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UNIV RSIOAD UT O TROPOLITA A
U IOAD tZTAPAlAPA
INGENIERA QUMICA .,
PROYECTO TERMINAL
Diseo de una planta para la produccin de

Acetona, Butanol y Etanol a travs de una ruta
biolgica
Autores
Lisette Samarti Ros
Maribel Snchez Morales
Sandra Avalas Farfn
Asesores
Dr. Ricardo~odriguez Dra. Divanery Rodrguez Gmez
Mxico, D.F. a 14 de Julio del 2014.

Contenido
Resumen ejecutivo .................................................................................................. 5
Justificacin general............................................................................................. 6
Objetivo general ................................................................................................... 6
Captulo 1 ................................................................................................................ 7
1.1. Introduccin del captulo 1 ...................................................................... 8
1.2. Justificacin del captulo 1 ...................................................................... 9
1.3. Objetivos del captulo 1 ........................................................................... 9
1.3.1. Objetivo general................................................................................... 9
1.3.2. Objetivos especficos ........................................................................... 9
1.4. Oferta y demanda de productos............................................................ 10
1.4.1. Principales productores ..................................................................... 11
1.5. Proyecciones a futuro ........................................................................... 11
1.6. Proceso de produccin de Acetona, butanol y etanol ........................... 12
1.7. Aspectos de seguridad y ambientales .................................................. 13
1.7.1. Evaluacin toxicolgica ..................................................................... 13
1.7.2. Impacto ambiental ............................................................................. 14
1.7.3. Legislacin ambiental vigente y normas ............................................ 14
1.8. Ubicacin geogrfica de la planta ......................................................... 16
1.8.1. Caractersticas de la Ubicacin de la Planta ..................................... 17
1.9. Conclusin del captulo 1 ...................................................................... 17
Captulo 2 Desarrollo experimental ....................................................................... 19
2.1. Introduccin captulo 2 ................................................................................ 20
2.1.1. Pretratamiento ..................................................................................... 21
2.1.2. Tcnica de DNS o mtodo de Miller ..................................................... 23
2.1.3. Hidrlisis enzimtica ............................................................................. 23
2.1.4. Fermentacin de acetona, butanol y etanol ......................................... 24
2.2. Objetivos de la etapa experimental ............................................................. 27
2.2.1. Objetivo general .................................................................................... 27
2.2.2. Objetivos especficos ............................................................................ 27
2.3. Metodologa y resultados ............................................................................ 27
2.3.1. Sustrato ................................................................................................ 27
2.3.2 Pretratamiento del bagazo de caa ....................................................... 29
2.3.4. Toxicidad .............................................................................................. 34
1
2.3.6. Fermentacin ABE (acetona, butanol y etanol) .................................... 36
2.5. Resumen de resultados .............................................................................. 42
2.6. Conclusiones............................................................................................... 43
Captulo 3 Sntesis y diseo a escala industrial ................................................... 45
3.1. Introduccin captulo 3 ................................................................................ 46
3.2. Objetivos del captulo 3 ............................................................................... 46
3.2.1 Objetivo general ..................................................................................... 46
3.2.2 Objetivos particulares ............................................................................ 46
3.3. Balance de materia ..................................................................................... 47
3.4. Simulacin del proceso ............................................................................... 48
3.4.1. Pretratamiento ...................................................................................... 49
3.4.2. Neutralizacin ....................................................................................... 49
3.4.3. Inculo .................................................................................................. 50
3.4.5. Fermentacin ABE ................................................................................ 50
3.4.6. Proceso de separacin y purificacin ................................................... 51
3.5. Anlisis e integracin energtica en el proceso .......................................... 54
3.6. Descripcin de los equipos ......................................................................... 58
3.6.1 Equipos mayores ................................................................................... 58
3.6.2. Equipos menores .................................................................................. 64
3.7. Anlisis econmico ..................................................................................... 64
3.7.1. Costo de equipo .................................................................................... 64
3.7.2. Capital de inversin .............................................................................. 65
3.7.3. Costo de mano de obra ........................................................................ 66
3.7.4. Costos de operacin ............................................................................. 66
3.8 Rentabilidad ................................................................................................. 67
3.9. Anlisis ambiental ....................................................................................... 68
3.10. Diseo de la planta a nivel escala ............................................................. 68
3.10. Conclusiones del captulo 3 ...................................................................... 69
Anexo A ................................................................................................................. 71
Propiedades fsicas y qumicas de productos .................................................... 71
Anexo B ................................................................................................................. 73
Humedad del bagazo de caa. .......................................................................... 73
Anexo C ................................................................................................................ 75
2
Determinacin porcentual de celulosa, hemicelulosa y lignina. ......................... 75
Anexo D ................................................................................................................ 77
Preparacin de soluciones ................................................................................. 77
Anexo E ................................................................................................................. 81
Volmenes de muestra lquida, volumen de NaOH y pH ................................... 81
Anexo F ................................................................................................................. 84
Curvas de glucosa ............................................................................................. 84
Anexo G ................................................................................................................ 88
Concentracin de glucosa en g/L obtenida despus del pretratamiento ........... 88
Anexo H .............................................................................................................. 101
Estimacin de la concentracin de biomasa .................................................... 101
Anexo I ................................................................................................................ 108
Cuantificacin de pH para las fermentaciones 1 y 2 ........................................ 108
Anexo J ............................................................................................................... 112
Cuantificacin de absorbancia en fermentacin 1 y 2. ..................................... 112
Anexo K ............................................................................................................... 116
Estimacin de los parmetros cinticos de la fermentacin ABE .................... 116
Anexo L ............................................................................................................... 117
Estimacin de la velocidad especfica de crecimiento () ................................ 117
Anexo M .............................................................................................................. 119
Cuantificacin de productos (acetona, butanol y etanol) obtenidos durante la
fermentacin 1 y 2............................................................................................ 119
Anexo N .............................................................................................................. 129
Equipos utilizados en la parte experimental ..................................................... 129
Espectrofotmetro ........................................................................................ 129
Autoclave ...................................................................................................... 129
Anexo O .............................................................................................................. 130
Anlisis energtico ........................................................................................... 130
Anexo P ............................................................................................................... 133
Determinacin de la cintica para los tres reactores principales del proceso .. 133
Reactor de pretratamiento. .............................................................................. 133
Hidrlisis enzimtica ........................................................................................ 134
Fermentacin ................................................................................................... 135
Anexo Q .............................................................................................................. 137
Dimensiones de los equipos ............................................................................ 137
3
Tanques ........................................................................................................ 137
Columnas...................................................................................................... 139
Referencias ......................................................................................................... 140
4
Resumen ejecutivo
El consumo de energa se ha incrementado en el ltimo siglo, ocasionado
especialmente por el crecimiento de la poblacin y la industrializacin de muchas
ciudades. Adems, el abuso del petrleo como energtico principal ha ocasionado
el aumento en el precio de sus derivados y las crecientes consecuencias sobre el
calentamiento global y los cambios ecolgicos (Martnez y Morales, 2009). Por lo
que desde hace algunos aos, distintas naciones han incursionado en la
bsqueda de fuentes alternas de energa. Por las mismas razones, es necesario
que Mxico acelere el desarrollo de nuevas tecnologas para la produccin de
biocombustibles de segunda generacin tales como bioetanol, biobutanol,
biometanol, etc., a partir de biomasa, la cual es obtenida a partir de residuos
agroindustriales, como el bagazo de caa, rastrojo de maz, etc.
El bagazo de caa de azcar es un residuo de la produccin azucarera que se

genera de la molienda de la caa de azcar en los ingenios azucareros. Este
residuo generalmente se quema para producir una cierta cantidad de energa. En
el presente informe se propone una alternativa para obtener acetona, butanol y
etanol, partir del bagazo de caa de azcar mediante la fermentacin, utilizando
como microorganismo el Clostridium acetobutylicum.
El butanol al igual que el etanol puede ser adicionado a la gasolina como elemento
oxigenante, adems que se puede reducir las emisiones de CO2 al medio
ambiente, en comparacin con los combustibles fsiles. La acetona puede ser
vendida para la industria qumica y cosmetolgica.
5
Justificacin general
En Mxico, slo el 9.5% de la oferta total de energa es renovable (SENER, 2013).
Adems, dicha energa renovable es fundamentalmente hidrulica, solar y elica.
Hasta el momento no hay produccin comercial de biocombustibles a partir de
cultivos agrcolas o forestales (Villalpando y Octavio, 2008).
Recientemente se ha prestado atencin a la produccin de los biocombustibles

debido a la reduccin de las reservas de petrleo, el aumento en el precio de los
combustibles fsiles y el efecto ambiental negativo que causan debido a las
emisiones de gases de efecto invernadero (GEI). Ante esta situacin, resulta
inevitable la bsqueda de alternativas para la produccin de biocombustibles
(bioetanol, biobutanol, biometanol, etc.) utilizando los residuos agroindustriales
generados en Mxico.
Objetivo general
Disear una planta para la produccin de acetona, butanol y etanol a travs de
una ruta biolgica utilizando Clostridium acetobutylicum. Con capacidad de 2,011
ton/ao de acetona, butanol y etanol.
6
Captulo 1
7
1.1. Introduccin del captulo 1
Actualmente, el 16.6% del consumo mundial de energa primaria proviene de
fuentes renovables como la energa elica, geotrmica, hidrulica, mareomotriz,
solar y la biomasa. Del total del consumo de energa renovable, slo el 10%
corresponde a la producida a partir de residuos agroindustriales. Para el 2040 se
espera que dicho consumo sea del 24.6% (3,271 millones de toneladas
equivalentes de crudo) (Drre, 2007).
A nivel Federal, Mxico ha presentado diversas leyes y propuestas con el fin de

contribuir al desarrollo sostenible, por ejemplo, las propuestas en el Plan Nacional
de Desarrollo (PND) 2013-2018 (Plan Nacional de Desarrollo 2013-,2018) y
recientemente el 6 de Junio de 2012, el gobierno de Mxico public la Ley General
de Cambio Climtico en el Diario Oficial de la Federacin (Ley General de Cambio
Climtico, 2012), donde se establecieron diversas tareas respecto al
direccionamiento a nivel federal, las entidades federativas y los municipios en
materia de mitigacin y adaptacin al cambio climtico.
Los biocombustibles generados a partir de biomasa, son empleados como

combustible para el transporte, siendo los componentes de mayor atencin en
este rubro, el bioetanol y el biodiesel en cuanto a su desarrollo e investigacin. Se
prev un crecimiento del sector para 2015 y 2020 de 18 y 30 millones de TEP
(toneladas equivalentes de petrleo), respectivamente. Los principales pases
productores y consumidores son Alemania, Francia, Espaa, Italia, Reino Unido,
Polonia, Dinamarca, Estados Unidos, etc. (IIE, 2015).
En Mxico la produccin de energa a partir de biomasa cubre apenas el 2.5 % del

consumo nacional (IIE, 2015) y ha sido tradicionalmente aportada por la lea y el
bagazo de caa, existiendo otras fuentes importantes todava sin aprovechar,
como los residuos forestales, aguas residuales, basura urbana y residuos
agropecuarios. Una de las alternativas energticas a partir de biomasa residual
(como los residuos agroindustriales) es la produccin de biocombustibles de
segunda generacin, tales como el bioetanol, biobutanol, biodiesel, biometanol,
etc.
Entre la diversa gama de biocombustibles, el biobutanol puede ser utilizado como
aditivo de los combustibles lquidos (gasolina) debido a sus diversas ventajas
como son: la alta capacidad de mezclado, mayor contenido energtico en
comparacin con el bioetanol (Drre, 2007), etc. La tecnologa y aplicacin de la
fermentacin ABE para la produccin de biobutanol como el combustible del futuro
presenta en la actualidad gran desarrollo y es objeto de investigacin alrededor del
mundo por empresas como DuPont y British Petroleum (Jaramillo y Cardona,
2011). A nivel mundial la produccin de acetona, butanol y etanol (ABE) a travs
de la fermentacin de azcares (obtenidos de residuos agroindustriales como
rastrojo de maz, caa de azcar, etc.) es un proceso que se ha estudiado a
escala de laboratorio, pero su anlisis a escala industrial an no ha sido
completamente investigado.
8
En Mxico no existe una planta de produccin de ABE, por lo que deben ser
adquiridos y transportados desde el extranjero, resultando contraproducente con
su objetivo de pretender disminuir las emisiones de CO2, generados por
combustibles fsiles. Por lo tanto, es necesario que Mxico incremente el
desarrollo de nuevas tecnologas para la produccin de biocombustibles de
segunda generacin, utilizando residuos agroindustriales generados en el pas,
por ejemplo los residuos de caa de azcar.
1.2. Justificacin del captulo 1

El biobutanol es un biocombustible que ofrece grandes ventajas en virtud de sus
caractersticas fsico-qumicas, materias primas de origen, costos de produccin
relacionados y efectos ambientales, entre muchas otras. En el mundo se lleva a
cabo gran cantidad de estudios para desarrollar la produccin a gran escala de
biobutanol a partir de biomasa lignocelulsica (Domnguez et al., 2011).
El bagazo se obtiene como subproducto o residuo de la molienda de la caa de

azcar en las centrales azucareras, representa aproximadamente entre el 25 y 40
% del total de la materia prima procesada, dependiendo del contenido de fibra de
caa y la eficiencia en la extraccin del jugo (Pernalete et al., 2008).
Dada la importancia de la produccin de biocombustibles de segunda generacin

(butanol y etanol), es decir, utilizando fuentes que no compitan con los
requerimientos de alimentacin de la poblacin como el maz, semillas
oleaginosas, entre otros; es importante evaluar la factibilidad de la demanda,
situacin actual y proyecciones a futuro para la produccin de acetona, butanol y
etanol utilizando residuos agroindustriales.
1.3. Objetivos del captulo 1

1.3.1. Objetivo general
Realizar un anlisis econmico, ambiental y social de las principales etapas
implementadas en la produccin de acetona, butanol y etanol por va
biotecnolgica.
1.3.2. Objetivos especficos

Evaluar la rentabilidad y la economa del proceso de produccin de
acetona, butanol y etanol a partir de los residuos de la industria azucarera.
Determinar la ubicacin de la planta, considerando aspectos ambientales,

sociales y econmicos.
9
Evaluar la oferta y la demanda, as como los posibles productores del
proceso de produccin de acetona, butanol y etanol, para estimar las
proyecciones a futuro del proceso.
Determinar las etapas ms relevantes del proceso de produccin de

acetona, butanol y etanol;
Evaluar los aspectos ambientales y de seguridad del proceso.
1.4. Oferta y demanda de productos

La tecnologa y los productos ABE se utilizan en una gran variedad de mercados,
incluyendo recubrimientos, adhesivos, tintas, polmeros, plsticos y como aditivo
en gasolinas. Como mezcla de combustibles, el biobutanol representa una
oportunidad de mercado de aproximadamente 80 mil millones de dlares
equivalentes a 159 teralitros por ao (Butanol, 2013).
En 2010, el mercado mundial de biobutanol fue de 2.8 millones de toneladas, con

un valor estimado aproximadamente de 5 mil millones de dlares. Se espera que
el crecimiento medio sea en 3.2% anual, donde la demanda se concentra en
Amrica del Norte (28%), Europa Occidental (23%) y el Norte de Asia Oriental
(35%) (Green, 2011).
Por otra parte, la acetona es uno de los disolventes generales que ms empleo
tienen en la tcnica industrial y profesional, debido a sus excelentes propiedades
disolventes. Es un eficaz quitamanchas y es muy utilizado para quitar el esmalte
de las uas. La aplicacin ms importante de la acetona se encuentra en la
fabricacin de Metil metacrilato (MMA), mercado que experimenta una demanda
creciente (3% anual) desde el 2002 por el incremento en los usos del
Polimetilmetacrilato (PMMA), un material antifragmentacin alternativo al vidrio en
la industria de la construccin.
La demanda de bisfenol-A y de resinas de policarbonato se ha duplicado en la
dcada de los 1990, convirtindose en la segunda aplicacin importante de la
acetona (7% incremento anual), demandada por la industria del automvil y de
microelectrnica (fabricacin de discos CD y DVD) (Acetone, 2014).
Por ltimo, el uso del etanol en los aos recientes como combustible alterno al
proveniente del petrleo ha ido en constante aumento a nivel global, debido a la
necesidad de reducir la dependencia de combustibles derivados del petrleo ante
sus altos y crecientes precios y a su vez, cumplir con el Protocolo de Kyoto1.
Durante el periodo 2004 - 2009, la produccin mundial de etanol registr un
crecimiento promedio anual de 17.3%. Segn estimaciones de The Global
Renewable Fuels Alliance (GRFA), la produccin mundial en el 2010 habra
alcanzado un crecimiento de 16.2% respecto al 2009, explicado principalmente por
la recuperacin de la demanda de combustibles, en EE.UU. y en los pases de la
10
Unin Europea (Etanol, 2014).
1.4.1. Principales productores

Actualmente a nivel mundial slo el 67% de las empresas productoras de energas
renovables se dedica a la produccin de biocombustibles. Estados Unidos
encabeza la lista de los pases con mayor produccin de biocombustibles. En
segundo lugar se encuentra China, con aproximadamente el 3 % de las empresas
mundiales, justo por delante de Alemania, Francia y Brasil (Green, 2011).
En la Tabla 1 se muestran algunos de los principales productores de acetona,

butanol y etanol en el mundo que utilizan biomasa como materia prima.
Actualmente en Mxico no existen plantas que produzcan acetona, butanol y
etanol por lo que es una inversin segura y con potencial positivo.
Tabla 1. Principales productores de acetona, butanol y etanol en el mundo

(Butanol, 2013)
Industria Lugar de origen Materia prima utilizada
Butamax adbaced Biofuels LL. Estados Unidos Maz y caa de azcar.
Gevo Estados Unidos Maz, caa de azcar y remolacha
Cobalt techologies Biomasa de pulpa de madera y
Estados Unidos
remolacha azucarera
Sorvert Fermentacin de residuos en
Reino Unido descomposicin y residuos de uso
domstico.
Butyl fuel LL C Pulpa de madera y otros productos
Reino Unido
derivados de la madera.
Green-biologics Estados Unidos Maz y caa de azcar.
Cathay Industrial Biotech. China Maz y caa de azcar.
1.5. Proyecciones a futuro

Las estimaciones realizadas por las multinacionales para el biobutanol en 2010
indicaban que este combustible era ms caro que los combustibles
convencionales, mientras se posicionaba en el mercado, se desarrollaba la
tecnologa y se instalaban las plantas de produccin masiva llegando a costos de
produccin competitivos. Se estim un costo de produccin de alrededor 3 - 4
USD/kg (Jaramillo y Cardona, 2011).
La demanda mundial de n-butanol se estim en 3 millones de toneladas en 2011 y

se estim que llegara a 4 millones de toneladas en 2020. La Figura 1 muestra el
incremento en el precio de venta del biobutanol hasta el ao 2020, donde a la
disminucin del petrleo y las nuevas legislaciones impulsan a la produccin de
butanol a travs del proceso ABE (Nejame, 2010).
11
Figura 1. Proyeccin de la venta y produccin en el mercado de biobutanol (Nejame 2010).
El mercado se expandir significativamente, ya que el biobutanol se convierte en

una puerta de entrada a otros derivados qumicos. El biobutanol tiene varias
caractersticas que lo convierten en un biocombustible atractivo. Algunas de las
caractersticas son (Butamax, 2013):
Tiene una baja presin de vapor lo que significa que puede ser fcilmente
aadido a la gasolina convencional.
Se puede utilizar en concentraciones ms altas en comparacin con el

etanol, sin necesidad de utilizar vehculos especialmente adaptados.
En Estados Unidos, por ejemplo, permiten que el biobutanol sea mezclado

al 16 % en volumen frente al 10 % en volumen de etanol, sin correr el
riesgo de comprometer el rendimiento, durabilidad y economa del
combustible.
Mezclas de biobutanol/gasolina son menos susceptibles a la separacin en

la presencia de agua que las mezclas de etanol/gasolina.
El Biobutanol se ajusta a la infraestructura existente del combustible.

Adems el biobutanol tiene el potencial para sustituir tanto al etanol como al
biodiesel. Los biocombustibles tendrn aproximadamente un valor en el
mercado de 247,000 millones de dlares para el ao 2020 (Green, 2011).
1.6. Proceso de produccin de Acetona, butanol y etanol

La fermentacin ABE (acetona, butanol y etanol) es un proceso biolgico
anaerobio a partir de azucares, principalmente de la glucosa. El esquema general
del proceso de produccin ABE se ilustra en la Figura 2, inicia con un pre-
12
tratamiento de la biomasa, seguido de la hidrlisis enzimtica para la liberacin de
glucosa a partir de la celulosa, la cual es utilizada para la produccin simultanea
de ABE a travs de un proceso de fermentacin.
Figura 2. Diagrama de bloques del proceso de produccin de acetona, butanol y etanol (Morales, 2014))
1.7. Aspectos de seguridad y ambientales
1.7.1. Evaluacin toxicolgica

Durante el desarrollo de cualquier proyecto es importante hacer una evaluacin
toxicolgica tanto de las materias primas como de los productos y subproductos
que se tienen en el proceso. La importancia de esto radica en que basados en
sta informacin se har la seleccin de los materiales, los dispositivos de
seguridad, las normas ambientales a considerar, adems de otras restricciones
que se especifican con esta evaluacin, tales como; el lugar de ubicacin de la
planta y la seguridad de la misma.
La Tabla 2 muestra algunos aspectos toxicolgicos de las sustancias utilizadas en

el proceso de produccin de acetona, butanol y etanol.
13
Tabla 2. Toxicologa de los compuestos involucrados en el proceso.
(Ballesteros et al., 2006).
Compuesto Aspectos toxicolgicos

Hidrgeno El principal peligro para la salud est asociado con el escape de este gas y la
asfixia producida por el desplazamiento de oxgeno en personas expuestas a
altas concentraciones.
Bixido de carbono La inhalacin de grandes cantidades causa una rpida insuficiencia respiratoria
conduciendo al coma y la muerte. El dixido de carbono no se encuentra
registrado como carcinognico o potencial carcinognico.
Butanol La exposicin a los vapores (50 ppm), puede causar irritacin en la nariz, ojos,
garganta y membranas mucosas. La exposicin excesiva adicional puede
agregar dolor de cabeza, efectos narcticos suaves y depresin del sistema
nervioso central. Se absorbe a travs de la piel.
Etanol Altas concentraciones del vapor pueden causar somnolencia, tos, irritacin de
los ojos y el tracto respiratorio, dolor de cabeza y sntomas similares a los
causados por la ingestin. Afecta el sistema nervioso central.
Acetona En altas concentraciones produce la muerte. Es irritante. Nocivo por
inhalacin. Al ser ingerido puede causar daos a los riones, cambios
metablicos y coma.
cido sulfrico Puede ser fatal si se inhala, causa daos en riones y pulmones. Causa efectos
fetales. Es corrosivo. La exposicin crnica produce cncer.
Bagazo de caa No es txico por el uso que se le da, ya que generalmente estos residuos son
quemados.
Residuos de biomasa Los residuos puedes desecharse, sin ningn problema ya que son materia
orgnica.
1.7.2. Impacto ambiental

Uno de los retos de la ingeniera qumica a futuro es desarrollar procesos menos o
nada agresivos al medio ambiente. En el diseo de la planta se debe considerar el
impacto ambiental de las sustancias que se utilizan en dicho proceso (produccin
de ABE utilizando Clostridium acetobutylicum).
1.7.3. Legislacin ambiental vigente y normas

La Ley General del Equilibrio Ecolgico y la Proteccin al Ambiente y de La Ley
General para la Prevencin y Gestin Integral de los Residuos son de orden
pblico e inters social (Ley general del equilibrio ecolgico, 2013).
El marco legal que regula las actividades concernientes a la produccin de

biocombustibles se ha ido desarrollando a partir del inters de tomar a estos
productos como una alternativa energtica sustentable adems de ser factibles
tcnica y econmicamente.
En Mxico se cuenta desde 2008 con la Ley de Promocin y Desarrollo de los

Bioenergticos (LPDB, 2008). En los cuales se tiene la finalidad de coadyuvar a la
diversificacin energtica y el desarrollo sustentable, promoviendo la produccin
de insumos para bioenergticos a partir de las actividades agropecuarias,
14
forestales, algas, procesos biotecnolgicos y enzimticos que no compitan con la
soberana alimentaria del pas, reactivando el sector rural de las comunidades
menos favorecidas, ayudando as a la disminucin de emisiones de gases de
efecto invernadero al ambiente (LPDB, 2008).
En cuanto a la normatividad, cabe sealar que las normas son especificaciones

que reglamentan procesos y productos para garantizar la sustentabilidad. La
produccin de ABE involucra varios aspectos (proceso, emisiones, transporte del
biocombustible, seguridad industrial). En la Tabla 3 se enlista las normas
ambientales a considerar en cada etapa.
Tabla 3. Normas ambientales y de seguridad (SEMARNAT, 2013)

rea de Norma Especificacin
aplicacin
Proceso NOM-065-SSA1-1993 Medidas sanitarias de los medios de cultivo.
Clasificacin e identificacin de residuos

NOM-052-SEMARNAT-2005
peligrosos.
Clasificacin y manejo de residuos
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 biolgico-infecciosos.
Emisiones Niveles mximos permisibles de emisiones a
NOM-043-SEMARNAT-1993 la atmosfera de partculas slidas
provenientes de fuentes fijas.
Transporte Documento de embarque de substancias,
NOM-043-SCT/2003 materiales y residuos peligrosos.
Revisin ocular diaria de la unidad destinada
NOM-006-SCT2/2000 al autotransporte de materiales y residuos
peligrosos.
Especificaciones y caractersticas relativas al
diseo y pruebas de cisternas porttiles
NOM-032-SCT2/2009
destinadas al transporte de las substancias y
residuos peligrosos.
Seguridad Manejo y almacenamiento de materiales.
NOM-006-STPS-2000
industrial Condiciones y procedimientos de seguridad.
NOM-001-STPS-2008 Condiciones de seguridad. Centros de trabajo
Sistemas de proteccin y dispositivos de
NOM-004-STPS-1999 seguridad del equipo que se utiliza en los
centros de trabajo.
Prevencin y proteccin contra incendios en
NOM-002-STPS-2000
los centros de trabajo.
Efluentes Lmites mximos permisibles de
NOM-001-SEMARNAT-1996 contaminantes en las descargas de aguas
residuales y bienes nacionales.
Contaminantes en las descargas de aguas
NOM-001-SEMARNAT-1996 residuales a los sistemas de alcantarillado
urbano o municipal.
15
1.8. Ubicacin geogrfica de la planta
Para determinar la ubicacin de la planta se realiza un estudio evaluando distintos
puntos, entre ellos tener la posibilidad de desarrollar el proyecto lo ms cercano
posible del ingenio azucarero ya que es el principal proveedor de materia prima y
de esta manera evitar costos de traslado. Los ingenios que pueden proporcionar la
materia prima para el proceso se mencionan a continuacin: (INEGI, 2013 y
Caeros, 2013)
Ingenio San Cristbal

Ingeni Tres Valles
Ingenio La Gloria
Ingenio El potrero
Los factores que se consideran para realizar un anlisis por puntos son los
siguientes:
Disponibilidad de materia prima

Principales consumidores
Transporte
Servicios
Mano de obra
Ambiental y social
Caractersticas geogrficas del lugar
Se asigna una ponderacin a cada factor (ver Tabla 4), dependiendo de su

importancia en el proceso; seguido por la asignacin de puntos a cada uno de los
ingenios azucareros identificados (ver Tabla 5).
Tabla 4. Ponderacin de los factores considerados para la ubicacin de la

planta
Factor Porcentaje
Disponibilidad de materia prima 30
Principales consumidores 30
Transporte 10
Servicios 10
Mano de obra 10
Ambiental y social 5
Caractersticas geogrficas del lugar 5
Total 100
16
Tabla 5. Anlisis por puntos para la seleccin del ingenio
Factor Ingenio Ingenio
Ingenio Ingenio
San Tres
La gloria El potrero
Cristbal Valles
Disponibilidad de materia prima 30 28.5 20.5 18.7
Principales consumidores 30 21 13 11
Transporte 10 10 10 10
Servicios 10 10 10 5
Mano de obra 7 10 6 9
Ambiental y social 5 5 5 5
Caractersticas geogrficas del
5 5 2.5 4
lugar
Total 97 89.5 67 62.7
El ingenio con mayor puntuacin fue San Cristbal el cual se ubica en: Nicols
Bravo #5, Carlos A. Carrillo, Veracruz, CP 95330.
1.8.1. Caractersticas de la Ubicacin de la Planta
Municipio Carlos A. Carrillo
El municipio de Carlos A. Carrillo es uno de los 212 municipios del estado de

Veracruz, se encuentra ubicado en la zona costera central de la Entidad, en la
regin llamada Sotavento o, tambin, Cuenca del Papaloapan y colinda con los
siguientes municipios:
Norte: Amatitln e Ixmatlahuacan

Sur: Jos Azueta y Chacaltianguis
Este: Amatitln
Oeste: Cosamaloapan
Carlos A. Carrillo tiene un clima principalmente tropical con lluvias casi todo el ao
y gran parte del tiempo se mantiene a una temperatura de 25 C a 27 C
(SEFIPLAN, 2013). Es un municipio categorizado como semiurbano.
1.9. Conclusin del captulo 1

La implementacin de tecnologa para obtener productos como acetona, butanol y
etanol, a partir de desechos de la industria azucarera, es una alternativa factible
para la obtencin de energa limpia y renovable.
El biobutanol es un compuesto prometedor para la generacin de nuevos

biocombustibles al igual que el bioetanol. Su produccin se centra en un proceso
de fermentacin a partir de residuos agrcolas con un alto contenido de celulosa.
Estos compuestos se utilizan como aditivos en gasolinas, para disminuir las
emisiones de CO2. La acetona es un producto empleado en la industria debido a
17
que posee propiedades para la obtencin de nuevos productos (metil isobutil
cetona, polimetilmetacrilato, entre otros).
En Mxico no existe una planta productora de acetona, butanol y etanol, por lo que
es necesario implementar esta nueva tecnologa, para que as se dependa menos
del petrleo y se mantengan o mejoren las condiciones del medio ambiente.
A travs de una evaluacin por puntos se determin que la ubicacin de la planta

de produccin de ABE sera en el municipio del estado de Veracruz llamado
Carlos A. Carrillo, el cual cuenta con un ingenio azucarero: San Cristbal con la
capacidad de proveer la materia prima necesaria para llevar a cabo el proceso.
El proceso no genera compuestos txicos, es decir, cumple con las normas

ambientales establecidas.
18
Captulo 2
Desarrollo
experimental
19
2.1. Introduccin captulo 2
Los biocombustibles pueden ser producidos a partir de residuos agroindustriales
como bagazo de caa, rastrojo de maz, paja de trigo, etc. En general, las
caractersticas de los residuos agroindustriales dependen de la materia prima y del
proceso que los genera, no obstante, comparten una caracterstica principal que
es el contenido de materia orgnica, constituida por diferentes porcentajes de
celulosa, lignina, hemicelulosa y pectina (Saval, 2012). Para producir acetona,
butanol y etanol se propone el uso de los residuos de la industria azucarera,
especficamente, el bagazo de caa de azcar; el butanol producido se adicionar
como aditivo a la gasolina en una proporcin del 5 al 10% volumen.
El bagazo es un material lignocelulsico rico en fibra y compuesta de polmeros

carbonatados; est constituido por cuatro fracciones: fibra o bagazo (45 %),
slidos no solubles (2-3 %), slidos solubles (2-3 %) y agua (49 -51 %) (Triana,
1990). La composicin del bagazo residual de caa de azcar est formado
principalmente por celulosa (38-50 %), hemicelulosa (17-32 %) y lignina (15-30 %).
La celulosa y la hemicelulosa, las cuales comprenden generalmente dos terceras
partes de la biomasa seca son polisacridos que pueden ser hidrolizados en
azucares y eventualmente fermentados en el proceso de ABE. La lignina no
interviene en el proceso pero puede ser utilizada como alimento para ganado o
puede ser quemada para generar energa.
El bagazo de caa que se obtiene como subproducto o residuo de la molienda de

la caa de azcar en las centrales azucareras, representa aproximadamente entre
el 25 y 40% del total de la materia prima procesada, dependiendo del contenido de
fibra de caa y la eficiencia en la extraccin del jugo (Pernalete et al., 2008). En
Mxico, ste es uno de los residuos agrcolas ms abundantes en las centrales
azucareras y generalmente este desecho se quema para producir una cierta
cantidad de energa para produccin de vapor utilizada en el proceso de
produccin de azcar (Sica, 2006).
La celulosa (38-50% de la biomasa seca), es un polmero lineal de celobiosa

(dmero glucosa - glucosa), cuyos monmeros estn unidos por enlaces
glucosdicos -1,4 para formar materiales altamente cristalinos que resisten la
hidrlisis enzimtica. La orientacin de los enlaces y uniones adicionales de
hidrgeno hacen al polmero rgido y difcil de romper. En la hidrlisis el
polisacrido, este es quebrado a molculas de azcar libres mediante la adicin
de agua, este procedimiento es llamado sacarificacin (Zhang, 2004).
La hemicelulosa (17-32% de la biomasa seca) sirve de unin entre la lignina y la

celulosa, consiste de cadenas cortas altamente ramificadas de varios azcares:
principalmente xilosa y arabinosa (monmeros de cinco carbones), galactosa,
glucosa y manosa (monmeros de seis carbones). sta tambin contiene
pequeas cantidades de molculas que no son azcares tales como grupos acetil.
20
Debido a sus ramificaciones y naturaleza amorfa, la hemicelulosa es relativamente
fcil de hidrolizar (Celis, 2007).
La lignina (13-30% de biomasa seca), es un polmero tridimensional de

fenilpropileno al igual que la celulosa y hemicelulosa, est altamente entrecruzado,
tiene un alto peso molecular y es amorfo, est presente en toda la biomasa
lignocelulsica. Es una sustancia polifenlica (no carbohidrato), que se incrusta en
las paredes de las clulas mantenindolas juntas. Por lo tanto, cualquier proceso
de produccin de biocombustible tendr lignina como residuo, la cual es
degradada por pocos organismos a productos de alto valor como cidos orgnicos
y fenoles. (Celis, 2007).
El proceso de produccin de acetona, butanol y etanol, se divide en tres etapas,

las cuales son: pretratamiento, hidrlisis enzimtica y fermentacin ABE.
2.1.1. Pretratamiento
Los tratamientos buscan aumentar el rea superficial de esta, y por consiguiente
eliminar o disminuir la presencia de sustancias que interfieren en la hidrlisis (Sun
y Cheng, 2002). El pretratamiento ha sido visto como una de las etapas ms caras
del proceso de conversin de biomasa (Lynd, 1996; Lee et al, 2008).
Se requiere realizar un pretratamiento para alterar la estructura de la biomasa

(romper la capa lignocelulsica) (ver Figura 3) con el fin de facilitar la accin del
complejo enzimtico y fraccionar la estructura de la celulosa (Mendoza y Lpez,
2012).
Figura 3. Representacin esquemtica del efecto del

pretratamiento. (Cortinez, 2010)
21
2.1.1.1. Tipos de pretratamientos
Los mtodos de pretratamiento se refieren a la solubilizacin y separacin de uno
o ms de los cuatro componentes de la biomasa (hemicelulosa, celulosa, lignina y
extractivos) para hacer la biomasa slida restante ms accesible a un posterior
tratamiento qumico o biolgico (Demirbas, 2005). El pretratamiento qumico ha
recibido mayor atencin a diferencia del pretratamiento fsico que resulta
relativamente ineficiente (Rabelo et al, 2008). En la Tabla 6 se muestran algunos
de los tipos de pretratamientos qumicos reportados en la literatura.
Tabla 6. Mtodos de pretratamiento de bagazo de caa de azcar
Pretratamiento Condiciones Caractersticas Referencias

Alcalino Temperatura El pretratamiento Torres y Molina
(hidrxido de 121 C y pH de alcalino con hidrxido (2012)
sodio) entre 8.5 y 11 de sodio se basa en la
saponificacin de los Sun y Cheng
enlaces del ester en la (2002)
hemicelulosa, esto
aumenta el rea Martnez y Gragera
superficial y disminuye (2008)
el grado de
polimerizacin debido
a la remocin de los
enlaces entre la lignina
y los carbohidratos.
cido (cido Temperatura de El pretratamiento Sun y Cheng
sulfrico) entre 100 a 160 qumico con cido (2002)
C, pH de 2 y sulfrico diluido ha
una sido reportado por sus
concentracin altas tasas de reaccin
del 2% en peso y por su efectiva
de cido hidrlisis de la
sulfrico. celulosa. A una
temperatura moderada
la sacarificacin tiene
bajos rendimientos. A
altas temperaturas el
tratamiento con cido
diluido favorece la
hidrlisis de la celulosa
y se hidroliza cerca del
80% de la
hemicelulosa.
22
Entre los diversos mtodos de pretratamiento de los materiales lignocelulsicos
para la obtencin de azcares, destaca la hidrlisis cida, la cual consiste en el
empleo de catalizadores cidos para transformar las cadenas de polisacridos que
forman la biomasa en sus monmeros elementales (azcares fermentables o
reductores). El grado de degradacin del bagazo depende de la concentracin del
cido, la temperatura y el tiempo de hidrlisis. A medida que acta el cido, el
peso molecular y la viscosidad de los productos decrecen y el poder reductor
aumenta (Ferrer et al., 2002).
2.1.2. Tcnica de DNS o mtodo de Miller

Hay diferentes mtodos de determinacin de azcares reductores (Miller, Fehling,
Benedict, Nelson-Somogyi, etc.). En todos ellos, el azcar reductor es oxidado por
el catin cprico (Cu+2) en medio alcalino, con formacin de xido cuproso
insoluble, lo que da la tpica coloracin rojizo-amarillenta. Los iones Cu+2 se
pueden mantener en disolucin, formando complejos coloreados con tartratos y
citratos, lo que permite la determinacin de azcares reductores. Estos mtodos
se emplean comnmente por su sensibilidad, alta especificidad y rpida ejecucin.
Segn el mtodo Miller (Miller, 1959), los azcares reductores pueden reducir al
cido 3,5-dinitrosaliclico (DNS) bajo determinadas condiciones. Cuando el cido
3,5-dinitrosaliclico es reducido en presencia de calor, por los azcares reductores
que entran en contacto con l, se desarrolla un cambio de color parecido al caf
(con variaciones de amarillo hasta caf). El cambio de coloracin puede entonces
determinarse por lecturas de densidad ptica, ledas por espectrofotometra a una
determinada longitud de onda.
La concentracin de azcares reductores se determina mediante el uso de la

grfica de absorbancia en funcin de la concentracin, donde se realiza una
interpolacin para conocer la concentracin de azucares presente en la muestra
(detalles en el Anexo F y G), (Xiao et. al, 2004).
2.1.3. Hidrlisis enzimtica

La hidrlisis enzimtica de la celulosa es una reaccin de pasos mltiples que
toma lugar en un sistema heterogneo, en el cual la celulosa insoluble se
fracciona en la interfase slidolquido por la accin sinrgica de la -1-4
endoglucanasa, -1-4 glucan hidrolasas y las -1-4 glucosidasas como se muestra
en la Figura 4 (Selby et al., 1976; Kadam et al., 2004).
La hidrlisis de la celulosa es catalizada por un grupo de tres enzimas (Mosier, et

al., 1999):
Endo--1,4-glucanasa, que ataca los enlaces -1,4 en las regiones amorfas

internas de la macromolcula dando largos fragmentos solubles (oligosacridos).
23
Exo--1,4-glucanasa, tambin llamadas celobiohidrolasas, que separa el
disacrido celobiosa desde los extremos de la molcula.
-glucosidasa, o celobiasa, que hidroliza la celobiosa con formacin de glucosa.
Figura 4. Funcionamiento de las enzimas en el polisacrido (adaptado de Arantes y

Saddler, 2010)
2.1.4. Fermentacin de acetona, butanol y etanol
24
La fermentacin ABE es un proceso biolgico anaerobio a partir del cual los
azcares, principalmente glucosa, se convierten en productos por medio de
microorganismos como Clostridium acetobutylicum, C. beijerinckii y C.
pasteurianum, entre otros (Lee et al., 2008).
La ruta metablica del proceso fermentativo empleando Clostridium

acetobutylicum, se muestra en la Figura 5, consta de dos fases caractersticas: la
acidognesis (lnea continua gruesa) y la solventognesis (lnea punteada). En la
primera fase se forman los cidos orgnicos (butrico y actico), el dixido de
carbono e hidrogeno. Como consecuencia de esta fase se presenta una
disminucin en el pH, lo cual es importante para el crecimiento de los
microorganismos (Shinto et al., 2007).
Figura 5. Ruta de fermentacin ABE con Clostridium acetobutylicum (Desai, et al. 1999)
El pH aumenta durante la fase solventognica, en donde, los cidos (butrico y

actico) son reasimilados, dando lugar a la formacin de acetona, butanol y etanol.
25
Entre las variables que afectan la fermentacin ABE se encuentra el pH, la
temperatura, la concentracin del sustrato y la concentracin de productos. En la
Tabla 7, se resumen las condiciones favorables para la fermentacin ABE a parir
de Clostridium acetobutylicum (Lee et al., 2008).
Tabla 7. Propiedades que afectan la fermentacin ABE (Lee et al., 2008).
Variables Condiciones favorables Justificacin

Obtencin de una mayor
pH 5.0 concentracin de n-
butanol.
Temperatura favorable
Temperatura 37 C para del crecimiento
microorganismo.
Proceso en lotes, a
concentraciones
Concentracin de
60-80 g/L superiores se ha
sustrato (glucosa)
evidenciado inhibicin
por sustrato.
Concentraciones Procesos por lotes, por
Concentracin de
menores de 20 g/L encima se presenta
solventes
inhibicin celular
Concentraciones Procesos por lotes, por
menores a 14 g/L encima se presenta
Concentracin de (mximo valor inhibicin celular debido
butanol encontrado), se reporta a la toxicidad del butanol.
una concentracin (8 g/L
y 13 g/L)
El microorganismo es
Anaerobiosis Anaerobio
estrictamente anaerobio.
2.1.4.1. Microorganismo
La produccin biolgica de algunos alcoholes ocurre naturalmente en algunas
especies de microorganismos, como las bacterias Batyribacterium
methylotrophicum, Clostridium butyricum, etc. Sin embargo, el gnero ms
estudiado es el Clostridium, ya que son capaces de convertir diversas fuentes de
carbono, como la glucosa, galactosa, celobiosa y xilosa en combustibles y
qumicos como la acetona, el butanol y el etanol (ABE).
Como en la mayora de los microorganismos, el metabolismo del Clostridium se

detiene o disminuye cuando los solventes (butanol) alcanzan una concentracin
de 20 g/L. El microorganismo se inhibe y disminuye la produccin de ABE. (Lee et
al., 2008).
26
2.2. Objetivos de la etapa experimental
2.2.1. Objetivo general
Evaluar a nivel laboratorio las condiciones ptimas para la produccin de acetona,
butanol y etanol, a partir de bagazo de caa de azcar, utilizando Clostridium
acetobutylicum CDBB-797.
2.2.2. Objetivos especficos

Determinar las condiciones de temperatura y presin para obtener la mayor
cantidad de liberacin de glucosa en la etapa del pretratamiento.
Establecer si a las condiciones de operacin del pretratamiento, se liberan

sustancias txicas que inhiban el crecimiento del microorganismo.
Cuantificar la cantidad de enzima necesaria en la hidrlisis enzimtica, para

obtener la mayor liberacin de azucares empleados en la produccin de
acetona, butanol y etanol.
Determinar las condiciones ideales en la etapa de fermentacin para

obtener una mayor produccin acetona, butanol y etanol.
2.3. Metodologa y resultados

2.3.1. Sustrato
La materia prima (bagazo de caa), fue obtenida del ingenio El Refugio, el cual
pertenece a la unidad Central Motzorongo S.A de C.V., con oficinas ubicadas en el
eje central Lzaro Crdenas No. 425-101. Colonia Narvarte, Delegacin Benito
Jurez, en Mxico D.F.
El ingenio proporcion dos tipos de bagazo de caa, el bagazo seco y el bagazo

hidrolizado. La Figura 6.a. muestra el primer tipo de bagazo clasificado como
bagazo seco, el cual es un residuo industrial salido de los molinos despus de la
extraccin del jugo. La Figura 6.b. muestra el bagazo amplificado, por medio del
microscopio estereoscpico. En la actualidad, casi el 95% de este residuo es
quemado en el ingenio para la produccin de energa y el resto se utiliza como
alimento para ganado (Central Motzorongo, 2014).
27
a) b)
Figura 6. Bagazo de caa seco: a) Amplificado 1X; b) Amplificado 4X
El bagazo clasificado como hidrolizado se muestra en la Figura 7.a. Este residuo

ha sido mezclado con urea para despus ser utilizado como composta.
La Figura 7.b. muestra las fibras de bagazo magnificadas por medio del
microscopio estereoscpico.
a) b)
Figura 7. Bagazo de caa hidrolizado: a)Amplificado 1X ; b) Amplificado 4X
2.3.1.1 Caracterizacin de la materia prima (sustrato)

Cada tipo de bagazo fue analizado de manera independiente, registrando sus
caractersticas y propiedades fsicas y qumicas de importancia como: la forma, la
28
textura, el color, el olor, la humedad y el pH. La Tabla 8 muestra las propiedades
registradas para ambos bagazos.
La obtencin de la humedad se realiz llevando a cabo un anlisis por triplicado

de cada tipo de bagazo. Se utiliz una termobalanza (analizador de humedad
electrnico, Sartorius MA-35) donde se coloc una cantidad de muestra y se
monitore su cambio de peso en funcin del tiempo. Los resultados obtenidos en
la determinacin de la humedad, se pueden observar con mayor detalle en el
Anexo B.
El pH para cada tipo de bagazo se determin al colocar 1 gramo de muestra en 10

mL de agua destilada y posteriormente ste fue medido con un potencimetro
(Conductronic pH120).
Tabla 8. Caractersticas de los bagazos de caa analizados
Propiedad
Propiedades fsicas
qumica
Bagazo Tipo
Humedad
Forma Textura Color Olor pH
(%)
caf
1 Seco Tierra azcar quemada 37.08 2.88 3.11 0.01
claro
fibras
largas y
delgadas
2 Hidrolizado Hmedo negro descomposicin 68.32 0.97 6.63 0.01
2.3.2 Pretratamiento del bagazo de caa

En la Figura 8 se muestra la metodologa utilizada para el pretratamiento del
sustrato, donde tambin se anexan las condiciones de operacin utilizadas en
cada proceso. La metodologa incluye: el secado, la molienda, el tamizaje y la
hidrlisis cida utilizando cido sulfrico diluido.
29
Figura 8. Metodologa para el pretratamiento del bagazo, (donde T x corresponde a la
temperatura, tx al tiempo en que se llev a cabo el proceso; en secado (s), hidrlisis cida
con H2SO4 (AC), autoclave (a)y centrifugado (c); y N las revoluciones por minuto.
2.3.2.1. Secado, molienda y tamizado

Para realizar un anlisis comparativo, ambos bagazos deben tener las mismas
condiciones por lo tanto el bagazo debe ser secado para disminuir la humedad y
evitar la reproduccin de microorganismos patgenos en la fermentacin de los
azcares residuales, que estn contenidos en el bagazo y tambin por la
degradacin de dichos azcares. (Llanes, 2012).
El proceso de secado del bagazo se llev a cabo en una estufa a 68 C, durante

24 h, posteriormente ste se coloc 2 h en un desecador que contena slica gel
hasta obtener un peso constante.
30
El tamao de fibras de la materia prima no era uniforme por lo que se moli en una
licuadora y se tamiz para obtener un tamao de partcula definido. La muestra
seleccionada fue la contenida entre los tamices del nmero 40 y 60. El tamao
promedio de partcula fue de aproximadamente 0.42 mm.
2.3.2.2. Pretratamiento cido

El diseo experimental se realiz siguiendo la metodologa descrita a
continuacin:
a. Se analizaron los dos tipos de bagazo por separado siguiendo la misma
metodologa.
b. El peso del bagazo de caa se fij a 0.25 g.
c. La relacin slido-lquido para cada experimento fue 1:15.
d. Las concentraciones de cido fueron de 0, 2, 4, 6, 8, 10 % p/p de cido
sulfrico (ver Anexo D).
e. Se utilizaron la temperaturas de 100, 110 y 120 C en autoclave, el cual
genera presin por el vapor de agua producido a la temperatura
correspondiente (ver Anexo E)
f. Los controles de la metodologa fueron unidades experimentales en
ausencia de cido (reemplazado por agua) y sometidas a 100, 110 y 120
C, y adicionalmente las unidades experimentales tratadas con solucin de
cido a temperatura ambiente (25 C).
g. Cada nivel de tratamiento se evalu por triplicado, por lo que el nmero
total de muestras fue de 126 entre muestras y controles, por lo tanto la
distribucin de ests se ilustra en la Figura 9.
h.
Figura 9. Desarrollo experimental (hidrlisis cida)
Se determin el porcentaje de celulosa, hemicelulosa y lignina presente en el

bagazo seco, antes y despus del pretratamiento (120C, 6% cido sulfrico;
Tabla 9). El procedimiento se ilustra en el Anexo C
31
Tabla 9. Porcentaje de material lignocelulsico presente en el sustrato
Bagazo seco % Celulosa % Hemicelulosa % Lignina

Antes del 72.33 7.76 2.75 1.26 21.27 2.75
pretratamiento.
Despus del 24.5 2.64 39.67 26.6 14.66 6.11
pretratamiento.
2.3.2.3. Neutralizacin de sobrenadante

Los slidos y sobrenadantes de las muestras obtenidas a la salida de la autoclave,
fueron separados utilizando una centrifuga a 10,000 rpm durante 5 min.
Posteriormente se transfiri el sobrenadante a tubos de 15 mL, midiendo el
volumen extrado. Finalmente se neutraliz con NaOH al 4 % p/p (ver Anexo D)
hasta alcanzar un pH entre 5 y 7 (ver Anexo E). Las muestras resultantes se
transfirieron a tubos plsticos de 2 mL y se congelaron a -20 C, para su posterior
evaluacin de azcares reductores y toxicidad.
2.3.3.4. Determinacin de azcares reductores mediante la tcnica de DNS

(cido 3,5 dinitrosalcilico) o mtodo de Miller
La tcnica se realiz en una microplaca de fondo cnico con 96 pozos. A cada
pozo se agreg 40 L de solucin buffer de acetato (pH 4.8), 20 L de muestra
neutralizada y 120 L de DNS (ver Anexo D). Posteriormente la microplaca fue
introducida a un equipo que se encarga de mantener una temperatura uniforme en
todos los pozos (termociclador Robocycler 96), la reaccin se llev a cabo a 95 C,
durante 5 minutos (Xiao et. al, 2004). A continuacin, se transfirieron 36 L de la
reaccin a una microplaca de fondo plano que contena 160 L de agua
desionizada, se midi la absorbancia en un lector de microplacas,
(espectrofotmetro Ultra microplate reader ELx 808) a 540 nm de longitud de onda
(Xiao et. al, 2004).
Utilizando como estndar una solucin de concentracin conocida de glucosa, se

obtuvo la concentracin en cada muestra. Los datos obtenidos de gramos de
glucosa por gramo de bagazo pretratado se muestran en la Tabla 10. Los datos
fueron analizados por ANOVA con el programa SPSS 13 (IBM, NY, USA, 2004),
con un nivel de significancia de 0.05. El anlisis de los datos se realiz por
separado para cada tipo de bagazo.
32
Tabla 10. Resultados de concentracin en gramos de glucosa por gramo de bagazo
de caa
Clasificacin de bagazo Temperatura (C) Concentracin de Concentracin

H2SO4 (%p/p) [C] gglucosa/gbagazo
100 2 0.009 0.001 a1
4 0.029 0.001 bc1
6 0.055 0.002 efg1
8 0.061 0.007 fg1
10 0.082 0.008 h1
110 2 0.025 0.001 b1
4 0.044 0.002 de1
6 0.045 0.003 de1
Hidrolizado
8 0.040 0.001 d1
10 0.040 0.001 cd1
120 2 0.050 0.005 de1
4 0.054 0.003 ef1
6 0.061 0.004 g1
8 0.046 0.001 de1
10 0.060 0.004 fg1
25 2 0.005 0.005 a2
4 0.006 0.002 a2
6 0.0014 0.006 a2
8 0.002 0.001 a2
10 0.007 0.006 a2
100 0 0.046 0.01 de2
2 0.037 0.004a2
4 0.064 0.0ab2
6 0.075 0.0 ab2
8 0.092 0.002 ab2
10 0.109 0.003 ab2
Seco 110 0 0.048 0.001 de2
2 0.101 0.002 ab2
4 0.073 0.001a2
6 0.074 0.0 a2
8 0.098 0.003 ab2
10 0.109 0.005abc2
120 0 0.049 0.001 de2
2 0.184 0.015cd2
4 0.173 0.009bcd2
6 0.199 0.009d2
8 0.103 0.003ab2
10 0.183 0. 083cd2
El nmero 1 corresponde al bagazo hidrolizado y el nmero 2 para el bagazo seco. Las letras
diferentes del superndice indican diferente grupo por anlisis de varianza con significancia de 0.05
y concentracin porcentaje peso de cido sulfrico sobre peso de agua (%p/p).
33
En la Figura 10 se muestran los resultados obtenidos en el pre-tratamiento. Se
observa que conforme se aumenta la temperatura, la produccin de azcares
reductores aument, obteniendo la mayor liberacin para bagazo seco de 0.199
0.009 gglucosa/gbagazo en el tratamientos del 6 % p/p de cido sulfrico a 120 C (sin
diferencia significativa con los tratamientos de 2 y 4% de cido sulfrico). Mientras
que para el bagazo hidrolizado fue de 0.082 0.008 gglucosa/gbagazo a 100 C y
concentracin de cido del 10 % p/p.
Debido a los resultados obtenidos, se decidi pretratar el bagazo de caa seco a
120 C con cido sulfrico al 6%, la fraccin lquida obtenida se us en las
fermentaciones posteriores.
0%
2%
f
0.20 4%
f
6%
f
8%
10%
0.15
g glucosa/g bagazo
cde
cdecde
cde
cde
bcde
abcde cd
abcde
0.10
abcde
abcde
abcde
abc abcd
abcd
abcd
abc
abc
abc
ab de
abc
de
abc
de
0.05
abc
abc
ab
ab
a
a
a
a
aa
0.00
BS-25 BH-100 BS-100 BH-110 BS-110 BH-120 BS-120
Figura 10. Produccin de azcares reductores obtenidos durante el pretratamiento con

cido sulfrico a diferentes concentraciones y diferentes temperaturas (BH: bagazo
hidrolizado. BS: bagazo seco y temperaturas de 100, 110, 120 C).
2.3.4. Toxicidad
Los productos de la hidrlisis cida generalmente contienen ciertos inhibidores
que pueden afectar el desempeo de los microorganismos. Por tal motivo, se
realiz un anlisis de toxicidad donde se monitore el crecimiento del
microorganismo en distintas muestras de la hidrlisis cida y se llev a cabo de la
siguiente manera. Las unidades experimentales constaron de tubos con tapa
rosca conteniendo 1.8 mL de medio de cultivo segn la siguiente formulacin:
peptona de casena (10 g/L), extracto de levadura (3 g/L), 1 mL de fraccin lquida
de bagazo pretratado y la cantidad necesaria de glucosa para estandarizar las
34
muestras a una concentracin de 10 g/L. Se esteriliz en autoclave a 121 C
durante 15 min, posteriormente se agreg cido p-amino benzoico y biotina con
una concentracin de 1 mg/L. Se inocul con 200 L de medio de cultivo que
contena el inculo segn el inciso 2.3.6.1. Finalmente el medio se cubri con 1
mL de aceite mineral y se incub a 37 C durante 60 h. Se evalu el crecimiento
por absorbancia a 600 nm usando el espectrofotmetro Genesys 10S UV-Vis
(Thermo). En los tubos correspondientes a los controles, la fraccin lquida de
bagazo pretratado fue reemplazada por agua.
El resultado se muestra en la Figura 11. No se encontr diferencia en el

crecimiento entre los tratamientos y el control, determinando que no hubo
presencia de inhibidores del crecimiento que afectaron al microorganismo durante
la fermentacin.
Control
2% p/p
1.0
4 % p/p
6 % p/p
0.8 8 % p/p
10 % p/p
Absorbancia
0.6
0.4
0.2
0.0
Control BH-100 BS-100 BH-110 BS-110 BH-120 BS-120
Figura 11.- Anlisis de toxicidad al producto de pretratamiento a diferentes concentraciones

y diferentes temperaturas (BH: bagazo hidrolizado. BS: bagazo seco y temperaturas de 100,
110, 120 C).

Esta etapa se realiz a 50 C y presin atmosfrica. Se emple la enzima
Celluclast de Novozymes , con agitacin constante durante 36 horas. Se
midieron los azucares reductores posteriores al proceso, no se obtuvo diferencia
respecto a lo encontrado antes de la hidrlisis, por lo que se concluy que haba
una baja en la actividad de la enzima y no se utilizaron estos datos en posteriores
anlisis.
35
2.3.6. Fermentacin ABE (acetona, butanol y etanol)
2.3.6.1. Preparacin del inculo

Para el presente estudio se emple una cepa de Clostridium acetobutylicum
CDBB-797 proveniente de la coleccin de microorganismos del CINVESTAV del
IPN (Mxico, D.F.).
El microorganismo se sembr en tubos que contenan caldo tioglicolato (Bioxon),

para generar un medio anaerobio se agreg cuidadosamente 1 mL de aceite
mineral, se incub a 37 C hasta observarse turbidez. Posteriormente se transfiri
1 mL a botellas serolgicas las cuales contenan 30 mL de medio de cultivo
compuesto de (g/L): glucosa (50), extracto de levadura (3), K2HPO4 (0.5) y
KH2PO4 (0.5), MgSO4.7H2O (0.2), MnSO4.H2O (0.01), FeSO4.7H2O (0.01), NaCl
(0.01), Despus de salir de la autoclave, se adicion cido p- amino benzoico
(PABA) (0.001) y biotina (0.0001). Posteriormente, se hizo pasar un flujo de
nitrgeno a cada botella durante 5 minutos con el fin de desplazar el aire. Se
incubaron a 37 C durante 48 h, subsecuentemente se midi la absorbancia a 600
nm. Durante distintas etapas del proceso se corrobor la pureza del cultivo por
medio de la realizacin de la tincin de Gram (Gholizadeh, 2009).
2.3.6.2. Preparacin del medio de cultivo de fermentacin

Se analizaron 4 medios de cultivo con base en las investigaciones realizadas en
donde la principal fuente de carbono es la glucosa:
Medio de cultivo G, contena solo glucosa (50 g/L) como fuente de carbono.
Medio de cultivo AB, contena glucosa (50 g/L) y cido butrico (0.3 g/L).
Medio de cultivo BG, contena glucosa (50 g/L) y el lquido pretratado.
Medio de cultivo SG, contena el lquido pretratado sin adicin de glucosa.
Los medios se prepararon siguiendo la formulacin que se us para producir el

inculo. El pH fue ajustado a 5 (Gholizadeh, 2009). Las fermentaciones se
analizaron de la siguiente manera, las realizadas en los medios de cultivo G y AB
se usaron para comparar con la literatura y usar como modelo; las fermentaciones
realizadas en medios de cultivo BG y SG se usaron como muestras reales del
proceso y se compararon con la realizada en medio G.
Cada medio se distribuy en 6 botellas serolgicas (para obtener triplicados de

cada condicin) en un volumen de 70 ml cada una, para despus ser esterilizadas
en autoclave a 121 C, 15 psi, durante 15 minutos. Se dejaron enfriar a
temperatura ambiente. A cada botella se le inyect nitrgeno durante 5 minutos
para tener condiciones anaerbicas. Antes de inocular las botellas se agreg 0.1
ml de cido p-amino benzoico (PABA) y 0.1 ml de biotina ambos con una
concentracin de 1 mg/L y se inocularon con 3.5 ml de cultivo fresco de la cepa
Clostridium acetobutylicum CDBB-797. El volumen final del medio de cultivo fue de
36
73.7 ml. Las botellas serolgicas se incubaron a 37 C durante 160 h (medios G y
AB) o 233 horas (medios BG y SG). Se realiz un monitoreo en intervalos de
tiempo definidos tomando aspticamente 3 ml de las muestra lquidas.
2.3.6.3. Mtodos analticos

A las muestras obtenidas de las fermentaciones se les realiz diferentes
determinaciones y anlisis. El pH se midi utilizando un potencimetro
(Conductronic pH 120) (Ver apndice I). La densidad celular se analiz midiendo
la densidad ptica de la suspensin celular a una longitud de onda de 600 nm
(D.O. 600 nm) con un espectrofotmetro (Modelo Genesys 10 S UV-VIS, Marca
Thermo scientific) (Ver anexo J). La biomasa se determin por peso seco
utilizando membranas de 0.2 m de tamao de poro y la fraccin lquida se
congel (-20C) para posteriores anlisis de presencia de sustrato y productos.
La glucosa se cuantific por medio del mtodo de DNS para azcares reductores.
Se cuantifico la concentracin de acetona, butanol y etanol contenido en cada una
de las muestras utilizando un cromatgrafo de gases Agilent modelo 7820, usando
una columna Innowax equipado con un detector de ionizacin de flama (FID), la
temperatura de la rampa fue de 80 C hasta 300 C. Se realiz una curva de
calibracin utilizando una mezcla modelo de acetona, butanol y etanol para
determinar los tiempos de retencin de cada uno de ellos y despus se analizaron
cada una de las muestras de las fermentaciones (Ver apndice N).
2.3.6.4. Resultados de la fermentacin

La concentracin mxima de biomasa fue de 1.86 g/L. Finalmente se obtuvo el
rendimiento de sustrato en biomasa (YX/S), el sustrato residual (SR) y el sustrato
consumido (SC) (ver Anexo H).
La tasa mxima especfica de crecimiento, max ( expresado en h-1) se determin a

partir de la grfica semi logartmica descrita por la ecuacin (1) para los datos
tomados exclusivamente en la fase exponencial de crecimiento celular usando un
mnimo de tres datos experimentales:
ln = + (1)
La velocidad especfica de crecimiento () obtenida en los distintos medios fue: en

el medio G fue de 0.29 h-1, mientras que al usar el medio AB, la fue de 0.0021 h-
1. Por otra parte, en el medio BG se obtuvo de 0.048 h-1 y en el medio SG de
0.0142 h-1. Lo cual indica que el microorganismo mostr mayor afinidad por el
sustrato en el medio G, aunque en el caso de los medios que contenan extracto
de bagazo pretratado, la afinidad al sustrato fue mayor en el medio SG.
La Tabla 11 muestra los parmetros cinticos obtenidos de la fermentacin ABE

con C. Acetobutylicum. La cepa CDBB-797 produjo mayor concentracin de
37
biomasa y consumi mayor cantidad de sustrato disponible cuando se ferment en
el medio G que en los otros medios.
Tabla 11. Parmetros cinticos para la fermentacin ABE con C.

Acetobutylicum.
Medio de Biomasa Sustrato (h-1) % Sustrato YX/S

cultivo mxima residual (g/L) consumido (gbiomasa/g
(g/L) (SC) de SC)
G 1.880.098 3.110.083 0.290 94 0.040
AB 1.570.163 42.975.410 0.0021 14 0.220
BG 2.670.103 91.260.083 0.0048 8.74 0.611
SG 3.830.234 12.335.410 0.0142 89.67 0.728
: Velocidad especfica de crecimiento.
YX/S: Rendimiento de sustrato en biomasa.
Se determin que el mejor medio de cultivo como sustrato modelo sea el medio G
que slo contena glucosa como fuente de carbono, ya que se observ un mayor
crecimiento del microorganismo y un consumo alto de glucosa. Al usar el extracto
de bagazo pretratado, el mejor resultado, en trminos del crecimiento del
microorganismo, fue el medio de cultivo SG que contena slo los azucares
provenientes del bagazo, donde se obtuvo una velocidad especifica de crecimiento
de 0.0142 h-1.
Se analizaron los productos obtenidos de la fermentacin en el medio G, se

encontr un aumento de la concentracin de los productos conforme se consumi
la glucosa (Figura 12a). La concentracin mxima de butanol se obtuvo a las 113
horas de fermentacin, para posteriormente decaer (Anexos M) La figura 12b
muestra los resultados del monitoreo del pH, el cual disminuy conforme aument
la absorbancia a travs del tiempo. Despus de 20 horas se present una
estabilizacin del sistema y comenz la produccin de acetona, etanol y butanol.
a)
38
55
12 50
concentracin de productos (g/L)

45
10
40
8 35
glucosa (g/L)
30
6 25
20
4
15
2 10
5
0
0
0 25 50 75 100 125 150
tiempo (h)
b)
4.5 5.0
4.0
biomasa (g/L); absorbancia (600nm)
4.5
3.5
3.0 4.0
2.5
3.5
ph
2.0
1.5 3.0
1.0
2.5
0.5
0.0 2.0
0 25 50 75 100 125 150
tiempo (h)
Figura 12. Fermentacin medio G: a) Concentracin de acetona (), butanol (), etanol (),
glucosa (); b) pH(*), biomasa (), absorbancia ()
En la fermentacin del medio AB se produjo una mayor concentracin de

productos en las primeras 30 h respecto al medio G, pero posteriormente se
observ una disminucin relacionada con el no consumo de glucosa por parte del
microorganismo (Figura 13a). Lo cual coincide con que no se observ crecimiento
del microorganismo (Fig. 13b). El cambio en las primeras horas pudo deberse a la
39
concentracin de cido butrico, sin embargo la concentracin en el medio fue muy
baja para promover el crecimiento del mismo.
a)
60
4.0
50

3.5
40
3.0
glucosa (g/L)
30
2.5
20
2.0
1.5 10
1.0 0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
tiempo (h)
b)
4.5 5.0
4.0
4.5
3.5
3.0 4.0
2.5
3.5
ph
2.0
1.5 3.0
1.0
2.5
0.5
0.0 2.0
0 50 100 150 200
tiempo (h)
Figura 13. Fermentacin medio AB: a) Concentracin de acetona (), butanol (), etanol (),
glucosa (); b) pH (*), biomasa (), absorbancia () en el medio AB
En la fermentacin con el medio BG, en presencia de la fraccin lquida del

bagazo pretratado adicionado con glucosa (Figura 14a), se observ un mximo de
1 g/L de butanol aproximadamente a las 62 h de cultivo. Se observ adems que
se produjo mayor concentracin de etanol (1.5 g/L) en comparacin con el butanol.
En la Figura 14b se observa que el pH disminuy despus de las 25 horas de
cultivo, pero no se observ cambio en la absorbancia despus de este tiempo.
40
a)
100
2.0

80
1.5
60
glucosa (g/L)
1.0
40
20
0.5
0.0
0 25 50 75 100 125 150 175 200 225
tiempo (h)
b)
9 6.5
8 6.0
b)
7 5.5
6 5.0
5 4.5
4 4.0 ph
3 3.5
2 3.0
1 2.5
0 2.0
0 25 50 75 100 125 150 175 200 225
tiempo (h)
Figura 14. Fermentacin medio BG: a) Concentracin de acetona (), butanol (), etanol
(), glucosa (); b) pH (*), biomasa (), absorbancia ().
Para la fermentacin con el medio SG, que contena la fraccin lquida del bagazo
pretratado sin adicin de glucosa (Figura 15 a) se observ una concentracin muy
baja de productos (menos de 1 g/L) probablemente relacionado con la baja
concentracin de glucosa presente en el medio (menos de 5 g/L). El pH disminuy
a 4.5 y se mantuvo constante despus de 80 horas de cultivo (Figura 15b).
41
a)
3.0 5
4
2.5

3
2.0
2
1.5
1
glucosa (g/L)
1.0 0
-1
0.5
-2
0.0
-3
-0.5
-4
-1.0 -5
0 25 50 75 100 125 150 175 200 225
tiempo (h)
b)
9 6.5
8 b) 6.0
7 5.5
6 5.0
5 4.5
4 4.0 ph
3 3.5
2 3.0
1 2.5
0 2.0
0 25 50 75 100 125 150 175 200 225
tiempo (h)
Figura 15. Fermentacin medio SG: a) Concentracin de acetona (), butanol (), etanol (),
glucosa (); b) pH (*), biomasa (), absorbancia ()
2.5. Resumen de resultados

Se analizaron dos tipos de bagazo: bagazo seco y bagazo hidrolizado. La mayor
concentracin de azcares reductores (g-glucosa/g-bagazo) obtenida del bagazo
seco fue 0.199 0.009 g/L, utilizando cido sulfrico al 6% p/p y 120 C; mientras
para el bagazo hidrolizado fue de 0.082 0.008 g/L con 10 % p/p de cido
sulfrico a 100 C.
Una vez determinado que el bagazo seco liber mayor cantidad de glucosa, se le
realiz una caracterizacin con el fin de determinar la cantidad de celulosa,
hemicelulosa y lignina presente en la fraccin slida antes y despus del
pretratamiento. Resultando que el porcentaje de celulosa disminuy de 72.33 a
42
24.5 %, mientras que el porcentaje de hemicelulosa pas de 2.75% a 39.67%
despus del pretratamiento, por ltimo la lignina pas del 21.27% al 14.66%. Estos
datos sern utilizados para el balance de materia y la conversin de celulosa a
glucosa, en la etapa de pretratamiento.
El bagazo seco fue pretratado a las condiciones indicadas anteriormente, la

fraccin lquida fue usada para complementar el medio de cultivo y llevar a cabo la
fermentacin por parte del microorganismo Clostridium acetobutylicum, adems se
evaluaron otros tres medios de cultivo conteniendo diferentes fuentes de carbono.
Las mayores concentraciones de productos se obtuvieron en los medios que
contenan como fuente de carbono glucosa (G) y la fraccin lquida del bagazo
pretratado adicionado con glucosa (BG). Ya que ambas demostraron producir
butanol, pero slo la fermentacin que contena glucosa obtuvo hasta 13 g/L de
butanol en un tiempo de 113 h. Los datos obtenidos de la mejor fermentacin
sern tomados para disear los equipos, y as finalmente realizar el anlisis
econmico.
Se muestra en la Tabla 12 la comparacin de los cuatro medios de cultivo en

cuanto a su mxima produccin de acetona, butanol y etanol; y el tiempo
destinado para su obtencin. Se puede observar que el mejor medio cuando se
trabaj con bagazo fue el medio SG y el medio modelo, G, que contena slo
glucosa.
Tabla 12. Resultados de concentracin de productos obtenidos en los cuatro

medios de fermentacin
Concentracin de productos
MEDIO
Acetona Butanol Etanol

Tiempo Concentracin Tiempo Concentracin Tiempo Concentracin
(h) (g/L) (h) (g/L) (h) (g/L)
G 113 3.42 1.48 113 7.65 4.21 5 1.38 0.51
AB 31 2.93 0.00 31 3.82 0.00 31 3.29 0.00
BG 21 0.91 0.23 65 1.05 0.19 21 1.41 0.65
SG 19 0.96 0.99 19 1.41 0.36 21 1.26 1.26
2.6. Conclusiones
Se determin que se trabajar con el bagazo seco, ya que contiene menos
humedad y una mayor cantidad de azucares reductores indispensables para la
fermentacin. Las mejores condiciones para su pretratamiento fueron a una
temperatura de 120 C y una concentracin de cido del 6% p/p.
Adems se comprob que en el medio modelo, que contena slo glucosa como
fuente de carbono se obtuvo la mayor concentracin de acetona, butanol y etanol,
debido a que se consumi la mayor concentracin de sustrato y se logr una alta
velocidad de crecimiento en comparacin con los otros medios.
43
Por otra parte, en los medios que contenan la fraccin lquida del bagazo
pretratado, el que mostr mejor resultado fue el medio SG, aunque la diferencia
respecto al medio modelo, G, fue considerable y significativa.
44
Captulo 3
Sntesis y diseo a
escala industrial
45
3.1. Introduccin captulo 3
El diseo de un proceso a nivel industrial incluye diversas etapas en la cual las
actividades de experimentacin juegan un papel primordial, debido a que
determinan las condiciones a las que debe operar una planta industrial. Estos
resultados tambin son utilizados en las actividades de escalamiento del proceso,
en el cual se busca maximizar la produccin, con la finalidad de reducir gastos
tanto de operacin como de inversin.
Para determinar la cantidad de materia prima necesaria en el proceso, se realiza

un balance de materia donde se recaba la mayor parte o en su mayora todos los
datos obtenidos en la etapa experimental, con el fin de escalar los flujos y
cantidades tanto de productos como de reactivos, para posteriormente simularlo
en un programa de procesos y determinar si se cumplen con los requerimientos
tanto fsicos, qumicos y termodinmicos a las condiciones establecidas.
Adems, cuando se forma un objetivo de produccin, es fundamental determinar

alternativas que beneficien al proceso, tanto econmico, ambiental y social, por lo
tanto una de las etapas es realizar un anlisis econmico del producto de inters.
ste con el fin de determinar los gastos de produccin, gastos de materia prima y
los gastos de adquisicin de equipos, entre otros, para certificar que el proyecto es
rentable econmicamente.
3.2. Objetivos del captulo 3

3.2.1 Objetivo general
Realizar la sntesis y diseo del proceso de produccin a escala industrial.
3.2.2 Objetivos particulares

Realizar un balance de materia con los datos obtenidos en la etapa
experimental, y determinar la cantidad de materia prima para producir
3,561 kg de butanol al da.
Determinar las dimensiones de los equipos como, tanques,

intercambiadores de calor y torres de destilacin, que se utilizarn en el
proceso a escala industrial.
Realizar una simulacin del proceso, empleando un programa de

simulacin (PRO II)
Cuantificar la energa necesaria en servicios auxiliares al implementar una

integracin de energa en los intercambiadores de calor.
46
Determinar mediante un anlisis econmico, si el proceso es factible de
recuperar la inversin en 10 aos.
3.3. Balance de materia

En Mxico se producen 190 mega litros de gasolina al da, de los cuales el 10 %
es gasolina Premium. Una de las metas en este proyecto es presentar el anlisis
para producir una mezcla de gasolina premium con un biocombustible;
proporcionando una alternativa bioenergtica para los consumidores de la
gasolinas en Mxico. Para este fin, se plantea utilizar el 5% del total de la gasolina
Premium (950,000 litros) para ser mezclada con biobutanol y obtener una mezcla
con 10 % biobutanol y 90 % gasolina premium la cual denominaremos B10. El
diagrama de bloques para la produccin de ABE se muestra en la Figura 16.
Figura 16. Diagrama de bloques del proceso de produccin de ABE
Basado en los resultados obtenidos en la fase experimental se obtuvo la

conversin de los compuestos principales del proceso. La conversin de celulosa
a glucosa en las secciones de pretratamiento e hidrlisis enzimtica fue del 0.66 y
en la seccin de fermentacin se obtuvo una conversin de glucosa a productos
de 0.89. Esta informacin permiti calcular los flujos de corriente de las diferentes
etapas del proceso, y en especial, la cantidad de bagazo de caa que se
alimentara al proceso. Los valores de los flujos de cada corriente se muestran en
la Tabla 13.
47
Tabla 13. Resultados del balance de masa en la produccin de ABE.
Definicin de la Flujo msico

Corriente Componentes Mtodo aplicado
corriente en (kg /da)
Materia prima
Bagazo de caa Slidos Pretratamiento 27,243.03
(slidos)
Solucin de Agua Complemento de 17,925.91
pretratamiento
H2SO4 H2SO4 materia prima 3,814.02
Complemento para
Vapor a alta alcanzar
Agua pretratamiento 41,827.13
presin condiciones de
operacin
Producto 14,478.13
Lquido 1 (antes Glucosa
intermedio 59,753.04
de la Agua pretratamiento
obtenida a la salida 3,814.02
neutralizacin) H2SO4
del pretratamiento
Complemento para 3,110.81
NaOH NaOH slido Neutralizacin la neutralizacin
del H2SO4
Lquido 1 Glucosa 5,791.25
Corriente
(despus de la Agua Neutralizacin 61,154.17
neutralizada
neutralizacin) Na2(SO4) 5,523.70
Celulosa 19,704.88
Producto 749.18
Slido 1 Hemicelulosa Neutralizacin
intermedio 4,290.77
Lignina
Glucosa Hidrlisis Producto 14,478.13
Lquido 2 59,706.38
Agua enzimtica intermedio
Celulosa 6,674.54
Hemicelulosa Hidrlisis 749.18
Slido 2 Residuos
Lignina enzimtica 6,788.95
Na2(SO4) 5,523.70
Acetona 1,393.38
Butanol 3,561.62
Etanol 553.41
Lquido 3 Fermentacin Producto
CO2 6,344.06
H2 48.44
Agua 60,788.45
Acetona 1,393.38
Etanol 553.41
Destilado CO2 Purificacin Producto 6,344.06
H2 48.44
Agua 60,763.34
Agua 25.10
Fondo Purificacin Producto final
Butanol 3,561.62
3.4. Simulacin del proceso

La simulacin se realiz en el programa PRO II, versin 9.0. La base de datos de
los compuesto involucrados en el proceso se obtuvo del trabajo presentado por
Alvarado-Morales et al (2009). Los modelos termodinmicos se determinaron
basados en el anlisis de los componentes y condiciones del proceso de
48
produccin (Martnez, et al, 2000); los modelos seleccionados fueron: el modelo
de solucin non-random two-liquid (NRTL) y el mtodo de Hayden-OConnell. Los
parmetros del modelo de solucin NRTL para este sistema se obtuvieron de un
trabajo publicado por Wooley y Putsche (1996), este modelo de solucin fue
utilizado en casi toda la simulacin del proceso con excepcin de las 3 ltimas
columnas de destilacin (ver Figura 16) donde se emple el modelo de Hayden-
OConnell debido a los compuestos presentes.
En la figura 16 se muestra el diagrama de flujo de proceso de la planta de

produccin de ABE a partir del bagazo de caa de azcar.
3.4.1. Pretratamiento
El proceso inicia con la alimentacin del bagazo de caa (celulosa 72.33 %,
hemicelulosa 2.75 %, lignina 15.75 % y cenizas) (SOLIDOS) la cual se mezcla a
condiciones ambientales con una corriente que lleva una solucin de cido
sulfrico al 6% en peso (SOLUCIONLIQ). El producto del mezclador se alimental
al reactor de pretratamiento el cual debe operar a una presin de 12 atm y una
temperatura de 120 C; para alcanzar tales condiciones en el reactor, se alimenta
una corriente de vapor de alta presin a una temperatura de 268 C y 13 atm de
presin (VAPORDEAGUA). Dentro del reactor se lleva a cabo la reaccin de la
celulosa ms el agua para producir glucosa con un porcentaje de conversin del
66.13% de celulosa a glucosa.
[C6H10O5]n + n H2O n C6H12O6

Celulosa + Agua Glucosa
3.4.2. Neutralizacin
A la salida del reactor de pretratamiento se obtiene una mezcla vapor, slido y
lquido (SALRPTREENFL1), la cual se alimenta a un separador de slidos el cual
elimina lo slidos y las fases lquidas y vapor tambin son separadas. La fase
lquida se separar en dos corrientes, una con el 98% y otra con el 2 % del total
del flujo volumtrico (H2O4NEUT y H2SO4FUEN_N, respectivamente), sta ltima
se alimenta junto con una corriente de amoniaco a un reactor (R_PROD_F_NIT)
para producir sulfato de amonio, el cual ser utilizado como fuente de nitrgeno
para el crecimiento y reproduccin del microorganismo en la etapa de
fermentacin y produccin de inculo. La reaccin para la produccin de sulfato de
amonio es la siguiente:
H2SO4 + 2 NH3 (NH4)2 SO4
La reaccin se lleva a cabo a 1 atmosfera de presin y una temperatura de 50C

obteniendo un porcentaje de conversin del cido sulfrico a sulfato de amonio del
89%. La corriente de salida de este reactor es mezclado con la corriente
MEZNEUTRA para despus hacer pasar esta mezcla a travs de un proceso de
intercambio de calor y alcanzar 25C, la cual es alimentada junto con una corriente
de hidrxido de sodio (NAOH) a un reactor (R3) para llevar a cabo la
neutralizacin a travs de la siguiente reaccin qumica.
49
H2SO4 + 2 NaOH Na2SO4 + 2 H2O.
La corriente lquida neutralizada se mezcla con la corriente slida (SOLIDO) y se

divide en dos corrientes, una de estas tiene el 10 % del total de la corriente la cual
ser destinada para el medio inculo (LIQINOCULO) y el resto de la corriente
pasa a la hidrlisis enzimtica (LIQ_ENZIMA).
3.4.3. Inculo
Para el medio inculo, la corriente (LIQINOCULO) debe disminuir su temperatura
a 37 C a travs de un proceso de intercambio de calor (TEMDEMICRO37) y ser
mezclada con una corriente (ENZIMA) de enzimas (Celluclast Novozymes ) y
agua (H2O). La relacin de alimentacin de la enzima es, por cada gramo de
celulosa se requiere de 20 mg de enzima; adems la mezcla de las corrientes de
enzima y agua deben tener un 30 % de enzima y 70 % de agua con el fin de
garantizar una liberacin de glucosa apropiada, la cual ser la fuente de carbono
para el microorganismo.

En la etapa de hidrlisis enzimtica la corriente LIQ_ENZIMA debe aumentar su
temperatura a 50 C en un intercambiador de calor para posteriormente ser
alimentada junto con una corriente de enzima (ENZIM_HIDROL) al reactor de
hidrlisis enzimtica (R_HIDROLISIS). En este reactor se lleva a cabo la reaccin
de celulosa ms agua catalizada por las enzimas para producir glucosa
obteniendo con un porcentaje de conversin del 66 % de celulosa. La corriente de
salida del reactor (HIDROLIZADO) debe disminuir su temperatura a 37C para
tener las condiciones adecuadas para la etapa de fermentacin (L_HIDR_ENZ).
Enzima
C6H10O5 + H2O C6H12O6
3.4.5. Fermentacin ABE

Tanto la corriente del inculo (INOCULO) como de la hidrlisis enzimtica
(HIDROLIZADO), pasan por el separador slido-lquido. La corriente del medio
inculo se separa en una corriente para la fase lquida la cual es enviada a los
reactores de fermentacin (MICROORGANIS) y una corriente que contiene los
slidos los cuales se disponen para su combustin y generacin de energa
(SOLIDOINO). En el caso de la corriente de salida de la seccin de hidrlisis
enzimtica (L_HIDR_ENZI), la fase lquida es enviada a la zona de fermentacin y
la fase slida tambin se dispone para su combustin a travs de la produccin de
pellets.
El proceso de fermentacin se lleva a cabo a una temperatura de 37 C y una

atmosfera de presin. En este reactor se alimenta el microorganismo, el cual se
50
encarga de consumir la glucosa y producir acetona, etanol, butanol, agua,
hidrogeno y bixido de carbono.
186 12 6 63 6 + 124 10 + 32 6 + 152 + 62 + 362
El porcentaje de conversin glucosa a productos que se obtuvo a nivel

experimental y utilizado en la simulacin fue de 89.7%.
3.4.6. Proceso de separacin y purificacin

La corriente de salida del fermentador (PROFERMEN) se alimenta a una unidad
flash (F2) de donde la corriente de salida en fase vapor se alimenta a un
intercambiador de calor (T_CO2) para disminuir su temperatura hasta 15C
buscando condensar la fraccin de compuestos pesados (butanol, acetona y
etanol) de la corriente, los cuales son arrastrados por las fuertes interacciones
moleculares con el bixido de carbono en la fase vapor. Los condensados que
salen de la unidad flash (FLASHCO2) son enviados (LIQ_VARI) a la segunda
columna de destilacin (COLUMNA2) para su separacin subsecuente, mientras
que el bixido de carbono e hidrgeno salen en fase gaseosa del proceso
(SALIDA).
La salida en fase lquida (ALIMENCOL1) de la unidad flash (F2) se alimenta a la

primera columna de destilacin (COLUMNA1), donde tambin se alimenta cerca
de los fondos una corriente de CO2 (CO2CRITICO) en condiciones supercrticas
(50 C y 40 atm) con el propsito de mejorar la separacin de los productos de
inters. La columna de destilacin 1 tiene una configuracin de 10 etapas y una
relacin de reflujo de 1, la cual fue determinada a travs de mtodos cortos. El
objetivo de esta primera columna es separar por el fondo (FONDOCOL1) la mayor
cantidad de agua y glucosa que no reaccion y obtener por el domo (DETILCOL1)
una mezcla con los componentes principales.
La corriente de salida por el domo de la columna (DETILCOL1) es mezclada (M1)

con los condensados recuperados (LIQ_VARI) de la fase vapor de la unidad flash
(FLASHCO2). Esta mezcla (ALIMCOL2) se alimenta a la segunda columna de
destilacin (COLUMNA2) con 63 etapas, a sta Tambin se alimenta CO2 en
condiciones supercrticas (CO2CRITIC) y se realiza un vaco (0.5 atm). El butanol
se obtiene por el fondo de la columna (FONDOCOL2) con una pureza del 99% en
masa junto con trazas de agua. La corriente de salida en el domo de la columna
(ALIMCOL3) contiene acetona, etanol, agua, hidrgeno y CO2. La mezcla de estos
cinco componentes se hace pasar por una tercera columna de destilacin
(COLUMNA3) para separar acetona, hidrgeno y bixido de carbono por la
corriente del domo (ALIMCOL4) y etanol con el resto de agua por la corriente del
fondo (FONDOCOL3); la separacin se realiza en una columna de destilacin de 5
platos a 1 atm de presin. La corriente del domo al tener gran cantidad de
acetona, se introduce a la ltima columna con el fin de separar CO 2 e hidrgeno
por el domo (DOMOCOL4) y acetona por el fondo (FONDOCOL4) con una pureza
del 93.44% en base molar.
51
La mezcla restante de agua y etanol FONDO_COL_3 no ser tratada en una
subsecuente columna de destilacin por ser esta una mezcla muy diluida (16.3 %
de etanol en base molar). En el caso de querer recuperar este etanol para ser
utilizado como un biocombustible, seguramente se requerira de una considerable
cantidad de energa en el proceso de purificacin, ya que la mezcla etanol-agua es
un reconocido azetropo y por lo tanto incluir en esta planta al etanol como
biocombustible podra reducir considerablemente la factibilidad del proceso ABE.
Para los alcances de este trabajo se disea la planta ABE con nfasis nicamente
hacia biobutanol como biocombustible y se dejar la mezcla etanol-agua como un
subproducto que puede ser utilizado en la industria con una finalidad diferente a la
que tendra como biocombustible.
El bixido de carbono que se produce durante la reaccin de fermentacin y que

es recuperado en la seccin de purificacin, se puede considerar para su
comercializacin a la industria refresquera como sucede en otras plantas de
produccin de biocombustibles (Inbicon, 2013).
La Tabla 13 muestra los flujos y concentraciones de salida de los compuestos en

la seccin de purificacin y separacin.
52
Figura.16. Diagrama del proceso de produccin de acetona, butanol y etanol.
53
Tabla 13. Datos de las corrientes obtenidas en el simulador PRO II. Versin
9.0
CORRIENTES DE SALIDA
FONDO
DOMO FONDO FONDO FONDO COLUMNA
UDM CO2 CRTICO COLUMNA 4 COLUMNA 2 COLUMNA 3 COLUMNA 4 1
Temperatura C 50 -88.1 100 100 27.5 100
Presin atm 40 1 0.5 1 1 1
kg-
Flujo molar mol /
da 5 50.88 60.45 211.63 29.80 3,240.86
Acetona 0 0 0 0.0005 0.8447 0
Etanol 0 0 0 0.0676 0.0073 0
H2O 0 0 0.0474 0.9275 0.1309 0.9968
Butanol 0 0 0.9525 0.0043 0 0
CO2 1 0.9819 0 0 0.0169 0
H2 0 0.01807 0 0 60 0
UDM: Unidades de medicin
3.5. Anlisis e integracin energtica en el proceso

Los requerimientos energticos en la mayora de los proceso de produccin a
escala industrial generalmente llegan a ser muy altos, el proceso de produccin de
acetona, butanol y etanol no es la excepcin, por lo tanto resulta necesario realizar
un anlisis e integracin energtica en el proceso.
El diseo de redes de recuperacin de calor toma en consideracin diversas

variables importantes en el proceso, especialmente, los flujos y las temperaturas
de entrada y salida de las corrientes que participan en el proceso de intercambio
de energa. Durante el funcionamiento de un proceso, las condiciones de
operacin pueden variar dependiendo de agentes externos al proceso por
ejemplo, incremento o reduccin de la produccin debido a cambios
climatolgicos, etc.
Para este anlisis se define como una red flexible aquella que es capaz de
mantener las condiciones de operacin establecidas, a pesar de la presencia de
variaciones en las condiciones originales de operacin. Para realizar la integracin
es necesario conocer las caractersticas de las corrientes del proceso, la cual se
obtiene de los resultados de la simulacin del proceso ilustrado en la Figura 17. La
Tabla 14 contiene la informacin requerida para realizar la integracin de energa
para el proceso de produccin ABE.
54
Tabla 14. Datos de los intercambiadores de calor obtenidos en el simulador
PRO II. Versin 9.0
Corriente Nombre en el

diagrama de /.
[ ] [ ]
flujo [] [] [ ] [ ] [kW]

H1 S1-S40 102 25 62.93 0.8 4846.01 77,721.51 2.91
H2 LIQINOCULO- 48.6 37.5 8.23 0.8 91.44 9,498.96 3.12
LIQPARAINOCU
H3 HIDROLIZADO- 50 37 73.77 0.8 959.09 85,611.66 3.10
L_HIDR_ENZI
H4 VAPORFERMEN- 37 15 3.30 0.8 72.78 6,511.78 1.83
ALIMCOL2
H5 1 93 86 5.27 0.8 36.93 11,811.80 1.61
C1 LIQ_ENZIMA- 48.6 50 74.13 0.8 103.79 85,490.64 3.12
LIQ_E_ENZIMA
C2 10 86 100 68.85 0.8 963.99 60,030.14 4.13
C3 VAPORDEAGUA 20 268 68.85 0.8 17076.05 59,301 4.18
HU 300 300 0.8
CU 5 25 0.8
H: corriente caliente a enfriar; C: corriente fra a calentar; HU:enfriador; CU:calentador; F: energa a intercambiar
Obteniendo datos para costos por servicio de enfriamiento y de calentamiento.
U para todos los apareamientos 0.8 kW K-1 m-2

Costo de enfriamiento 20 $kW -1 ao-1
Costo de calentamiento 80 $kW -1 ao-1
Funcin de costo para los equipos de la red, $ ao-1 1,300 A 0.6 [A en m2]
La realizacin de la Tabla de calor (anexo O), es til para la configuracin de un

diseo de recuperacin de calor, con la cual se obtienen los datos para la
construccin de una red, con el fin de mejorar los costos. Con ello es posible
realizar un anlisis e integracin de energa en el proceso para los
intercambiadores de calor (ver Figura 16).
55
103.7939 kW 4742.2156 kW
102C 25C F(kW/K) H (kW)
H1 1 3 62.9352 4846.0095
91.4374 kW
48.6C 37.5C 8.2376 91.4374
H2 CU
169.3081 kW 789.7825 kW
37C
H4 50C 4 47.71C CU 73.7762 959.0906
72.7843 kW
37C 15C
H5 CU 3.3084 72.7844
36.9286 kW
93C 86C 5.2755 36.9287
H6 2
50C 48.6C
H3 74.1385 103.7939
963.9897 kW
100C HU 86C H7 68.8564 963.9898
12127.6001 kW
268C 91.8C 48.6C 0.085975 20C
HU AS 68.8551 17076.0524
5.9199
95.35C 0.914024 62.9351
Figura 17. Diagrama de integracin de calor
Realizando un anlisis sin integracin energtica del proceso, se obtiene un gasto

de 1,652,707.69 dlares al ao de gastos por corrientes auxiliares, segn se indica
en la Tabla 15.
Tabla 15. Energa y costo de red sin integracin de calor
Calor total recuperado 0.00 kW/da

Total de servicios de calentamiento 18,143.84 kW/da
Total de servicios de enfriamiento 6,006.25 kW/da
Costo total anual del capital 81,075.80 (dlares/ao)

Costo total anual de operacin 1,571,631.89 (dlares/ao)
Costo total anual de la red 1,652,707.69 (dlares/ao)
56
Empleando una integracin de energa se obtiene un costo de 1, 216,797 dlares
por ao utilizando las corrientes de calentamiento y enfriamiento como se muestra
en la Tabla 16.
Tabla 16. Energa y costo de red con integracin de calor
4,974.38 kW/da
Calor total recuperado
Total de servicios de enfriamiento 954.00 kW/da

Costo total anual de operacin 1,066,407.28 (dlares/ao)
Costo total anual de la red 1,216,797.02 (dlares/ao)
Se puede observar una disminucin de aproximadamente 26.37 % del costo total

comparado con el caso base en el cual slo se utilizan los servicios auxiliares.
Otro de los impactos positivos al realizar la integracin energtica de procesos es
la disminucin de produccin de bixido de carbono que se genera al realizar la
combustin de algn combustible fsil para la generacin de vapor.
En el proceso de produccin ABE se obtiene una cantidad significativa de residuos

slidos. Estos desechos tienen un potencial uso para generar energa trmica a
travs de su combustin en forma de pellets y as producir el vapor que se
necesite en el proceso. La combustin de los pellets y su uso como fuente de
energa trmica permite eliminar el consumo de los servicios auxiliares de
calentamiento, los cuales utilizan combustibles que generan un gasto extra y un
impacto negativo al ambiente.
Los residuos slidos que se obtienen tienen un poder calorfico de 4,000 kcal/kg
(Pellets, 2014). El flujo msico de salida de los slidos residuales en el proceso es
de 16,847.88 kg/da, con lo cual es posible producir 78,436.24971 kW por da de
energa trmica.
El proceso de produccin ABE requiere de 13,091.590 kW por da para sustituir

los servicios auxiliares de calentamiento. Lo que nos deja con 2,812.03 kg/da de
materia disponible (pellets) para obtener energa extra o ser vendida en el
mercado.
El uso los desechos slidos del proceso y la eliminacin de los costos de servicios
de calentamiento (ver Tabla 17), representara una reduccin de
aproximadamente el 80 % del costo de operacin, con la utilizacin general de los
servicios auxiliares.
57
Tabla 17. Comparacin de la energa de calentamiento y enfriamiento
empleada al proceso
Calor total recuperado 4,974.37 kW/da
Total de servicios de enfriamiento 954.00 kW/da

Costo total anual de operacin 19,080.08 (dlares/ao)
Costo total anual de la red 169,469.83 (dlares/ao)
3.6. Descripcin de los equipos

Los equipos utilizados en el proceso se clasifican en dos categoras:
Equipos mayores donde se pueden encontrar los reactores,
intercambiadores de calor, tanques de almacenamiento y flash, columnas
de destilacin, etc.
Equipos menores donde podemos encontrar las bombas, mezcladores y
separadores, cinta trasportadora, etc.
3.6.1 Equipos mayores

Las reacciones qumicas y biolgicas del proceso son llevadas a cabo en
reactores continuos y por lotes donde se requiere un determinado tiempo de
reaccin y residencia para obtener la conversin deseada.
En la etapa de purificacin son necesarias cuatro torres de destilacin, la primera

para retirar la mayor cantidad de agua obtenida durante el proceso y la segunda
para obtener la pureza deseada del butanol del 99.5% peso, finalmente la
purificacin de la acetona y etanol se obtiene con las ltimas tres columnas.
Los reactores necesarios para realizar las tres etapas principales del proceso
(pretratamiento, hidrlisis enzimtica y fermentacin), son analizadas en base a
los resultados obtenidos en la etapa experimental, para determinar la cintica, el
volumen y de igual manera el costo de cada equipo.
3.6.1.1 Pretratamiento
En esta etapa del proceso, el flujo de slidos (bagazo)y cido sulfrico se
alimentan al tanque donde se lleva a cabo la reaccin; adems de inyectar vapor
de agua a alta presin de manera continua para alcanzar las condiciones de
reaccin deseadas. El tiempo de residencia de la reaccin es de 5 min (ver Figura
18)
58
Figura 18. Diseo del tanque de pretratamiento empleado en el proceso
El volumen del tanque se determin utilizando la cintica para produccin de

glucosa, la cual indica la velocidad en la que lleva a cabo la reaccin. El volumen
de tanque obteniendo fue de 4258 m3. Este volumen requerido se distribuye en
tres tanques con capacidad de 1420 m3 cada uno. El material del tanque debe ser
acero inoxidable 316 Los tanques de reaccin debe operar a las condiciones
mostradas en la Tabla 18 en modo continuo con un tiempo de residencia de 5
minutos.
Tabla 18 Condiciones de operacin y dimensiones del tanque de

pretratamiento

= 0.235
Cintica Anexo R
Volumen 1,420 m3 Anexo Q
Dimetro 7.67 m Altura 30.70 m

0.66 de celulosa a glucosa
Conversin
Reaccin
Condiciones de operacin Material

Temperatura 120 C Presin 1 atm Acero inoxidable 316
3.6.1.2 Hidrlisis enzimtica

En esta etapa del proceso se agrega la enzima (Celluclast Novozymes ), el
tiempo de reaccin en el reactor se muestra en la Figura 19. Para la alimentacin
de la enzima al reactor se consideran dos relaciones, la primera es que por cada
gramo de celulosa se agrega 20 mg de enzima y la segunda es que la corriente
que contiene la enzima debe tener un 70 % de agua.
59
Figura 19 Diseo del tanque de hidrlisis enzimtica
Para determinar el volumen del reactor, se hizo un anlisis del clculo cintico. Se
determin utilizar un reactor de flujo pistn. Los resultados de la derivada de la
concentracin de celulosa en funcin del tiempo (dCc/dt) fueron obtenido del
modelo propuesto por Tsai et al. (2014). El volumen del reactor que se requiere
fue de 12,574.8 m3. El reactor debe operar de manera continua como se muestra
en la Tabla 19. El tiempo de residencia es de 1.32 min
Tabla 19. Condiciones de operacin y dimensiones del tanque de hidrlisis

enzimtica

= 1E-07
Cintica Anexo R
2,080 m3
Volumen Anexo Q
Dimetro 9.59 m Longitud 28.78 m
Reaccin

Temperatura 50 C pH 7 Presin 1 atm Acero inoxidable 316
3.6.1.3 Fermentacin
Para la etapa de fermentacin, el tanque debe tener caractersticas distintas a los
anteriores, ya que en esta etapa se manejan gases como el CO2 e H2 que son
subproductos de la fermentacin (Figura 20), por lo cual debe de incorporarse una
vlvula de seguridad para la liberacin de los mismos, ya que de no ser as la
presin del tanque aumenta considerablemente causando serios daos. El tiempo
de reaccin es de 113 horas para que se cumpla la produccin mxima de
acetona, butanol y etanol.
60
Figura 20. Diseo del tanque de fermentacin
Se determin la cintica del consumo de la glucosa en base al anlisis obtenido en

la etapa experimental, obteniendo un volumen de 20,541 m 3 para un reactor de
tanque agitado. Las condiciones de operacin para cada tanque se muestran en la
Tabla 20. Donde cada tanque tiene un tiempo de residencia de 2.4 minutos, un
tiempo de esterilizacin de 1 hora y un tiempo de flujo de CO 2 para condiciones
anaerobias de 30 minutos.
Tabla 20 Condiciones de operacin y dimensiones del tanque de

pretratamiento

= 0.8573
Cintica Anexo R
3,200 m3
Volumen Anexo Q
Dimetro 11.07 m Longitud 33.22 m
0.897 de glucosa a
Conversin productos
Reaccin
+ + + + +

Temperatura 37 C pH 7 Presin 1 atm Acero inoxidable 316
Para la determinacin de la tabla de operacin, se tomaran en cuenta los tiempos

de llenado, reaccin y vaciado. El tiempo de llenado se determina con la relacin
del flujo de alimentacin al reactor y el volumen del tanque
Datos:
Volumen del tanque (V) = 3,200 m3
Flujo de alimentacin al tanque (F) = 71,383 kg/h
Densidad ()=1,000 kg/m3
Capacidad de llenado del (C)= 83.88 %
61
Los datos se introducen a la reaccin para determinar el tiempo de llenado y
vaciado.

=
100
Calculando un tiempo de llenado y de vaciado de 37.6 h cada uno y el tiempo de

reaccin de 113 horas, se realiza la tabla de operacin (Figura 21) para los 5
reactores de fermentacin.
Horas 37.6 75.2 112.8 150.4 188 225.6 263.2 300.8 338.4 376 413.6
Reactor 1
Reactor 2
Reactor 3
Reactor 4
Reactor 5
Reactor 1
Reactor 2
Fermentacin
Llenado Lneas horizontales
Reaccin Puntos
Vaciado Lneas verticales
Figura 21. Tabla de operacin para la etapa de fermentacin (Morales-Rodrguez et al, 2011).
3.6.1.4 Purificacin
En la etapa de purificacin se emplea un tren de separacin, constituido por 4
columnas de destilacin conectadas en serie como se muestra en la Figura 22.
Figura 22 Diseo del tren de separacin del rea de purificacin
Las condiciones de operacin de cada columna al igual que sus dimensiones, se

muestran en la Tabla 21. La primera columna fue diseada para separar por el
fondo la mayor cantidad de agua y la glucosa que no reaccion durante el
proceso; por el domo se obtiene el resto de los componentes (mezcla 1), los
cuales son alimentados a la segunda columna que opera a condiciones de vaco y
de igual manera se alimenta con un flujo de CO 2 para beneficiar la separacin del
62
butanol obtenido en el fondo de la segunda columna con una pureza de 95.25 %
en base molar. La corriente que sale del domo de la segunda columna (mezcla 2)
se alimenta a la tercera columna donde se separa la acetona por el domo y el
etanol por el fondo, pero ambos componentes no se obtienen con una pureza alta,
ya que la acetona al ser un componente muy voltil se separa junto con el CO 2 y
el H2, en comparacin con el etanol que es un componente hidroflico el agua
arrastra a est compuesto.
La ltima columna es diseada para obtener acetona con una pureza del 84.47%
en peso, de una mezcla que en su mayora es CO2, H2 y muy poca agua. No es
necesario realizar una separacin para la mezcla de etanol-agua ya que es una
solucin muy diluida y la separacin sera demasiado costosa para la cantidad de
producto obtenido, ya que las condiciones a la que debe operar la torre son
especiales por ser una mezcla azotropica.
Tabla 21. Condiciones de operacin de las torres de destilacin
Nmero Fondo Domo

Presin Relacin de
Columna de Flujo Flujo
(atm) reflujo Componentes Componentes
etapas (kgmol/h) (kgmol/da)
Acetona,
etanol,
Agua,
1 1 1 10 3240.88 336.96 butanol,
glucosa
agua, CO2 e
H2,
Acetona,
Butanol y
2 0.5 4 63 60.407 292.372 etanol, agua,
agua
CO2, e H2,
Acetona,
3 1 3 5 211.657 Etanol y agua 80.697
CO2, e H2
Acetona y
4 1 3 6 29.810 50.887 CO2, e H2
agua
Mediante los resultados de la Tabla 21 se obtienen los datos para determinar las
dimensiones de cada columna (Tabla 22) y as determinar el costo de cada una de
las columnas necesarias para llevar a cabo el proceso.
Tabla 22. Dimensiones de las torres de destilacin
Columna Dimetro (m) Altura (m) Material

(Anexo Q) (Anexo Q)
1 3.05 10.37
2 5.33 42.70 Acero inoxidable
3 2.03 7.32 316
4 1.19 7.93
3.6.1.5. Intercambiadores de calor

En base a los datos obtenidos en el Pro II, se obtiene el rea destinada para cada
intercambiador como se muestra en la Tabla 23.
63
Tabla 23 Dimensiones y condiciones de operacin de las torres de
destilacin
Equipo Q (kW) Tcal (K) Tfro (K) rea (m2) Temperaturas

1 103.7939 52.00 51.75 2.50 37 a 15
2 36.9287 38.16 37.40 1.22 48.6 a 37.5
3 4742.2156 5.00 5.00 1185.55 102 a 25
4 91.4374 1.40 27.70 12.97 50 a 37
5 89.5635 4.58 36.90 2.36 48.6 a 50
3.6.2. Equipos menores

Para los equipos menores slo se analiz la bomba (Tabla 24) para determinar su
trabajo y eficiencia as como tambin la presin a la salida.
Tabla 24. Condiciones de operacin de la bomba (datos extrados del

simulador Pro II)
Trabajo Eficiencia Presin
0.28 kW 65% 1 atm
3.7. Anlisis econmico

La factibilidad del proceso de realiz llevando cabo un estudio econmico de ste.
El cual se determina de acuerdo a los costos directos, indirectos y de mano de
obra.
Los costos directos se clasifican en dos grupos: 1) costos dentro de la regin del
proceso, que involucra el costo de los equipos, instalacin de tuberas y del
sistema elctrico, y 2) costos fuera de la regin del proceso, la cual engloba los
costos de servicios utilizados, tales como agua de enfriamiento, vapor para
calentamiento y el mantenimiento de la planta. El costo fuera de la regin de
proceso es el 45% del costo dentro de la regin del proceso.
Por otra parte, los costos indirectos estn constituidos por los gastos, el pago al
personal y los costos por accidentes e imprevistos. Este tipo de costos se calcula
como el 25% de los costos directos (Douglas, 1988).
Los gastos de inversin deben incluir los costos de materias primas, sin embargo,
en nuestro caso particular, la materia prima es bagazo de caa de azcar, el cual
es un residuo de la industria azucarera. Por lo tanto es de esperarse que el costo
de adquisicin de esta sea mnimo.
3.7.1. Costo de equipo
64
El costo de los equipos se estim con el programa CAPCOST y utilizando el
mtodo descrito en Biegler (1997); los precios obtenidos se muestran en la Tabla
25.
Tabla 25. Costos de compra
Etapa del proceso Equipo Nmero de unidades Costo en dlares

Pretratamiento Tanque 3 488,004
Intercambiador de 1 206,677
calor
Cinta transportadora 1 138,273
Hidrlisis Tanque 6 1,958,838
enzimtica Intercambiador de 1 1,597
calor I
calor II
calor III
Bomba 1 14,062
Cinta transportadora 1 138,273

Fermentacin Tanque 5 1,995,703
calor
Bomba 1 14,062
Purificacin Torre de destilacin I 1 85,522
Torre de destilacin II 1 588,253
Torre de destilacin III 1 42,555
Torre de destilacin IV 1 29,652
TOTAL USD 5,708,023
3.7.2. Capital de inversin

Una vez calculado el monto total del equipo del proceso, se determina el monto
necesario para los conceptos que conforman el capital fijo, asignndoles un
porcentaje determinado del total del equipo (Tabla 26). Una vez determinado el
capital fijo, se calcula con base en este el capital de trabajo.
Tabla 26. Capital total de inversin

COSTOS DIRECTOS
IN SITU
CONCEPTO COSTO (USD)
Equipo 5,708,023
Instalacin de equipo 6,307,366
Instrumentacin y control 2,680
Instalacin de tuberas 1,769,487
65
Instalacin elctrica 570,802
FUERA DE SITIO
Instalaciones 1,655,327
Mantenimiento de instalaciones 342,481
Terreno 4,130,528
COSTOS INDIRECTOS
Servicios de ingeniera y supervisin 1,826,568
Gastos de construccin 1,940,728
Gastos de contingencia 9,334,902
CAPITAL FIJO 5,708,023
CAPITAL DE TRABAJO 1,141,605
CAPITAL TOTAL DE INVERSIN USD 34,730,497
3.7.3. Costo de mano de obra

El costo de mano de obra est incluido dentro de capital de trabajo, por lo que slo
se hace mencin del personal necesario y el sueldo a percibir durante un ao de
labor. El clculo se realiza tomando como base el salario mnimo establecido para
la zona C en la cual se encuentra el municipio de Carlos A. Carrillo, Veracruz;
lugar donde se ubicar la planta.
Tabla 27. Costos de mano de obra.
PUESTO TURNOS PERSONAL SALARIOS SALARIO

POR TURNO MNIMOS ANUAL
(DOLARES)
Gerente de planta 1 --- 44 80,000
Ingeniero de 2 1 7 24,056
planta
Ingeniero de 2 1 8 27,756
seguridad
Supervisores 1 1 4 7,032
Operarios 3 7 3 112,392
especializados
Personal de taller 2 3 2.3 24,978
Obrero calificado 3 7 1.5 58,296
Ayudante general 2 3 1.3 13,878
Salario anual total USD 348,388
3.7.4. Costos de operacin
En la operacin de la unidad de pretratamiento son necesarios los siguientes

insumos: el bagazo de caa de azcar, H2SO4; en la unidad de neutralizacin el
NaOH, en la hidrolisis enzimtica la enzima Celluclast Novozymes y en el
tanque de fermentacin el microorganismo Clostridium acetobutylicum, adems
66
electricidad y agua. Los productos del proceso son acetona, butanol, etanol, H 2O,
H2 y CO2.
Para estimar el costo del hidrogeno (3.38/kg) se consideraron los reportes

emitidos por el laboratorio nacional de energa renovable (NREL, por sus siglas en
ingls) del gobierno de Estados Unidos. El precio de compra y venta por ao de
todos los insumos, servicios y productos se muestran en la Tabla 28 y 29.
Tabla 28. Costos de operacin
Concepto Cantidad (kg/ao) Precio unitario Total

(USD/kg) (USD/ao)
Gastos de operacin 862,110
Gastos administrativos 2,221,307
Bagazo de caa de 238,648,680 0.02 4,772,973
azcar
H2SO4 33,419,640 0.085 2,840,669
NaOH 3,056 0.45 1,375
Mantenimiento 342,481
Enzima 40 1.50 60
TOTAL USD 11,040,975
Tabla 29. Ingresos
Compuesto Cantidad (kg/ao) Precio unitario Total

(USD/kg) (USD/ao)
Acetona 13,709,987 1.3 17,822,983
Butanol 37,840,819 30.9 1,169,281,307
Mezcla agua- 374,404,418 0.1 3,740,442
Etanol
TOTAL USD 1,190,844,732
3.8 Rentabilidad
Para determinar si el proyecto es factible se requiere conocer la tasa de inters de
retorno (TIR) y la tasa de rendimiento mnima aceptada (TREMA). La TIR se
calcula en base a la inversin inicial requerida para el funcionamiento de la planta
y la produccin anual de butanol y acetona, que son los productos de inters en
este proyecto.
La tasa interna de retorno (TIR) se calcul considerando una depreciacin del 10

% en los equipos y una tasa de inflacin de 35 %. Si la TREMA es menor que la
TIR el proceso es rentable. Considerando una tasa de inters interbancario (TIIE)
de 3.32 (BANXICO, 2014) y un porcentaje de riesgo del 20 %, tenemos que la
TREMA tiene un valor de 23.32 % mientras que la TIR presenta un valor de 38.25
% por lo que esto representa que el proceso es rentable. El tiempo necesario para
67
recuperar la inversin son 7 aos, a partir de los cuales se obtendr una ganancia
neta.
3.9. Anlisis ambiental

Las actividades industriales generan gases de efecto invernadero (GEI) que
afectan al medio ambiente, provocando la modificacin del clima. La cuantificacin
de las emisiones de GEI permite el estudio del impacto medioambiental de las
actividades realizadas en la empresa y de esta manera estimar las emisiones
asociadas a stas.
La herramienta de la que se dispone para poder valorar el impacto total que se

tiene sobre el clima mediante los GEI es la huella de carbono (HC). Mediante este
indicador se busca cuantificar la cantidad de emisiones de GEI expresada en
emisiones de CO2 equivalentes, que son generadas como consecuencia de las
actividades y bienes generados. Se emplea el anlisis del CO2 porque es el gas
ms emitido dentro de los GEI, y por lo tanto el que mayor repercusin tiene (Gua
HC, 2014).
El certificado de la huella de carbono no es obligatorio, pero muchas empresas

estn interesadas en que sus productos lleven la etiqueta que certifica los niveles
mnimos de CO2 y de esta manera los consumidores puedan optar por productos
menos contaminantes (Procarbono, 2014).
Para determinar la cantidad de kg equivalentes de carbono producidos durante el

proceso de produccin de acetona, butanol y etanol, se considera el CO2 emitido
durante el proceso de produccin y el gasto energtico de los equipos empleados.
La cantidad de equivalentes de carbono asciende a un total de 144.188 kg/da

(huella de carbono, 2014) de los cuales el suministro de energa empleado en los
equipos es menor del 1% de las emisiones generadas de CO2. Lo cual indica que
la cantidad de equivalentes de carbono presente en los equipos no genera un
impacto en el medio ambiente.
3.10. Diseo de la planta a nivel escala

Una vez obtenido las dimensiones de los equipos se procede a realizar un plano
sobre la distribucin de las secciones de procesamiento dentro de la planta, lo que
tendr un rea de superficie de 10,579 m2 distribuidos en almacn, rea de
pretratamiento, hidrlisis enzimtica, fermentacin, purificacin, almacn de
butanol y finalmente el rea de servicios auxiliares.
El rea de almacn, as como el rea de servicios auxiliares deben permanecer

alejados del rea de produccin, ya que si se llega a tener un riesgo de incendio o
de explosin, no se afecte al rea de proceso.
68
El rea de pretratamiento cuenta con tres tanques, el rea de hidrlisis cuenta con
6 tanques y el rea de fermentacin con 5 tanques. Las 4 columnas se encuentran
en el exterior del rea de proceso, esto es debido a su gran altura.
El diseo de la panta a nivel plano, fue basado en la empresa Inbicon, donde su

distribucin de reas se encuentra representado de manera semejante a la Figura
23.
Figura 23. Distribucin de reas en la planta de produccin (Layout)
3.11. Conclusiones del captulo 3

La cantidad de materia prima necesaria para producir 3,561 kg /da de butanol y
1,395 kg/da de acetona, es de 27,243 kg/da. Teniendo una conversin en el
pretratamiento de 0.66 de celulosa a glucosa y en fermentacin de 0.89 de
glucosa a productos.
Una vez obtenido el dato de la cantidad de materia prima se realiz una

simulacin en el programa PRO II versin 9.0 basado en los resultados obtenidos
en la etapa experimental, se establecieron las condiciones de operacin
establecidas en el simulador.
El proceso para la obtencin de acetona, butanol y etanol resulta ser complejo

debido a las series de reacciones involucradas en la fermentacin, lo cual implica
un obstculo en el dimensionamiento de los equipos (tanques), de igual manera
en la seccin de purificacin los compuestos involucrados (agua, etanol, acetona y
butanol) tienen propiedades similares en muestras binarias formando azetropos,
lo cual complica la separacin de los componentes en columnas con una altura
menor a 3 m y con temperatura y presin atmosfrica.
69
Mediante un anlisis econmico se determin que el proceso es rentable, lo cual
implica que la TIR es mayor que la TREMA. Se obtuvo que el valor de la TIR es de
38.25% y la TREMA de 23.32% la inversin total se recupera a partir del sptimo
ao de operacin de la planta.
En el aspecto ambiental se realiz un anlisis utilizando un estudio de los

carbonos equivalentes empleados en el proceso (huella de carbono), de donde se
concluye que el suministro de energa en los equipos no genera un impacto
considerable al medio ambiente, ya que representa menos del 1% de carbonos
equivalentes de todo el proceso.
70
Anexo A
Propiedades fsicas y qumicas de productos
Acetona
La acetona est constituida por tres carbonos cuya frmula es C 3H6O; se obtiene
como subproducto en la fermentacin. Es utilizada como disolvente de grasas,
aceites, plsticos, barnices, etc. Se usa en la manufactura de algunos explosivos,
purificacin de parafinas, extraccin de productos vegetales y animales, y como
materia prima en una gran variedad de sntesis de qumica orgnica. La Tabla A1
describe las propiedades fsicas de la acetona.
Tabla A1. Propiedades fsicas de la acetona (Hoja de seguridad acetona.

UNAM. 2012)
Punto de ebullicin 329.4 K

Densidad 788 g/L
Lmite de explosividad 2.6-12.8%
Presin de vapor 0.24 atm (293 K)
Solubilidad Con agua, alcoholes,
cloroformo, aceites y
teres
Butanol
El butanol (alcohol butlico o 1-butanol) es un alcohol primario constituido por

cuatro carbonos cuya frmula C4H10O; es un lquido incoloro, flamable, con un olor
caracterstico, su vapor irrita las membranas mucosas produciendo un efecto
narctico a altas concentraciones. La Tabla A2 resume algunas propiedades
importantes del butanol. El butanol es miscible en solventes orgnicos comunes y
parcialmente miscible en agua. Recientemente se ha determinado que el
biobutanol se puede utilizar como aditivo en las gasolinas debido a su capacidad
de mezclado y contenido energtico (Durre, 2007).
Tabla A2. Propiedades fsicas del butanol (Hoja de seguridad butanol. UNAM.
2012)

Densidad 809.8 g/L
Lmite de explosividad 1.4 a 11.3 %
Solubilidad Con agua, alcoholes,
cloroformo, aceites y
teres
71
Etanol
El etanol es un alcohol constituido por dos carbonos, cuya frmula es C 2H6O se

utiliza industrialmente para la obtencin de acetaldehdo, vinagre, butadieno,
cloruro de etilo y nitrocelulosa, entre otros. Es utilizado como disolvente en sntesis
de frmacos, plsticos, lacas, perfumes, etc. La Tabla A3 resume las propiedades
fsicas del etanol.
Tabla A3. Propiedades fsicas del etanol (Hoja de seguridad etanol. UNAM.
2012)

Densidad 789.3g/L
Lmite de explosividad 3.3-19%
Solubilidad Con agua, butanol,
cloroformo, acetona y
teres
72
Anexo B
Humedad del bagazo de caa.
La Tabla B1. Muestra la prdida de agua en el bagazo hidrolizado en funcin del
tiempo, medido en una termobalanza.
Tabla B1. Datos de humedad para bagazo hidrolizado

Bagazo hidrolizado
primer segundo tercer
anlisis anlisis anlisis
Tiempo masa (g) masa (g) masa (g)
(min) 0.001 0.001 0.001
2.2
0.0 1.989 2.044 2.136
0.5 1.976 2.018 2.116 2.0
1.0 1.953 1.962 2.064
1.8
1.5 1.898 1.865 1.966 primer anlisis
1.6
2.0 1.795 1.709 1.804 segundo anlisis
2.5 1.639 1.5 1.614 tercer anlisis
masa(g)
1.4
3.0 1.431 1.331 1.412
1.2
3.5 1.269 1.178 1.251
4.0 1.132 1.043 1.108 1.0
4.5 1.022 0.945 1.006
0.8
5.0 0.93 0.874 0.917
5.5 0.862 0.811 0.856 0.6
6.0 0.802 0.768 0.81
0.4
6.5 0.76 0.733 0.763 0 2 4 6 8 10 12
7.0 0.724 0.707 0.742 tiempo (min)
7.5 0.693 0.695 0.72
8.0 0.668 0.683 0.707
8.5 0.653 0.677 0.696 Figura B1. Grfico de masa del bagazo de caa hidrolizado en
9.0 0.638 0.672 0.687 funcin del tiempo
9.5 0.626 0.669 0.682
10.0 0.618 0.668 0.679
10.5 0.608 0.677
11.0 0.608
Los anlisis llevados a cabo a cada muestra dan como resultado un

comportamiento similar en las tres muestras tomadas al azar.
73
La Tabla B2 se muestra la humedad perdida de la muestra seca.
Tabla B.2. Tabla de humedad de bagazo seco
bagazo seco
primer segundo tercer
anlisis anlisis anlisis
tiempo masa (g) masa (g) masa (g) 2.0
(min) 0.001 0.001 0.001
0.0 1.945 1.982 2.005
primer anlisis
0.5 1.929 1.956 1.981 1.8 segundo anlisis
1.0 1.915 1.896 1.922 tercer anlisis
1.5 1.901 1.768 1.748
masa (g)
2.0 1.701 1.601 1.632 1.6
2.5 1.616 1.44 1.477
3.0 1.468 1.338 1.401
1.4
3.5 1.356 1.286 1.37
4.0 1.291 1.264 1.346
4.5 1.26 1.236 1.337
1.2
5.0 1.247 1.221 1.331
5.5 1.237 1.212 1.328
-1 0 1 2 3 4 5 6 7 8
6.0 1.235 1.207 1.328
tiempo (min)
6.5 1.234 1.204
7.0 1.204 Figura B2. Grfico de masa del bagazo

seco en funcin del tiempo
Las muestras se realizaron por triplicado, teniendo un comportamiento similar.
74
Anexo C
Determinacin porcentual de celulosa, hemicelulosa y lignina.
Metodologa empleada para la preparacin del bagazo de caa de azcar
El tamao de fibras de la materia prima no era uniforme por lo que se moli en una
licuadora y se tamiz para obtener un tamao de partcula definido. Se tom la
muestra entre el tamiz de numero 40 y 60 teniendo un tamao de partcula de
aproximadamente 0.42 mm. El proceso de secado se llev a cabo en una estufa a
65 C, durante 24 h. (Harris, 2007)
Determinacin porcentual de la celulosa.
A 0.5 o 1 gramo de muestra seca se le aadieron 15 ml de cido actico al 80 % y

1.5 ml de cido ntrico concentrado y se llev a reflujo por 20 min. La muestra
tratada se filtr y el residuo se lav con etanol, se sec en un horno a 119-121 C -
durante 20 horas dejando que se enfriara a temperatura ambiente en un
desecador por 2 horas y despus se pes (material A). Entonces se inciner a 504
C durante 3 horas dejando que se enfriara a temperatura ambiente en un
desecador por 2 horas y despus se pes (material B) (Abdullah et al., 2007).
La determinacin del porcentaje de celulosa se calcul mediante la ecuacin A1:
( )( )
% = 100 = (%) (%) (A1)
Dnde:
FAD: Fibra cido detergente.
LAD: Lignina cido detergente.
Determinacin porcentual de la hemicelulosa
A 0.5 o 1 gramo de muestra seca se le aadieron 100 ml de solucin neutra

detergente a temperatura ambiente (Soest y Wine, 1967) y 2 ml de
decahidronaftaleno. Se calent hasta el hervor de 5 a 10 minutos. Se redujo el
fuego cuando comenz a hervir, para evitar la formacin de espuma. Se mantuvo
hirviendo a un reflujo durante 60 minutos cronometrados desde el inicio de la
ebullicin. La muestra tratada se filtr y lav con un mnimo de agua caliente (90
C a 100 C), se lav la muestra con 5 ml de acetona y filtr con muy poco vaco,
el procedimiento se repiti dos veces ms. Se sec en un horno a 119-121 C -
durante 20 horas dejando que se enfriara a temperatura ambiente en un
desecador por 2 horas y despus se pes (material C). Entonces se inciner a 504
C durante 3 horas dejando que se enfriara a temperatura ambiente en un
desecador por 2 horas y despus se pes (material D). (Abdullah et al., 2006)
75
( )( )
% = 100 = (%) (%) (A2)
Dnde:
FND: Fibra neutro detergente.
FAD: Fibra acido detergente.
Determinacin porcentual de lignina
A 0.5 o 1 gramo de muestra seca se le aadieron 70 ml de cido sulfrico al

1.25%. La mezcla se llev a reflujo con agitacin constante, por 120 minutos, se
filtr y se lav con agua. A este material se le aadieron 30 ml de cido sulfrico al
72 % y se le permiti permanecer durante 3 horas con agitacin constante.
Posterior mente los slidos se lavaron filtraron y secaron a 119-121 C durante 20
horas dejando que se enfriara a temperatura ambiente en un desecador por 2
horas y despus se pes (material E). Entonces se inciner a 540 C durante 3
horas dejando que se enfriara a temperatura ambiente en un desecador por 2
horas y despus se pes (material F). (Van Soest et al., 1967)
La determinacin del porcentaje de lignina se calcul mediante la ecuacin:
( )( )
% = 100 = (%) (A4)
Dnde:
LAD: Lignina cido detergente.
76
Anexo D
Preparacin de soluciones
- Pretratamiento cido
Preparacin de soluciones hidrlisis de cido sulfrico a 2, 4, 6, 8, 10 % p/p
Para determinar la concentracin peso a peso, se utiliza la ecuacin A4 donde por

medio de un cociente relaciona las cantidades en gramos de las sustancias a
utilizar.
2 4
% = 100 % (A4)
2 + 2 4
Tabla D1. Datos en gramos para preparar las soluciones de cido sulfrico a
concentraciones de 2, 4, 6, 8, 10 %p/p
Concentracin (%p/p) masa de H2SO4 (g) masa de H2O (g) Masa total (g)
2 2 98
4 4 96
6 6 94 100
8 8 92
10 10 90
Preparacin de hidrxido de sodio al 4 % p/p

Para determinar la concentracin de 4% p/p de NaOH, se utiliza la ecuacin
2 y 3 donde se considera la densidad del H2O como 1 g/mL y de 2.16 g /mL
para el NaOH considerando un volumen total de 500 ml. La frmula
utilizada es la siguiente:

= (2.16) + 2 (1 ) (A5)
Se agreg 20.44 g de NaOH y 490.53 g de H2O
- Tcnica de azcares reductores (DNS)
Solucin buffer de acetato a 0.2 M y un pH de 4.8

Preparar 100 ml de solucin de acetato de sodio a 0.2 M y 100 ml de cido
actico glacial a 0.2 M.
Para la muestra slida se utiliz la siguiente ecuacin.
= . . (A6)
Donde:
77
g = masa en gramos
M = molaridad (mol/L)
V = volumen (L)
PM = peso molecular (g/mol)
Y para la muestra lquida
= (. . )/ (A7)
Donde
g = masa en gramos
M = molaridad (mol/L)
V = volumen (L)
PM = peso molecular (g/mol)
= densidad (g/mL)
Tabla D2. Preparacin de la solucin buffer de acetato

Peso
Concentracin Densidad Cantidad
Compuesto molecular
(mol/L) (g/mL) necesaria
(g/mol)
Acetato de
0.2 82.04 ---- 1.64 g
sodio
cido actico
0.2 60.05 1.049 1.15 mL
glacial
La cantidad necesaria se afora a 100 mL.
Para la solucin buffer se agrega 59 ml de acetato de sodio a 0.2 M y 41

mL de cido actico glacial a 0.2 M. Medir el pH para corroborar el dato.
Solucin DNS
La preparacin de 500 mL de solucin para el anlisis de DNS, se realiza
de la siguiente manera:
Agregar en un matraz de 500 mL las cantidades indicadas en la Tabla D.3

en el orden en que se muestran manteniendo una agitacin constante,
agregar uno a uno los compuestos y esperar su solubilidad antes de
agregar el siguiente compuesto, de lo contrario no habr solubilidad y
podrn precipitarse partculas slidas. Si se realiza correctamente la
solucin la mezcla adquiere un color amarillo que es fotosensible.
Tabla D3. Cantidades para la preparacin de la solucin de DNS

Compuesto Masa (g)
Hidrxido de sodio 5
Tartrato de sodio y potasio 100
Sulfito de sodio 0.25
Fenol 1
78
DNS (cido 3,5 dinitrosaliclico) 5
El cido 3,5 dinitrosaliclico es un compuesto fotosensible por lo que se

debe cubrir de la luz para que no pierda sus propiedades qumicas.
Preparacin de la muestra para la curva de glucosa anhidra.
Se prepar una solucin de 50 g/L de glucosa, de la cual se obtuvieron

diluciones de 10, 8, 6, 4, 2 g/L, para realizar una curva de calibracin con
base en la medicin de absorbancia.
Fermentacin
Preparacin de caldo tioglicolato
Se agregan 28.5 g de caldo tioglicolato por cada 1000 mL de agua destilada
para preparar el medio de cultivo que contiene componentes que permiten
el desarrollo de microorganismos.
Medio de cultivo y de inculo
El medio se prepar de acuerdo a la siguiente formulacin (componentes por

litro de agua destilada:
50 g de glucosa,
3 g/L de extracto de levadura,
0.5 g de fosfatos (K2HPO4 y KH2PO4),
Vitaminas: 0,001 g de cido p- amino benzoico (PABA), 0.001 g de tiamina,
0.0001 g de biotina, los cuales se esterilizan por filtracin
Trazas de elementos metales: 0.2 g de MgSO4.7H2O, 0,01 g de MnSO4.H2O,
0.01 g de FeSO4.7H2O, y 0.01 g de NaCl.
Para preparar el medio de cultivo se mezclan los compuestos mencionados
anteriormente con agua destilada en un matraz Erlenmeyer con agitacin
constante. Cuando los compuestos se hayan mezclado perfectamente, el
medio se sirve en las botellas serolgicas para posteriormente esterilizarlas en
la autoclave a 121 C, 15 lb/in2 durante 15 minutos.
La biotina y el PABA se agregan al medio despus de ser esterilizado en

autoclave.
Preparacin del inculo
La cepa se inocul en cajas de Petri, tubos con tioglicolato y en botellas

serolgicas.
Para las cajas de Petri el medio se prepar con:

200 mL de agua destilada
79
5.7 g de caldo tiogicolato
3 g de agar bacteriolgico
Despus se esteriliz el medio en autoclave, a las condiciones mencionadas
anteriormente. Finalmente el medio se sirvi en las cajas de Petri en
condiciones aspticas. Cuando el medio solidific se inocul con un asa
bacteriolgica, sembrando en las cajas de Petri, las cuales se introdujeron en
una jarra GasPak para mantener el inocul en condiciones estrictamente
anaerbicas. La jarra se incubo a 50 C.
Medio en tubos de 15 mL:

El medio se esteriliz para despus servir 10 mL de medio en cada uno de los
tubos (10 tubos en total). Los cuales fueron inoculados con un asa
bacteriolgica. 3 tubos contenan slo el inoculo, a 3 tubos ms se les adicion
1 mL de aceite mineral y los 4 restantes se inocularon igual con asa
bacteriolgica, pero se llenan hasta el lmite del tubo.
80
Anexo E
Volmenes de muestra lquida, volumen de NaOH y pH
La Tabla E1, E2 y E3 muestran las cantidades en ml de la muestra lquida (cido
sulfrico), el volumen agregado de NaOH, el pH.
Tabla E.1. Cantidades de H2SO4 y NaOH a una temperatura de 100 C
Bagazo hidrolizado
Volumen de
Concentracin de Volumen de
Muestra Temperatura (C) NaOH 5 % p/p pH
H2SO4 en % p/p H2SO4 (L)
(L)
21.1 2300 800 6.53 0.01
21.2 2 2140 800 6.32 0.01
21.3
2180 820 5.39 0.01
22.1 1980 1700 6.17 0.01
22.2
4 2150 1500 6.03 0.01
22.3
2180 1680 5.52 0.01
23.1 1950 2500 6.18 0.01
23.2 6 100 2210 2800 6.75 0.01
23.3 2140 2600 5.36 0.01
24.1 2440 2880 5.67 0.01
24.2
8 2320 3690 5.19 0.01
24.3
2600 4240 5.23 0.01
25.1 2050 4650 5.44 0.01
25.2 10 2080 4600 5.59 0.01
25.3
2340 4870 5.33 0.01
Bagazo seco
Volumen de
(L)
26.1 1080 410 6.59 0.01
26.2 2 1065 355 5.46 0.01
26.3 865 330 5.65 0.01
27.1 1350 1050 6.60 0.01

27.2 4 100 670 600 5.89 0.01
27.3
925 750 6.57 0.01
28.1 800 1030 6.98 0.01
28.2 6 740 850 5.71 0.01
28.3
940 1170 5.48 0.01
29.1 1000 1600 5.65 0.01
29.2 8 940 1660 5.98 0.01
29.3
1080 1870 5.07 0.01
30.1 1000 2050 6.00 0.01
30.2 10 1300 2880 5.33 0.01
30.3
1000 2250 5.88 0.01
81
Tabla E2. Cantidades de H2SO4 y NaOH a una temperatura de 110 C
Bagazo hidrolizado
Concentracin de Temperatura (C) Volumen de
Volumen de
Muestra H2SO4 en % p/p NaOH 5 % p/p pH
H2SO4 (L)
(L)
1.1 2900 790 5.88 0.01
1.2 2 2650 760 5.43 0.01
1.3
2600 700 6.50 0.01
2.1 2500 1520 5.12 0.01
2.2 4 110
2700 1620 5.22 0.01
2.3
2600 1520 5.64 0.01
3.1 2550 2650 6.33 0.01
3.2 6 2800 2880 5.31 0.01
3.3 2520 2440 5.74 0.01
4.1 3020 4070 5.30 0.01
4.2 8 3240 3250 5.31 0.01
4.3 2950 3640 5.66 0.01
5.1 2900 4370 5.75 0.01
5.2 10 2800 4240 6.03 0.01
5.3
2900 4250 5.38 0.01
Bagazo seco
Volumen de
(L)
6.1 590 200 5.92 0.01
6.2 2 1670 520 6.55 0.01
6.3
700 250 5.54 0.01
7.1 510 424 6.16 0.01
7.2 4 110 2220 1420 5.33 0.01
7.3
940 650 6.79 0.01
8.1 1340 1215 5.57 0.01
8.2 6 760 700 6.24 0.01
8.3 700 700 5.38 0.01
9.1 1900 2210 5.26 0.01
9.2 8 1130 1605 5.67 0.01
9.3 1150 1620 5.21 0.01
10.1 940 1670 5.63 0.01

10.2 10 1550 2450 6.68 0.01
10.3
1700 2270 6.00 0.01
82
Tabla E3. Cantidades de H2SO4 y NaOH a una temperatura de 120 C
Bagazo hidrolizado
Volumen de
Muestra Temperatura (C) NaOH 5% p/p pH
(L)
11.1 1684 600 6.83 0.01
11.2 2 1600 570 6.30 0.01
11.3 2200 2200 6.18 0.01
12.1 2200 1450 5.22 0.01
12.2 4 120
2180 1500 6.49 0.01
12.3
2780 1300 5.28 0.01
13.1 2250 2600 5.32 0.01
13.2 6 1674 2200 6.42 0.01
13.3 2000 2115 5.32 0.01
14.1 2380 3360 5.19 0.01
14.2 8 2340 2720 5.73 0.01
14.3
1800 2840 5.36 0.01
15.1 2180 2950 5.84 0.01
15.2 10 2460 5100 6.76 0.01
15.3
2340 4040 6.10 0.01
Bagazo seco
Volumen de
Muestra Temperatura (C) NaOH 5% p/p Ph
H2SO4 en %p/p H2SO4 (L)
(L)
16.1 1220 460 5.52 0.01
16.2 2 1440 470 6.16 0.01
16.3 1630 740 6.31 0.01
17.1 1400 1215 5.88 0.01
17.2 4 120 1380 1060 6.84 0.01
17.3
1204 820 5.92 0.01
18.1 705 915 5.01 0.01
18.2 6 1360 1550 5.82 0.01
18.3 1202 1400 6.36 0.01
19.1 860 1300 6.99 0.01

19.2 8 1222 2030 5.64 0.01
19.3
1202 1990 6.43 0.01
20.1 1382 2950 6.18 0.01

20.2 10 1560 3390 5.67 0.01
20.3
--- --- ---
83
Anexo F
Curvas de glucosa
La Tabla F1 es la curva de glucosa para pretratamiento con temperaturas de 100 y
120C.
Curva de glucosa para determinar la concentracin de glucosa presente en la

muestras de fermentacin. Las Tablas F1 y F2 muestran las los datos de la
absorbancia contra concentracin a diferentes temperaturas.
Tabla F1. Concentraciones de glucosa y absorbancia para temperatura de 120 y 100

C
Segunda Tercera
Primera curva curva curva
Concentraciones absorbancia absorbancia absorbancia
en g/L (540 nm) (540 nm) (540 nm)
0 0.049 0.050 0.051
2 0.193 0.502 0.321
4 0.422 0.556 0.534
6 0.573 0.813 0.850
8 0.715 1.028 1.117
10 0.839 1.135 1.317
En la Figura F1 se muestran graficados los datos para la curva de calibracin, en

donde aplicando una lnea de tendencia con aproximacin lineal, se obtiene su
ecuacin y su valor de R2.
Curva de calibracin de glucosa para

T= 120C y 100C
1.4 primera curva de glucosa de
1.2 la serie 1 y = 0.081x + 0.0604
R = 0.991
absorbancia
(540nm)
1.0
0.8
segunda curva de glucosa
de la serie 1 y = 0.1123x + 0.0859
Absorbanicia
0.6
R = 0.9866
0.4
tercera curva de glucosa de
0.2 la serie 1 y = 0.1291x + 0.053
0.0 R = 0.997
0 0 2 2 4 4 6 6 8 8 10 10
glucosa (g/L)
concentracin de glucosa ( g/L)
Figura F1. Datos graficados de absorbancia vs concentracin de glucosa para las

temperaturas de 120 y 100 C
84
Analizando las tres corridas de datos, se determin que la tercera curva de
glucosa con la R2 = 0.997 es la mejor al obtener un valor muy cercano a 1. Se
utiliz la ecuacin = 0.1291 + 0.053 para los datos a temperatura de 120 y 100
C, donde C es la concentracin y A la absorbancia.
La Figura F2 es la Curva de glucosa para pretratamiento a temperatura 110C
Tabla F2. Tabla de concentraciones de glucosa y absorbancia para temperatura de

110 C
Primera curva Segunda curva Tercera curva
Concentraciones
absorbancia absorbancia (540 absorbancia
en %p/p
(540 nm) nm) (540 nm)
0 0.048 0.045 0.044
2 0.238 0.273 0.257
4 0.653 0.563 0.526
6 0.953 0.771 0.766
8 0.993 0.827 0.991
10 1.427 1.349 1.123
En la Figura F2 se muestran graficados los datos para la curva de calibracin, en

donde aplicando una lnea de tendencia con aproximacin lineal, se obtiene su
ecuacin y su valor de R2.
1.6 curva de calibracin de glucosa T=110C

1.61.4
1.41.2 primera curva de glucosa de y = 0.1351x + 0.043
1.21.0 la serie 1 R = 0.9707
Absorbancia (540nm)
absorbancia
1 segunda curva de glucosa de

0.8
la serie 1 y = 0.1199x + 0.0387
0.8
0.6 R = 0.9582
0.6 tercera curva de glucosa de la
0.4 serie 1
0.4 y = 0.112x + 0.058
0.20.2 R = 0.9922
00.0
0 0 2
5
4 6 8
1010
concentracin
glucosa en %p/p
(g/L)
Figura F2. Datos graficados de absorbancia vs concentracin de glucosa para

temperatura de 110C
Analizando las tres corridas de la segunda serie de datos, se determina que la

tercera curva de glucosa con la R2 = 0.9922 es la mejor al obtener un valor muy
cercano a 1. Se utilizara la ecuacin = 0.112 + 0.058 para los datos a
temperatura de 110 C, donde C es la concentracin y A la absorbancia.
85
Se realizaron varios ajustes de curvas de glucosa, de tal manera que se obtenga
un ajuste cercano a R2= 0.999.
Las Tablas F3 y F4 muestran los datos de la absorbancia contra concentracin a

diferentes temperaturas. La Figura F3 nos muestra la curva de glucosa para
fermentacin 1.
Tabla F3.Tabla de concentraciones de glucosa y absorbancia para la primera

fermentacin.
Primera Segunda Tercera

curva curva curva
Concentraciones absorbancia absorbancia absorbancia
en g/L (540 nm) (540 nm) (540 nm)
0 0.048 0.046 0.048
2 0.345 0.336 0.317
4 0.685 0.604 0.599
6 0.863 0.898 0.77
8 0.998 1.033 0.941
10 1.041 0.986 0.992
Figura F3. Datos graficados de absorbancia vs concentracin de glucosa para los

resultados obtenidos en la primera fermentacin.
curva de calibracin de glucosa para la

fermentacin 1
primera curva de glucosa de y = 0.1015x + 0.156
la serie 1 R = 0.9298
segunda curva de glucosa de y = 0.1012x + 0.1444
la serie 1 R = 0.9116
tercera curva de glucosa de la
serie 1 y = 0.0966x + 0.1281
R = 0.9568
86
Tabla F4.Tabla de concentraciones de glucosa y absorbancia para la segunda
fermentacin.
Primera Segunda Tercera

curva curva curva
Concentracin en absorbancia absorbancia absorbancia
g/L (540 nm) (540 nm) (540 nm)
0 0.051 0.051 0.049
2 0.266 0.24 0.243
4 0.401 0.45 0.471
6 0.627 0.669 0.678
8 0.706 0.739 0.786
10 1.088 0.924 1.205
curva de calibracin de glucosa para la

1.2 fermentacin 2
1.0 y = 0.0962x + 0.0424
primera curva de glucosa de
R = 0.97
la serie 1
0.8
Absorbancia (540nm)
segunda curva de glucosa de y = 0.0869x + 0.0778

0.6 la serie 1 R = 0.9851
0.4 tercera curva de glucosa de la

serie 1
y = 0.1088x + 0.028
0.2 R = 0.9752
0.0
0 2 4 6 8 10
glucosa (g/L)
Figura F4. Datos graficados de absorbancia vs concentracin de glucosa para los

resultados obtenidos en la segunda fermentacin.
De la primera fermentacin se utilizara la ecuacin = 0.0966 + 0.1281, en la

segunda fermentacin se utilizara la ecuacin = 0.0869 + 0.0778, donde C es
la concentracin y A la absorbancia.
87
Anexo G
Concentracin de glucosa en g/L obtenida despus del
pretratamiento
Las Tablas G1 y G2 muestran la concentracin de glucosa en g/L y g/g bagazo; en
las tablas G3 y G4 muestran la concentracin de glucosa en g/L y g/g bagazo para
la fermentacin 1, las tablas G5 y G6 muestran los datos de glucosa para la
fermentacin 2.
Todos los clculos se realizaron utilizando un factor de dilucin (ecuacin A8) y

midiendo la absorbancia obtenida despus de un anlisis por DNS, la cual se
sustituye en la curva de calibracin de glucosa y de esta manera calcular la
concentracin en g/L (Ecuacin A9).
El factor de conversin es calculado como:

2 4 +
= (A8)
2 4
El clculo para determinar la cantidad de glucosa por gramo de bagazo.

( )3.75

= (A9)
0.25
88
Tabla G1. Resultados de concentracin de glucosa en g/L para el pretratamiento a temperaturas de 100 y 120 C
Bagazo hidrolizado
Concentracin de glucosa
Absorbancia de
Concentracin en Temperatura Ecuacin de Factor de C1 C2 promedio C1 C2
Muestra azcares reductores
% p/p (C) glucosa dilucin
(A)
g/L (g /g bagazo)
11 2 0.354 0.635 1.356 2.332 4.508 3.420 0.047 0.092
0.355 0.474 1.356 2.339 3.261 2.800 0.048 0.066
0.295 0.359 2.000 1.875 2.370 2.123 0.056 0.071
12 4 0.320 0.339 1.659 2.068 2.215 2.142 0.051 0.055
120 0.341 0.455 1.688 2.231 3.114 2.673 0.056 0.079
0.286 0.316 1.468 1.805 2.037 1.921 0.040 0.045
=
13 6 0.317 0.288 2.156 2.045 1.820 1.933 0.066 0.059
0.053
0.272 0.330
0.1291
2.314 1.696 2.146 1.921 0.059 0.074
0.279 0.259 2.058 1.751 1.596 1.674 0.054 0.049
14 8 0.235 0.218 2.412 1.410 1.278 1.344 0.051 0.046
0.235 0.239 2.162 1.410 1.441 1.426 0.046 0.047
0.393 0.338 2.578 2.634 2.208 2.421 0.102 0.085
15 10 0.263 0.291 2.353 1.627 1.844 1.736 0.057 0.065
0.206 0.217 3.073 1.185 1.270 1.228 0.055 0.059
0.172 0.234 2.726 0.922 1.402 1.162 0.038 0.057
89
Bagazo seco
Absorbancia de
Concentracin en Temperatura Ecuacin de Factor de C1 C2 Promedio C1 C2
(A)
g/L (g /g bagazo)
16 2 1.102 0.930 1.377 8.125 6.793 7.459 0.168 0.140

0.671 1.287 1.326 4.787 9.558 7.173 0.095 0.190
0.922 1.208 1.454 6.731 8.947 7.839 0.147 0.195
17 4 120 0.892 1.064 1.868 6.499 7.831 7.165 0.182 0.219
0.891 1.245 1.768 6.491 9.233 7.862 0.172 0.245
0.661 0.893 1.681 4.710 6.507 5.608
=
0.119 0.164
18 6 0.824 0.809 2.298 5.972 5.856 5.914 0.206 0.202
0.053
0.1291
0.718 0.777 2.140 5.151 5.608 5.380 0.165 0.180
0.801 1.070 2.165 5.794 7.878 6.836 0.188 0.256
19 8 0.857 0.417 2.512 6.228 2.820 4.524 0.235 0.106
0.947 0.379 2.661 6.925 2.525 4.725 0.276 0.101
0.669 0.382 2.656 4.771 2.548 3.660 0.190 0.102
20 10 0.794 0.387 3.135 5.740 2.587 4.163 0.270 0.122
0.700 0.332 3.173 5.012 2.161 3.586 0.239 0.103
--- --- --- --- --- --- --- ---
90
Bagazo hidrolizado
Absorbancia de Concentracin de glucosa

(A) g/L (g /g bagazo)
21 2 0.103 0.115 1.348 0.387 0.480 0.434 0.008 0.010
0.104 0.126 1.374 0.395 0.565 0.480 0.008 0.012
0.190 0.203 1.376 1.061 1.162 1.112 0.022 0.024
22 4 0.181 0.190 1.859 0.991 1.061 1.026 0.028 0.030
100
0.229 0.164 1.698 1.363 0.860 1.112 0.035 0.022
0.203 0.201 1.771 1.162 1.146 1.154 0.031 0.030
=
23 6 0.192 0.255 2.282 1.077 1.565 1.321 0.037 0.054
0.053
0.270 0.158 2.267 1.681 0.813 1.247 0.057 0.028
0.1291
0.162 0.260 2.215 0.844 1.603 1.224 0.028 0.053
24 8 0.234 0.262 2.180 1.402 1.619 1.510 0.046 0.053
0.276 0.313 2.591 1.727 2.014 1.871 0.067 0.078
0.258 0.284 2.631 1.588 1.789 1.689 0.063 0.071
25 10 0.236 0.275 3.268 1.418 1.720 1.569 0.069 0.084
0.249 0.290 3.212 1.518 1.836 1.677 0.073 0.088
0.206
3.081 1.185 1.371 1.278
0.230 0.055 0.063
91
Bagazo seco
Absorbancia de
Muestra azcares
reductores (A) g/L
(g /g bagazo)
26 2 0.254 0.312 1.380 1.557 2.006 1.782 0.032 0.042

0.306 0.305 1.333 1.960 1.952 1.956 0.039 0.039
0.342 0.352 1.382 2.239 2.316 2.277 0.046 0.048
27 4 100 0.327 0.357 1.778 2.122 2.355 2.239 0.057 0.063
0.345 0.345 1.896 2.262 2.262 2.262 0.064 0.064
1.811 2.370 2.153 2.262
=
0.359 0.331 0.064 0.058
28 6 0.335 0.336 2.288 2.184 2.192 2.188 0.075 0.075
0.053
0.1291
0.312 0.300 2.149 2.006 1.913 1.960 0.065 0.062
0.347 0.338 2.245 2.277 2.208 2.242 0.077 0.074
29 8 0.322 0.311 2.600 2.084 1.998 2.041 0.081 0.078
0.344 0.343 2.766 2.254 2.246 2.250 0.094 0.093
0.370 0.335 2.731 2.455 2.184 2.320 0.101 0.089
30 10 0.322 0.329 3.050 2.084 2.138 2.111 0.095 0.098
0.334 0.348 3.215 2.177 2.285 2.231 0.105 0.110
0.358 0.346 3.250 2.363 2.270 2.316 0.115 0.111
92
Tabla G2. . Resultados de concentracin de glucosa en g/L para el pretratamiento a temperatura de 110C
Bagazo hidrolizado
Absorbancia de
% p/p (C) glucosa dilucin g/L
(A) (g /g bagazo)
1 2 0.248 0.225 1.272 1.696 1.491 1.594 0.032 0.028

0.208 0.202 1.287 1.339 1.286 1.313 0.026 0.025
0.210 0.206 1.269 1.357 1.321 1.339 0.026 0.025
2 4 0.256 0.245 1.608 1.768 1.670 1.719 0.043 0.040
110 0.266 0.274 1.600 1.857 1.929 1.893 0.045 0.046
0.180 0.188 1.585 1.089 1.161 1.125 0.026 0.028
=
3 6 0.218 0.192 2.039 1.429 1.196 1.313 0.044 0.037
0.058
0.218 0.273 2.029 1.429 1.920 1.674 0.043 0.058
0.112
0.200 0.241 1.968 1.268 1.634 1.451 0.037 0.048
4 8 0.195 0.191 2.348 1.223 1.188 1.205 0.043 0.042
0.205 0.190 2.003 1.313 1.179 1.246 0.039 0.035
0.175 0.192 2.234 1.045 1.196 1.121 0.035 0.040
5 10 0.180 0.201 2.507 1.089 1.277 1.183 0.041 0.048
0.173 0.201 2.514 1.027 1.277 1.152 0.039 0.048
0.136 0.178 2.466 0.696 1.071 0.884 0.026 0.040
93
Bagazo seco
Absorbancia de C1 C2 Promedio C1 C2
Concentracin en Temperatura Ecuacin de Factor de
(A) g/L (g /g bagazo)
6 2 0.620 0.606 1.339 5.018 4.893 4.955 0.101 0.098

0.621 0.639 1.311 5.027 5.188 5.107 0.099 0.102
0.318 0.319 1.357 2.321 2.330 2.326 0.047 0.047
7 4 110 0.362 0.387 1.831 2.714 2.938 2.826 0.075 0.081
0.391 0.389 1.640 2.973 2.955 2.964 0.073 0.073
0.375 0.427 1.691 2.830 3.295 3.063 0.072 0.084
=
8 6 0.319 0.347 1.907 2.330 2.580 2.455 0.067 0.074
0.058
0.112
0.347 0.335 1.921 2.580 2.473 2.527 0.074 0.071
0.334 0.372 2.000 2.464 2.804 2.634 0.074 0.084
9 8 0.324 0.372 2.163 2.375 2.804 2.589 0.077 0.091
0.352 0.387 2.420 2.625 2.938 2.781 0.095 0.107
0.369 0.359 2.409 2.777 2.688 2.732 0.100 0.097
10 10 0.344 0.344 2.777 2.554 2.554 2.554 0.106 0.106
0.390 0.390 2.581 2.964 2.964 2.964 0.115 0.115
0.349 0.349 2.335 2.598 2.598 2.598 0.091 0.091
94
Tabla G3. Resultados de concentracin de glucosa en g/L para medio G (Slo glucosa)
absorbancia para azcares
Tiempo Ecuacin Factor de C1 C2 Promedio
Muestras reductores
utilizada dilucin
g/L
(h) A1 A2
0 1.G.0 0.719 0.721 10.000 48.587 48.743 48.665
5 1.G.5 0.591 0.538 10.000 38.595 34.457 36.526
10 1.G.10 0.582 0.695 10.000 37.892 46.714 42.303
12 1.G.12 0.519 0.574 10.000 32.974 37.268 35.121
15 1.G.15 0.624 0.6 10.000 41.171 39.297 40.234
17 1.G.17 0.585 0.517 10.000 38.126 32.818 35.472
=
19 1.G.19 0.275 0.268 10.000 13.927 13.380 13.653
0.1281
21 1.G.21 0.712 0.59 10.000 48.041 38.517 43.279
0.0966
31 1.G.31 0.509 0.401 10.000 32.194 23.763 27.978
41 1.G.41 0.398 0.42 10.000 23.528 25.246 24.387
65 1.G.65 0.32 0.367 10.000 17.440 21.109 19.274
89 1.G.89 0.356 0.305 10.000 20.250 16.269 18.259
113 1.G.113 0.246 0.254 10.000 11.663 12.287 11.975
137 1.G.137 0.295 0.295 10.000 15.488 15.488 15.488
161 1.G.161 0.144 0.129 10.000 3.700 2.529 3.115
95
Tabla G4. Resultados de concentracin de glucosa en g/L para medio AB (Glucosa+ cido
Butrico)
absorbancia para azcares
Tiempo Ecuacin Factor de C1 C2 Promedio
muestras reductores
utilizada dilucin
g/L
(h) A1 A2
0 1.AB.0 0.658 0.631 10.000 43.825 41.717 42.771
5 1.AB.5 0.688 0.668 10.000 46.167 44.606 45.386
10 1.AB.10 0.687 0.394 10.000 46.089 23.216 34.653
12 1.AB.12 0.639 0.643 10.000 42.342 42.654 42.498
15 1.AB.15 0.271 0.229 10.000 13.614 10.336 11.975
17 1.AB.17 0.63 0.63 10.000 41.639 41.639 41.639
19 1.AB.19 0.589 0.652 = 10.000 38.439 43.357 40.898
21 1.AB.21 0.793 0.711 0.1281 10.000 54.364 47.963 51.163
0.0966
31 1.AB.31 0.479 0.461 10.000 29.852 28.447 29.149

41 1.AB.41 0.463 0.461 10.000 28.603 28.447 28.525
65 1.AB.65 0.546 0.587 10.000 35.082 38.283 36.682
89 1.AB.89 0.549 0.627 10.000 35.316 41.405 38.361
113 1.AB.113 0.662 0.583 10.000 44.137 37.970 41.054
137 1.AB.137 0.553 0.583 10.000 35.628 37.970 36.799
161 1.AB.161 0.696 0.598 10.000 46.792 39.141 42.966
96
Tabla G5. Resultados de concentracin de glucosa en g/L para el medio BG (Glucosa y
bagazo de caa)
Datos Factor C1 C2 Promedio promedio total

tiempo Ecuacin
Muestras de
(h) utilizada
dilucin
g/L
A1 A2
1.BG.0 0.889 0.817 10.000 93.564 85.260 89.412
0 2.BG.0 0.789 0.944 10.000 82.030 99.908 90.969 90.354
3.BG.0 0.832 0.896 10.000 86.990 94.371 90.681
1.BG.5 0.888 0.881 10.000 93.449 92.641 93.045
5 2.BG.5 0.707 0.761 10.000 72.572 78.800 75.686 87.624
3.BG.5 0.892 0.896 10.000 93.910 94.371 94.141
1.BG.10 0.697 0.708 10.000 71.419 72.687 72.053
10 2.BG.10 0.631 0.627 10.000 63.806 63.345 63.576 64.575
3.BG.10 0.661 0.502 10.000 67.266 48.927 58.097
1.BG.12 0.894 0.914 10.000 94.141 96.448 95.294
12 2.BG.12 0.882 0.818 10.000 92.757 85.375 89.066 94.506
3.BG.12 0.996 0.879 10.000 105.905 92.411 99.158
1.BG.15 0.785 0.635 10.000 81.569 64.268 72.918
=
15 2.BG.15 0.650 0.764 10.000 65.998 79.146 72.572 76.205

0.0778
0.0869
3.BG.15 0.733 0.864 10.000 75.571 90.681 83.126

1.BG.17 0.869 0.889 10.000 91.257 93.564 92.411
17 2.BG.17 0.500 0.544 10.000 48.697 53.772 51.234 80.531
3.BG.17 0.904 0.950 10.000 95.294 100.600 97.947
1.BG.19 0.901 0.937 10.000 94.948 99.100 97.024
19 2.BG.19 0.835 0.953 10.000 87.336 100.946 94.141 95.044
3.BG.19 0.867 0.918 10.000 91.027 96.909 93.968
1.BG.21 0.883 0.883 10.000 92.872 92.872 92.872
2.BG.21 0.950 0.988 10.000 100.600 104.983 102.791
3.BG.21 0.857 0.912 10.000 89.873 96.217 93.045
21 85.750
4.BG.21 0.764 0.635 10.000 79.146 64.268 71.707
5.BG.21 0.678 0.712 10.000 69.227 73.149 71.188
6.BG.21 0.743 0.850 10.000 76.724 89.066 82.895
1.BG.31 0.949 0.920 10.000 100.484 97.140 98.812
31 86.221
2.BG.31 0.628 0.643 10.000 63.460 65.190 64.325
97
3.BG.31 0.955 0.857 10.000 101.176 89.873 95.525
1.BG.41 0.453 0.405 10.000 43.276 37.739 40.507
41 2.BG.41 0.461 0.422 10.000 44.198 39.700 41.949 42.238
3.BG.41 0.520 0.403 10.000 51.003 37.509 44.256
1.BG.65 0.636 0.630 10.000 64.383 63.691 64.037
65 2.BG.65 0.623 0.536 10.000 62.884 52.849 57.866 60.423
3.BG.65 0.609 0.576 10.000 61.269 57.463 59.366
1.BG.89 0.700 0.729 10.000 71.765 75.110 73.437
89 2.BG.89 0.759 0.609 10.000 78.570 61.269 69.919 70.938
3.BG.89 0.717 0.643 10.000 73.725 65.190 69.458
1.BG.113 0.746 0.678 10.000 77.070 69.227 73.149
113 2.BG.113 0.640 0.654 10.000 64.844 66.459 65.652 71.669
3.BG.113 0.789 0.688 10.000 82.030 70.381 76.205
1.BG.137 0.774 0.789 10.000 80.300 82.030 81.165
137 2.BG.137 0.687 0.680 10.000 70.265 69.458 69.862 73.283
3.BG.137 0.669 0.680 10.000 68.189 69.458 68.824
1.BG.161 0.722 0.768 10.000 74.302 79.608 76.955
161 2.BG.161 0.701 0.717 10.000 71.880 73.725 72.803 74.783
3.BG.161 0.702 0.747 10.000 71.995 77.186 74.591
1.BG.185 0.559 0.454 10.000 55.502 43.391 49.446
185 2.BG.185 0.550 0.548 10.000 54.464 54.233 54.348 53.291
3.BG.185 0.552 0.576 10.000 54.694 57.463 56.078
1.BG.209 0.456 0.480 10.000 43.622 46.390 45.006
209 2.BG.209 0.478 0.522 10.000 46.159 51.234 48.697 48.793
3.BG.209 0.562 0.507 10.000 55.848 49.504 52.676
1.BG.233 0.646 0.621 10.000 65.536 62.653 64.095
2.BG.233 0.625 0.642 10.000 63.114 65.075 64.095
3.BG.233 0.576 0.607 10.000 57.463 61.038 59.250
233 55.175
4.BG.233 0.474 0.499 10.000 45.698 48.581 47.140
5.BG.233 0.447 0.499 10.000 42.584 48.581 45.582
6.BG.233 0.506 0.532 10.000 49.389 52.388 50.888
98
Tabla G6. Resultados de concentracin de glucosa en g/L para el medio SG (bagazo sin
agregar glucosa)
Datos Factor C1 C2 Promedio Promedio total

Tiempo Ecuacin
Muestras de
(h) utilizada
dilucin
g/L
A1 A2
1.SG.0 0.080 0.074 10.000 0.254 -0.438 -0.092
2.157
0 2.SG.0 0.095 0.085 10.000 1.984 0.830 1.407
3.SG.0 0.120 0.125 10.000 4.867 5.444 5.156
1.SG.5 0.097 0.081 10.000 2.215 0.369 1.292
5 2.SG.5 0.089 0.081 10.000 1.292 0.369 0.830 1.119
3.SG.5 0.088 0.089 10.000 1.176 1.292 1.234
1.SG.10 0.115 0.112 10.000 4.291 3.945 4.118
10 2.SG.10 0.106 0.091 10.000 3.253 1.522 2.388 3.137
3.SG.10 0.104 0.102 10.000 3.022 2.791 2.907
1.SG.12 0.092 0.082 10.000 1.638 0.484 1.061
12 2.SG.12 0.069 0.096 10.000 -1.015 2.099 0.542 0.850
3.SG.12 0.086 0.086 10.000 0.946 0.946 0.946
=
1.SG.15 0.065 0.067 10.000 -1.476 -1.246 -1.361

0.0778
0.400
15 2.SG.15 0.074 0.079 10.000 -0.438 0.138 -0.150
0.0869
3.SG.15 0.075 0.086 10.000 -0.323 0.946 0.311

1.SG.17 0.071 0.092 10.000 -0.784 1.638 0.427
17 2.SG.17 0.115 0.110 10.000 4.291 3.714 4.002 3.060
3.SG.17 0.111 0.127 10.000 3.829 5.675 4.752
1.SG.19 0.087 0.076 10.000 1.061 -0.208 0.427
19 2.SG.19 0.076 0.083 10.000 -0.208 0.600 0.196 0.235
3.SG.19 0.077 0.080 10.000 -0.092 0.254 0.081
1.SG.21 0.076 0.074 10.000 -0.208 -0.438 -0.323
2.SG.21 0.076 0.081 10.000 -0.208 0.369 0.081
3.SG.21 0.079 0.080 10.000 0.138 0.254 0.196
21 0.640
4.SG.21 0.064 0.068 10.000 -1.592 -1.130 -1.361
5.SG.21 0.076 0.070 10.000 -0.208 -0.900 -0.554
6.SG.21 0.070 0.053 10.000 -0.900 -2.860 -1.880
31 1.SG.31 0.069 0.074 10.000 -1.015 -0.438 -0.727 0.938
99
2.SG.31 0.080 0.066 10.000 0.254 -1.361 -0.554
3.SG.31 0.066 0.063 10.000 -1.361 -1.707 -1.534
1.SG.41 0.120 0.111 10.000 4.867 3.829 4.348
41 2.SG.41 0.102 0.089 10.000 2.791 1.292 2.042 3.541
3.SG.41 0.112 0.117 10.000 3.945 4.521 4.233
1.SG.65 0.064 0.062 10.000 -1.592 -1.822 -1.707
65 2.SG.65 0.069 0.073 10.000 -1.015 -0.554 -0.784 1.361
3.SG.65 0.064 0.064 10.000 -1.592 -1.592 -1.592
1.SG.89 0.088 0.087 10.000 1.176 1.061 1.119
89 2.SG.89 0.320 0.478 10.000 27.935 46.159 37.047 13.518
3.SG.89 0.100 0.097 10.000 2.561 2.215 2.388
1.SG.113 0.095 0.099 10.000 1.984 2.445 2.215
113 2.SG.113 0.093 0.103 10.000 1.753 2.907 2.330 1.79
3.SG.113 0.085 0.085 10.000 0.830 0.830 0.830
1.SG.137 0.098 0.085 10.000 2.330 0.830 1.580
137 2.SG.137 0.086 0.075 10.000 0.946 -0.323 0.311 0.350
3.SG.137 0.073 0.068 10.000 -0.554 -1.130 -0.842
1.SG.161 0.068 0.068 10.000 -1.130 -1.130 -1.130
161 2.SG.161 0.050 0.051 10.000 -3.206 -3.091 -3.149 1.380
3.SG.161 0.080 0.078 10.000 0.254 0.023 0.138
1.SG.185 0.075 0.080 10.000 -0.323 0.254 -0.035
185 2.SG.185 0.052 0.047 10.000 -2.976 -3.552 -3.264 1.188
3.SG.185 0.077 0.074 10.000 -0.092 -0.438 -0.265
1.SG.209 0.086 0.084 10.000 0.946 0.715 0.830
209 2.SG.209 0.053 0.052 10.000 -2.860 -2.976 -2.918 0.650
3.SG.209 0.082 0.076 10.000 0.484 -0.208 0.138
1.SG.233 0.056 0.054 10.000 -2.514 -2.745 -2.630
2.SG.233 0.052 0.052 10.000 -2.976 -2.976 -2.976
3.SG.233 0.054 0.051 10.000 -2.745 -3.091 -2.918 1.121
233
4.SG.233 0.070 0.098 10.000 -0.900 2.330 0.715
5.SG.233 0.081 0.077 10.000 0.369 -0.092 0.138
6.SG.233 0.090 0.082 10.000 1.407 0.484 0.946
100
Anexo H
Estimacin de la concentracin de biomasa
Para determinar la concentracin de biomasa se utiliz el mtodo de peso seco, el
cual consiste en utilizar el peso de las membranas que se utilizan durante la
filtracin de las muestras tomadas en la fermentacin. Dichos filtros se pesan
antes de filtrar la muestra y despus de filtrar la misma, la diferencia entre el peso
final y el peso inicial nos proporciona la concentracin de biomasa presente en la
muestra (Tabla H1).
Cabe mencionar que los filtros se meten al microondas durante 2 minutos antes de
ser pesados inicialmente. Cuando las muestras ya se filtraron las membranas
utilizadas se meten al microondas durante 2 minutos y posteriormente se
introducen a un desecador, el cual contiene slica gel y se sella al vaco. Los filtros
permanecen ah durante 2 horas. Transcurrido este tiempo las membranas se
pesan obteniendo as el peso final de la membrana y por ende la concentracin de
biomasa en mg/ml.
Tabla H1 Variacin de la concentracin de biomasa para cada muestra respecto al tiempo

para el medio G (Glucosa).
Peso de Peso de
Volumen papel filtro papel filtro Concentracin Promedio de la
Tiempo
Muestra de muestra antes de la despus de de biomasa concentracin de
(h)
(mL) muestra la muestra (mg/mL) biomasa (mg/ml)
(mg) (mg)
1.G.0 5.200 5.900 0.233

0 2.G.0 1 5.200 5.800 0.200
3.G.0 5.200 5.900 0.233 0.222 0.019
1.G.5 5.200 6.000 0.267
5 2.G.5 1 5.100 6.100 0.333
3.G.5 5.200 6.200 0.333 0.311 0.038
1.G.10 5.200 6.000 0.267
10 2.G.10 1 5.100 6.200 0.367
3.G.10 5.100 6.200 0.367 0.333 0.058
1.G.12 5.100 6.400 0.433
12 2.G.12 1 5.000 6.300 0.433
3.G.12 4.900 6.300 0.467 0.444 0.019
1.G.15 5.000 6.300 1.300
15 2.G.15 1 5.200 6.500 1.300
3.G.15 5.200 6.400 1.200 1.267 0.058
101
1.G.17 5.200 6.400 1.200
17 2.G.17 1 5.000 6.400 1.400
3.G.17 5.200 6.500 1.300 1.300 0.100
1.G.19 5.400 6.500 1.100
19 2.G.19 1 5.000 6.400 1.400 1.333 0.208
3.G.19 5.000 6.500 1.500
1.G.21 5.200 6.500 1.300
2.G.21 5.000 6.600 1.600
3.G.21 5.100 6.600 1.500
21 1
4.G.21 5.000 6.500 1.500
5.G.21 5.000 6.600 1.600
6.G.21 5.000 6.500 1.500 1.500 0.110
1.G.31 5.000 6.600 1.600
27 2.G.31 1 5.100 6.500 1.400
3.G.31 5.100 6.700 1.600 1.533 0.115
1.G.41 5.100 6.600 1.500
41 2.G.41 1 5.200 6.700 1.500
3.G.41 5.000 6.800 1.800 1.600 0.173
1.G.65 5.100 6.700 1.600
65 2.G.65 1 5.000 6.600 1.600
3.G.65 5.100 6.800 1.700 1.633 0.058
1.G.89 5.100 6.700 1.600
89 2.G.89 1 5.000 6.600 1.600
3.G.89 4.900 6.800 1.900 1.700 0.173
1.G.113 5.100 6.700 1.600
113 2.G.113 1 5.000 6.800 1.800
3.G.113 5.000 6.800 1.800 1.733 0.115
1.G.137 5.100 6.900 1.800
137 2.G.137 1 4.900 6.800 1.900
3.G.137 5.100 6.900 1.800 1.833 0.058
1.G.161 5.000 6.900 1.900
2.G.161 4.900 6.900 2.000
3.G.161 5.000 6.900 1.900
161 1
4.G.161 5.100 6.800 1.700
5.G.161 5.100 7.000 1.900
6.G.161 5.000 6.900 1.900 1.883 0.098
En la Tabla H.2 se observa la variacin de la concentracin de biomasa respecto

al tiempo.
102
Tabla H.2. Resultados de la concentracin de biomasa para el medio AB (glucosa y cido
butrico).
Volumen de Peso de papel Peso de papel Concentracin Promedio de la
Tiempo
Muestra muestra filtro antes de la filtro despus de de biomasa concentracin
(h)
(mL) muestra (mg) la muestra (mg) (mg/mL) de biomasa
1.AB.0 5.000 5.900 0.900

0 2.AB.0 1 5.100 6.000 0.900 0.967 0.115
3.AB.0 5.000 6.100 1.100
1.AB.5 5.000 6.000 1.000
5 2.AB.5 1 5.100 6.100 1.000 1.000 0.000
3.AB.5 5.100 6.100 1.000
1.AB.10 5.100 6.200 1.100
10 2.AB.10 1 5.200 6.200 1.000 1.000 0.100
3.AB.10 5.200 6.100 0.900
1.AB.12 5.000 6.100 1.100
12 2.AB.12 1 5.100 6.000 0.900 1.033 0.115
3.AB.12 5.000 6.100 1.100
1.AB.15 5.200 6.200 1.000
15 2.AB.15 1 5.100 6.000 0.900 1.000 0.100
3.AB.15 5.100 6.200 1.100
1.AB.17 5.100 6.300 1.200
17 2.AB.17 1 5.100 6.200 1.100 1.167 0.058
3.AB.17 5.000 6.200 1.200
1.AB.19 5.100 6.300 1.200
19 2.AB.19 1 5.000 6.300 1.300 1.200 0.100
3.AB.19 5.100 6.200 1.100
1.AB.21 5.200 6.300 1.100
2.AB.21 5.000 6.400 1.400
3.AB.21 5.100 6.200 1.100
21 1 1.150 0.138
4.AB.21 5.200 6.200 1.000
5.AB.21 5.100 6.300 1.200
6.AB.21 5.200 6.300 1.100
1.AB.31 5.300 6.300 1.000
31 2.AB.31 1 5.100 6.400 1.300 1.167 0.153
3.AB.31 5.000 6.200 1.200
1.AB.41 4.900 6.400 1.500
41 2.AB.41 1 5.200 6.200 1.000 1.200 0.265
3.AB.41 5.100 6.200 1.100
1.AB.65 5.100 6.300 1.200
65 1 1.267 0.115
2.AB.65 5.000 6.200 1.200
103
3.AB.65 4.900 6.300 1.400
1.AB.89 5.100 6.200 1.100
89 2.AB.89 1 5.000 6.400 1.400 1.300 0.173
3.AB.89 5.000 6.400 1.400
1.AB.113 5.100 6.400 1.300
113 2.AB.113 1 5.100 6.500 1.400 1.333 0.058
3.AB.113 5.000 6.300 1.300
1.AB.137 4.900 6.500 1.600
137 2.AB.137 1 5.000 6.600 1.600 1.400 0.346
3.AB.137 5.100 6.100 1.000
1.AB.161 5.100 6.700 1.600
2.AB.161 5.100 6.600 1.500
3.AB.161 5.000 6.300 1.300
161 1 1.567 0.163
4.AB.161 5.000 6.600 1.600
5.AB.161 5.100 6.700 1.600
6.AB.161 5.000 6.800 1.800
Tabla H3. Resultados de la concentracin de biomasa para el medio BG (Bagazo con glucosa).
Peso de papel Peso de papel

Concentracin Promedio de la
Tiempo Volumen de filtro antes de filtro despus
Muestra de biomasa concentracin de
(h) muestra (mL) la muestra de la muestra
(mg/mL) biomasa
(mg) (mg)
1.BG.0 8.300 8.900 3.000
0 2.BG.0 1 8.300 9.000 3.500 3.333 0.289
3.BG.0 7.200 7.900 3.500
1.BG.5 7.200 7.500 1.500
5 2.BG.5 1 8.500 9.000 2.500 2.667 1.258
3.BG.5 7.200 8.000 4.000
1.BG.10 7.400 8.100 3.500
10 2.BG.10 1 8.700 9.000 1.500 2.167 1.155
3.BG.10 8.600 8.900 1.500
1.BG.12 25.300 26.900 8.000
12 2.BG.12 1 25.300 26.900 8.000 7.833 0.289
3.BG.12 24.800 26.300 7.500
1.BG.15 20.800 22.200 7.000
15 2.BG.15 1 25.500 27.100 8.000 7.000 1.000
3.BG.15 22.400 23.600 6.000
1.BG.17 24.800 26.100 6.500
17 1 5.167 2.309
2.BG.17 25.600 26.900 6.500
104
3.BG.17 8.800 9.300 2.500
1.BG.19 7.600 7.800 1.000
19 2.BG.19 1 8.900 9.200 1.500 1.333 0.289
3.BG.19 8.800 9.100 1.500
1.BG.21 8.800 9.100 1.500
2.BG.21 7.500 7.800 1.500
3.BG.21 8.900 9.000 0.500
21 1 1.500 0.837
4.BG.21 8.900 9.100 1.000
5.BG.21 9.000 9.300 1.500
6.BG.21 9.300 9.900 3.000
1.BG.31 9.000 9.700 3.500
31 2.BG.31 1 9.300 9.700 2.000 2.333 1.041
3.BG.31 9.300 9.600 1.500
1.BG.41 9.400 9.700 1.500
41 2.BG.41 1 9.300 9.700 2.000 2.167 0.764
3.BG.41 9.100 9.700 3.000
1.BG.65 9.100 9.700 3.000
65 2.BG.65 1 9.100 9.600 2.500 2.833 0.289
3.BG.65 9.100 9.700 3.000
1.BG.89 9.000 9.900 4.500
89 2.BG.89 1 8.900 9.500 3.000 3.000 1.500
3.BG.89 9.400 9.700 1.500
1.BG.113 9.400 9.700 1.500
113 2.BG.113 1 9.500 10.300 4.000 2.833 1.258
3.BG.113 9.300 9.900 3.000
1.BG.137 9.300 9.600 1.500
137 2.BG.137 1 9.400 9.800 2.000 1.667 0.289
3.BG.137 9.400 9.700 1.500
1.BG.161 9.500 9.900 2.000
161 2.BG.161 1 9.600 9.900 1.500 1.833 0.289
3.BG.161 9.200 9.600 2.000
1.BG.185 9.300 9.800 2.500
185 2.BG.185 1 9.300 9.800 2.500 2.833 0.577
3.BG.185 9.400 10.100 3.500
1.BG.209 9.200 9.900 3.500
209 2.BG.209 1 9.100 9.800 3.500
3.BG.209 9.000 9.600 3.000 3.333 0.289
1.BG.233 9.300 9.900 3.000
233 1 2.667 0.516
2.BG.233 9.500 10.000 3.500
105
3.BG.233 9.500 9.900 2.000
4.BG.233 9.000 9.500 2.500
5.BG.233
6.BG.233 9.000 9.500 2.500
9.600 10.100 2.500
Tabla H4. Resultados de la concentracin de biomasa para el medio SG (Bagazo de caa sin
glucosa).
Peso de papel
Peso de papel Concentracin Promedio de la
Tiempo Volumen de filtro antes de
Muestra filtro despus de de biomasa concentracin de
(h) muestra (mL) la muestra
la muestra (mg) (mg/mL) biomasa
(mg)
1.SG.0 9.300 10.400 5.500
0 2.SG.0 1 9.400 10.300 4.500
3.SG.0 9.500 10.400 4.500 4.833 0.577
1.SG.5 9.100 9.800 3.500
5 2.SG.5 1 9.300 10.000 3.500
3.SG.5 9.000 9.000 0.000 2.333 2.021
1.SG.10 8.600 9.700 5.500
10 2.SG.10 1 9.200 10.200 5.000
3.SG.10 9.300 9.600 1.500 4.000 2.179
1.SG.12 8.900 9.600 3.500
12 2.SG.12 1 9.200 9.800 3.000
3.SG.12 9.100 9.900 4.000 3.500 0.500
1.SG.15 9.400 9.600 1.000
15 2.SG.15 1 9.400 9.600 1.000
3.SG.15 9.200 9.800 3.000 1.667 1.155
1.SG.17 9.300 9.900 3.000
17 2.SG.17 1 9.500 9.800 1.500
3.SG.17 9.100 9.700 3.000 2.500 0.866
1.SG.19 9.100 9.800 3.500
19 2.SG.19 1 9.200 9.900 3.500
3.SG.19 9.700 10.000 1.500 2.833 1.155
1.SG.21 9.000 10.100 5.500
2.SG.21 9.000 10.000 5.000
3.SG.21 9.500 10.000 2.500
21 1
4.SG.21 9.700 10.100 2.000
5.SG.21 8.800 10.000 6.000
6.SG.21 9.400 10.000 3.000 4.000 1.703
106
1.SG.31 9.500 9.900 2.000
31 2.SG.31 1 9.400 10.100 3.500
3.SG.31 9.500 10.100 3.000 2.833 0.764
1.SG.41 9.400 9.800 2.000
41 2.SG.41 1 9.600 10.100 2.500
3.SG.41 9.200 10.100 4.500 3.000 1.323
1.SG.65 9.600 10.100 2.500
65 2.SG.65 1 9.700 10.100 2.000
3.SG.65 9.200 10.000 4.000 2.833 1.041
1.SG.89 9.000 10.100 5.500
89 2.SG.89 1 9.500 10.000 2.500
3.SG.89 9.600 10.300 3.500 3.833 1.528
1.SG.113 9.700 10.200 2.500
113 2.SG.113 1 9.400 10.200 4.000
3.SG.113 9.400 10.300 4.500 3.667 1.041
1.SG.137 9.700 9.900 1.000
137 2.SG.137 1 9.200 10.100 4.500
3.SG.137 9.300 9.800 2.500 2.667 1.756
1.SG.161 9.500 10.400 4.500
161 2.SG.161 1 9.500 10.000 2.500
3.SG.161 9.000 9.900 4.500 3.833 1.155
1.SG.185 9.400 10.000 3.000
185 2.SG.185 1 10.100 10.800 3.500
3.SG.185 9.400 10.000 3.000 3.167 0.289
1.SG.209 9.200 9.600 2.000
209 2.SG.209 1 9.300 9.800 2.500
3.SG.209 9.000 9.800 4.000 2.833 1.041
9.200 10.300 5.500
1.SG.233
2.SG.233 9.200 10.200 5.000
3.SG.233 9.500 10.000 2.500
233 1
4.SG.233 9.300 10.000 3.500
5.SG.233 9.400 10.000 3.000
6.SG.233
9.300 10.000 3.500 3.833 1.169
107
Anexo I
Cuantificacin de pH para las fermentaciones 1 y 2
Las siguientes tablas nos muestran los resultados de pH obtenidos durante la
fermentacin 1 y 2.
Tabla I1. Monitoreo del pH de las muestras medio G con glucosa y el medio
AB con cido butrico.
FERMENTACIN 1
Tiempo CON GLUCOSA CON CIDO BUTRICO
(h) Muestra pH pH promedio Muestra pH pH promedio
1.G.0 3.71 1.AB.0 4.63
0 2.G.0 3.71 3.67 0.06 2.AB.0 4.85 4.80 0.15
3.G.0 3.60 3.AB.0 4.92
1.G.5 4.62 1.AB.5 3.36
5 2.G.5 4.73 4.68 0.06 2.AB.5 3.40 3.38 0.02
3.G.5 4.68 3.AB.5 3.38
1.G.10 5.06 1.AB.10 3.82
10 2.G.10 4.95 4.97 0.08 2.AB.10 3.83 3.84 0.03
3.G.10 4.90 3.AB.10 3.87
1.G.12 4.92 1.AB.12 3.83
12 2.G.12 4.89 4.89 0.03 2.AB.12 3.83 3.82 0.02
3.G.12 4.87 3.AB.12 3.79
1.G.15 4.20 1.AB.15 3.76
15 2.G.15 4.21 4.18 0.04 2.AB.15 3.61 3.65 0.10
3.G.15 4.13 3.AB.15 3.57
1.G.17 3.90 1.AB.17 3.88
17 2.G.17 3.92 3.90 0.03 2.AB.17 3.88 3.88 0.01
3.G.17 3.87 3.AB.17 3.87
1.G.19 3.71 1.AB.19 3.92
19 2.G.19 3.70 3.70 0.01 2.AB.19 3.89 3.91 0.02
3.G.19 3.70 3.AB.19 3.91
1.G.21 3.51 1.AB.21 3.78
2.G.21 3.49 2.AB.21 3.78
3.G.21 3.51 3.AB.21 3.82
21 3.54 0.05 3.79 0.03
4.G.21 3.61 4.AB.21 3.75
5.G.21 3.54 5.AB.21 3.80
6.G.21 3.60 6.AB.21 3.81
31 1.G.31 3.50 3.47 0.08 1.AB.31 3.73 3.73 0.05
108
2.G.31 3.52 2.AB.31 3.68
3.G.31 3.38 3.AB.31 3.78
1.G.41 3.82 1.AB.41 3.96
41 2.G.41 3.59 3.74 0.13 2.AB.41 4.00 3.97 0.03
3.G.41 3.80 3.AB.41 3.95
1.G.65 3.95 1.AB.65 3.83
65 2.G.65 3.65 3.86 0.18 2.AB.65 3.40 3.69 0.25
3.G.65 3.97 3.AB.65 3.84
1.G.89 4.12 1.AB.89 3.87
89 2.G.89 3.90 4.02 0.11 2.AB.89 3.85 3.85 0.02
3.G.89 4.05 3.AB.89 3.84
1.G.113 3.34 1.AB.113 3.11
113 2.G.113 3.43 3.39 0.05 2.AB.113 3.09 3.11 0.02
3.G.113 3.39 3.AB.113 3.12
1.G.137 3.90 1.AB.137 3.81
137 2.G.137 3.83 3.88 0.05 2.AB.137 3.83 3.83 0.02
3.G.137 3.92 3.AB.137 3.84
1.G.161 3.96 1.AB.161 3.82
2.G.161 3.96 2.AB.161 3.83
3.G.161 3.99 3.AB.161 3.83
161 3.89 0.12 3.86 0.07
4.G.161 3.86 4.AB.161 3.99
5.G.161 3.66 5.AB.161 3.87
6.G.161 3.91 6.AB.161 3.81
Tabla I 2. Monitoreo del pH de las muestras con bagazo-glucosa y las de

bagazo-sin glucosa durante la segunda fermentacin
FERMENTACIN 2
Tiempo BAGAZO CON GLUCOSA BAGAZO SIN GLUCOSA
(h) Muestra pH pH promedio Muestra pH pH promedio
1.BG.0 5.66 1.SG.0 5.99
0 2.BG.0 5.70 5.69 0.03 2.SG.0 6.00 5.93 0.11
3.BG.0 5.71 3.SG.0 5.81
1.BG.5 5.65 1.SG.5 5.94
5 2.BG.5 5.64 5.69 0.08 2.SG.5 6.06 6.07 0.13
3.BG.5 5.78 3.SG.5 6.20
1.BG.10 5.98 1.SG.10 5.78
10 2.BG.10 5.96 5.95 0.04 2.SG.10 5.72 5.76 0.03
3.BG.10 5.91 3.SG.10 5.78
109
1.BG.12 5.67 1.SG.12 6.05
12 2.BG.12 5.68 5.71 0.06 2.SG.12 6.02 6.03 0.02
3.BG.12 5.78 3.SG.12 6.01
1.BG.15 5.71 1.SG.15 5.99
15 2.BG.15 5.73 5.74 0.04 2.SG.15 5.96 6.01 0.07
3.BG.15 5.78 3.SG.15 6.09
1.BG.17 5.65 1.SG.17 6.00
17 2.BG.17 5.72 5.71 0.06 2.SG.17 5.97 5.96 0.05
3.BG.17 5.76 3.SG.17 5.91
1.BG.19 5.70 1.SG.19 6.03
19 2.BG.19 5.73 5.73 0.03 2.SG.19 5.95 5.98 0.05
3.BG.19 5.75 3.SG.19 5.95
1.BG.21 5.65 1.SG.21 5.90
2.BG.21 5.71 2.SG.21 5.95
3.BG.21 5.74 3.SG.21 5.93
21 5.69 0.03 5.92 0.08
4.BG.21 5.68 4.SG.21 5.99
5.BG.21 5.70 5.SG.21 5.95
6.BG.21 5.68 6.SG.21 5.77
1.BG.31 6.07 1.SG.31 6.16
31 2.BG.31 5.93 5.99 0.07 2.SG.31 6.01 6.13 0.11
3.BG.31 5.98 3.SG.31 6.23
1.BG.41 5.98 1.SG.41 5.73
41 2.BG.41 5.39 5.54 0.39 2.SG.41 5.01 5.48 0.41
3.BG.41 5.24 3.SG.41 5.71
1.BG.65 5.48 1.SG.65 4.81
65 2.BG.65 4.84 5.14 0.32 2.SG.65 5.96 5.10 0.76
3.BG.65 5.09 3.SG.65 4.52
1.BG.89 4.69 1.SG.89 4.70
89 2.BG.89 4.75 4.66 0.11 2.SG.89 4.39 4.51 0.17
3.BG.89 4.54 3.SG.89 4.44
1.BG.113 4.39 1.SG.113 4.71
113 2.BG.113 4.50 4.44 0.06 2.SG.113 4.68 4.61 0.15
3.BG.113 4.42 3.SG.113 4.43
1.BG.137 4.32 1.SG.137 4.67
137 2.BG.137 4.28 4.28 0.05 2.SG.137 4.60 4.66 0.06
3.BG.137 4.23 3.SG.137 4.72
1.BG.161 4.20 1.SG.161 4.84
161 2.BG.161 4.18 4.21 0.04 2.SG.161 4.46 4.61 0.20
3.BG.161 4.25 3.SG.161 4.52
110
1.BG.185 4.16 1.SG.185 4.78
185 2.BG.185 4.12 4.26 0.20 2.SG.185 4.41 4.46 0.30
3.BG.185 4.49 3.SG.185 4.19
1.BG.209 4.00 1.SG.209 4.70
209 2.BG.209 4.05 4.06 0.07 2.SG.209 4.35 4.50 0.18
3.BG.209 4.13 3.SG.209 4.45
1.BG.233 4.78 1.SG.233 4.47
2.BG.233 4.70 2.SG.233 4.35
3.BG.233 4.79 3.SG.233 4.30
233 4.43 0.37 4.68 0.54
4.BG.233 4.05 4.SG.233 4.46
5.BG.233 4.03 5.SG.233 5.74
6.BG.233 4.23 6.SG.233 4.75
111
Anexo J
Cuantificacin de absorbancia en fermentacin 1 y 2.
Las siguientes tablas nos muestran los resultados de absorbancia a 600 nm como
estimacin de crecimiento celular obtenidos durante la fermentacin 1 y 2.
Tabla J1. Monitoreo de la absorbancia en las muestras del medio G con

glucosa y medio AB que contena cido butrico
FERMENTACIN 1
CON GLUCOSA CON CIDO BUTRICO
Tiempo (h) absorbancia absorbancia
Muestra absorbancia Muestra absorbancia
promedio promedio
1.G.0 0.157 1.AB.0 0.154
0 2.G.0 0.144 0.151 0.007 2.AB.0 0.146 0.147 0.007
3.G.0 0.153 3.AB.0 0.140
1.G.5 0.127 1.AB.5 0.147
5 2.G.5 0.125 0.129 0.005 2.AB.5 0.139 0.145 0.005
3.G.5 0.135 3.AB.5 0.148
1.G.10 0.125 1.AB.10 0.142
10 2.G.10 0.129 0.127 0.002 2.AB.10 0.128 0.137 0.008
3.G.10 0.128 3.AB.10 0.142
1.G.12 0.167 1.AB.12 0.148
12 2.G.12 0.176 0.173 0.006 2.AB.12 0.176 0.158 0.015
3.G.12 0.177 3.AB.12 0.151
1.G.15 0.614 1.AB.15 0.144
15 2.G.15 0.638 0.626 0.012 2.AB.15 0.135 0.138 0.005
3.G.15 0.626 3.AB.15 0.136
1.G.17 1.125 1.AB.17 0.145
17 2.G.17 1.095 1.134 0.045 2.AB.17 0.138 0.139 0.005
3.G.17 1.183 3.AB.17 0.135
1.G.19 1.358 1.AB.19 0.140
19 2.G.19 1.335 1.363 0.031 2.AB.19 0.129 0.166 0.055
3.G.19 1.397 3.AB.19 0.229
1.G.21 1.452 1.AB.21 0.140
2.G.21 1.424 2.AB.21 0.126
3.G.21 1.48 3.AB.21 0.132
21 1.467 0.026 0.124 0.013
4.G.21 1.477 4.AB.21 0.105
5.G.21 1.473 5.AB.21 0.128
6.G.21 1.498 6.AB.21 0.114
31 1.G.31 1.514 1.502 0.024 1.AB.31 0.123 0.122 0.003
112
2.G.31 1.474 2.AB.31 0.124
3.G.31 1.517 3.AB.31 0.119
1.G.41 1.532 1.AB.41 0.119
41 2.G.41 1.555 1.568 0.045 2.AB.41 0.118 0.121 0.004
3.G.41 1.618 3.AB.41 0.126
1.G.65 1.546 1.AB.65 0.099
65 2.G.65 1.465 1.496 0.044 2.AB.65 0.096 0.102 0.007
3.G.65 1.476 3.AB.65 0.110
1.G.89 1.448 1.AB.89 0.105
89 2.G.89 1.385 1.376 0.076 2.AB.89 0.096 0.103 0.007
3.G.89 1.296 3.AB.89 0.109
1.G.113 1.197 1.AB.113 0.106
113 2.G.113 1.129 1.165 0.034 2.AB.113 0.103 0.106 0.003
3.G.113 1.170 3.AB.113 0.109
1.G.137 0.537 1.AB.137 0.087
137 2.G.137 0.636 0.726 0.247 2.AB.137 0.089 0.090 0.004
3.G.137 1.005 3.AB.137 0.095
1.G.161 0.904 1.AB.161 0.104
2.G.161 0.910 2.AB.161 0.098
3.G.161 0.753 3.AB.161 0.092
161 0.892 0.159 0.102 0.009
4.G.161 0.751 4.AB.161 0.093
5.G.161 0.905 5.AB.161 0.110
6.G.161 1.140 6.AB.161 0.115
Tabla J 2. Monitoreo de la absorbancia de las muestras del medio G con

glucosa y el medio AB con cido butrico
FERMENTACIN 2
BAGAZO CON GLUCOSA BAGAZO SIN GLUCOSA
Tiempo (h) absorbancia absorbancia
Muestra absorbancia Muestra absorbancia
promedio promedio
1.BG.0 0.557 1.SG.0 0.653
0 2.BG.0 0.575 0.558 0.017 2.SG.0 0.655 0.658 0.008
3.BG.0 0.541 3.SG.0 0.667
1.BG.5 0.562 1.SG.5 0.551
5 2.BG.5 0.503 0.531 0.030 2. SG.5 0.553 0.547 0.009
3.BG.5 0.529 3.SG.5 0.537
1.BG.10 0.577 1.SG.10 0.507
10 2.BG.10 0.578 0.581 0.007 2.SG.10 0.540 0.514 0.023
3.BG.10 0.589 3.SG.10 0.495
113
1.BG.12 0.521 1.SG.12 0.616
12 2.BG.12 0.538 0.531 0.009 2.SG.12 0.613 0.614 0.002
3.BG.12 0.535 3.SG.12 0.614
1.BG.15 0.593 1.SG.15 0.636
15 2.BG.15 0.565 0.577 0.014 2.SG.15 0.647 0.648 0.012
3.BG.15 0.573 3.SG.15 0.660
1.BG.17 0.574 1.SG.17 0.634
17 2.BG.17 0.599 0.575 0.023 2.SG.17 0.640 0.647 0.017
3.BG.17 0.553 3.SG.17 0.666
1.BG.19 0.584 1.SG.19 0.640
19 2.BG.19 0.605 0.581 0.025 2.SG.19 0.633 0.647 0.019
3.BG.19 0.555 3.SG.19 0.669
1.BG.21 0.581 1.SG.21 0.641
2.BG.21 0.599 2.SG.21 0.637
3.BG.21 0.582 3.SG.21 0.679
21 0.578 0.021 0.653 0.029
4.BG.21 0.571 4.SG.21 0.631
5.BG.21 0.541 5.SG.21 0.630
6.BG.21 0.596 6.SG.21 0.698
1.BG.31 0.586 1.SG.31 0.613
31 2.BG.31 0.537 0.575 0.034 2.SG.31 0.634 0.688 0.112
3.BG.31 0.602 3.SG.31 0.816
1.BG.41 0.639 1.SG.41 0.738
41 2.BG.41 0.715 0.696 0.050 2.SG.41 0.548 0.503 0.260
3.BG.41 0.734 3.SG.41 0.223
1.BG.65 0.534 1.SG.65 0.937
65 2.BG.65 0.733 0.622 0.101 2.SG.65 0.610 0.826 0.187
3.BG.65 0.599 3.SG.65 0.931
1.BG.89 0.758 1.SG.89 0.739
89 2.BG.89 0.979 0.910 0.132 2.SG.89 0.976 0.845 0.120
3.BG.89 0.993 3.SG.89 0.821
1.BG.113 1.007 1.SG.113 0.882
113 2.BG.113 0.975 0.961 0.054 2.SG.113 0.904 0.942 0.086
3.BG.113 0.901 3.SG.113 1.040
1.BG.137 0.820 1.SG.137 0.863
137 2.BG.137 1.003 0.911 0.092 2.SG.137 0.935 0.933 0.069
3.BG.137 0.910 3.SG.137 1.001
1.BG.161 0.937 1.SG.161 0.625
161 2.BG.161 1.041 1.006 0.060 2.SG.161 1.117 0.859 0.247
3.BG.161 1.040 3.SG.161 0.835
114
1.BG.185 1.070 1.SG.185 0.779
185 2.BG.185 1.077 1.083 0.017 2.SG.185 1.233 0.972 0.235
3.BG.185 1.102 3.SG.185 0.903
1.BG.209 1.261 1.SG.209 0.987
209 2.BG.209 1.285 1.249 0.043 2.SG.209 1.428 1.152 0.241
3.BG.209 1.202 3.SG.209 1.041
1.BG.233 0.695 1.SG.233 1.246
2.BG.233 0.790 2.SG.233 1.430
3.BG.233 0.771 3.SG.233 1.427
233 0.908 0.262 1.307 0.185
4.BG.233 0.709 4.SG.233 1.425
5.BG.233 1.277 5.SG.233 1.409
6.BG.233 1.206 6.SG.233 1.008
115
Anexo K
Estimacin de los parmetros cinticos de la fermentacin ABE
El sustrato residual (SR) es la concentracin que se obtiene de glucosa al trmino
de la fermentacin. Dicho dato se adquiere mediante la tcnica de cido 3,5
dinitrosaliclico (Tcnica DNS), resultando 3.1100.083 g/L.
El porcentaje de sustrato consumido se determin considerando la concentracin

inicial de glucosa presente en el medio de cultivo, la cual se considera como el
100 %. Si se tiene la concentracin de sustrato residual el porcentaje de sustrato
consumido se calcula como sigue:
100( )
= % (10)

Sustituyendo los valores correspondientes se tiene que:
100(3.11 /)
= 6.22 %
(50 /)
Ahora, en la ecuacin A11, se obtiene el %SC como sigue:
100% % = % (11)
100% 6.22% = %
% = 94
El rendimiento de sustrato en biomasa se determina a partir de la ecuacin A12:

/ = (12)

As;
1.883 /
/ = = 0.040
46.89/
La concentracin de sustrato consumido es:
0 = (13)
50 / 3.11/ =
Finalmente:
= 46.89 /
116
Anexo L
Estimacin de la velocidad especfica de crecimiento ()
La tasa de crecimiento especfico mxima , max ( expresado en h-1 ) se
determina a partir de la grfica semi logartmica descrita por la ecuacin (A14)
para los datos tomados exclusivamente en la fase exponencial de crecimiento
celular usando un requisito mnimo de tres datos experimentales:
ln = + (14)
El parmetro de turbidez, OD, representa la densidad ptica (absorbancia) de la

suspensin celular y se midi a 600 nm de longitud de onda, t es el tiempo de
muestreo (horas).
La concentracin de biomasa se estim en peso seco celular (DCW), se hizo
mediante la utilizacin de una correlacin predeterminada entre la absorbancia a
600 nm de una suspensin de clulas y su correspondiente peso seco en g/L. La
concentracin mxima que se obtuvo fue 1.86 g/L.
La tasa de crecimiento especfico mxima , max ( expresado en h-1 ) se
determina a partir de la grfica semi logartmica descrita por la ecuacin (A15)
para los datos tomados exclusivamente en la fase exponencial de crecimiento
celular usando un requisito mnimo de tres datos experimentales:
ln = + (A15)
El parmetro de turbidez, OD, representa la densidad ptica (absorbancia) de la

suspensin celular y se midi a 600 nm de longitud de onda, t es el tiempo de
muestreo (horas).
117
Fermentacin con glucosa
0.5
0.0
ln[ absorbancia a (600nm)]
-0.5
-1.0
-1.5
Ln Ab= 0.291 (t) - 5.051
-2.0
-2.5
10 12 14 16 18 20
tiempo (h)
Figura L1 Grfico de Ln absorbancia vs. t. Medio 1 que contiene slo glucosa.
118
Anexo M
Cuantificacin de productos (acetona, butanol y etanol) obtenidos
durante la fermentacin 1 y 2.
La curva de calibracin se realiz realizando diluciones de 0.5, 1.25, 2.5, 5 y 10
(g/l) para cada uno de los compuestos. Posteriormente se analiz la mezcla en un
espectrmetro de gases para determinar los tiempos de retencin y las reas
obtenidas para cada concentracin (Ver tabla M1).
Tabla M1. Muestra tiempo de retencin y concentracin de acetona, butanol y etanol.
Tiempo de Concentracin g/L

Compuestos retencin Muestras
(min) 0.5 1.25 2.5 5 10
1 1102099 2476033 4779201 11244083 23769368
Acetona 2.580 2 1073578 2605521 5230797 10093784 16888719
3 926508 2375728 5218206 12136495 22944485
1 1031137 2348040 4354770 10182103 21259283
Etanol 3.402 2 1010313 2406173 4817676 9231439 15421347
3 883640 2306306 4830265 11278870 21432117
1 2073411 4681763 8864270 20871903 44009662
Butanol 5.810 2 2037898 4910935 8964270 18888249 31515648
3 1757159 4569724 8894270 22786258 43200636
Se analizaron muestras por triplicado y se determin por realizar un ajuste por
cada uno de los compuestos (acetona, etanol y butanol), como se muestran en las
Figuras M1, M2 y M3
Curva de calibracin para concentracin de

acetona en cromatografa de gases
25000000
20000000
15000000
acetona (g/L)
rea
10000000
y = 2E+06x - 486359
5000000 R = 0.9954
0
0 2 4 6 8 10
concentracin (g/L)
Figura L1. Curva de calibracin para acetona obtenida por cromatografa de gases.
119
Curva de calibracin de concentracin para
butanol en cromatografa de gases
50000000
45000000
40000000
35000000
butanol y = 4E+06x - 1E+06
30000000
R = 0.9946
25000000
rea
20000000
15000000
10000000
5000000
0 2 4 6 8 10
concentracin (g/L)
Figura M2. Curva de calibracin para butanol obtenida por cromatografa de gases
curva de calibracin de concentracin para

etanol en cromatografa de gases
25000000
20000000
15000000
etanol
rea
10000000
5000000
y = 2E+06x - 389438
R = 0.9953
0
0 2 4 6 8 10
concentracin (g/L)
Figura M3. Curva de calibracin para etanol obtenida por cromatografa de gases
Las siguientes tablas nos muestran las concentraciones de acetona butanol y

etanol obtenidos en la fermentacin 1 y 2.
.
120
Tabla M2. rea y concentracin de acetona, butanol y etanol obtenidos en el medio G. Slo glucosa.
Fermentacin 1 con glucosa

Tiempo
Muestra Ecuacin Concentracin (g/L) Ecuacin Concentracin (g/L) Ecuacin Concentracin (g/L)
(h) rea rea rea
utilizada C promedio utilizada C promedio utilizada C promedio
1.G.0 1016201 0.64 506536 0.35 2135755 0.81
0 2.G.0 1371149 0.79 0.75 0.10 690234 0.39 0.38 0.03 3002543 1.21 1.11 0.26
3.G.0 1471282 0.83 721953 0.40 3197094 1.30
1.G.5 1234959 0.73 555454 0.36 2740600 1.09
5 2.G.5 1869755 1.00 0.83 0.14 614027 0.37 0.38 0.02 4631163 1.97 1.38 0.51
3.G.5 1333418 0.77 734200 0.40 2707172 1.08
1.G.10 920387 0.60 897678 0.44 1815750 0.66
10 2.G.10 1831821 0.98 0.72 0.22 1246384 0.52 0.51 0.06 3930765 1.64 1.16 0.49
3.G.10 916193 0.59 1437372 0.56 2900079 1.17
=
1.G.12 1209316 0.72 512892 0.35 2691605 1.07
=
=
12 2.G.12 1349148 0.78 0.81 0.12 847058 0.43 0.37 0.05 2633397 1.04 1.24 0.32
+ 1038087.13
+ 486358.59
+ 389437.63
3.G.12 1739319 0.94 405938 0.33 3848922 1.61
2361987.69
4417039.46
2513387.73
1.G.15 1519250 0.85 291478 0.30 3268558 1.34
15 2.G.15 1575557 0.87 0.87 0.02 531540 0.36 0.41 0.15 3154212 1.28 1.30 0.03
3.G.15 1626796 0.89 1524770 0.58 3130961 1.27
1.G.17 1497818 0.84 389500 0.32 2828486 1.13
17 2.G.17 805792 0.55 0.73 0.16 442057 0.34 0.33 0.01 1985910 0.74 0.95 0.20
3.G.17 1402074 0.80 476814 0.34 2497291 0.98
1.G.19 1231997 0.73 728302 0.40 1528623 0.53
19 2.G.19 689370 0.50 0.57 0.13 1095769 0.48 0.58 0.24 843495 0.21 0.49 0.26
3.G.19 671294 0.49 2757846 0.86 1944041 0.72
1.G.21 765160 0.53 1118162 0.49 855472 0.22
2.G.21 455759 0.40 2681016 0.84 897720 0.24
21 3.G.21 468537 0.40 0.60 0.30 1249328 0.52 1.14 1.13 708439 0.15 0.37 0.31
4.G.21 678968 0.49 3988442 1.14 1182608 0.37
5.G.21 908703 0.59 1101468 0.48 952004 0.26
121
6.G.21 2309638 1.18 13908974 3.38 2493247 0.98
1.G.31 1150387 0.69 3199217 0.96 497762 0.05
31 2.G.31 1191961 0.71 0.73 0.05 2467457 0.79 1.02 0.26 806318 0.19 0.11 0.07
3.G.31 1371078 0.79 4710806 1.30 597053 0.10
1.G.41 2363127 1.21 12623376 3.09 796376 0.19
41 2.G.41 1390427 0.79 1.00 0.21 2965634 0.91 4.12 3.84 725652 0.16 0.38 0.35
3.G.41 1869636 1.00 35948872 8.37 2079085 0.78
1.G.65 2880688 1.43 10131226 2.53 939519 0.26
65 2.G.65 1078693 0.66 1.33 0.62 3166883 0.95 2.95 2.24 503514 0.05 0.32 0.31
3.G.65 3991394 1.90 22699038 5.37 1815683 0.66
1.G.89 2971199 1.46 9727561 2.44 783370 0.18
89 2.G.89 5309306 2.45 2.81 1.55 19761398 4.71 5.32 3.23 1850804 0.68 0.71 0.54
3.G.89 10145038 4.50 37894206 8.81 3115686 1.27
1.G.113 11422725 5.04 53285001 12.30 5113305 2.19
113 2.G.113 4536719 2.13 3.42 1.49 16977478 4.08 7.65 4.22 1724052 0.62 1.33 0.80
3.G.113 6800251 3.08 27963178 6.57 2950587 1.19
1.G.137 3577900 1.72 15643492 3.78 1764649 0.64
137 2.G.137 4800504 2.24 1.55 0.78 14372190 3.49 2.84 1.39 1593052 0.56 0.47 0.22
3.G.137 1178792 0.70 4468649 1.25 869543 0.22
1.G.161 3015023 1.48 11413239 2.82 754109 0.17
2.G.161 2629530 1.32 15993310 3.86 874249 0.23
3.G.161 5765266 2.65 20469624 4.87 1551858 0.54
161 2.52 2.67 5.24 5.90 0.59 0.93
4.G.161 2014661 1.06 7230719 1.87 556762 0.08
5.G.161 1377425 0.79 3583305 1.05 587440 0.09
6.G.161 17970531 7.81 73884099 16.96 5694495 2.46
122
Tabla M3. Muestra rea y concentracin de acetona, butanol y etanol obtenidos en el medio AB que contena glucosa con cido butrico.
Fermentacin 1 cido butrico

Tiempo Concentracin Concentracin Concentracin
Muestra Ecuacin Ecuacin Ecuacin
(h) rea (g/L) rea (g/L) rea (g/L)
utilizada utilizada utilizada
C C C
0 1.AB.0 2390241 1.22 6667045 1.74 2411107 0.94
5 1.AB.5 2109831 1.10 4304599 1.21 2280367 0.88
10 1.AB.10 2115486 1.10 5565596 1.50 2313704 0.89
12 1.AB.12 2715653 1.36 6833192 1.78 3791196 1.58
=
=
=
15 1.AB.15 2311908 1.18 6511667 1.71 2929984 1.18
17 1.AB.17 1921452 1.02 4147928 1.17 2143412 0.81
+ 1038087.13
+ 486358.59
+ 389437.63
19 1.AB.19 2309381 1.18 4610230 1.28 5473673 2.36
2361987.69
4417039.46
2513387.73
21 1.AB.21 2373003 1.21 4863073 1.34 2664125 1.06
31 1.AB.31 5788216 2.66 15043053 3.64 6568189 2.87
41 1.AB.41 2106697 1.10 5016885 1.37 2761838 1.10
65 1.AB.65 2010336 1.06 4861317 1.34 2205159 0.84
89 1.AB.89 1872318 1.00 4273337 1.20 2106935 0.80
113 1.AB.113 2455205 1.25 6371363 1.68 3006887 1.22
137 1.AB.137 2596118 1.31 5573420 1.50 3872983 1.62
161 1.AB.161 2465003 1.25 4731292 1.31 3624959 1.50
123
Tabla M4. Muestra rea y concentracin de acetona, butanol y etanol obtenidos en el medio BG que contena glucosa con bagazo.
Fermentacin 2 bagazo- glucosa

Tiempo
(h) rea rea rea
utilizada C promedio utilizada C promedio utilizada C promedio
1.BG.0 1721326 0.93 2350367 0.77 3821334 1.59
0 2.BG.0 1496114 0.84 0.86 0.07 2155979 0.72 0.73 0.03 3021904 1.22 1.41 0.19
3.BG.0 1384275 0.79 2095548 0.71 3465535 1.43
1.BG.5 1268417 0.74 2795358 0.87 2988839 1.21
5 2.BG.5 1013532 0.64 0.66 0.08 1987120 0.68 0.72 0.13 1993888 0.75 1.09 0.30
3.BG.5 927108 0.60 1633534 0.60 3208197 1.31
1.BG.10 788940 0.54 1365875 0.54 1268335 0.41
10 2.BG.10 820950 0.55 0.57 0.04 1692823 0.62 0.63 0.09 1452858 0.49 0.43 0.06
3.BG.10 951606 0.61 2181150 0.73 1206011 0.38
=
1.BG.12 1066696 0.66 1239926 0.52 2561215 1.01
=
=
12 2.BG.12 871424 0.57 0.65 0.08 1625473 0.60 0.62 0.11 1901333 0.70 0.99 0.28
+ 1038087.13
+ 486358.59
+ 389437.63
3.BG.12 1234953 0.73 2219996 0.74 3088672 1.25
2361987.69
4417039.46
2513387.73
1.BG.15 929260 0.60 2948832 0.90 3465520 1.43
15 2.BG.15 1485527 0.83 0.81 0.19 3457235 1.02 1.00 0.09 2196123 0.84 1.28 0.39
3.BG.15 1838043 0.98 3689114 1.07 3767363 1.57
1.BG.17 1675687 0.92 2976626 0.91 3453292 1.42
17 2.BG.17 763907 0.53 0.71 0.19 944639 0.45 0.73 0.25 1425565 0.48 0.87 0.49
3.BG.17 1162895 0.70 2649587 0.83 1893914 0.70
1.BG.19 1345646 0.78 1994127 0.69 2313695 0.89
19 2.BG.19 1448751 0.82 0.77 0.05 2428846 0.78 0.72 0.05 3091031 1.25 1.32 0.46
3.BG.19 1211662 0.72 2029867 0.69 4277350 1.81
1.BG.21 2573061 1.30 5477665 1.48 5247459 2.26
2.BG.21 1333422 0.77 2393615 0.78 2210669 0.85
21 3.BG.21 1276750 0.75 0.91 0.23 3483072 1.02 0.98 0.27 2336430 0.90 1.41 0.64
4.BG.21 1215287 0.72 3252834 0.97 2228724 0.85
5.BG.21 1483912 0.83 2151502 0.72 3571213 1.48
124
6.BG.21 2062467 1.08 3056718 0.93 4903103 2.10
1.BG.31 1331629 0.77 1571509 0.59 2816738 1.13
31 2.BG.31 1552415 0.86 0.77 0.10 1589694 0.59 0.64 0.08 3877924 1.62 1.28 0.29
3.BG.31 1092674 0.67 2217237 0.74 2762792 1.10
1.BG.41 916162 0.59 2175217 0.73 1213956 0.38
41 2.BG.41 959752 0.61 0.60 0.01 2206389 0.73 0.69 0.06 1313433 0.43 0.46 0.10
3.BG.41 894046 0.58 1707966 0.62 1609560 0.57
1.BG.65 1667234 0.91 3992706 1.14 3362779 1.38
65 2.BG.65 1941866 1.03 0.89 0.15 4166538 1.18 1.05 0.19 2831272 1.13 1.14 0.23
3.BG.65 1220960 0.72 2635523 0.83 2366696 0.92
1.BG.89 1559770 0.87 3123322 0.94 3540151 1.46
89 2.BG.89 1786398 0.96 0.82 0.17 1756609 0.63 0.63 0.31 3908608 1.63 1.25 0.53
3.BG.89 986561 0.62 384379 0.32 1765426 0.64
1.BG.113 1847593 0.99 3126821 0.94 3365931 1.38
113 2.BG.113 1508467 0.84 0.87 0.10 2829854 0.88 0.82 0.16 2340123 0.91 1.08 0.26
3.BG.113 1377653 0.79 1790884 0.64 2458960 0.96
1.BG.137 1142448 0.69 624828 0.38 2291269 0.88
137 2.BG.137 1091445 0.67 0.68 0.01 1803220 0.64 0.61 0.22 1722723 0.62 0.73 0.14
3.BG.137 1115579 0.68 2551549 0.81 1842288 0.67
1.BG.161 653588 0.48 923494 0.44 957422 0.26
161
2.BG.161 1247586 0.73 0.62 0.13 1382526 0.55 0.53 0.08 2138246 0.81 0.54 0.27
3.BG.161 1014501 0.64 1618154 0.60 1552834 0.54
1.BG.185 612082 0.47 3138138 0.95 747164 0.17
185 2.BG.185 966890 0.62 0.57 0.09 1359877 0.54 0.66 0.25 1491996 0.51 0.41 0.21
3.BG.185 972793 0.62 1067472 0.48 1556076 0.54
1.BG.209 1053485 0.65 1649988 0.61 1257189 0.40
209 2.BG.209 1035140 0.64 0.62 0.04 1043129 0.47 0.48 0.13 1520165 0.53 0.52 0.12
3.BG.209 864576 0.57 512491 0.35 1779768 0.65
1.BG.233 1220418 0.72 1051781 0.47 2495790 0.98
2.BG.233 1555893 0.86 1385186 0.55 3152121 1.28
233 0.71 0.12 0.48 0.10 0.89 0.30
3.BG.233 1446194 0.82 1006595 0.46 2915421 1.17
4.BG.233 1127501 0.68 834160 0.42 1836736 0.67
125
5.BG.233 896154 0.59 1764594 0.63 1574831 0.55
6.BG.233 877135 0.58 419218 0.33 1837404 0.67
Tabla M5. Muestra rea y concentracin de acetona, butanol y etanol obtenidos en el medio SG contiene slo bagazo. (Utilizando cromatografa de gases).
Fermentacin 2 bagazo- sin glucosa

Tiempo
(h) rea rea rea
utilizada C promedio utilizada C Promedio utilizada C promedio
1.SG.0 1587848 0.88 5227390 1.42 3472986 1.43
0 2.SG.0 2244275 1.16 0.95 0.18 5361845 1.45 1.37 0.10 2716001 1.08 0.99 0.49
3.SG.0 1428471 0.81 4511758 1.26 1387736 0.46
1.SG.5 1117021 0.68 3459392 1.02 1640121 0.58
5 2.SG.5 1258480 0.74 0.75 0.08 3455080 1.02 1.07 0.09 1496997 0.51 0.51 0.07
3.SG.5 1482947 0.83 4170943 1.18 1342177 0.44
1.SG.10 1082511 0.66 4415983 1.23 3678920 1.53
10 2.SG.10 1820790 0.98 0.91 0.22 4251147 1.20 1.28 0.12 3418134 1.41 1.51 0.09
=
3.SG.10 2081835 1.09 5220063 1.42 3804467 1.59
=
=
1.SG.12 1385263 0.79 3590295 1.05 2953283 1.19
+ 1038087.13
+ 486358.59
+ 389437.63
12 2.SG.12 1187795 0.71 0.80 0.09 3918419 1.12 1.17 0.15 2467958 0.97 0.90 0.32
4417039.46
2361987.69
2513387.73
3.SG.12 1607024 0.89 4882309 1.34 1582486 0.55
1.SG.15 2062838 1.08 5987261 1.59 2784533 1.11
15 2.SG.15 1046228 0.65 0.82 0.23 3251795 0.97 1.20 0.34 1379399 0.46 0.75 0.33
3.SG.15 1264626 0.74 3571085 1.04 1828357 0.67
1.SG.17 2009818 1.06 5869017 1.56 4859135 2.08
17 2.SG.17 973690 0.62 0.87 0.23 4017832 1.14 1.34 0.21 3173916 1.29 1.38 0.66
3.SG.17 1754985 0.95 4706337 1.30 2048059 0.77
1.SG.19 1906894 1.01 5502264 1.48 2586631 1.02
19 2.SG.19 1149437 0.69 0.96 0.24 3466164 1.02 1.41 0.36 2620897 1.04 0.99 0.06
3.SG.19 2258407 1.16 6580114 1.72 2380810 0.92
1.SG.21 1659229 0.91 4302996 1.21 8236056 3.64
21 2.SG.21 1397679 0.80 0.86 0.14 4906703 1.35 1.28 0.23 5010471 2.15 1.39 1.26
3.SG.21 2167941 1.12 6400204 1.68 2167794 0.83
126
4.SG.21 1360961 0.78 3440758 1.01 1568027 0.55
5.SG.21 1342462 0.77 4632612 1.28 1808732 0.66
6.SG.21 1315027 0.76 4090164 1.16 1497826 0.51
1.SG.31 857812 0.57 2915640 0.90 861533 0.22
31 2.SG.31 1287311 0.75 0.63 0.10 4450576 1.24 1.01 0.20 2534927 1.00 0.54 0.41
3.SG.31 869486 0.57 2963787 0.91 1253162 0.40
1.SG.41 1001948 0.63 2868357 0.88 1840928 0.67
41 2.SG.41 1445488 0.82 0.75 0.11 2717828 0.85 0.86 0.02 2818287 1.13 0.87 0.23
3.SG.41 1432157 0.81 2706650 0.85 2117152 0.80
1.SG.65 750065 0.52 2004026 0.69 1218436 0.38
65 2.SG.65 822979 0.55 0.53 0.02 2084431 0.71 0.66 0.06 1310538 0.43 0.41 0.02
3.SG.65 752773 0.52 1599466 0.60 1255747 0.40
1.SG.89 1301008 0.76 2907786 0.89 3556375 1.47
89 2.SG.89 1398610 0.80 0.79 0.04 3765718 1.09 0.97 0.10 2769147 1.11 1.12 0.34
3.SG.89 1467225 0.83 3127836 0.94 2088985 0.79
1.SG.113 560475 0.44 2504091 0.80 1309186 0.43
113 2.SG.113 744909 0.52 0.44 0.08 905963 0.44 0.57 0.20 1238989 0.39 0.40 0.03
3.SG.113 383343 0.37 1085642 0.48 1202237 0.38
1.SG.137 658782 0.48 1691058 0.62 1087286 0.32
137 2.SG.137 673205 0.49 0.53 0.07 2310064 0.76 0.71 0.08 1113421 0.34 0.38 0.09
3.SG.137 932225 0.60 2231232 0.74 1442582 0.49
1.SG.161 613495 0.47 1865875 0.66 1134897 0.35
161
2.SG.161 233920 0.30 0.56 0.32 2322176 0.76 0.70 0.05 1956884 0.73 0.60 0.22
3.SG.161 1693863 0.92 1973476 0.68 1939947 0.72
1.SG.185 828102 0.56 2246157 0.74 1620824 0.57
185 2.SG.185 633864 0.47 0.57 0.10 3562658 1.04 0.77 0.26 1265624 0.41 0.44 0.12
3.SG.185 1093369 0.67 1313064 0.53 1124762 0.34
1.SG.209 721215 0.51 862894 0.43 1694773 0.61
209 2.SG.209 455016 0.40 0.51 0.11 3202681 0.96 0.65 0.27 1153751 0.35 0.45 0.13
3.SG.209 994291 0.63 1488774 0.57 1255688 0.40
1.SG.233 394128 0.37 2305440 0.76 912476 0.24
233 0.47 0.13 0.65 0.09 0.67 0.52
2.SG.233 357259 0.36 1892157 0.66 1865432 0.69
127
3.SG.233 430837 0.39 2128024 0.72 1034933 0.30
4.SG.233 1160911 0.70 1818145 0.65 4020046 1.69
5.SG.233 667841 0.49 1333420 0.54 1592026 0.56
6.SG.233 738291 0.52 1422300 0.56 1595261 0.56
128
Anexo N
Equipos utilizados en la parte experimental
Espectrofotmetro
Despus de realizar la tcnica de DNS a la muestra obtenida se le midi la

absorbancia a 540 nm de longitud de onda en un lector de microplacas
(espectrofotmetro Ultra microplate reader ELx 808) (Xiao, et al, 2004).
Para determinar el crecimiento de la biomasa durante el monitoreo de la

fermentacin, se utiliz un espectrofotmetro a 600 nm de longitud de onda
(Genesys 10S UV-Vis) para medir la absorbancia. La microplaca de fondo plano
fue colocada en el espectro y se realiz la medicin de absorbancia.
Autoclave
Tcnicas para la utilizacin de la autoclave.
1. Revisar que el nivel de agua se mantenga por encima de la marca

solicitada.
2. Encender la autoclave y mover la perilla al mximo, hasta que mantenga
una temperatura de 60 C.
3. Colocar las muestras en una cesta para evitar derrames, las muestras
deben estar bien cerradas y con sello para evitar que la presin dentro del
tubo ocasione que se abran.
4. Cerrar la autoclave de manera uniforme, para que cierre correctamente.
5. Se mantendr la vlvula abierta durante 5 min, mientras se libera todo el
vapor.
6. Se cierra la vlvula y comenzara a elevar la temperatura y presin.
7. Cuando se llegue a la temperatura deseada se mover la perilla al mnimo
8. Se deja reaccionar la muestra por 5 min.
Se despresuriza quitando la vlvula de salida de vapor, al finalizar se retiran las
muestras y se desconecta.
129
Anexo O
Anlisis energtico
Antes de hacer el anlisis e integracin de energa es posible cumplir con los requerimientos del proceso utilizando servicios auxiliares,
para este caso se genera la siguiente tabla de resultados.
Tabla de resultados - slo servicios auxiliares

Equipo Corrientes Q (kW) Tcal (K) Tfro Tln (K) rea (m2) C. Cap. ($/a) C. Oper.
( ) (K) ($/a)
C1 H1-CU 4,846.01 0.8 77.00 20.00 42.28 143.26 25,563.66 96,920.19

C2 H2-CU 91.44 0.8 23.60 32.50 27.81 4.11 3,035.39 1,828.75
C3 H3-CU 959.09 0.8 25.00 32.00 28.35 42.28 12,291.84 19,181.81
C4 H4-CU 72.78 0.8 12.00 10.00 10.97 8.29 4,625.91 1,455.69
C5 H5-CU 36.93 0.8 68.00 81.00 74.31 0.62 976.96 738.57
H1 HU-C1 103.79 0.8 250.00 251.40 250.70 0.51 875.59 8,303.51

H2 HU-C2 963.99 0.8 200 214 206.92 5.82 3,741.54 77,119.18
H3 HU-C3 17,076.05 0.8 32.00 280.00 114.33 186.69 29,964.91 1,366,084.19
Calor total recuperado 0.00 kW

Total de servicios de calentamiento 18,143.84 kW
Total de servicios de enfriamiento 6,006.25 kW
Costo total anual del capital 81,075.80 ($/a)

Costo total anual de operacin 1,571,631.89 ($/a)
Costo total anual de la red 1,652,707.69 ($/a)
130
El anlisis e integracin de energa en el proceso, puede ayudar a disminuir los costos del consumo de energa, pero con esto, es
necesario invertir recursos para realizar la infraestructura necesaria para la recuperacin de calor. A continuacin se muestra la Tabla de
resultados, para la estimacin de los costos con la integracin propuesta
Tabla de resultados Integracin propuesta

Equipo Corrientes Q (kW) ( ) Tcal. Tfro Tln (K) rea (m2) C. Cap. C. Oper.
(K) (K) (dlares/ao) (dlares/ao)
1 H1-C1 103.79 0.8 52.00 51.75 51.87 2.50 2,253.28 NA
2 H5-C3 36.93 0.8 38.16 37.40 37.78 1.22 1,466.06 NA
3 H1-C3 4,742.23 0.8 5.00 5.00 5.00 1,185.55 90,843.98 NA
4 H3-C3 91.44 0.8 1.40 27.70 8.81 12.97 6,049.49 NA
H2 HU-C2 963.99 0.8 200.00 214.00 206.92 5.82 3,741.54 77,119.18

H3 HU-C3 12,127.60 0.8 32.00 208.13 94.06 161.16 27,434.39 970,208.01
C2 H2-CU 91.44 0.8 23.60 32.50 27.81 4.11 3,035.39 1,828.75

C3 H3-CU 789.78 0.8 25.00 32.00 28.35 34.81 10,939.70 15,795.65
C4 H4-CU 72.78 0.8 12.00 10.00 10.96 8.29 4,625.91 1,455.69
Calor total recuperado 4974.38 kW

Total de servicios de calentamiento 13091.59 kW
Total de servicios de enfriamiento 954.00 kW
Costo total anual del capital 150389.75 ($/a)

Costo total anual de operacin 1066407.28 ($/a)
Costo total anual de la red 1216797.02 ($/a)
131
Tabla de resultados Integracin propuesta Uso de desechos slidos
Equipo Corrientes Q (kW) ( ) dTh (K) dTc (K) Tln (K) rea (m2) C. Cap. C. Oper.
(dlares/ao) (dlares/ao)
1 H1-C1 103.79 0.80 52.00 51.75 51.87 2.50 2253.28 NA
2 H5-C3 36.99 0.80 38.16 37.40 37.78 1.22 1466.06 NA
3 H1-C3 4,742.21 0.80 5.00 5.00 5.00 1,185.55 90,843.97 NA
4 H3-C3 91.44 0.80 1.40 27.70 8.81 12.97 6049.49 NA
H2 HU-C2 963.99 0.80 200.00 214.00 206.92 5.82 3741.53 0

H3 HU-C3 12,127.60 0.80 32.00 208.13 94.06 161.15 27,434.39 0
C2 H2-CU 91.44 0.80 23.60 32.50 27.81 4.11 3,035.38 1,828.75

C3 H3-CU 789.78 0.80 25.00 32.00 28.35 34.81 10,939.70 15,795.65
C4 H4-CU 72.78 0.80 12.00 10.00 10.96 8.29 4,625.91 1,455.69
Calor total recuperado 4,974.37 kW

Total de servicios de calentamiento 13,091.59 kW
Total de servicios de enfriamiento 954.00 kW
Costo total anual del capital 150,389.74 ($/a)

Costo total anual de operacin 19,080.08 ($/a)
Costo total anual de la red 169,469.83 ($/a)
132
Anexo P
Determinacin de la cintica para los tres reactores principales del
proceso
Reactor de pretratamiento.
Los datos obtenidos en la etapa experimental se muestran en la Tabla P1, donde
no se pudo realizar un monitoreo constante de la trasformacin de celulosa a
glucosa, ya que no se tenan los equipos adecuados para dicha funcin, por lo
tanto se realizar un anlisis bsico donde se determina la ecuacin de la
concentracin en funcin del tiempo (Figura P1). Se grafica el tiempo y la
concentracin de celulosa considerando que el 100% son slidos, los cuales
equivalen a 105 gramos y el volumen de la solucin es de 1575 ml.
Tabla P1. Concentracin

de la celulosa obtenida
experimentalmente Consumo de celulosa
50
Tiempo Concentracin
(min) %peso 45
g/L 40
Cc= 0.2351 t + 5
concentracin (g/L)
0 72.3 48.2
5 24.5 16.33 35
30
25
20
15
0 1 2 3 4 5
tiempo (min)
Figura P1. Grfico de consumo de celulosa
Los resultados de la concentracin de la celulosa en g/L, se determina de la

siguiente manera, considerando los 105 gramos de slidos totales, de los cuales el
72.3% es de celulosa, utilizando la ecuacin A16 se determina la cantidad en
gramos de celulosa.
(% )( )
= 100%
(A16)
133
Y para determinar la concentracin en un volumen de solucin cida de 1575 ml,
se utiliza la ecuacin A17
( )
= (A17)

De la ecuacin obtenida en el grfico se determina la constante cintica de
k=0.2351 g/L min y el orden de reaccin de cero.
Hidrlisis enzimtica
En la etapa de la hidrlisis no se tienen datos experimentales, por lo que se
utilizar un modelo cinpetico previamente validado para la etapa de hidrlisis
enzimtica (Tsai, et al. 2014), donde se obtienen los resultados del cambio de
concentracin de la celulosa en funcin del tiempo (dCc/dt), la conversin de
celulosa (sustrato) y el tiempo trascurrido. Mediante la operacin de multiplicar el
flujo msico que ingresa al proceso por la velocidad de reaccin, se grafican junto
con la conversin obtenida (Figura P2) para determinar el polinomio que mejor se
ajuste al comportamiento de la funcin (Fogler, 2008).
Grfico para determinar el volumen en un reactor tubular

Cc = 2E+07 x 3 - 9E+06 x 2 + 6E+06 x + 44017
5000000
R = 0.9995
4000000
Fc/-rc (L)
3000000
2000000
1000000
0
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
x (fraccin msica)
Figura P2. Grfico del volumen para la hidrlisis enzimtica, utilizando un flujo
pistn
Una vez obtenido el polinomio caracterstico, se obtiene el rea bajo la curva

mediante la ecuacin 19 que representa el volumen del reactor.
=0.56 0
= =0 (A18)

134
La integral est definida hasta x=0.56, porque es la conversin obtenida despus
de 36 horas de reaccin en el proceso de hidrlisis enzimtica. Al sustituir el
polinomio en la ecuacin A18 y resolver la integral se determina el volumen del
reactor.
Fermentacin
Para determinar la cintica de la fermentacin se analizan los datos monitoreados
en la etapa experimental, que es el consumo de glucosa en funcin del tiempo
(Tabla P2), se grafican los datos y se ajusta un polinomio (no siempre el de mayor
grado es el ms adecuado) del grafico (Figura P3) se obtiene el polinomio el cual
se derivara para obtener el cambio de la concentracin de la glucosa en funcin
del tiempo (-dCg/dt).
Tabla P2. Consumo de glucosa en funcin

del tiempo.
concentracin de glucosa
Tiempo(h) Grfico del consumo de glucosa
(Cg) en g/L
50
0 50
5 36.53 40
10 42.30 Cg = 0.0013 t^2 - 0.4316 t + 44.206
concentracin (g/L)
R = 0.8938
12 35.12 30
15 40.23
17 35.47 20
21 43.28
10
31 27.98
41 24.39 0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
65 19.27 tiempo (h)
89 18.26
113 11.97
137 15.48 Figura P3. Grfico de consumo de glucosa

161 3.11 y ajuste a los datos experimentales
De la ecuacin obtenida en el grfico de consumo de glucosa, se deriva la

ecuacin y se sustituyen los datos de tiempo, para obtener la derivada de la
concentracin de glucosa en funcin del tiempo (dCg/dt) Tabla P3 y se grafican los
datos de la derivada y la concentracin en escala ln/ln.
135
Tabla P3 Datos logartmicos de
velocidad de reaccin y 6 Cintica de consumo de glucosa en el fermentador
concentracin de glucosa
ln Cg dCg/dt ln (-dCg/dt) 5
3.91202301 -0.4316 4.66044395
ln(-dCg/dt) (g/L h)
4
3.59802848 -0.4186 4.62986053
3.74485537 -0.4056 4.59831217 3
3.55879922 -0.4004 4.58540877 ln(-dCg/dt) = 0.8573e ^(0.472 (lnCg))
3.69471718 -0.3926 4.565736 2
R = 0.8644
3.56875175 -0.3874 4.55240247

3.76766033 -0.377 4.52518991 1
3.33142357 -0.351 4.45373094

1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
3.1940583 -0.325 4.3767699 ln Cg (g/L)
2.95875728 -0.2626 4.16357668
2.90466756 -0.2002 3.89226159
2.48282277 -0.1378 3.51874808
2.74005908 -0.0754 2.915752
Figura P4. Grafico para determinar la constante
1.13615021 -0.013 1.15789408 cintica y el orden de reaccin
De la ecuacin obtenida en grfico de la Figura P4 se determina que la contante

cintica del proceso de fermentacin (Fogler, 2008) que es de 0.857 g/L h y de
orden 0.472, la cintica calculada es una aproximacin ya que para calcular
cintica total, se deben emplear el anlisis de varias reacciones en cadena.
136
Anexo Q
Dimensiones de los equipos
Tanques
Una vez determinada la cintica se procede a determinar el volumen del tanque
mediante la ecuacin A19:
0
= ( (A19)
)
Donde
-rA: Velocidad de reaccin del compuesto A
FA0: Flujo de entrada del compuesto A
X: Conversin del compuesto A
Est ecuacin slo aplica para los tanques de pretratamiento y para los de
fermentacin, ya que el de hidrlisis fue diseado como un reactor continuo de
flujo pistn y el volumen se obtiene empleando la ecuacin A20.
0
= (A20)

Los volmenes calculados corresponden slo al compuesto con el que se

determin la cintica, por lo tanto para determinar el volumen total de todos los
componentes se utiliza la ecuacin A21

= (A21)

Donde
Vtotal: volumen total con todos los compuestos
Vcom: volumen del compuesto con el que se determin la cintica
Ftotal: flujo de la corriente de entrada que incluye todos los compuestos
Fcom: flujo del compuesto con el que se calcul la cintica
Calculando cada uno de los datos se determina el volumen de cada reactor (Tabla
Q4), necesario para que se lleven las reacciones en cada reactor.
137
Tabla Q4. Condiciones de operacin de los tanques empleados para las
etapas importantes del proceso
Etapa Flujo total Flujo del Cintica Volumen Volumen
(kg/h) compuesto del total (m3)
(kg/h) compuesto
(m3)
Pretratamiento 90,810.01 19,704.8 0.235g/L min 924 4,258.3

Hidrlisis 85,611.05 6,674.54 1E-07 971.8 12,464.80
enzimtica
fermentacin 74,184.51 14,478.13 0.8573 h-1Cg 4863.03 24,917.68
Obteniendo el volumen necesario se procede a distribuir el nmero de reactores

para cubrir dicho volumen, mediante el siguiente arreglo:
Pretratamiento, tres tanques de 1420 m3 cada uno.

Hidrlisis enzimtica, seis tanques de 2080 m3 cada uno
Fermentacin, cinco tanques de 3200 m3 cada uno dejando una tolerancia
para la eliminacin de gases.
Las dimensiones de cada tanque se determinan con la ecuacin (Equipos, 2014)

= 4 2 (A22)
Donde
V: volumen en m3
D: dimetro del tanque en m
L: longitud en m
Donde los rangos de presin determinan la relacin L/D, de la siguiente forma:
P 17 atm, el valor de L/D= 3
17 P 34 atm, el valor de L/D= 4
P 34 atm, el valor de L/D =5
Por lo tanto las dimensiones para cada tanque se muestran en la Tabla Q5.
Tabla Q5. Dimensiones de los tanques empleados para las etapas ms

importantes del proceso
Etapa Volumen Presin Relacin Dimetro Longitud (m)
(m3) (atm) (L/D) (m)
Pretratamiento 1420 12 4 7.67 30.70
Hidrlisis 2080 1 3 9.59 28.78
enzimtica
Fermentacin 3200 1 3 11.07 33.22
138
Columnas
Para determinar las dimensiones de cada columna (Tabla Q6), se utilizan las
ecuaciones A23 y A24 para determinar el dimetro de la columna (Jimnez, 2003).
1/2
4 1 1
= [( ) ()( + 1)(22.2) ( )( )( )] (23)
273 3600
Donde
1 1/2
= 0.761 ( ) (24)

D: dimetro de la columna, m
F: flujo del destilado, kg mol/h
R: razn de reflujo
T: temperatura de roco del vapor en el condensador, K
P: presin de la columna, atm
Para la altura se utiliza la ecuacin A25 (Jimnez, 2003).

= 0.61 ( ) + 4.27 (25)
Donde
H: altura de la columna, m
S: nmero de etapas ideales
: eficiencia promedio de los platos en la columna
Tabla Q6. Condiciones y propiedades necesarias para determinar el dimetro

y altura de la columna
Smbolo Unidades columna 1 columna 2 columna 3 columna 4
V atm^-1/2 0.761 1.07621652 0.761 0.761
F kmol(h) 336.9615 292.372 80.697 50.887
R 1 4 3 3
T K 365.952 363.069 338.187 184.976

P Atm 1 0.5 1 1
1 1 1 1
S 10 63 5 6
139
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UNIV RSIOAD UT O TROPOLITA A

Diseo de una planta para la produccin de

Dr. Ricardo~odriguez Dra. Divanery Rodrguez Gmez

Mxico, D.F. a 14 de Julio del 2014.

El bagazo de caa de azcar es un residuo de la produccin azucarera que se

Recientemente se ha prestado atencin a la produccin de los biocombustibles

A nivel Federal, Mxico ha presentado diversas leyes y propuestas con el fin de

Los biocombustibles generados a partir de biomasa, son empleados como

En Mxico la produccin de energa a partir de biomasa cubre apenas el 2.5 % del

1.2. Justificacin del captulo 1

El bagazo se obtiene como subproducto o residuo de la molienda de la caa de

Dada la importancia de la produccin de biocombustibles de segunda generacin

1.3. Objetivos del captulo 1

1.3.2. Objetivos especficos

Determinar la ubicacin de la planta, considerando aspectos ambientales,

Determinar las etapas ms relevantes del proceso de produccin de

Evaluar los aspectos ambientales y de seguridad del proceso.

1.4. Oferta y demanda de productos

En 2010, el mercado mundial de biobutanol fue de 2.8 millones de toneladas, con

1.4.1. Principales productores

En la Tabla 1 se muestran algunos de los principales productores de acetona,

Tabla 1. Principales productores de acetona, butanol y etanol en el mundo

1.5. Proyecciones a futuro

La demanda mundial de n-butanol se estim en 3 millones de toneladas en 2011 y

El mercado se expandir significativamente, ya que el biobutanol se convierte en

Se puede utilizar en concentraciones ms altas en comparacin con el

En Estados Unidos, por ejemplo, permiten que el biobutanol sea mezclado

Mezclas de biobutanol/gasolina son menos susceptibles a la separacin en

El Biobutanol se ajusta a la infraestructura existente del combustible.

1.6. Proceso de produccin de Acetona, butanol y etanol

1.7. Aspectos de seguridad y ambientales

1.7.1. Evaluacin toxicolgica

La Tabla 2 muestra algunos aspectos toxicolgicos de las sustancias utilizadas en

Compuesto Aspectos toxicolgicos

1.7.2. Impacto ambiental

1.7.3. Legislacin ambiental vigente y normas

El marco legal que regula las actividades concernientes a la produccin de

En Mxico se cuenta desde 2008 con la Ley de Promocin y Desarrollo de los

En cuanto a la normatividad, cabe sealar que las normas son especificaciones

Tabla 3. Normas ambientales y de seguridad (SEMARNAT, 2013)

Clasificacin e identificacin de residuos

Ingenio San Cristbal

Disponibilidad de materia prima

Se asigna una ponderacin a cada factor (ver Tabla 4), dependiendo de su

Tabla 4. Ponderacin de los factores considerados para la ubicacin de la

1.8.1. Caractersticas de la Ubicacin de la Planta

Municipio Carlos A. Carrillo

El municipio de Carlos A. Carrillo es uno de los 212 municipios del estado de

Norte: Amatitln e Ixmatlahuacan

1.9. Conclusin del captulo 1

El biobutanol es un compuesto prometedor para la generacin de nuevos

A travs de una evaluacin por puntos se determin que la ubicacin de la planta

El proceso no genera compuestos txicos, es decir, cumple con las normas

El bagazo es un material lignocelulsico rico en fibra y compuesta de polmeros

El bagazo de caa que se obtiene como subproducto o residuo de la molienda de

La celulosa (38-50% de la biomasa seca), es un polmero lineal de celobiosa

La hemicelulosa (17-32% de la biomasa seca) sirve de unin entre la lignina y la

La lignina (13-30% de biomasa seca), es un polmero tridimensional de

El proceso de produccin de acetona, butanol y etanol, se divide en tres etapas,

Se requiere realizar un pretratamiento para alterar la estructura de la biomasa

Figura 3. Representacin esquemtica del efecto del

Tabla 6. Mtodos de pretratamiento de bagazo de caa de azcar

Pretratamiento Condiciones Caractersticas Referencias