Mutagnesis en Aguas

Jos F. Oate1

Resumen

Una revisin de la literatura sobre la mutagenicidad y genotoxicidad de aguas

superficiales y de consumo, es presentada en este artculo. Las secciones de este artculo
consisten en la descripcin de las observaciones de algunos estudios con respecto a la
contaminacin de aguas, mtodos de concentracin, mutagenicidad en aguas
superficiales, mutagenicidad en aguas de consumo y utilizacin de otros bioensayos. La
mayora de trabajos de mutagenicidad en aguas, emplean el test de Ames con las cepas
TA98 y TA100, con y sin activacin metablica. En los resultados observados de las
distintas publicaciones se determina que existe mutagenicidad en las aguas superficiales
y en las aguas de consumo, indicando que algunos ros en el mundo son contaminados
por descargas industriales, residuos urbanos, agroqumicos y lixiviados, que pueden llegar
hasta las aguas de consumo. Muchos estudios evalan la mutagenicidad y genotoxicidad
de las aguas in vitro, usando distintas clases de clulas y in vivo utilizando distintos
organismos para monitorear las respuestas genotxicas. Anlisis qumico, mutagnico y
genotxico pueden ser incluidos como parmetros adicionales en programas de
monitoreo de calidad de aguas. Esta revisin provee fundamentos tericos para el uso de
herramientas sensibles y reproducibles en la evaluacin mutagnica de ambientes
acuticos.

Palabras claves: Mutagenicidad, Aguas superficiales, Aguas de cosnumo, Test de Ames,

Contaminacin.

Abstract

Literature review about mutagenicity and genotoxicity in surface and drinking water will be
made in the following article. The sections of this paper are the descriptions of the
observations of some studies regarding water pollution, concentration methods,
mutagenicity in surface water, mutagenicity in drinking water and the use of bio-tests.
Most of works related to water mutagenicity are develop using Ames test with the strains
TA98 and TA100, with and without metabolic activation. In the results exposed in different
papers, it is determined that mutagenicity exists in surface and drinking water, showing
that some rivers around the world are contaminated by industrial wastes, urban wastes,
agrochemicals and leachate that are able to get into drinking water. Many studies evaluate
the mutagenicity and genotoxicity of water in vitro using different kind of cells and in vivo
using different kind of organisms to check the genotoxic responses. Chemical, mutagenic
and genotoxic analysis can be included as additional parameters in monitor programs for
water quality. This review provides theoretical foundations of sensible and reproducible
tools for the mutagenic evaluation of aquatic environments.

Key words: Mutagenicity, surface water, drinking water, Ames test, Pollution.
1
Grupo Interdisciplianrio de Estudios Moleculares (GIEM). Universidad de Antioquia.
Medelln, Colombia. E-mail: joselo_1583@yahoo.com

INTRODUCCIN

Un ambiente acutico, como un ro, es un depositario de descargas antropognicas,

domsticas, agrcolas e industriales, constituyndose as un reservorio potencial de
contaminantes y a su vez son utilizados para la agricultura y agua potable (Kataoka et al.,
2000). Consecuentemente la contaminacin del agua puede ser un serio problema para la
salud humana y un riesgo para el ecosistema acutico (Houk, 1992, Claxton et al., 1998,
White and Rasmussen, 1998, Ansari and Malik, 2009), ya que muchos de esos
contaminantes arrojados en el agua, son carcingenos reconocidos por la IARC y la
mayora de ellos tienen actividades mutagnicas y/o clastognicas (Waters et al., 1991,
Waters et al., 1999). Algunos carcingenos son persistentes y pueden ser transportados
por el agua.

Los mutacarcingenos en el agua pueden ser conocidos o desconocidos, pero su accin

puede verse afectada en una mezcla compleja por mecanismos de interaccin con otros
componentes (White, 2002). Sin embargo muchos estudios a nivel mundial han
relacionado la actividad mutagnica de las aguas con algunos compuestos identificados
tales como: aminas heterocclicas (AHs), formadas en las partes quemadas de carnes
fritas y asadas, que pueden llegar al agua por la orina y heces fecales (Ohe, 1997);
hidrocarburos policclicos aromticos (HPA) formados por la combustin incompleta del
material orgnico (Marston et al., 2001, Yang et al., 2003), entre otros desechos
(Kleinsasser et al., 2000, Zhang et al., 2011).

Algunos investigadores han reportado que los tratamientos de desinfeccin

convencionales de aguas no remueven efectivamente muchos contaminantes qumicos,
de hecho pueden incrementar la mutagenicidad despus de la purificacin (Meier and
Bishop, 1985, Cao et al., 2009, Wu et al., 2010). En consecuencia, los desechos
finalmente pueden llegar a las plantas de tratamiento que al reaccionar con el cloro
forman trihalometanos y otros subproductos, muchos de los cuales son fuertes
mutacarcingenos (Bull et al., 1995, Garcia-Villanova et al., 1997, Xu et al., 1997),
pudiendo llegar hasta los domicilios (Melndez et al., 2001).
El uso de bioensayos de corto tiempo, permiten detectar un amplio rango de sustancias
qumicas que pueden producir dao gentico, facilitando as, la cuantificacin de riesgo
mutagnico sin una informacin previa acerca de la identidad y propiedad fsico-qumica
de la sustancia. Desde 1980, muchos investigadores han realizado ensayos de
mutagenicidad y genotoxicidad en aguas usando una variedad de bioensayos y mtodos
analticos.

El ensayo de mutagnicidad de Ames, que consiste en cepas de Salmonella typhimurium

con mutacin en el opern histidina, determinan si algn compuesto o mezcla es
mutagnica o no, dependiendo de la cantidad de colonias revertantes de his- a his+. Este
ensayo, ha sido ampliamente usado para detectar actividad mutagnica en mezclas
complejas ambientales, as como aguas de ro y para consumo humano. Cepas altamente
sensibles responden a aminas aromticas y/o nitrocompuestos que han sido encontrados
en algunas aguas superficiales (Kusamran et al., 1994, Goto et al., 2000, Kataoka et al.,
2000) y a furanonas, que se han encontrado en aguas de consumo (Onstad et al., 2008).

En el (2004) Ohe et al., realiz una revisin de 178 publicaciones en aguas superficiales,
donde concluy que el ensayo de mutagenicidad de Ames es el ms utilizado para este
tipo de estudios (Fig. 1).

Figura 1. Porcentajes de distintos bioensayos usados para estudios de mutagenicidad y genotoxicidad de aguas
superficiales, en una revisin de 178 publicaciones (Ohe et al., 2004).
A continuacin se describen algunos puntos necesarios a tener en cuenta, para llevar a
cabo la evaluacin mutagnica de aguas contaminadas con qumicos genotxicos.

CONTAMINACIN DE LAS AGUAS POR MUTGENOS Y DESINFECCIN.

En Colombia, la calidad del agua de consumo solo se determina teniendo en cuenta

parmetros fisicoqumicos y microbiolgicos (Decreto 475 de 1998), pero se desconoce
por completo el control relacionado con compuestos mutacarcinognicos, ya que los
afluentes que surten las plantas de potabilizacin pueden recibir mutgenos
constantemente (Zuleta et al., 1990, Au et al., 1999). Segn Withe y Rasmussen (1998),
una planta de tratamiento que abastece grandes zonas urbanas, en promedio distribuye a
la poblacin un total de 109 litros de agua por da, por lo tanto, es de gran importancia
evaluar la calidad del tratamiento de las aguas negras.

Aguas negras: Los afluentes pueden ser contaminados con mutacarcingenos tales como
hidrocaburos policclicos aromticos (HPA) que se encuentran en cenizas, holln, tiznes de
humos y otros subproductos de la combustin (Yang et al., 2003), nitrosaminas que se
encuentran en alimentos ahumados y descompuestos (Grubbs et al., 1983) y aminas
heterocclicas (AH), que se generan de alimentos proteicos quemados como carnes fritas
y asadas (Sugimura et al., 2004). Los desechos domiciliarios constituyen el principal
contenido de las aguas negras.

Desechos industriales: Son frecuentemente vertidos a quebradas y ros que luego son
usados para surtir las plantas de tratamiento (Morisawa et al., 2003, Komulainen, 2004).
El benceno es ampliamente usado como materia prima en la sntesis de plsticos, hules,
resinas, nylon, anilina, detergentes, medicamentos, colorantes e insecticidas, por lo tanto
est contenido en muchos residuos industriales (Claxton et al., 1998, Whysner et al.,
2004) y est asociado con un incremento en la incidencia de leucemias y mielodisplacia e
induce aneuploidas en clulas madre hematopoyticas (Travis et al., 1994). Los
compuestos, como los ptalatos han mostrado ser mutagnicos (Shea, 2003), entre ellos
estn: dibutil ptalato (DBP) y diidobutil ptalato (DiBP), son usados para mejorar el
procesamiento qumico de materiales plsticos, de lacas, de cauchos, cosmticos,
juguetes de nios y lubricantes. Algunos ptalatos son formados por la reaccin de
naftaleno (residuo industrial) con dioxido de titanio, que es un colorante (Garcia-Martinez
et al., 2005).
Cloracin: La formacin de mutacarcingenos durante el proceso de desinfeccin del
agua, se debe a que el cloro es altamente reactivo, lo que favorece su interaccin con
numerosos compuestos orgnicos e inorgnicos (Melndez et al., 2001, Yuan et al.,
2005). La formacin de mutacarcingenos por accin del cloro depende del pH, la
temperatura, consumo de cloro, cantidad de carbn orgnico total (TOC) y de la presencia
de compuestos inorgnicos como el bromo, que contribuye a la produccin de
organoclorados bromados, altamente mutagnicos (Nobukawa and Sanukida, 2001).
Estos productos de desinfeccin pueden estar presentes en el agua como mezclas
complejas. Entre los mutgenos ms potentes formados por la reaccin del cloro con los
cidos hmicos y flvicos del material orgnico, estn los Trihalometanos (THMs) tales
como el MX (3-Cloro-4-diclorometil)-5-hidroxi-2-(5H)-furanona), el MA (3-4-(dicloro)-5-
hidroxi-2-(5H) furanona) (Meier et al., 1987), el E-MX que es un ismero de forma abierta
del MX, el bromohidroxifuranona (BrMX) e hidrocaburos clorinados (Badawi et al., 2000).

CONCENTRACIN DE MUESTRAS DE AGUA

El material orgnico en las aguas se encuentra en forma disuelta, de manera que es

recomendable concentrar las muestras ya que cada contaminante usualmente est
presente en niveles muy bajos, difciles de detectar. Sin embargo existen reportes donde
la muestra de agua sin concentrar presenta actividad mutagnica (Vargas et al., 1995).

Viene en aumento el reporte del uso del mtodo analtico que usan resinas de polmeros
porosos como retenedor de los compuestos orgnicos de muestras de ro, aguas
saladas, aguas negras y de medios biolgicos acuosos (Daignault et al., 1988, Kool et al.,
1989, Zuleta et al., 2004, Zubair Alam et al., 2010). El mtodo ms usado es la resina
XAD, esta es un polmero de estireno-divenilbenzeno de baja polaridad que posee
caractersticas macroreticulares esenciales para su alta capacidad de adsorcin de
qumicos polares y apolares potencialmente efectivos en pruebas txicas y genotxicas
(Zaika et al., 1968, Slooff et al., 1983).

Con XAD se pueden detectar compuestos poco voltiles y contaminantes lipoflicos en

aguas, esto se debe a sus propiedades que le dan una alta capacidad de adsorcin. Se
ha observado la retencin eficiente de pesticidas (Richard and Fritz, 1974, Kosikowska
and Biziuk, 2010), aminocidos (Oshima et al., 2009), cidos alifticos (Sullivan and
Weber, 2006) y componentes miscelneos individuales (Burnham et al, 1972; Riley y
Taylor, 1969) del agua, usando resinas XAD. Resultados similares para alcaloides (Saikia
and Dutta, 2006) en medios biolgicos acuosos, han sido tambin publicados. Estos
resultados sugieren que las resinas XAD tienen una amplia aplicabilidad para retener una
amplia gama de componentes orgnicos presentes en una matriz acuosa. Se recomienda
en un estudio de identificacin de compuestos en aguas, aplicar la retencin con resinas
XAD para el anlisis preciso de contaminantes orgnicos presentes en bajos niveles en
agua cruda y agua potable.

EL TEST DE AMES EN AGUAS

El test de Ames, tambin conocido como el ensayo de mutagenicidad en Salmonella, ha

sido ampliamente usado para detectar mutagenicidad en aguas superficiales y de
consumo. Las diferentes respuestas de las cepas de Salmonella detectan una gran
variedad de mutgenos presentes en las aguas, pero las cepas ms empleadas en estos
estudios han sido la TA98 y la TA100, las cuales son sensibles a mutgenos que actan
por prdida o ganancia de bases y a los que actan por sustitucin de bases
respectivamente. Este test desarrollado por Maron y Ames (1983), es sencillo de ejecutar
(Fig. 2) y se basa en la deteccin de revertantes de cepas de Salmonella independientes
de histidina despus de la exposicin a mutgenos en presencia o ausencia de enzimas
metablicas. Los mutgenos pueden ser clasificados de dos maneras: directos, cuando
en su estado original son capaces de interactuar con biomolculas; indirectos, cuando
necesitan ser transformados qumicamente por enzimas metablicas para ser bioactivos.

La dosis-respuesta puede ser cuantificada variando la concentracin de la muestra de

agua y contando revertantes por plato en cada concentracin. Se considera una
respuesta mutagnica positiva cuando el nmero de revertantes del tratamiento duplica al
control negativo (Vargas et al., 2001). Sin embargo existen cifras precisas para clasificar la
actividad mutagnica: hasta 500 revertantes por equivalente litro concentrado, como
baja; desde 500 hasta 2500 revertantes por equivalente litro concentrado, como
moderada; de 2500 hasta 5000 revertantes por equivalente litro concentrado, como
alta y de 5000 revertantes por equivalente litro concentrado en adelante, como extrema
(Umbuzeiro et al., 2001).
Figura 2. Procedimiento del test de Ames.

0.5 ml de S-9 Buffer

Tratamiento bacteriano
Dosis del extracto control (0.1ml)
TA-100
Incubar 35 min.0.1
370ml
C de Salmonella TA-98
Agar blando
Con histidina
Homogenizar y servir
Agar mnimo
Incubar 48 h a 370C

Tratamiento Control

En una revisin de publicaciones de mutagenicidad en aguas superficiales, Ohe (2004)

observ que la frecuencia de mutacin en la cepa TA98 era mayor que en la cepa TA100,
independiente de la accin de enzimas metablicas, sugiriendo la predominancia de
mutgenos que actan por prdida y ganancia de bases en los ros del mundo. Sin
embargo existen subproductos de cloracin que tienen una marcada actividad mutagnica
en la cepa TA100 (Sujbert et al., 2006, Ward et al., 2010).

El test de Ames ha sido recomendado como el mtodo estndar para la examinacin de

calidad de aguas y aguas negras por la Public Health Association (APHA), American
Water Works Association (AWWA) y Water Environment Federation (WEF) (APHA, 1998).
El test tambin ha sido propuesto por la E.P.A para cumplir con el monitoreo de limpieza
de aguas (U.S. Environmental Protection Agency, 1989) y por el Programa de Monitoreo
de Trabajos de Agua en el Estado de Sao Paulo, en sitios donde el agua es utilizada para
el consumo humano (de Aragao Umbuzeiro et al., 2004).
OTROS BIOENSAYOS PARA LA MUTAGENICIDAD/GENOTOXICIDAD DE AGUAS.

La aplicacin de biomarcadores es un importante enfoque cuando se investiga la relacin

entre exposicin a contaminantes ambientales y la observacin de efectos a largo trmino
en individuos y poblaciones. El uso de una batera de biomarcadores en el campo del
biomonitoreo se ha incrementado en los ltimos 15 aos. Biomarcadores de
genotoxicidad son considerados como una parte integral en los estudios de exposicin a
agentes genotxicos.

Los aductos de DNA en organismos acuticos, son dosmetros moleculares efectivos de

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exposicin a contaminantes genotxicos y el ensayo de marcaje con P, ha sido usado
para medir aductos de xenobiticos con el DNA. Esta tcnica es el mtodo ms sensible
para la deteccin de un amplio rango de compuestos hidrofbicos unidos al DNA, tales
como los derivados de los compuestos policclicos aromticos en 10 9 1010 bases.
Reicher et al (1998), document que los niveles de aductos en el DNA son un factor de
riesgo significativo para algunas lesiones degenerativas y preneoplsicas, ocurriendo en
la histognesis de neoplasmas hepticos en Pleuronectes vetulus capturados en reas
contaminadas con compuestos policclicos aromticos.

El ensayo cometa ha sido ampliamente utilizado en eritrocitos de sangre perifrica, debido

a que este tipo de clula es fcilmente manejable (Belpaeme et al., 1998). Esta tcnica
permite una eficiente visualizacin del dao en el DNA en clulas individuales y en
cualquier clula que tenga ncleo. Utilizando un pH alto, no solo detecta quiebres de una
sola cadena sino que pueden revelar otra clase de dao en el DNA (entrecruzamiento,
DNA-protena) y reparacin incompleta de DNA. La literatura reporta estudios que usan el
ensayo cometa in vitro y in vivo con peces. Para los experimentos in vivo, la sustancia a
evaluar es inyectada o mezclada en el alimento o el agua (Cotelle and Ferard, 1999). La
tabla 1, muestra varios estudios usando ensayo cometa para la deteccin de agentes
genotxicos en ambientes acuticos.

Tabla 1. Publicaciones de ensayo cometa en estudios de biomonitoreo y de deteccin de

genotxicos en organismos acuticos.
Organismo Clula Localizacin Contaminante Referencia
Oncorhynchus Eritrocitos Ro Biobio (Chile) Hidrocarburo (Inzunza et
mykiss policclico aromtico al., 2006)
Orechromis Eritrocitos Laboratorio Cromo (Matsumoto et
niloticus al., 2006)
Geophagus Eritrocitos y Santa Catarina Drenaje domestico (Beninc,
brasiliensis clulas de rin (Brazil) 2006)
Gambusia affinis Eritrocitos Laboratorio Hidrocarburos (Caliani et al.,
residuales 2009)
Salmo truttafario Eritrocitos Rio Morcille Mezcla de pesticidas (Bony et al.,
(Francia) usados en viedo 2008)
Channa Linfocitos, Laboratorio Pesticidas (Ali and
punctatus agallas y rin organofosforados Kumar, 2008)

Los microncleos (MN) son fragmentos de cromatina que se observan como ncleos
pequeos debido al resultado de quiebres cromosmicos o a errores en las protenas
envueltas en la segregacin cromosmica. La formacin de MN originados de fragmentos
cromosmicos o perdidas cromosmicas, necesitan una divisin mittica o meitica
(Mateuca and Lombaert, 2006). El ensayo de microncleos ha sido considerado como uno
de los ms populares y promisorios biomarcadores por ms de 30 aos (Fenech et al.,
2003). Ferraro et al (2004), evalu el potencial mutagnico de tributiltina (TBT) y plomo
inorgnico (Pb II) en Hoplias malabariscus usando ensayo cometa, ensayo de MN y
alteraciones cromosmicas (AC). Ellos observaron que el plomo era mutagnico en todos
los biomarcadores pero la TBT, era mutagnica en MN y AC pero no en el ensayo cometa.
Otros investigadores encuentran respuestas negativas del ensayo de MN en presencia de
un ensayo cometa con resultados positivos (Huang et al., 2007). Una alta concordancia
entre los efectos genotxicos detectados por cometa y MN han sido reportados por
distintos autores (Russo et al., 2004, Pellacani et al., 2006), aunque la alta sensibilidad de
cometa haya sido cuestionada (Kim and Hyun, 2006).

Genotoxicidad tambin ha sido medida indirectamente en aguas tratadas mediante

pruebas in vivo con animales acuticos (peces, tritones y moluscos) o plantas (Vicia faba,
Allium cepa y especies de Tradescantia). El ensayo de microncleos en clulas de peces
y en branquias de mejilln han demostrado una alta sensibilidad en el seguimiento in situ
de la calidad de aguas superficiales y en la deteccin de genotoxicidad del agua potable
(Minissi et al., 1996). Por otra parte, se ha encontrado un aumento de microncleos en
eritrocitos de larvas de tritn sometidas a aguas cloradas (Gauthier and Levi, 1989).
Algunos estudios han utilizado la prueba de Tradescantia / microncleos para detectar
mutgenos en los sistemas acuticos y en agua potable (Monarca et al., 1998). El ensayo
de AC en las puntas de las races de A. cepa ha sido usado en el estudio de las aguas
residuales industriales, agua potable y agua potable (FISKESJ, 1985, Rank and Nielsen,
1993).

Hay que tomar en cuenta que la informacin complementaria otorgada por diversos
ensayos, ha sido sugerida por varios autores debido a sus distintas habilidades para
detectar diferentes caractersticas de genotoxicidad y clastogenicidad (Lopez-Poleza,
2004., Mouchet et al., 2006, Vanzella et al., 2007).

CONCLUSIONES

Ensayos de mutagenicidad y genotoxicidad de mezclas complejas tales como las aguas

demuestran que esas mezclas ambientales contienen muchas sustancias desconocidas,
las cuales representan un riesgo de magnitud desconocida y pueden ser carcinognicas.
Se puede concluir que el anlisis de aguas provee la identificacin de reas
potencialmente contaminadas con agentes genotxicos.

Diversos ensayos pueden ser necesarios para evaluar efectivamente el riesgo relativo en
humanos y en el ambiente. La respuesta de las cepas de Salmonella que son sensibles a
diferentes clases de qumicos pueden ayudar en la identificacin de genotxicos
presentes en las aguas. Para determinar eficientemente la presencia de mutgenos en el
agua, adems del anlisis qumico convencional, ensayos de genotoxicidad podran ser
incluidos como parmetros adicionales en los programas de monitoreo de calidad de
aguas, ya que de acuerdo a esta revisin, ellos pueden ser herramientas para proveer
una sensible actividad mutagnica en ambientes acuticos.

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