PRCTICA No.

10 CUANTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
Introduccin:
Entre los distintos componentes de los alimentos, despus del agua, los
carbohidratos son las sustancias ms abundantes y ms ampliamente distribuidas
en la naturaleza; siendo la celulosa la biomolcula que se encuentra en mayor
cantidad en la biosfera, y el almidn, la fuente energtica alimentaria ms
empleada en el mundo. En todos los seres vivos se encuentran presentes los
carbohidratos ya que la ribosa y la desoxirribosa son parte de su material gentico.
De la misma forma, en las frutas y hortalizas los carbohidratos cumplen funciones
estructurales y energticas, constituyendo algunos la estructura rgida o mecnica
de los tejidos vegetales; en tanto que en las semillas, races y tubrculos
funcionan bsicamente como reservas energticas. Por otro lado, en algunos
animales estos compuestos son parte de sus reservas energticas (glucgeno) o
constituyen un componente esencial de su estructura externa (quitina).
OBJETIVO:
El alumno aprender dos tcnicas para la cuantificacin de carbohidratos por
espectrofotometra (sacarosa) y por titulacin (lactosa).
Fundamento: (Metodo de Somogy Nelson)
Existen diversos mtodos de cuantificacin de carbohidratos basados en la
capacidad reductora de los azcares que tienen libre el grupo carbonilo. Estos
carbohidratos son capaces de reducir elementos como el cobre, el hierro o el
yodo.
La glucosa u otro azcar reductor, reducen el reactivo cprico alcalino, ando el
xido cuproso. Este, en presencia del reactivo de Nelson, forma un complejo de
molibdeno de color azul estable cuya intensidad puede ser medida en el
fotocolimetro, siempre este siga las leyes de Lambert y Beer. El complejo se
determina en el espectrofotmetro a 520- 540nm.
Material:
Tubos de ensaye
Pipetas graduadas de 5 ml
Pipetas graduadas de 10 ml
Bao Mara
Mortero
Gradilla
Canicas
Material Biolgico:
Espinacas
Reactivos:
Reactivo de cobre en medio alcalino
Solucin A
Solucin B
Inmediatamente antes de usar mezclar 24 partes de solucin A con una de
solucin B.
Reactivo de arseno molibdato
cido sulfrico 2N
Hidrxido de sodio 4N
Solucin de sacarosa 50 mg/100 ml (patrn)
Procedimiento: Mtodo de Somogy Nelson
1. Secar 50 g de espinacas 2 das
antes de la prctica, a 60 C.
4. Filtrar el extracto de hojas
7. Colocar en bao a ebullicin
por 20 min tapados con canicas.
Transcurrido el tiempo, enfriar
los tubos y agregar los siguientes
reactivos: (Tabla 3)
10. Interpolar en la grfica las
lecturas obtenidas de los tubos
problema
2. Pesar 1g de hojas de espinacas
secas y macerarlas en mortero
con un poco de agua
5. Preparar en una gradilla los
tubos numerados de acuerdo a la
siguiente tabla: ( Tabla 1)
8. Esperar 20 a 30 min y leer en
el espectrofotmetro a 520nm
ajustando a cero con el blanco
(tubo 0). Los tubos 6 y 7 son los
problemas.
11. Expresar los resultados en
micromoles de sacarosa por
gramo de tejido seco.
3. Transferir a un matraz
volumtrico de 100ml y aforar
con agua. Dejar reposar 5
minutos.
6. Colocar los tubos 5 min. en
ebullicin y continuar agregando
lo siguiente (Tabla2)
9. Trazar una grfica con las
lecturas obtenidas de la curva
estndar, colocando las
absorbancias en el eje de las
abcisas (x) y la concentracin de
sacarosa en el de las ordenadas
(y).
Mtodo volumtrico de Lane-Enyon
 1. Medir con una pipeta
volumtrica 2ml de solucin B y
2ml de solucin A de Fehling y
pasar a un matraz Erlenmeyer de
250ml.
2. Aadir 12ml de agua destilada
y unas perlas de vidrio para
ebullicin.

3. Calentar en parrilla el matraz

4. Aadir una gota de solucin
hasta ebullicin y agregar poco a
acuosa de azul de metileno al
poco con una bureta, la solucin
0.2% y continuar la titulacin
patrn de lactosa, hasta la
hasta la desaparicin del color
reduccin del cobre (aparicin
azul.
de precipitado).

6. Colocar 10ml de muestra en

5. Calcular el factor de Fehling
un matraz volumtrico de 100ml
para lactosa
con 12.5ml de agua.

7. Aadir 3ml de solucin

saturada de acetato de plomo,
8. Llevar a un volumen de 50ml
5ml de solucin acuosa saturada
con agua, filtrar y el filtrado
de sulfato de sodio y 0.5ml de
colocarlo en la bureta.
cido actico glacial y mezclar.
Deje reposar 30 min.

9. Se repite el procedimiento 1-3

10. Calcular la concentracin de
pero titulando con la solucin
lactosa
del paso 8.
Tabla 1

Tabla 2

Tabla 3

Resultados

Observaciones

Conclusiones
Cuestionario:
1. Da las estructuras de dos azcares reductores
2. Que otros mtodos sirven para determinar azcares reductores
3. De acuerdo a su naturaleza qumica como se clasifican la sacarosa y la lactosa.