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UNVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

FACULTAD DE MEDICINA
ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

PRACTICA N 2: GNERO: Staphylococcus

I. INTRODUCCION:
Los estafilococos constituyen un grupo de microorganismos esfricos, Gram positivos,
agrupados en forma de racimos, inmviles no esporulados. El gnero Staphylococcus
pertenece a la familia Micrococaceae. La especie patgena del gnero S. aureus. Los
portadores sanos tienen al Staphylococcus aureus en las fosas nasales. Este
microorganismo tambin es causante de diversos procesos infecciosos tales como
imptigo, forunculosis, abscesos, intoxicaciones alimentarias e infecciosas particularmente
graves como bacteriemias. La especie patgena de Staphylococcus produce una enzima
llamada coagulasa.

Algunas especies de Stahylococcus coagulasa negativas, tales como S. epidermidis y


S. saprohyticus considerados hasta hace relativamente poco tiempo como no patgenos,
vienen teniendo un papel relevante en cuadros infecciosos bacterimicos y urinarios
respectivamente.

II. OBJETIVOS:
El alumno reconocer e identificara a los Staphyloccus que ms se aslan de muestras
clnicas.

III. MATERIALES:
3.1. Muestras:
Secrecin farngea
Secrecin de lesiones superficiales o profundas
Pus de diverso origen

3.2. Materiales
Agar Manitol salado
Agar Sangre
Agar Nutritivo
Asas en anillo
Mecheros
Batera GRAM
Aceite de inmersin
Hisopos estriles
Bajalenguas
Plasma citratado
Agua oxigenada al 10%
Lminas portaobjetos
Gradillas
Solucin Salina Fisiolgica

IV. PROCEDIMIENTO:
Muestra: Secrecin farngea, lesiones superficiales o profundas:

DOCENTES DE PRCTICA:
Med. Juan Luis Rodrguez Vega Blga. Katya Ysabel Guzmn Capuay
Blgo. Roberto Daz Sipin Blga. Sindy Diez Vsquez
UNVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO
FACULTAD DE MEDICINA
ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

Realizar la toma de muestra, con un hisopo estril.


Tocar suavemente una esquina de la superficie del medio Agar Sangre y Manitol
salado con el hisopo con que se tom la muestra.

Con el asa anillo realizar la siembra de la muestra por agotamiento en estra


Con el mismo hisopo realizar un extendido en una lmina portaobjetos fijar hacer
una coloracin Gram
Observar a 100X.
El mismo procedimiento se realiza con la muestra de secrecin y sembrar por
agotamiento en una placa de agar manitol salado y agar sangre.
Incubar las placas cultivadas a 35 - 37C por 18 a 24 hrs.

MANITOL SALADO AGAR.


Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas.

Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los
estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias
aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos,
presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. El extracto de carne y la pluripeptona,
constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de
carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente
selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol,
producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color
rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el
manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias
amarillas rodeadas de una zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el
manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura.

AGAR SANGRE:
El agar sangre es un medio de enriquecimiento aporta muchos factores de crecimiento, es til
tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente
exigentes a partir de una gran variedad de muestras, Se usa tambin para ver la capacidad
hemoltica de los microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). Observando los
halos hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que posee:
alfa: halos verdosos (hemlisis parcial)
beta: halos incoloros (hemlisis total)
gamma: inexistencia de halos (sin hemlisis

Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que
permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de aquellos
nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.

DOCENTES DE PRCTICA:
Med. Juan Luis Rodrguez Vega Blga. Katya Ysabel Guzmn Capuay
Blgo. Roberto Daz Sipin Blga. Sindy Diez Vsquez
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El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10%, aporta nutrientes


para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.

II PARTE: PRUEBAS PARA LA IDENTIFICACION DE Staphylococcus

PRUEBA DE LA CATALASA:
En una lmina portaobjetos colocar una gota de perxido de hidrgeno (agua oxigenada)
Con un aplicador de madera o asa de siembra coger una porcin del centro de la colonia
sospechosa y realizar una emulsin
Observar la presencia o no de burbujas

Interpretacin de la prueba:
La rpida aparicin y produccin sostenida de burbujas de gas o efervescencia indica una
reaccin positiva.
CATALASA (+): Presencia de burbujas
CATALASA (-): No burbujas

Fundamento de la prueba:
La catalasa es una enzima que descompone el perxido de hidrgeno (H2O2) en oxgeno y
agua: H2O2 H2O + O2 (burbujas de gas). De esta manera las bacterias se protegen del
efecto txico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azcares.
Staphylococcus son productores de catalasa por lo tanto son catalasa (+)

PRUEBA DE LA COAGULASA:
En un tubo con caldo nutritivo estril (0.5 ml) colocar una porcin de la colonia sospechosa
(catalasa positiva) y realizar una emulsin
Agregar en el caldo 0.5 ml de plasma citratado
Incubar a 37C por 2 a 4 horas.
Realizar la observacin: formacin de cogulo.
COAGULASA POSITIVO: Formacin de cogulo
COAGULASA NEGATIVO: NO formacin de cogulo

Interpretacin de la coagulasa:
La reaccin se considera positiva ante cualquier grado de coagulacin visible dentro del tubo.
La reaccin se observa mejor inclinando el tubo. Si es positiva, el cogulo permanece en el
fondo del tubo. Las bacterias fuertemente coagulasa positivas pueden producir un coagulo en
1 a 4 horas; por lo tanto, se recomienda observar el tubo a intervalos de 30 minutos durante
las primeras 4 horas de la prueba. Algunas cepas de S. aureus pueden formar fuertes
fibrinolisinas que disuelven el cogulo recin formado. Por consiguiente, pruebas positivas
pueden pasar inadvertidas si no se observa el tubo a intervalos frecuentes. Otras cepas de
S.aureus pueden producir slo suficiente coagulasa como para dar una reaccin positiva tarda
luego de 18 a 24 horas de incubacin; por lo tanto, todas las pruebas negativas a las 4 horas,
deben observarse despus de las 18 a 24 horas de incubacin.

Fundamento: S. aureus posee dos tipos de coagulasa:


a. Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que est unida a la pared
celular. Esta acta directamente sobre el fibringeno provocando la formacin de
cogulos o grumos cuando se mezcla una suspensin bacteriana con plasma citratado
(test en lmina)
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b. Una exocoagulasa o coagulasa libre que acta mediante la activacin de un factor


(CRF), formndose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibringeno
producindose un cogulo de fibrina (test en tubo).

PRUEBA DE LA NOVOBIOCINA: Realizar esta prueba para diferenciar S.epidermidis de


S.saprophiticus.

V. RESULTADOS:
Esquematizar y fundamentar los resultados.

Aislamiento e Identificacin de S. aureus


COLONIAS:
MEDIOS AS MH
Tamao
Forma
Pigmento
Hemlisis
Manitol
Coagulasa
GRAM

Aislamiento e Identificacin de S. epidermidis


COLONIAS:
MEDIOS AS MH
Tamao
Forma
Pigmento
Hemlisis
Manitol
Coagulasa
Novobiocina
GRAM

Aislamiento e Identificacin de S. saprophyticus


COLONIAS:
MEDIOS AS MH
Tamao
Forma
Pigmento
Hemlisis
Manitol
Coagulasa
Novobiocina
GRAM

VI. CUESTIONARIO:
1. Cmo se diagnostica el S. aureus?
2. Cmo se diagnostica el S.saprohyticus?
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3. Cmo se diagnostica el S.epidermidis?

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