Laboratorio 1 Microbiologia Sanitaria I UNI

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL
A o de la cosolidacio del Mar de Grau"
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA SANITARIA
LABORATORIO N1:
DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS

MICROORGANISMOS
DOCENTE:
JORGE TELLO CEBREROS
CURSO:
MICROBIOLOGIA SANITARIA I
ALUMNO:
SALAZAR TORRES, JOSHEP
FECHA:
20 DE SETIEMBRE DEL 2016
Objetivos
Aprender el correcto manejo de los instrumentos tales como la placa Petri, tubos de prueba, pipetas,
etc.
Aprender el correcto manejo de los equipos utilizados en este laboratorio, tales como autoclave,
horno, incubadora, etc.
Conocer la forma correcta de la preparacin de los medios de cultivos para el crecimiento de los
microorganismos.
Observar el desarrollo bacteriano en cada uno de los ambientes expuestos.
Reconocer las caractersticas principales de cada colonia y el grado de contaminacin de cada
ambiente de la facultad de Ingeniera Ambiental.
Reconocer la necesidad de evitar la contaminacin tanto de los medios de cultivo como los
materiales utilizados en el laboratorio de microbiologa.
Observar las principales caractersticas de cultivo elaborado, tales como su forma, margen,
cromognesis, elevacin, etc.
Fundamento Terico
LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

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CULTIVO DE BACTERIAS
Para estudiar debidamente los microorganismos se necesita como requisito preciso el cultivarlos en
condiciones de laboratorio. Para lograr esto es preciso conocer cules son los nutrientes y las
condiciones fsicas que se requieren. Mediante investigaciones extensas se han determinado las
necesidades nutricionales de las bacterias, y esta informacin ha sido la causa del desarrollo de
numerosos medios de cultivo. Ya que las necesidades nutricionales de las bacterias varan de manera
muy amplia, existen diferencias muy importantes en cuanto a la composicin de los medios
empleados. Las bacterias tambin tienen diferencias notables en lo que respecta a las condiciones del
ambiente que favorece su proliferacin. Por ejemplo, algunas prosperan bajo 0C, otras necesitan
temperaturas superiores a los 45C y pueden reproducirse aun a 70C. Algunas necesitan atmosfera
de oxgeno, en cambio, otras se inhiben con el oxgeno o bien este elemento les es indiferente.
NECESIDADES NUTRICIONALES
Desde los hombres hasta los microorganismos, todas las formas de vida, tienen en comn
determinadas necesidades nutricionales en trminos de necesidad qumicas para llevar a cabo su
crecimiento y sus funciones normales. Las siguientes observaciones confirman lo anterior:
1. Todo organismo vivo necesita una fuente de energa. Algunas formas de vida, como las plantas
verdes, pueden consumir la energa radiante y se las denomina fototrofas. Las formas de vida
incapaces de asimilar la energa radiante, por ejemplo, la vida animal, se valen de la oxidacin
de compuestos qumicos para obtener su energa. A estas se las denomina quimiotrofas.
2. Todo organismo vivo necesita obtener carbono de alguna manera, todos requieren al menos
pequeas cantidades de dixido de carbono, pero la mayora de ellos necesita de algn
compuesto que tenga carbono orgnico, como azcar y otros carbohidratos.
3. Todo organismo vivo necesita obtener nitrgeno de alguna manera. Las bacteria son muy
verstiles a este respecto; algunos tipos de ellas absorben nitrgeno atmosfrico, otras lo
obtienen en compuestos de nitrgeno inorgnico, y otras ms lo toman de las protenas.
4. Todo organismo vivo necesita azufre y fosforo.
5. Todos los organismos vivos necesitan de varios metales como sodio, potasio, calcio, hierro, entre
otros; para que puedan crecer normalmente. Las bacterias no son la excepcin.
6. Todos los organismos necesitan agua para su crecimiento. En el caso de las bacterias, todos los
nutrientes deben estar en solucin antes de que puedan ser incorporadas a estos organismos
7. Todo organismo vivo tiene vitaminas y compuestos vitaminados. Aunque todas las bacterias
necesitan de vitaminas en su proceso metablico normal, algunas son capaces de elaborar
(sintetizar) todas las vitaminas que necesitan a partir de otros compuestos que se encuentran en
el medio. Estudios sobre metabolismo efectuados con bacterias han posibilitado comprender
como se sintetizan y funcionas las vitaminas. En la siguiente tabla se ha referencia a las
vitaminas de uso ms comn para el crecimiento bacteriano, asimismo ejemplo de especies.

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TIPOS
DE NUTRICION DE LAS BACTERIAS
De acuerdo con las caractersticas generales ya mencionadas en los prrafos anteriores, es posible
dividir las bacterias en muchos grupos tomando como base sus requerimientos nutricionales. Estos
son los llamados fototrofos y quimiotrofos, estos a su vez se subdividen en base a la fuente principal
de energa que consumen para su crecimiento, por ejemplo, la luz o la oxidacin de compuestos
qumicos. Estos tipos de nutricin se consignan en la siguiente tabla.
AUTOTROFOS Y HETEROTROFOS
En trminos sencillos, los auttrofos tienen las necesidades ms simples. Por ejemplo, un medio de
cultivo como que se muestra en la siguiente tabla permite el crecimiento de bacterias autotrficas
que oxidan azufre. El hecho de que un organismo que puede crecer y reproducirse en tal mezcla de
compuestos qumicos simples, es indicativo de que poseen una capacidad muy compleja para llevar a

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cabo la sntesis. Es decir, el organismo puede transformar estos compuestos en carbohidratos, grasa,
protenas, cidos nucleico, vitaminas y otras sustancias complejas que constituyen la clula viva.
Las
bacterias hetertrofas se han estudiado ms ampliamente que las auttrofas ya que, en esencia, las
hetertrofas estn ms relacionadas con el hombre. En este grupo de bacterias se pueden encontrar
todas las que producen enfermedades al hombre, animales y plantas. Aunque las bacterias
heterotrficas constituyen uno de los grupos nutritivos ms importantes, estos microrganismo varan
considerablemente en cuando a sus necesidades de nutrientes especficos para el desarrollo. Como
se indica en la siguiente tabla, las bacterias heterotrficas pueden tener necesidades nutricionales
relativamente simples o muy complicadas, dependiendo de la especie que se trate.
COONDICIONES FISICAS NECESARIAS PARA EL

CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Adems de conocer los nutrientes apropiados necesarios para el cultivo de bacterias, tambin
conviene conocer las condiciones fsicas del medio en donde el microorganismo puede desarrollarse
mejor. As como las bacterias varan ampliamente en relacin a sus necesidades nutricionales,
tambin muestran respuestas diversas a las condiciones fsicas del medio. Dicho de otra manera, para

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un buen cultivo de las bacterias se necesita combinar apropiadamente los nutrientes necesarios y las
condiciones fsicas adecuadas.
TEMPERATURA
Ya que el proceso de desarrollo de las bacterias depende de reacciones qumicas y la velocidad con
que se efectan estas reacciones es influida por la temperatura, el patrn de desarrollo bacteriano
puede ser influido profundamente por esta condicin. La temperatura puede, en parte, determinar la
velocidad de crecimiento y el grado total de desarrollo de los microorganismos. Las variaciones en la
temperatura tambin pueden influir en los procesos metablicos en la morfologa celular. Cada
especie de bacterias crece a temperatura que estn dentro de ciertos lmites como se muestra en la
siguiente tabla.
NECESIDAD O AUSENCIA DE GASES

Los gases principales que afectan el desarrollo bacteriano, son el oxgeno y el dixido de carbono.
Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxigeno libre, y sobre esta base se dividen
en cuatro grupos:
1. Aerobias, bacterias que se desarrollan en presencia de oxigeno libre
2. Anaerobias, bacterias que se desarrollan en ausencia de oxigeno libre
3. Anaerobias facultativas, bacterias que se desarrollan tanto en presencia como en ausencia de
oxigeno libre.
4. Microaerfilas, bacterias que crecen en presencia de pequesimas cantidades de oxigeno libre.

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ACIDEZ O ALCALINIDAD (pH)

En la mayor parte de las bacterias el pH ptimo de crecimiento est entre 6.5 y 7.5, aunque algunas
bacterias pueden desarrollarse a pH extremos, en la mayor parte de las especies los lmites mnimos
y mximos corresponden a cualquier punto entre pH 4 y pH 9 como se puede apreciar en la siguiente
tabla.
ACTIVIDAD DEL AGUA

Como los microorganismos dependen del agua para la sntesis de sus componentes celulares, es
necesario que sta se encuentre disponible en el medio de cultivo para que los microorganismos la
puedan utilizar para su crecimiento. La actividad del agua (a W) es una expresin para la cantidad de
agua disponible en un sustrato dado y se define como la centsima parte de la humedad relativa del
aire que est en equilibrio con ese sustrato. Este valor nos indica la cantidad de agua disponible
para ser utilizada por los microorganismos.
En la siguiente tabla se presentan como ejemplo algunos microorganismos y el valor de aw en el que

se produce su crecimiento.

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LUZ AMBIENTAL
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz
solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos
ESTERILIDAD DEL MEDIO

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de
vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los
especmenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es
el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)
MEDIOS BACTERIOLOGICOS
Se necesita un gran nmero de sustancias qumicamente puras para cultivar bacterias que tengan
necesidades nutricionales como los lactobacilos. Aunque para el cultivo de bacterias heterotrficas
en laboratorios, tanto si son similares a las especies Escherichia o de Lactobacillus, generalmente se
basan en medios de cultivo sintticos. En lugar de esto, se usan ciertos materiales crudos como

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peptonas, extracto de carne y extracto de levadura y as el medio de cultivo que se obtiene hace
posible el desarrollo de gran variedad de bacterias y otros microorganismos. Cuando se desea un
medio solido se tomo el agar como agente solidificante.
Tenemos en la siguiente tabla la descripcin de algunos materiales crudos, de los cuales es posible la
preparacin de un capaz de permitir el crecimiento de muchas bacteria heterotrficas.
PREPARACION DE LOS MEDIOS

Para el cultivo de las bacterias se recurre a algunas sutancias naturales comunes, En relacion con
esto, se usa la leche denatada y no entera. Los materiales, en su forma natural, no presentan ningun
tipo de porblema para tomarlos como medios de cultivo ya que simplemente se depositan dentro de
los ensvases adecuados tales como tu bos de ensayo, o matraces, los cuales deberan ser esterelizados
antes de utilizarlos. Los medios que se preparan del tipo agar o caldo nutritivo, se hacen mezvlando

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los infredientes individuales necesarios, o de manera mas practica agregando agua o productos
deshidratados que contienen todos los ingredientes. En el comercio podemos encontrar
practicamente todos los medios de cultivo en forma deshidratada. En la prepracion de cultivo, se
debe segior os guientes pasos:
1. Cada ingrediente, o el medio deshidratado completo, se debe disolver en un volumen adecuado

de agua destilada.
2. Se determinara el pH del medio y si es necesario se ajustara. El pH se deermina por medio de
indicadores como se muestra en la siguiente tabla .

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3. El medio se pondra en recipientes adeciados, como tubos, matraces, botellas, cuyas bocas se
cierran con tapones de algodn, pasltico o cubiertas de metal.
4. Los medios se esterilizan generalmente en el autoclave.
MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS

Agar nutritivo :
El agar Nutritivo garantiza el crecimiento de todos los microorganismos de importancia clnica tanto
grampositivos como gramnegativos, hongos y levaduras, adems de proporcionar una herramienta
para el mantenimiento y confirmacin de aislamientos primarios El agar Nutritivo se prepara a partir
del medio de cultivo deshidratado, materia prima producida por la casa BBL y tiene la siguiente
composicin:g/l
Agar Nutritivo (Concentracin: 23 g en 1 litro)Se utiliz 2.76 g de agar en 120ml de agua.
Caldo Nutritivo :
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales. Est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Contiene pluripeptona (una mezcla de
partes iguales de peptona de carne y de casena) y extracto de carne que constituyen la fuente de
carbono y nitrgeno necesarias para el adecuado desarrollo bacteriano. Puede ser utilizado adems,
como preenriquecimiento en la bsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos, ya que permite
recuperar clulas daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias inhibitorias. Composicin ( gr
/litro)

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pH final: 6.9 0.2
Caldo Nutritivo (Concentracin: 8 g en 1 litro)Se utiliz 1.08 g de caldo en 135 ml de agua.
Agar Sabouraud :
Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y saprfitos.

Tambin es til para el cultivo de levaduras.Recomendado para el aislamiento y desarrollo de
hongos, particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo). En el medio de cultivo,
la peptona, la triptena y la glucosa son los nutrientes para eldesarrollo de microorganismos. El alto
contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicoly el pH cido, inhiben el desarrollo bacteriano y
favorecen el crecimiento de hongos y levaduras. El agar es el agente solidificante. Puede ser
suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento. Glucosado Composicin (en gramos por
litro)
Peptona..........................................................................................................................5.0.
Triptena.........................................................................................................................5.0.
Glucosa..........................................................................................................................40.0.
Cloranfenicol.................................................................................................................0.05.
Agar...............................................................................................................................15.0.
pH final: 5.6 0
Agar Sabouraud (Concentracin: 65 g en 1 litro).Se utiliz 4.875 g de agar en 75 ml de agua
MORFOLOGIA DE LAS COLONIAS EN LA SUPERFICIE

DE UN MEDIO SOLIDO
FORMA DE LA COLONIA

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BORDE O MARGEN DE LA COLONIA
ELEVACION DE LA COLONIA
SUPERFICIE DE LA COLONIA
o Lisa
o Rugosa
o Plegado
LUZ REFLEJADA ( observar a traves de la colonia)
o Opaca
o Brillante
CROMOGNESIS O PIGMENTACION
o Crema
o Amarilla
o Anaranjado
o Blanca

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CARACTERISTICAS OPTICAS
o Opaca : no permite el paso de la luz

o Traslucida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad
o Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramente los objetos a traves de la colonia
METODOLOGIA
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO A :
Materiales y Equipos :
4 tubos de ensayo
4 placas Petri ( 3 estriles y 1 no estril )
2 inoculadores ( 1 estril y 1 no estril)
Incubadora
Refigeradora
Agar nutritivo
Procedimiento A :
1. Haber preparado el Agar nutritivo en 4 tubos de ensayo.
2. Vaciar el agar nutritivo en cada una de las 3 placas Petri estriles y en la placa Petri no estril.
Numerar las placas estriles del #1 al #3 y la placa no estril con el #4.

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3. Una vez se haya solidificado el agar nutritivo, se debe llevar a experimentacin las cuatro placas de
la siguiente manera:
Placa N 1:
Grupo 1: Bao de Mujeres

Fecha: 25 de Agosto del 2016
Hora: 5:05 5:20 p.m.
Grupo 3: Bao de Varones
Fecha: 25 de Agosto del 2016

Hora: 5:06 5:21 p.m.
Placa N 2:
Se debe dividir la placa en 4 partes, trazando lneas perpendiculares (cuatro cuadrantes) con
algn marcador.
A) Pelo

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B) Huella Digital
C) Inoculador Estril
D) Inoculador no Estril
Placa N 3 y N 4:
No se deben abrir.
Las placas Petri se deben invertir e incubarlos a 37C por un periodo de 48 horas. Despus
de ese tiempo llevarlas a refrigerar.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO B:
Materiales y Equipos:
3 pipetas ( 2 estriles y 1 no estril)
3 tubos de ensayo ( 2 estriles y no estril )
Pera
Incubadora
Refrigeradora
Caldo Nutritivo
Procedimiento B:
Se prepara el caldo nutritivo y se extrae del autoclave, para despus con pipeta extraer el medio en
otras 3 pipetas distribuidas de la siguiente manera:
Pipeta estril- Tubo estril

pipeta no estril- tubo estril
pipeta estril- tubo no estril
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO C:
Materiales y Equipos:
Agar Sabouraud
5 placas Petri
Incubadora
Procedimiento C:
Ya preparado el Agar Sabouraud, se vierte en 5 placas uno para cada grupo y se lleva a diferentes
ambientes de la Facultad de Ingeniera Ambiental. El trabajo fue realizado el 25 de Agosto del
2016.
Grupo 1: Bao de Varones

Hora: 4:48-5:03 p.m.
Grupo 2:Laboratorio de Fisicoqumica
Hora: 4:49-5:04 p.m.

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Grupo 3:Centro de Estudiantes

Hora: 4:50-5:05 p.m.
Grupo 4: Biblioteca FIA
Hora: 4:49-5:04 p.m.
Grupo 5: Laboratorio de Microbiologa
Hora: 5:45-6:00 p.m.
Ubicado cada uno en su ambiente, se destapa la placa y se deja durante 15 minutos.

Luego, ponerla en la parte superior de la incubadora para que se desarrollen los hongos.
RESULTADOS
RESULTADOS DEL PROCEDIMIENTO A:
Placa N1 Placa N2 Placa Placa N4

Grupo Estril Estril N3 estril no
estril
BAO DE Sector A: Pelo Sector B: Sector Sector
1 MUJERES Huella C: D:
(FIA) Inocu- Inocu-
lador lador
estril no
estril
Nmero de 12 25 --- --- --- --- 3

colonias
Tamao X1=1mm (4) X1<1mm(1) Liso(6) X1=65mm(1
X2=2mm (1) X2=1mm (0) Lobulado(4) )
X3 =4mm (1) X3 =2mm (6) Ondulatorio( X2=4mm (1)
X4=5mm (1) X4=3mm(1) 3) X3 =2mm (1)
X5=18mm(1) X5=4mm(1)
X6=22mm(4) X6=5mm(0)
Margen Lobulado(1) Liso(25) Liso(6) Filamentoso
Liso(10) Ondulatorio(4) Lobulado(4) (1)
Ondulatorio= Lobulado(2) Ondulado(3) Liso(2)

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Elevacin Plano(10) convexo(1) Convexo(4) Plano(2)

Convexo(1) liso(24) Plano(9) Convexo(1)
Elevado(1)
Pigmenta- Blanco(1) Blanco(9) Amarillo(1) Blanco(2)

cin Amarillo(1) Bromo(20) Bromo(2) Crema(1)
Bromo(10) Blanco(9)
Negro(1)
Caracters- Opaco(12) Opaco(25) Opaco(13) Opaco(1)

ticas
Placa N1 Placa N2 Placa Placa

Grupo Estril Estril N3 N4
Estril Estril
no
BAO DE Sector A: Pelo Sector B: Sector Sector
3 VARONES Huella C: D: No abrir
(FIA) Inocu- Inocu- ---
lador lador no
estril estril
Nmero de 29 4 5 1 1 1 ---
colonias
Tamao X1=1mm (16) X1=4mm(1) X1=4mm (1) X1=2m X1=5m X1=4mm
X2=2mm (3) X2=1mm (3) X2=3mm (2) m(1) m(1) (1)
X3 =3mm (2) X3 =2mm (2)
X4=4mm (1)
X5=5mm(4)
X7=7mm(1)
X8=8mm(1)
X9=9mm(1)
Margen Liso(10) Liso(13) Liso(64 Plana(1)

Lobulado(1) Lobulado(1)
Elevacin Convexo(29)

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Pigmentaci amarillo(1) amarillo(0) Amarillo(1) Claro(1) Claro(1) Crema(1)

n naranja(3) crema(1) crema(2)
crema(0) Blanco(3) Blanco(2)
Caracters- Opaco(12) Opaco(26) Opaco(0) Opaco(1 Opaco(0 Opaco(0) Opaco(

ticas Transparente(3) Transparente ) ) Trans(1) 0
(4) Trans(4) Trans(1) Trans(1
)
RESULTADOS DEL PROCEDIMIENTO B:

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Grupo N2 Tubo N1 Tubo N2 Tubo N3

CARACTERSTICAS Pipeta estril Pipeta estril Pipeta no estril
Tubo estril Tubo no estril Tubo estril
CANTIDAD DE escaso escaso escaso

CRECIMIENTO
DISTRIBUCION DEL turbidez sedimento sedimento

CRECIMIENTO
OLOR ptrido imperceptible ptrido
Grupo N4 Tubo N1 Tubo N2 Tubo N3

CARACTERSTICAS Pipeta estril Pipeta estril Pipeta no estril
Tubo estril Tubo no estril Tubo estril
CANTIDAD DE escaso escaso Abundante

CRECIMIENTO
DISTRIBUCION DEL Sedimento Sedimento Pelcula

CRECIMIENTO (anaerobia) (anaerobia) (aerobia)
OLOR aromtico imperceptible ptrido

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RESULTADOS DEL PROCEDIMIENTO C:

GRUPO 1:
Observacin: estuvo expuesto al Ambiente: Bao de varones
Ambiente durante: 15min
Tiempo de cultivo: 72 horas

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Hora de exposicin : 4:48pm--5:03pm

Fecha de exposicin 25/08/16
Numero de hondos observados 16
Tipos de hongos Aspergillus(1), penicillium(3), Alternarias(1),
saccharomyces(2), rhizopus(9)
Caractersticas Verde azulado, verde amarillento y verde

negrusco
GRUPO 2:
Observacin: estuvo expuesto al Ambiente: laboratorio fsico-qumico

Tipos de hongos Aspergillus(11), penicillium(3)
Caractersticas Color verde amarillento
GRUPO 3:
Observacin: estuvo expuesto al Ambiente: Centro de Estudiantes

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Tipos de hongos Aspergillus(3), penicillium(1), Alternarias(6),

rhizopus(2), esporangioforo(3)
Caractersticas Verde azulado, verde amarillento y verde

negrusco
GRUPO 4:
Observacin: estuvo expuesto al Ambiente: biblioteca de la FIA
Tipos de hongos Aspergillus(4), penicillium(3), levadura(2)
Alternarias(1)

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GRUPO 5:
Observacin: estuvo expuesto al Ambiente: laboratorio de microbiologa
Tipos de hongos Aspergillus(1), penicillium(5),
Alternarias(2), esporangioforo(1)
DISCUSIN

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En el procedimiento A, se observa que el cabello utilizado del grupo 1 se encuentra ms contaminado con
respecto al cabello utilizado del grupo 3, se refleja la higiene personal de cada uno de los alumnos que
participaron en el experimento. Por otro lado, el grupo 3 obtuvo bacterias en la parte de la placa que se uso el
inoculador estril, mientras que el grupo 1 no obtuvo bacterias, por lo tanto, se afirma que el grupo 3
contamin su inoculador estril.
En el procedimiento B, los dos grupos contaminaron la pipeta al momento de transferir el caldo nutritivo a
los tubos de ensayo, esto justifica la presencia de bacterias en el primer tubo el cual es estril. Se debe tomar
en cuenta, que el grupo 4 dejo un periodo ms largo de incubacin que el grupo 2, por lo que es un factor
muy importante que nos impide poder comparar los resultados ya que son diferentes como en el olor, la
cantidad de crecimiento y la distribucin del crecimiento.
En el procedimiento C, los 5 grupos colocaron sus placas al mismo tiempo y las retiraron todos juntos, los
resultados fueron los esperados ya que se encontraron una gran cantidad de hongos los cuales se podan
identificar y especificar de qu tipo de hongo se trataba. Cada placa tena algn tipo de hongo propio del
ambiente al cual fue expuesto. El resultado predecible fue que la mayor cantidad de hongos se encontraba en
el bao de hombres, se debe a que este no tiene un constante mantenimiento.

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OBSERVACIONES
Se observ al calentar el Agar nutritivo con el bao mara demor mucho ms tiempo que al
calentarlo en la plancha.
Como la pera se encuentra contaminada, se pipetea. Al poner el dedo en la pipeta se contamina.
La prepar muy de Agar Sabouraud, por lo que el grupo 5 tuvo que preparar ms de este agar.
El mechero no es muy til para la esterilizacin del inoculador.
Las transferencias del caldo nutritivo a cada tubo de ensayo fue desigual.
El grupo 4 tard ms de 72 horas en sacar los tubos de ensayo, los cuales contenan el caldo
nutritivo. No se llegaron a poner en el refrigerador.
Es necesario tener en disposicin los guantes ya que se trabaja a altas temperaturas.
Solo se calienta el Agar Nutritivo y el Agar Sabouraud.
El autoclave debe llegar hasta 121C, tambin se debe recoger el vapor de agua en un balde.
CONCLUSIONES

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Se aprendi a usar los materiales necesarios para preparar los medios de cultivos para el desarrollo
de bacterias y hongos, evitando que los materiales se contaminen se pudo obtener unos resultados
ms precisos.
Se comprendi como se debe manejar los equipos del laboratorio de microbiologa y as se pudo
evitar algn accidente durante el trabajo realizado.
A pesar de que los materiales de cultivos se encontraban vencidos, se pudo demostrar la presencia de
hongos y bacterias en algunos ambientes de la Facultad de Ingeniera Ambiental.
Se concluye que a pesar de que las placas hayan sido expuestos a diferentes ambientes de la facultad,
tienen muchos hongos en comn y otros propios de ese lugar. Por ejemplo, en la biblioteca apareci
el hongo de la levadura; esto es lgico ya que los alumnos comen sus alimentos dentro de la
biblioteca frecuentemente.
El ambiente ms contaminado de la facultad es el Bao de los hombres, ya que la cantidad de hongos

que se encontr fue superior a los dems ambientes, de esto se podra concluir que los varones son
menos aseados que las damas, ya que en el bao de damas la cantidad de hongos fue inferior. Otro
motivo de esta conclusin es que el mantenimiento del bao es muy poco frecuente.
Es muy importante no contaminar los materiales ya que en los resultados se hace difcil identificar y
reconocer el tipo de hongo o bacterias que se encuentran dentro del tubo o la placa Petri.
Se logr identificar diferentes tipos de hongos: Aspergillus, penicillium, Alternarias, esporangioforo,

levaduras. Se pudieron reconocer gracias a su morfologa (forma, color, elevacin, etc.)
En el procedimiento B, en el tubo N1, los dos grupos obtuvieron resultados diferentes, esto se debe
que al momento de pipetear la pipeta se contamin.
RECOMENDACIONES
Para realizar el experimento, tratar de usar materiales de cultivo cuya fecha de vencimiento sea
posterior al trabajo de laboratorio.

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En el momento de la preparacin del medio de cultivo, realizar bien los clculos ya que podra faltar
algn medio de cultivo para la realizacin del trabajo.
Lavar bien los materiales que se usaran en el trabajo ya que ests podran contaminarse y as hacer
variar un resultado esperado.
Siempre trabajar cerca del mechero para evitar la contaminacin de los materiales estriles.
Por ningn motivo abrir por completo las placas Petri que estn estriles, solo se levanta un poco y
se ingresa el Agar.
Esterilizar todo los materiales que se usaran para los medios de cultivo.
Se comprob que el bao mara era menos eficaz para elevar la temperatura del Agar que se
encuentra solidificado, se recomienda usar la plancha.
Tapar bien los tubos de ensayo, usar una significante cantidad para evitar la contaminacin.
Tener el conocimiento necesario del autoclave y del horno para su utilizacin, ya que esto podra
provocar accidentes si es que no tenemos los instrumentos preventivos como los guantes.
Al transferir el caldo nutritivo con la pipeta, evitar tocar la pipeta estril con la mano, ya que se
contaminara.
Al colocar las placas Petri en la incubadora, se deben colocar invertidas.
Se recomienda poner todas las placas al mismo tiempo que contienen el Agar Sabouraud encima de
la incubadora.
Despus de sacar los tubos de la incubadora, no se deben agitar.
Una vez concluido el laboratorio, lavarse bien las manos y descontaminarlas con alcohol.
CUESTIONARIO
1. Qu factores influyen en la flora bacteriana del aire?
La clase y el nmero de microorganismo del aire varan segn el medio. Los microorganismos del
aire libre estn influenciados por las condiciones meteorolgicas y por el tipo de terreno. Las
partculas inertes y microbianas que flotan en el aire son llevadas a grandes distancias por los
vientos. Se sabe tambin, que el nmero de microorganismos no aumenta porque carecen de
sustancias nutritivas adecuadas. Por lo tanto, existen muchos factores que afectan a las bacterias en
el aire, entre las principales serian:

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Temperatura
Humedad
Partculas en suspensin
Ventilacin
Radiacin
2. Cules son las caractersticas principales de los Aspergillus, Rhizobium,

Penicillium, sacharomyze cervicae?
Caractersticas de la Aspergillus
Perteneciente al filo Ascomycota.

Se encuentra formado por hifas hialinas septadas y puede tener reproduccin sexual (con formacin
de ascosporas en el interior de ascas) y asexual (con
formacin de conidios).
Las diferentes especies se diferencian en tamao,
tasa de crecimiento, textura (aterciopelada,
granular, algodonosa) y color de la colonia.
La coloracin aparece casi siempre en todas las
estructuras areas, tanto en el micelio como en las
cabezas conidiales.
Aspergillus es uno de los principales hongos
productores de micotoxinas.
Es termotolerante, puede vivir entre los 12C y los
57C.
Caractersticas de la Penicillium
Se caracterizan por formar conidios mediante

una estructura ramificada.
las ramificaciones terminan en unas clulas que
se conocen como fialides. Las filides originan
las esporas.
Cuando existe solamente un verticilo se
denomina monoverticilado y si existen varios
biverticilado, terverticilado o poliverticilado.
siendo el gnero de hongos ms abundante en
suelos
Caractersticas de la Rhizobium

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Se alimenta de los restos de organismos

muertos.
Son bacilos mviles, Gram-negativos
Aerobios (necesita oxgeno para crecer),
Crece casi en cualquier temperatura, pero
su desarrollo es ms ptimo a una
temperatura de 25 C (77 F),
Sus dimensiones son de 0.5-0.9 x 1.2-3.0
m, y cuenta con flagelos.
Sacharomyze cervicae
Conocida desde la antigedad, la levadura del pan,

del vino y de la cerveza, Saccharomyces cerevisiae, se ha convertido en un organismo de estudio comn en
el laboratorio. La investigacin biotecnolgica ha mantenido el uso tradicional que se ha hecho de esta
levadura, mejorando e innovando los procesos de panificacin y de produccin de bebidas alcohlicas. A la
vez, este organismo ha ganado protagonismo en el
laboratorio al convertirse en un potente modelo biolgico
de organismos eucariotas.
Caractersticas del Sacharomyze cervicae
En la naturaleza se encuentra sobre sustratos ricos

en azcares o en los exudados y savias dulces de
algunas plantas.
Ha demostrado tener un enorme potencial como
herramienta tecnolgica para la biologa
molecular al permitir establecer con relativa
facilidad la relacin entre la estr uctura gentica y
la funcin de la protena.
5.- Qu clase de nutrientes proporciona cada uno de los ingredientes del caldo
nutritivo, agar sabourdou y agar nutritivo?
El agar sabouraud proporciona los siguientes ingredientes:
Peptona..........................................................................................................................5.0.
Triptena.........................................................................................................................5.0.
Glucosa..........................................................................................................................40.0.
Cloranfenicol.................................................................................................................0.05.
Agar...............................................................................................................................15.0.
Y en el siguiente cuadro se muestra lo que proporciona el Agar nutritivo y el Caldo nutritivo:

30
Bibliografa
Collis, C.H., y P.M. Lyne: Microbiological Methods, 3. Ed., University Park Press, Baltimore, 1970.
Descripcion fcil de entender de las ecinas de laboratorio incluyendo el cultivo de bacterias.
Doestsch, R.N., y T.T. Cook: Introduction to Bacteria and their Ecobiology, University Park Press,
Baltimore, 1973. Este volumen proporciona una excelente descripcin de las necesidades fsicas y
qumicas (nutrientes) para el desarrollo bacteriano, particularmente respecto a los habitasts naturales.

30
Koser, Stewart, A.: Vitamin Requirements of Bacteria and Yeasts, Charles C. Thomas, Springfield, I11., 1968.
Este volumen contiene una compilacin amplia de las necesidades de vitaminas y compuestos
relacionados que tiene las bacterias y levaduras.
Lamanna, C., M.F. Mallette, y L.N. Zimmerman: Basic Bacteriology. Its Biological and Chemical
Background, 4. Ed., Williams and Wilkins, Baltimore, 1973. Proporciona inforamacion extensa
acerca de la nutricin bacteriana y de las condiciones fsicas que influyen sobre el crecimiento.
Lennette, E.H., E.H. Spaulding, y J.P. Traunt (eds.): Manual of clinical Microbiology, 2. Ed., American
Society for Microbiology, Washington, 1974. La seccin 11 (cap.45) contiene descripcin general
sobre medios de cultivo, una lista muy extensa de medios con sus ingridenties y empleo.
Universidad central de Venezuela. (s/f). Tema 5: cultivo de microorganismos.

Referencia:http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Te
ma_5_Cultivo.pdf
Instituto nacional de salud. (2016). Protocolo de vigilancia en salud pblica: infecciones

respiratorias agudas. Referencia:
http://www.ins.gov.co/lineas-de-accion/subdireccion-vigilancia/sivigila/protocolos
%20sivigila/pro%20infeccion%20respiratoria%20aguda%20ira.pdf
Bial Arstegui. (2002). Alternara Alternata. pp. 19-21. Referencia:

http://hongos-alergenicos.reviberoammicol.com/files/019.PDF

30

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

A o de la cosolidacio del Mar de Grau"

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA SANITARIA

DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

4. Todo organismo vivo necesita azufre y fosforo.

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

COONDICIONES FISICAS NECESARIAS PARA EL

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

NECESIDAD O AUSENCIA DE GASES

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

ACIDEZ O ALCALINIDAD (pH)

ACTIVIDAD DEL AGUA

En la siguiente tabla se presentan como ejemplo algunos microorganismos y el valor de aw en el que

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

ESTERILIDAD DEL MEDIO

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

PREPARACION DE LOS MEDIOS

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

1. Cada ingrediente, o el medio deshidratado completo, se debe disolver en un volumen adecuado

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS

Agar Nutritivo (Concentracin: 23 g en 1 litro)Se utiliz 2.76 g de agar en 120ml de agua.

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

pH final: 6.9 0.2

Caldo Nutritivo (Concentracin: 8 g en 1 litro)Se utiliz 1.08 g de caldo en 135 ml de agua.

Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y saprfitos.

Agar Sabouraud (Concentracin: 65 g en 1 litro).Se utiliz 4.875 g de agar en 75 ml de agua

MORFOLOGIA DE LAS COLONIAS EN LA SUPERFICIE

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

BORDE O MARGEN DE LA COLONIA

LUZ REFLEJADA ( observar a traves de la colonia)

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

o Opaca : no permite el paso de la luz

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

Grupo 1: Bao de Mujeres

Grupo 3: Bao de Varones

Fecha: 25 de Agosto del 2016

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

Pipeta estril- Tubo estril

Grupo 1: Bao de Varones

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

Grupo 3:Centro de Estudiantes

Ubicado cada uno en su ambiente, se destapa la placa y se deja durante 15 minutos.

RESULTADOS DEL PROCEDIMIENTO A:

Placa N1 Placa N2 Placa Placa N4

Nmero de 12 25 --- --- --- --- 3

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

Elevacin Plano(10) convexo(1) Convexo(4) Plano(2)

Pigmenta- Blanco(1) Blanco(9) Amarillo(1) Blanco(2)

Caracters- Opaco(12) Opaco(25) Opaco(13) Opaco(1)

Placa N1 Placa N2 Placa Placa

Margen Liso(10) Liso(13) Liso(64 Plana(1)

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

Pigmentaci amarillo(1) amarillo(0) Amarillo(1) Claro(1) Claro(1) Crema(1)

Caracters- Opaco(12) Opaco(26) Opaco(0) Opaco(1 Opaco(0 Opaco(0) Opaco(

RESULTADOS DEL PROCEDIMIENTO B:

LABORATORIO N 1: DISTRIBUCION UNIVERSAL DE LOS MICROORGANISMOS

Grupo N2 Tubo N1 Tubo N2 Tubo N3

CANTIDAD DE escaso escaso escaso

DISTRIBUCION DEL turbidez sedimento sedimento