BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS DE MICROBIOLOGIA Y

PARASITOLOGIA
INTRODUCCIN
Los laboratorios de microbiologa constituyen ambientes de trabajo
especiales, que pueden presentar riesgos de enfermedades infecciosas para
las personas que se encuentren en o cerca de ellos. El trabajo diario en el
laboratorio es un trabajo de grupo, en donde la actitud de cada uno de los
integrantes ante las prcticas, as como el entrenamiento que posean en las
tcnicas requeridas para el manejo de material contaminado, determinan su
propia seguridad, as como la de sus compaeros y la de la colectividad en
general.
Es por ello que antes de comenzar con las actividades prcticas, todas las
personas involucradas (estudiantes y profesores) tenemos la obligacin de
conocer cules son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio de
manera tal, que el trabajo se realice con un riesgo mnimo de exposicin,
tanto para las personas que lo ejecutan como para el medio ambiente. El
objetivo de esta lectura, es ofrecerle al estudiante una gua que contribuya
a lograr un ambiente de trabajo adecuado y seguro, durante la ejecucin de
las actividades prcticas en el Laboratorio de Microbiologa.
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD
Bioseguridad
La seguridad biolgica o bioseguridad, es la aplicacin del conocimiento, de
las tcnicas y de los equipos necesarios para prevenir la exposicin del
personal, del rea de laboratorio y del medio ambiente a agentes
potencialmente infecciosos o biopeligrosos.
Agentes Biopeligrosos
Son todos aquellos agentes biolgicos y materiales que son potencialmente
peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre ellos
podemos citar: bacterias, virus, hongos, parsitos, productos
recombinantes, alrgenos, priones, etc. Riesgo Microbiolgico El Riesgo
Microbiolgico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad
prctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulacin de cultivos de
microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy
elevadas y pueden llegar a provocar una infeccin si no son manipulados
adecuadamente.
Para que se produzca un accidente por un agente biolgico deben estar
presente bsicamente 4 elementos: un husped susceptible, un agente
infeccioso, una concentracin suficiente de ste y una ruta de transmisin
adecuada; siendo este ltimo punto el que mejor se puede controlar en el
laboratorio.
Vas de Infeccin
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a travs de: la boca, los
pulmones, la piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. Las vas de
contaminacin ms frecuentes en el laboratorio se dan a travs de:
 La boca Comer, beber y fumar en el laboratorio. Realizar transferencias
con pipetas sin utilizar ningn tipo de proteccin. Transferencia indirecta de
microorganismos a travs de los dedos o utensilios contaminados (lpices,
bolgrafos, etc.).
La piel Inoculacin accidental con una aguja hipodrmica u otros
instrumentos punzantes o de vidrio. Cortaduras o rasguos.
Los ojos Salpicaduras de materiales infecciosos. Transferencia indirecta de
microorganismos a travs de los dedos contaminados.
Los pulmones Inhalacin de microorganismos transportados por el aire
(aerosoles). En los Laboratorios de Microbiologa de la Facultad de Farmacia
estamos seguros que comprendiendo y teniendo conocimiento de todos
estos posibles riesgos, aprendiendo y ejecutando las tcnicas adecuadas,
contribuiremos con una parte importante e integral del proceso de
educacin, as como tambin a reducir el nmero de accidentes en el
laboratorio y en futuras actividades fuera de l.
MEDIDAS EN CASO DE EMERGENCIA
A continuacin mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso de
que ocurran los siguientes accidentes:
Derrame de material biolgico sobre el cuerpo: Remover la ropa
inmediatamente. Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua y jabn
por un minuto. Reportar el incidente al profesor. Buscar atencin mdica si
es necesario. La ropa contaminada debe ser colocada en una solucin
desinfectante antes de ser lavada.
Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos: Lavar
inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del prpado con
abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para
asegurar efectivamente el lavado, comenzando por los prpados. Reportar
el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
Cortadas menores y heridas por pinchazo: Lavar vigorosamente la herida
con agua y jabn por varios minutos. Aplicar un antisptico adecuado
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
En el caso de derrames: Reportar el incidente al profesor. Colocarse
guantes y cubrir con papel absorbente el rea del derrame. Verter un
desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo necesario. Retirar el
material absorbente junto al material roto y colocarlos en un recipiente para
residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual debe esterilizarse junto
con los guantes utilizados. Limpiar y desinfectar nuevamente el rea
empleando nuevas toallas de papel y desinfectante. Lavarse las manos con
abundante agua y jabn
El xito de estas normas depende de la sinceridad, la constancia, la
participacin activa y cooperativa de cada estudiante, por ello antes de
 asistir al laboratorio, deben leer el fundamento y las actividades a realizar,
para as evitar posibles accidentes, con el conocimiento y las tcnicas de
trabajo apropiadas.

NIVELES
Relacin de los grupos de riesgos con los niveles de Bioseguridad
Nivel 1. Bsico.
Nivel 2. Bsico.
Nivel 3. Contencin.
Nivel 4. Contencin Mxima.
Nivel de Bioseguridad 1 (Bsico)
Los laboratorios BSL-1 trabajan con agentes menos peligrosos y que no
representan una amenaza para la salud humana; es decir, que requieren
menos precauciones.
Dentro de los agentes estudiados en los laboratorios de nivel de
Bioseguridad 1, se incluyen:
Bacilus subtilis.
Naegeria gruberi.
Virus de hepatitis canina infecciosa.
Especies de E. coli.

Algunas de las prcticas estandarizadas para este nivel:

Lavado frecuente de manos, especialmente despus de quitarse los
guantes y antes de salir del laboratorio.
No fumar, comer, beber, o almacenar alimentos en el laboratorio.
Cuidado para minimizar salpicaduras y acciones que pudieran crear
aerosoles (gotas minsculas).
Tener precauciones al usar objetos punzantes, lo que incluye el uso
de contenedores especiales para desecho de agujas y otros objetos
punzantes.
Mantenimiento de un programa de control de insectos y roedores.)
Uso de equipo de proteccin personal (tales como batas de
laboratorio, guantes de ltex, y proteccin para los ojos o mscaras
para el rostro, segn sea necesario dependiendo del tipo de trabajo
que se realice).
Nivel de Bioseguridad 2 (Bsico)
Se requiere para trabajar en estos laboratorios generalmente con cualquier
derivado de sangre humana, otros fluidos corporales, o tejidos en los cuales
halla presencia de un agente patgeno. Los principales peligros a los que
puede exponerse en estos laboratorios son:
 Pinchazos accidentales con agujas. Infeccin mediante la
exposicin de ojos y nariz.
Ingestin de materiales infecciosos.
Algunos de los organismos que se trabajan en estos laboratorios:
Virus del sarampin.
Salmonellas.
Especies de Toxoplasmas.
Clostridium botolinum.
Virus hepatitis B.

Adems de las prcticas estandarizadas del BSL-1, se suman las siguientes:

Polticas especiales y procedimientos para restringir el acceso al
laboratorio mientras se desarrollan trabajos.
Seales de advertencia de peligro biolgico desplegado fuera del
laboratorio.
Vigilancia del personal de laboratorio al cual se le ofrece inmunizacin
adecuada.
Manual de bioseguridad.

Nivel de Bioseguridad 3 (Contencin)

Estos laboratorios deben utilizarse, cuando el trabajo de laboratorio se
realiza con agentes nativos o exticos que puedan ser transmitidos por va
respiratoria (aerosol) y que pueden causar infecciones serias y
potencialmente letales. Principales diferencias a los otros niveles:
1. Cdigo de prcticas.
2. Diseo de instalaciones.
3. Vigilancia mdico-sanitaria.
Algunos de los ejemplos de cdigos de prcticas:
Seales de advertencia.
Ropa protectora adecuada.
Equipo de proteccin respiratoria.
Diseo de las instalaciones:
El aire que sale del laboratorio debe ser filtrado.
El laboratorio debe tener presin de aire negativa respecto al edificio.
Las ventanas deben estar cerradas hermticamente y llevar cristales
resistentes.
Algunos de los agentes estudiados en este laboratorio:
Tuberculosis.
Virus de encefalitis.
Tularemia.
Coxiella burnetti.
Nivel de Bioseguridad 4(Contencin Mxima)
En estos laboratorios se trabajan con microorganismos que se transmiten
rpidamente, los que son un riesgo elevado para el individuo y para la
comunidad. Ellos no tienen tratamiento o prevencin. Estos laboratorios
deben estar sometidos a controles especiales.
Algunos de los microorganismos tratados en estos laboratorios:
El virus Marburg.
El virus Ebola.
Congo-Crimea.
Fiebre Lassa.
Flavivirus.
Paramixovirus.
Las prcticas de laboratorio para el BSL-4, incluyen todas las
prcticas del BSL-3, ms:
Acceso estrictamente controlado al laboratorio.
Cambio de ropa antes de entrar y salir del laboratorio.
Descontaminar todo el material antes de salir del lugar.

NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA Y

PARASITOLOGIA
Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros
objetos personales en el lugar que se les indique para tal fin.

Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe

permanecer completamente cerrada.
 Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al
finalizar la sesin prctica.

Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades
programadas, antes de salir del laboratorio y siempre despus de manejar
materiales que se sabe o se sospecha que son contaminantes.

Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando

fsicamente cmodo.

Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela

antideslizante en las reas de laboratorio.
 Evitar llevar en el laboratorio
accesorio que podran ser fuente de contaminacin (por ejemplo joyas).

Recoger el cabello largo

Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar slo lo

indispensable.

No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o

utensilios, aplicarse cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en
ningn rea del laboratorio.
 Conocer el manejo de todos los
equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las actividades indicadas en
la prctica. Si usted tiene alguna duda, dirjase al profesor.

Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos

personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la
realizacin del trabajo prctico.

Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe

dejar ste desatendido.
 Regresar los reactivos y equipos empleados
(microscopio, mechero, etc.), limpios y de
manera ordenada a su respectivo lugar una vez
finalizada la actividad. Reporte cualquier dao
de los mismos al profesor.

Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes

dispuestos para tal fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y
placas de Petri en las ollas de desecho, etc.

No usar ningn reactivo que no est debidamente

identificado, verificar las etiquetas de los mismos y
estar seguro de cmo emplearlo.

No devolver sustancias a sus envases originales.

 Emplear la propipeta al medir lquidos. Est rigurosamente prohibido
pipetear con la boca. De igual manera las pipetas tendrn tapones de
algodn para reducir la contaminacin de estos dispositivos de pipeteo.

Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no

llevar a cabo experimentos no autorizados.

Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de

material contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser
catalogado como menor.
 Reducir al mnimo la formacin de aerosoles durante la realizacin de
cualquier trabajo prctico.

Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar

la inoculacin accidental y la generacin de aerosoles durante su

manipulacin y desecho.
 Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de
microorganismos.
RECONOCIEMTO DEL MATERIAL DEL LABORATORIO
La seguridad del laboratorio est relacionada con la naturaleza del material,
el instrumental y la actitud del educando frente a su uso y manifestaciones.
Es muy importante que los materiales y equipos de uso comn en el
laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso especfico que
tiene cada uno, pero ms importante es saber manejarlo correctamente en
el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales
para el uso de aquellos que as lo requieran.
MATERIALES, INSTRUMENTOS Y EQUIPOS
1. POR SU USO ESPECIFICO

a) Materiales para Medicin

Metro: Instrumento para medir que consiste en una regla o en una
cinta graduada que generalmente tiene un metro o ms de longitud y
que lleva marcada la divisin en decmetros, centmetros y
milmetros.
Probeta graduada: es un instrumento de laboratorio que se utiliza,
sobre todo en anlisis qumico, para contener o medir volmenes de
lquidos de una forma aproximada.
Bureta: Tubo largo de vidrio graduado en dcimas de centmetro
cbico, que est abierto por un extremo y por el otro termina en una
caperuza con llave; se utiliza en el laboratorio para determinar
volmenes.
Pipeta: Tubo de vidrio, generalmente graduado y ms ancho por la
parte central, usado en los laboratorios para transvasar pequeas
porciones de lquido; el tubo, que se llena de lquido por succin, se
vaca cuando se saca el dedo que obstruye la parte superior.
Picnmetro: Recipiente de pequeas dimensiones que se usa para
determinar la densidad de un slido o de un lquido.
Cuenta gotas: Instrumento para verter un lquido gota a gota que
consiste en un pequeo tubo de cristal o plstico con una pieza de
goma en uno de sus extremos y acabado por el otro de forma capilar.
Matraz de Erlenmeyer: es un recipiente de vidrio que se utiliza en los
laboratorios, tiene forma de cono y tiene un cuello cilndrico, es plano
por la base. Se utiliza para calentar lquidos cuando hay peligro de
prdida por evaporacin.
Tubos de ensayo: son parte del material de vidrio de un laboratorio de
qumica
Papeles indicadores: indicadores de pH es una sustancia que permite
medir el pH de un medio. Habitualmente, se utilizan como indicador
de las sustancias qumicas que cambian su color al cambiar el pH de
la disolucin.

b) Instrumentos de Medicin
Balanza de dos platillos y marco de pesas: son palancas de primer
gnero de brazos iguales que permiten medir masas, cuyo
funcionamiento se basa en compensar el momento del cuerpo a
pesar y el momento antagonista del patrn de masa, de manera que
 se determina la masa del objeto comparndola con un baremo
conocido y equilibrando sus momentos.
Fluxmetro:
Vernier
Balanza granataria
Dinammetro
Termmetro
Barmetro
Brjula
Multmetro

c) Materiales de Separacin
Embudos
Matraces
Papel filtro
Tamices metlicos

d) Equipos de Separacin
De absorcin:
- columna de absorcin
- tubos desecadores
De secado
Centrifugas
Decantadores
De extraccin
De destilacin

e) Materiales para mezcla: combinacin y reaccin

Tubos de prueba
Matraz erlenmeyer
Balones
Crisoles
Capsulas de evaporacin
Fiolas o matraces aforados
Lunas de reloj
Cristalizadores

f) Materiales para calentamiento

Mecheros bunsen y de alcohol
Hornos elctricos
Mufla elctrica
Planchas elctricas

g) Materiales para sostenimiento o sostn

Soporte universal
Pinzas
Trpode
Gradilla para tubos de prueba
Rejillas
Triangulo de porcelana

h) Materiales para conservacin

 Frascos de reactivos
Frascos desecadores
Campana de vidrio
Frascos o goteros
Envases.

i) Materiales para reduccin de tamao y disgregacin

Morteros
Cuchillas
Tijeras
Limas.

j) Materiales para uso diverso

Varillas de vidrio
Tubos de vidrio
Manguera
Esptulas
Pinza
Escobillas
Lamina de vidrio
EL MICROSCOPIO
Qu es el Microscopio?
Es un instrumento que sirve para ver objetos demasiados pequeos para
ser vistos con claridad por el ojo humano (objetos microscpicos).

Aunque el hombre tenga el sentido de la vista, no puede ver objetos

correctamente demasiados pequeos sin la ayuda de un microscopio.

Si tuvieramos que dar una definicin de microscopio la ms correcta sera:

"Instrumento ptico que permite ver objetos aumentados".

El microscopio que nosotros vamos a estudiar es el llamado microscopio

ptico o de luz, que se sirve de la luz visible para crear una imagen
aumentada del objeto mediante lentes.
Quien Invent el Microscopio?
En general, suele atribuirse la invencin del microscopio simple a Anton
Van Leeuwenhoek (1632-1723), un comerciante holands sin apenas
estudios, pero como podemos leer al final de la pgina fue un proceso de
mejora de lentes hasta llegar al microscopio de Van Leeuwenhoek. Por
ejemplo antes que Anton, ya Zaccharias Janssen y su padre Hans pusieron
varias lentes en un tubo y descubrieron que al colocar un objeto en su
extremo se vea mucho ms grande. Realmente ellos fueron los que
descubrieron el primer microscopio, aunque se le atribuya a Anton.

Van Leeuwenhoeck construy muchos microscopios a lo

largo de su vida, que segn cuentan, no prest nunca a
nadie. Son conocidos sus descubrimientos pioneros
sobre los protozoos, los glbulos rojos, el
sistema de capilares y los ciclos vitales de los
insectos. Por todos estos descubrimientos se
le llama "El Padre del Microscopio".
Partes del Microscopio

Las Partes principales son:

- Ocular: donde acercas los ojos para ver.

- Platina: es esa especie de pequeo plato, donde se coloca el

portaobjeto, donde est lo que quieres observar.

- Foco: Este control sirve para enfocar el objetivo, para tener mejor nitidez
y observar los detalles.

- Condensador: Es el lente que esta debajo de tu objetivo, sirve para

concentrar la luz sobre el mismo.

- Lentes: Estn justo encima del objetivo. Segn el modelo de microscopio

puede tener un revolver, con distintos valores de aumentos para
seleccionar.
Como Se Usa el Microscopio
Lo primero es preparar lo que queremos mirar a travs del microscopio. A
esto se le llama montar la preparacin. Para montar la preparacin
debemos colocar lo que queremos ver encima de un cristal (portaobjeto) y
poner encima otro cristal (cubreobjeto). Te recomendamos que empieces
por ver una gota de agua de un charco.
 A veces se hecha un lquido entre los 2 cristales para que se vea mejor
(depende lo que se quiera ver).

a) Encendemos la luz del microscopio y comprobamos que vemos la luz a

travs del ocular.

b) Colocamos la preparacin sobre la platina y movemos el revlver para

poner sobre ella el objetivo de menor aumento.

c) Enfocamos la muestra:

Giramos el tornillo macromtrico hasta que el objetivo est lo ms cerca

posible de la preparacin.

- Mirando por el ocular, giramos el tornillo para ir separando el objetivo de

la preparacin hasta ver una imagen los ms enfocada posible.

- Movemos el tornillo micromtrico para conseguir una imagen ms

enfocada.

Podemos observar la muestra con ms aumentos, cambiando el objetivo

(mediante el revlver) y ajustando el enfoque con el tornillo micromtrico.

Tipos de Microscopios

Un microscopio de "luz" es uno que se basa en la luz para producir la

imagen visualizada. Se llaman microscopios pticos. Estos son la mayora
que se usan a nivel particular o en las escuelas, pero hay otros tipos de
microscopios que utilizan otros tipos de energa diferentes a la luz. Ejemplos
de ello son los microscopios electrnicos que utilizan los electrones y
los microscopios de sonda de barrido que utilizan campos
electromagnticos o diminutas sondas que miden fuerzas.

Ahora existen los llamados microscopios digitales, son aquellos que se

conectan al ordenador, normalmente por medio de un puerto USB, y se
pueden verlas imgenes directamente por el ordenador. Estas imgenes se
pueden convertir en archivos y guardar en nuestro ordenador. Por lo dems,
el funcionamiento es igual que los dems.

Un microscopio simple es uno que utiliza slo una lente para ampliar,
como una lente de aumento. Un microscopio compuesto utiliza dos o ms
lentes para ampiar la muestra.

Hay muchos otros tipos de microscopios, incluyendo los que utilizan rayos
X, gases y lseres.

Informacin Sobre el Microscopio

Durante el primer siglo (ao 100), el vidrio se haba inventado y los

romanos se miraban a travs del cristal. Experimentaron con diferentes
formas de cristal, una de ellas era ms fino por los bordes y ms grueso en
el centro. Descubrieron que si esta "lente" se colocaba sobre un objeto, el
objeto se vea ms grande.

Alguien descubri tambin que se puede enfocar los rayos del sol con una
de estas lentes especiales y provocar un incendio. Estas primeras lentes
fueron llamados lupas o lentes de quemar. La palabra "lente", por cierto,
deriva de la palabra lentejas, porque se parecan a la forma de un grano de
lenteja.

Estas lentes no se utilizaron mucho hasta el final del siglo XIII, cuando los
fabricantes de gafas estaban produciendo lentes para usarlas como gafas.

Los primeros microscopios sencillos, que eran realmente las gafas, slo
aumentaban 6 o 10 veces el tamao real. Una cosa que era muy comn e
interesante, era usarlas para mirar pulgas y otros insectos diminutos.

En algn momento alrededor del ao 1590, dos fabricantes de gafas

holandeses, Zaccharias Janssen y su padre Hans comenzaron a
experimentar con estas lentes. Ellos pusieron varias lentes en un tubo y
hicieron un descubrimiento muy importante. El objeto cerca del extremo del
tubo se vea muy ampliado , mucho ms que lo que se poda ampliar con
cualquier lupa. Acababan de inventar el microscopio compuesto (que es un
microscopio que utiliza dos o ms lentes).

Galileo oy de sus experimentos y comenz a experimentar por su cuenta.

Describi los principios de lentes y los rayos de luz y mejor tanto el
microscopio como el telescopio. Aadi un dispositivo de enfoque a su
microscopio y, por supuesto, pas a explorar los cielos con sus telescopios.
 Anthony Leeuwenhoek de Holanda estaba muy interesado en las lentes
mientras trabajaba con lupas en una tienda de telas. Us la lupa para contar
los hilos en una tela. Fue tanto su inters que aprendi a hacer lentes.
Mediante el esmerilado y el pulido, fue capaz de hacer pequeas lentes con
grandes curvaturas. Estas lentes redondas producan una mayor ampliacin,
y sus microscopios fueron capaces de ampliar hasta 270 veces el tamao
real.

Anthony Leeuwenhoek se involucr ms en la ciencia y con su nuevo

microscopio mejorado fue capaz de ver cosas que nadie haba visto antes.
Vio bacterias, levaduras, clulas sanguneas y pequeos animales que
nadan alrededor en una gota de agua. Por sus grandes contribuciones,
descubrimientos y trabajos de investigacin, Anthony Leeuwenhoek (1632-
1723) desde entonces ha sido llamado el "Padre del Microscopio".

Hoy en da los Microscopios nos permiten ver organismos enfermos y cmo

funcionan. Podemos estudiar la composicin de las rocas y los fluidos y por
ejemplo, podemos ver exactamente lo que hay en un vaso de agua potable.

COLORACIONES
Las Sustancias Colorantes

En 1665, Robert Hooke inform sobre sus hallazgos referentes a la

composicin del tejido, en su texto titulado Micrographia (Royal Society,
London), tras observar muestras vegetales diafanizadas con suero
glicerinado y donde acu el concepto de Clula, debido a que la unidad
estructural observada era similar a las "cell" de un panal de abejas.
Leeuwenhoek (1714) aplic por primera vez un agente colorante natural
para mejorar la observacin microscpica de fibras musculares de
mamfero, al emplear una solucin alcohlica de saffron.

A partir de estas experiencias, otros autores utilizaron diferentes tintes de

origen natural a fin de colorear distintos componentes tisulares. As por
ejemplo, Hill (1770) aplic carmn para la demostracin del sistema vascular
en plantas, Link (1807) utiliz sales frricas para visualizar el tanino celular
en tejido vegetal, Raspail (1825) emple yoduro para colorear los grnulos
de almidn presentes en semillas germinadas, Hartig (1854) colore ncleos
con phytolocca y Bhmer hizo lo mismo pero con hematoxilina en 1865.

Prout (1855) tuvo la brillante idea de hacer reaccionar los cidos ntrico y
rico para obtener murexide, primer colorante sinttico y Perkin, en 1856,
produce un colorante anilnico: el mauve, ao en que comienza la
produccin industrial de distintas anilinas sintticas.
El color de un agente colorante est relacionado con su estructura
molecular y la percepcin del color es consecuencia de un conjunto de
mecanismos psicolgicos y fisiolgicos a las radiaciones emitidas
por los colorantes, cuando stas impactan en la retina del ojo. Si las
radiaciones de todas las longitudes de onda inciden simultneamente en la
retina se percibe el color blanco. Cuando impacta un rango estrecho de
longitudes de onda se observa un solo color y si no se percibe radiacin
alguna sentimos la sensacin de oscuridad, color negro, ya que ninguna
energa fotnica impacta sobre la retina (Berne & Levy 1986, Christie et al.
1999). De esta manera, si la percepcin de la imagen coloreada involucra
mecanismos fisiolgicos y psicolgicos interrelacionados, por tanto, del
estado funcional de la visin del observador y de cmo tal individuo aprende
a determinar y definir un color, comenzaremos por abordar algunos
conceptos referidos a visin.

El ojo del ser humano transforma los fotones lumnicos en impulsos

nerviosos que llegan al cerebro y dan origen a la visin. Si bien todos los
procesos involucrados en la visin, sean fsicos, qumicos y biolgicos no se
conocen en su totalidad, se sabe que los bastones y conos de la retina son
las clulas fotorreceptoras de la imagen, la cual se caracteriza por las
diferentes figuras coloreadas que la componen. Los bastones captan
imgenes bajo iluminacin dbil y la percepcin de los colores blanco y
negro (visin escotpica), mientras que los conos son las clulas
responsables de la percepcin de los colores y de recibir imgenes bajo luz
intensa (visin fotpica).
Los bastones detectan la luz a travs de un pigmento citoplasmtico
denominado Rodopsina, la cual se origina por combinacin del 11-cis-retinal,
un precursor de la vitamina A, con el grupo amino de una protena compleja
llamada Opsina:

Si un cuanto de energa proveniente de una fuente de luz (hv) incide sobre

la rodopsina, se produce una serie de conversiones hasta producir trans-
retinal por un lado y amino-opsina por el otro, con introduccin de una
molcula de agua (el impulso nervioso se genera durante las conversiones
intermedias representadas por las metarrodopsinas I y II):
Para que la visin escotpica se mantenga, estos subproductos son
reconvertidos por fotoinduccin a 11-cis-retinal y opsina y as promover un
nuevo ciclo de la rodopsina. En caso que la cantidad de luz sea escasa, el
trans-retinal no puede ser fotoinducido con facilidad y, por ello, debe ser
reducido enzimticamente a trans-vitamina A, la cual se transporta al
hgado para ser convertida por isomerizacin a 11-cis-vitamina A y,
nuevamente en el ojo, oxidada a 11-cis-retinal para unirse a la opsina y
originar la rodopsina.
Como dijimos, la visin escotpica carece de color y permite determinar las
formas que presentan las estructuras tisulares, por ejemplo si las
observamos en una fotografa en blanco y negro. Dichas estructuras, no
obstante, las podemos diferenciar unas de otras por los distintos matices de
color que adoptan tras teir el corte histolgico. La definicin de esas
estructuras coloreadas -por ejemplo fibras colgenas azules y musculares
rojas en la tcnica de Masson- se debe a la participacin fotorreceptora de
los conos, los cuales son los que proporcionan la visin en color. Hay tres
tipos de conos y cada uno contiene un pigmento especfico fotosensible al
azul, verde y rojo, cuya capacidad mxima de absorcin es 430, 530 y 560
nm de longitud de onda, respectivamente. Si bien todava no se sabe cmo
se organizan las vas visuales para discriminar las longitudes de onda y
producir la sensacin de color, lo cierto es que conos y bastones combinan
sus actividades especficas en las clulas Ganglionares X de la retina, va
neuronas intercalares. El conjunto de todas estas funciones imprimen sobre
el cerebro la imagen, a travs de canales geniculoestriados, los cuales
parecen tener un papel clave en todo el proceso, ya no solo en la
apreciacin de la forma y color del objeto, sino tambin de la distancia y el
movimiento.

Estos conceptos se deben tener en cuenta cuando un mismo preparado

histolgico es analizado por dos o ms observadores para la interpretacin
de una coloracin. Existe una manera correcta y tradicional de hacer una
coloracin adecuada; sin embargo, he observado que un mdico
anatomopatlogo prefiere que los preparados histolgicos teidos con H&E
muestren una eosina ms intensa, mientras que otros colegas los prefiere
menos brillante (otra analoga relacionada podra ser cuando un observador
prefiere ver los preparados con luz fuerte al microscopio pero otros lo hacen
con luz ms dbil). De esto se deduce que cada observador aprecia una
tincin mejor en funcin de sus condiciones fisiolgicas, solapadas con la
forma en que aprendi a ver una coloracin en particular. Esto, no quiere
decir que cualquier coloracin de H&E sera adecuada y que la
interpretacin dependa del estado del observador, pues podra suceder que
el tcnico realice una tincin ineficiente. Lo que se seala es que una buena
coloracin, libre de artificios de tcnica, puede ser bien apreciada o muy
apreciada por el observador en funcin de sus condiciones fisiopsicolgicas.
Pero, cmo una molcula qumica puede producir color?. Witt, en 1876,
comprob que en la estructura qumica de las sustancias colorantes existen
determinados grupos atmicos no saturados de enlaces mltiples
conjugados y los denomin cromognicos. Las sustancias colorantes son
compuestos orgnicos aromticos, es decir que presentan en su
configuracin molecular uno o varios anillos bencnicos, si bien es necesario
mencionar que algunas sustancias alifticas presentan color, por ejemplo, la
bixina, que se utiliza para la tincin in vivo de lpidos y cuya estructura
presenta varias insaturaciones a lo largo de su molcula.

Los compuestos aromticos tienen una fuerte tendencia a absorber ondas

electromagnticas y dar color. Se supone que existe la posibilidad de
cambios rpidos en la configuracin de la molcula colorante entre varios
estados conformacionales; estos cambios o resonancia involucran la
absorcin de ondas electromagnticas cuando son tratadas con un haz de
luz. Los grupos cromgenos ms importantes son:

En otras palabras, los compuestos saturados presentan electrones

fuertemente unidos y se necesita de mucha energa electromagntica para
excitarlos, por tanto, estas sustancias son incoloras. En cambio, los
compuestos que presentan uniones no saturadas (por ejemplo, 3 en el anillo
de benceno) y cuyos electrones en orbitales moleculares estn
dbilmente unidos, requieren poca energa para excitarlos, razn por la cual,
esos compuestos absorben ondas electromagnticas en la zona visible del
espectro de luz y manifiestan color. Este fenmeno se intensifica si
aumentamos la cantidad de dobles enlaces conjugados, ya que disminuye la
energa de excitacin de sus electrones. En la actualidad y tras el desarrollo
terico de las transiciones electrnicas basadas en los conceptos de Louis
de Broglie (1923), se sabe que estas estructuras parciales necesarias para
la aparicin del color en un compuesto orgnico son grupos qumicos
insaturados capaces de experimentar transiciones * (orbitales
moleculares enlazantes a orbitales antienlazantes) o n* (orbitales
ocupados no enlazantes a orbitales antienlazantes prximos).
Si nuestros ojos fueran sensibles en luz ultravioleta, el benceno podra
aparecer coloreado (a una banda de absorcin de 184 nm); sin embargo, es
incoloro en el espectro visible. Ahora bien, si incorporamos un grupo
qumico azo entre dos anillos bencnicos, la molcula resultante emitir
color amarillo debido al aumento de las insaturaciones en la misma
molcula (mayor cantidad de enlaces no saturados conjugados en el mismo
sistema anular) con varias alternativas transicionales *. Ese grupo azo
se denomina cromforo (del griego chroma, color y foros, soportar):

Asimismo, la presencia de otros grupos qumicos unidos al colorante da

lugar a una intensificacin del color y se denominan auxcromos (del griego
auxanein, aumentar). En los colorantes de naturaleza bsica, los grupos
ms representativos son los aminos sustituidos primarios, secundarios y el
imino:

Muchos de estos colorantes bsicos, tambin llamados catinicos, presentan

carga positiva delocalizada (dado por un dficit electrnico), la cual forma
parte del sistema cromognico-aromtico. Por ejemplo, el Azur B (CI 52015),
que compone la mezcla de Giemsa, presenta un grupo imino cargado:

Otro grupo de colorantes bsicos se conforma por las llamadas lacas

colorantes (metallochrom), que incluyen la hematoxilina, ferrona o azul de
alciano, entre otros, los cuales presentan carga positiva localizada o carga
puntual. Estas lacas se forman con iones metlicos di- o trivalentes y por
agrupaciones atmicas tipo ortofenol o similares en el sistema anular
aromtico del colorante. La gallocianina (CI 51030) es tambin un ejemplo y
se esquematiza a continuacin:

En los colorantes cidos, si bien

tambin pueden presentar grupos aminos pero sin carga, los grupos
auxocrmicos ms representativos son: sulfnico, sulfnico, carboxilo,
hidroxilo y halognico:

Todos los grupos auxocrmicos

mencionados experimentan transiciones n* y favorecen, adems, la
disolucin del colorante en medio acuoso. Tal disolucin, sin embargo,
puede encontrarse entorpecida con otros grupos qumicos presentes en la
molcula colorante y que, en tcnica histolgica, se denominan
modificadores, tales como metilo, etilo o propilo:

Estos grupos modificadores no son

solubles en agua pero se disuelven en solventes orgnicos, que incluyen
etanol, acetona, ter, metanol, propilenglicol, entre otros, como sucede con
los colorantes para grasas, tipo Sudn. Ahora bien, esto no supone que el
resto de los colorantes no contengan en su composicin grupos
modificadores, de hecho se los ha mencionado ms arriba. Lo importante es
saber que pueden estar presentes e intervenir en la propiedad e intensidad
tintorial.

A continuacin se esquematizan la Eosina Y (CI 45380) y la Eritrosina B (CI

45430) para determinar cmo un grupo qumico puede variar el color. Estos
colorantes xantnicos derivan de la fluorescena por sustitucin de sus 4
tomos de hidrgenos con Bromo y Yodo, respectivamente:

Si preparamos una solucin etanlica de eosina Y al 0.5% y otra de

eritrosina B, observaremos que la primera es color anaranjado amarillento,
mientras que la segunda adoptar un color rosado azulino (en ambos casos,
se ver un trasfondo verdoso dado por la presencia de fluorescena, debido
a la hidrogenacin parcial de algunas molculas disueltas). Tras la tincin de
un corte histolgico de piel, la solucin de eosina colorea, por ejemplo, de
rosa brillante la fibra colgena, al igual que la queratina; mientras que, la
eritrosina, tie el colgeno de color rosado suave y la capa crnea de
anaranjado. No es casual que en algunos laboratorios se utilice la Triosina
(Galigher, 1934), una mezcla colorante que se compone de esos dos
colorantes y Orange G para obtener una tincin de contraste pancromtica.
Por otra parte y con el propsito de interpretar el mecanismo de accin de
una molcula colorante sobre el tejido es necesario tener en cuenta la
propiedad que tienen las protenas, ciertos polisacridos, pigmentos
endgenos y cidos nucleicos de ionizarse como base o cido para originar
cargas, positiva o negativa, y que muestran afinidad por el colorante. Es
decir que, la sola existencia de cargas catinicas o aninicas en la molcula
colorante no sera suficiente para unirse a los componentes tisulares si
estos, a su vez, no presentan cargas opuestas a aquellas.
La ionizacin cida de la mayora de los componentes del tejido se produce
en sitios tales como: hidroxilos (-OH), sulfhidrilos (-SH), fosfatos (=PO4H) y,
en especial, carboxilos (-COOH). La ionizacin bsica se realiza a travs de
los grupos aminos (-NH2), generalmente presentes en protenas y
proteoglicanos. En ambos casos, la ionizacin de esos sitios qumicos es
dependiente del potencial de hidrogeniones (pH) de la solucin colorante.

Las protenas son macromolculas que se componen de aminocidos que se

unen originando una cadena lineal (estructura primaria) con grupos
laterales funcionales que protruyen hacia ambos lados de la macromolcula,
los cuales determinan los plegamientos proteicos, toda interaccin y la
unin con el colorante. Cada aminocido contiene en la molcula ambos
iones, el carboxilo (-COO-) y el amonio (-NH3+). Por tanto, el aminocido es
anftero y puede reaccionar con cidos o bases para originar el catin o el
anin correspondiente (Fessenden & Fessenden 1984). En soluciones
acuosas, los aminocidos neutros son ligeramente cidos, debido a que el
grupo amonio es un cido ms fuerte de lo que el grupo carboxilo lo es
como base. La diferencia en acidez o basicidad da como resultado que una
solucin acuosa, por ejemplo, de alanina contenga ms aminocidos en
forma de anin que de catin. Por tanto, la Alanina presentara en tal
solucin una carga neta negativa:

Sin embargo, tras agregar unas gotas de cido actico a dicha solucin, el
equilibrio cido-base se desplaza de manera tal, que la carga neta de los
iones de la alanina se vuelve cero (0). El pH al cual un aminocido no
presenta carga inica se lo conoce como punto isoelctrico del aminocido:

Los puntos isoelctricos se determinan por electroforesis y es una Constante

Fsica. Estos puntos varan de un aminocido a otro, aunque se pueden
agrupar en las siguientes categoras:

1. Aminocidos neutros, como es el caso analizado con anterioridad y cuyo

punto isoelctrico se encuentra entre 5.5 y 6.0.
2. Aminocidos cidos, los cuales presentan dos grupos carboxilos y siempre
muestran carga neta negativa (punto isoelctrico prximo a 3.0):

3. Aminocidos bsicos, los

cuales presentan varios grupos aminos y siempre muestran carga neta
positiva. Aqu, se requiere la presencia de iones hidroxilos en la solucin
para neutralizar el aminocido bsico (punto isoelctrico se halla en el
rango de 9.0 a 10.8):

Si el pH de la solucin colorante est por debajo del punto isoelctrico de las

protenas, los grupos aminos presentarn carga. De esta manera, las
protenas se tien con colorantes de naturaleza cida: eosina, floxina,
fucsina cida, azul de anilina, orange G, etc. Sin embargo, si esas protenas
estn compuestas por gran cantidad de aminocidos bsicos continuarn
colorendose con aquellos colorantes, debido que a si bien la concentrain
de hidrogeniones es nula, dichas protenas siguen presentando carga
positiva en algunos de sus grupos aminos, tal como sucede en la tincin
selectiva de Eosinfilos. Por el contrario, si el pH es superior al punto
isoelctrico de las protenas, la ionizacin se presentar en los grupos
carboxilos, los cuales se colorean con colorantes bsicos, tales como tionina,
pironina, azul de metileno, entre otros.

La propiedad tintorial debe preservarse durante la fijacin de la muestra. Un

rasgo importante de la estructura de las protenas es que un grupo lateral
particular puede reaccionar qumicamente con el fijador en sitios diferentes
a los que han de reaccionar con el colorante, sin que se produzcan cambios
importantes en la naturaleza de la cadena proteica completa. Si un grupo
lateral determinado es capaz de reaccionar con un colorante particular es
porque retuvo aquella propiedad cuando se us un fijador que slo bloque
algunos sitios de la cadena lateral. Ahora bien, si teimos en iguales
condiciones, por ejemplo con la tcnica de H&E, dos cortes histolgicos de
un mismo espcimen, pero uno de esos cortes es obtenido a partir de un
fragmento de dicho espcimen fijado en formol convencional y el otro
corte obtenido del fragmento restante pero sin fijacin previa y ambos
seccionados en cristato, observaremos que el ltimo corte muestra una
coloracin general ms intensa de las protenas eosinfilas en comparacin
con el corte fijado. Horobin (2002) inform que estos resultados se producen
porque la fijacin previa provoca en el espcimen una trama reticular entre
las protenas que dificulta la difusin de la molcula colorante. Si bien el
concepto es correcto es conveniente considerar que el fijador tambin
puede bloquear algunos sitios qumicos laterales de las protenas,
provocando disminucin en la intensidad de la coloracin. Esto puede
observarse, por ejemplo, cuando se colorea un corte histolgico
previamente tratado con buffer Citrato pH 6.0 en horno de microondas, tal
como se emplea en recuperacin antignica. Haciendo una prueba
comparativa con dos secciones histolgicas adyacentes, coloreadas en
idnticas condiciones, la seccin pretratada con el buffer citado muestra mayor intensidad
tintorial respecto al corte histolgico no tratado con microondas (Camarero et al. 2005).

Por otra parte, las protenas globulares y fibrosas exhiben propiedades y mecanismos de
tincin diferentes. Ambos tipos de protenas pueden, dependiendo del pH, ser coloreadas con
tintes aninicos (acidofilia) o colorantes catinicos (basofilia). Solamente, la tincin con tintes
aninicos son de importancia prctica, ya que los colorantes catinicos se reservan para la
tincin combinada de cidos nucleicos y poder observar simultneamente, adems de las
protenas tisulares, los ncleos celulares. No obstante y a diferencia de las protenas fibrilares,
se supone que la mayora de las protenas globulares retienen ligeramente sus plegamientos
estructurales tras la fijacin, deshidratacin e inclusin de la muestra. Asimismo, si bien la
solucin colorante es en si misma desnaturalizante de protenas y causa su desplegamiento
parcial, no afecta demasiado las propiedades tintoriales. Esto se observa tambin en que los
cortes de tejido tanto por congelacin como de parafina conservan caractersticas colorantes
similares.
La coloracin de protenas globulares hecha con soluciones acuosas se lleva a cabo,
fundamentalmente, por interacciones hidrofbicas. El pH bajo empleado en la mayora de los
mtodos de tincin promueve el incremento de la repulsin de cargas, durante la cual se abren
las estructuras secundarias, aumentando la tensin mecnica de las protenas inmovilizadas en
el corte de tejido. Este pH es determinado, por supuesto, por el disolvente adicionado
comnmente con cido actico y, posteriormente, una vez producida la unin del colorante
aninico con los residuos no polares disminuye dicha repulsin permitiendo, como
consecuencia, que la tensin se alivie y se reestablezcan las estructuras secundarias de las
protenas ya coloreadas. En el siguiente se esquematiza el fenmeno de repulsin de cargas
en una protena hipottica: a pH 7.0 observamos la disposicin espacial de la cadena
polipeptdica, la cual muestra en sus residuos laterales grupos qumicos con carga positiva (+),
negativa (-) y grupos no polares (#):
Al sumergir la protena en una solucin cida (pH 3.0), se produce la siguiente secuencia de
eventos:

1. las cargas negativas se neutralizan (el potencial de hidrogeniones est por debajo del punto
isoelctrico de la protena),

2. introduccin de grupos hidronios (H3O+) en la intimidad de la estructura,

3. incremento de la repulsin de cargas con aumento de la tensin mecnica y

4. exposicin de residuos apolares, los cuales se vuelven ms accesibles a colorantes de

estructura simple y tamao pequeo (por ejemplo, OrangeG).

Como se ver ms adelante, en la coloracin de protenas fibrilares adems de las

interacciones hidrofbicas, la tincin con colorantes aninicos tambin se establece por
puentes hidrgeno, ya que en los plegamientos de estas protenas los grupos peptdicos
presentan aminocidos disponibles para colorantes de elevado peso molecular y ms
complejos (por ejemplo, Azul de anilina).

En los cidos nucleicos, la carga neta est determinada por los grupos fosfatos, los cuales se
unen a la mayora de colorantes catinicos, una vez ionizados. Ejemplos de colorantes
catinicos: hematoxilina, azul de metileno, azul de toluidina, etc. Un caso particular en la
coloracin de cidos nucleicos, lo presenta el ADN en la Tcnica de Feulgen-Rossenbeck
(1924), ya que este cido se tie especficamente por oxidacin fuerte de la desoxirribosa con
liberacin de un grupo aldehdo que se colorea con la Fucsina bsica de Schiff.

Los lpidos son compuestos fuertemente apolares y presentan slo algunos escasos sitios
polares: carboxilos y fosfricos, que son insuficientes para producir una coloracin intensa. Por
ello, se recurre a la naturaleza no polar de los lpidos, utilizando colorantes apolares tales
como: Sudn III, Oil Red, Sudn black B, etc. Los hidratos de carbono neutros se colorean tras
oxidacin previa de sus grupos 1-2 glicoles; mientras que los proteoglicanos se tien a travs
de sus sitios carboxilados y sulfatados con colorantes bsicos, tal como sucede con los cidos
nucleicos pero a pH ms cido (0.5 -2.5).

Los mecanismos fsico-qumicos involucrados en la mayora de las coloraciones histolgicas

son an poco entendidos. Sin embargo, en razn a lo expuesto en prrafos anteriores y al
avance de la tecnologa en el campo de la Fsica, la Qumica y la Informtica, se est aplicando
desde hace algunos aos el Modelo de las Relaciones Cuantitativas de Actividad-Estructura,
conocido como QSAR (Quantitative Structure-Activity Relationship) para intentar predecir qu
componente tisular ha de teirse con un colorante determinado en condiciones particulares. En
la literatura se encuentran numerosos informes sobre el modelo QSAR con aplicacin en
fisiologa olfatoria, toxicologa y farmacologa, mientras que en histotecnologa ya se han
publicado algunos trabajos. Horobin (2004) describe con simpleza las caractersticas que se
deben considerar para emplear este modelo en la coloracin biolgica y, al respecto, menciona
4 propiedades qumicas:

1. La carga elctrica del colorante (Z).

2. El tamao del colorante (MWt), el cual hace referencia al peso molecular (lo ideal es trabajar
con el tamao inico del colorante (IMWt).
3. La afinidad molecular (MA), el cual se relaciona con la hidrofilicidad o hidrofobicidad del
colorante con la macromolcula tisular. El valor numrico de esta propiedad se calcula a partir
del logaritmo del Coeficiente de Particin (log P) del colorante entre agua-octanol.
4. El nmero de enlaces conjugados (NUC), el cual representa el tamao del sistema aromtico
de la molcula colorante.

En el siguiente cuadro se ejemplifican tres colorantes utilizados en tcnica histolgica de rutina,

en el cual se detallan los parmetros numricos que caracterizan sus correspondientes
estructuras:

En este mismo trabajo, Horobin agrupa diferentes molculas colorantes de propiedades

tintoriales muy similares, los cuales muestran sorpresivamente, relaciones numricas entre
estos cuatro parmetros y la macromolcula coloreada. Si bien el uso del modelo QSAR en la
coloracin histolgica es muy reciente, seguramente en el futuro se conocern nuevos avances
en el rea, los cuales permitirn comprender con mayor exactitud el fundamento terico que
sustenta la prctica de la tincin biolgica.

Los resultados de coloracin pueden ser infructuosos debido a diferentes razones y una de
ellas es por el uso del colorante inadecuado. As por ejemplo, cuando se emplea el Verde
rpido C.I. 61570 en vez de C.I. 42053 en la coloracin de Gomori para patologa muscular, la
Fucsina cida C.I. 17200 en vez de C.l. 42685 en la tricrmica de Masson para diferenciar
tejido muscular y conectivo o el Rojo congo C.I. 22150 en vez de C.I. 22120 en la tcnica de
Benhold para la coloracin de amiloide, pueden obtenerse resultados de tincin dbiles,
inespecficos o falsos negativos. Por ello, es conveniente recordar que existen diferentes
variedades de una misma molcula colorante y que, por supuesto, tienen el mismo nombre.

Estas molculas, cuyo cromgeno es el mismo, difieren unas de otras en los grupos
modificadores y/o auxcromos presentes. Por ello, la Comisin Americana para la
Estandardizacin de Colorantes Biolgicos, ha elaborado una lista con todos los colorantes
utilizados en Tcnica Histolgica, identificados con un nmero, precedido de la sigla C.I.
(Colour Index) para cada uno de ellos (Rowe 1924, Conn 1953, Lillie 1977). Por ejemplo, si
comparamos los colorantes tipo Orange (CI 16230 vs. CI 15510), tanto la geometra como la
cantidad de grupos sulfnicos presentes, intervienen de manera decisiva en la selectividad e
intensidad de la coloracin de Bensley (1911) para diferenciar clulas A y B en los islotes de
Langerhans del pncreas:

Asimismo, el Colour Index evita el uso de sinnimos empleados para un mismo colorante y que
fueron acuados por diferentes autores en distintos trabajos, sin saber que se trataba de la
misma sustancia qumica. Retomando el ejemplo anterior, el Orange G se lo conoce tambin
como Wool Orange 2G o Crystal Orange GG, mientras que el Orange R es llamado Orange II,
Orange extra, Mandarin G o Tropaeolin OOO N 2.

Por otra parte, cada colorante tiene un nmero conocido como CAS (Chemical Abstract
Service), el cual permite la correcta identificacin de cada colorante en funcin de todas las
sustancias qumicas conocidas. En el siguiente cuadro se detallan algunas caractersticas que
figuran en la etiqueta de un mismo colorante expendido por tres marcas comerciales
reconocidas internacionalmente. El Chromeazurol B es tambin conocido como, Mordant blue
1, Solocrome azurine B, Chromoxane pure B, Chrome fase blue y Azurine B (Lillie 1977). De
todos los datos, el CAS "debe" figurar y es el que confirma cul es la molcula colorante que
compramos.
BIBLIOGRAFIA
http://www.chlaep.org.uy/pdf/normas_de_bioseguridad.pdf
https://es.slideshare.net/rohanpianist/niveles-de-bioseguridad-en-el-
laboratorio-16719185
http://www.monografias.com/trabajos82/seguridad-laboratorio-
reconocimiento-material/seguridad-laboratorio-reconocimiento-
material.shtml
http://www.areaciencias.com/El_Microscopio.htm
http://educacionhistotecnologiacoloracio.blogspot.pe/