UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO - FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

DETERMINACION DE LA GLUCOSA EN LA SANGRE DE PERRO

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.

La investigacin realizada en la universidad nacional del altiplano de puno de

la facultad de medicina veterinaria y zootecnia y escuela de la misma mencionada,
se realiza el estudio de experimentacin con muestras biolgicas como la sangre
de perro, ya que la sangre del animal contiene propiedades orgnicas pero para su
estudio se considerara los carbohidratos o glcidos, se sabe que en un nivel normal
los glcidos favorecen al cuerpo del animal para mantenerse con energa y un
incremento de estos puede producir enfermedades no tan comunes en perros como
la diabetes, hiperglucemia y un descenso puede causar anemia o hipoglucemia,
para mantener un nivel adecuado de glucosa en el organismo se debe conocer el
nivel de glucosa en sangre de la mascota (perro) ,para as saber que alimentos
favorecen su alimentacin saludable por ello debemos identificar si el animal sufre
de enfermedades relacionadas a la glucosa ,asi mismo utilizaremos mtodos
cientficos y experimentales para determinar.
Tomando en cuenta algunos antecedentes incluidos en la investigacin se
formula la siguiente pregunta:

Qu mtodo es ms exacto para determinar el nivel de glucosa en sangre de

perro?

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2. HIPOTESIS:

2.1. HIPOTESIS GENERAL

a) El mtodo enzimtico colorimtrico es ms exacto, en cuanto a su

ejecucin para obtener resultados slidos y verdicos.

2.2. HIPOTESIS ESPECIFICOS

a) Utilizar los reactivos enzimticos especficos para determinar de

glucosa obtenemos resultados visibles y comparables en colorimetra.

b) Hacer comparaciones de las caractersticas colorimtricas entre

muestra problema y muestra estndar obtenemos resultados similares.

c) Usando parmetros de glucosa normal y muestra problema realizamos

clculos aplicando formulas especficas y obtenemos resultados ms
precisos.

3. OBJETIVOS

3.1. OBJETIVO GENERAL

1. Determinar los niveles de glucosa en la sangre de perro con tcnicas y

mtodos enzimticos colorimtricos.

3.2. OBEJTIVOS ESPECIFICOS

1. Desarrollar el procedimiento aplicando el mtodo enzimtico colorimtrico

de glucosa.

2. Obtener resultados del espectrofotmetro aplicando la longitud de onda de

510 en la muestra estndar y muestra problema.

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3. Calcular los resultados obtenidos del espectrofotmetro, usando formulas

especficas propuestas por el mtodo usado.

4. MARCO TEORICO

(BETTERHEIM, 2000) Dice que los hidratos de carbono son compuestos orgnicos
formados fundamentalmente por C, O e H a partir de los cuales se puede obtener energa
con gran rapidez y que aportan, aproximadamente, el 50% de las caloras que recibimos
de la dieta.

Se ingieren en forma de polisacridos (ej. almidn), disacridos (ej. sacarosa

y fructosa) o monosacridos (ej. glucosa y galactosa). En cualquier caso, se
desdoblan en el intestino hasta obtener monosacridos que son absorbidos y
transformados en glucosa a nivel heptico.

Los niveles de glucosa en sangre (glucemia) se mantienen dentro de unos lmites

muy estrechos y constantes gracias, fundamentalmente, a la accin de dos hormonas:
la insulina (hipoglucemiante) y el glucagn (hiperglucemiante). As, tras la ingestin
aumenta la glucemia pero, en las personas con un correcto metabolismo hidrocarbonado,
estos niveles descienden rpidamente (gracias a la liberacin de insulina) de manera que
tras 1,5-2 horas la glucemia vuelve al nivel basal. (KARP,G. 1998 p.44)

1. Alteraciones del metabolismo glucdico , la diabetes

Aunque las patologas relacionadas con alteraciones del metabolismo

glucdico son muy diversas, vamos a centrarnos en los trastornos en la regulacin del
nivel de glucosa en sangre

Cuando la homeostasis de la glucosa se rompe por disfuncin de cualquier

elemento que la mantiene, sobrevienen los sndromes hiper o hipoglucmicos que,
como su nombre indican, conllevan el aumento (>120 mg/dL en ayunas) o la
disminucin (<45-50mg/dL) de la glucemia, respectivamente. (HERRERA GUSTAVO
Salud y bienestar p 12).

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1.1. Diabetes mellitus

La diabetes mellitus es la causa ms frecuente y grave de hiperglucemia. Es una

metabolopata crnica que aparece como consecuencia de la deficiencia absoluta o
relativa de insulina. En estas condiciones, la entrada de glucosa en las clulas est
disminuida y en consecuencia los niveles en sangre se mantienen elevados
(hiperglucemia). Esta deficiencia da lugar a una serie de complicaciones a largo
plazo, lo que origina una gran morbilidad y mortalidad.

Existe otro tipo de alteracin denominada disminucin de la tolerancia a la glucosa o

tolerancia anormal a la glucosa que se caracteriza por valores de glucemia intermedios
entre los normales y los de los diabticos.

1.1.1. Clasificacin:

Actualmente la diabetes se clasifica en: Diabetes tipo I

(dficit total de insulina).
Diabetes tipo II (resistencia a la insulina o defecto secretor con resistencia
a la insulina, los enfermos al principio no requieren la administracin de
insulina).
Diabetes secundaria (enfermedades pancreticas, tumores endocrinos).
Diabetes gestacional (se detecta durante el embarazo).

1.1.2. Sntomas

La diabetes cursa con polifagia, polidipsia, poliuria, disminucin del peso corporal,
hiperglucemia y en ocasiones glucosuria.

1.1.3. Diagnstico

Las pruebas ms utilizadas para el diagnstico de la diabetes se basan en la

demostracin de una tolerancia anormal a la glucosa. Concretamente se suele:
Determinar la glucemia basal
Realizar pruebas de provocacin o sobrecarga en las que se administra al
paciente una cantidad conocida de glucosa y se analiza la evolucin de la
glucemia. Entra estas pruebas se incluyen la curva de glucemia y el test de

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OSullivan.

Se considera diabetes si se cumple alguno de los tres puntos que se citan a

continuacin:
Nivel de glucemia > 200 mg/dL acompaado de los sntomas tpicos de la
enfermedad.
Glucemia en ayunas > 140 mg/dL, obtenida en dos ocasiones Glucemia en
ayunas entre 110 y 140 mg/dL y dos curvas de glucemia positivas

2. Determinacin de la glucemia basal

Esta prueba consiste en determinar la glucemia tras un ayuno de 10-16h). En general

se considera que:
Valores menores de 110 mg/dL son normales.
Valores entre 110 y 140 mg/dL son dudosos y deben ser
confirmados.
Valores mayores de 140 mg/dL son probablemente indicativos de diabetes.

5. METODOLOGIA

(KRAFT H. 2001 Mtodos de laboratorio clnico p. 34) Cabe indicar que en su libro: Se
realiza mediante el Mtodo enzimtico, para la determinacin de glucosa en suero o
plasma
La patologa ms comn relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la
diabetes mellitus. El diagnstico precoz y el control en los animales diabticos, tienen por
objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los sntomas resultantes de la
hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado. Dado que existen mltiples factores
causales de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la condicin fisiolgica
y/o la patologa presente en el animal en cuestin.

La glucosa es oxidada a D-gluconato por la glucosa oxidasa (GOD), con formacin

de perxido de hidrgeno. En presencia de peroxidasa (POD), el fenol y la 4-
aminoantipirina (4-AA) se condensan por accin del perxido de hidrgeno, formando una
quinonaimina roja proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra.

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GOD
-D-Glucosa + H2O + O2 D-Gluconato + H2O2

H2 O 2
4-AA + Fenol Quinonaimina + H2O
POD

Como resultado se produce un cromgeno de color rosado cuya densidad es proporcional

a la cantidad de glucosa que hay en la muestra de suero sanguneo de perro.

Equipo y material

1. Espectrofotmetro calibrado a una longitud de onda de 510 nm

2. Bao mara a 37 C
3. Pipeta automtica de 1000 micro Litros.
4. Pipeta automtica de 100 micro Litros.
5. Tres tubos de ensayo de material de vidrio.
6. Gradilla

Material biolgico

1) Sangre de perro.

Reactivo enzimtico.

Todos estos materiales estn incluidos en el kit de GLUCOSA.

1. 12, 000 U\L de glucosa oxidasa

2. 660 U\L de peroxidasa.
3. 0.4 mmol\L de4-animo-antipirina

Se realizara mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.

PROCEDIMIENTO:

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1. Obtener sangre del animal en ayunas, debe cumplir las condiciones necesarias.

a) El animal no debe ingerir alimentos antes de obtener la sangre

b) El animal o persona no debe ingerir alcohol.
c) El animal no debe ingerir medicamentos.

2. Una vez obtenido la sangre del animal en una jeringa de 20 mL. Colocar en un
tubo de ensayo.
Levar rpidamente a la centrifugadora RPM 10
Una vez terminado la centrifugacin sacar la muestra de sangre
Separar el suero sanguneo con una pipeta de 10 Ml

3. Preparar el siguiente juegos de tubos ( con la finalidad de conocer y determinar el

nivel de glucosa de cada uno).

Blanco Standar Suero

Estndar - 10 uL -
Suero sanguneo - - 10 uL
Reactivo
1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
enzimtico

4. Mezclar suavemente las muestras de los tubos de ensayo.

5. Llevar a bao mara a 37 C
6. Verter las muestras en una cuadrilla fotomtrica.
7. Leer por separado las muestras en el espectrofotmetro a una longitud de onda de
510 nm contra el blanco. El color producido es estable por una hora.
8. Determinar los clculos obtenidos por el espectro fotmetro.

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6. CONCLUSIONES:

I. Este mtodo esta prximamente relacionado a las determinacias de propiedades

qumicas orgnicas e el organismo del animal, los mtodos son aplicables a
exmenes clnicos como en veterinarias, y hospitales, ya que nos permite saber el
nivel de sustancias qumicas orgnicas inorgnicas, y toxicas que tenemos en la
sangre.

II. El uso del mtodo enzimtico colorimtrico facilito determinar en la sangre de

perro el nivel de glucosa en sangre en su organismo, este experimento colabora a
obtener nuevas experiencias para un buen desarrollo y dominio del mtodo, as
mismo para su uso para en los prximos exmenes clnicos.

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7. PRESUPUESTO.

Materiales y reactivos precio

Jeringa de 20 mL 1.00

Algodn 1.50

Alcohol 1.50

Reactivos enzimtico de glucosa 8.00

TOTAL 12.0 OLES

8. BIBLIOGRAFIA

BETTELHEIM Y LANDESBERG 2000. Laboratory for generaland

biochemistry Londres. Fourth Edition

KARP, H. 2001 Biologa Celular y molecular. McGraww Hill

Interamericana. Espaa.

KRAFT, H. 2001 Metodos de laboratorio clnico en medicina

veterinaria de mamferos domsticos. Editorial acribia, S.A.,
Zaragoza, Espaa.

9. WEBGRAFIA:

HERRERA, G. https://www.diabetesbienestarysalud.com/2009/08/los-
carbohidratos-y-su-impacto-en-la-glucosa/

http://www.clinicaveterinariasanjorge.com/p/la-diabetes-canina.

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10. ANEXOS.

Obtencin del animal

Extraccion de la sangre del animal con la jeringa de 20 mL, colocada

en un tubo de ensayo isto para la centrifugacion por 10 RPM.

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muestra de sangre ya centrifugada, obtecion del suero sanguineo.

Organizar materiales para el uso y determinacin de la glucosa

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Organizar materiales para el uso y determinacin de la glucosa

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