CROMATOGRAFA

INTEGRANTES:
Esvin Darinel Gmez Lpez
Josu David Prez Palacios
Julio Alfonzo Lucas
Brayan Geovanny de Len Figueroa
Mynor Estuardo Gomes Rodas
Edwin Leodan Ruiz Cano
Amner Eduardo Hernndez Martnez
Carlos Daniel Rivas Lpez
Hestalyn Rolando Villatoro Arriaga

Huehuetenango, abril de 2017

 CROMATOGRAFA

ndice
1. Introduccin. Mtodos de separacin
2. Tipos de Cromatografa
3. Cromatografa liquida clsica y cromatografa liquida de alta
performance
4. Los mtodos cromatogrficos
5. Ventajas y desventajas de la cromatografa lquida de alta presin
6. Instrumental
7. Aplicaciones
8. bibliografa
1.Introduccin.

La cromatografa es una tcnica que permite separar, aislar e identificar los

componentes de una mezcla de compuestos qumicos. La muestra es
distribuida entre dos fases inmiscibles (slida, lquida o gas) , una estacionaria
y otra mvil, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un
contacto ntimo, de tal forma que cada uno de los componentes de la mezcla
es selectivamente retenido por la fase estacionaria. Los componentes de la
mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las
fases, con lo que se produce la separacin. Si un componente est la mayor
parte del tiempo en la fase mvil el producto se mueve rpidamente, mientras
que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda
retenido y su salida es mucho ms lenta.
La separacin se lleva a efecto en una columna tubular rellena de un slido
poroso finamente dividido, el cual puede actuar como fase estacionaria
propiamente dicha como soporte de una fase estacionaria lquida. Tambin se
puede efectuar utilizando como fases estacionaria papel de filtro o un slido
finamente dividido colocado en forma de capa fina sobre una placa de vidrio.
Estos tres tipos de cromatografa se basan en los mismos principios
fundamentales, y se conocen respectivamente como cromatografa en
columna, en papel y de capa fina. En sta cromatografa solo se considerara la
cromatografa en columna.
LA CROMATOGRAFA
La cromatografa es un proceso de separacin muy comn en ingeniera
qumica y bioqumica. Es un procedimiento altamente selectivo, capaz de
distinguir y separar componentes con caractersticas fsicas y qumicas muy
similares. Esta tcnica se considera importante tanto a nivel de produccin
como de anlisis.
Desde el siglo pasado las separaciones analticas se llevaban a cabo por
mtodos clsicos como son la precipitacin, destilacin y extraccin. Los
crecientes esfuerzos por conocer ms sobre la composicin y funcin de las
protenas han obligado a los cientficos a buscar tcnicas, cada vez, ms
precisas.
Para elegir una tcnica de separacin, adems de tener en cuenta los
criterios econmicos y de accesibilidad, hay que atender a dos tipos de
consideraciones: unas tienen que ver con las propiedades fsicas y
estructurales de las molculas que se pretende separar, o de las
caractersticas de la matriz en que se encuentran; otras se derivan de los
objetivos del anlisis (sensibilidad, resolucin, tiempo de anlisis, necesidad de
una deteccin especfica).
El mtodo de seleccin incluye los pasos necesarios para la obtencin,
preparacin y posible fraccionamiento de la muestra, la aplicacin de la tcnica
analtica adecuada y el tratamiento de los datos obtenidos.
Las tcnicas analticas ms empleadas en la actualidad pueden englobarse
en dos grandes grupos: tcnicas de separacin y tcnicas espectroscpicas.
Las tcnicas espectroscpicas proporcionan, para cada compuesto analizado,
una informacin compleja, relacionada con sus caractersticas estructurales
especficas, por otro lado las tcnicas de separacin se utilizan para resolver
los componentes de una mezcla y la seal obtenida puede utilizarse con fines
analticos cuantitativos o cualitativos.

2.Tipos de cromatografa

En la cromatografa en columna, la fase mvil puede ser un lquido o un

gas, y segn el caso se denominan respectivamentecromatografa lquida y
cromatografa de gases . Esta fase mvil fluye a travs del relleno de la
columna, arrastrando los componentes de la mezcla, que son selectivamente
retenidos por al fase estacionaria. EL flujo de la fase mvil se mantiene
constante a travs de todo el proceso y de esta manera se logra que cada
componente de la mezcla sea eluido de la columna como un compuesto puro,
disuelto en la fase mvil. A esta tcnica se le llama cromatografa de elusin.
De acuerdo con la naturaleza de las fases involucradas y con los mecanismos
de separacin, es posible distinguir diferentes tipos de cromatografa, como se
indica en la figura 1.
 FIG. 1 - Mtodos cromatogrficos. CGS: cromatografa gas-slido; CGL:
cromatografa gas-lquido; CLS: cromatografa lquido-slido; CLL:
cromatografa lquido-lquido; CFQU: cromatografa de fase qumicamente
unida; CII: cromatografa de intercambio inico; CCF: cromatografa de capa
fina; CP: cromatografa de papel; CE: cromatografa de exclusin; CPG:
cromatografa de permeacin en gel; CFG: cromatografa de filtracin en gel.

Cromatografa de gases y cromatografa lquida de alta presin.

 3. Cromatografa liquida clsica y cromatografa liquida de alta
performance

La cromatografa liquida clsica se lleva acabo en una columna

generalmente de vidrio, la cual esta rellena con la fase lquida. Luego de
colocar la muestra en la parte superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la
columna por efecto de la gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en
las separaciones, el tamao de las partculas de fase fija se fue disminuyendo
hasta el tamao de los micrones, lo cual genero la necesidad de utilizar altas
presin es para lograr que fluya la fase mvil. De esta manera, naci la tcnica
de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), que requiere de
instrumental especial que permita trabajar con las altas presiones requeridas.
Ver figura 2.

4. Los Mtodos Cromatogrficos

Dependiendo del tipo de fase fija y del tipo de fenmeno fsico que provoca la
separacin, la cromatografa lquida de alta resolucin puede ser:
1) cromatografa de reparto o CLL: separa los solutos basndose en la
solubilidad.
Formada por CLL y CFQU. Estas tcnicas se diferencian en la forma en que se
retiene la fase estacionaria sobre las partculas del soporte relleno. En el segundo
caso, la fase estacionaria se une qumicamente a la superficie del soporte. Esta
tcnica actualmente es ms usada debido a que la cromatografa CLL necesita de
un recubrimiento peridico de las partculas del soporte debido a la prdida de la
fase estacionaria por disolucin en la fase mvil.
En general, los soportes para casi todos los rellenos de fases unidas
qumicamente se preparan con slice rgida o composiciones donde la slice es el
elemento bsico. Estos slidos estn formados por partculas mecnicamente
resistentes, porosas y uniformes.
Los rellenos de columna en la CFQU se clasifican como de fase inversa cuando
el recubrimiento enlazado tiene carcter no polar, y de fase normal cuando el
recubrimiento contiene grupos funcionales polares.
Este mecanismo de separacin se basa en la distinta solubilidad que presenta una
molcula de la muestra en la fase mvil y en la fase estacionaria. De ah que los
compuestos mas solubles en la fase estacionaria sean selectivamente retenidos
por ella en tanto que los menos solubles son transportados mas rpidamente por
la fase mvil. Puede utilizarse en la separacin de mezclas edulcorantes
artificiales, antioxidantes, bebidas refrescantes entre otras.

2) Cromatografa de fase qumicamente unida (CFQU):

Esta tcnica surgi como consecuencia de problemas asociados con la CLL.

Dado que su fase estacionaria esta qumicamente unida a la superficie de un
soporte, la fase mvil difcilmente produce deterioro alguno en la columna. Si se
vara la naturaleza de los grupos funcionales de las fase estacionaria es posible
obtener diferentes tipos de selectividad. Dichos grupos pueden ser de naturaleza
polar, como el grupo amino y el grupo nitrilo en el caso de la cromatografa de fase
normal, o bien no polar como el grupo octilo, octadecilo, fenilo, etc. en el caso de
la cromatografa de fase inversa, sta tiene innumerables aplicaciones.

3) Cromatografa de adsorcin o CLS: se basa en la afinidad de adsorcin

Es la forma clsica de la cromatografa de lquidos. Ha sufrido algunas
transformaciones que la han convertido en un mtodo importante de la HPLC.
Las nicas fases que se utilizan en este tipo de cromatografa son la slice y la
almina, siendo la primera la preferida.
Es adecuada para compuestos no polares probablemente con masas
moleculares inferiores a 5000. Los mtodos de la cromatografa de adsorcin y
reparto tienden a ser complementarios, aunque en algunos casos se superponen.
En general la CLS es ms adecuada para muestras que son solubles en
disolventes no polares y por ello tienen solubilidad limitada en disoluciones
acuosas que son las que se utilizan en cromatografa de reparto en fase inversa.
En ste tipo de cromatografa tambin se pueden separar compuestos con
diferentes grupos funcionales. Una caracterstica particular de este mtodo es su
capacidad para diferenciar compuestos ismeros en mezclas.
El mecanismo de separacin de sta, se basa en la competencia que existe
entre las molculas de la muestra y de la fase mvil o disolvente por ocupar los
sitios activos en la superficie de un slido (almina y gel de slice).
Este tipo de cromatografa es muy til y se aplica a molculas de baja o media
polaridad.
4) Cromatografa lquida por exclusin o CE: separa solutos segn el peso
molecular

La columna se rellena de un gel, cuyos poros son de tamao similar al

tamao de las molculas de la muestra. Las molculas pequeas pueden
penetrar dichos poros y quedan retenidas en tanto que las grandes no. Las
columnas empleadas pueden ser muy largas (varios metros) y esto es
especialmente cierto cuando se desea separar muestras cuyos pesos
moleculares estn distribuidos en intervalos muy amplios.

5) Cromatografa por intercambio inico o CII: Separa solutos segn la carga

inica.

Est basada en la atraccin entre iones del soluto y puntos cargados que
existen en la fase estacionaria. En el caso de intercambiadores aninicos,
grupos cargados positivamente en la fase estacionaria atraen aniones del
soluto. Los intercambiadores catinicos contienen puntos cargados
negativamente que atraen cationes del soluto.

La gran variabilidad de los mtodos cromatogrficos se debe a las diferentes

condiciones que pueden utilizarse para separar los componentes de una
sustancia. Todas estas tcnicas tienen en comn la existencia de una fase
estacionaria a travs de la cual fluye una fase mvil, as como la presencia de
un mecanismo de inyeccin de la muestra y un mecanismo de deteccin de los
diferentes componentes separados

tipo
fase estacionaria fase mvil

lquido-slido slido inerte como gel

disolventes
de slice o almina

intercambio inico
resina cambiadora soluciones acuosas

lquido-lquido lquido adsorbido en

lquido
un soporte slido

pelcula de lquido
gas-lquido
adsorbida sobre un gas
soporte slido
4. Ventajas y desventajas de la cromatografa lquida de alta presin

Ventajas
-Velocidad de anlisis
-Alta resolucin
-Resultados cuantitativos
-Buena sensibilidad
-Automatizacin
-Amplio espectro de aplicaciones
Desventajas
-Instrumentacin costosa
-Difcil anlisis cualitativo
-No existe detector universal
y sensible
-Elevado costo de operacin
-Experiencia indispensable

Con esta tcnica es usual obtener separaciones en minutos e inclusive en

algunos casos en segundos. Por lo tanto se requieren columnas de alta
eficacia y sistemas de bombeo de alta presin, ya que separaciones rpidas
requieren flujos rpidos de fase mvil y esto a su ves requiere presiones
elevadas.
Su alta resolucin permite obtener y separar mezclas muy complejas; como
algunos fluidos biolgicos como la orina humana. Las muestras naturales son
difciles de manejar, pero con CII y programacin de fase inmvil la resolucin
es notable.
Los mtodos de HPLC proporcionan muy buena informacin de tipo
cualitativo, efectuando anlisis con precisin del 1%.
Los detectores proporcionan buena sensibilidad y segn el tipo de muestra
suelen medir hasta los 10 9 ng (nanogramos), otros mas especializados
pueden detectar cantidades muy pequeas.
Entre las ventajas de esta tcnica, la ms importante es la diversidad de sus
aplicaciones tantos a compuestos orgnicos como inorgnicos, etc.
Las nicas muestras no susceptibles de poderse analizar con facilidad son
las gaseosas.

5. Instrumental

La HPLC utiliza un instrumental con ventajas significativas:

 En este mtodo se usan columnas de dimetros muy reducido, rellenas de
materiales especiales pulverulentos, cuyas partculas tienen un tamao entre
30-40 m y con frecuencia hasta de 5 6 m , con una distribucin de 2
m . Este tipo de columna es muy eficaz, pero ofrece una gran resistencia al
flujo de la fase mvil, o sea una gran cada de presin. Por lo que se emplean
sistemas de bombeo de alta presin que hagan fluir la fase mvil a velocidad
a travs de la columna. La cantidad de fase estacionaria dentro de la columna
es pequea, por lo tanto la muestra debe ser pequea en 1 y 10 mg.
Si la presin de entrada a la columna no es muy elevada, la muestra se
introduce en la cmara de inyeccin mediante una jeringa de alta presin, a
presiones ms elevadas se utilizan las vlvulas de inyeccin. La columna a
pesar de su repetido uso, presenta un escaso deterioro, auque en algunos
casos es necesario regenerarla.
Un detector colocado a la salida de la columna, proporciona un registro
continuo de la composicin del lquido que sale, lo que permite obtener un
cromatograma y que se utiliza para identificar y cuantificar los componentes de
la muestra.

6. Aplicaciones

La cromatografa lquida de alta presin a pesar de ser una tcnica

relativamente nueva, se cuenta que describe numerosas aplicaciones en la
literatura qumica. En la mayora de los casos, stas consisten en
determinaciones de sustancias cuyo anlisis por otra tcnica cromatogrfica
resulta muy difcil. Estos resultados comprenden:

Compuestos inicos, como aminocidos, sales inorgnicas, cidos

orgnicos, etc.
Compuestos de alto peso molecular, como polmeros, hidrocarburos
polinucleares, productos naturales, etc.
Compuestos termolbiles y no voltiles, como vitaminas, pesticidas,
esteroides, plastificantes, drogas y un producto muy grande de otros
productos farmacuticos.
 CONCLUSIN

La cromatografa es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de

retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de
una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos
componentes.
Con el estudio de la cromatografa de los cidos y sus distintos tipos
de reacciones qumicas se pudo determinar que las sustancias pueden estar
unidas en un factor que mediante la cromatografa de las reacciones pueden
separarse.
BIBLIOGRAFA

* Harold M. McNair y Benjamn Esquivel H. Departamet of Chemistry y

Virginia Polytechnic Institute and State University Blacksburg, Virginia
Estados Unidos, 2 edicin 1980.
* Principios de Anlisis Instrumental 5 Edicin. Skoog Holler Nieman.
* Informacin de internet (www.quiored.com.ar, www.tecnoedu.com, Red
Latinoamericana de Qumica por: Rubn Daro Cortez)