Manual POPs Agua LABEAM

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN
DEPARTAMENTO DE HIDRULICA E SANEAMENTO DHS

LABORATRIO DE ENGENHARIA AMBIENTAL BORSARI NETO
MANUAL DE PROCEDIMENTOS
LABORATORIAIS INTEGRA-CLIMASUL
APLICADO AO MONITORAMENTO DE
PARMETROS ASSOCIADOS QUALIDADE
DA GUA EM CORPOS AQUTICOS
Elaborao e Organizao: Carla Cristina Bem e Luiz Fernando Dombroski
Curitiba
2010
NDICE
CAPTULO 1 - Monitoramento de qualidade da gua em corpos aquticos...........4
CAPTULO 2 - Parmetros de interesse na gesto e monitoramento de qualidade

da gua em corpos aquticos..................................................................................6
CAPTULO 3 - Procedimentos para amostragem em campo, conservao e

armazenamento de amostras de gua associadas ao monitoramento de qualidade
da gua em corpos aquticos................................................................................12
CAPTULO 4 Consideraes gerais sobre coleta, preservao de amostras e

medidas de segurana em laboratrio...................................................................15
CAPTULO 5 - Procedimentos para limpeza e descontaminao de frascos,

vidrarias e materiais de uso geral utilizados nos ensaios laboratoriais.................20
CAPTULO 6 - Procedimentos para amostragem em campo, conservao e

armazenamento de amostras de gua associadas ao monitoramento de qualidade
da gua em corpos aquticos................................................................................25
POP 01 - Oxignio dissolvido.................................................................................30

POP 02 - DBO5.......................................................................................................38
POP 03 - DQO........................................................................................................47
POP 04 - Carbono orgnico dissolvido..................................................................48
POP 05 - Srie de slidos......................................................................................51
POP 06 - UV-Vis.....................................................................................................56
POP 07 a POP 11 - Srie de nitrognio.................................................................58
POP 12 e POP 13 - Srie de fsforo......................................................................79
POP 14 - Clorofila-a...............................................................................................90
POP 15 - Metais pesados (Cd, Cr, Cu, Ni, Zn, Pb)................................................93
POP 16 - Alcalinidade total.....................................................................................99
POP 17 - Fluorescncia molecular.......................................................................103
POP 18 - Coliformes totais e fecais......................................................................105
LISTA DE SMBOLOS
PEAD polietileno de alta densidade

PP - polipropileno
OD oxignio dissolvido
DBO5 demanda biolgica de oxignio (5 dias de incubao)
DQO demanda qumica de oxignio
COD carbono orgnico dissolvido
CT carbono total
CI carbono inorgnico
UV-Vis regio ultravioleta - visvel do espectro eletromagntico
IF intensidade de fluorescncia
N-NO2- nitrognio na forma de nitrito
N-NO3- nitrognio na forma de nitrato
N-NH3 nitrognio amoniacal total
NH4+ on amnio (amnia ionizada)
NH3 amnia no ionizada
NT nitrognio total
NOrgT nitrognio orgnico total
NINORG nitrognio inorgnico total
PT fsforo total
PTD fsforo total dissolvido
PTP fsforo total particulado
PO43- - ortofosfato / fosfato reativo solvel
POrgD fsforo orgnico dissolvido
ST slidos totais
SF slidos totais fixos
SV slidos totais volteis
SST slidos suspensos totais
SSF slidos suspensos fixos
SSV slidos suspensos volteis
SDT slidos dissolvidos totais
comprimento de onda e variao do comprimento de onda
_____________________________________________________________
C aptulo 1 Monitoramento de
qualidade das guas em corpos aquticos
______________________________________________________________
O monitoramento da qualidade ambiental surgiu da necessidade de

mensurar a interferncia ou nvel de degradao causada por agentes de
natureza antropognica no ambiente ao longo do tempo (variaes temporais) ou
do espao (variaes espaciais), por meio da anlise, experimentos e
interpretao de parmetros fsicos, qumicos e biolgicos.
A freqncia do monitoramento deve ser de acordo com a resposta
requerida e da infraestrutura disponvel para realiz-lo. O uso do monitoramento
da qualidade de corpos aquticos pode ser realizado e aplicado como:
Instrumento de comando e controle e;
Instrumento de gesto do recurso.
O monitoramento de comando e controle consiste em analisar pontos

estratgicos onde possam estar ocorrendo violaes nos padres de qualidade
ambiental estabelecidos por legislao, sendo utilizados, principalmente, pelos
rgos que possuem poder fiscalizador.
Quando se pretende obter dados de qualidade para dar suporte ao sistema
de gesto, o monitoramento deve ser realizado ao longo de tempo, permitindo
observar as variaes temporais da qualidade e, ao longo do espao,
possibilitando observar plumas de poluio, desde sua origem, disperso e/ou
degradao completa. Este foco permite a indagao de inmeras questes
voltadas aos resultados obtidos frente ao monitoramento de parmetros da
qualidade da gua.
Alm da importncia em se estabelecer uma frequncia no monitoramento,
que seja adequada informao a ser obtida, fundamental que os dados
produzidos sejam de uma confiabilidade inquestionvel (validao dos
procedimentos analticos) e possam garantir uma verdadeira imagem fotogrfica
4
momentnea do que estava ocorrendo no ambiente durante uma determinada
amostragem.
Em relao qualidade da gua, a questo da consistncia dos dados de
qualidade e quantidade de gua de grande relevncia na gesto dos recursos
hdricos, por estes serem a base principal para a busca pelas ferramentas
necessrias no suporte de tomada de deciso.
Esta confiabilidade dos dados coletados em campo obtida por meio de
anlises fsico-qumicas realizadas com procedimentos analticos adequados e
executados com rigor, alm da utilizao de sensores calibrados, de modo a
produzir resultados que representem com preciso e exatido as concentraes
existentes na amostra.
A validao dos dados evita que erros sejam propagados e venham a
produzir outros, como no caso da modelagem matemtica de cenrios futuros,
calibrados com valores de concentraes que possuem distores devido a
determinao analtica inadequada ou execuo do procedimento.
Por fim, importante notar que esta pequena introduo um comunicado
de grande importncia deste manual, ao analista que venha a desempenhar o
papel fundamental de comunicar aos demais envolvidos do projeto de pesquisa
que os dados obtidos em campo e em laboratrio, so de alta qualidade e
veracidade frente ao ambiente aqutico estudado.
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______________________________________________________________
C aptulo 2 Parmetros de interesse na
gesto e monitoramento de qualidade da

gua em corpos aquticos
______________________________________________________________
As variveis monitoradas para avaliar a qualidade das guas podem ser

fsicas, qumicas e biolgicas.
As variveis fsicas so:
(a) TEMPERATURA: descrita diretamente como a medida da intensidade de

calor. Em ambientes aquticos um parmetro importante, pois influi em algumas
propriedades da gua (densidade, viscosidade, oxignio dissolvido), com reflexos
sobre a manuteno da vida aqutica. A temperatura pode variar em funo de
fontes naturais (energia solar, sazonalidade do meio) e fontes antropognicas
(guas residurias industriais; guas de resfriamento de mquinas e outros).
(b) TURBIDEZ: parmetro de qualidade da gua relacionado diretamente com

a presena de material em suspenso (slidos suspensos) na gua, como areia,
silte, argila, substncias orgnicas finamente divididas, organismos microscpicos
e outras partculas.
(c) CONDUTIVIDADE ELTRICA: capacidade que a gua possui de

conduzir corrente eltrica. Este parmetro est relacionado com a presena de
ons dissolvidos na gua, que so partculas carregadas eletricamente Quanto
maior a quantidade de ons dissolvidos, maior ser a condutividade eltrica na
gua. Para estudos em corpos aquticos, os resultados so, normalmente,
mensurados em campo com o uso de sensores (condutivmetro), devidamente
calibrado. O valor se d atravs da medida lida pelo sensor e a unidade
apresentada como S.cm-1 ou mS.cm-1.
As variveis qumicas so:
6
POTENCIAL HIDROGENINICO (pH): o pH de uma soluo o logaritmo
decimal negativo da concentrao de ons hidrnio (H3O+, em mol.L-1) e avalia o
carter cido ou bsico da soluo. O pH normalmente determinado por
eletrometria, mas pode ser estimado por titulao ou por papel indicador. A
medio do pH por eletrometria baseia-se na determinao da atividade dos ons
hidrnio pela medio potenciomtrica utilizando um eletrodo de vidro associado
a um eletrodo de referncia.
ALCALINIDADE: causada por sais alcalinos, principalmente de sdio e clcio;

mede a capacidade da gua de neutralizar os cidos; em teores elevados, pode
proporcionar sabor desagradvel gua, tem influncia nos processos de
tratamento da gua.
OXIGNIO DISSOLVIDO: elemento principal no metabolismo dos

microorganismos aerbios que habitam as guas naturais ou os reatores para
tratamento biolgico de esgotos. A determinao da concentrao de oxignio
dissolvido em guas tambm imprescindvel para o desenvolvimento da anlise
da demanda bioqumica de oxignio (DBO) e um dos parmetros que indicam o
nvel de degradao de ambientes aquticos. Em corpos aquticos, a
quantificao de OD pode ser feita com o uso de sensores ou por meio de
procedimentos analticos em laboratrio. A unidade de concentrao mg O2.L-1.
DEMANDA BIOQUMICA DE OXIGNIO: a Demanda Bioqumica de

Oxignio (DBO) um teste no qual procedimentos padronizados de laboratrio
so usados para determinar a quantidade de oxignio relativa em guas naturais,
efluentes domsticos e industriais que so consumidos no processo de
estabilizao da matria orgnica presente na amostra durante um perodo de
tempo, considerando somente a atividade microbiolgica.
O teste de DBO empregado para determinar os nveis de poluio, na
avaliao de cargas poluidoras ou eficincia de um determinado sistema de
tratamento. O teste de DBO mais difundido o DBO520, no qual, as amostras so
incubadas por 5 dias a 20C, mas tambm h a DBO U (Demanda Bioqumica
ltima de Oxignio). Normalmente realizado o teste de DBO 520 devido ao menor
7
perodo de incubao e a degradao que ocorre neste tempo equivale a cerca
de 70% da concentrao de matria orgnica presente.
Os valores obtidos no teste de DBO com os obtidos nos testes de DQO
podem ser relacionados. Esta relao DQO/DBO indica a biodegrabilidade da
amostra. Quanto mais elevada for esta relao, menor a frao biodegradvel, e
quando menor a relao, maior a atividade de biodegradao da amostra. O valor
da DBO expresso em mg O2.L-1.
DEMANDA QUMICA DE OXIGNIO: a Demanda Qumica de Oxignio

(DQO) definida como a quantidade de oxignio necessria para oxidar
quimicamente e completamente a matria orgnica e inorgnica oxidvel de uma
determinada amostra, sob condies de anlise controladas. O parmetro DQO
largamente empregado na avaliao de qualidade das guas naturais e de guas
residurias industriais e domsticas. Seu valor pode ser correlacionado com
outros parmetros como, por exemplo, com a Demanda Bioqumica de Oxignio
(DBO). O valor da concentrao expresso em mg O2.L-1.
SRIE DE SLIDOS: resduos ou slidos so todas as matrias suspensas ou

dissolvidas na gua, provenientes de despejos domsticos ou industriais. Pode-se
interpretar o termo slido a partir de uma definio operacional, como sendo a
matria que permanece como resduo aps evaporao, secagem ou calcinao,
a uma determinada temperatura padro e por um tempo fixo de um volume de
amostra conhecido. Os slidos de uma gua podem ser classificados de acordo
com o fluxograma disposto abaixo:
Slidos Totais (ST)
Slidos Suspensos Totais (SST) Slidos Dissolvidos Totais (SDT)
Slido Slido Slido Slido

Suspensos Suspensos Dissolvidos Dissolvidos
Volteis Fixos Volteis Fixos
(SSV) (SSF) (SDV) (SDF)
Slidos Volteis Totais (SVT) Slidos Fixos Totais (SFT)
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De acordo com o tratamento trmico efetuado na amostra, pode-se, ainda,
fragmentar os slidos em termos de fixos e volteis, sendo que o primeiro
aplicado ao resduo total, em suspenso ou dissolvido, aps aquecimento e
secagem por um perodo especfico e a uma temperatura especfica. A massa
perdida por ignio chamada de slidos volteis; a determinao dessas
pores no permite distinguir com preciso a matria orgnica e inorgnica, uma
vez que a perda por ignio no envolve apenas a matria orgnica, podendo
ocorrer perdas (pequenas, considerando a temperatura utilizada) na
decomposio ou volatilizao de sais minerais, por exemplo.
UV-Vis: a espectrofotometria na regio UV-Vis do espectro eletromagntico

uma das tcnicas analticas mais empregadas, em funo de robustez, custo
relativamente baixo e grande nmero de aplicaes desenvolvidas como
exemplo, na caracterizao da matria orgnica. O mtodo consiste na leitura da
amostra a partir de varredura entre faixas de comprimento de onda na regio do
UV-Vis, normalmente, entre os comprimentos de onda de 200 a 800nm, para
posterior tratamento dos dados. A resposta do sinal de absorvncia ser dada em
funo dos constituintes orgnicos e/ou inorgnicos que compe cada amostra,
cada qual com picos de intensidade de sinais em faixas distintas do espectro.
SRIE DE NITROGNIO: o nitrognio (N) um macronutriente essencial ao

metabolismo dos seres vivos pois, aps o carbono o elemento exigido em maior
quantidade pelas clulas vivas e ao contrrio do fsforo (P), abundante no
ambiente aqutico (na grande maioria dos casos, visto que pode atuar tambm
como nutriente limitante). Sua importncia se deve, principalmente, a sua
participao na formao de protenas e, em baixas concentraes, atuando
como nutriente utilizado na produtividade primria, etapa metablica dos
ambientes aquticos. Em ambientes aquticos, o nitrognio encontra-se presente
em diferentes espcies: N2 (nitrognio molecular), NO2- (nitrito), NO3- (nitrato),
N2O (xido nitroso), nitrognio orgnico dissolvido, nitrognio orgnico
particulado, NH4+ (on amnio), NH3 (amnia), sendo a soma desses dois ltimos
o nitrognio amoniacal total. Dentre essas espcies, o nitrato e o on amnio so
de grande importncia para os ecossistemas aquticos, por representarem a
principal fonte de nitrognio para os produtores primrios (Ex.: fitoplncton).
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O estado de oxidao dos compostos de nitrognio em corpos aquticos
pode indicar a idade e o grau de poluio. Isto significa dizer, por exemplo, que as
formas reduzidas apontam para um foco de poluio prximo, enquanto a
prevalncia de NO2- (baixa concentrao) e NO3-, ao contrrio, indica que a
influncia de atividades antropognicas, como os lanamentos de esgotos, se
encontram distante, considerando que os estados reduzidos ou oxidados so
funo, principalmente, da concentrao de oxignio dissolvido na coluna dgua.
SRIE DE FSFORO: a grande importncia do fsforo deve-se participao

deste elemento em processos fundamentais do metabolismo dos seres vivos
como macronutriente. Entretanto, quando comparado a outros nutrientes , em
geral, considerado limitante. Tal fato se deve a tendncia de formar compostos
insolveis associados a argilas, ctions, xihidrxidos de ferro, material
particulado, os quais acabam incorporando e concentrando uma significativa
quantidade de fsforo nos sedimentos. Em guas naturais, geralmente
encontrado na forma inica ou complexado, como o fosfato, por ser a nica forma
estvel em soluo aquosa. Sob esta forma, o fsforo pode ser encontrado como:
PO43-, HPO42-, H2PO4-, conhecidas como ortofosfato ou, tambm, fsforo reativo
solvel. Estas por sua vez, representam a frao de maior biodisponibilidade e
rpida assimilao pelas algas e plantas aquticas. As formas dissolvidas ou
particuladas estaro sempre combinadas ou complexadas a outros elementos, a
exemplo do ferro. Ainda, a presena de fsforo nos sedimentos envolve a
contribuio dos minerais do solo da bacia de drenagem ou deposio atravs da
coluna dgua por meio de processos fsicos, qumicos ou biolgicos.
CLOROFILA-a: monitorada no laboratrio como uma varivel biolgica, a

clorofila-a um parmetro de anlise realizado normalmente em ambientes
lnticos, mas com possibilidade de casos de floraes de algas em ambientes
lticos. A clorofila-a o pigmento fotossintetizante primrio dos organismos que
produzem oxignio estando presente em algas, organismos fotossintetizantes e
tambm em algumas bactrias, sendo o nico pigmento que tem a capacidade de
converter energia luminosa em molculas orgnicas.
O monitoramento da concentrao de clorofila-a em sistemas aquticos
permite avaliar quantitativamente a biomassa fitoplanctnica presente no
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ambiente, resultado este que pode ser aplicado como indicador de condies
como, por exemplo, o grau de trofia.
METAIS PESADOS: a presena de metais pesados em ambientes aquticos

se relaciona tanto com fontes naturais, a partir de processos fsicos e qumicos,
envolvendo, por exemplo, desgate (intemperismo) e lixiviao do material
contindo nos solos e rochas que compe a bacia de drenagem de rios, lagos,
reservatrios. Neste caso, as concentraes avaliadas para metais so
relacionadas a nveis de background, encontrados a partir da ocorrncia natural,
considerando a sua variabilidade e disponibilidade geolgica entre diferentes
regies. Por outro lado, atividades de origem antropognica que repercutem no
impacto sobre a qualidade do ambiente (ar, gua, solos e sedimentos,) resultam
em nveis elevados de metais pesados de alto carter txico (ao considerar
valores guia de qualidade para cada metal) como: arsnio (As), mercrio (Hg),
chumbo (Pb), cdmio (Cd), cromo (Cr), cobre (Cu), nquel (Ni) e zinco (Zn). Estes
metais aportam nos sistemas aquticos a partir de uma variedade de fontes,
sendo transportados direta ou indiretamente, a exemplo do lanamento de guas
residurias industriais (distintos ramos industriais) e por meio da deposio
atmosfrica (precipitao dos metais, influncia das chuvas e dos ventos no
transporte para outras regies), alm da importante contribuio da drenagem
urbana, a qual se caracteriza por nveis relativamente elevados para Cu, Pb e Zn.
No ambiente aqutico, a especiao dos metais representa um importante
significado na avaliao da biodisponibilidade e toxicidade, com diferenas
significativas entre diferentes espcies. Neste caso se torna, por exemplo, uma
rea especfica no estudo das espcies para avaliao dos seus efeitos na biota
aqutica. Um exemplo a verificao das espcies de cromo, a partir do estado
de oxidao quando verificada as formas mais estveis: Cr (III) e Cr (VI). O Cr (VI)
ou cromo hexavalente descrito como a forma do elemento mais txica, com um
significante impacto em efeitos adversos sobre a qualidade do ambiente aqutico.
Neste caso, a necessidade de valores guia de qualidade imposta para as
diferentes espcies fundamental para obter um melhor entendimento do impacto
causado pelo metal. Outra quest fundamental a tendncia de acmulo dos
metais em sedimentos de fundo, os quais influenciam diretamente e de forma
dinmica na disponibilidade para a coluna da gua.
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______________________________________________________________
C aptulo 3 Procedimentos para

amostragem em campo, conservao e
armazenamento de amostras de gua
associadas ao monitoramento de qualidade
da gua em corpos aquticos
______________________________________________________________
A coleta das amostras deve ser realizada de tal forma que seja garantida e
preservada a total integridade de suas caractersticas fsico-qumicas, inicialmente
presentes no ambiente possibilitando obter um retrato do ponto de amostragem.
Para tal, os procedimentos de coleta e armazenamento para posterior anlise em
laboratrio so especficos para cada parmetro. Estes devem ser aplicados
como metodologia modelo para as linhas de pesquisa relacionadas ao trabalho de
campo, no estudo de ambientes aquticos.
A Tabela 1 apresenta um resumo do procedimento para coleta
considerando: estocagem, perodo para realizao do ensaio, procedimentos para
conservao (quando necessrio), volume e frao da amostra utilizada na
determinao dos parmetros associados ao monitoramento de qualidade da
gua de corpos aquticos.
Os procedimentos para preparo, limpeza e descontaminao dos frascos
para amostragem constam no Captulo 4 - Procedimentos para limpeza e
descontaminao de frascos, vidrarias e materiais de uso geral utilizados
nos ensaios laboratoriais.
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Tabela 1 Procedimentos para coleta e armazenagem das amostras para anlise em laboratrio.
COLETA PERODO MXIMO PARA FRAO DA VOLUME

PARMETRO
(FRASCO) ANLISE / CONSERVAO AMOSTRA (ml)
Fixao em campo do OD Winkler

OD Frasco Winkler TOTAL 300
e quantificao no laboratrio (12h)
Calculado
segundo as
DBO5* PEAD, PP ou garrafa mbar 24h TOTAL
diluies
necessrias*.
10 (digesto
1 semana (4C), acidificar com 1ml fechada)# e 50
DQO PEAD, PP ou garrafa mbar TOTAL
H2SO4 / L amostra (digesto
aberta)
24h para filtrao (4C), acidificar

COD PEAD, PP ou garrafa mbar DISSOLVIDA** 50
com 0,1ml H2SO4 / 50ml amostra
Alcalinidade PEAD, PP ou garrafa mbar 24h (4C), s/ preservao TOTAL 100
24h (4C), filtrar, no mximo, no dia

Clorofila-a Garrafa mbar DISSOLVIDA 1000
posterior a coleta de campo
N-NO2- PEAD, PP ou garrafa mbar 24h (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 30#
N-NH3 PEAD, PP ou garrafa mbar 48h (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 6#
N-NO3- PEAD, PP ou garrafa mbar 7 dias (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 50#
NT PEAD, PP ou garrafa mbar 10 dias (4C), s/ preservao TOTAL 15#
13
COLETA PERODO MXIMO PARA FRAO DA VOLUME
PARMETRO
(FRASCO) ANLISE / CONSERVAO AMOSTRA (ml)
NOrgT*** / NINORG**** - - - -
PO43- PEAD, PP ou garrafa mbar 24h (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 30#
7 dias (4C), acidificar com 0,1ml

PT, PTD PEAD, PP ou garrafa mbar TOTAL E DISSOLVIDA 15# cada frao
H2SO4 / 50ml amostra
PTP***** - - - -
SDT, SST### PEAD, PP ou garrafa mbar 20 dias (4C), s/ preservao TOTAL E DISSOLVIDA 300#
20 dias (temperatura ambiente), s/

SS PEAD, PP ou garrafa mbar TOTAL 1000
preservao
IF & UV-Vis PEAD, PP ou garrafa mbar 24h para filtrao (4C) Dissolvida 25
Metais trao (Cd, Cr, Cu, Ni, 48h para filtrao (4C), acidificar
PEAD, PP DISSOLVIDA 100##
Zn e Pb) com 2ml HNO3 / L amostra
Metais trao (Cd, Cr, Cu, Ni, 48h para filtrao (4C),
PEAD, PP PARTICULADA 300##
Zn e Pb) s/preservao
Coliformes totais e fecais#### Frascos de vidro (100ml) 24h, s/ preservao TOTAL 100
*Verificar o volume de amostra necessria.
**Amostra filtrada por membrana de acetato de celulose 0,45m.
*** NOrgT quantificado da seguinte forma: NORG = NT - NINORG.
****NINORG quantificado da seguinte forma: NINORG = (N-NO2 + N-NO3- + N-NH3).
*****PTP quantificado da seguinte forma: PTP = PT - PTD.
#
Volume para anlise do parmetro em triplicata.
##
Volume para anlise do parmetro em duplicata.
###
Considera a anlise de slidos fixos e volteis de cada frao (suspensos e dissolvidos).
####
Manter 1/5 do frasco livre de amostra.
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______________________________________________________________
C aptulo 4 Consideraes gerais sobre
coleta, preservao de amostras e medidas

de segurana em laboratrio
______________________________________________________________
O objetivo da amostragem coletar pequenas pores de um determinado

material, para favorecer o transporte, porm, grandes o suficiente para atenderem
os propsitos da anlise, ou seja, representar acuradamente o material
amostrado.
Os mtodos de coleta de amostras devem ser realizados de acordo com o
material a ser analisado e com os propsitos da anlise, seguindo-se metodologia
especfica para cada parmetro. Porm, algumas regras gerais podem ser
estabelecidas para a realizao de um procedimento correto de amostragem.
1. Assegure-se de que todos os equipamentos esto limpos e em boa

qualidade de uso antes de usar;
2. Quando uma determinada substncia preservativa for adicionada aos
recipientes de coleta, encher os mesmos sem pr-enxaguar com a amostra
e tomar cuidado para no extravasar no enchimento e no haver formao
de bolhas;
3. Todos os mtodos de preservao podem ser inadequados tratando-se de
anlises relacionadas com a frao particulada da amostra;
4. Depois de fechado o frasco de coleta, verificar a formao de bolhas por
inverso e leves batidas no frasco. Se houver bolhas de ar, o ideal
descartar e coletar outra amostra, porm, isto no deve ser feito se ao frasco
tiver sido adicionado algum preservativo antes do enchimento com amostra;
5. Para coleta em rios, no caso de amostra simples, coletar preferencialmente
no meio da seo transversal a meia profundidade (para outros tipos de
coleta, estudar o mtodo mais apropriado);
15
Universidade Federal do Paran Departamento de Hidrulica e Saneamento
6. Evite reas com muita turbulncia, pois, pode haver muita perda de
constituintes volteis e potencial presena de vapores txicos mais densos
que o ar;
7. Dependendo do tipo de anlise a ser realizada, encha completamente o
recipiente de coleta (p/ a maioria das anlises de compostos orgnicos) ou
deixe espao para aerao, mistura e etc. (anlises microbiolgicas e
compostos inorgnicos);
8. Evite coletar gua da superfcie a menos que leos e graxas sejam
desejveis ou no interfiram na anlise;
9. Exceto para a anlise de compostos orgnicos volteis, deixe um espao
livre de aproximadamente 1% em todas as amostras para permitir expanso
trmica durante o transporte;
10. Identifique todas as amostras especificando inclusive caractersticas fsicas e
qumicas da gua e tambm caractersticas climticas que possam ser
correlacionas com as caractersticas da amostra (utilize caneta com tinta
prova dgua);
11. Ao acidificar amostras tenha certeza de que a diluio proporcionada pela
acidificao desprezvel ou grande o suficiente para que um fator de
correo possa ser incorporado ao clculo das concentraes (usar cido
ultra puro para evitar contaminao);
Alguns fatores importantes que interferem nos resultados das anlises so:
a presena de material em suspenso ou turbidez, o mtodo escolhido para
remover a amostra do recipiente de coleta, e as mudanas fsicas e qumicas
ocorridas devido ao armazenamento ou aerao. Na anlise de elementos trao,
procedimentos detalhados para o processamento das amostras so necessrios,
especialmente para metais e compostos orgnicos. Deve-se definir e considerar
cuidadosamente no plano de amostragem as tcnicas especficas de coleta para
tornar as amostras representativas. Para metais, frequentemente, apropriado
coletar uma amostra filtrada e outra normal para diferenciar entre metal total,
dissolvido e metal particulado, presente na matriz. Deve-se estar atento para o
fato de que alguns metais podem ser parcialmente adsorvidos ao filtro.
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Frequentemente, uma leve turbidez pode ser tolerada se a experincia
mostrar que esta no causar nenhuma interferncia em testes gravimtricos ou
volumtricos e que sua influncia em testes colorimtricos pode ser corrigida,
pois, neste teste que se apresentam os maiores efeitos da interferncia da
turbidez em amostras.
Frascos de coleta
O tipo de frasco de coleta a ser usado de grande importncia,

principalmente na determinao de elementos trao, por isso, certifique-se de que
todos os recipientes de coleta esto foram descontaminados seguindo
procedimento padro. Em geral, utilizam-se frascos de plstico ou vidro, a escolha
depende do constituinte a ser analisado, por exemplo, slica, sdio e boro podem
se desprender de frascos de vidro leve, mas no do plstico, e quantidades trao
de alguns pesticidas e metais podem ser adsorvidos nas paredes de frascos de
vidro. Portanto, frascos de vidro duro (pyrex ou equivalente) so preferveis. Para
amostras contendo compostos orgnicos, no use frascos de plstico ou somente
aqueles feitos de polmeros fluorados como os de politetrafluoretileno (PTFE).
Sempre que possvel, evite plsticos, devido ao seu potencial contaminante por
steres de ftalato. Use frascos de vidro para todas as anlises de compostos
orgnicos como orgnicos volteis, orgnicos semi-volteis, pesticidas, PCBs e
leos e graxas. Alguns compostos so sensveis a luz (compostos contendo
bromo, alguns pesticidas, compostos aromticos polinucleares, etc.), por isso,
utilize nestes casos, frascos de vidro mbar para minimizar a fotodegradao.
Geralmente, as tampas de frascos de vidro so de plstico, o que pode, em
alguns casos, representar um problema. No utilize tampas de plstico com forro
de papel. Use forros de PTFE ou lmina, mas esteja ciente de que forros de metal
podem contaminar amostras para anlise de metais e tambm podem reagir com
amostras cidas ou alcalinas. Frascos de soro com borracha forrada com PTFE
ou septo de PTFE tambm podem ser utilizados.
17
Dicas de segurana
Devido possibilidade de algum constituinte ser txico, deve-se ter muito

cuidado ao manusear as amostras, assim como em todo o processo das anlises.
Substncias txicas podem entrar em nosso corpo pela pele, pelos olhos e no
caso de vapores, a partir da respirao, podendo atingir os pulmes. A seguir,
apresenta-se alguns procedimentos de segurana:
1. Use luvas apropriadas ao tipo de mtodo a ser desenvolvido;

2. Sempre use culos de proteo;
3. Na presena de vapores txicos, faa a amostragem em locais bem
ventilados, ou utilize equipamento de respirao adequado;
4. Nunca se alimente dentro de um laboratrio ou prximo s amostras e locais
de amostragem;
5. Sempre lave muito bem as mos antes de se alimentar;
6. No deixe as amostras prximas de locais com chamas ou muito quentes;
7. No caso de presena de compostos inflamveis e necessidade de
refrigerao das amostras, utilize apenas refrigeradores especiais prova de
exploses;
8. Colete as amostras de maneira segura, evitando acidentes;
9. Para coleta de substncias radioativas, procedimentos de segurana
especficos devem ser adotados;
10. No caso de dvida quanto ao nvel de periculosidade, sempre consulte um
profissional de segurana ou higiene industrial.
Minimizao dos resduos
A minimizao dos resduos de laboratrio, alm de contribuir com o meio

ambiente, reduz os custos do laboratrio. Por isso, algumas prticas devem ser
adotadas em todos os procedimentos de anlises qumicas. Algumas so:
1. Sempre que possvel, compre e utilize quantidades menores de

substncias qumicas. Pode ser mais econmico comprar quantidades
18
maiores, porm, deve-se estar atento ao fato de que quantidades maiores
ficam mais sujeitas a ter o seu prazo de validade expirado antes do trmino
da substncia, gerando maior quantidade de resduo e maior custo para
disposio final e tratamento do mesmo;
2. Utilize primeiro os produtos que esto com seus prazos de validade mais
prximos do vencimento (mais velhos), ou se possvel, adquira-os apenas
no momento da anlise na quantidade ideal;
3. Produtos qumicos vencidos e que no foram abertos, muitas vezes podem
retornar para o fornecedor para serem reciclados ou corretamente
dispostos;
4. De preferncia para mtodos de anlise que utilizem menor quantidade de
reagente, e que estes no sejam perigosos;
5. Evite transformar resduos no perigosos em perigosos atravs de mistura
quando descartados no mesmo local;
6. Transfira produtos que esto armazenados muito tempo para locais onde
outras pessoas possam ter acesso e ento utilizar (sempre com a
autorizao do responsvel pelo laboratrio ou produtos).
19
______________________________________________________________
C aptulo 5 - Procedimentos para limpeza
e descontaminao de frascos, vidrarias e

materiais de uso geral utilizados nos ensaios
laboratoriais
______________________________________________________________
A incluso deste captulo no manual de procedimentos laboratoriais,

voltado s tcnicas de limpeza e descontaminao do material utilizado nas
diversas metodologias analticas, descritas na sequncia, no Captulo 6, uma
etapa fundamental e de grande importncia antes do incio de uma metodologia e,
dessa forma, merece especial ateno.
Em muitas situaes o procedimento de descontaminao ou a ausncia
deste, pode gerar dvidas preocupantes durante uma determinada anlise. Fato
este, provocado pelo equvoco da separao do material, no verificao da
qualidade e validade dos reagentes analticos, dentre outros.
Muitas vezes, a quantificao do parmetro pode ser realizada em triplicata
e os valores responderem bem prximos com baixa variabilidade, entretanto para
todas as rplicas, existe a possibilidade de contaminao, originada, por exemplo,
da separao de vidrarias da mesma fonte (Ex.: vidrarias lavadas com detergente
Extran, contendo fosfato na composio, utilizadas para ensaios da srie de
fsforo).
Por fim, o presente captulo apresenta os passos a serem aplicados no
preparo de material para posterior anlise dos parmetros. Os procedimentos
para limpeza dos frascos de amostragem tambm so apresentados neste
captulo.
20
1. PROCEDIMENTOS DE DESCONTAMINAO
1.1. Oxignio Dissolvido (OD) e Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO)
Toda a vidraria utilizada na determinao de OD e DBO deve seguir os

passos abaixo:
- Limpeza com escovo para vidraria e detergente Extran. Enxgue diversas

vezes com gua normal. Posteriormente, enxgue no mnimo 3 vezes com gua
destilada e deionizada. Colocar vidraria para secar em estufa (405 C);
No caso dos frascos utilizados no preparo dos reagentes analticos, seguir os
passos abaixo:
- Enxaguar diversas vezes com gua normal. Emergir em banho de HCl 10% por
um perodo mnimo de 12h (ideal: 24h);
- Retirar do banho cido e enxaguar no mnimo 3 vezes com gua destilada e
deionizada. Colocar os frascos para secar em estufa (405 C);
1.2. Demanda Qumica de Oxignio (DQO), Carbono Orgnico

(COT/COD), UV-Vis e Fluorescncia (IF)
Toda a vidraria utilizada na quantificao de DQO (refluxo aberto ou refluxo

fechado) e frascos para preparo de reagentes devem seguir os passos abaixo:

vezes com gua normal;
- Transferir o material para banho de HNO3 10% por um perodo mnino de 12h
(ideal: 24h);
- Retirar do banho cido e enxaguar com gua destilada (mnino de 3 vezes);
- Transferir o material para banho de HCl 10% por um perodo mnimo de 12h
(ideal: 24h);
21
1.3. Srie de Slidos
O preparo do material para slidos no apresenta necessidades de

solues cidas para lavagem. necessria apenas uma boa limpeza com
detergente Extran, para remoo do material residual, lavagem no mnimo 3
vezes com gua destilada e deionizada e estufa para secar (405 C).
1.4. Srie de Nitrognio e Clorofila-a
Todo material aplicado aos ensaios laboratoriais da srie de nitrognio,

deve seguir os passos abaixo para descontaminao:

- Transferir o material para banho de HCl 10% por um perodo mnino de 12h
(ideal: 24h);
ATENO: nunca mantenha ou utilize material que foi imerso em banhos de HNO 3 10% para
descontaminao nos ensaios da srie de nitrognio, devido contaminao pelo cido na
deteco das formas do elemento.
1.5. Srie de Fsforo
Todo material aplicado aos ensaios laboratoriais da srie de fsforo, deve

seguir os passos abaixo para descontaminao:
- Aps utilizar o material ou para iniciar o ensaio da srie de fsforo lavar o

material APENAS com gua normal, enxaguando diversas vezes;
(ideal: 24h);
- Retirar do banho cido e enxaguar com gua destilada (mnino de 3 vezes).
Colocar os frascos para secar em estufa (405 C);
22
ATENO: no caso da srie de fsforo, se possvel, prefervel manter o material separado para
evitar a utilizao de vidrarias, frascos, dentre outros que tenham sido lavados com detergente
Extran, visto que muito utilizado no laboratrio. A determinao de fsforo acaba sendo muito
sensvel a pequenas contaminaes causadas geralmente pela limpeza com detergente. Fato
este, devido s baixas concentraes, quantificadas na maioria dos casos.
1.6. Metais pesados
Todo material aplicado aos ensaios laboratoriais de metais pesados, deve

seguir os passos abaixo para descontaminao:

(ideal: 24h);
- Retirar do banho cido e enxaguar com gua destilada (mnino de 3 vezes);
- Transferir o material para banho de HCl 10% por um perodo mnimo de 12h
(ideal: 24h);
- Retirar do banho cido e enxaguar no mnimo 3 vezes com gua mili-Q (ultra-
pura);
- Para secar o material preparado para anlise de metais pesados, no manter o
material exposto ao ar ou estufa de modo a evitar contaminao. Coloque o
material em bandejas e cubra, por exemplo, com papel filme;
ATENO: durante o manuseio do material e durante o procedimento, utilize de preferncia luvas

isentas de talco em p, devido possibilidade de contaminao, principalmente, por zinco.
23
______________________________________________________________
C aptulo 6 - Procedimentos e mtodos
analticos para ensaios laboratoriais de

parmetros de qualidade da gua
______________________________________________________________
O presente captulo tem por objetivo, descrever passo a passo os materiais

e mtodos analticos envolvidos na quantificao e validao dos resultados
relacionados aos parmetros de qualidade da gua de corpos aquticos (rios,
crregos, reservatrios, lagos e outros). Assim, de forma sucinta, cada mtodo
apresenta os seguintes itens: descrio breve da metodologia, materiais
(equipamentos, vidrarias, reagentes analticos) necessrios, procedimentos para
calibrao e padronizao de mtodos, procedimentos para tratamento e anlise
da amostra, limites de deteco do mtodo, referncias e outros.
De grande importncia e apresentado neste captulo, a reduo do
volume de amostra necessrio para as anlises de diversos parmetros,
considerando inclusive a quantificao em triplicata para uma melhor resposta e
confiabilidade da metodologia proposta pelo manual.
Por fim, os seguintes parmetros so apresentados neste captulo: OD,
DBO, DQO, UV-Vis, COD, srie de slidos, srie de nitrognio, srie de
fsforo, clorofila-a, metais pesados (Cd, Cr, Cu, Ni, Zn e Pb), alcalinidade
total, intensidade de fluorescncia molecular (IF) e coliformes (totais e
fecais).
importante ressaltar que os mtodos foram expostos da maneira mais
usualmente aplicada no laboratrio de Engenharia Ambiental Borsari Neto nos
projetos que envolvem avaliao da qualidade da gua em ambientes aquticos.
Entretanto, todos os procedimentos analticos podem ser novamente adaptados e
avaliados quanto possibilidade de aplicao, dependendo da necessidade do
trabalho, linhas de pesquisa e/ou projetos.
24
POP 01 OXIGNIO DISSOLVIDO (OD)
1. MTODO WINKLER MODIFICADO PELA AZIDA SDICA
1.1. MTODO WINKLER MODIFICADO PELA AZIDA SDICA
Este mtodo consiste em fixar o oxignio dissolvido da amostra por meio

da adio das solues de sulfato manganoso (MnSO4) e a soluo lcali-iodeto-
azida, que contm hidrxido de sdio (NaOH), iodeto de sdio (NaI) e azida
sdica (NaN3).
A fixao do oxignio dissolvido ocorre atravs da formao de xido de
mangans, segundo a reao 1:
Mn (OH2) + O2 MnO2 + H2O (1)
Nesta etapa ocorre uma intensa floculao da amostra e uma consequente

precipitao do material floculado. A soluo de azida sdica utilizada para a
remoo da interferncia de nitritos, representada pelas reaes 2 e 3:
NaN3 + H+ HN3 + Na+ (2)
HN3 + NO2 + H+ N2 + N2O + H2O (3)
A segunda fase a liberao de iodo, que ocorre aps a adio de cido

sulfrico concentrado (H2SO4), provocando a ruptura dos flocos e o
desenvolvimento de uma colorao amarelada, cuja intensidade proporcional
concentrao de oxignio dissolvido presente inicialmente na amostra. A reao 4
expressa o procedimento citado acima:
MnO2 + 2I- + 4H+ Mn+2 + I2 + 2H2O (4)
Note-se que o on iodeto oxidado a iodo molecular em proporo

estequiomtrica a quantidade de xido de mangans que, por sua vez,
proporcional concentrao de oxignio dissolvido na amostra, conforme
mostrado na reao de fixao (1).
A fase final da anlise a titulao do iodo liberado com soluo
padronizada de tiossulfato de sdio (iodometria), representado pela reao 5.
2Na2S2O3 + I2 Na2S4O6 + 2NaI + 10H2O (5)
25
O indicador desta reao uma soluo de amido (0,5% - 2,5%), com
ponto de viragem da titulao do azul para incolor.
Os resultados para a concentrao de OD presente na amostra so
expressos na unidade de mg O2.L-1.
1.2. EQUIPAMENTOS, VIDRARIAS E REAGENTES
Equipamentos
No necessita.
Vidrarias
Frascos de DBO winkler de 300ml

Pipetas volumtricas
Bckeres
Erlenmeyer
Bureta de 50ml
Reagentes analticos
Soluo de Sulfato Manganoso (MnSO4): dissolver 480g de

MnSO4.4H2O, ou 400g MnSO4.2H2O ou 364g de MnSO4.H2O em,
aproximadamente, 800ml de gua destilada e deionizada, filtrar em papel
filtro Watman n 40 e diluir em balo volumtrico de 1000ml.
* Estocar em frascos tipo mbar ou frascos de vidro, em temperatura ambiente.

* Estvel por 1 ano (mnimo).
Soluo de Alcali-Iodeto-Azida: dissolver em, aproximadamente, 400ml

de gua destilada e deionizada e seguindo a ordem:
- 250g de hidrxido de sdio (NaOH p.a); adicione lentamente devido
elevada quantidade de NaOH (reao exotrmica).
- 67,5g de iodeto de sdio (NaI p.a);
Diluir para 500ml em balo volumtrico. Em seguida, transferir 5g de azida
sdica (NaN3 p.a), previamente dissolvida em 20ml de gua destilada,
perfazendo um volume final de 520ml.
* Estocar em frascos tipo mbar, em temperatura ambiente.

26
cido Sulfrico concentrado (p.a);
Soluo de Dicromato de Potssio (K2Cr2O7) 0,004167 mol.L-1: dissolver

1,226g de dicromato de potssio p.a (K2Cr2O7), previamente seco em
estufa a temperatura de 100C por 2h, em 800ml de gua destilada.
Transferir para um balo volumtrico de 1000ml, aferindo o volume total
com gua destilada.
* Estocar em frascos tipo mbar, em temperatura ambiente.

Soluo indicadora de Amido 1%: adicionar em um bcker, 100ml de

gua destilada e 1g de amido solvel (p.a). Levar a mistura para
aquecimento e agitao simultaneamente at a temperatura atingir valores
entre 60 e 70C (controle atravs de um termmetro graduado). Na
sequncia, mantenha por, aproximadamente, 15min a soluo de amido
nesta faixa de temperatura, sob agitao. Por fim, transfira a soluo j
dissolvida ou o sobrenadante para um frasco de reagente.
* Mantenha o frasco em ambiente refrigerado (< 4C) para preservao

* Estvel por 6 meses (mnimo).
Soluo Padro de Tiossulfato de Sdio (Na2S2O3.5H2O) 0,025 mol.L-1:

dissolver 6,205g de tiossulfato de sdio pentahidratado, juntamente com
1,5ml de hidrxido de sdio 6 mol.L-1 (ou 0,4g de NaOH p.a), em
aproximadamente 800mL de gua destilada. Transferir para um balo
volumtrico de 1000ml, aferindo o volume total com gua destilada.
* Estocar em frascos tipo mbar ou frascos de vidro, em temperatura ambiente.

* A utilizao da soluo dependente de sua padronizao diria (hora do uso) para clculo
da concentrao real.
Padronizao: dissolver aproximadamente 2g de iodeto de potssio (KI p.a) em

100ml de gua deionizada e destilada em um erlenmeyer de 250ml. Adicionar
10ml de soluo H2SO4 1:9 (1ml de H2SO4 e 9ml de gua deionizada).
Acrescentar 20ml da soluo de dicromato de potssio 0,004167 mol.L-1. Deixar a
soluo no escuro por 5min. Em seguida, aferir para 200ml com gua destilada.
Titular a soluo com o tiossulfato de sdio 0,025 mol.L-1 at a colorao amarelo-
palha, acrescentar ento 5 gotas do indicador amido 1% e prosseguir a titulao
27
at o ponto de viragem do azul para o incolor. Calcular a concentrao real
(mol.L-1) do tiossulfato segundo a equao 1:
M ( K 2 Cr2 O7 ) * v1( K 2 Cr2 O7 )

M ( Na2 S 2 O3 ) (1)
v2( Na2 S 2 O3 )
em que:
M (K2Cr2O7) = molaridade da soluo de dicromato de potssio (mol.L-1).
v1 (K2Cr2O7) = volume da soluo de dicromato de potssio (mL).
v2 (Na2S2O3) = volume da soluo de tiossulfato gasto na titulao (mL).
1.3. PROCEDIMENTO ANALTICO (Amostra)
1. Transferir a amostra para o frasco Winkler, evitando agitar a amostra e a

formao de bolhas;
2. Adicionar 1ml de sulfato manganoso;
3. Adicionar 1ml de soluo alcalina de iodeto azida;
4. Feche o frasco, misture por inverso no mnimo 10 vezes:
Havendo a formao de uma suspenso leitosa, no h oxignio
dissolvido para ser determinado na amostra;
Havendo a formao de um precipitado de cor marrom, dar
continuidade a anlise (ver tpico 5).
* As etapas de 1 a 4 devem ser, preferencialmente, realizadas em campo com a amostragem

direta no frasco Winkler, evitando ao mximo a presena de bolhas.
5. Em laboratrio, adicionar ao frasco 1ml de H2SO4 (manuseie

cuidadosamente, com o uso de EPIs jaleco, luvas e culos de proteo);
6. Fechar o frasco e misturar por inverso novamente at que o precipitado
seja totalmente dissolvido;
7. Transferir do frasco para um erlenmeyer, 100ml da amostra;
8. Titular com soluo padronizada de tiossulfato de sdio 0,025 mol.L-1 (valor
terico) at o aparecimento de uma colorao amarelo-palha;
9. Acrescentar ento, de 3 a 5 gotas do indicador amido 1% e prosseguir a
titulao at o ponto de viragem da cor azul para incolor;
10. Anote o volume gasto na titulao (ml), correspondente a amostra;
28
1.4. CLCULO DA CONCENTRAO DE OD
OD(mg / L) Vg * 2 * fc (2)
em que:
Vg = volume de tiossulfato de sdio gasto na titulao (mL).
fc= fator de correo do tiossulfato de sdio (Volume prtico / Volume terico).
1.5. LIMITE DE DETECO
Concentrao de oxignio dissolvido (mg O2.L-1):

Limite mximo: 7 a 9 mg OD.L-1
Limite mnimo: 2 mg OD.L-1
2. DESTINAO DO RESDUO GERADO
Depois de finalizada a etapa de titulao o resduo gerado na leitura do

OD, pode ser descartado diretamente na pia sem necessidade de um pr-
tratamento.
3. REFERNCIA
STANDARD METHODS, methods 4500 - O C & 5210 B (Apha, 1998)
29
POP 02 DEMANDA BIOQUMICA DE OXIGNIO (DBO5)
1. MTODO PARA DETERMINAO
1.1. MTODO WINKLER MODIFICADO PELA AZIDA SDICA
O teste de DBO tem por objetivo, determinar a quantidade de oxignio

consumido por microorganismos aerbios presentes na amostra e assim,
relacionar com a quantidade de matria orgnica de natureza biodegradvel.
O mtodo usualmente empregado para a determinao da DBO o da
diluio, incubao por um perodo de 5 dias a 20C, com a determinao dos
nveis iniciais e finais da concentrao de oxignio atravs do mtodo da azida
sdica modificada (POP-01).
1.1.1. EQUIPAMENTOS, VIDRARIAS E REAGENTES
Equipamentos
Garrafo para gua de diluio (compatvel com o volume necessrio no
ensaio)
Incubadora termo-regulvel (201C)
Vidrarias
Frascos de DBO de 300ml

Pipetas volumtricas
Bckeres
Erlenmeyer
Bureta de 50ml
Reagentes analticos - Solues nutrientes
Soluo Tampo de Fosfato: dissolver em aproximadamente 600ml de

gua destilada:
- 8,5g de fosfato monobsico de potssio (KH2PO4 p.a);
- 21,75g de fosfato dibsico de potssio (K2HPO4 p.a);
30
- 33,4g de fosfato dibsico de sdio heptahidratado (Na2HPO4.7H2O
p.a);
- 1,7g de cloreto de amnio (NH4Cl p.a)
Transferir para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume com
gua destilada.
* Estocar a soluo em frasco tipo mbar, em temperatura ambiente.

Soluo de Sulfato de Magnsio (MgSO4): dissolver 22,5g de sulfato de

magnsio heptahidratado (MgSO4.7H2O p.a) em aproximadamente 800ml
de gua, transferir para um balo volumtrico de 1000ml e completar o
volume com gua destilada.

Soluo de Cloreto de Clcio (CaCl2): dissolver 27,5g de cloreto de

clcio anidro (CaCl2 p.a) em aproximadamente 800ml de gua, transferir
para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume com gua
destilada.

Soluo de Cloreto Frrico (FeCl3): dissolver 0,25g de cloreto frrico

hexahidratado (FeCl3.6H2O p.a) em aproximadamente 800ml de gua,
transferir para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume.

gua de Diluio: adicionar a um garrafo previamente limpo e estril

gua destilada de acordo com a necessidade a ser empregada no teste;
manter o contedo desse garrafo em aerao por, no mnimo, 45 min e
mximo de 1h30min; deixar em repouso por aproximadamente 30min; na
sequncia, adicionar 1ml de cada uma das solues nutrientes para cada
litro de gua de diluio utilizada.
Reagentes analticos - Mtodo Winkler modificado pela azida sdica (POP-01)
31
Os reagentes utilizados na etapa de quantificao do OD (inicial e final),
atravs da titulao iodomtrica, seguem os mesmos procedimentos de preparo e
padronizao descritos no POP-01 (procedimento para OD).
1.1.2. PROCEDIMENTO ANALTICO (Amostra)
1.1.2.1. Mtodo Winkler sem semente
1. Regular o pH das amostras para 6,8 a 7,2 quando estiverem a temperatura

ambiente. Utilize para o ajuste solues levemente cidas ou bsicas como
HCl 0,01 mol.L-1 ou NaOH 0,01 mol.L-1;
2. Adicionar ao frasco de DBO identificado, a amostra ou amostra mais a
alquota da diluio. O Standard recomenda pelo menos 5 diluies. As
diluies devem ser decididas com base na concentrao de DQO,
previamente quantificada (ver POP-03);
3. Anotar o n e volume do frasco e a porcentagem da amostra adicionada em
uma ficha de controle padro;
4. No caso de diluio da amostra, completar o volume do frasco com gua de
diluio evitando a formao de bolhas e turbulncias;
5. Preparar, considerando a necessidade de diluio, amostra em rplica de
modo que possibilite a medio do ODinicial e ODfinal;
5. Medir o ODinicial por meio do mtodo modificado pela azida sdica (ver POP-
01);
6. Levar as amostras de DBO5 para a incubao (201C);
7. Aps 5 dias determinar a concentrao de ODfinal da amostra por meio do
mtodo modificado pela azida sdica (ver POP-01);
1.1.2.2. Procedimento Winkler com semente
1. Regular o pH das amostras para 6,8 a 7,2 quando estiverem a temperatura

ambiente. Utilize para o ajuste solues levemente cidas ou bsicas como
HCl 0,01 mol.L-1 ou NaOH 0,01 mol.L-1;
32
2. Anotar o n e o volume do frasco ou porcentagem da amostra adicionada
em uma ficha de controle;
3. Adicionar o volume da amostra ao frasco de DBO preparado evitando a
formao de bolhas e turbulncias;
4. Em um frasco em separado, incubar a semente, adicionando 2ml da
semente preparada, completando o volume com gua de diluio;
5. Completar o volume do frasco com gua de diluio evitando a formao
de bolhas e turbulncias;
6. Medir o ODinicial por meio do mtodo modificado pela azida sdica (ver
POP-01);
7. Levar as amostras de DBO5 para a incubao (201C);
8. Aps 5 dias determinar a concentrao de ODfinal da amostra por meio do
mtodo modificado pela azida sdica (ver POP-01);
Preparo da semente
As sementes utilizadas no teste da DBO podem ser obtidas de amostras in

natura de esgotos, de amostras do prprio efluente coletadas aps 3 a 8km a
jusante do ponto de despejo, de forma a obter microorganismos adaptados.
Tambm podem ser utilizados slidos suspensos ou serem adquiridas sementes
comerciais para DBO.
CLCULO DA DBO SEM SEMENTE

ODI ODF
DBO5 (mg / L) (3)
P
em que :
ODI = concentrao de OD inicial (mg.L-1)
ODF = concentrao de OD final (mg.L-1)
P = frao volumtrica da amostra utilizada (ml)
CLCULO DA DBO COM SEMENTE

ODI ODF (BI BF )* f
DBO5 (mg / L) (4)
P
em que :
33
ODI = concentrao de OD inicial (mg.L-1)
ODF = concentrao de OD final (mg.L-1)
BI = concentrao de OD no controle da semente inicial (mg.L-1)
BF = concentrao de OD no controle da semente final (mg.L-1)
f = razo da semente diluda na amostra em relao semente de controle
P = frao volumtrica da amostra utilizada (ml)
1.2. DESTINAO DO RESDUO GERADO
Depois de finalizada a etapa de titulao o resduo gerado nas leituras de

DBO, pode ser descartado diretamente na pia sem necessidade de um pr-
tratamento.
Concentrao de oxignio dissolvido (mg.L-):

limite mximo 7 a 9 mg OD.L-1
limite mnimo 2 mg OD.L-1
1.4. MTODO RESPIROMTRICO / MANOMTRICO OXITOP
Baseia-se numa amostra em uma garrafa mbar sob quantidade suficiente

de microorganismos e nutrientes a temperatura controlada de 201C e que por
meio de agitao faz com que o O2 presente na cmara de ar se dissolva no
lquido. Os microorganismos respiram este oxignio dissolvido na amostra
durante o processo de degradao da matria orgnica, exalando CO 2, que
absorvido pelos grnulos de NaOH p.a contido em um reservatrio de borracha,
produzindo uma diferena de presso na garrafa, que medida pelo sensor
Oxitop, cujo sistema realiza este leitura digital e converso dos valores para mg
O2.L-1.
34
Equipamentos
Garrafas de DBO Oxitop
Bandeja de agitao magntica
Agitador magntico
Vidrarias
Pipetas volumtricas
Frascos volumtricos padro
Reagentes analticos
NaOH (p.a) em prolas;
Soluo Tampo de Fosfato: dissolver em aproximadamente 600ml de

gua destilada:
- 8,5g de fosfato monobsico de potssio (KH2PO4 p.a);
- 21,75g de fosfato dibsico de potssio (K2HPO4 p.a);
- 33,4g de fosfato dibsico de sdio heptahidratado (Na2HPO4.7H2O
p.a);
- 1,7g de cloreto de amnio (NH4Cl p.a)
Transferir para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume com
gua destilada.

Soluo de Sulfato de Magnsio (MgSO4): dissolver 22,5g de sulfato de

magnsio heptahidratado (MgSO4.7H2O p.a) em aproximadamente 800ml
de gua, transferir para um balo volumtrico de 1000ml e completar o

Soluo de Cloreto de Clcio (CaCl2): dissolver 27,5g de cloreto de

clcio anidro (CaCl2 p.a) em aproximadamente 800ml de gua, transferir
35
para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume com gua
destilada.

Soluo de Cloreto Frrico (FeCl3): dissolver 0,25g de cloreto frrico

hexahidratado (FeCl3.6H2O p.a) em aproximadamente 800ml de gua,
transferir para um balo volumtrico de 1000ml e completar o volume com
gua destilada.

Soluo de Cloreto de Amnio (NH4Cl): dissolver 38,2g de cloreto de

amnio (NH4Cl p.a) em aproximadamente 800ml de gua, neutralize o pH
para 7,0 com KOH, transfira para um balo volumtrico de 1000ml e
completar o volume com gua destilada.

1.2.2. PROCEDIMENTO ANALTICO OXITOP (Amostra)
1. Conhecer o valor da DQO da amostra ou a faixa de DBO esperada e de

acordo com estes valores observar na Tabela 2, o volume da amostra e
soluo nutriente a ser transferido para a garrafa de Oxitop;
Tabela 2. Especificao dos valores de amostra e volume de soluo nutriente utilizados

na quantificao de DBO, a partir do procedimento OXITOP segundo as faixas de DBO.
DBO ESPERADA VOLUME DE VOLUME DE SOLUO

(mg.L-1) AMOSTRA (ml) NUTRIENTE (ml)
0 40 432 1,7
0 80 365 1,5
0 200 250 1,0
0 400 164 0,6
0 800 97 0,4
0 2000 43,5 0,2
2. Transferir o volume de amostra no frasco de DBO Oxitop;

36
3. Pipetar o volume da soluo nutriente, que composta por:
a. 6ml da soluo de tampo fosfato;
b. 2ml da soluo de sulfato de magnsio;
c. 2ml da soluo de cloreto frrico;
d. 2ml da soluo de cloreto de clcio;
e. 2ml da soluo de cloreto de amnio.
4. Colocar a barra magntica dentro da garrafa;
5. Adicionar de 2 a 4 pastilhas de NaOH (p.a) no reservatrio de borracha;
6. Colocar o reservatrio com cuidado na boca da garrafa;
7. Fechar a garrafa com o sensor e colocar sobre o sistema de agitao;
8. Ligar o sistema de agitao e verificar os agitadores;
9. Pressionar simultaneamente as teclas M e S at que aparea no visor do
sensor 00;
1.2.2.1. CLCULO DA DBO OXITOP
A concentrao final da DBO5 ser dada aps o trmino da anlise no leitor

do sensor do Oxitop.
1.2.2.2. LIMITE DE DETECO
0 2000 mg O2.L-1
2. DESCARTE DO RESDUO GERADO
Depois de finalizada as leituras no equipamento OXITOP, o resduo

(amostra e mistura de soluo nutriente) pode ser descartado diretamente na pia
sem necessidade de um pr-tratamento.
3. REFERNCIA
STANDARD METHODS, methods 4500 - O C & 5210 B (Apha, 1998)
37
POP 03 DEMANDA QUMICA DE OXIGNIO (DQO)
1.1. MTODO DO REFLUXO ABERTO TITULOMTRICO
A matria orgnica / inorgnica oxidada em meio cido (H2SO4) por um

forte agente oxidante dicromato de potssio (K2Cr2O7) em excesso, em um
condensador de refluxo do tipo Friedrichs. Toda reao catalisada por sulfato de
prata (Ag2SO4) e intensa liberao de calor.
Aps a digesto, o excesso de dicromato titulado com soluo de sulfato
ferroso amoniacal SFA (Fe (SO4)2(NH4)2), previamente padronizado, e assim
determina-se a quantidade de oxidante consumida na reao; tal quantidade ser
expressa em termos equivalentes de oxignio. O tempo ideal para a digesto de
2 horas.
Equipamentos
Chapa de aquecimento contendo condensadores Friedrichs
Balana analtica (preciso 0,0001g)
Vidrarias
Balo de fundo chato de 500ml

Prolas de vidro para controlar ebulio
Esptulas
Pipetas volumtricas
Bales volumtricos
Dispenser
Proveta
Bureta de 50ml
38
Reagentes analticos
cido Sulfrico com Sulfato de Prata: adicionar lentamente e

cuidadosamente 10g de sulfato de prata (Ag2SO4 p.a) em 1000ml de cido
sulfrico concentrado (H2SO4 p.a). Deixar em repouso de um a dois dias
para a dissoluo completa.

Soluo de Dicromato de Potssio 0,04167 mol.L-1: dissolver 12,259g

de dicromato de potssio (K2Cr2O7 p.a), previamente seco a 150C por 2h,
em aproximadamente 800ml de gua destilada, transferir para um balo
volumtrico de 1000ml e aferir com gua destilada.

* Estvel por 1 ano (mnimo) padro primrio
Soluo de Dicromato de Potssio 0,004167 mol.L-1: diluir 100ml da

soluo de dicromato de potssio 0,25 mol.L-1 em um balo volumtrico de
1000ml, completar o volume com gua destilada.

* Estvel por 1 ano (mnimo) padro primrio
Soluo de Sulfato Ferroso Amoniacal (SFA) 0,25 mol.L-1: dissolver 98g

de SFA (p.a) em aproximadamente 800ml de gua destilada, adicionar
lentamente 20ml de cido sulfrico concentrado (H2SO4 p.a), aguardar
esfriar e transferir para um balo volumtrico de 1000ml, completar o
* Estocar a soluo em frasco tipo mbar ou frasco de vidro, em temperatura ambiente.
* Estabilidade do reagente dependente da padronizao diria (momento do uso).
Soluo de indicador ferrona: dissolver 1,485g de 1,10 fenantrolina

monohidratada (p.a) e 695mg de sulfato ferroso heptahidratado (p.a) em
100ml de gua destilada.

Padronizao - SFA:
39
1. Adicionar 10 ml de dicromato de potssio 0,04167 mol.L-1 em um
erlenmeyer;
2. Completar o volume do erlenmeyer para 100ml, com gua destilada;
3. Adicionar, com um dispenser, 30ml de cido sulfrico;
4. Aguardar esfriar;
5. Adicionar de 3 a 6 gotas de indicador ferrona;
6. Titular com a soluo de SFA 0,25 mol.L-1 at o ponto de viragem do
indicador (verde para marrom);
7. Calcular a Molaridade da soluo de SFA:
v1( K 2 Cr2 O7 )
M ( SFA) * 0,2500
v 2( SFA)
em que:
M (SFA) = molaridade da soluo de sulfato ferroso amoniacal (mol.L-1).
v1 (K2Cr2O7) = volume da soluo de dicromato de potssio (mL).
v2 (SFA) = volume da soluo de tiossulfato gasto na titulao (mL).
Soluo de Sulfato Ferroso Amoniacal (SFA) 0,025 mol.L -1: diluir 100ml
da soluo de SFA 0,25 mol.L-1 em um balo volumtrico de 1000ml e
completar o volume com gua destilada. Padronizar da mesma forma
descrita para o SFA 0,25 mol.L-1, com uma alterao: utilizar a soluo de
dicromato de potssio 0,004167 mol.L-1 no mtodo descrito anteriormente.
Sulfato de Mercrio (HgSO4 p.a)
1.1.2.1. Procedimento para DQO > 50 (mg.L-1)
1. Pesar em um balo de fundo chato 0,4g de sulfato de mercrio;

2. Adicionar ao balo de fundo chato:
a. 20ml da amostra homogeneizada;
b. 10ml da soluo 0,04167 mol.L-1 de dicromato de potssio;
c. 5ml de cido sulfrico p.a;
d. 3 a 4 prolas de vidro;
40
e. 25ml de cido sulfrico p.a./sulfato de prata com o auxilio de um
dispenser;
3. Conectar o balo no condensador de refluxo;
4. Deixar em refluxo por 2h; desligar o condensador e deixar esfriar;
5. Adicionar 5 a 6 gotas de soluo indicadora de ferrona no balo;
6. Titular a amostra com soluo de SFA 0,25 mol.L-1 (padronizada) at
atingir o ponto de viragem do verde azulado para o marrom;
7. Anotar o volume gasto na titulao;
1.1.2.2. Procedimento para DQO < 50 (mg.L-1)
1. Pesar em um balo de fundo chato 0,4g de sulfato de mercrio;

2. Adicionar ao balo de fundo chato:
a. 50ml da amostra j homogeneizada;
b. 25ml da soluo 0,004167 mol.L-1 de dicromato de potssio;
c. 5ml de cido sulfrico p.a;
d. 3 a 4 prolas de vidro;
e. 25ml de cido sulfrico p.a./sulfato de prata com o auxilio de um
dispenser;
3. Conectar o balo no condensador de refluxo;
4. Deixar em refluxo por 2h; desligar o condensador e deixar esfriar;
5. Adicionar 5 a 6 gotas de soluo indicadora de ferrona no balo;
6. Titular a amostra com soluo de SFA 0,025 mol.L-1 (padronizada) at
atingir o ponto de viragem do verde azulado para o marrom;
7. Anotar o volume gasto na titulao.
1.1.3. CLCULO DA DQO
DQO(mgO2 / L)
Vb Va ) * 0.1 * fc * 8000 (5)
V
em que :
Vb: volume gasto na titulao do branco (mL)
Va: volume gasto na titulao da amostra (mL)
41
V: volume da amostra (ml): 20 para DQO > 50 mg.L-1 e 50 para DQO < 50 mg.L-1.
fc: fator de correo do SFA
1.2. MTODO DO REFLUXO FECHADO COLORIMTRICO
A matria orgnica / inorgnica presente na amostra oxidada por meio do

agente oxidante (K2Cr2O7). O mtodo padro emprega como reagentes: soluo
padro de hidrogenoftalato de potssio, soluo cataltica cida (Ag2SO4 em
H2SO4 concentrado) e soluo digestora (composta de K 2Cr2O7, HgSO4 e H2SO4
diludos em gua). O mtodo consiste na reduo do cromo (Cr 6+ a Cr3+) e
subsequente anlise atravs da modificao da colorao, em um
espectrofotmetro na regio do visvel. Este procedimento usualmente
conduzido em um digestor a 150C, por 2h e as leituras obtidas em
espectrofotmetro de luz visvel. Para valores esperados de DQO menores que
90 mg.L-1, a amostra deve ser lida no comprimento de onda de 420nm, se a DQO
estiver entre 100 a 900 mg.L-1, a leitura deve ser realizada no comprimento de
onda de 600nm. Valores de concentrao superiores a 900 mg.L -1 podem ser
obtidos atravs da diluio da amostra, previamente homogeneizada.
Equipamentos
Aparelho digestor - refluxo fechado
Espectrofotmetro UV-Vis
Micropipeta (100 - 1000l)
Vidrarias
Pipetas graduadas e volumtricas

Frascos de vidro para digesto
Cubeta de vidro
Reagentes analticos
cido sulfrico (p.a);

42
Sulfato de mercrio (p.a);
cido Sulfrico com Sulfato de Prata (soluo cataltica): adicionar 10g

de sulfato de prata (Ag2SO4 p.a) em 1000ml de cido sulfrico concentrado
(H2SO4 p.a). Deixar um dia para a dissoluo total.

Soluo digestora: dissolver 1,0216g de dicromato de potssio (K2Cr2O7

p.a), previamente seco a 150C por 2 horas, em aproximadamente 80ml de
gua destilada, adicionar lentamente 16,7ml de cido sulfrico p.a. e 3,33g
de sulfato de mercrio. Dissolver, aguardar esfriar e transferir para um
balo volumtrico de 100ml, aferindo com gua destilada; O preparo desta
soluo considera a leitura em = 600nm (DQO > 100 mg O2.L-1).
Para leitura em = 420nm (DQO < 90 mg O2.L-1), deve ser seguido
o mesmo procedimento de preparo, apenas alterando a quantidade de
dicromato de potssio para 0,1022g, considerando 100ml de soluo final.

Hidrogenoftalato de Potssio (soluo padro para calibrao):

dissolver 0,0425g de hidrogenoftalato de potssio (KHP), previamente seco
em estufa (110C) e dessecador, em gua destilada e diluir para 100ml em
balo volumtrico.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente refrigerado (4C) para estabilidade
do reagente (1 ms).
-1
* KHP = 1,176 mg O2 / mg e DQO terica de 500 mg O2.L .
1.2.2.1. Calibrao do mtodo
A calibrao do mtodo realizada atravs de curva de calibrao padro,

descrito na seqncia:
1. A partir da soluo padro (KHP), preparar, em bales volumtricos de

50ml, a seguinte curva de calibrao (volume final com gua destilada):
43
Concentrao DQO (mg.L-1) Volume (ml)
0 (branco) -
10 1
25 2,5
50 5
150 15
250 25
*Para uma melhor confiabilidade e verificao da linearidade da curva de calibrao, esta pode ser preparada
em duplicata ou triplicata.
2. Posteriormente ao preparo das solues padres, conforme a tabela

acima, retirar, com auxlio de uma pipeta volumtrica, uma alquota de 2ml de
cada padro e reservar nos frascos para digesto;
3. Na sequncia, adicionar cuidadosamente (reao exotrmica calor),

2ml da soluo digestora e em seguida, 2ml da soluo cataltica;
4. Fechar bem os frascos e misturar lentamente pela parede do mesmo, de

modo a favorecer a mistura dos reagentes adicionados (evitar misturar totalmente
por inverso, pois a presena de H2SO4 pode danificar as tampinhas, podendo
causar vazamento durante a digesto e tambm, cuidar com o aquecimento dos
frascos);
5. Realizar a digesto em aparelho digestor por um perodo de 2h e

temperatura de 150C;
6. Aps completar a digesto, transferir os frascos para um suporte

especfico e aguardar o resfriamento;
7. Realizar leitura no espectrofotmetro, ( = 600nm), sem especificao de

tempo mximo para leitura aps a digesto;
NOTA: O procedimento descrito acima considera a calibrao para leituras em

= 600nm. No caso de calibrao para = 420nm os passos metodolgicos so os
mesmos, havendo apenas a mudana da soluo digestora (K 2Cr2O7), (Ver item
1.2.1 Reagentes).
8. Equao da reta, obtida com a plotagem do grfico: absorbncia (eixo y)

X concentrao (eixo x);
9. Verificar coeficiente de linearidade: R > 0,990;
10. Realizar comparao com a curva analtica apresentada abaixo na
Figura 1.
44
0,08
-1
Exemplo 1 (10<DQO<250 mg.L )
-1
Exemplo 2 (10<DQO<150 mg.L )
0,06
Eq.Reta(1): Conc=(Abs-0,00173)/3,03109E-4
Absorvncia
R = 0,99844 / n = 5
0,04
0,02
Eq.Reta(2): Conc=(Abs+2,11083E-4)/2,8534E-4
R = 0,99953 / n = 4
0,00
0 50 100 150 200 250
-1
DQO (mg O2.L )
Figura 1. Exemplo de curva analtica de KHP aplicada calibrao do mtodo

colorimtrico para determinao da DQO ( = 600nm) em amostras de gua e efluentes
lquidos.
1.2.2.2. Determinao da concentrao em amostras de DQO > 100 mg.L-1
1. Homogeneizar bem a amostra presente no frasco de coleta;
2. Transferir 2ml de amostra para o frasco de digesto;

4. Transferir 2ml de amostra para o frasco de digesto (verificar a
necessidade de diluio);
5. Na sequncia, adicionar, na ordem e cuidadosamente (reao
exotrmica calor), 2ml da soluo digestora para leitura em = 600nm
(Ver item 1.2.1 Reagentes) e 2ml da soluo cataltica;
6. Realizar o mesmo procedimento para provas em branco, utilizando 2ml
de gua destilada;
7. Fechar bem os frascos e misturar lentamente pela parede do mesmo,
de modo a favorecer a mistura dos reagentes adicionados (evitar
misturar totalmente por inverso, pois a presena de H 2SO4 pode
danificar as tampinhas, podendo causar vazamento durante a digesto
e cuidar com o aquecimento dos frascos);
45
10. Realizar leitura no espectrofotmetro, ( = 600nm), sem especificao
de tempo mximo para leitura aps a digesto;
1.2.2.3. Determinao da concentrao em amostras de DQO < 90 mg.L-1

2. Transferir 2ml de amostra para o frasco de digesto;
3. Na sequncia, adicionar, na ordem e cuidadosamente (reao
exotrmica calor), 2ml da soluo digestora para leitura em = 420nm
(Ver item 1.2.1 Reagentes) e 2ml da soluo cataltica;
4. Realizar o mesmo procedimento para provas em branco, utilizando 2ml
de gua destilada;
5. Fechar bem os frascos e misturar lentamente pela parede do mesmo,
de modo a favorecer a mistura dos reagentes adicionados (evitar
misturar totalmente por inverso, pois a presena de H2SO4 pode
danificar as tampinhas, podendo causar vazamento durante a digesto
e cuidar com o aquecimento dos frascos);
8. Realizar leitura no espectrofotmetro, ( = 420nm), sem especificao
de tempo mximo para leitura aps a digesto;
1.2.3. CLCULO DA CONCENTRAO
Quantificao da concentrao de DQO (mg O2.L-1) atravs da equao da

reta, obtida na curva analtica (calibrao).
46
1.2.4. LIMITE DE DETECO
Para leituras no comprimento de onda 420 nm: 0 - 90 mg O2.L-1

Para leituras no comprimento de onda de 600 nm: 100 - 900 mg O2.L-1
2. REFERNCIA
Adaptao de STANDARD METHODS, method 5220 D (Apha, 1998)
Para ambos os mtodos (1.1 refluxo aberto e 1.2 digesto fechada) o

resduo gerado apresenta um alto carter de toxicidade tendo na sua composio:
cromo hexavalente, Cr (VI) e trivalente, Cr (III), mercrio (Hg2+) e prata (Ag2+) e
um meio fortemente acidificado. Dessa forma, o resduo deve ser armazenado em
frasco plstico preferencialmente rgido (PEAD) e identificado, inclusive para
novas estocagens. A partir do acmulo em excesso no laboratrio necessria
requerer junto Prefeitura da Cidade Universitria uma solicitao para
encaminhamento ao aterro industrial Essencis.
47
POP 04 CARBONO ORGNICO DISSOLVIDO (COD)
A quantificao de COD segue metodologia especificada pelo fabricante do

equipamento. De modo geral, o mtodo consiste na combusto da amostra, sob
alta temperatura, e posterior quantificao atravs de deteco infravermelha no
dispersiva (NDIR) A determinao da concentrao de carbono realizada pela
combusto alta temperatura
Equipamentos
Analisador de carbono orgnico (marca Shimadzu, modelo TOC V-CPH).
Membrana de acetato de celulose 0,45m de porosidade
Bomba de vcuo
Frasco plstico (PEAD, PP) para amostra (50ml).
Vidrarias
Conjunto kitassato para filtrao
Reagentes analticos
cido clordrico (HCl) 2 mol.L-1: prepare a soluo diluindo uma parte de

HCl concentrado (12 M) em cinco partes de gua deionizada.
Solues Padres para calibrao:
Soluo padro para CT: pesar 0,2125g de biftalato hidrognio de potssio,

previamente seco a 105-120C por 1h e resfriado em dessecador. Transferir para
um balo volumtrico de 100ml e dissolver em gua deionizada. Aferir para
100ml. A concentrao terica desta soluo de 1000 mg C.L-1.
Soluo padro para CI: pesar 0,305g de bicarbonato de sdio (p.a), previamente
seco por 2 horas em um dessecador e 0,441g de carbonato de sdio,
previamente seco a 280-290C por 1h e resfriado em um dessecador. Transferir
48
para um balo volumtrico de 100ml e dissolver em gua deionizada. Aferir para
100ml. A concentrao terica desta soluo de 1000 mg C.L-1.
2. PROCEDIMENTO ANALTICO
3.1. CALIBRAO DO MTODO
A partir das solues padres preparadas de CT e CI, o usurio deve

selecionar uma calibrao padro a partir do software do equipamento, visto que
este realiza automaticamente as diluies, especificando a concentrao padro
inicial (CT e CI de 100 mg C.L-1).
OBS: No tendo o conhecimento desta etapa de utilizao do TOC V-CPH
recorrer aos usurios capacitados para a realizao da calibrao do aparelho
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE COD EM AMOSTRAS
1. Devido a no adequao deste equipamento com teores elevados de

cloretos nas amostras, este parmetro deve ser cuidadosamente verificado da
sua presena na amostra, antes de iniciar a leitura;
2. Filtrar, aproximadamente, 50ml de amostra em membrana de acetato de
celulose 0,45m;
NOTA: a leitura do COD pode ser realizada imediatamente aps a realizao da

coleta, em um prazo de 2 dias, considerando a refrigerao da amostra (< 4 C),
ou voc pode transferir a frao filtrada para esta anlise para o frasco especfico
e congelar para leitura posterior (6 meses).
3. Preparar o equipamento para procedimento de leitura de amostras

(Verificar POP TOC V-CPH);
4. Posteriormente, ser solicitado o incio das leituras de CT e CI;
5. Inserir o capilar do equipamento analisador de COT no frasco de
amostra e proceder determinao;
49
3.3. CLCULO DA CONCENTRAO
O valor do COD (mg C.L-1) se d automaticamente, atravs do software do

equipamento, o qual realiza a subtrao do CI a partir do CT, para quantificao
da frao orgnica de carbono presente na amostra.
O limite de deteco, segundo o manual do aparelho (Shimadzu, 2003), de

4 g.L-1, sendo o valor de COD obtido pela subtrao do carbono total (CT) pelo
carbono inorgnico (CI), com faixa de deteco igual a: < 25.000 mg.L -1 para CT e
30.000 mg.L-1 para CI.
4. REFERNCIA
TOC-VCPH SHIMADZU CORPORATION (2003)
50
POP 05 SRIE DE SLIDOS
1. MTODO PARA DETERMINAO GRAVIMTRICO
O mtodo gravimtrico baseia-se na diferena de peso. Dessa forma, a

determinao das vrias formas de slidos prende-se a diferena entre o peso
seco e mido, em relao ao volume de amostra utilizado no ensaio.
Equipamentos e materiais
Bomba de Vcuo
Dessecador
Estufa (105 5C)
Mufla (550 5C)
Pina simples metlica ou de madeira e esptula
Porta Filtro
Membrana de filtrao de fibra de vidro
Vidrarias
Proveta graduada (50ml e 100ml)

Pipeta graduada e volumtrica
Cpsula de porcelana de 50ml de capacidade
Cpsula de porcelana de 100ml de capacidade
Cadinho de porcelana de 50ml de capacidade
Cone Imhoff
Reagentes analticos
No utilizada nenhuma soluo, apenas a amostra.
51
1.2. SLIDOS TOTAIS (ST)
(a) Preparo da Cpsula (NOTA: procedimento explicativo para 1 rplica)
1. Ligar a mufla a 550 5C e a estufa a 105 5C;

2. Colocar uma cpsula limpa na mufla para aferio por 1h e seguir os
passos abaixo na sequncia:
a. Esfriar na estufa por 45min seguido de dessecador por 45min;
b. Pesar a cpsula e anotar o resultado em g (P0);
(b) Determinao de Slidos Totais (ST)
1. Transferir para a cpsula, uma alquota homognea de volume adequado

de amostra, medido em proveta, e manter sob evaporao em banho-maria
at atingir secura completa (MANUSEAR A CPSULA SEMPRE COM O AUXLIO
DA PINA E NO DIRETAMENTE COM A MO);
2. Levar a cpsula com resduo em estufa a 105 5C por 45min;
3. Deixar a cpsula esfriar no dessecador por 45min;
4. Pesar a cpsula com resduo e anotar o resultado em g (P1);
5. Expressar o resultado:
ST (mg / L)
P1 P0 *1.000.000 (6)
Vamostra(mL)
(c) Determinao de Slidos Totais Fixos (STF)
1. Aps anotar o valor do peso P1, transferir a cpsula para mufla a 550 5C
por 1 hora e seguir os passos abaixo na sequncia;
2. Esfriar na estufa a 105 5C por 30min seguido de dessecador por 45min;
3. Pesar a cpsula e anotar o resultado em g (P2);
STF (mg / L)
P2 P0 *1.000.000 (7)
Vamostra(mL)
52
(d) Determinao de Slidos Totais Volteis (STV)
1. obtido atravs do clculo da diferena entre os Slidos totais e os

Slidos Totais Fixos;
STV (mg / L) ST STF (8)
1.3. SLIDOS SUSPENSOS (SST)
(a) Preparo do Cadinho (NOTA: procedimento explicativo para 1 rplica)
1. Ligar a mufla a 550 5C e a estufa a 105 5C;

2. Colocar um cadinho limpo com a membrana de fibra de vidro na mufla para
aferio por 1h;
3. Deixar o cadinho esfriar na estufa por 45min seguido de dessecador por
1h;
4. Pesar o cadinho e anotar o resultado em g (P0);
(b) Determinao de Slidos Suspensos Totais (SST)
1. Transferir o cadinho contendo o papel filtro de fibra de vidro para um porta

filtro adaptado ao kit kitassato para filtrao (MANUSEAR A CPSULA SEMPRE
COM O AUXLIO DA PINA E NO DIRETAMENTE COM A MO);
2. Filtrar um volume de amostra entre 50 e 200ml (volumes utilizados
rotineiramente), com auxlio de uma proveta graduada, que favorea a
quantificao de SST na amostra em questo;
3. Retirar o cadinho contendo o papel filtro fibra de vidro e o resduo slido
retido no mesmo do kit kitassato;
4. Levar o cadinho com resduo, para estufa a 105 5C por 1h;
5. Em seguida, aguardar esfriar no dessecador por 30min;
6. Pesar o cadinho com resduo e anotar o resultado em g (P1);
53
SST (mg / L)
P1 P0 *1.000.000 (9)
Vamostra(mL)
(c) Determinao de Slidos Suspensos Fixos (SSF)
1. Aps anotar o valor do peso P1, transferir o cadinho para mufla a 550
5C por 1h;
2. Deixar a cadinho esfriar na estufa a 105 5C por 30min seguido de
dessecado por 45min;
3. Pesar a cadinho e anotar o resultado em g (P2);
SSF (mg / L)
P2 P0 *1.000.000 (10)
Vamostra(mL)
(d) Determinao de Slidos Suspensos Volteis (SSV)
1. obtido pela diferena entre os slidos suspensos totais e os slidos

suspensos fixos;
SSV (mg / L) SST SSF (11)
1.4. SLIDOS SEDIMENTVEIS (SS)
2. Homogeneizar vigorosamente a amostra;

3. Transferir a amostra para o cone de Imhoff at a marca de 1000ml;
4. Deixar em repouso por 45min;
5. Passar vagarosamente um basto de vidro na parede interna do cone, ou
gira-lo suavemente entre as mos;
6. Deixar em repouso por mais 15min;
7. Determinar o volume, em ml, ocupado pelos slidos sedimentveis;
8. Anotar o valor observado;
9. Expressar o resultado em ml.L-1 pela leitura direta no cone Imhoff;
54
2. REFERNCIAS
Adaptao de STANDARD METHODS, method 2540 B (Apha, 1998)
Adaptao de STANDARD METHODS, method 2540 E (Apha, 1998)
STANDARD METHODS, method 2540 F (Apha, 1998)
55
POP 06 UV-Vis
1. MTODO PARA DETERMINAO - ESPECTROFOTOMTRICO
Varredura espectrofotomtrica na regio do UV-Vis. Espcies atmicas ou

moleculares que absorvem energia na regio do UV-Vis so detectadas atravs
do espectro de varredura.
Bomba de vcuo
Frasco plstico (PEAD, PP) para amostra (20ml)
Vidrarias
Cubeta de quartzo
Reagentes analticos
No h uso de solues para o preparo e quantificao da amostra.
1. Filtrar aproximadamente 20ml de amostra em membrana de acetato de

celulose 0,45m;
2. Transferir a amostra (~ 4ml) para uma cubeta de quartzo;
3. Selecionar no espectrofotmetro UV-Vis a opo espectro e realizar uma
varredura na faixa de comprimentos de onda entre 200 e 700nm (Verificar
POP UV-Vis SHIMADZU);
4. Realizar a anlise de UV-Vis para cada amostra;
5. Utilizar gua destilada como prova em branco da anlise;
56
NOTA: a leitura no espectrofotmetro pode ser realizada imediatamente aps a
realizao da coleta, em um prazo de 2 dias, considerando a refrigerao da
amostra (< 4C), ou voc pode transferir a frao filtrada para esta anlise para o
frasco especfico e congelar para leitura posterior (6 meses).
2. EXEMPLO GRFICO DO ESPECTRO UV-Vis DE VARREDURA PARA

AMOSTRAS DE GUA
A Figura 2 exemplifica o espectro de varredura obtido aps o tratamento

dos dados obtidos a partir do espectrofotmetro de UV-Vis. Este exemplo
considera os valores de absorvncia entre os comprimentos de onda de 200 a
350nm.
0,6
Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3
Amostra 4
Amostra 5
0,4
Amostra 6
Absorvncia
0,2
0,0
200 250 300 350
Comprimento de Onda (nm)
Figura 2. Espectro de varredura na regio do UV-Vis para seis amostras de guas

superficiais coletadas em diferentes pontos de amostragem na regio do Alto Iguau.
57
POP 07 SRIE DE NITROGNIO NITRITO (N-NO2-)
1.1. MTODO DA SULFANILAMIDA / N-1-NAFTIL
A concentrao de N-NO2- determinada atravs da formao de um azo

corante, de colorao prpura caracterstica, em faixa de pH entre 2,0 e 2,5,
decorrente da complexao entre sulfanilamida e N-(1-naftil)-etilenodiamina,
conforme esquema abaixo:
Figura 3. Esquema explicativo das etapas de reao de Griess (1879), utilizada como
metodologia analtica na quantificao de N-Nitrito em amostras de gua e de efluentes
lquidos.
Bomba de vcuo
Membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
58
Vidrarias
Balo volumtrico de 50ml

Pipetas volumtricas ou graduadas
Cubeta de vidro
Reagentes analticos
Soluo estoque padro de N-NO2-: dissolver 0,308g de nitrito de sdio

(NaNO2 p.a) em gua destilada. Aferir para 250ml com gua destilada em
balo volumtrico.
-1
* 1 ml = 250g N ou 250 mg.L
* Estvel por 6 meses aps o preparo.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente refrigerado (4C)
Soluo padro para calibrao de N-NO2-: diluir 0,2ml da soluo

estoque padro em gua destilada. Aferir com gua destilada para 100ml,
em balo volumtrico.
-1
* 1ml = 0,5 g N ou 0,5 mg.L
* Preparo deve ser realizado apenas para o uso imediato.
Soluo reativa para N-NO2-: adicionar 25ml de cido fosfrico (H3PO4

p.a) 85% em, aproximadamente, 200ml de gua destilada. Adicionar 2,5g
de sulfanilamida (C6H8N2O2S p.a). Aps dissoluo total, adicionar 0,25g
de N-1-naftil etilenodiamina dihidroclrico (C12H4N2.2HCl p.a). Aps
dissoluo total, aferir com gua destilada, para um volume final de 250ml
em balo volumtrico.
* Estvel por 1 ms (mnimo).
* Acondicionamento em ambiente refrigerado (4C).
59

descrita na seqncia:
1. A partir da soluo padro para calibrao (0,5 mg.L-1), preparar, em
bales volumtricos de 25ml, a seguinte curva de calibrao (volume final com
gua destilada):
Concentrao N-NO2- (g.L-1) Volume N-NO2- (ml)

0 (branco) -
5 0,25
10 0,5
25 1,25
50 2,5
100 5
*Para uma melhor confiabilidade e verificao da linearidade da curva de calibrao, esta pode ser preparada
em duplicata ou triplicata.

cada padro e reservar em outro frasco;
3. Juntamente aos padres, realizar prova em branco utilizando alquotas
de 10ml de gua destilada;
4. Adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2- em cada alquota
(padro e branco), com auxlio de uma micropipeta e misturar por inverso;
5. Leitura em espectrofotmetro ( = 543 nm) entre 10min e tempo mximo
de 2h;
6. Equao da reta, obtida com a plotagem do grfico: absorvncia (eixo y)
8. Realizar comparao com a curva analtica apresentada na Figura 4a;
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE N-NO2- EM AMOSTRAS

2. Transferir 50ml de amostra para o sistema de filtragem de vcuo;
60
3. Filtrar em membrana de acetato de celulose 0,45m;
4. A partir da frao dissolvida, retirar alquotas de 10ml (triplicata) e
reservar em frascos secundrios;
5. Juntamente as amostras, realizar prova em branco utilizando alquotas
6. Adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2- em cada alquota e
misturar por inverso. Realizar o mesmo procedimento para o branco;
7. Realizar prova em branco, utilizando alquotas de 10ml de gua
destilada;
8. Leitura em espectrofotmetro ( = 543nm) entre 10min e tempo mximo
de 2 horas;
0,35 0,35
Calibrao 1 (R= 0,9986)
0,30 0,30 Calibrao 2 (R= 0,9984)
0,25 0,25
Absorvncia
Absorvncia
0,20 0,20
0,15 0,15
0,10 0,10
Eq.Reta: Conc=(Abs+0,00514)/0,00305
R = 0,99866 / n = 10
0,05 0,05
(a) (b)
0,00 0,00
0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100
N-NO2- (g.L ) N-NO2- (g.L )
-1 -1
Figura 4. (a) Exemplo de curva analtica de NaNO2 aplicada calibrao do mtodo

colorimtrico para determinao de N-Nitrito (N-NO2-) em amostras de gua e efluentes
lquidos e (b) Exemplo comparativo de quatro calibraes preparadas em diferentes
perodos (jul/09 fev/10) para anlise de N-NO2-.
Quantificao da concentrao de N-NO2- (mg.L-1 ou g.L-1) atravs da

equao da reta, obtida na curva analtica (calibrao).
61
2.4. LIMITE DE DECTEO
O mtodo para quantificao de N-NO2- aplicvel para leitura na faixa de

concentrao entre 5 e 1000 g.L-1. Para concentraes superiores, sugere-se a
diluio da amostra e, posteriormente, quantificao atravs do fator de diluio
fdiluio utilizado.
O resduo da anlise de nitrito deve, primeiramente, ser neutralizado com

solues de NaOH (0,01 1 mol.L-1) para posterior descarte na pia.
3. REFERNCIA
Adaptao de STANDARD METHODS, method 4500- NO2- B (Apha, 1998)
62
POP 08 SRIE DE NITROGNIO NITRATO (N-NO3-)
1.1. MTODO DA COLUNA DE Cd-Cu
A concentrao de N-NO3- determinada, quantitativamente, atravs da

reduo para N-NO2-, em presena de grnulos de cdmio (Cd). Posteriormente,
o N-NO2- quantificado segundo o mtodo da sulfanilamida / N-1-naftil (ver POP
n. 07 / N-NO2-), como mostra o esquema abaixo:
O
(+)
Cd-Cu
N N
Cd0Cd2+
(-) O O (-) (-) O O (-)
Figura 5. Esquema explicativo das etapas da reduo de N-Nitrato para N-Nitrito atravs
da coluna de Cd-Cu e reao de Griess (1879), utilizada como metodologia analtica na
quantificao de N-Nitrato em amostras de gua e de efluentes lquidos.
Bomba de vcuo
Vidrarias
63
Pipetas volumtricas ou graduadas
Cubeta de vidro
Tubos de plstico para centrfuga, tipo Falcon (15ml)
Reagentes analticos
Soluo estoque padro de N-NO3-: dissolver 0,18045g de nitrato de

potssio (KNO3 p.a), previamente seco em estufa (105C / 24h) em gua
destilada. Aferir para 250ml com gua destilada em balo volumtrico.
- -1
* 1ml = 100 g N-NO3 ou 100 mg.L .
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente refrigerado (4C)
Soluo intermediria padro de N-NO3-: diluir 25ml da soluo estoque

padro em gua destilada. Aferir com gua destilada para 250ml, em balo
volumtrico.
- -1
* 1ml = 10g N-NO3 ou 10 mg.L
Soluo de sulfato de cobre 2% (CuSO4): dissolver 10g de CuSO4 p.a

em aproximadamente 300ml de gua destilada. Aferir com gua destilada
para 500ml, em balo volumtrico.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente seco.
Soluo estoque de NH4Cl EDTA: dissolver 13g de cloreto de amnio

(NH4Cl p.a) e 1,7g de EDTA (p.a) em aproximadamente 800ml de gua
destilada. Aferir com gua destilada para 1000ml, em balo volumtrico.
* Verificar o pH da soluo e, se necessrio, ajustar para pH 8,5.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente refrigerado (4C).
Soluo diluda de NH4Cl EDTA: diluir 300ml da soluo estoque de

NH4Cl EDTA para 500ml (volume final), com gua destilada, em balo
volumtrico. Soluo estoque de NH4Cl EDTA
Soluo reativa para N-NO2-: ver POP-07, item 1 (N-NO2-).
64

- Partindo-se da soluo intermediria padro preparar, em bales volumtricos
de 50ml, a seguinte curva de calibrao (volume final com gua destilada):
Concentrao N-NO3- (g.L-1) Volume N-NO3- (ml)

0 (branco) -
50 0,25
100 0,5
300 1,5
500 2,5
800 4,0
*Para uma melhor confiabilidade e verificao da linearidade da curva de calibrao, esta pode ser
preparada em duplicata ou triplicata.
NOTA: aps adio do volume respectivo ao padro apresentando na tabela

acima, adicionar, em cada padro, 10ml da soluo diluda de NH4Cl EDTA e,
posteriormente, aferir com gua destilada;
Aps o preparo das solues padres e suas respectivas concentraes,

seguir para a prxima etapa: processo de ativao da coluna de Cd-Cu,
descrito na sequncia:
1. Passar pela coluna de Cd-Cu uma alquota de 20 25ml de soluo de
sulfato de cobre 2%;
2. Na sequncia, passar uma alquota de 50ml da soluo diluda de NH4Cl
EDTA;
3. Aps a soluo de NH4Cl EDTA, lavar a coluna com alquotas de 25 ml
de gua destilada;
4. Retirar uma alquota de 5ml da coluna ( utilizar um tubo de centrfuga
aferido) e adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2-. Verificar a presena ou
no da colorao prpura (desenvolvimento da cor indica a presena de N-NO2-);
5. Na presena de cor, lavar a coluna novamente com alquotas de 25ml de
gua destilada e realizar novo teste para verificar a limpeza da coluna;
65
Aps ativao da coluna de Cd-Cu, seguir as etapas para a calibrao do
mtodo, descrito na seqncia (considerando solues padres preparadas para
volume final de 50ml):
6. Passar o primeiro padro pela coluna. Descartar, aproximadamente, os
primeiros 40ml da soluo;
7. Coletar, em um tubo de centrfuga aferido (15ml), os prximos 5ml e
transferir para um frasco secundrio;
8. Nesta alquota de 5ml, adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2-
dentro de no mximo 10min;
de 2h;
10. Realizar o mesmo procedimento para as prximas solues padres
preparadas;
11. Passar pela coluna de Cd-Cu provas em branco, seguindo o modo de
preparo para os padres, porm, utilizando apenas gua destilada;
12. Equao da reta, obtida com a plotagem do grfico: absorvncia (eixo
y) X concentrao (eixo x);
14. Realizar comparao com a curva de analtica apresentada na Figura
6a;
2,0 2,0
1,6 Calibrao 3 (R= 0,9998)
1,5 Calibrao 4 (R= 0,9998)
Absorvncia
1,2
Absorvncia
1,0
0,8
Eq.Reta: Conc=(Abs-0,02655)/0,00234
R = 0,99959 / n = 10 0,5
0,4
(a) (b)
0,0 0,0
0 200 400 600 800 0 200 400 600 800
N-NO3- (g.L ) N-NO3- (g.L )
-1 -1
Figura 6. (a) Exemplo de curva analtica de KNO3 aplicada calibrao do mtodo

colorimtrico para determinao de N-Nitrato (N-NO3-) em amostras de gua e efluentes
lquidos e (b) Exemplo comparativo de cinco calibraes preparadas em diferentes
perodos (jul/09 fev/10) para anlise de N-NO3-.
66
ATENO: a leitura das solues padres deve manter durante a passagem pela coluna de Cd-
-1
Cu a mesma vazo (7 - 10 mL.min ), assim como as amostras a serem quantificadas
posteriormente. Isto se deve ao fato de vazes diferentes ocasionarem alteraes na sensibilidade
da coluna, podendo ocasionar alteraes na deteco de padres e amostras.
- A verificao da sensibilidade da coluna de Cd-Cu pode ser realizada da seguinte

maneira: caso voc tenha utilizado a mesma soluo reativa para N-NO2-, tanto na
calibrao de N-NO2- como de N-NO3-, compare os resultados obtidos para a absorvncia
do ltimo padro de N-NO2- e o primeiro padro de N-NO3- (dados a partir das tabelas de
calibrao deste manual, indicam a mesma concentrao para ambos).
- Considerando a absorvncia de N-NO2- (ltimo padro) igual a 100%, verificar a relao
com o valor encontrado para N-NO3-. Considerando como exemplo, a calibrao padro
para N-NO2- e N-NO3- presente neste manual, a partir dos dados de absorvncia, verifica-
se uma sensibilidade de, aproximadamente 95%, ou seja, indica uma boa eficincia da
coluna de Cd-Cu na reduo de N-NO3- para N-NO2-.
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE N-NO3- EM AMOSTRAS
1. Primeiramente, verificar ativao da coluna de Cd-Cu. Caso, anteriormente

quantificao das amostras, tenha sido preparado uma calibrao
padro, a coluna no precisa ser ativada novamente;
5. A partir da frao dissolvida, transferir, com o auxlio de uma pipeta
volumtrica, 5ml da amostra (triplicata) para balo volumtrico de 50ml;
6. Adicionar 10ml da soluo diluda de NH4Cl EDTA;
7. Aferir o balo volumtrico com gua destilada;
ATENO: seguindo este procedimento acima, voc estar realizando uma diluio de 10 vezes
de sua amostra, a qual deve ser utilizada posteriormente para correo do valor encontrado
atravs da curva de calibrao. Considerando que uma diluio de 10 vezes pode estourar a
calibrao do mtodo ou ficar abaixo da deteco do mesmo, verificar nova diluio para
-
quantificao de N-NO3 na amostra, como os exemplos a seguir: 25ml de amostra + 10ml de
soluo diluda de NH4Cl - EDTA para volume final de 50ml (diluio de 2 vezes); 1ml de amostra
+ 10ml de soluo diluda de NH4Cl - EDTA para volume final de 50ml (diluio de 50 vezes).
67
8. Dando continuidade ao procedimento analtico, aps diluio da amostra,
passar pela coluna de Cd-Cu;
9. Descartar, aproximadamente, os primeiros 40ml da amostra;
11. Nesta alquota de 5ml, adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2-;
de 2h;
13. O mesmo procedimento deve ser realizado para as rplicas da amostra e
para outras amostras;
14. Aps a passagem da amostra, seguir o mesmo procedimento para
realizao de testes em branco, utilizando gua destilada;
Quantificao da concentrao de N-NO3- (mg.L-1 ou g.L-1) atravs da

equao da reta, obtida na curva analtica (calibrao). importante ressaltar que
o resultado analisado para N-NO2- deve ser descontando do valor obtido.
O mtodo para quantificao de N-NO3- aplicvel para leitura na faixa de

concentrao entre 10 e 1000 g.L-1. Para concentraes superiores, sugere-se a
diluio da mesma e, posteriormente, quantificao atravs do fator de diluio
fdiluio utilizado.
Da mesma forma que apresentado na anlise de nitrito, o resduo da

anlise de nitrato deve primeiramente ser neutralizado para descarte em pia.
3. REFERNCIA
Adaptao de STANDARD METHODS, method 4500- NO3- E (Apha, 1998)

68
POP 09 SRIE DE NITROGNIO NITROGNIO
AMONIACAL TOTAL (NH3 + NH4+)
1.1. MTODO MODIFICADO DO FENATO / AZUL DE INDOFENOL
A presena de um composto de intensa colorao azul-esverdeado

caracterstica, azul de indofenol, formada atravs da reao entre a
concentrao de N-NH3 presente na amostra, hipoclorito de sdio e fenol em meio
bsico, tendo o nitroprussiato de sdio como catalisador da reao, conforme
esquema abaixo:
H
(+)
N) Na2[Fe(CN)5NO]2H2O
H + OCl- H2NCl + OH-
H H Meio bsico
H2NCl + OH Na2[Fe(CN)5NO]2H2O O NCl

Meio bsico
OH
Na2[Fe(CN)5NO]2H2O
O NCl + OH
Meio bsico
Ausncia de luz
O N
Azul de indofenol
Figura 7. Esquema explicativo das etapas de reao de Berthelot (1859), utilizada como
metodologia analtica na quantificao de N-Amoniacal em amostras de gua e de
efluentes lquidos.
Bomba de vcuo
Espectrofotmetro UV-VIS
69
Papel parafilm
Vidrarias

Balo volumtrico de 500 ml
Pipetas volumtricas e graduadas
Cubeta de vidro
Reagentes analticos
Soluo estoque padro de NH4Cl: dissolver 0,3819g de cloreto de

amnio (NH4Cl p.a), previamente seco em estufa (100C/2h), em
aproximadamente 80ml de gua destilada. Aferir com gua destilada para
100ml, em balo volumtrico.
* Estvel por 1 ms aps o preparo.
* 1ml = 1mg N ou 1ml = 1,22 mg NH3.
Soluo intermediria padro de N-NH3: diluir 5ml da soluo estoque

padro em gua destilada. Aferir com gua destilada para 50ml (diluio de
10x), em balo volumtrico.
-1
* Concentrao final de 100 mg N.L
* Preparo deve ser realizado para uso imediato.
Soluo de hipoclorito de sdio: soluo comercial 2,5%.

Verificar reposio desta soluo a cada 6 meses, devido decomposio aps abertura
do frasco.
* Transfira a soluo para um frasco mbar para acondicionamento em ambiente refrigerado
(4C).
Soluo reativa 1 (Hipoclorito alcalino): adicionar 20ml de hipoclorito de

sdio 2,5% em 80ml de gua destilada e deionizada. Na sequncia,
adicionar 5g de NaOH p.a. Dissolver e aferir com gua destilada para 100
ml, em balo volumtrico.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar em ambiente refrigerado (<4C).
70
Soluo reativa 2 (Fenol + Nitroprussiato de sdio): dissolver 10g de
fenol (p.a) e 0,1g de nitroprussiato de sdio (p.a) em, aproximadamente,
80ml de gua destilada. Dissolver e aferir com gua destilada para 100ml,
em balo volumtrico.
* ATENO: durante o preparo, utilize luvas e culos de proteo e sempre que for manusear o
fenol (reagente ou soluo para N-NH3), trabalhar SEMPRE em capela com ventilao / exausto;
O fenol altamente cancergeno e todos os procedimentos de segurana devem ser adotados na
hora do uso.

1. Partindo-se da soluo intermediria padro preparar, em bales
volumtricos de 50ml, a seguinte curva de calibrao (volume final com gua
destilada):
Concentrao N-NH3 (g.L-1) Volume N-NH3 (ml)

0 (branco) -
200 0,1
400 0,2
800 0,4
1200 0,6
2000 1,0

4. Adicionar nesta ordem: 1ml da soluo reativa 1 seguido de 1ml da
soluo reativa 2;
71
5. Fechar o frasco com papel Parafilm e misturar por inverso;
6. Aguardar 10 minutos para desenvolvimento e estabilizao da cor;
7. Leitura em espectrofotmetro ( = 630nm). Tempo mximo para leitura
de 24h;
10. Realizar comparao com a curva de analtica apresentada na Figura
8a;
1,2 1,4
Calibrao 1
1,0 1,2 Calibrao 2
Calibrao 3
Calibrao 4
1,0 Calibrao 5
0,8
Absorvncia
Absorvncia
0,8
0,6
0,6
0,4
Eq.Reta: Conc=(Abs-0,02894)/4,74999E-4 0,4
R = 0,99757 / n = 10
0,2
0,2
(a) (b)
0,0 0,0
0 300 600 900 1200 1500 1800 2100 0 500 1000 1500 2000 2500
-1
N-NH3 (g.L ) -1
N-NH3 (g.L )
Figura 8. (a) Exemplo de curva analtica de NH4Cl aplicada a calibrao do mtodo

colorimtrico para determinao de N-Amoniacal (N-NH3) em amostras de gua e
efluentes lquidos e (b) Exemplo comparativo de cinco calibraes preparadas em
diferentes perodos (jul/09 fev/10) para anlise de N-NH3.
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE N-NH3 / NH4+ EM

AMOSTRAS

72
6. Adicionar nesta ordem: 1ml da soluo reativa 1 seguido de 1ml da
soluo reativa 2, para cada alquota (amostra ou branco);
7. Fechar o frasco com papel Parafilm e misturar por inverso;
8. Aguardar 10min para desenvolvimento e estabilizao da cor;
de 24h;
ATENO: o mtodo do fenato para quantificao de N-NH3 acaba por gerar um resduo
composto, principalmente, por fenol, devido existncia deste reagente nas etapas de reao do
mtodo. Assim, todo e qualquer material lquido gerado por este mtodo devem ser armazenados
em frascos prprios para o resduo de fenol / N-NH3 (FRASCOS DE VIDRO PARA DESCARTE).
Quantificao da concentrao de N-NH3 / NH4+ (mg.L-1 ou g.L-1) atravs

da equao da reta, obtida na curva analtica (calibrao).
O mtodo para quantificao de N-NH3 /NH4+ aplicvel para leitura na

faixa de concentrao entre 10 e 2000 g.L-1. Para concentraes superiores,
sugere-se a diluio da mesma e, posteriormente, quantificao atravs do fator
de diluio fdiluio utilizado.
O mtodo proposto no presente manual para anlise de nitrognio

amoniacal utiliza fenol nas etapas de quantificao da amostra. Dessa forma, o
resduo gerado deve ser, exclusivamente, armazenado em frascos de vidro (
1litro). Quando houver um acmulo excessivo em laboratrio deve-se solicitar na
Prefeitura da Cidade Universitria um encaminhamento para transporte e
destinao final no aterro industrial da Essencis.
73
3. REFERNCIAS
WEATHERBURN. Phenol-hypochlorite reaction for determination of ammonia. Anal.

Chem, Vol.8, pp. 130-132, 1962.
Adaptao de STANDARD METHODS, method 4500-NH3 F (Apha, 1998)
74
POP 10 SRIE DE NITROGNIO NITROGNIO TOTAL
(NT)
1.1. MTODO DA DIGESTO POR PERSULFATO DE POTSSIO
Quantificao de NT atravs de uma oxidao alcalina em autoclave (25min

/ 14kg.cm-1) na faixa de temperatura entre 110 - 125C, para converso de todas
as formas de nitrognio presentes a N-NO3- e posterior reduo pela coluna de
Cd-Cu para deteco na forma de N-NO2-, a exemplo do esquema abaixo:
O
K2S2O8 / NaOH (+)
N
NT T = 120C;t = 30min (-) O O (-)
O
(+)
Cd-Cu
N N
Cd0Cd2+
(-) O O (-) (-) O O (-)
Figura 9. Esquema explicativo das etapas da oxidao por persulfato das formas de
nitrognio a N-Nitrato, reduo de N-Nitrato para N-Nitrito atravs da coluna de Cd-Cu e
reao de Griess (1879), utilizada como metodologia analtica na quantificao de N-
Total em amostras de gua e de efluentes lquidos.
Equipamentos
Autoclave vertical
75
Vidrarias
Frascos para digesto

Tubos de plstico para centrfuga, tipo Falcon (15ml)
Cubeta de vidro
Reagentes analticos
Soluo digestora: dissolver 2,01g de persulfato de potssio (K2S2O8 p.a

< 0,001% N), em aproximadamente 80ml de gua destilada. Adicionar
0,300g de hidrxido de sdio (NaOH p.a) e dissolver novamente. Aferir com
gua destilada para 100ml, em balo volumtrico.
Soluo tampo de borato: dissolver 30,9g de cido brico (H3BO3 p.a)

em, aproximadamente, 300ml em gua destilada. Adicionar 4g de hidrxido
de sdio (NaOH p.a) e dissolver novamente. Aferir com gua destilada para
500 mL em balo volumtrico.
Soluo de sulfato de cobre 2%: ver POP-08, item 1 (N-NO3-).
Soluo estoque de NH4Cl EDTA: ver POP-08, item 1 (N-NO3-).
Soluo diluda de NH4Cl EDTA: ver POP-08, item 1 (N-NO3-).

Soluo reativa para N-NO2-: ver POP-07, item 1 (N-NO2-).
A calibrao do mtodo mesma utilizada para a determinao do nitrato

(ver POP-08).
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE N-TOTAL EM AMOSTRAS
76
2. Transferir com o auxlio de uma pipeta volumtrica, 5ml da amostra
para tubos de ensaio com rosca para uso na autoclave;
3. Adicionar ao volume de amostra, 2,5ml da soluo digestora;
4. Fechar bem os tubos para digesto e misturar por inverso;
5. Manter na autoclave, por um perodo de 25min aps atingir a
temperatura de 120C e presso de 14 kg.cm-2. Neste momento, mudar
a chave seletora de mximo para mdio e controlar a possibilidade de
aumento no manmetro de controle. Neste caso, mudar a chave para
mnimo;
6. Aps o trmino da digesto e resfriamento da autoclave, retirar os tubos
e aguardar que atinjam a temperatura ambiente;
7. Aps esfriar, adicionar 1ml da soluo tampo de borato e misturar por
inverso;
8. Transferir o volume presente no tubo de ensaio para um balo
volumtrico de 50ml;
9. Adicionar 10ml da soluo de NH4Cl-EDTA diluda;
10. Aferir o balo volumtrico com gua destilada;
11. Passar a amostra pela coluna de Cd-Cu (ver etapa de ativao da
coluna de Cd-Cu);
12. Descartar, aproximadamente, os primeiros 40ml;
14. Nesta alquota de 5ml, adicionar 0,4ml da soluo reativa para N-NO2-;
de 2h;
O mesmo procedimento deve ser realizado para as rplicas da amostra e

para outras amostras. Aps a passagem da amostra, seguir o mesmo
procedimento para realizao das provas em branco, utilizando gua destilada.
ATENO: seguindo este procedimento acima, descrito para NT, voc estar fazendo uma
diluio de 10 vezes da amostra, ou seja, foram tomados 5ml iniciais da amostra, passado pela
digesto e antes de passar pela coluna de Cd-Cu foi diluda para 50ml. Para este exemplo, o valor
77
obtido para a absorbncia deve ser corrigido com um fator de diluio de 10 vezes, de modo a se
obter o valor da concentrao real.
Quantificao da concentrao de NT (mg.L-1 ou g.L-1) atravs da equao

da reta, obtida na curva de calibrao para N-NO3-.
O mtodo para quantificao de NT aplicvel para leitura de

concentraes < 2,9 mg.L-1. Concentraes superiores ao limite podem ser
obtidas atravs da diluio da amostra e, posteriormente, quantificao atravs do
fator de diluio fdiluio.
ATENO: para este mtodo, se a concentrao de NT for superior ao limite de deteco,
a diluio da amostra deve ser realizada na etapa 2 deste procedimento. Ao adicionar os 5ml da
amostra, uma diluio de 5x, por exemplo, pode ser preparada a partir de 1ml da amostra e 4ml de
gua destilada e, em seguida adio da soluo digestora (etapa 3). Ainda, a diluio pode ser
feita separadamente, em balo volumtrico, e posteriormente o volume de 5ml retirado e
transferido para o tubo de digesto. Assim, se houver uma diluio prvia a etapa de digesto,
esta deve ser acrescida a diluio de 10x, aplicada a este procedimento e descrita acima, ou seja,
ambos os fatores de diluio so multiplicados para que a nova diluio seja obtida.
Idem procedimento apresentado para nitrito e nitrato.
3. REFERNCIA
Adaptao de STANDARD METHODS, method 4500- N C (Apha, 1998)
78
POP 11 SRIE DE NITROGNIO NITROGNIO
ORGNICO TOTAL (NOrgT)
Aplicando as metodologias descritas para a srie de nitrognio at o

presente momento, quantificamos o N-Orgnico da seguinte forma:
NOrgT = NT - NINORG (12)
em que:
NINORG = [N-NH3] + [N-NO2-] + [N-NO3-]
79
POP 12 SRIE DE FSFORO ORTOFOSFATO (PO43-)
1.1. MTODO DO CIDO ASCRBICO
A reao entre molibdato de amnio e antimnio tartarato de potssio em

meio cido (H2SO4) com ortofosfato, formam o cido fosfomolibdico, que em
presena de cido ascrbico reduzido para fosfomolibdato, composto de
colorao azul intensa caracterstica.
Bomba de vcuo
Vidrarias

Erlenmeyer
Cubeta de vidro
Reagentes analticos
Soluo padro para fosfato (50 mg.L-1): dissolver 0,02195g de fosfato

de potssio monobsico anidro (KH2PO4 p.a) em, aproximadamente, 80ml
80
de gua destilada. Aferir com gua destilada para 100ml, em balo
volumtrico.
-1
* Concentrao final de 50 mg P.L
Soluo de cido sulfrico 2,5 mol.L-1: adicionar lentamente 70ml de

H2SO4 (p.a) em, aproximadamente, 400ml de gua destilada. Aferir com
gua destilada para 500ml, em balo volumtrico.
* Armazenar em frascos de vidro normal para reagente, em temperatura ambiente.
Soluo de tartarato de antimnio e potssio: dissolver 0,6858g de

tartarato de antimnio e potssio (p.a) em, aproximadamente, 200ml de
gua destilada. Aferir com gua destilada para 250ml, em balo
volumtrico.
Soluo de molibdato de amnio: dissolver 10g de molibdato de amnio

(p.a) em, aproximadamente, 200ml de gua destilada. Aferir com gua
destilada para 250ml, em balo volumtrico.
Soluo de cido ascrbico: dissolver 1,76g de cido ascrbico (p.a) em,

aproximadamente, 80ml de gua destilada. Aferir com gua destilada para
100ml, em balo volumtrico.
* Estvel por 1 semana (mximo).
Soluo reativa combinada (Mix): adicionar com o auxlio de pipetas

volumtricas e/ou graduadas os seguintes reagentes, na ordem e
proporo de volume: 50ml de H2SO4 2,5 mol.L-1 + 5ml de tartarato de
antimnio e potssio + 15ml de molibdato de amnio + 30ml de cido
ascrbico (volume final de 100ml).
* Antes de promover a misturar, aguardar os reagentes armazenados em refrigerador atingir a
temperatura ambiente.
* Estvel por 4 horas aps o preparo.
81
- A cada adio de um reagente, promover a homogeneizao da soluo.
- Ao final, na adio do cido ascrbico, uma colorao amarelada bem clara
aparecer, sendo um indicativo que os reagentes do Mix foram bem preparados,
sem influncia de contaminao por fsforo no material utilizado.
- No caso da soluo Mix ficar com colorao esverdeada e azulada, indica
contaminao por fsforo, embora possa ser utilizada devido correo pelo
branco a ser realizado com gua destilada;

1. A partir da soluo padro (50 mg P.L-1) preparar, em bales
volumtricos de 50ml, a seguinte curva de calibrao (volume final com gua
destilada):
Concentrao P-PO4-3 (g.L-1) Volume P-PO4-3 (ml)

0 (branco) -
100 0,1
300 0,3
500 0,5
900 0,9
1500 1,5

4. Adicionar 2ml da soluo reativa combinada (MIX) para ortofosfato em
cada alquota;
82
5. Fechar o frasco e misturar por inverso;
6. Aguardar 10min para o desenvolvimento e estabilidade da cor;
de 45min;
10. Realizar comparao com a curva analtica apresentada na Figura 10;
0,6 0,9
0,5 Calibrao 3 (R= 0,9986)
0,6 Calibrao 5 (R= 0,9983)
0,4
Absorvncia
Absorvncia Calibrao 6 (R= 0,9968)
0,3
0,2 Eq.Reta: Conc=(Abs+0,00509)/5,7998E-4 0,3

R = 0,99967 / n = 12
0,1
(a) (b)
0,0 0,0
0 200 400 600 800 1000 0 250 500 750 1000 1250 1500
3-
3-
P-PO4 g.L ) -1 P-PO4 g.L-1)
Figura 10. (a) Exemplo de curva analtica de KH2PO4 aplicada calibrao do mtodo
colorimtrico para determinao de Ortofosfato (PO43-) em amostras de gua e efluentes
lquidos e (b) Exemplo comparativo de seis calibraes preparadas em diferentes
perodos (jul/09 fev/10) para anlise de PO43-.
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE PO43- EM AMOSTRAS

2. Transferir 50ml de amostra para o sistema de filtragem a vcuo;
83
6. Adicionar 2ml da soluo reativa combinada (Mix) em cada alquota;
de 45min;
Quantificao da concentrao de PO43- (mg.L-1 ou g.L-1) atravs da

equao da reta, obtida na curva analtica (calibrao).
O mtodo para quantificao de ortofosfato (PO43-) aplicvel para

concentraes < 1500 g.L-1 com valor mnimo detectvel de 5 g.L-1.
A composio do resduo de fsforo / ortofosfato fortemente cida, devido

ao uso de H2SO4 como parcela na mistura do reativo indicador combinado. Dessa
forma, o descarte pode ser realizado na pia, logo aps a correo do pH para a
faixa de neutralidade.
O mesmo procedimento deve ser adotado nas anlises de P T e PDT,
apresentados no POP-13, na sequncia.
3. REFERNCIAS
MURPHY, J.; RILEY, J.P. A Modified Single Solution Method for the Determination of
Phosphate in Natural Water. Anal.Chim.Acta, Vol. 27, pp. 31-36, 1962
STANDARD METHODS, method 4500 - P E (Apha, 1998)
84
POP 13 SRIE DE FSFORO FSFORO TOTAL (PT)
1.1. MTODO DA DIGESTO ALCALINA (K2S2O8 / NaOH) & MTODO DO

CIDO ASCRBICO
Quantificao de PT atravs de digesto alcalina utilizando persulfato de

potssio em autoclave (125C / 14kg.cm -1 / 25min) para converso de todas as
formas de fsforo presentes para ortofosfato (PO 43-) e posterior quantificao
segundo o mtodo do cido ascrbico.
Bomba de vcuo e membranas de acetato de celulose ( 0,45m)
Autoclave vertical
Vidrarias
Frascos para digesto (vidro)

Balo volumtrico de 100ml, 250ml e 500ml
Erlenmeyer
Cubeta de vidro
Reagentes analticos
Soluo digestora alcalina: dissolver 2,01g de persulfato de potssio

(K2S2O8 p.a < 0,001% N), em aproximadamente 80ml de gua destilada
Adicionar 0,300g de hidrxido de sdio (NaOH p.a) e dissolver novamente.
Aferir com gua destilada para 100ml, em balo volumtrico.
85
Soluo reativa combinada (Mix): ver POP-12, item 1 (PO43-).
Soluo padro para fosfato (50 mg.L-1): ver POP-12, item 1 (PO43-).
Soluo tampo de borato: dissolver 30,9g de cido brico (H3BO3 p.a)

em, aproximadamente, 300ml em gua destilada. Adicionar 4g de hidrxido
de sdio (NaOH p.a) e dissolver novamente. Aferir com gua destilada para
500 mL em balo volumtrico.

1. A partir da soluo padro (50 mg P.L-1) (ver POP-12, item 1) preparar,
em bales volumtricos de 50ml a seguinte curva de calibrao (volume final com
gua destilada):
Concentrao P-PO4-3 (g.L-1) Volume P-PO4-3 (ml)

0 (branco) -
100 0,1
300 0,3
500 0,5
900 0,9
1500 1,5
2. A partir das solues padres preparadas, retirar com o auxlio de uma

pipeta volumtrica, alquotas de 5ml e transferir para os tubos de ensaio com
rosca para uso em autoclave;
4. Adicionar a cada tubo, 2,5ml da soluo digestora alcalina;
5. Fechar bem os tubos para digesto e misturar por inverso no mnimo
duas vezes;
86
temperatura de 120C e presso de 14 kg.cm -2. Neste momento, mudar a chave
seletora de mximo para mdio e controlar a possibilidade de aumento no
manmetro de controle. Neste caso, mudar a chave para mnimo;
inverso.
9. Transferir a soluo para um balo volumtrico de 25ml e aferir com
gua destilada;
10. Retirar uma alquota de 10ml e reservar em outro frasco;
11. Adicionar a esta alquota 2ml da soluo reativa combinada (Mix).
Repetir o mesmo procedimento para os demais padres e rplicas;
de 45min;
15. Equao da reta obtida com a plotagem do grfico: absorbncia (eixo y)
17. Realizar comparao com a curva analtica apresentada na Figura 11a:
0,18 0,9
3- -1
(a) Calibrao PO4 (0 - 1500 g.L ) (b)
-1
Calibrao PT- digesto (0 - 300 g.L )
0,12
Absorvncia
0,6
Absorvncia
Comparativo com o
3-
padro P2 de PO4
0,06 0,3
Eq.Reta: Conc=(Abs+0,00166)/5,61129E-4
R = 0,99982 / n = 10 Padro P5 (PT) diludo 5 vezes
aps digesto /
tamponamento.
0,00 0,0
0 50 100 150 200 250 300 0 250 500 750 1000 1250 1500
3- 3-
P-PO4 g.L-1) P-PO4 g.L-1)
Figura 11. (a) Exemplo de curva analtica de KH2PO4 aplicada calibrao do mtodo de
digesto / colorimtrico para determinao de Fosfato Total (PT) em amostras de gua e
87
de efluentes lquidos e (b) Exemplo comparativo entre a calibrao para PO43-, com
ausncia da etapa de digesto, e calibrao para PT com presena da etapa de digesto /
neutralizao.
ATENO: verifique a seguinte etapa da metodologia: ao adicionar 5ml do padro para digesto
e aps a neutralizao, ter aferido para 25ml, voc realizou uma diluio de 5 vezes, ou seja, o
padro deve estar, teoricamente, 5 vezes mais diludo que o valor encontrado para a curva de
calibrao de Ortofosfato (POP n. 12). Um exemplo pode ser observado na Figura 11b.
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE PT EM AMOSTRAS

2. Com o auxlio de uma pipeta volumtrica, transferir 5ml da amostra para
tubos de ensaio com rosca, para digesto;
4. Adicionar a cada tubo, 2,5ml da soluo digestora alcalina;
5. Fechar bem os tubos para digesto e misturar por inverso;
temperatura de 120C e presso de 14 kg.cm -2. Neste momento, mudar
a chave seletora de mximo para mdio e controlar a possibilidade de
aumento no manmetro de controle. Neste caso, mudar a chave para
mnimo;
inverso;
9. No mesmo frasco, adicionar 1,5ml de gua destilada e misturar por
inverso;
ATENO: verifique a seguinte etapa da metodologia: ao adicionar 5ml do padro para digesto
e aps a adio dos reagentes seguintes (soluo digestora, soluo tampo e gua), a amostra
foi diluda, neste caso, 2x, fator este que deve ser utilizado na correo da concentrao de PT
quantificada.
10. Adicionar a esta alquota 2ml da soluo reativa combinada (Mix).
Repetir o mesmo procedimento para as demais amostras e rplicas;
88
de 45min;
Quantificao da concentrao de PT (mg.L-1 ou g.L-1) atravs da equao

da reta, obtida na curva analtica (calibrao) para PT.
O mtodo para quantificao de PT est relacionado com o mtodo

utilizado na quantificao de ortofosfato (PO43-). Assim, segue a faixa de leitura
descrita para ortofosfato: quantificao para concentraes < 1500 g.L-1 com
valor mnimo detectvel de 5 g.L-1.
3. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE FSFORO TOTAL

DISSOLVIDO (PTD) EM AMOSTRAS
A quantificao de fosfato total na frao dissolvida (PTD) pode ser

realizada seguindo a metodologia descrita para fosfato total (PT). Entretanto, a
nica diferena uma etapa adicional de pr tratamento da amostra:
A amostra deve, primeiramente, ser filtrada em membrana de acetato de
celulose 0,45m para obteno da frao dissolvida e, na sequncia, seguir o
mtodo da digesto alcalina (fechada).
4. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE FSFORO TOTAL

PARTICULADO (PTP) EM AMOSTRAS
4.1. MTODO PARA DETERMINAO
89
A quantificao da concentrao de fosfato total, presente na frao
particulada (PTP) pode ser obtida a partir da subtrao da concentrao de fosfato
total dissolvido (PTD) pela concentrao encontrada para fosfato total (PT):
PTP = PT PTD (13)
5. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE FSFORO ORGNICO

DISSOLVIDO / SOLVEL (POrgD) EM AMOSTRAS
5.1. MTODO PARA DETERMINAO
A quantificao da concentrao do fsforo orgnico dissolvido (PORG),

presente na amostra pode ser obtida a partir da subtrao da concentrao de
ortofosfato (PO43-), POP N. 12 pelo resultado encontrado para a concentrao de
fosfato total dissolvido (PTD):
POrgD = PTD PO4-3 (14)
6. REFERNCIAS
MURPHY, J.; RILEY, J.P. A Modified Single Solution Method for the Determination of
Phosphate in Natural Water. Anal.Chim.Acta, Vol. 27, pp. 31-36, 1962
STANDARD METHODS, method 4500 - P E (Apha, 1998)
90
POP 14 CLOROFILA-a (CLa)
1.1. MTODO DA EXTRAO COM ACETONA 90%
Quantificao de clorofila-a por meio da extrao com acetona 90% e

determinao da concentrao pela absorvncia medida em espectrofotmetro
UV-Vis.
Bomba de vcuo
Membranas de fibra de vidro ( 0,45m)
Tubos para centrfuga graduados com tampa
Gral e pistilo de porcelana
Micropipeta (100 1000l)
Centrfuga
Vidrarias

Cubeta de vidro
Reagentes analticos
Soluo saturada de carbonato de magnsio: adicione 1,0g de

carbonato de magnsio e dissolva em 100ml de gua destilada.
* Armazenar em frasco mbar e acondicionar a temperatura ambiente.
91
Soluo de acetona 9:1: misture 90 partes de soluo de acetona
(CH3(CO)CH3) com 10 partes de soluo saturada de carbonato de
magnsio.
Soluo de HCl 0,1 mol.L-1: adicionar 8,5ml de cido clordrico (HCl

p.a) em, aproximadamente, 800ml de gua destilada. Aferir para 1000ml
em balo volumtrico.
2.1. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE CLa EM AMOSTRAS
1. Homogeneizar bem a amostra presente no frasco de coleta, pelo

menos 10 vezes, fazendo movimento em forma de 8;
2. Aps homogeneizao da amostra, filtrar em membrana de fibra
de vidro at a saturao da membrana e anotar o volume filtrado;
3. Retirar o filtro e armazen-lo em envelope de papel laminado
identificado. A membrana pode ser congelada por um perodo de
at 60 dias. A anlise para determinao pode ser prosseguida
aps a filtrao ou posteriormente ao descongelamento da
membrana;
4. Na sequncia, a membrana dever ser colocada em um tubo de
centrfuga graduado e, com auxlio de um basto de vidro,
macere o filtro at que a membrana se desmanche por completo,
adicionando aos poucos os 10ml da soluo saturada de acetona;
5. Centrifugar a 4000rpm por 10min. Envolver os tubos, com papel
laminado identificado (ausncia de luminosidade) e manter as
amostras armazenadas sob refrigerao (4C) por um perodo de
24h;
92
6. Aps este perodo proceder leitura do sobrenadante em
espectrofotmetro UV-Vis, de acordo com a seguinte ordem:
LEITURA 1: com a amostra simples, no comprimento de onda

de 664nm e 750nm, para eliminar a interferncia de outros
compostos;
LEITURA 2: adicionar na mesma amostra, diretamente na
cubeta, 300l (6 gotas) de HCl 0,1 mol.L-1. Tampar a cubeta e
misturar por inverso (1 vez). Aps 3min da adio do HCl,
realizar novamente a leitura para os comprimentos de onda de
665nm e 750nm;
Os valores das concentraes de clorofila-a so obtidos por meio da

seguinte equao:
26, 7 x[664b 665a ]xV 1

CLa(mg / m3 ) (15)
V 2 xL
em que:
664b: subtrao do sinal obtido em 664nm e 750nm
665a: subtrao do sinal obtido em 665nm e 750nm (densidade ptica
aps a acidificao)
V1: volume do extrato (acetona, 10ml)
V2: volume filtrado da amostra (L)
L: caminho tico da cubeta (1cm)
3. REFERNCIA
Adaptado de STANDARD METHODS (Apha, 1998)
93
POP 15 METAIS PESADOS (Cd, Cr, Cu, Ni, Zn, Pb)
1.1. ESPECTROMETRIA DE ABSORO ATMICA DE CHAMA (EAA-

Chama) / PR CONCENTRAO DA AMOSTRA (10x)
Espectrmetro de absoro atmica de chama (EAA-Chama)
Frasco plstico (PEAD, PP) para solues padres (50ml) e tubos de
centrfuga Falcon (15ml) para as amostras
Bomba de vcuo
Chapa de aquecimento
gua ultra pura (mili-Q)
Vidrarias
Bales volumtricos de 100ml

Becker de 50ml
Erlenmeyers de 50ml
Reagentes analticos
cido Ntrico concentrado 65% ultra puro (HNO3 p.a 65%)
H2O2 30%
cido Ntrico 1:1: adicione, lentamente, 500ml de cido ntrico

concentrado (HNO3 p.a 65%), com auxlio de pipetas volumtricas de
100ml em 500ml de gua destilada e deionizada.
*Armazenar em frasco mbar e acondicionar a temperatura ambiente.

94
cido Clordrico 1:1: adicione, lentamente, 500ml de cido clordrico

concentrado (HCl p.a), com auxlio de pipetas volumtrica de 100ml em
500ml de gua destilada e deionizada.
*Armazenar em frasco mbar e acondicionar a temperatura ambiente.
Cada metal a ser quantificado no espectrmetro de absoro atmica

necessita de solues padres, preparadas em uma determinada faixa de
concentrao do metal para que, antes da leitura das amostras, o equipamento
seja devidamente calibrado e retorne uma resposta adequada frente
sensibilidade do aparelho para o determinado metal a ser analisado.
Na sequncia, so apresentados os procedimentos para o preparo das
solues padres para os metais Cd, Cr, Cu, Ni, Zn e Pb.
2.1.1. PREPARO DAS SOLUES PADRES DE METAIS
Os padres de metais consistem na preparao de cinco solues de

concentrao conhecida, sendo que para cada uma todos os metais (Cd, Cr,
Cu, Ni, Zn e Pb) esto presentes. Por exemplo: o padro 1 deve conter
igualmente 1 mg.L-1 para Cd, Cr, Cu, Ni, Zn e 2 mg.L-1 para Pb. Retomando,
necessrio adicionar igualmente o mesmo volume para cada metal, ou seja,
6ml totalizando 36ml de soluo padro. Para tal, se deve calcular a
concentrao de cada metal que seja 6 vezes superior a concentrao final,
visto que, considerando os 6 metais em anlise estes devem ser diludos por
igual. Na Tabela 2 so apresentados os clculos e procedimento para o
preparo das solues padres:
95
Tabela 2 Procedimento para o preparo das solues padres dos metais Cd, Cu, Cr, Ni, Zn e Pb, utilizados na etapa de calibrao.
Padro
P.I. P.I. Pd-5*** Pd-5 Pd-1 Pd-1 Pd-2 Pd-2 Pd-3 Pd-3 Pd-4 Pd-4
METAL estoque* -1 -1 -1 -1 -1 -1
-1 (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo)**** (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo) (mg.L ) (preparo)
(mg.L )
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Cd 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
(2%)
(2%) (2%) (2%)
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Cu 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
3ml padro (2%)
(2%) (2%) (2%)
estoque +
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
97ml HNO3 1,2ml PI +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Cr 1000 30 (2%)** 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
100ml (2%)
(2%) (2%) (2%)
(balo
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
volumtrico) 1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Ni 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
(2%)
(2%) (2%) (2%)
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Zn 1000 30 5 6ml P.I 1 4,8ml HNO3 2 3 4
HNO3 HNO3 HNO3
(2%)
(2%) (2%) (2%)
6ml padro
estoque +
2,4ml P.I. 3,6ml P.I. 4,8ml P.I.
97ml HNO3 1,2ml P.I. +
+ 3,6ml + 2,4ml + 1,2ml
Pb 1000 60 (2%) 10 6ml P.I 2 4,8ml HNO3 4 6 8
HNO3 HNO3 HNO3
100ml (2%)
(2%) (2%) (2%)
(balo
volumtrico)
#
Volume final (ml) 36 36 36 36 36
96
*Padro certificado, de concentrao conhecida.
**HNO3 (2%): diluir, em balo volumtrico, 20ml de HNO3 65% em 980ml de gua ultra pura.
***Pd: identificao dos padres na tabela Pd-5 (padro 5), Pd-1 (padro 1)...
****Os padres Pd-1, Pd-2, Pd-3 e Pd-4 so preparados a partir de diluies de volumes conhecidos
dos padres intermedirios (PI) em HNO3 (2%) para um volume final de 6ml .
#
Representa a soma do volume de soluo adicionado para cada metal (6+6+6+6+6+6)ml.
2.2. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NA

FRAO DISSOLVIDA - Pr concentrao 10x
1. Homogeneizar bem o frasco contendo a amostra preservada com HNO 3;

4. Transferir 50ml da amostra (dissolvida) com o auxlio de uma pipeta
volumtrica para o erlenmeyer (realizar o procedimento em duplicata ou
triplicata);
5. Adicionar 3ml de cido ntrico concentrado (HNO3 p.a 65%);
6. Manter os erlenmeyers contendo as amostras em uma chapa de aquecimento
a uma temperatura entre 110 e 130C;
7. Manter evaporando a soluo at volume inferior a 5ml. Evitar que a soluo
evapore completamente;
8. Retirar da chapa e aguardar esfriar. (Mantenha os frascos sempre cobertos
de modo a evitar contaminao);
9. Transferir as amostras para tubos de centrfuga de 15ml e aferir o volume
para 5ml com gua ultra pura;
10. Acondicionar em refrigerador (<4C) at o momento da leitura;
11. Realizar a quantificao em espectrmetro de absoro atmica de chama;
12. Caso o tempo para leitura seja superior a 30 dias, mantenha as amostras em
congelador;
2.3. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE METAIS PESADOS NA

FRAO PARTICULADA - Pr concentrao 15x
1. Homogeneizar bem o frasco contendo a amostra preservada com HNO3;

97
3. Filtrar em membrana de acetato de celulose 0,45m. Para cada membrana
utilizada, anotar o valor do seu respectivo peso (P1) e ponto ou rplica
correspondente;
4. Manter as membranas em ambiente livre de contaminao por metais
(temperatura ambiente) para secagem at peso constante (24h);
5. Realizar uma nova verificao do peso e anotar o valor observado (P2);
6. Em erlenmeyers de 50ml, colocar as membranas, seguido de 10ml de HNO 3
1:1;
7. Juntamente, realizar brancos analticos apenas com 5ml de gua ultra pura e
10ml de HNO3 1:1 e seguir todos os passos seguintes das amostras;
8. Manter em chapa de aquecimento por um perodo de 45min, aps atingir a
9. Retirar da chapa e aguardar o resfriamento dos frascos, mantendo-os na
capela de exausto;
10. Adicionar 5ml de HNO3 concentrado (65% p.a) e retornar os frascos para a
chapa de aquecimento, na temperatura de 150C, por 2h ou reduo do
volume prximo de 3ml;
11. Retirar da chapa e aguardar que os frascos atinjam a temperatura ambiente;
12. Adicionar 2ml de H2O2 (30%) e, novamente, manter sob aquecimento (150C);
13. Aguardar a completa efervescncia da amostra. Se necessrio adicionar
alquotas de 5ml de gua ultra pura, evitando a evaporao total da mesma;
14. Retirar da chapa e aguardar que os frascos atinjam a temperatura ambiente.
Na sequncia, adicionar 10ml de HCl 1:1 e retornar para a chapa, mantendo a
uma temperatura de 180C por um perodo de 1h;
15. Verificar um volume aproximado, abaixo de 5ml e retirar os mesmos da
chapa. Manter na capela de exausto at que atinjam a temperatura
ambiente;
16. Transferir a amostra para o tubo de centrfuga, aferindo com gua ultra pura
no volume de 10ml;
17. Centrifugar as amostras para remoo de particulados residuais do
sobrenadante;
18. Acondicionar em refrigerador (<4C) at o momento da leitura;
19. Realizar a quantificao em espectrmetro de absoro atmica de chama;
98
20. Caso o tempo para leitura seja superior a 30 dias, mantenha as amostras em
congelador;
Os resultados da concentrao (g.mL-1 ou mg.L-1) so calculados

diretamente pelo software do equipamento, uma vez que antes da leitura das
amostras para cada metal necessrio a calibrao com as solues padres para
ver a resposta e sensibilidade do aparelho. Ainda, seguindo este procedimento, os
resultados devem ser corrigidos, visto que a amostra foi concentrada 10x (frao
dissolvida) e 15x (frao particulada) para quantificao. Para as amostras da frao
particulada, os resultados tambm podem ser obtidos em peso seco (ex.: g.g-1)
visto que a quantidade de slidos pode ser determinada pela diferena do peso da
membrana (g) antes e aps a filtrao e o respectivo volume filtrado (ml).
Os valores de limite de deteco devem ser obtidos juntamente com a leitura

das amostras. Para tal, voc deve separar para cada metal, oito alquotas de gua
mili-Q para serem lidas antes das amostras. O clculo feito segundo a frmula: LD
= k.sb/m onde k o fator de confiana superior (2 ou 3, sendo que o primeiro
apresenta um nvel de 92,1% de confiana e o segundo 98%) ao desvio padro (s b)
das oito rplicas de gua mili-Q e a varivel m responde quanto sensibilidade da
calibrao (inclinao da curva de calibrao para cada metal).
Para metais, o resduo necessita de um ajuste de pH prvio, visto que o

procedimento de anlise adotado neste manual, tem na etapa ou alquota final um
meio extremamente cido, na presena de HNO3. Aps a correo do pH, o resduo
pode ser descartado pela pia. A concentrao de metais, inicialmente, no
considerada, embora, apresente valores inicialmente baixos.
99
4. REFERNCIAS
Method 3050B. Acid Digestion of Sediments, Sludges and Soils. EPA, revision 2, 1996
STANDARD METHODS (Apha, 1998)
100
POP 16 ALCALINIDADE TOTAL
1.1. MTODO TITULOMTRICO
A amostra titulada com cido padro a um pH especfico, determinando-se o ponto

final pelo ponto de viragem do indicador aplicado na titulao.
Equipamentos
Agitador magntico
Vidrarias
Erlenmeyer
Bureta
Reagentes analticos
Soluo indicadora de metilorange: dissolver 0,2g de metilorange

C14H14N3SO3Na (p.a), em gua quente e aps esfriamento, filtrar se
necessrio. Aferir com gua destilada / deionizada para 100ml em balo
volumtrico.
Soluo indicadora de fenolftalena: dissolver 1,0g de fenolftalena

C6H4COO.C(C6H4OH)2, p.a., em 60 mL de lcool etlico p.a (C2H5OH). Aferir
com gua destilada / deionizada para 100 ml em balo volumtrico.
101
Soluo de carbonato de sdio 0,1N: pesar 5,3g de carbonato de sdio,
Na2CO3 (p.a), previamente seco em estufa a 200C por 1 hora. Dissolver em
gua destilada, transferir para um balo volumtrico e aferir para 1000ml.
Diluio da soluo de Na2CO3 0,1N para 0,02N: transferir 200ml da

soluo de carbonato de sdio 0,1N para um balo volumtrico de 1000 ml e
aferir com gua destilada.
Soluo de cido sulfrico 0,1N: adicionar aproximadamente 500ml de

gua destilada em um balo volumtrico de 1000ml. Com o auxlio de uma
pipeta, transferir, lentamente, 2,8ml de cido sulfrico concentrado (H2SO4
p.a) para o balo volumtrico aferindo-o posteriormente com gua destilada.
Diluio da soluo de H2SO4 0,1N para 0,02N: transferir 200ml da soluo

de cido sulfrico 0,1N para um balo volumtrico de 1000ml e aferir com
gua destilada.
Soluo de tiossulfato de sdio: dissolver 0,35g de tiossulfato de sdio

pentahidratado, Na2S2O3.5H2O (p.a) em gua destilada e aferir para 100ml
em balo volumtrico. Adicionar 1ml desta soluo para complexar 2 mg.L-1
de Cloro.
Padronizao da soluo de H2SO4 0,02N: transferir com auxlio de uma

pipeta volumtrica, 10ml da soluo de carbonato de sdio 0,02N para um
elernmeyer. Preparar uma bureta com o agente titulante de cido sulfrico
0,02N. Adicionar 4 gotas da soluo indicadora de metilorange no elernmeyer
que contm carbonato de sdio e agitar at notar a viragem do indicador
metilorange de amarelo para laranja. Anotar o volume gasto na titulao do
cido sulfrico e calcular o fator de correo:
102
Vt
Fc= (16)
Vg
em que:
Vt = volume terico (mL)
Vg = volume gasto na titulao (mL)
2. PROCEDIMENTO ANALTICO (amostra)
2.1. DETERMINAO DA ALCALINIDADE
1. Preencher a bureta com a soluo de cido sulfrico 0,02N;

2. Colocar 100ml da amostra com pipeta volumtrica em um erlenmeyer e
adicionar de 4 a 5 gostas de soluo indicadora de fenolftalena;
NOTA 1: No filtrar, diluir ou concentrar, ou alterar a amostra;
NOTA 2: Caso a amostra seja clorada, adicionar algumas gotas de tiossulfato de
sdio;
NOTA 3: A amostra dever ficar com a colorao rsea aps a adio da
fenolftalena, caso tenha um pH > 8,3 e ficar incolor quando o pH for < 8,3. Para
este ltimo caso no existe alcalinidade fenolftalena;
3. Obtendo uma colorao rsea, titular at ficar incolor e anotar o volume
gasto do agente titulante (H2SO4);
4. Adicionar de 4 a 5 gotas da soluo de metilorange;
NOTA 4: Caso a amostra tenha um pH > 4,4 ficar com uma colorao amarela e
quando o pH for < 4,4 ficar com uma colorao laranja. Neste ltimo caso, no
existe alcalinidade metilorange;
5. Obtendo uma colorao amarela, acertar o menisco da bureta, anotar o
ponto de partida da titulao, adicionar o cido gota a gota agitando a
amostra at o ponto de viragem (colorao laranja) e anotar o volume
do agente titulante (H2SO4) gasto;
6. Anotar o volume total do cido gasto na titulao (AlcFenolftalena +
AlcMetilorange);

103
Alcalinidade fenolftalena:
Alcalinidade(mg / LCaCO3 ) Vg 10 fc (17)
em que:
Vg: volume (ml) de H2SO4 0,02N gasto com a amostra
Fc: fator de correo do H2SO4 0,02N
Alcalinidade total:
Alcalinidade(mg / LCaCO3 ) Vg 10 fc (18)
em que:
Vg: volume (ml) de H2SO4 0,02N gasto com a amostra
Fc: fator de correo do H2SO4 0,02N
Alcalinidade metilorange:
Alcalinidade metilorange (mg/L de CaCO3) = alcalinidade total alcalinidade

fenolftalena
3. REFERNCIA
STANDARD METHODS (Apha, 1998)
104
POP 17 FLUORESCNCIA MOLECULAR (IF)
1. MTODO PARA DETERMINAO - ESPECTROFLUORMETRO
Varredura espectroscpica de fluorescncia molecular. Excitao de espcies

atmicas ou moleculares presentes no analito, atravs de radiaes
eletromagnticas localizadas na regio do UV e/ou visvel e posterior espectro de
radiaes emitidas (quando as espcies retornam ao estado fundamental) em
comprimentos de onda superiores ao valor estabelecido para excitao.
Equipamentos
Espectrofluormetro
Bomba de vcuo
Vidrarias
Cubeta de quartzo multifacetada

Frasco plstico (PEAD, PP) para amostra (20ml)
Reagentes analticos
No h uso de solues para o preparo e quantificao da amostra.
1. Filtrar aproximadamente 20ml de amostra em membrana de acetato de

celulose 0,45m;
2. Transferir a amostra (3ml) para uma cubeta de quartzo multifacetada;
3. Selecionar no espectrofluormetro a opo desejada: modalidade emisso
(varredura entre 300 e 700nm e comprimento de onda de excitao (Exc) de
105
314nm e 370nm e modalidade sincronizada (varredura entre 250 e 700nm
com 18nm);
4. Realizar a varredura de fluorescncia desejada para cada amostra;
5. Utilizar gua mili-Q como prova em branco da anlise;
NOTA: a leitura no espectrofluormetro pode ser realizada imediatamente aps a

realizao da coleta, em um prazo de 2 dias, considerando a refrigerao da
amostra (< 4C), ou voc pode transferir a frao filtrada para esta anlise para o
frasco especfico e congelar para leitura posterior (6 meses);
2. EXEMPLO GRFICO DO ESPECTRO DE FLUORESCNCIA MOLECULAR

PARA AMOSTRAS DE GUA
50
Amostra 1
Amostra 2
40 Amostra 3
Amostra 4
Amostra 5
-1
IF_314/mg C.L
Amostra 6
30
(a)
20
10
0
350 400 450 500 550 600
Comprimento de onda (nm)
30 8
Amostra 1 Amostra 1
Amostra 2 Amostra 2
Amostra 3 Amostra 3
Amostra 4 6 Amostra 4
-1
-1
Amostra 5
IF_370/mg C.L
IF_Sinc/mg C.L
20
Amostra 6 (c)
(b) 4
10
2
( 18nm)
0 0
400 450 500 550 600 300 350 400 450 500
Comprimento de onda (nm) Comprimento de onda_emisso (nm)
Figura 12.
Exemplos grficos de espectros de varredura de intensidade de fluorescncia molecular: (a)
IF (excitao 314nm) (b) IF (excitao 370nm) e (c) IF (sincronizado).
106
POP 18 COLIFORMES TOTAIS E FECAIS
1. MTODO PARA DETERMINAO CARTELA COLILERT
O mtodo Colilert consiste na quantificao dos coliformes totais e fecais

presentes em uma dada amostra, atravs da mistura entre a amostra e o reagente
colilert patenteado, com posterior transferncia da soluo para uma cartela estril
(100ml), a qual selada e mantida incubada a 352C durante 24h (1 leitura) e 48h
(2 leitura-confirmao). Os resultados so obtidos pela relao de valores positivos
entre os quadrados maiores e menores da cartela, com queles verificados na
tabela padro para o teste colilert.
Equipamentos
Seladora para cartelas colilert
Autoclave vertical
Cmara escura equipada de radiao UV
Vidrarias
Balo de fundo chato (esterilizado*)

Proveta 100ml (esterilizado*)
* 15 minutos em autoclave, frascos totalmente vedados com tampes (preparados
com gases), papel alumnio e papel kraft (camada dupla)
Reagentes
Reagente especfico colilert
Primeiramente, importante avaliar a faixa possvel de quantificao para a

anlise de coliformes na amostra de interesse, de modo a verificar se existir ou no
107
a necessidade de diluio da mesma. O mtodo utiliza 100ml de amostra, mas em
muitos casos volumes menores so utilizados, devido grande quantidade de
coliformes presentes. Para estes casos, volumes de 1ml ou 0,1ml da amostra, por
exemplo, so transferidos para 100ml de gua destilada, previamente esterilizada, e
o fator de diluio anotado para correo do resultado final. Dessa forma, seguir as
etapas abaixo:
1. Aps coleta da amostra, transferir 100ml desta para um balo de fundo chato
estril ou o volume correspondente para a diluio pretendida, de modo que o
volume final seja de 100ml;
2. Em cada amostra, adicionar uma cartela do reagente colilert e agitar at
dissoluo completa;
3. Transferir os 100ml para uma cartela colilert estril, colocar sobre o suporte
da seladora e selar a mesma;
4. Manter a cartela em incubadora termo-regulvel a 352C;
5. Aps 24h na incubadora, anotar os valores positivos nos quadrados grandes
(49 espaos) e pequenos (48 espaos). Os valores positivos so aqueles nos
quais uma colorao amarela forte se desenvolveu;
6. O mesmo procedimento deve ser realizado observando-se as cartelas em
uma cmara escura equipada de luz UV, de modo que, para este caso, os
quadrados grandes e pequenos a serem anotados so aqueles que
desenvolverem uma luminescncia azul caracterstica;
7. Os valores anotados pelo item 5 so referentes aos coliformes totais e os
resultados do item 6, os coliformes fecais;
8. Repetir o procedimento dos itens 6 e 7 aps 48h para confirmao dos
resultados;
2.1. CLCULO DO NMERO MAIS PROVVEL (NMP/100ml)
Os resultados so obtidos a partir da cartela padro do mtodo que

correlaciona os valores observados nos quadrados grandes com aqueles
observados nos quadrados pequenos.
108
Por exemplo, em uma anlise que utilizou 100ml da amostra foram
observados 10 quadrados positivos grandes com 15 quadrados positivos pequenos
para coliformes totais e 5 quadrados positivos grandes com 3 quadrados positivos
pequenos para coliformes fecais. Pela tabela, os valores observados so
respectivamente 28 NMP/100ml e 8,2 NMP/100ml. Caso um volume de apenas
0,1ml de amostra tenha sido utilizado e as mesmas observaes obtidas, estes
valores acima devem ser multiplicados pelo fator de diluio de 1000x,
correspondendo a 28 000 NMP/100ml para coliformes totais e 8 200 NMP/100ml
para coliformes fecais.
3. REFERNCIA
Colilert IDEXX Quanti Tray/200
109

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN

DEPARTAMENTO DE HIDRULICA E SANEAMENTO DHS

Elaborao e Organizao: Carla Cristina Bem e Luiz Fernando Dombroski

CAPTULO 1 - Monitoramento de qualidade da gua em corpos aquticos...........4

CAPTULO 2 - Parmetros de interesse na gesto e monitoramento de qualidade

CAPTULO 3 - Procedimentos para amostragem em campo, conservao e

CAPTULO 4 Consideraes gerais sobre coleta, preservao de amostras e

CAPTULO 5 - Procedimentos para limpeza e descontaminao de frascos,

CAPTULO 6 - Procedimentos para amostragem em campo, conservao e

POP 01 - Oxignio dissolvido.................................................................................30

PEAD polietileno de alta densidade

O monitoramento da qualidade ambiental surgiu da necessidade de

O monitoramento de comando e controle consiste em analisar pontos

C aptulo 2 Parmetros de interesse na

gesto e monitoramento de qualidade da

As variveis monitoradas para avaliar a qualidade das guas podem ser

As variveis fsicas so:

(a) TEMPERATURA: descrita diretamente como a medida da intensidade de

(b) TURBIDEZ: parmetro de qualidade da gua relacionado diretamente com

(c) CONDUTIVIDADE ELTRICA: capacidade que a gua possui de

As variveis qumicas so:

ALCALINIDADE: causada por sais alcalinos, principalmente de sdio e clcio;

OXIGNIO DISSOLVIDO: elemento principal no metabolismo dos

DEMANDA BIOQUMICA DE OXIGNIO: a Demanda Bioqumica de

DEMANDA QUMICA DE OXIGNIO: a Demanda Qumica de Oxignio

SRIE DE SLIDOS: resduos ou slidos so todas as matrias suspensas ou

Slidos Totais (ST)

Slidos Suspensos Totais (SST) Slidos Dissolvidos Totais (SDT)

Slido Slido Slido Slido

Slidos Volteis Totais (SVT) Slidos Fixos Totais (SFT)

UV-Vis: a espectrofotometria na regio UV-Vis do espectro eletromagntico

SRIE DE NITROGNIO: o nitrognio (N) um macronutriente essencial ao

SRIE DE FSFORO: a grande importncia do fsforo deve-se participao

CLOROFILA-a: monitorada no laboratrio como uma varivel biolgica, a

METAIS PESADOS: a presena de metais pesados em ambientes aquticos

C aptulo 3 Procedimentos para

COLETA PERODO MXIMO PARA FRAO DA VOLUME

Fixao em campo do OD Winkler

24h para filtrao (4C), acidificar

Alcalinidade PEAD, PP ou garrafa mbar 24h (4C), s/ preservao TOTAL 100

24h (4C), filtrar, no mximo, no dia

N-NO2- PEAD, PP ou garrafa mbar 24h (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 30#

N-NH3 PEAD, PP ou garrafa mbar 48h (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 6#

N-NO3- PEAD, PP ou garrafa mbar 7 dias (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 50#

NT PEAD, PP ou garrafa mbar 10 dias (4C), s/ preservao TOTAL 15#

PO43- PEAD, PP ou garrafa mbar 24h (4C), s/ preservao DISSOLVIDA 30#

7 dias (4C), acidificar com 0,1ml

20 dias (temperatura ambiente), s/

C aptulo 4 Consideraes gerais sobre

coleta, preservao de amostras e medidas

O objetivo da amostragem coletar pequenas pores de um determinado

1. Assegure-se de que todos os equipamentos esto limpos e em boa

O tipo de frasco de coleta a ser usado de grande importncia,

Devido possibilidade de algum constituinte ser txico, deve-se ter muito

1. Use luvas apropriadas ao tipo de mtodo a ser desenvolvido;

Minimizao dos resduos

A minimizao dos resduos de laboratrio, alm de contribuir com o meio

1. Sempre que possvel, compre e utilize quantidades menores de

C aptulo 5 - Procedimentos para limpeza

e descontaminao de frascos, vidrarias e

A incluso deste captulo no manual de procedimentos laboratoriais,

1.1. Oxignio Dissolvido (OD) e Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO)

Toda a vidraria utilizada na determinao de OD e DBO deve seguir os

- Limpeza com escovo para vidraria e detergente Extran. Enxgue diversas