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El primer factor que analizaremos ser la temperatura que el aumento de esta va a incrementar el
movimiento de las cadenas de aminocidos y de los grupos laterales, y por tanto, aumenta la fuerza
y frecuencia de las colisiones entre las molculas y las enzimas que las rodean. Dicho aumento de
las colisiones presentes entre las molculas de la enzima y el sustrato favorecen la reaccin
catalizada debido al contacto entre ellos. Al presentar temperaturas elevadas, estas colisiones
adquieren un comportamiento violento, siendo capaces de romper los puentes de hidrogeno y las
fuerzas de van der Waals, que son enlaces relativamente dbiles, logrando disminuir la actividad
enzimtica. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se
eleva demasiada, la enzima pierde su actividad.
El segundo factor que analizamos es pH en donde los cambios del mismo pueden alterar al estado
de ionizacin de las cadenas laterales de los aminocidos cidos y bsicos, en donde estos cambios
pueden afectar a la afinidad de la enzima por el sustrato, si las cargas se ven alteradas las cargas de
los aminocidos que participan en la formacin de interacciones no covalentes entre la enzima y el
sustrato para formar complejo ES. Tambin se puede alterar la etapa de transformacin del
sustrato en producto, si se modifican los residuos catalticos.
Otro factor que entra a tallar tambin es la concentracin del sustrato, a mayor concentracin del
sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus de que se
alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad
de la reaccin y concentracin de la enzima siempre y cuando haya sustrato disponible, un
aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica hacia cierto lmite
temperatura.
Si bien usamos la amilasa, que es una enzima que ayuda a dirigir los carbohidratos o almidones,
siendo esta enzima la que se utiliz para el anlisis de los factores externos que alteran la actividad
enzimtica; la temperatura ptima de dicha enzima es de 50 a 55C, pero en las reacciones usadas
fue satisfactoria a 37C. Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta ciertos
lmites.
Ahora bien los monosacridos poseen un poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen
en su molcula. Nosotros hemos empleado el reactivo de Fehling, que consiste en una mezcla de dos
reactivos: el Fehling A (sulfato cprico), de color azul, y el Fehling B (tartrato sdico-potsico),
incoloro. La glucosa por poseer el grupo carbonilo que permite que la reaccin de Fehling se obtenga
xido de cobre, que tras ser calentado da un precipitado de color rojo, el cual observamos en todo
los tubos al finalizar los 10 y 15 minutos.
En los tubos de ensayo:
Las enzimas, en su mayora, son protenas con la capacidad de manipular otras molculas,
denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al sitio activo de la enzima que lo
reconozca y transformarse en un producto a lo largo de una serie de pasos denominados
mecanismo enzimtico.
3) Como vemos, en el tubo de ensayo nmero 03, la enzima amilasa salival fue sometida a un
pH de 8.0 con el buffer fosfato, el cual es demasiado alcalino para esta enzima; por lo tanto
se desnaturaliz y no pudo cumplir su funcin, lo que se expres en la no formacin del
producto esperado. El pH ptimo para que la amilasa saliva realice su funcin es de 5 a 7,
cualquier valor que o est dentro de ese rango proceder a desnaturalizar la enzima.
4) Por el contrario, en el tubo de ensayo nmero 04; la enzima amilasa salival fue sometida a
un pH de 4.7 con el buffer fosfato, el cual fue demasiado cido para esta enzima; por lo que
tambin se desnaturaliz y no pudimos observar la formacin de producto, ya que no pudo
cumplir su funcin. El pH ptimo para que la amilasa saliva realice su funcin es de 5 a 7,
cualquier valor que est dentro de ese rango proceder a desnaturalizar la enzima.
5) En el tubo 5 en los primeros 5 min: La amilasa salival tuvo reaccin con su sustrato almidn
formando productos. Esto sucedi a pesar de la presencia del Fenol, que es un disolvente
orgnico. Esto fue debido a que la concentracin de Fenol no era suficiente para causar la
desnaturalizacin del enzima. Tambin a pesar de la presencia del cido clorhdrico, hubo
reaccin, debido a que este fue amortiguado por el tampn de fosfato a un pH de 6.8.
En la prueba del yodo apareci una tonalidad de color amarillo lo que nos indica que no hay
presencia de sustrato almidn y por consiguiente no hubo formacin de cadenas de
poliyoduro. La bibliografa nos dice que, la amilasa salival siendo una protena, en presencia
de una concentracin elevada de Fenol se desnaturaliza.
Adems tambin en presencia de cido clorhdrico se desnaturaliza a menos que exista un
tampn que el amortige, como es el caso del buffer fosfato a un pH de 6.6. Debido a la
desnaturalizacin de un enzima como es la amilasa, en contacto con su sustrato no debi
haber formacin de producto, lo cual en la prueba del yodo aparece una tonalidad
purpurea debido a la formacin de cadenas de poliyoduro. Lo mismo ocurri en el tubo 5 a
los 10 y 15 min del incubado en la reaccin. En el tubo 5, en la reaccin con el Fehling A y B,
no hubo producto debido que no haba presencia de azucares reductores.
CONCLUSIN
La finalidad de la prctica era comprobar como el cambio del Ph y la temperatura afectaba a la
actividad enzimtica. El pH en el plasma sanguneo presenta valores prximos a la neutralidad 7,4 y
su desviacin de unas pocas dcimas provoca alteraciones muy graves, la temperatura presenta dos
efectos contrapuestos, por un lado el aumento de temperatura produce, un aumento en la
velocidad de cualquier reaccin qumica; pero por otro lado, las enzimas experimentan
desnaturalizacin y prdida de actividad al superar una determinada temperatura.
En la presente practica se pudo determinar la forma como ciertos factores pueden afectar las
reacciones enzimticas, provocando una disminucin de la actividad de estas, generando su
desnaturalizacin y por ende impidiendo su capacidad de unirse a un sustrato para poder generar
un producto. Estos factores vienen determinados por el cambio de un pH o por un aumento de la
temperatura, provocando que no cree un estado ptimo para que se puedan obtener productos de
estas reacciones.