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VENTAJAS
experimentos.
Podemos ver tambin cmo afectan los cambios de temperatura, de pH, el tipo de
haciendo titulaciones.
LIMITACIONES
Como no todo son ventajas, algunas de las limitaciones las podemos encontrar en
mximo de las protenas susceptibles de ser investigadas por RMN est en torno a
los 60-80 kDa para las tcnicas de rutina pero estos lmites pueden ir aumentando
tiene que ser grande, en el rango de los miligramos por cada 500 microlitros y el
mantenimiento como el tener que rellenar los espectrmetros con nitrgeno y helio
lquidos, sino que las muestras para estudio pueden necesitar un marcaje
El personal tiene que tener una formacin muy especializada en RMN, por ello en
el equipo contamos con fsicos, qumicos y bioqumicos que trabajan sinergia. Esta
tcnicas.
Finalmente, para asignar un espectro de resonancia, hace falta dedicar mucho
esfuerzo y tiempo.
MATERIAL DE PARTIDA
Para adquirir los espectros de RMN, es necesario que las muestras estn en
espectrmetros de 1 GHz.
Los ncleos empleados para estudio, como he mencionado antes, tienen que
tener un spin nuclear distinto a cero y contamos para ello con distintos istopos
realmente baja, como el 13C que ronda el 1.1%, mientras que el 15N del 0.37%.
N = ruido (noise)
B0 = Campo magntico
Los ncleos con espn diferente a cero pueden considerarse como pequeos
imanes que colocados dentro de un campo magntico tienen una energa que
energa, la diferencia de poblaciones entre los dos niveles es muy pequea y esto
radiofrecuencia.
Por otra parte, una criosonda hace que RT en el denominador sean muy bajos y
s, sino que en funcin de los resultados que se vayan obteniendo, puede ser
Hay que tener en cuenta que las macromolculas son molculas grandes y que a
y las seales del espectro sern ms anchas. Es por eso que se recurre a la
estudio.
o RNA.
resonancia y para ello, la muestra tiene que ser soluble, estar muy concentrada,
de los espectros.
Se pueden variar distintos parmetros como el pH, la temperatura, los tampones,
de la protena.
radiofrecuencia.
magnetizacin al eje y.
tipos de experimentos.
parmetros de RMN. El mtodo de clculo debe ser capaz de ajustar todas las
restricciones experimentales y de explorar adecuadamente el espacio
conformacional.
los datos experimentales a una nica estructura se mide por el valor RMSD.
esta falta de orden refleja la existencia de una regin muy flexible en la estructura
de la protena.
DINMICA
Las protenas no son rgidas, para tener su funcionalidad biolgica hace falta que
Por RMN se puede estudiar los grados y las regiones de mayor flexibilidad, lo cual
mayores.
Tipos de RMN[editar]
Espectroscopia de RMN con Onda Continua (CW: Continuous
Wave)[editar]
Desde sus comienzos hasta finales de los 60, la espectroscopia de
RMN utiliz una tcnica conocida como espectroscopia de onda
continua (CW). La manera de registrar un espectro de RMN en el
modo de CW era, bien mantener constante el campo magntico e ir
haciendo un barrido de frecuencias con un campo oscilante, o bien, lo
que era usado ms a menudo, se mantena constante la frecuencia del
campo oscilante, y se iba variando la intensidad del campo magntico
para encontrar las transiciones (picos del espectro). En la RMN de CW
las seales del espectro se registran como seales en resonancia.
La seal que se detecta FID (Free Induction Decay) es una seal oscilante que
contiene todas las seales del espectro y decae hasta hacerse cero.
La FID es una onda que contiene todas las seales del espectro en
una forma que es dependiente del tiempo. Esta onda puede
convertirse en un espectro de seales en funcin de su frecuencia.
Para ello se utiliza una funcin matemtica conocida
como Transformada de Fourier. El resultado es lo que se conoce como
un espectro de RMN (espectro de frecuencias).
RMN Multidimensional[editar]
La posibilidad de excitar la muestra con uno o ms pulsos de
radiofrecuencia (RF), cada uno de ellos aplicado con una potencia,
duracin, frecuencia, forma y fase particulares, e introducirlos en
momentos especficos de tiempo durante el experimento de RMN,
generalmente antes de que el sistema haya regresado al equilibrio por
relajacin, permite disear toda una gama de secuencias de pulsos de
las que se puede extraer informacin molecular muy variada.
Slidos[editar]
La RMN en disolucin es complementaria de la cristalografa de rayos
X ya que la primera permite estudiar la estructura tridimensional de
las molculas en faselquida o disuelta en un cristal lquido, mientras
que la cristalografa de rayos-X, como su nombre indica, estudia las
molculas en fase slida.
Sensibilidad[editar]
Debido a que la intensidad de la seal de RMN, y por tanto, tambin la
sensibilidad de la tcnica depende de la fortaleza del campo
magntico, desde los inicios de la RMN ha existido gran inters por el
desarrollo de imanes ms potentes. En la actualidad los imanes
comerciales ms potentes estn en torno a los 22.31 T, o 950 MHz
frecuencia de resonancia de 1H. Los avances en la tecnologa audio-
visual e informtica tambin han mejorado los aspectos de generacin
de pulsos y la recepcin de seal y el procesado de la informacin.
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Ejemplo de un espectro APT, un tipo de experimento de C.
http://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099.1/9988/05_RMN.pdf?sequence=5