra la enzima Ir.v4i. dill I.
ATP sintasa, que U1iJiza la energia del flujo de protones para sinlelizar ATP a par membrane 1m bacter1eno

tir de ADP y PI' Otras prole(nas acoplan el flujo de protones a! transpone de de

lerminados metabolitos dentro y fuera de los organulos. En las bacterias el gra Figura 14-1 AcoplamJento
dienle electroqu[mico de prolones es por s( solo tan importante como almaren qulmJosm6Llco. La energfa
de energfa directamente utilizable como por el ATP que este genera: el gradieme procedente de la luz solar 0 de la
no wlo impulsa muchos procesos de transpone sino que tambien impulsa la ro- oxidaci6n de los a1imemos. se utiliza
en primer lugar para generar un
laci6n rapida del Dagelo bacteriano. 10 que permite la motiJidad bacreriana en
gradiente elecrroquimico de protones a
media acuoso. trav& de la membrana. Esle gradiente
iDe qu~ forma la energfa derivada de los nutrientes 0 de la luz impulsa las constituye un a1macen Yersatil de
bombas de H' que estan en el nueleo del mecanismo quimiosm6lico? La res- energfa y se utiliza para impulsat
puesta radica en las reacciones en las que los elecrro"es son transferidos de un diversas reocciones de la m1locondria,
componente a otro. En la mitocondria, por ejemplo. los electrones liberados de de los doroplaslOS y de las bacterias.

697
 MITOCONORIA CLOROPLASTO

I" I"

..
fotoeisteme
fotosisteme 1

cicio del
'cide ~
" ckllode
,---(fljacl(Jn del
__

e!lrico l J .. clfliono

IAI IBI
productos produetos

una molecula glucfdica en el curso de su degradaci6n hasta COl son transferidos Figura 14-2 Lamltocondriayel
hasta el 01 a traves de una ruta complicada, reduciendo el 0 1 hasla formar agua. c1oroplaslo como aparatos de
La energfa libre liberada cuando los eleclrones pierden energfa por esta vfa de transformacl6n de energfa. Las
un estado de alta energfa a un estado de baja energfa es utilizada para impulsar enlradas se indican can flechas verde
las bombas de protones como parte de un elaborado proceso de transporte de claro. los productos en azul y eJ
electrones que tiene lugar en la membrana mitocondrial principal. EI mecanis- sentido del flujo eleclr6nico can
flechas rojas. N6tese que la fuerza
mo es amilogo a.l de una celula electrica que impulsa corriente elecnica a traves
electromolriz generada por los dos
de un conjunto de motores elecnicos. Pero en los sistemas biol6gicos los elec- fotosistemas de los c1oroplaslOs
trones no son transporlados de un lugar a otro mediante hilos conductores, sino permile aI c1oroplaslO (8) impulsar
por molecuJas difusibles que pueden recoger electrones en un lugar y enlregar- una rransferencia electr6nica desde el
los en otro. Uno de los mas importantes de estos transportadores de elecrrones es H20 aJ carbohidralO, ell sentido
el NAO', que puede captar dos electrones (mas un H+) para convertirse en comrario aJ de la transferencia
NADH, que es una pequena molecula soluble en agua que transporta electrones electr6nica de las mitocondrias.
desde los lugares en que se degradan las moJeculas hasta el primero de una serie
de transportadores incluidos en la membrana mitocondrial. Estos Iransportado-
res difunden en el plano de la membrana y transportan su carga de electrones
desde una bomba de H' a olra. La tercera bomba de H' de la serie cataliza la
transferencia final de los electrones al 01 (Figura 14-2A). EI conjunlo completo
de protefnas y moleculas pequeflas implicadas en esta secuencia ordenada de
transportadores de electrones en la membrana se denomina cadena de trans-
porte de electrones.
Aunque el c1oroplasto puede ser descrito en lerminos similares y algunos de
sus componentes principales son muy similares a los de la mitocondria, la mem-
brana del c1oroplasto comiene algunos componentes cruciales no encontrados
en la membrana mitocondrial. Es mas, entre esos componentes estan losfotosis-
temas, en los que la energfa luminosa es capturada y preparada para la transfe-
rencia de electTones, de manera anaIoga a como hacen las fOlocelulas fabricadas
por el hombre en paneles solares, absorbiendo la energfa luminosa y utilizandola
para impuJsar corriente elect rica. La fuerza motriz del electr6n generada por los
fotosistemas del c1oroplasto impulsa el transporte de electrones en direci6n
opuesta a la que hemos descrito para el caso de las mitocondrias: los electrones
son recogidos desde la molecula del agua produciendo 02 y son donados (vfa
NADPH) al COl' para sintetizar carbohidratos. De esta forma el c1oroplasto gene-
ra 02 y carbohidralOS, mientras que la mitocondria los consume (Figura 14-28). - - - 20 minulos
Generalmente, se cree que los organulos de eucariotas transformadores de Figura 143 Plastlcldad
energfa evolucionaron desde procariotas que fueron endocitados por celulas euca- mltocondrial. Cuanda se observa una
riotas prirnitivas y desarrollaron una relaci6n simbi6tica con ellos, hace aproxi- milOcondria en una celuJa viva, se
madamente 1,5 x lO~aflos. Esto explicarfa por que las mitocondrias y los c1oro- aprecian en ella rapidos cambios de
plastos contienen su propio DNA, que codifica algunas de sus protefnas. Desde fonna.

698 Caprtulo 14 : Conversi6n energetlca: mitocondrias y c1oroplastos

su captaci6n inicial par una celula huesped estos organulos han perdido gran Figura 14-4 Relaciones entre las
parte de su genoma y han L1egado a depender notablemente de prot'einas que milocondrlas y los mlcrOll1bulos.
son codificadas por genes en el nucleo celular, sinteti7..adas en el citosol yenton- (A) Micrografia 6plica de cadenas de
ees imponadas al organulo. De forma reciproca, las celulas huesped han lIegado milocondrias alargadas observadas en
a depender de estos organulos tanto por la gran cantidad de ATP que necesitan una celula viva de mamrrero
mantenida en cultivo. La celula fue
para Uevar a cabo la biosfntesis, el bomboo de iones, y la motilidad como por de-
contrastada con un colorante vital
tenninadas reacciones biosinreticas que ocurren dentro de ellos. fluorescente (la rodamina 123) que
marca especfficamente las
mitocondrias. (B) Micrograffa de
La mitocondria 1 inmunofluorescencia de In misma
celula anterior pero fijada y
La mitocondria ocupa una parte substancial del volumen citoplasmAtico de las contraslada con anticuerpos
celulas eucariotas, y han side esencialcs para la evoluci6n de los animales pluri- nuorescemes que se unell a los
celulares. Sin las mitocondrias las celulas animales actuales depcnderfan de la microtUbulos. N6tese que las
g1uc6lisis anaer6hica para fonnar ATP. Sin embargo, cuando la g1ucosa es con- milocondrias tienden a alinearse a 10
venida en piruvalo a traves de la g1ucolisis, s610 se libera una pequena fracci6n largo de los micronibulos. (Por
del total de la energfa lihre pOlencialmente disponible de la g1ucosa. En las mito conesfa de Lan 50 Chen.)
condrias el metabolismo de los azticares esta integrado: el piruvato es importado
dentro de la mitocondria y oxidado por el oxfgeno molecular (02) a CO 2 y Hp. La
cnergfa liberada es almacenada de una forma tan eficiente que por cada molecu-
la de g111cosa oxidada se prodllcen aproximadamente 30 moleculas de ATP. Por el
contrario, wlo dos moleculas de ATP son producidas a partir de la glucolisis.
Las mitocondrias suelen descrihirse como cilindros alargados y rfgidos, de
un diamclro comprendido entre 0,5 y I I-'m y parecidos a bacterias. Sin embargo,
la microcinematograffa a intervalos de liempo de las celulas vivas revela que las
mitocondrias son organulos c1aramente m6viles y plasticos, que camhian cons-
tanlemente de fonna (Figura 14-3) e incluso que se fusionan unos con otros y se
vuelven a separar. Cuando se desplazan por el citoplasma, las mitocondrias apa
recen a rnenudo asociadas a los microtubulos (Figura 14-4),10 que quizas deter-
mina la orientaci6n y la distribuci6n tfpica de las mitocondrias en los diferentes
tipos celuJares. Asf, las mitocondrias de algunas celulas forman largos filamentos
o cadenas m6viles, mientras que olras se mantienen en una posici6n fija en la
que pueden proporcionar ATP directamente en lugares de consumo anormal-
mente elevado de ATP -por ejemplo, exiSlen un gran n(imero de mitocondrias
empaquetadas entre las miofibrillas adyacenles en las celulas del musculo cardfa
co,o mitocondrias densamente agrupadas a1rededor del flagelo en los espenna-
tozoides (Figura 145).
Aunque su tamano es suficiente como para ser observadas al microscopio
6ptico -fueron identificadas por primera vez en el siglo XIX- el verdadero progre-
so en el conocimiento de su funci6n dependi6 de procedimientos para aislar mi-

La mJtocondria 699
 Figura 14-5 Locallzacl6n de las
mltocondrias en el musculo canlJaco y
en 1a cola del espennatozolde, cerca de
los 1ugares en los que se utllizan grandes
cantklades deATP. Durante el desarrollo
del flagelo de la cola del espermatozoide,
onos microl\ibulos se enroscan de forma
helicoidal a1rededor del axoncma, donde
aI parecer condicionan la localizaci6n de
las mitocondrias en la cola; despucs,
estos microtubulos desaparecen.

MUSCULO CAROIACO COLA OEL ESPERMATOZOIOE MITOCONORIA metriz

INTACT~A';~G"'9?;;';';::membrene externs
membrana Interna
toeondrias intactas, desarrollados en 1948. Por euestiones tecnicas, la mayoria espacio
de los estudios bioquimicos se han realizado en mitoeondrias purificadas de hf- intermembrane
gado; eada celula hepatica contiene entre 1000 y 2000 de estos organulos, los en un medio de baie osmolaridad, el

I
cuales ocupan aproximadamente una quinta parte del volumen celular. influio de agua hace que la
mitocondria se hinche V que Ie
membrane externa se rompa,
liberendo el contenido del espacio
La mitocondria presenla una membrana externa y una intermembrana; la membrene interna
membrana interna que defme dos compartimientos internosZ permanoce intecta

Cada mitocondria esta limitada por dos membranas altamente especializadas,

que desempeftan un papel crucial en las actividades de la mitoeondria. Ambas
membranas definen dos eompartimientos mitocondriales diferentes: el espaclo
de la matrlz, interno, y un espacio intermembranoso mas estreeho que el ante
rior. 51 las mitocondrias purificadas se rompen suavemente y luego se fraccio
nan sus distintos componentes (Figura 146), se puede determinar la composi-
la centrlfugaci6n consigue que el
ci6n bioqufmica de cada membrana y de los espacios delimitados por elias. Tal contanido del espacio intermEtmbrena

como se presenta en la Figura 14-7, cada uno contiene una colecci6n determina quede en la fracci6n no sedimentads
da de protefnas.

D....
La membrana ex:terna eontiene numerosas copias de una proteina de trans-
pone, Hamada parina (vease Capftulo 10), que forma grandes canales acuosos a .' .'
traves de la bieapa lipidica. As!, esta membrana se parece a un tamiz permeable a
...... : .. '.:
todas las moleculas de menos de 5000 daltons, incluidas pequeftas prote!nas. Es- ESPACIO
INTERMEMBRANA
tas moleeulas pueden penetrar en el espacio intermembranoso perc 1a mayoria
Is trsnsferencia e un medio de
de elias no pueden atravesar la membrana interna, que es impermeable. Esto sig- osmolaridad elevada provoca la
nifiea que, rnientras que el espacio intermembranoso es qu!micamente equiva- retracci6n
lente al citosol respecto a las pequeiias moltkulas que conriene, el espacio de la
matriz eontiene un grupo de pequeiias moleeulas altamente seleccionado.
Como explicaremos con detalle mas adelante, el principal compartimiento
de la mitocondria desde el punto de vista funcional es la matriz y la membrana
interna que 10 delimita. La membrana mitocondrial interna esta altamente es-
la centrifug&ci6n en gradiente
pecializada. Contiene una elevada proporci6n del fosfolfpido "doble" cardiolipi- de densldad separs la
na, que contiene cuatro acidos grasos que al parecer eolaboran en conseguir que membrana elcterne de la
mitocondrie de la matriz V Is
la membrana sea espeeialmente impermeable a los iones. Tambil~n presenta di- membrana que la rodea
versas protefnas de transporte que hacen a la membrana permeable selectiva-

Figura 14-6 Fracclonamlento de mltocondrias purificadas en sus

Ie rotura V centrifugaci6n
componentes. Estas tecnicas han hecho posible estudiar las diferentes separa la membrana interna de
prolefnas de cada compartimiento mitocondrial. EI metodo mostrado, que los componentes de la matrlz
permite el procesamienlo de un gran mimero de mitocondrias al mismo
tiempo, aprovecha el hecho de que en un media con una fuerza osm6tica
baja, el agua fluye hacia dentm de la mitocondria y dilata el espacio matricial 0"-
.l"'~ _ 0
(amarillo). Mientras que las crestas de In membrana mitocondrial interna la o~oo
permiten desplegarse para acomodarse a In expansi6n, la membrana externa "'0 0- 0
-que no tiene pliegues- se rompe, liberanda una estructura compuesta s610 MEMBRANA MATRIZ MEMBRANA
por la membrana interna yla matriz. lNTERNA EXTERNA

700 Capftulo 14 : Conversion energelica: mitocondrias y c1oroplastos

 Figura 147 Organizacl6n general de
una mJtocondria. En eJ hfgado se
estima que un 67"(, de la totalidad de
las praternas mitocondriales se
encuentran en la matm, un 21'" se
encuentran en la membrana
mitocondrial imerna, un 6% en Is
membrana externa yOlro 6% cn eI
espacio intermembranoso. Como se
Indica a contlnuaci6n, cada una de
estas cuatro regiones cunticne un
equipo especial de proteinas que
fntemene en distintas funciones.
(Cones!a de Daniel S. Friend.)

'-----'
'00 nm

Matriz. La matnz contiene una mezda alta mente concantrads de

cientos de eozlmas. incluyando las que son necesarias para Ie
oxidaci6n del piruvato y los kidos grasos y para el cicio de acido
cllrico. La mal,iz tambian conliene diversas copias idlmlicas del
genoma de DNA mitocondrial, ribosomes mitocondriales especiales,
IRNA y varias enzimas requeridas para la expresi6n de los genes
mitocondriales.
Membran'!'nterna. La membrana interna S6 encuentra replegada
en numaras crestas, que aumentan considerablemente su superficie
lotal. Cootien proteinss con Ires tipos de funciones: 111 squallss que
realizan las reacciones de oxidaci6n de Ie cadena respiratoris, (2) un
complejo enzimatico Itamado A TP sintsss que produce ATP en la
matoz, y (3J proteinas de transpone especfficas que regulan el paso de
metabolitos dentm y fuera de la matriz. Dado que se establece un
gradiente electroquimico a traves de esta membrana por la cadena
respiratoria que impulsa la ATP sintasa, es importante que la
membrana sea impermeable a la mayoria de iones.
Membrana externa. Gracias a que esta contiene una gran proteina
formadora de canales Wamada porina), la membrana externa es
permeable a todas las moleculas can un peso molecular inferior a
5000 daltons. Otras protelnas de esta membrana son las enzimas
implicadas en la sintesis mitocondrial de IIpidos y las enzimas que
transforman en la matriz los substratos lipfdicos en formas
metabolizables.
Esp.cio intermembrana. Este espacio contiene varias enzimas que
utilizan la salida de ATP de la matriz para fosforilar otros nucle6tidos.

La mitocondrla 701
mente a las pequenas mol~culas que son metabolizadas 0 que son necesarias
por las numerosas cllzimas mitocondriales que se hallan concentradas en el es-
pacio de la marriz. Entre estas enzimas se encuentran las que metabolizan el pi-
ruvato y los acidos grasos hasta aceril CoA y las que oxidan el aceti! CoA en el ci-
cio del acido cftrico. Los principales productos finales de esta oxidaci6n son el
CO 2, que es eliminado de la cclula, y el NADH, que constituye la principal fuente
de electrones que serlin transponados a trav~s de la cadena resplratoria -nom-
bre que recibe la cadena de transporte de electrones de la mitocondria. Las enzi-
mas de ia cadena respiratoria estan situadas en la membrana rnitocondrial in-
terna y son esenciales 'Para todo el proceso de la fosforilaci6n oxidativa, que
genera la mayorfa del ATP de ia cclula animal.
La membrana mitocondriai interna suele estar muy replegada en el espacio
de la matriz, formando una serie de dobleces denominados crestas. Estas inva-
ginaciones aumentan notablemente el area de la membrana interna, de forma
que en las c~lulas de hfgado, por ejemplo, constituyen alrededor de una tcrccra
parte del total de la membrana de la c~lula. EI mlmero de crestas de las mitacon-
drias de las cclulas del musculo cardfaco es tres veces mayor que el de las mito-
condrias de lIna cclula hepatica, debido probablemente a la mayor dcmanda de
ATP de la cclulas del coraz6n. Ademas de las diferencias morfol6gicas, tam bien
existen diferencias substanciales en las enzimas milocondriales de diferentes ti-
pas celulares. Sin embargo, en este capftulo prescindiremos de estas diferencias
y centraremos nuestra atenci6n en las enzimas y en las propiedades que son co-
munes a todas las mitocondrias.

La oxidaci6n mitocondrial empieza cuando se generan grandes

cantidades de acetil CoA a partir de piruvato y de acidos grasos
en el espacio de la matriz 3
EI metabolismo oxidativo de las mitocondrias utiliza como combustibles mayo-
ritarios el piruvato y los <icidos grasos producido en el citosol a traves de la glu-
colisis. Estos compuestos son transponados selectivamente desde el citosol
hasta la matriz mitocondrial, donde son degradados hasta el grupo acerilo, de
dos carbonos, de la molecula del acctlJ cocnzlma A (acetil CoAl (Figura 148); a
continuaci6n, el grupo acetilo es introducido en el cicio del acido cit rico para su
degradaci6n posterior, y el proceso termina con el paso de los eleclfones de alta
energfa derivados del grupo acetilo, a 10 largo de la cadena respiratoria.

Figura 148 EI aeetll eoenzimaA

(aeetll CoAl. Esle intermediario
central es producido durante la
transformaei6n de los alimenlos en la
mitoeondria. En la figura se muestra
un modelo espacial de una abreviaci6n
comun del acetil eoA (vease tambien
Figura 220). EI alOma sefiaJado can
una S es un alamo de azufre que forma
una uni6n tioesler COil el acetato.
Debido a que este enlace cs rico en
energfa, el grupo acctato puedc ser
facilmente transferido a Olras
molCeulas, como el oxaiaceiato (vease
Figura 14-14).

702 Capftulo 14 : Conversi6n energetica: mitocondrias y c1oroplastos

 Figura 149 Gn.sa. (A) FOlograffa
obtcnida con el microscopio
_electr6nico de una inclusi6n lipfdica
en el citoplasma que oontiene
lriacilgliceridos.la princi!J3.l rorma de
reserva de grasa. (8) Estruetura de un
lriacilgli~rido,con su porci6n de
o g1icerol en cofor verde. (A, por oortesfa
I de Daniel S. Friend.)
CH - 0 - ( - e<H8 de 6cido iJrMO

o
I
CH 2-O-C - tol_ de icido 9'-.0

IB}

Para asegurar un aporte cOIHinuado de combustible para el metabolismo

oxidativo, las celulas ani males almacenan <icidos grasos en forma de grasas y
glucosa en fanna de gluc6gcno. Desde el pUOla de vista cuantitativo, las grasas
son, con diferencia, mas imponantes que el gluc6geno, por lIna parte debido a
que 13 oxidaci6n de las grasas libera lIna cantidad de energfa mas de seis veces
superior a la que libera una masa iguaJ de gluc6geno en forma hidratada. Un in-
dividuo humano aduho medio almacena una cantidad de gluc6geno suficiente
aproximadameme para Ull solo dfa de actividad normal, pero almacena una
cantidad de grasa suficienle para casi un mes de actividad normal. Si nueslra re-
serva mayoritaria de energfa fuese el g1uc6geno en lugar de las grasas, nuestro
peso corporal aumentaria en unos 25 kilos de promedio.
La mayor parte de nuestra grasa esta almacenada en el tejido adiposo, del
cual pasa al torrente sangufneo cuando otras dlulas la necesitan. Esta necesidad
surge tras un perfodo de ayuno; incluso el ayuno nocturno normal da lugar a la
movilizaci6n de grasa, de forma que por la manana, la mayor parte del acetil
CoA que entra en el cicio del ~cido cftrico deriva de los ~cidos grasos y no de la
glucosa. Sin embargo, despuCs de una comida la mayor pane del acetil GoA que
entIa en el cicio del ~cido cftrico procede de la glucosa derivada de los alimen-
lOS. y toda la g1ucosa que se halla en exceso es utilizada 0 para restablecer las
agotadas reservas de gluc6geno 0 para sinterizar grasas. rrengase en cuenta que
CIl las celulas animales los azucares son facilmente converlidos en grasa pero
que la grasa no puede ser convertida en azucares.}
Una molecula de grasa esu1 compuesta por tres moleculas de acido graso
unidas a una de glicerol, a {raVeS de enlaces ester. EsioS trlacllgllceridos (trigli-
cf!ridos) carecen de carga y son prt!.cticameme insolubles en agua, formando pe-
quenas gotitas en el dlosol (Figura 14-9). En los adipocitos, las grandes celuJas
especializadas en el almacenamienlO de grasa en el lejido adiposo. exiSle una
gran gOla unica de grasa que ocupa casi lOdo el volumen de la celula. En olras
celulas que obtienen la energfa a partir de la transfomlaci6n de los ~cidos gra-
50S, como por ejemplo las fibras del muscuJo cardJaco, normalmenle se presen-
tan unas gotas de grasas mucho mas pequenas, a menudo cstrechamente aso-
ciadas a la mitocondrias (Figura 14-IO). En tadas las celulas,las enzimas de las
membranas mitocondriales extema e intema median el paso de los acidos gra-
50S derivados de las moleculas de grasa, hacia la matriz mitocondrial. En la ma-
triz, cada molecula de acido graso (en forma de adl graso GoA) es degradada miofibritla
completameme gracias a un cicio de reacciones que en cada vuelta elimina los milocondri.
dos carbonos del extremo carboxilo terminal del aeil graso CoA, dando lugar a Figura 1410 Goludegrasadeuna
una molecula de acetil CoA (Figwa 14-11). Este acetil CoA praducido entTa en el celula de ml1sculo canUaco. Las gotas
cicio del acido cftrico para ser oxidado. esul.n rodeadas de rnitocondrias, las
E1 g1uc6geno, es un polfmero de glucosa, grande y ramificado, que se halla cuales oxidan los acidos grasos
en forma de grAnulos en el cilaplasma celular (Figura 14-12); su sfntesis y degra- derivados de los lriacilgliceridos de la
daci6n estl1n altamente reguladas de acuerda can las necesidades de la celula. gata.

La mllocondrla 703
 o Figura 14-11 CIcio de oJddaci6n de
acil graso CoA R-CH-CH- CH-C
2 2 2 "SCM
"-
los ncldas grasos. EI cicio estll
catalizado par series de cuatro
enzimas, en la malriz miwcondrial. Tal
como se indica en la figura, cada vuelta
del cicio acorta elllcido graso en dos
acil greso CoA f 0 repetici6n del cicio ... carbonos (que se n'luestran en color
IIcorllldo eo R-CHr- C "",- rajo) y genera una moltkula de acetil
dos carbooos
" $C0I\ eoA, una molecula de NADH y una de
FADH z. EI NADH es soluble en la
mauiz. Par el contrario, el FADH 2
pennanece fuertemente unido a la
enzima acil graso eoA desllidrogenasa;
sus dos electrones pueden ser
transferidos rrtpidamente a la cadena
acetil CoA respiraloria de la membrana
o
R-CHrCH=CH -C's<:'"oA - mitocondrial interna, con 10 que se
regenera FAD.
G:iASH)
I- H,O
oII 0
OH H
I I -Y
0
R-CH C-CH _C-Y R-CHrC- C - C M

;- ~ ~~ Figura 14-12 Elcctronmlcrograffa y

dlbujo esquematlco de Wl granulo de
gluc6geno. EI gluc6geno es la forma
_ INADol principal de reserva de carbohidraws
.H' de las cellilas de los vertebrados. Es un
polfmero de glllcosa, y cada gninulo de
g1uc6geno es una sola molecula muy
Cuando las necesidades aumentan, el gluc6geno es hidrolizado liberando gluco- ramificada. La sfntesis y la degradaci6n
sa I-fosfato, substrato de la glucolisis. Las reacciones de la glucolisis convierten del gluc6geno estan catalizadas por
las molecu!as de la glucosa, de seis aromos de carbono, (y tam bien de otros azu- enzimas unidas a la supetficie de los
gnl.nulos: la enzima de biosintesis 0
cares relacionadosl en dos moleculas de piruvato, de tres carbonos, las cuales
g/ucogenosilltasa yla enzima de
lodavia contienen la mayor parte de la energfa que se puede obtener de la oxida- degradaci6n 0 g/uc6geno josforilasa.
ci6n de los azucares. Esta energfa s610 se obtiene despues de que el piruvato {Par cortesia de Robert Fletlerick y
haya sido transportado desde el citosol hasta la matriz de la mitocondria, donde Daniel S. Friend.}

,
\,
,
i

cadenas ramificadn
formadas por residuos
domloio catlliitico de glucoslI de una
molkula de gluc6geno

'.domioio
rllgulador
dfmoro de
gluc6geno
gr'oulos de gluc6geoo monocapa de mol6culas fosforilasa
en el citoplasma de una de eozlma cubriendo un
c"ula del higlldo gr'nulo de gluc6gllno

704 Capitulo 14 : Conversl6n energetica: mltocondrias y c1oroplastos

 Figura 1413 Reaccionesquecatallza
el complejo de la piruvalO
deshldrogenasa. El complejo
transforma el piruvato en acelil GoA.
en la matriz mitocondrial: en eSla
reacci6n lambien se produce NADH.
A.B, YC son las Ires enzimas piruvato
descarboxilasa, lipoamida reductasa
transacetilasa y dihidrolipoil
desllfdroge"asa, cuyas actlvidades
eSI!n acopladas lal como se mueSlra
en la figura. En la Figura 2-41 se
muestra la eslructura del complejo
se encuentra can un gran complejo mullienzim<itico, el complejo de Ja piruvalO enzimdlico; esle complejo tambien
desllidroge"asa. Este complejo -que contjene multiples capias de tres enzimas, presenla una proteina quinasa y una
cinco coenzimas y dos prolefnas reguladoras- transforma r<\pidamenle el piru proteina fosfalasa que regulan la
vatu hasta acetiJ CoA, liberando COz como subproducto (Figura 1413). Esle ace actividad de la piruvalo
deshidrogenasa, inhibiendola cuando
til CoA, junto con el acetil CoA producido a partir de los <icidos grasos, alimenta
los nlveles de ATP son altos.
el cicio del <1cido dtrico.

El cicio del acido cftrico oxida el grupo acetilo del acetil CoAt
generando NADH y FADH 2 para la cadena respiraloria-4
En el siglo XIX, unos bi610gos observaron que en ausencia de aire (en condiciones
anaer6bicas) las c~lulas producen acido lactico (0 etanol) mientras que en pre
sen cia de aire (en condiciones aer6bicas) utilizan O2 y producen COz y HzO. Los
esfuerzos que se reatizaron pata definir las vias del metabolismo aer6bico se
centraron en el estudio de la oxidaci6n del piruvato y condujeron at descubri-
miento, en 1937, del cicio del 4c1do cftrico, tambi~n conocido como el cicio de
los dcidos rricarboxflicos 0 cicio de Krebs. En la mayorfa de las c~lulas, el cicio del
<icido dtrico es el responsable de la oxidaci6n total de aproximadamente dos
terceras panes de los compuestos de carbono, y sus principales productos fina-
les son el COz y electrones ricos en energfa, los cuales pasan vfa NADH y FADH z
a la cadena respiratoria. EI COz es eliminado como producto de desecho mien
tras que los electrones ricos en energia se desplazan a 10 largo de la cadena res
piratoria y finalmente se combinan con el Oz formando HzO.
EI cicio del acido cftrico empieza cuando el acelil CoA formado a panir de
los <icidos grasos 0 del piruvato reacciona con el compuesto de cuatro carbonos
oxalacetalo produciendo dcidQ c(trico, mol~cula de seis atom as de carbona que
da nombre al cicio. A continuaci6n, como resultado de siete reacciones conse
cutivas, calalizadas por enzimas, se eliminan en forma de CO 2 dos .\tomos de
carbono y se regenera en oxalacela[Q. En cada una de estas vueltas del cicio se
producen dos moleculas de COz a partir de dos alamos de carbona que entraron
en cidos a"teriores (Figura 14-14); por 10 que respecta aI gropo acetilo del acetil
CoA, el resultado neto es el siguienle:
CH3COOH (como acetil CoAl + 2H zO + 3NAO' + FAD unido a protefna-+
2eOz + 3W + 3NADH + FADH z unido a proteina
Esta reacci6n produce tambi~n una molecula de ATP (vfa GTPl a traves de
una transferencia directa de un fosfato del azucar fosfato imennediario at GOP;
reacci6n defosforilacitm a nivel de substrato del mismo tipo de las Que se pradu
cen en la g1ucolisis, como se explic6 en el Capitulo 2.
Sin embargo, 1a contribuci6n mas importame del cicio del addu cilrico al
metabolismo consisle en la extracci6n de electrones de alta energfa durante Ja
oxidaci6n de los dos alomos de carbona del grupo acetiJo, hasta COz' Estos elcc
trones, que son transportados de forma transitoria por el NADH y por el FADHz,
son rnpidamenle transferidos a la cadena respiraloria en la membrana mitacon
drial interna. EI FADH z' Que forma parte del complejo de la succinato deshidro
genasa de la membrana interna, cede sus electrones direclamente a la cadena

La mJtocondria 705
 acetil CoA Figura 1414 EI cicio del acldo cflrlco.
o Los intermediarios se muestran en
.HJIt' forma de acidos libres, aunque en
realidad los grupos carboxilo esul.n
!SCQA
ionizados. Cada una de las reacciones
indicadas esta catalizada por una
siguiente cicio
enzima diferente, locaJizada en la
CoA$H membrana mitocondriaL Los dos
carbonos procedentes del acelil eoA
oxalacatato 1l00H que entran en esta vuelta del cicio
IIH,
, (sombreados en color rojo) seran
transformados en CO 2 en posteriores
HO-C-aOOH
, vueltas del cicio. Los dos atamos de
(H, carbono que son Iransformados en
800H COl en esta vuella del cicio se sei'lalan
con una C de color azul. En cada vuelta
"""0\ se forman Ires moleculas de NADH y
una de GTP, la cual se puede

H::
~ malato
riOOH
IIH,
,
transfOflllar en ATP mediante la
reacci6n de intercambio GTP + ADP--t
GOP + ATP. Ademas. se forma una
(OOH
(H,
I H-C ....OOH molecula de FADH 2, que permanece

t-- isocitrato ,
unida a una protefna formando parte
H-C-OH
del complejo de la succinato
H,O 800H des/lidrogellasa en la membrana
mitocondrial interna; este complejo
.OOH transfiere directamente los electrones
BH fumarato
u-<:atoglutarato "OOH,~ H (m=H'
II
transporlados por el FADH 2 a la
ubiquinona (vease mas adelanle).
I
"
(H
succinato (H,
,
(OOH IijlOOH
(=0 1102

rJ' DOOH
succ,n,l CoA
rIIH
I .OOH

'fIlIH,
1
Im!IlI (H, H 0 .L A":;,---- (QASH
IFAO]
~04tH THz
(
l' ,
o 5(qA
CoASt! m:D GOP
110,
"
respiratoria. Por el contrario, el NADH forma un acervo de equivalentes reduci-
dos en la matriz mitocondrial y transfiere sus electrones despues de que se pro-
duzca una colisi6n al azar con una enzima deshidrogenasa unida a la membra-
na. Ahora vamos a considerar de que forma se utiliza para sintetizar ATP la
energfa almacenada en estos electrones.

En la membrana mitocondriaJ internal un proceso

quimiosm6tico convierte la energa de oxidaci6n en Alps
Aunque el cicio del acido cftrico forma parte del metabolismo aer6bico, ninguna
de las reacciones que \levan a la producci6n de NADH y FADH 2 lItilizan directa-
mente oxfgeno molecular. Casi toda la energfa disponible a partir de la comblls-
ti6n de los carbohidratos, grasas y olros nutrientes, obtenidos de los substratos
par el NAD' y el FAD, se almacena inicialmente en forma de electrones de alta
energfa. Estos electrones, transportados por el NADH y el FADH 2, reaccionan
con el oxfgeno molecular a traves de la cadena respiratoria. Para describir estas
ultimas reacciones se utiliza el termino de fosforilaci6n oxJdativa ya que la gran
cantidad de energfa que se Iibera de elias es utilizada par las enzimas de la mem-

706 Capltulo l4: Conversi6n energthica: mitocondrias y c1oroplastos

J......... ------"-
 bran a interna de la mitocondria para impulsar la transformaci6n de ADP + PI 11m + H' + ~02 [NAO'I + H20
hasta ATP (Figufa 14-15).
Como ya hcmos mencionado, la producci6n de ATP por In fosforilaci6n oxi-
dntiva en la cadena rcspiratoria depende de un proceso quimiosm6tico. Cuando
fue propuesto por primera vez en 1961, este mecanismo resolvi6 un antiguo rom-
\.. plocesos de
)
trenlformllci6n IInllrg8t~
pecabezas de la biologfa celular. No obstante, la idea resultaba tan original que
fueron ne<:esarios varios ailos para acumular las pruebas suficientes para que fue-
ra aceptada de forma general. Anterionnente se crefa que la energfa para la sfnte- I"'-fOSFORILACIO:-"
.. ~
OXIOATlVA '"

sis del ATP vCa la cadena respiratoria era suministrada por el mismo proceso que ~+PI aD+H20
actua durante las fosforilaciones a nivel de substrato: es decir, se crefa que la
energfa de oxidaci6n era utilizada para producir un enlace de alta energfa entre Figura 14-15 Prlncipal red de
un grupo fosfato y a1giin compuesto intennedio. y que la conversi6n de ADP en transformacion energetlca catallzada
pur la mltocondria. En este proceso
ATP era impulsada par la energfa que se liberaba al romperse este enlace. Sin
defosfori1lu:i6n oxidatilXJ, la
embargo, a pesar de los intensos esfuerzos que se realizaron. nunea se pudieron membrana mitocondrial interna actlia
lIegar a dete<:tar estos intennediarios. como una maquina de interconversi6n
Un resumen de nuestra visi6n actual del metabolismo energetico mitacon- energetica, transformando pane de la
drial se representa en la Figura 14-16. Segtin la llip6tesis qllimiosl1Iotica, los in- energCa de oxidation del NAOH {y del
termediarios qufmicos de alia energfa son substituidos por una conexi6n enlre FADH 2l en energCa de enlace fosfato
procesos qufmicos rquimio") y procesos de transporte {"osm6tico del GriegoM
, deiATP.
OSI1IOS, empujarl -de ahf el nombre de acoplamJenlo quimlosm6tlco (Tabla
14-1). Cuando los electrones de alta energfa de los hidr6genos del NADH y del
FADH1 son lransferidos a 10 largo de la cadena respiratoria de la membrana mi-
tocondrial intema, la energfa que se libera cada vez que pasan de una moMcula
transportadora a la siguiente es utilizada para bombear prolones (H') a traves
de la membrana inlema, desde la matriz mitocondrial hasta el espacio inter-
membranoso. ESlo genera un gradieme eler:troquimico de protones a traves de
la membrana mitoeondrial interna. y el f1ujo de H' a favor de este gradiente es
utilizado, mediante una enzima Iigada a la membrana. la ATP simastl, para im-
pulsar la conversi6n de ADP + PI en ATP, eomplelando asf el proeeso de la fosfo-
riJaei6n oxidativa.
En 10 que queda de esta secci6n vamos a esbozar brevemenle el tipo de re- FIgura l4-l6 Reswnendel
aeciones que haeen posible la fosforilaci6n oxidativa, dejando los detalles para metaboUsmo energetlco mJtocondrlal.
mas tarde. EI piruvato y los acidos grasos que
eottan en la mitocondria son
procesados a acetil CoA y son
metabolizados par eJ cicio delllcido
, uv/tt IicldQf; gfa dtrico, produciendose NADH (y FADH~,
que no se muestra en la figural. En el
membr.ne
proceso de la fosforiJacion oxidativa, los
Interne electrones de alia energfa del NADJ-I (y
membr.nll del FADH 1 ) se transfieren al oxfgeno
externe
plruveto 8cldos ijfnos mediante la cadena respiratoria de la

"
&clltH CoA /
membrana mitocondrial interna,
produciendose ATP mediante un
mecanismo quimiosmotico.
EI NADH generado en el citosol
cicio de
por la glucolisis tambien transfiere
"ida
cilrico
/'--WIlll-......--1I-- _ electrones a la cadena respiratoria (no
se muestra en la figural. Dado que el
NADH no puede pasar a traves de
la membrana mitocondrial interna, la
transferencia electr6nica desde el
NADH citos6lico se ha de efectuar de
manera indirecta por medio de un (de
entre varios) sistema de "Ianzadera-,
que transpona otros compuestos
reducidos al interior de la mitocondria;
despues de ser oxidado, este
H' H" H' compuesto vuelve at citosol, donde es
rcducido de nuevo por eI NADH_

La mitocondrla 707

7
Tabla 14-1 Acoplamlento qulmlosm6tlco
La hip6tesis quimiosm6tica, tal como fue propuesta a principios de la decada de
1960, consiste en cuaHo postulados independienres. En terminos de funci6n
mitacandrial, fueron:
1. La cadena respiratorla miLOcondrial de la membrana interna transloca
protones; cuando se transportan electrones a traves de la cadena, bombea H'
hacia afuera del espacio de la matriz.
2. EI complejo mitocondrialATP sintasa tambien transloca protones a traves de la
membrana interna: al ser reversible, puede utilizar energfa de la hidr6lisis del
ATP para bombear H' a traves de la membrana, pero si existe un gradiente
electroquImico de protanes suficiente, los protones fluyen en direcci6n opllesta
a traves del complejo impulsando la sfntcsis de ATP.
3. La membrana mitocondrial interna esta equipada con una serle de protefnas
transportadoras que median la entrada y la salida de metabolitos esenciales yde
determinados iones inorganicos.
4. La membrana mitocondrial interna es impemleable a H', OH- y, en general, a
caliones y aniones

Los electrones son transferidos desde el NADH hasta el oxfgeno, a

traves de tres grandes complejos enzimaticos respiratorios6
Aunqlle el mecanismo a traves del que se aprovecha la energfa por la cadena res-
piratoria difiere del de otras reacciones metab6licas, el principio es el mismo. Se
consigue que la reacci6n energeticamente favorable H2 + Ih02 4 Hp se produz-
ca a traves de muchos pequef'ios pasos, de forma que la mayor parte de la ener-
gfa de esta reacci6n pueda ser transformada en una forma de almacenamienro
en vcz de ser Iiberada al medio en forma de calor. Tal y como ocurre en la forma-
ci6n de ATP y de NADH en la glucolisis 0 en el cicio del acido cftrico, esto impH-
ca que la reacci6n debe realizarse a traves de una vfa indirecta. La cadena respi-
ratoria es una vfa t1nica en cuanto a que en ella los atomos de hidr6geno son
escindidos en protones y electrones. Los electrones pasan a HaveS de una serie

Figura 14-17 Comparacl6ndelas

'A' H,
'81
H, oxldaclones blol6g1cas con la
combustl6n. En esta ilustraci6n se

\1 ! eSCiSi6rlerl prolorles
yeleetrones muestra c6mo la mayor parte de la
energfa que se liberarfa en forma de
2W + 2&

--
calor si se quemara el hidr6geno (Al se
utiliza y se almacena en forma ulil poe
medio de la cadena de transporte
eleclr6nico de la membrana
milocondrial interna (B). EI resto de la
LlBERACION energfa de oxldaci61l se Iibera par la
la mayor parte
EXPLOSIVA
de la anergfa aa mitocondria en forma de calor. En
Of ENERGIA
..""., CALORfFICA ~
aprovecha y sa realidad, los protones y los clectrones
transforma en
una forma de
que se mllestrall aqllf se obtienen de
almacenamianto los atemos de hidr6geno que se hallan
unidos covalentemente a moleculas de
NADH 0 de FADH 2 (vllase Figura
14-18).

"-=r---
2H 1

708 Capftulo 14: Conversl6n energetlca: mitocondrlas y c1oroplastos

 .mhol .doh...

H H
H" H H"
H H
1 Yo 1 " 1
R -C+O' R-C+O' R -C+O' R -C#O
1 ".
"I"
H
H
1
H, C ......C-NH1
C C I
0
H/ C N C'H
1
]NAD'I

RESUMEN: ,......-,HH
~ +NAO+ - C) + NAOli + W
$Ubstrllto substrlto
oxidlldo

de transportadores de electrones de la membrana mitocondrlal interna. En algu- Figura 14-t8 LaoJddacl6n blol6glca
nos pasos a 10 largo de esta cadena los protones y los elecrrones se recombinan de un alcohol a un aJdehfdo. Del
temporalmeme. Pero s610 cuando los electrones alcanzan el final de esta cadena alcohol se eliminan los componenles
de transporte electr6nico, se devuelven los protones para neutralizar las cargas de dos '-lOmos de hidrogeno
negativas creadas por la adici6n final de electrones a la mol&:ula de o:dgeno (Fi- complelOS: un ion hidruro es
trnnsfcrido aI NAn' Yun prol6n escapa
gura 14ln.
ala solud6n acuosa. Ell la figura se
ESludiaremos el proceso de oxidaci6n empezando por el NADH, el mas im- muestra unicamemc la porci6n del
porlanle colector de eleclrones derivados de la oxidaci6n de las mol~culas de anma de nicotinamida de las
los nutrientes. Cada atomo de hidr6geno consla de un electr6n (e-) y un prot6n moleculas de NAO' y de NADH (v~ase
(H'). En el Capitulo 2, ya explicamos el mecanismo por el que el NAOH capta Figura 2-24). Las reacdones que se
los eleclrones, 10 cual se muestra can mas delalle en la Figura 14-18. Como cla- iluslran aqu{ se desarroUan sabre la
rifica este ejemplo, cada molecula de NADH no transporta un ion hidr6geno superfide de una protelna, yest.in
sino un iOIl hidruro (un atomo de hidr6geno m<1s un electr6n adicional, aI que C8talizadas por grupos qulmicos
podemos indicar como H:-, ilustrando como un puma cada uno de sus dos elec especfficos de la enzima alcohol
trones). Sin embargo, y Pllcsto que en las soluciones acuosas los protones estan deshidrogenasa (que no se muestra).
disponibles libremente, el transporte de lin ion hidruro par el NAOH equivale (Modificado con permiso de P.P. Cook,
a transportar dos Momos de hidr6geno, es decir, una molecula de hidr6geno N.j. Oppenheimery W.W. Cleland.
Biocllemistry20;1817-1825.1981.
(H:-+ W --+ H 2).
01981 American Chemical Society.)
EI transporte de electrones empieza en el momenta en que el ion hidrwo se
libera del NADH, regener<1ndose NAn", y se convierte en un prot6n y dos elee-
troncs (H:---+ H' + 2e-). Estos dos electroncs son transreridos al primero de una
serie de m<1s de 15 transportadorcs diferenlcs de electrones que se hallan en la
cadena respiratoria. Los electrones empiezan con una energfa muy alia, que van
perdiendo a medida que pasan a 10 largo de la cadena. La mayor parte de las ve-
ces los eleclrones pasan de un Morna metalico a otro, cada uno de los cuales
est<1 estrechameme unido a una moltkula de protefna que altera la afinidad
electr6nica del <1tomo metAlico. M;1s adelante se explicaran con detalle los dire-
rentes tipos de transportadores electr6nicos de la cadena respiratoria. Pero 10
que es mas importante es el elevado numero de enzimas implicadas en este pro-
ceso que se encuentran agrupadas en tres grandes complejos e"zimdticos respi-
ratorios, cada uno de los cuales presenta protefnas transmembrana que sostie-
nen firmemenle el complejo en la membrana mitocondrial interna. Cada
complejo de la cadena tiene mayor afinidad par los electrones que su predece-
sor, de forma que los elecLTones pasan secuencialmente de un complejo aI otro
hasta que finalmente son transferidos aI oxfgeno, el cual tiene una afinidad par
los electrones mayor que la de cualquier complejo de la cadena.

La mltocondrla 709
La energfa liberada por el paso de los electrones a 10 largo
de la cadena respiratoria se almacena en forma de gradiente
electroquimico de protones a traves de la membrana
mitocondrial interna7
La flllima asociaci6n existente entre los transportadores de electrones y las mo-
leculas de protefna hace posible la fosforilaci6n oxidativa. Las protefnas gufan a
los electrones a 10 largo de la cadena respiratoria. de tal manera que los etectro-
nes se desplazan secuencialmente de un complejo enzimatico al otro -sin que
haya cortocircuitos. Es importante que la transfcrencia de electrones este aco-
plada a la captaci6n y liberaci6n de prolOnes y a los cambios alostericos de de-
terminadas moleculas de protefna, de tal manera que el flujo energeticamente
favorable de electrones bombea protones (H') a traves de la membrana interna
desde el compartimiento de la matriz hasla el espacio intermembrana. Este des-
plazamiento de protones tiene dos consecuencias principales. (1) Genera un
gradiente de pH a traves de la membrana milocondrial interna, can un valor de
pH mayor en la matriz que en el cilosol en donde suelc ser cercano a 7. (EI pH
del espacio intermembrana es equivalente al del cilosol ya que las moleculas pe-
quefias se equilibran libremente a traves de la membrana cxterna de la mitocon-
dria.) (2) Genera un gradiente de voltaje (potencial de membrana) a traves de la
membrana mitocondrial interna, negativo en el interior y positivo en el exterior
(que es el resullado del flujo neto de salida de iones positivos).
El gradiente de pH (~pH) empuja a los H' de nuevo hacia adentro y a los
OH- hacia afuera de la matriz, reforzando asf el efectn del potencial de membra-
na (6 V) que actua atrayendo hacia la matriz a cualqUler ion positive y empujan-
do hacia el eXlerior a cualquier ion negativo. En conjunto, estas dos fuerzas
constituyen un gradlentc elcctroqufmJco de protones (Figura 14-19).
El gradiente electroqufmico de prolones ejerce Wla fuerza prot6n-motrlz, la
cual puede medirse en unidades de milivoltios (mV). eada 6pH de una unidad de
pH tiene un efecto equivalenle a un potencial de membrana de aproximadamente
60 mY, par 10 que la fuena pr0l6n-motriz total es igual a6V-6O(6pH). En una celu-
la !fpica, la fuerza prol6n-motriz a traves de la membrana interna de una mitocon-
dria en respiraci6n es de unos 200 mVy esta constituida por un potencial de mem-
brana de WlOS 140 mVy de un gradiente de pH de alrededor de -I unidad de pH.

La energia almacenada en el gradiente electroqufmico de

protones se utiliza para producir ATP y para transportar
metabolitos e iones inorganicos hacia el espacio de la matriz8
La membrana mitocondrial intema contiene Wla extraordinaria cantidad de protef-
na: un 70% de su peso seeo son protemas mientras que el otro 30% son fosfolipidos.
Muchas de estas protefnas fonnan pane de la cadena de transporte electr6nico, la
cual establece el gradiente electroqufmico de protones a traves de la membrana. Otro

w Figura) 4-) 9 Los dos componentes

del gradJente electroqu(mlco de
mambrana protones, La fuerza prot6n-motriz
mitocondrial
intarna [ luana prot6n potancial da
motriz dabida al membrana 8V
-------
total a traves de la membrana
mitocondrial interna esta compuesta
liP. par una gran fuerza debida aI
w potencial de membrana (designada
tradicionalmente como.1'f' par los
expertos, pero que en eSle libro se
w Beida
w indica como.1. \I) y por Wla pequeiia
"' H'

membrana
mitocondrial
interna
[ fuena prot6n- ........
motriz dabid8 81 con::.dBprotonas 8pH
H' H' H' H'
"' fuerza debida aI gradiente de
concentraci6n de protones (.1pH).
Ambas fuerzas actl1an en el senlido de
W impulsar prOlones hacia el espacio
H'
de la matriz milocondrial.
elcelina

710 Caphulo 14: Conversl6n energetIca: mitocondrias y cloroplastos

componente mayoritario de la membrana mitocondrial es la enzima A7P silltasa,
que cataliza la sfntesis de ATP. Se trata de un gran complejo proteico a traves del cual
los protones fluyen hacia la matriz a favor de su gradiente electroqufmico. Como si se
tratara de una turbina, este complejo proteico ttansfonna una forma de energfa en
otta, sintetizando ATP a partir de ADP y Pi en la matriz mitocondrial, a ttaves de una
reacci6n que esta acoplada al flujo de protones hacia la matriz (Figura 14-20).
La sfntesis de ATP no es, sin embargo, el unico proceso que esta impulsado
por el gradiente electroqu!mico de protones. Las enzimas de la matriz milocon- H'
drial, donde tienen lugar el cicio del acido cftrico y otras reacciones metab6licas,
han de abaslecerse con elevadas concentraciones de substratos, y la ATP sintasa cadtlrll de
se ha de abastecer con ADP y fosfato. As! pues, han de ser transportados a traves Iranaporte
.1ectr6rlico H'
de la membrana mitocondrial intema un elevado numero de substratos carga-
dos. Este transporte se realiza gracias a la acci6n de varios transportadores pro-
teicos de membrana, muchos de los cuales transportan activamente moleculas
especfficas en contra de sus gradientes electroqufmicos, procesos que requieren
un aporte de energfa. Como se explic6 en el Capitulo 11, a menudo esta energia
procede del cotransporte de oua molecula a favor de su gradiente electroqufmi-
co. EI transpone de ADP hacia el espacio de la mauiz, por ejemplo, esta media-
do por un sistema antipone de ADP-ATP: por carla molecula de ADP que entra,
sale una molecula de ATP a favor de su gradiente electroqufmico (la salida de
una carga negativa es favorable). El transporte de fosfato hacia la matriz esta
mediado por una protefna transponadora que acopla el movimiento de fosfato
hacia adentro con el flujo de protones hacia adentro, a favor de su gradiente ATe
sintau
electroquimico, de tal manera que el fosfato es arrastrado con ellos. EI piruvato
MATRIZ
es transportado hacia la matriz de la misma manera (Figura 14-21). EI gradiente
electroquimico de protones se utiliza tambien para imporlar Ca 2., el cual se cree
que es importante en la regulaci6n de algunas enzimas mitocondriales; la im-
portaci6n de Ca 2' hacia la mitocondria puede ser importante para eliminarlo del
citosol cuando sus niveles empiezan a ser peligrosos. membrana membrana
Se utiliza mayor cantidad de energia del gradiente electroqufmico de proto- intema aXlama
nes, para transportar moltkulas e iones hacia la mitocondria, que para impulsar Figura 1420 Mecanlsmo general de
la ATP sintasa. Si por ejemplo se incuban mitocondrias aisladas en presencia de la fosforilacl6n oxldatlva. Cuando un
elevadas concenlraciones de Ca2., la producci6n de ATP cesa completamente; electr6n de alta energfa es transferido
toda la energfa de su gradiente electroqufmico de protones se utiliza para bom- a 10 largo de la cadena de trans porte
bear Ca2 hacia la matriz. De forma similar, en unas celulas especializadas el gra- electr6nico, parte de la energla
diente electroqufmico de protones se cortocircuita, de tal manera que sus mito- liberada se utiliza para impulsar la
condrias producen calor en lugar de ATP como se explica mas adelante. La acci6n de tres complejos enzimaticos
utilizaci6n de energfa almacenada en el gradienle electroqufmico de protones respiratorios que bombean protones
hacia el exterior del espacio de la
puede regularse par las celulas de tal manera que, en un momenta dado, se pue-
matriz. EsIOS prolones generan un
de dirigir hacia aquellas actividades que sean mas necesarias.
gradiente electroqufmico de protones
a traves de la membrana mitocondrlal
La rapida conversi6n de ADP en ATP en las mitocondrias interna que impulsa a los protones a
mantiene una elevada relaci6n ATP-ADP en las celulas8 volver hacia la matriz a traves de la
ATP sintasa, un complejo proteico
A consecuencia del antiporte de la membrana interna que bombea ADP hacia la transmembrana que utiliza la energla
matriz mitocondrial intercambiandolo con ATP (vease Figura 14-21), las moltku- del flujo de protones para sintetizar
las de ADP producidas en el citosol por la hidr6lisis del ATP, penetran rapida- ATP a partir de ADP YPI en la matriz.
mente en las mitocondrias para ser recargadas a ATP, mientras que las moleculas
de ATP formadas en la matriz mitocondrial mediante la fosforilaci6n oxidativa
son rapidamente bombeadas hacia el ciIOSO], que es donde son necesarias. Una
molecula t(pica de ATP del cuerpo humano eorra y sale de la mitocondria miles
de veces al df~ (tal como ocurre tambien con el ADP), manteniendo la conceorra-
ci6n de ATP en la celula unas 10 veces superior a la deADP.
Como hemos discutido en el Capftulo 2, las enzimas biosinteticas de las celu-
las gufan a sus substratos a 10 largo de cadenas de reacciones especfficas, impul-
sando a menudo reacciones energeticamente desfavorables al acoplarlas con la
hidr6lisis del ATP, que es energeticamente favorable (vease Figura 2-29). De esta
forma, los elevados niveles de ATP se utilizan para impuJsar procesos celulares, de

La mltocondria 711
 Figura 14-21 Algunos procesosde
trasporte acllvo Impulsados por el
el gradiente de gradlenle electroqulmlco a traves de
vOltaje Impulsa el
intercambio ADP-ATP la membrana mltocondrlallntema.
La carga de carla una de las moleculas
transportadas se indica con respecto aI
potencial de membrana, que es
ncgativo en el interior. La membrana
ADF" mitocondrial externa es permeable a
lodos estos compuestos. Para una
discusi6n sobre los mecanismos de
transporte de membrana, vease el
Capftulo 11.

H' el gradiente de
el gradiente de pH pH impulsa la
impulsa la entrada entrada de fosfato
de piruvato

plruvato H'

la misma forma como se puede utilizar una baterfa para accionar maquinas eltk-
tricas: si la actividad de las mitocondrias se detiene, el nivel de ATP disminuye y la
baterfa celular se descarga, de forma que, finalmente, las reacciones energetica-
mente desfavorables ya no pueden ser impuJsadas par la hidr6lisis del ATP.
Podrfa parecer que esta situaci6n no se alcanza hasla que la concentraci6n
de ATP es cera. Sin embargo, se alcanza a concentraciones de ATP que depen-
den de la concentraci6n de ADP y de PI' Para explicar el porque, hemos de consi-
derar algunos principios elementaJes de la termodinamica.

La diferencia entre ~Go y ~G: para que la Wdr6lisis de ATP sea util
para la c~lula es necesario que tenga un valor muy negativo de ~G9
La segunda ley de la lennodinamica dice que las reacciones qufmicas discurren
espontaneamente en la direcci6n que corresponde a un aumenlO del desorden
del universo. En el Capftulo 2 ya indicamos que las reacciones que Iiberan ener-
gfa aJ medio en forma de calor (tales como la hidr6lisis del ATP) tienden a
aumentar el desorden del universo al incrementar los movimientos aleatorios de
las moleculas. Por eSla raz6n, las reacciones discurren convirtiendo la energfa Ii-
bre (energfa disponible para realizar un trabajo) en calor. Asf, la reacci6n A ;: 8
discrnrira en la direcci6n A --+ 8 cuando el cambio de energfa Iibre asociado, tl.G,
es negativo, del mismo modo que cuando un muelle lensado se deja subitamen-
te de estirar libera su energfa almacenada en forma de calor. Sin embargo, para
una reacci6n qurmica, tl.G no s610 depende de la energfa almacenada en cada
molecula individual, sino tambien de las concentraciones de las mohkulas en la
mezda de reacci6n. Esto es porque, para una reacci6n reversible A;: 8, un ex-'
ceso de 8 sabre A tendeni a impulsar la reacci6n en direcci6n 8 --+ A; es decir,
habra mas moleculas haciendo la (ransici6n 8 --+ A que moleculas haciendo la
transici6n en sentido contrario. No esta daro cuat es valor de la diferencia de
concentraci6n necesario para compensar una cantidad de calor liberada dada;
esto depende de cambios en la entropfa que pueden ser calculados como se des-
cribi6 en el Panel 14-1, pags. 714-715.
Para una reacci6n dada, el 6G se descompone en la suma de dos partes: la
primera, denominada varlacl6n de energfa Ubre estandar. 6eo, depende de las
caracterfsticas intrfnsecas de las moJeculas que reaccionan; la segunda depende
de sus concentraciones. Para la reacci6n simple A --+ 8,

712 Capitulo 14 : Conversi6n energetica: mitocondrlas y c1oroplastos

_____________________________.......:.10.
 3~
I- EN El EQUILIBRIO:
.
am hidr61isis
IAopl velocidsd de slntesis vslocidlld de hidr61isis

velocldad de
hldr61isis
. .elacion
constanta
de hidr611sis
, concentracion
deATP
relacion
constants
de slntesls
, cone. de
fosfato
Jl cone. de
ADP
. relaci6n
constente
de hidrtolisis
, cone. de
ATP
relaci6n
cone. de , cone. de conSlllnte
2 asi,
ADP fosfato
. de !lidr6l,sis
constanta de Itquilibrio K
IAopl
slntelis
am concentraci6n
deATP
ralaci6n
eonst,lnte
velocidad de
slntesis
. derelacion
constants
sintesls
, cone. de
fosfato
x cone. de
ADP
de slotesis
IADPII@1
IIbreYiando. K
[ATPI

Para Is reaccion En el equilibria, la reacci6n no tiene un efecta neto en el desorden

del unlverso. asl que oG. O. Por esta ,alon, en el equilibria,

am , IAOpl
-RTIn
IADP]I@J
.AG"
IATPJ
se utilizs la siguiente ecuaci6n:
Pero las concantreciones de los reactivos en el equilibria deben
fADPII@1 satislacer la reacci6n da equilibria:
"'G.,.,(1'.RTln
IATPI IADPJI@I
K
lATPJ
Donde"'G y fj,(J' est~n expresados en kilocalorlas
por moL Rea la constante de los gases Par esta raz6n, en elequilibrio,
(2 x 10-3 kcal/mol 01(;), T es Ie temperatura tJ.(1' _ -RTIn K
abaoiula ll(;), y lodas las concentraciones est~n
expnlsadas en moles por litro.
Cuendo las concentraciones de todos los Vemos asl, que tJ.(1' indica el punta de equilibria para una.
compuestos reacclonentes son iguales a reeccl6n, y tJ.G Indica 10 IIle/lldll que ast~ una reeccl6n dal
1 M, fj,G _ fj,C1' (ya que RTln 1 .0). Par consiguiente, equilibria. tJ.G es una medida de la fuerza impulsora" de una
,.,(1' es una constante definida como la variaci6n r8acci6n qulmica, como la fuerza prot6n motriz 10 es para la
de energle libre est~ndar para Ie reecci6n. translocaci6n de protones.

donde [AI Y[B] representan las concentraciones de A y de B, y In es ellogaritmo Figura 14-22 Relacl6n Mslca entre
neperiano. De esta manera, t::.G" iguaJa el valor de flG cuando las concentracio- las varlaclones de energ{a libre y el
nes molares de A y de B son iguaJes (In 1= 0). El equilibrio qufmico se alcanza equlllbrio, llustradas para la reaccl6n
cuando el efecro de la concentraci6n esta equilibrado por el efecto de t::.G", asf de hldnSllsls delATP. Las constantes
que no se produce un cambio neto de energfa Iibre para impulsar la reacci6n en de velocidad en los recuadros (I) y (2)
se determinan en experimentos en los
cualquier direcci6nj entonces t::.G =0, y las concentraciones de Ay B son tales que
que se mide In acumulaci6n del
IBI producto en fullci6n del tiempo. La
-RTIn [AI = t::.G" constante de equilibrio que se muestra
aquf, K. viene dada en moles par Iitro.
10 que significa que hay un equilibrio qufmico cuando (Para una discusi6n sabre la energfa
libre, vease Panel 14-1. p<1gs. 714-715, y
l!!!.= e-6G'I//T para una definici6n de la constante de
[AI
equilibria, v~ase Figura 3-9.)
Cuando el ATP se hidroliza a ADP y PI' a las condiciones que normaJmenle
existen ell la celula, la variaci6n de energ(a Iibre del proceso esta entre -11 y-13
kcaJ/mol. Este t::.G es ex.tremadamente favorable y requiere que la concentraci6n
de ATP en la celuJa se manlenga alta en relaci6n a la de ADP y a la de PI' En "con-
diciones eSlandar", en las que tanto el ATP como elADP y el PI se haUan presen
tes a la misma concentraci6n de 1 mol por litre, el t::.G para la hidr6lisis del ATP
-llamada variaci6n de energfa fibre esufndaro t::.G" de la reacci6n- es unicamente
de -7,3 kcallmol. A concentraciones de ATP todavia mas bajas en relaci6n con
las de ADP y PI ' el t::.G Ilegara a ser igual a cero. En este punto, la velocidad a la
que se uniran el ADP i el Pj formando ATP sera igual a la velocidad a la que se hi-
drolizara el ATP formando ADP YPI' En otras palabras, cuando t::.G= 0 la reacci6n
se halla en equilibria (Figura 14-22).
Es t::.G Y no t::.G" el valor que indica 10 lejos que una reacci6n dada eSla del
equilibrio y 10 que determina si una reacci6n puede ser utilizada 0 no para im-

La milocondrla 713
 LA IMPORTANCIA DE LA ENERGIA L1BRE PARA LAS C~LULAS
La vida es posible gracias a una compleje red de reacciones
qulmicas inleraetuantes que lienen lugar en todas las celules.
Ob5ftrvendo las reacciones metab6licas que componen eSla rad.
uno puede suponer que la c6lula debe Jener la habilidad de
desarrollar enzimas capaces de lIevar a cabo cualquier reacci6n
que la c6lula necesite. Pero en realidad asto no es asi. A pesar
de que las enzimas son poderosos catalizadores, unicamente
puaden acelerar las reacctones que sean termodinamicamente
posibles. Las otras reacciones unicamente son posibles porque
se Koplan a reaceiones muv favorables que las impufsan.
LA ENERGIA L1BERADA POR CAM BIOS EN LOS ENLACES QUIMICOS ES TRANSFORMADA EN CALOR
CA-JA
MAR
' - - - - - - - UNIVERSO ...J
Un sistema carrado sa define como un conjunto de molkulas que
no intercambian materia con el resto del universo (por ejemplo, la
-c6Iula-eaja- que sa muestra mb arriba). Cualquier sistema como
6ste presanta moleculas con una energfa total E. Esta energfa sa
distribuve entre diferentes formas: como energla de translaci6n de
les moleculas, cOmo su energla de vibraci6n, como su energle de
enlace entre los alomos individuales que formen las moleculas.
Supongamos que en el siSlema liene luger una reacci6n.La
primera lev de la lermodin6mica restringe el tipo de reacci6n que
puede tener lugar en el sistama: eSlablece que -en cualquier
proteso, la energfa lotal del sistema se mantiene conSlante-. Por
ejemplo, supongamos que en el sistema cerrado tiene lugar la
reaccl6n A -+ B, V que esta reaccl6n fibere una gran cantidad de
energla qulmica de enlace. Inlcialmente, esta energfa incrementara
la intensidad de los movimienlOS moleculares (de translaci6n, de
vibraci6n y de rotaci6n) an el sislama. 10 cual equivale a un
aumento de latemperatura. Sin embargo, este incremento delos
movimientos pronto sara trensfarido fuera del sistema a traves de
LA SEGUNDA LEY DE LA TERMODINAMICA
Consldaremos un reeipiente en al que hay 1000 monedas.
dilpuestas todas elias de cara hacia arriba. Si al recipiente 58 agita
vigorosamente, sometiendo a las monadas a movimientos
aleatorios del mismo tipo de los que experimentan todas las
molkulas debido a sus frecuentes colisiones con otras molecules,
puede asperarse que al final, aproximadamente la mitad de las
monedas se enconuaran orianladas de cara hacia abaio. EI motivo
de esta reorientaci6n as que tan 1610 axisle un camino para
rain'taurar el estado iniciallcada moneda con la cara hatia arriba).
mientras que existen muchos caminos diferentes
(aproximadamente unos 10298 ) para alcanzar un estado compuesto
714 Panell4-) Ene... llbre y reacdones blol6ltc:as.
La cuesti6n de si una reacci6n puede aeunir espontaneamenle. 0
por el conlrario. necesita acoplarse a otra reacci6n, es de una
imponancia capital para la biologla calular. La respuesta sa obtiene
elT relaci6n a una cantidad Ilamada la energia libre: la variaci6n total
de energla libre que 58 produce a traves de un conjunto de reaociones
determina si este gropo de reacciones puede 0 no tener lugar. En
este Panel explicaremos algunas de las ideas fundamentales
-derivadas de una rama especial de Ie qulmk:a V de la fisice, lIamada
fermO(Jin.lmica- que son necesarias para entender 10 que es la
energfa libre V por qu6 es tan imponante para las c6lulas.
series de colisiones moleculeres que en primer lugar calenlaran Iss
paredes de la caja y posteriormente el mundo exterior (representado
en nuestro ejemplo por el mar). AI final, el sistema vuelve a su
temperatura inicial, en el momento en el que toda la anergla de
enlace qufmico ha sido trensformada en energfa calorffica y
transferida fuera de la caja al medio exterior. De acuerdo
con la primer ley, la variaci6n de la energfa en la caja (.6Ec.j., que
indicaremos como.6El debe ser Igual y de signo contrario a la
variacl6n de energla calorlfica transferida, la cual podemos indicar
como h: es decir,.6E. -h. Asl pues, cuando el calor abandona el
sistema, la canlidad de energia disminuye en la caje.
E tambien puede variar durante una reacci6n debido al trabajo
reefizado en el mundo exterior. Supongamos por ejemplo que
durante una reacci6n determinada sa produce un pequeno
incremento del volumen (.6 V) de Ie caja. Dado que para poder
expandirse, las paredes de la caja deben empujar contra la presi6n
constante (PI del madio exterior, eSla expansi6n supone la
reaHzaci6n de un trabajo en el mundo exterior y requiere energla.
La energla utiUzada es P(.6V! que. de acuerdo con la primera ley,
debe raducir la energla de la caja (E) en una cantidad igual a la
utilizada para prodocir aste traba;jo. En muchas reacciones, la
energla qufmica de enlace es transformada en trabajo V celor. La
ftnralp(a {H)es una funci6n compuesta que incluve ambas formas de
energfa (H _ E -+ PVI. Para sar rigurosos. en un sistema cerrado, as
la variaci6n de la entalpla (.6H) , y no la variaci6n da la energla. la
que es igual a la cantidad de calor transferida al mundo exterior
durante una reacci6n.las reacciones en las que Hdisminuye libersn
calor al medio y se denominan -exotermicas mientras que las
reacciones en las cuales H incrementa absorben calor del medio y
se denominan "'endotarmicas~. Asl, -h .6H. Sin embargo. debido
a que la variaci6n de volumen que ocurre durante la mayoda de la
reacciones biol6gicas, es despreciable, puede aproximarse:
por el mismo numaro de caras V de cruces; de hecho, hay mochos
mas caminos para alcanzar un estado 50:50 que par. conseguir
cualquier ouo astado. Cada estado tiene una posibilidad de soceder,
que as proportional al numero de vias por las que dicho astado se
puede alcanzar. La segunda ley de la termodinamica estabfece que
"los sistemas cambiaran espont6neamenta dasde astados de
probabilidad baja de ocurrir, hacia estados de probabilidad
elevada-. Dado que los estados de baja probabilidad son mas
~ordenados- que los estados de alta probabilidad, la segundalay
tambien se puede axpresar como: "el universo cambia
constantemente an el sentido de convertirsa an mas desordenado-.
 LA ENTROpIA, S
La segunda ley (a diferencia de la primere) permite predecir 18
direccion de una reacci6n determinada. Sin embargo. para poder
utilizerls en este santido. es necesario disponer de una medide de la
probabilidad de un eSlado. es deeir, de su grado de desorden. Esla
medide as la entropfa (S). La entropla es una funci6n logeritmica de
Ie probabilidad tal que Ie var;aci6n de emrop!s (60S) que S9 produce
cuando Ie reacei6n A...., B convierte un mol de A en un mol de B, as:
6S.Rln Ip.
dande PA Y Po son las posibilidades de los dos estados Aye, R as Ie
constanta de los gases (2 cal grado-1 mol-'), y 6Sse mide en
unidades de enlropla (ue). En nuestro ejemplo inieial de las mil
monades, Ie probabilidad relative de que sa presenten lodes las
caras lastado A) respecto a la situaciOn da mitad de caras y mitad da
cruces (astado BI es igual. al numero de caminos diferentes a traves
de los que se pueden alcanzar cada uno de estos dos estados. Se
puade calcular que PA _1 Y PB _10001(5001 x SOOIl- 10298. Asl pues,
la variaciOn de entropfa producida por la reorientaciOn de las
LA ENERGIA LlBRE DE GIBBS, G
AI trabajar con un sistema biolOgico cerrado, nos puede interesar
disponer de un sistema sendtto de predecir sl una reacciOn va a
tener lugar 0 no en al sistama. Hamos vista que la cuestiOn crucial
es si, al producirse la reacciOn, la variaciOn de entropla del universo
es positiva 0 negativa. En nuestro sistema ideatizado de la celula-
caja, la variaciOn de entropia en el universe tiene dos componentes
-Ia variaciOn de entropfa para el sistema cerrado de la caja y la
variaciOn da antropfa en al mar circundant&- y ambos
componentes deben ser considarados conjuntamante para
cualquier tipo de predicciOn que se haga. Por ejemplo, es posible
que una reacciOn absorba calor, haga disminuir la entropia del mar
(o.5mar < 0) Y cause un gran incremento del desorden en el interior
de la caja (J),5caja > 0), de manera qua la variaciOn total t..5unlve"JO-
t..5mar + t..5caia sea mayor que O. En esta caso la reacciOn sucedera
espontaneamente siempre que durante la reaceiOn al mar cada
calor a la caja. Un ejemplo de reaceiOn de este tipo es la disoluciOn
da cloruro sOdico an un vaso da pracipitados conteniendo agua (la
Mcaja M). Esta reacciOn tiena lugar espontanaamente a pasar da que
la temparatura del agua sube cuando la sal sa disualva.
los qulmicos han encontrado Litil detinir nuevas Hfunciones
compuestas Mque describen combinacionesde propiedades fisicas
del sistema. Las propiedades que sa pueden combinar son: la
temperatura (T), la presiOn (Pl, el volumen IV), la energia (E), y la
entropfa (5). La entalpfa (HI es una de estas funciones compuestas.
Pero la tunciOn compuesta mlls utit para los biOlogos es. con
diferencia, Ie energia fibre de Gibbs, G. Esta funciOn es util como
estrategia de contaje que permite dedudr los cambios de entropfa
del universo resultantes de reaceiones quimicas en la caja, evitando
cualquier consideradOn sobre los cambios de entropia an al mer.
Para una caja de volumen Va presiOn P, la definiciOn de G es
donde Hes la entalpfa descrita antes (E + PV), Tes Ie temperatura
absoluta y 5 es la entropfa. Cada uno de estos parametros esta
refarido unicamente al intarior de la caja. Durante una reacciOn
que se produzca en la caja, la variaciOn de la anargla libre (Ia G de
los productos menos la G de los substratos inidales) se senala
como J),G, y como ahora demostraremos, es una medida directa de
la cantidad de desorden generado en el universo cuando tiene
lugar la reacdOn.
monedas cuando la caja es agitada vigorosamante y se obllene ef
mismo nLimero de cares que de cruces, es R In (0 298 ), es dadr,
aproximadamente iguaf a 1370 ue por mol de cajas da este tipo
(6 x 1023 cajas). Asi pues, debido a que anteriormente se ha
definido 05 como positiva para la transiciOn del estado A af estado
B (Ps !PA > 1), fas reacciones con un gran incremento de 5 (esto es,
las reacciones que tengan una oS > 0) se harran favorecidas, es
decir, se producirlm espontlneamente.
Como se discute en af Capitulo 2, la energia caforifiea provoca
una conmociOn afeatoria de fas mofecufas. Dado que fa
transterencia de cafor desde un sistema cerrado af medio
incremanta el numero de disposiciones diferentes que pueden
adoptar fas molecufas def medio exterior, incrementa fa entropfa
del medio. Se puede damostrar qua la liberadOn de una
determinada cantidad de energia caloritica tiene un etecto de
desorden mayor a temperaturas bajas que a aftas, y qua, como se
definiO anteriormente, ef vafor para la J),5 def medio (J),5ma ,), es
iguaf a fa cantidad de cafor transferida desde ef sistema (h) af
medio dividida por la temperatura (T):
A temperatura constanta, la variaciOn de energfa libre (t..G)
durante la reacciOn as igual a oH- Tto5. Como toH _ -h, el calor
absorbido del mar, tenemos
-AG_-!Jt+ TAS
4G-h+TAS Y -AGIr-IIIT+4$
Pero como hlTes igual a la variaciOn de antropfa dal mar (05ma,),
y.1.5 en la reacciOn anterior es to5caja , tenemos
-AGIT-ASw..+ -AS.
Podemos concluir que una reacciOn se producira en la direcciOn an
la que suponga que la variaciOn de energfa libre (oG) sea menor
que cero, porqua en este caso, cuando tenga lugar la reacciOn se
producira una variadOn positiva da la anlfopla del universo. Asf, la
variaci6n de la anergia Iibre as una medida directa de la Vlrlaci6n
de la entropia del universo,
Para una serie eompleja de reaeeiones aeopladas en las qua
participen muehas moh!ieulas diferentes, la variad6n total de
energra libre sa puede medir simplemente sumando la anergia
Iibre de todas las especies moleculares despues de la reacci6n y
comparando este valor con la suma de la energfa libre antes de la
reaceiOn; los valores de energla libre da los compuestos mls
comunes sa puedan eneontrar en tablas publieadas. De esta
manera se puede predaeir la direcei6n da una raacd6n
determinada y, en consacuencia, refutar Meilmente cualquier
meeanismo propuesto. Asl, pO'" ejemplo, de los valores
observados para la magnitud del gradienta alactroquimico de
protones a lfaveS de la membrana mitocondrial interna. se pueda
asegurar que la enzima AlP sintetasa raquiere al paso de mes de
un prot6n por cada molecula de AlP que sintetiza,
EI valor de toG de una reaeei6n es una medida diracta del grado
de desplazamiento del equilibrio da dicha reaeei6n. El elevado valor
negativo qua presenta la eelula para la hidr61isis de AlP
simplementa rafleja el hacho de que las eelutas mantienen la
reacei6n da hidr61isis del AlP unas 10 veees alejada del valor de
equilibrio. Si una reaeci6n alcanza el equilibrio,"toG _ 0, la reacei6n
tiene lugar a la misma velocidad en un sentido qua en al otro. Para
la hidr6tisis del AlP, el equilibrio se aleanza euando la gran mayor!a
del AlP ha sido hidroli2ado, tal como ocurre en una eelula muerta.
715
pulsar orras reacciones. Debido a que la eficiente conversi6n de ADP en ATP en
la mitocondria mantiene una concentraci6n de ATP elevada en relaci6n a la de
ADP y de PI' la reacci6n de hidr61isis del ATP se mantiene muy lejos del equili-
brio, por 10 que tl.G tiene un valor muy negativo. Si no existiera eSle desequili-
brio, la hidr6lisis del ATP no se podrfa utiJizar para impulsar las reacciones de la
celula, de forma que mllchas reacciones biosintelicas se producirfan ~hacia
atn1s~ en lugar de ~hacia adelante".

La respiraci6n celulac es notablemente eficiente lO

Por medio de la fosforilaci6n oxidativa, cada par de electrones del NADH propor
cionan energfa para la fonnaci6n de aproximadamente 2,5 molecllias de ATP. El
par de electrones del FADH 2, que liene una energfa algo mas baja, unicamente ge
nera aproximadamente 1,5 moleculas de ATP. En total. a partir de cada moltkllia
de acetil CoA que entra en el cicio del acido dtrico se forman aproximadamcntc
10 O1oleculas de ATP, 10 que significa que a partir de una molecula de glucosa se
producen unas 20 O1oleculas de ATP y 84 a partir de una molecuJa de palmitato.
un acido graso de 16 atomos de carbono. Si tambien se incluyen las rcacciones
energeticas que se producen antes de que se forme el acetil GoA. la oxidaci6n
oompleta de una molOCu..la de glucosa produce un rendimiento neto aproximado
de 30 moleculas de ATP. rnientras que a partir de la oxidaci6n completa de una rna-
lerola de palmitato se producen aproximadamente 1JO moleculas de ATP netas.
Estas cifras son vaJores maximos aproximados. ya que la cantidad de ATP produ-
cido en la milocondria depende del porcentaje de energfa del gradiente electro-
quimico que se utiUce para ouos fines diferentes a la smtesis de ATP.
Cuando se comparan las variaciones de energfa Iibre de la combusti6n di-
recta de grasas y de hidratos de carbono hasta CO2 y H20 con la cantidad lotal de
energfa almacenada en enlaces fosfato del ATP duranle las correspondientes
oxidaciones biol6gicas, se observa que a menudo la eficiencia con que se trans-
forma la energfa de oxidaci6n en energia de enlace de fosfato del ATP es superior
al40%. Este valor es considerablemente superior al de la eficiencia de la mayorfa
de los aparalos de conversi6n energetica no biol6gica. Si las celulas trabajaran
con un rendimiento igual al que tienen un motor electrico 0 un motor de gasoli-
na (entre 10% y 20%), un organismo deberfa comer de una fomla voraz para
mant.enerse vivo. Adcmc1.s, pucsto que la energfa no utilizada se libera en forma
de calor, los organismos de gran volumen tendrfan que desarroUar l1leCaniSlllos
mas eficientes para poder ceder este calor al medio.
Los eswdiantes a veces se preguntan por que las interconversiones celulares
siguen estas vfas tan complcjas. De hecho, la oxidaei6n de los azucares hasta
CO 2 y H2 0 podrfa realizarse mas directamenre, eliminando el cicio del dcido cf-
trico y muchos de las pasos de la cadena respiratoria. De esta forma, la respira-
ci6n hubiera resultado mas fdeil de estudiar pero el resuhado habrfa sido desas-
troso para la celula. La oxidaci6n produce inmensas cantidades de energfa libre
que s610 a pequeiias dosis puede ser utilizada de forma eficiente. Las vfas oxida-
tivas complejas implican muchos intermediarios, cada uno de los cuales se dife
rencia de su predecesor en algunos detalles. Como resullado de ello, la energfa
Iiberada se fraceiona en pequef'ios paquetes que pueden ser convertidos de for
rna eficiente en enlaces de alta energfa de mo1ect!las utiles, como el ATP y el
NADH mediante reacciones acopladas (vease Figura 2-17).

Resumen
La mitocondrla real1zn Ia mayorla tU las oxidaciones q/U se prodUCt!n en Ia cilula y
genera Ia mayor parte del ATP que Sf? genera en las dlulas animales. La matrlz mi-
tocondrial mntiene una gran ooriedad de enzimas, entre las q/U se 'ulilan las que
oxidan el piruOOIO y los tfcidos grasos hasta tu:etil GoA, Y las enzimas del cicio del
dcido dtrlm. ql,e oxidllll este acetil GoA hasta CO;r En estas reac:dones se prod,u:en
grandes Mntidlula tk NADH (y tk FADHJ. La energla dLsponibk re$ulUmle tk Ia

716 CaphuJo 14 : Conversi6n energ~tlca: m.itocondrias y doroplaslOS

combiruu;wn del oxfgeno con los electrones reaaillQ$ rrtUlsportados por el NADH y membrana membrana
interna aldarna
el FADH7 se utiUzn medumte llna cadena de trall$porte electronico qlre se halla in-
c:luidn en In membrana interna de In mitocondria y q.4e recibe el nombre de cadena
respiratoria. La cadena respiratoria bombea protona h&1n el exterior de la malriz
mitocondrial, generando asf un gnuJlente ekc:troqufmico de protones al que conm
buyen tanto el potencial de membrana como In diferencla de pH. ate gnuJie"te
trall$membrana se utilizo, a su tIt!%o para slnteliuu ATP y para impulstlr el trans MfTOCONDRlA
porte activo de detem'inados metabolltos a traves de In membrana mitocondrinl
Intema. La comblnacl6n de estas reacciones es in respDIl$lIbk de lin eFlCienre inter-
I DlSGREGAOA POR
UL TRASONIDOS

cambio de ATPADP entre In mitocondrin y el eltosol qlle m.ant/ene elaceroo celillar ptJ0c> 0 0 ~
Q\i: ...... ;~......... ~
de ATP aitamente cargaLIo, de forma qlre el ATP pllede ser Iltllizado para illll,,,lsar
muchas de las retICC/ones celulares que requieren e"erg(a.
q:j >t'j'j
()~ q"""u
l't 00
QO
La cadena respiratoria y la ATP sintasa II "''''' c>~~ 0 tJ
vesiculAS CON LA CARA
Despues de estas consideraciones generales sabre la funci6n de las mitocon- INTERNA EN CONTACTO
CON EL EXTERIOA
drias, pasemos a esrudiar con mayor detalle la cadena respiratoria -Ia cadena de OBTENtOAS A PARTIR DE
transporte de electrones que es tan crucial para todo el metabolismo oxidativo. FRAGMENTOS DE MEMBRANA
INTERNA REfUSIONAOOS
La mayona de los elementos de la cadena san componentes intrfnsecos de la
membrana mitocondrial interna, y suministran algunos de los ejemplos nuts da-
c:l::Foo
ros de las complejas interaceiones que puedan tener lugar entre protefnas indi-
viduales en una membrana biol6gica.

A partir de las rnitocondrias se pueden aislar partfculas

invertidas funcionales l2
00
partlcl.llaa aubmltocondrlales
purlficadas

Figura 14-23 Preparacldn de

La cadena respiratoria es relativamente inaccesible a la manipuJaci6n experi- parU"culas 5ubmltocondrlales a partir
mental en las milocondrias intactas. Fragmentando las mitocondrias mediante de rnltocondrlas purificadas. Las
ultrasonidos, es posible aislar partfcufas submitocotldriafes que estan formadas partfculas son trazos de crestas
por crestas rotas que se han fusionado de nuevo, constituyendo pequenas vesI- disgregadas que fonnan vesfculas
culas cerradas de unos 100 nm de dicimetro (Figura 14-23). Cuando estas partl- cerradas.
culas submitocondriales se examinan al microscopio electr6nico. se aprecia que
su superficie est<1 recubierta de pequenas esferas que se hallan unidas a 11 mem-
brana mediante unos finos pedunculos (Figura 1424). En las mitocondrias in-
tactas se observa que estas estructuras semejantes a un "chupa-chups" se hallan
localizadas en la sup~e i"tema (de la matriz) de la membrana intema. Asf
pues, las partfclllas sllbmitocondriales son vesfculas de membrana interna re-
vertidas, de forma que la superficie que inicialmeme estaba dirigida hacia la ma-
triz ahora est<1 cxpuesta al medio circundame. Por consiguieme, facilmcnte se
les puede suministrar metabolitos para los que la membrana es impermeable,
que normalmente se encuentran en el companimiento de la matriz.. Cuando se
les anade NADH, ADP Yfosfato inorg:1nico. estas panfculas transportan electro-
nes desde el NADH hasta el 02 y acoplan esta oxidaci6n a la sfntesis de ATP, ca-
talizando la reacci6n ADP + PI ~ ATP. Este sistema libre de celulas proporciona
un sistema de ensayo que haec posible la purificaci6n, en su forma fundonal, de
muchas protefnas responsables de la fosforiJaci6n oxidaliva.

La ATP sintasa puede ser purificada y de nuevo incorporada

a las membranas l3
Los primeros experimemos que demostraron que las diferentes protefnas de la
membrana que camlizan la fosforilaci6n oxidativa pueden ser separadas unas de
ouas sin perder actividad, fueron realizados en 1960. Las minusculas esferas '---'
l00nm
proteicas que recubren la superficie de las partIculas submitocondriales fuerOIl Figura 14-24 EJeclronmlcrograflade
separadas de las particulas, dejando el palo del chupa-chups y las otras protef- partfculas 5ubmllocondrlaJes. Esta
nas intrfnsecas de membrana en la membrana de la panfcula. Las particulas preparaci6n se ha contrastado en
desnudas de esferas podian todavfa oxidar NADH en presencia de oxfgeno, pero negalivo. (Coru~5fa de Erraim Racker.)

La cadena respiratoria y la ATP smtasa 717

 ya no podfan sintetizar ATP. POT atro lado, las esferas purificadas podfan actuar
como ATPasas, hidrolizando ATP a ADP YPi' Cuando las esferas purificadas (de-
nominadas ATPasasFj ) se afiadieron de nuevo a las panfculas suhmitocondria-
les desnudas, las partfculas reconstituidas volvieron a sintetizar ATP a partir de
ADPy Pi'
Estudios posteriores demostraron que la ATPasaP j forma parte de un com-
plejo transmembrana mayor (de unes 500 000 daltonsl que conriene, por 10 me-
nos, nueve cadenas polipeptfdicas diferentes (Figura 14-25) y que actualmente
se denomina ATP slntasa (0 rambien ATPasaFoFl)' La ATP sinrasa supone apro-
ximadamente un 15% de la protefna total de la membrana interna; en membra-
nas de cloroplastos y de bacterias se hallan presentes complejos enzimaticos
muy similares a eSle.
La porci6n transmembrana del complejo proteico actua como un transpor-
tador de W y la porci6n ATPasaF I (Ia cabeza del chupa-chups) sintetiza ATP
cuando los protones pasan a traves suyo a favor de gradiente electroqufmico. trsnsportsdor de
H+ transmembrans
Cuando la ATPasaF 1 se separa del transportador de H\ s610 actua en sentido in-
verso, catalizando la hidr6lisis de ATP. Figura 14-25 LaATP slntasa. Como
Una de las demostraciones mas convincentes de la funci6n de la ATP sinta- ya se ha indicado. la porci6n ATPasaF,
sa se obtuvD en un experimento realizado en 1974. En aquel momenta ya se ha- se fonna de subunidades multiples
bfan desarrollado algunos metodos que permitfan transferir protefnas inlegra- (/etras griegas). como ocurre can el
les de membrana solubilizadas can detergente a vesiculas Iipfdicas (Iiposomas) transportadorde H' fransmembrana.
formadas a partir de fosfolfpidos purificados. Asf, fue posible formar una mem-
brana hfbrida que contenia ATP sintasa mitocondrial purificada y bacteriorro-
dopsina -una bomba de protones activada por la luz, estudiada en el CapItulo
10- pero ninguna de las protefnas de la cadena respiratoria mitocondrial. Cuan-
do estas vesfculas eran expuestas a la luz, los protones bombeados hacia el inte-
rior del lumen de la vesfcula por la bacteriorrodopsina, flufan de nuevo hacia el
exterior a traves de la ATP sintasa, produciendo ATP en el medio externo (Figu-
ra 14-26).
Puesto que la interacci6n directa entre una bomba bacteriana de protones y
una ATP sintasa de mamffero parecfa altamente improbable, este experimento
sugiri6 claramente que en las mitocondrias la traslocaci6n de protones impulsa-
da por el transporte de electrones por un lado y la sfntesis de ATP par otro, son
dos acontecimiencos diferentes.

\
ATP sinlsss Figura 14-26 Esquema de un
bacteriorrodopsins purificsda experimento que demuestra de qu~
purificsds
fonna un nujo simple de protones
puede Impulsar la acc16n de laATP
" + detergente +
slntasa. Combinando una bomba
baCferiana de prolones aClivada par la
ADICIQN DE FOSFOL!PIDOS
luz (1a bacteriorrodopsina). unaATP
Y ELiMINACl6N DEL sintasa purificada a partir de
DETERGENTE mitocondrias de coraz6n de buey y
fosfolfpidos, se produjeron vesfculas
que sintetizaban ATP en respuesta a
un esdmulo luminoso.

718 Capftulo 14: Conversi6n energetlca: mitocondrias y c1oroplastos

 H'
H' Figura 14-27 LaATPslntasaesun
H'
H' oH'
mecanlsmo acoplador reversible que
Inlen::onvlerte las energ(as del
gradlente elec:troqu{mlco de prolones
y los enlaces qu{mlcos. La ATP sintasa
puede slntetizar ATP mediante [a
utilizaci6n de la fuerza prot6n-morriz
(izqllierdal y tambien puede bombear
protones en contra de su gradit!'n1e
electroqufmico mediante la hidr6lisis
de ATP (dereclla). Como se ha
F, exp[icado en el texto, en un cada
momento la direcci6n de su actuaci6n
depende de la variaci6n de energfa
libre neta para los procesos acoplados
I----- 9 om -----+ de translocaci6n de H' a traves de la
membrana y la s(ntesis de ATP a partir
deADPyPI'
Previa mente, mostramos c6mo la
La AlP sintasa puede fimcionar de manera reversible, variaci6n de la energfa libre (aG) para
hidrolizando ATP y bombeando H+ 13 la hidr6lisis deATP depende de las
concentraciones de [os tres reactivos
La ATP sintasa puede utilizar un flujo de protanes a favor de gradiente electro- ATP, ADPy P, (Figura 14-22); el aG
qufmico para sintclizar ATP, pem tambien puede urilizar la energfa de hidr61isis para la translocaci6n de los protones a
del ATP para bombear H" a traves de la membrana mirocondrial interna (Figura traves de la membrana es proporcional
14-27). As! pues, aCl1.la como un efemento de acoplamicnto reversible. intercon- a [a fuerza prot6n-motriz. E1 factor de
virtiendo un gradiente electroqufmico de protanes en energfas qufmicas de en- conversi6n entre ellos es el faraday.
lace y viceversa. La direcci6n en que actua depende del balance entre el valor del Asf. .6.GIl' = -0.023 (fuerza prot6n-
gradiente electroqufmico de protanes y el 6G local para la hidr6lisis de ATP. motriz}. donde 6GIl , se expresa en
EI complejo enzimatico se denomina ATP sintasa porque normalmenle kilocalorias por mol (kcal/mol) y la
sintetiza ATP gracias al impulso del gran gradiente electroqufmico de prolOnes fuerza prot6n-motriz en milivoltios
que se mantiene por la cadena respiratoria (Figura 14-20). EI mlmero exaclO de (mY). Para un gradiente
protones necesarios para simetizar una molecula de ATP no se conoce can electroqufmico de H' de 200 mV
exactitud. De todas formas, para facilirar los calculos que describiremos mas lendremos un .6.Gu = -4,6 kcal/moL
adelante, asumiremos que la ATP simasa sintetiza una molecula de ATP por
cada 3 protones impulsados a traves de ella.
En un momento dado, el que la ATP sintasa sinterize a hidrolize ATP depen-
de del balance exacto entre la variaci6n de energfa Iibre favorable para que los
tres prot ones atraviesen la membrana, hacia.la matriz (6G3lt., que es negativa) y
la variaci6n de energfa libre desfavorable para la sfntesis de ATP en la matriz
(6G. fn ,esl'okj\.l"P' que es positiva). Como ya discutimos, el valor de 6Gslnleo1 'okATP de-
pende de las concemraciones exacras de los tres compuestos que reaecionan
ATP, ADP Y PI en la ma!riz mitocondrial (vease Figura 14-22). Por olra parte, el
valor de 6G~1l' es proporcional al valor de la fuerza prot6n-motriz a !raves de la
membrana mitocondrial interna. EI sigl.liente ejempl0 ayudara a explicar de que
forma afecla a la A"~'P sintasa el equilibria entre estas dos variaciones de energfa
libre.
Como se explica en el pie de la Figura 1427, un unieo prot6n que penetra
en la matriz a favor de un gradiente de 200 mY, libera una energfa libre de 4,6
kcal/mol; la energfa libre Iiberada para el movimiento de tres protones es ellri
pie (6G~II' = -13,8 kcal/mo\J. As!, si la fuerza prot6n-motriz se mantiene conslan-
te a 200 mY, la ATP sintasa sintetizara ATP hasta que se alcance una relaci6n de
ATP respecto con ADP i P, tal que 6G'ftllesl'deATP sea igual a +13,8 kcallmol (aquf
6G,rn,osi'okj\.TP + 6G~If+=O). En este pun to, no existini ni sfntesis ni hidr61isis neta de
ATP mediada por la ATP sintasa.
Supongamos que, de pronto, se hidroliza una gran cantidad de ATP debido
a reaecianes que requieren energfa en el citosol -cayendo la relaci6n ATP/ADP
de la matriz. En esta situaci6n el valor de 6G,rn,esl'deATP disminuira (vease Figura
14-22), y la ATP sintasa comenzara a sintetizar de nuevo ATP, para restablecer la
relaci6n ATP/ADP original. Alternaljvamente, si de pronto la fucrza prot6n-mo-

La cadena respiralorla y la ATP sinlasa 719

lriz disminuye y entonees se mamiene constante pero a un valor dc 160 mY. en
lances .1GSll ' variara a -I J ,0 keal/mol. <;omo resultado de clio, la ATP simasa co
menzant a hidrolizar una parte del ATP de la mauiz hasta que sc alcance un
nuevo equilibrio de ATP a ADP y Pj (donde .1G..n...... deAw = +11 kcal/mol), ctc.
Como vercmos mas adelante, en muchas bacterias la ATP sinlasa revierte el
sentido de su acci6n durante la transici6n enlre el melabolismo aerobioo y anae-
r6bico. La reversibilidad de la ATP sintasa es una propiedad compartida par Olras
protefnas de membrana que aooplan el bomboo de iones con la sfntesis 0 hidr61i-
sis de ATP. Por ejemplo, tanto la bomba de Na'-K' como la de Caz, ,descritas en el
Capftulo II, hidrolizan ATP y utilizan la energfa Iiberada para bombear los iones
a traves de la membrana. Si cualquiera de estas bombas estuviera expuesla a un
valor anonnalmeme elevado del gradiente de los iones que transporta, actuarfa
en sen lido contrario-sintelizandoATP a partir de ADP YPI en lugar de hidrolizar-
10. De esta manera, como ocurre can laATP simasa, estas bombas son capaces de
convertir directameme la encrgfa elccuoqufmica a1macenada en un gradiente
i6nioo transmembrana en cnergfa de enlace fosfaro deIATP.

La cadena respiratoria bombea H+ a traves de la membrana

mitocondriaJ interna 14
La cadena respiratoria induida en la membrana m..itocondrial imema normal-
mente genera el gradieme elcctroquimioo de protones que impulsa la sfntesis de
ATP. La capacidad de la cadena respiratoria para traslocar H' hacia aluera de la
matriz se puede poner de manifiesto experimentalmente bajo ciertas condicio-
nes. Por ejemplo, se puede tratar una suspensi6n de mitocondrias aisladas con
un substrato adecuado para la oxidaci6n Yse puede bloquear el flujo de proto-
nes a traves de la ATP simasa. En ausenda de aire, la administraci6n de una pe-
quefia camidad de oxfgeno a esta preparaci6n causa una breve incremento de la
respiraci6n. de I 02 segundos antes de que todo el oxigeno haya sido consumi-
do. Durame este brusco incremenlo de la respiraci6n se puede medir con un
sensible electrodo de pH la subita acidificaci6n del medio que resultn de In sali-
da de H' desde el espacio de la matriz.
En un experirnemo similar Llevado a cabo can una suspensi6n de pnrtfculas
submitocondriales, el medio se alcaliniza cuando se agrega el oxlgeno. ya que
los H' son bombeados hacia detltro de cada vesicula debido a su orientaci6n in-
vert ida.

Se han utilizado m~todos espectrosc6picos para identificar

muchos transportadores de electrones de la cadena respiratoria 15
Muehos de los transportadores de electrones de la cadena rcspiratoria absorben
In luz visible y eambian de color cuando son oxidados 0 reducidos. En general.
cada uno de ellos tiene su propio espectro de absorci6n y su reactividad, sufi-
cientemente caractcrfslicos como para poder seguir espectrosc6picamente su
comportamiemo inc!uso en mezclas crudas. Gracias a esta caracterfstica, fue
posible purificar estos componentes mucho antes de que se conocicran sus fun-
ciones exactas. Asf, los citocromos fueron dcscubiertos en 1925 como compues-
tos que sufren una rttpida oxidaci6n y reducci6n, en organismos vivos tan dispa-
res como las bacterias, levaduras e insectos. Mediante la observad6n de c~lulas
Y lejidos con un espcctroscopio, se identificaron Ires tipos de citocromos en
base a SU espectro de absorci6n caracterislico y rueron denominados citocromos
a, bye. Esta nomenclatura se mantiene en la acrualidad a pesar de que se sabe
que las c~lulas contienen varios dtocromos de cada tipo, y que la c1asificaci6n
en tipos no es fundonalmente importante.
Los cltocromos conslituyen una familia de protefnas coloreadas que tienen
en comun la presencia de un grl4po "emo, cuyo tttomo de hierro pasa del estado
ferrico (Fe III) al estado ferraso (Fe II) cada vez que acepta un electr6n. EI grupo
hema consiste en un anillo de porfirina con un atomo de hierro rucrtemente en-

720 Capftulo 14 : Conversi6n energ~tica: mitocondrias y c1oroplastos

lazado y sostenido por cuatro :1tomos de nitr6geno de las esquinas de un cua- COOH COOH
drado (Figura 1428). Un anillo de porfirina relacionado con este, unido a hierro I I
CH, CH,
en la hemoglobina y a magnesio en la doroma, es el responsable del color rojo I I
de la sangre y del color verde de las hojas. EI citocromo que se conoce mejor de CH, CH,
la cadena respiraloria es el citocromo c, cuya estructura uidimensional ha sido
determinada por cristalografTa de rayos X (Figura 14-29). H,C
Las prole/nas de llierro-azu[re constituyen otTa familia de transportadores
de electrones. Estas prolefnas presentan entre dos y cuatro atomos de hierro
unidos a un mimero igual de .homos de azufre y a cadenas laterales de cistefna,
formando un centro de hlerro-azufre en la proteina (Figura 14-30). En la cadena
respiratoria existen mas centros de hierro-azufre que citocromos, pero su detec-
ci6n espectrosc6pica requiere la utiJizaci6n de especnoscopia de resonancia de
espfn electronico (ESR, de Electron Spin Resonance), por 10 que est:1n menos ca-
racterizados que los citocromos.
EI mas sencillo de los transportadores de electrones es una pequefla mole-
cula hidrof6bica disuelta en la bicapa lipidica conocida como IIbiqllinona 0 co- FJgun. 1428 Estructura del gropo
enzima Q. Una qulnona (Q) puede aceptar 0 ceder uno 0 dos electrones, y por hemo unJdo covalentemente aI
cada electr6n que transporta acepta temporalmente un prot6n del medio (Figu- dlocromo c. EI anillo de porfirina se
ra 14-31). muestra en azul. En la cadena
Ademas de los seis grupos hemo diferentes unidos a citocromos, de mas de respiraloria hay 5 cilocromos
seis centros de hierro-azufre y de la ubiquinona, tambien acruan como transpor- diferentes. Dado que en dtocromos
tadores de electrones desde el NADH hasta el oxfgeno, dos :1tom05 de cobre y una diferentes los gropos heme presentan
Oavina que se hallan fuenemente unidos a prolefnas de la cadena respiraloria. La algunas diferencias estrueturales y
esuin unidos a sus respectivas
vfa implica aproximadamente 40 protefnas diferentes en total. EI orden de los
protefnas de manera diferellte, cada
transponadores de elecuones ha sido detenninado mediante sofisticados meto-
uno de los dtocromos tiene diferenle
dos espectrosc6picos (Figura 1432), y muchas de las protefnas fueron inicialmen- afinidad por los electrones.
te aisladas y purificadas como polipeptidos individuales. No obstante, para com
prender el funcionamiento real de la cadena respiratoria hay que tener en cuenta
que las protefnas est<1n organizadas en tres grandes complejos enzimaticos.

La cadena respiratoria contiene tres grandes complejos

enzimaticos incluidos en la membrana interna l6
Las prote(nas de membrana son diffciles de purificar en forma de complejos in
tactas, porque Son insolubles en la mayarfa de soluciones acuosas, y algunos de

Figura 14-29 Estructura

tridimensional del c1tocromo c, un
Iransportador de electrones de la
cadena de transporte electrdnlco.
Esta pequena prolefna contiene algo
mb de 100 amillollcidos yse une a la
membrana de manera bastanle laxa,
mediante inleracciones i6nicas (vease
Figura 14-33). EI titomode hierro (en
CQlor narallja) colocado sobre el grupe
hemo (ell CQlor azul) puede transponar
un solo electrOn (vease lambicn

I
Figura 3-59).

La cadena respiratorla y 1a ATP sintasa 721

 Figura 14-30 Estructura de dos Opes
de centros de hlerro-azum. (Al Un
""Cys cenlro dellipo 2Fe2S. (Bl Un centro
,/V1Cys
,
x~
del tipo 4Fe4S. Aunque conlienen
muchos alomos de hierro, cada centro
de hierro-azufre 5610 puede
Iransportar un electron a la vez. En la
cadena respiratoria exiSlen mas de seis
s, s, cenlros de hierro-azufre diferentes.

VC~,p'
lA,

los detergentes que se requieren para solubilizarlas puedcn destruir las interae-
danes normales protefna-pratefna. Sin embargo, a principios de la decada de
1960 se descuhri6 que los detergentes i6nicos relativamente suaves como el des-
oxicolato pueden solubilizar. en forma nativa, componentes delerminados de la
membrana milocondrial intema. Eslu penniti6 identificar y purificar los Ires
principales complejos enzJrn,hJcos respiratorios, unidos a la membrana, de la
via que va desde el NADH hasta el oxfgeno (Figura 14-33). Como veremos. carla
uno de estos complejos actlia como una bomba de H- impulsada por un trans-
pone de eJectrones; sin embargo. estos complejos fueron caracterizados inidal-
mente en funci6n de los lransponadores de electrones que contienen y con los
que interactuan.
I. EI complejo NADH deshldrogenasa es el mayor de los complejos enzimMi-
cos respiralOrios. con una masa de aproximadamente 800 000 daltons y
mas de 22 cadenas polipeptidicas. Acepla electrones del NADH y los trans-
{jere a travl!s de una flavina y al menos cinco cennos de hierro-azufre a la
ubiquinona. que nansfiere sus electrones a un segundo complejo enzima-
tieo respiralOrio, el complejo b-c,.
2. EI complejo cllocromo b-c , conliene por 10 menos 8 cadenas polipeptfdicas
diferentes. y parece que se presenta en fonna de dfmero de unos 500 000
dallons. Cada mon6mero contiene Ires grupos hemo unidos a dtocromos. y
una prolerna hierro-azufre. EI complejo acepta electrones de la ubiquinona
y los lransfiere al citocromo c, que transporta su electr6n hasla el complejo
de fa citocromo oxidasa.
FlguTB 14-31 las quinonas. Cada uno
3. EI complejo de In dlocromo oxJdasa (dtocromo aaJ ) es el complejo mejor
de estos transporladores de electrones
caraclerizada de los tres. Bsla (armada por, al menos. 9 cadenas polipeplf- capta un prol6n del ambienle acuoso
dicas diferentes. y sc afsln como un dfmero de unos 300 000 daltons; cada par cada elec[r6n que acept'a, y puede
mon6mero conlienc dos cilocromos y dos ,Homos de cobre. 1 complejo Iransportar uno 0 dos electrones como
acepla electroncs del dlocromo c y los cede al oxfgeno. parle de un atQmo de hidr6geno (color
amarl/lo). Cuando cede sus eleclrones
al siguienle Iransponador de la
O .....CH J e- ... H O ....CH) e- ... H' cadena, eSIOS protones se liberan. En
las mitocondrias la quinona es la
0
-CH~ 0 -CH~ 0 O-CH) ubiquinona (coenzima OJ, que se
mueslra aquf; la larga cola hidrof6bica
que ancla la ubiquinona a la
H,C 0 H,C O H,C 0 membrana COllSla generaJmenle de 6 a
10 unidades de isopreno (de cinco
carbonos cada una). En las planlas. el
lransponador de electrones
w. hidrolObQ correspondienle es la plasloquinona.
hidrourbonlda
casi id~ntica a la ubiquinona. Para
simplificar. tanlo a la ubiquinona
ubiMmlquinoni ubOquil'lOl como a la plastoquinona se les
(rlMlieallibreJ (dihldroubOqUinonlJ denomina qllinona. abreviada como Q.

722 Capftulo 14 : Conversl6n energ~lica: milocondrias y c1oroplaslos

 -,.-.-.-.,-0, r-0-0-0-0
(A) CONDICIONES NORMAlfS IBI CONOtCtONES ANAeA6B1CAS FIgura 14-32 MefodosgeneraJes
utUlzados para deferminar la
control
r
lrayedoria de 1M electrones a 10 largo
de la cadena de lransporle
pareialmente oxidadOt: I I
electrtSnlco. EI grado de oxidllci6n de

,--0-0.-.-0, '--0- -.-.-0,

complel8mente reducido
Inhibldor los transportadores electr6nicos II. b. c,
adiel6n repentina de oxlgeno y d se puede seguir de forma continua
! I ! I
CSludiando su CSpeClfO, ya que el del
reducido ox~do I I
eslado oxidado es diferenle al del
eslado reducido. En esle esquema un
M prod..- u.... 0'- dol oxidaci6n que 1M
,
va deapla1ando eN i1quiel'da a derecM aumenlO en el grado de oxidacion se
indica en color rojo oscuro. (A) En
condiciones normaJes. lodos los
transponadores se hallan en un estado
Los citocromos, los centros de hierro-azufre y los atomos de cobre, s610 parcialmeme oxidado. La adici6n de
pueden transportar un electr6n a la vez. Sin embargo, cada NADH cede dos elec- WI inhibidor espedfico hace que los
trones y cada molecuJa de O2 debe recibir cuatro electrones para producir agua. transportadores siluados a favor de la
Existen varios puntos de recolecci6n y de dispersi6n de electrones a 10 largo de corrienle de eleclrones se oxiden mas
(roja claro) y los lransportadores
la cadena de transporte de electrones en los que se reajustan estas diferencias en
situados en direcdon contraria de la
el ntimero de electrones.
corrienle de electrones se reduzcan.
(8) En ausencla de oxfgeno. todos los
En la citocromo oxidasa, un centro de hierro-cobre cataliza de lransportadores se hallan en estado
forma eficiente la reducci6n del 0 2 17 complelamente reducido (gris). La
adicion subita de oxfgeno hace que
Debido a que el oxfgeno tiene una gran afinidad por los electrones, libera una cada Iransportador se lransforme en
gran cantidad de energfa Libre cuando es reducido formando agua. De esta ma- su forma parcialmenle oxidada, con
nera,la evoluci6n de la respiraci6n celuJar, en la que el 0 , es convertido en agua, un relraso que es mayor para la
capacit6 a los organismos para obtener mucha mi1s energia que la que podfan mayoria de los transponadores
obtener a partir del metabolismo anaer6bico. Es por eUo por 10 que probable- silUados a favor de la corriente de
mente todos los organismos superiores respiran. En cualquier caso, para poder electrones.
utilizar el O2 de este modo, los sistemas biol6gicos requieren disponer de unos
procesos qufmicos muy sofisticados. Podemos tolerar el 02 en el aire que respi-
ramos porque Ie cuesta captar el primer electr6n, por 10 que su reacci6n inicial
en las celulas esti1 finamente controlada por la cataLisis enzimatica. Pero un vez
que una molecula de 02 haya captado un electr6n, fonnando un radical super-
6xido ( 2-), este se convierte en peligrosamente reactivo y captarl1tres electro-
nes adicionales de donde sea. La celuJa puede utilizar el 02 para la respiraci6n
s610 porque la citocromo oxidasa sitlia el 02 en un centro bimetl1Jico especial
(Figura 14-34B), donde se mantiene unido entre un .homo de hierro Iigado a un
I
grupo hemo ya un <ltomo de cobre. hasta que se captan un total de cuatro elec o

ESPACIO
""- Figura 1433 Paso de loselectrones II
travis de los Ires complejo!
INTERMEMBRANA enzlmadco5 resplratorlos. En la figura
se observan las formas y lamai'los
reilltivos de tres cornplejos
e01.imaticos respiratorios. Eslas
membrana [ eslructuras tridimensionales de baja
miloconclri,l

-
inlem, resoludon fueron oblenidas a partir de
im4genes de criSlales bidimensionales
(hojas cristalinas) visualizadas a1
microscopio eleclronico a varios
ESPACIO
amI+ H' 10nm 4ngulos de inclinacion. Durante la
DE LA MATAIZ tNAD'! transferencia de dos eleclroncs del
NADH a1 oxfgcno (Iff/cas rojas).la
ublquinona y el citocromo c hacen la
funcion de Iransporladores entre los
complejO$.

La cadena respiratorla y la ATP slntasa 723

 paso de
electrones

entrada de bombeo
electrones de protones

.,
H

membrsns
mitocondrial
interns

ESPAC1Q
DE LA
MATRIZ

IAi
subunidad I
"
subunidad II
I I Figura 1434 La reaccl6n del O2 can
complejo de la citocromo oxidass los electrones en la dlocromo
oxJdasa. (A) Disposici6n de Jos
lransponadores de electrones en la
dtocromo oxidasa. La subunidad I,

,.
..
,.>-r- +--e
,., e-

2',
.
2.

O,

2.

O~
,.
que tiene 12 helices 0. transmembranll.
eontiene 2 ,'i!omos de hierro unidos a 2
gropos hemo; uno de estos aetua como
un punta captador de electrones que
los transfiere al centro bimetaJico
(enmarcado en un rectdngulo blanco),
formado par el otTO atomo de hierro y
'0
par un atomo de cohre opuesto muy
cereano. Hay que destaear que par

)
siguiente cicio cada molecula de O2 que reacciona son
bombeados fuera de la matriz4 H' y

,.
que eslO requiere un total de 4

,.
2. electrones. (B) Una visi6n ampliada
2. del centro bimela1ico de hierro-cobre
~ .' , .
2.
~h
'0-
~
con el O2 unido. (el Un esquema de la
via utilizada para la reducci6n del

oxigeno, dando una idea de la
~O
eomplejidad de las reaeciones
2H' implieadas. Los electrones se
/0 W W
rep resell tan como puntos rajas hasta

lei 2",0
" " que se ineorporan a los atomos de
hidr6geno (amarillo). (Basado en el
modelo de G. T. Babcock y M.
Wikstrom, Natllre356:301309. 1992.
@1992.MacmillanMagazinesLtd.)
trones; s610 entonces los dos atomos de la molecula de oxfgeno seran Iiberados
como dos moJeculas de agua, sin ningun peligro (Figura 14-34C).
Aunque la citocromo oxidasa contiene muchas subunidades proteicas, la
mayorfa de elias tienen un papel secundario, ayudando a regular tanto la activi-
dad como el ensamblaje de las Ires subunidades que forman el mkleo de la en-
rima. Una de las subunidades de este mlcleo contiene el centro bimeuilico don-
de se une el oxfgeno, y es responsable del bombeo de cuatro protones que se
..
-

transfieren a traves de la membrana mitocondrial interna por cada molecula de

origeno que se reduce a agua (Figura 1434).

724 Capftulo 14 : Conversl6n energetlca: mltocondrlas y cloroplaslos

 $e cslima que la reacci6n de la dlocromo oxidasa utiliza un 90% del consu-
mo tOlal de oxfgeno de la mayorfa de las celuJas. La toxicidad de venenos como
el cianuro y la azida se basa en su capacidad de unirse fuenemenle a eSle com-
plejo, bloqueando asi cualquier tipo de transporte electr6nico.

Las transrerencias de elect.rones estan mediad as por colisiones

aleatorias que se producen entre los dado res y los aceptores que
difunden en la membrana mitocondrial interna l8
Los dos componentes que transportan los electrones enlre los Ires complejos en-
zim<\Licos principales de la cadena respiraloria -Ia ubiquinona y el dlocremo c-
difunden rnpidamente en el plano de la membrana. Las colisiones que se pueden
esperar entre estos dos transportadores m6viJes y los complejos enzimjticos pue-
den explicar las velocidades observadas de rransferencia de electrones (cada
complejo cede y recibe un electron cada 5 a 20 milisegundos). Asf pues, para ex-
plicar la lransferencia de electrones en la bicapa Iipidica no es necesario poslUlar
la existencia de una cadena de proleinas ordenada estructuralmente: de hecho,
parece que los Ires complejos enzim<\Licos existen en el plano de la membrana in-
terna como enlidades independientes, de forma que la transferencia ordenada de
electrones se debe a la especificidad de las interacciones funcionales entre los
componentes de la cadena.
Esta idea se ve refof7..3da por la observaci6n de que varios de los componcn-
les de la cadena respiraloria se halJan presenres en cantidades baslante diferen-
tes. En las miiocondrias de ooraz6n, por ejemplo, se estima que por cada mole-
cula del complejo de la NADH deshidrogenasa existen 3 moleculas de complejo
b-c.. 7 moleculas de complejo de la cilOcromo oxidasa, 9 moleculas de dtocro-
mo c, y 50 moleculas de ubiquinona; en otros Lipos celulares se presentan pro-
porciones muy difercnles. EsIOS componentes forman una cadena en la que
cada uno interactua espedficamente con el transportador adyaceme en la se-
cucncia mostrada en la Figura 14-33, y hay un f1ujo neta de electrones desde la
NADH deshidrogenasa a la cilocremo oxidasa porque cada uno de los complejos
enzimalicos de la secuencia presenta una afinidad mayor por los eleclrones que
su predecesor. La afinidad que presenta una moh'!cula por los clcctrones es su
potencial redox. Como esrudiaremos a conrinuaci6n, las diferencias de potencial
redox de un transporlador de electrones y el siguiente se utiliza para bombear
prOlones fuera de la matriz mitocondrial.

Una gran carda del potencial redox a traves de cada uno

de los tres complejos enzim:iticos respiratorios aporta
energfa para el bombeo de H+ 19
A los pares de componcnles, tales como el H 20 y Ih0 2 0 el NADH y el NAD' se les
denomina pares redox conjugados, ya que uno de los componellles se convierte
en el olro mediante la adici6n de uno 0 mas electrones mas uno 0 mas protones
-los prOlOnes estan ya djsponibles en cualquier soluci6n acuosa. As!, por ejcmplo,
Ih0 2 + 2e- + 2H' --+ H 20

Muchos lectores sabran que una mezcla equimolar de los miembros de un par
co"jllgado dcido-base aClua como tamp6n, manten.iendo una ~presi6n de H'"
definida, 0 pH, que es una medida de la constante de disociaci6n del :icido. De
la misma forma, una mezcla equimolar de los miembros de un par conjugado
redox mantiene una ~presi6n de electrones" definida, 0 polenclal redox (reduc-
ci6n-oxidaci6n), E, que es una medida de la afmidad del transportador de elec-
trones par los electrones.
Colocando electrodos en contacto con soluciones que conlengan los pares
redox conjugados apropiados, uno puede medir el potencial redox de cada uno
de los diversos transportadores de electrones que panicipan en las reacciones
biol6gicas de oxidaci6n-reducci6n. En los sistemas biol6gicos el potencial redox

La cadena resplratoria y la ATP slntasa 725

j
se determina a pH 7,0, al que IH'J = 1O~7 M. Los pares de compuestos que pre-
sentan un potencial redox mas negativo tienen menor afinidad por los electro-
nes y por esta raz6n comienen transportadores can una fuerte tendencia a do-
nar eleclrones, mientras que los pares que presentan pOlenciales redox mas
positivos tienen mayor afmidad por los electrones y, consecuenlemente, contie-
nen transportadores con una fuerte tendencia a aceptar electrones. De esta ma-
nera, una mezda 50-50 de NADH y NAD' tiene lUl potencial redox de -320 mV,
10 cual indica que el NADH tiene una fuerte tendencia a donar electronesj una
mezda 50-50 de HzO y IhO z tiene un potencial redox de +820 mV, 10 cual indica
que el Oz tiene una fuerte tendencia a aceptar elcctrones.
Se pueden determinar los potenciales redox de todos los transportadores de
electrones de la cadena respiratoria que se puedan distinguir por su especlro, y
se observa que van aumentando a medida que uno va pasando por la cadena de
transponadores de clcctrones. Dado que la mayoria de citocromos presentan
unos pOlcnciales redox mas altos que los de los centros de hierro-azufre, gene-
ralmente actuan como transportadores de eleclrones cerca del extremo del Oz
de la cadena respiratoria, mientras que las protefnas hierro-azufre actuan como
transponadores cerca del extremo del NADH .
. En la Figura 14-35 se muestra un esquema de los potenciales redox medidos
a 10 largo de la cadena respiratoria. Los potenciales caen en tres grandes escalo-
nes, uno a traves de cada complejo enzimMico principal. La variaci6n de pOlen-
cial redox entre cada dos transportadores de electrones cs directamente propor-
cional a la energfa libre liberada por cada electr6n transferido entre ellos (vease Figura 14-35 El polenclal redox
Figura 14-35). Cada complejo actua como un clemento transformador de ener- (IndJcado como ~ 0 ~) aumenla a
gfa, utilizando esta variaci6n en energfa librc para bombear prolones a traves de medlda que los elcctrones f1uycn
hacla abajo de la cadena resplratorla,
la membrana interna, creando de csta manera un gradiente electroqufmico de
hacla el oxfgeno. La variaci6n de
protones a traves de la membrana. Esta transformaci6n se puede poner de ma- energfa libre estandard, 6Go, para la
nifiesto mediante la incorporaci6n a Iiposomas de cada uno de los complejos transferencia de cada uno de los dos
purificados: cuando se afiaden un dador y un aceplor de eleclrones apropiados, elcclrones cedidos por la moh~cula de
de forma que los electrones atraviesen el complejo, los H+ se traslocaran a traves NADH puede oblenerse en la escala de
de la membrana delliposoma. ordenadas de la derccha (6G =
-n(O,023) 6E,;, donde 11 es cl mimero de
electroncs Iransferidos a IraveS de una
EI mecanismo del bombeo de H" se conoce mejor variaci6n de potencial redox de 6E,;
en bacteriorrodopsina20 mY). Los electrones fluyen a IraveS de
Debido a que algunos complejos enzimaticos de la cadena respiratoria bombean un complejo enzimatico pasaudo de
un prol6n por electr6n a traves de la membrana mitocondrial interna mientras manera secuencial a los cuatro 0 mas
lransponadores de electrones de cada
complejo. Como se indica, parle de la
nH' variaci6n favorable de energfa libre es
NAOH ulilizada por cada complejo
-400 ~\NAOj enzim:itico para bombear protones a

~.
-300 IraveS de la membrana mitocondrial
25

_u
intema. No se conoce con exaclirud

~'...cCa
-200
cmil es el numero de protones
'> nH'
E -100
o
11 "I' 20
bombeados por eleclr6n (n); se estima
que la NADIi deshidrogenasa y los
100
"~NADH "
0
~ complejos b-c, bombean dos H' por

T " ~
electr6n, mientras que el complejo de
200
la citocromo oxidasa s610 bombea
300
-~
dllla tH:,
" "
WlO.

..-
'00 Los dos eleclrones transportados
500
desde el FADH z' generados a panir de
la oxidaci6n de los acidos grasos (vease
500 5
complejo de Figura 14-11) ydel cicio del acido
IaCItOCfDmO cftrico (vease Figura 14-14), pasan
'00
directamellte a la ubiquinona. Poresta
800 ,=S:< 0
raz6n, inducen menos bombco de H'

dir&CCi6n del fluiD de electrones que los dos electrolles que provienen
del NADH (no mostrado).

726 Capftuto 14: Conversi6n energetica: mitocondrias y cloroplaslos

 ONFOfl

captaci6n de protones Iiberaci6n

protones
de~ captacl6n de protones

DENTRO AUMENTO
DE LA AFINIDAD
POR LOS H'
~ DISM1NUClON jbaja- altal
Zw DE LA AFINIDAD
POR LOS H'
w
(alta -bejal
FUERA

Figura 14-36 8ombeo de protones.

ESIe modelo general del bombeo de H'
impulsado par energfa se basa en el
mecanismo que parece que utiliza la
bacteriorrodopsina. La prate/na
lJ"ansmembrana mostrada es
impulsada a seguir cambios ordenados
de confonnadones, designadas aquf
como A, B YC. En la conformad6n C la
pratefna tiene una baja afinidad para
que otros bombean dos, el mecanismo molecular mediante el que el transporte los H' causando la liberaci6n de un H'
de electrones se acopla al bombeo de protones parece ser diferente para c?da al exterior de la bicapa lipfdica; en la
uno de los tres complejos enzimdticos. Se desconocen los detalles del mecanis- conformad6n A, la protefna tiene una
mo por el que acWan. En el caso del complejo b-cl' las quinonas c1aramente par- afinidad muy alta por los H',
ticipan en este mecanismo. Como mencionamos anteriormente, una quinona favoredcndo su captad6n hada
capta un prot6n del medio acuoso por cada electr6n que Iransporta y 10 libera dentro de la bicapa lip'dica. Como se
indica, la transid6n de la
cua.l1do Iibera el electr6n (vease Figura 14-30. Ellibre desplazamiento de la ubi-
confonnad6n B a la C es
quinona por la bicapa lipidica Ie permite aceptar electrones cerca de la superfi- energeticamente desfavorable. pero
cie interna de la membrana y donarlos al complejo b-c 1 cerca de la superficie ex- esta impulsada a realizarse par el
tern a, transfiriendose asf un prot6n a traves de la bicapa por cada electr6n acoplamictllo con una reacd6n
transportado. Sin embargo, por cada electr6n se bombean dos protones a traves energeticamente favorable que ocurre
del complejo b-c 1: existen evidencias del Uamado cicio Q, ell el que la ubiquino- en algun silio de la protefna (jIeclla
na se recic1a a traves del complejo en un sentido detenninado, que hace posible azul). Los otras cambios
esta transferencia dos por uno. conformacionaJes. conducen a estados
Los cambios alostericos de las conformaciones proteicas determinados por de menor energfa y discurrcn
el transpone elecrr6nico tam bien pueden bombear H', tal como la ATP sintasa espontaneamenle. Dc este modo. el
trabajando en sentido inverso bombea H' hidrolizando ATP. Tanto para el com- dcloA -4 B -4 C -4 A s610 va en un
plejo de la NADH deshidrogenasa como para el complejo de la citocromo oxida- sentido, favoredendo el bombeo de los
H' dcsde denrro hacia fuera. En el caso
sa, parece probable que el transporte de electrones determine de manera ordena-
de la bacteriorrodopsina, la energfa
da los cam bios alostericos de conformaci6n de las protefnas que provocan que
para la transici6n B -4 C esta
una parte de la protefna bombee H' a traves de la membrana mitocondrial inter- prapordonada par la luz, mientras que
na. Este tipo de bombeo de protones esta bien estudiado para la bacteriorrodop- en la mitocondria esta cncrgfa csta
sina, una bomba prot6nica impulsada por Juz que se encuentra en la membrana propordonada par el transporte
plasm.atica de ciertas bactcrias altamente especializadas (vease Figura 10-32). electr6nico.
En la Figura 14-36 se presenta un mecanisme general para el bombeo de H'
basado en estudios estructurales y funcionales de esta protefna.

Los ion6foros de H+ disipan el gradiente de H+ J desacoplando asf

el transporte de electrones de la smtesis de ATP 21
Desde los ailos 1940 se sabe que varias substancias, como eI2,4-dinitrofenol, ac-
t(Jan como agentes desacoplalltes, desacoplando el transporle de electrones de la
sfntesis de ATP. La adici6n de estos compuestos organicos de bajo peso molecu-
lar a las celulas detiene la sfnlesis de ATP en las mitocondrias, sin bloquear el

La cadena respiratorla y la ATP slntasa 727

consumo de oxfgcno. En presencia de este agenre desacoplante, el transportc de
electrones continua a gran velocidad pero no se genera ningun tipo de gradiente
de H. La explicaci6n de eSlo es tan elegante como sencilla: los agentes desaco
planles aCIt'ian como transportadores de H+ (ion6foros de Hl. col1stituyendo
una via para el nujo de H a trav~s de la membrana milocondrial interna alterna-
liva a la de la ATP sintasa. Como consecuencia de este ~conocircuilO". la fuerza
prot6n-motriz se disipa completamente por 10 que ya no se puede sintetizar ATP.

Normalmente el control respiratorio restringe el flujo

de electrones a traves de la cadenaZ2
Cuando se ai'lade un desacoplador tal como el dinirrofenol a las oolulas. las miro
condrias aumenlan substancialmente la captad6n de oxfgeno debido a un aumen
to en la velocidad de transporte de eleclrones. Este aumento reneja la existencia
de un control respiratorio. Se cree que el control acnia a trav~s del efccto inhi-
bidor dirccto que tlene el gradiente elcctroquimico de protones sabre la veloci
dad de transporte de electrones. Cuando el gradiente se elimina por acci6n de
un desacoplador. el transporte de electrones discurre a la mc1xima velocidad po-
sible, de una manera descontrolada. A medida que el gradiente aumenta. el
transporte de electrones se vuelve mas difi"cil y el proceso se welve mds lento,
Ademlis. si experimemalmente se genera un fuene gradiente electroqufmico ar-
tificial de protones a travbi de la membrana imerna, el transporte normal de
electrones se para por completo y se detecta unflujo inuerso de electrotles en al
gunas secciones de la cadena respiratoria. Esta observaci6n sugiere que el con
trol respiratorio reneja un equilibrio simple entre la variaci6n de energfa Iibre
del bamboo de protones ligado al transporte de electrones y la variaci6n de
energla Iibre del transporte de electrones -es decir. la magnitud del gradiente
elcclroqufmico de protones afecta tanto a la velocidad como a la direcci6n del
transpone de elecrrones, ral como afccra a la direccionalidad de la ATP simasa
(v~ase Figura 1427).
El control respiratorio es 5610 una pane de un sistema compartimentado
muy elaborado de comroles por retroalimentaci6n que coord ina las velocidades
de la glucolisis, la hidr6lisis de los acidos grasos. el cicio del acido cftrico y el
transporte de electrones. Las velocidades de todos estos procesos se ajustan a la
relaci6n ATP/ADP. aumentando cuando se produce un aumento de la uriliza
ci6n de ATP que provoca una disminuci6n de csta relaci6n. La ATP simasa de la
membrana mitocondrial interna, por cjcmplo, trabaja a velocidad mayor cuan
do aument'a la concentraci6n de sus dos substratos ADP y PI' Al aumentar la actio
vidad de la enzima, aumenta el Oujo de protones hacia en interior de la matriz,
disipandose mas n1pidamcnte el gradiente electroqufmico de protones. A su vez,
el descenso de este gradientc activa la velocidad del transporte electr6nico.
Sistemas de control similares a ~ste. incluida la retroinhibici6n ncgativa por
ATP de varias enzimas clave (para un ejemplo. v~ase Figura 14-13), adaptan por
ejemplo la velocidad de producci6n de NADH a la de utilizaci6n de NADH en la
cadena respiratoria. Como result ado de todos estos mecanismos de comrol, du
rante un perfodo de ejercicio intenso, el cuerpo oxida grasas y azucares a una ve
locidad entre 5 y 10 veces superior a la que se produce durante Ull perlodo de re
poso.

Existell desacoplantes naturales que transforman

las mitocondrias del tejido adiposo marr6n
en maquinas generadoras de caJor D
En algunas c~lulas adiposas especializadas la respiraci6n mitocondrial est<1 des-
acoplada de la slntesis de ATP de forma natural. En estas c~lulas. conocldas
como adipocitos del tejido adiposo marr6n 0 de la grasa parda, la mayor parte
de la energfa de oxidaci6n se disipa en fonna de calor en lugar de ser transfor

728 Capftulo 14: Conversi6n energet.ica: mitocondrias ycloroplastos

mada en ATP. La membrana intema de las grandes mitocondrlas de estas c6111-
las, contienen una protefna de transporte que permite a los protones Ouir a lra-
ves de la membrana a favor de su gradicnte electroqufmico, sin activar 1a ATP
sinlasa. A consecuenda de eUo. las celulas oxidan sus reservas dc grasa a lIna
gran velocidad, produciendo m~s calor que ATP. Por clio, los Icjidos quc con Lie
nen lejido adiposo marr6n acluan como "almohadillas caJefactoras" que reani ATP slntasa
man a los animales hibernantes y que protegen del fTio las ~reas sensibles el reo
den naddo humano.

Todas las bacterias utiUzan mecanismos quimiosmoticos

para ahorrar energfaz"
Las baeterias utilizan fuenles de energia enonnemente diversas. Como las celu-
las eucariotas. algunas bacterlas sintetizan ATP a partir de azucares, oxid~ndolos
hasta COl y HzO a lraves de la glucolisis y del cicio del acido cftrico; eslas bacte-
rias tienen en su membrana plasmatica una cadena respiratoria muy similar a la
de la membrana mitocondrial inlema. Otras bacterias son anaer6bicas estrlclas
por 10 que oblienen la energfa exclusivamenle de la g1ucolisis (fennenlaci6n) 0 membrana
de una cadena electr6nica que utiliza como aceptor fmal de eleclrones una mo- plllIImMica
baeterief\ll
I~ula diferenle al oxIgeno. Estos aceptores a1temativos pueden ser un com-
pueslo nitrogenado (nitratos 0 nitritos). un compuesto de azufre (sulfalos 0 sul-
fitos) 0 un compuesto organico (fumaratos 0 carbonatos). Los elcclrones son
transferidos a estos aceptores mediante una serle de transportadores de electro-
nes que se hallan en la membrana plasmalica. semejames a los que se encuen-
tran en las cadenas respiratorias mitocondriales.
A pesar de esta diversidad. la membrana plasmatica de la mayorfa de las
bacterias presenla una ATP sintasa muy similar a la de las milocondrias (y a la
de los cloroplastos). En las bacterias aer6bicas, exisle una cadena de transporte de
electrones que eSlablece la fuerza prot6n-motriz que impulsa la ATP sintasa a
generar ATP. En las bacterias anaer6bicas que carecen de cadena de transporte
electr6nico, eSla ATP sinlasa aClua en sentido inverso. utiJizando el ATP produ-
cido en la glucolisis para generar una fuerza prot6n- mOlriz a traves de la mem-
brana plasmalica bacleriana.
Asf, la mayorfa de las bacl'erias, incluidas las anaer6hicas eSlrictas. manlie
nen una fuerza prot6n-motriz a traves de su membrana plasm:itica. EI gradiente
eleclroqufmico de protones se utiliza para impliisar el motor flagelar que penni
te la motilidad de la bacteria: el Na es bombeado afuera dc las bacterias por un
sistema de antiporte de NaH' que desempena la funci6n de la ATPasa de Na'-
K' de la celulas clIcar!olas; la mayorfa de aminoacidos y azucares son transpor-
Figura 1437 Transportelmpulsado
tados de esta manera en las baclerias: el transp.orle activo de nulrienles tiellde a
por protones en las baeterias. Una
estar mediado par un sistema de simporte impulsado par H' (Figura 14-37) ell el fuerza prot6n-rnotriz generada a traves
que el metabolito dcseado es arrastrado hacia el interior de la celula jUlllamente de la membrana plasmatica bombea
con uno 0 mas protones. En las celulas animales, por el cont.rario, la mayorfa del nutrientes hacia el interior de la celula
Iransporte hacia el interior a traves de la membrana plasmalica es impliisado ysodio hacia el exterior. En (Al, se esta
por el gradientc de Na' eSlablecido por la ATPasa de Na'-K'. generando un gradiente
Entre los diSlinlOS tipos de baclerias, existen algunas que son capaces de electroqufmico de protones en una
adaplarse a vivir en ambienles muy alcalinos y deben manlener su ciloplasma a bacteria anaerobica, mediante
un pH fisiol6gico. Para estas celuJas, cualquier intento de generar un gradiente una cadena respiratoria. Luego. este
elecrroqufmico de prolones serfa opuesto al elevado gradiente de concclllraci6n gradiente sera utilizado por la ATP
de protones en direcci6n contraria (mas H' en el interior que en el exterior). Pro- sintasa para producir ATP. Tambien
bablemente por esla raz6n. aI algunas de estas bacterias substituy6 el Na' por H' sera utilizado para transportar algunos
nutrientes aI interior de la bacteria. En
en todos sus meca.nismos quimiosm6ticos. Su cadena respiraloria bombea Na'
{B),la misma bacteria pero en
hacia el exterior de la reJula, sus sislemas de transporte eslan acoplados a un condiciones anaerobicas, obtendra el
simporte de Na' hacia adentro. su motor Dagelar esta irnpulsado por un Oujo de ATPde la g1ucolisis. Pane de esteATP
Na' hacia adcnlro, y la responsable de la mayor parte de su sfnlesis de ATP pare- sera hidrolizado por la ATP sintasa
ce ser una ATP sinlasa impulsada por Na'. La exislcncia de estas bacterias de- generando una fuerza prot6n.motriz
muestra que el principio de la quimiosmosis es mds fundamental que el gra- transmembrana que impulsani los
dienle elcclroqufmico de protones en el que se basa nonnalmente. procesos de transporte.

La cadena resplralorla y la ATP slntasa 729

Resumen
La cadena resplratoria de In membrann mitocondrial internn rontiene tres comple-
jos eruinufticos prlndpales, impiicados en Ia transfereru:ia de electrones desde el
NAnH hasta el aT CadLJ uno de estos rompIejos puede ser purlficado e ituertado en
vesfadm lipCdkiu sint~ticas, demostrtfndose asi que bamboon protones cuatulD se
transponan electrones a su travis. En In membrann nativa. In ubiquinonn y el dto-
cramo c son transportadores m6viles th electrones que van y vienen th llno a otro
complejo enzinuftiro, completando In cadena de transporte electr6nico. La vEa del
flujo th electrones es: NAnH -t complejo th In NAnH desllidrogenasa -t ubiquino
nn -t romplejo b-c, -t citocromo C -t complejo de In dtocromo oxidasa -t OIigeno
molecular (OJ.
Los romplejos eruimdtiros resplrntorlos aroplnn el transporte de electrones,
energericamenre favorable, al bombeo de protones haeia el exterior de In nratriz.. El
gradiente electroqllfmico resIIltanle se lltillzil para fabrkar ATP mediante otro
complejo proteico transmembrmUl, In ATP slntasa, a traves del cllal los protones
jlllyen de nllevo hada la nrotrlz. La ATP sinrasa es lin mecanismo acopkulor rever-
sible que normalmelJle transfornro elflllja de prolanes hacia adentro de La miro-
oondrla ell ellerg(a de enlnce fosfato del ATP, catallzilncro la reaeeMII ADP + P, -t
ATP, pero qlle, si se redllce el gradiente electroqu{mioo de protond, rambiin puede
IJidrolizar ATP y bombear electrones en direcci6n opllesta. Su presencia universal
en mltocondrlas, cloroplastos y bacterias restifica su Importancia central en los nu?-
canismos quimlosm6tioos de las celuw.

Cloroplastos y fotosfntesis 25
Todos los animales y la mayorfa de los microorganismos conffan en una conti-
nuada captaci6n de glandes camidades de compuestos org;1nicos de su am-
bieme. Estos compuestos aponan los esqueletos carbonados para la biosfntesis
y la energfa metab6lica que impulsa todos los procesos celulares. Se cree que los
primeros orgarnsmos de la Tierra primitiva tenian acceso a una abundancia de
compuestos organicos de origen geoquimico (vease Capftulo I), pero la mayoria
de estos compuestos origin ales se agOtaron hace miles de millones de ailos.
Desde ese perfodo pnkticamente todos los materiales organicos que han nece-
sitado las celulas vivas han sido producidos par orgallismosfotosinrericos, inclu-
yendo muchos tipos de bacterias fotosint~ticas. Las cianobaclerlas, que son las
bacterias fotosinteticas mas cvolucionadas, lienen lInos requerimientos nutri-
cionales minimos. Estas bactcrias utilizan los electrones del agua y la energfa de
la luz solar para convertir el CO2 atmosft:!rico en compuestos organicos. En el
curso de la hidr61isis del agua len la reacci6n llH 20 + "C02 .!!!!.., (CH20)~ + ll021,
liberan a la atm6sfera el oxigcno necesario para la fosforilaci6n oxidativa. Como
veremos se cree que la evoluci6n de las cianobacterias a partir de bacterias foto-
sint~ticas m<1s primitivas hizo posible por primera vez el desarrollo de las fonnas
aer6bicas de vida.
En las plantas, que se desarroJlaron m<1s tarde, la fotosfnlesis se realiza en
un organulo intracelular especializado --el c1oroplasto. Los c1oroplastos realizan
la fOlosfntesis durante las horas de luz solar. Los productos de la fotos{ntesis son
utiJizados directamente por las celulas fotosinteticas para la biosfntesis y tam-
bien son transfonnados en azucares de bajo peso molecular (nonnalmente saca-
rosa) que son exponados para satisfacer las necesidades memb6licas de muchas
de las celuJas no fotosinteticas de la pianta. Altemativamente, los productos pue-
den ser almacenados como polisac<1ridos osm6ticamente inenes (normalmente
almid6n) que se guardan disponible como una fuente de azucar para una utiJi-
zaci6n futma.
Las evidencias bioqu[micas sugieren que los c1oroplastos son descendjentes
de bacterias fOlosinteticas productoras de oxigeno que fueron endocitadas y vi-
vieron en simbiosis can c~lulas primilivas eucariotas. Tambien se cree que, en

730 Capftulo 14: Conversi6n cnerg(!tica: mitocondrias y c1oroplastos

 'i-_-!grano. d'!'_4~
""l lllmidon

general, las mltocondrias son descendientes de bacterias endocil3das. Probable- Figura 14-38 D1ve:rsidad de los
menle, la gran cantidad de diferencias Que hay entre c1oroplaslos y milocondrias plastldlos. (A) Un propla.stidio de una
refieja tanto el hecho de que provienen de antetesores bacterianos diferentes cl!lula de rafz de una planta de judias.
como su posterior divergencia evolutiva. Sin embargo, los mecanismos funda- Ob~rvese la doble membrana: la

mentales impJicados en la smtesis de ATP irnpulsada por la luz. en los c1oroplas- membrana mterna resalla la relativa
IDS. y los que esti\n implicados en la smlesis de ATP impulsacta por la respiraci6n, escasez de membranas inlemas.
(B) Tres amiloplastos (un fonna de
en las mitocondrias, son muy parecidos.
leucoplaslO) 0 plastidios
a1maccnadores de a1mid6n. en una
El c1oroplasto es un miembro de una familia de org:inulos pUllla de la ra.fz de soja. (De B.
exclusivos de las plantas -los plastidios 26 Gunning y M. Steer. Ultrastructure and
the Biology of Plant Cells. Londres:
EI c1oroplaslO es el micmbro ml1s prommente de la familia de los plastldlos. Los Arnold. 1975.)
plastidios se presentan en lodas las c~lulas vivas de las plantas, cada lipo celular
tiene su propio complemento caracterfstico. Todos los plastidios tienen una se-
rie de caraClerfsticas comunes. Lo mas notable de elias es que todos los plasli-
dios de una especie de planta concreta contienen multiples copias del mismo
genoma, relativamente corto (vease Tabla 143, pag. 754) y estan rodeados por
una envolrura compuesta por dos membranas concentricas.
Todos los plastid los se desarrollan a partir de los propfastidios, que son lInos
organulos relativamenle pequenos presentes en las celulas inmaduras de los
meristemos de la planta (Figura 14-38A). Los proplastidios se desarrollan en fun-
ci6n de los requerimientos de cada celula diferenciada y ellipo de proplaslidio
viene determinado en gran parte par el genoma nuclear. 8i se hace crcccr una
hoja en la oscuridad, sus proplastidios aumentaran de tamano y se t'ransforma-
ran en etiop/oslOS, los cuales presentan un eje semicristalino de membranas in-
ternas que contiene una clorofila amarilla precursora en lugar de la clorofila.
Cuando son expuestos a la luz, los etioplastos rapidamente se transforman en
cloroplaslos mediante la conversi6n de este precursor a c1orofila y sintetizando
nuevas membranas, pigmentos, enzimas fotosinteticos y componenles de la ca-
dena de transporte electr6nico.
Los leucopfoslOS son plastidios que aparecen en la epidermis y en muchos
tejidos internos que no se vuelven verdes ni fotosinteticos. Son Iigeramenle mas
grandes que los proplastidios. EI amiIoplasto es una forma comon de leucoplas-
to (Figura 14-388), que acumula almid6n en los [ejidos de reserva. En algona
plantas, tales como las patatas, los amiloplastos pueden lIegar a ser Ian grandes
como una celula animal de tamano medio.
Es importante darse cuenta que los plastidios no 5610 son lugares en los que
tiene lugar la fotosfntesis ni la deposici6n de materiales de reserva. Las plantas
han utilizado sus plastidios para la compartimentaci6n celular del metabolismo
intermediario. Los plastidios producen mucha mas energfa y mas poder reduc-
tor (en forma de ATP y NADPH) que los que son utilizados para las reacciones
biosinteticas de la planta. La sfntesis de las purinas y pirimidinas. la mayorfa de

C1oroplastos y fotosfntesls 731

 I - - - 211m---r Figura 14-39 EI cloroplaslo. Este
organulo fotosintetico presenta tres
HOJA CLOROPLASTO membranas distintas (Ia membrana
extema, la membrana intema y la
membrana tilacoidal) que delimitan t'res
epidermis superior
compartimientos intemos diferentes (el
espacio intemlembranoso, el estroma y
el espacio tilacoidal). La membrana
tilacoidal contiene todos los sistemas
generadores de energfa del c1oroplasto.
En las electronmicrograffas, esta
membrana aparece formando unidades
separadas que delimitan vesfculas
aplanadas (vcase Figura 14-40), pero
probablemente estan unidas formando
epidermis inferior una sola membrana muy plegada en
cada c1oroplasto. Como se indica en la
membrane membrene figura. los distintos tilacoides eSlan
externll interna
espllcio intermembrllnoso
interconectados. y lienden a agruparse
formando agregados denominados
grana.

erlVolture del
cloroplesto

0.5 I'm
'AI

Figura 14-40 E1ectronmlcrograffa de

cloroplastos. (A) Una hoja de trigo en la
que exisle una gran vacuola rodeada por
una tina franja de ciloplasma can
cloroplastos. (B) 5ecci6n u1trafina de un
solo cloroplasto, mostrando los granulos
de almid6n y gotas Iipfdicas que se han
acumulado en el estroma como
resultado de los procesos de biosfntesis
que se producen en este lugar. (e, Una
visi6n a mayor aumento de los grana,
mostrando las mernbranas tilacoidaies
181 aplanadas. (Par cortesfa de K. Plasldlt.)

732 CapftuJo 14: Conyersl6n energ~tica: mitocondrias y c1oroplaslos

 21lm - - - l Figura 14~41 Comparaci6n entre una
mltooondria y un cloroplasto. EI
membrana intem. cioroplasto suelc ser mucho mayor
y conliene una membrana tilacoidal y
un espacio lilacoidal. La membrana
~"-- 85pKio intermembrMlU _ _ j/ inlcma de la milorondria estli plegada
"tro~_-nr.
fonnando creslas.

DN.----~
r[bosonuos --\\

membrana tHacoidill ----\\,,~

MlTOCONORIA CLOROf>\.ASTO

los arninoacidos y de todos los acidos grasos de las plantas tiene lugar en los
plastidios. mientras que en las c(;lulas anima.les todos estos compuestos SOil
prodllcidos en el citosol.

Los cloroplastos se parecen a las mitocondrias, pero tienen un

compartimiento adicional 21
Los c1oroplasto& reaJizan sus interconversiones energericas mediante mecanis-
mos quimiosm6ticos. tal como 10 hacen Las mitocondrias, y su organizaci6n se
basa en los mismos principios (Figuras 14-39 y 14-40). Ambos tipos presentan
una membrana extema altamente penneable, una membrana mteroa mucho
menos penneable, en la que estan induidas proteinas transportadoras especia-
les, y un estrecho espacio intermembrana. La membrana interna envuelve un
gran espacio Uamado estroma, que es analogo a la matriz mitocondriaJ yeontie-
ne varias enzimas, ribosomas, RNA y DNA.
En cualqllier easo, existe una importante diferencia entre la organizaci6n de
las mitocondrias y de los doroplaslos. Generalrnente la membrana interna del
doroplasto no esta plegada en erestas y no eontiene una cadena transportadora
de eleetrones. En lugar de ello, tanto la cadena de Iransporte de electrones como
el sistema fotosintetico de absorci6n de la luz y una ATP sintasa se loealizan en
ulla lereera membrana distinta que forma un eonjunto de saeos pianos apilados,
los tIIacoldes (vease Figura 14-39). Se cree que ellumen de cada tilaeoide eSla
eoneetado con ellumen de los otros tilacoides. definiendo asf un tercer com par-
timiento interno Uamado el espacio t;ulCoidal que delimita con el estroma me-
diante la membrann tilacoidal.
En la Figura 14-41 se ilustran las similitudes y diferencias ultraestrueturales
entre las mitoeondrias y los c1oroplastos. En general, se puede imaginar el c1oro-
plasto como una mitocondria mAs grande en la que las crestas se han eonvertido
en series de partfculas submitocondriales intereonectadas situadas en el espacio
de la matriz. EJ extremo prominente de la ATP sintasa del c1oroplasto. donde se
sintetiza el ATP, sobresaIe de la membrana tilacoidal hacia el estroma, como si
sobresaliera de la matriz desde la membrana de cada cresta milocondrial.

Dos reacciones caracterfsticas de los cloroplastos: la producci6n

de ATP y de NADPH, impulsada por la luz, y la conversi6n de CO2
en carbohidratos25
La gran eantidad de reacciones que se produeen durante la fOlosfntesis, se pue-
den agrupar en dos grandes eategorfas. (I) En las reacclones fOloslnttHlcas de
transferencla de electrones (algunas veees Ilamadas las "reaeciones de la rase
lumlnosa"), la encrgfa derivada de la luz solar aetiva un electr6n de 1a cloroflla,

Cloroplastos y fOlosfntesis 733

10 cual permite que este electr6n se desplace a 10 largo de una cadena de oxida-
ci6n de la membrana tilacoidal, de manera amiloga a como se desplazan los CITQSOL
electrones a 10 largo de la cadena respiratoria de las mitocondrias. La clorofila
obliene sus eleclrones del agua, can la liberaci6n de 02' Este proceso de trans-
porte electr6nico bombea pralones a traves de la membrana liiacoidaJ, y la fuer-
za prot6n-motriz resultante impulsa el proceso de sfntesis de ATP en el estroma.
AI mismo tiempo, las reacciones de transpone electr6nico generan eleclrones
de alta energfa (junto con W) que Iransforman el NAD?' en NADPH. Todas es-
las reacciones se producen en el c1oroplasto. (2) En las reacclones de fijacl6n
del carbona (llamadas tambil~n "reacciones de la fase oscura"), el ATP y el
NADPH producidos en las reacciones fOlosinteticas de transferencia de electro-
nes se ulilizan como fuente de energfa y de poder reduclor, respectivamenie,
para impulsar la Iransformaci6n de CO 2 en carbohidralOS. Las reacciones de fi-
jaci6n de carbo no, que empiezan en el estroma del c1oroplasto y conlint1an en
el cilosol celular, producen sacarosa en las hojas de la planla; desde donde es
exporlada a olras tejidos como fuente de moleculas organicas y de energfa para
el crecimiento.
Asf. In formaci6n de oxfgeno (que necesita directamente la energia de la luzl
y la conversi6n del di6xido de carbono en carbohidralOs (que necesita, tan s610
Figura 14-42 EI proceso de la
indirectamente, la energfa de la luzl, son dos procesos fotosintelicos c1aramente rotosfRlesls en un cloroplasto. En la
separados el uno del otro (Figura 14-42). No obstante, como veremos, existen primera serie de reacciones, el agua se
elaborados mecanismos de retroalimentaci6n que interconectan ambos proce- oxida y se libera oxfgeno, mientras que
sos, equilibrando la biosfnlesis. Por ejemplo, las variaciones en los requerimien- en la segunda serle de reacciones el
tos celulares de ATP y de NADPH regulan la producci6n de estas moleculas en la di6xido de carbono es asiml1ado
membrana del tilacoide; tambicn ocurre que varias de las enzimas del cloroplas- (fijado) produciendo carbohidratos.
to que son necesarias para la fijaci6n del carbono se inaclivan en la oscuridad y
se reactivan por los procesos de transporte eleclr6nico estimulados por la luz.

La fijaci6n del carbono esta catalizada por la ribulosa bisfosfato

carboxilasa 211
En este capitulo bemos visco que las celulas producen ATP aprovechando la gran
cantidad de energfa libre que se libera cuando los carbohidratos son oxidados
hasta CO 2 y H2 0. Par consiguieme, es evidente que la reacci6n inversa en la que
el CO 2 y el H20 se combinan formando carbohidralos ha de ser una reacci6n
muy desfavorable. En consecuencia, esla sfntesis debe estar acoplada a otras re-
acciones muy favorables que la impulsen.
La Figura 14-43 i1ustra la reacci6n central en la que un atomo de carbono
inorganico se transforma en un carbono organico: el CO 2 de la alm6sfera se
combina con el compuesto de cinco carbonos, la ribulosa 1,5bisfosfato, y con
agua, para dar dos moleculas de tres carbOllOS, el 3-fosfoglicerato. Esta reacci6n
de "fijaci6n del carbono", que fue descllbierta en 1948, se produce en el estroma
del c1oroplaslo y eSla catalizada por lIna gran cnzima Hamada ribulosa bisfosfato
carboxilasa (-500 000 daltonsl. Puesto que cada mollkliia de enzima lrabaja con
Figura 14-43 La reaccl6n Inlchtl de la
fljacl6n del carbono. Esta reacci6n, en
,00 la que el di6xido de carbona se

o 0 . ;:::0
H~C~OH
O~

~o
~OH
'H,00
c=o
H

icoo-
(XT

OH
transforma en carbona organico, se
desarrolla en el estroma del
cloroplaslO y esta catalizada por la
enzima ribulosa bisfosfato carboxilasa,
que es muy abundante. El producto,
3-fosfoglicerato, el cuallambit'!n es un
I 1 I importante intermediario de la
H~C~OH H~C-OH H-C~OH

I glucolisis; cuando la enzima adiciona

I 1
oxfgeno en lugar de CO 2, los dos
CHP0 CHP0 cHP0
,llomos de carbono que se presentan
di6~ido da ribuloss 1,5 bis/oslato producto intermediario dO. mol&culas de en color azul se utilizan para generar
carbono 3foafoglicerato fosfogiicolato (vt'!ase mas adelante).

734 Capftulo 14: Conversi6n energetica: mltocondrias ycloroplastos

 bastanle lentitud (transforma unas 3 moltkulas de substrato por segundo. en
comparaci6n con las 1000 mol~culas por segundo de una enzima tfpical, es nc-
cesario que en cada cloroplasto exislan muchas copias de ella. A menudo, III ri-
bulosa bisfosfato carboxilasa represenla mas del 50% del 10lal de protefna del
cloroplaslo, y se cree que es la prolefna mas abundanle de la Tierra.

En el cicio de fijaci6n del carbono se consumen tres moleculas de

ATP y dos moleculas de NADPH por cada mol~cuJa de CO, fijada 29
La reacci6n de fijaci6n del COz es energ~licamente favorable gracias a la reaCli-
vidad del compuesto rico en energfa riblllosa I,S-bufosfata a! que se ai'iade cada
mol~cuJa de COz (Figura 14-43). Pero para que se produzca un aporte de ribulo-
sa l,5-bisfosfalo se requieren una serie de reacciones que consuman grandes
cantidades de NADPH y ATP. La elaborada via a lrav~ de la cua! se regenera este
compuesto se descubri6 gracias a un experimenlo que cOllstituye uno de los
mayores ~xiIOS en el uso de los radiois6topos. Como se mueSlra en 1a Figura 14-
44, gracias a la ribulosa bisfosfalo carboxilasa se fijan 3 mollkulas de COz produ-
ci~ndose 6 molttulas de 3-fosfoglicerato (con un tOla! de 6 x 3 = 18 atomos de
carbono: 3 procedentes del COz Y 15 de 1a ribulosa I,S-bisfosfatoJ. Los 18 atomos
de carbono recorren entonces un cicio de reacciones que regeneran las 3 mol~
cuJas de ribulosa I,S-bisfosfato que fueron utilizadas en el primer paso de fija-
ci6n del carbono (3 x 5 =15 l1tomos de carbono). Asf, el proceso genera una mo-
I~cula de gliceraldehfdo 3-fosfata (3 l1tomos de carbona) como ganancia neta. En

este cicio de ftjacl6n del carbona (0 cicio de Calvin-Benson). se consumen 3

tres mol6eul1l5
Figura 14-44 Cicio de OJacldn del

~
carbono, que forma mol&ulas
orglinlcas a partir de CO z y de HzO. El
numero de alomos de carbono de cada
lipo de mol~cula se indica en los
recuadros blancos. Emre el
lrllmol6euln 5eis mOlkulu g1iceraldehrdo 3-osato y la ribulosa
,c 5-fosfato hay una gran cantidad de
imermediarios, que en este esquema
sc han omitido en aras de una mayor
~--,r:m claridad. Tampoco se representa la
emrada de agua en cl cicio.
\ - - - - - - 61ADPI

I~-- ,1lril!liIlI
cInco mol6eula. ~;.m~~-.~
@
;="':'OI6eUlllS
3C glicet"a\detl;1Oo
,c
3-fos1~o

. . ".ot6cu. . . . 001
lijedlld." II"
~tnIento MItO de u'"
.......IhIdo....,.
m'-"do

IoCIW . . . . . ." . . .
H-C=O
I
H-C-OH
MlO ' " ftllllW MOIIIoJ... I
_AlP.,. . . ,."....... CH,O
do .......

AZUCAAES .4aOOS GRASOS. AMlNOAcJOOS

C1oroplaslos y fotosfntesls 735

..
moleculas de ATP y 2 moleculas de NADPH por cada molecula de COz que se
transforma en carbohidrato. La ecuaci6n neta es
3COz + 9ATP + 6NADPH + agua -i'
gliceraldehfdo 3-fosfato + 8PI + 9ADP + 6NADP'
En consecuencia, para la formaci6n de moleculas organicas a partir de COz Y
HzO' se requiere energfa de enlacefosfalo (en forma de ATP) y poder reductor (en
forma de NADPH). Mas adelante volveremos sobre este punto.
EI gliceraldehfdo 3-fosfato produddo en los cloroplastos a trav~ del cicio
de fijaci6n del carbono es un al.ucar de tres carbonos que tambien se utiliza
como intennediario central en 1a g1ucolisis. Gran parte de este al.Ucar es expor-
tado at chosol donde puede ser rapidamente transfonnado en fruclOsa 6-fosfato
y g1ucosa I-fosfato mediante la inversi6n de varias reacciones en la g1ucolisis
(vease Figura 2-21). Luego, la glucosa I-fosfato es transformada en el azucar-
nucle6tido UDP-glucosa, que se combina con la fructosa 6-fosfam formando
sacarosa fosfato, el intennediario precursor del disac8rido sacarosa. La sacarosa
es la fonna principal de transporte de azucares en las celulas vegetates, como 10 es
la g1ucosa en las celulas ani males: aI igual que la glucosa, que es transponada en
la sangre de los ani males, la sacarosa es exponada desde las hojas a uaves de los
haces vasculares, proporcionando los carbohidratos requeridos por el resto de
la plama.
La mayor parte del g1iceraldehfdo 3-fosfato que permanece en el cloroplasto
es uansformado en almid6n en el estroma. AI igual que el gluc6geno en las celu-
las animales, el a1m1d6n es un gran polfmero de glucosa que se utiliza como re-
serva de carbohidratos. La producci6n de almid6n csla regulada de tal manera
que se produce y almacena en grandes granos en el estroma del cloroplasto (vea-
se Figura 14-388) durante perfodos de exceso de capacidad fotosintetica. Esto
sucede a traves de reacciones que se producen en el estroma, inversas de las que
rienen lugar en 1a glucolisis: transfonnan el gLiceraldehfdo 3-fosfalo en glucosa
I-fosfato, que enlonces se utiliza para producir el azucar-nucle6lido ADP-gJuco-
sa, el precursor inmediato del almid6n. Durante la nache, el almid6n es hidroli-
zado para proveer de energfa a las necesidades metab6licas de la planla.

En algunas plantas, Ja fijaci6n del carbono esta compartimentada

para facilitar el crecimiento a concentraciones bajas de COlO
Aunque la ribulosa bisfosfato carboxilasa afiade preferentcmente una molecula
de COz a la ribulosa I,S-bisfosfato, puede tambien utilizar 02 ademas de CO2, y si
la conccntraci6n de CO2 cs baja, af\adira 02. Este es el primer paso de una v(a Ha-
mada [otorrespiraci61l, cuyo cfccto es consumir 02 y liberar CO2 sin la produc-
ci6n de ahnacenes de energfa uti!. En muchas plamas, aproximadamente una
tcrcera pane del CO2 fijado se pierde de nuevo como resultado de 1a fotorrespi-
raci6n.
La fomrrcspiraci6n resulta dominante en condiciones secas y calurosas en
las que las plantas se ven forzadas a cerrar sus estomas (los poros de inlercam-
bio gaseoso de su hojas) con el fin de evitar un perdida excesiva de agua. Esto
provoca una caida extraordinaria de los niveles de COz en la hoja, favoreciendo
la fotorrespiraci6n. No obstame, en las hojas de muchas plantas que viven en
ambientes caJidos y secos, como acurre con los cereales y con la cana de azucar,
tiene lugar una adaptaci6n especial. En estas planlas, el cicio de fijaci6n del car-
bono moslrado en la Figura 14-44 tiene lugar 5610 en los c1oroplaslos de las diu-
/as ltinico-VQSulares, que contienen toda la ribulosa bisfosfalO carboxilasa de la
planla. Eslas celulas estAn protegidas del aire y rodeadas por una capa especiali
zada de dlulas del mes6jilo que "bombean~ CO2 hacia las celulas lunicovascu-
lares, abasteciendo a 18 ribulosa bisfosfalO carboxilasa con una alta concentra-
d6n de CO2, que disminuye en gran medida la fotorrespiraci6n.
La bomba de CO 2 es un cicio de reacciones que empieza con un paso espe-
cial de fijaci6n del CO 2, catalizado en el dtosol de las celulas del mes6fi1o por

736 Caprtulo 14 : Conversi6n energetica: mitocondrias y c1oroplastos

 'AOJAS C. Figura 1445 Comparacl6ndela
analOm(a de 1a hoja de una planta <;
celulas del celulat
clo,opla.to epidermis me&6filo tunico-vasculare. y de una planta C. Las celulas
dibujadas en color verde contienen
cloroplastos que lIevan a cabo el cicio
normal de fijaci6n del carbono. En las
plantas C.' las celulas del mes6fi1o no
h.. h..
vascular vascula' fijan carbono sino que estan
especiali7..adas en el bombeo de COl' Y
gem~ran una elevada relaci6n 001;2
en las ce:lulas ulnico-vasculares. que
son las unicas ce:lulas de eslas plantas
en las que tiene lugar el cicio de
fijaci6n del carbono. Los haces
vasculares lransportan la sacarosa
estoma epidermis cloropl..to producida en la hoja hasla OlIOS

.....
celu'-s del
,~
lejidos.

CH,
una enzima que une di6xido de carbona (en fonna de bicarbonato) con aha afl I
CH H
nidad y 10 combina con una moMcula activada de tres carbonos formando una
molecula de cualTO carbonos. La molecula de cualtO carbonos difunde a las ct:!-
Iulas tunico-vasculares, donde es transformado Iiberando el CO 2 Y generando
una molecula de tres carbonos. EI cicio de bombeo se completa cuanda este H H
compuesto de tres carbonos vuelve a las ct:!lulas del mes6fi1o y es lTansformado
en su forma original activada. Las plantas que fijan CO2 en las que el CO 2 es ini HJC ....C'
cialmenle capturado mediante su conversi6n en un compuesto que contiene H/ 'c~
cuatro carbonos, reciben el nombre de plantas C(. Todas las demas plantas reci /
CH,
ben el nombre de plantas CJ (Figura 14-45) porque capturan el CO 2 directamen- I
te en un compuesto de tres carbonos, el 3-fosfog(jceralO. CH,
I
Como sucede en cualquier proceso de transporte vectorial, el bomboo de c-o
CO 2 en las ct:!lulas tunico-vasculares de las plantas C. cuesta energfa. En los am b
bientes secos y calurosos, este coste es normaJmente muy inferior a In pt:!rdida
por fotorrespiraci6n de las plantas CJ , por 10 que las plantas C, tienen una venla-
jn potencial. Ademas, dado que las plantas C. pueden realizar la fotosfntcsis en
el interior de las hojas a concentraciones de CO~ mas bajas, necesitan abrir me-
nos sus estomas y por 10 tanto pueden fijar aproximadamenlC el doble de carbo-
no neto por unidad de agua perdida que las plantas Cr

La fotosmtesis depende de la fotoqufmica

de las mol~culas de clorofila31 regi6n
hldrof6bica
de Is cola
Habiendo estudiado las reacciones de fijaci6n del carbono, vamos a retornar ala
cuesti6n de c6mo las reacciones fotosintt:!licas de transferencia de electrones ge
neran el ATP y cl NADH necesarios para impulsar la producci6n de los carbohi-
dralos en 1a planta a partir de CO 2 y H 20 (vt:!ase Figura 14-42). La encrgfa necesa-
ria deriva de la luz solar capmda pOT las moleculas de clorofila (Figura 1446). EI
proceso de conversi6n energetica empieza cuando una molt:!cula de c1orol1la cs
excitada por un cuanto de luz (un (Ol6n) y un electron se desplaza de un orbital
molecular a otro de mayor energfa. Esta molecula excilada es inestable y tiende
a volver a su estado original no excitado por una de eslas tres posibles vias: (I)
mediante la conversi6n de la energfa extra en calor (movimientos moleculares) 0
Figura 14-46 EsU'Uetura de la
por alguna combinaci6n de calor y luz de una longitud de onda mas larga (nuo-
c1orofila. Un alOmO de magnesio esta
rescencia), tal como ocurre cuando la energia lumfnica es absorbida por una
unido a un anmo de porfirina, que
molecula aislada de clorofila en soluci6n; (2) mediant'e la lTansferencia de ener- estJl. relacionado con el anillo de
gfa -pero no del electr6n- directamente a una molecula de c1orofila vecina, por porfirina que une hierro en el grupo
un proceso denominado trans!erencia de energia par resonmlcia; 0 (3) mediante hemo (comparar con la Figura 14-28).
la trans(erencia del electr6n de alta energia a otra moll!cula cercana (un acepror En los enlaces sei'lalados en color, los
de electroflcs) y retornando a su eSlado original tomando un electr6n de baja electrones estan deslocalizados.

Cloroplastos y rotosfntesis 737

 ......,
molllk:ula
eltCitllda de
elorofila
Il'IOIkula
ue.lllda de
dorofita
I
Ui
molkula
excitada de
dorofila

\
moIecuia
ellci'lllda de
elorofila
elolofila
o>Udllda
....... ....."
KeptOf'
ollidado

---
electr6rl
POSIBLES decalmlerl!o por
, -I"'"
decalmierllo par
BI-ll decllimierlto por trllnsferencias
EXCITACION VIAS O 1 tiberaci6rl de lUi 2 trarlaferencia erlerglitica 3 suces,vllS de electronea
DECAIMIENTO V de calor por rlt$()nancill

energfa de a1guna otra molt!cula (un dador de eJectrOfles, Figura 14-47). Los dos Figura 14-47 Tres poslbles vfas que
ti!timos mecanismos desempenan un papel esencial en la fotosfntesis. puede segulr una molku1a excIUKfa
de c1orofUa para votver- a su estado
original. no excItado. Mediante el
Un fotosistema contiene un centro de reacci6n PJOceso 1, la energfa luminosa
y un complejo antena32 absorbida por una molecuJa de
c1orofila se libera completamente en
Cicoos complejos muhiproleicos, lIamados fotoslstemas, catalizan la transfor- forma de luz y c.,lor. Por el contrario.
maci6n de la energfa lumfnica capturada por moleculas excitadas de dorofHa, en en la fotosfntesis las mol~lIlas de
formas utiles de energfa. Un fotosistcma consiste en dos componentes estrecha- dorofila slgllcn el proceso 2 en el
mente unidos: un CCTlfTO de reacciOIl [oloqllfmico, que consiste en un complejo de complejo all lena y el proccso 3 en el
prmefnas y moleculas de c1orofHa que captan la energfa solar convirticndola en centro de reacci6n, como se describe
energfa quim.ica, y un complejo atHena, que consistc en moleculas de pigmento en el texto.
que capturan la encrgfa solar y la canalizan aI centro de reacci6n.
EI complejo antena es importante para el aprovechamiemo de la luz.. En los
c1oroplastos, los complejos antena consisten en agrupaciones de varios cientos
de molecuJas de c1orofila unidas entre sf por proteinas que las fijan fuertemente
sobre la membrana tilacoidal. Segtin la planta de que se trate, en cada complejo
lambien exislen canlidades variables de pigmentos accesorios, denominados
CllrDte1loides, que ayudan a captar la luz de otras longitudes de onda, y que tam-
bien se hallan localizados en cada complejo. Cuando una molecula de c1orofila
del complejo antena es excitada, la energfa es nipidameme transferida dcsde
una molecula a In otra, mediante transferencia energetica por resonancia, hasta
que alcanza un par especial de moleculas de dorofila en el centro fOloqufmico
de reacci6n. Por 10 tanto cada complejo antena actua a modo de "embudo~, que
rccoge la energfa lumjnosa y la dirige hacia un unico centro de reacci6n especffi-
co que la puede utilizar can cficiencia (Figura 14-48).

FIgura ......48 Unfotoslstemaconsta

molkulasde
LUZ
clorofila en el
de en un Cftllro de reac:d6n y una
complejo proteico antena. Las molecuJas A(dadores
de la antena de electrones> y las moleculas B
(aceptores de electrones) difieren de
acuerdo con el fOlosistema.

~P41r "PtlCial~ de complejo prote'na-

molkula de clorofila pigmento del c.ntro
del c.ntro de reacQ6n de reacci6n

738 Capitulo t4: Conversi6n energt:!tica: mitocondrias y c1oroplaslos

 par especial de Figura 1449 D1sposlcl6n de los
moltlculas de clorofile transportadores de ele<:lrones en un
centro de reacci6n fotosinh~tico
bacleriano, determinada por
crlslalograffa de rayos X. Ttll como se
indica en la figura, las moIeculas de
pigmento eSlan colocadlls en el
interior de una protelna
transmembranll y envueltlls por III
bicapa lipidica. Un clectr6n Cll el pllr
feofitina espedlll es excitlldo por resonancia
desde un complejo llntena clorofJ1ico
(proceso 2 en III Figura 14-47), y luego.
quinone el electr6n excitado es transferido
fuenemente desde el par especial a la quinona
unide
(vease Figura 14-50).
CITOSOL

EI centro de reaccl6n fotoqu{mlco es un pigmento protcico transmembra-

na que se halla en eJ coraz6n de la fotosfOlesis. Se cree que se origin6 hace mas
de 3 mil millones de anos en una bacteria fotosintetica primiliva. El par especial
de moleculas de c1orofila del centro de reacci6n actUa como una trampa de
cuantos de excitaci6n porque su electr6n excitado pasa inmediatamente a una
cadena de aceptores de electrones que se hallan situados de forma precisa en el
mismo complejo proteico (Figura 14-49). Mediante el nipido desplazamiento del
electr6n de alta energfa lejos de las c1orofilas, el centro de reacci6n 10 transfiere a
un ambiente donde es mucho mas estable. Por consiguiente, el electr6n es resta-
blecido convenientemente para reacciones fotoqufmicas posteriores que requie-
ren mas tiempo para lIevarse a cabo.

En un centro de reacci6n, la energfa capturada por la clorofila

genera un dador fuerte de electrones a partir de uno debiP3
Las transferencias de electrones implicadas en las reacciones fOloqufmicas des-
critas recientemente han sido <Inalizadas exhaustivamente mediante melOdos
espectrosc6picos rapidos, especial mente en el fotosistema de la bacteria purpu-
ra, que es mas sencillo que el fotosistema evolutivameme emparentado de los
c1oroplastos. EI centro de reacci6n bacteriano es un gran complejo pigmento-
protefna que puede solubilizarse con detergentes y purificarse en forma activa.
En 1985 se determin6 su estructura tridimensional compleca mediante cristalo-
graffa de rayos X (veanse Figura 10-33 y Figura 14-49). Su estructura, combinada
con los datos cineticos. proporciona la mejor representaci6n de que se dispone
de las reacciones iniciales de transferencia de electrones en que se basa la foto-
sfntesis.
En la Figura 14-50 se muestra un diagrama de la secuencia de transferencias
que tienen lugar en eJ centro de reacci6n de la baterfa purpura. Como esquema-
tizamos anteriormente (Figura 14-48), en un centro de reacci6n, la luz provoca
la transferencia neta de un electr6n desde un dador debil de elec(fones a una
molecula que es lin dador fuerte de electrones en su forma reducida. De esta
manera la energfa de excitaci6n, que podrfa ser liberada en forma de fluorescen-
cia y/o de calor, es utilizada para aumentar la energfa de un elect.r6n y generar
un dador fuerte de electrones donde no 10 habfa antes. En esta bacteria el dador
debil de electrones es un citocromo (recuadro naranja). y el dador fuerte de
eJectrones es una qui nona (recuadro amarillo). Tal como veremos, en los claro-
plastos de las plantas superiores, es el agua (en lugar de un citocromo) la que ac-
tua como dador inicial de electrones, por 10 que en la fotosfntesis de las plantas
se Iibera oxfgeno.

Cloroplastos y fotosfntesis 739

Figura 14-50 Trllnsferenda electronh:a que tiene lugar en el cenlro de tellcdon
(otoqu(mlcode la bacteria purpura. se cree que cn el fotosislcma II de las plamas.
relacionado cvolulivamcnte liene lugar una serie de reacciones similar a esta. Enla pane p,r especlsl
superior derecha de la figuta se mUCSlra un diagrama csquem<'ilico que indica tas de moillculas
moloculas que Iransportan electroncs,las cuales son las de la Figura 14-49 mas una de ctorofila clorofils
quinona imercambiable {QJ y una quinona libremenle movil (Q) disuelta en la bicapa prolelne leofitina
lipfdica. Los Iransponadores de eleclrones del I al5 se unen en una posicion especffica de ~
una protelna transmembrana de 596 aminoacidos, formada por dos subunidades I
di(erenles (vease Figura 10-33). Tras la excilaci6n por un fOl6n de luz, un electr6n de alta &
energ(a pasa de una molocula de pigmenlo a otra. generando una carga de separacion lal
como se muestra debajo en los pasos de ta secuencia de Ahasta D, en la que la molocula ~ )l moillcula de
de pigmemo que transpona electrones de aha energl"a esla indicada en color verde. La motllcula qulnona
libl"e de fu8ftemente
elapa Ese desarrolla muy lentamente. Una vez liberada en la bicapa, la quinona con dos quinonelQ) quinona unldal(W
electronesacepta dos protoncs y pierde su cargo (vease Figura 14-31). intercambiable

'''''
LUZ -.aro._ dol qul~ 'edueida que t~08pOfU
!los eMcl:~ de en.. _gia

3 pic:osegundos
~~~ ~
.. I ~undos 230 pico$egundos
~@
2711 nanosegundos 100 mic:rosegundot ,epetic:i6n de
-[0
intereambio de
(3 1I 10 12 segundosl 10' paso, desde Ia quinona en
"-,ta .1 lugar a.

En plantas y en cianobaclerias, fa fotofosforilaci6n

no ciclica produce NADPH y ATP3t.:w
En las planras y en las cianobaclerias la fOlOsfnresis produce directameme tame
ATP como NADH mediante un proceso en dos pasos Uamado fotofosforilacl6n
no cfcUca. Dado que se ulilizan dos fotosistemas en serie para $r energia a un
electr6n, este electr6n puede ser lransferido por toda la vfa desde el agua hasta
NADPH. Debido a que los electrones de alta energia pasan a trav~s de fotosiste-
mas acoplados generando NADPH, parte de su energia es desviada para la sfnte-
sis deATP.
En el primero de los dos fOlOsistemas -denominado forosisrema1l por razo-
nes hiSl6ricas- los oxfgenos de dos moleculas de agua se unen a un grupo de
~l.tomos de manganeso de lIno enzirna hidrolitica, todavfa poco estudiada. que
posibilita que los eleclrones sean eliminados uno a uno rellenando los agujeros
generados por la luz en el centro de reacci6n de las moleculas de cloronla. En
cuanto los cuatro electrones de las dos moleculas de agua se han eliminado (10
que requiere cuatro quantos de luz), la enzima Iibera el 02' Asf plies, el fOlosiste-
ma II cataliza la reacci6n 21-1 2 ..
4 fotones --+ 4W + 4e-. 02'
EI nucleo del centro de reacci6n del fotosistemaIi es hom6logo al cenlro de
reacci6n bacteriano descrito anteriormente, y tambien produce fuerles dadores
de electrones en forma de moleculas de quinona reducida en la membrana. Las
quinonas ceden sus electrones a una bomba de protones lIamada complejo bs '/'
que se parece notablemente aI complejo b-cl de la cadena respiratoria milocon-
drial y a un complejo emparentado en las baclerias. Como en las mitocondrias, el
complejo bombea 1-1' al espacio lilacoidal a traves de la membrana del lilacoide
(0 fuera del Cilosol a traves de la membrana plasmatica en cianobaclerias), y el
gradiente eleclroqufmico resultante impulsa la sintesis de ATP por la ATP sintasa
(Figuras 14-51 y 14-52). El aceptor final de electrones de esla cadena de transpor-
te electr6nico es el segundo fOlosistema f/Olosislema I), que acepta el electr6n del
agujero dejado por la luz en el centro de reacci6n de su molecula de c1orofila.
Cada electr6n que entra el fotosistema I es elevado a un nivel energetico mas alto,
10 que Ie pennitira pasar aI centro de hierro-azufre de la ferrodoxina e impulsar la
reducci6n de NADP' hasta NADPH; este ultimo paso tambien implica la caplura
de un prot6n del medio (Figura 14-52).

740 Capftulo 14: Conversl6n energetica; mitocondrias ycloroplastos

 ,,, ,,, Figura 1451 Flulo de electrones que
se produce en la membrana tllacoldal
durante Ja fOlOsfntesls. Los
complejo transportadores de electrones m6yiJes
antena
de la cadena son la plastoquinona (que
H'
se parece a la ubiquinona de las
milocondria), la plastocianina (una
pequefia protefna que comiene cobre)
y la ferrodoxina (una pequefla proterna
membrana [
tilllcoidal que contiene un centro de hierro-
azufre). E1 complejo b6 -fes muy similar
al complejo b-c l de la mitocondria y al
enlima que complejo b-c de las bacterias (yeaSe
dascompona
81 agua + 4H'
Figura 14-61): los tres complejos
ESPACIO
TILACOIDAL _
"" aceplan electrones desde quinonas y
bombean protones. Observese que
tanto los H' liberados en la oxidaci6n
del agua como el H' captado durante
la formaci6n del NADPH, tambien
El esquema de la fotosfntesis que se presenta en la Figura 14-52 se conoce comribuyen a la generaci6n del
como el esquema Z. Par media de sus dos pasas de activaci6n electr6nica, calali- gradiente elecrroqufmico de protones
zados eada uno por lin fotasistema, un electr6n es transferido desde el agua, que que impulsa la sflUesis de ATP
normalmente fija sus electrones muy fuertemente (potencial redox = +820 mV), mediante una sintasa prescnte en esta
hast'a el NADPH, que normal mente fija sus electrones de forma mas debil (po- misma membrcna [no se muestra),
tencial redox = -320 mY). Un solo Clianto de luz visible no dispone de suficiente
energfa para activar un electr6n desde la base del fotosistemall hasta el extrema
superior del fotosistema I, la cual representa probablemente la variaci6n de
energfa necesaria para transferir un electr6n desde el agua hasta el NADP', EI
usa de dos fatosistemas separados supone que queda suficiente cantidad de
energfa para que la cadena de transporte eleclr6nico que une los dos fotosiste-
mas bombee H' a tra~es de la membrana tilacoidal (0 la membrana plasmatica

Figura 14-52 Varlaclones del

potencial redox para el paso de
electrones durante 10. fotosfntesls.
-800 EI potencial redox de cada especie
molecular se indica por su posici6n
-600 a 10 largo del eje vertical. EI
fOlOsistemall es similar al centro de
reacci6n de las bacterias purpura, EI
fotosistema J es diferente: transfiere

l -200
electrones desde su clorofila
excitada a trayes de series de centros
de reacci6n de hierro-azufre
i o fuertemente unidos, EI flujo neto de
,
:!!
200
.\ \ n com,";o
electrones a lraves de los dos
fotosistemas unidos en serie va
i. V be" desde el agua hasla el NADP', Y
'00 plutoquln~o:":~"'::::::::C~pC~~JI __+ ,., produce NADPH y ATP, que se
sintetiza por una ATP sintasa (no
indicada aquO que utiliza el
600
gradiente electroqufmico de
protones producido por los tres
eoo lugares de actividad de protones que
se resaltan en la Figura 14-51. Este
" 1000
I--f- ,., esquema Z para la producci6n de
ATP se denorrtinafotofosforiiacion
~~::::~anlim. qua 110 cfclica, para distinguirlo del
dascompone esquema cfclico que s610 utiliza el
~ " fotosisterna I (vt'!ase texto),
diracci6n dal flujo da elactrone$
Cloroplastos y fotosfntesls 741

I.
de las cianobacterias), 10 cuaJ permite a la ATP sintasa aprovechar parte de la MITOCONDRIA
energfa electr6nica derivada de Ja luz para producir ATP. p",

Los cloroplastos pueden producir ATP por fotofosforiJaci6n

cfclica sin generar NADPH31.35
En el esquema de fOlofosforilaci6n no dclica que acabamos de mencionar, los
eleclrones altamente energelicos que dejan el fOlosistemall son utiJizados para
generar ATP y son transferidos al fOlosistema I para impulsar la producci6n de
NADPH. EsIO produce un poco mo1s de una molecuJa de ATP por cada par de elec-
trones que pasan del agua hasta el NADP' generando una molecula de NADPH.
Pem para la fijaci6n del carbona se neeesita 1,5 molecuJas de ATP par NADPH
(vease Figura 14-44). Para producir mas ATP, en algunas especies los cloroplas- membrana
tos pueden utilizar el fO(Qsistema I de un modo dclico, de fonna que se produz- externil
ca ATP en lugar de NADPH. En eSle proceso, lIamado fOlOfosforilaci6n cfc/icn, los
electrones de aha energia del fOlosistema I son lransferidos de nuevo al comple-
jo b,-f en lugar de ser Iransferidos al NADP', Yel eleetr6n can una energia infe-
/
rior es entonces reciclado hada el fotosiSlema l. El unico resultado nelO, al igual
que la conversi6n de una pane de la energfa lumfnica en calor. es que el H' es
bombeado a trav~ de la membrana tilacoidal mediante el complejo b,-f aumen-
tando el gradiente electroqufmico de protones que impuJsa laATP sintasa.
En resumen, la fOlofosrorilaci6n dclica impLica s610 el rOlosistcma I, que
produce ATP sin la fonnaci6n de NADPH ni de 02' De esla manera, las activida-
des relaLivas de los flujos dclicos y no dclicos de eleetrones pueden delenninar
cuAnta energfa lumfnica se transforma en pader recluctor (NADPH) y cu<1nta en
enlaces fosfato de alta energia (ATP).
.;.;:),:::=II=Zi~ membnlna
tilacoidal
pHS pH8
ClOROPlASTO
EI gradiente electroquJrnico de protones es similar
en las mitocondrias y los cloroplastos36 , .ATP.inlasa

La presencia del espacio tilacoidal divide el cloroplasto en tres compartimienlos

internos, en lugar de dos como ocurre en la mitocondria. En cualquier caso, el Figura 14-53 Comparacl6n de los
Oulos de protones yde la orlentacl6n
erecto neto de la translocaci6n de H' en los dos organulos es similar. En la Figura
de la ATP slntasa que se presentan en
14-53 se i1ustra c6mo se bombea el W desde el estroma (pH 8) hast a el espacio las mltocondrlas yen los c1oroplastos.
lilacoidal en los c1oroplaslOs (pH aproximadamente 5), creando un gradiente de Los companimiemos que tienen un
3 a 3.5 unidades de pH. Esto representa una fuerza prol6n-molriz de aproxima- pH similar se representan en el mismo
damente 200 mV a Iraves de la membrana Lilacoidal (Ia mayor parle del cllaJ es color. La fUeiL.a prot6n-motriz a naves
debida al gradicntc de pH mas que al potencial de membrana), que impulsa la de Iii membrana tiJacoldai consiste
sfnlesis de ATP mediante la ATP sinlasa integrada en esla membrana. mayoritariamente en un gradiente de
Como el estroma, Ja matriz mitocondrial tlene un pH de aproximadamente pH; 18 alta perrneabilidad de esta
8, pero en eSle caso esn'l generado por el bombeo de protones de Ja mitocondria membrana al Mg2. Ya los iones CI-
hada eJ dtosol (pH de aproximadamenle 7), en lugar de hacia un espacio inte- permite que eI flujo de estos iones
rior del organulo. Asf, el gradiente de pH es relativamente pequeilo, y la mayorfa dlsipe la mayorfa del polencial de
de la fuena prot6n-molfiz a traves de la membrana mitocondrial interna, que es membrana. Probablemente, las
mitocondrlas no pueden IOlerar un pH
aproximadameme la misma qlJe la de la membrana tilacoidal del c1oroplasto,
de 10 en su matriz. y porello requieren
eSla generada por el potencial de membrana resultante. En cualquier caso. tanlO
gencrarfuerzas prol6n-mOlrices sin
para las mitocondrias como para los c1oroplastos, el lugar calaIftico de la ATP que exisla polencial de membrana.
sintasa se encuenlra a un pH de aproximadamente 8 y se localjza en un gran
comparLimienlo del organulo (matriz 0 estroma) donde se incluyen enzimas so-
lubles. Consecuenlemente. es allf donde se produce todo el ATP del org<1nuJo
(Figura 14-53).
Aunque hay muchas similitudes entre las mitocondrias y los c1oroplastos. la
estructura de los cloroplastos hace que el estudio de sus procesos de transporte
de electrones y protones sea mas racil: a traves de la rotura de las membranas in-
terna y externa de un c1oroplasto. los discos tilacoidales aislados pueden able-
nerse intactos. Estos tilacoides se pareeen a las panfcuJas submilocondriales
que contienen una membrana en la que la cadena de transpone de elee1rones
tiene sus lugares de ulilizaci6n para el NADP', ADP, YfosfalO libremente accesi-

742 Capftulo 14: Conversl6n energetica: mitocondrias ycloroplastos

bles aI exterior. Pero los tilacoides aislados manlienen su eSlructura nativa iniac-
ta y son mucho m.is activos que las partfculas submitocondriales aisladas. Par
esta raz6n varios de los experimentos que en un principia demostraron el papel
central de los mecanismos quimiosm6ticos se realizaron con c1oroplastos y no
con mitOcondrias.

Como la membrana mitocondrial interna, la membrana interna

del cloroplasto contiene proteCnas transportadoras que facllitan
el intercambio de metabolitos con el citosol:'S7
Si los c1oroplastos se afslan de manera que se dejan intactas sus membranas in-
lernas, se puede demostrar que esta membrana dene una permeabilidad select i-
va, reflejando la presencia de protefnas Iransportadoras espedficas. Adem~s, la
mayor parte del g1iceraldehIdo 3-fosfato producido por la fijaci6n de CO 2 en el
estroma del c1oroplasto es transportado fuera del c1oroplaslo por un eficienle
sistema antiporte que intercambia azucares-fosfato de 3litomos de carbono por
fosfato inorgAnico.
Normalmente, el g1iceraldehfdo 3-fosfalo suministra al citosol una abun-
dante fuente de carbohidralos que es utilizada por la celula como punlo de
partida de otros muchos procesos de biosfntesis -incluyendo la producci6n de
sacarosa para su exponad6n. Pero su utilidad no termina aqui. Cuando el gli-
ceraldehJdo 3-fosfalo lIega al dlosol, es rapidamente Iransformado (mediante
parte de la via glucolftica) de nuevo en 3-fosfogHcerato, generando una mole-
cula de ATP y otra de NADH. (Una reacd6n de dos pasos en senlido inverso,
muy similar, que forma el gliceraldehfdo 3-fosfato en el cicio de fijacl6n del
carbono -vease la Figura 14-44.) Par consiguiente.la exponaci6n de gliceralde-
hfdo 3-fosfalo del c1oroplasto suministra aI resto de la celula. no s610 la princi-
pal Fuente de carbono fijado sino lambicn el pader reductor y el ATP necesa-
rios para el metabolismo fuera del c1oroplastO.

Los cloroplastos Uevan a cabo otros procesos biosinteticos

Ademas de la fotosfnlesis. el c1oroplaslo tambien realiza otros procesos biosinte-
ticos. Todos los acidos grasos de la celula y un numero determinado de amino-
acidos. por ejemplo. estan sintelizados por enzimas del estroma del c1oroplaslo.
En el c1oroplasto. el poder reduclor de los electrones activados por la luz impulsa
la reducci6n de los nitritos (NOil a amonfaco CNH:J; este amonfaco proporciona a
la planta el nitr6geno necesario para la sfntesis de aminoacidos y de nucle6tidos.
Por consiguiente, la imponancia melab6lica del c1oroplasto para las plantas y las
algas es mucho mJis amplia que su papel en el proceso de la fotosfntesis.

Resumen
Los cloroplastos y Ins bacteritufotosintiticas obtie,ren los electrones de aita ellergfa
por medio de f010sistemas que captumn los e.lectrones udtados crumdo la luz solar
n absorbida por las molkulas de cloroJlla. Los founistemas nUSn compualos por
un complejo antena unldo a un centro de lWU'Ci6n fotoqu{mico, qlle es predsamen""
te un complejo ordenado de prote{1UU y pigmentos en dOllde Ilene lugar La fotoqut-
mica de La fotos{ntesls. El mejor centro de reacci6n!otoqll{mica conocido es, con di-
ferenda, el de la bacteria ptlrpum fotosintitica, del que se conoce La estrllchlm
tridimensional completa. Mientras que estas bact.erlas s610 coutienell UII ,illico fo-
tosistema, en cloropliutos y cianobacterias existen dos ti,JOS de fotosistemas. Los
dos fotosistemas estdll normalmellte IIgados en serie y tra,ujierell los electrolles
desde el agua Ilasta el NADP' fomJalldo NADPH, COli La producci611 collcomitanle
de un gradiente electroqu{mico trammembrana; el ox(gello molecular (OJ se gelle-
ra como producto secundario.
En compartu:i6n con liu mitocondria.J, los cloroplastos tienen ,,"a membrana
adidonal (La membrana tilacoidal) y un espacio interno (el espacio tilacoidal). To-

Cloroplastos y (olos{nlesis 743

dos los procesos de transporte electron/co tiemm lugar en ILl membrana tilLlcoldal:
para prodllc/r ATP, el proMn es bombeado htu:ia el espat;/o tilacoidali ,m fluio In-
verso de protones a travis de una ATP s/"tasa prodUe el ATP en el estroma del clo-
roplasto. EsteATP se rlt/liza en conjwu;wf' con eI NADPII prod/u:itto enlLlfotosfnle-
sis para implllsar ,m gran ",imero de reaa:/ones biosinliticas en el estroma del
cloroplasto, incluyef'do ellmportante cicio de jijaci6n del carbono, que genera car-
bohidratos a partir de CO;r ]111I10 con otros productos del claroplaslo, esle carbohl-
drato se exporta ar citasol de la cilllla, donde -en forma de gliceraldel,fdo 3-fosfa-
to- propomalllm carbona orgdnko, ATP, y potIer reductor al retIa de In cilllla.

Evoluci6n de las cadenas de transporte de electrones 38

Mucho de 10 que se conoce sobre la estructura. funci6n y evoluci6n de las ct!!lu-
las y organismos puede relacionarse con sus necesidades energt!!ticas. Hemos
visto que los mecanismos fundamentales para utUizar energfa de fuentes Ian
dispares como la luz y la oxidaci6n de la glucosa son los mismos. Aparentemen-
te un mt!!todo efectivo para sintetizar ATP surgi6 en una evoluci6n temprana y
desde entonces ha sido conservado con 5610 pequeiias variaciones. iC6mo sur-
gieron los primeros componenles individuales cruciales lales como la ATP sin-
tasa. las bombas prot6nicas generadoras de poder reduclOf y los fotosistemas?
Las hip6tesis sobre acontecimientos que sucedieron en una escala temporal
evoluliva son diffciles de probar. Pero disponemos de pislas. lanto respecto a las
muy diferentes cadenas de transpone electr6nico primitivas que sobreviven ac-
tualmeme en algunas bacterias como respecto a evidencias geol6gicas en rela-
ci6n aI ambiente de la Tierra de hace miles de miUones de arias.

Probablemente las celuJas mas primitivas produdan ATP

mediante fermentaci6n 39
Como explicamos en el CapItulo I, se cree que las primeras ct!!lulas vivas apare-
cieroo haee mas de 3,5 x JO~ arlOS, cuando la Tierra no tenia mas de 109 anos.
Probablemente las vfas met'ab6licas mas prim.itivas que producfan ATP se pare-
dan a las actuales formas de fermentaci6n debido a la falta de oxfgeno en el am-
bieme y a la presencia de moleeulas organicas producidas geoqufmicamemc.
En el proceso de la fennentacl6n el ATP se produce mediante un proceso de
fosforilaci6n que utiliza la cnergfa Iiberada cuando una molt!!cula organica rica
en hidr6geno, tal como la glucosa, se oxida parcialmentc (vt!!ase Figura 2-14). AJ
no disponer de oxfgeno como aeeptor, los eleetrones que provienen de las mole-
culas organicas oxidadas ticnen que ser transferidos (vfa NADH 0 NADPH) a una
moleeula organica difcrcnte (0 a una parte diferente de la misma mOleCllla), que
consecuentemente se reduce. A1 final del proceso fermemativo. una (0 varias) de
las moleculas organicas prodllcidas se excretan aI medio como productos meta-
b6licos residuales; otros, lales como el piruvato, son retenidos por la ct!!lula para
la biosfntesis.
Los productos excretados son distintos en diferentes organismos, pero tien-
den a ser acidos organicos (compuestos carbonados con un grupo COOH). En
las ct!!luJas bacterianas los mas importantes son el acido lactico (que lambicn se
acumuJa en la glucolisis anaer6bica en los mamiferos) y"acidos como el f6rmico,
el act!!(ico, el propi6nico, el butfrico y el sucdnico. En la Figura 14-54 se i1ustran
dos vfas fermentalivas de las bacterias actuales.

La evoluci6n de la cadena de transporte electr6nico conservadora

de energfa capacit6 a las bacterias anaer6bicas para utilizar
compuestos org3nicos no fennentables como Fuente de energa40
Los procesos de fermentaci6n prirnitivos no 5610 habrfan generado el ATP sino
tambit!!n el poder reductor (en forma de NADH 0 de NADPH) necesarios para la

744 Capflulo 14 : Conversl6n energ~tica: m.itocondrias y cloroplastos

 (A) FERMENTAC~N QUE PROOUCE LA EXCRECION DE ACIDO LAcTICO Figura 14-54 Dos lipos de procesos
de fermentacl6n. Los produetos
~ finales se destaean en recuadros de
2~ 2NAO o _
color verde. En ambos easos se utiliz.an
dos moMeulas de NAO por cada
2~2NAOH -~1----2NAO ~ mol&:ula de gtucosa que sufre la
glueolisis y eslas son regeneradas
I 2H mediante la transferencia de iones
piruvato
piruvalO
JI----\'--- 2 a;;;::;::11
hidruro desde el NAOH. En (A) los
iones hidruro son transferidos hasla el
piruvato. produciendo dos moleculas
de aeido laetico que es excretado. En
(SI FERMENTAOON QUE PROOUCE lA EXCRECION DE AcIOO SUCdNJCO (8) los dos iones hidruros se
lransfieren sueesivamente desde dos
~ molOCulas de NAOH hasta compueslos
2~ 2NAD' ~ derivados del piruvalo, producicndo
acido succfnico. Par cada molula de
2aD-j2NADH - " ) - - - - " ) - 2NAD'~ acido 5uccfnko cxcretada, se guarda
una molkula de piruvalo (roja) para
H; A: procesos de bios{mesis en el imerior
eclular. Tanto en (A) como en (B) se ha

piruvatT Lfum.~,oL
de cxeretar un acido orgillico para
poder valver a simetizar NAD' y
pennilir que la g1uoolisis cominue en
Co, ausencia de oxfgcno.

biosfntesis esencial, y probablemente aJgunas de las principaJes vias melab6li-

cas evolucionaron mientras la fermenlaci6n era la unica forma de produccl6n
de energfa. Sin embargo, con el liempo, las aClividades melab6licas de esos or-
ganismos prpcariotas cambiaron el medio ambiente circunda.llle. forzando a los
organismos a desarrollar nuevas vfas bioqufrnicas. La acumulaci6n de proouctos
residuales de fermentaci6n, por ejemplo, pudo provocar la siguiente serie de
cambios:

Stadio 1. La excreci6n continua de acidos organkos disminuy6 el pH del me.

dio ambiente. favoreciendo la evoluci6n de protefnas que actuaban
como bombas lransmembrana de l-!' que bombeaban l-!' hacia el ex-
terior de la celula can el objetivo de protegerla de los efectos peligro-
sos de la acidificaci6n intracelular. Una de esas bombas pudo haber
utilizado la energfa procedente de la hidr6lisis del ATP y asf mismo
pudo haber side la antecesora de la ATP simasa actual.
Bsradio2. AI mismo ticmpo que los acidos organicos no fermentables se aCll-
mulaban en el media ambiente y favorecfan la evoluci6n de una
bomba de 11' consumidora de ATP. el apone de nutrientes fermen
tables de origen geoqufmico. que suministraba la encrgfa a las bom-
bas y a olros procesos celulares, fue dismjnuyendo. Ello favoreci6 a
las bacterias que podfan excrelar H' sin hidrolizar AT? 10 que les
permilfa conscrvar el ATP para otras aClividades celulares. De este
tipo de presiones seleclivas pudjeron haber surgido las primeras
protefnas unidas a membrana que utilizaron el transporle de elec
trones enlre moleculas de difereme potencial redox como fueme de
energfa para transponar H' a traves de la membrana plasm<'ilica. AI
gunas de esas protefnas debieron encontrar sus dadores y aceptores
de eJectrones entre los <'icidos organicos no fermenrables que acu-
mulaban. Muchas de esas proteinas transponadoras de eleclrones
se encuentran en las bacterias actuales: por ejemplo. algunas bacte-
rias que creceo en <'icido f6rmico bombean Ho utilizando una peque
fia cantidad de energfa redox derivada de la transferencia de electro-

Evolucl6n de las cadenas de lranspone de electrones 745

 Figura 1455 LaoxJdacl6ndelacido
f6rmJco de a1gunas bacterlas
gr.dientl
elec:troqu(mleo acluales. En tales bacterias
deprotonn anaer6bicas, incluyendo . coli, la
oxidaci6n de ll.cido f6nnico estll.
mediada por una cadena de transporte
de eleclrones conservadora de energra,
de la membrana celular. Tal como se
indica en la figura, los reactivos de eSle
proccso son acido f6rmico y fumaralo
211' + y los produclos, succinato y COl'
N61ese que los H' segeneran fuera de
fumarlto suocinll:o la Iula y se utilizan denrro de la
cE:lula.lo cual equivale a bombear H'
hacia el exterior celular. Asi pues, este
sistema de lranspone de electrones
ligado a membrana puede generar un
nes desde ellicido f6nnico al fumarato (Figura 14-55). Dlf3S lienen gradienle electroqufmico de prolones
a lraves de la membrana. EI potencial
componentes transponadores de elecuones similares dedicados so
redox del par ll.cido f6nnico-C0 2 es de
lameme a la oxidaci6n y reducci6n de substratos inorglinicos (vease -420 mV, mientras queel del par
Figura 1457, porejemplo). fumarato-succinato es de +30 mY.
Estadio3. A la larga, algunas bacterias desarrollaron sistemas de Iransporte
electr6nico que bombeaban H+, que fueron suficientemente eficien
les para oblener mas energia redox de la que necesilaban para man-
tener su pH interno. Ahara bien, las bacterias que disponfan de los
dos tipos de bombas de H+ presentaban una ventaja. En esas celulas
un gran gradicnte eleclroqufmico de protones generado por un ex-
cesivo bomboo de H+ permitfa el relorno de los protones a la celuJa a
traves de bombas de H+ impulsadas por ATP, haciendolas actuar at
reves, ya que funcionaban como ATP sintasas produciendo ATP. De-
bido a que estas bacterias requerian cada vez menos aporte de nu-
Irienles fermentables, proliferaron a expensas de sus vecinos.
P,
En la Figura 14-56 se resumen estos Ires eSladios hipotclicos en la evoluci6n de
los mecanismos de la fosforilaci6n oxidativa. ESTAOIO 1

Las bacterias rotosinteticas, swninistrando una fuente

inagotable de poder reductof, superaron el mayor
obstaculo de la evoluci6n de las celulas-41
Las et'apas evolut'ivas que hemos mencionado habrfan resueho cl problema de
mantencr un pH intracelular neutro y una fuente abundantc de cnergfa, pero
habrfan dejado sin soluci6n olro problema tambien muy grave. La disminuci6n
de la cantidad de nutrientes orglinicos fermentables significaba que se debra en
contrar una fuente de carbona alternativa, para producir los azucares que se uti- ESTAOIO 2

Iiz.aban como precursores de otras mllchas molecuJas de la celula. EI di6xido de

carbono de la atm6sfera constiluia una abundante fuente potencial de carbona.
Sin embargo, 1a conversi6n de di6xido de carbono en una molccula org:inica,
como por ejemplo un carbohjdralo, requiere que el di6xido de carbono fijado
sea reducido por un fuene dador electr6nico, como el NADH a el NADPH, capaz
de suministrar los dos electrones necesarios para generar una unidad de (CH 20)
.-
a panir de cada CO2 (vease Figura 14-44). En las primcras etapas de la evoluci6n
celular debieron abundar agentes reductores fuenes como eslos, procedentes de
los procesos de fennentaci6n. Pero a medida que el apone de nUlrientes fer-
ESTAOIO J
mentables disminufa, y empez6 a aClUar una ATP sintasa unida a membrana
produciendo la mayor parte del ATP de las celuJas, tambicn debi6 empez.ar a Figura 1456 Evolucl6n de los
disminuir el apone abundante de NADH y de OlTOS agentes reductores. Por clio, mecanlsmos de osforiJad6n
result6 imprescindible que las celuJas desarrollaran un nuevo sistema de gene- oxJdatlvL se muestra una posible
rar una fuenle de poder reduetor. secuencia.

746 Capftulo 14: Convcrsi6n energe:tica: mitocondrlas ycloroplaslos

 podllr redOClor form.oo
&qui debldo 1IIIujo In.....-o
deeleclronellmpul..do
pol'" 'II grediente de H'
, H'
gradienle de H' lormedo por 'II bombeo
de H' hllCie el eXlerior de Ie dlule
durlnte II trlnslerarM:ia de electron..
Figura 14-57 A1gunas de las vias del
transporte de electrones de las
bacterlas actuaJes. Estas vfas generan
todo el ATP y el poder reductor celular
a panir de 1a oxidaci6n de moltkulas
inorg<tnicas tales como hierro, amonio,
nitritos y compuestos de azufre. Tal
como se indica, a1gunas especies
pueden crecer de forma anaer6bica
utilizando nitratos como aceplor final

-
de electrones en lugar de oxlgeno. La

........ .-...... mayorfa de estas baclerias utiJizan el

ciclo de (jjaci6n del carbona y
sintelizan sus moltkulas organicas a
partir de di6xido de carbono. EJ flujo
de electrones haec que se bombeen
protones hacia el exterior de la d!lula,
yeJ gradiente de protones resuhanle
Probablemente, los principales dadores disponibles de electrones fueron los dirige la producci6n de ATP mediante
acidos organicos producidos por el metabolismo anaer6bico de los carbohidra- una ATP sintasa (no moslrada aquf).
tos, a1gunas molecuJas inorganicas como el sulfuro de hidr6geno (HzS) gencradas Adem<ts, el NADPH necesario para la
geoquImicamente, y el agua. Sin embargo, el poder reductor de estas moleculas fijaci6n del carbona se produce
resulla demasiado debil para poder ser utilizado en la fijaci6n del di6xido de car- mediante un flujo inverso de
bono. Probablemente, la utilizaci6n de un gradiente electroqu{mico de electro- electrones que es lambit'!n impulsa.do
nes a {raves de la membrana plasmatica para impulsar un flujo inverso de elcc- por el gradiente de H', como se indica..
[fones, genero un suminiSlIO temprano de dadores fuertes de electrones. Este
proceso requiri6 la evoluci6n de complejos enzimaticos unidos a membrana se-
mejantes a la NADH deshidrogenasa; mecanismos de esle lipo sobreviven lOOa-
via en el melabolismo anaer6bico de a1gunas bacterias actuales (Figura 14-57).
EI principal avance en el metabolismo energetico fue, sin embargo, el desarrollo
de centros de reacci6n fOloqu{micos que pueden utilizar energfa solar para pro-
ducir dirCClamente moleeulas como el NADH. Se cree que eslO sucedi6 haee
mas de 3 x IO~ af'lOs en los organismos ancestrales de las baClerias verdes del
azufre. Actualmente. las baclerias verdes del azufre utilizan energfa luminosa
para transferir atomos de hidr6geno (como un electr6n mas un prot6n) desde cl
HzS al NADPH; de esla (orma, se crea el fuerte poder reduclor necesario para la
fijaci6n de carballO (Figura 14-58). Como los electrones eliminados del HzS se
haUan a un pOlencial redox mas negativo que los del H20 (-230 mY eomparados
a +820 mY del H20), un cuanto de luz absorbida par el unico (o(Qsistema de esas
bacterias es suficienle para eonseguir un potencial redox suficientemente alto
para generar NADPH a lraves de una cadena de transporte de electrones fotosin-
tetica relativamente sencilla.

Figura 14-58 l-lujogeneraJde

electrones en una fonna
"'01'_
,g -- ~\
relatlvamente primitlva de
fot05lntesls observada en bacterlas
verdes del azufre actuaJes. EJ
fotosistema de una bacteria verde se

~ -300 H' ~N~'l\1lI parece al fotosistema I de las plantas y
de las cianobacterias en que utiliza
series de cenlros de hierro-azufre
~ como aceplores primarios de
~ electrones, los cuales ceden finalmente
sus electrones de alta energia a la

r--a
-200
fe"odoxina (Fd).
I~
S. 2 H'

direcci6n dill f1ujo eM fitelronee

Evo1ucl6n de las cadenas de lranspone de electrones 747
Las cadenas de transporte electr6nico de los complejos
fotosinteticos de las cianobacterias produjeron oxfgeno
atmosferico y permitieron nuevas rormas de vida 4z
Parece ser que el siguiente paso que se produjo con el desarrollo de las cianobacle-
rias hace unos 3 x 1()9 anos consisli6 en la evoluci6n de organ.ismos capaees de uli-
lizar agua como fuente de eleclrones para reducir el CO 2, EsIO permiti6 la evolu-
ci6n de una enzima h..idrolizadora de la moltkula del agua y lambien requiri6 un
segundo fOlosislema que ac(Uara en serie con el primero haciendo de puente por
encima de la enorme diferencia de polencial redox exislente entre el H20 y el
NADPH. las homologfas estructurales que existen entre fotosistemas actuales su-
gieren que este cambio implic6 la cooperaci6n de un fotosistema derivado de las
bacterias verdes (folosistema I) con un fotosislema derivado de las baclerias pur-
puras (folosislema 11). Las consecuencias biol6gicas de este paso evolutivo se ma-
nifeslaron haec mucho liempo. AI principio, habra organismos cuyas demandas
quimicas a su medio ambienle eran mfnimas, por 10 que se extendian yevolucio-
naban por vias que las bacterias fotosinteticas primitivas, que necesitaban HzS 0
acidos organicos como fuentes de electrones, no podian seguir. Consec;uememen-
Ie se acumulaban grandes ca.nlidades de maleriales organicos reducidos. sintetiza-
dos biol6gicamente. Ademas, el oxfgeno por primera vez entr6 en la atm6sfera.
Figura 14-59 Relacl6n entre las
EI oxigeno es altamente t6xico porque las reacciones de oxidaci6n que cala-
variaciones de los niveles
liza pueden alterar aI azar mollXulas biol6gicas. Por ejemplo, muchas baclerias
atmosf&icos de oxfgeno y aJgunos de
anaer6bicas aClUales mucren rapidameme cuando son expueslas al aire. Por 10 los prlnclpaJes esladios que se
lanto, los organismos de la Tierra primit.iva tuvieron que desarrollar mecanis- debleron producir durante la
mos de protecci6n contra el incremento de los niveles de 02 en el ambienle. Los evolucl6n de los organismos vivos
recien lIegados evolutivamenlc, como nOSOlros mismos, presentan numerosos sobre laTierra. Tal como se indica en
mecanismos de desloxilicaci6n que protegen las enzimas de los efectos adversos la figura, existcn evidendas geol6gicas
del oxfgeno. que sugieren que hubo mas de mil
EI incremento de los niveles del oxfgeno atmosferico fue inicialmente muy miilones de anos de inlervalo entre la
lento y permiti6 una evoluci6n gradual de medidas protectoras. Los mares pri- aparid6n de las danobaclerias (las
mit.ivos tenian grandes canLidades de hjerro ferroso (Fe[lIlJ, y casi todo el oxige- cualcs, segUn se cree, fueron los
no producido por las bacterias fotosinteticas primitivas fue utilizado en transfor- primeros organismos que liberaron
mar el Fe(ll) en Fe(III). Esta conversi6n caus6 la precipitaci6n de enormes oxfgeno) y el momento en que el
oxfgeno se empezO a acumular en las
cantidades de 6xidos ferricos. Los exlensos aeumulos de hierro, que nacieron
atmosfera en grandes cantidades. Este
hace aproximadamentc 2,7 x 10~ anos, permiten dalar el incremento evolulivo retraso fuc debido prineipalmente a
de las cianobaeterias. Haec aproximadamente 2 x 1O~ anos, el sllministro de hie- las grandes cantidades de hierro
rro ferroso se agot6, y ces6 In deposici6n de precipitaciones de hierro. Las evi- fcrroso disucho en los oceanos. que
dencias gcol6gieas sllgieren que enlonees empezaron a aumcnlar los niveles de reaccion6 con el oxfgeno liberado
oxfgeno en la atm6sfera, aleanzando los niveles actuales haec entre 0,5 y 1,5 X formalldo cnorrnes depOsitos de
109 anos (Figura 14-59). oxidos de hierro.

20

NIVELES DE
OX(GENOEN
Iniclo do un rtipldo
LA ATMOSfERA
,cumulo de O:l...!agOtlml,nIO
1%' 10 (lilt Fr' de lot ~l'IO'l

prj"..,... !Nnw y
M\imalet; m... Iticel... I,.es

748 Caprtulo 14: Conversi6n energ~tica: mitocondrias ycioropJastos

.
 EUCARIOTAS

PROCARIOTAS

E.coJi rilobllcter,a

ATMOSFERA
_
~O~X~'D~A~N~T~E~_{==~~
ATMOSFERA
....,''';''''~,.;,;O,,'_....I t.,.""",...d~
- ...
REOUCTORA

lotoslntesis H2S

batteries
fermenlador81
enceslrales

La disponibilidad de oxfgeno hizo posible el desarrollo de bacterias que de- Figura 14-60 Arbol flIogenetico de Is
pendfan del metabolismo aer6bico para producir ATP. Como hemos explicado probable evolucl6n de las
anteriormente, estos organismos pudieron utilizar la gran cantidad de energfa Ii- mltocondrlas y los doroplastos y de
berada en la degradaci6n de carbohidratos y de otras moleculas organicas redLl- sus ancestros bacterlanos. Parece que
cidas hasta CO 2 y H20. Los componentes de los complejos de transporte electr6- la respiraci6n de oXfgeno comenz6 su
nico preexistentes fueron modificados, generandose ulia citocromo oxidasa, de desarrollo hace 2 x IO~ anos: tal como
se indica, parece ser que evolucion6
forma que los electrones obtenidos a partir de subsuatos organicos e inorg{mi-
independientemente en las Ifneas
cos pudieron ser transportados hasta el 02' como aceptor final de electrones. verde. !)urpura yazul-verdosas
Muchas bacterias pt.'"lrpura fOlOsinteticas actuales pueden alternar enlre la foto- (cianobacterias) de bacterias
sfntesis y la respiraci6n, dependiendo de la disponibilidad de luz y de oxfgeno, fotosinleticas. Se cree que una bacleria
mediante sorprendentes reorganizaciones secundarias en sus cadenas de trans- purpura aer6bica que debi6 de perder
parle de electrones. su capacidad para realizar fotosfntesis:
Como resultado de la fotosfntesis se acumularon materiales organicos en la dio lugar a las mitocondrias, mientras
Tierra, 10 que provoc6 que a1gunas bacterias fotosinreticas (incluyendo las pre- que algunas bacterias azul-verdosas
cursoras de E. cofl) perdieran su capacidad de sobrevivir s610 de la energfa de la diferentes dieron lugar a los
luz y se volvieran ellleramente dependientes de la respiraci6n. Se'cree que las cJoroplastos. Analisis det'alJados de
primeras mitocondrias surgieron hace 1,5 x 1O~ ai'ios, cuando eslas bacterias de- secuencias de nucle6tidos sugieren
pendienres de la respiraci6n se transformaron en endosimbiontes de celulas pri- que las mitocondrias surgieron de
bacterias parecidas a las rizobacterias,
mitivas eucariotas. Posteriormente, los descendientes de estas celulas eucariotas
las agrobacterias y a las rickettsias -Ires
aer6bicas primitivas endocitarOtl una bacteria fotosintetica que se convirti6 en
especies estrechamente relacionadas
el precursor de los c1oroplastos; no obstante, los c1oroplastos actuales proceden- que generan asociaciones lmimas con
tes de diferentes tipos de algas son suficieiHemente distintos entre sf como para las celulas eucariotas actuales.
sugerir que evolucionaron separadamente en diferentes linajes. La Figura 14-60
esboza algunas de estas vfas evolutivas.
La evoluci6n siempre es conservativa utilizando panes antiguas y constru-
yendo sobre elias nuevas procesos. Por clio, probablemente todavia sobreviven,

Evoluci6n de las cadenas de transporte de electrones 749

 Figura 14-61 ComparaclcSn de los
tr'e$tlpos de cadenas transportadoras
de electtones, quese dlscuten en esle
ClIpCtuio. Las bacterias, los
c1oroplaSIOS y las milocondrias
COl1licnen un complejo enzim~lico
unido a membr.ma que es muy
semejanle a1 complejo b-c, de las
mitocondrias. Estos complejos caplan
elecuones del uansponador quinona
{designado como QJ y bombean H' a
trav6 de sus respectivas membranas.
Ademcis. en sislemas in ,duo
reconstituidos.los di(erel1les
complejos pueden SUbsliluirse uno
por olroy las secuencias de
aminolkidos de sus componentcs
proteicos indican que esl~n
rclacionados evolulivamente.

vo

aunque en fanna aherada, en los eucariotas superiores actuales paries de 13 ca-

dena de transpone electr6nlco de las baclerias anaer6bicas de haee m<1s de tres
a cuatra mil millones de aoos. Por ejemplo, CxiSlc una notable bomologia en
cuanto a estructura y funci6n entre un complejo enzim,Hico que bombea proto-
nes en el segmento central de la cadena respiraloria mitocondrial (el complejo
b-c l ) y los segmentos correspondienlcs de las cadenas de transporte clectr6nico
de las bacterias y de los c1oroplaslos actuales (Figura 14-61).

Resumen
Al parecer, las dlulas primUivaJ [uern" organismos pareddos a las ooderias ac
tuaks, que vivum en un medio rico en molkulns organicas all4menCe reduddas, de
orlgen geoqu(mlco, en eltralUCurso de denlOS de millo1U!$ de aitos. Probahlemente,
esMs dlultu prlmirivas obtenlan In mnyor parte de s" ATP medltmte 10. transfor-
macron tk esuu molkulas organicas redudLlm en dlvemn acido.s organicos, que
eran X:r"eUUlos como productos tk daho. All pue:s, esuu fennenttuiones acidifl-
ctlron el medio, to cuai pudo 1uJber sido 10. causa tk 10. eooiuci6n tk las prinU'rtlS
bombas tk 1/- unidas a membrana, que penniJieron mantener un pH neutro en el
interior tk 10. ciiula. Las propiedLules tl.e las bacterim actuales slIgieren que en ute
ambiente anaerobio aparederon una bomba tk no inrpulsada par el transparte
electronio y lIna bonrba de H- inrpldsada par ATP. La invers16n del sentido tki
funcionanriento de In bonrba tk H- inrpldsada por ATP Pluto pernritlr qllefllncio
nnse conro una ATP sintasa. Al desarrollo.rse cmknas de transparte electronio mas
efectivas. se pud6 utiliznr para generar ATP ILl energla liberadn por 1m reacciones

750 Cap(lulo 14 : Convcrsi6n encrg~llca: milocondrias y c1oroplaslos

redox efltre 1tI0lec.das j,rorgdllicas ylo La ellergia acumulada ell compuestos "0 fer
mefltables.
La proliferacl611 de btKterlas qu~ utilizaban moIeclllas organicas preformadas
conro jI,ente de carbono y (Ie potier redm:tor, no pudo llegar muy leJos, y(' que estas
moIeculas orgd,,'cas eran generadas con UIUJ gran lentitJUt par los procesos geoqu{.
mlcos. Por coluiglliente, el agotamiento de los numentes orgdllicos ferme"tables
condklotW probablemente La elJOluci611 de las bacterlas forosi"titicas, que podia"
"tllizar dl6xldo de carbono para prodmir carbohidralas. Combilratldo fragme"tos
de las cade,ra.s de tratlsporre electronlco deso.rrolladas COli anteriorldad, las bacte-
rias fotasintitlcas llegaron a desarrolLar un !oroslstema qllB utillzaba energfa lu-
minasa para generar el NADPH necestlrlo para LafiJaci6t1 del Mrbo"o. La posterior
aparld6n en las clanobaeterlas, de codenasfotosintiticas de trans,HJrte eiectronlco
nu1s romplejas, penniti6 que se pudiera IItiiizar el agua, en I!lgar de dadores de
electrones menos abundantes y que eran utilizados por otras bacterlas fotosillua-
cas, como dador de eiectrones para lafomr.aci6n del NADPH. De esUl forma, La vida
plldo proliferar en grandes dreas de la Tierra, par 10 q.U! se valvieron a acu"",lar
molkulas organicas rMlU:idas. Hace aproxinuuJamente 2 mil miliones de ai'los eE
oxlge"o liberado por La fotos(ntesls de las cianobacterlas empez6 a acum"larse ell
La atm6sfera. Cum&do tanto las molkllias orgtfnicas romo el axlgena llegaron ill ser
abundantes, las cnde,ra.s de tramparte electr6nico se adaptarotl a transportar elec-
trones desde el NAnH hasra el oxfgeno, y en muchas baeterlas se desarroll6 un me-
tabolisma aerobico ejkiente. En las mitocondrlas de los eucarlotas se presentan
emcramente estos mlsmos mecanismos aerObicos. y exisren considerables eviden-
das de qlU tanto las milocondrlas conro los cloroplastos elJOllu:ionarotJ a partir de
baeterias aerobicas quefllBran endocitadas porcilulns e"carlotas primitiuas.

Los genomas de las mitocondrias y de los c1oroplastos

Para poder seguir el ritmo de crecimiento y divisi6n celular, las c~luJas han de
generar nuevos orgc1nulos citoplasmc1ticos. Tambien han de reponer los orgc1nu-
los que son degradados como parte del proceso continuo de recambio de org:i-
nulos que se produce en las celulas no proUferativas. La biosintesis de orgc1nulos
supone la sfntesis ordenada de las prote(nas y de los Ifpidos necesarios, asf como
el transporte de cada componelHe al subcompartimiento del orgc1nulo adecua
do. En el Capitulo 12 explicc1bamos la transferencia de proteinas y Upidos hacia
el interior de las mitocondrias y de los cloroplastos desde cualquier sitio de la c~
lula. Aquf describimos las contribuciones que hacen estos org<inulos transfor-
madores de energfa a su propia biogenesis.

La biosfntesis de las mitocondrias y de los cloroplastos supone la

contribuci6n de dos sistemas genetlcos diferentes 43
Mientras que la mayorfa de las protefnas de las mitocondrias y de los cloroplas-
tos estc1n codificadas por el DNA nuclear y son importadas hacia el org<inulo
desde el citosol despues de haber side sintetizadas en los ribosomas citoOOlicos,
otras protefnas est<in codificadas por el DNA del propio org.mulo y son sintetiza
das sobre los ribosomas del interior del orgc1nulo. Parece que el trafico de protef-
nas entre el citoplasma y los orgc1nuJos es unidireccional, ya que no se conoce
ninguna protefna que sea exportada desde las mitocondrias 0 desde los c1oro-
plastos hacia el citosol.
Las contribuciones de ambos sistemas gemWcos a la fonnaci6n de las mito-
condrias y de los c1oroplastos estc1n estrechamente coordinadas en la c~lula.
Aunque 0010 durante un perfodo de tiempo breve, los orgc1nulos aislados en un
tubo de ensayo continuan produciendo DNA, RNA Y proleinas, 10 cual ha penni-
lido detenninar Quiles son las protefnas que est.m codificadas en el DNA del or-
gc1nuJo y cuc1les 10 estc1n en el DNA nuclear. Otra fonna de abordar este estudio
consiste en utilizar inhibidores especfficos sobre celulas intactas. La droga ciclo-

Los genomas de las mltocondrias y de los c1oroplaslOS 751

 Figura 14-62 Resumen de la
blosCntesls de las protefnas en las

NOClf~
mllOcondrlas y en los cloropluslos.
CITOSOl Cadajlecha roja indica ellugar de

~~N6L
acci6n de un inhibidor que es
DNA especffico para la sfntesis de protefnas.
geOOmiCOT RNA RNA en los organulos 0 en el citosol.

~'dJ protelna
prllCursoril
cicloheximida

MlioCONDRIA
o CLOROPLASTO

DNA del
org,nUlo. RNA T
tcridinss clor.nfenicol,
o alldio eritromlcln&
o tetracicllna

~
heximida, por ejemplo, inhibe la slntesis citos61ica de protefnas, pero no inhibe
la sfntesis proteica de los organulos. Por el contraria, varios antibi6ticos (COIllO
el c1oranfenicol, la tetraciclina y la eritromicina) inhiben la s(ntesis de prolcfnas
I
en las mitocondrias y en los cloroplasros. pero tienen poco cfceto sobre la sfnte-
sis de prolcfnas citos6lica (Figura 14-62). ES{Qs inhihidores se utilizan amplia-
mente en los estudios sabre la funci6n de estos organulos.

EI crecimiento y la divisi6n de los organulos mantiene eillumero

de mitocondrias y de cloroplastos en la celula44
Las mitocondrias y los cloroplastos no se sinletizan nunca de 1I0VO. 5iempre
surgen por crecimiento y divisi6n de c1oroplastos y mitocondrias ya existentes.
Las observaciones de celulas vivas indican que las mitocondrias no s610 se divi
den, sino que tambien se fusionan una con olra. Sin embargo, cada organulo ha
de duplicar su masa y luego dividirse por la mitad un promedio de una vez por
cada generaci6n celular. Estudios con el microscopio electr6nico sugieren que
la divisi6n de estos organulos empieza con la invaginaci6n de la membrana in-
terna, tal como ocune en la divisi6n celular de muchas bacterias (Figuras 1463
y 1464),10 cual imptica que se lrata de un proceso controlado y no de un aeon-
tecimiento causado por un estrangulamiento casual.
En la mayorfa de las celulas, los diferentes organulos lransformadores de ener
gfa se dividen durante la intetfase, en desfase con el proceso de divisi6n celular 0
con el de la divisi6n de los otros organulos. De forma anaJoga, la replicaci6n del
DNA de los organulos no se produce unicamente durante la rase 5, cuando se reali
za la replieaci6n del DNA nuclear, sino a 10 largo de todo el cicio celular. Parece que
las moleculas de DNA de los organulos individuales se seleccionan al azar para su Figura 14-63 Dlagrama de una
replicaci6n, de manera que durante un cicio celular detenninado algunas de eUas division mhocondrlal. La via
pueden replicarse mas de una vez y otras no Uegar a replicarse. De eualquier modo, mostrada aqu( ha sido postulada a
en condiciones constantes el proceso eSla regulado asegurando que e~ nl1mero to partir de fotograflas estaticas de
tal de moleculas de DNA se duplique en cada cicio celular, de ral manera que cada mitocondrias en divisi6n, como la de
tipo eelular mantiene Wla cantidad constanle de DNA de los organulos. la Figura 14-64.

752 Caphulo 14: Conversi6n energ~tica: mitocondrias yc1oroplastos

 Figura 14-65 Electronmlcrograffa de
una molecula de DNA mllocondrlal
animal durante el proceso de
repllcacl6n del DNA. EI gcnoma de
DNA circular se ha replicado
unicamente entre los dos pumos
scnalados con f1echas (llebras
amarillas). (Cortesia de David
Clayton.)

FIgura 14-64 E1eclronmlcrograffade

una mltocondria en d1visl6n de una
ct:lula heplbka. (Conesfa de Daniel S.
Friend.)

EI mimero de org~nulos que se presentan en cada celula puede estar regula-

do de acuerdo a las necesidades de la celula; por ejemplo, si un l1lusculo esque-
1t~lico en reposo se estimula repetidamente durante un periodo prolongado de
liempo, se observa un gran incremento de la canlidad 100ai de milocondrias (del
orden de 5 a to veces). Por otra parte, en circunslancias especiaJes. la divisi6n de
los organulos est~ controlada con precisi6n por la celulas: asf en algunas algas
que contienen un solo 0 unos cuantos c1oroplaslos, el organulo se divide juslo
antes de la citocinesis, en un plano que es identico aJ ruturo plano de la divisi6n.

Generalmente los genomas de los cloroplaslos y de las

mitocondrias son mol~culasde DNA circulares45
Las moleculas de DNA de los orgAnulos son relalivamenle pequenas y simples, y
excepto en los genomas mitocondriales de algunas algas y protozoos, son circu-

Tabla 142 Tamano de los genomas de los orglinulos*

Tamano
Tlpode DNA (en miles de pares de lIucle6tldos)
DNA de c1oroplastos
Plantas superiores 120200
Chlamydomonas (alga verde) 180
DNA de mltocondrlas
Animales Oncluyendo los gusanos plalelmintos,
los inseclos y los mamfferos) 16-19
Plantas supcriores 150-2500
Hongos
Scilizosaccllllromyces pombe (Ievaduras de fisi6n) 17
Aspergillus lIidulans 32
Neurospora cmssa 60
Saccharom}'CeS cerevisiae (Ievadura de gemaci6n) 78
Clilamydomollas (alga verde) 16 (molecula lineal)
PrOIOZOOS
Trypanosoma brncei 22
Paramecium 40 (molecuta lineal)

Estos genomas son mole:uJas de DNA circular a menos que se indique 10 conlrario.

Los genomas de las mllocondrlas y de los c1oroplastos 753

Tabla J 4-3 CanUdades relallvas de DNA de los organuJos de dlrerentes
dluJas y tcJidos
MolecuJ.as
de DNA
TeJldoo PO' Organulos
Organlsmo lIpo celuJar orgUiulo porceluJa
DNA mltocondrlal
Rata hfgado 5-10 1000
L.evadurao vegetativo 2-50 I-SO
Rana huevo 5-10 10'
DNA del c1oroplasto
ClIlnmydomollas vegetativo 80 I
Ma{z hojas 20-40 20-40

La gran variad6n del numero y lamafto de las mitocondrias por c6ula en las levaduras es de-
bida a la fusmn y fragmenlaci6n de milocondrias.

lares. EI genoma de los c1oroplaslOS (que es identico aI genoma de los otros plas-
tidios de la planta) tiene un tamai'io similar en todos los orgarnsmos examina-
dos. pero el genoma mitocondrial es mucho mayor en las plantas que en los anj-
males [Tabla 142).
Muchas mohkulas de DNA de los orgwulos tienen aproximadamente el
mismo tamafio que el DNA tfpico de los virus. En los mamiferos. por ejcmplo.
el genoma mitocondriaJ es un DNA circular de unos 16500 pares de bases (me-
nos de IO-S veres el tamano dcl genoma nuclear). En ani males tan diversos
como Drosophila y el erizo de mar, el genoma mitocondrial es aproximadamen-
te del mismo tamano (Figura 14-65). No obstante, las plantas tienen un gcnoma
mitocondrial circular que es entre 10 y 150 veces mas grande. dependiendo de
la planta. Los mas grandes de estos genomas son aproximadamente la mitad del
tamano de los genomas baclerianos tfpicos. que tambien son moleculas circula-
res de DNA.
Todas las milocondrias y los c1oroplastos contienen multiples copias de la
molecula de DNA del orglinulo rrabla 14-3). Normalmente. cstas mohkulas de
DNA estan distribuidas en varias grupos separados, sHuados en la matriz de la mi-
tocondria 0 en el estroma del cloroplasto, donde a1 parecer estan unidos a la mem-
brana interna. A pesar de que no se conace c6ma est<1 empaquetado este DNA,
es probable que la estructura del genoma se parezca m<1s a la de las bacterias
que a la de la cromatina eucariota. Por ejemplo, como en el caso de las bacterias,
en los c1oroplastos y en las mitocondrias no hay histonas.
En las celulas de mamffero el DNA mitocondrial constituye menos del 1%
del DNA celular total. Sin embargo. en otras celulas -como en las de las hojas de
las plantas superiores 0 en los grandes oocitos de los anfibios- los org<1nulos
transformadores de energfa pueden contener una proporci6n mucho mayor del
DNA total de la celula (vease Tabla 14-3) y. por consigujente. en ellos se produce
una mayor proporci6n de RNA y sfntesis proteica total.

Las mitocondrias y los cloroplastos contienen

sistemas geneticos completos.46
A pesar del reducido numero de protefnas codificadas en su genoma. las milo-
condrias y los plastidios lIevan a cabo replicaci6n de su DNA. lranscripci6n del
DNA y sfntesis proteica. Estos procesos se producen en la matriz de las milocon-
drias y en el estroma de los c1oroplastos. Aunque las protefnas que llevan a cabo
estos procesos geneticos son exclusivas del organulo, la mayorfa de elias est<1n
codificadas en el genoma nuclear. Este hecho es tanto mas sorprendeme por

754 CapftuJo 14: Convenl6n energEtica: mitocondrias y c1oroplastos

coanto que la maquinaria de sfntesis proteica de los orgAllulos se parece mas a
la de las bacterias que a la de los eucariotas. Esta similitud es particularmente
grande en el caso de los c1oroplastos:

I. Los ribosomas de los c1oroplastos son muy similares a los ribosomas de E.

coli, tanto respecto a su sensibilidad frente a diversos antibi6ticos (tales
como el c1oranfenicol, la estreptomicina, la eritromicina y la tetraciclina),
como respecto a su estructura. No 5610 son extremadamente parecidas las
secuencias de nucle6tidos de los RNA ribo56micos respecro a las de los clo
roplastos y de E. coli, sino que los ribosomas del cloroplasto son capaces de
utilizar los tRNA ribosomales para realjzar sfntesis proteica. En todos los
aspectos, los ribosomas de los c1oroplaslOs difieren de los que se hallan en
el citosol de la misma cclula de la planta.
2. En los c1oroplastos la s(ntesis proteica empieza con la N-fomlilmetionina,
al igual que en las bacterias, y no con la metionina como ocurre en el cito-
sol de las celulas eucariotas.
3. A diferencia del DNA nuclear, el DNA del c1oroplasto puede ser transcrito
par la enzima HNA polirnerasa de E. coli, produciendo rnolcculas de mRNA
del c1oroplasto, que pueden se traducidas de fonna cficiente por un siste
rna sintetizador de protefnas de E. coli.

Aunque los sistemas genelicos mitocondriales son menos similares a los de

las bacterias actuales de 10 que 10 son los sistemas geneticos de los c1oroplastos,
sus ribosomas son tambicn sensibles a los antibi6ticos antibacterianos y la sfn-
tesis proteica en mitocondrias tambien empieza can la N-fonnilmetionina.

EI genoma del c1oroplaslo de las plantas superiores

contiene aproximadamente 120 genes 4?
Los genomas de cloroplastos mejor estudiados son los de las plantas y de las al-
gas verdes, moleculas de DNA circular muy simjlares entre sf. Sc ha detenninado
la secuencia completa de nucle6tidos de los c1oroplastos del tabaco y de las he-
pdticas. Los resultados indican que est'as dos plantas superiores Icjanamcntc
emparemadas comienen en sus cloroplastos genes casi idcnticos. Ademas de
cuatro RNA ribos6micos, estos genomas codifican aproximadameme 20 protef-
nas ribosomales del c1oroplasto, determinadas subunidades de la RNA polime-
rasa del c1oroplasto, varias protcfnas que forman parte de los fotosistemas I y 11,
suhunidades de la ATP sintasa, porciones de complejos enzimaticos de la cade-
na de transporte de electrones, una de las dos suhunidades de la rihulosa bisfos-
fato carhoxiJasa y 30 moleculas de tUNA (Figura 14-66). Ademas, parece que las
secuencias de DNA presentes codHican al menos 40 protefnas cuyas funciones
son desconocidas. Parad6jicamellte, todas las proteinas conocidas codificadas
en el c1oroplasto fonnan parte de grandes complejos proteicos que tambien
contienen una 0 mds subunidades codificadas en el nuclco. Las posibles razones
de este hecho se discutiran mas adelante.
Las similitudes entre los genomas de los cloroplastos y de las bacterias son
notables. Las secuencias reguladoras basicas, como los promotores de la trans-
cripci6n y los terminadores, son practicamente identicas en los dos casas. Las
secuencias proteicas codificadas en c1oroplastos son claramente reconocibles
como bacterianas, y varias agrupaciones de genes con funciones relacionadas
(por ejemplo, los que codifican para protefnas ribosomales) est<1.n organizados
de la misma manera en los genomas de los cloroplastos, de E. coli y de las ciano
bacterias.
Son necesarios detalJados estudios comparacivos de un gran numero de se
cuencias nucleotfdicas hom610gas para trazar la vfa evolutiva desde las bacterias
hasta los cloroplastos, pero ya pueden esbozarse varias conclusiones. (l) Los clo-
roplastos de las plantas superiores evolucionaron a partir de bacterlas fotosinteti-
cas. (2) EI genoma del c1oroplasto se ha mantenido estable al.menos durante va

Los genomas de las mltocondrlas y de los c1oroplastos 755

 CLAVE:

genes tRNA
genes ds protefnas ribos6mices
genes del fotoslsteme I
o genes del fotosislema II
genes de Ie AlP sinlasa
genes del compleio ~f
genes de Ie RNA polimerese
genes que codiflcen el compleio
de Ie NADH deshidrogenase

longilud 10lel del genome_ Figura 14-66 Organlzad6n del

121024 pares de nucle6tldos genoma de los c1oroplastos de
heplillcas. 5e ha determinado la
secuencia completa de nucle6tidos. La
ribulosa blsfosfato organizaci6n del genoma del
carooxllase cloroplasto es muy similar en lodas las
plamas superiores, pem el tamafio
varia enlre especies, dependicndo de
la canlidad que haya presente en las
dos co!)ias de DNA que flanquea los
genes que codifican los RNA
ribos6micos 16$ y 235 de los
c1oroplaslos.

rios miles de millones de anos, el momento estimado en el que se produjo la di-

vergencia entre las hepalicas y el tabaco. (3) Muchos de los genes de la bacteria
original pueden ser identificados en el genoma nuclear, donde fueron transferi-
dos y mantcnidos de forma eSlable. En plantas superiores, por ejemplo, dos ter-
cios de las casi 60 protefnas rihosomales del c1oroplasto estan codificadas en el
nucleo celular, aunque los genes tienen un claro ancestro bacteriano, y los ribo-
somas del cloroplasto relienen todavfa sus propiedades bacterianas originales.

Los genomas mitocondriales presentan

varias caracterfsticas sorprendentes48
EI genoma del cloroplasto no fue el primer genoma de un organulo que fue com- Figura 14-67 Organlzacl6n del
pletamente secuenciado. EI tamafio relativamente pequeno del genoma mito- genoma mltocondrial humano. El
genoma contienc 2 genes rRNA, 22
condrial humano 10 convirti6 en un material anactivo para los genetistas mole-
genes tRNA y 13 secuencias que
culares equipados con las lecnicas recien desarrolladas de secuenciaci6n de codifican prolefnas. Tambien se han
DNA, yen 1981 se public6 la secuencia completa de sus 16 569 nucle6tidos. secuenciado completamente los DNA
Comparando esta secuencia con las de tRNA mitocondriales conocidas y con las de OIrOS genomas mitocondriales de
secu'encias parciales de aminoacidos disponibles de las protefnas codificadas algunos animales, ytienen los mismos
par el DNA mitocondrial, fue posible localizar todos los genes mitocondriales genes y la misma organizaci6n de
humanos en la moJecula circular de DNA (Figura 14-67). genes.

L
subunidades de Ie
AlP sinleSa

subunidedes de la cltocromo oxidase ----~

- - - -_ _-.."O"ubunidedes de Ie NAOH ::1. - regi6n que codifice prolelne subunidedes de Is NADH

deshldrogensse

(13 en lolel)
gen tRNA (22 en totel)

longitud lolal dei genome. 16 569 peres de beses

deshidrogenase

rRNA 16S rRNA 12S ori en re Ilcaci6n citocromo b

756 Capftulo 14: Conversi6n energetica: mitocondrias y c1oroplastos

Tabla 14-4 AJgunas dlfercnclas entre el c6dlgo genetlco "universal" y algunos
c6dlgos gcnt'!tlcos mltocondrialcs
- - - - -mltocondrlales
------ C6d~gos

Cod6n Plantas

UGA STOP
AUA lie
CUA Leu
AGA
AGG } kg kg

En eursiva yen color se seftalan los e6digos que difieren del e6digo unlversal",

Comparando los genomas del nudeo, de los doroplastos y de las bacterias

con el genoma milocondrial humano se pueden observar varios rasgos sorpren-
dentes. (I) A diferencia de otros genomas, casi todos los nude6tidos parecen
formar parte de secuencias que codifican, ya sea para protefnas 0 para molt~cu
las de rRNA 0 de tRNA. Dado que estas secuencias codificantes estAn practica-
mente una a continuaci6n de oua, queda muy poco espacio para las secuencias
de DNA reguJadoras. (2) Aunque en el citosol y en los c1oroplastos existen aI
menos 30 0 mAs mole;culas de tRNA djferemes que especifican aminoAcidos,
5610 se requieren 22 mol&:ulas de tRNA para la sfmesis proteica mitocondrial.
Las reglas normales de apareamiento cod6n-anticod6n estAn relajadas en las
mitocondrias, de modo que muchas moltkuJas de tRNA reconocen cualquicra
de los cuatro nucle6tidos de la tereera posici6n (f1uctuante 0 de balanceo), Esta
lectura de "2 de cada 3" permite que un tRNA se aparee con uno cualquiera de
los cuatro codones y pemlita la sfntesis proteica con menos mole;culas de tRNA.
(3) Quiz:is 10 mAs sorprendente aparezca aI comparar las secuencias ge;nicas mi-
tocondriales y las secuencias de aminoacidos de las protefnas correspondientes,
ya que se concluye que en las mitocondrias el c6digo gent!tico estA alterado, de
modo que 4 de los 64 codones tienen "signifieados" diferentes de los que tiellen
en otros gcnomas (Tabla 14-4).
La observaci6n de que el c6digo genetico es casi el mismo en todos los orga-
nismos proporciona fuerles evidencias de que todas la ct!lulas evolucionaron a
partir de un antcpasado comun, Entonces. tc6mo pueden explicarse las diferen-
cias en el c6digo gene;tico de las mitocondrias? Una indicaci6n procede del re-
ciente descubrimicJ1to de que el c6digo genetico mitocondrial es difcrente en
diferentes organismos. Asf UGA, que en todos las ce;luJas es un cod6n de term i-
naci6n, se lee como tript6fano en las mitocondrias de mamfferos, de hongos y de
protozoos. pero es una seflal de stop en las mitocondrias de las plantas. De ma-
nera similar, el cod6n AGG que normalmente codifica arginina, codifica parada
en las mitoeondrias de los mamfferos y codifica serina en Drosophila (ve;ase Ta-
bla 14-4). Esta variaci6n sugiere que en el c6digo gene;tico de las milocondrias
aparece una variaci6n aI azar. Seguramente. el extraordinariamente pequeno
numero de proteinas codificadas por el genoma mitocondrial haee que un cam
bio ocasional en el significado de un cod6n raro sea tolerable, nuenuas que un
cambio de este tipo en un gran genoma podria a1terar la funci6n de muchas pro-
teinas y por 10 tanto destruir la celula.

Las mitocondrias de animaJes contienen el sistema gen~tico

mlis simple de los conocidos49
Estudios comparativos entre las secuencias de DNA de diferentes organismos
revelan que la velocidad de substituci6n de nucle6tidos durante la evoJuci6n ha

Los genomas de las mltocondrias y de los c1oroplastos 757

 -
side 10 veces mayor en los genomas mitocondriales que en los nucleares, 10 cual
posiblemente se dcba a la reducida fidelidad de los sistema de rcplicaci6n y/o
reparaci6n en el DNA mitocondrial. Dado que en las mitocondrias de las c~llIlas
animaJes 5610 se han de replicar y expresar en forma de RNA y de prolcfna lInos
16500 nucledtidos de DNA aproximadamente. la lasa de errores par Il/lcloorido
copiado por la replicaci6n de DNA, manlcnido por la reparaci6n de DNA, trans-
erito por la RNA polimerasa, 0 Iraducido a prolefna por los ribosomas milocon.
driales. puede ser relativamcnte aha sin que se altere ninguno de los relaliva
mente pocos produclos g~nicos. Esto puede explicar por qu~ los mecanismos
que realizan estos procesos son relativamente simples comparados can los ulili-
zados can el mismo prop6sito en olras partes de la celula. Por ejemplo, aunque
no se ha probado adecuadamente, se puede esperar que la presencia de Ian s610
22 lipos de tRNA y el extraordinariamente pequeno tamano de los rRNA (inferior
ados lercios deltamano de los rRNA de E. coli) pueden reducir la fidelidad de la
sfntesis proleica en la milocondria.
La relalivamente elevada velocidad de la evoluci6n de los genes mitocon-
driales hace que las comparaciones entre las secuencias de DNA mitocondriales
sean especial mente tililes para estimar las fechas de sucesos evolulivos relaliva-
mente recientes. lales como las fases del desarrollo de los primates.

iPor qu~ los genomas mitocondriales en las plantas

son tan grandes?50
Los genomas milocondriales de las plantas son mucho mas grandes que los de
las c~luJas animales. y su contenido en DNA varia de fonna importanlc. oscilan-
do desde aproximadamente ISO 000 hasta aproximadamente 2,5 x 10' pares de
nucle6lidos. Sin embargo, al parecer estos genomas milocondriales de las plan-
tas codifican muy pocas prolefnas mas que los genomas milocondriales de ani-
males. La paradoja se complica con la observaci6n de que en una familia de
plantas, las cucurbilaceas, el tamaiJo de los genomas mitocondriales varia tanto
como siete veces. Ademas, el alga verde Chlamydomonas liene un genoma milO-
condriallineal de tan s610 16000 pares de nucle6tidos, el mismo lamano que el
presente en animaleS".
Aunque todavfa se dispone de poca informaci6n sobre las secuencias de las
moleculas de DNA mitocondriales de las plantas superiores, se han secuenciado
casi todos los 70 000 pares de nucle6tidos del gran genoma mitoeondrial de la Ie-
vadura Saccharomyces cerevjsjae, del que s610 lIna tercera parte aproximada-
mente codifica protefna. Estos hallazgos suscitan la posibilidad de que gran par-
le del DNA extra de las mitocondrias de levadura, y posiblemente lam bien de las
mitocondrias vegctales en general, sea un "DNA de desecho" de poea imporlan-
cia para el organismo.

Algunos genes de org(1nulos contienen intrones 51

EI procesamiento de los RNA precursores desempci'ia un papel importamc en
los dos sistemas miloeondriales eSludiados can mas delalJe -el humano y el de
levadura. En c~lulas humanas, las dos hebras del DNA mitocondrial son Irans-
critas a la misma velocidad a partir de una sola regi6n promotora en cada hebra,
producicndo dos moleculas diferellles de RNA gigantes, cada una de las euales
comiene una copia com piela de cada hebra del DNA. Por 10 lanto, la Iranscrip-
ci6n es complelamente siml!lrica. Los transcritos heehos sabre una hebra -lIa-
mada la 1Iebra pesada <1Iebra H, de "heavy") debido a su densidad en CsCI- son
proeesados completamente mediante la acci6n de nucleasas que los fragmen-
tan, produciendo las dos mol&:ulas de rRNA, la mayorfa de las mol&:ulas de
IRNA y unas 10 moleeulas de RNA que presentan poli-A. Por el contrario. el pro
cesamiemo del transcrito de la Ilebm ligera (liebra L. de ~light") produce s610
ocho moll!culas de tRNA y un pequeno RNA que contiene poli-A; aparentemen.
te, el 90 % reslante de este transcrito (que es complemenlario de las secuencias

758 Capitulo 14 : Conversl6n energ~tica: mitocondrias y doroplaslos

codil1cantes sintetizadas en la olta hebra) cOllliene informacl6n no util, yes de
gradado. Los RNA que presentan poli-A son los mRNA mitocondriales: aunque
les falta la estructura de capucha ("cap~) en su extremo 5', tienen una cola de
poli-A en su extremo 3' que se af\ade despu~ de la transcripci6n mediante una
polimerasa de poli-A mitocondrial.
A diferencia de los genes humanos mitocondriales. algunos genes mitocon-
driales de plantas y de hongos (incluyendo las levadurasl presentan intTones.
que deben ser eliminados por maduraci6n por corte y empalme ("splicing") del
RNA. Tambien se presentan inlrones en unos 20 genes de c1oroplastos vegetales.
Muchos de los intrones de genes de org:1nulos consisten en secuencias de nu-
c1ootidos emparentadas que son capaces de madurar por sf solos fuera de los
transcritos de RNA. mediante catllisis mediada por RNA (vease p1g. 113). aun-
que generalmente estas reacclones de automaduraci6n (self-splicing) est1n faci-
litadas por protefnas. La presencia de intrones en los genes de org:1nulos es sor-
prendente. ya que en los genes de las bacterias, cuyos antepasados se cree que
dieron lugar a las mitocondrias y a los c1oroplastos de las plantas, no se hallan
intrones similares a estos.
En las levaduras es posible que un mismo gen mitocondrial tenga un intr6n
ell ulla cadena pero no en la otra. AI parecer. estos ~intrones opciollales" son ca-
paces de desplazarse, entrando 0 saliendo de los genomas. igual que los elemen-
tos transponibles. Par otro lado. en otros genes mitocondriales de levadura se
han haUado intrones en una posici6n correspondiente del genoma de las mito-
condrias de Aspergillus y de Neurospora, 10 que implica que eSlos intrones fue-
ron heredados a partir de un antepasado comun de estos tres hongos. Parece
probable que las secuencias de los intrones tengan un origen muy antiguo y que
se hayan perdido en muchas bacterias pero que se hayan conservado preferen-
cialmente en aqueUos genomas de orglnulos en los que la maduraci6n del RNA
este regulada. colaborando en el control de la expresi6n genica.

Los genes mitocondriales se pueden distingui,r de los genes

nucleares gracias a su herencia no mendeliana (citoplasmlitica)S2
La mayorfa de experimentos realizados sobre los mecanismos de la biogenesis
mitocondrial han sido realizados en Saccharomyces cerevisiae Oevadura del
pan). Existen diversas razones para ello. En primer lugar. eSlas levaduras tienen
la capacidad de sobrevivir excilisivamente de la glucolisis si se cultivan en pre- .
sencia de glucosa y, por 10 tanto, sin utilizar las mitocondrias, las cuales son
necesarias para la fosforilaci6n oxidativa. Este hecho pennite a est as celulas so-
brevivir con mutaciones de su DNA mitocondrial 0 nuclear que afectan dnisti~
camente la biogenesis mitocondrial; este tipo de Illutaciones resulta letal en
casi todos los eucariotas. En segundo lugar, las levaduras son eucariotas unice-
lulares simples. f:1ciles de cultivar y de caracterizar bioqufmicamente. Por tilti-
mo. normalmente estas celuJas de la levadura se reproducen asexualmente me-
diante gemaci6n (mitosis asimetrica). pero lam bien se pueden reprodudr
sexualmente. Duranle su reproducci6n sexual. dos celulas haploides se fusio-
nan fonnando un zigoto diploide que puede crecer mit6ticamente 0 bien divi-
dirse por meiosis produciendo de nuevo celulas haploides. La capacidad de
controlar en ellaboratorio la allemancia entre reproducci6n sexual y asexual fa-
dlita enormemente su amtJisis genetico. Dado que las mutaciones en los genes
mitocondriales no se heredan de acuerdo a las leyes mendelianas que gobier-
nan la herencia de los genes nucleares, los estudios geneticos revelan cuales de
los genes implicados en la fund6n mitocondrial se localizan en el nucleo y cu:1-
les en la milOcondria.
En la Figura 14-68 se illistra un ejemplo de herencla no mendeliana (cUo
plasmatJca) de los genes milocondriales en una celula haploide de levadura. En
este ejemplo, el gen mutante hace que la sfntesis de proteena sea resislente al
c1oranfenicol. Cuando una celula haploide resistente al c1oranfenicol se aparea
con con una celula de fcnotipo salvaje sensible al c1oranfenicol. cl zigoro diploi-

Los genomas de las mHocondrlas y de los c1oroplaslos 759

 mutllllte de levadura haploide levadura haploide Figura 14-68 OJrerel1cias entre los
resistente a eloranfenieol salvaje patrones de herencia de los genes
mltocondriales y nucleares en la
levadura. Para cada gen nuclear, dos
de las cuatro celulas que resultan de la
meiosis heredan el gen procedente de
una de las celulas haploides
parenterales originales, y las otras dos
celulas heredan el gen procedente de
la OWl c~lula (llerencia mendelialla).
levadura En cambio, y debido a la segregaci6n
diploide
mit6tica de las mitocondrias duranle
el crecimiento vegetativo (vease texto).
I SEGREGACI6N MITOTICA GRADUAL
DE LAS MITOCONDRIAS DURANTE
es posible que las cuatro celulas que
! MUCHOS CICLOS DEL CRECIMIENTO
VEGETATIVO
resultan de la meiosis heredell los
genes mitocondriales de una de las dos
I
. -
c~lulas haploides originales [llerencia

~'
cilOpiasmdlica 0 110 mendeiiana). En
este ejemplo, el gen mitocondrial

,.
/'1
+

MEIOSIS DURANTE t"-..
LA ESPORULACION .......
puede mutar haciendo que la sfntesis
de protefnas en la mitocondria sea
resistente al c1oranfcnicol, un
A f'.....DE LAS Cl!LULAS / \ I'-. inhibidor de la sintesis de protcfnas
/" I I "' DIPLOIDES \ .......... que actua espedficamente sobre los
organulos transformadores de encrgia
y sobre las bactcrias. Las celulas de
levadura que conlienen el gen mUlado
pueden ser detectadas por su
capacidad de crecimienlO en presencia
de c1oranfenicol sobre un subslfato.
como por ejemplo el gJicerol. que no se
utiliza en la glucolisis. Can la gJucoJisis
todo la progenie es resisteflte toda Ie progeflie es sensible
bloqueada, la milocondria funcional
al eioraflfenieoi 01 eloranfenieol ha de proporcionar ATPy, par tanto.
s610 crecerrtn las cl!lulas que
contengan mitocondrias resistentes al
c1oranfenicol.

de resultame contendra una mezcla de mitocondrias mutantes y salvajes. Pero

cuando sufra la mirosis para producir una celula hija diploide. las mitocondrias
mutantes y salvajes senin distribuidas al azar entre la celula madre y la hija, por
10 que cada celula hija es probable que herede mas mirocondrias mutantes 0
mas salvajes. En sucesivas divisiones mit6ticas, tanto las mitocondrias mutantes
como las salvajes seran gradualmente eliminadas de algunas celulas hijas me-
diante el mismo proceso aleatorio, dejando mitocondrias de un solo tipo. A par-
tir de entonces, toda la progenie de est a celula hija tendra mitocondrias geneti-
camente identicas. Con el tiempo, este proceso aleatorio, Hamado segregaci6n
mit6tica, produce una progenie diploide de celula5 de levadura con un 5610 lipo
de DNA mitocondrial. Cuando estas celulas diploides sufren meiosis y forman
cuano celulas haploides hijas, cada una de estas celulas hijas recibira los mis-
mos genes mitocondriales. Este tipo de herencia se denomina lIO mendeliana 0
citoplasmatica, en eontraposici6n con la hereneia mendeliana de los genes nu-
c1eares (vease Figura 14-68). Cuando esto oelUre, se demuestra que el gen en
euesti6n se localiza fuera de los eromosomas nucleares y por 10 tanto, esta situa-
do probablemente en las mitocondrias.

En muchos organismos, los genes de los organulos

se heredan de la madre53
Las eotlsecuencias de la herencia eitoplasmatica son mas profundas para algu-
nos organismos, incluido el hombre, que para las levaduras. En las levaduras,

760 Capftulo 14: Conversi6n energetica: mitocondrias y c1oroplastos

cuando dos c~lulas haploides se aparean. ambas son de igual lamano y por 10
lanlO contribuyen por igual a la dOlaci6n del DNA mitocondrial del zigolo (v~a
se Figura 14-68). Por consiguienle. en la levadura la herencia milocondrial es bi-
paremal: ambos progenitores contribuyen por igual al acervo de genes mitocon-
driales de la progenie (aunque. como hemos visto. t.ras varias generaciones de
crecimiento vegelativo, a menudo la progenie individual conliene milocondrias
procedentes de uno solo de los progenitores). En los ani males superiores. en
cambio. el 6vulo aporta siempre al zigoto mucho mjs cilOplasma que el esper-
malOwide -en algunos animales, el espermatozoide no aporta nada de citoplas-
ma al zigolo. Por consiguiente, cabe esperar que en los animales superiores. la
herencia mitocondrial sea uniparelllal (mas exactamente. materna). En algunos
animales de laboratorio se ha podido demostrar esta herellcia malema, utilizan-
do dos cepas que se diferencian en sU DNA mitocondrial. Cuando los animales
que presentan DNA milocondrial del tipo A se cruzan con animales dellipo n, la
progenie presenta s610 DNA milocondrial del tipo materno. De forma similar,
siguiendo en grandes familias la diSIribuci6n de secuencias varianles de DNA
mitocondrial. se ha demostrado que el DNA mitocondrial humano sc hereda
por via materna.
En aproximadamente dos terceras panes de las plan las superiores, los c10-
roplaslos patemos masculinos (contenidos en los granos de polen) no entran en
el zigoto. de tal manera que lanlO el DNA de los c1oroplaslos como el de las mi-
tocondrias se hercdan por \'fa materna. En otras plantas, los c1oroplaslos del po-
len emran en el zigolo, haciendo que la herencia de los c1oroplastos sea biparen-
tal. En estas plantas. la presencia de cloroplastos defeclivos son la causa de la
variegqci61l: mediante la segregaci6n mit6tica se puede producir una tllezcla de
c1oroplastos normal.es y defectuosos en un zigoto durante el crecimienlO y desa-
rrollo de la planla. produciendo por 10 tanto porciones allernantes verdes y
blancas en las hojas. Las porciones verdes contienen los c1oroplaslos normales,
mientras que las blancas contienen los c1oroplaslos defecluosos.

Los mutantes diminutos en levadura demuestran la extraordinaria

importancia del nucleo celular en la biog~nesis mitocondrial S4
Diversos estudios gen~ticos en levadura han resultado de una gran imporlancia
para el analisis de la biog~nesis milocondrial. Un ejemplo notabJe de eSIO 10
conslituyen los eSludios de mulanles de levadura que conlienen grandes dele-
ciones en su DNA milocondrial. de manera que toda la sfntesis proteica mito-
condrial se haHa anulada. Como era de esperar, estos murantes no pueden pro-
ducir mitocondrias funcionales en la respiraci6n. A algunos de estos mutallles
les faha todo el DNA mitocondrial. Dado que estos mutanles forman colonias
eXlraordinariamente pequeftas cuando crecen en un medio con baja call1idad
de glucosa, lodos los mutantes con estas mitocondrias defecruosas se denomi-
nan mlltatlles dimitlutos citoplasmaticos.
Los mutanles diminutos no pueden sintetizar protefnas en sus mitocondrias
y. por 10 tanto, no pueden tener mitocondrias que produzcan ATP. pero a pesar Figura 14-69 EJectf'Onmk:rograffas
de todo tienen milocondrias. Estas mitocondrias tienen una membrana externa de secc:lones uhrafinas de celulll5 de
normal y una membrana interna que presenra crestas pobremente desarrolladas levadura. Qlostrando la estructura de
(Figura 14-69) y contienen praclicamente toelas las prolefnas milocondriales mitocondrlas nonnaJes (A) yde
que estan codificadas por los genes nucleares importados desde el dlosol -in- mitocondrlas de un mutanle
c1uyendo las DNA y RNA polimerasas, loelas las enzimas del cicio del <'icido cftri- dimlnuto que care<::e de todos los
prodUC10S g~nicos codillcados par las
co y muchas prote(nas de la membrana inlerna- demostrando claramenle la ex-
mltocondrias (B). En los mulanles
traordinaria importancia del mlcleo en la biog~nesis mitocondrial. Los mutanles
diminuIOS lodos los producIOS gcnicos
diminutos lambi~n demuestran que lin organulo que se divide par fisi6n puede codificados en In mitocondria se
replicarse indefinidamente en el citoplasma de c~llllas ellcariotas proliferantes, pierden. y por ello, el organulo eSla
incluso en ausencia complera de su propio genoma. Muchos bi61ogos crecn que fonnado exclusivamente a partir de
normalmente los peroxisomas se replican de esta manera (v~ase Figura 12-29). protefnas codificadas en el m1c1eo de
Para el caso de los c1oroplasloS. los equivalenles m<'is cercanos a los muran- la celula. (Par conesfa de Barbara
tes diminutos mitocondriales de las levaduras son los murantes de algas unice- Stevens.)

Los genomas de las milocondrias yde los c1oroplastos 761

r

lulares como la Euglena. Celulas de este tipo, en las que no tiene lugar la sintesis
proteica en los c1oroplastos. presentan doroplastos y son perfeclamente viables
si se les proporcionan substratos oxidables. No obstante, si en las plantas se blo-
quea el desarrollo de los c1oroplaslos maduros, ya sea situando las plantas en la
oscuridad 0 bien debido a que el DNA del c1oroplasto es defectuoso 0 esta ausen-
Ie, las plantas mueren en cuanlO se agOlan sus reservas de alimento.

Las mitocondrias y los c1oroplastos contienen

protefnas espedficas de tejidoSS
En determinados tipos celulares las mitocondrias pueden tener funciones espe-
cializadas. EI cicio de la urea, por ejemplo, es la via melab6lica central de que
disponen los mamfferos para la degradad6n de los compuestos que contienen
nitr6geno. Estos productos son secretados por la orilla en forma de urea. Varios
pasos de este cicio estan catalizados. en la malriz mitocondrial, por enzimas co-
difieadas en el nl1c1eo. La sfntesis de urea s610 se realiza en algunos tejidos,
como el hfgado, y 5610 en estos tejidos se produce la sfntesi5 y eltransporte hasta
la miloeondria de estas enzimas. Ademas, los complejos enzimatieos respirato-
rios de la membrana mitocondrial interna de los mamfferos contienen varias sub-
unidades codificadas par el nucleo que son espedficas de lejido y que aI parecer
aetl1an como reguladoras del transporte electr6nico. Asi, algunos humanos que
padecen una delerminada enfcrmedad muscular genetica tienen una subunidad
defectuosa de la dtocromo oxidasa; dado que esta subunidad es especffica de la
celulas del muscuJo esqueletico, las celulas musculares de coraz6n fundonan
normalmeme. permjtiendo que los individuos sobrevivan. Tal como cabria es-
perar, tambien se encuentran diferencias especfficas de tejido en protefnas de
c1oroplastos codificadas por el nudeo celular.

Las mitocondrias irnportan la mayor parte de sus lfpidos

mjentras que los cloroplastos producen la mayor parte de ellos56
La biosfntesis de nuevas c1oToplastos y de milocondrias requiere Jipidos, ;icictos
nudeicos y protefnas. Los c1oroplastos tienden a producir los Ifpidos que necesi-
tan. En las hojas de 1a espill3ca, por ejemplo, tada la s[nlesis celular de ;icidos
grasos riene lugar en los c1oroplastos, mientras que su desaturaci6n tiene lugar
ell otTO lugar de la celula. Los grandes glucolfpidos del c1oroplasto tambien se
producen localmente.
L1S milocondrias, por el contra rio, importan la mayor parte de sus lfpidos.
En las c~lulas animales, los fosfolfpidos fosfatidilcolina y fosfatidilserina. se sin-
ICli7..an en cl rctfculo endoplasll1titico y [uego se transfieren a la membrana ex-
lerna de la mitocondria. Ademas de descarboxilar la fosfalidilserina importada
lransformandola en fosfalidilemnolamina, la principal reacci6n de la biosfntesis
de lfpidos catalizada por la mitocondria es la transfonnaci6n de los lfpidos im-
portados hasta cardioljpina (bisfosfatidilglicerol). La cardiolipina es un fosfolfpi-
do ~doble" que contiene cuatro colas de acidos grasos; se halla principalmente
en la membrana mitocondrial interna y constituye aproximadamente un 20% de
su contenido lipidico total.
En el Capftulo 12 ya se estudi6 en delalle la importame cuesli6n de c6mo
prOle(nas citos6licas especlficas son importadas a las mitocondrias y a los c10-
roplastos.

Probablemente. tanto las mitocondrias como los cloroplastos

han evolucionado a partir de bacterias endosimbi6ticas57
Como vimos en el Capftulo I, el canteter procariota de los sistemas geneticos de
los organulos celulares, especialmente notable en el caso de los c1oroplastos, su-
giere que las mitocondrias y los c1oroplastos evolucionaron a partir de bacterias
que fucron endodtadas haee mas de mil millones de arlOS. De acuerdo con la hi-

762 Capftulo 14 : Conversl6n energe:Uca: mHocondrias y c1oroplastos

 c61ula procariota Figura 14-70 Rutaevolutlvasugerlda
anaer6bica prim,ltiva sobre orlgen de la mltocondrla.

DNA~'I
Microsporidia y Giardia son dos
eucariotas unicelulares anaer6bicos
actuales (protozoos) que carecen de
j ~MACION DEL NUCLEO mitocondrias. Su secuencia de rRNA

[IJ
sugiere que existe una gran distancia

~~
evolutiva entre ellos y resto de los
eucariolas, por 10 que se ha postulado

::::::;~" ~!!/
que sus parientes ancestrales tambien
,",', ''',,',''",,,,,,,,1
son m,tocondnas
fueron anaer6bicos yparecidos a los
primeros eucariotas que incorporaron
los precursores de las mitocondrias.
UNA CELUlA-CE=U-'CAAIOT='=~A~'NC:'--'O~RPO=
RD UNA CELULA
PRQCAFUOTA AERCIUCA MEDIANTE ENDOCtTOSIS

c61ula eucariota
con un procariota
endosimbionte
aer6bico

c61ula eucariota
actual c61ula eUCllriotll
anaer6blCll actual

mitocondria nucleo

pOtesls endosimbi6dca, las celulas eucariotas aparecieron en forma de orgall.is-

mos anaer6bicos sin mitocondrias ni e1oroplastos, y luego establecieron lIna rela-
ci6n endosimbi6tica estable con un tipo de bacterias, utilizando su sistema de
fosforilaci6n oxidativa (Figura 14-70). EI proceso de endocitosis que condujo al
desarrollo de las mitocondrias se produjo cuando el oxfgeno apareci6 en la at-
m6sfera en cantidades substanciales, haee aproximadamente 1,5 x lOy aftos, an-
tes de que los animales y las plantas se separaran (vease Figura 14-59). AI parecer,
los e1oroplastos de las plantas y de las algas han derivado posteriormente a partir
de WI suceso endocftico que implie6 a una bacteria fOlOsintetica productora de
oxigeno. Para explicar los diferentes pigmentos y propiedades de los cloroplastos
que se encuentran en las aetuales plamas superiores y en las algas verdes, se asu-
me que por los menos tuvieron lugar tres sucesos separados de este tipo.
Dado que la mayorfa de los genes que codifican las protefnas actuales se ha-
lIan en el nDdeo celular, parece probable que durante la evolueiOn eucariota se
produjera una extensa transferencia de genes desde el organulo aI DNA del nD-
cleo. Esto explicarfa par que algunos de los genes del odeleo que codifican pro-
tefnas mitoeondriales se parecen a los genes bacterianos: por ejemplo, la secuen-
cia de aminoAcidos del extremo amino terminal de la enzima mitocondrial
super6xido disf1Illtasa de gallina se parece mucho mas al segmento correspon-
dienle de la misma enzima de una bacteria que a la super6xido dismutasa del d-
tosol de las mismas celulas ellcariotas. Mas evidencias de que este tipo de trans-
ferencias de DNA sucedieron durante la evoluti6n surge del descubrimiento de
algunas secuencias de DNA no codificames del DNA nuclear que parecen ser de
origen mitocondrial reciente; aparentemente se han integrado dentro del geno-
rna nuclear como ~ DNA de desecho".
lQUe tipo de bacteria dio lugar a las mitocondrias? Am'ilisis mas recientes de
secuencias de protefnas y nucle6tidos proporcionan la principal evidencia para

Los genomas de las mitocondrlas y de los cloroplastos 763

 DNA mitocondrlal Figura 14-71 Orfgcncsdelas
transcritos de RNA protc(nas y RNA mltocondrlales. Las
membrana mitocondrial membrana mitocondrial protefnas importadas del eitosol
interna eKterna desempenan una importante funei6n
en el siSlema genetieo de la
mitoeondria y eonstituyen la mayor
parte de las protefnas del organulo. La
mitoeondria s610 eontrlbuye a su
sistema genetieo con los mRNA, los
RNA polimerase rRNA y los tRNA. En este diagrama no
mitocondrial
se indican las protefnas adicionales
eodifieades por el mlcleo que regtdan
amino-__ -!-!,_---l la expresi6n de los genes
'cldM
mitoeondriales individuales a niveles
amlno6tl! tubunIdId JUburIiGId post-transeri peionales.
tfIllliA rlbaD'nIca IItaO'lioI

~
I ;,...--
..."'---
_... -
. . .. '- l)1i1oWldrle

.............
ON'

....
enlimas mltocondrialea de la
aminoacll-tRNA replicaci6n del DNA
,intlllas mitocondriale.

conftgurar el arbol evolutivo presentado previamente en la Figura 14-60. Parece

que las mitocondrias descicnden de un tipo particular de bacteria purpura foto-
sintetica que previamente perdi6 la capacidad de realizar fotosfntesis y que que-
d6 unicamente can una cadena respiratoria. Sin embargo, igual que para los
c1oroplaslOs, no esta claro si todas las mitocondrias se originaron a partir de un
s610 suceso endosimbi6tico 0 no. Por ejemplo, las milOcondrias de los proto-
zoos tienen rasgos procariotas distintivos, pero algunas de elias son suficiente-
mente diferentes de las mitocondrias de las plantas y de los animales como para
sugerir un origen diferente.

iPor que los cloroplastos y las mitocondrias tienen

sus propios sistemas geneticOS?58
~Por que las mitocondrias y los cloroplaslOs necesican sus propios sistemas ge-
neticos, si olros organulos, como los peroxisomas y los lisosomas, no los tienen?
La pregunta no es trivial, ya que mantener un sistema genetico diferente resulta
costoso: mas de 90 protefnas -incluyendo las proteinas ribos6micas, las amino-
acil-tRNA sintasas, las DNA y RNA polimcrasas, y las enzimas de procesamienro
y de modificaci6n del RNA- se han de codificar por genes nucleares, especial-
mente para este fin (Figura 14-71). Las secuencias de aminoacidos de la mayorfa
de las prote(nas de mitocondrias y c1oroplastos difieren de las secuencias de las
protefnas correspondientes del mlc1eo y del citosol y no existe ninguna raz6n

764 Caphulo 14 : Conversl6n energetica: mitocondrias y c1oroplastos

para pensar que estos orgtinulos tengan relativameme pocas protefnas en co-
mun can el resto de 101 c~lula. Esto significa que el n(ieleo debe suministrar como
mfnimo 90 genes para mantener el sistema gen~lico de cada organulo. La raz6n
de eSle arreglo Ian costoso no estti elara, y 101 esperanza de que el conocimielllo
de 101 secuencia de nuele6tidos del genoma de las milOcondrias y de los eloro-
plastos proporcione 101 respuesla definitiva, hOI resuhado fallida. No se nos ocu-
rren razones imperiosas por las que las protefnas de las milOcondrias tengan
que eSlar producidas en las propias mitocondrias y no puedan eslar sinlclizadas
en ci cilosol.
En cierlo momemo se sugiri6 que algunas protefnas lienen que estar sinteti-
zadas en el imerior del organuJo, ya que son demasiado hidwf6bicas para poder
lIegar desde cl cilosol hasta su lugar en 101 membrana mitocondrial. No obslante,
estudios mas recicmes haecn que esla explicaci6n sea inverosfmil. En muchos
casos, subunidades ineluso altamenle hidrof6bicas estan sintelizadas en el cito-
sol. Ademas, aunque las distinlas subunidades proteicas de los diferentes com-
plejos enzimtilicos mitocondriales eslan a1tamenle conservadas a 10 largo de la
evoluci6n, no esta conservado su lugar de sfntesis. La diversidad en la locaJiza-
ci6n de los genes que cOOifican subunidades de protefnas funcionalmente equi-
valentes en diferenles organismos es dificiI de explicar por cualquier hip6tesis
que postu!e una ventaja evolutiva espedfica de los sislemas gen~ticos de las mi-
locondrias 0 de los c1oroplastos actuales.
Quizas el sislema gen~tico de los organulos sea un catlej6n evolulivo sin sa-
lida. En I~nninos de 101 hip6lesis endosimbi6tica, eslO pOOrfa significar que los
procesos por los que los endosimbionles transfirieron 101 mayorfa de sus genes OIl
nUcleo se pararon antes de complctarse. Posleriores lransformaciones se han
padido descarlar, en el caso de las mitocondrias, por recientes alreraciones en el
c6digo gen~lico milocondrial que convirtieron los genes milocondriales rcma-
nentes en no funcionales si eran lransferidos at mlc1eo.

Resumen

Las mUocondrlas y los cloroplaslos cream y se dilliden mediatile prtH:#SOS coordbm-

dos que reqf4lenm lu colllribm:i611 de dos sislemas gelletlcos lliJerelltes -el del orgd-
lIulo y el dellllicleo cellliar. Ln mayorla de las prole(lIas de eslos orgatulios esllfn
codlficlUlas por el DNA ,,,,clear, esllf" slnletlzadas e" el cltosol y lllego sml IraIlS-
portllllas b,dillldllllimellle III orgallldo. S;'I embllrgo, algllllQS prole(JIlu tiel orga-
IIldo y IdgWIOS RNA esltfll cotliflCIUlos por el DNA del orgatlllio y SOil si1ltellztulos en
el proplo orgall/do. HI ge'lOlIlll milOCOtldriallmmatlO cOlllletle aproximadtlmenle
16500 IIIlcle6Hdos y codificll 2 moteculas de RNA ribos6mlco, 22 moleculas de RNA
de tral/.sJeretlcln y 13 Cwlellas polipeptfdicas diJeretltes. El getlomn de los clorollllU-
tos es llproxlnradame1lte 10 vcces nrayorqlle el de las mitocondrias y cotltietle Imos
120 genes. Sin embargo, ell mlltlmles en los qfle el getlOmll del orgdmdtJ no es JUII-
ciotlal, se I}/Iemur Jommr orgdtlulos pardalmente fimciollales y en catltldndes 'lOr-
males, 10 cllal demuestra la extraordinnrla lmportam:ia qlre tietle el ",icko ell lu
biogenesis de ambos orgamdos.
Los r#.bosomas de 'os cloroplastos se paret:en enomleme"te a los rlbosomas
bacterimlos, mie,,'ras qlre los rlbosomas milocondriales ","estran slmiIitluJes y tll-
Jeretlcias qlle dlficultml mucllo mtis el estudio de su orlgen. A'gunas sllll/W,uJes
proleiau sllgierell que las mUocolldrias y los cloroplastos se originnroll clumdo
111m dlula ellarlota primitiva esrableci6 u,m relaci6l1 endosimbl6tlca esiabIe COli
1111/1 bacleria: se cree que IUla bacleria putpflra dio lugar a las miltx:tmdrlas y qfre,
mas larde, "n parienle lie ""a cimtobacterla dio lugar a los cloroplaslos de las
plumas. Almq"e nmdlOS de los genes de eslas antiiJIUlS bacterlas lodnvla son Jim-
donnles para producir prole{nas del orgdnulo, mlllU)s de ellos lIan quedado inle-
grados ell el getloma mu;lear, dOIl~te cotJifican emlmas semejanles a las de las bac-
lerias, qm SOli siJlletlzndas en los rlbosomas del cilosol y luego fransportadns al
orgti",tlo.

los genomas de las mitocondrias y de los cloroplastos 765

Bibliograffa
General
Ernster, L., ed. Bioenergetics. New York: Elsevier, 1984.
Harold, F.M. The Vital Force: A Study of Bioenergetics. New
York: W.H. Freeman, 1986.
Lehninger, A.L: Nelson, D,L; Cox, M.M. Principios de Bioqui-
mica. Barcelona: Ediciones Omega, SA. Barcelona, 1993.
NichoJls, D.G. Bioenergetics: An Introduction to the Che
miasmatic Theory. New York: Academic Press, 1982.
Stryer. L. Biochemistry, 3rd ed., Chaps. 16, 17, and 22. New
York: W.H. Freeman, 1988.
Cltas
J. Be~eiter.Hahn, J. Behavior o~ mitochrondria inerhe fv-
mgceU.rnt. Rev. Cytol. 122.1-63, 1990.
Ernster, L.; Schatz, G. Mitochondria: a hisrorica revi .
j. Gel/Bioi. 91:227s-255s, 1981.
Fawcen, D.W. The Cell, 2nd ed., pp. 410-485. Philadel-
phia: Saunders, 1981.
Tzagoloff, A. Mitochondria. New York: Plenum Press,
1982.
2. DePierre, ).W.: Ernster, L. Enzyme topology of intracel-
lular membranes. AnflU. Rev. Biocllem. 46:201-262,
1977.
Krstic, R.v. Ultrastructure of the Mammalian Cell, pp.
28-57. New York: Springer-Verlag, 1979.
Pollak, JX; Sutton, R. The differentiation of animal mi-
tochondria during development. Trends Biochem. Sci.
5:23-27,1980.
Srere, P.A. The structure of the mitochondrial inner
membrane-matrix compartment. Trends. Bioel/em.
Sci. 7:375-378,1982.
3. Geddes, R. Glycogen: a metabolic viewpoint. Biosci.
Rep. 6:415-428, 1986.
McGilvery, RW. Biochemistry: A Functional Approach.
3rd ed. Philadelphia: Saunders, 1983.
Newsholme. E.A.; Start, C. Regulation in Metabolism.
New York: Wiley, 1973.
4. Baldwin, J.E.; Krebs, H. The evolution of metabolic cy-
cles.Nature291:381-382,1981.
Krebs, H.A. The history of the U'icarboxylic acid cycle.
Perspeet. Bioi. Med. 14:154-170, 1970.
5. Mitchell. P. Coupling of phosphorylation to electron
and hydrogen transfer by a chemi-osmotic type of
mechanisms. Nature 191 :144-148, 1961.
Racker, E. From Pasteur to Mitchell: a hundred years of
bioenergetics. Ped. Proc. 39:210-215, 1980.
6. Hatefi, Y. The mitochondrial electron transport and oxi-
dative phosphorylation system. Allllu. Rev. Bioellem.
54: I0 15-1 070. 1985.
7. Nicholls, D.G. Bioenergetics: An Introduction LO the Che-
miosmotic Theory, Chap. 3. New York: Academic Press,
1982.
Wood, W.B.; Wilson, J.H.; Benbow, R.M.; Hood, L.E. Bio-
chemistry: A Problems Approach, 2nd ed. Menlo
Park, CA: Benjamin-Cummings, 1981. (Ver proble-
mas, Caphulos 9, 12 Y14.)
B. Durand, R; Briand, Y.; Touraille, S.; Alziari, S. Molecular
approaches to phosphate transport in mitochondria.
Trends Biochem. Sci. 6:211-214, 1981.
766 Capitulo 14: Conversi6n energetica: mitocondrlas y c1oroplastos
Hinkle, P.C.; McCarty, RE. How cells make ATP. Sci.
Am. 238(3):104-123, 1978.
Klingenberg, M. The ADP, ATP shuttle of the mitochon-
drion. Trends Biochem. Sci. 4:249-252,1979.
LaNoue, K.F.; Schoolwerth, A.C. Metabolite transport in
mitochondria. AmlU. Rev. Biochem. 48:871-922, 1979.
9. Eisenberg, D.; CrOlhers, D. Physical Chemistry with Ap-
plications to the Life Sciences, Chaps. 4 and 5. Menlo
Park, CA: Benjamin-Cummings, 1979.
Kauzmann, W. Thennodynamics and Statistics: With Ap-
plications to Gases. New York: W.A. Benjamin, 1967.
10. Hinkle, P.C.; Kumar, M.A.; Resetar, A.; Harris, D.L. Me-
chanistic stoichiometry of mitochondrial oxidative
phosphorylation. Biochemistry 30:3576-3582, 1991.
II. Hatefi. Y. The mitochondrial electron transport and oxi-
dative phosphorylation system. Amlll. Rev. Biochem.
54:1015-1069,1985.
12. Racker, E. A New Look at Mechanisms in Bioenergetics.
New York: Academic Press, 1976. (Una explicaci6n
personal de los conceptos y la historia.)
13. Bianchet. M.; Ysern, x.; Hullihen, J.; Pedersen, P.L; Am-
zel, LM. Mitochondrial ATP synthase. Quaternary
structure of the F1 moiety at 3.6 A detennined by x-
ray diffraction analysis. j. BioL ellen!. 266:21197-
21201, 1991.
Futai, M.; Noumi, T.; Maeda, M. ATP synthase (H'-ATP-
ase): results by combined biochemical and molecular
biological approaches. Anllu. Rev. Biocllem. 58:111-
136,1989.
Pederson, P.L; CarafoH, E. Ion motive ATPases. II. En-
ergy coupling and work output. Trends Biocllem. Sci
12:186-189,1987.
Racker, E.; Stoeckenius, W. Reconstitution of purple
membrane vesicles catalyzing light-driven proton
uptake and adenosine triphosphate formation. j.
Bioi. C/lem. 249:662-663,1974.
14. Fillingame, R.H. The proton-translocating pumps of
oxidative phosphorylation. Allllu. Rev. Biocllem.
49:1079-1113,1980.
Malmstrom, B.G. The mechanism of proton transloca-
tion in respiration and photosynthesis. PEBS Leu.
250;9-21,1989.
15. Chance, B.: Williams. G.R A method for the localization
of sites for oxidative phosphorylalion. Nature 176:
250-254, 1955.
Dickerson, R.E. The structure and history of an ancielll
protein. Sci. Am. 226(4):58-72, 1972. (La conforma-
ci6n y evoluci6n del cilOcromo c.)
Keilin, D. The History of Cell Respiration and Cytochro-
meso Cambridge, UK: Cambridge University Press,
1966.
Spiro, T.G., ed. Iron-Sulfur Proteins. New York; Wiley-
lnterscience, 1982.
16. Capaldi, RA. Structure and function of cytochrome c
oxidase. Anna. Rev. Biocllem. 59:569-596,1990.
Casey, R.P. Membrane reconstitution of the energy-
conserving enzymes of oxidative phosphorylation.
Bioc/lim. Biopllys. Acta 768;319-347. 1984.
Hofuaus, G.; Weiss, H.; Leonard, K. Electron microsco-
pic analysis ofthe peripheral and membrane parts of
mitochondrial NADH dehydrogenase (complex I). f.
Mol. Bioi. 221:1027-1043, 1991.
 Weiss, H.: Linke, P.; Haiker, H.; Leonard, K. Structure
and function of the mitochondrial ubiquinol: cyto-
chrome c reductase and NADH: ubiquinone reducta-
se. Biochem. Soc. TrailS. 15:100-102, 1987.
17. Badcock:, G.T.: Wikstrom, M. Oxygen activation and the
conservation of energy in cell respiration_ Nalllre
356:301-308,1992.
18. Hackenbrock, e.R. lateral diffusion and electron trans
fer in the mitochodnrial Inner membrane. Trends
Biocllem. Sci. 6:151154, 1981.
19. Dutton, P.L; Wilson, D.F. Redox potemiomeuy in mito-
chondrial and photosynthetic bioenergetics. Bio-
cllim. Biophys. Acta 346:165-212, 1974.
Hamamoto, T.; Carrasco, N.; Matsushita, K.; Kabak,
H.R.; Montal, M. Direct measurement of the el&tro-
genic activity OfO-type~OCAorne oxidase from f.
coli reconstituted intO plan r lipid bilayers. Proc.
Nail. Acad. Sci. USA 82:2 0-2 3.1985.
Lehninger, A.L. Bioenergetits. 'he Molecular Basis of
Biological Energy Transformations, 2nd ed. Menlo
Park, CA: Benjamin-Cummings, 1971.
20. Henderson, R.; Baldwin. j.M.; Ceska. TA: Zem!in, F.:
Heckmann, E.: Downing, K.B. Model for the structure
of bacteriorhodopsin based on high-resolution elec-
tron cryo-microscopy. J. Mol. Bioi. 213:899-929, 1990.
Mathies, RAj Lin, S.W.; Ames, I.B.; Pollard, W.T. From
femtoseconds to biology: mechanism of bacteriorho-
dopsin's light-driven proton pump. Annu. Rev.
Biopllys. Biopllys. Chem. 20:491-518, 1991.
Prince, R.C. The proton pump of cytochrome oxidase.
Trends Biocllem. Sci_ 13: 159-160, 1968.
Trumpower, B.L The 'proton motive Q cycle. J. Bioi.
Che,n 265:11409-11412, 1990.
21. Hanstein, W.G. Uncoupling of oxidative phosphoryla-
tion. Tre"ds Biocllem. Sci. 1:65-67, 1976.
22. Brand, M.D.; Murphy, M.P. Control of electron nux
through the respiratory chain in mitochondria and
cells. BioI. Rell. (Amb. PIli/. Soc. 62:141-193, 1987.
Racker, EA New Look at Mechanisms in Bioenergetics.
New York: Academic Press, 1976.
23. Klingenberg, M. Mechanism and evolution of the un-
coupling protein of brown adipose tissue. Tre1lds
Biodlem. Sci. IS: 108-112, 1990.
Nicholls, D.G.: Rial, E. Brown fat mitochondria. Tre1lds
Biocllem. Sci. 9:489-491,1984.
24. Gottschalk, G. Bacterial Metabolism, 2nd ed. New York:
Springer-Verlag, 1986.
MacNab, R.M. The bacterial nagellar motor. Trends Bio-
diem. Sci. 9:185-189,1984.
Neidhardt, F.e., et al. eds. Eschericllia coli and Sa/mone-
fla rypllimurium; Cellular and Molecular Biology.
Washington, DC: American Society for Microbiology.
1987.
Skulachev, V.P. Sodium Bioenergetics. Treflds Biochem.
Sci. 9:483-485, 1984.
Thauer, R.: Jungermann, K.; Decker, K. Energy conser-
vation in chemotrophic anaerobic bacteria. Bacteriol.
Rev. 41:100180, 19n.
25. Bogorad, L. Chloroplasts. j. Cell Bioi. 91 :256s-270s, 1981.
(Una revisi6n hist6rica.)
Clayton, R.K. Photosynthesis: Physical Mechanisms and
Chemical Patterns. Cambridge, UK: Cambridge Uni-
versity Press, 1980. (Un tratamiento general excelente.)
Bibllograffa
I-Ialiwell, B. Chloroplast Metabolism-The Structure and
Function of Chloroplasts in Green Leaf Cells. Oxford,
UK: Clarendon Press. 1981.
Hoober. '.K. Chloroplasts. New York: Plenum Press, 1984.
26. Anderson. I.M. Photoregulation of the composition, func-
tion. and structure ofthytakoid membranes. Anflu. Rev.
Plalll PllysioL 37:93-136, 1986.
Gruissem. W. Chloroplast gene expression: how plants
turn their plastidson. CeIl56:161-170, 1989.
Thomson, W.W.; Whatley, I.M. Development of non-gre-
en plastids.AmlU_ Ret'. Plam PhysioL 31:375394,1980.
27. Cramer, WA; Widger, W.R.: Herrmann. R.G.; Trebst, A.
Topography and function of thytakoid membrane
proteins. Trends Bioclzem. Sci. 10:125-129, 1985.
Miller, K.R. The photosynthetic membrane. Sci. Am.
241(4):102-113,1979.
28. Akazawa, T.: Takabe, T.: Kobayashi, 1-1. Molecular evolu-
tion of ribulose-I ,5-bisphosphate carboxylase/oxyge
nase (RuBisCO). Trends Bioclzem. Sci. 9:380-383, 1984.
Lorimer, G.H. The carboxylation and oxygenation of ri-
bulose-I,5-bisphosphate: the primary events in pho-
tosynthesis and photorespiratlon. AmlU. Rev. Plailt.
Pilysiol. 32:349-383. \981.
Lundqvist, T.: Schneider, G. Crystal structure of activa-
ted ribulose-I ,5-biphosphale carboxylase complexed
with its substrate, ribulose-1.5-biphosphate. j. Bioi.
Cizern. 266:12604-12611, 1991.
29. Bassham, JA The path of carbon in photosynthesis. Sci.
Am_ 206(6):68100,1962.
Preiss, I. Starch, sucrose biosynthesis and the partition of
carbon in plants are regulated by orthophosphate and
triose-phosphates. Trellds Biochern. Sci. 9:24-27, 1984.
30. Bjorkman, 0.: Berry, J. High-efficiency photosynthesis.
Sci. Am. 229(4):80-93, 1973. (C~ plants.)
Edwards, G.; Walker, D. ct, C4 Mechanisms, and Celular
and Environmental Regulation of Photosynthesis.
Berkeley: University ofCaJifornia Press, 1983.
Heber. U.; Krause, G.H. What is the physiological role of
photOrespiration? Trends Siocllem. Sci. 5:32-34. 1980.
Langdale, JA: Nelson, T. Spatial regulation of photo-
synthetic development in C~ plants. Trends Genet.
7:191-196,1991.
31. Clayton, R.K. Photosynthesis: Physical Mechanisms and
Chemical Patterns. Cambridge, UK: Cambridge Uni-
versity Press, 1980.
Parson, W.W. Photosynthesis and other reactions invol
ving light. In Biochemistry (G. Zubay, cd.) 2nd ed.,
pp. 564-597. New York: Macmillan, 1968; 3rd ed.,
Carmel. IN: Brown & Benchmark. 1993.
32. Barber, I. Photos)'nthethic reaction centres: a common
link. Trends Biocllem. Sci. 12:321-326, 1987.
Govindjee; Govindjee, R. The absorption of light in pho-
tosynthesis. Sci. Am. 231 (6):68-82, 1974.
Zuber, H. Structure of light-harvesting antenna comple
xes of photosynthetic bacteria, cyanobacteria, and
red algae. Trellds Biocllem. Sci. ) 1:414-419, 1986.
33. Boxer, S.G. Mechanism of longdistance electron transfer
in proteins: lessons from photosynthetic reaclion cen-
ters. AllIlLL Rev. Biophys. Biopllys. 011/l. 19:267-299, 1990.
Deisenhofer, J.: Epp, 0.; Miki, K.; Huber, R.; Michel, H.
Structure of the protein subunits in the photosynthe-
tic reaction centre of RlIOdopse/ldom01las virdis at 3A
resolution. Nature 3 J8:6 J8-624. 1985.
767
 Deisenhofer. J.; Michel, H. Structures of bacterial pho-
tosynthetic reaction centers. Anllu. Rev. Cell Bioi. 7: 1-
23, 1991.
34. Blankenship, R.E.; Prince, R.C. Excited-slate redox pro-
tentials and the Z scheme of photosynthesis. Trends
Biochem. Sci. 10:382-383. 1985.
Govindjee; Coleman, W.J. How plants make oxygen. Sci.
Am. 262(2):50-58. 1990.
Krauss, N.; Hinrichs, W.; Wilt, 1.; et al. Three-dimensio-
nal structure of system I of photosynthesis at 6 A re-
solution. Nature361:326-331, 1993.
35. Anderson, I.M. Photoregulation of the composition,
function, and structure of thylakoid membranes.
AmlU. Rev. Plam Physiol. 37:93-136. 1986.
36. Hinkle, P.C.; McCarty, R.E. How cells make ATP. Sci.
Am. 238(3):104-123, 1978.
Jagendorf, A.T. Acid-base transitions and phosphoryla-
tion by chloroplasts. Fed. Proc. 26:1361-1369, 1967.
37. Douce, R; Ioyard, 1. Biochemistry and function of the
plastid envelope. AmlU. Rev. Cell Bioi. 6: 173-216, 1990.
Fliigge, U.I.; Heide H.w. The phosphate-triose phos-
phate-phosphoglycerate translocator of the chloro
plast. Trellds Biochem. Sci. 9;530-533,1984.
38. Wilson, T.H.; Lin, E.C.C. Evolulion of membrane bio-
energetics.}. Supramol. Struct. 13:421-446, 1980.
Woese, c.R. Bacterial evolution. Microbiol. Rev. 51:221-
271,1987.
39. Cest, H. The evolution of biological energy-transducing
systems. FEMS Microbiol. Leu. 7:73-77, 1980.
Gottschalk, G. Bacterial Metabolism, 2nd ed. New York:
Springer-Verlag, 1986. (EI Capftulo 8 trata las fermen-
taciones.)
Miller, S.M.; Orgel, LE. The Origins of We on the Earth.
Englewood Cliffs, NI: Prentice-Hall, 1974.
40. Cross, RL.; Taiz, L. Gene duplication as a means for al-
tering H'/ATP ratios during the evolution of FoF I ATP-
ases and synthases. FEBS Lett. 259:227229. 1990.
Knowles, c.J., ed. Diversity of Bacterial Respiratory Sys-
tems, Vol. 1. Boca Raton. FL: CRC Press, 1980.
Nelson, N.; Taiz, L. The evolution of H'-ATPases. Trends
Biochem. Sci. 14:113-116, 1989.
41. Clayton, RK.; Sistrom, W.R., eds. The Photosynthetic
Bacteria. New York: Plenum Press, 1978.
Deamer, D.W., ed. Light Transducing Membranes:
Structure, Function and Evolution. New York: Acade-
mic Press, 1978.
Gromel-Elhanan, Z. Electrochemical gradients and
energy coupling in photosynthetic bacteria. Trends
Biochem. Sci. 2:274-277,1977.
Olson, J.M.; Pierson, B.K. Evolution of reaction centers
in photosynthetic prokaryotes. 1m. Rev. Cytol. 108:209-
248,1987.
42. Dickerson, R.E. Cytochrome c and the evolution of
energy metabolism. Sci. Am. 242(3):136-153, 1980.
Gabellini, N. Organization and structure of the genes for
the cytochrome b/c! complex in purple photosynthe-
tic bacteria. A phylogenetic study describing the ho-
mology ofthe b/c) subunits between prokaryotes, mio-
tochondria, and chloroplasts.}. Bioellerg. Biomembr. 20:
59-83, 1988.
Lockhart, PJ.; Penny, D.; Hendy, M.D.; et al. Controversy
on chloroplast origins. FEES Lett. 301:127-131, 1992.
768 CapUulo 14 : Conversi6n energ~tlca: mltocondrlas y c1oroplastos
Schopf, l.W.; Hayes, I.M.; Walter, M.R Evolution of
earth's earliest ecosystemas: recent progress and un-
solved problems. In Earth's Earliest Biosphere: Its
Origin and Evolution U.W. Schopf, ed.). pp. 361-384.
Princeton, N}: Princeton University Press, 1983.
43. Attardi. G.: Schatz. C. Biogenesis of milochondria.
An/lu. Rev. Cell Bioi. 4:289-333, 1988.
Ellis, R.I., ed. Chloroplast Biogenesis. Cambridge. UK:
Cambridge University Press, 1984.
44. Clayton, D.A. Replication and transcription of vertebra-
te milochondrial DNA. AI/llu. Rev. Cell BioI. 7:453-
478,1991.
Posakony, J,W.; England, J.M.; Attardi, G. Mitochondrial
growth and division during the cell cycle in HeLa
cells.}. Cell Biol. 74:468-491. 1977.
45. Borst, P.; Grivell, L.A.; Groot, G.S.P. Organelle DNA.
Trellds Biocllem. Sci. 9:128-130, 1984.
Gray, M.W. Origin and evolution of mitochondrial DNA.
ATl/lu. Rev. Cell BioI. 5:25-50, 1989.
Sugiura. M. The chloroplast chromosomes in land
plants. AlIlIU. Rev. Cell Bioi. 5:51-70, 1989.
46. Crivell, LA Mitchondrial DNA. Sci. Am. 248(3):60-73,
1983.
Hoober, J.K. Chloroplasts, New York: Plenum Press, 1984.
Rochaix, ).0. Molecular genetics of chloroplast and mi-
tochondria in the unicellular green alga Chlamydo-
monas. FEMS Microbial. Rev. 46: 13-34, 1987.
47. Clegg, M.T. Chloroplast gene sequences and the study
of planl evolution. Proc. Nael. Acad. Sci. USA 90:363-
367,1993.
Ohyama, K., et al. Chloroplast gene organization dedu-
ced from complete sequence of liverwort. Marcllal/-
tia polymorpha chloroplast DNA. Nature 322:572-
574.1986.
Shinozaki, K., et aI. The complete nucleotide sequence
of the tobacco chloroplast genome: its gene organi-
zation and expression. EMBO}. 5:2034-2049, 1986.
48. Anderson, S" et al. Sequence and organization of the
human mitochondrial genome. Nature 290:457-465,
1981.
Bibb, M.I.: Van Etten, R.A.: Wrigth, C.T.; Walberg, M.W.;
ClaYlon, D.A. Sequence and gene organization of
mouse mitochondrial DNA. Cell26:167-180, 1981.
Breitenberger, C.A.; RajBhandary, U.L Some highlights
of mitchondrial research based on analysis of Neu-
rospora crassa mitchondrial DNA. Trends Biochem.
Sci. 10:478-482, 1985.
Fox, T.D. Natural variation in the genetic code. Antlu.
Rell. Gellet. 21:67-91,1987.
49. Attardi, G. Animal mitochondrial DNA: an extreme ex-
ample of genetic economy. llll. Rev. Cytol. 93:93-145,
1985.
Wilson, A. The molecular basis of evolution. Sci. Am.
253(4):164-173,1985.
50. Levings. COS. Molecular biology of plant milochondria.
Cell56:171-179,1989.
Mulligan, RM.; Walbot, V. Gene expression and recom-
bination in plant mitochondrial genomes. Trends Ge-
net. 2:263-266. 1986.
Newton, K.J. Plam mitochodnrial genomes: organiza-
tion. expression and variation. Annu. Rev. Plant Phy-
sial. Pumt Mol. BioI. 39:503-532, 1988.
.
51. Clayton, D.A. Transcription of the mammalian mito-
chondrial genome. Anflu. Rev. Biacllem. 53:573-594,
1984.
Grivell, L.A.; Schweyen, R.I. RNA splicing in yeast mito-
chondria: taking OUI the rwists. Trends Genet. 5:39-
41,1989.
Gruissem. W.: Barken, A.: Deng, S.; Stern, D. Transcrip-
tional and post-transcriptional control of plastid
mRNA in higher plants. Trends Genet. 4:258-262, 1988.
Mullet, J.E. Chloroplast development and gene expres-
sion. Annu. Rev. Plant Pllysiol. Plant Mol. Biol.
39:475-502,1988.
Rochaix, ].-0. Post-nanscriptional steps in the expres-
sion of chJoroplast genes. Annu. Rev. Cell Biol. 8: 1-2-
28, 1992.
52. Birky, C.W., Jr. Transmission genetics of mitochondria
and chloroplasts. AmlU. Rev. Genet. 12:471-512, 1978.
53. Giles, R.E.; Blanc, H.: Cann, H.M.: Wallace, D.C. Mater-
nal inheritance of human mitochondrial DNA. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 77:6715-6719,1980.
54. Attardi, G.: Schatz, G. Biogenesis of mitochondria.
AI/flU. Rev. Cell Bioi. 4:289-333, 1988.
Bernardi, G. The petite mutation in yeast. Trends Bio-
cllem. Sci. 4:197-201,1979.
Montisano, D.F.; James, T.W. Mitochondrial morphol-
ogy in yeast with and without mitochondrial DNA.].
Ultrastruct. Res. 67:288-296,1979.
Bibllograffa
55. DiMauro,S., et at. Mitochondrial myopathies.]. Inherit.
Metab. Dis. lO(Suppl. 1):113-128, 1987.
Wallace, D.C. Diseases of the mitochondrial DNA.
Annu. Rev. Biochem. 61:11751212, 1992.
56. Bishop, W.R.; Bell, R.M. Assembly of phospholipids into
cellular membranes: biosynthesis, transmembrane
movement, and intracellular translocation. All1l1L
Rev. Cell Bioi. 4:579-611, 1988.
57. BUlOW, B.A.; Doeherty, R: Parikh, V.S. A path from mito-
chondria 10 the yeast nucleus. Phi/os. Trans. R. Soc.
Land. (Biol.)319:127-133, 1988.
Cavalier-Smith, T. The origin of eukaryotic and archae-
bacterial cells. An/l. N. Y. Acad. Sci. 503:17-54, 1987.
Gellissen, G.: Michaelis, G. Gene transfer: mitochondria
to nucleus. Ann. N. Y. Acad. Sci. 503:391401, 1987.
Margulis, I. Symbiosis in Cell Evolution. New York: W.H.
Freeman, 1981.
Schwartz. R.M.: Dayhoff, M.D. Origins of prokaryotes,
eukaryotes, mitochondria, and chloroplasts. Science
199:395-403, 1978.
Whatley, I.M.; John, P.; Whatley, F.R. From extracellular
to intracellular: the establishment of mitochondria
and chloroplasts. Proc. R. Soc. Land. (Bioi.) 204:165-
187,1979.
58. von Heijne, G. Why milOchondria need a genome. FEBS
Lett. 198:1-4, 1986.
769
Transmision de sefiales
entre celulas 15
'==C'::... 10
.....-Ideeelular-wf
",-G
s

.OI.
.. sea-......... vfareteplUielde

~'M'WllriII~.
saperllde CiI!Wa- =IeoIw
'rI". .
.. .wa.... wa aII ...
La I6Ika de
1........_
-sa.....
............
.......... ltsssdea_

EJ registro fOsil sugicre que hace 3,5 mil millones de afios ya existfan sofislicados or-
ganismos unicclulares pareddos a las bacterias actuales, pem que al parecer fueron
necesarios Olros 2,5 mil millones de anas para que apareciera el primer organismo
pluricelular (veasc Figura 1-17). tPor que la pluricelularidad lard6 lanto en cvolu
donar? Aunquc no podemos conocer la respuesta parece que esla cuesli6n est<1 reo
lacionada con la ncccsidad de los organismos pluricelulares de elaborar senales
que pennilieran a sus celulas comunicarse entre sf, de fanna que pudieran coordi-
nar su comportamicnlo en beneficio del organismo como un todD. Las senales in-
tercelulares. inrerprcladas por complejas maquinarias de la celula que responde a
elias, pennile a carla celula detcrminar SlI posici6n y su papel cspeciali7..1do en el
cuerpo y, por ejemplo, asegurar que cada celula se divida unicameme cuando sus
\lccinas dictcn que clio puede ser posible. La importancia de eSIOS ;'comroles socia-
les" sobre la divisi6n celular sc hace aparente cuando el control falla, dando lugar a
un cancer, que habilualmcnle mala el organismo pluricelular.
A medida que vamos disponiendo de tecnicas safisticadas y pOlCllles que
nos penni ten estudiar las'celulas y los mecanismos que ulilizan para cotnuni-
carse entre sf, lenlarncntc vamos comprendiendo los proccsos dc sef\alizaci6n
que Lltilizan los eucariotas superiores. Una celula animal contienc un elaborado
sistema de protefnas que Ie pcrmite responder a senales que provienen de otras
celulas. EI sistema incluye protcfnas receptoras de la superficie celular, prolef-
nas receptoras intracclularcs. protefna quinasas, prolefna fosfatasas. protefnas
quc unen GTP y el enormc nUlllero de prolefnas intracelulares con las que intcr-
aCluan estas prolcfllas de seflal. Ell cste capftuJo djsculimos en primer lugar los
principios generales de la seiializaci6n intcrceluJar. En las dos sccciones sib'Uicn-
tes consideramos las dos principales familias de protefnas receptoras de la super-
ficie celular, y c6mo generan seflaJes intracelulares. A continuaci6n examinamos
de que forma las celulas se adaplan conlinllamente para responder de fonna sen-
sible a peqlleflos cambios de concentraci6n de molecuJas seoal extracelulares. Fi-
nalmenle considemmos una anaJogfa de las redes neuronales. basada en los or-
denadores. que nos proporciona sugcrcl1cias sabre la forma en que trabajan las
complejas redes de seflales intraceluJares.

Principios generales de la sefializaci6n celular'

Casi con loda seguridad los mccanismos que permilcn a una celuJa innuir en el
comportamiemo de olra celula ya existIan en el mundo de los organismos un ice-

771
 SEfijALlZACION POR MOLECULAS SEGREGADAS Figura IS) Sefta1lzacl6n Intercelular
en anlmales. Se ilustran dos sistemas a
traves de los que las celulas animales

se comunican entre sf.
CfLULA 00_ CELULA
SENAL DIANA

molkola
sanal

SENAUZACION POR MOl1:CUlAS UNIDAS A MEMBRANA PlAsMAnCA

CELULA CELULA
SENAL DIANA
RECEPTORES DE SUPERFICIE CELUlAR

mollkula receptor de membra"a plasmMica

5e~1 receptor la IJllperl"lCie
celolar

lulares mucho antes de que los organismos pluricelulares aparecieran sobre la

Tierra. Algunas evidencias de ello provienen de estudios reaJizados en eucariOtas
unicelulares actuales, como las levaduras. A pesar de que normalmenle eslas ce- mOI6cola lienal
lulas lIevan una vida independiente, pueden comunicarse entre sl, y cada una de hktrofiliea
eUas puede influir en In proliferaci6n de OlTa. en preparaci6n del acoplamiento
RECEPTORESINTRACELULARES
sexual. En la levadura de gemaci6n Saccharomyces cerevisiae, por ejemplo, cuan
do un individuo haploide esl;1 preparado para el acoplamiento, segrega un pepli- peqoelia molltcol.
....---.... /se~1 hidlol6biCll
do denominado factor de acoplamiemo que constituye una senaJ para que las ce-
lulas cuyo tipo de acoplamienlo es el contrario dejen de proliferar y se preparen Plolef~ ~.O"'.....
para la conjugaci6n; la fusi6n de dos celuJas haploides de lipo de acopla..mienlo lla"lpor1aoola
contrario produce una celula diploide, la cual enlonces puede sufrir una meiosis
y esporular, generando celuJas haploides con una nueva dOlaci6n de genes.
Estudios sobre levaduras mUlanles que son incapaces de acoplarse han per-
mitido identificar muchas protefnas que son necesarias para este proceso de se-
flalizaci6n. Estas proternas forman una red de sefiaJizaci6n que induye receplo
receptor i"tracelolar
res de superficie celular. protefnas que unen GTP y protefna quinasas, cada una
de las cuales Hene parienles cercanos entre las prolefnas que participan en la se Flgurn 15-2 Las moleculas senal
nalizaci6n de las celulas ani males. Sin embargo, a traves de la duplicaci6n geni- extracelulares se unen a receplores de
ca y de la divergencia, los sistemas de sefiaJizaci6n de los ani males se han vuelto III superflcle celular 0 a receptores

much a mas claborados que los de las levaduras. Intrllcelulares. La mayoria de las
rnolcculas sei'ial son hidrofilicas, por 10
que son incapaces de alravesar
Las moltkulas senal extraceluJares son reconocidas por receptores dircctamente la membrana
especfficos de la superficie 0 del interior de las celulas diana 2 plasmlltica; en lugar de ella. se unen a
receptores de la superllcie de la celula
Mientras que las celulus de levudura se comunican elllre eUas para acoplarse. se los cuales, a su vez. generan una 0
cretando divcrsos tipos de pequefios peplidos, las celuJas de los ani males supcrio varias sei'iales ell et inlerior de la celula
res se comunican mediante cenlenares de tipos de moleculas seilal, incJuycndo diana. Por el comrario. algunas
proleinas, pequcnos peptidos, aminoacidos, nude6lidos, eSleroides, relinoides, pequei'ias mol&:ulas senal difunden a
derivados de acidos grasos, e incluso gases disuehos como el 6xido nftrico y cl traves de 13 membrana plasmalica y se
mon6xido de carbono. La mayona de estas moltkulas seliaJ eSlan secreladas por unen a receplOres situados en el
las cell/las se/laf mediante exocilosis (vease Capflulo 13). Dtms se libemn pordifu interior de la celula diana --en el citosol
si6n a traves de la membrana plasmatica y 5610 inOuyen en las celulas que eSlan o en el nucleo (como se observa en la
en contacto con la celula seii.alizadom (Figura 15-1). figural. Muchas de eSlas pcquefias
Sea cual sea la nal'uraleza de la molecula seii.al, la celllia diana responde me- moleculas sena! son hidrof6bicas y
diante una prolefna especffica denominada receptor. Se une espedficamenle a casi insolubles en soluciones acuosas:
por ello. son lransponadas a (raves del
la molecula senaJ, y entonces inicia una respuesla en la celula diana. Muchas de
lorreme sangufneo y de otros fluidos
las moleculas senal extracelulares acruan a concenrraciones muy bajas (tfpica- cxtracelulares. unidas a prolcfnas
menle SIO"Ml, y los receplores que las reconocen usualmenle se unen a elias lransponadoras. de las que han de
con una elevada afinidad (constante de afmidad K. ~ 10' !itros/mol; vease Figura disociarse antes de enlrar a la ctHula
3-9). En la mayona de los casos los receptores son protefnas transmembrana de diana.

772 Capftulo)5 : Transmisl6n de seiiales enlTe clulas

 las superficie de las celulas diana; cuando se unen a una l1lolecula senal ext race-
lular (un Ugal1do) se vuelven activos, de forma que generan una cascada de sena-
les intracelulares que alteran el componamiento de la celula. En algunos casos,
sin embargo. los receptores eSlan situados en el interior de la celula diana, yelJi-
gando senal enlra a la celula para activarlos: eSlas moleculas senaJ, por 10 tanto.
han de ser suficienlemente pequefias e hidror6bicas para poder difundir a Iraves
de la membrana plasm:Hica (Figura 15-2).
En este caphulo nos centraremos fundamentalmente en el eslUdio de la co-
municaci6n entre celuJas animales mediada por sefiales quimicas segregadas.
Este enfasis reneja el escado actuaJ de conocimientos sobre ellema: las molcculas
segregadas son mucho mas faciles de estudiar que las molecuJas unidas a mem-
brana. por 10 que conocemos muchos mas delaJles de su aCluaci6n. La senaliza-
ci6n dependiente de conlacto. via molecuJas unidas a membrana. es mucho mas
dificil de esludiar y por eUo mucha peor canocida. pera es de crucial imponancia
especialmente durante el desarroUo y en la respuesta inmune; como veremos
mas adelante. la base molecuJar de este sislema de comunicaci6n puede ser simi-
lar a la de la senaJizaci6n a distancia.

Las moleculas secreladas median tres formas de seiializaci6n:

la paracrina,la sim:iptica y la endocrina2
Las moleculas selial que segrega una celula pueden ser transponadas a largas
distancias para que actuen sobre cclulas diana muy alejadas. a pueden aCluar
como medJadores locales afeclando unicamenle las cclulas del ambiente inme-
dialo de la celula senaJ. Esle l1JIimo proceso se denomina seiiaJlzacl6n paracrl-
na (Figura 153A). Para que las sefiaJes paracrinas solamente afeclen a las cclu-
las diana mas cercanas. es necesario que las moleculas senal segrcgadas no
puedan difundir mucho; por esla raz6n habituaJmente son capladas nipidamen-
Ie por las celulas diana vecinas. destruidas por enzimas extracelulares 0 inmovi-
Iizadas por la marriz extracelular.
Para un organismo pluricelular. grande y complejo, la senalizaci6n de cort'O
alcance no es suficiente para coardinar el componamienlo de sus ctHulas. Por
ello han evolucionado cOlljunlos de celulas especializadas en la senalizaci611 en-
tre panes del cuerpo muy separadas entre Sl. Las mas sofisticadas de elias son
las celulas nerviosas, 0 neuronas. las cuaJes tfpicamente emiten largas prolonga-
dones (axones) que cntran en contacto con celulas diana alejadas. Cuando es Figura 15-3 Tres fonnas de
activada por senales del ambieJHe 0 de Olras celuJas nerviosas, la neurona envfa senallzacl6n medladas por molCc:lllas
segregadas. En las seiializaciones
impulsos eleclricos (polendalcs de acd6n) a 10 largo de su ax6n; cuando uno de
paracrina. sinaptica y endocrina se
estos impulsos lIega al terminal nervioso, en el eXlremo del ax6n. estimula al ler uliJizan muchos tipos iguales de
minal para que scgregue una senal qufmica denominada neurolransmlsor. El moleculas sefial. Las diferencias
terminal nervioso enlra en cantaclo con su ctHula diana a traves de lIniones ce- cruciales radican en la velocidad y en
lulares espedales denominadas SifWpsis quimicas.las cuales parecen eSlar dise- la sele<:tividad con las que son
fiadas para asegurar que el lleurotransmisor sea Iiberado sobre la membrana liberadas las senales a sus celulas
posisinaplica de la celula diana. rapida y especificamente (Figura 15-38). Eslc diana.

lAI PARACRINA 181 SINAPnCA (CI ENOOCRINA

Ilna",11 dlula endoc'ina
qulmica
~Iula
~
"'"
eelula nerviOH neurotransm,-.o, dlula diana

e8lula diana

Principlos generaJes de la scnalizaci6n celuJar 773

.
 Figura 15-4 Conlraste entre las seftallzaci6n endocrina y 10 slnaptlca. 1...15
lA) SEI'lALlZACION ENOOCRINA
cclulas endocrinas y las celulas nerviosas actuan conjuntamente
ooordinando las diversas aClividades de los miles de miUones de cclulas de
un animal sUI>erior.las celulas endocrinas segregan a la circulacion muchos
lipos diferenlcs de hormonas. para seiializar relulas diana especfficas. Las
<:elulas diana tienen receplOrf$ que se unen especfficamente a las hormonas,
vllrilll
de forma que tiellen que ~alrapar~ delliquido extracelular las honnonas celulllt
adecuadas. En la sefializaci6n sinaptica. por el contrario, la especificidad endocrinlls
reside en los contactos entre las prolongaciones nerviosas y las Iulas
nerviosas detenninadas que seiializan: habitualmente salo la celula diana
que se halla en contacto sinaptico con la celula nerviosa esta expuesta al
neurotransmisor liberado por eltermlnal nervioso (a pesar de que algunos
neurotransmisores actuan de una manera paracrina como mediadores
locales que InOuyen sobre muchas celulas diana en una ciena area). Mientras
que diferentes celulas endocrinas han de utilizar diferentes hormonas para
conseguir comunicarse especificamente con sus celulas diana, muchas cireulaci6r>
celulas nerviosas pueden ulilizar el mismo neurotransmisor y, a pesar de ello, sangulnell
comunicarse tambien de una fonna espedfica.

proceso de seftallzad6n sinliptica se trata en detalle en el Capitulo II, por 10

villi..
que no sera considerado aqui. ~ulll&
Las otras relulas senal especializadas que conuolan el comportamiento del
organismo como un todo son las <:Bulas endocrinas. Segregan sus moleculas se-
"al, denominadas honnonas, en el torrente sangufneo (de un animal) 0 en la savia
di,ln,l

(de una planta), los cuales transportan la senal hasta las relulas diana djstribuidas
ampliamente por todo el cuerpo (Figura 15-3Q. En la Figura 15-4 se contrastan los
diferentcs sistemas a traVe; de los cuales las celuJas endocrinas y las relulas ner-
viosas coordinan el componamiento celuJar en los animales. lBI SEftALlZActON SINAPTICA
Como la senalizaci6n endocrina depende de la difusi6n y del flujo sanguf-
neo, es relativamente lenta. las celulas nerviosas, por el contrario, pueden ai- varias neuronlls
canzar una velocidad y una precisi6n mucho mas elevadas. Pueden cransmilir
informaci6n a grandes distandas mediante impulsos electricos que transport'lln
la seflal a 10 largo de las prolongaciones nerviosas, a velocidades de hasta 100
metros por segundo. Una vez liberado por un tenninal nervioso, un neurotrans-
misor difunde no m<1s de 100 nm de la celula diana, un proceso que dura menos
de un milisegundo. Qua diferenda entre la transmisi6n endocrina y la sin:'iplica
es que, mientras que las horrnonas se diluyen enormemenle en la sangre cirCII-
lante y en ellfquido intersticial, por 10 que han de poder actuar a conccntracio-
nes muy bajas (dpicamente <10-8 MJ, los neurotransmisores se diluyen mucho
menos, pudicndo Ilcgar a alcanzar concentraciones locales alias. Por ejemplo, la
concentraci6n del neurotransmisor acetilcolina en la hcndidura sin:'iptica de
una uni6n ncuromuscularacliva es de alrededor de 5 x IO-l M. Por 10 taniO, en la
senalizaci6n simtptica los receptores de los neurotransmisores tienen una aOni-
dad relalivamente baja para sus ligandos, 10 cua! significa que el ncurotransmi-
sor puede disodarse rapidamenle del receptor, con 10 que acaba la rcspuesla.
(Los neurotransmisores son r:'ipidameme retirados de la hendldura sinaptica, varin dluln dillnll
tanto par enzimas hidrolfticas especfficas como por protefnas de membrana que
transportan especfficameme el neurot.ransmisor, bombeandolo de nuevo hacia
el terminal nervioso 0 hacia las celulas g1iales vednas.)

La seiializaci6n autocrina puede coordinar decisiones

de grupos de cf!lulas idf!nticas3
Todas las fonnas de senalizaci6n que hemos descrito penniten a un tipo celula.r
inDui.r sobre OlTO tipo celuJa.r. Sin emba.rgo, mediante el mismo mecanismo las ce-
lulas pueden enviar senales a otras celulas del ntismo tipo, de 10 que se deduce
que pueden enviarse incluso senales a eUas mismas. En una seflalizaci6n de cste
tipo, denominada aUlocrina, una celula segrega moleculas senal que pueden

774 CapftuJo 15: Transmisi6n de seftales entrecBulas

.
 Figura 15-5 5ei'ializacI6n 8ulocrina.
Un grupo de celulas id~nticas produce
concentrnciones de moll!cula gei'ial
m1s elevadas que una dlula sola.

Figura 15-6 Lasfnteslsdeun

eicosanolde. Los eicosanoides son
continuamente sintelizados en las
membranas. a panir de cadenas de
UNA SOLA CfLULA SENAL EN UN GRUPO DE CELULAS SEIiiAL
RECIBE UNA SENAL AUTOCRINA IDENTICAS. CADA CELULA RECIBE UNA tlcidos grasos de 20 carbonos que
MAs DEBIL SENAL AUTOCRINA MAYOR cOlllCngan. al menos, tres dobles
enlaces. como se muestra en (Al p.1ra el
caso de la sfnlesis de proslaglandina
unirse a receptorcs de la propia c~lula. Durante el desarrollo, por ejemplo, cuando PGEz, EJ subfndice se refiere a los dos
una c~lula ha sido dirigida a una etapa determinada de diferenciaci6n, puede 00- dobles enlaces carbono-carbono
menzar a segregar seilales aulocrinas que refuercen esta decisi6n de desarrollo. siluados filera del anillo de PGEr
La seilalizaci6n autocrina es mAs efectiva cuando se lleva a cabo simultanea- Enslen cuatm da.ses principales de
mente por varias c~lulas vecinas del mismo tipo. por 10 que puede utilizarse para cicosanoides -las prosrnglandinas. las
estimular a grupos de c~lulas id~nticas para que tomen las mismas decisiones de prostaddinas, los rromboxnllOS y los
desarrollo (Figura 15-5). Asf, se cree que la seilalizaci6n autocrina constituye un !eucornetl05- y (odas eRas cstAn
posible mecanismo sobre el que se basa el Mefecto comunitario" observado en sintetizadas a panirdel <icido
las primeras etapas del desarrollo, segun el cual un grupo de c~lulas id~micas araquid6nico.la sfntesis de lodas eUas,
puede responder a seflaJes que inducen diferenciaci6n mientras que una c~lula excepto de los leucotrienos. se produce
por la acci6n de la cidooxigellasa; la
aislada no puede hacerlo.
sfntesis de los leucotrienos se produce
Pero, la senalizaci6n autocrina no se produce s610 durante el desarrollo. Los
por In nccl6n de la lipoxigellasa (Bl.
elcosanoldes son mol~culas senal que a menudo actuan de una forma autocrina Estas etapas biosintl'ticas son diana de
en los mamfferos maduros. Estos derivados de acidos grasos est.m sinletizados una gran eanlidad de drogas
por celuJas de lodos los tejidos de mam(fero. $e sintetizan continuamente en la terapeulicas, ya que los elcosanoides
membrana plasmatica y se Iiberan al exterior celular, donde son rapidamente de- son importantes en procesos de dolor.
gradados por enzimas del medio extracelular. Sintetizados a partir de precursores fiebre e inflamaci6n. Por ejemplo, las
(principalmente de dcido araqlliddnico) liberados a partir de los fosfolfpidos de la hormonas cortiooesteroideas, como eI
membrana celular mediante la aed6n de fosfolipasas (Figura 15-6). tienen una cortisol, inhiben Ia actMdad de 13.
gran variedad de aetividades biol6gicas; por ejemplo influyen sabre la eOnlrac- fosfolipasa de la primera etapa de la
d6n del museulo liso y la agregaci6n de las plaquetas y participan en las respues- sfntesis de eicosanoides. por 10 que son
ampliamente ulilizadas c1fnicamenle
para tratar enfermedades inllamalorias
no ink'CCiosas. como son algunas

losfollpido d& 'j-o-IH, formas de artritis. Por el contrario,

drogas antiinllamatorias no esteroideas.

;vv-v-v-v=vv~-o-tH 'r
membr.n&

I
como la tlspirina y el ibupofrl'n,
bloque:lIlla primera etara de oxidaci6n.
-{}-A--G--' x
I
CH2 calaliz..'\da por la cicJooxigenasa.
~ losfoliplISli
A1gunas prostagiandinas producidas en
grandes cantidades en eI ulero en el
okido .r.,qu,dOnico momenlo del parto y queestimulan 13
t20 e8rbonot) en contracci6n del mtlsculo 1150 uterino. se
conforln8C06n .xtendid8
utilizan para indoor abortos.

kido .rllCfutdOnico ~OOH

en conform.ciOn
plegllde
ETAPA DEPENDIENTE ETAPA OEPENOlE

j ETAPA' OXIDATIVA'
DE LA
CICLOQXIGENASA
DE LA
Uf>OXIGENASA

o
~COOH
I
pro~l.ncIjnllS. ~ucotrlerlOS
prostKielinM.
OH OH tromoourlOS

(AI ,.,
Principios generales de la seiiali.7..acl6n celular 775
tas inflamatorias y febriles. Cuando las c~lulas se activan por dano tisulnr 0 por
a1gun tipo de senales qufmicas, se incrementa la velocidad de sfntesis de ccosa-
noides; el incremento resultante de los niveles locales de eicosanoides influye
tanto sobre las c~lulas que los sintetizan como sobre sus vecinas inmediatas.
Figura 157 SenaJizacl6n a traves de
Las uniones comunicantes permiten que la informaci6n de unlones comunlcantes. las celulas
sefializaci6n sea compartida por las celulas vecinas 4 que esuin conectadas por uniones
comunicanles comparten las
Qtra via para coordinar las actividades de las c~luJas vecinas consisle en las unlo pequenas moleculas, incluidas las
nes comunlcantes 0 de tJpo gap. Se trata de uniones especializadas reluJa-c~lula pequenas moleculas senal
que pueden fonnarse entre membranas plasm~ticassiruadas en eslrecho conlac- intracelulares, por 10 que pueden
10. y que conectan directamcnle los citoplasmas de las c~lulas que unen, a trav~ responder a senaJes extracelulares de
de esuechos canales Uenos de agua (v~ase Figura 19-15). Los canales penniten el una forma coordinada.
inlercambio de pequeflas molecuJas sefial intraceluJares (mediadores imrace/flUl-
res). como el Ca20 y el AMP cfclico. pero no el de macromoleculas como protefnas
y ~eidos nucleieos. Asf pues, las relulas eonectadas por uniones de lipo gap pue-
den comunicarse entre eUas directamente. sin tener la difieultad de la barrera
que supone la presencia de las membranas plasm~licas (Figura 15-7).
Como se diseule en el Capftulo 19, el patr6n de distribuci6n de las conexio-
nes eomunicantes en un tejido puede ponerse de manifieslO lanto electrieamen-
te, con electrodos intraeelulares, como visualmente. {ras la microinyecci6n de
colorantes solubles en agua. Esludios de esle tipo indican que las e~lulas de un
embri6n en desarrollo forman y deshacen uniones comunicantes siguiendo pa-
trones espedfieos y muy interesantes. 10 eual sugiere que eslas uniones juegan
un importante papel en los procesos de sefializaci6n que tienen lugar entre eslas
e~luJas. Puede sospecharse que, como en el caso de la sefializaci6n autoerina
deserita con anlerioridad. las uniones eomunicantes eolaboran en la coord ina-
ci6n del eomponamiento de las e~lulas vecinas de tipo simiJar. Sin embargo, no
sabemos qu~ pequenas mol~cll.las en particular son importantes transportado-
res de senales a lraves de las uniones comunieantes; lampoeo se ha definido con
precisi6n eu~1 es la funci6n precisa de la comunicaci6n a lTav~ de las uniones
de lipo gap en el desarrollo animal.

Cada celula esta programada para responder a combinaciones

espedficas de moMculas sefial5
Cualquier c~lula dada de un organismo pluricelular est~ expuesta a lllllehas
-quiz~s denlOS- senales diferentcs de su entomo. Est'as senales pucden ser solll-
bles, estar unidas a In mnlriz cxtracclular 0 estar unidas a la superlide de las ce-
lulas vecinas. y pueden aCluur ell varios millones de combinaciones posibles. La
celula respondera a esln seleetividad de babel, de acuerdo con su car~eter espe-
cffico adquirido mediante In progresiva especializaci6n eelular, en el curso del
desarrollo. Asf pues. una c~lula puede estar programada para responder a un
conjumo de sel'lnles, diferenci~ndose, a otro conjullio de senales. proliferando. y
a un tercer grupo de scnales. desarrollando algunas funeiones especializndas.
La mayorfa de las relulas de los animales superiores, sin embargo, eSlan
programadas para depender de un grupo espedfieo de senales simplemente
para sobrevivir: euando son deprivadas de las sefiales adecuadas (por ejemplo.
en una plaea de eultivo), las e~lulas inieian un programa suicida y se aUlodestru-
yen -un proceso denominado nlllerte cell/tar programada. que se discule mas
extensamenle en el Capitulo 21 (Figura 15-8). Diferentes lipos de celulas requie-
ren diferenles eonjuntos de sefiales de supervivencia, y par ello su loealizaci6n
esta reslringida a diferenles ambiemes en el cuerpo.
Debido a que generalmente las moleculas senal aenian en eombinaciones
de elias. un animal puede eontrolar el eomportamiento de sus celulas de una
manera altamente especffiea, utilizando una diversidad limitada de tales mole-
eulas: dent os de moleculas senal pueden utilizarse en millones de eombinaeio-
nes dUerentes.

776 CaprtuJo 15: Transmisi6n de senates entre c~luJas

 FIgura 15-8 sef'iallzacl6n comblnatorla.
~
~
' _ MUERTE CELULAR _
PROGRAMADA
~.
~
Cada tipo de celuJa presenta un conjunto
de receptores que Ie pcmlile responder a
illl conjunto correspondiente de

B_
A" \!) - SOBREVIVE
rnoleculas setial producidas por otras
celulas. Varias de estas moloculas seiial
actuan de fomm combinada, regulando
el cornportarniento de la ct'Huia Como se
muestra aqui, muchas celulas rcquieren
C/
mJ1ltiples sefiales (jlechas verdes) para

A" @ -
B_ PROLIFERA
sobreviviry sefiates adicionales (jlecllas
rojas) para proliferar; si se depriva a las
celulas de ladas esas sefiales, inician un
programa de muerte celular.

</ 1 '\, (A) fibre muscular esquelf!itica

D

Diferentes celulas pueden responder de forma diferente Bcetilcoline

ala misma senal qufmica6

La manera espedfica en que una clHula reacciona con su enloma, varfa, en pri-
!
mer lugar, de acuerdo con el conjunto de prorefnas receploras que posee la celu-
la y a traves de las que detect a un canjunlo particular de todas las seflales que Ie
son asequibles y, en segundo lugar, de acuerdo con la maquinaria intracelular
a (raves de la eual la celula integra e interpreta la informaci6n que recibe. ASI, a
menudo una misma mohkula senal tiene efectos diferentes sobre cclulas diana
diferentes. Por ejemplo. el neurotransmisor acetilcolina estimula la cancentra-
CONTRACCION
ci6n de las celulas del mtisculo esqueletico pem disminuye la frecuencia y la
fuerza de contracci6n de las celulas museulares del eoraz6n. Ello es debido a que
las protefnas receptoras de acetilcolina de las celulas musculares esquelt'hicas
son diferentes de las de las fibras musculares del coraz6n. Sin embargo. no siem-
(8) fibre muscular cardiaca
pre son las diferencias entre los receptores 10 que explica las diferencias de eree-

.-
lOS. En muchas casas la misma molecula sefial se une a protefnas receptoras
identicas y produce respueslas rnuy diferentes en diferentes tipos de celulas dia-
na, 10 cual reOeja diferencias en la maquinaria enzima:tica a la que estan acopla-
dos los receptores (Figura 15-9).

La concentraci6n de una molecula puede ajustarse nipidamente

s610 si la vida media de la molecula es corta6
Es natlUal' pensar ell los sistemas de sefializaci6n en terminos de los cam bios RELAJACION

que se producen cuando se libera una sefial. Pero tam bien resulta importante
considerar que ocurre cuando se elimina una sefial. Durante el desarrollo a me-

..
nuda sefiales transilorias producen efeclOs duraderos: pueden desencadenar un
cambia que persiste indefinidamente, a traves de mecanismos de memoria celu- (C) cf!ilule SecrBtora

lar como los discutidos en los Capflulos 9 y 21. Sin embargo, en la mayorfa de los
casos, especialmente en los tejidos adullos, la respuesta se desvanece cuando
cesa una sefial. La sefial actda sabre un sistema de moleeulas que estan en conti-
- . '....
.' .'

SECRECION

Figura 15-9 Una mlsma moh~culasenalplIede Indllclr respuestas

dlferentes en celulas diana diIerentes. En algunos casos, ello es debido a que 10) acetilcoline
la molecula senal se une a proteinas receptoras diferenres, tal como se iJustra
ell CAl y (B). En atros casas. la maleeula seiial se une a proreinas receptoras o CH J
identicas pero estus aetivan respuestas diferentes en celulas diferentes. lal
H3C-C" -O-CH1-CH2-r-CHJ
I
como se iJustra en (B) y (e). En todos los casos lIlostrados aquila molCcula
sefial es la acetilco/ina (D). CH,

Principios generales de la sefiallzaci6n celular 777

 I"~:::::::::::::=- 200 ml'
" _-----1 min
Figura 15-10 La Importancla de un
recanlblo rlipldo.La figura mueslra
predicciones de las velocidades
relalivas de cambio de las
40 min
concenlraciones inlracelulares de
8 molt!culas que lienen diferentes
velocidades de recambio, cuando sus
velocidades de simesis disminuyen (A)
o aumeman (B) repentinameme en un
6 lOmin faclor de 10. En ambos casos la
10 min concemraci6n de las moleculas que
normalmenle son degradadas
, rapidamenle en la celula (lineas rojas)
cambia rapidamenle mienlJ"as que la
concenlrad6n de las moleculas que
40 min nonnalmente son degradadas mas
2
lenlamenle (lineas verdes) cambia
proporcionalmeme mas despacio. Los
~-----'m'n 11:'=:::::::.------- 200 min numeros (en azuf) dellado derecho de
las graficas son las vidas medias
o , , o , asumidas para cada una de las
6 8
"
minutos despuft de qlHl I. vetoc:~ de
2 6 8
"
minutos despu6s (Ie que I, yetocidad de
diferenles moleculas.
&lotes;. hay. disminuido en un factor de 10 .lolasis hay umtHltMio en un factor de 10
tAl lSI

nuo recambio, de forma que cuando 1a senal cesa el reemplazamicnto de las

moh~culas viejas por mole:culas nuevas borra las trazas de su acci6n. De ello se
deduce que la velocidad de la reacci6n para eliminar los efeclos de 13 sefial de
pende de la velocidad del recambio de las moleculas a las que afeCla 13 seiial.
Puede no resu.ltar Ian obvio que esla velocidad de recambio tam bien determine
la prontirud de la respuesI3 cuando la sefial se activa.
Consirleremos por ejemplo dos moleculas intracelulares X e Y, y que ambas
se mantienen normal mente a una concentraci6n de 1000 moleculas por eelula.
La moleeula X tiene una velocidad de reeambio baja; es sintetizada y degradada
a una velocidad de 10 mol6eulas por segundo, de forma que eada moleeula tiene
una vida media de 100 segundos. A su vez, la moleeula Y se recamhia 10 veees
mas rapidarnente; es sintetizada y degradada a una velocidad de 100 moleeulas
por segundo, de forma que eada moleeula tiene una vida media de 10 segundos.
Si una sef'ial que acWa sobre la celula incrementa 10 veees las velocidades de
sfntesis tanlo de X como de Ysin alterar las vidas medias, al final del primer se-
gundo la coneenlraci6n de Ysc habra incrementado unas 900 mol6clIias en cada
celula (10 x 100 - 100) mientras que la concentraci6n de X s610 se habra incre-
mentado 90 mol6culas por celuta. De hecho, despues de que Sll veloeidad de
sfntesis haya aumentado 0 disminuido abruptamente, el tiempo nccesario para
que una molecula Ilegue a medio camino entre su concentraci6n antigua y Sll
nueva concentraci6n de equilibria es igual a su vida media --es decir. es igunl al
liempo que serfa necesario para que su concentraci6n bajara a la mitad si se pa-
rara complelamenle su sfnlesis (Figura 15-lO).
EI mismo principia se aplica tanlo a prmefnas como a pequcflas moleculas,
y tanto a molcculas del espacio extraceluJar como imracelulares. Muchas protef-
nas imracelulares que son degradadas nipidnmente tienen vidas medias cortas;
a1gunas de elias sobreviven menos de J0 minutos; en la mayona de los casas sc
trata de protefnas euyo papel regulador es clave, y cuyas concenlraciones celula-
res est<'in reguladas rapidamente mediante eambios en la velocidad de su sfnle-
sis. De la misma forma, cualquier modificaci6n covalenle de una protefna, que
tenga lugar como pane de un proceso de rapido de seflalizaci6n -hahitualmente
la adici6n de un grupo fosfato a una cadena lateral de un aminoacido- ha de ser
eliminada eonlinuamente a una gran velocidad para hacer posible tal senaliza-

778 Capitulo 15: Transmisi6n de sefiaJes entre dlulas

ci6n. Mas adelante discutimos en detalle algunos de estos procesos moleculares.
para el caso de procesos de seflalizaci6n que trabajan via receplOres de superfi-
cie celular. Sin embargo, los principios se aplican de forma general. como i111S-
tran los siguientes ejcmplos.

EI gas 6xido nJtrieo actua como una sefial, uni~ndose

directarnente a una enzima en el interior de la c~lula diana'
A pesar de que 13 mayorfa de las senales extracelulares estan mediadas por mole-
culas hidrofllicas que se unen a rceeptores silUados en la superficie de 13 mem-
brana de 13 celula diana. algunas moleculas senal son suficientemente hidrof6bi-
cas y/o suficienlemente pequenas para alravesar facilmente la membrana de la
celula diana; una vez en el interior. regulan directamcnte la actividad 0 la especi-
ficidad de una prolefna intracelular. Un e;emplo remarcable 10 constituye el gas
6x1do nIlrlco (NO). el cual recientemente ha sido reconocido como una molt~cu
la senal en los venebrados. Por ejemplo. cuando la acetilcolina es liberada pOT
nervios aut6nomos a las paredes de los vasos sangufneos, hace que las fibras
musculares lisas se relajen. La acetilcolina acrua indirectamente induciendo a las
ctHulas endoteliales a simetizar y Iiberar NO, el cual haec que las celulas muscu-
lares lisas se relajen. EI efecto de NO sobre los vasos sangufneos proporciona una
explicaci6n del mecanismo de acci6n de la nitroglicerina. que ha sido utilizada
durante mas de 100 arlOs para tratar pacientes con angina de pecho (dolor debi-
do a un flujo sangllfneo inadecuado en el musculo cardfaco). La nitroglicerina es
transformada en NO. que relaja los vasos sangufneos, reduciendo el trabajo del
coraz6n y. en consecuencia, el requerimiento de oxfgene del musculo cardfaco.
Tambien se produce NO como mediador local por macr6fagos y neutr6filos acti-
vados para colaborar en el proceso de eliminaci6n de microorganismos invaso-
res. Ademas. se uliliza por muchos tipos de celulas nerviosas para sefiaJizar celu-
las vecinas: el NO liberado por nervios aut6nomos en el pene. por ejemplo. hace
que se dilaten los vasos sangufneos locales que son responsables de la erecci6n.
EI NO es sintetizado por la enzima NO sill1asa mediante la desaminaci6n del
aminoacido arginina. Como difunde flicilmenre a trav~ de las membranas, el
NO difunde fuera de la cl!lula que 10 sinletiza. y entra directamente en las cl!lulas
vecinas. 5610 acroa Iocalmente debido a que en el espacio extracelular su vida
media es muy cona -enlre 5 y 10 segundo5- transfonnlindose en nitratos y nilri-
tos al combinarse con oxfgeno y agua. En muchas celulas diana, como las celulas
cndoteliales, el NO reacciona un atomo de hierro del lugar activo de la enzima
guallilaro cielasa, cstimulandola para que produzca el mediador intracelular
GMP cfclico, del que hablaremos mds adelante. Los efectos del NO pueden ser
rap ides, ocurriendo en cuesti6n de segundos, debido a que la velocidad de re-
cambia del GMP ddico es alta: la rapida producci6n de GMP dc1ico a partir de
GTP por la guanilato ciclasa esta compensada por la rapida degradaci6n a GMP
por una fosfodiesterasa. Existen evidencias recientes de que el mon6xido de car-
OOtlO (CO) tambien se utiJiza como una senal intracelular. y de que puede aCllIar
de la misma forma que el NO, estimulando la guanilato ciclasa.
Los gases como el NO y el CO no son las I1nicas moleculas senal que pueden
pasar directamente a naves de la membrana plasm:\tica de la celula diana. Tam-
bien entran en la celula diana. de esta fonna, un grupo de hormonas no gaseo-
sas, pequeiias e hidrof6bicas. y varios mediadores locales; sin embargo, en lugar
de unirse directamente a enzimas. se linen a receptores intracelulares que regu-
Ian direclamente In transcripci6n genica.

Las hormonas esteroideas, las hormonas tiroideas, los retinoides

y la vitarnina D se unen a receptores intracelulares que son
protefnas reguladoras de genes aclivadas por ligando8
Las hormonas eSleroideas. las IlOrmOtlas tiroideas. los re/;tloides y la vitam ilia 0
son pequenas moll!culas hidrof6bicas, muy diferentes entre sf lanto en estruclu-

Principios generales de la seiializaci6n celular 779

 OH
CHzOH
I
C-O OH
HO /,-,,/,-,OH

HO

COr1itol

HO

CH J 0
tirollina
v ....../ ..........~,,~,l,o_
ra qufmica (Figura 15-tl) como en funci6n. Sin embargo, IOOas elias actlian a H,C CH,
kido ret;nceo
traves de un mecanismo similar. Difunden directamemc a traves de la membrana
plasmatica de las c~lulas diana y se unen a prot'cinas receploras intracelulares. La
Flgural5-1t AlgunasmolNulas
uni6n delligando aCliva los receptores, los cuales entonces regttlan directamente
seftaJ que se unen a receptores
la transcripci6n de detcnninados genes. Estos receptores tienen eslnlCfUraS Tela-
lntraceJula.res. Notese que todas elias
cionadas entre sf y conslituyen la superfamilla de receptores intracelulares (0 son pequei'ias e hidrof6bicas. Se
superfamWa de rea!ptores de IlOmlOlIllS esteroideas) (Figura 15-12). muestra la forma activa, hidroxilada,
Todas las hormonas esteroldeas, incluyendo e1 cortisol, las hormonas se- de la vitamina D~.
xuales. la vitamina D (en los venebradosl y la hormona de la muda ecdisona (en
los inseclOS), estan sintelizadas a partir del colesterol. EI cortisol se produce en e1
c6rtex de las g1lindulas adrenales y afecta el metabolismo de muchos tipos celu-
lares. Las hormonas esteroideas sexuaJes se sinletizan en los testfculos y en los
ovarios y son responsables de las caraclerfsticas sexuales secundarias que distin-
guen los machos de las hembras. La vltamlna 0 se sintetiza en la piel en res- Figura 1512 La superfamilla de
puesla a la luz solar; despu~ de transformarse en una fonna aCliva en el rifl6n 0 receptores lntracelulares. (Al Modelo
en el hfgado, regula el melabolismo del Ca2., favoreciendo la caplaci6n de Cn2 de protefna receptora de hormonas
en el inleslino y reduciendo su excreci6n por el rifi6n. Las honnonas t1roldeas, esteroideas. En su estado inaclivo el
que son sinteli,,,adas a parlir del amineacido tirosina, incrementan el melabolis receptor se halla unido a un complejo
me de una gran variedad de ('ipos celulares, mientras que los rednoldes, como el proteko inhibidor que contiene una
acido retinoico, que se sintetizan a partir de la vitamina A, jllegan un irnportantc protefna activada por estres calor(fko
(heal shock protein) dcnominada
papcl como mcdiadorcs locales durante el desarrollo de los vertcbrados. A pcsar
l"sp90 (se discule en el Capffulo 5). La
de que todas eSlas mol~clJlas senal son rclativamente insolubles en agua, se ba-
uni6n delligando al reccptor hace que
la protefna inhibidora se disocie, de
oompleio fonna que el receptor se activa
proteico lugal de uniOn a la hormona domlnlo de union exponiendo su lugar de uni6n al DNA.
inhibidOI COOH Elmodelo que se presenla en la figura
N - - - - -......--'D_N_A
__
domlnlo de C
receptor de cortisol se basa ell el receptor para el cortisol
aclillacion dale
IrenseripeiOn (glucoconicoides), pero lodos los
N _ C receplores de la superfamilia lienen
receptor de eS1rOgllflo una esffUClura similar a esta. como se
mueSfra en {B}, donde se han dibujado
dominlo de uniOn{reQl6r'1 bllagrs
en IICrdC los cortos dominios de uni6n
alONA N - - - - - -- - - C al DNA de cada receptor.
receptor- de progesterona
hormone . . Experimelllos de infercambio de
esleroidea dominios sugieren que en esfOS
N_ C
receptor de vilam,,,. D recepfores la mayorfa de los dominios
de union a la hormona, de aetivadon
luga. de uniOn a' DNA ."pUB.to
N _ C de la transcripcKin yde union al DNA
pUedcn aCfUar como m6dulos
receptor de harmon.. tlraide..
intercambiables. Se cree que fodos los
N _ C receplores inuacelulares se unen aI
DNA como homodimeros 0 como
,AI 'B'
receptor de kkto ,etinceo
helerodfmeros.

780 Capftulo 15: Transmisl6n de sei'iales entre c~lulas

cell solubles para su transporte par ellorrente sangufneo y Olros lIquidos eXlra-
celulares mediante su uni6n a protelnas transportadoras especfficas, de las que
se disocian antes de entrar en la celula diana (vease Figura 15-2).
Ademas de la diferencia fundamental en la manera en que seiializan a sus
celulas diana, la mayorfa de las molecuJas insolubles en agua se diferencian de
las solubles en agua en cuanlo al tiempo que se mantienen en el torrenle sanguf-
neo y en los lejidos. La mayorfa de las hormonas solubles en agua se eliminan
ylo degradan en cuesli6n de minutos despu~ de cntrar en la sangre y los mc-
diadores locales y los neurOiransmisores son eliminados del espacio extraeelular
induso mas rnpidamenle -en cuesti6n de segundos 0 de milisegundos. Las hor-
monas esteroideas, par el contrario, persislen en la sangre durante horas, y las
hormonas tiroideas durante dlas. En consecuencia, las moleculas senal solubles
en agua habitualmenle median respueslas de duraci6n carta mienlras que las
insolubles en agua tienden a mediar respuestas mas duraderas.
Tados los receptores intraceluJares para las hormonas esteroideas, para las Figura 15-t3 Respuestaprimaria
hormonas tiroidcas. para los retinoides y para la vitamina 0, se unen a secuen- ternprana IA) y respuesta secundaria
retardada CB) que resulta de la
cias especfficas del DNA adyacentes a los genes que estan regulados por elligan-
aet.lvad6n de receptores protelcos
do correspondienle. AJgunos de elias, como los receplores de cortisol, se locali-
intracelulares. Se i1ustra la respuesla a
zan principalmente en el citoplasma y s610 se unen al DNA despuCs de unirse al una honnona esteroidea. pero est05
Iigando (vease Figura 15-12); otros, como los receptores de relinoides, se locali- misrnos principi05 se pueden aplicar a
zan principalmente en el nueleo y se unen al DNA incluso en ausencia de ligan- tados los ligandos que activan alguno
do. En cualquier caso, la uni6n delligando altern la conformaci6n de la proteina de los cornponentes de esla familia de
receptora, la cual entonees acliva (u ocasionalmente inhibella transcripci6n ge- protefnas receploras. AJgunas de las
niea. En muchos casos la respuesta tiene lugar en dos etapas: en primer Jugar la prolefnas de la respuesta pomaria
inducci6n directa de la transcripci6n de un pequeno numero de genes especffi- activan a los genes de la respuesla
cos, en cuesti6n de 30 minutos, y que se canace como la respuesta primaria: los secundaria. mientras que olras
praducros de estos genes, a su vez. activan arras genes, produciendo una res- inactivan a los genes de la respuesla
puesta retardada, denominada resp"esta set:undaria. As!, un simple incremento primaria. El nlimero real de genes
hormonal puede generar un complejo cambia del patr6n de expresi6n genica implicados en las respuestas primaria
y secundaria es mayor que el que se
(Figura 15-13).
indica en eSle dibujo. Como era de
La respuesta a las hormonas tiroideas y esteroideas, a la vitamina 0 y a los esperar, las drogas que inhiben la
retinoides, como en el caso de las respuestas a seiiales extracelulares en general, sfntesis proteica suprimen la
esta determinada tanto por la naluraleza de la celula diana como por la nalura- transcripci6n de los genes de la
leza de la molecula sei\al. A pesar de que diferentes lipos celulares (eogan recep- reSl'uesla secundaria pero no los de la
lares intraccllliares idenlicas, el conjunto de genes que regula el receptor es di respuesla primaria.

(A) RESPUESTA PRIMARIA TEMPRANA A LA HORMONA ESTEROlDEA (6) RESPUESTA SECUNDARIA RETAROAOA A LA HORMONA ESTEROIDEA

hormona recaptor de hormona

esteroldea esteroidlla

'-C-
AA
A
~ prolllinas dela rll5pullsta SllCundaria

1011 eomplejos tIormona

esteroid".....eeeplor .cI;van
101I gen" de la r..pu_a prlmaroa
.\.: ~ :.
DNA I I I I DNA

..,I
-:-
I
inducciOn d11I,IIIM"" de '1(Jun.a,.proteln"
difllrllnl" lin I. respull1iU prim.ri,
un.a protllln. dll.
r"puISI' primllfia
un. protein. de III
rllpUlllla primaria
inaetjva 10, genes .cIivalOll gene,
de .. rnpuuta dela rnpunla
J)f'ffillrl' MCUndan.

Principios generales de la seftalizaci6n celular 781

ferente en cada caso. Ello es debido a que generalmeme a cada gen eucariota se
Ie ha de unir mas de un lipo de protefna reguladora de genes. para aClivar su
transcripci6n. Por ello, un receptor intrnceJular puede activar un gen wlo si exis
te In combinaci6n adecuada de otras prolefnas reguladoras de genes, y algunas
de elias son especfficas del tipo celuJar. Asi, las honnonas liroideas, la vilamina
o y cada una de las hormonas esleroideas y de relinoides inducen un conjunto
caracterfsrico de respuestas en los animales, debido a que: (I) lmicamente ciertos
tipos celulares tienen receptores para ello; y (2) cada uno de estos tipos cclularcs
contienen una combinaci6n diferenle de otras protefnas reglliadoras de genes,
que colaboran con el receptor activado innllyendo enla transcripci6n de conjun-
lOS especfficos de genes. En el Capftulo 9 se discutcn los dClalles molecularcs so
bre c6mo los receplores intracelulares YOWlS protcfnas reguladoras controlan la
transcripci6n de genes de forma especffica.

Se canoeen tres c1ases de prolefnas reeeptoras de superficie

celular: las asociadas a canales i6nicos, las asociadas
a protefnas G y las asociadas a enzimas9
Las tecnicas de DNA recombinante han revolucionado el estudio de los recepto
res y de las proteinas intracelulares que panicipan en la sefializaci6n celular. Es
tas protefnas a menudo constiruyen menos del 0,01% de la masa proleica tOlal
de una celuJa, por 10 que ha resultado cxtremadamente dirfcil purificarlas. EI clo
naje de las secuencias de DNA que codifican las prolefnas ha acelerado enorme
mente el proceso de caracterizad6n: la mayorta de las protefnas sef'lal discutidas
en este capitulo se han caracterizado de esta forma. Una contriblld6n funda
mental de estos estlldios de donaje y de secuendaci6n de DNA ha consistido en
revelar que la increfble diversidad de protefnas receptoras conoddas puede re
ducirse a un mlmero mucho menor de grandes familias. Los receptores intrace
lulares de los que acabamos de tratar consthuyen una de estas famiLias. Ahora
consideraremos los grupos de familias que pueden identificarse como pertene
dentes a una gran c1ase de receptores de sei'ial: los receptores Iocalizados en la
superficie de In celula.
Todas las moleculas senal solubles en agua (incluyendo los neurolransmiso
res, las homlOnas protcicas y los factores de crecimiemol y algunas moleculas
sei'ialliposolubles, se unen a receptores proteicos especificos situados en la su-
perficie de las relulas diana que afectan. Estos receptores proteicos de superfide
acttlan como transductores de sei'ial: llnen la molecula sei'ial (el ligando) con
una alta afinidad. y transforman cste evento extracelular en una 0 mas sei'mles
intracelulares, las cuates alteran el comportamiento de la celula diana.
La mayorfa de los receptores de la superfide celular pertenecen a una de es
laS tres clases. que se definen en fundon del mecanismo de transducd6n que uti
Iizan. los receptores asoclados a canales, lambien conocidos como canales i6"i
cos regulados por tTammisor, panidpan prindpalmente en la rapida senalizad6n
sim1ptica entre celulas excitables elecuicamente. Esle tipo de senalizaci6n esla
mediada por un pequeno numero de neurotransmisores que abren 0 derran
transitoriamente el canal i6nico aI que estan unidos, alterando asf brevemente la
permeabilidad i6nica de la membrana plasmatica y. por 10 lanto. modificando la
exdtabilidad de la celula postsinaptlca (Figura 1514A). Estos receptores relado
nados con un canal pertenecen a una familia de protefnas transmembrana que la
atraviesan varias veces (muJripasol y que son hom610gas entre sL En el Capftulo
11 se eSludian estos receplores, de forma que aquf no se tralaran en mayor pro
fundidad.
Los receptores asoclados a protefnas G actuan indlrectamente regulando la
activldad de Ulla enzima Iigada a la membrana plasmMica 0 un canal i6nico. se-
parados del receptor. La interacci6n enlre el receptor y la protefna diana esta
mcdiada por una tercera protefna. lIamada protei"a reglliadortl qlle line GTP (0
protei"a G) (Figura 15-148). La activaci6n de la protefna diana altera la coneen
trad6n de una 0 mas pequenas moleculas senal intracelulares (sl la protefna

782 Caprlulo 15: Transmisi6n de senalcs entre celulas

(AI RECEPTOR RELAC10NAOO CON CANALES 16NICOS
Figura t5-14 Lastresdasesde
rec::eptores de superflcle. A pesar de
.>looe6 que muchos receplores asociados II
enzimas tiencn una actividad
enzim;jlica intrinseca. como se
muestra en {Cj, muchos otros aCllian
sobre enzimas asociadas (no se
muestra).

IB) RECEPTOR RElAClONAOQ CON PROn:lNAS G

prot.lne G
lIozime 0
proteine G
ectivitda IInlime ect.vitda
--
'''~

uneli60ico o un" iOnico

IC) RECEPTOR RElAClONAOO CON ENZlMAS

\
dominlo dominio
C8laUtico ciltalilico
ina<:tlvo activo

diana es una enzima) 0 altera la permeabilidad de la membrana plasmatica (si la

protefna diana es un canal i6nico). A su vez, los mensajeros intracelulares ac-
tuan alterando el comportamiento de otras protefnas diana de la celula. Todos
los receptores rclacionados con protefnas G pertenecen a lIna gran sllperfamilia
de protefnas horn6logas, que atraviesan siete veces la membrana
Cuando son activados par su Uganda, los receptores asoclados a cnzlmas
actuan directamcntc como enzimas 0 estan asociadas a enzimas (Figura 15-14C).
La mayorfa de elias son prote(nas que atraviesan la membrana una sola vez y que
tienen ellugar de uni6n alligando en el exterior de la celu!a y e!!ugar catalftico en
el interior. Comparados can las otras dos c1ases, los receptores relacionados con
enzimas son heterogeneos. a pesar de que la gran mayorfa de ellos son protefna
quinasas 0 estan asociados con protefna quinasas, que fosforilan con juntos cspe-
cflicos de protefnas en la celula diana.

Los receptores de superficie celular, una vez activados,

desencadenan la adici6n de grupos fosfato a una red
de prote(nas intraceluJares9 10
La mayorla de 10 que se tratarn en este capitulo a partir de aqui se refiere a c6mo
trabajan los receptores relacionados con prol'efnas G y los receptores relacionados
con enzimas. A menudo las senales recibidas en la superficie de la c.:HuJa por cstas
dos c1ases de receptores son transmitidas hasta el nudeo, donde alteran la expre-
si6n de detenninados genes modificando asf el comportamiemo de la ~Iula. EI
sistema de nansmisi6n de la sefial csta fonnado por elaborados conjuntos de pro-
leinas seflal intracelularcs. La mayoria de cstas proteinas son: 0 bien protefnas que
cuando lIega la sena1 se rosrorilan mediante protefna quinasas 0 bien protefnas
que cuando !lega 1a senal sc linen a GTP. En ambos casas las prole{nas ganan uno

Principios generales de la sei'ializaci6n celuJar 783

 ENTRADA DE LA SENAl I ENTRADA DE LA seNAL
Figura 15-15 Los dos me(:anlsmos
prtnc:lpales de seftaUzacl6n
V
;-0
Intracelular comparten
ca.racter{nlcafl comunes. En ambos
casos una prOlefna sei'ial es activada
por la adici6n de un grupo fosfato,
-v-( _\ -(_\ e inaclivada por la e1iminaci6n del

~. ~~ ;-0 grupo fosfato. En (A) el fosfato es

af'iadido de forma covaJente a la
protefna sef'ial, mediante una protefna
quinasa; en (8) una proteina

~ sef'ializadora es inducida a cambiar su

GOP por un GTP. Para poner de

ISAUDA DE LA SENAlI I
SAUDA DE LA SEI'ilAL I manifiesto las simililUdes entre ambos
me(:anismos, el ATP se muestra como
V V APP cl AOP como APP, el GTP comO
GPPy el GOP como GPP.
(A) sePlALIZACtON MEDIANTE IBI Ser\lALIZACIQN MEDIANTE UNA
fOSFORILACION PROn:INA QUE UNE Gn>

o m<is rosratos en su cstado aClivado y pierden los rosfatos cuando la senal decae
(Figura 1515). A su vez, estas protefnas generalmente causan la fosforilaci6n de
Olras protefnas, generando una cmcada de fosforilaciolles.
Las casendas de fosforilaciones estan mediadas por dos tipos principales de
prote[na quinasas: las serina/lreo"ina qllinasas. que fosforUan protcfnas sobre
cadenas laterales de serina y (menos a menudo) de treonina, y las tirosina qui-
1Ill$ll$ que fosforilan protefnas sobre cadenas laterales de tirosina. Una quinasa
ocasional puede haeer ambas cosas. Se estima que a1rededor del I% de nueslros
genes codifican protefna quinasas, y que una sola celula de mamffero puede
contener mlls de lOO tipos distintos de estas enzimas, la mayorfa de las cuales
son serina/lreonina quinasas. A pesar de que menos del 0,1% de las protefnas
fosforiladas celulares contienen fosfotirosinas, veremos que esta pequena mino-
rfa juega un papel crucial en la senalizaci6n de la mayorfa de los receptores rela-
cionados con enzimas.
Como hemos ualado previamente, generaJmente los comportamientos ce-
lulares complejos, como la supervivencia 0 la proliferaci6n, no estilll estimula-
dos por una sola senaJ que acttia sola sino por combinaciones especfficas de se-
i'IaJes (Figura 15-8). La celula ha de integrar la informaci6n que proviene de
sei\ales difcrcntcs, para gencrar una respucsta adecuada -para vivir 0 moriT. 0
para proliferar 0 permancccr quicsccnte. La inregraci6n parece dcpcnder de in-
tcracciones cnrre las diversas cascadas de fosforilaci6n de protc(nas que se acti-
van por difercntes sefiales extracelularcs. En particular, algunas de las prolefnas
sei'lal cn las cascadas actuan como elemcn{QS integradores, equivalenlcs a los
microprocesadores de un ordenador: en respuesta a multiples sei\ales de entra-
da producen una salida calibrada para generar el efecto biol6gico deseado. En la
Figura 15-16 se presentan dos ejemplos sobre c6mo pueden actuar estas prote(-
nas intcgradoras.
La complejidad de estos sistcmas de respuesta a senaJes, compuestos por
multiples cadenas de protefnas sefiaJ que interaetuan entre sf, intimida. Sin em-
bargo, la lecnologfa de DNA recombinante combinada con los an;1l..isis geneticos
bo1sicos en Drosophila, en el nemAtodo C elegans y en levaduras, as{ como DUOS
metodos bioquimicos y farrnacol6gicos convencionales nos penniten descubrir
rnpidamcnte los inlrincados dctalles de estos mecanismos mediante los cuales las
protc(nas receptoras activadas cambian el comportamiento de la celula.

Resumen
Ctufa IIna de Ins relums de lin animal plllrkellllar estd "rogramadn dllrante el de-
sarrollo para respontkr a lin conjllnlo espedfico de senates qlle adrian ell diversas
comblnaclones reglllando el com,lOrramlento de la dlula y determi,uJlloo si la ci-

784 Caprtulo 15: Transmisi6n de seftales cntrcc~Hulas

IAI '81 Plgura 15-16 Integracl6n de seftales.
En (Al las seoales A y B activan
diferenles cascadas de fosforilaci6n de
prolC{nas, cada una de las cuales
produce la fosforilaci6n de la prolefna
Y, pero en diferenles lugares de la
prole{na. La prolefna Yse activa
unicamenle cuando ambos lugares
esljn fosforilados, por 10 que
Iinicamenle es activa cuando las
senales A y Bse hallan presentes
simuhjneamente. En (B) las sefiales A
y B producen la fosforilaci6n de dos
prolefnas. a y b, las cuales entonces se
unen entre sf dando lugar a una
protena activa abo En ambos ejemplos
I las proteinas se fosforilan. Sin
PROCESO DE PROOUCCION DE SENAl PROCESO DE PRODUCtION DE sellilAL embargo, una forma equivalente de
control puede ocurrir con el
intercambio de GTP por GOP sobre
una proteina que une GTP (~ase
Figura 15-15).
'ilia debe v;v;r 0 morlr 0 Ii debe proliferar 0 penlUlnecer qu;namte. La ",ayorin de
esttu senates median senalizaciones paracrinas en las que los mediadofU locales
son rapldamente captados, destruidos 0 inmoviliuulos. de forma que Ilnlcamente
pueden lU:tuar sabre las c11ulas vecintlS. Adem4s, uisu un control amfrallzado qlll!
estd ejerddo tanto por la seilallzaci6n endocrina, en la qlll! las ',omlomu segrega-
lias por las cil"las endocrlnas son transportadas por In Mngre hast" las dl"'as
diana th todD et cuerpo, como por In seiializaci6n sinaptlen en In ell/II los lIeum-
transmlsoru s~dos por las celulas nerv;osas actdan localmente sobre Ins ellu-
las postsinaptlMS con las que oontacmn sus axones.
Ln seiialluri6n eelldar requiere tanto moleculas senal extracel"'ares como 1m
oollJUllto oomplementario de prote/llas receplOTas en cadn cilula, ql,e In permlletl
unirlns y responder a elias de fUm JOmul programada y caracterlstica. Algrmas pe_
qll.eiias molkulas hldro/6bicm, iI.eluyendo las hormonas esteroilleas y tirolliens
y los retinoldes, tli/unden a trallh de la membrana plasmdtlca de la cilt1la diana y
actlvan protelnas receptoras intracelulares, las cllales regulan tliredtlmente la
transcripcMn de determlnados genes. Algunos gases en solucMII, oomo el dxillo III
trico y el mon6xllio de ctlrbollO, actllon como mediadores locales llifumliemlo a tra.
ves lIB la membrana de It, cilula diana y activanda una enz.ima illtracelt11ar -Imbl-
tIIalmente la gua,dlato ciclasa, que produce GMP cfcllco e" la cilu/a llilllUI. Slrr
emlH1rgo, la mayorla lIB las molkulas senai extracellliares SO" hidroflilcas y s610
son CttJHu;es de aCt/wlr proteltulS receploras de la superjicle de la c~/ula diana; eslos
receptores actlmn oomo trlUlsdllctores de senal, cOlwirtiemw el eoo",o de ImMIl ex-
tracelular e,r senales intracelull1res que alteran el oomportamlellto de la cilula dia-
nn.. Existell Ires /amllias prillcipales de receptores de slllJerficie celltlar, los comlJO-
mmtes de aula wu, de las cl"'les tran.sducen las se,1ales ex'racelulares de wla
mallera difere",e. Los receptores asociadDs a canales 16nicos son canales 16"lcos reo
gultulos por transmisor que se abren 0 se cierrall breoomellte 001110 respuesta a la
unl6" de un neurolTansmisor. Los receptores asociadas a protelnas G act/van 0
in.actlvan /ndirectame1lte ellZimas unidns a membralla plasmdtlca 0 canales 16"i-
cos, a travis de proteinas trim~ricas que ullell GTP (proteinas G). Los recelltores
moeiadDs a ellZimas actrlon directamente como ellZimas 0 esttIn asoc/ados a elu.l
mas; IUlbU,,,,lmente las e,lZimas son proteina quinasas que fosforilrm proteinas
determinadas de III cilula diana. A tram de cascadas de fosforilllciones de protei
n4S, muy bien reguladtu, oonjuntos elaborados de protein4S que ilrteractl1an entre
ellas transportan la mayorla de las senales desde III superjide luuta el nricleo, alu--
rando a.sl el patron de expresJ6n ginlar y, como oonsecuencia de ello, el comporta
mlento de la cilula. La interacd611 entre diferentes ca.sauJas permite a la dlula in-
kgrar la infonnaci611 que prolJielle de las mliltiples senales que recibe.

PrincipiOS generales de la sefiaJizaci6n celular 785

Seiializaci6n via receptores de superficie celular
asociados a protefnas G')
Los receptores asociadas a protefnas G constituyen la mayor familia de recep-
tares de 1a superficie celular. En malllfferos se han descrito mas de 100 miem
bros de esla familia. La mayorfa de elias han sido identificados mediante c!ollaje
de llOmolog(a, en el que se utiliza 1a hibridaci6n a baja estringencia con sondas
de eDNA preexiSlentes para detectar secuencias de DNA relacionadas (vease Fi-
gura 7-17). Olros micmhros de la famma se han encontrado mediante dOllnje de
expresi6". utilizando sus propiedades de uni6n de ligandos 0 de aClivaci6n celu-
lar para identificarlos. Una forma de esta aproximaci6n consiSIC en capiar en
moleculas de RNA una lihrerfa de moleculas de eDNA preparada a panir de ce-
luJas 0 de Icjidos que expresan el receplor en cuesti6n, e inyeclarlas en oocitos
de XenopllS. Los oocilos traducen las molec-uJas de RNA a prOleina. Estas proler
nas se insenan en la membrana plasmalica, donde pueden detectarse gracias a
sus propiedades de uni6n de un ligando determinado 0 de activaci6n celular.
Los receplores asociadas a proteinas G median las respueslas celulares de
una enonne diversidad de moleculas senal, incluyendo hormonas, neurotrans
misores y mediadores locales. de estructura tan variada como 10 es su funci6n: la
lista induye protefnas y pequenos pept.idos. aminoacidos y derivados de .kidos
grasos. Un mismo ligando puede activar muchos miembros diferenles de la fa- Ftgura 15-17 D1bujo esquematico de
milia. Par ejemplo. la adrenalina puede activar por 10 menos 9 miembros dife- un uecptor asoclado a protefnas G.
rentes de receptores asociados a prote(nas G, la acet.iJcolina a Somas y la sero- Los receptores que unen Iigandos
tonina por 10 menos a 15 de ellos. proleicos denen un gran dominio
extracelular de uni6n fonnado por la
A pesar de la diversidad qurmica y funcional de las moleculas senal que se
parle de la cadena polipeptfdica que se
unen a ellos, todos los receplores asociados a proteina G de los que se conoce su
mUC$tra en verde claro. Los receplores
secuencia de amino<1.cidos a partir de estudios de secuenciaci6n de DNA, lienen para Iigandos pequefios, como es la
una estructura similar y eSlan, casi con loda seguridad, relacionados evoluliva adrenalina, tienen dominios
mente. Estan formados por una sola cadena polipeptidjca que atraviesa siele ve extracelulares pequenos y
ces, arriba y abajo, la bicapa Iipidica (Figura 1517). Como discmiremos mas habitualmente ellugar de uni6n se
adelante, esta superfamilia de prolefnas receptoras Iransmembrana que atravie halla incruslado en el plano de la
san la membrana siete veces induye la rodopsina, la prole!na localizada en los membrana, fonnado por aminoacidos
ojos de los vertebrados y que es activada par la luz, aSI como los receplores olfa- de vados de los segmentos
tivos de los vertebrados. En los organismos unicelulares (amblen se encuentran transmernbrana. Las regiones de los
miembros de esta familia: un ejemplo de eUos son los receptores de levaduras dominios transrnembrana que son
que reconoccn los faCiO res de acoplarniento de las levaduras. Este motlvo es- responsables prillcipales de ullirse a
truclural tan anliguo tam bien 10 presenta la bacleriorrodopsin3, una bomba las protefnas G trimericas se mucstran
en naranja, y los que se fosforilan
bacteriana de H' actlvada por la luz, que se discule en el Capitulo 10, a pesar de
durante la dcscnsibilizaci6n del
que, a diferencia de los miembros de la familia, la bacteriorrodopslna no cs lin receptor (10 cllal se discute mas
receptor y no actlla a traves de ninguna proteina G. En Sll conjllnto, estos hechos adelante) se lTlueslran en rojo.
sugieren que los receptores asociadas a proteinas G que median la sei'ialil..aci6n
celula-celula en los organismos pluricelulares deben haber evolucionado a par
lir de receptores sensoriales de sus anlepasados uniceluJares. Los miembros de
esta familia de receplorcs han conservado no s610 su secuencia de mninoacidos
sino tambien su relaci6n funcional can llna proteina G a Iraves de la cllal trans-
milen al interior celular la senal que ha transportado un Ugando extracelular. En
esta secci6n trataremos principalmenle de esta cadena de acontecimienlos que
se inician can la activaci6n de las proleinas G.

Las prote(nas G trim~ricas transmiten la sefial intraceluJar desde

los receptores asociados a prote(nas Gil, 12
las prolefnas trlmerlcas que unen GTP (proteinas G) que acoplan funcional-
mente estos receplores a sus enzimas diana 0 a canales i6nicos en la membrana
plasmalica son eSlructuralmente diferentes de las proteinas que unen GTP. de
una sola cadena (denominadas prote(nas monomericas que unetl GTP 0 GTPasas
mOllomericas). las cuales transmiten las senales intracelulares y regulan el trati

786 Capftulo 15 : Transmlsi6n de sefiales entre ceJulas

 _..... . FlguralS-18 Losdosprocesos
prlnclilales mediante los cuales 1a
proleina G relacionada con los
receplores de superficie de la ~Iula
genera mensajeros inlracelulares. En
ambos casas, la uni6n de un Iigando
eXlTacelular altern la conformaci6n del
dominio citoplasmatico del receptor,
de forma que ahora puede unirse a
una protefna G, la cual a su vez aCliva
(0 inaclival una enzima de la
membrana plasmatica. En el proceso
del AMP cfclico (cAMP).la enzima
produce AMP cfclico directamente. En
el proceso del Cal. ,Ia enzima produce
un mediador soluble (el inositol
trisfosfaw, se discute mas adelante)
que Iibcra Cal. desde el retfculo
endoplasmlhico. Como otms
pequcf'ibs mediadores intracelulares,
tanto el AMP dclico como el Ca2.
transmiten la sef'ial aClUando como
ereclOres alostericos: se Wlen
PflOCESQ DE cAMP PROCESO DE Cal. espedficamente a protefnas de la
celula, alterando su conformaci6n y,
por 10 tanlo. su aClividad.

co de vesfculas y muchas Olros procesos de las celulas eucariotas. Las GTPasas

monomericas seran tratadas mas tarde en este y en DUOS capflUlos. Sin embar-
go, ambas c1ases de prolcfnas que unen GTP son GTPasas y aCllian como inle-
rruptores moleculares que pueden saltar entre dos estados: uno activo, cuando
eSlan unidas a GTP, y otro inactivo, cuando estan unidas a GOP. En el contexto
habitual. ~activo~ significa que la molecula actua como una senal desencade-
nando Olras procesos celuJares. Cuando un ligando eXlracelular se une a un re-
ceptor asociado a prolcfna G. el receptor cambia de canformaci6n modificando
1a prolefna G trimerica a la que esta asociado. hacienda que se desprenda del
GOP y 10 reemplace por GTP. Este cambia revierte cuando la prOlcina G hidrolj-
z.a el GTP que lIeva unido, transformandolo de nuevo en GOP. Pero mientras ello
ocurre, la protefna (activa) ticne la oportunidad de difundir lejos del receptor y
de Iransmilir su mensajc por la cclula, durante un perfodo de tiempo mas 0 me-
nos prolongado.
La lllayorfa de receptorcs asociados a protefnas G activan una cadena de
acontecimientos que modifican la concentraci6n de una 0 mas moleculas senal
intracelulares. A su vez, estas pequenas molecuJas, a menudo denominadas me-
dladores Intracelulares (a l'ambien mellsajeros illtrace/llfares 0 segulldos mensaje-
ros), transieren la senal alterando el comportamienta de determinadas prolefnas
de la celula. Dos de los mediadores intracelulares mas ampljameme utilizados
son el AMP cicfico (cAMP) y el Ca2,: en la mayona de las celulas animales exiSlen
direrentes mecanismos que modifican sus concentraciones y la mayana de los re 4

ceptores asociadas a protefnas G regulan uno de los dos mediadores, como se in-
dica en 1a Figura 15-18.

Algunos receptores incrementan los niveles intracelulares de

AMP cfclico activando la adenil ciclasa a traves de una
protefna G estimuladora (G s )13
EI AMP dcllco (Figura 15-19) fue identificado par primera vez en 1959 como un
mediador intracelular de la acci6n hormonal. Ahora sabemos que actua como
una Illolecula senal intracelular en todas las celulas procariot'as y animales en
que se ha eSludiado. Para que el AMP cfclico aClue como un mediador intracelu-

Seftal.Izacl6n vfa receptores de superficlc celular asociadas a prole(nas G 787

 o
I
-0-'I
o
FOSFATO

laT, su concenlraci6n (que normalmente es S 1O-7M) ha de poder variar. aumen- Figura 15-19 E1AMPcklko.se
lando 0 disminuyendo. en respuesta a sefiales extraceluJares: bajo la influencia muesrra su f6rmula. un modelo
de hormonas los niveles de AMP ciclico pueden variar hasta valores cinco veces espacial de varilla y un modelo de
superiores. en cUC5li6n de segundos. Como hemos explicado antes (vease Figura espacio !Ieno. (C. H, N, 0 Y P indican
15-10), una capacidad de respuesla como esta requiere que la rapida sfmesis de 410mos de carbono, hidr6geno,
la moh~cula este compensada por una rapida degradaci6n 0 eliminaci6n de ella. nitrdgeno, oxigeno y f6sfoTO,
respeclivamente.)
EI AMP cicJico se sinlCtiza a panir de ATP mediante una enzima unida a mem-
brana, la adenU c1clasa, y es rapida y continuamenle destruido mediante una 0
varias fosfodiesterasas de AMP deUco, que h..idrolizan el AMP cfclico hasta ade-
nosina S'-monofosfalo (S'AMP) (Figura 15-20).
Muchas moh~culas sel\~d cxtracelulares aetuan controlando los nivcles de
AMPcfdico, alterando la aClividad de la adenil ciclasa (Figura 15-21) y no la aCli- 000
I I I
vidad de la fosfodiesterasa. De la misma fonna en que la misma honnona eSleroi- l)-P-O P-O-P-Q-CH
I I I 1
dea produce efectos diferenles en cclulas diana diferenles, dislintas cclulas diana 0- 0- 0-
responden de forma muy diferente a sefiales extraceluIares que alteran los nivcles
intracelulares de AMP cfclico (rabla 15-1). Sin embargo, habinlalmente todos los OH OH
ligandos que activan la adenil ciclasa en un detenninado ripe de cclllia diana

;;~ AN~
causan siernpre el mismo efecto: por ejemplo, por 10 menos cualro horrnonas ac-
tivan la adenil ciclasa en las c6111las deltejido adiposo y IOdas elias estirnul'ln la
degradaci6n de triacilgliceridos (1a forma de almacenamiento de las grasas) baSla
acidos grasos (vease Tabla 15-1). Los diferenles receptores para cstas hormonas

O/~
activan un acervo cornun de moleculas de adenil ciclasa, a las que estan acopla-
das mediantc una protefna G trimerica. Como esta protcina participa en la aCli-
vaci61l de la cnzima, se denomina proleina G esllmuladora (G. de "stimulating"l. \/H1~
Los individuos que son geneticamentc deficientes en G. prcsentan respucstas , ' - 0 OH
disminuidas a cicrtas hormonas y, par 10 tanto, t'ienen anomalfas metab6licas. 0-

Il---
anomalfas en el desarrollo de los huesos y retraso mental.
'oModleater8s/I de
Los receplores acoplados a la activaci6n de la adenil ciclasa mejor estudia-
MPclll
dos son los rec::eplores Il adrcnerglcos. los cuales median algunas de las accio-
nes de la adre"afi"a y de la lIoradrellalitla (Figura 15-22 y vease la Tabla 151).
o
Puede reconslruirse un sistema adenil ciclasa activable par adrenalina en vesf- I
culas de fosfolipidos sinteticas, utilizando receptores 13-adrenergicos purilica- -O-P-O-CH ~:1!~
I
0- ""..... ,
dos, G. y moleculas de adenil ciclasa, 10 cual indka que no se requiere ninguna
otra protefna para eSle proceso de activaci6n. iDe que fonna la prolefna G. me-
dia este acoplamicnto? La respuesta depende de la estructura trimenca de la OH OH
prolefna G, tal como disculiremos a cOnlinuaci6n. Figura 15-20 SCntesis y degradacl6n
del AMP cklko (cAMP). Una
Se cree que las prolemas G trim~ricas se desensamblan pirofosfatasa hace que la sinlesis de
cuando son activadas ll . 12, 14 AMP cfclico sea un proceso
irreversible, hidrolizando el pirofosfato
Una prolefna G est~ compueSla por tres cadenas polipeptidicas diferenles, de- -@que se libera en esta reaoci6n
nominadas a, ~ y y. La cadet/a a de las proleitlas G. (aJ se une e hidroliza GTP y (no se muesrra).

788 Capftulo 15: Transmisi6n de seiiaJes entre ~Iulas

 dominios
C8tl11illCOS
COOH

Figura 15-21 La adenU c1cJasa. En los vertebrados.la enzima est;i farmada

habitualmcnlc por unos 1100 residuos de aminoacido y se cree que Ilene dos
grupos de seis segmenlos transmembrana que scpamn dos dominios
cataJiticos citol)]asmaticos similares. En mamfferos cxisten como minima
seis tipos de cstas farmas de udellil ciclasa (tipos I-VI). Todos elias cstlln
estimulados porG. aunque ellipo I, que se encuenlra prillcipalmentc en el
cerebra, tamblen se estimula por complejos de en!' unidos a la praterna que
une Cal., la calmodulina (de la que tralafernos mas adelanle).

aCliva la adenil ciclasa. La cadena 13 y la cadena rde las proteiTlns G. fannan un

intima complejo (Pl) que ancla el complejo G. a la eara citoplasmatica de 1a
membrana plasmatica al menos en pane mediante una cadena Iipidica (un gru-
po prenilo) que est~ anclado covalentemente a la subunidad y. En su forma inac-
tiva, G. esta en forma de trlmero can una molecula de GOP unida a a.. Cuando
G, es activada par la uni6n de un receptor activado par un Iigando, a, cambia su
GOP par GTP. 5e cree que clio hace que a. se disocie de jly, permitiendo que a,
se una a una l1lolecula de adenil ciclasa, a la que act iva a producir cAMP dclico.
5i las celulas son capaces de responder nipidamente a cambios en la COllcell-
traci6n de una molecula senal cxtracelular, la activaci6n de la adcn..il ciclasa puc-
de ser revenida nipidamente en cuanlo el Iigando senal se disocia del receptor.
Esta capacidad para responder rapidamcnte a cambios esta asegurada debido a
que la vida media de la fonna activa de a. es corta: la aClhridad GTPasa de se a.
a.
eSlimula cuando se une a la adenil cidasa, de forma que el GTP unido a ella se
hidroliza a GDP, generando a.y la adenil cidasa inacliva. Entonces, a. se vuelve a
asociar con ~ydando lugar de nuevo a una molecula G, inactiva (Figura 15-23).
La importancia de la actividad GTPasa en el proceso de fmalizaci6n de 13
respuesla puede ponerse de manifieslo en el tuba de ensayo. Si se loman celu-
las, se rompen, se abren y se exponen a un anaJogo del GTP (GTPyS) cuyo fosfalo
terminal no es hidrolizable. la producci6n de AMP dc1ico tras cl tratamiento con
Idrenalinl

Figura 15-22 La adrenalina. Esta

Tabla 15-1 Algunas respueSlas ce1ulares Inducldas por hormonas a tra... ~s del AMP hormona (tambll!n denominada
dclico epinefrina) se sintetiza a partir de
lirosina y es segregada por ia gl4ndula
Tejldo diana Hormona Respuesta principal adrenal cuando un mamlfero se
Glandula liroides hormona eslimuladora de la sintesis y secreci6n de estresa.
liroides (TSH) hormonas tiroideas
Coneza adrenal hormona adrenoconicotropa secreci6n de cortisol
(ACTH)
Ovario hormona IUleinizante (LH) secreci6n de progesterona
Musculo adrenalina degradaci6n de gluc6geno
'iueso paralhormona resorci6n del hueso
Coraron adrcnalina incremento de la frccucncia
cardfaca y de la fuerza de
contracci6n del coraz6n
Hrgado glucag6n dcgradaci6n de gluc6geno
RiMn vasopresina resorci6n de agua
Tejido adiposo adrenalina. ACTH, degradaci6n de
g1ucag6n. TSH lriacilgliceridos

Sei'ializaci6n vfa receplores de superficie celuJar asociados a protemas G 789

 protelne
r8Ceptofe
protejna G,
, adenil
ciclasa
Figura 15-23 Modelo actual que
\lustra de que forma G. acopla la
actlvacldn del receptor a la actlvacldn
de la aden" c1c1asa. Mientras el
ligando senal pennanece unido, el
receptor proleico puede continuar
activando moleculas de protefna G,.
ligando
con 10 que se produce una
sellal amplificaci6n de la respuesta. Lo que
es m;js importante, despues de que el
la uniOn delligando IIlte'lI La eoofOlmaciOn
del receplor haciendo asequible un lugll'
ligando senal se haya disociado del
pII,e III uniOn de la proleina Go receptor, la prOieina a. puede
pennanecer activa y seguir
estimulando una molecula de ciclasa
durante muchos segundos, 10 cual
proporciona una amplificaci6n todavfa
mayor.

I ia difusl6n &f1 la bicapa pennlte .. asociaclOn

de 10$ compleios Itgando-receplOf con protelnas
G., disminuyendo mueho III .finidad de Go par GOP

el GOP se disocia, permitiendo que se u~ GTP;

elto hace que Ia subunidad a se disocie del complejo
G.. exponiendo su lugar de unIOn para la adenil ciclasa

la subunidad II sa una e la adenil clclasa, activ~ndola

para producir muchas moleculas da cAMP: mientra8
tanto, 18 disociaci6n delligando hace que el fllCeptor
recupere su conformacion origlnsl

la hidrolisis del GTP por la subunidad a hsce qOll Btlta

subunidad fllCUpere su conformacion original,
disocijndose de la ad&f1H cielan (que se vuelve InaCCiv.)
y se rea$OCie con un complejo ~y fo,mando de nuevo
un complejo Go

790 CapftuJo 15: Transmisidn de sefiaJes entre cIulas

una hormona se prolonga enomlemente. Un fen6meno similar se observa en
pacientes que sufien de cOlera, en los que 10'1 toxina bacteriana responsable de
los s(ntomas de esta enfermedad inhibe el mecanismo de autoinaClivaci6n de 0:...
La toxlna oolerica es una enzima que cataliza 10'1 transferencia de ADP ribosa
desde NAO' imracelular a a.. La AOP ribosiJaci6n altera a. de fonna que pierde
10'1 capacidad de hidrolizar cl GTP que tienc unido. Las llloleculas dc adenil ciela-
sa aClivadas por estas a. allcradas perlllanccen activas indefinidamente. La c[c-
vaci6n prolongada de [os nivelcs de AMP cfelico en las celulas cpitcliales lotesti-
nales provoca un gran eOujo de Na' y de agua en el intestino, que es responsab[e
de 10'1 sever;) diarrea caracteristica del c6lera.

Algunos receptores disminuyen los niveles de AMP ciclico

inhibiendo la adenil ciclasa via una protefna G trimerica
inhibidora (G j ) 11, 12,15
Una misma molecula selial puede incrementar 0 disminuir 10'1 concentraci6n in
tracelular de AMP delieo, cn funci6n de[ tipo de receptor 0'11 que se una. Cuando
[a adrenalina, por ejemp[o, se une a un receptor p adrem!rgico, activa [a adenil ci-
elasa mientras que cuando se une a un receptor 0.2 adrenergico inhibe a la enzi-
rna. La diferencia entre ambos radka en 10'1 proteina G que acopla en cada casu
estos receptores a 10'1 cielasa. Los receptores p-adrenergicos se acoplan funcio-
nalmente a la adenil cielasa a traves de una proleina G. mientras que los recep-
tores ll:z adrenergicos se acoplan a 10'1 misma enzima a traves de una proteina G
Inhibldora (Gil. Una Gl puede contener el mismo complejo Prque lIna G. pero
tiene una subunidad a. diferente (~). Cuando son activados, los receptores ~
adrenergicos se unen a 10'1 proteina Gl provocando que III se una a GTP y se diso-
cie del complejo py. Se cree que tanto In 0.1 como el pycontribuycn a 10'1 inhibici6n
de la adenil cielasa: III inhibe 1.1 adenil ciclasa, probablcmentc de forma dirccta
mientras que fty puede inhibir [a sfntesis de AMP dclieo de dos maneras -direc
tamente, uniendose a 10'1 cielasa, e indirectamente uniendose a algllnas subuni
dades ~ libres de la misma celula, impidiendo aSI que activen moleculas de ade-
nil ciclasa. Mas adelante veremos que Gj tambien actua abriendo canales de K'
de 10'1 membrana plasmatica, y parece probable que esta funci6n sea mas impor-
tante que 10'1 inhibici6n de la adenil ciclasa.
Mientras que 10'1 toxina colerica cataliza 10'1 ADP ribosilaci6n de 0:.. y de esta
forma inactiva 10'1 actividad GTPasa de 0:., 10'1 toxina pertusica, sintctizada por 10'1
bacteria que causa la 109 fcrina, calaliza la ADP ribosilaci6n de 0.,. La AOP ribosi-
[ad6n de a, impide que el complejo G1 pueda intcraclunr con [os receplores, por
[0 que permanece unido a GOP y pierde 10'1 capacidad de inhibir 10'1 adenil ciclasn
ode abrir los canales de K'.
Las protelnas G trimericas son molkulas genal extraordinariamente versati-
les. En los ejemplos considerados anteriormente tanto 10'1 subllnidad a como el
complejo py son componentes activos, pero en otros casas los receplores se ha-
Ilan acoplados a sus protel'nas diana unicamente a traves de 10'1 Iiberaci6n del
complejo py. Ademas, los complejos Itt tam bien pueden actuar como regulado-
res condidonales de protefnas efectoras: por ejemplo pueden incrementar 10'1 ac-
tivaci6n de algunas formas de adenil ciclasa, pero unieamemc si 10'1 ciclasa ha
sido activada previamente por a,.

La protefna quinasa dependiente de AMP cklico <quinasa A)

media los efectos del AMP dclico 1fi
EI AMP cfclieo ejerce sus cfectos en las celulas animalcs principalmcnte aclivan-
do 10'1 enzima protema qulnasa dependlente de AMP cfclico (qulnasa A), la cual
cataliza 10'1 transferencia de un gropo fosfato terminal desde el ATP a un residuo
especffico de serina 0 de treonina de determinadas protclnas de 10'1 celuJa diana.
Los residuos de aminmlcido que son fosforilados por 13 quinasa A sc caracteri
zan por cstnr unidos, por su lado amino terminal, n dos 0 mas aminoacidos basi-

SeiiaJizaci6n v{a reccptores de superficie celular asoclados a prote(nas G 791

 ....
AMPclcliro Figura 15-24 Acllvacl6n de la
proterna qulnasa dcpendiente de AMP
dcJlco (quinasa A). La uni6n de AMP
cJclico a las subunidades reguladoras

l
induce en elias un cambio de
confonnaci6n que las hace disociarse
quinMIIA
del complejo, aClivando asrlas
in.acliva
+ subunidades calalflicas. cada
subunidad reguladora liene dos lugares
de uni6n para AMP cfdico. y la
liberaci6n de las subunidades
calalflicas es un proceso cooperativo
.ubunKlad .ubunKlad complejo de AMP que requiere la uni6n de mas de dos
reguladora c.1l1litial cidico Y de III. mol&:ulas deAMP cfclico al temtmero.
inactiYa subunidactn
reguladoru Esle hecho hace que la respucsta de la
quinasa a los cambios en la
concentraci6n de AMP cidico sea
cos. A su vez, la fosrorilaci6n covalente de los residuos de aminoacido adccua- aguda, como discutimos mas tarde. En
dos regula la actividad de la proteina. la mayorfa de las celulas de mamifero
La quinasa A se encuentra en todas las celulas animales y se cree que es la exU;len aI menos dos tipos de quinasas
A:. la del tipo Ise halla
responsable de todos los efectos del AMP ddico en la mayona de las celulas. (La
fundamenlalmente en el cilosol
unica funcion conocida diferente del AMP dclico en mam(feros consiste en re-
mienlras que la de lipo n se halla unida
guJar una elase especial de canales ionicos en neuronas olfativas sensibles al a trav6 de su subunidad reguladora a
olor.) Los substratos de la quinasa A son diferentes en diferentes lipos celuJares, la membrana plasma-liea. a la
10 cual explica por qu~ los efectos del AMP ciclico varian en funcion de la c~lulas membrana nuclear y a los
diana de que se lrale. microlUbulos. En ambos casas. sin
En su eslado inactivo, la quinasa A es un complejo formado por dos subuni- embargo, cuando las subunidades
dades catalflicas y dos subunidades reguJadoras que unen AMP delico. La union catalfticas son liberadas y aClivadas,
de AMP cfelico altera la conformacion de las subunidades reguladoras, haciendo pueden migrar al mideo (donde
que se disocien del complejo. Las subunidades catalilicas Iiberadas resultan ac- pueden fosforilar proleinas
tivas para fosforilar especfficamenle delerminadas moltkulas proleicas (Figura reguladoras de genes) mientras que las
15-24). subunidades reguJadoras permanecen
La fosforilaci6n de protelnas mediada por AMP cfclico rue demOSlrada por en el citoplasma. La estrucrura
lridimensional del dominio proterna
primera vez en estudios del metabolismo del glucogeno en c~lulas de musculo
quinasa de la subunidad catalftica de la
esqueletico. EI glucogeno constituye la principal reselVa de glucosa, y tanto su qUina&'1 Ase mueslra en la Figura 5-12.
sfntesis como su degradaci6n en el musculo esqueletico eSlrtn reguladas par la
adrenalina. Par ejemplo, cuando par cualquier causa un animal se halla asusta-
do a en tension, su glandula sllprarrenal segrega adrenalina a la sangre, ponien-
do en estado de "alerta" a diversos tejidos del cuerpo. Entre Olros efectos, la
adrenalina cirClllante induce a las cclllias lllllsculares a degradar su glucogeno
hasta glucosa I-fosfato y a detener la srntesis de gluc6geno. La glucosa se ox.ida a
traves de la glucolisis suminislrando ATP para la contracci6n muscular sosteni-
da. De esta (orma, la adrenalina prepara a las celulas musculares para una aClivi-
dad intensa. La adrenalina se une a receptores ~ adrenergicos de la sllperficie de
la celula muscular, incrementando los niveles citos6licos de AMP cfclico. A Sll
vez, el AMP cfclico aCliva la quinasa A, la cllal fosforila Olras dos enzimas. La prj-
mera de elias, lafasfarilasa quillasa es la primera protelna quinasa que fue des-
cubierta (1956) ya su vez, fosforila la enzima gfuc6gerlO fosforUasa, activandola
para que libere residuos de glucosa a panir de la molecula de gluc6geno (Figura
15-25). La otra enzima que resulta fosforilada por la accion de la quinasa A es la
gfuc6gello simasa. la cual cataliza el ultimo paso de la slnlesis de g1ucogeno a
partir de g1ucosa. Mediante esla cascada de interacciones, un incremento de los
Iliveles de AMP delico estimula la dcgradacion de glucogeno e inhibe su slnlesis.
con 10 que aumenla al maximo la cantidad de g1ucosa disponible para la c~lula.
En algunas c~lulas animales, un incremento de los niveles de AMP cfclico
activa la transcripci6n de determinados genes. Por ejemplo, en las c~lulas que
segregan la hormona somatosrarina, el AMP cfclico activa los genes que codifi-
can esta hormona. La region reguladora del gen de la somatostatina contiene
una cona secuencia de DNA. denominada elemenro respuesta ai AMP cfclico

792 Caprtulo 15: Transmisi6n de seiiales entre relulas

 Figura 1525 Estlmulacl6ndela
degradaci6n de gluc6geno por AMP
cfclleo en eelulas de museulo
esquelellco. La union de AMP cfcIieo a
la quinasa Aact iva a esta enzima a
fosforilar, y por tanto activar, a la
fosforilasa quinasa, la cual, a su vez,
fosforiia y activa la gluc6geno
fosforilasa, la enzima que degrada el
I()$foriteilll glucogeno. La quinasa Atambien
quina..
,nae11ve incrementa, directa e indireetamente,
la fosforilacion de la glucogeno sintasa
inhibiendola, inactivando asf la
sfntesis de gluc6geno (no se muestra).

GLuc6GENO GLUCOSA ,-FOSFATO

GLUCOLISIS

(eRE, de Cyclic AMP Hesponse Element), que tambicn se enCllentra en las regio-
nes reguladoras de otros genes activados por el AMP cfclico. Esta secuencia es
reconocida por una protefna especffica reguladora de genes denominada protei-
na de unl6n a CRE (eREB, de CRE-Binding). Cuando CREB es fosforilada por la
qllinasa A sobre un residuo de serina, adquiere la capacidad de activar la trans-
cripci6n de estos genes; la fosforilaci6n estimula la actividad transcripcional de
CREB sin afectar sus propiedades de uni6n al DNA. 5i eSle residuo de serina se
modifica por mutaci6n, CHEB resulra inactiva y ya no puede estimular la trans-
cripci6n de ningun gen ell respuesta a un incremento de los niveles de AMP d-
elico.

Diversas protefna serina/treonina fosfatasas revierten

rapidamente los efectos de la quinasa A17
Normalmente es imponante que los cfettos del AMP cfclico sean transitorios,
por 10 que es evidellle que las cclulas han de desfosforilar las protefnas que han
sido fosforiladas por la quinasa A. En generalla desfosforilaci6n de las serinas y
las treoninas fosforiladas eSla catalizada por cuatro grupos de fosfoproteina
serina/treonlna fosfatasas -las prolefna fosfalasas I, llA, liB Y lie. Excepto
para el caso de la protein a fosfatasa IIC (que es una fosfalasa poco imponante,
no relacionada con las olras), las demas fosfatasas eSlan compueslas por una
subunidad calalftica hom610ga que forma un complejo con una 0 mas subllni-
dades reglliadoras. La proce{lIa fosfarasa I juega un importanle papel en la res-
puesta al AMP cfclico, como veremos a continuaci6n. La prolenafosfarasa IIA
tiene una especificidad muy amplia y parece ser la principal fosfatasa responsable
de reverlir muchas de las fosforilaciones catalizadas por serina/lreonina quinasas;
juega un papel importante en la regulaci6n del cicio celular. La proteillafosfatasa
liB, lambicn denominada calcineurilla, es activada por Ca2~ y es especialmente
abundante en el cerebro.
La actividad de cualquier proteina rcgulada por fosforilaci6n depende del
balance en un instante dado entre las actividades de las quinasas que la fosfori-
Ian y de las fosfatasas que constantemente la eSlan desfosforilando. La proteina
fosfatasa I es responsable de la desfosforilaci6n de muchas de las protefnas que
son fosforiladas por la quinasa A. Par ejemplo, inactiva la CREB eliminando su

Sefializaci6n vfa receptores de superficie eelular asociados a protefnas G 793

fosfato activador, inactivando asf la respuesta Iranscripdonal causada por un
incremento de los niveles de AMP dclico. En las celulas del musculo esqueletico,
la prolefna fosfatasa I desfosforila cada una de las tres enzimas dave del metabo-
Iismo del gluc6geno que, como hemos mendonado anles, resultan fosforiladas
par la quinasa A en respuesta a la adrenalina, y hacen que la celula cambie de
una situad6n de sfntesis de gluc6geno a oHa de degradaci6n. La prOlefna fosfa-
tasa I tiende a contrarreslar cslas fosforilaciones, pero en las celulas musculares
activadas por adrcnalina Sll aClividad eSla suprimida por otra enzit~la diana de la
quinasa A, que es una protef"a j"lljbidom de fosfatasas espedfica. Cuando esta
protefna inhibidora es fosforilada por la quinasa A, se une a la protefna fosfatasa
I inactivandola (Figura 15-26). Activando la fosforilasa quinasa e inhibiendo si-
multaneamente la acci6n opuest'a de la proleina fosfatasa I, la quinasa A genera
un cambio mucho mayor en el metabolismo del g1uc6geno del que podrfa obtener
mediante su acci6n a traves de una sola de eslas enzimas.
Habiendo discutido de que forma las proteinas G trimericas acoplan los re-
ceptores a la adenil ddasa allerando los niveles de AMP dclico en las celulas,
ahora consideraremos de que forma las proleinas G acoplan los receptores a
alra enzima crucial-Iafosfolipasa C. La aClivaci6n de eSla enzima conduce a un
incremento de la concentraci6n de Ca 2 en el citosol, y el Cal. es utilizado, de
una forma incluso mas general que el AMP ddico, como mediador intracelular.

Para utilizar el Ca2. como seiial intraceluJar, las cfHuJas han

de mantener los niveles basales de Ca2+ muy bajoslll
La concenlrad6n de Ca~' Iibre en el dlosol de cualquier celula es extremada-
mente baja ($ 10-7 M), mientras que Sll concentrad6n en el nuido eXlracelular
(_10-3 Mf yen el reticulo endoplasmatico (ER) es alta. Asf pues. existe un ellor-
me gradiente de Ca2< que tiende a llevar Ca 2 hacia el dtosol, lanto a traves de
la membrana plasmatica como a traves de la membrana de EH. Cuando una
seflal abre transitoriamente los canales de Ca 2 en alguna de eSlas dos mem-
branas, el Ca 2 nuye precipitadamenle al citosol. incrementando dramalica-
mente la concentraci6n local de Caz. y activando mecanismos celulares sensi-
bles a Caz'.
Para que este mecanismo de seiiaHzaci6n sea funcional, es necesario que la
concentrad6n de Cal. en el dlosol se manlenga baja, 10 cual se consigue de dife-

Plgura 15-26 Papel de lit protelna

rosratasa I enla rcgulacl6n del
metaboUsmo del gluc6gcno por el
AMP dcllco. El AMP ddioo inhibe la
protefna rosratasa I, que en caso
contrario podrla oponerse a la
reaoci6n de rosrorilaci6n estimulada
por el MiP ddioo. E110 ocurre ya que
la quinasa A rosrorila a la protefna
inhibidora de la roSratasa, la cual
entonces se une a 10 rosratasa I,
inhibiendola.

"'l - .---
LA UNION DE LA
PROTEiNA lNHIB1DORA
FOSfORILADA INHIBE
LA PROTEINA FOSFATASA -
794 Capitulo 15: Transmlsi6n de seiiales entre celulas
 rentes fomlas. Todas las ccluJas eucariotas tienen en su membrana plasmc1lica
una ATPasa que uliliza la energfa de la hidr6lisis del ATP para bombear Cal. ha
cia el exterior del chosol. Las celulas tales como las musculares y las nerviosas.
que utilizan de forma intensa el sistema de sefializaci6n del Ca2., disponen en su
membrana plasmc1tica de OlTa bomba de Ca2. adicional, que acopla el eflujo de
Ca2. a un innujo de Na'_ Este intercambiador Ca2Na tiene una afinidad por el
Ca2 relativamente baja. por 10 cual unicamente actua de forma eficiente cuando
los niveles citoplasmc1ticos de Ca2. aumentan 10 veces por encima de sus valores
normales. tal como ocurre despues de que una celula nerviosa 0 una celula mus-
cular hayan sido estimlliadas repetidnmenle. En In membrana de ER exisle otra
bomba que lambicn desempei'm un papel importanle en el manlenimienlo de
una concenlTaci6n baja de Ca2' en cl cjtosol: esta ATPasa dependiente de Ca2
perrnite al ER capmr grandes canlidades de Cal. del citosol, en contra del gra-
dieme de concenlraci6n y aunque los niveles de Ca2. en el cilosol sean bajos.
HabituaJmeme, la concemraci6n de Ca2 libre en el citosol varia desde 10-7
Figura 1527 Controles de la
M cuando la relula estc1 en reposo. hasta alrededor de 5 x lQ-6 M cuando esta ac- concentJ"ltcl6n c1tos6Uca de Ca Zo EI
livada por una senal exuacelular. Sin embargo, cuando la cclula estc1 danada y dibujo muestra un esquema de los
no puede extraer Cal. del citosol de forma eficiente. la concentraci6n de Ca2. mecanism05 principales a lra\~ de 105
puede aumentar de forma peligrosa (>I~ M). En estas circunstancias, comienza euales la etHula mantiene muy bajas
a actuar una bomba de Ca2. de baja actividad pero gran capacidad. siluada en la las concentraciones de Cal. ell el
membrana interna de la mitocondria. y utiliza el gradiente elcctroqufmico gene- cilosol, ell contra de elevadas
rado a traves de esta membrana durante las etapas de transferencia de electro- eoneentraciones de Cal. en el fluido
nes de la fosforilaci6n oxidativa, para extraer Ca~' del cilosol importandolo a la eXlrncclular. EI Cal' es bombcado
milocondria. En la Figura 15-27 se resume este mecanismo. aetivamellle des<1e el cilOSOI al exterior
de la e~lula (Aj yal interior de Ell (B).
Ademas, en la eelula existen varios
El Ca2 actua como un mensajero intracelular ubicuO l9 tipos de Illoleeulas que unen Cal. Iibre.
La milOeondria tambien puede
La primera evidencia dirccla de que el Ca2 actua como un mediador inlracelular bombear Cal. eXlrayendolo del citosol.
proviene de un experimenlo reali7..ado en 1947, que demostr6 que la inyecci6n pero 5610 10 haee de (omla eficlenle
intracelular de una pequefia cantidad de Ca2. provoca la contracci6n de las fi- cuando los niveles de UtI. son
bras musculares esqueh~ticas. Rccienlemente se ha puesto c1aramenle de mani- cxtremadamente altos -habitualmente
fiesto que el Ca2. actua. como un mensajero intracelular en una amplia. gama. de como resuhado de una a1teraci6n de la
respueslas celularcs. entre las que se pueden destacar la secreci6n y la prolifera- eelula.

ATPasa dependieme
de Cal. mot6cuJal del importatIOn
en la membrana ciloplasma ao;:tjva de Cal.
del retlculo que unen Cl l en la mitocondria
endoplalmiltico
mllmbrana plnmMicll

transportto 0. inter~mbio
de c. 20 impulpdo pol" Na'

retlculo elHk>plaamillico milocondria

CITOSOL
C1TOSOl

lAl ,.,
Seiializaci6n vfa receptores de superficle celular asociadas a protefnas G 795

J
 membrana plnm61ice polarizeda membrana plasm61ica dnpolarizada Figura 152.8 Dos procesos comunes
-
:
.... '.
::.j
'ta:. .
.
canal de Ce l
:.' : \ . IIIrllv& de los cuales el ea!' puede
entrar en el cltosol en respuesta II
:':".: ::'. ::.:.:: ::::.:". canaldeCa~'
..
reguledo por seftaJes extracelulares. En (Al el Ca~'
.: " voltaje c8rrado .:: ~re<;lulado pol
:: ...ollaj. abieno entra a un lenninaJ nervioso desde el
TERMINAl ::.. seJilAL lluido extracelular a lraves de canales
NERVIOSO ., de Caz. regulados por vohaje, cuando
.'
la membrana dellermjnal nervioso es
IAJ
~""''.''''.' despolarizada por un potencial de
acci6n. En (B), la uni6n de una
prOle!na .e<:eptora mol~ula senal extracelular a un
de la membrana moll!lcula

~~::::;:~ .. ' . i'

p
lasm6lica
lnacli...a
'~'i:'
.'
~':"
::':;:;::::-.. ' ..
~Hi'I.1

~ eltt.acelular
reeeplOr de superficie celular genera
inosilollrisfosfalo, el cual eSlimuia la
Iiberaci6n de CaZ' desde el ER.
l'~
etLULA
'. -""'=~-
'. SENAL plole!na
receplor.
acti....

i_ilol

,., ;'. :'. : .' .. .. ....

.... '
. ...
t""'o,I.IO

ci6n celular. Sc han definido dos procesos en la sefializaci6n par Caz'. uno de
eUos milizado principalmente por c~lulas con actividad eleclrica (excitables) yel
arm uLilizado por casi lodas las celulas eucariolas. EI primero de eSlOS procesos
ha sido panicularmenle bien eSludiado en las celuJas nerviosas, en las cuales la
despolarizaci6n de la membrana plasmatica provoca un influjo de Caz, a1 inle-
rior del lenninal nervioso iniciandose la secreci6n de un neurotransmisor: el
Ca~ entra a traves de canales regulados par voltaje que se abren cuando la
membrana plasmatica dcllerminal nervioso se despolariza por un potencial de
acd6n que IJcga hasta elterminal (vease Figura 11-34). En el segundo proceso.
que es ubicuo, la uni6n de moleculas senal extracelulares a receplores de super-
ficie celular provoca la liberaci6n de Caz, del ER; los acontccimielllOS que ocu
rren en la superficie celular esH1n acoplados a la apertura de los canales de Caz,
del ER a traves de Oint molccula mensajera intracelular, el illositol trisfosfato (Fi-
gura 15-28), como discutiremos despues.

Algunos receptores relacionados con protefnas G aclivan

el proceso de senalizaci6n de fosfoHpidos de inositol
activando la fosfolipasa C-(320
En 1953 se sugiri6 por primera vez que los fosfolfpidos de inositol (fosfoillosfti-
dos) desempeflan un cicrto papel en la transducci6n de la sci;al cxtracelular,
cuando se descubri6 que algunas moleculas seflal extracelulares eSlimulan la in
corporaci6n de fosfato radiacljvo a fosfatidillnositol (PI, de phosphatidylinosj
tol), una c1ase minoritaria de fosfolfpidos de las membranas celuJares. Mas larde
se descubri6 que eSla incorporaci6n se produce par la degradaci6n Yposlerior
sfntesis de fosfolfpidos de inosilOI. Se encontr6 que los fosfolipidos de inositol
mas imponantes en 101 lransducci6n de la senal son dos derivados fosforilados
del PI, el PI-fosfato (PIP, de PI-phosphate y el PI-bisfosfalO (PIP]). Se cree que
ambos compueslos se hallan localizados principalmente en 101 carOl imerna de la
membrana plasmatica (Figura 15-29). A pesar de que en las membranas de las
c~lulas animales el PIP! es menos abundante que el PI, es 101 hidr61isis de PIPzla
que es realmenle imponame en el proceso de sefJ.alizaci6n.
La cadena de acontecimientos que Ueva a la rotura dc PIP z empieza con la
uni6n de una molecula senal a un receptor unido a 101 protefna G de la membra-
na plasmatica. Se ha demoslrado que mas de 25 receptares de superficie diferen
les utilizan esta via de Iransducci6n; en la Tabla 15-2 se presentan varios cjcm

796 CapfluJo 15: Transmisi6n de sefiales entre clulas

 Figura 15-29 Los fosfoUpldos de
Inosllol (fosfolnosflidos). Los
fosfoinosflidos (PIP y PIP1) se
udenas de kido, ",nos del ellterior
dIIla monoc:a~ liprdiea
de 1;1. membr.na pI mlilie- producen par fosforilaci6n del
fosfalidilinosilol (PI). A pesar de que
los Ires fosfol1pidos de inositol pueden
degradarse en el proceso de respucsla
a una set\al, 1a degradaci6n mlls critica

II - II
es 18 de P1Pl' a pesar de que es el

lI
cadensa.~ menos abundame, ya que constilUye
gr-. del inteOof

....""""-
Is~liplda
menos del 10% dellotal de Upidos
de inositol y menos dell'" deltolal de
fosfolfpidos.
~-ogo ~-o ~-o -0 COO
, , 0, ,0 , 9
CITOSOL

I'
CH -CH-CH
, CH 2-CH-CH 2
1m I_DB CH 2-CH-CH 2

0 , !~tB I, 0 U b 9--
0-\'_0 0 - 0-
-o-p-o
0
I 6 sOH
PI qulnna o-p-o
I
0
PIP quinn,

0
6
H
HH
2 , ,
O:p-o-
,
O"p-O-
inosilOI I
0-
I
0-

fosfatidillnosilol (PQ Pl41osf.lo (PIP) PI A,5-bisfc.fato {PlP2J

plos de respueslas mediadas de esta forma. Los detalles del proceso de activa-
ci6n no son tan bien conocidos como los del AMP cfclico, pero existen eviden-
cias creciemes de que en la membrana plasm3.1ica actua el mismo lipo de meca-
nismo constituido por varias elapas. Un receptor aClivado cslimula a una
protefna G denominada G", la cual, a su vez, aCliva unafosfoUpasa Cespecifica de
fosfoillosiwles, denominada fosfollpasa C-p. En menos de un segundo, esta en-
zima degrada el PlP2 generando dos producloS: inosiwl trisfosfow y diad/gUarol
(Figura 15-30). En este pUlltO, el proceso de setiaJizaci6n se bifurca en dos ra-
mas. Ambas molcculas juegan papeles cruciaJes en la senalizaci6n celular, por 10
que las consideraremos par sepamdo.

EI inositollrisfosfato (JP3) acopla la activaci6n

del receptor con la liberaci6n de Ca2 del ER 21 t-

Ellnositol trlsfosfalo (IPJ producido por la hidr6lisis de PlP2 es una pequena

molCt:ula hidrosoluble que se libera de la membrana plasm(tticn y difunde nipi-
damente par todo el citosol. Alii, libera Ca 2 del ER unicndose a callales liberado-
res de or' semibles a IP3 de la membrana del ER. Los canales son estructural-

Tabla 15-2 Algunas respuestas celulares medladas por receptores unldos a

protcfnas G, acoplados al proceso de seiializaci6n de los fosfolJpidos de inositol

TeJldo diana Molkula seiial Respuesta principal

Hfgado vasopresina degradaci6n del
gluc6gcno
P~ncrcas acelilcolina secred6n de amilasa
MUSCll]O lisa acetilcolina contracd6n
~Iula cebada anUgeno secrcd6n de histamina
Plaquctas sangufneas trombina agregaci6n

Senallzad6n vfa receptorcs de sllperficle celular asociadoS:1 prolcfnas G 797

 Figura 15-30 Hldrollsls de PI.P}. La
hidr6lisis de PIP} produce dos
mediadores intracelulares: el inositol
QdenM cIII kidol ( I f ' " del extefior
de .. ~ lipkIlc:.I de" membrana pl..rnMlu
trisfosftlto (lP). el cual difunde a lrares
del cilosol y provoca la Iiberaci6n de
Cal. desde el ER. yel diacilglicerol. que
pennanece en la membrana ycolabora
en 1a aClivaci6n de la enzima proleCna
quinasa C (v~ase mts ade1ante). AI

II
c:MIiInaI de 6cicSoIc ~ menos exislen tres clases de
dIiIlllleriGl' de .. ~
IlpidiU de I. rMf1'Itlr-. fosfolipasas C-fl, 1 Y&- y es la de c1ase
......"'" pIa que se aetiva por re<:eplores
unidos a protefna G. Mts adelanle
veremos que la c1ase les activada por
o, 0, CITOSOL olra c1ase de receptores, denominados
(H1 -(H-CH rereptores tirosirw quinasa. que
0 1(- 1 aclivan el proceso de senalizaci6n de
-o-r- oo -6- o- diacilglicllrol -
ACTIVA LA
PROTEfNA
aUINASAC
fosrolfpidos de inositol sin ninguna
prole(na G intermediaria.
~ fosfolip8S11 C-Il

~o=p-o-
I
o
O-P=O
O=p-o-
,
9
6~
~ LIBERA Cll~'
oeSOE EL

~
- RETlcULO

o-r- o-
o~
ENOOPlAsMAnco

inoIil:oll,4,s-trisfosfato CIP:II

mente simiJares a los canales de Iiberaci6n de Cal. (receptores de riatlQ(/itla) del

reticulo sarcoplasmatico de las cl!lulas musculares. los cuales Jiberan el Cal. que
desencadena el proceso de contraccion muscular (vease Figura 16-92). Ambos
opos de canales estan reguJados por retroalimentaci6n positiva, ya que el Cal. Ji-
berado puede unirse a los canales incrementando aun mas la liberaci6n de Cal.
Ello hace que la liberaci6n de Cal. OCllrra de una manera repcntina. lipo ~todo 0
nada". En tlluchas cl!lulas inclllycndo las cl!lulas musculares. sc encuenlran am-
bos tipos de canales liberadores de Cal.
Para aeabar la respuesta inicial de Ca 2 aetoan dos mecanismos: (I) ellP3 es
rapidamcnle desfosforilado (y asf illactivado) mediante fosfatasas especffieas, y
(2) el Cal. que enlra ell el cHosol es rapidamente bombeado hacia el exterior,
principal mente hacia el exterior de la celu.la.
Sin embargo no todo el IP, es desfosforilado: algunas moteculas son fosfori-
ladas hasta 1,3,4.Stetraquisfosfato (IP 4J. el eual puede mediar respuestas lentas
pero mAs prolongadas en la celula 0 facilitar la recuperaci6n de las reservas in-
traeeluJares de Cal. a panir del fluido extraeeluJar, La enzima que cataliza la pro-
ducci6n de IP. se activa por un incremento de la collcentracion citosolica de
Cal. inducida por Wv 10 cual constiluye una forma de relroaJimellfaci6n negati-
va de los niveles de lP3'

A menudo las oscilaciones de Ca2. prolongan la respuesta inicial

de Ca2. inducida por IP,22
Cuando se ulilizan incUcadores Ouorescentes sensibles a Cal como la aecuorina
a fura-2 (se discUie en el Capftulo 4) para estudiar las variaciones de los niveles
citos61icos de Cal. en celuJas individuates en las que se ha aClivado el proceso de
sCI1alizacion de fosfolfpidos de inositol, a menudo se observa que la senal inicial
de Cal. se propaga como una ola a traves del cirosol desde una zona localizada

798 Cap(luJo 15: Transmisi6n de scnales enlre celulas

 concenlrllciones de ",uopfnln. Figura 1531 Induccl6n de
O,4nM O,6nM O.9nM osclladones de ea:' en una celula
,----, heptitlC8 por vasopreslna.
La c~lula rue cargada con la proleina
sensible a Caz'. aecuorina, y a
lIOO cominuaci6n rue expuesta a
concentraciones creciemes de
vasopresina N6tese que la frecuencia
de las espigas de caz. aumenta a
[""'I
medida que aumenta la concentraci6n
InM) de vasopresina, pero que la amplitud
de las espigas no se ve afectada.
(Adaplado de N.M. Woods, K.S.R.
CUlhbenson y P.H. Cobbold, Nature
319:600602, 1986.01966 Macmillan
Magazines Ltd.)

10 30 50 70
liempo (minulo_) '"

de la c~lula, Ademas, a menudo cl incremento transitorio inicial de la concenua-

ci6n de Cal. viene segujdo por series de "espigas~ de concenlTaci6n de Cal.,
cada una de las cuales tarda en producirse del orden de segundos 0 minutos; es-
tas oscllaclones de Caz. puetlen persistir mlentras los receptores se mantengan
activados en la superficie de la c~lula (Figura 15-31).
EI mecanismo responsable de la propagaci6n de las olas de Cal> y de la ge-
neraci6n de las oscilaciones no es conocido con certeza, a pesar de que se han
propuesto una gran cantidad de modelos para explicarlo. En la mayorfa de estos
modelos tanto la propagaci6n como las oscilaciones dependen de una retroali-
mentaci6n positiva, en la que el Cal> activa su propia Iibcraci6n produciendo
una espiga de Cal. del "Iodo 0 nada". Los modelos se diferencian eOlre sf princi-
palmcnte en considerar si el Cal. actua directamente sobre los canales de Iibera-
ci6n de Cal. del ER estimulando su propia Iiberaci6n, 0 bien si actua indirecla-
mente incrcmenlando la actividad de la fosfolipasa C, generando asf oleadas de
1P3 que, a su vez, inducirfan olcadas de Iiberaci6n de ealo.
EI significado biol6gico de las oscilaciones de Cal. lambien es incierto.
A menudo su frecuencia depende de las concentraci6n delligando sef'ial extra-
celular (Figura 15-31) y puede, en principio, traducirse a respuesta celular de-
pendiente de frecuencia, En c~lulas de la hip6fisis secretoras de hormona, por
ejemplo, la estimulaci6n par una molecula sefial extracclular induce espigas
rcpetidas de Cal>, cada una de las cuales eSla asociada con un pulso de secre-
ci6n de honnona. Se ha sugerido que este hecho puede maximizar la secreci6n
impidiendo los efectos t6xicos de un incremento soslenido de la concentra-
ci6n citos6lica de Ca2,.

El diacilglicerol activa la protefna quinasa C (quinasa C)23

AI mismo tiempo que ellP3 producido por la h.idrolisis del PIP2 incrementa la con-
centraci6n de Cal, en el cilOSOI. el otro producto de hidr6lisis -el dlacUglicerol-
ejerce efectos baslanles diferentes. Tiene dos papeles funcionales potenciales. En
primer lugar, puede ser posleriormente degradado, liberando acido araquid6nico
que puede actuar como mensajero 0 ser utiJizado en la sfOlesis de eicosanoides
(vease Figura 15-6); En segundo lugar, y mucho mcis imporrante, activa una protef-
na scrina/treonina quinasa que fosforila varias protefnas de la c~lula diana.

Scl\aUzacl6n vfa receptores de superflcle celular asociados a prolefnas G 799

 La enzima aClivada por el diacilglicerol se denomina prolcfna qulnasa C
(qulnasa C 0 PKC de Protein Kinase C), debido a que es dependiente de Ca 2+. Se
cree que el incremento inicial de la concentraci6n citos61ica de Ca2+ inducido
por 1P3 altera la quinasa C, traslocAndola de la cara cilos61ica de la membrana
plasmatica a la eara citoplasmalica. Se activa par la combinaci6n de Ca2+, diacil-
g1icerol y el fosfolfpido de membrana cargado negativamente, fosfatidilserina.
De las ocho 0 mas isofarmas diferentcs de la quinasa C en mamfferos, al menos
cualro son activadas por diacilglicerol.
Como el diacilglicerol producido inicialmente par la rotura de PIPl es rapi-
damente metabolizado, no puede mantener la actividad de la quill3S3 C como
seria necesario para oblener respuestas mantenidas como la proliferaci6n 0 la
diferenciaci6n. La aClivaci6n prolongada de la quinasa C depellde de una segun-
da ola de producci6n de diacilglicerol catalizada por fosfolipasas que rompen el
fosfolfpido principal de la membrana fosfalidilcolina. No se conoce c6mo resul-
tan aClivadas estas fosfolipasas que acttinn retrasadas.
Cuando la quinasa C es nctivnda fosforila residuos delerminados de serina 0
de treonina de protefnas diana, las cunles varfan en funci6n del tipo de celula de
que se (rate. Las mayores concentraciones de quinasa C se han cncantrada en el
cerebra, donde (entre atras cosas) fasforila canales i6nicas de las celulas nervio-
sas alteranda sus propiedades y, par 10 Ian to, variando la excitabilidad de las
membrana plasmatica de las celulas Ilerviosas.
En muchas celulas la activaci6n de la quinasa C incremenm la transcripci6n de
delenninados genes. Se conocen par 10 menos dos procesos. Ell uno dc elias, la qui-
nasa C aCliva una cascada de protefnas quinasa que conduce a la fosforilaci6n, yac-
tivaci6n, de una prOleina reguladora de genes unida a DNA; en el otro proceso, la
activaci6n de la quinasa C conduce ala fosforilaci6n de una proleina inhibidora, Ii-
berando asf una proteina ciloplasmalica reguladora de genes que puede migrar aI Figura 15-32 Dos procesos
nucleo y cslimular la tTan.sc:ripci6n especifica de deterrninados genes (Figura 15-32). lntracelulare5 mediante los
cuales 18 quinasa. C activo
puede actlvar la
lrans4::rlpcl6n especffico de
OUlNASA C INACTIVA OUINASA C ACTIVA
determlnados genes.. En uno
MEMBRANA PlAsMAnCA de eUos fjlechas rajas), la
quinasa C activa una cascada
de fosforilaciones que
conduce a la fosforilaci6n de
una protefna quinasa clave,

denominada MAP qui/JaW
(sc discute mas adelante), la
NF-KB cua!. a su vez, fosforita y
CITOSOL act iva la protefna reguladora
c N(JCLEO
:J de genes Elk-I. Elk-l se halla
unida a cortas secuencias de
DNA (denominadas

"en 1
-..
SRF

5"
Elk-l

regiOn
e/ememos de respllcsta sirka.
SRE, de serum Response
Elements) en asociaci6n con
otra protefna de uni6n al
codif.c.nte DNA (denominada!actorde
respuesta sirica, SRF, de
serum Response FaclOr). En
el 01rO proceso (flechas
lugar de regi6n
wrdes) la activaci6n de la
uniOn a codif.c.nte quinasa C conduce a la
NF-ICB fosforilaci6n de he+B.la cual
libera la protefna reguiadora
de genes NF-ICB de fomla que
ahora puede migrar haSla el
m'icleo y allf aetivar la
NO HA,VTRANSCRIPCI6N TRANSCRIPCION ACTIVAOA DE transcripci6n de
OE lOS GENES 1 V 2 LOS GENES 1 V 2
determinados genes.

800 Cap((ulo 15: Transmisl6n de senales entre celulas

 mol6cula leflal
extracelular

fosfolipasa Cop
activada
dlacilglicerol
PIP~ ESPAC10 EXTflACELULAR

;~~~ii;iEE~;~~;~~~~~~~;~==~~==I~;;=~"I~
it mOWL
PLASMAnCA
MEM8RANA

mi.....tlz.do po.
.eceptor
ae:tlvado
,Pl
prOle'na ~
..
aetivada
esaSI N ...e.el d.lorbol

mimetil.cto por
c.
lonOlorol de lo

USERA c.J+ FOSFOftllA PROTEINAS

OELREOcuLO CELULARES
ENOOf'\.ASMAnco

En In Figura 15-33 se muestra cada una de las dos ramas del proceso de se- FIgura 15]3 Lasdosramasdel
flalizaci6n de fosfolfpidos de inositol. Como se indica en la figura. cada rama del proceso de los fosfolfpidos de inositol.
proceso puede ser mimetizada mediante la adici6n a celulas inlactas de agentes EI receptor. una vez activado, se unea
farmacol6gicos espccfficos . Los efectos de 1P3 plleden ser mimetizados utilizan- una proteina G trimenca especffica
do un jOlloforo de CU". como el A23187 0 la ionomjcina, los cuales permhen que (G,,) haciendo que la subunidad a se
el Ca 2 entre al chosol desde ellfquido extracelular (se discute en el Capftulo II). disocie y active la fosfotipasa C-~.Ia
cual rompe el PIPzgenerando IPJ y
Los efectos del diacilglicerol se pueden mimetizar por esteres de forOO/, produc-
diacilglicerol. EI diacilglicerol (junto
tos vegemles que se unen a la quinasa C y la activan directamente. Utilizando es- con el Ca2. que lIeva unido y can
tos reactivos, se ha podido demostrar que, a menudo, las dos ramas del proceso fosfalidilsenna -no se mueSlra en el
colaboran produciendo una respuesta celular complera. Por ejemplo, algunos ti- dibujO). actlva la quinasa C. Tanto la
pos celulares pueden ser estimulados a proliferar en cultivo cuando son tratados fosfolipasa C-Ii como la quinasa C son
con ion6foros de calcio y con un activador de la quinasa C. pero no si se tratan enzimas solubles en agua que, al
con uno solo de ambos reaclivos. activarse. se lranstocan desde el citosol
hasta la cara interna de la membrana
plasm,hica. Los efeclos de IP) pueden
La calmoduHna cs un receptor intracelular de Ca2.. ubicu0 24 seT mimelizados expenmentalmente
Habilllaimente la coneentraci6n de Ca 2 libre en el citoplasmn cs s; 10-7 M Ygc- en celulas intactas mediante el
ncralmcnte no aumenla por encima de 6 x 10-6 M, incluso aunqlle In e~lllla este trat8mlcnto con ion6foros de Ca 2
rnientras que los crectos del
aetivada por un influjo de Ca 2. Asf, eualquiera que sea la estructum de la celula
diacilglicerol pueden seT mimctizados
que aetlie directamcnte como diana para la regulaci6n dependicnte de Ca 2 de- mediante eltratamiento can estcTes de
ben1 tener una const3nle de afinidad (K..l para el Ca2. de unos J06 litros/mol. forbol, los cuales se unen a 1a quinasa
Ademas. como la concentraci6n de Mgl' en el citosol es relalivamente constantc C actiVlilldola.
(alredcdor de 10-3 M), estos lugares de uni6n aJ Ca 2 deberAn presentar una sc-
lectividad para el Cal< sobre cl Mgl' de un as 1000 veces como mfnimo. Se COIlO-
cen varias prOlcfnas que unen Ca 2 ', que cumplen estos requisitos.
La primera prolefna de este tipo que se descubri6 es la tropotlitla C de las
celulas del mlisculo esqueletico; en el Capftulo 16 se discUl'e el papel de eSla pro-
teina en la contracci6n muscular. En todas las celulas animales y vegelales en
que se ha estudiado. se ha encontrado otta prmeina que une Ca2', estrechamen
te relacionada con la troponina C, denominada calmodullna. Una celula animal
tipica contiene mAs de 107 molecuJas de calmodulina, 10 cual significa aproxima-
damenle el 1% de la masa tOlal de prolefna de la celuJa. La calmodulina aetua
como un receptor intracelular polivaJenle de Ca2. que media la mayorfa de los
procesos regulados par Ca 2'. Se trata de una cadena polipeplfdica altamente
conservada. de unos 150 residuos de aminmkido, con cuatro lugates de uni6n
con una alta afinidad para el Ca 2'. Cuando une calcio, la calmodulina Sllfre un
imponame cambio de confonnaci6n (Figura 15-34A).

SCiia1iza<:l6n via receptores de superficie celular asocIadas a protelnas G 801

 ....
Figura 15-34 Estructura del complejo
ca2 '-calmodullna, basada sobre
estudlos de dlfracd6n de rayos X y de
resonancla magn~tJca nuclear (NMR,
de Nuclear Magnetic Resonance).
(A) La molocula parKe una ~pesa de
gimnasia-. con dos cabezas g10bulares
conectadas mediante una larga h~lice
f.( expuesta. Gada una de las dos

cabezas tJene dos dominiosde unl6n

2 om HDOC NH,
al cal., cada uno de los cuales est:!.
constituido por un lazo de 12 residuos

1 {"
de aminm'icidos cn el que algunas
cadenas lalerales de :tcido asp:trtlco y
de addo glulamlco forman enlaces
i6n.icos con el Ca 2 '. Los dos lugares de
uni6n al cal. del eXlremo carboxilo
lenninal de la moltkula tienen una
afinidad par el Cal. diu VKCS superior
{Aj
a \a del extrema amino terminal. En
soluci6n la molkula e5 flexible,
moslfando un abanioo de form as,
La activaci6n a1osl~rica de la calmodulina por el Caz. es analoga a la aCliva-
desde formas eXlendidas (como la dc
ci6n aloslerica de la quinasa A por el AM P cfcLico. con la diferencia de que el la figural hasta formas mas compactas.
complejo Ca~'-calmoduLina no tielle actividad enzimatica sino que actua uniell- (D) Cambios eslructurales del
dose a atras protefnas. En algunos casas, la calmodulina actlia como una sub complejo Ca l'-ca1modulina que
unidad reguladora permanente de un complejo enzimatico, perc en la mayorfa ocurren cuando este se une a una
de los casas la uni6n del Ca 2 induce a la calmodulina a unirse a varias protefnas prolefna dIana (en CSle ejemplo. un
diana de In celula, alterando su actividad. Cuando el complejo Ca2'- calmodulin3 peplido que contiene un dominio de
se une a su prolcfna diana puede suffir un cambia de conformaci6n posterior uni6n para Cal'-calmodulina de una
mucha mas importanle (Figura 15-348), prolerna quinasa dependiente de Cal._
De entre las protefnas diana reguladas por el complejo Ca2- calmodulina. va- calmodulina Iia quinasa de la cadena
rias de eUas son enzimas 0 prmem8S de transporte a lra~ de la membrana_ En ligera de la miosina. lratada mas
adelantel). N61ese que eI comple;o
muchas celulas, por ejemplo, el complejo Cal'-calmodulina se une. activando, la
Cal'-calmodulina se dobla como una
CalATPasa de la membrana plasm~tica, la cual bombea Cal. hacia el exterior de
"navaja de bolsillo" abrazando al
la celula. Asi, si la concenuaci6n de Cat. en el citosol aumenta, la bomba se aCli
peptido. lA. basado en dalos de
va. 10 cual contribuye a que los niveles citos61icos de Cal. vuelvan a los valores crislalograffa de rayos X de Y.S. Babu el
normales. Sin embargo.la mayor parte de los erectos del complejo Ca2- calmodu at. Natllre315:37-40. 1985. C 1985
lina son mas dircctos y estan mediados por prorefna quillasas depefldiemes de Macmillan Magazines Ltd.; B, basado
QT-calmodulifla. en datos de crislalograffa de rayos X de
W.E. QUiocho, Science 257; 1251- J 255,
1992, Yen dalos de NMR de M. lkura el
En las c~lu1as animales la mayor(a de acciones del Ca2+ al.. SciCllce 256;632-638, 1992. e the
se producen a trav~s de protefna quinasas dependienles MAS.)
de Ca2+-ca1modulina (quinasas CaM)2S
La mayoria de los erectos de Ca2. en las celulas animales estan mediados por ros-
forilaciones de prolefnas catalizadas par una familia de proleCna quinasas de-
pendlenles de Cal'-calmodulina (quinasas CaM). Estas quinasas fosforilan resi-
duos de serina 0 de treonina de detenninadas protemas y, como en el caso del
AMP delko, la respuesta de una celuJa djana a un incremento de la concentra
ci6n de Ca2, libre en el citosol depende del lipo de qujnasas CaM reguJadas de
que disponga la celuJa. Las primeras quinasas CaM que se descubrieron -Ia qui
nasa de la cadena ligera de la miosilla, que acliva la contracci6n del musculo
liso, y lafosforilasa quillasa, que acliva la degradaci6n del gluc6geno- presentan
una especificidad de substrata muy aha. Mas recienlemenle, sin embargo, se
han identificado a1gunas quinasas CaM con una especificidad mc1s amplia, y que
parecen ser las responsables de mediar muchas de las acciones del Ca2. en las
celulas animales.
EI ejemplo mejor estudiado de una quinasa "multifuncionar Cdcalmodu
tina es la quinasaCaM II, que se encuentra en todas las celulas animales pero

802 Capitulo 15 : Transmlsi6n de senales entre cBulas

 dominio Inhibidor Figura 15-35 Aclivacl6n de la
P,
prolelnll qulnasa CaM II. La cnrima es un
fosfatasa complejo prolcico de unas J2
subunidades. Las subunidades son de
cuatro ripos hom610gos (a, It yy 6) que
INDEPENDIENTE DE Ca" se expresan en diferell1es lipos
(50-80% ACTIVO)
celulares en proporciones diferenles.
dominio En la figura se presell1a unicamell1e
CIlllllftieo
la subunidad a (en gris), que se
expresa 5610 en el cerebro. En ausencia
de Calo-calmodulina la enzima es
inaCliva como consecuencia de una
inleracci6n entre el dominio inhibidor
y del dominio catalflico. La uni6n de
Ca" -i:llimoduline
Calo-calmodulina altern la
conformaci6n de la prolefna,
permitiendo que el dominio catalftico
fosforile el dominio inhibidor de
subunidades vecinas del complejo asf
como olms protefnas de Ja celula (no
se muestrnn). La autofosforilaci6n del
lIutofoslorilKi60 complejo enzimatico (por fosforilaci6n
mutua de sus subunidades) prolonga
COMPlETAMENTE
ACllVO la aClividad de la enzima de dos
maneras: {II atrapa el complejo
Ca~o-calmodulina unido. de forma que
no se disocia del complejo enzimalico
hasta que los niveles cito56licos de
especialmcntc cnriquecida en el sistema nervioso. Constimye hasta el 2% de la Cal' vuelven a los valores basales, unos
masa total de prolelna en algunas regiones del cerebro, a1tamenle concentradas 10 segundos despues (no se muestra);
en sinapsis. Por ejcmplo, cuando las ncuronas que utilizan catecolaminas (dopa- (2) conviene la enzima en una forma
mina, noradrenalina 0 adrcnalina) como neurotransmisores) son activadas, el independiente de Calo ya que la
innujo de Ca 2 a traves de canales de Ca 2 regulados en sus membranas plasm:1li- qulnasa se mantiene activa incluso
cas induce a la ccluta a scgregar su ncurotransmisor. 1 inllujo de Ca2. tambicn despues de que el complejo
Calo-calmodlilina se disocie de eUa.
haec que la quinasa CaM II se fosforile, aClivandose, y activando a la firasi"a hi-
La actividad continua hasta que el
droxUasa, la cual es In enzimu rcguJadora de flujo de In sfntesis de calecolami- proceso de alltofosforilaci6n es
nas. Dc eSla forma, cuando la celula se activa se estimliia lanlO la secreci6n cOll1rareslado par una protefna
como la s(ntesis del ncurotransmisor. fosfallls3.
L.'l qllinasa CaM II lienc una propicdad deslacable: pllede actuar como un
dispositivo de memoria molecular, colocandose en un estado activo cuando es
expuesla a Caz'-calmodulina y permaneciendo activa incluso despues de que la
concentraci6n de Caz, haya bajado. Ello es debido a que la qllinasa se fosforila a
ella misma (un proceso denominado awofosforilaci6r1), lal como fosforila a otras
prolefnas celulares cuando es activada par Ca 2-calmodulina. En su estado auto-
fosforilado la enzirna permanece activa en ausencia de Ca~', prolongando asf la
duraci6n de 1'1 aClividad de la quinasa despues de que acabe la senal inicial acti-
vadora de Ca~'; la aClividad se manliene hasla que las fosfalasas abaten la activi-
dad autofosforilativa de la enzima, inhibi~ndola (Figura 15-35).
Debido a estas propiedades, la aClivaci6n de la quinasa CaM II puede ser
utilizada como una memoria lraza de un puJso de Ca~' anterior, y aJ parecer jue-
ga un imponante papel en algunos Lipos de memoria y de aprendizaje del siste-
ma nervioso de los venebrados. Ratones mutantes que careeen de la subunidad
especi"fica de cerebra que se i1ustra en la Figura 15-35 tienen defeetos especfficos
en su capacidad de recordar la localizaci6n de un objeto -es deeir, de aprendiza-
je espacial.

Los procesos de Ca Zo y de AM.P cfclico interaccionan entre sfl'

Los procesos de senalizaci6n a traves de calcio y de AMP cfclico interaccionan
en diversos niveles en la jerarqufa de control. En primer lugar, los niveles citos6-

Seftallzad6n via receplores de superficle celuJar asoclados a prolefnlll'i G 003

licos de Ca 2 y de AMP cfclico pueden influirse respectivamente. Por ejemplo. al lugs.8ctivo
subunidlld catalities
gunas formas de las enzimas pueden sintetizar y degradar AMP cfclico -Ia adcnil
dclasa y la fosfodiesterasa respectivamente- estan reguladas por complejos Ca 2.
calmodulina. De forma inversa, la quinasa fir puede fosforilar algunos canales y
- -
\ \ 1,/

bombas de Cal. modificando su actividad; par ejemplo, la quinasa A fosforila cl

receptor de IP3 dcl ER, 10 cual puede inhibir 0 activar la liberad6n de Cal. induci
da por 1P3, dependicndo del tipo celular. En segundo lugar. las enzimas regula
das directamente por Cal. y por AMP cfclico pueden influirse mutuamcnte. Por
ejemplo, algunas quinasas CaM son fosforiladas por la quinasa A. En terccr lugar.
estas enzimas pueden tener efectos interactivos sobre las mismas moleculas dia- lugllres foslorilsdos PO' quinllSll A
na del metaboUsmo. Asf, frccuentemente la quinasa A y la quinasa CaM fosfori-
Ian lugares diferemes de la misma prolefna 1a cual, por 10 tanto. csta regulada Figura 1536 La fosforilasa qulnasa.
tanto por el AMP cfclico como por el Cal.; 1a prolefna reguladora del gen CREB, Dibujo muy esquematico que muestra
de la que hcmos lratado anteriormcllle (vease pag. 793), constiluye un ejemplo las cualrO subunidades de la enzima
de ello. de muscuJo de mamffero. La
subunidad., presenta la actividad
Como ejemplo de c6mo pueden interactuar el Cal. yal AMP cfclico, consi-
catalitica de la enzima aCliva; las
deremos lafosforiiasn qllillasa del musculo esqueh~tico. cuyo papel ellia degra
subunidadesa YJJ ylasubunidad 6 (la
daci6n de gluc6geno ya hemos explicado. Esta quinasa fosforila la g1uc6geno calmodulina) median la regulaci6n de
fosforilasa, la cual cataliza la degradaci6n del g1uc6geno (vease Figura 15-25). Se la enzima por AMP c1c1ico y por ca 2 .,
trata de una enzima formada por cuatro subunidades aunque tan s610 una de respectivamente. fJ complejo
elias cataliza la reacci6n de fosforilaci6n: las otras tres son reguladoras y permi- enzimatico final contiene cuatro
ten que el complejo enzimMico sea acLivado por AMP cfclico y por Ca2. Las eua- copias de cada subunidad.
tro subunidades se designan como a, p. y y 5. La subunidad y es la que presema
la actividad catalflica; la subunidad 5 es la calmodulina y es la principal respon-
sable de la depcndencia de la enzima por el Ca2. Las subunidades Cl y P son las
dianas de la regulaci6n por el AMP cfclieo. siendo ambas fosforiladas por la qui-
nasa A (Figura 15-36).
La misma seiial de Ca2. que inicia la comracci6n muscular tambien asegura
que exisla suficiente cantidad de glucosa que aporte la energfa necesaria para la
contracci6n. EI gran innujo de Cal. al imerior del citosol (se discule en el Caphu-
10 16) altera 130 conformaci6n de la subunidad de calmodulina. de 130 fosforilasa
quinasa, incrementando su actividad quinasa. con 10 que se incrementa la vela-
cidad de degradaci6n de gluc6geno varios centenares de veces. Adcm<is, el innu
jo de Ca2 tambicn acliva dos quinasas CaM que fosforilan (inhibiendola) la glu
c6geno sintasa, con 10 que se inbibe la sfntesis de gluc6geno. Por el contrario, las
fosforilaciones de la quinasa A inducidas por la adrenalina que hemos descrito
ajl/stan el metabolismo de la celula muscular anticipandose al incremento de la
demand a cnergetica pennitiendo a la enzima ser activada cllando existen me
nos iones calcio unidos a la cahnodulina, con 10 que la cnzima se hace mas sen-
sible al Ca2.

Algunas proteCnas G trim~ricas reguJan directamente

canales i6nicos27
Las prolefnas G trimericas no actuan exclusivamenle regulando la aClividad de
enzimas y alterando 1a concentraci6n de nucle6tidos cfclicos 0 de Cal> en el cho-
sol. En algunos casos activan 0 inaclivan directamente canales i6nicos de 130
membrana plasmlitica de la celula diana, alterando asf su permeabilidad i6nica
y. par 10 tanto, la excilabilidad de la membrana. Par ejemplo. la acetilcolina libe
rada par el nervio vago reduce tanto la frecuencia como la fuerza de la contmc
ci6n de la celula muscular del coraz6n. EI efecto esta mediado por una c1ase es
pecia! de receptores de acetilcolina que activan la proteina G inhibidora G,. de la
que hemos tratado previal1lente. (Estos receptores. que pueden ser activados
por el alcaloide de hongos muscarina. se denominan receplores nlllscarinicos de
aati/colina para dislinguirlos de Olros receptores, muy diferentes a ~tos, deno
minados receplores nicotfllicos de aceti/colilla. que son receptores relacionados
con canales i6nicos de las celulas del musculo esqueletico y de celulas nerviosas
que pueden ser activadas por nicotina.) Una vez aetivada, la subunidad a de G1

804 CapftuJo 15 : Transmisi6n de senales entre celuJas

 Figura 15-37 Rec::eptores de neuronas
olfativas. (AJ Dibujo esquematico del
epitelio olfativo de la nariz. EI receplOr
cilios
modificsd~
olfutivo de las neuronas poseen cilios
modificados que se proyectan desde la
superfide del epitelio y contienen los
neYrons olfst, ...s rec::eptores olfalivos y la maquinaria
para la transducd6n de la sei'ial. EI
dluls de _ten
axOn. que se eXliende desde el extremo
dluls bessl opuesto de la neurona receptora.
I6mins bassI conduce las senales eltktricas hasta el
s)(6n
cerebra ruando la celula es aclivada
por un odoranle. las celulas basales
actuan como celulas madre.
lA, '81 produciendo nuevas neuronas
receptoras durante IOOa la vida. (8)
EJeclronmicrografIa de barrido de
no s610 inhibe la adeniJ ciclasa (como hemos descrito previamenle) sino que dUos de la superficie de una neurona
olfaliva. (8, de E.E. Morrison y R.M.
tambicn abre directamenle canaJes de K de la membrana plasmMica de la cclu-
COSlanw. /. Comp. Neurol. 297; 1-13.
la muscular. La apertura de eSIOS canales de K+ hace que la clHula sea mAs diffcil
19900Wiley-liss.lnc.)
de despolarizar, 10 cual contribuye aI efecto inhibidor de la acetiJcolina sobre el
coramn.
Otras protefnas G trimericas regulan la actividad de canales i6nicos de una
forma menos directa, bien regulando la fosforiJaci6n de canales (medianle, por
ejemplo, la qui nasa A, la quinasa Cola quinasa CaM) 0 bien causando la pro-
ducci6n 0 la destrucci6n de nucle6lidos cfclicos que aClivan 0 inactivan direcla-
menle canales i6nicos. EsIOS canales i6"icos regiliados por tlllcle6tidos juegan un
papel crucial en los procesos de la visi6n y de la 0lfacci6n.

La olfacci6n y la visi6n dependen de receptores asociados a

protemas G y de canales i6nicos regulados par nucle6tidos Cc1icos28
Los humanos podcmos distinguir mas de 10 000 olores diferenies (orlorantes),
los cuales son delcclados por neuronas con receplores olfalivos especializados
en el reveslimiemo de la nariz. Estas celulas reconocen odoranles mediante re-
ceptores olfatlvos relacionados con lIna protefna G especffica, que se presenlan
en la superficie de citios modificados que sobresalen de las celulas (Figura 15-
37). Muchos de estos receptores aClllan a traves de AMP cfclico; cuando son esti-
mulados par la lIni6n del odorante, activan una prote(na G trimerica olfaliva es-
pedfica (ClJI/J' la cual. a su vez, acHva la adenil ciclasa; el incremento resultante
de los nivcles de AMP cfclico abre canales cationicos regllfados par AMP cfcfice,
10 cual permitc que se produzca un influjo de Na+ que despolariza la celula e ini-
cia un impulso ncrvioso que viaja a 10 largo del ax6n, hasta el cerebro. Otros re-
ceptores olfativos aClllan a traves del proceso de fosfolfpidos de inositol y cana- GUANINA
les de Ca~+ regulados por 1P3 de la membrana plasmatica, pero respeclo a su
mecanismo de transducci6n existe todavfa poca informaci6n.
Se cree que exislen centenares de receplores olfativos diferentes; cada uno
esla codificado por un gen diferente y reconoce odoranles diferentes, pero todos
eUos pertenecen a la superfamilia de reeeplOres asociadas a proleinas G. A pesar
de que sabemos que cada celula olfativa responde a un conjunto determinado
de odorantes. no eSla e1aro si cada aHula contiene linicamente un lipo de recep-
tor que reconoce loda la serie de odoranles a los que la celuJa es sensible 0 si o
cada celula comiene un juego de receplores, cada uno de los cuales es espec(fico
de un solo odorante. los receplores relacionados con prolefnas G lambien me -o-p
I
dian a1gunas formas de delecci6n de sabor, pero respecto a ello se conace lada I
via muy poca cosa. o
FOSFATO
los canales i6nicos regulados por nuele6tidos cielicos tambien panicipan
en la transducci6n de senales en la visi6n de los vertebrados, pero el nuele6tido
crucial en esle caso es el GMP cfcllco (Figura 15-38) en lugar de ser el AMP deli Acun 15-38 EI GMP cfcUco.

Senalizaci6n vfa receplores de superfide ceJular asociadas a protemas G 805

co. Como el AMP cfclico, las concentraciones celulares de GMP cfclico eSlan
controladas por una rapida velocidad de sfntesis (por la guallilaro cic/asa) y una
rapida degradaci6n (por lafosfodiesterasa de GMPciC/ico).
En la rransducci6n visual, la aclivaci6n de los receplOres esta producida por
la luz. y conduce a una disminuci6n, en lugar de un incremento, de los niveles
del nucleOtido cfclico. EI proceso se ha estudiado especial mente bien en el caso
segmento
e><tenor
...." .
membr.na
fote,receptor.
de la respuesta a la luz de los rotorreeepto.-es en ro.-rna de bast6n (baslones) de
la retina de los venebrados. Los bastones son responsables de la visi6n mono- membra...ll
cromatica con luz tenue, mientras que los fotorreceptores ell forma de COIlO (co- plll$mAlic.
1/os) son responsables de la visi6n cromatica con luz brillante. Un fotorret:cptor
en forma de bast6n es una celula ahamente especializada con un segmento ex-
terior y otro interior, un cuerpo celular y una regi6n sinaptica a traves de la cual
el bast6n pasa una selial qufmica a lIna eelula nerviosa retiniana, la cual trans-
fiere la senaJ a 10 largo del proeeso visual (Figura 15-39), EI aparato fototransdue-
lOr se haUa en el segmento exterior, que eontiene discos apilados, cada uno de segme... te
los cuales esta formado por una especie de saco de membrana en la que se ha- i... terior

lIan embebidas las moleculas fotosensibles de rodopslna. La membrana plas-

matiea que radea el segmento exterior contiene canales de Na regulados por
GMP delico. Estos canales de Na' se manrienen abiertos en la oscuridad me-
diante moleculas de GMP dclico unidas al canal. Parad6jicamente. la luz no
causa una despolarizaci6n de la membrana plasmatica (que podrfa estimlliar la
senalizaci6n sinaplical sino una hiperpolarizaci6n de la membrana plasnuhica
(que inhibe la senal sinaptiea), porque la activaci6n de las moleculas de rodopsi-
na por la luz en la membrana de los discos conduce a que los canales de Na de
la membrana cirCllndanle se cierrell (Figura 15-40).
Como hemos indicado anteriormente, la rodopsina es una molecula trans-
membrana que atraviesa la membrana siete veces, hom610ga de onos miembros mJcleo
de la familia de receplores asociados a prote(nas G y. como sus primas, actlla a
trav~s de una prolefna G trimerica. Sin embargo, la serial activadora extracelular
no es una molecula sino un fot6n de luz. Cada moleeula de rodopsina contiene
el crom6foro. II-cis retinal, unido covalentemente, el cual se isomeriza casi ins-
tantaneamente a todo-mms retinal cuando absorbe un solo fot6n. La isomeriza
ci6n altera la conformaci6n del retinal. induciendo un cambio de conformad6n
mas lenlO en la prole(na {opsinal. Entonees, la proteina activada se une a la pro- cuerpo
tefna G trimerica tra1lsducilla (G,l haciendo que la subunidad tl (~) se disode y li""ptieo
active una fosfodleste.-asa de GMP delico, la cual hidroliza el GMP delico. de
forma que los niveles de GMP cielico del citosol disminuyen. Como consecuen-
cia de clio, el GMP cfelieo se disocia de los canales de Na de la membrana plas-
matica. permitiendo que se derrell. De esta forma la senal pasa de la membrana Figura 1539 Dlbulo de una celula
de los discos a la membrana plasmatica, y la senal luminosa se transforma en folorreceplora en basl6n. En cl
una seflal electrica. segmenlO extcrior exiSlen lInos I()(X)
Los canales de Na' lambien son permeables aJ Ca2., de forma que cuando discos: las membranas de cada disco
se cierran el influjo normal de calcio se inhibe, haciendo que la concentraci6n no se haHan oonecladas a 1a
de Ca2> en el drosol disminuya: esta disminud6n estimula a la guaniJaro cicla- membrana plasmd.tica.
sa, la cual sintetiza GMP delico recuperando los niveles y haciendo que la celu-
la r{jpidamente recobre el estado en el que cstaba anles de que la luz la activara.
La activaci6n de la guanilato ciclasa por la disminuci6n de los niveles de Cal.
esta mediada por una proteina sensible al Cal. denominada recoverina la cual,
contrariamente a la calmodulina. es inactiva cuando se halla llnida a Ca2' yac
tiva cuando esta Iibre de Ca z.; estimula In cielasa cuando los niveles de Caz, son
bajos Iras In respuesta a la luz. Este mecanismo dependiente de Cal. es de im-
ponancin crucial, en dos aspectos. En primer lugar. permite al fotorreceptor re-
venir rapidamente basta su est ado de reposo, (fpieo de In oscuridad, tras un
nash de luz, haciendo posible que el fotorreceplor pueda ser sensible a la corta
duraci6n del nash. En segundo lugar. contribuye a permitir que el fotorreceplor
se adaple, disminuyendo la intensidad de la respuesta cuando se expone a la
luz continuamente. Como expJicaremos mas adelantc, la adaptaci6n significa
que la celula receptora puede actuar como un detector sensible a cambios de la

806 Capfmlo 15: Transmisi6n de senales entre celulas

 1=1 C:.::. Figura 15-40 La respuesta a Ja luz de
r=r
Ie;:. radopsina
0::'-:'
0::::> radop"na
una dluJa fotolTeceptora en bast6n.
Los fotones son absorbidos por las
I ... I inllCti...a llCtiva
Mgmento
el<"terlor
=
I.:::::.l..canales de Na-
<::>
0::::. CIOn' Ie. de N,-
moleculas de rodopsina situadas en los
discos del segmento exterior. Ello
I ~..::.l. abiertos 0::::' cenada. dctennina que los canales de Na' de la
r=r
r=r =
= membrana pJasmatica se cierren. 10

rgr
-. =
=
cual hiperpolariza la membrana y
reduce la velocidad de liberaci6n del
neurotransmisor desde la regi6n
Mgmento
interior
[ celull
hiperpol,riz8dl
sinaptica. Debido a que el
neurotransmisor aett:ia inhibiendo
muchas de las neuronas retinianas
postsinapticas, la iluminaci6n Crena la
regiOO
nuele.r
[ inhibici6n y, de esla Conna, de hecho.
las aCliva

regiOO
.injptica
[ alta V'IlIocidad
de liber.ciOn de
tr.nsmisor
bI)I veloci6ad
de liberiICiOn de
t.ansmi_

M,ew IlUMINACION

inlensidad del eslImulo en un enormemenle ampljo abanico de niveles basaJes

de estimulaci6n.
En la Tabla 15-3 se recogen datos de las principales protefnas G traladas en
eSle caphulo.

Las sena1es extracelulares son notablemente amplificadas

mediante la ulHizaci6n de mensajeros intracelulares y de
cascadas enzirnaticas 29
A pesar de diferencias en delalles moleculares, todos los sistemas sef'alizadores
iniciados por rcceplores dependiclHes de protefnas G comparlCn cicnas carac-
terfslicas y est:in gobernados por principios generales similares. Todos ellos, por
ejemplo, dependcn de complejas cascadas 0 inician cadenas de mensajcros in-
tracelulares. A difcrencia de 10 que ocurre con siSlemas de sei'lalizaci6n m:is di-
rectos utilizados por los receptores intracelulares discutidos anles y por recepto
res relacionados can canales i6nicos, tratados en el Capftulo II, las cascadas
cataHticas de mediadores intracelulares proporcionan numcrosas oportunida
des de amplificar y de regular las respuestas a sefiales extracelulares. En la casca-
da de la transducci6n visual que acabarnos de describir, por ejemplo, una sola
molecula de rodopsina activada cataliza la activaci6n de dentos de mol6culas de
transdudna a una vclocidad de unas 1000 molecuJas de lransducina por segun-
do. Cada molecula de transducina activada activa una molecula de fosfodieste
rasa de GMP cfclico, cada una de las cuales hidroliza unas 4000 moleculas de
GMP dclico por segundo. Esta cascada catalitica se manlienc durante aproxima-
damente un segundo, produciendo la hidr61isis de mas de 10~ molecuJas de
GMP dcLico par cada cuanto de luz absorbida. que derra lransiloriamente cen-
tenares de canales de Na' de la membrana plasmatica (Figura 15-41).
De forma similar. cuando una molecuJa seflal extracelular se une a un re-
ceptor que indirectamcnte acliva la adenil cic1asa via proteina G cada protefna
receptora puede activar muchas molecuJas de proteina G cada una de las cua-
les puede activar a una molecula de adenil cic1asa. Como cada molecula de G.
pennanece aCliva durame algunos segundos antes de hidrolizar su GTP unido.

Seiiallzacl6n via receptores de superflcle celular asociados a prolc(nas G 807

Tabla 15-3 Las prlnclpaJes faml1las de proteCnas G trimerlcas*
Algunos
mJembros Subunldades Modlfkado por
Famill. delafamllla Fundones toxlna baeteriana
G, o, aCliva adenil ciclasa; col~rica activa

G. ... aCliva canales de Cal<

activa adenil ciclasa en
neuronas sensoriales
col~rica aCliva

G, .. aloUalo

.
II inhibe adenil ciclasa; penusica inhibe
activa canales de K'
G. activa canales de K'; penusica inhibe
inactiva canales de ea:';

G,
(transductna)
.. activa fosfolipasa C-~
activa fosfodiesterasa de
GMP dclico en foto-
colerica acliva
y
pertuslca inhibe

.
rreceptores en bast6n de
venebrado
III G. acliva fosfolipasa C-~ no tiene efecto
Las familias se determinan por Ia relacidn entre las secuencias de aminoaddos de las subuni-
dades u. Onlcameme se preseman ejemplos seleccionados. En mamfferos se han descrito unas
20 subunidades a y at menos 4 subunidades ~ y 7 subunidades 'Y.

puede manlener activa a la ciclasa a la que se halla un ida durante algunos se

gundos, de forma que la ciclasa puede calalizar la conversi6n de un gran nlime-
ro de moleculas de ATP a AMP cfclico (Figura J5-42). Un tipo de amplificaci6n
como este se presenta en la rum de los fosfolfpidos de inosilOl. Como resultado
de eUa, una senal extracelular a concentraci6n nanomolar no'" M) induce a me-
una molkula de rodoplina
nudo concentraciones micromolares (10-6 M) de un segundo mensajero intrace- ablorbe un lolon
lular como el AMP dclico 0 el Ca:', Estas moleculas acnian como efeclores alos-
lericos aClivando enzimas determinadas, por 10 que una unica mol~cula scf'lal
eXlracelular puede provocar la alteraci6n de varios miles de mol~culas en la ce- $I aetivan 500 molllcul88
lula diana. Ademrts, carla una de las prorefnas reguladoras de la cadena de pro- de trasdU<:lna
cesos que se han aClivado puedc ser una diana independienle de la regulaci6n.
ral como ocurre por ejemplo en la cascada melab6lica que produce la degrada-
Ie aelrvlln 500 moltlculu
ci6n del gluc6geno en las fibras del musculo esqueletico, de fOlfodltlltllr8$l1
ESlas cascadas rnelab6licas explosivas han de estar reguladas por rnecanis-
mos muy eficlenlcs y scnsibles, Por consiguienle, no resulla sorprendenlc que
....--J.c.......:..
las celulas presenlen l11ccanismos eficaces para la degradaci6n rtipida del AMP U hidrolizoo 10~ mol6<;ulas
cfc1ico y para el amortiguamienlo y secuesrTO del Ca2 asf como para la inactiva- de G~P cletico
ci6n de las enzimas que responden y para las protefnas transponadoras, una
vez se han activado. Todo esto es c1aramente esencial para parar la respuesla y
II eitltan 250 Clln.~
para definir el estado eSlacionario a partir del cual la celula ha de responder. de Nt'
Como hemos visla anles (v~ase ptig. 777), en generalla respuesla a la eSlimula-
ci6n puede ser frenada rrtpidamente unicamente si los mecanismos lam bien
son rrtpidos. """ imPide que entre 10' V101 iONl$ N,'
ootren, t, Cl!itula pot" Hgundo, dunmta
un perfodo de 1 M9uodo
Las celulas pueden responder de forma subita a incrementos
graduales de la concentraci6n de una serial extracelularo
I
A1gunas respuesras celulares a Iigandos de sefializaci6n aumenlan gradualmen
te de fonna proporcional a la concentraci6n del ligando. La respuesla primaria Figura 15-41 Ampllflcacl6n de la
a las hormonas esteroideas (vease Figura 15 I3) sigue a menudo esle paU'6n, cascada catalftlca tnduclda pot la Iuz,
posiblemenle porque cada receptor hormonal une una sola molecula de hor- en bastones de vertebrados. Las
mona, y cada secuencia de DNA de reconocimiento especifico de un gen que flechas divergemes indican las etapas
responde a las honnonas eSleroideas acrua de forma independienle. A medida en las que se produce amplificad6n.

808 Capftulo 15 : Transmlsl6n de seiiales entre celulas

 moI:ul. de
1,1 ....
li911000 ..f1.1 -
cada prolelrla receptora activada
puede ectivar muchllll moloculas
de p,otelmt Go. c.d. Url. de las
cu.I" libtrfB unuburlidad a que AMPUFlCACION
puede llCliv" Url, molecul. de ~
aden,I ciclasa dur.nt. un periodo
de titrmpo prolongado
protein. receptor, Figura 15-42 Amplificaci6n en una
cascada calalfllca Inducida por un
Ugando. La primera elapa de
amplificaci6n requiere que elligando
senal permanczca unido al receptor el
tiellll)O necesario para que el receptor
I subunidad (I de
active varias mol~culas G,; en muchos
casas elligando se disociarn muy
I. protein. G.
~
[emamente para que se produzca esta
I adenH
del.sa
ltCliv.ct.
amplificacl6n.

c.d. molkul. de adenil

ciel... aetiva<la gener. AMPlIFICACtON
much molkol 0. cAMP
j I I I
<AMP

las molkul.s de cAMP

llClivan I. qulnasa A I
III .,E
'"

utle moIkule de qulne.. A

/ (
AMPlIFICACtON
\ " quh'l... A
E
a!
/ I \
"
puede fo.lorilar. .etiv.ndo
muchll copi.s de I.

!
emime X



~

en~lm. X

I I I I
c.da copl. de I. emlm. X
produce much.s molkulas AMPUFICACION ,
de produeto
I I '"
'" de receptor" llClivldos

.': :.::-. FIgura 15-43 Respuesla que

::.::::';::'X: !pro<!ueto. de presentan las celulas del ovlduclo de
,-::::.:'.':.: l.enltm.X gallina ante la estlmulaci6n por 18
"::.:;~"";"~' hormona esteroldea estradiol. Una
vez activados. los reccl>lores de
estradiol activan la transcripci6n de
varios genes direrentes. La grnfica
muestra las curvas dosisrespuesta
que aumenta la concenlraci6n de la hormona, la concentraci6n de los com ple- para dos de estos genes. que codifican
jos hormona-receptor aumenta de forma proporcionai, y tambi~n awuenta pro- las proteinas del huevo conalbumina
porcionalmente el numero de complejos unidos a secuencias especfficas de re- uno y olJQtllbllmina el otro. La cinetica
conocimiento de los genes que responden: asf pues, la celula responde de una lineal de respuesla para la
manera lineal. conalbumina indica que cada
Sin embargo. otras respuestas a Iigandos de seflalizaci6n empiezan de ma- rnolfi'icula de receptor activado que se
nera mAs subita cuando aumenta la concentraci6n delligando. A1gunas de eUas une al gen de la conalbumina
pueden ocurrir incluso de una forma que casi es del "todo 0 nada~, siendo inde- incremellla la actividad del gen en la
teetable por debajo de una concentraci6n umbral de Iigando y aumentando has- misma cantidad. Por el conlrnrio, el
ta un mAximo en wanto esta concentraci6n umbral se sobrepasa. Algunos facto- retraso seguido del abruplo
res de crecimiemo, por ejemplo, aetuan como senales de todo 0 nada indicando incremento en la c1netica de respuesta
para la ovoalbumina sugiere que para
a las celulas que deben empezar a replicar su DNA como preludio de una divi-
iniciar la transcripci6n de eSle gen se Ie
si6n celular. leual puede ser la base molecular de una respuesta abrupta como han de unir simultltneamente mlts de
esta, casi a modo de interruptor, ante una senal gradual? un receptor activado (en eSle caso son
Un posible mecanismo para escalonar la respuesta consiste en que para que 2 receplOres). (A.daptado de E.R.
se produzca la respuesta haga faJta que a una macromolt:cuJa diana se Ie una Mulvihill y R.D. Palmiter. I. Bioi. Chern.
una molt:cula 0 un complejo intracelular. Por ejemplo, en algunas respuestas in- 252:2060-2068. 19n.)

Senalizacl6n vfa receplores de superficie celular asoclados a proleinas G 809

 '" Figura 15-44 Cinetlcas de actlvacl6n
en funcl6n de la concentraci6n de la
o moiecuia senal. Las curvas muestral1

,

:0 80
c6mo se incremenla la pendiente de la
respuesta a medlda que se incrementa
.,
"5 el numero de moleculas de efector que
se han de unir simultaneamenle para
'1 activar una macromolecula diana. Las
.! 50
curvas de la grMica son las que cabe
~
o esperar sl la activaci6n necesitara la
.~ uni6n simuhanea de 1. 2, 8016
molCculas de efector. respectivamente.
~ 40
E
~ $ubunidades
proteicas ligando
~ 20 se/'lal '5
inactives

o '.5 2.0
concentraci6n relativa de molecules de ef&Ctor

ducidas par hormonas esteroideas parece que han de unirse simultaneamente

mas de un complejo hormana-receplor a una secuencia de DNA espedfica de
reconocimiento para conseguir activar un gen determinado. Como resultado de
ello, In activaci6n del gen empieza de forma mas abrupta que si fucra suficicnle
la uni6n de un solo complejo para producir eSla aClivaci6n (Figura 15-43). Un
mecanisme similar a este aetDa en las activaciones mediadas por la quinasa A y
por la calmodulina. como hemos discutido antes. Por ejemplo, se han de unir
dos 0 mas iones Ca2 para conseguir que la calmodulina adopte su conformaci6n
activa; como resultado de ello, se produce lin incremento de dncuenta veccs en
la activaci6n del proceso cuando la concentraci6n de Ca 2' tan s610 se incremen~
ta diez veces. Este tipo de respuestas son lanto mas abruptas cuanto mayor sea
el nlimero de moltkulas que cooperan, de forma que si el mlmero es sufidente-
mente elevado se pueden conseguir respuestas cercanas al "todo 0 nada" (Figu-
compleios proteicos Ilctivos ensnmblados
ras 15-44 y 15-45). de forma cooperativ8
Tambicn se consiguen respuestas subitas cuando un Ugando activa a una
enzima y al mismo tiempo inhibe otra enzima que cataliza la reacd6n opuesta a Figura 15-45 Un tJpo de mecanlsmo
de senailzacl6n del que cabe esperar
la de la primera enzima. Ya hemos hablado de un ejemplo de este habitual siste-
que presente una respuesta sublta.
ma de regulad6n en la estimulaci6n de la degradaci6n del gluc6geno en las ce-
Aquf se requiere la uni6n de ocho
lulas del musculo esqueh~tico, en las cuales un incremento en la concentrad6n moJeculas de un ligando senal sobre
intracelular de AMP cfclico actjva la fosforilasa quinasa e inhibe la acci6n opues- un complejo protcico para activarlo: In
ta de la fosfoprotefna fosfatasa. capacidad de las subunidades para
ESle mecanismo puede producir respueslas muy abruptas, pero en todo ensamblarse formando el complejo
caso ligeramente graduales de acuerdo can la variaci6n de la concentraci6n del activo depende del cambio alosterico
Uganda senal. Sin embargo, existe otro mecanismo par el cual una celula puede de conformaci6n que sufre cada
responder de forma "todo 0 nada" de modo que en cuanto la senal sobrepasa un subunidad cuando se une a su ligando.
valor umbral se produce una respuesta rapida y maxima. Todas las respuestas La un16n de un ligando formando un
"lodo a nada" de este tipo dependen generalmente de la retroalimentaci611 posi- complejo de este lipo es generalmenle
tiva. Por este mecanismo, las celulas nerviosas y musculares generan potellciales un proceso cooperativo, que genera
una respuesta escalonada cuando
de acci611 siguiendo la ley del" todo a nada", en respuesta a neurotransmisores
cambia la concentraci6n delligando,
(se discute en el Capitulo II). La activaci6n de los receptores de acetilcolina en
como se explica en el Capftulo 5.
una uni6n neuromuscular, par ejemplo, abre los canales cati6nicos de la mem- A bajas concetltraciones delligando,
brana plasmalica de la cclula muscular. Et resultado de ella es un inl1ujo neto de el numero de complejos activos se
Na' que despolariza localmente la membrana plasmatica. Esto hace que los ca- incrementara subitamente en
nales de Nat controlados por voltaje situados en esta regi6n de la membrana se proporci6n a la octava pOlencla de la
abran, produciendo un nuevo influjo de Na', el cua! despolariza aun mas la concemraci6n delligando.

810 Capltul0 15: Transm.lsl6n de seftales entre c~lulas

membrana por 10 que los canales de Na' todavfa se abren mM, elc. Si la despola-
rizaci6n inicial excede un cieno umbral, csta retroalimenlaci6n posiliva tiene un
efcclo "explosivo", produciendo un potencial de acci6n que se propaga por toda
In membrana del mllsculo. Como hemos disculido antes, tiene lugar un meca-
rLn ,,,'m,
~ '"oct'_'
nismo de retroalimenmci6n positivo como cstc cuando cl Cah cs liberado del EH.
o del redculo sarcoplasmarico a traves de canales de Ca2.; el Ca2. liberado puede
~--i
-, ",""m,
unirse a los canales de Ca2. incrementando mas la liberaci6n de Cal', producien-
do asf una espiga de Ca2. tipo "todo 0 nada".

lugal do ----' lICtiva

EI efecto de algunas sefiales puede ser recordado por la c~lula31
/1
u"i6" para
el producto ./
Un mecanismo de aceleraci6n par relroalimentaci6n positiva puede cSlablecer- d,l, '''2imil 1
se entre prolefnas senal que en lugar de ser canales i6nicos presenten actividad lug.r

-
aetivo
enzimatica. Supongamos por ejemplo que un Iigando senal determinado activa
una enzima localizada a mitad de la cadena de acont'ecimienlos que transmiten
la scflal, y que dos 0 mas moleculas del producto de esta reacci6n emimatica se
unen a la enzima activandola atin mas (Figura 15-46). La consccuencia sera que ,""',"'.
en ausencia del Ugando se producira una velocidad muy pequena de sfntesis del d"'.'i~~
producto enzimatico, y que eSla velocidad aumentara muy lentamente cuando
aumente la concentraci6n delligando hasta que. a un determinado valor umbral
de concentraci6n del Iigando, se formam suficiente canudad de producto para
activar la emima, estableciendose entonces un sistema de autoaceleraci6n. En-
UNION DE DOS
MO!.1:CUlAS DEL
PROOUCTO DE LA
I prodUC1o de
I. em,ma

ENDMA
tonces, la concentraci6n del producto enzimatico aumentara stibitamenle hasta
el nivcl mas alto posible. De eSla forma, la celula puede traducir una variaci6n
gradual de la conccntraci6n de un lignndo senal en un cambio de tipo "interrup- ~ ,,,zima
tor" de los niveles de lin producto enzilm1.lico delerminado, gencrando una res- muyaetN'
puesla de tipo "todo 0 nada" en la celula.
Ste tipo de mecanismo tiene una imponante propiedad que 10 hace inuti-
Iizable para detenninados prop6silos y tinicarnente titi! para otros. Si un sisle-
rna como este ha side activado aumenlando la concentraci6n delligando senal
por encima del umbral, generalmente permanecera activo cuando la seilal

Figura 1546 Un mecanlsmo de
"retroalimentacl6n POSltlv8
vuelva a descender por debajo del valor umbral: en lugar de reflejar fielmente acelcrante". La uni6n inicial del
los niveles reales de seflal en cada momento, este sistema de respllesta liene Ugando sefta! activa la enzima para
memoria. Va hemosdiscutido cl ejemplo de la CaM quinasa II, la cual es acuva- generar un producto, el cual se une a la
da por Ca2'-calmodulina a autofosforilarse y a fosforilar otras protefnas. La propia enzima, incrementado aun mas
autofosforilaci6n mantiene activa la quinasa cuando los niveles de Ca 2 ya han su actividad enzimatica.
vuelto a la normalidad y el complejo CaZcalmoduJina sc ha disociado de la en-
zima (veasc Figura 15-35). Tambien puedc actuar un mecanisme de autoactiva-
ci6n de memoria mas abajo en lin proceso de seflalizaci6n, a nivel de la trans-
cripci6n gcnica. Por cjemplo, la senal que desencadena la determinaci6n de la
fibra muscular activa una serie proteinas reguladoras de genes especfficos de
celula muscular que estimulan lanlO la transcripci6n de eslos mismos genes
como de otros genes que producen muchas otras protefnas de celula muscular
(vease pag. 475).

Resumen
Los receptores asociados con prote{nas G aetiwm a inactivan i"din!CIamente f!nzl
mas unidas a 10 membrana plasmtftic:a a c:anales 16nkos. a traves de prole{niI$ re-
guladoras G trimeriau (prote{nas GJ, que Sf! inaalvan a s{ munuu medUrnte 10 111-
dr61isis de.1 GTP que llevan unido. Alg.,nos receptores asocliliuu a prote{niI$ G
ac:tivan 0 '"ac:tluan In amnii elelma, altermuio as{ In concentrac:i6" Illtracelllltlr
del ",ediador Intracelultlr AMP dclico. Otros aetivan IIntl fosfolipllStI C espedf1a,
de. fosfoUpidos de inositol (la fosfoliptUll C-llJ, 10 elltllll1drollzn elfos/atidilinosltol
bis/osfato (PIPJ generando dos mediadores intracel"lores -el inositol Iris/as/ato
(IPJ, qlle libera eaz- destk el ER itu:rementando as{ In concentracwn de eaz ell el
dtosol, y el diaci/gUcerol, q"e permnnece en In membralla plnsmdticn y aetiva In
q"innsn C. Un Illcremento de /05 nlvela de AMP del/co 0 de or- afecta la dluln es

Seiiallzacl6n vfa receptorcs de superncle celular asoclados a protefnas G 811

amullwdo {til/II/nasa A y In fill/mull Ct'M, respectivtltnenle. til qll/mull C, In qll/-
tuua A y In quilUlStI CaM los/orUn" pro/ell/as diana detem.ilwd/IS sobre res/duos
de uri/,a y de treon/nn, alteramlo In m:l;vitl,1d de estm protelnas. Giuln tipo de ce-
lula tie"e oofljuntos caracterlstioos de protetlas diana que SOil regrdadas de esta
forma. 10 Clud pennUi! a In dlllin presetrtar 511 ",spuesta prop/a y carac:terlstica a
c:nmbios de los niveles ;ntroc:elulnres de AMP cfclico 0 de Cal' libre. A traves de las
cascadns meditulas por el AMP cfclioo 0 por el Qr2', las rrsplfesUU a 1m senales u-
trac:elulnres pueden ser enornreme"te ampl iftcadns.
Las diferellln resplle$las medilUiLu por estos receptores SOli rtfpidamf?nte fre,ln-
diu C1umdo elligmufo senal ttrtrae/ulares elimilUldo. Ello es debldo a qlle las prote{-
IUlS G Sf! auto/lind/van Ilidrolwmdo eI GTP que ,levan IInido, diP, es rtfpidnmetlte
desfas/orllndo mediante una fosfatasn (olos/orllado por II1Il1 quimlSil), el diacilgli-
cernl es rdpidnmelltedegradado, los mu;le6tidos dclioos SOil rdpidamellte Iridroliza-
dos por Ima fosfodiesterasa. el GIr' es rdpidametlte bombeado lracia fllera del cito-
sol y las profeflms SOtl rdpidameflfe desfosforiladas por protef"a fosfatasas. El
oo"amlO y rdpido recambio de eslos mediadores i"'racelulares llace posibk que se
prodllZCtlllll rtfpido incremellto de SIIS OOllcellfraciolles cuatulo Ins d''''as respOII-
dell a smlales extracelulares. Atlemds, las dlulas pll.edell ,uilWlr la cooperatlvidad y
la retrrxdlmelltaci611 positilla IJam IUlcer que 5"S respueslas seall mas $IIbitas.

Sefializaci6n via receptores de superficie celular

asociados a enzimas
Como los receptores asociados a proteinas G, los receptores asociados a enzi-
mas son protemas transmembrana cuyo dominio de uni6n aI Iigando se halla
sobre la superficie exterior de la membrana plasmoitica. En lugar de lener un do-
minio cilos6lico que se asocia a una protefna G trimerica, sus dominios citos6li-
cos tienen una actividad enzimfitica asociada 0 estan asociados directamente a
una enzima. Mientras que los receptores asociados a protefnas G atraviesan sie-
Ie veces la membrana. habilualmenle cada subunidad de los receplores cataHti-
cos la alraviesan una sola vez.
Existen cinco c1ases conocidas de receptores asociadas a enzimas: (l) el re-
ceptor gllallilaro cielasa, que calalizan la producci6n de GMP cfclico en el cito-
sol; (2) los receptores t;ros;na qllillasa, que fosforilan determinados residuos de
tirosina de un pequeno grupo de prolefnas senal intracelulares: (3) los receptores
asociados a tirosina qllillasas, que est an asociados a protefnas que tienen activi-
dad lirosina quinasa; (4) los rcccptores tirosina fosfarasa, que eliminan grupos
fosfato de residuos de tirosina de dClcrminadas protefnas scnal intracelulares, y
(5) los recepcores seri"altreollifla q/linam, que fosforilan delerminados residuos
serina 0 neon ina de algunas proleinas intracelulares.
Empezaremos nueslra discusi6n con el recepwr guanilato ciclasa.

Los receptores guaniJato ciclasa generan GMP cfclico directamente3 1

Los peptidos lIatriurelicos alriales (ANP, de Atrial Natriuretic Pcplidcs) constitu-
yen una familia de hormonas peptfdicas, muy relacionadas enlre sf, que son se-
gregadas por celulas musculares del atrium del coraz6n cuando se incrementa la
presi6n de la sangre. Los ANP eslimuJan el riMn para que segregue Na- y agua e
inducen a las celulas musculares Iisas de las paredes de los vasos sanguineos a
que se relajen. Ambos efectos tienden a disminuir la presi6n sangufnea. EI re-
ceptor de ANP que media estas respuestas se halla presente en las ce:lulas del ri-
n6n y en las celulas de la musculatura lisa de los vasos sangldneos; se trata de
una protefna que atraviesa una sola vez la membrana plasmatica, que tiene un
lugar cXlracelular de uni6n a ANP y lin dominio intracclular con actividad guani-
lalO ciclasa. La uni6n de ANP activa la cic1asa para producir GM P cfclico, el cual,
a su vez, sc une y acliva una proteina qllinusa depelldieme de GMP cfelico (qu;-
"asa G), la cual fosforila determinadas protefnas sobre residuos de serina 0 treo-

812 Capftulo 15 : Transmisi6n de senales entre ce:lulas

 dominio semejente Figura J 5-47 Scls subfarnUias de
e una inmunoglobulina
receptores lirosina quinasa.
dominio
rico en Solamenle se indican uno 0 dos
cistelnas _ miembros de cada subfamilia. N6tese
que en algunas subfamilias el dominio
tirosina quinasa se halla inrerrumpida
por una "regi6n insertada en la
quinasa". No se canace el significado

._"'_""_"""_+_-I"_+__
ss
"
ss

+,~~~~membrana
CITOSOL plasm8tica
funcional de los dominios ricos
en cisterna y de los dominios
semcjanrcs a una inmunoglobulina.
dominio - regi6n
tirosina insertada
quinasa en la quinasa

raceplor receptor de raceptor receptor

de EGF insulina, de NGF de FGF
reCeplOr receptor raceplor
de IGF' de PDGF, de VEGF
receplor
de M-CSF

nina. Asf, los receptores guanilalo c1c1asa utilizan el GMP cfclico como media-
dar intracelular de la misma forma que algunos receplOres asociados con protef-
nas G utilizan el AMP cfclico, can la diferencia de que la uni6n entre el ligando y
la actividad cidasa se produce directamente en Iligar de sHeeder vfa una prolef-
na G trimerica.
A pesar de que conoeemos relativamente poeos reeeptores que pertenezcan
a la familia guanilato ciclasa, muchos receptores conocidos perteneeen a la fa-
milia tirosina qllillasa, de la que trataremos a eontinuaci6n.

Los receptores para la mayorfa de los factores de crecimiento son

protefnas transmembrana que presentan actividad protefna
tirosina quinasa especffica 32
La primera protefna receptora que se reconoci6 que presentaba actividad protei~
na t1TOslna qulnasa especifica (en 1982) fue el receptor para el factor de creci-
miemo epidermico (EGF, de Epidermal Growth Factor). EI EGF es una pequefia
protefna {53 residuos de aminmicidal que estimula la proliferaci6n de las celulas
epidermicas y de una gran variedad de otros tipos celulares. Su recep(Qr es una
protefna transmembrana, que atraviesa la membrana una sola vez, de unos 1200
residuos de aminoacido y que presenta una larga zona extracelular glucosilada
que se line a EGF. Cuando el EGF se une a esta porci6n, se aCliva un dominio in-
tracelular con actividad tirosina quinasa. Una vez activado, el receptor transfiere
un grupo fosfato del ATP a determinadas cadcnas laterales de tirosina, tanto de
la propia protefna receptora como de otras protefnas celulares determinadas.
Muchas alros receptores para facIO res de crecimienta y diferenciaci6n tambien
SOil receptares tiroslna quinasa. Entre elias, cabe destacar los receplOres para el
factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF, de Platelet-Derived Growth
Factor). para los factores de crecimiento de los fibroblastos (FGF, de Fibroblast
Growth Factors), para cl factor de crecimiento de los hepatocitos (HGF, de Hepa-
tocyte Growth Factor), para elfactor de crecimiento-I para iflSlIli"a y compuestos
andlogos (fGF-I, de Insulin, insuli"like Growth FacIOr-l), para el factor de creci-
miento neuronal (NGF, de Nerve Growth FacIOr), para el factor de crecimiefllo
vascular endotelial (VEGF, de Vascular Endothelial Growth Factor), y para elfac-
tor estimllladorde laformaci61l de colonias de macr6fagos (M-CSF, de Macropha-
ge Colony Stimulating Factor), todos los cuaJes son protefnas. Como se muestra
en la Figura 15-47, la familia de receptores can actividad tirosina quinasa puede
subdividirse en un determinado numero de subfamilias estructurales; en cada

Sciializacion via receptares de supcrflcie cclular asociadas a cnzimas 813

 I
'om
dlmero de PDGF

1
lAl IBI '_plor de PDGF

caso los receplores se fosforilan a sf mismos para iniciar la cascada de senaliza- Figura 15-48 Factordecrecimiento
ci6n imraceJular. derivado de las plaquetas (PDGF).
iDe que forma la uni6n de una protefna especffica del dominic extracelular (Al Estructul1l. dimerica de la protelna.
de un receptor lirosina quinasa acHva el dominic catalitico que se halla siluado con las regiones de uni6n al receptor
al DUO lado de la membrana plasmMica? Resulta diffcil de imaginar que un cam- sombreadas en amarillo. EJ dimero se
bia de conformaci6n pueda propagarse a traves de la bicapa Iipfdica a traves de mantiene por tres enlaces disulfuro
(nose muestran). {B} Debido a que
una helice (X sencilla que alraviesa la membrana. EI problema qued6 resuelto
PDGF es un dimero con dos lugares de
cuando se demostr6 que la uni6n de un ligando haee que el receptor de EGF for- uni6n, puede unirse a dos receptores
me dfmeros. 10 cual permite a los dos dominios citoplasmaticos fosforilarse uno adyacentes, iniciando asi el proceso de
aJ ouo sobre varios resldUQS lirosina. Esta fosforiJaci6n crnzada se denomina auto- senalizaci6n intracelular. EI factor de
fosforikJci6n porque se produce demro del receptor dimerico. En el caso de los crecimiemo neuronal (NGF), como las
receptores de PDGF elligando es un dimero que reacciona con dos receplOres a demas protefnas de la familia de las
la vel. (Figura 15-48). E! EGF, par el contrario, es un mon6mero que al parecer mmrotrofinilS (discutida en el Capitulo
induce un cambio de confonnaci6n en el dominio extracelular de su receptor, 10 21). lambi~n actua como dimeros que
cual induce la dirnerizaci6n del receptor. Se cree que la dimerizaci6n del recep- entrecruzan sus tirosina quinasas.
tor es un mecanismo general de la activaci6n de los receptores asociados a enzi-
rna que tienen un unico dominio transmembrana.
La dimerizaci6n del receptor puede utilizarse experirnentalmente para inac-
tivar espec{ficamente detenninados receptores, en un intento de determinar su
importancia en una respuesta celular particular. La estralegia supone In trans-
fecci6n de c~lulas con un DNA que codifica una forma mutalHe de un receptor
tirosina quinasa que dillleriza normalmente pero que tiene un dominio quinasa
inactivo. Cuando se coexpresan a elevado nivel can receptores normales, los re-
ceptores mutantes acn.ian de L1na manera dominante llegatiua (v~ase Figura 7-
44), inhabilitando los receptorcs normales al formar dfmeros inactivos con ellos.
Los procesos de senalizaci6n desencadenados por los receptores de EGF,
POGF Yde FGF sc han annlizado con gran detalle. En cada caso las tirosinas de
autofosforilaci6n se lltilizan como lugarcs de uni6n, de aha afinidad, para protef-
nas senal intTUcelulares de In c~lula diana. Cada una de estas protefnns se line a
diferentes lugares fosforilndos del receptor activado, reconociendo ademas de la
fosfotirosina, dCl'Crminadas cnracterfsticas del entomo de la cadena polipeptfdi-
ca. Una vel. se han unido al receptor, muchas de estas protefnas resuhan fosfori-
ladas sobre tirosinas, y asf son activadas. De esta forma se cree que la autorosfo-
rilaci6n en tirosinas actua como una especie de interruptor que desencadena el
ensamblaje transitorio de un complejo senal intracelular. el cual libera la senal
al interior de la cellila.
Los receptores de insulina y de IGF-I acn1an de una fomla ligeramente dire
rente_ En primer lugar, dado que los receptores son tetrameros (vease Figura 15
47), se cree que la uni6n delligando no induce una dimerizaci6n sino una inter-
acei6n alost~rica entre las dos mitades del receptor. En segundo lugar, la uni6n
de insulina hace que el receptor fosforile su dominio catalftico, el Cllal activa la
capacidad de fosforilar otra protefna (denominada substrata- J del receptor de in-
s"lina 0 IRS), de insIllin Receptor Substrate-i) sabre mliltiples tirosinas. Las fos
fotirosinas de IRS) actuan como lugares de uni6n de alta afinidad para el aco
plamienro y aetivaci6n de proteinas senal intracelulares, muchas de las cuales
tambi~n se unen directamenle a otros receptores tirosina quinasa acLivados.

814 CapftuJo 15: Transmlsl6n de sciiales entrecelulas

 receptor Figura 15-49 Uni6n de prote(nas
membrana plasm!lica de PDGF
senallntracelulares que conlienen
crrosoL 51-12, a un receptor aclivado de POGF.
(a) Dibujo esquemlilico de un receplor
I
740 dominio
de PDGF moslrando cinco lugares de
aUlofosrorilaci6n en tirosinas. Ires en
751 t,rosina
quinua la regi6n insenada en la quinasa y
n1 dividido cinco en la cola carboxilo terminal: a
..---J estos lugares se unen las [res prolefnas
senal que se indican a su izquierda.
(Exislen Olms dos lugares de
aUlofosrorilaci6n en timsinas del
damioio SH2 dommio SH3
IAI receptor, que no se indican en el
dibujo, localizados enlre el dominic
que mraviesa la membrana y el
dominlo de uni6n principio del dominio quinasa, que
dominio de unl6n para !a cadena lateral
para la 101101lrosine de un eminoacido acnlan como lugares de union para
tirosina quinasas no receploras
semejantes a Src.) Los llllmeros de 111
derecha indican las posiciones de las
tlrosinas en la cadena polipeptfdica.
[SIOS lugares de union han side
idcl1lificados utilizando la lecnologfa
del DNA recombiname para mular
determinadas prolefnas del receplor.
la mUlacion de las lirosinas 1009 y
.
1021, por ejemplo, impide la uni6n y la
I aetivaci6n de PLC-y, de forma que la
activaci6n del receplor no eslimula el
proceso de senalizaci6n de fosfolfpidos
dc inosilOl. Se indica la localizaci6n de
los dominios SH2 (en mjo) y Sl-lJ (en
lSI
azul) en las tres proleinas senal.
(8) E$truClUra tridimensional de un
dominio SH2, delerminada por
Los residuos tirosina fosforilados son reconocidos crislalogralia de rayos X. En amarillo a
por prote{nas con dominios 5H2" la dere<:ha, se mueslra el bolsillo para
la fosfolirosina y en amarillo a la
Se ha encontrado una colecci6n complct<l de protefnas seftal intracelulares que se izquierda se muestra un bolsillo de
unen a las fosfolirosinas de rcceplores tirosina quinasa aClivados. A1gunas de estas uni6n espedfica a una cadena lateral
protefnas -una protefna ae/i/Jadora de una GTPasa (GAP, de GTPase-Activating de un aminokldo. (Cl EI dominio SI12
Protein"), lafosfolipasa C-y(PLC-y. de phospholipase C-n y las proteflla tirosina es un m6dulo compacta <lue puedc ser
qllinasas 110 receptoras, semejames a Src- tienen fWlciones mas 0 menos conoci- insertada en casl cualquier Sllio de una
das, como veremos en las pr6ximas paginas. La fosfolipasa Coy, por ejemplo, actlia prote(na sin alterar ni el plegamiento
de la misma fornm que 1a fosfolipasa C-J}, activando el proceso de sei'lalizaci6n de ni la runci6n de dicha proterna.
los fosfolfpidos de inosiwl, del que hemos trarado anlerionnenle en conexi6n con Debido a que cada dominio Ilene
direrenles lugares de unl6n que
la seftalizaci6n via protefnas G. Olras prOieinas que se unen a receptores lirosina
reconocen rosfotimsinas y
qujnasa aClivados constituyen un mislerio. La enzima!os!atfdWtlosiI013'-qui"asa
delerminadas cadenas lalerales de
(PI3-qllinasaJ, par ejemplo, parece ser importame en la regulad6n de la prolifera- aminOOcidos. los direrentes dominios
ci6n celular; su acci6n inmediata es fosforilar el aniUo de inositol del fosfatidilino- 5H2 reconocen rosfotimsinas en el
sitol en la posici6n 3 (vea5C Figura 15-29). pero las funciones de los fosfoinosftidos contexto de direrentes secuencias de
espcciales generados de esla fonna son desconocidas. arninolicidos flanqueanlcs. (8. basado
A pesar de que las prolefnas sefta! intracelulares que se unen a residuos de fos- en datos deG. Wroman et at, Cell
fotirosina de receptores activados tirosina quinasa (ya IRS-I) lienen estrueturas y 72:1-20, 1993. o Cell Press.)
fundones muy variadas, habitualmcnlc companen dos dominios no calalfticos ai-
tamenle conservados, dcnominados SH2 y SH3 por n?giOtles lIom610gas Src 2 y 3 ,
ya que enconlraron por primera vez en la prmefna Src (famosa par su papel en el
eSlUdio de cancer, como se discute en cl Capftulo 24). Los dominlos 5H2 recono-
cen lirosinas fosforiladas y pcnniten a las prolemas que los prcsentan unirse a los
rceeptores tirosina quinasa aClivados asf como a otras protefnas sefial intTace!ula-
res que hayan sido fosforiladas transiwriamente sabre tirosinas (Figura 1549). La

Seilallzaci6n v(a receptores de sllperncie celu.lar asociadas a enz.lmas 815

funci6n del dominio SH3 es menos clara, pero parece ser que se une a olras protei-
nas celulares.
Los estudios sobre una c1ase de pequefias protefnas "adapladoras~que sola-
mente constan de un dominio SH2 y ouo SH3 han permilido sugerir que el do
minio SH3 debe tener una funci6n de uni6n. Estas peque;;as prorefllas SH (ulap
'adoras no presentan actividad calalftica intrinseca y actuan acoplando
proteinas fosforiladas en tirosinas. como los receptores tirasina quinasa activa-
dos, con otras proleinas que no tienen dominios SH2 a SH3 propios. Una de es-
las proteinas SH adapladoras. denominada Sem-5, fue descubierta a traves de
estlldios geneticos en el gusano nem<1todo C elegans, como se discute en el Ca-
pitulo 21. Delenninadas mutaciones en el gen sem-5 bloquean el proceso de se
nalizaci6n que parte desde varios rcceptores tirosina quinasa y tiene profundos
efCClOS sobre el desarrollo del gusano. Los procesos de senalizaci6n son bloquea
dos con la misma efectividad por mutaciones que afectan aI dominio SH2 0 a
cualquiera de los dos dominios SH3 de la moIecula, 10 cual sugiere que ambos
dominios SH3 son necesarios para unir un componente senal del proceso (vease
Figura 1553). De hecho, parece que en la mayona de las celulas animales se ha-
lIan presentes protefnas hom61ogas a Sem-5, y exislen evidencias lanto geneti-
cas como bioqu(micas de que estas proteinas acoplan los receptores proterna
quinasa activados con Has, la importante prote(na del proceso de senalizaci6n,
sobre la que volveremos enseguida.

Las protemas Ras constituyen un eslab6n crucial

en la cascada inlracelular de seiializaci6n aClivada
por receplores prolefna quinasa34
Las procefnas Ras pertenecen a la gran superfamilia Ras de GTPasas monomeri
cas, que tambien contiene otms dos superfamilias: (1) las proleinas Rho y Rae,
implicadas en la transmisi6n de senales desde receptores de la superficie celular
hasta el citoesquelcto de actina (discutidas en el Capitulo L6), y (2) la familia
Rab, implicada en la regulaci6n del trMico del transporte intracelular de vesicu-
las (disculidas en el Capftulo 13). Como casi todas estas proternas GTPasa mo-
nomericas, las proternas Has comienen un grupo fen ii, unido covalentemente,
que participa en el anclaje de la prote(na a la membrana, en este case a la cara
citoplasm<itica de la membrana plasmatica donde actua esta protefna.
Las protefnas Has participan en la transmisi6n de sefiales desde receptores
tirosina quinasa haSla el nucleo, estimulando la proliferaci6n 0 la diferenciaci6n
celular. 5i se inhibe la fllnci6n de Has mediante la microinyecci6n de anticucr-
pos anti-Ras a mediante formas mutantes dominantes negalivas de Has, deja de
producirse la respuesta de proliferaci6n 0 de diferenciaci6n normalmente indu-
cida por recepteres protefna quinasa activados; contrariamente, si lin mulante
hiperactivo de protefna Ras es introducido en una celula, el efecto sabre la proli-
feraci6n 0 la diferenciaci6n es habitualmente el mismo que el inducido por la
uni6n de un Uganda a los receplores de la superficie celular. De hecho, las proteI
nas Has fueron descubiertas como los productos hiperactivos de genes ras mu
tantes, que producen cAncer al romper los contrales normales sabre la prolifera-
ci6n y la diferenciaci6n; alrededor del 30% de los c<1nceres humanos presentan
estas mUlaciones en un gen ras.
Como OlTas GTPasas monomericas y las protelnas G trimericas, las prolel
nas Has actuan como interruptores, altemando entre dos estados conformacio
nales diferentes -activo cuando unen GTP (vease Figura 15-18) e inactivo cuan
do unen GOP. Ras hidroliz.a GTP a1 menos 100 veces mas lentamente que la
subunidad (t de la proterna G trimerica estimuJadora G. de la que hemos tratado
anteriormente, y debido a que en el citosollas concentraciones de GTP son unas
10 veces mas altas que las de GOP, en ausencia de otros esdmuJos, mientras el
GTP se halla unido a ella Ras permanece constantemente activa. Sin embargo.
en la celula exislen dos c1ases de protelnas seoal que regulan la aetividad de Ras
influyendo en la transici6n entre el estado activo y el inactivo. las protefnas ac-

816 CapItulo 15: Transmisi6n de sei'iales entre celulas

 INACTIVA FlgUJ1l 1550 Regulacl6n de la
iK:llvldad Ras. Las proteCnas
activadoras de GfPasa {GAP} inactivan
Pi
Ras aI estimularlas a que hidrolizen el
GTP que Uewn unido. Las proteJnas
liberadoras de nucle6tid05 de guanina
(GNRP) activan Ras aI estimularlas a
que Iiberen el GOP que Devan unido;
dado que la concentraci6n de GTP en
el olosol es 10 veres mayor que la de
GOP, Has lendni tendencia a unirGTP
cuando se haya Iiberado desu GOP. En
ctlulas de mamifero se han
identificado hasla ahora dos GAP
reguladoras de Ras (Ros GAP) -p J2(f'N'
ACTIVA y nellrofibromillQ (denominada asf
porque ests codificada por el gen que
se halla mutado en la mayona de la
tlvadoras de GTPasa (GAP, de GTPase-Activating Proteins) incremenran la velo- enfermedad humana comunllamada
neurofibromatosis, asociada can
cidad de hidrolisis del GTP unido a Ras, de fonna que la inaclivan. EsIOS regula-
tumores de los nervios). A pcsar de que
dores negalivos estan compensados por las prolefnas Ilberadoras de nuclootl- las dos Ras GAP se expresan de forma
dOl de guanina (GNRP, de Guanine Nucleotide Releasing Proteins), las cuales ubicua, parece que en los diferentes
estimulan el intercambio de los nuclootidos unidos cstimulando la perdida de tipos celulares una de las dos domina
GOP y la posterior captaci6n de GTP del citosal; asf, tienden a activar Ras (Figura al manlener la mayorfa de las
15-50). En principio, pucs.los receptorcs tirosina quinasa pueden activar Has ac- prole{nas Ras (-95%) ensu estado
tivando una GNRP 0 inhibiendo una GAP. Los receptorcs tirosina quinasa acti- inactivo, unido a GOP.
vadas se unen a GAP directamente, como hemos dkho anles, y se unen a GNRP
sOlo indirectamente. como discutiremos despues. Sin embargo, es la union indi-
recta a GNRP Ia que habitualmente es la rcsponsable de conducir a la protema
Ras a su estado activo, unido a GTP.
Las pmtemas Ras y las proteinas que reguJan la actividad de Ras han side
rouy conservadas durante la evolucion; analisis geneticos realizados en Drosop-
hila y en C ekgans han praporcionado los primeros indicios sabre cOmo los re-
ceptores tirosina quinasa activan Ras. Han sido particularmente infonnalivos
los estudios sabre eI desarrollo de la celula fotorreceplora del ojo de Drosophila.

Una protel'na SH adaptadora acopla los receplores tirosina

quinasa con Ras: evidencias que provienen del desarrollo
del aja de Drosophila"
EI ojo compucsto de Drosophila cstc1. formado por unas 800 unidades identi-
cas denominadas omalidios, cada una de las cuales CSlct farmada por 8 celulas
(otorreceptoras (RI-RB) y 12 celulas accesorias (Figura IS-51). EI oia se desarrolla
a partir de una lamina epiteliaJ simple. y las celuJas que forman cada omatidjo
son reclutadas desde tOOa la l:imina a traves de una secuencia fija mediante una
serie de interacciones celuJa-c~Hu1a. Empezando con el desarrollo de R8, cada
relula diferenciada induce a su celula vecina inmediata, hasta cste momento no
comprometida, a adoptar un destine y a eosamblarse de una manera especi.al en
eI desarrollo del omatidio (Figura IS-52).
FJ desarrollo del (otorreceptor R7, necesario para la deteccion de la luz ul-
travioleta, ha sido estudiado m6s intensamente, empezando en 1976 con la des-
Figura 15-51 Electronmlcrografrade
cripcion de una mosca mutanle denominada sevenless (sev, de "sin el siete'") en barrldo de un ojo compuesto de
la que el tlnico derecto observado es que R7 no se desarrolla. Estos mut'antes son Drosophila. EI ojo esut rompueslO de
f;\ciIcs de seleccionar sobre la base de su ceguera a la luz ultraviolela. EI gen sev uuas 800 unidades identicas
fue aislado y se observ6 que codifica un receptor lirosina quinasa que se expresa (omalidiosl. cada una de las cuales
en las relulas pTeCunlOras de R7. Posteriores anc1..Hsis gentilicos de mutantes en ticne una lente independienle que
los que se halla bloqueado el desarrollo de R7 pero en los que la protefna R7 no enfoca la luz sabre las ocho dlulas
estct afectada, lIevaron a la identificacion del gen bride-oJ-sevenless (boss, 0 fotorreccploras de Sll base. (Por
Ncompafiero de sevenless"), <Iue codifica elligando de la prot'cfna rcceptora Sev. cortesfa de Ernst Hafen.)

Seiializacl6n via recelltores de sUllCrflcle celular asociados a enzimas 817

 Figura 15-52 Ensamblaje de las

(0- celulas de un [otofTeceptor en un

omatldlo en desarrollo de
Drosoplrila. Dibujo esquematico del
reclulamiento secuencial de
Boss es una proteina que alraviesa 7 veces la membrana. que exdusivamcmc se fOlorreceplores, empezando con R8 y
acabandocon R7. que es la ultima
expresa en la superficie de la relula adyaceme R8, y que cuando se une a una Sev
celula fOlorreceplora que se desarrolla.
la aCliva induciendo a 1a celula precursora de R7 a diferenciarse en un fotorre-
ceplar R7. La prOlcfna Sev lambicn se expresa en algunas otras celulas prccurso-
ras del omalidio en desarrollo. perc ninguna de estas celulas emTan en conlacto
con R8. poT 10 que la proteina Sev no es activada y las celulas no se diferencian a
fOlorreceplores R7. A pesar de que puede sospecharse que los organismos pluri-
celuJares hacen un usa mllY extendido de ligandos seflal unidos a la superficie
cellilar como Boss. tales moleculas han sido mllY dificiles de identifiear y carae-
terizar mediamc tecnicas bioqufmicas (fpieas. La identificaci6n de Boss ilustra el
poder de las aproximaciones geneticas.
Ha resuhado ml1s diffcil identificar los componentes del proceso imracelu-
lar de sei\alizaci6n activado por $even la celula precursora de R7 que el receptor
o su ligando, debido a que estos componentes son utilizados por celulas de una
gran cantidad de 6rganos en desarrollo ademas del ojo, y las mUlaciones que
inactivan el proceso son lel'ales. Sin embargo, algunas de eSlas mulaciones son
lelales unicamenle cuando estlin afectadas ambas copias del gen, por 10 que
pueden manlenerse en ani males heterozigotos que presentan una copia del gen
mutanle y la otra normal. Aislando estos mutanles asi como utilizando otras es-
Iralegias genelicas, se han podido idenlificar algunos genes que codifican pro-
lefnas de senalizaci6n intracelular. Uno de ellos codifica la prolefna Ras. Mien-
tras que las moSas en las que ambas copias del gen ras estl1n inaclivadas por
mutaci6n mueren, las que presentan unicamente una copia inaClivada sobrevi-
yen aunque carecen de R7. COl1trariamenle, si uno de los genes ras se hace hi-
peraclivo medial1le mUlaci6n, R7 se desarrolla incluso en mUlanles en los que
lanlO sevcomo boss son inaclivos. Asf pues, la aClivaci6n de Ras parece ser nece
saria y suficiente para inducir la diferenciaci6n de R7. Un segundo gen, eillama
do lIijo-de-sevellfess (50S, de "s0':l-ofsevenless~)codifica una prolefna Iiberadora
de nucle61idos de guanina (GNRPj, que es necesaria para que el receptor tirosi-
na quinasa Sev aClive a Ras. Un tercer gen codifica lIna proterna semejante a
SemS denominada Drt (de downstream of receptor kinases, "mtis adelanle de
los receplores qllinasa") que acopla el receptor Sev a la prote(na 50s; el dominic
SH2 de Drk se une a Sev, activl1ndola, mientras que parece que los dos domini os
SH3 se unen a Sos. Un cuarlo gcn codifica una prote(na activadora de GTPasa
(GAP). Si estc gcn es inactivado, R7 se desarroHa incluso aunqlle sev haya sido
inactivado, probablemente porque Ras es hiperaclivo cuando GAP no 10 inhibe
(Figura 15-53). En este sistema de sei\alizaci6n, sin embargo, y en muchos atros
sistemas estudiados, la activaci6n de Ras par receptores lirosina quinasa depen-
de de la aClivaci6n de GNRP m<ts que de la inactivaci6n de GAP.
Una vez aClivada, Ras transmite la senal aClivando una cascada de fosforila-
ci6n serina/lreonina, que est<1 ahamente conservada en las celulas eucariolas,
desde las levaduras hasta los humanos, Un componente crucial en esta cascada
es un nuevo lipo de protefna quinasa denominado MAP-quinasa, que conside-
raremos a cOl1linuaci6n.

Ras activa una cascada de fosforilaciones serina/treonina

que activa la MAP-quinasa36
Las fosrorilaciones en tirosina y la activaci6n de Ras, estimuladas por receplores
quinasa de la superficie ciloplasml1lica de la membrana plasml1tica, tienen una
vida muy cona: las rosrorilaciones son revertidas rl1pidamente por prolefna liro-
sina fosratasas especfficas (discutidas mas adelante), y Ras cuando estl1 activa se
inactiva a sf misma hidrolizando el GTP que tiene unido, a GDP. Para poder esti-

818 Caprlulo 15: Transmisi6n de sefiales entre celulas

 ~Iul. R8
Figura t5-53 Procesos de
seftallzaclon celular tempranos en el
.;.ITO.S.O.l__. , ~\-...... desarrollo de R7. La aetivaci6n del
receptor tirosina quinasa sev de la
membr.nli pl..malica. superficie de la c~lula precursora de R7
por la protefna Boss de la superficie de
R8 estli acoplada con \a activacion de
moSOl la protefna liberadora de nucl~tides
de guanlna Sos. a traves de la pequena
Uluu. R7
DB prOlena adaptadora SH, Drk.. Drt
reconoce una detenninada liresina
autofosforilada de la prote{na Sev
mediante un dominio SH2 e inleractua
con 50s mediallle dos dominios SH3.
50s eSlimula la protefna inactiva Ras
para e1iminare! GDP que tiene unido y
as( II caplar GTP, 10 cua! aCliva a Ras
para transmitir la seflal siguiendo el
curso del proceso de seJializaciOn. (j\
SIGUE EL PROCESO
OE SENALIZACl6N
pesar de que no se mues[ra aqur, Itas
Inhlbi<:iOn se halla unida a la cara c1tos6lica de 13
de GAP membrana plasmatica.l Se cree que
Sev activa tambien inhibe GAP, la eua!
podrra, casa de estar activa,
mular las celulas para proliferar 0 para diferenciarse, estos conos eventos seflal contrarrestar 1a funci6n de 50s
han de convenirse en eventos m:is duraderos que puedan manlener la seflal y estimulando a Ras para hidrolizar el
lransmitirla hacia el nUcleo. EI sistema de transmisi6n esl<1 formado por multi- GTP que lIevara unido, inactivandose.
ples cascadas de fosforiJaci6n en serinasltreoriinas. que interactuan entre si, las Parece que el acoplamiento del
cuales son procesos mas duraderos que las fosforilaciones en tirosinas. En estas receptor tirosina quinasa con Ras
cascadas participan muchas scrinaltreonina quinasas, pero una familia que ocurre a traves del mismo mecanismo
contiene a1 menos cinco miembros parece desempeflar un papel especial mente que en las c~lulas de mamffero.
importanle -las protema qulnasas actlvadas por mit6genos (MAP, de Mitogen
Activated Proteins) (tambien denominadas quinasas regll/lUias por sena/es extra
celli/ares, IERK, de Extracellular Signal Regulaled Kinasesl). ESlas quinasas son
activadas por una gran variedad de seoales inductoras de proliferaci6n y dife-
renciaci6n celular, algunas de las cuales acrivan receplOres Urosina quinasa
mienlras que ouas activan receplores asociados con prolefnas G.
Una caraClerfstica extraardinaria de las MAP-quinasas es que para que se
produzca su activaci6n complela hace faha que se fosforilen sabre una treonina
y sabre una tirosina que en la protcfna se hallan separadas par un solo amino-
addo. La prolefna quinasa que calaliza ambas fosforilacioncs se denomina
MAP-qlli"asaqui"asa. Los requerirnientos de fosforilaci6n sobre lirosina y treo-
nina aseguran que MAP-quinasa se mantenga inactiva mienlras no se active es
pecfficamenle la MAPquinasa-quinasa, cuyos unicos subslralos conocidos son
las MAP-quinasas. A su vez, la MAP-quinasa-quinasa se activa por fosforilaci6n
en serinas/treoninas calalizada por una MAP-quinasa-quinasa-qujnasa, que al
parecer se activa por uni6n a Ras activa (Figura 15-54).
Cuando MAP-quinasa se halla activada, transmite senales fosforiJando va-
rias protefnas celulares. incluyendo olras proteina quinasas y prolefnas regula-
doras de genes. A menudo, en cuesti6n de minutos despues de que la celuJa
haya side estimulada por un factor de crecimiento, se activa la transcripci6n de
un conjunlo de genes tempra1los i1lmediatos. Un complejo proleico que desem-
pena un imponanle papel en esta activaci6n de la transcripci6n es el complejo
disculido anteriormente fonnado por el factor de respuesta S4!rica (SRF. de Se-
rum Response Factor) y Elk-I. EI complejo se halla unido constitutivamente a
una secuencia detenninada de DNA (el elemento de respuesta serica) que se ha-
Ila en la regi6n reguladora de un gcn denominado [as y de Olros gcncs (vease Fi-
gura 15-32). Ademas. las MAP-quinasas pueden fosforilar la protcfna Jun, que se
combina con la protefna recit1n formada Fos formando ulla prot'cfna aCliva regu-
ladora de genes denominada AP). Entonces, est'a prote(na AP] activa otras ge-

Seftallzacl6n via receplores de superflcle celular asoclados a cl17.lmas 819

 membrana plasmatica Figura 15-54 Cascada de
fosforUaciones serinaltreonina
actlvada por Ras y qulnasa C. En el
CITOSOL proceso activado pot re<:eptores
..' '
"'\~
F. tirosina quinasa a traves de Ras, a
menudo MAP-quinasa-quinasa-

v:
quinasa es una serina treonina quinasa

1"3 ,/ dcnominada RaJ, que al parccer se

activa por la uni6n de una Ras
activada. En el proceso activado por
re<:eptores asociados a protcfnas G a
trav~ de quinasa C, MAP-quinasa-
quinasa-quinasa puede ser tamo RaC

f:~
como otra protena serina/treonina
quinasa. En levaduras y en todos los
,II,
P
,,,~
. animales en que se ha estudiado, se ha
encomrado una cascada de
fosforilaciones serinaJtreonina

, f:~ ,II,
semejanle a ~ta. en Ia que participan
protefnas relacionadas estructural y
P 'I\~
. fundonalmente con es.tas. Estas
cascadas de fosforilaci6n inlegran y

f~
amplifican senales que provienen de
diferenles eslfmulos extracelulares.
Los receptores tirosina quinasa
tambi~n pueden aetivar un proceso de

1 J"' I 1 8E1k 1
senalizaci6n mas dire<:tO hacia el
nucleo mediante la fosforilaci6n
dire<:ta de protcmas reguladoras de
genes, que as se activan, que
nes, aunque no se conoce con total exactitud emil es el papel que desempena en conticnen dominios 5H2.
la proliferaci6n celular.
La quinasa C tambi~n puede fosforilar 'un y, como se iluslra en la Figura 15-
54, puede activar la MAP-quinasa-quinasa-quinasa. de fonna que tanto lun
como MAP-quinasa-quinasa-quinasa constiluyen ejemplos de punlos de inte-
graci6n donde convergen varios procesos de senalizaci6n.

La actividad de los receptores asociados a tirosina quinasa

depende de tirosina quinasas que no son receptores 37
I Muchas de las prolefnas receptoras de la sllperficie celular que han sido aisladas
y caracterizadas no encajan en ninguna de las familias principales de receptores
que hemos descrito hasta aquf: no eslitin asociadas a canales i6nicos ni a proter-
nas G, y carecen de dominio catalftico evidente. Este gran y helerogeneo surtido
de receptores incluye receplores para la mayorfa de los mediadores locales (de-
nominados citoquinas> que regulan la proliferaci6n y diCerenciaci6n en el siste-
ma hematopoy~tico, asf como receptores para algunas hormonas (por ejemplo,
hormona de crecimiento y prolactina) y los receptores especificos de antfgenos
de los linfocitos T YB. Muchos de los receptores de esta categorfa trabajan a tra-
v~s de tirosina quinasas asociadas que fosforilan varias protefnas diana cuando
el receptor se une a su Ugando. La mayoria de las quinasas asociadas con estos
receptores asoclados a tlreslna quinasa son miembros de la bien caraclerizada
familia Src de protefna tirosina quinasas no receptoras mencionadas anterior-
mente, 0 de la recientemenle descrita familia Janus tambien de protena tirosi-
na quinasas no receptoras. Se cree que estos receptores acruan casi de la misma
forma que los receptores tirosina quinasa. exceptO en que su dominic quinasa
esta codificado por otro gen y se halla asociado no covalentemente con la cade-
na polipeptfdica del receptor. Como los receptores tirosina quinasa, parece que
a menudo en su activaci6n panicipa una dimerizaci6n del receptor inducida por
elligando (Figura 15-55).

820 CapftuJo IS: Transmlsl6n de 5enaJes entre celulas

 En mam(feros existen al menos ocho miembros de la familia Src de prOlcf-
na tirosina quinasas no receptoras: Src. Yes. Fgr. Fyn. Lek. Lyn, Hcky Bfk. Contie-
nen dominios SH2 y SH3 Ytodos eLlos se hallan localizados en la cara citoplas-
m<ttica de la membrana plasmatica, unidos a ella en pane a trav~s de su
interacci6n con prote(nas reccptoras transmembrana y en parte por su uni6n
covalente a cadenas Iipfdicas. Varios miembros de la familia se hallan asociados
con diferentes receptores y fosforilan de forma solapada distintos juegos de pro-
teinas diana_ Por ejemplo, Lyn, Fyn Y Lck se hallan asociadas a diferentes juegos
de receptores en los Iinfocitos. Todos los miembros de la familia Src tirosina qui-
nasa se activan cuando un ligando extracelular se une a una protema receptora
adecuada.
Los miembros de esta familia Src quinasa pueden asociarse tanto a recepto-
res que no tienen actividad tirosina quinasa intrinseca como a receptores que s(
la tienen. En varias celuJas no-linfoc{ticas, por ejemplo, Fyn se une vfa su domi- Figura 15-55 Estructunl
nio SHl a receptores PDGF activados, los wales fasforilan a Fyn en residuos ti- trldlmensJonai de la hormona de
c:rec:imienlo bumana unIda asu
rosina. activando asf su actividad quinasa. Por ello no resulta sorprendente que
rec::eplor. La honnona (en rojo) se ha
los receptores tirosina quinasa y los rcaptores de la familia Src de receptores unido, entrecruzindolos, a dos
asociados a actividad tirosina quinasa, en algunos casas activen los mismos pro- receptores idmticos (uno se muestra
cesos de sefializaci6n. en ~ y eJ olm co llZlll), formando
De mucha menos infonnaci6n disponemos sabre la famIlia Janus de protef- un receptor homodfmero. {No podia
na tirosina quinasas no receptoras, que induye JAKI. JAK2 y Tyk2. Participan en preverse en absoluto que un Uganda
la senalizaci6n a partir de varios receptores asociadas a tirosina quinasa, inelu- monombioo como la hormona de
yendo los de hormone de crecimiento. prolactina y varias citoquinas que aetiian crecinUento PuWel1l unir.:;e,
sabre ~Iulas hematopo~ticas(se discuten en el Capitulo 22). entrecruz.t.odolos. a dos receptores. ya
En muchos receptores asociados a tirosina quinasa, la unidn delligando ge- que eUo supone que los dos receptores
nera el ensamblaje de dos 0 mas subunidades receptoras transmembrana dife- tMnticos han de recooocer zonas
rentes_ Un ejemplo de ella, bien estudiado, es el receptor para ;ncerfeudna-2 diferenles de la hormonal Se aee que
Ia dimerizaci6n inducida poria uni6n
(lL-2), un mediador local segregado por los linfocitos T que estimula la prolife-
de un liganda une ~ dominios
racidn de los Iinfocitos (sc discute en el Capftulo 23). EJ receptor 1L-2 est<t com-
citoplasm'ticos de las dos pmteinas
puesto de tres cadenas polipeptfdicas (a, P yy). que al parecer se ensamblan des- receptoras 1l1losmembrana de un solo
pu~ de que el Ugando se una a un complejo receptor funcional, como se i1ustra paso. Ella, a su vez, aoova una tirosina
en la Figura IS-56. quinasa no reccptora (no se muestral.
Las estructuras mostradas aqui han
sido delerminadas por estudios de
Algunos receptores son proteina tirosina fosfatasas 38 cristalografia de rayos X de complejos
Como hemos mencionado previamente. los residuos de tirosina que son fosfori- form ados entre la hormona y los
lados por protefna tirosina qujnasas son nipidamente desfosforilados por protef- dominios extracclulares del receptor
na tlroslna fosfatasas. Desdc cl punto de vistaestructural. estas cnumas no es- producidos por la tecnologfa del DNA
t<tn relacionadas con las protefna serinaltreonina fosfatasas de las que hemos recombinante. {De A.M. deVos, M.
Ullrech YA.A. Kossiakoff. Science
tratado antes, y unicamente eliminan un grupo fosfato de determinados grupos
255:306-312. 1992. C theAAAS.)
fosfotirosina de determinados tipos de protefnas. Estas fosfatasas se cncuentran
tanto en fonnas solubles como unidas a membrana, y de eLIas existen muchas
mlls variedades que de serina/treonina fosfatasas. Su elevada especificidad ase
gura que las fosforilaciones en tirosina tengan una vida media muy corta y que el
nivel de fosforilacidn en tirosinas que presentan las c~lulas en reposa sea muy

1l-2. Figura 15-56 Ensaroblaje induddo

por Ugando en un receptor 1L-2.
I.. Parece que Ia unt6n de baja afinidad
de 1l...2 a la cadena a desencadena eJ
ensamblaje del receptor
bete~rico, de aha afinidad. eJ

OTOSOl. cual entonces se une. aooVllndola. a Ia

tirosina quinasa Lck, interaccionando
con ella a tra~ de Ia cola
T dtoplasmttica de Ia subunidad Jl..

senallzaci6n via receptores de superficie celular asociados a enzimas 821

 bajo. Las prolefna tirosina fosfatasas no actuan simplemente revertiendo conti-
nuamente el efeclo de las prolema tirosina quinasas. sino que pueden estar re
guladas y desempei'lar funciones especfficas en la sefializaci6n celular. asf como
en el control del cido celular (se discute en el Capftulo 17).
Un imponante ejemplo de protefna tirosina fosfatasa regulada es la protefna
CD45. que se encuentra sobre la superficie de los linfocilOs y juega un papel
esencial en la activad6n tanto de los Unfodlos B como de los linfocilos T por an-
tfgenos extraiios. CD4S es una g1ucoprolefna que alraviesa la membrana una
sola vez, cuyo dominio tirosina fosfatasa se halla expuesto sobre la cara citoplas-
m~hica de la membrana plasmAtica. Cuando se aCliva por la reacci6n de un ami
cuerpo extracelular (Sll Iigando normal no es conoddo), su dominio catalftico se
activa eliminando grupos fosfato de residuos de tirosina de determinadas pro-
tefnas diana de la celula. Se cree que una de estas protefnas es la lirosina quina-
sa Lck mencionada anteriomlente. Cuando es desfosforilada por CD45, Lck se
activa fosforilando otras protefnas de la cclula.

La utilizaci6n de oncogenes que provocan cancer ha permitido

identificar muchos componentes del proceso de seiializaci6n
de los receplores tirosina quinasa3!1
Normalmente. las celulas de los animales superiores se dividen unicamente
cuando son estimuladas por faClOres de crecimienro, producidos por otras diu
las y que habitualmente actuan uniendose a receptores lirosina quinasa. Las ce-
lulas cancerosas proliferan excesivamente principalmente porque. como resul-
lado de mutacioncs acumuladas, son capaces de dividirse sin ser estimuladas
por otras celulas, por 10 que no se hallan sujetas aI control "social" normal de la
proliferaci6n celular (se discute en el Capftulo 17). No cs sorprendente que mu-
chas de estas mutaciones afeclen a genes que codifican protefnas que participan
en los procesos de senalizaci6n utiJizados por los receptores tirosina quinasa. De
hecho. muchos de los genes que codifican las protefnas sei'lal discutidas en esta
secci6n, incluyendo Has. Src (y los orros miembros de la familia SrcJ. RaI. Fos y
Jun. fueron identificadas por primera vez como fonnas mutantes en celulas can-
cerosas 0 en virus tumorales productores de cancer. Como se discure en el Capf-
tulo 24, los genes mutantes se denominaron oncogenes antes de que se com-
prendiera su origen a partir de genes normales; par ella, a los genes normales
habitualmente se les denomina proto-oncogerles.
En principio podrfa esperarse que cualquier mutaci6n que provocara la pro-
ducci6n de una protefna anormalmente activa de cualquier paso del proceso de
seiializaci6n que va dcsde el factor de crecimienlo hasta cl n(ldeo pudiera pro-
ducir cancer aI estimular a la celula a proliferar en ausencia de las sefiales extra-
celulares apropiadas. Las evidencias de que disponemos corroboran esta idea. EI
oncogen sis, por ejemplo. codifica un fonna funcionalmente acuva de PDGF que
se expresa de fonna inadecuada; las celulas que presentan el oncogen sis y tam
bien expresan receptores para PDGF. continuanlente se autoestimulan a prolife-
rar. EI oncogen erbB codifica una fonna truncada del receptor de EGF que tiene
un dominio intracelular tirosina quinasa que se halla activo continuamente; las
celulas que expresan este oneogen se componan como si esluvieran estimula-
das continuamente a proliferar por un (aclOr de crecimienlO. Las eelulas se com-
portan de una fonna similar a como 10 harfan si hubieran estado infectadas por
un virus que transportara el oncogen v-src, que codifica una fonna conSlilutiva-
men Ie activa de la prolefna tirosina quinasa Src. 0 como si expresara un onco-
gen ras. que codifica una forma anormal de una protefna Ras que no puede
inactivarse a sf misma ya que ha perdido la capacidad de hidrolizar GTP. De for-
ma similar. las celulas proliferan de forma anonnal si expresan un oncogen que
codifica una forma eonstitulivamente activa de una prolefna reguladora de un
gen activado por (aelores de crecimiento, como lun 0 Fos. los estudios sobre
oncogenes de este tipo no s610 han i1uminado los mecanismos moleculares que
estan en la base del cancer, sino que tambien han descubierto muchas prolefnas

_____________________L
822 Capfrulo 15: Transmlsl6n de sei\a1es entre ee:lulas
desconocidas de los procesos de sefializaci6n aetivados por faetores de creci-
miemo.
Algunas honnonas que estimulan sus celulas diana a proliferar se unen a re-
ceptores asociados a protemas G en lugar de unirse a receptores tirosina quina-
sa. Por ejemplo, el factor liberador de hormona de crecimiento (GHF, de Growth
Hormone Releasing Factor) estimula las celulas secretoras de hormona de creci-
miento de la glandula hip6fisis a proliferar; GHF se line a los receplores de GHF
que activan la adenil cicJasa a uaves de lIna protefna G estimlliadora G. EI incre-
mento resuhame de los niveles de AMP cfdico induce a las celulas de la hip6fisis
a dividirse. Como era de esperar, las mutaciones del gen a, que inaetivan la acti-
vidad GTPasa de la subunidad a de G, (y por 10 tamo hacen que la proteina este
aeliva de forma constitutiva) producen un oncogen que se halla frecuenlemente
en los tumores humanos de hip6fisis.

Las protemas de la superfamilia TGF-13 activan receptores

que son protema serina/treonina quinasas 40
Los faclores-p Iransformantes del creclmlento (TGF-ll, de Transforming Growth
Factors-In eonstituyen lIna familia de mediadores locales que regulan la prolife-
raci6n y otras funciones de la mayorfa de tipos celulares de los vertebrados. Los
cinco miembros de la familia ffGF-pl aI PS) son protefnas de estrueturas y fun-
ciones similares. Sus efectos sobre las eelulas son variados. Dependiendo del
lipo celular, pueden suprimir la proliferaci6n, estimular la sfntesis de matriz ex-
tracelular, estimular la formaci6n del hueso y atraer celulas por quimiolaxis. los
TGF-p son simetizados como largos precursores y secre(ados como complejos
inactivos que mas tarde son activados por procesamienlo proteolftico.
Algunas orras protefnas senal extracelulares est<l.n estrucruralmente relacio-
nadas con los TGF-p. Entre elias, encontramos las actillinas, que juegan un papel
importante en la inducci6n del mesodermo en el desarrollo de los vertebrados
(se discute en el Captulo 21), y las prote(,lQs de marfogenesis del III/eso, que esti-
mulan la formaci6n del hueso. En conjunto. estas protemas constituyen la SIl-
perfa milia TGF-p.
Recienremente se han donado y secuenciado los eDNA que codifican algu-
nos receptores de miembros de esta superfamilia. Estos receptores son prote'-
nas que atraviesan una vez la membrana y con dominios serina/treonina quina-
sa sobre la cara citos6lica de la membrana plasmatica. Se (rata de los primeros
receptores serlnaltreonlna quinasa que se han identificado. y todavi"a conoee-
mos muy poca cosa acerca de los procesos de sei'iaJizaci6n que ellos activan.
Enla Figura 15-57 se resumen algunas de las protefna quinasas especfficas
de tirosina 0 especfficas de serinaltreonina de que hemos tratado en este capr
tulo.

EI receptor transmembrana Notch media la inhibici6n lateral

mediante un mecanismo desconocido 41
La clase de receptores de superficie celular asociados a enzimas es grande y va-
riada. [ncluye, ademas de los que ya hemos considerado, las i1lregrirlas, que se
unen a componentes de la matriz extracelular. Como se discute en el Cap{tulo
19, estas proternas transmembrana no s610 unen celulas a la matriz a traves de
contactos focales sino que tambien generan sef\ales intracelulares en estos luga-
res de uni6n, probablemente desencadenando el ensamblaje de un complejo se-
f\a1 intracelular (vease Figura 17-42).
EI mecanismo de sefializaci6n utilizado por algunas protefnas receptoras es
todavia ran desconocido que resulta dificil clasificar tales receptores. Un ejem-
plo importante de ella 10 constituye la proteina de Drosophila Notch. Como se
explica en el CapfruJo 21. esta protefna transmembrana que la atraviesa una sola
vez juega un papel crucial en las interacciones celuJa-celula que controlan el de-
Hcado patron de diversificaci6n celular durante el desarrollo de la mosca. Tfpi-

Senallzacl6n via receptores de superficle celular asociados a en7.lmas 823

 NH,

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HOOC COOH
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COOH COOH COON
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deeGf COOH

COOH COOH

PftOTEINA aUINASAS eSPECIFICAS DE TIROSINA PRorefNA OUINASA.s ESPEclFICAS DE SERINA/TREONINA

camente, una cclula que carccc de Notch no responde a la inllibiciorllateral-se- Figura 1557 Algunas de las proteina
nales inhibidoras que proviencn de sus vecinas inmediatas y que normal mente qulnasas dlsc:utJdas en este capftulo.
harfan que se diferenciara siguiendo un camino diferente a elias. En un embri6n Se muestra el tamana y la localizaci6n
normal de mosca, por cjemplo, un precursor de cclula nerviosa inhibc a sus ve de sus dominios eatalftieos (en verde
oscuro). En eada easo el dominio
doas para impedir que lambicn se transformen en celulas nerviosas, por 10 que
eatalftieo cs de unos 250 residuos de
dichas cclulas sc transfonnan en cclulas epiteliaJes; en mutantes Notch esta in-
aminodcidos de longitud. Todos estos
hibici6n no se produce y todas las cclulas se uansforman en celulas nerviosas. dominios ticnen una seeuencia
Como en el caso de la protefna Sev de la que hemos tratado anteriormente, similar, 10 eual sugiere que todos eUos
Notch se activa al unirsc no a molcculas senal solublcs sino a protefnas que se han evolueionado a partir de una
presentan sobre la superfide de las c~lulas adyacentes. Aunque se conoce la se- quinasa primordial comun. N61ese
cuenda de Notch y se han identificado algunas de las proteinas del proceso de se- que looas las tirosina quinasas
iializad6n, mediante an;1lisis gen~ticos, todavfa no csta claro de qu~ forma Notch mostradas se hallan unidas a la
transmite In senal al interior de la celula. OtTaS protefnas semejantes a Notch tam- membrana plasrndtica, mientras que la
bi~n desempef'ian papeles importantes en el desarroUo de los vertebrados, pero mayoria de las serinaftreonina
en estos casas, los mecanismos que partidpan en los procesos de senalizaci6n quinasas se hallan en el citosol.
tambi~n resultan un mistcrio.

Resumen
& conoan cinco da.ses th tw:f!ptort!:S asoclados a enzinuu: (I) reaptort!:S guanilalo
ciclasa transmembrano, que generan GMP cklico directamenle; (2) tw:('pWtu tiro-
sino fosfafQ.sQ, que eliminon fosfatos tk cadena.s Iaterales tk fosfotirosino th thter-
mirnulas protelnn.s; (3) tw:('ptOtu serinaltreonina quinasa transmembrana, que
ai'iaihn un grupo fosfaw a t:4lUnas Iateraln de serino 0 th rreonina th protelna.s

824 Capitulo 15 : Transmisl6n de seiiaJes entre celulas

ditmni (4) receplores tlrosl"n qlllmua. y (5) receptores fUocindos a tirositm q"l"n.
sas. Los dos l1ft/mostipos de receptores SOil, con diferem:in, los mm Illlmerosos y al
parecer actllm, de 'ma mnnera simiinr. Ilnbitualmente in ,,,,1611 del liga"do it,dlli;e
la dfmerlzncf6" del receptor, locllnl activa in actlvidad tiroslna qllillllSa del propio
receptor 0 de la etlZima tiroslna quillllSll asociadn al receptor. Utm ve.z: activadn,
1mb/nmimellte la actividad tirosinn quillllSn se alltofosforlin a sf mLsma sobre m,iI-
tiples resid"os tirosilla, que elllonees lII:llitm como lugares de ,ml6111Jtlra 1111 redu-
cldo ",imero de protef"as seilnl i"tracel"inres las c,mles. a travis de SItS tromi"ios
5HZ, se II"ell es"edflam,etlle a determimulos residuos fosfotirosilltJ. De estn fonna
se netiva 'III complejo seilal ",ultiproteinn. a partir del alnlin seiial se transmUe al
interlorcel11lnr.
Liu proteb,as R4s achian como IInJones cnu:iales del sislema Intracel'Uar de
trallsmisi6n de seilaln. Son GTPasas monomerials que actJian como llllerruplores
molec'lfnres; son actilHUtiu par proteflllU que Jiberan nucle6tldos de gunniJ,a e
innct'11HUtiu par GAP. C,umdo las proteflllU Ras son ac:tivadns. inidnll una ca.scada
de fosforlllll:iol'es urlnnltreol,ina que convergen sobre MAP'quinasas, las cunles
colnborm, ell In Iralumisi6n de In seRnI nl ndeleo. M,.chos de los genes que codifl-
ca" prote{tUIS de las cascadas lntracel"lnres de seiialimd6n que SOli aetjvados par
rec.eplores rirosina q,dlUUiU jt,eroll idenlificados conto oncogenes en dl"las calla-
rosas 0 como virus tlmloraln, ya que su actiwu:wn inndecluula Itace que In dluln
prallfere uaslvamente.

Adaptaci6n de las celulas diana

Normalmenle. cuando las celulas y los organismos responden a algtin esdmulo.
pueden detectar el mismo porcemaje de variaci6n de la senal en una gama muy
ampLia de inlensidades del estfmulo. A nivel celular. esto requiere que las ~Iulas
diana sufran un proceso de adaplaci6n 0 desensibilizaci6n. mediante el cual su
respuesta va disminuyendo cuando se halla expuesla a un eSlmulo durante un
periodo prolongado de tiempo. De esta forma, la celula ajusla de forma reversible
su sensibilidad al nivel del estfmulo. En el caso de 1..1 senalizaci6n qufmica. la de-
sensibili...aci6n permite a la celula responder a cambios de la concenlraci6n de la
molecula tigando (en lugar de responder a concentraciones absolums del lignn-
do) en un am plio margen de concenlraciones absolulas. El principio general es
sencillo: la adapmci6n se consigue a lraves de una relroalimentaci6n negativa
que nClua can un cierlo relraso. La relroalimentaci6n negativa significa que una
respllesta fuerle modifica la maquinaria que produce dicha respllesta, de fonna
que sc inhibe a sf misma: pero gracias al relraso, un cambio repentino del nivel
de eSI(mliJo es capaz de producir lIna respuesta intensa durante un perfodo de
tiempo corto, anles de que la retroalimentaci6n negativa tenga ticmpo de actuar.
La adaptacidn a sefiales qufmicas puede producirse de diferemes formas.
En algunos casas, se produce por la disminuci6n progresiva del numero de pro-
tefnas receptoras especfficas de superlicie. la cual normalrnente se produce en
un intervalo de horas. En otros casos se produce por una n1pida inactivaci6n de
eslos receplores. 10 cual se produce en cuesti6n de minutos. En otros casos es
debida a cambios en las protefnas que partjcipan en la transducci6n de la sel\al
tras 1a aClivaci6n de los receplores. los cuales se producen habitualmente a unas
escalas de liempo inlermedias.

La adaptaci60 leota depende de la regulaci6n par disminuci6n

del mirnero de receptores42
A menudo. despu~ de que una honnona 0 un factor de crecimiento se haya
unido a su receptor de la superficie de las celulas diana. son ingeridos por la ce-
Iula por endocilosis mediada por receplor y liberados a los endosomas (sc discu-
Ie en el Capflulo 13). La mayoria de los receplores descargan su Ligando en el
ambienle acido de los endosomas y sc reciclan de nuevo hacia la membrana.

Adaptad6n de las cilulas diana 825

 Figura 1558 Dos mecanlsmos de la
~"o~ receplor
desensibitizado r4plda descnslblllzaci6n del receptor
J}2 adrenergko. Ambos dependen de

~
-zr- UN INCREMENTO DE LA
CONCENTRACION DE AMP
cfellCo ACTTVA LA OUINASA A
la rosrorilaci6n del receplor. Tanto la
fosrorilaci6n en (A) como la uni6n de
arreslina en (BJ inhiben la capacidad
del recepwr para interaclUar con G.,
PARA QUE FOSFORILE El
RECEPTOR EN UN SOLO LUGAR
disminuyendo as( la respuesla a la
adrenalina.
IAI

..._-~ -L A QUINASA IS
AORENl:RGlCA
FOSFORILA El
RECEPTOR
ACTIVADO EN
MUCHOS
LA IS ARRESTINA
SE UNE AL
RECEPTOR
FOSFORILADO

LUGARES
~ arrestlne
181

mientras que el Iigando es transferido a los Iisosomas y es degradado. Este pro-

ccso, por 10 tanto, constituye el principal mecanismo de degractaci6n de muchas
prolcfnas senal. A pesar de que muchas moltkuJas de receptor son recuperactas
del endosoma y recicladas, una derta proporci6n de elias no se Iiberan de su Ii-
gando y acaban en los lisosomas, daude son degradadas con el Iigando. Asr,
cuando una celula es expuesta continuamente a elevadas concentraciones de un
Iigando, el numero de receptores de su superficie va disminuyendo progresiva-
mente. con una disminuci6n concomitante de la sensibilidad de la celula diana
al Iigando. Mediante este tipo de mecanismos, conocido como regulacl6n por
dismlnucl6n del ntimero de receptores (receptor down-regulation). las celulas
pueden. lentamente (durante horas) ajustar su sensibilidad a la concenlTaci6n
de un ligando eslimulador.

A menu do la adaptaci6n r~pida se produce

por fosforiJaci6n de los receptores 43
Frecuentcmente en la adaptaci6n de Ja cclula diana participa, adcllH1s de la lenta
regulaci6n por disminuci6n del nlimero de receptores. una rapida fosforilaci6n
del receptor inducida por el Ugando. EI ejemplo mejor conocldo es el receptor
~2 adrenergico, que activa la adenil ciclasa a traves de las protelna G eSlimulado
ra G. Cuando las celulas son expuestas a elevadas concentraciones de adrenaJi
na. pueden desensibilizarse en cuesti6n de minutos, a traves de dos procesos
que dependen de la fosforilaci6n del receptor pz adrenergico. En uno de eUos. el
incremento de los niveles de AMP cfclico causado por la llni6n de la adrenaJina
activa la quinasa A. la CllaJ fosforila el receptor l3z sabre un residuo de serina. in-
terfiriendo asf con la habilidad del receptor de activar G. En el Otro proceso. el
receptor pz una vez activado se conviene en substrato de otra protefna quinasa
m~s especifica (denominada qlli"asa Ii adrenergl.'ca) que fosforila el extremo car
001010 de la cola citoplasmatica del receptor activado. sabre multiples residuos
de serina y treonina; esta cola fosforilada se une a una prote(na inhibidora deno
minada Ii arrestina (del ingles -arrest": parar). la CllaJ bloquea la capacidad del
receptor para activar G. (Figura 1558). En las celulas fotorreceptoras de los ver-
tebrados. la rodopsina, que como hemos visto esta estructuralmente relaciona
da COil los receptores Ii adrenergicos. se inactiva mediante un mecanismo alta
mel1le rclacionado al descrito basado en la acci6n de la arreslina, despues de
haber sido 3clivado par la acci6n de un fot6n. Eslas celulas lienen una capaci

826 Caprtulo 15: Transmisi6n de scnalcs entTC celulas

 r
dad de adaptaci6n excepcionalmente rapida y sofisticada, en la que parlicipan, CH,
ademas del mecanismo basado en la arrestina, muchos otros; uno de ellos fue I
N
discutido anteriormente, en la pagina 806.
B mecanismo de desensibilizaci6n del receptor pz adrenergico dependieme
de la quinasa A actua cuando los niveles de AMP dclico aumentan en la celula.
Asf, la activaci6n de cualquier tipo de receptor de la celula diana que active la
adenil ciclasa puede desensibilizar el receptor pz -10 cual constituye un ejemplo
de desemibilizaci6r1 Ilecer61oga, medianl'e el cual un ligando desensibiliza la ce-
lula diana a otro ligando. EI mecanismo dependiente de la P arrestina, por el HO o OH
contrario, unicamentc actua cuando los receptores P2 han side activados por la morflna
uni6n de un liganda -un ejemplo de deserlsibilizaci61l hom6loga. medianle el Figura 15-59 Estnlctura de In
cual un ligando desensibiliza la celula diana unieamente a sf mismo. morOna.tPor que algunas de nuestras
celulas tienen receptores para una
Algunas formas de adaptaci6n son debidas a cam bios droga como la mOnilla. que proviene
de las semillas de la adormidera?
en el proceso de sefializaci6n44 Duranle mucho liempo los
A pesar de que 13 mayoria de los mecanismos oonocidos de adaptaci6n suponen fannac6logos han sospechado que la
cambios en la protefna receplora, en principia la adaptaci6n puede producirse morfina puede mirnelizar alguna
por modificaciones de cualquier componente del proceso de sefializaci6n. Se rnolecula sei\a1 intracelular que regule
conocen varios casos en los que la adaptaci6n de la celula diana se produce por el humory la percepci6n del dolor. En
1975 se aislaron a panir de cerebro de
modificaci6n de una proterna G trimerica. Ello ocurre, por ejemplo, en la res-
cerdo dos pentapeptidos con actividad
puesta de las celulas de levadura a feromonas de apareamiento.
sernejante a la morfina denorninados
Las alteraciones mas adelanle de la protefna G en el proceso de senalizaci6n encefallnas. y poco mas tarde a partir
lambicn pueden contribuir a la adaptaci6n de las celulas diana, como en el caso de hip6fisis y de otros tejidos se
de los fOlorreceptores (vease pag. 806). En los aditios a la morfina, par ejemplo. las aislaron unos polipeptidos mas
neuronas sensibles a los opia-ceos del cerebro se desensibilizan a la morfina, de grandes con actividad semejante.
forma que los adiClOS necesitan dosis de morfina muy superiores a las que requie- denominados endorflnas. Todas cstas
ren los individuos nomlales para elim..inar el dolor a para causar sensaci6n de substanclas. denominadas opidceos
euforia (Figura IS-59). Las cclulas adaptadas, sin embargo, tienen niveles norma- end6genos, presenlan una secuencia
les de receptores de superficie celular funcionales contra la morlina (opiaceos). cornun de cuatro aminoticidos y se
Los mecanismos de adaptaci6n se han cstudiada tanto en rata como en Iineas ce- unen at mismo tipo de receptorcs de la
luiares newales sensibles a la morfina, mantenidas en cultivo. Los receptores a la superficie celular at que se une la
mortina de la superficie de estas celulas activan la proterna G inhibidora G" que morfina (y otros narc6licos
relacionados con eUa). A diferencia de
inhibe la adenil ciclasa. causando asf una disminuci6n de los niveles intracelulares
la morfina. sin embargo. cstos
de AMP cfclico. Ello disminuye la actividad de la quinasaA y, por 10 tanto, la fosfo-
compuestos son rapidamenle
rilaci6n de varios tipos de canales i6nicos, 10 cual djsminuye la excitabiJidad elec- degradados tras ser segregados. de
trica de las neuronas. Las celulas cultivadas mantenidas durante mucho tiempo fonna que nunca se acumulan en
en presencia de elevadas concenlraciones de morfina se adaptan mediante un in- cantidadcs suficientes como para
cremento compensatorio de la expresi6n de los genes de quinasa A y de adcnil ci- inducir 111 tolCfancia que se observa en
clasa, 10 cual hace que los niveles tanto de actividad adeniJ cic1asa como de AMP los adiclos a la momna.
dcLico vuelvan a los valores normales aunque los receptores de la superficie celu-
lar esten ocupados por mortina. Sin embargo, como las celulas adaptadas tienen
niveles incrementados de adenil ciclasa y de quinasa A, cuando se elimina la mor-
fina se produce un marcado incremento de la actividad adenil ciclasa y de la aeti-
vidad quinasa A, que provoca que los niveles de AMP cfdico aumenten hasta ai-
canzar valores anormalmente elevados. Ello incrementa la excitabilidad de las
neuronas y conduce a los smtomas extremadamente desagradables de la depriva-
ci6n, (ansiedad, sudoraci6n. temblores, alucinaciones, elc.) que experimentan los
adietos a la morlina cuando tienen "el mono".

La adaptaci6n desempeiia un papel crucial

en la quimiotaxis bacteriana4:l
Muchos de los mecanismos que participan en la senalizaci6n qufmiea entre ce-
Iulas en los animales pluricelulares han evolucionado a panir de mecanismos
utilizados por organismos unicelula.res para responder a cambios qufmicos de
su entomo. De hecho. ambos tipos de organismos ulilizan algunos mediadores
intracelulares comunes. Entre las reacciones de los organismos unjcelulares me-

Adaptaci6n de las dlulas diana 827

 Figura 15-60 Qulm:IotaxJ.s
bactertana. las fOlografias muestran
baeterias SaJmonelltl ryphimurlum
atrafdas hacia un pequeno tubo
capilar de vidrio que oontiene eI
aminoacido senna (A) y repelidas por
un tubo capilar que oontiene renol (8).
las fotograrl3S fueron tomadas a los
cinco minutos de haber introducido
los tubas capilares en las placas de
cultivo en que se encontraban las
baeterias. Esla prueba del tubo capilar
es un metodo senciUo para demostrar
'''' la exIstencla de quimiotaxis baeteriana
(De B.A. Rubik y D.E. Kosbland, Prot;.
jor estudiadas (rente a sei'iales extracelulares, se encuentran las respuestas qui~ NaIL Aeatl. ScL U~ 75:2820-2824,
miotticticas, en las cuales el movimicnto celular se dirige hacia 0 escapa de una 1978.)
fuente de algljn compuesto qufmico del media. Concluimos esle capflUJo con
una descripci6n de 1a quimiotaxis bacteriana la eual, a traves de In pOlencia del
amUisis genelico, nos proporciona una ilustraci6n clara y elegante del papel cru-
cial que supone la adaptaci6n en respucsta a sefiales qu(micas. En el Capitulo 16
se discule la quimiotaxis de las celulas eucariotas.
Las bacterias m6viles han de nadar hacia los IligaTes donde haya elevadas
concentraciones de nutrientes (arrayellles), como los al.ucares, los aminoacidos
y pequeflos ~ptidos, y aJejarse de (ugares donde haya elevadas concentraciones
de produclos qufmicos nocivos (repelemes) (Figura 15-60l. Este componamiento
quimiotlictico, relativamente simple pero c1aramente adaptativo, se ha estudiado
especialmente en coli y en Salmonella typhinlllrillm. Aqu[ nos centraremos
principalmeme en la quirniotaxis hacia los atrayentes: la quimlotaxis que huye
de los repelentes se produce esencialmente por los mismos mecanismos, ac-
ruanda a la inversa.
Las bacterias nadan gracias a los flagelos, que son completamente diferen-
res de los flagelos de las celulas eucariotas. Los flagelos baeterianos consisten en
un cilindro helicoidal que contiene un solo tipo de subunidad proteica, lIamada
jlagelina. Cada flagelo est<i unido por su base, gracias a un corto codo flexible, a
un pequef\o disco proteico localizado a n.ivel de la membrana de la bacteria. Por
increlble que pueda parecer, este disco forma pane de un diminulO ~motor" que

--
Figura 1561 Dlbujo esquem:itlcodel
mOlor del Oagelo baeteriano. EI
nagelo eslt unido a un codo flexible. EI
codo esla unido a varias protelnas
ctrculares (mostradas en rajo) que Ie
hallan integradas en las membranas

_
interiory exterior (plasmatica). y giran
con el nagelo aproximadamente a ISO

--
J=-
... revoluciones por segundo. se cree que

]-
1a rotaci6n estt dirigida por un flulo de

"... ....elelPKio
protones a traves de un anillo exterior
de proternas (el estator). que tambi~n
conliene las protelnas responsables de
J:::::- cambiar 13 direcci6n de giro. (Basado
en datos deT. Kubori et al.,J. Mol. 8101.
226:433-446, 1992 y N.R.Francisel al..
Proc. Nml. Acad. Sci. U~ 89:6304-
6308, 1992.)

828 Capftulo 15 : Transmisi6n de sei\a1es entre celu]as

utiliza 13 energfa aJmacenada en el gradiente transmembrana de H' girnndo r.1-
pidamente y moviendo el Oagelo helicoidal (Figura 15-61).
Debido a que los Oagelos de la superficie bacteriana tienen una "orienta- w
ci6n" intrinseca. diferentes direcciones de rotaci6n tienen efectos distinlOS so
bre el movimiento. La TOlaci6n en eI sentido opuesto a las agujas del reloj hace
que los nagelos se unan fonnando un haz, con 10 que la bacteria nada de forma
uniforme en una direcci6n. Pero la rotaci6n en el sentido de las agujas del reloj

)
hace que los flagelos se separen unos de otros. con 10 que la bacteria se mueve
de forma ca6tica sin avanzar (Figura 15-62). En ausencia de estimulos ambienta
les, Ia direcci6n de giro de los Oagelos se revierte cada poros segundos produ-
cieodo un patr6n caracterfstico de movimientos en eI que Ia nataci6n suave en
Linea recta se halla intemunpida por cambios abruptos de direcci6n (Figura 15-
63A).
Este patr6n normal de nataci6n de Ia bacteria se modifica por attayentes 0
por repelentes quimiot:k:ticos, los cuales se unen a protefnas receptoras especr
ficas afectando la frecuencia de cambios de direcci6n, incrementando 0 dismi-
nuyendo Ia duraci6n de los intervalos de tiempo entre los cambios sucesivos de
181
direcci6n de giro de los Oagelos. Cuando las bacterias est:in nadando en una di
recci6n favorable (hacia concentraciones elevadas de un atrayente 0 huyendo de Figura 15-62 Poskionesdeb
concenttaciones elevadas de un repclente), cambian de direcci6n menos fre fbpIoI: de coli durante .. nat-*Sn.
cuentemente que cuando est:in nadando en una direcci6n desfavorable (0 cuan- Cuando los flageIos giran en sentido
do no existe mngUn gradiente). Como los perfodos de nataci6n suave son mas Opueslo al de las agujas del reloj W
largos cuando la bacteria se desplaza en una direcci6n favorable, graduatmenle quedan unidos en un solo baz que
aettia como helice, dando lugar a Wla
progresarn en esta direcci6n -hacia un atrayente (Figura 15638) 0 apart:indose
nataci6n suave. Cuando los BageJos
de un repeleme.
giran en el sentido de las agujas del
En su ambiente natural, una bacteria detecta un gradiente espacial de atra- rdoj (8) se separan entre sf, generando
yentes 0 de repelenles en el medio, nadando a una velocidad constante y com un movimiento ca6tico.
parando la concentraci6n de compueslOS quimicos en fonci6n del tiempo (no
monitoriza los cambios de concentraci6n utilizando receptores separados en el
espacio a 10 largo de su longitud; ello serfa extremadamente dificil dado el pe-
quefifsimo lamafio de la bacteria). En ellaboralorio se pueden generar artificial-
menle variacioncs de concent'raci6n en funci6n del tiempo, medianle la adici6n
o la eliminaci6n de productos qufmicos del medjo de cuhivo. Cuando se afiade,
de csta (onna, un atrayenle at medio, la bacteria, tal como era de espcrar, cesa
de cambiar de direcci6n durante algunos segundos. Pero transcurrido esle tiem-
po, incluso aunque se mantenga la presencia de atrayente en el medio, la fre-
cuencia de cambio de direcci6n de la bacteria se recupera hasla valores norma-

Figura 15-63 Camlnos recorridos por

una bacleria al nadar. En ausendade

-
seftales quimiotacticas (A), los
perfodos de nataci6n suave se
intemJmpen con breves movimientos
ca6ticos que modifican al azar la
direcci6n del desplazamiento. As!

, w
pues, la bacteria se desplaza en tres
dimensiones de una forma ca6tica,
con continuos cambios de direcci6n
que alteman con periodos de nataci6n
suave. En presencia de un atrayente
quimiotktico (8), eI movimiento

..
-
ca6tico queda parcialmente suprimido

.. .' ',,:._.'.: I.'..

,' ' mH!ntras la bacteria se desplaza hacia
una concentrad6n mas alta del
' alrayente. de modo que se va
acercando gradualmente al atrayente
'1 I "
181
I I. I
I
-un desplazamiento aI aut sesgado.

Adaptad6n de las relulas diana 829

 Figura 15-64 Modelo de la eslructuca homodlmertca de la protefna
re<:eptora qulmlotactlca del aspartalO. La estruclura tridimensional del
dominio eXU"acelular ha sido oblenida por difracci6n de rayos X. Los
dominios inlracelulares superenrollados son una predicci6n a partir del
analisis de la sec:uencia de aminoAcidos. Contienen los lugares de rnetilaci6n
(mostradoscomo pll11l0S negros), de los que hay cuatro en cada una de las
dos cadenas polipeptidicas (los lugares de una de las cadenas estan fuera de
visi6n en la figural. Se cree que la uni6n delligando. en el espacio
periplasmlilico. induce un cambio de oonfonnaci6n en el receptor que se
propaga por loda la membrana mediante un movimienlO de toda la moldcula
sernejante al de una tijera. (Basado en M.V. Milburn et al .. SCience254:1342-
1347, 1991 e 1991 the AMS: y I.B. Stock et al../. Bioi. Cllem. 267:19753-19756.
1992. publica ASBMB.)

les. La bacteria se mantiene en este estado adaptado mientras no se produzca

ninguna dismjnuci6n 0 aumenlO de 101 concentraci6n de atrayente en el medio;
la adici6n de mas atrayenle de nuevo suprimira durante unos segundos los cam- dominio
tvper..-.rollado
bios de direcci6n de 101 bacteria mienuas que 101 eliminaci6n de atrayente en el
medio incrementara, tambien durante unos segundos, 101 rrecuencia de cambios
de direcci6n. hasta que 101 bacteria se haya vueho a adaptar OIl nuevo nive!. La
adaptaci6n constituye una pane crucial de 101 respuesta quimiotactica en tanto
que permile a 101 bacteria responder a ca",bios de concenuaci6n en lugar de res-
ponder a niveles estacionarios de un atrayente. y responde a estos cambios en
un extraordinariamente amplio rango de concentraciones del atrayente (en al- dominio de
sel'leliulci6n
gunos casosdesde menos de 10-10 M hasta mas de 1()-3 M).

La Quimiotaxis bacteriana est(\ mediada por una familia

de cuatro receptores transmembrana hom61ogos 'om
y por un sistema de fosforilaci6n que transmite la seiial46
EI desenmarai'iamiento de los mecanismos moleculares responsables de 101 qui-
miotaxis bacteriana hOI dependido fundamentalmente del aislamiemo yanaJisis
de mutantes con comportamiento quimiot8ctico defectuoso. De esta forma, se
ha demostrado que 101 quimiotaxis a varios compuestos depende de una peque-
na familia de prolefnas receptoras transmembrana relacionadas entre sf. que
son responsables de la transmisi6n de seoales quimiotacticas a traves de 101
membrana plasmlitica. Estos receptores qulmlotacticos se melilan durante 101
adaptaci6n (vease mas adelante), por 10 que a menudo se les denomina prater-
litiS de qllimiotaxis accptoras de melilos (MCP, de Methyl-Accepting Chemotaxis
Proteins"). Como verernos, la actividad del receptor se estimula por un incre-
mento de la concentraci6n de atrayente: un solo receptor se afecta par ambos [i-
pos de moleculas. can consecuencias opuestas.
Existen cuatro tipos de receptores quimiot8cticos de membrana, cada uno
de los cuales esta relacionado con 101 respuesta a un pequeno grupo de compues-
tOS qufmicos. Los receptores de tipo I Yde tipo 2 median 101 respuesta a 101 serina
y OIl aspartato. respectivamente, uniendose a estos amino<1cidos directamente y
transduciendo el evento uni6n en forma de seoal en el citosol. En la Figura 15-64
se presenta un modelo de 101 estructura de uno de eslOS receptores. Los recepto-
res de tipo 3 y 4 median la respuesta a azucares y a dipeplidos, respectival11eme.
de una manera ligeramente menos direcl'a (Figura 15-65).
Estudios gemWcos indican que cuatro protefnas citoplasmthicas -CileA,
CheW, CheY y Chez.- participan en el proceso de seflalizaci6n que acopla el re-
ceptor quimiotactico con el motor bacteriano. CheY actua en el final efector del
proceso. controlando la direcci6n de giro del f1agelo. Cuando esta aClivada, se
une aI motor haciendo que gire en el sentido de las agujas del reloj, 10 cual pro-
duce cambios de direcci6n del movimiento de 101 bacteria; los mutantes que ca-
recen de esta protefna nadan de forma continua sin cambiar de direcci6n. CheA
es una hislidina protefna quinasa. Cuando esta unida tanto OIl receptor quimio-

630 Capitulo 15 : Transmisi6n de senaJes entre c~lulas

 ,
.minoacKb lZuc.I,n diP'Pl;idoI:

ESPACIO A
I I
] '1rl'f1lntn

,/' "L ~,"'o"

PERIPLASMATlCO
membrana
] reeeptoras
e){\erior periplasm~tlcas

] ,""'0"
receptor..
qUlmic:llicticas
membrena
pl.sm~tlC8

CfTOSOl

] "oc.~.
) ) ) )

"agelo
sel'lsl
Intrllcelulares

) ) ) J

tactico como a CheW, y aClivada por elias. se autofosforila sabre un residua de Figura 15-65 Dlferentes tlpos de
histidina y casi inmediatamente transfiere el fosfato a un residuo de acido aspar- receptores qulmlotactlcos. Los
tieo de CheY. La fosforilaci6n de CheY act iva la protefna de manera que se une al atrayentes qurmicos se unen a los
motor llagelar y genera una rotaci6n en el sentido de las agujas del reloj, y cam- rcceptores quimiot~cticos de la
bios de direcci6n. CheZ rapidamenle inacliva a la CheY fosforilada. estimulando membrana plasmatica de tipo lode
tipo 2 0 a proteinas receptoras
su desfosforilaci6n (Figura 15-66).
espectficas del espacio periplasmalico
La uni6n de un repelente a un receptor quimiOlactico incrementa la activi- (entre las membranas exterior e
dad del receptor, el cual, a su vez. incrementa la actividad de CheA y por 10 tanlo Interior de la bacteria), las cuales
la fosforilaci6n de CheY, que genera cambios de direcci6n. Estas fosforilaciones emonces se unen a receptores
se producen rnpidamente: el tiempo necesario para que se produzca la respues- quimiotacticos de tipo 3 0 de lipo 4. La
la de cambios de direcci6n lras la adici6n de un repelente es de alrededor de 200 uni6n de un 3lrayente disminuye la
milisegundos. La uni6n de un atrayente tiene el efecto opuesto. Oisminuye la actividad del receptorquimiotktico.
actividad del receptor, el cual disminllye la actividad de CheA, de forma que inhibiendo In cascada de senallzaci6n
CheY permanecc desfosforilada, elmotor continuara girando en scntido contra- intracclular yhaciendo que el motor
rio al de las agujas del reloj y la bacteria nadara de manera continua. deillagelo continue girando cn sentido
La funci6n de CheY en la quimiotaxis bacteriana es anaJoga a la funci6n de opueSlO al de las agujas del reloj,
las protefnas Ras en la senalizaci6n de las celulas animales. Como Ras, CheY ac- suprimiendo pues los cambios de
direcci6n del desplazamiento de la
nla como un interruptor de encendido/apagado; se halla aCliva cuando esta fos-
bacteria y generando un movimiemo
forilada e inacliva cuando esta desrosforilada, tal como ocurre can Ras, que esla
suave y continuado. Los atra)'ente5
activa cuando tiene unido GTP e inactiva cuando tiene unido GDP. CheY se acti- difunden en el espacio periplasmatico
va por CheA y se inactiva par CheZ. tal como Ras se aCliva por GNRP y se inacti- desde el exterior de la ctHula, a traves
va par GAP (vease Figura 15-50). En erector las estnlcluras tridimensionaJes de de grandes canales situados en In
CheY y de Ras son similares. membrana exterior (no mostrados
aquO.
En la quimiotaxis bacteriana, la metilaci6n del receptor
es responsable de la adaptaci6n 46
En la quimiotaxis bacteriana la adaptaci6n resulta de la meliJaci6n covaJeme de
las protefnas receptoras quimiotacticas. $i se bloquea el proceso de metiJaci6n
mediante una mutaci6n, la adaptaci6n se inhibe marcadamente y la exposici6n
de la bacteria mutante a un alrayente produce el cese de los cambios de direc-
ci6n de su movimiento durant'e dias. en lugar de durante algunos segundos 0 un
minuto. Asf pues, la activaci6n de los receptores quimiotactieos por un quimio-

Adaptacl6n de las c~luJas diana 831

 Figura 15-66 Sistema de transfereocla de fosforilacieSo que l}Cnnlte a los
receptores qulmlotlictloos oontrolar el motor del Oagelo. La uni6n de un
repelente incremCl1la 18 actividad el receptor, el cual se une a CheW y a CheA,
estimulando asf CheA a que se autofosforile. R<'ipidamente CheA Iransficre el
grupo fosfato que tiene unido de forma covalente a traves de un enlace de
alta energfa. directamente a CheY generando CheY-fosfato, cl cual se unc al
motor del nagclo haciendolo girar en el sentido de las agujas del reloj,lo cual
hace que la bacteria entre en un movimiento anarquico, coo constantes
cambios de dirccci6n. La uni6n de un atrayente tiene los efectos contrarios.
Dismlnuye la actividad del receptor con los que produce una dlsminuci6n del
grado de fosforilaci6n de CheA y de CheY. 10 cual provoca que el motor
nagelar gire en scntido opuesto aI de las agujas del reloj, y por 10 lanto la
bacteria nade con un movimiento sua\'e y continuo. CheZ acelera la
desfosforilacicSn de CheY-fosfato. antagonizando asf la acdeSn de OleY. Cada
uno de estos inlennediarios fosforilados se desfosforila en cuesti6n de unos
10 segundos.locualIe pennite a la bacteria responder de una forma muy
rnpida acambios de su entomo (vhse Figura 15-10).

atrayenle tiene dos consecuencias diferentes: (I) nipidamenle disminuye la acti-

vidad del receptor, disminuyendo la actividad de CheA y de CheY y haciendo
que el motor flagelar continue rotando en sentido contrario aI de las agujas del
......
motor del

giro en.1 senlido

reloj, 10 cual hace que cesen los cambios de direcci6n; (2) se produce una adap- de las ~uj" del
taci6n ya que. mientras el arrayenle est<1. unida aI receptor. el receptor es metila- '"'~
do por una enzima del citoplasma, 10 cual revierte la activaci6n durante un perlo-
do de algunos minutos (Figura 15-67). MOVlMIENTO ANAROUICO eON
La metilaci6n del receptor est:i catalizada por una enzima soluble (1a meliJ CONTINUOS CAMBIOS DE D1RECCION
trans/erma> que actua sobre la protefna receptora. Se pueden lIegar a transferir
ocho grupos metilo a cada receptor. por 10 que el grado de metilaci6n se incre-
menta a elevadas concentraciones del atrayente (cuando cada receptor est<1. uni- luga. de uoi6n delligando
lugar de I..
do alligando durante periodos de tiempo prolongados). Cuando el arrayente se metilaci6n
elimina del medio. el receptor es desmetilado mediante una enzima desmetilan
te soluble (metil esterasa). A pesar de que el nivel de metilaci6n varfa durante 1a
respuesta quimiot<1.ctica. permanece constante mientras la bacteria est:1 adapta
da, ya que se alcanza un balance exacto entre las velocidades de melilaci6n y de
desmetilaci6n. La metil esterasa que elimina los grupos metilo de los reccptorcs
quimiot<1.cticos tambi~n est:1 regulada mediante fosforilaci6n mcdiada por ~e~~~~~~oor -;/ II \ <'
CheA, 10 eual proporciona otra forma de regulaci6n por retroalimentaci6n ncga- LA UNION DELAlMYENTE
D1SMINUYE LAACTMDAO
tiva que tambi~n contribuye al proceso de adaptaci6n. DEL RECEPTOR Y HACE
Probablcmcnte quedan Otms imcracciones y retroalimentaciones por des- ASEOUIBLES LOS LUGARES
DE METlL.AOON ALA METlL
cubrir en la quimiotaxis bacteriana. Sin embargo, ya se han identificado todos TRANSfERASA
los genes y lodas las protefnas que participan ell este componamiento alta men-
te adaptativo. y en la mayorfa de los casos se conacen las secuencias de las pro-
tefnas, y estas proteinas se encuentran disponibles ell grandes cantidades. Por
ello. parece que la quimiotaxis baeteriana ser<1. el primer sistema de sei'lalizaci6n

Figura J 5-67 ActJvacieSn sec:uenclaJ y adapl&CleSn (vfa metllacl6n) de un receptor menos

activado
receptor qulmlotlicUoo. N6tese que la actlvidad del receptor, y por 10 tanto la III \'

frecuencia de cambios de direcci6n de la bacteria, es la misma en el eSlado <At.EnACl6NLENTAOE

II
basal que en el estado de adaptaci6n. EI receptor se ha represemado con dos LOS lUGARES EXPI.STOS
HACE OI.JE LA ACJ1\IDIlD
lugares de metilaci6n, para simplificar el dibujo; en realidad existen ocho DEL RECEPTOR RECUf'ERE
lugares de metilaci6n en cada receptor. A medida que la concentraci6n del LOS NMlES ANTEAlORES
alrayente va aumentando. la fratti6n de tiempo durante la cual el receptor
estci ocupado por elligando tambien aumenla. Aelevados niveles del
alrayente pues, se produCLra un cambio de confonnaci6n del receptor mayor
que a ba}os niveles de Ugando. empujando aun mas al receplor hacla su
estado completamente aJlerado. Sin embargo, se produce un ligero grado de
melilaci6n. de fonna que en cuesti6n de algunos minutos la a1teraci6n
confonnacional del receptor se habrn revertido completamente y la actividad
del receptor se Incrementar.l hasta su niveJ anterior. FJ receptor se ha adaptado.

832 Capftulo 15: Transmisi6n de seftaJes entre celulas

ceJular que serll comprendido compJetamente en terminos moleculares. Pero
incJuso cuando se hayan definido lodas las mohkuJas y sus interacciones, resul-
tarll todavia diffcil comprender de que forma actlian los procesos de sef\aJiza-
ci6n de una red integrada, como discutiremos a continuaci6n.

Resumen
Mediante la tulaptad6n a alias ooncentradones de un ligantJo senaI. tk unafonna
rfllJersible y M"eruUente tll!l tlempo, las dlulas plUden ajustar su sensibilldad td
nivel de estfmulo, respondientJo pun a cambios de la ooncentrad6n en un rango
tunpllsimo, y no a ooncentradones absolutas de ligando. fA adaptad6n se plUde
produclr de dJferflnta forrruu; (1) la un16n delligantJo punk indudr la inum411-
z.ad6n de los ret%ptores, algunos de los cuales serdn degradados en los Ilsosonuu
-un prooeso denominado reguladdn por di.sminu.ddn tll!l ndmero de receptores (re-
ceptor oownngulatlon); (2) los ret%ptores activadDs plUMn ser innctivadDs de for-
ma rfllJftrsibk skntJofosforlUulos 0 tmtiltJdos; (3) las protefnas G plU!llen $U inaai-
vadas de fornuJ reversible; y (4) las prott:fntu de etapDS m4s aoonuuilu del proc:ao
til! seRaUzad6n prutkn ur reguladas por incrrtmnto (up-regulation) 0 por di.smi
nuci6n (oown-regulation). A nivel mol::ulor, el ejemplo mejor cotuK:iQo de adapta~
ci6n tkRfl lugar en las qulmiotaxis baderlana, en ta cualla 1R4ltitaci6n reversible
de prott:flUU clave en ta transdu.cci6n de la uiial. que se hallan en la 1R4lmbralUl
plasmdtlea. "ermlle a la dlula nadar hacia los ambkntes 6ptimos.

La 16gica de la sefializaci6n intracelular: lecciones

de "redes neuronales" basadas en los ordenadores
Cada una de las celulas de un organismo pluricelular estll bombardeada con se
f'iales qufmicas que han sido producidas por otras celulas -senales que regulan
su metabolismo, senales que alteran 0 mantienen su estado de diferenciaci6n,
sef'iales que determinan cullndo se han de dividir las celulas y senales que dictan
cullndo la celula ha de vivir 0 morir. En general, estas sef'iales se unen a receplO-
res de la superficie extracelular, los cuales activan varios procesos intracelulares
de sef'ializaci6n, de forma que las senales intracelulares generadas por rccepto-
res diferentes interactlian entre sf de maneras muy complejas.
iDe que forma una celula integra toda esta informaci6n de modo que puede
comportarse de la manera que es 6ptima para el organismo en su conjunto? La
tarea de entender de que manera la celula controla su magia parece abrumado
ra. Incluso en el caso relativamente sencillo de la quimiotaxis bacteriana, en el
que existen relativamente pocos componentes, y probablemente todos ellos co-
nocidos, las complejidades de las integraciones es demasiado enorme para po-
derse visualizar fllcilmente y comprender completamente, por el momento. To-
davia no podemos predecir real mente, por ejemplo, el comportamiento de un
mutante bacteriano en el que se hayan a1terado los niveles de un receptor de
membrana 0 de una proterna citoplasmlltica, especialmente si el estfmulo qui-
miotllctico induye m~s de un atrayente 0 repelente 0 si el estfOluJo cambia rnpi-
damente con el tiempo. ,De que forma podemos esperar, entonces, entender las
redes mucho mAs complejas de senaJizaci6n intracelular de las ululas animales,
en las que participan cientos de componentes, muchos de los cuales todavia no
conoceOlOS?
A medida que vamos disponiendo de mlis informaci6n, resuha Ollls eviden
Ie que las simuJaciones basadas en los ordenadores deben1n jugar un papel cada
vez mAs importante en nuestros intentos de entender de que forma aetlian estos
procesos de sef\a1izaci6n. Construyendo un modelo del proceso en un ordena-
dor, se puede visualizar y manipular la red de componentes interactivos, de for-
mas que son imposibles de estudiar en las celuJas.

La l6gica de la sel'loallzacl6n celular: lecclones de redes neuronales basadas en los ordenadores 833
 Los analisis basados en el ordenador son titHes desde otro punto de vista
-que no depende del conocimiento cuantitativo detallado de las reacciones que
participan. Los procesos de sefializaci6n intracelular, vistos como un todo, for-
man una red altamente interconectada en la que las sefiales son procesadas a
traves de multiples rutas paralelas que interactuan una con otra. Asf, uno puede
aprender acerca del comportamiemo de las redes de sef'ializaci6n companindo-
las con otras redes altamente imerconectadas. Las redes basadas en el ordena-
dar, a menudo denominadas redes neuronales, se desarroUaron original mente
para comprender de que forma las celulas nerviosas transmiten y procesan la in
formaci6n en el cerebro, pero existen propiedades que tambien son relevantes
para la senalizaci6n intracelular.

Las redes neuronales basadas en el ordenador

pueden ser entrenadas47
Uno de los tipos mas sencillos de redes neuronales basadas en el ordenador esta.
compuesto de tres niveles de 11llidades interconectadas -un niuef de entrada (i11'
put), un niuel escondido y un niuel de salida (OIllPlllJ, Cada una de las muchas
unidades de la red acnia como un modelo de celula nerviosa (neurona), cuya sa-
lida individual esta. controlada por ml.'!ltiples sefiales de entrada. Las conexiones
entre las unidades son anaJogas a las sinapsis y tienen pesos de conexi6n modifi-
cables, que controlan la fuerza can la que una unidad influye en ona unidad. La
actividad de la red como un todo depende tanto de los valores de estos pesos de
conexi6n como de las reglas matemalieas mediante las cuales carla unidad suma
sus sefiales de entrada para generar una seflal de salida. Un patr6n de seflales de
entrada recibido por las unidades de entrada es transform ado segtin estos pesos
y reglas en otros patrones diferentes de actividad en las unidades de salida, v{a
conexiones a traves de las unidades escondidas (Figura 1568).
La caracterfsrica mas remarcable y mas utH de las redes neuronales basadas
en el ordenador es que pueden ser entrenadas para reconocer patrones especfficos
de sef'iales de entrada, y para responder a cada uno de ellos con un palr6n de acti-
vidad de salida determinado. EI entrenamiento se consigue confrontando la red
con ejemplos de entrenamiento en forma de series de seflales de entrada acompa-
f'iadas de los correspondiemes patrones deseados de sef'iales de salida. Par ejem-
pia, las entradas pueden ser series de letras presentadas en una orientaci6n deter-
minada en la panralla, y la salida deseada puede ser simplemente la identificaci6n
correcta de cada lena. La entrada tambien puede ser las secuencias de aminoaci-
dos de varias cadenas polipeptfdicas y la salida los tipos de eSlTUcturas secunda-
Tias que forma cada cadena polipeptfdica. Cualquiera que sea la tarea, cuando se
ha presentado lin ejemplo concreto de entrenamiemo, la salida que propane la
red se campara con la salida deseada y se asigna un valor de ~error" basado en 10
cerca que esten las sei'lales real y deseada. Tras procesar todos los ejemplos de la
serie de entrenamiento, se calcllia una medida general de realizaci6n, que caracte-
riza 10 bien que ha trabajado la red en toda la serie de entrenamiento.

ENTRADA

Figura 15-68 Una red neuronal

senclUa. La aClividad de cada unidad
neuronal (moslrada como clrculos) se
NIVEL determina par las unidades de
ESCONDIDO entrada. Habitualmente la salida de
cada unidad es una funci6nno lineal
de las unidades de entrada. Cada una
de las conexiones entre unidades tiene
una fuel'7.a particular 0 "peso", que se
indica par las diferencias de grosor de
SALIDA las flechas que las conectan.

834 CapCtulo 15: Transmisl6n de sefiales entre celulas

 La vemaja del entrenamicnto es que pueden call1biarse los valores de peso
de la red, de forma que su realizaci6n lllejore en presentaciones posteriores de
series de entrenamiento. Se han disefiado varios algoritmos de entrenamiento
para realizar estos cambios de los pesos de las conexiones. Uno de los metodos
oonceptualmente m~s sencillos, y quizas el mas relevante para la sefialjzaci6n
celular (como se discute mots adelante), es aquel en el que los pesos de las cone-
xiones se cambian al azar, y los cambios que producen una mejora de la realiza-
ci6n de la red tienden a mantenerse. Sea cual fuere el algoritmo utilizado, el pro-
ceso de entrenamiento se repite una y otra vez hasta que la salida real de la red
se asemeja a 1a salida deseada. Los pesos finales de la red no est~ predetennina-
dos por el algorinno sino que emergen de una fonna aut6noma como resultado
de la presentaci6n repetida de los ejemplos de entrenamiento. Cuando la red ha
"aprendido" la tarea deseada, a menudo puede reconocer y dar la respuesta 00-
rrecta de patrones de entrada nuevos, que no formaron parte de los ejemplos de
entrenamiento.

Las redes de seiializaci6n celular pueden observarse como redes

neuron ales entrenadas por la evoluci6n 46
A pesar de que las redes neurales se utilizaron originalmente para eSludiar siste-
mas de neuronas interconectadas, no existe ninguna raz6n para que las unida-
des de estas redes tengan que represenar unicamente neuronas; por ejemplo
pucden ser enzimas u otro tipo de moleculas senal intracelulares. Consideremos
las protefna quinasas que panicipan en Ja sefializaci6n celular. Estas enzimas re-
ciben sefiales de entrada (en forma de fosforilaciones 0 de sencillas uniones de
protefnas) a panir de componentes de varios procesos intracelulares de sefiali-
zaci6n, y estas senales de entrada, colectivamente, regulan 1a aclividad catalitica
de la quinasa. Asu vez, cada qui nasa genera una senal de salida (1a fosforilaci6n
de otras proteinas) que regula la actividad de determinadas protel"nas diana, las
coales pueden ser componemes mas alejados del propio proceso de senaliza-
ci6n 0 procesos de sefializaci6n paralelos. En tenninos de una red, en este ejem-
plo las quinasas acnian exactamente como 10 hacen las neuronas: integran va-
rias senales de entrada y responden con una senal de salida adecuada.
AI menos en principio, puede entrenarse una red altamente interconectada
de reacciones senal intracelulares para que reoonozcan ciertos patrones de se-
nalcs de entrada y respondan con patrones de salida especfficos, de una fonna
similar a como hemos descrito para las redes neuronales basadas en ordenador.
En este esquema, el entrenamiento debi6 de ocurrir durante la cvoluci6n, me-
diante mutaci6n y selecci6n natural, de forma que mutaciones al azar en los ge-
nes que codifican protefnas senal ejercieron la misma funci6n que las variacio-
nes al azar en los pesos de las conexiones introducidas por el ordenador. Una
mutaci6n que camhie In actividad de una protefna quinasa senal, par ejemplo,
puede incrementar el peso de una 0 m~s conexiones de la red, mientras que un
cambio de la especificidad de uni6n de una protefna SH adaptadora puede afiadir
nuevas conexiones. las mutaciones que mejoran la realizaci6n de una red de se-
nalizaci6n, por ejemplo, al pennitirle reconocer una nueva oombinaci6n de facto-
res de crecimiento 0 discriminar entre dos senales extrncelulares que previamente
la c~lula era incapaz de dislinguir, pueden proporcionar al organismo una vemaja
selectiva y por eUo, ser retenidas para ser mejoradas posteriormente. De esta for
rna, pudo evolucionar una red de sefializaci6n cada vez m~s compleja.

Las redes de sefializaci6n capacitan a las c~luJas

para responder a complejos patrones de senales
extracelulares47 49
Cuando se analizan las redes neuronales entrenadas para detennillar como reco-
nocen complejos patrones de seliales de entrada, se enCllentra que las unidades
individuales del nivel escondido (vease Figura 15-68) han 9uedado fuertemente

La 16glca de 1a senalizacl6n cclular: lecclones de rcdcs ncuronales basadas en los ordenadores 835
 ENTRADA Figura 1569 Una hlpoletlca red de
mol6c.uln de Ie metriI factore. de l:reclmlento
seftallzacl6n senclUa. La red conSla de
seis receptores y tres protefna quinasas
cit0s6licas. Cada receptor activa
(/lechas verdes) 0 inhibe (l(neas negras)
la quinasa I, la quinasa 2 0 ambas,
mediante un mecanismo no
espedfico. Dado que las senales
convergen en la quinasa 3 (1a quinasa
de salida), esta red sect activa aI
maximo tlnicamente cuando se
presenten las combinaciones
especfftcaS de estfmulos extracelulares.
Apesar de que esta red es mocho mas
sencilla que cualquiera de las que se
halla en una dlula viva. puede rormar
parte de un proceso de senalizaci6n
nW complejo.
SALIDA

interconectadas a conjunlos significativos de unidades del nivel de entrada, de

fanna que las unidades escondidas pasan a representar caracterfsticas significati-
vas del patron de entrada aplicado a 101 red. En una red entrenada para reconneer
letras represenladas en cualquier orientad6n sabre 101 pantaJJa, por ejemplo, de-
tenninadas unidades escondjdas pueden empezar para reconocer Iineas curvas 0
pares de I{neas en Angulo recto, mientras que en una red entrenada para pronun-
dar palabras escrilas, delemlinadas unidades escondidas pueden representar so--
nidos de vocales 0 de consonantes.
De una fonna similar, moltkuJas determinadas de senalizaci6n intracelular
de una c~Hulapueden haber evoludonado para reconneer combinadones deler-
minadas de senales extracelulares, contribuyendo asf a tradudr estas combina-
dones de sci'lales en una respuesla celular particular. Consideremos 101 hipotthi-
ca red moslrada en la Figura 15-69, que casi con IOOa seguridad es mucho mAs
sencilla que cualquier red de sciializaei6n eneonlrada en una celuJa. Consta de
seis tipos de rcceplores de superfieie que eslAn acoplados funcionalmente a Ires
prolefna quinasas citos6licas. Cada uno de los rcceptores I, II YIII reconocen di-
ferentes eomponentes dc la malra cxlraceluJar, mientras que cada uno de los
reeeplores A, Bye reeonoeen diferenles faelores de crecimienlo. La quinasa 3
lrabaja en una elapa poslerior del proeeso que las quinasas 1 y 2 Yactua como
salida de III red, qUi7As estimulando a 101 eelula a proliferar al fosforilar un can-
junlo de prolefnas reguladoras de genes. Debido a las diferentes fuerl.aS de las
conexiones de la red, algllnas de las euales son exdtadoras y olras inhibidoras,
eada una de las Ires quinasas seran estimu.ladas de forma 6plima par diferentes
combinaciones de scf'iales extraccllliares. La quinasa 1 es mas activa cuando 101
celu.la enellcntra los componcntes I y II de matriz y no encuenlra los componen-
tes III, mientras que la quinasa 2 cs mAs aeUva cuando 101 eelula encuenlra facto-
res de crccimicnto A, By C y no el eomponente HI de malriz. Los requerimientos
para la aelividad 6plima de 101 quinasa 3 son mAs eomplejos, ya que es sensible OIl
entomo extraeelular unicamenle a traves de las quinasas 1 y 2. Presentar;i mm-
ma aClividad, y estimulara a 101 celuJa a proliferar, cuando las quinasas I y 2 sean
aelivas simult:\neamenle -es decir, cuando la eelu.la haya encontrado los faclO-
res de crccimiento A, By C y las moItxuJas de matriz I y II, Yno la molecula de
malnz III, 10 cual conslituye un patr6n sorprendentemente complejo si conside
ramos la senciUez de 101 red. De acuerdo con esle punto de vista, 101 quinasa 3 ha
"aprendido" a 10 largo de la evoluci6n a asociar esla partieuJar combinaci6n de
estimu.los extraeelu.larcs con 101 necesidad de la eelula para proliferar. De la mis-
rna fonna a1gunas de las imponantes molecuJas sefial de una ce.luJa real han
aprendido a reconocer y responder a combinaciones relevantes de caracterfsti-
cas del enlomo celular.

836 Capitulo 15 : Transmlsi6n de sci\a.Ies entre c6u.1as

Las redes senal son robuslas
Una imponante consecuencia de la arquitectura ahamcnte interconectada de
una red neuronal es que. una vez ha sido entrenada para realizar una larea. su
realizaci6n no es facilmeme destruida por la modiJicaci6n 0 la eliminaci6n de
unidades de la red. Si una determinada unidad responde de forma 6ptima cuan-
do recibe sefiales de entrada de otras seis unidades, tambien responder.1. aunque
no tan bien. a tan s610 cinco de eslas senales. Si por ejemplo se introducen cam-
bios al azar en el peso de las conexiones en una red neuronal entrenada para re-
conacer letras. la capacidad para realizar esta tarea no sc suprime. sino que uni-
cameme se degrada Iigerameme.
De una fonna similar. una respuesta celular que depende de procesos de sc-
iializaci6n intracelular ahamente imerconectados no sera f.kilmente a1terada si
se elimina 0 se cambia un solo elememo sei'ial de uno de estos procesos. Por
eUo. no debemos sorprendernos demasiado de encontrar que una celula euca-
riota pueda actuar casi con normalidad aunque una protcfna quinasa haya sido
inactivada por mutaci6n. incluso si esta proteina quinasa ha sido muy conserva-
da durante la evoluci6n. Probablemente esta estabilidad de las redes de senali-
zaci6n es importante para celulas perfecta mente normales y para celula que no
comienen numeros detenninados de forma precisa de protefnas inlracelulares;
adem:is, las concentraciones de metabolitos importalltes pueden flucluar can cl
estado melab6lico de la celula. EI extenso ennecruzamiento enne los procesos
seiial en las celulas animales puede haber evolucionado. en parte, para permitir
que los procesos funcionen normalmente en el seno de eSlas fluctuaciones.
Las propiedades semejantes a las de redes neuronales de los sistemas alta-
mente interconectados de prolefnas. puede ayudarnos a enlender otTOS aspec-
tos de la biologfa celuJar. ademlis de la scnalizaci6n celular. Estas mismas consi-
deraciones sc pueden aplicar. por ejemplo. a las complejas redes de protefnas
que interaccionan entre sf. que forman el citoesqueleto, que es ellema del pr6xi-
mo capftulo.

Resumen
La construa:i6n tk motlelos en el onlenndor puet:le aYlUwnlos a iluminar los com-
pfejos comportamientos de las cascada.s tk seiializaci611 que se encuelltrall en las d-
lIIlas. Ell particuwr, las rede.s IIeuronales basadas ell ef orde"ador tiefUm una serie
tk propiedades que es pas/hle que las ret:ks tk seiiafizacidfl ftltracelular comparta".
Tal como las relies IIeuro"ales pllet:um ser entrenadas para reslJOmler de jonlla ade-
Cilada a detem.iruu/os patrolles de senales de elltrada, estas retks tk senalizacidfl,
mediarde proct!sos darwilllallos de cambio aleatorio Y seleecid" p/~edell I.aber desa-
rrollado la capacldLui de responder de jorma apropituw a com,,'ejas combinaeiolles
de senales extraceluwres. Ln arql4itectllra altamerlte irderactllJ{I de las relies rJelll'O-
"ales esttf mimetluula por las redes de prote(nas senallrltrticellliares. Ambas retles
puedell, en principia, aetllar como eleme"tos de reomocimie"to de patrolles, ttue
re.spotullm de jomm dptima a combituu:wnes selecciomuJa.s de estfmulos de etltra-
da. Las retIes de este tipo tambU" son rewtivamellte re.sistellte.s a las fluctuacione.s
de ja"do 0 a las alteraciolles, de JamUl que eliminarulo 11110 de SIlS comporumtes 110
u altere completamenre w red.

La loglca de la sei'iallzacion celular: lecclones de rLodes neuronales basadas en los ordcnadores 837
Bibliograffa
General
Barrill, G.I. Communitation Within Animal Cells. Oxford,
UK: Oxford Science Publications. 1992.
Baulieu. E.-E.; Kelly, PA. I"lormones: From Molecules to Di-
sease. London: Chapman and Hall. 1990.
Hardie, D.G. Biochemical Messengers: Hormones, Neuro-
transmitters and Growth Factors. London: Chapman
and Hall, 1990.
Molecular Biology of Signal Transduction. Cold Spring
Harb. Symp. Quam. Bioi. Vol. 53, 1988.
Morgan, N.C. Cell Signalling. Mihon Keynes. UK: Open Uni-
versity Press, 1989.
Citas
I. Errede, 8.: Levin, D.E. A conserved kinase cascade for
MAP kinase activation in yeast. CUfT. Opill. Cell Bioi.
5:254-260. 1993.
Kurjan.1. Pheromone response in yeast. AllflU. Rev. Bio-
cllem. 61:1097-1129.1992.
Marsh, I.; Neimsen. A.M.: Herskowitz, I. Signal trans-
duction during pheromone response in yeast. AmlU.
Rev. Cell Bioi. 7:699728, 1991.
2. Hardie, D.G. Biochemical Messengers: Hormones, Neu-
rotrasnminers and Growth Factors. London: Chap-
man and Hall, 1990.
Kahn, C.R. Membrane receptors for hormones and neu-
rotransminers.j. QUBiol. 70:261-266,1976.
Levitski, A. Receptors: A Quantitative Approach. Menlo
Park, 0.: Benjamin-Cummings, 1984.
Snyder, S.H. The molecular basis of communication
between ceUs. Sci. Am. 253(4):132-140, 1985.
3. Gurdon, '.; Tiller, E.; Roberts, J.; Kato, K. A community
effect in muscle development. Curro Bioi. 3:1-11, 1993.
Smith, W.L: Borgeat, P. The eicosanoids: prostaglan-
dins, thromboxanes, leukotrienes, and hydroxyeico-
saenoic acids. In Biochemistry of Upids and Mem-
branes (D.E. Vance, I.E. Vance, eds.), pp. 325-360.
Menlo Park, 0.: Bcnjamin-Cummings, 1985.
Weissmann, G. Aspirin. Sci. Am. 264(1):84-90, 1991.
4. Caveney, S. The role of gap junctions in developmenl.
AmHl. Rell. P/lysiol. 47:319335,1985.
Warner, A.E. Thc role of gap junctions in amphibian de-
velopmcnt. J. Embryol. Exp. Morpllol. Suppl. 89:365-
380, 1985.
5. Raff, M.C. Social controls on cell survival and cell death.
Nature 356:397-400, 1992.
6. Schimke, R.T. On the roles of synthesis and degradation
in regulation of enzynle levels in mammalian tissues.
Curro Top. Cell Reglli. 1:77-124, 1969.
7. Bredt, D.S.: Snyder. S.H. Nitric oxide, a novel neuronal
messenger. Nellron 8:3-11, 1992.
Lowenstein, Col.; Snyder, S.H. Nitric oxide, a novel bio-
logical messenger. Cell 70:705707. 1992.
Moncada, S.; Palmer, R.M.; Higgs, EA Nitric oxide: phy-
siology, pathophysiology and pharmacology. Pllar-
macc/. Rev. 43:109142,1991.
Stevens, C.F.lust say NO. Curr Bioi. 2:108109, 1992.
8. Andres, A.J., Thummel, e.S. Hormones, puffs and flies:
the molecular control of metamorphosis by ecdyso-
ne. Trends ee"et. 8: 132-138, 1992.
838 Capitulo 15: Transmisi6n deseiiales entre celulas
Ashburncr, M.; Chibara, C.; Meltzer, P.; Richards, G.
Temporal control of puffing activity in polytene duo
l11osomes. Cold Sprillg Harh. Symp. Quant. Bioi.
38:655662,1974.
Evans, R.M. The steroid and thyroid hormone receptor
superfamily. Sciellce 240:889-895, 1988.
Parker, M.G.. ed. Nuclear Hormone Receptors: Molecu-
lar Mechanisms, Cellular Functions and Clinical Ab
normalities. London: Academic Press, 1991.
Yamamoto, K.R. Steroid receptor regulated lrancription
of specific genes and gene networks. Amlll. Rev. Ge-
lIet. 19:209252, 1985.
9. Nishizuka, Y., ed. Signal tmasduction: crosstalk. Tre"ds
Biccllem. Sci. 17:367443, 1992.
10. Boume, H.R.; Nicoll, R. Molecular machines imegrate
coincident synaptic signals. Cell/Neuron 72/10:65-75.
1993.
Cohen, P. Signal integration at the level of protein kina
ses, protein phosphatases and their substrates. Trends
Bicc/lem. Sci. 17:408-413, 1992.
Pelech, S.L Nerworlting with protein ltinases. Curro Bioi.
3:513-515,1993.
Posada, J.: Cooper, JA Molecular signal integration. In
terplay between serine, threonine, and tyrosine phos-
phorylation. Mol. Bioi. Q1l3:583-592, 1992.
II. Birnbaumer, L G protei.ns in signaltransducoon. AmlU.
Rev. Plwmwcof. Toxicol. 30:675-705,1990.
Dohlman, H.G.; Thorner, I.; Caron, M.G.; Lefkowitz, R.I.
Model systems for the study of seven-transmembra
ne-segment receptors. Amm. Rev. Biechem. 60:653-
688, 1991.
Houslay, M.D.; Milligan, G.. eds. G-Proteins as Media-
lors of Cellular signalling Processes. Chichester, UK:
Wiley, 1990.
Linder, M.E.; Gilman, A.G. G proteins. SCi. Am. 267(1):
36-43, 1992.
12. Bourne, H.R.; Sanders, D.A.: McCormick, F. The GTPase
superfamily: conserved structure and molecular me-
chanisms. Natllre349:117127, 1991.
Hepplcr, J.l1.: Gilman, A.G. G proteins. Trends Biccllem.
Sci. 17:383387, 1992.
13. Feder, D., et al. Reconstitution of betal-adrenoceplOr-
dcpendcnt adenyl ate cyclase from purified compo-
ncnts. EMBO). 5:1509-1514, 1986.
Gilman, A.G. G proteins: transducers of receptor-gen'
erated signals. AtIIllI. Rev. Bioc1lem. 56:615-649, 1987.
Pastan, J. Cyclic AMP. Sci. Am. 227(2):97-105, 1972.
Schramm, M.; Selinger, Z. Message transmission: recep
tor controlled adenylate cyclase system. Science
225:1350-1356,1984.
Suthcrland, E.W. Studied on the mechanisms ofhormo-
ne action. Science 177:401-408, 1972.
Tang, W.-'.; Gilman, A.G. Adenylyl cyclases. Cell 70:869-
872,1992.
14. Lai, e.-Y. The chemistry and biology of cholera toxina.
CRCCrit. Rev. Biccl/em. 9:171-206,1980.
15. Bimbaumer, L Receptor-loeffector signaling through G
proteins: roles for beta gamma dimers as well as alpha
subunits. Ce1l71:1069-1072, 1992.
IniguezUuhi, I.: Kleuss, C.; Gilman, A.G. The importan-
ce of G-portein /3:y subunits. Tremis. Cell BioI. 3:230-
235, 1993.
16. Brindle, P.K.; Montminy, M.R. The CHEB family of tran-
scription activatoTS. Curro Opill. Gen. Dev. 2:199-204,
1992.
Cohen, P. Protein phosphorylation and the comrol of
glycogen metabolism in skeletal muscle. Pili/os.
Trans. R. Soc. Wild. (Bioi.) 302:13-25,1983.
Krebs. E.G. Role of the cyclic AMP-dependent protein
kinase in signal transduction. lAMA 262:1815-1818,
1969.
PiUds, 5.1.; E1-Maghrabi, M.R.; Claus, T.H.Honnonal re-
gulation of hepatic gluconeogenesis and glycolysis.
AI/tlu. Rev. Bioclu:m. 57:755-784, 1988.
Taylor, 5.5.; Buechler, ,A; Vonemoto, W. 0MP-depe!"'-
dent protein kinase: framework for a diverse family
of regulatory enzymes. Amill. Rev. Biocllem. 59:971-
1005, 1990.
17. Cohen, P. SuuClUre and regulation of protein phospha
tases. AmlII. Rev. Bichem. 58:453-506, 1989.
18. Carafoli, E. Intracellular calcium homeostasis. AmIU.
Rev. Bioc/lem. 56:395-433, 1987.
Evered, D.; Whelan, J., eds. Calcium and the Cell, Ciba
Foundation Symposium 122. Chichester, UK: Wiley,
1986.
Koch, G.LE. The endoplasmic reticulum and calcium
storage. Bioessayss 12:527531, 1990.
19. Augustine, G.'.; Charhon, M.P.; Smith, 5.1. Calcium ac-
tion in synaptic transmitter release. Amm. Rev. Nell-
rosci. 10:633-693, 1987.
Heilbrunn, LV.; Wiercenski, F.J. The action of various
cations on muscle protoplasm. /. Cell. Comp. Pllysiol.
29:15-32, 1947.
20. Bansal, V.S.; Majerus, P.W. Phosphatidylinositol-deri
ved precursors and signals. AIIIIU. Rev. Cell Biol. 6:41-
67,1990.
Harden, T.K. G-protein-regulated phospholipase C: iden-
tification of component proteins. Adv. 5ecolld Me$Sf?ll-
ger PllospJlOproteill Res. 26: 11-34, 1992.
Majerus, P.W. Inositol phosphate biochemistry. Amm.
Rev. Biocllem. 61:225-250,1992.
Michell, R.H. Inositol lipids in cellular signalling mecha-
nisms. Trends Biocllem. Sci. 17:274-276, 1992.
Sekar, M.C.; Hokin, L.E. The role of phosphoinositides in
signal transduction./. Membr. Bioi. 89:193-210,1986.
21. Berridge, M.J. Inositol trisphosphate and calcium signa-
lling. Nature 361 :315-325, 1993.
Feris, C.D.; Snyder, S.H.lnosiloIIA,5-trisphosphate-ac-
tivated calcium channels. Antill. Rev. Pllysiol_ 54:469-
488,1992.
Meldolesi, J. Multifarious IP] receptors. Curro Bioi.
2:393-394,1992.
Taylor, C.W.; Marshall, l.e.B. Calcium and inositol
1,4,5-triphosphate receptors: a complex relation-
ship. Trends Bioc/lem. Sci. 17:403-407, 1992.
22. Berridge, M.J. Inositol triphosphate and calcium .oscila-
tions. Adll. Second Messenger PllospllOprorem Res.
26:211-223,1992.
Cobbold, P.H.; Cuthbenson, K.S. Calcium oscillations:
phenomena, mechanisms and significance. Semi".
Cell Bioi. 1:311-321, 1990.
Meyer, T.; Stryer, L Calcium spilcing. AmlU. Rev.
BioplJys. BiolJhys. Cllem. 20:153-174, 1991.
Tsien, R.W.; Tsien, R.V. Calcium channels, stores, and
oscillations. Amw. Rev. Cell Bioi. 6:715-760, 1990.
Bibliograffa
Tsunoda, Y. Oscilatory Cal< signaling and its cellular
function. New BioI. 3:3-17, 1991.
23. Asaoka, Y.; Nakamura, S.-\.; Yoshida, K.; Nishizuka, Y.
Protein kinase C, calcium and phospholipid degrada-
tion. Trends BioclJem. Sci. 17:414-417, 1992.
HUlller, T.; Karin, M. The regulation of trancription by
phosphorylation. Cell 70:375-387. 1992.
Liou, H.-C.: Baltimore, D. Regulation of the NF-\:B/rel
transcriplion factor and hill inhibitor system. Curro
Opin. Cell Bioi. 5:477-487,1993.
Nishizuka, V. Intracelllular signaling by hydrolisis of
phospholipids and activation of protein kinase C.
Science 258:607-614. 1992.
Sternweis, P.C.; Smrcka, A.V. Regulation of phospholi-
pase C by G proteins. Trends Bioc/lem. Sci. 17:502-
506,1992.
24. Gerday, c.; Bolis. L.; GiUes, R., eds. Calcium and Cal-
cium Binding Proteins. Berlin: Springer-Verlag. 1988.
Head, I.F. A better grip on calmodulin. Curro BioI. 2:609-
61l,1992.
O'Neil, K.T.; DeGrado, W.F. How calmodulin binds its
targets: sequence independent recognition of ampm-
pathic a-helices. Trends Biocllem. Sci. 15:59-64,
1990.
25. Hanson, P.I.; Schulman, H. Neuronal Cal'/calmodulin-
dependent protein kinases. AmlU. Rell. Biochem.
61:559-601, 1992.
Morris, R.G.M.; Kennedy, M.B. The pierian spring. Curro
Bioi. 2:511-514,1992.
Schulman, H. The multifunctional Cal'/caimodulin-de-
pendent protein kinases. Curro Opin Cell 8iol. 5:247-
253,1993.
26. Cohen, P. Protein phosphorytation and hormone ac-
lion. Proc. R. Soc. Wild. (Bioi.) 234:115-144. 1988.
27. Brown, A.M.; Birnbaumer, L. Ionic channels and their
regulation by G protein subunits. Amm. Rev. Pllysiol.
52:197-213,1990.
Hille, B. G protein-coupled mechanisms and nervous
signaling. Neuron 9: 187-195, 1992.
28. Buck, LB. The olfactory multigene family. Curro Opin.
Neurobio/. 2:262-288, 1992.
Kaupp, U.B.; Koch, K.W. Role of cGMP and Ca2. in vene-
brate pholoreceptor excitation and adaptation. Amm.
Rev. Pllysiol. 54:153-176, 1992.
Lagnado, L; Baylor, D. Signal flow in visual transduc-
tion. Neuron 8:995-1002, 1992.
Reed, R.R. How does the nose know? Cel/GO: 12, 1990.
Simon, M.I.; Strathmann, M.P.; Gautam, N. Diversity of
G proteins in signal transduction. Science 252:802-
808,1991.
Stryer, L. Visual excitation and recovery. /. 8iol. Cllem.
266:10711-107)4,1991.
29. Lamb, T.D.; Pugh, E.N.. Jr. G-protein cascades: gain and
kinetics. Trends nellrosci. 15: 291-298.1992.
30. Lewis, ).; Slack, J.; Wolpert, L Thresholds in develop-
ment./. 17100r. Bioi. 65:579-590, 19n.
Mulvihill. ER.; Palmiter, R.D. Relalionship of nuclear
estrogen receptor levels to induction of ovalbumin
and conalbumin mRNA in chick oviduct. /. Bioi.
Chem. 252:2060-2068,1977.
31. Maack, T. Receptors of atrial natriuretic factor. AIIIllI.
Rev. Physiol. 54:11-27, 1992.
839
 Miller, S.G.; Kennedy, M.S. Regulation of brain type U
('.a'-'/calmodulin-dependenl protein ldnase by au-
lophosphorylation: a Ca1_triggered molecular switch.
CelI44:861-870, 1986.
Mohun. T. Muscle differentiatiolL Curr. OpifL Cell BioL
4:923-928, 1992-
Rosenzweig. A.; Seidman. C.R Atrial natriuretic factor
and related peptide hormones. Annu. Rev. Biochem
60-.229256.1991.
Yuen, P.5.T.; Garbers, D.L Guanylyl cyclase-linked re-
ceptors.Annu. Rev. Neurosd. 15:193-225, 1992.
32. Carpenter. G. Receptors for epidennal growth factor
and ocher polypeptide mitagens. Annu. Rev. BiD-
chem 56:881-914,1987.
Fand, W.J.; Johnson, D.R; Williams, LT. Signalling by
receplor tyrosine Ir:inases. Annu. Rell. Biochem..
62:453-481,1993.
Scblessinger, ,. Ullrich, A. Growt:b factor signaling by re-
ceptor tyrosine kinases. Neuron 9".383-391, 1992.
Ullrich. A.; Schlessinger. J. Signal transduction by recep-
tors with tyrosine kinase activity. Cell 61:203-212,
1990.
33. (]ark, S.G.; Stem, M.J.; Horvitz. H.R. C elegans ceU-sig-
nalling gene sem-5 encodes a protein with SH2 and
SH3 domains. Narure3S6:340-344, 1992.
Koch, CA.; Anderson. D.; Moran, M.F.; FlIis, e.; Pawson,
T. SH2 and SH3 domains: elements thai conrro1 inte-
ractions of cytoplasmic signaling proteins. Science
252:668-674,1991.
Mayer, B.'.; B1atimore. D. Signalling through SH2 and
Sf{] domains. Trends Cell 8WL 3:8-13, 1993.
Pawson. T.; Schlessinger, I. SH2 and Sf{] domains. Curr.
BWL 3:434-442. 1993.
34. Ballag. G.; McCom.ick. F. Regulators and effectors of ras
proreins..AnnlL Rev. CeUBioL 7:601-632,1991.
Downward, ,. Has regulation: putting bad: the GTP.
CulT. BWL 2:329-331,1992-
Hall, A. Ras-related proteins. Curr. OpifL CeU BioL
5:265-268.1993.
Lowy, D.R.; Wlllumsen, B.M. Function and regulation of
Rm. Annu. Rev. Biochem.. 62:851-891. 1993.
35. Greenwald, L; Rubin. G.M. Making a difference: the role
of celI-ceIl interactions in establishing separate iden-
tities for equivalent cells. Ceu 68:271-281. 1992.
Olivier, '.P., eI. at A Drosophila SHZ-SH3 adaptor pro-
tein implicated in coupling the sevenless tyrosine ki-
nase ro an activator of Has guanine nucleotide ex-
change, 50s. CelI73:179-19I, 1993.
Ready, D.F. A multifaceted approach to neural develop-
meoL Trends Neurosci. 12: 102-110, 1989.
35. Simon, M.A.; Dodson, G.s.; Rubin, G.M. An SH3-SH2-
SH3 protein is required for pll'" activation and
binds to sevenless and 50s proteins in IIUro. Cell
73:169-177,1993.
Tomlinson, A. Cellular interactions in the developing
Drosophila eye. Deueloprru:nt 104:183-193.1988.
Warne, P.H.; VIciana. P.R.; Downward, ,. Direct interac-
tion of Ras and the amino-tenninal region of Raft in
IIitro. Nature 364:352-355, 1993.
36. Hill, e.S., eI. at Functional analysis of a growth factor-
responsive ttaneription actor complex. Cell 73:395-
406.1993.
840 Cap(tuIo 15: Tnmsmlsi6n de seiiales eolre reluias
Nishida, E.; Gotob, Y. The MAP kinase cascade is essen-
tial fOf diverse signal transduction pathways. Trends
Biochem Sci. 18:128-130, 1993.
Pelech, S.L Networking with protein lrioases. Curro BioL
3:513-515, 1993.
Rudennan, J.V. MAP kinase and the activation of quies-
cent ceUs. Curro Opin. CeIlBioL 5:207-213, 1993.
Thomas, G. MAP kinase by any other name smells just
as sweeL Cell68:3-6, 1992.
'AK2
37. Argetsinger. LS., et aI. Identification of as a growth
honnone receptor-associated tyrosine kinase. Cell
74:237244, 1993.
Miyajima, A.; Ham, T.; Kilamura, T. Common subunits
of eytokine receptors and the functional redundancy
of eytolrines. Trends Biochem. Sci. 17:378-382, 1992.
Mustelin, T.; Bum, P. Regulation of src family tyrosine
kinases in lymphocytes. Trends Biochem. Sci. 18:215
220,1993.
Schreurs, J.; Gonnan, D.M.; Miyajima, A. Cytokine re-
ceptors: a new superfamily of receptors. Jnt Rell. Cy-
IOL 137B:121-155, 1993.
Sthal, N.; Yancopoulos, G.D. The alphas, betas, and ki-
oases of cytokine receptor complexes. Cell 74:587-
590,1993.
38. Cbamonneau, H.; Tonks, N.I( 1002 protein phosphata-
ses? Annu. Rev. Cell BioI. 8:463-493, 1992.
Korettky, GAo Role of the CD45 tyrosine phosphatase in
signal transduction in the immune system. FASEB J.
7:420-426, 1993.
Walton. IC.M.; Dixon,'.E. Protein tyrosine phosphatases.
Annu. Rev. Biochem 62: 101-120, 1993.
39. Bishop, I.M. Molecular themes in oncogenes. Cell
64:235-248,1991-
Gupta, S.IC.; GaUego, C.; Johnson, G.L Mitogenic path-
ways regulated by G protein oncogenes. Mol. BioI.
Ce1l3:123-128,I992.
Kahn, P.; Graf, T., eds. Oncogenes and Growth Control.
Berlin: Springer, 1986.
40. lin, H.Y.; Lodish, H.F. Receptors for the TGF-j3 super-
family: multiple polypeptides and serine/threonine
kinases. Trends Cell BioL 3:14-19, 1993.
Massague, J. The transforming growth factor-j3 family.
Annu. Rell. Cell BioI. 6:597-641, 1990.
Massague, I. Receptors for the TGF-j3 family. Cell
69:10671070,1992.
Taylor, S.5., et al. Structural framewoR:: for the protein
kinase family. Annu. Rell. Cell BioL 8:429-462, 1992.
41. Artavanis-Tsakonas, S.; Delidalcis, C.; Fehon, R.G. The
Notdllocus and the ceU biology of neuroblast segre-
gadOlL Annu. Rell. Cell SioL 7:427-452, 1991.
Burridge, IC.; Petch, LA.; Romer, LH. Signals from focal
adhesions. Curro BioL 2:537-539, 1992.
42. Soderquist, A.M.; Carpenter, G. Biosynthesis and meta-
bolic degradation of receptors for epidennal growth
factor./. Membr. BioL 90:97-105,1986.
43. Hausdorff, W.P.; caron, M.G.; Lefkowitz. R.I. Turning off
the signal: desensitization of j3-adrenergic receptor
function. FASEBJ. 4:2881-2889, 1990.
Lefkowitz, R.J. Gprotein-coupled receptor kinases. Cell
74:409-412,1993.
Palczewski, IC.; Benovic, I.L G-protein-coupled receptor
kinases. Trends Biochem Sci. 16:387-391, 1991.
44. Cole, G.M., Reed, 5.1. Pheromone induced phosphory-
lation of a G protein ~ subunit in S. cerevisiae is asso-
ciated with an adaptive response to mating phero-
mone. CeIl64:703-716, 1991.
Nestler, E.I. Molecular mechanisms of drug addiction.}.
Neurosci. 12:2439-2450, 1992.
45. Adler, ]. The sensing of chemicals by bacteria. Sci. Am.
234(4):40-47,1976.
Berg, H. How bacteria swim. Sci. Am. 233(2):36-44, 1975.
Koshland, D.E., Jr. Biochemistry of sensing and adapta-
lion in a simple bacterial system. Anml. Rev. Bio-
cllem. 50:765-782, 1981.
46. Bourret, R.B.; Borkovich, K.A.; Simon, M.1. Signallrans-
dllction pathways involving protein phosphorylation
in prokaryotes. Amlll. Rev. Biocllem. 60:401-441,
1991.
Hazelballer, G.L. Bacterial chemoreceptors. Curro Opill.
SUuct. BioI. 2:505510, 1992.
Parkinson, J.S. Signal transduction schemes of bacteria.
Cell 73:857-871, L993.
Stock, J.B.; Lukat, G.S.; Stock. A.M. Bacterial chemotaxis
and the molecular logic of intracellular signal trans-
duction networks. AIIIlU. Rev. Biop/IYS. BiopJiys.
Cliem. 20: 109-136, 1991.
Bibliograffa
Stoddard, B.L.; Bui, J.D.; Koshland, D.E., Jr. Structure
and dynamics of transmembrane signaling by the Es-
chericllia coli aspartate receptor. Biochemistry 31:
11978-11983,1992.
47. Hinton, G.E. How neural networks learn from experien-
ce. Sci. Am. 267(3):144-151, 1992.
Hopfield, J.J. Neural networks and physical systems
with emergent collective computalional abilities.
Proc. Natl. Acall. Sci. USA 79:2554-2558, 1982.
Sejnowski, T.J.; Rosenberg, c.R. Parallel networks that
learn to pronounce English text. Complex Systems
1:145-168,1987.
48. Bray, D. Intracellular signalling as a parallel distributed
process.}. Tlleor. Bioi. 143:215-231, 1990.
Pelech, S.L. Networking with protein kinases. Curro BioI.
3:513-515,1993.
49. Gatmaitan, Z., et at Regulation of growth and differen-
tiation of a ral hepatoma cell line by the synergistic
interactions of hormones and collagenous substrata.
}. Cell BioI. 97: 1179-1190, 1983.
Rozengurt, E.; Mendoza, SA Synergistic signals in mi-
togenesis: role of ion fluxes, cyclic nuc1eotides and
protein kinase in Swiss 3T3 cells. }. Cell Sci. Suppl.
3:229-242,1985.
841
Micrografia de Ouorescencla de la bacteria Listeria monocytogelles. La bacteria (en rajo) se desplaza induciendo la
ronnaci6n de filamenlos de actina (en verde) en el citosol de las celulas huesped. Las regiones en las que se superpone
la fluorescencia verde y 18 raja aparecen de color amarillo. (Por cortesfa de Tim Mitchison y Julie Theriot.)
 .,

EI citoesqueleto
16
.-
La IIatUraIea del dtoeequeleso
Pllaaaeatollntltl"llMlllb

aIIoI, ceub IloIoI

tu.meo. . 4eec:dna
Protdnalcle anI6n alaJM:dna
S . . . . . .

La capacidad de las c~lulas eucariOias de adaptar una gran variedad de formas y

lIevar a cabo movimientos direccionales y coordinados depende de una red muy
compleja. de filamcnloS proteicos que se extienden a lfaves del citoplasma (Figu-
ra 16-1). Esta red recibe el nomhre de citoesqueleto, aunque. a difercncia del
esqueleto 6500. es una CSlnlctura sumamente dinamica que se reorganiza can-
tinuamcnre mienlras la celula cambia de forma. se divide, y responde a su co-
loma.
De hecho. el ciloesqueleto podrfa. lIamarse tambien "citomusculatura" ya
que es el responsable directo de movirnientos tales como el deslizamienlo de las
celulas sobre un substrata, la contracci6n muscular. y lodos los cambios de for-
lila que ocurrcn durallle el desarrollo embrionario de los vertebrados; tambicn
proporciona la maquinaria para los movimientos inrracelulares. lales como el
transporte de los organulos desde un lugar a otro del citoplasma y la segregaci6n
de los cromosomas durante la mitosis. Las bacterias carecen, aparentemente, de
cilocsquclcto. par 10 que podrfa haber sido un factor decisivo en la evoluci6n de
las celulas cllcariotas.
Figura 16-1 EI citoesque!cto. Celula
Las diversas actividudes del citocsqueleto dependen de tres tipos de fila-
en cuJtivo Iijada y marcada con el azul
mentos proteicos -los jilamemos de actina. los microlllblllos y los j'ilamelltos i,,
de Coomassie. colorante espedfico de
termeciios. Cada tipo de filamento esta formado par una subunidad proteica dis-
proternas. Podemos obselVar la gnm
tinta: actina para los filamentos de actina, tubulina para los micro1l1bulos, y una vanedad de estructuras nJamentosas
familia de protefnas fibrosas relacionadas, tales como vimentina 0 laminas. para que se exticnden a traves de In c~lula.
los filamentos Intermedios. (Por cortesfa de Colin Smith.)
La actina y la tllbulina han sido altamente conservadas a 10 largo de la evo-
luci6n de los eucariotas; sus filamentos proteicos se unen a una gran variedad de
protelnas accesorias. las cuak'S capacitan al mismo filamento para parlicipar en
distintas funciones en regiones diferentes de la cclula.
Empezaremos este capltuJO con una introducci6n sobre los lIes principales
tipos de filamentos del citoesqueleto e ilustrando algunos de los principios ge-
nerales que rigen su funcionamiento.
Despues de clio, consideraremos cada tipo de ftIamento por separado: en
primer lugar. los filamcntos intennedios. cuya estnlctura a modo de cuerda pa-
rece tener la funci6n reJativamente simple de proveer a las relulas de fueua me
canica; en segundo lugar, los microtubuJos. los cuales se consideran los organi
zadores primarios del citoesqueleto; y fmalmente. los filamentos de actina. que
son esenciales para muchos de los movimientos celuJares. especialmente los
que se \levan a cabo en la sllperficie celuJar.

843
La naturaleza del citoesqueleto
Una cclula cucariota dispone de miles de miUones de molecuJas proteicas. las
cuales constituyen ccrca del 60% de su peso seeD. Se cree que una celula indivi-
dual de un vcrtebrado tiene aproximadamente 10 000 tipos de protcfnas distill-
las, la mayorfa de las cuales se encuentran organizadas en el espacia. Enconlra-
mas esla organi7..aci6n a distintos niveles. En todas las celulas, las prOlcfnas
fomlan complejos funcionales. la mayorfa de los cuales eslAn farmadas QUizas
por 5 a 10 protefnas, aunquc otros complejos pueden ser Ian grandes 0 incluso
mjs que los ribosomas. EI siguicnte nivel de organizaci6n induye la disposici6n
de prOlcfnas locaJizadas funcionalmente en 1a misma membrana 0 en el mismo
compartimienlo acuoso de un orgAnulo limilado por una membrana, como por
ejemplo el mlcleo, las milocondrias 0 el complejo de Golgi. EJ choesqueleto es el
encargado de crear y mantener un nivel de organizaci6n todavia m<1.s elevado.
Conviene la relula viva en una cosa muy parecida a una ciudad, con servicios
especializados concentrados en o1reas distintas pero tmalmenle inlerconectados
mediante vias de comunicaci6n. En esta secci6n, revisaremos algunas de las es-
rrategias Msicas que capacitan aI citoesqueleto para controlar la localizaci6n de
los complejos proteicos y los orgi1nulos asl como para crear las vias de comuni-
caci6n entre eUos.

EI citoplasma de una c~lula eucariota esta organizado

espacialmente por los fiJamentos de actina, los microtubulos
y los mamentos intermedios)
iDe qu~ formas una c~lula eucariota, de diametro de 10 pm 0 m<1.s, puede estar
espacialmente organizada por moleculas de proteina del citoesqueleto que son
c1aramenre m<1.s pequeiias (unas 2000 veres m:is pequefias en dimensiones linea-
les)'? La respucsta radica en la poUmerizaci6n. En cada uno de los tres principa-
les tipos de prolcfnns de ciloesqueleto, miles de moleculas proleicas identicas se
ensamblan formando un filamento lineal, que puede ser 10 suficientemcnle lar-
go como para ir de un lado de la celula hasta ellado opuesto. Estos filamentos
conectan complejos proleicos y orgo1nulos de regiones distintas de la celula y ac-
ulan a modo de ranes para el transporte entre ellos. Ademas, forman el soporte
mecanico, que es especial mente irnportante en las celulas animales, las cuales
no disponen de rfgidas paredes celulares externas. EI citoesqueleto forma una
arrnaz6n interno que mnntiene todo el volumen dtoplasmatico. de igual modo
como el esqueleto formado por vigas contribuyc a mantener un edilicio.
Resulta sencillo determinar c6rno aparecen los filamentos durallle la evolu-
ci6n: cualquier protefna que disponga en su superficie de pares orientados de
lugares de autouni6n complementarios puede formar un largo filamcnto heli-
coidal (vease pag. 131). Cada uno de los tres lipos principales de filamcntos pro-
teicos que forman el citoesqueleto es un polimero helicoidal que tiene una dis-
posici6n diferente en In celula y una funci6n distinta (Figura 16-2). Sin embargo,
los tres tipos de filamentos, por sf mismos, no pueden ser responsables ni de la
forma ni de la longitud de In celula. Sus funciones dependen de un gran sequito
de protefnas accesorias que unen los filamentos a orros filamentos y a otros
componentes celuJares. Las protefnas accesorias son esenciales para el control
del ensamblaje de los fiJamentos proteicos en lugares particulares, y proporcio
nan los motores que, 0 bien mueven los orgi1nulos a 10 largo de los fLlamentos, 0
bien mueven los filamentos unos respecto a otros.

La dinamica de los microtubulos emana del centrosomaz

Los microtubulos son cstructuras polares; un extrema (el extrema mas) es capat.
de crecer a gran velocidad mientras que el otro extremo (el extrema menos) tiene
tendencia a perder subunidades si no esta estabilizado. En la mayona de celulas,

844 Capftulo 16: EI c!taesqueleto

FILAMENTOS DE ACTINA
Lo. j,lamenlOJ de .cti"'a (Illmbi'n conocido. como microfilamenro.)
JOn poUmaro. helicold,I", enro~dos de do. en dos, de la prolelna
actin. Aparecen como Ulructur8B f1eK'ble., con un di'metro deS a
9 nm. que "t'n organludn en una gran veriedad de hllCU. da ,edt.
bldimen.ionale. y de gele. trldimen.ionale. Aunque los filemenlos de
actina e.I'n di.pe..os por el citopla.ma de ta celula, esl'n alta mente
concenlrados en e4 c6na'l, juliO por debaio de la membrana plalm'liee.

25,m 2SIlm

MICROTUBULOS
LOI mJCrOlubulos.art cihnd,OII largos y hlHlCOS formadas por una
protelna lubulina. Su dl'metro utemo" de 2S nm y JOn mucho m'l
rigidOJ qlHllos fit.memos de actina. Los mjc,otubulos son largos y
rectOI y lipic:emerlle dll9O(len de un eKlr8mO unido a un eenl,o
organizedor de mic,otubulos IMTOC, de microtubule or98niz,ng eenlerl
Ilemado unflOSOfmltel como puede ob$ervarse en Ie '""'9"".

( .
~.
.
, ,
'" .~".
'.' , > ~

"',m

FILAMENTOS INTEAMEDfOS " " " " " "

Los filemento. 'ntarmed,o. JOn estructurel parecidn cuarde., de un
dl'metro de aproKimadamente 10 ",m; esl'n form&dos por lal protel",el
de los mamentOI intermedlol, qua conlliluyen una grim familia
heterogl!inea de protelnas. Uno de 10. tiPOI de fila menlO. intermedias
forma una red !lamada I"mlna nuclear que se localila debajo de la
membrane nuclear interna. Otros filamentol intermediOI se extienden a
10 largo del ciloplasma proporclonl,.,do a las cl!ilula. relilteneia
mec"nlca y ,oll""iendo la lanli6n mec"nice de los tejidos epitelialea
medianle I, u,.,i6n de 10. citoplumas de lal cl!ilulas vecinas a trav'. de
111I unionas celular".

2Snm 25 11m

el extremo menos de los mierotubulos esta estabilizado mediante la uni6n a una Figura 16-2 LostrestJposde
estructura que recibc el nombre de centrosoma, y los extremos can crecimien flIamentos protelcos que constlluyen
to rapido estan entonces libres para afiadir moUiculas de tubulina (Figura 16-3). el citoesqueleto. Se muesrra una
EI centrosoma suele estar localizado cerca del nucleo, en la zona central de la elcctronmicrografia de cada tipo de
celula. filamento y Wl diagrama esquem~tico
En un momento determinado, centenares de rnicrotubulos crecen a partir de como estan fomlados a panirde
de un cemrosoma, a1argandose muchas mieras, con su ~extremo mas" dirigido subunidades. Tambien puede
hacia la periJeria celular. Cada uno de estos mieronibulos es una estructura di observarse esquemaocamente la
narnica que tanto puede acortarse como a1argarse: despues de unos minutos de distribud6n de cada filamento en un
crecimiento durante los cuales se produce la adici6n de subunidades, su extre- tipo de relula epitelial Los colores
mo mas puede sufrit una repentina transici6n que implica una perdida de tales utilizados paR cada opo de liIamento se
utilizan tambien en el resto del capitulo.
subunidades, de forma que la longitud del microtubulo disminuye rapidamente
(las micrografias de los filamentos de
y puede lIegar incluso a desaparecer. actina. de los microl11bulos Yde los
La red mierOlubular que emerge a partir del centrosoma esta enviando filamentos intennedios porconesia de
constantemente nuevas microtubulos que reemplazan a los viejos que se han Roger Craig. Richard Wade y Roy
despolimerizado (Figura 164). Quinlan. respectivamente.)

La naturaleza del citoesqueleto 845

 Figura J 6-3 Un centrosoma con micronibulos adherldos. Como hemos +
indicado, el extremo menos, de crecimiento lento, de cada microlubulo se
encuentra inmerso en la matriz del centrosoma (verde claro) que rodea a un +
par de estruclUras que reciben el nombre de centr(%s. Esla matriz colabora
en la delerminaci6n del nlimero de microtubulos de una celula mediante la
nucleaci6n del crecimiento de los microtubulos de nueva formaci6n.

La red microtubular puede encontrar el centro de la ccHula3

l.Qu~ es 10 que determina que las hileras de microtubulos lengan una posici6n
delerminada en la celula? Experimentos en los cuales se utilizan ctHulas pigmen-
tarias aisladas a pan.ir de las escamas de peces han proporcionado datos muy
importanlcs: en la celula exiSlen grandes celulas a1argadas que contienen gr~nu
los lIenos de pigmento. Los gninuJos, que pueden ser marr6n oscuro, amarilJos,
rojos. 0 iridisccntes. dependiendo de la especie. estan unidos a los microtubulos
y pueden agregarse en el centro de la retula 0 dispersarse a traves del ciroplas-
mao El movimienlO de los granuJos de pigmento se produce a 10 largo de los mi-
crotubulos y puede ser controlado por el pez; de esla forma pueden cambiar el
color de su piel. En una celula pigmentaria mantenida en cultivo, el movimiento
puede ser controlado convenientemente mediante la aplicaci6n de hormonas u
olros reaclivos. que hacen variar las concentraciones de AMP ticHco del cilosol:
+
+
un incremento de la concenlraci6n de AMP cfclico provoca la dispersi6n de los
granulos. mientras que una disminuci6n implica una agregad6n de los mismos.
Los granulos de pigmento pueden ser utilizados como marcadores de la disposi
ci6n de los micrOlubuJos en la celula (Figura 16-5).
Si cortamos, con una aguja. una porci6n de una celuJa pigmenlaria. el frag
mento celular restanle puede sobrevivir durante largos perfodos de tiempo in-
c1uso aunque desaparezca su nueleo. Si realizamos la misma operaci6n cuando
los granulos pigmentarios se encuenlran dispersos por el dloplasma. algunos de
eSlos grnnulos qucdan auapados en el fragmento celuJar. Si, inmediatamente
despues de la operaci6n inducimos una agregaci6n de los granulos de pigmenlo
en eSle fragmento celular mediante lfalamienlos hormonales, estos se mueven
hada ellugar donde se ha producido el corte. Pero si esta agregad6n se induce 4
horas despu~s de la operad6n, los granuJos en vez de 1110verse hada la zona
donde se ha producido la lesi6n, se mueven exactamenle hada el centro del
fragmento celular. Investigaciones posteriores mueSlran que cste cambio impll
ca una redistribuci6n importante de los microtubulos dentro del fragmento, de
forma que ahara SlJ eXlremo menDs se encuentra en el centro del fragmento,
como si eSluvieran en el centro de una celula inlacta. En efecto, el fragmento ce-
lular aislado se ha convertido en una minicelula respecto a la organizaci6n de
sus microtubulos: los microtubulos se han reorganizado alrededor de un nuevo
centro organizador de microtubulos (Figura 16-6).

Figura 16-4 Cn:<::Imlentoy

, Dcortamlento de un hazde
mkrotUbuJos. EI haz de microlubulos
anclados en un centrosoma eSlli en
cambio continuo, mientras los nuevas
microlubulos crecen (flechaJ rojm) y
los microlubulos antiguos se aconan
(flecllas azules)

646 CapftuJo 16: EJ citoesqueleto
 dilminuci6n
decAMP

eumenta
decAMP

OISPERSOS AGREGAOOS
IAI

Figura 165 Q!lulas plgmenlarlas de peres. Eslas celulas gigantes. responsables de los cambios de colorad6n de
algunas especies de peces. disponen de grandes granulos de pigmento (morr6n). los cuales pueden cambiar su
locali7.aci6n en respuesta a estfmulos neuronales u hormonales. (A) Visl6n esquemalica de una celula pigmenlaria. que
muestra la dispersi6n y la agregaci6n de los granulos de pigmento, que se produceR a 10 largo de los microtubulos.
(8J Electronmicrograffa de barrido de una celuta pigmentaria despues de una breve exposici6n a un detergente. La
membrana plasm<1.tlca y el contenldo soluble del cltoptasma han sido eliminados y pueden observarse los haces de
microtubulos asf como los granulos de pigmento asociadas. {C y DJ Itm1genes cn campo claro de la misma celula en una
escama de un pez cfelldo africano, que muestra sus granulos de pigmento dispersos par el ciloplasma 0 agregados en el
centro de la celula. (El Una Imagen de inmunofluorescencla de otra celula del mlsmo ejemplar marcada con anticuerpos
conlra tubullna, que muestra largos haces de microtubulos paralelos extendlendose a partir del centrosoma hacla la
periferia celuJar. (B, de MA McNivcn and K.R. Porter, j. Cell BioI. 103: 1547-1555), 1986, reproducida con permiso de
copyright de Thc Rockefeller University Press; C, D, YE, por'cortcsfa dc Leah Halmo,)

e.ntrosome con Figura 16-6 Un experlmento que

un per de
e.nlrfolos muestra de que fonna un haz de
+ mJcrotubuJos puede encontrar el
cenlro de la Iula. Despues de que el
extremo de una relula pigmentaria de
un pez se corte con una aguja. los
microtl1bulos situados el fragmento
celular aislado se reorientan, siluando
++ SU extremo menos cereano al centro
eortado~

""'~~""O~
pot equf
del fragmento.
con une
agujl Ol'{Jenlledor
de microtubule. frlgmento celul8t
lin cttn1riolol -+ con mlCl'otubulos
r80'V,niI8Oot:
celule meI,n6fore

La naturaJeza del cltoesqueleto 847

 Este cxperimento tan sencillo sugiere que las hileras citoplasmaticas de mi-
crotublilos que emergen del centrosoma plleden actuar como un mecanismo de
supervivencia que es capaz de encontrar el centro de la celula. Esta posibilidad
es muy imponante puesto que implica que la red microtubular puede organjzar
el interior de la celula. Pera esto 5610 es el punta de inkio; tal y como veremos
m.is adelante en esta secci6n de introducci6n, una celula puede posicionar la
red moviendo especificamente su centrosoma a un lugar desplazado del centro
celular.

Determinadas protemas motoras utilizan la red microtubular

como gufa para posicionar los orgarmJos rodeados de membrana
Como acabamos de ver en las cclulas pigmentarias de determinadas especies de
peces, los filamentos del citoesquclcto pueden utilizarse no s610 como soporte
esuuctural sino como IIneas de transportc. Si con el microscopio 6plico obser-
vamos una celula viva de un vertebrado, podemos contemplar su citoplasma en
continuo movimiellto. Despues de unos minutos, las mitocondrias y otras orga-
nulos membranosos mas pequenos cambian sus posiciones mediante movi-
miemos saltatorios peri6dicos, mucho mas sostenidos y direccionados que el
continuo y pequeno movimiento browniano, pravocado por el movimiento ter-
mico al azar. stos y olras movimientos intracelulares en las celulas cucariotas
son generados par prote(nas motoms, las cuales se unen a los microtubulos 0 a
los fLIamentos de actina y utilizan la energfa producida a partir de ciclos repeti-
dos de hidr61isis de ATP para moverse a 10 largo de estos filamentos (vease pag.
221). Actualmente han sido identificadas docenas de protefnas motoras distin-
tas. Se diferencian en el tipo de filamento al cual se unen, en la direcci6n en la
que se mueven a 10 largo de este filamento y en la "carga" que transponan.
La primera protefna motora descubierta fue la miosina, una proteina que se
desliza a 10 largo de los filamentos de actina y que es especial mente abundante
en el musculo esqueletico donde constituye la parte mas importante del aparato
contractil. POSleriormente se descubrieron otros tipos de miosinas en las celulas
no musculares. Todas las miosinas tienen dominios motores semejanles (la par-
te de la protefna responsable del movimiento), pero presentan diferencias muy
marcadas en los dominios a traves de los cuales la molecula de miosina se une a
otros componentes de la celula.
Las prOtefnas motoras que se mueven a 10 largo de los microtlibulos son dis-
tintas a las miosinas y pertenecen ados familias: las qllillesillas, que gcneralmen-
te se mlleven hacia el extremo mas de los microrubulos (a partir del ccntrosoma),
y las dille[/las, que se desplazan hacia el extremo menos (hacia cl centrosoma). AI
igual que las miosinas, cada tipo de prote(na motora dependierue de microtubu-
los transpona una carga determinada con la cual se desplaza (Figura 16-7).
Las proteinas mororas microrubulo-dependientes juegan un papel muy im-
portante en el posicionamiento de los organuJos membranosos dentro de la ce-
lula eucariota. Los tubulos membranosos del retfculo endoplasm3.tico (ER), por
ejemplo, eslan alineados can los microtubulos y se extienden casi hasta la peri-
feria celuJar; el complejo de Golgi, en cambio, esta localizado cerca del centroso-

Flgun t6-7 ProteJnas motorasque se

mueven alo largo de los
mlcroll1bulos. Las quinesinas se
mueven hacia el extremo mas de los
microlubulos, mientras que las
dinefnas se mueven hacia el extremo
EXTREMO EXTREMO
MENOS MAs menos. Como hemos indicado,
pueden exiSlir diversas formas de
motor ambas prOlefnas mOlOras
adaplador OINE[NAS microlubulares, y se cree que cada ulla
carga de eUas transporltl un lipo distimo de

848 Cap{tulo 16: EI citoesqueleto

carga.

L
IAI

rna. Cuando tralamas las celulas con una droga que despolimeriza los micrOl1j Figura 16-8 DlstribuckSn de los
bulos, ambos org:tnulos cambian su locaJizaci6n: el ER se colapsa hacia el centro orglinulos por los mkrotubulos.
de la celula, mientras que el complejo de Goigi se fragmema en mtihiples vesicu- (A) Diagrama esquemalico de una
las de pequeno (amano que se dispersan por todD el ciloplasma. Cuando la dro- celu/a que muestr.l.la disposici6n
ga es eliminada. los organulos recuperan su posicion iniciaJ, conducidos por Ifpica de los microttibulos (t'erde). el
prolefnas mOlOras que se desplazan a 10 largo de los microtubulos nuevamente relfcuJo endoplasmatico (azull. y el
complejo de Golgi (amarillo). Se
farmadas. Se cree que la posici6n de cada uno de estos organulos vicne delcrmi-
muestra el nucleo en marr6n y el
nada por una protefna receplora que se encuentra localizada en la superficie d
centrosoma en IIf!rde claro. (B) celula
tos6lica de la membrana del orgemu.lo, 1a Cllal se une a una prolcfna mOlora mi- marcada con anticuerposcontra el
crolubulodcpcndiente especffica -una quinesina para el ER y LIlla dineina para retfculo endoplasmalico (ptlnel
el complejo de Goigi (Figura 16-8). SU1Jerior) 0 contra los microtubulos
(ptlnef inferior). Las prOlefnas motoras
empujan aJ reticulo cndoplasmlllico a
EI c6rtex de actina puede generar y mantener la polaridad celuJarS 10 largo de los mkrotubulos, lirando
En general, los microtl1bulos funcionan como entidades individuales, mientras de ellos desde su locaJizaci6n hacia la
que los filamentos de actina actl1an formando redes 0 haces. Los filarnentos de membrana nuclear. (Cl Celula
actina que descansan debajo de la membrana plasmatica, por cjemplo, eSlan marcada con amkuerpos contra el
asociados a una red de protefnas que se unen a la actina formando el cortex ce- complejo de Golgi (panel superior) 0
contra los microtubulos (panel
luJar. Como discutiremos mas adelante, la red es ahamente dim1mica y funciona
il/ferior). En este caso las prote!nas
con diversos tipos de miosinas que controlan los movimientos de la sllperficie
motoras muevell el complejo de Golgi
celular. La localizacion y orientaci6n de los filamentos de actina corticales esta hada su posici6n cerca del
controlada mediante lugares de nucleaci6n en la membrana plasmatica; dislin- cemrosoma. (B. por cortesia de Mark
las regiones de la membrana dirigen la formaci6n de diferentes estruCluras ba- Terasaki y Lan Bo Chen; C, por cortesfa
sadas en los filamenlOS de actina. de Viki Allan y Thomas Kreis.)
Delerminadas senales extracelulares que afeclan a una parle de la superficie
celular pueden provocar reeSlruCluraciones locales del c6rtex de aClina debajo
de la zona correspondiente de la membrana pJasmtttica. De manera recfproca, la
organizacion del c6rtex de actina puede tener una influencia delerminada en el
comportamiento de la membrana plasmatica que esta por encima. Mecanismos
basados en los nJamenlos de actina corticales, pueden, por ejemplo, empujar la
membrana plasmtitica hacia fuera rormando largas y finas microespi"as 0 exlen-
50S lamelipodios, 0 pueden invaginar Ja membrana duranle la divisi6n celular
(Figura 16-9).
En casas extremos el c6rtex de actina puede inlegrar los movimienlos de
una celula animal sobre su superficie complela y mantener la polaridad celular

La naluraJeza del ciloesqueleto 849

 Figura 16-9 Amenudo los marnentos
de actina conRguran la membrana
plasm:hlca de las celulas anlmales.
Tres ejemplos de cambios en la
membrana plasmatica provocados por
la red cortical de filamenlos de aClina.
(A) Protrusiones delgadas y
punliagudas como las microespinas se
forman en la superficie de las dlulas
por el ensamblaje de haces de
flJamenlos de actina anclados en el
c6rtexcelular. (8) Extensiones
parecidas a sabanas,lIamadas
lamelipodios, tambien se forman en la
superficie. en este caso sostenidas por
181
redes alargadas de filamentos de
actina en vez de haees discretos.
(e) lnvaginaciones de la superficie
independientemente de la rcd microtubular. Esto ha sido i1ustrado mediante ex- celular, iguales que las que se
pcrimentos en los cuales se han utilizado celulas no pigmentadas de las escamas producen durante la divisi6n de la
de los peces. Estas ct"Hulas epidermicas, conocidas como qllcrari/locifOS, migran eelula, producidas por un haz
en cultivo rapidamentc y de una manera poco corriente, viajando a velocidades eontrrtclil de filamentos de actina
iguales 0 superiores a 30 }.Im/minuto. Inmunomarcajes utiliz.'mdo anticuerpos asociado con la protefna molora
demucstran que los filamentos intermedios y los micron.ibulos se encuentran miosina.
5610 en la regi6n posterior alrededor del Ilucleo. mientras que el exuemo exten-
dido de la celula es rico en filamentos de actina (Figura 16-10). Ademtls, las celu-
las traladas con una droga que despolimeriza los microtiibulos migran a la m.is-
rna velocidad que las no {ratadas, mientras que 13 migraci6n se detiene
totalmente si las relulas son tratadas con agentes que interfieren con los fila-
mentos de actina. Evidentemente. los filamentos de actina (actuando con otras
protefnas) son capaces de provocar el movimienlo de los queratinocilos sobre
una superficie y tambicn de mantener su morfologfa di(erenciaJ y su polaridad;
los detalles del mecanismo implicado no estan aun tolalmente esclarecidos.

Normalment.e los filamentos de actina y los microtubuJos

actuan juntos polarizando Ja celuJa6
En una celula viva los tres tipos mayoritarios de filamentos del citoesqueleto es-
t:in cOllectados los lInos con los Olros y sus fllnciones est:in coordinadas. La dis- Figura 16-10 La epidermis de los
tribuci6n de los filamenlOs intermedios en una celula epitclial en cultivo, par peces esld formada por celulas
mlgratorias. (Al Micrograffas 6!>ticas
de un queratinocito en cultivo
tomadas a illlervalos de 15 segundos.
La eclula esta migrando
aproximadamente a 15llm/segundo.
(8) Queralinocito observado con el
microscopio elccn6nico de barrido,
que mUC$lra su extremo en avance
ahameme extendido, ycon el cuerpo
celular que comiene el nucleo cerca
del extrema final de la celula
(O) Oistribuci6n de los fLIamenloS del
citaesquelelo en esle tipo inusual de
ct!:lula. Los filamentos de actina (rojo)
lIenan el margen enendido de la c~lula
y son los responsables de su
migraci6n. Los microrubulos (verde) y
los filamentos inlermedios (a.wf) eSlan
restringidos en la zona pr6xima al
nucleo. (Micrografia por cortes(a de
lei
juliellee.)

850 Capftulo 16: EI cltoesquclcto

 IAI

5e".1
localizada
regi6n npeci81ized.l
del C6r(8)<

Figura J 6-11 La polarlzacl6n de una celula T c1tot6xJca despues del

reconoclmlento de una celuJa diana. (A) Cambios en el citoesqueJeto de una
celula T cilOl6xica despues del contaclo con una ctlula diana. (8) Micrograffa
de inmunofiuorescencia en que la celula T (arriba) y su celula diana (abajo)
han sido marcadas con un anticuerpo contra los mlcrolubulos. En la celula T
el cemrosoma y los microlllbulos que irradian a partir de el est~n orienlados
hacia el punto de centaClo entre ambas celulas. En 13 celula diana el haz de
microtubulos no cstll polarizado. (B. reproducida de II. Geiger, D. Rosen, y G.
Berke, I. Cell BioI. 95:137-143. 1982, reproducido con permiso de copyright de
The Rockefeller Universily Press.)

ejemplo. puede verse radicalmente aherada 5i tratamos las celulas con una dro-
ga que provoca una despolimerizaci6n de los microlubulos: los filamentos inter-
medios, que normal mente sc distribuyen a 10 largo del citoplasma, se agmpan
en la regi6n cercana al nucleo. Existen diversas situadones en las cuales los mi-
crotubulos y los fiJamenros de actina acruan de una manera coordinada polari-
zando la celula entera. Discllliremos unicamenle un ejemplo: la muene de una
celula diana mediarizada por los Iinfocilos T citot6xicos.
Las celulas T cirot6xicas matan a olras celulas que lIevan amfgenos extranos
en su superficie. Esto conslituye una parte importante de la respuesta inmune
de los vertebrados a una infecci6n, como se discute en el Capftulo 23. Cllundo
los receplOres en la sllperficie de la celula T reconocen un antfgena en la sllperfi-
cie de la c~lula diana, la senal de los receprores hacia el cdrtex subyacenre de la
celula T altera el ciloesqueleto de diversas maneras. Primero, las proremas aso-
ciadas con los filamenros de actina en la celula T reorganizan la zona de conlac-
ro entre las dos celulas. Entonces, el cenlrosoma se reorienta y se mueve junto a
los microtubulos hacta la zona de contaclo entre la celula T y la celula diana (Fi-
gura 16-IIA). Los micron1bulos, colocan el complejo de Goigi correclamenle de-
bajo de la zona de comacto, dirigiendo la maquinaria asesina -que esla asociada
con una secreci6n del complejo de Golgi- hacia la celula diana.
En esle ejemplo y en muchos orros, una ceJula se conviene en polarizada de
la manera siguienle. Primero, la membrana plasmatica detecta a1guna diferencia
en un lado de la celula y genera una senallransmembrana. EI c6rlex de actina se
rcorganiza localmente debajo de la membrana afectada, con 10 cual el centroso-
rna se desplaza hacia esta zona de la celula, probablemelue con un movimiento
de los micrOlubuJos. Entonces, el cemrosoma posiciona los sistemas endomem-
branosos de una manera polarizada. EI resuJlado final es Ulla celula con Ull foro
direccional muy marcado (Figura 16-11 B).

Las funciones del citoesqueJeto son diffciles de estudiar

Aunque las prindpales subunidades de los tres tipos de polfmeros del ciloesqlle-
lelo, asf como los muchos ciemos de prolefnas que se asocian con ellos. han sido
aislados y su secuencia de aminoacidos delerminada. ha sido diffcil establecer
c6mo funcionan estas protefnas deniro de la c~luJa. Independientemente de la
complejidad que implica la exlslencia de un m1mero enomle de prolefnas impli-
cadas, la comprensi6n del citoesqueleto se ve dificuJtada por dos hechos princi-

La naruraleza del ciloesquelelo 851

 -
pales. Primcro, el fUllcionamienlo del ciloesqueleto depende de un ensamblaje
complejo de protc{nas. que se unen ~n grupos cooperativos a los filamcntos del
citoesqucleto. Es rehitivamente senc1no estudiar el cfecto sabre un liIamenlO de
una unica prolc{na accesoria, pero es mucha mas complejo analizar los creclos
de un conjullto de muchas prolcfnas distintas. Este problema no se encuentra
unicamente en el esturlio del citoesqueleto, pero aquf es mucha mas acusado.
En segundo lugar, las funciones del ciloesqueleto son mucha mas diffcUes de
analizar que las funciones de alros grandes grupos de complejos proteicos. EI
proceso de sfnlesis del RNA y del DNA, por ejemplo, que inc1uye la rormaci6n de
nuevos polfmeros unidos mediante enlaces covalentes, puede ser f<1cihnenle
analizado jtJ vitro, en pane porque los productos de las reacciones jtJ vjtro se
pueden medir de una manera facil y comparar con los productos correspon-
dientes fabricados en la c~lula. EI ciloesquelelo, por el conlrario, ejerce fuerzas y
provoca movimientos sin cambios qufmicos imponantes. EsIO hace que sea es-
pecialmente dificil esludiar la funci6n de un sislema citoesquel~lico reconS(ilUi-
do in vitro a partir de los componentes purificados.

Resumen
Una red de protefnns jilnmentostU conocidm con el nombre de citonqueleto orga-
nizan espadalmente el citoplasma de las dlulns eucariotas. Bta red esuf fonnadn
por tres tipos de jilametltos prindpales: microtlib"ws. jilnme1ltos de acti,1a y jila-
mentos itltermediO$. Los microtlibulos SOli estnu;t14ras rigitlLu q,'e, getleralmellte.
dispomm de un extremo unido al centrosoma y otro exrumo Ubre en el dtoplasnm
En la mayorin de dlula$ los microtdbulos son estmcturas alIamente dlndmlca.s
ql4e altenlatllKlmente CTeCen y se acortan mediante In alUci6n y In plrdlda de s"b-
unidatks de tllbulina_ Algunas protefnu motoras se tksplazan en ambas dlrecclo-
nes a 10 Inrgo de los mlcrohibulos, tmnsportando orgdnulos membranosos especfJi-
cos Ilaela sus localJuu;lones deternrinadns en In dluln. Losjilame,IlOS de actIna son
tambii" eslrllctl4ras dl"dmlcas, pera 1l0nJudmetJte!onmm luu;es 0 redes y 110 flla.-
mentos simples. Ulla m/Hl llamada c6rtex se forma justo debajo de la membralla
plasmdtlca a partir de los jilnmelltos de actilla y de tIIltI variedad i",portatlte de
protefr,as que se Ime" a la actilla. Esta mpa rica en actilla colltrala la f01711(1 y los
movlmlentos sl~perflclalesde In mayoria de las dlulas animales. Losjllamelllos 111-
termedlos son relatilKlmellte reslste,ttes, eslructuras a modo de cllerdns que propor-
clonat' ,wa esttdJllidtu/ ",ectfnlca a la dlulLu y tejidos. Los (res tlpos de jllame"tos
esttf"l"terconectatlos y SIts /lmclones coordlnadns.

Filamentos intermedios'
Los filamentos inlermedios son fibras proleicas resistentes y duraderas que se
encuentran en el citoplasma de la mayorfa de las celuJas eucariOlas superiores.
Reciben el nombre de "inlermedios~ porque en las micrograffas clectr6nicas Sll
diametro aparenle (8-10 nm) se encuentra entre el de los finos filamentos de
actina y el de los grllesos filamentos de miosina de las celulas musculares. don-
de se descubrieron por vez primera (su diametro es tambien intermedio entre
el de los fLIamentos de actina y el de los microtubuJos). En la mayorfa de celulas 2O,m
animales. una exlensa red de filamentos intermedios rodea al nucleo y se ex-
Figura 16-12 FUamenlos lntennedlos
tiende desde esta zona hacia la perireria celular. donde illleracciona con la
en el c1toplasma de una dHula de un
membrana plasmalica (Figura 16-12). Ademas, UD armaz6n densamente lejido
telldo en cultJvo. Se marcaron celulas
de fiJamentos intermedios -Ia lamina nucJear- se encuentra debajo de la envoi- epi!eliales de rata canguro (celulas
lura del nudeo. PtJ(2) en interfase, con anticuerpos
los filamelllos intennedios son paniculannente abundallles en las celulas contra uno de los tipas de filamentos
que estan sometidas a imponantes tensiones meeanicas. Son muy abundanles, inlennedios (llamados queratinasl Yse
por ejemplo, en los epilelios, donde ronnan pane de las uniones especializadas observaron al microscopio de
entre dos cellilas vecinas, a 10 largo de los axones de las celulas nerviosas. y en fluorescencla. (por conesfa de Mary
tOOos los tipos de celulas musculares. Cuando las celulas se tratan con soludo- Osborn.)

852 CapftuJo t6: El ciloesqueleto

 dominlo cent1en hlillce (l

"".m~_~ ~. .",.,=~=_~.,m..o...\rboxilo
vim.ntin.
~-~-~------"~=,,
protein.. de 1o. neurofil.mentos

l.minln.. nucl. . . .
L-...J I ! L...J " ---'
regiones que contienen I.. -MelWncl.. en httplld.- Ihepl.d repEl.tI)

nes salinas concentradas 0 bien con delergentes no i6nicos, los filamemos inter- Flgun 16-13 Organizacl6ndelos
medios se conservan mientras que los elementos restames del citoesqueleto son dornini05 de los mon6meros
solubilil.ados. De hecho. el termino "citoesqueleto" se utiliz6 original mente para protelcos de 105 filamentos
describir a esle sistema fibroso tan estable e insoluble. lntermedJos. La mayorla de las
prolelilas de los filamentos
inlennedios disponen de una regi6n
Los fLlamentos intermedios son polfmeros de protefuas fibrosas' centJal similar que tiene generalmente
unos 310 aminoacidos yque forma
A difcrencia de la actina y la tubulina, que son protefnas globulares, los tipos
una larga helice a. Los dominios
principales de mon6meros proteicos de los filamentos intennedios son mohku- amino terminal y carboxilo terminal
las fibrosas muy a1argadas que tienen una cabeza amino termjnal, una cola car- no presentan esta estructura en helice
boxilo lerminal, y un dominio cemral a modo de varilJa. Esle dominio central (l y son variables en cuanto a tamano y
conSla de una regi6n extensa de heLice a que contiene largos landems repelidos secuencia en los distintos lipos de
de secuencias aminoacfdicas dislinlas, que redben el nombre de "repericiotles filamentos intennedios.
ellllepcada". Como disculimos en el Capitulo 3, esta secuencia de 7 aminoacidos
permite la formaci6n de dfmeros enroUados entre dos helices Cl paralelas (vease
Figura 3-48). Otros tipos de prolefnas a1argadas del citoesqueleto con eslruClu-
ras dimericas enrolladas, como por ejemplo la tropomiosina y la cola de la mio-
sina, conliencn largas tiras de repeliciones en heplada, como discutJremos m<1s
adelantc.
En la siguicnte elapa dcl cnsamblaje, dos de los dfmeros enrollados interac-
cionan anliparalelamente formando un leuamero (Figura 16-14). Se encuentran
pequenas cantidades de letrameros solubles en las celulas, 10 cual sugiere que la
subunidad lelram~rica constiluye la unidad fundamental para el ensamblaje de
los lilamenlQS intermedios. La disposici6n antiparalela de los dfmeros implica
que el telramero y, por consiguiente, el filamento que forma, cs una estructura
no polarizada -eSIO es, es la misma estructura en ambos extremos y es sim~lrica
en toda sulongiwd. Esto distingue los filamentos intermedios de los microttibu-
los y los filamentos de aClina, que son estructuras polarizadas, cuya funci6n de-
pende de csta polaridad. La Clapa final del ensamblaje de los filamenlOS intenne-
dios no esta atin completamente caracterizada, pero parece que los tet.r<1meros
se afiaden al filamento inlennedio en crecimiento mediante una reacei6n de
uni6n sencilla, alineandose a 10 largo del eje del filamento y uni~ndose siguiendo
un patr6n helicoidal (v~ase Figura 16-14).
EI dominio centra] a modo de varilla, cuya estructura es parecida en todos
los tipos de filamemos intennedios. inlerviene en las interacciones lalerales que
forma el filamemo ensamblado. Los dominios g10buJares de la cabeza y de la
cola pueden variar significativamente tanto en ellamaflo como en la secuencia
de aminoacidos. sin que eSlO afecle la eSlruClUra axial basica del ftJamento; a
menudo se proyeclan desde la superficie del fiJamento e intervienen en las unio
nes con olroS componentes. Esle diseflo experimental implica la existencia de
una sorprendente variedad de tamanos de las protefnas que los fonnan (desde
40000 a 200 000 daltons).
En la mayorfa de celulas, casi todas las proteinas de los filamentos intenne
dios se encuenlran totalmeme polimerizadas, con muy pocas subunidades te-

Filamenlos intermedios 853

 NH, eOOH

IAI !3-
, ~----.
regi6n en h(,lice 0:
~
NH, COOH

IB!
sobreenrollemiento dimllrico
NH, eOOH
I' "'om I

eOOH NH,
eOOH
0,5 urn !CI
t ~
eaCH NH2 NHl
~
eOOH
tetr.l.imero de dos dime'os sobreenrollados

101 dOs tatrtomaros empaquelados conjuntamente

tramericas lib res. Sin embargo, una celula puede controlar el ensamblaje de sus Figura 16-14 Modelohabltualde
filamenlos intermedios y decidir su cantidad, longifud y posici6n. Uno de los ensamblaJe de un fllamento Intennedlo.
mecanismos de control 5e basa en la fosforilaci6n de residuos de serina en el do- El mon6mero mostrado en (A) se empareja
con un mon6mero identico a el, fonnalldo
minic amino terminal de las protefnas de los filamentos intermedios. En un casa
un dfmero (Bl. de fonna que la regi6n
extrema, la fosforilaci6n de las subunidades proteicas que forman la lamina nu-
central--conservada- se alinea en paralclo y
clear provoca un desensamblaje tolal de los filamentos durante la mitosis; cuan- se cmpaqueta conjuntamet1le fommndo
do esta term ina, las serinas espedficas son desfosforiladas y se produce la for- un sobreenroLlamiemo. Entonccs, dos
maci6n de /lOUO de la lamina nuclear (vease Figura 12-18). Los filamentos dfmeros se alinean, lado contra lado, y
intermedios ciloplasmaticos pueden suffir tambien una reorganizaci6n radical fonnan un tetrarnem antiparalelo de cuatro
durante la mitosis como respuesta a algun tipo de senal extracelular. Aunque es cadenas polipeptfdicas (el. Dentm de cada
los cambios suelen ir acompanados de un incremento en la fosforilaci6n de las tetnimero los dfmeros estan dlstanciados
subunidades. otros factores pueden intervenir tam bien en este proceso. suficientemente uno can respccto a otto
pcmtitiendo la asociaci6n can otro
tetramero, como puede observarse en (D).
Las c~lulas epiteliales presentan una familia muy diversa En eJ filamento intennedio final de 19 nm
de filamentos de queratina9 los tetnimeros cstan unidos fonnando lUl
haz helicoidal (E). Se muestra Wla
En las celulas de los vertebrados, los filamentos intermedios citoplasmaticos elcctronmicrograffa del ftIamento final en
pueden agruparse en Ires clases: (1) filamentos de qlleratina, (2) filamelltos de vi- elmargen superior izquierdo. (Diagrama
mentifla y fllamentos relacionados COil la vimentina y (3) nellrofilamemos, cada basado en datos de Murray Stewart;
uno de los cllnles esta [armado por la polimerizaci6n de sus correspondicntes nticrogrnffa por cortcs(a de Roy Quinlan.)

854 Capitulo 16: El citoesqueleto

Tabla 16-1 Prlnclpales tlpos de protefnas de fLIamentos Intermedlos
en las celulas '1105 vertebrados
Tlpo de rnamento Componente polJpeptfdlco
lntermedlo (masa en dattons) Locallzacl6n celular
Laminas nucleares lamininas A, B, YC I~mina nuclear de las celuJas
(65000- 75 000) eucariotas
PrOlefnas vimentina (54 OOOJ muchas celulas de origen
relacionadas con mesenquimlitico, a menudo
la vimentina expresada lransitoriamente
durante el desarrollo
desmina (53 000) muscuJo
proleina glial acfdica celuJas g1iales (aslrocitos
fibrilar (SO 000) y celulas de Schwann)
periferina (66 000) neuronas
Queratinas lipo I (~cidas)
(40000- 70000)
1 celuJas epileliales y sus derivados
tipo II (neutrns/Msicas) (I'. ej., el pelo y las Ulias)
(40000-70000)
Filamentos protefnas de los neuronas
inlermedios neurofiIamentos NF-L,
neuronales NF-M yNF-H
(60 000 - 130000J

subunidades proleicas (fabla 16-1). la familia mas diversa de subunidades pro-

teicas la constituyen las queratlnas (tambien lIamadas citDqlleratinas), que for-
man mantentos dequeratlna, principalmeme en las celulas epiteliales. Hay mas
de 20 tipos distinlOS de querntinas en los epitelios humanos. AI menos, Olras 8
queralillas, lIamadas qlleratinas dllras. son especfficas del pelo y de las unas.
(Las queratinas de las c~lulas epiteliales. pelo, y uflas reciben lambiE!n elnombre
de a-queralinas para distinguirlas de las p-queratinas, evolulivamente distintas,
que se cncuenlran en las plumas de las aves y que presentan una CSlructura to-
tahnentc distinta que no disclitiremos en eSle capftlllo).
las querntinas se subdividen en dos tipos. si nos basamos en su secuencla de
aminoacidos: qllcrati1ws del tipo , (acidas) y quemtinQs del tipo II (llelltraslbdsi-
cas). Mediante expcrimentos de reensamblaje se ha encontrado que los hetcrodf-
meros formados par queratinas del tipo I y dellipo 11 pueden formar n1amentos
micntras que los homodfmeros no los forman, hecho que pcrmite cxplicar por
quE! los filamell10s de queratina son siempre hereropolfmeros formados par la
misma cantidad de polipE!ptidos de queratina del tipo I y del tipo II.
Cualquier celula epilelial puede disponer de una gran varied ad de querati-
nas, tadas elias copolimerizando en un unico sistema filamentoso de queratina.
Los epitelios mas simples, como los que encontramos en los embriones tempra-
nos a en algunos tejidos adultos como por ejemplo el hfgado. disponen de un
solo tipO de queratina del lipo I y uno solo lambicn de queratina del tipo II.
Olros CpilClios, como el de la lengua, el de la vejiga. y el de las ghlndulas sudorl-
paras. conlienen 6 0 ml1s tipos de queratinas -cuya combinaci6n particular de-
pende de la localizaci6n de la cE!lula dentro del 6rgano. Esta diversidad es aun
mas pronunciada en la piel, donde en las celuJas de las dislintas capas de la epi-
dermis se expresan mediante distintos tipos de queralinas (vease Figura 2219).
Existen tambicn queratinas que son caracterfSlicas de los epilelios en proLifera-
ci6n. Esta helerogeneidad de queratinas es muy util c1fnicamente: en el diagn6s-
lico de los dnceres epiteliales (carcinomas), el tipo concreto de queratinas que
se expresa pucde ser utilizado para detenninar el tejido epitelial a panir del cual
se ha origillado el tumor, 10 cUai puede servir de ayuda en el momento de deci-
dir el tipo de lralamiento que resultani mas efectivo.

Filamentos Intermedios 855

Muchas eclulas no epiteliales presentan sus propios filamentos
intermediT citoplasmaticos diferenciales 'o
A diferencia dc las queratinas, la vimenrina y las prQce(nas relacionadascofl fa vi-
mencina, pueden formar filamentos intennedios que son polrmeros de un linico
tipo de cspecie prOlcica. La vimentina es la proterna de los fiJamentos inlerme-
dios ciloplasm,Uicos mlls abundante y se encuentra en la mayorfa de celulas de
origen mcso<Jermico, incJuyendo fibroblastos, ululas endotelialcs, y celulas
sanguineas de la Ifnea blanca; ademas muchas celuJas expresan la vimenlina
transitoriamcnle durante el desarrollo. La desmina se encuentra principalmente
en las fibras muscularcs: se cncuenlra distribuida poc todo el citoplasma de las
fibras musculares lisas, y se une a las miofibrillas adyacentes (haces ordcnados
de actina y miosina filamentosas que discutiremos mas adelante) en las fibras
del mlisculo esqueletico y cardfaco. La prote(na glial acidicafibrilarfonna los fi-
lamenms gliales en los astrocitos del sistema nervioso central yen algunas celu-
las de Schwann de los nelVios perifericos (Figura 16-15). Todas estas protefnas
pueden polimeri7..ar correctamenle entre elias; en algunos lipos celulares adul-
tos se han enconlrado copolfmeros fonnados por vimentina y por prolefnas re-
lacionadas con la vimentina. Por el comrario, ninguna de estas proteinas copoli-
meriza con las queratinas: cuando queratinas y protefnas relacionadas can la
vimentina se exprcsan en la misma celula, fonnan sislemas filamentosos inde-
pendientes.
Las celulas nerviosas disponen de una variedad liniea de filamentos inter-
medios, que se expresan en disuntas regiones del sistema nervioso central en es.
(adios especfficos del desarrollo. Los neurofilamenros son los mlls abundantes;
se extienden a 10 largo dcl ax6n y fonnan su componente ciloesqueletieo prima-
rio, especialmente en las celulas nerviosas maduras. En los mamfferos, se han
descrito tres lipos de prole(nas de los neurofilamenros. Uamadas NF-L, NF-M Y
NF-H, debido a diferencias en su peso molecular (L de bajo, ~Iow'", M de medio,
"middle" y H de aha, ~high~, respeclivamente). Normalmenle los lfes tipos de
protefnas se encuentran en cada neurofilameoto. NF-M y NF- H tienen largas co-
las carboxilo terminalcs; se cree que se proyectan desde el eje del neurofilamen-
to y contribuyen a regular el espaciarniento lateral de los neurofilamelllos en el
ax6n (Figura 16-16).
Si marcamos lIna celliia en cultivo con un anticuerpo contra las protefnas
de los filamenlos intermedios del ciloplasma, podremos obsclVar una rcd deli-
cada de filamcntos fibrosos que envuelve el nucleo y se eXliende a traves del d-
toplasma hasla la membrana plasm,Hica (vease Figura 16-12), En las celulas epi-

Figura 16-15 Mlcrograf(a de

Inm unonuorescencla de flIamentos
gllBles en astrocltos cultlvados. Los
haces de filamentos intermedios
(verde) se han marcado con
anticuerpos contra la proteina glial
acfdica fibrilar. Los nudeos se han
marcado con un colorame azul de
union al DNA. (par conesfa de Nancy
L.. Kedersha.)

856 Capitulo 16: EI ciloesquelclo

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l00nm 250,m
neurofilamentOl

telinles, los filamentos de queralina eSlan unidos a las uniones celulares espe- Figura 16-16 Electronmlcrogranas
cializadas -los desmosol/las que unen celulas vccinas y los hemidesmosomas, de dos tlpas de flIamentos
que unen las celulas a In lamina basal (se disculcn en el Capftulo 19). Dado que Intermedlos en c~lulas del sistema
en cada celula los filamentos de queratina estan conectados a traves de los des- nervtoso. (A) Imagen de
neuTofilamentos preparados mediante
mosomas can las celulas vecinas, forman una red continua a lraves de todo el
congelacl6n Tapida y sublimaci6n
epitelio (Figura 16-17). De forma parecida, los filamentos de desmina se en-
profunda de un ax6n de una celula
cuentran a menudo anclados en las uniones cclulares especializadas de las fl nerviosa, mostrando el extraordinario
bras musculares. entrecruzamiento de los haces a traves
de puentes de protefna -una
La lamina nuclear esta constituida por un tipo especial de configuraci6n que probablemenle
proporciona una gran resistencia a la
protemas de filamentos intermedios: las lamininas ll
tensi6n en este largo aJM'!ndice celular.
La himlna nuclear es una red proteica que limita la superficie interna de la Las uniones cruzadas estan farmadas
membrana nuclear interna en las celulas eucariotas (Figura 16-18). Presenta un por largas extensiones no hdicoidaJes
grosor tfpico de 10-20 nm y estli interrumpida en la zona de los poros nucleares, del extremo carboxilo tenninaJ de las
permitiendo la libre entrada y salida de macromolttulas del nucleo. En los ma- protefnas lOis grandes del
mfferos la lamina nuclear esta formada por las laminlnas. proteinas hom610gas neurofilamento. (B) Imagen de
filamentos g1iaJes en una cetula glial
a las de los filamenros inlermedios. de las cuales difieren' al menos en cuatro
oblenida mediante congelaci6n n'ipida
puntos: (I) el dominio central en forma de vnrilla es alga Ollis largo (vease Figura
y sublimaci6n profunda ilustrando que
eSIOS filamentos son lisos y tienen
menos puentes cruzados.
(C) Elcclromicrograf(a convcncionltl
dc un corte de un ax6n que muCSlrll [ll
distancia de separaci6n regular dc los
ncurofilal11enlos, l11ucho l11ll.s
abundanles que los microtubulos. (A y
B, por cortesfa de Nobutaka I-Iirokawa;
C. por cortesfa de John Hopkins.)

Figura 16-17 Losrnamentosde

queratlna manllenen unldas las
Iulas, fonnando las capas celulares.
MicrografIa de inmunoOuorescencia
de una red de filamentos de queratina
en una monocapa de celulas
epiteliales en cultivo. Los filamelltos
de cada celula estan conectados
indirectamcnte con los de las cl!lulas
vcclnas, a travl!s de los desl11osomas.
(Porcortes(a de Michael K1ymkowslcy.l

Fllamel1los intermed.los 857

 complejo del CITOSOL
paro nuclear
membrana nuclear

NUCLEO
lA) 181

Figura 16-18 La Iimlna nuclear. (A) Dibujo esquemAtico que mueslra la Mmina nuclear a tra~de un corte en la regi6n
del poro nuclear. La lAmina estA asaciada con la cromatina y con la membrana nuclear lnlema. (8) E1ectronmicrografia
de una porci6n de la lAmina nuclear de un oocito de rana preparado por lIofilizacl6n y sombreado metalico. La lAmina
estA fannada por una red cuadrangular altamente organizada de fLIamentos intemledios, compuesta por lamininas
nucleares (no siempre tan altamente organizada como aqui se presenta). (C) E1eclf(mmicrograHa de dfmeros aislados de
laminlna, sombreados metdlicamente (marcadas como Ll. Presentan una fom\a general semejante a la miosina
muscular (marcados como M), con una cola en fonna de vari1Ia y das cabezas g1obulares. Sin embargo, son mucha
menores que las molecuJas de miasina. las cabezas globulares estAn farmadas por los dos largos dominios carboxilo
terminales. (8 y C. por cortesfa de Ueli Aebil.

16-13). (2) Presentan una seftal de transpone hacia el n(ideo que las dirige desde
el cilosol. donde son sintetizadas, hasla el nudeo. (3) Se ensamblan fonnando
una red bidimensional parecida a lIna l<tmina y necesilan de la asociaci6n de
otras protefnas para el ensamblaje. (4) La red que forman es extraordinariamen-
Ie dinmnica y r<tpidamenle se produce el desensamblaje al iniciarse la mitosis y
el reensamblaje cuando ~sta ha lerminado; como ya hemos mencionado. el des-
ensamblaje y reensamblaje vienen delenninados por la fosforilaci6n y desfosfo-
rilaci6n de algunos residuos de serina en las lamininas.
A diferencia de los microlubulos y de los filamentos de aClina, que se en-
cuentran en lodas las c~lulas eucariotas, los filamentos intermedios citoplasma
ticos han sido descritos s610 en animales pluricelulares, y en ellos no son necc
sarios en cada uno de los lipos celulares que los forman. Por ejemplo, las c~lulas
gliales especializadas del sistema nervioso cenlral que fabrican mielina no dis-
ponen de filamenlos itHermedios. Adem<ts, si desorganizamos los filamemos in-
lermedios de flbras musculares, flbroblastos 0 c~lulas epiteliales en cultivo. no
se produce ningtln creclo en el compoTlamiento celular.
Parece ser que la primera c1ase de protefnas de los filamenlos intermedios
que apareci6 en la evoluci6n fueron las lamininas nucleares y los diversos tipos
de f1lamentos intermedios ciwplasmaticos aparecieron m<ts adelante como
adaptaciones de esta forma primitiva. Las protefnas de los filamentos interme
dios en los invertebrados, por ejemplo, se parecen mucho m<ts a las lamininas
que a las protcfnas de los f1lamentos intermedios citoplasmaticos de los verte-
brados.

Los filamentos intermedios proporcionan estabilidad mecanica

a las celulas animaJes t2
Cada dfa disponemos de mayor m1mero de evidencias de que la funci6n princi-
pal de los ftJamentos inlermedios es la de soponar la lensi6n mccanica. En la
enfermedad gen~tica humana epidermolisis bullosa simple. las mutaciones en
los genes de las queralinas que se expresan nonnalmente en la capa basal de la
epidermis desorganizan la red de filamentos de citoqueratina en estas c~lulas.
transform<tndolas en c~luJas extremadamente sensibles a las lesiones mcc<tni
cas: una ligera presi6n puede provocar la return de las c~lulas basales mulanlCS,
y la piel se Ilena de ampollas en la zona afectada. Podemos provocar una situa
ci6n parecida en monos lransg~nicosque expresan queratinas mUantcs de esle
tipo (Figura 16-19). TaniO en humanos como en monos la epidennis puede ser

858 Capftulo 16: EI dtDeSqueleto

 -

celull bual dela epldermi

.
,,
.i '.

/
I'mlnl baul
hemidumosomas
ICI

tan fmgil que el individuo mutante puede morir por un trauma meclnico. Se flgural6-J9 Aparid6ndeampoUasen
cree que los filamenlos inlennedios citoplasmAlicos juegan un papel semejante Ia piel provocadas porun gen mutante
en las celulas no epiteliales. dequeratbla. Un gen mutanteque
La estruClura que presenlan los filamelllos imermedios es la ideal para de- codifica una quemtina truncada (sin
dominios amino y carboxiJo tenninales)
sarrollar este tipo de funciones mecanicas. Las subunidades fibrosas se asocian
ha sido expres:ldo en un rnl6n
de manera paralela formando haces superpuestos. 10 cual les permite resistir
trans~nico. La proteena defectuosase
tensiones mecAnicas mucho mas intensas que las que resisten los microtlibulos ensambla con las molecu!as de queratina
o los filamentos de actina (Figura 16-20). En la pie!. los nJamenlos de queratina nonnales ydesorganiza Ia red de
de las capas mas extemas de la epidermis se entrecmzan covalentemente entre filamentos de querntina en las capas
Sl y con protemas asociadas. y a medida que las celulas de la capa exterior van celu!ares basales. Micrografias 6pticas de
muriendo. las queratinas entrecruzadas persisten como la pane principal de 1a piel nonna! W y mutante (8) muestran
capa protectora externa del animal. Las celuJas epileliales especializadas de lu- que las ampoUas se producen a partir de
gares especfficos de la piel proporcionan variaciones regionales. y generan la ruplum de las celulas enla capa basal
apcndices superficiales tales como los pelos y las uoas. de [a cpidennis l11ulante. EI d[bujo en (el
Sin embargo, si la funci6n de los filamentos intermedios es simplementc la de tres celulas de la capa basal de la
de resiSlir las tensiones mectinicas en las celulas y lejidos, tpor que existen tan- epidermis mutantcobservadas mediante
tos tipos de subunidades proteicas? Adem;1s, tcuAI es la funci6n de los dominios microscopla electronica muestra que las
dlulas se rompcn entre eI nUcleoy los
variables de la cabeza y de 13 cola de estas proteinas? En la actualidad estas pre-
hemidesmosomas. que conectan los
guntas no pueden COntestarse delaUadamente, pero est<1. claro que la manera en lilamelllos de queratina con la lamina
que los filamentos intemledios se unen a otros componentes de la celula varia basal subyacente. (De PA Coulombe,
de un lipo celular a otro. Los filamentos de desmina que unen entre sf los bordes M.E. Hutton. R. Vassary E. Fuchs,). Cell
de las miofibrillas en las celuJas del rnuscuJo esqueletico deben presentar lllga- BioL 115:16611674, 1991, rcproducido
res de uni6n para proteinas especfficas asociadas a las miofibriJlas. Los neurofi- con penniso de copyright deThe
lamentos en los axones estan unidos entre Sl a lraves de sus dominios carboxilo Rockereller Univcrsity Press.)
terminales y forman un haz continuo de filamentos, a modo de cuerda de un
metro 0 mas de longirud. A1gunas queratinas estAn especializadas en la forma-

Figura 16-20 Propledades meconlcas de los polfmeros de actina, tubullna

yvlmentlna. Redes formadas por microtubuJos 0 filamentos de actina 0
filamenlos de vimentina. tOOas a In misma concentracion. fueron expuestas a
una fuena en un viscometro. y se calcul6 el gmdo de lension resultante. Los
resultados muestran que la red de microtubulos se defonna facilmente pero
que cuando 13 tension sobrepasa el 50% de su longitud original (indicada
mediante 1a estrella roja que estalln) se mmpen y empiezan a fluir sin Il"mite.
Los filamenlOs de actina son mucho mas rlgidos. pem se rompen facilmente.
Las redes de vimentin3. al contrario. se defonnan facilmente. pero a
diferencla de los microtl1bulos, sopoflan tenslones y esfuer.ros muy grandes
sin romperse. Los filarnentos de vtmentina son muy necesar[os para el
manlenim[ento de la lntegridad celular. (Adaplado de P. !amlley et al.,). Cell
BioI. 113:155-160. 1991. reprOOucldo con permiso de copyright de The
Rockefeller Uni\'crsity Press.} luet't. deformldor. - - -

FiJamentos intermedlos 859

ci6n de la capa externa protectora de la piel, dura y resisteme. mientras que
olras simplemente mantienen las tensiones que sufren los epiteJios en los cam-
bios de forma que se producen durante la morfog~nesis. Estas funciones dire-
renciales han de ser desarrolladas por las regiones variables de las distilllas pro-
teinas de los filamentos intermedios. que se proyectan desde la superficie del
fLIamento y delerminan su capacidad de uni6n a OlrOS componentes de la c~lula.
En este sentido. las regiones variables de las protefnas de los nJamentos interme-
dios realizan funciones parecidas a las de las protemas accesorias de los fila-
mentos de actina y de los microtubuJos. La diferencia esuiba en que las regiones
variables son parte integral de la subunidad del filarnento intermedio mientras
que las otras constituyen una protefna independiente.

Resumen
Los filA.menttu intermeditu son fuert.es, poUmeros de polipiptidos fibrosos, a modo

tk cuerda, que raisten tensiones y tksempeiUm un papel estructural meafnico en
IA. dlula. Se conoce,. di.stintas formas especfficas de filA.mentos intern,edios que di-
fieren en el tipo tk polipiptido que los forn,a.: entre las que se encuentran los filA.-
mentos tk qlleratinn tk las cillllas epiteliales, los neurofilLlmelitos de las cilulas
rrerviosas, los filLlmentos gl/ales tk los astrocitos y las cillllas de Schwa"", los filA.-
nlt!l1tos tk desm"", tie las fibrtu musculnres, y losfilamentos de vimenti1Ul de los fl-
broblastos y de otros nlllchos tipos celulLlres. Las lnm",inas nucleares, qlle form""
lLll4minn fibrosa sllbyacente a In envoltura nuclear, SOil Ima familia diferenre de
prote{nas tk los fllLlmetltos intermedios.
Los mondmeros de los di.st",tos tipos de fllamelltos internledios tkmm secuell-
citu de aminotfddos distintas y diJleren ell SIU pews molecrtlLlres. Sill embargo, to
dDs ellos preuntan un dominio celltral homd/ergo que, clUmdo dimerizn, fonna
una estructura tk sobree"rollamiellto rigido. Esras subullidades dimericns se aso-
cia" unas con otras fonlla"do tetrtfmeros simetricos, ws c,udes se e'lSambln" ell
haces SUperpllf!$toS formalldo el fllnmento intern,edio no polarizado. Los dominios
fibrosos de Ins sub",Jidadesforman el eJe estructural de losfilnmentos illtennedios,
mientras que los dominlos globllinres se proyectan hac/a el exterior. UnaflmcUm
de estos domillios variables puede ser la de penllitir a cadn tipo de Jllamellto illter-
medio la asociaci6" COli otms compo"e"tes especfflcos de la celllia y la de pos/c/o-
1Ulr estosfllamelltos ell elillgar adecuado dentm de la dlllla.

Microtubulos'3
Los microtubulos, como hemos vista, son polfmeros largos y rfgidos que se ex-
tienden a trav6s del citoplasma y dirigen la localizaci6n de los orgallulos delimi-
tados de membrana y de Olros componentes celulares. En este apanado discuti-
remos el ensamblajc de cstas importantes estructuras a partir de mol6culas de
tubulina y explicarcmos c6mo su polimerizaci6n y despolimerizaci6n cst;! COI1-
trolada por el nucleOtido GTP. A continuaci6n examinaremos c6mo algunos mi-
crotdbulos previamente scleccionados son estabilizados en 1a c~lula mediante
su asociaci6n a protefnas accesorias espedficas. Finalmente, discutiremos la im-
ponancia de los motores dcpendientes de microtubulos que transportan vesicu-
las membranosas y diversos complejos proteicos a 10 largo de los microllibulos.

Los microtubuJos son cilindros huecos formados por tubulina l4

Los mjcratubulos estan constituidos par moleculas de (ubullna, cada una de las
cuales es un hctcrOOfmero ronnado por dos subunidades globulares ruertemen-
te unidas entre sf. lIamadas a-lIIblllillil y p-tubulina. Aunque la tubulina eSla
presente en casi tOOas las c~lulas eucariotas. la fuente mas abundante para los
esrudios bioqufmicos es el cerebra de los venebrados. Los procedimiemos de
extracci6n recuperan de un 10 a un 20% de la prolefna soluble total del cerebra

860 CapflUlo 16: EI cltoesqueleto

 Figura 1621 Mlcrotubulos. (A) Eieclronmicrograffa de un microtubulo vislO (C)
en secci6n lransversaJ, con su anillo de 13 subunidades, cada una de las
cuales corresponde a una molocula de tubulina diferente (un helerodimero
a/~). (8) Crioelectronmicrograffa de un microlubulo ensamblado in vitro.
(C y OJ Oiagramas esquem4ticos de un microtiibulo, en los que se muestrn la
fonna en que las moloculas de lubulina se empaquelan entre sf fonnando la
pared cilfndrica. {C} mueslra las 13 molOCulas vistas en secci6n transversal.
(D) muestra una visi6n lateral de una corta secci6n de un microlubulo, con
las moleculas de tubulina alineadas fonnando largas hileras paralelas 0
18) (OJ pl"OIofilamentos
protofi/amemos. cada uno de los 13 prolofilamenlos esta compueslo por
series de moloculas de tubulina, cada una dc las cUlllcs es un hClerodfmero
alit Un rnicrotubulo es unn eSlructura polar, ya que cada uno de sus
extremos tlene una molecula de tubulina {IX 0 PI diferenle. (A, por cOrlesfa de
Richard Unck; B, por cortesla de Richard Wade; 0, dibujado a partir de datos
proporcionados por Joe Howard.)

en forma de tubulina, 10 cual reneja la elevada y poco usual densidad de micro-

tlibulos que exisle en los apendices alargados de las ct:lulas nerviosas.
Las molt:culas de tubulina, en sf mismas, son diversas. En los mamiJeros
existen como mfnimo seis farmas de a-lubuJina y un mlmero parecido de for-
mas de P-tubulina, cada una de las cuales esta codificada por un gen diSlinto.
Las dislintas formas de tubulina son muy parecidas, y IOOas elias copolimerizan
en ensayos in /litro, formando un mismo microtlibulo, aunque pueden encoo-
lrarse en distintas regiones de la ct:lula y lIevar a cabo fundones sutilmentc dis-
tintas. Por ejemplo, en seis neuronas especializadas que preselllan sensibilidad
por contacto del nemalOdo CaeflorlwlJditis elegans, los microtubulos estan for-
mados par una forma espedfica de l3-tubulina; las mutaciones en el gen que co-
difica esta proteina implican la pt:rdida de la sensibilidad par contacto especffi-
ca, sin ningtin efecto aparellle en otms funciones celulares.
Un microtubulo puede ser considerado como una cstrucrura cilindrica en la
cuallos heterodfmeros de rubulina estan empaquetados a1rededor de un nucleo
ceOlral, que aparece vado en las micrograffas electr6nicas. De una forma quiz.as
mas detallada, uno puede observar c6mo esta estruClura se construye a partir de
13 prOloftlamentos lineales, cada uno de los cuales esta formado por subunida-
des a1temadas de a- y p-rubuJina, dispuestos paralelamente formando un cilin-
dro (Figura 16-21). Dado que los 13 protonJamentos cstan alineados en paralelo
con la misma polaridad, los microtublilos son estructuras polares, y es posible
distinguir un extremo mas (de crecimiento rapido) y un extremo menos (de cre-
cimiento leoto).

Los microtubuJos son estructuras muy hibiles, sensibles

a drogas antirnit6ticas espedficas l5
Muchas de las disposiciones de los microtlibulos celulares son labiles y esta labi-
lidad es imprescindible para que puedan desarroUar su funci6n. Uno de los
ejemplos mas notables de este hecho es el huso mit6tico, que se forma desput!s
del desensamblaje de los microtUbulos aI comienzo de la mitosis. EI huso mit6tj
co es la diana de una gran variedad de drogas antimil6licas especificas que actuan
interfi.riendo en el recambio entre las subunidades de tubulina de los microtu-
bulos y el aeervo de tubulina libre. Una de estas drogas es la colclticina (Figura
1622), alcaloide que se extrae del azafran silvestre y que ha sido utilizada como
planta medicinal para el tratamiento de la gota desde la ~poca de los antiguos
egipcios. Cada l1lol~cllla de colchicina se une fuertemente a IIna moltkula de tll-
bulina e impide su polimerizaci6n, pero no puede 1I1lirsc a la tubulina una vez la
tubuJina ha polimerizado formando un micro(UbuJo. La cxposici6n de una celu

la en divisi6n a la colchicina, a la colcemida, droga fntimamente rcladonada
can eUa, produce una desaparici6n rapida del huso mit6tico, e indica que el
equilibrio qufmico se mantiene mediante el recambio continuo de subunidades

MicrotubuJos 861
 NH-C-CH l
I H
o o
HO

o O~-O
OCH. o
tuo!

entre los microtubulos del huso m1l6tico y el acervo de lUbulina Iibre. Debido a Flgul'll 16-22 Est.ructuras qufmkas
que la inlerrupci6n temporal de los microtubulos del huso mit6tico pravoca de lacolchldna ydel taxol. La
preferentemenle la muerte de celulas que se dividen de fonna anonnal. las dro- cokemida. una tercera droga, estoi
gas antimit6ticas. como la vinblastina y la vincristina (cuyos efeclOS son pareci fntimamente relacionada con la
dos a los de la colchicina), han side ampliamente utilizadas en el tratamienlo del oolchicina y en ella el gropo que se
cancer. muestra en amarillo esta substituido
por un -eHl _ Se une a la tubulina. pero
La droga taxol (Figura 1622), que se extrae de la coneza del tejo. liene un
a diferenda de la colchicina. su uni6n
efecto opuesto. Se une fuenemente a los rnicrotubulos y los estabiliza; cuando es rticilmenle reversible.
se afiade a celulas. provoca que muchas de las moleculas de tubulina Iibre se en-
samblen formando microtubulos_ La estabilizaci6n de los microtubulos con ta-
xol detiene la mitosis de las ctHulas en divisi6n, 10 cual indica que durante la mi-
tosis los microll1bulos deben ser capaces no 5610 de polimerizar sino tambien de
despolimerizar. Eltaxol ha sido tambien ampliamente utilizado como droga an
ticancerosa.

El alargamiento de un microtubulo es un proceso rlipido,

mientras que la nucleaci6n de un nuevo microtubulo
es un proceso lento l6
La polimerizaci6n y despolimerizaci6n de los microttibulos es compleja e inler
viene en procesos interesanles con importames papeles biol6gicos. Una buena
parte de los conocirnientos actuales ace rca del comportamiento dinamico de los
microl'ubulos ha sido obtenida en estudios de polimerizaci6n ill vitro a partir de
moleculas de tubulina purificadas. La tubulina pura polimeriza a 37C en ellubo
de ensayo, forlllando lllicrotubulos. siempre y cuando esten presentes tanto
Mg2. como GTP. Si seguimos In polimerizaci6n ya sea lllidiendo la luz dispersada
o a traves del microscopio, podremos observar una fase inicial (fase lag). des-
pues de la cual los microtubulos se forman n'ipidamente hasta Ilegar a un /livel
de polimerizaci6n determinado. La fase inicial se produce porque es mucho mas
fadl anadir moleculas de tubulina a un microtubulo existente, proceso Uamado
alargamiellto. que iniciar un nuevo microtubulo de flOVO. proceso Hamado fllI-
cfeaci61l.
Durante la fase de polimerizaci6n rapida, las concentraciones elevadas de
rubulina libre provocan que la polimerizaci6n de los microtubulos sea mas nipi
da que la despolimcrizaci6n (vease mas adelamel. Sin embargo. cuando se ha lie
gada al nivel de polimerizaci6n mas elevado. no toda la tubulina habra polimeri-
zado pueslO que las subunidades se estan disociando (despolimerizando) a partir
de los extremos de los microlubulos y. aI mismo riempo, ai'ladiendose a elias. La
velocidad de polimerizaci6n decae con el tiempo porque es proporcional a la
concentraci6n de tubulina libre; la concentraci6n de rubulina Iibre en el nivel
mas alto. en el cual las velocidades de poLimerizaci6n y despolimerizaci6n se en
cuenuan en equilibria. recibe el nombre de collcentraci6" crftica (Figura 16-23).
AI iniciar este capitulo vimos que nonnalmente en una celula los microtu-
bulos crecen a panir de un lugar especffico de nucleaci6n (generalmente el cen-

862 Caprtulo 16: El citoesqucleto
 .1.rgamknto
FIgura 16-23 Pollmerizacl6n de
"Xl tubulin. pura. Una mezcla de
IUbuiina, tamp6n y GTP se eoloca a
37"C en el tiempo cera. La eantidad de
micmnJbulo polimerizado, medida
mediante dispersi6n de luz, sigue una
mlcrotubulO con
,ubunid.de, eurva sigmoidal. Duranle la fase inicial
Intrlndo y (fase lag) las moleculas individuales de
Slllenda tubulina se asocian fonnando
I. agregados mClaestables, algunos de los
~ euales continuan y nuclean
<: ;
, E microtubulos. La rase lag relleja una
microtubulo en
:&
<:=
crecimiento barrera cinctica para este proceso de
nucleaci6n. Durante la fase n1pida de
~~
.--,
,.,
"" nlargamiento, Ins subunidadcs se
anaden a los extremos libres de los

. -
"'tl .!l! lubunidade.
#. E individuale. ..... microtubulos existentes. Durante la
rase de meseta, la polimerizaci6n y la
0."''''--:;0-", olig6meros
despolimerizaci6n estan en equilibrio
tiempo a 37"C ya que 1a eantidad de lubuHna Iibre ha
IIcgado a1 punto en que se ha
eonseguido la collcemraci6n cr(rica.
Para simplificllr, las subunidades que
trosorna); puesto que existe una barrera cinetica para la llucleaci6n en soluci6n, se aftaden y que se pierdcll de Ull
la polimerizaci6n de la tubulina se produce lmicamenle en eSle lugar. Como en microtubulo se muestran siempre en
el tubo de ensayo, no toda la tubulina de la celula se encuemra polimerizada. el mismo extremo.
Una fibroblasto t{pico dispone aproximadameme de una concemraci6n de IU-
bulina 20 micromolar (2 mg/ml), de la cual un 50% esta en los microtubulos y el
50% restame se encuemra Iibre.

Los dos extremos de un microtubuJo son diferentes

y crecen a velocidades diferentes l7
La polaridad estructwal de un microtubu.lo, reflejo de la orientaci6n regular de
las suhunidades de lubuJina, haee que los dos extremos del polfmero sean dis-
timos, 10 cual tiene un efecto profunda en su velocidad de crecimienlo. Si se
permite que moleculas de tubuJina purificada polimericen durante un cono pe-

Figura 16-24 E1cctronmlcrograffa

que muestra la poUmcrlzacion
prderenclal de tubullna ell los
extremos "mu" de los mlcmtl1bulos.
Un haz estable de microtubulos

I
oblenido del nuclco de un cilia (se

.
microtubulo
form.oo
"~
discute mas adelante) se ineuba con
subunidades de tubulina en
condiciones de polimerizaci6n. Los
micronibulos crecen mas ral)idamcllte
en el extrema "mas" del haz de
micrOlubulos (extrema que se
encuentra sobre el haz en esta figural.
(Por conesfa de Gary Borisy.l

Mlcrol1.1bulos 863
 Figunr. 16-25 Polarldad de 105 mierotubulos puesta de man16.esto por el
metodo de "de<:oracldn con ganchos". En esta electronmicrograffa IOdos los
micron1bulos (vistos en secci6n transversal) tienen la ntisma orientaci6n. Los
pequci'ios ganehos, rormados par la tubulina que se ha ai'iadido, se eurvan
siguielldo el sentido de las agujas del reloj,lo eual indica que los
mierotubulos se estAn observando desde el extremo -mlis~ hacia el extremo
~menos~. La polaridad de los microll1bulos tambien se puededetcrminar
mediante Is decoracl6n con moleculas de dinefna {no se muestra aquO. (Por
cortesfa de Ursula Euteneuer.)

rfodo de tiempo en los extremos de fragmemos de microtubulos estables y en-

tonces se examina la mezcla aI microscopio electr6nico puede observarse que
un extrema se a1arga aI menos a una velocidad rres veces superior a la del ouo
(Figura 16-24). Por ello. el extrema de crecimiento r<ipido se defini6 entonees
como el extrema mlis y el otro como el extrema menas.
Es posible detectar la polaridad de los micronibulos en secci6n transversal
anadiendo mollkulas de tubulina libre a microtubulos preexistenles: en condi-
ciones especiales los mon6meros de tubulina no se incorporan a los extremos de 0.2 11m
los micrott1bulos sino a los lados. formando Iminas de protofilamentos curva-
dos. Estas laminas observadas en secci6n transversal parecen pequeflos ganchos
y. dependiendo de la orientaci6n del micrott1bulo. siguen la misma direcci6n de
las agujas del reloj a van en sentido conuario (Figura 16-25). De esta forma se ha
demostrado que en una ctHuJa. los extremos mas de los microtubuJos se extien-
den a partir de los lugares de nuc1eaci6n de los micrott1bulos como por ejemplo
el centrosoma, los polos del huso mit6tico a el corpusculo basal de un cilio (Fi-
gura 16-26).
~1uI. en interf...

Los centrosomas son ellugar primario de nucleaci6n --~

de los microtubulos en las c~lulas animales l8
En el citoplasma de una celula interfasica podemos observar los microtubulos
mediante tinci6n de la celula con anticuerpos anti-tubulina Ouorescentes, des-
pues de que las celulas hayan sido fijadas. Se observa una elevada densidad de
microtubulos alrededor del nueleo. desde donde irradian hacia la periferia celu-
lar. en forma de flnas hebras (Figura 16-27). EI origen de los microtubulos se etllula elliada
puede observar elaramente si estos se despolimerizan primero can colcemida y
eilio/fl.gelo
luego se permite su repolimerlzaci6n despues dellavado de la droga. Los nuevos
microtubulos crecen a partir del centrosoma y forman una estructura con apa
riencia de estrella Uamada lister y entonces se a1argan hacia la periferia celular
hasta que se restablece su distribuci6n inicial (Figura 16-28). Si los microtubulos
de celulas en cultivo se ~decoran" con ganchos de tubulina para determinar su
polaridad. se observa que t'Odos rienen sus extremos ~mas~, alejado del centroso-
ma, 10 cual indica que est'e centro organizador dene la capacidad de nuelear la ~Iul. en divisi6n polo del
polimerizaci6n de los microtubulos can una polaridad especffica. "'W
En la mayorfa de c~lulas ani males el centrosoma es el centro organizador de
microtubulos mas importante. Durante la interfase se localiza en la proximidad
del nucleo, muy cercano a la superficie extema de Ja envoltura nuclear. Inmer
sas en el centrosoma se encuentran un par de estructuras cilJndricas, dispuestas
en angulo recto una respecto a otTa. en un configuraci6n en forma de L Son los
cenrrlolos. que discutiremos mas adelante. EI centrosoma se duplica y se d.ivide
en dos partes iguales durante la interfase de manera que cada mitad contiene un
eelul. nerviou

Flgun 16-26 Orle:nlacl6n de los mlcrolubulos en las celulas. Nonnalmenle

los extremos menos~ de los micronibulos se hallan embebidos en un centro
organizador de microu1bulos. mientras que los enremos ~m4s~ se hallan
cerca de Is membrana plasmlitica.

864 CapftuJo 16: El c1toesquelelo

 Figura 16-27 Distribucl6n Inlerfulca
de 10$ mlcmtdbulos en un ftbroblaslo
en cultivo. Los microtubulos (en
!Jerde) han sido marcados con un
anticuerpo Contra la tubulina; el
nucleo celular (en azul) se ha marcado
con un colorante Ouorescenle que se
une aJ DNA. (Por conesla de Nancy 1..
Kedersha.)

~
10um

par de centriolos duplicados. Estos dos cemrosomas hijos se dirigen hacia Jados
opuestos del nucleo al empezar la mitosis. y forman los dos polos del huso mit6-
tieo (vease Figura 18-5).
Durante la interfase y la melafase se distingue una regi6n de citoplasma
mucha mas ascura rodeando cada par de centrfolos; en las mejores electromni-
crograffas se puede distinguir en eSla regi6n una red de pequei"las fibras (Figura
1629A). Es el material pericentrlolar, 0 maIm del cenlrosoma, yes la regi6n
del centrosoma que nuclea la polimerizaci6n de los microtubulos. La composi-
ci6n proteica de la matriz del centrosoma 5610 es parcialmente conodda, igual
que el mecanisme a panir del cual se produce la nucleaci6n de los microtubu-
los. Sin embargo. sabemos que estli (armada por protefnas especfficas del cen
trosoma, incluyendo una forma minoritaria de la tubuLina, lIamada y-rubuli"a
(Figura 16-298), que puede interactuar con el dimero a/p,-tubulina colaborando
en la nucleaci6n de los microrubulos.
No todos los centros organizadores de microhibulos comienen centriolos.
En las celulas mit6ticas de plantas superiores, por ejemplo, los microtubulos
terminan en regiones eleclrodensas pobremente definidas, completamente des-
provistas de centrfolos. El huso mei6tieo de los OOcilOS de ral6n tampoco pre-
seota centriolos, aunque estos aparecen mas tarde en el cmbri6n en desarrollo.
En hongos y dialomeas el centro organizador de mierotubulos es una plaea lIa
mada corpusculo polar del huso, que se encuentra en la envoltura nuclear. A pc
sar de las diferencias morfol6gicas (Figura 16-30), lodos los centros organizada.
res contienen una matriz que nuclea la polimerizaci6n de los microlubulos, y
que normaJmente esla formada por y-tubuJina y otras prole(nas espedficas del
centrosoma. Asf pues, parece que el mecanismo molecular de la nucleaci6n de
los microhibulos se ha conservado notablemenre durante la evoluci6n.

Figura 16-28 Mlcrotlibul05crec:lendo a partir del centrosoma despu& de

retlrar I. colcemlda. MicrografJas de inmunonuorescencia que mueslran la
dlslribucl6n de los microtubulos en c(!lulas cuhlvadas. deleclados mediante
tincl6n can anticuerpos contra tubulina. En (A) se muestra una eelula normal
de un tejido en cultivo. Las celulas,que se muestran en (B) fueron tratadas
con colcemida durante I hora para despolimerizar sus microttibulos, y
posterlonnenle se penniti6 que se re<:uperaran: los microtubulos apare<:en
en primer lugar en una estruClura en forma de estrella, y luego se aJargan
hada la periferia de la celula. (A, por cortesfa de Eric Karsenti y Marc
Kirschner; B. de M. Osborn y K. Weber, Proc. Nad. Acad. Sci. USA 73:867-871,
1976.)

Mlcrotubulos 865
 Figura 1629 Lamatrlzdel
centrosoma. (A) E1ectronmicrogmffa
de un centrosoma en una preparaci6n
pUrificada. La matriz envuelve un
centrfolo en forma de barril yaparece
como un material fibroso que contiene
granulos finos. (8) Micrograffa 6ptica
de una celula humana dividiendose en
cultivo, tenida con un anlicuerpo
contra la ~-tubulina (verde) y con un
amicuerpo contra la y-tubulina (rajo),
una prolcfna que se localiza en el
centrosoma de las celulas de una gran
variedad de organismos. La
superposici6n del marcaje rojo y verde
provoca que las regiones que
contiencn la y-tubulina en los palos
del huso sean amari11as. (A, cortesfa dc
Stcphcn Fuller; B, conesfa de
M. Katherine Jungy Berl R. Oaklcy.)
En las celuJas animales los microtubulos se despolimerizan
y repoUmerizan continuamente l9
En Ulla celula, como por ejemplo un fibroblasto en cultivo, se produce un re-
cambio cominuo de la red de microlllbulos. La vida media de un microtUbulo
individual es aproximadameme de 10 minutos, miemras que Ja vida media de
una molecula de rubulina. desde su sfntesis hasta su degradaci6n protooJitica. es
de mas de 20 horas. Asf pues cada molecuta de tubulina panidpa en la fonna-
ci6n y desmantelamiento de muchos microl1.:ibulos durante su perfodo de vida,
proceso que puede ser csludiado mediante la observaci6n dirccta de celulas vi-
vas. As! por ejemplo. a una celula podemos inyectarle tubulina que ha side uni-
da covalentemente a un colorante nuorescenle y seguir. utilizando un microsco-
pia de fluorescenda, el componamienro de los microtubulos que incorporan la
tubulina marcada. Ahernauvameme. en algunas celulas muy eXlcndidas los mi-
crotubulos pueden observarse directamente. sin neccsidad de ningt.in tipo de
marcaje. lllmzando la microscopia de Contraste interferendal-diferencial video
amplificada (vease Figura 4-12). Cuando se sigue el componamiento de los mi
crotubulos mediante a1guno de estos metodos. se observa un fen6meno impor
lante. Los microtubulos individllales crecen hacia la periferia celular a una velo-
cidad constante durante un deno perfodo de tiempo y entonces de repente se

Figura 1630 Un centro organlzador

de mlcroll1bulos en una ce:lula de un
hongo. Electronmicrograffa del
corpusculo polar del huso en la
levadura. (Conesfa de John Kilmanin.)

866 Capftllio 16: EI citoesquc]cto l

 FIgura 16-31 DIn3micadetos
mlcroldbub en una c6uJa viva. Se ha
inyectado tubulina a un 6broblasto, que
ha sido ligada cova!entemente a
rodamina, de manera que
aproximadiUnetlte una subunidad de
tubulina de cada 10 de la relu1a esta
marcada con eI coknante nuorescente. Se
observa entonces la nuorescencia en un
extremo de Ja celula mediante lUl sistema
de imagen electr6nica extrenUldnmente
sensible. Debajo de las micrograffas se
muestr..lIl tr.tzos que pemlilen vcr los
microtubulos seleccionados mas
detalladamente. Podemos observar. por
ejcmplo, oomo eI microtlibulo I crece
primero y luego se aeona rnpidamente,
mientras que eI microtlibulo4 crece
continuamente. (De P.l. 5ammak yG.c.
7 Borisy,Nature332:724-736, 1988. 0 1988
Maanil1an Journals Ltd)

...... --
--
---
acortan rapidamellle hacia el celllrosama. Pueden acartarse parcial mente y en-
lanCes continuar el crecimienta, a desaparecer por completo, siendo substilUi-
los por un microtubulo distinto (Figura 16-30. Estas nuetuaciones de tamana
----
--
---
-

pueden abarcar algunos micr6melros de langirud e incluyen la palimerizaci6n y

--..
----
-

-----
despues la despolimerizaci6n de miles de subunidades de tubulina. Cuando se
han estudiado en un tubo de ensayo microlubulos purincados, se han podido
observar transiciones entre perfodos prolongados de polimerizaci6n y despoli-
merizaci6n (Figura 16-32). ESle comportamiento,lIamado iIJeslabiUdad dimfmi-
ca, juega un papel muy importante en el posicionamiento de los microtuhulos
enla celula, tal como discutiremos mas adelante. ----
----
---- - -

La hidr6lisis de GTP puede explicar la inestabilidad

de los microtubulos individuaJes20
La
din~mica

InestabUidad dlnamlca de los microtubulos necesita un aporte de energfa

para equilibrar el balance qu(mico entre la polimerizaci6n y la despolimcriza
ci6n --energ(a que proviene de la hidr6lisis de GTP. EI GTP se une ala subunidad
-- -
extrema
menos
Slim
-
extremo
"".
FIgura 16-32 lalnestabilidaddlnMtIca
f}-tubulina de la mol&:ula de tubulina heterodimerica y. cuando la mol&:ula de del ttedmlento de 'os microliibulos.
lubulina se incorpora aI extremo de un microtUbulo, esla mol&:ula de GTP es hi- AUClUaCiones de 13 k>ngitud de un
drolizada a GOP. (La subunidad (llubutina tambicn transporta GTP, pero no microtUbtdo en una soIuci6n de rubulina
puede ser inlercambiado por GTP Iibre y no es hidrolizado, por 10 eual puede pura observadas mediante microsoopia de
considerarse como una pane fija de la estructura proleica de la rubulina.) campo oscuro vfdeo-amplilicada. Se
Se ha estudiado el papel de la hidr61isis del GTP en la polimerizaci6n de los recogieron imagcnes del mismo
micron.ibulos, utilizando amUogos no hidrolizables del GTP. Las mol&:ulas de microtubulo a intervaJosde 10 2 minutos
y se presentaron siguiendo una secuenda
tuhulina que conticnen estos analogos 110 hidrolizablcs de GTP forman microlli.-
ordelmda en la panTalla del monilor.lm
bulos normahnente, 10 cual indica que la uni6n del nucle61ido es necesaria para
dos extremos del microtllbulo estuvicron
la polimerizaci6n del microtlibulo, pero Sll hidr6lisis no 10 es. Sin embargo, es- sometidos a dclos de acortamiento y
lOS microlubulos son anormalmente estables y no se despolimerizan igual que alargamiento. de fonna independiclIle,
los micrOlubulos nonnales cuando la concentraci6n de lubulina en el lluido que los siendo el extremo ~mas~ el que experi.
rodea es menor 0 cuando se tratan con eolchicina. As( pues. apareOlemeOle el ment6las mayores DUCluaciones. (De T.
papel nonnal de la hidr6Hsis del GTP es el de permiLir la despolimerizaci6n de Horio YIi. Hotani. Natllre 321:6()5.607,
los microtubulos dcbiJitando las uniones entre las suhunidades de rubulina. 1986.0 1986 Macmillan Journals Ltd)

Microlubulos 867
 Se cree que la inestabWdad dimimica es una consecuencia de la hidr61isis re-
FIgura 16-33 La hklr6lIsls del GTP
trasada del GTP despues del ensamblaje de la rubulina. Cuando un microtUbulo
despues de la pollmertzad6n
crece rnpidamente, la incorporaci6n de moJeculas de tubulina en el extrema del desestabllb:a los mictotdbulos. 8 amUisis
poHmero es mas rnpida que la velocidad de hidr6lisis del GTP que transportan. del crecimienlo y aconamiento de los
Esto impLica la formaci6n de un "casquete" de GTP en el extremo del micronibulo microlubulos in mlro sugiere eI siguiente
y. puestO que las mohkulas de rubulina que contienen GTP se unen unas a otras modelo para la inestabilidad dimimica.
con mayor afinidad que las que contienen GOP, el casquete de GTP estimula at (AJ La adicidn de los heterodimeros de
microtubulo a continuar su crecimiento. Por el contrario, cuando un microtUbulo tubulina transponando GTP a un extrernO
ha perdido su casquete de GTP -por ejemplo, si la velocidad de polimerizaci6n del pl'Q(ofllamento pro\"oca 50
baja lentamente- empezara a acortarse y luego tendera a seguir acorterndose. crecimiento en una conformaci6n lineal,
En la Figura 16-33 se muestra un modelo esquemiitico de los cambios es- 10 cual favorece eI empaquelamienlo en
tructurales que acompanan a la inestabiLidad diniimica. Algunos principios ge- la pared cilindrica del micron1buJo. es
door, 10 convieneen eslabiJizado. La
nerales que pueden apLicarse tanto a los filamentos de actina como a los micro-
hidr6lisis del GTP despues del ensamblaje
tubulos se discuten en el Panel 16-1, piiginas 882-883.
cambia la conformaci6n de las
Las celulas pueden modjficar la inestabilidad diniimica de sus microtubulos subunidades yel protofllamento tiende a
para prop6sitos especfficos. En cada fase M del cicio celular. por ejemplo, la ra- dcfonnarse en un fonna cuJVada que es
pidez con la que los microttibulos se forman y se rompen se ve incrementada, de menos capaz de empaquetarse en la
forma que los cromosomas pueden ser fiicilmente capturados por los microtu- pared del microtubulo. (B) En un
bulos en crecimiento y el huso mit6tico se forma con una gran rapidez (discuti- microtubulo intacto, los protofilamentos
do en el Capitulo 18). Contrariamente, cuando un celula se diferencia y adopta fonnados par subunldades que contienen
una morfologfa definida, la inestabilidad dinamica de sus microtubulos se supri- GOP son forades a adopt31 una
me mediante protefnas que se unen a los microtubulos y los estabilizan. impi- confonnaci6n lineal mediante los
diendo su despolimerizaci6n. La capacidad de estabilizar a los microtubulos en muchas enlaces Iaterales de la pared del
una configuraci6n particular proporciona un mecanisme muy imponante me- micronibulo, especialmente en eI
diante el cualla celula puede organizar su citoplasma, casquele eslable de subunidades que
conlienen GTP. La perdida del casquete
de GTP pennile que los prolofilamentos
La inestabilidad dimimica de los microtubulos proporciona queconlienen GOP se relajen y adoplen
un principio organizador para la morfogenesis celular2 1 su confonnaci6n curvada. Esto conduce a
trna disrupci6n progresiva del
En las celulas animales los microtubulos citoplasmaticos tienden a irradiar en rnicronibulo Yal desensamblaje final de
todas direcciones a partir del centrosoma, donde estern anclados sus extremos los protofilamenlQS, fonnando dfmeros
"menos", No obstante, la mayona de las celulas animales estan polarizadas, y el de IUbulina Iibres.

,dlmero de tubotin.

GTP Inlerc.mbl~ cuquete
deGTP
r
protom.mento recto I
III hidroll,i, ~I GTP CIImbi.l. conformKlon de I.
(
lIUbonldlld y debllit. el enlilCII en el pollmero
I
region meno.
nc.b'e~I

prolofilllmenio curvlldo I mlcrOlubulo

q~eontiene
deIpolimerizKiOn _do
tubulin.
I Unidolll GOP

,
rlelmblo GOP-GTP

~J CRECIMIENTO ACORTAMtENTO

'AI '81

ii
:......--..-
868 Capllulo 16: El citoesquelelo
L
 ellnlrosomll prOllllns qUlI forms un U5qUlIll1 FIKura 16-34 LaeslabUlzacldn
selec:tlva de los mlcroltibuJolJ puede
polartzar una aHula. Un micronJbulo
acabado de rormar 5610 persistinl. si
sus dos extrem05 estan protegidos de
la despolimerizaci6n. En las ctHulas,
105 extremos men05 de 105
IA' .......- - miCfOnJbulos generalmente estan
protegidos por los centros
organizadores, a partir de 105 cuales
crecen. los extremos mas son
ensamblaje y desensamblaje de las moleculas de tubuJina estan controlados es- inicialmente Iibres pero pueden ser
pacialmente de manera que predomina la extensi6n de los microtubulos hacia estabilizados por otras proternas. Aqul
regiones especfficas de la celula. Se desconoce como se consigue esta distribu- por ejemplo en (A) se representa una
ci6n, pero se cree que los mecanismos dependen de la inestabilidad dinamica relula no polarizada con nuevos
de los micronlbulos. microttibulos creciendo y
Hemos visto como ill vitro los micron1bulos individuales ticnden a existir en rompi~ndose en lodas direcciones. Los
uno de los dos estados posibles -de crecimiento regular 0 n\pido, y de desen- haces de microtubulos encuenlran
samblaje "catastr6fico"- y que los microtubulos en las celulas lambien existen entonces estructuras hipoU!llcas en
en una de estas dos formas. La inestabilidad inherente de los microtubulos con- una regi6n espedfica del c6rtex celular
que pueden unir (eslabilizar) los
tribuye a explicar c6mo pueden ser inducidos a crecer en direcciones especfficas
eXlremos mlls de los microtubulos (8l.
de la celula -par ejemplo, hacia el borde frontal de avance de la celula que se La estabilizaci6n selectiva de eslos
arrastra. La red de microtubulos que irradia a partir del centrosoma esta cam- microtubulos, que sucede a1 encontrar
biando continuamente ya que crecen nuevas nticrotubulos y reemplazan a otros estas estructuras, componara una
que se estan despolimerizando. Un microtubulo que crece desde un centrosoma redistribuci6n rapida de los haces de
puede ser estabiLizado si su extremo "mas" es estabilizado, 0 si se forma un cas- mlcrotubulos yconveI"tirn a la c~lula
quete. de manera que se impida su despolimerizaci6n. Si es recubierto por una en una rorma polarizada {C y DJ.
estructura de una regi6n particular de la celula, se establecera un punto de
uni6n relativamente estable entre esta estructura y el centrosoma. Asf pues, los
microtubulos originados en el centro organizador pueden estabilizarse selecti-
vamente por diferentes fen6menos en cualquier lugar de la celula. Se cree que la
polaridad celular esta determinada de esta manera, por medio de estructuras 0
factores desconocidos localizados en regiones particulares del c6rtex celular que
"capturan" los extremos mas de los microtubulos (Figura 16-34).
Tal como discutiremos a continuaci6n, en muchas celulas la estabilizaci6n
inidal de los extremos mas de los microtubulos se consolida. produciendose
una polarizaci6n mas permanenle de la misma.

Los microtubulos sufren una lenta "maduraci6n"

como resultado de modificaciones post-traduccionaJes
de sus subunidades de tubulina 22
Las subunidades de tubuJina pueden ser modificadas covalentemente despues
de su polimerizaci6n. Dos de estas modificaciones son especialmeme interesan-
tes puesto que proporcionan una forma de reloj molecular, que puede usarse
para expLicar cuanto tiempo ha transcurrido desde que un microtubulo determi-
nado ha polimerizado. Estas modificaciones son la acetilaci6n de la a-tubulina
en un residuo determinado de Iisina y la eliminad6n de un residua de tirosina
del extremo carboxilo terminal de la a-rubulina. Ambas, acetilacion y destirosi-
lIadon, son reacciones enzimaticas lentas que tienen lugar 5610 en los microtu-
bulos y no se producen sobre moleculas de rubulina Iibres; ademas, su acci6n
revierte rnpidamente cuando la molecula de rubulina se despolimeriza. Asf pues,
cuanto mas tiempo haga que un microtubulo particular ha polimerizado. mayor
sera el porcentaje de sus subunidades que estan acetiladas y destirosinadas. Las
modificaciones tardan diversas horas en ptoducirse, de forma que en los fibto-
blastos, donde los microtubulos se recambian rapidamenle, relativamente po-
cos de ellos est<\n modificados. Al contrario, en los axones de las celulas nervio-
sas, la mayorfa de los microtubulos son estables par 10 que muchos de ellos se
hallan modificados.

Mlcroltibulos 869
 La acelilaci6n y 1a destirosinaci6n pueden ser delectadas mediante anti-
cuerpos especfficos, y proporcionan un indicio util de la estabilidad de los mi-
crotubulos en aquellas c~lulas en que es diffcil estudiar direclumente la din~mi
ca de los microtubulos. Se desconoce aun el papel de estas modificaciones, pera
se cree que proporcionan lugares de uni6n para prateinas especfficas asociadas
a microtubulos que podrian estabUizar los microltibulos maduros.

Las proteinas asociadas a microtubulos (MAP) se unen a los

microtubulos y modifican sus propiedades23
Mien(Tas la modificaci6n posHraduccional de la tubulina marca ciertos micro-
tubulos como "maduros" y puede aumentar su eslabilidad, las modificaciones
m~s exlendidas y vers:1tiles de los microtubulos son las conferidas por la uni6n
de orras proleillas. Estas prolelitas asociadas a los microllibulos (MAP, de Mi-
crotubule-Associated Proteins), actuan tanlo estabilizando los microtubulos
contra el desensamblaje como mediando su interacci6n con OITOS componentes
celulares. Como cabrfa esperar de la diversidad de funciones de los microtubu-
los, hay muchos tipos de MAP; algunas de elias eSI~n ampliamenre dislribuidas
en la mayorfa de c~lulas, mientras que otras se encuentran Ian 0010 en algunos
tipos celulares espccfficos.
Los dos principales tipos de MAP se pueden aislar a panir de cerebro, asocia-
das a microlubulos: las prote{llas HMW (proleinas de aho peso molecular, de High
Molecular Weight), que lienen pesos moleculares de 200 000 a 300 000 dallons 0
mas; y las proleinas tau, de pesos moleculares entre 55 000 Y 62 000 dallons. Am-
bos tipos de protefnas tienen dos dominjos, y 0010 uno de elias se une a los micro-
lubulos; se cree que el otro dominio permile a los miCTOtubulos unirse a ouos
componentes celulares (Figura L6-35). Pueslo que este dominio de uni6n a los
microrobulos se une simull~neamentea varias mollkulas de tubulina no polime-
rizada, estas MAP aceleran ill virro el proceso de nucleaci6n durante la polimeri-
zaci6n de la lubulina. Mucho mas importante es el hecho que estas MAP inhibcn
la disociaci6n de la lubulina de los extremos de los microltibulos, por 10 cual eSlas
protefnas los csl'abiliZ3Jl una vez formados. Anticuerpos contra la MAP-2 y cOnlra
lau muesrran que ambas proteinas se unen a 10 largo de tada la extensi6n de los
microlubulos cilOplasmMicos.
Se han aislado muchas alras MAP. A1gunas actuan como componcntes es-
truclurales y proporcionan uniones permanentes con otTOS componenles cclll-
lares, incluyendo otras partes del ciloesqueleto. Dims son rnOlores microtubula-
res. y utilizan la energfa que proporciona la hidr6lisis del ATP para desplazarsc n
10 largo de los microtubulos, tal y como disculiremos m~s adelanle.

Las MAP colaboran en la generaci6n de regiones citoplasmliticas

funcionalmente distintas 2
Muchas tipos celulares eSlabilizan especfficamenle los microrubulos en regia-
nes espccializadas del ciloplasma. Un ejemplo especialmente bien eSlUdiado cs Figura 1635 Una protefna asociada
a 105 microtubulo$.
(A) E1eclronmicrografia que muestra
los brazos laterales dismbuidos
unifomlcmente a 10 largo de un
microtubulo, y formados par una gran
protefna asociada a los microtubulos
",,~....-,micr01Ubulo
(denominada MAP-2) aislada a panir
MAP-2
del cerebro de los venebrados.
Porciones de la proterna se proyectan
hacia el exterior del microtubulo,
como se muestra esquematicamente
en IS). (MicrografJa electr6nica por
25flm conesfa de William Voter y Harold
10llnm lSI Erickson.)

870 CapfluJo 16: EI citoesqucLeto

el de las celulas nerviosas, que disponen de dos tipos de apendices -axollcsy dell-
dritas. Los axones, llniformes en cuanto a su diametro y que pueden tener varios
cenlfmelros de longitud, son los responsables de la propagaci6n de las sei'iales
clectricas a partir del soma cclular, mientras que las dendritas, que se distribuyen
radialmenle a partir del soma celuJar y que raramentc sobrepasan los 500 pm de
longilud, son las responsables de recibir la informaci6n electrica de otras neuro-
nas y retransmitirla al soma celular. La mayorfa de celulas nerviosas disponcn de
varias dendritas pero tienen solamenre un unico ax6n (vease Figura 11-20).
Ambos, axones y dendritas, estan formados por microlubulos, aunque can
disposiciones distinras. En los axones, los microtubuJos son muy largos y lodos
estc1n orientados con su extremo "mas~ aJejado del cuerpo celular. En las dendri-
tas, los microtubulos son mas cortos y su polaridad es mixla: algunos de los ex-
tremos ~mas" se alejan del cuerpo celuJar, mienrras que ouos dirigen su extrema
~mas" hacia eSle cuerpo celular. Cuando se estudia la distribuci6n de las MAP en
neuronas cultivadas mediante anlicuerpos especfficos, se observa c6mo ciertas
formas de la protefna lau se encuentran solamente en los axones; par otro lado,
la MAP-2 se encuentTa 0010 en las dendrilas y en el soma celuJar y esto1 totalmen-
te ausente en los axones (Figura 16-36). Axones y dendritas se diferencian tam-
bien en OIrOS aspectos: por ejemplo, en las dendritas y en el soma cclular, pero
no en los axones, se encuentran las molecuIas de mRNA. los ribosomas y algu-
nos tipos de canales i6nicos mientras que ciertos tipos de molecuJas implicadas Figura 16-36 UneJemplodela
compartlmentackSn dtoplasmthlta
en la adhesi6n celular y los canales de sodio implicados en la generaci6n de po-
de una c8ula nervtosa. Esla
tenciales de acci6n estan localizados selectivamente en los axones. De est'e
micrograffa muestra la distribucion de
modo tanto el citoplasma como la membrana plasmatica de las celulas nervio- la prolefna lau (!Jerde) yde la MAP-2
sas se dividen en comparrimiemos axonales y dendriticos. Estos compartimien- (namnja) en una neurona de
lOS en una celuJa individual se diferencian de los compartimienros delimitados hipocampo, en cuhivo. Mientras que
por membrana, tales como el relfculo endoplasmatico 0 las mitocondrias, en tau se encuenlra con6nada a1 axon,
que no estan separados los unos de los otros por membranas; de hecho, la dife- MAP-2 se encuemra localizada en el
rencia radica en la organizaci6n estructural y en los tipos de prote(nas que se en- soma celular y en las dendritas. EI
cuenlran presentes. anlicuerpo que se ha utilizado para
La formaci6n de los axones y de las dendritas durante la diferenciaci6n de detectar lau se une dnicamenle a tau
las celulas nerviosas se discute en el Capftulo 21. Aunque todavfa no conocemos desfosforilada, que se encuentra en el
c6mo se compartimentan el ciloplasma y la membrana plasmatica de una celula ax6n; olros datos muestran que lau
nerviosa, las MAP podrfan ser esenciales en este proceso. Cuando se inhibe la fosforiJada lambien puede encontrarse
en las dendritas. (Por conesfa de James
producci6n de la prolefna lau en nellronas cultivadas mediante tratamiento con
W. Mandell y Gary A. Banker.)
oligonucle61idos antisenlido especfficos, se suprime la formaci6n de los axones
mientras que no se ve afectada la de las dendritas. Contrariarnente, cuando celu-
las no neuronales son manipuladas geneticamenle de manera que se cxpresa cn
elias la prolcfna tau (que normal mente se expresa solamentc en las celulas ncr-
viosas), forman largos apendices parecidos a los axones, que est~n formados por
haces de microt(lbulos dispuestos con sus extremos "mas" parlicndo hacia fuera
del cuerpo celular, al igual que en las celuJas nerviosas.
Debido a que diferentes componenles de la celula se desplazan en distintas
dirccciones a 10 largo de los microWbulos, se puede postular que una difercncia
inicial en la polaridad de los micron:i.bulos esta generada por la distribuci6n dife-
rencial de las MAP. que comportaro1una diferencia posterior entre axones y den-
dritas. Las vesfculas secretoras, por ejemplo, se desplazan hacia el extremo mas
de los micrOlubulos y son lransportadas desdc el ax6n hasta los terminales ner-
viosos donde desarrollan su funci6n; contrariamenlc, si los ribosomas y los
mRNA se desplazan hacia el extremo menos de los microtubulos, podrian ser ex-
c1uidos de los axones.

La quinesina y la dinefna dirigen el movimiento

de los organuJos a 10 largo de los micron:ibuJos2S
A menudo ocurre que la aparici6n de una nueva tecnica experimemal ha com-
portado avances muy importantes en la biologfa celuJar. Con la microscopia 61'-
lica vfdeo-amplificada se ha mejorado la capacidad de observaci6n de objctos

Microtubulos 871
 eXlrllmo ml!is utrllmo meno,

quinllllinll dlnelnll
'AI

debUes y diminutos, 10 cual ha conduddo al descubrimicnto de los motares de Pigura 16-37 Protefnas motorasde
los microtubulos responsables del transporte de los organulos. Cuando fue posi- los mlcrotdbulos. Las quinesinas y las
ble visualizar los rnicrotubulos simples en Ull espedmen no fijado, los investiga- dinc[nas cilOI)lasmaticas son protc(nas
dores pudieron seguir el movimiento de los organulos y atras part feu las a 10 lar- motoras dc los microtubulos que
go de los microtubulos in vitro. AJternativamente, pudieron observar y medir el general mente se desplazan en
direcciones opuestas a 10 largo de un
deslizamiemo de microrubulos individuales sobre superficies de cristal recu-
microtubulo (Al. Estas protefnas (aquJ
biertas con extractos celulares. dibujadas a escala) son complejos
Estos estudios in vitro sirvieron para idenoficar y aislar dos opos de protef- compuestos por dos cadenas pesadas
nas motoras dependientes de microtubulos -las quinesinas y las dillelnas cilo- id~nticas y algunas cadenas Iigeras
pJasmdticas. las dlnemas ciloplasmlhlcas eSlan implicadas en el transporte de mas pequenas. Cada cadena pesada
los organulos y en la mitosis y estan muy fntimamente relacionadas con la dinel- forma una cabeza globular que une la
tlQ ciliar, prote(na motora de los cilios y flagelos (se djscute mas adelante). las protefna a los microtubulos de fonna
qulneslnas son mucho mas diversas que las dinefnas; algunos miembros de esta dependieme deATP. (8 yC)
familia estan implicados en el transporte de los organuJos en la mitosis y en la Electronmicrograffas de grabado
meiosis y en el transporte de las vesiculas sinapticas a 10 largo de los axones. por congelacl6n de una molOCuJa
Tanto las dinefnas citoplasmaocas como las quinesinas esth fonnadas por dos de quinesina (B1 y de una molecula de
cadenas pesadas y algunas cadenas ligeras. Cada cadena pesada contiene una dinefna citoplasmatica (C). Mientras la
cabeza globular muy conservada de uni6n al ATP y una cola formada por domi- quinesina y la dinefna citoplasmatica
tienen dos cabezas. la dinefna ciliar
nios a modo de varillas. Las dos cabezas globuJares son motores ATPasa que se (D) tiene Ires. (vease Figura 16-44).
unen a los micrott1bulos, mientras que las colas generalmente se unen a compo (Las micrograffas elCClr6nicas de
nel1les celulares espedficos, detcrminando asf la carga que cada protein a trans- grabado por congeJacion fueron
porta (Figura 16-37). preparadas por John Heuser.)

La velocidad y la direcci6n de desplazamiento a 10 largo

de los microtubulos son espedficos del dominio globular
de las protefnas motoras 26
La mayorfa de protefnas motoras conoddas se mueven unicamente en una di-
recci6n a 10 largo de los microtubulos -hada su extremo mas 0 hacia su extremo
menos. Esta direccionalidad se puede analizar in vitro si se permite que bolas de
poliestireno recubiertas con protefnas motoras se desplacen a 10 largo de micro-
tubulos polimerizados en centrosomas. Los microtlibulos asf dispuestos l.ienen
su extremo mas dirigido hacia al exterior y es fadl determinar la direcci6n del
movimiento con un microscopio 6ptico. Miemras que las bolas de poliestireno
que han side recubiertas con extractos crudos de citoplasma se mueven en am-
bas direcciones, las que han sido recubiertas con quinesina aislada de axones se
mueven unicamente hacia el extremo mas de los microtubulos. AJ contrario, bo-
Iitas recubiertas con dineinas citoplasmaticas se mueven hacia los extremos me-
nos de los microtubulos, embebidos en el centrosoma.
Estudios con axones nerviosos intactos han confirmado los resultados ob-
tenidos en los experimentos in /litro: la quinesina conduce, principalmente, el
movimiento de los organulos hacia el exterior del soma celular, mientras que la

L
dinefna citoplasmatica conduce el movimiento de los organulos desde los cxtre-

872 Capftulo 16: EI dloesquelclo

 Figura 16-38 Transporte vellcular en
dos dlrecc::lones. La quinesina y la
dinefna citoplasmatica transportan su
carga en direcciones Opueslas a 10
largo de los micrott:ibulos, Ial y como
se mueslra en un fibroblaslo tAl yen el
ax6n de una neurooa (8).

181
vesicula; con di.-r..... unid
vesieul. con quin"in. unid"
_ miCfotubulo

mos del terminal nervioso hacia el soma celular (Figura 16-38). La dinema cilo-
plasmatica se sinteliza, igual que el resto de protefnas, en el soma celular nervio
so, y entonces debe ser transportada en un estado no funcional hacia el terminal
nervioso antes de que em piece Sll funci6n transportando orgl'inulos de regreso al
cuerpo celular.
Sorprendememente no toctas las quinesinas desplazan los organulos hacia
el eXlTemo mas de los microulbulos. Por ejemplo en Drosophila, una quinesina
lIamada Ned, que es necesaria para la meiosis nonnal. se diferencia de la quine-
sina axonal tanto en la direcci6n como en la velocidad a la que se desplaza a 10
largo de los microrubulos: mienlnlS que la quinesina axonal se dirige hacia el ex
tremo m<1s a una velocidad aproximada de 2 p.m/segundo, la protema Ned 10
haee hacia el extremo menos a 0, I }lm/segundo. aproximadamente.
Se deseonoce el mecanismo mediante el cual estas protefnas convienen la
energfa de la hidr6lisis del ATP en movimiento vectorial. Seran necesarios estu-
dios estructluales mas detallados para determinar c6mo las cabezas g10bulares
tan fntimamente relacionadas de estas proteinas pueden desplazarse en direc-
ciones opuestas a 10 largo de los microtubulos y quizts estO apone algtln conoci-
mienlo sobre el proceso de transducci6n de energia.

Resumen
Los mlcrotlibulos SO" poUmeros rlglOOs de moleculas de tubullna. El ensamblnje se
produce mediante In adleMII al extrema libre de los mlcrotlibulos de moleculas de
t"bulina que contienen GTP y ql4e dis/Jane" de "" extrema fet extrema "miSs") qlfe
crece mds rdpidnmenre que el otro extremo fel "meJlOs"). Despuls del ensamblaje se
produce In hldrolisis del GTP y debillta los enlaces que malltlemm unldos a tos ml-
crohlbulos. Los mlcrohlbulos de creelmlento lento son muy Inestables y estan suje-
tos a un desensamblnje Mtastrojlcoi pueden estabitlzarse dentro de In cilula si Ul
asoclan con otras estructuras {Ille rec"bren sus dO$ extremos. Un centros organiza
dores de microt,ibulos, tates como los centrosomas, protegen lO$ extremO$ menos y
continllamente n1u:lean mrevos microtlibulos, que crecen en rodas direcciones. 5i
un nrtcroh1bulo enCirentTa Ilna esrnu::tum que estabillza su extremo "nu&" libn,
sem Ulh!ctivanrente retenido, mtentms que otro microtdbl4lo Ul despolinrerizaNf.. Se
cree que este proceso selectivo detemlina In posid6n tk 10$ haus tk microhiblllos
dentro tk In cilula.
Las subll"idades tk hlbllUna tk los microtdbuios que han sldo Ulltivanrente
estabillzada.s Ul modlfican mediante acetilad6n y destirosinaci6n. Se cree que estas
alteradones marean a tO$ microtdblllos como "maduros" y proporcionan lugares
tk u1lt6n pam las prote{"as espedjlc:as de ,,,,16n a los microtlibu/os (MAP), 10 C1ud
tambiln estabillza al microtdbulo [rente al desensamblaje. Las prote{nas motoms
mlcrotllbldares constlhlyen una clase Importante de AtAP que IItfllzan In energla
de In llidrolisis del ATP para desplaznrse unidirea:lotlalme"te a 10 largo de los mt
crotlibldos, lIevatlOO una Mrga espec{jlM. En gelleral, las dlnefnas desplnzan su

Mlcrotdbulos 873
carga lutcia los extremos menos de los microhib"'os, mielltras qlle In nutyorla de
las qllinesinas 10 Imam luu:ia los extremos nufs. Estas prote(lIlu motoros SOli Ins
respcmsables de In organiznci6n espacial y del movimiellto dirigido de los 01"86"11-
los del citoplasnm.

Cilios y centrfolos27
El batido de los cilios es una de las formas del movimiento celular mas estudia-
das. Los cUios son evaginaciones delgadas, a modo de pelos, de unos 0,25 Jlm de
diametro, con un haz de microtlibulos en su interior; sobresalen desde la super-
ficie de muchos tipos celulares y se encuentran en la mayorfa de especies an.i~
males, muchos prolOzoos, y algtUlas plantas inferiores. Su principal funci6n es-
triba en desplazar fluidos sabre la supcrficic de la cclula 0 en propllisar a lIna
celula aislada a trav~s de un lfquido. Los protozoos. por ejemplo, ulilizan los ci-
lias tanto para capturar panfculas alimenticias como para la locomoci6n. En las
c~lulas epiteliales del tracto respiratorio humano, grandes cantidades de cilios
(l0'/cm 2 o mas) trasladan hacia la boca capas de mucus que contienen partfcu-
las atrapadas de polvo 0 celulas muenas. En la boca son enguUidas y eUminadas.
Los cilios participan en el proceso de trasladar los oocitos a 10 largo del oviducto.
Una eslructura relaclonada, el flagelo, propulsa el espermatozoide humano.

Los cilios se mueven por el batido de un axonema -un complejo

haz de microtubuJos27
Los campos de cilios se inclinan siguiendo ondas coordinadas, unidireccionales
(Figura 16-39). EI movimiento de cada cilio es semejame al de un latigo: un gol-
pe activo hacia adelante, durante el cual el cilio esta totalmente extendido y es
capaz de ejercer una fuerza maxima sobre el liquido circundame, seguido de
una rase de recupcraci6n, duranle la cual el cilio recupera su posici6n original
gracias a un movimiento de desenroUamiento que minimiza la resislencia visco-
sa (Figura 16-40A). Los tielos de los cilios adyacenles son casi sincr6nkos, aun-
que no los son totalmente. Este sincronismo da lugar a unos patrones parecidos
a olas, que se pueden observar al microscopio 6ptico.
EI linico Oagelo de los espermatozoides y de muchos prolozoos es muy pa-
recido a los dlios en cuanto a su ultraestructura interna, pero normalmente los
nagelos son mucho mas largos que los cilios. Los flagelos no presentan un movi-
miento parecido al de un laligo, sino que generalmente propagan ondas casi si-
nusoidales (Figura 16-408). Sin embargo, la base molecular de su movimienlo es

figura 16-39 ClUos.

Electronmicrograffa de barrido de un
Mea ciliar del inlestino de un gusano
marino. (De ).S. Mellor y 1.5. Hyams.
Micron 9:91-94, 1978.01978, wn
aulorizaci6n de Pergamon Press Ltd.)

874 Capftulo 16: EI citoesqueleto

 Figura 1&.40 Conlrasteenlre los movlmlentosde baddo de uncilio yde un
Ragelo. (Al EI batido de Ull cilio de una c~lula epitelial del tracto respiratorio
humano parece una brazada de un nadador. EI golpe de una brtlUllh1
(esladios I y 2), durante el cual el fluido es empujado sabre la superficie de la
CIBula, va seguido de un lento mOlJimiemo de recllperacion (estadios 3. 4 Y5).
Tfpicamente. cada cicio tarda entre 0.1 yO.2 segundos y genera una fuerza
perpendicular at eje del axonema. Para efectos comparativos en (8) se
muestra el movimiento ondulante del f1agelo de un espermatozoide de un
tunicado. La ~Iula se fotografi6 sabre una peUcula en movimiento con una
iluminaci6n estrob0sc6pica de 400 destellos por segundo. N6tese que las
ondas de amplilUd constante se desplazan desde la base del nagelo hasta su
punta. Entonces. la ~Iula es eOlpujada directamente desde su axonema. un 2
efeclo muy diferente del que produce un cilio. (8. por conesfa de C.,.
Brokaw.)

la misma que la de los cilios. Los llagelos de las bacterias, sin embargo, (descri-
lOS en el Capitulo 15) son completamenle diferentes a los cilios y a los flagelos de
las celulas eucariotas.
EI movimienlo de un cilia 0 de un llagelo eSla prodllcido par la llexi6n de su
eje, llamado axonema. EI axonema est<1 formado tOlahncntc por micrOltiblilos y
por sus prolefnas asociadas. Los microtubulos est<1n modilicados y se hallao dis-
puestos siguiendo un patr6n cuyo aspecto curiosa y caracterfstico rue una de las
m<1s nOlables revelaciones de los inkios de la microscopia electr6nica: nueve

dobletes de microtubulos especiales estan dispuestos en cfrculo aJrededor de un
par de micronlbulos sencillos (Figura 16-41). Esta disposici6n de "9 + 2" es ca-
racterfstica de casi {odas las formas de ciLios y de flagelos eucario{as, desde los
protozoos hasta los que exislen en los humanos. Los microtubulos se extienden
5
inintemJmpidameOle en toda la longilud de' axonema. que suele ser de 10 p.m,
aunque en algunas celulas puede alcanzar los 200 pm.
Gada miembro del par de microtubulos sencillos (el par cemral) es un mi-
crotubulo completo pero cada uno de los dobletes eXleriores esta compueslo IA) IBI
por un microtUbulo completo y un microtubulo parcial fusionados, de lal forma
que ambos comparten una pared coml1.n. En secciones transversales, cada mi

braw elrterior de
dinern.

sspina radial

valns intarior

par cenlral de
microtlibtllotl --.--....;::
Mncillotl

braw Interior de
dinefn.l
IB'
,AtutM.no Bt\ibulo,
doblets elllerno de microtubulo

FlKura 16-41 La dlsposlcl6n de los mlcrotubuJos en un cillo 0 en un Dagelo.

(A) Electronmicrograffa que muestra una secci6n transversal del flagelo de un
alga verde (CIIlamydomollas) en la que se puede observar la disposici6n
caraclerfSlica de "9 + 2~ de los microtUbulos. (B) Diagrama de las parIes. Las
diversas proyecciones de los microtubulos los Olantienen unidos y se
producen a inlcrvalos regulares a 10 largo del ax-onema. (A, por cortesfa de
Lewis Tuney.)

Clllos y centrfolos 875

 Figura 16-42 Mkrotubulo desUzAndose en un axonema. ElectronmicrografTa
de un axonema aislado (a panir de un cilio de Tetrahymena) que ha side
brevemente expueslo a la enzima proteolftica lripsina para romper las
uniones proteicas que normalmente lo mantienen unldo. Tras el tratamiento
con ATP, los dislintos dobletes de microtUbulos se deslizan unos respeclo a
los otros, tal y como se mueslra esquematicamenle en la Figwa 16-43A.
Como hay nueve dobletes de microlubuJos en el axonema, la eslructura
original puede alargarse hasla nueve vecessu longitud inicial. (De F.D.
Warner y D. R. Mitchell, ,. Cell Bioi. 89:35-44, 1981. Reproducido con permiso
de copyright de The Rockefeller University Press.)

crotubula aparece farmada por un anillo de 13 subunidades, mientras que ellu

bulo incompleto de los dobletes exteriares esta formado s610 por 1I subunida
des.

La dinetna dirige el movimiento de los cilios y de los flagelos 28

los microttibulos del axonema estan asociados a numerosas proteinas, que se
encuentran en posiciones regulares a 10 largo de los microtubulos. Algunas sir-
ven como puntas de uni6n que mantienen juntos los haces de microtubulos.
Otras generan fuerzas que dirigen el movimiento de nexi6n, mientras que olras
forman un sistema de transmisi6n aClivado mecanicamente que controla el rna-
vimiento, produciendo la forma de onda deseada. La mas importanle de estas I
prolefnas accesorias es la dlnema cUlar, cuyas cabezas interaccionan con los
microtlibulos adyacenlcs y generan una fuerza de deslizamienlo entre microlu-
bulos. A causa de las multiples uniones que mantienen unidos los dobleles de
microttibulos adyacenles, 10 que serfa un movimiento deslizante entre microtu-
bulos Iibres (Figura 16-42) se convierte en un movimiento de flex:i6n en el cilio
(Figura 16-43).
Como la dinefna citoplasmatica, la dinefna ciJiar liene un dominio mOlor
que hidroliza ATP para desplazarse a 10 largo del microtubulo hacia su extrema
menos, y una cola que transporta la carga, la coal en este caso es un microtubulo
adyacente. La dinefna ciliar es considerablemente mas larga que la dinefna cho-
plasm.1lica, tanto en la medida de sus cabezas pesadas como en el numero y
complejidad de sus cadenas polipeptfdicas. En los flagelos del alga verde unice-
lular Chlamydomonas, par ejemplo, la dinefna esta formada por 2 a 3 cadenas
pesadas (hay multiples formas de dinefna en los flagelos) y 10 a m<1s polip~pti
dos mas pequefios (Figura 1644). Podemos observar c6mo In cola de la dinefna
ciliar se une s610 al tubulo A y no allubulo B, que {iene una estructura Iigera
mente distinta. Esta asimetrfa, resultado de la disposici6n de las moleculas de
dinefna, es necesaria para prevenir una lucha de "eslirar la cuerda" sin semido

(A.) OE.SPU~S DE LA PAOTEOUSIS: FIgura 16-43 Flexl6n de un axonema.

(BI ESTRUCTURA INTACTA: FLEXION
OESf'lAZAMIENTO TELEscOf'M:o (A) 5i las prOlefnas que mantienen
unidos los dobletes son eliminadas
medianle proleolisis, el des1izamiento
de los dobleles de microlubulos
enemos, unos respecto a los ouos,
provoca el a1argamienlO del axonema.
(8) Si los dobleles se encuentran
unidos entre sf, el axonema se nexlona.

doblelU librel 101 doblelel dobtetes Ul'lidol el desliz.mlenlo de

1101 puel'llel cnlz.dos ledesliz.1'I de UI'I cilio medlel'lte 101 dobletel prOYOCll
Ie h.1'I eHmil'lado puentes CfUZedos: I. ftexiOl'I de I.
medi.l'Ite proteolisill estructur.

876 Capftulo 16: EI cltoesqueleto

 IAI
Figura 16-44 La dlne(na clllar. La
"om
dine(na ciliar es un gran complejo
proleico (cerca de 2 milJones de
entre microtubulos vecinos, 10 eual posiblemente explicarfa por que cada uno de daltons) compuesto por entre 9 y 12
los nueve microttibulos externos es un doblete A-B. cadenas polipepddicas, la mayor de las
cuales tlene unos 512 000 daltons.
(Al Se cree que las cadenas pesadas
Cilios y flagelos crecen a partir de corpusculos basales que estan constituyen la mayor parte de \a
muy intimamente relacionados con los centrfolos29 cabeza globular y de los dominlos del
tallo, y muchas de las cadenas mas
5i los dos flagelos del alga verde Chlamydomonas se separan de la celu!a, vuel- pequenas se encuentran agrupadas
ven a formarse n1pidamente por elongaci6n a partir de uoas estructuras llama- alrededor de la base del tallo. La base
das corplisclilos basales. Los corptisculos basales poscen la misma estructura de la moMcula se une fuertemente a
que los centriolos que encontramos inmersos en el centro de los centrosomas un mlcrotubulo A, a traves de una
animales. De hecho, en algunos organismos, corpdsculos basales y centrfolos reaccion dependiente deATP,
parecen tener funciones intercambiables: durante carla una de las mitosis en mientras que las cabezas globulares
ClIlamydomonas, por ejemplo, los flagelos son reabsorbidos y los corpusculos mayores tienen un lugar de union
basales se mueven hacia el interior de la celula y se convierten en los generado- dependienle de ATP para un
res de los polos del huso rnit6tico. microtubulo B (vease Figura 16-41).
'Centrfolos y corpusculos basales son estructuras cilfndricas de aproximada- Cuando las cabezas hidrolizan el ATP
que tienen unido. se desplazan hacia
mente 0,2 11m de ancho y 0,4 11m de longitud. La pared del centrfolo esta forma-
el eXlremo menos de eSle segundo
, da por nueve grupos de (res microtubu]os, distribuidos en Iripletes. Cada triple-
microtubulo, produciendo asf una
te esta indinado hacia el eje central, como las aletas de una turbina (Figura fuerza de deslizamiento entre los
16-45). Los tripletes adyacentes estan unidos a intervalos a 10 largo de su longi- dobletes de microttlbulos adyacentes
tud. En electronmicrograffas se pueden observar finos radios proteicos irradiando de un cilio 0 de un Ilagelo (vease
desde un nudeo central hasta cada triplete y dando lugar a un patr6n semejante a Figura 16-43). Aqu( se ilustra la forma
una rueda de carro (vease Figura l6-45A). de tres cabezas de Ja dinefna dJiar,
farmada por tres cadenas pesadas.
(B) Electronmicrograffa de un cilio
sometido a criofraclUra, mostrando los
brazos de dineina proyectjndose a
inlervalos regulares a partir de Jos
dobletes de microtubulos. (B, por
conesfa de John Heuser.)

100nm

Figura 1645 Corpusculos basales. (A) Electronmicrograffa de una seccion

transversal a traves de tres centrioles del cortex de illl protozoo. (Bl Diagrama
de un corpusculo basal viste lateralmente. Cada corpusculo basal constituye la
pordon inferior de un axenema ciliar, y esta farmado por nueve tripleles de
micronlbulos. cada uno de los cuates tiene un micronlbulo completo (el tubulo
A) fusienado can dos microtubulos Incompletos (los tubulos B YC). Otras
protefnas {marcada en rojo en (Bli forman puentes que mantienen unida la
disposidon dlfndrica de microtubulos. La estructura del centrfolo es
esencialmeme la misma. (A, porcones(a de D.T. Woodrowy R.W. Unck.) IBI

Cllios y centriolos 877

 \vI
Duranle la formaci6n 0 regeneraci6n del eiJio. carla doblclc de micrOlubulos
del axonema creee a parti.r de dos de los micronibulos deltriplete del corpusculo
basal, de manera que se preserva la simctrfa nonagonal de los microllibulos del
axonema ciliar. Los eSludios autorradiograficos sugieren que la incorporaci6n tOllm
de tubulina y de alras protefnas del axonema tiene lugar en la punta distal de 1a
estructura, en el extrema mas de los microtubulos. Se desconocc c6mo se forma Figura 16-46 La longtcud del flBgelo
el par central de micrOluhulos aislados del axonema, ya que en el ccOlTralo yen escli eOIlCrollldn medJnnte UII proceso
nellvo. (Al Cuanda se separa
los corplisculos basales no existe ningun par central.
ffslcamente uno de los flagelos (aspa
Se desconoce c6mo se dctcrmina la longilud de los ciHos y de los flagelos. La azlll), empieza a crecer mediante
longitud es constanle para uoas c~lllias detcrminadas. y no est<i limitada por polimerlzacl6n a part.ir del corpusculo
la disponibilidad de componentes a par la ci.lu~tica del alargamienta. $i separa- basal (rojo). AI mismo tiempo. el
mos uno de los dos Oagelos de CII/amydomollas. par ejemplo. el flagelo restante nagelo restanle empieza a
empieza a reabsorberse mientras que. simultaneamente. el flagelo perdido se reabsorberse. CUlIndo ambos miden la
regenera. Una vez el f1agelo que se reabsorbe alcanza la misma longitud que el mitad de su longilud original.
f1agelo que se regenera. los dos crecen juntos hasta conseguir la longirud final empiezan a crecer juntos. EI
caracterCSlica. Este experimemo sugiere que la longitud flagelar esta constante crecimienlO se deliene cuando ambos
mente comrolada de la misma forma (Figura 16-46). ftagelos han conseguido la longitud
final. cuidadosamente especificada.
(8) FOlografia en color del alga
Los centrfolos suelen aparecer por duplicaci6n Chlamydomonas. donde el color
de los centrfolos preexislenles30 anaralljado e$ el resuhado de la
aU(Qfluorescencia de la c1orofila y el
EI incremento continuo de la masa celular a 10 largo de todo el cicio celular ani- l!E'rde proviene de la uni6n de un
mal presenta dos acontecimientos discretos de duplicaci6n: la replicaci6n del anticuerpo f1uorescente cOlllra una
DNA y la duplicaci6n del centrosoma. que normalmeme tiene un par de centrfo- protelna de la membrana plasmlilica.
los en su interior. Los dos cemrlolos del par estan dispueslOs perpendicularmen+ (8. por cortesfa de Robert A.
te UIlO respceto aI otro (Figura 16-47). En los fibroblastos en cultivo la duplica- Bloodgood.)
ci6n del centrfolo empieza casi al mismo tiempo que empicza la sfmesis de
DNA: primcro se separan los dos miembros de un par y entOllces se forma un
centriolo hijo perpendicular a cada ccntrfolo original (v~ase Figura 18-4). Un
centriolo inmaduro rnuestra una disposici6n en simetrfa nonagonal de rnicrotu-

Figura 16-47 EleclJ'Onmlcrografla

moslrando un par de cenlriolos
reden repUcados. Un cenlrfolo de
cada par ha sido corrado
lransversa!menle y el OUO conado en
senlido 10ngilUdinal.lo cua! indica que
los dos miembros de cada par estan
colocados formando un Angulo reclO.
(De M. McGill. D.P. Highfield. T.M.
Monahan. and B.R. BrinkJey. J.
Ultraslruct. Res. 57:43-53. 1976.)

878 ClIpftulo 16: EI citocsquelcto

 Figura 16-48 Herenela co~lcal del
patr6n en un protozoo cUiado.
(I.) Electronmicrografia de barrido de
un Paramecium, que nada mediante el
batido sincronico de sus cilios.
(Bl Dibujo csquclmhico de las hileras
de citios de la superficie de un
Paramecium nonnal y de un
Paramecium en el que se han invertido
a1gunas hileras de cilios. con 10 cual
baten en direcclones opuestas. Estos
patrones alterados se propagan
indefinidamcnte mientras el
Paramecium se divida, aunque 13
"--------' informaci6n a nivcl de DNA no haya
20 11m PARAMECIUM ALTERADO
cambiado. tA. por cortesla de Sidney
IAI 181 Tamm.)

bulos sencilfos; probablememe carla microtubulo acrua como plantilla para el

ensamblaje de los tripletes de microuJhulos lipicos de los centriolos maduros.
Los dos centrfolos que forman un par no son id~nticos: el centriolo hijo no soJa-
mente liene una orientaci6n distinta sino que tambi~n se diferencia en detalles con-
cretos de su motfologfa y de Sli flUlci6n. En muchos lipos celularcs de los vert'chra-
dos, por ejemplo. uno de los dos centriolos se dlstingue por su capacidad para
nuclear el Uamado cilio primario-cilio aislado inm6vil cuya funci6n es desconocida.
Estas diferencias padres/rujos lambi~n se presentan en los corpusculos basales.
10 eual puede conducir a las asimetrfas del ciloesquelclo. En los protozoos ciliados.
la replicaci6n de los corpusculos basales esta coordinada con In divisi6n celular y
se cree Que la eSlcreoespecificidad del proceso de duplicaci6n puede ser impor-
lanle para manlener la orientaci6n del cilio en la superficie celular. Esto fue c1ara-
mente demostrado en un experimento c1asico Ilevado a cabo durante los afios
1960 en Paramecium, protozoo cuya superficie esta cubierta por hileras de cilios
m6viles. Normalmente, todas las hileras estan alineadas con la ndsma polaridad a
traves de la replicaci6n coordinada de los corpusculos basales. los cuales producen
corpusculos basales hijos con la misma orientaci6n relativa respecto a la superficie
celuJar. Los haces de citios que crecen a panir de los corpusculos basales propor-
cionan a la celula la capacidad para nadar con una gran eficiencia. Mediante expe-
rimenlos de microinyecci6n, es posible aherar este patr6n y producir hileras de ci-
Iios invertidos que baten en diret:cioncs opuestas a las de sus vecinos (Figura
16-48). Una vez establecidas, estas alteraclones pasan de padres a hijos en el Para
mecium durante mas de 100 generaciones. Este tipo de herencia no tiene nada que
ver con el DNA: las celulas modificadas hcredan un palT6n particular de hileras de
cilios gracias a la replicaci6n cstereoespecffica de sus corpusculos basales.

Resumen
El tlXonema del cillo y del Jlogelo em:arlota cont/ene "n lInz cilflldrlco de ""eve do-
bletes de microtliblllo.s perljirlco.s. Entre los dobletes de microtlibllios adyaeentes se
extienden braz.o.s latera/es de lline{na que IlidroliulII ATP y gelleran luena de desli-
zamiento entre /o.s dobletes. Diversn.s prote{nas aa:esorias mantierlen unMo el atlilio
de dobktes de mlcrotlibllim y conmerte,. la ftrena tk deslizamiento en I", mom
m/ento inclinadD que genera el hatido de los ci/im. Ln comple)a e:stnu:tura del axo-
nema ciliar sefomm por II" alltoensambla]ede sus componentes proteicos y estd--Hu-
deatla por ,m centriolo (coTplisculo basal), que sirve de plmltilla para el patm"
carac.erlstico de 9 2 microtdbulos quelontUIn el ",ideo del tlXotlema. Los eentrio-
los se dllpl/call mediante 1m proceso altamente COlltroladO en el cual el celltriolo
I.tjo se nuc/en a partir de IU' centrlolo plulre que se e"cue"trll a Sll lado y crece lJer
pelld/culannellie a it. Ln replicaci6" orlentada tk los coTplucuios basales comporta
un patr6" Ileredable de hatMo de los cilios en la sllperficie deproroUJOS dlindos..

Clllos y centriolos 879

 molkul8 de ect.in8
Filamentos de actina" I
eJltremo menos
Todas las especies eucariolas contienen actina. Esta protefna del citoesqueleto
es la prolcfna mas abundamc en muchas c~lulas eucariotas, ya menudo conSli-
tuye el 5% 0 mas de la protefna celuJar tOlal. Las fibras del musculo esquel~tico
de los venebrados son la fueote mas COffiiln de actina para los experimcnlos que
se realizan in vitro, puestQ que la actina constituye el 20% de su masa. Si se trata
polva seea de musculo con una soluci6n salina filly diluida. los filamentos de
octina se disocian en sus subunidades de actina. Cada mol~cu)a de actina es un
Unico polipeplido de 375 aminoacidos de longitud y esta asociada fiUy fntima
mente con una mol6cula de ATP.
En las relulas los filamenlos de actina pueden formar estructuras eslables y
estructuras l<tbUes. Los filamentos eSlables de actina forman el eje de los micro-
villi y son un componente cruciaJ del aparato conlrActil de las c~lulas muscula-
res. Sin embargo, muchos de los movimientos celulares dependen de estruCIU-
ras labiles formadas por filamemos de actina. Dedicaremos esta secci6n aver
c6mo la c~lula controla el ensamblaje de los filamentos dinamicos de aClina a
partir de subunidades de actina solubles en el citosol.

Los filamentos de actina son delgados y tlexibles32

1
eJltremo m_

En las elcctronmicrograffas los OIamentos de actina aparecen como hebras de 8 18'

nm de diametro. Estan formados por una apretada helice de mon6meros de ac- Flgurtl16.49 FUamentosdeactina.
tina oriemados uniformemente (tambien conocida como actina globular. 0 acri {A}E1cclronmicrograffa de fLIamenlos
na G) (Figura 16-49). AI iguaJ que los microtUbuJos, un filamento de actina es de actina oontrnstados negativamenle.
una estructura polar. con dos extremos estructuraJmente distinlos -un extrema (B) Disposici6n helicoidal de las
~menos~. relativamente inerte y de crecimiento lento y un extrema ~mas~. de mol~culas de actina en un filamento.
crecimiento rapido. A causa de la apariencla de flecha del complejo formado en- (A. por conesfa de Roger Craig.)
tre los filamentos de actina y la protema motora miosina, que describiremos
mas adelante, el extremo menos se canace tambh~n como el extrema en punta y
el extrema mas como extremo ancho 0 barbado. La estructura tridimensional de
la molecula de actina ha sido anaJizada mediante an:i1isis de difracci6n de rayos
X, y esta informaci6n ha sido utilizada para deducir la estructura de un filamen
to de actina a nivel de sus aminoacidos individuaJes (Figura 1650).
Algunos eucariotas inferiores, como las levaduras, tjenen un unico gen para
la actina, que codifica una unica protefna. Sin embargo, lodes los eucariotas su-
periores tienen algunas isoformas codificadas por una familia de genes de acti-
na. AI menos hay scis tipes distintos de aClina en los tejidos de los mamfferos; se
agrupan en tres c1ases, dependiendo de su punto isoeUjctrico. Las alfa actinas se
encuentran en diversos tipos de mtlsculo, mientras que las beta y las gamma son
los conslituyenlcs principales de las cclulas no musculares. Aunquc las distinlas
formas de actina presentan sutiles diferencias en sus propicdades, las secuen-
cias de aminoacidos han sido altamente conservadas duranle la evoluci6n, y to-
das se ensamblan en filamentos que son esencialmente idcnticos en la mayorfa
de estudios Ilevados a cabo in vitro.
La longilud tOlal de fOdos los fiJamentos de actina de una c~lula es al menos
30 veces mayor que la longitud total de los microtubulos. 10 cual refleja una dife-
rencia fundamental en la manera como estos poLmeros del ciloesqueleto estan
organizados y funcionan en la c~lula. Los fdamenlos de actina son mas delgados y
mAs flexibles, y normaJmenle mas cortos. que los microttibuJos. Veremos que rara
mente los filamentos de actina se encuentran aislados en la celula. sino que gene
ralmente forman agregados y haces. con puentes entrecruzados. que son mucho
mas fuenes que los filamenlos individuaJes.

La actina y la tubulina polimerizan por mecanismos parecidos"

La polimerizaci6n de la actina pura i" vitro necesita ATP y tambicn cationes mo
novaJentes y divalenres, que normalmente son el K y el Mgz. La reacci6n puede

880 Capftulo 16: EI clloesqueJelo

 txf.emo mtl108

~:t'"
.~
c.:.-:'
,.' ...

J..

IAI
extrtma m'l
la, ,e,

(OJ ul.tmo m"

estudiarse mediante la observaci6n del cambio de luz emitida desde una sonda Figura 16-50 Estructura de Ja acUna.
f]uorescenle que ha side covalenlemenle unida a la actina 0 medianle el segui- (A) Estructura tridimensional de la
mienlo del gran incremenlo de viscosidad provocado por la polimerizaci6n. molocula de actina. deducida
Cuando se ai'Jade K- y Mt a la actina monomerica en presencia de ATP, se pro- mediante amUisis de difracci6n de
duce una rase lema (lag), mienlras se nudean 105 nuevos filamentos, y luego una rayos X. Una molerola aislada de ATP
(amarillo) est! estreehamente unida
rase de polimerizaci6n rnpida, mienlras 105 conos filamentos se a1argan. La fase
en una ftsura entre los dos dominlos
lag que encontramos en 1a polimerizaci6n de la actina pura es debida a la rrusma de la protefna. (B) Dibujo esquemlillco
barrera cinetica para la nucleaci6n que discutimos para la polimerizaci6n de la de una molecula de actina que pone
tubulina (vease Figura 16-23). Para la actina, la velocidad de nucleaci6n es pro- de maniOesto sus dos dominies y el
porcional al cuba de la concenlraci6n de actina, 10 cual sugiere que la estructura lugar de uni6n al ATP que se encuentra
de nucleaci6n para la polimerizaci6n espomanea de la actina pura es un trimero entre ellos. (el Dibujo esquemlitico del
de moleculas de actina. AJ contrario, la velocidad con la cual un filamento se filamento de aClina que muestra romo
alarga es proporcional, igual que para los microtUbulos. a la concentraci6n de la las mol~culas de actina interacluan
suhunidad libre indicando que el filamento se a1arga mediante adici6n de mole- unas con otras formando el polfmero
culas de actina, de una en una. helicoidal. Advi~rtase que de la misma
La velocidad de polimerizaci6n es distinta en los dos extremos del filamento manera que las moleculas de actinn se
de actina, y esta diferencia es mucho mayor que en los microt(lbulos: el extrema cnsamblan en el polfmero. hldrolizan
sus moleculas de ATP estrechamente
~masH 0 "barbado", la actina polimeriza unas 10 veces mas rapidamente que el
unidas (vtlase Figura 16-51). (0)
extrema ~menos" 0 "puntiagudo La concentracion crfrica para la polimeriza-
H

Eslructura de la molecula de actina
ci6n de la actina -esto es, la concenlraci6n del mon6mero de actina Iibre en la basada en la Imagen de un filamento
cualla proporci6n de actina polimerizada detiene su incremento- esta a1rededor obtenida mediante microscopia
de 02 micromolar (a1rededor de 8 pg/ml). Esta concentraci6n es mucho mas electr6nica. Cada bola del modele
bajlque la concentraci6n de actina no polimerizada de la celula. por 10 que la representa a un aminolicido; los que
celula ha desarrollado mecanismos especiales para impedir que la mayona de Interactuan con la miosina {se discute
esta actina monomerica se ensamble formando filamentos. tal y como discutire- m!s adelantel se han marcado en
mos mas adelante. verde. La diferencia emre los extremos
Rapidamente despu~ de la polimerizaci6n, el fosfato terminal del ATP uni- m!s y menos es aparenle. (A. adaplado
do a la molecuJa de actina es hidrolizado, quedando un ADP atrapado en el polf- de W. Kabsch et at.. Natun347:3744,
mero. La h..idr61isis del ATP durante la polimerizaci6n de la actina es anAloga a la 1990. C 1990 Macmillan Magazines
Ltd.: B, de K.C. Holmes et 81.. Nature
hidr61isis del GTP que acompal'ia el ensamblaje de los microtubulos, pero en el
347:44-49, 1990.0 Macmillan
caso de la actina podemos comprender los cambios confonnacionales implica-
Magazines Ltd.)
dos puesto que conocemos la estructura tridimensional de la protefna. La mole-
cula de actina {iene forma de almeja y el ATP se hall a situado en la charnela si-
tuada entre las dos mitades; como la concha de una almeja, puede abrirse y
cerrarse. Cuando la actina polimeriza, la concha esta total mente cerrada par in-

Fllamentos de actina 881

 VELOCIOAOES OE CRECIMIENTO NUClEACION Un pollmero helicoidal esl6 eslabilizado mediante multiples
Y OE ACORTAMIENTO COnlaetos enlre subunidades adyacenles. Para Ie actina, dos malkulss de actina se
Un pollmero lineal de molecules de proteins. unen mediante enlaces relativamente debiles, pero Ie uni6n de un tercer mon6mero
como por ejemplo un memento de actina 0 un de actina formando un Ifimera proporciona una mayor estabilidad al conjunlO.

microtubulo, se ensambla (polimerizsl V se
dltS&nsambta IdespoHmeriZl) mediante Ie
adici6n y Ie p'rdidll de subunidades de los
extremas del filemento. La velocidad de edici6n
"on.
de mon6meros viano dada por Ie constanta
cuvas uoidedes son de M-I 5eg-I. La velocidad l l
de perdida viena dada por Ie constanta '0"
(uoidedes de 58g-'),
mon6mero dimero
subunidad pollmero (con n subunldadell
La adici6n posterior puede tener luger sobre este trlmaro, qua enlonces actua como
+ CIIIIJ luger de nucleeci6n pare Ie polimerizaci6n. Ellugar de nucleaci6n de la tubulina es
mucho mils grande y tiene una estructura mas compleia (posiblemente un anillo de

'-11'" 130 mas moleculas), pero el principio es at mismo.

EI ensamblaje dellugar de nucteaci6n es relalivamenle lento, 10 cuel explica la
fase inicial lenta (lase lag) producida durante la polimerizaci6n. La fese lenta puede
-=oIl] ser reducida 0 eliminada del todo si se ai\aden lugares de nucleaci6n prefebricados,
lales como fragmentos de micrOlubulos 0 fifamentos de actina previamente
polimerizados.

POLIMERACION EN FUNCION OEL TIEMPO

EI ensamblaje de una protelna en un largo pollmero helicoidal, (p. ej., un fitemento
del ciloesquelelo 0 un f1agelo bacterianol mueSlren eSla curva dependiente del tiempo:
FASE DE
eOUILIBflIO

liempo_
La fue inicial lenta lfase lag) as debida a ta barrera cimhica para la nucleacion.
La fase de crecimiento se produce mientras los monomeros se ai'laden a los
extremos eKpueslos del pollmero en crecimiento.
La fase de equilibrio se conslgue cuendo el crecimiento del pollmero debido a la
edici6n de mon6meros eSlii precisamenle en equilibrio con elacortamienlo del
polfmero debido a la perdida de monomeros.

EXTREMO MAs Y EXTREMO MENOS

Los dos eJctremos de un filemento de actina 0 de un microtubulo
polimeriz8n e vefocidades distintas. EI elCtremo de creeimienlo
rapido sa llama eKtremo mils, y et de credmiento lento sa llama
eKtremo menos. La diferencia de velocidad de credmiento de
embos extremos se debe a cambios conformacionales de cada
I
--.
subunldad cuando sa incorpora al pollmero. UNTO RAPlOOI
SUbunidad. sobunidad en
libre el poHmero

Este cambio conformacional afecta a la velocidad a la cuallas
subunidades se anaden a los dos eKtremOI.
Aunque kon y Ieofl tendran valores distinlOS para el extremo menos
del pollmero, la relaci6n kon/k",,-y, por taniO, Ce- debe ser igual
en ambos eKtremos, Ello es debido a que cuando se pierde una
subunidad en uno de los eJctremos sa rompan eKactamente el mismo
numero de interacciones entre subunidades, y el estado final de la
subunidad despues de Ie disociacl6n es identico. Asl pUBS, la toG de
la subunidad perdida, que delermina la constante de equilibrio para
su asociaci6n al extremo (vease Table 3-3, piigine 1011, es idenlica
en ambos eKtremos; sl el eJctremo mils creee cuatro vecos mas
nipidamenle que el extremo menos, tambiem debe disociarse cuatro
voces mils rilpidamenle. Por lanlo, para ICI ;> Ce ambos eKtremos
creeen; para ICI < Ce , ambos eKtremos decrecen.

882 Pmell6-1 PoUmerizad6n de la actina y la lubullna.

 INTERCAMBIO ROTATORIO ITREADMILUNGI
Una consecuencia de Ie hidroli,i, del nucleotido qua Kompana 18 formaci6n
de un polimero 8S al cambW de 18 concentraci6n critica en los dos extremos
del pollmero. Debido a que IPoff V kTon se refteren a raacciones diferentes,
Ie relacion IP""iTon no liene por que ser neeesanamente Ie misma en los
dos extremos del poUmero, de forma que:

c~ (extrema menDs) > Cc (extrema mlisl

Asumiendo que ambos extremas del pollmero S8 hallan asequibles, Ie

polimerizaci6n proceden hasle que Ie concentracion del rnon6mero libra
supere al valor de Cc para 81 extrema mas, perc este por debaje de Ce para
81 extremo menos. En este eSlado estacionario. las subunidades se
ensamblaran 81 extrema mas V S8 desensamblarlin del eletrema menos a
velocidades identicas. EI polimero manlendra una longitud constante, aunque
uista un flujo neto de subunidades a traves del pollmero que se conoee como
intercambio rotatorio (treadmiUing).

LalNESTABIUDAD OINAMICA vel

HIDR6uSIS DE NUCLE6TIDOS INTEACAMBIQ AOTATOAIO son dos
Cada moh~cula de actina transporta una mohlcula de ATP fuertemente un ida, la cual, en comportamientos observados en los
cuanto se produce el cambio de conformacion que acompana al ensamblaje de subunidades
pollmeros del citoesqueleto. Ambos
formando el poUmero, es hidrolizada hasta una molecula de ADP. De manera similar, cada
molecula de tubulina transporta una molecule de GTP fuertemente unida, que se conviene procesos estan asociados a la hidrolisis de
en una molecula de GDP cuando la molecula 58 ensambla en el pollmero. nucle6tidos trifosfato. Se cree que la
inestabilidad dinamica predomina en los
- - - - _ ---~--- {T.ATPoGTPI microtubulos mientres que el intercambio
____ ___ ~ (O.AQf'oGDf>l
rotatorio podria predominar en los
mon6mero librll .ubun~ Mill poIlmero
filamentos de actina
La hidr6lisis del nucleotido unido reduce la afinidad de union de cada subunidad
respeclo a la subunidad vecina, haciendola mas Mellmente disociable de cada uno de
los extremos del memento lvease Figura 16-33 para elillble mecanismo). Es habilual
que la forma se aflada al mamento V que 18 forma 0 se disgregue del filamento. CASQUETES DE ATP Y DE GTP
Consideremos solo los acontecimientos del extremo m<!is:
La velocidad de adicion de subunidades a
un filamento de actina 0 a un microtubulo
o
0 000
en crecimienlO puede ser mas rapida que
000 000 la velocidad a la cual sa hidroliza al
'- If'o.
.'-=-.. CD nucleotido que lIevan unido. En estas
condiciones, las subllnidades de los
Como antes, el pollmero cre<:era hasta que ICI Ce. Por motivos didlieticos, podemos extremos del tilamento forman un casquete
considerar que If'on V kToff son insignirlcantes, de forma que podemos decir que el de subunidades que tienen unido el
crecimienlo del polimero cese cuando nucleosido Irilosfato -un casquete de ATP
en el filemenlo de actina V un casquele de
o C,. If'o.
.,~
GTP en el microtUbulo.

Es un estado estaelonario V no un equilibrio va que el ATP 0 el GTP hidrolizados

pueden ser reemplazados por una reaccion intercambiadore de nucle6tidos sobre Ie
subunidad libre (m _ .). ro;::-r;::-o-r.::O-=T"'T-=t""J
o 0 0 T

INESTABIUDAD DINAMICA casquete de ATP/GTP

los microtubulos se despolimerizan unas 100 veees mas rapidamenle del extremo que
conliene lubulina GOP que del que conliene tubulina GTP. Un casquete de GTP favore<:e
01 crecimiento,l>ero si sa pierde, entonces sa produce la despolimerizael6n.

,....,
casquete de GTP

-" ..
-...
co
.--co CO
CO

CAECIMIENTO . . . ACORTAMIENTO ~
co

Los microtubulos individuales pueden alternar periodos de crecimiento lento

V de desensamblClje rapido, fen6meno lIamado inestabilidad dinamica.

883
 Figura 16-51 La trampa de ADP en un flIamento de aCIlna. Una lI1ol&ula
de actina liene una estructuta que esta reladonada con la de la ubicua
enztma hexoquinasa (v~ase Figura 5-2), can dos dominios que forman una
bisagra alrededor dellugarde uni6n a1ATP. EI ATP es hidrolizado a ADP
inmediatamente despu61 de que la mol~cula se ha incorporado a un
filamento de actina. Para que el ADP sea reemplazado por un ATP, la bisagra
deberfa abrirse, pero en el filamento de actina los dos dominios de cada
molkula de actina estan unidos entre sf por interacciones con las I
subunidades vecinas, de manera que la bisagra se mantiene cerrada yactua
de trampa para el ADP, hasta que el filamento se despolimeriz.a.
OESPOUM}RIZACtON
\
tt
POUMER1ZAC16N

(
teracciones entre aminoacidos de las dos valvas de la aimeja y la zona posterior ~
de la siguieme subunidad en el polimero. Se cree que la hidr6lisis del ATP se des-
encadena por el cierre de la concha miemras cada moll!cula de actina se incor-
pora aI filamento, y deja e) ADP alrapado dentro (Figura 16-51).

El comportamiento dimimico de los filamentos de actina

requiere la hidr6lisis del ATF
En la polimerizaci6n de la aClina, la hidr6lisis del ATP juega un papel parecido aI
de la hidr61isis del GTP en la polimerizaci6n de la tubulina, como explicamos en
el Panel 16-1 (pags. 882-883). Para formar el nJamento no es necesaria la hidr61i-
sis del ATP: de hecho. debilila los enlaces del poJimero y de esla forma facilila la
despolimerizaci6n. Sin embargo. existen diferencias importantes en los compor-
tamiemos del nucle6tido que esla unido a las subunidades de eslOS dos polfme-
ros. Una diferencia especialmeme interesame es que el recambio ATP-ADP (la
SUbSliluci6n del ADP unido por ATP) es relativameme lenta para la actina Iibre
(del o~den de minutos). mientras que el recambio GTP-GDP es muy nlpido para
la tubulina libre (del orden de segundos); asf pues, cuando las moltkulas de acti-
na son Iiberadas por el desensamblaje de un filamenlo, tardan mucho liempo en
poder a volver a ser reutilizadas en el ensamblaje de un filamento. En principio,
eSla propiedad de la actina permhe a la celula mantener una elevada concemra-
ci6n cilOs6lica de moltkulas de actina no polimerizadas en rorma ADP-actina;
ademas, el mon6mero ADP-actina puede ser estabilizado en la celula mediante
su uni6n a Olra protefna. 10 cua! podrfa proporcionar una manera para regular la
polimerizaci6n de la aClina.
EI erecto que la hidr6lisis del ATP tiene sobre la actina es suti!. y qucdan mu-
chas pregumas sin responder sobre las consecuencias precisas de tiene este pro-
ceso para la c~lula. Los l1lamentos de aClina, a diferencia de los rnicroll.'ibulos, no
parecen mOSlrar una inestabilidad dimimica dn1stica ill vitro. De hecho, pueden
intervenir en un comportamiento dinamico interesante denominado illtercambio
roUltorio (treadmilling), que se produce cuando se afiaden continuamente mole
culas de aClina al extrema mas del filamento y se pierden continuamente por el
extremo menos, sin que haya un cambio neta de Jongitud en el filamemo (vease
Panel 16-1. pags..882-883). EI intercambio rotalorio, a! igual que la ineslabUidad
din:lln.ica, es un comportamiemo de no equilibrio que requiere un apone de
energfa, el cual proviene de la hidr61isis de ATP que acompana a la polimeriza
ci6n. Se cree que este fen6meno contribuye a! recambio rapido de subunidades
de filamentos de actina que se produce en la celula.
Es remarcable que tanlo la actina como la tubulina esten implkadas en la
hidr6lisis de nude6sidos trifosfato por la misma raz6n basica -para poder. una
vez polimerizadas. despolimerizarse facilmeme. Actina y tubulina no estan ab-
solutamente relacionadas en cuanto a su secuencia de aminoacidos: la aClina
esta relacionada relalivameme. en cuanto a estnJctura, a la enzima glucolftica
hexoquinasa. mientras que la lubulina esta dislantemente relacionada con una
gran familia de GTPasas que induye la proteina G helerotrimerica y GTPasas
monomericas como la proterna Ras. (Ambos tipos de estructura se discuten con
detalle en el Capftulo 5.) La evoluci6n convergente de la capacidad de hidr6lisis

884 Capftulo 16: El c1loesqueleto

de un nucle6tido en la actina y en la tubulina demuestra 10 importante que re-
suha la funci6n de los microtubulos y de los fLIamentos de actina: el ensamblaje
y desensamblaje dim1.m.icos de estos poUrneros del citoesqueleto en los que la
hidr6lisis hace posible que se encuentren en el coraz6n de la organizaci6n cito-
plasm~tica.
FIgun.16-52 Elerectodela
c1tocalaslna sobre el borde frontal del
Las funciones de los filamentos de actina son inhibidas por cono en credmlento de una ~ula
drogas estabilizadoras y desestabilizadoras del polfmero35 nervlon en cultJvo. Observacl6n de
Las drogas que estabilizan 0 desestabilizan los nJamentos de actina constituyen un cono vivo en crecimiento mediante
herramientas imponantes para investigar el comportamiento din~mico de estos microscopia de contraste
interfcrenclaJ de Nomarsky antes (A) y
filamentos en las celulas. Las citocalasillas son productos sintetizados par hon-
despu~s (8) del tratamiento con
gas, que impiden la polimerizad6n de la actina ya que se unen al extremo m~s cilocalasina. La celula en {BJ ha sido
de los filamentos de actina. Las!aloidillas son toxinas aisladas del hongo Amani- marcada despues con faloidina Iigada
lao que se unen muy fuertemente a los lados de los filamentos de actina y los es- a rodamina para revelar los filamenlOS
tabilizan. impidiendo su despolimerizaci6n. (Un remedio contra el veneno del de actina (C). Puede observarse c6mo
hongo Amanita es comer una gran cantidad de carne cruda: la elevada cantidad la regi6n deuas del borde fronlal de
de filamentos de actina del tejido muscular se une a la faloidina y reduce su toxi- avance del conn en crecimiento
ddad.) Ambas drogas provocan cambios dram~ticos en el ciloesqueleto de acti tralado con c1toc:alasina esui
na. Anterionnente vimos. aI referimos a los microtubulos. que tanto las drogas desprovista de filamenlos de actina. La
desestabilizadoras del polfmero. por ejemplo la colchidna. como las drogas que estructura qulmica de la citocalasina B
los estabilizan, por ejemplo el laxol, son t6xicas para las celulas. La mismo suce- se muestra en (D). (A, B, YC, por
de con las drogas que afectan la estabilidad de los filamentos de actina, 10 cual cortesla de Paul Forscher.)
indica que la funci6n de los filamentos de actina tambilin depende de un equili-
brio dinAmico entre el filamento y el mon6mero de actina.
La dtocalasina es de gran utilidad para el estudio del movimiento celular.
En particular. el borde frontal de avance de una clilula en movimiento contiene
filamentos de actina que continuamente polimerizan y son muy sensibles a la d-
tocalasina. En la mayorfa de celulas en movimiento la citoca.lasina provoca la re-
tracd6n de este borde fromal de avancc. Sin embargo. si la membrana plasmi1tica
de este borde esto1. fuenemente unida aI substrata, la citoca.lasina provoca la re-
tracci6n de los filamentos de actina pero deja la membrana pegada al substrato
(Figura 16-52).
La faloidina tambien se utiliza ampliamente, como derivado Duorescenle,
para marcar los filamemos de actina de celulas fijadas, y tiene tambien un efecto
profunda en las celulas vivas. Si se microinyecta faloidina a un fibroblaslo vivo,
por ejemplo, los mon6meros de actina polimerizan formando fJJamentos situa-
dos a1 azar en el citoplasma, 10 cual provoca una contracci6n brusca que destru-
ye la celula.

La moIecula de actina se une a pequefias protemas que ayudan

a controlar su polimerizaci6n36
En un fibroblasto, aproximadamente el 50% de la actina se encuemra en forma
de filamemos, mientras que el 50% restante esU. monomerizada. En una gran

FUamentos de actina 885

 la prote(nll sa une y
mllntiene la actina en
III forme cia unl6n al AOP
Figura 16-53 Dos mec::anJsmos
poslbles mediante los cuales una
proteCna de unl6n al mon6mero de
actina puede Inhlblr la
pollmerlzacl6n de la actina. Se cree
que 13 timosina inhibe la
polimcriz.aci6n de la aedna mediante
uno de estos dos mecanismos.

lugar de uniOn al
proteiOll cubriendo el
filamento de actinll
tugar de uniOn ala actina

PUEOE POUMERlZAR NO PUEOE POUMERlZAR

variedad de lipos celulares la concentraci6n del mon6mero es Ilpicameme de

50-200 micromolar (2-8 mg/m1). Esta concemraci6n es sorprendentemenle ele-
vada dada la baja concentraci6n crftica de actina pura (menDs de I micromOo
lar), y reneja la presencia de prolefnas especiales que se unen a la molecula de
actina e inhiben su uni6n en los extremos de los filamemos de actina_ La mas
abundante de estas prote{nas de uni6n aI mon6mero de actina en muchos lipos
celuJares es la limoslna, una pequefla protelna poco corntin, de un peso mole-
cular de aproximadameme SOOO daltons. En las celulas en que ha sido cuidado-
samente estudiada (las plaquet'as sangulneas y los neuu6ftJos), se encuentra a
una concentraci6n que es suficiente para secuestrar tOOa la actina monomerica.
Se desconoce c6mo esta protelna inhibe la poLiIJ.1erizaci6n de la actina: pOOrfa
bloquear estericameme la polimerizaci6n cubriendo el lugar donde un mon6-
mem se une al DUO, 0 podrfa secuestrar el ADP urudo a la actina impidiendo el
recambio ADP-ATP, con 10 cualla molecula de actina no podria polimerizar (Fi- Figura 16-54 FlIarnentos de actina en
gura 16-53). el borde frontal de avance de un
Otra protefna de uni6n al mon6mero de actina es la pronUna, que se en- Rbroblasto en cultlvo.
cuenua en lodas las celulas y se cree que conLrola la polimerizaci6n de la actina (A) Eleclronmierograffa del extremo
como respuesta a est(mulos exLraceluJares. La proftJina, que en muchas celulas delantero de avance de una celula en
esto1 asociada a la membrana plasmatica, acetera el recambio de ATP por ADP cullivo, tralada con un detergente no
cuando se une a la actina monomerica y se cree que facilita la polimerizaci6n re- i6nico para eliminar la membrana
I'lasmatica y la mayorfa de las
gulada de actina duranle el movimiento cetuJar, aunque esto es lema de contro-
I'rotefnas solubles. N6tese la !rama
versia. Un mutante de levadura deficiente en profilina tiene un deficit de fila- orientada de los fiJamentos de actina
meows de actina, to cual apoya el papel de esta motecuta en la eSlimulaci6n de que se presenta en ellamelipodio. en
ta polimerizaci6n de ta actina. cl que se haUa inerustada la
microespina. En (BJ se presenta una
visi6n esquema/iea de los ftIamentos
de actina de un lame1ipodio. (A, de J.Y.
Small,). Cell BioI. 91:695-705, 1981.
Reproducido con permiso de copyright
de TIle Rockefeller University Press.)

elClremo menos de Ia. lugarM cle nueleaci6n cle actina unida.

filllmenla. de eelinll a membrana (elClrema. mjs cle los
filamenla. de eelinal

~
oontlldO ett,.;:ho
I
con el A1bstr.lo
- substrato

lSI

886 Capftulo 16: EI cltoesqueleto

 Adem<1s de la timosina y de la proftlina, las celulas disponen de otras mu-
chas protefnas capaces de unirse a los mon6meros de actina, y algllnas de estas
protefnas, como el factor despo/imeriUldor de fa aClina (ADF, de Actin-Depoly-
merizing Factor), illhibe el ensamblaje de los filamentos de actina. Evidente-
mente las celulas disponen de una gran variedad de mecanismos. cuyos detalJes
no comprendemos todavfa, mediante los cuales la celula controla el ensamblaje
de los filamentos de actina s610, cuando y d6nde es necesario.

Muchas celulas emilen, desde su borde frontal de avance,

microespinas y lamelipodios dimimicos que contienen actina"
Las expansiones superficiales dimimicas que contienen filamentos de actina son
una caracterfstica comun de las celulas animales, especial mente cllando las cl!-
lulas estan migrando 0 cambiando de ronna. Las voluminosas cl!lulas vivas de
Amoeba proteus, por ejemplo, producen pselld6podos -extensiones COrlas y
gruesas del c6r1ex de actina- can los coales se mueven sobre las superficies. En
los tejidos de los venebrados, muchas relulas tambil!n son capaces de despla-
zarse sobre una superficie, especialmente cuando se cultivan. EI borde fromal de
avance de un fibroblasto que se arraslra extiende regularmente delgadas protu-
berancias laminates conocidas como lameUpodios, que poseen una densa red
de filamentos de actina. Muchas cl!lulas emiten tambien protrusiones delg:ldas y
rfgidas lIamadas mkroespinas. de aproximadamente 0,1 pm de diametTO y entre
5 y to pm de largo y que conuenen un haz laxo de aproximadamente 20 filamen-
tos de actina orientado con su extremos mas hacia el exterior (vl!ase Figura 16-
9). EI extremo en crecimiento (nucleo de crecimiento) de un ax6n nervioso ex-
tiende microespinas incluso mas largas, lIamadas jiJopodios. que pueden tener
hasta 50 pm de largo.
Un lamelipodio puede ser considerado como una versi6n bidimensional de
una microespina; de hecho, a menudo este borde de la cl!lula esta delimitado
par corlaS microespinas. Cuando una celula en movimiento es fijada y contras-
tada cuidadosamente para ser examillada aI microscopio electr6nico, se observa
c6mo los filamentos de actina de los lamelipodios parecer estar mas organiza-
dos que en Otras regiones de la corteza celular. Muchos de los filamentos se pro-
yectan hacia el exterior siguiendo una disposici6n ordenada, con sus extremos
Mm<1s~ insertados en el borde frontal de avance de la membrana plasm<1tica (Fi-
gura 16-54). Los lamelipodios se comportan como una unidad estructural; si se
pierde su adhesi6n al substrato, normalmenle se retraen r:jpidamente hacia
atras y se enrollan de nuevo sobre la c61ula como un "rizo" (Figura 16-55).

Figura 16-55 Lamellpodlosy

mlcroeslJlnas del borde frontal de
avance de un nbroblasto humano en
cuhlvo que esta mJgrando. La necha
indica la direcci6n del desplazamiento
de la celula. A medida que la celula va
avanzando, los lamelipodios y las
microespinas pierden su uni6n a Ja
placa de Cullivo y se enrollan sobre la
superficie dorsal-un mo\li.mienlo
conocido como rizado (ruffling). (Por
conesfa de Julian Hearn.)

Filamentos de actina 887

 IAI IBI lei 101

Tanto los lamelipodios como las microespinas son estructuras m6viles que Figura 1656 Dlnamica de un
pueden formarse y retraerse a una gran velocidad. Tal como discutiremos mas filamento de actina en ellamellpodlo
adelante, se cree que estas microespinas y lamelipodios SOil generados por 1a po- de un Dbroblasto en cultivo. Las
limerizaci6n de la actina local en la membrana plasmatica y que eSla actina pue- mol~culas de actina marcadas con el

de rl1pidamente empujar 1a membrana plasmatica hacia adelante sin rasgarla. coloranle fluorescente rodamina
fueron microinyectadas en una c~lu1a,
donde fueron incorporadas a los
El borde frontal de avance de las celulas m6viles nuclea filamentos de actina. Utilizando un
la polimerizaci6n de la actina38 rayo !liser se produce una pequena
mancha (por eliminaci6n del marcaje
Cuando se estudia el comportamiemo de los filamentos de actina en el borde Iluorescenle) sobre los mamenlos de
frontal de avance, marcando una pequefia parte de la actina y siguiencto su mo- actina en el extrema anterior de la
vimiento, puede verse c6mo 1a actina se mueve continuamente de regreso hacia celuta. Enlonces la c~lula se fotograffa
el cuerpo celular a una velocidad de aproximadamente I J.lm/minuto, 10 que su- a intervalos de tiempo utilizando un
giere que esta actina esta continua mente polimerizando cerca del borde frontal microscopio Iluorescente equipado
de avance y continuamente despolimerizandose en lugares mas internos (Figura con un intensificador de imagenes. EI
1656). Se cree que este comportamiento altamente dinamico de los filamentos rapido movimiento hacia atras de la
de actina en el borde frontal de avance es crucial para procesos tales como la 10- mancha sugiere que las moJecuias de
comoci6n celular y la quimiotaxis. La impresi6n general es que el borde frontal actina poHmerizan continuamente en
el extremo del borde frontal de avance
de avance se impulsa a sf mismo hacia delante empujando los filamentos de ac
y se despolimerizan en su base. (Par
tina hacia atras.
cortesfa de Y.L. Wang.)
Parece que el borde frontal de avance de una celula organiza los filamentos
de actina al igual que un centrosoma organiza los microtl1bulos, pero con una
diferencia crucial: no nuclea unicamente el crecimiento de nuevos filamentos Figura 1657 1 extremo del borde
frontal de avance nudea fIIamenlos
sino que tambien parece ser el lugar en que los mon6meros se van anadiendo,
de actina. Fibroblaslos en cultivo se
permitiendo el alargamiento de los filamenlos. Esta funci6n puede demostrarse permeabilizaron ligeramente con un
si lisamos Iigeramente un fibroblasto y entonces ai\adimos mon6meros de actio detergenle no i6nico y entonces se
na unidos a rodamina, los cuales se ha visto que polimerizan preferentemente incubaron con moleculas de actina
en ellimite del borde frontal de avance (Figura 1657). Ademas, si se marcan los marcadas con rodamina (rojo). Al cabo
de 5 minutos se fijaron las c~lulas y se
marcaron can faloidina marcada con
Iluorescefna (verde). (A) Todos los
mamenlos de actina, la mayorfa de
ellos formados antes de la lisis, se
marcan en verde. (B) La localizaci6n de
los ftIamentos de actina nuevamente
formados (rojo) polimerizados a partir
de la actina marcada con rodamina
ai\adida pennite observar que el
borde fronlal de avance es ellugar
predominate de nucleaci6n de
ftIamentos de actina en 1a c~lu1a. (De
M.H. Symons yT.J. Mitchison,j. cell
Bioi. 114:503513, 1991, reproducido
con permiso de copyright de The
Rockefeller University Press.)

888 Capitulo J 6: EI citoesqueleto

 polimerizaci6n de Ia actin.
lin eI borde ..
lronl~'~'de:';'~'~::rr.ifT,.,..,
modelo del inllllcambio rolatorio largos filamentos dll actina $e d~pollmeliz.n
en III pane lIaser. dellamelipodio
Figura 16-58 Dos modelos que
podrfan expUc::ar el OuJo retnSgrado
de actina en un lameUpodlo. Las
fl1uu azules indican la direcci6n del
movimiemo de la aHula. Aunque aqui
se muestran las diferencias entre los
dos modelos, ambos procesos pueden
darse simult!neamenle en la c~lula.
(Adaptado de JA Theriot yT.I.

los filamento' de
aClina 511 nuclean en
el borde Iront81 de
Milchison, Nafllre352:126131, 1991 .
Rcproducldo can el permiso de
Nature. e 1991 Macmillan Magazines
Ltd.)
avence

Ia red de filemenlos de actina liberados en

modelo de liberllCi6n de III nucleaclOn III borde Iron... de Bvllnee SIll des.pl.~ h1a Ia
pane poslefio1' del IamehpodlO

ftIamentos de actina para pader observar su polaridad, se encuentra que en cada

nJamento de actina, el extrema mlts de n1pido crecimienlo se encuentra unida a
la membrana en el borde frontal de avance.
Hay aun Jnuchas cuestiones sin respuesta acerca del mecanismo mediante
el eual el borde frontal de avance nudea la polimerizaci6n de los filamcntos de
actina. lEI borde frontal de avance se une aI extrema mas del filameolo que tlU-
clea, 0 nuclea lIll nuevo filamento y nipidamente se Iibera de cl? A causa del mo-
vimiento reu6grado de la actina (vease Figura 16-56), algtill modelo postula que,
para que el borde frontal de avance se agarre a los extremos de los fLIamento de
actina se necesitarfa que los fLIamentos dellamelipodio estuvieran en continuo
intercambio rotatorio mediante la inserci6n de mon6meros de actina en los lu-
gares donde los filamentos estAn unidos a la membrana. En un modele a1ternati-
va, los filamenlos de actina individuales serfan Iiberados en cuanlo se formamn
y se desplazarian alejAndose de la membrana (seguramente como una red de
puentes cruzados) (Figura 16-58).
EI rapido ensamblaje de los filamentos de actina en cl borde frontal de avan-
ce de una celula en movimiento implica la liberaci6n de los mon6meros de acti-
na de las protefnas de uni6n al mon6mero, que normnhnente impiden In poli-
mcrizaci6n de los filamcntos de actina. Discutiremos mas adelante c6mo las
sei'iales del ambiente celular extcrno pueden regular esta liberaci6n y permitir la
polimerizaci6n de los mon6meros de actina en el extremo del borde fronlal de
avance.

AJgunas bacterias pat6genas utilizan la actina

para moverse dentro y entre las c~lu1as39
Listeria mOllocytogenes, una bacteria que provoca una fonna aguda de envene-
namiento a1imentario, ha proporcionado datos inesperados acerca delmecan..is-
mo mediante el cualla celula controla la polimerizaci6n local de la actina. Esta
bacteria pat6gena penetra por fagocitosis en la celula; entonces secreta enzimas
que rompen la membrana del fagosoma y se Iibera en el citosol de la c6111la
hllcsped. Una vez en el citosol, no sola mente crece y se divide, sino que se des-
plaza hacia las ccJulas adyacentcs movilizando el sistema de motilidad basado
en los filamentos de actina de la celula huesped. Mediante la nucleaci6n de los
filamentos de actina en una regi6n de su superficie, una bacteria individual se
desplaza por el citosol a una velocidad de 10 pm por minuto 0 mas, dejando lras
ella una cola de filamentos de actina. Cliando oolisiona can la membrana plas-
matica de la celula huesped, se desplaza hacia el exterior induciendo la fonna-

FilamenlOS de actina 889

 ~I~
bactarie libra

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(
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