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UNIVERSIDAD NACIONAL JOS FAUSTINO SNCHEZ CARRIN

FACULTAD DE BROMATOLOGA Y NUTRICIN

AEROMONA HYDROPHYLA
La taxonoma del gnero Aeromonas se encuentra en vas de transicin; el gnero se
ha situado en la nueva familia Aeromonadaceae derivada de la familia Vibrionaceae.

Aeromonas hydrophilas es la especie ms importante causa enfermedad en el hombre.

Aeromonas hydrophila

Taxonoma

Dominio Bateria

Filo Proteobacteria

Clase Gammaproteobacteria

Orden Aeromonadales

Gnero Aeromonas

Especie A. Hydrophila

CARACTERISTICAS MORFOLGICAS.

Aeromonas son bacilos Gram negativos.


Miden de 1.0 4.4 por 0.4 1.0 .
La morfologia de sus colonias es semejante a la de los bacilos intestinales gram
negativos y produce zonas grandes de hemolisis en agar sangre.
Generalmente son bacilos rectos con extremos redondeados que aparecen
solos, en parejas o cadenas cortas.
Presentan desplazamiento por flagelos polares unicos (monotricos). De longitud
1.7
No forman capsula, ni esporas y son aerobios o anaerobios facultativos.
Las especies de aeromonas se distinguen de las bacterias intestinales Gram
negativas, por la reaccin positiva a oxidasa en colonias obtenidas en placas de
agar sangre.
Desde el punto de vista fisiolgico la oxidasa es positiva, as como la catalasa, y
producen la fermentacin de la glucosa y otros carbohidratos, dando lugar a la
acidificacin de los medios diferenciales y a la produccin de gas, y reducen
nitratos a nitritos.

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Las especies aeromonas se diferencian de los vibriones por la resistencia que


muestran al compuesto 0/129 y por que no proliferan, tiene una incapacidad para
crecer en caldo con 6% , (Las Aeromonas son resistentes al factor
vibriosttico O/129).
MORFOLOGA

bacilos cortos

Gram negativos

mviles

flagelo polar nico

no forman capsula

no forman esporas

A) Cultivo de Aeromonas hydrophila en agar


sangre de cordero 5% a las 48 horas de
incubacin.
B) Intensa (hemolisis alrededor de las colonias.
C) Crecimiento en agar MacConkey.

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FACTORES DE CRECIMIENTO

PARMETROS VALORES

Temperatura T optima: 35 37

lmites de temperatura: 5 42

PH 4,5 9

Concentraciones de sal 0 4%

o Aeromonas hydrophila tambin puede sobrevivir en medios aerobios y


anaerobios.
o Es capaz de digerir materiales, como por ejemplo la gelatina o la hemoglobina.
o Vive principalmente en zonas con un clima clido. Esta bacteria tambin puede
vivir en aguas dulces, saladas, cloradas y no clorinadas, (Se encuentra viviendo
libres en el agua, como su nombre de especie Hydrophila lo indica).
o Es muy resistente a medicamentos, cloro, y bajas temperaturas. Puede
prosperar en aguas tan fras como 4 C.

HBITAD

o Habitan en aguas, todas con baja concentracin salina, Las Aeromonas se ha


encontrado en: pescado, mariscos, carnes rojas, aves, leche cruda, huevo
liquido y alimentos envasados al vacio.
o Las aeromonas moviles son, principalmente microorganismos acuaticos que se
encuentran en aguas frescas, y oceanos, asi como heces de algunas personas
sanas y en la de animales domesticos.
MODO DE TRASMISIN

o Se transmiten por el agua de bebida, tambien se pueden propagar a travez de


alimentos que hayan estado en contacto con agua contaminada por estos
microorganismos al ser ingeridos.

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MEDIOS SELECTIVOS PARA EL AISLAMIENTO DE AEROMONAS.

Crece bien en medios comunes para enterobacterias y tambin en agar selectivos.

AGAR SANGRE CON 20 G/ML DE AMPICILINA (ABA) es til para el


aislamiento de todas las especies de Aeromonas excepto A. Trota que es
sensible a la ampicilina.
Resultado: Las especies de relevancia clnica son beta- hemolticas; a las
colonias beta-hemolticas en agar sangre se les realiza oxidasa e indol, cualquier
colonia que da ambas pruebas positivas debe someterse a identificacin
definitiva.

CEFSULODINA- IRGASAN-NOVOBIOCINA (CIN).

Resultado: Las colonias de Aeromonas tienen centro rosa y son indistinguibles


de Yersinia enterocoltica. Incubando a 25 C se aumenta la recuperacin de
Yersinia pero tambin crece Aeromonas. Para tener un ptimo aislamiento hay
que combinar agar sangre y CIN.

BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar)


BD Aeromonas Yersinia Agar

Uso:
BD Yersinia Selective Agar (=CIN Agar, Cefsulodin-Irgasan-Novobiocin Agar)
(agar selectivo para Yersinia BD: agar CIN [Cefsulodina-Irgasan-Novobiocina])
es un medio selectivo de diferenciacin para el aislamiento de Yersinia
enterocolitica y BD Aeromonas Yersinia Agar (agar para Aeromonas y Yersinia
BD) es un medio selectivo de diferenciacin para el aislamiento de Yersinia
enterocolitica y Aeromonas

Fundamento
BD Aeromonas Yersinia Agar es una modificacin de BD Yersinia Selective
Agar que favorece el crecimiento de no slo la especie Yersinia enterocolitica
sino tambin de Aeromonas, dado que presenta un contenido reducido de
cefsulodina.
En ambos medios, las peptonas proporcionan nutrientes. La fermentacin de
manitol en presencia de rojo neutro crea el aspecto caracterstico de ojo de toro
de las colonias de Y. enterocolitica: incoloras con centros de color rojo en ambos
medios. La inhibicin selectiva de organismos gram negativos y gram positivos
se obtiene mediante cristal violeta, desoxicolato sdico y los agentes
antimicrobianos: cefsulodina, Irgasan (Triclosan) y novobiocina.
En BD Aeromonas Yersinia Agar, las especies Aeromonas producen colonias
plidas con centro rojo carmes, similar a Yersinia. Ambos organismos pueden
diferenciarse mutuamente por medio de la reaccin de oxidasa (positiva slo
para Aeromonas)

Composicin: BD Yersinia Selective Agar

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Digerido pancretico de 10,0 g Sulfato magnsico 0,001 g


gelatina
Digerido pptico de tejido 5,0 Cristal violeta 0,001
animal
Extracto de carne bovina 5,0 Rojo neutro 0,03
Extracto de levadura 2,0 Cefsulodina 0,015
Manitol 20,0 Irgasan 0,004
Piruvato sdico 2,0 Novobiocina 0,0025
Cloruro sdico 1,0 Agar 12,0
Desoxicolato de sodio 0,5 pH 7,4 0,2

En lugar de 0,015 g de cefsulodina en BD Yersinia Selective Agar, BD


Aeromonas Yersinia Agar contiene slo 0,004 g de cefsulodina por litro de medio.

Resultados:

Incubar las placas en atmsfera aerobia a 25 2 C o 35 2 C y efectuar la lectura


despus de 20 24 y 42 48 h.

Cepas BD Yersinia Selective Agar BD Aeromonas Yersinia Agar


(CIN Agar)
Aeromonas Inhibicin de parcial a Crecimiento de medio a bueno;
hydrophila completa colonia de incolora a rosa plido
con un centro de rosa a rojo
Yersinia Crecimiento de bueno a Crecimiento de bueno a
enterocolitica excelente; colonia rosa plido excelente; colonia rosa plido
con un centro de color rojo con un centro de color rojo
oscuro (aspecto caracterstico oscuro (aspecto caracterstico de
de ojo de toro) ojo de toro)
Escherichia coli Inhibicin completa. Inhibicin completa.
Enterococcus faecalis Inhibicin de parcial a Inhibicin de parcial a completa
completa
Proteus mirabilis Inhibicin de parcial a Inhibicin de parcial a completa
completa
Pseudomonas Inhibicin de parcial a Inhibicin de parcial a completa,
aeruginosa completa crecimiento medio aceptable
Staphylococcus Inhibicin de parcial a Inhibicin de parcial a completa
aureus completa
Sin inocular Rosa claro, ligeramente opalescente

EL MEDIO NOVOBIOCINA, SALES BILIARES, XILOSA Y DOS


GALACTOPIRANSIDOS (XGM) ha sido evaluado para el aislamiento de
Salmonella, Shigella, Aeromonas y Yersinia. Las especies de Aeromonas se
aislan con una frecuencia del 36% del agar XGM y 43% del agar CIN. El XGM
tiene menos falsos positivos (11%) que el CIN (60%).

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EL MEDIO TIOSULFATO- CITRATO- SALES BILIARES- SACAROSA (TCBS)


es usualmente inhibitorio para Aeromonas. El enriquecimiento en agua
peptonada alcalina aumenta la recuperacin de Aeromonas en portadores
convalecientes y en aquellos con infecciones subclnicas, en pacientes con
diarrea aguda el enriquecimiento es innecesario.

AGAR SELECTIVO PARA AEROMONAS (SALES BILIARES IRGASAN


VERDE BRILLANTE (BSIBG))

Agar selectivo para Aeromonas se recomienda para el aislamiento selectivo


de especies de Aeromonas de los alimentos.

Basando su selectividad en el verde brillante e irgasan, no inhibe las cepas de


Aeromonas sensibles a la ampicilina que es empleada en otros medios.

Fundamento: Protena peptona y el extracto de carne de vacuno proporciona


compuestos nitrogenados esenciales. La D-xilosa es fuente de carbono y
energa. Los organismos Gram positivos son inhibidos por sales biliares y
organismos verdes brillantes y Gram negativos que poseen una nitratasa de tipo
A son inhibidos por irgasan. Los organismos que sobreviven se diferencian por
su capacidad para fermentar la xilosa. Las especies de Aeromonas no fermentan
xilosa y Oxidasa se puede realizar en colonias que no producen cido. La
formulacin actual de Agar selectivo para Aeromonas (BSIBG Agar) se
recomienda para el aislamiento de Aeromonas.
Composicin:

Extracto de carne de vaca 5.000


Protena peptona 5.000
D-Xilosa 10.000
Tiosulfato de sodio 5,440
Verde brillante 0,005
Rojo neutro 0,025
Sal biliar 8.500
Irgasan 0,005
Agar 11.500
El pH final (a 25 C) 7,0 \ pm 0,2
gramos por litro 45.5

Preparacin:
Suspender 45,5 gramos en 1000 ml de agua destilada. Calentar a ebullicin para
disolver completamente el medio. NO AUTOCLAVE.
Mezclar bien y verter en placas de Petri estriles.

Apariencia: Polvo fluido homogneo de color amarillo claro ha rozado.

Color y claridad del medio preparado: Color naranja rojizo de color claro a
ligeramente opalescente formas de gel en placas de Petri.

PH: 6,80-7,20

Inoculacin: sobre Agar selectivo para Aeromonas, extendindose la superficie


para colonias individuales.

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Incubacin: Incubar las placas aerobicamente a 37 C durante 18-24


horas. Examinar para las colonias tpicas y confirmar como Aeromonas.

Interpretacin de los resultados:

Organismo crecimiento tamao de caractersticas de la


la colonia colonias
Aeromonas Translcido
hydrophila Colonias
exuberante 0,5-3,0 mm Convexo,
entero, brillante
verde, rosa
translucido.
Pseudomonas Convexo,
spp. entero, brillante
exuberante 0,5-1,0 mm verde, rosa
translucido.
Escherichia Inhibido
coli (sin crecimiento) ---- ----

Proteus Inhibido
mirabilis (sin crecimiento) ---- ----

Confirmacin

Las colonias tpicas (colonias translcidas, de color verde plido de 0,5-3,0 mm


de dimetro) deben ser confirmadas como presuntivo Aeromonas spp. Mediante
la realizacin de una prueba de oxidasa del medio.

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Aeromonas, dar una reaccin positiva de la oxidasa y demostrar la


reaccin oxidativa y metabolismo fermentativo.

Pseudomonas spp. Tambin sern positivos a la oxidasa, pero no


poseen propiedades fermentativas metabolismo.

Un mtodo alternativo es inocular tubos de hierro de azcar triple.

Aeromonas producir tpicamente un extremo cido (amarillo) y una


inclinacin alcalina o inalterada (rojo).

Pseudomonas spp. Se mantendr sin cambios.

GSP- GLUTAMATO AGAR. PSEUDOMONAS / AEROMONAS KIELWEIN


(BASE)
Aislamiento y enumeracin de Psicotrofos, Formadores de limos, Pseudomonas
y Aeromonas.

Aeromonas hydrophilas, amarilla, vira


el medio a naranja

Composicin: (Frmula por litro)

Glutamato sdico 10,00 g


Almidn soluble 20,00 g
Dihidrgenofosfato K 2,00 g
Sulfato de Magnesio 0,50 g
Rojo Fenol 0,36 g
Agar-Agar 12,00 g
pH final: 7,2 0,2

Preparacin:

Disolver 45 gramos en un litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullicin,


para su completa disolucin. Autoclavar a 121 C durante 15 minutos.

Enfriar a 50 C y aadir aspticamente 100.000 U.I. de Penicilina G sdica y,


eventualmente, 001 g de pimaricina esterilizadas por filtracin.

Apariencia: deshidratado, polvo grueso, Rojo

Color y claridad del medio preparado: Estril, Rojo intenso

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Resultados:

Control de crecimiento 48-72 h a 37c aproximadamente:

Organismo crecimiento de la colonia


Bacillus subtillis: Inhibido.
Staphylococcus aureus Inhibido.
E.coli Inhibido.
Pseudomonas aeruginosa Bueno, Medio tendiendo al violceo.
Aeromonas hydrophila Bueno, medio amarillento

NOTA: Las Pseudomonas y Aeromonas son flora habitual de las aguas naturales y
sirven de indicador de contaminacin en todo tipo de aguas de la industria.

Interpretacin de resultados.

El Agar Almidn GSP de Kielwein es selectivo y diferencial para ambos gneros. Tras
incubar a 30-37 C aproximadamente, durante 24-72 horas.

Las colonias de 2-3 mm, de color violceo o azulado y rodeadas de un viraje


violceo del medio, son de Pseudomonas.
Las colonias de igual tamao, pero amarillas, rodeadas de un viraje amarillo del
medio, son de Aeromonas.

Las colonias ms pequeas suelen ser Enterobacterias. Confirmar con tiras de oxidasa
(Pseudomonas y Aeromonas dan prueba positiva)

MEDIO AEROMONAS (RYAN)

Para el aislamiento selectivo de Aeromonas hydrophila de muestras clnicas y


ambientales cuando Ampicilina se utiliza como un suplemento selectivo.

Preparacin: Suspender 28,1 gramos del medio en 500 ml de agua destilada.


Mezclar bien y disolver por calentamiento con agitacin frecuente. Deje hervir
durante un minuto hasta que se disuelva completamente. Evite el
sobrecalentamiento. NO AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y aadir
aspticamente un vial de Suplemento de Ampicilina previamente reconstituido
en 5 ml de agua destilada estril. Homogeneizar suavemente y dispensar en
placas de Petri.

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Proteosa-peptona 5 g/l
extracto de levadura 3 g/l
clorhidrato de L-lisina 3,5 g/l
inositol 2,5 g/l
lactosa 1.5 g/l
sorbosa 3 g/l
xilosa 3.75 g/l
sales biliares 3 g/l
tiosulfato sdico 10.67 g/l
cloruro sdico 5 g/l
citrato amnico ferrico 0.8 g/l
azul de bromitol 0.04 g/l
ampicilina 0.005 g/l
Ph 80,1

Resultados: las colonias de Aeromonas son de color verde oliva con el centro
ms oscuro y de 0.5 y de 1.5 mm de dimetro.

AGAR GLUTAMATO PENICILINA (AGAP)

L(+) Glutamato sdico 10 g/l


almidn hidrosoluble 20 g/l
dihidrogeno fosfato potsico 20 g/l
sulfato de magnesio 0.5 g/l
rojo de fenol 0.36 g/l
agar 12 g/l
pimaricina 0.01 g/l
penicilina 100.000 UI/L
Ph 7,2 0,2

Resultado: Las Aeromonas aparecen colonias amarillas de 2-3 mm de dimetro


rodeadas de una zona amarillenta.

AGAR ALMIDON AMPICILINA (AAA)

Almidn soluble 10 g/l


agar con rojo de fenol 31 g/l
proteasa peptona 10 g/l
extracto de carne 1 g/l
cloruro sdico 5 g/l
rojo fenol 0.25 g/l
agar 15 g/l
ampicilina 0.01 g/l
Ph 7,0 0,1

Resultado: Aeromonas dan lugar a colonias amarillas, de 3-5 mm de dimetro,


que se caracteriza por que despus de aadir 5 ml de lugol (solucin yodo yodura
de lugol: yodo 1 g; yoduro potsico 2 g: agua estilada 200 ml) en la superficie de
la placa se tornan de color miel con un halo amarillo alrededor.

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PRUEBAS BIOQUIMICAS

IDENTIFICACIN

Es necesario diferenciarla fundamentalmente de Vibrio y Plesiomonas, esta ltima se


diferencia facilmente de Aeromonas por reaccin positiva para lisina, ornitina, arginina
y por la fermentacin de m- inositol.

Vibrio es ms dificil de diferenciar de Aeromonas. La resistencia al agente vibriosttico


O/129 y la imposibilidad de crecer en concentraciones de sales mayores o iguales al 6%
usualmente indican el gnero Aeromonas. Vibrio cholerae O139, toxignico, que no
requiere sal y resistente al agente vibriosttico O/129 es la excepcin. Sin embargo el
patrn de decarboxilasa lisina y ornitina positivas y arginina negativa, la ausencia de
produccin de gas de la glucosa y la fermentacin de la salicina separan este
microorganismo de las Aeromonas.

PRUEBAS BIOQUIMICAS DIFERENCIALES ENRE GENEROS RELACCIONADOS CON


LAS AEROMODALES.
PRUEBAS GNEROS
BIOQUIMICAS vibrio aeromonas plesiomonas pseudomonas enterobacterias
Oxidasa + + + +
Fermentacin + + + +
de la glucosa
sensible a S/S R/R S/S N/A N/A
0/129
crecimiento en +
TCBS
Crecimiento + + N/A +
en NaCl:
0%
3% + +/ N/A
6% + + N/A
cido inositol + N/A
o 0/129= 2,4 dimetro
o + = la mayora de las cepas son positivas.
o = la mayora de las cepas son negativas.
o R= resistente.
o S= Sensible.
o NA= No aplicable

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IDENTIFICACIN DE LA ESPECIE

AEROMONAS HYDROPHILA

CARACTERISTICAS Aeromona Hydrophila

Oxidasa +
Catalasa +
Motilidad +
Indol +
2 en TSIA
Urea
Gas de glucosa +
Arginina dihidrolasa +
Descarboxilacin de Lisina +
Descarboxilacin de ornitinina
Descarboxilacion de arginina +
Voges-proskauer +
Acido de glucosa +
Acido de L-arabinosa +
Acido de lactosa
Acido de sacarosa +
cido myo-inositol
Acido D- manitol +
Acido salicina +
Acido de celobiosa
Hidrolisis de esculina +
Beta hemolisis en sangre de Carnero +
Susceptibilidad a la cefalotina
Susceptibilidad a la ampicilina
Sensibilidad a 0/129
Hidrolisis de gelatina a 22C +

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BIBLIOGRAFA

Microbiologia de Jawetz, Melnich y Adelber. (18 edicin )-Mexico Editorial- El


manual moderno (capitulo 18)

Kampfer, P., C. Chrismann, J. Swins and G. Huys. 1999. In vitro susceptibilities


of Aeromonas genomic species to 69 antimicrobial agents.
Syst. Appl. Microbiol. 22: 662-669.

Murray,P.,Baron,E.,Jorgensen, J., Pfaller,M.,Yolken,R. 2003.Manual of Clinical


Microbiology 8th edition ASM

Janda J, Abbott S. The Gemis Aeromonas: Taxonomy, pathogenicity, and


infection. Clin Microbiol Rev 2010; 23 (1): 35-73.

Microbiologa Alimentaria: Metodologa Analtica para Alimentos y Bebidas:


Escrito por Mara del Rosario Pascual Anderson,Vicente Caldern y Pascual
(capitulo 18: investifgacion para aeromonas hydroophilas.

Abbott, S.L. 2003. Aeromonas. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M.
A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.

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