FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y

BIOQUMICA

ANTEPROYECTO:
ANALISIS FISICOQUIMICO Y FITOQUIMICO DE LOS EXTRACTOS
ETANOLICOS DE HOJAS Y SEMILLAS DE CACAO
(THEOBROMA CACAO) AREQUIPA - 2015

ALUMNO:
JHONATHAN CHAVEZ BERVEO

AREQUIPA PER

2014
 I. INTRODUCCIN

En el mundo de la salud natural no es novedad que el cacao puro es uno de los

alimentos que ms propiedades beneficiosas para la salud del corazn posee. El
cacao aporta muchos beneficios tambin al equilibrio de la presin arterial y del
colesterol.

Las principales fuentes de estos compuestos son el t, el cacao, las aceitunas,

las manzanas

Norman Hollenberg, Profesor de Medicina de Harvard Medical School presenta

los resultados epidemiolgicos que sugieren que los alimentos ricos en
Flavonoides, especficamente el cacao, podran proporcionar grandes beneficios
en los manejos de 2 enfermedades ms comunes con causa de muerte en el
mundo: enfermedades cardiovasculares y el cncer.

Gran cantidad de estudios han demostrado los diversos y positivos roles que el
cacao puede jugar potencialmente para mejorar la salud pblica ya que tiene
antioxidantes naturales que ejercen efectos beneficiosos tanto a nivel fsico
como su accin de vasodilatacin como a nivel psicolgico, proporcionando una
sensacin de vitalidad y energa todo ello es por la presencia de diferentes
metabolitos secundarios.

Los metabolitos secundarios son compuestos qumicos sintetizados por las

plantas para realizar determinadas funciones, dispersin de semillas, defensa
frente a determinadas agresiones o la captacin de los insectos polinizadores,
son un elemento importante y necesario ya que en el reino vegetal representan
una ventaja competitiva.

Cada familia de plantas utiliza precursores qumicos comunes originando

diferentes resultados. Tambin son importantes para los humanos, pues
presentan incontables aplicaciones en los campos de la farmacologa, la industria
agrcola o la industria cosmtica.

Este estudio se realizar con el de identificar los principales metabolitos

secundarios del cacao (Theobroma cacao) con posible accin farmacolgica

Sin embargo no se precisa un anlisis fitoqumico y fisicoqumico lo cual es

importante, es por ello el objetivo de este trabajo.

Es importante resaltar que los estudios que se realizarn sobre las hojas y
semillas de Cacao puedan servir de base para la posterior semisntesis de
frmacos o como modelo de nuevos frmacos sintticos.
 LOCAL

AUTOR: Yamilet Irene Gutirrez Gaitn, Migdalia Miranda Martnez, Gloria

del Barrio, Noel Varona Torres y Jos Luis Mayoral Jimnez

TEMA: Evaluacin farmacognstica y fitoqumica preliminar de hyllanthus

rbicularis HBK

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana 2010

RESUMEN

Se realiz un estudio farmacognstico y fitoqumico preliminar

dePhyllanthus orbicularis HBK, donde se determinaron inicialmente las
caractersticas macromorfolgicas y micromorfolgicas de las hojas y
tallos de la especie. Se estandariz la droga cruda, cuyos valores
promedio obtenidos se encontraban dentro del rango permisible, cuando
los comparamos con los de drogas oficiales. Se determin la composicin
qumica general de la droga mediante ensayos de tamizaje fitoqumico, y
se detect la presencia de flavonoides, alcaloides, coumarinas, saponinas,
aminocidos, antocianidinas, muclagos, triterpenos y/o esteroides,
sustancias reductoras, taninos pirocateclicos, principios amargos y
astringentes, glicsidos y quinonas. Tambin se cuantificaron algunos de
estos metabolitos. Se procedi finalmente, a la extraccin y
fraccionamiento de flavonoides, obtenindose fracciones muy simples con
la presencia de dichos compuestos; adems, se detecta rutina y
quercetina, as como 2 compuestos cromatogrficamente puros, que
segn los anlisis efectuados se sospecha que sean flavonoides.
 II. HIPTESIS

Dado que a las hojas y semillas de cacao se le atribuye efectos teraputicos en

la medicina popular es probable que en los extractos etanlicos se pueda
identificar metabolitos secundarios en mayor cantidad en semillas que hojas ya
que en las semillas se encuentra los cdigos genticos de la planta .
 III. OBJETIVOS

3.1. OBJETIVO GENERAL

Realizar un anlisis fisicoquimico y fitoquimico de la hojas y semillas de

cacao (Theobroma cacao)

3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Preparar los extractos etanolicos de hojas y semillas de cacao

Identificar los metabolitos secundarios de semillas de cacao.
Identificar los metabolitos secundarios de las hojas de cacao.
Determinar el PH, densidad y viscosidad.
 IV. ALCANCE, TRASCENDENCIA, IMPORTANCIA O CONTRIBUCIN
DEL ESTUDIO:

El trabajo que se realizar nos favorecer porque nos brindar informacin

adems de ofrecer un aporte cientfico sobre el estudio del cacao con el fin de
evitar posibles enfermedades.

Al culminar con el trabajo se proporcionar datos importantes en la investigacin

tal como establecer hasta qu grado puede ser eficaz el cacao, en que
presentaciones farmacuticas puede ser llevada al mercado segn sus
caractersticas qumicas.
 V. METODOLOGA DEL TRABAJO

6.1. POBLACIN Y MUESTRA

La poblacin lo conformaran una determinada cantidad de semillas y hojas de

cacao durante la realizacin del trabajo de investigacin se seleccionaran la
unidad de muestra.

6.2. RECOLECCIN DEL VEGETAL

Dicho vegetal se comprar en el mercado Andrs Avelino del Distrito de Jos

Luis Bustamante Y Rivero.

LAVADO

A. MTODO:

Manual

B. FUNDAMENTO:

Se expone un mtodo de lavado del material vegetal del cacao con el fin
de disminuir su contaminacin microbiana y asegurar su calidad.

C. PROCEDIMIENTO:

El cacao colectado (tallos y hojas), se lavar dos veces con agua de llave
y una con agua destilada a temperatura ambiente con la finalidad de
eliminar restos de tierra y otros materiales.
 SECADO

A. MTODO

SECADO AL AIRE LIBRE

B. FUNDAMENTO

El aire es el que absorbe el vapor de agua que se retira de las plantas por
lo que no debe estar saturado, es decir, su humedad relativa debe ser
baja, sea tanto que se utilice secado al aire libre como secado mecnico, y
deber renovarse a medida que sea necesario en tanto el producto no
haya cedido el agua que contiene en exceso.

C. PROCEDIMIENTO

Se extender sobre papel craff y se colocar a la sombra para su secado;

transcurrido el tiempo se guardar en bolsas de papel etiquetadas para su
posterior uso.

5.3. EXTRACCIN DEL EXTRACTO ETANOLICO DE LAS HOJAS Y

SEMILLAS DE CACAO

A. MTODO

EXTRACCIN POR EQUIPO SOXHLET DE SEMILLAS Y HOJAS DE

CACAO
B. FUNDAMENTO

El mtodo se basa en la extraccin de grasa de la muestra mediante el

tratamiento con solvente en el aparato de Soxhlet, la duracin del tiempo
de extraccin depende del tipo de muestra que se analice, pero la mayora
requieren hasta de 4 horas.
C. PROCEDIMIENTO

Triturar o dejar en partculas ms pequeas las hojas y semillas de cacao

Secado al aire libre.

Pesar la muestra seca; envolver en papel filtro la muestra total y volver a

pesar.

Registrar los pesos obtenidos.

Pesar el matraz baln. No tocar con las manos libres.

Agregar al matraz baln la solucin de etanol para la extraccin etanlica

de las hojas y a otro matraz baln agua para la extraccin de las semillas.

Ensamblar las partes del equipo Soxhlet (el matraz baln, el extractor
Soxhlet, el adaptador y el refrigerante; el equipo se ensambla en ste
orden).

La muestra se pone dentro del cartucho de papel filtro en la cmara

interior del extractor.

Calentar el matraz con la cocina elctrica.

El proceso es cclico, por lo que se dejara calentado de 3 a 4 horas para

extraer todos los lpidos de la muestra.

Al final, se observar la solucin con ciertas cantidades de lpidos.

Evaporar la solucin.
5.4. ANLISIS FITOQUMICO

A. MTODO

PRUEBAS QUMICAS DE COLORACION Y PRECIPITACIN

B. FUNDAMENTO

El reconocimiento de metabolitos secundarios se realiza por medio de

pruebas fitoqumicas, las cuales son una prueba qumica de
caracterizacin consistente en una reaccin qumica que produce
alteracin rpida en la estructura molecular de un compuesto, por ejemplo,
la modificacin de un grupo funcional, la apertura de un sistema anular, la
formacin de un complejo, lo cual da por resultado una manifestacin
sensible como el cambio de un color, la formacin de un precipitado o el
desprendimiento de un gas, dndonos indicios de la presencia o ausencia
de un metabolito secundario en particular.

C. PROCEDIMIENTO

RECONOCIMIENTO DE ALCALOIDES:

Colocar en dos tubos de ensayo aproximadamente 0.5 ml del extracto,

agregar a cada uno de los tubos previamente rotulados con el respectivo
nombre del reactivo, 2 gotas de los reactivos de: Dragendorff, Mayer. Si se
observa turbidez o precipitado en los dos tubos se considera que la
muestra contiene alcaloides (Prueba presuntiva).
 RECONOCIMIENTO DE ESTEROIDES Y/O TRITERPENOIDES:

En un tubo de ensayo limpio y seco tomar 1 ml del extracto y agregar por

la pared del tubo 1 ml de anhdrido actico y con precaucin 1-2 gotas de
cido sulfrico concentrado. La aparicin de coloraciones: verdes, azules,
rojas o violeta es prueba positiva (+) para esteroides y/o triterpenoides en
la muestra.

RECONOCIMIENTO DE SAPONINAS:

Tomar 4 ml del extracto a en tubo de ensayo y agitar vigorosamente

durante un minuto, si se forma abundante espuma, estable
aproximadamente 5 minutos es prueba presuntiva de la presencia de
saponinas en la muestra.

RECONOCIMIENTO DE TANINOS:

Tomar 1 ml del extracto en un tubo de ensayo y adicionar dos (2) gotas de

solucin de tricloruro frrico (FeCL3 al 1%). La aparicin de un color
verde, azul o negro es prueba positiva (+) para compuestos fenlicos; en
un segundo tubo de ensayo tomar otro mililitro del filtrado y agregar unas
gotas de gelatinasal, si hay turbidez o formacin de precipitado es prueba
positiva para taninos en la muestra.
Las dos pruebas son necesarias para comprobar la presencia de taninos.

RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES:

Tomar un 1 ml del extracto en un tubo de ensayo, agregar varias

limaduras de magnesio y por la pared del tubo dejar caer lentamente HCl
concentrado (37%) la aparicin de colores: naranja, rojo, violeta o rosado,
indican que la prueba es positiva (+) para flavonoides.
 RECONOCIMIENTO DE QUINONAS:

Tomar 5ml del extracto y adicionar aproximadamente 3 ml de H2SO4 al

10%, calentar en bao mara, durante 15 minutos hasta ebullicin para
producir la hidrlisis; enfriar la muestra y realizar la extraccin de las
quinonas con 5 ml de tolueno (usar el tolueno bajo campana extractora)
agitar suavemente sin emulsionar, tomar 2ml de la fase orgnica en un
segundo tubo de ensayo, adicionar aproximadamente 1 ml de hidrxido de
sodio al 5% en amonaco al 2%. Luego de agitar se obtiene un color rojo
cereza en la capa acuosa, lo que indica presencia de quinonas en la
muestra.

RECONOCIMIENTO DE AZUCARES REDUCTORES

Tomar en un tubo de ensayo 1ml. Del extracto, evaporar el solvente a

bao maria y el residuo disolver en 1ml de agua. Aadir 3 gotas de
reactivo fehling A y 3 gotas de fehling B. calentar. Debe observarse un
precipitado de color rojo.

RECONOCIMIENTO DE GRASAS / ACEITES

Tomar 1ml del extracto en un tubo de ensayo, calentar a bao mara.

Aadir 1 gota del reactivo de sudn. Luego aadir 1gota de agua
destilada. Se debe observar un precipitado.
 A. FUNDAMENTO

El pH es una medida de acidez o alcalinidad de una disolucin. El

pH indica la concentracin de iones hidronio [H3O+] presentes en
determinadas sustancia.

B. PROCEDIMIENTO

Colocar el papel indicador en el extracto.

Mantenerlo por unos segundos.
Retirar el papel indicador de la muestra.
Comparar con la escala de pH.

5.5. DETERMINACION DE LA VISCOSIDAD

A. MTODO

Viscosmetro

B. FUNDAMENTO

La viscosidad es la oposicin de un fluido a las deformaciones

tangenciales.

C. PROCEDIMIENTO

Llenar el viscosmetro limpio y seco con 10 ml del extracto

de las hojas y semillas de cacao , a travs del tubo de
mayor dimetro.
 Introducir el viscosmetro en el bao termosttico y esperar
unos 5 minutos para que el lquido alcance la temperatura
de medida.
Succionar lquido por encima de la marca superior del
viscosmetro (tubo de menor dimetro)
medir a continuacin el tiempo de paso del mismo entre las
marcas A y B.
Cuando se termine la serie de medidas con un lquido,
limpiar el viscosmetro primero con agua y luego con alcohol
y por ltimo secar con aire.

5.6. DETERMINACIN DE LA DENSIDAD

A. MTODO

Picnmetro

B. FUNDAMENTO

La densidad de un cuerpo es la masa del cuerpo por unidad de

volumen.
C. PROCEDIMIENTO HALLAR LA DENSIDAD EN HOJAS Y
SEMILLAS
Se pesa el picnmetro vaco, asegurndose que este bien limpio y
seco. Obtenindose m1.
Se pesa el picnmetro lleno de agua destilada. Obtenindose m2.
Se pesa el picnmetro lleno del extracto de las hojas y semillas de
cacao. Obtenindose m3.
Se obtiene la masa del lquido mediante la ecuacin: ml = m3 m1.
Se obtiene la masa del agua destilada: ma = m2 m1.
Se obtiene la densidad relativa del lquido buscado:
 densidad relativa = . ml/ma
Anotar la temperatura del agua se considera la densidad del agua para
esta temperatura: densidad del agua (Da).
. Para obtener la densidad del lquido, se multiplica la densidad relativa
del extracto por la densidad del agua: Dl= Dr*

VI. CALENDARIO DE ACTIVIDADES

AO 2015
ACTIVIDAD ABRIL MAYO JUNIO JULIO
ES
S S S S S S S S S S S S S S S S
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

Eleccin del X
tema

Presentacin
del ttulo
X
anteproyecto

Redaccin y
presentacin
X
del primer
avance.
Modificacione
s del
X X
anteproyecto

Aprobacin X X
del
anteproyect
o

Formulaci X
n del
proyecto

VII. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES, INSUMOS Y REACTIVOS A

UTILIZAR EN LA INVESTIGACIN

8.1. EQUIPOS

02 Equipo soxhlet.
01 Una balanza

8.2. MATERIALES

DE LABORATORIO

02 vaso precipitado de 500ml.

03 pipetas de 10ml
03 pipetas de 1ml
01 mechero
01 tripode
01 rejilla
01 matraz Erlenmeyer de 125 ml
 04 Mangueras
02 embudos de vidrio
Papel filtro
01 probeta de 100ml

OTROS MATERIALES

05 Kg Cacao(1.25de semillas)
10 Un. Papel Graf
01 Un. Lavatorio
50 Un. Guantes estril
30 Un. Gorro desechable
50 Un. Mascarilla
02 Un. Mandil
Agua destilada

8.3. REACTIVOS

cido clorhdrico (HCl)

Etanol
Reactivo mayer
Reactivo fehling A
Reactivo fehling B
Reactivo sudan
Reactivo Lieberman
FeCl3
Reactivo shinoda
 VIII. PRESUPUESTO

RUBROS (gastos) COSTOS S/.

Materiales vegetal 05 Kg 20.00
Cacao(1.25de semillas)

Reactivos 80.00
Libros 90.00
Internet 50.00
Hojas bond 30.00
Copias 20.00
Impresin 50.00
Pasajes 50.00
Otros 100.00
Total 490.00
IX. BIBLIOGRAFA

1. CRESPO M, Atlas de botnica. 2 Ed. Madrid: Edibook; 2009.

2. LOPEZ GONZALES G. Fitoterapia. 2 Ed. Barcelona: Mundi prensa;

2007.

3. COVEAS L. Medicina Alternativa. 1 Ed. Colombia: Saxa; 2009.