Bouillon de ROTHE

DOMAINE DUTILISATION

Le bouillon de Rothe est utilis pour effectuer le test prsomptif de recherche et de dnombrement
des entrocoques dans les eaux dalimentation, les produits surgels et les autres produits
alimentaires par la mthode du nombre le plus probable. Cette recherche se pratique en deux
tapes :
test prsomptif sur bouillon de Rothe,
test confirmatif sur bouillon de Litsky.

HISTORIQUE

Ce bouillon lazide de sodium et au glucose est prpar suivant la formule de Rothe. Il a t

recommand par Malmann et Seligman pour la numration des streptocoques fcaux dans les
eaux, les eaux rsiduaires et les aliments. Malmann, Botwright et Churchill ont dmontr laction
bactriostatique de lazide de sodium sur la flore Gram ngatif, favorisant ainsi la croissance des
entrocoques.

PRINCIPES

- La forte nutritivit du milieu est due la prsence dune forte proportion de polypeptone ainsi que
de glucose.
- Le chlorure de sodium maintient lquilibre osmotique.
- Les phosphates agissent comme substances tampon.
- Lazide de sodium inhibe la croissance des microorganismes Gram ngatif par son action
bactriostatique et favorise la culture des streptocoques fcaux.
- Aprs lobservation de cultures dans les tubes (test prsomptif), il est ncessaire de pratiquer le
test confirmatif sur un bouillon de Litsky. Cette technique associe leffet de lazide de sodium
celui dun colorant : lthyl-violet.

PREPARATION

Milieu simple concentration

- Mettre en solution 35,6 g de milieu dshydrat (BK060) dans 1 litre deau distille ou
dminralise.
- Agiter lentement jusqu dissolution complte.
- Rpartir en tubes, raison de 10 mL par tube.
- Striliser lautoclave 121C pendant 15 minutes.

Milieu double concentration

- Mettre en solution 71,2 g de milieu dshydrat (BK060) dans 1 litre deau distille ou
dminralise.
- Agiter lentement jusqu dissolution complte.
- Rpartir en tubes 20 x 200 mm, raison de 10 mL par tube.
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- Striliser lautoclave 121C pendant 15 minutes.

MODE DEMPLOI

Milieu simple concentration

Ensemencer les tubes avec 1 mL dinoculum et de ses dilutions dcimales successives.

Milieu double concentration

Ensemencer les tubes avec 10 mL dinoculum.

Incubation
Incuber tous les tubes 37C pendant 24 et 48 heures.

LECTURE

Les tubes positifs prsentent un trouble. Ceux-ci seront obligatoirement soumis au test confirmatif
sur bouillon de Litsky (BK 061).

FORMULE - TYPE
(pouvant tre ajuste de faon obtenir des performances optimales)

Pour 1 litre de milieu :

Polypeptone .....................................................................................20,0 g
Glucose ..............................................................................................5,0 g
Chlorure de sodium ............................................................................5,0 g
Phosphate monopotassique...............................................................2,7 g
Phosphate dipotassique.....................................................................2,7 g
Azide de sodium.................................................................................0,2 g

pH du milieu prt--lemploi 25C : 6,8 0,2.

CONTRLE QUALITE

- Milieu dshydrat : poudre blanc crme, fluide et homogne.

- Milieu prpar : solution ambre, limpide.
- Rponse culturale typique aprs 24 heures dincubation 37C, puis subculture sur bouillon de
Litsky :

Microorganismes Cultures sur bouillon de Litsky

(1)
Enterococcus faecalis ATCC 33186 positive
+ Escherichia coli ATCC 25922
+ Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145
(1)
Enterococcus faecalis CCM 2541 positive
+ Salmonella Enteritidis ATCC 13076
+ Staphylococcus aureus ATCC 25923

Escherichia coli ATCC 25922 inhibe

Bacillus subtilis ATCC 6633 inhibe
(1)
inoculum <102 microorganismes.

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STOCKAGE / CONSERVATION

Milieu dshydrat : 2-30C.

- La date de premption est mentionne sur ltiquette.
- Milieu prpar en tubes : 6 mois 2-8C ( titre indicatif).

PRESENTATION Code

Milieu dshydrat :
- Flacon de 500 g BK060HA

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Rothe. Illinois State Health Department.

Mallmann, W.L., and Seligmann, E.B. 1950. A comparative study of media for the detection of streptococci in water and
sewage. Ann. J. Pub. Health, 40: 286.

J.O du 19 janvier 1980. Critres microbiologiques auxquels doivent satisfaire certaines denres animales ou dorigine
animale. Mthodes gnrales danalyse bactriologique. (arrt du 21 dcembre 1979 modifi). Dnombrement des
streptocoques fcaux.

Rodier, J. 1984. Lanalyse de leau. Dnombrement des streptocoques fcaux prsums (Mthode par ensemencement en
milieux liquides). Dunod 7me Ed., 825-828.

XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la prparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide gnral pour les essais de performance des milieux de culture.

Les mentions portes sur ltiquette sont prdominantes sur les formules ou les instructions dcrites dans ce document.
Les informations et les spcifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2009-02-10.
Elles sont susceptibles dtre modifies tout moment, sans pravis.
Code document : BK060/F/2001-01 : 4.

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