Repblica Bolivariana de Venezuela

Universidad Central de Venezuela

Facultad de Ciencias
Escuela de Qumica
Lab. I de Qumicaorgnica fusionado

Cromatografa de capa fina y columna

Muestra: Zanahoria, berro y tomateDocente: Chinea Carlos
Realizado por: Colmenares Jos

Resumen
Esta prcticase bas en la separacin e identificacin de los pigmentos vegetales presentes en la
zanahoria y el tomate. Para ello se extrajeron los pigmentos de zanahoria rallada y de pasta de
tomate, se mezclaron y por cromatografa de capa fina se determin el solvente que separaba
efectivamente a dichos pigmentos. Posteriormente se empac una columna para cromatografa y
se sembraron los pigmentos en ella, se realiz la separacin en la columna utilizando hexano y
mezcla hexano-diclorometano como fase mvil y se monitoriovisualmente, ya que estos
pigmentos son coloridos, y se identificaron una vez separados por cromatografa de capa fina
(CCF). Obteniendo que el pigmento de color rojo es el licopeno y el pigmento de color amarillo-
naranja es el -caroteno.
Marco Experimental
Experimento # 1: Extraccin de los pigmentos de la zanahoria, berro y el tomate.

(1) Se mezclaron 15mL de (2) Se filtr por

acetona por cada 10g de
muestra (tomate,berro
zanahoria)
(3) Se le agregaron
succin exprimiendo
10mL de diclorometano
bien el slido y se
(CH2Cl2) por cada 10g
desech el filtrado
de muestra pesada en
(1) y se agit

(6) Se unieron los 3 (5) Se repitio el

filtrados y se les agreg procedimiento desde (4) Se filtr por
una pequea cantidad el paso (3) dos veces succin y se
de agente desecante ms guardo el filtrado

(9) Se unieron los

filtrados finales de
(8) Una vez extraidos ambas, guardando
(7) Se filtr por
los pigmentos de una pequea cantidad
succin y se
ambas muestras de cada una para
guard el filtrado
analizar por CCf los
extractos puros
 Experimento #2: Empacado y sembrado de muestra en la columna.

(1) Se coloc un pequeo (2) Se agreg una pequea (3) Se le agregaron 15g
trozo de algodn en la cantidad de arena de slica, se compact y se
punta de la columna le agreg un poco ms de
arena en la parte superior

(6) Se empac en la (5) Se mezcl slica con

columna la mezcla de solucin de los pigmentos y (4) Se pas Hexano a travs
slidos resultante se evapor el solvente de la columna

Experimento #3: Anlisis cromatogrfico de los pigmentos.

(1) La solucin de la mezcla

de los pigmentos se (2) Se eluy la columna (3) Posteriormente se
analiz por CCF usando con hexano 100% eluy con una mezcla 3:1
Hexano como fase mvil hexano:diclorometano

(6) Se analizaron las

soluciones recolectadas (5) Se evapor solvente de (4) Se sigui la separacin
junto con las soluciones de las soluciones rojas y visualmente recolectando
pigmentos puros por CCF y amarillas anteriormente una solucin amarillenta y
se identificaron recolectadas otra rojisa por separado

Para el berro se utiliz el mismo procedimiento con la diferencia de que se extrajeron la mayor
cantidad de molculas de agua con etanol.

Resultados y discusin

1. Extraccin de los pigmentos en la zanahoria,berro y el tomate.

Tabla 1: Observaciones de la extraccin.
Observaciones generales
Al agregarle etanol a las muestras, se observ una coloracin de el etanol, roja en el
tomate y naranja en la zanahoria,por otro lado verde en el berro. Al realizar la extraccin
con diclorometano se observ tambin la coloracin ya indicada para cada muestra, pero
ms intensa, disminuyendo la intensidad en las extracciones sucesivas. Los extractos
finales de cada muestra eran bastante intensos, al unir el extracto del tomate con el
extracto de la zanahoria la solucin tomo un color, igualmente intenso, entre rojo y
naranja. Al unir el extracto de ambos on el del berro la solucin se torno marron.
La acetona se le agreg a las muestras para extraer el agua presente en las mismas, ya que el agua
es bastante afn a la acetona por las interacciones dipolo-dipolo que pueden existir entre sus
molculas, la coloracin en la acetona es debido a que en ella tambin se extrajo parte de los
pigmentos en la muestra por ser un poco solubles en la acetona. La extraccin de los pigmentos se
realiz con diclorometano debido a que es en este solvente donde los carotenos (pigmentos) son
ms solubles y as poder extraer la mayor cantidad posible de nuestras muestras, es por esta razn
que fue necesaria la extraccin
previa del agua con la acetona, ya
que el agua es muy poco miscible
con el diclorometano, incluso se
utiliz un agente desecante al
finalizar la extraccin con
diclorometano para eliminar
completamente la humedad.

La coloracin de las soluciones es

debida a que en todas las especies vegetales (vegetales y frutas) estn presentes los carotenos o
carotenoides, por ende en la
Figura2: Licopeno
zanahoria y en el tomate se
encuentran estas especies, siendo el licopeno el caroteno predominante en el tomate y el -
caroteno el predominante en la zanahoria, estos guardan una relacin de ismeros
constitucionales entre ellos, su diferencia radica en la existencia de un par de dobles enlaces extra
en el licopeno por la apertura del
enlace entre los carbonos 1 y 6 de Figura 1: -Caroteno
cada anillo. La conjugacin del
sistema de 11 dobles enlaces es la causal de la absorcin de estas molculas en el visible y lo que
las hace altamente coloridas, el par extra de dobles enlaces en el licopeno hace que las longitudes
de ondas de la absorcin se desplacen ms hacia el infra-rojo, pasando de 451nm en el -caroteno
a 475nm en el licopeno, por lo que observamos una coloracin amarilla-naranja en el primero y
una coloracin roja en el ltimo.

Tabla 2: Rf de la mezcla de pigmentos analizados por CCF.

RfAmarillo RfRojo Observaciones
0,429 0,200 Se observan dos puntos en la placa, uno de color
amarillo y otro de color rojo.
Como se observa en la figura 3, el hexano separa efectivamente nuestra mezcla de carotenos,
estos no se superponen y tienen Rf los suficientemente separados, por lo cual es el solvente ideal
para realizar la separacion de los mismos por cromatografa de columna.

Tabla 3: Cromatografa de columna.

Observaciones generales
Al eluir la mezcla con hexano los compuestosfueron arrastrados atravs de la columna, la linea
observada en la zona donde se encontraban los carotenos era irregular, semejante a una onda. Al
eluir la mezcla con Hexano-diclorometano en relacion 3:1, se apreci la separacin de los
compuestos observandose una zona en la columna amarilla y otra zona roja ms arriba en la
columna, recolectandose por separado el solvente de ambas zonas.

El hexano puro aunque desplaz la mezcla a travs de la columna, no fue suficiente para separarla
ni para eluirla fuera de la columna, esto puede ser debido a que la cantidad de slica en la columna
es mayor por lo que las molculas pueden ser ms retenidas; as el hexano separa efectivamente
la mazcla en CCF porque la cantidad de slica en el plato no es mucha pero no es capaz de
separarla cuando se encuentra en la columna. Por esta razn fue nucesario el uso de una mezcla
de solventes de mayor polaridad que el hexano puro, la cual si tuvo el poder suficiente para
separar la mezcla.

La linea irregular observada al eluir con hexano puede ser debida a que falto compactar ms el
empacado de la columna en su parte superior, por lo que existian irregularidades en esta zona,
luego se normaliz y se efectu la separacin satisfactoriamente.

Era de esperar que el primer pigmento en eluir fuese el amarillo, ya que este fue el ms arrastrado
por el solvente cuando se realiz la CCF (figura 3), esto indica que este es un compuesto de menor
polaridad o es ms arrastrado por el solvente por alguna otra razn, as si es arrastrado ms
fuertemente por el solvente que el pigmento rojo, este tiene que eluir primero, ya que si el
pigmento rojo es menos arrastrado se retrasara ms en la columna.

Tabla 4: Identificacin de los carotenos por CCF.

Rf1 Rf2 Rf3 Rf4 Observaciones

Los puntos 1 y 4 son ms intensos que
0,229 0,229 0,457 0,457 los puntos 2 y 3 (carotenos separados en
la columna)
Los puntos observados en la figura 4 son las muestras analizadas por CCF, los puntos 1 y 4
(enumerados de izquierda a derecha) son los puntos debido a las muestras de carotenos puros
guardados al realizar las extracciones con diclorometano, los puntos 2 y 3 son los debido a las
muestras obtenidas de la separacin por cromatografa de columna, siendo el punto 2 la muestra
de solucin roja eluida de ltima de la columna, y el punto 3 la muestra de solucin amarilla eluida
de primero de la columna. As el punto 1 es el caroteno proveniente del tomate (licopeno) y el
punto 4 el caroteno proveniente de la zanahoria (-caroteno). Identificando entonces el punto 2
como el licopeno y el punto 3 como el -caroteno, ya que poseen iguales Rf a los de los patrones
utilizados. Es de hacer notar que los Rf observados para ambos carotenos en esta medida es un
poco mayor a los observados en la tabla 2, esto puede ser debido a que los Rf en CCF no dependen
solo del solvente utilizado como fase mvil y de la fase estacionaria, sino adems se puede ver
afectado por el grosor de la fase estacionaria depositada en el plato, y puede ser que el grosor en
este plato no era exactamente igual al del plato utilizado anteriormente. La intensidad de los
puntos 2 y 3 es menor porque la concentracin de estas soluciones es mucho menor a la
concentracin de las soluciones patrones, se puntearon estas muestras mucho ms veces que las
muestras patrones que solo se puntearon una vez en el plato cromatogrfico, quizs concentrando
ms la soluciones se hubiese necesitado menor nmero de punteo de la muestra.

El licopeno (pigmento rojo) es menos arrastrado por los solventes debido a que es ms polar que
el -caroteno, ya que posee un par de dobles enlaces ms que su ismero, un doble enlace es ms
polar que un enlace simple o sigma por la densidad electrnica que proporcionan los electrones
que forman el enlace ; as el licopeno interacta ms fuertemente con la slica por ser ms polar
que el -caroteno, por lo cual se le dificulta ms al solvente arrastrarlo por el plato, de modo que
avanza menos.

Conclusiones

Se determin un solvente que separa efectivamente la mezcla de los pigmentos de la

La separacin de la mezcla de carotenos se efectusatisfactoriamente por medio de una
cromatografa de columna utilizando una mezcla de solventes de hexano-diclorometano
en relacin 3:1.
El licopeno (pigmento en el tomate) es ms polar que el -caroteno (pigmento en la
zanahoria).
Se identificaron los carotenos por medio de CCF.

Bibliografa
Galakovsky, L. qumica orgnica: Fundamentos tericos - prcticos para el laboratorio,
3raEdicin, Eudeba, 1993, Argentina.
Kenneth L. Williamson Macroscale and microscale organic experiments 6ta Edicin,
Brooks/Cole, 2011, USA.
Pavia, D.L. Introduction to organic laboratory techniques: A smalls cale approach
5taEdicin, Thomson/Brooks/Cole, 2005, USA.

Apndice