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Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Bacteriologa Mdica
PRACTICA 1
CEPAS DE REFERENCIA
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
RESUMEN
INTRODUCCION.
ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES.
Las enfermedades gastrointestinales ocupan una de las primeras causas de
consulta mdica y son tambin una de las primeras causas de muerte en Mxico y
en el mundo.
No perdonan a nadie ni por edad ni por condicin social, aunque el grupo ms
vulnerable a sus sntomas son los nios pequeos y los ancianos.
Son ocasionadas por varios motivos que pueden ser desde orgnicos y psicolgicos,
pero principalmente son causadas por bacterias, virus o parsitos que penetran al
organismo por medio de alimentos y agua contaminada principalmente con materia
fecal que tambin se disemina por el ambiente, sobre todo en temporada de calor.
Entre los principales microorganismos que las ocasionan estn: la Salmonella, la
Escherichia coli, la Shigella, las Giardias y las temibles amibas.
Las principales manifestaciones son.
Fiebre.
Dolor estomacal o abdominal (clicos).
Nuseas.
Vmito.
Diarrea.
Constipacin o estreimiento.
Una de las consecuencias y complicaciones ms graves cuando hay diarrea y
vmito, es la deshidratacin.
Los rganos que son afectados con mayor frecuencia son: el esfago, estmago,
duodeno, ano, recto, pncreas y los intestinos, el delgado y el grueso.
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Entre los estudios para identificar exactamente el tipo de problema, estn los de
sangre, materia fecal, endoscopas, radiografas y ecografas, adems de la
exploracin fsica y la historia clnica.
RESULTADO DE APRENDIZAJE.
Identificar los diferentes microorganismos patgenos del tracto gastrointestinal
presentes en la muestra.
MATERIALES Y METODOS.
MATERIAL Y EQUIPO.
Bata de laboratorio, cubre boca, guantes ltex.
2 Mecheros.
Microscopio ptico de campo claro.
Incubadora.
Asa de nicromio redonda y asa de nicromio recta.
Portaobjetos.
Puente de tincin.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina estril al 0.85%.
Reactivo de FeCl3.
Reactivo de Kovacs.
Rojo de metilo.
-Naftol
KOH al 40%
Cepas de referencia (Vibrio parahemolyticus, Salmonella
typhi, Salmonella enteritidis, Shigella sonnei y Yersinia enterocolitica).
2 Agar McConkey.
2 Agar Salmonella-Shigella.
1 Agar sulfito de bismuto.
1 Agar TCBS.
21 Agar XLD.
5 Triple azcar hierro (TSI).
5 Medio MIO.
5 Rojo de metilo.
5 Voges-Proskauer.
5 Caldo de urea.
5 Agar LIA.
5 Fenilalanina.
5 Citrato.
5 SIM.
Papel estraza.
Agua destilada.
Aceite de inmersin.
Gradilla.
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METODOS.
Tincin de Gram.
En un portaobjetos se coloca una gota de solucin salina al 0.85%, con el asa de
nicromio se toma una colonia del cultivo y se homogeniza la muestra sobre el
portaobjetos que contenga la solucin salina, se deja reposar a temperatura
ambiente, y se espera a que esta seque, depuse de que esta haya secado se
procede hacer lo que es la tincin de Gram:
1. Fijar el frotis con calor.
2. Cubrir con cristal violeta por un minuto.
3. Lavar con agua.
4. Cubrir con yodo lugol por un minuto.
5. Lavar con agua.
6. Decolorar con alcohol acetona de 10 -15 segundos.
7. Lavar con agua.
8. Cubrir con safranina por un minuto.
9. Lavar con agua y secar.
10. Observar en el microscopio con los objetivos de 10X y 100X.
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Pruebas bioqumicas.
TSI (Triple azcar hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de
la caja petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye y se
inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la parte de arriba, se cierra
y se incuba por 24 horas a 37C. Los resultados pueden dar de la siguiente manera:
K/K Rojo arriba y abajo.
K/A Rojo arriba y amarillo abajo
A/A Amarillo arriba y abajo.
Si se presenta un precipitado negro es que es productor de cido sulfhdrico.
LIA (agar lisina hierro). Se esteriliza el asa de nicromio y se toma una colonia de la
caja de petr que contenga la cepa de referencia, se toma el tubo de ensaye que
contenga el medio y se inocula por picadura directa hasta el fondo y se estra en la
superficie, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C. Despus del periodo de
incubacin se revisan los resultados, en este se revisa:
Produccin de H2S. Color negra (+).
Desaminacin. (Arriba) Color roja (+)
Color amarillo (-)
Descarboxilacin (Abajo) Color morado (+)
Color amarillo (-)
MIO. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura
directa hasta el fondo, se cierra el tubo y se incuba por 24 horas a 37C.
Pasado el tiempo de incubacin se agregan 4 gotas del reactivo de kovacs. Los
resultados se pueden dar de la siguiente manera:
Desaminacin: se lee en la parte de arriba del tubo, si al momento de agregar el
reactivo kovacs se presenta un anillo rojo es una desaminacin (+) e indol (+) y si se
presenta un anillo amarillo es una desaminacin (-) e indol (-).
Descarboxilacin: Si se presenta una coloracin morado-verdoso es una
Descarboxilacin (+) y si se presenta una coloracin amarillenta o blanca es una
Descarboxilacin (-).
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SIM. Se toma una colonia con el asa de nicromio y se inocula el medio por picadura
hasta el fondo, se cierra y se incuba por 24 horas a 37C.
Pasado el tiempo de incubacin se agregan 4 gotas del reactivo de kovacs si se
presenta un anillo color rojo es un indol (+) y si se presenta un anillo color amarillo es
un indol (-).
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RESULTADOS.
Morfologa macroscpica.
AGAR XLD
AGAR MacConkey
Salmonella sp
AGAR SS
Salmonella sp
Morfologa microscpica.
Vibrio parahemolyticus
Pruebas Bioqumicas.
Citrato - + -
FEA - - -
LIA
- + - - - + + - - -
MIO Ornitina Indol Movilidad Ornitina Indol Movilidad Ornitina Indol Movilidad
+ - + + - + + - -
Caldo
de - - -
urea
RM/VP RM VP RM VP RM VP
37C + - + - + -
- - + - - - - -
MIO Ornitina Indol Movilidad Ornitina Indol Movilidad
- - + - + -
Caldo de urea negativo negativo
RM/VP 37C RM VP RM VP
- + + -
SIM 37C Indol Movilidad Indol Movilidad
- + + + 25C
DICUSIN DE RESULTADOS
En este anlisis se puedo observar a las diferentes cepas de referencia que se nos
proporcionaron donde se puedo confirmar que se trataba de los microorganismos
que efectivamente nos haban proporcionado, esto se logro gracias a las pruebas
metablicas que se realizaron en donde, los resultados arrojados no variaron con
respecto a los que se menciona en la referencia consultada, asi que es de dicha
importancia tener en cuenta las caractersticas bioquimicas
CONCLUSIN
El estudio de la morfologa macroscpica y microscpica es de gran importancia
debido a que a travs de este estudio se pude ir identificando que tipo de bacteria es
la que se esta estudiando y as saber cuales pruebas bioqumicas son las
adecuadas para poder confirmar si se trata de la bacteria que se sospecha, y as
poder dar un resultado confiable el cual podr ayudar a dar un tratamiento adecuado
y a tiempo.
Las pruebas bioqumicas son de gran importancia ya que estas nos permiten
determinar caractersticas especificas de la bacteria a estudiar, y estas
caractersticas nos ayudan a determinar o identificar que tipo de bacteria es la que
se esta estudiando, los resultados obtenidos en esta practica fueron los esperados
ya que al compararlos con las tablas de referencia estos coincidieron en los
resultados obtenidos en las pruebas realizadas.
BIBLIOGRAFIA.
Braude, A. (1984) Microbiologa Clnica. Captulos 31 Enterobacteriaceas,.
Ed. Mdica Panamericana S.A., pgs. 394, 395, 397, 399,451.
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 2
Manual de bacter
UACH
Anlisis de Coprocultivo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
15 de Febrero de 2007
Manual de bacter
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Resumen.
Se realiz el anlisis bacteriolgico de una muestra diarreica con la finalidad de
identificar al microorganismo causante de la misma. Realizando primeramente la
siembra en agares propios para enterobacterias (McK, XLD), posteriormente en
Sulfito de Bismuto, despus de haber sido preenrriquecida la muestra con Caldo de
selenito.
Posteriormente se realiz el anlisis macroscpico y microscpico, para luego
realizar las pruebas bioqumicas correspondientes. Mismas que fueron incubadas 24
horas a 37C para despus del tiempo definido se procedi a su interpretacin, para
confirmar o descartar la posible presencia de algn patgeno.
En el anlisis realizado determin la presencia de Kluyvera ascorbata o Kluyvera
georgiana, por falta de pruebas; no se pudo definir la especie.
Introduccin.
El grupo de las Enterobacterias, nombre comn utilizado para referirse a la
Familia Enterobacteriacea, incluye a bacilos Gram (-), aerobios y anaerobios
facultativos, la mayora de ellos mviles mediante flagelos pertricos, que como
caracterstica microbiolgica fenotpica comn tienen la capacidad de fermentar la
glucosa y reducir los nitratos a nitritos. (2) (3)
Material: Equipo:
Portaobjetos y cubreobjetos. Microscopio ptico de campo claro.
Asa de nicromio punta recta. Incubadora a 37C.
Asa de nicromio punta redonda.
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri.
Hisopo estril.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.
Aceite de inmersin.
Cloruro Frrico al 10%
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Metodologa:
Primera sesin
1. Descargue muestra en primer cuadrante de medios de cultivos: McK y XLD.
2. Estriar en las cajas esterilizando el asa en cada cuadrante.
3. Colocar el hisopo con muestra en el caldo de selenito.
4. Incubar los medios de cultivo incluyendo el caldo de selenito a 37C durante 24
horas.
Segunda sesin
1. Pasado el tiempo de incubacin, revisar los medios de cultivo, realizando el
anlisis microscpico y macroscpico de las colonias.
2. Realizar pruebas bioqumicas de las diferentes colonias encontradas, seleccionar
estas de acuerdo a la morfologa microscpica que se observ.
3. Tomar el hisopo del caldo de selenito y descargar en el agar de Sulfito de
Bismuto, realizar el estriado con el asa de nicromio e incubar a 37C por 24 horas.
Tercera sesin:
1. Leer pruebas bioqumicas.
2. Observar el medio Sulfito de Bismuto, identificar las caractersticas
macroscpicas y microscpicas.
Pruebas Bioqumicas.
Se siembran con asa recta estril.
Citrato. Sembrar en el pico
FEA: Sembrar en pico
LIA: Sembrar en fondo y pico
TSI: Sembrar en fondo y pico
MIO: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha.
(despus en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovacs)
SIM: Sembrar con el asa recta con picadura hasta el fondo de forma derecha.
(despus en la lectura se le agrega 4 gotas del reactivo de kovacs)
Observacin microscpica
Colocar una gota de solucin salina en un portaobjetos.
Tomar una colonia con el asa recta estril y homogenizarla en el portaobjetos,
dejar secar a temperatura ambiente.
Fijar a la flama del mechero pasando tres veces el portaobjetos de la punta
hacia la base.
Colocar el portaobjetos en el puente de tincin y aadir cristal violeta, dejar
actuar por 1 minuto.
Enjuagar y adicionar yodo lugol, esperar 1 minuto y enjuagar.
Aadir alcohol acetona y dejar actuar de 10-15 seg., enjuagar.
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Resultados.
Macroscpicas:
Agar XLD Agar MacConkey
Kluyvera ascorbata
Microscpicas:
Bacilos cortos, Gram negativos.
Mviles, por medio de flagelos polares.
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Kluyvera ascorbata
Pruebas Bioqumicas.
Kluyvera ascorbata
TSI Gas H2S
A/A - -
Citrato +
FEA -
MIO Movilidad Indol Ornitina
+ + +
SIM Movilidad Indol
+ +
LIA H2S
- + -
RM-VP RM VP
+ -
Caldo de Urea -
Caldo de Malonato +
(4)
Desaminacin
Descarboxilacin
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Discusin.
En el anlisis de coprocultivo, se pretenda aislar las enterobacterias que causan
enfermedades gastrointestinales, como pueden ser: Salmonella, Vibrio, Shigella y
Yersinia. Los agares utilizados fueron: Agar XLD, MacConkey y Sulfito de bismuto,
donde crecieron colonias redondas, con borde entero, cremosas, convexas, en el
agar MacConkey se observaron colonias rosas por lo que indica que la bacteria
aislada, es lactosa positiva, por lo que se descarta la posibilidad de haber
encontrado alguna de las bacterias anteriormente mocionadas, ya que estas, a
excepcin de Vibrio, no fermentan la lactosa, solo que Vibrio no crece en los
agares utilizados.
As que se procedi a realizar pruebas bioqumicas, en donde se pudo diferenciar
a la bacteria aislada, cuyo genero es; Kluyvera, aunque por falta de pruebas su
especie no se pudo definir. Kluyvera es una bacteria que tambin pertenece a la
familia de enterobacterias.
Conclusin.
Se llego a la conclusin de que la bacteria aislada, es proveniente de la Familia
de las Enterobacterias, siendo por lo regular un microorganismo comensal de las
vas respiratorias altas y del aparato digestivo.
Se llego a esta por el motivo de al revisar la morfologa macroscpica y
microscpica, hubo una variable la fermentacin de la Lactosa, siendo la nica que
la fermenta el Vibrio cholerae, pero este ultimo no crece en este tipo de agar por ser
un microorganismo que necesita alcalinidad para crecer.
Bibliografa.
1. www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.htm
2. www.netropica.org/Presentaciones/ENTEROBACTERIAS%20FINAL.pdf
3. www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html
4. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico. Ed.
Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.
5. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra
edicin. Mxico.
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Bacteriologa Mdica
Practica 3
Cepas De Referencia Que Causan
Enfermedades Del Tracto Urinario
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
22 de febrero de 2007
Manual de bacter
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Resumen
En esta prctica se realiz un cultivo para identificar a las bacterias que causan
enfermedades del tracto urinario; estas son: E. coli, Enterobacter cloacae, Proteus,
Pseudomona auriginosa y Streptococcus faecalis. Para lo cual se utilizaron los
agares: sangre, MacConkey, ENDO y cetrimide, el agar cetrimide se utilizo para
identificar nicamente a la Pseudomona, as como el MacConkey, solo que en este
agar tambin se inocularon las bacterias de E. coli, E. cloacae y Proteus al igual que
el ENDO y sangre, en este ultimo tambin se inoculo el S. feacalis, una vez que
todas las cepas de referencia fueron inoculadas en los agares correspondientes se
procedi a incubar a 37C por 24 horas, trascurrido dicho tiempo se hizo la
identificacin macro y microscpicamente para luego realizar las pruebas
bioqumicas, pruebas que permiten identificar y diferenciar a las bacterias, los
resultados arrojados no variaron con las caractersticas citadas en las referencias,
solo en el Enterobacter cloacae no coincidi, por lo que se cree que la cepa fue
contaminada al momento de ser inoculada.
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Introduccin
Ms los de 80% de las infecciones humanas de la zona urinaria (UTI) son debido a
la bacteria, Escherichia coli, pero tambin se encuentran infecciones urinarias
debido a Proteus, entre otras Enterobacterias que infectan el rin las ms
comnmente encontradas son E. coli y en segundo termino esta el Proteus, que
tambin pertenecen a los Enterobacteriaceae y son bacterias mviles gram-
negativos. Se encuentran a menudo como organismos vivos libres en suelo y agua
pero son tambin parsitos en la zona urinaria superior de los seres humanos.
sta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso
digestivo. Adems produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona
negativamente a la tincin de Gram, es anaerobio facultativo, mvil por flagelos
peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la
glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.
respiratoria, piel e infecciones suaves del tejido fino, infecciones de la zona urinaria
(UTIs). Tiene flagelos peritricos, mide 0.3-0.6 x 0.8-2.0 m, es oxidasa-negativa,
catalasa-positive, y es facultativo anaerobia. Es un patgeno oportunista al igual que
otras bacterias de la familia enterobacteria.
Resultado De Aprendizaje.
Material: Equipo:
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.
Aceite de inmersin.
Cloruro Frrico al 10%
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Mtodos.
Resultados
Morfologa Macroscpica
Morfologa Microscpica
Morfologa Macroscpica
Agar MacConkey
E. cloacae E. coli
P. aureginosa Proteus
Agar sangre
S. faecalis E. coli
Proteus E. cloacae
Agar cetrimide
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P. aureginosa
Morfologa Microscpica
E. coli Proteus
E. cloacae P. aureginosa
S. faecalis
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Pruebas Bioqumicas
Citrat - + +
o
FEA - - +
- + - - - + - - - + + -
MIO Ornitina Indol Movilidad Ornitina Indol Movilidad Ornitina Indol Movilidad
+ + + + - + - - +
Caldo
de - - +
urea
RM/VP RM VP RM VP RM VP
37C + - - + + -
Pseudomona aureginosa
TSI Gas H2S
K/K - -
Citrato +
FEA +
MIO Movilidad Indol Ornitina
+ - +
SIM Movilidad Indol
+ -
LIA H2S
- + -
RM-VP RM VP
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+ -
Caldo de Urea -
Oxidasa +
Discusin De Resultados
Conclusin
Para poder identificar cada una de las bacterias, es necesario utilizar las pruebas
mas especificas, en este caso las pruebas bioqumicas, ya que estas permiten
diferenciar, por medio de su metabolismo a las bacterias, debido a que cada bacteria
utiliza sus propios nutrientes para poder desarrollarse, es por ello, que aun despus
de haber realizado el cultivo se realicen estas pruebas, adems de su identificacin
macro y microscpica. Es as, como se llega ala identificacin especifica de un
microorganismo, logrando identificar su gnero y especie por lo menos. Se no ser
as, las bacterias pueden ser confundidas; por no tener las pruebas suficientes para
diferenciarlas.
Bibliografa
Braude, A. (1984) Microbiologa Clnica. Captulos 31 Enterobacteriaceas,. Ed.
Mdica Panamericana S.A.
Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra
edicin. Mxico.
http://cienciasbiologicas.uniandes.edu.co/lema/nodo.php?id=37
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-
75412006000300002&lng=en&nrm=iso&tlng=es
http://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?
pid=S172646342003000300002&script=sci_arttext
http://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab8/simenter.html
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 4
urocultivo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Eloy Ricardo Borjas Senz 175211
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
Manual de bacter
UACH
1 de marzo de 2007
Resumen
Introduccin
Material: Equipo:
Portaobjetos y cubreobjetos. Microscopio ptico de campo claro.
Asa de nicromio calibrada. Incubadora a 37C.
Asa de nicromio punta redonda.
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri.
Hisopo estril.
Equipo de proteccin personal:
Cubreboca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
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UACH
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.
Aceite de inmersin.
Cloruro Frrico al 10%
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Agares: Pruebas Bioqumicas:
MacConkey. TSI
Sangre. MIO
Sal Manitol. SIM
Plate Count. Citrato
Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
Metodologa
Toma De La Muestra
Esta tcnica no es apropiada para nios que no controlan sus esfnteres, en cuyo
caso se procede a hacer limpieza de los genitales y a fijar un recolector de orina
estril (especial para bebs). Se deja en esta posicin hasta que el nio realice su
miccin; se despeja el recolector y se sella inmediatamente. No debe dejarse
colocado el recolector por tiempo prolongado. La alta probabilidad de contaminacin
en muestras de orina de lactantes, obliga a realizar el estudio en tres muestras
sucesivas de miccin espontnea.
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En los pacientes con sonda uretral permanente con drenaje cerrado, la orina para
cultivo se recoge despus de desinfectar la pared de la sonda en su punto de unin
con el tubo de drenaje. Se aspira la orina por medio de puncin en la sonda con una
aguja 21. En ningn momento deber sacarse de la bolsa de drenaje material para
cultivo.
Examen cuantitativo
Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo
de tripticasa o de suero fisiolgico, estriles.
Para calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300
colonias. Contadas stas, basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva para
obtener la cuenta total.
Examen cualitativo
Resultados
Morfologa Macroscpica
Morfologa microscpica
Pruebas Bioqumicas
medio E. coli
TSI Gas H2S
A/A + -
Citrato -
FEA -
MIO Movilidad Indol Ornitina
+ + -
SIM Movilidad Indol
+ +
LIA H2S
- + -
RM-VP RM VP
+ -
Caldo de Urea -
Caldo de Malonato -
Discusin De Resultados
En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infeccin fue
la E.coli uno de los principales microorganismos relacionados con las infecciones del
tracto urinario, dicha identificacin se determino gracias alas caractersticas
metablicas identificadas en las pruebas bioqumicas realizadas, tambin se puedo
determinar con ayuda del antibiograma que esta bacteria es resistente a los
antibiticos como son: gentamicina oxaxilina ceftriaxone, tetraciclina y penicilina; ya
que no presento ningn alo de inhibicin donde se colocaron los cencidiscos
penetrados con dichos antibiticos.
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Conclusin
Bibliografa
http://www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulos/CLUR9797110051A.PDF
http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html
www.actasurologicas.info/v25/n01/2501NC03.html
Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996. pp 105-117.
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 5
Cepas de referencia de Candida albicans y
de Streptococcus agalactiae
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
Manual de bacter
UACH
8 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
Esta practica estuvo dividida en tres sesiones, en la primera sesin se cultivaron
las bacterias Streptococcus agalactiae y Candida albicans para despus proceder
hacer la identificacin macroscpica y microscpica y las pruebas bioqumicas
correspondientes,solo que no hubo crecimiento de Candida albicans tambin se
realizo la prueba de CAMP la cual salio negativa debido a que no se presento
crecimiento por lo que esta se repetir mas adelante par ser reportada en esta
practica y por ultimo se reviso el tubo germinativo, para la identificacin del
pseudomicelio.
Introduccin.
Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) -tambin conocidas como
infecciones de transmisin sexual (ITS) o enfermedades venreas-, son
aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos
puede ser por otras vas) se transmiten de persona a persona por contacto ntimo
(que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales).
Los agentes productores de las enfermedades de transmisin sexual incluyen
bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parsitos.
Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por
virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en
estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado,
reapareciendo cclicamente. Este tipo de relacin entre el organismo y el agente
infeccioso facilita la transmisin de ste, es decir, su infectividad.
Resultado de aprendizaje.
Cultivar e identificar bioqumicamente las siguientes cepas Gardnerella vaginalis,
Candida albicans, Streptococcus del Grupo B.
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UACH
Material:
Mechero de bunsen
Asa de nicromio circular y recta estriles
Cajas de petri
Tubos de ensayo de 13x100 mm con tapa de rosca
Portaobjetos
Puente de tincin
Pizeta
Hisopos estriles
Papel estraza
Gradilla
Vela
Frasco para carboxifilia
Reactivos:
Agar BIGGY
Agar sangre de carnero
Tubo germinativo (con 1 mL De plasma)
Cristal violeta
Yodo lugol
Alcohol-acetona
Safranina
Aceite de inmersin
Muestras:
Cepas de referencia en caldo BHI:
Candida albicans
Cepas de referencia en agar sangre:
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus 33862
Manual de bacter
UACH
Mtodos.
Primera sesin.
Sembrado de las sepas de referencia.
Streptococcus agalactiae: Agar sangre.
Candida albicans: Agar Biggy.
Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la
cepa de referencia (Streptococcus agalactiae y Candida albicans) se toma la caja
petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se descarga esta
en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes de modo que se
puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de incubacin.
Despus de que se hayan sembrado cada una de las sepas de referencia se
colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este
periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las
sepas.
Segunda sesin.
1. Anlisis macroscpico y microscpico de Streptococcus agalactiae y Candida
albicans.
2. Para Streptococcus agalactiae realizar las pruebas de catalasa, hemolisinas y
prueba de CAMP (pendiente).
3. Para Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en
24horas e incubar a 37OC.
Prueba de CAMP:
1. Con el asa recta, estriar Staphylococcus (-hemoltico A) en una lnea recta
que atraviese el centro del agar sangre.
2. Estriar el Streptococcus agalactiae (-hemoltico B) a cada lado del centro del
inoculo estafiloccico en una lnea recta de 2-3 cm. de largo y perpendicular
(es decir en un ngulo recto) al inoculo del estafilococo sin tocar ste ultimo.
Resultados.
Streptococcus
agalactiae
(agar sangre
de carnero)
Forma Redonda
Tamao Pequeo
Elevacin Plana
Borde Entero
Luz Positiva
reflejada
Luz Negativa
transmitida
Color Blanquecino
Consistencia Cremosa
No hubo crecimiento de Candida albicans
Hemlisis hemoltico
en el agar BIGGY
Morfologa macroscpica.
Morfologa microscpica.
Catalasa: negativo
Oxidasa: negativo
Manual de bacter
UACH
Discusin.
En el estudio realizado para las cepas de referencia se puede discutir que la falta
de crecimiento de la cepa de Candida albicans se pudo deber a que no habia
suficiente cepa para iniciar su crecimiento, por lo que se realizara en otra sesin su
siembra.
El Streptococcus agalactiae tubo un ptimo crecimiento en el agar sangre, y su
identificacin se hizo evidente por medio de la Tincin de Gram.
Conclusin.
Se puede concluir que en el anlisis macroscpico de Candida albicans no se
pudo observar por la falta de crecimiento en el agar BIGGY; por lo tanto no se pudo
efectuar el anlisis microscpico; mientras que en el Streptococcus agalactiae creci
bien en el agar y en las pruebas resulto negativo como era previsto para su
identificacin.
La prueba de CAMP no resulto, ya que no salio nada.
Bibliografa.
6. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico.
Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.
7. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra
edicin. Mxico.
8. Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin..
Mxico., pgs. 422-427.
9. www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html
10. www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 6 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 6
Anlisis microbiolgico de una muestra de
Exudado Cervicovaginal y Uretral
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
15 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
En esta prctica se realiz un cultivo de un exudado cervicovaginal de un
paciente con una posible infeccin en el aparato genital. Para su diagnostico se
sembr una porcin de la muestra en agares Casman, Sangre, MacConkey, Biggy,
Sal Manitol y Thayer Martin.
Se efectuaron dos tipos de frotis uno con Gram y otro sin teir (fresco) tomando
una porcin directamente de la muestra para su anlisis microscpico, observando
bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo de incubacin
se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la investigacin.
Se realizo el anlisis macroscpico y microscpico de cada una de las colonias
para saber la morfologa de los posibles microorganismos, y como se obtuvo
crecimiento en agar Sangre, Casman y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram + se
efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin, obtenindose
que se trataba de Staphylococcus aureus.
Introduccin.
Las enfermedades de transmisin sexual (ETS) -tambin conocidas como
infecciones de transmisin sexual (ITS) o enfermedades venreas-, son
aquellas enfermedades infecciosas que (generalmente, aunque en algunos casos
puede ser por otras vas) se transmiten de persona a persona por contacto ntimo
(que se produce, casi exclusivamente, durante las relaciones sexuales).
Los agentes productores de las enfermedades de transmisin sexual incluyen
bacterias, virus (como el del herpes), hongos e incluso parsitos.
Aunque casi todas tienen tratamiento, algunas de ellas, como las producidas por
virus, nunca curan de manera definitiva, sino que el agente causal permanece en
estado latente, sin manifestarse, dentro del organismo al que ha infectado,
reapareciendo cclicamente. Este tipo de relacin entre el organismo y el agente
infeccioso facilita la transmisin de ste, es decir, su infectividad.
Staphylococcus aureus es una bacteria que se encuentra en la piel y fosas
nasales de las personas sanas, que causa gran variedad de infecciones, desde
infecciones menores de la piel (forunculos, ampollas, vejigas) y abscesos cutneos
hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como neumona,
meningitis, endocarditis, sndrome del shock toxico (SST) y sepsis.
Resultado de aprendizaje.
Anlisis Microbiolgico de una muestra de Exudado cervicovaginal, para
determinar Enfermedades de Transmisin Sexual (ETS).
Manual de bacter
UACH
Material: Reactivos:
Mechero de bunsen. Agar BIGGY.
Asa de nicromio circular estril. Agar Casman.
Cajas de petri Agar Sal manitol.
Tubos de ensayo de 13x100mm. Agar Thayer Martin.
Portaobjetos. Agar MacConkey.
Puente de tincin. Agar Sangre.
Pizeta. Cristal violeta.
Papel estraza. Yodo lugol.
Frasco para anaerobios con vela. Alcohol-acetona.
Safranina.
Aceite de inmersin.
KOH 3%
Agua oxigenada.
Medio de transporte (Stuart).
Muestra:
Exudado Cervicovaginal.
Mtodos.
Primera sesin.
Sembrado de la muestra de Exudado Cervicovaginal.
1. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Casman, BIGGY, Thayer Martin,
Sal Manitol), tomar el hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart,
y se descarga en una de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de
nicromio con el fin de obtener colonias aisladas.
Incubar a 37oC por 24horas. El agar Casman y el agar Sangre, se incuban por el
mismo tiempo y temperatura, con excepcin de que deben estar en condiciones
parciales de anaerobiosis.
Segunda sesin.
1. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias crecidas en los
diferentes agares.
2. En caso de haber crecimiento en el agar BIGGY; siendo indicio del
crecimiento de Candida albicans realizar la prueba de tubo germinativo y leerlo en
24horas e incubar a 37OC.
Resultados.
Agar Casman Agar Sangre Agar Sal Manitol Agar BIGGY
Forma Redondas Redondas Redondas Redondas
Tamao Grandes Medianas Chicas Chicas
Elevacin Aplanada Convexa Convexa Convexa
Borde Irregular Entero Entero Entero
Luz reflejada S S No No
Luz transmitida No No S S
Color Blancas Grises Amarillas Caf oscuro
Consistencia Cremosa Cremosa Cremosa Cremosa
Hemlisis ----- No present ----- -----
----- ----- Manitol (positivo) -----
Morfologa macroscpica.
A
g a
r
Morfologa microscpica.
Catalasa: positiva
Oxidasa: negativa
Coagulasa: positiva
Manual de bacter
UACH
Discusin.
En el estudio realizado al exudado cervicovaginal se obtuvieron resultados
similares en la morfologa microscpica, dando as un menor margen de error en la
comprobacin del agente bacteriano que resulto; siendo este Staphylococcus
aureus. Comprobandos esta hipotesis por medio de las pruebas confirmatorias
para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran la utilizacin del
Manitol, la Coagulasa positiva esta es especial para diferenciarse del
Staphylococcus epidermidis.
Conclusin.
La aparicin de Staphylococcus aureus en la regin cervicovaginal no es muy
frecuente pero cuando se da su aparicin, se puede deber cuando hay presencia del
Sndrome de choque txico especialmente despus del uso de tampones vaginales;
incluye fiebre, prurito, descamacin, vmito, diarrea; el choque toxico esta
relacionado con la produccin de toxinas.
Bibliografa.
11. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico.
Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.
12. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra
edicin. Mxico.
13. Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin..
Mxico., pgs. 422-427.
14. www.apuntes.rincondelvago.com/microbiologia_18.html
15. www.ucm.es/BUCM/revistas/med/11330414/articulo/CLUR9797110051A.PDF
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 6 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA
DE CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 7
cepas de referencia
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
22 de marzo de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
Esta practica se dividi en tres secciones el la primera seccin se inocularon las
cepas (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella pneumoniae y Corynebacterium
difteria) proporcionadas en los diferentes medios de agar, estas se pusieron a
incubar durante 24 hrs. a 37C, en la segunda seccin se hizo una revisin de la
morfologa macroscpica y microscpica de las colonias obtenidas en los diferentes
medios, adems se realizaron las pruebas bioqumicas de acuerdo a cada
microorganismo, realizando la prueba de la coagulasa entre los dos Staphylococcus.
Introduccin.
El Streptococcus pyogenes da lugar a colonias blancas o grises, de 1 a 2 mm de
dimetro, rodeadas de zonas de lisis completa de los eritrocitos presentes en el
medio de cultivo (hemlisis tipo ), aunque es posible, en raras ocasiones, aislar
cepas que no expresan la hemolisina en la superficie. Algunas cepas, las que
producen en grandes cantidades cido hialurnico capsular, crecen con la
apariencia de una gota de agua en la placa, pero esto ocurre tambin de forma
excepcional. Por lo general, las cepas menos mucosas asumen un aspecto arrugado
denominado mate, mientras que las colonias pequeas y opacas que carecen de
cpsula y protena M detectable se denominan brillantes.
Es incapaz de oxidar azcares y posee un metabolismo fermentativo de la
glucosa y otros carbohidratos produciendo cido lctico, aunque nunca gas. Produce
adems leucina-aminopeptidasa (LAP) y pirrolidonil-arilamidasa (PYR). Esta ltima
caracterstica rara vez es compartida por otros miembros de su mismo gnero.
Adems, es uniformemente sensible a la bacitracina.
Resultado de aprendizaje.
Cultivar e identificar bioqumicamente las siguientes cepas del tracto
respiratorio: Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus
aureus, Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium spp y Klebsiella pneumoniae.
Manual de bacter
UACH
Material:
Mechero de bunsen.
Frasco de vidrio con tapadera para carboxifilia con vela pequea.
Asa de nicromio circular y recta estriles.
Puente de tincin y pizeta.
Hisopo estril.
Papel estraza.
Gradilla.
Reactivos:
Agar Sangre con Telurito de Potasio.
Agar Sangre de Carnero.
Agar Sal Manitol.
Caldo de Urea.
Caldo rojo de fenol con glucosa.
Caldo rojo de fenol con xilosa.
Caldo rojo de fenol con maltosa.
Caldo rojo de fenol con sacarosa.
Caldo de nitratos.
1ml de plasma estril.
Sensidisco de Bacitracina.
-Naftilamina.
cido sulfanlico.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica al 0.85%.
KOH 3%.
-naftol.
H2O2 3%.
Aceite de inmersin.
Bactericida para limpieza.
Cepas de Referencia:
Streptococcus pneumoniae.
Streptococcus pyogenes.
Staphylococcus aureus.
Staphylococcus epidermidis.
Corynebacterium difteria.
Klebsiella pneumoniae.
Manual de bacter
UACH
Manual de bacter
UACH
Mtodo.
Primera sesin.
Sembrado de las diferentes cepas.
Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, Agar sangre + telurito de potasio.
Se sumerge el asa de nicromio redonda en el tubo de ensaye que contenga la
cepa de referencia (Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Corynebacterium spp.), se
toma la caja petr que contenga el agar en el cual se va a sembrar la muestra y se
descarga esta en el primer cuadrante, despus se estra en los dems cuadrantes
de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus del periodo de
incubacin.
Despus de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se
colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este
periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las
cepas.
NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios.
Segunda sesin.
Tercera seccin.
Realizar la lectura de las pruebas bioqumicas.
Leer halos de inhibicin.
Manual de bacter
UACH
Resultados.
Corynebacterium Corynebacterium Klebsiella
difteria. difteria. pneumoniae
(agar Chocolate) (agar Sangre c/Telurito) (agar McK)
Forma Redondas Redondas Redondas
Tamao Pequeas Pequeas Medianas
Elevacin Convexa Convexa Convexa
Borde Entero Entero Entero
Tipo de luz Reflejada Reflejada Reflejada
Color Blancas Gris Rosa-fuschia
Consistencia Cremosa Cremosa Cremosa
Hemlisis ------ No presenta ------
Lactosa ------ ------ Lactosa positiva
Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus
aureus aureus aureus
(agar Sangre) (agar Sal Manitol) (agar S-110)
Forma Redondas Redondas Redondas
Tamao Pequeas Pequeas Pequeas
Elevacin Planas Planas Planas
Borde Entero Entero Entero
Tipo de luz Reflejada Reflejada Reflejada
Color Dorado Amarillo Negras
Consistencia Cremosa Cremosa Cremosa
Hemlisis Beta hemlisis ----- ------
Manitol ------ Manitol positivo ------
Staphylococcus epidermidis Staphylococcus
(agar Sal Manitol) epidermidis (agar Sangre)
Forma Redondas Redondas
Tamao Pequeas Pequeas
Elevacin Planas Planas
Borde Entero Entero
Tipo de luz Reflejada Reflejada
Color Blancas Blancas
Consistencia Cremosa Cremosa
Hemlisis ------ No presenta
Manitol Manitol negativo ------
Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae (agar
(agar Sangre) Sangre)
Forma Redondas Redondas
Tamao Medianas Medianas
Elevacin Planas Planas
Borde Entero Entero
Tipo de luz Reflejada Reflejada
Color Blancas Gris
Consistencia Cremosa Cremosa
Hemlisis Beta hemlisis Alfa hemlisis
Manual de bacter
UACH
Morfologa Microscpica
Morfologa Macroscpica
S. pyogenes(vacitracina) S. pyogenes
Discusin.
En el cultivo de las cepas de referencia de las bacterias mencionadas al inicio, solo
se obtuvo dificultad para el crecimiento de S, pyogenes y S. pneuminiae, por o q ue
la titular realizo un cultivo de ambos que proporciono al grupo para realizarle las
pruebas necesarias para su identificacin, en donde S. pyogenes obtuvo un halo de
inhibicin a la vasitracina y el S. pneumoniae un halo para optoquina lo cual confirma
que efectivamente estabas tratando con dichas bacterias , en las pruebas
bioqumicas de Corymebacteriun se obtuvo una discrepancia con respecto a la
fermentacin y oxidacin de la xilosa debido a que esta dio un resultado negativo,
locuaz con respecto a la teora esta debi ser positiva, otra discrepancia se obtuvo
con la K. pneimoniae al dar el rojo de metilo positivo y vogues poskauer negativo, lo
cual deba de ser a la viceversa. Por lo dems todo coincidi con las caractersticas
mencionadas en las referencias.
Conclusin.
Se logro identificar a cada una de las bacterias de las cepas de referencia
proporcionadas, debido a que no hubo gran diferencia con las caractersticas
morfolgicas y metablicas de los microorganismos analizadas en la prctica, con
respecto ala teora que mencionan las referencias, es por eso de suma importancia
realizar cada una de las pruebas tanto microscpica, macroscpicas como
metablicas a cada uno de los microorganismos para poder dar un resultado
confiable, de que efectivamente, se trata de la bacteria que se sospecha, evitando la
contaminacin de otros microorganismos.
Bibliografa.
http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm
http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html
UNIVERSIDAD AUTNOMA
DE CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 8
Mycobacterium tuberculosis
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
Manual de bacter
UACH
Resumen
Introduccin
Material:
Mechero de bunsen.
Puente de tincin y pizeta.
Papel estraza.
Reactivos:
Agra Lowestein-Jensen.
Carbol fuschina
Alcohol acido
Azul de metileno
Aceite de inmersin.
Bactericida para limpieza
Metodologa
Tincin de Zielh-Neelsen
Realiza un frotis con la muestra de esputo y deja secar.
Fija al mechero pasndolo de arriba hacia abajo por la llama por tres veces.
Cubre el frotis con carbol fushina por 5 min.
Enjuaga el carbol fushina con agua destilada, permitiendo que esta corra a
travs del frotis.
Enjuaga el frotis con alcohol acido durante 1 min.
Y enjuaga con agua.
Cubre el frotis con azul de metileno durante 1min.
Enjuaga el frotis con agua.
Seca suavemente con papel estraza.
Observar en el microscopio con el objetivo de 100X.
Cultivo
El esputo se trata con 1N NaOH durante 30 min. Para eliminar las bacterias
de la flora normal.
La muestra centrifuga y se tira el sobrenadante.
Una vez neutralizada se siembra sobre el medio de aislamiento (Lowestein-
Jensen), en una campana de extraccin con las medidas necesaria para
evitar contaminacin del medio y evitar infectarse.
Manual de bacter
UACH
Resultado
Muestra:
Baciloscopia..Negativa
Frotis: 4901
0 0 0 0 0 0 0 0 0 14
0 0 1 5 0 1 0 0 0 0
0 0 0 0 1 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 2 0 0 1
1 0 0 0 0 1 0 0 0 3
5
0 0 0 8 0 0 0 1 0 0
2
3 1 0 4 2 0 0 0 0
0 4 2 0 0 0 0 0 0 2
0 0 1 4 0 0 3 0 1 4
3
0 1 6 0 0 4 0 0 0 0
Morfologa Microscpica
Mycobacterium tuberculosis
form color arreglo
a
bacilo Rosa(alcohol Simple o agrupados
resistente)
Morfologa Macroscpica
Mycobacterium tuberculosis
colonias tamao color borde luz
redondas mediano Blanca/crema entero No trasmitida
Manual de bacter
UACH
Discusin De Resultados
Conclusin
Bibliografa
http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/fenotm.htm
http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/434933.html
http://www.monografias.com/trabajos10. html
http://es.wikipedia.org/wiki/Mycobacteium-tuerculosis
http://www.escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/TemasMedicinaInterna/pdf/Enf
Tr
Fecha de consulta: 27-marzo-2007
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 9
Anlisis microbiolgico de una muestra de
Exudado Faringeo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
Manual de bacter
UACH
ALUMNOS:
Mayra Torres Gmez
7mo B
19 de abril de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen.
En esta prctica se realiz un cultivo de un exudado fraringeo. Para su
diagnostico se sembr una porcin de la muestra en agares: Sangre, MacConkey,
Chocolate y Sal Manitol.
Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su anlisis microscpico,
observando bacterias Gram + representantes de la flora normal. Pasado el tiempo
de incubacin se obtuvo un crecimiento colonial que marco la pauta de la
investigacin.
Se realizo el anlisis macroscpico y microscpico de cada una de las colonias
para saber la morfologa de los posibles microorganismos, y como se obtuvo
crecimiento en agar Sangre, Chocolate y Sal Manitol y sabiendo que era un Gram +
se efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin,
obtenindose que se trataba de Staphylococcus aureus. El manitol positivo
demostrado en la caja de agra sal manitol es una prueba de identificacion que
ayudo para determinar que era dicho mocroorgamismo.
Introduccin.
Los dos factores ms importantes que hacen posible una infeccin son: la habilidad
natural del agente infectante para pasar las barreras naturales y los tejidos, lo que se
conoce como virulencia, y por otro lado el grado de labilidad eficiencia del sistema
general de defensa del individuo durante las diversas fases del ataque del germen
(susceptibilidad).7
Resultado de aprendizaje.
Anlisis Microbiolgico de una muestra de Exudado faringeo, para determinar
Enfermedades del tracto respiratorio.
Manual de bacter
UACH
Material: Reactivos:
Mechero de bunsen.
Asa de nicromio circular estril. Agar Chocolate.
Cajas de petri Agar Sal manitol.
Tubo de ensayo de 13x100mm. Agar MacConkey
Portaobjetos. Agar Sangre.
Puente de tincin. Cristal violeta.
Pizeta. Yodo lugol.
Papel estraza. Alcohol-acetona.
Frasco para anaerobios con vela. Safranina.
Aceite de inmersin.
Agua oxigenada.
Medio de transporte (Stuart).
Muestra:
Exudado Faringeo.
Mtodos.
Toma de muestra
Toma de muestra: Se pide al paciente que se siente y coloque su cabeza hacia
atrs. Se ilumina bien la cavidad orofarngea y con un abatelenguas se empuja la
lengua hacia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. Con un
hisopo de algodn se hace un raspado de las reas hipermicas, purulentas o
necrticas, as como de las membranas o manchas de Koplic, si es que las
presenta.
Medio de transporte:
Primera sesin.
Sembrado de la muestra de Exudado Faringeo.
2. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate, Sal Manitol), tomar el
hisopo con la muestra que se encuentra en el medio de Stuart, y se descarga en una
de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de nicromio con el fin de
obtener colonias aisladas.
Incubar a 37oC por 24horas.
El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia.
Segunda sesin.
1. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias crecidas en los
diferentes agares.
Realizar la prueba de la catalasa.
Realizar la prueba de la coagulasa.
NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.
Manual de bacter
UACH
Resultados.
Agar Sangre Agar Sal Manitol Agar
Chocolate
Forma Redondas Redondas Redondas
Tamao Medianas Medianas Medianas
Elevacin Convexa Convexa Convexa
Borde Entero Entero Entero
Luz transmitida No no no
Color Blanca Doradas Blancas
Consistencia Cremosa Cremosa Cremosa
Hemlisis No present ----- -----
----- Manitol (positivo) -----
Morfologa macroscpica.
Morfologa microscpica.
Catalasa: positiva
Oxidasa: negativa
Coagulasa: positiva
Manual de bacter
UACH
Discusin.
En el estudio realizado al exudado faringeo se obtuvieron resultados con un
menor margen de error en la comprobacin del agente bacteriano que resulto;
siendo este Staphylococcus aureus. Comprobandos esta hipotesis por medio de las
pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se encuentran
la utilizacin del Manitol, la Coagulasa positiva.
Conclusin.
Bibliografa.
16. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico.
Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.
17. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra
edicin. Mxico.
18. Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin..
Mxico., pgs. 422-427.
19. http://www.salud.gob.mx/indre/mues.htm#M3.%20EXUDADO%20FARINGEO
20. http://html.rincondelvago.com/bacteria-staphilococcus-aureus.html
21. http://html.rincondelvago.com/flora-bucal.
22. http://www.alergia.ws/ot_infecciones.htm
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 18 de abril de 2007
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 10
Infecciones De La Piel
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
26 de abril de 2007
Manual de bacter
UACH
Resumen
Introduccin
Resultado De Aprendizaje
Cultivar e identificar al microorganismo causal de una infeccin de la piel.
Manual de bacter
UACH
Material: Equipo:
Portaobjetos y cubreobjetos. Microscopio ptico de campo claro.
Asa de nicromio calibrada. Incubadora a 37C.
Asa de nicromio punta redonda.
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri.
Hisopo estril.
Equipo de proteccin personal:
Cubreboca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.
Aceite de inmersin.
Cloruro Frrico al 10%
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Verde de malaquita
Agares: Pruebas Bioqumicas:
MacConkey. TSI
Sangre. MIO
Sal Manitol. SIM
Nutritivo Citrato
Liver veal. Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
o Nitratos
o Maltosa
o Sacarosa
o Glucosa
o Xilosa
o Manitol
Manual de bacter
UACH
Metodologa
Toma De La Muestra
A. MATERIAL NECESARIO.
- Suero fisiolgico.
-Jeringa y aguja estriles.
-Recipientes estriles con tapa de rosca.
-Hisopos con medio de transporte tipo Stuart-Amies.
B. TECNICA.
- Lavar con suero fisiolgico estril cuidadosamente la superficie de la herida para
retirar la flora
colonizante.
- Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas
profundas.
- Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solucin de Ringer lactato y
aspirarlo nuevamente en la jeringa.
- Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podr efectuarse un frotis
de los bordes de la herida con un hisopo.
C. NUMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN.
Para muestras lquidas se intentara obtener 1-10 ml. En el resto de las ocasiones se
enviar la mxima cantidad posible.
D. TRANSPORTE Y CONSERVACIN.
El envo al laboratorio debe ser inmediato. Se utilizar para el envo tubos estriles
con tapa rosca.
La jeringa de la extraccin ser evacuada en el recipiente en que se har el envo.
La prctica de colocar un tapn de goma en la aguja (usando la jeringa como
recipiente de transporte) debe desecharse por el riesgo para el personal de sufrir un
pinchazo con una aguja contaminada con lquidos orgnicos. No olvidar identificar la
muestra adecuadamente y si no puede procesarse antes de 2 horas usar medio de
transporte.
E. OBSERVACIONES.
Las muestras recibidas en hisopo son de escasa rentabilidad y deben obtenerse slo
en circunstancias muy excepcionales, cuando no se pueda recoger la muestra por
otros mtodos. Es importante especificar sitio anatmico de donde se realiz la
toma de muestra.
ABSCESOS CERRADOS.
Es un procedimiento mdico
A. MATERIAL NECESARIO.
- Gasas estriles.
- Alcohol etlico o isoproplico al 70%.
- Yodo povidona al 10%.
- Jeringa estril.
- Aguja IM.
Manual de bacter
UACH
Primera sesin.
Medios: Agar sangre, Agar Sal Manitol, chocolate y Agar Liver Veal.
Con el hisopo se descarga l muestra en el primer cuadrante, despus se estra en
los dems cuadrantes de modo que se puedan obtener colonias aisladas despus
del periodo de incubacin.
Despus de que se hayan sembrado cada una de las cepas de referencia se
colocan las cajas petr en la incubadora durante 24 horas a 37C, despus de este
periodo de incubacin se revisa la estructura microscpica de cada una de las
cepas.
NOTA: Esto se realiza de igual forma para cada uno de los medios.
Segunda sesin.
Resultados
Morfologa Macroscpica
Proteus mirabilis
Bacillus cereus
Morfologa microscpica
Proteus mirabilis
Bacillus cereus
Pruebas Bioqumicas
+ - -
RM-VP RM VP
+ -
Caldo de Urea +
Caldo de Malonato -
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Bacillus cereus
medio
Nitrato Negativo
Maltosa Positivo
Sacaros Positivo
a
Glucosa Positivo
Xilosa Negativo
Manitol negativo
Discusin De Resultados
En nuestro estudio el agente que se identifico como agente causal de infeccin fue
la Proteus, dicha identificacin se determino gracias alas caractersticas metablicas
identificadas en las pruebas bioqumicas realizadas. Proteus vulgaris es indol
positivo mientras que Proteus mirabilis es indol negativo. Por lo tanto mediante esta
prueba podemos hacer la identificacin presuntiva de Proteus mirabilis. Proteus
penneri y P. myxofaciens tambin son indol negativo pero raramente se encuentran
en infecciones de heridas. Por lo tanto para este anlisis, la recuperacin de una
especie de Proteus, indol negativo en una muestra de hisopado de la piel puede
identificarse como Proteus mirabilis. Podra confundirse con Proteus penneri solo
que este se diferencia por que no produce sulfuro de hidrogeno en el TSI, a
diferencia de P. mirabilis
Conclusin
Bibliografa
http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html
http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm
http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html
Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiolgico texto y atlas. 5 edicin. Panamericana. Buenos
Aires. 2004
Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974.
Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 11
Hemocultivo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNOS:
Eloy Ricardo Borjas Senz 175211
Mayra Torres Gmez 190128
7mo B
Manual de bacter
UACH
3 de mayo de 2007
Resumen
Se realiz un hemocultivo, el cual se estuvo revisando por tres das para observar
como se presenta un cultivo negativo, despus de esto se le inoculo una bacteria
problema, esta tcnica se realiz utilizando cultivos de la muestra en agares; sangre,
MacConkey y Chocolate. Donde, como resultado, se obtuvo; en el anlisis; colonias
redondas convexas, y de consistencia cremosa con una pigmento verde; esto en
agar MacConkey y, en sangre se observo colonias redondas, presentando una
hemlisis beta, y colonias blancas, redondas y convexa en chocolate.
Microscpicamente fueron bacilos gram negativos, por lo que se procedi a realizar
las pruebas bioqumicas o metablicas para determinar el tipo de microorganismo
asilado. El cual resulto ser, Pseudomona, comnmente relacionada a bacteriemias.
Introduccin
La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del
dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca
una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presin y hacer que
la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la
sangre en un frasco hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira
la banda para restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se
retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
describe el pigmento azul verdoso bacteriano, visto en los cultivos de laboratorio " de
P. aeruginosa.Es una bacteria Gram-negativa, aerbica, con motilidad unipolar. Es
un patgeno oportunista para los humanos.
Resultado De Aprendizaje
Cultivar e identificar al microorganismo causal de una bacteriemia.
Material: Equipo:
Portaobjetos y cubreobjetos. Microscopio ptico de campo claro
Asa de nicromio punta redonda. Incubadora a 37C
Mechero de Bunsen.
Papel estraza.
Puente de tincin.
Gradilla y piseta.
Cajas petri .
Equipo de proteccin personal:
Cubreboca.
Guantes de ltex.
Bata.
Reactivos:
Tincin de Gram.
Cristal violeta.
Yodo lugol.
Alcohol acetona.
Safranina.
Solucin salina fisiolgica isotnica al 0.85%.
Aceite de inmersin.
Cloruro Frrico al 10%
Kovaks.
-Naftol.
KOH al 40%.
Rojo de Metilo.
Agares: Pruebas Bioqumicas:
MacConkey. TSI
Sangre. MIO
Chocolate. SIM
Citrato
Caldo de Urea
FeA
RM-VP
LIA
Caldo de Malonato
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UACH
Metodologa
Toma De La Muestra
La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte anterior del codo o del
dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un antisptico y luego se coloca
una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presin y hacer que
la vena se llene de sangre. Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la
sangre en un frasco hermtico o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira
la banda para restablecer la circulacin y, una vez que se ha recogido la sangre, se
retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier sangrado.
Resultados
Morfologa Macroscpica
Pseudomona aeruginosa
Morfologa
Agar chocolate
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Pruebas Bioqumicas
medio pseudomona
TSI Gas H2S
k/k - -
Citrato +
FEA -
MIO Movilidad Indol Ornitina
+ - +
SIM Movilidad Indol
+ -
LIA H2S
- + -
RM-VP RM VP
+ -
Caldo de Urea -
Caldo de Malonato +
Oxidasa: positiva
Discusin De Resultados
Con las pruebas realizadas en este anlisis se pudo identificar a la bacteria que fue
inoculada en el hemocultivo; gracias al pigmento que produjo la bacteria en agar
Mac Conkey y a el caracterstico olor a maz se hace un diagnostico presuntivo de
que es Peudomona, este diagnostico se confirma con el montaje de pruebas
bioqumicas en donde se observa que no fermenta carbohidratos y con la prueba
de oxidasa que arroja un resultado positivo.
Conclusin
Bibliografa
http://html.rincondelvago.com/bacteriologia_2.html
http://www.eprodig.com/dermlink/Paginas/consejos_enfermedades_bacteriana.htm
http://www.msd.es/publicaciones/mmerck_hogar/seccion_18/seccion_18_201.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_aeruginosa#Patog.C3.A9nesis
Koneman. W Elmer y Co. Diagnostico microbiolgico texto y atlas. 5 edicin. Panamericana. Buenos
Aires. 2004
Borrows William Dr. Tratado de microbiologa, Vigsima edicin. Interamericana. Mxico 1974.
Garca Rodrguez JJ. Microbiologa Mdica. Tomo II.Doyma libros. Madrid 1996.
Manual de bacter
UACH
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
CHIHUAHUA
Laboratorio:
Bacteriologa Mdica
Prctica # 12
Lquido Cefalorraquideo
TITULAR:
Norma Herrera Daz
ALUMNA:
Mayra Torres Gomez 190128
7mo B
Manual de bacter
UACH
11 de Mayo de 2007
Manual de bacter
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Resumen.
En esta prctica se realiz un cultivo de una muestra de Lquido Cefalorraquideo.
Para su diagnostico se sembr una porcin de la muestra en agares: Sangre,
MacConkey y Chocolate.
Se efectuo un frotis con tincion Gram, para su anlisis microscpico, observando
bacterias Gram negativas. Pasado el tiempo de incubacin se obtuvo un crecimiento
colonial que marco la pauta de la investigacin.
Se realizo el anlisis macroscpico y microscpico de cada una de las colonias
para saber la morfologa del posible microorganismo, y como se obtuvo crecimiento
en agar Sangre, Chocolate y MacConkey; y sabiendo que era un Gram (-) se
efectuaron las pruebas bioqumicas adecuadas para su identificacin, obtenindose
que se trataba de Proteus mirabilis.
Introduccin.
Presenta una presin de 10-20 cm de agua, un volumen total de 150 ml, un volumen
intra ventricular de 20-30 ml, est compuesto mayoritariamente por agua, por
protenas 15-45 mg/100 ml, glucosa 50-75 mg/100 ml, cloruros 120-130 nmol/l y
leucocitos < 4-5 clulas por milmetro cbico. (2)
Resultado de aprendizaje.
Anlisis Microbiolgico de una muestra de Lquido Cefalorraquideo, para la
determinacin de algunas enfermedades, debidas al causas de un dao en el .
lquido cefalorraquideo.
Material:
Mechero de bunsen. Reactivos:
Asa de nicromio circular estril. .
Cajas de petri Agar Chocolate
Tubo de ensayo de 13x100mm. Agar MacConkey
Portaobjetos. Agar Sangre.
Puente de tincin. Cristal violeta.
Pizeta. Yodo lugol.
Papel estraza. Alcohol-acetona.
Frasco para anaerobios con vela. Safranina.
Aceite de inmersin.
Agua oxigenada.
Muestra:
Lquido Cefalorraquideo
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Mtodos.
Toma de muestra.
Primera sesin.
Sembrado de la muestra de Lquido Cefalorraquideo.
3. En todos los agares (Sangre, MacConkey, Chocolate), tomar el asa de
nicromio con la muestra que se encuentra en eltubo de ensaye, y se descarga en
una de los cuadrantes, despus se procede a estriar con el asa de nicromio con el
fin de obtener colonias aisladas.
Incubar a 37oC por 24horas.
El agar chocolate y sangre se incuban en condiciones de carboxifilia.
Segunda sesin.
1. Anlisis macroscpico y microscpico de las colonias crecidas en los
diferentes agares.
2. Realizar las pruebas bioqumicas, dependiendo del resultado obtenido en la
Tincin de Gram. Incubar las pruebas y leer a las 24horas.
3. Reportar los resultados obtenidos, para la determinacin de la cepa problema.
NOTA: todas estas pruebas para los agares que tengan crecimiento bacteriano.
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Resultados.
Agar Agar Agar
Sangre MacConkey Chocolate
Forma Redondas Redondas Redondas
Tamao Medianas Medianas Medianas
Elevacin Convexa Convexa Convexa
Borde Entero Entero Entero
Luz transmitida No no no
Color Blanca Grises Blancas
Consistencia Cremosa Cremosa Cremosa
Hemlisis No present ----- -----
Pruebas Bioqumicas
+ - -
RM-VP RM VP
+ -
Caldo de Urea +
Caldo de Malonato -
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Morfologa macroscpica.
Morfologa microscpica.
Proteus mirabilis
Catalasa: positiva
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Discusin.
En el estudio realizado a la muestra de Lquido Cefalorraquideo se obtuvieron
resultados con un menor margen de error en la comprobacin del agente bacteriano
que resulto; siendo este Proteus mirabilis. Comprobandos esta hipotesis por medio
de las pruebas confirmatorias para descartar otras posibilidades, entre ellas se
encuentran la utilizacin de la urea, ya que este microorganismo tiene la capacidad
de la reduccin de nitritos muy efectiva.
Conclusin.
Bibliografa.
23. Finegold, S. Martin, W. (2002). Bailey & Scout Diagnostico Microbiolgico.
Ed. Mdica Panamericana. 11va edicin. Mxico.
24. Lennette, E. (1987). Microbiologa Clnica. Ed. Mdica Panamericana. 3ra
edicin. Mxico.
25. Borrows. W. (1974). Tratado de microbiologa, Interamericana 20 edicin..
Mxico., pgs. 422-427.
26. http://www.umm.edu/esp_ency/article/003428.htm
27. http://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADquido_cefalorraqu%C3%ADdeo
Fecha de consulta de las pginas de Internet: 9 de Mayo de 2007
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