Determinacionde Organocloradosen Aguas

Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial Repblica de Colombia

SUBDIRECCIN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIN
Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 1 de 49

DETERMINACIN DE PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS EN AGUAS POR CROMATOGRAFA DE
GASES Y DETECTOR DE CAPTURA ELECTRNICA
1. OBJETIVO
Describir la metodologa para la determinacin de plaguicidas organoclorados en agua

natural, residual y extractos de matrices slidas (suelos o sedimentos) por Cromatografa
de Gases con detector de captura electrnica, utilizando columnas capilares. Referencias:
Mtodo SM 66301 EPA 508 (Revisin 3.1 1995)2, EPA 508.1 (1995 Revisin 2)3, EPA
8081 A (1996 Revisin 1)4, EPA 525.2 (1995 Revisin 2)
2. ALCANCE
2.1. Analitos y matrices
Este protocolo describe varios mtodos de multiresiduo para la identificacin y la

determinacin de ms de 30 plaguicidas organoclorados en matrices ambientales como
aguas naturales, aguas residuales y sedimentos.
Dependiendo de las condiciones de corrida en los mtodos tomados como referencia, en

algunos no se evidencian los PCBs. Para identificarlos se requiere procedimientos
especficos de limpieza y fraccionamiento descritos de manera particular en los mtodos
80825 y 36006, para facilitar la cuantificacin de varios de los compuestos que se separan
en mezclas multi-componentes que normalmente incluyen los productos de degradacin
ambiental.
1
American Public Health Association APHA., American Works Association, Water Environment
Federation. Standard methods for the examination of water and wastewater. 6630 Organochlorine
pesticides. 1999.
2
Determination of chlorinated pesticides in water by Gas Chromatography with an electron capture
detector. National exposure research laboratory office of research and development. U.S.
th
Environmental protection agency EPA Method 508-3.1 revision 1995.
http://www.epa.gov/epaoswer/hazwaste/test/main.htm
3
Determination of chlorinated pesticides, herbicides and organohalides in water using liquid solid
extraction and electron capture Gas Chromatography. National exposure research laboratory office
nd
of research and development. U.S. Environmental protection agency EPA Method 508-1 2
revision 1995 http://www.epa.gov/epaoswer/hazwaste/test/main.htm
4
Organochlorine pesticides by Gas Chromatography. National exposure research laboratory office
st
of research and development. U.S. Environmental protection agency EPA Method 8081 A.1
revision 1996 http://www.epa.gov/epaoswer/hazwaste/test/main.htm
5
Polyclorinated biphenyls (PCBs) por Cromatografa de gases. U.S. Environmental protection
agency EPA. Method 8082.. 1 Revisin 1996.
6
Cleanup. U.S. Environmental protection agency EPA. Method 3600C. 3a revisin. 1996.
Elaborado por: Teresa Prez Hernndez Revisor por: IDEAM Aprobado por:
Fecha: 10/11/2008 Fecha: 31/01/2009 Fecha:

En la metodologa para la determinacin de multicomponentes es necesario realizar la

confirmacin utilizando otras columnas, el sistema de columna dual o por lo menos otra
tcnica cualitativa, con detector diferente por ejemplo en el mtodo 82707 GC/MS.
El procedimientos SM 6630 tiene como alcance los analitos siguientes: BHC, lindano
(gamma HCH), heptacloro, Aldrn, heptacloro epxido, Dieldrn, endrin, captan, DDE,
DDD, DDT, metoxicloro, endosulfan, dicloran, mirex y pentacloronitrobenceno, detectados
por cromatografa de gases con detectores de captura de electrones y de masas.
Los analitos incluidos en las metodologas de la referencia de EPA se describen en la

Tabla 1, identificados con N CAS.
Tabla 1. Plaguicidas organoclorados de acuerdo al alcance de cada mtodo EPA.

Nmero de EPA EPA EPA
Analito
registro CAS 8081 A 508 508.1
Alacloro 15972-60-8 X
Aldrin 309-00-2 X X X
Aroclor 1016 12674-11-2 X X
Aroclor 1221 11104-28-2 X X
Aroclor 1232 11141-16-5 X X
Aroclor 1242 53469-21-9 X
Aroclor 1248 12672-29-6 X
Aroclor 1254 11097-69-1 X
Aroclor 1260 11096-82-5 X
Atrazina 5103-71-9 X X
-BHC (Hexaclorociclohexano HCH) 319-84-6 X X X
-BHC (HCH) 319-85-7 X X X
-BHC (HCH) (Lindano) 58-89-9 X X X
-BHC (HCH) 319-86-8 X X X
Butaclor 23184-66-9 X
-Chlordano 5103-71-9 X X X
-Chlordano 5103-74-2 X X X
Chlorneb 501-15-6 X
Chlordane - not otherwise specified 57-74-9 X
Chlorobenzilato 510-15-6 X
Chlorobenzilato 2921-88-2 X
Cianazina 21725-46-2 X
Cloroneb 2675-77-6 X
Clorotalonil 1897-45-6 X
DBCP 96-12-8 X
4,4'-DDD 72-54-8 X X X
4,4'-DDE 72-55-9 X X X
4,4'-DDT 50-29-3 X X X
Diallate 2303-16-4 X
Dieldrin 60-57-1 X X
Endosulfan I 959-98-8 X X X
Endosulfan II 33213-65-9 X X X
Endosulfan sulfate 1031-07-8 X X X
Endrin 72-20-8 X X X
Endrin aldehyde 7421-93-4 X X X
Endrin ketone 53494-70-5 X
Etridiazol 2593-15-9 X X
Heptachlor 76-44-8 X X X
Heptachlor epoxide 1024-57-3 X X X
Hexachlorobenzene 118-74-1 X X X
Hexachlorocyclopentadiene 77-47-4 X X
Isodrin 465-73-6 X
7
U.S. Environmental protection agency EPA. Semivolatile organic compounds by gas
chromatography/mass spectrometry (gc/ms). Method 8270C.3a revision 1996.

2.2. Referencias
La metodologa analtica se basa en las referencias documentadas en la bibliografa.
2.3. Seleccin de la metodologa
Diversos organismos internacionales han desarrollado y validado metodologas para el

anlisis de plaguicidas organoclorados. Entre los organismos que publican metodologas
normalizadas en este campo, est la Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados
Unidos US EPA, la American Standard for Testing and Materials ASTM, el grupo
conformado por The American Public of Health Association APHA, The American Water
Works Association (AWWA), y The Water Environment Federation (WEF), quienes
publican el Standard Methods for Water and Wastewater. Tambin se dispone de
Manuales para la determinacin de plaguicidas publicados por la Agencia para Drogas y
Alimentos US FDA.
En Europa, se cuenta con la Comisin Europea (European Comision) la cual emite

diferentes directivas y cuenta con comisiones especializadas (Commission working),
estos organismos emiten documentos como SANCO/825/00 Guidance document on
residue analytical methods. Tambin se emiten directrices relacionadas con las
metodologas analticas como EC (2002) Commission decision implementing Council
Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the
interpretation of results, entre otros, relacionados con el objeto del presente protocolo.
La Tabla 2 resume las metodologas de referencia para plaguicidas organoclorados.
Tabla 2. Metodologas para el anlisis de Plaguicidas Organoclorados
ORGANISMO IDENTIFICACIN DEL MTODO CARACTERSTICAS

Plaguicidas organohalogenados y
Mtodo 505 Rev 2.1 PCBs por microextraccin y CG.
Mtodo 508 Plaguicidas organoclorados en agua

Mtodo 508, Rev 3.1 por CG/ECD
Plaguicidas organoclorados,
herbicidas y compuestos
EPA organohalogenados en agua por
Mtodo 508.1 CG/ECD
Mtodo 508.1 Rev 2.0 Plaguicidas organoclorados,
herbicidas y compuestos
organohalogenados en agua por
extraccin lquida/slida CG/ECD
Compuestos orgnicos por extraccin
Mtodo 525.2 Rev 2.0 lquida/slida, columna capilar y
CG/MS

Continuacin Tabla 2. Metodologas para el anlisis de Plaguicidas Organoclorados
ORGANISMO IDENTIFICACIN DEL MTODO CARACTERSTICAS

Plaguicidas organoclorados y PCBs
Mtodo 608 por CG/ECD.
Compuestos clorados en agua por

EPA Mtodo 551.1 CG/ECD
Plaguicidas organoclorados por

Mtodo 8081 B CG/ECD
Standard Plaguicidas organoclorados en agua

Mtodo 6630C por CG
Methods
Plaguicidas organohalogenados y
Mtodo D5175-91 (1996) PBCs en agua por microextraccin y
ASTM CG
Plaguicidas organoclorados en agua
Mtodo ASTM D5812
por columna capilar y CG/ECD
Compuestos organoclorados y
USGS-NWQL Mtodo O1104 organofosforados disueltos en agua
(USGS por CG
National Plaguicidas en agua por extraccin en
Mtodo O-1126-95
Water Quality cartuchos de fase slida C18 y CG/MS
Laboratory) Plaguicidas en agua por extraccin en
Mtodo 0-1126-02
cartuchos de fase slida C18 y CG/MS
Plaguicidas organoclorados en agua
AOAC Mtodo 990.6
por CG
2.4. Idoneidad del analista
El mtodo debe ser realizado por profesionales del rea qumica con experiencia analtica
en la extraccin y manejo de cromatografa de gases. Los analistas sin experiencia deben
tener la supervisin del profesional de mayor experiencia en la ejecucin de este tipo de
anlisis. Todo analista debe demostrar la capacidad para aplicar la metodologa y obtener
resultados confiables.
3. CARACTERSTICAS DE LOS ANALITOS
3.1. Aldrn8 (EHC 91, 1989) y Dieldrn9 (HSG 21, 1989)
8
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health criteria 91 de 1989. Aldrin y Dieldrin. Consultado
Mayo 2007. Disponible en http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc91.htm

El Aldrn puro es un slido cristalino incoloro, con punto de fusin de 104 104,5 C. Su
presin del vapor es de 8,6 mPa a 20C (6,5 x 10-5 mmHg a 25C). Su densidad es 1,54
g/mL a 20 C. Es prcticamente insoluble en agua (27 g/L a 27C; en acetona, benceno,
y xileno es mayor de 600 g/L. El Aldrn es estable a menos de 200C y pH 4-8, pero en
presencia de agentes oxidantes y cidos concentrados hay dao del anillo no clorado.
El Dieldrn tiene un punto de fusin de 175-176C. Su presin de vapor es 0,4 mPa a

20C 3,2 x 10-6 mmHg a 25C. Es muy poco soluble en agua (186 g/L a 20C pero es
moderadamente soluble en hidrocarburos saturados y aromticos, hidrocarburos
halogenados, teres, steres, cetonas, y alcoholes. El Dieldrn es estable al lcali, cidos
dbiles y a la luz. Reacciona con los cidos minerales concentrados, los catalizadores
cidos, agentes oxidantes cidos, y metales activos (hierro, cobre).
El Aldrn se utiliza principalmente como insecticida en suelos, en el cual se encuentra

conjuntamente con su producto de degradacin, el Dieldrn. El Aldrn presenta baja
movilidad mediante volatilizacin o lixiviacin. Se fija por adsorcin rpidamente en suelos
con alto contenido de materia orgnica y de manera moderada en suelos arcillosos.
Tanto el Aldrn como el Dieldrn presentan baja penetracin y se adhieren a las partculas
del suelo por lo cual no se presenta contaminacin de las aguas subterrneas. Una vez
aplicado el Aldrn, una parte se volatiliza y el resto se degrada convirtindose en un 97%
en su epxido, el Dieldrn que es retenida por ms tiempo. Este ltimo es fotosensible y se
degrada en pequea proporcin hasta foto-Dieldrn.
3.2. Hexacloro-ciclohexanos (HCH BHC) (Alfa y Beta EHC 123, 1991)10, (Gama
EHC 124, 1991)11
El alfa Hexaclorociclohexano es subproducto importante (65-70%) en la fabricacin del

lindano. Su solubilidad en agua es baja, pero es muy soluble en solventes orgnicos como
acetona, cloroformo, y xileno. Es un slido con baja presin del vapor. Este ismero se
puede determinar conjuntamente con los otros ismeros por cromatografa de gases y
detector de captura electrnica, utilizando mtodos complementarios de separacin.
El beta Hexaclorociclohexano es subproducto (7-10%) en la fabricacin del lindano. Su

solubilidad en agua es baja, pero es muy soluble en solventes orgnicos tales como
acetona, ciclohexano y xileno. Es un slido con una presin baja del vapor. Tiene un
comportamiento similar al ismero alfa. Es el ismero ms persistente en suelo pero
depende de la accin de microorganismos, del contenido de la materia orgnica y el agua
9
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health and safety guide 21 de 1989. Aldrin y Dieldrin.
Consultado Mayo 2007. Disponible en http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc21.htm
10
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health criteria 123 de 1991. Alfa y Beta
Hexaclorociclohexano. Consultado Mayo 2007. Disponible en
http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc123.htm
11
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health criteria 54 de 1991. Lindano. Consultado Mayo
2007. Disponible en http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc54.htm

evaporada en el suelo. La bioconcentracin es ms alta y la eliminacin es ms lenta para

beta-HCH que para otros ismeros.
El gama Hexaclorociclohexano (Lindano) es un slido cristalino incoloro que funde a

112C y ebulle a 288C. Presin de vapor 0,434 x 10-5 kPa (3,26 x 10-5 mmHg) a 20 C.
Prcticamente insoluble en agua (10 mg/L a 20C; moderadamente soluble en el etanol
(6,7%); levemente soluble en aceites mineral; soluble en acetona y en solventes
aromticos. Es estable a la luz, al aire, al calor, al bixido de carbono y los cidos fuertes;
se dehidroclora en presencia del lcalis o en exposicin prolongada al calor con formacin
de tricloro benceno, fosgeno y cido hidroclrico. Es incompatible con las bases fuertes y
metales pulverizados, tales como hierro, cinc, y aluminio.
3.3. Endrn (EHC 130, 1992)12
El Endrn es un slido cristalino blanco prcticamente insoluble en agua 0,23 mg/L a 25C;
poco soluble en alcohol e hidrocarburos; moderadamente soluble en hidrocarburos
alifticos y muy soluble en solventes tales como acetona, benceno, tetracloruro de
carbono y xileno.
La volatilizacin ocurre despus de su aplicacin en los suelos y cosechas y depende

generalmente de muchos factores, como el contenido de la materia orgnica y contenido
de agua del suelo, la humedad, el flujo de aire, y el rea superficial de plantas.
Cuando es sometida a calentamiento alrededor de 200C como ocurre durante la

cromatografa gaseosa aparecen los derivados delta ceto-endrn y un aldehdo. El Endrn
tambin se transforma en cetoendrn bajo condiciones cidas y catalizador. Lo mismo
ocurre por irradiacin UV en 48 h.
3.4. Alaclor 13
El Alaclor es un compuesto slido cristalino blanco o crema, combustible de punto de

fusion 39,5 41,5 C. Soluble in acetona, benceno, cloroformo, etanol, ter y acetato de
etilo. La solubilidad en agua es 242 mg/L a 25 C. Es hidrolizado por cidos y bases
fuertes. Se descompone a 105C. Es estable a la radicacin UV. Es txico para
organismos acuticos.
3.5. Propaclor (EHC 147, 1993)14
Propaclor (2-cloro- N-(1-methiletil)- N-fenil acetamida). Compuesto slido que funde a

77C y se descompone por encima de 170; Presin de vapor a 25C:103 mPa; soluble en
12
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health criteria 130 de 1992. Eldrin. Consultado Mayo
13
WHO. IPCS INCHEM.Data Sheets on pesticides 86. 1996. Alachlor. Consultado Junio de 2007.
Disponible en http://www.inchem.org/documents/pds/pds/pest86_e.htm
14
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health criteria 147 de 1993. Propachlor. Consultado junio

agua (580mg/L a 20C y 613mg/L a 25C); soluble en solventes orgnicos: acetona 448
mg/kg; benceno 737 mg/kg; cloroformo 602 mg/kg; etanol 408 mg/kg; xileno 239 mg/kg.
El Propaclor se volatiliza en la superficie del suelo siempre que ste se encuentre

hmedo. Presenta una adsorcin moderada en presencia de materia orgnica, lo que
induce la posibilidad de lixiviacin a travs del perfil del suelo y llegar a las aguas
subterrneas, aunque es poco frecuente, ya que se necesitara una precipitacin muy alta
para desplazar los residuos a unos 30 cm de profundidad del suelo. La mayora de la
lixiviacin ocurre en suelo arenoso con poca materia orgnica. La mayora de los autores
aseguran que los residuos se encuentran dentro de los 4 centmetros superficiales del
suelo.
Los metabolitos originados por degradacin del propaclor en suelos son N-isopropilanilina,
N-Isopropilacetanilida,N-(1-hidroxiiso-propil)-acetanilida y N-isopropil-2- acetoxi
acetanilida. El metabolito conjugado de N-isopropilanilina es mucho ms persistente que
el compuesto original.
3.6. Arocloro (EHC 140, 1992, 2nd edition)15
Los PCBs son hidrocarburos bifenlicos polisustituidos con cloro, generando una mezcla
de alrededor de 130 diversos ismeros y congneres.
Los congeners puros individuales son incoloros, a menudo cristalinos; los compuestos
comerciales son mezclas de estos congneres y tienen colores desde amarillo claro hasta
oscuro. No se cristalizan a temperaturas bajas sino que se convierten en materiales
resinosos.
Los PCBs son prcticamente insolubles en agua, pero disuelven fcilmente en

hidrocarburos, grasas, y otros compuestos. La solubilidad de los frecuentes en agua a
25C es: para el 1221 0,59 mg/L, 1232 0,45 mg/L, 1016 0,42 mg/L, 1242 0,24 mg/L, 1248
0,054 mg/L, 1254 0,021 mg/L, 1260 0,0027 mg/L. Los PCBs tienen un alto grado de
estabilidad qumica bajo condiciones normales. Son muy resistentes a diversos oxidantes,
al oxgeno, metales activos y otros productos qumicos. Segn pruebas de laboratorio
permanecen, son qumicamente estables a altas temperaturas hasta 170C y por perodos
prolongados.
3.7. Butacloro16
N-butoximetil 2-cloro-2,6-dietilacetanilida es un lquido de color mbar con punto de

fusin <-5C y punto de ebullicin 16C. Presin de vapor 0,6 mPa a 25C. Solublidad a
15
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health criteria 140 de 1992. Polychlorinated biphenyls and
terphenyls. Disponible en http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc140.htm
16
The pesticida manual. A World compendium. 9 edicin. Charles R. Worthing Asc Ed Raymond J.
Hance. Published by The British Crop Protection Council. 1991

24C 23 mg/L en agua, miscible con acetona, benceno, etanol, acetato de etilo, hexano.
Es estable a la luz UV y se descompone a 165C
3.8. Clordano
Est constituido por una mezcla con 60-75% de ismeros siendo los de mayor proporcin
el ismero cis denominado alfa clordano, cuyo punto de fusin es 106-107C y el ismero
trans denominado gama clordano. Contiene otros ismeros en proporcin menor al 7% y
heptacloro. Solubilidad a 25C 0,1 mg/L en agua, miscible con acetona, ciclohexano,
etanol, 2-propanol, tricloroetuleno.
3.9. Heptacloro17
Este compuesto fue aislado del clordano grado tcnico. Cuando esta puro es un slido
cristalino de punto de fusin 95-96C y presin de vapor a 25C 53 mPa. Solubilidad de
25-29C 0,056 mg/L en agua.
El producto grado tcnico contiene alrededor del 7% de heptacloro y cerca del 28% de
compuestos relacionados tales como trans clordano (2022%) y trans nonachlor (48%).
Su punto de fusin vara entre 46-74C y su solubilidad 20-30C 1,65 kg/L en
ciclohexanona; 62,5 g/L en etanol; 1,41 kg/L en xileno. Es estable a temperaturas 261C,
a la luz, humedad, aire pero es susceptible a la epoxidacin.
3.10. Endosulfan
Es una mezcla de dos ismeros alfa endosulfan y I endosulfan que funde a 109C. El
ensosulfan con una pureza 94% es un slido cristalino pardo con olor a dixido de azufre
y punto de fusin 70-100C y presin de vapor 1,2 mPa a 80C. Solublidad a 22C para el
alfa endosulfano es 0,32 mg/L, para el beta endosulfano es 0,33 mg/L; a 20C 200 g/L en
diclorometano, acetato de etilo y tolueno; 65 g/L en etanol, 24 g/L en hexano. Es estable a
la luz solar e inestable en medio alcalino generando hidrlisis.
3.11. Clorobenzilato
Es un slido incoloro de punto de fusin 36-37,5C y presin de vapor 0,12 mPa a 20C.
Solubilidad a 20C 10 mg/L en agua; 1 kg/kg de acetona, diclorometano, metanol, tolueno;
600 g/kg de hexano y 700 g/kg en 1-octanol.
3.12. Cloroneb
Slido cristalino incloro con punto de fusin 133-135C y ebullicin 268C; presin de
vapor 400 mPa a 25C. Solubilidad a 25C de 8 mg/L en agua, 115 g/kg en acetona, 133
17
WHO. IPCS INCHEM. Concise International Chemical Assessment Document 70.
HEPTACHLOR. Disponible en http://www.inchem.org/documents/cicads/cicads/cicad70.htm

g/kg en diclorometano; 118 g/kg en dimetilformamida; 89 g/kg en xileno. Es estable a

temperatura 268C y a temperatura ambiente en presencia de cidos y bases.
3.13. DBCP (1,2 dibromo-3-cloropropano)18
Lquido incoloro de olor pungente que descompone a 196C y funde a 6,7C. Baja
solubilidad en agua, 0,1 g/100ml; presin de vapor 0,1 kPa a 20C
3.14. DDT y sus derivados 19
El p,p-DDT corresponde a 1,1-(2,2,2-tricloroetilideno)-bis(4-clorobenceno). Este

compuesto se encuentra normalmente con otros ismeros siendo los ms frecuentes el
4,4DDE y el 4,4DDD. Todos los ismeros del DDT con frmula emprica C14H9Cl5 son
slidos cristalinos blancos. El DDT es soluble en solventes orgnicos benceno, 106 g/L;
ciclohexanona 100 g/L; cloroformo 96 g/L; ter de petrleo 4-10 g/L etanol 1,5 g/L. Es
insoluble en agua. El DDT es resistente al ataque enzimtico en suelos y a los
microorganismos superficiales; el DDE es an ms resistente.
3.15. Clorotalonil
Tetracloro isoftallonitrilo. Es un slido cristalino inodoro que funde a 250-251C y presin

de vapor 1,3 Pa a 40C. Solubilidad a 25C: 0,6 mg/kg en agua; 20 g/kg en acetona,
butanona, dimetilsulfxido; 80 g/kg en xileno. Es estable a la temperatura en condiciones
normales de almacenamiento, a la luz UV y en soluciones acuosas cidas y alcalinas.
3.16. Etridiazol
Etil 3-triclorometil 1,2,4-tiadiazol-5-il-eter es un lquido de color amarillento, con presin de

vapor 13 mPa a temperatura ambiente. Solubilidad a 25C 50 mg/L en agua, soluble en
acetona, tetracloruro de carbono, etanol e hidrocarburos saturados. Es estable a la luz
solar y UV as como a la temperatura.
4. FUNDAMENTO DE LA METODOLOGA20
La cromatografa de gases es un mtodo de separacin y cuantificacin en la cual los

componentes que hacen parte de una muestra vaporizada, se inyectan en una columna
en la cual se separan por un proceso de reparto entre una fase mvil gaseosa,
generalmente inerte y una fase estacionaria lquida inmovilizada sobre la superficie de un
slido inerte o en las paredes de un tubo capilar. La elucin se consigue mediante el flujo
18
WHO. IPCS INCHEM. ICSC 0002. http://www.inchem.org/documents/icsc/icsc/eics0002.htm
19
WHO. IPCS INCHEM. Environmental Health criteria 9. DDT y sus derivados
http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc009.htm
20
Skoog D., West D., Holler J., Crouch S. Fundamentos de Qumica Analtica.8 edicin. Thomson
editores. 2005, p959.

de la fase mvil de gas inerte sin que se presente interaccin alguna de los analitos con
ella durante el recorrido a travs de la columna.
El detector de captura electrnica es uno de los ms utilizados en anlisis ambiental

teniendo en cuenta que responde de manera selectiva a compuestos orgnicos que
contienen halgenos como es el caso de los plaguicidas y bifenilos policlorados.
El eluyente de la muestra procedente de la columna pasa sobre un emisor de radiacin

beta, generalmente 63 Ni. Un electrn del emisor causa la ionizacin del gas portador y la
produccin de una corriente de electrones, la cual en ausencia de especies orgnicas, la
corriente generada entre los electrodos es constante, mientras que en presencia de
compuestos orgnicos que contengan grupos funcionales electronegativos que tienden a
capturar electrones, la corriente disminuye significativamente.
Este comportamiento permite la deteccin con alta sensibilidad para los halgenos,
perxidos, quinonas y grupos nitro. El detector no es sensible a los grupos funcionales
amino, hidroxilo e hidrocarburos.
Otro detector utilizado para compuestos organofosforados es el de captura de electrones

que se basa en que compuestos electronegativos toman electrones obtenidos de un
emisor beta, formando iones cargados negativamente, la seal de fondo conformada por
los electrones, disminuye cuando eluyen compuestos capaces de capturar electrones, lo
que lo hace muy sensible a molculas que contengan halgenos. No es til para todos los
compuestos de este grupo, pero tiene como ventaja su alta sensibilidad para los que
responden.
El detector de mayor uso a nivel ambiental para confirmar la presencia de compuestos

organofosforados de matrices complejas es el de masas, que se basa en la generacin de
iones a partir de las molculas o tomos originales y la posterior separacin de los iones
generados de acuerdo a la relacin masa/carga y medida de la abundancia de stos.
Generalmente se usa el modo scan para obtener informacin espectral muy precisa sobre
la identidad del compuesto, por lo cual tiene como ventaja su alta especificidad. sta es
la metodologa utilizada para la confirmacin de los componentes del grupo de
organofosforados en matrices ambientales. Con respecto a la sensibilidad, se deben
operar en modo de monitoreo de in selectivo para tener mayor sensibilidad y para la
cuantificacin.
5. CONSIDERACIONES PARA EL MANEJO DE MUESTRAS
5.1. Recomendaciones para la recoleccin de las muestras
Si el muestreo se aplica para agua de grifo, este debe abrirse y dejar que corra hasta que
la temperatura se estabilice (1 2 minutos). Se ajusta el flujo alrededor de 500 mL/min y
se recoge la muestra corriente. En los casos en que el agua ha sido clorada deber
reducirse el cloro residual agregando una cantidad suficiente de sulfito de sodio slido o

una solucin concentrada que permita alcanzar una concentracin final de 50 mg/L, para
luego tapar y agitar la botella con la muestra recolectada, para mantenerla protegida de la
luz.
En el caso de aguas superficiales se debe tener previsto el sitio ms representativo del

cuerpo de agua que se va a evaluar. Se llena la botella con la muestra de agua, se tapa y
refrigera hasta que llega al laboratorio para ser analizada. En el caso de utilizar
muestreadores automticos que permiten la obtencin de muestras compuestas es
fundamental contar con botellas de vidrio que puedan mantenerse refrigeradas hasta
finalizar el muestreo y llegar al laboratorio.
NOTA 1: Es fundamental tener la precaucin de utilizar materiales que no sean

plsticos en el equipo de muestreo, incluyendo las mangueras y los
protectores internos de las tapas de los frascos, ya que con frecuencia se
presenta la migracin de algunos compuestos derivados de los ftalatos, que
posteriormente son interferentes crticos para los analitos del mtodo en el
proceso cromatogrfico.
NOTA 2: Hay varios analitos cuyo comportamiento y estabilidad exigen la toma de

muestras independientes, a pesar de no ser del grupo de organoclorados
que pueden estar presentes.
Para la cianazina las muestras no se tratarn con sulfito y no se ajustar

el pH. Debern refrigerarse y analizarse dentro de los 14 das
posteriores al muestreo. En el momento de ser analizadas debern
tratarse para eliminar el cloro residual y se ajustar el pH
inmediatamente antes de la fortificacin con el estndar de los
compuestos relacionados, y de la extraccin utilizando las mismas
cantidades aplicadas a las otras muestras en campo.
Para el Atraton y el Prometon las muestras se tratarn con el sulfito del

sodio para eliminar el cloro residual, pero no se aplicar el ajuste de pH.
La eficiencia para la recuperacin de estos dos analitos en pH neutro es
90%.
5.2. Preservacin de las muestras
Una vez tomada la muestra se debe ajustar el pH a 2 con la adicin de HCl 6N. Si la
muestra contena cloro es indispensable haber realizado el tratamiento correspondiente
antes de ajustar el pH. La razn del ajuste del pH es la de retardar cualquier degradacin
microbiana de los analitos del mtodo. Este ajuste del pH permite una conservacin de los
analitos de la muestra hasta por 14 das.
Las muestras tomadas independientemente para anlisis de la cianazina debern

mantenerse refrigeradas hasta el momento del anlisis.

Los resultados del estudio de la preservacin demuestran que los analitos (excepto
cianazina) son estables por 14 das en las muestras que se preservan segn lo descrito
en la seccin 8.2 y la seccin 8.3. Los extractos de muestra refrigerados se pueden
almacenar hasta 30 das. 8.5
5.3. Almacenamiento de la muestra
Las muestras se deben mantener refrigeradas a 4C desde el momento de la recoleccin

hasta que se realice la extraccin en el laboratorio. Los extractos almacenados a
temperatura 4C son estables para los analitos del mtodo hasta por 30 das.
5.4. Estabilidad de los analitos
La cianazina se degrada en la muestra cuando se almacena bajo condiciones cidas o en

presencia de sulfito del sodio, condicin que debe tenerse en cuenta en el momento del
muestreo.
El atraton y el prometon se ionizan bajo condiciones cidas lo que afecta la eficiencia de

la extraccin de matrices de agua a pH cido.
Los analitos carboxin, diazinon, disulfoton, sulfoxido del disulfoton, fenamiphos, y terbufos
deben ser extrados inmediatamente despus de la recoleccin y conservacin; no se
pueden almacenar como los dems analitos hasta 14 das.
5.5. Extraccin de los analitos de la muestra
La cantidad utilizada para muestras lquidas es normalmente de 1L y para muestras

slidas se toma un peso entre 2 y 30 g, a partir de las cuales se recuperan los analitos
mediante la aplicacin de tcnicas de extraccin apropiadas dependiendo de la matriz.
En el caso de muestras lquidas se extraen a pH neutro con cloruro de metileno usando

extraccin discontinua (embudo de decantacin), (EPA 3510C)21 o por extraccin continua
lquido lquido, (EPA 3520C)22 u otros mtodos apropiados.
Las muestras de matrices slidas se extraen mediante extraccin soxhlet (EPA 354023
354124) o con ultrasonido (EPA 355025) con mezcla cloruro de metileno/acetona (1:1).
21
Separatory funnel liquid-liquid extraction. U.S. Environmental protection agency. Method EPA
3510C. 3a revision 1996. http://www.epa.gov/epaoswer/hazwaste/test/main.htm
22
Continuous liquid-liquid extraction. U.S. Environmental protection agency Method 3520C 3a
revision 1996. http://www.epa.gov/epaoswer/hazwaste/test/main.htm
23
Soxlhet extraction U.S. Environmental protection agency Method 3540C 3a revision 1996.
24
Soxlhet extraction U.S. Environmental protection agency. Method 3541C 1994.
25
Ultrasonic extraction U.S. Environmental protection agency Method 3550B 2a revision 1996.

La purificacin de las muestras se lleva a cabo con Florisil (EPA 362026) y/o permeacin
sobre gel (EPA 364027). Cuando se aprecie interferencia de azufre se recomienda el
procedimiento EPA 3660.
Antes del anlisis cromatogrfico el disolvente debe cambiarse a hexano usando un

concentrador Kuderna-Danish KD, ya que cualquier rastro de cloruro de metileno origina
un pico de disolvente muy ancho.
5.6. Responsabilidad del analista
Es responsabilidad del analista revisar que las muestras sean aptas para el anlisis de los
organoclorados, verificando el cumplimiento de las consideraciones descritas para su
manejo adecuado desde el momento de la recoleccin hasta la aplicacin del anlisis.
6. EQUIPOS, INSUMOS, REACTIVOS Y ESTNDARES
En este protocolo se ha partido del referente del mtodo SM 6630 y de tres mtodos de la
EPA y por lo tanto se mostrarn de manera particular y comparativa las necesidades de
cada uno de ellos, con lo cual es posible proceder de acuerdo a la disponibilidad de cada
laboratorio.
6.1. Equipos
6.1.1. Balanza analtica con precisin de pesada 0,0001 g
6.1.2. Potencimetro con capacidad de lectura de 0,01 unidades de pH.
6.1.3. Cromatgrafo de gases dotado con los elementos y sistemas necesarios para
operar, con columna sencilla o doble; sistema de inyeccin split-splitless,
6.1.3.1. Detector de captura electrnica ECD
Sistema de adquisicin, manejo y registro de datos, que permita obtener como

mnimo los datos de tiempos de retencin y reas de los picos.
26
Florisil cleanup. U.S. Environmental protection agency Method 3620B 2a revision 1996.
http://www.epa.gov/epaoswer/hazwaste/test/main.htm.
27
Gelpermeation cleanup U.S. Environmental protection agency Method 3640 D 1a revision 1994.
27
Eurachem. Uncertainty Manager; Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement
Eurachem 2000; Disponible en www.uncertaintymanager.com

Horno para la columna cromatogrfica con software para realizar corridas con
temperatura programable.
Bombas y equipo bsico para extraccin en fase slida, para la preparacin de la
muestra por medio de la utilizacin de discos o cartuchos,
Columnas para secado de las muestras de vidrio que contienen de 5-7 g de sulfato
de sodio anhidro con los cuales se previene la contaminacin de los extractos con
agua. Se puede utilizar un pequeo tubo, una jeringa, un cuenta gotas de cristal,
siempre que se evite el riesgo de cada del sulfato de sodio en el extracto y sea de
vidrio.
Bao de mara capaz de regular la temperatura con una variacin de 2C.
Columnas cromatogrficas. Se describen a continuacin varias alternativas de
columna cuyas especificaciones determina la respuesta del mtodo y estn dadas
particularmente por cada uno de los mtodos descritos.
Mtodo SM 6630
Esta metodologa describe el uso de columnas de vidrio tradicionales, las cuales han sido
reemplazadas por columnas capilares que permiten una resolucin y eficiencia mayores.
Las columnas descritas son columnas de vidrio de 2 m x 4 mm de dimetro interno con las
siguientes fases: 5% OV 210 soportado sobre tierra de diatomceas tratada con dimetil-
dicloro silano, 100 /120 mesh; como columna alterna 1,5% OV-17 y 1,95% QF1. Otras
opciones incluyen 3% OV-1 en mezcla con 6%QF-1 y 4% SE-30 en tierra de diatomceas
100/120 mesh. Recomienda esta metodologa el uso de columnas de 30 m x 0,32 mm de
dimetro interno y 0,25 micras de espesor con los soportes mencionados.
La Tabla 3 describe las columnas para 3 metodologas EPA.
Tabla 3. Columnas cromatogrficas para el anlisis de plaguicidas organoclorados EPA

Mtodo EPA 508 Mtodo EPA 508-1 Mtodo EPA 8081-A
Slica fundida 95% dimetil Slica fundida 95% dimetil 5% Slica fundida 95% dimetil 5%
5% fenil polisiloxano ( J&W fenil polisiloxano ( J&W fenil polisiloxano ( J&W
Scientific DB-5) o Scientific DB-5) o equivalente, Scientific DB-5 SE 54) o
equivalente, de 30 mx0,25 de 30 m x 0,25 mm dimetro equivalente, de 30 mx0,32 mm
mm dimetro interno interno espesor de pelcula de dimetro interno espesor de
espesor de pelcula de 0,25 0,25 micras. pelcula de 0,1 micras.
micras.
Slica fundida 50% dimetil, Slica fundida 50% dimetil, 50
50 % difenil polisiloxano % difenil polisiloxano (J&W
(J&W Scentific DB-1701 Scentific DB-1701 Sientific) o
Sientific) o equivalente 30 equivalente 30 mx0,25 mm
m x 0,25 mm dimetro dimetro interno, espesor de
interno, espesor de pelcula 0,1 micras
pelcula 0,25 micras

Continuacin Tabla 3. Columnas cromatogrficas para el anlisis de plaguicidas

organoclorados EPA
Mtodo EPA 508 Mtodo EPA 508-1 Mtodo EPA 8081-A

Slica fundida 35 % difenil 65%
dimetil polisiloxano (DB-608;
SPB 608) o equivalente, de 30
m x 0,25 mm pelcula de 1
micra de espesor
Slica fundida (DB-608, SPB-
608, RTx-35) de 30 m x 0,53
mm con pelcula 0,5 microm
0,83 microm de espesor
6.1.4. Sistema de inyeccin automtico o manual con capacidad para inyectar 2

microlitros.
6.1.5. Equipo de agitacin por rotacin con los accesorios necesarios
6.2. Materiales
6.2.1. Helio de alta pureza como gas de arrastre.

6.2.2. Equipo para toma de muestras simples o compuestas
Recipientes de borosilicato, capacidad 1L con graduacin (Wheaton Media/lab
bottle 219820 o equivalente). Pueden usarse botellas mbar. Estos recipientes
debern ser lavados y secados adecuadamente para minimizar la contaminacin.
Las tapas debern ser de rosca con cubierta interna de tefln u otro material inerte
que prevengan la contaminacin. Debern ser lavados cuidadosamente con el
ltimo solvente utilizado, luego con detergente y agua de grifo, agua destilada,
secados al aire o en estufa a 400C.
Envases para muestra, de vidrio mbar capacidad 1 L o de galn con tapa rosca
con recubierta interna de tefln. Las botellas mbar son muy importantes para
prevenir el dao de los analitos por accin de la luz.
6.2.3. Embudos de decantacin 2L con tapa de tefln o TFE fluorocarbono.
6.2.4. Balones o frascos para almacenamiento de soluciones en vidrio mbar de 10-15
mL de capacidad con tapa de TFE-fluorocarbono.
6.2.5. Erlenmeyer 500mL
6.2.6. Viales mbar de varios tamaos (5-10mL) tapa rosca interior de TFE fluorocarbono
6.2.7. Microjeringas de varios tamaos
6.2.8. Equipos de concentracin Kuderna-Danish KD, compuesto por los siguientes
elementos:
Tubos concentradores graduados de 10-25 mL (Kontes K-570050-1025 K-
570050-2525 o equivalentes). La calibracin deber verificarse para los volmenes
utilizados en la prueba.
Frascos evaporadores K-D-500 mL (Kontes K-570001-0500 equivalente) incluido
el tubo de concentracin.

Columnas Snyder de tres bolas macro K-D- (Kontes K-5030000-0121 o

equivalente)
Columnas Snyder de dos bolas macro K-D-(Kontes K-569001-0219 o equivalente)
6.2.9. Frascos para agitacin en equipo que permita la agitacin de 30 veces / minuto
6.2.10. Perlas de ebullicin carborundo # 12 (Arthur H Thomas Co. 1590-033 o
equivalente) Calentadas a 400C antes de su uso, enfriadas y guardadas en
desecador.
6.2.11. Vidriera general del laboratorio: Balones volumtricos de capacidad de 10 mL,
100 mL y 1000 mL, frascos de vidrio de varios tamaos mbar con tapa rosca con
cubierta interna de Tefln.
6.2.12. Viales para el inyector automtico, de capacidad de acuerdo a las especificaciones
del inyector con tapa cubierta internamente de tefln; o manual con jeringa de
vidrio para inyectar 2 microlitros.
6.2.13. Jeringas hipodrmicas de vidrio de capacidad 10 mL, con agujas para jeringas de
7-10 cm de longitud punta roma. Microjeringas de varios tamaos
6.3. Reactivos
6.3.1. Lista de reactivos
Acetona - GP
Metileno dicloruro - GP
Metil-tert-butil-ter MTBE - GP
cido clorhdrico RA
Fosfato de potasio K2HPO4 RA
Cloruro de sodio RA
Sulfato de sodio granular anhidro GP
Tiosulfato de sodio RA
Pentacloronitrobenceno PCNB 98% pureza RA (estndar interno)
Decaclorobifenilo DCB 96% pureza RA (compuesto sucedneo o surrogate)
Cloruro mercrico RA (agente conservante de las muestras)
Agua destilada
Nota: GP grado pesticida o solvente destilado en vidrio o equivalente
6.3.2. Purificacin de reactivos
Cloruro de sodio: caliente los cristales en una cpsula de porcelana a 400C durante
4 horas para remover sustancias orgnicas que pueden ocasionar interferencias.
Almacenar en frasco de vidrio para evitar contaminacin por ftalatos.
Sulfato de sodio anhidro granular: caliente los cristales en una cpsula de porcelana a
400C durante 4 horas para remover sustancias orgnicas que pueden ocasionar
interferencias. Almacene en frasco de vidrio para evitar contaminacin por ftalatos.
Agua destilada: utilice preferiblemente recin destilada, almacene en vidrio para evitar
contaminacin por ftalatos y libre de los analitos de inters.

6.3.3. Preparacin de soluciones:
Buffer de fosfatos (pH 7): preprelo por mezcla de 29,6 mL de cido clorhdrico 0,1 N y 50
mL de fosfato dipotsico 0,1 M
6.3.4. Estndares
Los estndares de los plaguicidas organoclorados incluidos en los mtodos de la

referencia se describen en la Tabla 1
6.3.4.1. Solucin concentrada de plaguicidas organoclorados
Se puede obtener de soluciones comercialmente disponibles, certificadas por el fabricante

o un ente independiente, de 1,00 g/mL o preparadas a partir de estndares certificados
de la siguiente manera:
Prepare una solucin de concentracin de 1,00 microgramo / microlitro para cada analito
pesando 0,0100 g del material certificado para disolverlo en MTBE y complete a un
volumen de 10 mL. Aplique la correccin en los clculos de la concentracin con base en
la pureza declarada en el certificado del estndar. Pueden usarse diluciones mayores
dependiendo de las necesidades del mtodo.
Transfiera la solucin estndar a un vial mbar de vidrio con tapa con cubierta interna de
TFE-fluorocarbono y almacene a temperatura ambiente y protegida de la luz. Estas
soluciones deben reemplazarse despus de 2 meses o en el momento en que los
resultados de comparacin con los blancos fortificados o las muestras de control indiquen
que presentan problemas.
6.3.4.2. Solucin de estndar interno.
Prepare una solucin de PCNB 98% de pureza para utilizarlo como estndar interno
pesando 0,010 g del compuesto puro, disulvalo en MTBE y afrelo a 100 mL. Transfiera
a un frasco de vidrio con tapa con cubierta interna de TFE-fluorocarbono y almacene a
temperatura ambiente. (100microgramos/mL). Esta solucin debe reemplazarse cuando
los controles implementados en el mtodo indiquen un problema. Se puede reemplazar
este estndar interno siempre y cuando el nuevo compuesto cumpla con los requisitos de
un estndar interno.
6.3.4.3. Solucin de compuesto sucedneo (surrogate)
Prepare una solucin concentrada de compuesto sucedneo (surrogate) pesando 0,050g

de DCB 96% de pureza y diselvalo en MTBE aforando a 100mL. Transfiera a un frasco
de vidrio con tapa con cubierta interna de TFE-fluorocarbono y almacene a temperatura

ambiente. Esta solucin debe reemplazarse cuando los controles implementados en el

mtodo indiquen un problema.
6.3.4.4. Solucin concentrada de verificacin del laboratorio (SVL)
La solucin de verificacin del laboratorio est compuesta por algunos analitos, se utiliza
para evaluar la idoneidad del sistema cromatogrfico y verificar que se encuentra dentro
de las especificaciones definidas en la metodologa. Prepare pesando 0,0010 g de cada
uno de los siguientes analitos: clorotalonil, clorpirifos, DCPA, y HCH delta. Disuelva cada
uno de ellos en MTBE y diluya a un volumen final individual de 10 mL en matraz aforado.
Prepare una solucin concentrada colocando en un baln aforado de 100mL:

2 microlitros de solucin estndar concentrada de clorpirifos
50 microlitros de solucin estndar concentrada de DCPA
50 microlitros de solucin estndar concentrada de clorotalonil
40 microlitros de solucin de estndar concentrada de HCH delta
Complete a volumen con MTBE y agite vigorosamente la solucin. Transfiera a un frasco

de vidrio con tapa con cubierta interna de TFE fluorocarbono y almacene a temperatura
ambiente. Reemplace la solucin de verificacin cuando los controles implementados
indiquen un problema en la respuesta del mtodo.
6.3.4.5. Solucin de verificacin de degradacin SVD
La solucin de verificacin de degradacin est indicada para algunos analitos en los

cuales es ms evidente este proceso. Prepare en MTBE una solucin que contiene 4,4-
DDT y Endrn a 1 microgramo/mL. Inyecte esta solucin para verificar la degradacin de
estos compuestos en el puerto de inyeccin, determinando la presencia de Endrn
aldehdo, Endrn cetona y para DDT, la aparicin de 4.4-DDE y 4,4-DDD.
7. CONTROL Y ASEGURAMIENTO DE CALIDAD DEL MTODO
El laboratorio debe demostrar la competencia tcnica para aplicar la metodologa en el

anlisis de plaguicidas y otros contaminantes ambientales con el fin de asegurar y
demostrar la obtencin de resultados confiables. El laboratorio deber implementar,
mantener, soportar y aplicar las buenas prcticas de laboratorio, que son la base para las
dems estrategias de demostracin de la competencia.
El requerimiento mnimo de control de calidad exigido incluye la demostracin de la

capacidad inicial del laboratorio, el porcentaje de recuperacin (%R) del compuesto
sucedneo (surrogate) en cada muestra y blanco, monitorear la respuesta del estndar
interno en cada muestra y blanco, el anlisis de los blancos de laboratorio (BS, BR, BC,
BLF, MLF y MCC) y el lmite de deteccin (LD) de cada analito.

7.1. BPL
7.1.1. Limpieza del material de vidrio:
El material de vidrio debe limpiarse de acuerdo al siguiente protocolo para asegurar su

limpieza:
Enjuague todo material de vidrio con el ltimo solvente utilizado tan pronto como sea
posible.
Lave con agua caliente y detergente, enjuague con agua del suministro del municipio y
agua destilada, en este orden.
Escurra el agua.
Enjuague todo el recipiente con acetona y/o
Coloque el material en una mufla o estufa que alcance 400C (A excepcin del
material volumtrico)
Seque y enfre el material
Tape el material con papel de aluminio o invierta y almacene en un ambiente limpio
para prevenir la acumulacin de polvo u otros contaminantes.
Este procedimiento puede no ser suficiente para la eliminacin de compuestos

termoestables como los bifenilos policlorados (PCB) que pueden causar interferencia.
7.1.2. Residuos de analitos
El analista debe prevenir la ocurrencia de interferencias potenciales como la

contaminacin debida a residuos de analitos dejados en los materiales provenientes de
estndares o muestras contaminadas.
7.2. Demostracin de la capacidad inicial del laboratorio
Para demostrar la capacidad inicial del laboratorio se deber conocer el porcentaje de

recuperacin (%R) de cada analito, la desviacin estndar relativa (DER) y el lmite de
deteccin (LD), de los datos obtenidos en las corridas de las muestras de blancos de
laboratorio fortificados (BLF).
Es recomendable que peridicamente el laboratorio determine y documente sus lmites de

deteccin y capacidad para los analitos de inters en cada proceso analtico.
7.2.1. Determinacin del porcentaje de recuperacin del analito.
Con blanco de laboratorio fortificado (BLF).
La manera de proceder es la siguiente.

Seleccione una concentracin representativa de al menos 10 veces el LD o una
concentracin intermedia del estndar de calibracin para cada analito.

Prepare una dilucin primaria del estndar que contenga 1000 veces la concentracin
seleccionada.
Con una jeringa adicione 1 mL de la solucin concentrada a un seriado de 4 a 7
alcuotas de 1L de agua reactivo.
Analizar cada alcuota de acuerdo al procedimiento establecido.
Calcule el porcentaje de recuperacin (%R) determinado para los diferentes analitos, el

cual podr variar en un rango de 30% del valor indicado en la Cromatografa de
gases/MS Mtodo EPA 525-2
Demuestre y documente la calibracin antes de proceder con el anlisis de muestras de

rutina, antes del anlisis de un lote de muestras (en un periodo no mayor a 12 horas) o al
inicio de cada da de trabajo.
Determine la escala de respuesta para las masas y la abundancia de acuerdo a lo

indicado por el manual del equipo.
Verifique el autotune y el cumplimiento de especificaciones
Inyecte 1 L de una solucin de DFTPP (decafluorotrifenilfosfina), endrn y 4,4-
DDT (estos 2 analitos pueden ir en solucin independiente a la de DFTPP y se
utilizan para verificar la degradacin).
Adquiera el espectro de masas de 45 a 450 uma, (al menos se debe adquirir 5
scans/pico), de un pico de respuesta simtrica para cada componente.
Analice el espectro del DFTPP y verifique el cumplimiento de los criterios definidos
en la Tabla para proseguir con la calibracin.
Analice los productos de degradacin del endrn, endrn cetona y endrn aldehido y
del 4,4-DDT, 4,4-DDD y 4,4-DDE. El pico de endrn cetona sale 1,1 a 1,2 veces
el tiempo de retencin del endrn con iones de relacin m/z 67 y 317 en el espectro
de masas. Si la degradacin del endrn y del DDT excede el 20%, es necesario
que realice mantenimiento en el puerto de inyeccin y posiblemente otras reas
antes de realizar la calibracin.
Inyecte 1 L de la solucin de calibracin del punto medio de la curva (0,5 a 2,0
g/L.
Adquiera el espectro de masas de 45-450 uma
En el caso de plaguicidas que dan varios picos como el toxafeno, el clordano o los
contaminantes bifenilos policlorados, inyecte individualmente cada solucin.
Las condiciones de trabajo se describen en la tabla 7
Analice los datos adquiridos, si los componentes son reconocidos inyecte las otras
soluciones de calibracin, compare la sensibilidad con la obtenida para los mismos
compuestos por otros detectores como CE.

Tabla y Tabla 8 para las ltimas 3 de 4 muestras consecutivas y la DER de las

mediciones deber ser menor del 30% de los valores de recuperacin descritos para el
mtodo normalizado de referencia. Con este criterio se determina si la eficiencia es
satisfactoria, caso en el cual se prosigue con el anlisis de las muestras. En caso de no
cumplir las especificaciones para ciertos analitos se debe repetir el anlisis utilizando
agua fresca, las veces necesarias, analizando en cada caso las posibles causas, hasta
que la recuperacin y la DER sean satisfactorios.
El criterio de aceptacin o rechazo es que la recuperacin del analito con que se fortific
el agua deber ser de 30% de la concentracin adicionada y la desviacin estndar
relativa de la medicin (DER) 20%. Una vez que se ha demostrado la capacidad del
laboratorio se podr repetir esta verificacin utilizando solamente 4 alcuotas. En la
Cromatografa de gases/MS Mtodo EPA 525-2


g/L.

Tabla se ilustran los resultados obtenidos en la determinacin del %R con BLF de varias
tipos de agua.
7.2.2. Determinacin del lmite de deteccin (LD)
Para la determinacin del lmite de deteccin se debern analizar al menos 7 Blancos de

laboratorio fortificados (BLF) preparados a una concentracin baja de los diferentes
analitos como recomienda el mtodo en la Tabla 8.
Otra opcin es utilizar un punto de calibracin calculado de manera que genere una
respuesta que sea 3 a 5 veces la seal de ruido. Se recomienda que estos 7 BLF sean
analizados en un periodo de 7 das para reflejar la variabilidad entre das. Una vez
analizados los 7 blancos se debe proceder a calcular la exactitud media y la desviacin
estndar (DE) para cada analito. Con estos resultados calcular el LD segn la ecuacin:
LD S * t( n 1 y 99%)
La demostracin de la capacidad inicial del laboratorio permite inferir que el laboratorio

puede analizar muestras desconocidas por esta nueva metodologa, aplicando las BPL y
los controles incluidos en este numeral.
7.3. Control de calidad
Una vez demostrada la capacidad del laboratorio para aplicar la metodologa, el

laboratorio puede iniciar el anlisis de muestras desconocidas, en este caso debe planear
el lote de corrida el cual estar compuesto por:
Soluciones para la verificacin de la eficiencia del sistema cromatogrfico, tal

como se desarrolla en el numeral 7.3.1

Preparacin, anlisis y evaluacin de los blancos de solventes, de reactivos, de

campo y de laboratorio fortificado de acuerdo a lo indicado en el numeral 7.3.2
Demostracin de la ausencia de interferencias potenciales tal como se indica en el
numeral 7.3.3
Preparacin, anlisis y evaluacin de rplicas de laboratorio tal como se indica en
el numeral 7.3.4
Preparacin, anlisis y evaluacin de las soluciones de calibracin, estndar
interno en caso de que aplique y compuesto sucedneo (surrogate), la preparacin
de las soluciones de calibracin se desarrolla en el numeral 8, la evaluacin se
desarrolla en el numeral 7.3.5
Preparacin, anlisis y evaluacin de muestras de control de calidad internas o de
origen externo de acuerdo a lo indicado en el numeral 7.3.5.4
7.3.1. Uso de Solucin de verificacin de eficiencia (SVL)
La eficiencia del laboratorio deber ser monitoreada mediante la aplicacin diaria del
anlisis de una SVL, la cual contiene compuestos designados para evaluar la sensibilidad
del instrumento en funcin de la deteccin del analito, relacin seal/ruido (S/N)>3. La
eficiencia del sistema cromatogrfico en funcin del factor Gaussiano del pico (PGF) y la
eficiencia de la columna cromatogrfica en funcin de la resolucin como se ilustra en la
Tabla 4.
El Factor Gaussiano del Pico (PGF) se calcula mediante la ecuacin:
1,83 * W(1 / 2)
PGF
W(1 / 10)
donde: W(1/2) = anchura de pico a la mitad de la altura en segundos.
W(1/10) = anchura de pico a la dcima parte de la altura en segundos.
La Resolucin entre picos est definida por la ecuacin

t
R
W
donde: t es la diferencia del tiempo de elucin entre dos picos
W es el promedio de la altura de pico a la lnea base de los dos picos.
En caso que la respuesta del instrumento no satisfaga las especificaciones dadas es

necesario revisar las condiciones del equipo e insumos involucrados en la determinacin
analtica. Los requerimientos de sensibilidad se basan en los LD dados para el mtodo
normalizado. Las concentraciones de los estndares utilizados como SVL pueden
ajustarse de manera que sean compatibles con el LD determinado por el laboratorio.
Tabla 4. Requerimientos para evaluar la eficiencia del laboratorio usando soluciones de

verificacin

Concentracin
Ensayo Analito Requerimientos
g/mL
Deteccin del analito;
Sensibilidad Clorpirifos 0,0020
S/N>3
Eficiencia
DCPA 0,0500 0,80<PGF<1,15a
cromatogrfica
Eficiencia de la Clorotalonil 0,0500
Resolucin >0,50b
columna HCH delta 0,0400
a b
Fuente EPA508 Versin 2.1 1995. PGF Factor Gussiano del pico. Resolucin entre dos picos.
El laboratorio puede adoptar prcticas de control de calidad dependiendo del mtodo.

sto depende las exigencias del laboratorio y la naturaleza de las muestras, se puede
analizar siempre duplicados de muestras de MLF, entre otras.
Se permite la modificacin de algunos factores crticos en el anlisis, tales como columna,

condiciones cromatogrficas o detector, sin embargo, valide la condicin cambiada y
evale que los nuevos resultados cumplan las especificaciones definidas para el mtodo
original.
7.3.2. Uso de blancos
Uno de los requisitos de obligatorio cumplimiento para el control y aseguramiento de la

calidad, incluido en BPL o dentro de un sistema de gestin de calidad desarrollado bajo
cualquier normativa o legislacin, es el anlisis de blancos con cada lote de corrida, que
demuestre que la determinacin cualitativa y cuantitativa del analito es confiable y no
corresponde a respuestas generadas por el agua utilizada en el laboratorio, reactivos,
solventes o interferentes causados durante las etapas de recoleccin, tratamiento,
extraccin y limpieza de la muestra. Los siguientes tipos de blancos se describen para la
aplicacin en esta metodologa:
7.3.2.1. Blanco de solventes (BS)
Prepare y analice un blanco de solvente, para cada nueva botella de solvente antes de ser
utilizada para la extraccin en las muestras. Mida un volumen de solvente igual al utilizado
para la extraccin de las muestras y somtalo a las mismas etapas de concentracin,
inyectando un volumen igual al definido para las muestras y verifique la respuesta
cromatogrfica. No se debe presentar respuesta en la ventana de deteccin o tiempo de
retencin de los analitos. En caso de que esto ocurra, utilice una nueva botella de reactivo
e informe al proveedor sobre el hallazgo, previa verificacin del material de laboratorio,
para eliminar una posible interferencia debido a los elementos de laboratorio utilizados.

7.3.2.2. Blanco de reactivos (BR)
Preparado con el agua utilizada en el laboratorio. Se utiliza para demostrar que los
materiales de vidrio no aportan interferentes, que los reactivos y solventes, estndares
internos y compuestos sucedneos (surrogate) utilizados durante el anlisis no presentan
respuesta analtica que pueda interferir con la del analito. Procese antes que las
muestras. Cada vez que se cambie algn reactivo prepare un nuevo blanco de reactivos,
incluso durante la corrida de un lote de trabajo.
Uso de blanco de reactivos (BR)
Anlisis del blanco de reactivos del laboratorio. (BR). Corra un blanco de reactivos al
menos en los siguientes casos:
Antes de comenzar el proceso analtico de muestras desconocidas
Cada vez que se cambie algn reactivo
Cada vez que se inicie una nueva muestra,
Una vez se haya eliminado la fuente de cualquier contaminacin o interferente
En caso que en el BR se produzca alguna seal en la ventana de tiempo de retencin de

cualquiera de los analitos de inters, estndar interno o compuesto sucedneo
(surrogate), investigue la fuente de contaminacin y elimine la interferencia antes de
procesar muestras
7.3.2.3. Blanco de campo (BC)
Se puede obtener un blanco de campo a partir de una muestra de agua de laboratorio

llevada al sitio de recoleccin, la cual es tratada como una muestra desconocida. Exponga
esta muestra a las condiciones del sitio de muestreo, conservacin y todos los dems
procedimientos analticos. Su finalidad es demostrar si los analitos u otros interferentes
estn presentes en el ambiente del sitio de muestreo.
7.3.2.4. Blanco de laboratorio fortificado (BLF)
Se prepara a partir de una muestra de agua destilada, a la cual se adiciona una alcuota
del analito de concentracin conocida. Se recomienda fortificar con concentraciones 10
veces mayores al LD. Analice como una muestra rutinaria. Procese por lo menos un BLF
por lote de corrida ( en 24 horas de anlisis). Su propsito es determinar que el mtodo
est bajo control y el cumplimiento de los parmetros de desempeo de la metodologa
(precisin y exactitud en el lmite de deteccin).
Uso de blanco de laboratorio fortificado BLF
El laboratorio debe analizar por lo menos un BLF cada 20 muestras o una por lote de
corrida (conformado por las muestras corridas en 24 horas). La fortificacin debe ser

preferiblemente 10 veces el LD. Calcule la exactitud como porcentaje de recuperacin, la

cual se debe encontrar dentro de las especificaciones descritas en el numeral 7.2.1.
Cuando no se cumplen las especificaciones de las muestras fortificadas y de control,

analice las causas, documntelas y tome las acciones correctivas y las preventivas
necesarias que eviten la repeticin de datos fuera de control.
Establezca los lmites mximo y mnimo de la carta control. Si no se cuenta con datos
suficientes para establecer estos valores, puede utilizar los criterios establecidos en el
numeral 7.2.1. Cuando se disponga de datos suficientes, (20 a 30 anlisis) establezca sus
propios lmites de control, para lo cual se realizan las estimaciones aplicando las
siguientes ecuaciones:
Lmite de control superior = R + 3*DE (desviacin estndar)

Lmite de control inferior = X 3*DE
Ajuste estos lmites de control despus de cada 10 nuevas mediciones de la recuperacin,

usando los ltimos 20 a 30 datos para su estimacin sin que se excedan las
especificaciones dadas para la metodologa.
7.3.3. Interferencias potenciales
7.3.3.1. Interferencias del mtodo
Las interferencias en esta metodologa pueden originarse en la contaminacin ocurrida

durante el manejo o debido a la calidad de los solventes, reactivos, limpieza de los
elementos de vidriera, equipo para el procesamiento de las muestras, los cuales pueden
producir seales discretas (artefactos) o aumentar el ruido de la lnea base.
Demuestre de manera rutinaria que todos los reactivos, solventes, elementos de

laboratorio y equipos se encuentran libres de interferencias para lo cual se utilizan los
blancos de laboratorio contemplados en el numeral 7.3.2.
La calidad de los reactivos y solventes debe ser la apropiada para el anlisis de

plaguicidas con el fin de minimizar las interferencias potenciales. En caso de no contar
con los solventes de la calidad requerida destile los reactivos disponibles en vidrio. Tenga
cuidado debido a que en esta operacin se remueven los estabilizadores agregados por el
fabricante por lo cual se reduce su tiempo de vida.
La contaminacin por ftalatos es una interferencia importante cuando se analizan

muestras utilizando el detector de captura de electrones. La contaminacin se origina por
el uso de material de plstico o manipulacin sobre superficies plsticas por lo que la
forma de minimizar esta contaminacin es evitando su uso en cualquiera de las etapas
analticas.

Otra forma de contaminacin sucede cuando se corren muestras desconocidas en el

cromatgrafo. Si una de ellas contiene los analitos en baja concentracin y se analiza
despus de otra que contiene concentraciones altas, es posible que se genere respuesta
mayor en la muestra de baja concentracin, lo cual da lugar a una contaminacin cruzada.
Este problema se puede disminuir realizando una inyeccin o ms de solvente MTBE

despus de la muestra de concentracin alta y para posteriormente volver a analizar la
muestra de concentracin baja.
Se debe tener en cuenta que debido al alcance de la metodologa, algunos compuestos

organoclorados pueden no tener buena resolucin por lo cual es necesario contar con
ms de un sistema cromatogrfico (columna y condiciones de trabajo) con el fin de
mejorar la capacidad de separacin de los analitos. La identificacin depende de la
especificidad del detector con el que se cuente, teniendo en cuenta que el detector que
presenta la mayor probabilidad de identificacin veraz de un compuesto es el de masas.
Los estndares de calibracin, las muestras de control y las muestras para anlisis deben
estar disueltos en el mismo solvente para evitar posibles problemas en la comparabilidad
de los picos cromatogrficos.
7.3.3.2. Interferencias de matriz
Verifique que no se presente contaminacin durante la recoleccin, almacenamiento y

transporte de las muestras. Es requisito indispensable que analice blancos de muestra
para demostrar que no se presenta este tipo de contaminacin y proporcionar validez a
los resultados.
Tenga en cuenta que dependiendo del origen de las muestras, se pueden presentar
interferencias por efecto de matriz. Es ideal que disponga de otras tcnicas para confirmar
que la respuesta obtenida es debida al analito y no a una interferente.
Las interferencias de matriz pueden variar considerablemente dependiendo de la fuente

de las muestras y su diversidad y ocurren por la coextraccin de contaminantes
contenidos en ella.
Tome las muestras de aguas crudas tratadas con cloro a una distancia adecuada antes
del sitio de cloracin, ya que la presencia de concentraciones excesivas de este
componente induce la prdida de algunos constituyentes de la muestra.
Dependiendo de la fuente de la cual sea tomada la muestra se pueden presentar

interferencias, principalmente si son de corrientes de desecho, filtrados de suelo
(lixiviados) o agua de vertimiento. En estos casos se requiere la aplicacin de anlisis
confirmatorio para incrementar la confiabilidad de la identificacin y cuantificacin de
compuestos determinados por el mtodo aplicado.

7.3.4. Rplicas
Uno de los requisitos de obligatorio cumplimiento para el control y aseguramiento de la

calidad, incluido en BPL o dentro de un sistema de gestin de calidad desarrollado bajo
cualquier normativa o legislacin, es el anlisis de rplicas, estas pueden ser:
7.3.4.1. Rplicas de laboratorio (RL)
Trabjelas a partir de dos alcuotas de la muestra analtica, identificadas como RL1 y RL2
(RL: Rplica de laboratorio), analizadas separadamente, aplicando el procedimiento en
idnticas condiciones. Tiene como finalidad determinar la precisin asociada con el
procedimiento en el laboratorio o repetibilidad. Estas rplicas no permiten conocer el
efecto del muestreo, conservacin y almacenamiento de muestras.
7.3.4.2. Rplicas de campo (RC)
Obtngalas por recoleccin en el mismo tiempo y lugar, bajo condiciones iguales de dos
muestras independientes (RC1 y RC2), las cuales se tratan de manera igual durante la
recoleccin, transporte y almacenamiento, es decir en campo, y en el laboratorio. Tienen
como objeto determinar la precisin (Reproducibilidad) asociada con el muestreo,
recoleccin, conservacin, almacenamiento y el procedimiento en el laboratorio.
Evaluacin de las rplicas: si los resultados de las rplicas no se encuentran dentro de los
lmites especificados en cada protocolo analtico en particular, reprocese otras muestras
de rplicas, si nuevamente se encuentran fuera de especificaciones, suspenda el lote de
corrida, busque la causa del problema, tome las acciones correctivas y documntelas.
7.3.5. Soluciones de calibracin
7.3.5.1. Estndares de calibracin (EC)
Son las soluciones preparadas a partir de la solucin concentrada de los estndares

certificados de los analitos, y que contienen estndar interno y compuesto sucedneo
(surrogate). Utilcelas para preparar la curva de calibracin y verificar la respuesta
instrumental frente al analito.
7.3.5.2. Estndar interno (EI)
El estndar interno es un compuesto similar en su estructura y comportamiento analtico

que no forma parte de la muestra. El mejor estndar interno corresponde al derivado
deuterado del analito. Agregue este estndar en cantidad conocida a la muestra y utilcelo
para medir la respuesta relativa de los analitos, compuesto sucedneo (surrogate) y otros
componentes.
Uso de estndar Interno (EI)

Cuando se aplica procedimiento de calibracin con l, monitoree su respuesta (rea o

altura del pico cromatogrfico) en todas las muestras corridas durante cada da de
anlisis. La respuesta del EI en los cromatogramas de cada muestra no podr presentar
una desviacin superior al 30 % en ningn caso.
En caso que la respuesta de una de las muestras sea >30%, optimice las condiciones del
instrumento e inyctelo una segunda alcuota. El criterio de toma de decisin es el
siguiente:
Si la segunda alcuota produce una seal aceptable, informe el resultado para la
muestra.
En caso que la desviacin sea 30%, analice nuevamente la muestra ncluyendo todas
las etapas analticas, utilizando preferiblemente remanente de la misma muestra. En
caso de no disponer de muestra remanente, anote los resultados de la nueva
inyeccin del mismo extracto e informe el resultado como SOSPECHOSO.
Si se sigue presentando respuesta por fuera de especificacin proceda con la verificacin

de un estndar de calibracin y el criterio para la toma de decisin es el siguiente:
Si el estndar de verificacin genera una respuesta cuya desviacin est dentro del
20% del valor esperado, entonces siga el procedimiento aplicando una segunda
inyeccin en cada muestra que incumpla los requerimientos de respuesta.
En caso que la respuesta se desve en ms del 20% del valor esperado, entonces
recalibre siguiendo todo el procedimiento descrito para calibracin (numeral 8.1).
7.3.5.3. Compuesto sucedneos (surrogate) CS
El compuesto sucedneo (surrogate) es un analito puro que no forma parte de la muestra

(se conoce que no va a estar presente en el tipo de muestras a analizar), agrguelo en
una cantidad conocida antes de la extraccin y mdalo de igual manera que los analitos de
la metodologa. Su fin es verificar la capacidad del mtodo para su determinacin en cada
muestra.
Uso del compuesto sucedneo (surrogate) (CS)
Cuando se usa en la metodologa un compuesto sucedneo (surrogate), determine la

recuperacin, la cual se debe encontrar entre el 70% al 130%.
Si la recuperacin es menor al 70% o mayor al 130%, proceda de la siguiente manera
Revise los clculos para detectar posibles errores
Fortifique soluciones para verificar la estabilidad o degradacin del CS
Verifique que no se presente contaminacin
Verifique el desempeo instrumental
En caso de que en estas revisiones no se identifique la causa, reanalice el extracto.

Si en el anlisis de un BLF, la recuperacin del CS no se encuentra entre el 70% al 130%,

identifique el problema e implemente una accin correctiva antes de continuar los anlisis.
Reanalice la muestra y si cumple con el criterio de recuperacin, reporte estos datos, en
caso de no cumplirlo, reporte la muestra como sospechosa.
7.3.5.4. Muestras para control de calidad (MCC)
Obtngala a partir de una muestra de una matriz, la cual puede contener los analitos del
mtodo en niveles conocidos o una muestra de matriz (si se trata de agua es preferible
obtenerla de una fuente externa al laboratorio), la cual es fortificada con una alcuota de
los analitos en un solvente miscible con agua. Tiene como objeto verificar los parmetros
del mtodo con una fuente externa al laboratorio.
7.3.5.5. Matriz de laboratorio fortificada (MLF)
Trabjela a partir de una alcuota de una muestra desconocida, a la cual se le agregan

cantidades conocidas de los analitos, estndar interno y compuesto sucedneo
(surrogate). Analcela de igual manera que las muestras rutinarias. Tiene como finalidad
determinar si la matriz contribuye al sesgo de los resultados analticos. Se debe
determinar la concentracin de los analitos en la muestra inicial, antes de enriquecerla,
para hacer la correccin en la MLF.
7.3.5.6. Controles con matriz de laboratorio fortificada (MLF)
Adicione una concentracin conocida al menos al 5% de las muestras de rutina o una

muestra por serie si stas son muy grandes. La concentracin seleccionada no podr ser
menor que la respuesta de corrida de la muestra que se selecciona para fortificar. En
condiciones ideales, la concentracin para fortificar a matriz deber ser la misma que para
preparar el BLF.
Calcule el porcentaje de recuperacin (%R) para cada analito en funcin de la

concentracin adicionada. Una vez se haya aplicado la correccin del resultado analtico,
siendo X la concentracin obtenida para la muestra fortificada y b la medida en la muestra
sin fortificar
( X b)
%R *100
concentrac in de fortificac in
Compare estos resultados con los lmites de control obtenidos en agua destilada
fortificada (BLF) utilizada en el mismo proceso analtico. El valor para %R debe estar entre
65 - 135% de la cantidad fortificada.
Si la recuperacin de cada uno de los analitos cae por fuera del rango asignado, y el
laboratorio tiene demostrada que la capacidad analtica est bajo control, el resultado
obtenido para la muestra no fortificada se informar como sospechoso con por efectos de
matriz y no del proceso analtico.

7.3.5.7. Uso de controles de calidad de fuente externa
El laboratorio debe analizar por lo menos una muestra cada trimestre de control de calidad
proveniente de una fuente externa. Estas muestras pueden provenir del ejercicio de
participacin en rondas de comparacin interlaboratorial.
7.3.5.8. Uso de la solucin de verificacin de degradacin (SVD)
La degradacin del DDT y el endrn ocurre por exposicin de sitios activos de las
molculas a las condiciones de temperatura del puerto de inyeccin y de las columnas.
Verifique diariamente esta degradacin. Los compuestos originados por el DDT eluyen
antes de ste, mientras que los productos de degradacin del endrn eluyen
posteriormente. Si los productos de degradacin exceden el 20%, vuelva a silanizar el
liner del puerto de inyeccin.
8. CALIBRACIN
8.1. Cromatografa de gases con detector de captura de electrones
Establezca los parmetros de operacin del cromatgrafo de gases de acuerdo con los
equipos e insumos descritos en el numeral 6. El sistema cromatogrfico puede calibrarse
utilizando la tcnica de estndar interno o de estndar externo. Realice la prueba indicada
en el numeral 7.2.1 para verificar la degradacin del DDT y el endrin. En caso de no
cumplir especificaciones, tome el correctivo pertinente.
Realice la cuantificacin por curva o por calibracin punto a punto. Prepare las soluciones
que contienen los estndares para calibracin en forma independiente por grupos de
analitos. Tambin puede preparar de tal manera que analitos que no presentan buena
resolucin bajo las condiciones de anlisis se encuentren juntos. Prepare los estndares
de toxafeno, clordano y los arocloros en forma individual.
8.1.1. Calibracin con estndar interno.
Seleccione uno o ms estndares internos de comportamiento analtico similar a los

analitos de inters y demuestre que la medicin obtenida para el estndar interno no se ve
afectada por el mtodo o por interferencias de matriz. Para este caso el PCNB se
comporta de manera conveniente.
Prepare estndar interno de calibracin (EICAL) en un baln volumtrico segn

recomendaciones del mtodo EPA 508 entre 3 y 5 niveles de concentracin para

cada analito de inters, por adicin de volmenes de una o ms de las soluciones

concentradas de estndares.
Utilice un mnimo de 3 estndares de calibracin para calibrar un rango de
concentracin con un factor de 20; para un factor de 50 utilicer al menos 4
estndares y para un factor de 100 al menos 5.
El estndar ms bajo deber representar la concentracin ms cercana pero
superior al lmite de deteccin del mtodo.
Emplee el estndar sobrante para evaluar el rango esperado de concentracin del
analito en la muestra o para definir el rango de trabajo del detector.
Adicione una cantidad conocida de uno ms estndares internos, para cada uno
de los estndares de calibracin y diluya a volumen con MTBE.
Analice cada uno de los EICAL de acuerdo al procedimiento establecido en el
numeral 9.4 y tabule los resultados utilizando la respuesta en rea o altura de los
picos frente a la concentracin dada para cada compuesto y estndar interno.
Calcule el factor de respuesta (FR) para cada analito y compuestos similares
utilizando la ecuacin:
:
( Aa )(Cei )
FR
( Aei )(Ca)
Donde:
Aa = respuesta para el analito utilizado
Aei= respuesta para el estndar interno
Ca = concentracin del analito utilizado en g/L
Cei= concentracin del estndar interno en g/L
Si el valor del factor de respuesta sobre el rango de trabajo es constante (20% de

la DER o menor) puede usarse para los clculos. Alternativamente los resultados
pueden usarse para trazar una curva de calibracin de relacin de respuesta
(Aa/Aei) vs concentracin del analito a medir (Ca).
Verifique diariamente el factor de respuesta o la curva de calibracin con que se
trabaje o como mnimo deber verificar dos estndares de calibracin, uno al
iniciar y otro al terminar los anlisis diarios. Estos estndares de chequeo debern
ser de diferente concentracin para permitir la verificacin de la curva de
concentracin.
Verifique los estndares de manera intercalada para perodos de anlisis mayores
de 8 horas, con una frecuencia regular de las muestras de anlisis durante el
perodo de trabajo. Si la respuesta para cualquier analito supera la variacin de
20%, repita con estndar de calibracin fresco. Si este resultado no es adecuado
genere una nueva curva de calibracin. Un inyector sucio puede disminuir la
sensibilidad para los compuestos que eluyen tarde en la corrida.
Se recomienda analizar una solucin de verificacin de la calibracin cada da de
trabajo
Si la verificacin de la curva no cumple las especificaciones, los analitos
detectados en el periodo de las 2 curvas (cumple / no cumple) se consideran

sospechosos y se debe reanalizar los extractos luego de tener una calibracin que
pasa la variacin.
Haga peridicamente la verificacin de los estndares, al menos cada 3 a 4 meses
por medio de MCC.
8.1.2. Calibracin con estndar externo.
Prepare estndar de calibracin de la misma forma que se indic en el numeral

8.1. omitiendo el uso del un estndar interno.
Comience con el estndar de calibracin ms bajo y analice cada uno de los
estndares aplicando el procedimiento establecido en el numeral 9.4 y tabule la
respuesta en rea o altura del pico del analito, contra las concentraciones
inyectadas en el estndar en g/L.
Utilice Los resultados para construir la curva de calibracin de cada componente.
Si el cociente de respuesta a la concentracin (Factor de calibracin) es una
constante sobre el rango de trabajo (DER < 20%) asuma linealidad por el origen y
el promedio del cociente o Factor de calibracin puede utilizarse en lugar de la
curva de calibracin.
Verifique tanto la curva de calibracin como el Factor de calibracin en cada da de
trabajo como se aplica con el EI.
Verifique peridicamente los estndares de calibracin, al menos cada trimestre mediante

un estndar preparado con un material de referencia obtenido externamente. Los
resultados de estos anlisis debern encontrarse dentro de los lmites usados en la
verificacin rutinaria de calibracin.
8.2. Cromatografa de gases/MS Mtodo EPA 525-2




g/L.
Tabla 5. Exactitud y precisin de plaguicidas organoclorados

EXACTITUD Y PRECISIN DE PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS PARA AGUA REACTIVO Y AGUA NATURAL FORTIFICADA
(SINTTICA), OBTENIDOS EN EL LABORATORIO
ANALITO CONCENTRACIN AGUA REACTIVO AGUA SINTTICA 1 AGUA SINTTICA 2
ug/L R* DE** R DE R DE
Aldrin 0,15 86 9,5 100 11 69 9
Clordano-alfa 0,15 99 11,9 96 12,5 99 7,9
Clordano-gamma 0,15 99 11,9 96 12,5 99 6,9
Clorneb 5,00 97 11,6 95 6,7 75 8,3
Clorobenzilato 10,00 108 5,4 98 10,8 102 9,2
Clorotalonil 0,25 91 8,2 103 10,3 71 9,2
DCPA 0,25 103 12,4 100 13 101 6,1
4,4'-DDD 0,25 107 6,4 96 8,6 101 7,1
4,4'-DDE 0,10 99 11,9 96 12,5 99 6,9
4,4'-DDT 0,60 112 16,8 98 11,8 84 8,4
Dieldrin 0,20 87 8,7 103 9,3 82 7,4
Endosulfan I 0,15 87 8,7 102 8,2 84 12,2
Endosulfan Sulfato 0,15 102 15,3 94 1,3 72 9,4
Endrin 0,15 88 8,8 98 9,8 104 9,2
Endrin Aldehido 0,25 88 7,9 103 11,3 84 6,8
Endosulfan II 0,15 92 10,1 98 10,8 76 3,9
Etridiazol 0,25 103 6,2 91 6,4 98 7,7
HCH-alfa 0,05 92 10,1 106 7,4 86 6
HCH-beta 0,10 95 6,7 92 5,5 100 6,2
HCH-delta 0,10 102 11,2 99 11,9 103 7,7
HCH-gamma 0,15 89 9,8 115 6,9 85 7,7
Heptacloro 0,10 98 11,8 85 11,1 85 9,8
Heptacloro Epoxido 0,15 87 8,7 103 7,2 82 4,8
Hexaclorobenceno 0,05 99 21,8 82 9,8 68 6,2
Metoxicloro 0,50 105 13,7 101 10,1 104 9,5
cis-Permetrina 5,00 91 9,1 96 11,5 86 7,1
trans-Permetrina 5,00 111 6,7 97 9,7 102 7,6
Propaclor 5,00 103 9,3 116 4,6 95 9,6
Trifluralina 0,25 103 5,2 86 10,3 87 10,3
R*: recuperacin promedio
DE**: desviacin estndar del % de recuperacin
: Agua Absopure Nature Artesian Spring Water (Absopure Water Co, Plymouth; Michigan) valor corregido por la cantidad presente en el blanco
: Agua reactivo fortificada con cido flvico 1 mg/L. cido flvico de International Humic Substances Society. Valor corregido por la cantidad
Determine las reas absolutas de los iones de cuantificacin de los componentes

de la mezcla de calibracin, estndar interno y compuesto sucedneo (surrogate).
Las reas no deben variar ms del 30% de la calibracin ms reciente. En caso de
tener variaciones mayores haga los ajustes (limpieza de la fuente de iones y
mantenimiento que incluye cambio del filamento, limpieza del cuadrupolo, etc.),
hasta alcanzar la sensibilidad y recalibre.
Verifique que el sistema se encuentra dentro de especificaciones mediante el
seguimiento de cartas control.
Calcule el FR de los analitos y el compuesto sucedneo (surrogate), los cuales
deben estar dentro del 30% del promedio del valor medido en la calibracin inicial.
Haga una regresin lineal para los compuestos de inters.
Cuando se cuantifica con concentracin puntual, la respuesta debe estar entre
20% del valor de la concentracin.
Empiece la adquisicin de datos a los 4 minutos

Tabla 6. Especificaciones para la verificacin de la respuesta del detector de masas con el

DFTTP
CRITERIOS PARA ABUNDANCIA DE IONES PARA DECAFLUOROTRIFENILFOSFINA DFTPP
Masa M/z Criterio de abundancia relativa Objeto de la verificacin
51 10-80% del pico base Sensibilidad de masa baja
68 < 2% de masa 69 Resolucin de masa baja
70 < 2% de masa 69 Resolucin de masa baja
127 10-80% del pico base Resolucin de masa media
197 < 2% de masa 198 Resolucin de masa media y sensibilidad
198 Pico base o > 50% de masa 442 Resolucin de masa media
199 5-9% de masa 198 Resolucin de masa media y relacin isotpica
275 10-60% del pico base Sensibilidad de masa media a alta
365 > 1% del pico base Threshold de linea base
441 Presente y < masa 443 Resolucin de masa alta y sensibilidad
442 pico base o > 50% de masa 198 Resolucin de masa alta y relacin isotpica
443 15-24% de masa 442 Resolucin de masa alta
Tabla 7. Condiciones del sistema cromatogrfico para el anlisis de plaguicidas

organoclorados por CG/MS - Mtodo EPA 525-2
Parmetro Condiciones
Rango de masas 45 - 450 uma
Tiempo de scan 1 seg/scan
Temperatura inicial 45C por 1 minuto
45C por 1 minuto
45C hasta 130C en 3 minutos
Rampa de temperatura 130C hasta 180C a 12C/minuto
180Chasta 240C a 7C/minuto
240C hasta 320C a 12C/minuto
Temperatura de Injector 250C - 300C
Temperatura de la lnea de transferencia 250C 300C
De acuerdo a las especificaciones del
Temperatura de la fuente
fabricante
Inyeccin splitless ( se puede utilizar
Inyector
splitless si la sensibilidad lo permite)
Volumen de inyeccin 1- 2 uL
Gas portador Helio a 33 cm/seg
La temperatura del manifold y la corriente
Trampa inica de emisin se deben fijar de acuerdo a las
recomendaciones del fabricante
Fuente: Mtodo EPA 8270 C revisin 3 1996

9. PROCEDIMIENTO
9.1. Tratamiento de la muestra
Realice el pretratamiento inicial de las muestras de acuerdo a lo consignado en el numeral

5.1, 5.2 y 5.3. Registre el volumen de agua recibido. Adicione conservante si no se aplic
antes a cada muestra, BLF, BR y estndares de calibracin (EICAL, EECAL).
9.2. Limpieza de la muestra
9.2.1. Para aguas naturales
Trate las muestras de acuerdo a lo indicado en el numeral 9.4
9.2.2. Para aguas residuales
Trate las muestras de acuerdo a lo indicado en el numeral 9.4
9.2.3. Para sedimentos
Examine la muestra, extraiga los plaguicidas teniendo en cuenta las limitaciones de

solubilidad, estabilidad y recuperacin antes de proceder con la solucin como una
muestra acuosa. El mtodo EPA 8270 para screening de plaguicidas por cromatografa de
gases con detector de masas, describe la siguiente metodologa para sedimentos, basada
en el mtodo de extraccin EPA 3545.
Pese 10 g de sedimento seco, pase al dedal de extraccin y extraiga con mezcla de

acetona/cloruro de metileno, reduzca el volumen a 1,0 mL. Agregue el compuesto
sucedneo y el estndar interno, y contine con la metodologa de determinacin. El
tiempo de estabilidad para plaguicidas organoclorados en este tipo de muestras es de 14
das, almacenados a 14C y en la oscuridad para minimizar la degradacin por efecto de
radiacin UV y por actividad microbiana.
Otro mtodo de extraccin recomendado para sedimentos es la limpieza por Florisil con
remocin de los azufrados. Cuando se trabaja con sedimentos liofilizados se puede
realizar extraccin con Soxhlet, ultrasonido y extraccin lquida presurizada.

Tabla 8. Exactitud, precisin y lmite de deteccin de plaguicidas organoclorados
EXACTITUD, PRECISIN, LMITE DE DETECCIN (LD) Y LMITE DE DETECCIN ESTIMADO (LDE) DE

PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
CONCENTR
LD
ACIN DE RECUPERA LD Mtodo
ANALITO N DER Estimado
FORTIFICA CIN % ug/L
ug/L
CIN ug/L
Aldrin 0,075 7 66 9 0,0140 0,0750
Clordano-alfa 0,015 7 117 8 0,0041 0,0015
Clordano-gamma 0,015 7 109 3 0,0016 0,0015
Clorneb 5,000 8 99 5 2,2000 5,0000
Clorobenzilato 0,025 7 119 12 0,0110 0,0250
Clorotalonil 0,025 7 119 12 0,0110 0,0250
DCPA 0,025 7 112 4 0,0032 0,0250
4,4'-DDD 0,025 7 115 5 0,0044 0,0025
4,4'-DDE 0,010 7 127 6 0,0025 0,0100
4,4'-DDT 0,060 7 87 23 0,0390 0,0600
Dieldrin 0,020 7 77 22 0,0110 0,0200
Endosulfan I 0,015 7 78 25 0,0092 0,0150
Endosulfan Sulfato 0,015 7 129 4 0,0024 0,0150
Endrin 0,015 7 72 18 0,0062 0,0150
Endrin Aldehido 0,025 7 95 15 0,0110 0,0250
Endosulfan II 0,015 7 148 35 0,0240 0,0240
Etridiazol 0,025 7 96 17 0,0130 0,0250
HCH-alfa 0,025 8 94 8 0,0053 0,0250
HCH-beta 0,010 7 95 12 0,0036 0,0100
HCH-delta 0,010 7 84 7 0,0020 0,0100
HCH-gamma 0,015 7 80 16 0,0060 0,0150
Heptacloro 0,010 7 67 7 0,0015 0,0100
Heptacloro Epoxido 0,015 7 71 18 0,0059 0,0150
Hexaclorobenceno 0,005 7 115 43 0,0077 0,0077
Metoxicloro 0,050 7 120 11 0,0220 0,0500
cis-Permetrina 0,500 7 64 24 25,0000 5,0000
trans-Permetrina 0,500 7 122 9 0,1800 0,5000
Propaclor 5,000 7 90 18 0,2500 0,5000
Trifluralina 0,025 7 108 3 0,0026 0,0025
Fuente: Mtodo 508 EPA. Versin 2.1 1995.

N nmero de rplicas. LD estimado con base en una relacin seal/ruido 5 (la concentracin con
la que se estim este valor difiere de la utilizada para determinar el LD del mtodo). DER
desviacin estndar relativa.
9.3. Sistema Cromatogrfico
El sistema cromatogrfico y las condiciones de operacin para la separacin y

anlisis de los plaguicidas organoclorados segn el protocolo tomado de la EPA
608 y se resume en la Tabla 3 a 13 . As mismo los tiempos de retencin de cada
uno de los analitos en funcin del tipo de columna utilizada se ilustra en la Tabla.
Calibre o verifique diariamente las condiciones del sistema cromatogrfico. Los
estndares y muestras debern estar disueltos en MTBE.

Tabla 9. Tiempos de retencin para los plaguicidas organofosforados con dos columnas
cromatogrficas diferentes
TIEMPOS DE RETENCIN
ANALITO COLUMNA 1 COLUMNA 2
Etridiazol 23,46 22,78
Clorneb 25,50 26,18
Propaclor 28,90 30,94
Trifluralina 31,62 ND
HCH-alfa 31,62 32,98
Hexaclorobenceno 31,96 ND
HCH-beta 33,32 40,12
HCH-gama 33,66 35,36
PCNB (estndar interno) 34,00 34,00
HCH-delta 35,02 41,48
Clorotalonil 35,36 39,78
Heptacloro 37,74 36,72
Aldrin 40,12 38,08
Clorpirifos 40,60 ND
DCPA 41,14 41,14
Heptacloro epxido 42,16 42,16
Clordano-gama 43,52 43,86
Endosulfan I 44,20 43,52
Clordano-alfa 44,54 44,54
4,4-DDE 45,90 44,88
Dieldrin 45,90 45,90
Endrin 46,92 ND
Endosulfan II 47,60 51,68
Clorobencilato 47,94 48,28
4,4-DDD 48,28 46,92
Endrin aldehido 48,62 46,92
Endosulfan sulfato 49,98 49,30
4,4-DDT 50,32 50,32
Metoxicloro 53,38 53,72
cis-permetrina 58,48 ND
trans-permetrina 58,82 ND
DCB 64,10 ND
ND: Dato no disponible Fuente: EPA 508 Versin 2.1 1995
9.4. Anlisis
9.4.1. Extraccin lquida / lquida de plaguicidas organoclorados
9.4.1.1. Extraccin manual
Marque en el recipiente que contiene la muestra el menisco para la posterior

determinacin del volumen.
Fortifique la muestra con 50 L de la solucin de compuesto sucedneo (surrogate) y
coloque en un embudo de separacin de 2 L. Trate de igual manera los BL, BLF y
dems muestras para control de calidad que acompaan al lote de anlisis.

Ajuste el pH de las muestras o los estndares a 7 por adicin de 50mL de buffer de

fosfatos. Verifique el pH y ajstelo hasta obtener el valor indicado.
Agregue 10 g de NaCl a la muestra, tape y agite para disolver la sal.
Agregue 60 mL de cloruro de metileno al frasco que contiene la muestra, tape y agite
por 30 segundos para enjuagar las paredes internas.
Transfiera la muestra con solvente al embudo de separacin y agite vigorosamente
por dos minutos permitiendo igualar presiones durante la agitacin.
Deje en reposo por lo menos 10 minutos para la separacin de las fases, en caso de
presentarse emulsin entre las fases en ms de 1/3 del volumen de la capa orgnica,
utilice medios mecnicos como centrifugacin, agitacin y filtracin por lana de vidrio u
otro medio fsico para romper la emulsin.
Separe la fase orgnica que contiene el cloruro de metileno en un erlenmeyer de 500
mL.
Agregue otra alcuota de 60 mL de cloruro de metileno al embudo que contiene la
muestra y repita la extraccin.
Combine los extractos del solvente en el erlenmeyer
Realice una tercera extraccin de la misma manera.
Determine el volumen de muestra original, llenando el frasco que contena la muestra
con agua, hasta la marca hecha al inicio de la extraccin. Transfiera el agua a una
probeta de 1000 mL. Registre el volumen con precisin de 5 mL.
9.4.1.2. Extraccin automtica
La extraccin automtica presentada se realiza en un sistema mecnico de agitacin por

rotacin.
Marque en el recipiente que contiene la muestra el menisco para la posterior

determinacin del volumen
Fortifique la muestra con 50 L de la solucin de compuesto sucedneo (surrogate) y
coloque en un embudo de separacin de 2L. Trate de igual manera los BL, BLF y
dems muestras para control de calidad que acompaan al lote de anlisis.
Ajuste el pH de las muestras o los estndares a 7 por adicin de 50 mL de buffer de
fosfatos. Verifique el pH y ajstelo hasta obtener el valor indicado.
Vierta la muestra en el recipiente del equipo para la agitacin
Agregue 10 g de NaCl a la muestra, tape y agite para disolver la sal.
Agregue 300 mL de cloruro de metileno al frasco que contiene la muestra, tape y agite
por 30 segundos para enjuagar las paredes internas. Iguale presiones
Transfiera la muestra con solvente al recipiente del equipo y agite por una hora. Se
debe observar mezcla completa entre la fase orgnica y la muestra durante los dos
primeros minutos de la agitacin.
Quite el frasco del equipo de agitacin, pase el contenido a un embudo de separacin
de 2 L.
Deje en reposo por lo menos 10 minutos para la separacin de las fases. En caso de
presentarse emulsin entre las fases en ms de 1/3 del volumen de la capa orgnica,

utilice medios mecnicos como centrifugacin, agitacin y filtracin por lana de vidrio u
otro medio fsico para romper la emulsin.
Pase la fase orgnica a un erlenmeyer de 500 mL.
Determine el volumen de muestra original, llenando el frasco que contiene la muestra
con agua, hasta la marca hecha al inicio de la extraccin, transfiera el agua a una
probeta de 1000 mL. Registrar el volumen con precisin de 5 mL.
9.4.2. Concentracin del extracto
Utilice un equipo de concentracin Kuderna-Danish KD de 500 mL de capacidad y

tubo concentrador de 25 mL.
NOTA: se pueden utilizar otros sistemas de concentracin que cumplan las
especificaciones dadas para la metodologa.
Seque el extracto orgnico (cloruro de metileno) pasndolo por una columna de
secado, de vidrio, que contenga aproximadamente 10 g de sulfato de sodio anhidro.
Coloque el extracto seco en el baln del Kuderna-Danish KD
Enjuague la columna con aproximadamente 20 a 30 mL de cloruro de metileno y
reuna este solvente con el extracto seco anterior.
Otra forma de secado puede efectuarse agregando 5 g de sulfato de sodio anhidro al
erlenmeyer, agitar, dejar en reposo por 15 minutos para la decantacin de la sal y
transvasar el solvente al baln del KD, enjuague el sulfato de sodio con porciones de
25 mL de cloruro de metileno y reuna con el extracto anterior.
Coloque unas perlas de ebullicin limpias en el KD, una al baln de KD una columna
macro-Snyder prehumedecida con 1 mL de cloruro de metileno.
Coloque el equipo KD ensamblado totalmente y con el solvente a evaporar en un bao
de agua a 65C 70C, de tal manera que el tubo concentrador quede parcialmente
sumergido en el agua caliente, asegurando que la superficie del baln del KD queda
expuesta al vapor caliente.
Ajuste la posicin del KD a medida que progresa la concentracin de tal manera que
se alcance la evaporacin en 15 a 20 minutos, quedando un remanente de
aproximadamente 2 mL.
Quite el KD del bao de agua, deje que el solvente drene en el tubo concentrador y
enfre por 10 minutos aproximadamente.
Remueva la columna Snyder y enjuague la parte interna y la unin esmerilada con
aproximadamente 1 a 2 mL de MTBE, recogiendo el solvente de enjuague en el tubo
concentrador. Deje drenar y retire la columna Snyder.
Pase el solvente a un tubo concentrador de 10 mL
Transvase la solucin del tubo concentrador y enjuague con 5 a 10 mL de MTBE,
agregando todas las soluciones al tubo concentrador y otras perlas de ebullicin
nuevas
Una una columna micro-Snyder al tubo concentrador, prehumedezca la columna con
0,5 mL de MTBE.
Coloque el sistema de micro-Snyder (tubo y columna), en un bao de agua de tal
manera que el tubo quede sumergido parcialmente en el agua caliente.

Ajuste la posicin del KD a medida que progresa la concentracin de tal manera que
se alcance la evaporacin en 5 a 10 minutos, quedando un remanente de
aproximadamente 2 mL.
Quite el KD del bao de agua, deje que el solvente drene en el tubo concentrador y
enfre por 10 minutos aproximadamente.
Remueva la columna micro-Snyder y enjuagar la parte interna y la unin esmerilada
con aproximadamente 0,5 a 1 mL de MTBE, recogiendo el solvente de enjuague en el
tubo concentrador. Deje drenar y retire la columna micro-Snyder.
Ajuste el volumen final a 5 mL con MTBE.
Pase el solvente a un vial de tamao apropiado con tapa rosca con recubierta interna
de TFE, tape y guarde a temperatura de 4C (Refrigeracin) para su anlisis
cromatogrfico.
Si el anlisis se va a realizar con estndar interno, agregue 50 L de la solucin de
estndar interno, tape y agite para distribuirlo en la solucin.
NOTA: Remueva completamente el cloruro de metileno de tal manera que el extracto final
se encuentre libre de este solvente debido a que causa problemas sobre el
detector de captura de electrones.
NOTA: Mantenga los extractos para anlisis a temperatura de 4C, protegidos de la luz.
Estudios de estabilidad han demostrado que la estabilidad de los analitos se
mantiene en estas condiciones por un periodo de 28 das, sin embargo se
recomienda un periodo mximo de almacenamiento de 14 das.
9.4.3. Anlisis cromatogrfico
Inyecte 1 a 2 L de los extractos provenientes de los blancos, muestras de campo y

de laboratorio fortificadas, muestras de control de calidad interno y externo, soluciones
de calibracin y muestras desconocidas. Ajuste el sistema de manejo de datos para
obtener la respuesta de los picos cromatogrficos en rea o altura.
Si la respuesta obtenida para el pico excede el rango de trabajo del sistema diluya la
muestra y reanalice.
9.5. Identificacin de analitos
La identificacin de los analitos se hace por comparacin de los tiempos de retencin

con los tiempos de retencin del cromatograma de referencia.
Considere positiva la identificacin, si el tiempo de retencin del pico del analito en la
muestra se encuentra dentro de la ventana especificada en el protocolo.
Estime el ancho de ventana del tiempo de retencin con base en la respuesta de los
estndares de calibracin analizados durante el da. Puede calcular el tamao de
ventana para cada compuesto estimando 3*DE del tiempo de retencin del
compuesto.
La interpretacin del cromatograma requiere de experiencia cuando:

Los componentes de la muestra no se resuelven cromatogrficamente

Los picos representan ms de un componente de la muestra (picos ensanchados, con
hombros, con valles entre dos o ms mximos).
Existe duda sobre la identificacin de un pico en un cromatograma
Para CG/MS, identifique tentativamente los picos con base en el tiempo de retencin y
la ventana preestablecida ( 5 seg del tiempo de retencin del estndar ms cercano).
Analice la abundancia de los iones de los componentes del cromatograma
Compare el espectro de masas (despus de la sustraccin de la seal de base o
background) al espectro de referencia en la base de datos creada
NOTA: En caso que ocurran estas situaciones, se requiere que disponga de tcnicas
alternativas apropiadas que ayuden a confirmar la identificacin de los picos.
Generalmente puede acudir al uso de otro tipo de detector que responda a un
principio fsico o qumico diferente del original tal como espectrometra de masas, o
la aplicacin de una tcnica de separacin diferente a la inicial.
Tabla 3. Cuadro resumen del sistema cromatogrfico
EPA 508 EPA 508

Parmetro
Columna 1 Columna 2
Columna 1 o primaria: Slice
Columna 2 o alternativa: Slice
fundida de 95% de dimetil 5%
fenil polisiloxano de 30 m de
longitud x 0,25 mm de
Columna 1 o primaria longitud x 0,25 mm de dimetro
dimetro interno y 0,25 m de
interno y 0,25 m de espesor,
espesor, crosslinked, tipo DB-
crosslinked, tipo DB-1701 (J&W
5 (J&W Scientific) o
Scientific) o equivalente
equivalente.
Gas portador Helio de alta Gas portador Helio de alta
Fase mvil pureza para cromatografa de pureza para cromatografa de
gases gases
Velocidad lineal del gas
30 cm/min 30 cm/min
de arrastre
Programacin de temperatura Programacin de temperatura
Temperatura del horno de 60C a 300C, con rampa de 60C a 300C, con rampa de
de 4C/minuto 4C/minuto
Programacin de temperatura Programacin de temperatura
Temperatura del horno de 60C a 300C, con rampa de 60C a 300C, con rampa de
de 4C/minuto 4C/minuto
Temperatura del
250C 250C
inyector
Volumen de
2 L 2 L
Inyeccin

Continuacin Tabla 4. Cuadro resumen del sistema cromatogrfico
EPA 508 EPA 508

Parmetro
Columna 1 Columna 2
Splitless con tiempo de 45 seg de Splitless con tiempo de 45 seg de
Modo de inyeccin
delay delay
Detector Captura de electrones Captura de electrones
Temperatura del
320C 320C
detector
Tabla 11. Cuadro resumen de las condiciones de trabajo de 3 columnas utilizadas en el

mtodo EPA 8141 B
EPA 8141 B EPA 8141 B

Parmetro
Columna DB-210 y SPB-608 Columna DB 5 o equivalente
Gas portador
5 mL/minuto 5 mL/minuto
He - flujo
Temperatura
50C por un minuto 130C por 3 minutos
inicial
180C por 10 minutos
140C por 10 minutos
Rampa de 180C hasta 250C a 2C/minuto
temperatura 250C por 15 minutos o hasta el
240C por 10 minutos o hasta el final
final de elucin de los
de elucin de los compuestos
compuestos
Fuente: Mtodo EPA 8141 B revisin 2 2000
Tabla 12. Cuadro resumen de las condiciones del sistema cromatogrfico para columnas
de 30 m - columna dual - Mtodo EPA 8141 B
EPA 507 EPA 507

Parmetro
Columna 1 Columna 2
Columna 2 o alternativa: Slice
Columna 1: Slice fundida de 95% de
dimetil 5% fenil polisiloxano de 30 m
de longitud x 0,53 mm de dimetro
Columna 1 longitud x 1,0 mm de dimetro
crosslinked, tipo DB-5 (J&W
crosslinked, tipo DB-210 o
Scientific) o equivalente.
equivalente
Gas de arrastre
Helio de alta
pureza para 6 (mL/min) Helium
cromatografa
de gases Flujo

Continuacin Tabla 5. Cuadro resumen de las condiciones del sistema cromatogrfico

para columnas de 30 m - columna dual - Mtodo EPA 8141
EPA 507 EPA 507

Parmetro
Columna 1 Columna 2
Velocidad del
20 (mL/min) Helium
gas de make up
Temperatura del 120 EC (3-min hold) to 270EC (10-min hold) at 5 EC/min
horno 120C (manteniendo 3 min) a 270C (manteniendo 10 min ) a 5C/min
Temperatura del
250C
inyector
Volumen de
2 L
inyeccin
Modo de
Flash vaporizacin
inyeccin
Solvente Hexano
Detector Nitrgeno / Fsforo
Temperatura del
300C
detector
Temperatura de
250C
la perla
Fuente: Mtodo EPA 8141 B revisin 2 - 2000
Tabla 6. Condiciones del sistema cromatogrfico para el anlisis de plaguicidas

organoclorados por CG/MS - Mtodo EPA 8270 C
Parmetro Condiciones
Rango de masas 35 500 uma
Tiempo de scan 1 seg/scan
Temperatura inicial 40C por 4 minutos
Rampa de temperatura 40C hasta 270C a 10C/minuto
Temperatura final 270C hasta que finalice la elucin
Temperatura del Inyector 250C - 300C
Temperatura de la lnea de transferencia 250C 300C
De acuerdo a las especificaciones del
Temperatura de la fuente
fabricante
Inyeccin splitless (se puede utilizar
Inyector
splitless si la sensibilidad lo permite)
Volumen de inyeccin 1- 2 L
Gas portador Hidrgeno 50 cm/seg Helio a 30 cm/seg
La temperatura del manifold y la corriente
Trampa inica de emisin se deben fijar de acuerdo a las
recomendaciones del fabricante
Fuente: Mtodo EPA 8270 C revisin 3 - 1996

10. CLCULOS Y EXPRESIN DE RESULTADOS
10.1. Clculos
Determine la concentracin de las muestras por comparacin directa en la curva de

calibracin de estndares utilizando la ecuacin generada por ella, no as la que se
usa para verificacin permanente. En caso de no haber realizado curva de calibracin
se puede hacer el clculo con base en la respuesta del calibrador utilizado.
Determine la concentracin de los compuestos individuales en la muestra utilizando la
siguiente ecuacin:
( Ax )(Cs )
Cx
( As )( FR )
donde: Cx = concentracin del analito en g/L

Ax = respuesta del analito de la muestra
As = respuesta del estndar (externo o interno) en unidades consistentes con las
unidades utilizadas para la respuesta del analito.
FR = factor de respuesta (con un estndar externo FR=1 porque el estndar es el
mismo compuesto medido como analito)
Cs = Concentracin del estndar interno o externo que produce una seal As en
g/L.
10.2. Reporte de resultados
Reporte los resultados en g/L sin hacer correccin de los resultados por la recuperacin
11. OBSERVACIONES
11.1. Seguridad y riesgo
Tenga cuidado en el manejo de los reactivos y estndares utilizados en el anlisis debido

a que su toxicidad o carcinogenicidad no han sido evaluados en forma definitiva.
Cada compuesto manipulado debe ser considerado como potencialmente peligroso para
la salud y se debe minimizar la exposicin.
Mantenga las fichas de seguridad de las sustancias utilizadas en la aplicacin de esta

metodologa, las cuales deben ser conocidas por los analistas o tcnicos que manejan
estas sustancias.
Tenga precaucin durante la purificacin de solventes debido a que se remueven los

estabilizadores agregados, lo cual puede generar riesgos para su manejo. El ter dietlico
tiende a formar perxidos explosivos por lo cual debe manejarlo con cuidado y, si es

necesario, estabilcelo haciendo reflujo sobre aleacin de plomo y sodio granulado

durante 8 horas, destilando en vidrio y agregando metanol al 2%.
11.2. Manejo ambiental
La metodologa empleada, utiliza volmenes altos de solventes, por lo cual se recomienda

que tenga un sistema de recuperacin de solventes o de reciclaje, lo cual ayuda a
minimizar la contaminacin ambiental y el riesgo ocupacional.
11.3. Disposicin de residuos
Cumpla con la normatividad vigente en el pas, sobre disposicin de residuos slidos,

lquidos y emisiones en general provenientes de actividades analticas.
12. VALIDACIN
Para realizar una validacin parcial o total de los parmetros de desempeo de la

metodologa, evale previamente al menos los siguientes aspectos
Verifique la calibracin y el mantenimiento de los instrumentos utilizados en las
metodologas, balanza analtica, HPLC.
Verifique el cumplimiento de las especificaciones para los instrumentos de
medicin.
Verifique las condiciones ambientales en las que se desarrollan las metodologas
12.1. Verificacin de la idoneidad del sistema cromatogrfico
Evale la idoneidad del sistema cromatogrfico mediante la determinacin del nmero de

platos tericos, el factor de asimetra, la resolucin, el factor de separacin alfa, el factor
de capacidad y la desviacin estndar relativa de la rplica del estndar, al inicio del
estudio y con cada lote de muestras analizadas.
12.2. Determinacin de los parmetros de desempeo de la metodologa
El diseo metodolgico para la validacin de mtodos cuantitativos comprende la

determinacin de los siguientes parmetros de desempeo:
Especificidad /Selectividad (Incluye la determinacin de las posibles interferencias)
Linealidad (rango lineal)
Precisin: evalela a travs de la repetibilidad y la precisin intermedia
(reproducibilidad)
Lmite de deteccin y de cuantificacin
Exactitud
Robustez
Clculo de la Incertidumbre

12.2.1. Especificidad
Evale muestras de blanco de reactivos y blancos de matriz diferentes para la

determinacin de este parmetro.
12.2.2. Linealidad
Determine la relacin entre las variables dependiente e independiente (X, Y), a travs del
anlisis de una curva de calibracin obtenida por lo menos con 6 niveles en el rango de
trabajo terico. El nmero de rplicas por nivel es 10. Analice blancos de reactivos y de
matriz conjuntamente.
12.2.3. Precisin
Determine este parmetro en los niveles de Repetitividad (o repetibilidad) y precisin

intermedia o reproducibilidad.
Repetibilidad: determine aplicando el mtodo a muestras con por lo menos 6

replicas, con niveles del analito en el rango de trabajo; realizados el mismo da, por
el mismo analista.
Precisin intermedia: determine aplicando el mtodo a muestras con entre 6 y 10
rplicas, con niveles del analito en el rango de trabajo; realizados en diferente da.
12.2.4. Lmites de deteccin y cuantificacin.
Evale estos parmetros con base en la respuesta promedio del blanco y su desviacin
estndar. Para su determinacin se analice 10 rplicas de blancos de reactivos.
Lmite de deteccin = promedio del blanco + 3*Desviacin estndar

Lmite de cuantificacin = promedio del blanco + 10*Desviacin estndar
12.2.5. Exactitud.
Estmela por medio de la recuperacin del analito
12.2.6. Robustez.
Aplique el mtodo de Youden para la evaluacin de la robustez. Seleccione 7 parmetros

de cada metodologa, a los cuales se les harn modificaciones ligeras y se observar la
respuesta analtica.

13. BIBLIOGAFA COMPLEMENTARIA
Glaser, J.A., Foerst, D.L., McKee, G.M., Quave, S.A., and Budde, W.L. Trace
Analyses for Wastewaters, Environ. Sci. Technol., 15, 1426, 1981.
ASTM Annual Book of Standards, Part 31, D3694, Standard Practice for Preparation
of Sample Containers and for Preservation, American Society for Testing and
Materials, Philadelphia, PA, p. 679, 1980.
OSHA Safety and Health Standards, General Industry, (29 CRF 1910), Occupational
Safety and Health Administration, OSHA 2206, (Revised, January 1976).
ASTM Annual Book of Standards, Part II, Volume 11.01, D3370-82, Standard
Practice for Sampling Water, American Society for Testing and Materials,
Philadelphia, PA, 1986.

Determinacionde Organocloradosen Aguas

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Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales

Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial Repblica de Colombia

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 1 de 49

Describir la metodologa para la determinacin de plaguicidas organoclorados en agua

2.1. Analitos y matrices

Este protocolo describe varios mtodos de multiresiduo para la identificacin y la

Dependiendo de las condiciones de corrida en los mtodos tomados como referencia, en

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 2 de 49

En la metodologa para la determinacin de multicomponentes es necesario realizar la

Los analitos incluidos en las metodologas de la referencia de EPA se describen en la

Tabla 1. Plaguicidas organoclorados de acuerdo al alcance de cada mtodo EPA.

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 3 de 49

La metodologa analtica se basa en las referencias documentadas en la bibliografa.

2.3. Seleccin de la metodologa

Diversos organismos internacionales han desarrollado y validado metodologas para el

En Europa, se cuenta con la Comisin Europea (European Comision) la cual emite

Tabla 2. Metodologas para el anlisis de Plaguicidas Organoclorados

ORGANISMO IDENTIFICACIN DEL MTODO CARACTERSTICAS

Mtodo 508 Plaguicidas organoclorados en agua

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 4 de 49

Continuacin Tabla 2. Metodologas para el anlisis de Plaguicidas Organoclorados

ORGANISMO IDENTIFICACIN DEL MTODO CARACTERSTICAS

Compuestos clorados en agua por

Plaguicidas organoclorados por

Standard Plaguicidas organoclorados en agua

2.4. Idoneidad del analista

3. CARACTERSTICAS DE LOS ANALITOS

3.1. Aldrn8 (EHC 91, 1989) y Dieldrn9 (HSG 21, 1989)

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 5 de 49

El Dieldrn tiene un punto de fusin de 175-176C. Su presin de vapor es 0,4 mPa a

El Aldrn se utiliza principalmente como insecticida en suelos, en el cual se encuentra

El alfa Hexaclorociclohexano es subproducto importante (65-70%) en la fabricacin del

El beta Hexaclorociclohexano es subproducto (7-10%) en la fabricacin del lindano. Su

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 6 de 49

evaporada en el suelo. La bioconcentracin es ms alta y la eliminacin es ms lenta para

El gama Hexaclorociclohexano (Lindano) es un slido cristalino incoloro que funde a

3.3. Endrn (EHC 130, 1992)12

La volatilizacin ocurre despus de su aplicacin en los suelos y cosechas y depende

Cuando es sometida a calentamiento alrededor de 200C como ocurre durante la

El Alaclor es un compuesto slido cristalino blanco o crema, combustible de punto de

3.5. Propaclor (EHC 147, 1993)14

Propaclor (2-cloro- N-(1-methiletil)- N-fenil acetamida). Compuesto slido que funde a

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 7 de 49

El Propaclor se volatiliza en la superficie del suelo siempre que ste se encuentre

3.6. Arocloro (EHC 140, 1992, 2nd edition)15

Los PCBs son prcticamente insolubles en agua, pero disuelven fcilmente en

N-butoximetil 2-cloro-2,6-dietilacetanilida es un lquido de color mbar con punto de

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g/kg en diclorometano; 118 g/kg en dimetilformamida; 89 g/kg en xileno. Es estable a

3.13. DBCP (1,2 dibromo-3-cloropropano)18

3.14. DDT y sus derivados 19

El p,p-DDT corresponde a 1,1-(2,2,2-tricloroetilideno)-bis(4-clorobenceno). Este

Tetracloro isoftallonitrilo. Es un slido cristalino inodoro que funde a 250-251C y presin

Etil 3-triclorometil 1,2,4-tiadiazol-5-il-eter es un lquido de color amarillento, con presin de

La cromatografa de gases es un mtodo de separacin y cuantificacin en la cual los

Cdigo: XXXXXX Fecha: 31/01/2009 Versin: 01 Pgina 10 de 49

El detector de captura electrnica es uno de los ms utilizados en anlisis ambiental

El eluyente de la muestra procedente de la columna pasa sobre un emisor de radiacin

Otro detector utilizado para compuestos organofosforados es el de captura de electrones

El detector de mayor uso a nivel ambiental para confirmar la presencia de compuestos

5. CONSIDERACIONES PARA EL MANEJO DE MUESTRAS

5.1. Recomendaciones para la recoleccin de las muestras