Ra Ximhai

ISSN: 1665-0441
raximhai@uaim.edu.mx
Universidad Autnoma Indgena de Mxico
Mxico

Snchez Zarza, Manuel; Avils Flores, Martha; Gonzlez Esquivel, Luis Alberto
DESARROLLO Y VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DE CIDO
CLOFBRICO POR CROMATOGRAFA DE GASES MASAS
Ra Ximhai, vol. 8, nm. 2., mayo-agosto, 2012, pp. 159-164
Universidad Autnoma Indgena de Mxico
El Fuerte, Mxico

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=46123333016

Cmo citar el artculo

Nmero completo
Sistema de Informacin Cientfica
Ms informacin del artculo Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal
Pgina de la revista en redalyc.org Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
 DESARROLLO Y
VALIDACIN DEL MTODO
PARA LA DETERMINACIN
DE CIDO CLOFBRICO POR
CROMATOGRAFA DE GASES
MASAS
Manuel Snchez Zarza1, Martha Avils Flores2 y Luis Alberto Gonzlez Esquivel3
Instituto Mexicano de Tecnologa del Agua. Paseo Cuauhnhuac 8532, Jiutepec, Morelos 62550 Mxico.
RESUMEN
S
e desarroll y valid una
metodologa para la cuantificacin
de cido clofbricoderivatizado con
trimetilsilildiazometano en muestras de
agua por cromatografa de gases acoplada a
un detector selectivo de masas (CG-MS). El
mtodo se valid en diferentes parmetros
como linealidad, exactitud, precisin,
lmites de deteccin y cuantificacin. Las
concentraciones de validacin se encuentran
en el intervalo de 0.0025 a 0.1644 gL-1.
Los lmites de deteccin y cuantificacin
obtenidos son 0.0003 y 0.0053 gL-1.
Palabras clave: ido clofbrico,trimetilsilildiazomet
ano, validacin.
INTRODUCCIN
Las aguas superficiales y las aguas
subterrneas son actualmente la mayor
fuente de produccin de agua potable en todo
el mundo, sin embargo estudios han revelado
recientemente la presencia de frmacosen
las ciudades de Alemania, Italia, Estados
Unidos y Canad; como cido clofbrico
Recibido: 3 abril de 2012. Aceptado: 26 mayo de 2012.
Publicado como ARTCULO CIENTFICO en Ra Ximhai 8(2): 157-161.
Edicin Especial: Contaminacin y Medio Ambiente.
2,3
Instituto Mexicano de Tecnologa del Agua.
Correro electrnico:manuels@tlaloc.imta.mx
(270 ngL-1) y gemfibrozil (70 ngL-
1),bezafbrato (27 ngL-1), carbamezapina
(258 ngL-1), diclofenaco (6 ngL-1),
penazona (400 ngL-1),provocando un
grave problema de salud pblica.
Los frmacos llegan al medio ambiente por
medio de su metabolizacin y excrecin
por el hombre. El frmaco administrado
puede ser excretado sin ningn cambio,
en forma de conjugados de glucurnidos o
sulfatos, como metabolito principal o como
una mezcla de metabolitos (Strennet et
al., 2004). En general, en el organismo los
frmacos son metabolizados por diversos
mecanismos, luego son excretados en forma
de derivados polares y solubles en agua,
que presentan una activad farmacolgica
reducida respecto al compuesto original
(Flores et al., 2008; Bellido, 2006).
En aguas superficiales al norte de America
y Europa, se han detectado concentraciones
de 0.75-1.50 gL-1 de cido clofbrico
(Sandersonet et al., 2003), mientras
que Pedersenet et al. (2005) reportaron
concentraciones de Gemfibrosil en cuerpos
de irrigacin en regiones ridas de Estados
159
 Desarrollo y validacin del metdo para la determinacin de acido clofibrico por
160 cromatografia de gases masas
Unidos de 190- 790 ngL-1 y en corrientes MATERIALES Y METDOS
de agua de 160 360 ngL-1.
Se desarroll un mtodo para la validacin
En Mxico Siemens et al. (2008) realizaron de cido clofbrico, mediante el mtodo
un estudio con muestras de agua residual de adicin de estndar. El mtodo implica
municipal provenientes del Valle del una extraccin en fase slida con cartuchos
Mezquital en Mxico, con el objetivo de de extraccin en fase slida Chromabond
determinar las concentraciones y flujos C18 de 3mL 500mg. El mtodo se valid
de frmacos en este sistema de irrigacin. en el rango de concentraciones de 0.0025 a
Los resultados de Acido Clofbrico, 0.1644 gL-1.
oscilaron entre 0.02 y 0.22 gL-1.
Estas concentraciones son menores en Reactivos
comparacin con los resultados de estudios Estndar de Acido Clofbrico
realizados en ciudades europeas (Carballaet marca AldlrichChemical Co.>99%,
et al., 2005). DerivatizanteN-(t-butildimetilsilil)-N
metiltrifluoroacetamida (MBSTFBA),tri
En la determinacin de cido clofibricoel uso metilsilildiazometano (TSDM),Surrogado
de cromatografa de gases espectrometra de 4,4-Diclorobifenilo, Metanol grado HPLC,
masas se facilita por su conversin a ester Hexano grado HPLC, Acetona grado
voltil. Los metilesteres son particularmente HPLC,. Viales de 1.8 mLMicrojeringas de
convenientes para la ionizacin electrnica 1000, 500, 100, 50, 25 L.
en espectrometra de masas y producidos
por la reaccin de sustratos cidos con Equipos
diazometano. Cromatgrafo de gases VARIAN modelo
3800 acoplado a espectrmetro de masas/
Una alternativa es el trimetilsilildiazometano masas modelo VARIAN SATURNO 2200,
(TMSDM), que es un derivado del Columna capilar VF5ms 30 m X 0.25mm X
diazometano, sin embargo ste es muy 0.25 m, , las muestras fueron inyectadas al
selectivo y exhibe reaccin con el cido cromatgrafo de gases.
carboxlico para producir el metilester, el
TMSDM es fcil de usar y ms seguro que Balanza analtica OHAUS, Potencimetro
el diazometano. El uso del TMSDM para la Orion-Termo, Bao Ultrasnico, Sistema
conversin de compuestos fenoxicidos o de extraccin en fase slida marca VARIAN
similares a metilesteres para anlisis por CG/ equipado con una bomba de vaco,Rotavapor,
MS se ha reportado en estudios realizados Concentrador de muestras Minivap
por Johnson et al. (1997).
Condiciones cromatogrficas
Objetivo Se determinaron las mejores condiciones
El objetivo de este estudio fue desarrollar del cromatgrafo de gases en cuanto a
y validarel mtodo de Acido Clofbrico por la respuesta en la seal y separacin del
cromatografa de gases masas, empleando pico de cido clofbrico, el programa de
como derivatizantetrimetilsilildiazometano. temperatura fue el siguiente: 65C durante
2 min, seguido de 30Cmin-1 hasta alcanzar
una temperatura de 180C, posteriormente
seguir a 1Cmin-1 hasta la temperatura de

230, finalmente a 300C durante 30Cmin-
1 para tener un tiempo final de corrida de
13.5 min.
Para detectar los analitos, primero se
realiz en modo SCAN (todos los iones)
en un rango de escaneo de 50-500 m/z y
una vez identificados los analitos en modo
SIM (monitoreo selectivo de iones). La
temperatura de la fuente de impacto de
electrones fue de 220C. La energa de
ionizacin fue fijada en 70eV.
Validacin del mtodo analtico
Para evaluar los parmetros de linealidad,
precisin y exactitud se prepararon 21
concentraciones de acidoclofbricopor
duplicado en el rango de 0.0025 a 0.1644
gL-1.
Linealidad. La linealidad del mtodo es la
relacin entre la respuesta del instrumento
y las concentraciones conocidas del analito.
La curva de calibracin para cido clofbrico
Figura 1 Linealidad cido clofbrico
Vol. 8, Nm. 2 / Mayo - Agosto 2012
Edicin Especial: Contaminacin y Medio Ambiente 161
se construy con la relacin de reas de
analito a estndar versus las concentraciones
del analito.
Se realiz el anlisis de regresin lineal
para determinar la linealidad del mtodo as
como para generar la ecuacin de la curva
de calibracin y = mx + b, donde y es la
relacin de rea, x la concentracin, m la
pendiente y b el intercepto.
Se usaron estndares externos para la
cuantificacin. Las curvas de calibracin se
obtuvieron con siete concentraciones estndar
(regresin lineal: R2 >0.98). La identidad
de las sustancias en muestras sintticas se
confirm revisando la abundancia relativa
de los iones caractersticos (Figura 1).
Se realizaron pruebas con dos derivatizante
s(Trimetilsilildiazometano y el MTBSTFA),
el que gener una seal ms sensible fue el
Trimetilsilidiazometano.
 Desarrollo y validacin del metdo para la determinacin de acido clofibrico por
162 cromatografia de gases masas
RESULTADOS Y DISCUSIN
Figura 2. Cromatgrama de cido clofbrico
Para calcular la linealidad se analizaron 6
diluciones del estndar por triplicado, se
demostr respuesta lineal en el rango de
0.0025 a 0.1644 gL-1. El coeficiente de
correlacin superior a 0.99 (figura 1) para
la relacin de rea versus concentracin,
sugiere una fuerte relacin entre la respuesta
del instrumento y las concentraciones
conocidas de cido clofbrico. Un
coeficiente de variacin menor de 5%,
indica que el instrumento es preciso bajo
las condiciones del anlisis establecidas. En
la Figura 2 se muestra el cromatograma del
cido clofbrico.
Precisin
La precisin se evalu mediante nueve
Cuadro 2. Resultados de la exactitud del mtodo.
determinaciones con tres niveles de
concentracin 0.0050, 0.0404 y 0.1614gL-
1. Los resultados obtenidos se indican en la
tabla 1. Los valores de desviacin estndar
son de 2.07, 0.49 y 0.42, lo que confirma la
precisin del mtodo analtico.
Exactitud
Los resultados del ensayo obtenidos
se indican en la tabla 2. Los valores
porcentuales de recuperacin obtenidos
se encuentran dentro del lmite estndar
de entre 86.02 y 95.32, lo que confirma la
exactitud del mtodo.
Lmites de deteccin y cuantificacin
La determinacin del lmite de deteccin

Tabla 3. Resultados de muestras agua de pozo y agua residual.
y cuantificacin se realiz en base a la
desviacin estndar de la respuesta del
blanco y a la pendiente de la curva de
linealidad, obtenindose valores de 0.0003
gL-1 para el lmite de deteccin y 0.0053
gL-1 para el lmite de cuantificacin.
Anlisis de muestras de agua potable
Se realizo un muestreo en un pozo de
abastecimiento y una descarga de agua
residual de un municipio del Estado de
Hidalgo, con el fin de cuantificar la presencia
de acidoclofbricoen los dos tipos de agua;
los resultados se presentan en la siguiente
tabla
CONCLUSIONES
Se concluye que el mtodo de derivatizacin
con el Trimetilsilildiazometano es ms
sensible que el aplicado con el MTBSTFA
para la identificacin y determinacin de
cido clofbrico.El lmite de deteccin
alcanzado con esta tcnica de anlisis (0.0003
ugmL-1) esta por debajo lo reportado en la
bibliografa, lo que indica adems que el
mtodo de extraccin en fase slida es el
adecuado para ste frmaco.La precisin
del mtodo es adecuada y esta por debajo
de lo especificado ( 20 %) y cumple con el
especificado en los mtodos EPA.En base a
los resultados obtenidos de la validacin se
concluye que el mtodo de anlisis de cido
clofbricopor cromatografa de gases masas
y extraccin en fase slida es un mtodo
sensible y confiable.
Vol. 8, Nm. 2 / Mayo - Agosto 2012
Edicin Especial: Contaminacin y Medio Ambiente 163
LITERATURA CITADA
Andreozzi, R., Marotta, R., Nicklas, P.,
2003. Pharmaceutical in STP effluents and
their solar photodegradation in aquatic
environment. Chemosphere 50, 1319-1330.
Bellido, D., 2006. Metabolismos de
frmacos y sus implicaciones clnicas.
Manual de Nutricion y metabolismo.Cap
10. 1 ed. Sep. 625p.
Carballa, M., Omil, F., Lema, J.M.,
Lomopart, M., Garcia, C., Rodriguez, I.,
Gomez, M., Ternes, T., 2005. Behaviour of
pharmaceutical and personal care products
in a sewage treatment plant of northwest
Spain. Water Science and technology. 8, 29-
35.
Flores, J., Media, V.A., Armijo, J.A., 2008.
Metabolismo de los frmacos. Farmacologa
humana. 6 Ed. Masson Barcelona. 1540 p.
Gross, M., Petrovic, M., Barcelo, D.,
2006. Development of a multi-residue
analytical methodology based on liquid
chromatography- tandem mass spectrometry
(LC-MS/MS) for screening and trace level
determination of pharmaceuticals in surface
and wastewaters.Talanta Vol. 70. 4, 678690
Johnson, P.D., Rimmer, D.A., Brown,
R.H. Adaptation and application of a
multiresidue method for the determination
of a range of pesticides, including phenoxy
acid herbicides in vegetation, based on high
resolution gel permeation chromatographic
 Desarrollo y validacin del metdo para la determinacin de acido clofibrico por
164 cromatografia de gases masas
clean-up gas chromatographic analysisi with
mass-selective detection. J. Chromatogr.
A 1997; 765; 245-250 and Johnson, P.D.,
Rimmer, D. A., Brown, R.H. Determination
of phenoxy acid herbicides in vegetation,
utilizing high resolution gel permeation
chromatographic clean-up methylation
with trimehylsilyldiazomethane prior to
gas chromatographic analysis with mass-
selective detection. J. Chromatogr. A 1996;
755: 3-11.

Pedersen, J., Soliman, M., Suffet, M. (2005).

Human pharmaceuticals, hormones, and
personal care products ingredients in runoff
from agricultural fields irrigated with
treated wastewater. Journal of Agricultural
and Food Chemistry. 53, 1625-1632.

Siemens, J., Huschek, G., Siebe, C.,

Kaupenjohann, M., 2008. Concentration
and mobility of human pharmaceuticals in
the worlds largest wastewater irrigation
system. Mexico City-Mezquitalvelley.
Water Research. 42, 2124-2134.

Strenn, B., Clara, M., Gans, O., Kreuzinger,

N., 2003. The comportment of selected
pharmaceutical in sewage treatment
plants. Water Pollution VII. WIT Press,
Southampton, UK

Sanderson, H., Johnson, D.J., Wilson,

C.J., Brain, R.A., Solomon, K.R., 2003.
Probabilistics Hazard assessment of
envoronmetally occurring pharmaceutical
toxicity to fish, daphnids and algae by
ECOSAR screening. Toxicology Letters
144, 383-395.